ES2926542T3

ES2926542T3 - Compuestos de ácido 1,2,4-oxadiazol benzoico y su uso para supresión de mutaciones finalizadoras y el tratamiento de enfermedades

Info

Publication number: ES2926542T3
Application number: ES21169137T
Authority: ES
Inventors: Gary Karp; Seongwoo Hwang; Guangming Chen; Neil G Almstead; Young-Choon Moon
Original assignee: PTC Therapeutics Inc
Current assignee: PTC Therapeutics Inc
Priority date: 2003-04-11
Filing date: 2004-04-09
Publication date: 2022-10-26
Anticipated expiration: 2024-04-09
Also published as: CY2015017I1; EP3549936B1; US7202262B2; AU2004229487B2; US20100168109A1; EP3103800B1; KR101134188B1; EP3103800A1; PL3889142T3; EP3889142A1; US20140301978A1; WO2004091502A2; DK3345895T3; AU2004229487A1; PT3103800T; US7419991B2; NZ543263A; US20060035943A1; TR201706226T4; US9861617B2

Abstract

En el presente documento se proporciona un compuesto de fórmula o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para usar en un método para tratar un trastorno de almacenamiento lisosomal asociado con un codón de terminación prematuro en un paciente. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Compuestos de ácido 1,2,4-oxadiazol benzoico y su uso para supresión de mutaciones Analizadoras y el tratamiento de enfermedades

1. Campo de la invención

La invención se refiere a compuestos de ácido 1,2,4-oxadiazol benzoico para su uso en un método para tratar un trastorno de almacenamiento lisosómico asociado con un codón de parada prematuro en un paciente.

2. Antecedentes de la invención

La expresión génica en células depende del proceso secuencial de transcripción y traducción. Juntos, estos procesos producen una proteína a partir de la secuencia de nucleótidos de su gen correspondiente.

La transcripción implica la síntesis de ARNm a partir de ADN mediante ARN polimerasa. La transcripción empieza en una región promotora del gen y continúa hasta que se induce la terminación, tal como mediante la formación de una estructura de tallo-bucle en el ARN naciente o la unión del producto génico rho.

Entonces la proteína se produce a partir de ARNm mediante el proceso de traducción, que se produce en el ribosoma con la ayuda de ARNt, ARNt sintetasas y otras diversas proteínas y especies de ARN. La traducción comprende las tres fases de inicio, elongación y terminación. La traducción se inicia mediante la formación de un complejo de inicio que consiste en factores proteínicos, ARNm, ARNt, cofactores y las subunidades ribosómicas que reconocen señales en el ARNm que dirige la maquinaria de traducción para que comience la traducción sobre el ARNm.

Una vez formado el complejo de inicio, se produce el crecimiento de la cadena polipeptídica mediante la adición repetitiva de aminoácidos mediante la actividad peptidil transferasa del ribosoma, así como ARNt y ARNt sintetasas. La presencia de uno de los tres codones de terminación (UAA, UAG, UGA) en el sitio A del ribosoma señaliza a los factores de liberación (RF) de cadena polipeptídica para que se unan y reconozcan la señal de terminación. Posteriormente, el enlace éster entre el nucleótido 3' del ARNt localizado en el sitio P del ribosoma y la cadena polipeptídica naciente se hidroliza. La cadena polipeptídica completada se libera, y las subunidades ribosómicas se reciclan para otra ronda de traducción.

Las mutaciones de la secuencia de ADN en que se altera el número de bases se clasifican como mutaciones de inserción o eliminación (mutaciones de desplazamiento del marco de lectura) y pueden provocar alteraciones importantes del genoma. Las mutaciones del ADN que cambian una base por otra se denominan mutaciones de aminoácido y se subdividen en las clases de transiciones (una purina por otra purina, o una pirimidina por otra pirimidina) y transversiones (una purina por una pirimidina, o una pirimidina por una purina).

Las inserciones, las eliminaciones, las mutaciones de transición y transversión pueden provocar todas una mutación finalizadora, o mutaciones de terminación de cadena, en que la mutación de base o mutación de desplazamiento del marco de lectura cambia un codón aminoacídico a uno de los tres codones de parada. Estos codones de parada prematuros pueden producir proteínas aberrantes en las células como resultado de la terminación prematura de la traducción. Una mutación finalizadora en un gen esencial puede ser mortal y también puede provocar varias enfermedades, tales como cánceres, trastorno de almacenamiento lisosómico, distrofias musculares, fibrosis quística y hemofilia, por nombrar unas pocas.

En cepas bacterianas y eucarióticas con mutaciones finalizadoras, la supresión de la mutación finalizadora puede surgir como resultado de una mutación en una de las moléculas de ARNt, de modo que el ARNt mutante puede reconocer el codón finalizador, como resultado de mutaciones en proteínas que están implicadas en el proceso de traducción, como resultado de mutaciones en el ribosoma (el ARN ribosómico o proteínas ribosómicas), o mediante la adición de compuestos que se sabe que alteran el proceso de traducción (por ejemplo, cicloheximida o los antibióticos aminoglucosídicos). El resultado es que se incorporará un aminoácido en la cadena polipeptídica en el sitio de la mutación finalizadora, y la traducción no se terminará de forma prematura en el codón finalizador. El aminoácido insertado no será necesariamente idéntico al aminoácido original de la proteína de tipo silvestre; sin embargo, muchas sustituciones aminoacídicas no tienen un efecto pronunciado sobre la estructura o función de la proteína. Por tanto, una proteína producida por la supresión de una mutación finalizadora probablemente poseería actividad parecida a la de la proteína de tipo silvestre. Este escenario proporciona una oportunidad de tratar enfermedades asociadas con mutaciones finalizadoras evitando la terminación prematura de la traducción a través de la supresión de la mutación finalizadora.

La capacidad de los antibióticos aminoglucosídicos de promover la ultralectura de codones de parada eucarióticos ha despertado el interés en estos fármacos como posibles agentes terapéuticos en enfermedades humanas provocadas por mutaciones finalizadoras. Una enfermedad para la que puede ser viable dicha estrategia terapéutica es la lipofuscinosis ceroide neuronal infantil tardía clásica (LINCL), una enfermedad neurodegenerativa infantil mortal actualmente sin tratamiento eficaz. Las mutaciones de codones de parada prematuros en el gen CLN2, que codifica la tripeptidil-peptidasa 1 (TPP-I) lisosómica, están asociadas con enfermedad en aproximadamente la mitad de los niños diagnosticados con LINCL. Se ha examinado la capacidad del aminoglucósido gentamicina de restablecer la actividad de TPP-I en líneas celulares de LINCL. En una línea celular derivada de paciente que era heterocigótica mixta para una mutación finalizadora observada normalmente (Arg208Stop) y una mutación finalizadora infrecuente diferentes, aproximadamente un 7 % de los niveles normales de TPP-I se restablecían al máximo con tratamiento con gentamicina. Estos resultados sugieren que la supresión farmacológica de mutaciones finalizadoras mediante aminoglucósidos o compuestos farmacéuticos funcionalmente similares puede tener potencial terapéutico en LINCL (Sleat et al., Eur. J. Ped. Neurol. 5:Supl. A 57-62 (2001)).

En células cultivadas que tienen codones de parada prematuros en el gen del regulador de conductancia transmembranaria en fibrosis quística (CFTR), el tratamiento con aminoglucósidos dio lugar a la producción de CFTR de longitud completa (Bedwell et al., Nat. Med. 3:1280-1284 (1997); Howard et al. Nat. Med. 2: 467-469 (1996)). En un modelo de ratón para distrofia muscular de Duchenne, se observó que sulfato de gentamicina suprimía la terminación traduccional en un codón de parada prematuro, produciendo distrofina de longitud completa (Barton-Davis et al., J. Clin. Invest. 104:375-381 (1999)). Un pequeño aumento en la cantidad de distrofina de longitud completa proporcionó protección contra los daños inducidos por contracción en los ratones mdx. El aminoácido insertado en el sitio del codón finalizador no se determinó en estos estudios.

Serían útiles compuestos terapéuticos y profilácticos micromoleculares que supriman la terminación prematura de la traducción mediando la lectura incorrecta del codón finalizador para el tratamiento de varias enfermedades. El descubrimiento de fármacos micromoleculares, particularmente fármacos biodisponibles por vía oral, puede dar lugar a la introducción de un amplio espectro de compuestos terapéuticos selectivos que pueden usarse contra enfermedades provocadas por mutaciones finalizadoras.

3. Sumario de la invención

La invención se define en las reivindicaciones adjuntas. Las divulgaciones no forman parte de la invención y se proporcionan simplemente como información pertinente adicional. En este documento se proporciona un compuesto para su uso en un método para tratar un trastorno de almacenamiento lisosómico asociado con un codón de parada prematuro en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto que tiene la fórmula I:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

Z es arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, cicloalquilo sustituido o sin sustituir, alquilo sustituido o sin sustituir, alquenilo sustituido o sin sustituir, heterociclo sustituido o sin sustituir, arilalquilo sustituido o sin sustituir;

R¹es hidrógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, cicloalquilo sustituido o sin sustituir, heterocicloalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, -(CHzCHzO)ⁿR⁶o cualquier grupo biohidrolizable;

R², R³, R⁴, R⁵y R⁶son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, alquenilo sustituido o sin sustituir, alquinilo sustituido o sin sustituir; cicloalquilo sustituido o sin sustituir, heterocicloalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, alcoxi, ariloxi, heteroariloxi, halógeno, CF³, OCF³, OCHF², CN, COOH, COOR⁷, SO²R⁷, NO², NH²o N(R⁷)²;

cada aparición de R⁷es independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, alquenilo sustituido o sin sustituir, alquinilo sustituido o sin sustituir; cicloalquilo sustituido o sin sustituir, heterocicloalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, alcoxi, ariloxi, heteroariloxi, halógeno o CF³; y

n es un número entero de 1 a 7;

en la que el término sustituido define una sustitución con uno a cuatro o más sustituyentes, que comprenden halo, trifluorometilo, trifluorometoxi, hidroxi, alcoxi, cicloalquiloxi, heterociclooxi, oxo, alcanoílo, alquilcarbonilo, cicloalquilo, arilo, ariloxi, aralquilo, alcanoiloxi, ciano, azido, amino, alquilamino, arilamino, aralquilamino, cicloalquilamino, heterocicloamino, amino mono- y disustituido en que los dos sustituyentes en el grupo amino se seleccionan de alquilo, arilo, aralquilo, alcanoilamino, aroilamino, aralcanoilamino, alcanoilamino sustituido, arilamino sustituido, aralcanoilamino sustituido, tiol, alquiltio, ariltio, aralquiltio, cicloalquiltio, heterociclotio, alquiltiono, ariltiono, aralquiltiono, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquilsulfonilo, sulfonamido (por ejemplo, SO²NH²), sulfonamido sustituido, nitro, carboxi, carbamilo (por ejemplo, CONH²), carbamilo sustituido (por ejemplo, CONH alquilo, CONH arilo, CONH aralquilo o casos donde hay dos sustituyentes en el nitrógeno, seleccionados de alquilo, arilo o aralquilo), alcoxicarbonilo, arilo, arilo sustituido, guanidino y heterociclo, tal como indolilo, imidazolilo, furilo, tienilo, tiazolilo, pirrolidilo, piridilo, pirimidilo.

En una realización, el compuesto tiene la fórmula II:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

Z es arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, cicloalquilo sustituido o sin sustituir, alquilo sustituido o sin sustituir, alquenilo sustituido o sin sustituir, heterociclo sustituido o sin sustituir, arilalquilo sustituido o sin sustituir; y R es hidrógeno o halógeno.

En otra realización, el compuesto tiene la fórmula I:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

Z es arilo sustituido o sin sustituir, cicloalquilo sustituido o sin sustituir, alquilo sustituido o sin sustituir, alquenilo sustituido o sin sustituir, arilalquilo sustituido o sin sustituir;

R¹es hidrógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, cicloalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir o -(CH²CH²O)ⁿR⁶;

R², R³, R⁴, R⁵y R⁶son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, alquenilo sustituido o sin sustituir, alquinilo sustituido o sin sustituir; cicloalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, alcoxi, ariloxi, halógeno, CF³, OCF³, OCHF², CN, COOH, COOR⁷, SO²R⁷, NO², NH²o N(R⁷)²;

cada aparición de R⁷es independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, alquenilo sustituido o sin sustituir, alquinilo sustituido o sin sustituir; cicloalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, alcoxi, ariloxi, halógeno o CF³; y

n es un número entero de 1 a 7.

En otra realización, el compuesto tiene la fórmula I:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

Z es arilo sustituido, cicloalquilo sustituido o sin sustituir, alquilo sustituido, alquenilo sustituido o sin sustituir, arilalquilo sustituido o sin sustituir;

R¹es hidrógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, cicloalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, -(CHzCHzO)ⁿR⁶o cualquier grupo biohidrolizable;

n es un número entero de 1 a 7.

En otra realización, el compuesto tiene la fórmula:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

X es fluoro, cloro, metoxi o trifluorometilo;

n es un número entero de 1 a 7.

En otra realización, el compuesto es ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otra realización, el compuesto es ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico.

En otra realización, el paciente se ha sometido a un proceso de cribado para determinar la presencia de un codón de parada prematuro.

En otra realización, el paciente es un ser humano.

En otra realización, el compuesto se administra por vía parenteral, transdérmica, mucosa, nasal, bucal, sublingual u oral.

En otra realización, el compuesto se administra por vía oral en una forma de comprimido, líquido o cápsula.

En otra realización, la cantidad terapéuticamente eficaz es de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 2000 mg al día.

En otra realización, el trastorno de almacenamiento lisosómico asociado con un codón de parada prematuro es mucopolisacaridosis de tipo VII, mucopolisacaridosis de tipo III A o mucopolisacaridosis de tipo VI.

En otra realización, en este documento se proporciona una composición farmacéutica para su uso en un método para tratar un trastorno de almacenamiento lisosómico asociado con un codón de parada prematuro en un paciente, que comprende los compuestos de la invención y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

Los compuestos para el uso de la invención se basan, en parte, en la modulación de la terminación prematura de la traducción y/o el deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora que desempeñan una función en una diversidad de enfermedades. Dichas enfermedades pueden producirse debido a la cantidad disminuida de proteína activa producida como resultado de terminación prematura de la traducción. Los compuestos de la invención permiten que la traducción de ARNm continúe pasada la mutación finalizadora, provocando la producción de proteína de longitud completa. La divulgación abarca compuestos, composiciones y métodos para tratar y prevenir una diversidad de enfermedades, en particular enfermedades genéticas.

En algunos ejemplos, los compuestos de fórmulas I y II son sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, clatratos, profármacos, polimorfos, ésteres biohidrolizables, racematos o estereoisómeros purificados incluyendo, aunque sin limitación, enantiómeros ópticamente puros y diastereoisómeros.

En este documento también se divulgan métodos de tratamiento o prevención de una enfermedad que mejora mediante la modulación de la terminación prematura de la traducción o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora, o de mejora de uno o más síntomas asociados con la misma, que comprenden administrar a un paciente que lo necesita una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de un compuesto de fórmula I o II y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, clatratos, profármacos o polimorfos del mismo. En algunos ejemplos, la enfermedad es una enfermedad genética; una enfermedad del SNC; una enfermedad inflamatoria; una enfermedad neurodegenerativa; una enfermedad autoinmunitaria; una enfermedad proliferativa, en particular cáncer; una enfermedad cardiovascular; o una enfermedad pulmonar; más preferiblemente la enfermedad incluye, aunque sin limitación, amiloidosis, LINCL, hemofilia, enfermedad de Alzheimer, ateroesclerosis, gigantismo, enanismo, hipotiroidismo, hipertiroidismo, fibrosis quística, envejecimiento, obesidad, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Niemann Pick, fibrosis quística, hipercolesterolemia familiar, retinitis pigmentosa, atrofia muscular de Duchenne o síndrome de Marfan.

En este documento también se divulgan métodos de tratamiento o prevención, o de mejora de uno o más síntomas asociados con una enfermedad genética o manifestaciones de una enfermedad genética, que comprenden administrar a un paciente que lo necesita una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de un compuesto de fórmula I o II y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, clatratos, profármacos o polimorfos del mismo. En algunos ejemplos, la enfermedad es una enfermedad del SNC; una enfermedad inflamatoria; una enfermedad neurodegenerativa; una enfermedad cardiovascular; una enfermedad autoinmunitaria; cáncer; más preferiblemente, la enfermedad genética incluye, aunque sin limitación, amiloidosis, LINCL, hemofilia, enfermedad de Alzheimer, ateroesclerosis, gigantismo, enanismo, hipotiroidismo, hipertiroidismo, fibrosis quística, envejecimiento, obesidad, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Niemann Pick, fibrosis quística, hipercolesterolemia familiar, retinitis pigmentosa, distrofia muscular de Duchenne o síndrome de Marfan.

En este documento también se divulgan métodos de tratamiento, prevención o mejora de uno o más síntomas asociados con el cáncer o manifestaciones del cáncer, que comprenden administrar a un paciente que lo necesita una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de un compuesto de fórmula I o II y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, clatratos, profármacos o polimorfos del mismo.

En una realización preferida de la invención, el paciente es un mamífero, más preferiblemente un ser humano susceptible de o en riesgo de adquirir una enfermedad genética. En una realización alternativa, el paciente se ha sometido a un proceso de cribado para determinar la presencia de una mutación finalizadora, que comprende las etapas de cribar a un sujeto o células extraídas del mismo mediante un ensayo de cribado aceptable de mutaciones finalizadoras. En una realización relacionada, el tratamiento es personalizado, puesto que el paciente se criba por un ensayo de cribado de mutaciones finalizadoras y se trata mediante la administración de uno o más compuestos de la invención; particularmente, el paciente puede tratarse con un compuesto particularmente adecuado para las mutaciones en cuestión, por ejemplo, dependiendo del tipo de enfermedad, el tipo de célula y el gen en cuestión. En una realización adicional, el paciente es un bebé o niño. En otra realización más, la invención abarca los compuestos para el uso de la invención para el tratamiento de mujeres embarazadas o el feto directamente.

En una realización preferida más de la invención, el compuesto se administra por vía parenteral, transdérmica, mucosa, nasal, bucal, sublingual u oral; más preferiblemente el compuesto se administra por vía oral, mucho más preferiblemente el compuesto se administra por vía oral en forma de un comprimido, cápsula o líquido.

En este documento también se divulgan métodos para modular la terminación prematura de la traducción y/o el deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora. En este documento también se divulga un método para suprimir la terminación prematura de la traducción y/o el deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora en una célula, que comprende poner en contacto una célula que presenta terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora con una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I o II. En este documento también se divulga un método para inducir supresión de mutaciones finalizadoras en una célula, que comprende poner en contacto una célula que presenta una mutación finalizadora con una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I o II. Un codón finalizador puede estar presente en el ADN o ARN de cualquier tipo de célula y puede surgir de forma natural o resultar de mutagénesis. Por consiguiente, las células abarcadas por los presentes métodos incluyen células animales, células de mamífero, células bacterianas, células vegetales y células infectadas por virus. En una realización, el codón finalizador estaba presente en el ADN progenitor. En otra realización, el codón finalizador resultó de mutagénesis.

Sin limitarse a teoría particular alguna, la capacidad de los compuestos de fórmula I o II de promover la ultralectura de codones de parada los hace útiles en el tratamiento o prevención de cualquier enfermedad que esté provocada en su totalidad o en parte por una mutación finalizadora. Dichas enfermedades pueden producirse debido a la cantidad disminuida de proteína activa producida como resultado de terminación prematura de la traducción. Sin limitarse a teoría particular alguna, los compuestos de fórmula I o II permiten que la traducción de ARNm continúe pasada la mutación finalizadora provocando la producción de proteína de longitud completa. Un aspecto poderoso es que la actividad terapéutica de los compuestos de fórmula I o II no es necesariamente específica de enfermedad, en su lugar son eficaces en el tratamiento o prevención de cualquier enfermedad asociada con una mutación finalizadora. Además, los usos de la invención pueden ser específicos de paciente. Es decir, puede cribarse a un paciente para determinar si esta enfermedad está asociada con una mutación finalizadora. Si lo está, puede tratarse con los compuestos para el uso de la invención.

Los compuestos de fórmula I o II son útiles para tratar o prevenir enfermedades genéticas. Enfermedades genéticas que pueden tratarse o prevenirse mediante compuestos de fórmula I o II incluyen cáncer, enfermedad autoinmunitaria, enfermedad sanguínea, enfermedad de colágeno, diabetes, enfermedades inflamatorias o una enfermedad del sistema nervioso central.

3.1 Definiciones

Como se usa en este documento, "terminación prematura de la traducción" se refiere al resultado de una mutación que cambia un codón correspondiente a un aminoácido en un codón de parada.

Como se usa en este documento, "deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora" se refiere a cualquier mecanismo que medie el deterioro de los ARNm que contienen un codón de terminación prematura de la traducción.

Como se usa en este documento, un "codón de terminación prematuro" o "codón de parada prematuro" se refiere a la aparición de un codón de parada donde debería haber un codón correspondiente a un aminoácido.

Como se usa en este documento, una "mutación finalizadora" es una mutación puntual que cambia un codón correspondiente a un aminoácido en un codón de parada.

Como se usa en este documento, "supresión de mutación finalizadora" se refiere a la inhibición o supresión de la terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora.

Como se usa en este documento, "modulación de la terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora" se refiere a la regulación de la expresión génica alterando el nivel de supresión de mutación finalizadora. Por ejemplo, si se desea aumentar la producción de una proteína defectuosa codificada por un gen con un codón de parada prematuro, es decir, permitir la ultralectura del codón de parada prematuro del gen patológico de modo que pueda producirse la traducción del gen, entonces la modulación de la terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora implica regulación por aumento de la supresión de mutación finalizadora. A la inversa, si se desea promover la degradación de un ARNm con un codón de parada prematuro, entonces la modulación de terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora implica regulación por disminución de la supresión de mutación finalizadora.

Como se usa en este documento, el término "paciente" significa un animal (por ejemplo, vaca, caballo, oveja, cerdo, pollo, pavo, codorniz, gato, perro, ratón, rata, conejo, cobaya, etc.), preferiblemente un mamífero tal como uno que no sea primate y un primate (por ejemplo, mono y ser humano), mucho más preferiblemente un ser humano. En determinadas realizaciones, el paciente es un bebé, niño, adolescente o adulto. En una realización, se ha determinado a través de cribado previo que el paciente posee una mutación finalizadora. En otra realización, se ha determinado a través de cribado previo la mutación Analizadora que tiene el paciente (es decir, UAA, UGA o UAG). En otra realización, el paciente está infectado con células bacterianas (por ejemplo, Pseudomonas aeruginosa). En otra realización, las células del paciente están infectadas con virus.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "sustituido" significa un grupo sustituido con uno a cuatro o más sustituyentes, tales como halo, trifluorometilo, trifluorometoxi, hidroxi, alcoxi, cicloalquiloxi, heterociclooxi, oxo, alcanoílo, alquilcarbonilo, cicloalquilo, arilo, ariloxi, aralquilo, alcanoiloxi, ciano, azido, amino, alquilamino, arilamino, aralquilamino, cicloalquilamino, heterocicloamino, amino mono- y disustituido en que los dos sustituyentes en el grupo amino se seleccionan de alquilo, arilo, aralquilo, alcanoilamino, aroilamino, aralcanoilamino, alcanoilamino sustituido, arilamino sustituido, aralcanoilamino sustituido, tiol, alquiltio, ariltio, aralquiltio, cicloalquiltio, heterociclotio, alquiltiono, ariltiono, aralquiltiono, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquilsulfonilo, sulfonamido (por ejemplo, SO²NH²), sulfonamido sustituido, nitro, carboxi, carbamilo (por ejemplo, CONH²), carbamilo sustituido (por ejemplo, CONH alquilo, CONH arilo, CONH aralquilo o casos donde hay dos sustituyentes en el nitrógeno, seleccionados de alquilo, arilo o aralquilo), alcoxicarbonilo, arilo, arilo sustituido, guanidino y heterociclo, tal como indolilo, imidazolilo, furilo, tienilo, tiazolilo, pirrolidilo, piridilo, pirimidilo y similares. En el que, como se indica anteriormente, los propios sustituyentes están sustituidos adicionalmente, y dichos sustituyentes adicionales se seleccionan del grupo que consiste en halógeno, alquilo, alcoxi, arilo y aralquilo. En un ejemplo particular, el término sustituido no significa ciano.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "alquilo" significa un hidrocarburo ^{acíclico saturado de cadena lineal o ramificado que tiene de}1 ^a20 ^{átomos de carbono, preferiblemente}1-10 ^átomosde carbono y mucho más preferiblemente 1-4 átomos de carbono. Alquilos saturados de cadena lineal representativos incluyen -metilo, -etilo, -n-propilo, -n-butilo, -n-pentilo, -n-hexilo, -n-heptilo, -n-octilo, -n-nonilo y -n-decilo; mientras que alquilos saturados ramificados incluyen -isopropilo, -sec-butilo, -isobutilo, -ferc-butilo, -isopentilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, 2-metilpentilo, 3-metilpentilo, 4-metilpentilo, 2-metilhexilo, 3-metilhexilo, 4-metilhexilo, 5-metilhexilo, 2,3-dimetilbutilo, 2,3-dimetilpentilo, 2,4-dimetilpentilo, 2,3-dimetilhexilo, 2,4-dimetilhexilo, 2,5-dimetilhexilo, 2,2-dimetilpentilo, 2,2-dimetilhexilo, 3,3-dimtheylpentilo, 3,3-dimetilhexilo, 4,4-dimetilhexilo, 2-etilpentilo, 3-etilpentilo, 2-etilhexilo, 3-etilhexilo, 4-etilhexilo, 2-metil-2-etilpentilo, 2-metil-3-etilpentilo, 2-metil-4-etilpentilo, 2-metil-2-etilhexilo, 2-metil-3-etilhexilo, 2-metil-4-etilhexilo, 2,2-dietilpentilo, 3,3-dietilhexilo, 2,2-dietilhexilo, 3,3-dietilhexilo y similares. Un grupo alquilo puede estar sin sustituir o sustituido. Grupos alquilo insaturados incluyen grupos alquenilo y grupos alquinilo, que se analizan a continuación.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, la expresión "grupo alquenilo" significa un ^{hidrocarburo acíclico de cadena lineal o ramificado que tiene de}2 ^a20 ^{átomos de carbono, más preferiblemente}2-10 ^{átomos de carbono, mucho más preferiblemente}2-6 ^{átomos de carbono y que incluye al menos un doble enlace}carbono-carbono. Alquenilos (C²-C¹⁰) de cadena lineal o ramificados representativos incluyen -vinilo, -alilo, -1-butenilo, -2-butenilo, -isobutilenilo, -1-pentenilo, -2-pentenilo, -3-metil-1-butenilo, -2-metil-2-butenilo, -2,3-dimetil-2-butenilo, -1-hexenilo, -2-hexenilo, -3-hexenilo, -1-heptenilo, -2-heptenilo, -3-heptenilo, -1-octenilo, -2-octenilo, -3-octenilo, -1-nonenilo, -2-nonenilo, -3-nonenilo, -1-decenilo, -2-decenilo, -3-decenilo y similares. El doble enlace de un grupo alquenilo puede estar sin conjugar o conjugado con otro grupo insaturado. Un grupo alquenilo puede estar sin sustituir 0 sustituido.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, la expresión "grupo alquinilo" significa un ^{hidrocarburo acíclico de cadena lineal o ramificado que tiene de}2 ^a20 ^{átomos de carbono, más preferiblemente}2-10 ^{átomos de carbono, mucho más preferiblemente}2-6 ^{átomos de carbono y que incluye al menos un triple enlace}carbono-carbono. Alquinilos (C²-C¹⁰) de cadena lineal o ramificados representativos incluyen -acetilenilo, -propinilo, -1 -butinilo, -2-butinilo, -1-pentinilo, -2-pentinilo, -3-metil-1 -butinilo, -4-pentinilo, -1-hexinilo, -2-hexinilo, -5-hexinilo, -1-^{heptinilo, -2-heptinilo, -}6^{-heptinilo, -1-octinilo, -2-octinilo, -7-octinilo, -1-noninilo, -2-noninilo, -}8^{-noninilo, -1-decinilo, -2-}decinilo, -9-decinilo y similares. El triple enlace de un grupo alquinilo puede estar sin conjugar o conjugado con otro grupo insaturado. Un grupo alquinilo puede estar sin sustituir o sustituido.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "halógeno" o "halo" significa flúor, cloro, bromo o yodo.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, la expresión "alquil sulfonilo" significa -alquil-SO³H o -SO³-alquilo, en el que alquilo se define como anteriormente, incluyendo -SO²-CH³, -SO²-CH²CH³, - SO²-(CH²)²CH³, -SO²-(CH²)³CH³, -SO²-(CH²)⁴CH³, -SO²-(CH²)^sC H y similares.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "carboxilo" y "carboxi" significa -COOH.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "alcoxi" significa -O-(alquilo), en el que alquilo se define anteriormente, incluyendo -OCH³, -OCH²CH³, -O(CH²)²CH³, -O(CH²)³CH³, -O(CH²)⁴CH³, -O(CH²)⁵CH³y similares.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "alcoxicarbonilo" significa -C(=O)O-(alquilo), en el que alquilo se define anteriormente, incluyendo -C(=O)O-CH³, -C(=O)O-CH²CH³, -C(=O)O-(CH²)²CH³, -C(=O)O-(CH²)³CH³, -C(=O)O-(CH²)⁴CH³, -C(=O)O-(CH²)⁵CH³y similares. En un ejemplo, los ésteres son biohidrolizables (es decir, el éster se hidroliza en un ácido carboxílico in vitro o in vivo).

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "alcoxialquilo" significa -(alquil)-O-(alquilo), en el que cada "alquilo" es independientemente un grupo alquilo como se define anteriormente, incluyendo -CH²OCH³, -CH²OCH²CH³, -(CH²)²OCH²CH³, -(CH²)²O(CH²)²CH³y similares.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "arilo" significa un anillo aromático carbocíclico que contiene de 5 a 14 átomos en el anillo. Los átomos en el anillo de un grupo arilo carbocíclico son todos átomos de carbono. Las estructuras de anillo arilo incluyen compuestos que tienen una o más estructuras de anillo tales como compuestos mono-, bi- o tricíclicos, así como restos carbocíclicos benzocondensados tales como 5,6,7,8-tetrahidronaftilo y similares. Preferiblemente, el grupo arilo es un anillo monocíclico o anillo bicíclico. Grupos arilo representativos incluyen fenilo, tolilo, antracenilo, fluorenilo, indenilo, azulenilo, fenantrenilo y naftilo. Un grupo arilo carbocíclico puede estar sin sustituir o sustituido.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "heteroarilo" significa un anillo aromático carbocíclico que contiene de 5 a 14 átomos en el anillo y los átomos en el anillo contienen al menos un heteroátomo, preferiblemente de 1 a 3 heteroátomos, independientemente seleccionados de nitrógeno, oxígeno o azufre. Las estructuras de anillo heteroarilo incluyen compuestos que tienen una o más estructuras de anillo tales como compuestos mono-, bi- o tricíclicos, así como restos heterocíclicos condensados. Heteroarilos representativos son triazolilo, tetrazolilo, oxadiazolilo, piridilo, furilo, benzofuranilo, tiofenilo, benzotiofenilo, benzoisoxazolilo, benzoisotiazolilo, quinolinilo, pirrolilo, indolilo, oxazolilo, benzoxazolilo, imidazolilo, bencimidazolilo, tiazolilo, benzotiazolilo, isoxazolilo, pirazolilo, isotiazolilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, cinolinilo, ftalazinilo, quinazolinilo, benzoquinazolinilo, acridinilo, pirimidilo y oxazolilo. Un grupo puede estar sin sustituir o sustituido.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "ariloxi" significa grupo -O-arilo, en el que arilo es como se define anteriormente. Un grupo ariloxi puede estar sin sustituir o sustituido.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "arilalquilo" significa -(alquil)-(arilo), en el que alquilo y arilo se definen anteriormente, incluyendo, aunque sin limitación, -(CH²)fenilo, -(CH²)²fenilo, -(CH²)³fenilo, -CH(fenilo)², -CH(fenilo)³, -(CH²)tolilo, -(CH²)antracenilo, -(CH²)fluorenilo, -(CH²)indenilo, -(CH²)azulenilo, -(CH²)naftilo y similares.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "heteroarilalquilo" significa -(alquil)-(heteroarilo), en el que alquilo y heteroarilo se definen anteriormente, incluyendo, aunque sin limitación, -(CH²)pi ridilo, -(CH²)²piridilo, -(CH²)³piridilo, -CH(piridilo)², -C(piridilo)³, -(CH²)triazolilo, -(CH²)tetrazolilo, -(CH²)oxadiazolilo, -(CH²)furilo, -(CH²)benzofuranilo, -(CH²)tiofenilo, -(CH²)benzotiofenilo y similares.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "arilalquiloxi" significa -O-(alquil)-(arilo), en el que alquilo y arilo se definen anteriormente, incluyendo, aunque sin limitación, -O-(CH²)²fenilo, -O-(CH²)³fenilo, -O-CH(fenilo)², -O-CH(fenilo)³, -O-(CH²)tolilo, -O-(CH²)antracenilo, -O-(CH²)fluorenilo, -O-(CH²)indenilo, -O-(CH²)azulenilo, -O-(CH²)naftilo y similares.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "cicloalquilo" significa un anillo saturado monocíclico o policíclico que comprende átomos de carbono e hidrógeno y que no tiene enlaces múltiples carbono-carbono. Un grupo cicloalquilo puede estar sin sustituir o sustituido. Ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen, aunque sin limitación, grupos cicloalquilo (C³-C⁷), incluyendo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo, y terpenos cíclicos y bicíclicos saturados. Un grupo cicloalquilo puede estar sin sustituir o sustituido. Preferiblemente, el grupo cicloalquilo es un anillo monocíclico o anillo bicíclico.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "heterociclilo" significa un anillo monocíclico o policíclico que comprende átomos de carbono e hidrógeno, opcionalmente que tiene de 1 a 4 enlaces múltiples, y los átomos en el anillo contiene al menos un heteroátomo, preferiblemente de 1 a 3 heteroátomos, independientemente seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre. Las estructuras de anillo heterociclilo incluyen compuestos que tienen una o más estructuras de anillo tales como compuestos mono-, bi- o tricíclicos. Preferiblemente, el grupo heterociclilo es un anillo monocíclico o anillo bicíclico. Heterociclos representativos incluyen, aunque sin limitación, morfolinilo, pirrolidinonilo, pirrolidinilo, piperidinilo, hidantoinilo, valerolactamaílo, oxiranilo, oxetanilo, tetrahidrofuranoílo, tetrahidropi ranilo, tetrahidropiridinilo, tetrahidroprimidinilo, tetrahidrotiofenilo, tetrahidrotiopiranilo y similares. Un anillo heterociclilo puede estar sin sustituir o sustituido.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "cicloalquiloxi" significa -O(cicloalquilo), en el que cicloalquilo se define anteriormente.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "cicloalquilalquiloxi" significa -O-(alquil)-(cidoalquilo), en el que cicloalquilo y alquilo se definen anteriormente, incluyendo, aunque sin limitación, -O-ciclopropilo, -O-ciclobutilo, -O-ciclopentilo, -O-ciclohexilo, -O-cicloheptilo y similares.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "aminoalcoxi" significa -O-(alquil)-NH², en el que alquilo se define anteriormente, incluyendo, aunque sin limitación -O-CH²-NH², -O-(CH²)²-NH², -O-(CH²)³-NH², -O-(CH²)⁴-NH², -O-(CH²)⁵-NH²y similares.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "alquilamino" significa -NH(alquil) o -N(alquil)(alquilo), en el que alquilo se define anteriormente, incluyendo, aunque sin limitación, NHCH³, -NHCH²CH³, -NH(CH²)²CH³, -NH(CH²)³CH³, -NH(CH²)⁴CH³, -NH(CH²)⁵CH³, -N(CH³)², -N(CH²CH³)², -N((CH²)²CH³)², -N(CH³)(CH²CH³) y similares.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "arilamino" significa -NH(arilo), en el que arilo se define anteriormente, incluyendo, aunque sin limitación, -NH(fenilo), -NH(tolilo), -NH(antracenilo), -NH(fluorenilo), -NH(indenilo), -NH(azulenilo), -NH(piridinilo), -NH(naftilo) y similares.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "arilalquilamino" significa -NH-(alquil)-(arilo), en el que alquilo y arilo se definen anteriormente, incluyendo -NH-CH²-(fenilo), -NH-CH²-(tolilo), -NH-CH²-(antracenilo), -NH-CH²-(fluorenilo), -NH-CH²-(indenilo), -NH-CH²-(azulenilo), -NH-CH²-(piridinilo), -NH-CH²-(naftilo), -NH-(CH²)²-(fenilo) y similares.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "cicloalquilamino" significa -NH-(cicloalquilo), en el que cicloalquilo se define anteriormente, incluyendo -NH-ciclopropilo, -NH-ciclobutilo, -NH-ciclopentilo, -NH-ciclohexilo, -NH-cicloheptilo y similares.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "aminoalquilo" significa -(alquil)-NH², en el que alquilo se define anteriormente, incluyendo -CH²-NH², -(CH²)²-NH², -(CH²)³-NH², -(CH²)⁴-NH², -(CH²)⁵-NH²y similares.

Como se usa en este documento, salvo que se indique de otro modo, el término "alquilaminoalquilo" significa -(alquil)-NH(alquil) o -(alquil)-N(alquil)(alquilo), en el que cada "alquilo" es independientemente un grupo alquilo definido anteriormente, incluyendo -CH²-NH-CH³, -CH²-NHCH²CH³,

-CH²-NH(CH²)²CH³, -CH²-NH(CH²)³CH³, -CH²-NH(CH²)⁴CH³, -CH²-NH(CH²)⁵CH³, -(CH²)²-NH-CH³, -CH²-N(CH³)², -CH²-N(CH²CH³)², -CH²-N((CH²)²CH³)², - CH²-N(CH³)(CH²CH³), -(CH²)²-N(CH³)²y similares.

Como se usa en este documento, una "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad del compuesto de la invención u otro ingrediente activo suficiente para proporcionar un beneficio terapéutico en el tratamiento o regulación de la enfermedad o para retardar o minimizar los síntomas asociados con la enfermedad. Además, una cantidad terapéuticamente eficaz con respecto a un compuesto de la invención significa esa cantidad de agente terapéutico en solitario, o en combinación con otros tratamientos, que proporciona un beneficio terapéutico en el tratamiento o regulación de la enfermedad. Usada con respecto a una cantidad de un compuesto de la invención, la expresión puede abarcar una cantidad que mejora el tratamiento global, reduce o evita los síntomas o causas de la enfermedad, o potencia la eficacia terapéutica de o sinergiza con otro agente terapéutico.

Como se usa en este documento, una "cantidad profilácticamente eficaz" se refiere a esa cantidad de un compuesto de la invención u otro ingrediente activo suficiente para provocar la prevención de reaparición o propagación de la enfermedad. Una cantidad profilácticamente eficaz puede referirse a la cantidad suficiente para prevenir la enfermedad inicial o la reaparición o propagación de la enfermedad o la aparición de la enfermedad en un paciente, incluyendo, aunque sin limitación, los predispuestos a la enfermedad. Una cantidad profilácticamente eficaz también puede referirse a la cantidad que proporciona un beneficio profiláctico en la prevención de la enfermedad. Además, una cantidad profilácticamente eficaz con respecto a un compuesto de la invención significa esa cantidad en solitario, o en combinación con otros agentes, que proporciona un beneficio profiláctico en la prevención de la enfermedad. Usada con respecto a una cantidad de un compuesto de la invención, la expresión puede abarcar una cantidad que mejora la profilaxis global o potencia la eficacia profiláctica de o sinergiza con otro agente profiláctico.

Como se usa en este documento, un "protocolo terapéutico" se refiere a una pauta de cronología y dosificación de uno o más agentes terapéuticos.

Como se usa en este documento, un "protocolo profiláctico" se refiere a una pauta de cronología y dosificación de uno o más agentes profilácticos.

Como se usa en este documento, un "protocolo" incluye pautas de dosificación y regímenes de dosificación.

Como se usa en este documento, "en combinación" se refiere al uso de más de un agente profiláctico y/o terapéutico.

Como se usa en este documento, las expresiones "regular", "que regula" y "regulación" se refieren a los efectos beneficiosos que un sujeto obtiene de un agente profiláctico o terapéutico, que no provocan la cura de la enfermedad. En determinadas realizaciones, a un sujeto se le administra uno o más agentes profilácticos o terapéuticos para "regular" una enfermedad para prevenir la progresión o empeoramiento de la enfermedad.

Como se usa en este documento, las expresiones "prevenir", "que previene" y "prevención" se refieren a la prevención del inicio, reaparición o propagación de la enfermedad en un sujeto, como resultado de la administración de un agente profiláctico o terapéutico.

Como se usa en este documento, las expresiones "tratar", "que trata" y "tratamiento" se refieren a la erradicación o mejora de la enfermedad o síntomas asociados con la enfermedad. En determinadas realizaciones, dichas expresiones se refieren a minimizar la propagación o empeoramiento de la enfermedad como resultado de la administración de uno o más agentes profilácticos o terapéuticos a un sujeto con dicha enfermedad.

Como se usa en este documento, la expresión "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales preparadas a partir de ácidos o bases atóxicas farmacéuticamente aceptables, incluyendo ácidos y bases inorgánicas y ácidos y bases orgánicas. Sales de adición de base farmacéuticamente aceptables adecuadas para el compuesto de la presente invención incluyen, aunque sin limitación, sales metálicas preparadas a partir de aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y cinc o sales orgánicas preparadas a partir de lisina, N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilendiamina, meglumina (N-metilglucamina) y procaína. Ácidos atóxicos adecuados incluyen, aunque sin limitación, ácidos inorgánicos y orgánicos tales como ácido acético, algínico, antranílico, bencenosulfónico, benzoico, alcanforsulfónico, cítrico, etenosulfónico, fórmico, fumárico, furoico, galacturónico, glucónico, glucurónico, glutámico, glicólico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, maleico, málico, mandélico, metanosulfónico, múcico, nítrico, pamoico, pantoténico, fenilacético, fosfórico, propiónico, salicílico, esteárico, succínico, sulfanílico, sulfúrico, tartárico y ácido p-toluenosulfónico. Ácidos atóxicos específicos incluyen ácido clorhídrico, bromhídrico, fosfórico, sulfúrico y metanosulfónico. Ejemplos de sales específicas, por tanto, incluyen sales clorhidrato y mesilato. Otros ejemplos de sales son bien conocidos en la técnica, véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18.a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).

Como se usa en este documento y salvo que se indique de otro modo, el término "profármaco" significa un derivado de un compuesto que puede hidrolizar, oxidar o reaccionar de otro modo en condiciones biológicas (in vitro o in vivo) para proporcionar un compuesto activo, particularmente un compuesto de la invención. Ejemplos de profármacos incluyen, aunque sin limitación, derivados y metabolitos de un compuesto de la invención que incluyen restos biohidrolizables tales como amidas biohidrolizables, ésteres biohidrolizables, carbamatos biohidrolizables, carbonatos biohidrolizables, ureidas biohidrolizables y análogos de fosfato biohidrolizables. Preferiblemente, son profármacos de compuestos con grupos carboxilo funcionales los ésteres de alquilo inferior del ácido carboxílico. Los ésteres carboxilato se forman convenientemente esterificando cualquiera de los restos de ácido carboxílico presentes en la molécula. Los profármacos pueden prepararse típicamente usando métodos bien conocidos, tales como los descritos ^{por Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery}6^{.a ed. (Donald J. Abraham ed., 2001, Wiley) y Design and}Application of Prodrugs (H. Bundgaard ed., 1985, Harwood Academic Publishers Gmfh).

Como se usa en este documento y salvo que se indique de otro modo, las expresiones "amida biohidrolizable", "éster biohidrolizable", "carbamato biohidrolizable", "carbonato biohidrolizable", "ureida biohidrolizable", "fosfato biohidrolizable" significan una amida, éster, carbamato, carbonato, ureida o fosfato, respectivamente, de un compuesto ^que:1^{) no interfiere con la actividad biológica del compuesto, pero puede conferir sobre ese compuesto propiedades ventajosas in vivo, tales como captación, duración de acción o inicio de acción; o}2^{) es biológicamente inactivo, pero}se convierte in vivo en el compuesto biológicamente activo. Ejemplos de ésteres biohidrolizables incluyen, aunque sin limitación, ésteres de alquilo inferior, alcoxiaciloxi ésteres, ésteres de alquil acilamino alquilo y ésteres de colina. Ejemplos de amidas biohidrolizables incluyen, aunque sin limitación, amidas de alquilo inferior, amidas de aaminoácido, alcoxiacil amidas y alquilaminoalquilcarbonil amidas. Ejemplos de carbamatos biohidrolizables incluyen, aunque sin limitación, alquilaminas inferiores, etilendiaminas sustituidas, aminoácidos, hidroxialquilaminas, aminas heterocíclicas y heteroaromáticas, y poliéter aminas.

Como se usa en este documento y salvo que se indique de otro modo, la expresión "ópticamente puro" o "estereoisoméricamente puro" significa que el estereoisómero de un compuesto está sustancialmente libre de los otros estereoisómeros de ese compuesto. Por ejemplo, un compuesto estereoisoméricamente puro que tiene un centro quiral estará sustancialmente libre del enantiómero opuesto del compuesto. Un compuesto estereoisoméricamente puro que tiene dos centros quirales estará sustancialmente libre de otros diastereoisómeros del compuesto. Un compuesto estereoisoméricamente puro típico comprende más de aproximadamente un 80 % en peso de un ^{estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente un}20 ^{% en peso de otros estereoisómeros del}compuesto, más preferiblemente más de aproximadamente un 90 % en peso de un estereoisómero del compuesto y ^{menos de aproximadamente un}10 ^{% en peso de los otros estereoisómeros del compuesto, incluso más}preferiblemente más de aproximadamente un 95 % en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente un 5 % en peso de los otros estereoisómeros del compuesto, y mucho más preferiblemente más de aproximadamente un 97 % en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente un 3 % en peso de los otros estereoisómeros del compuesto.

Como se usa en este documento y salvo que se indique de otro modo, la expresión "enantioméricamente puro" significa una composición estereoisoméricamente pura de un compuesto que tiene un centro quiral.

Debe apreciarse que, si hay discrepancia entre una estructura representada y una denominación dada a esa estructura, a la estructura representada se le concederá más importancia. Además, si no se indica la estereoquímica de una estructura o una parte de una estructura con, por ejemplo, líneas negritas o discontinuas, la estructura o parte de la estructura se interpretará abarcando todos los estereoisómeros de la misma.

4. Descripción detallada de la invención

Cualquier referencia a los compuestos para el uso de la invención también abarca una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, que comprende los compuestos para el uso de la invención.

4.1 Compuestos para el uso de la invención

En este documento se proporciona un compuesto para su uso en un método para tratar un trastorno de almacenamiento lisosómico asociado con un codón de parada prematuro en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto que tiene la fórmula I:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

n es un número entero de 1 a 7;

En una realización, el compuesto tiene la fórmula II:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

En otra realización, el compuesto tiene la fórmula I:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

n es un número entero de 1 a 7.

En otra realización, el compuesto tiene la fórmula I:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

n es un número entero de 1 a 7.

En otra realización, el compuesto tiene la fórmula:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

X es fluoro, cloro, metoxi o trifluorometilo;

n es un número entero de 1 a 7.

En una realización alternativa, la invención abarca un compuesto de fórmula I, en la que, cuando R¹, R², R³, R⁴y R⁵son hidrógeno, Z no es metilo, 2-carboxietilo, 3-(4-piridinil)propilo o 2-(4-piperidinil)etilo.

^{En una realización preferida, la invención abarca un compuesto de fórmula I, en la que R}1 ^{es H.}

^{En una realización preferida, la invención abarca un compuesto de fórmula I, en la que R}1 ^{es cualquier grupo}biohidrolizable distinto de H.

En una realización, R es el halógeno flúor. En una realización preferida, R es hidrógeno.

En una realización preferida, la invención abarca un compuesto de fórmula I o II, en la que Z es p-tolilo; (4-clorometilfenilo); (2-cloro-piridin-3-ilo); (2-fluoro-fenilo); (3,4-difluoro-fenilo); (4-metoxi-fenilo); benzo[1,3]dioxol-ilo; (4-etil-fenilo); o-tolilo; (2-cloro-fenilo); (3-metil-tiofen-2-ilo); benzo[b]tiofen-2-ilo; (3-fluoro-fenilo); (4-terc-butil-fenilo); (2-metoxi-fenilo); (2-difluoro-fenilo); tiofen-2-ilo; (2,4-difluoro-fenilo); (3-cloro-fenilo); m-tolilo; (4-trifluorometil-fenilo); (4-fluoro-fenilo); (3-metoxi-fenilo); fenilo; (2,6-difluoro-fenilo); (2-dimetil-furan-3-ilo); (4-pirrol-1-il-fenilo); (3-dimetilamino-fenilo); bifenil-4-ilo; (4-dimetilamino-fenilo); benzo[1,2,5]oxadiazol-ilo; m-tolilo; (2-trifluorometil-fenilo); (6-cloro-piridin-3-ilo); (3-bistrifluorometil-fenilo); furan-2-ilo; (4-nitro-fenilo); (3,4-dimetoxi-fenilo); (3-trifluorometoxi-fenilo); naftalen-1-ilo; ciclohexilo; piridin-3-ilo; piridin-4-ilo; ciclopentilo; ciclopropilo; (4-pentiloxi-fenilo); (3,4-trimetoxi-fenilo); (4-isobutilfenilo); ciclobutilo; (1-acetil-piperidin-4-ilo); isoxazol-ilo; [2-(cloro-6-fluoro-fenil)-metil-isoxazol-4-ilo] o [2-(cloro-fenil)-metil-isoxazol-4-ilo]; más preferiblemente Z es (3-fluoro-fenilo), más preferiblemente Z es (4-fluoro-fenilo), incluso más preferiblemente Z es (2-fluoro-fenilo).

En una realización específica, la invención abarca un compuesto de fórmula I o II, en la que Z no es 4-ciano-fenilo.

Compuestos preferidos de la invención incluyen, aunque sin limitación,

ácido 3-(5-p-tolil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-[5-(4-clorometil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(2-cloro-piridin-3-il)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(3,4-difluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(4-metoxi-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-(5-benzo[1,3]dioxol-5-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-[5-(4-etil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-(5-o-tolil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-[5-(2-cloro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(3-metil-tiofen-2-il)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-(5-benzo[b]tiofen-2-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-[5-(3-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(4-terc-butil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(2-metoxi-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(2,5-difluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il-benzoico;

ácido 3-(5-tiofen-2-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-[5-(2,4-difluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(3-cloro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-(5-m-tolil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-[5-(4-trifluorometil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(4-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(3-metoxi-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-(5-fenil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-[5-(2,6-difluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(2,5-dimetil-furan-3-il)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(4-pirrol-1-il-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(3-dimetilamino-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-(5-bifenil-4-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-[5-(4-dimetilamino-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-(5-benzo[1,2,5]oxadiazol-5-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-(5-m-tolil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-[5-(2-trifluorometil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(6-cloro-piridin-3-il)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(3,5-bis-trifluorometil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-(5-furan-2-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-[5-(4-nitro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(3,4-dimetoxi-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(3-trifluorometoxi-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-(5-naftalen-1-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-(5-ciclohexil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-(5-piridin-3-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-(5-piridin-4-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-(5-ciclopentil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-(5-cidopropil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-[5-(4-pentiloxi-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(3,4,5-trimetoxi-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(4-isobutil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-(5-ciclobutil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-[5-(1-acetil-piperidin-4-il)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-(5-isoxazol-5-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-{5-[3-(2-cloro-6-fluoro-fenil)-5-metil-isoxazol-4-il]-[1,2,4]oxadiazol-3-il}-benzoico;

ácido 3-(5-isopropil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-(5-terc-butil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico; ácido 3-(5-butil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-(5-propenil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-[5-(4-cloro-bencil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(4-cloro-fenoximetil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-(5-bencil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-(5-metoximetil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-[5-(1-fenil-propil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(4-fluoro-bencil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(3-cloro-fenoximetil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(6-cloro-piridin-3-il)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-(5-ciclopentilmetil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico;

ácido 3-[5-(4-metoxi-bencil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(2,3-difluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(2-fluoro-5-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(2-metilsulfanil-piridin-3-il)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 4-fluoro-3-[5-(4-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 2-fluoro-5-[5-(4-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(4-cloro-2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(4-bromo-2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(3-fluoro-bifenil-4-il)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-{5-[3-(2-cloro-fenil)-5-metil-isoxazol-4-il]-[1,2,4]oxadiazol-3-il}-benzoico;

ácido 3-[5-(4-ciano-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

sal sódica del ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

éster metílico del ácido 3-[5-(4-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 5-[5-(4-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2-metoxi-benzoico;

ácido 3-[5-(4-bromo-2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(3-fluoro-bifenil-4-il)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(6-pi rrolidi n-1-il-piridin-3-il)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(6-morfolin-4-il-piridin-3-il)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(3,4,5,6-tetrahidro-2H-[1,2']bipiridinil-5'il)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(2-fluoro-6-hidroxi-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

éster metílico del ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

éster 2-metoxi-etílico del ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

éster 2-(2-metoxi-etoxi)-etílico del ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

éster 2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etílico del ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

éster 2-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etílico del ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico; éster 2-(2-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-etílico del ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico; éster 2-[2-(2-{2-[2-(2-hidroxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-etoxi]-etílico del ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(4-amino-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico;

ácido 3-[5-(4-azido-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico; y

ácido 3-[5-(4-benciloxi-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, clatratos y estereoisómeros de los mismos.

Los compuestos de fórmulas I y II y los enumerados anteriormente se mencionan en este documento como "compuestos de la invención". Se representan compuestos ejemplares de la invención en la tabla 1 a continuación.

Tabla I: Compuesto Denominación del compuesto Actividad ácido 3-[5-(3-doro-fenN)- *****

ácido 3-[5-4-isobutil-fenil-

ácido 3-[5-o-tolil-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-

ácido 3-[5-2-metoxi-fenil-

ácido 3-[5-(4-terc-butil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-(5-butil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico

ácido 3-(5-ciclopropil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico

ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-(5-tiofen-2-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico

ácido 3-(5-propenil-[1,2,4]oxadiazol-3-

il)-benzoico

ácido 3-[5-(3-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(4-etil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(3,4-difluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-(5-m-tolil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico

ácido 3-[5-(4-pirrol-1 -il-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-(5-bencil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-

benzoico

ácido 3-(5-metoximetil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico

ácido 3-[5-(2,5-difluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(1 -fenil-propil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(2-cloro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(3-trifluorometoxi-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(4-fluoro-bencil)-

[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-{5-[3-(2-doro-6-fluoro-fenil)-5-metil-isoxazol-4-il]-[1,2,4]oxadiazol-3-il}-benzoico

ácido 3-(5-ciclopentilmetil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico

ácido 3-[5-(2,4-difluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-(5-piridin-3-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico

ácido 3-(5-piridin-4-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico

ácido 3-(5-ciclobutil-[1,2,4]oxadiazol-3-

il)-benzoico

ácido 3-[5-(4-metoxi-bencil)- ** [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(3,4-dimetoxi-fenil)- * * * * [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(2-doro-piridin-3-il)- **** [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(1 -acetil-piperidin-4-il)- * [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-(5-benzo[b]tiofen-2-il- * * * * * ^[1^{,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico}

ácido 3-[5-(3-dimetilamino-fenil)- * * * *

[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(4-bromo-2-fluoro-fenil)-

ácido 3-[5-(3-fluoro-bifenil-4-N)- **

éster 2-metoxi-etílico del ácido 3-[5-(2-

Las mediciones de actividad de la tabla I se realizaron en un ensayo indicador de luciferasa basado en células (como se describe en la sección 4.2), que comprende la construcción indicadora de luciferasa que contiene un codón de terminación prematuro UGA que se transfectó de forma estable en células de riñón embrionario humano 293T. Se usó una micromolécula, ácido 3-[3-(4-isopropil-fenil)-2,5-dioxo-imidazolidin-1-il]-benzoico, conocido por permitir la ultralectura de codones de terminación prematuros, como patrón interno. Las mediciones de actividad se basan en la relación cualitativa entre la concentración mínima de compuesto requerida para producir una proteína dada en una célula (potencia) y la cantidad máxima de proteína producida por la célula (eficacia). Las actividades de potencia y eficacia se clasifican como extremadamente altas, muy altas o significativas. La combinación de estas actividades se usa para determinar la clasificación de actividad. Los compuestos que se encontró que tenían potencia extremadamente alta y eficacia extremadamente alta de síntesis proteínica se clasifican como "*****". Los compuestos que se encontró que tenían potencia extremadamente alta de síntesis proteínica y eficacia extremadamente alta se clasificaron como "****". Los compuestos que se encontró que tenían potencia muy alta de síntesis proteínica y eficacia muy alta se clasificaron como "****". Los compuestos que se encontró que tenían potencia muy alta y eficacia muy alta de síntesis proteínica se clasifican como "***". Los compuestos que se encontró que tenían potencia muy alta de síntesis proteínica y eficacia significativa se clasificaron como "**". Los compuestos que se encontró que tenían potencia significativa de síntesis proteínica y eficacia extremadamente alta se clasificaron como "**". Asimismo, los compuestos que se encontró que tenían potencia y eficacia significativa de síntesis proteínica se clasificaron como "*" (véase la tabla a continuación).

Los compuestos que tienen potencia o eficacia menos que significativa de síntesis proteínica o ambas en el ensayo de luciferasa basado en células se clasificaron sin asteriscos. No obstante, se cree que estos compuestos tienen utilidad en los métodos in vivo de la invención.

La presente divulgación abarca el uso in vitro o in vivo de un compuesto divulgado en este documento, y la incorporación de un compuesto divulgado en este documento en composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas unitarias individuales útiles en el tratamiento y prevención de una diversidad de enfermedades y trastornos. Enfermedades y trastornos específicos incluyen los que mejoran mediante la supresión de una mutación finalizadora en ARN mensajero.

Pueden usarse composiciones farmacéuticas que incluyen formas farmacéuticas de la invención, que comprenden los compuestos para el uso de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en los usos de la invención.

Sin limitarse a teoría alguna, se cree que los compuestos para el uso de la invención pueden modular la terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora. En este documento se divulga un método de modulación de la terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora, que comprende poner en contacto una célula que presenta una mutación finalizadora con una cantidad eficaz de un compuesto divulgado en este documento, o un profármaco, metabolito, polimorfo, sal, solvato, hidrato o clatrato farmacéuticamente aceptable del mismo. En un ejemplo, se divulga un método para inducir la supresión de mutaciones finalizadoras, que comprende poner en contacto una célula que presenta una mutación finalizadora con una cantidad eficaz de un compuesto divulgado en este documento, o un profármaco, metabolito, polimorfo, sal, solvato, hidrato, o clatrato farmacéuticamente aceptable del mismo.

4.2 Ensayos biológicos y estudios en animales

Los compuestos que modulan la terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora pueden identificarse por varias técnicas. Por ejemplo, se describen métodos para cribar compuestos que modulan la expresión postranscripcional de cualquier gen con un codón de parada de la traducción prematuro en la publicación de patente internacional n.° WO 01/44516 A2. En un ejemplo, un ARNm con un codón de terminación prematuro se traduce in vitro y se usa para cribar una colección de compuestos de ensayo. En otro ejemplo, el ARNm con un codón de terminación prematuro es un gen indicador con un codón de terminación prematuro.

Se desarrollaron dos ensayos para su uso en cribados de alto rendimiento para identificar micromoléculas que promuevan la supresión de mutaciones finalizadoras. Cada ensayo utilizó la luciferasa porque es un ensayo de gen indicador funcional (se produce luz solamente si la proteína es funcional) y es extremadamente sensible (la intensidad de la luz es proporcional a la concentración de luciferasa en el intervalo nM). El primer ensayo es un ensayo indicador de luciferasa basado en células y el segundo es un ensayo bioquímico que consiste en lisado de reticulocitos de conejo y un ARNm indicador de luciferasa que contiene mutación finalizadora. En el ensayo basado en células, una construcción indicadora de luciferasa que contiene un codón de terminación prematuro UGA se transfectó de forma estable en células de riñón embrionario humano 293T. En el ensayo bioquímico, se usó ARNm que contenía un codón de terminación prematuro UGA como indicador en una reacción de traducción in vitro usando lisado de reticulocitos ^{de conejo complementado con ARNt, hemina, creatina cinasa, aminoácidos, KOAc, Mg(OAc)}2 ^{y fosfato de creatina.}La traducción del ARNm se inició dentro de una secuencia líder derivada de virus, que redujo significativamente el coste del ensayo porque no se requería ARN con caperuza. Se preparó ARNm sintético in vitro usando el promotor T7 y el kit de transcripción in vitro MegaScript (Ambion). Tanto en el ensayo bioquímico como en el celular, la adición de una micromolécula conocida por permitir la ultralectura de codones de terminación prematuros, ácido 3-[3-(4-isopropil-fenil)-2,5-dioxo-imidazolidin-1-il]-benzoico, provocó actividad luciferasa aumentada y, por lo tanto, se usó como patrón interno.

También pueden usarse sistemas de modelos animales para demostrar la seguridad y eficacia de compuestos de fórmula I o II. Los compuestos de fórmula I o II pueden ensayarse para la actividad biológica usando modelos animales para una enfermedad, afección o síndrome de interés. Estos incluyen animales manipulados para que contengan el elemento de ARN diana acoplado a un sistema de lectura, tal como un ratón transgénico.

Ejemplos de modelos animales para fibrosis quística incluyen, aunque sin limitación, ratones cftr(-/-) (véase, por ejemplo, Freedman et al., 2001, Gastroenterology 121(4):950-7), ratones cftr(tm1HGU/tm1HGU) (véase, por ejemplo, Bernhard et al., 2001, Exp Lung Res 27(4):349-66), ratones deficientes en CFTR con conductancia mediada por AMPc defectuosa Cl(-) (véase, por ejemplo, Stotland et al., 2000, Pediatr Pulmonol 30(5):413-24) y ratones con inactivación C57BL/6-Cftr(m1UNC)/Cftr(m1UNC) (véase, por ejemplo, Stotland et al., 2000, Pediatr Pulmonol 30(5):413-24).

Ejemplos de modelos animales para distrofia muscular incluyen, aunque sin limitación, ratón, hámster, gato, perro y C. elegans. Ejemplos de modelo de ratón para distrofia muscular incluyen, aunque sin limitación, el ratón dy-/-(véase, por ejemplo, Connolly et al., 2002, J Neuroimmunol 127(1-2):80-7), un ratón con distrofia muscular con mutación de miositis (mdm) (véase, por ejemplo, Garvey et al., 2002, Genomics 79(2): 146-9), el ratón mdx (véase, por ejemplo, ^{Nakamura et al.,}2001^{, Neuromuscul Disord}11 ^{(3):251-9), el ratón con inactivación de utrofina-distrofina (dko) (véase,}por ejemplo, Nakamura et al., 2001, Neuromuscul Disord 11(3):251-9), el ratón dy/dy (véase, por ejemplo, Dubowitz et al., 2000, Neuromuscul Disord 10(4-5):292-8), el modelo de ratón mdx(Cv3) (véase, por ejemplo, Pillers et al., 1999 Laryngoscope 109(8): 1310-2) y los ratones mutantes miotónicos ADR-MDX (véase, por ejemplo, Kramer et al., 1998, Neuromuscul Disord 8(8):542-50). Ejemplos de modelos de hámster para distrofia muscular incluyen, aunque sin limitación, hámsteres deficientes en sarcoglucano (véase, por ejemplo, Nakamura et al., 2001, Am J Physiol Cell Physiol 281(2):C690-9) y el hámster distrófico BIO 14.6 (véase, por ejemplo, Schlenker y Burbach, 1991, J Appl Physiol 71(5): 1655-62). Un ejemplo de un modelo felino para distrofia muscular incluye, aunque sin limitación, el modelo de distrofia muscular felina hipertrófico (véase, por ejemplo, Gaschen y Burgunder, 2001, Acta Neuropathol (Berl) 101(6):591-600). Modelos caninos para distrofia muscular incluyen, aunque sin limitación, distrofia muscular del golden retriever (véase, por ejemplo, Fletcher et al., 2001, Neuromuscul Disord 11(3):239-43) y distrofia muscular canina ligada al X (véase, por ejemplo, Valentine et al., 1992, Am J Med Genet 42(3):352-6). Ejemplos de modelos de C. elegans para distrofia muscular se describen en Chamberlain y Benian, 2000, Curr Biol 10(21):R795-7 y Culette y Sattelle, 2000, Hum Mol Genet 9(6):869-77.

Ejemplos de modelos animales para hipercolesterolemia familiar incluyen, aunque sin limitación, ratones que carecen de genes del receptor de LDL funcionales (véase, por ejemplo, Aji et al., 1997, Circulation 95(2):430-7), ratas Yoshida (véase, por ejemplo, Fantappie et al., 1992, Life Sci 50(24): 1913-24), la rata JCR:LA-cp (véase, por ejemplo, Richardson et al., 1998, Atherosclerosis 138(1): 135-46), cerdos (véase, por ejemplo, Hasler-Rapacz et al., 1998, Am J Med Genet 76(5):379-86) y el conejo con hiperlipidemia hereditaria de Watanabe (véase, por ejemplo, Tsutsumi et al., 2000, Arzneimittelforschung 50(2): 118-21; Harsch et al., 1998, Br J Pharmacol 124(2):227-82; y Tanaka et al., 1995, Atherosclerosis 114(1):73-82).

Un ejemplo de un modelo animal para cáncer humano en general incluye, aunque sin limitación, tumores que aparecen espontáneamente de animales de compañía (véase, por ejemplo, Vail y MacEwen, 2000, Cancer Invest 18(8):781-92). Ejemplos de modelos animales para cáncer pulmonar incluyen, aunque sin limitación, modelos animales con cáncer pulmonar descritos por Zhang y Roth (1994, In Vivo 8(5):755-69) y un modelo de ratón transgénico con función de p53 alterada (véase, por ejemplo, Morris et al., 1998, J La State Med Soc 150(4):179-85). Un ejemplo de un modelo animal para cáncer de mama incluye, aunque sin limitación, un ratón transgénico que sobreexpresa ciclina D1 (véase, por ejemplo, Hosokawa et al., 2001, Transgenic Res 10(5):471-8). Un ejemplo de un modelo animal para cáncer de colon incluye, aunque sin limitación, un ratón con doble inactivación de TCRbeta y p53 (véase, por ejemplo, Kado et ^al., 2001^{, Cancer Res 61(6):2395-8). Ejemplos de modelos animales para cáncer pancreático incluyen, aunque sin}limitación, un modelo metastásico de adenocarcinoma pancreático murino Panc02 (véase, por ejemplo, Wang et al., 2001, Int J Pancreatol 29(1):37-46) y ratones nu-nu generados con tumores pancreáticos subcutáneos (véase, por ejemplo, Ghaneh et al., 2001, Gene Ther 8(3):199-208). Ejemplos de modelos animales para linfoma no hodgkiniano incluyen, aunque sin limitación, un ratón con inmunodeficiencia combinada grave ("SCID") (véase, por ejemplo, Bryant et al., 2000 Lab Invest 80(4):553-73) y un ratón transgénico IgHmu-HOX11 (véase, por ejemplo, Hough et al., 1998, Proc Natl Acad Sci USA 95(23):13853-8). Un ejemplo de un modelo animal para cáncer esofágico incluye, aunque sin limitación, un ratón transgénico para el oncogén E7 del virus del papiloma humano de tipo 16 (véase, por ejemplo, Herber et al., 1996, J Virol 70(3):1873-81). Ejemplos de modelos animales para carcinomas colorrectales incluyen, aunque sin limitación, modelos de ratón Apc (véase, por ejemplo, Fodde y Smits, 2001, Trends Mol Med 7(8):369-73 ^{y Kuraguchi et al.,}2000^{, Oncogene 19(50):5755-63). Un ejemplo de un modelo animal para neurofibromatosis incluye,}aunque sin limitación, ratones mutantes NF1 (véase, por ejemplo, Cichowski et al., 1996, Semin Cancer Biol 7(5):291-8^{). Ejemplos de modelos animales para retinoblastoma incluyen, aunque sin limitación, ratones transgénicos que}expresan el antígeno T del virus del simio 40 en la retina (véase, por ejemplo, Howes et al., 1994, Invest Oftalmol Vis Sci 35(2):342-51 y Windle et al., 1990, Nature 343(6259):665-9) y ratas endogámicas (véase, por ejemplo, Nishida et al., 1981, Curr Eye Res 1(1 ):53-5 y Kobayashi et al., 1982, Acta Neuropathol (Berl) 57(2-3):203-8). Ejemplos de modelos animales para tumor de Wilms incluyen, aunque sin limitación, un ratón con inactivación de WT1 (véase, por ejemplo, Scharnhorst et al., 1997, Cell Growth Differ 8(2):133-43), una sublínea de rata con una alta incidencia de neuroblastoma (véase, por ejemplo, Mesfin y Breech, 1996 Lab Anim Sci 46(3):321-6) y una rata Wistar/Furth con tumor de Wilms (véase, por ejemplo, Murphy et al., 1987, Anticancer Res 7(4B):717-9).

Ejemplos de modelos animales para retinitis pigmentosa incluyen, aunque sin limitación, la rata del Royal College of Surgeons ("RCS") (véase, por ejemplo, Vollrath et al., 2001, Proc Natl Acad Sci USA 98(22); 12584-9 y Hanitzsch et al., 1998, Acta Anat (Basilea) 162(2-3):119-26), un ratón con inactivación de rodopsina (véase, por ejemplo, Jaissle et al., 2001, Invest Oftalmol Vis Sci 42(2):506-13) y ratas Wag/Rij (véase, por ejemplo, Lai et al., 1980, Am J Pathol 98(1):281-4).

Ejemplos de modelos animales para cirrosis incluyen, aunque sin limitación, ratas expuestas a CCU (véase, por ejemplo, Kloehn et al., 2001, Horm Metab Res 33(7):394-401) y modelos de roedor estimulados por componentes de células bacterianas o colitis (véase, por ejemplo, Vierling, 2001, Best Pract Res Clin Gastroenterol 15(4):591-610).

Ejemplos de modelos animales para hemofilia incluyen, aunque sin limitación, modelos de roedor para hemofilia A (véase, por ejemplo, Reipert et al., 2000, Thromb Haemost 84(5):826-32; Jarvis et al., 1996, Thromb Haemost 75(2):318-25; y Bi et al., 1995, Nat Genet 10(1):119-21), modelos caninos para hemofilia A (véase, por ejemplo, Gallo-Penn et al., 1999, Hum Gene Ther 10(11): 1791-802 y Connelly et al., 1998, Blood 91(9); 3273-81), modelos murinos para hemofilia B (véase, por ejemplo, Snyder et al., 1999, Nat Med 5(1):64-70; Wang et al., 1997, Proc Natl Acad Sci USA 94(21):11563-6; y Fang et al., 1996, Gene Ther 3(3):217-22), modelos caninos para hemofilia B (véase, por ejemplo, Mount et al., 2002, Blood 99(8):2670-6; Snyder et al., 1999, Nat Med 5(1):64-70; Fang et al., 1996, Gene Ther 3(3):217-22); y Kay et al., 1994, Proc Natl Acad Sci USA 91(6):2353-7) y un modelo de macaco de la India para hemofilia B (véase, por ejemplo, Lozier et al., 1999, Blood 93(6):1875-81).

Ejemplos de modelos animales para enfermedad de von Willebrand incluyen, aunque sin limitación, una cepa de ratón ^{endogámica RIIIS/J (véase, por ejemplo, Nichols et al., 1994, 83(11):3225-31 y Sweeney et al., 1990, 76(1}1 ^):2258-65), ratas a las que se ha inyectado botrocetina (véase, por ejemplo, Sanders et al., 1988 Lab Invest 59(4):443-52) y modelos porcinos para enfermedad de von Willebrand (véase, por ejemplo, Nichols et al., 1995, Proc Natl Acad Sci USA 92(7):2455-9; Johnson y Bowie, 1992, J Lab Clin Med 120(4):553-8); y Brinkhous et al., 1991, Mayo Clin Proc 66(7):733-42).

Ejemplos de modelos animales para b-talasemia incluyen, aunque sin limitación, modelos murinos con mutaciones en genes de globina (véase, por ejemplo, Lewis et al., 1998, Blood 91(6):2152-6; Raja et al., 1994, Br J Haematol 86(1):156-62; Popp et al., 1985, 445:432-44; y Skow et al., 1983, Cell 34(3):1043-52).

Ejemplos de modelos animales para cálculos renales incluyen, aunque sin limitación, ratas con hipercalciuria genética (véase, por ejemplo, Bushinsky et al., 1999, Kidney Int 55(1):234-43 y Bushinsky et al., 1995, Kidney Int 48(6):1705-13), ratas tratadas químicamente (véase, por ejemplo, Grases et al., 1998, Scand J Urol Nephrol 32(4):261-5; Burgess et al., 1995, Urol Res 23(4):239-42; Kumar et al., 1991, J Urol 146(5):1384-9; Okada et al., 1985, Hinyokika Kiyo 31(4):565-77; y Bluestone et al., 1975 Lab Invest 33(3):273-9), ratas hiperoxalúricas (véase, por ejemplo, Jones et al., 1991, J Urol 145(4):868-74), cerdos con nefroscopia flexible retrógrada unilateral (véase, por ejemplo, Seifmah et al., 2001, 57(4):832-6) y conejos con las vías urinarias superiores obstruidas (véase, por ejemplo, Itatani et al., 1979, Invest Urol 17(3):234-40).

Ejemplos de modelos animales para ataxia-telangiectasia incluyen, aunque sin limitación, modelos murinos de ataxiatelangiectasia (véase, por ejemplo, Barlow et al., 1999, Proc Natl Acad Sci USA 96(17):9915-9 e Inoue et al., 1986, Cancer Res 46(8):3979-82).

Ejemplos de modelos animales para enfermedades de almacenamiento lisosómico incluyen, aunque sin limitación, modelos de ratón para mucopolisacaridosis de tipo VII (véase, por ejemplo, Brooks et al., 2002, Proc Natl Acad Sci U S A. 99(9):6216-21; Monroy et al., 2002, Bone 30(2):352-9; Vogler et al., 2001, Pediatr Dev Pathol. 4(5):421-33; Vogler et al., 2001, Pediatr Res. 49(3):342-8; y Wolfe et al., 2000, Mol Ther. 2(6):552-6), un modelo de ratón para leucodistrofia metacromática (véase, por ejemplo, Matzner et al., 2002, Gene Ther. 9(1):53-63), un modelo de ratón de enfermedad de Sandhoff (véase, por ejemplo, Sango et al., 2002, Neuropathol Appl Neurobiol. 28(1):23-34), modelos de ratón para mucopolisacaridosis de tipo III A (véase, por ejemplo, Bhattacharyya et al., 2001, Glycobiology 11 (1):99-10 y Bhaumik et al., 1999, Glycobiology 9(12):1389-96), ratones deficientes en arilsulfatasa A (ASA) (véase, por ejemplo, D'Hooge et al., 1999, Brain Res. 847(2):352-6 y D'Hooge et al., 1999, Neurosci Lett. 273(2):93-6); ratones con una mutación de aspartilglucosaminuria (véase, por ejemplo, Jalanko et al., 1998, Hum Mol Genet. 7(2):265-72); modelos felinos de mucopolisacaridosis de tipo VI (véase, por ejemplo, Crawley et al., 1998, J Clin Invest. 101(1): 109-19 y Norrdin et al., 1995, Bone 17(5):485-9); un modelo felino de enfermedad de Niemann-Pick de tipo C (véase, por ejemplo, March et al., 1997, Acta Neuropathol (Berl). 94(2):164-72); ratones deficientes en esfingomielinasa ácida (véase, por ejemplo, Otterbach y Stoffel, 1995, Cell 81 (7): 1053-6) y manosidosis bovina (véase, por ejemplo, Jolly et al., 1975, Birth Defects Orig Arctic Ser. 11(6):273-8).

Ejemplos de modelos animales para esclerosis tuberosa ("TSC") incluyen, aunque sin limitación, un modelo de ratón de TSC1 (véase, por ejemplo, Kwiatkowski et al., 2002, Hum Mol Genet. 11(5):525-34), un modelo con inactivación de Tsc1 (homólogo de TSC1) (véase, por ejemplo, Kobayashi et al., 2001, Proc Natl Acad Sci U S A. 14 de julio de 2001; 98(15):8762-7), un modelo de rata mutante del gen TSC2 (Eker) (véase, por ejemplo, Hino 2000, Nippon Rinsho 58(6):1255-61; Mizuguchi et al., 2000, J Neuropathol Exp Neurol. 59(3):188-9; y Hino et al., 1999, Prog Exp Tumor Res. 35:95-108); y ratones Tsc2(+/-) (véase, por ejemplo, Onda et al., 1999, J Clin Invest. 104(6):687-95).

4.3 Síntesis y preparación

Los compuestos pueden obtenerse mediante metodología sintética convencional bien conocida, véase, por ejemplo, March, J. Advanced Organic Chemistry; Reactions Mechanisms, and Structure, 4.a ed., 1992. Los materiales de partida útiles para preparar los compuestos e intermedios para los mismos están disponibles en el mercado o pueden prepararse a partir de materiales disponibles en el mercado usando métodos sintéticos y reactivos conocidos.

Los compuestos de fórmulas I o II pueden sintetizarse usando la síntesis representada en los esquemas A y B a continuación. Los compuestos pueden prepararse mediante los métodos analizados en la siguiente sección.

Los compuestos de fórmula I pueden prepararse usando la metodología representada en el esquema A.

Puede usarse resina ácido-lábil A1 disponible en el mercado, tal como resina de tritilo, resina de cloruro de 2-clorotritilo, resina de fenilacetamidometilo (PAM) y resina de alcohol p-alcoxibencílico en esta invención. El acoplamiento del compuesto de ácido benzoico A2 y resina de tritilo (aquí X = cloruro de 2-clrotritilo) puede realizarse en un disolvente adecuado tal como diclorometano, dimetilformamida, tolueno en presencia de un reactivo de amina terciaria tal como diisopropiletilamina o trietilamina. En un método alternativo, la resina acilada A3 se prepara convenientemente usando condiciones convencionales de formación de enlaces éster usando diisopropilcarbodiimida (para resina de fenilacetamidometilo y resina de alcohol p-alcoxibencílico) o equivalentes tales como hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio (PyBOP), hexafluorofosfato de bromo-tris-pirrolidino-fosfonio (PyBrOP), clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) sin o con diisopropiletilamina en dimetilformamida. El éster cianobenzoico unido a resina puede tratarse con hidroxilamina en un disolvente inerte tal como etanol, tetrahidrofurano, dioxano y dimetilformamida o mezclas con o sin diisopropiletilamina para producir el compuesto de hidroxiamidina A4. La resina de hidroxiamidina A4 puede usarse como conector común para la síntesis de compuestos de colección de 1,2,4-oxadiazol con variación del resto del compuesto de estructura I como se muestra en el esquema A. El compuesto de hidroxiamidina unido a resina se acila con un reactivo A5, en el que el grupo Y representa algunos grupos salientes, tales como halo, imidazoílo, p-nitrofenol, etc. en presencia de un reactivo de base, tal como diisopropiletilamina o trietilamina, en un disolvente inerte tal como diclorometano, tetrahidrofurano y dimetilformamida o mezclas. En un método alternativo, la acilación se realiza convenientemente con un reactivo 5, en el que el grupo Y ^{representa hidroxi, usando diisopropilcarbodiimida o equivalentes tales como hexafluorofosfato de benzotriazol-}1^-il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio, hexafluorofosfato de bromo-tris-pirrolidino-fosfonio, clorhidrato de 1 -etil-3-(3-^{dimetilaminopropil)carbodiimida sin o con diisopropiletilamina en dimetilformamida. El compuesto acilado A}6 ^{unido a}resina se escinde en condiciones ácidas tales como ácido trifluoroacético 2 molar en diclorometano, o ácido acético 3 molar en diclorometano, para producir el compuesto deseado A7. Puede lograrse una reacción de cierre de anillo sobre el compuesto de ácido libre A7 mediante reflujo en un disolvente inerte tal como tolueno, tetrahidrofurano, dioxano y dimetilformamida o mezclas con o sin un reactivo de base tal como diisopropiletilamina, trietilamina o fluoruro de tetrabutilamonio para el compuesto de 1,2,4-oxdiazol I. Puede realizarse una reacción de cierre de anillo alternativa por deshidrociclación del compuesto A6 unido a resina (esquema A). Esta transformación puede realizarse con o sin un reactivo de base tal como trietilamina, diisopropiletilamina o fluoruro de tetrabutilamonio en un disolvente inerte tal como tolueno, tetrahidrofurano, dioxano y dimetilformamida o mezclas. Las temperaturas de la reacción varían de ambiental a reflujo del disolvente.

La química de la fase sólida descrita anteriormente puede aplicarse a la síntesis en fase de solución de compuestos de estructura I. Esto se describe en el esquema B, a continuación.

El compuesto ciano B1 se hidroxiamidina con hidoxilamina. Esta reacción se realiza habitualmente en presencia de un reactivo de base, tal como trietilamina, carbonato de potasio o diisopropiletilamina, en un disolvente tal como metanol, etanol, ferc-butanol, tetrahidrofurano o dimetilformamida, y temperaturas que varían de ambiental a la temperatura de reflujo del disolvente elegido. El compuesto de hidroxiamidina B2 se acila con un reactivo B3, en el que el grupo Y representa algunos grupos salientes, tales como halo, imidazoílo, p-nitrofenol, etc. La reacción se realiza habitualmente con un reactivo de base, tal como trietilamina o diisopropiletilamina, en un disolvente tal como diclorometano, tetrahidrofurano o dimetilformamida. En un método alternativo, la acilación se realiza convenientemente en reacciones habituales de formación de enlaces éster, en las que el grupo Y representa hidroxi, ^{usando diisopropilcarbodiimida o equivalentes tales como hexafluorofosfato de benzotriazol}-1 ^{-il-oxi-tris-pirrolidino-}fosfonio, hexafluorofosfato de bromo-tris-pirrolidino-fosfonio, clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida sin o con diisopropiletilamina. El cierre de anillo en el compuesto acilado B4 puede realizarse con o sin un reactivo de base tal como trietilamina o diisopropiletilamina, en un disolvente tal como diclorometano, tetrahidrofurano, tolueno o dimetilformamida, y temperaturas que varían de ambiental a la temperatura de reflujo del disolvente elegido.

4.4 Uso de la invención

En este documento se divulgan métodos de tratamiento y prevención de enfermedades o trastornos que mejoran mediante la supresión de la terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento o prevención una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto divulgado en este documento, o un profármaco, solvato, metabolito, polimorfo, sal, solvato, hidrato o clatrato farmacéuticamente aceptable del mismo.

En un ejemplo, la presente divulgación abarca el tratamiento o prevención de cualquier enfermedad que esté asociada con un gen que presente terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora. En una realización, la enfermedad se debe, en parte, a la ausencia de expresión del gen, resultante de un codón de parada prematuro. Ejemplos específicos de genes que pueden presentar terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora y enfermedades asociadas con terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora se encuentran en la solicitud de patente de Estados Unidos n.° 60/390.747, titulada: Methods For Identifying Small Molecules That Modulate Premature Translation Termination And Nonsense Mediated mRNA Decay, presentada el 21 de junio de 2002.

Enfermedades que mejoran mediante la supresión de la terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora incluyen, aunque sin limitación: una enfermedad genética, cáncer, una enfermedad autoinmunitaria, una enfermedad sanguínea, una enfermedad del colágeno, diabetes, una enfermedad neurodegenerativa, una enfermedad proliferativa, un enfermedad cardiovascular, una enfermedad pulmonar, una enfermedad inflamatoria o enfermedad del sistema nervioso central.

Enfermedades genéticas específicas incluyen, aunque sin limitación, amiloidosis, hemofilia, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Tay Sachs, ateroesclerosis, gigantismo, enanismo, hipotiroidismo, hipertiroidismo, envejecimiento, obesidad, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Niemann Pick, fibrosis quística, distrofia muscular, cardiopatía, cálculos renales, ataxia-telangiectasia, hipercolesterolemia familiar, retinitis pigmentosa, esclerosis tuberosa, distrofia muscular de Duchenne y síndrome de Marfan. En este documento se divulgan tanto tumores sólidos como otros cánceres. Enfermedades genéticas específicas de acuerdo con la invención incluyen enfermedades de almacenamiento lisosómico.

En otro ejemplo, la enfermedad genética es una enfermedad autoinmunitaria. En otro ejemplo, la enfermedad autoinmunitaria es artritis reumatoide o enfermedad de injerto contra hospedador.

En otro ejemplo, la enfermedad genética es una enfermedad sanguínea. En otro ejemplo, la enfermedad sanguínea es hemofilia, enfermedad de von Willebrand, ataxia-telangiectasia, b-talasemia o cálculos renales.

En otro ejemplo, la enfermedad genética es una enfermedad del colágeno. En otro ejemplo, la enfermedad del colágeno es osteogénesis imperfecta o cirrosis.

En otro ejemplo, la enfermedad genética es diabetes.

En otro ejemplo, la enfermedad genética es una enfermedad inflamatoria. En otro ejemplo, la enfermedad inflamatoria es artritis.

En otro ejemplo, la enfermedad genética es una enfermedad del sistema nervioso central. En un ejemplo, la enfermedad del sistema nervioso central es una enfermedad neurodegenerativa. En otro ejemplo, la enfermedad del sistema nervioso central es esclerosis múltiple, distrofia muscular, distrofia muscular de Duchenne, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Tay Sachs, lipofuscinosis ceroide neuronal infantil tardía (LINCL) o enfermedad de Parkinson.

En otro ejemplo, la enfermedad genética es cáncer. En otro ejemplo, el cáncer es de cabeza y cuello, ojo, piel, boca, garganta, esófago, tórax, hueso, pulmón, colon, colon sigmoide, recto, estómago, próstata, mama, ovarios, riñón, hígado, páncreas, cerebro, intestino, corazón o glándulas suprarrenales.

En otro ejemplo, el cáncer está asociado con genes supresores tumorales (véase, por ejemplo, Garinis et al. 2002, Hum Gen 111:115-117; Meyers et al. 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95: 15587-15591; Kung et al. 2000, Nature Medicine 6(12): 1335-1340. Dichos genes supresores tumorales incluyen, aunque sin limitación, APC, ATM, BRAC1, BRAC2, MSH1, pTEN, Rb y p53.

En un ejemplo, el gen supresor tumoral es el gen p53. Se han identificado mutaciones finalizadoras en el gen p53 y se han implicado en el cáncer. Se han identificado varias mutaciones finalizadoras en el gen p53 (véase, por ejemplo, Masuda et al., 2000, Tokai J Exp Clin Med. 25(2):69-77; Oh et al., 2000, Mol Cells 10(3):275-80; Li et al., 2000 Lab Invest. 80(4):493-9; Yang et al., 1999, Zhonghua Zhong Liu Za Zhi 21 (2): 114-8; Finkelstein et al., 1998, Mol Diagn.

3(1):37-41; Kajiyama et al., 1998, Dis Esophagus. 11(4):279-83; Kawamura et al., 1999, Leuk Res. 23(2):115-26; Radig et al., 1998, Hum Pathol. 29(11):1310-6; Schuyer et al., 1998, Int J Cancer 76(3):299-303; Wang-Gohrke et al., 1998, Oncol Rep. 5(1):65-8; Fulop et al., 1998, J Reprod Med. 43(2):119-27; Ninomiya et al., 1997, J Dermatol Sci. 14(3):173-8^{; Hsieh et al., 1996, Cancer Lett. 100(1-2):107-13; Rall et al., 1996, Pancreas. 12(1 ):10-7; Fukutomi et al., 1995,}Nippon Rinsho. 53(11):2764-8; Frebourg et al., 1995, Am J Hum Genet. 56(3):608-15; Dove et al., 1995, Cancer Surv.

25:335-55; Adamson et al., 1995, Br J Haematol. 89(1):61-6; Grayson et al., 1994, Am J Pediatr Hematol Oncol.

^{16(4):341-7; Lepelley et al., 1994, Leukemia.}8⁽8^{): 1342-9; McIntyre et al., 1994, J Clin Oncol. 12(5):925-30; Horio et} al., 1994, Oncogene. 9(4):1231-5; Nakamura et al., 1992, Jpn J Cancer Res. 83(12): 1293-8; Davidoff et al., 1992, Oncogene. 7(1): 127-33; y Ishioka et al., 1991, Biochem Biophys Res Commun. 177(3):901-6. Cualquier enfermedad asociada con un gen p53 que codifique un codón de parada prematura de la traducción incluyendo, aunque sin limitación, las mutaciones finalizadoras descritas en las referencias citadas anteriormente, puede tratarse o prevenirse mediante compuestos de fórmula I o II. Sin limitarse a teoría alguna, estos compuestos median la terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora.

En otros ejemplos, enfermedades a tratar o prevenir administrando a un paciente que lo necesita una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I incluyen tumor sólido, sarcoma, carcinomas, fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteógeno, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfangiosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de colon, cáncer pancreático, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de próstata, carcinoma escamocelular, carcinoma basocelular, adenocarcinoma, carcinoma de glándulas sudoríparas, carcinoma de glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncógeno, carcinoma de células renales, hepatoma, carcinoma de las vías biliares, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionario, tumor de Wilms, cáncer cervicouterino, tumor testicular, carcinoma pulmonar, carcinoma pulmonar microcítico, carcinoma de vejiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, sarcoma de Kaposi, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, meningioma, melanoma, neuroblastoma, retinoblastoma, un tumor de transmisión hemática, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica aguda de linfocitos B, leucemia linfocítica aguda de linfocitos T, leucemia mieloblástica aguda, leucemia promielocítica aguda, leucemia mieloblástica aguda, leucemia eritroleucémica aguda, leucemia megacarioblástica aguda, leucemia mielomonocítica aguda, leucemia no linfocítica aguda, leucemia indiferenciada aguda, leucemia mielocítica crónica, leucemia linfocítica crónica, tricoleucemia o mieloma múltiple. Véase, por ejemplo, Harrison's Principles of Internal Medicine, Eugene Braunwald et al., eds., pág. 491-762 (15.a ed. 2001).

En otro ejemplo se divulga un método de tratamiento o prevención de una enfermedad que mejora mediante la modulación de la terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora, o de mejora de uno o más síntomas asociados con la misma, que comprende poner en contacto una célula con una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I o II. Las células incluyen células animales, células de mamífero, células bacterianas, células vegetales y células infectadas con virus. En una realización, el codón finalizador estaba presente en el ADN progenitor. En otra realización, el codón finalizador resultó de mutagénesis.

En otro ejemplo, un compuesto de fórmula I o II, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a un paciente, preferiblemente un mamífero, más preferiblemente un ser humano, como medida preventiva contra una enfermedad asociada con la terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora.

En una realización preferida, en primer lugar, se determina que el paciente está padeciendo una enfermedad asociada con terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora. En otra realización, el paciente se ha sometido a un proceso de cribado para determinar la presencia de una mutación finalizadora, que comprende las etapas de cribar a un sujeto o células extraídas del mismo mediante un ensayo de cribado aceptable de mutaciones finalizadoras. En una realización preferida, el ADN del paciente puede secuenciarse o someterse a transferencia de Southern, reacción en cadena de la polimerasa (PCR), uso del análisis de repetición en tándem corta (STR) o fragmentos de restricción de longitud polimórficos (RFLP) para determinar si está presente una mutación finalizadora en el ADN del paciente. Como alternativa, puede determinarse si se expresan niveles alterados de la proteína con la mutación finalizadora en el paciente por transferencia de Western u otros inmunoensayos. En otra realización, el paciente es un feto que se ha sometido a cribado in utero para la presencia de una mutación finalizadora. La administración de un compuesto de fórmula I o II puede producirse antes o después del nacimiento. En una realización relacionada, el tratamiento es personalizado, puesto que el paciente se criba por un ensayo de cribado de mutaciones finalizadoras y se trata mediante la administración de los compuestos para el uso de la invención; particularmente, el paciente puede tratarse con los compuestos particularmente adecuados para las mutaciones en cuestión, por ejemplo, dependiendo del tipo de enfermedad, el tipo de célula y el gen en cuestión. Dichos métodos son bien conocidos por los expertos en la materia.

En otros usos, las células (por ejemplos, células animales, células de mamífero, células bacterianas, células vegetales y células infectadas con virus) se criban para terminación prematura de la traducción y/o deterioro del ARNm mediado por mutación finalizadora con un método tal como el descrito anteriormente (es decir, el ADN de la célula puede secuenciarse o someterse a transferencia de Southern, reacción en cadena de la polimerasa (PCR), uso del análisis de repetición en tándem corta (STR) o fragmentos de restricción de longitud polimórficos (RFLP) para determinar si está presente una mutación finalizadora en el ADN de la célula).

Usos específicos de la invención comprenden además la administración de un agente terapéutico adicional (es decir, un agente terapéutico distinto de un compuesto de la invención). En determinadas realizaciones de la presente invención, los compuestos de la invención pueden usarse en combinación con al menos otro agente terapéutico. Los agentes terapéuticos incluyen, aunque sin limitación, analgésicos no opiáceos; agentes antinflamatorios no esteroideos; antieméticos; bloqueantes p-adrenérgicos; anticonvulsivos; antidepresivos; bloqueantes del canal de Ca2+; agente antineoplásico y mezclas de los mismos.

En determinadas realizaciones, los compuestos de fórmula I o II pueden administrarse o formularse en combinación con agentes antineoplásicos. Agentes antineoplásicos adecuados incluyen, aunque sin limitación, agentes alquilantes; mostazas nitrogenadas; antagonistas de folato; antagonistas de purina; antagonistas de pirimidina; venenos del huso; inhibidores de la topoisomerasa; agentes inductores de la apoptosis; inhibidores de la angiogénesis; podofilotoxinas; nitrosoureas; cisplatino; carboplatino; interferón; asparaginasa; tamoxifeno; leuprolida; flutamida; megestrol; mitomicina; bleomicina; doxorrubicina; irinotecán y taxol.

En determinadas realizaciones, los compuestos de fórmula I o II pueden administrarse o formularse en combinación con antibióticos. En determinadas realizaciones, el antibiótico es un macrólido (por ejemplo, tobramicina (Tobi®)), una cefalosporina (por ejemplo, cefalexina (Keflex®), cefradina (Velosef®), cefuroxima (Ceftin®), cefprozil (Cefzil®), cefacloro (Ceclor®), cefixima (Suprax®) o cefadroxil (Duricef®)), una claritromicina (por ejemplo, claritromicina (Biaxin®)), una eritromicina (por ejemplo, eritromicina (EMycin®)), una penicilina (por ejemplo, penicilina V (V-Cillin K® o Pen Vee K®)) o una quinolona (por ejemplo, ofloxacina (Floxin®), ciprofloxacina (Cipro®) o norfloxacina (Noroxin®)). En una realización preferida, el antibiótico es activo contra Pseudomonas aeruginosa.

Los compuestos para el uso de la invención y los otros agentes terapéuticos pueden actuar de forma aditiva o, más preferiblemente, sinérgica. En una realización preferida, una composición que comprende los compuestos para el uso de la invención se administra simultáneamente con la administración de otro agente terapéutico, que puede ser parte de la misma composición o puede estar en una composición diferente de la que comprende los compuestos para el uso de la invención. En otra realización, los compuestos para el uso de la invención se administran antes de o después de la administración de otro agente terapéutico.

La magnitud de una dosis profiláctica o terapéutica de un ingrediente activo particular en la regulación aguda o crónica de una enfermedad o afección variará, sin embargo, con la naturaleza y gravedad de la enfermedad o afección, y la vía por la que se administra el ingrediente activo. La dosis y, quizás, la frecuencia de dosis, también variarán de acuerdo con la edad, peso corporal y respuesta del paciente individual. Las pautas de dosificación adecuadas pueden seleccionarlas fácilmente los expertos en la materia teniendo en consideración dichos factores. En general, el intervalo de dosis diaria recomendada para las afecciones descritas en este documento estará dentro del intervalo de ^{aproximadamente}0,1 ^{mg a aproximadamente}2000 ^{mg al día, administrada como una sola dosis una vez al día,}preferiblemente como dosis divididas en todo el día. En una realización, la dosis diaria se administra en una sola dosis 0 en dosis divididas equitativamente. Específicamente, un intervalo de dosis diaria debe ser de aproximadamente 5 mg a aproximadamente 500 mg al día, más específicamente, entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 200 mg al día. En la regulación del paciente, el tratamiento debe iniciarse a una dosis inferior, quizás de aproximadamente 1 ^{mg a aproximadamente 25 mg, y debe aumentarse si fuera necesario hasta aproximadamente}200 ^{mg a aproximadamente}2000 ^{mg al día como una sola dosis o dosis divididas, dependiendo de la respuesta global del}paciente.

Puede ser necesario usar dosificaciones del ingrediente activo fuera de los intervalos divulgados en este documento en algunos casos, como será evidente para los expertos en la materia. Además, se aprecia que el médico o facultativo a cargo conocerá la manera y el momento de interrumpir, ajustar o terminar el tratamiento junto con la respuesta individual del paciente.

Las expresiones "cantidad terapéuticamente eficaz", "cantidad profilácticamente eficaz" y "cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz", como se usan en este documento, abarcan las cantidades de dosificación y pautas de frecuencia de dosis descritas anteriormente. Pueden ser aplicables cantidades terapéuticamente eficaces diferentes para diferentes enfermedades y afecciones, como sabrán fácilmente los expertos en la materia. Asimismo, también están incluidas cantidades suficientes para tratar o prevenir dichas enfermedades, pero insuficientes para provocar, o suficientes para reducir, los efectos adversos asociados con tratamientos convencionales, por las cantidades de dosificación y pautas de frecuencia de dosis descritas anteriormente.

4.5 Composiciones farmacéuticas

Cualquier referencia a una composición farmacéutica debe entenderse como la composición farmacéutica para el uso de la invención.

También están incluidas composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas unitarias individuales que comprenden los compuestos para el uso de la invención, por la invención. Las formas farmacéuticas individuales de la invención pueden ser adecuadas para administración oral, mucosa (incluyendo sublingual, bucal, rectal, nasal o vaginal), parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, inyección intravenosa rápida, intraarterial o intravenosa), transdérmica o tópica.

Las composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas de la invención comprenden el compuesto para el uso de la invención. Las composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas de la invención típicamente también comprenden uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

Una composición farmacéutica particular incluida por esta realización comprende los compuestos para el uso de la invención o clatrato de los mismos, y al menos un agente terapéutico adicional. Ejemplos de agentes terapéuticos adicionales incluyen, aunque sin limitación: fármacos antineoplásicos y tratamientos antinflamatorios incluyendo, aunque sin limitación, los enumerados anteriormente en la sección 4.3.

Las formas farmacéuticas unitarias individuales de la invención son adecuadas para administración oral, mucosa (por ejemplo, nasal, sublingual, vaginal, bucal o rectal), parenteral (por ejemplo, subcutánea, intravenosa, inyección intravenosa rápida, intramuscular o intraarterial) o transdérmica a un paciente. Ejemplos de formas farmacéuticas incluyen, aunque sin limitación: comprimidos; comprimidos oblongos; cápsulas, tales como cápsulas de gelatina elásticas blandas; sellos; trociscos; grageas; dispersiones; supositorios; pomadas; cataplasmas (apósitos); pastas; polvos; vendajes; cremas; emplastos; soluciones; parches; aerosoles (por ejemplo, pulverizadores nasales o inhaladores); geles; formas farmacéuticas líquidas adecuadas para administración oral o mucosa a un paciente, incluyendo suspensiones (por ejemplo, suspensiones líquidas acuosas o no acuosas, emulsiones de aceite en agua, o emulsiones líquidas de agua en aceite), soluciones y elixires; formas farmacéuticas líquidas adecuadas para administración parenteral a una paciente; y sólidos estériles (por ejemplo, sólidos cristalinos o amorfos) que pueden reconstituirse para proporcionar formas farmacéuticas líquidas adecuadas para administración parenteral a un paciente.

La composición, forma y tipo de las formas farmacéuticas de la invención típicamente variarán dependiendo de su uso. Por ejemplo, una forma farmacéutica usada en el tratamiento agudo de inflamación o una enfermedad relacionada puede contener cantidades de uno o más de los ingredientes activos mayores que las que comprende una forma farmacéutica usada en el tratamiento crónico de la misma enfermedad. Asimismo, una forma farmacéutica parenteral puede contener cantidades de uno o más de los ingredientes activos menores que las que comprende una forma farmacéutica oral usada para tratar la misma enfermedad o trastorno. Estas y otras maneras en que variarán entre sí las formas farmacéuticas específicas incluidas por esta invención serán fácilmente evidentes para los expertos en la materia. Véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18.a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).

Las composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas típicas comprenden uno o más vehículos, excipientes o diluyentes. Los excipientes adecuados son bien conocidos por los expertos en farmacia, y en este documento se proporcionan ejemplos no limitantes de excipientes adecuados. Que un excipiente particular se adecuado para su incorporación en una composición farmacéutica o forma farmacéutica depende de una diversidad de factores bien conocidos en la técnica incluyendo, aunque sin limitación, la manera en que se administrará la forma farmacéutica a un paciente. Por ejemplo, formas farmacéuticas orales tales como comprimidos pueden contener excipientes no adecuados para su uso en formas farmacéuticas parenterales. La idoneidad de un excipiente particular también puede depender de los ingredientes activos específicos en la forma farmacéutica.

Esta invención abarca además composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas anhidras que comprenden ingredientes activos, ya que el agua puede facilitar la degradación de algunos compuestos. Por ejemplo, la adición de agua (por ejemplo, 5 %) está ampliamente aceptada en las técnicas farmacéuticas como medio de simulación de almacenamiento a largo plazo para determinar características tales como vida útil o estabilidad de las formulaciones a lo largo del tiempo. Véase, por ejemplo, Jens T. Carstensen, Drug Stability: Principles & Practice, 2.a Ed., Marcel Dekker, NY, NY, 1995, pág. 379-80. De hecho, el agua y el calor aceleran la descomposición de algunos compuestos. Por tanto, el efecto del agua sobre una formulación puede ser de gran importancia, ya que se encuentra hidratación y/o humedad normalmente durante la fabricación, manipulación, envasado, almacenamiento, transporte y uso de las formulaciones.

Pueden prepararse composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas anhidras de la invención usando ingredientes anhidros o que contienen baja humedad y condiciones de baja hidratación o baja humedad. Las composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas que comprenden lactosa y al menos un ingrediente activo que comprende una amina primaria o secundaria son preferiblemente anhidras si se espera contacto sustancial con hidratación y/o humedad durante la fabricación, envasado y/o almacenamiento.

Una composición farmacéutica anhidra debe prepararse y almacenarse de modo que se mantenga su naturaleza anhidra. Por consiguiente, las composiciones anhidras se envasan preferiblemente usando materiales que se sabe que evitan la exposición al agua, de modo que puedan incluirse en kits de formulario adecuados. Ejemplos de envasado adecuado incluyen, aunque sin limitación, láminas selladas herméticamente, plásticos, recipientes monodosis (por ejemplo, viales), envases alveolados y envases de tiras.

La invención abarca además composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas que comprenden uno o más compuestos que reducen la tasa por la que se descompondrá un ingrediente activo. Dichos compuestos, que se denominan en este documento "estabilizantes", incluyen, aunque sin limitación, antioxidantes tales como ácido ascórbico, tampones del pH o tampones salinos.

Como las cantidades y tipos de excipientes, las cantidades y tipos específicos de ingredientes activos en una forma farmacéutica pueden diferir dependiendo de factores tales como, aunque sin limitación, la vía por la que se tiene que administrar a los pacientes. Sin embargo, formas farmacéuticas típicas de la invención comprenden los compuestos ^{para el uso de la invención dentro del intervalo de aproximadamente}0,1 ^{mg a aproximadamente}2000 ^{mg al día,}administrados como una sola dosis una vez al día por la mañana, pero preferiblemente como dosis divididas en todo el día tomadas con comida. Más específicamente, la dosis diaria se administra dos veces al día en dosis divididas equitativamente. Específicamente, un intervalo de dosis diaria debe ser de aproximadamente 5 mg a aproximadamente 500 mg al día, más específicamente, entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 200 mg al día. En la ^{regulación del paciente, el tratamiento debe iniciarse a una dosis inferior, quizás de aproximadamente}1 ^{mg a}aproximadamente 25 mg, y debe aumentarse si fuera necesario hasta aproximadamente 200 mg a aproximadamente 2000 ^{mg al día como una sola dosis o dosis divididas, dependiendo de la respuesta global del paciente.}

4.5.1 Formas farmacéuticas orales

Las composiciones farmacéuticas de la invención que son adecuadas para administración oral pueden presentarse como formas farmacéuticas diferenciadas, tales como, aunque sin limitación, comprimidos (por ejemplo, comprimidos masticables), comprimidos oblongos, cápsulas y líquidos (por ejemplo, jarabes aromatizados). Dichas formas farmacéuticas contienen cantidades predeterminadas de ingredientes activos, y pueden prepararse por métodos de farmacia bien conocidos por los expertos en la materia. Véase, en general, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18.a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).

Las formas farmacéuticas orales típicas de la invención se preparan combinando el uno o más ingredientes activos en una mezcla íntima con al menos un excipiente de acuerdo con técnicas convencionales de formulación farmacéutica. Los excipientes pueden adoptar una amplia diversidad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para administración. Por ejemplo, los excipientes adecuados para su uso en formas farmacéuticas orales líquidas o de aerosol incluyen, aunque sin limitación, agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes aromatizantes, conservantes y agentes colorantes. Ejemplos de excipientes adecuados para su uso en formas farmacéuticas orales sólidas (por ejemplo, polvos, comprimidos, cápsulas y comprimidos oblongos) incluyen, aunque sin limitación, almidones, glúcidos, celulosa microcristalina, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes y agentes disgregantes.

Las preparaciones líquidas para administración oral pueden adoptar la forma de, por ejemplo, soluciones, jarabes o suspensiones, o pueden presentarse como un producto seco para su reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Dichas preparaciones líquidas pueden prepararse por medios convencionales con aditivos farmacéuticamente aceptables tales como agentes de suspensión (por ejemplo, jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas comestibles hidrogenadas); agentes emulsionantes (por ejemplo, lecitina o goma arábiga); vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite de almendra, ésteres oleosos, alcohol etílico o aceites comestibles fraccionados); y conservantes (por ejemplo, p-hidroxibenzoato de metilo o propilo o ácido sórbico). Las preparaciones también pueden contener sales tamponantes, agentes aromatizantes, colorantes y edulcorantes según lo apropiado.

Debido a su facilidad de administración, los comprimidos y las cápsulas representan una forma farmacéutica oral unitaria ventajosa, en cuyo caso se emplean excipientes sólidos. Si se desea, los comprimidos pueden recubrirse mediante técnicas convencionales acuosas o no acuosas. Dichas formas farmacéuticas pueden prepararse mediante cualquiera de los métodos de farmacia. En general, las composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas se preparan mezclando de forma uniforme e íntima los ingredientes activos con vehículos líquidos, vehículos sólidos finamente divididos, o ambos, y después conformando el producto en la presentación deseada si fuera necesario.

Por ejemplo, un comprimido puede prepararse mediante compresión o moldeo. Los comprimidos por compresión pueden prepararse comprimiendo en una máquina adecuada los ingredientes activos en una forma de flujo libre tal como polvo o gránulos, opcionalmente mezclados con un excipiente. Los comprimidos moldeados pueden fabricarse moldeando en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte.

Ejemplos de excipientes que pueden usarse en formas farmacéuticas orales de la invención incluyen, aunque sin limitación, aglutinantes, rellenos, disgregantes y lubricantes. Aglutinantes adecuados para su uso en composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas incluyen, aunque sin limitación, almidón de maíz, almidón de patata u otros almidones, gelatina, gomas naturales y sintéticas tales como goma arábiga, alginato sódico, ácido algínico, otros alginatos, tragacanto en polvo, goma guar, celulosa y sus derivados (por ejemplo, etilcelulosa, acetato de celulosa, carboximetilcelulosa de calcio, carboximetilcelulosa de sodio), polivinilpirrolidona, metilcelulosa, almidón pregelatinizado, hidroxipropilmetilcelulosa (por ejemplo, n.° 2208, 2906, 2910), celulosa microcristalina y mezclas de los mismos.

Ejemplos de rellenos adecuados para su uso en las composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas divulgadas en este documento incluyen, aunque sin limitación, talco, carbonato de calcio (por ejemplo, gránulos o polvo), celulosa microcristalina, celulosa en polvo, dextratos, caolín, manitol, ácido silícico, sorbitol, almidón, almidón pregelatinizado y mezclas de los mismos. El aglutinante o el relleno en las composiciones farmacéuticas de la invención típicamente está presente en aproximadamente un 50 a aproximadamente un 99 por ciento en peso de la composición farmacéutica o forma farmacéutica.

Formas adecuadas de celulosa microcristalina incluyen, aunque sin limitación, los materiales vendidos como AVICEL-PH-101, AVICEL-PH-103, AVICEL RC-581, AVICEL-PH-105 (disponible en FMC Corporation, American Viscose Division, Avicel Sales, Marcus Hook, PA) y mezclas de los mismos. Un aglutinante específico es una mezcla de celulosa microcristalina y carboximetilcelulosa de sodio vendida como AVICEL RC-581. Excipientes o aditivos anhidros o de baja humedad adecuados incluyen AVICEL-PH-103™ y Starch 1500 LM.

Se usan disgregantes en las composiciones de la invención para proporcionar comprimidos que se disgreguen cuando se expongan a un entorno acuoso. Los comprimidos que contienen demasiado disgregante pueden disgregarse en almacenamiento, mientras que los que contienen demasiado poco, no pueden disgregarse a una tasa deseada o en las condiciones deseadas. Por tanto, debe usarse una cantidad suficiente de disgregante que no sea demasiado grande ni demasiado pequeña para alterar perjudicialmente la liberación de los ingredientes activos, para formar formas farmacéuticas orales sólidas de la invención. La cantidad de disgregante usada varía basándose en el tipo de formulación, y es fácilmente discernible para los expertos en la materia. Las composiciones farmacéuticas típicas comprenden de aproximadamente un 0,5 a aproximadamente un 15 por ciento en peso de disgregante, específicamente de aproximadamente un 1 a aproximadamente un 5 por ciento en peso de disgregante.

Los disgregantes que pueden usarse en composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas de la invención incluyen, aunque sin limitación, agar, ácido algínico, carbonato de calcio, celulosa microcristalina, croscarmelosa sódica, crospovidona, polacrilina de potasio, glicolato sódico de almidón, almidón de patata o tapioca, almidón pregelatinizado, otros almidones, arcillas, otras alginas, otras celulosas, gomas y mezclas de los mismos.

Lubricantes que pueden usarse en composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas de la invención incluyen, aunque sin limitación, estearato de calcio, estearato de magnesio, aceite de vaselina, aceite de vaselina fluido, glicerina, sorbitol, manitol, polietilenglicol, otros glicoles, ácido esteárico, laurilsulfato de sodio, talco, aceite vegetal hidrogenado (por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de girasol, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja), estearato de cinc, oleato de etilo, laurato de etilo, agar y mezclas de los mismos. Lubricantes adicionales incluyen, por ejemplo, un gel de sílice Syloid (AEROSIL 200, fabricado por W.R. Grace Co. de Baltimore, MD)), un aerosol coagulado de sílice sintética (comercializado por Degussa Co. de Plano, TX), CAB-O-SIL (un producto de dióxido de silicio pirógeno vendido por Cabot Co. de Boston, MA) y mezclas de los mismos. Si apenas se usan, los lubricantes se usan típicamente en una cantidad de menos de aproximadamente un 1 ^{por ciento en peso de las composiciones farmacéuticas o formas farmacéuticas en que se incorporan.}

4.5.2 Formas farmacéuticas de liberación retardada

Los compuestos para el uso de la invención pueden administrarse por un medio de liberación controlada o mediante dispositivos de suministro que son bien conocidos por los expertos en la materia. Ejemplos incluyen, aunque sin limitación, los descritos en las patentes de Estados Unidos n.°: 3.845.770; 3.916.899; 3.536.809; 3.598.123; y 4.008.719, 5.674.533, 5.059.595, 5.591.767, 5.120.548, 5.073.543, 5.639.476, 5.354.556, y 5.733.566. Dichas formas farmacéuticas pueden usarse para proporcionar liberación lenta o controlada de uno o más ingredientes activos usando, por ejemplo, hidropropilmetilcelulosa, otras matrices poliméricas, geles, membranas permeables, sistemas osmóticos, recubrimientos multicapa, micropartículas, liposomas, microesferas o una combinación de los mismos para proporcionar el perfil de liberación deseado en proporciones variables. Las formulaciones de liberación controlada adecuadas conocidas por los expertos en la materia, incluyendo las descritas en este documento, pueden seleccionarse fácilmente para su uso con los ingredientes activos de la invención. La invención, por tanto, abarca formas farmacéuticas unitarias individuales adecuadas para administración oral tales como, aunque sin limitación, comprimidos, cápsulas, cápsulas de gelatina y comprimidos oblongos que están adaptados para liberación controlada.

Todos los productos farmacéuticos de liberación controlada tienen un objetivo común de mejorar el tratamiento farmacológico sobre el conseguido mediante sus equivalentes no controlados. De forma ideal, el uso de una preparación de liberación controlada diseñada de forma óptima en tratamiento médico se caracteriza por un mínimo de sustancia farmacéutica que se emplea para curar o controlar la afección en una cantidad mínima de tiempo. Ventajas de formulaciones de liberación controlada incluyen actividad prolongada del fármaco, frecuencia de dosificación reducida y cumplimiento aumentado por parte del paciente. Además, las formulaciones de liberación controlada pueden usarse para influir en el tiempo de inicio de la acción u otras características, tales como niveles sanguíneos del fármaco y, por tanto, pueden influir en la aparición de efectos secundarios (por ejemplo, adversos).

La mayoría de las formulaciones de liberación controlada se diseñan para liberar inicialmente una cantidad de fármaco (ingrediente activo) que produce de inmediato el efecto terapéutico deseado, y la liberación gradual y continuamente de otras cantidades de fármaco para mantener este nivel de efecto terapéutico o profiláctico durante un periodo prolongado de tiempo. Para mantener este nivel constante de fármaco en el organismo, el fármaco debe liberarse de la forma farmacéutica a una tasa que remplazará la cantidad de fármaco que se está metabolizando y excretando del organismo. La liberación controlada de un ingrediente activo puede estimularse mediante diversas condiciones incluyendo, aunque sin limitación, pH, temperatura, enzimas, agua u otras condiciones fisiológicas o compuestos.

4.5.3 Formas farmacéuticas parenterales

Las formas farmacéuticas parenterales pueden administrarse a los pacientes mediante diversas vías incluyendo, aunque sin limitación, subcutánea, intravenosa (incluyendo inyección intravenosa rápida), intramuscular e intraarterial. Como su administración típicamente esquiva las defensas naturales de los pacientes contra contaminantes, las formas farmacéuticas parenterales son preferiblemente estériles o pueden esterilizarse antes de su administración a un paciente. Ejemplos de formas farmacéuticas parenterales incluyen, aunque sin limitación, soluciones listas para inyección, productos secos listos para disolverse o suspenderse en un vehículo para inyección farmacéuticamente aceptable, suspensiones listas para inyección, y emulsiones.

Los vehículos adecuados que pueden usarse para proporcionar formas farmacéuticas parenterales de la invención son bien conocidos por los expertos en la materia. Ejemplos incluyen, aunque sin limitación: agua para inyección USP; vehículos acuosos tales como, aunque sin limitación, solución de cloruro de sodio, solución de Ringer, solución glucosada, solución glucosada y de cloruro de sodio y solución de Ringer con lactato; vehículos miscibles en agua tales como, aunque sin limitación, alcohol etílico, polietilenglicol y polipropilenglicol; y vehículos no acuosos tales como, aunque sin limitación, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuete, aceite de sésamo, oleato de etilo, miristato de isopropilo y benzoato de bencilo.

También pueden incorporarse compuestos que aumentan la solubilidad de uno o más de los ingredientes divulgados en este documento en las formas farmacéuticas parenterales de la invención.

4.5.4 Formas farmacéuticas transdérmicas y tópicas

Las formas farmacéuticas transdérmicas y tópicas de la invención incluyen, aunque sin limitación, cremas, lociones, pomadas, geles, soluciones, emulsiones, suspensiones u otras formas conocidas por los expertos en la materia. Véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18.a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990); e ^{Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms,}4^{.a ed., Lea y Febiger, Filadelfia (1985). Las formas farmacéuticas}transdérmicas incluyen parches "de tipo depósito" o "de tipo matriz", que pueden aplicarse a la piel y usarse durante un periodo específico de tiempo para permitir la penetración de una cantidad deseada de ingredientes activos.

Los excipientes adecuados (por ejemplo, vehículos y diluyentes) y otros materiales que pueden usarse para proporcionar formas farmacéuticas transdérmicas y tópicas incluidas por esta invención son bien conocidos por los expertos en las técnicas farmacéuticas, y dependen del tejido particular al que se aplicará una composición farmacéutica o forma farmacéutica dada. Con ese hecho en mente, excipientes típicos incluyen, aunque sin limitación, agua, acetona, etanol, etilenglicol, propilenglicol, butano-1,3-diol, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, aceite de vaselina y mezclas de los mismos para formar lociones, tinturas, cremas, emulsiones, geles o pomadas, que son atóxicos y farmacéuticamente aceptables. También pueden añadirse hidratantes o humectantes a las composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas si se desea. Ejemplos de dichos ingredientes adicionales son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18.a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).

Dependiendo del tejido específico a tratar, pueden usarse componentes adicionales antes de, junto con o después del tratamiento con ingredientes activos de la invención. Por ejemplo, pueden usarse potenciadores de la penetración para ayudar a suministrar los ingredientes activos en el tejido. Potenciadores adecuados de la penetración incluyen, aunque sin limitación: acetona; diversos alcoholes tales como etanol, oleílo y tetrahidrofurilo; sulfóxidos de alquilo tales como sulfóxido de dimetilo; dimetilacetamida; dimetilformamida; polietilenglicol; pirrolidonas tales como polivinilpirrolidona; clases de Kollidon (Povidona, Polividona); urea; y diversos ésteres de glúcidos insolubles o solubles en agua tales como Tween 80 (polisorbato 80) y Span 60 (monoestearato de sorbitán).

El pH de una composición farmacéutica o forma farmacéutica, o del tejido al que se aplica la composición farmacéutica 0 forma farmacéutica, también puede ajustarse para mejorar el suministro de uno o más ingredientes activos. Asimismo, la polaridad un vehículo disolvente, su fuerza iónica o tonicidad pueden ajustarse para mejorar el suministro. También pueden añadirse compuestos tales como estearatos a composiciones farmacéuticas o formas farmacéuticas para alterar ventajosamente la hidrofobia o lipofilia de uno o más ingredientes activos para mejorar el suministro. A este respecto, los estearatos pueden servir como vehículo lipídi

tensioactivo, y como agente potenciador del suministro o potenciador de la penetración. Pueden usarse diferentes sales, hidratos o solvatos de los ingredientes activos para ajustar más las propiedades de la composición resultante.

4.5.5 Formas farmacéuticas mucosas

Formas farmacéuticas mucosas de la invención incluyen, aunque sin limitación, soluciones oftálmicas, pulverizadores y aerosoles, u otras formas conocidas por los expertos en la materia. Véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18.a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990); e Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4.a ed., Lea y Febiger, Filadelfia (1985). Las formas farmacéuticas adecuadas para tratamiento de tejidos mucosos dentro de la cavidad bucal pueden formularse como colutorios o como geles bucales. En una realización, el aerosol comprende un vehículo. En otra realización, el aerosol no tiene vehículo.

Un compuesto de fórmula I o II también puede administrarse directamente al pulmón por inhalación (véase, por ejemplo, Tong et al., solicitud PCT, WO 97/39745; Clark et al., solicitud PCT, WO 99/47196). Para administración por inhalación, un compuesto de fórmula I o II puede suministrarse convenientemente al pulmón mediante varios dispositivos diferentes. Por ejemplo, puede usarse un inhalador de dosis medida ("MDI") que utiliza depósitos que contienen un propulsor de ebullición lenta adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado para suministrar un compuesto de fórmula I directamente al pulmón. Están disponibles dispositivos MDI de una diversidad de proveedores tales como 3M Corporation, Aventis, Boehringer Ingleheim, Forest Laboratories, Glaxo-Wellcome, Schering Plough y Vectura.

Como alternativa, puede usarse un dispositivo inhalador de polvo seco (DPI) para administrar un compuesto de fórmula 1 al pulmón (véase, por ejemplo, Raleigh et al., Proc. Amer. Assoc. Cancer Research Annual Meeting, 1999, 40, 397). Los dispositivos DPI típicamente usan un mecanismo tal como una explosión de gas para crear una nube de polvo seco dentro de un recipiente, que entonces puede inhalarse por el paciente. Los dispositivos DPI también son conocidos en la técnica y pueden adquirirse de varios proveedores que incluyen, por ejemplo, Fisons, Glaxo-Wellcome, Inhale Therapeutic Systems, ML Laboratories, Qdose y Vectura. Una variación popular es el sistema DPI de múltiples dosis ("MDDPI"), que permite el suministro de más de una dosis terapéutica. Los dispositivos MDDPI están disponible de empresas tales como AstraZeneca, GlaxoWellcome, IVAX, Schering Plough, SkyePharma y Vectura. Por ejemplo, pueden formularse cápsulas y cartuchos de gelatina para su uso en un inhalador o insuflador, que contienen una mezcla en polvo del compuesto y una base en polvo adecuada tal como lactosa o almidón para estos sistemas.

Otro tipo de dispositivo que pueden usarse para suministrar un compuesto de fórmula I o II al pulmón es un dispositivo de pulverizador líquido suministrado, por ejemplo, por Aradigm Corporation. Los sistemas de pulverizador líquido usan orificios de boquilla extremadamente pequeños para convertir en aerosol formulaciones de fármaco líquidas que entonces pueden inhalarse directamente en el pulmón.

En una realización preferida, se usa un dispositivo nebulizador para suministrar un compuesto de fórmula I o II al pulmón. Los nebulizadores crean aerosoles de formulaciones de fármaco líquidas usando, por ejemplo, energía ultrasónica para formar partículas finas que pueden inhalarse fácilmente (véase, por ejemplo, Verschoyle et al., British J Cancer, 1999, 80, supl. 2, 96). Ejemplos de nebulizadores incluyen dispositivos suministrados por Sheffield/Systemic Pulmonary Delivery Ltd. (véase, Armer et al., patente de Estados Unidos n.° 5.954.047; van der Linden et al., patente de Estados Unidos n.° 5.950.619; van der Linden et al., patente de Estados Unidos n.° 5.970.974), Aventis y Batelle Pulmonary Therapeutics. El compuesto de fórmula I inhalado, suministrado por dispositivos nebulizadores, está actualmente en investigación como tratamiento para cáncer del sistema respiratoriodigestivo (Engelke et al., póster 342 en la American Association of Cancer Research, San Francisco, Calif., 1-5 de abril, 2000) y cáncer pulmonar (Dahl et al., póster 524 en la American Association of Cancer Research, San Francisco, Calif., 1-5 de abril, 2000).

En una realización particularmente preferida, se usa un dispositivo de aerosol electrohidrodinámico ("EHD") para suministrar un compuesto de fórmula I o II al pulmón. Los dispositivos de aerosol EHD usan la energía eléctrica para convertir en aerosol soluciones o suspensiones de fármaco líquidas (véase, por ejemplo, Noakes et al., patente de Estados Unidos n.° 4.765.539; Coffee, patente de Estados Unidos n.° 4.962.885; Coffee, solicitud PCT, WO 94/12285; Coffee, solicitud PCT, WO 94/14543; Coffee, solicitud PCT, WO 95/26234, Coffee, solicitud PCT, WO 95/26235, Coffee, solicitud PCT, WO 95/32807). Las propiedades electroquímicas de la formulación de compuesto de fórmula I pueden ser parámetros importantes a optimizar cuando se suministra este fármaco al pulmón con un dispositivo de aerosol EHD y dicha optimización se realiza de forma rutinaria por un experto en la materia. Los dispositivos de aerosol EHD pueden suministrar los fármacos al pulmón de manera más eficaz que las tecnologías de suministro pulmonar existentes. Otros métodos de suministro intrapulmonar de un compuesto de fórmula I o II serán conocidos por los expertos en la materia y están dentro del alcance de la invención.

Las formulaciones de fármaco líquidas adecuadas para su uso con nebulizadores y dispositivos de pulverizador líquido y dispositivos de aerosol EHD típicamente incluirán un compuesto de fórmula I con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Preferiblemente, el vehículo farmacéuticamente aceptable es un líquido tal como alcohol, agua, polietilenglicol o un perfluorocarbono. Opcionalmente, puede añadirse otro material para alterar las propiedades de aerosol de la solución o suspensión de un compuesto de fórmula I o II. Preferiblemente, este material es líquido, tal como un alcohol, glicol, poliglicol o ácido graso. Otros métodos de formulación de soluciones o suspensiones de fármaco líquidas adecuadas para su uso en dispositivos de aerosol son conocidos por los expertos en la materia (véase, por ejemplo, Biesalski, patente de Estados Unidos n.° 5.112.598; Biesalski, 5.556.611). Los compuestos también pueden formularse en composiciones rectales o vaginales tales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, que contienen bases de supositorio convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos.

Además de las formulaciones descritas previamente, un compuesto de fórmula I o II también puede formularse como una preparación de liberación lenta. Dichas formulaciones de acción prolongada pueden administrarse por implante (por ejemplo, por vía subcutánea o intramuscular) o por inyección intramuscular. Por tanto, por ejemplo, los compuestos pueden formularse con materiales poliméricos o hidrófobos adecuados (por ejemplo, como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados moderadamente solubles, por ejemplo, como una sal moderadamente soluble.

Como alternativa, pueden emplearse otros sistemas de suministro farmacéutico. Los liposomas y emulsiones son ejemplos bien conocidos de vehículos de suministro que pueden usarse para suministrar un compuesto de fórmula I o II. También pueden emplearse determinados disolventes orgánicos tales como dimetilsulfóxido, aunque habitualmente a costa de una mayor toxicidad. Un compuesto de fórmula I también puede suministrarse en un sistema de liberación controlada. En una realización, puede usarse una bomba (Sefton, CRC Crit. Ref Biomed Eng., 1987, 14, ^{201; Buchwald et al., Surgery, 1980,}88^{, 507; Saudek et al., N. Engl. J Med, 1989, 321, 574). En otra realización,}pueden usarse materiales poliméricos; véase, Medical Applications of Controlled Release Langer y Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Fla. (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen y Ball (eds.), Wiley, Nueva York (1984); Ranger y Peppas, J Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem., 1983, 23, 61; véase también Levy et al., Science 1985, 228, 190; During et al., Ann. Neurol., 1989, 25, 351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71, 105). En otra realización más, un sistema de liberación controlada puede colocarse en proximidad de la diana de los compuestos para el uso de la invención, por ejemplo, el pulmón, requiriendo, por tanto, solamente una fracción de la dosis sistémica (véase, por ejemplo, Goodson, en Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pág. 115 (1984)). Puede usarse otro sistema de liberación controlada (véase, por ejemplo, Langer, Science, 1990, 249, 1527).

Los excipientes adecuados (por ejemplo, vehículos y diluyentes) y otros materiales que pueden usarse para proporcionar formas farmacéuticas mucosas incluidas por esta invención son bien conocidos por los expertos en las técnicas farmacéuticas, y dependen del sitio o método particular con el que se administrará una composición farmacéutica o forma farmacéutica dada. Con ese hecho en mente, excipientes típicos incluyen, aunque sin limitación, agua, etanol, etilenglicol, propilenglicol, butano-1,3-diol, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, aceite de vaselina y mezclas de los mismos, que son atóxicos y farmacéuticamente aceptables. Ejemplos de dichos ingredientes adicionales son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18.a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).

El pH de una composición farmacéutica o forma farmacéutica, o del tejido al que se aplica la composición farmacéutica o forma farmacéutica, también puede ajustarse para mejorar el suministro de uno o más ingredientes activos. Asimismo, la polaridad un vehículo disolvente, su fuerza iónica o tonicidad pueden ajustarse para mejorar el suministro. También pueden añadirse compuestos tales como estearatos a composiciones farmacéuticas o formas farmacéuticas para alterar ventajosamente la hidrofobia o lipofilia de uno o más ingredientes activos para mejorar el suministro. A este respecto, los estearatos pueden servir como vehículo lipídi

5. Ejemplos

Los siguientes ejemplos emplean metodología que puede usarse para preparar los compuestos para el uso de la invención y todos los compuestos divulgados en este documento, siempre que se utilicen los reactivos y sustratos apropiados y se mantengan variaciones mínimas de las condiciones descritas. Dichas variaciones las realizarían fácilmente los expertos en la materia sin experimentación excesiva dada la descripción a continuación.

5.1 Ejemplo 1: Preparación de ácido 3-[5-(4-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

Se suspendieron 40 g de resina de cloruro de 2-clorotritilo (Rapp polymere, Alemania), en dimetilformamida seca (200 ml) durante 10 min y el disolvente se drenó. A la resina se le añadió una solución de ácido 3-cianobenzoico (12,71 g, 96,4 mmol) en 300 ml de dimetilformamida y se agitó 4 h a temperatura ambiente. Los disolventes se drenaron y la resina se lavó con diclorometano (3 x 200 ml x 1 min), dimetilformamida (3 x 200 ml x 1 min), metanol (3 x 200 ml x 1 min) y diclorometano (3 x 200 ml x 1 min). La resina se secó al vacío durante 4 h. El producto deseado se analizó por escisión de una pequeña cantidad de la resina que había reaccionado con trietilsilano/ácido trifluoroacético/diclorometano (10/50/40). CL/EM (IEN) m/z 148 [M+H]+ y 97 % de pureza.

La resina de tritilo 3-cianobenzoico en etanol (300 ml) se agitó durante 10 min a temperatura ambiente, y después el disolvente se drenó. A una solución de clorhidrato de hidroxiamina (35,81 g, 516 mmol) en etanol (200 ml) se le añadió diisopropiletilamina (89,3 ml, 516 mmol) y se agitó 5 min a temperatura ambiente. A la resina se le añadió la mezcla de reacción y se agitó 24 h a 40 °C. Los disolventes se drenaron y la resina se lavó con diclorometano (3 x 200 ml x 10 min), dimetilformamida (3 x 200 ml x 10 min), metanol (3 x 200 ml x 10 min) y diclorometano (3 x 200 ml x 10 min). La resina se secó al vacío durante 4 h. El producto deseado se analizó por escisión de una pequeña cantidad de la resina que había reaccionado con trietilsilano/ácido trifluoroacético/diclorometano (10/50/40). CL/EM (IEN) m/z 181 [M+H]+ y 90 % de pureza.

A una suspensión de resina de hidroxiamidina (500 mg, 0,4 mmol) en diclorometano anhidro (3 ml) se le añadió cloruro de 4-fluorobenzoílo (95 ul, 0,8 mmol) y diisopropiletilamina (138 ul, 0,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Los disolventes se drenaron y la resina se lavó con diclorometano (3 x 10 ml x 10 min), dimetilformamida (3 x 10 ml x 10 min), metanol (3 x 10 ml x 10 min) y diclorometano (3 x 10 ml x 10 min). La resina se secó al vacío durante 4 h. El producto deseado se analizó por escisión de una pequeña cantidad de la resina que había reaccionado con trietilsilano/ácido trifluoroacético/diclorometano (10/50/40). CL/EM (IEN) m/z 303 [M+H]+ y 65 % de pureza.

A una suspensión de resina acilada en diclorometano anhidro (1,5 ml) se le añadió ácido trifluoroacético al 50 % en diclorometano (1,5 ml). La mezcla de reacción se agitó 2 h a temperatura ambiente. La resina se retiró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en dimetilformamida al 10 % en tolueno (4 ml) y después se agitó durante 2 h a 130 °C. Los disolventes se retiraron y el producto deseado se purificó por CL/EM preparativa. CL/EM (IEN) m/z 285 [M+H]+ y 98 % de pureza.

Los siguientes compuestos se preparan usando los procedimientos descritos anteriormente. Los compuestos se analizaron mediante CL/EM usando ionización por electronebulización (IEN).

Tabla 2: Compuesto Denominación del compuesto [M H]+ ácido 3-[5-(3-cloro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol- 301,7

ácido 3-(5-ciclohexil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)- 273,3 benzoico

ácido 3-[5-(3,4,5-trimetoxi-fenil)- 357,3 [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(4-nitro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol- 312,2 3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(4-metoxi-fenil)- 297,3 [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(o-tolil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]- 281,3 benzoico

ácido 3-(5-benzo[1,3]dioxol-5-il- 311,3 ^[1 ^{,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico}

ácido 3-(5-isopropil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)- 233,2

benzoico

ácido 3-[5-(3,5-bis-trifluorometNfenil)- 403,2

[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(4-trifluorometil-fenil)- 335,2 [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(4-dimetilamino-fenil)- 310,3 [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(2-metoxi-fenil)- 297,3 [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(3-metoxi-fenil)- 297,3 [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-(5-furan-2-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)- 257,2 benzoico

ácido 3-(5-terc-butil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)- 247,3

benzoico

ácido 3-(5-benzo[1,2,5]oxadiazol-5-il- 309,2

[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico

ácido 3-[5-(4-dorometil-fenN)- 315,7 [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(4-terc-butil-fenil)- 323,4 [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-(5-butil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)- 247,3 benzoico

ácido 3-(5-ciclopropil-[1,2,4]oxadiazol-3- 231,2 il)-benzoico

ácido 3-(5-tiofen-2-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)- 273,3 benzoico

ácido 3-(5-propenil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)- 231,2 benzoico

ácido 3-(5-ciclopentil-[1,2,4]oxadiazol-3- 259,3

il)-benzoico

ácido 3-(5-tiofen-2-ilmetil-[1,2,4]oxadiazol- 287,3

ácido 3-(5-m-tolil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)- 281,3 benzoico

ácido 3-[5-(4-pirrol-1 -il-fenil)- 332,0 [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-(5-bencil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)- 281,3 benzoico

ácido 3-(5-metoximetil-[1,2,4]oxadiazol-3- 235,2 il)-benzoico

ácido 3-[5-(2,5-difluoro-fenil)- 303,2 [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(1-fenil-propil)-[1,2,4]oxadiazol- 309,3 3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(2-cloro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol- 301,7

3-il]-benzoico

ácido 3-[5-3-trifluorometoxi-fenil- 351,2

ácido 3-{5-[3-(2-cloro-fenil)-5-metil- 382,8 isoxazol-4-il]-[1,2,4]oxadiazol-3-il}-benzoico

ácido 3-{5-[3-(2-doro-6-fluorofenil)-5- 400,0 metil-isoxazol-4-il]-[1,2,4]oxadiazol-3-il}-benzoico

ácido 3-(5-ciclopentilmetil- 273,3 [1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico

ácido 3-[5-(2,4-difluoro-fenil)- 303,2 [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-(5-piridin-3-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)- 268,2 benzoico

ácido 3-(5-piridin-4-il-[1,2,4]oxadiazol-3-il)- 268,2 benzoico

ácido 3-(5-ciclobutil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)- 245,2

benzoico

ácido 3-[5-(4-metoxi-bencil)- 311,3

[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(3,4-dimetoxi-fenil)- 327,3 [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(2-doro-piridin-3-il)- 302,7 [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(1-acetil-piperidin-4-il)- 316,3 [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-(5-benzo[b]tiofen-2-il- 323,3 [1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico

ácido 3-[5-(3-dimetilamino-fenil)- 310,3 [1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(2,3-difluoro-fenil)- 303,2

[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

ácido 3-[5-(2-fluoro-5-metil-fenN)- 299,3

ácido 3-[5-(2-fluoro-5-metil-fenN)- 299,3

éster metílico del ácido 3-[5-(2-fluoro- 299,08

fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

5.2 Ejemplo 2: Preparación de ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico

^{A una solución de ácido 3-cianobenzoico (44,14 g, 300 mmol) en DMF (0,6 l) se le añadió K}2^CO3 ^{(62,19 g, 450 mmol)}y después se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. A la suspensión se le añadió yoduro de metilo (28 ml, 450 mmol) durante 20 min, y la mezcla de reacción se agitó 4 h más a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió a 1,2 l de agua helada y se agitó durante 30 min, y el precipitado se retiró por filtración. La torta blanca se disolvió en metanol (70 ml), y después se volvió a precipitar en agua fría. El producto deseado se obtuvo como un polvo blanco con un 79 % de rendimiento (38 g, 99 % de pureza por CL/UV). RMN de 1H (CDCh) 58,85 (2H), 8,28 (1H), 8,02 (1H), 4.17 (3H).

A una solución de éster metílico del ácido 3-cianobenzoico (50 g, 310 mmol) en etanol (500 ml) se le añadió hidroxilamina acuosa al 50 % (41 ml, 620 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 1 h a 100 °C y los disolventes se retiraron a presión reducida. El residuo oleoso se disolvió en etanol/tolueno 20/80 (50 ml x 2) y después se concentró de nuevo. El éster deseado (61 g, rendimiento cuant.) se obtuvo como un polvo blanco con un 98 % de pureza (CL/UV). RMN de 1H (CDCh) 59,76 (1H), 8,24 (1H), 7,82 (2H), 7,51 (1H), 5,92 (2H), 3,82 (3H).

A una solución de éster metílico del ácido 3-(N-hidroxicarbamimidoil)-benzoico (60 g, 310 mmol) en THF anhidro (200 ml) se le añadió diisopropiletilamina (75 ml, 434 mmol) a 5 °C, y después a la mezcla se le añadió cloruro de 2-fluorobenzoílo (48,1 ml, 403 mmol) durante 20 min. La mezcla de reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. El precipitado se retiró por filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo (400 ml) y después se calentó con agua (200 ml x 2). El disolvente se retiró a presión reducida y el producto deseado se cristalizó en acetato de etilo al 60 % en hexano para producir el producto deseado (81 g, 83 % de rendimiento) como un sólido blanco. RMN de 1H (CDCh) 58,18 (1H), 8,03 (2H), 7,48 (2H), 7,18 (2H), 5,61 (2H), 3,82 (3H).

Se calentaron 44 g de éster metílico del ácido 3-(N-2-fluorobenzoilcarbamimidoil)-benzoico en tolueno (500 ml) a reflujo durante 4 h a 130 °C usando el aparato Dean-Stark. La mezcla de reacción se agitó a 5 °C durante 18 h. El precipitado blanco se retiró por filtración y el filtrado se concentró, se cristalizó de nuevo en tolueno. El oxadiazol deseado (38 g, 92 % de rendimiento) se obtuvo como un sólido blanco con un 99 % de pureza (CL/UV). RMN de 1H (CDCh) 58,91 (1H), 8,38 (1H), 8,15 (2H), 7,62 (2H), 7,35 (2H), 3,95 (3H)

A una solución de éster metílico del ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico (33 g, 111 mol) en THF (400 ml) se le añadió NaOH acuoso 1,5 M (100 ml, 144 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2 h a 100 °C. El disolvente orgánico se retiró a presión reducida y la solución acuosa se agitó 2 h a 5 °C. El precipitado blanco se retiró por filtración y el filtrado se concentró y se precipitó de nuevo en agua. La torta blanca se lavó con agua fría y después se secó usando un liofilizador. La sal deseada (33 g, 96 % de rendimiento) se obtuvo como un polvo blanco con un 98,6 % de pureza (CL/UV).

A una solución de éster metílico del ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico (3,3 g, 11 mmol) en THF (40 ml) se le añadió NaOH acuoso 1,5 M (10 ml, 14 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2 h at 100 °C. El disolvente orgánico se retiró y la solución acuosa se diluyó con agua (50 ml), y después se acidificó con HCl acuoso. El precipitado blanco se retiró por filtración y la torta blanca se lavó con agua fría y después se secó usando un liofilizador. El ácido deseado (3,0 g, 96 % de rendimiento) se obtuvo como un polvo blanco con un 98 % de pureza (CL/UV). Punto de fusión 242 °C; IR u 3000 (C-H aromático), 1710 (C=O); RMN de 1H (D6-DMSO) 58,31 (1H), 8.18 (2H), 8,08 (1H), 7,88 (2H), 7,51 (2H); RMN de 13C (D6-DMSO) 5172,71, 167,38, 166,48, 161,25, 135,80, 132,24, 131,79, 131,79, 131,08, 130,91, 129,81, 127,76, 125,48, 117,38, 111,70; RMN de 19F (D6-DMSO) 5109,7.

Los siguientes compuestos se preparan usando los procedimientos descritos anteriormente.

5.3 Ejemplo de referencia 3: Identificación y caracterización de compuestos que promueven supresión de mutaciones finalizadoras y/o modulan la term inación de la traducción.

Los ensayos descritos anteriormente en la sección 4.2 se usaron en dos cribados de alto rendimiento. Los compuestos se cribaron en los ensayos celulares y bioquímicos. Los compuestos se ensayaron, se volvieron a sintetizar y se ensayaron de nuevo para confirmar las estructuras químicas. La sal sódica del ácido 3-[2-(4-isopropil-3-metil-fenoxi)-acetilamino]-benzoico se caracterizó más el ensayo de supresión de mutaciones finalizadoras de luciferasa in vito. Para garantizar que la actividad observada de supresión de mutaciones finalizadoras de los compuestos seleccionados no se limitaba al sistema de ensayo de reticulocitos de conejo, se preparó extracto de células HeLa y se optimizó (Lie y Macdonald, 1999, Development 126(22): 4989-4996 y Lie y Macdonald, 2000, Biochem. Biophys. Res. Commun.

270(2):473-481).

5.4 Ejemplo de referencia 4: Caracterización de compuesto que aumentan la supresión de mutaciones finalizadoras y producen proteína funcional.

Se demostró previamente que los compuestos de la invención aumentan el nivel de supresión de mutaciones finalizadoras en el ensayo bioquímico de tres a cuatro veces sobre los extractos no tratados. Para determinar si los compuestos también funcionan in vivo, una línea celular estable que porta el gen de luciferasa que contiene UGA finalizador se trató con compuestos seleccionados. Las células se cultivaron en medio convencional complementado con penicilina-estreptomicina (P/S) al 1 % y suero fetal bovino (FBS) al 10 % hasta un 70 % de confluencia y se dividieron 1:1 el día antes del tratamiento. El siguiente día, las células se trataron con tripsina y se añadieron 40000 células a cada pocillo de una placa d histocultivo de 96 pocillos. Se prepararon diluciones en serie de cada compuesto para generar una curva de respuesta a dosis de seis puntos que abarca 2 log (30 ^M a 0,3 ^M). La concentración final del disolvente DMSO permaneció constante a un 1 % en cada pocillo. Las células tratadas con DMSO al 1 % sirvieron como el patrón de fondo, y las células tratadas con gentamicina sirvieron como control positivo.

5.5 Ejemplo de referencia 5: Sal sódica del ácido 3-[2-(4-isopropil-3-metil-fenoxi)-acetilamino]-benzoico altera la accesibilidad de los agentes modificadores químicos a los nucleótidos específicos en el ARNr 28S.

Estudios previos han demostrado que la gentamicina y otros miembros de la familia de aminoglucósidos que disminuyen la fidelidad de la traducción se unen al sitio A del ARNr 16S. Mediante elaboración de huella química, reticulación UV y RMN, se ha demostrado que la gentamicina se une al sitio A (compuesto de los nucleótidos 1400 1410 y 1490-1500, numeración de E. coli) del ARNr en los nucleótidos 1406, 1407, 1494 y 1496 (Moazed y Noller, 1987, Nature 327(6121):389-394; Woodcock et al., 1991, EMBO J. 10(10):3099-3103; y Schroeder et al., 2000, EMBO J. 19:1-9.

Se incubaron ribosomas preparados a partir de células HeLa con las micromoléculas (a una concentración de 100 ^M), seguido de tratamiento con agentes modificadores químicos (sulfato de dimetilo [DMS] y ketoxal [KE]). Después de modificación química, el ARNr se extrajo con fenol-cloroformo, se precipitó con etanol, se analizó en reacciones de prolongación de cebador usando oligonucleótidos marcados en el extremo que hibridan con diferentes regiones de los tres ARNr y se resolvió en geles de poliacrilamida al 6 %. Las sondas usadas para la prolongación de cebador cubren los ARNr completos 18S (7 cebadores oligonucleotídicos), 28S (24 cebadores oligonucleotídicos) y 5S (un cebador). Los controles en estos experimentos incluyen DMSO (un control para cambios en la accesibilidad del ARNr inducidos por DMSO), paromomicina (un marcador para unión a ARNr 18S) y anisomicina (un marcador para unión a ARNr 28S).

Los resultados de estos experimentos de huella indicaron que la sal sódica del ácido 3-[2-(4-isopropil-3-metil-fenoxi)-acetilamino]-benzoico altera la accesibilidad de los agentes modificadores químicos a nucleótidos específicos en el ARNr 28S. Más específicamente, las regiones protegidas por la sal sódica del ácido 3-[2-(4-isopropil-3-metil-fenoxi)-acetilamino]-benzoico incluyen: (1) una región conservada en las cercanías del centro de la peptidil transferasa (dominio V) implicada en la formación de enlaces peptídicos y (2) una región conservada en el dominio II que puede interactuar con el centro de la peptidil transferasa basándose en la unión de vemamicinina B a estas dos zonas.

5.6 Ejemplo de referencia 6: Ultralectura de codones de term inación prematuros en modelos de enfermedad basados en células.

Para abordar los efectos de los compuestos supresores de mutaciones finalizadoras en ARNm alterados en enfermedades hereditarias específicas, una línea celular epitelial bronquial que portaba un codón finalizador en el aminoácido 1282 (W1282X) se trató con sal sódica del ácido 3-[2-(4-isopropil-3-metil-fenoxi)-acetilamino]-benzoico (20 |j M) y se controló la función de CFTR como un canal de cloruro activado por AMPc usando el ensayo SPQ (Yang et al., 1993, Hum Mol Genet. 2(8):1253-1261 y Howard et al., 1996, Nat Med. 2(4):467-469). Estos experimentos mostraron que el tratamiento con AMPc de estas células provocaba un aumento en la fluorescencia SPQ, coherente con la estimulación de descarga de haluro mediada por CFTR. No se observó aumento en la fluorescencia cuando las células no se trataban con compuesto o si las células no se estimulaban con AMPc. Estos resultados indican que el CFTR de longitud completa expresado a partir de este alelo que contiene mutación finalizadora después de tratamiento con el compuesto también funciona como canal de aniones estimulado por AMPc, demostrando, por tanto, que las líneas celulares de fibrosis quística aumentan la actividad del canal de cloruro cuando se tratan con sal sódica del ácido 3-[2-(4-isopropil-3-metil-fenoxi)-acetilamino]-benzoico.

5.7 Ejemplo de referencia 7: Células primarias del ratón mdx que contiene mutación finalizadora expresan proteína distrofina de longitud completa cuando se tratan con sal sódica del ácido 3-[2-(4-isopropil-3-metilfenoxi)-acetilamino]benzoico.

La mutación en el ratón mdx que provoca terminación prematura del polipéptido de la distrofina de 427 kDa ha demostrado ser una transición de C a T en la posición 3185 en el exón 23 (Sicinski et al., 1989, Science.

244(4912):1578-1580). Se prepararon cultivos primarios de músculo esquelético de ratón derivados de ratones mdx de 1 día de edad como se describe previamente (Barton-Davis et al., 1999, J Clin Invest. 104(4):375-381). Las células se cultivaron durante 10 días en presencia de sal sódica del ácido 3-[2-(4-isopropil-3-metil-fenoxi)-acetilamino]-benzoico (20 ^jM). El medio de cultivo se remplazó cada cuatro días y se detectó la presencia de distrofina en cultivos de mioblastos por inmunotinción como se describe previamente (Barton-Davis et al., 1999, J Clin Invest. 104(4):375-381). Se usó un anticuerpo monoclonal primario contra el extremo C de la proteína distrofina (F19A12) sin diluir y se usó anticuerpo anti-IgG de ratón conjugado con rodamina como anticuerpo secundario. El anticuerpo F19A12 detectará la proteína de longitud completa producida por supresión del codón finalizador. La tinción se observó usando un microscopio Leica DMR, cámara digital y programa informático de imágenes asociado en la Universidad de Pensilvania.

5.8 Ejemplo de referencia 8: Ultralectura de codones de terminación prematuros en el ratón mdx.

Como se describe previamente (Barton-Davis et al., 1999, J Clin Invest. 104(4):375-381), el compuesto se suministró mediante bombas osmóticas Alzet implantadas bajo la piel de ratones anestesiados. Se administraron dos dosis de sal sódica del ácido 3-[2-(4-isopropil-3-metil-fenoxi)-acetilamino]-benzoico. La gentamicina sirvió como control positivo y las bombas llenas solamente de disolvente sirvieron como control negativo. Las bombas se cargaron con compuesto apropiado de modo que las dosis calculadas a las que se expuso el tejido fueron 10 j M y 20 j M. La concentración de gentamicina se calculó para conseguir exposición del tejido de aproximadamente 200 ^jM. En el experimento inicial, los ratones se trataron durante 14 días, tras lo que los animales se anestesiaron con ketamina y se desangraron. Entonces se escindió el músculo tibial anterior (TA) de los animales experimentales, se congeló y se usó para análisis por inmunofluorescencia de la incorporación de distrofina en músculo estriado. La presencia de distrofina en músculos TA se detectó por inmunotinción, como se describe previamente (Barton-Davis et al., 1999, J Clin Invest. 104(4):375-381).

5.9 Ejemplo 9: Cápsula de 200 mg de dosificación

La tabla 3 ilustra una formulación de lote y formulación de dosificación individual para una unidad de dosis individual de 200 mg, es decir, aproximadamente un 40 por ciento en peso.

Tabla 3. Formulación para cápsula de 200 mg

Material Porcentaje en Cantidad Cantidad

peso (mg/comprimido) (kg/lote)

Compuesto de la 40,0 % 200 mg 16,80 kg

invención

Almidón de maíz 9,5 % 297,5 mg 24,99 kg pregelatinizado, NF5

Estearato de 0,5 % 2,5 mg 0,21 kg

magnesio

Total 100,0 % 500 mg 42,00 kg

El almidón de maíz de pregelatinizado (SPRESS B-820) y los componentes del compuesto para el uso de la invención se pasan a través de un tamiz de 710 |jm y después se cargan en una mezcladora de difusión con una pieza deflectora y se mezclaron durante 15 minutos. El estearato de magnesio se pasa a través de un tamiz de 210 jm y se añade a la mezcladora de difusión. La mezcla entonces se encapsula en una cápsula de tamaño n.° 0, 500 mg por cápsula (tamaño de lote de 8400 cápsulas) usando una máquina de llenado de cápsulas de tipo Dosator.

5.10 Ejemplo 10: Forma farmacéutica oral de 100 mg.

La tabla 4 ilustra una formulación de lote y una formulación unitaria de dosis individual que contiene 100 mg de un compuesto para el uso de la invención.

Tabla 4. Formulación para comprimido de 100 mg

Material Porcentaje en Cantidad Cantidad

peso (mg/comprimido) (kg/lote)

Compuesto de la 40 % 100,00 20,00

invención

Celulosa 53,5 % 133,75 26,75

microcristalina, NF

Pluronic F-68 4,0 % 10,00 2,00

Tensioactivo

Croscarmelosa 2,0 % 5,00 1,00

sódica de tipo A, NF

Estearato de 0,5 % 1,25 0,25

magnesio

NF

Total 100,0 % 250,00 mg 50,00 kg

La celulosa microcristalina, la croscarmelosa sódica y los componentes de los compuestos para el uso de la invención se pasan a través de un tamiz de malla n.° 30 (de aproximadamente 430 jm a aproximadamente 655 jm ). El tensioactivo Pluronic F-68® (fabricado por JRH Biosciences, Inc. de Lenexa, KS) se pasa a través de un tamiz de malla n.° 20 (de aproximadamente 457 jm a aproximadamente 1041 jm ). El tensioactivo Pluronic F-68® y 0,5 kg de croscarmelosa sódica se cargan en una mezcladora de tambor de cubierta doble de 15,14 l (16 qt) y se mezclan durante aproximadamente 5 minutos. La mezcla entonces se transfiere a una mezcladora de tambor de cubierta doble de 84,95 l (3 pies cúbicos) donde se añade la celulosa microcristalina y se mezclan durante aproximadamente 5 minutos. El compuesto se añade y se mezcla durante 25 minutos adicionales. Esta mezcla previa se pasa a través de un compactador de rodillo con un molino de martillo fijado en la descarga del compactador de rodillo y se mueve de vuelta a la mezcladora de tambor. La croscarmelosa sódica y el estearato de magnesio restantes se añaden a la mezcladora de tambor y se mezclan durante aproximadamente 3 minutos. La mezcla final se comprime en una prensa de comprimidos giratoria con 250 mg por comprimido (tamaño de lote de 200000 comprimidos).

5.11 Ejemplo 11: Forma farmacéutica de aerosol

Se prepara un concentrado combinando los compuestos para el uso de la invención y una parte de 12,6 kg del tricloromonofluorometano en un recipiente de acero inoxidable sellado equipado con una mezcladora de alta cizalla. La mezcla se realiza durante aproximadamente 20 minutos. La suspensión en bruto entonces se prepara en el recipiente sellado combinando el concentrado con el equilibrio de los propulsores en un depósito de producto a granel que tiene la temperatura controlada a 21 °C hasta 27 °C y la presión controlada a 2,8 hasta 4,0 bar. Se usan recipientes de aerosol de 17 ml que tienen una válvula dosificadora diseñada para proporcionar 100 inhalaciones de la composición para el uso de la invención. En cada recipiente se proporciona lo siguiente:

compuesto de la invención 0,0141 g tricloromonofluorometano 1,6939 g diclorodifluorometano 3,7028 g diclorotetrafluoroetano__________________________________________ 1,5766 g

total 7,0000 g

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto para su uso en un método para tratar un trastorno de almacenamiento lisosómico asociado con un codón de parada prematuro en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto que tiene la fórmula I:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

R1 es hidrógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, cicloalquilo sustituido o sin sustituir, heterocicloalquilo sustituido o sin ^{sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, -(CH}2^CH2^{O)nR6 o cualquier grupo}biohidrolizable;

R2, R3, R4, R5 y R6 son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, alquenilo sustituido o sin sustituir, alquinilo sustituido o sin sustituir; cicloalquilo sustituido o sin sustituir, heterocicloalquilo sustituido o sin ^{sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, alcoxi, ariloxi, heteroariloxi, halógeno, CF}3^{, OCF}3^{, OCHF}2^{, CN, COOH, COOR7, SO}2^R7^{, NO}2^{, NH}2 ^{o N(R7)}2^;

cada aparición de R7 es independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, alquenilo sustituido o sin sustituir, alquinilo sustituido o sin sustituir; cicloalquilo sustituido o sin sustituir, heterocicloalquilo sustituido o sin ^{sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, alcoxi, ariloxi, heteroariloxi, halógeno o CF}3^;y

n es un número entero de 1 a 7;

en la que el término sustituido define una sustitución con uno a cuatro o más sustituyentes, que comprenden halo, trifluorometilo, trifluorometoxi, hidroxi, alcoxi, cicloalquiloxi, heterociclooxi, oxo, alcanoílo, alquilcarbonilo, cicloalquilo, arilo, ariloxi, aralquilo, alcanoiloxi, ciano, azido, amino, alquilamino, arilamino, aralquilamino, cicloalquilamino, heterocicloamino, amino mono- y disustituido en que los dos sustituyentes en el grupo amino se seleccionan de alquilo, arilo, aralquilo, alcanoilamino, aroilamino, aralcanoilamino, alcanoilamino sustituido, arilamino sustituido, aralcanoilamino sustituido, tiol, alquiltio, ariltio, aralquiltio, cicloalquiltio, heterociclotio, alquiltiono, ariltiono, ^{aralquiltiono, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquilsulfonilo, sulfonamido (por ejemplo, SO}2^NH2^{), sulfonamido sustituido, nitro, carboxi, carbamilo (por ejemplo, CONH}2^{), carbamilo sustituido (por ejemplo, CONH alquilo, CONH arilo, CONH}aralquilo o casos donde hay dos sustituyentes en el nitrógeno, seleccionados de alquilo, arilo o aralquilo), alcoxicarbonilo, arilo, arilo sustituido, guanidino y heterociclo, tal como indolilo, imidazolilo, furilo, tienilo, tiazolilo, pirrolidilo, piridilo, pirimidilo.

2. El compuesto para el uso de la reivindicación 1, en el que el compuesto tiene la fórmula II:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

3. El compuesto para el uso de la reivindicación 1, en el que el compuesto tiene la fórmula I:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

R1 es hidrógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, cicloalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir o -(CH2CH2O)nR6;

R2, R3, R4, R5 y R6 son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, alquenilo sustituido o sin sustituir, alquinilo sustituido o sin sustituir; cicloalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, alcoxi, ^{ariloxi, halógeno, CF}3^{, OCF}3^{, OCHF}2^{, CN, COOH, COOR7, SO}2^R7^{, NO}2^{, NH}2 ^{o N(R7)}2^;

cada aparición de R7 es independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, alquenilo sustituido o sin sustituir, alquinilo sustituido o sin sustituir; cicloalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, alcoxi, ^{ariloxi, halógeno o CF}3^{; y}

n es un número entero de 1 a 7.

4. El compuesto para el uso de la reivindicación 1, en el que el compuesto tiene la fórmula I:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

R1 es hidrógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, cicloalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, -^(CH2^CH2^{O)nR6 o cualquier grupo biohidrolizable;}

n es un número entero de 1 a 7.

5. El compuesto para el uso de la reivindicación 1, en el que el compuesto tiene la fórmula:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

X es fluoro, cloro, metoxi o trifluorometilo;

n es un número entero de 1 a 7.

6. El compuesto para el uso de la reivindicación 1, en el que el compuesto es ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

7. El compuesto para el uso de la reivindicación 1, en el que el compuesto es ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-benzoico.

8. El compuesto para el uso de la reivindicación 6 o 7, en el que el paciente se ha sometido a un proceso de cribado para determinar la presencia de un codón de parada prematuro.

9. El compuesto para el uso de la reivindicación 6 o 7, en el que el paciente es un ser humano.

10. El compuesto para el uso de la reivindicación 6 o 7, en el que el compuesto se administra por vía parenteral, transdérmica, mucosa, nasal, bucal, sublingual u oral.

11. El compuesto para el uso de la reivindicación 10, en el que el compuesto se administra por vía oral en una forma de comprimido, líquido o cápsula.

12. El compuesto para el uso de la reivindicación 6 o 7, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz es de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 2000 mg al día.

13. El compuesto para el uso use de la reivindicación 1,6 o 7, en el que el trastorno de almacenamiento lisosómico asociado con un codón de parada prematuro es mucopolisacaridosis de tipo VII, mucopolisacaridosis de tipo III A o mucopolisacaridosis de tipo VI.

14. Una composición farmacéutica para su uso en un método para tratar un trastorno de almacenamiento lisosómico asociado con un codón de parada prematuro en un paciente, que comprende el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.