ES2995063T3

ES2995063T3 - Bed bugs detection device

Info

Publication number: ES2995063T3
Application number: ES22153308T
Authority: ES
Inventors: William John Hall; Andy Sturman; Min Wang; Benedict Louis Zin
Original assignee: Redcoat Solutions Inc
Current assignee: Redcoat Solutions Inc
Priority date: 2015-10-21
Filing date: 2016-10-21
Publication date: 2025-02-06
Anticipated expiration: 2036-10-21
Also published as: HUE069452T2; PL3370515T3; MA43180A; SMT202200238T1; EP4063862B1; CY1125172T1; US20250137998A1; AU2024201061A1; MA43180B1; MD4063862T2; AU2016342364A1; PL4063862T3; RS63144B1; LT3370515T; EP3370515A1; DK3370515T3; AU2021221911A1; HRP20220538T1; US11913943B2; MD3370515T2

Abstract

Se describen realizaciones de sistemas y métodos para analizar un fluido de prueba para detectar infestaciones previas o actuales de chinches. En una realización, el método puede incluir recibir el fluido de prueba en una tira de prueba dentro del dispositivo de detección. La tira de prueba puede incluir una porción de reacción y una porción de reactivo que contiene un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno que está conjugado con una partícula coloreada. El fluido de prueba puede incluir un antígeno de chinches que reacciona con el anticuerpo conjugado. El dispositivo de detección puede incluir un primer y un segundo sensor óptico para monitorear una reacción y una intensidad de color de fondo, respectivamente. Después de que transcurra un retardo de tiempo predeterminado, el dispositivo de detección determina si el antígeno de chinches está presente en el fluido de prueba utilizando las intensidades de color monitoreadas y los umbrales de intensidad de color mínimo y máximo asociados con las chinches. Luego, el dispositivo de detección genera un resultado utilizando una pantalla visual. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Dispositivo de detección de chinches de cama

Campo

Las realizaciones se refieren en general a detectar una presencia de plagas, y más particularmente, a un dispositivo de detección electrónico, banda reactiva, el respectivo kit y método para detectar plagas de insectos domésticos incluyendo, por ejemplo, chinches de cama.

Antecedentes

Los estudios y las encuestas de la última década sugieren que las infestaciones de chinches de cama son cada vez más frecuentes tanto en Estados Unidos como en el resto del mundo. Para empezar a tratar las infestaciones de chinches de cama, los operadores de control de plagas necesitan procedimientos eficaces y exactos para detectar e identificar la presencia de chinches de cama.

En un ejemplo típico, un operador de control de plagas es llamado para inspeccionar una unidad de vivienda (por ejemplo, una casa, un apartamento, un hotel o un hospital) donde puede haber chinches de cama. Las opciones de detección actuales incluyen la inspección visual de una habitación sospechosa, que es ineficaz y poco fiable, o la obtención de una muestra de residuos de chinches de cama sospechosos para su análisis en un laboratorio de pruebas externo. A menudo, el operador de control de plagas puede tener que utilizar un costoso equipo de pruebas de ADN fuera de las instalaciones para analizar los residuos sospechosos en busca de pruebas de chinches de cama. Además, los equipos de análisis de chinches de cama (por ejemplo, los equipos de análisis de ADN) a menudo no se pueden utilizar in situ y pueden requerir de 24 a 48 horas para producir un resultado de análisis. El Documento US 8.375.626 describe procedimientos y bandas reactivas para detectar chinches de cama mediante el uso de un anticuerpo IgE e indicadores colorimétricos.

Sumario

La presente invención se refiere a un dispositivo de detección electrónico para analizar un fluido de prueba para determinar infestaciones anteriores o presentes de chinches de cama, que comprende una prueba de ensayo de flujo lateral procesada dentro del dispositivo de detección, en donde la prueba de ensayo de flujo lateral comprende una banda reactiva para recibir el fluido de prueba cerca de un primer extremo de la banda reactiva, en donde la banda reactiva comprende: (a) una porción reactiva que comprende anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión a antígeno de los mismos que están conjugados con partículas coloreadas y son capaces de unirse a antígenos de chinches de cama dentro del fluido de prueba para formar moléculas de chinches de cama, en donde los anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión a antígeno de los mismos comprenden regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de cadena pesada y ligera de un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC) bajo el Número de Acceso PTA-122644. [BB2] o el Número de Acceso PTA-122645 [BB7], y (b) una porción de reacción que comprende anticuerpos monoclonales inmovilizados o fragmentos de unión a antígeno de los mismos que son capaces de unirse a las moléculas de chinches de cama, en donde los anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión a antígeno de los mismos comprenden regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de cadena pesada y ligera de un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en la ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el Número de Acceso PTA-122645 [BB7].

La invención se refiere además al método para analizar un fluido de prueba para determinar infestaciones anteriores o presentes de chinches de cama usando el dispositivo y el kit que lo comprende como se detalla en las reivindicaciones adjuntas. En un aspecto adicional, la invención se refiere a una banda reactiva para detectar infestaciones anteriores o presentes de chinches de cama que comprende, en orden, un primer extremo, una porción reactiva que contiene partículas coloreadas, una porción de reacción y un segundo extremo, en donde la banda reactiva está configurada para recibir un fluido de prueba cerca del primer extremo y: (a) la porción reactiva comprende anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión a antígeno de los mismos que están conjugados con las partículas coloreadas y son capaces de unirse a antígenos de chinches de cama dentro del fluido de prueba para formar moléculas de chinches de cama, en donde los anticuerpos monoclonales o sus fragmentos de unión a antígeno comprenden regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de la cadena pesada y ligera de un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC) bajo el Número de Acceso pTa -122644 [BB2 ] o el Número de Acceso PTA-122645 [BB7], y (b) la porción de reacción comprende anticuerpos monoclonales inmovilizados o fragmentos de unión a antígeno de los mismos que son capaces de unirse a las moléculas de chinches de cama, en donde los anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión a antígeno de los mismos comprenden regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de cadena pesada y ligera de un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en la ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el Número de Acceso PTA-122645 [BB7].

Se resumen realizaciones adicionales en las reivindicaciones dependientes adjuntas.

De acuerdo con ciertos aspectos desvelados de la presente divulgación, se proporciona un sistema y un procedimiento para determinar, por medio de un dispositivo de detección, si se detecta la presencia de una o más plagas de insectos. El dispositivo de detección puede estar configurado para almacenar perfiles de plagas, cada uno con umbrales para una o más características del perfil. En una realización, el dispositivo de detección detecta, dentro de un tiempo determinado, la presencia de un fluido de muestra (o fluido de prueba) que se está analizando durante un ensayo de flujo lateral procesado dentro del dispositivo de detección. El dispositivo de detección además comprueba que una cantidad suficiente de partículas coloreadas ha pasado por una zona de prueba, de forma que se pueda detectar la presencia de una o más plagas dentro del fluido de la muestra. A continuación, el dispositivo desvelado compara los resultados de las pruebas con uno o más perfiles de plagas para determinar si una o más plagas están presentes.

De acuerdo con la invención, un dispositivo de detección recibe un fluido de prueba cerca de un primer extremo de una banda reactiva dentro del dispositivo de detección, en el que el fluido de prueba fluye más allá de una porción de reactivo de la banda reactiva que contiene partículas coloreadas y a través de una porción de reacción de la banda reactiva, en la que la porción de reactivo contiene anticuerpos conjugados con partículas coloreadas, y en la que los anticuerpos conjugados son capaces de unirse con cualquier antígeno de chinches de cama dentro del fluido de prueba para formar moléculas de chinches de cama. Un primer sensor óptico dentro del dispositivo de detección monitoriza la intensidad del color de reacción de la porción de reacción de la banda reactiva cuando los anticuerpos inmovilizados dentro de la porción de reacción se unen a las moléculas de chinches de cama. Un segundo sensor óptico dentro del dispositivo de detección monitoriza una intensidad de color de fondo de una porción de la banda reactiva cercana a la porción de reacción. El dispositivo de detección determina que una cantidad inicial de fluido de prueba ha pasado por la porción de reacción basándose en la intensidad de color de reacción monitorizada y la intensidad de color de fondo monitorizada. El dispositivo de detección determina que una cantidad dada de partículas coloreadas de la porción de reactivo ha pasado por la porción de reacción basándose en la intensidad de color de reacción monitorizada y la intensidad de color de fondo monitorizada. El dispositivo de detección detecta que ha transcurrido un tiempo de retardo desde que se determinó que la cantidad dada de partículas de color ha pasado por la porción de reacción. El dispositivo de detección determina un resultado del perfil de chinches de cama mediante el uso de las intensidades de color monitorizadas y los umbrales de intensidad de color mínimo y máximo, en el que el retardo de tiempo, el umbral de intensidad de color mínimo y el umbral de intensidad de color máximo se almacenan en una memoria del dispositivo de detección, y en el que el resultado del perfil indica si se ha detectado la presencia de chinches de cama en el líquido de prueba. A continuación, el dispositivo de detección emite el resultado del perfil de chinches de cama por medio de una pantalla visual.

En ciertas realizaciones, el anticuerpo es producido por el hibridoma depositado en la American Type Culture Collection (ATCC) bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2], o un fragmento de unión a antígeno del mismo.

En ciertas realizaciones, el anticuerpo es producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7], o un fragmento de unión a antígeno del mismo.

El anticuerpo utilizado en el dispositivo electrónico y banda reactivareactiva de la invención es un anticuerpo monoclonal o un fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de cadena pesada y de cadena ligera de un anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o un anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122645 [BB7]. En ciertas realizaciones, el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo comprende las regiones variables de cadena pesada y ligera del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en la ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en la ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7].En ciertas realizaciones, el anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno del mismo comprende las cadenas pesada y ligera del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7].

En ciertas realizaciones, el anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno de cualquiera de las realizaciones anteriores es capaz de unirse a un antígeno de chinches de cama en un lisado de chinches de cama enteras o un extracto de papel de recolección que comprende material de desecho de chinches de cama.

En ciertos aspectos, el anticuerpo es un mutante de un anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o un mutante de un anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122645 [BB7], en el que el mutante es capaz de unirse a un antígeno de chinches de cama en un lisado de chinches de cama enteras o un extracto de papel de recolección que comprende material de desecho de chinches de cama.

En ciertas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal conjugado o un fragmento de unión a antígeno conjugado que comprende cualquiera de los anticuerpos, fragmentos de unión a antígeno o mutantes y un agente de detección. En ciertas realizaciones, el agente de detección es oro coloidal. En ciertas realizaciones, el anticuerpo conjugado o el fragmento conjugado de unión a antígeno comprende un anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2], o un fragmento de unión a antígeno del mismo, o un anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7], o un fragmento de unión a antígeno del mismo.

Ciertos aspectos pueden incluir una composición que comprende cualquiera de los anticuerpos, fragmentos de unión a antígeno, mutantes, o anticuerpos conjugados o fragmentos de unión a antígeno conjugados, o una combinación de los mismos. En ciertos aspectos, la composición comprende un anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] y un anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7]. En ciertos aspectos, la composición comprende un anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122644 [BB2], y un anticuerpo conjugado que comprende el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122645 [BB7] y un agente de detección. En ciertos aspectos, la composición comprende un anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122645 [BB7], y un anticuerpo conjugado que comprende el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] y un agente de detección.

Ciertas realizaciones pueden incluir un kit que comprende cualquiera de las invenciones o realizaciones anteriores, o una combinación de las mismas.

Ciertos aspectos pueden incluir un hibridoma capaz de producir un anticuerpo, en el que el hibridoma está depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o en el que el hibridoma está depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7].

Ciertos aspectos pueden incluir una célula aislada que produce un anticuerpo, un fragmento de unión a antígeno o un mutante.

Ciertos aspectos pueden incluir un procedimiento de fabricación de un anticuerpo, fragmento de unión a antígeno o mutante, que comprende el cultivo de una célula aislada que produce el anticuerpo, el fragmento de unión a antígeno o el mutante, y el aislamiento del anticuerpo, el fragmento de unión a antígeno o el mutante de la célula cultivada.

Ciertos aspectos pueden incluir un procedimiento de detección de chinches de cama, que comprende el contacto de una muestra que comprende un antígeno de chinches de cama con cualquiera de los anticuerpos, fragmentos de unión a antígeno, mutantes, anticuerpos conjugados o fragmentos de unión a antígeno conjugados, o composiciones o una combinación de los mismos, y la detección de la unión del antígeno de chinches de cama al anticuerpo o fragmento de unión a antígeno, mutante, anticuerpo conjugado o fragmento de unión a antígeno conjugado, composición o combinación de los mismos. En ciertos aspectos, la muestra se pone en contacto con un anticuerpo de cualquiera de las invenciones o realizaciones anteriores y un anticuerpo conjugado. En ciertas realizaciones, el anticuerpo es producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2], y el anticuerpo conjugado comprende el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7] y un agente de detección. En ciertas realizaciones, el anticuerpo es producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7], y el anticuerpo conjugado comprende el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] y un agente de detección. De acuerdo con la invención, la detección comprende la realización de un ensayo de flujo lateral. En ciertos aspectos, el procedimiento además comprende la recolección de una muestra que comprende el antígeno de chinches de cama con un dispositivo de recolección y la extracción de antígenos de la muestra. En ciertas realizaciones, el dispositivo de recolección es un hisopo.

Breve descripción de los dibujos

La FIG. 1 es un diagrama de un dispositivo de detección para detectar la presencia de chinches de cama.

La FIG. 2 es una vista en despiece del dispositivo de detección de la FIG. 1.

La FIG. 3 es una vista en alzado ampliada del dispositivo de detección de la FIG 1.

La FIG. 4 es una vista en sección ampliada del dispositivo de detección de la FIG. 3 antes de retirar una porción del capuchón.

La FIG. 5 es una vista en alzado en sección fragmentaria del dispositivo de la FIG. 3 cuando se retira la porción del capuchón.

La FIG. 6 es una vista en sección ampliada de la FIG. 5 después de retirar una porción del capuchón.

La FIG. 7 es un diagrama de bloques que ilustra los componentes de un procesador de un dispositivo de detección

Las FIGS. 8 a 13 son diagramas de flujo que ilustran procedimientos llevados a cabo por un dispositivo de detección.

La FIG. 14 es un diagrama que ilustra ejemplos de resultados obtenidos en ensayos de flujo lateral de muestras analizadas por un dispositivo de detección.

La FIG. 15 muestra los resultados de un ensayo de captura en sándwich mediante el uso de los anticuerpos monoclonales anti-chinches de cama BB2 y BB7. Se muestran bandas de nitrocelulosa con la unión del antígeno de chinches de cama indicada por puntos asociados a la presencia del anticuerpo monoclonal BB2 o BB7 conjugado con oro (“Detector Ab”), con el pH del anticuerpo conjugado con oro como se indica. Las bandas reactivas están indicadas con “chinches de cama” para el antígeno. Las bandas de control negativo se indican con “ninguno” para el antígeno, con PBS añadido a las bandas en lugar del antígeno de chinches de cama. Los anticuerpos de captura asociados a los carriles 1 a 3 fueron el anticuerpo policlonal de conejo contra la chinche de cama (carril 1), el anticuerpo monoclonal BB2 (carril 2) y el anticuerpo monoclonal BB7 (carril 3).

Las FIGS. 16 a 21 muestran los resultados de un inmunoensayo de flujo lateral para muestras de hisopo obtenidas de los niveles de infestación de chinches de cama señalados, siendo el nivel 0 el que no contiene chinches de cama y el nivel 8 el que contiene el nivel más alto de chinches de cama. Las muestras de los hisopos se extrajeron en un tampón de extracción 1 que contenía 1X Tris-HCl (pH 7,6), 0,05 % de NaN<3>, 0,1 % de BSA y 0,1 % de Tween-20, y las diluciones anotadas se aplicaron a las bandas reactivas. “Tampón” indica una banda reactiva de control negativo en la que se aplicó el tampón 1 en lugar de una muestra de hisopo. Todas las bandas contienen una franja de control positivo de anticuerpo de cabra anti-ratón, que se encuentra por encima de una franja de anticuerpo de captura BB7 para la unión del antígeno de chinches de cama. Las franjas se vuelven visualmente detectables sólo al unirse el anticuerpo monoclonal de ratón BB2 conjugado con oro a la franja de control positivo de cabra anti-ratón o al antígeno de chinches de cama inmovilizado capturado por la franja BB7. La línea de la banda “Tampón” y las líneas correspondientes de las bandas reactivas son los controles positivos que indican la unión del anticuerpo de cabra anti-ratón con el anticuerpo detector BB2 conjugado con oro. Sólo los controles positivos son detectables en la FIG. 16 debido a la ausencia de antígeno. Las líneas debajo de las líneas de control positivo en las FIGS. 17 a 21 indican la unión del anticuerpo BB2 conjugado con oro al antígeno de chinches de cama inmovilizado capturado por la franja BB7. Las FIGS. 20 y 21 muestran suciedad y residuos notables para las muestras menos diluidas en la parte inferior de las bandas reactivas asociadas con los niveles más altos de infestación de chinches de cama.

Las FIGS. 22A y 22B son gráficos basados en las mediciones llevadas a cabo por el lector de bandas reactivas Axxin de muestras de hisopos para los niveles 2, 4 y 8 extraídos en el tampón 1. En la FIG. 22A, el eje x “concentración” es la dilución asociada a las muestras de hisopo medidas, y el eje y es el valor del “área de las líneas de prueba” proporcionado por el lector de bandas reactivas Axxin. En la FIG. 22B, el valor obtenido para el tampón 1 como control negativo (es decir, “Bo”) se dividió por sí mismo para obtener un valor normalizado de 1. A continuación, la lectura del control negativo (Bo) se dividió por el área de las líneas de prueba (B) para cada dilución de la muestra de prueba en el nivel, donde los valores más pequeños por debajo de 1 sugieren mayores cantidades de antígeno de chinches de cama y los valores por encima de 1 indican ausencia de antígeno de chinches de cama.

Las FIGS. 23 a 25 muestran los resultados de un inmunoensayo de flujo lateral para las muestras de hisopo obtenidas de los niveles de infestación de chinches de cama señalados. Las muestras de los hisopos se extrajeron en un tampón de extracción 2 que contenía 1X Tris-HCl (pH 7,6), 0,05 % de NaN<3>, 0,1 % de BSA y 0,2 % de Tween-20, y las diluciones anotadas se aplicaron a las bandas reactivas. La FIG. 25 muestra suciedad y residuos notables para las muestras menos diluidas en la parte inferior de las bandas reactivas asociadas con los niveles más altos de infestación de chinches de cama. El etiquetado de las bandas y la interpretación de los resultados son como se describe para las FIGS. 16 a 21.

Las FIGS. 26A y 26B son gráficos basados en las mediciones llevadas a cabo por el lector de bandas reactivas Axxin de muestras de hisopos para los niveles 4, 5 y 8 extraídos en el tampón 2. El etiquetado de los gráficos es el descrito para las FIGS. 22A y 22B.

Las FIGS. 27 a 31 muestran los resultados de un inmunoensayo de flujo lateral para las muestras de hisopo obtenidas de los niveles de infestación de chinches de cama señalados. Las muestras de los hisopos se extrajeron en un tampón de extracción 3 que contenía 1X Tris-HCl (pH 7,6), 0,05 % de NaN<3>, 0,25 % de BSA y 0,1 % de Tween-20, y las diluciones anotadas se aplicaron a las bandas reactivas. Las FIGS. 30 y 31 muestran suciedad y residuos notables para las muestras menos diluidas en la parte inferior de las bandas reactivas asociadas con los niveles más altos de infestación de chinches de cama. El etiquetado de las bandas y la interpretación de los resultados son como se describe para las FIGS. 16 a 21.

Las FIGS. 32A y 32B son gráficos basados en las mediciones llevadas a cabo por el lector de bandas reactivas Axxin de muestras de hisopos para los niveles 2, 5 y 8 extraídos en el tampón 3. El etiquetado de los gráficos es el descrito para las FIGS. 22A y 22B.

Las FIGS. 33A y 33B son gráficos basados en las mediciones llevadas a cabo por el lector de bandas reactivas Axxin que muestran una comparación de los resultados de las muestras de hisopo de nivel 8 extraídas en los tampones 1, 2 y 3. El etiquetado de los gráficos es el descrito para las FIGS. 22A y 22B.

La FIG. 34 es un gráfico basado en las mediciones llevadas a cabo por el lector de bandas reactivas Axxin para nueve réplicas del tampón de extracción 1 como control negativo y nueve réplicas de cada una de las diluciones 1/2048, 1/512 y 1/128 para las muestras de hisopos de nivel 7 extraídas en el tampón 1. El eje x indica las nueve réplicas por número de “ensayo”; el eje y es el descrito para la FIG. 22A.

El dibujo en el que aparece por primera vez un elemento se indica típicamente por medio del dígito o los dígitos situados más a la izquierda en el número de referencia correspondiente. En los dibujos, los números de referencia similares pueden indicar elementos idénticos o funcionalmente similares.

Descripción detallada

Lo que se necesita es un dispositivo de detección portátil y fiable que se pueda utilizarin situpara identificar y detectar la presencia de chinches de cama en cuestión de minutos. De acuerdo con ciertos aspectos divulgados de la presente divulgación, se proporciona un sistema y un procedimiento para determinar, por medio de un dispositivo de detección, si se detecta la presencia de una o más plagas de insectos. El dispositivo de detección puede estar configurado para almacenar perfiles de plaga, cada uno con umbrales para una o más características del perfil de plaga. En una realización, el dispositivo de detección detecta, dentro de un tiempo determinado, la presencia de un fluido de muestra que se está analizando durante un ensayo de flujo lateral procesado dentro del dispositivo de detección. El dispositivo de detección además comprueba que una cantidad suficiente de partículas coloreadas ha pasado por una zona de prueba, de forma que se pueda detectar la presencia de una o más plagas dentro del fluido de la muestra. A continuación, el dispositivo desvelado compara los resultados de las pruebas con uno o más perfiles de plagas para determinar si una o más plagas están presentes.

Implantación del sistema

La FIG. 1 es un diagrama que ilustra un dispositivo de detección 100 para detectar la presencia de chinches de cama. El dispositivo de detección 100 se puede implementar de forma similar a un dispositivo de ensayo descrito en la Patente de los Estados Unidos Núm. 7.220.597titulada“Assay Test Device and Method of Making Same",y la Patente de los Estados Unidos Núm. 7.214.542titulada“Method of Processing Assay Test Results".

Como se muestra, el dispositivo de detección 100 puede incluir una carcasa alargada 12 adaptada para ser sostenida en la mano de un usuario, tal como un operador de control de plagas. En una realización, la carcasa 12 puede incluir un capuchón extraíble 14 unida además al actuador del interruptor 47 que se extiende a través de la abertura 52. Como se detalla en la FIG. 5 a continuación, cuando se retira el capuchón extraíble 14, el dispositivo de detección 100 se puede activar (por ejemplo, encender) para comenzar a ejecutar un programa de software de detección para identificar y detectar la presencia de chinches de cama. En una realización, en lugar del capuchón extraíble 14, el dispositivo de detección 100 puede incluir la abertura 13 de forma que el dispositivo de detección 100 se puede activar cuando se detecta la luz que entra en la abertura 13. En una realización, el dispositivo de detección 100 puede incluir un interruptor o botón para activar el dispositivo de detección 100.

La pantalla de resultados 25 puede incluir un diodo emisor de luz (LED) amarillo 27, un LED verde 29 y un LED rojo 32 dispuestos en una fila en la superficie superior de la carcasa 12 y colocados dentro de los correspondientes orificios 34, 36 y 38 de la FIG. 2. Uno o más de los LED 27, 29 y 32 pueden ser controlados por el procesador 21 de la FIG. 2 para indicar, por ejemplo, encendiendo, si un resultado de detección indica la presencia de chinches de cama o si el resultado de detección es indeterminado. En un aspecto, se puede utilizar una pantalla LED, una pantalla LCD u otra electrónica de visualización para exhibir el resultado de la detección.

La FIG. 2 es un diagrama que ilustra una vista en despiece ordenado del dispositivo de detección 100 de la FIG. 1. La FIG. 3 ilustra además una vista en alzado ampliada del dispositivo de detección 100 de la FIG. 1. La carcasa 12 puede incluir la porción inferior 69 que se fija a la porción superior 72 para encerrar la placa de circuito impreso 19 y la banda reactiva alargada 16 dispuesta longitudinalmente dentro de la carcasa 12. También se muestra el capuchón extraíble 14 conectada al actuador del interruptor 47, que incluye la banda aislante 49, que puede tener la forma de una banda rígida de materiales adecuados, tales como plástico térmico u otro material similar. El dispositivo de detección 100 se puede activar cuando la banda aislante 49 se retira de la abertura 52 y a través de ella.

La banda reactiva 16 puede tener la forma de la banda reactiva desvelada en la solicitud de patente europea Núm. EP0.962.771A1. En una realización, la banda reactiva 16 proporciona un entorno para llevar a cabo un ensayo de flujo lateral o una prueba de inmunoensayo utilizada por el dispositivo de detección 100 para determinar si las chinches de cama están presentes o son detectadas. Dependiendo del tipo de banda reactiva 16 y de los materiales/componentes incorporados en o dentro de la banda reactiva 16, el dispositivo detector 100 también puede detectar la presencia de otros tipos de plagas de insectos (por ejemplo, cucarachas o termitas) o si están presentes múltiples plagas, que incluyen las chinches de cama.

Para llevar a cabo un ensayo de flujo lateral, la banda reactiva 16 incluye una banda de respaldo 54 que tiene una almohadilla de muestra o mecha 56 para recibir y absorber un fluido de muestra que potencialmente contiene antígenos de chinches de cama. Por ejemplo, el fluido de la muestra puede ser un extracto producido a partir de una muestra que comprenda potencialmente residuos de chinches de cama, tales como desechos y/o tejidos. En una realización, para obtener el fluido de la muestra, un operador de control de plagas puede utilizar primero un material de hisopo (por ejemplo, un hisopo de algodón) para limpiar los puntos calientes de chinches de cama en una ubicación determinada. Algunos ejemplos de puntos calientes de chinches de cama pueden ser las sábanas, los marcos de los colchones, las patas de los colchones, los enchufes, los alféizares de las ventanas, las superficies de los muebles u otras regiones próximas a un área de descanso (por ejemplo, un colchón, un futón o un sofá). Después de limpiar los focos de chinches de cama, el operador de control de plagas puede sumergir el material de limpieza, que puede contener residuos de chinches de cama, en un tampón de extracción (es decir, un líquido que puede extraer los antígenos de las chinches de cama de una muestra) dentro de un frasco u otros recipientes para producir un fluido de muestra. A continuación, el operario de control de plagas puede gotear porciones del líquido tampón sobre una almohadilla de muestra o mecha 56, que recibe la mezcla de líquido tampón y mecha como líquido de muestra.

En un aspecto, en el que el dispositivo de detección 100 incluye un capuchón extraíble 14, la banda reactiva 16 se puede extender fuera de la carcasa 12 y ser cubierta por el capuchón extraíble 14 o una porción de tapa cuando se ensambla a la carcasa 12. Cuando se retira el capuchón extraíble 14 de la carcasa 12, la mecha 56 queda expuesta para poder aplicar el fluido de la muestra como se ha descrito. En una realización sin capuchón extraíble 14, la mecha 56 puede en cambio recibir el fluido de muestra aplicado a través de la abertura 13 como se representa en la FIG. 1.

La banda reactiva 16 incluye una banda portadora porosa 58 que tiene una sección de reactivo o almohadilla 61 fijada a la mecha 56, y una sección de absorción de fluido o almohadilla de absorción 63 en la porción del extremo opuesto de la banda reactiva 16 de la mecha 56. La banda portadora porosa 58 permite que el fluido de la muestra de la mecha 56 fluya a través de la almohadilla de reactivo 61 y la zona de formación de líneas 65 hasta la almohadilla de absorción 63, donde se absorbe el exceso de fluido de la muestra.

Una sección de captura o zona de formación de líneas 65 en la superficie superior de una porción intermedia de la banda portadora porosa 58 está dispuesta frente a un sensor de reacción o sensor frontal 23. En la zona de formación de líneas 65, se forma una línea de intensidad y coloración específica una vez que se produce una reacción con antígenos de chinches de cama si hay una cantidad suficiente de antígeno de chinches de cama en el fluido de la muestra que indica que hay chinches de cama dentro de una habitación sospechosa de albergar chinches de cama. En un aspecto, el dispositivo de detección 100 puede leer una medida del sensor frontal 23 para determinar si se detecta la presencia de chinches de cama. En una realización, para aumentar la exactitud y reducir (o eliminar) el tiempo de calibración, el dispositivo de detección 100 puede utilizar mediciones de más de un sensor, tal como el sensor frontal 23 y el sensor posterior 18.

En una realización, la almohadilla reactiva 61 puede contener una mezcla solubilizable de anticuerpos contra chinches de cama conjugados con partículas de color. Los ejemplos de partículas coloreadas pueden incluir, por ejemplo, oro coloidal, microesferas de látex o etiquetas fluorescentes. Se utiliza una partícula coloreada como agente de detección de forma que cuantas más partículas coloreadas detecte el dispositivo de detección 100 durante la evaluación del perfil (que se describirá más adelante con respecto a la FIG. 7), mayor es la probabilidad de que haya presencia de una plaga, tales como chinches de cama, en la muestra. A medida que el fluido de la muestra recibido en la mecha 56 migra a través de la almohadilla de reactivo 61 a una porción intermedia de la banda de soporte 58, el fluido de la muestra se puede mezclar con la mezcla solubilizable en la almohadilla de reactivo 61 para formar una mezcla de muestra-conjugado. Los antígenos de chinches de cama presentes en el fluido de la muestra se pueden unir a los anticuerpos antichinches de cama conjugados para formar moléculas conjugadas con la muestra. Cuando el fluido de la muestra se disipa o solubiliza la mezcla solubilizable, el fluido de la muestra-conjugado fluye hacia la almohadilla de absorción 63 hasta que un sensor de fondo o sensor posterior 18 dispuesto frente a la porción intermedia de la banda portadora 58 detecta la presencia del fluido de la muestraconjugado debido al cambio de color de la banda portadora porosa mojada 58. En un aspecto, para aumentar la exactitud y reducir (o eliminar) la calibración, el dispositivo de detección 100 determina una relación entre las mediciones de más de un sensor, que incluye el sensor frontal 23 y el sensor posterior 18, para determinar si el fluido conjugado de la muestra está presente.

Para permitir que se tomen las mediciones de los sensores, se puede disponer o montar un diodo emisor de luz (LED) 67 en la parte inferior de la placa de circuito impreso 19 entre el sensor posterior 18 y el sensor frontal 23 para iluminar la porción intermedia de la banda portadora porosa 58 y reflejar la luz de la misma hacia los sensores. El LED 67 de iluminación puede producir luz en el intervalo visible del espectro electromagnético. Un LED blanco puede proporcionar mediciones más exactas, pero también se puede utilizar otro LED de color, tal como un LED verde, como LED de iluminación 67, dependiendo del color de la línea formada en la zona de formación de líneas 65. En un aspecto, el dispositivo de detección 100 puede hacer que se encienda el LED 67 siempre que se vaya a leer una medición del sensor posterior 18 o del sensor frontal 23.

La zona de formación de líneas 65 puede incluir una región (por ejemplo, una línea) de uno o más tipos de anticuerpos inmovilizados que se pueden unir con los antígenos de chinches de cama de las moléculas conjugadas de la muestra dentro del fluido conjugado de la muestra que fluye más allá de la zona de formación de líneas 65. En una realización, los anticuerpos inmovilizados pueden incluir la porción de anticuerpos antibacterianos conjugados sobre o dentro de la almohadilla de reactivo 61. A medida que el fluido conjugado con la muestra desde la almohadilla de reactivo 61 fluye a través de la zona de formación de líneas 65 hacia la almohadilla de absorción 63, una mayor cantidad de moléculas conjugadas con la muestra puede reaccionar (o unirse) a los anticuerpos inmovilizados. En una realización en la que la partícula conjugada es una partícula coloreada como el oro coloidal, a medida que se produce una mayor reacción dentro de la zona de formación de la línea 65 debido a una mayor presencia de antígenos de chinches de cama dentro del fluido de la muestra, la coloración dentro de la zona de formación de la línea 65 se puede intensificar a una mayor velocidad. En una realización, dependiendo del tipo de partícula conjugada, un nivel de luminiscencia o fluorescencia se puede intensificar en su lugar.

El sensor posterior 18 (sensor de fondo) y el sensor frontal 23 (sensor de reacción) se pueden montar en la parte inferior de la placa de circuito impreso 19. El sensor frontal 23 se puede disponer directamente frente a la zona de formación de líneas 65 de la banda reactiva 16 para captar una reflectancia colorimétrica de la reacción, es decir, una intensidad de color de la zona de formación de líneas 65. El sensor posterior 18 puede estar dispuesto cerca de la zona de formación de líneas 16 (pero no directamente sobre la zona de formación de líneas 16) entre la zona de formación de líneas 16 y la almohadilla de absorción 63. En una realización, el sensor posterior 18 puede estar dispuesto entre la zona de formación de líneas 16 y la almohadilla de reactivo 61. El sensor posterior 18 mide o capta de forma similar una intensidad de color de la región de la banda reactiva dispuesta frente al sensor posterior 18. Aunque el dispositivo de detección 100 puede utilizar sólo las lecturas del sensor posterior 18 para detectar la presencia del fluido conjugado a medida que fluye a lo largo de la banda reactiva 16, en una realización mejorada, el dispositivo de detección puede utilizar las lecturas de medición tanto del sensor posterior 18 como del sensor frontal 23. Del mismo modo, el dispositivo de detección 100 puede utilizar las lecturas del sensor frontal 23 o del sensor posterior 18 y del sensor frontal 23 para determinar si se detecta la presencia de chinches de cama en la zona de formación de líneas 65.

Cada uno de los sensores posteriores 18 y frontales 23 puede ser un sensor foto-óptico que incluye, por ejemplo, una célula fotoconductora o una resistencia dependiente de la luz que varía la resistencia en función de una intensidad de luz incidente detectada y medida debido a la reflectancia difusa colorimétrica dentro de la zona de formación de líneas 65. Una reflectancia difusa colorimétrica medida puede ser representativa de la intensidad del color dentro de la zona de formación de líneas 65. Por ejemplo, a medida que el color dentro de la zona de formación de líneas 65 se intensifica, más luz puede ser absorbida por la zona de formación de líneas 65, es decir, menos luz puede ser reflejada por la zona de formación de líneas 65, y una célula fotoconductora puede emitir una resistencia mayor debido a una menor intensidad de luz incidente. En una realización, el sensor foto-óptico puede incluir un fotodiodo que produce una corriente de fuga que es directamente proporcional a la intensidad de la luz incidente. Dependiendo de la partícula conjugada, se pueden utilizar otros tipos de sensores, tal como un sensor de efecto Hall para captar la densidad de flujo magnético.

La fuente de alimentación indicada generalmente en la región de alimentación 41 está montada en la superficie superior de la placa de circuito impreso 19. La región de alimentación 41 puede incluir la batería 43 que alimenta eléctricamente la placa de circuito impreso 19 y sus componentes, que incluyen, por ejemplo, el LED amarillo 27, el LED verde 29, el LED rojo 32, el sensor posterior 18, el LED de iluminación 65, el sensor frontal 23 y el procesador 21.

El procesador 21 se puede montar en la superficie superior de la placa de circuito impreso 19 y programarse para empezar a detectar la presencia de chinches de cama cuando el dispositivo de detección 100 se activa o se enciende. El procesador 21 puede incluir puertos de entrada para recibir las mediciones de potencia y de lectura del sensor frontal 23 y del sensor posterior 18 e incluir puertos de salida para controlar el LED 65 de iluminación y los LED 32, 27 y 29 de la pantalla de resultados 25. En una realización, el procesador 21 puede ser un microprocesador (por ejemplo, un microcontrolador de 8 o 16 bits) con capacidades limitadas de procesamiento y memoria debido a las limitaciones de tamaño, potencia y coste del dispositivo de detección 100. Para detectar eficientemente la presencia de chinches de cama dado el hardware limitado, el procesador 21 puede incluir algoritmos almacenados para un procesamiento de calibración eficiente y resultados de detección de chinches de cama exactos. En un aspecto, el procesador 21 puede detectar diferentes tipos de plagas de insectos o la presencia de más de un tipo de plaga de insectos, que incluyen las chinches de cama.

Las FIGS. 4 a 6 son diagramas que ilustran configuraciones dentro del dispositivo de detección 100. Como se muestra en la FIG. 4 es una vista en sección ampliada del dispositivo de detección de la FIG. 3 antes de retirar el capuchón extraíble 14 y alimentar el dispositivo de detección 100. La FIG. 5 ilustra una vista en alzado en sección fragmentaria del dispositivo de la FIG. 3 cuando se retira el capuchón extraíble 14. La FIG. 6 ilustra una vista en sección ampliada de la FIG. 5 después de haber retirado el capuchón extraíble 14.

En un aspecto, el actuador del interruptor 47 en forma de banda aislante 49 se extiende a través de una abertura 52 en una porción de pared angular de la carcasa 12 al interruptor 45 cuando el capuchón extraíble 14 es ensamblada a la carcasa 12 como se muestra en las FIGS. 1 y 3. Cuando el capuchón extraíble 14 se retira de la carcasa 12 como se indica en la FIG. 5, el actuador del interruptor 47 puede ser retirado del interruptor 45 como se indica en las FIGS. 4 y 6 para hacer que la batería 43 se conecte eléctricamente a la placa de circuito impreso 19 para energizar o encender el dispositivo de detección 100.

Aunque el dispositivo de detección 100, como se muestra, puede ser un dispositivo de un solo uso que es exacto y rápido en su determinación de la presencia de chinches de cama, el dispositivo de detección 100 puede ser empleado como un dispositivo de uso múltiple. Por ejemplo, un dispositivo de detección de uso múltiple 100 puede incluir una carcasa 12 que puede ser desmontada como se indica en la FIG. 2 para permitir que la banda reactiva 16 sea reemplazada por una nueva banda reactiva para llevar a cabo ensayos adicionales de flujo lateral. La banda aislante 49 del actuador del interruptor 47 puede tener la forma de una banda rígida de materiales adecuados, tales como plástico térmico u otro material similar. A este respecto, la banda aislante 49 se puede volver a introducir a través de la abertura 52 y bajo la batería 43 para desacoplar eléctricamente la batería 43 de la placa de circuito impreso 19.

La FIG. 7 es un diagrama de bloques 700 que ilustra los componentes del procesador 700 de un dispositivo de detección, tal como el dispositivo de detección 100 de las FIGS. 1 a 3. El procesador 700 puede ser una implementación de ejemplo del procesador 21 de las FIGS. 2, 3 y 5. El procesador 702 puede incluir una memoria 704, los puertos 714A y B, un reloj 728 y los componentes 730 a 742.

Los puertos 714A pueden ser puertos de entrada, que incluyen el puerto de alimentación 720, que alimenta al procesador 702 desde una fuente de energía, tal como la batería 43 de la placa de circuito impreso 19 de la FIG. 2. Los puertos de entrada 714A además pueden incluir el puerto 716 del sensor frontal y el puerto 718 del sensor posterior, que reciben las mediciones del sensor frontal 23 y del sensor posterior 18 de la FIG. 2, respectivamente. Los puertos 714B pueden incluir puertos de salida para emitir un resultado que indique si el procesador 702 encontró un error y si el procesador 702 determinó la presencia de una o más plagas que incluyen, por ejemplo, chinches de cama. Como se muestra, los puertos de salida 714B pueden incluir el puerto de LED amarillo 722, el puerto de LED verde 724 y el puerto de LED rojo 726 para controlar el LED amarillo 27, el LED verde 29 y el LED rojo 32 de la FIG.

2, respectivamente. En una realización, un solo puerto LED puede controlar más de un LED.

La memoria 704 puede incluir registros, RAM, ROM, caché u otros tipos de almacenamiento de memoria. La memoria 704 almacena el perfil de plaga 706, los parámetros de funcionamiento 712, el contador 709 y las lecturas de los sensores 713A y B. Los parámetros de funcionamiento 712 pueden incluir un umbral de líquido, un umbral de color y umbrales mínimos y máximos para cada uno de los sensores frontales 23 y posteriores 18. El umbral de líquido puede ser representativo de una cantidad o concentración inicial mínima de fluido de muestra-conjugado que fluye a través de la zona de formación de líneas 65 que puede ser necesaria antes de que el procesador 702 continúe determinando si se detectan chinches de cama. El umbral de color puede ser representativo de un valor de intensidad de color proporcional a una cantidad o concentración mínima de fluido de muestra-conjugado que fluye a través de la zona de formación de líneas 65 que puede ser necesaria para validar cualquier determinación de detección final llevada a cabo por el procesador 702. Otros parámetros de funcionamiento 712 pueden incluir un intervalo de valores de potencia (por ejemplo, voltajes de potencia mínimos y máximos) de forma que cualquier valor de potencia fuera del intervalo indica que el procesador 702 no está siendo alimentado adecuadamente a través del puerto de alimentación 720, y un intervalo de valores del sensor (por ejemplo, valores mínimos y máximos del sensor) de forma que los valores del sensor fuera del intervalo del sensor no son válidos. Dependiendo del tipo de sensor utilizado o de la metodología de medición, los valores del intervalo del sensor pueden ser, por ejemplo, resistencias, corrientes o tensiones. Por ejemplo, un sensor puede ser un fotodiodo (es decir, un dispositivo que convierte la luz recibida en corriente) o una célula fotoconductora (es decir, un dispositivo que convierte la luz recibida en resistencia). El valor del sensor medido para cada tipo de sensor puede ser, por ejemplo, un valor de tensión.

El contador 709 puede ser un registro que es incrementado por el reloj 728 del procesador 702. Un valor de contador del contador 709 puede ser representativo de un período de tiempo o ciclos de reloj desde que el contador 709 fue activado o inicializado. En una realización, el valor del contador puede ser representativo de un período de tiempo desde que el contador 709 fue borrado o puesto a 0 por el procesador 702.

El perfil de plaga 706 puede incluir umbrales o parámetros configurados para las características del perfil de una plaga de insectos específica, tales como las chinches de cama, asociadas con el perfil de plaga 706. Las características del perfil pueden incluir un período de tiempo de prueba y un intervalo de intensidad de color medido. Como se muestra, los umbrales configurados incluyen el umbral de intensidad 708 y el umbral de tiempo de prueba 710, de forma que el procesador 702 determina la presencia de una plaga cuando el procesador 702 calcula un valor de resultado que excede el umbral de intensidad 708 después de que un valor del contador 709 excede el umbral de tiempo de prueba 710. En una realización, el umbral de intensidad 708 puede incluir un intervalo de umbrales de intensidad, tal como un umbral mínimo y un umbral máximo, de forma que el procesador 702 indica una presencia detectada de la plaga sólo cuando un valor de resultado calculado excede o alcanza el umbral máximo. Si el valor calculado cae por debajo del umbral mínimo, el procesador 702 puede indicar la ausencia de la plaga. Pero, si el valor calculado cae entre los umbrales mínimo y máximo, el procesador 702 puede indicar o emitir un resultado indeterminado para reducir el número de falsos positivos, es decir, determinar incorrectamente la presencia de la plaga. Del mismo modo, el umbral de tiempo de prueba 710 puede incluir un intervalo de umbrales de tiempo de prueba, tal como un umbral de tiempo de prueba mínimo y un umbral de tiempo de prueba máximo. Un resultado de la prueba determinado por el procesador 702 sólo puede ser exacto si se utilizan mediciones entre los umbrales de tiempo de prueba mínimo y máximo.

El perfil de plaga 706 puede incluir dos o más perfiles de plagas para las respectivas plagas de insectos. Cada perfil de plaga puede incluir, para al menos una característica del perfil, un intervalo de umbral que no se superponga o se cruce con un intervalo de umbral correspondiente (es decir, intervalo de umbral de las mismas características del perfil) de cualquier otro perfil de plaga. Por ejemplo, el perfil de plaga 706 puede incluir un perfil de chinches de cama y un perfil de cucarachas. El perfil de chinches de cama puede estar configurado para incluir, por ejemplo, umbrales de tiempo de prueba 710 de 3 min y 5 min y umbrales de intensidad 708 que van de 18 a 100. Por el contrario, el perfil de cucarachas puede incluir umbrales de intensidad 708 de 15 a 30 que se superponen a los umbrales de intensidad del perfil de chinches de cama entre 18 y 30. Pero, el perfil de cucarachas también puede incluir umbrales de tiempo de prueba 710 de 9 min a 10 min que no se superponen a ninguno de los umbrales de tiempo de prueba 710 de todos los demás perfiles de plagas 706, que incluyen el perfil de chinches de cama (por ejemplo, 9 a 10 min no se superponen a 3 a 5 min en el perfil de chinches de cama).

Las lecturas de los sensores 713A y 713B pueden almacenar las lecturas del sensor frontal 23 y del sensor posterior 18, respectivamente. Las lecturas del sensor 713A y las lecturas del sensor 713B pueden incluir, cada una, las respectivas lecturas iniciales del sensor y las respectivas lecturas posteriores del sensor frontal 23 y del sensor posterior 18, respectivamente. Una lectura inicial del sensor frontal 23 y del sensor posterior 18 se puede actualizar dependiendo de cuándo el procesador 702 ejecute el componente de comprobación de color 736 (que se describirá más adelante). Por medio del seguimiento de las lecturas subsiguientes del sensor en asociación con un tiempo de seguimiento a lo largo del proceso de detección de plagas, el procesador 702 puede determinar y detectar si se han cumplido dos o más perfiles de plagas 706, e indicar o emitir los respectivos resultados de la determinación. En una realización, un perfil de plaga 706 se cumple o se satisface si se cumple cada umbral configurado dentro de ese mismo perfil de plaga 706.

El procesador 702 puede incluir varios componentes 730 a 742 para implementar la funcionalidad de detección del dispositivo de detección 100. Para facilitar la comprensión, las descripciones de los componentes de la FIG. 7 se referirá a las FIGS. 1 a 3, que ilustran ejemplos de estructuras o componentes físicos del dispositivo de detección 100. Un componente del procesador 702 puede incluir una selección de operaciones almacenadas que, al ejecutarse en el procesador 702, provoca que éste lleve a cabo las operaciones del componente.

La FIG. 8 es un diagrama de flujo de un procedimiento 800 para un algoritmo generalizado para detectar si una o más plagas de insectos están presentes. El procedimiento 800 puede ser llevado a cabo por la lógica de procesamiento dentro de uno o más componentes, tales como los componentes 730 a 742 del procesador 702 de la FIG. 7, que puede comprender hardware (por ejemplo, circuitos, lógica dedicada, lógica programable, microcódigo, etc.), software (por ejemplo, instrucciones que se ejecutan en un dispositivo de procesamiento), o una combinación de los mismos. Para facilitar la referencia, las descripciones de las siguientes etapas se pueden referir a los componentes de la FIG. 7 y estructuras dentro de la FIG. 2.

En la etapa 802, el componente de prueba de encendido 732 activa el dispositivo de detección 100. Una vez activado, el dispositivo de detección 100 comienza a analizar un ensayo de flujo lateral para detectar la presencia de una o más plagas de insectos, incluidas las chinches de cama. El componente de prueba de encendido 732 puede activar el dispositivo de detección 100 cuando, por ejemplo, el dispositivo de detección 100 se enciende o se alimenta. El componente de prueba de encendido 732 puede lanzar adicionalmente una secuencia de autocomprobación para verificar un estado de funcionamiento del dispositivo de detección 100, descrito además con respecto a la FIG. 7 a continuación. En una realización, el componente de prueba de encendido 732 enciende o parpadea uno o más LED para indicar que se está realizando la etapa 802. Por ejemplo, el componente de prueba de encendido 732 puede parpadear el<l>E<d>verde 29 y parpadear el LED amarillo 27.

En la etapa 804, al completar la etapa 802, el componente de prueba de encendido 732 toma (o solicita al componente de muestreo 740 que tome) una lectura inicial del sensor frontal y una lectura inicial del sensor posterior. Estas lecturas iniciales se pueden almacenar en las lecturas de los sensores 713A y B.

En la etapa 806, el componente de comprobación de líquido 734 comprueba una cantidad inicial de líquido detectado que fluye más allá de la zona de formación de líneas 65. El líquido puede ser un fluido de muestraconjugado que fluye desde la almohadilla de reactivo 61 hacia la almohadilla de absorción 63, descrita con respecto a la FIG. 2 arriba. Dado que la detección de picos y la evaluación del perfil (como se explica con respecto a la FIG. 7 más adelante) puede ser crítico en cuanto al tiempo, el dispositivo de detección 100 sólo debe comenzar a rastrear un tiempo transcurrido cuando se detecta que se está realizando una prueba de ensayo de flujo lateral. Por ejemplo, basándose en el anticuerpo antichinches de cama conjugado específico y en la concentración del mismo en la almohadilla de reactivo 61, una determinación de la presencia de chinches de cama llevada a cabo por el procesador 700 sólo puede ser válida dentro de un cierto intervalo de tiempo transcurrido desde que se inició la prueba de ensayo de flujo lateral.

En la etapa 808, el componente de comprobación de color 736 comprueba si suficientes partículas de color dentro de un fluido de muestra-conjugado han pasado la zona de formación de líneas 65. Cuando se utiliza oro coloidal, esto se puede denominar como comprobación de la “migración del oro” En una realización, si muy poco del fluido de la muestra-conjugado ha migrado más allá de la zona de formación de la línea 65, entonces cualquier resultado de evaluación del perfil subsiguiente puede ser inválido. Esto se debe a que el procesador 702 determina una presencia de chinches de cama, es decir, un resultado de la prueba satisface el perfil de chinches de cama, basándose en al menos una intensidad de color detectada de la zona de formación de líneas 65. Por lo tanto, en un ejemplo, aunque el residuo de chinches de cama puede estar presente en el fluido de la muestra-conjugado, una intensidad de color de la zona de formación de líneas 65 puede no alcanzar un umbral de intensidad mínimo si no ha pasado suficiente, por ejemplo, oro coloidal por la zona de formación de líneas 65. En un aspecto, el componente de comprobación de color 736 puede encender o parpadear uno o más LED para indicar que se está realizando la etapa 808. Por ejemplo, el componente de comprobación de color 736 puede hacer parpadear el LED rojo 32 y parpadear el LED amarillo 27.

En la etapa 810, el componente de evaluación de perfil 742 determina un resultado de evaluación de perfil para el perfil de plaga 706, tal como un perfil de chinche de cama. En un aspecto, sólo existe un perfil para la evaluación. En otro aspecto, se puede configurar más de un perfil en el perfil de plaga 706, y el componente de evaluación de perfiles 742 determina un resultado de evaluación del perfil para cada plaga de insectos que tenga un perfil de plaga configurado. El resultado de la evaluación del perfil puede ser una de las tres posibilidades: presencia de plaga de insectos detectada, ausencia de plaga de insectos detectada y resultado indeterminado.

En un aspecto, si cualquiera de las etapas 804 a 810 devuelve un resultado no válido, el procedimiento 800 procede a la etapa 818. En la etapa 818, el procesador 702 puede controlar uno o más LED para indicar que se ha producido un error. Por ejemplo, el procesador 702 puede encender el LED amarillo 27. En un aspecto, el LED encendido puede continuar encendido hasta que la batería 43 del dispositivo de detección 100 se agote.

Las etapas 812 a 816 incluyen posibles salidas de LED que indican un resultado de perfil de plaga válido de la etapa 810. En un aspecto, el componente de evaluación de perfiles 742 puede indicar el resultado de un perfil de plaga mediante el uso de una variedad de transductores de salida, que incluyen uno o más LED, LCD, altavoces o motores de retroalimentación háptica. En la etapa 812, cuando el resultado de la evaluación del perfil de la etapa 810 es negativo o se detecta la ausencia de plagas de insectos, el componente de evaluación de perfiles 742 enciende el LED verde 29. En la etapa 814, cuando el resultado de la evaluación del perfil de la etapa 810 es indeterminado, el componente de evaluación de perfiles 742 enciende el LED verde 29 y el LED rojo 32. Y en la etapa 816, cuando el resultado de la evaluación del perfil de la etapa 810 es positivo o se detecta la presencia de una plaga de insectos, el componente de evaluación de perfiles 742 enciende el LED rojo 32. El procedimiento 800 termina en la etapa 820. Las FIGS. 9 a 13 son diagramas de flujo que detallan varias etapas del procedimiento 800. Los procedimientos 900 a 1300 pueden ser llevados a cabo por la lógica de procesamiento dentro de uno o más componentes, tales como los componentes del procesador 702 de la FIG. 7, que puede comprender hardware (por ejemplo, circuitos, lógica dedicada, lógica programable, microcódigo, etc.), software (por ejemplo, instrucciones que se ejecutan en un dispositivo de procesamiento), o una combinación de los mismos. Para facilitar la referencia, las descripciones de las siguientes etapas se pueden referir a los componentes de la FIG. 7 y estructuras dentro de la FIG. 2.

La FIG. 9 es un diagrama de flujo de un procedimiento 900. El procedimiento 900 detalla las operaciones de la etapa 806, que comprueba la presencia de líquido, de acuerdo con una realización de ejemplo. En la etapa 902, el componente de comprobación de líquido 734 inicializa, pone a 0, reinicia o borra el contador 709.

En la etapa 904, el componente de comprobación de líquido 734 invoca al componente de muestreo 740 para leer las mediciones del sensor posterior 18 y del sensor frontal 23. El componente de comprobación de líquido 734 recibe un resultado calculado (Calc) o una indicación de que se ha producido un error, es decir, que el resultado calculado no es válido. Si se produce un error, el componente de comprobación de líquido 734 devuelve un resultado no válido en la etapa 914.

En la etapa 906, el componente de comprobación de líquido 734 determina si el resultado calculado recibido excede un umbral de líquido dentro de los parámetros de funcionamiento 712. Si se ha superado el umbral de líquido, el componente de comprobación de líquido 734 devuelve un resultado válido en la etapa 916. Un resultado calculado que supere el umbral de líquido puede indicar que se está realizando un ensayo lateral para, por ejemplo, la detección de chinches de cama.

En la etapa 908, el componente de comprobación de líquido 734 determina si ha transcurrido un tiempo máximo (por ejemplo, 24 horas). Si es así, el componente de comprobación de líquido 734 devuelve un resultado no válido en la etapa 914.

En la etapa 910, el componente de comprobación de líquido 734 determina si es necesario volver a llevar a cabo las lecturas iniciales de los sensores frontales y posteriores. En una realización, el componente de comprobación de líquido 734 determina si se cumple la siguiente desigualdad: “|Lectura frontal- lectura frontal inicial| > DRIFT y |Calc| < MIN. “ Una lectura del sensor frontal actual que se aleja demasiado de la lectura frontal inicial almacenada, por ejemplo, supera un valor DRIFT de 20, se debe recalibrar si el resultado calculado (Calc), es inferior a MIN, tal como 3. Un resultado calculado por debajo de un mínimo especificado, por ejemplo, 3, puede indicar que el resultado calculado está causado por el ruido en las mediciones del sensor.

En la etapa 912, el componente de comprobación de líquido 734 recalibra los sensores frontales y posteriores por medio del ajuste de las lecturas iniciales frontales y posteriores a una lectura actual frontal y una lectura actual posterior, respectivamente.

La FIG. 10 es un diagrama de flujo de un procedimiento 1000. El procedimiento 1000 detalla la operación de la etapa 808 de comprobar si hay suficientes partículas de color tal como el oro coloidal, de acuerdo con una realización de ejemplo. En la etapa 1002, el componente de comprobación de líquido 734 inicializa, pone a 0, reinicia o borra el contador 709.

En la etapa 1004, el componente de comprobación de color 736 invoca al componente de muestreo 740 para leer las mediciones del sensor posterior 18 y del sensor frontal 23. El componente de comprobación de color 736 recibe un resultado calculado (Calc) o una indicación de que se ha producido un error, es decir, que el resultado calculado no es válido. Si se produce un error, el componente de comprobación de color 736 devuelve un resultado no válido en la etapa 1018.

En la etapa 1006, el componente de comprobación de color 736 invoca al componente de detección de picos 738. El componente de detección de picos 738 comprueba la existencia de un pico, y el componente de comprobación de color 736 recibe un resultado de detección de picos del componente de detección de picos 738. La detección de picos se describe más adelante con respecto a la FIG. 12.

En la etapa 1008, si el resultado de la detección de picos indica que no se encontró ningún pico, el procedimiento 1000 procede a la etapa 1012. De lo contrario, el procedimiento 1000 procede a la etapa 1010.

En la etapa 1010, el componente de comprobación de color 736 determina si el resultado calculado (Calc) excede el parámetro UMBRAL DE COLOR de los parámetros de funcionamiento 712. El UMBRAL DE COLOR puede indicar que se ha detectado una cantidad o concentración suficiente de partículas coloreadas dentro del fluido de la muestra-conjugado a medida que avanza el ensayo de flujo lateral. Cuando el resultado calculado supera el UMBRAL d E COLOR, el componente de comprobación de color 736 devuelve un resultado válido en la etapa 1016. De lo contrario, el procedimiento 1000 procede a la etapa 1012 donde se incrementa el contador 709. En una realización, en lugar de la etapa 1012, el contador 709 puede ser incrementado por el reloj 728 mientras el componente de comprobación de color 736 lleva a cabo las etapas 1004 a 1010 y 1014 a 1018.

En la etapa 1014, el componente de comprobación de color 736 comprueba si un valor del contador 709 excede un RETRASO MÁXIMO, por ejemplo, 172 segundos o un número correspondiente de ciclos de reloj.

La FIG. 11 es un diagrama de flujo de un procedimiento 1100. El procedimiento 1100 que detalla el funcionamiento del componente de muestreo 740 (invocado por una o más etapas del procedimiento 800 de la FIG. 8) para leer los valores de los sensores y calcular los resultados. El procedimiento 1100 comienza en la etapa 1102.

En la etapa 1104, el componente de muestreo 740 determina si ha transcurrido un tiempo de muestreo antes de tomar las lecturas del sensor posterior 18 y del sensor frontal 23. En una realización, un contador de muestreo (no mostrado) en la memoria 704 se puede incrementar cada ciclo de reloj y se reinicia en la etapa 1106 después de que el tiempo de muestreo ha sido alcanzado o excedido.

En la etapa 1106, el componente de muestreo 740 enciende el LED 67 de iluminación para que el sensor frontal 23 y el sensor posterior 18 puedan leer una medición de reflectancia óptica. En la etapa 1108, el componente de muestreo 740 lee el sensor frontal 23 y el sensor posterior 18, y almacena las mediciones leídas en las lecturas de los sensores 713A y B. Tras leer o almacenar las mediciones, el componente de muestreo 740 apaga el LED 67 de iluminación. El procedimiento 1100 puede omitir las etapas 1106 y 1110 para ahorrar en la velocidad de procesamiento. Sin embargo, es posible que se necesite más energía para mantener encendidos los LED 67 durante más tiempo.

En la etapa 1112, el componente de muestreo 740 comprueba si cada una de las lecturas del sensor frontal 23 y del sensor posterior 18 están en un intervalo de funcionamiento válido, como se ha configurado en los parámetros de funcionamiento 712. Por ejemplo, el componente de muestreo 740 puede comprobar si se cumplen todas las condiciones siguientes: lectura del sensor frontal > SENSOR FRONTAL MÍNIMO, lectura del sensor posterior > SENSOR POSTERIOR MÍNIMO, lectura del sensor frontal < SENSOR FRONTAL MÁXIMO, y lectura del sensor posterior < SENSOR POSTERIOR MÁXIMO. Las variables en mayúsculas indican los valores mínimos y máximos de los umbrales de lectura de los sensores frontales y posteriores. En una realización, si una o más condiciones fallan, el procedimiento 1100 procede a la etapa 1116 y devuelve un error o un resultado no válido.

En la etapa 1114, el componente de muestreo 740 devuelve un resultado calculado válido, calculado por medio de las lecturas de medición del sensor posterior 18 y del sensor frontal 23. Por ejemplo, el componente de muestreo 740 puede calcular el resultado mediante el uso de la siguiente ecuación de resultado:

resultado = [(Ri/R) — (Fi/F)] * SF

donde,

Fi = lectura inicial del sensor frontal 23;

F = lectura actual del sensor frontal 23;

Ri = lectura inicial del sensor posterior 18;

R = lectura actual del sensor posterior 18; y

SF = factor de escala, donde el factor de escala es un número entero positivo grande (por ejemplo, 666) y se utiliza para evitar valores inferiores a uno en el resultado calculado.

La FIG. 12 es un diagrama de flujo de un procedimiento 1200. El procedimiento 1200 detalla la operación de la etapa 1006 del procedimiento 1000, que determina si se ha encontrado un pico. El pico puede representar una intensidad de color máxima de la zona de formación de líneas 65 dado que la mayor parte del fluido de la muestra-conjugado ha fluido más allá de la zona de formación de líneas 65 hacia la almohadilla de absorción 63. Como se ha descrito anteriormente, determinar si una plaga, tales como las chinches de cama, está presente dentro del fluido de la muestra-conjugado puede ser un proceso de tiempo crítico. Un resultado determinado de la prueba o de la evaluación del perfil sólo puede ser válido dentro de un intervalo específico de tiempo transcurrido desde que se detectó el pico.

En la etapa 1202, el componente de detección de picos 738 recibe un resultado calculado (Calc) del componente de comprobación de color 736. Además, durante una primera iteración de la etapa 1202, un valor de pico (Pico) puede ser inicializado a 0.

En la etapa 1204, el componente de detección de picos 738 determina si se ha encontrado un pico en una iteración anterior del procedimiento 1200. Durante una primera iteración de la etapa 1204, el procedimiento 1200 puede proceder a la etapa 1206.

En la etapa 1206, el componente de detección de picos 738 compara el resultado calculado con el Pico. Si el resultado calculado excede el Pico, el procedimiento 1200 procede a la etapa 1210, donde el componente de detección de picos 738 asigna el Pico al resultado calculado actual.

En la etapa 1208, el componente de detección de picos 738 detecta si una diferencia entre el Pico y el resultado calculado excede un valor de RUIDO, por ejemplo, 9. El componente de detección de picos 738 puede necesitar implementar una etapa de filtrado de ruido tal como la etapa 1208 para eliminar una detección de picos falsapositiva, es decir, detectar un pico que no se ha alcanzado.

En la etapa 1212, si la diferencia entre el Pico y el resultado calculado excede el RUIDO, entonces el componente de detección de picos 738 puede estar más seguro de que se ha encontrado un pico. En iteraciones subsiguientes del procedimiento 1200, la etapa 1204 puede indicar que un pico fue encontrado previamente, es decir, en la etapa 1212 de una iteración previa del procedimiento 1200.

En la etapa 1214, el componente de detección de picos 738 devuelve si se encontró un pico.

La FIG. 13 es un diagrama de flujo de un procedimiento 1300. El procedimiento 1300 detalla las operaciones de la etapa 810 del procedimiento 800, que determina un resultado de la prueba o un resultado de la evaluación del perfil de una plaga. En la etapa 1302, el componente de evaluación de perfiles 742 inicializa, pone a 0, reinicia o borra el contador 709.

En la etapa 1304, el componente de evaluación de perfiles 742 invoca al componente de muestreo 740 para leer las mediciones del sensor posterior 18 y del sensor frontal 23. El componente de evaluación de perfiles 742 recibe un resultado calculado (Calc) o una indicación de que se ha producido un error, es decir, que el resultado calculado no es válido. Si se produce un error, el componente de evaluación de perfiles 742 devuelve un resultado no válido en la etapa 1306.

En la etapa 1308, el componente de evaluación de perfiles 742 determina si el contador 709 ha alcanzado o superado un parámetro de UMBRAL DE TIEMPO, tal como el umbral de tiempo de prueba 710, para el perfil de plaga 706. El parámetro UMBRAL DE TIEMPO es un período de tiempo predeterminado que es específico para un perfil de plaga particular 706. Si no se ha alcanzado el umbral de tiempo de prueba 710, el procedimiento 1300 procede a la etapa 1304, en el que se remuestrean los valores de los sensores.

En la etapa 1310, el componente de evaluación de perfiles 742 determina si el resultado calculado recibido de la etapa 1304 ha excedido un parámetro MAX_THRESHOLD, tal como un umbral de intensidad máxima de prueba 708 para el perfil de plaga 706. Si el resultado calculado excede el MAX_THRESHOLD, en la etapa 1312, el componente de evaluación de perfiles 742 determina que el perfil de plaga 706 ha sido satisfecho, y se ha detectado la presencia de la plaga asociada al perfil de plaga 706.

En la etapa 1314, el componente de evaluación de perfiles 742 determina si el resultado calculado recibido de la etapa 1304 cae por debajo de un parámetro MIN_THRESHOLD, tal como un umbral de intensidad mínima del umbral de prueba 708 para el perfil de plaga 706. Si el resultado calculado no excede o alcanza el MIN_THRESHOLD, en la etapa 1316, el componente de evaluación de perfiles 742 determina que el perfil de plaga 706 no fue satisfecho, y se detectó una ausencia de la plaga asociada al perfil de plaga 706.

En la etapa 1318, el componente de evaluación de perfiles 742 determina que debido a que el resultado calculado cae entre MIN_THRES<h>O<l>D y MAX_THRESHOLD, el resultado de la evaluación de perfiles es indeterminado. Al devolver una salida indeterminada, aunque el procedimiento 1300 no siempre produzca un resultado definitivo, es decir, presencia o ausencia detectada, el procedimiento 1300 reduce los falsos positivos en la detección de plagas. En la etapa 1320, se devuelve el resultado determinado de la etapa 1312, 1316 o 1318.

Aunque el procedimiento 1300 se ha descrito con respecto a un perfil de plaga, el procedimiento 1300 se puede adaptar para determinar si se satisfacen múltiples perfiles de plagas (por ejemplo, del perfil de plaga 706). El componente de evaluación de perfiles 742 puede estar configurado para llevar a cabo el procedimiento 1300 para cada perfil de plaga configurado en el perfil de plaga 706, de forma que se determine un resultado de evaluación de perfil para cada perfil configurado.

Volviendo a la FIG. 7, cada componente de los componentes 730 a 742 se describe más adelante a su vez:

El componente de configuración de perfiles 730 configura el uno o más perfiles de plagas 706 para incluir umbrales específicos para las características del perfil dentro de los perfiles de plagas 706. Los umbrales pueden ser proporcionados, por ejemplo, por un fabricante del dispositivo de detección 100. El componente de configuración de perfiles 730 puede ser un componente opcional. En un aspecto, el dispositivo de detección 100 está simplemente precargado o preconfigurado con uno o más perfiles de plagas 706. Por lo tanto, el dispositivo de detección 100 puede ejecutar una sola prueba de ensayo de flujo lateral y detectar la presencia de más de una plaga.

En un aspecto, el dispositivo de detección 100 puede incluir una interfaz de comunicación (por ejemplo, un puerto USB o un puerto de red) para recibir nuevos perfiles de plagas 706 o actualizaciones de perfiles de plagas 706. Por ejemplo, el dispositivo de detección 100 puede incluir un chip de red Bluetooth (no mostrado) acoplado a un puerto de red del procesador 702 (es decir, el procesador 21 de la FIG. 1) de forma que un usuario o fabricante de dispositivos pueda añadir o programar nuevos perfiles a los perfiles de plagas 706, añadir características de perfil a los perfiles de plagas existentes 706, o actualizar uno o más valores de umbral dentro de los perfiles de plagas existentes 706. Por lo tanto, el perfil de plaga 706 se puede configurar dinámicamente a través del componente de configuración de perfiles 730 para analizar una banda reactiva 16 incorporada actualmente en un ensayo de flujo lateral específico.

El componente de prueba de encendido 732 puede determinar cuándo activar el procesador 702 para comenzar a detectar la presencia de una o más plagas. En un aspecto, el componente de prueba de encendido 732 puede activar el procesador 702 cuando se detecta una señal de activación. Por ejemplo, una señal de activación puede ser detectada cuando el procesador 702 está siendo alimentado (por ejemplo, el puerto de alimentación 720 recibe energía) o cuando la luz ambiental está siendo detectada por al menos un sensor (por ejemplo, las lecturas del puerto del sensor frontal 716 o del puerto del sensor posterior 718). En una realización, durante el arranque del procesador 702, el componente de prueba de encendido puede inicializar los puertos 714 y los registros o datos dentro de la memoria 704.

Tras la inicialización, el componente de prueba de encendido 732 puede lanzar una secuencia de autocomprobación para verificar que se cumplen los parámetros de funcionamiento 712. Por ejemplo, el componente de prueba de encendido 732 puede llevar a cabo un ciclo a través de cada LED, controlado por el procesador 702, para determinar si cada uno de los LED está funcionando. En un aspecto, tras la puesta en marcha o la inicialización, la secuencia de autocomprobación puede incluir la determinación de si una luz ambiental detectada está por encima de un umbral almacenado en los parámetros de funcionamiento 712. El componente de prueba de encendido 712 puede controlar uno o más LED para que parpadeen o se iluminen para indicar el progreso actual o el resultado de la autoprueba. Al finalizar el autodiagnóstico, se puede solicitar al componente de muestreo 740 que tome una lectura inicial del sensor frontal 23 y una lectura inicial del sensor posterior 18.

El componente de comprobación de líquido 734 puede detectar si se está realizando una prueba de ensayo de flujo lateral en la banda reactiva 16 de la FIG. 2 en función de las mediciones leídas en el puerto del sensor frontal 716 o en el puerto del sensor posterior 718. Como se describe con respecto a la FIG. 2, la lectura de un sensor puede ser un valor de tensión representativo de una reflectancia óptica de la luz incidente, por ejemplo, la intensidad del color, detectada por el sensor. En una realización, el componente de comprobación de líquido 734 puede llamar o invocar al componente de muestreo 740. El componente de muestreo 740 lee de uno o más sensores para obtener lecturas de medición utilizadas para calcular un resultado utilizado por el componente de comprobación de líquido 734 para calibrar el sensor frontal 23 y el sensor posterior 18, como se explicó anteriormente con respecto a la FIG. 9.

En una operación típica de la prueba de ensayo de flujo lateral en la banda de ensayo 16, el fluido de la muestra puede fluir desde la mecha 56, a través de la almohadilla de reactivo 61, y pasar por la zona de formación de líneas 65 hacia la almohadilla de absorción 63. En una realización, el componente de comprobación de líquido 734 recibe un resultado calculado del componente de muestreo 740. El componente de muestreo 734 puede entonces comparar el resultado calculado con un umbral de líquido en los parámetros de funcionamiento 712 antes de determinar que se proceda con el algoritmo o proceso de detección. Cuando el resultado calculado supera el umbral de líquido, al menos una porción del líquido de la muestra ha llegado a la parte de la banda reactiva 16 opuesta al sensor frontal 23 o al sensor posterior 18. El componente de verificación de líquido 734 además puede utilizar el resultado calculado recibido para calibrar las lecturas iniciales de los sensores frontal y posterior (por ejemplo, reinicializar las lecturas iniciales del sensor) si una lectura actual del sensor frontal se desvía de la lectura inicial frontal anterior y el resultado calculado está cerca de 0, lo que indica que no se está detectando líquido.

El componente de comprobación de color 736 puede detectar si una cantidad suficiente de partículas de color dentro de la almohadilla de reactivo 61 ha fluido más allá de la zona de formación de líneas 65 opuesta al sensor frontal 23. En un aspecto, si no hay suficientes partículas de color que migren o fluyan más allá de la zona de formación de líneas 65, no se pueden capturar suficientes moléculas de muestra-conjugado. Como resultado, el procesador 702 puede detectar un falso negativo (es decir, detectar una ausencia de una o más plagas de insectos aunque una plaga de insectos podría estar presente). El componente de comprobación de color 736 puede invocar o llamar al componente de muestreo 740. El componente de muestreo 740 lee del sensor frontal 23 y del sensor posterior 18 para obtener las lecturas del sensor. Las lecturas son necesarias para el componente de comprobación de color 736 para determinar si se ha detectado una cantidad suficiente de partículas de color. En un aspecto, el componente de comprobación de color 736 puede ser llamado para comenzar a ejecutarse cuando el componente de comprobación de líquido 734 detecta el fluido de la muestra.

En una operación típica de la prueba de ensayo de flujo lateral, a medida que más fluido de muestra-conjugado fluye más allá de la zona de formación de líneas 65, las partículas coloreadas (por ejemplo, oro coloidal) dentro del fluido de muestra-conjugado pueden intensificar la coloración detectada por el sensor frontal 23 opuesto a la zona de formación de líneas 65. Cuando la mayor parte del fluido conjugado con la muestra ha migrado a la almohadilla absorbente 63, se pueden detectar cada vez menos partículas coloreadas que pasan por la zona de formación de líneas 65. El componente de comprobación de color 736 puede utilizar un resultado calculado del componente de muestreo invocado 740 para determinar un pico de intensidad en la coloración, que indica que la mayor parte del fluido de la muestra-conjugado ha migrado más allá de la zona de formación de líneas 65. El componente de comprobación de color 736 puede invocar o llamar al componente de detección de picos 736 para llevar a cabo la detección de picos.

El componente de muestreo 740 puede verificar que cada uno de los sensores frontales 23 y posteriores 18 están operando correctamente antes de leer de los sensores para calcular un resultado. En una realización, después de un retardo de muestreo, el componente de muestreo 740 puede muestrear y almacenar las lecturas del sensor frontal 23 y del sensor posterior 18 en las lecturas de los sensores 713A y B, respectivamente. El componente de muestreo 740 también puede almacenar un resultado calculado en la memoria 704. En un aspecto, el componente de muestreo 740 puede determinar si un sensor está funcionando correctamente por medio de la verificación de que el valor de la lectura del sensor está entre los umbrales de funcionamiento para el sensor definidos en los parámetros de funcionamiento 712.

En un aspecto, el componente de muestreo 740 puede calcular un resultado de acuerdo con la siguiente ecuación:

resultado = [(Ri/R) — (Fi/F)] * SF

donde,

Fi = lectura inicial del sensor frontal 23;

F = lectura actual del sensor frontal 23;

Ri = lectura inicial del sensor posterior 18;

R = lectura actual del sensor posterior 18; y

En un aspecto, la ecuación proporcionada “resultado = [(Ri/R) — (Fi/F)] * SF” puede ser utilizada por el componente de comprobación de líquido 734, el componente de comprobación de color 736, así como el componente de evaluación de perfil 742.

En un aspecto, al tener en cuenta la relación entre las lecturas iniciales y actuales del sensor frontal 23 y del sensor posterior 18 antes de la prueba, el resultado calculado tiene en cuenta las condiciones ambientales para proporcionar un resultado de prueba más exacto. Los aspectos que describen el uso y las ventajas proporcionadas por la ecuación anterior se describen en la Patente de los Estados Unidos Núm. 7.499.170 B2 titulada“System and Method for Reading a Test Strip".Dependiendo del tipo de sensores que se utilicen, el resultado calculado puede utilizar una ecuación modificada. Por ejemplo, en un aspecto, en el que un sensor es un fotodiodo, se puede utilizar la siguiente ecuación en su lugar: resultado = [(R/Ri) — (F/Fi)] * SF.

Por ejemplo, durante la inicialización y antes de la prueba, tanto el sensor frontal 23 como el sensor posterior 18 pueden proporcionar una respuesta proporcional o lecturas de medición, y ambos sensores pueden seguir de manera similar, porque ambos sensores están expuestos a las mismas condiciones ambientales y ambos sensores están expuestos a una fuente de luz similar, es decir, el LED 67 iluminado. Para aclarar lo que significan las frases “respuesta proporcional” y “seguir de forma similar”, supongamos que ambos sensores están expuestos a una fuente de luz de una longitud de onda y una intensidad determinadas. Supongamos también que la distancia entre ambos sensores y la fuente de luz es similar. La luz haría que cada sensor produjera una respuesta de salida o medición de lectura dentro del intervalo de funcionamiento particular de cada sensor. Una respuesta de salida podría ser mayor o menor que la otra respuesta de salida sin afectar al resultado de la prueba. Ahora tome los mismos dos sensores y expóngalos a una fuente de luz con la misma longitud de onda pero con una intensidad menor. La respuesta de salida de cada sensor puede ser menor que la respuesta de salida anterior, lo que significa que siguen de forma similar.

El componente de evaluación de perfiles 742 puede comparar o hacer coincidir un resultado calculado o almacenado con el perfil de plaga 706 para determinar si uno o más perfiles de plagas dentro del perfil de plaga 706 han sido satisfechos. El componente de evaluación de perfiles 742 puede llamar o invocar al componente de muestreo 740 para calcular u obtener el resultado calculado. En un aspecto, para cada perfil configurado en el perfil de plaga 706, el componente de evaluación de perfiles 742 puede esperar un tiempo mínimo dentro del umbral de tiempo de prueba 710 antes de comparar el resultado calculado con cada perfil. Esto produce un resultado de evaluación de perfil para cada plaga de insectos. El retardo de tiempo puede ser necesario para que suficientes moléculas de conjugado de la muestra reaccionen con los anticuerpos inmovilizados en la zona de formación de líneas 65, de forma que el componente de evaluación de perfiles 742 pueda determinar un resultado válido.

En un aspecto, el componente de evaluación de perfiles 742 puede comparar el resultado calculado con, por ejemplo, un umbral de intensidad máxima dentro del perfil de plaga 706. Esto determina si se detecta la presencia de una plaga de insectos asociada al perfil de plaga 706. Se pueden llevar a cabo otras comparaciones en función de las características del perfil almacenado en los perfiles de plagas 708. Por ejemplo, una característica del perfil puede incluir una tasa de cambio de la intensidad de la luz.

Al determinar si se ha cumplido un perfil de plaga de los perfiles de plagas 706, el componente de evaluación de perfiles 742 puede hacer que los puertos de salida 714 enciendan uno o más LED. Esto indica un resultado de evaluación del perfil. Por ejemplo, el componente de evaluación de perfiles 742 puede alimentar o encender el LED rojo 32 para indicar la presencia detectada de chinches de cama. Es decir, el resultado de la evaluación del perfil es positivo, lo cual indica que se ha cumplido el perfil de plaga 506 de chinches de cama. Por el contrario, el componente de evaluación de perfiles 742 puede encender el LED verde 29 cuando detecta la ausencia de chinches de cama, es decir, el resultado de la evaluación del perfil es negativo. En una realización, el componente de evaluación de perfiles 742 puede emitir un resultado (por ejemplo, encendiendo tanto el LED verde 29 como el LED rojo 32) para indicar que el resultado de la evaluación del perfil era indeterminado.

En un aspecto, el componente de evaluación de perfil 742 puede indicar un resultado de evaluación de perfil para cada perfil de plaga configurado dentro del perfil de plaga 706. Por ejemplo, la pantalla de resultados 25 puede incluir un dispositivo basado en LED para cada perfil configurado que se controla para que se ilumine o cambie a un color específico para indicar cada resultado específico de la evaluación del perfil. En una realización, el componente de evaluación de perfiles 742 puede exhibir una gravedad de la presencia detectada de una plaga de insectos basada en una intensidad de la coloración de la zona de formación de líneas 65.

La FIG. 14 es un diagrama que ilustra resultados de ejemplo obtenidos para pruebas de ensayo de flujo lateral de muestras analizadas por los componentes del dispositivo de detección 100 de la FIG. 1. Como se muestra, la tabla de valores de intensidad de infestación de la izquierda muestra los resultados calculados para seis pruebas de ensayo de flujo lateral de muestras llevadas a cabo en el mismo dispositivo de detección, tal como el dispositivo de detección 100 de la FIG. 1. Para cada prueba de ensayo, el componente de muestreo 740 puede almacenar los resultados calculados en tres momentos de muestreo: 3min, 5min y 10min.

El perfil de plaga 706 puede incluir un perfil de chinches de cama que incluye, por ejemplo, un umbral de intensidad mínima de 9, un umbral de intensidad máxima de 15 y un umbral de tiempo de prueba entre 4 y 6 minutos. Por ejemplo, el umbral de tiempo de prueba puede ser de 5 minutos. Este umbral de tiempo de prueba es un tiempo predeterminado específico para el perfil de las chinches de cama. Los resultados de las pruebas de ensayo 1 a 3 superan el umbral de intensidad máxima en la marca de 5 minutos. El resultado de la prueba de ensayo 6 se encuentra entre los umbrales de intensidad mínimo y máximo. Y, el resultado calculado de la prueba de ensayo 5 cae por debajo del umbral de intensidad mínima. Por lo tanto, el componente de evaluación de perfiles 742 puede controlar los LED para indicar una presencia de chinches de cama para las pruebas de ensayo 1 a 3, una ausencia de chinches de cama para la prueba de ensayo 5, y un resultado indeterminado para la prueba de ensayo 6. En un aspecto, un perfil de chinches de cama puede incluir umbrales de severidad tales que los resultados de la evaluación del perfil para las pruebas de ensayo 1 a 3 indican una severidad media, una severidad baja y una severidad alta, respectivamente. Uno o más LED pueden ser controlados para indicar la gravedad de los niveles de infestación, por ejemplo, al encenderse, al parpadear a un ritmo específico, o al emitir luz a una intensidad específica.

En un aspecto, el perfil de plaga 706 puede incluir el perfil de chinches de cama descrito y un perfil de cucarachas que incluye, por ejemplo, un umbral de intensidad mínima de 11, un umbral de intensidad máxima de 14 y un umbral de tiempo de prueba entre 9 y 11 minutos. Aunque en el tiempo de muestreo de 10 minutos, las pruebas de ensayo 1 a 3 y 6 pueden superar cada una el umbral de intensidad máxima de 14, el componente de evaluación de perfiles 742 sólo puede indicar una presencia detectada de cucarachas para la prueba de ensayo 6. Por lo tanto, el procesador 702 puede ser un detector de plagas de insectos priorizado. Los tipos de plagas posiblemente detectados se pueden priorizar en función de los umbrales de tiempo de comprobación, desde el menor retraso hasta el mayor. Por ejemplo, el procesador 702 puede estar configurado para detectar primero si hay chinches de cama en el tiempo de muestreo de 5 minutos antes de detectar segundo si hay cucarachas en el tiempo de muestreo de 10 minutos.

Para probar la eficacia del dispositivo de detección 100 de la FIG. 1, que tiene el procesador 702 de la FIG. 7 y funciona de acuerdo con los procedimientos de las FIGS. 8 a 13, se examinaron 17 camas infestadas de chinches de cama. En esta prueba de campo, se confirmó visualmente que cada una de las 17 camas tenía al menos 10 chinches de cama vivas. En este ejemplo de prueba de campo, se creó una muestra de líquido para cada una de las 17 camas y se aplicó al dispositivo de detección 100 para detectar la infestación de chinches de cama anterior o presente. Brevemente, como se describe con respecto a la FIG. 1, el fluido de la muestra se creó mediante el uso de primero un material de hisopado y un procedimiento de recolección estandarizado para hisopar cada lecho y luego sumergir el material de hisopado en un tampón de extracto.

En este ejemplo de prueba de campo, el resultado de la detección de chinches de cama para cada una de las 17 camas se generó y se exhibió después de 10 minutos. Como se ha comentado anteriormente con respecto al perfil de la plaga 706, este tiempo de prueba de 10 minutos es un ejemplo de período de tiempo específico para las chinches de cama. La implementación de los procedimientos de las FIGS. 8 a 13, el dispositivo de detección 100 detectó una infestación previa o presente de chinches de cama en 13 de las 17 camas infestadas de chinches de cama. Por lo tanto, este ejemplo de prueba de campo muestra que mediante el uso del dispositivo de detección 100, un operador de control de plagas puede determinar las infestaciones de chinches de cama en el sitio y en un corto período de tiempo, por ejemplo, dentro de 10 minutos, con alta exactitud. El operador de control de plagas no tendría que depender de los procedimientos de detección actuales, tales como la obtención de una muestra de residuos de chinches de cama sospechosos para ser analizada en un laboratorio de pruebas externo, que a menudo requiere de 24 a 48 horas para producir un resultado de la prueba.

Cualquiera de los aspectos anteriores puede incluir los siguientes anticuerpos monoclonales contra chinches de cama o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, mutantes, anticuerpos conjugados o fragmentos de unión a antígeno conjugados, composiciones, kits, hibridomas, polinucleótidos, polipéptidos, vectores, células o procedimientos, como se desvela en la Solicitud de Patente Provisional de los Estados Unidos Núm. 62/244.189 presentada el 21 de octubre de 2015, titulada“Anti-bed bug monoclonal antibodies and methods of making and uses thereof’.

Terminología

Como se utiliza en la presente memoria, el término “chinche de cama” se refiere a cualquier especie o cepa deCimex.

Los términos “anticuerpo” y “anticuerpos” son términos de la técnica y se pueden usar indistintamente en la presente memoria para referirse a una molécula o moléculas con un sitio de unión a antígeno que se une específicamente a un antígeno.

El término “anticuerpo monoclonal” se refiere a una población homogénea de anticuerpos que participan en el reconocimiento específico y la unión de un único determinante antigénico, o epítopo. Esto contrasta con los anticuerpos policlonales que suelen incluir diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes antigénicos. Además, “anticuerpo monoclonal” se refiere a dichos anticuerpos fabricados de cualquier manera, que incluyen, pero sin limitarse a, por hibridoma, selección de fagos, expresión recombinante y animales transgénicos. El término “fragmento de unión a antígeno” se refiere a una porción de un anticuerpo que es capaz de unirse específicamente a un antígeno. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen, pero no se limitan a fragmentos de región variable de cadena pesada, fragmentos de región variable de cadena ligera, Fab, Fab', F(ab')2, fragmentos scFv, fragmentos Fv, anticuerpos lineales, anticuerpos de cadena simple, anticuerpos multiespecíficos, minicuerpos, dicuerpos, triacuerpos y tetracuerpos.

Los términos “región variable” o “dominio variable” son términos de la técnica y se pueden utilizar indistintamente en la presente memoria para referirse a una porción de un anticuerpo que difiere ampliamente en la secuencia entre los anticuerpos y se utiliza en la unión y la especificidad de un anticuerpo particular para su antígeno particular. Cada una de las regiones variables de cadena pesada y ligera consiste en cuatro regiones marco (FR) conectadas por tres regiones determinantes de la complementariedad (CDR) también conocidas como regiones hipervariables. Las CDR de cada cadena contribuyen a la formación del sitio de unión al antígeno de los anticuerpos.

El término “se une específicamente” se refiere a las moléculas que se unen a un antígeno (por ejemplo, un epítopo o un complejo inmunitario) como lo entienden los expertos en la técnica. Por ejemplo, una molécula que se une específicamente a un antígeno se puede unir a otros péptidos o polipéptidos, generalmente con menor afinidad, como se determina, por ejemplo, por medio de inmunoensayos, BIAcore®, instrumento KinExA 3000 (Sapidyne Instruments, Boise, ID), u otros ensayos conocidos en la técnica.

Como se utiliza en la presente memoria, el término “detectar” abarca la detección cuantitativa y cualitativa.

Como se utiliza en la presente memoria, el término “cantidad efectiva” se refiere a la cantidad que consigue un efecto deseado.

Como se utilizan en la presente memoria, los términos “célula huésped” y “célula” se pueden utilizar indistintamente y se pueden referir a cualquier tipo de célula, por ejemplo, una célula primaria, una célula en cultivo o una célula de una línea celular, incluido un hibridoma.

Un anticuerpo, un fragmento de unión a antígeno, una célula huésped y una célula, como se mencionan en la presente memoria, incluyen formas “aisladas” que han sido separadas o recuperadas de un componente de su entorno nativo, tal como la separación o la eliminación de contaminantes que interferirían con los usos del anticuerpo, del fragmento de unión a antígeno, de la célula huésped o de la célula, en los que dichos contaminantes pueden incluir enzimas, hormonas y otros materiales proteicos o no proteicos.

Ciertos aspectos pueden incluir un anticuerpo producido por el hibridoma depositado en la American Type Culture Collection (ATCC) bajo el Número de Acceso PTA-122644, o un fragmento de unión a antígeno del mismo. El anticuerpo monoclonal contra la chinche de cama designado en la presente memoria como BB2 es producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644.

Ciertos aspectos pueden incluir un anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645, o un fragmento de unión a antígeno del mismo. El anticuerpo monoclonal antichinche designado en la presente memoria como BB7 es producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645

Ciertos aspectos pueden incluir un anticuerpo monoclonal o un fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de cadena pesada y de cadena ligera del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7] (véase, por ejemplo, la discusión de las CDR en Kabatet al.,U.S. Dept. of Health and Human Services,“Sequences of Proteins of Immunological Interest"(1983), y Chothiaet al., J. Mol. Biol.196:901a 917 (1987)). Los procedimientos para determinar las CDR son muy conocidos, que incluyen un enfoque basado en la variabilidad de la secuencia entre especies (es decir, Kabatet al. Sequences of Proteins of Immunological Interest,(5ta ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda, MD)), y un enfoque basado en estudios cristalográficos de complejos antígenoanticuerpo (Al-lazikaniet al., J. Molec. Biol.273:927a 948 (1997)). Además, se pueden utilizar combinaciones de estos dos enfoques para determinar los CDR. Las CDR también se pueden determinar de acuerdo con Lefranc M-P,The Immunologist7: 132 a 136 (1999) Lefranc M-P,et al., Nucleic Acids Res27: 209 a 212 (1999) MacCallum RMet al., J. Mol. Biol.262: 732 a 745 (1996) Martin A.“Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains",en Antibody Engineering, Kontermann y Dübel, eds., capítulo 31, págs. 422 a 439, Springer-Verlag, Berlín (2001); y el software de modelado de anticuerpos AbM de Oxford Molecular (Oxford Molecular Group, Inc.).

Ciertos aspectos pueden incluir un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende las regiones variables de cadena pesada y ligera del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7]. Por lo general, una región variable está situada en torno a los 110 a 120 aminoácidos aminoterminales en la cadena pesada madura y en torno a los 90 a 115 aminoácidos aminoterminales en la cadena ligera madura.

Ciertos aspectos pueden incluir un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende las cadenas pesada y ligera del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7]. Cada cadena pesada comprende una región variable de cadena pesada y una región constante de cadena pesada. La región constante de cadena pesada comprende tres dominios, CHI, CH2 y CH3. Cada cadena ligera comprende una región variable de cadena ligera y una región constante de cadena ligera. La región constante de cadena ligera comprende un dominio (CL1).

Los anticuerpos monoclonales incluidos en la divulgación pueden ser, pero no se limitan a, anticuerpos producidos recombinantemente, anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados, anticuerpos quiméricos, anticuerpos multiespecíficos tales como anticuerpos biespecíficos, proteínas de fusión que comprenden una porción de determinación de antígeno de un anticuerpo, y cualquier otra molécula de inmunoglobulina modificada que comprenda un sitio de reconocimiento de antígeno siempre que los anticuerpos exhiban la actividad deseada. Los anticuerpos pueden ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA o IgY), de cualquier clase (por ejemplo, IgG-i, IgG<2>, IgG<3>, IgG<4>, IgA<1>o IgA<2>) o de cualquier subclase (por ejemplo, IgG<2>a o IgG<2>b) de molécula de inmunoglobulina. Las técnicas para la producción de anticuerpos serán evidentes para los profesionales expertos. Los anticuerpos monoclonales se pueden preparar, por ejemplo, mediante el uso de procedimientos de hibridoma, tal como los descritos por Kohler y Milstein,Nature256:495 (1975). Por medio del procedimiento del hibridoma, se inmuniza a un ratón, un hámster u otro animal huésped apropiado para provocar la producción por parte de los linfocitos de anticuerpos que se unirán específicamente a un antígeno inmunizante. Los linfocitos también se pueden inmunizarin vitro.Tras la inmunización, los linfocitos se aíslan y se fusionan con una línea celular de mieloma adecuada mediante el uso de, por ejemplo, polietilenglicol, para formar células de hibridoma que luego se pueden seleccionar a partir de linfocitos no fusionados y células de mieloma.

Los anticuerpos monoclonales también se pueden fabricar mediante el uso de procedimientos de ADN recombinante como se describe en la Patente de los Estados Unidos 4.816.567. Los polinucleótidos que codifican un anticuerpo monoclonal se aíslan a partir de células B maduras o de células de hibridoma, tales como por medio de RT-PC<r>mediante el uso de cebadores oligonucleótidos que amplifican específicamente los genes que codifican las cadenas pesada y ligera del anticuerpo, y su secuencia se determina por medio de procedimientos convencionales. Los polinucleótidos aislados que codifican las cadenas pesadas y ligeras se clonan entonces en vectores de expresión adecuados, que permiten la generación de anticuerpos monoclonales cuando se transfectan en células huésped, que incluyen, pero sin limitarse a ello, célulasE. coli,células COS de simio, células de ovario de hámster chino (CHO) o células de mieloma. Asimismo, los anticuerpos monoclonales recombinantes o sus fragmentos de la especie deseada se pueden aislar a partir de bibliotecas de visualización de fagos que expresen CDR de la especie deseada (véase, por ejemplo, McCaffertyet al., Nature348:552 a 554 (1990) Clacksonet al., Nature352:624 a 628 (1991); y Markset al., J. Mol. Biol.222:581a 597 (1991)).

Los fragmentos de unión a antígeno en las realizaciones pueden ser producidos por cualquier procedimiento conocido e incluyen una porción de un anticuerpo que es capaz de unirse específicamente a un antígeno. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen, pero no se limitan a, fragmentos de la región variable de cadena pesada, fragmentos de la región variable de cadena ligera, Fab, Fab', F(ab')2, fragmentos scFv, fragmentos Fv, anticuerpos lineales, anticuerpos de cadena simple, anticuerpos multiespecíficos, minicuerpos, diacuerpos, triacuerpos y tetracuerpos (véase, por ejemplo, Hudson y Souriau,Nature Med.9: 129 a 134 (2003) y la Patente de los Estados Unidos 5.641.870). Tradicionalmente, estos fragmentos se obtienen por medio de la digestión proteolítica de anticuerpos intactos (véase, por ejemplo, Morimotoet al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods24:107 a 117 (1993) Brennanet al., Science229:81 (1985)). En ciertas realizaciones, los fragmentos de anticuerpos se producen de forma recombinante. Por ejemplo, los fragmentos de anticuerpos se pueden expresar y secretar a partir deE. coliu otras células huésped, para de ese modo permitir la producción de grandes cantidades de los fragmentos. Dichos fragmentos de anticuerpos también se pueden aislar de las bibliotecas de fagos de anticuerpos. Otras técnicas para la producción de fragmentos de anticuerpos serán evidentes para los expertos en la técnica.

En ciertos aspectos, cualquiera de los anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de los mismos puede ser capaz de unirse a un antígeno de chinches de cama en un lisado de chinches de cama enteras o un extracto de papel de recolección que comprende material de desecho de chinches de cama. Los procedimientos de producción de lisados de chinches de cama enteros y de extractos de papel de recolección que comprenden material de desecho de chinches de cama serán evidentes para los expertos en la técnica, basándose en las técnicas de extracción conocidas y en los procedimientos desvelados en la presente memoria. Las chinches de cama enteras incluyen ninfas, machos y/o hembras se pueden obtener a partir de un área de infestación o de una colonia de chinches de cama mantenida experimental o comercialmente, y pueden incluir cualquier especie o cepa deCimex,que incluye, pero sin limitarse a,Cimex lectulariusy la cepa Harlan. El papel de recolección que contiene material de desecho de chinches de cama puede incluir excrementos y/o tejidos de chinches de cama, por ejemplo, y se puede obtener de fuentes comerciales (por ejemplo, i2LResearch USA Inc., Baltimore, Maryland, Estados Unidos).

La divulgación puede incluir un mutante del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7]. Los mutantes pueden contener, por ejemplo, mutaciones de sustitución conservadora, es decir, la sustitución de uno o más aminoácidos por aminoácidos similares. Por ejemplo, la sustitución conservadora se refiere a la sustitución de un aminoácido por otro dentro de la misma clase general tal como, por ejemplo, un aminoácido ácido por otro aminoácido ácido, un aminoácido básico por otro aminoácido básico o un aminoácido neutro por otro aminoácido neutro. Lo que se pretende con una sustitución conservadora de aminoácidos es muy conocido en la técnica. Las mutaciones también pueden incluir supresiones, inserciones, inversiones y repeticiones. Las mutaciones se pueden introducir por medio de procedimientos generales de biología molecular conocidos en la técnica, que incluyen, pero sin limitarse a ello, la PCR con riesgo de error, la mutagénesis dirigida por oligonucleótidos, la mutagénesis dirigida al sitio y el barajado de cadenas pesadas o ligeras.

La divulgación puede incluir un anticuerpo monoclonal o un fragmento de unión a antígeno del mismo que tiene una o más características que son sustancialmente similares a las del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7]. La frase “sustancialmente similar”, como se utiliza en la presente memoria, denota un grado de similitud lo suficientemente alto entre dos características como para que los expertos en la técnica consideren que la diferencia tiene poca o ninguna importancia biológica y/o estadística. En ciertas realizaciones, la diferencia entre dos valores numéricos puede ser inferior a aproximadamente el 15%, 10%, 5%, 2% o 1%. Las características de los anticuerpos depositados pueden incluir una o más propiedades, tales como, pero no limitadas a, la especificidad de unión (por ejemplo, el valor Kd), los determinantes antigénicos/epítopo y las secuencias polinucleotídicas o polipeptídicas. En ciertos aspectos, el anticuerpo monoclonal o fragmento de unión a antígeno del mismo tiene una secuencia polinucleotídica o polipeptídica que es al menos 90% a 99%, al menos 95% a 99%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, o al menos un 99% idéntica a la secuencia polinucleotídica o polipeptídica del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122645 [BB7]. En ciertos aspectos, el anticuerpo monoclonal o el fragmento de unión a antígeno del mismo tiene una o más de las mismas características que el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7]. En ciertos aspectos, el anticuerpo monoclonal o el fragmento de unión a antígeno del mismo se une al mismo determinante/epítopo antigénico que el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122645 [BB7].

Los términos “epítopo” o “determinante antigénico” se pueden utilizar indistintamente en la presente memoria para referirse a la porción de un antígeno capaz de ser reconocido y unido específicamente por un anticuerpo particular. Un epítopo suele incluir al menos 3, y más habitualmente, al menos 5 u 8 a 10 aminoácidos en una conformación espacial única. Un epítopo puede ser, por ejemplo, aminoácidos contiguos de un polipéptido (epítopo lineal o contiguo) o un epítopo puede, por ejemplo, provenir de dos o más regiones no contiguas de un polipéptido o polipéptidos (epítopo conformacional, no lineal, discontinuo o no contiguo). El epítopo al que se une un anticuerpo se puede determinar, por ejemplo, por medio de espectroscopia de RMN, estudios de cristalografía por difracción de rayos X, ensayos ELISA, intercambio de hidrógeno/deuterio acoplado a la espectrometría de masas (por ejemplo, espectrometría de masas por cromatografía líquida y electrospray), ensayos de barrido de oligopéptidos basados en matrices, y/o mapeo de mutagénesis (por ejemplo, mapeo de mutagénesis dirigida al sitio). Para la cristalografía de rayos X, la cristalización se puede llevar a cabo mediante el uso de cualquiera de los procedimientos conocidos en la técnica (por ejemplo, Giegé Ret al.,(1994)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr50(Pt 4): 339 a 350 McPherson A (1990)Eur J Biochem189: 1 a 23 Chayen NE (1997) Structure 5: 1269 a 1274 McPherson A (1976)J Biol Chem251: 6300 a 6303). Los cristales de anticuerpos:antígenos se pueden estudiar por medio de técnicas de difracción de rayos X muy conocidas y se pueden refinar mediante el uso de programas informáticos tales como X-PLOR (Universidad de Yale, 1992, distribuido por Molecular Simulations, Inc.; véase, por ejemploMeth Enzymol(1985) volúmenes 114 y 115, eds Wyckoff HWet al.,U.S. 2004/0014194), y BUSTER (Bricogne G (1993)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr49(Pt 1): 37 a 60 Bricogne G (1997)Meth Enzymol276A: 361 a 423, ed Carter CW; Roversi Pet al.,(2000)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr56(Pt 10): 1316 a 1323). Los estudios de mapeo de mutagénesis se pueden llevar a cabo mediante el uso de cualquier procedimiento conocido por los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Champe Met al.,(1995)J Biol Chem270: 1388 a 1394 y Cunningham BC & Wells JA (1989)Science244: 1081 a 1085 para una descripción de las técnicas de mutagénesis, incluidas las técnicas de mutagénesis de barrido de alanina.

La divulgación puede incluir un anticuerpo monoclonal conjugado o un fragmento de unión a antígeno conjugado que comprenda cualquiera de los anticuerpos, fragmentos de unión a antígeno o mutantes descritos en la presente memoria y un agente de detección, incluidos los agentes de detección descritos anteriormente. El agente de detección se puede conjugar directa o indirectamente con el anticuerpo, el fragmento de unión al antígeno o el mutante. El agente de detección puede ser detectable por sí mismo o, en el caso de una etiqueta enzimática, puede catalizar la alteración química de un compuesto o composición de sustrato que sea detectable. El agente de detección incluye, pero no se limita a, un radiomarcador, un fluoróforo, un cromóforo, un agente de imagen o un metal, que incluyen un ion metálico. En ciertos aspectos, el agente de detección es oro coloidal o nanopartículas de oro. En ciertas realizaciones, el oro coloidal o las nanopartículas de oro están compuestos por partículas de oro que tienen un tamaño de 1 a 300 nm, de 1 a 250 nm, de 10 a 200 nm, de 20 a 150 nm, de 20 a 100 nm, de 20 a 80 nm, de 20 a 60 nm, de 20 a 50 nm, 20 nm, 30 nm, 40 nm, 50 nm, 60 nm, 70 nm, 80 nm, 90 nm, 100 nm, 150 nm, 200 nm, 250 nm o 300 nm. En ciertos aspectos, el anticuerpo conjugado o el fragmento conjugado de unión a antígeno comprende el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122644 [BB2], o un fragmento de unión a antígeno del mismo, o el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122645 [BB7], o un fragmento de unión a antígeno del mismo.

La divulgación puede incluir una composición que comprenda cualquiera de los anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, mutantes, o anticuerpos conjugados o fragmentos de unión a antígeno conjugados den la presente memoria, o una combinación de los mismos. En ciertos aspectos, la composición comprende el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] y el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7]. En ciertas realizaciones, la composición comprende el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122644 [BB2], y un anticuerpo conjugado que comprende el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122645 [BB7] y un agente de detección. En ciertos aspectos, la composición comprende el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122645 [BB7], y un anticuerpo conjugado que comprende el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] y un agente de detección.

La divulgación puede incluir un kit que comprende cualquiera de los anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, mutantes, anticuerpos conjugados o fragmentos de unión a antígeno conjugados, o composiciones den la presente memoria, o una combinación de los mismos. En ciertos aspectos, un kit comprende al menos un componente en uno o más recipientes. En algunos aspectos, el kit comprende componentes necesarios y/o suficientes para llevar a cabo un ensayo de detección, que incluyen controles, instrucciones para llevar a cabo los ensayos, cualquier dispositivo necesario, y/o software para el análisis y la presentación de los resultados. Entre los dispositivos adecuados se encuentran los desvelados en la Patente de los Estados Unidos Núm.

7.220.597 y 7.214.542.

La divulgación puede incluir un hibridoma capaz de producir un anticuerpo, en el que el hibridoma está depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o en el que el hibridoma está depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122645 [BB7].

La divulgación puede incluir un polipéptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos al menos 90% a 99%, al menos 95% a 99%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idéntica a una secuencia de aminoácidos de una región variable de cadena pesada o ligera o una cadena pesada o ligera, del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7]. En ciertos aspectos, el polipéptido comprende las secuencias de aminoácidos de las CDR de una región variable de cadena pesada o ligera del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7]. En ciertos aspectos, el polipéptido comprende las secuencias de aminoácidos de la región variable de cadena pesada o ligera, o de cadena pesada o ligera, del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122645 [B<b>7].

La divulgación puede incluir un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de ácido nucleico al menos 90% a 99%, al menos 95% a 99%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idéntica a una secuencia de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena pesada o ligera o una cadena pesada o ligera, del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122645 [BB7]. En ciertos aspectos, el polinucleótido comprende secuencias de ácido nucleico que codifican las CDR de una región variable de cadena pesada o ligera del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122645 [BB7]. En ciertos aspectos, el polinucleótido comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica la región variable de cadena pesada o ligera, o la cadena pesada o ligera, del anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC con el Número de Acceso PTA-122645 [BB7].

Las realizaciones pueden incluir un vector que comprende uno o más de los polinucleótidos aislados de la invención. En ciertas realizaciones, el vector es un vector de expresión.

La divulgación puede incluir una célula aislada que produce un anticuerpo, un fragmento de unión a antígeno o un mutante de la invención. En ciertas realizaciones, la célula es un hibridoma. En ciertas realizaciones, la célula comprende uno o más vectores de la invención. En ciertos aspectos, la célula comprende uno o más polinucleótidos de la.

La divulgación puede incluir un procedimiento para fabricar un anticuerpo, un fragmento de unión a antígeno o un mutante de la invención, que comprende cultivar una célula aislada que produce el anticuerpo, el fragmento de unión a antígeno o el mutante, y aislar el anticuerpo, el fragmento de unión a antígeno o el mutante de la célula cultivada.

Las células incluyen, pero no se limitan a, hibridomas, procariotas, levaduras, insectos o células eucariotas superiores. Los hibridomas que producen anticuerpos monoclonales se pueden propagar en cultivosin vitromediante el uso de procedimientos estándar (Goding,Monoclonal Antibodies: Principies and Practice,Academic Press, 1986) oin vivocomo tumores de ascitis en un animal. Los procariotas incluyen organismos gramnegativos o grampositivos, por ejemplo E.colio bacilos. Las células eucariotas superiores incluyen, entre otras, las líneas celulares establecidas de origen mamífero. Los ejemplos de líneas celulares de mamíferos adecuadas son las líneas celulares COS-7, L, C127, 3T3, ovario de hámster chino (CHO), HeLa y BHK. En ciertos aspectos, cualquiera de los anticuerpos, fragmentos de unión a antígeno o mutantes de la invención son producidos por células aisladas tras la transfección de las células con vectores que comprenden polinucleótidos que codifican las secuencias de los anticuerpos, fragmentos de unión a antígeno o mutantes. Los vectores de clonación y expresión adecuados para su uso con huéspedes celulares bacterianos, fúngicos, de levadura y de mamíferos se describen en Pouwelset al. (Cloning Vectors:A Laboratory Manual,Elsevier, N.Y., 1985). Los vectores de expresión de mamíferos pueden comprender elementos no transcritos, tales como un origen de replicación, un promotor y un potenciador adecuados vinculados al gen que se va a expresar, y otras secuencias no transcritas que flanquean 5' o 3', y secuencias no traducidas 5' o 3', tales como sitios de unión a ribosomas necesarios, un sitio de poliadenilación, sitios de empalme donante y aceptor, y secuencias de terminación transcripcional. Los sistemas de baculovirus para la producción de proteínas heterólogas en células de insectos son revisados por Luckow y Summers,Bio/Technology6:47 (1988).

Los anticuerpos, fragmentos de unión a antígeno o mutantes se pueden aislar de las células o del medio de cultivo, o del líquido de ascitis para la propagaciónin vivode hibridomas. El aislamiento de los anticuerpos, de los fragmentos de unión a antígeno o de los mutantes se puede llevar a cabo de acuerdo con cualquier procedimiento adecuado. Dichos procedimientos estándar incluyen la cromatografía (por ejemplo, intercambio iónico, cromatografía en columna de afinidad y de tamaño), centrifugación, solubilidad diferencial, o por cualquier otra técnica estándar para la purificación de proteínas. Los procedimientos conocidos en la técnica para purificar anticuerpos y otras proteínas incluyen, por ejemplo, los descritos en las Publicaciones de Patente de los Estados Unidos Núm.

2008/0312425, 2008/0177048 y 2009/0187005.

La divulgación puede incluir un procedimiento de detección de chinches de cama, que comprende el contacto de una muestra que comprende un antígeno de chinches de cama con cualquiera de los anticuerpos, fragmentos de unión a antígeno, mutantes, anticuerpos conjugados o fragmentos conjugados de unión a antígeno, o composiciones, o una combinación de los mismos, y la detección de la unión del antígeno de chinches de cama al anticuerpo o fragmento de unión a antígeno, mutante, anticuerpo conjugado o fragmento conjugado de unión a antígeno, composición, o combinación de los mismos. “Una muestra” incluye, pero no se limita a, chinches de cama enteras, partes de chinches de cama, material de desecho de chinches de cama, lisados o extractos de los mismos, extractos de papel de recolección que comprenden material de desecho de chinches de cama y fluidos que contienen los mismos. El contacto puede ser por cualquier procedimiento adecuado. En ciertos aspectos, el contacto se lleva a cabo por medio de la aplicación de una muestra que comprende el antígeno de la chinche de cama a un anticuerpo, un fragmento de unión a antígeno, un mutante, un anticuerpo conjugado o un fragmento de unión a antígeno conjugado, o una composición de la invención, o una combinación de los mismos que está inmovilizada o situada de otra manera en una superficie. Se puede utilizar cualquier superficie aceptable, como apreciarán los expertos en la técnica, que incluyen, pero sin limitarse a ello, una membrana de nitrocelulosa o una almohadilla compuesta de un material adecuado, y puede incluir un diseño de sándwich, de pozo o de flujo lateral. La muestra se pone en contacto con un anticuerpo y un anticuerpo conjugado. En ciertos aspectos, el anticuerpo es producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2], y el anticuerpo conjugado comprende el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7] y un agente de detección. En ciertos aspectos, el anticuerpo es producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7], y el anticuerpo conjugado comprende el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] y un agente de detección. En ciertos aspectos, el contacto además comprende poner en contacto el anticuerpo, el fragmento de unión a antígeno, el mutante, el anticuerpo conjugado o el fragmento de unión a antígeno conjugado, o la composición, o una combinación de los mismos con una muestra de control para compararla con la muestra de ensayo.

La detección puede ser por cualquier procedimiento adecuado y puede incluir la detección cuantitativa o cualitativa. Dichos procedimientos incluyen, pero no se limitan a, ensayos de unión de antígenos que son muy conocidos en la técnica, tales como ensayos de flujo lateral, radioinmunoensayos, ELISA (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas), ensayos “sándwich”, ensayos de inmunoprecipitación, inmunoensayos fluorescentes, inmunoensayos de proteína A e inmunohistoquímica (IHC). La detección puede incluir el análisis visual de una reacción colorimétrica, fluorescente o luminiscente, por ejemplo, o puede incluir el uso de un dispositivo que mida dichas reacciones. Entre los dispositivos adecuados se encuentran los desvelados en la Patente de los Estados Unidos Núm.

7.220.597 y 7.214.542, así como un dispositivo desvelado en la presente memoria. En ciertas realizaciones, la detección comprende la realización de un ensayo de flujo lateral. En ciertos aspectos, la detección se produce en 1 a 20 minutos, 1 a 15 minutos, 1 a 10 minutos, 1 a 5 minutos, 20 minutos o menos, 15 minutos o menos, 10 minutos o menos, 5 minutos o menos, en 20 minutos, en 15 minutos, en 10 minutos o en 5 minutos.

La cantidad del anticuerpo, del fragmento de unión a antígeno, del mutante, del anticuerpo conjugado o del fragmento de unión a antígeno, de la composición, o de una combinación de los mismos, puede incluir cualquier cantidad efectiva, que será evidente para los expertos en la técnica basándose en los procedimientos de detección conocidos y en los procedimientos desvelados en los ejemplos. La muestra puede estar diluida o sin diluir.

En ciertos aspectos, el procedimiento además comprende la recolección de una muestra que comprende el antígeno de chinches de cama con un dispositivo de recolección y la extracción de antígenos de la muestra. La muestra se puede recolectar de cualquier superficie asociada a la infestación de chinches de cama, incluidos, entre otros, la ropa de cama, los colchones, la tapicería, las alfombras, las moquetas y los muebles. El dispositivo de recolección puede ser cualquier dispositivo adecuado, que incluyen, pero sin limitarse a, un hisopo, tal como un hisopo de algodón, una aspiradora o cualquier material que se pueda utilizar para recolectar residuos, que incluyen, pero sin limitarse a, una toallita, un pañuelo o una toalla. En ciertos aspectos, el dispositivo de recolección es un hisopo. En ciertos aspectos, la extracción de antígenos de la muestra comprende la solubilización de antígenos en la muestra con un tampón de extracción. Los tampones de extracción adecuados serán evidentes para los expertos en la técnica en vista de los tampones de extracción muy conocidos y los desvelados en los ejemplos.

Las propiedades de los anticuerpos BB2 y BB7 se describen en los siguientes ejemplos, que se ofrecen a modo de ilustración y no de limitación.

Ejemplo 1: Generación de anticuerpos monoclonales contra chinches de cama

Los ratones fueron inmunizados con lisados enteros de chinches de cama y extractos de papel de chinches de cama (es decir, extractos de papel de recolección de chinches de cama que contienen material de desecho de una colonia de chinches de cama).

Se produjeron lisados enteros de chinches de cama a partir de ninfas, machos y hembras de una colonia de chinches de cama (cepa Harlan, i2LResearch USA Inc., Baltimore, Maryland, EE.UU.) que fueron congelados y triturados en solución salina tamponada con fosfato 1X (PBS). Los lisados se clarificaron por medio de un filtro de jeringa de 0,45 micrómetros. La concentración de proteínas se determinó por medio de un ensayo estándar de proteínas de Bradford. Los extractos clarificados y cuantificados se alicuotaron en tubos Eppendorf de 1,5 mL y se almacenaron a -80 °C.

El papel de recolección de chinches de cama (i2LResearch USA Inc., Baltimore, Maryland, USA) se cortó en trozos de aproximadamente 1 cm2 y se colocó en tubos de centrífuga de plástico de 2 mL. La extracción se llevó a cabo por medio de la adición de 1,0 mL de PBS 50 mM (pH 7,4) y la mezcla de los tubos durante 30 minutos en un balancín de tubos. Después de 30 minutos, el extracto se extrajo completamente al pasar la mezcla por una jeringa de 5 mL. Este extracto recolectado se utilizó después para obtener más extracto de papel de recolección fresco por medio de la adición en serie del extracto al papel recién cortado y repitiendo el proceso. A continuación, el extracto final se centrifugó a 12.000 rpm durante 10 minutos para eliminar las partículas. El sobrenadante se retiró y se conservó, y el material granulado se desechó. La concentración de proteínas del sobrenadante se determinó por medio del ensayo de Bradford como 0,6 mg/mL. La solución final (es decir, el "extracto de papel de chinches de cama”) se almacenó a -20 °C.

Cuatro ratones Balb/c de 4 a 5 semanas de edad (Harlan Laboratories, Inc., Indianápolis, Indiana, EE.UU.) fueron inmunizados por vía subcutánea en el lomo con 50 |jg de lisado de chinche de cama entero mezclado con 100 j l de adyuvante. El adyuvante utilizado para dos de los ratones fue un adyuvante tradicional (Freund's Adjuvant, Sigma-Aldrich Co. LLC, St. Louis, Missouri, USA) y el adyuvante utilizado para los dos ratones restantes fue un adyuvante hidrosoluble (ImmuQuik®, KCH Scientific, San Jose, California, USA).

En el Día 14 después de la inmunización inicial, los ratones inmunizados fueron reforzados con 50 jg de lisado de chinche de cama entero mezclado con 100 j l de un adyuvante como el utilizado originalmente para cada ratón. En el Día 37, los sueros de los ratones se sometieron a una prueba de titulación por medio de un inmunoensayo enzimático estándar, mediante el uso de un anticuerpo de cabra anti-ratón conjugado con peroxidasa de rábano como anticuerpo secundario/conjugado enzimático y 3,3',5,5'-Tetrametilbenzidina como sustrato cromogénico, y 10 jg/ml de lisado de chinche de cama entero como fuente de antígeno. Los dos ratones inmunizados con lisado de chinche de cama entero en el adyuvante hidrosoluble produjeron títulos más altos. Sin embargo, dado que los títulos no eran fuertes en general, los cuatro ratones inmunizados fueron reforzados con el doble de la cantidad de lisado de chinche de cama entero (es decir, 100 jg ) en el Día 51 y luego de nuevo en el Día 78. En el Día 107, los cuatro ratones fueron reforzados con 15 j l de extracto de papel de chinche de cama. En el Día 117, el ratón con el título anterior más alto fue sometido a una prueba de título mediante el uso de lisado de chinches de cama enteras o extracto de papel de chinches de cama como fuente de antígeno. Se observó una reacción débil para el extracto de papel de chinche de cama. En el Día 134, los cuatro ratones fueron reforzados con 100 j l de extracto de papel de chinche de cama mediante el uso de ImmuQuik® como adyuvante. En el Día 151, los ratones fueron sometidos a una prueba de título mediante el uso del extracto de papel de chinche de cama como fuente de antígeno, y el ratón con mayor título fue reforzado con 100 j l de extracto de papel de chinche de cama.

Se recolectaron células del bazo de los dos ratones de mayor título, uno en el Día 154 y el otro en el Día 216, y se fusionaron con células de mieloma murino SP 2/0 mediante el uso de polietilenglicol. Las células fusionadas se cultivaron en un medio de selección durante 10 días, seguido por un cribado con extracto de papel de chinche de cama como fuente de antígeno. Se identificaron aproximadamente 41 clones positivos en el cribado primario, y aproximadamente 25 clones positivos se confirmaron en el cribado secundario. Se subclonaron líneas celulares estables, se produjeron ascitis para más de 25 clones y se purificaron anticuerpos (por ejemplo, en cantidades de 2 a 5 mg). Se determinó, por medio de un inmunoensayo enzimático, que dos anticuerpos, denominados en la presente memoria como BB2 y BB7, presentaban una fuerte reacción con el extracto de papel de chinches de cama, en comparación con los anticuerpos de otros clones, y se seleccionaron para su estudio posterior. Los hibridomas que producen los anticuerpos BB2 y BB7 fueron depositados bajo el Tratado de Budapest en laAmerican Type Culture Collection, Patent Depository,10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, el 8 de octubre de 2015, y se les dio el Núm. de Acceso ATCC PTA-122644 y ATCC PTA-122645, respectivamente.

Ejemplo 2: Ensayo de captura en sándwich de anticuerpos monoclonales contra chinches de cama

Se llevó a cabo un ensayo de captura tipo sándwich mediante el uso del anticuerpo BB2 o BB7 como anticuerpo de captura y BB2 conjugado con oro o BB7 conjugado con oro como anticuerpo detector. Se utilizó el extracto de papel de chinche de cama descrito en el Ejemplo 1 como fuente de antígeno de chinche de cama. Un anticuerpo policlonal de conejo contra la chinche de cama como se describe en la Publicación de los Estados Unidos Núm. 2015 0064727 se utilizó como anticuerpo de captura de control positivo y PBS se utilizó como control negativo del antígeno.

Los anticuerpos de captura a concentraciones de 2,0 mg/ml se mancharon como puntos de 0,3 j l en bandas de papel de nitrocelulosa. El extracto de papel de chinche de cama se añadió a las bandas reactivas y el PBS se añadió a las bandas de control negativo. Se añadió el anticuerpo BB2 conjugado con oro (a pH 7 o 9) o el anticuerpo BB7 conjugado con oro (a pH 9) como anticuerpo detector a las bandas como se muestra en la FIG. 15. Las bandas de control negativo mostraron una ausencia de unión por parte de los anticuerpos detectores. Las bandas reactivas mostraron una tinción roja de los puntos de captura que indicaba la unión de los anticuerpos detectores conjugados con oro al antígeno de la chinche de cama inmovilizado en la nitrocelulosa por los anticuerpos de captura. Como se resume en la Tabla 1, se observaron fuertes reacciones con el uso del anticuerpo BB2 o b B7 como el anticuerpo de captura. Por el contrario, se observaron reacciones muy débiles (es decir, “+") o inciertas (es decir, “+/-") con el uso del anticuerpo policlonal de conejo contra chinches de cama como el anticuerpo de captura.

Tabla 1: Intensidades Observadas en el Ensayo de Captura en Sándwich

Anticuerpo de captura

Ejemplo 3: Inmunoensayo de flujo lateral para detectar antígenos de chinches de cama

Se diseñó un ejemplo de inmunoensayo de flujo lateral para detectar antígenos de chinches de cama a partir de muestras tomadas con un hisopo en áreas con diferentes niveles de infestación de chinches de cama. Se prepararon y probaron los tampones de extracción para obtener una extracción eficaz del antígeno de las chinches de cama a partir de los hisopos, un flujo adecuado en las bandas reactivas de nitrocelulosa y una unión no específica o baja. Se extrajeron muestras de hisopos y se diluyeron en serie para investigar la sensibilidad del ensayo. La precisión del ensayo se investigó por medio de la prueba de réplicas y la lectura de las intensidades de las señales por medio de un lector de bandas reactivas.

Preparación de la membrana de nitrocelulosa: Las membranas de nitrocelulosa (CN 140, 25 mm, Sartorius Corp., Bohemia, Nueva York, EE.UU.) se rociaron con 1,0 mg/mL del anticuerpo BB7 contra la chinche de cama como línea de prueba y 0,5 mg/mL de anticuerpo de cabra contra el ratón (Lampire Biological Laboratories, Pipersville, Pennsylvania, EE.UU.) como línea de control mediante el uso de un Biodot Air Jet (Biodot, Irvine, California, EE.UU.) para arrastrar las membranas de nitrocelulosa. El Tampón de Arrastre fue IX PBS, 0,2% de Sacarosa, pH 7,4. La línea de prueba y la línea de control se rociaron a 7 mm de distancia, con la línea de prueba situada a 10 mm de la parte inferior de la membrana. Las membranas se arrastraron a una velocidad de 1,0 pl/cm. Las membranas se secaron a 37 °C durante 1 hora y se guardaron en una bolsa de papel de aluminio desecado. Las membranas arrastradas se mantuvieron desecadas durante la noche antes del bloqueo.

Bloqueo de la membrana de nitrocelulosa: Después de secarse durante la noche, las membranas arrastradas se colocaron en una solución de bloqueo (25 mM KPO<4>, 0,2% de Caseína, 0,5% de Ácido Bórico, 0,02% de Sacarosa, 0,1% de Tensioactivo 10G, 0,5% de PVA) con la orientación de la línea de prueba en la parte inferior de la nitrocelulosa y la línea de control en la parte superior de la nitrocelulosa. Se dejó que la solución de bloqueo llegara a la parte superior de la membrana. Las membranas se sacaron de la solución de bloqueo y se colocaron en una rejilla para secar a 37 °C durante 1 hora. Las membranas bloqueadas se mantuvieron desecadas en una bolsa de plástico y se guardaron en una sala seca.

Conjugación de oro con anticuerpos: Se utilizó un casete de desalización Slide-A-Lyzer™ (límite de peso molecular 10000, Thermo Fisher Scientific Inc., Carlsbad, California, USA) para dializar el anticuerpo BB2 anti-chinches de cama durante la noche en 10 mM KPO<4>, pH 7,4. La concentración final del anticuerpo BB2 tras la dialización fue de 0,875 mg/ml. Una solución de oro coloidal que contenía partículas de 40 nm y una densidad óptica (DO) de 2,28 a 525 nm se ajustó a temperatura ambiente a pH 8,6 con K<2>CO<3>0,1 M recién hecho. El anticuerpo BB2 dializado se añadió a la solución de oro coloidal mientras se agitaba. La solución se incubó durante 30 minutos en un rotador a temperatura ambiente. El conjugado se bloqueó con 10 pl (por cada 1 ml de DO 2 de oro coloidal) de tampón de bloqueo del conjugado de oro (25 mM de KPO<4>, 0,2% de Bioterge, 6% de BSA, 0,3% de Sacarosa) en un rotador a temperatura ambiente durante 10 minutos. El conjugado de oro se centrifugó a 12000 RPM, 4 °C durante 20 minutos y se descartó el sobrenadante. El gránulo de conjugado se resuspendió con 0,2 ml (por cada 1 ml de DO 2 de oro coloidal) de tampón de resuspensión (dilución 1:5 del tampón de bloqueo del conjugado de oro en 25 mM de KPO<4>, 0,05% de azida sódica). La Do del anticuerpo BB2 conjugado con oro se comprobó con un espectrofotómetro y se ajustó a 10. El anticuerpo BB2 conjugado con oro se almacenó a 4 °C.

Preparación de la almohadilla de conjugado de oro: Se utilizó una pipeta P-1000 para saturar almohadillas de fibra de vidrio conjugada Ahlstrom 8950 de 300 mm (Ahlstrom, Helsinki, Finlandia) con tampón de bloqueo (25 mM KPO<4>, 0,2% de Caseína, 0,5% de Ácido Bórico, 0,02% de Sacarosa, 0,1% de Tensioactivo 10G, 0,5% de PVA). Después de 15 minutos, las almohadillas de conjugado saturadas se transfirieron a una toalla de papel durante un minuto. A continuación, las almohadillas de conjugado se colocaron en una rejilla para secar a 37 °C durante 1 hora. Las almohadillas de conjugado bloqueadas se colocaron en una bolsa de plástico con desecante y se almacenaron en una sala seca. El anticuerpo BB2 conjugado con oro DO10 se preparó por medio de la adición de 10% de Sacarosa y 5% de Trehalosa al conjugado. El anticuerpo conjugado con oro se dispensó en las almohadillas de conjugado por medio de un estriador automático (Matrix 160, Kinematic Automation, Inc., Twain Harte, California, EE.U<u>.) a una velocidad de dispensación de 10 pl/cm. Las almohadillas de conjugado se secaron a 37 °C durante 1 hora, se envasaron en una bolsa de papel de aluminio desecado y se almacenaron en una sala seca.

Laminación y corte de la banda reactiva: La membrana de nitrocelulosa arrastrada con el anticuerpo BB7 de prueba y el anticuerpo de cabra anti-ratón de control se laminó en una tarjeta de soporte de vinilo (G&L Precision Die Cutting, San José, California, USA). Se colocó una almohadilla de mecha (30250, EMI Specialty Papers, Redding, Connecticut, EE.UU.) en la parte superior del soporte, solapando la membrana 2 mm. Una almohadilla de conjugado de 10 mm se superpuso a la membrana en 2 mm. Se colocó una almohadilla de muestra (almohadilla de celulosa Surewick C048, Millipore, Darmstadt, Alemania) encima de la almohadilla de conjugado con un solapamiento de 15 mm desde la parte inferior de la tarjeta de soporte. Las tarjetas ensambladas se cortaron en bandas de 4 mm con una cortadora (CM4000, Biodot, Irvine, California, EE.UU.).

Extracción de hisopos de prueba: Se obtuvieron muestras de hisopos de lugares de prueba con diferentes niveles de infestación de chinches de cama, designados como niveles 0, 2, 3, 4, 5, 7 y 8, siendo el nivel 0 el más bajo (es decir, sin chinches de cama) y el 8 el más alto. Los hisopos se extrajeron en 35o pl de tampón de extracción durante 15 minutos a temperatura ambiente en un tubo Eppendorf. Se probaron tres tampones de extracción: el tampón de extracción 1 contenía 1X Tris-HCl (pH 7,6), 0,05 % de NaN<3>, 0,1 % de BSA y 0,1 % de Tween-20; el tampón de extracción 2 contenía 1X Tris-HCl (pH 7,6), 0,05 % de NaN<3>, 0,1 % de BSA y 0,2 % de Tween-20; y el tampón de extracción 3 contenía 1X Tris-HCl (pH 7,6), 0,05 % de NaN<3>, 0,25 % de BsA y 0,1 % de Tween-20. Se llevaron a cabo diluciones seriadas de los extractos de los hisopos de 1/2 a 1/4096.

Procedimiento de ensayo: Se pipetearon 70 pl de tampón de extracción (control negativo) o de muestra de chinches de cama en tampón de extracción en la almohadilla de muestra. La intensidad de las líneas de prueba se leyó a ojo a los 15 minutos.

Resultados del tampón de extracción 1: Como se muestra en las FIGs. 16 a 21, todas las bandas mostraron líneas de control positivas para la unión del anticuerpo de cabra anti-ratón con el anticuerpo BB2 conjugado con oro. Todas las bandas mostraron la ausencia de líneas de prueba para la banda de control negativo en la que se añadió tampón de extracción en lugar de una muestra de hisopo. La FIG. 16 sólo muestra líneas de control positivas para las diluciones de muestras de hisopos de nivel 0, dado que el antígeno de chinches de cama no estaba presente. En las FIGs. 17 a 21, las líneas de control positivo son las líneas superiores, y las líneas de prueba que muestran la presencia de antígeno de chinches de cama están debajo de las líneas de control positivo. La suciedad o las partículas insolubles de los hisopos estaban presentes cerca del fondo de las membranas para las bandas reactivas de nivel 3, 5, 7 y 8. La muestra de hisopo de nivel 2 (FIG. 17) tenían líneas de prueba visibles desde la dilución 1/16 hasta la dilución 1/2. La muestra de hisopo de nivel 3 (FIG. 18) tenían líneas de prueba visibles desde la dilución 1/128 hasta la dilución 1/2. La muestra de hisopo de nivel 4 (FIG. 19) tenían líneas de prueba visibles desde la dilución 1/1024 hasta la dilución 1/2. La muestra de hisopo de nivel 7 (FIG. 20) tenían líneas de prueba visibles desde la dilución 1/4096 hasta la dilución 1/2. La muestra de hisopo de nivel 8 (FIG. 21) tenían líneas de prueba visibles desde la dilución 1/2048 hasta la dilución 1/2. Aunque se observan visualmente, algunas de las líneas de prueba señaladas no son fácilmente aparentes para ciertas diluciones en las FIGs. 17 a 21 debido a las limitaciones fotográficas. Todas las líneas de prueba estaban sin manchas. La intensidad de la señal de la dilución 1/2 del hisopo del nivel 2 era aproximadamente igual a la de la dilución 1/32 del hisopo del nivel 3, la dilución 1/64 del hisopo del nivel 4, la dilución 1/1024 del hisopo del nivel 7 y la dilución 1/512 del hisopo del nivel 8. Por lo tanto, la intensidad de la señal visible de la dilución 1/2 del hisopo del nivel 2 era más débil, en comparación con la de las diluciones 1/2 de los hisopos de los niveles 3, 4, 7 y 8. La señal de la dilución 1/2 del hisopo de nivel 8 fue la más fuerte.

También se determinaron las intensidades de las señales mediante el uso de un lector de bandas reactivas Axxin (Axxin, Fairfield, Victoria, Australia) para medir las áreas de las líneas de prueba para diferentes concentraciones (1/2048 a 1/2) de muestras de hisopos de nivel 0, 2, 3, 4, 7 y 8 extraídas en 350 pl de tampón 1. Los resultados se muestran en la Tabla 2.

Tabla 2: Áreas de las Líneas de Prueba de Diferentes Concentraciones de Muestras de Hisopo (Tampón 1)

Para cada nivel, se obtuvo una lectura para el tampón como control negativofes decir, la concentración “0”). La lectura del control negativo (Bo) se dividió por sí misma para obtener un valor normalizado de 1. La lectura del control negativo (Bo) se dividió entonces por el área de las líneas de prueba (B) para cada dilución en el nivel, donde los valores más pequeños por debajo de 1 sugieren mayores cantidades de antígeno de chinches de cama y los valores por encima de 1 indican ausencia de antígeno de chinches de cama. Los datos expresados en Bo/B se presentan en la Tabla 3.

Tabla 3: Bo/B Calculado a partir de las Áreas de las Líneas de Prueba de Diferentes Concentraciones de Muestras de Hisopos (Tampón 1)

Las Tablas 2 y 3 y la FIG. 22A muestran, en general, que los valores medidos de las concentraciones de los hisopos de nivel 8 (correspondientes al mayor nivel de infestación de chinches de cama) fueron los más altos y los valores de las concentraciones de los hisopos de nivel 2 (correspondientes al menor nivel de infestación de chinches de cama) fueron los más bajos. La Tabla 2 y la FIG. 22B muestran que los hisopos de nivel 8 produjeron mejores intensidades de señal que los de nivel 2 y 4. La Tabla 3 sugiere que los hisopos del nivel 8 contenían más antígeno de chinches de cama que los otros niveles.

Resultados del tampón de extracción 2: Como se muestra en las FIGs. 23 a 25, todas las bandas mostraron líneas de control positivas para la unión del anticuerpo de cabra anti-ratón con el anticuerpo BB2 conjugado con oro. Todas las bandas mostraron la ausencia de líneas de prueba para la banda de control negativo en la que se añadió tampón de extracción en lugar de una muestra de hisopo. En las FIGs. 23 a 25, las líneas de control positivo son las líneas superiores, y las líneas de prueba que muestran la presencia de antígeno de chinches de cama están debajo de las líneas de control positivo. La suciedad o las partículas insolubles de los hisopos estaban presentes cerca del fondo de las membranas para las bandas reactivas de nivel 4, 5 y 8. La muestra de hisopo de nivel 4 (FIG. 23) tenían líneas de prueba visibles desde la dilución 1/512 hasta la dilución 1/2. Las muestras de hisopo del nivel 5 y 8 (FIGs.

24 y 25, respectivamente) tenían líneas de prueba visibles desde la dilución 1/1024 hasta la dilución 1/2. Aunque se observan visualmente, algunas de las líneas de prueba señaladas no son fácilmente aparentes para ciertas diluciones en las FIGs. 23 a 25 debido a las limitaciones fotográficas. Todas las líneas de prueba estaban manchadas. La intensidad de la señal de la dilución 1/16 del hisopo de nivel 4 era aproximadamente igual a la de la dilución 1/64 de los hisopos de nivel 5 y 8. La intensidad de la señal fue más débil para el hisopo de nivel 4 y similar entre los hisopos de nivel 5 y 8.

También se determinaron las intensidades de las señales mediante el uso de un lector de bandas reactivas Axxin (Axxin, Fairfield, Victoria, Australia) para medir las áreas de las líneas de prueba para diferentes concentraciones (1/2048 a 1/2) de muestras de hisopos de nivel 4, 5 y 8 extraídas en 350 pl de tampón 2. Los resultados se muestran en la Tabla 4.

Tabla 4: Áreas de las Líneas de Prueba de Diferentes Concentraciones de Muestras de Hisopo (Tampón 2)

Los datos expresados como Bo/B calculados a partir de las áreas de las líneas de prueba se proporcionan en la Tabla 5.

Tabla 5: Bo/B Calculado a partir de las Áreas de las Líneas de Prueba de Diferentes Concentraciones de Muestras de Hisopos (Tampón 2)

Las Tablas 4 y 5 y la FIG. 26A muestran que, en general, los valores medidos de los hisopos de nivel 8 fueron los más altos y los valores de los hisopos de nivel 4 fueron los más bajos. Aunque la visibilidad de las líneas de prueba de los hisopos de nivel 5 era similar a la de los hisopos de nivel 8 (FIGs. 24 y 25, respectivamente), los resultados del lector Axxin en la Tabla 4 y la FIG. 26A muestran que los hisopos de nivel 8 produjeron mejores intensidades de señal que los de nivel 4 y 5. La Tabla 5 sugiere que los hisopos del nivel 8 contenían más antígeno de chinches de cama que los otros niveles.

Resultados del tampón de extracción 3: Como se muestra en las FIGs. 27 a 31, todas las bandas mostraron líneas de control positivas para la unión del anticuerpo de cabra anti-ratón con el anticuerpo BB2 conjugado con oro. Todas las bandas mostraron la ausencia de líneas de prueba para la banda de control negativo en la que se añadió tampón de extracción en lugar de una muestra de hisopo. En las FIGs. 27 a 31, las líneas de control positivo son las líneas superiores, y las líneas de prueba que muestran la presencia de antígeno de chinches de cama están debajo de las líneas de control positivo. La suciedad o las partículas insolubles de los hisopos estaban presentes cerca del fondo de las membranas para las bandas reactivas de nivel 3, 5, 7 y 8. La muestra del nivel 2 (no mostrada) tenía líneas de prueba visibles desde la dilución 1/8 hasta la dilución 1/2. La muestra de hisopo de nivel 3 (FIG. 27) tenían líneas de prueba visibles desde la dilución 1/128 hasta la dilución 1/2. La muestra de hisopo de nivel 4 (FIG. 28) tenían líneas de prueba visibles desde la dilución 1/1024 hasta la dilución 1/2. La muestra de hisopo de nivel 5 (FIG. 29) tenían líneas de prueba visibles desde la dilución 1/512 hasta la dilución 1/2. La muestra de hisopo de nivel 7 (FIG.

30) tenían líneas de prueba visibles desde la dilución 1/4096 hasta la dilución 1/2. La muestra de hisopo de nivel 8 (FIG. 31) tenían líneas de prueba visibles desde la dilución 1/2048 hasta la dilución 1/2. Aunque se observan visualmente, algunas de las líneas de prueba señaladas no son fácilmente aparentes para ciertas diluciones en las FIGs. 27 a 31 debido a las limitaciones fotográficas. Todas las líneas de prueba estaban manchadas. La intensidad de la señal de la dilución 1/2 del hisopo del nivel 2 era aproximadamente igual a la de la dilución 1/64 del hisopo del nivel 3, la dilución 1/64 del hisopo del nivel 4, la dilución 1/64 del hisopo del nivel 5, la dilución 1/1024 del hisopo del nivel 7 y la dilución 1/512 del hisopo del nivel 8. Por lo tanto, la intensidad de la señal visible de la dilución 1/2 del hisopo del nivel 2 era más débil en comparación con la de las diluciones 1/2 de los otros niveles. La señal de la dilución 1/2 del hisopo de nivel 8 fue la más fuerte.

También se determinaron las intensidades de las señales mediante el uso de un lector de bandas reactivas Axxin (Axxin, Fairfield, Victoria, Australia) para medir las áreas de las líneas de prueba para diferentes concentraciones (1/2048 a 1/2) de muestras de hisopos de nivel 4, 5 y 8 extraídas en 350 pl de tampón 3. Los resultados se muestran en la Tabla 6.

Tabla 6: Áreas de las Líneas de Prueba de Diferentes Concentraciones de Muestras de Hisopo (Tampón 3)

Los datos expresados como Bo/B calculados a partir de las áreas de las líneas de prueba se proporcionan en la Tabla 7.

Tabla 7: Bo/B Calculado a partir de las Áreas de las Líneas de Prueba de Diferentes Concentraciones de Muestras de Hisopos (Tampón 3)

Las Tablas 6 y 7 y la FIG. 32A muestran que, en general, los valores medidos de los hisopos de nivel 8 fueron los más altos y los del nivel 2 los más bajos. La Tabla 7 y la FIG. 32A muestran que los hisopos del nivel 8 produjeron mejores intensidades de señal que los otros niveles.

Comparación de los tampones de extracción: En el caso del tampón de extracción 1, todas las líneas de prueba eran claras y no presentaban manchas, mientras que los tampones de extracción 2 y 3 daban lugar a líneas de prueba manchadas. Para los hisopos del nivel 4, la extracción con los tampones 1 y 3 dio lugar a señales a partir de la dilución 1/1024, pero la extracción con el tampones 2 dio lugar a señales a partir de la dilución 1/512. Sin embargo, la extracción del nivel 5 con el tampón 2 produjo una señal a una concentración menor (dilución 1/1024) que la extracción con el tampón 3 (dilución 1/512). Los tampones 1 y 3 dieron señales a la misma concentración para los hisopos de nivel 3 y 7. Sin embargo, la extracción de los hisopos de nivel 2 con el tampón 1 dio lugar a una señal de menor concentración (dilución 1/16) que la extracción con el tampón 3 (dilución 1/8). En general, los valores medidos de todos los hisopos del nivel de prueba fueron más altos para la extracción con el tampón 1 que para los tampones 2 y 3.

Estudio de precisión con el lector Axxin: Se prepararon nueve réplicas del tampón de extracción 1 como control negativo y nueve réplicas de cada una de las diluciones de 1/2048, 1/512 y 1/128 de los hisopos de nivel 7 extraídos con el tampón 1 y se midieron las áreas de las líneas de prueba mediante el uso de un lector de bandas reactivas Axxin (Axxin, Fairfield, Victoria, Australia). Las áreas de las líneas de prueba se muestran en la Tabla 8 y en la FIG.

34.

Tabla 8: Resultados del Estudio de Precisión de las Áreas de Prueba Replicadas

El coeficiente de variación porcentual (% de CV) fue inferior al 20%, que es un buen % de CV para las mediciones de Axxin

Conclusión

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un dispositivo de detección electrónico para analizar un fluido de prueba para determinar infestaciones anteriores o presentes de chiches de cama, que comprende un ensayo de flujo lateral procesado dentro del dispositivo de detección, en donde el ensayo de flujo lateral comprende una banda reactiva para recibir el fluido de prueba cerca de un primer extremo de la banda reactiva, en donde la banda reactiva comprende:

(a) una porción de reactivo que comprende anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión a antígenos de los mismos que están conjugados con partículas coloreadas y son capaces de unirse a antígenos de chinches de cama dentro del fluido de prueba para formar moléculas de chinches de cama, en donde los anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión a antígenos de los mismos comprenden regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de cadena pesada y ligera de un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC) bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el Número de Acceso PTA-122645 [BB7], y

(b) una porción de reacción que comprende anticuerpos monoclonales inmovilizados o fragmentos de unión a antígenos de los mismos que son capaces de unirse a las moléculas de chinches de cama, en donde los anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión a antígenos de los mismos comprenden regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de cadena pesada y ligera de un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en la ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el Número de Acceso PTA-122645 [BB7].

2. Una banda reactiva para detectar infestaciones anteriores o presentes de chiches de cama que comprende, en orden, un primer extremo, una porción de reactivo que contiene partículas coloreadas, una porción de reacción, y un segundo extremo, en donde la banda reactiva está configurada para recibir un fluido de prueba cerca del primer extremo y:

(a) la porción de reactivo comprende anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión a antígenos de los mismos que están conjugados con las partículas coloreadas y son capaces de unirse a antígenos de chinches de cama dentro del fluido de prueba para formar moléculas de chinches de cama, en donde los anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión a antígenos de los mismos comprenden regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de cadena pesada y ligera de un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC) bajo el Número de Acceso pTa -122644 [BB2] o el Número de Acceso PTA-122645 [BB7], y

(b) la porción de reacción comprende anticuerpos monoclonales inmovilizados o fragmentos de unión a antígenos de los mismos que son capaces de unirse a las moléculas de chinches de cama, en donde los anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión a antígenos de los mismos comprenden regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de cadena pesada y ligera de un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en la ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el Número de Acceso PTA-122645 [BB7].

3. El dispositivo de detección electrónico de la reivindicación 1 o la banda reactiva de la reivindicación 2, en donde la banda reactiva comprende: (a) una banda de respaldo que comprende una mecha para recibir y absorber el fluido de prueba, (b) una banda portadora porosa que comprende una almohadilla de reactivo fijada a la mecha, en donde la almohadilla de reactivo comprende la porción de reactivo, (c) una zona de formación de líneas que comprende la porción de reacción, y (d) una almohadilla de absorción en la porción de extremo opuesta de la banda reactiva de la mecha.

4. El dispositivo de detección electrónico de la reivindicación 1 o 3, o la banda reactiva de la reivindicación 2 o 3, en donde los anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión a antígenos de los mismos en la porción de reactivo y/o la porción de reacción comprenden regiones variables de cadena pesada y ligera del anticuerpo producido por un hibridoma depositado en la ATCC bajo el Número de Acceso<p>T<a>-122644 [BB2] o el Número de Acceso PTA-122645 [BB7].

5. El dispositivo de detección electrónico de la reivindicación 1 o 3, o la banda reactiva de la reivindicación 2 o 3, en donde los anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión a antígenos de los mismos en la porción de reactivo y/o la porción de reacción comprenden cadenas pesada y ligera del anticuerpo producido por un hibridoma depositado en la ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2] o el Número de Acceso PTA-122645 [BB7].

6. El dispositivo de detección electrónico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3 a 5, o la banda reactiva de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en donde los anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión a antígenos de los mismos en la porción de reactivo y/o la porción de reacción son capaces de unirse a un antígeno de chinches de cama en un lisado de chinches de cama enteras o un extracto de papel de recolección que comprende material de desecho de chinches de cama.

7. El dispositivo de detección electrónico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3 a 6, o la banda reactiva de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, en donde la porción de reactivo comprende anticuerpos monoclonales producidos por un hibridoma depositado en la ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2], o un fragmento de unión a antígeno de los mismos.

8. El dispositivo de detección electrónico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3 a 6, o la banda reactiva de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, en donde la porción de reactivo comprende anticuerpos monoclonales producidos por un hibridoma depositado en la ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7], o un fragmento de unión a antígeno de los mismos.

9. El dispositivo de detección electrónico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3 a 8, o la banda reactiva de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8, en donde la porción de reacción comprende anticuerpos monoclonales producidos por un hibridoma depositado en la ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122644 [BB2], o un fragmento de unión a antígeno de los mismos.

10. El dispositivo de detección electrónico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3 a 8, o la banda reactiva de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8, en donde la porción de reacción comprende anticuerpos monoclonales producidos por un hibridoma depositado en la ATCC bajo el Número de Acceso PTA-122645 [BB7], o un fragmento de unión a antígeno de los mismos.

11. El dispositivo de detección electrónico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3 a 10, o la banda reactiva de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 10, en donde las partículas coloreadas en la porción de reactivo son oro coloidal, una microesfera de látex o una etiqueta fluorescente.

12. Un método para analizar un fluido de prueba para determinar infestaciones anteriores o presentes de chiches de cama, que comprende poner en contacto el fluido de prueba con la banda reactiva del dispositivo de detección electrónico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3 a 11 o la banda reactiva de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 11.

13. Un kit que comprende el dispositivo de detección electrónico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3 a 11 o la banda reactiva de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 11.