[go: up one dir, main page]

ES2993135T3 - Codon-optimized mrna encoding cftr for use in treating cystic fibrosis - Google Patents

Codon-optimized mrna encoding cftr for use in treating cystic fibrosis Download PDF

Info

Publication number
ES2993135T3
ES2993135T3 ES18730550T ES18730550T ES2993135T3 ES 2993135 T3 ES2993135 T3 ES 2993135T3 ES 18730550 T ES18730550 T ES 18730550T ES 18730550 T ES18730550 T ES 18730550T ES 2993135 T3 ES2993135 T3 ES 2993135T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
composition
mrna
cftr
lipid
protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES18730550T
Other languages
English (en)
Inventor
Michael Heartlein
Frank Derosa
Alan Kimura
Jonathan Abysalh
Anusha Dias
Shrirang Karve
Zarna Patel
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Translate Bio Inc
Original Assignee
Translate Bio Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Translate Bio Inc filed Critical Translate Bio Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2993135T3 publication Critical patent/ES2993135T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
    • A61K48/0041—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being polymeric
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A61K48/0066—Manipulation of the nucleic acid to modify its expression pattern, e.g. enhance its duration of expression, achieved by the presence of particular introns in the delivered nucleic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0075—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the delivery route, e.g. oral, subcutaneous
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A61K9/0078—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy for inhalation via a nebulizer such as a jet nebulizer, ultrasonic nebulizer, e.g. in the form of aqueous drug solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
    • A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers comprising non-phosphatidyl surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids or non-phosphatidyl liposomes coated or grafted with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/12—Mucolytics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4712—Cystic fibrosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

La presente invención proporciona, entre otras cosas, métodos para tratar la fibrosis quística, que comprenden una etapa de administrar a un sujeto que necesita tratamiento una composición que comprende un ARNm que codifica una proteína reguladora de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR), en donde el ARNm que codifica la proteína CFTR comprende una secuencia de polinucleótidos al menos 80% idéntica a SEQ ID NO: 1, en donde el ARNm está en una concentración de al menos 0,4 mg/mL, y en donde la etapa de administración comprende inhalación. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
ARNm de codones optimizados que codifica CFTR para su uso en el tratamiento de fibrosis quística Antecedentes
La fibrosis quística es un trastorno hereditario autosómico provocado por mutación del gen de CFTR, que codifica un canal de iones cloruro que se cree que está implicado en la regulación de muchos otros canales de iones y sistemas de transporte en las células epiteliales. La pérdida de función de CFTR provoca enfermedad pulmonar crónica, producción aberrante de moco y esperanza de vida drásticamente reducida. Véase, en general, Roweet al.New Engl. J. Med. 352, 1992-2001 (2005).
Actualmente, no hay cura para la fibrosis quística (CF). La bibliografía ha documentado numerosas dificultades encontradas en el intento por inducir la expresión de CFTR en el pulmón. Por ejemplo, los vectores víricos que comprenden ADN de CFTR desencadenaban respuestas inmunitarias y los síntomas de CF persistían después de la administración. Coneseet al.,J. Cyst. Fibros. 10 Supl. 2, S114-28 (2011); Roseneckeret al.,Curr. Opin. Mol. Ther.
8, 439-45 (2006). Se ha informado de que la administración no vírica de ADN, incluyendo<a>D<n>de CFTR, desencadena respuestas inmunitarias. Altonet al.,Lancet 353, 947-54 (1999); Roseneckeret al.,J Gene Med. 5, 49 60 (2003). Además, los vectores no víricos de ADN encuentran el problema adicional de que la maquinaria del complejo de poro nuclear no importa normalmente ADN al núcleo, donde se produciría la transcripción. Pearson, Nature 460, 164-69 (2009). El documento US 2015/038556 A1 describe materiales, formulaciones, métodos de producción y métodos para la administración de ARNm de CFTR para la inducción de la expresión de CFTR, incluyendo en el pulmón de mamífero. El documento WO 2008/045548 A2 describe una secuencia sintética de ADN de hCFTR que se ha desarrollado que produce ARNm y proteína de hCFTR en pulmones murinos y células humanas en cultivo dosificados. Ruizet al.(2001) describe un síndrome inflamatorio clínico atribuible a la administración aerosolizada de lípido-ADN en fibrosis quística. El documento WO 2018/089790 describe composiciones y métodos de formulación de nanopartículas que contienen ácido nucleico, que comprende no más de tres componentes lipídicos distintos.
Sumario de la invención
La presente invención se define por las reivindicaciones.
La presente invención proporciona una composición que comprende un ARNm de codones optimizados para su expresión en células humanas, que codifica una proteína de regulador de la conductancia transmembranaria en fibrosis quística (CFTR) que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, en donde el ARNm que codifica la proteína CFTR comprende una secuencia polinucleotídica al menos un 90 % idéntica a SEQ ID NO: 1, y en donde el ARNm está a una concentración de al menos 0,4 mg/ml, y en donde la composición comprende además un diluyente seleccionado del grupo que consiste en DMSO, etilenglicol, glicerol, 2-metil-2,4-pentanodiol (MPD), propilenglicol, sacarosa y trehalosa, en donde dicha composición es para su uso en un método de tratamiento de fibrosis quística (CF) en un sujeto, y la etapa de administración de la composición al sujeto comprende inhalación. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica CFTR está a una concentración de al menos 0,5 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica CFTR está a una concentración de al menos 0,6 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica CFTR está a una concentración que varía de 0,4 mg/ml a 0,8 mg/ml. En algunas realizaciones, la dosis es de 24 mg o menos a la semana, de ARNm que codifica CFTR. En algunas realizaciones, la dosis es de 16 mg o menos a la semana, de ARNm que codifica CFTR. En algunas realizaciones, la dosis es de 8 mg o menos a la semana, de ARNm que codifica CFTR.
El ARNm que codifica la proteína CFTR comprende una secuencia polinucleotídica al menos un 90 % idéntica a SEQ ID NO: 1. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica la proteína CFTR comprende una secuencia polinucleotídica al menos un 95 % idéntica a SEQ ID NO: 1. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica la proteína CFTR comprende una secuencia polinucleotídica al menos un 99 % idéntica a SEQ ID NO: 1. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica la proteína CFTR comprende una secuencia polinucleotídica idéntica a SEQ ID NO: 1.
En algunas realizaciones, la composición se almacena como una suspensión estéril congelada antes de la administración. En algunas realizaciones, la composición se almacena en un vial de un solo uso antes de la administración. En algunas realizaciones, el vial de un solo uso comprende menos de 5,0 ml de la composición. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica la proteína CFTR está a una dosificación que varía de 8 mg a 24 mg. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica la proteína CFTR comprende además una secuencia de región no traducida (UTR) 5' de SEQ ID NO: 3. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica la proteína CFTR comprende además una secuencia de región no traducida (UTR) 3' de SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 5.
En algunas realizaciones, el ARNm que codifica la proteína CFTR se encapsula dentro de una nanopartícula. En algunas realizaciones, la nanopartícula es un liposoma. En algunas realizaciones, el liposoma comprende uno o más lípidos catiónicos, uno o más lípidos no catiónicos, y uno o más lípidos modificados con PEG. En algunas realizaciones, el liposoma comprende no más de tres componentes lipídicos distintos. En algunas realizaciones, un componente lipídico distinto es un lípido catiónico a base de esterol. En algunas realizaciones, el liposoma tiene un tamaño menor de aproximadamente 100 nm. En algunas realizaciones, el liposoma tiene un tamaño que varía de 40 nm a 60 nm. En algunas realizaciones, los no más de tres componentes lipídicos distintos son un lípido catiónico, un lípido no catiónico y un lípido modificado con PEG. En algunas realizaciones, el liposoma comprende éster de imidazol colesterol (ICE), 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DOPE) y 1,2-dimiristoil-sn-glicerol, metoxipolietilenglicol (DMG-PEG-2K). En algunas realizaciones, ICE y DOPE están presentes a una relación molar de >1:1. En algunas realizaciones, ICE y DMG-PEG-2K están presentes a una relación molar de >10:1. En algunas realizaciones, DOPE y DMG-PEG-2K están presentes a una relación molar de >5:1.
En algunas realizaciones, el vial de un solo uso comprende entre 3,0 y 4,0 ml de la composición. En algunas realizaciones, el vial de un solo uso comprende entre 3,2 ml de la composición.
Breve descripción de los dibujos
Los dibujos son con propósitos de ilustración solamente, no para limitación.
La figura 1 representa la estructura general de la composición que comprende un ARNm que codifica una proteína CFTR y un proceso de formulación simplificado.
La figura 2 representa un gráfico ejemplar del número de copias de ARNm/g en tejido pulmonar de rata después de tratar las ratas con liposomas cargados con ARNm de hCFTR.
La figura 3 representa un gráfico ejemplar del número de copias de ARNm en tejido pulmonar de primate (NHP) después de tratar los NHP con liposomas cargados con ARNm de hCFTR.
La figura 4 representa un gráfico ejemplar que muestra la actividad aumentada del canal de cloruro demostrada después de la transfección con liposomas cargados con ARNm de hCFTR.
La figura 5 representa IHC ejemplar de la proteína hCFTR en tejido pulmonar de un primate después de una sola dosis de una composición que comprende un ARNm que codifica una proteína CFTR.
La figura 6 representa un gráfico ejemplar del aumento factorial de copias de CO-ARNm de hCFTR sobre los niveles endógenos de ARNm de CFTR en tejido pulmonar de primate después de una sola dosis de una composición que comprende un ARNm que codifica una proteína CFTR.
La figura 7 representa un gráfico ejemplar del porcentaje de CO-ARNm de hCFTR administrado a tejido pulmonar de primate en comparación con tejido de las vías respiratorias después de una sola dosis de una composición que comprende un ARNm de codifica una proteína CFTR.
La figura 8A-C representa la expresión de proteína derivada de ARNm de CFTR en células epiteliales bronquiales altas de primate colocalizada con proteína endógena de unión ocluyente de membrana, ZO1 (que está presente en la membrana celular), después de tratamiento con ARNm de CFTR nebulizado encapsulado en una nanopartícula lipídica, administrado por inhalación. La figura 8A representa imágenes microscópicas de inmunotinción de células epiteliales bronquiales altas de un primate tratado con tampón (10 % de trehalosa) como control; que muestran la tinción de proteína CFTR derivada de ARNm (izquierda), tinción de proteína ZO1 endógena (centro) y combinación óptica de la tinción de proteína CFTR derivada de ARNm y tinción de proteína ZO1 endógena (derecha), sin proteína CFTR derivada de ARNm visible presente en las membranas celulares de células epiteliales bronquiales altas. La figura 8B representa imágenes microscópicas de inmunotinción de células epiteliales bronquiales altas de un primate tratado con ARNm de CFTR nebulizado (500 pg/kg); que muestran tinción de proteína CFTR derivada de ARNm (izquierda), tinción de proteína ZO1 endógena (centro) y combinación óptica de la tinción de proteína CFTR derivada de ARNm y tinción de proteína ZO1 endógena (derecha), con proteína CFTR derivada de ARNm presente en las membranas celulares de células epiteliales bronquiales altas. La figura 8C representa imágenes microscópicas de inmunotinción representativas de células epiteliales bronquiales altas de un primate tratado con ARNm de CFTR nebulizado (1000 pg/kg); que muestran la tinción de proteína CFTR derivada de ARNm (izquierda), tinción de proteína ZO1 endógena (centro) y combinación óptica de la tinción de proteína CFTR derivada de ARNm y tinción de proteína ZO1 endógena (derecha) con proteína CFTR derivada de ARNm presente en las membranas celulares de células epiteliales bronquiales altas.
La figura 9A-C representa la expresión de proteína derivada de ARNm de CFTR en células epiteliales de las vías respiratorias bajas de primate colocalizada con proteína endógena de unión ocluyente de membrana, ZO1 (que está presente en la membrana celular), después de tratamiento con ARNm de CFTR nebulizado encapsulado en una nanopartícula lipídica, administrado por inhalación. La figura 9A representa imágenes microscópicas de inmunotinción de células epiteliales de las vías respiratorias bajas de un primate tratado con tampón (10 % de trehalosa) como control; que muestran la tinción de proteína CFTR derivada de ARNm (izquierda), tinción de proteína ZO1 endógena (centro) y combinación óptica de tinción de la proteína CFTR derivada de ARNm y proteína ZO1 endógena (derecha), sin proteína CFTR derivada de ARNm visible presente en las membranas celulares de células epiteliales bronquiales bajas. La figura 9B representa imágenes microscópicas de inmunotinción de células epiteliales de las vías respiratorias bajas de un primate tratado con ARNm de CFTR nebulizado (500 pg/kg); que muestran tinción de proteína CFTR derivada de ARNm (izquierda), tinción de proteína ZO1 endógena (centro) y combinación óptica de la tinción de proteína CFTR derivada de ARNm y tinción de proteína ZO1 endógena (derecha), con proteína CFTR derivada de ARNm presente en las membranas celulares de células epiteliales bronquiales bajas. La figura 9C representa imágenes microscópicas de inmunotinción representativas de células epiteliales de las vías respiratorias bajas de un primate tratado con ARNm de CFTR nebulizado (1000 pg/kg); que muestran la tinción de proteína CFTR derivada de ARNm (izquierda), tinción de proteína ZO1 endógena (centro) y combinación óptica de la tinción de proteína CFTR derivada de ARNm y tinción de proteína ZO1 endógena (derecha) , con proteína CFTR derivada de ARNm presente en las membranas celulares de células epiteliales bronquiales bajas.
La figura 10A-C representa la expresión de proteína derivada de ARNm de CFTR en células de la región alveolar de un pulmón de primate colocalizada con proteína endógena de unión ocluyente de membrana, ZO1 (que está presente en la membrana celular), después de tratamiento con ARNm de CFTR nebulizado encapsulado en una nanopartícula lipídica, administrado por inhalación. La figura 10A representa imágenes microscópicas de inmunotinción de un primate tratado con tampón (10 % de trehalosa) como control; que muestran la tinción de proteína CFTR derivada de ARNm (izquierda), tinción de proteína ZO1 endógena (centro) y combinación óptica de tinción de la proteína CFTR derivada de ARNm y proteína ZO1 endógena (derecha), sin proteína CFTR derivada de ARNm presente en las membranas celulares de células alveolares. La figura 10B representa imágenes microscópicas de inmunotinción de un primate tratado con ARNm de CFTR nebulizado (500 pg/kg); que muestran la tinción de proteína CFTR derivada de ARNm (izquierda), tinción de proteína ZO1 endógena (centro) y combinación óptica de tinción de la proteína CFTR derivada de ARNm y proteína ZO1 endógena (derecha), con proteína CFTR derivada de ARNm presente en las membranas celulares de células alveolares. La figura 10C muestra imágenes microscópicas de inmunotinción representativas de un primate tratado con ARNm de CFTR nebulizado (1000 pg/kg); que muestran la tinción de proteína CFTR derivada de ARNm (izquierda), tinción de proteína ZO1 endógena (centro) y combinación óptica de la tinción de proteína CFTR derivada de ARNm y tinción de proteína ZO1 endógena (derecha), con proteína CFTR derivada de ARNm presente en las membranas celulares de células alveolares. Definiciones
Para que la presente invención se entienda más fácilmente, en primer lugar, se definen a continuación determinados términos. Definiciones adicionales para los siguientes términos y otros términos se exponen por toda la memoria descriptiva.
Aproximadamente:Como se usa en este documento, el término "aproximadamente", aplicado a uno o más valores de interés, se refiere a un valor que es similar a un valor de referencia indicado. El término "aproximadamente" puede referirse a un intervalo de valores que están dentro de un 25 %, 20 %, 19 %, 18 %, 17 %, 16 %, 15 %, 14 %, 13 %, 12 %, 11 %, 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 % o menos en cualquier dirección de (mayor de o menor de) el valor de referencia indicado a menos que se indique otra cosa o sea evidente de otra manera por el contexto (excepto cuando dicho número excedería un 100 % de un valor posible).
Administración:Como se usa en este documento, el término "administración" abarca tanto administración local como sistémica. Por ejemplo, la administración de ARNm abarca situaciones en que un ARNm se administra a un tejido diana y la proteína codificada se expresa y retiene dentro del tejido diana (también denominada "distribución local" o "administración local"), y situaciones en que un ARNm se administra a un tejido diana y la proteína codificada se expresa y secreta al sistema de circulación del paciente (por ejemplo, suero) y se distribuye sistémicamente y se capta por otros tejidos (también denominada "distribución sistémica" o "administración sistémica"). En algunas realizaciones, la administración es administración pulmonar, por ejemplo, que comprende nebulización.
Encapsulación:Como se usa en este documento, el término "encapsulación" o un equivalente gramatical, se refiere al proceso de confinar una molécula de ARNm dentro de una nanopartícula.
Expresión:Como se usa en este documento, "expresión" de una secuencia de ácido nucleico se refiere a la traducción de un ARNm en un polipéptido, el ensamblaje de múltiples polipéptidos (por ejemplo, cadena pesada o cadena ligera de anticuerpo) en una proteína intacta (por ejemplo, anticuerpo) y/o modificación postraduccional de un polipéptido o proteína completamente ensamblada (por ejemplo, anticuerpo). En esta solicitud, los términos "expresión" y "producción" y equivalentes gramaticales, se usan indistintamente.
Funcional:Como se usa en este documento, una molécula biológica "funcional" es una molécula biológica en una forma en que presenta una propiedad y/o actividad por la que se caracteriza.
Semivida:Como se usa en este documento, el término "semivida" es el tiempo requerido para que una cantidad, tal como concentración o actividad de ácido nucleico o proteína caiga hasta la mitad de su valor medido al inicio de un periodo de tiempo.
Mejorar, aumentar o reducir:Como se usa en este documento, los términos "mejorar", "aumentar" o "reducir", o equivalentes gramaticales, indican valores que son relativos a una medición basal, tal como una medición en el mismo individuo antes del inicio del tratamiento descrito en este documento, o una medición en un sujeto de control (o múltiples sujetos de control) en ausencia del tratamiento descrito en este documento. Un "sujeto de control" es un sujeto afectado con la misma forma de enfermedad que el sujeto que se está tratando, que es aproximadamente de la misma edad que el sujeto que se está tratando.
In vitro:Como se usa en este documento, el término"in vitro"se refiere a acontecimientos que se producen en un entorno artificial, por ejemplo, en un tubo de ensayo o recipiente de reacción, en cultivo celular, etc., en lugar de dentro de un organismo multicelular.
In vivo:Como se usa en este documento, el término"in vivo"se refiere a acontecimientos que se producen dentro de un organismo multicelular, tal como un ser humano y un animal no humano. En el contexto de sistemas basados en células, el término puede usarse para hacer referencia a acontecimientos que se producen dentro de una célula viva (en oposición a, por ejemplo, sistemasin vitro).
Aislada:Como se usa en este documento, el término "aislada" se refiere a una sustancia y/o entidad que se ha (1) separado de al menos algunos de los componentes con los que estaba asociado cuando se produjo inicialmente (ya sea en la naturaleza y/o en un entorno experimental), y/o (2) producido, preparado y/o fabricado por la mano del hombre. Las sustancias y/o entidades aisladas pueden separarse de aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 91 %, aproximadamente un 92 %, aproximadamente un 93 %, aproximadamente un 94 %, aproximadamente un 95 %, aproximadamente un 96 %, aproximadamente un 97 %, aproximadamente un 98 %, aproximadamente un 99 % o más de aproximadamente un 99 % de los otros componentes con que estaban asociadas inicialmente. Los agentes aislados pueden ser aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 85 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 91 %, aproximadamente un 92 %, aproximadamente un 93 %, aproximadamente un 94 %, aproximadamente un 95 %, aproximadamente un 96 %, aproximadamente un 97 %, aproximadamente un 98 %, aproximadamente un 99 % o más de aproximadamente un 99 % puros. Como se usa en este documento, una sustancia es "pura" si está sustancialmente libre de otros componentes. Como se usa en este documento, el cálculo del porcentaje de pureza de sustancias y/o entidades aisladas no debe incluir excipientes (por ejemplo, tampón, disolvente, agua, etc.).
ARN mensajero (ARNm):Como se usa en este documento, la expresión "ARN mensajero (ARNm)" se refiere a un polinucleótido que codifica al menos un polipéptido. ARNm, como se usa en este documento, abarca ARN tanto modificado como sin modificar. El ARNm puede contener una o más regiones codificantes y no codificantes. El ARNm puede purificarse de fuentes naturales, producirse usando sistemas de expresión recombinante y opcionalmente purificarse, sintetizarse químicamente, etc. Cuando sea apropiado, por ejemplo, en el caso de moléculas sintetizadas químicamente, el ARNm puede comprender análogos nucleosídicos tales como análogos que tienen bases o glúcidos modificados químicamente, modificaciones de la cadena principal, etc. Una secuencia de ARNm se presenta en dirección 5' a 3' a menos que se indique otra cosa.
Ácido nucleico:Como se usa en este documento, la expresión "ácido nucleico", en su sentido más amplio, se refiere a cualquier compuesto y/o sustancia que se incorpore o pueda incorporarse en una cadena polinucleotídica. En algunas realizaciones, un ácido nucleico es un compuesto y/o sustancia que se incorpora o puede incorporarse en una cadena polinucleotídica mediante un enlace fosfodiéster. En algunas realizaciones, "ácido nucleico" se refiere a residuos de ácido nucleico individuales (por ejemplo, nucleótidos y/o nucleósidos). En algunas realizaciones, "ácido nucleico" se refiere a una cadena polinucleotídica que comprende residuos de ácido nucleico individuales. En algunas realizaciones, "ácido nucleico" abarca ARN, así como ADN mono y/o bicatenario y/o ADNc. Además, las expresiones "ácido nucleico", "ADN", "ARN" y/o expresiones similares incluyen análogos de ácido nucleico, es decir, análogos que tienen cadenas principales distintas de fosfodiéster. Por ejemplo, los denominados "ácidos peptidonucleicos", que son conocidos en la técnica y tienen enlaces peptídicos en lugar de enlaces fosfodiéster en la cadena principal, se consideran dentro del alcance de la presente divulgación. La expresión "secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos" incluye todas las secuencias de nucleótidos que son versiones degeneradas entre sí y/o codifican la misma secuencia de aminoácidos. Las secuencias de nucleótidos que codifican proteínas y/o ARN pueden incluir intrones. Los ácidos nucleicos pueden purificarse de fuentes naturales, producirse usando sistemas de expresión recombinante y opcionalmente purificarse, sintetizarse químicamente, etc. Cuando sea apropiado, por ejemplo, en el caso de moléculas sintetizadas químicamente, los ácidos nucleicos pueden comprender análogos nucleosídicos tales como análogos que tienen bases o glúcidos modificados químicamente, modificaciones de la cadena principal, etc. Una secuencia de ácido nucleico se presenta en dirección 5' a 3' a menos que se indique otra cosa. En algunas realizaciones, un ácido nucleico es o comprende nucleósidos naturales (por ejemplo, adenosina, timidina, guanosina, citidina, uridina, desoxiadenosina, desoxitimidina, desoxiguanosina y desoxicitidina); análogos nucleosídicos (por ejemplo, 2-aminoadenosina, 2tiotimidina, inosina, pirrolo-pirimidina, 3-metiladenosina, 5-metilcitidina, C-5 propinilcitidina, C-5 propiniluridina, 2-aminoadenosina, C5-bromouridina, C5-fluorouridina, C5-yodouridina, C5-propiniluridina, C5-propinilcitidina, C5-metilcitidina, 2-aminoadenosina, 7-desazaadenosina, 7-desazaguanosina, 8-oxoadenosina, 8-oxoguanosina, O(6)-metilguanina y 2-tiocitidina); bases modificadas químicamente; bases modificadas biológicamente (por ejemplo, bases metiladas); bases intercaladas; glúcidos modificados (por ejemplo, 2'-fluororribosa, ribosa, 2'-desoxirribosa, arabinosa y hexosa); y/o grupos fosfato modificados (por ejemplo, fosforotioatos y enlaces 5'-N-fosforamidita). En algunas realizaciones, la presente divulgación se refiere específicamente a "ácidos nucleicos no modificados", que significa ácidos nucleicos (por ejemplo, polinucleótidos y residuos, incluyendo nucleótidos y/o nucleósidos) que no se han modificado químicamente para facilitar o conseguir su administración. Los nucleótidos T y U se usan indistintamente en las descripciones de secuencia.
Paciente:Como se usa en este documento, el término "paciente" o "sujeto" se refiere a cualquier organismo al que puede administrarse una composición proporcionada, por ejemplo, con propósitos experimentales, de diagnóstico, profilácticos, cosméticos y/o terapéuticos. Pacientes típicos incluyen animales (por ejemplo, mamíferos tales como ratones, ratas, conejos, primates y/o seres humanos). En algunas realizaciones, un paciente es un ser humano.Farmacéuticamente aceptable:La expresión "farmacéuticamente aceptable", como se usa en este documento, se refiere a sustancias que, dentro del alcance de criterio médico razonable, son adecuadas para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, acorde con una relación de beneficio/riesgo razonable.
Sujeto:Como se usa en este documento, el término "sujeto" se refiere a un ser humano o cualquier animal no humano (por ejemplo, ratón, rata, conejo, perro, gato, ganado bovino, cerdos, ovejas, caballos o primates). En muchas realizaciones, un sujeto es un ser humano. Un sujeto puede ser un paciente, que se refiere a un ser humano que se presenta a un profesional médico para diagnóstico o tratamiento de una enfermedad. El término "sujeto" se usa en este documento indistintamente con "individuo" o "paciente". Un sujeto puede estar afectado con o es susceptible a una enfermedad o trastorno, pero puede presentar o no síntomas de la enfermedad o trastorno.
Sustancialmente:Como se usa en este documento, el término "sustancialmente" se refiere a la condición cualitativa de presentar un alcance o grado total o casi total de una característica o propiedad de interés. Un experto en la materia de biología entenderá que los fenómenos biológicos y químicos raramente, si acaso, llegan a completarse y/o prosiguen hasta completarse o consiguen o evitan un resultado absoluto. El término "sustancialmente", por lo tanto, se usa en este documento para capturar la posible ausencia de totalidad inherente en muchos fenómenos biológicos y químicos.
Tratar:Como se usa en este documento, el término "tratar", "tratamiento" o "tratando" se refiere a cualquier método usado para aliviar, mejorar, atenuar, inhibir, prevenir, retardar la aparición de, reducir la gravedad de y/o reducir la incidencia, parcialmente o completamente, de uno o más síntomas o rasgos de una enfermedad, trastorno y/o afección particular. El tratamiento puede administrarse a un sujeto no presenta signos de una enfermedad y/o presenta solamente signos iniciales de la enfermedad, con el propósito de disminuir el riesgo de desarrollar la patología asociada con la enfermedad.
Descripción detallada
La presente invención proporciona una composición que comprende un ARNm de codones optimizados para su expresión en células humanas, que codifica una proteína de regulador de la conductancia transmembranaria en fibrosis quística (CFTR) que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, en donde el ARNm que codifica la proteína CFTR comprende una secuencia polinucleotídica al menos un 90 % idéntica a SEQ ID NO: 1, y en donde el ARNm está a una concentración de al menos 0,4 mg/ml, y en donde la composición comprende además un diluyente seleccionado del grupo que consiste en DMSO, etilenglicol, glicerol, 2-metil-2,4-pentanodiol (MPD), propilenglicol, sacarosa y trehalosa, en donde dicha composición es para su uso en un método de tratamiento de fibrosis quística (CF) en un sujeto, y la etapa de administración de la composición al sujeto comprende inhalación. Diversos aspectos de la invención se describen en detalle en las siguientes secciones. No se entiende que el uso de secciones sea limitante. Cada sección puede aplicarse a cualquier aspecto.
La fibrosis quística, también conocida como mucoviscidosis, es un trastorno genético recesivo autosómico que afecta muy crucialmente a los pulmones, y también al páncreas, el hígado y el intestino (Gibsonet al., Am J Hespir Crit Care Med.(2003) 168(8):918-951; Ratjenet al., Lancet Lond Engl.(2003) 361(9358):681-689; O'Sullivanet al., Lancet Lond Engl.(2009) 373(9678):1891-1904). La fibrosis quística está provocada por mutaciones en el gen que codifica la proteína de regulador de la conductancia transmembranaria en fibrosis quística (CFTR). Esta proteína funciona como un canal que transporta iones cloruro a través de la membrana de las células y es necesaria para regular los componentes del moco, sudor, saliva, lágrimas y enzimas digestivas. Las mutaciones que provocan enfermedad en la proteína CFTR provocan disfunción de su actividad de canal provocando transporte anómalo de iones cloruro y sodio a través del epitelio, dando lugar a las secreciones espesas, viscosas en el pulmón, el páncreas y otros órganos característicos de enfermedad CF (O'Sullivenet al., Lancet Lond Engl.(2009) 373(9678): 1891-1904; Roweet al., N Engl J Med.(2005) 352(19): 1992-2001). La mayoría de pacientes con CF desarrollan enfermedad pulmonar crónica grave relacionada con obstrucción de las vías respiratorias parcialmente debida a niveles aumentados de mucinas sulfatadas, inflamación e infecciones recurrentes que finalmente son mortales; la mediana de edad de supervivencia prevista en Estados Unidos es de 40,7 años. La fibrosis quística es la enfermedad genética mortal más frecuente en la población blanca.
Los síntomas a menudo aparecen en la infancia y la niñez, con síntomas respiratorios muy frecuentemente seguidos de retraso del crecimiento, esteatorrea y íleo meconial (Gibsonet al., Am J Respir Crit Care Med.(2003) 168(8): 918-951). Las complicaciones más comunes de CF están relacionadas con los pulmones e incluyen bloqueos de los pasos estrechos de los órganos afectados con secreciones espesadas. Estos bloqueos dan lugar a remodelado e infección en el pulmón, provocan daños en el páncreas debido a enzimas digestivas acumuladas, y bloqueos de los intestinos. La diabetes es la complicación no pulmonar más común y es una entidad distinta conocida como diabetes relacionada con CF.
Los pulmones de individuos con CF se colonizan e infectan por bacterias desde una edad temprana. Esto da lugar a infección e inflamación crónica de las vías respiratorias, que progresan a bronquiectasia, atrapamiento de gas, hipoxemia e hipercapnia. La insuficiencia pulmonar es responsable de un 68,1 % de muertes relacionadas con CF en Estados Unidos. En la fase inicial, bacterias comunes tales comoStaphylococcus aureusyHemophilus influenzaecolonizan e infectan los pulmones. Finalmente,Pseudomonas aeruginosa(y, a veces,Burkholderia cepacia)dominan. Para los 18 años de edad, un 80 % de pacientes con CF clásica portanP. aeruginosa,y un 3,5 % portanB. cepacia.
Una vez dentro de los pulmones, estas bacterias se adaptan al entorno y desarrollan resistencia a antibióticos normalmente usados.
El defecto subyacente que provoca CF es transporte anómalo de aniones epiteliales debido a la ausencia de expresión o disfunción de la proteína CFTR. La proteína CFTR funciona principalmente como un canal de cloruro en membranas de células epiteliales; sin embargo, también está implicada en otras varias funciones de membrana celular tales como inhibición del transporte de sodio a través del canal de sodio epitelial, regulación del canal de cloruro rectificativo hacia el exterior y regulación de canales de trifosfato de adenosina (ATP) (O'Sullivanet al., Lancet Lond Engl.(2009) 373(9678): 1891-1904). La CF está provocada por mutaciones en el gen que codifica la proteína CFTR, de las que se han identificado más de 1500 mutaciones que provocan enfermedad (O'Sullivanet al., Lancet Lond Engl.(2009) 373(9678): 1891-1904). Las mutaciones génicas más comunes provocan la pérdida de síntesis de la proteína CFTR (clase I), procesamiento y maduración defectuosos de la proteína CFTR (clase II) o la expresión de una proteína CFTR defectuosa en la regulación, por ejemplo, unión e hidrólisis disminuidas de ATP (clase III) (Roweet al., N Engl J Med.(2005) 352(19):1992-2001). Una eliminación de fenilalanina en la posición 508 (F508del) es la mutación de CFTR más común en todo el mundo y es un defecto de clase II en que la proteína plegada incorrectamente se degrada rápidamente por la célula pronto tras su síntesis (Roweet al., N Engl J Med.(2005) 352(19): 1992-2001). La ausencia de una proteína CFTR funcional provoca obstrucción mucosa de las glándulas exocrinas en pacientes con CF, secundaria a transporte anómalo de cloruro y sodio a través del epitelio. En el pulmón, esto da lugar al desarrollo de secreciones espesas, persistentes que obstruyen las vías respiratorias y las glándulas submucosas, lo que a su vez da lugar a infección bacteriana e inflamación crónicas, como se describe anteriormente.
Los síntomas respiratorios de fibrosis quística incluyen: una tos persistente que produce moco espeso (esputo), sibilancias, disnea, intolerancia al ejercicio, infecciones pulmonares repetidas y pasos nasales inflamados u obstrucción nasal. Los síntomas digestivos de fibrosis quística incluyen: olor fétido, esteatorrea, poco aumento de peso y crecimiento, bloqueo intestinal, particularmente en recién nacidos (íleo meconial) y estreñimiento grave.
Hay varios métodos diferentes para evaluar los síntomas de la fibrosis quística. En un caso, se evalúa uno o más síntomas de fibrosis quística por volumen espiratorio forzado (FEV), que mide la cantidad de aire que una persona puede espirar durante una respiración forzada. En un caso, se mide la cantidad de aire espirado en el primer segundo de la respiración forzada (FEV<1>). En un caso, se mide la cantidad de aire espirado en la segunda de la respiración forzada (FEV<2>). En un caso, se mide la cantidad de aire espirado en el tercer segundo de la respiración forzada (FEV<3>). En un caso, se mide la capacidad vital forzada (FVC), que es la cantidad total de aire espirada durante un ensayo de FEV. En un caso, se evalúa uno o más síntomas de fibrosis quística por la puntuación del dominio respiratorio del cuestionario de fibrosis quística revisado (CFQ-R). La puntuación del dominio respiratorio del CFQ-R es una medida de los síntomas respiratorios relevante para pacientes con CF, tales como tos, producción de esputo y dificultad para respirar. En un caso, se evalúa uno o más síntomas de fibrosis quística por el riesgo relativo de exacerbación pulmonar. En un caso, se evalúa uno o más síntomas de fibrosis quística por cambio en el peso corporal. En un caso, se evalúa uno o más síntomas de fibrosis quística por cambio en el cloruro del sudor (mmol/l).
Selección de pacientes
La composición para su uso con la presente invención es adecuada para el tratamiento de pacientes con diversos defectos de CFTR incluyendo, aunque sin limitación, pacientes con diferentes síntomas, mutaciones o clases de CFTR, descritos en este documento.
En algunas realizaciones, la composición para su uso con la presente invención puede usarse para tratar a pacientes que portan una o más, dos o más, tres o más, cuatro o más, o cinco o más mutaciones de clase I (síntesis defectuosa de proteína) mostradas en la tabla 1. En algunas realizaciones, la composición para su uso con la presente invención puede usarse para tratar a pacientes que portan una o más, dos o más, tres o más, cuatro o más, o cinco o más mutaciones de clase II (procesamiento y tráfico anómalos) mostradas en la tabla 1. En algunas realizaciones, la composición para su uso con la presente invención puede usarse para tratar a pacientes que portan una o más, dos o más, tres o más, cuatro o más, o cinco o más mutaciones de clase III (regulación/activación defectuosa del canal) mostradas en la tabla 1. En algunas realizaciones, la composición para su uso con la presente invención puede usarse para tratar a pacientes que portan una o más, dos o más, tres o más, cuatro o más, o cinco o más mutaciones de clase IV (conductancia disminuida del canal) mostradas en la tabla 1. En algunas realizaciones, la composición para su uso con la presente invención puede usarse para tratar a pacientes que portan una o más, dos o más, tres o más, cuatro o más, o cinco o más mutaciones de clase V (síntesis y/o tráfico reducidos) mostradas en la tabla 1. En algunas realizaciones, la composición para su uso con la presente invención puede usarse para tratar a pacientes que portan cualquier combinación de mutaciones específicas seleccionadas de la tabla 1 (por ejemplo, una o más, dos o más, tres o más, cuatro o más, cinco o más, seis o más, siete o más, ocho o más, nueve o más, o diez o más mutaciones de diferentes clases mostradas en la tabla 1).
Tabla 1. Clasificación de mutaciones énicas de CFTR
En algunas realizaciones, un paciente que necesita tratamiento es un hombre o mujer de 2 años o más, o de 3 años o más, o de 6 años o más, o de 7 años o más, o de 12 años o más, o de 13 años o más, o de 18 años o más, o de 19 años o más, o de 25 años o más, o de 25 años o más, o de 30 años o más, o de 35 años o más, o de 40 años o más, o de 45 años o más, o de 50 años o más. En algunas realizaciones, un paciente que necesita tratamiento es de menos de 50 años de edad, o menos de 45 años de edad, o menos de 40 años de edad, o menos de 35 años de edad, o menos de 30 años de edad, o menos de 25 años de edad, o menos de 20 años de edad, o menos de 19 años de edad, o menos de 18 años de edad, o menos de 13 años de edad, o menos de 12 años de edad, o menos de 7 años de edad, o menos de 6 años de edad, o menos de 3 años de edad, o menos de 2 años de edad. En algunas realizaciones, un paciente que necesita tratamiento es un hombre o mujer de 2 a 18 años de edad, o de 2 a 12 años de edad, o de 2 a 6 años de edad, o de 6 a 12 años de edad, o de 6 a 18 años de edad, o de 12 a 16 años de edad, o de 2 a 50 años de edad, o de 6 a 50 años de edad, o de 12 a 50 años de edad, o de 18 a 50 años de edad. En algunas realizaciones, un paciente que necesita tratamiento es una mujer que está embarazada o que puede quedarse embarazada.
En algunas realizaciones, un paciente que necesita tratamiento tiene un valor de cloruro en sudor de >60 mmol/l, >65 mmol/l, >70 mmol/l, >75 mmol/l, >80 mmol/l, >85 mmol/l, >90 mmol/l, >95 mmol/l, >100 mmol/l, >110 mmol/l, >120 mmol/l, >130 mmol/l, >140 mmol/l o >150 mmol/l por iontoforesis cuantitativa de pilocarpina (documentada en el registro médico del sujeto). En algunas realizaciones, un paciente que necesita tratamiento tiene enfermedad senopulmonar crónica y/o anomalías gastrointestinales/nutricionales coherentes con enfermedad CF. En algunas realizaciones, un paciente que necesita tratamiento tiene enfermedad senopulmonar crónica y/o anomalías gastrointestinales/nutricionales coherentes con enfermedad CF.
En algunas realizaciones, un paciente que necesita tratamiento tiene FEV<1>>50 % y <90 % (por ejemplo, <85 %, <80 %, <75 %, <70 %, <65 %, <60 % o <55 %) de los normal previsto (es decir, el FEV promedio de pacientes sin CF) en función de la edad, sexo y estatura del paciente. En algunas realizaciones, un paciente que necesita tratamiento tiene saturación de oxígeno en reposo >92 % en aire ambiente (pulsioximetría). En algunas realizaciones, un paciente que necesita tratamiento tiene un índice de masa corporal >17,5 kg/m2 y peso >40 kg.
En algunas realizaciones, un paciente que necesita tratamiento ha recibido o está recibiendo simultáneamente otras medicaciones para CF. Por ejemplo, un paciente que necesita tratamiento puede estar recibiendo el fármaco combinado lumacaftor/ivacaftor (ORKAMBI) o puede haber estado con este tratamiento durante al menos 28 días antes del comienzo de un tratamiento con una composición de acuerdo con la presente invención. Otras medicaciones para CF pueden incluir, aunque sin limitación, tratamientos inhalados rutinarios dirigidos a la depuración de las vías respiratorias y gestión de las infecciones respiratorias, tales como broncodilatadores, rhDNasa (PULMOZYME), solución salina hipertónica, antibióticos y esteroides; y otros tratamientos rutinarios relacionados con CF tales como antibióticos sistémicos, enzimas pancreáticas, multivitaminas, y medicaciones para la diabetes y el hígado.
En algunas realizaciones, un paciente que necesita tratamiento ha sido no fumador durante un mínimo de 2 años. En algunas realizaciones, un paciente que necesita tratamiento no recibe tratamiento inhalado de rhDNasa (PULMOZYME) durante 24 horas antes y/o después de la administración de una composición que comprende un ARNm que codifica una proteína CFTR de acuerdo con la presente invención.
En algunas realizaciones, un paciente que necesita tratamiento se ha tratado o se está tratando actualmente con hormonoterapias de remplazo, hormonoterapia de remplazo tiroideo, fármacos inflamatorios no esteroideos y dronabinol con receta (MARINOL) durante el tratamiento.
En algunas realizaciones, un paciente que necesita tratamiento ha interrumpido el uso de uno o más tratamientos distintos para fibrosis quística descritos en este documento. En algunas realizaciones, el paciente ha interrumpido el uso de uno o más tratamientos distintos para fibrosis quística durante al menos 12 horas, al menos 24 horas, al menos 36 horas, al menos 48 horas, al menos 72 horas, al menos 1 semana, al menos 2 semanas, al menos 3 semanas, al menos 4 semanas, al menos 5 semanas, al menos 6 semanas, al menos 7 semanas o al menos 8 semanas antes de la administración de una composición que comprende un ARNm de CFTR de acuerdo con la presente invención. En algunas realizaciones, el paciente ha interrumpido el uso de uno o más tratamientos distintos para fibrosis quística durante menos de 12 horas, menos de 24 horas, menos de 36 horas, menos de 48 horas, menos de 72 horas, menos de 1 semana, menos de 2 semanas, menos de 3 semanas, menos de 4 semanas, menos de 5 semanas, menos de 6 semanas, menos de 7 semanas, menos de 8 semanas, menos de 9 semanas o menos de 10 semanas antes de la administración de una composición que comprende un ARNm de CFTR de acuerdo con la presente invención.
Formulación y administración
Una secuencia de ARNm adecuada tiene los codones optimizados para expresión eficaz en células humanas. Una secuencia codificante ejemplar de ARNm de CFTR de codones optimizados y la correspondiente secuencia de aminoácidos se muestran en la tabla 2:
Tabla 2. Secuencias eem lares de ARNm roteína de CFTR
Una secuencia de ARNm de CFTR adecuada para su uso con la presente invención comparte al menos un 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % de identidad con SEQ ID NO: 1 y codifica una proteína CFTR que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. En una realización, una secuencia de ARNm de CFTR incluye SEQ ID NO: 1.
En algunas realizaciones, un ARNm de CFTR adecuado para la invención también contiene secuencias UTR 5' y 3'. Secuencias UTR 5' y 3' ejemplares se muestran a continuación:
Secuencia UTR 5' ejemplar GGACAGAUCGCCUGGAGACGCCAUCCACGCUGUUUUGACCUCCAUAGAAGACACC GGGACCGAUCCAGCCUCCGCGGCCGGGAACGGUGCAUUGGAACGCGGAUUCCCCG UGCCAAGAGUGACUCACCGUCCUUGACACG(SEQ ID NO: 3)
Secuencia UTR 3' ejemplar CGGGUGGCAUCCCUGUGACCCCUCCCCAGUGCCUCUCCUGGCCCUGGAAGUUGCC ACUCCAGUGCCCACCAGCCUUGUCCUAAUAAAAUUAAGUUGCAUCAAGCU(SEQ
ID NO: 4)
o
GGGUGGCAUCCCUGUGACCCCUCCCCAGUGCCUCUCCUGGCCCUGGAAGUUGCCA CUCCAGUGCCCACCAGCCUUGUCCUAAUAAAAUUAAGUUGCAUCAAAGCU(SEQ
ID NO: 5)
Por tanto, en una realización, una secuencia ejemplar de longitud completa de ARNm de CFTR de codones optimizados adecuada para la invención es:
GGACAGAUCGCCUGGAGACGCCAUCCACGCUGUUUUGACCUCCAUAGAAGACACC GGGACCGAUCCAGCCUCCGCGGCCGGGAACGGUGCAUUGGAACGCGGAUUCCCCG UGCCAAGAGUGACUCACCGUCCUUGACACGAUGCAACGCUCUCCUCUUGAAAAGG CCUCGGUGGUGUCCAAGCUCUUCUUCUCGUGGACUAGACCCAUCCUGAGAAAGGG GUACAGACAGCGCUUGGAGCUGUCCGAUAUCUAUCAAAUCCCUUCCGUGGACUCC GCGGACAACCUGUCCGAGAAGCUCGAGAGAGAAUGGGACAGAGAACUCGCCUCAA AGAAGAACCCGAAGCUGAUUAAUGCGCUUAGGCGGUGCUUUUUCUGGCGGUUCA UGUUCUACGGCAUCUUCCUCUACCUGGGAGAGGUCACCAAGGCCGUGCAGCCCCU GUUGCUGGGACGGAUUAUUGCCUCCUACGACCCCGACAACAAGGAAGAAAGAAGC AUCGCUAUCUACUUGGGCAUCGGUCUGUGCCUGCUUUUCAUCGUCCGGACCCUCU UGUUGCAUCCUGCUAUUUUCGGCCUGCAUCACAUUGGCAUGCAGAUGAGAAUUG CCAUGUUUUCCCUGAUCUACAAGAAAACUCUGAAGCUCUCGAGCCGCGUGCUUGA CAAGAUUUCCAUCGGCCAGCUCGUGUCCCUGCUCUCCAACAAUCUGAACAAGUUC GACGAGGGCCUCGCCCUGGCCCACUUCGUGUGGAUCGCCCCUCUGCAAGUGGCGC UUCUGAUGGGCCUGAUCUGGGAGCUGCUGCAAGCCUCGGCAUUCUGUGGGCUUG GAUUCCUGAUCGUGCUGGCACUGUUCCAGGCCGGACUGGGGCGGAUGAUGAUGA AGUACAGGGACCAGAGAGCCGGAAAGAUUUCCGAACGGCUGGUGAUCACUUCGG AAAUGAUCGAAAACAUCCAGUCAGUGAAGGCCUACUGCUGGGAAGAGGCCAUGG AAAAGAUGAUUGAAAACCUCCGGCAAACCGAGCUGAAGCUGACCCGCAAGGCCGC UUACGUGCGCUAUUUCAACUCGUCCGCUUUCUUCUUCUCCGGGUUCUUCGUGGUG UUUCUCUCCGUGCUCCCCUACGCCCUGAUUAAGGGAAUCAUCCUCAGGAAGAUCU UCACCACCAUUUCCUUCUGUAUCGUGCUCCGCAUGGCCGUGACCCGGCAGUUCCC AUGGGCCGUGCAGACUUGGUACGACUCCCUGGGAGCCAUUAACAAGAUCCAGGAC UUCCUUCAAAAGCAGGAGUACAAGACCCUCGAGUACAACCUGACUACUACCGAGG UCGUGAUGGAAAACGUCACCGCCUUUUGGGAGGAGGGAUUUGGCGAACUGUUCG AGAAGGCCAAGCAGAACAACAACAACCGCAAGACCUCGAACGGUGACGACUCCCU CUUCUUUUCAAACUUCAGCCUGCUCGGGACGCCCGUGCUGAAGGACAUUAACUUC AAGAUCGAAAGAGGACAGCUCCUGGCGGUGGCCGGAUCGACCGGAGCCGGAAAG ACUUCCCUGCUGAUGGUGAUCAUGGGAGAGCUUGAACCUAGCGAGGGAAAGAUC AAGCACUCCGGCCGCAUCAGCUUCUGUAGCCAGUUUUCCUGGAUCAUGCCCGGAA CCAUUAAGGAAAACAUCAUCUUCGGCGUGUCCUACGAUGAAUACCGCUACCGGUC CGUGAUCAAAGCCUGCCAGCUGGAAGAGGAUAUUUCAAAGUUCGCGGAGAAAGA UAACAUCGUGCUGGGCGAAGGGGGUAUUACCUUGUCGGGGGGCCAGCGGGCUAG AAUCUCGCUGGCCAGAGCCGUGUAUAAGGACGCCGACCUGUAUCUCCUGGACUCC CCCUUCGGAUACCUGGACGUCCUGACCGAAAAGGAGAUCUUCGAAUCGUGCGUGU GCAAGCUGAUGGCUAACAAGACUCGCAUCCUCGUGACCUCCAAAAUGGAGCACCU GAAGAAGGCAGACAAGAUUCUGAUUCUGCAUGAGGGGUCCUCCUACUUUUACGG CACCUUCUCGGAGUUGCAGAACUUGCAGCCCGACUUCUCAUCGAAGCUGAUGGGU UGCGACAGCUUCGACCAGUUCUCCGCCGAAAGAAGGAACUCGAUCCUGACGGAAA CCUUGCACCGCUUCUCUUUGGAAGGCGACGCCCCUGUGUCAUGGACCGAGACUAA GAAGCAGAGCUUCAAGCAGACCGGGGAAUUCGGCGAAAAGAGGAAGAACAGCAU CUUGAACCCCAUUAACUCCAUCCGCAAGUUCUCAAUCGUGCAAAAGACGCCACUG CAGAUGAACGGCAUUGAGGAGGACUCCGACGAACCCCUUGAGAGGCGCCUGUCCC UGGUGCCGGACAGCGAGCAGGGAGAAGCCAUCCUGCCUCGGAUUUCCGUGAUCUC CACUGGUCCGACGCUCCAAGCCCGGCGGCGGCAGUCCGUGCUGAACCUGAUGACC CACAGCGUGAACCAGGGCCAAAACAUUCACCGCAAGACUACCGCAUCCACCCGGA AAGUGUCCCUGGCACCUCAAGCGAAUCUUACCGAGCUCGACAUCUACUCCCGGAG ACUGUCGCAGGAAACCGGGCUCGAAAUUUCCGAAGAAAUCAACGAGGAGGAUCU GAAAGAGUGCUUCUUCGACGAUAUGGAGUCGAUACCCGCCGUGACGACUUGGAA CACUUAUCUGCGGUACAUCACUGUGCACAAGUCAUUGAUCUUCGUGCUGAUUUG GUGCCUGGUGAUUUUCCUGGCCGAGGUCGCGGCCUCACUGGUGGUGCUCUGGCUG UUGGGAAACACGCCUCUGCAAGACAAGGGAAACUCCACGCACUCGAGAAACAACA GCUAUGCCGUGAUUAUCACUUCCACCUCCUCUUAUUACGUGUUCUACAUCUACGU CGGAGUGGCGGAUACCCUGCUCGCGAUGGGUUUCUUCAGAGGACUGCCGCUGGUC CACACCUUGAUCACCGUCAGCAAGAUUCUUCACCACAAGAUGUUGCAUAGCGUGC UGCAGGCCCCCAUGUCCACCCUCAACACUCUGAAGGCCGGAGGCAUUCUGAACAG AUUCUCCAAGGACAUCGCUAUCCUGGACGAUCUCCUGCCGCUUACCAUCUUUGAC UUCAUCCAGCUGCUGCUGAUCGUGAUUGGAGCAAUCGCAGUGGUGGCGGUGCUG CAGCCUUACAUUUUCGUGGCCACUGUGCCGGUCAUUGUGGCGUUCAUCAUGCUGC GGGCCUACUUCCUCCAAACCAGCCAGCAGCUGAAGCAACUGGAAUCCGAGGGACG AUCCCCCAUCUUCACUCACCUUGUGACGUCGUUGAAGGGACUGUGGACCCUCCGG GCUUUCGGACGGCAGCCCUACUUCGAAACCCUCUUCCACAAGGCCCUGAACCUCC ACACCGCCAAUUGGUUCCUGUACCUGUCCACCCUGCGGUGGUUCCAGAUGCGCAU CGAGAUGAUUUUCGUCAUCUUCUUCAUCGCGGUCACAUUCAUCAGCAUCCUGACU ACCGGAGAGGGAGAGGGACGGGUCGGAAUAAUCCUGACCCUCGCCAUGAACAUU AUGAGCACCCUGCAGUGGGCAGUGAACAGCUCGAUCGACGUGGACAGCCUGAUGC GAAGCGUCAGCCGCGUGUUCAAGUUCAUCGACAUGCCUACUGAGGGAAAACCCAC UAAGUCCACUAAGCCCUACAAAAAUGGCCAGCUGAGCAAGGUCAUGAUCAUCGAA AACUCCCACGUGAAGAAGGACGAUAUUUGGCCCUCCGGAGGUCAAAUGACCGUGA AGGACCUGACCGCAAAGUACACCGAGGGAGGAAACGCCAUUCUCGAAAACAUCAG C U UC UC C A U U UC GC C GGGAC AGC GGGU C GGC C U UC UC GGGC GGAC C GGU UC C GGG AAGUCAACUCUGCUGUCGGCUUUCCUCCGGCUGCUGAAUACCGAGGGGGAAAUCC AAAUUGACGGCGUGUCUUGGGAUUCCAUUACUCUGCAGCAGUGGCGGAAGGCCU UCGGCGUGAUCCCCCAGAAGGUGUUCAUCUUCUCGGGUACCUUCCGGAAGAACCU GGAUCCUUACGAGCAGUGGAGCGACCAAGAAAUCUGGAAGGUCGCCGACGAGGU CGGCCUGCGCUCCGUGAUUGAACAAUUUCCUGGAAAGCUGGACUUCGUGCUCGUC GACGGGGGAUGUGUCCUGUCGCACGGACAUAAGCAGCUCAUGUGCCUCGCACGGU CCGUGCUCUCCAAGGCCAAGAUUCUGCUGCUGGACGAACCUUCGGCCCACCUGGA UCCGGUCACCUACCAGAUCAUCAGGAGGACCCUGAAGCAGGCCUUUGCCGAUUGC ACCGUGAUUCUCUGCGAGCACCGCAUCGAGGCCAUGCUGGAGUGCCAGCAGUUCC UGGUCAUCGAGGAGAACAAGGUCCGCCAAUACGACUCCAUUCAAAAGCUCCUCAA CGAGCGGUCGCUGUUCAGACAAGCUAUUUCACCGUCCGAUAGAGUGAAGCUCUUC CCGCAUCGGAACAGCUCAAAGUGCAAAUCGAAGCCGCAGAUCGCAGCCUUGAAGG AAGAGACUGAGGAAGAGGUGCAGGACACCCGGCUUUAACGGGUGGCAUCCCUGU GACCCCUCCCCAGUGCCUCUCCUGGCCCUGGAAGUUGCCACUCCAGUGCCCACCA GCCUUGUCCUAAUAAAAUUAAGUUGCAUCAAGCU (SEQ ID NO: 6)
En otra realización, una secuencia ejemplar de longitud completa de ARNm de CFTR de codones optimizados es: GGACAGAUCGCCUGGAGACGCCAUCCACGCUGUUUUGACCUCCAUAGAAGACACC GGGACCGAUCCAGCCUCCGCGGCCGGGAACGGUGCAUUGGAACGCGGAUUCCCCG UGCCAAGAGUGACUCACCGUCCUUGACACGAUGCAACGCUCUCCUCUUGAAAAGG CCUCGGUGGUGUCCAAGCUCUUCUUCUCGUGGACUAGACCCAUCCUGAGAAAGGG GUACAGACAGCGCUUGGAGCUGUCCGAUAUCUAUCAAAUCCCUUCCGUGGACUCC GCGGACAACCUGUCCGAGAAGCUCGAGAGAGAAUGGGACAGAGAACUCGCCUCAA AGAAGAACCCGAAGCUGAUUAAUGCGCUUAGGCGGUGCUUUUUCUGGCGGUUCA UGUUCUACGGCAUCUUCCUCUACCUGGGAGAGGUCACCAAGGCCGUGCAGCCCCU GUUGCUGGGACGGAUUAUUGCCUCCUACGACCCCGACAACAAGGAAGAAAGAAGC AUCGCUAUCUACUUGGGCAUCGGUCUGUGCCUGCUUUUCAUCGUCCGGACCCUCU UGUUGCAUCCUGCUAUUUUCGGCCUGCAUCACAUUGGCAUGCAGAUGAGAAUUG CCAUGUUUUCCCUGAUCUACAAGAAAACUCUGAAGCUCUCGAGCCGCGUGCUUGA CAAGAUUUCCAUCGGCCAGCUCGUGUCCCUGCUCUCCAACAAUCUGAACAAGUUC GACGAGGGCCUCGCCCUGGCCCACUUCGUGUGGAUCGCCCCUCUGCAAGUGGCGC UUCUGAUGGGCCUGAUCUGGGAGCUGCUGCAAGCCUCGGCAUUCUGUGGGCUUG GAUUCCUGAUCGUGCUGGCACUGUUCCAGGCCGGACUGGGGCGGAUGAUGAUGA AGUACAGGGACCAGAGAGCCGGAAAGAUUUCCGAACGGCUGGUGAUCACUUCGG AAAUGAUCGAAAACAUCCAGUCAGUGAAGGCCUACUGCUGGGAAGAGGCCAUGG AAAAGAUGAUUGAAAACCUCCGGCAAACCGAGCUGAAGCUGACCCGCAAGGCCGC UUACGUGCGCUAUUUCAACUCGUCCGCUUUCUUCUUCUCCGGGUUCUUCGUGGUG UUUCUCUCCGUGCUCCCCUACGCCCUGAUUAAGGGAAUCAUCCUCAGGAAGAUCU UCACCACCAUUUCCUUCUGUAUCGUGCUCCGCAUGGCCGUGACCCGGCAGUUCCC AUGGGCCGUGCAGACUUGGUACGACUCCCUGGGAGCCAUUAACAAGAUCCAGGAC UUCCUUCAAAAGCAGGAGUACAAGACCCUCGAGUACAACCUGACUACUACCGAGG UCGUGAUGGAAAACGUCACCGCCUUUUGGGAGGAGGGAUUUGGCGAACUGUUCG AGAAGGCCAAGCAGAACAACAACAACCGCAAGACCUCGAACGGUGACGACUCCCU CUUCUUUUCAAACUUCAGCCUGCUCGGGACGCCCGUGCUGAAGGACAUUAACUUC AAGAUCGAAAGAGGACAGCUCCUGGCGGUGGCCGGAUCGACCGGAGCCGGAAAG ACUUCCCUGCUGAUGGUGAUCAUGGGAGAGCUUGAACCUAGCGAGGGAAAGAUC AAGCACUCCGGCCGCAUCAGCUUCUGUAGCCAGUUUUCCUGGAUCAUGCCCGGAA CCAUUAAGGAAAACAUCAUCUUCGGCGUGUCCUACGAUGAAUACCGCUACCGGUC CGUGAUCAAAGCCUGCCAGCUGGAAGAGGAUAUUUCAAAGUUCGCGGAGAAAGA UAACAUCGUGCUGGGCGAAGGGGGUAUUACCUUGUCGGGGGGCCAGCGGGCUAG AAUCUCGCUGGCCAGAGCCGUGUAUAAGGACGCCGACCUGUAUCUCCUGGACUCC CCCUUCGGAUACCUGGACGUCCUGACCGAAAAGGAGAUCUUCGAAUCGUGCGUGU GCAAGCUGAUGGCUAACAAGACUCGCAUCCUCGUGACCUCCAAAAUGGAGCACCU GAAGAAGGCAGACAAGAUUCUGAUUCUGCAUGAGGGGUCCUCCUACUUUUACGG CACCUUCUCGGAGUUGCAGAACUUGCAGCCCGACUUCUCAUCGAAGCUGAUGGGU UGCGACAGCUUCGACCAGUUCUCCGCCGAAAGAAGGAACUCGAUCCUGACGGAAA CCUUGCACCGCUUCUCUUUGGAAGGCGACGCCCCUGUGUCAUGGACCGAGACUAA GAAGCAGAGCUUCAAGCAGACCGGGGAAUUCGGCGAAAAGAGGAAGAACAGCAU CUUGAACCCCAUUAACUCCAUCCGCAAGUUCUCAAUCGUGCAAAAGACGCCACUG CAGAUGAACGGCAUUGAGGAGGACUCCGACGAACCCCUUGAGAGGCGCCUGUCCC UGGUGCCGGACAGCGAGCAGGGAGAAGCCAUCCUGCCUCGGAUUUCCGUGAUCUC CACUGGUCCGACGCUCCAAGCCCGGCGGCGGCAGUCCGUGCUGAACCUGAUGACC CACAGCGUGAACCAGGGCCAAAACAUUCACCGCAAGACUACCGCAUCCACCCGGA AAGUGUCCCUGGCACCUCAAGCGAAUCUUACCGAGCUCGACAUCUACUCCCGGAG ACUGUCGCAGGAAACCGGGCUCGAAAUUUCCGAAGAAAUCAACGAGGAGGAUCU GAAAGAGUGCUUCUUCGACGAUAUGGAGUCGAUACCCGCCGUGACGACUUGGAA CACUUAUCUGCGGUACAUCACUGUGCACAAGUCAUUGAUCUUCGUGCUGAUUUG GUGCCUGGUGAUUUUCCUGGCCGAGGUCGCGGCCUCACUGGUGGUGCUCUGGCUG UUGGGAAACACGCCUCUGCAAGACAAGGGAAACUCCACGCACUCGAGAAACAACA GCUAUGCCGUGAUUAUCACUUCCACCUCCUCUUAUUACGUGUUCUACAUCUACGU CGGAGUGGCGGAUACCCUGCUCGCGAUGGGUUUCUUCAGAGGACUGCCGCUGGUC CACACCUUGAUCACCGUCAGCAAGAUUCUUCACCACAAGAUGUUGCAUAGCGUGC UGCAGGCCCCCAUGUCCACCCUCAACACUCUGAAGGCCGGAGGCAUUCUGAACAG AUUCUCCAAGGACAUCGCUAUCCUGGACGAUCUCCUGCCGCUUACCAUCUUUGAC UUCAUCCAGCUGCUGCUGAUCGUGAUUGGAGCAAUCGCAGUGGUGGCGGUGCUG CAGCCUUACAUUUUCGUGGCCACUGUGCCGGUCAUUGUGGCGUUCAUCAUGCUGC GGGCCUACUUCCUCCAAACCAGCCAGCAGCUGAAGCAACUGGAAUCCGAGGGACG AUCCCCCAUCUUCACUCACCUUGUGACGUCGUUGAAGGGACUGUGGACCCUCCGG GCUUUCGGACGGCAGCCCUACUUCGAAACCCUCUUCCACAAGGCCCUGAACCUCC ACACCGCCAAUUGGUUCCUGUACCUGUCCACCCUGCGGUGGUUCCAGAUGCGCAU CGAGAUGAUUUUCGUCAUCUUCUUCAUCGCGGUCACAUUCAUCAGCAUCCUGACU ACCGGAGAGGGAGAGGGACGGGUCGGAAUAAUCCUGACCCUCGCCAUGAACAUU AUGAGCACCCUGCAGUGGGCAGUGAACAGCUCGAUCGACGUGGACAGCCUGAUGC GAAGCGUCAGCCGCGUGUUCAAGUUCAUCGACAUGCCUACUGAGGGAAAACCCAC UAAGUCCACUAAGCCCUACAAAAAUGGCCAGCUGAGCAAGGUCAUGAUCAUCGAA AACUCCCACGUGAAGAAGGACGAUAUUUGGCCCUCCGGAGGUCAAAUGACCGUGA ACACCGCCAAUUGGUUCCUGUACCUGUCCACCCUGCGGUGGUUCCAGAUGCGCAU CGAGAUGAUUUUCGUCAUCUUCUUCAUCGCGGUCACAUUCAUCAGCAUCCUGACU ACCGGAGAGGGAGAGGGACGGGUCGGAAUAAUCCUGACCCUCGCCAUGAACAUU AUGAGCACCCUGCAGUGGGCAGUGAACAGCUCGAUCGACGUGGACAGCCUGAUGC GAAGCGUCAGCCGCGUGUUCAAGUUCAUCGACAUGCCUACUGAGGGAAAACCCAC UAAGUCCACUAAGCCCUACAAAAAUGGCCAGCUGAGCAAGGUCAUGAUCAUCGAA AACUCCCACGUGAAGAAGGACGAUAUUUGGCCCUCCGGAGGUCAAAUGACCGUGA AGGACCUGACCGCAAAGUACACCGAGGGAGGAAACGCCAUUCUCGAAAACAUCAG CUUCUCCAUUUCGCCGGGACAGCGGGUCGGCCUUCUCGGGCGGACCGGUUCCGGG AAGUCAACUCUGCUGUCGGCUUUCCUCCGGCUGCUGAAUACCGAGGGGGAAAUCC AAAUUGACGGCGUGUCUUGGGAUUCCAUUACUCUGCAGCAGUGGCGGAAGGCCU UCGGCGUGAUCCCCCAGAAGGUGUUCAUCUUCUCGGGUACCUUCCGGAAGAACCU GGAUCCUUACGAGCAGUGGAGCGACCAAGAAAUCUGGAAGGUCGCCGACGAGGU CGGCCUGCGCUCCGUGAUUGAACAAUUUCCUGGAAAGCUGGACUUCGUGCUCGUC GACGGGGGAUGUGUCCUGUCGCACGGACAUAAGCAGCUCAUGUGCCUCGCACGGU CCGUGCUCUCCAAGGCCAAGAUUCUGCUGCUGGACGAACCUUCGGCCCACCUGGA UCCGGUCACCUACCAGAUCAUCAGGAGGACCCUGAAGCAGGCCUUUGCCGAUUGC ACCGUGAUUCUCUGCGAGCACCGCAUCGAGGCCAUGCUGGAGUGCCAGCAGUUCC UGGUCAUCGAGGAGAACAAGGUCCGCCAAUACGACUCCAUUCAAAAGCUCCUCAA CGAGGGGUCGCUGUUCAGACAAGCUAUUUCACCGUCCGAUAGAGUGAAGCUCUUC CCGCAUCGGAACAGCUCAAAGUGCAAAUCGAAGCCGCAGAUCGCAGCCUUGAAGG AAGAGACUGAGGAAGAGGUGCAGGACACCCGGCUUUAAGGGUGGCAUCCCUGUG ACCCCUCCCCAGUGCCUCUCCUGGCCCUGGAAGUUGCCACUCCAGUGCCCACCAGC CUUGUCCUAAUAAAAUUAAGUUGCAUCAAAGCU (SEQ ID NO: 7)
Un ARNm adecuado para la presente invención tiene una secuencia de nucleótidos al menos un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más idéntica a SEQ ID NO: 1.
Los ARNm en las composiciones para su uso de acuerdo con la presente invención pueden sintetizarse de acuerdo con cualquiera de una diversidad de métodos conocidos. Por ejemplo, los ARNm pueden sintetizarse mediante transcripciónin vitro(IVT). En resumen, se realiza IVT típicamente linealmente o proporcionando resistencia a nucleasas encontradas en la mayoría de células eucariotas.
La presencia de una "cola" sirve para proteger el ARNm de la degradación por exonucleasas.
Por tanto, los ARNm que codifican CFTR incluyen una estructura de capuchón 5'. Un capuchón 5' se añade típicamente como sigue: en primer lugar, una ARN terminal fosfatasa elimina uno de los grupos fosfato terminales del nucleótido 5', dejando dos fosfatos terminales; entonces se añade trifosfato de guanosina (GTP) a los fosfatos terminales mediante una guanilil transferasa, produciendo un enlace 5'5'5 trifosfato; y el 7-nitrógeno de guanina entonces se metila por una metiltransferasa. Ejemplos de estructuras de capuchón incluyen, aunque sin limitación, m7G(5')ppp (5'(A,G(5')ppp(5')A y G(5')ppp(5')G. Estructuras adicionales de capuchón se describen en la solicitud de Estados Unidos publicada n.°<u>S 2016/0032356 y la solicitud provisional de Estados Unidos 62/464.327, presentada el 27 de febrero de 2017.
Por tanto, los ARNm que codifican CFTR incluyen una estructura de cola 3'. Típicamente, una estructura de cola incluye una cola de poli(A) y/o poli(C). Una cola de poli-A o poli-C en el extremo 3' del ARNm típicamente incluye al menos 50 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 150 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 200 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 250 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 300 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 350 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 400 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 450 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 500 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 550 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 600 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 650 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 700 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 750 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 800 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 850 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 900 nucleótidos de adenosina o citosina, al menos 950 nucleótidos de adenosina o citosina, o al menos 1 kb de nucleótidos de adenosina o citosina, respectivamente. En algunas realizaciones, una cola de poli-A o poli-C puede ser de aproximadamente 10 a 800 nucleótidos de adenosina o citosina (por ejemplo, de aproximadamente 10 a 200 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 10 a 300 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 10 a 400 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 10 a 500 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 10 a 550 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 10 a 600 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 50 a 600 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 100 a 600 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 150 a 600 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 200 a 600 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 250 a 600 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 300 a 600 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 350 a 600 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 400 a 600 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 450 a 600 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 500 a 600 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 10 a 150 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 10 a 100 nucleótidos de adenosina o citosina, de aproximadamente 20 a 70 nucleótidos de adenosina o citosina, o de aproximadamente 20 a 60 nucleótidos de adenosina o citosina) respectivamente. En algunas realizaciones, una estructura de cola incluye una combinación de colas de poli(A) y poli(C) con diversas longitudes descritas en este documento. En algunas realizaciones, una estructura de cola incluye al menos un 50 %, 55 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 92 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % de nucleótidos de adenosina. En algunas realizaciones, una estructura de cola incluye al menos un 50 %, 55 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 92 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % de nucleótidos de citosina.
ARNm modificado
Un ARNm de CFTR puede contener solamente nucleótidos de origen natural (o nucleótidos no modificados). En algunas realizaciones, sin embargo, un ARNm de CFTR adecuado puede contener modificaciones en la cadena principal, modificaciones en los glúcidos y/o modificaciones en las bases. Por ejemplo, los nucleótidos modificados pueden incluir, aunque sin limitación, purinas modificadas (adenina (A), guanina (G)) o pirimidinas (timina (T), citosina (C), uracilo (U)), y análogos o derivados de nucleótidos modificados de purinas y pirimidinas, tales como, por ejemplo, 1-metil-adenina, 2-metil-adenina, 2-metiltio-N-6-isopentenil-adenina, N6-metil-adenina, N6-isopenteniladenina, 2-tio-citosina, 3-metil-citosina, 4-acetil-citosina, 5-metil-citosina, 2,6-diaminopurina, 1-metil-guanina, 2-metilguanina, 2,2-dimetil-guanina, 7-metil-guanina, inosina, 1-metil-inosina, seudouracilo (5-uracilo), dihidro-uracilo, 2-tiouracilo, 4-tio-uracilo, 5-carboximetilaminometil-2-tio-uracilo, 5-(carboxihidroximetil)-uracilo, 5-fluoro-uracilo, 5-bromouracilo, 5-carboximetilaminometil-uracilo, 5-metil-2-tio-uracilo, 5-metil-uracilo, éster metílico del ácido N-uracil-5-oxiacético, 5-metilaminometil-uracilo, 5-metoxiaminometil-2-tio-uracilo, 5'-metoxicarbonilmetil-uracilo, 5-metoxiuracilo, éster metílico del ácido uracil-5-oxiacético, ácido uracil-5-oxiacético (v), 1-metil-seudouracilo, queosina, .beta.-D-manosil-queosina, wybutoxosina y fosforamidatos, fosforotioatos, peptidonucleótidos, metilfosfonatos, 7-desazaguanosina, 5-metilcitosina e inosina. La preparación de dichos análogos es conocida por los expertos en la materia, por ejemplo, de la patente de Estados Unidos n.° 4.373.071, patente de Estados Unidos n.° 4.401.796, patente de Estados Unidos n.° 4.415.732, patente de Estados Unidos n.° 4.458.066, patente de Estados Unidos n.° 4.500.707, patente de Estados Unidos n.° 4.668.777, patente de Estados Unidos n.° 4.973.679, patente de Estados Unidos n.° 5.047.524, patente de Estados Unidos n.° 5.132.418, patente de Estados Unidos n.° 5.153.319, patente de Estados Unidos n.° 5.262.530 y 5.700.642.
En algunas realizaciones, los ARNm que codifican CFTR pueden contener modificaciones de la cadena principal de ARN. Típicamente, una modificación de la cadena principal es una modificación en que los fosfatos de la cadena principal de los nucleótidos contenidos en el ARN están modificados químicamente. Modificaciones de la cadena principal ejemplares típicamente incluyen, aunque sin limitación, modificaciones del grupo que consiste en metilfosfonatos, metilfosforamidatos, fosforamidatos, fosforotioatos (por ejemplo, 5'-O-(1-tiofosfato) de citidina), boranofosfatos, grupos guanidinio cargados positivamente, etc., que significa remplazar el enlace fosfodiéster por otros grupos aniónicos, catiónicos o neutros.
En algunas realizaciones, los ARNm que codifican CFTR pueden contener modificaciones en los glúcidos. Una modificación de glúcidos típica es una modificación química del glúcido de los nucleótidos que lo contienen, incluyendo, aunque sin limitación, modificaciones en los glúcidos elegidas del grupo que consiste en 2'-desoxi-2'-fluoro-oligorribonucleótido (5'-trifosfato de 2'-fluoro-2'-desoxicitidina, 5'-trifosfato de 2'-fluoro-2'-desoxiuridina), 2'-desoxi-2'-desamina-oligorribonucleótido (5'-trifosfato de 2'-amino-2'-desoxicitidina, 5'-trifosfato de 2'-amino-2'-desoxiuridina), 2'-O-alquiloligorribonucleótido, 2'-desoxi-2'-C-alquiloligorribonucleótido (5'-trifosfato de 2'-Ometilcitidina, 5'-trifosfato de 2'-metiluridina), 2'-C-alquiloligorribonucleótido, e isómeros de los mismos (5'-trifosfato de 2'-aracitidina, 5'-trifosfato de 2'-arauridina), o azidotrifosfatos (5'-trifosfato de 2'-azido-2'-desoxicitidina, 5'-trifosfato de 2'-azido-2'-desoxiuridina).
En algunas realizaciones, los ARNm que codifican CFTR están sin modificar.
Vehículos de administración
De acuerdo con la presente invención, el ARNm que codifica una proteína CFTR como se describe en este documento puede administrarse como ARNm desnudo (sin empaquetar) o mediante vehículos de administración. Como se usa en este documento, la expresión "vehículo de administración", "vehículo de transferencia", "nanopartícula" o equivalente gramatical, se usan indistintamente.
Los vehículos de administración pueden formularse en combinación con uno o más ácidos nucleicos, vehículos, ligandos de dirección o reactivos estabilizantes adicionales, o en composiciones farmacológicas donde se mezclan con excipientes adecuados. Pueden encontrarse técnicas para formulación y administración de fármacos en "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Co., Easton, Pa., última edición. Un vehículo de administración particular se selecciona en función de su capacidad de facilitar la transfección de un ácido nucleico a una célula diana.
De acuerdo con diversas realizaciones, los vehículos de administración adecuados incluyen, aunque sin limitación, vehículos basados en polímero, tales como polietilenoimina (PEI), nanopartículas lipídicas (LNP) y liposomas, nanoliposomas, nanoliposomas que contienen ceramida, proteoliposomas, exosomas tanto naturales como derivados sintéticamente, cuerpos laminares naturales, sintéticos y semisintéticos, nanoparticulados, nanoparticulados de fosforosilicato de calcio, nanoparticulados de fosfato de calcio, nanoparticulados de dióxido de silicio, particulados nanocristalinos, nanoparticulados semiconductores, poli(D-arginina), soles-geles, nanodendrímeros, sistemas de administración basados en almidón, micelas, emulsiones, niosomas, copolímeros de bloque de multidominio (polímeros de vinilo, polímeros de ácido polipropil acrílico, policonjugados dinámicos), formulaciones en polvo seco, plásmidos, virus, nucleótidos de fosfato de calcio, aptámeros, péptidos y otras marcas vectoriales.
Vehículos de administración liposómicos
En algunas realizaciones, un vehículo de administración adecuado es un vehículo de administración liposómico, por ejemplo, una nanopartícula lipídica (LNP) o liposoma. En algunas realizaciones, los liposomas pueden comprender uno o más lípidos catiónicos. En algunas realizaciones, un liposoma comprende uno o más lípidos catiónicos, uno o más lípidos no catiónicos, uno o más lípidos basados en colesterol y uno o más lípidos modificados con PEG. En algunas realizaciones, un liposoma comprende uno o más lípidos catiónicos, uno o más lípidos no catiónicos, y uno o más lípidos modificados con PEG. En algunas realizaciones, un liposoma comprende no más de cuatro componentes lipídicos distintos. En algunas realizaciones, un liposoma comprende no más de tres componentes lipídicos distintos. En algunas realizaciones, un componente lipídico distinto es un lípido catiónico a base de esterol. Como se usa en este documento, la expresión "lípidos catiónicos" se refiere a cualquiera de varias especies lipídicas y lipidoides que tienen una carga positiva neta a un pH seleccionado, tal como a pH fisiológico. Se han descrito varios lípidos catiónicos en la bibliografía, de los que muchos están disponibles en el mercado.
Los lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones descritas en este documento incluyen los lípidos catiónicos descritos en la publicación de patente internacional WO 2010/144740. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico, 4-(dimetilamino) butanoato de (6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-ilo, que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la presente invención incluyen lípidos catiónicos ionizables como se describe en la publicación de patente internacional WO 2013/149140. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico de una de las siguientes fórmulas:
0 una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R<2>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, un alquilo C<1>-C<20>opcionalmente sustituido, variablemente saturado o insaturado y un acilo C<6>-C<20>opcionalmente sustituido, variablemente saturado o insaturado; en donde L<1>y L<2>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, un alquilo C<1>-C<30>opcionalmente sustituido, un alquenilo C<1>-C<30>opcionalmente sustituido, variablemente insaturado, y un alquinilo C<1>-C<30>opcionalmente sustituido; en donde m y o se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en cero y cualquier número entero positivo (por ejemplo, donde m es tres); y en donde n es cero o cualquier número entero positivo (por ejemplo, donde n es uno). En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen el lípido catiónico (15Z,18Z)-N,N-dimetil-6-(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il)tetracosa-15,18-dien-1 -amina ("HGT5000"), que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen el lípido catiónico (15Z,18Z)-N,N-dimetil-6-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il)-tetracosa-4,15,18-trien-1 -amina ("HGT5001"), que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen el lípido catiónico (15Z,18Z)-N,N-dimetil-6-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il)-tetracosa-5,15,18-trien-1 -amina ("HGT5002"), que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la invención incluyen lípidos catiónicos descritos como lipidoides de aminoalcohol en la publicación de patente internacional Wo 2010/053572. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la invención incluyen lípidos catiónicos como se describe en la publicación de patente internacional WO 2016/118725. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la invención incluyen lípidos catiónicos como se describe en la publicación de patente internacional WO 2016/118724. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la invención incluyen un lípido catiónico que tiene la fórmula de 14,25-ditridecil 15,18,21,24-tetraaza-octatriacontano, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la invención incluyen lípidos catiónicos como se describe en las publicaciones de patente internacional WO 2013/063468 y WO 2016/205691. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico de la siguiente fórmula:
o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde cada caso de RL es independientemente alquenilo C6-C40 opcionalmente sustituido. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la invención incluyen lípidos catiónicos como se describe en la publicación de patente internacional WO 2015/184256. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico de la siguiente fórmula:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada X es independientemente O o S; cada Y es independientemente O o S; cada m es independientemente 0 a 20; cada n es independientemente 1 a 6; cada R<a>es independientemente hidrógeno, alquilo C1-50 opcionalmente sustituido, alquenilo C2-50 opcionalmente sustituido, alquinilo C2-50 opcionalmente sustituido, carbociclilo C3-10 opcionalmente sustituido, heterociclilo de 3-14 miembros opcionalmente sustituido, arilo C6-14 opcionalmente sustituido, heteroarilo de 5-14 miembros opcionalmente sustituido o halógeno; y cada RB es independientemente hidrógeno, alquilo C1-50 opcionalmente sustituido, alquenilo C2-50 opcionalmente sustituido, alquinilo C2-50 opcionalmente sustituido, carbociclilo C3-10 opcionalmente sustituido, heterociclilo de 3-14 miembros opcionalmente sustituido, arilo C6-14 opcionalmente sustituido, heteroarilo de 5-14 miembros opcionalmente sustituido o halógeno. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico, "Target 23", que tiene una estructura de compuesto de:
(Target 23)
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la invención incluyen lípidos catiónicos como se describe en la publicación de patente internacional WO 2016/004202. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la presente invención incluyen lípidos catiónicos como se describe en J. McClellan, M. C. King, Cell 2010, 141, 210-217 y en Whiteheadet al.Nature Communications (2014) 5:4277. En determinadas realizaciones, los lípidos catiónicos de las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la invención incluyen lípidos catiónicos como se describe en la publicación de patente internacional WO 2015/199952. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la invención incluyen lípidos catiónicos como se describe en la publicación de patente internacional WO 2017/004143. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la invención incluyen lípidos catiónicos como se describe en la publicación de patente internacional WO 2017/075531. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico de la siguiente fórmula:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde uno de L1 o L2 es -O(C=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S(O)x, -S-S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, NRaC(=O)NRa-, -OC(=O)NRa- o -NRaC(=O)O-; y el otro de L1 o L2 e -O(C=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S(O)x, -S-S-, -C(=O)S-, SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, NRaC(=O)NRa-, -OC(=O)NRa- o -NRaC(=O)O- o un enlace directo; G1 Y G2 son cada uno independientemente alquileno C<1>-C<12>o alquenileno C<1>-C<12>sin sustituir; G3 es alquileno C<1>-C<24>, alquenileno C<1>-C<24>, cicloalquileno C<3>-C<8>, cicloalquenileno C<3>-C<8>; Ra es H o alquilo C<1>-C<12>; R1 y R2 son cada uno independientemente alquilo C<6>-C<24>o alquenilo
C<6>-C<24>; R3 es H, OR5, CN, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4 o -NR5C(=O)R4; R4 es alquilo C<1>-C<12>; R5 es H es 0, 1 o 2.
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la invención incluyen lípidos catiónicos como se describe en la publicación de patente internacional WO 2017/117528. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura de compuesto:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la invención incluyen lípidos catiónicos como se describe en la publicación de patente internacional WO 2017/049245. En algunas realizaciones, los lípidos catiónicos de las composiciones de la presente invención incluyen un compuesto de una de las siguientes fórmulas:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Para una cualquiera de estas cuatro fórmulas, R<4>se selecciona independientemente de -(CH<2>)nQ y -(CH<2>)nCHQR; Q se selecciona del grupo que consiste en -OR, -OH, -O(CH2)nN(R)2, -OC(O)R, -CX<3>, -CN, -N(R)C(O)R, -N(H)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(H)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(H)C(O)N(R)<2>, -N(H)C(O)N(H)(R), -N(R)C(S)N(R)<2>, -N(H)C(S)N(R)<2>, -N(H)C(S)N(H)(R), y un heterociclo; y n es 1,2 o 3. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la invención incluyen lípidos catiónicos como se describe en las publicaciones de patente internacional WO 2017/173054 y WO 2015/095340. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Otros lípidos catiónicos adecuados para su uso en las composiciones de la presente invención incluyen lípidos catiónicos escindibles como se describe en la publicación de patente internacional WO 2012/170889. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico de la siguiente fórmula:
en donde Ri se selecciona del grupo que consiste en imidazol, guanidinio, amino, imina, enamina, un alquilamino opcionalmente sustituido (por ejemplo, un alquilamino tal como dimetilamino) y piridilo; en donde R<2>se selecciona del grupo que consiste en una de las siguientes dos fórmulas:
opcionalmente sustituido, variablemente saturado o insaturado y un acilo C<6>-C<20>opcionalmente sustituido, variablemente saturado o insaturado; y en donde n es cero o cualquier número entero positivo (por ejemplo, uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce, quince, dieciséis, diecisiete, dieciocho, diecinueve, veinte o más). En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico, "HGT4001", que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico, "HGT4002", que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico, "HGT4003", que tiene una estructura de compuesto de:
(HGT4003)
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico, "HGT4004", que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen un lípido catiónico, "HGT4005", que tiene una estructura de compuesto de:
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen el lípido catiónico, cloruro de N-[1-(2,3-dioleiloxi)propil]-N,N,N-trimetilamonio ("DOTMA"). (Feigneret al.(Proc. Nat'l Acad. Sci. 84, 7413 (1987); patente de Estados Unidos n.° 4.897.355). Otros lípidos catiónicos adecuados para las composiciones de la presente invención incluyen, por ejemplo, 5-carboxiespermilglicinadioctadecilamida ("DOGS"); 2,3-dioleiloxi-N-[2(esperminacarboxamido)etil]-N,N-dimetil-1-propanaminio ("DOSPA") (Behret al.Proc. Nat.'l Acad. Sci. 86, 6982 (1989), patente de Estados Unidos n.° 5.171.678; patente de Estados Unidos n.° 5.334.761); 1,2-dioleoil-3-dimetilamonio-propano ("DODAP"); 1,2-dioleoil-3-trimetilamonio-propano ("DOTAP").
Lípidos catiónicos ejemplares adicionales adecuados para las composiciones de la presente invención también incluyen: 1,2-diesteariloxi-N,N-dimetil-3-aminopropano ("DSDMA"); 1,2-dioleiloxi-N,N-dimetil-3-aminopropano ("DODMA"); 1,2-dilinoleiloxi-N,N-dimetil-3-aminopropano ("DLinDMA"); 1,2-dilinoleniloxi-N,N-dimetil-3-aminopropano ("DLenDMA"); cloruro de N-dioleil-N,N-dimetilamonio ("DODAC"); bromuro de N,N-diestearil-N,N-dimetilamonio ("DDAB"); bromuro de N-(1,2-dimiristiloxiprop-3-il)-N,N-dimetil-N-hidroxietilamonio ("DMRIE"); 3-dimetilamino-2-(colest-5-en-3-beta-oxibutan-4-oxi)-1 -(cis,cis-9,12-octadecadienoxi)propano ("CLinDMA"); 2-[5'-(colest-5-en-3-betaoxi)-3'-oxapentoxi)-3-dimetil-1 -(cis,cis-9', 1 -2'-octadecadienoxi)propano ("CpLinDMA"); N,N-dimetil-3,4-dioleiloxibencilamina ("DMOBA"); 1,2-N,N'-dioleilcarbamil-3-dimetilaminopropano ("DOcarbDAP"); 2,3-dilinoleoiloxi-N,N-dimetilpropilamina ("DLinDAP"); 1,2-N,N'-dilinoleilcarbamil-3-dimetilaminopropano ("DLincarbDAP"); 1,2-dilinoleoilcarbamil-3-dimetilaminopropano ("DLinCDAP"); 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminometil-[1,3]-dioxolano ("DLin-K-DMA"); 2-((8-[(3P)-colest-5-en-3-iloxi]octil)oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]propano-1-amina ("octil-CLinDMA"); (2R)-2-((8-[(3beta)-colest-5-en-3-iloxi]octil)oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]propan-1 -amina ("octil-CLinDMA (2R)"); (2S)-2-((8-[(3P)-colest-5-en-3-iloxi]octil)oxi)-N,fsl-dimetil-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]propan-1-amina ("octil-CLinDMA (2S)"); 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminoetil-[1,3]-dioxolano ("DLin-K-XTC2-DMA"); y 2-(2,2-di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il)-1,3-dioxolan-4-il)-N,N-dimetiletanamina ("DLin-KC2-DMA") (véase, documento<w>O 2010/042877; Sempleet al.,Nature Biotech. 28: 172-176 (2010)). (Heyes, J.,et al,J Controlled Release 107: 276-287 (2005); Morrissey, DV.,et al,Nat. Biotechnol. 23(8): 1003-1007 (2005); publicación de patente internacional WO 2005/121348). En algunas realizaciones, uno o más de los lípidos catiónicos comprenden al menos uno de un resto imidazol, dialquilamino o guanidinio.
En algunas realizaciones, uno o más lípidos catiónicos adecuados para las composiciones de la presente invención incluyen 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminoetil-[1,3]-dioxolano ("XTC"); (3aR,5s,6aS)-N,N-dimetil-2,2-di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienil)tetrahidro-3aH-ciclopenta[d] [1,3]dioxol-5-amina ("a LnY-100") y/o 4,7,13-tris(3-oxo-3-(undecilamino)propil)-N1 ,N16-diundecil-4,7,10,13-tetraazahexadecano-1,16-diamida ("NC98-5").
En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen uno o más lípidos catiónicos que constituyen al menos aproximadamente un 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 % o 70 %, medido en peso, del contenido total de lípidos en la composición, por ejemplo, una nanopartícula lipídica. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen uno o más lípidos catiónicos que constituyen al menos aproximadamente un 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 % o 70 %, medido como % molar, del contenido total de lípidos en la composición, por ejemplo, una nanopartícula lipídica. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen uno o más lípidos catiónicos que constituyen aproximadamente un 30-70 % (por ejemplo, aproximadamente un 30-65 %, aproximadamente un 30-60 %, aproximadamente un 30-55 %, aproximadamente un 30-50 %, aproximadamente un 30-45 %, aproximadamente un 30-40 %, aproximadamente un 35-50 %, aproximadamente un 35-45 % o aproximadamente un 35-40 %), medido en peso, del contenido total de lípidos en la composición, por ejemplo, una nanopartícula lipídica. En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención incluyen uno o más lípidos catiónicos que constituyen aproximadamente un 30-70 % (por ejemplo, aproximadamente un 30-65 %, aproximadamente un 30 60 %, aproximadamente un 30-55 %, aproximadamente un 30-50 %, aproximadamente un 30-45 %, aproximadamente un 30-40 %, aproximadamente un 35-50 %, aproximadamente un 35-45 % o aproximadamente un 35-40 %), medido como % molar, del contenido total de lípidos en la composición, por ejemplo, una nanopartícula lipídica.
En algunas realizaciones, pueden usarse lípidos catiónicos a base de esterol en lugar de o además de lípidos catiónicos descritos en este documento. Lípidos catiónicos a base de esterol adecuados son lípidos catiónicos a base de esterol que contienen dialquilamino, imidazol y guanidinio. Por ejemplo, determinadas realizaciones se refieren a una composición que comprende uno o más lípidos catiónicos a base de esterol que comprenden un imidazol, por ejemplo, el éster de imidazol colesterol o lípido "ICE" 3-(1H-imidazol-4-il)propanoato de (3S, 10R, 13R, 17R)-10,13-dimetil-17-((R)-6-metilheptan-2-il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro-1 H-ciclopenta[a]fenantren-3-ilo, como se representa por la estructura (I) a continuación. En determinadas realizaciones, una nanopartícula lipídica para la administración de ARN (por ejemplo, ARNm) que codifica una proteína funcional puede comprender uno o más lípidos catiónicos a base de imidazol, por ejemplo, el éster de imidazol colesterol o lípido "ICE" 3-(1H-imidazol-4-il)propanoato de (3S, 10R, 13R, 17R)-10,13-dimetil-17-((R)-6-metilheptan-2-il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-3-ilo, como se representa por la
un 20 %, mayor de un 30 %, mayor de un 40 %, mayor de un 50 %, mayor de un 60 % o mayor de un 70 %. En algunas realizaciones, el uno o más lípidos catiónicos constituyen aproximadamente un 30-50 % (por ejemplo, aproximadamente un 30-45 %, aproximadamente un 30-40 %, aproximadamente un 35-50 %, aproximadamente un 35-45 % o aproximadamente un 35-40 %) del liposoma en peso. En algunas realizaciones, el lípido catiónico (por ejemplo, lípido ICE) constituye aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 35 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 45 % o aproximadamente un 50 % del liposoma en relación molar.
Como se usa en este documento, la expresión "lípido no catiónico" se refiere a cualquier lípido neutro, zwiteriónico o aniónico. Como se usa en este documento, la expresión "lípido aniónico" se refiere a cualquiera de varias especies lipídicas que portan una carga negativa neta a un pH seleccionado, tal como pH fisiológico. Lípidos no catiónicos incluyen, aunque sin limitación, diestearoilfosfatidilcolina (DSPC), dioleoilfosfatidilcolina (DOPC), dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), dioleoilfosfatidilglicerol (DOPG), dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE), palmitoiloleoilfosfatidilcolina (POPC), palmitoiloleoil-fosfatidiletanolamina (POPE), 4-(N-maleimidometil)-ciclohexano-1-carboxilato de dioleoil-fosfatidiletanolamina (DOPE-mal), dipalmitoilfosfatidiletanolamina (DPPE), dimiristoilfosfoetanolamina (DMPE), diestearoil-fosfatidil-etanolamina (DSPE), fosfatidilserina, esfingolípidos, cerebrósidos, gangliósidos, 16-O-monometil PE, 16-O-dimetil PE, 18-1-trans PE, 1-estearoil-2-oleoil-fosfatidiletanolamina (SOPE), o una mezcla de los mismos.
En algunas realizaciones, dichos lípidos no catiónicos pueden usarse en solitario, pero se usan preferiblemente en combinación con otros lípidos, por ejemplo, lípidos catiónicos. En algunas realizaciones, el lípido no catiónico puede comprender una relación molar de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 90 %, o de aproximadamente un 10 % a aproximadamente un 70 % del lípido total presente en un liposoma. En algunas realizaciones, un lípido no catiónico es un lípido neutro, es decir, un lípido que no porta una carga neta en las condiciones en las que se formula y/o administra la composición. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido no catiónico en un liposoma puede ser mayor de un 5 %, mayor de un 10 %, mayor de un 20 %, mayor de un 30 % o mayor de un 40 %.
Lípidos catiónicos a base de colesterol adecuados incluyen, por ejemplo, DC-Choi (N,N-dimetil-N-etilcarboxamidocolesterol), 1,4-bis(3-N-oleilamino-propil)piperazina (Gao,et al.Biochem. Biophys. Res. Comm. 179, 280 (1991); Wolfet al.BioTechniques 23, 139 (1997); patente de Estados Unidos n.° 5.744.335) o ICE. En algunas realizaciones, el lípido a base de colesterol puede comprender una relación molar de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 30 %, o de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 20 % del lípido total presente en un liposoma. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido a base de colesterol en la nanopartícula lipídica puede ser mayor de un 5 %, mayor de un 10 %, mayor de un 20 %, mayor de un 30 % o mayor de un 40 %.
También se contempla por la presente invención el uso de fosfolípidos modificados con polietilenglicol (PEG) y lípidos derivatizados tales como ceramidas derivatizadas (PEG-CER), incluyendo N-octanoil-esfingosina-1-[succinil(metoxipolietilenglicol)-2000] (C8 PEG-2000 ceramida), en solitario o preferiblemente en combinación con otras formulaciones lipídicas conjuntamente, que comprenden el vehículo de transferencia (por ejemplo, una nanopartícula lipídica). Lípidos modificados con PEG contemplados incluyen, aunque sin limitación, una cadena de polietilenglicol de hasta S kDa de longitud, unida covalentemente a un lípido con una o más cadenas alquilo de longitud C<6>-C<20>. La adición de dichos componentes puede evitar la agregación de complejos y también puede proporcionar un medio para aumentar el tiempo en circulación y aumentar la administración de la composición de lípido-ácido nucleico a los tejidos diana (Klibanovet al.(1990) FEBS Letters, 268 (1): 235-237), o pueden seleccionarse para intercambio rápidamente de la formulaciónin vivo(véase la patente de Estados Unidos n.° 5.885.613). Lípidos intercambiables particularmente útiles son PEG-ceramidas que tienen cadenas acilo más cortas (por ejemplo, C14 o C18). El fosfolípido modificado con PEG y lípidos derivatizados de la presente invención pueden comprender una relación molar de aproximadamente un 0 % a aproximadamente un 20 %, de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 20 %, de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 15 %, de aproximadamente un 4 % a aproximadamente un 10 % o aproximadamente un 2 % del lípido total presente en el vehículo de transferencia liposómico.
De acuerdo con diversas realizaciones, la selección de lípidos catiónicos, lípidos no catiónicos y/o lípidos modificados con PEG que comprenden la nanopartícula lipídica, así como la relación molar relativa de dichos lípidos entre sí, se basa en las características del lípido o lípidos seleccionados, la naturaleza de las células diana pretendidas, las características del ARNm a administrar. Consideraciones adicionales incluyen, por ejemplo, la saturación de la cadena alquilo, así como el tamaño, carga, pH, pKa, capacidad fusogénica y toxicidad del lípido o lípidos seleccionados. Por tanto, las relaciones molares pueden ajustarse en consecuencia.
En algunas realizaciones, un vehículo de administración adecuado se formula usando un polímero como vehículo, en solitario o en combinación con otros vehículos, incluyendo diversos lípidos descritos en este documento. Por tanto, en algunas realizaciones, los vehículos de administración liposómicos, como se usan en este documento, también abarcan nanopartículas que comprenden polímeros. Polímeros adecuados pueden incluir, por ejemplo, poliacrilatos, polialquicianoacrilatos, poliláctido, copolímeros de poliláctido-poliglicólido, policaprolactonas, dextrano, albúmina, gelatina, alginato, colágeno, quitosano, ciclodextrinas, protamina, protamina PEGilada, PLL, PLL PEGilado y polietilenimina (PEI). Cuando está presente PEI, puede ser PEI ramificada de un peso molecular que varía de 10 a 40 kDa, por ejemplo, PEI ramificada de 25 kDa (Sigma n.° 408727).
Un liposoma adecuado para su uso con la presente invención puede incluir uno o más de cualquiera de los lípidos catiónicos, lípidos no catiónicos, lípidos de colesterol, lípidos modificados con PEG y/o polímeros descritos en este documento a diversas relaciones. Como ejemplos no limitantes, una formulación liposómica adecuada puede incluir una combinación seleccionada de cKK-E12, D<o>PE, colesterol y DMG-PEG2K; C12-200, DOPE, colesterol y DMG-PEG2K; HGT4003, DOPE, colesterol y DMG-PEG2K; ICE, DOPE, colesterol y DMG-PEG2K; o ICE, DOPE y DMG-PEG2K.
En diversas realizaciones, los lípidos catiónicos (por ejemplo, cKK-E12, C12-200, ICE y/o HGT4003) constituyen aproximadamente un 30-60 % (por ejemplo, aproximadamente un 30-55 %, aproximadamente un 30-50 %, aproximadamente un 30-45 %, aproximadamente un 30-40 %, aproximadamente un 35-50 %, aproximadamente un 35-45 % o aproximadamente un 35-40 %) del liposoma en relación molar. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípidos catiónicos (por ejemplo, cKK-E12, C12-200, ICE y/o HGT4003) es o mayor de aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 35 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 45 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 55 % o aproximadamente un 60 % del liposoma en relación molar.
En algunas realizaciones, la relación de uno o más lípidos catiónicos a uno o más lípidos no catiónicos a uno o más lípidos a base de colesterol a uno o más lípidos modificados con PEG puede ser entre aproximadamente 30-60:25-35:20-30:1-15, respectivamente. En algunas realizaciones, la relación de uno o más lípidos catiónicos a uno o más lípidos no catiónicos a uno o más lípidos a base de colesterol a uno o más lípidos modificados con PEG es aproximadamente 40:30:20:10, respectivamente. En algunas realizaciones, la relación de uno o más lípidos catiónicos a uno o más lípidos no catiónicos a uno o más lípidos a base de colesterol a uno o más lípidos modificados con PEG es aproximadamente 40:30:25:5, respectivamente. En algunas realizaciones, la relación de uno o más lípidos catiónicos a uno o más lípidos no catiónicos a uno o más lípidos a base de colesterol a uno o más lípidos modificados con PEG es aproximadamente 40:32:25:3, respectivamente. En algunas realizaciones, la relación de uno o más lípidos catiónicos a uno o más lípidos no catiónicos a uno o más lípidos a base de colesterol a uno o más lípidos modificados con PEG es aproximadamente 50:25:20:5. En algunas realizaciones, la relación de uno o más lípidos de esterol a uno o más lípidos no catiónicos a uno o más lípidos modificados con PEG es 50:45:5. En algunas realizaciones, la relación de uno o más lípidos de esterol a uno o más lípidos no catiónicos a uno o más lípidos modificados con PEG es 50:40:10. En algunas realizaciones, la relación de uno o más lípidos de esterol a uno o más lípidos no catiónicos a uno o más lípidos modificados con PEG es 55:40:5. En algunas realizaciones, la relación de uno o más lípidos de esterol a uno o más lípidos no catiónicos a uno o más lípidos modificados con PEG es 55:35:10. En algunas realizaciones, la relación de uno o más lípidos de esterol a uno o más lípidos no catiónicos a uno o más lípidos modificados con PEG es 60:35:5. En algunas realizaciones, la relación de uno o más lípidos de esterol a uno o más lípidos no catiónicos a uno o más lípidos modificados con PEG es 60:30:10.
En algunas realizaciones, un liposoma adecuado para su uso con la presente invención comprende ICE y DOPE a una relación molar de ICE:DOPE de >1:1. En algunas realizaciones, la relación molar de ICE:DOPE es <2,5:1. En algunas realizaciones, la relación molar de ICE:DOPE es entre 1:1 y 2,5:1. En algunas realizaciones, la relación molar de ICE:DOPE es aproximadamente 1,5:1. En algunas realizaciones, la relación molar de ICE:DOPE es aproximadamente 1,7:1. En algunas realizaciones, la relación molar de ICE:DOPE es aproximadamente 2:1. En algunas realizaciones, un liposoma adecuado para su uso con la presente invención comprende ICE y DMG-PEG-2K a una relación molar de ICE:DMG-PEG-2K de >10:1. En algunas realizaciones, la relación molar de ICE:DMG-PEG-2K es <16:1. En algunas realizaciones, la relación molar de ICE:DMG-PEG-2K es aproximadamente 12:1. En algunas realizaciones, la relación molar de ICE:DMG-PEG-2K es aproximadamente 14:1. En algunas realizaciones, un liposoma adecuado para su uso con la presente invención comprende DOPE y DMG-PEG-2K a una relación molar de DOPE:DMG-PEG-2K de >5:1. En algunas realizaciones, la relación molar de DOPE:DMG-PEG-2K es <11:1. En algunas realizaciones, la relación molar de DOPE:DMG-PEG-2K es aproximadamente 7:1. En algunas realizaciones, la relación molar de DOPE:DMG-PEG-2K es aproximadamente 10:1. En algunas realizaciones, un liposoma adecuado para su uso con la presente invención comprende ICE, DOPE y DMG-PEG-2K a una relación molar de ICE:DOPE:DMG-PEG-2K de 50:45:5. En algunas realizaciones, un liposoma adecuado para su uso con la presente invención comprende ICE, DOPE y DMG-PEG-2K a una relación molar de ICE:DOPE:DMG-PEG-2K de 50:40:10. En algunas realizaciones, un liposoma adecuado para su uso con la presente invención comprende ICE, DOPE y DMG-PEG-2K a una relación molar de ICE:DOPE:DMG-PEG-2K de 55:40:5. En algunas realizaciones, un liposoma adecuado para su uso con la presente invención comprende ICE, DOPE y DMG-PEG-2K a una relación molar de ICE:DOPE:DMG-PEG-2K de 55:35:10. En algunas realizaciones, un liposoma adecuado para su uso con la presente invención comprende ICE, DOPE y DMG-PEG-2K a una relación molar de ICE:DOPE:DMG-PEG-2K de 60:35:5. En algunas realizaciones, un liposoma adecuado para su uso con la presente invención comprende ICE, DOPE y DMG-PEG-2K a una relación molar de ICE:DOPE:Dm G-PEG-2K de 60:30:10.
Los vehículos de transferencia liposómicos para su uso en la invención pueden prepararse por diversas técnicas que son actualmente conocidas en la técnica. Se describen diversos métodos en la solicitud de Estados Unidos publicada n.° US 2011/0244026, la solicitud de Estados Unidos publicada n.° US 2016/0038432 y la solicitud de Estados Unidos provisional n.° 62/580.155, presentada el 1 de noviembre de 2017 y pueden usarse para poner en práctica la presente invención.
En resumen, el proceso de preparación de nanopartículas lipídicas de ARNm de CFTR incluye una etapa de calentamiento de un primer conjunto de una o más soluciones con un primer conjunto de una o más soluciones (es decir, aplicar calor desde una fuente de calor a las soluciones) hasta una temperatura (o para mantener a una temperatura) mayor de la temperatura ambiente. El primer conjunto de una o más soluciones puede incluir una solución no acuosa que comprende los lípidos usados para formar la nanopartícula lipídica, y/o una solución que comprende nanopartículas lipídicas preformadas. El segundo conjunto de una o más soluciones puede incluir una solución acuosa del ARNm de CFTR y/o una solución que comprende el ARNm encapsulado en nanopartícula lipídica. En determinados casos, el proceso incluye una etapa de calentamiento hasta una temperatura (o para mantener a una temperatura) mayor de la temperatura ambiente de una primera solución que comprende nanopartículas lipídicas preformadas con una segunda solución acuosa que comprende ARNm de CFTR. En algunos casos, el proceso incluye la etapa de calentamiento de una o ambas de la solución de ARNm y la solución de nanopartícula lipídica preformada, antes de la etapa de mezcla. En algunos casos, el proceso incluye calentar una o más de la solución que comprende las nanopartículas lipídicas preformadas, la solución que comprende el ARNm y la solución que comprende el ARNm encapsulado en nanopartícula lipídica, durante la etapa de mezcla. En algunos casos, el proceso incluye la etapa de calentamiento del ARNm encapsulado en nanopartícula lipídica, después de la etapa de mezcla. En algunos casos, la temperatura a la que se calienta una o más de las soluciones (o a la que se mantiene una o más de las soluciones) es o es mayor de aproximadamente 30 °C, 37 °C, 40 °C, 45 °C, 50 °C, 55 °C, 60 °C, 65 °C o 70 °C. En algunos casos, la temperatura a la que una o más de las soluciones se calienta varía de aproximadamente 25-70 °C, aproximadamente 30-70 °C, aproximadamente 35-70 °C, aproximadamente 40-70 °C, aproximadamente 45-70 °C, aproximadamente 50-70 °C o aproximadamente 60-70 °C. En algunos casos, la temperatura mayor de la temperatura ambiente a la que una o más de las soluciones se calienta es aproximadamente 65 °C.
Para facilitar la expresión de ARNmin vivo,pueden formularse vehículos de administración tales como liposomas en combinación con uno o más ácidos nucleicos, vehículos, ligandos de dirección o reactivos estabilizantes adicionales, o en composiciones farmacológicas donde se mezclan con excipientes adecuados. Pueden encontrarse técnicas para formulación y administración de fármacos en "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Co., Easton, Pa., última edición.
Como se usa en este documento, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" se determina en gran medida en función de la cantidad total del agente terapéutico contenido en composiciones farmacéuticas. En general, una cantidad terapéuticamente eficaz es suficiente para conseguir un beneficio significativo para el sujeto (por ejemplo, tratar, modular, curar, prevenir y/o mejorar la fibrosis quística). Por ejemplo, una cantidad terapéuticamente eficaz puede ser una cantidad suficiente para conseguir un efecto terapéutico y/o profiláctico deseado.
De acuerdo con la invención, la composición que comprende un ARNm que codifica CFTR comprende ARNm a una concentración de al menos 0,4 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración de al menos 0,5 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración de al menos 0,6 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración de al menos 0,7 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración de al menos 0,8 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración de al menos 0,9 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración de al menos 1,0 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración de al menos 2,0 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración de al menos 3,0 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración de al menos 4,0 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración de al menos 5,0 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración de al menos 6,0 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración de al menos 7,0 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración de al menos 8,0 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración de al menos 9,0 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración de al menos 10,0 mg/ml. En algunas realizaciones, el ARNm que codifica una proteína CFTR está a una concentración que varía de 0,1 mg/ml a 10,0 mg/ml.
La composición que comprende el ARNm que codifica CFTR se formula con un diluyente seleccionado del grupo que consiste en DMSO, etilenglicol, glicerol, 2-metil-2,4-pentanodiol (MPD), propilenglicol, sacarosa y trehalosa. En algunas realizaciones, la formulación comprende un 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 % o 20 % de diluyente.
Administración pulmonar
Un ARNm de CFTR para su uso con la presente invención se formula para administración pulmonar. Como se usa en este documento, administración pulmonar se refiere a administración al pulmón mediante, por ejemplo, la cavidad nasal, la tráquea, los bronquios, los bronquiolos y/u otro sistema pulmonar. En realizaciones particulares, un ARNm de CFTR se formula para nebulización. En estas realizaciones, el vehículo de administración puede estar en una composición aerosolizada que puede inhalarse.
En algunas realizaciones, se forma polvo seco de ARNm de CFTR por liofilización del complejo de ARNm-lípido (véase la patente de Estados Unidos 9.717.690). El polvo seco liofilizado es adecuado para almacenamiento a largo plazo. Puede reconstituirse con agua purificada para administración a un sujeto que lo necesita. En determinadas realizaciones, tras la reconstitución con un medio de rehidratación apropiado (por ejemplo, agua purificada, agua desionizada, dextrosa al 5 %, trehalosa al 10 % y/o solución salina normal, la composición reconstituida demuestra actividad farmacológica o biológica comparable con la observada antes de la liofilización. Por ejemplo, en determinadas realizaciones, la actividad farmacológica y biológica de un polinucleótido encapsulado es equivalente a la observada antes de la liofilización de la composición; o como alternativa demuestra una reducción insignificante en la actividad farmacológica y biológica (por ejemplo, menos de aproximadamente un 1 %, 2 %, 2,5 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % o 10 % de reducción en la actividad biológica o farmacológica de un polinucleótido encapsulado).
En determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas que comprenden nanopartículas liofilizadas o vehículos de administración de nanopartículas lipídicas se caracterizan como estables (por ejemplo, como estables como composiciones farmacéuticas que comprenden un vehículo no liofilizado equivalente). La liofilización de las nanopartículas lipídicas no cambia apreciablemente o altera el tamaño de partículas de las nanopartículas lipídicas después de la liofilización y/o reconstitución. Por ejemplo, en este documento se divulgan composiciones farmacéuticas que comprenden vehículos de administración lipídicos liofilizados, en donde, tras la reconstitución (por ejemplo, con agua purificada), las nanopartículas lipídicas no floculan o se agregan, o como alternativa demuestran floculación o agregación limitada o insignificante (por ejemplo, determinada por el tamaño de partículas de las nanopartículas lipídicas reconstituidas).
Por consiguiente, en determinadas realizaciones, tras la reconstitución de una nanopartícula lipídica liofilizada, las nanopartículas lipídicas tienen un Dv50 de menos de aproximadamente 500 nm (por ejemplo, menos de aproximadamente 300 nm, 200 nm, 150 nm, 125 nm, 120 nm, 100 nm, 75 nm, 50 nm, 25 nm o más pequeño). Asimismo, en determinadas realizaciones, tras la reconstitución de una nanopartícula lipídica liofilizada, las nanopartículas lipídicas tienen un Dv90 de menos de aproximadamente 750 nm (por ejemplo, menos de aproximadamente 700 nm, 500 nm, 300 nm, 200 nm, 150 nm, 125 nm, 100 nm, 75 nm, 50 nm, 25 nm o más pequeño).
En otras realizaciones, las composiciones farmacéuticas que comprenden vehículos de administración lipídicos liofilizados se caracterizan por tener un índice de polidispersión de menos de aproximadamente 1 (por ejemplo, menos de 0,95, 0,9, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,25, 0,2, 0,1, 0,05 o menos). En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas que comprenden vehículos de administración lipídicos liofilizados demuestran una tendencia reducida a flocular o agregarse de otro modo (por ejemplo, durante la liofilización o tras reconstitución).
Por ejemplo, tras la reconstitución, los vehículos de administración lipídicos pueden tener un tamaño de partícula promedio (Zave) de menos de 500 nm (por ejemplo, menos de aproximadamente 400 nm, 300 nm, 200 nm, 175 nm, 150 nm, 125 nm, 100 nm, 75 nm, 50 nm, 25 nm o más pequeño en una solución de PBS).
En algunas realizaciones, los vehículos de administración lipídicos liofilizados (por ejemplo, nanopartículas lipídicas liofilizadas) comprenden además o se preparan, como alternativa, usando uno o más lioprotectores (por ejemplo, glúcidos y/o carbohidratos). En determinadas realizaciones, la inclusión de uno o más lioprotectores en la nanopartícula lipídica puede mejorar o potenciar de otro modo la estabilidad de los vehículos de administración lipídicos liofilizados (por ejemplo, en condiciones normales de almacenamiento) y/o facilitar la reconstitución de los vehículos de administración lipídicos liofilizados usando un medio rehidratación, preparando de ese modo una formulación acuosa. Por ejemplo, en determinadas realizaciones, las nanopartículas lipídicas se preparan y, antes de la liofilización, el tampón presente en la formulación liposómica puede remplazarse (por ejemplo, mediante centrifugación) con un lioprotector tal como una solución o suspensión de sacarosa (por ejemplo, una solución acuosa que comprende entre aproximadamente un 1-50 % o un 10-25 % de sacarosa). En algunas realizaciones, el lioprotector es trehalosa. En algunas realizaciones, el lioprotector comprende un 10-50 %, o un 10-25 %, o un 10 20 % o un 10-15 % de trehalosa. Otros lioprotectores que pueden usarse para preparar las composiciones liofilizadas descritas en este documento incluyen, por ejemplo, dextrano (por ejemplo, 1,5 kDa, 5 kDa y/o 40 kDa) e inulina (por ejemplo, 1,8 kDa y/o 4 kDa). Los vehículos de administración lipídicos liofilizados tienen una eficacia de encapsulación de más de aproximadamente 80 %.
Una composición farmacéutica que comprende una nanopartícula lipídica liofilizada que comprende ARNm que codifica CFTR es estable a 4 °C durante al menos 1 mes, al menos 2 meses, al menos 3 meses, al menos 4 meses, al menos 5 meses, al menos 6 meses o durante al menos 1 año. En algunas realizaciones, los vehículos de administración lipídicos liofilizados pueden almacenarse en refrigeración y permanecer estables (por ejemplo, como se demuestra por pérdidas mínimas o ausentes en su actividad farmacéutica o biológica pretendida) durante periodos prolongados de tiempo (por ejemplo, estables durante al menos aproximadamente 1,2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 24, 36 meses o más tras almacenamiento a aproximadamente 4 °C). En otras realizaciones, los vehículos de administración lipídicos liofilizados pueden almacenarse sin refrigeración y permanecer estables durante periodos prolongados de tiempo (por ejemplo, estables durante al menos aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 24, 36 meses o más tras almacenamiento a aproximadamente 25 °C).
La composición farmacéutica en forma liofilizada puede almacenarse en estado congelado durante 1, 2, 3, 4, 5 o 10 años sin pérdida de actividad farmacológica o biológica.
Por consiguiente, también se contemplan en este documento composiciones para su uso en el tratamiento de enfermedades en un sujeto, al administrar una cantidad eficaz de composiciones farmacéuticas que comprenden vehículos de administración lipídicos liofilizados de ARNm de CFTR a un sujeto (por ejemplo, tras reconstitución con un medio de rehidratación tal como agua estéril para inyección).
En algunas realizaciones, la formulación se administra mediante un inhalador de dosis medida.
En algunas realizaciones, la formulación se administrar mediante un nebulizador.
La formulación de ARNm de CFTR adecuada para nebulización puede almacenarse como un líquido congelado, o líquido estéril, o polvo liofilizado o seco y reconstituirse antes de nebulización. En algunas realizaciones, la composición se almacena en un vial de un solo uso antes de la nebulización. En algunas realizaciones, el vial de un solo uso comprende 50 ml o menos de la composición. En algunas realizaciones, el vial de un solo uso comprende
40 ml o menos de la composición. En algunas realizaciones, el vial de un solo uso comprende 30 ml o menos de la composición. En algunas realizaciones, el vial de un solo uso comprende 20 ml o menos de la composición. En algunas realizaciones, el vial de un solo uso comprende 10 ml o menos de la composición. En algunas realizaciones, el vial de un solo uso comprende 9,0 ml o menos de la composición. En algunas realizaciones, el vial de un solo uso comprende 8,0 ml o menos de la composición. En algunas realizaciones, el vial de un solo uso comprende 7,0 ml o menos de la composición. En algunas realizaciones, el vial de un solo uso comprende 6,0 ml o menos de la composición. En algunas realizaciones, el vial de un solo uso comprende 5,0 ml o menos de la composición. En algunas realizaciones, el vial de un solo uso comprende entre 4,0 ml y 5,0 ml de la composición. En algunas realizaciones, el vial de un solo uso comprende 3,2 ml de la composición.
En esta invención, la administración pulmonar implica inhalación (por ejemplo, para administración nasal, traqueal o bronquial). En algunas realizaciones, la formulación de ARNm de CFTR se nebuliza antes de la inhalación. La nebulización puede conseguirse mediante cualquier nebulizador conocido en la técnica. Un nebulizador transforma un líquido en una bruma de modo que pueda inhalarse más fácilmente en los pulmones. Los nebulizadores son eficaces para lactantes, niños y adultos. Los nebulizadores pueden nebulizar grandes dosis de medicamentos inhalados. Un tipo de nebulizador es un nebulizador de chorro, que comprende tubos conectados a un compresor, que provoca que aire u oxígeno comprimido fluya a una alta velocidad a través de un medicamento líquido para convertirlo en un aerosol, que después se inhala por el paciente. Otro tipo de nebulizador es el nebulizador de onda ultrasónica, que comprende un oscilador electrónico que genera una onda ultrasónica de alta frecuencia, que provoca la vibración mecánica de un elemento piezoeléctrico, que está en contacto con un depósito de líquido. La vibración de alta frecuencia del líquido es suficiente para producir una bruma de vapor. Nebulizadores de onda ultrasónica ejemplares son el Omron NE-U17 y el Beurer Nebulizer IH30. Un tercer tipo de nebulizador comprende tecnología de malla vibrante (VMT). La VMT comprende malla/membrana con 1000-7000 orificios que vibra en la parte superior de un depósito de líquido y de ese modo hace salir por presión una bruma de gotas muy finas a través de los orificios en la malla/membrana. Nebulizadores VMT ejemplares incluyen Pari eFlow, Respironics i-Neb, Beurer Nebulizer IH50, Aerogen Aeroneb y Philips InnoSpire Go.
En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen que varía de 13,0 ml a 42,0 ml. En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen menor de o igual a 13,9 ml. En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen menor de o igual a 16,0 ml. En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen menor de o igual a 18,0 ml. En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen menos de o igual a 20,0 ml. En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen menor de o igual a 22,0 ml. En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen menor de o igual a 24,0 ml. En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen menos de o igual a 26,0 ml. En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen menor de o igual a 27,9 ml. En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen menor de o igual a 30,0 ml. En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen menos de o igual a 32,0 ml. En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen menor de o igual a 34,0 ml. En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen menor de o igual a 36,0 ml. En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen menos de o igual a 38,0 ml. En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen menor de o igual a 40,0 ml. En algunas realizaciones, el volumen de nebulización es a un volumen menor de o igual a 41,8 ml.
En algunas realizaciones, la duración de la nebulización varía de 1 minuto a 150 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 1 minuto. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 2 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 3 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 6 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 9 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 12 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 15 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 18 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 21 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 24 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 27 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 30 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 33 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 36 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 40 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 45 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 50 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 55 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 60 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 67 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 70 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 80 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 90 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 100 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 110 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 120 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 130 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 140 minutos. En algunas realizaciones, la duración de la nebulización es menor de o igual a 150 minutos.
En algunas realizaciones, el número de nebulizadores usados durante una sola sesión de nebulización varía de 2-8. En algunas realizaciones, se usa 1 nebulizadores durante una sola sesión de nebulización. En algunas realizaciones, se usan 2 nebulizadores durante una sola sesión de nebulización. En algunas realizaciones, se usan 3 nebulizadores durante una sola sesión de nebulización. En algunas realizaciones, se usan 4 nebulizadores durante una sola sesión de nebulización. En algunas realizaciones, se usan 5 nebulizadores durante una sola sesión de nebulización. En algunas realizaciones, se usan 6 nebulizadores durante una sola sesión de nebulización. En algunas realizaciones, se usan 7 nebulizadores durante una sola sesión de nebulización. En algunas realizaciones, se usan 8 nebulizadores durante una sola sesión de nebulización.
Eficacia terapéutica
De acuerdo con la presente invención, un ARNm de CFTR se administra a un paciente con CF que necesita tratamiento a una dosis terapéuticamente eficaz y un intervalo de administración durante un periodo de tratamiento suficiente para mejorar, estabilizar o reducir uno o más síntomas de fibrosis quística con respecto a un control. Los términos "tratar" o "tratamiento", como se usan en el contexto de fibrosis quística en este documento, se refieren a mejora de uno o más síntomas asociados con fibrosis quística, prevención o retardo de la aparición de uno o más síntomas de fibrosis quística, y/o reducción de la gravedad o frecuencia de uno o más síntomas de fibrosis quística. En algunas realizaciones, una dosis terapéuticamente eficaz de un ARNm de CFTR es o mayor de aproximadamente 2 mg, 4 mg, 6 mg, 8 mg, 10 mg, 12 mg, 14 mg, 16 mg, 18 mg, 20 mg, 22 mg, 24 mg, 26 mg, 28 mg, 30 mg, 32 mg, 34 mg, 36 mg, 38 mg o 40 mg por dosis o equivalente de la misma. En algunas realizaciones, una dosis terapéuticamente eficaz de un ARNm de CFTR es o menos de aproximadamente 50 mg, 48 mg, 46 mg, 44 mg, 42 mg, 40 mg, 38 mg, 36 mg, 34 mg, 32 mg, 30 mg, 28 mg, 26 mg, 24 mg, 22 mg, 20 mg, 18 mg, 16 mg, 14 mg, 12 mg, 10 mg, 8 mg, 6 mg o 4 mg por dosis o equivalente de la misma. En algunas realizaciones, una dosis terapéuticamente eficaz de un ARNm de CFTR es aproximadamente 2-50 mg, 4-45 mg, 4-40 mg, 6-40 mg, 6-38 mg, 6-36 mg, 6-34 mg, 6-32 mg, 6-30 mg, 6- 28 mg, 6-26 mg, 6-24 mg, 6-22 mg, 6-20 mg, 6-18 mg, 6-16 mg, 8-50 mg, 8 45 mg, 8-40 mg, 8- 38 mg, 8-36 mg, 8-34 mg, 8-32 mg, 8-30 mg, 8-28 mg, 8-26 mg, 8-24 mg, 8-22 mg o 8-20 mg por dosis o equivalente de la misma.
En algunas realizaciones, una dosis terapéuticamente eficaz de un ARNm de CFTR se administra diariamente, dos veces a la semana, semanalmente, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas, una vez cada cuatro semanas, mensualmente, una vez cada dos meses, una vez cada tres meses.
En algunas realizaciones, una dosis terapéuticamente eficaz de un ARNm de CFTR se administra durante un periodo de al menos dos semanas, tres semanas, cuatro semanas, un mes, dos meses, tres meses, cuatro meses, cinco meses, seis meses, siete meses, ocho meses, nueve meses, diez meses, once meses, doce meses, 1 año, 2 años, 3 años, 4 años, 5 años o 10 años.
En algunas realizaciones, un ARNm de CFTR se administra en combinación con uno o más potenciadores y/o correctores de CFTR. En algunas realizaciones, un ARNm de CFTR se administra en combinación con uno o más potenciadores de CFTR. En algunas realizaciones, un ARNm de CFTR se administra en combinación con uno o más correctores de CFTR. Potenciadores y/o correctores de CFTR adecuados incluyen ivacaftor (nombre comercial Kalydeco), lumacaftor (en una combinación con ivacaftor vendida con el nombre comercial Orkambi) o la combinación de ivacaftor y lumacaftor. Correctores adecuados adicionales incluyen tezacaftor, VX-659 y VX-445. En algunas realizaciones, un ARNm de CFTR se administra en combinación con uno o más tratamientos para CF diferentes, tales como hormonoterapias de remplazo, hormonoterapia de remplazo tiroideo, fármacos antiinflamatorios no esteroideos y dronabinol con receta (MARINOL) durante el tratamiento.
En algunas realizaciones, pueden administrarse potenciadores y/o correctores de CFTR y/u otros tratamientos para fibrosis quística antes de, simultáneamente con o posterior a la administración de un ARNm de CFTR de acuerdo con la presente invención. Por ejemplo, pueden administrarse potenciadores y/o correctores de CFTR y/u otros tratamientos para fibrosis quística 1 hora o más, 2 horas o más, 4 horas o más, 6 horas o más, 8 horas o más, 10 horas o más, 12 horas o más, 18 horas o más, 24 horas o más, 36 horas o más, 48 horas o más, 72 horas o más, 1 semana o más, 2 semanas o más, 3 semanas o más, o 1 mes o más antes o después de la administración de un ARNm de CFTR de acuerdo con la invención.
Ejemplos
Aunque determinados compuestos, composiciones y métodos de la presente invención se han descrito con especificidad de acuerdo con determinadas realizaciones, los siguientes ejemplos sirven únicamente para ilustrar los compuestos de la invención y no pretenden limitar la misma.
Ejemplo 1. Formulación de composición de ARNm/liposoma
Se sintetizó el ARN mensajero del regulador de la conductancia transmembranaria en fibrosis quística (CFTR) humano con codones optimizados por transcripciónin v itroa partir de un molde de ADN plasmídico que codifica el gen, que estuvo seguido de la adición de una estructura de capuchón 5' (Cap 1) (Fechter, P.; Brownlee, G.G.
"Recognition of mRNA cap structures by viral and cellular proteins" J. Gen. Virology 2005, 86, 1239-1249) y una cola de poli(A) 3' de aproximadamente 250 nucleótidos de longitud determinadas por electroforesis en gel. El ARNm que codifica la proteína CFTR también comprendía regiones no traducidas (UTR) 5' y 3'.
Una solución de base acuosa que comprendía el ARNm ejemplar que codifica la proteína CFTR se combinó con una solución lipídica a base de etanol, se aisló y se dializó en la formulación final apropiada para almacenamiento a -80 °C.
La solución lipídica contenía tres componentes lipídicos para formar nanopartículas lipídicas. Los tres componentes biodegradables contribuyeron todos a las características del producto farmacéutico final. El primer componente era el lípido ionizable, éster de imidazol colesterol (ICE). Esto producido un entorno cargado positivamente a bajo pH que facilita la encapsulación eficaz del ARNm cargado negativamente. También puede desempeñar una función clave en la interacción de superficie celular para permitir la captación celular. El segundo componente de la LNP fue 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DOPE). DOPE es un lípido zwiteriónico que se ha informado que tiene propiedades fusogénicas para potenciar la captación y liberación de la carga de fármaco. El componente final fue un lípido PEGilado (es decir, modificado con PEG) conocido como 1,2-dimiristoil-sn-glicerol, metoxipolietilenglicol (DMG-PEG-2K). La adición de este lípido PEGilado proporcionó control sobre el tamaño de partícula y la estabilidad de la nanopartícula y puede proporcionar propiedades mucopenetrantes potenciadas para la captación pulmonar. La relación de carga nominal de nitrógeno/fósforo (N/P) de la LNP fue 4 y el intervalo de tamaño de partícula promedio para el ARNm encapsulado en la LNP fue 40-60 nm.
Ejemplo 2. Dosificación de composición de ARNm de CFTR/liposoma
Estos estudios evaluaron una composición de ARNm de CFTR/liposoma en un modelo de rata Sprague-Dawley. No se observaron efectos adversos en el sistema nervioso central (SNC), sistema cardiovascular (CV) o la respiración. Evaluaciones del SNC
Se realizaron evaluaciones neuroconductuales en 6 machos/grupo antes de la dosificación y el día 1 (4 y 24 horas después de la dosificación). Se midieron la temperatura, humedad, nivel de ruido e iluminación de cada estancia y se registraron para garantizar que las variaciones en las condiciones del entorno eran mínimas durante todas las evaluaciones. No hubo efectos sobre el neurocomportamiento relacionados con el tratamiento con liposomas a base de ICE cargados con ARNm de hCFTR o control de vehículo liposómico a base de ICE a dosis inhaladas de hasta 6,70 mg/kg de liposomas a base de ICE cargados de ARNm de hCFTR.
Evaluaciones cardiovasculares
A ratas Sprague-Dawley macho (n = 5/grupo), a las que se les había implantado previamente dispositivos de telemetría, se les dosificó mediante inhalación solamente por la nariz liposomas a base de ICE cargados de ARNm de hCFTR durante hasta 6 horas a dosis diana de 0 (control de solución salina al 0,9 %) o 0,7, 3,75 o 6,4 mg/kg de liposomas a base de ICE cargados de ARNm de hCFTR o control de vehículo liposómico a base de ICE (LNP que no contiene ARNm suspendida en una solución que contiene trehalosa al 10 %) (dosis conseguidas de 0, 0,86, 3,52, 6,02 o 0 mg/kg, respectivamente). Para dosis diana a 0,7 y 3,75 mg/kg, se administró aire después del final de la exposición para hacer que el tiempo retenido total fuera equivalente entre todas las dosis. Cada día de dosis estuvo seguido de un periodo mínimo de reposo farmacológico de 7 días. Todos los animales se devolvieron a la colonia tras completarse todas las evaluaciones.
Los parámetros de telemetría incluyeron parámetros cardiovasculares (presión sistólica, diastólica, sanguínea media, presión diferencial, ritmo cardiaco y parámetros electrocardiográficos [PR, QRS, QT, QTc]), actividad y temperatura corporal. Otros parámetros evaluados durante el estudio fueron la viabilidad, observaciones clínicas y peso corporal. Las concentraciones de aerosol medias y las dosis administradas totales estimadas de liposomas a base de ICE cargados de ARNm de hCFTR y vehículo liposómico a base de ICE (lípido total) se resumen en la tabla 3.
Tabla 3. Concentraciones medias de liposoma cargado de ARNm de hCFTR y aerosol de liposoma y dosis administradas totales estimadas
a Media global de cada animal individual para cada grupo de tratamiento. Esta dosis refleja la dosis administrada total de ARNm de hCFTR.
Además de este estudio en ratas, también se realizaron evaluaciones cardiovasculares similar como estudios de dosis repetida en ratas y monos. En esos estudios de dosis repetida, no se observaron efectos relacionados con el artículo de ensayo en ningún parámetro CV evaluado hasta las dosis más altas evaluadas (6,7 mg/kg en ratas y 0,691 mg/kg en monos).
Evaluaciones respiratorias
Se evaluaron los efectos respiratorios de liposomas a base de ICE cargados de ARNm de hCFTR como parte de los estudios de una sola dosis y de dosis repetida en ratas y monos. Se observo un aumento en el volumen respiratorio por minuto después de la administración por inhalación de liposomas a base de ICE cargados de ARNm de hCFTR a ratas Sprague-Dawley, así como la frecuencia respiratoria y el volumen corriente, en todos los grupos de dosis hasta 6,4 mg/kg de liposomas a base de ICE cargados de ARNm de hCFTR, así como en controles de trehalosa al 10 %.
No se observaron efectos en los parámetros respiratorios, incluyendo la frecuencia respiratoria, el volumen corriente y el volumen respiratorio por minuto derivado después de administración por inhalación de liposomas a base de ICE cargados de ARNm de hCFTR a ratas Sprague-Dawley a dosis repetidas de hasta 6,7 mg/kg o macacos cangrejeros a dosis individuales o repetidas de hasta 0,85 mg/kg o 0,691 mg/kg, respectivamente.
Hay preocupación mínima respecto a ICE, DOPE y DMG-PEG 2000 como componentes de la composición desarrollada para administración por inhalación. En una evaluación de genotoxicidadin silico,se prevé que ICE sea negativo para la capacidad mutagénica bacteriana. Esto es coherente con los datos negativos de capacidad mutagénica/genotoxicidad que están disponibles para imidazol y ácido propiónico, los 2 componentes del resto de ácido imidazolpropiónico de ICE, y para colesterol. DOPE es una variante del glicerofosfolípido, fosfatidiletanolamina, que es un componente del tensioactivo pulmonar. Se esperaría que la degradación de DOPE siguiera una ruta similar a la de otros glicerofosfolípidos, con la formación final de etanolamina y ácido oleico, que están ambos presentes en la circulación en lactantes y adultos. Se prevé que DMG PEG 2000 tendrá baja toxicidad en función de la información para los productos de descomposición metabólica previstos PEG 2000 y ácido mirístico. Hay preocupación mínima de toxicidad local o sistémica en función de los datos de estudios con PEG de diversos tamaños, mientras el ácido mirístico es un ácido graso que está presente en la mayoría de grasas animales y vegetales y está presente en la circulación de lactantes y adultos.
Ejemplo 3. Farmacocinética
En el estudio de este ejemplo, a ratas Sprague-Dawley o monos se les dosificó durante hasta 6 horas (para ratas) o durante hasta 2 horas (para monos) mediante inhalación liposomas a base de ICE cargados de ARNm de hCFTR o los liposomas a base de ICE en solitario, y después se sacrificaron 24 horas después para medir los niveles de hCFTR en diversos tejidos. Las dosis diana se muestra en las tablas 4-6. Las dosis reales medidas fueron 420, 630 y 850 pg/kg para liposomas a base de ICE cargados de ARNm de hCFTR administrados a monos (correspondientes a las dosis diana en el encabezado de la tabla 4); 0,77, 4,05 y 6,70 mg/kg para los liposomas a base de ICE cargados de ARNm de hCFTR administrados a ratas (correspondientes a las dosis diana en el encabezado de la tabla 5); y 0,77, 4,05 y 6,70 mg/kg para liposomas a base de ICE administrados a ratas (correspondientes a las dosis diana en el encabezado de la tabla 6). Los resultados detallados de la distribución en tejidos se presentan a continuación en las tablas 4, 5 y 6.
Tabla 4. Concentraciones medidas de ARNm de hCFTR en tejidos de mono y sangre 24 horas después de
BQL: Por debajo del límite de cuantificación
a Niveles en tejido expresados como 106 x copias/g y niveles en sangre como 106 x copias/ml, para expresar los niveles en masas comparables ya que 1 ml de sangre ~ 1 g.
Tabla 5. Concentraciones medias de ARNm de hCFTR en tejidos de rata y sangre 24 horas después de dosis de li m r ARNm h FTR 7 7 4 m k
BLQ: por debajo del límite de cuantificación
Concentraciones en tejidos (copias x 106/g)/concentraciones en sangre (copias x 106/ml), con la suposición de que 1 ml de sangre = 1 g.
Tabla 6. Concentraciones medias de ICE en tejidos de rata (gg/g) y sangre (gg/ml) 24 horas después de la ifi i n r inh l i n li m r ARNm h FTR^ i 7 7 4 m k
BLQ: por debajo del límite de cuantificación
Concentraciones en tejidos (copias x 106/g)/concentraciones en sangre (copias x 106/ml), con la suposición de que 1 ml de sangre = 1 g.
Estos datos muestran altos niveles de ARNm en tejido pulmonar y secreciones asociadas del sistema respiratorio tales como la laringe, la tráquea, los ganglios linfáticos traqueobronquiales y los cornetes nasales con niveles menores o de fondo en corazón, cerebro, hígado, riñón, bazo, testículo y ovario, particularmente a dosis menores de administración, mostrando la dosis más alta distribución de ARNm de hCFTR entre diversos tejidos. Los niveles pulmonares fueron altos y sensibles a la dosis tanto en ratas como en NHP, con los niveles más altos observados a 6,4 mg/kg en ratas.
La cinética de eliminación pulmonar de ARNm se midió de forma fiable en ratas, ya que pudieron usarse más momentos de sacrificio que para monos. La figura 2 indica una reducción exponencial de un solo componente con una semivida de aproximadamente 2-3 días. Estaban disponibles solo dos datos puntuales para NHP (figura 3) y estos datos parecen coherentes con los datos de rata en vista de las diferencias en la dosis.
Como se muestra en la tabla 5, los niveles de ARNm en el pulmón fueron dependientes de la dosis de una manera relativamente lineal. Las mediciones en tejido pulmonar realizadas después de un periodo de recuperación de 28 días al final del estudio de 29 días mostraron una disminución en la exposición de aproximadamente 100 veces, similar a lo observado 28 días después del estudio de una sola dosis.
También se examinaron las toxicocinéticas de los liposomas de ICE. No hubo niveles medibles de liposomas de ICE en sangre completa. Sin embargo, hubo niveles medibles y sensibles a la dosis de liposomas de ICE en el tejido pulmonar en ratas (tabla 6).
Ejemplo 4. Actividad in v itro de hCFTR en células epiteliales bronquiales humanas
Este ejemplo ilustra un estudio donde el ARNm de hCFTR se transfectó en células epiteliales bronquiales humanas cultivadas, tras lo que la proteína expresada a partir del ARNm de hCFTR transfectado proporcionó un aumento significativo en el transporte de cloruro a través de la membrana de las células epiteliales bronquiales en comparación con el tampón, demostrando de este modo la eficacia funcional del ARNm transfectado. Los cambios en el transporte de cloruro a través de la membrana de las células epiteliales bronquiales se midieron por la salida de corriente de cortocircuito en un aparato de pinzamiento de voltaje epitelial Ussing (es decir, una cámara Ussing). Específicamente, usando un procedimiento de cámara Ussing establecido (Charles River Laboratories), el ARNm de hCFTR encapsulado en un liposoma que comprende ICE, DOPE y un lípido modificado con PEG se incubó durante 2 o 4 horas en el lado apical (mucoso) o basolateral (seroso), o ambos lados, de células epiteliales bronquiales humanas. También se incluyó un blanco de tampón como control, por ejemplo, para evaluar el transporte de cloruro mediante CFTR endógeno en las células. Después, se midió la actividad del canal de cloruro inducida por forskolina usando el ensayo con cámara Ussing. Después de la medida del cambio de corriente como indicativo del transporte de cloruro a través de la membrana de las células epiteliales bronquiales, se añadió un inhibidor de CFTR a las muestras para mostrar que el cambio de corriente se debía a la actividad CFTR.
Como se muestra en la figura 4, en comparación con el grupo de control (A. blanco de tampón), el tratamiento de la superficie epitelial apical (mucosa) durante 2 o 4 horas (muestras B y E, respectivamente) y las superficies epiteliales apical y basolateral (serosa) durante 2 horas (muestra C) con ARNm de hCFTR proporcionó un aumento significativo en la actividad del canal de cloruro. Además, la actividad de cloruro en todos los grupos se inhibió por el inhibidor-172 de CFTR. Los resultados de este estudio muestran que el ARNm de hCFTR administrado en un liposoma a células epiteliales bronquiales humanas produjo proteína CFTR activa en esas células. También muestra que la proteína CFTR activa producida a partir del ARNm de hCFTR proporcionó transporte de cloruro aumentado significativamente, en comparación con la proteína CFTR endógena, a través de las membranas celulares de las células epiteliales bronquiales humanas transfectadas.
Ejemplo 5. Distribución de hCFTR después de una sola dosis de composición de ARNm de hCFTR/liposoma en primates
En el estudio de este ejemplo, primates no humanos (NHP) se trataron con una sola exposición de aerosol de una composición de CO-ARNm de hCFTR/liposoma. Como se muestra en la figura 5, la tinción inmunohistoquímica (IHC) de secciones transversales de pulmón demuestran un aumento dependiente de la dosis en la intensidad para la detección de proteína hCFTR positiva. Además, cuando se detectó y cuantificó ARNm de hCFTR en tejidos de los NHP, se encontró una distribución amplia por todos los pulmones de los monos, con niveles de CO-hCFTR órdenes de magnitud (>200 veces) por encima de CFTR endógeno (figure 6). Además, los pulmones de los monos, que eran los órganos diana, recibieron >90 % de la dosis de CO-CFTR que entró en las vías respiratorias, en comparación con otros tejidos del sistema respiratorio que se ensayaron (figure 7).
Ejemplo 6. Tratamiento de sujetos con fibrosis quística con composición de CO-ARNm de hCFTR/liposomaEl estudio en este ejemplo se diseña para evaluar una composición de liposoma con CO-ARNm de CFTR en paciente con fibrosis quística.
Una composición de liposoma con CO-ARNm de hCFTR (composición de CO-hCFTR) se administra por nebulización a sujetos con fibrosis quística. La composición de CO-hCFTR se dosifica en función de su contenido de CO-ARNm de hCFTR. Se usará un nebulizador para administrar la composición de CO-hCFTR por nebulización a un caudal de aproximadamente 0,3 ml/minuto. La composición de CO-hCFTR se administrará a los sujetos a los siguientes 3 niveles de dosis: 8,0, 16,0 o 24,0 mg de CO-ARNm de hCFTR (niveles de dosis nominales) una vez o una vez a la semana durante cinco semanas. A otros sujetos se les dosificará control de placebo.
Para recibir tratamiento con administración de la composición de CO-hCFTR, los pacientes tendrán un diagnóstico confirmado de CF como se definen por todos los siguientes: un valor de cloruro en sudor de >60 mmol/l por iontoforesis cuantitativa de pilocarpina (documentada en el registro médico del sujeto), una mutación confirmada de CFTR que provoca enfermedad (genotipo confirmado en la visita de selección) y enfermedad senopulmonar crónica y/o anomalías gastrointestinales/nutricionales coherentes con enfermedad CF; enfermedad CF clínicamente estable, por ejemplo, FEVi >50 % y <90 % de lo normal previsto para la edad, sexo y estatura en la selección, saturación de oxígeno en reposo >92 % en aire ambiente (pulsioximetría) e índice de masa corporal >17,5 kg/m2 y peso >40 kg. Los sujetos que están recibiendo el fármaco de combinación de lumacaftor/ivacaftor (ORKAMBI) permanecerán con el mismo mientras dure el estudio preferiblemente a una dosis estable.
Los procedimientos y ensayos que se realizarán tanto para la selección de los sujetos como durante el estudio para evaluar la actividad biológica de la composición de liposoma con CO-ARNm de CFTR incluyen: constantes vitales, pulsioximetría, exploración física, espirometría, pruebas clínicas de laboratorio (química sérica, hematología, coagulación, análisis de orina, CRP), ECG, radiografía de tórax, cuestionario revisado de fibrosis quística (CFQ-R), prueba de embarazo en suero, informe de AE y medicamentos concomitantes, medición del peso, muestras de sangre para CO-ARNm de hCFTR y ensayos de ICE y muestras de sangre para ensayos de respuesta inmunitaria. Algunos sujetos también se someterán a broncoscopia.
Las células epiteliales bronquiales obtenidas durante las broncoscopias se prepararán para la cuantificación de CO-ARNm de hCFTR exógeno y ARNm de CFTR endógeno por qPCR, y para una evaluación cualitativa de la proteína CFTR por análisis de transferencia de Western.
Además, durante la broncoscopia, se realizarán mediciones de la diferencia de potencial de las vías respiratorias bajas para evaluar la actividad del canal de cloruro CFTR en el epitelio bronquial. Las mediciones de la diferencia de potencial se harán en la salida de la língula del pulmón izquierdo, como se describe por Dransfieldet al.(Dransfieldet al.,Chest. (2013) 144:498-506). Se registrará un potencial estable con el valor medio de un intervalo de puntuación de 10 segundos después de perfusión de cada solución. La actividad CFTR se estimará por el cambio en la diferencia de potencial después de perfusión con isoproterenol libre de cloruro.
El cuestionaron revisado de fibrosis quística (CFQ-R; versión para adolescentes y adultos [pacientes de 14 años de edad y mayores]) se completará por los sujetos para conseguir tano una puntuación basal como puntuaciones durante el estudio para comparaciones. Los resultados del dominio respiratorio del CFQ-R serán de interés principal; el cambio mínimo desde la medida inicial que represente una mejora clínicamente importante en el dominio respiratorio se determinará en >4 (Quittneret al., Chest.(2009) 135:1610-8).
Ejemplo 7. Colocalización de CFTR con proteína de membrana en células bronquiales de las vías respiratorias altas
Este ejemplo demuestra la expresión de la proteína CFTR en diversos tejidos pulmonares, incluyendo el epitelio bronquial alto, el epitelio bronquial bajo y el tejido alveolar después de administración por inhalación de ARNm de CFTR formulado en una nanopartícula lipídica. Este ejemplo demuestra además, a través de colocalización con la proteína de unión ocluyente de membrana endógena, ZO-1, que se encuentra en la membrana celular, que la proteína CFTR expresada a partir del ARNm de CFTR administrado está localizada en la membrana celular de tejido pulmonar, incluyendo células epiteliales pulmonares, tales como células epiteliales bronquiales de las vías respiratorias altas y células epiteliales bronquiales de las vías respiratorias bajas, así como en las membranas celulares de células alveolares.
Protocolo de estudio de colocalización:El método de inmunohistoquímica y estudio de colocalización descrito en este párrafo es común para los ejemplos 7, 8 y 9. La administración pulmonar del ARNm de CFTR en primates estuvo seguida de inmunohistoquímica para detectar la expresión de proteína y la colocalización en membrana en las células bronquiales de las vías respiratorias altas y células epiteliales de las vías respiratorias bajas y el pulmón alveolar profundo. Los primates en este estudio se agruparon en cinco categorías y se les administró lo siguiente: (1) control, trehalosa 10 %; (2) control, vehículo de LNP; (3) CO-hCFTR dosis baja, 500 pg/kg, (4) CO-hCFTR dosis media, 750 pg/kg, (5) CO-hCFTR dosis alta, 1000 pg/kg. La formulación de ARNm-LNP o los controles (sin ARNm) se administraron diariamente. Por consiguiente, los animales se expusieron durante 60 minutos a la composición de aerosol (grupo 3, dosis baja, 500 pg/kg), 90 minutos de aerosol (grupo 4, dosis media, 750 pg/kg) o 120 minutos de aerosol (grupo 5, dosis alta) como se describe en la tabla 4. Al final del estudio, los animales se sacrificaron y se recogieron los tejidos para inmunohistoquímica para detectar la expresión y localización de la proteína CFTR humana en los pulmones. Para la detección inmunohistoquímica de la proteína CFTR humana de codones optimizados, se incubaron secciones pulmonares durante una noche a 4 °C con una dilución 1:250 de cada uno de anticuerpo monoclonal de ratón anti-CFTR (MAB 25031, R & D Systems) y anticuerpo de conejo anti-ZO1 (Ab214228, Abecam); o con anti-CFTR en solitario; y anti-ZO1 en solitario. Después de incubación durante una noche, las secciones se bloquearon con primer agente de bloqueo que contiene peróxido de hidrógeno, se incubaron con el anticuerpo secundario (DyLight 594 antirratón para anticuerpo contra CFTR, y anticuerpo DyLight 488 anticonejo) y seguido de segundo bloqueo en una solución que contenía suero de caballo al 3 % y BSA al 3 % y se sometieron a microscopia confocal para la colocalización. DyLight 594 emite señal roja, y DyLight 488 emite verde, y tras la colocalización de las dos señales (y, por lo tanto, las proteínas que se unen cada una), la combinación óptica produce señal amarilla.
Como se muestra en la figura 8A, 8B y 8C, la proteína CFTR traducida a partir de ARNm de CFTR administrado se expresa en el sistema respiratorio alto en células epiteliales bronquiales. En el estudio ejemplar, la proteína derivada de ARNm de CFTR presentó una expresión dependiente de la dosis y se colocalizó con la proteína de unión ocluyente de membrana endógena ZO1 en la membrana de células epiteliales bronquiales altas. La figura 8A representa imágenes de microscopio representativas de células epiteliales bronquiales de un animal de control que recibió trehalosa al 10 % en solitario, visualizadas para tinción de CFTR (izquierda), tinción de ZO1 (centro) y combinación óptica de tinción de CFTR y ZO1 (derecha). La figura 8B representa imágenes de microscopio representativas de células epiteliales bronquiales de un animal que recibió dosis baja de ARNm de CFTR (500 pg/kg), visualizadas para tinción de CFTR (izquierda), tinción de ZO1 (centro) y combinación óptica de tinción de CFTR y ZO1 (derecha). La figura 8C representa imágenes de microscopio representativas de células epiteliales bronquiales de un animal que recibió dosis alta de ARNm de CFTR (1000 pg/kg), visualizadas para tinción de CFTR (izquierda), tinción de ZO1 (centro) y combinación óptica de tinción de CFTR y ZO1 (derecha). Como se indica en la figura, la expresión de CFTR fue dependiente de la dosis, es decir, la señal de inmunotinción fue más fuerte a la dosis más alta (imagen de la izquierda de la figura 8C) que a la dosis baja (figura 8B, imagen de la izquierda). Además, como es evidente por la colocación de las señales de CFTR y ZO1, CFTR y ZO1 se expresan en la membrana celular de las células epiteliales. Las dos proteínas se colocalizaban produciendo una señal intensificada, que era amarilla tras observación visual (imagen de la derecha de la figura 8B y 8C). No se observó señal roja correspondiente a CFTR en la figura 8A, lo que indica la especificidad de la tinción. Además, la señal óptica combinada no estaba intensificada y era monocromática para la señal de ZO-1 en solitario.
Ejemplo 8. Colocalización de CFTR con proteína de membrana en células epiteliales de las vías respiratorias bajas
Para un efecto terapéutico satisfactorio, el ARNm de CFTR administrado tiene que suministrarse a la parte baja de los pulmones. Como se muestra en la figura 9A, 9B y 9C, la proteína CFTR traducida a partir de ARNm de CFTR administrado se expresó en células epiteliales del sistema respiratorio bajo. La proteína derivada de ARNm de CFTR presentó una expresión dependiente de la dosis y colocalización con la proteína de unión ocluyente de membrana endógena ZO1 en la membrana de células epiteliales de las vías respiratorias bajas. La figura 9A muestra imágenes de microscopio representativas de una sección de tejido de la membrana de células epiteliales de las vías respiratorias bajas de un animal de control que recibió trehalosa al 10 % en solitario, visualizadas para tinción de CFTR (izquierda), tinción de ZO1 (centro) y combinación óptica de tinción de CFTR y ZO1 (derecha). La figura 9B muestra imágenes de microscopio representativas de una sección de tejido de la membrana de células epiteliales de las vías respiratorias bajas de un animal que recibió dosis baja de ARNm de CFTR (500 pg/kg), visualizadas para tinción de CFTR (izquierda), tinción de ZO1 (centro) y combinación óptica de tinción de CFTR y ZO1 (derecha). La figura 9C muestra imágenes de microscopio representativas de una sección de tejido de las vías respiratorias bajas de un animal que recibió dosis alta de ARNm de CFTR (1000 pg/kg), visualizadas para tinción de CFTR (izquierda), tinción de ZO1 (centro) y combinación óptica de tinción de CFTR y ZO1 (derecha). La intensidad de la expresión de CFTR fue mayor en la dosis alta (figura 9C, imagen de la izquierda) en comparación con la dosis baja (figura 9B, imagen de la izquierda). La imagen combinada en la figura 9C fue amarilla, lo que indica que las proteínas estaban colocalizadas, mientras la figura 9A no tuvo señal de CFTR (izquierda) como se esperaba del control.
Ejemplo 9. Expresión de proteína derivada de ARNm de CFTR en pulmón alveolar
El ARNm de CFTR se captó satisfactoriamente por células alveolares en el pulmón profundo. Como se muestra en la figura 10A, 10B y 10C, la proteína CFTR traducida a partir de ARNm de CFTR administrado se expresó en membranas de células alveolares y se colocalizó con proteína de unión ocluyente de membrana endógena ZO1 en la membrana de células alveolares. La figura 10A muestra imágenes de microscopio representativas de una sección de tejido de la membrana de células epiteliales de las vías respiratorias bajas de un animal de control que recibió trehalosa al 10 % en solitario, visualizadas para tinción de CFTR (izquierda), tinción de ZO1 (centro) y combinación óptica de tinción de CFTR y ZO1 (derecha). La figura 10B muestra imágenes de microscopio representativas de una sección de tejido de la membrana de células epiteliales de las vías respiratorias bajas de un animal que recibió dosis baja de ARNm de CFTR (500 pg/kg), visualizadas para tinción de CFTR (izquierda), tinción de ZO1 (centro) y combinación óptica de tinción de CFTR y ZO1 (derecha). La figura 10C muestra imágenes de microscopio representativas de una sección de tejido de las vías respiratorias bajas de un animal que recibió dosis alta de ARNm de CFTR (1000 pg/kg), visualizadas para tinción de CFTR (izquierda), tinción de ZO1 (centro) y combinación óptica de tinción de CFTR y ZO1 (derecha). La intensidad de la expresión de CFTR fue mayor en la dosis alta (figura 10C, imagen de la izquierda) en comparación con la dosis baja (figura 10B, imagen de la izquierda). La imagen combinada en la figura 10C fue amarilla, lo que indica que las proteínas estaban colocalizadas, mientras la figura 10A no tuvo señal de CFTR (izquierda) como se esperaba para el control.

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Una composición que comprende un ARNm de codones optimizados para su expresión en células humanas, que codifica una proteína de regulador de la conductancia transmembranaria en fibrosis quística (CFTR) que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, en donde el ARNm que codifica la proteína CFTR comprende una secuencia polinucleotídica al menos un 90 % idéntica a SEQ ID NO: 1, y en donde el ARNm está a una concentración de al menos 0,4 mg/ml, y en donde la composición comprende además un diluyente seleccionado del grupo que consiste en DMSO, etilenglicol, glicerol, 2-metil-2,4-pentanodiol (MPD), propilenglicol, sacarosa y trehalosa, en donde dicha composición es para su uso en un método de tratamiento de fibrosis quística (CF) en un sujeto, y la etapa de administración de la composición al sujeto comprende inhalación.
2. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el ARNm está a una concentración i) de al menos 0,5 mg/ml;
ii) de al menos 0,6 mg/ml; o
iii) que varía de 0,4 mg/ml a 0,8 mg/ml.
3. La composición para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la secuencia polinucleotídica es al menos un 95 % o al menos un 99 % idéntica a SEQ ID NO: 1, o es idéntica a SEQ ID NO: 1.
4. La composición para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la secuencia polinucleotídica es un 100 % idéntica a SEQ ID NO: 6 o SEQ ID NO: 7.
5. La composición para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la composición se nebuliza antes de la inhalación.
6. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, en donde la nebulización se consigue mediante un nebulizador que comprende tecnología de malla vibrante (VMT), opcionalmente en donde la VMT comprende una malla o membrana con 1000-7000 orificios que vibra en la parte superior de un depósito de líquido y de ese modo hace salir por presión una bruma de gotas muy finas a través de los orificios en la malla o membrana.
7. La composición para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la composición se
i) almacena como una suspensión estéril congelada antes de su administración; y/o
ii) almacena en un vial de un solo uso antes de su administración, opcionalmente en donde el vial de un solo uso puede comprender menos de 5,0 ml de la composición, opcionalmente en donde el vial de un solo uso comprende entre 3,0 y 4,0 ml de la composición; opcionalmente en donde el vial de un solo uso comprende 3,2 ml de la composición.
8. La composición para su uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-4, en donde la composición farmacéutica i) se almacena en forma de polvo seco liofilizado; y/o
ii) es estable en forma liofilizada en un estado congelado durante 1, 2, 3, 4, 5 o 10 años sin pérdida de actividad farmacológica o biológica del ARNm que codifica la proteína CFTR; y/o
iii) en forma liofilizada se reconstituye adicionalmente en una solución acuosa antes de su administración; opcionalmente en donde la solución acuosa es agua purificada.
9. La composición para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el ARNm que codifica la proteína CFTR:
i) está a una dosificación que varía de 8 mg a 24 mg; y/o
ii) comprende además una secuencia de región no traducida (UTR) 5' de SEQ ID NO: 3; y/o
iii) comprende además una secuencia de región no traducida (UTR) 3' de SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 5.
10. La composición para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el ARNm que codifica la proteína CFTR se encapsula dentro de una nanopartícula; opcionalmente en donde la nanopartícula es un liposoma.
11. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 10, en donde el liposoma comprende uno o más lípidos catiónicos, uno o más lípidos no catiónicos, y uno o más lípidos modificados con PEG.
12. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 10, en donde el liposoma comprende no más de tres componentes lipídicos distintos.
13. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde uno componente lipídico distinto es un lípido catiónico a base de esterol, o los no más de tres componentes lipídicos distintos son un lípido catiónico, un lípido no catiónico y un lípido modificado con PEG.
14. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 12 o 13, en donde el liposoma comprende éster de imidazol colesterol (ICE), 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DOPE) y 1,2-dimiristoil-sn-glicerol, metoxipolietilenglicol (DMG-PEG-2K); opcionalmente en donde ICE y DOPE están presentes a una relación molar de >1:1; ICE y DMG-PEG-2K están presentes a una relación molar de >10:1; o DOPE y DMG-PEG-2K están presentes a una relación molar de >5:1.
15. La composición para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10-14, en donde el liposoma tiene un tamaño menor de aproximadamente 100 nm; opcionalmente en donde el liposoma tiene un tamaño que varía de 40 nm a 60 nm.
ES18730550T 2017-05-16 2018-05-16 Codon-optimized mrna encoding cftr for use in treating cystic fibrosis Active ES2993135T3 (en)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762507061P 2017-05-16 2017-05-16
US201762532301P 2017-07-13 2017-07-13
US201762580782P 2017-11-02 2017-11-02
US201762592238P 2017-11-29 2017-11-29
US201862659053P 2018-04-17 2018-04-17
PCT/US2018/033011 WO2018213476A1 (en) 2017-05-16 2018-05-16 Treatment of cystic fibrosis by delivery of codon-optimized mrna encoding cftr

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2993135T3 true ES2993135T3 (en) 2024-12-23

Family

ID=62567807

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES18730550T Active ES2993135T3 (en) 2017-05-16 2018-05-16 Codon-optimized mrna encoding cftr for use in treating cystic fibrosis

Country Status (9)

Country Link
US (2) US11173190B2 (es)
EP (1) EP3624824B1 (es)
AU (1) AU2018268859B2 (es)
CA (1) CA3063531A1 (es)
ES (1) ES2993135T3 (es)
IL (1) IL270631B2 (es)
MA (1) MA49138A (es)
MX (1) MX2019013752A (es)
WO (1) WO2018213476A1 (es)

Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2663360T3 (es) 2011-06-08 2018-04-12 Translate Bio, Inc. Lípidos escindibles
MA45053A (fr) 2016-05-18 2019-03-27 Modernatx Inc Polynucléotides codant pour un régulateur de conductance transmembranaire de fibrose kystique pour le traitement de la fibrose kystique
CA3054062A1 (en) * 2017-02-27 2018-08-30 Translate Bio, Inc. Novel codon-optimized cftr mrna
MA49138A (fr) * 2017-05-16 2020-03-25 Translate Bio Inc Traitement de la fibrose kystique par administration d'arnm à codons optimisés codant pour la cftr
US20210220449A1 (en) * 2018-05-15 2021-07-22 Translate Bio, Inc. Subcutaneous Delivery of Messenger RNA
EP3883592A1 (en) * 2018-11-21 2021-09-29 Translate Bio, Inc. Treatment of cystic fibrosis by delivery of nebulized mrna encoding cftr
US20220323542A1 (en) * 2019-07-30 2022-10-13 Translate Bio, Inc. TREATMENT OF CYSTIC FIBROSIS BY DELIVERY OF NEBULIZED mRNA ENCODING CFTR
CN115515559A (zh) 2019-12-20 2022-12-23 翻译生物公司 信使rna的直肠递送
CA3165388A1 (en) 2019-12-20 2021-06-24 Translate Bio, Inc. Improved process of preparing mrna-loaded lipid nanoparticles
WO2021142245A1 (en) 2020-01-10 2021-07-15 Translate Bio, Inc. Compounds, pharmaceutical compositions and methods for modulating expression of muc5b in lung cells and tissues
US11969480B2 (en) 2020-02-25 2024-04-30 Translate Bio, Inc. Processes of preparing mRNA-loaded lipid nanoparticles
EP4138791A1 (en) * 2020-04-20 2023-03-01 Board of Regents, The University of Texas System Biologically active dry powder compositions and method of their manufacture and use
BR112022021918A2 (pt) * 2020-04-27 2023-03-14 Univ Iowa Res Found Composições e métodos para o tratamento de fibrose cística
CN115552021A (zh) 2020-04-27 2022-12-30 4D分子治疗有限公司 用于肺递送的腺相关变体、制剂和方法
US20230181619A1 (en) * 2020-05-07 2023-06-15 Translate Bio, Inc. Improved compositions for cftr mrna therapy
AU2021273502A1 (en) 2020-05-15 2023-02-02 Translate Bio, Inc. Lipid nanoparticle formulations for mRNA delivery
CA3194863A1 (en) * 2020-10-06 2022-04-14 Shrirang KARVE Improved process and formulation of lipid nanoparticles
US20220133631A1 (en) 2020-10-12 2022-05-05 Translate Bio, Inc. Process of preparing ice-based lipid nanoparticles
JP2023545128A (ja) 2020-10-12 2023-10-26 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド ｍＲＮＡ搭載脂質ナノ粒子を製造する改善された方法
WO2022081752A1 (en) 2020-10-14 2022-04-21 George Mason Research Foundation, Inc. Methods of lipid nanoparticle manufacture and compostions derived therefrom
WO2022099194A1 (en) * 2020-11-09 2022-05-12 Translate Bio, Inc. Improved compositions for delivery of codon-optimized mrna
JP2024511463A (ja) 2021-03-22 2024-03-13 リコード セラピューティクス，インク． 細胞への標的送達のための組成物および方法
EP4314290A4 (en) 2021-03-23 2025-01-15 Recode Therapeutics, Inc. POLYNUCLEOTIDE COMPOSITIONS, RELATED FORMULATIONS AND METHODS OF USE THEREOF
IL307319A (en) * 2021-03-31 2023-11-01 Rejuvenation Tech Inc Compositions and methods for delivery of rna
AU2022261865A1 (en) 2021-04-19 2023-11-30 Translate Bio, Inc. Improved compositions for delivery of mrna
EP4362920A1 (en) 2021-07-01 2024-05-08 Translate Bio, Inc. Compositions for delivery of mrna
US20230159449A1 (en) * 2021-11-03 2023-05-25 Arcturus Therapeutics, Inc. Lipid formulations containing nucleic acids and methods of treatment for cystic fibrosis
CN114557971B (zh) * 2022-04-25 2023-05-23 康希诺生物股份公司 一种核酸-脂质纳米颗粒的冷冻干燥保护剂及其制备方法和应用
KR20250115452A (ko) 2022-12-08 2025-07-30 리코드 테라퓨틱스, 인크. 지질 나노입자 조성물 및 이의 용도
WO2025111297A1 (en) * 2023-11-21 2025-05-30 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding cystic fibrosis transmembrane conductance regulator for the treatment of cystic fibrosis
US12364773B2 (en) 2023-12-01 2025-07-22 Recode Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions and uses thereof

Family Cites Families (452)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2647121A (en) 1951-02-02 1953-07-28 Ruth P Jacoby Diamine-bis-acetamides
US2819718A (en) 1953-07-16 1958-01-14 Isidore H Goldman Drainage tube
US2717909A (en) 1953-09-24 1955-09-13 Monsanto Chemicals Hydroxyethyl-keryl-alkylene-ammonium compounds
US2844629A (en) 1956-04-25 1958-07-22 American Home Prod Fatty acid amides and derivatives thereof
US3096560A (en) 1958-11-21 1963-07-09 William J Liebig Process for synthetic vascular implants
GB1072118A (en) 1962-12-01 1967-06-14 Sandoz Ag Amides of aminopropionic acid
FR1378382A (fr) 1962-12-01 1964-11-13 Sandoz Sa Amides de l'acide amino-propionique, utilisables en particulier pour le traitement des fibres textiles
JPS5141663B1 (es) 1966-03-12 1976-11-11
NL143127B (nl) 1969-02-04 1974-09-16 Rhone Poulenc Sa Versterkingsorgaan voor een defecte hartklep.
US3614955A (en) 1970-02-09 1971-10-26 Medtronic Inc Standby defibrillator and method of operation
US3614954A (en) 1970-02-09 1971-10-26 Medtronic Inc Electronic standby defibrillator
JPS5024216B1 (es) 1970-12-29 1975-08-14
US3945052A (en) 1972-05-01 1976-03-23 Meadox Medicals, Inc. Synthetic vascular graft and method for manufacturing the same
US3805301A (en) 1972-07-28 1974-04-23 Meadox Medicals Inc Tubular grafts having indicia thereon
JPS49127908A (es) 1973-04-20 1974-12-07
JPS5624664B2 (es) 1973-06-28 1981-06-08
US4013507A (en) 1973-09-18 1977-03-22 California Institute Of Technology Ionene polymers for selectively inhibiting the vitro growth of malignant cells
JPS5123537A (ja) 1974-04-26 1976-02-25 Adeka Argus Chemical Co Ltd Kasozaisoseibutsu
GB1527592A (en) 1974-08-05 1978-10-04 Ici Ltd Wound dressing
US3995623A (en) 1974-12-23 1976-12-07 American Hospital Supply Corporation Multipurpose flow-directed catheter
JPS5813576B2 (ja) 1974-12-27 1983-03-14 アデカ ア−ガスカガク カブシキガイシヤ 安定化された合成高分子組成物
US4281669A (en) 1975-05-09 1981-08-04 Macgregor David C Pacemaker electrode with porous system
DE2520814A1 (de) 1975-05-09 1976-11-18 Bayer Ag Lichtstabilisierung von polyurethanen
JPS5210847A (en) 1975-07-16 1977-01-27 Nippon Steel Corp Pinch roll
US4096860A (en) 1975-10-08 1978-06-27 Mclaughlin William F Dual flow encatheter
CA1069652A (en) 1976-01-09 1980-01-15 Alain F. Carpentier Supported bioprosthetic heart valve with compliant orifice ring
US4134402A (en) 1976-02-11 1979-01-16 Mahurkar Sakharam D Double lumen hemodialysis catheter
US4072146A (en) 1976-09-08 1978-02-07 Howes Randolph M Venous catheter device
US4335723A (en) 1976-11-26 1982-06-22 The Kendall Company Catheter having inflatable retention means
US4099528A (en) 1977-02-17 1978-07-11 Sorenson Research Co., Inc. Double lumen cannula
US4140126A (en) 1977-02-18 1979-02-20 Choudhury M Hasan Method for performing aneurysm repair
US4265745A (en) 1977-05-25 1981-05-05 Teijin Limited Permselective membrane
US4182833A (en) 1977-12-07 1980-01-08 Celanese Polymer Specialties Company Cationic epoxide-amine reaction products
US4180068A (en) 1978-04-13 1979-12-25 Motion Control, Incorporated Bi-directional flow catheter with retractable trocar/valve structure
EP0005035B1 (en) 1978-04-19 1981-09-23 Imperial Chemical Industries Plc A method of preparing a tubular product by electrostatic spinning
US4284459A (en) 1978-07-03 1981-08-18 The Kendall Company Method for making a molded catheter
US4227533A (en) 1978-11-03 1980-10-14 Bristol-Myers Company Flushable urinary catheter
US4375817A (en) 1979-07-19 1983-03-08 Medtronic, Inc. Implantable cardioverter
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
US5132418A (en) 1980-02-29 1992-07-21 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
DE3010841A1 (de) 1980-03-21 1981-10-08 Ulrich Dr.med. 6936 Haag Uthmann Katheder
US4308085A (en) 1980-07-28 1981-12-29 Jenoptik Jena Gmbh Process for the preparation of high molecular thermoplastic epoxide-amine-polyadducts
US4668777A (en) 1981-03-27 1987-05-26 University Patents, Inc. Phosphoramidite nucleoside compounds
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US4339369A (en) 1981-04-23 1982-07-13 Celanese Corporation Cationic epoxide-amine reaction products
US4373071A (en) 1981-04-30 1983-02-08 City Of Hope Research Institute Solid-phase synthesis of polynucleotides
US4401796A (en) 1981-04-30 1983-08-30 City Of Hope Research Institute Solid-phase synthesis of polynucleotides
US4406656A (en) 1981-06-01 1983-09-27 Brack Gillium Hattler Venous catheter having collapsible multi-lumens
US4475972A (en) 1981-10-01 1984-10-09 Ontario Research Foundation Implantable material
US4401472A (en) 1982-02-26 1983-08-30 Martin Marietta Corporation Hydraulic cement mixes and processes for improving hydraulic cement mixes
US4568329A (en) 1982-03-08 1986-02-04 Mahurkar Sakharam D Double lumen catheter
US4546499A (en) 1982-12-13 1985-10-15 Possis Medical, Inc. Method of supplying blood to blood receiving vessels
US4530113A (en) 1983-05-20 1985-07-23 Intervascular, Inc. Vascular grafts with cross-weave patterns
US4550447A (en) 1983-08-03 1985-11-05 Shiley Incorporated Vascular graft prosthesis
US4647416A (en) 1983-08-03 1987-03-03 Shiley Incorporated Method of preparing a vascular graft prosthesis
US5104399A (en) 1986-12-10 1992-04-14 Endovascular Technologies, Inc. Artificial graft and implantation method
US4710169A (en) 1983-12-16 1987-12-01 Christopher T Graham Urinary catheter with collapsible urethral tube
US4571241A (en) 1983-12-16 1986-02-18 Christopher T Graham Urinary catheter with collapsible urethral tube
US4737518A (en) 1984-04-03 1988-04-12 Takeda Chemical Industries, Ltd. Lipid derivatives, their production and use
US4562596A (en) 1984-04-25 1986-01-07 Elliot Kornberg Aortic graft, device and method for performing an intraluminal abdominal aortic aneurysm repair
US4782836A (en) 1984-05-24 1988-11-08 Intermedics, Inc. Rate adaptive cardiac pacemaker responsive to patient activity and temperature
US4897355A (en) 1985-01-07 1990-01-30 Syntex (U.S.A.) Inc. N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US4662382A (en) 1985-01-16 1987-05-05 Intermedics, Inc. Pacemaker lead with enhanced sensitivity
US4762915A (en) 1985-01-18 1988-08-09 Liposome Technology, Inc. Protein-liposome conjugates
US4860751A (en) 1985-02-04 1989-08-29 Cordis Corporation Activity sensor for pacemaker control
US5223263A (en) 1988-07-07 1993-06-29 Vical, Inc. Liponucleotide-containing liposomes
CA1320724C (en) 1985-07-19 1993-07-27 Koichi Kanehira Terpene amino alcohols and medicinal uses thereof
US4701162A (en) 1985-09-24 1987-10-20 The Kendall Company Foley catheter assembly
US4737323A (en) 1986-02-13 1988-04-12 Liposome Technology, Inc. Liposome extrusion method
US5153319A (en) 1986-03-31 1992-10-06 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
DE3616824A1 (de) 1986-05-17 1987-11-19 Schering Ag Verwendung von haertbaren kunstharzmischungen fuer oberflaechenbeschichtungen und druckfarben und verfahren zu ihrer herstellung
DE3780374D1 (de) 1986-07-31 1992-08-20 Irnich Werner Frequenzadaptierender herzschrittmacher.
US4960409A (en) 1986-09-11 1990-10-02 Catalano Marc L Method of using bilumen peripheral venous catheter with adapter
JPH0829776B2 (ja) 1986-10-29 1996-03-27 東燃化学株式会社 合成樹脂製容器及びその製造用金型
US4720517A (en) 1986-11-24 1988-01-19 Ciba-Geigy Corporation Compositions stabilized with N-hydroxyiminodiacetic and dipropionic acids and esters thereof
US4920016A (en) 1986-12-24 1990-04-24 Linear Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
DE3728917A1 (de) 1987-08-29 1989-03-09 Roth Hermann J Neue lipide mit unsymmetrisch substituierter disulfidbruecke
US4946683A (en) 1987-11-18 1990-08-07 Vestar, Inc. Multiple step entrapment/loading procedure for preparing lipophilic drug-containing liposomes
US5047540A (en) 1987-12-17 1991-09-10 Shionogi & Co., Ltd. Lipid derivatives
US5138067A (en) 1987-12-17 1992-08-11 Shionogi & Co. Ltd. Lipid derivatives
US4892540A (en) 1988-04-21 1990-01-09 Sorin Biomedica S.P.A. Two-leaflet prosthetic heart valve
US5176661A (en) 1988-09-06 1993-01-05 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Composite vascular catheter
US5024671A (en) 1988-09-19 1991-06-18 Baxter International Inc. Microporous vascular graft
US5200395A (en) 1988-10-18 1993-04-06 Ajinomoto Company, Inc. Pharmaceutical composition of BUF-5 for treating anemia
CA2001401A1 (en) 1988-10-25 1990-04-25 Claude Piantadosi Quaternary amine containing ether or ester lipid derivatives and therapeutic compositions
US5047524A (en) 1988-12-21 1991-09-10 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
US5262530A (en) 1988-12-21 1993-11-16 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
US6214804B1 (en) 1989-03-21 2001-04-10 Vical Incorporated Induction of a protective immune response in a mammal by injecting a DNA sequence
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
DK0465529T3 (da) 1989-03-21 1998-10-05 Vical Inc Ekspression af exogene polynukleotidsekvenser i et hvirveldyr
FR2645866B1 (fr) 1989-04-17 1991-07-05 Centre Nat Rech Scient Nouvelles lipopolyamines, leur preparation et leur emploi
US5194654A (en) 1989-11-22 1993-03-16 Vical, Inc. Lipid derivatives of phosphonoacids for liposomal incorporation and method of use
US5279833A (en) 1990-04-04 1994-01-18 Yale University Liposomal transfection of nucleic acids into animal cells
US5101824A (en) 1990-04-16 1992-04-07 Siemens-Pacesetter, Inc. Rate-responsive pacemaker with circuitry for processing multiple sensor inputs
US5264618A (en) 1990-04-19 1993-11-23 Vical, Inc. Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
EP0549590A1 (en) 1990-07-26 1993-07-07 LANE, Rodney James Self expanding vascular endoprosthesis for aneurysms
US5693338A (en) 1994-09-29 1997-12-02 Emisphere Technologies, Inc. Diketopiperazine-based delivery systems
DE9117152U1 (de) 1990-10-09 1996-07-11 Cook Inc., Bloomington, Ind. Stent
DE59008908D1 (de) 1990-12-19 1995-05-18 Osypka Peter Herzschrittmacherleitung mit einem inneren Kanal und mit einem Elektrodenkopf.
US5116360A (en) 1990-12-27 1992-05-26 Corvita Corporation Mesh composite graft
US5405363A (en) 1991-03-15 1995-04-11 Angelon Corporation Implantable cardioverter defibrillator having a smaller displacement volume
US5330768A (en) 1991-07-05 1994-07-19 Massachusetts Institute Of Technology Controlled drug delivery using polymer/pluronic blends
US5545449A (en) 1991-10-02 1996-08-13 Weyerhaeuser Company Polyether-reinforced fiber-based materials
US5151105A (en) 1991-10-07 1992-09-29 Kwan Gett Clifford Collapsible vessel sleeve implant
US5284491A (en) 1992-02-27 1994-02-08 Medtronic, Inc. Cardiac pacemaker with hysteresis behavior
US5352461A (en) 1992-03-11 1994-10-04 Pharmaceutical Discovery Corporation Self assembling diketopiperazine drug delivery system
SE9200951D0 (sv) 1992-03-27 1992-03-27 Kabi Pharmacia Ab Pharmaceutical composition containing a defined lipid system
DE69325096T2 (de) 1992-04-06 1999-09-30 Biosite Diagnostics Inc., San Diego Morphinderivate sowie deren konjugate und labels mit proteinen und polypeptiden
US6670178B1 (en) 1992-07-10 2003-12-30 Transkaryotic Therapies, Inc. In Vivo production and delivery of insulinotropin for gene therapy
EP0657534A4 (en) 1992-08-04 1997-06-04 Green Cross Corp ANTIALLERGIC AGENT.
US5334761A (en) 1992-08-28 1994-08-02 Life Technologies, Inc. Cationic lipids
US5461223A (en) 1992-10-09 1995-10-24 Eastman Kodak Company Bar code detecting circuitry
US5300022A (en) 1992-11-12 1994-04-05 Martin Klapper Urinary catheter and bladder irrigation system
US5496362A (en) 1992-11-24 1996-03-05 Cardiac Pacemakers, Inc. Implantable conformal coil patch electrode with multiple conductive elements for cardioversion and defibrillation
US5552155A (en) 1992-12-04 1996-09-03 The Liposome Company, Inc. Fusogenic lipsomes and methods for making and using same
US5716395A (en) 1992-12-11 1998-02-10 W.L. Gore & Associates, Inc. Prosthetic vascular graft
DE69422163T2 (de) 1993-02-19 2000-06-15 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Glycerolderivat, vorrichtung und pharmazeutische zusammensetzung
US5395619A (en) 1993-03-03 1995-03-07 Liposome Technology, Inc. Lipid-polymer conjugates and liposomes
US5697953A (en) 1993-03-13 1997-12-16 Angeion Corporation Implantable cardioverter defibrillator having a smaller displacement volume
US5624976A (en) 1994-03-25 1997-04-29 Dentsply Gmbh Dental filling composition and method
US5314430A (en) 1993-06-24 1994-05-24 Medtronic, Inc. Atrial defibrillator employing transvenous and subcutaneous electrodes and method of use
DE4325848A1 (de) 1993-07-31 1995-02-02 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von N-(2-Hydroxyethyl)-piperazin
DE69428057T2 (de) 1993-10-06 2002-04-18 Mitsubishi Jukogyo K.K., Tokio/Tokyo Verfahren zur Abscheidung von Kohlendioxid aus Verbrennungsabgasen
US5609624A (en) 1993-10-08 1997-03-11 Impra, Inc. Reinforced vascular graft and method of making same
SE9303481L (sv) 1993-10-22 1995-04-23 Berol Nobel Ab Hygienkomposition
WO1995013033A1 (en) 1993-11-08 1995-05-18 Lazarus Harrison M Intraluminal vascular graft and method
WO1995014651A1 (en) 1993-11-24 1995-06-01 Megabios Corporation Amphiphilic derivatives of piperazine
US5595756A (en) 1993-12-22 1997-01-21 Inex Pharmaceuticals Corporation Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents
US5464924A (en) 1994-01-07 1995-11-07 The Dow Chemical Company Flexible poly(amino ethers) for barrier packaging
US5844107A (en) 1994-03-23 1998-12-01 Case Western Reserve University Compacted nucleic acids and their delivery to cells
ATE234605T1 (de) 1994-04-12 2003-04-15 Liposome Co Inc Fusogene liposomen und verfahren zu deren herstellung und verwendung
US5858747A (en) 1994-07-20 1999-01-12 Cytotherapeutics, Inc. Control of cell growth in a bioartificial organ with extracellular matrix coated microcarriers
US5820873A (en) 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
US5885613A (en) 1994-09-30 1999-03-23 The University Of British Columbia Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes
US5641665A (en) 1994-11-28 1997-06-24 Vical Incorporated Plasmids suitable for IL-2 expression
US6071890A (en) 1994-12-09 2000-06-06 Genzyme Corporation Organ-specific targeting of cationic amphiphile/DNA complexes for gene therapy
US5965434A (en) 1994-12-29 1999-10-12 Wolff; Jon A. Amphipathic PH sensitive compounds and delivery systems for delivering biologically active compounds
US6485726B1 (en) 1995-01-17 2002-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US5830430A (en) 1995-02-21 1998-11-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Cationic lipids and the use thereof
JP2001523215A (ja) 1995-04-17 2001-11-20 イマークス ファーマシューティカル コーポレーション ハイブリッド磁気共鳴造影剤
US5772694A (en) 1995-05-16 1998-06-30 Medical Carbon Research Institute L.L.C. Prosthetic heart valve with improved blood flow
US5700642A (en) 1995-05-22 1997-12-23 Sri International Oligonucleotide sizing using immobilized cleavable primers
US5783383A (en) 1995-05-23 1998-07-21 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method of detecting cytomegalovirus (CMV)
US5981501A (en) 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
US5609629A (en) 1995-06-07 1997-03-11 Med Institute, Inc. Coated implantable medical device
JP4335310B2 (ja) 1995-06-07 2009-09-30 ザ ユニバーシティ オブ ブリティッシュ コロンビア 疎水性脂質−核酸複合中間体を通して調製される脂質−核酸粒子、及び遺伝子移送のための使用
US7422902B1 (en) 1995-06-07 2008-09-09 The University Of British Columbia Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5705385A (en) 1995-06-07 1998-01-06 Inex Pharmaceuticals Corporation Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5607385A (en) 1995-08-17 1997-03-04 Medtronic, Inc. Device and algorithm for a combined cardiomyostimulator and a cardiac pacer-carioverter-defibrillator
US5744335A (en) 1995-09-19 1998-04-28 Mirus Corporation Process of transfecting a cell with a polynucleotide mixed with an amphipathic compound and a DNA-binding protein
FR2740978B1 (fr) 1995-11-10 1998-01-02 Ela Medical Sa Dispositif medical actif du type defibrillateur/cardioverteur implantable
US5874105A (en) 1996-01-31 1999-02-23 Collaborative Laboratories, Inc. Lipid vesicles formed with alkylammonium fatty acid salts
AU2284697A (en) 1996-04-11 1997-10-29 University Of British Columbia, The Fusogenic liposomes
US5935936A (en) 1996-06-03 1999-08-10 Genzyme Corporation Compositions comprising cationic amphiphiles and co-lipids for intracellular delivery of therapeutic molecules
US5913848A (en) 1996-06-06 1999-06-22 Luther Medical Products, Inc. Hard tip over-the-needle catheter and method of manufacturing the same
US5677124A (en) 1996-07-03 1997-10-14 Ambion, Inc. Ribonuclease resistant viral RNA standards
US5736573A (en) 1996-07-31 1998-04-07 Galat; Alexander Lipid and water soluble derivatives of drugs
US7288266B2 (en) 1996-08-19 2007-10-30 United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Liposome complexes for increased systemic delivery
CA2264140A1 (en) 1996-08-26 1998-03-05 Transgene S.A. Cationic lipid-nucleic acid complexes
CA2271388C (en) 1996-09-13 2007-11-06 The School Of Pharmacy, University Of London Liposomes encapsulating polynucleotides operatively coding for immunogenic polypeptides
TW520297B (en) 1996-10-11 2003-02-11 Sequus Pharm Inc Fusogenic liposome composition and method
CA2270396C (en) 1996-11-04 2008-03-11 Qiagen Gmbh Cationic reagents for transfection
US6887665B2 (en) 1996-11-14 2005-05-03 Affymetrix, Inc. Methods of array synthesis
US5985930A (en) 1996-11-21 1999-11-16 Pasinetti; Giulio M. Treatment of neurodegenerative conditions with nimesulide
US6204297B1 (en) 1996-11-26 2001-03-20 Rhodia Inc. Nonionic gemini surfactants
JPH10197978A (ja) 1997-01-09 1998-07-31 Mitsubishi Paper Mills Ltd ハロゲン化銀写真感光材料
EP0853123A1 (de) 1997-01-10 1998-07-15 Roche Diagnostics GmbH Reinigung von DNA durch Cross-Flow-Filtration
FR2760193B1 (fr) 1997-02-28 1999-05-28 Transgene Sa Lipides et complexes de lipides cationiques et de substances actives, notamment pour la transfection de cellules
US5837283A (en) 1997-03-12 1998-11-17 The Regents Of The University Of California Cationic lipid compositions targeting angiogenic endothelial cells
US5945326A (en) 1997-03-20 1999-08-31 New England Biolabs, Inc. Method for cloning and producing the Spel restriction endonuclease
US6287591B1 (en) 1997-05-14 2001-09-11 Inex Pharmaceuticals Corp. Charged therapeutic agents encapsulated in lipid particles containing four lipid components
US6835395B1 (en) 1997-05-14 2004-12-28 The University Of British Columbia Composition containing small multilamellar oligodeoxynucleotide-containing lipid vesicles
US20030104044A1 (en) 1997-05-14 2003-06-05 Semple Sean C. Compositions for stimulating cytokine secretion and inducing an immune response
JPH115786A (ja) 1997-06-13 1999-01-12 Pola Chem Ind Inc 新規アミノヒドロキシプロピルピペラジン誘導体
US6067471A (en) 1998-08-07 2000-05-23 Cardiac Pacemakers, Inc. Atrial and ventricular implantable cardioverter-defibrillator and lead system
JPH1180142A (ja) 1997-09-05 1999-03-26 Pola Chem Ind Inc ジフェニルアルキル化合物の製造法
EP2292771A3 (en) 1997-09-19 2011-07-27 Life Technologies Corporation Sense mRNA therapy
US6165763A (en) 1997-10-30 2000-12-26 Smithkline Beecham Corporation Ornithine carbamoyltransferase
US6096075A (en) 1998-01-22 2000-08-01 Medical Carbon Research Institute, Llc Prosthetic heart valve
US6617171B2 (en) 1998-02-27 2003-09-09 The General Hospital Corporation Methods for diagnosing and treating autoimmune disease
US6271209B1 (en) 1998-04-03 2001-08-07 Valentis, Inc. Cationic lipid formulation delivering nucleic acid to peritoneal tumors
US6176877B1 (en) 1998-04-20 2001-01-23 St. Jude Medical, Inc. Two piece prosthetic heart valve
DE19822602A1 (de) 1998-05-20 1999-11-25 Goldschmidt Ag Th Verfahren zur Herstellung von Polyaminosäureestern durch Veresterung von sauren Polyaminosäuren oder Umesterung von Polyaminosäureestern
NO313244B1 (no) 1998-07-08 2002-09-02 Crew Dev Corp Fremgangsmåte for isolering og produksjon av magnesitt eller magnesiumklorid
US6055454A (en) 1998-07-27 2000-04-25 Cardiac Pacemakers, Inc. Cardiac pacemaker with automatic response optimization of a physiologic sensor based on a second sensor
EP1105169A1 (en) 1998-08-20 2001-06-13 Cook Incorporated Coated implantable medical device
US6210892B1 (en) 1998-10-07 2001-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Alteration of cellular behavior by antisense modulation of mRNA processing
US6656498B1 (en) 1998-11-25 2003-12-02 Vanderbilt University Cationic liposomes for gene transfer
US6248725B1 (en) 1999-02-23 2001-06-19 Amgen, Inc. Combinations and methods for promoting in vivo liver cell proliferation and enhancing in vivo liver-directed gene transduction
US6379698B1 (en) 1999-04-06 2002-04-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Fusogenic lipids and vesicles
WO2000062813A2 (en) 1999-04-20 2000-10-26 The University Of British Columbia Cationic peg-lipids and methods of use
US6169923B1 (en) 1999-04-23 2001-01-02 Pacesetter, Inc. Implantable cardioverter-defibrillator with automatic arrhythmia detection criteria adjustment
MXPA01010751A (es) 1999-04-23 2002-05-14 Alza Corp Enlace liberable y composiciones que contienen el mismo.
PL352332A1 (en) 1999-05-19 2003-08-11 Lexigen Pharm Corp Expression and export of interferon-alpha proteins as fc fusion proteins
US6696424B1 (en) 1999-05-28 2004-02-24 Vical Incorporated Cytofectin dimers and methods of use thereof
US6346382B1 (en) 1999-06-01 2002-02-12 Vanderbilt University Human carbamyl phosphate synthetase I polymorphism and diagnostic methods related thereto
AU6105300A (en) 1999-07-16 2001-02-05 Purdue Research Foundation Vinyl ether lipids with cleavable hydrophilic headgroups
PT1200578E (pt) 1999-07-23 2004-08-31 Genentech Inc Metodo para purificacao de adn de plasmideo sem solventes organicos e sem arnase utilizando filtracao de fluxo tangencial
US6358278B1 (en) 1999-09-24 2002-03-19 St. Jude Medical, Inc. Heart valve prosthesis with rotatable cuff
US6371983B1 (en) 1999-10-04 2002-04-16 Ernest Lane Bioprosthetic heart valve
US7060291B1 (en) 1999-11-24 2006-06-13 Transave, Inc. Modular targeted liposomal delivery system
EP1242609A2 (en) 1999-12-30 2002-09-25 Novartis AG Novel colloid synthetic vectors for gene therapy
US20010036454A1 (en) 2000-02-17 2001-11-01 Chester Li Genetic modification of the lung as a portal for gene delivery
US6370434B1 (en) 2000-02-28 2002-04-09 Cardiac Pacemakers, Inc. Cardiac lead and method for lead implantation
US6565960B2 (en) 2000-06-01 2003-05-20 Shriners Hospital Of Children Polymer composite compositions
EP1297169B1 (en) 2000-06-26 2012-08-08 Ethris Gmbh Method for transfecting cells using a magnetic field
IL138474A0 (en) 2000-09-14 2001-10-31 Epox Ltd Highly branched water-soluble polyamine oligomers, process for their preparation and applications thereof
US6998115B2 (en) 2000-10-10 2006-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
US7427394B2 (en) 2000-10-10 2008-09-23 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
USRE43612E1 (en) 2000-10-10 2012-08-28 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
AU2002214854A1 (en) 2000-10-25 2002-05-06 Inex Pharmaceuticals Corporation Lipid formulations for target delivery
GB0028361D0 (en) 2000-11-21 2001-01-03 Glaxo Group Ltd Method of separating extra chromosomal dna from other cellular components
US20020094528A1 (en) 2000-11-29 2002-07-18 Salafsky Joshua S. Method and apparatus using a surface-selective nonlinear optical technique for detection of probe-target interations
JP2002167368A (ja) 2000-12-01 2002-06-11 Nitto Denko Corp アルキル置換デンドリマーおよびその製造法
US20050004058A1 (en) 2000-12-07 2005-01-06 Patrick Benoit Sequences upstream of the carp gene, vectors containing them and uses thereof
DE10109897A1 (de) 2001-02-21 2002-11-07 Novosom Ag Fakultativ kationische Liposomen und Verwendung dieser
US20020192721A1 (en) 2001-03-28 2002-12-19 Engeneos, Inc. Modular molecular clasps and uses thereof
TW588032B (en) 2001-04-23 2004-05-21 Shinetsu Chemical Co New tertiary amine compound having ester structure and method for producing the same
US6585410B1 (en) 2001-05-03 2003-07-01 The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration Radiant temperature nulling radiometer
ES2344078T3 (es) 2001-06-05 2010-08-17 Curevac Gmbh Arnm estabilizado con un contenido de g/c aumentado para la terapia genetica.
CA2462144C (en) 2001-09-28 2016-09-20 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Micro-rna molecules
CA2466328A1 (en) 2001-11-09 2003-05-15 Bayer Healthcare Ag Isotopically coded affinity markers 3
DE10162480A1 (de) 2001-12-19 2003-08-07 Ingmar Hoerr Die Applikation von mRNA für den Einsatz als Therapeutikum gegen Tumorerkrankungen
DE10207178A1 (de) 2002-02-19 2003-09-04 Novosom Ag Komponenten für die Herstellung amphoterer Liposomen
DE10214983A1 (de) 2002-04-04 2004-04-08 TransMIT Gesellschaft für Technologietransfer mbH Vernebelbare Liposomen und ihre Verwendung zur pulmonalen Applikation von Wirkstoffen
US20030215395A1 (en) 2002-05-14 2003-11-20 Lei Yu Controllably degradable polymeric biomolecule or drug carrier and method of synthesizing said carrier
US7601367B2 (en) 2002-05-28 2009-10-13 Mirus Bio Llc Compositions and processes using siRNA, amphipathic compounds and polycations
ES2354607T3 (es) 2002-06-28 2011-03-16 Protiva Biotherapeutics Inc. Procedimiento y aparato para producir liposomas.
DE10229872A1 (de) 2002-07-03 2004-01-29 Curevac Gmbh Immunstimulation durch chemisch modifizierte RNA
US20040028804A1 (en) 2002-08-07 2004-02-12 Anderson Daniel G. Production of polymeric microarrays
EP1539936A2 (en) 2002-08-22 2005-06-15 Celltran Limited Cell culture surface
JP2006505644A (ja) 2002-11-04 2006-02-16 ジーイー・バイエル・シリコーンズ・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング・ウント・コンパニー・コマンジツトゲゼルシヤフト 線状ポリアミノおよび／またはポリアンモニウムポリシロキサン共重合体ｉ
CA2506843A1 (en) 2002-11-22 2004-06-10 Novo-Nordisk A/S 2,5-diketopiperazines for the treatment of obesity
US7169892B2 (en) 2003-01-10 2007-01-30 Astellas Pharma Inc. Lipid-peptide-polymer conjugates for long blood circulation and tumor specific drug delivery systems
WO2004066138A1 (ja) 2003-01-20 2004-08-05 Asahi Kasei Emd Corporation ポインティングデバイス
NZ542665A (en) 2003-03-05 2008-05-30 Senesco Technologies Inc Use of antisense oligonucleotides or siRNA to suppress expression of eIF-5A1
US20040224912A1 (en) 2003-05-07 2004-11-11 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of PAI-1 mRNA-binding protein expression
US7619017B2 (en) 2003-05-19 2009-11-17 Wacker Chemical Corporation Polymer emulsions resistant to biodeterioration
US7507859B2 (en) 2003-06-16 2009-03-24 Fifth Base Llc Functional synthetic molecules and macromolecules for gene delivery
WO2005028619A2 (en) 2003-09-15 2005-03-31 Massachusetts Institute Of Technology Nanoliter-scale synthesis of arrayed biomaterials and screening thereof
JP4842821B2 (ja) 2003-09-15 2011-12-21 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド ポリエチレングリコール修飾脂質化合物およびその使用
US20050069590A1 (en) 2003-09-30 2005-03-31 Buehler Gail K. Stable suspensions for medicinal dosages
BRPI0415204A (pt) 2003-10-10 2006-12-05 Powderject Vaccines Inc construção de ácido nucleico, métodos de obtenção da expressão em células de mamìferos de um polipeptìdeo de interesse, e de imunização com ácido nucleico, partìculas revestidas, receptáculo de dosagem para um dispositivo de liberação mediada por partìculas, dispositivo de liberação mediada por partìculas, e, sequência de promotor quimérico isolada purificada
WO2005037226A2 (en) 2003-10-17 2005-04-28 Georgia Tech Research Corporation Genetically engineered enteroendocrine cells for treating glucose-related metabolic disorders
KR20060111471A (ko) 2003-11-10 2006-10-27 니폰 가야꾸 가부시끼가이샤 디이모늄염 화합물 및 그의 용도
US7022214B2 (en) 2004-01-21 2006-04-04 Bio-Rad Laboratories, Inc. Carrier ampholytes of high pH range
US7556684B2 (en) 2004-02-26 2009-07-07 Construction Research & Technology Gmbh Amine containing strength improvement admixture
US20060228404A1 (en) 2004-03-04 2006-10-12 Anderson Daniel G Compositions and methods for treatment of hypertrophic tissues
US7799565B2 (en) 2004-06-07 2010-09-21 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid encapsulated interfering RNA
JP4764426B2 (ja) 2004-06-07 2011-09-07 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド カチオン性脂質および使用方法
US7670595B2 (en) 2004-06-28 2010-03-02 Merck Patent Gmbh Fc-interferon-beta fusion proteins
GB0418172D0 (en) 2004-08-13 2004-09-15 Ic Vec Ltd Vector
DE102004042546A1 (de) 2004-09-02 2006-03-09 Curevac Gmbh Kombinationstherapie zur Immunstimulation
DE102004043342A1 (de) 2004-09-08 2006-03-09 Bayer Materialscience Ag Blockierte Polyurethan-Prepolymere als Klebstoffe
AU2005300638A1 (en) 2004-11-05 2006-05-11 Novosom Ag Improvements in or relating to pharmaceutical compositions comprising an oligonucleotide as an active agent
GB0502482D0 (en) 2005-02-07 2005-03-16 Glaxo Group Ltd Novel compounds
WO2007086883A2 (en) 2005-02-14 2007-08-02 Sirna Therapeutics, Inc. Cationic lipids and formulated molecular compositions containing them
EP1869106B1 (en) 2005-03-28 2014-06-25 Dendritic Nanotechnologies, Inc. Janus dendrimers and dendrons
CA2611944A1 (en) 2005-06-15 2006-12-28 Massachusetts Institute Of Technology Amine-containing lipids and uses thereof
RS63964B1 (sr) 2005-08-23 2023-03-31 Univ Pennsylvania Rnk koja sadrži modifikovane nukleozide i postupci za njenu upotrebu
US9012219B2 (en) 2005-08-23 2015-04-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania RNA preparations comprising purified modified RNA for reprogramming cells
WO2007031091A2 (en) 2005-09-15 2007-03-22 Santaris Pharma A/S Rna antagonist compounds for the modulation of p21 ras expression
CN101346393B (zh) 2005-11-02 2015-07-22 普洛体维生物治疗公司 修饰的siRNA分子及其应用
US7238791B1 (en) 2005-12-16 2007-07-03 Roche Diagnostics Operations, Inc. 6-monoacetylmorphine derivatives useful in immunoassay
US20090221684A1 (en) 2005-12-22 2009-09-03 Trustees Of Boston University Molecules for Gene Delivery and Gene Therapy, and Methods of Use Thereof
CN100569877C (zh) 2005-12-30 2009-12-16 财团法人工业技术研究院 含多uv交联反应基的分枝状结构化合物及其应用
US20070281336A1 (en) 2006-04-14 2007-12-06 Epicentre Technologies Kits and methods for generating 5' capped RNA
US9085778B2 (en) 2006-05-03 2015-07-21 VL27, Inc. Exosome transfer of nucleic acids to cells
US20070275923A1 (en) 2006-05-25 2007-11-29 Nastech Pharmaceutical Company Inc. CATIONIC PEPTIDES FOR siRNA INTRACELLULAR DELIVERY
US8808681B2 (en) 2006-06-05 2014-08-19 Massachusetts Institute Of Technology Crosslinked, degradable polymers and uses thereof
US20090186805A1 (en) 2006-07-06 2009-07-23 Aaron Thomas Tabor Compositions and Methods for Genetic Modification of Cells Having Cosmetic Function to Enhance Cosmetic Appearance
ES2293834B1 (es) 2006-07-20 2009-02-16 Consejo Superior Investig. Cientificas Compuesto con actividad inhibidora de las interacciones ubc13-uev, composiciones farmaceuticas que lo comprenden y sus aplicaciones terapeuticas.
EP2046266A4 (en) 2006-07-21 2009-11-04 Massachusetts Inst Technology ENDMODICIFIED POLY (BETA AMINO ESTER) AND ITS USE
CA2665225C (en) 2006-10-03 2015-06-30 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid containing formulations
JP2010506838A (ja) 2006-10-12 2010-03-04 コペルニクス セラピューティクス インコーポレイテッド コドン最適化ｃｆｔｒ
DE102006051516A1 (de) 2006-10-31 2008-05-08 Curevac Gmbh (Basen-)modifizierte RNA zur Expressionssteigerung eines Proteins
WO2008140615A2 (en) 2006-12-21 2008-11-20 Novozymes, Inc. Modified messenger rna stabilizing sequences for expressing genes in bacterial cells
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
US8859229B2 (en) 2007-02-02 2014-10-14 Yale University Transient transfection with RNA
WO2008113364A2 (en) 2007-03-20 2008-09-25 Recepticon Aps Amino derivatives to prevent nephrotoxicity and cancer
JP5186126B2 (ja) 2007-03-29 2013-04-17 公益財団法人地球環境産業技術研究機構 新規トリアジン誘導体ならびにその製法およびそのガス分離膜としての用途
PT2144609E (pt) 2007-04-18 2015-02-06 Cornerstone Pharmaceuticals Inc Formulações farmacêuticas contendo derivados de ácido lipóico
WO2008137470A1 (en) 2007-05-01 2008-11-13 Pgr-Solutions Multi-chain lipophilic polyamines
US20090163705A1 (en) 2007-05-21 2009-06-25 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Cationic lipids
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
WO2009036280A1 (en) 2007-09-12 2009-03-19 Copernicus Therapeutics, Inc. Long-term in vivo transgene expression
JP5697450B2 (ja) 2007-10-02 2015-04-08 マリーナ バイオテック，インコーポレイテッド 核酸の送達のためのリポペプチド
WO2009046739A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating prostate cancer (pca)
US8592569B2 (en) 2007-11-22 2013-11-26 Japan Science And Technology Agency Small RNA-dependent translational regulatory system in cell or artificial cell model
AU2008333811B2 (en) 2007-12-04 2014-05-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides
AU2008342535B2 (en) 2007-12-27 2015-02-05 Arbutus Biopharma Corporation Silencing of polo-like kinase expression using interfering RNA
WO2009120247A2 (en) 2007-12-27 2009-10-01 The Ohio State University Research Foundation Lipid nanoparticle compositions and methods of making and using the same
CA2711236A1 (en) 2008-01-02 2009-07-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Screening method for selected amino lipid-containing compositions
AU2009234266B2 (en) 2008-04-11 2015-08-06 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
PL2279254T3 (pl) 2008-04-15 2017-11-30 Protiva Biotherapeutics Inc. Nowe preparaty lipidowe do dostarczania kwasów nukleinowych
US20090263407A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Abbott Laboratories Cationic Lipids and Uses Thereof
WO2009127230A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Curevac Gmbh MODIFIED (m)RNA FOR SUPPRESSING OR AVOIDING AN IMMUNOSTIMULATORY RESPONSE AND IMMUNOSUPPRESSIVE COMPOSITION
US8222221B2 (en) 2008-06-04 2012-07-17 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Modulation of gene expression through endogenous small RNA targeting of gene promoters
US20100035249A1 (en) 2008-08-05 2010-02-11 Kabushiki Kaisha Dnaform Rna sequencing and analysis using solid support
US8404198B2 (en) 2008-08-27 2013-03-26 Life Technologies Corporation Apparatus for and method of processing biological samples
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
EP3225621A1 (en) 2008-10-09 2017-10-04 Arbutus Biopharma Corporation Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
EP2349210B1 (en) 2008-10-16 2015-03-18 Marina Biotech, Inc. Processes and compositions for liposomal and efficient delivery of gene silencing therapeutics
US9080211B2 (en) 2008-10-24 2015-07-14 Epicentre Technologies Corporation Transposon end compositions and methods for modifying nucleic acids
US20120009222A1 (en) 2008-10-27 2012-01-12 Massachusetts Institute Of Technology Modulation of the immune response
CA2742954C (en) 2008-11-07 2018-07-10 Massachusetts Institute Of Technology Aminoalcohol lipidoids and uses thereof
PL2355851T3 (pl) 2008-11-10 2018-08-31 Arbutus Biopharma Corporation Nowe lipidy i kompozycje do dostarczania środków terapeutycznych
CN102216462A (zh) 2008-11-17 2011-10-12 安龙制药公司 用于核酸递送系统的支化阳离子脂质
EP2405921A4 (en) 2009-01-26 2013-05-22 Protiva Biotherapeutics Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR INACTIVATION OF APOLIPOPROTEIN C-III EXPRESSION
US20100222489A1 (en) 2009-02-27 2010-09-02 Jiang Dayue D Copolymer composition, membrane article, and methods thereof
NZ594995A (en) 2009-03-12 2013-06-28 Alnylam Pharmaceuticals Inc LIPID FORMULATED COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING EXPRESSION OF HUMAN KINESIN FAMILY MEMBER 11 (Eg5) AND VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR (VEGF) GENES
CN102334237B (zh) 2009-04-02 2015-05-13 西蒙公司 电信接线板
EP2419144B1 (en) 2009-04-17 2019-08-07 Oxford University Innovation Limited Composition for delivery of genetic material
EP2421506B1 (en) 2009-04-22 2015-08-19 Emory University Nanocarrier therapy for treating invasive tumors
EP3097908A1 (en) 2009-05-05 2016-11-30 Arbutus Biopharma Corporation Lipid compositions
DK2440183T3 (en) 2009-06-10 2018-10-01 Arbutus Biopharma Corp Improved lipid formulation
BRPI1010689A2 (pt) 2009-06-15 2016-03-15 Alnylam Pharmaceuticals Inc "dsrna formulado por lipídios direcionados para o gene pcsk9"
US9051567B2 (en) 2009-06-15 2015-06-09 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA
US8569256B2 (en) 2009-07-01 2013-10-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
US9018187B2 (en) 2009-07-01 2015-04-28 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
EP2449106B1 (en) 2009-07-01 2015-04-08 Protiva Biotherapeutics Inc. Compositions and methods for silencing apolipoprotein b
WO2011011447A1 (en) 2009-07-20 2011-01-27 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing ebola virus gene expression
US9040701B2 (en) 2009-07-30 2015-05-26 Laboratorios Salvat, S.A. Apaf-1 inhibitor compounds
CN105255881A (zh) 2009-07-31 2016-01-20 埃泽瑞斯公司 用于蛋白质表达的具有未修饰和修饰核苷酸的组合的rna
DE102009043342A1 (de) 2009-09-29 2011-03-31 Bayer Technology Services Gmbh Stoffe für selbstorganisierte Träger zur kontrollierten Freisetzung eines Wirkstoffs
LT3338765T (lt) 2009-12-01 2019-06-25 Translate Bio, Inc. Steroidiniai dariniai, skirti mrnr tiekimui, esant genetinėms ligoms
NO3112467T3 (es) 2009-12-07 2018-07-14
WO2011069529A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Curevac Gmbh Mannose-containing solution for lyophilization, transfection and/or injection of nucleic acids
EP2512449B1 (en) 2009-12-18 2019-08-07 The University of British Columbia Methods and compositions for delivery of nucleic acids
EP2338520A1 (de) 2009-12-21 2011-06-29 Ludwig Maximilians Universität Konjugat mit Zielfindungsligand und dessen Verwendung
EP2516010A2 (en) 2009-12-23 2012-10-31 Novartis AG Lipids, lipid compositions, and methods of using them
US20130123338A1 (en) 2010-05-12 2013-05-16 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel cationic lipids and methods of use thereof
MX341332B (es) 2010-06-03 2016-08-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc Lipidos biodegradables para la administracion de agentes activos.
CN101863544B (zh) 2010-06-29 2011-09-28 湖南科技大学 一种氰尿酸基重金属螯合絮凝剂及其制备方法
US9006417B2 (en) 2010-06-30 2015-04-14 Protiva Biotherapeutics, Inc. Non-liposomal systems for nucleic acid delivery
WO2012016184A2 (en) 2010-07-30 2012-02-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for delivery of active agents
EP3578205A1 (en) 2010-08-06 2019-12-11 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
WO2012019630A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded protein
EP2609135A4 (en) 2010-08-26 2015-05-20 Massachusetts Inst Technology POLY (BETA AMINO ALCOHOLS), THEIR PREPARATION AND USES THEREOF
BR112013007862A2 (pt) 2010-10-01 2019-09-24 Moderna Therapeutics Inc ácidos nucleicos manipulados e métodos de uso dos mesmos.
US8853377B2 (en) 2010-11-30 2014-10-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. mRNA for use in treatment of human genetic diseases
WO2012113413A1 (en) 2011-02-21 2012-08-30 Curevac Gmbh Vaccine composition comprising complexed immunostimulatory nucleic acids and antigens packaged with disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates
US9238716B2 (en) 2011-03-28 2016-01-19 Massachusetts Institute Of Technology Conjugated lipomers and uses thereof
WO2012133737A1 (ja) 2011-03-31 2012-10-04 公益財団法人地球環境産業技術研究機構 架橋性アミン化合物、該化合物を用いた高分子膜及びその製造方法
US8710200B2 (en) 2011-03-31 2014-04-29 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids encoding a modified erythropoietin and their expression
US11767534B2 (en) 2011-05-04 2023-09-26 The Broad Institute, Inc. Multiplexed genetic reporter assays and compositions
JP2014520084A (ja) 2011-05-17 2014-08-21 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッド 非ヒト脊椎動物用の改変核酸及びその使用方法
EP2532649B1 (en) 2011-06-07 2015-04-08 Incella GmbH Amino lipids, their synthesis and uses thereof
DK3586861T3 (da) 2011-06-08 2022-04-25 Translate Bio Inc Lipidnanopartikelsammensætninger og fremgangsmåder til mrna-indgivelse
ES2663360T3 (es) 2011-06-08 2018-04-12 Translate Bio, Inc. Lípidos escindibles
US9862926B2 (en) 2011-06-27 2018-01-09 Cellscript, Llc. Inhibition of innate immune response
WO2013039861A2 (en) 2011-09-12 2013-03-21 modeRNA Therapeutics Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2013039857A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 modeRNA Therapeutics Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
HRP20220250T1 (hr) 2011-10-03 2022-04-29 Modernatx, Inc. Modificirani nukleozidi, nukleotidi i nukleinske kiseline, te njihove uporabe
US8999950B2 (en) 2011-10-05 2015-04-07 Protiva Biotherapeutics Inc. Compositions and methods for silencing aldehyde dehydrogenase
CN104136419B (zh) 2011-10-27 2017-11-03 麻省理工学院 能够形成药物封装微球的在n末端上官能化的氨基酸衍生物
WO2013090186A1 (en) 2011-12-14 2013-06-20 modeRNA Therapeutics Modified nucleic acids, and acute care uses thereof
EP2791364A4 (en) 2011-12-14 2015-11-11 Moderna Therapeutics Inc PROCESS FOR RESPONSE TO A BIOLOGICAL THREAT
PT2791160T (pt) 2011-12-16 2022-07-04 Modernatx Inc Composições arnm modificado
JP2015510495A (ja) 2011-12-21 2015-04-09 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 器官または器官移植片の生存可能性または寿命を延長する方法
US20140371302A1 (en) 2011-12-29 2014-12-18 Modema Therapeutics, Inc. Modified mrnas encoding cell-penetrating polypeptides
HUE047947T2 (hu) 2011-12-30 2020-05-28 Cellscript Llc In vitro szintetizált ssRNS elõállítása és alkalmazása emlõssejtekbe történõ bevezetésre biológiai vagy biokémiai hatás indukálására
WO2013120497A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded therapeutic protein
KR20220045089A (ko) 2012-02-24 2022-04-12 아뷰터스 바이오파마 코포레이션 트리알킬 양이온성 지질 및 그의 사용 방법
CN104487055A (zh) 2012-03-29 2015-04-01 夏尔人类遗传性治疗公司 脂质衍生的中性纳米颗粒
JP6283655B2 (ja) 2012-03-29 2018-02-21 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド イオン化可能なカチオン性脂質
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US20140275229A1 (en) 2012-04-02 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides encoding udp glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide a1
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
JP6189415B2 (ja) 2012-04-02 2017-08-30 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． 細胞質および細胞骨格タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
JP2015518705A (ja) 2012-04-02 2015-07-06 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． ヒト疾患に関連する生物製剤およびタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
US20150050354A1 (en) 2012-04-02 2015-02-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the treatment of otic diseases and conditions
ES2864878T5 (es) 2012-06-08 2024-10-23 Translate Bio Inc Administración pulmonar de ARN, a células objetivo no pulmonares
EP2858677B1 (en) 2012-06-08 2020-08-05 ethris GmbH Pulmonary delivery of messenger rna
EP3536787A1 (en) 2012-06-08 2019-09-11 Translate Bio, Inc. Nuclease resistant polynucleotides and uses thereof
EP2882706A1 (en) 2012-08-13 2015-06-17 Massachusetts Institute of Technology Amine-containing lipidoids and uses thereof
WO2014093924A1 (en) 2012-12-13 2014-06-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleic acid molecules and uses thereof
EP2922554B1 (en) 2012-11-26 2022-02-23 ModernaTX, Inc. Terminally modified rna
CN104968795B (zh) * 2012-12-05 2021-07-20 索拉生物科学有限公司 增强蛋白表达的多肽
EP2929035A1 (en) 2012-12-07 2015-10-14 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Lipidic nanoparticles for mrna delivering
WO2014093574A1 (en) 2012-12-13 2014-06-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for altering cell phenotype
HK1217215A1 (zh) 2013-01-17 2016-12-30 Modernatx, Inc. 用於改变细胞表型的信号传感器多核苷酸
WO2014158795A1 (en) 2013-03-12 2014-10-02 Moderna Therapeutics, Inc. Diagnosis and treatment of fibrosis
WO2014159813A1 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
HK1219955A1 (zh) 2013-03-14 2017-04-21 Shire Human Genetic Therapies, Inc. 含4'-硫代修饰的核苷酸的核糖核酸及相关方法
CA2903487A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Quantitative assessment for cap efficiency of messenger rna
CN105051190A (zh) 2013-03-14 2015-11-11 夏尔人类遗传性治疗公司 信使rna的纯化方法
WO2014152940A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Mrna therapeutic compositions and use to treat diseases and disorders
JP6316930B2 (ja) 2013-03-14 2018-04-25 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド ＣＦＴＲｍＲＮＡ組成物ならびに関連する方法及び使用
MX2015011945A (es) 2013-03-14 2015-12-01 Shire Human Genetic Therapies Evaluacion cuantitativa para la eficacia de los casquetes de arn mensajero.
US10258698B2 (en) 2013-03-14 2019-04-16 Modernatx, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
US10087247B2 (en) 2013-03-14 2018-10-02 Translate Bio, Inc. Methods and compositions for delivering mRNA coded antibodies
WO2014144039A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Characterization of mrna molecules
ES2967701T3 (es) 2013-03-15 2024-05-03 Translate Bio Inc Mejora sinergística de la entrega de ácidos nucleicos mediante formulaciones mezcladas
EP2983804A4 (en) 2013-03-15 2017-03-01 Moderna Therapeutics, Inc. Ion exchange purification of mrna
EP2971165A4 (en) 2013-03-15 2016-11-23 Moderna Therapeutics Inc DISSOLUTION OF DNA FRAGMENTS IN MRNA MANUFACTURING METHODS
US20160017313A1 (en) 2013-03-15 2016-01-21 Moderna Therapeutics, Inc. Analysis of mrna heterogeneity and stability
WO2014152027A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Manufacturing methods for production of rna transcripts
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
EP2971161B1 (en) 2013-03-15 2018-12-26 ModernaTX, Inc. Ribonucleic acid purification
US9315472B2 (en) 2013-05-01 2016-04-19 Massachusetts Institute Of Technology 1,3,5-triazinane-2,4,6-trione derivatives and uses thereof
WO2014210356A1 (en) 2013-06-26 2014-12-31 Massachusetts Institute Of Technology Multi-tailed lipids and uses thereof
AU2014287009B2 (en) 2013-07-11 2020-10-29 Modernatx, Inc. Compositions comprising synthetic polynucleotides encoding CRISPR related proteins and synthetic sgRNAs and methods of use
EP3033325B1 (en) 2013-07-23 2019-12-04 Arbutus Biopharma Corporation Compositions and methods for delivering messenger rna
US20160194625A1 (en) 2013-09-03 2016-07-07 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
EP3041938A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
WO2015051169A2 (en) 2013-10-02 2015-04-09 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
EP3052479A4 (en) 2013-10-02 2017-10-25 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
EP3058082A4 (en) 2013-10-18 2017-04-26 ModernaTX, Inc. Compositions and methods for tolerizing cellular systems
JP6893785B2 (ja) 2013-10-22 2021-06-23 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド ｍＲＮＡのＣＮＳ送達及びその使用方法
US11224642B2 (en) 2013-10-22 2022-01-18 Translate Bio, Inc. MRNA therapy for argininosuccinate synthetase deficiency
JP6506749B2 (ja) 2013-10-22 2019-04-24 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド フェニルケトン尿症のためのｍＲＮＡ療法
WO2015085318A2 (en) 2013-12-06 2015-06-11 Moderna Therapeutics, Inc. Targeted adaptive vaccines
US20150167017A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
WO2015095340A1 (en) 2013-12-19 2015-06-25 Novartis Ag Lipids and lipid compositions for the delivery of active agents
RU2717986C2 (ru) 2013-12-30 2020-03-27 Куревак Аг Искусственные молекулы нуклеиновой кислоты
US20170002060A1 (en) 2014-01-08 2017-01-05 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides for the in vivo production of antibodies
CA2935878C (en) 2014-03-12 2023-05-02 Curevac Ag Combination of vaccination and ox40 agonists
WO2015164674A1 (en) 2014-04-23 2015-10-29 Moderna Therapeutics, Inc. Nucleic acid vaccines
CN106659731A (zh) 2014-05-30 2017-05-10 夏尔人类遗传性治疗公司 用于递送核酸的可生物降解脂质
CA3179824A1 (en) 2014-06-25 2015-12-30 Acuitas Therapeutics Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
EP3164379A1 (en) 2014-07-02 2017-05-10 Massachusetts Institute of Technology Polyamine-fatty acid derived lipidoids and uses thereof
BR112016030852A2 (pt) 2014-07-02 2018-01-16 Shire Human Genetic Therapies encapsulação de rna mensageiro
CR20170174A (es) 2014-10-02 2017-11-07 Protiva Biotherapeutics Inc Composiciones y métodos para el silenciamiento de la expresión cénica del virus de la hepatitis b
WO2016071857A1 (en) 2014-11-07 2016-05-12 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing ebola virus expression
WO2016077125A1 (en) 2014-11-10 2016-05-19 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules containing reduced uracil content and uses thereof
US20170362627A1 (en) 2014-11-10 2017-12-21 Modernatx, Inc. Multiparametric nucleic acid optimization
EP3247363A4 (en) 2015-01-21 2018-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions
EP3247398A4 (en) 2015-01-23 2018-09-26 Moderna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions
US20180245077A1 (en) 2015-03-20 2018-08-30 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for treating hypertriglyceridemia
WO2016164762A1 (en) 2015-04-08 2016-10-13 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor egf-a and intracellular domain mutants and methods of using the same
WO2016183366A2 (en) 2015-05-12 2016-11-17 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing expression of hepatitis d virus rna
US20180245074A1 (en) 2015-06-04 2018-08-30 Protiva Biotherapeutics, Inc. Treating hepatitis b virus infection using crispr
US10626393B2 (en) 2015-06-04 2020-04-21 Arbutus Biopharma Corporation Delivering CRISPR therapeutics with lipid nanoparticles
WO2016201377A1 (en) 2015-06-10 2016-12-15 Moderna Therapeutics, Inc. Targeted adaptive vaccines
LT3310764T (lt) 2015-06-19 2023-06-12 Massachusetts Institute Of Technology Alkenilu pakeisti 2,5-piperazindionai ir jų panaudojimas kompozicijose, skirtose agento pristatymui į subjektą ar ląstelę
FI3313829T3 (fi) 2015-06-29 2024-07-01 Acuitas Therapeutics Inc Lipidejä ja lipidinanohiukkasformulaatioita nukleiinihappojen annostelemiseksi
US20180208932A1 (en) 2015-07-29 2018-07-26 Arbutus Biopharma Corporation Compositions and methods for silencing hepatitis b virus gene expression
JP6948313B6 (ja) 2015-09-17 2022-01-14 モデルナティエックス インコーポレイテッド 治療剤の細胞内送達のための化合物および組成物
WO2017049286A1 (en) 2015-09-17 2017-03-23 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides containing a morpholino linker
WO2017049275A2 (en) 2015-09-17 2017-03-23 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides containing a stabilizing tail region
WO2017049074A1 (en) 2015-09-18 2017-03-23 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide formulations for use in the treatment of renal diseases
RS63986B1 (sr) 2015-10-28 2023-03-31 Acuitas Therapeutics Inc Novi lipidi i lipidne formulacije nanočestica za isporuku nukleinskih kiselina
US20190022247A1 (en) 2015-12-30 2019-01-24 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
PL3436077T3 (pl) 2016-03-30 2025-07-28 Intellia Therapeutics, Inc. Formulacje nanocząstek lipidowych dla składników crispr/cas
IL310050A (en) * 2016-11-10 2024-03-01 Translate Bio Inc An improved ICE-based lipid nanoparticle formulation for delivery of mRNA
MA49138A (fr) * 2017-05-16 2020-03-25 Translate Bio Inc Traitement de la fibrose kystique par administration d'arnm à codons optimisés codant pour la cftr

Also Published As

Publication number Publication date
AU2018268859A1 (en) 2019-12-12
IL270631B2 (en) 2024-03-01
EP3624824C0 (en) 2024-07-10
US11173190B2 (en) 2021-11-16
US20240299489A9 (en) 2024-09-12
MX2019013752A (es) 2020-07-20
AU2018268859B2 (en) 2024-07-25
EP3624824A1 (en) 2020-03-25
US20180333457A1 (en) 2018-11-22
US20220160827A1 (en) 2022-05-26
EP3624824B1 (en) 2024-07-10
IL270631B1 (en) 2023-11-01
WO2018213476A1 (en) 2018-11-22
IL270631A (es) 2020-01-30
CA3063531A1 (en) 2018-11-22
MA49138A (fr) 2020-03-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2993135T3 (en) Codon-optimized mrna encoding cftr for use in treating cystic fibrosis
US12195505B2 (en) Treatment of cystic fibrosis by delivery of nebulized mRNA encoding CFTR
US20230000781A1 (en) Dry Powder Formulations for Messenger RNA
US20210046192A1 (en) Stable compositions of mrna-loaded lipid nanoparticles and processes of making
ES2992127T3 (es) Nanopartículas lipídicas cargadas de ARNm mejoradas y sus procesos de fabricación
ES2972014T3 (es) Lípidos catiónicos de tioéster
US20230372440A1 (en) Improved process and formulation of lipid nanoparticles
ES2971849T3 (es) Compuestos lipídicos catiónicos y composiciones de los mismos para su uso en la administración de ARN mensajero
CN112533909A (zh) 维生素阳离子脂质
WO2020227085A1 (en) Di-thioester cationic lipids
WO2020097379A2 (en) Peg lipidoid compounds
US12370238B2 (en) Composition and methods for treatment of primary ciliary dyskinesia
WO2021231697A1 (en) Peg lipidoid compounds
ES3029073T3 (en) Treatment of cystic fibrosis by delivery of nebulized mrna encoding cftr
EA043901B1 (ru) ЛЕЧЕНИЕ КИСТОЗНОГО ФИБРОЗА ПУТЕМ ДОСТАВКИ КОДОН-ОПТИМИЗИРОВАННОЙ мРНК, КОДИРУЮЩЕЙ CFTR