ES2970864T3

ES2970864T3 - Moléculas de anticuerpos contra APRIL y usos de las mismas

Info

Publication number: ES2970864T3
Application number: ES16810195T
Authority: ES
Inventors: James Myette; Zachary Shriver; Karthik Viswanathan; Andrew Wollacott; Hedy Adari-Hall; Boopathy Ramakrishnan; Gregory Babcock
Original assignee: Visterra Inc
Current assignee: Visterra Inc
Priority date: 2015-11-25
Filing date: 2016-11-23
Publication date: 2024-05-31
Anticipated expiration: 2036-11-23
Also published as: EP4285923A2; CN109089419A; WO2017091683A1; JP2024073611A; DK3380522T5; DK3380522T3; LT3380522T; ZA201803366B; HUE064791T2; IL259585A; IL259585B2; CL2024000276A1; HK1254337A1; CN118027201A; NZ782606A; US20200331995A1; AU2016361488A1; KR102747820B1; US20250066464A1; MY197345A

Abstract

Se describen moléculas de anticuerpos que se unen específicamente a APRIL. Las moléculas de anticuerpo se pueden usar para tratar, prevenir y/o diagnosticar trastornos, tales como la nefropatía por IgA. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Moléculas de anticuerpos contra APRIL y usos de las mismas

CAMPO

[0001]La nefropatía IgA es una de las enfermedades glomerulares crónicas más prevalentes en todo el mundo. Estimaciones epidemiológicas conservadoras hablan de una incidencia mundial de aproximadamente 5-50 casos/millón (niños) y 10-40 casos/millón (adultos). Esta incidencia de la enfermedad presenta un sesgo regional con una mayor prevalencia en Asia y América, con una carga de morbilidad especialmente elevada en Japón y regiones de China. Los casos de nefropatía IgA confirmados por biopsia en Japón se estiman en aproximadamente 350.000. En EE.UU., esta proyección es de aproximadamente 100.000, por lo que es la enfermedad glomerular de primer grado más frecuentemente diagnosticada en adultos. Aunque se trata de una enfermedad relativamente indolente, la nefropatía por IgA conduce a la enfermedad renal terminal (ERT),es decir,a la insuficiencia renal en el 20-50% de los pacientes en un plazo de 20-30 años. Es probable que estas cifras estén muy infradeclaradas, dada la necesidad de confirmar la enfermedad mediante biopsia renal, un protocolo que se practica de forma variable en diversos entornos clínicos. La enfermedad tiene una patogénesis compleja con componentes genéticos, epidemiológicos y potencialmente ambientales en la etiología, patología y progresión de la enfermedad. Asimismo, tiene una presentación clínica variable que va desde la asintomática hasta la insuficiencia renal terminal (IRT). La nefropatía IgA está causada por el depósito de IgA, normalmente en forma de complejos inmunes en el mesangio del riñón. Actualmente no existen tratamientos específicos de la enfermedad para tratar la enfermedad primaria o la progresión.

[0002]Existe la necesidad de desarrollar nuevos enfoques para tratar, prevenir y diagnosticar la nefropatía por IgA y otros trastornos que comparten mecanismos de enfermedad similares.

[0003]El documento WO 2010/100056 se refiere a un compuesto de unión que se une a APRIL humano. Más específicamente, los documentos proporcionan composiciones de anticuerpos específicos anti-APRIL y métodos para utilizar dichos anticuerpos en la modulación de la actividad biológica APRIL, particularmente en enfermedades inflamatorias, inhibición de la proliferación celular y cáncer.

RESUMEN

[0004]La presente invención se define en las reivindicaciones adjuntas. En el presente documento se proporcionan otras realizaciones que no forman parte de la invención, pero que proporcionan otras implementaciones ejemplares de la divulgación. La presente divulgación proporciona, al menos en parte, moléculas de anticuerpos que se unen a APRIL,p. ej.,APRIL humano y/o de ratón, y que comprenden una o más propiedades funcionales y estructurales divulgadas en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo se une a y/o reduce(p. ej.,inhibe, bloquea o neutraliza) una o más actividades de APRIL. En una realización, la molécula de anticuerpo se une a una región de APRIL que interactúa con TACI(p. ej.,el dominio CRD2 de TACI). En una realización, la molécula de anticuerpo se une a uno o más residuos dentro de una región de APRIL humano como se define en cualquiera de lasTablas 3-4 o 7-8.Sin querer estar limitado por la teoría, se cree que en una realización, se puede lograr una inhibición mejorada u óptima de las actividades de APRIL, dirigiéndose a cierta(s) región(es) en APRIL(p. ej.,la(s) región(es) asociada(s) con las interacciones entre APRIL y el dominio CDR2 de TACI). En una realización, la molécula de anticuerpo se selecciona de la Tabla 1o 5,o compite por la unión a APRIL con una molécula de anticuerpo seleccionada de laTabla 1 o 5.En una realización, la molécula de anticuerpo se une al mismo epítopo o a un epítopo solapado que el epítopo reconocido por una molécula de anticuerpo seleccionada de laTabla 1 o 5.En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una o más regiones variables de cadena pesada y/o una o más regiones variables de cadena ligera descritas enla Tabla 1 o 5.En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una o más CDR de cadena pesada y/o una o más CDR de cadena ligera descritas enla Tabla 1 o 5.En una realización, también se proporcionan moléculas de ácido nucleico que codifican las moléculas de anticuerpo, vectores de expresión, células huésped, composiciones(p. ej.,composiciones farmacéuticas), kits, contenedores y métodos para fabricar las moléculas de anticuerpo. Las moléculas de anticuerpos aquí divulgadas pueden utilizarse (solas o en combinación con otros agentes o modalidades terapéuticas) para tratar, prevenir y/o diagnosticar trastornos asociados con APRIL, como la nefropatía IgA.

[0005]Por consiguiente, en ciertos aspectos, la presente divulgación proporciona una molécula de anticuerpo,p. ej.,una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento, que tiene una o más(p. ej.,1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, o 23) de las siguientes propiedades:

a) Se une a APRIL humano con alta afinidad,p. ej.,con una constante de disociación (K<d>) de menos de unos 100 nM, típicamente unos 10 nM, y más típicamente, unos 10-0,001 nM, unos 10-0,01 nM, unos 5-0,01 nM, unos 3-0,05 nM, unos 1-0,1 nM, o más fuerte,p. ej.,menos de aproximadamente 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 8, 6, 4, 3, 2, 1, 0,5, 0,2, 0,1, 0,05, 0,01, 0,005 o 0,001 nM,

b) Se une a APRIL de ratón con alta afinidad,p. ej.,con una constante de disociación (K<d>) de menos de unos 100 nM, típicamente unos 10 nM, y más típicamente, unos 10-0,001 nM, unos 10-0,01 nM, unos 5-0,01 nM, unos 3-0,05 nM, unos 1-0,1 nM, o más fuerte,p. ej.,menos de aproximadamente 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 8, 6, 4, 3, 2, 1, 0,5, 0,2, 0,1, 0,05, 0,01, 0,005 o 0,001 nM, c) No se une a APRIL de ratón, o se une a APRIL de ratón con baja afinidad,p. ej.,con una constante de disociación (K<d>) superior a 500 nM aproximadamente,p. ej.,superior a 1000 nM aproximadamente, d) No se une, o se une con baja afinidad,p. ej.,con una constante de disociación (K<d>) superior a aproximadamente 500 nM,p. ej.superior a aproximadamente 1000 nM, a una o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, o más) citocinas de la superfamilia TNF (TNFSF) distintas de APRIL(p. ej.,TNFa, CD40 (TNFSF4), FasL (TNFSF6), TRAIL (TNFSF10), RANKL (TNFSF11), Tweak (TNFSF12), BAFF (TNFSF13B), o LIGHT (TNFSF14)),

g) Se une a uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, o todos) residuos dentro de una región de APRIL como se define enla Tabla 3,o se une específicamente a un epítopo en APRIL,p. ej.,un epítopo que comprende uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos) residuos descritos en la Tabla 3,

g) Se une a uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o todos) residuos dentro de una región de APRIL como se define enla Tabla 4,o se une específicamente a un epítopo en APRIL,p. ej.,un epítopo que comprende uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o todos) residuos descritos en la Tabla 4, g) Se une a uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos) residuos dentro de una región de APRIL como se define enla Tabla 7,o se une específicamente a un epítopo en APRIL,p. ej.,un epítopo que comprende uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos) residuos descritos en la Tabla 7,

g) Se une a uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, o todos) residuos dentro de una región de APRIL como se define enla Tabla 8,o se une específicamente a un epítopo en APRIL,p. ej.,un epítopo que comprende uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos) residuos descritos en la Tabla 8,

i) Se une específicamente a un epítopo de APRIL,p. ej.,el mismo epítopo, similar o superpuesto al epítopo reconocido por un anticuerpo monoclonal descrito enla Tabla 1 o 5,p. ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419 1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621, 4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540 063, 4540-033, 4439 o 4237,

j) Reduce(p. ej.,inhibe, bloquea o neutraliza) una o más actividades biológicas de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón o ambas),in vitro, ex vivooin vivo,

k) Reduce(p. ej.,inhibe, bloquea o neutraliza) la unión de APRIL humano a TACI,p. ej.,a una IC50 de aproximadamente 50 nM o menos, típicamente de aproximadamente 0,01-50 nM, 0,1-25 nM, 0,1-10 nM, 0,5-5 nM, o 1-5 nM,p. ej.,inferior a aproximadamente 40, 30, 20, 10, 5, 1, 0,5, 0,2, 0,1, 0,05 o 0,01 nM,p. ej.,según se determine mediante un método descrito en el presente documento,

l) Reduce(p. ej.,inhibe, bloquea o neutraliza) la unión de APRIL de ratón a TACI,p. ej.,a una IC50 de aproximadamente 100 nM o menos, típicamente de aproximadamente 0,01-75 nM, 0,1-50 nM, 0,1-25 nM, 0,1-10 nM, 0,5-5 nM, o 1-5 nM,p. ej.,menos de aproximadamente 80, 60, 40, 20, 10, 5, 1, 0,5, 0,2, 0,1, 0,05 o 0,01 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento, m) Reduce(p. ej.,inhibe, bloquea o neutraliza) la unión de APRIL humano a BMCA,p. ej.,a una IC50 de aproximadamente 50 nM o menos, típicamente de aproximadamente 0,01-50 nM, 0,1-25 nM, 0,1-10 nM, 0,5-5 nM, o 1-5 nM,p. ej.,inferior a aproximadamente 40, 30, 20, 10, 5, 1, 0,5, 0,2, 0,1, 0,05 o 0,01 nM,p. ej.,según se determine mediante un método descrito en el presente documento,

n) Reduce(p. ej.,inhibe, bloquea o neutraliza) la unión de APRIL de ratón a BMCA,p. ej.,a una IC50 de aproximadamente 200 nM o menos, típicamente de aproximadamente 0,01-200 nM, 0,1-150 nM, 0,1 100 nM, 0,1-50 nM, 0,1-25 nM, 0,1-10 nM, 0,5-5 nM, o 1-5 nM,p. ej.,menos de aproximadamente 150, 100, 50, 40, 30, 20, 10, 5, 1, 0,5, 0,2, 0,1,0,05 o 0,01 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento,

o) Muestra la misma o similar afinidad o especificidad de unión, o ambas, que un anticuerpo monoclonal descrito enla Tabla 1 o 5,p. ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419 1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621,4035, 4035 062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439 o 4237,

p) Muestra la misma o similar afinidad o especificidad de unión, o ambas, que una molécula de anticuerpo que comprende una región variable de cadena pesada y/o una región variable de cadena ligera descritas enla Tabla 1 o 5,p. ej.,una región variable de cadena pesada y/o una región variable de cadena ligera de cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419 1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621,4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439 o 4237,

q) Muestra la misma o similar afinidad o especificidad de unión, o ambas, que una molécula de anticuerpo que comprende una o más(p. ej.,dos o tres) CDR de cadena pesada y/o una o más(p. ej.,dos o tres) CDR de cadena ligera descritas enla Tabla 1 o 5,p. ej.,una o más(p. ej.,dos o tres) CDR de cadena pesada y/o una o más (dos o tres) CDR de cadena ligera de cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621, 4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540 033, 4439 o 4237,

r) Muestra la misma o similar afinidad o especificidad de unión, o ambas, que una molécula de anticuerpo que comprende una secuencia de aminoácidos mostrada en la Tabla 1 o 5, s) Muestra la misma o similar afinidad o especificidad de unión, o ambas, que una molécula de anticuerpo que comprende una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótidos mostrada en la Tabla 2,

t) Inhibe,p. ej.,inhibe competitivamente, la unión de una segunda molécula de anticuerpo a APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos, donde la segunda molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo elegida de la Tabla 1 o 5,p. ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419 1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621, 4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439 o 4237, u) Compite por la unión con una segunda molécula de anticuerpo a APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos, en la que la segunda molécula de anticuerpo es un anticuerpo monoclonal elegido de la Tabla 1 o 5,p. ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419 0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621,4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439 o 4237,

v) Tiene una o más propiedades biológicas de un anticuerpo monoclonal elegido de la Tabla 1 o 5,p. ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419 0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621, 4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439 o 4237,

w) Tiene una o más propiedades estructurales de un anticuerpo monoclonal elegido de la Tabla 1 o 5,p. ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419 1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621, 4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439 o 4237, o

x) Tiene una o más propiedades farmacocinéticas de un anticuerpo monoclonal elegido de la Tabla 1 o 5,p. ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419 1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621, 4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439 o 4237.

[0006] En un aspecto, la divulgación presenta una molécula de anticuerpo anti-APRIL, que:

(i) se une, o se une sustancialmente, a la APRIL humano;

(ii) vincule, o vincule sustancialmente, al APRIL de ratón;

(iii) inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a TACI(p. ej.,TACI humano, TACI de ratón, o ambos); y

(iv) inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a BCMA(p. ej.,BCMA humano, BCMA de ratón, o ambos).

[0007] En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo sintética. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo aislada.

[0008] En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano a una EC<50>de 20 nM o menos,p. ej.,10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0,8 nM o menos, 0.6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos, 0,005 nM o menos, 0,002 nM o menos, o 0,001 nM o menos,p. ej.,entre 0,001 nM y 20 nM,p. ej.,entre 0,01 nM y 20 nM, entre 0,1 nM y 20 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, entre 1 nM y 5 nM, entre 0,001 nM y 0,1 nM, entre 0,001 nM y 0,01 nM, entre 0,001 nM y 0,005 nM, entre 0,01 nM y 0,05 nM, o entre 0,01 nM y 0,1 nM,p. ej.,según se determine por un método descrito en el presente documento.

[0009] En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL de ratón a una EC<50>de 100 nM o menos,p. ej.,80 nM o menos, 60 nM o menos, 40 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos, 0,005 nM o menos, 0,002 nM o menos, o 0,001 nM o menos,p. ej.,entre 0,001 nM y 100 nM,p. ej.,entre 0,001 nM y 50 nM, entre 0,01 nM y 20 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,5 nM y 5 nM o entre 1 nM y 5 nM, entre 0,001 nM y 0,1 nM, entre 0,001 nM y 0,01 nM, entre 0,001 nM y 0,005 nM, entre 0,01 nM y 0,05 nM, o entre 0,01 nM y 0,1 nM,p. ej.,según se determine por un método descrito en el presente documento.

[0010] En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a TACI(p. ej.,TACI humano, TACI de ratón, o ambos), a una IC50 de 50 nM o menos,p. ej.,40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, o 0,01 nM o menos,p. ej.,entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento.

[0011]En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a BCMA(p. ej.,,BCMA humano, BCMA de ratón, o ambos),p. ej.,a una IC50 de 200 nM o menos, 150 nM o menos, 100 nM o menos, 50 nM o menos, 40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos,p. ej.,entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento.

[0012]En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG,p. ej.,que comprende una región constante de cadena pesada de IgG,p. ej.,elegida entre IgG1, IgG2(p. ej.,IgG2a), IgG3 o IgG4,p. ej.,IgG2 o IgG4. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG1,p. ej.,que tiene una región constante IgG1 descrita en el presente documento. En otra realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG2,p. ej.,que tiene una región constante IgG2 descrita en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región constante de cadena ligera de cadena ligera kappa o lambda.

[0013]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región Fc. En una realización, la región Fc comprende una o más mutaciones localizadas en la interfaz entre los dominios CH2 y CH3(p. ej.,para aumentar la afinidad de unión al receptor neonatal FcRn y/o la semivida de la molécula de anticuerpo). En una realización, la región Fc comprende una o más mutaciones,p. ej.,una o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6 o todas) mutaciones elegidas entre T250Q, M252Y, S254T, T256E, M428L, H433K, N434F, o cualquier combinación de las mismas, de IgG1. En una realización, la región Fc comprende una o más mutaciones en las posiciones 233-236 o 322 de la IgG1 o IgG2 humana, o una o más sustituciones en las posiciones 327, 330 o 331 de la IgG4 humana(p. ej.,para reducir la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC)). En una realización, la región Fc comprende una o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7 o todas) mutaciones elegidas entre E233P, L234V, L235A, G236, K322A, A327G, A330S, P331S, o cualquier combinación de las mismas.

[0014]En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo humanizada,p. ej.,que comprende una o más regiones base derivadas de la secuencia de línea germinal base humana. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada (VH) descrita enla Tabla 1 o 5.En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera (VL) descrita enla Tabla 1 o 5.En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada (VH) y una región variable de cadena ligera (VL) descritas enla Tabla 1 o 5.En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una, dos o tres CDR de una región variable de cadena pesada (VH) descrita enla Tabla 1 o 5.En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una, dos o tres CDR de una región variable (VL) de cadena ligera descrita enla Tabla 1 o 5.En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una, dos o tres CDR de una región variable de cadena pesada (VH) descrita en la Tabla 1 o 5,y una, dos o tres CDR de una región variable de cadena ligera (VL) descrita enla Tabla 1 o 5.En una realización, la molécula de anticuerpo comprende dos regiones variables de cadena pesada y dos regiones variables de cadena ligera. En una realización, la molécula de anticuerpo es un Fab, F(ab')2, Fv, Fd, o un fragmento Fv de cadena simple (scFv).

[0015]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o más, residuos dentro de una región de APRIL humano como se define en cualquiera de lasTablas 3-4 o 7-8.

[0016]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o más, residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enla Tabla 3.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos, los residuos APRIL humanos de laTabla 3.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de laTabla 3.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende residuos APRIL de dos monómeros,p. ej.,uno o más residuos del monómero A y del monómero B como se muestra enla Tabla 3.

[0017]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o más, residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enla Tabla 4.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 4.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de laTabla 4.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende uno o más residuos APRIL del bucle C-D(p. ej.,el bucle que conecta las hojas p C y D), el bucle G-H(p. ej.,el bucle que conecta las hojas p G y H), o ambos.

[0018]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos, los residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enla Tabla 7.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 7.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de laTabla 7.

[0019]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos, los residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enla Tabla 8.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos, los residuos APRIL humanos de laTabla 8.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de laTabla 8.

[0020]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o todos) residuos de APRIL humano de las posiciones 105-114 y/o uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o todos) residuos de APRIL de ratón de las posiciones 96-105. En una realización, la molécula de anticuerpo no se une, o no se une sustancialmente, a uno, dos o todos los Asp129, Arg233, o His203 de APRIL humano. En una realización, el epítopo es un epítopo conformacional.

[0021]En una realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL(p. ej.,APRIL humano) inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión del dominio CRD2 de TACI(p. ej.,TACI humano) a APRIL(p. ej.,APRIL humano). En otra realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano, inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos, de los residuos APRIL de laTabla 3.En otra realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano, inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 4.En otra realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano, inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 7.En otra realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano, inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 8.En otra realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de BCMA humano, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 8.

[0022]En un aspecto, la divulgación presenta una molécula de anticuerpo que se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, o más, residuos dentro de una región de APRIL humano como se define en cualquiera de lasTablas 3-4 o 7-8.

[0023]En una realización, la molécula de anticuerpo anti-APRIL se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o más, de los residuos APRIL humanos de cualquiera de lasTablas 3-4 o 7-8.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo conformacional.

[0024]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o más, residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enla Tabla 3.En una realización, la molécula de anticuerpo anti-APRIL se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o está formado por uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos) de los residuos APRIL humanos de laTabla 3.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende residuos APRIL de dos monómeros,p. ej.,uno o más residuos del monómero A y del monómero B como se muestra enla Tabla 3.

[0025]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej., 2,3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o todos, los residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enla Tabla 4.En una realización, el epítopo está formado por uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o todos los residuos APRIL de latabla 4.En una realización, el epítopo comprende o consiste en uno o más residuos APRIL del bucle C-D(p. ej.,el bucle que conecta las hojas p C y D), el bucle G-H(p. ej.,el bucle que conecta las hojas p G y H), o ambos.

[0026]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos, los residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enlaTabla 7.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 7.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de laTabla 7.

[0027]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej., 2,3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos, los residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enla Tabla 8.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos, los residuos APRIL humanos de laTabla 8.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de laTabla 8.

[0028]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o todos) residuos de APRIL humano de las posiciones 105-114 y/o uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o todos) residuos de APRIL de ratón de las posiciones 96-105. En una realización, la molécula de anticuerpo no se une, o no se une sustancialmente, a uno, dos o todos los Asp129, Arg233, o His203 de APRIL humano.

[0029]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, o todos) de los residuos APRIL humanos de la Tabla 6.

[0030]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre V174, F176, Q190, R195, R206, o Y208. En una realización, la molécula de anticuerpo no se une, o no se une sustancialmente, a uno o más(p. ej.,2, 3, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre V181, S226, I228, o N237. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más(p. ej.,2, 3, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre F176, V181, Q190, o I228. En una realización, la molécula de anticuerpo no se une, o no se une sustancialmente, a uno o ambos de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre Y208 o N237. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más(p. ej.,2, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre V174, R206, o Y208. En una realización, la molécula de anticuerpo no se une, o no se une sustancialmente, a uno o más(p. ej.,2, 3, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre F176, V181, Q190, o N237.

[0031]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano y APRIL de ratón. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano, pero no se une a APRIL de ratón, o se une a APRIL de ratón con baja afinidad.

[0032]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano a una EC<50>de 20 nM o menos,p. ej.,10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0,8 nM o menos, 0.6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos, 0,005 nM o menos, 0,002 nM o menos, o 0,001 nM o menos,p. ej.,entre 0,001 nM y 20 nM,p. ej.,entre 0,01 nM y 20 nM, entre 0,1 nM y 20 nM,p. ej.,entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, entre 1 nM y 5 nM, entre 0,001 nM y 0,1 nM, entre 0,001 nM y 0,01 nM, entre 0,001 nM y 0,005 nM, entre 0,01 nM y 0,05 nM, o entre 0,01 nM y 0,1 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento.

[0033]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL de ratón a una EC<50>de 100 nM o menos,p. ej.,,80 nM o menos, 60 nM o menos, 40 nM o menos, 20 nM o menos,p. ej.,10 nM o menos,p. ej.,9 nM o menos 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0,8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0.4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos, 0,005 nM o menos, 0,002 nM o menos, o 0,001 nM o menos,p. ej.,entre 0,001 nM y 100 nM,p. ej.,entre 0,001 nM y 50 nM, entre 0,01 nM y 20 nM, entre 0,1 nM y 20 nM,p. ej.,entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, entre 1 nM y 5 nM, entre 0,001 nM y 0,1 nM, entre 0,001 nM y 0,01 nM, entre 0,001 nM y 0,005 nM, entre 0,01 nM y 0,05 nM, o entre 0,01 nM y 0,1 nM,p. ej.,según se determina por un método descrito en el presente documento.

[0034]En una realización, la molécula de anticuerpo no se une a APRIL de ratón, o se une a APRIL de ratón con baja afinidad,p. ej.,a una EC<50>de 1000 nM o más,p. ej.,2000 nM o más,p. ej.,como se determina por un método descrito en el presente documento.

[0035]En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a TACI(p. ej.,TACI humano,TACI de ratón, o ambos). En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a TACI(p. ej.,TACI humano, TACI de ratón, o ambos), a una IC<50>de 50 nM o menos,p. ej.,40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, o 0,01 nM o menos,p. ej.,entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento.

[0036]En una realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL(p. ej.,APRIL humano) inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión del dominio CRD2 de TACI(p. ej.,TACI humano) a APRIL(p. ej.,APRIL humano). En una realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 3.En una realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano, inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 4.En una realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 7.En una realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano, a uno o más,p. ej.,,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 8.En otra realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de BCMA humano, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 8.

[0037]En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a BCMA(p. ej.,BCMA humano, BCMA de ratón, o ambos). En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a BCMA(p. ej.,BCMA humano, BCMA de ratón, o ambos),p. ej.,a una IC50 de 200 nM o menos, 150 nM o menos, 100 nM o menos, 50 nM o menos, 40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos,p. ej.,entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento.

[0038]En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo sintética. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo aislada. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG,p. ej.,que comprende una región constante de cadena pesada de IgG,p. ej.,elegida entre IgG1, IgG2(p. ej.,IgG2a), IgG3 o IgG4,p. ej.,IgG2 o IgG4. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG1. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG2. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región constante de cadena ligera de cadena ligera kappa o lambda.

[0039]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región Fc. En una realización, la región Fc comprende una o más mutaciones localizadas en la interfaz entre los dominios CH2 y CH3(p. ej.,para aumentar la afinidad de unión al receptor neonatal FcRn y/o la semivida de la molécula de anticuerpo). En una realización, la región Fc comprende una o más mutaciones,p. ej.,una o más(p. ej.,2, 3, 4, 6 o todas) mutaciones elegidas entre T250Q, M252Y, S254T, T256E, M428L, H433K, N434F, o cualquier combinación de las mismas, de IgG1. En una realización, la región Fc comprende una o más mutaciones en las posiciones 233-236 o 322 de la IgG1 o IgG2 humana, o una o más sustituciones en las posiciones 327, 330 o 331 de la IgG4 humana(p. ej.,para reducir la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC)). En una realización, la región Fc comprende una o más(p. ej.,2, 3, 4, 6 7 o todas) mutaciones elegidas entre E233P, L234V, L235A, G236, K322A, A327G, A330S, P331S, o cualquier combinación de las mismas.

[0040]En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo humanizada,p. ej.,como se describe enla Tabla 1 o 5,p. ej.,que comprende una o más regiones base derivadas de la secuencia de línea germinal base humana.

[0041]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende dos regiones variables de cadena pesada y dos regiones variables de cadena ligera. En una realización, la molécula de anticuerpo es un Fab, F(ab')2, Fv, Fd, o un fragmento Fv de cadena simple (scFv).

[0042]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada (VH), en la que la región variable de cadena pesada comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3), en la que la región variable de cadena pesada comprende uno, dos o todos los siguientes: (i) una HCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR1 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 11) o un anticuerpo relacionado con 2419; (ii) una HCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR2 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 12) o un anticuerpo relacionado con 2419; o (iii) una HCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR3 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 13) o un anticuerpo relacionado con el 2419.

[0043]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera (VL), en la que la región variable de cadena ligera comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3), en la que la región variable de cadena ligera comprende uno, dos o todos los siguientes: (i) una LCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR1 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 14) o un anticuerpo relacionado con 2419; (ii) una LCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR2 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 15) o un anticuerpo relacionado con 2419; o (iii) una LCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR3 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 16) o un anticuerpo relacionado con el 2419.

[0044]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende:

(i) una VH que comprende uno, dos o todos los siguientes: una HCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR1 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 11) o un anticuerpo relacionado con 2419; una HCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR2 del anticuerpo monoclonal 2419 (p.ej.,SEQ ID N°: 12) o un anticuerpo relacionado con 2419; o una HCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR3 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 13) o un anticuerpo relacionado con 2419, y

(ii) una VL que comprende uno, dos, o todos los siguientes: una LCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2, o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR1 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 14) o un anticuerpo relacionado con 2419; una LCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR2 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 15) o un anticuerpo relacionado con 2419; o una LCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR3 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 16) o un anticuerpo relacionado con el 2419.

[0045]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende: (i) una VH que comprende: una HCDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la HCDR1 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 11) o un anticuerpo relacionado con 2419; una HCDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la HCDR2 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 12) o un anticuerpo relacionado con 2419; o una HCDR3 que comprenda la secuencia de aminoácidos de la HCDR3 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 13) o un anticuerpo relacionado con 2419, y (ii) una VL que comprenda: una LCDR1 que comprenda la secuencia de aminoácidos de la LCDR1 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 14) o un anticuerpo relacionado con 2419; una LCDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la LCDR2 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 15) o un anticuerpo relacionado con 2419; y una LCDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la LCDR3 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ iD N°: 16) o un anticuerpo relacionado con el 2419.

[0046]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada (VH), en la que la región variable de cadena pesada comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3), en la que la región variable de cadena pesada comprende uno, dos o todos los siguientes: (i) una HCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR1 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 17) o un anticuerpo relacionado con 2419; (ii) una HCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR2 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 18) o un anticuerpo relacionado con 2419; o (iii) una HCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR3 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 13) o un anticuerpo relacionado con el 2419.

[0047]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera (VL), en la que la región variable de cadena ligera comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3), en la que la región variable de cadena ligera comprende uno, dos o todos los siguientes: (i) una LCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR1 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 14) o un anticuerpo relacionado con 2419; (ii) una LCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR2 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 15) o un anticuerpo relacionado con 2419; o (iii) una LCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR3 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 16) o un anticuerpo relacionado con el 2419.

[0048]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende:

(i) una VH que comprende uno, dos o todos los siguientes: una HCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR1 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 17) o un anticuerpo relacionado con 2419; una HCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR2 del anticuerpo monoclonal 2419 (p.ej.,SEQ ID N°: 18) o un anticuerpo relacionado con 2419; o una HCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR3 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 13) o un anticuerpo relacionado con 2419, y

[0049]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende: (i) una VH que comprende: una HCDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la HCDR1 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 17) o un anticuerpo relacionado con 2419; una HCDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la HCDR2 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 18) o un anticuerpo relacionado con 2419; o una HCDR3 que comprenda la secuencia de aminoácidos de la HCDR3 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 13) o un anticuerpo relacionado con 2419, y (ii) una VL que comprenda: una LCDR1 que comprenda la secuencia de aminoácidos de la LCDR1 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 14) o un anticuerpo relacionado con 2419; una LCDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la LCDR2 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 15) o un anticuerpo relacionado con 2419; y una LCDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la LCDR3 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQD N°: 16) o un anticuerpo relacionado con el 2419.

[0050]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, o 15 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la VH del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 19) o un anticuerpo relacionado con el 2419. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VL que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, o 15 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la VL del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 20) o un anticuerpo relacionado con el 2419.

[0051]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende: (i) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, o 15 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la VH del anticuerpo monoclonal 2419 (p.ej.,SEQ ID N°: 19) o un anticuerpo relacionado con 2419; y (ii) una VL que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, o 15 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la VL del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 20) o un anticuerpo relacionado con el 2419.

[0052] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende: (i) una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de la V<h>del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 19) o un anticuerpo relacionado con 2419; y (ii) una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de la VL del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 20) o un anticuerpo relacionado con el 2419.

[0053] En una realización, la molécula de anticuerpo es el anticuerpo monoclonal 2419. En una realización, el anticuerpo monoclonal 2419 es un anticuerpo monoclonal humanizado 2419. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo relacionada con 2419,p. ej.,cualquiera de los anticuerpos 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310 o 2419-1406,p. ej.,como se describe en la Tabla 1 o 5. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N°: 209-214, 283, 288, 289, 291, 292, 294, 296, o 317, una VL que comprenda la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N°: 215-219, 284, 286, 295 o 316, o ambos.

[0054] En otro aspecto, la divulgación presenta una molécula de anticuerpo anti-APRIL, que:

(i) se une, o se une sustancialmente, a la APRIL humano;

(ii) inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a TACI(p. ej.,TACI humano, TACI de ratón, o ambos);

(iii) inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a BCMA(p.ej.,BCMA humano, BCMA de ratón, o ambos); y

(iv) se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o más, residuos dentro de una región de APRIL humano como se define en cualquiera de las Tablas 3-4 o 7-8.

[0055] En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano a una EC<50>de 20 nM o menos,p. ej.,10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0,8 nM o menos, 0.6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos, 0,005 nM o menos, 0,002 nM o menos, o 0,001 nM o menos,p. ej.,entre 0,001 nM y 20 nM,p. ej.,entre 0,01 nM y 20 nM, entre 0,1 nM y 20 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, entre 1 nM y 5 nM, entre 0,001 nM y 0,1 nM, entre 0,001 nM y 0,01 nM, entre 0,001 nM y 0,005 nM, entre 0,01 nM y 0,05 nM, o entre 0,01 nM y 0,1 nM,p. ej.,según se determine por un método descrito en el presente documento.

En una realización, la molécula de anticuerpo no se une a APRIL de ratón, o se une a APRIL de ratón con baja afinidad,p. ej.,a una EC<50>de 1000 nM o más,p. ej.,2000 nM o más,p. ej.,como se determina por un método descrito en el presente documento.

[0057] En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a TACI(p. ej.,TACI humano, TACI de ratón, o ambos), a una IC<50>de 50 nM o menos,p. ej.,40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, o 0,01 nM o menos,p. ej.,entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento.

[0058] En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a BCMA(p. ej.,BCMA humano, BCMA de ratón, o ambos),p. ej.,a una IC<50>de 200 nM o menos, 150 nM o menos, 100 nM o menos, 50 nM o menos, 40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos,p. ej.,entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento.

[0059] En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende residuos APRIL de dos monómeros,p. ej.,uno o más residuos del monómero A y del monómero B como se muestra en la Tabla 3. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más residuos APRIL del bucle C-D(p. ej.,el bucle que conecta las hojas p C y D), el bucle G-H(p. ej.,el bucle que conecta las hojas p G y H), o ambos. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o todos) residuos de APRIL humano de las posiciones 105-114 y/o a uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o todos) residuos de APRIL de ratón de las posiciones 96-105. En una realización, la molécula de anticuerpo no se une, o se une con baja afinidad, a uno, dos o todos los Asp129, Arg233, o His203 de APRIL humano.

[0060] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende uno o ambos de:

(i) una región variable de cadena pesada (VH) que comprenda uno, dos o todos los elementos siguientes una HCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR1 de un anticuerpo monoclonal elegido entre los anticuerpos 2218, 2419, 2419 0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3125, 2621, 4035, 4035-062, 3934, 4338, 4439, o 4237; una HCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR2 del (mismo) anticuerpo monoclonal; o una HCDR3 que comprenda una secuencia de aminoácidos que difiera en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de la secuencia de aminoácidos de la HCDR3 del (mismo) anticuerpo monoclonal, o que tenga al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con dicha secuencia, o

(ii) una región variable de cadena ligera (VL) que comprenda uno, dos o todos los elementos siguientes una LCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2, o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR1 del (mismo) anticuerpo monoclonal; una LCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR2 del (mismo) anticuerpo monoclonal; o una LCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de la secuencia de aminoácidos de la LCDR3 del (mismo) anticuerpo monoclonal, o que tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con la misma.

[0061]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende uno o ambos de:

(i) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, o 15 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la VH de un anticuerpo monoclonal elegido entre los anticuerpos 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419 0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3125, 2621, 4035, 4035-062, 3934, 4338, 4439, o 4237; o

(ii) una VL que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, o 15 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la VL del (mismo) anticuerpo monoclonal.

[0062]En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo sintética. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo aislada. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo humanizada,p. ej.,que comprende una o más regiones base derivadas de la secuencia de línea germinal base humana.

[0063]En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG,p. ej.,que comprende una región constante de cadena pesada de IgG,p. ej.,elegida entre IgG1, IgG2(p. ej.,IgG2a), IgG3 o IgG4,p. ej.,IgG2 o IgG4. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG1. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG2. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región constante de cadena ligera de cadena ligera kappa o lambda.

[0064]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región Fc. En una realización, la región Fc comprende una o más mutaciones localizadas en la interfaz entre los dominios CH2 y CH3(p. ej.,para aumentar la afinidad de unión al receptor neonatal FcRn y/o la semivida de la molécula de anticuerpo). En una realización, la región Fc comprende una o más mutaciones,p. ej.,una o más(p. ej.,2, 3, 4, 6 o todas) mutaciones elegidas entre T250Q, M252Y, S254T, T256E, M428L, H433K, N434F, o cualquier combinación de las mismas, de IgG1. En una realización, la región Fc comprende una o más mutaciones en las posiciones 233-236 o 322 de la IgG1 o IgG2 humana, o una o más sustituciones en las posiciones 327, 330 o 331 de la IgG4 humana(p. ej.,para reducir la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC)). En una realización, la región Fc comprende una o más(p. ej.,2, 3, 4, 6 7 o todas) mutaciones elegidas entre E233P, L234V, L235A, G236, K322A, A327G, A330S, P331S, o cualquier combinación de las mismas.

[0065]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende dos regiones variables de cadena pesada y dos regiones variables de cadena ligera. En una realización, la molécula de anticuerpo es un Fab, F(ab')2, Fv, Fd, o un fragmento Fv de cadena simple (scFv).

[0066]En un aspecto, la divulgación presenta un anticuerpo anti-APRIL, que:

a) compite por la unión a APRIL con una molécula de anticuerpo que comprende las regiones determinantes complementarias de la cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3) y las regiones determinantes complementarias de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3) de cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419 1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621, 4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540 063, 4540-033, 4439, o 4237,p.ej.g ,como se describe en las Tablas 1 o 5; o

b) se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa total o parcialmente con el epítopo de una molécula de anticuerpo que comprende las regiones determinantes complementarias de la cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3) y las regiones determinantes complementarias de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3) de cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218(p. ej.,SEQ ID N°: 1 6 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 3-8 según la numeración de Kabat), 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 11-16 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 13-18 según la numeración de Kabat), 2419 0105(p. ej.,SEQ ID N°: 11-13, 16, 280 y 281 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 13, 16, 17 y 280-282 según la numeración de Kabat), 2419-0205(p. ej.,SEQ ID N°: 11-13, 16, 280 y 281 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 13, 16, 17 y 280-282 según la numeración de Kabat), 2419-0206 (p. ej., SEQ ID N°: 11-13, 16, 280 y 285 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 13, 16, 17, 280, 282 y 285 según la numeración de Kabat), 2419-0406(p. ej.,SEQ ID N°: 11-13, 16, 280 y 285 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 13, 16, 17, 280, 285 y 290 según la numeración de Kabat), 2419 0605(p. ej.,SEQ ID N°: 11-13, 16, 280 y 281 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 13, 16, 17 y 280-282 según la numeración de Kabat), 2419-0805(p. ej.,SEQ ID N°: 11-13, 16, 280 y 281 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 13, 16, 17, 280, 281 y 287 según la numeración de Kabat), 2419 0806(p. ej.,SEQ ID N°: 11-13, 16, 280 y 285 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 13, 16, 17, 280, 285 y 287 según la numeración de Kabat), 2419-1204(p. ej.,SEQ ID N°: 11-13, 16, 280 y 293 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 13, 16, 17, 280, 282 y 293 según la numeración de Kabat), 2419-1205(p. ej.,SEQ ID N°: 11-13, 16, 280 y 281 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 13, 16, 17 y 280-282 según la numeración de Kabat), 2419-1210(p. ej.,SEQ ID N°: 11-13, 16, 314 y 315 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 13, 16, 17, 282, 314 y 315 según la numeración de Kabat), 2419-1305(p. ej.,SEQ ID N°: 11-13, 16, 280 y 281 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 13, 16, 17 y 280-282 según la numeración de Kabat), 2419-1306 (p.ej.,SEQ ID N°: 11-13, 16, 280 y 285 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 13, 16, 17, 280, 282 y 285 según la numeración de Kabat), 2419-1310(p. ej.,SEQ ID N°: 11-13, 16, 314 y 315 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 13, 16, 17, 282, 314 y 315 según la numeración de Kabat), 2419-1406(p. ej.,SEQ ID N°: 11-13, 16, 280 y 285 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 13, 16, 17, 280, 282 y 285 según la numeración de Kabat), 2922(p. ej.,SEQ ID N°: 21 y 32-36 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 33-38 según la numeración de Kabat), 3327(p. ej.,SEQ ID N°: 51-56 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 53-58 según la numeración de Kabat), 3530(p. ej.,SEQ ID N°: 61-63, 67, 45 y 46 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 63-65, 67, 45 y 46 según la numeración de Kabat), 3525(p. ej.,SEQ ID N°: 44-46 y 61-63 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 44-46 y 63-65 según la numeración de Kabat), 3125(p. ej.,SEQ ID N°: 11 y 42-46 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 43-48 según el número de Kabat), 2621(p. ej.,S<e>Q ID N°: 21-26 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 23-28 según la numeración de Kabat), 4035(p. ej.,SEQ ID N°: 93-98 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 95-100 según la numeración de Kabat), 4035-062(p. ej.,SEQ ID N°: 93-98 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 95-99 y 273 según la numeración de Kabat), 3934(p. ej.,SEQ ID N°: 103-108 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 105-110 según la numeración de Kabat), 3833(p. ej.,SEQ ID N°: 113-118 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 115-120 según la numeración de Kabat), 3631(p. ej.,SEQ ID N°: 123-128 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 125-130 según la numeración de Kabat), 3732(p. ej.,SEQ ID N°: 127 y 133-137 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 127 y 135-139 según la numeración de Kabat), 4338(p. ej.,SEQ ID N°: 11, 107 y 142-145, o SEQ ID N°: 11, 142, 143 y 146-148 según la numeración de Chothia; o SEQ ID N°: 107, 143-145 y 149-150, o SEQ ID N°: 143 y 146-150 según la numeración de Kabat), 4540(p. ej.,SEQ ID N°: 116 y 154-158 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 116 y 156-160 según la numeración de Kabat), 4540-063(p. ej.,SEQ ID N°: 154-156, 158, 274 y 275 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 156, 158 y 274-277 según la numeración de Kabat), 4540-033(p. ej.,SEQ ID N°: 154-156, 158, 274 y 275 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 156, 158, 159, 274, 275 y 278 según la numeración de Kabat), 4439(p. ej.,SEQ ID N°: 146-148 y 266-268 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 146-148 y 269-270 según la numeración de Kabat), o 4237(p. ej.,SEQ ID N°: 163-168 según la numeración de Chothia o SEQ ID N°: 165-170 según la numeración de Kabat),p. ej.,como se describe en la Tabla 1 o 5.

[0067] En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo sintética. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo aislada.

[0068] En una realización, la molécula de anticuerpo compite por la unión con dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, o más de las moléculas de anticuerpo que comprenden el HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, y LCDR3 de cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419 0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621, 4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439 o 4237.

[0069] En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa total o parcialmente con los epítopos de dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, o más de las moléculas de anticuerpo que comprenden el HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, y LCDR3 de cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419 1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621,4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439 o 4237.

[0070]En una realización, la molécula de anticuerpo que comprende el HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, y LCDR3 de cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419 0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621, 4035, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4439, o 4237 comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera de cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621,4035, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4439, o 4237.

[0071]En una realización, la molécula de anticuerpo que comprende el HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, y LCDR3 de cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419 0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621, 4035, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4439, o 4237 es el anticuerpo monoclonal 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621,4035, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4439, o 4237.

[0072]En una realización, la molécula de anticuerpo es un anticuerpo monoclonal humanizado 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621,4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439 o 4237. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada (VH) que tiene una secuencia de aminoácidos descrita enla Tabla 1 o 5.En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera (VL) que tiene una secuencia de aminoácidos descrita enla Tabla 1 o 5.En molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada (VH) que tiene una secuencia de aminoácidos descrita en la Tabla 1o5 y una región variable de cadena ligera (VL) que tiene una secuencia de aminoácidos descrita en laTabla 1 o 5.

[0073]En una realización, la molécula de anticuerpo compite por unirse a APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano a una EC<50>de 20 nM o menos,p. ej.,10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0,8 nM o menos, 0.6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos, 0,005 nM o menos, 0,002 nM o menos, o 0,001 nM o menos,p. ej.,entre 0,001 nM y 100 nM,p. ej.,entre 0,001 nM y 50 nM, entre 0,01 nM y 20 nM, entre 0,1 nM y 20 nM,p. ej.,entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, entre 1 nM y 5 nM, entre 0,001 nM y 0,1 nM, entre 0,001 nM y 0,01 nM, entre 0,001 nM y 0,005 nM, entre 0,01 nM y 0,05 nM, o entre 0,01 nM y 0,1 nM,p. ej.,según se determina por un método descrito en el presente documento.

[0074]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL de ratón a una EC<50>de 100 nM o menos,p. ej.,,80 nM o menos, 60 nM o menos, 40 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0.2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos, 0,005 nM o menos, 0,002 nM o menos, 0,001 nM o menos, o 0,001 nM o menos,p. ej.,entre 100 nM y 0.001 nM,p. ej.,entre 50 nM y 0.01 nM, entre 20 nM y 0.1 nM, entre 20 nM y 0.1 nM,p. ej.,entre 10 nM y 0.5 nM, entre 5 nM y 1 nM, entre 5 nM y 0.001 nM, entre 0,1 nM y 0,001 nM, entre 0,01 nM y 0,001 nM, entre 0,005 nM y 0,01 nM, entre 0,05 nM y 0,01 nM, o entre 0,1 nM y 0,1 nM,p. ej.,según se determina por un método descrito en el presente documento.

[0075]En una realización, la molécula de anticuerpo no se une, o se une a APRIL de ratón con baja afinidad,p. ej.,a una EC<50>de 1000 nM o más, porejemplo,2000 nM o más,p. ej.,como se determina por un método descrito en el presente documento.

[0076]En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p.ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a TACI(p. ej.,TACI humano, TACI de ratón, o ambos), inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a BCMA(p. ej.,BCMA humano, BCMA de ratón, o ambos), o ambas.

[0077]En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a TACI(p. ej.,TACI humano, TACI de ratón, o ambos), a una IC<50>de 50 nM o menos,p. ej.,40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, o 0,01 nM o menos,p. ej.,entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento.

[0078]En una realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL(p. ej., APRIL humano)inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión del dominio CRD2 de TACI(p. ej.,TACI humano) a APRIL(p. ej.,APRIL humano).

[0079]En una realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos los residuos APRIL humanos de laTabla 3.En una realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano, inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o todos los residuos de APRIL humano de laTabla 4.En una realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano, inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos los residuos de APRIL humano de laTabla 7.En una realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano, inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, o todos los residuos de APRIL humano dela Tabla 8.

[0080]En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a BCMA(p. ej.,BCMA humano, BCMA de ratón, o ambos).

[0081]En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a BCMA(p. ej.,BCMA humano, BCMA de ratón, o ambos),p. ej.,a una IC<50>de 200 nM o menos, 150 nM o menos, 100 nM o menos, 50 nM o menos, 40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos,p. ej.,entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento.

[0082]En una realización, la molécula de anticuerpo no inhibe, o no inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,Ap R iL humano, APRIL de ratón, o ambos) a BCMA(p. ej.,BCMA humano,BCMA de ratón, o ambos).

[0083]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o más, residuos dentro de una región de APRIL humano como se define en cualquiera de lasTablas 3-4 o 7-8. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo conformacional.

[0084]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o más, residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enla Tabla 3.En una realización, la molécula de anticuerpo se une a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos los residuos APRIL humanos de laTabla 3.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende residuos APRIL de dos monómeros,p. ej.,uno o más residuos del monómero A y del monómero B como se muestra enla Tabla 3.

[0085]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o más, residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enla Tabla 4.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o todos los residuos APRIL de laTabla 4.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende uno o más residuos APRIL del bucle C-D(p. ej.,el bucle que conecta las hojas p C y D), el bucle G-H(p. ej.,el bucle que conecta las hojas p G y H), o ambos.

[0086]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos, los residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enla Tabla 7. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 7.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de laTabla 7.

[0087]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos, residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enla Tabla 8.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos, los residuos APRIL humanos de laTabla 8.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de la Tabla 8.

[0088] En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o todos) residuos de APRIL humano de las posiciones 105-114 y/o uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o todos) residuos de APRIL de ratón de las posiciones 96-105. En una realización, la molécula de anticuerpo no se une, o no se une sustancialmente, a uno, dos o todos los Asp129, Arg233, o His203 de APRIL humano.

[0089] En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG,p. ej.,que comprende una región constante de cadena pesada de IgG,p. ej.,elegida entre IgG1, IgG2(p. ej.,IgG2a), IgG3 o IgG4,p. ej.,IgG2 o IgG4. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG1. En otra realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG2. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región constante de cadena ligera de cadena ligera kappa o lambda.

[0090] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región Fc. En una realización, la región Fc comprende una o más mutaciones localizadas en la interfaz entre los dominios CH2 y CH3(p. ej.,para aumentar la afinidad de unión al receptor neonatal FcRn y/o la semivida de la molécula de anticuerpo). En una realización, la región Fc comprende una o más mutaciones,p. ej.,una o más(p. ej.,2, 3, 4, 6 o todas) mutaciones elegidas entre T250Q, M252Y, S254T, T256E, M428L, H433K, N434F, o cualquier combinación de las mismas, de IgG1. En una realización, la región Fc comprende una o más mutaciones en las posiciones 233-236 o 322 de la IgG1 o IgG2 humana, o una o más sustituciones en las posiciones 327, 330 o 331 de la IgG4 humana(p. ej.,para reducir la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC)). En una realización, la región Fc comprende una o más(p. ej.,2, 3, 4, 6 7 o todas) mutaciones elegidas entre E233P, L234V, L235A, G236, K322A, A327G, A330S, P331S, o cualquier combinación de las mismas.

[0091] En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo humanizada,p. ej.,que comprende una o más regiones base derivadas de la secuencia de línea germinal base humana. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende dos regiones variables de cadena pesada y dos regiones variables de cadena ligera. En una realización, la molécula de anticuerpo es un Fab, F(ab')2, Fv, Fd, o un fragmento Fv de cadena simple (scFv).

[0092] En un aspecto, la divulgación presenta una molécula de anticuerpo anti-APRIL descrita en el presente documento,p. ej.,una molécula de anticuerpo anti-APRIL sintética o aislada descrita en el presente documento.

[0093] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende uno o ambos de:

(i) una región variable de cadena pesada (VH), en la que la región variable de cadena pesada comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3), en las que la región variable de cadena pesada comprende una, dos o todas de las siguientes: una HCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos de G-Y-T-F-T-D-Y (SEQ ID N°: 11); una HCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos de Y-P-L-R-G-S (SEQ ID N°: 12); o una HCCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos de H-G-A-Y-Y-S-N-A-F-D-Y (SEQ ID N°: 13); o

(ii) una región variable de la cadena ligera (VL), en la que la región variable de la cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3), en las que la región variable de la cadena ligera comprende una, dos o todas las siguientes: una LCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos de X1-X2-S-X4-S-V-D-N-D-G-I-R-F-X14-H (SEQ ID N°: 327), en la que X1 es R o K; X2 es A o S; X4 es E o Q; y X14 es M o L; una LCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos de R-A-S-X4-X5-X6-X7 (SEQ ID N°: 328), donde X4 es N o T; X5 es L o R; X6 es E o A; y X7 es S o T; o una LCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos de Q-Q-S-N-K-D-P-Y-T (SEQ ID N°: 16).

[0094] En otra realización, la molécula de anticuerpo comprende uno o ambos de:

(i) una región variable de cadena pesada (VH), en la que la región variable de cadena pesada comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3), en las que la región variable de cadena pesada comprende una, dos o todas de las siguientes: una HCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos de D-Y-T-I-H (SEQ ID N°: 17); una HCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos de W-I-Y-P-L-R-G-S-I-N-Y-X12-X13-X14-F-X16-X17 (SEQ ID N°: 329), donde X12 es N, S, o A, X13 es E, P, o Q; X14 es K o S; X16 es K o Q; y X17 es D o G; o una HCCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos de H-G-A-Y-Y-S-N-A-F-D-Y (SEQ ID N°: 13); o

[0095] En una realización, la molécula de anticuerpo es cualquiera de los anticuerpos 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419 0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419 1310, o 2419-1406.

[0096] En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano a una EC<50>de 20 nM o menos,p. ej.,10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0,8 nM o menos, 0.6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos, 0,005 nM o menos, 0,002 nM o menos, o 0,001 nM o menos,p. ej.,entre 0,001 nM y 20 nM,p. ej.,entre 0,01 nM y 20 nM, entre 0,1 nM y 20 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, entre 1 nM y 5 nM, entre 0,001 nM y 0,1 nM, entre 0,001 nM y 0,01 nM, entre 0,001 nM y 0,005 nM, entre 0,01 nM y 0,05 nM, o entre 0,01 nM y 0,1 nM,p. ej.,según se determine por un método descrito en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo se une a APRIL humano a una EC<50>de 0,01 nM o menos,p. ej.,aproximadamente 0,001-0,005 nM o 0,002-0,004 nM,p. ej.,aproximadamente 0,001, 0,002, 0,003, 0,004 o 0,005 nM. En una realización, la molécula de anticuerpo no se une a APRIL de ratón, o se une a APRIL de ratón con baja afinidad,p. ej.,a una EC<50>de 1000 nM o más,p. ej.,2000 nM o más,p. ej.,como se determina por un método descrito en el presente documento.

[0097] En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano) a TACI(p. ej.,TACI humano), BCMA(p. ej.,BCMA humano), o ambos.

[0098] En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL humano a TACI humano a una IC<50>de 50 nM o menos,p. ej.40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, o 0,01 nM o menos,p. ej.entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe la unión de APRIL humano a TACI humano a una IC<50>de 0,5 nM o menos,p. ej.aproximadamente 0,1 0,5 nM o 0,2-0,4 nM,p. ej.aproximadamente 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 o 0,5 nM.

[0099] En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL humano a BCMA humano a una IC<50>de 200 nM o menos, 150 nM o menos, 100 nM o menos, 50 nM o menos, 40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos,p. ej.,entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.según se determina mediante un método descrito en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe la unión de APRIL humano a BCMA humano a una IC<50>de 0,5 nM o menos,p. ej.,aproximadamente 0,1-0,5 nM o 0,2-0,4 nM,p. ej.,aproximadamente 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 o 0,5 nM.

[0100] En otra realización, la molécula de anticuerpo comprende

(i) una región variable de cadena pesada (VH), en la que la región variable de cadena pesada comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena pesada (HCDR1, HCDR2, y HCDR3), en la que la región variable de cadena pesada comprende una, dos, o todas las siguientes: una HCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2, o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR1 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 11 o 17); una HCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR2 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 12 o 18); o una HCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR3 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 13); y

(ii) una región variable de la cadena ligera (VL), en la que la región variable de la cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3), en la que la región variable de la cadena ligera comprende una, dos o todas de las siguientes: una LCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR1 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 14); una LCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR2 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 15); o una LCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR3 del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 16).

[0101] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende uno o ambos de: (i) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, o 15 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la VH del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 19); o (ii) una VL que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, o 15 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la VL del anticuerpo monoclonal 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 20).

[0102] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH codificada por la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N°: 73 (o una secuencia de nucleótidos sustancialmente idéntica) o una Vl codificada por la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N°: 74 (o una secuencia de nucleótidos sustancialmente idéntica), o ambas.

[0103] En una realización, la molécula de anticuerpo es el anticuerpo monoclonal 2419. En una realización, el anticuerpo monoclonal 2419 es el anticuerpo monoclonal humanizado 2419. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N°: 209-214, una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N°: 215-219, o ambos.

[0104] En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano a una EC<50>de 20 nM o menos,p. ej.,10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0,8 nM o menos, 0.6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos, 0,005 nM o menos, 0,002 nM o menos, o 0,001 nM o menos,p. ej.,entre 0,001 nM y 20 nM,p. ej.,entre 0,01 nM y 20 nM, entre 0,1 nM y 20 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, entre 1 nM y 5 nM, entre 0,001 nM y 0,1 nM, entre 0,001 nM y 0,01 nM, entre 0,001 nM y 0,005 nM, entre 0,01 nM y 0,05 nM, o entre 0,01 nM y 0,1 nM,p. ej.,según se determine por un método descrito en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo se une a APRIL humano a una EC<50>de 1 nM o menos,p. ej.,aproximadamente 0,8 nM, aproximadamente 0,003 nM, o aproximadamente 0,002 nM. En una realización, la molécula de anticuerpo no se une, o se une a APRIL de ratón con baja afinidad,p. ej.,a una EC<50>de 500 nM o más.

[0105] En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano) a TACI(p. ej.,TACI humano), BCMA(p. ej.,BCMA humano), o ambos.

[0106] En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL humano a TACI humano a una IC<50>de 50 nM o menos,p. ej.40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, o 0,01 nM o menos,p. ej.entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe la unión de APRIL humano a TACI humano a una IC<50>de 1 nM o menos,p. ej.,aproximadamente 0,74 nM, aproximadamente 0,4 nM, 0,3 nM o 0,2 nM.

[0107] En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL humano a BCMA humano a una IC<50>de 200 nM o menos, 150 nM o menos, 100 nM o menos, 50 nM o menos, 40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos,p. ej.,entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.según se determina mediante un método descrito en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe la unión de APRIL humano a BCMA humano a una IC<50>de 5 nM o menos,p. ej.,aproximadamente de 4 nM, aproximadamente de 2 nM, o aproximadamente de 1 nM, o 0,5 nM o menos,p. ej.,aproximadamente de 0,22 nM, aproximadamente de 1 nM, aproximadamente de 0,7 nM, aproximadamente de 0,3 nM, aproximadamente de 0,2 nM, o aproximadamente de 0,1 nM.

[0108] En otra realización, la molécula de anticuerpo comprende:

(i) una región variable de cadena pesada (VH), en la que la región variable de cadena pesada comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3), en la que la región variable de cadena pesada comprende una, dos o todas las siguientes: una HCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR1 de un anticuerpo relacionado con 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 11 o 17); una HCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR2 del anticuerpo relacionado con 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 12, 282, 287, o 290); o una HCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2, o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la HCDR3 del anticuerpo relacionado con 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 13); y

(ii) una región variable de la cadena ligera (VL), en la que la región variable de la cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3), en la que la región variable de la cadena ligera comprende una, dos o todas las siguientes: una LCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR1 del anticuerpo relacionado con 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 280 o 314); una LCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR2 del anticuerpo relacionado con 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 281, 285, 293, o 315); o una LCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2, o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR3 del anticuerpo relacionado con 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 16).

[0109] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende uno o ambos de: (i) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, o 15 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la VH del anticuerpo relacionado con 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 283, 288, 289, 291,292, 294, 296, o 317); o (ii) una VL que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, o 15 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la VL del anticuerpo relacionado con 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 284, 286, 295, o 316).

[0110] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH codificada por la secuencia de nucleótidos VH del anticuerpo relacionado con 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 304, 307, 308, 309, 310, 311, 313, o 319) (o una secuencia de nucleótidos sustancialmente idéntica a la misma) o una VL codificada por la secuencia de nucleótidos VL del anticuerpo relacionado con 2419(p. ej.,SEQ ID N°: 305, 306, 312 o 318) (o una secuencia de nucleótidos sustancialmente idéntica), o ambas.

[0111] En una realización, la molécula de anticuerpo relacionada con 2419 se elige entre los anticuerpos 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, o 2419-1406. En una realización, el anticuerpo relacionado con 2419 es una molécula de anticuerpo humanizada. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N°: 209-214, 283, 288, 289, 291,292, 294, 296, o 317, una VL que comprenda la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N°: 215-219, 284, 286, 295 o 316, o ambos.

[0112] En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano a una EC<50>de 20 nM o menos,p. ej.,10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0,8 nM o menos, 0.6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos, 0,005 nM o menos, 0,002 nM o menos, o 0,001 nM o menos,p. ej.,entre 0,001 nM y 20 nM,p. ej.,entre 0,01 nM y 20 nM, entre 0,1 nM y 20 nM,p. ej.,entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, entre 1 nM y 5 nM, entre 0,001 nM y 0,1 nM, entre 0,001 nM y 0,01 nM, entre 0,001 nM y 0,005 nM, entre 0,01 nM y 0,05 nM, o entre 0,01 nM y 0,1 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo se une a APRIL humano a una EC<50>de 1 nM o menos,p. ej.,aproximadamente 0,8 nM, aproximadamente 0,003 nM, o aproximadamente 0,002 nM.

[0113] En una realización, la molécula de anticuerpo no se une, o se une a APRIL de ratón con baja afinidad,p. ej.,a una EC<50>de 500 nM o más.

[0114] En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano) a TACI(p. ej.,TACI humano), BCMA(p. ej.,BCMA humano), o ambos. En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL humano a TACI humano, a una IC<50>de 50 nM o menos,p. ej.,40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, o 0,01 nM o menos,p. ej.,entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe la unión de APRIL humano a TACI humano a una IC<50>de 1 nM o menos,p. ej.,aproximadamente 0,74 nM, aproximadamente 0,4 nM, 0,3 nM o 0,2 nM.

[0115] En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL humano a BCMA humano a una IC<50>de 200 nM o menos, 150 nM o menos, 100 nM o menos, 50 nM o menos, 40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos,p. ej.,entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.según se determina mediante un método descrito en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe la unión de APRIL humano a BCMA humano a una IC<50>de 5 nM o menos,p. ej.,aproximadamente de 4 nM, aproximadamente de 2 nM, o aproximadamente de 1 nM, o 0,5 nM o menos,p. ej.,aproximadamente de 0,22 nM, aproximadamente de 1 nM, aproximadamente de 0,7 nM, aproximadamente de 0,3 nM, aproximadamente de 0,2 nM, o aproximadamente de 0,1 nM.

[0116]En otra realización, la molécula de anticuerpo comprende uno o ambos de:

(i) una región variable de cadena pesada (VH), en la que la región variable de cadena pesada comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3), en las que la región variable de cadena pesada comprende una, dos o todas de las siguientes: una HCDRI que comprende una secuencia de aminoácidos de G-Y-X3-X4-T-X6-X7-Y (SEQ ID N°: 330), en la que X3 es S o T; X4 es I o F; X6 es S o ausente; y X7 es G, D o S; una HCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos de X3-X4-X5-X6-X7-X8 (SEQ ID N°: 331), donde X3 está ausente, N o Y; X4 es S o P, X5 es Y, L o R; X6 es D, N o R; X7 es G o S; y X8 es Y, D o S; o una HCCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos de X1-X2-X3-X4-Y-X6-X7-X8-X9-F-X11-X12 (SEQ ID N°: 332), en la que X1 es Y, E o H; X2 está ausente o es G; X3 es Y, D o A; X4 es D, G o Y; X6 es E, ausente o D; X7 es D, Y, S o K; X8 es W, N o R; X9 es Y, A o G; X11 es G o D; y X12 es V o Y, o (ii) una región variable de la cadena ligera (VL), en la que la región variable de la cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3), en las que la región variable de la cadena ligera comprende una, dos o todas de las siguientes: una LCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos de X1-A-S-X4-S-V-X7-X8-X9-G-X11-X12-X13-X14-X15 (SEQ ID N°: 333), en la que X1 es R o K; X4 es E o Q; X7 es D o S; X8 es N, F, I o N; X9 es Y, A, I o D; X11 es I o T; X12 es S, N o R; X13 es F, L o S; X14 es M o I; y X15 es N o H; una LCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos de X1-A-S-N-X5-X6-X7 (SEQ ID N°: 334), en la que X1 es A, R o H; X5 es Q o L; X6 es G o E; y X7 es S, P o T; o una LCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos de X1-Q-S-X4-X5-X6-P-X8-T (SEQ ID N°: 335), donde X1 es Q o L; X4 es K, R o N; X5 es E o K; X6 es V, Y, I o D; y X8 es R, W o Y.

[0117]En una realización, la molécula de anticuerpo es cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2922 o 3327.

[0118]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano a una EC<50>de 20 nM o menos,p. ej.,10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0,8 nM o menos, 0.6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos, 0,005 nM o menos, 0,002 nM o menos, o 0,001 nM o menos,p. ej.,entre 0,001 nM y 20 nM, entre 0,01 nM y 20 nM, entre 0,1 nM y 20 nM,p. ej.,entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, entre 1 nM y 5 nM, entre 0,001 nM y 0,1 nM, entre 0,001 nM y 0,01 nM, entre 0,001 nM y 0,005 nM, entre 0,01 nM y 0,05 nM, o entre 0,01 nM y 0,1 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo no se une, o se une a APRIL de ratón con baja afinidad,p. ej.,a una EC<50>de 1000 nM o más,p. ej.,2000 nM o más,p. ej.,como se determina por un método descrito en el presente documento.

[0119]En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano) a TACI(p. ej.,TACI humano), BCMA(p. ej.,BCMA humano), o ambos. En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL humano a TACI humano, a una IC<50>de 50 nM o menos,p. ej.,40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0,8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, o 0,1 nM o menos,p. ej.,entre 0,1 y 50 nM,p. ej.,entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.,según se determine mediante un método descrito en el presente documento.

[0120]En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL humano a BCMA humano a una IC<50>de 200 nM o menos, 150 nM o menos, 100 nM o menos, 50 nM o menos, 40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos,p. ej.,entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.según se determina mediante un método descrito en el presente documento.

[0121]En otra realización, la molécula de anticuerpo comprende uno o ambos de:

(i) una región variable de cadena pesada (VH), en la que la región variable de cadena pesada comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3), en las que la región variable de cadena pesada comprende una, dos o todas de las siguientes: una HCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos de X6-X7-Y-X9-X10-X11 (SEQ ID N°: 336), en la que X6 es S o está ausente; X7 es G, D o S; X9 es Y, F, T o D; X10 es W, M, I o V; y X11 es N, H o F; una HCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos de X1-I-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Y-N-X13-X14-X15-K-X17 (SEQ ID N°: 337), donde X1 es Y, R o W; X3 está ausente, N o Y; X4 es S o P, X5 es Y, L o R; X6 es D, N o R; X7 es G o S; X8 es Y, D o S; X9 es N, T o I; X10 es N, F o K; X13 es P, Q o E; X14 es S o K; X15 es L o F; y X17 es N, G o D; o una HCCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos de X1-X2-X3-X4-Y-X6-X7-X8-X9-F-X11-X12 (SEQ ID N°: 332), en la que X1 es Y, E o H; X2 está ausente o es G; X3 es Y, D o A; X4 es D, G o Y; X6 es E, ausente o D; X7 es D, Y, S o K; X8 es W, N o R; X9 es Y, A o G; X11 es G o D; y X12 es V o Y, o

(ii) una región variable de la cadena ligera (VL), en la que la región variable de la cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3), en las que la región variable de la cadena ligera comprende una, dos o todas de las siguientes: una LCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos de X1-A-S-X4-S-V-X7-X8-X9-G-X11-X12-X13-X14-X15 (SEQ ID N°: 333), en la que X1 es R o K; X4 es E o Q; X7 es D o S; X8 es N, F, I o N; X9 es Y, A, I o D; X11 es I o T; X12 es S, N o R; X13 es F, L o S; X14 es M o I; y X15 es N o H; una LCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos de X1-A-S-N-X5-X6-X7 (SEQ ID N°: 334), en la que X1 es A, R o H; X5 es Q o L; X6 es G o E; y X7 es S, P o T; o una LCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos de X1-Q-S-X4-X5-X6-P-X8-T (SEQ ID N°: 335), donde X1 es Q o L; X4 es K, R o N; X5 es E o K; X6 es V, Y, I o D; y X8 es R, W o Y.

[0122]En una realización, la molécula de anticuerpo es cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2922 o 3327. En una realización, la molécula de anticuerpo es un anticuerpo monoclonal humanizado 2218, 2419, 2922 o 3327.

[0123]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano a una EC<50>de 20 nM o menos,p. ej.,10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0,8 nM o menos, 0.6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos, 0,005 nM o menos, 0,002 nM o menos, o 0,001 nM o menos,p. ej.,entre 0,001 nM y 20 nM, entre 0,01 nM y 20 nM, entre 0,1 nM y 20 nM,p. ej.,entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, entre 1 nM y 5 nM, entre 0,001 nM y 0,1 nM, entre 0,001 nM y 0,01 nM, entre 0,001 nM y 0,005 nM, entre 0,01 nM y 0,05 nM, o entre 0,01 nM y 0,1 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo no se une, o se une a APRIL de ratón con baja afinidad,p. ej.,a una EC<50>de 1000 nM o más,p. ej.,2000 nM o más,p. ej.,como se determina por un método descrito en el presente documento.

[0124]En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano) a TACI(p. ej.,TACI humano), BCMA(p. ej.,BCMA humano), o ambos. En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL humano a TACI humano, a una IC<50>de 50 nM o menos,p. ej.,40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, o 0,01 nM o menos,p. ej.,entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.,según se determina mediante un método descrito en el presente documento.

[0125]En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL humano a BCMA humano a una IC<50>de 200 nM o menos, 150 nM o menos, 100 nM o menos, 50 nM o menos, 40 nM o menos, 30 nM o menos, 20 nM o menos, 10 nM o menos, 9 nM o menos, 8 nM o menos, 7 nM o menos, 6 nM o menos, 5 nM o menos, 4 nM o menos, 3 nM o menos, 2 nM o menos, 1 nM o menos, 0.8 nM o menos, 0,6 nM o menos, 0,4 nM o menos, 0,2 nM o menos, 0,1 nM o menos, 0,05 nM o menos, 0,02 nM o menos, 0,01 nM o menos,p. ej.,entre 0,01 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 50 nM, entre 0,1 nM y 25 nM, entre 0,1 nM y 10 nM, entre 0,1 nM y 5 nM, entre 0,1 nM y 1 nM, entre 0,1 nM y 0,5 nM, entre 0,5 nM y 5 nM, o entre 1 nM y 5 nM,p. ej.según se determina mediante un método descrito en el presente documento.

[0126]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o más, residuos dentro de una región de APRIL humano como se define en cualquiera de lasTablas 3-4 o 7-8.

[0127]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o más, residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enla Tabla 3.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 3. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de laTabla 3. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende residuos APRIL de dos monómeros,p. ej.,uno o más residuos del monómero A y del monómero B como se muestra enla Tabla 3.

[0128]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o más, residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enla Tabla 4.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 4.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de laTabla 4.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende uno o más residuos APRIL del bucle C-D(p. ej.,el bucle que conecta las hojas p C y D), el bucle G-H(p. ej.,el bucle que conecta las hojas p G y H), o ambos.

[0129]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej., 2,3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos, los residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enla Tabla 7.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos, de los residuos APRIL humanos de laTabla 7.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de laTabla 7.

[0130]En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o más, residuos dentro de una región de APRIL humano como se define enla Tabla 8.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos, los residuos APRIL humanos de laTabla 8.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de laTabla 8.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende residuos APRIL de dos monómeros,p. ej.,uno o más residuos del monómero A y del monómero B, como se muestra enla Tabla 8.

[0131]En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG,p. ej.,que comprende una región constante de cadena pesada de IgG,p. ej.,elegida entre IgG1, IgG2(p. ej.,IgG2a), IgG3 o IgG4,p. ej.,IgG2 o IgG4. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG1. En otra realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG2. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región constante de cadena ligera de cadena ligera kappa o lambda.

[0132]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región Fc. En una realización, la región Fc comprende una o más mutaciones localizadas en la interfaz entre los dominios CH2 y CH3(p. ej.,para aumentar la afinidad de unión al receptor neonatal FcRn y/o la semivida de la molécula de anticuerpo). En una realización, la región Fc comprende una o más mutaciones,p. ej.,una o más(p. ej.,2, 3, 4, 6 o todas) mutaciones elegidas entre T250Q, M252Y, S254T, T256E, M428L, H433K, N434F, o cualquier combinación de las mismas, de IgG1. En una realización, la región Fc comprende una o más mutaciones en las posiciones 233-236 o 322 de la IgG1 o IgG2 humana, o una o más sustituciones en las posiciones 327, 330 o 331 de la IgG4 humana(p. ej.,para reducir la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC)). En una realización, la región Fc comprende una o más(p. ej.,2, 3, 4, 6 7 o todas) mutaciones elegidas entre E233P, L234V, L235A, G236, K322A, A327G, A330S, P331S, o cualquier combinación de las mismas.

[0133]En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo humanizada,p. ej.,como se describe enla Tabla 5,p. ej.,que comprende una o más regiones base derivadas de la secuencia de línea germinal base humana.

[0134]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende dos regiones variables de cadena pesada y dos regiones variables de cadena ligera. En una realización, la molécula de anticuerpo es un Fab, F(ab')2, Fv, Fd, o un fragmento Fv de cadena simple (scFv).

[0135] En un aspecto, la divulgación presenta una composición,p. ej.,una composición farmacéutica, que comprende una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento. En una realización, la composición comprende además un portador farmacéutico aceptable.

[0136]En un aspecto, la divulgación presenta una molécula de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena pesada (VH), una región variable de cadena ligera (VL), o ambas, de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento.

[0137]En un aspecto, la divulgación presenta un vector que comprende una molécula de ácido nucleico descrita en el presente documento.

[0138]En un aspecto, la divulgación presenta una célula,p. ej.,una célula aislada, que comprende una molécula de ácido nucleico descrita en el presente documento o un vector descrito en el presente documento.

[0139]En un aspecto, la divulgación presenta un kit que comprende una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento e instrucciones de uso de la molécula de anticuerpo.

[0140] En un aspecto, la divulgación presenta un recipiente que comprende una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento.

[0141] En un aspecto, la divulgación presenta un método de producción de una molécula de anticuerpo anti-APRIL, comprendiendo el método el cultivo de una célula descrita en el presente documento en condiciones que permiten la producción de una molécula de anticuerpo, produciendo así la molécula de anticuerpo.

[0142] En una realización, el método comprende además aislar la molécula de anticuerpo.

[0143] Las referencias a métodos de tratamiento en los párrafos posteriores de esta descripción deben interpretarse como referencias a las moléculas de anticuerpo o composiciones farmacéuticas de la presente invención para su uso en un método de tratamiento.

[0144] También se divulga en el presente documento un método para tratar la nefropatía por IgA, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento o una composición descrita en el presente documento, tratando así la nefropatía por IgA.

[0145] En una realización, la molécula de anticuerpo se administra al sujeto por vía intravenosa.

[0146] En una realización, la molécula de anticuerpo se administra al sujeto a una dosis entre 0,1 mg/kg y 50 mg/kg,p. ej.,entre 0,2 mg/kg y 25 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 10 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 5 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 3 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 2,5 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 2 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 15 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 1 mg/kg, entre 1 mg/kg y 1,5 mg/kg, entre 1 mg/kg y 2 mg/kg, entre 1 mg/kg y 2,5 mg/kg, entre 1 mg/kg y 3 mg/kg, entre 1 mg/kg y 2,5 mg/kg, o entre 1 mg/kg y 5 mg/kg.

[0147] En una realización, la molécula de anticuerpo se administra al sujeto a una dosis fija entre 10 mg y 1000 mg,p. ej.,entre 10 mg y 500 mg, entre 10 mg y 250 mg, entre 10 mg y 150 mg, entre 10 mg y 100 mg, entre 10 mg y 50 mg, entre 250 mg y 500 mg, entre 150 mg y 500 mg, entre 100 mg y 500 mg, entre 50 mg y 500 mg, entre 25 mg y 250 mg, entre 50 mg y 150 mg, entre 50 mg y 100 mg, entre 100 mg y 150 mg. entre 100 mg y 200 mg, o entre 150 mg y 250 mg.

[0148] En una realización, la molécula de anticuerpo se administra una vez a la semana, dos veces a la semana, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas, una vez cada cuatro semanas, una vez cada ocho semanas, una vez al mes, una vez cada dos meses o una vez cada tres meses.

[0149] En una realización, la administración de la molécula de anticuerpo reduce el nivel de IgA en un tejido periférico,p. ej.,en suero, tejido mucoso, médula ósea o cualquier combinación de los mismos.

[0150] En una realización, la administración de la molécula de anticuerpo reduce el nivel de IgA1. En una realización, la administración de la molécula de anticuerpo reduce el nivel de IgA1 en forma polimérica (pIgA1). En una realización, la administración de la molécula de anticuerpo reduce el nivel de IgA1 con variantes de glicosilación ligadas a O(p. ej.,composición aberrante o reducida de galactosa en la región bisagra CH1).

[0151] En una realización, el método comprende además determinar el nivel de IgA en una muestra de tejido periférico del sujeto,p. ej.,elegida entre suero, tejido mucoso o médula ósea.

[0152] En una realización, el método comprende además administrar al sujeto una segunda terapia para la nefropatía IgA. En una realización, la segunda terapia se elige entre un inhibidor de la enzima convertidora de angiotensina (ACE), un bloqueador del receptor de angiotensina (ARB), ácidos grasos omega-3, un inmunosupresor(p. ej.,un corticosteroide,p. ej.,prednisona), una estatina, micofenolato mofetilo o cualquier combinación de los mismos.

[0153] También se divulga en el presente documento un método para tratar la nefropatía diabética, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento o una composición descrita en el presente documento, tratando así la nefropatía diabética.

[0154] También se divulga en el presente documento un método para tratar el cáncer, el método comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento o una composición descrita en el presente documento, tratando así el cáncer.

[0155] En una realización, el cáncer es un cáncer hematológico. En una realización, el cáncer hematológico se elige entre linfoma no Hodgkin de células B, leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma de Hodgkin, mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom o linfoma linfoplasmacítico. En una realización, el cáncer es un mieloma múltiple.

[0156] También se divulga en el presente documento un método para tratar un trastorno inmunoproliferativo, comprendiendo el método administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento o una composición descrita en el presente documento, tratando así el trastorno inmunoproliferativo.

[0157]En una realización, el trastorno inmunoproliferativo es la hipergammaglobulinemia IgA monoclonal.

[0158]También se divulga en el presente documento un método para tratar la vasculitis, el método comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento o una composición descrita en el presente documento, tratando así la vasculitis.

[0159]En una realización, la vasculitis es vasculitis renal. En una realización, la vasculitis es una vasculitis asociada a IgA(p. ej.,púrpura de Henoch-Schonlein) o glomerulonefritis post-estreptocócica.

[0160]También se divulga en el presente documento un método para tratar un trastorno autoinmune, el método comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento o una composición descrita en el presente documento, tratando así el trastorno autoinmune.

[0161]En una realización, el trastorno autoinmune se elige entre artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, una enfermedad bullosa IgA lineal(p. ej.,dermatosis por inmunoglobulina A (IgA) lineal) o epidermólisis bullosa adquirida (EBA) mediada por IgA.

[0162]También se divulga en el presente documento un método para tratar el pénfigo IgA, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento o una composición descrita en el presente documento, tratando así el pénfigo IgA.

[0163]También se divulga en el presente documento un método para tratar la enfermedad celíaca, el método comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento o una composición descrita en el presente documento, tratando así la enfermedad celíaca.

[0164]También se divulga en el presente documento un método para tratar la cirrosis alcohólica, el método comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento o una composición descrita en el presente documento, tratando así la cirrosis alcohólica.

[0165]También se divulga en el presente documento un método para reducir el nivel de IgA en una célula o sujeto, el método comprende poner en contacto la célula o sujeto, o administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad eficaz de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento o una composición descrita en el presente documento, reduciendo así el nivel de IgA.

[0166]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra al sujeto por vía intravenosa.

[0167]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra al sujeto a una dosis entre 0,1 mg/kg y 50 mg/kg,p. ej.,entre 0,2 mg/kg y 25 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 10 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 5 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 3 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 2,5 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 2 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 15 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 1 mg/kg, entre 1 mg/kg y 1,5 mg/kg, entre 1 mg/kg y 2 mg/kg, entre 1 mg/kg y 2,5 mg/kg, entre 1 mg/kg y 3 mg/kg, entre 1 mg/kg y 2,5 mg/kg, o entre 1 mg/kg y 5 mg/kg.

[0168]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra al sujeto a una dosis fija entre 10 mg y 1000 mg,p. ej.,entre 10 mg y 500 mg, entre 10 mg y 250 mg, entre 10 mg y 150 mg, entre 10 mg y 100 mg, entre 10 mg y 50 mg, entre 250 mg y 500 mg, entre 150 mg y 500 mg, entre 100 mg y 500 mg, entre 50 mg y 500 mg, entre 25 mg y 250 mg, entre 50 mg y 150 mg, entre 50 mg y 100 mg, entre 100 mg y 150 mg. entre 100 mg y 200 mg, o entre 150 mg y 250 mg.

[0169]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra una vez a la semana, dos veces a la semana, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas, una vez cada cuatro semanas, una vez cada ocho semanas, una vez al mes, una vez cada dos meses, una vez cada tres meses.

[0170]En una realización, la administración de la molécula de anticuerpo reduce el nivel de IgA en un tejido periférico,p. ej.,en suero, tejido mucoso, médula ósea o cualquier combinación de los mismos.

[0171]En una realización, la administración de la molécula de anticuerpo reduce el nivel de IgA1. En una realización, la administración de la molécula de anticuerpo reduce el nivel de IgA1 en forma polimérica (pIgA1). En una realización, la administración de la molécula de anticuerpo reduce el nivel de IgA1 con variantes de glicosilación ligadas a O(p. ej.,composición aberrante o reducida de galactosa en la región bisagra CH1).

[0172]También se divulga en el presente documento el uso de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento o una composición descrita en el presente documento en el tratamiento, o en la fabricación de un medicamento para el tratamiento, de un trastorno descrito en el presente documento.

[0173]En otro aspecto, la divulgación presenta una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento o una composición descrita en el presente documento para su uso en el tratamiento de un trastorno descrito en el presente documento.

[0174]En un aspecto, la divulgación presenta un método de detección de una molécula APRIL, comprendiendo el método poner en contacto una célula o una muestra de un sujeto con una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento, detectando así la molécula APRIL.

[0175]En una realización, la molécula de anticuerpo se acopla con un marcador detectable. En una realización, la molécula APRIL se detectain vitrooex vivo.En otra realización, la molécula APRIL se detectain vivo.

[0176]La divulgación contempla todas las combinaciones de uno o más de los aspectos y/o realizaciones anteriores, así como combinaciones con una o más de las realizaciones expuestas en la descripción detallada y en los ejemplos.

[0177]Otras características, objetos y ventajas de las composiciones y métodos aquí descritos serán evidentes a partir de la descripción y los dibujos, y a partir de las reivindicaciones.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

[0178]

Las FIGS. 1A-1Brepresentan el perfil de anticuerpos anti-APRIL de hibridomas derivados de ratón. Los ratones CD-1 fueron inmunizados con APRIL multimérico recombinante (humano o de ratón) como se ha descrito. Los esplenocitos de ratones seropositivos anti-APRIL se inmortalizaron mediante fusión con mieloma para generar hibridomas. Se utilizaron métodos de cribado basados en ELISA para evaluar los anticuerpos anti-APRIL presentes en los medios condicionados de hibridomas productores de inmunoglobulinas. Los sobrenadantes de cultivos celulares se analizaron inicialmente tanto para la unión a la diana (APRIL) mediante ELISA indirecto como para la actividad funcional con respecto a la capacidad de bloquear la interacción de APRIL con el receptor de TNF humano recombinante soluble TACI-Fc (ELISA de bloqueo). Se realizó un cribado frente a APRIL humano y de ratón para identificar anticuerpos potencialmente reactivos cruzados. Las actividades relativas se basan en mediciones de un solo punto tras la normalización de la concentración de inmunoglobulina a 10 pg/mL cuando es posible. El inmunógeno APRIL para el refuerzo final en la vena de la cola se indica en negrita. Los anticuerpos derivados de hibridoma que carecen de actividad bloqueante frente a APRIL humano o de ratón (definida inicialmente por un bloqueo del receptor inferior al 10% en este ensayo de cribado de primera pasada) no se incluyen en esta tabla resumen. Se indican los isotipos de Ig de determinados hibridomas.

Las FIGS. 2A-2Brepresentan la actividad de bloqueo del receptor APRIL de anticuerpos anti-APRIL ejemplares. Las actividades funcionales de anticuerpos anti-APRIL seleccionados purificados a partir de clones de hibridoma derivados de ratón se evaluaron mediante ELISA utilizando TACI-Fc recombinante como receptor soluble. El ensayo consta de dos etapas: 1) preincubación de APRIL con concentraciones variables de anticuerpo de ratón purificado; 2) medición posterior de la unión de APRIL al TACI-Fc inmovilizado cuantificada mediante ELISA utilizando el anticuerpo secundario apropiado para la detección de APRIL marcado con epítopos. La interferencia de la unión del receptor APRIL se midió como una pérdida de A<450>. Los anticuerpos del hibridoma se representan con símbolos sólidos. Los anticuerpos de control y de comparación se representan con símbolos abiertos. Apry-1-1 representa un anticuerpo de bloqueo específico de ratón utilizado como control. Los anticuerpos neutralizantes humanos 0201 y 1313 se utilizaron igualmente como controles y con fines comparativos con anticuerpos descritos en la literatura científica. Los datos presentados son representativos del ensayo y del método para evaluar la inhibición por anticuerpos (bloqueo del receptor).La FIG. 2A(human ARL);FIG. 2B(APRIL de ratón). Los valores IC<50>se indican en laFIG. 3.

La FIG. 3representa los perfiles de actividad de anticuerpos anti-APRIL seleccionados, purificados y derivados de ratón. Las actividades de unión y bloqueo se extrapolan a partir de los datos resumidos enlas FIGS. 2A-2By se basan en una regresión no lineal de las valoraciones de anticuerpos con ajuste de curvas de 3 parámetros utilizando Graphpad Prism. Los guiones indican que no hay actividad.La FIG. 4representa la inhibición de la señalización TACI mediada por APRIL en células HEK 293. La inhibición funcional de la activación del receptor humano mediada por APRIL se evaluó utilizando una línea celular derivada de 293 con un reportero NF-<k>B transfectado de forma estable y un receptor APRIL humano TACI transfectado de forma transitoria. Como fuente de APRIL se utilizó ApRIL humano GCN4 marcado con HA (R&D Systems). Como control positivo se utilizó el mAb 1313 preexistente (específico humano, con actividad bloqueante preestablecida); como control negativo se utilizó el anticuerpo anti-APRIL Apry-1-1 específico de ratón. Los datos son ilustrativos de un ensayo ortogonal y biológicamente relevante para evaluar la actividad anti-APRIL de anticuerpos derivados de ratón.

La FIG. 5representa la unión de anticuerpos anti-APRlL a APRIL humano. La unión relativa de anticuerpos anti-APRIL seleccionados se midió mediante ELISA indirecto. Se produjeron recombinantemente anticuerpos selectos basados en el cribado previo de hibridomas (a partir de la secuenciación de los genes VH y VL de la inmunoglubina), tal como se ha descrito. Se utilizó APRIL humano marcado con HA GCN4 de R&D Systems como fuente de APRIL. Los datos de unión se analizaron mediante regresión no lineal utilizando un ajuste de tres parámetros. Los MAbs 1313, 0201 y Aprily-5 se incluyeron con fines comparativos; Apry-1-1 se utilizó como control negativo. Los valores EC<50>extrapolados se resumen en laFIG. 6.

La FIG. 6representa las afinidades de unión relativas de anticuerpos anti-APRIL seleccionados. Los datos se obtuvieron mediante ELISA indirecto (resumidos en laFlG. 5). Los guiones indican ausencia de actividad de unión.

La FIG. 7representa la inhibición por anticuerpos de la unión de APRIL a TACI. El ensayo se basa en ELISA de bloqueo utilizando APRIL humano recombinante (R&D Systems) y TACI-Fc humano. La inhibición se analizó mediante regresión no lineal utilizando un ajuste de cuatro parámetros. Los MAbs 1313 y 0201 se utilizaron como controles y con fines comparativos. Como control negativo se utilizó el mAb no neutralizante anti-APRIL Aprily-5.

La FIG. 8representa la inhibición por anticuerpos de la unión de APRIL a BCMA. El ensayo se basa en ELISA de bloqueo utilizando APRIL humano recombinante y BCMA-Fc humano.Véasela descripción de laFIG. 7para más detalles.

La FIG. 9representa la inhibición por anticuerpos de la unión de APRIL a TACI-Fc humano y BCMA-Fc humano. Se resumen las actividades inhibitorias relativas. Los datos derivados de los análisis de regresión no lineal de las curvas de inhibición de anticuerpos representadas enlas FIGS. 7-8utilizando un ajuste de 4 parámetros. El % de inhibición se normalizó con respecto al control sin anticuerpos (100% de inhibición) tras sustraer el fondo (0% de inhibición). Los guiones representan la falta de valores IC<50>calculados debido a la escasa o nula actividad de bloqueo medida.

Las FIGS. 10A-10Brepresentan la reactividad cruzada de especies APRIL de los anticuerpos anti-APRIL. Anticuerpos anti-APRIL con actividad bloqueante (resumidos en laFIG. 9) para comprobar su capacidad de bloquear la unión de APRIL humano y de ratón a TACI-Fc y BCMA-Fc humanos. Como ligandos receptores se utilizaron APRIL recombinantes de ratón y humanos con fusiones N-terminales de GCN4 marcadas con HA idénticas (R&D Systems). Se incluyen algunos datos a título ilustrativo. Los anticuerpos 3530 y 3525 demostraron cualquier actividad entre especies con respecto al bloqueo del receptor TACI-Fc (FIG. 10A). La neutralización cruzada análoga con respecto a la unión de APRIL a BCMA-Fc sólo se consiguió parcialmente (FIG. 10B). Se utilizaron como controles el anticuerpo neutralizante 1313 (específico para humanos) y el anticuerpo Apry-1-1 (específico para ratones). Símbolos cerrados, APRIL humano; símbolos abiertos, APRIL de ratón.

Las FIGS. 11A-11Brepresentan la inhibición por anticuerpos de la señalización del receptor mediada por APRIL. La inhibición de la señalización intracelular NF-kB mediada por el receptor APRIL se evaluó utilizando la línea celular reportera NF-<k>B HEK 293 tras la transfección transitoria de los vectores de expresión de ADNc de longitud completa de los receptores humanos de la familia TNF TACI o BCMA. Los datos se normalizan con respecto a la actividad frente a la ausencia de tratamiento con anticuerpos. La escala del eje Y va de 0 a 1. La inhibición de la señalización del receptor mediada por APRIL se midió a tres concentraciones diferentes del anticuerpo (0,08 pg/mL, 0,4 pg/mL y 10 pg/mL).La FIG. 11Amuestra la inhibición de la señalización NFB mediada por TACI; laFIG. 11Bmuestra la inhibición de la señalización NF-<k>B mediada por BCMA.

Las FIGS. 12A-12Brepresentan la potenciain vivode un anticuerpo anti-APRIL en la reducción de los niveles séricos de IgA. La idoneidad del uso del anticuerpo anti-APRIL para modular la producción de IgAin vivose evaluó basándose directamente en una reducción de los niveles séricos de IgA tras la administración de un anticuerpo neutralizante anti-APRIL en un modelo de roedor de laboratorio. Con este fin, se utilizó también como anticuerpo de prueba el anticuerpo bloqueante Apry-1-1 (Adipogen), específico de April de ratón, utilizado hasta ahora como control para evaluar la actividad de los anticuerpos anti-APRILin vitro,a fin de demostrar la prueba de concepto. Ratones macho B6C3F1 de la misma edad (6-10 semanas de edad) fueron dosificados con 20 mg/kg de anticuerpo dos veces por semana mediante inyección i.p. durante un total de 8 semanas. Se utilizó solución salina inyectable como control negativo (vehículo). Los niveles séricos de inmunoglobulinas específicas de isotipo (IgG, IgM e IgA) se controlaron individualmente mediante ELISA aproximadamente cada 12 días.La FIG.

12Amuestra el efecto del tratamiento sobre los niveles séricos totales de IgA;FIG. 12Bmuestra el efecto del tratamiento frente al control en los niveles totales de inmunoglobulina en suero. Los datos representan la suma de los niveles de IgG IgA IgM medidos por separado.

La FIG. 13representa la alineación de secuencias de APRIL humano y de ratón (SEQ ID N°: 85 y 91, respectivamente. Las alineaciones de secuencias de APRIL soluble se determinaron utilizando CLUSTALW. Las secuencias de aminoácidos corresponden a los números de acceso SwissProt O75888 (humano) y Q9D777 (ratón).

La FIG. 14representa la definición estructural de un epítopo APRIL ejemplar para la orientación de anticuerpos. Se representa un modelo de llenado de espacio de APRIL trimérico. La región ejemplar (definida espacialmente) a la que se dirige una molécula de anticuerpo se representa en gris más oscuro y se indica con una flecha. Este epítopo incluye posiciones en APRIL que tienden puentes entre monómeros. Las diferencias entre las secuencias APRIL humano y de ratón se resaltan con las correspondientes diferencias de aminoácidos en estas posiciones. El sitio putativo de N-glicosilación (N124) está marcado en negro e indicado con una flecha.

La FIG. 15representa la definición estructural de un epítopo APRIL ejemplar para la orientación de anticuerpos. Se representa el modelo de cinta de APRIL trimérico y el epítopo central para la diana anti-APRIL se resalta en gris oscuro.

La FIG. 16representa la unión de anticuerpos anti-APRIL ejemplares a APRIL humano. La unión relativa de anticuerpos anti-APRIL ejemplares se midió mediante ELISA indirecto. Los valores EC<50>extrapolados se resumen enla FIG 17.

La FIG. 17representa las afinidades de unión relativas de anticuerpos anti-APRIL ejemplares. Los datos se obtuvieron mediante ELISA indirecto (resumidos en laFIG.16).

Las FIGS. 18A-18Brepresentan la inhibición por anticuerpos de la señalización del receptor mediada por APRIL. La inhibición de la señalización intracelular de NFkB mediada por receptores APRIL se evaluó utilizando la línea celular reportera de NFkB HEK 293 tras la transfección transitoria de receptores humanos de la familia del TNF de longitud completa TACI (FIG. 18A) o BCMA (FIG. 18B) vectores de expresión de ADNc de longitud completa. Se mostraron anticuerpos ejemplares con fines ilustrativos.

Las FIGS. 19A-19Brepresentan la inhibición por anticuerpos de la unión de APRIL a los receptores TACI del TNFSF (FIG. 19A) y BCMA (FIG. 19B). El ensayo se basa en ELISA de bloqueo utilizando APRIL humano recombinante (R&D Systems) y TACI-Fc humano. La inhibición se analizó mediante regresión no lineal utilizando un ajuste de cuatro parámetros. Los valores IC<50>se resumen en laFIG.

20.

La FIG. 20representa la inhibición por anticuerpos de la unión de APRIL a TACI-Fc humano y BCMA-Fc humano (resumen de las actividades inhibitorias relativas). Los datos derivados de los análisis de regresión no lineal de las curvas de inhibición de anticuerpos representadas en laFIG. 19utilizando un ajuste de 4 parámetros. El % de inhibición se normalizó con respecto al control sin anticuerpos (100% de inhibición) tras sustraer el fondo (0% de inhibición). Los guiones representan la falta de valores IC<50>calculados debido a la escasa o parcial actividad de bloqueo medida.

Las FIGS. 21A-21Brepresentan las actividades de bloqueo cruzado de especies APRIL de los anticuerpos anti-APRIL. Capacidad de los anticuerpos anti-APRIL para bloquear la unión de ambos anticuerpos humanos (FIG. 21A) y ratón (FIG. 21 B) APRIL a BCMA se evaluó mediante ELISA. Se muestran las actividades de bloqueo respectivas de anticuerpos ejemplares (3833, 4540, 3530, 3631 y 3732) con unión APRIL previamente determinada entre especies (ratón y humano).

La FIG. 22representa las variantes APRIL humanas utilizadas para el mapeo de epítopos. APRIL se representa como un trímero. En gris oscuro se representa el epítopo típico que contiene el sitio de unión del receptor de alta afinidad CRD2. Las posiciones de los cambios de aminoácidos se indican con el aminoácido de tipo salvaje precediendo al número y la mutación a continuación(p. ej.,R233G representa la mutación de arginina en la posición 233 a glicina).

Las FIGS. 23A-23Brepresentan la cartografía epitópica del anticuerpo 4035 (FIG. 23A) (se compara con el anticuerpo de referencia 1313;véaselaFIG. 23B). La unión del anticuerpo a las variantes humana y de ratón se evaluó mediante ELISA. APRIL marcado con FLAG se capturó del medio de cultivo celular utilizando un anticuerpo anti-FLAG. Las variantes APRIL humanas se representan como barras abiertas; las variantes APRIL de ratón se representan como barras sólidas.

Las FIGS. 24A-24Brepresentan la cartografía epitópica del anticuerpo 2419 (FIG. 24A) (se compara con el anticuerpo de referencia 1313;véaselaFIG. 24B).La unión del anticuerpo a las variantes humana y de ratón se evaluó mediante ELISA. Las variantes APRIL humanas se representan como barras abiertas; las variantes APRIL de ratón se representan como barras sólidas.

Las FIGS. 25A-25Brepresentan la cartografía epitópica del anticuerpo 3833 (FIG. 25A) (se compara con el anticuerpo de referencia 1313;véaselaFIG. 25B). La unión del anticuerpo a las variantes humana y de ratón se evaluó mediante ELISA. APRIL marcado con FLAG se capturó del medio de cultivo celular utilizando un anticuerpo anti-FLAG. Las variantes APRIL humanas se representan como barras abiertas; las variantes APRIL de ratón se representan como barras sólidas.

La FIG. 26representa el mapeo de epítopos diferenciados de anticuerpos anti-APRIL mediante mutagénesis dirigida al sitio. La caracterización primaria del sitio de unión de APRIL humano se llevó a cabo mediante mutagénesis dirigida a determinadas posiciones de aminoácidos dentro de APRIL, seguida de la evaluación de la unión de anticuerpos a estas variantes mediante ELISA. A título ilustrativo, se muestran datos ejemplares de tres anticuerpos anti-APRIL 4035 (círculos sólidos), 2419 (cuadrados sólidos) y 1313 (triángulos abiertos).

Las FIGS. 27A-27Brepresentan la unión de anticuerpos anti-APRIL ejemplares a APRIL humano. Los anticuerpos incluyen variantes humanizadas de anticuerpos de ratón 4035 (FIG. 27A) y 2419 (FIG.

27B). La unión relativa de anticuerpos anti-APRIL ejemplares se midió mediante ELISA indirecto. La comparación de los anticuerpos humanizados anti-APRIL con los anticuerpos parentales (no humanizados) de ratón se realiza con fines comparativos. Los valores EC<50>extrapolados se resumen enla FIG 29A.

Las FIGS. 28A-28Brepresentan la unión de la variante humanizada del anticuerpo 4540-063 de reacción cruzada humano-ratón tanto a APRIL humano (FIG. 28A) y APRIL de ratón (FIG. 28B). La unión relativa del anticuerpo anti-APRIL ejemplar se midió mediante ELISA indirecto. La comparación del anticuerpo parental (no humanizado) se realiza con fines comparativos. Los valores EC<50>extrapolados se resumen enla FIG 29B.

Las FIGS. 29A-29Brepresentan las afinidades de unión relativas de anticuerpos anti-APRIL ejemplares. Los datos (valores EC<50>)se obtuvieron mediante ELISA indirecto (resumidos enlas FIGS.

27A-27ByFIGS 28A- 28B).La FIG. 29Amuestra las afinidades de unión relativas de anticuerpos anti-APRIL humanizados ejemplares basados en 2419 y 4035.La FIG. 29Bmuestra las afinidades de unión relativas del anticuerpo de reactividad cruzada 4540 y su variante humanizada 4540-063. Se incluyen datos de unión para APRIL humano y de ratón.

Las FIGS. 29C-29Drepresentan la afinidad de unión de los anticuerpos 2419-1406 y 4035-062 a APRIL humano trimérico medida por ELISA. El trímero se estabilizó mediante la fusión N-terminal de APRIL con el dominio de la cremallera de isoleucina (GCN4). La unión de APRIL a TACI-Fc humano se muestra con fines comparativos. Los valores EC<50>derivados de las curvas de unión representadas en laFIG.

29Cse resumen en laFIG. 29D.

Las FIGS. 30A-30Brepresentan la inhibición de la unión de APRIL a los receptores TACI y BCMA del TNFSF por variantes IgG2K humanizadas del anticuerpo 2419 parental derivado de murino. El ensayo se basa en ELISA de bloqueo del receptor utilizando APRIL humano recombinante (R&D Systems) y TACI-Fc humano (FIG. 30A) o BCMA-Fc (FIG. 30B). El anticuerpo quimérico parental 2419 (VH-VL de ratón injertado en regiones constantes de IgG1K humana) se incluyó con fines comparativos, al igual que el anticuerpo quimérico anti APRIL humano 4035. La inhibición se analizó mediante regresión no lineal utilizando un ajuste de curva de cuatro parámetros tras la normalización a una actividad del 100% (control sin anticuerpos). Los valores IC<50>se resumen en laFIG. 33.

Las FIGS. 31A-31Brepresentan la inhibición de la unión de APRIL a los receptores TACI del TNFSF (FIG. 31A) y BCMA (f Ig . 31B) por variantes humanizadas adicionales de 2419 (IgG2K) 2419-0205 y 2419-1406 y variante humanizada (4035-062) del anticuerpo parental 4035. El 4035-062 humanizado es del subtipo IgG1K. Se incluyen versiones quiméricas, no humanizadas, de los anticuerpos derivados de ratón 4035 y 2419, y 1313 con fines comparativos. mAb1313 es un anticuerpo anti-APRIL de control. Se utilizaron TACI-Fc y BCMA-Fc. Los valores IC<50>se resumen en laFIG. 33.

Las FIGS. 32A-32Brepresentan la inhibición por anticuerpos de la unión de APRIL a los receptores TACI del TNFSF (FIG. 32A) y BCMA (FIG. 32B) mediante variantes humanizadas del anticuerpo neutralizante cruzado APRIL 4540 de ratón/humano. El anticuerpo humanizado 4540 es del subtipo IgG1K. Parental 4540 (quimera no humanizada) y humanizada 4035-062 (FIGS. 30A-30B) se incluyen a efectos comparativos. La inhibición se analizó mediante regresión no lineal utilizando un ajuste de curva de cuatro parámetros como se describe paralas FIGS. 29A-29ByFIGS. 30A-30B. Los valores IC<50>también se resumen en laFIG. 33.

La FIG. 33representa los valores IC<50>de inhibición por anticuerpos de la unión APRIL-receptor. Los valores IC<50>se basan en un análisis de regresión no lineal de los datos delas FIGS. 30A-32B. Los datos también se han normalizado (actividad relativa) con respecto al anticuerpo parental 2419 derivado de ratón.

Las FIGS. 34A-34Brepresentan la inhibición por anticuerpos de la señalización del receptor mediada por APRIL. La inhibición de la señalización intracelular de NFkB mediada por el receptor APRIL se evaluó utilizando la línea celular reportera de NFkB HEK 293 tras la transfección transitoria de vectores de expresión de ADNc de receptores humanos de la familia del TNF de longitud completa TACI o BCMA. Los datos se normalizan con respecto al control sin anticuerpos (100%).

La FIG. 34Amuestra la inhibición de la señalización NF<k>B mediada por TACI.La FIG. 34Bmuestra la inhibición de la señalización NFkB mediada por BCMA.

La FIG. 35representa los valores IC<50>aproximados de la inhibición por anticuerpos de la señalización del receptor mediada por APRIL. Los datos se extrapolan delas FIGS. 34A-34Bbasado en un análisis de regresión no lineal utilizando un ajuste de tres parámetros de pendiente variable de la concentración de anticuerpos frente a la respuesta. El anticuerpo de control negativo (sin unión a APRIL) no demostró actividad en este ensayo (datos no mostrados).

La FIG. 36muestra el análisis de la reactividad de unión del anticuerpo APRIL a otros miembros de la familia de citoquinas TNFSF 13. Se utilizó un panel selecto de citocinas recombinantes relacionadas con el TNFSF (Adipogen) para comprobar la reactividad cruzada de los anticuerpos medida mediante ELISA. El panel incluía APRIL humano (diana específica) y BAFF estructuralmente relacionado. Se incluyen anticuerpos ejemplares con fines ilustrativos. Como se había previsto, se detectó una fuerte unión de los anticuerpos anti-APRIL a APRIL humano. Sin embargo, la reactividad cruzada con BAFF y otros miembros distintos del objetivo (APRIL humano) no se detectó en general sustancialmente por encima del fondo del ensayo (medido aquí utilizando sólo BSA y diluyente del ensayo, controles 1x PBS). El anticuerpo 4338, un anticuerpo de reactividad cruzada BAFF previamente identificado, se utilizó como control positivo (reactivo BAFF). También se incluyó un anticuerpo de control, mAb1313.

Las FIGS. 37A-37Cmuestran la reactividad cruzada mínima de mAb 2419-1406 y mAb 4035-062 en un amplio conjunto de más de 4500 proteínas de membrana humanas expresadas heterológicamente en un ensayo basado en HEK293 y en el cribado confirmatorio/secundario. Un ejemplo de diseño de matriz de expresión de proteínas se muestra en laFIG.37A. Las FIGS. 37B-37Crepresentan el cribado confirmatorio/secundario de 12 proteínas. Los niveles de expresión de la matriz de cribado secundario de 12proteínas de membrana humanas en células 293 basadas en GFP se muestran en los paneles izquierdos delas FIGS. 37B-37C. La unión de anticuerpos a esta misma matriz se muestra en los paneles derechos delas FIGS. 37B-37C.

La FIG.38Arepresenta el compromiso molecular de la unión del mAb anti-APRIL 2419 a APRIL basado en datos co-cristalográficos de rayos X de baja resolución de APRIL humano (aminoácidos 115-250) y la región Fab del ratón 2419. La estructura se resolvió mediante sustitución molecular utilizando el APRIL de ratón descrito en la base de datos de estructuras proteicas. El epítopo 2419 dentro de APRIL se indica con una flecha. También se indican las cadenas ligeras y pesadas variables del mAb 2419. La estructura de APRIL se representa como un trímero.

La FIG. 38Brepresenta residuos dentro de APRIL que comprenden un subconjunto del epítopo 2419. Esta representación estructural del epítopo 2419 también destaca el hecho de que 2419 se une a un epítopo cuaternario no lineal que abarca dos monómeros diferentes de APRIL dentro de un complejo trimérico mayor representado aquí como monómero A y monómero B. Se indica el epítopo en el monómero A y el epítopo en el monómero B. El epítopo 2419 se solapa sustancialmente con el sitio de unión al receptor de alta afinidad (CRD2) y el sitio de unión al receptor de baja afinidad (CRD1) críticos para la señalización del receptor mediada por APRIL. El sitio de unión del receptor CRD2 y el sitio de unión del receptor CRD1 están delineados e indicados.

Las FIGS. 39A-39Brepresentan la estabilidad térmica de los anticuerpos mAb 2419-1406 y 4035-062 medida mediante el ensayo de barrido de fluorescencia Sypro-Orange®. Las temperaturas de fusión térmica (valores Tm) tanto para 2419-1406 como para 4035-062 se muestran en laFIG. 39B.

Las FIGS. 40A-40Brepresentan los perfiles PK de mAb 2419-1406 y 4035-062 en la cepa de ratón transgénico FcRn humanizado tg32. Se administró a ratones Tg32 una dosis única de 5 mg/kg de mAb 2419-1406 o mAb 4035-062 mediante inyección intravenosa. Los niveles de anticuerpos en el suero se determinaron mediante ELISA tras un periodo de hasta 20 días. Los valores PK figuran en laFIG. 40B.

La FIG. 41representa la reducción de los niveles séricos basales de IgA en ratones tratados con mAb 4540 y mAb 3833. Ratones C57/BL6 de 11 semanas de edad recibieron dosis subcrónicas (1* semanal mediante inyección i.p.) de 20 mg/kg de mAb 4540 o anticuerpo de control del isotipo durante siete semanas. Los niveles séricos basales de IgA total se cuantificaron mediante ELISA. Mediana de los niveles de IgA graficados; N=5 ratones por grupo.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

[0179]En el presente documento se dan a conocer moléculas de anticuerpos que se unen a APRIL,p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos, con alta afinidad y especificidad. Ventajosamente, varias de las moléculas de anticuerpos aquí descritas tienen una capacidad mejorada para reducir(p. ej.,inhibir, bloquear o neutralizar) una o más actividades biológicas de APRIL. También se proporcionan moléculas de ácido nucleico que codifican las moléculas de anticuerpo, vectores de expresión, células huésped, composiciones(p. ej.,composiciones farmacéuticas), kits y métodos para fabricar las moléculas de anticuerpo. Las moléculas de anticuerpos y las composiciones farmacéuticas aquí divulgadas pueden utilizarse (solas o en combinación con otros agentes o modalidades terapéuticas) para tratar, prevenir y/o diagnosticar trastornos y afecciones,p. ej.,trastornos y afecciones asociados con APRIL,p. ej.,nefropatía IgA.

Definiciones

[0180]Tal y como se utilizan aquí, los artículos "un" y "una" se refieren a uno o a más de uno(p. ej.,a al menos uno) del objeto gramatical del artículo.

[0181]El término "o" se utiliza aquí para significar, y se utiliza indistintamente con, el término "y/o", a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

[0182]"Aproximadamente" significará en general un grado aceptable de error para la cantidad medida dada la naturaleza o precisión de las mediciones. Los grados de error ejemplares están dentro del 20% (%), típicamente, dentro del 10%, y más típicamente, dentro del 5% de un valor dado o intervalo de valores.

[0183]Las composiciones y métodos aquí divulgados abarcan polipéptidos y ácidos nucleicos que tienen las secuencias especificadas, o secuencias sustancialmente idénticas o similares a las mismas,p. ej.,secuencias al menos 85%, 90%, 95% idénticas o superiores a la secuencia especificada.

[0184]En el contexto de una secuencia de aminoácidos, el término "sustancialmente idéntico" se utiliza aquí para referirse a un primer aminoácido que contiene un número suficiente o mínimo de residuos de aminoácidos que son i) idénticos a, o ii) sustituciones conservadoras de residuos de aminoácidos alineados en una segunda secuencia de aminoácidos de tal manera que las secuencias de aminoácidos primera y segunda pueden tener un dominio estructural común y/o una actividad funcional común. Por ejemplo, secuencias de aminoácidos que contienen un dominio estructural común que tiene al menos aproximadamente 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad con una secuencia de referencia, porejemplo,una secuencia proporcionada en el presente documento.

[0185]En el contexto de la secuencia de nucleótidos, el término "sustancialmente idéntica" se utiliza aquí para referirse a una primera secuencia de ácido nucleico que contiene un número suficiente o mínimo de nucleótidos que son idénticos a nucleótidos alineados en una segunda secuencia de ácido nucleico de tal manera que las secuencias de nucleótidos primera y segunda codifican un polipéptido que tiene una actividad funcional común, o codifican un dominio polipeptídico estructural común o una actividad polipeptídica funcional común. Por ejemplo, secuencias de nucleótidos que tengan al menos un 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad con una secuencia de referencia, porejemplo,una secuencia proporcionada en el presente documento.

[0186]El término "variante funcional" se refiere a polipéptidos que tienen una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a la secuencia natural, o están codificados por una secuencia de nucleótidos sustancialmente idéntica, y son capaces de tener una o más actividades de la secuencia natural.

[0187]Los cálculos de homología o identidad de secuencia entre secuencias (los términos se utilizan indistintamente en el presente documento) se realizan de la siguiente manera.

[0188]Para determinar el porcentaje de identidad de dos secuencias de aminoácidos, o de dos secuencias de ácidos nucleicos, las secuencias se alinean para fines de comparación óptima(p. ej.,,se pueden introducir huecos en una o ambas de una primera y una segunda secuencia de aminoácidos o ácidos nucleicos para una alineación óptima y las secuencias no homólogas se pueden descartar para fines de comparación). En una realización típica, la longitud de una secuencia de referencia alineada con fines de comparación es de al menos el 30%, porejemplo,al menos el 40%, 50%, 60% ,p. ej.,al menos el 70%, 80%, 90%, 100% de la longitud de la secuencia de referencia. A continuación, se comparan los residuos de aminoácidos o nucleótidos en las posiciones de aminoácidos o nucleótidos correspondientes. Cuando una posición de la primera secuencia está ocupada por el mismo residuo de aminoácido o nucleótido que la posición correspondiente de la segunda secuencia, las moléculas son idénticas en esa posición.

El porcentaje de identidad entre las dos secuencias es una función del número de posiciones idénticas compartidas por las secuencias, teniendo en cuenta el número de huecos, y la longitud de cada hueco, que es necesario introducir para una alineación óptima de las dos secuencias.

[0190]La comparación de secuencias y la determinación del porcentaje de identidad entre dos secuencias puede realizarse utilizando un algoritmo matemático. En algunas realizaciones, el porcentaje de identidad entre dos secuencias de aminoácidos se determina utilizando el método de Needleman y Wunsch ((1970) J. Mol. Biol. 48:444-453) que se ha incorporado al programa GAP del paquete informático GCG (disponible en www.gcg.com), utilizando una matriz Blossum 62 o una matriz PAM250, y un peso degapde 16, 14, 12, 10, 8, 6 ó 4 y un peso de longitud de 1, 2, 3, 4, 5 ó 6. En ciertas realizaciones, el porcentaje de identidad entre dos secuencias nucleotídicas se determina utilizando el programa GAP del paquete de software GCG (disponible en www.gcg.com), utilizando una matriz NWSgapdna.CMP y un peso degapde 40, 50, 60, 70 u 80 y un peso de longitud de 1, 2, 3, 4, 5 o 6. Un conjunto adecuado de parámetros (y el que debería usarse a menos que se especifique lo contrario) es una matriz de puntuación Blossum 62 con una penalización degapde 12, una penalización de extensión degapde 4 y una penalización degapde desplazamiento del marco de lectura de 5.

[0191]El porcentaje de identidad entre dos secuencias de aminoácidos o de nucleótidos puede determinarse utilizando el algoritmo de E. Meyers y W. Miller ((1989) CABIOS, 4.X.C.): 11-17) que se ha incorporado al programa ALIGN (versión 2.0), utilizando una tabla de residuos de peso PAM120, una penalización de longitud degapde 12 y una penalización degapde 4.

[0192]Las secuencias de ácidos nucleicos y proteínas aquí descritas pueden utilizarse como "secuencia de consulta" para realizar una búsqueda en bases de datos públicas para, por ejemplo, identificar otros miembros de la familia o secuencias relacionadas. Estas búsquedas pueden realizarse utilizando los programas NBLAST y XBLAST (versión 2.0) de Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10. Se pueden realizar búsquedas de nucleótidos BLAST con el programa NBLAST, puntuación = 100, longitud de palabra = 12 para obtener secuencias de nucleótidos homólogas a un ácido nucleico según se describe en el presente documento. Se pueden realizar búsquedas de proteínas BLAST con el programa XBLAST, puntuación = 50, longitud de palabra = 3 para obtener secuencias de aminoácidos homólogas a las moléculas de proteínas descritas en el presente documento. Para obtener alineaciones separadas con fines comparativos, se puede utilizar Gapped BLAST como se describe en Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402. Al utilizar los programas BLAST y Gapped BLAST, se pueden utilizar los parámetros por defecto de los respectivos programas(p. ej.,XBLAST y NBLAST). See www.ncbi.nlm.nih.gov.

[0193]Tal como se utiliza aquí, el término "hibrida en condiciones de baja rigurosidad, media rigurosidad, alta rigurosidad o muy alta rigurosidad" describe las condiciones de hibridación y lavado. En Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y., se ofrece orientación para realizar reacciones de hibridación. (1989), 6.3.1-6.3.6. En dicha referencia se describen métodos acuosos y no acuosos, pudiendo utilizarse cualquiera de ellos. Las condiciones específicas de hibridación a las que se hace referencia en el presente documento son las siguientes: 1) condiciones de hibridación de baja rigurosidad en 6X cloruro sódico/citrato sódico (SSC) a aproximadamente 45°C, seguidas de dos lavados en 0,2X SSC, 0,1% SDS al menos a 50°C (la temperatura de los lavados puede aumentarse a 55°C para condiciones de baja rigurosidad); 2) condiciones de hibridación de rigurosidad media en 6X SSC a aproximadamente 45°C, seguidas de uno o más lavados en 0,2X SSC, 0,1% SDS a 60°C; 3) condiciones de hibridación de alta rigurosidad en 6X SSC a aproximadamente 45°C, seguidas de uno o más lavados en 0,2X SSC, 0,1% SDS a 65°C; y preferentemente 4) condiciones de hibridación de muy alta rigurosidad en 0,5M de fosfato sódico, 7% SDS a 65°C, seguidas de uno o más lavados en 0,2X SSC, 1% SDS a 65°C. Las condiciones de muy alta rigurosidad 4) son condiciones adecuadas y las que deben utilizarse a menos que se especifique lo contrario.

[0194]Se entiende que las moléculas aquí descritas pueden tener sustituciones adicionales de aminoácidos conservadoras o no esenciales, que no tienen un efecto sustancial sobre sus funciones.

[0195]El término "aminoácido" abarca todas las moléculas, naturales o sintéticas, que incluyen tanto una funcionalidad amino como una funcionalidad ácida y que pueden incluirse en un polímero de aminoácidos naturales. Los aminoácidos ejemplares incluyen aminoácidos naturales; análogos, derivados y congéneres de los mismos; análogos de aminoácidos con cadenas laterales variantes; y todos los estereoisómeros de cualquiera de los anteriores. En el presente documento, el término "aminoácido" incluye tanto los isómeros ópticos D o L como los peptidomiméticos.

Una "sustitución conservadora de aminoácidos" es aquella en la que el residuo de aminoácido se sustituye por un residuo de aminoácido con una cadena lateral similar. En la técnica se han definido familias de residuos de aminoácidos con cadenas laterales similares. Estas familias incluyen aminoácidos con cadenas laterales básicas(p. ej.,lisina, arginina, histidina), cadenas laterales ácidas(p. ej.,ácido aspártico, ácido glutámico), cadenas laterales polares no cargadas(p. ej.,glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadenas laterales no polares(p. ej.,alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano), cadenas laterales beta-ramificadas(p. ej.,treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas(p.ej.,tirosina, fenilalanina, triptófano, histidina).

[0197]Los términos "polipéptido", "péptido" y "proteína" (si es de cadena simple) se utilizan indistintamente en el presente documento para referirse a polímeros de aminoácidos de cualquier longitud. El polímero puede ser lineal o ramificado, puede comprender aminoácidos modificados y puede estar interrumpido por no aminoácidos. Los términos también abarcan un polímero de aminoácidos que ha sido modificado; por ejemplo, formación de enlaces disulfuro, glucosilación, lipidación, acetilación, fosforilación o cualquier otra manipulación, como la conjugación con un componente de marcación. El polipéptido puede aislarse de fuentes naturales, puede producirse mediante técnicas recombinantes a partir de un huésped eucariota o procariota, o puede ser un producto de procedimientos sintéticos.

[0198]Los términos "ácido nucleico", "secuencia de ácido nucleico", "secuencia de nucleótidos" o "secuencia de polinucleótidos" y "polinucleótido" se utilizan indistintamente. Se refieren a una forma polimérica de nucleótidos de cualquier longitud, ya sean desoxirribonucleótidos o ribonucleótidos, o análogos de los mismos. El polinucleótido puede ser monocatenario o bicatenario, y si es monocatenario puede ser la cadena codificante o la cadena no codificante (antisentido). Un polinucleótido puede comprender nucleótidos modificados, como nucleótidos metilados y análogos de nucleótidos. La secuencia de nucleótidos puede estar interrumpida por componentes no nucleotídicos. Un polinucleótido puede modificarse aún más después de la polimerización, por ejemplo, mediante conjugación con un componente de marcación. El ácido nucleico puede ser un polinucleótido recombinante o un polinucleótido de origen genómico, ADNc, semisintético o sintético que no se encuentra en la naturaleza o que está unido a otro polinucleótido en una disposición no natural.

[0199]El término "aislado", tal como se utiliza aquí, se refiere al material que se retira de su entorno original o nativo(p. ej.,el entorno natural si se produce de forma natural). Por ejemplo, no se aísla un polinucleótido o polipéptido presente de forma natural en un animal vivo, sino que se aísla el mismo polinucleótido o polipéptido, separado por intervención humana de algunos o todos los materiales coexistentes en el sistema natural. Dichos polinucleótidos podrían formar parte de un vector y/o dichos polinucleótidos o polipéptidos podrían formar parte de una composición, y aún así estar aislados en el sentido de que dicho vector o composición no forma parte del entorno en el que se encuentra en la naturaleza.

[0200]Tal como se utiliza en el presente documento, el término "tratar", p. ej., la nefropatía por IgA, significa que un sujeto(p. ej.,un ser humano) que tiene un trastorno,p. ej.,nefropatía por IgA, y/o experimenta un síntoma de un trastorno,p. ej.,nefropatía por IgA, sufrirá, en una realización, un síntoma menos grave y/o se recuperará más rápidamente cuando se administre una molécula de anticuerpo que si nunca se administrara la molécula de anticuerpo. En una realización, cuando se trata la nefropatía por IgA, una biopsia renal mostrará menos o ningún depósito de IgA,p. ej.,en forma de complejos inmunes en el mesangio del riñón, después de un tratamiento eficaz para la nefropatía por IgA. Por ejemplo, un ensayo de diagnóstico mediante inmunofluorescencia o microscopía electrónica detectará menos depósitos de IgA en una muestra biológica de un sujeto tras la administración de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento para el tratamiento eficaz de la nefropatía por IgA. También pueden utilizarse otros ensayos, análisis de orina, análisis de sangre, pruebas de aclaramiento de iotalamato o imágenes renales(p. ej.,ultrasonidos, radiografías o cistoscopia), para monitorizar el tratamiento en un paciente, o para detectar la presencia,p. ej.,disminución de la presencia (o ausencia), de un síntoma de nefropatía por IgA, tras el tratamiento de la nefropatía por IgA en el sujeto. El tratamiento puede,p. ej.,aliviar, mejorar, mitigar, inhibir o reducir parcial o totalmente la gravedad y/o reducir la incidencia y, opcionalmente, retrasar la aparición de una o más manifestaciones de los efectos o síntomas, características y/o causas de un trastorno,p. ej.,la nefropatía por IgA. En una realización, el tratamiento es de un sujeto que no exhibe ciertos signos de un trastorno,p. ej.,nefropatía IgA, y/o de un sujeto que exhibe sólo signos tempranos de un trastorno,p. ej.,nefropatía. En una realización, el tratamiento es de un sujeto que exhibe uno o más signos establecidos de un trastorno,p. ej.,nefropatía IgA. En una realización, el tratamiento es de un sujeto diagnosticado de padecer un trastorno,p. ej.,nefropatía IgA.

[0201]Tal como se utiliza en el presente documento, el término "prevenir" un trastorno,p. ej.,la nefropatía por IgA, significa que un sujeto(p. ej.,un ser humano) tiene menos probabilidades de padecer el trastorno,p. ej.,la nefropatía por IgA, si el sujeto recibe la molécula de anticuerpo.

[0202]Varios aspectos de las composiciones y métodos aquí descritos se describen con más detalle a continuación. A lo largo del pliego de condiciones figuran otras definiciones.

APRIL

[0203] APRIL (A PRoliferation Inducing Ligand, en inglés), también conocido como CD256, ligando 2 expresado por leucocitos relacionados con TNF y APOL (TALL-2), o ligando 1 de muerte relacionado con el TNF (TRDL-1), es una citoquina de la familia TNF codificada por el gen Miembro 13 de la superfamilia del ligando del factor de necrosis tumoral(TNFSF13)(también conocido comoAPRIL, TALL2, o ZTNF2).APRIL interviene en varios procesos biológicos, como la transducción de señales, la regulación de la proliferación celular y el cambio de clase de IgA (Hahne et al. (1998) J. Exp. Med. 188: 1185-1190 (1998); Castigli et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101:3903-3908 (2004)).

[0204]APRIL está relacionado tanto funcional como estructuralmente con BAFF (B Cell Activating Factor F13B, en inglés) también conocido como BLyS (Estimulador de linfocitos B). Ambas citoquinas intervienen en la regulación de aspectos clave de las funciones inmunitarias innata y adaptativa. Tanto APRIL como BAFF se unen a los receptores linfocitarios TACI (activador transmembrana e interaccionador CAML) y BCMA (antígeno de maduración de células B). APRIL y BAFF parecen interactuar heterológicamente entre sí a través de interacciones proteína-proteína. Aunque tanto APRIL como BAFF comparten características bioquímicas (unión a receptores), inmunológicas e incluso algunas coincidencias estructurales(p. ej.,en lo que se refiere a la topología tridimensional de sus respectivos dominios de unión a receptores), ambas citocinas son, sin embargo, estructural y funcionalmente distintas. APRIL se une al heparán sulfato biológicamente relevante (presente en las matrices extracelulares de las células como proteoglicanos de heparán sulfato); BAFF no. Esta interacción desempeña una función biológica crítica con respecto a la promoción del estado de oligomerización de APRIL en concierto con su interacción localizada con TACI, que igualmente requiere HSPGS para una actividad completa. A diferencia del BAFF, que actúa como un potente activador de los linfocitos B, incluyendo tanto la proliferación como la diferenciación, APRIL parece funcionar más particularmente con respecto a la modulación del fenotipo de los linfocitos B,p. ej.,en relación con la producción de IgA y la diferenciación/supervivencia de las células plasmáticas IgA positivas. Como tal, se espera que una interrupción dirigida en la señalización del receptor APRIL tenga efectos menos perturbadores en la homeostasis de las células B y la función inmune en general en comparación con otras terapias relacionadas con el sistema inmune que se dirigen a BAFF(p. ej.,belimumab) o terapias anti CD20(p. ej.,rituximab) que se dirigen en gran medida a las células B pre y tempranas. También se ha demostrado que APRIL se expresa a altos niveles en otras células relacionadas con los mieloides y en tejidos linfoides, así como en cánceres hematológicos(p.ej.,mieloma, leucemia linfocítica crónica (CLL)) y tumores sólidos(p.ej.,colon, tiroides y mama).

[0205]Se describen secuencias ejemplares de aminoácidos y nucleótidos de APRIL humano,p. ej.,en Hahne et al. J. Exp. Med. 188:1185-1190 (1998); Shu etal. J. Leukoc. Biol. 65:680-683 (1999); Kelly et al. Cancer Res., 2002, 62, 7291-7297(19):5665-9, 2007. 60: 1021-1027(2000); y Pradet-Balade et al. EMBO J. 21:5711-5720 (2002).

[0206]La secuencia de aminoácidos de APRIL humano (isoforma alfa, también denominada secuencia "canónica" (SEQ ID N°: 85)) se proporciona como sigue.

>huAPRIL

MPASSPFLLAPKGPPGNMGGPVREPALSVALWLSWGAALGAVACAMALLTQQTELQSLRREVSRLQGT GGPSQNGEGYPWQSLPEQSSDALEAWENGERSRKRRAVLTQKQKKQHSVLHLVPINATSKDDSDVTEV MWQPALRRGRGLQAQGYGVRIQDAGVYLLY SQVLFQDVTFTMGQVVSREGQGRQETLFRCIRSMPSHP DRAYNSCY SAGVFHLHQGDILSVIIPRARAKLNLSPHGTFLGFVKL

[0207]Existen varias isoformas de APRIL humano producidas porsplicingalternativo.

[0208]La isoforma beta tiene la siguiente secuencia de aminoácidos (SEQ ID N°: 86):

>sp|075888-2|TNF13_HUMAN Isoforma Beta del miembro 13 de la superfamilia del ligando del factor de necrosis tumoral oS=Homo sapiens GN=TNFSF13

MPASSPFLLAPKGPPGNMGGPVREPALSVALWLSWGAALGAVACAMALLTQQTELQSLRREVSRLQGT GGPSQNGEGYPWQSLPEQSSDALEAWENGERSRKRRAVLTQKQKNDSDVTEVMWQPALRRGRGLQAQG YGVRIQDAGVYLLYSQVLFQDVTFTMGQVVSREGQGRQETLFRCIRSMPSHPDRAYNSCY SAGVFHLH QGDILSVIIPRARAKLNLSPHGTFLGFVKL

[0209]La secuencia de la isoforma beta difiere de la secuencia canónica como sigue: los aminoácidos 113-129 de SEQ ID N°: 85: KQHSVLHLVPINATSKD ^ N

[0210]La isoterma gamma tiene la siguiente secuencia de aminoácidos (SEQ ID N°: 87):

>sp|O75888-3|TNF13_HUMAN Isoterma Gamma del miembro 13 de la superfamilia del ligando del factor de necrosis tumoral OS=Homo sapiens GN=TNFSF13

MPASSPFLLAPKGPPGNMGGPVREPALSVALWLSWGAALGAVACAMALLTQQTELQSLRREVSRLQGT GGPSQNGEGYPWQSLPEQSSDALEAWENGERSRKRRAVLTQKQKKQHSVLHLVPINATSKDDSDVTEV MWQPALRRGRGLQAQGYGVRIQDAGVYLLY SQVLFQDVTFTMGQVVSREGQGRQETLFRCIRSMPSHP DRAYNSCY SAGVFHLHQGDILSVIIPRARAKLNLSPHGTFLGL

[0211]La secuencia de la isoforma gamma difiere de la secuencia canónica como sigue: aminoácidos 247-249: Falta.

[0212]La isoforma 4 tiene la siguiente secuencia de aminoácidos (SEQ ID N°: 88):

>sp|075888-4|TNF13_HUMAN Isoforma 4 del miembro 13 de la superfamilia del ligando del factor de necrosis tumoral oS=Homo sapiens GN=TNFSF13

MPASSPFLLAPKGPPGNMGGPVREPALSVALWLSWGAALGAVACAMALLTQQTELQSLRREVSRLQGT GGPSQNGEGYPWQSLPEQHSVLHLVPINATSKDDSDVTEVMWQPALRRGRGLQAQGYGVRIQDAGVYL LYSQVLFQDVTFTMGQVVSREGQGRQETLFRCIRSMPSHPDRAYNSCYSAGVFHLHQGDILSVIIPRA RAKLNLSPHGTFLGFVKL

[0213]La secuencia de la isoforma 4 difiere de la secuencia canónica como sigue: aminoácidos 86-113: Falta.

[0214]La isoforma TWE-PRIL tiene la siguiente secuencia de aminoácidos (SEQ ID N°: 89):

>sp|O43508-2|TNF12_HUMAN Isoforma TWE-PRIL del miembro 12 de la superfamilia del ligando del factor de necrosis tumoral OS=Homo sapiens GN=TNFSF12

MAARRSQRRRGRRGEPGTALLVPLALGLGLALACLGLLLAVVSLGSRASLSAQEPAQEELVAEEDQDP SELNPQTEESQDPAPFLNRLVRPRRSAPKGRKTRARRAIAAHYEVHPRPGQDGAQAGVDGTVSGWEEA RINSSSPLRYNRQIGEFIVTRAGLYYLYCQSSDALEAWENGERSRKRRAVLTQKQKKQHSVLHLVPIN ATSKDDSDVTEVMWQPALRRGRGLQAQGYGVRIQDAGVYLLY SQVLFQDVTFTMGQVVSREGQGRQET LFRCIRSMPSHPDRAYNSCYSAGVFHLHQGDILSVIIPRARAKLNLSPHGTFLGFVKL

[0215]La isoforma 5 tiene la siguiente secuencia de aminoácidos (SEQ ID N°: 90):

>sp|O75888-5|TNF13_HUMAN Isoforma 5 del miembro 13 de la superfamilia del ligando del factor de necrosis tumoral oS=Homo sapiens GN=TNFSF13

MGGPVREPALSVALWLSWGAALGAVACAMALLTQQTELQSLRREVSRLQGTGGPSQNGEGYPWQSLPE QHSVLHLVPINATSKDDSDVTEVMWQPALRRGRGLQAQGYGVRIQDAGVYLLYSQVLFQDVTFTMGQV VSREGQGRQETLFRCIRSMPSHPDRAYNSCYSAGVFHLHQGDILSVIIPRARAKLNLSPHGTFLGFVK

L

[0216]La secuencia de la isoforma 5 difiere de la secuencia canónica como sigue: aminoácidos 1-17: Falta; aminoácidos 87-114: Falta.

[0217]Otras secuencias variantes y alternativas de APRIL humano se describen,p. ej.,en The MGC Project Team, Genome Res. 14:2121-2127 (2004); Ota et al. Nat. Genet. 36:40-45 (2004); y Kelly et al. Cancer Res., 2002, 62, 7291-7297(19):5665-9, 2007. 60:1021-1027 (2000).

[0218]Tal como se utiliza en el presente documento, cuando una molécula de anticuerpo anti-APRIL se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano, se une, o se une sustancialmente, a una o más isoformas de APRIL humano,p. ej.,una o más isoformas de APRIL humano descritas en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo se une o se une sustancialmente a APRIL humano que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 85.

[0219]Se describen secuencias ejemplares de aminoácidos y nucleótidos de APRIL de ratón,p. ej.,en Yu et al. Nat. Immunol. 1:252-256 (2000); Caminci et al. Science 309:1559-1563 (2005); The MGC Project Team, Genome Res.

14:2121-2127 (2004); y Bossen et al. J. Biol Chem. 281: 13964-13971 (2006).

[0220]La secuencia de aminoácidos de la isoforma 1 de APRIL de ratón (SEQ ID N°: 91) se proporciona como sigue. >muAPRIL

MPASSPGHMGGSVREPALSVALWLSWGAVLGAVTCAVALLIQQTELQSLRREVSRLQRSGGPSQKQGE RPWQSLWEQSPDVLEAWKDGAKSRRRRAVLTQKHKKKHSVLHLVPVNITSKADSDVTEVMWQPVLRRG RGLEAQGDIVRVWDTGIYLLYSQVLFHDVTFTMGQVVSREGQGRRETLFRCIRSMPSDPDRAYNSCYS AGVFHLHQGDIITVKIPRANAKLSLSPHGTFLGFVKL

[0221]La secuencia de aminoácidos de la isoterma 2 de APRIL de ratón (SEQ ID N°: 92) se proporciona como sigue.

MPASSPGHMGGSVREPALSVALWLSWGAVLGAVTCAVALLIQQTELQSLRREVSRLQRSGGPSQKQGE RPWQSLWEQSPDVLEAWKDGAKSRRRRAVLTQKHKKKHSVLHLVPVNITSKDSDVTEVMWQPVLRRGR GLEAQGDIVRVWDTGIYLLY SQVLFHDVTFTMGQVVSREGQGRRETLFRCIRSMPSDPDRAYNSCYSA GVFHLHQGDIITVKIPRANAKLSLSPHGTFLGFVKL

[0222]Tal como se utiliza en el presente documento, cuando una molécula de anticuerpo anti-APRIL se une, o se une sustancialmente, a APRIL de ratón, se une, o se une sustancialmente, a una o más isotermas de APRIL de ratón,p. ej.,una o más isoformas de APRIL de ratón descritas en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo se une o se une sustancialmente a APRIL de ratón que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 91/SEQ ID N°: 92, o ambas.

[0223]Tal como se utiliza en el presente documento, cuando una molécula de anticuerpo anti-APRIL no se une, o no se une sustancialmente, a APRIL de ratón, no se une, o no se une sustancialmente, a una o más isoformas de APRIL de ratón,p. ej.,una o más isoformas de APRIL de ratón descritas en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo no se une, o no se une sustancialmente, a APRIL de ratón que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 91, o 92. En una realización típica, la molécula de anticuerpo no se une, o no se une sustancialmente, a APRIL de ratón que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 91 y APRIL de ratón con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 92.

[0224]Alineación de secuencias de proteínas APRIL humanos y de ratón ejemplares (SEQ ID N°: 85 y 91, respectivamente) se muestra en laFIG. 13.

Epítopo

[0225] La molécula de anticuerpo descrita en el presente documento puede unirse a un epítopo de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos). Por ejemplo, un epítopo unido por una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento puede incluir uno o más puntos de contacto de epítopos descritos en el presente documento.

[0226]En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une, o sustancialmente se une, a) uno o más residuos, o una o más regiones, como se describe en cualquiera de lasTablas 3-4 o 6-8,o cualquiera de lasFIGS.

14,22,23A-23B,24A-24B,25A-25B,o 38A-38B.

[0227]En una realización, la molécula de anticuerpo contactafp. ej., se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos) de los residuos de aminoácidos que se muestran enla Tabla 3.En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) todos los residuos de aminoácidos mostrados enla Tabla 3. Por ejemplo, las moléculas de anticuerpo descritas en el presente documento pueden entrar en contacto con los residuos de aminoácidos mostrados enla Tabla 3de una manera que incluye la unión a través de dos monómeros APRIL(p. ej.,como se representa posicionalmente en laTabla 3como A vs. APRIL). B). Aunque no se desea estar limitado por la teoría, se cree que en una realización, al menos algunos de los residuos de aminoácidos mostrados enla Tabla3 contribuyen a interacciones de alta afinidad entre APRIL y el dominio CDR2 de TACI. En una realización, el contacto de uno o más de los residuos de aminoácidos dela Tabla 3con una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL a TACI.

[0228]En laTabla 3se muestran residuos de aminoácidos APRIL humanos ejemplares que pueden unirse a las moléculas de anticuerpos anti-APRIL aquí descritas.Una representación estructural de este epítopo(p. ej.,definido tanto espacial como conformacionalmente) se muestra en laFIG. 14.

Tabla 3.Residuos de aminoácidos APRIL humanos ejemplares que se unen a anticuerpos anti-APRIL (numeración de aminoácidos basada en SEQ ID N°: 85)

[0229]En otra realización, la molécula de anticuerpo contactafp. ej., se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o todos) de los residuos de aminoácidos mostrados enla tabla 4.En otra realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) todos los residuos de aminoácidos mostrados enla Tabla 4.En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, al bucle C-D(p. ej.,el bucle que conecta las hojas p C y D), al bucle G-H(p. ej.,el bucle que conecta las hojas p G y H), o a ambos, en APRIL.

[0230]Una representación estructural (espacial) de este epítopo (a veces denominado en el presente documento "región central") se muestra en laFIG. 15. Como se muestra en laFlG. 15, cada molécula de proteína APRIL contiene dos láminas p antiparalelas de ocho hebras (A a G), una interna y otra externa, en una topología p-gelatina. Estas hojas B están conectadas por bucles que también definen (basándose en las definiciones de la estructura secundaria) un epítopo deseado. Aunque no se desea estar limitado por la teoría, se cree que como estas posiciones/estructuras definen un subconjunto de interacciones clave con APRIL y el dominio CRD2 de TACI, se lograría una inhibición óptima de la unión de APRIL a TACI por un anticuerpo de este tipo.

Tabla 4.Residuos de aminoácidos APRIL humanos ejemplares que se unen a anticuerpos anti-APRIL (numeración de aminoácidos basada en SEQ ID N°: 85)

[0231]En otra realización, la molécula de anticuerpo no se une a uno, dos o todos los Asp 129, Arg233, o HIS203, en APRIL humano(p. ej.,SEQ ID N°: 85). Por ejemplo, una o más mutaciones en estas posiciones,p. ej.,Asp129Ala, Arg233Asn, His203Asp, o cualquier combinación de las mismas, no reduciría, o reduciría sustancialmente, la afinidad de unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano, o el efecto inhibitorio de la molécula de anticuerpo sobre una actividad de APRIL humano(p. ej.,neutralización de la unión de APRIL a TACI).

[0232] En otra realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o todos) residuos de APRIL humano(p. ej.,SEQ ID N°: 85) desde las posiciones 105-114 y/o uno o más(por ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o todos) residuos de Ap R iL de ratón(p. ej.,s Eq ID N°: 91) desde las posiciones 96-105.

[0233] En otra realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej., se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos) de los residuos de aminoácidos mostrados en la tabla 7. En otra realización, la molécula de anticuerpo contacta(p.ej.,se une o se une sustancialmente a) todos los residuos de aminoácidos mostrados en la Tabla 7.

Tabla 7. Residuos de aminoácidos APRIL humanos ejemplares que se unen a anticuerpos anti-APRIL (numeración de aminoácidos basada en SEQ ID N°: 85)

[0234] En una realización, la molécula de anticuerpo,p. ej,una molécula de anticuerpo anti-APRIL que tiene uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis CDR de cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, o 2419-1406, se une a uno o más aminoácidos descritos en la Tabla 7. En otra realización, la molécula de anticuerpo,p. ej.,una molécula de anticuerpo anti-APRIL específica humana,p. ej.,que tiene una, dos, tres, cuatro, cinco o seis CDR de cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, se une a APRIL de ratón cuando una o más(p. ej.,2, 3, 4 o todas) las siguientes posiciones dentro de APRIL de ratón (se aplica la numeración APRIL de ratón) están mutadas,p. ej.,a lo siguiente: A120D, N224R, H163Q, K219I, o R181Q. En otra realización, la molécula de anticuerpo,p. ej.,una molécula de anticuerpo anti-APRIL específica humana,p. ej.,que tiene una, dos, tres, cuatro, cinco o seis CDR de cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419 0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, se une a APRIL de ratón cuando la lisina en la posición 219 (se aplica la numeración APRIL de ratón) está mutada,p. ej.,a una isoleucina(es decir, K2191).

[0235] En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej., se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano mostrados en la Tabla 6. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento,p. ej.,el anticuerpo monoclonal 2218, 2419, 2621, 2622, 3125, 3327, 3525, 3530, 4035, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540 o 4237.

[0236] En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre D132, V174, F176, V181, Q190, R195, R206, Y208, I228, o N237. En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre V174, F176, Q190, R195, R206, o Y208. En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3 o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre F176, V181, Q190 o I228. En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre V174, R206, o Y208.

[0237] En una realización, la molécula de anticuerpo no contacta(p. ej.,no se une o no se une sustancialmente a) al menos uno(p. ej.,1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, o 20) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano mostrados en la Tabla 6. En una realización, la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento,p. ej.,el anticuerpo monoclonal 2218, 2419, 2621, 2622, 3125, 3327, 3525, 3530, 4035, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540 o 4237.

[0238] En una realización, la molécula de anticuerpo no contacta(p. ej.,no se une o no se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre F176, V181, Q190, S226, I228, Y208, o N237. En una realización, la molécula de anticuerpo no contacta(p. ej.,no se une o no se une sustancialmente a) uno o más(p.ej.,2, 3 o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre V181, S226, I228 o N237. En una realización, la molécula de anticuerpo no contacta(p. ej.,no se une o no se une sustancialmente a) uno o ambos de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre Y208 o N237. En una realización, la molécula de anticuerpo no contacta(p. ej.,no se une o no se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2 , 3 o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre F176, V181, Q190 o N237.

[0239] En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, o todos) de los residuos de aminoácidos de APR iL humano elegidos de V174, F176, Q190, R195, R206, o Y208; y no contacta(p. ej., no se une o no se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3 o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre V181, S226, I228 o N237. En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) uno o ambos residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos de V174 o R206; y no contacta(p. ej.,no se une o no se une sustancialmente a) uno o ambos residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos de V 181 o N237 (y opcionalmente S226). En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una o más(p. ej.,dos o tres) CDR de cadena pesada, una o más(p. ej.,dos o tres) CDR de cadena ligera, o ambas del anticuerpo monoclonal 4035. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región de cadena pesada, una región variable de cadena ligera, o ambas, del anticuerpo monoclonal 4035. En una realización, el anticuerpo monoclonal 4035 es una molécula de anticuerpo humanizado.

[0240] En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej., se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre F176, V181, Q190, o I228; y no contacta(p. ej.,no se une o no se une sustancialmente a) uno o ambos de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre Y208 o N237. En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) el residuo de aminoácido I228 de APRIL humano; y no contacta(p. ej.,no se une o no se une sustancialmente a) uno o ambos de los residuos de aminoácido de APRiL humano elegidos entre Y208 o N237. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una o más(p. ej.,dos o tres) CDR de cadena pesada, una o más(p. ej.,dos o tres) CDR de cadena ligera, o ambas del anticuerpo monoclonal 2419. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región de cadena pesada, una región variable de cadena ligera, o ambas, del anticuerpo monoclonal 2419. En una realización, el anticuerpo monoclonal 2419 es una molécula de anticuerpo humanizado.

[0241] En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, o todos) de los residuos de aminoácido de APRIL humano elegidos de V174, R206, o Y208; y no contacta(p. ej.,no se une o no se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre F176, V181, Q190, o N237. En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) uno o ambos de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre V174 o R206; y no contacta(por ejemplo, no se une o no se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre F176, V181, Q190, o N237. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una o más(p. ej.,dos o tres) CDR de cadena pesada, una o más(p. ej.,dos o tres) CDR de cadena ligera, o ambas del anticuerpo monoclonal 3833. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región de cadena pesada, una región variable de cadena ligera, o ambas, del anticuerpo monoclonal 3833. En una realización, el anticuerpo monoclonal 3833 es una molécula de anticuerpo humanizado.

[0242] En una realización, el epítopo se solapa con un sitio de unión del receptor CRD2. En una realización, el epítopo es un epítopo no lineal,p. ej.,que se extiende a través de una interfaz de monómero. En una realización, el epítopo se encuentra en una región asociada con el bloqueo de los receptores TACI y BCMA.

[0243] En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre V133, V181, E185, Q187, G188, R189, Q190, E191, T192, R195, H218, L219, H220, S226, I228, P230 (localizados en el monómero A). En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre V121, I123, Q139, P140, A141, L142, N237, S239, P240, o H241 (localizados en el monómero B). En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre V133, V181, E185, Q187, G188, R189, Q190, E191, T192, R195, H218, L219, H220, S226, I228, P230 (localizados en el monómero A); V121, I123, Q139, P140, A141, L142, N237, S239, P240, o H241 (localizados en el monómero B).

[0244]En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej., se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3 o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre V181, Q190, T192 e I228 (localizados en el monómero A). En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) uno o ambos residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre A141 o H241 (localizados en el monómero B). En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une o se une sustancialmente a) uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5 o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre V181, Q190, T192 e I228 (localizados en el monómero A); A141 o H241 (localizados en el monómero B).

[0245]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una o más(p. ej.,dos o tres) CDR de cadena pesada, una o más(p. ej.,dos o tres) CDR de cadena ligera, o ambas del anticuerpo monoclonal 2419. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región de cadena pesada, una región variable de cadena ligera, o ambas, del anticuerpo monoclonal 2419. En una realización, el anticuerpo monoclonal 2419 es una molécula de anticuerpo humanizado.

[0246]En una realización, el epítopo comprende uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre V133, V181, E185, Q187, G188, R189, Q190, E191, T192, R195, H218, L219, H220, S226, I228, P230 (localizados en el monómero A); V121, I123, Q139, P140, A141, L142, N237, S239, P240, o H241 (localizados en el monómero B). En una realización, el epítopo comprende uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5 o todos) de los residuos de aminoácidos de APRIL humano elegidos entre V181, Q190, T192 e I228 (localizados en el monómero A); A141 o H241 (localizados en el monómero B).

[0247]En una realización, una representación estructural de este epítopo se muestra en laFIG. 38B. En una realización, el epítopo comprende uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos) de los residuos de aminoácidos mostrados enla Tabla 8.

[0248]En una realización, la molécula de anticuerpo contacta(p. ej.,se une, o se une sustancialmente, a) todos los residuos de aminoácidos mostrados en cualquiera de lasTablas 3-4 o 7-8.En una realización, el epítopo comprende, o consiste en, todos los residuos de aminoácidos mostrados en cualquiera de lasTablas 3-4 o 7-8.

[0249]En una realización, la molécula de anticuerpo tiene una o más de las siguientes propiedades descritas en el presente documento,(p. ej.,una o más(p. ej.,dos, tres o todas) de: (i) se une, o se une sustancialmente, a APRIL humano; (ii) se une, o se une sustancialmente, a APRIL de ratón; (iii) inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a TACI(p. ej.,TACI humano, TACI de ratón, o ambos); o (iv) inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL(p. ej.,APRIL humano, APRIL de ratón, o ambos) a BCMA(p. ej.,BCMA humano, BCMA de ratón, o ambos). En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a APRIL de ratón. En otra realización, la molécula de anticuerpo no se une, o se une con baja afinidad, a APRIL de ratón.

Moléculas de Anticuerpos

[0250]Se divulgan en el presente documento moléculas de anticuerpos que se unen a APRIL,p. ej.,una molécula APRIL descrita en el presente documento.

[0251]Tal como se utiliza en el presente documento, el término "molécula de anticuerpo" se refiere a una proteína,p. ej.,una cadena de inmunoglobulina o un fragmento de la misma, que comprende al menos una secuencia de dominio variable de inmunoglobulina. El término "molécula de anticuerpo" incluye, por ejemplo, anticuerpos maduros de longitud completa y fragmentos de unión a antígeno de un anticuerpo. Por ejemplo, una molécula de anticuerpo puede incluir una secuencia de dominio variable de cadena pesada (H) (abreviada aquí como VH), y una secuencia de dominio variable de cadena ligera (L) (abreviada aquí como VL). En otro ejemplo, una molécula de anticuerpo incluye dos secuencias de dominio variable de cadena pesada (H) y dos secuencias de dominio variable de cadena ligera (L), formando así dos sitios de unión a antígenos, como Fab, Fab', F(ab')2, Fc, Fd, Fd', Fv, anticuerpos de cadena simple (scFv, por ejemplo), anticuerpos de dominio variable simple, diabodies (Dab) (bivalentes y biespecíficos), y quiméricos(p.ej.,humanizados), que pueden producirse modificando anticuerpos enteros o sintetizándolosde novomediante tecnologías de ADN recombinante. Estos fragmentos de anticuerpos funcionales conservan la capacidad de unirse selectivamente a su antígeno o receptor respectivo. Los anticuerpos y los fragmentos de anticuerpos pueden ser de cualquier clase de anticuerpos, incluyendo, pero sin limitarse a, IgG, IgA, IgM, IgD e IgE, y de cualquier subclase(p. ej.,IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4) de anticuerpos. Las moléculas de anticuerpos pueden ser monoclonales o policlonales. La molécula de anticuerpo también puede ser un anticuerpo humano, humanizado, injertado con CDR o generadoin vitro.La molécula de anticuerpo puede tener una región constante de cadena pesada elegida entre,p. ej.,IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4. La molécula de anticuerpo también puede tener una cadena ligera elegida entre,p. ej.,kappa o lambda. El término "inmunoglobulina" (Ig) se utiliza aquí indistintamente con el término "anticuerpo".

[0252]Ejemplos de fragmentos de unión a antígeno incluyen: (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste en los dominios VL, VH, CL y CH1; (ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos por un puente disulfuro en la región bisagra; (iii) un fragmento Fd que consiste en los dominios VH y CH1; (iv) un fragmento Fv que consiste en los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo, (v) un fragmento diacuerpo (dAb), que consiste en un dominio VH; (vi) un dominio variable camélido o camelizado; (vii) un Fv de cadena única (scFv), véasep. ej.,Bird et al. (1988) Science 242:423-426; y Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883); (viii) un anticuerpo de dominio único. Estos fragmentos de anticuerpos pueden obtenerse mediante cualquier método adecuado, incluidas varias técnicas convencionales conocidas por los expertos en la materia, y la utilidad de los fragmentos puede evaluarse del mismo modo que la de los anticuerpos intactos.

[0253]El término "anticuerpo" incluye moléculas intactas así como fragmentos funcionales de las mismas. Las regiones constantes de los anticuerpos pueden ser alteradas,p. ej.,mutadas, para modificar las propiedades del anticuerpo(p. ej.,para aumentar o disminuir una o más de: unión al receptor Fc, la glicosilación del anticuerpo, el número de residuos de cisteína, la función de las células efectoras o la función del complemento).

[0254]La molécula de anticuerpo puede ser un anticuerpo de cadena simple. Se puede diseñar un anticuerpo de cadena simple (scFv)(véase,por ejemplo, Colcher, D. et al. (1999) Ann N Y Acad Sci 880:263-80; y Reiter, Y. (1996) Clin Cancer Res. El anticuerpo de cadena simple puede dimerizarse o multimerizarse para generar anticuerpos multivalentes con especificidades para diferentes epítopos de la misma proteína diana.

[0255]Las moléculas de anticuerpo aquí divulgadas también pueden ser anticuerpos de dominio único. Los anticuerpos de dominio único pueden incluir anticuerpos cuyas regiones determinantes complementarias forman parte de un polipéptido de dominio único. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos de cadena pesada, anticuerpos naturalmente desprovistos de cadenas ligeras, anticuerpos de dominio único derivados de anticuerpos convencionales de 4 cadenas, anticuerpos de ingeniería y andamiajes de dominio único distintos de los derivados de anticuerpos. Los anticuerpos de dominio único pueden ser cualquiera de la técnica, o cualquier anticuerpo de dominio único futuro. Los anticuerpos de dominio único pueden derivarse de cualquier especie, incluidos, entre otros, el ratón, el ser humano, el camello, la llama, el pez, el tiburón, la cabra, el conejo y el bovino. Según algunos aspectos, un anticuerpo de dominio único es un anticuerpo de dominio único natural conocido como anticuerpo de cadena pesada desprovisto de cadenas ligeras. Tales anticuerpos de dominio único se describen en el documento WO 94/04678, por ejemplo. Por razones de claridad, este dominio variable derivado de un anticuerpo de cadena pesada naturalmente desprovisto de cadena ligera se conoce aquí como VHH o nanobody para distinguirlo de la VH convencional de las inmunoglobulinas de cuatro cadenas. Dicha molécula VHH puede derivarse de anticuerpos criados en especiesCamelidae,por ejemplo en camello, llama, dromedario, alpaca y guanaco. Otras especies además deCamelidaepueden producir anticuerpos de cadena pesada naturalmente desprovistos de cadena ligera; también se contemplan tales VHH.

[0256]Las regiones VH y VL pueden subdividirse en regiones de hipervariabilidad, denominadas "regiones determinantes de la complementariedad" (CDR), intercaladas con regiones más conservadas, denominadas "regiones base" (FR o FW). Los términos "región determinante de la complementariedad" y "CDR" se refieren a las secuencias de aminoácidos dentro de las regiones variables de los anticuerpos que confieren especificidad al antígeno y afinidad de unión. En el presente documento, los términos "base", "FW" y "FR" se utilizan indistintamente.

[0257]La extensión de la región base y de las CDR se ha definido con precisión mediante varios métodos(véase,Kabat, E. A., et al. (1991) Secuencias de proteínas de interés inmunológico, quinta edición, EE.UU. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917; y la definición AbM utilizada por el software de modelado de anticuerpos AbM de Oxford Molecular.Véase,en general,p. ej.,Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. In: Antibody Engineering Lab Manual (Ed.: Duebel, S. y Kontermann, R., Springer-Verlag, Heidelberg). En una realización, se utilizan las siguientes definiciones: Definición AbM de la CDR1 del dominio variable de la cadena pesada y definiciones Kabat para las demás CDR. En una realización, las definiciones de Kabat se utilizan para todos los CDR. Además, las realizaciones descritas con respecto a los CDR de Kabat o AbM también pueden implementarse utilizando bucles hipervariables de Chothia. Cada VH y VL incluye normalmente tres CDR y cuatro FR, dispuestas desde el amino-terminal al carboxi-terminal en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, y FR4.

[0258]Tal como se utiliza en el presente documento, una "secuencia de dominio variable de inmunoglobulina" se refiere a una secuencia de aminoácidos que puede formar la estructura de un dominio variable de inmunoglobulina. Por ejemplo, la secuencia puede incluir toda o parte de la secuencia de aminoácidos de un dominio variable natural. Por ejemplo, la secuencia puede o no incluir uno, dos o más aminoácidos N- o C-terminales, o puede incluir otras alteraciones que sean compatibles con la formación de la estructura proteica.

[0259]El término "región de unión a antígeno" se refiere a la parte de una molécula de anticuerpo que comprende determinantes que forman una interfaz que se une a un antígeno,p. ej.,APRIL, o a un epítopo del mismo. Con respecto a las proteínas (o proteínas miméticas), la región de unión al antígeno incluye típicamente uno o más bucles (de al menos,p. ej.,cuatro aminoácidos o aminoácidos miméticos) que forman una interfaz que se une al antígeno,p. ej.,APRIL. Típicamente, la región de unión a antígeno de una molécula de anticuerpo incluye al menos una o dos CDR y/o bucles hipervariables, o más típicamente al menos tres, cuatro, cinco o seis CDR y/o bucles hipervariables.

[0260]Los términos "competir" o "competencia cruzada" se utilizan indistintamente en el presente documento para referirse a la capacidad de una molécula de anticuerpo de interferir con la unión de una molécula de anticuerpo anti-APRIL,p. ej.,una molécula de anticuerpo anti-APRIL proporcionada en el presente documento, a una diana,p. ej.,APRIL. La interferencia con la unión puede ser directa o indirecta(p. ej.,a través de una modulación alostérica de la molécula de anticuerpo o de la diana). El grado en que una molécula de anticuerpo es capaz de interferir con la unión de otra molécula de anticuerpo a la diana, y por tanto si puede decirse que compite, puede determinarse utilizando un ensayo de unión competitiva, por ejemplo, un ensayo FACS, un ensayo ELISA o BIACORE. En una realización, un ensayo de unión de competición es un ensayo de competición cuantitativo. En una realización, se dice que una primera molécula de anticuerpo anti-APRIL compite por la unión a la diana con una segunda molécula de anticuerpo anti-APRIL cuando la unión de la primera molécula de anticuerpo a la diana se reduce en un 10% o más, porej,20% o más, 30% o más, 40% o más, 50% o más, 55% o más, 60% o más, 65% o más, 70% o más, 75% o más, 80% o más, 85% o más, 90% o más, 95% o más, 98% o más, 99% o más en un ensayo de competición de unión(p. ej.,un ensayo de competición descrito en el presente documento).

[0261]Los términos "anticuerpo monoclonal" o "composición de anticuerpo monoclonal" utilizados en el presente documento se refieren a una preparación de moléculas de anticuerpo de composición molecular única. Una composición de anticuerpos monoclonales muestra una única especificidad de unión y afinidad por un epítopo concreto. Un anticuerpo monoclonal puede fabricarse mediante tecnología de hibridoma o mediante métodos que no utilizan tecnología de hibridoma(p. ej.,métodos recombinantes).

[0262]Una proteína "efectivamente humana" es una proteína que no evoca una respuesta de anticuerpos neutralizantes,p. ej.,la respuesta de anticuerpos antimurinos humanos (HAMA). El HAMA puede ser problemático en varias circunstancias,p. ej.,si la molécula de anticuerpo se administra repetidamente,p. ej.,en el tratamiento de una enfermedad crónica o recurrente. Una respuesta HAMA puede hacer que la administración repetida de anticuerpos sea potencialmente ineficaz debido a una mayor eliminación de anticuerpos del suero(véase, p. ej.,Saleh et al., Cancer Immunol. Immunother., 32:180-190 (1990)) y también por posibles reacciones alérgicas (véase,p. ej.,LoBuglio et al., Hybridoma, 5:5117-5123 (1986)).

[0263]La molécula de anticuerpo puede ser un anticuerpo policlonal o monoclonal. En algunas realizaciones, el anticuerpo puede producirse recombinantemente,p. ej.,mediante cualquier método combinatorio o de visualización de fagos adecuado.

[0264]En la técnica se conocen varios métodos combinatorios y de visualización de fagos para generar anticuerpos (como se describe en,p. ej.,Ladner et al. la Patente de EE.UU. N.° 5.223.409 ; Kang et al. Publicación Internacional N.° WO 92/18619 ; Dower et al. Publicación Internacional N.° WO 91/17271 ; Winter et al. Publicación Internacional WO 92/20791 ; Markland et al. Publicación Internacional N.° WO 92/15679; Breitling et al. Publicación Internacional WO 93/01288 ; McCafferty et al. Publicación Internacional N.° WO 92/01047 ; Garrard et al. Publicación Internacional N.° WO 92/09690 ; Ladner et al. Publicación Internacional N.° WO 90/02809 ; Fuchs et al. (1991) Bio/Technology 9:1370-1372; Hay et al. (1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81-85; Huse et al. (1989) Science 246: 1275-1281; Griffths et al. (1993) EMBO J 12:725-734; Hawkins et al. (1992) J Mol Biol 226:889-896; Clackson et al. (1991) Nature 352:624-628; Gram et al. (1992) PNAS 89:3576-3580; Garrad et al. (1991) Bio/Technology 9: 1373-1377; Hoogenboom et al. (1991) Nuc Acid Res 19:4133-4137; y Barbas et al. (1991) PNAS 88:7978-7982).

[0265]En una realización, la molécula de anticuerpo es un anticuerpo totalmente humano(p. ej.,un anticuerpo fabricado en un ratón que ha sido modificado genéticamente para producir un anticuerpo a partir de una secuencia de inmunoglobulina humana), o un anticuerpo no humano,p. ej.,un anticuerpo de roedor (ratón o rata), cabra, primate(p. ej.,mono), camello. En una realización, el anticuerpo no humano es un roedor (anticuerpo de ratón o rata). Los métodos de producción de anticuerpos de roedores son conocidos en la técnica.

[0266]Los anticuerpos monoclonales humanos pueden generarse utilizando ratones transgénicos portadores de los genes de inmunoglobulina humana en lugar del sistema de ratón. Los esplenocitos de estos ratones transgénicos inmunizados con el antígeno de interés se utilizan para producir hibridomas que secretan mAbs humanos con afinidades específicas para epítopos de una proteínahumana(véase, p. ej.,Wood et al. Solicitud Internacional WO 91/00906, Kucherlapati et al. Publicación PCT WO 91/10741 ; Lonberg et al. Solicitud Internacional WO 92/03918 ; Kay et al. Solicitud Internacional 92/03917 ; Lonberg, N. et al. 1994 Nature 368:856-859; Green, L.L. et al. 1994 Nature Genet.

7:13-21; Morrison, S.L. et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855; Bruggeman et al. 1993 Year Immunol 7:33-40; Tuaillon et al. 1993 PNAS 90:3720-3724; Bruggeman et al. 1991 Eur J Immunol 21:1323-1326).

[0267]Un anticuerpo puede ser uno en el que la región variable, o una parte de la misma,p. ej.,las CDR, se genera en un organismo no humano,p. ej.,una rata o un ratón. Los anticuerpos quiméricos, injertados con CDR y humanizados forman parte de la invención. Los anticuerpos generados en un organismo no humano,p. ej.,una rata o un ratón, y luego modificados,p. ej.,en la base variable o en la región constante, para disminuir la antigenicidad en un humano están dentro de la invención.

[0268]Los anticuerpos quiméricos pueden producirse mediante cualquier técnica adecuada de ADN recombinante. Se conocen varios en la técnica(véaseRobinson et al., Publicación de solicitud de patente internacional n° WO1987/002671 ; Akira, et al., Publicación de solicitud de patente europea n° 184.187 ; Taniguchi, M., Publicación de solicitud de patente europea n° 171.496 ; Morrison et al., Publicación de solicitud de patente europea n° 173.494 ; Neuberger et al., Publicación de solicitud de patente internacional n° WO 86/01533 ; Cabilly et al. la Patente de EE.UU. N.° 4.816.567; Cabilly et al., Publicación de Solicitud de Patente Europea n° 125.023 ; Better et al. (1988 Science 240: 1041-1043); Liu et al. (1987) PNAS 84:3439-3443; Liu et al., 1987, J. Immunol. 139:3521-3526; Sun et al. (1987) PNAS 84:214-218; Nishimura et al., 1987, Canc. Res. 47:999-1005; Wood et al. (1985) Nature 314:446-449; y Shaw et al., 1988, J. Natl Cancer Inst. 80:1553-1559).

[0269] Un anticuerpo humanizado o injertado con CDR tendrá al menos una o dos, pero generalmente las tres CDR receptoras (de las cadenas de inmunoglobulina pesada y/o ligera) sustituidas por una CDR donante. El anticuerpo puede sustituirse con al menos una parte de una CDR no humana o sólo algunas de las CDR pueden sustituirse con CDR no humanas. Sólo es necesario sustituir el número de CDR necesarias para la unión del anticuerpo humanizado al lipopolisacárido. En una realización, el donante será un anticuerpo de roedor,p. ej.,un anticuerpo de rata o ratón, y el receptor será una estructura humana o una estructura humana consensuada. Normalmente, la inmunoglobulina que proporciona los CDR se denomina "donante" y la inmunoglobulina que proporciona la base se denomina "aceptor". En algunas realizaciones, la inmunoglobulina donante es no humana(p. ej.,un roedor). la base aceptor suele ser una base natural(p. ej.,humano) o una base de consenso, o una secuencia idéntica en un 85% o más,p. ej.,en un 90%, 95%, 99% o más.

[0270] Tal como se utiliza en el presente documento, el término "secuencia consenso" se refiere a la secuencia formada a partir de los aminoácidos (o nucleótidos) que aparecen con mayor frecuencia en una familia de secuencias relacionadas (Véase ,p. ej.,Winnaker, From Genes to Clones (Verlagsgesellschaft, Weinheim, Alemania 1987). En una familia de proteínas, cada posición de la secuencia consenso está ocupada por el aminoácido que aparece con más frecuencia en esa posición en la familia. Si dos aminoácidos aparecen con la misma frecuencia, cualquiera de los dos puede incluirse en la secuencia consenso. Un "base consenso" se refiere a la región base en la secuencia de inmunoglobulina consenso.

[0271] Un anticuerpo puede humanizarse por cualquier método adecuado, y existen varios métodos de este tipo conocidos en la técnica(véase, p. ej.,Morrison, S. L., 1985, Science 229: 1202-1207, by Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214, y por Queen et al. US 5,585,089, US 5,693,761 y US 5,693,762).

[0272] Los anticuerpos humanizados o injertados con CDR pueden producirse por injerto de CDR o sustitución de CDR, en los que pueden sustituirse una, dos o todas las CDR de una cadena de inmunoglobulina.Véase, p. ej.,Patente de EE.UU, 5.225.539 ; Jones et al. 1986 Nature 321:552-525; Verhoeyan et al. 1988 Science 239: 1534; Beidler et al. 1988 J. Immunol. 141:4053-4060; Winter US 5,225,539. Winter describe un método de injerto de CDR que puede utilizarse para preparar anticuerpos humanizados (solicitud de patente del Reino Unido GB 2188638A, presentada el 26 de marzo de 1987; Winter US 5.225.539).

[0273] También se proporcionan anticuerpos humanizados en los que se han sustituido, eliminado o añadido aminoácidos específicos. Los criterios para seleccionar aminoácidos del donante se describen en, porejemplo,el documento US 5,585,089,p. ej.,las columnas 12-16 del documento US 5,585,089. Otras técnicas para humanizar anticuerpos se describen en Padlan et al. EP 519596 A1, publicado el 23 de diciembre de 1992.

[0274] En una realización, la molécula de anticuerpo tiene una región constante de cadena pesada elegida entre,p. ej.,las regiones constantes de cadena pesada de IgG1, IgG2(p. ej.,IgG2a), IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, e IgE; particularmente, elegida de, porejemplo,las regiones constantes de cadena pesada(p. ej.,humanas) de IgG1, IgG2, IgG3, e IgG4. En otra realización, la molécula de anticuerpo tiene una región constante de cadena ligera elegida entre,p. ej.,las regiones constantes de cadena ligera(p. ej.,humana) de kappa o lambda. La región constante puede ser alterada,p. ej.,mutada, para modificar las propiedades de la molécula de anticuerpo(p. ej.,para aumentar o disminuir una o más de: unión al receptor Fc, la glicosilación del anticuerpo, el número de residuos de cisteína, la función de las células efectoras y/o la función del complemento). En una realización, la molécula de anticuerpo tiene función efectora y puede fijar el complemento. En otra realización, la molécula de anticuerpo no recluta células efectoras ni fija el complemento. En ciertas realizaciones, la molécula de anticuerpo tiene una capacidad reducida o nula de unirse a un receptor Fc. Por ejemplo, puede ser un isotipo o subtipo, fragmento u otro mutante, que no admite la unión a un receptor Fc, porejemplo,tiene una región de unión al receptor Fc mutagenizada o suprimida.

[0275] En una realización, se altera una región constante de la molécula de anticuerpo. Los métodos para alterar la región constante de un anticuerpo son conocidos en la técnica. Las moléculas de anticuerpo s con función alterada, por ejemplo, afinidad alterada por un ligando efector, como el FcR en una célula, o el componente C1 del complemento pueden producirse sustituyendo al menos un residuo de aminoácido en la porción constante del anticuerpo por un residuo diferente (véanse, porejemplo,EP 388.151 A1, U.S. Patente de EE. UU. N.° 5.624.821 y Patente de EE. UU. N.° 5,648,260). También se contemplan las mutaciones de aminoácidos que estabilizan la estructura del anticuerpo, como la S228P (nomenclatura UE, S241P en la nomenclatura Kabat) en la IgG4 humana. Podrían describirse alteraciones de tipo similar que si se aplicaran a la inmunoglobulina murina, o de otras especies, reducirían o eliminarían estas funciones.

[0276] En una realización, los únicos aminoácidos en la molécula de anticuerpo son aminoácidos canónicos. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende aminoácidos naturales; análogos, derivados y congéneres de los mismos; análogos de aminoácidos con cadenas laterales variantes; y/o todos los estereoisómeros de cualquiera de los anteriores. La molécula de anticuerpo puede comprender los isómeros ópticos D o L de aminoácidos y peptidomiméticos.

[0277] Un polipéptido de una molécula de anticuerpo descrito en el presente documento puede ser lineal o ramificado, puede comprender aminoácidos modificados y puede estar interrumpido por no aminoácidos. La molécula de anticuerpo también puede modificarse; por ejemplo, mediante la formación de enlaces disulfuro, glicosilación, lipidación, acetilación, fosforilación o cualquier otra manipulación, como la conjugación con un componente de marcación. El polipéptido puede aislarse de fuentes naturales, puede producirse mediante técnicas recombinantes a partir de un huésped eucariota o procariota, o puede ser un producto de procedimientos sintéticos.

[0278]La molécula de anticuerpo aquí descrita puede usarse sola en forma no conjugada, o puede unirse a una sustancia,p. ej.,una toxina o una fracción(p. ej.,un fármaco terapéutico; un compuesto que emite radiación; moléculas de origen vegetal, fúngico o bacteriano; o una proteína biológica(p. ej.,una toxina proteica) o partícula(p. ej.,una partícula viral recombinante, porejemplo,a través de una proteína de cubierta viral). Por ejemplo, el anticuerpo anti-APRIL puede acoplarse a un isótopo radiactivo como un emisor a-, p-, o y, o un emisor p-y y.

[0279]Una molécula de anticuerpo puede derivatizarse o unirse a otra molécula funcional(p. ej.,otro péptido o proteína). Tal y como se utiliza aquí, una molécula de anticuerpo "derivatizada" es aquella que ha sido modificada. Los métodos de derivatización incluyen, entre otros, la adición de una fracción fluorescente, un radionucleótido, una toxina, una enzima o un ligando de afinidad como la biotina. Por consiguiente, las moléculas de anticuerpos incluyen formas derivatizadas y modificadas de otro modo de los anticuerpos descritos en el presente documento, incluidas las moléculas de inmunoadhesión. Por ejemplo, una molécula de anticuerpo puede estar funcionalmente unida (por acoplamiento químico, fusión genética, asociación no covalente o de otro modo) a una o más entidades moleculares, como otro anticuerpoj'p.e/., un anticuerpo biespecífico o un diacuerpo), un agente detectable, una toxina, un agente farmacéutico, y/o una proteína o péptido que pueda mediar la asociación del anticuerpo o porción de anticuerpo con otra molécula (como una región central de estreptavidina o un marcador de polihistidina).

[0280]Algunos tipos de moléculas de anticuerpos derivatizados se producen por entrecruzamiento de dos o más anticuerpos (del mismo tipo o de tipos diferentes,p. ej.,para crear anticuerpos biespecíficos). Entre los reticulantes adecuados se incluyen los heterobifuncionales, que tienen dos grupos reactivos distintos separados por un espaciador adecuado(p. ej.,éster de m-maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimida) u homobifuncionales(p. ej.,suberato de disuccinimidilo). Dichos enlazadores están disponibles en Pierce Chemical Company, Rockford, Ill.

[0281]Los agentes detectables útiles con los que se puede derivatizar (o marcar) una molécula de anticuerpo antidengue incluyen compuestos fluorescentes, diversas enzimas, grupos prostéticos, materiales luminiscentes, materiales bioluminiscentes, átomos metálicos emisores de fluorescencia,p. ej.,europio (Eu), y otros antanuros, y materiales radiactivos (descritos a continuación). Los agentes detectables fluorescentes ejemplares incluyen fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, cloruro de 5dimetilamina-1-naftalenosulfonilo, ficoeritrina y similares. Un anticuerpo también puede derivatizarse con enzimas detectables, como fosfatasa alcalina, peroxidasa de rábano picante, p-galactosidasa, acetilcolinesterasa, glucosa oxidasa y similares. Cuando un anticuerpo se derivatiza con una enzima detectable, se detecta añadiendo reactivos adicionales que la enzima utiliza para producir un producto de reacción detectable. Por ejemplo, cuando está presente el agente detectable peroxidasa de rábano picante, la adición de peróxido de hidrógeno y diaminobencidina da lugar a un producto de reacción coloreado, que es detectable. Una molécula de anticuerpo también puede derivatizarse con un grupo prostético(p. ej.,estreptavidina/biotina y avidina/biotina). Por ejemplo, un anticuerpo puede derivatizarse con biotina y detectarse mediante la medición indirecta de la unión a avidina o estreptavidina. Ejemplos de materiales fluorescentes adecuados incluyen umbeliferona, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, fluoresceína diclorotriazinilamina, cloruro de dansilo o ficoeritrina; un ejemplo de material luminiscente incluye luminol; y ejemplos de materiales bioluminiscentes incluyen luciferasa, luciferina y aequorina.

[0282]Las moléculas de anticuerpo marcadas pueden utilizarse, por ejemplo, con fines diagnósticos y/o experimentales en varios contextos, incluyendo (i) para aislar un antígeno predeterminado mediante técnicas estándar, tales como cromatografía de afinidad o inmunoprecipitación; (ii) para detectar un antígeno predeterminado(p. ej.,en un lisado celular o sobrenadante celular) para evaluar la abundancia y el patrón de expresión de la proteína; (iii) para monitorizar los niveles de proteína en el tejido como parte de un procedimiento de pruebas clínicas,p. ej.,para determinar la eficacia de un régimen de tratamiento dado.

[0283]Una molécula de anticuerpo puede conjugarse con otra entidad molecular, típicamente un marcador o una fracción o agente terapéutico(p. ej.,antimicrobiano(p. ej.,antibacteriano o bactericida), inmunomodulador, inmunoestimulador, citotóxico o citostático). Los isótopos radiactivos pueden utilizarse en aplicaciones diagnósticas o terapéuticas. Los isótopos radiactivos que pueden acoplarse a las moléculas de anticuerpo incluyen, entre otros, emisores a, p o<y>, o emisores p y y. Dichos isótopos radiactivos incluyen, entre otros, el yodo (131I o 125I), itritio (90Y), lutecio (177Lu), actinio (225Ac), praseodimio, astatina (211At), renio (186Re), bismuto (212Bi o 213Bi), indio (111In), tecnecio (99mTc), fósforo (32P), rodio (188Rh), azufre (35S), carbono (14C), tritio (3H), cromo (51Cr), cloro (36Cl), cobalto (57Co o 58Co), hierro (59Fe), selenio (75Se), o galio (67Ga). Entre los radioisótopos útiles como agentes terapéuticos se encuentran el itritio (90Y), lutecio (177Lu), actinio (225Ac), praseodimio, astatina (211At), renio (186Re), bismuto (212Bi o 213Bi) y el rodio (188Rh). Los radioisótopos útiles como marcadores,p. ej.,para su uso en diagnóstico, incluyen el yodo(131I o 125I), el indio (111In), el tecnecio (99mTc), el fósforo (32P), el carbono (14C), y el tritio (3H), o uno o más de los isótopos terapéuticos enumerados anteriormente.

[0284]La presente divulgación proporciona moléculas de anticuerpo radiomarcadas y métodos de marcaje de las mismas. En una realización, se divulga un método de marcación de una molécula de anticuerpo. El método incluye el contacto de una molécula de anticuerpo con un agente quelante, para producir así un anticuerpo conjugado. El anticuerpo conjugado se radiomarca con un radioisótopo,p. ej.,111 Indio, 90Itritio y 177Lutecio, para producir así una molécula de anticuerpo marcada.

[0285]En algunos aspectos, la presente divulgación proporciona un método de fabricación de una molécula de anticuerpo divulgada en el presente documento. El método incluye: proporcionar un antígeno,p. ej.,APRIL o un fragmento del mismo; obtener una molécula de anticuerpo que se une específicamente al antígeno; evaluar la eficacia de la molécula de anticuerpo para modular la actividad del antígeno y/o del organismo que expresa el antígeno,p. ej.,APRIL. El método puede incluir además la administración de la molécula de anticuerpo, incluido un derivado de la misma(p. ej.,una molécula de anticuerpo humanizada) a un sujeto,p. ej.,un humano.

[0286]La presente divulgación proporciona una molécula de ácido nucleico aislada que codifica la molécula de anticuerpo anterior, vectores y células huésped de la misma. La molécula de ácido nucleico incluye, entre otros, ARN, ADN genómico y ADNc.

[0287]Las secuencias de aminoácidos y nucleótidos de moléculas de anticuerpos ejemplares se describen enlas Tablas 1 y 2,respectivamente. Enla Tabla 5se describen las secuencias de aminoácidos de otras moléculas ejemplares de anticuerpos humanizados.

Tabla 1.Las secuencias de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada (VH) y de la región variable de la cadena ligera (VL) de los anticuerpos anti-APRIL ejemplares son las siguientes. Las CDR definidas según el sistema Kabat aparecen subrayadas y en negrita, mientras que las CDR definidas según el sistema Chothia aparecen en cursiva.

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Tabla 2.Secuencias de nucleótidos de las regiones variables de la cadena pesada (VH) y de la cadena ligera (VL) de moléculas de anticuerpos ejemplares

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Tabla5. Las secuencias de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada (VH) y de la región variable de la cadena ligera (VL) de los anticuerpos anti-APRIL humanizados ejemplares son las siguientes.

��

[0288]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una, dos o tres CDR de la región VH de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento, porejemplo,enla Tabla 1 o 5(p. ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419 1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621,4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439, 4439 o 4237), utilizando las definiciones de Kabat o Chothia de CDR. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una, dos o tres CDR de la región VL de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento,p. ej.,enla Tabla 1 o 5(p. ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419 0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621, 4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439, 4439 o 4237), utilizando las definiciones de Kabat o Chothia de CDR. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una o más(p. ej.,dos o tres) CDR de la región VH y/o una o más(p. ej.,dos o tres) CDR de la región VL de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento,p. ej.,en laTabla 1 o 5(p. ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419 0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419 1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621,4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439, 4439 o 4237), utilizando las definiciones de Kabat o Chothia de CDR.

[0289]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende uno, dos o tres CDR VH descritos enla Tabla 1 o 5.En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una, dos o tres CDR de VL descritas enla Tabla 1 o 5.En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una o másfp. ej., dos o tres) CDR de VH y/o una o másfp. ej., dos o tres) CDR de VL descritas enla Tabla 1 o 5.

[0290]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende uno, dos, tres, o cuatro armazones de la región VH de una molécula de anticuerpo descrita enla Tabla 1 o 5(p. ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621, 4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439, 4439 o 4237). En una realización, la molécula de anticuerpo comprende uno, dos, tres, o cuatro armazones de la región VL de una molécula de anticuerpo descrita enla Tabla 1 o 5(p. ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621, 4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439, 4439 o 4237). En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una o más(p. ej.,dos, tres o cuatro) estructuras de la región VH y/o una o más(p. ej.,dos, tres o cuatro) estructuras de la región VL de una molécula de anticuerpo descrita enla Tabla 1 o 5(p. ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419 0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419 1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621, 4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439 o 4237).

[0291]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento,p. ej.,enla Tabla 1 o 5(p.ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419 1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621,4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439 o 4237). En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento,p. ej.,enla Tabla 1 o 5(p. ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419 0205, 2419-0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419 1306, 2419-1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621,4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439 o 4237). En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento,p. ej.,enla Tabla 1 o 5(p. ej.,cualquiera de los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2419-0105, 2419-0205, 2419 0206, 2419-0406, 2419-0605, 2419-0805, 2419-0806, 2419-1204, 2419-1205, 2419-1210, 2419-1305, 2419-1306, 2419 1310, 2419-1406, 2922, 3327, 3530, 3525, 3125, 2621,4035, 4035-062, 3934, 3833, 3631, 3732, 4338, 4540, 4540-063, 4540-033, 4439 o 4237).

[0292]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos descrita enla Tabla 1 o 5,o una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a la misma. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos descrita enla Tabla 1 o 5,o una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a la misma. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos descrita en la Tabla 1o5 (o una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica) y una región variable de cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos descrita en laTabla 1 o 5(o una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica).

[0293]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada codificada por una secuencia de nucleótidos descrita enla Tabla 2,o una secuencia de nucleótidos sustancialmente idéntica a la misma.

En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera codificada por una secuencia de nucleótidos descrita enla Tabla 2,o una secuencia de nucleótidos sustancialmente idéntica a la misma. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada codificada por una secuencia de nucleótidos descrita en laTabla2 (o una secuencia de nucleótidos sustancialmente idéntica a la misma) y una región variable de cadena ligera codificada por una secuencia de nucleótidos descrita en laTabla 2(o una secuencia de nucleótidos sustancialmente idéntica a la misma).

[0294]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende además una región constante de cadena pesada. En una realización, la región constante de la cadena pesada es una región constante IgG1,p. ej.,cualquiera de las SEQ ID N°: 320-322, o una parte funcional del mismo. En otra realización, la región constante de la cadena pesada es una región constante IgG2,p. ej.,cualquiera de las SEQ ID N°: 323-326, o una parte funcional del mismo. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende además una región constante de cadena ligera. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende además una región constante de cadena pesada y una región constante de cadena ligera. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una región constante de cadena pesada, una región constante de cadena ligera, y regiones variables de cadena pesada y ligera de una molécula de anticuerpo descrita enla Tabla 1 o 5.En ciertas realizaciones, la molécula de anticuerpo comprende una región constante de cadena pesada, una región constante de cadena ligera y regiones variables que comprenden una, dos, tres, cuatro, cinco o seis c Dr de una molécula de anticuerpo descrita enla Tabla 1 o 5.

[0295]A continuación se describen regiones constantes de cadena pesada ejemplares.

Regiones constantes ejemplares de IgG1

[0296]

>IGHG1*01

STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV PSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPE VTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO: 320 )

>IGHG1*03

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWT VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO: 3 21 )

>IGHG1*04

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWT VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO: 322 )

Regiones constantes ejemplares de IgG2

[0297]

>IGHG2*01

STKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV PSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRT PEVTCV VVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPI

EKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO: 323 )

>IGHG2*02

STKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV TSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRT PEVTCV WDVSHEDPEVQFNWYVDGMEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPI EKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO: 324 )

>IGHG2*04

STKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV PSSSLGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV WDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPI EKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO: 325 )

>IGHG2*06

STKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV PSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPI EKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO: 326 )

[0298] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende uno o ambos de:

(i) una región variable de la cadena pesada (VH), en la que la región variable de la cadena pesada comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3), en las que la región variable de la cadena pesada comprende una, dos o todas de las siguientes: una HCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 11; una HCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 12; o una HCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 13; o

(ii) una región variable de la cadena ligera (VL), en la que la región variable de la cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3), en la que la región variable de la cadena ligera comprende una, dos o todas de las siguientes: una LCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 ó 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR1 de SEQ ID N°: 280; una LCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 ó 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID N°: 285; o una LCDR3 que comprenda una secuencia de aminoácidos que difiera en no más de 1, 2 ó 3 residuos de aminoácidos de, o tenga al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 16.

[0299] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende:

(i) una región variable de cadena pesada (VH), en la que la región variable de cadena pesada comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3), en la que la región variable de cadena pesada comprende: una HCDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 11; una HCDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 12; y una HCDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 13; y (ii) una región variable de cadena ligera (VL), en la que la región variable de cadena ligera comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3), en la que la región variable de cadena ligera comprende: una LCDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la LCDR1 de SEQ ID N°: 280; una LCDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 285; o una LCDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 16.

[0300] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende uno o ambos de:

(i) una región variable de la cadena pesada (VH), en la que la región variable de la cadena pesada comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3), en las que la región variable de la cadena pesada comprende una, dos o todas de las siguientes: una HCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 17; una HCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 282; o una HCDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 13; o

(ii) una región variable de la cadena ligera (VL), en la que la región variable de la cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3), en las que la región variable de la cadena ligera comprende una, dos o todas las siguientes: una LCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 280; una LCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2 ó 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID N°: 285; o una LCDR3 que comprenda una secuencia de aminoácidos que difiera en no más de 1, 2 ó 3 residuos de aminoácidos de, o tenga al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 16.

[0301] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende:

(i) una región variable de cadena pesada (VH), en la que la región variable de cadena pesada comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3), en la que la región variable de cadena pesada comprende: una HCDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 17; una HCDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 282; y una HCDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 13; y (ii) una región variable de la cadena ligera (VL), en la que la región variable de la cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3), en las que la región variable de la cadena ligera comprende: una LCDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 280; una LCDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 285; o una LCDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 16.

[0302] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 296. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 286. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 296 y una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 286.

[0303] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH codificada por un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N°: 313. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VL codificada por un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N°: 306. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH codificada por un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N°: 313 y una VL codificada por un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N°: 306.

[0304] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende además una región constante pesada de IgG2,p. ej.,cualquiera de SEQ ID N°: 323-326.

[0305] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende uno o ambos de:

[0306] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende:

[0307] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende uno o ambos de:

[0308] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende:

[0309] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 289. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 286. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 289 y una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 286.

[0310] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH codificada por un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N°: 308. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VL codificada por un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N°: 305. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH codificada por un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N°: 308 y una VL codificada por un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N°: 306.

[0311]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende además una región constante pesada de IgG2,p. ej.,cualquiera de SEQ ID N°: 323-326.

[0312]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende uno o ambos de:

(ii) una región variable de la cadena ligera (VL), en la que la región variable de la cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3), en la que la región variable de la cadena ligera comprende una, dos o todas de las siguientes: una LCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 ó 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la LCDR1 de SEQ ID N°: 280; una LCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 ó 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID N°: 281; o una LCDR3 que comprenda una secuencia de aminoácidos que difiera en no más de 1, 2 ó 3 residuos de aminoácidos de, o tenga al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 16.

[0313]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende:

(i) una región variable de cadena pesada (VH), en la que la región variable de cadena pesada comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3), en la que la región variable de cadena pesada comprende: una HCDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 11; una HCDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 12; y una HCDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 13; y (ii) una región variable de cadena ligera (VL), en la que la región variable de cadena ligera comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3), en la que la región variable de cadena ligera comprende: una LCDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la LCDR1 de SEQ ID N°: 280; una LCDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 281; o una LCDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 16.

[0314]En una realización, la molécula de anticuerpo comprende uno o ambos de:

(ii) una región variable de la cadena ligera (VL), en la que la región variable de la cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3), en las que la región variable de la cadena ligera comprende una, dos o todas las siguientes: una LCDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1, 2 o 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 280; una LCDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere en no más de 1,2 ó 3 residuos de aminoácidos de, o tiene al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID N°: 281; o una LCDR3 que comprenda una secuencia de aminoácidos que difiera en no más de 1, 2 ó 3 residuos de aminoácidos de, o tenga al menos 85, 90, 95, 99 o 100% de homología con, la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 16.

[0315] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende:

(i) una región variable de cadena pesada (VH), en la que la región variable de cadena pesada comprende tres regiones determinantes de complementariedad de cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3), en la que la región variable de cadena pesada comprende: una HCDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 17; una HCDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 282; y una HCDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 13; y (ii) una región variable de la cadena ligera (VL), en la que la región variable de la cadena ligera comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3), en las que la región variable de la cadena ligera comprende: una LCDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 280; una LCDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 281; o una LCDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 16.

[0316] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 289. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 284. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 289 y una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 284.

[0317] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH codificada por un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N°: 308. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VL codificada por un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N°: 305. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH codificada por un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N°: 308 y una VL codificada por un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N°: 305.

[0318] En una realización, la molécula de anticuerpo comprende además una región constante pesada de IgG2,p. ej.,cualquiera de SEQ ID N°: 323-326.

[0319] En una realización, la molécula de anticuerpo descrita en el presente documento tiene una o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, o todas) de las siguientes propiedades: (a) es una molécula de anticuerpo humanizada; (b) se une a APRIL humano a una EC50 de 60 pM o menos, según se determina por ELISA; (c) inhibe la unión de APRIL humano a TACI,p. ej.,invitro,a una IC50 de 0,5 nM o menos; (d) inhibe la unión de APRIL humano a BCMI,p. ej., in vitro,a una IC50 de 0,6 nM o menos; (e) es una IgG2x; o (f) tiene una región Fc diseñada para reducir la activación del complemento. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, o todas) CDRs, una o ambas regiones variables de cadena pesada o regiones variables de cadena ligera, o una o ambas regiones variables de cadena pesada o cadena ligera, de cualquiera de las moléculas de anticuerpo 2419-1406, 2419-0205, o 2419-0206. En una realización, la molécula de anticuerpo es adecuada para su uso en el tratamiento de un trastorno renal,p. ej.,la nefropatía IgA. En otra realización, la molécula de anticuerpo es adecuada para su uso en el tratamiento de un cáncer,p. ej.,un mieloma múltiple.

[0320] En una realización, la molécula de anticuerpo descrita en el presente documento tiene una o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, o todas) de las siguientes propiedades: (a) es una molécula de anticuerpo humanizada; (b) se une a<a>P<r i>L humano a una EC50 de 50 pM o menos, según se determina por ELISA; (c) inhibe la unión de APRIL humano a TACI,p. ej.,invitro,a una IC50 de 0,3 nM o menos; (d) inhibe la unión de APRIL humano a BCMA,p. ej., in vitro,a una IC50 de 0,2 nM o menos; (e) es una IgG1K; o (f) tiene una mayor actividad de neutralización de BCMA,p. ej.,tiene una IC50 de 0,1 nM o menos. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, o todas) CDRs, una o ambas regiones variables de cadena pesada o regiones variables de cadena ligera, o una o ambas regiones variables de cadena pesada o cadena ligera, de la molécula de anticuerpo 4035-062. En una realización, la molécula de anticuerpo es adecuada para su uso en el tratamiento de un cáncer o un trastorno autoinmune.

[0321] Las moléculas de anticuerpos aquí descritas pueden tener varias propiedades ventajosas. Por ejemplo, las moléculas de anticuerpo pueden usarse para tratar, prevenir o diagnosticar eficazmente un trastorno asociado con APRIL,p. ej.,un trastorno descrito en el presente documento,p. ej.,nefropatía IgA.

[0322] En una realización, la molécula de anticuerpo es capaz de unirse, o unirse sustancialmente, a APRIL humano y APRIL de ratón. En una realización, la molécula de anticuerpo es capaz de unirse, o unirse sustancialmente, a APRIL humano, pero no es capaz de unirse, o unirse sustancialmente, a APRIL de ratón. En una realización, la molécula de anticuerpo se une a APRlL con alta afinidad,p. ej.,con una constante de disociación (K<d>) de menos de aproximadamente 100 nM, típicamente aproximadamente 10 nM, y más típicamente, aproximadamente 10-0,001 nM, aproximadamente 10 0,01 nM, aproximadamente 10-0,01 nM, aproximadamente 5-0,01 nM, aproximadamente 3-0,05 nM, aproximadamente 1 0,1 nM, o más fuerte,p. ej.,menos de aproximadamente 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 8, 6, 4, 3, 2, 1, 0,5, 0,2, 0,1, 0,05, 0,01, 0,005 o 0,001 nM. En una realización, la molécula de anticuerpo se une a APRIL con un Koff más lento que 1*10'4, 5*10'5, o 1 x 10'5 s-1. En una realización, la molécula de anticuerpo se une a APRIL con un Kon más rápido que 1*104, 5*104, 1*105, o 5*105 M-1s-1.

[0323] En una realización, la molécula de anticuerpo es capaz de inhibir, o inhibir sustancialmente, la unión de APRIL humano a TACI. En una realización, la molécula de anticuerpo es capaz de inhibir, o inhibir sustancialmente, la unión de APRIL humano a TACI. En una realización, la molécula de anticuerpo es capaz de inhibir, o inhibir sustancialmente, la unión de APRIL humano a BCMA. En una realización, la molécula de anticuerpo es capaz de inhibir, o inhibir sustancialmente, la unión de APRIL humano a TACI y BCMA. En una realización, la molécula de anticuerpo es capaz de inhibir, o inhibir sustancialmente, la unión de APRIL humano a TACI, pero no es capaz de inhibir, o inhibir sustancialmente, la unión de APRIL humano a BCMA. En una realización, la molécula de anticuerpo es capaz de inhibir, o inhibir sustancialmente, la unión de APRIL humano a BCMA, pero no es capaz de inhibir, o inhibir sustancialmente, la unión de APRIL humano a TACI.

[0324] En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe la unión de APRIL humano a TACI humano en un 50% o más,p. ej.,60% o más, 70% o más, 80% o más, 85% o más, 90% o más, 95% o más, 96% o más, 97% o más, 98% o más, 99% o más, o 100%, como se determina por un método descrito en el presente documento(p. ej.,,normalizado al control sin anticuerpo).

[0325] En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe la unión de APRIL humano a BCMA humano en un 30% o más,p. ej.,,40% o más, 50% o más, 60% o más, 70% o más, 80% o más, 85% o más, 90% o más, 95% o más, 96% o más, 97% o más, 98% o más, 99% o más, o 100%, como se determina por un método descrito en el presente documento(p. ej.,normalizado al control sin anticuerpo).

[0326] En una realización, la molécula de anticuerpo no inhibe sustancialmente la unión de APRIL humano a BCMA humano,p. ej.,inhibe la unión de APRIL humano a BCMA humano en menos del 10%, como se determina por un método descrito en el presente documento(p. ej.,normalizado al control sin anticuerpo).

[0327] En una realización, la molécula de anticuerpo se une a un epítopo lineal o conformacional en APRIL. En una realización, la molécula de anticuerpo se une a un epítopo conservado entre APRIL humano y APRIL de ratón. En una realización, la molécula de anticuerpo se une a un epítopo descrito en el presente documento. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, al mismo epítopo, similar o solapado en APRIL, que una segunda molécula de anticuerpop. ej.,un anticuerpo monoclonal descrito en la Tabla 1 o 5). En una realización, la molécula de anticuerpo compite con una segunda molécula de anticuerpo(p. ej.,un anticuerpo monoclonal descrito en la Tabla 1 o 5) para unirse a APRIL.

[0328] En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, o más, residuos dentro de una región de APRIL como se define en la Tabla 3. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos los residuos APRIL humanos de la Tabla 3. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de la Tabla 3. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende residuos APRIL de dos monómeros,p. ej.,uno o más residuos del monómero A y del monómero B como se muestra en la Tabla 3.

[0329] En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o sustancialmente se une, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o más, residuos dentro de una región de APRIL como se define en la Tabla 4. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o sustancialmente se une, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o todos los residuos APRIL humanos de la Tabla 4. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de la Tabla 4. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende uno o más residuos APRIL del bucle C-D(p. ej.,el bucle que conecta las hojas p C y D), el bucle G-H(p. ej.,el bucle que conecta las hojas p G y H), o ambos.

[0330] En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o todos) residuos de APRIL humano de las posiciones 105-114 y/o uno o más(p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o todos) residuos de APRIL de ratón de las posiciones 96-105.

[0331] En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o sustancialmente se une, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o más, residuos dentro de una región de APRIL como se define en la Tabla 7. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos los residuos a Pr IL humanos de la Tabla 7. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de la Tabla 7.

[0332] En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o sustancialmente se une, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, o más, residuos dentro de una región de APRIL como se define en la Tabla 8. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que comprende o consiste en uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos los residuos APRIL humanos de la Tabla 8. En una realización, la molécula de anticuerpo se une, o se une sustancialmente, a un epítopo que se solapa con un epítopo que comprende o consiste en todos los residuos APRIL humanos de la Tabla 8.

[0333] En una realización, el epítopo es un epítopo conformacional.

[0334] En una realización, la molécula de anticuerpo no se une, o no se une sustancialmente, a uno, dos o todos los Asp 129, Arg233, o His203 de APRIL humano.

[0335] En una realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL(p. ej.,APRIL humano) inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión del dominio CRD2 de TACI(p. ej.,TACI humano) a APRIL(p. ej.,APRIL humano). En otra realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano, inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos los residuos APRIL de la Tabla 3. En otra realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano, inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o todos los residuos APRIL humanos de la Tabla 4. En otra realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano, inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o todos los residuos APRIL humanos de la Tabla 7. En otra realización, la unión de la molécula de anticuerpo a APRIL humano, inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de TACI humano, a uno o más,p. ej.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o todos los residuos de APRIL humano de la Tabla 8.

Modelos Animales

[0336] Las moléculas de anticuerpos descritas en el presente documento pueden evaluarsein vivo, p. ej.,utilizando diversos modelos animales. Por ejemplo, puede usarse un modelo animal para probar la eficacia de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento en la inhibición de APRIL y/o en el tratamiento o prevención de un trastorno descrito en el presente documento, porejemplo,nefropatía IgA. También pueden utilizarse modelos animales,p. ej.,para investigar efectos secundarios, medir concentraciones de moléculas de anticuerposin situ,demostrar correlaciones entre una función APRIL y un trastorno descrito en el presente documento(p. ej.,nefropatía IgA).

[0337] Los modelos animales ejemplares de nefropatía IgA que pueden utilizarse para evaluar una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento incluyen, entre otros, un modelo de ratón ddY para nefritis IgA espontánea (Imai et al. Kidney Int. 1985; 27(5):756-761); un modelo de ratón que utiliza proteínas inertes o un patógeno vírico común como antígeno incitador (Emancipator et al. Curr. Protoc. Immunol. 2001 Mayo; Capítulo 15: Unidad 15.11), un modelo de rata por antígenos proteicos no infecciosos (Emancipator et al. Curr. Protoc. Immunol. 2001 Mayo; Capítulo 15: Unidad 15.11); un modelo de ratón crónico de nefropatía asociada a inmunocomplejos IgA (Montinaro et al. Nephrol. Dial. Transplant.

1995; 10(11): 2035-2042); el ratón Gne M712T como modelo de glomerulopatía humana (Kakani et al. Am. J. Pathol.

2012; 180(4):1431-1440); un modelo de nefropatía IgA en ratón con la proteína de fusión MBP-20-péptido (Zhang et al. Anat. Rec. (Hoboken). 2010; 293(10): 1729-1737); y un modelo de ratón para la nefritis por complejos inmunes IgA (Rifai et al. J Exp Med. 1979; 150(5):1161-1173). Otros modelos animales de nefropatía IgA se describen,p. ej.,en Tomino et al. J. Nephrol. 2008; 21(4):463-467; Endo Ren. Fail. 1997; 19(3):347-371; y Rifai Kidney Int. 1987; 31(1):1-7.

[0338] También se conocen en la técnica modelos animales ejemplares para otros trastornos descritos en el presente documento. Tipos ejemplares de animales que pueden utilizarse para evaluar las moléculas de anticuerpos descritas en el presente documento incluyen, entre otros, ratones, ratas, conejos, cobayas y monos.

Composiciones Farmacéuticas y Kits

[0339] En algunos aspectos, la presente divulgación proporciona composiciones,p. ej.,composiciones farmacéuticamente aceptables, que incluyen una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento(p. ej.,una molécula de anticuerpo humanizada descrita en el presente documento), formulada junto con un portador farmacéuticamente aceptable.

[0340] Como se usa aquí, "portador farmacéuticamente aceptable" incluye todos y cada uno de los disolventes, medios de dispersión, agentes isotónicos y retardadores de la absorción, y similares que son fisiológicamente compatibles. El portador puede ser adecuado para la administración intravenosa, intramuscular, subcutánea, parenteral, rectal, espinal o epidérmica(p. ej.,mediante inyección o infusión). En ciertas realizaciones, menos del 5%,p. ej.,menos del 4%, 3%, 2% o 1% de las moléculas de anticuerpo en la composición farmacéutica están presentes como agregados. En otras realizaciones, al menos aproximadamente del 95%,p. ej.,al menos aproximadamente del 96%, 97%, 98%, 98,5%, 99%, 99,5%, 99,8%, o más de las moléculas de anticuerpo en la composición farmacéutica están presentes como monómeros. En algunas realizaciones, el nivel de agregados o monómeros se determina por cromatografía,p. ej.,cromatografía de exclusión por tamaño de alto rendimiento (HP-SEC).

[0341] Las composiciones aquí expuestas pueden presentarse en diversas formas. Estas incluyen, por ejemplo, formas de dosificación líquidas, semisólidas y sólidas, como soluciones líquidas(p. ej.,soluciones inyectables e infusibles), dispersiones o suspensiones, liposomas y supositorios. La forma adecuada depende del modo de administración previsto y de la aplicación terapéutica. Las composiciones típicas adecuadas se presentan en forma de soluciones inyectables o infusibles. Un modo de administración adecuado es el parenteral(p. ej.,intravenoso, subcutáneo, intraperitoneal, intramuscular). En algunas realizaciones, la molécula de anticuerpo se administra mediante infusión o inyección intravenosa. En ciertas realizaciones, el anticuerpo se administra mediante inyección intramuscular o subcutánea.

[0342]Las frases "administración parenteral" y "administrado parenteralmente" tal como se usan aquí, significan modos de administración distintos de la administración enteral y tópica, normalmente por inyección, e incluyen, sin limitación, inyección e infusión intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal, epidural e intraesternal.

[0343]Las composiciones terapéuticas típicamente deben ser estériles y estables bajo las condiciones de fabricación y almacenamiento. La composición puede formularse en forma de solución, microemulsión, dispersión, liposoma u otra estructura ordenada adecuada a una alta concentración de anticuerpos. Las soluciones inyectables estériles pueden prepararse incorporando el compuesto activo(es decir,anticuerpo o porción de anticuerpo) en la cantidad requerida en un disolvente apropiado con uno o una combinación de los ingredientes enumerados anteriormente, según sea necesario, seguido de esterilización filtrada. Generalmente, las dispersiones se preparan incorporando el compuesto activo a un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los demás ingredientes necesarios de los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son el secado al vacío y la liofilización que produce un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado a partir de una solución previamente filtrada estérilmente del mismo. La fluidez adecuada de una solución puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento como la lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de la dispersión y mediante el uso de tensioactivos. La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede conseguirse incluyendo en la composición un agente que retrase la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina.

[0344]Las moléculas de anticuerpos descritas en el presente documento pueden administrarse mediante diversos métodos. Se conocen varios en la técnica, y para muchas aplicaciones terapéuticas, profilácticas o diagnósticas, una vía/modo de administración apropiado es la inyección o infusión intravenosa. Por ejemplo, las moléculas de anticuerpo pueden administrarse por infusión intravenosa a una velocidad inferior a 10 mg/min; preferiblemente inferior o igual a 5 mg/min para alcanzar una dosis de aproximadamente 1 a 100 mg/m2, preferiblemente de aproximadamente 5 a 50 mg/m2, de aproximadamente 7 a 25 mg/m2 y más preferiblemente, de aproximadamente 10 mg/m2. Como apreciará el artesano experto, la vía y/o el modo de administración variarán en función de los resultados deseados. En ciertas realizaciones, el compuesto activo puede prepararse con un portador que proteja el compuesto contra la liberación rápida, como una formulación de liberación controlada, incluidos implantes, parches transdérmicos y sistemas de administración microencapsulados. Pueden utilizarse polímeros biodegradables y biocompatibles, como el etilvinilacetato, los polianhídridos, el ácido poliglicólico, el colágeno, los poliortoésteres y el ácido poliláctico. Muchos métodos para la preparación de tales formulaciones están patentados o son generalmente conocidos por los expertos en la materia. Véase,p. ej.,Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.

[0345]En ciertas realizaciones, una molécula de anticuerpo puede administrarse por vía oral, por ejemplo, con un diluyente inerte o un portador comestible asimilable. La molécula de anticuerpo (y otros ingredientes, si se desea) también puede encerrarse en una cápsula de gelatina de cubierta dura o blanda, comprimirse en tabletas o incorporarse directamente a la dieta del sujeto. Para la administración terapéutica oral, la molécula de anticuerpo puede incorporarse con excipientes y utilizarse en forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, troques, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas y similares. Para administrar una molécula de anticuerpo por vía no parenteral, puede ser necesario recubrir el compuesto con un material que impida su inactivación, o coadministrar el compuesto con dicho material. Las composiciones terapéuticas, profilácticas o de diagnóstico también pueden administrarse con dispositivos médicos, y varios de ellos son conocidos en la técnica.

[0346]Los regímenes de dosificación se ajustan para proporcionar la respuesta deseada(p. ej.,una respuesta terapéutica, profiláctica o diagnóstica). Por ejemplo, puede administrarse un único bolo, pueden administrarse varias dosis divididas a lo largo del tiempo o la dosis puede reducirse o aumentarse proporcionalmente según indiquen las exigencias de la situación terapéutica. Resulta especialmente ventajoso formular composiciones parenterales en forma de unidades de dosificación para facilitar la administración y uniformizar la dosificación. La forma unitaria de dosificación, tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias para los sujetos a tratar; cada unidad contiene una cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. Las especificaciones de las formas farmacéuticas unitarias están dictadas por y dependen directamente de (a) las características únicas de la molécula de anticuerpo y el efecto terapéutico, profiláctico o diagnóstico particular que se desea conseguir, y (b) las limitaciones inherentes al arte de componer dicha molécula de anticuerpo para el tratamiento de la sensibilidad en individuos.

[0347]Un intervalo ejemplar, no limitante, para una cantidad terapéutica, profiláctica o diagnósticamente eficaz de una molécula de anticuerpo es de aproximadamente 0,1-50 mg/kg de peso corporal de un sujeto,p. ej.,aproximadamente 0,1 30 mg/kg,p. ej.,aproximadamente 1-30, 1-15, 1-10, 1-5, 5-10 o 1-3 mg/kg,p. ej.,aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40 o 50 mg/kg. La molécula de anticuerpo puede administrarse por infusión intravenosa a una velocidad inferior a 10 mg/min,p. ej.,,inferior o igual a 5 mg/min para alcanzar una dosis de aproximadamente 1 a 100 mg/m2,p. ej.,de aproximadamente 5 a 50 mg/m2, de aproximadamente 7 a 25 mg/m2,p. ej.,de aproximadamente 10 mg/m2. Cabe señalar que los valores de dosificación pueden variar en función del tipo y la gravedad de la afección que se desea aliviar. Debe entenderse además que para cualquier sujeto en particular, los regímenes de dosificación específicos deben ajustarse con el tiempo de acuerdo con la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y que los intervalos de dosificación establecidos aquí son sólo ejemplares y no pretenden limitar el alcance o la práctica de las composiciones reivindicadas.

[0348] Las composiciones farmacéuticas del presente documento pueden incluir una "cantidad terapéuticamente eficaz", una "cantidad profilácticamente eficaz" o una "cantidad diagnósticamente eficaz" de una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento.

[0349] Una "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, a las dosis y durante los periodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado terapéutico deseado. Una cantidad terapéuticamente eficaz de la molécula de anticuerpo puede variar en función de factores como el estado de la enfermedad, la edad, el sexo y el peso del individuo, y la capacidad del anticuerpo o de la porción de anticuerpo para provocar una respuesta deseada en el individuo. Una cantidad terapéuticamente eficaz es también aquella en la que cualquier efecto tóxico o perjudicial de la molécula de anticuerpo es superado por los efectos terapéuticamente beneficiosos. Una "dosis terapéuticamente eficaz" suele inhibir un parámetro medible al menos en un 20%,p. ej.,al menos en un 40%, al menos en un 60% o al menos en un 80% en relación con los sujetos no tratados. El parámetro medible puede ser,p. ej.,hematuria, orina coloreada, orina espumosa, dolor, hinchazón (edema) en manos y pies o hipertensión arterial. La capacidad de una molécula de anticuerpo para inhibir un parámetro mensurable puede evaluarse en un sistema modelo animal predictivo de la eficacia en el tratamiento o la prevención de la nefropatía IgA. Alternativamente, esta propiedad de una composición puede evaluarse examinando la capacidad de la molécula de anticuerpo para inhibir APRIL,p. ej.,mediante un ensayoin vitro.

[0350] Una "cantidad profilácticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, en las dosis y durante los períodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado profiláctico deseado. Típicamente, dado que una dosis profiláctica se utiliza en sujetos antes o en un estadio más temprano de la enfermedad, la cantidad profilácticamente eficaz será menor que la cantidad terapéuticamente eficaz.

[0351] Una "cantidad diagnósticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, en las dosis y durante los periodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado diagnóstico deseado. Típicamente, una cantidad diagnósticamente eficaz es aquella en la que un trastorno, porejemplo,un trastorno descrito en el presente documento,p. ej.,la nefropatía por IgA, puede diagnosticarsein vitro, ex vivooin vivo.

[0352] También dentro de esta divulgación hay un kit que comprende una molécula de anticuerpo, descrita en el presente documento. El kit puede incluir uno o más elementos que incluyan: instrucciones de uso; otros reactivos,p. ej.,un marcador, un agente terapéutico o un agente útil para quelar, o acoplar de otro modo, una molécula de anticuerpo a un marcador o agente terapéutico, o una composición radioprotectora; dispositivos u otros materiales para preparar la molécula de anticuerpo para su administración; portadores farmacéuticamente aceptables; y dispositivos u otros materiales para su administración a un sujeto.

Ácidos Nucleicos

[0353] La presente divulgación también presenta ácidos nucleicos que comprenden secuencias de nucleótidos que codifican las moléculas de anticuerpo(p. ej.,regiones variables de cadena pesada y ligera y CDR de las moléculas de anticuerpo), como se describe en el presente documento.

[0354] Por ejemplo, la presente divulgación presenta un primer y segundo ácido nucleico que codifican regiones variables de cadena pesada y ligera, respectivamente, de una molécula de anticuerpo elegida de entre una o más de las moléculas de anticuerpo divulgadas en el presente documento,p. ej.,una molécula de anticuerpo de la Tabla 1 o 5, o una porción de una molécula de anticuerpo,p. ej.,las regiones variables de la Tabla 2. El ácido nucleico puede comprender una secuencia de nucleótidos que codifique cualquiera de las secuencias de aminoácidos de las tablas de este documento, o una secuencia sustancialmente idéntica a la misma(p. ej.,una secuencia al menos aproximadamente 85%, 90%, 95%, 99% o más idéntica a la misma, o que difiera en no más de 3, 6, 15, 30 o 45 nucleótidos de las secuencias mostradas en las tablas de este documento).

[0355] En ciertas realizaciones, el ácido nucleico puede comprender una secuencia de nucleótidos que codifica al menos una, dos o tres CDR de una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos como se establece en las tablas del presente documento, o una secuencia sustancialmente homóloga a la misma(p. ej.,una secuencia al menos aproximadamente 85%, 90%, 95%, 99% o más idéntica a la misma, y/o que tiene una o más sustituciones,p. ej.,sustituciones conservadas). En algunas realizaciones, el ácido nucleico puede comprender una secuencia de nucleótidos que codifica al menos una, dos o tres CDR de una región variable de cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos como se establece en las tablas del presente documento, o una secuencia sustancialmente homóloga a la misma(p. ej.,una secuencia al menos aproximadamente 85%, 90%, 95%, 99% o más idéntica a la misma, y/o que tiene una o más sustituciones,p. ej.,sustituciones conservadas). En algunas realizaciones, el ácido nucleico puede comprender una secuencia de nucleótidos que codifica al menos una, dos, tres, cuatro, cinco o seis CDR de regiones variables de cadena pesada y ligera que tienen una secuencia de aminoácidos como se establece en las tablas del presente documento, o una secuencia sustancialmente homóloga a la misma(p. ej.,una secuencia al menos aproximadamente 85%, 90%, 95%, 99% o más idéntica a la misma, y/o que tiene una o más sustituciones,p. ej.,sustituciones conservadas).

[0356] En ciertas realizaciones, el ácido nucleico puede comprender una secuencia de nucleótidos que codifica al menos una, dos o tres CDR de una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de nucleótidos como se establece en la Tabla 2, una secuencia sustancialmente homóloga a la misma(p. ej.,,una secuencia al menos aproximadamente 85%, 90%, 95%, 99% o más idéntica a la misma, y/o capaz de hibridar en las condiciones de rigurosidad descritas en el presente documento). En algunas realizaciones, el ácido nucleico puede comprender una secuencia de nucleótidos que codifica al menos una, dos o tres CDR de una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de nucleótidos como se establece en la Tabla 2, o una secuencia sustancialmente homóloga a la misma(p. ej.,una secuencia al menos aproximadamente 85%, 90%, 95%, 99% o más idéntica a la misma, y/o capaz de hibridar en las condiciones de rigurosidad descritas en el presente documento). En ciertas realizaciones, el ácido nucleico puede comprender una secuencia de nucleótidos que codifica al menos una, dos, tres, cuatro, cinco o seis CDR de regiones variables de cadenas pesadas y ligeras que tienen la secuencia de nucleótidos como se establece en la Tabla 2, o una secuencia sustancialmente homóloga a la misma(p. ej.,una secuencia al menos aproximadamente 85%, 90%, 95%, 99% o más idéntica a la misma, y/o capaz de hibridar en las condiciones de rigurosidad descritas en el presente documento).

[0357] En ciertas realizaciones, el ácido nucleico comprende una secuencia de nucleótidos como se establece en la Tabla 2 o una secuencia sustancialmente homóloga a la misma(p. ej.,una secuencia al menos aproximadamente 85%, 90%, 95%, 99% o más idéntica a la misma, y/o capaz de hibridar bajo las condiciones de rigurosidad descritas en el presente documento). En algunas realizaciones, el ácido nucleico comprende una porción de una secuencia de nucleótidos como se establece en la Tabla 2 o una secuencia sustancialmente homóloga a la misma(p. ej.,una secuencia al menos aproximadamente 85%, 90%, 95%, 99% o más idéntica a la misma, y/o capaz de hibridar en las condiciones de rigurosidad descritas en el presente documento). La porción puede codificar, por ejemplo, una región variable(p. ej.,VH o VL); una, dos o tres o más CDR; o una, dos, tres o cuatro o más regiones base.

[0358] Los ácidos nucleicos aquí divulgados incluyen desoxirribonucleótidos o ribonucleótidos, o análogos de los mismos. El polinucleótido puede ser monocatenario o bicatenario, y si es monocatenario puede ser la cadena codificante o la cadena no codificante (antisentido). Un polinucleótido puede comprender nucleótidos modificados, como nucleótidos metilados y análogos de nucleótidos. La secuencia de nucleótidos puede estar interrumpida por componentes no nucleotídicos. Un polinucleótido puede modificarse aún más después de la polimerización, por ejemplo, mediante conjugación con un componente de marcación. El ácido nucleico puede ser un polinucleótido recombinante o un polinucleótido de origen genómico, ADNc, semisintético o sintético que no se encuentra en la naturaleza o que está unido a otro polinucleótido en una disposición no natural.

[0359] En algunos aspectos, la aplicación presenta células huésped y vectores que contienen los ácidos nucleicos aquí descritos. Los ácidos nucleicos pueden estar presentes en un único vector o en vectores separados presentes en la misma célula huésped o en células huésped separadas, como se describe con más detalle a continuación.

Vectores

[0360] Se proporcionan además en el presente documento vectores que comprenden secuencias de nucleótidos que codifican una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento.

[0361] En una realización, el vector comprende un nucleótido que codifica una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento,p. ej.,como se describe en la Tabla 1 o 5. En otra realización, el vector comprende una secuencia de nucleótidos descrita en el presente documento,p. ej.,en la Tabla 2. Los vectores incluyen, entre otros, un virus, un plásmido, un cósmido, un fago lambda o un cromosoma artificial de levadura (YAC).

[0362] Pueden emplearse numerosos sistemas vectoriales. Por ejemplo, una clase de vectores utiliza elementos de ADN derivados de virus animales como, por ejemplo, el virus del papiloma bovino, el virus del polioma, el adenovirus, el virus vaccinia, el baculovirus, los retrovirus (virus del sarcoma de Rous, MMTV o MOMLV) o el virus SV40. Otra clase de vectores utiliza elementos de ARN derivados de virus de ARN como el virus del bosque de Semliki, el virus de la encefalitis equina oriental y los flavivirus.

[0363] Además, las células que han integrado de forma estable el ADN en sus cromosomas pueden seleccionarse introduciendo uno o más marcadores que permitan la selección de células huésped transfectadas. El marcador puede proporcionar, por ejemplo, prototropía a un hospedador auxotrófico, resistencia a biocidas(p. ej.,antibióticos), o resistencia a metales pesados como el cobre, o similares. El gen marcador seleccionable puede unirse directamente a las secuencias de ADN que se desea expresar o introducirse en la misma célula por cotransformación. También pueden ser necesarios elementos adicionales para una síntesis óptima del ARNm. Estos elementos pueden incluir señales desplicing,así como promotores transcripcionales, potenciadores y señales de terminación.

[0364] Una vez que el vector de expresión o la secuencia de ADN que contiene las construcciones ha sido preparada para la expresión, los vectores de expresión pueden ser transfectados o introducidos en una célula huésped apropiada. Para ello, pueden emplearse diversas técnicas, como, por ejemplo, la fusión de protoplastos, la precipitación de fosfato cálcico, la electroporación, la transducción retroviral, la transfección viral, el cañón genético, la transfección basada en lípidos u otras técnicas convencionales. En el caso de la fusión de protoplastos, las células se cultivan en medios y se analiza su actividad.

[0365] Los métodos y condiciones para cultivar las células transfectadas resultantes y para recuperar la molécula de anticuerpo producida son conocidos por los expertos en la materia, y pueden variarse u optimizarse dependiendo del vector de expresión específico y de la célula huésped de mamífero empleada, basándose en la presente descripción.

Células

[0366] La presente divulgación también proporciona células(p. ej.,células huésped) que comprenden un ácido nucleico que codifica una molécula de anticuerpo como se describe en el presente documento. Por ejemplo, las células huésped pueden comprender una molécula de ácido nucleico que tenga una secuencia de nucleótidos descrita en la Tabla 2, una secuencia sustancialmente homóloga a la misma(p. ej.,una secuencia al menos aproximadamente 85%, 90%, 95%, 99% o más idéntica a la misma, y/o capaz de hibridarse en las condiciones de rigurosidad descritas en el presente documento), o una porción de uno de dichos ácidos nucleicos. Además, las células huésped pueden comprender una molécula de ácido nucleico que codifique una secuencia de aminoácidos de la Tabla 1 o 5, una secuencia sustancialmente homóloga a la misma(p. ej.,una secuencia al menos aproximadamente 80%, 85%, 90%, 95%, 99% o más idéntica a la misma), o una porción de una de dichas secuencias.

[0367] En algunas realizaciones, las células huésped están modificadas genéticamente para comprender ácidos nucleicos que codifican la molécula de anticuerpo descrita en el presente documento.

[0368] En ciertas realizaciones, las células huésped se modifican genéticamente utilizando un casete de expresión. La frase "casete de expresión" se refiere a secuencias de nucleótidos capaces de afectar a la expresión de un gen en huéspedes compatibles con dichas secuencias. Dichos casetes pueden incluir un promotor, un marco de lectura abierto con o sin intrones, y una señal de terminación. También pueden utilizarse factores adicionales necesarios o útiles para efectuar la expresión, como, por ejemplo, un promotor inducible.

[0369] La divulgación también proporciona células huésped que comprenden los vectores aquí descritos.

[0370] La célula puede ser, entre otras, una célula eucariota, una célula bacteriana, una célula de insecto o una célula humana. Las células eucariotas adecuadas incluyen, entre otras, células Vero, células HeLa, células COS, células CHO, células HEK293, células BHK y células MDCKII. Las células de insecto adecuadas incluyen, entre otras, las células Sf9. En una realización, la célula(p. ej.,la célula huésped) es una célula aislada.

Usos de las moléculas de anticuerpos

[0371] Las moléculas de anticuerpos aquí divulgadas, así como las composiciones farmacéuticas aquí divulgadas, tienen utilidades terapéuticas, profilácticas y/o diagnósticasin vitro, ex vivoein vivo.

[0372] En una realización, la molécula de anticuerpo reduce(p. ej.,inhibe, bloquea o neutraliza) una o más actividades biológicas de APRIL. Por ejemplo, estas moléculas de anticuerpos pueden administrarse a células en cultivo,in vitrooex vivo,o a un sujeto,p. ej.,un sujeto humano,p. ej., in vivo,para reducir(p. ej.,inhibir, bloquear o neutralizar) una o más actividades biológicas de APRIL. En una realización, la molécula de anticuerpo inhibe, o inhibe sustancialmente, la unión de APRIL,p. ej.,APRIL humano, a TACI, BCMA, o ambos. La divulgación proporciona un método para tratar, prevenir o diagnosticar un trastorno,p. ej.,un trastorno descrito en el presente documento(p. ej.,nefropatía IgA), en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento, de manera que se trate, prevenga o diagnostique el trastorno. Por ejemplo, la divulgación proporciona un método que comprende poner en contacto la molécula de anticuerpo descrita en el presente documento con células en cultivo,p. ej., in vitrooex vivo,o administrar la molécula de anticuerpo descrita en el presente documento a un sujeto,p. ej., in vivo,para tratar, prevenir o diagnosticar un trastorno,p. ej.,un trastorno asociado con APRIL(p. ej.,nefropatía IgA).

[0373] Como se usa aquí, el término "sujeto" pretende incluir animales humanos y no humanos. En algunas realizaciones, el sujeto es un sujeto humano,p. ej.,un paciente humano que padece un trastorno descrito en el presente documento(p. ej.,nefropatía por IgA), o que corre el riesgo de padecer un trastorno descrito en el presente documento(p. ej.,nefropatía por IgA). El término "animales no humanos" incluye mamíferos y no mamíferos, como los primates no humanos. En algunas formas de realización, el sujeto es un ser humano. Los métodos y composiciones aquí descritos son adecuados para tratar en pacientes humanos un trastorno aquí descrito(p. ej.,nefropatía IgA). Los pacientes que padecen un trastorno descrito en el presente documento(p. ej.,nefropatía por IgA) incluyen aquellos que han desarrollado un trastorno descrito en el presente documento(p. ej.,nefropatía por IgA) pero son (al menos temporalmente) asintomáticos, pacientes que han presentado un síntoma de un trastorno descrito en el presente documento(p. ej.,nefropatía por IgA) o pacientes que padecen un trastorno relacionado o asociado con un trastorno descrito en el presente documento(p. ej.,nefropatía por IgA).

Métodos para tratar o prevenir trastornos

[0374] Las moléculas de anticuerpos aquí descritas pueden utilizarse para tratar o prevenir trastornos asociados con APRIL o síntomas de los mismos.

[0375] Trastornos o condiciones ejemplares que pueden asociarse con APRIL incluyen, pero no se limitan a nefropatía IgA, nefropatía diabética, cáncer (p.ej.,cáncer hematológico(p. ej.,linfoma no Hodgkin de células B, leucemia linfocítica crónica, linfoma de Hodgkin, mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom y linfoma linfoplasmacítico) o tumores sólidos(p. ej.,cáncer colorrectal, cáncer de mama(p. ej.,carcinoma de mama), cáncer de esófago(p. ej.,adenocarcinoma esofágico), cáncer cerebral(p. ej.,glioblastoma) y cáncer de riñón(p. ej.,carcinoma de células renales)), trastornos inmunoproliferativos(p. ej.,hipergammaglobulinemia monoclonal IgA), vasculitis(p. ej.,vasculitis renal, púrpura de Henoch-Schonlein (vasculitis asociada a IgA) y glomerulonefritis postestreptocócica), trastornos autoinmunes(p. ej.,artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, enfermedad bullosa IgA lineal/dermatosis por inmunoglobulina A (IgA) lineal y epidermólisis bullosa adquirida mediada por IgA), pénfigo IgA, enfermedad celíaca y cirrosis alcohólica. En una realización, el trastorno está asociado con una expresión aberrante de IgA. En una realización, la molécula de anticuerpo se utiliza para tratar a un sujeto que padece un trastorno descrito en el presente documento, o que está en riesgo de desarrollar un trastorno descrito en el presente documento.

[0376] Las moléculas de anticuerpo aquí descritas se administran típicamente a una frecuencia que mantiene un nivel terapéuticamente eficaz de moléculas de anticuerpo en el sistema del paciente hasta que éste se recupera. Por ejemplo, las moléculas de anticuerpo pueden administrarse a una frecuencia que alcance una concentración sérica suficiente para que al menos aproximadamente 1, 2, 5, 10, 20, 30 o 40 moléculas de anticuerpo se unan a cada molécula APRIL. En una realización, las moléculas de anticuerpo se administran cada 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 días, cada 1, 2, 3, 4, 5 o 6 semanas, o cada 1, 2, 3, 4, 5 o 6 meses.

[0377] Los métodos de administración de diversas moléculas de anticuerpos son conocidos en la técnica y se describen a continuación. Las dosis adecuadas de las moléculas de anticuerpos utilizadas dependerán de la edad y el peso del sujeto y del fármaco concreto utilizado.

[0378] En una realización, la molécula de anticuerpo se administra al sujeto(p. ej.,un sujeto humano) por vía intravenosa. En una realización, la molécula de anticuerpo se administra al sujeto a una dosis entre 0,1 mg/kg y 50 mg/kg,p. ej.,entre 0,2 mg/kg y 25 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 10 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 5 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 3 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 2,5 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 2 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 1.5 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 1 mg/kg, entre 1 mg/kg y 1,5 mg/kg, entre 1 mg/kg y 2 mg/kg, entre 1 mg/kg y 2,5 mg/kg, entre 1 mg/kg y 3 mg/kg, entre 1 mg/kg y 2,5 mg/kg, o entre 1 mg/kg y 5 mg/kg. En una realización, la molécula de anticuerpo se administra al sujeto a una dosis fija entre 10 mg y 1000 mg,p. ej.,entre 10 mg y 500 mg, entre 10 mg y 250 mg, entre 10 mg y 150 mg, entre 10 mg y 100 mg, entre 10 mg y 50 mg, entre 250 mg y 500 mg, entre 150 mg y 500 mg, entre 100 mg y 500 mg, entre 50 mg y 500 mg, entre 25 mg y 250 mg, entre 50 mg y 150 mg, entre 50 mg y 100 mg, entre 100 mg y 150 mg. entre 100 mg y 200 mg, o entre 150 mg y 250 mg. En una realización, la molécula de anticuerpo se administra una vez a la semana, dos veces a la semana, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas, una vez cada cuatro semanas, una vez cada ocho semanas, una vez al mes, una vez cada dos meses o una vez cada tres meses. En una realización, la molécula de anticuerpo se administra entre 0,5 mg/kg y 3 mg/kg o entre 50 mg y 150 mg, una vez a la semana, dos veces a la semana, una vez cada dos semanas o una vez cada cuatro semanas.

[0379] Las moléculas de anticuerpo pueden usarse solas o conjugadas con un segundo agente,p. ej.,un agente bacteriano, toxina o proteína,p. ej.,una segunda molécula de anticuerpo anti-APRIL. Este método incluye: administrar la molécula de anticuerpo, sola o conjugada con un segundo agente, a un sujeto que requiera dicho tratamiento. Las moléculas de anticuerpos pueden utilizarse para administrar una variedad de agentes terapéuticos,p. ej.,una toxina, o mezclas de los mismos.

Nefropatía IgA

[0380] La nefropatía IgA (también conocida como enfermedad de Berger, enfermedad de Berger, síndrome de Berger, síndrome de Berger, nefritis IgA, IgAN o glomerulonefritis sinfaringítica) es la enfermedad glomerular crónica más prevalente en todo el mundo. Estimaciones epidemiológicas conservadoras hablan de una incidencia mundial de aproximadamente 5-50 casos/millón (niños) y 10-40 casos/millón (adultos). Esta incidencia de la enfermedad presenta un sesgo regional con una mayor prevalencia en Asia y América, con una carga de morbilidad especialmente elevada en Japón y regiones de China. Los casos de nefropatía IgA confirmados por biopsia en Japón se estiman en aproximadamente 350.000. En EE.UU., esta proyección es de aproximadamente 100.000, por lo que es la enfermedad glomerular de primer grado más frecuentemente diagnosticada en adultos. Aunque se trata de una enfermedad relativamente indolente, la nefropatía por IgA conduce a la enfermedad renal terminal (ERT),es decir,a la insuficiencia renal en el 20-50% de los pacientes en un plazo de 20-30 años. Es probable que estas cifras estén muy infradeclaradas, dada la necesidad de confirmar la enfermedad mediante biopsia renal, un protocolo que se practica de forma variable en diversos entornos clínicos. La enfermedad tiene una patogénesis compleja con componentes genéticos, epidemiológicos y potencialmente ambientales en la etiología, patología y progresión de la enfermedad. Asimismo, tiene una presentación clínica variable que va desde la asintomática hasta la insuficiencia renal terminal (IRT). Actualmente no existen tratamientos específicos de la enfermedad para tratar la enfermedad primaria o la progresión.

[0381]La etiología de esta enfermedad, como su nombre indica, ha sido establecida. En resumen, la enfermedad está causada por el depósito de IgA, normalmente en forma de complejos inmunes en el mesangio del riñón. Se ha llevado a cabo una caracterización molecular de estas inmunoglobulinas concretas. Estas IgA son de la subclase A1 (IgA1 vs. IgA1). IgA2), predominantemente polimérico (con enlaces mediados por la cadena J), y aparentemente diferencialmente oglicosilado en la región bisagra que interviene entre los dominios CH1 y CH2. En particular, estos o-glicanos carecen heterogéneamente de enlaces (31,3 galactosa y, como tales, se denominan comúnmente IgA1 deficiente en galactosa (o gdIgAl). Dado que la patogénesis de esta enfermedad puede implicar un mecanismo poligénico de múltiples impactos para inducir la patología renal y la fisiología aberrante, la IgA1 puede considerarse como el denominado autoantígeno que representa este primer "impacto" crítico en un modelo de múltiples impactos para la nefropatía IgA. Asimismo, se ha definido un conjunto de autoanticuerpos para esta enfermedad y se relaciona con inmunoglobulinas (predominantemente IgG) que reconocen específicamente este epítopo diferencialmente glicosilado y promueven la formación de complejos inmunes (que representan el denominado "hit 2"). También debe tenerse en cuenta que la propia IgA está sujeta a agregación debido al mal plegamiento, los cambios conformacionales y los posibles cambios en el estado de N-glicosilación de los glicanos CH2/CH3.

[0382]Sin querer estar limitado por la teoría, se cree que en una realización, los niveles aberrantemente glicosilados de IgA1 se correlacionan con la enfermedad y los resultados clínicos en la nefropatía IgA. La IgA1 aberrantemente glicosilada se ha caracterizado directamente a partir de biopsias renales y se ha observado una mayor producción de IgA1 aberrantemente glicosilada en células B (tonsilares, PBMC) en pacientes con nefropatía IgA. El nivel de IgA1 deficiente en galactosa en el suero de pacientes con nefropatía IgA está asociado a la progresión de la enfermedad (Zhao et al. Kidney Int. 2012; 82(7):790-6). La tinción diferencial con lectinas demostró niveles elevados de IgA1 aberrantemente glicosilada en suero y glomérulos de pacientes con nefropatía IgA en relación con controles sanos (Allen et al. Kidney Int.

2001; 60(3):969-73).

[0383]Sobre la base de este modelo de enfermedad en evolución, la nefropatía por IgA puede considerarse adecuadamente como una enfermedad autoinmune con una fuerte y crítica afectación extrarrenal. La identificación y validación de dianas inmunitarias seleccionadas que desempeñan un papel fundamental en la patogénesis de la enfermedad, a saber, la producción de IgA y la posterior producción de anticuerpos autoreactivos contra esta diana, representan una estrategia terapéutica lógica para el tratamiento. APRIL (TNFSF13) representa un área de interés particular por esta razón. Entre las razones adicionales para centrarse en APRIL se incluyen los datos genéticos emergentes basados en múltiples estudios exhaustivos de asociación de todo el genoma (GWAS) junto con trastornos genéticos relacionados con la IgA,p. ej.,la hipogammaglobulinemia IgA relacionada con la deficiencia de inmunoglobulina variable común (CVID) cuyo locus se asigna a defectos en TNFRSF13B (TACI) con implicaciones directas del papel de las interacciones APRIL-TACI en la regulación de la síntesis de IgA.

[0384]La nefropatía por IgA no suele causar síntomas en las fases iniciales. La enfermedad puede pasar desapercibida durante años y a veces se diagnostica por primera vez cuando los análisis rutinarios revelan proteínas y glóbulos rojos en la orina que no pueden verse sin un microscopio (hematuria microscópica). Los signos y síntomas de la nefropatía por IgA cuando la función renal está alterada incluyen,p. ej.,orina de color cola o té (causada por la presencia de glóbulos rojos en la orina); episodios repetidos de orina de color cola o té, a veces incluso sangre visible en la orina, generalmente durante o después de una infección de las vías respiratorias altas u otro tipo de infección; dolor en el costado o costados de la espalda por debajo de las costillas (flanco); espuma en el agua del inodoro por la presencia de proteínas en la orina; hinchazón (edema) en manos y pies; e hipertensión arterial. En una realización, el signo o síntoma incluye,p. ej.,uno o más de hematuria, proteinuria, albuminuria, hipertensión o una enfermedad renal en fase inicial(p. ej.,que requiera diálisis o trasplante). En una realización, el signo o síntoma está asociado con,p. ej.,uno o más de IgA1 aberrantemente glicosilada, formación de autoanticuerpos, deposición de complejos inmunes nefritogénicos en el riñón, o inflamación y pérdida de la función renal.

[0385]La presentación clásica (en aproximadamente el 40-50% de los casos, más común en adultos jóvenes) de la nefropatía IgA es la hematuria episódica que suele comenzar uno o dos días después de una infección inespecífica de las vías respiratorias superiores (por lo tanto, sinfaringítica). Con menor frecuencia, el agente desencadenante puede ser una infección gastrointestinal o urinaria. Todas estas infecciones tienen en común la activación de las defensas de las mucosas y, por tanto, la producción de anticuerpos IgA. Estos episodios pueden producirse de forma irregular cada pocos meses y en la mayoría de los pacientes acaban remitiendo. La función renal suele permanecer normal, aunque en raras ocasiones puede producirse insuficiencia renal aguda.

[0386]Una proporción menor (en aproximadamente del 20-30% de los casos, generalmente la población de mayor edad) de pacientes con nefropatía IgA presentan hematuria microscópica y proteinuria (menos de 2 gramos/día). Estos pacientes pueden no presentar ningún síntoma y sólo se detectan clínicamente si un médico decide tomar una muestra de orina. De ahí que la enfermedad se diagnostique con mayor frecuencia en situaciones en las que el cribado de orina es obligatorio,p. ej.,en los escolares de Japón.

[0387] Algunos pacientes con nefropatía IgA (aproximadamente el 5% de cada uno) tienen la siguiente presentación de la enfermedad: síndrome nefrótico(p. ej.,pérdida de 3 a 3,5 gramos de proteínas en la orina, asociado con un peor pronóstico); insuficiencia renal aguda(p. ej.,ya sea como complicación de la hematuria franca, cuando suele recuperarse, o debido a una glomerulonefritis rápidamente progresiva que suele desembocar en insuficiencia renal crónica); insuficiencia renal crónica (p. ej., sin síntomas previos, se presenta con anemia, hipertensión y otros síntomas de insuficiencia renal, en personas que probablemente llevaban mucho tiempo con hematuria microscópica y/o proteinuria no detectadas).

[0388] Una variedad de enfermedades sistémicas pueden estar asociadas con la nefropatía IgA como la insuficiencia hepática, la enfermedad celíaca, la artritis reumatoide, la artritis reactiva, la espondilitis anquilosante y el VIH. El diagnóstico de la nefropatía IgA y la búsqueda de cualquier enfermedad asociada revelan ocasionalmente una enfermedad sistémica grave subyacente. En ocasiones, hay síntomas simultáneos de púrpura de Henoch-Schonlein. Se ha sospechado que algunos alelos HLA junto con los fenotipos del complemento son factores genéticos.

[0389] La nefropatía por IgA puede diagnosticarse mediante diversas pruebas, porejemplo,análisis de orina, análisis de sangre(p. ej.,para mostrar un aumento de los niveles sanguíneos del producto de desecho creatinina), prueba de aclaramiento de iotalamato, diagnóstico por imagen del riñón(p. ej.,ecografía, radiografías o cistoscopia), biopsia renal o una combinación de los mismos.

[0390] Para un paciente adulto con hematuria aislada, pruebas como ultrasonido del riñón y cistoscopia son usualmente realizadas primero para localizar la fuente del sangrado. Estas pruebas descartarían los cálculos renales y el cáncer de vejiga, otras dos causas urológicas frecuentes de hematuria. En niños y adultos jóvenes, los antecedentes y la asociación con una infección respiratoria pueden hacer sospechar una nefropatía IgA. A menudo es necesaria una biopsia renal para confirmar el diagnóstico. La muestra de biopsia muestra proliferación del mesangio, con depósitos de IgA en la inmunofluorescencia y la microscopía electrónica. Sin embargo, los pacientes con hematuria microscópica aislada(es decir,sin proteinuria asociada y con función renal normal) no suelen someterse a biopsia, ya que se asocia a un pronóstico excelente. Un análisis de orina mostrará glóbulos rojos, normalmente en forma de cilindros urinarios de glóbulos rojos. También puede haber proteinuria, normalmente inferior a 2 gramos al día. Otras causas renales de hematuria aislada son,p. ej.,la enfermedad de la membrana basal delgada y el síndrome de Alport, este último una enfermedad hereditaria asociada a deficiencias auditivas y problemas oculares. Otros análisis de sangre que se realizan para ayudar al diagnóstico son la PCR o la VSG, los niveles de complemento, los ANA y la LDH. La electroforesis de proteínas y los niveles de inmunoglobulinas pueden mostrar un aumento de IgA en el 50% de los pacientes.

[0391] El tratamiento con diversos medicamentos puede ralentizar el avance de la enfermedad y ayudar a controlar síntomas como la hipertensión arterial, la presencia de proteínas en la orina (proteinuria) y la hinchazón (edema) de manos y pies. Las terapias ejemplares para la nefropatía IgA incluyen,p. ej.,medicamentos para la presión arterial alta(p. ej.,inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (ACE) o bloqueadores de los receptores de angiotensina (ARB)), ácidos grasos omega-3, inmunosupresores(p. ej.,corticosteroides, como la prednisona), tratamiento con estatinas, micofenolato mofetilo, ciclosporina, mizoribina, ciclofosfamida(p. ej.,en combinación con antiagregantes plaquetarios/anticoagulantes, o en combinación con esteroides y azatioprina), diálisis renal o trasplante de riñón. También se describen terapias ejemplares para la nefropatía IgA en Floege y Eitner J. Am. Soc. Nephrol. 22: 1785-1794, 2011. Otras terapias ejemplares para la nefropatía IgA se describen en la sección "Terapias combinadas" del presente documento.

[0392] Sin querer estar limitado por la teoría, se cree que, en una realización, dirigirse a APRIL reduce selectivamente la IgA. Los ratones APRIL-/-tienen un desarrollo normal de linfocitos T y B, una proliferación normal de células T y Bin vitro,pero niveles séricos de IgA disminuidos (Castigli et al. Proc Natl Acad Sci USA. 2004; 101(11):3903-8). El descubrimiento de nuevos loci de riesgo para la nefropatía IgA implica a genes implicados en la inmunidad frente a patógenos intestinales (Kiryluk et al. Nat Genet. 2014; 46(11):1187-96). Los niveles séricos y la producción de células B de APRIL están elevados en pacientes con nefropatía IgA y se correlacionan con niveles aberrantemente glicosilados de IgA (Zhai et al. Medicina (Baltimore). 2016; 95(11):e3099). Los niveles plasmáticos de APRIL (TNFSF13) se correlacionan con la progresión de la enfermedad renal crónica en la nefropatía IgA (Han et al. JAm Soc Nephrol. 2016; 27(2):439-53). El tratamiento con anticuerpos anti-APRIL produce una reducción de la IgA sérica, la limpieza del mesangio renal y la reducción de la infiltración de células inflamatorias y de la lesión glomerular en ratones (Kim et al. PLoS One. 2015; 10(9):e0137044). El anticuerpo anti-APRIL preserva la homeostasis de las células inmunitarias en la médula ósea y el bazo (Kim et al. PLoS One. 2015; 10(9):e0137044).

[0393] APRIL (TNFSF13) representa una diana biológica y terapéutica lógica para el tratamiento de la nefropatía IgA. Sin querer estar limitado por la teoría, se cree que en una realización, la eficacia de las moléculas de anticuerpo descritas aquí con respecto a la modulación dirigida de los mecanismos inmunobiolgociales mediados por APRIL es directamente relevante para el tratamiento de la nefropatía IgA. Las moléculas de anticuerpos anti-APRIL descritas en el presente documento(p. ej.,moléculas de anticuerpos anti-APRIL humanizados),p. ej.,con alta potencia biológica y/o baja activación del complemento, pueden utilizarse para tratar la nefropatía IgA. En una realización, la molécula de anticuerpo tiene afinidad de unión a APRIL picomolar y actividad de bloqueo del receptor subnanomolar tanto a TACI como a BCMA,p. ej., in vitro.En otra realización, la molécula de anticuerpo interfiere funcionalmente con la señalización celular descendente mediada por APRIL,p. ej.,a través de la vía canónica de activación de NFxB. En una realización, la molécula de anticuerpo se diseña, porejemplo,como un subtipo IgG2, con el fin de mitigar clínicamente la exacerbación dependiente de anticuerpos del reclutamiento del complemento,p. ej.,en los riñones de pacientes con nefropatía IgA. En una realización, una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento puede tener un perfil de seguridad mejorado en comparación con enfoques terapéuticos basados en células B más depletivas,p. ej.,debido a una menor perturbación de la homeostasis de células T de banda, como se muestra en un modelo murino (Kim et al. PLoS One.

2015;10(9):e0137044).

[0394] Las moléculas de anticuerpos aquí descritas pueden utilizarse para tratar o prevenir diferentes estadios de la nefropatía IgA. En una realización, la molécula de anticuerpo se utiliza para tratar un síntoma asociado con la nefropatía IgA,p. ej.,hematuria, proteinuria, albuminuria, hipertensión, una enfermedad renal en fase inicial(p. ej., querequiera diálisis o trasplante), o una combinación de las mismas. En una realización, la molécula de anticuerpo reduce la IgA1 aberrantemente glicosilada, la formación de autoanticuerpos, el depósito de complejos inmunes nefritogénicos en el riñón, la inflamación y la pérdida de función renal, o una combinación de los mismos. En una realización, el sujeto tiene un riesgo bajo, porejemplo,presenta anomalías urinarias menores(p. ej.,microhematuria), una tasa de filtración glomerular (GFR) normal y/o no tiene hipertensión. En otra realización, el sujeto presenta un riesgo de moderado a alto, porejemplo,proteinuria superior a 0,5-1 g/d y/o TFG reducida(p. ej.,inferior a 30-50 ml/min) y/o hipertensión. En otra realización, el sujeto tiene una pérdida aguda o rápida de la GFR,p. ej.,padece síndrome nefrótico o glomerulonefritis rápidamente progresiva (RPGN), o lesión renal aguda (AKI) debida a macrohematuria u otra causa común. En una realización, el sujeto tiene proteinuria superior a 0,5 g/día,p. ej.,entre 0,5-1 g/día o superior a 1 g/día. En una realización, el sujeto tratado por nefropatía IgA tiene una tasa de filtración glomerular (GFR) inferior a 50 ml/min,porejemplo, inferior a 30 ml/min. En una realización, la molécula de anticuerpo no modifica significativamente(p. ej.,es capaz de preservar) la homeostasis de las células inmunitarias. En otra realización, la molécula de anticuerpo produce una reducción de IgA y no una ablación total de IgA.

Nefropatía diabética

[0395] La molécula de anticuerpo aquí descrita puede utilizarse para tratar o prevenir la nefropatía diabética. La nefropatía diabética (o conocida como enfermedad renal diabética) es una enfermedad renal progresiva causada,p. ej.,por daños en los capilares de los glomérulos de los riñones. Se caracteriza típicamente por síndrome nefrótico y cicatrización difusa de los glomérulos. A menudo se debe a una diabetes mellitus de larga duración, y es una de las principales razones para someterse a diálisis. Se clasifica como una complicación de la diabetes en los vasos sanguíneos pequeños.

[0396] Los síntomas ejemplares de la nefropatía diabética incluyen, entre otros, cansancio intenso, dolores de cabeza, sensación general de enfermedad, náuseas, vómitos, micción frecuente, falta de apetito, picor en la piel o hinchazón de las piernas. La causa de la nefropatía diabética puede ser,p. ej.,la hiperglucemia, la formación de productos finales de glicación avanzada. Las citoquinas pueden estar implicadas en el desarrollo de la nefropatía diabética.

[0397] La diabetes puede causar una serie de cambios en el metabolismo del cuerpo y la circulación sanguínea, que probablemente se combinan para producir un exceso de especies reactivas de oxígeno. Estos cambios dañan los glomérulos del riñón, lo que conduce a la característica distintiva de la albuminuria (Cao y Cooper J Diabetes Investig.

2011; 2(4): 243-247). A medida que progresa la nefropatía diabética, la barrera de filtración glomerular (BFG), compuesta por el endotelio fenestrado, la membrana basal glomerular y los podocitos epiteliales, se daña cada vez más (Mora-Fernández et al. J. Physiol. (Lond.) 2014; 592 (Pt 18): 3997-4012). El daño de la membrana basal glomerular permite que las proteínas de la sangre se filtren y se acumulen en el espacio de Bowman en forma de nódulos positivos de ácido periódico de Schiff (nódulos de Kimmelstiel-Wilson).

[0398] El diagnóstico de la nefropatía diabética puede basarse en la medición de niveles elevados de albúmina en la orina o en la evidencia de una función renal reducida (Lewis and Maxwell Practitioner. 2014; 258(1768):13-7, 2). Las mediciones de albúmina pueden definirse como sigue: albuminuria normal: excreción urinaria de albúmina <30 mg/24h; microalbuminuria: excreción urinaria de albúmina en el intervalo de 30-299 mg/24h; albuminuria clínica (manifiesta): excreción urinaria de albúmina >300 mg/24h. Para evaluar la función renal, se mide la tasa de filtración glomerular estimada (eGFR) de la persona a partir de una muestra de sangre. La eGFR normal oscila entre 90 y 120 ml/min/1,73m2.

[0399] Otros tratamientos que pueden utilizarse en combinación con la molécula de anticuerpo descrita en el presente documento para tratar la nefropatía diabética incluyen,p. ej.,un inhibidor de la enzima convertidora de angiotensina (ACE)(p. ej.,captopril, enalapril, lisinopril o ramipril), un bloqueante de los receptores de angiotensina II (ARB)(p. ej.,candesartán cilexetilo, irbesartán, losartán o telmisartán), un antagonista del calcio(p. ej.,amlodipino, diltiazem o verapamilo), un diurético(p. ej.,clortalidona, hidroclorotiazida o espironolactona), un betabloqueante(p. ej.,atenolol, carvedilol o metoprolol) y tratamiento de la diabetes(p. ej.,control de la hipertensión arterial o de los niveles de azúcar en sangre, o reducción del consumo de sal en la dieta).

Cáncer

[0400] La molécula de anticuerpo aquí descrita puede utilizarse para tratar o prevenir un cáncer. Los cánceres ejemplares que pueden tratarse o prevenirse mediante las moléculas de anticuerpos descritas en el presente documento incluyen, entre otros, la leucemia linfoblástica aguda (ALL), la leucemia mieloide aguda (AML), el carcinoma corticosuprarrenal, el sarcoma de Kaposi, linfoma relacionado con el AIDS, linfoma primario del sistema nervioso central (CNS), cáncer anal, cáncer de apéndice, astrocitoma, tumor teratoide/rabdoide atípico, carcinoma basocelular, cáncer de vías biliares, cáncer de vejiga, cáncer óseo(p. ej.,sarcoma de Ewing u osteosarcoma e histiocitoma fibroso maligno), tumor cerebral(p. ej.,astrocitomas, glioma de tronco encefálico, tumor teratoide/rabdoide atípico del sistema nervioso central, tumor embrionario del sistema nervioso central, tumor de células germinales del sistema nervioso central, craneofaringioma o ependimoma), cáncer de mama, tumor bronquial, linfoma de Burkitt, tumor carcinoide(p. ej.,tumor carcinoide gastrointestinal), tumor cardíaco (corazón), tumor embrionario, tumor de células germinales, linfoma, cáncer de cuello uterino, colangiocarcinoma, cordoma, leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia mielógena crónica (CML), neoplasia mieloproliferativa crónica, cáncer de colon, cáncer colorrectal, craneofaringioma, linfoma cutáneo de células T, carcinoma ductal in situ (DCIS), cáncer de endometrio, ependimoma, cáncer de esófago, estesioneuroblastoma, sarcoma de Ewing, tumor extracraneal de células germinales, tumor extragonadal de células germinales, cáncer ocular(p. ej.,melanoma intraocular o retinoblastoma), cáncer de trompas de Falopio, histiocitoma fibroso óseo, osteosarcoma, cáncer de vesícula biliar, cáncer gástrico (estómago), tumor carcinoide gastrointestinal, tumores del estroma gastrointestinal (GIST), tumor de células germinales(p. ej.,tumor del sistema nervioso central, tumor extracraneal, tumor extragonadal, cáncer de ovario o cáncer de testículo), enfermedad trofoblástica gestacional, glioma, leucemia de células pilosas, cáncer de cabeza y cuello, cáncer hepatocelular (hígado), linfoma de Hodgkin, cáncer hipofaríngeo, melanoma intraocular, tumor de células de los islotes, tumor neuroendocrino pancreático, sarcoma de Kaposi, cáncer de riñón(p. ej.,cáncer de células renales o tumor de Wilms), histiocitosis de células de Langerhans (LCH), cáncer de laringe, leucemia (p. ej., leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia mielógena crónica (CML) o leucemia de células pilosas), cáncer de labio y de cavidad oral, cáncer de hígado, cáncer de pulmón(p. ej.cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) o cáncer de pulmón de células pequeñas), linfoma(p. ej.linfoma relacionado con aids, linfoma de Burkitt, linfoma cutáneo de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin o linfoma primario del sistema nervioso central (CNS)), macroglobulinemia de Waldenstrom, cáncer de mama masculino, histiocitoma fibroso maligno óseo y osteosarcoma, melanoma(p. ej.,melanoma intraocular (ocular)), carcinoma de células de Merkel, mesotelioma, cáncer escamoso metastásico de cuello, carcinoma del tracto medio, cáncer de boca, síndrome de neoplasia endocrina múltiple, mieloma múltiple/neoplasia de células plasmáticas, micosis fungoide, síndrome mielodisplásico, neoplasia mielodisplásica/mieloproliferativa, neoplasia mieloproliferativa crónica, cáncer de cavidad nasal y senos paranasales, cáncer nasofaríngeo, neuroblastoma, cáncer oral, cáncer de labio y cavidad oral, cáncer orofaríngeo, osteosarcoma e histiocitoma fibroso maligno óseo, cáncer de ovario(p. ej.,cáncer de ovario epitelial o tumor de ovario de células germinales), cáncer de páncreas, tumores neuroendocrinos pancreáticos (tumores de células de los islotes), papilomatosis, paraganglioma, cáncer de senos paranasales y cavidad nasal, cáncer de paratiroides, cáncer de pene, cáncer de faringe, feocromocitoma, tumor hipofisario, blastoma pleuropulmonar, cáncer peritoneal, cáncer de próstata, cáncer de recto, retinoblastoma, rabdomiosarcoma, cáncer de glándulas salivales, sarcoma(p. ej.,sarcoma de Ewing, sarcoma de Kaposi, osteosarcoma, rabdomiosarcoma, sarcoma de partes blandas o sarcoma uterino), síndrome de Sézary, cáncer de piel(p. ej.,melanoma, carcinoma de células de Merkel o cáncer de piel no melanoma), cáncer de intestino delgado, carcinoma de células escamosas, cáncer de testículo, cáncer de garganta, timoma y carcinoma tímico, cáncer de tiroides, cáncer de células de transición de pelvis renal y uréter, cáncer de uretra, cáncer de endometrio uterino, cáncer de vagina, cáncer de vulva o una lesión metastásica de los mismos.

[0401] En una realización, el cáncer es un cáncer hematológico,p.ej.,un linfoma o leucemia, porejemplo,elegido entre linfoma no Hodgkin de células B, leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma de Hodgkin, mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom o linfoma linfoplasmocítico. En una realización, el cáncer es un mieloma múltiple. En otra realización, el cáncer es un tumor sólido,p. ej.,elegido entre cáncer colorrectal, cáncer de mama(p. ej.,carcinoma de mama), cáncer esofágico(p. ej.,adenocarcinoma esofágico), cáncer cerebral(p. ej.,glioblastoma) o cáncer de riñón(p. ej.,carcinoma de células renales).

[0402] En una realización, la molécula de anticuerpo se utiliza para tratar un linfoma. Otros tratamientos que pueden utilizarse en combinación con la molécula de anticuerpo descrita en el presente documento para tratar el linfoma incluyen,p. ej.,quimioterapia, inmunoterapia, terapia farmacológica dirigida, radioterapia y trasplante de células madre. Un tratamiento farmacológico dirigido ejemplar incluye un inhibidor de CD20(p. ej.,rituximab (RITUXAN® o ibritumomab tiuxetan (ZEVALIN®)).

[0403] En una realización, la molécula de anticuerpo se utiliza para tratar una leucemia. Otros tratamientos que pueden utilizarse en combinación con la molécula de anticuerpo descrita en el presente documento para tratar la leucemia incluyen,p. ej.,quimioterapia, inmunoterapia, terapia farmacológica dirigida, radioterapia y trasplante de células madre. La terapia farmacológica dirigida ejemplar incluye un inhibidor de la tirosina quinasa(p. ej.,imatinib (GLEEVEC®).

[0404] En una realización, la molécula de anticuerpo se utiliza para tratar un mieloma múltiple. Otros tratamientos que pueden utilizarse en combinación con la molécula de anticuerpo descrita en el presente documento para tratar el mieloma múltiple incluyen,p. ej.,quimioterapia, corticosteroides, inmunoterapia, terapia farmacológica dirigida, radioterapia y trasplante de células madre. La terapia farmacológica dirigida ejemplar incluye,p. ej.,un análogo de talidomida(p. ej.,talidomida (THALOMID®), lenalidomida (REVLIMID®) o pomalidomida (POMALYST®)).

[0405] En una realización, la molécula de anticuerpo se utiliza para tratar la macroglobulinemia de Waldenstrom. Otros t ra ta m ie n to s q u e p u e d e n u t iliz a rs e e n c o m b in a c ió n c o n la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o d e s c r ita e n e l p re s e n te d o c u m e n to p a ra<t r a ta r la m a c ro g lo b u lin e m ia d e W a ld e n s t ro m in c lu y e n ,>p. ej.,<re c a m b io p la s m á tic o , q u im io te ra p ia , in m u n o te ra p ia , te ra p ia>fa rm a c o ló g ic a d ir ig id a y t ra s p la n te d e c é lu la s m a d re .

<[>0406]<E n u n a re a liz a c ió n , la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o s e u tiliz a p a ra t r a ta r un c á n c e r c o lo r re c ta l. O tro s tra ta m ie n to s q u e>p u e d e n u t il iz a rs e e n c o m b in a c ió n c o n la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o d e s c r ita e n e l p re s e n te d o c u m e n to p a ra t r a ta r e l c á n c e r<c o lo r re c ta l in c lu y e n ,>p. ej.,<c iru g ía , q u im io te ra p ia , ra d io te ra p ia , in m u n o te ra p ia y te ra p ia fa rm a c o ló g ic a d ir ig id a . L a te ra p ia fa rm a c o ló g ic a d ir ig id a e je m p la r in c lu y e ,>p. ej.,<un in h ib id o r d e l V E G F (>p. ej.,p. ej.,<c e tu x im a b (E R B IT U X ® ), p a n itu m u m a b (V E C T IB IX ® )) , y un in h ib id o r d u a l d e la t ir o s in a q u in a s a V E G F R 2 -T IE 2 (>p. ej.,<re g o ra fe n ib (S T IV A R G A ® )).>

[0407]<E n u n a re a liz a c ió n , la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o s e u t iliz a p a ra t r a ta r un c á n c e r d e m a m a ,>p.ej.,<un c a rc in o m a de>m a m a . O tro s t r a ta m ie n to s q u e p u e d e n u t il iz a rs e e n c o m b in a c ió n c o n la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o d e s c r ita e n e l p re s e n te<d o c u m e n to p a ra t r a ta r e l c á n c e r d e m a m a in c lu y e n ,>p. ej.,<c iru g ía , q u im io te ra p ia , ra d io te ra p ia , te ra p ia h o rm o n a l, in m u n o te ra p ia y te ra p ia fa rm a c o ló g ic a d ir ig id a . U n tr a ta m ie n to fa rm a c o ló g ic o d ia n a e je m p la r in c lu y e ,>p. ej.,<un in h ib id o r d e H E R 2 (>p. ej.,<t ra s tu z u m a b (H E R C E P T IN ® ), p e r tu z u m a b (P E R J E T A ® ), a d o - t ra s tu z u m a b>(KADCYlA<®>)<o la p a tin ib (T Y K E R B ® )) o un in h ib id o r d e V E G F (>p. ej.,

[0408]<E n u n a re a liz a c ió n , la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o s e u t iliz a p a ra t r a ta r un c á n c e r e s o fá g ic o ,>p.ej.,<un a d e n o c a rc in o m a>e s o fá g ic o . O tro s tra ta m ie n to s q u e p u e d e n u t iliz a rs e e n c o m b in a c ió n c o n la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o d e s c r ita e n e l p re s e n te<d o c u m e n to p a ra t r a ta r e l c á n c e r d e e s ó fa g o in c lu y e n ,>p. ej.,<c iru g ía , q u im io te ra p ia , ra d io te ra p ia e in m u n o te ra p ia .>

[0409]<E n u n a re a liz a c ió n , la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o s e u t iliz a p a ra t r a ta r un c á n c e r c e re b ra l,>p.ej.,<un g lio b la s to m a . O tro s>t ra ta m ie n to s q u e p u e d e n u t iliz a rs e e n c o m b in a c ió n c o n la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o d e s c r ita e n e l p re s e n te d o c u m e n to p a ra t r a ta r e l c á n c e r c e re b ra l in c lu y e n ,p. ej.,<c iru g ía , q u im io te ra p ia , ra d io te ra p ia , ra d io c iru g ía , in m u n o te ra p ia y te ra p ia fa rm a c o ló g ic a d ir ig id a . La te ra p ia fa rm a c o ló g ic a d ir ig id a e je m p la r in c lu y e ,>p. ej.,<un in h ib id o r d e l V E G F (>p. ej.,(A V A S T IN ® )) .

[0410]<E n u n a re a liz a c ió n , la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o s e u t iliz a p a ra t r a ta r un c á n c e r d e r iñ ó n ,>p.ej.,<un c a rc in o m a de>c é lu la s re n a le s . O tro s tra ta m ie n to s q u e p u e d e n u t il iz a rs e en c o m b in a c ió n co n la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o d e s c r ita en elp. ej.,<c iru g ía , c r io a b la c ió n , a b la c ió n p o r ra d io fre c u e n c ia , ra d io te ra p ia , in m u n o te ra p ia y te ra p ia fa rm a c o ló g ic a d ir ig id a . E l t ra ta m ie n to fa rm a c o ló g ic o d ir ig id o e je m p la r in c lu y e ,>p. ej.,<un in h ib id o r d e l V E G F (>p. ej.,p. ej.,<a x it in ib>(INLYTa ®), p a z o p a n ib (V O T R IE N T ® ) o s u n it in ib (S U T E N T ® ), a x it in ib (IN L Y T A ® ), p a z o p a n ib (V O T R IE N T ® ), s o ra fe n ib (N E X A V A R ® ) o<s u n it in ib (S U T E N T ® ), o un in h ib id o r d e m T O R (>p. ej.,<te m s iro l im u s>(TO<r>ISEL<®>)<o e v e ro lim u s>(A<f>INITOR<®>).

Trastornos inmunoproliferativos

[0411]<L a m o lé c u la d e a n t ic u e rp o a q u í d e s c r ita p u e d e u t iliz a rs e p a ra t r a ta r o p re v e n ir un tra s to rn o in m u n o p ro life ra t iv o .>L o s tra s to rn o s in m u n o p ro life ra t iv o s ( ta m b ié n c o n o c id o s c o m o e n fe rm e d a d e s in m u n o p ro life ra t iv a s o n e o p la s ia s in m u n o p ro life ra t iv a s ) s o n t ra s to rn o s d e l s is te m a in m u n ita r io q u e se c a ra c te r iz a n p o r la p ro li fe ra c ió n a n o rm a l d e la s c é lu la sp. ej.,<c é lu la s B, c é lu la s T y lin fo c ito s T a s e s in o s (N K ) ) o p o r la p ro d u c c ió n e x c e s iv a d e in m u n o g lo b u lin a s (>p. ej.,<a n t ic u e rp o s ).>

[0412]<T ra s to rn o s in m u n o p ro life ra t iv o s e je m p la re s in c lu y e n , p e ro n o se lim ita n a, t ra s to rn o s l in fo p ro life ra t iv o s (L P D ),>h ip e rg a m m a g lo b u lin e m ia y p a ra p ro te in e m ia . L o s tra s to rn o s l in fo p ro life ra t iv o s in c lu y e n v a r ia s a fe c c io n e s en la s q u e se p ro d u c e n lin fo c ito s en c a n t id a d e s e x c e s iv a s . S u e le n a p a re c e r en p a c ie n te s co n un s is te m a in m u n ita r io d e b ilita d o . La h ip e rg a m m a g lo b u lin e m ia s u e le c a ra c te r iz a rs e p o r un a u m e n to d e lo s n iv e le s d e in m u n o g lo b u lin a s e n e l s u e ro s a n g u ín e o . L a p a ra p ro te in e m ia o g a m m a p a tía m o n o c lo n a l e s la p re s e n c ia d e c a n t id a d e s e x c e s iv a s d e u n a ú n ic a g a m m a g lo b u lin a<m o n o c lo n a l (>p. ej.,h ip e rg a m m a g lo b u lin e m ia Ig A m o n o c lo n a l.

Vasculitis

[0413]<L a m o lé c u la d e a n t ic u e rp o a q u í d e s c r ita p u e d e u t il iz a rs e p a ra t r a ta r o p re v e n ir la v a s c u lit is . L a v a s c u lit is e s un>g ru p o d e t ra s to rn o s q u e d e s tru y e n lo s v a s o s s a n g u ín e o s p o r in f la m a c ió n . L a v a s c u lit is e s tá c a u s a d a p r in c ip a lm e n te p o r la m ig ra c ió n d e le u c o c ito s y e l d a ñ o re s u lta n te . A lg u n o s t ip o s e je m p la re s d e v a s c u lit is so n , e n tre o tro s , la p o lia r te r it is m ic ro s c ó p ic a (p o lia n g e ít is ) , la g ra n u lo m a to s is d e W e g e n e r , la p ú rp u ra d e H e n o c h S c h o n le in y la p o lia r te r it is n o d o s a .

[0414]<E n u n a re a liz a c ió n , la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o s e u t iliz a p a ra t r a ta r la p ú rp u ra d e H e n o c h -S c h o n le in ( v a s c u lit is>a s o c ia d a a IgA ).

[0415]<La p ú rp u ra d e H e n o c h -S c h o n le in (H S P , ta m b ié n c o n o c id a c o m o p ú rp u ra a n a fi la c to id e , p ú rp u ra re u m á tic a o p ú rp u ra>d e S c h o n le in -H e n o c h ) e s u n a e n fe rm e d a d d e la p ie l y o tro s ó rg a n o s q u e a fe c ta m á s c o m ú n m e n te a lo s n iñ o s . La H S P es u n a v a s c u lit is s is té m ic a ( in f la m a c ió n d e lo s v a s o s s a n g u ín e o s ) y s e c a ra c te r iz a p o r la d e p o s ic ió n d e c o m p le jo s in m u n e s d e Ig A y e l c o m p o n e n te 3 d e l c o m p le m e n to (C 3 ) en a r te r io la s , c a p ila re s y v é n u la s . E n la p ie l, la e n fe rm e d a d c a u s a p ú rp u ra palpable (pequeñas hemorragias); a menudo con dolor articular y abdominal. Con la afectación renal, puede haber pérdida de pequeñas cantidades de sangre y proteínas en la orina; en una pequeña proporción de casos, la afectación renal evoluciona a enfermedad renal crónica, incluso a daño renal irreversible. La HSP suele ir precedida de una infección, por ejemplo de garganta.

[0416] Los síntomas de la púrpura de Henoch-Schonlein incluyen,p.ej.,erupción cutánea (púrpura), articulaciones hinchadas o doloridas (artritis), síntomas gastrointestinales(p.ej.,dolor abdominal, náuseas, vómitos o heces sanguinolentas) y afectación renal(p.ej.,proteínas o sangre en la orina). Los niveles séricos de IgA son elevados en los pacientes con HSP.

[0417] Las normas para definir la púrpura de Schonlein-Henoch incluyen,p. ej.,la clasificación del Colegio Americano de Reumatología (ACR) de 1990 (Mills et al. (1990). Arthritis and Rheumatism 33 (8): 1114-21), la Conferencia de Consenso de Chapel Hill (CHCC) de 1994 (Jennette et al. (1994) Arthritis and Rheumatism 37 (2): 187-92), y la clasificación de 2006 de la Liga Europea contra el Reumatismo (EULAR) y la Sociedad de Reumatología Pediátrica (PReS), que incluye la púrpura palpable como criterio obligatorio, junto con al menos uno de los siguientes hallazgos: dolor abdominal difuso, depósito predominante de IgA (confirmado mediante biopsia cutánea), artritis aguda en cualquier articulación y afectación renal (evidenciada por la presencia de sangre y/o proteínas en la orina) (Ozen et al. (2006) Annals of Rheumatic Diseases 65 (7): 936-41).

[0418] Otros tratamientos que pueden utilizarse en combinación con la molécula de anticuerpo aquí descrita para tratar la púrpura de Henoch-Schonlein incluyen,p.ej.,analgésicos para los dolores abdominales y articulares, esteroides(p.ej.,esteroides orales o una combinación de metilprednisolona intravenosa (esteroide), ciclofosfamida y dipiridamol seguida de prednisona). Otros regímenes también incluyen,p. ej.,esteroides/azatioprina, y esteroides/ciclofosfamida (con o sin heparina y warfarina), o inmunoglobulina intravenosa (IGIV).

[0419] En otra realización, la molécula de anticuerpo se usa para tratar glomerulonefritis proliferativa aguda,p.ej.,glomerulonefritis post-estreptocócica.

[0420] La glomerulonefritis proliferativa aguda es un trastorno de los glomérulos (glomerulonefritis), o pequeños vasos sanguíneos de los riñones. Es una complicación frecuente de las infecciones bacterianas, típicamente la infección cutánea por bacteriasStreptococcusde los tipos 12, 4 y 1 (impétigo), pero también tras una faringitis estreptocócica, por lo que también se conoce como glomerulonefritis postinfecciosa o postestreptocócica. La infección hace que los vasos sanguíneos de los riñones se inflamen, lo que dificulta la capacidad de los órganos renales para filtrar la orina.

[0421] La fisiopatología de este trastorno es consistente con un mecanismo mediado por complejos inmunes. Este trastorno produce proteínas que tienen diferentes determinantes antigénicos, que a su vez tienen afinidad por sitios del glomérulo. En cuanto se produce la unión con el glomérulo, a través de la interacción con la properdina, se activa el complemento. La fijación del complemento provoca la generación de mediadores inflamatorios adicionales.

[0422] Los síntomas de la glomerulonefritis proliferativa aguda incluyen,p. ej.,hematuria, oliguria, edema, hipertensión, fiebre, dolor de cabeza, malestar, anorexia y náuseas.

[0423] Otros tratamientos que pueden usarse en combinación con la molécula de anticuerpo aquí descrita para tratar la glomerulonefritis proliferativa linda incluyen,p.ej.,el control de la presión arterial (BP) y el control de la cantidad de potasio en individuos con lesión renal aguda oligúrica.

Trastornos autoinmunitarios

[0424] La molécula de anticuerpo aquí descrita puede utilizarse para tratar o prevenir un trastorno autoinmune. Los trastornos autoinmunes ejemplares que pueden tratarse o prevenirse mediante la molécula de anticuerpo descrita en el presente documento incluyen, entre otros, la encefalomielitis diseminada aguda (ADEM), la leucoencefalitis hemorrágica necrotizante aguda, la enfermedad de Addison, la agammaglobulinemia, la alopecia areata, amiloidosis, espondilitis anquilosante, nefritis anti-GBM/anti-TBM, síndrome antifosfolípido (APS), angioedema autoinmune, anemia aplásica autoinmune, disautonomía autoinmune, hepatitis autoinmune, hiperlipidemia autoinmune, inmunodeficiencia autoinmune, enfermedad autoinmune del oído interno (AlED), miocarditis autoinmune, ooforitis autoinmune, pancreatitis autoinmune, retinopatía autoinmune, púrpura trombocitopénica autoinmune (ATP), enfermedad tiroidea autoinmune, urticaria autoinmune, neuropatías axonales y neuronales, enfermedad de Balo, enfermedad de Behcet, penfigoide bulloso, cardiomiopatía, enfermedad de Castleman, enfermedad celíaca, enfermedad de Chagas, síndrome de fatiga crónica, polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica (CIDP), ostomielitis multifocal crónica recurrente (CRMO), síndrome de Churg-Strauss, penfigoide cicatricial/ penfigoide mucoso benigno, enfermedad de Crohn, síndrome de Cogans, enfermedad de la aglutinina fría, bloqueo cardíaco congénito, miocarditis por coxsackie, enfermedad de CREST, crioglobulinemia mixta esencial, neuropatías desmielinizantes, dermatitis herpetiforme, dermatomiositis, enfermedad de Devic (neuromielitis óptica), lupus discoide, síndrome de Dressler, endometriosis, esofagitis eosinofílica, fascitis eosinofílica, eritema nodoso, encefalomielitis alérgica experimental, síndrome de Evans, fibromialgia, alveolitis fibrosante, arteritis de células gigantes (arteritis temporal), miocarditis de células gigantes, glomerulonefritis, síndrome de Goodpasture, granulomatosis con poliangeítis (GPA) (antes llamada granulomatosis de Wegener), enfermedad de G ra v e s , s ín d ro m e d e G u illa in -B a rré , e n c e fa li t is d e H a s h im o to , t ir o id i t is d e H a s h im o to , a n e m ia h e m o lít ic a , p ú rp u ra de H e n o c h -S c h o n le in , H e rp e s g e s ta t io n is , h ip o g a m m a g lo b u lin e m ia , p ú rp u ra t ro m b o c ito p é n ic a id io p á tic a ( IT P ), n e fro p a tía IgA , e n fe rm e d a d e s c le ro s a n te re la c io n a d a co n Ig G 4 , lip o p ro te ín a s in m u n o r re g u la d o ra s , m io s it is p o r c u e rp o s d e in c lu s ió n , c is t it is in te rs t ic ia l, a r tr it is ju v e n il, d ia b e te s ju v e n il (d ia b e te s t ip o 1), m io s it is ju v e n il, s ín d ro m e d e K a w a s a k i, s ín d ro m e de L a m b e r t-E a to n , v a s c u lit is le u c o c ito c lá s t ic a , liq u e n p la n o , liq u e n e s c le ro s o , c o n ju n tiv it is le ñ o s a , e n fe rm e d a d Ig A lin e a l (L A D ), p u p u s (S L E ), e n fe rm e d a d d e L y m e c ró n ic a , e n fe rm e d a d d e M e n ie re , p o lia n g e ít is m ic ro s c ó p ic a , e n fe rm e d a d m ix ta d e l te j id o c o n e c tiv o (M C T D ), ú lc e ra d e M o o re n , e n fe rm e d a d d e M u c h a -H a b e rm a n n , e s c le ro s is m ú ltip le , m ia s te n ia g ra v is , m io s it is , n a rc o le p s ia , n e u ro m ie lit is ó p tic a (D e v ic ) , n e u tro p e n ia , p e n fig o id e c ic a tr ic ia l o c u la r, n e u r it is ó p tic a , re u m a tis m o p a lin d ró m ic o , P A N D A S (P e d ia tr ic A u to im m u n e N e u ro p s y c h ia tr ic D is o rd e rs A s s o c ia te d w ith S tre p to c o c c u s , en in g lé s ), d e g e n e ra c ió n c e re b e lo s a p a ra n e o p lá s ic a , h e m o g lo b in u r ia p a ro x ís t ic a n o c tu rn a (P N H ), s ín d ro m e d e P a rry R o m b e rg , s ín d ro m e d e P a rs o n n a g e -T u m e r, P a rs p la n it is (u v e ít is p e r ifé r ic a ) , p é n fig o , n e u ro p a tía p e r ifé r ic a , e n c e fa lo m ie lit is p e r iv e n o s a , a n e m ia p e rn ic io s a , s ín d ro m e P O E M S , p o lia r te r it is n o d o s a , s ín d ro m e s p o lig la n d u la re s a u to in m u n e s d e t ip o I, II y III, p o lim ia lg ia re u m á tic a , p o lim io s it is , s ín d ro m e p o s t in fa r to d e m io c a rd io , s ín d ro m e p o s tp e r ic a rd io to m ía , d e rm a t it is p o r p ro g e s te ro n a , c ir ro s is b il ia r p r im a r ia , c o la n g it is e s c le ro s a n te p r im a r ia , p s o r ia s is , a r tr it is p s o r iá s ic a , f ib ro s is p u lm o n a r id io p á tic a , p io d e rm a g a n g re n o s o , a p la s ia p u ra d e e r itro c ito s , fe n ó m e n o d e R a y n a u d , a r tr it is re a c t iv a , d is tro f ia s im p á t ic a re f le ja , s ín d ro m e d e R e ite r, p o lic o n d r it is re c id iv a n te , s ín d ro m e d e la s p ie rn a s in q u ie ta s , f ib ro s is re tro p e r ito n e a l, f ie b re re u m á tic a , a r tr it is re u m a to id e , s a rc o id o s is , s ín d ro m e d e S c h m id t, e s c le r it is , e s c le ro d e rm ia , s ín d ro m e d e S jo g re n , a u to in m u n id a d e s p e rm á t ic a y te s t ic u la r , s ín d ro m e d e la p e rs o n a r íg id a , e n d o c a rd it is b a c te r ia n a s u b a g u d a (S B E ), s ín d ro m e d e S u s a c , o f ta lm ia s im p á tic a , a r te r it is d e T a k a y a s u , a r te r it is te m p o ra l/a r te r i t is d e c é lu la s g ig a n te s , p ú rp u ra t ro m b o c ito p é n ic a (T T P ), s ín d ro m e d e T o lo s a -H u n t, m ie lit is t ra n s v e rs a , d ia b e te s d e t ip o 1, c o lit is u lc e ro s a , e n fe rm e d a d in d ife re n c ia d a d e l te j id o c o n ju n tiv o (U C T D ), u v e ít is , v a s c u lit is , d e rm a to s is v e s ic u lo b u llo s a , v it í l ig o , g ra n u lo m a to s is d e W e g e n e r ( ta m b ié n c o n o c id a c o m o g ra n u lo m a to s is c o n p o lia n g e ít is (G P A ).

[0425]<E n u n a re a liz a c ió n , e l t r a s to rn o a u to in m u n e e s a r tr it is re u m a to id e , lu p u s e r ite m a to s o s is té m ic o , u n a e n fe rm e d a d b u llo s a Ig A lin e a l>p. ej.,<d e rm a to s is p o r in m u n o g lo b u lin a A ( Ig A ) l in e a l) o e p id e rm ó lis is b u llo s a a d q u ir id a m e d ia d a p o r IgA .>

[0426]<E n u n a re a liz a c ió n , la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o se u tiliz a p a ra t r a ta r la a r tr it is re u m a to id e . O tro s tr a ta m ie n to s q u e>p u e d e n u t il iz a rs e e n c o m b in a c ió n c o n la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o d e s c r ita e n e l p re s e n te d o c u m e n to p a ra t r a ta r la a r tr it is<re u m a to id e in c lu y e n ,>p. ej.,<un N S A ID , un e s te ro id e (>p. ej.,<c o r t ic o s te ro id e ) , un fá rm a c o a n t ir re u m á t ic o m o d if ic a d o r d e la e n fe rm e d a d>(DMA<r>D)( p. ej.,<m e to tre x a to (T R E X A L L ® ), le f lu n o m id a (A R A V A ® ), h id ro x ic lo ro q u in a (P L A Q U E N IL ® ) o s u lfa s a la z in a (A Z U L F ID IN E ® ), un m o d if ic a d o r d e la re s p u e s ta b io ló g ic a (>p. ej.,<a b a ta c e p t (O R E N C IA ® ), a d a lim u m a b>(H U M IR a ® ), a n a k in ra (K IN E R E T ® ), c e r to liz u m a b (C IM Z IA ® ), e ta n e rc e p t (E N B R E L ® ), g o lim u m a b (S IM P O N I® ), in f lix im a b (R E M IC A D E ® ), r itu x im a b (R IT U X A N ® ) y to c i l iz u m a b (A C T E M R A ® ), o T o fa c it in ib (X E L J A N Z ® )) , o c iru g ía .

[0427]<E n u n a re a liz a c ió n , la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o se u t iliz a p a ra t r a ta r e l lu p u s e r ite m a to s o s is té m ic o . O tro s>t ra ta m ie n to s q u e p u e d e n u t iliz a rs e e n c o m b in a c ió n c o n la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o d e s c r ita e n e l p re s e n te d o c u m e n to p a ra<t r a ta r la a r tr it is re u m a to id e in c lu y e n ,>p.ej.,<un N S A ID , un fá rm a c o a n t ip a lú d ic o (>p.ej.,<h id ro x ic lo ro q u in a (P L A Q U E N IL ® ), c o r t ic o s te ro id e (>p.ej.,p.ej.,<a z a t io p r in a ( IM U R A N ® , A Z A S A N ® ), m ic o fe n o la to (C E L L C E P T ® ), le f lu n o m id a>(AR<a>V<a ®>)<o m e to tre x a to (T R E X A L L ® )), o un in h ib id o r d e B A F F (>p.ej.,(B E N L Y S T A ® ).

[0428]<E n u n a re a liz a c ió n , la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o se u t iliz a p a ra t r a ta r u n a e n fe rm e d a d b u llo s a Ig A lin e a l (>p.ej.,d e rm a to s is p o r in m u n o g lo b u lin a A ( Ig A ) lin e a l) . O tro s t ra ta m ie n to s q u e p u e d e n u t iliz a rs e en c o m b in a c ió n co n la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o d e s c r ita en e l p re s e n te d o c u m e n to p a ra t r a ta r u n a e n fe rm e d a d b u llo s a Ig A lin e a l( p. ej.,<d e rm a to s is p o r in m u n o g lo b u lin a A ( Ig A ) l in e a l) in c lu y e n ,>p. ej.,<c o r t ic o s te ro id e s (>p. ej.,p. ej.,te t ra c ic lin a , e r itro m ic in a , s u lfa p ir id in a ) , c o lc h ic in a o m ic o fe n o la to m o fe tilo .

[0429]<E n u n a re a liz a c ió n , la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o s e u t iliz a p a ra t r a ta r la e p id e rm ó lis is b u llo s a a d q u ir id a m e d ia d a p o r>IgA . O tro s t ra ta m ie n to s q u e p u e d e n u t il iz a rs e e n c o m b in a c ió n co n la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o d e s c r ita en e l p re s e n te<d o c u m e n to p a ra t r a ta r la e p id e rm ó lis is a m p o llo s a a d q u ir id a m e d ia d a p o r Ig A in c lu y e n ,>p. ej.,<un a n t ib ió tic o , un fá rm a c o a n t iin f la m a to r io (>p. ej.,<un c o r t ic o s te ro id e ) o c iru g ía .>

Otros Trastornos

[0430]<La m o lé c u la d e a n t ic u e rp o a q u í d e s c r ita p u e d e u t il iz a rs e p a ra t r a ta r o p re v e n ir o tro s t ra s to rn o s , p o r>ejemplo,<el>p é n fig o IgA , la e n fe rm e d a d c e lía c a o la c ir ro s is a lc o h ó lic a .

[0431]<E n u n a re a liz a c ió n , la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o se u t iliz a p a ra t r a ta r o p re v e n ir e l p é n fig o IgA . O tro s tra ta m ie n to s>q u e p u e d e n u t iliz a rs e en c o m b in a c ió n c o n la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o d e s c r ita en e l p re s e n te d o c u m e n to p a ra t r a ta r e lp.ej.,<c o r t ic o s te ro id e s , un in m u n o s u p re s o r (>p.ej.,<a z a t io p r in a ( IM U R A N ® ), m e to tre x a to (T R E X A L L ® ) o m ic o fe n o la to m o fe t ilo (C E L L C E P T ® )) , un in h ib id o r d e C D -20 (>p.ej.,<r itu x im a b (R IT U X A N ® ), un a n t ib ió tic o , un a g e n te>a n t iv ír ic o o un a g e n te a n t ifú n g ic o .

[0432]<E n u n a re a liz a c ió n , la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o se u t iliz a p a ra t r a ta r o p re v e n ir la e n fe rm e d a d c e lía c a . O tro s>t ra ta m ie n to s q u e p u e d e n u t iliz a rs e e n c o m b in a c ió n c o n la m o lé c u la d e a n t ic u e rp o d e s c r ita e n e l p re s e n te d o c u m e n to p a ra<t r a ta r la e n fe rm e d a d c e lía c a in c lu y e n , p o r>ejemplo,esteroide.

[0433]En una realización, la molécula de anticuerpo se utiliza para tratar o prevenir la cirrosis alcohólica. Otros tratamientos que pueden utilizarse en combinación con la molécula de anticuerpo descrita en el presente documento para tratar la cirrosis alcohólica incluyen,p. ej.,un inmunosupresor(p. ej.,azatioprina, prednisona, azatioprina, ciclosporina o metotrexato) o un trasplante de hígado.

Terapias Combinadas

[0434]Las moléculas de anticuerpos pueden utilizarse en combinación con otras terapias. Por ejemplo, la terapia combinada puede incluir una molécula de anticuerpo coformulada con, y/o coadministrada con, uno o más agentes terapéuticos adicionales,p. ej.,uno o más agentes terapéuticos adicionales descritos en el presente documento. En otras realizaciones, las moléculas de anticuerpo se administran en combinación con otras modalidades de tratamiento terapéutico,p. ej.,otras modalidades de tratamiento terapéutico descritas en el presente documento. Dichas terapias combinadas pueden utilizar ventajosamente dosis más bajas de los agentes terapéuticos administrados, evitando así posibles toxicidades o complicaciones asociadas con las diversas monoterapias.

[0435]Administrado "en combinación", como se usa aquí, significa que dos (o más) tratamientos diferentes son administrados al sujeto antes, o durante el curso de la aflicción del sujeto con un desorden. En una realización, dos o más tratamientos se administran profilácticamente,p. ej.,antes de que el sujeto tenga el trastorno o se le diagnostique el trastorno. En otra realización, los dos o más tratamientos se administran después de que el sujeto haya desarrollado o se le haya diagnosticado el trastorno. En algunas realizaciones, la administración de un tratamiento aún está en curso cuando comienza la administración del segundo, de modo que se produce un solapamiento. Esto se denomina a veces "administración simultánea" o "concurrente". En otras realizaciones, la administración de un tratamiento finaliza antes de que comience la administración del otro tratamiento. En algunas realizaciones de cualquiera de los casos, el tratamiento es más eficaz debido a la administración combinada. Por ejemplo, el segundo tratamiento es más eficaz, esdecir,se observa un efecto equivalente con menos cantidad del segundo tratamiento, o el segundo tratamiento reduce los síntomas en mayor medida de lo que se observaría si se administrara el segundo tratamiento en ausencia del primero, o se observa una situación análoga con el primer tratamiento. En algunas realizaciones, la administración es tal que la reducción de un síntoma u otro parámetro relacionado con el trastorno es mayor que la que se observaría con un tratamiento administrado en ausencia del otro. El efecto de los dos tratamientos puede ser parcialmente aditivo, totalmente aditivo o mayor que aditivo. La administración puede ser tal que un efecto del primer tratamiento administrado sea aún detectable cuando se administra el segundo.

[0436]En ciertas realizaciones, el agente adicional es una segunda molécula de anticuerpo,p.ej.,una molécula de anticuerpo diferente de una primera molécula de anticuerpo. Las moléculas de anticuerpos ejemplares que pueden utilizarse en combinación incluyen, pero no se limitan a, cualquier combinación de las moléculas de anticuerpos enumeradas enla Tabla 1 o 5.

[0437]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con una segunda terapia para tratar o prevenir la nefropatía IgA.

[0438]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con un inhibidor de la enzima convertidora de angiotensina (ACE) o un bloqueante de los receptores de angiotensina (ARB).

[0439]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con un receptor Fc señuelo,p.ej.,un receptor Fc soluble. En una realización, el receptor Fc soluble es un receptor Fc-gamma IIB soluble. En una realización, el receptor Fc soluble es SM101/BAX 1810 (Baxalta). En una realización, el receptor Fc soluble se administra a una dosis entre 1 mg/kg y 50 mg/kg,p. ej.,entre 5 mg/kg y 15 mg/kg, entre 12 mg/kg y 24 mg/kg, o entre 20 mg/kg y 30 mg/kg.

[0440]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con corticotropina de depósito (ACTHAR®). La corticotropina de depósito es un análogo de la hormona adrenocorticotrópica (ACTH). En una realización, la corticotropina de depósito se administra a una dosis entre 50 U y 150 U,p. ej.,entre 80 U y 120 U, mediante inyección subcutánea, dos o tres veces por semana. En una realización, la corticotropina de depósito se administra a una dosis de 120 U, mediante inyección subcutánea,p. ej.,una, dos o tres veces por semana.

[0441]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con micofenolato mofetilo (MMF). El micofenolato mofetilo es el éster 2-morfolinoetil del ácido micofenólico (MPA), un agente inmunosupresor e inhibidor de la inosina monofosfato deshidrogenasa (IMPDH). En una realización, el micofenolato mofetilo se administra a una dosis de entre 0,5 g y 2 g,p. ej.,entre 1 g y 1,5 g o entre 1,5 g y 2 g, por vía oral o intravenosa,p. ej.,una, dos o tres veces al día.

[0442]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con bortezomib (VELCADE®). El bortezomib, también conocido como ácido [(1R)-3-metil-1-({(2S)-3-fenil-2-[(pirazin-2-ilcarbonil)amino]propanoil}amino)butil]borónico, es un inhibidor del proteasoma. En una realización, bortezomib se administra a una dosis de entre 0,5 mg/m2 y 2,5 mg/m2,p. ej.,entre 1 mg/m2 y 1,5 mg/m2,p. ej.,cada tres días o cada semana.

[0443]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con alopurinol (ZYLOPRIM®). El alopurinol, también conocido como 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4(2H)-ona, es un análogo de la purina. En una realización, el alopurinol se administra a una dosis entre aproximadamente 50 mg y 1000 mg,p. ej.,entre 100 mg y 600 mg o entre 200 y 300 mg, por vía oral,p. ej.,una vez al día o una vez cada dos días.

[0444]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con prednisona y/o ciclofosfamida. En una realización, la prednisona se administra a una dosis entre 0,2 mg/kg y 2 mg/kg,p. ej.,entre 0,5 mg/kg y 1 mg/kg,p. ej.,una vez al día. En una realización, la ciclofosfamida se administra a una dosis entre 0,2 g y 2 g,p. ej.,entre 0,5 g y 1 g,p. ej.,una vez al día.

[0445]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con rituximab (RITUXAN®). El rituximab es un anticuerpo monoclonal quimérico anti-CD20. En una realización, rituximab se administra a una dosis entre 100 mg/m2 y 500 mg/m2,p. ej.,entre 200 mg/m2 y 450 mg/m2 o entre 300 mg/m2 y 400 mg/m2, por vía intravenosa,p. ej.,una vez por semana, una vez cada dos semanas, una vez cada cuatro semanas o una vez cada ocho semanas.

[0446]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con blisibimod. Blisibimod, también conocido como A-623 o AMG 623, es un antagonista selectivo del factor activador de las células B (BAFF, también conocido como estimulador de los linfocitos B o BLyS).

[0447]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra con budesonida. En una realización, la budesonida es<nefec° n®,>una formulación oral que libera budesonida.

[0448]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra con valsartán y/o probucol. En una realización, valsartán se administra a una dosis entre 50 mg/día y 200 mg/día,p. ej.,entre 80 mg/día y 160 mg/día. En una realización, el probucol se administra a una dosis entre 500 mg/día y 1000 mg/día,p. ej.,entre 700 mg/día y 800 mg/día.

[0449]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con OPL-CCL2-LPM. OPL-CCL2-LPM es una proteína de fusión recombinante compuesta por la quimioquina humana CCL2 (proteína quimioatrayente de monocitos-1) fusionada a una forma truncada del dominio A1 enzimáticamente activo de la holotoxina deShigella dysenteriae(SA1). En una realización, OPL-CCL2-LPM se administra a una dosis entre 0,001 mg/kg y 1 mg/kg,p. ej.,entre 0,01 mg/kg y 0,5 mg/kg o 0,05 mg/kg y 0,1 mg/kg, porejemplo,por vía intravenosa.

[0450]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con metilprednisolona. En una realización, la metilprednisolona se administra a una dosis entre 0,1 mg/kg y 2 mg/kg/día,p. ej.,entre 0,2 mg/kg/día y 1,5 mg/kg/día o 0,5 mg/kg/día y 1 mg/kg/día,p. ej.,por vía oral.

[0451]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con sirolimus. El sirolimus, también conocido como rapamicina, puede inhibir los mecanismos de transducción de señales dependientes del receptor de IL-2 y otras citocinas, a través de la acción sobre mTOR, y bloquear así la activación de las células T y B. En una realización, el sirolimus se administra a dosis entre 0,2 mg/día y 2 mg/día,p. ej.,entre 0,5 mg/día y 1 mg/día.

[0452]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con un bloqueador del sistema reninaangiotensina (RAS). Por ejemplo, el bloqueante del SRA puede ser un inhibidor de la enzima convertidora de angiotensina (ACE) o un bloqueante del receptor AT1 (ARB). Los inhibidores de la ACE ejemplares que pueden utilizarse en combinación con la molécula de anticuerpo descrita en el presente documento incluyen,p. ej.,benazepril (LOTENSIN®), captopril, enalapril (VASOTEC®), fosinopril, lisinopril (ZESTRIL®), moexipril (UNIVASC®), perindopril (ACEON®), quinapril (ACCUPRIL®), ramipril (ALTACE®) o trandolapril (MAVIK®). Los bloqueantes del receptor AT1 ejemplares que pueden utilizarse en combinación con la molécula de anticuerpo aquí descrita incluyen,p. ej.,candesartán (ATACAND®), eprosartán (TEVETEN®), irbesartán (AVAPRO®), losartán (COZAAR®), olmesartán (BENICAR®), telmisartán (MICARDIS®) o valsartán (DIOVAN®).

[0453]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con fostamatinib. Fostamatinib es un profármaco del compuesto activo tamatinib (R-406), que es un inhibidor de la enzima tirosina quinasa del bazo (Syk). En una realización, fostamatinib se administra a una dosis entre 50 mg y 200 mg,p. ej.,entre 100 mg y 150 mg, por vía oral,p. ej.,todos los días.

[0454]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con paricalcitol. En una realización, el paricalcitol se administra a una dosis entre aproximadamente 0,2 mg y 2 mg,p. ej.,entre 0,5 mg y 1 mg,p. ej.,todos los días.

[0455]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con ramipril. En una realización, ramipril se administra a una dosis entre 0,5 mg y 5 mg,p. ej.,entre 1 mg y 4 mg o entre 2 mg y 3 mg,p. ej.,todos los días.

[0456]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con un inhibidor de la enzima convertidora de angiotensina (ACE). En una realización, el inhibidor de la ECA es enalapril (VASOTEC®).

[0457]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con un inmunosupresor. En una realización, el inmunosupresor es tacrolimus. El tacrolimus, también conocido como FK-506 o fujimicina, es un macrólido inhibidor de la calcineurina.

[0458]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con ácidos grasos omega-3.

[0459]En una realización, la molécula de anticuerpo se administra en combinación con CCX168. El CCX168 es un inhibidor del C5aR administrado por vía oral.

[0460]Terapias ejemplares que pueden ser usadas en combinación con una molécula de anticuerpo o composición descrita aquí para tratar o prevenir otros desórdenes también se describen en la sección de "Métodos para Tratar o Prevenir Desórdenes" en este documento.

Métodos de diagnóstico

[0461]En algunos aspectos, la presente divulgación proporciona un método de diagnósti

APRILin vitro (p. ej.,en una muestra biológica, tal como una biopsia o muestra de sangre) oin vivo (p. ej.,imágenesin vivoen un sujeto). El método incluye: (i) poner en contacto la muestra con una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento, o administrar al sujeto, la molécula de anticuerpo; (opcionalmente) (ii) poner en contacto una muestra de referencia,p. ej.,una muestra de control(p. ej.,una muestra biológica de control, como una biopsia o una muestra de sangre) o un sujeto de control con una molécula de anticuerpo descrita en el presente documento; y (iii) detectar la formación de un complejo entre la molécula de anticuerpo y APRIL en la muestra o sujeto, o en la muestra o sujeto de control, donde un cambio,p. ej.,un cambio estadísticamente significativo, en la formación del complejo en la muestra o sujeto en relación con la muestra o sujeto de control es indicativo de la presencia de APRIL en la muestra. La molécula de anticuerpo puede marcarse directa o indirectamente con una sustancia detectable para facilitar la detección del anticuerpo unido o no unido. Entre las sustancias detectables adecuadas se incluyen diversas enzimas, grupos prostéticos, materiales fluorescentes, materiales luminiscentes y materiales radiactivos, como se ha descrito anteriormente y se describe con más detalle a continuación.

[0462]El término "muestra", como se refiere a las muestras usadas para detectar un polipéptido(p. ej.,APRIL) o un ácido nucleico que codifica el polipéptido incluye, pero no se limita a, células, lisados celulares, proteínas o extractos de membrana de células, fluidos corporales como sangre, o muestras de tejido como biopsias.

[0463]La formación de complejos entre la molécula de anticuerpo y APRIL puede detectarse midiendo o visualizando la molécula de anticuerpo unida a APRIL o la molécula de anticuerpo no unida. Puede utilizarse cualquier ensayo de detección adecuado, y los ensayos de detección convencionales incluyen un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), un radioinmunoensayo (RIA) o inmunohistoquímica tisular. Como alternativa al marcaje de la molécula de anticuerpo, la presencia de APRIL puede analizarse en una muestra mediante un inmunoensayo de competición utilizando estándares marcados con una sustancia detectable y una molécula de anticuerpo no marcada. En este ensayo, la muestra biológica, los estándares marcados y la molécula de anticuerpo se combinan y se determina la cantidad de estándar marcado unido a la molécula de unión no marcada. La cantidad de APRIL en la muestra es inversamente proporcional a la cantidad de estándar marcado unido a la molécula de anticuerpo.

[0464]Las moléculas de anticuerpos aquí descritas pueden ser usadas para diagnosticar desórdenes que pueden ser tratados o prevenidos por las moléculas de anticuerpos aquí descritas. Los métodos de detección o diagnóstico descritos en el presente documento pueden utilizarse en combinación con otros métodos descritos en el presente documento para tratar o prevenir un trastorno descrito en el presente documento.

EJEMPLOS Ejemplo 1: Inmunización y selección de anticuerpos anti-APRIL

[0465]Ratones CD-1 IGS (outbred stock) (Charles River Laboratories), hembras (20-25 g de peso), de 7-8 semanas de edad fueron inmunizados por vía intraperitoneal (i.p.) con 10 |jg de APRIL recombinante, FLAG-ACRP30dead/ess oligomérico, en adelante FLAG-ACR-APRIL. Con el fin de generar potencialmente una respuesta de anticuerpos anti-APRIL de especies reactivas cruzadas (ratón y humano), se llevaron a cabo inmunizaciones autólogas y heterólogas que comprendían el uso de APRIL humano y/o de ratón como inmunógenos. Los inmunógenos APRIL marcados con FLA<g>se formularon en un volumen de 200 j l compuesto por 100 j l de PBS estéril y 100 j l de sistema adyuvante RIBI emulsionado (Sigma Aldrich) compuesto por una mezcla definida de lípido monofosforil A (MPL, aislado deSa/mone//a minnesota)y dicorynomycolato de trehalosa sintético (TDM, un análogo del dimicolato de trehalosa del factor cordal del bacilo de la tuberculosis). Se inmunizó a 3 ratones por brazo dos veces por semana durante un máximo de cuatro semanas. Los títulos séricos de anticuerpos anti-APRIL se detectaron posteriormente mediante ELISA indirecto utilizando FLAG-GCN4 APRIL, R&D Systems. En resumen, se recubrieron 50 ng de FLAG-GCN4 hAPRIL (105-250) o FLAG-GCN4 mAPRIL (96-241) en PBS en placas Maxisorp de fondo plano de 96 pocillos (NUNC # 439454), durante la noche a 4oC. Las placas recubiertas se bloquearon en 1 x de tampón de bloqueo que contenía 5% de BLOTTO™ en PBS y 0,05% de Tween-20 (PBST) durante 1 hora a temperatura ambiente. Todos los pasos de incubación posteriores fueron seguidos de un paso de lavado 3X en PBST. Los títulos de anticuerpos anti-APRIL se determinaron a partir de una dilución en pliegues de suero de ratón (en PBS) comenzando inicialmente en 1:1000 y siguiendo con la incubación de un anticuerpo secundario IgG de conejo antiratón conjugado con HRP 1:5000 (Jackson Immunoresearch Laboratories) durante 1 hora a temperatura ambiente. La reactividad de la inmunoglobulina anti-APRIL se visualizó utilizando 100 pl/pocillo de sustrato TMB recién preparado (KPL). El desarrollo colorimétrico se llevó a cabo durante un máximo de 10 minutos a temperatura ambiente antes de apagar la reacción enzimática mediante la adición de 100 pl de ácido sulfúrico 1N y la cuantificación por absorbancia a 450 nm. Los ratones con títulos seropositivos fuertes frente al inmunógeno primario (APRIL humano o de ratón) se reforzaron mediante inyección en la vena de la cola tres días antes del sacrificio, la extirpación del bazo y el aislamiento de las fusiones esplenocitarias. Se anotaron los ratones con reactividad cruzada de especies preferibles a partir del perfil sérico.

[0466]Se utilizaron plasmocitomas P3X63Ag8.653 (ATCC #CRL-1580), aquí denominados células P3X, como fuente de mielomas socios de fusión. Se inmortalizaron clones de células B derivadas de esplénicos utilizando métodos publicados con modificaciones. En resumen, las células P3X se cultivaron al menos 1 semana antes de su uso y se mantuvieron en fase logarítmica para alcanzar una densidad celular objetivo de entre ®*105 y 1,2*10® células/mL y una viabilidad del 95% el día antes de realizar posteriormente la fusión esplénica. Las células del bazo se aislaron de 2-3 ratones por brazo de inmunización tras la eutanasia y la punción cardíaca y se recogieron en DMEM 1% de antibiótico (penicilina/estreptomicina), seguido de un centrifugado con lavado suave (2X) para precipitar los restos de tejido y clarificar los esplenocitos en suspensión. A continuación, los esplenocitos se precipitaron por centrifugación durante 10 minutos a 400xg a 4°C, y los hematíes se lisaron a temperatura ambiente durante 5 minutos tras resuspender suavemente el sedimento celular en tampón de lisis de hematíes 1X. Los esplenocitos se recogieron por centrifugación (2X) tras diluirlos con DMEM helado. Las células P3X también se lavaron 3 veces en DMEM antes de la fusión.

[0467]Se fusionaron esplenocitos de ratón con células P3X en medio de fusión (50% PEG 1450, Sigma Aldrich)) en una proporción 3:1 de acuerdo con los métodos establecidos. En resumen, se añadió gradualmente PEG precalentado a la mezcla peletizada de esplenocitos y células P3X (37oC, con resuspensión suave) seguida de la adición gradual de DMEM precalentado. Las células fusionadas se recogieron mediante centrifugación a baja velocidad y se resuspendieron en medio selectivo para hibridomas (hipoxantina-aminopterina-timidina, Sigma Aldrich) seguido de incubación a 37oC durante 30 minutos. Las células fusionadas se sembraron en una placa de 96 pocillos a una densidad aproximada de 2,0 * 10® células de bazo por placa (20.000 células por pocillo).

[0468]Los sobrenadantes de hibridoma se analizaron por ELISA el día 14 post-fusión como se describe (Ejemplo 2). En resumen, los sobrenadantes de los medios condicionados se cuantificaron para IgG total mediante bioinferometría utilizando el kit de cuantificación de IgG anti-ratón AMC (Pall Biosciences). Los sobrenadantes de los medios condicionados de hibridoma se normalizaron a 10 pg/mL cuando fue posible y se analizaron para determinar la reactividad APRIL tanto a FLAG-GCN4-hAPRIL como a FLAG GCN4-mAPRIL como se ha descrito. También se incluyó un contraexamen utilizando una proteína marcada con FLAG no-APRIL (FLAG-ACR30-myc-his) para excluir los clones con una fuerte inmunorreactividad a los epítopos específicos FLAG o ACRP30 (epítopos no relevantes presentes en el inmunógeno original). Los hibridomas APRIL positivos (APRIL humano o de ratón) se examinaron para detectar la actividad de bloqueo del receptor mediante ELISA como se describe en el Ejemplo 3. En resumen, la TACI-Fc recombinante se recubrió en placas Maxisorp de fondo plano de 9® pocillos a 100 ng/pocillo en tampón carbonatobicarbonato 0,1 M (pH 9,6), durante una noche a 4oC. Las placas se bloquearon con BSA al 1% en 1xPBS durante 1 hora a 37oC, seguido de 3 lavados en 1X PBST (con 0,025% de Tween). APRIL recombinante marcado con FLAG (ratón o humano) a una concentración de 50 ng/mL se premezcló en tampón de unión con sobrenadante de medios de hibridoma normalizado cuando fue posible a una concentración de 10 pg/mL de IgG. La preincubación anticuerpo-APRIL se llevó a cabo durante 1 hora a 30°C con mezcla antes de añadir a las placas recubiertas con TACI-Fc, seguida de una incubación de 1 hora, igualmente a 30°C. La detección de FLAG-APRIL unido a TACI-Fc se cuantificó usando anticuerpo anti-FLAG M2 conjugado con HRP (Sigma Aldrich) usado a dilución 1:10000 como se describe en el Ejemplo 3. Se aislaron los hibridomas inmunorreactivos a APRIL que también mostraron al menos un 10% de inhibición a APRIL humano o APRIL de ratón, se subclonaron por dilución limitada y se volvieron a evaluar por ELISA la actividad de unión y bloqueo de APRIL y el título de IgG, tal como se ha descrito. Los hibridomas con actividad positiva pero títulos bajos de IgG se isotiparon posteriormente para determinar posibles clones productores de IgM. Los hibridomas positivos se seleccionaron para la ampliación del cultivo, la purificación de anticuerpos y la caracterización posterior como se describe en el Ejemplo 2.

Ejemplo 2: Purificación y caracterización de anticuerpos anti-APRIL derivados de hibridomas de ratón

[0469]Trece clones de hibridoma del Ejemplo 1 se cultivaron a una escala secuencialmente mayor de placas de 9® pocillos a placas de 24 pocillos y posteriormente a matraces T150 (volumen de cultivo de 20 mL). Antes de la purificación, las células se transfirieron de medios selectivos HAT a medios predefinidos con bajo contenido en Ig. Los sobrenadantes se recogieron 3-5 días después de la transferencia de medios y se clarificaron por centrifugación, seguida de filtración estéril a través de una membrana PES de 0,22 pm (Corning). Los títulos de IgG se confirmaron por Bioinferometría como se ha descrito. Los sobrenadantes se diluyeron 1:1 con tampón de unión 2x Proteína G (1M glicina, 2M NaCl, pH 9,0,). Los anticuerpos se purificaron mediante cromatografía de afinidad de proteína G utilizando columnas HiTrap de proteína G de 1 ml (G<e>Health Care) a un flujo de 1 ml/min y según las recomendaciones del fabricante. La IgG se eluyó de la columna de proteína G bajando el pH con tampón de glicina 0,1M, pH 2,8, seguido de neutralización inmediata con TRIS 2M, pH 8,5. Los anticuerpos purificados se reformularon mediante diálisis en 1x PBS, pH 7,4 seguida de concentración por ultrafiltración utilizando una unidad de filtración Ultra-30 AMICON 30kD MWCO. La concentración final de anticuerpos se determinó espectrofotométricamente mediante NanoDrop utilizando un coeficiente de extinción generalizado para anticuerpos murinos (IgG1). La pureza e integridad de los anticuerpos se confirmó mediante SDS-PAGE en condiciones reductoras y no reductoras. El isotipo del anticuerpo se determinó utilizando el kit Rapid ELISA Mouse mAb isotyping (Pierce/Thermofisher Scientific) junto con un análisis preliminar de la secuencia(véaseel Ejemplo 3). Se determinó que todos los anticuerpos purificados eran predominantemente una distribución de IgG1 y G2a; se determinó que todas las cadenas ligeras eran de clase kappa. Un subconjunto relativamente menor de anticuerpos APRIL inmunorreactivos derivados de los ratones B-002/B-003(p. ej.,02-009, 02-016, 046,FIGS. 1A-1B) se determinó que eran IgM y no se llevaron a purificación.

[0470]Los anticuerpos purificados fueron caracterizados adicionalmente para la unión APRIL, reactividad cruzada de especies APRIL (APRIL humano vs. APRIL de ratón), y actividad de bloqueo del receptor usando TACI-Fc. Para la unión, se utilizó un ELISA indirecto basado en APRIL para determinar por primera aproximación la afinidad relativa de los anticuerpos anti-APRIL purificados con APRIL humano o APRIL de ratón. El método ELISA fue el descrito anteriormente. En resumen, se recubrieron HA-GCN4 hAPRIL (residuos de aminoácidos 105-250) y HA-GCN4 mAPRIL (residuos de aminoácidos 96-241) a una densidad de 50ng/pocillo. Los pasos de bloqueo y lavado se completaron como se ha descrito. La unión de los anticuerpos anti-APRIL a APRIL se cuantificó utilizando una dilución de 8 puntos del anticuerpo de prueba que abarcaba una escala de cuatro logaritmos. La unión del anticuerpo a APRIL se detectó utilizando un conjugado IgG de conejo anti-ratón (H+L)-HRP (Jackson ImmunoResearch Laboratories). Los datos de unión de anticuerpos se analizaron mediante un análisis de regresión no lineal utilizando un ajuste de 3 parámetros para determinar la unión máxima y los valores EC50 aparentes. Los resultados se muestran en laFIG. 3. Anticuerpos monoclonales anti-APRIL específicos humanos h01A (descritos,p. ej.,en Guadagnoli, M. et al. Blood 117, 6856-6865 (2011)), aquí descrito como mAb 1313, y A019C11 (descrito,p. ej.,en Jagessar, S. et al. J Neuroimmune Pharmacol 7:557-570 (2012)), en lo sucesivo denominado mAb 0201, se utilizaron como controles positivos de unión a APRIL humano y con fines comparativos. También se utilizó el anticuerpo específico de ratón Apry-1-1 (Adipogen) para cuantificar la unión del anticuerpo a APRIL de ratón.

[0471]La actividad bloqueadora de receptores de los anticuerpos anti-APRIL se midió igualmente por ELISA utilizando TACI o BCMA recombinantes (dominio(s) extracelular(es) expresado(s) y purificado(s) como proteínas de fusión Fc en un experimento basado en competición de unión. Para este experimento, se produjeron TACI-Fc o BCMA-Fc recombinantes en células HEK 293 tras la transfección transitoria de estas células utilizando el vector de expresión Fc pc-tPA-Fc. En resumen, este vector se construyó a partir del vector parental de expresión de mamíferos pcDNA3.1 (Life Technologies) utilizando técnicas estándar de clonación molecular. El vector se diseñó para incluir una secuencia consenso de iniciación de la traducción Kozak 5' seguida de una secuencia señal tPA N-terminal para el procesamiento y la secreción optimizada de la proteína recombinante en el medio como proteína soluble. Los c-termini de los dominios extracelulares de unión a APRIL de TACI humano o BCMA humano se fusionaron en marco a la porción Fc de IgG1 humana comenzando en la posición E98 en CH1. Las secuencias de ADN se sintetizaron tras la optimización de codones para la expresión en mamíferos y se clonaron inicialmente en pcDNA3.1 típicamente como casete Bam H1-Xba. Las variantes del receptor se clonaron en el vector resultante como fragmentos de ADN Asc1-Bbs1 o Asc1-Not 1 en función del diseño y la estrategia de clonación. TACI-Fc comprende las secuencias humanas TACI 29-110 que incluyen los dominios CRD1 y CRD2 y corresponde en general al señuelo receptor atacicept basado en TACI-Fc. Esta secuencia se describe en el presente documento como HuTACI-Fc-001 (o más comúnmente como TACI-Fc a menos que se indique lo contrario). Una variante de TACI, expresada igualmente como proteína de fusión Fc, sólo incluye CRD2. La TACI puede incluir la región C-terminal (o llamada "tallo") desde los aminoácidos 110 a aproximadamente 166 que preceden inmediatamente al dominio transmembrana. BCMA-Fc comprende el dominio extracelular de unión a citoquinas (residuos de aminoácidos 1-54) y se describe en el presente documento como HuBCMA-Fc-001 (o más comúnmente como BCMA-Fc a menos que se indique lo contrario).

[0472]TACI-Fc recombinante o BCMA-Fc se recubrió en placas de 96 pocillos en tampón carbonato-bicarbonato 0.1 M (pH 9.6), durante la noche a 4oC. Las placas se lavaron tres veces con 1x PBST (PBS 0,025% Tween 20) seguido de bloqueo con 1% BSA en 1x PBS, 37°C durante 1 hora. Todos los pasos de lavado posteriores se realizaron con 1x PBST. Para evaluar el bloqueo por anticuerpos, se preincubaron 15 ng/mL o 50 ng/mL de HA-GCN4-huAPRIL con concentraciones variables de anticuerpos que oscilaban entre 0,03-30 pg/mL en tampón de unión compuesto por 1% de BSA y 0,025% de Tween-20 en 1X PBS. La preincubación se llevó a cabo a 30oC durante 1 hora con mezcla. A continuación, se añadió la premezcla anticuerpo-APRIL con 50 ng/mL de APRIL o 15 ng/mL de APRIL a las placas recubiertas con TACI-Fc o BCMA-Fc, respectivamente, y se incubaron durante una hora más a 30°C. La unión de APRIL marcado con HA a cualquiera de los receptores se cuantificó utilizando un anticuerpo policlonal anti-HA tag-HRP de cabra (Abcam) añadido a una dilución 1:10000 seguido de un desarrollo colorimétrico utilizando 100 pl/pocillo de sustrato TMB recién preparado (KPL) llevado a cabo durante un máximo de 30 minutos a temperatura ambiente antes de apagar la reacción enzimática mediante la adición de ácido sulfúrico 1N. La señal ELISA se cuantificó por absorbancia a 450 nm. Los resultados se muestran enlas FIGS. 2A-2ByFIG. 3. Los datos ELISA se analizaron mediante regresión no lineal. Los valores IC50 se calcularon a partir de un ajuste de 4 parámetros de las curvas de titulación de anticuerpos. En su caso, el % de inhibición se calcula a partir de la normalización de los datos con respecto al control sin anticuerpos (0% de inhibición) frente al fondo (sin APRIL), establecido como 100% de inhibición. Se utilizaron mAb 1313 y mAb 0201 antihumanos como controles positivos y con fines comparativos. Los anticuerpos no bloqueantes Aprly-1 o Aprly-5 (Enzo Biosciences) se utilizaron como controles negativos. El anticuerpo bloqueante específico de ratón aprily-1-1 (Adipogen) se utilizó generalmente como control positivo en los experimentos con APRIL de ratón (HA-GCN4-mAPRIL).

[0473]La actividad funcional de los anticuerpos anti-APRIL también se evaluó utilizando un ensayo de transducción de señalización de receptores basado en células. En este ensayo, la unión de APRIL a TACI o BCMA da lugar a la activación del receptor que, a su vez, conduce a la activación descendente de NF-kB, un factor de transcripción que, en última instancia, media los cambios programados en la expresión génica y el fenotipo de las células B. En la bibliografía se ha descrito el uso de líneas celulares reporteras de NF-kB establecidas para este fin. El uso de líneas celulares heterólogas (no linfoides) que carecen de expresión de TACI o BCMA pero en las que TACI o BCMA pueden introducirse exógenamente mediante transfección permite un análisis controlado y definido por el receptor de la señalización APRIL y la inhibición de esta señal mediante anticuerpos anti-APRIL. Para ello, se eligió la línea celular comercial 293TN derivada de NF-<k>B reporter NF-<k>B /293/GFP-Luc™ (System Biosciences). Estas células se transfectan de forma estable con los genes de GFP y luciferasa de luciérnaga colocados en tándem bajo el control transcripcional de un promotor CMV mínimo (mCMV) y múltiples copias del elemento de reconocimiento NF-kB.

[0474]Las células NF-<k>B /293/GFP-Luc™ se mantuvieron y cultivaron en medio de crecimiento celular 293TN (medio base DMEM suplementado con GlutaMAX y FBS) según las instrucciones del fabricante. Para las transfecciones se utilizaron los plásmidos de expresión de ADNc pcMV6-XL4/TACI y pcMV6-XL4BCMA (Origene). Estos plásmidos codifican TACI humano de longitud completa (TNFRSF13B, número de acceso NM_012452) o BCmA (TNFRSF17, número de acceso NM_001192) Las células 293TN reporteras se transfectaron a una densidad aproximada de 6*105 células/mL (>90% de viabilidad) utilizando PEI-MAX como se indica a continuación: Para pcMV6-XL4/TACI, 10,4 ng/mL (~1 ng/pocillo); para pcMV6-XL4BCMA 83 ng/mL de cultivo celular (~8 ng/pocillo). La concentración total de plásmido se mantuvo constante en 1,67 pg/mL de volumen de cultivo (167 ng/pocillo) utilizando el vector vacío pcMV6-XL4 según fuera necesario para mantener constantes las cantidades de plásmido en cada transfección. Las transfecciones se escalonaron adecuadamente en función del número de placas necesarias. Se transfirieron 100 pl de mezcla de transfección a cada pocillo. Las placas se transfirieron a una incubadora a 37 °C con un 5% de CO2 durante 20-24 horas.

[0475]En el día 2, APRIL recombinante (HA-GCN4-APRIL) fue preincubado con anticuerpo serialmente diluido en medio de cultivo 293TN completo antes de agregarlo a las células. En resumen, para la activación mediada por APRIL de la transducción de señales de TACI, se mezclaron 40 ng/mL de APRIL (concentración objetivo 2X) 1:1 con anticuerpos diluidos en serie (igualmente diluidos en medios de cultivo celular) en una placa de 96 pocillos; para la activación mediada por APRIL de la transducción de señales de BCMA, se mezclaron igualmente 200 ng/mL de APRIL (concentración objetivo 2X) 1:1. La mezcla anticuerpo-APRIL se incubó durante 1 hora a 37oC con agitación. Se añadieron 40 pl de preincubación al cultivo celular transfectado tras retirar el medio de cultivo celular gastado. Las células se incubaron a 37°C como se ha indicado anteriormente durante 20-24 horas más. Posteriormente se cuantificó la actividad de luciferasa impulsada por NF-xB utilizando el kit ONE-Glo™ Luciferase (Promega) siguiendo en general el protocolo del fabricante, pero con pequeñas modificaciones. Las unidades fluorescentes relativas (RLU) se midieron en placas de 96 pocillos de color blanco opaco utilizando un lector de placas luminométrico. Los resultados se muestran en laFIG. 4. Los datos se normalizaron con respecto al control sin Ab tras corregir la señal de fondo del ensayo (sin APRIL). Los valores IC50 se obtuvieron a partir de un análisis de regresión no lineal de las curvas de valoración de anticuerpos ajustadas a un parámetro de cuatro ajustes. Los anticuerpos 1313 y 0201 se utilizaron normalmente como controles positivos. En el caso de utilizar APRIL de ratón recombinante, apry 1-1, se utilizó como control positivo. Los anticuerpos no neutralizantes anti-humanos APRIL Aprily-1 o Aprily-5 se utilizaron normalmente como controles negativos.

Ejemplo 3: Determinación y clonación molecular de secuencias de inmunoglobulina anti-APRIL

[0476]Las secuencias de los genes VH y VL de los anticuerpos de ratón derivados del cribado de hibridomas se determinaron inicialmente mediante PCR de transcriptasa inversa de ARN de células B utilizando un conjunto predefinido de cebadores específicos de secuencia Ig de ratón de degeneración variable. El diseño del cebador 5' para la secuenciación VH se basó en un análisis exhaustivo de la base de datos de inmunoglobulinas de ratón con la correspondiente alineación con las secuencias líderes variables. A partir de este análisis, se agruparon las secuencias líderes de la VH (o se clasificaron según la relación de secuencia y la representación de las "familias" de la línea germinal); se diseñó un conjunto único de cebadores, cada uno de los cuales se predijo que se acoplaría más específicamente a estas familias de secuencias VH clasificadas, y se utilizó como cóctel en la reacción RT-PCR. Los cebadores 3' se diseñaron para recocer en la región constante de la cadena pesada. Este conjunto de cebadores era naturalmente menos complejo y correspondía a secuencias únicas en CH1 que definen las cuatro regiones constantes IgG de ratón conocidas (IgG1, IgG2a, IgG2b e IgG3). Las secuencias VH relacionadas con IgM se amplificaron como en el caso anterior, pero sustituyendo el cebador 3' por un cebador de isotipo IgM. Del mismo modo, se utilizó un método RT-PCR denominado "iniciador combinado" para amplificar las secuencias VL correspondientes a partir de ARN de hibridoma de ratón. Asimismo, se realizó una búsqueda sistemática de todas las secuencias líderes de VL de ratón conocidas. Dado que las cadenas ligeras kappa y lambda no comparten ni la región constante ni las secuencias de la región variable, se diseñaron conjuntos de cebadores separados (específicos para kappa frente a específicos para lambda). Los cebadores 3' se diseñaron basándose en la secuencia de la región constante de la cadena ligera específica del isotipo (kappa frente a lambda) de forma análoga a la descrita anteriormente para las secuencias de la cadena pesada. La amplificación RT-PCR de las secuencias genéticas del hibridoma a partir del ARN de células B se completó utilizando métodos establecidos de otro modo. En resumen, se extrajo ARN de 0,5-2*10® células utilizando el kit RNeasy (Life Technologies) siguiendo las instrucciones del fabricante. La lisis celular se facilitó utilizando Qiashredder o un método relacionado para la extracción inicial de ácidos nucleicos. El ARN purificado se cuantificó por absorbancia UV. La síntesis del ADNc y la posterior amplificación por PCR (utilizando la polimerasa Platinum Taq y las mezclas de cebadores descritas anteriormente) se completaron en tándem utilizando el kit Superscript III One Step RT-PCR (Life Technologies). Los amplicones de la PCR se purificaron utilizando el kit de limpieza Qiaquick PCR (Life Technologies) y se cuantificaron mediante absorbancia UV a 260 y 280 nm utilizando un espectrofotómetro Nanodrop. Los productos de la PCR también se analizaron mediante electroforesis en gel de agarosa para confirmar el tamaño previsto y se purificaron en gel según fuera necesario. Las secuencias de los genes VH y VL se determinaron mediante secuenciación directa de los productos de la PCR utilizando cebadores anidados. Los datos de secuencias ambiguas fueron seguidos de una nueva amplificación del ARN celular mediante RT PCR, tal como se ha descrito anteriormente, pero modificando el protocolo y utilizando un subconjunto de conjuntos de iniciadores combinados más pequeños; en caso necesario, los productos de PCR se clonaron mediante clonación TA en un vector intermedio) y se transformaron en TOP10 (Life Technologies) o DH5a (New England Biolabs) químicamente competentes según los protocolos de los fabricantes. Los datos de la secuencia de ADN se analizaron utilizando bases de datos de acceso público(p. ej.,International Immunogenetics Information system (IMGT), VBase o NCBI Ig-Blast) para evaluar el uso de la línea germinal, identificar las secuencias CDR y asignar el isotipo putativo cuando fue posible. En general, esta estrategia de secuenciación condujo a la identificación de secuencias VH únicas para cada hibridoma de interés; varios clones dieron lugar a la identificación de múltiples cadenas ligeras.

[0477]Las secuencias de Ig VH y VL productivas se amplificaron por PCR y se clonaron por separado en vectores de expresión de Ig de mamífero o-pcMG2 y o-pcMK2, respectivamente, para la producción recombinante en células HEK293 como anticuerpos isotipados IgG2 (HC) y kappa (LC) de ratón emparejados. Se diseñaron cebadores específicos para cada gen a partir de las secuencias VH y VL identificadas como se ha descrito anteriormente. El diseño de cebadores incluyó 18-23 nucleótidos solapados complementarios a las correspondientes regiones base de las secuencias de genes variables, además de secuencias complementarias de vectores diseñadas para permitir la clonación basada en recombinación mediante ensamblaje Gibson modificado fusionado en base a secuencias de regiones variables mediante ligadura de ADN, tal como se describe a continuación. El diseño de los cebadores se realizó con ayuda del software NEB Builder (New England Biolabs) o Primer3. El diseño de cebadores adicionales incluyó la incorporación de secuencias de reconocimiento de endonucleasas de restricción en los respectivos extremos 5' para la subclonación, según fuera necesario. En el caso de secuencias variables ambiguas, el diseño del cebador incorporó el uso de secuencias de nucleótidos modestamente degeneradas (en 1-2 posiciones) o de codones sustitutos ("best guess") guiados por el conocimiento dla base de la línea germinal predicho identificado en el análisis original de las secuencias VH y VL.

[0478]Para la clonación molecular por RT PCR, el ARN se extrajo de los hibridomas generalmente como se describe. La primera cadena de ADNc se sintetizó utilizando Superscript III First Strand Synthesis Supermix (Life Technologies) según el protocolo del fabricante. Se amplificaron 2,5 pl de ADN molde de ADNc mediante PCR utilizando la ADN polimerasa de alta fidelidad Q5 (New England BioLabs). La amplificación incluyó un total de 35 ciclos mediante PCR de "retoque" utilizando inicialmente una amplificación en tres pasos durante 10 ciclos, seguida de 25 ciclos con amplificación en dos pasos (recocido y extensión, ambos a 72 °C). Los amplicones de la PCR se evaluaron mediante electroforesis en gel de agarosa para confirmar la pureza, el tamaño correcto y las cantidades aproximadas. La purificación en gel de los productos de PCR se llevó a cabo cuando fue necesario utilizando el kit de purificación en gel Qiaquick (Qiagen). Los vectores de expresión de HC y LC Ig se linealizaron y prepararon para la clonación mediante doble digestión con endonucleasas de restricción. Los extremos 5' de los vectores digeridos se desfosforilaron posteriormente con fosfatasa alcalina de camarón, tras lo cual se inactivaron las enzimas por calor. Los productos de la PCR se ligaron a 50 ng de vector linealizado (purificado en gel) utilizando NEB Builder (New England Biolabs) en una proporción molar 2:1 de inserto: vector. Se transformaron 2 pl de la reacción de ligación enE. coliquímicamente competente (DH5a, New England Biolabs) y se sembraron en l B con antibiótico. Los clones recombinantes se seleccionaron mediante secuenciación del ADN de las colonias, seguida de la purificación del plásmido de los clones positivos a escala de 200 mL deE. coliutilizando kits Purelink Maxiprep de baja endotoxina (Life Technologies) según los protocolos del fabricante.

[0479]Para la producción de anticuerpos recombinantes, se utilizaron aproximadamente 225 pg de cada uno de los vectores de expresión de Ig purificados (HC y LC) para transfectar transitoriamente células HEK 293F. Se transfectaron unas 2*10® células/mL utilizando un reactivo de transfección basado en PEI-Max y se cultivaron en medio celular Freestyle 293 durante un total de 5-7 días. El título de anticuerpos se cuantificó mediante bioinferometría utilizando biosensores inmovilizados con proteína A (Pall Biosensors).

[0480]Los anticuerpos recombinantes se purificaron a partir del sobrenadante de cultivo tras clarificación por centrifugación a baja velocidad y filtración estéril a través de membranas PES de 0,22 pm, seguido de la adición de un cóctel inhibidor de proteasas (Cóctel III, Thermofisher) para mitigar la proteólisis. Los anticuerpos se purificaron mediante cromatografía de afinidad con proteína A utilizando una columna Hitrap de proteína A de 1 mL (GE Healthcare) con elución a pH bajo, tal como se ha descrito, seguida de neutralización con TRIS, pH 8,5. Los anticuerpos se reformularon y concentraron en 1* PBS, pH 7,4 mediante diálisis en tándem y ultrafiltración utilizando unidades concentradoras de centrifugación Amicon-Ultra 30.

Ejemplo 4: Actividades In Vitro de unión y bloqueo de receptores de los anticuerpos anti-APRIL

[0481]Los anticuerpos anti-APRIL recombinantes se caracterizaron con respecto a las actividades de unión a APRIL y de bloqueo del receptor utilizando métodos basados en ELISA y de señalización celular como se describe. Como se muestra en lasFIGS.5-6, la unión de anticuerpos de primer paso a APRIL humano mediante ELISA indirecta indicó varios anticuerpos con afinidades de unión bajas y subnanomolares a la citocina diana, basándose en valores EC50 extrapolados a partir de análisis de regresión no lineal de curvas de titulación de anticuerpos. En particular, los anticuerpos 2218, 2419 y 2621 se unieron a APRIL humano con afinidades de unión a diana aparentes inferiores a 0,2 nM; los anticuerpos 3530 y 2922 se unieron a APRIL humano con afinidades de unión a diana aparentes entre 0,2 nM y 1 nM. 3125 se unió a APRIL humano con una afinidad aparentemente menor (>1 nM). Un análisis similar de la unión del anticuerpo monoclonal al homólogo APRIL de ratón indicó que sólo mAb 3530 tenía una unión apreciable entre especies a la diana (datos no mostrados). El análisis funcional de la actividad de bloqueo del anticuerpo se evaluó mediante ELISA de competición utilizando receptor-Fc como ligando de captura de APRIL en un formato basado en 96 pocillos, tal como se ha descrito. Este análisis incluyó el uso de ambos receptores APRIL relacionados con el TNFR biológicamente relevantes (TACI humano y BCMA humano) con el fin de evaluar cualquier selectividad con respecto al antagonismo mediado por anticuerpos de las interacciones APRIL-receptor. Como se muestra en laFIG. 9, los valores IC50 de los anticuerpos se calcularon a partir de un análisis no lineal de las curvas de valoración de los anticuerpos. Los anticuerpos de bloqueo antihumanos 1313 y 0201 se utilizaron como controles positivos y con fines comparativos. Como control negativo se utilizó el anticuerpo no neutralizante Aprily-5 (Enzo Biosciences). Basándose en estos datosin vitro,todos los anticuerpos recombinantes demostraron un bloqueo al menos parcial de APRIL humano a TACI-Fc humana. Como se muestra en laFIG. 7, los anticuerpos monoclonales 2218, 2419, 2621, 3327 y 3530 bloquearon la unión APRIL-TACI con los correspondientes valores IC50 en el intervalo bajo o subnanomolar. Los MAbs 3125 y 2922 parecen bloquear con una potencia algo inferior, con valores de IC50 superiores a 10 nM. Como se muestra en laFIG. 8, una evaluación similar del bloqueo del receptor utilizando BCMA-Fc indica que los anticuerpos 2218, 2419 y 3327 son igualmente capaces de bloquear la unión a BCMA con una potencia baja o subnanomolar. El MAb 3530 parecería ser relativamente selectivo con respecto al bloqueo de la unión de APRIL a TACI-Fc en comparación con BCMA-Fc; como tal, este anticuerpo puede considerarse "selectivo para TACI". MAb 2621 no pareció bloquear la unión de APRIL a BCMA-Fc según se evaluó en este ensayo; como tal, mAb 2621 puede considerarse como un anticuerpo potencialmente "TACI-específico".

[0482]La actividad funcional (antagonismo del receptor) de los anticuerpos anti-APRIL se evaluó adicionalmente utilizando un ensayo reportero transcripcional NF-<k>B ortogonal, basado en células, para evaluar la inhibición de la activación de la señal del receptor mediada por APRIL. Este ensayo implicó la expresión heteróloga de TACI o BCMA de longitud completa (transmembrana) mediante transfección transitoria de plásmidos en una línea celular HEK293 modificada que poseía un gen reportero de luciferasa activado por transcripción NF-kB transfectado de forma estable. En general, el ensayo se llevó a cabo como se ha descrito utilizando Hu APRIL recombinante como fuente exógena de citoquina activadora del receptor. Los datos se normalizaron con el control de anticuerpo negativo tras sustraer la señal de fondo (sin APRIL ni Ab). Los datos se resumen enlas FIGS. 11A-11B. Basándose en estos datos, se confirmaron las potentes actividades de bloqueo del receptor de los anticuerpos monoclonales 2218 y 2419 de una manera dependiente de la dosis de anticuerpo. Estas actividades incluían el bloqueo de los receptores BCMA y TACI. Los anticuerpos monoclonales 2922 y 3125 mostraron cualitativamente una menor actividad, en consonancia con sus actividades relativamente más bajas en el ELISA de bloqueo del receptor-Fc(es decir,en comparación con los mAbs 2218 y 2419). Las discrepancias aparentes entre estos dos ensayos pueden atribuirse a niveles de expresión diferenciales de los receptores, al recambio de proteínas o a otros factores biológicos que no están presentes en los ensayos de unión basados en ELISA menos complejos. No obstante, estos datos, tomados en conjunto, demuestran una clara actividad funcional de los anticuerpos recombinantes anti-APRIL con respecto al antagonismo de la actividad APRIL descrito en el presente documento.

[0483]Datos experimentales adicionales incluyen, por ejemplo, los siguientes. La unión de anticuerpos anti-APRIL ejemplares a APRIL humano se muestra en laFIG. 16. Las afinidades de unión relativas de anticuerpos anti-APRIL ejemplares se muestran en laFIG. 17. La inhibición por anticuerpos de la señalización del receptor mediada por APRIL se muestra enlas FIGS. 18A-18B. La inhibición por anticuerpos de la unión de APRIL a los receptores TACI y BCMA del TNFSF se muestra enlas FIGS. 19A-19B. La inhibición por anticuerpos de la unión de APRIL a TACI-Fc humano y BCMA-Fc humano se resume en la tabla de laFIG. 20.

Ejemplo 5: Reactividad cruzada entre especies de los anticuerpos anti-APRIL

[0484]Además de demostrar la actividad funcional de varios anticuerpos anti-APRIL, también se evaluó la reactividad cruzada de estos anticuerpos con respecto a la unión y bloqueo de APRIL tanto de ratón como humano. Esta caracterización empleó el mismo conjunto de ensayosin vitrodescritos, pero con la inclusión de APRIL de ratón marcado con HA análoga (R&D Systems). A título ilustrativo, se incluye un subconjunto de datos del ELISA de bloqueo basado en el receptor-Fc (tanto TACI-Fc como BCMA-Fc). En este análisis, mAb 3530 se comparó con los anticuerpos 1313 (anticuerpo bloqueante anti-APRIL específico para humanos), Apry-1-1 (anticuerpo bloqueante anti-APRIL específico para ratones) y el anticuerpo no neutralizante Aprly-5 (control negativo). Los datos de la actividad de bloqueo del receptor por anticuerpos se resumen enlas FIGS. 10A-10Bpara bloquear la unión de APRIL a TACI-Fc humano y BCMA-Fc humano, respectivamente. En consonancia con otros datos, mAb 3530 parecería ser un anticuerpo "selectivo para TACI" basándose en su perfil de neutralización relativa (TACI frente a TACI). BCMA). Además, este anticuerpo fue capaz de bloquear aparentemente tanto la unión del ratón como la de APRIL al TACI-Fc con una potencia comparable (valores IC50 aparentes). Hasta donde sabemos, este es el primer ejemplo de un anticuerpo anti-APRIL reactivo cruzado con implicaciones tanto con respecto a la especificidad del epítopo como al uso en el desarrollo preclínico de este anticuerpo utilizando modelos de roedores relevantes para la enfermedad (singénicos).

[0485]Las actividades de bloqueo cruzado de especies APRIL de los anticuerpos anti-APRIL también se muestran enlas FIGS. 21A-21B.

Ejemplo 6: Actividad funcional del anticuerpo anti-APRIL para la reducción de la IgA sérica In Vivo

[0486]Además de su papel en la promoción del crecimiento tumoral, la citoquina APRIL juega varios papeles críticos en la regulación de la inmunidad adaptativa y de mucosas vis-a-vis la modulación de la función de las células B y T. Esta actividad inmunológica incluye la inducción de la producción de IgA en las células B a través de la inducción mediada por el receptor del cambio de clase de Ig, la proliferación de células B y la supervivencia de células plasmáticas relacionadas con IgA+. Este papel central de APRIL en la producción de IgA conduce a su potencial como diana terapéutica para enfermedades que implican la producción desregulada de IgA y/o la formación de complejos inmunes que contienen IgA. Dichas enfermedades incluirían, entre otras, la nefropatía IgA, la vasculitis relacionada con IgA(p.ej.,púrpura de Henoch-Schodein), LES, gammapatías monoclonales relacionadas con IgA, enfermedad hepática alcohólica, etc. Por lo tanto, la potencia biológica del anticuerpo terapéutico anti-APRIL puede evaluarse in vivo basándose directamente en una reducción de los niveles séricos de IgA tras la administración de dicho anticuerpo en un modelo de roedor de laboratorio. Con este fin, también se utilizó como artículo de prueba el anticuerpo bloqueante Apry-1-1 (Adipogen), específico de APRIL de ratón, utilizado según se describe en el presente documento como control para evaluar la actividad del anticuerpo anti-APRILin vitro.Ratones macho B6C3F1 de la misma edad (6-10 semanas de edad) fueron dosificados con 20 mg/kg de anticuerpo dos veces por semana mediante inyección IP. 12 durante 8 semanas. Se utilizó solución salina inyectable como control negativo (vehículo). Los niveles séricos de inmunoglobulinas específicas del isotipo (IgG, IgM e IgA) se controlaron individualmente mediante ELISA aproximadamente cada 12 días. Se controló el peso corporal 3 veces por semana, la hematología y la bioquímica sérica, así como el estado general de salud de los animales. Se extrajo sangre antes de la dosificación (día 0, pre-sangrado). Las hemorragias de supervivencia se produjeron a las 2 semanas (final de la fase I), a las 4 semanas y a las 6 semanas. Las hemorragias terminales se produjeron al cabo de 8 semanas. Los resultados se muestran enlas FIGS. 12A-12B.

[0487]En este estudio, la administración crónica de un anticuerpo anti-APRIL funcional con actividad bloqueante validadain vitrocondujo a una reducción de los niveles séricos de IgA por debajo del 50%. La reducción se observó el día 24 y se mantuvo durante el tratamiento con anticuerpos. El tratamiento con el anticuerpo anti-APRIL de ratón no tuvo efectos estadísticamente diferenciales sobre los niveles séricos de Ig totales en relación con el control; la hematología y la química sanguínea tampoco se vieron afectadas.

Ejemplo 7: Cartografía de epítopos

[0488]Se utilizaron variantes APRIL humanos dirigidas al sitio para el mapeo de epítopos. Como se muestra en laFIG.

22, APRIL se representa como un trímero (cian, verde y magenta). En azul oscuro se representa el epítopo típico que contiene el sitio de unión del receptor de alta afinidad CRD2. Las posiciones de los cambios de aminoácidos se indican con el aminoácido de tipo salvaje precediendo al número y la mutación a continuación(p. ej.,R233G representa la mutación de arginina en la posición 233 a glicina).

[0489]Se realizó el mapeo de epítopos de los anticuerpos ejemplares 4035, 2419 y 3833. La unión del anticuerpo a las variantes humana y de ratón se evaluó mediante ELISA. Se compara con el anticuerpo de referencia 1313. APRIL marcado con FLAG se capturó del medio de cultivo celular utilizando un anticuerpo anti-FLÁG. Los resultados se muestran enlas FIGS. 23A-23B,24A-24B,y 25A-25B. La cartografía de epítopos diferenciados de anticuerpos anti-APRIL ejemplares se realizó mediante mutagénesis dirigida al sitio. La caracterización primaria del sitio de unión de APRIL humano se llevó a cabo mediante mutagénesis dirigida a determinadas posiciones de aminoácidos dentro de APRIL, seguida de la evaluación de la unión de anticuerpos a estas variantes mediante ELISA. Enla FIG.4035 (círculos sólidos), 2419 (cuadrados sólidos) y 1313 (triángulos abiertos) se muestran datos ejemplares de tres anticuerpos anti-APRIL.26con fines ilustrativos.

[0490]Los perfiles de unión diferencial de anticuerpos anti-APRIL ejemplares se muestran enla Tabla 6. Se enumeran residuos de aminoácidos ejemplares que se unen a las moléculas de anticuerpos anti-APRIL aquí descritas. Uno o más de estos residuos forman al menos parte de una región de unión en APRIL. Los residuos ejemplares dentro de la región de unión que se predice que tienen un impacto en la unión(p. ej.,basándose en los estudios de mutagénesis dirigida al sitio descritos aquí) se señalan con una "X". Los residuos ejemplares que se prevé que tienen un impacto menor o nulo en la unión(p. ej.,basándose en los estudios de mutagénesis dirigida al sitio descritos en el presente documento) se señalan con una "N" a efectos comparativos.

Tabla 6. Perfiles de Unión Diferencial de Anticuerpos Anti-APRIL Ejemplares (La Tabla revela SEQ ID N°: 338-341, respectivamente, por orden de aparición)

Ejemplo 8: Humanización de anticuerpos anti-APRIL derivados de ratón

[0491]Los anticuerpos anti-APRIL seleccionados se derivaron de la inmunización de ratones como se describe en el presente documento. Las regiones variables de determinados anticuerpos, a saber, 2419, 4035 y 4540, se humanizaron posteriormente con fines de uso terapéutico potencial y mitigación de la inmunogenicidad. En resumen, la humanización se llevó a cabo mediante la identificación de germlines humanos próximos a la variable pesada (VH) y la variable ligera (VL) del ratón. Una vez identificadas, las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de mAb2419 VH y VL se injertaron en las plantillas de la línea germinal humana VH y VL, respectivamente, utilizando el diseño guiado por la estructura. Se introdujeron selectivamente mutaciones adicionales (incluidas mutaciones inversas al residuo parental en el mAb de ratón) basándose en la inspección visual del modelo estructural. Las construcciones de anticuerpos humanizados se produjeron de forma recombinante en células HEK293 tras la transfección transitoria de vectores separados para la expresión de las cadenas pesada y ligera. Los anticuerpos recombinantes se purificaron mediante cromatografía de afinidad con proteína A utilizando métodos estándar. Posteriormente, se comprobó la unión de los anticuerpos humanizados a APRIL, el bloqueo funcional del receptor (interacciones TACI-APRIL y BCMA-APRIL) y la estabilidad térmica mediante un ensayo de desdoblamiento de proteínas por fluorescencia de barrido diferencial. Se compararon la actividad relativa y los perfiles de estabilidad con los anticuerpos parentales de ratón en los que se basó la humanización.

Ejemplo 9: Actividades In Vitro de unión y bloqueo de receptores de anticuerpos anti-APRIL humanizados

[0492]La unión relativa de anticuerpos anti-APRIL ejemplares se midió por ELISA indirecto. La unión de las variantes humanizadas de los anticuerpos de ratón 4035 y 2419 a APRIL humano se muestra en laFIG. 27A-27B, respectivamente. La unión de una variante humanizada del anticuerpo 4540-063 de reacción cruzada humano-ratón tanto a APRIL humano como a APRIL de ratón se muestra enlas FIGS. 28A-28B, respectivamente. La comparación de los anticuerpos humanizados anti-APRIL con los anticuerpos parentales (no humanizados) de ratón se realiza con fines comparativos. Los valores EC50 extrapolados se resumen enlas FIGS. 29A-29B. Las moléculas de anticuerpos ejemplares se unen a APRIL con afinidad picomolar.

[0493]Las afinidades de unión aparentes de los anticuerpos 2419-1406 y 4035-062 a APRIL humano trimérico también se midieron por ELISA. El trímero APRIL se estabilizó mediante la fusión N-terminal de APRIL con un dominio de oligomerización de cremallera de isoleucina (GCN4). La unión de APRIL a TACI-Fc humano se muestra con fines comparativos. Los resultados de la unión ELISA se muestran en laFIG. 29C. Los valores Picomolar EC50 derivados de las curvas de unión representadas en laFIG. 29Cse resumen en laFIG. 29D. El anticuerpo mostró una unión picomolar (pM) a APRIL humano trimérico medida por ELISA. Se observó una mayor afinidad de unión de 2419-1406 y 4035-062 a APRIL en relación con la unión de APRIL a su propio receptor (TACI-Fc).

[0494]Se midió la inhibición de la unión de APRIL a los receptores TACI y BCMA de TNFSF por variantes IgG2x humanizadas del anticuerpo 2419 parental, derivado murino. El ensayo se basa en ELISA de bloqueo del receptor utilizando APRIL humano recombinante (R&D Systems) y TACI-Fc humano (FIG. 30A) o BCMA-Fc (FIG. 30B). El anticuerpo quimérico parental 2419 (VH-VL de ratón injertado en regiones constantes de IgG1K humana) se incluye con fines comparativos, al igual que el anticuerpo quimérico anti APRIL humano 4035. La inhibición se analizó mediante regresión no lineal utilizando un ajuste de curva de cuatro parámetros tras la normalización a una actividad del 100% (control sin anticuerpos). Los valores IC50 se resumen en laFIG. 33.

[0495]La inhibición de la unión de APRIL a los receptores de TNFSF TACI (FIG. 31A) y BCMA (FIG.31B) por las variantes humanizadas adicionales de 2419 (IgG2x) 2419-0205 y 2419-1406 y la variante humanizada (4035-062) del anticuerpo parental 4035. El 4035-062 humanizado es del subtipo IgGlx. Se incluyen versiones quiméricas, no humanizadas, de los anticuerpos derivados de ratón 4035 y 2419, y 1313 con fines comparativos. mAb1313 es un anticuerpo anti-APRIL de control. Se utilizaron TACI-Fc y BCMA-Fc. Los valores IC50 se resumen en laFIG. 33.

[0496]La inhibición de la unión de APRIL a los receptores de TNFSF TACI (FIG. 32A) y BCMA (FIG. 32B) por variantes humanizadas del anticuerpo 4540 de neutralización cruzada APRIL ratón/humano. El anticuerpo humanizado 4540 es del subtipo IgG1K. Parental 4540 (quimera no humanizada) y humanizada 4035-062 (FIGS. 30A-30B) se incluyen a efectos comparativos. La inhibición se analizó mediante regresión no lineal utilizando un ajuste de curva de cuatro parámetros como se describe paralas FIGS. 29A-29ByFIGS. 30A-30B. Los valores IC50 también se resumen en laFIG. 33. En la mayoría de los anticuerpos ensayados se observó un bloqueo subnanomolar de la unión APRIL-receptor.

[0497]Estos resultados indican que la humanización y el reformateo(p. ej.,como IgG2) generalmente, si no siempre, conducen a una retención comparable de las actividades de bloqueo del receptor.

[0498]Se evaluó la inhibición por anticuerpos de la señalización del receptor mediada por APRIL. La inhibición de la señalización intracelular NFxB mediada por el receptor APRIL se evaluó utilizando la línea celular reportera HEK 293 NFkB tras la transfección transitoria de vectores de expresión de ADNc de receptores humanos de la familia TNF de longitud completa TACI o BCMA. Los datos se normalizan con respecto al control sin anticuerpos (100%). La inhibición de la señalización de NFxB mediada por TACI y BCMA se muestra enlas FIGS. 34A-34B, respectivamente.

[0499]La FIG.35representa los valores IC50 aproximados de la inhibición por anticuerpos de la señalización del receptor mediada por APRIL. Los datos se extrapolan delas FIGS. 34A-34Bbasado en un análisis de regresión no lineal utilizando un ajuste de tres parámetros de pendiente variable de la concentración de anticuerpos frente a la respuesta. El anticuerpo de control negativo (sin unión a APRIL) no demostró actividad en este ensayo (datos no mostrados). Estos resultados indican una potente inhibición de la vía de señalización descendente de NF<k>B mediada por APRIL (con IC50 bajo o subnM) por la molécula ejemplar de anticuerpo anti-APRIL. El bloqueo se produce tanto con los receptores TACI como con los BCMA.

Ejemplo 10: Evaluación de la especificidad de unión del anticuerpo anti-APRIL a APRIL

[0500]Los anticuerpos anti-APRIL seleccionados se evaluaron para determinar la reactividad cruzada potencial con otros miembros de la familia de citocinas de la superfamilia TNFa (TNFSF), incluyendo: TNFa humano (TNFSF2; Adipogen), CD40 humano (TNFSF4, Adipogen), FasL humano (TNFSF6, Adipogen), TRAIL humano (TNFSF10, Adipogen), RANKL humano (TNFSF11; Adipogen), Tweak humano (TNFSF12; Abcam), BAFF humano y de ratón (TNFSF13B, AB Biosciences y Adipogen, respectivamente), y LIGHT humano (TNFSF14, Adipogen). Estas citocinas comparten un grado variable de secuencia, así como homologías estructurales de orden superior. Entre ellos, BAFF parece ser el más estrechamente relacionado con APRIL, con un 29% de identidad y un 53% de similitud en la secuencia de aminoácidos.

[0501] La unión se evaluó mediante un protocolo ELISA indirecto utilizando métodos similares a los descritos para la evaluación de la unión a APRIL; las citocinas se inmovilizaron en una placa ELISA a 50 ng por pocillo y luego se expusieron a una solución de cada uno de los anticuerpos de prueba a una concentración fija de 10 pg/ml Para la detección de la unión de anticuerpos se utilizaron conjugados de anticuerpos policlonales Ig- HRP antihumanos o antiratón (Jackson Laboratories). Los resultados presentados enFIG. 36indicaron que once de los doce anticuerpos probados en este ensayo se unen específicamente a APRIL sin reactividad cruzada medible con los otros miembros del TNFSF sustancialmente por encima del fondo del ensayo. El anticuerpo 4338 demostró una unión detectable a las versiones humana y de ratón del BAFF y se utilizó como control del ensayo.

[0502]Los mAbs 2419-1406 y 4035-062 demuestran una reactividad cruzada con proteínas extrañas mínima o nula en un amplio conjunto de más de 4500 proteínas de membrana humanas (RETROGENIX™). Un ejemplo de diseño de matriz de expresión de proteínas se muestra en laFIG. 37A. Se realizó un cribado confirmatorio/secundario de 12 proteínas (FIGS. 37B-37C). Se observó unión a receptores Fc tanto para 2419-1406 como para 4035-062, tal como se había previsto. Se observó una unión más débil a F<cy>R1 en el anticuerpo 2419-1406, lo que concuerda con su isotipo IGg2. También se detectó una unión insignificante a PDGFR para 2419-1406. No se observó unión a ninguna otra diana de membrana excepto las descritas Anticuerpo 4035-062

Ejemplo 11: Identificación del epítopo diana para la máxima potencia del anticuerpo anti-APRIL

[0503] El epítopo de una molécula de anticuerpo anti-APRIL ejemplar, mAb 2419, se mapeó utilizando una combinación de herramientas y datos empíricos y computacionales. Estos métodos y los datos resultantes incluyeron 1) cristalografía de baja resolución del mAb 2419 Fab en complejo con APRIL humano (aminoácidos 115-250) en tándem con 2) modelado estructural (FIG. 38A), y 3) mutagénesis de saturación de APRIL en posiciones selectas dentro de la superficie de APRIL llevada a cabo en combinación con la visualización de la superficie de APRIL en levadura (FIG 38B). Como se muestra en ambasFIGS. 38A-38B, la molécula de anticuerpo se dirige a un epítopo cuaternario no lineal que abarca dos monómeros diferentes de APRIL dentro de un complejo trimérico mayor. El epítopo de 2419 también se solapa sustancialmente con una región de APRIL correspondiente al sitio de unión al receptor de alta afinidad (sitio CRD2) crítico para el bloqueo de los receptores TACI y BCMA (FIG. 38B). Un sitio secundario de unión al receptor (sitio CRD1) también se solapa con el epítopo 2419 con implicaciones para el bloqueo de las interacciones TACI-APRIL. Basándose en este análisis, las posiciones dentro de APRIL que definen el epítopo de 2419 incluyen V133, V181, E185, Q187, G188, R189, Q190, E191, T192, R195, H218, L219, H220, S226, I228, P230 (localizadas en el monómero A); V121, I123, Q139, P140, A141, L142, N237, S239, P240 y H241 (situados en el monómero B).

[0504] Un análisis más centrado de este epítopo mediante mutagénesis de posiciones selectas de APRIL accesibles en superficie apunta a un subconjunto de posiciones dentro del epítopo mayor de 2419 (representado estructuralmente en laFIG. 38A) que parecen especialmente críticos para la unión de anticuerpos. Estos llamados "residuos calientes", es decir , aquellos residuos que son críticos para la interacción entre APRIL y mAb 2419, se definen empíricamente (utilizando una combinación de los métodos descritos anteriormente) como aquellas posiciones en las que la mutación de la secuencia de tipo salvaje a casi cualquier otro residuo amino resultó en una pérdida sustancial de la unión de 2419 a APRIL. Ejemplos de estas posiciones son V181, Q190, T192 e I228 en un monómero, y A141 y H241 en un monómero adyacente.

Tabla 8. Residuos de aminoácidos APRIL humanos ejemplares que se unen a mAb 2419 (numeración de aminoácidos basada en SEQ ID N°: 85)

[0505]En resumen, el epítopo se solapa con las regiones predichas para el bloqueo máximo del receptor, y se dirige a un epítopo cuaternario no lineal que abarca dos monómeros diferentes de APRIL, lo que implica la neutralización de la forma biológicamente más activa de APRIL (trímero).

Ejemplo 12: Propiedades farmacéuticas de los anticuerpos anti-APRIL

[0506]La estabilidad térmica de moléculas anti-APRIL ejemplares, 2419-1406 y 4035-062, se midió utilizando el ensayo de barrido de fluorescencia Sypro-Orange® (FIG. 39A). Las temperaturas de fusión térmica (valores Tm) tanto para 2419 1406 como para 4035-062 se muestran en laFIG. 39B. mAb 2419-1406 y mAb 4035-062 presentan una elevada estabilidad térmica.

[0507]El modelo de ratón tg32 se utilizó como sustituto para predecir la farmacocinética (PK) del anticuerpo en humanos. La FC del anticuerpo de control (IgG1) con FC preestablecida de aproximadamente 25 días (en humanos) también se evaluó en este estudio con fines comparativos. Como se muestra en lasFIGS.40A-40B, se observó el perfil PK favorable de una molécula de anticuerpo anti-APRIL ejemplar, 2419-1406 y 4035-062, en la cepa de ratón transgénico FcRn humanizado tg32.

Ejemplo 13: Los anticuerpos anti-APRIL reactivos entre especies reducen eficazmente los niveles séricos de IgA en ratones

[0508]El mAb 4540 de ratón es un anti-APRIL reactivo entre especies (ratón y humano) con actividad neutralizante del receptor. El mAb 4540 se dirige a un epítopo APRIL que se solapa con el mAb 2419-1406. El mAb4540 se utilizó como sustituto para evaluar el efecto del tratamiento con mAb anti-APRIL en una reducción de los niveles séricos de IgA en ratones C57/BL6. Ratones de 11 semanas de edad recibieron dosis subcrónicas (1 vez por semana mediante inyección i.p.) de 20 mg/kg de mAb 4540, mAb 3833 o anticuerpo de control del isotipo durante siete semanas. Los niveles séricos basales de IgA total se cuantificaron mediante ELISA. Como se muestra en laFIG. 41, el tratamiento con mAb 4540 o mAb 3833 redujo los niveles séricos de IgA en ratones C57/BL6.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una molécula de anticuerpo anti-APRIL, que comprende una región variable de cadena pesada (VH) que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 296, y una región variable de cadena ligera (VL) que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N°: 286.

2. La molécula de anticuerpo de la reivindicación 1, que es una molécula de anticuerpo sintética o aislada, y/o es una molécula de anticuerpo humanizada.

3. La molécula de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-2, que comprende una región constante de cadena pesada de IgG1, IgG2, IgG3, o IgG4, y/o comprende una región constante de cadena ligera de cadena ligera kappa o lambda.

4. La molécula de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende una región constante de cadena pesada de IgG2.

5. La molécula de anticuerpo de la reivindicación 4, que comprende una región constante de cadena ligera kappa.

6. La molécula de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, que comprende una región Fc.

7. La molécula de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, que comprende dos regiones variables de cadena pesada y dos regiones variables de cadena ligera, o es un Fab, F(ab')2, Fv, Fd, o un fragmento Fv de cadena simple (scFv).

8. Una composición farmacéutica que comprende una molécula de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 7 y un portador farmacéuticamente aceptable.

9. Una molécula de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena pesada (VH) y una región variable de cadena ligera (VL) de una molécula de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-7.

10. Un vector que comprende una molécula de ácido nucleico de la reivindicación 9.

11. Una célula aislada que comprende (i) una molécula de ácido nucleico de la reivindicación 9, (ii) una molécula de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena pesada (VH) y una molécula de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena ligera (VL), de una molécula de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, o (iii) un vector de la reivindicación 10.

12. Un kit que comprende una molécula de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, instrucciones de uso de la molécula de anticuerpo, y uno o más de: un reactivo que es un marcador, un agente terapéutico, y un dispositivo o materiales para la administración a un sujeto; y opcionalmente comprende además un portador farmacéuticamente aceptable.

13. Un recipiente que comprende una molécula de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, o una composición de la reivindicación 8.

14. Un método para producir una molécula de anticuerpo anti-APRIL, el método comprende cultivar una célula de la reivindicación 11 en condiciones que permitan la producción de una molécula de anticuerpo, produciendo así la molécula de anticuerpo.

15. El método de la reivindicación 14, que comprende además aislar o purificar la molécula de anticuerpo.

16. Una molécula de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, o una composición de la reivindicación 8, para su uso en un método de tratamiento de la nefropatía por IgA en un sujeto.

17. La molécula de anticuerpo para su uso según la reivindicación 16, o la composición para su uso según la reivindicación 16, en la que la molécula de anticuerpo se administra al sujeto por vía intravenosa o subcutánea, y/o se administra al sujeto a una dosis entre 0,1 mg/kg y 5o mg/kg, entre 0,2 mg/kg y 25 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 10 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 5 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 3 mg/kg, entre 0 .5 mg/kg y 2,5 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 2 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 1,5 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 1 mg/kg, entre 1 mg/kg y 1,5 mg/kg, entre 1 mg/kg y 2 mg/kg, entre 1 mg/kg y 2.5 mg/kg, entre 1 mg/kg y 3 mg/kg, entre 1 mg/kg y 10 mg/kg, entre 1 mg/kg y 15 mg/kg, o entre 1 mg/kg y 5 mg/kg, o 1 mg/kg, 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg u 8 mg/kg, o a una dosis fija entre 10 mg y 1000 mg, entre 10 mg y 500 mg, entre 10 mg y 250 mg, entre 10 mg y 150 mg, entre 10 mg y 100 mg, entre 10 mg y 50 mg, entre 250 mg y 500 mg, entre 150 mg y 500 mg, entre 100 mg y 500 mg, entre 50 mg y 500 mg, entre 25 mg y 250 mg, entre 50 mg y 150 mg, entre 50 mg y 100 mg, entre 100 mg y 150 mg. entre 100 mg y 200 mg, o entre 150 mg y 250 mg.

18. La molécula de anticuerpo para uso según la reivindicación 17, o la composición para uso según la reivindicación 17, en la que la molécula de anticuerpo se administra una vez a la semana, dos veces a la semana, una vez cada dos semanas, o una vez cada cuatro semanas, o una vez al mes, una vez cada dos meses, o una vez cada tres meses.

19. La molécula de anticuerpo para uso según cualquiera de las reivindicaciones 16-18, o la composición para uso según cualquiera de las reivindicaciones 16-18, dicho método comprende además determinar el nivel de IgA en una muestra de tejido periférico del sujeto.

20. La molécula de anticuerpo para uso según la reivindicación 19, o la composición para uso según la reivindicación 19, en la que el tejido periférico es suero, tejido mucoso o médula ósea.

21. Un método de detección de una molécula APRIL, el método comprende poner en contacto una célula o una muestra de un sujeto con una molécula de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, detectando así la molécula APRIL, en el que la molécula APRIL se detecta invitrooex vivo.

22. El método de detección de una molécula APRIL de la reivindicación 21, en el que la molécula de anticuerpo se acopla con un marcador detectable.