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ES2967983T3 - Compuestos - Google Patents

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ES2967983T3
ES2967983T3 ES19734722T ES19734722T ES2967983T3 ES 2967983 T3 ES2967983 T3 ES 2967983T3 ES 19734722 T ES19734722 T ES 19734722T ES 19734722 T ES19734722 T ES 19734722T ES 2967983 T3 ES2967983 T3 ES 2967983T3
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ES
Spain
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mmol
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etoac
added
compound
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Active
Application number
ES19734722T
Other languages
English (en)
Inventor
Paul STUPPLE
Helen Lagiakos
Benjamin Morrow
Richard Foitzik
Catherine Hemley
Michelle Camerino
Ylva Bozikis
Scott Walker
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CTXT Pty Ltd
Original Assignee
CTXT Pty Ltd
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Publication date
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Abstract

Un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéutica del mismo. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos
La presente invención se refiere a compuestos que actúan como inhibidores de la Lisina Acetil Transferasa (KAT) de la familia MYST.
Antecedentes de la invención
La familia MYST es la mayor familia de KAT y su nombre proviene de los elementos fundadores en levaduras y mamíferos: MOZ, Ybf2/ Sas3, Sas2 y TIP60(Dekker 2014).Las proteínas MYST median en muchas funciones biológicas incluyendo la regulación génica, reparación de ADN, regulación del ciclo celular y desarrollo(Avvakumov 2007; Voss 2009).Las proteínas KAT de la familia MYST desempeñan papeles en la modificación postraduccional de histonas y por tanto tienen un profundo efecto en la estructura de cromatina en el núcleo eucariota(Avvakumov 2007).La familia comprende en la actualidad cinco KAT de mamífero: TIP60 (KAT5; HTATIP; MIM 601409), MOZ (KAT6A; MIM 601408; MYST3), MORF (KAT6b; QKF; MYST4), HBO (KAT8; HBO1; MYST2) y MOF (KAT8; MYST1)(Voss 2009). Estos cinco miembros de la familia MYST están presentes en seres humanos y se sabe que la disfunción de proteínas MYST está asociada al cáncer(Avvakumov 2007).Los nombres usados con más frecuencia para miembros de la familia MYST son:
Dominios funcionales de MYST
Las proteínas MYST actúan en complejos proteicos multisubunitarios incluyendo adaptadores tales como proteínas ING que median en la unión a ADN(Avvakumov 2007).Por ejemplo, TIP60 está afiliada con el complejo multiproteico NuA4 (que abarca más de 16 miembros)(Zhang 2017).Sin embargo, también se ha observado algunas veces un motivo de unión a ADN de hélice-vuelta-hélice en la estructura de la proteína MOZ en sí misma(Holbert 2007),lo que sugiere la capacidad para unirse directamente a ADN.
La actividad acetiltransferasa de proteínas MYST se ve afectada por el dominio MYST (el dominio catalítico). El dominio MYST contiene un motivo de unión a acetil-coenzima A, que está estructuralmente conservado con otras HAT, y un dedo de cinc de tipo C<2>HC poco habitual(Voss 2009).El dominio MYST muy conservado, que incluye el motivo de unión a acetil-CoA y dedo de cinc, se considera el elemento definitorio de esta familia de enzimas(Avvakumov 2007).
Papel de las proteínas MYST
La acetilación de restos de histona está asociada en general a la activación de la transcripción. Sin embargo, en algunos casos, también se ha atribuido represión de la transcripción a proteínas MYST(Voss 2009).Se sabe que los miembros individuales de la familia MYST participan en una amplia serie de interacciones bioquímicas importantes:
HBO1 regula de forma positiva el inicio de la replicación de ADN(Avvakumov 2007; Aggarwal 2004; Doyon 2006; Iizuka 2006)mediante acetilación de sustratos de histona, lo que conduce supuestamente a una conformación de cromatina más accesible(Avvakumov 2007, Iizuka 2006).También se sabe que HBO1 desempeña un papel en la patogenia del cáncer de mama promoviendo un enriquecimiento de células de tipo germinal de cáncer(Duong 2013)y desestabilizando el receptor de estrógeno a (ERa) a través de ubiquitinización, que progresa mediante la actividad de acetilación de histona de HBO1(Iizuka 2013).HBO1 también se ha implicado en la leucemia mieloide aguda (LMA)(Shi 2015).
TIP60 (KAT5) es el miembro más estudiado de la familia MYST. TIP60 desempeña un papel importante no solamente en la regulación de la transcripción sino también en el proceso de reparación de daño de ADN, particularmente en roturas bicatenarias de ADN (DSB)(Gil 2017).TIP60 puede acetilar p53, ATM y c-Myc. TIP60 y MOF acetilan específicamente lisina 120 (K120) de p53 tras daño de ADN(Avvakumov 2007).También se ha indicado que TIP60 es importante en la biología de linfocitos T reguladores (Treg). FOXP3 es el regulador maestro en el desarrollo y la función de Treg y se ha mostrado que la acetilación de FOXP3 por TIP60 es esencial para la actividad de FOXP3 (Li2007, Xiao 2014).Esto se subraya porque la supresión condicional de TIP60 en ratones conduce a una enfermedad autoinmunitaria letal de tipo scurfy, que imita un fenotipo visto en ratones con desactivación de FOXP3(Xiao 2014).En el cáncer, los linfocitos T reg pueden facilitar la progresión tumoral mediante la supresión de la inmunidad adaptativa contra el tumor.
MOF("males absent on the first')se identificó originalmente como uno de los componentes de la compensación de dosificación enDrosophila,y se clasificó como un miembro de la familia MYST basándose en estudios funcionales y análisis de secuencias(Su 2016).El ortólogo humano muestra similitud significativa con MOF deDrosophila; que contiene un sitio de unión a acetil-CoA, un cromodominio (que se une con histonas) y un dedo de cinc de tipo C<2>HC(Su 2016).MOF es una enzima clave para acetilar la histona H4K16 y los complejos que contienen MOF están implicados en diversas funciones celulares esenciales ligadas al cáncer(Su 2016).Además de la reducción global de la acetilación de histonas, el agotamiento de MOF en células de mamífero puede dar como resultado transcripción génica anómala, particularmente causando expresión anómala de determinados genes supresores de tumores u oncogenes, lo que sugiere un papel crítico de MOF en tumorigénesis(Su 2016).Por ejemplo, se ha mostrado que es necesaria actividad KAT de MOF para mantener leucemia LLM-AF9 y puede ser importante para múltiples subtipos de LMA(Valerio 2017).
KAT6B (Querkopf) se identificó en primer lugar en una exploración de mutación para genes que regulan el equilibrio entre proliferación y diferenciación durante el desarrollo embrionario(Thomas 2000).Los ratones homocigotos para el alelo mutante de KAT6B tienen defectos graves en el desarrollo de la corteza cerebral que resultan de una reducción grave tanto en proliferación como en diferenciación específicamente de la población progenitora cortical durante el desarrollo embrionario. KAT6B es necesaria para el mantenimiento de la población de células madre neurales del adulto y es parte de un sistema que regula la diferenciación de células madre en neuronas(Merson 2006).KAT6B también está mutada en formas poco habituales de leucemia(Vizmanos 2003).
El locus MOZ se clasifica como la 12° región más habitualmente amplificada entre todos los tipos de cáncer (Zack 2013).MOZ está en el amplicón 8p11-p12, que se ve a frecuencias de aproximadamente 10-15 % en diversos cánceres, especialmente de mama y ovario(Turner-Ivey2014).MOZ se identificó por primera vez como un compañero de fusión de la proteína CREB (CBP) durante el examen de una translocación cromosómica específica en leucemia mieloide aguda (LMA)(Avvakumov 2007; Borrow 1996).La actividad de MOZ KAT es necesaria para promover la expresión de MEIS1 y HOXa9, proteínas que se ven habitualmente sobreexpresadas en algunos linfomas y leucemias. Se ve aumento de la supervivencia de ratones heterocigotos MOZ+/- en el modelo transgénico de Ep-Myc de linfoma de linfocitos B, donde la pérdida de un único alelo de MOZ conduce a una reducción biológicamente relevante en los niveles de Meis1 y Hoxa9 en prelinfocitos B(Sheikh 2015).
Se conocen inhibidores de algunas MYST. Por ejemplo, se ha señalado que el siguiente derivado de ácido anacárdico(Ghizzoni 2012)inhibe TIP60 (CI<50>= 74 pM) y MOF (CI<50>= 47 pM):
Otros inhibidores conocidos incluyen (Zhang 2017):
Czudor et al "Novel compounds with potent CDK9 inhibitory activity for the treatment of myeloma", Bioorg Med Chem Lett, 2018, vol 28(4), p769-773 divulgan derivados de pirimina 2,4-disustituidos y su actividad como inhibidores de CDK9.
Stein et al "Discovery and structure-activity relationships of sulfonamide ETA-selective antagonists", J. Med Chem, 1995, vol 38(8), p1344-1354 divulgan relaciones estructura-actividad de antagonistas del receptor de sulfonamida ET<a>. El documento WO 2014/144545 (Genentech Inc, Xenon Pharmaceuticals Inc, publicado el 18 de septiembre de 2014) divulga benzoxazoles sustituidos y procedimientos de uso de los mismos.
El documento WO 2018/102419 (Epizyme Inc, publicado el 7 de junio de 2018) divulga compuestos que contienen un grupo sulfónico como inhibidores de KAT.
A la vista del papel establecido de las KAT en general, y MYST en particular, en enfermedades tales como cáncer, existe la necesidad de nuevos inhibidores de estas proteínas.
Divulgación de la invención
La presente invención proporciona compuestos que inhiben la actividad de una o más KAT de la familia MYST, es decir, TIP60, KAT6B, MOZ, HBO1 y MOF.
Un primer aspecto de la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
en la que:
R1, R2, R3y R4se seleccionan independientemente entre:
(i) H;
(ii) alquilo C<1-3>, opcionalmente sustituido con:
hidroxi,
alcoxi C<1-2>,
NH2,
fenilo,
heteroarilo C<5-6>,
alquilcarbamoílo C<1-4>, o
acilamido;
(iii) alcoxi C<1-3>, opcionalmente sustituido con cicloalquilo C<3-6>o con uno o más grupos flúor;
(iv) cicloalquilo C<3-6>;
(v) halo;
(vi) CORC, donde RCse selecciona entre NRN1RN2, donde RN1y RN2se seleccionan independientemente entre H y metilo;
(vii) ciano, NH<2>o NO<2>; y
(viii) fenilo o heteroarilo C<5-6>, opcionalmente sustituido con metilo, hidroxi o metoxi;
Ar es un fenilo opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre:
(i) alquilo C<1-4>, opcionalmente sustituido con hidroxi, alcoxi C<1-2>, NH<2>, alquilcarbamoílo C<1-4>, o con uno o más grupos flúor;
(ii) cicloalquilo C<3-6>;
(iii) hidroxi; ciano; NRN3RN4, donde RN3y RN4se seleccionan independientemente entre H y metilo; o acilamido;
(iv) halo;
(v) alcoxi C<1-3>, opcionalmente sustituido con hidroxi, C(O)NH<2>, cicloalquilo C<3-6>, fenilo, heteroarilo C<5-6>, o con uno o más grupos flúor;
(vi) fenoxi, opcionalmente sustituido con flúor;
(vii) fenilo o heteroarilo C<5-6>; o
(viii) SF<5>o SO2CH3;
y en el que al menos uno de R1, R2, R3y R4no es H.
Un primer aspecto también proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I),o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido, y un excipiente farmacéuticamente aceptable. La presente invención también proporciona un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en un procedimiento de terapia o para uso en el tratamiento del cáncer.
Como se describe a continuación, el compuesto como se ha definido en el primer aspecto puede administrarse simultánea o secuencialmente con radioterapia y/o quimioterapia en el tratamiento del cáncer.
Definiciones
A menos que se especifique de otro modo, el término "sustituido", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo principal que porta uno o más sustituyentes. El término "sustituyente" se usa en el presente documento en el sentido convencional y se refiere a un resto químico que está unido covalentemente a, o si fuera adecuado, fusionado a, un grupo principal. La expresión "opcionalmente sustituido", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo principal que puede estar no sustituido o que puede estar sustituido.
heteroarilo C<5-12>: La expresión "heteroarilo C<5-12>", como se usa en el presente documento, se refiere a un resto monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de una estructura aromática que tiene de 5 a 12 átomos en el anillo, de los que de 1 a 3 son heteroátomos en el anillo. La expresión "estructura aromática" se usa para indicar un anillo individual o sistema de anillos condensados que tiene propiedades aromáticas, y la expresión "heteroátomo en el anillo" se refiere a un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre.
En este contexto, los prefijos (por ejemplo, C<5-12>, C<5-6>, etc.) indican el número de átomos que componen la estructura aromática, o un intervalo del número de átomos que componen la estructura aromática, ya sean átomos de carbono o heteroátomos.
Los ejemplos de estructuras heteroarilo C<5-12>incluyen, pero sin limitación, los procedentes de:
N<1>: pirrol (azol) (C<5>), piridina (azina) (C6); piridona (C6); indol (C<9>); quinolina (C<10>);
O<1>: furano (oxol) (C<5>);
S<1>: tiofeno (tiol) (C<5>);
N<1>O<1>: oxazol (C<5>), isoxazol (C<5>), isoxazina (C6);
N<2>O<1>: oxadiazol (furazano) (C<5>);
N<1>S<1>: tiazol (C<5>), isotiazol (C<5>);
N<2>S<1>: tiadiazol (C<5>)
N<2>: imidazol (1,3-diazol) (C<5>), pirazol (1,2-diazol) (C<5>), piridazina (1,2-diazina) (C6), pirimidina (1,3-diazina) (C6) (por ejemplo, citosina, timina, uracilo), pirazina (1,4-diazina) (C6); benzoimidazol (C<9>)
N<3>: triazol (C<5>), triazina (C6).
Halo: El término "halo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo seleccionado entre flúor, cloro, bromo y yodo.
Ciano: El término "ciano", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo -C=N.
Hidroxi: el término "hidroxilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo -OH.
Fenilo: el término "fenilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un resto monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de una estructura de un solo anillo aromático que tiene 6 átomos de carbono en el anillo (-C<6>H<5>).
Fenoxi: el término "fenoxi", como se usa en el presente documento, se refiere a un resto monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno del átomo de oxígeno de fenol (-O-C<6>H<5>).
Alquilo C<1-4>: El término "alquilo C<1-4>", como se usa en el presente documento, se refiere a un resto monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono de un compuesto de hidrocarburo saturado que tiene de 1 a 4 átomos de carbono.
Los ejemplos de grupos alquilo saturados incluyen, pero sin limitación, metilo (C<1>), etilo (C<2>), propilo (C<3>) y butilo (C<4>). Los ejemplos de grupos alquilo lineales saturados incluyen, pero sin limitación, metilo (C<1>), etilo (C<2>), n-propilo (C<3>) y n-butilo (C<4>).
Los ejemplos de grupos alquilo ramificados saturados incluyen /so-propilo (C<3>), /so-butilo (C<4>), sec-butilo (C<4>) yterebutilo(C<4>)
Cicloalquilo C<3>-<6>: La expresión "cicloalquilo C<3>-<6>", como se usa en el presente documento, se refiere a un resto monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono de un compuesto de hidrocarburo cíclico saturado que tiene de 3 a 6 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos cicloalquilo C<3-6>incluyen, pero sin limitación, ciclopropilo (C<3>), ciclobutilo (C<4>), ciclopentilo (C<5>) y ciclohexilo (C6).
alcoxi C<1>-<4>: La expresión "alcoxi C<1>-<4>", como se usa en el presente documento, se refiere a un resto monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo de oxígeno de un compuesto de alcohol saturado que tiene de 1 a 4 átomos de carbono. Puede representarse como -O-alquilo C<1>-<4>. Los ejemplos de grupos alcoxi C<1-4>incluyen, pero sin limitación, metoxi (C<1>), etoxi (C<2>), propiloxi (C<3>) y butiloxi (C<4>).
Alquilcarbamoílo C<1>.<4>: -NHC(=O)OR en donde R es un grupo alquilo C<1-4>como se ha definido anteriormente. Los ejemplos de alquilcarbamoílo C<1-4>incluyen, pero sin limitación, -N(H)C(=O)OCH<3>, -N(H)C(=O)OCH<2>CH<3>y -N(H)C(=O)OC(CH3)3.
Acilamido: -NR(C=O)R' en donde R y R' se seleccionan independientemente entre H y alquilo C<1-4>como se ha definido anteriormente. R y R' también pueden ser -(CH<2>V , donde n es 3 o 4. Los ejemplos de un grupo acilamido incluyen, pero sin limitación, -N(H)C(=O)CF<3>, N(H)C(=O)Me, y:
alquil C<1-4>éster: La expresión "alquil C<1.4>éster", como se usa en el presente documento, se refiere a un resto monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo de oxígeno de un compuesto de ácido carboxílico saturado que tiene de 1 a 5 átomos de carbono. Puede representarse como -O-C(O)-alquilo C<1-4>. Los ejemplos de grupos alquil C<1-4>éster incluyen, pero sin limitación, acetoxi (-O-C(O)-CH<3>), propanoiloxi (-O-C(O)-CH<2>CH<3>), butanoiloxi (-O-C(O)-CH<2>CH<2>CH<3>) y pentanoiloxi (-O-C(O)-CH<2>CH<2>CH<2>CH<3>).
Otras formas incluidas
A menos que se especifique de otro modo, se incluyen en lo anterior las formas iónica, sal, y solvato bien conocidas de estos sustituyentes. Por ejemplo, una referencia al ácido carboxílico (-COOH) también incluye la forma aniónica (carboxilato) (-COO'), una sal o un solvato de la misma. Análogamente, una referencia a un grupo amino incluye la forma protonada (-N+HR1R2), o una sal o un solvato del grupo amino, por ejemplo, una sal de clorhidrato. Análogamente, una referencia a un grupo hidroxilo también incluye la forma aniónica (-O‘), o una sal o un solvato de la misma.
Sales
Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manipular una sal correspondiente del compuesto activo, por ejemplo, una sal farmacéuticamente aceptable. Se tratan ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables enBerge 1977.
Por ejemplo, si el compuesto es aniónico o tiene un grupo funcional que puede ser aniónico (p. ej., -COOH puede ser -COO’), entonces puede formarse una sal con un catión adecuado. Los ejemplos de cationes inorgánicos adecuados incluyen, pero sin limitación, iones de metal alcalino, tales como Na+ y K+, cationes alcalinotérreos tales como Ca2+ y Mg2+ y otros cationes tales como Al+3. Los ejemplos de cationes orgánicos adecuados incluyen, pero sin limitación, ion amonio (es decir NH<4>+) e iones de amonio sustituidos (p. ej., NH<3>R+, NH<2>R<2>+, NHR<3>+, NR<4>+). Ejemplos de algunos iones amonio sustituido adecuados son aquellos derivados de: etilamina, dietilamina, diciclohexilamina, trietilamina, butilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, bencilamina, fenilbencilamina, colina, meglumina y trometamina, así como aminoácidos, tales como lisina y arginina. Un ejemplo de un ion amonio cuaternario común es N(CH3)4+.
Si el compuesto es catiónico o tiene un grupo funcional que puede ser catiónico (por ejemplo, -NH<2>puede ser -NH<3>+), entonces puede formarse una sal con un anión adecuado. Ejemplos de aniones inorgánicos adecuados incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de los ácidos inorgánicos siguientes: clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, sulfúrico, sulfuroso, nítrico, nitroso, fosfórico y fosforoso.
Los ejemplos de aniones orgánicos adecuados incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de los ácidos orgánicos siguientes: 2-acetioxibenzoico, acético, ascórbico, aspártico, benzoico, alcanforsulfónico, cinámico, cítrico, edético, etanodisulfónico, etanosulfónico, fumárico, gluqueptónico, glucónico, glutámico, glicólico, hidroximaleico, hidroxinaftalencarboxílico, isetiónico, láctico, lactobiónico, láurico, maleico, mélico, metanosulfónico, múcico, oleico, oxálico, palmítico, pamoico, pantoténico, fenilacético, fenilsulfónico, propiónico, pirúvico, salicílico, esteárico, succínico, sulfanílico, tartárico, toluenosulfónico, ácido trifluoroacético y valérico. Los ejemplos de aniones orgánicos poliméricos adecuados incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de los ácidos poliméricos siguientes: ácido tánico, carboximetilcelulosa.
Solvatos
Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manejar un solvato correspondiente del compuesto activo. El término "solvato", se usa en el presente documento en el sentido convencional para referirse a un complejo de soluto (por ejemplo, compuesto activo, sal de compuesto activo) y disolvente. Si el disolvente es agua, el solvato se puede definir oportunamente como un hidrato, por ejemplo, un mono-hidrato, un di-hidrato, un tri-hidrato, etc.
Isómeros
Ciertos compuestos de la invención pueden existir en una o más formas geométricas, ópticas, enantioméricas, diastereoméricas, epiméricas, atrópicas, estereoisoméricas, tautoméricas, conformacionales o anoméricas particulares, incluyendo, pero sin limitación, formas cis y trans; formas E y Z; formas c, t y r; formas endo y exo; formas R, S y meso; formas D y L; formas d y l; formas (+) y (-); formas ceto, enol y enolato; formas sin y anti; formas sinclinal y anticlinal; formas a y p; formas axiales y ecuatoriales; formas barco, silla, torsión, sobre, y media silla; y combinaciones de los mismos, en lo sucesivo en el presente documento denominadas de forma colectiva como "isómeros" (o "formas isoméricas").
El término "quiral" se refiere a moléculas que tienen la propiedad de no superponerse a la compañera de imagen especular, mientras que el término "aquiral" se refiere a moléculas que se superponen a su compañera de imagen especular.
El término "estereoisómeros" se refiere a compuestos que tienen idéntica constitución química, pero se diferencian con respecto a la disposición de los átomos o grupos en el espacio.
"Diastereómero" se refiere a un estereoisómero con dos o más centros de quiralidad y cuyas moléculas no son imágenes especulares entre sí. Los diastereómeros tienen propiedades físicas diferentes, por ejemplo, puntos de fusión, puntos de ebullición, propiedades espectrales y reactividades. Las mezclas de diastereómeros pueden separarse mediante procedimientos analíticos de alta resolución, tales como electroforesis y cromatografía.
"Enantiómeros" se refiere a dos estereoisómeros de un compuesto que no son imágenes especulares superponibles entre sí.
Las convenciones y definiciones estereoquímicas usadas en el presente documento siguen generalmente a S. P. Parker, Ed.,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984) McGraw-Hill Book Company, Nueva York; y Eliel, E. y Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Son, Inc., Nueva York, 1994. Los compuestos de la invención pueden contener centros asimétricos o quirales y por lo tanto existen en diferentes formas esteroisoméricas. Se pretende que todas las formas esteroisoméricas de los compuestos de la invención, incluyendo, pero sin limitación, diastereómeros, enantiómeros y atropisómeros, así como mezclas de los mismos, tales como mezclas racémicas, formen parte de la presente invención. Muchos de los compuestos orgánicos existen en formas ópticamente activas, es decir, tienen la capacidad de rotar el plano de luz polarizada. En la descripción de un compuesto ópticamente activo, los prefijos D y L oRy S, se usan para indicar la configuración absoluta de la molécula en torno a su centro o centros quirales. Los prefijos d y l o (+) y (-) se emplean para designar el sentido de rotación del plano de luz polarizada por el compuesto, significando (-) o l que el compuesto es levógiro. Un compuesto con el prefijo (+) o d es dextrógiro. Para una estructura química dada, estos estereoisómeros son idénticos salvo por que son imágenes especulares entre sí. Un estereoisómero específico puede denominarse también enantiómero y una mezcla de dichos isómeros se denomina a menudo una mezcla enantiomérica. Una mezcla 50:50 de enantiómeros se denomina mezcla racémica o racemato, que puede aparecer cuando no ha habido estereoselección ni estereoespecificidad en un proceso o reacción química. Los términos "mezcla racémica" y "racemato" se refieren a una mezcla equimolar de dos especies enantioméricas, desprovista de actividad óptica.
En la presente invención, el átomo de carbono al que R1 y Cy están unidos puede ser un centro estereoquímico, es decir, cuando R1 no es H y R1 y Cy son diferentes. Los compuestos de la presente invención pueden ser una mezcla racémica, o pueden estar en un exceso enantiomérico o ser sustancial y enantioméricamente puros.
Cabe destacar que, excepto como se analiza a continuación para formas tautómeras, específicamente excluidas del término "isómeros", como se usa en el presente documento, están los isómeros estructurales (o constitucionales) (es decir, isómeros que difieren en las conexiones entre átomos en lugar de simplemente por la posición de los átomos en el espacio). Por ejemplo, una referencia a un grupo metoxi, -OCH<3>, no debe interpretarse como una referencia a su isómero estructural, un grupo hidroximetilo, -CH<2>OH. Análogamente, una referencia al orto-clorofenilo no debe interpretarse como una referencia a su isómero estructural, el metaclorofenilo. Sin embargo, una referencia a una clase de estructuras bien puede incluir formas estructuralmente isoméricas que pertenecen a esa clase (por ejemplo, alquilo C<1-7>incluye n-propilo e iso-propilo; butilo incluye n-, iso-, sec-, y terc-butilo; metoxifenilo incluye orto-, meta- y para-metoxifenilo).
La exclusión anterior no se refiere a formas tautoméricas, por ejemplo, formas ceto, enol y enolato, como en, por ejemplo, los siguientes pares tautoméricos: ceto/enol (ilustrado a continuación), imina/enamina, amida/imino alcohol, amidina/amidina, nitroso/oxima, tiocetona/enotiol, N-nitroso/hiroxiazo y nitro/aci-nitro.
ceto enol enolato
El término "tautómero" o "forma tautomérica" se refiere a isómeros estructurales de energías diferentes que son interconvertibles mediante una barrera de baja energía. Por ejemplo, los tautómeros de protón (también conocidos como tautómeros prototrópicos) incluyen interconversiones mediante migración de un protón, tal como isomerizaciones ceto-enol e imina-enamina. Los tautómeros de valencia incluyen interconversiones mediante la reorganización de algunos de los electrones de enlace.
Cabe destacar que en el término "isómero" están incluidos de forma específica los compuestos con una o más sustituciones isotópicas. Por ejemplo, H puede estar en cualquier forma isotópica, incluyendo 1H, 2H (D) y 3H (T); C puede estar en cualquier forma isotópica, incluyendo 12C, 13C y 14C; O puede estar en cualquier forma isotópica, incluyendo 16O y 18O; y similares.
Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como, pero sin limitación 2H (deuterio, D), 3H (tritio), 11C, 13C,
14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl y 125I. Diversos compuestos marcados con isótopos de ejemplo aquellos en los que se incorporan isótopos radiactivos tales como 3H, 13C y 14C. Dichos compuestos marcados isotópicamente pueden ser útiles en estudios metabólicos, estudios de cinética de reacción, técnicas de detección o formación de imágenes, tales como tomografía por emisión de positrones (PET) o tomografía computarizada por emisión de fotón único (SPECT), incluyendo ensayos de distribución en tejido de sustrato o fármaco o en el tratamiento radiactivo de pacientes. Los compuestos terapéuticos marcados con deuterio o sustituidos de la invención pueden tener propiedades DMPK (de metabolismo del fármaco y farmacocinéticas) mejoradas, con respecto a distribución, metabolismo y excreción (ADME). La sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio pueden proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo semividain vivoaumentada o requerimientos de dosificación reducidos. Un compuesto marcado por 18F puede ser útil para estudios de PET o SPECT. Los compuestos marcados isotópicamente de esta invención y sus profármacos generalmente pueden prepararse llevando a cabo los procedimientos desvelados en los esquemas o en los ejemplos y preparaciones descritos a continuación sustituyendo un reactivo no marcado isotópicamente por un reactivo marcado isotópicamente fácilmente disponible. Además, la sustitución con isótopos más pesados, particularmente deuterio (es decir, 2H o D) puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo semividain vivoaumentada o requerimientos de dosificación reducidos o una mejora en el índice terapéutico.
Se entiende que el deuterio en este contexto se considera un sustituyente. La concentración de dicho isótopo más pesado, específicamente deuterio, puede definirse mediante un factor de enriquecimiento isotópico. En los compuestos de esta invención cualquier átomo no designado específicamente como un isótopo particular está destinado a representar cualquier isótopo estable de ese átomo.
A menos que se especifique de otro modo, una referencia a un compuesto particular incluye todas las formas isoméricas, incluyendo (total o parcialmente) mezclas racémicas y otras mezclas de las mismas.
Los procedimientos de preparación (p. ej., síntesis asimétrica) y separación (p. ej., cristalización fraccionada y medios cromatográficos) de dichas formas isoméricas se conocen en la técnica o se obtienen fácilmente adaptando los procedimientos enseñados en el presente documento o procedimientos conocidos, de una manera conocida.
Inhibición
Los compuestos de la presente invención inhiben la actividad de una o más KAT de la familia MYST, es decir, TIP60, KAT6B, MOZ, HBO1 y MOF.
Es probable que la actividad inhibidora de los compuestos de la invención varíe entre las KAT de la familia MYST.
Los compuestos de la presente invención pueden inhibir selectivamente la actividad de una o más KAT de la familia MYST sobre otras KAT de la familia MYST, es decir, la actividad inhibidora del compuesto puede ser mayor para una o más de las KAT de la familia MYST que para una o más de las otras KAT de la familia MYST.
Los compuestos de la presente invención pueden inhibir (selectivamente) la actividad de una sola KAT de la familia MYST. Por lo tanto, los compuestos de la presente invención pueden inhibir la actividad de TIP60, MORF, MOZ, HBO1 o MOF.
Los compuestos de la presente invención pueden inhibir la actividad de dos KAT de la familia MYST, por ejemplo MOZ y MORF.
Los compuestos de la presente invención pueden inhibir la actividad de tres KAT de la familia MYST, por ejemplo MOZ, MORF y HBO1.
Los compuestos de la presente invención pueden inhibir la actividad de cuatro KAT de la familia MYST, por ejemplo MOZ, MORF, HBO1 y TIP60.
Los compuestos de la presente invención pueden inhibir la actividad de las cinco KAT de la familia MYST, por lo tanto los compuestos pueden inhibir la actividad de TIP60, MORF, MOZ, HBO1 y MOF.
Los compuestos de la presente invención pueden, en particular, inhibir la actividad de MOZ y/o KAT6B y/o HBO1 y/o TIP60.
indicaciones terapéuticas
Los compuestos divulgados en el presente documento pueden proporcionar un beneficio terapéutico en diversos trastornos, en particular, en el tratamiento o prevención de cánceres.
Cáncer
Se considera que los inhibidores de acetilación de lisina postraduccional mediada por KAT de la familia MYST son agentes antineoplásicos prometedores y por lo tanto pueden ser agentes terapéuticos útiles, por ejemplo para su uso en el tratamiento del cáncer. Dichos agentes también pueden ser útiles como agentes terapéuticos para el tratamiento de cánceres que muestran sobreexpresión de proteínas MYST.
Un "cáncer" puede ser cualquier forma de cáncer. En particular, un cáncer puede comprender uno cualquiera o más de los siguientes: leucemia, leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia linfocítica crónica (LLC), leucemia mieloide crónica (LMC), linfoma no Hodgkin, enfermedad de Hodgkin, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, melanoma, cáncer de mama, cáncer de colon y rectal, cáncer de colon, carcinoma de células escamosas y cáncer gástrico.
Como alternativa, el cáncer puede comprender cáncer adrenocortical, cáncer de ano, cáncer de vejiga, cáncer de sangre, cáncer de hueso, tumor cerebral, cáncer del sistema genital femenino, cáncer del sistema genital masculino, linfoma del sistema nervioso central, cáncer de cuello uterino, rabdomiosarcoma de la infancia, sarcoma de la infancia, cáncer de endometrio, sarcoma endometrial, cáncer de esófago, cáncer ocular, cáncer de vesícula biliar, cáncer del tubo gastrointestinal, leucemia de células pilosas, cáncer de cabeza y cuello, cáncer hepatocelular, cáncer hipofaríngeo, sarcoma de Kaposi, cáncer de riñón, cáncer de laringe, cáncer de hígado, histiocitoma fibroso maligno, timoma maligno, mesotelioma, mieloma múltiple, mieloma, cáncer de la cavidad nasal y del seno paranasal, cáncer nasofaríngeo, cáncer del sistema nervioso, neuroblastoma, cáncer de la cavidad oral, cáncer orofaríngeo, osteosarcoma, cáncer ovárico, cáncer de páncreas, cáncer paratiroideo, cáncer de pene, cáncer faríngeo, tumor de la pituitaria, neoplasia de células plasmáticas, linfoma primario del SNC, cáncer rectal, sistema respiratorio, retinoblastoma, cáncer de las glándulas salivales, cáncer de piel, cáncer del intestino delgado, sarcoma de tejidos blandos, cáncer de estómago, cáncer de estómago, cáncer de testículo, cáncer de tiroides, cáncer del sistema urinario, sarcoma uterino, cáncer de vagina, sistema vascular, macroglobulinemia de Waldenstrom y/o tumor de Wilms.
Los cánceres pueden ser de un tipo particular. Los ejemplos de tipos de cáncer incluyen linfoma, melanoma, carcinoma (por ejemplo, adenocarcinoma, carcinoma hepatocelular, carcinoma medular, carcinoma papilar, carcinoma de células escamosas), astrocitoma, glioma, meduloblastoma, mieloma, meningioma, neuroblastoma, sarcoma (por ejemplo, angiosarcoma, condrosarcoma, osteosarcoma).
El cáncer puede ser un cáncer que sobreexpresa MYST. El cáncer puede sobreexpresar la proteína MYST en relación con tejido no canceroso. En algunos casos, el cáncer produce exceso de ARNm de MYST en relación con tejido no canceroso. La proteína MYST sobreexpresada o ARNm de MYST puede ser una KAT cualquiera de la familia MYST, es decir una cualquiera de TIP60, KAT6B, MOZ, HBO1 y<m>O<f>. En algunas realizaciones, el cáncer puede sobreexpresar más de una KAT de la familia MYST, por ejemplo dos o más seleccionadas del grupo que consiste en TIP60, KAT6B, MOZ, HBO1 y MOF. El cáncer puede ser un cáncer que evita el reconocimiento inmunitario, por ejemplo mediante linfocitos Treg asociados a tumor.
Como alternativa o adicionalmente, el cáncer puede ser un cáncer que sobreexpresa bromodominio: La célula cancerosa puede sobreexpresar una o más proteínas que contienen bromodominio (denominadas en el presente documento "proteínas de bromodominio") en relación con tejido no canceroso. Puede sobreproducir uno o más ARNm de bromodominio en comparación tejido no canceroso. En algunos casos, la cantidad de proteína y/o ARNm de bromodominio en la célula está a un nivel aproximadamente equivalente al de una célula no cancerosa. El cáncer puede sobreexpresar una o más proteínas de bromodominio seleccionadas del grupo que consiste en; una proteína de bromodominio (a saber, BRD2, BRD3, BRD4, BRD7, BRD8, BRD9 y BRDT), TAF1/TAF1L, TFIID, SMARC2 (también denominada BRM) y SMARC4 (también denominada BRG1). Por ejemplo, algunos cánceres de colon sobreexpresan BRD8. Algunas células de leucemia mieloide aguda sobreexpresan BRD4.
Células Treg como una diana de cáncer
Las células Treg son células inmunosupresoras, que actúan para prevenir la autoinmunidad en el sistema inmunitario de mamífero sano. Sin embargo, algunos cánceres actúan para regular positivamente la actividad de Treg para evitar el sistema inmunitario del hospedador. La infiltración de Treg en muchos tipos tumorales se correlaciona con malos pronósticos del paciente y el agotamiento de linfocitos Treg en modelos tumorales demuestra respuestas inmunitarias antitumorales aumentadas(Melero 2015).Se ha señalado supresión de Treg asociada a tumor del sistema inmunitario del hospedador en los cánceres de pulmón(Joshi 2015), (Tso 2012),mama(Gobert 2009; Yan 2011),próstata(Miller 2006)y pancreático(Wang X 2016).Se considera que FOXP3 es el regulador maestro de la diferenciación de Treg, desarrollo y función de linfocitos Treg.
Varios estudios han demostrado que la acetilación de FOXP3 desempeña un papel crítico en la estabilidad de la proteína FOXP3 y en la regulación de su capacidad para acceder al ADN; y la acetilación de FOXP3 está mediada por KAT(Dhuban 2017).Se ha mostrado que reducciones en la acetilación de FOXP3 mediada por TIP60 atenúa el desarrollo de Treg, lo que sugiere un mecanismo adicional por el que podría usarse la inhibición de la actividad de acetilación de proteínas MYST para intervenir en enfermedades tales como el cáncer.
Terapias de combinación
Los agentes descritos en el presente documento pueden ser útiles en combinación con otras terapias antineoplásicas. Pueden actuar de forma sinérgica con quimio o radioterapia y/o con terapias dirigidas, incluyendo, pero sin limitación, inhibidores de FGFR1 y terapias que se dirigen a receptores de hormonas nucleares. Por ejemplo, los agentes descritos en el presente documento pueden ser útiles en combinación con fármacos dirigidos a bromodominios incluyendo inhibidores de BET. Los inhibidores de BET se unen de forma reversible a los bromodominios de las proteínas BET BRD2, BRD3, BRD4 y BRDT.
La inhibición de proteínas KAT de la familia MYST, para reducir el alcance de la acetilación de lisina de histonas (y otras proteínas nucleares descritas en el presente documento), probablemente sensibilice a las células tumorales a quimio y radioterapia atenuando el proceso de reparación de daño de ADN, por ejemplo la reparación de roturas de doble cadena (DSB) de ADN, aumentando de este modo la frecuencia de muerte celular inducida por quimio y radioterapia. Por lo tanto, es probable que la inhibición de proteínas KAT de la familia MYST actúe bien de forma sinérgica con quimio o radioterapia de dosis baja.
Por lo tanto, en algunos casos, un antagonista de proteína MYST desvelado en el presente documento puede administrarse junto con un régimen radioterapéutico o quimioterapéutico. Puede administrarse simultánea o secuencialmente con radio y/o quimioterapia. El experto en la materia apreciará fácilmente agentes quimioterapéuticos y protocolos de radioterapia adecuados. En particular, el compuesto descrito en el presente documento puede combinarse con quimio o radioterapia de dosis baja. El experto en la materia apreciará fácilmente dosificaciones adecuadas para quimio o radioterapia de "dosis baja".
En particular, cuando los compuestos de la presente solicitud se usan para anular la supresión de Treg, estos pueden combinarse con inhibidores de puntos de control inmunitarios(Melero 2015, Wang L 2016).Adicionalmente, cuando los compuestos de la presente invención que anulan la supresión de Treg pueden usarse en combinación con radioterapia, para reducir el agotamiento de la función de Treg en tumores (Persa 2015, Jeong 2016)
Procedimientos de tratamiento
Los compuestos de la presente invención pueden usarse en un procedimiento de terapia. También se proporciona un compuesto para uso en un procedimiento de tratamiento, que comprende administrar a un sujeto que necesite tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención.El término "cantidad terapéuticamente eficaz" es una cantidad suficiente para mostrar un beneficio a un paciente. Dicho beneficio puede ser al menos la mejora de al menos un síntoma. La cantidad real administrada, y la velocidad y el ciclo de tiempo de administración, dependerán de la naturaleza y la gravedad de lo que se está tratando. La prescripción del tratamiento, por ejemplo, las decisiones sobre la dosificación, es de la responsabilidad de los facultativos generales y otros médicos.
Tal como se ha descrito anteriormente, el tratamiento antineoplásico definido en el presente documento puede aplicarse como una única terapia o puede implicar, además del compuesto de la invención, cirugía convencional o radioterapia o quimioterapia. Dicha quimioterapia puede incluir una o más de las siguientes categorías de agentes antitumorales:
(i) otros fármacos antiproliferativos/antineoplásicos y combinaciones de los mismos, como se usa en oncología médica, tales como agentes alquilantes (por ejemplo, cisplatino, oxaliplatino, carboplatino, ciclofosfamida, mostaza de nitrógeno, melfalán, clorambucilo, busulfán, temozolamida y nitrosoureas); antimetabolitos (por ejemplo, gemcitabina y antifolatos tales como fluoropirimidinas como 5 fluorouracilo y tegafur, raltitrexed, metotrexato, arabinósido de citosina e hidroxiurea); antibióticos antitumorales (por ejemplo, antraciclinas como adriamicina, bleomicina, doxorrubicina, daunomicina, epirrubicina, idarrubicina, mitomicina-C, dactinomicina y mitramicina); agentes antimitóticos (por ejemplo, alcaloides de la vinca como vincristina, vinblastina, vindesina y vinorelbina y taxoides como taxol y docetaxel (Taxotere) e inhibidores de poloquinasa); e inhibidores de topoisomerasa (por ejemplo, epipodofilotoxinas como etopósido y tenipósido, amsacrina, topotecán y camptotecina);
(ii) agentes citostáticos tales como antiestrógenos (por ejemplo tamoxifeno, fulvestrant, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno y yodoxifeno), antiandrógenos (por ejemplo, bicalutamida, flutamida, nilutamida y acetato de ciproterona), antagonistas de LHRH o agonistas de LHRH (por ejemplo, goserelina, leuprorelina y buserelina), progestágenos (por ejemplo, acetato de megestrol), inhibidores de la aromatasa (por ejemplo, como anastrozol, letrozol, letrozol, vorazol y exemestano) e inhibidores de 5*-reductasa, tal como finasterida;
(iii) agentes antiinvasivos (por ejemplo inhibidores de la familia de c-Src quinasa como 4-(6-cloro-2,3-metilenodioxianilino)-7-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoxi]-5-tetrahidropiran-4-iloxiquinazolina (AZD0530; Solicitud de Patente Internacional WO 01/94341), N-(2-cloro-6-metilfenil)-2-{6-[4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il]-2-metilpirimidin-4-ilamino}tiazol-5-carboxamida (dasatinib, b Ms -354825; J. Med. Chem., 2004, 47, 6658-6661 y 4-((2,4-dicloro-5-metoxifenil)amino)-6-metoxi-7-(3-(4-metilpiperazin-1-il)propoxi)quinolin-3-carbonitrilo (bosutinib, SKI-606; Cancer research (2003), 63(2), 375-81), e inhibidores de metaloproteinasa como marimastat, inhibidores de la función del receptor del activador del plasminógeno de urocinasa o anticuerpos contra heparanasa);
(iv) inhibidores de la función del factor de crecimiento: por ejemplo, dichos inhibidores incluyen anticuerpos del factor de crecimiento y anticuerpos del receptor del factor de crecimiento (por ejemplo, el anticuerpo anti erbB2 trastuzumab [HerceptinT], el anticuerpo anti-EGFR panitumumab, el anticuerpo anti erbB1 cetuximab [Erbitux, C225] y cualquier factor de crecimiento o anticuerpos de receptores de factores de crecimiento desvelados porStern 2005;dichos inhibidores también incluyen inhibidores de la tirosina cinasa, por ejemplo inhibidores de la familia del factor de crecimiento epidémico (por ejemplo inhibidores de tirosina quinasa de la familia EGFR tales como N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-metoxi-6-(3-morfolinopropoxi)quinazolin-4-amina (gefitinib, ZD1839), N-(3-etinilfenil)-6,7-bis(2-metoxietoxi)quinazolin-4-amina (erlotinib, OSI 774) y 6-acrilamido-N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-(3-morfolinopropoxi)-quinazolin-4-amina (CI 1033), inhibidores de tirosina quinasa erbB2 tales como lapatinib, inhibidores de la familia del factor de crecimiento de hepatocitos, inhibidores de la familia del factor de crecimiento derivado de las plaquetas tales como imatinib, inhibidores de serina/treonina cinasas (por ejemplo, inhibidores de señalización de Ras/Raf, tales como inhibidores de farnesil transferasa, por ejemplo, sorafenib (<b>A<y>43-9006)), inhibidores de la señalización celular a través de MEK y/o cinasas AKT, inhibidores de la familia del factor de crecimiento de hepatocitos, inhibidores de c-kit, inhibidores de cinasa abl, inhibidores de cinasa del receptor de IGF (factor de crecimiento de tipo insulina); inhibidores de la aurora cinasa (por ejemplo, AZD1152, PH739358, VX-680, MLN8054, R763, MP235, MP529, VX-528 y AX39459) e inhibidores de la cinasa dependientes de ciclina, tales como inhibidores de CDK2 y/o CDK4;
(v) agentes antiangiogénicos y antilinfangiogénicos tales como los que inhiben los efectos del factor de crecimiento endotelial vascular, [por ejemplo el anticuerpo antifactor de crecimiento de células endoteliales vasculares A (VEGFA) bevacizumab (AvastinT), el anticuerpo antifactor de crecimiento de células endoteliales vasculares A (VEGFA) ranibizumab, el aptámero anti-VEGF pegaptanib, el anticuerpo antirreceptor de factor de crecimiento de células endoteliales vasculares 3 (VEGFR3) IMC-3C5, el anticuerpo antifactor de crecimiento de células endoteliales vasculares C (VEGFC) VGX-100, el anticuerpo antifactor de crecimiento de células endoteliales vasculares D (VEGFD) VGX-200, la forma soluble del receptor de factor de crecimiento de células endoteliales vasculares 3 (VEGFR3) VGX-300 e inhibidores de la tirosina quinasa receptora de VEGF tales como 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metoxi-7-(1-metilpiperidin-4-ilmetoxi)quinazolina (vandetanib; ZD6474; Ejemplo 2 en el documento WO 01/32651), 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxi-7-(3-pirrolidin-1-ilpropoxi)quinazolina (cediranib; AZD2171; Ejemplo 240 en el documento WO 00/47212), vatalanib (PTK787; documento WO 98/35985), pazopanib (GW786034), axitinib (AG013736), sorafenib y sunitinib (SU11248; documento WO 01/60814), compuestos tales como los descritos en las solicitudes de patente internacional WO97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 y WO 98/13354 y compuestos que funcionan mediante otros mecanismos (por ejemplo, linomida, inhibidores de la función de Integrina avb3 y angiostatina)];
(vi) agentes de daño vascular tales como Combretastatina A4 y compuestos desvelados en las solicitudes de patente internacional WO 99/02166, WO 00/40529, WO 00/41669, WO 01/92224, WO 02/04434 y WO 02/08213;
(vii) terapias antisentido, por ejemplo, las que se dirigen a las dianas enumeradas anteriormente, tal como ISIS 2503, un antisentido anti-ras;
(viii) enfoques de terapia génica, incluyendo, por ejemplo, enfoques para reemplazar genes aberrantes tales como p53 aberrante o BRCA1 o BRCA2 aberrantes, enfoques GDEPT (terapia de profármaco de enzimas dirigida al gen) tales como los que utilizan citosina desaminasa, timidina quinasa o una enzima nitrorreductasa bacteriana y enfoques para aumentar la tolerancia del paciente a la quimioterapia o radioterapia, tal como la terapia génica de resistencia a múltiples fármacos; y
(ix) enfoques de inmunoterapia, incluyendo, por ejemplo, enfoquesex vivoein vivopara aumentar la inmunogenicidad de células tumorales del paciente, tales como la transfección con citoquinas tales como interleucina 2, interleucina 4 o factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos, las estrategias para disminuir la anergia de los linfocitos T, las estrategias que utilizan células inmunitarias transfectadas, tales como células dendríticas transfectadas con citocinas, las estrategias que utilizan líneas celulares tumorales transfectadas con citocinas y las estrategias que utilizan anticuerpos antidiotípicos.
Administración
El compuesto activo o la composición farmacéutica que comprende el compuesto activo puede administrarse a un sujeto por cualquier vía conveniente de administración, ya sea sistémicamente/periféricamente o en el lugar de la acción deseada, incluyendo, pero sin limitación, oral (por ejemplo, por ingestión); tópica (incluyendo, por ejemplo, transdérmico, intranasal, ocular, bucal y sublingual); pulmonar (por ejemplo, mediante terapia de inhalación o insuflación usando, por ejemplo, un aerosol, por ejemplo, a través de la boca o la nariz); rectal; vaginal; parenteral, por ejemplo, mediante inyección, incluyendo vía subcutánea, intradérmica, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intracardíaca, intratecal, intraespinal, intracapsular, subcapsular, intraorbital, intraperitoneal, intratraqueal, subcuticular, intraarticular, subaracnoidea, intravítrea e intraesternal; por implante de un depósito, por ejemplo, subcutánea, intravítrea o intramuscular. El sujeto puede ser un eucariota, un animal, un animal vertebrado, un mamífero, un roedor (por ejemplo, una cobaya, un hámster, una rata, un ratón), murino (por ejemplo, un ratón), canino (por ejemplo, un perro), felino (por ejemplo, un gato), equino (por ejemplo, un caballo), un primate, simio (por ejemplo, un mono o simio), un mono (por ejemplo, tití, babuino), un simio (por ejemplo, gorila, chimpancé, orangután, gibón) o un ser humano.
Formulaciones
Aunque es posible que el compuesto activo se administre solo, es preferible presentarlo como una composición farmacéutica (por ejemplo, una formulación) que comprende al menos un compuesto activo, tal como se ha definido anteriormente, junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, adyuvantes, excipientes, diluyentes, cargas, tampones, estabilizadores, conservantes, lubricantes u otros materiales bien conocidos por los expertos en la técnica y, opcionalmente, otros agentes terapéuticos o profilácticos.
Por lo tanto, la presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas, como se ha definido anteriormente, y procedimientos para elaborar una composición farmacéutica que comprende mezclar al menos un compuesto activo, tal como se ha definido anteriormente, junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, excipientes, tampones, adyuvantes, estabilizantes u otros materiales, como se describe en el presente documento.
El término "farmacéuticamente aceptable", como se usa en el presente documento, se refiere a compuestos, materiales, composiciones y/o formas farmacéuticas que, dentro del alcance del buen criterio médico, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de un sujeto (por ejemplo, un ser humano) sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, acordes con una relación beneficio/riesgo razonable. Cada vehículo, excipiente, etc. también debe ser «aceptable» en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación.
Los vehículos, excipientes, etc. adecuados se pueden encontrar en textos farmacéuticos convencionales, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a edición, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990.
Las formulaciones pueden estar presentes convenientemente en forma de dosis unitaria y se pueden preparar mediante cualquier procedimiento bien conocido en la técnica de farmacia. Dichos procedimientos incluyen la etapa de poner en asociación el principio activo con un vehículo que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan asociando de forma uniforme e íntima el compuesto activo a vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos o ambos, y después, si es necesario, moldeando el producto.
Las formulaciones pueden estar en forma de líquidos, soluciones, suspensiones, emulsiones, elixires, jarabes, comprimidos, pastillas, gránulos, polvos, cápsulas, sellos, píldoras, ampollas, supositorios, pesarios, pomadas, geles, pastas, cremas, pulverizaciones, brumas, espumas, lociones, aceites, bolos, electuarios o aerosoles.
Las formulaciones adecuadas para administración oral (por ejemplo, por ingestión) pueden presentarse como unidades discretas tales como cápsulas, sellos o comprimidos, conteniendo cada uno una cantidad predeterminada del compuesto activo; como polvo o gránulos; como una solución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión líquida de agua en aceite; como un bolo; como un electuario; o como una pasta.
Un comprimido puede fabricarse por medios convencionales, por ejemplo, compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Los comprimidos de compresión pueden prepararse prensando en una máquina adecuada el compuesto activo en forma fluida como polvo o gránulos, opcionalmente mezclados con uno o más aglutinantes (por ejemplo, povidona, gelatina, goma arábiga, sorbitol, tragacanto, hidroxipropilmetilcelulosa); cargas o diluyentes (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina, fosfato de hidrógeno y calcio); lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco, sílice); desintegrantes (por ejemplo, glicolato de almidón sódico, povidona reticulada, carboximetilcelulosa sódica reticulada); agentes de superficie activa o dispersantes o humectantes (por ejemplo, lauril sulfato de sodio); y conservantes (por ejemplo, p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, ácido sórbico). Los comprimidos creados por moldeo pueden prepararse moldeando en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte. Los comprimidos opcionalmente pueden recubrirse o ranurarse y pueden formularse para proporcionar una liberación lenta o controlada del compuesto activo de los mismos usando, por ejemplo, hidroxipropilmetil celulosa en proporciones variables para proporcionar el perfil de liberación deseado. Los comprimidos pueden proporcionarse opcionalmente con un recubrimiento entérico, para proporcionar liberación en partes del intestino distintas del estómago.
Las formulaciones adecuadas para administración tópica (por ejemplo, transdérmica, intranasal, ocular, bucal y sublingual) pueden formularse como un ungüento, crema, suspensión, loción, polvo, la solución, pasta, gel, pulverización, aerosol, o aceite. Como alternativa, una formulación puede comprender un parche o un apósito tal como un vendaje o emplasto adhesivo impregnado con compuestos activos y opcionalmente uno o más excipientes o diluyentes.
Las formulaciones adecuadas para la administración tópica en la boca incluyen los lentes que comprenden el compuesto activo en una base con sabor, normalmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto; pastillas que comprenden el compuesto activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arábiga; y enjuagues bucales que comprenden el compuesto activo en un vehículo líquido adecuado.
Las formulaciones adecuadas para administración tópica al ojo también incluyen gotas oculares, en las que el compuesto activo se disuelve o suspende en un vehículo adecuado, en especial un disolvente acuoso para el compuesto activo.
Las formulaciones adecuadas para la administración nasal, en las que el vehículo es un sólido, incluyen un polvo grueso que tiene un tamaño de partícula, por ejemplo, en el intervalo de aproximadamente 20 a aproximadamente 500 micrómetros que se toma de la manera en que se administra el rapé, es decir mediante inhalación rápida a través de la fosa nasal desde un recipiente del polvo sujeto cerca de la nariz. Las formulaciones adecuadas en donde el vehículo es un líquido para administración como, por ejemplo, aerosol nasal, gotas nasales, o mediante la administración de aerosol por nebulizador, incluyen soluciones acuosas o aceitosas del compuesto activo.
Las formulaciones adecuadas para administración por inhalación incluyen aquellas presentadas como una pulverización en aerosol de un paquete presurizado, con el uso de un propulsor adecuado, tal como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, dicloro-tetrafluoroetano, dióxido de carbono u otros gases adecuados.
Las formulaciones adecuadas para la administración tópica a través de la piel incluyen ungüentos, cremas y emulsiones. Cuando se formula en una pomada, el compuesto activo puede emplearse opcionalmente con una base de pomada parafínica o miscible en agua. Como alternativa, los compuestos activos pueden formularse en una crema con una base de crema de aceite en agua. Si se desea, la fase acuosa de la base de crema puede incluir, por ejemplo, al menos aproximadamente el 30 % p/p de un alcohol polihídrico, es decir, un alcohol que tiene dos o más grupos hidroxilo tal como propilenglicol, butano-1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol y polietilenglicol, y mezclas de los mismos. Las formulaciones tópicas pueden incluir, a ser posible, un compuesto que potencie la absorción o la penetración del compuesto activo a través de la piel u otras zonas afectadas. Los ejemplos de dichos potenciadores de la penetración dérmica incluyen dimetilsulfóxido y análogos relacionados.
Cuando se formula como una emulsión tópica, la fase oleosa puede comprender opcionalmente simplemente un emulsionante (también conocido como un agente emulsionante), o puede comprender una mezcla de al menos un emulsionante con una grasa o un aceite o con una grasa y un aceite. Preferentemente, se incluye un emulsionante hidrófilo junto con un emulsionante lipófilo que actúa como estabilizante. También se prefiere incluir tanto un aceite como una grasa. Conjuntamente, el emulsionante (o emulsionantes) con o sin el estabilizador (o estabilizadores) constituyen la denominada cera emulsionante y la cera junto con el aceite y/o la grasa constituyen la denominada base de pomada emulsionante que forma la fase oleosa dispersa de las formulaciones de crema.
Los emulgentes y estabilizantes de emulsión adecuados incluyen Tween 60, Span 80, alcohol cetoestearílico, alcohol miristílico, monoestearato de glicerilo y laurilsulfato de sodio. La elección de los aceites o grasas adecuados para la formulación es a base de lograr las propiedades cosméticas deseadas, ya que la solubilidad del compuesto activo en la mayoría de los aceites que probablemente se usarán en formulaciones de emulsión farmacéutica puede ser muy baja. Por lo tanto, la crema debería ser preferiblemente un producto no graso, que no manche y lavable, con la consistencia adecuada para evitar la filtración desde tubos u otros contenedores. Pueden usarse ésteres de alquilo de cadena lineal o ramificada, mono o dibásicos como di-isoadipato, estearato de isocetilo, propilenglicol diéster de ácidos grasos de coco, miristato de isopropilo, oleato de decilo, palmitato de isopropilo, estearato de butilo, palmitato de 2-etilhexilo o una mezcla de ésteres de cadena ramificada conocida como Crodamol CAP, siendo los tres últimos los ésteres preferentes. Estos pueden usarse solos o en combinación, dependiendo de las propiedades requeridas.
Como alternativa, pueden usarse lípidos de elevado punto de fusión tales como parafina blanca blanda y/o parafina líquida, u otros aceites minerales.
Las formulaciones adecuadas para administración rectal pueden presentarse como un supositorio con una base adecuada que comprende, por ejemplo, manteca de cacao o un salicilato.
Las formulaciones adecuadas para administración vaginal se pueden presentar como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones en aerosol que contienen además del compuesto activo, los vehículos que se conocen en la técnica como apropiados.
Las formulaciones adecuadas para administración parenteral (p. ej., por inyección), incluyendo cutánea, subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica), incluyen soluciones de inyección isotónicas, sin pirógenos, estériles acuosa y no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, conservantes, estabilizadores, bacteriostáticos y solutos que hagan que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor previsto; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes, y liposomas u otros sistemas de micropartículas que están diseñados para dirigir el compuesto a componentes sanguíneos o uno o más órganos. Ejemplos de vehículos isotónicos adecuados para su uso en dichas formulaciones incluyen inyección de cloruro de sodio, solución de Ringer o inyección de Ringer lactato. Normalmente, la concentración del compuesto activo en la solución es de aproximadamente 1 ng/ml a aproximadamente 10 pg/ml, por ejemplo de aproximadamente 10 pg/ml a aproximadamente 1 pg/ml. Las formulaciones se pueden presentar en recipientes sellados de dosis unitaria o multidosis, por ejemplo, ampollas y viales, y se pueden almacenar en un estado deshidratado por congelación (liofilizado) que requiere solo la adición del vehículo líquido estéril, por ejemplo, agua para inyecciones, inmediatamente antes de su uso. Se pueden preparar soluciones y suspensiones para inyección extemporáneas a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles. Las formulaciones pueden estar en forma de liposomas u otros sistemas microparticulados que están diseñados para dirigir el compuesto activo a los componentes de la sangre o a uno o más órganos.
Dosificaciones
Un experto en la materia apreciará que las dosificaciones adecuadas del compuesto, y composiciones que comprenden el compuesto, pueden variar de paciente a paciente. La determinación de la dosificación óptima implicará en general equilibrar el nivel de beneficio terapéutico frente a cualquier riesgo o efectos secundarios deletéreos. El nivel de dosificación seleccionado dependerá de diversos factores que incluyen, pero sin limitación, la actividad del compuesto especial, la vía de administración, el tiempo de administración, la velocidad de excreción del compuesto, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales usados en combinación, la gravedad de la afección y la especie, el sexo, edad, el peso, la afección, la salud en general y el historial médico previo del paciente. La cantidad de compuesto y la vía de administración será en última instancia a discreción del médico, veterinario o facultativo, aunque en general la dosificación se seleccionará para conseguir concentraciones locales en el sitio de acción que consiguen el efecto deseado sin provocar efectos secundarios perjudiciales o deletéreos sustanciales.
Puede efectuarse administración en una dosis, de forma continua o intermitente (por ejemplo, en dosis divididas a intervalos apropiados) a lo largo del ciclo de tratamiento. Los procedimientos para determinar los medios y dosificaciones de administración más eficaces son bien conocidos para los expertos en la técnica y variarán con la formulación usada para la terapia, la finalidad de la terapia, las(s) célula(s) diana que se tratan y el sujeto que se trata. Pueden llevarse a cabo administraciones individuales o múltiples con el nivel de dosis y patrón seleccionado por el médico, veterinario o facultativo a cargo.
En general, una dosis adecuada del compuesto activo está en el intervalo de aproximadamente 100 pg a aproximadamente 25 mg (más habitualmente de aproximadamente 1 pg a aproximadamente 10 mg) por kilogramo de peso corporal del sujeto por día. Cuando el compuesto activo es una sal, un éster, una amida, un profármaco o similares, la cantidad administrada se calcula sobre la base del compuesto precursor y, por lo tanto, el peso real a usar se aumenta proporcionalmente.
En una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano según el siguiente régimen de dosificación: aproximadamente 100 mg, 3 veces al día.
En una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano según el siguiente régimen de dosificación: aproximadamente 150 mg, 2 veces al día.
En una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano según el siguiente régimen de dosificación: aproximadamente 200 mg, 2 veces al día.
Sin embargo, en una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano según el siguiente régimen de dosificación: aproximadamente 50 o aproximadamente 75 mg, 3 o 4 veces al día.
En una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano según el siguiente régimen de dosificación: aproximadamente 100 o aproximadamente 125 mg, 2 veces al día.
Tratamiento
El término "tratamiento", cuando se usan en el contexto del tratamiento de una afección, se refiere generalmente al tratamiento y terapia, bien de un ser humano o bien de un animal (por ejemplo, aplicaciones veterinarias), en el que se consigue algún efecto terapéutico deseado, por ejemplo, la inhibición del progreso de la afección, e incluye una reducción en la velocidad de progreso, un alto en la velocidad de progreso, regresión de la afección, la mejora de la afección y la cura de la afección. También se incluye el tratamiento como una medida profiláctica (es decir, profilaxis, prevención).
La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz", como se usa en el presente documento, se refiere a la cantidad de un compuesto activo, o un material, composición o dosificación que comprende un compuesto activo, que es eficaz para producir algún efecto terapéutico deseado, acorde con una relación de beneficio/riesgo razonable, cuando se administra de acuerdo con un régimen de tratamiento deseado.
Análogamente, la expresión "cantidad profilácticamente eficaz", como se usa en el presente documento, se refiere a la cantidad de un compuesto activo, o un material, composición o dosificación que comprende un compuesto activo, que es eficaz para producir algún efecto profiláctico deseado, acorde con una relación de beneficio/riesgo razonable, cuando se administra de acuerdo con un régimen de tratamiento deseado.
El sujeto/paciente
El sujeto/paciente puede ser un animal, mamífero, un mamífero placentario, un marsupial (por ejemplo, canguro, vombat), un monotrema (por ejemplo, ornitorrinco), un roedor (por ejemplo, una cobaya, un hámster, una rata, un ratón), murino (por ejemplo, un ratón), un lagomorfo (por ejemplo, un conejo), ave (por ejemplo, un pájaro), canino (por ejemplo, un perro), felino (por ejemplo, un gato), equino (por ejemplo, un caballo), porcino (por ejemplo, un cerdo), ovino (por ejemplo, una oveja), bovino (por ejemplo, una vaca), un primate, simio (por ejemplo, un mono o simio superior), un mono (por ejemplo, tití, babuino), un simio superior (por ejemplo, gorila, chimpancé, orangután, gibón) o un ser humano.
Adicionalmente, el sujeto/paciente puede ser cualquiera de sus formas de desarrollo, por ejemplo, un feto. En una realización preferida, el sujeto/paciente es un ser humano.
Procedimientos de síntesis general
Los compuestos de la invención pueden prepararse empleando los siguientes procedimientos generales y usando procedimientos descritos en detalles en los ejemplos. Las condiciones de reacción a las que se hace referencia son ilustrativas y no imitantes, por ejemplo, un experto en la materia puede usar amplio intervalo de procedimientos de síntesis para sintetizar los compuestos deseados tales como, pero sin limitación, procedimientos descritos en la bibliografía (por ejemplo, pero sin limitación, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 7a Edición o Larock's Comprehensive Organic Transformations: Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations).
Los compuestos de fórmula (l), como se han descrito anteriormente, pueden prepararse mediante estrategias de síntesis que se resumen a continuación, en donde se aplican las definiciones anteriores.
Síntesis General 1
El Esquema 1A ilustra la formación de un enlace de sulfonamida para formar compuestos con la estructuraIpor acoplamiento de un compuesto de cloruro de sulfonilo pertinente de estructuraG2con una amina primaria o secundaria tal como la benzoisoxazol aminaG3.
Esquema 1A
Los procedimientos para formar dichas sulfonamidas serán evidentes para los expertos en la materia, pero incluyen, por ejemplo, el uso de una base adecuada tal como, pero sin limitación, piridina, LiHMDS, n-BuLi o NaH y el uso de formas activadas del ácido sulfónico tal como el haluro de sulfonilo correspondiente. La formación de cloruros de sulfonilo de estructuraG2a partir de los ácidos correspondientes de estructuraG1puede realizarse, por ejemplo, con el uso de cloruro de tionilo o cloruro cianúrico.
Como alternativa, la forma activada de un ácido sulfónico tal como, pero sin limitación, un éster de sulfonato de pentafluorofenilo o éster de sulfonato de triclorofenilo con la estructuraG5puede acoplarse con la amina primaria o secundaria pertinente, tal como la benzoisoxazol aminaG3(Esquema 1B).
Esquema 1B
La formación del éster de sulfonato enG5a partir del cloruro de sulfonilo correspondienteG2y el fenol pertinente (R5 puede ser, por ejemplo, pentafluorofenilo o triclorofenilo) puede realizarse usando una base adecuada tal como, pero sin limitación, piridina o trietilamina. Los procedimientos para formar las sulfonamidas deIserán evidentes para los expertos en la materia, pero incluyen, por ejemplo, el uso de una base adecuada tal como, pero sin limitación, LiHMDS.
Síntesis General 2
El Esquema 2A ilustra la formación de un cloruro de sulfonilo tal comoG2, como un sustituyente que es parte de Ar.
Ar. 9
A r -H N ,
/s=o
Cl
G6 G2
Esquema 2A
Esto puede realizarse haciendo reaccionar un compuesto de arilo pertinente con la estructuraG6con, por ejemplo, pero sin limitación, ácido clorosulfónico. Como alternativa, el compuesto de ariloG6puede tratarse secuencialmente con una base, tal como, pero sin limitación, n-BuLi, y óxido de azufre para formar el arilsulfinato de litio que se oxida adicionalmente, por ejemplo, con cloruro de sulfurilo para dar el cloruro de sulfonilo deseado enG2. El productoG2puede aislarse por procedimientos conocidos por los expertos en la materia, o puede formarsein situy usarse inmediatamente en la siguiente etapa.
Además, el cloruro de sulfonilo deG2puede formarse a partir de un aril tiol en la estructuraG8que se ilustra en el Esquema 2B.
A r-X Ar-SH
G7 G8 G2
Esquema 2B
Los procedimientos para formarG2incluyen, por ejemplo, el uso de un oxidante adecuado tal como, pero sin limitación, peróxido de hidrógeno y nitrato potásico en presencia de una fuente de cloruro tal como, pero sin limitación, clorotrimetilsilano o cloruro de tionilo. Un tiol de estructuraG8puede sintetizarse a partir de un compuesto de estructuraG7donde (X) puede ser un halógeno por procedimientos conocidos por los expertos en la materia, incluyendo, pero sin limitación, desplazamiento nucleófilo en presencia o ausencia de un metal de transición.
Como alternativa, la sulfonación de un compuesto de arilo tal comoG6puede dar el ácido sulfónico correspondiente de estructuraG1. Esto puede realizarse con cualquier reactivo adecuado conocido por los expertos en la materia, por ejemplo trióxido de azufre o ácido sulfúrico.
A r-H<Ar\ />s<?>=o<0>AArr\ /O/.
HOCl
G6 G1 G2
Esquema 2C
El ácido sulfónicoG1puede convertirse en el cloruro de sulfoniloG2por los procedimientos resumidos en la Síntesis General 1, Esquema 1A.
Síntesis General 3
El Esquema 3A ilustra la formación de una benzoisoxazol amina tal comoG3a partir de un aril nitrilo con un sustituyente orto X, tal como de estructuraG9. El grupo (X) puede ser, pero sin limitación, un halógeno tal como un grupo cloro o un grupo y se elige para que sea adecuado para la reacción empleada.
Esquema 3A
Por ejemplo, el material de partidaG9puede hacerse reaccionar con una oxima tal como, pero sin limitación, acetona oxima o, por ejemplo, con ácido acetohidroxámico, en presencia de una base adecuada tal como, pero sin limitación, terc-butóxido potásico, para formar la benzoisoxazol aminaG3.
Síntesis General 4
G10 G11
Esquema 4A
El Esquema 4A ilustra la adición de un grupo R7 a un compuesto de estructuraG10(donde R6 representa H o un grupo protector adecuado incluyendo, pero sin limitación, 2,4-dimetoxibencilo (DMB); procedimientos para la eliminación de dichos grupos protectores serán bien conocidos por los expertos en la materia (por ejemplo,Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 4a Edición)),como un sustituyente que es parte de Ar. Esto puede realizarse usando cualquier reacción de acoplamiento adecuada conocida por la persona experta en la materia, por ejemplo acoplamiento de Suzuki. Los grupos R7B1 y X se eligen para que sean adecuados para la reacción de acoplamiento empleada. Por ejemplo, en el caso de una reacción de acoplamiento de Suzuki, (X) puede ser un halógeno, triflato u otro grupo adecuado y B1 representa un compuesto de boro adecuado incluyendo, pero sin limitación, un ácido borónico o éster boronato.
Los ejemplos de B1 que pueden usarse en el acoplamiento de Suzuki incluyen, pero sin limitación, los que se muestran a continuación.
Los tipos de compuestos R7B1 que pueden usarse en la reacción de Suzuki incluyen, pero sin limitación, los que se muestran a continuación.
Adicionalmente al esquema 4A, la posición de (X) y (B1) puede invertirse como se muestra a continuación en el esquema 4B, para dar el mismo compuesto finalG11. De forma análoga al Esquema 2A, los grupos indicados por R7X y B1 se eligen para que sean adecuados para la reacción de acoplamiento empleada. Por ejemplo, en el caso de una reacción de acoplamiento de Suzuki, (X) puede ser un halógeno, triflato u otro grupo adecuado y B1 representa un compuesto de boro adecuado incluyendo, pero sin limitación, un ácido borónico o éster boronato.
Esquema 4B
Puede usarse diversas reacciones de acoplamiento, distintas del acoplamiento de Suzuki, para introducir el grupo R7, tales como, por ejemplo reacciones de acoplamiento catalizadas con metales de transición o, por ejemplo, compuestos de estaño (reacción de tipo Stille) y de cinc (reacción de tipo Negishi). Además, puede usarse un acoplamiento de tipo Chan-Lam cuando el grupo (X) es, por ejemplo, pero sin limitación, un fenol (O-H) o una amina primaria o secundaria (R'R''N-H).
Las transiciones descritas en el Esquema 4A y 4B también pueden realizarse con un sustituyente R1, R2, R3 o R4 en el resto benzoisoxazol en la estructuraG13, representada por el Esquema 4C a continuación.
R 1 o R 2 o R 3 o R 4 = X o B -t R 1 o R 2 o R 3 o R 4 = _RI
G13 G14
Esquema 4C
Además, el sustituyente R7 puede introducirse antes de la formación de la sulfonamida y el benzoisoxazol en el precursor de nitriloG9(cuando R1 o R2 o R3 o R4 = X o B1) en la Síntesis General 3, Esquema 3D.
Síntesis General 5
El Esquema 5A ilustra la adición de un nitrógeno ligado a un grupo R8, como un sustituyente que es parte de Ar o en el resto benzoisoxazol para dar un compuesto de estructuraG16. Esto puede realizarse usando cualquier reacción de acoplamiento adecuada conocida por la persona experta en la materia, por ejemplo, por desplazamiento de SnAr o acoplamiento de Buchwald. El grupo indicado por (X) puede ser, pero sin limitación, un halógeno y se elige para que sea adecuado para la reacción de acoplamiento empleada.
<R 1 o R 2 o R 3 o R 4 o R 9 = X>R 1 o R 2 o R 3 o R 4 o R 9 = NHR-8
G15 G16
Esquema 5A
Como alternativa, para sintetizar compuestos ligados a éter, puede emplearse una estrategia similar como se muestra en el Esquema 5B. Esto puede realizarse usando cualquier reacción de acoplamiento adecuada conocida por una persona experta en la materia, por ejemplo, por un acoplamiento de SnAr o de tipo Ullman para dar compuestos con estructuraG17.
R 1 o R 2 o R 3 o R 4 o R 9 = X R 1 o R 2 o R 3 o R 4 o R 9 = OR-8
G15 G17
Esquema 5B
Los dos acoplamientos anteriores también pueden invertirse, de tal forma que el grupo añadido sea R8-X.
Además, el sustituyente OR8 o NHR8 puede introducirse antes de la formación de la sulfonamida y el benzoisoxazol en el precursor de nitriloG9(cuando R1 o R2 o R3 o R4 = X) en la Síntesis General 3, Esquema 3D.
Síntesis General 6
R 1 o R 2 o R 3 o R 4 o R 9 R 1 o R 2 o R 3 o R 4 o R 9 = CO 2R 12 R 12 = Alk o H = CONR 10R 11
G18 G19
Esquema 6A
El Esquema 6A ilustra la adición de una amina (HNR10R11) para formar la amida correspondiente, como un sustituyente que es parte de Ar o en el resto benzoisoxazol para dar un compuesto de estructuraG19. Esto puede realizarse por acoplamiento de un ácido carboxílico pertinente con una amina primaria o una amina secundaria NHR10R11. Los procedimientos para formar dichas aminas serán evidentes para los expertos en la materia, pero incluyen, por ejemplo, el uso de reactivos tales como HATU, HBTU, T3P y EDCI/HOBt, y el uso de formas activadas del ácido carboxílico tales como el correspondiente haluro de acilo, anhídrido mixto o éster de W-hidroxisuccinimida. La amidaG19también puede sintetizarse directamente a partir del compuesto de éster (cuando R12 = Alk, tal como, pero sin limitación, metilo o etilo). La formación del ácido carboxílico (cuando R12 = H) a partir del éster correspondiente puede realizarse, por ejemplo, por hidrólisis con una base tal como un hidróxido de metal alcalino o un ácido, por ejemplo, ácido clorhídrico acuoso.
A partir del compuesto de amidaG19, pueden realizarse transformaciones adicionales, tales como, pero sin limitación, reducción de la amida para formar la amina o deshidratación de la amida para formar el nitrilo. Los procedimientos para realizar dicha transformación serán bien conocidos por los expertos en la materia.
Además, puede introducirse una amida CONR10R11 antes de la formación de la sulfonamida y el benzoisoxazol en el precursor de nitriloG9(cuando R1 o R2 o R3 o R4 = CO<2>R12, R12 = Alk o H) en la Síntesis General 3, Esquema 3D.
Síntesis General 7
La conversión de (X) en la estructuraG20en el Esquema 7A en un éster en la estructuraG18(R12 = Alquilo, tal como metilo o etilo) será evidente para los expertos en la materia, pero incluye, por ejemplo, una reacción de carbonilación que puede realizarse mediante el uso de monóxido de carbono en presencia de un catalizador de metal de transición tal como, pero sin limitación, PdC^dppf-DCM; y un disolvente alcohólico, tal como, pero sin limitación, metanol o etanol. La formación del ácido carboxílico en la estructuraG18(R=H) puede realizarse, por ejemplo, por hidrólisis con una base tal como un hidróxido de metal alcalino o un ácido, por ejemplo, ácido clorhídrico acuoso.
= _CO , RJ2 RJ2 = Alk o H = C H .O H
G20 G18 G21
Esquema 7A
El éster o ácidoG18del Esquema 7A puede reducirse para dar el compuesto de hidroxilo tal como de estructuraG21. Los procedimientos para dicha transformación serán conocidos por los expertos en la materia pero incluyen, por ejemplo, el uso de agentes reductores tales como hidruro de litio y aluminio (para el éster y el ácido carboxílico) y borano (para el ácido carboxílico).
A partir del compuesto de hidroxiloG21, pueden realizarse transformaciones adicionales, tales como, pero sin limitación, reacciones de Mitsunobu o de sustitución nucleófila. Los procedimientos para realizar dicha transformación serán bien conocidos por los expertos en la materia.
Además, puede introducirse un grupo éster antes de la formación de la sulfonamida y el benzoisoxazol en el precursor de nitriloG9(cuando R1 o R2 o R3 o R4 = X) en la Síntesis General 3, Esquema 3D.
Síntesis General 8
El Esquema 8A ilustra la reducción de un grupo nitro en la estructuraG22para formar la amina correspondiente en la estructuraG23, como un sustituyente que es parte del Ar o en el resto benzoisoxazol.
G22 G23
Esquema 8A
La reducción del grupo nitro para dar la amina primariaG23será evidente para los expertos en la materia e incluye, pero sin limitación, el uso de condiciones reductoras tales como un metal de transición (Fe, In, Zn) en presencia de HCl, hidrogenación en presencia de un metal de transición o catalizador de metal de transición.
A partir del compuesto de aminaG23, pueden realizarse transformaciones adicionales, tales como, pero sin limitación, formación de enlace amida. Los procedimientos para realizar dicha transformación serán similares a los descritos en la Síntesis General<6>.
Además, puede introducirse un grupo amina antes de la formación de la sulfonamida y el benzoisoxazol en el precursor de nitriloG9(cuando R<1>o R<2>o R<3>o R<4>= NO<2>) en la Síntesis General 3, Esquema 3D.
Síntesis General 9
El Esquema 9A ilustra la introducción de un grupo nitrilo en la estructuraG25, como un sustituyente que es parte del Ar o en el resto benzoisoxazol.
CN
G24 G25
Esquema 9A
El procedimiento para dicha transformación será evidente para los expertos en la materia e incluye, pero sin limitación, desplazamiento de SnAr o un acoplamiento catalizado con metal de transición con un reactivo de cianuro adecuado. El grupo indicado por (X) en la estructuraG24puede ser, pero sin limitación, un halógeno, triflato o mesilato y se elige para que sea adecuado para la reacción empleada.
Otras preferencias
Las siguientes preferencias pueden aplicarse a todos los aspectos de la invención tal como se han descrito anteriormente o pueden referirse a un único aspecto. Las preferencias pueden combinarse juntas en cualquier combinación.
R1, R2, R3 y R4
En algunas realizaciones, al menos uno de R1, R2, R<3>y R<4>puede ser H. En algunas de estas realizaciones, uno de R1, R2, R<3>y R<4>son H. En otras de estas realizaciones, dos de R1, R2, R<3>y R<4>son H. En otras de estas realizaciones, tres de R1, R2, R<3>y R<4>son H.
En algunas realizaciones, al menos uno de R1, R2, R<3>y R<4>no es H.
En algunas realizaciones, al menos uno de R1, R2, R<3>y R<4>puede ser alquilo C<1>-<3>, opcionalmente sustituido con: hidroxi,
alcoxi C<1>-<2>,
NH2,
fenilo,
heteroarilo C<5-6>,
alquilcarbamoílo C<1-4>,
acilamido.
En estas realizaciones, al menos uno de R1, R2, R3 y R4 puede ser alquilo C<1-3>. Además, en estas realizaciones, el grupo alquilo C<1-3>puede ser metilo, etilo o propilo. Estos grupos pueden estar sin sustituir.
Si el grupo alquilo está sustituido, el sustituyente puede seleccionarse entre:
(i) hidroxi; o
(ii) alcoxi C<1-2>sin sustituir, es decir, metoxi, etoxi; o
(iii) NH<2>; o
(iv) fenilo; o
(v) heteroarilo C<5-6>, por ejemplo N-pirazolilo; o
(vi) alquilcarbamoílo C<1-4>, por ejemplo NHC(O)Me; o
(vii) acilamido, por ejemplo NHCO<2>Me.
En algunas realizaciones, al menos uno de R1, R2, R3 y R4 puede ser alcoxi C<1-3>, opcionalmente sustituido con cicloalquilo C<3-6>o con uno o más grupos flúor. En estas realizaciones, el grupo alcoxi C<1-3>puede ser metoxi, etoxi o propiloxi. Estos grupos pueden estar sin sustituir. Estos grupos pueden estar sustituidos con uno o más grupos flúor, y pueden estar perfluorados, por ejemplo OCF<3>, OC<2>F<5>. Estos grupos pueden estar sustituidos con uno, dos, tres, cuatro o cinco grupos flúor. En alguna realización, estos grupos pueden estar sustituidos con uno; uno o dos; o uno, dos o tres grupos flúor. El grupo alcoxi puede estar sustituido con cicloalquilo C<3-6>, por ejemplo ciclopropilo. Por lo tanto, el grupo global puede ser OCH<2>(ciclopropilo).
En algunas realizaciones, al menos uno de R1, R2, R3 y R4 puede ser cicloalquilo C<3-6>. En estas realizaciones, el grupo cicloalquilo C<3-6>puede ser ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo. En particular, el grupo cicloalquilo C<3-6>puede ser ciclopropilo.
En algunas realizaciones, al menos uno de R1, R2, R3 y R4 puede ser halo. En estas realizaciones, el grupo halo puede ser flúor, cloro, bromo o yodo.
En algunas realizaciones, al menos uno de R1, R2, R3 y R4 puede ser CORC, donde RC se selecciona entre NRN1RN2, donde RN1 y RN2 se seleccionan independientemente entre H y metilo. En estas realizaciones, el grupo puede seleccionarse entre C(O)NH<2>, C(O)NHCH<3>y C(O)N(CH<3>)<2>.
En algunas realizaciones, al menos uno de R1, R2, R3 y R4 puede ser ciano, NH<2>, NO<2>. En algunas de estas realizaciones, al menos uno de R1, R2, R3 y R4 puede ser ciano. En otras de estas realizaciones, al menos uno de R1, R2, R3 y R4 puede ser NH<2>. En otras de estas realizaciones, al menos uno de R1, R2, R3 y R4 puede ser NO<2>.
En algunas realizaciones, al menos uno de R1, R2, R3 y R4 puede ser fenilo o heteroarilo C<5-6>, estando estos grupos opcionalmente sustituidos con metilo, hidroxi o metoxi. En algunas de estas realizaciones, al menos uno de R1, R2, R3 y R4 puede ser fenilo. En otras de estas realizaciones, al menos uno de R1, R2, R3 y R4 puede ser heteroarilo C<5-6>, por ejemplo oxazolilo, pirazolilo, triazolilo, piridilo y pirimidinilo. El grupo fenilo o heteroarilo C<5-6>puede estar sin sustituir. En determinadas realizaciones, el grupo fenilo puede estar sustituido con metilo, o metoxi. En determinadas realizaciones, el grupo heteroarilo C<5-6>puede estar sustituido con uno o más grupos metilo, de tal forma que el grupo global es, por ejemplo, dimetilpirazolilo o N-metilpirazolilo.
En algunas realizaciones, R4 es metoxi.
En algunas realizaciones, R4 es metoxi, R2 es CH<2>OCH<3>o CH<2>OCH<2>CH<3>y R1 y R3 son H.
En algunas realizaciones, R4 es metoxi, R2 es fenilo, opcionalmente sustituido con metilo o metoxi, y R1 y R3 son H. En algunas realizaciones, R4 es metoxi, R2 es heteroarilo C<5-6>, opcionalmente sustituido con metilo.
En algunas realizaciones, R4 es metoxi y R1, R2 y R3 son H.
En algunas realizaciones, R4 es cloro, R2 es alquilo C<1-3>o bromo, y R1 y R3 son H.
En algunas realizaciones, R4 es cloro y R1, R2 y R4 son H.
En algunas realizaciones, R3 es alquilo C<1-3>y R1, R2 y R4 son H.
Ar
Ar es fenilo, que puede estar sustituidos o sin sustituir.
En algunas realizaciones, Ar es fenilo.
En algunas realizaciones, un sustituyente para Ar es alquilo C<1-4>, opcionalmente sustituido con hidroxi, alcoxi C<1-2>, NH<2>, alquilcarbamoílo C<1-4>, o con uno o más grupos flúor. En estas realizaciones, el grupo alquilo C<1-4>puede ser metilo, etilo, propilo o butilo. Estos grupos pueden estar sin sustituir. Estos grupos pueden estar sustituidos con uno o más grupos flúor, y pueden estar perfluorados, por ejemplo CF<3>, C<2>F<5>. Si el grupo alquilo está sustituido, el sustituyente puede seleccionarse entre:
(i) hidroxi; o
(ii) alcoxi C<1-2>, es decir, metoxi, etoxi; o
(iii) NH<2>; o
(iv) alquilcarbamoílo C<1-4>, por ejemplo NHC(O)CH<3>.
En algunas realizaciones, un sustituyente para Ar es cicloalquilo C<3-6>. En estas realizaciones, el grupo cicloalquilo C<3>-6 puede ser ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo. En particular, el grupo cicloalquilo C<3-6>puede ser ciclohexilo.
En algunas realizaciones, un sustituyente para Ar es hidroxi; ciano; NRN3RN4, donde RN3 y RN4 se seleccionan independientemente entre H y metilo; o acilamido. En algunas de estas realizaciones, el sustituyente puede ser hidroxi. En otras de estas realizaciones, el sustituyente puede ser ciano. En otras de estas realizaciones, el sustituyente puede ser NRN3RN4, donde RN3 y RN4 se seleccionan independientemente entre H y metilo - por lo tanto el sustituyente puede ser NH<2>, NHCH<3>o N(CH<3>)<2>. En otras de estas realizaciones, el sustituyente puede ser acilamido, tal como NHCO<2>CH<3>.
En algunas realizaciones, un sustituyente para Ar es halo. En estas realizaciones, el grupo halo puede ser flúor, cloro, bromo o yodo.
En algunas realizaciones, un sustituyente para Ar es alcoxi C<1-3>, opcionalmente sustituido con hidroxi, C(O)NH<2>, cicloalquilo C<3-6>, fenilo, heteroarilo C<5-6>, o con uno o más grupos flúor. En estas realizaciones, el grupo alcoxi C<1-3>puede ser metoxi, etoxi o propiloxi. Estos grupos pueden estar sin sustituir. Estos grupos pueden estar sustituidos con uno o más grupos flúor, y pueden estar perfluorados, por ejemplo OCF<3>, OC<2>F<5>. El grupo alcoxi puede estar sustituido con hidroxilo, de tal forma que el grupo global es, por ejemplo, OC<2>H<4>OH. El grupo alcoxi puede estar sustituido con C(O)NH<2>, de tal forma que el grupo global es, por ejemplo, OCH<2>C(O)NH<2>. El grupo alcoxi puede estar sustituido con cicloalquilo C<3-6>, por ejemplo, ciclopropilo, de tal forma que el grupo global puede ser, por ejemplo, OCH<2>(ciclopropilo). El grupo alcoxi puede estar sustituido con fenilo, de tal forma que el grupo global es, por ejemplo, benciloxi. El grupo alcoxi puede estar sustituido con heteroarilo C<5-6>, por ejemplo piridilo, pirazolilo, de tal forma que el grupo global es, por ejemplo, OCH<2>(N-metilpirazolilo) u OCH<2>(metoxipiridilo).
En algunas realizaciones, un sustituyente para Ar es fenoxi, opcionalmente sustituido con flúor. En algunas de estas realizaciones, el sustituyente puede ser fenoxi. En otras de estas realizaciones, el sustituyente puede ser OC<6>H<4>F.
En algunas realizaciones, un sustituyente para Ar es fenilo o heteroarilo C<5-6>. En algunas de estas realizaciones, el sustituyente es fenilo. En otras de estas realizaciones, el sustituyente puede ser heteroarilo C<5-6>, tal como oxazolilo o N-pirazolilo.
En algunas realizaciones, un sustituyente para Ar es SF<5>o SO<2>CH<3>. En algunas de estas realizaciones, el sustituyente es SF<5>. En otras de estas realizaciones, el sustituyente es SO<2>Me.
En algunas realizaciones, Ar es 5-etil-2-metoxifenilo.
En algunas realizaciones, Ar es 5-CF3-2-metoxifenilo.
En algunas realizaciones, Ar es 2,6-dimetoxifenilo.
En algunas realizaciones, R4 es metoxi, R2 se selecciona entre CH<2>O CH<3>, CH<2>O CH<2>CH<3>y fenilo opcionalmente sustituido, y Ar es 2,6-dimetoxibenceno. Estos compuestos pueden mostrar actividad particular contra MOZ y MORF. Los compuestos en los que R2 se selecciona entre CH<2>OCH<3>y CH<2>OCH<2>CH<3>pueden mostrar actividad selectiva contra MOZ y MORF.
Los compuestos de particular interés incluyen los de los ejemplos.
Ejemplos
Acrónimos
Por conveniencia, muchos restos químicos se representan usando abreviaturas ya conocidas, incluyendo, pero sin limitación, metilo (Me), etilo (Et), W-propilo (nPr), isopropilo (iPr), W-butilo (nBu), tere-butilo (tBu), fenilo (Ph), bencilo (Bn), metoxi (MeO), etoxi (EtO), trimetilsililo (TMS) y acetilo (Ac).
Por conveniencia, muchos compuestos químicos se representan usando abreviaturas ya conocidas, incluyendo, pero sin limitación, metanol (MeOH), metanol deuterado (metanol-d4) etanol (EtOH), isopropanol (/-PrOH), acetato de etilo (EtOAc), ácido acético (AcOH), acetonitrilo (MeCN o ACN), diclorometano (cloruro de metileno, DCM), ácido trifluoroacético (TFA), W,W-dimetilformamida (DMF), tetrahidrofurano (THF), dimetilsulfóxido (DMSO), W-metil-2-pirrolidona (NMP), acetona deuterada (acetona-de), cloroformo deuterado (CDCh), dimetilsulfóxido deuterado (DMSO-de), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno (dppf), trietilamina (Et<3>N o TEA), W,W-diisopropiletilamina (DIPEA o DIEA), 1,1'bis(difenilfosfino)ferroceno dicloropaladio (II) (PdCl<2>(dppf)), trans-diclorobis(trifenilfosfina)paladio (II) (PdCl<2>(PPh<3>)<2>), tris(dibencilidenoacetona) dipaladio (0) (Pd<2>(dba)<3>), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (Pd(PPh<3>)<4>), 2,4-dimetoxibencilo (DMB), éter de petróleo (éter de pet.), bis(trimetilsilil)amida de litio (LHMDS o LiHMDS), bis(trimetilsilil)amida potásica (KHMDS), bis(trimetilsilil)amida sódica (NaHMDS),n-butil litio (n-BuLi),N-bromosuccinimida (NBS), N-clorosuccinimida (NCS), p-toluenosulfonato de piridinio (PPTS), azobisisobutironitrilo (AIBN),tetrametiletilendiamina(TMEDA), cloruro de terc-butildimetilsililo (TBSCl), fluoruro de tetra-n-butilamonio (TBAF) y azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD).
Además, TLC se refiere a cromatografía de capa fina.
Otras abreviaturas: tiempo de retención (tr o Tr), minuto(s) (min), hora(s) (h), temperatura ambiente (TA), concentrado (conc.), atmósfera (atm), acuoso (ac.), saturado (sat.), equiv. (equivalente(s)).
Detalles experimentales generales
A menos que se indique otra cosa, se aplican las siguientes generalizaciones. Los espectros de 1H RMN se registraron en un Bruker Ultrashield Plus (400 MHz) o un Bruker AVANCE III (400 MHz). La multiplicidad de una señal se designa por las siguientes abreviaturas: s, singlete; d, doblete; t, triplete; q, cuadruplete; p, quintuplete; dd, doblete de dobletes; dt, doblete de tripletes; tt, triplete de tripletes; a, ancho; m, multiplete. Todas las constantes de acoplamiento observadas,J,se indican en hercios (Hz). No siempre se observan protones intercambiables.
Los datos de LCMS se generaron usando un Agilent 6100 Series Single Quad (LCMS-A), un Agilent 1260 Infinity Series UPLC/MS (LCMS-B), un Agilent 1200 (LCMS-C y LCMS-D), un Waters 2695 alliance (LCMS-E), un Agilent 6120 Single Quad (LCMS-F) o HPLC-MS dirigida a masas. Los isótopos de cloro se indican como 35Cl, Los isótopos de bromo se indican como 79Br o 81Br o ambos 79Br/81Br.
Procedimiento A de LCMS (LCMS-A):
Instrumento: Agilent 6100 Series Single Quad LC/MS
Agilent 1200 Series HPLC
Bomba: Bomba cuaternaria 1200 Series G1311A
Automuestreador: Automuestreador con termostato 1200 Series G1329A
Detector: Detector de longitud de onda variable 1200 Series G1314B
Condiciones de LC:
Análisis por HPLC de fase inversa
Columna: Luna C8 (2) 5 pm 50 x 4,6 mm 100 A
Temperatura de la columna: 30 °C
Volumen de inyección: 5 pl
Disolvente A: Agua-ácido fórmico al 0,1%
Disolvente B: MeCN Ácido Fórmico al 0,1%
Gradiente: disolvente B al 5-100% durante 10 min
Detección: 254 nm o 214 nm
Condiciones de MS:
Fuente de iones: Cuadrupolo
Modo de iones: Multimodo-ES
Temp. de gas de secado: 300 °C
Temperatura de vaporizador: 200 °C
Tensión de capilaridad (V): 2000 (positiva)
Tensión de capilaridad (V): 4000 (negativa)
Intervalo de exploración: 100-1000
Tamaño de etapa: 0,1 s
Tiempo de adquisición: 10 min
Procedimiento B de LCMS (LCMS-B):
Instrumento: Agilent 1260 Infinity Series UPLC/MS
Bomba: Bomba binaria 1260 Infinity G1312B
Automuestreador: 1260 Infinity G1367E 1260 HiP ALS
Detector: 1290 Infinity G4212A 1290 DAD
Condiciones de LC:
Análisis por HPLC de fase inversa
Columna: Poroshell 120 EC-C182,7 pm 50 * 3,0 mm
Temperatura de la columna: 35 °C
Volumen de inyección: 1 pl
Disolvente A: Agua-ácido fórmico al 0,1%
Disolvente B: MeCN Ácido Fórmico al 0,1%
Gradiente: disolvente B al 5-100% durante 3,8 min
Detección: control a 254 nm y 214 nm
Condiciones de MS:
Fuente de iones: Cuadrupolo
Modo de iones: API-ES
Temp. de gas de secado: 350 °C
Tensión de capilaridad (V): 3000 (positiva)
Tensión de capilaridad (V): 3000 (negativa)
Intervalo de exploración: 100-1000
Tamaño de etapa: 0,1 s
Tiempo de adquisición: 5 min
Procedimiento C de LCMS (LCMS-C):
modelo de LC: Agilent 1200
(Tipo de bomba: Bomba Binaria, Tipo de detector: DAD)
Modelo de MS: Agilent G6110A Quadrupole
Condiciones de LC:
Columna: Xbridge-C18, 2,5 pm, 2,1*30 mm
Temperatura de la columna: 30 °C
Adquisición de longitud de onda: 214 nm, 254 nm
Fase móvil: A: solución acuosa al 0,07% de HCOOH, B: MeOH
Condiciones de MS:
MS: Fuente de iones: ES+ (o ES-) Intervalo de MS: 50 - 900 m/z Fragmentador: Flujo de gas de secado 60: 10 l/min Presión del nebulizador: Temperatura del gas de secado 241,32 kPa (35 psi): 350 °C
Vcap: 3,5 kV
Tabla de gradiente:
Preparación de muestras:
La muestra se disolvió en metanol, a una concentración de aproximadamente 0,11 - 1 mg/ ml, después se filtró a través de un filtro de jeringa con 0,22 pm. (Volumen de inyección: 1 - 10 pl)
Procedimiento D de LCMS (LCMS-D):
modelo de LC: Agilent 1200
(Tipo de bomba: Bomba Binaria, Tipo de detector: DAD)
Modelo de MS: Agilent G6110A Quadrupole
Condiciones de LCMS:
LC: Columna: Xbridge-C18, 2,5 pm, 2,1*30 mm
Temperatura de la columna: 30 °C
Adquisición de longitud de onda: 214 nm, 254 nm
Fase móvil: A: solución acuosa al 0,07% de HCOOH, B: MeOH
Condiciones de MS:
MS: Fuente de iones: ES+ (o ES-) Intervalo de MS: 50 - 900 m/z
Fragmentador: Flujo de gas de secado 60: 10 l/min
Presión del nebulizador: Temperatura del gas de secado 241,32 kPa (35 psi): 350 °C
Vcap: 3,5 kV
Tabla de gradiente:
Preparación de muestras:
La muestra se disolvió en metanol, a una concentración de aproximadamente 0,11 - 1 mg/ ml, después se filtró a través de un filtro de jeringa con 0,22 pm. (Volumen de inyección: 1 - 10 pl)
Procedimiento E de LCMS (LCMS-E):
Información del equipo:
modelo de LC: Waters 2695 alliance
(Tipo de bomba: Bomba Cuaternaria, Detector: Detector de Serie de Fotodiodos 2996)
Modelo de MS: Micromass ZQ
Condiciones de LC:
LC: Columna: Xbridge-C18, 3,5 pm, 2,1*50 mm
Temperatura de la columna: 30 °C
Adquisición de longitud de onda: 214 nm, 254 nm
Fase móvil: A: solución acuosa al 0,07% de HCOOH, B: MeOH
Condiciones de MS:
MS: Fuente de iones: ES+ (o ES-) Intervalo de MS: 50 - 900 m/z
Capilaridad: 3 kV Cono: 3 V Extractor: 3 V
Flujo del gas de secado: 600 l/h Cono: 50 l/h
Temperatura de desolvación: 300 °C
Temperatura de fuente: 100 °C
Tabla de gradiente:
Preparación de muestras:
La muestra se disolvió en metanol, a una concentración de aproximadamente 0,11 - 1 mg/ ml, después se filtró a través de un filtro de jeringa con 0,22 pm. (Volumen de inyección: 1 - 10 pl)
Procedimiento F de LCMS (LCMS-F)
Instrumento: Agilent 6120 Series Single Quad LC/MS
Agilent 1200 Series HPLC
Bomba: Bomba cuaternaria 1200 Series G1311A
Automuestreador: Automuestreador con termostato 1200 Series G1329A
Detector: Detector de longitud de onda variable 1200 Series G1314B
Condiciones de LC:
Análisis por HPLC de fase inversa
Columna: Luna C8 (2) 5 pm 50 x 4,6 mm 100 A
Temperatura de la columna: 30 °C
Volumen de inyección: 1 - 10 pl
Disolvente A: Agua-ácido fórmico al 0,1%
Disolvente B: MeCN Ácido Fórmico al 0,1%
Gradiente: disolvente B al 0-95 % durante 10 min
Detección: 254 nm o 214 nm
Condiciones de MS:
Fuente de iones: Cuadrupolo
Modo de iones: Multimodo-ES y APCI
Temp. de gas de secado: 250 °C
Temperatura de vaporizador: 200 °C
Tensión de capilaridad (V): 4000 (positiva)
Tensión de capilaridad (V): 4000 (negativa)
Intervalo de exploración: 100-1000
Tamaño de etapa: 0,1 s
Tiempo de adquisición: 10 min
HPLC preparativa dirigida a masas
Instrumento:
Waters ZQ 3100 -Detector de Masa
Bomba Waters 2545
Organizador de fluidos sistema Waters SFO
Detector de matriz de diodos Waters 2996
Gestor de muestras Waters 2767
Condiciones de LC:
Análisis por HPLC de fase inversa
Columna: XBridge TM C185 pm 19 x 50 mm
Volumen de inyección 500 pl
Disolvente A: Agua-ácido fórmico al 0,1%
Disolvente B: Acetonitrilo-Ácido fórmico al 0,1%
Gradiente: 25-100% de B durante 10 min
Caudal: 19 ml/min
Detección: 100-600 nm
Condiciones de MS:
Fuente de iones: Cuadrupolo individual
Modo de iones: ES positiva
Temp. de fuente: 150 °C
Temp. de desolvación: 350 °C
Detección: Recuento de iones
Capilaridad (KV)-3,00
Cono (V): 30
Extractor (V):3
Lente RF (V): 0,1
Intervalo de exploración: 100-1000 Amu
Tiempo de exploración: 0,5 s
Tiempo de adquisición: 10 min
Flujo de gas
Desolvación l/hora-650
Cono l/hora-100
HPLC preparativa (HPLC prep.):
Tipo de instrumento: Varian 940-LC series;
Tipo de bomba: Bomba Cuaternaria;
Tipo de detector: Detector de Serie de Diodos
Condiciones de HPLC:
Waters Sunfire prep C18 OBD, columna de 5 pm 19 x 100 mm, eluyendo con un gradiente de MeOH en agua con TFA al 0,07% a un caudal de 15 ml/min. Longitud de onda de adquisición 214 nm, 254 nm.
La cromatografía analítica de capa fina se llevó a cabo en gel de sílice F254 60 de Merck, placas con respaldo de aluminio que se visualizaron mediante la inactivación con fluorescencia bajo luz UV o una inmersión básica en KMnO<4>o inmersión en Ninhidrina.
La cromatografía preparativa de capa fina (TLC preparativa o TLC prep.) se realizó usando Tklst (China), gran grado: (HPTLC): 8±2 pm>80%; (TLC): 10-40 pm. Tipo: GF254. Los compuestos se visualizaron por UV (254 nm).
La cromatografía en columna se realizó usando un sistema de purificación Biotage Isolera usando cartuchos de sílice Grace o RediSep® o con Tklst (China), gran grado, mallas de gel de sílice 100-200.
La irradiación de microondas se realizó usando un Reactor de Microondas CEM Explorer SP.
Cuando fue necesario, los disolventes anhidros se adquirieron de Sigma-Aldrich o se secaron usando procedimientos convencionales.
A menos que se indique otra cosa, la acidificación se realizó con una solución acuosa o concentrada de HCl.
Se usaron cartuchos adicionales como se indica a continuación:
Separador de fases:
Fabricante: Biotage
Producto: Separador de fases ISOLUTE ® (3 ml a menos que se indique otra cosa)
Cartuchos de Si-amina:
Fabricante: Biotage
Producto: Isolute ® NH2, 1 g</6>ml
O
Fabricante: Silicycle
Producto: Si-amina de 500 mg o 1 g
Síntesis de intermedios
i) 6-(Metoximetil)-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-amina I4
a) 4-Ciano-5-fluoro-2-metilbenzoato de metilo I1
Una mezcla de 4-bromo-2-fluoro-5-metilbenzonitrilo (3,5 g, 16,4 mmol), Pd(dppf)Cl<2>'DCM<( 668>mg, 0,82 mmol) y Et<3>N (5,0 g, 49,1 mmol) en MeOH (80 ml) se calentó a 100 °C en una atmósfera de CO (0,2 MPa) durante una noche. Se añadió más cantidad de Pd(dppf)Cl<2>'DCM (340 mg, 0,4 mmol) y el calentamiento se continuó en una atmósfera de CO (0,2 MPa) durante una noche. El catalizador se retiró por filtración, se lavó con MeOH y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 20/1 a 10/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (2,4 g, 74%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 2,48 min;m/z216,1 [M+Na]+.
b) 2-Fluoro-4-(hidroximetil)-5-metilbenzonitrilo I2
A una solución de 4-ciano-5-fluoro-2-metilbenzoato de metilo I1 (2,4 g, 12,4 mmol) en THF anhidro (20 ml) a TA en atmósfera de N<2>se le añadió UBH<4>(solución 2,0 M en THF, 12,4 ml, 24,8 mmol) gota a gota y la mezcla se calentó a reflujo durante 2 h. La reacción se interrumpió con agua (80 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (90 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua<( 10 0>ml x<3>) y salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 20/1 a 10/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (1,6 g, 79 %) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 1,43 min;m/z166,1 [M+H]+, 188,1 [M+Na]+.
c) 2-Fluoro-4-(metoximetil)-5-metilbenzonitrilo I3
A una solución de 2-fluoro-4-(hidroximetil)-5-metilbenzonitrilo I2 (800 mg,<8 ,8>mmol) y yodometano (3,4 g, 24,2 mmol) en DMF (12 ml) a 0 °C se le añadió NaH (dispersión al 60% p/p en aceite, 379 mg, 9,7 mmol) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 30 min. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (50 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 20/1 a 10/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (660 mg, 76%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 2,44 min;m/z180,1 [M+H]+, 202,1,1 [M+Na]+.
d) 6-(Metoximetil)-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-amina I4
A una solución de ácido acetohidroxámico (792 mg, 10,6 mmol) en DMF anhidra (20 ml) a 0 °C se le añadióterc-butóxido potásico (1,2 g, 10,6 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 2 h. Después, se añadió 2-fluoro-4-(metoximetil)-5-metilbenzonitrilo I3 (630 mg, 3,5 mmol) y la mezcla se calentó a 60 °C durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (80 ml x<3>). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 20/1 a 10/1) para dar el compuesto del título (1,0 g, 77%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 1,75 min;m/z193,1 [M+H]+.
ii) 4-Metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina I9
a) 4-Bromo-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I5
A una solución de 4-bromo-2,6-difluorobenzonitrilo (6,0 g, 27,5 mmol) en THF (100 ml) se le añadió metanolato sódico (1,5 g, 55,0 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 48 h. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (150 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 300/1 a 200/1) para dar el compuesto del título (4,3 g,<6 8>%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,53 min;m/z251,8/253,8 [M+Na]+.
b) 4-Ciano-3-fluoro-5-metoxibenzoato de metilo I6
Una mezcla de 4-bromo-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I5 (4,3 g, 18,7 mmol), Pd(dppf)ChDCM (768 mg, 0,94 mmol) y Et<3>N (5,7 g, 56,1 mmol) en MeOH (50 ml) se calentó a 100 °C en una atmósfera de CO (0,2 MPa) durante una noche. El catalizador se retiró por filtración, se lavó con MeOH y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc =<200 / 1>a 50/1) para dar el compuesto del título (2,9 g, 74 %) en forma de un sólido de color blanco. L<c>M<s>-D: Tr 2,41 min;m/z210,0 [M+H]+, 232,0 [M+Na]+.
c) 2-Fluoro-4-(hidroximetil)-6-metoxibenzonitrilo I7
A una solución de LiBH<4>(solución 2,0 M en THF, 13,9 ml, 27,8 mmol) en THF anhidro (60 ml) a TA en atmósfera de N<2>se le añadió gota a gota una solución de 4-ciano-3-fluoro-5-metoxibenzoato de metilo I<6>(2,9 g, 13,9 mmol) en THF anhidro (10 ml) y la mezcla se calentó a reflujo durante 1 h. La reacción se interrumpió con HCl ac. 1 M y se extrajo con EtOAc (100 ml x<3>). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (100 ml x<3>) y salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron para dar el compuesto del título (2,5 g, 100%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,31 min;m/z182,1 [M+H]+, 204,1 [M+Na]+.
d) 2-Fluoro-6-metoxi-4-(metoximetil)benzonitrilo I8
A una solución de 2-fluoro-4-(hidroximetil)-6-metoxibenzonitrilo I7 (2,7 g, 14,9 mmol) y yodometano (10,6 g, 74,5 mmol) en DMF (100 ml) a 0 °C se le añadió NaH (dispersión al 60% p/p en aceite, 1,2 g, 29,8 mmol) en pequeñas porciones y la mezcla se agitó a TA durante 30 min. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (100 ml x<3>). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (2,2 g, 76%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 2,22 min;m/z218,0 [M+Na]+.
e) 4-Metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina I9
A una solución de ácido acetohidroxámico (2,3 g, 30,8 mmol) en DMF anhidra (1500 ml) a TA se le añadió terc-butóxido potásico (3,5 g, 30,8 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió 2-fluoro-6-metoxi-4-(metoximetil)benzonitrilo I<8>(2,0 g, 10,3 mmol) y la agitación se continuó a TA durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 20/1 a 10/1 a 3/1) para dar el compuesto del título (580 mg, 27%) en forma de un sólido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6)ó 6,92 (d,J =0,8 Hz, 1H), 6,65 (s, 1H), 5,91 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,32 (s, 3H, oscurecido con pico de agua). LCMS-D: Tr 1,33 min;m/z209,0 [M+H]+.
iii) 4-Nitrobenzo[d]isoxazol-3-amina 110
110
A una solución de 2-fluoro-6-nitrobenzonitrilo (1,0 g, 6,17 mmol) en DMF/H<2>O (32 ml/32 ml) se le añadieron ácido acetohidroxámico (2,78 g, 37,0 mmol) y K<2>CO<3>(10,23 g, 74,0 mmol) y la mezcla se calentó a 70 °C durante 19 h. Se añadió agua (200 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (100 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, y salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 30/1 a 1/1) para dar el compuesto del título (380 mg, 35%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 2,82 min;m/z<18 0 ,1>[M+H]+.
iv) 4-Metoxi-6-(1-metoxietil)benzo[tf]isoxazol-3-amina I15
a) 4-(1-Etoxivinil)-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I11
A una solución de 4-bromo-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I5 (2,0 g, 8,7 mmol) en THF (40 ml) se le añadieron tributil(1-etoxivinil)estanano (3,4 g, 9,6 mmol), Pd(PPh<3)4>(201 mg, 0,174 mmol) y LiCl (1,15 g, 27,0 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo en atmósfera de N<2>durante 48 h. La mezcla se diluyó con EtOAc y se lavó consecutivamente con agua, una solución acuosa al 5% de hidróxido de amonio y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 200/1) para dar el compuesto del título (1,6 g, 84%) en forma de un sólido de color amarillo claro. LCMS-C: Tr 2,41 min;m/z222,0 [M+H]+.
b) 4-Acetil-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I12
A una solución de 4-(1-etoxivinil)-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I11 (1,0 g, 4,5 mmol) en THF (10 ml) se añadió HCl ac.
2 M (6,0 ml) y la mezcla se agitó a TA durante 3 h. La mezcla se diluyó con éter dietílico y se lavó con una solución acuosa saturada de NaHCO<3>y agua. La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (710 mg, 81%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 1,42 min;m/z194,0 [M+H]+.
c) 2-Fluoro-4-(1-hidroxietil)-6-metoxibenzonitrílo I13
A una solución de 4-acetil-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I12 (700 mg, 3,6 mmol) en THF (30 ml) se le añadió borohidruro sódico (206 mg, 5,4 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (30 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SÜ<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (675 mg, 95%) en forma de un aceite incoloro. LCMS-C: Tr 0,98 min;m/z196,0 [M+H]+.
d) 2-Fluoro-6-metoxi-4-(1-metoxietil)benzonitrilo I14
A una solución de 2-fluoro-4-(1-hidroxietil)-6-metoxibenzonitrilo I13 (670 mg, 3,4 mmol) y yodometano (1,5 g, 10,3 mmol) en DMF (20 ml) a 0 °C se le añadió NaH (dispersión al 60% p/p en aceite, 274 mg, 6,8 mmol) en pequeñas porciones y la mezcla se agitó a 0 °C durante 2 h. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (40 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (650 mg, 90%) en forma de un sólido de color amarillo claro. LCMS-C: Tr 1,95 min;m/z210,0 [M+H]+.
e) 4-Metoxi-6-(1-metoxietil)benzo[d]isoxazol-3-amina I15
A una solución de ácido acetohidroxámico (698 mg, 9,3 mmol) en DMF anhidra (20 ml) a 0 °C se le añadióterc-butóxido potásico (1,04 g, 9,3 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió gota a gota una solución de 2-fluoro-6-metoxi-4-(1-metoxietil)benzonitrilo I14 (650 mg, 3,1 mmol) en DMF anhidra (10 ml) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (50 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 300/1 a 200/1) para dar el compuesto del título (130 mg, 19%) en forma de un sólido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 6,90 (s, 1H), 6,64 (s, 1H), 5,92 (s, 2H), 4,39 (c,J =6,4 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,15 (s, 3H), 1,36 (d,J =6,4 Hz, 3H). LCMS-C: Tr 0,73 min;m/z223,0 [M+H]+.
v) 4-Metoxi-6-fenilbenzo[tf]isoxazol-3-amina I17
a) 3-Fluoro-5-metoxi-[1,1'-bifenil]-4-carbonitrilo I16
A una solución de 4-bromo-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I5 (6,0 g, 26,1 mmol) y ácido fenilborónico (6,36 g, 52,2 mmol) en 1,4-dioxano (200 ml) y agua (50 ml) en atmósfera de N<2>se le añadieron Pd(PPh<3)4>(2,99 g, 2,66 mmol) y Na<2>CO<3>(8,29 g, 78,2 mmol) y la mezcla se calentó a 100 °C durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 50/1) para dar el compuesto del título (5,45 g, 93 %) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-C: Tr 2,48 min;m/z228,0 [M+H]+.
b) 4-Metoxi-6-fenilbenzo[d]isoxazol-3-amina I17
A una solución de ácido acetohidroxámico (8,15 g, 23,98 mmol) en DMF anhidra (200 ml) a 0 °C se le añadióterc-butóxido potásico (5,5 g, 24,0 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió 3-fluoro-5-metoxi-[1,1'-bifenil]-4-carbonitrilo I16 (5,45 g, 7,99 mmol) y la mezcla se calentó a 60 °C durante 4 h. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 10/1 a 8/1 a 6/1) para dar el compuesto del título (2,2 g, 38%) en forma de un sólido de color amarillo .
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6)ó7,79 - 7,74 (m, 2H), 7,52 - 7,46 (m, 2H), 7,45 - 7,39 (m, 1H), 7,26 (d,J= 1,1 Hz, 1H), 6,95 (s, 1H), 5,97 (s, 2H), 4,00 (s, 3H). LCMS-C: Tr 2,15 min;m/z241,0 [M+H]+
vi) 3-(3-Amino-4-metoxibenzo[rf]isoxazol-6-il)fenol I19
a) 3-Fluoro-3'-hidroxi-5-metoxi-[1,1 '-bifenil]-4-carbonitrilo I18
A una solución de 4-bromo-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I5 (650 mg, 2,8 mmol) y ácido (3-hidroxifenil)borónico (1,2 g, 5.6 mmol) en 1,4-dioxano (40 ml) y agua (10 ml) en atmósfera de N2se le añadieron Pd(PPh3)4(327 mg, 0,28 mmol) y Na2CO3(899 mg, 8,5 mmol) y la mezcla se calentó a 100 °C durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 3/1) para dar el compuesto del título (687 mg, 94%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-C: Tr 2.07 min;m/z244,0 [M+H]+.
b) 3-(3-Amino-4-metoxibenzo[d]isoxazol-6-il)fenol I19
A una solución de ácido acetohidroxámico (636 mg, 8,5 mmol) en DMF anhidra (60 ml) a 0 °C se le añadióterc-butóxido potásico (952 mg, 8,5 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió 3-fluoro-3'-hidroxi-5-metoxi-[1,1'-bifenil]-4-carbonitrilo I18 (687 mg, 2,8 mmol) y la mezcla se calentó a 60 °C durante 4 h. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 1/1) para dar el compuesto del título (282 mg, 39 %) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-C: Tr 2,3 min;m/z257,0 [M+H]+.
vii) 6-(Etoximetil)-4-metoxibenzo[tf]isoxazol-3-amina I21
17 120 121
a) 4-(Etoximetil)-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I20
A una solución de 2-fluoro-4-(hidroximetil)-6-metoxibenzonitrilo I7 (1,15 g, 6,4 mmol) y yodoetano (5,0 g, 31,7 mmol) en DMF (40 ml) a 0 °C se le añadió NaH (dispersión al 60% p/p en aceite, 508 mg, 12,7 mmol) en pequeñas porciones y la mezcla se agitó a TA durante 30 min. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (100 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 2/1) para dar el compuesto del título (1,0 g, 79%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-C: Tr2,15 min;m/z210,0 [M+H]+.
b) 6-(Etoximetil)-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I21
A una solución de ácido acetohidroxámico (1,1 g, 14,3 mmol) en DMF anhidra (50 ml) a TA se le añadió terc-butóxido potásico (1,6 g, 14,3 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió 4-(etoximetil)-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I20 (1,0 g, 4,8 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 20/1 a 10/1 a 3/1) para dar el compuesto del título (650 mg, 61%) en forma de un aceite de color amarillo.1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 6,92 (s, 1H), 6,65 (s, 1H), 5,91 (s, 2H), 4,53 (s, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,51 (c,J =7,0 Hz, 2H), 1,17 (t,J= 7,0 Hz, 3H). LCMS-C: Tr0,82 min;m/z223,0 [M+H]+.
viii) 6-Bromo-4-metoxibenzo[tí]isoxazol-3-amina I22
A una solución de ácido acetohidroxámico (2,0 g, 26,1 mmol) en DMF anhidra (100 ml) a TA se le añadió terc-butóxido potásico (2,9 g, 26,1 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió 4-bromo-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I5 (2,0 g, 8,7 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 2/1) para dar el compuesto del título (296 mg, 14%) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfó) ó 7,32 (d,J =1,2 Hz, 1H), 6,90 (d,J =1,2 Hz, 1H), 6,04 (s, 2H), 3,92 (s, 3H). LCMS-C: Tr 1,4 min;m/z244,0 [M+H]+.
ix) 7-Etoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I26
a) 2-Fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzonitrílo I23
Una mezcla de 3-bromo-2-fluorobenzonitrilo (3,0 g, 15,0 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (11,4 g, 45 mmol), acetato potásico (5,9 g, 60,0 mmol) y Pd(dppf)Cl<2>(2,2g, 3,0 mmol) en DMSO (45 ml) y 1,4-dioxano (15 ml) se calentó a 105 °C en atmósfera de N<2>durante 3 h. La mezcla se diluyó con EtOAc (30 ml) y se lavó con agua (30 ml x 3). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 20/1) para dar el compuesto del título (3,9 g, >100%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 2-Fluoro-3-hidroxibenzonitrilo I24
A una solución de 2-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzonitrilo I23 (1,9 g, 7,6 mol) en AcOH (19 ml) en atmósfera de N<2>se le añadió gota a gota H<2>O<2>(solución acuosa al 30%, 1,9 ml) y la mezcla se agitó a TA durante 2 h y después se vertió en una mezcla de EtOAc y Na<2>SO<3>acuoso en exceso. Después, las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (650 mg, 62%) en forma de un sólido ceroso de color blanquecino. LCMS-D: Tr0,93 min;m/z138,1 [M+H]+.
c) 3-Etoxi-2-fluorobenzonitrilo I25
A una solución de 2-fluoro-3-hidroxibenzonitrilo I24 (360 mg, 2,6 mmol) en DMF (30 ml) se le añadieron Cs<2>CO<3>(4,3 g, 13,1 mmol) y yodoetano (1,0 g,6 ,6mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla se diluyó con EtOAc (80 ml) y se lavó con agua (50 ml x3). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (220 mg, 51%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr2,31 min;m/z166,1 [M+H]+.
d) 7-Etoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I26
A una solución de ácido acetohidroxámico (300 mg, 4,0 mmol) en DMF (15 ml) a 0 °C en atmósfera de N2se le añadió terc-butóxido potásico (450 mg, 4,0 mmol) y la mezcla se calentó a 30 °C durante 1 h. Se añadió una solución de 3-etoxi-2-fluorobenzonitrilo I25 (220 mg, 1,3 mmol) en DMF (10 ml) y la mezcla se calentó a 30 °C durante una noche. Se añadió EtOAc (80 ml) y la mezcla se lavó con agua (50 ml x 3). La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (170 mg, 70 %) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 1,68 min;m/z179,1 [M+H]+.
x) 7-(Ciclopropilmetoxi)benzo[tf]isoxazol-3-amina I28
a) 3-(Ciclopropilmetoxi)-2-fluorobenzonitrilo I27
A una solución de 2-fluoro-3-hidroxibenzonitrilo I24 (360 mg, 2,6 mmol) en DMF (30 ml) se le añadieron Cs2CO3(4,3 g, 13,1 mmol), KI (87 mg, 0,5 mmol) y (bromometil)ciclopropano (880 mg,6,6mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. Se añadió EtOAc (80 ml) y la mezcla se lavó con agua (50 ml x3). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (150 mg, 30%) en forma de un sólido de color rojo. LCMS-D: Tr 2,54 min;m/z192,1 [M+H]+.
b) 7-(Ciclopropilmetoxi)benzo[d]isoxazol-3-amina I28
Se preparó a partir de 3-(ciclopropilmetoxi)-2-fluorobenzonitrilo I27 de acuerdo con el procedimiento descrito para 7-etoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I26, etapa d. LCMS-D: Tr 2,23 min;m/z205,1 [M+H]+.
xi) 6-Etoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I32
131 I32
a) 2-Fluoro-4-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)benzonitrilo I29
A una solución de 2-fluoro-4-hidroxibenzonitrilo (20 g, 145,9 mmol) y PPTS (733 mg, 2,9 mmol) en DCM (500 ml) en atmósfera de N2se le añadió 3,4-dihidro-2H-pirano (24,5 g, 292 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/0 a 100/2) para dar el compuesto del título (27 g, 83%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 6-((Tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)benzo[d]isoxazol-3-amina I30
A una solución de ácido acetohidroxámico (13,7 g, 182,3 mmol) en DMF (60 ml) a 0 °C en atmósfera de N2se le añadió terc-butóxido potásico (20,4 g, 182,3 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió 2-fluoro-4-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)benzonitrilo I29 (13,4 g, 60,8 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. Seañadió EtOAc (500 ml) y la mezcla se lavó con agua (100 ml * 5). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SÜ<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (12,1 g, 85 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,31 min;m/z235,1 [M+H]+.
c) 3-Aminobenzo[d]isoxazol-6-ol I31
A una solución de 6-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)benzo[d]isoxazol-3-amina I30 (3,5 g, 15 mmol) en THF (50 ml) se le añadió HCl ac. 2 M (20 ml) y la mezcla se agitó a TA durante 3 h. La mezcla se diluyó con EtOAc (300 ml) y se lavó con agua (x 2). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (2,1 g, 94%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
d) 6-Etoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I32
Una mezcla de 3-aminobenzo[d]isoxazol-6-ol I31 (300 mg, 2 mmol), Cs<2>CO<3>(2,0 g, 6 mmol), KI (66 mg, 0,4 mmol) y bromoetano (436 mg, 4 mmol) en DMF (30 ml) se calentó a 50 °C en atmósfera de N<2>durante una noche. La mezcla se diluyó con EtOAc (300 ml) y se lavó con agua (100 ml * 5). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (270 mg, 76%) en forma de un sólido de color blanco. Lc Ms -D: Tr 0,37 min;m/z179,0 [M+H]+.
xii) 6-(Ciclopropilmetoxi)benzo[tf]isoxazol-3-amina I33
131 I33
Se preparó a partir de 3-aminobenzo[d]isoxazol-6-ol I31 de acuerdo con el procedimiento descrito para 6-etoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I32, etapa d (395 mg, 97%). LCMS-D: Tr 2,27 min;m/z205,1 [M+H]+.
xiii) 6-(1H-1,2,3-Triazol-1-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I36
136
a) 4-Azido-2-fluorobenzonitrilo I34
Una mezcla de 4-amino-2-fluorobenzonitrilo (2,0 g, 14,7 mmol) en agua (4 ml), ACN (32 ml) y HCl concentrado (10 ml) se agitó a TA en atmósfera de N<2>durante una noche. Después, se añadió en porciones NaNO<2>(2,0 g, 29,4 mmol) y la agitación se continuó a TA durante 2 h. La mezcla se enfrió a 0 °C, Se añadió en porciones NaN<3>(1,9 g, 29,4 mmol) y la agitación se continuó a TA durante 2 h. Se añadió agua (50 ml) y la mayor parte del disolvente orgánico se retiró a presión reducida. Después, la mezcla acuosa restante se extrajo con<d>C<m>(50 ml * 4) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, y salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/0 a 20/1) para dar el compuesto del título (1,5 g, 62%) en forma de un sólido de color amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 2-Fluoro-4-(1H-1,2,3-triazol-1-il)benzonitrilo I35
Una mezcla de 4-azido-2-fluorobenzonitrilo I34 (500 mg, 3,1 mmol), etiniltrimetilsilano (454 mg, 4,6 mmol) y CuI(704 mg, 3,7 mmol) en THF (50 ml) se calentó a 50 °C en atmósfera de N2durante 24 h. Se añadió más cantidad de etiniltrimetilsilano (454 mg, 4,6 mmol) y la mezcla se calentó a 50 °C durante 24 h más, después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 10/1) para dar 2-fluoro-4-(5-(trimetilsilil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzonitrilo (410 mg), que se disolvió en una solución1M deTBa Fen THF (50 ml) y se calentó a 45 °C en atmósfera de N2durante una noche. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 2/1) para dar el compuesto del título (200 mg, 34%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
c) 6-(1H-1,2,3-Triazol-1-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I36
A una solución de ácido acetohidroxámico (239 mg, 3,16 mmol) en DMF (25 ml) a 0 °C en atmósfera de N2se le añadió terc-butóxido potásico (357 mg, 3,18 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 2 h. Después, se añadió una solución de 2-fluoro-4-(1H-1,2,3-triazol-1-il)benzonitrilo I35 (200 mg, 1,06 mmol) en DMF (15 ml) y la agitación se continuó a TA durante una noche. Se añadió EtOAc (100 ml) y la mezcla se lavó con agua (x 5). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 2/1) para dar el compuesto del título (150 mg, 70 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 0,47 min;m/z202,1 [M+H]+.
xiv) 6-(Pirimidin-2-il)benzo[tf]isoxazol-3-amina I39
a) 2-Fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzonitrilo I37
Una mezcla de 4-bromo-2-fluorobenzonitrilo (1,0 g, 5,0 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (1,3 g, 5,0 mmol), acetato potásico (5,9 g, 20,0 mmol) y Pd(dppf)Cl<2>(2,0 g, 1,0 mmol) en DMSO (50 ml) y 1,4-dioxano (10 ml) se calentó a 105 °C en atmósfera de N<2>durante 3 h. La mezcla se diluyó con EtOAc (200 ml) y se lavó con agua (100 ml x 3). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/0 a 50/1) para dar el compuesto del título (1,1 g, 89%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 2-Fluoro-4-(pirimidin-2-il)benzonitrilo I38
A una solución de 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzonitrilo I37 (464 mg, 2 mmol) y 2-bromopirimidina (736 mg, 4 mmol) en agua (40 ml), tolueno (40 ml) e i-PrOH (10 ml) en atmósfera de N<2>se le añadieron Pd(dppf)Cl<2>(146 mg, 0,2 mmol) y K<3>PO<4>3H<2>O (1,33 g, 5,0 mmol) y la mezcla se calentó a 85 °C durante 4 h. La mezcla se diluyó con EtOAc (200 ml) y se lavó con agua (50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./ EtOAc = 50/1 a 2/1) para dar el compuesto del título (270 mg, 68%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr2,38 min;m/z200,1 [M+H]+.
c) 6-(Pirimidin-2-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I39
A una solución de ácido acetohidroxámico (306 mg, 4,07 mmol) en DMF (20 ml) a 0 °C en atmósfera de N<2>se le añadió terc-butóxido potásico (457 mg, 4,07 mmol) y la mezcla se calentó a 30 °C durante 1 h. Después, se añadió una solución de 2-fluoro-4-(pirimidin-2-il)benzonitrilo I38 (270 mg, 1,36 mmol) en DMF (10 ml) y el calentamiento se continuó a 30 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con agua (50 ml x3). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./ EtOAc = 50/1 a 2/1) para dar el compuesto del título (200 mg, 69 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr0,38 min;m/z213,1 [M+H]+, 235,1 [M+Na]+.
xv) 5-Bromobenzo[tf]isoxazol-3-amina I40
A una solución de ácido acetohidroxámico (23,7 g, 0,315 mol) en DMF (800 ml) a 0 °C en atmósfera de N<2>se le añadió f-BuOK (35,4 g, 0,315 mol) y la mezcla se agitó a 15 °C durante 2 h. Después, se añadió 5-bromo-2-fluorobenzonitrilo (21,0 g, 0,105 mol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla se diluyó con EtOAc (1,5 l) y se lavó con agua (400 ml x 4). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 3/1) para dar el compuesto del título (19 g,<86>%) en forma de un sólido de color blanco. Lc MS-D: Tr 2,13 min;m/z212,9/214,9 [M+H]+.
xvi) 4-Bromobenzo[d]isoxazol-3-amina I41
A una solución de ácido acetohidroxámico (11,25 g, 0,15 mol) en DMF (220 ml) a 0 °C en atmósfera de N<2>se le añadió f-BuOK (16,8 g, 0,15 mol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h. Después, se añadió gota a gota una solución de 2-bromo-6-fluorobenzonitrilo (10,0 g, 0,05 mol) en DMF (80 ml) y la agitación se continuó a 25 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con agua (200 ml) y se extrajo con EtOAc (400 ml). El extracto orgánico se lavó con agua (400 ml x 3), se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (7,0 g,<6 6>%) en forma de un sólido de color rojo claro. LCMS-D: Tr 2,05 min;m/z212,9/214,9 [M+H]+.
xvii) 4-(Trifluorometil)benzo[tf]isoxazol-3-amina I42
A una solución de ácido acetohidroxámico (2,25 g, 30 mmol) en DMF (80 ml) a 0 °C en atmósfera de N<2>se le añadió f-BuOK (3,37 g, 30 mmol) y la mezcla se calentó a 30 °C durante 1 h. Después, se añadió una solución de 2-fluoro-6-(trifluorometil)benzonitrilo (1,89 g, 10 mmol) en DMF (20 ml) y el calentamiento se continuó a 30 °C durante una noche. La mezcla se repartió entre EtOAc (300 ml) y agua (100 ml), las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua (100 ml x<3>) y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./ EtOAc = 50/1 a 1/1) para dar el compuesto del título (1,3 g, 64%) en forma de un sólido de color blanco LCMS-D: Tr 2,19 min;m/z203,0 [M+H]+.
xviii) 5-Bromo-4-clorobenzo[tí]isoxazol-3-amina I44
a) 3-Bromo-2-cloro-6-fluorobenzonifrílo I43
A una solución de 2-cloro-6-fluorobenzonitrilo (1,0 g, 6,4 mmol) en ácido trifluorometanosulfónico (10 ml) a 0 °C en atmósfera de N<2>se le añadió NBS (1,1 g, 6,4 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla se vertió en hielo y se extrajo con EtOAc (30 ml x 2). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro,se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 200/1 a 100/1) para dar el compuesto del título (705 mg, 47%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 5-Bromo-4-clorobenzo[d]isoxazol-3-amina I44
A una solución de ácido acetohidroxámico (5,1 g, 67,8 mmol) en DMF (150 ml) a 0 °C en atmósfera de N2se le añadió f-BuOK (7,6 g, 6,4 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 2 h. Después, se añadió 3-bromo-2-cloro-6-fluorobenzonitrilo I43 (5,3 g, 22,6 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla se diluyó con EtOAc (500 ml) y se lavó con agua (x 3) y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 2/1) para dar el compuesto del título (3,1 g, 52%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
xix) 5-Bromo-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I48
a) Ácido 3-bromo-6-fluoro-2-metoxibenzoico I45
A una solución de diisopropilamina (5,4 g, 53,7 mmol) en THF (150 ml) a -78 °C en atmósfera de N<2>se le añadión-BuLi (solución 2,5 M en hexanos, 23,4 ml, 58,5 mmol) gota a gota y la mezcla se agitó a -78 °C durante 1 h. La mezcla resultante se añadió gota a gota a una solución de 1-bromo-4-fluoro-2-metoxibenceno (10,0 g, 48,8 mmol) en THF (50 ml) a -78 °C y la agitación se continuó durante 90 min. CO<2>se burbujeó a través de la mezcla durante 20 min con agitación a -78 °C, después se dejó calentar a TA y se agitó durante 15 min. La mezcla de reacción se ajustó a pH = 1 con HCl y la mezcla se diluyó con agua y se extrajo con DCM (500 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 100/1 a 30/1) para dar el compuesto del título (8,0 g,66%) en forma de un aceite incoloro. LCMS-D: Tr2,12 min;m/z248,9/250,9 [M+H]+.
b) 3-Bromo-6-fluoro-2-metoxibenzamida I46
Una mezcla de ácido 3-bromo-6-fluoro-2-metoxibenzoico I45 (8,0 g, 32,1 mmol) y SOCl<2>(30 ml) se calentó a 85 °C durante 3 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se disolvió en DCM (5 ml) y se añadió gota a gota a NH<4>OH conc. (20 ml) a 0 °C. La mezcla se dejó calentar a TA, se agitó durante 20 min y después se extrajo con DCM (50 ml x3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, y salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 1/1) para dar el compuesto del título (6,8g, 80 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-E: Tr2,24 min;m/z247,8/249,8 [M+H]+.
c) 3-Bromo-6-fluoro-2-metoxibenzonitrilo I47
Una mezcla de 3-bromo-6-fluoro-2-metoxibenzamida I46 (6,8g, 25,6 mmol) y SOCl<2>(30 ml) se calentó a 80 °C durante una noche, después se concentró a presión reducida. El residuo se repartió entre agua y EtOAc, las fases se separaron y la capa orgánica se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 20/1) para dar el compuesto del título (3,5 g, 55%) en forma de un aceite incoloro, que se usó directamente en la siguiente etapa.
d) 5-Bromo-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I48
A una solución de ácido acetohidroxámico (3,4 g, 45,7 mmol) en DMF (150 ml) a 0 °C en atmósfera de N<2>se le añadió t-BuOK (5,1 g, 45,7 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 90 min. Después, se añadió una solución de 3-bromo-6-fluoro-2-metoxibenzonitrilo I47 (3,5 g, 15,2 mmol) en DMF (30 ml) y la mezcla se calentó a 70 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con EtOAc (1000 ml) y se lavó con agua (x 3) y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtróy se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 3/1) para dar el compuesto del título (3,2 g,<86>%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,24 min;m/z243,0/244,9 [M+H]+.
xx) 4-(Metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina I51
a) 2-(Bromometil)-6-clorobenzonitrílo I49
Una mezcla de 2-cloro-6-metilbenzonitrilo (2,0 g, 13,2 mmol), NBS (2,5 g, 13,8 mmol) y AIBN (660 mg, 4,0 mmol) en CCl<4>(60 ml) se calentó a 85 °C en atmósfera de N<2>durante una noche. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./ EtOAc = 100/1 a 50/1) para dar el compuesto del título (1,7 g, 37%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 2-Cloro-6-(metoximetil)benzonitrilo I50
Se disolvió metal sodio (115 mg, 4,8 mmol) en MeOH (5 ml) y THF (5 ml) y la mezcla se agitó a TA durante 20 min. Después, se añadió 2-(bromometil)-6-clorobenzonitrilo I49<( 560>mg, 2,4 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 5 h. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 50/1) para dar el compuesto del título (340 mg, 77%) en forma de un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfó)57,75 - 7,70 (m, 3H), 4,82 (s, 2H), 3,35 (s, 3H).
c) 4-(Metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina I51
A una solución de ácido acetohidroxámico (422 mg, 5,6 mmol) en DMF (25 ml) a -78 °C en atmósfera de N<2>se le añadió t-BuOK (630 mg, 5,6 mmol) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h. Después, se añadió 2-cloro-6-(metoximetil)benzonitrilo I50 (340 mg, 1,9 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche, y después se calentó a 85 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con agua (70 ml) y se extrajo con EtOAc (100 ml * 2). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (200 ml * 3), se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOA = 5/1 a 3/1) para dar el compuesto del título (105 mg, 31%) en forma de un aceite de color amarillo claro. LCMS-D: Tr 1,57 min;m/z179,1 [M+H]+.
xxi) 4-Etoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I53
a) 2-Etoxi-6-fluorobenzonitrilo I52
Una mezcla de 2-fluoro-6-hidroxibenzonitrilo (2,0 g, 14,6 mmol), K<2>CO<3>(6,04 g, 43,8 mmol) y bromoetano (2,38 g, 21,9 mmol) en DMF (4 ml) se agitó a TA en atmósfera de N<2>durante una noche. La mezcla se diluyó con EtOAc (300 ml), se lavó con agua (100 ml * 5) y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (1,6 g, 67 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-E: Tr 5,24 min;m/z166,1 [M+H]+ .
b) 4-Etoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I53
A una solución de ácido acetohidroxámico (2,18 g, 29 mmol) en DMF (40 ml) a 0 °C en atmósfera de N<2>se le añadió t-BuOK (3,26 g, 29 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió 2-etoxi-6-fluorobenzonitrilo I52 (1,6 g, 9,7 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla se diluyó con DCM (80 ml), se lavó con agua (60 ml * 4), se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 5/1) para dar el compuesto del título (240 mg, 15 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-E: Tr 5,05 min;m/z179,0 [M+H]+.
xxii) 5-Metoxibenzo[tf]isoxazol-3-amina I54
A una solución de ácido acetohidroxámico (1,49 mg, 19,8 mmol) en DMF (35 ml) a 0 °C en atmósfera de N2se le añadió t-BuOK (2,23 mg, 19,8 mmol) y la mezcla se calentó a 30 °C durante 1 h. Después, se añadió una solución de 2-fluoro-5-metoxibenzonitrilo (1,0 g,6,6mmol) en DMF (5 ml) y la mezcla se calentó a 30 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con agua (70 ml) y se extrajo con EtOAc (100 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (200 ml x 3), después se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título( 110mg,11%) en forma de un sólido de color amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
xxiii) 5-Etoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I57
155 156 157
a) 2-Fluoro-5-hidroxibenzonitrílo I55
Una mezcla de 2-fluoro-5-metoxibenzonitrilo (1,7 g, 1,2 mmol) y piridinaHCl (17 g) se calentó a 80 °C en atmósfera de N<2>durante 5 h, después se diluyó con DCM (40 ml) y se lavó con HCl ac. 2 M(8ml) y agua (2 x 40 ml). La capa orgánica se extrajo con una solución acuosa de K<2>CO<3>(50 ml x 2) y los extractos acuosos combinados se lavaron con DCM (70 ml x 2), después se ajustaron a pH 3-4 con HCl ac. 2 M y se extrajeron con DCM (80 ml x3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (430 mg, 28%) en forma de un sólido de color blanquecino, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 5-Etoxi-2-fluorobenzonitrilo I56
A una solución de 2-fluoro-5-hidroxibenzonitrilo I55 (430 mg, 3,1 mmol) en DMF (15 ml) se le añadió K<2>CO<3>(1,3 g, 9,4 mmol) y la mezcla se agitó a TA en atmósfera de N<2>durante 30 min. Después, se añadió bromoetano (512 mg, 4,7 mmol) y la agitación se continuó a TA durante una noche. La mezcla se diluyó con agua (70 ml) y se extrajo con EtOAc (100 ml x 2). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (200 ml x3), se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 30/1 a 20/1) para dar el compuesto del título (480 mg, 92%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr2,44 min;m/z166,0 [M+H]+188,0 [M+Na]+.
c) 5-Etoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I57
A una solución de ácido acetohidroxámico (645 mg, 8,7 mmol) en DMF (35 ml) a 0 °C en atmósfera de N<2>se le añadió t-BuOK (978 mg, 8,7 mmol) y la mezcla se calentó a 30 °C durante 1 h. Después, se añadió una solución de 5-etoxi-2-fluorobenzonitrilo I56 (480 mg, 2,9 mmol) en DMF (5 ml) y la mezcla se calentó a 30 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con agua (60 ml) y se extrajo con EtOAc (80 ml x 2). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (150 ml x 2), se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (400 mg, 77%) en forma de un sólido de color amarillo claro. LCMS-D: Tr2,02 min;m/z179,1 [M+H]+.
xxiv) 6-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I59
a) 2-Cloro-4-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il) benzonitrilo I58
Una mezcla de 3,5-dimetil-1H-pirazol (5 g, 0,052 mol), NaH (dispersión al 60% en aceite, 2,6 g, 0,065 mol) en DMF (50 ml) se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió una solución de 2-cloro-4-fluorobenzonitrilo (6,74 g, 0,043 mol) en DMF (50 ml) y la agitación se continuó a TA durante 1 h. La reacción se interrumpió con agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (11,0 g, 92%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 2,58 min;m/z232,1 [M+H]+.
b) 6-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I59
A una solución de ácido acetohidroxámico (972 mg, 12,9 mmol) en DMF (20 ml) a 0 °C en atmósfera de N2se le añadió t-BuOK (1,45 g, 12,9 mmol) y la mezcla se calentó a 30 °C durante1h. Después, se añadió 2-cloro-4-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il) benzonitrilo I58 (1 g, 4,3 mmol) y la mezcla se calentó a 60 °C durante 5 h. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por TLC preparativa (MeOH/DCM = 1/20) para dar el compuesto del título (150 mg, 15%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,22 min;m/z229,1 [M+H]+.
xxv) 5-Metilbenzo[d]isoxazol-3-amina I60
A una solución de ácido acetohidroxámico (8,33 g, 0,11 mol) en DMF (200 ml) se le añadió t-BuOK (12,5 g, 0,11 mol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 hora. Después, se añadió 2-fluoro-5-metilbenzonitrilo (5 g, 0,37 mol) y la mezcla se calentó a 60 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (DCM/MeOH = 200/1 a 50/1) para dar el compuesto del título (3,0 g, 55%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 1,75 min,m/z149,0 [M+H]+.
xxvi) 6-(Metoximetil)benzo[tf]isoxazol-3-amina I62
a) 2-Fluoro-4-(metoximetil)benzonitrilo I61
Una mezcla de MeI (2,0 g, 13,2 mmol) y NaH (suspensión al 60% en aceite, 790 mg, 19,8 mmol) en THF (50 ml) se agitó a 0 °C durante 10 min, después se añadió 2-fluoro-4-(hidroximetil)benzonitrilo (2,0 g, 13,2 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 2 h. La reacción se interrumpió con agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 20/1) para dar el compuesto del título (1,7 g, 78%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,01 min;m/z166,0 [M+H]+ 187,9 [M+Na]+.
b) 6-(Metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina I62
A una solución de ácido acetohidroxámico (1,5 g, 9,1 mmol) en DMF (50 ml) se le añadió t-BuOK (3,06 g, 27,2 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió 2-fluoro-4-(metoximetil)benzonitrilo I61 (1,5 g , 9,1 mmol) y la mezcla se calentó a 40 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 10/1) para dar el compuesto del título (1 g, 62%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 0,95 min,m/z179,0 [M+H]+.
xxvii) 5-(Trifluorometoxi)benzo[tí]isoxazol-3-amina I63
A una solución de ácido acetohidroxámico (2,2 g, 0,029 mol) en DMF (50 ml) se le añadió t-BuOK (3,28 g, 0,029 mol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 hora. Después, se añadió 2-fluoro-5-(trifluorometoxi)benzonitrilo (2 g, 9,75 mmol) y la mezcla se calentó a 60 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (1,6 g, 75 %) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 2,43 min;m/z219,0 [M+H]+.
xxviii) 5-Metil-6-(oxazol-2-il)benzo[tf]isoxazol-3-amina I65
a) 2-Fluoro-5-metil-4-(oxazol-2-il)benzonitrilo I64
A una solución de oxazol (90 mg, 1,31 mmol) en THF (10 ml) a -70 °C en atmósfera de N<2>se le añadió n-BuLi (solución 2,5 M en hexano, 1,1 ml, 2,66 mmol) y la mezcla se agitó durante 10 min. Se añadió ZnCl<2>sólido (380 mg, 2,79 mmol) y la mezcla se dejó calentar a TA. Se añadió 4-bromo-2-fluoro-5-metilbenzonitrilo (200 mg, 0,93 mmol) y la mezcla se calentó a 60 °C durante una noche. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc 10/1) para dar el compuesto del título (50 mg, 27%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,51 min;m/z203,0 [M+H]+.
b) 5-Metil-6-(oxazol-2-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I65
A una solución de ácido acetohidroxámico (189 mg, 2,52 mmol) en DMF (10 ml) a 0 °C en atmósfera de N<2>se le añadió t-BuOK (377 mg, 3,26 mmol) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h. Después, se añadió 2-fluoro-5-metil-4-(oxazol-2-il)benzonitrilo I64 (170 mg , 0,84 mmol) y la mezcla se calentó a 50 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por TLC preparativa (DCM/MeOH = 10/1) para dar el compuesto del título (90 mg, 50%) en forma de un sólido de color blanco. Lc MS-D: Tr 2,10 min;m/z216,0 [M+H]+.
xxix) 7-Bromobenzo[d]isoxazol-3-amina I66
166
A una solución de ácido acetohidroxámico (3,75 g, 0,05 mol) en DMF (60 ml) a 0 °C se le añadió t-BuOK (5,6 g, 0,05 mol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió gota a gota una solución de 3-bromo-2fluorobenzonitrilo (5,0 g, 0,025 mol) en DMF (90 ml) y la agitación se continuó a TA durante una noche. La mezcla se diluyó con DCM (300 ml), se lavó con agua (250 ml x 4) y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (4,0 g, 63%) en forma de un sólido de color blanco.
LCMS-D: Tr 2,09 min,m/z213,0/215,0 [M+H]+.
xxx) 7-(Pirimidin-2-il)benzo[tf]isoxazol-3-amina I68
a) 2-Fluoro-3-(pirimidin-2-il)benzonitrílo I67
Una mezcla de 2-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzonitrilo I23 (1,5 g, 6,1 mmol), 2-bromopirimidina (1,9 g, 12,0 mmol), Pd(dppf)Cl<2>(1,3 g, 1,8 mmol) y K<3>PO<4>(6,5 g, 24,2 mmol) en agua (60 ml), tolueno (60 ml) ei-PrOH (15 ml) se calentó a 85 °C en atmósfera de N<2>durante 4 h. La mezcla se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó con agua (80 ml * 3). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 4/1) para dar el compuesto del título (450 mg, 38%) en forma de un sólido de color amarillo claro. LCMS-E: Tr4,82 min;m/z199,9 [M+H]+.
b) 7-(Pirimidin-2-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I68
A una solución de ácido acetohidroxámico (243 mg, 3,2 mmol) en DMF (15 ml) a 0 °C en atmósfera de N2se le añadió t-BuOK (363 mg, 3,2 mmol) y la mezcla se agitó durante 1 h. Después, se añadió gota a gota una solución de 2-fluoro-3-(pirimidin-2-il)benzonitrilo I67 (400 mg, 1,6 mmol) en DMF (5 ml) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla se diluyó con EtOAc (80 ml) y se lavó con agua (60 ml x 3). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (230 mg, 67%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 0,80 min,m/z213,1 [M+H]+.
xxxi) 6-(1H-Pirazol-1-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I70
a) 2-Fluoro-4-(1H-pirazol-1-il)benzonitrilo I69
Una mezcla de 4-bromo-2-fluorobenzonitrilo (400 mg, 2,0 mmol), 1H-pirazol (177 mg, 2,6 mmol), Cul (381 mg, 2,0 mmol), K<3>PO<4>(849 mg, 4,0 mmol) y (1 S,2S)-N1, N2-dimetilciclohexano-1,2-diamina (28 mg, 0,2 mmol) en DMF (20 ml) se calentó a 100 °C en un microondas durante 1 h. La mezcla se repartió entre EtOAc (200 ml) y agua (100 ml), las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua (x 3) y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./ EtOAc = 100/1 a 20/1) para dar el compuesto del título (120 mg, 32%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr2,20 min,m/z188,1 [M+H]+.
b) 6-(1H-Pirazol-1-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I70
A una solución de ácido acetohidroxámico (215 mg, 2,9 mmol) en DMF (25 ml) a 0 °C se le añadió t-BuOK (322 mg, 2,9 mmol) y la mezcla se calentó 30 °C durante 2 h. Después, se añadió 2-fluoro-4-(1H-pirazol-1-il)benzonitrilo I69 (120 mg, 0,64 mmol) y la mezcla se calentó a 30 °C durante una noche. La mezcla se repartió entre EtOAc (100 ml) y agua (50 ml), las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua (x 3) y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 2/1) para dar el compuesto del título (72 mg, 57 %) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
xxxii) 6-(2H-1,2,3-Triazol-2-il)benzo[tí]isoxazol-3-amina I72
a) 2-Cloro-4-(2H-1,2,3-tríazol-2-il)benzonitrílo I71
Una mezcla de 2H-1,2,3-triazol (553 mg, 8,0 mmol) y NaH (dispersión al 60% en aceite, 192 mg, 4,8 mmol) en DMF (20 ml) se agitó a 0 °C durante 30 min, y después se añadió una solución de 2-cloro-4-fluorobenzonitrilo (622 mg, 4,0 mmol) en DMF (10 ml). La mezcla se agitó a 0 °C durante 2 h, después se dejó calentar a TA y se agitó durante 2 h. La mezcla se repartió entre EtOAc (300 ml) y agua (100 ml), las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua (x 3) y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 20/1) para dar el compuesto del título (200 mg, 24 %) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfó) ó 8,31 - 8,28 (m, 3H), 8,19 - 8,14 (m 2H).
b) 6-(2H-1,2,3-Triazol-2-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I72
A una solución de ácido acetohidroxámico (221 mg, 2,9 mmol) en DMF (25 ml) a 0 °C se le añadió t-BuOK (330 mg, 2,9 mmol) y la mezcla se calentó a 30 °C durante 2 h. Después, se añadió 2-cloro-4-(2H-1,2,3-triazol-2-il)benzonitrilo I71 (200 mg, 0,98 mmol) y la mezcla se calentó a 30 °C durante una noche. La mezcla se repartió entre EtOAc (100 ml) y agua (50 ml), las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua (x 3) y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 2/1) para dar el compuesto del título (90 mg, 46 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 1,93 min,m/z202,1 [M+H]+.
xxxiii) 6-(Piridin-2-il)benzo[tf]isoxazol-3-amina I74
a) 2-Fluoro-4-(piridin-2-il)benzonitrilo I73
Una mezcla de 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzonitrilo I37 (494 mg, 2,0 mmol), 2-bromopiridina (948 mg, 6,0 mmol), Pd(dppf)Cl<2>(293 mg, 0,4 mmol) y K<3>PO<4>3H<2>O (2,66 g, 10,0 mmol) en H<2>O (40 ml), tolueno (40 ml) e i-PrOH (10 ml) se calentó a 85 °C en atmósfera de N<2>durante 4 h. La mezcla se repartió entre EtOAc (200 ml) y agua (30 ml), las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 30/1 a 10/1) para dar el compuesto del título (190 mg, 48 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr2,32 min,m/z199,1 [M+H]+.
b) 6-(Piridin-2-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I74
A una solución de ácido acetohidroxámico (216 mg, 2,88 mmol) en DMF (50 ml) a 0 °C se le añadió t-BuOK (323 mg, 2,88 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió una solución de 2-fluoro-4-(piridin-2-il)benzonitrilo I73 (190 mg, 0,96 mmol) en DMF (10 ml) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla se repartió entre EtOAc (200 ml) y agua (50 ml), las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua (50 ml x 3) y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 100/0 a 100/1) para dar el compuesto del título (105 mg, 52%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr0,83 min,m/z212,1 [M+H]+.
xxxiv) 6-Bromobenzo[d]isoxazol-3-amina I75
A una solución de ácido acetohidroxámico (13,7 g, 182 mmol) en DMF (60 ml) a 0 °C se le añadió t-BuOK (20,5 g, 182 mmol) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h. Después, se añadió una solución de 4-bromo-2-fluorobenzonitrilo (12,2 g, 60,8 mmol) en DMF (30 ml) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla se repartió entre EtOAc (500 ml) y agua (200 ml), las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua (x 2) y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 30/1) para dar el compuesto del título (8,1 g, 63 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,34 min;m/z213,0 /215,0 [M+H]+.
xxxv) 4-Metoxi-6-(piridin-2-il)benzo[tf]isoxazol-3-amina I77
a) 2-Fluoro-6-metoxi-4-(piridin-2-il)benzonitrílo I76
Una mezcla de 4-bromo-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I5 (244 mg, 1,06 mmol), ácido piridin-2-ilborónico (195 mg, 1,59 mmol), CuCl (105 mg, 1,06 mmol), Pd(OAc)<2>(24 mg, 0,106 mmol), XPhos (100 mg, 0,212 mmol) y Cs<2>CO<3>(1,38 g, 4,24 mmol) en DMF (10,6 ml) se calentó en una atmósfera de nitrógeno en un tubo cerrado herméticamente de 20 ml a 100 °C durante 16 h. La reacción se repitió tres veces más a la misma escala y las cuatro reacciones se interrumpieron con NH<4>Cl acuoso saturado, se combinaron y se extrajeron con EtOAc (80 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 10/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (190 mg, 20%) en forma de un sólido de color amarillo. LC<m>S-C: Tr 2,13 min;m/z229,0 [M+H]+.
b) 4-Metoxi-6-(piridin-2-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I77
A una solución de ácido acetohidroxámico (178 mg, 2,37 mmol) en DMF anhidra (20 ml) a 0 °C se le añadióterc-butóxido potásico (266 mg, 2,37 mmol) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h. Después, se añadió 2-fluoro-6-metoxi-4-(piridin-2-il)benzonitrilo I76 (180 mg, 0,79 mmol) y la mezcla se calentó a 40 °C durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 200/1 a 100/1 a 60/1) para dar el compuesto del título (70 mg, 37%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-C: Tr 0,52 min;m/z242,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 8,73 - 8,68 (m, 1H), 8,14 - 8,09 (m, 1H), 7,95 - 7,88 (m, 1H), 7,70 (d,J= 1,0 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,44 - 7,38 (m, 1H), 6,01 (s, 2H), 4,01 (s, 3H).
xxxvi) 4-Metoxi-7-fenilbenzo[tf]isoxazol-3-amina I80
a) 3-Bromo-2-fluoro-6-metoxibenzonitrílo I78
Una solución de Br<2>(507 mg, 3,2 mmol) en CCI<4>(4,0 ml) se añadió a una solución de 2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo (480 mg , 3,2 mmol) y Fe (8,0 mg, 0,1 mmol) en CCU (4,0 ml) a -10 °C durante un periodo de 30 min y después la mezcla se dejó calentar a TA y se agitó durante una noche. La mezcla se repartió entre agua y EtOAc, las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con una solución acuosa saturada de Na<2>SO<3>(x2) y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró para dar el compuesto del título (580 mg, 80%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr2,12 min;m/z229,9 [M+H]+.
b) 2-Fluoro-4-metoxi-[1,1'-bifenil]-3-carbonitrilo I79
A una solución de 3-bromo-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I78 (600 mg, 2,6 mmol), ácido fenilborónico (636 mg, 5,2 mmol) y Na<2>CO<3>(829 mg, 7,8 mmol) en 1,4-dioxano (40 ml) y agua (10 ml) en atmósfera de N<2>se le añadió Pd(PPh<3>)<4>(300 mg, 0,26 mmol) y la mezcla se calentó a 100 °C durante una noche. La mezcla se repartió entre agua y EtOAc, las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc =10/1a 3/1) para dar el compuesto del título (538 mg, 90 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr2,43 min;m/z228,0 [M+H]+.
c) 4-Metoxi-7-fenilbenzo[d]isoxazol-3-amina I80
A una solución de ácido acetohidroxámico (533 mg, 7,11 mmol) en DMF anhidra (30 ml) a TA se le añadió terc-butóxido potásico (797 mg, 7,11 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió 2-fluoro-4-metoxi-[1,1'-bifenil]-3-carbonitrilo I79 (538 mg, 2,37 mmol) y la mezcla se calentó a 60 °C durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (30 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 10/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (413 mg, 72%) en forma de un sólido de color naranja. LCMS-C: Tr1,33 min;m/z209,0 [M+H]+.1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 7,84 - 7,79 (m, 2H), 7,61 (d,J= 8,1 Hz, 1H), 7,46 (t,J= 7,7 Hz, 2H), 7,38 - 7,32 (m, 1H), 6,67 (d,J= 8,2 Hz, 1H), 4,00 (s, 3H).
xxxvii) 4-Metoxi-7-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[c(]isoxazol-3-amina I82
a) 2-Fluoro-6-metoxi-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzonitrilo I81
A una solución de 3-bromo-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I78 (720 mg, 3,31 mmol), 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (1,30 g, 6,26 mmol) y Na<2>CO<3>(995 mg, 9,39 mmol) en 1,4-dioxano (50 ml) y agua (10 ml) en atmósfera de N<2>se le añadió Pd(PPh<3>)<4>(358 mg, 0,30 mmol) y la mezcla se calentó a 100 °C durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 100/1) para dar el compuesto del título (485 mg, 63%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr1,26 min;m/z232,0 [M+H]+.
b) 4-Metoxi-7-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I82
A una solución de ácido acetohidroxámico (474 mg, 6,24 mmol) en DMF anhidra (20 ml) a TA se le añadió terc-butóxido potásico (700 mg, 6,24 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió 2-fluoro-6-metoxi-3-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)benzonitrilo I81 (485 mg, 2,04 mmol) y la mezcla se calentó a 60 °C durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (30 ml x3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 50/1) para dar el compuesto del título (225 mg, 45%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-C: Tr0,46 min;m/z245,0 [M+H]+.1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 8,19 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,69 (d,J= 8,2 Hz, 1H), 6,74 (d,J= 8,2 Hz, 1H), 6,00 (s, 2H), 3,91 (s, 3H), 3,90 (s, 3H).
xxxviii) 5-Cloro-4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[rf]isoxazol-3-amina I83
A una solución de 4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina I9 (300 mg, 1,4 mmol) en DMF (10 ml) se le añadió NCS (192 mg, 1,4 mmol) y la mezcla se calentó a 50 °C durante 2 h. La mezcla se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con H<2>O (40 ml x 3). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 7/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (190 mg, 54 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 1,21 min;m/z242,9 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 7,32 (s, 1H), 6,19 (s, 2H), 4,55 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,41 (s, 3H).
xxxix) 4-Metoxi-6-(oxazol-2-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I86
a) 2-(Tribut¡lestan¡l)oxazol I84
A una solución de oxazol (500 mg, 7,25 mmol) en THF (15 ml) a -78 °C en atmósfera de N<2>se le añadió n-BuLi (solución 2,5 M en hexanos, 2,9 ml, 7,32 mmol) gota a gota y la mezcla se agitó a -78 °C durante 30 min. Después, se añadió tributilcloroestanano (1,96 ml, 7,25 mmol) y la mezcla se dejó calentar a TA y se agitó durante 1 h. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se recogió en hexanos (50 ml). El precipitado resultante se retiró por filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (2,0 g, 77%) en forma de un aceite incoloro.
1H RMN (400 MHz, DMSO-de)ó8,20 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 1,59 - 1,49 (m, 6H), 1,31 - 1,26 (m, 6H), 1,16 - 1,10 (m, 6H), 0,83 (t,J= 7,3 Hz, 9H).
b) 2-Fluoro-6-metox¡-4-(oxazol-2-¡l)benzon¡tr¡lo I85
A una solución de 4-bromo-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I5 (305 mg, 1,33 mmol) en 1,4-dioxano (25 ml) se le añadió 2-(tributilestanil)oxazol I84 (1,43 g, 3,98 mmol) y Pd(PPh<3)4>(154 mg, 0,133 mmol) y la mezcla se calentó a 90 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro se filtró y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 8/1) para dar el compuesto del título (370 mg, 96%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 1,86 min;m/z218,9 [M+H]+.
c) 4-Metox¡-6-(oxazol-2-¡l)benzo[d]¡soxazol-3-am¡na I86
A una solución de ácido acetohidroxámico (382 mg, 5,09 mmol) en DMF (25 ml) a 0 °C se le añadió terc-butóxido potásico (570 mg, 5,09 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió 2-fluoro-6-metoxi-4-(oxazol-2-il)benzonitrilo I85 (370 mg, 1,7 mmol) y la mezcla se calentó a 60 °C durante 2 h. La mezcla se diluyó con EtOAc y se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró para dar el compuesto del título (100 mg, 26%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-C: Tr 0,57 min;m/z232,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 8,29 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,47 - 7,42 (m, 1H), 7,27 (s, 1H), 6,09 (s, 2H), 4,00 (s, 3H).
xl) 6-(Oxazol-2-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I90
a) Cloruro de 4-ciano-3-fluorobenzoílo I87
A una solución de ácido 4-ciano-3-fluorobenzoico (1,0 g, 6,1 mmol) en DCM (20 ml) a 0 °C se le añadieron gota a gota DMF (0,1 ml) y cloruro de oxalilo (1,86 g, 12,1 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. El disolvente se retiró a presión reducida para dar el compuesto del título (1,2 g) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la etapa siguiente sin purificación adicional.
b) 4-Ciano-N-(2,2-dimetoxietil)-3-fluorobenzamida I88
A una solución de cloruro de 4-ciano-3-fluorobenzoílo I87 (1,1 g, 6,06 mmol) y Et<3>N (1,84 g, 18 mmol) en DCM (20 ml) a 0 °C se le añadió 2,2-dimetoxietanamina (955 mg, 9,1 mmol) y la mezcla se agitó durante 2 h. La mezcla se vertió en agua y se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 1/1, v/v) para dar el compuesto del título (1,2 g, 78%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 1,55 min,m/z274.9 [M+Na]+.
c) 3-Amino-N-(2,2-dimetoxietil)benzo[d]isoxazol-6-carboxamida I89
A una solución de ácido acetohidroxámico (448 mg, 5,95 mmol) en DMF (30 ml) a 0 °C se le añadió en porciones t-BuOK (889 mg, 7,92 mmol) y la mezcla se agitó durante 1 h. Después, se añadió 4-ciano-N-(2,2-dimetoxietil)-3-fluorobenzamida I88 (500 mg, 1,98 mmol) y la mezcla se calentó a 40 °C durante una noche. La mezcla se vertió en agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 1/1, v/v) para dar el compuesto del título (380 mg, 72%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 0,59 min,m/z287.9 [M+Na]+.
d) 6-(Oxazol-2-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I90
Una mezcla de 3-amino-N-(2,2-dimetoxietil)benzo[d]isoxazol-6-carboxamida I89 (240 mg, 0,9 mmol) y P<2>O<5>(193 mg, 1,36 mmol) en ácido metanosulfónico (10 ml) se calentó a 150 °C con irradiación de microondas durante 30 min. La mezcla se vertió en agua, se hizo básica con KOH acuoso y se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se lavó con salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (DCM/MeOH = 10/1, v/v) para dar el compuesto del título (50 mg, 28%) en forma de un sólido. L<c>M<s>-D: Tr 1,57 min,m/z201,9 [M+H]+.
xli) Cloruro de 5-etil-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-sulfonilo I94
a) 5-Etil-2-metoxipiridina I91
A una solución de 5-bromo-2-metoxipiridina (10,2 g, 54,25 mmol) en THF (200 ml) a -78 °C en atmósfera de N2se le añadió n-BuLi (solución 2,5 M en hexano, 24,0 ml, 60,0 mmol) gota a gota y la mezcla se agitó a -78 °C durante 1,5 h. Después, se añadió gota a gota yodoetano (12,7 g, 81,4 mmol) y la mezcla se agitó a -78 °C durante 20 min, después se calentó a TA y se agitó durante 30 min. La reacción se interrumpió con agua (5 ml) y el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se disolvió en DCM, se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (2,8 g, 38%) en forma de un aceite incoloro. LCMS-D: Tr1 ,80min;m/z138,1 [M+H]+.
b) 5-Etilpiridin-2( 1H)-ona I92
Una solución de 5-etil-2-metoxipiridina I91 (1,6 g, 11,66 mmol) en conc. HCl (30 ml) se calentó a 100 °C durante una noche. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 20/1) para dar el compuesto del título (800 mg, 56%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
c) 5-Etil-1-metilpiridin-2(1H)-ona I93
Una mezcla de 5-etilpiridin-2(1H)-ona I92 (800 mg, 6,5 mmol), K2CO3(1,8 g, 13 mmol) y yodometano (1,85 g, 13 mmol) en MeOH (20 ml) se calentó a 50 °C en atmósfera de N2durante una noche. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se disolvió en DCM (100 ml), se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 40/1) para dar el compuesto del título (500 mg, 56%) en forma de un aceite incoloro. LCMS-D: Tr 0,68 min;m/z138,1 [M+H]+.
d) Cloruro de 5-etil-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-sulfonilo I94
Una mezcla de ácido clorosulfónico(6ml) y 5-etil-1-metilpiridin-2(1H)-ona I93 (0,6 g, 4,37 mmol) se calentó a 150 °C en atmósfera de N2durante 3 h, después se dejó enfriar a TA y se vertió sobre hielo (100 g). La mezcla se extrajo con DCM (50 ml x3) y los extractos orgánicos combinados se lavaron dos veces con agua enfriada con hielo, se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 100/1 a 20/1) para dar el compuesto del título (200 mg, 12 %) en forma de un sólido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 7,87 - 7,84 (m, 1H), 7,71 (s, 1H), 3,47 (s, 3H), 2,39 (c,J =7,6 Hz, 2H), 1,09 (t,J= 7,5 Hz, 3H). LCMS-D: Tr 1,58 min;m/z236,0 [M+H]+.
xlii) Cloruro de 5-bromo-2,3-dihidrobenzofuran-7-sulfonilo I95
195
Se añadió lentamente 5-bromo-2,3-dihidrobenzofurano (2,0 g, 10 mmol) a ácido clorosulfónico(6ml) a -5 °C y la mezcla se agitó a -5 °C durante 30 min. La mezcla se vertió en agua enfriada con hielo (100 ml) y se extrajo con EtOAc (180 ml x 2). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (250 ml x 3), se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 15/1) para dar el compuesto del título (1,45 g, 48%) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 7,80 - 7,76 (m, 1H), 7,63 - 7,58 (m, 1H), 4,91 (m, 2H), 3,35 (m, 2H). LCMS-D: Tr 2,74 min;m/z318,8/320,8 [M+Na]+.
xliii) Cloruro de 4,6-dimetoxi-2,3-dihidro-1H-inden-5-sulfonilo I98
a) 5,7-Dimetoxi-2,3-dihidro-1H-inden-1-ona I96
Una mezcla de ácido 3-(3,5-dimetoxifenil)propanoico (5 g, 23,8 mmol) y ácido metanosulfónico (24 ml) se calentó a 90 °C durante 10 min, después se dejó enfriar a TA y se vertió en agua. La mezcla se ajustó a pH 9 con KOH ac. 10 M y se extrajo con EtOAc (x 5). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, y salmuera, se secaron sobre Na2SO4anhidro se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (3,5 g, 76%)en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 1,76 min;m/z193,1 [M+H]+.
b) 4,6-Dimetoxi-2,3-dihidro-1H-indeno I97
Una mezcla de 5,7-dimetoxi-2,3-dihidro-1H-inden-1-ona I96 (3,0 g, 15,6 mmol) y trietilsilano (7,3 g, 62,4 mmol) en TFA (20 ml) se agitó a TA en atmósfera de N<2>durante 11 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 20/1) para dar el compuesto del título (2,0 g, 72%) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCI<3>) ó 6,42 (s, 1H), 6,29 (d,J =2,0 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 2,89 (t,J =7,5 Hz, 2H), 2,80 (t,J =7,3 Hz, 2H), 2,13 - 2,02 (m, 2H).
c) Cloruro de 4,6-dimetoxi-2,3-dihidro-1H-inden-5-sulfonilo I98
A una solución de 4,6-dimetoxi-2,3-dihidro-1H-indeno I97 (1 g, 5,6 mmol) y TMEDA (0,72 g, 6,17 mmol) en n-hexano (20 ml) a -70 °C se le añadió n-BuLi (2,5 M en hexano, 2,5 ml, 6,17 mmol) gota a gota y la mezcla se dejó calentar a 0 °C y se agitó durante 2 h. Después, la mezcla se enfrió de nuevo a -65 °C, se burbujeó con gas SO<2>durante 20 min, y después se dejó calentar lentamente a 10 °C. El precipitado resultante se recogió por filtración y se lavó con éter dietílico seco. El sólido se suspendió en n-hexano (20 ml), se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota SO<2>CI<2>(0,83 g, 6,2 mmol). La mezcla se agitó a 0 °C en atmósfera de N<2>durante 1 h, después se filtró. La torta de filtro se disolvió en éter dietílico y se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (550 mg, 35%) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCI<3>)ó6,72 (s, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 2,96 (c,J =7,6 Hz, 4H), 2,18 - 2,08 (m, 2H).
xliv) Cloruro de 2-metoxi-5-fenoxibencenosulfonilo 1100
a) Ácido 2-metoxi-5-fenoxibencenosulfónico I99
A una solución de 1-metoxi-4-fenoxibenceno (2 g, 10 mmol) en DCM (15 ml) a 0 °C se le añadió gota a gota una solución de ácido clorosulfónico (0,35 ml) en DCM (10 ml) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 15 min. La mezcla se vertió lentamente en agua enfriada con hielo (100 ml) y después se concentró a presión reducida. El residuo se aclaró con DCM (100 ml x 2) y se secó para dar el compuesto del título (560 mg, 40%) en forma de un sólido de color blanquecino. LCMS-D: Tr 0,62 min;m/z281,0 [M+H]+.
b) Cloruro de 2-metoxi-5-fenoxibencenosulfonilo I100
Una mezcla de ácido 2-metoxi-5-fenoxibencenosulfónico I99 (250 mg, 0,9 mmol) y PCl<5>(284 mg, 1,3 mmol) en POCl<3>(3 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N<2>durante 1 h. Después, la mezcla se añadió lentamente a agua enfriada con hielo (20 ml) y se extrajo con DCM (15 ml * 2). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (51 mg, 18%) en forma de un aceite de color amarillo. LCMS-D: Tr 2,72 min;m/z295,0 [M-CI+<o>C<h 3>]+, 317,0 [M-Cl+OCH<3>+Na]+.
xlv) Cloruro de 2,6-dimetoxi-3-(trifluorometil)bencenosulfonilo I102
a) 2,4-Dimetoxi-1-(trifluorometil)benceno I101
A una mezcla de ácido (2,4-dimetoxifenil)borónico (3,0 g, 16,5 mmol), CF<3>SO<2>Na (18,0 g, 115,4 mmol), Cu(OAc)<2>(748 mg, 4,1 mmol), imidazol (281 mg, 4,1 mmol), 2,4,6-colidina (3,0 g, 33,0 mmol) y NH<4>CI (11,3 g, 206,0 mmol) en agua (16,5 ml) y d Cm (100 ml) a 0 °C se le añadió gota a gota t-BuOOH (3,6 ml, 4,1 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 16 h. Después, las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (Éter de pet.) para dar el compuesto del título (900 mg, 27%) en forma de un aceite. 1H RMN (400 MHz, CDCI<3>) ó 7,42 - 7,36 (m, 1H), 6,45 - 6,37 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,76 (s, 3H).
b) Cloruro de 2,6-dimetoxi-3-(trifluorometil)bencenosulfonilo I102
A una solución de 2,4-dimetoxi-1-(trifluorometil)benceno 1101 (1,5 g, 7,3 mmol) y TMEDA (0,93 g, 8,0 mmol) enn-hexano (30 ml) a -78 °C en atmósfera de N2se le añadió n-BuLi (2,5 M en hexano, 3,2 ml, 8,0 mmol) gota a gota y la mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h. Después, se burbujeó gas SO2a través de la mezcla a -78 °C durante 20 minutos y después se dejó calentar a 0 °C y se agitó durante 1 h. El precipitado resultante se recogió por filtración y se lavó con hexano. La torta de filtro se suspendió en n-hexano (30 ml), se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota SO2Ch (1,1 g, 8,0 mmol). La mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h y los sólidos se recogieron por filtración y se lavaron con n-hexano frío. La torta de filtro se disolvió en éter y se lavó con agua. La fase acuosa se extrajo con éter y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 5/1) para dar el compuesto del título (1,5 g,68%) en forma de un sólido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 7,90 - 7,84 (m, 1H), 6,98 - 6,92 (m, 1H), 4,09 (s, 3H), 4,04 (s, 3H).
xlvi) Cloruro de 3-etil-2,6-dimetoxibencenosulfonilo 1106
1103 1104 1105 H06
a) 2,4-Dimetoxi-1-vinilbenceno I103
Una suspensión de 1-bromo-2,4-dimetoxibenceno (4,0 g, 18,4 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioxaborolano (3,4 g, 22,1 mmol), Pd(dppf)Cl<2>'DCM (753 mg, 0,92 mmol) y K<2>CO<3>(7,6 g, 55,2 mmol) en 1,4-dioxano (40 ml) y agua (10 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N<2>durante una noche. La mezcla se filtró a través de una capa de Celite y se aclaró con EtOAc. El filtrado se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (60 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (Éter de pet.) para dar el compuesto del título (2,6 g,86%) en forma de un aceite de color amarillo. LCMS-D: Tr2,28 min;m/z165,0 [M+H]+.
b) Etil-2,4-dimetoxibenceno I104
A una solución de 2,4-dimetoxi-1-vinilbenceno I103 (2,6 g, 15,8 mmol) en EtOAc (50 ml) se le añadió Pd al 10%/C (300 mg) y la mezcla se agitó a TA en una atmósfera de H<2>durante una noche. El catalizador se retiró por filtración a través de Celite y se aclaró con EtOAc. El filtrado se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (2,0 g, 83%) en forma de un aceite de color amarillo. LCMS-D: Tr2,39 min;m/z167,1 [M+H]+.
c) Ácido 3-etil-2,6-dimetoxibencenosulfónico I105
Se preparó a partir de etil-2,4-dimetoxibenceno I104 de acuerdo con el procedimiento descrito para cloruro de 2,6-dimetoxibencenosulfonilo I111. Se descubrió que el producto obtenido era principalmente ácido 3-etil-2,6-dimetoxibencenosulfónico. LCMS-D: Tr2,36 min;m/z247,0 [M+H]+.
d) Cloruro de 3-etil-2,6-dimetoxibencenosulfonilo I106
Una mezcla de ácido 3-etil-2,6-dimetoxibencenosulfónico I105 (300 mg, 1,22 mmol) y cloruro de tionilo(6ml) se calentó a 95 °C durante 3 h y después se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (322 mg,100%) en forma de un aceite de color pardo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
xlvii) Cloruro de 7-metoxiquinolin-8-sulfonilo I107
1107
Se añadió gota a gota ácido clorosulfónico (1,8 g, 15,7 mmol) a 7-metoxiquinolina (500 mg, 3,14 mmol) a 0 °C y lamezcla se calentó a 100 °C durante 1 h. La mezcla se dejó enfriar a TA, se vertió sobre hielo y después se neutralizó con una solución acuosa saturada de NaHCO<3>. La mezcla se extrajo con EtOAc (30 ml * 3) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (280 mg, 34%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 0,27 min;m/z239,9 [M-Cl+H<2>O]+
xlviii) Cloruro de 6-metoxi-2,3-dihidro-1H-inden-5-sulfonilo I108
1108
A una solución de 5-metoxi-2,3-dihidro-1H-indeno (3,1 g, 20,9 mmol) en DCM (40 ml) a -5 °C en atmósfera de N<2>se le añadió gota a gota ácido clorosulfónico (6,5 g, 62,8 mmol) y la mezcla se agitó a -5 °C durante 40 min. La reacción se interrumpió con agua enfriada con hielo (20 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (30 ml * 2). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (50 ml x 3), se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 20/1) para dar el compuesto del título (3,1 g, 60%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 7,77 (d,J =1,1 Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), 4,02 (s, 3H), 2,99 (t,J =7,5 Hz, 2H), 2,91 (t,J =7,4 Hz, 2H), 2,19 - 2,10 (m, 2H).
xlix) Cloruro de 3-metoxi-5,6,7,8-tetrahidronaftaleno-2-sulfonilo I109
1109
Se preparó a partir de 6-metoxi-1,2,3,4-tetrahidronaftaleno y ácido clorosulfónico de acuerdo con el procedimiento descrito para cloruro de 6-metoxi-2,3-dihidro-1H-inden-5-sulfonilo I108 y se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación.
l) Cloruro de 4-bromo-2-metoxibencenosulfonilo I110
1110
Se añadió lentamente 1-bromo-3-metoxibenceno (15,0 g, 80 mmol) a ácido clorosulfónico (16 ml) a -5 °C y la mezcla se agitó a -5 °C durante 5 min. La mezcla se vertió en agua enfriada con hielo (50 ml) y se extrajo con EtOAc (80 ml * 2). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (150 ml x 3), se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 50/1) para dar el compuesto del título (2,6 g, 17%) en forma de un sólido de color amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
li) Cloruro de 2,6-dimetoxibencenosulfonilo I111
1111
A una solución de 1,3-dimetoxibenceno (5,0 g, 36 mmol) y TMEDA (4,6 g, 39,8 mmol) en n-hexano (100 ml) a 0 °C en atmósfera de N<2>se le añadió n-BuLi (solución 2,5 M en hexanos, 16,0 ml, 39,8 mmol) gota a gota mientras se mantenía la temperatura interna de la reacción por debajo de 5 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 20 min, después se enfrió a -78 °C y se burbujeó con gas SO<2>durante 20 min. Después, la mezcla se dejó calentar lentamente a 10 °C y el precipitado resultante se recogió por filtración y se lavó con éter dietílico seco. El sólido se suspendió en n-hexano (100 ml), se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota una solución de SO<2>O<2>(4,9 g, 36 mmol) en n-hexano (20 ml) mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de 3 °C. Después, la mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h y los sólidos se recogieron por filtración y se lavaron con n-hexano frío. Después, los sólidos se repartieron entre éter dietílico y agua, las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo adicionalmente con éter dietílico. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (4,0 g, 47%) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 7,54 (t,J =8,4 Hz, 1H), 6,66 (d,J =8,4 Hz, 2H), 3,97 (s, 6H).
lii) Cloruro de 5-etil-2-metoxibencenosulfonilo I112
1112
Se añadió gota a gota 1-etil-4-metoxibenceno (5,0 g, 37 mmol) a ácido clorosulfónico (20 ml) a 0 °C y la mezcla se agitó a TA durante 2 h y después se vertió sobre hielo y se extrajo con EtOAc (50 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 30/1) para dar el compuesto del título (4,6 g, 53 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,70 min;m/z256,9 [M+Na]+.
liii) Cloruro de 2,4-dimetoxi-[1,1'-bifenil]-3-sulfonilo I114
1113 1114
a) 2,4-Dimetoxi-1,1 ’-bifenilo I113
Una suspensión de 1-bromo-2,4-dimetoxibenceno (5,0 g, 23,0 mmol), ácido fenilborónico (3,4 g, 27,6 mmol), Pd(PPh<3>)<4>(1,3 g, 1,15 mmol) y carbonato potásico (7,3 g, 69,0 mmol) en 1,4-dioxano (30 ml) y agua (6 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N<2>durante 16 h. La mezcla se filtró a través de una capa de Celite y se lavó con EtOAc. El filtrado se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (30 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 10/1) para dar el compuesto del título (2,8 g, 57%) en forma de un aceite de color amarillo. LCMS-D: Tr 2,46 min;m/z215,0 [M+H]+.
b) Cloruro de 2,4-dimetoxi-[1,1 '-bifenil]-3-sulfonilo I114
A una solución de 2,4-dimetoxi-1,1'-bifenilo I113 (1,0 g, 4,70 mmol) y TMEDA (601 mg, 5,20 mmol) en n-hexano (40 ml) a 0 °C en atmósfera de N<2>se le añadió n-BuLi (solución 2,5 M en hexanos, 2,1 ml, 5,20 mmol) gota a gota mientras se mantenía la temperatura interna de la reacción por debajo de 5 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 20 min, después se enfrió a -70 °C y se burbujeó con gas SO<2>durante 20 min. Después, la mezcla se dejó calentar lentamente a 10 °C y el precipitado resultante se recogió por filtración y se lavó con éter dietílico seco. El sólido se suspendió en n-hexano (40 ml), se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota una solución de SO<2>O<2>(634 mg, 4,7 mmol) en n-hexano (5 ml) mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de 3 °C. Después, la mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h y los sólidos se recogieron por filtración y se lavaron con n-hexano frío. Después, los sólidos se repartieron entre éter dietílico y agua, las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo adicionalmente con éter dietílico. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (590 mg, 40%) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6)ó7,48 - 7,35 (m, 4H), 7,34 - 7,21 (m, 2H), 6,87 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,29 (s, 3H).
liv) Cloruro de 3,5-dimetoxi-[1,1'-bifenil]-4-sulfonilo I116
a) 3,5-Dimetoxi-1,1'-bifenilo I115
Una suspensión de 1-bromo-3,5-dimetoxibenceno (5,0 g, 23,0 mmol), ácido fenilborónico (2,8 g, 23,0 mmol), Pd(dppf)Cl<2>(0,57 g, 0,69 mmol) y carbonato potásico (4,8 g, 34,6 mmol) en 1,4-dioxano (80 ml) y agua (20 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N<2>durante 4 h. La mezcla se diluyó con agua, se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 500/1 a 200/1 a 100/1) para dar el compuesto del título (5,2 g, 100%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr2,47 min;m/z215,0 [M+H]+.
b) Cloruro de 3,5-dimetoxi-[1,1 '-bifenil]-4-sulfonilo I116
Se preparó a partir de 3,5-dimetoxi-1,1'-bifenilo I115 de acuerdo con el procedimiento descrito para cloruro de 2,4-dimetoxi-[1,1'-bifenil]-3-sulfonilo I114.1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 7,62 - 7,55 (m, 2H), 7,54 - 7,44 (m, 3H), 6,81 (s, 2H), 4,04 (s,6H).
lv) 4-Metoxi-6-((2,2,2-trifluoroetoxi)metil)benzo[tí]isoxazol-3-amina I118
a)2-Fluoro-6-metoxi-4-((2,2,2-trifluoroetoxi)metil)benzonitrilo I117
A una solución de 2-fluoro-4-(hidroximetil)-6-metoxibenzonitrilo I7 (500 mg, 2,76 mmol) en THF seco (50 ml) a 0 °C en atmósfera de N2se le añadió NaH (dispersión al 60% p/p en aceite, 331 mg, 8,28 mmol) seguido de trifluorometanosulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo (1,9 g, 8,28 mmol) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h, después se dejó calentar a TA y se agitó durante una noche. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. La reacción se repitió dos veces usando 2-fluoro-4-(hidroximetil)-6-metoxibenzonitrilo I7 (100 mg, 0,55 mmol) y los tres lotes se combinaron y se purificaron por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 5/1 a 2/1) para dar el compuesto del título (577 mg, 57%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 2,43 min;m/z263,9 [M+H]+.
b)4-Metoxi-6-((2,2,2-trifluoroetoxi)metil)benzo[d]isoxazol-3-amina I118
Una suspensión de ácido acetohidroxámico(86mg, 1,14 mmol) y t-BuOK (128 mg, 1,14 mmol) en DMF anhidra (10 ml) se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió 2-fluoro-6-metoxi-4-((2,2,2-trifluoroetoxi)metil)benzonitrilo I117 (100 mg, 0,38 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se lavó con salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a presión reducida. La reacción se escaló debidamente usando 2-fluoro-6-metoxi-4-((2,2,2-trifluoroetoxi)metil)benzonitrilo I117 (400 mg, 1,52 mmol) y los dos lotes se combinaron y se purificaron por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 20/1 a 5/1) para dar el producto del título (350 mg, 67%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-C: Tr2,08 min;m/z277,0 [M+H]+.1H RMN (400 MHz, DMSO-d6)ó6,96 (s, 1H),6,68(s, 1H), 5,94 (s, 2H), 4,74 (s, 2H), 4,13 (c,J= 9,4 Hz, 2H), 3,90 (s, 3H).
lvi) 6-(Difluorometoxi)-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I121
1119 1120 I121
a)4-(Difluorometoxi)-2,6-difluorobenzonitrílo I119
A una suspensión de KOH (22,0 g, 392 mmol) en acetonitrilo (30 ml) y agua (30 ml) a -20 °C se le añadió en porciones 2,6-difluoro-4-hidroxibenzonitrilo (3,1 g, 20,0 mmol) seguido de (bromodifluorometil)fosfonato de dietilo (10,0 g, 37,4 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (50 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (4,0 g, 97%) en forma de un aceite incoloro. LCMS-C: Tr 2,11 min;m/z205,9 [M+H]+.
b)4-(Difluorometoxi)-2-fluoro-6-metoxibenzonitrilo I120
A una solución de 4-(difluorometoxi)-2,6-difluorobenzonitrilo I119 (2,52 g, 12,3 mmol) en THF seco (30 ml) se le añadió en porciones NaOMe (1,32 g, 24,57 mmol) y la mezcla se calentó a 40 °C durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (30 ml x<3>). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 10/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (663 mg, 25 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 2,11 min;m/z217,9 [M+H]+.
c)6-(Difluorometoxi)-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I121
Una suspensión de ácido acetohidroxámico (680 mg, 9,15 mmol) y t-BuOK (1,03 g, 9,15 mmol) en DMF anhidra (50 ml) se agitó a TA durante 1 h. Después, se añadió 5-(difluorometoxi)-1-fluoro-2-isociano-3-metoxibenceno I120 (663 mg, 3,05 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (30 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 10/1 a 8/1) para dar el compuesto del título (186 mg, 26%) en forma de un sólido de color naranja claro. LCMS-C: Tr 1,14 min;m/z231,0 [M+H]+.
lviii) 5-Metil-6-(piridin-2-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I124
a)2-Fluoro-5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzonitrilo I122
Una mezcla de 4-bromo-2-fluoro-5-metilbenzonitrilo (500 mg, 2,34 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (1,78 g, 2,34 mmol), acetato potásico (918 mg, 9,36 mmol) y Pd(dppf)Cl<2>(188 mg, 0,23 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) se calentó a reflujo en atmósfera de N<2>durante 3 h. La mezcla se diluyó con agua, se extrajo con EtOAc (300 ml) y la capa orgánica se lavó con agua (50 ml x 3), se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (1,56 g, 88%), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-C: Tr 2,75 min;m/z262,0 [M+H]+.
b)2-Fluoro-5-metil-4-(piridin-2-il)benzonitrilo I123
A una solución de 2-fluoro-5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzonitrilo I122 (1,32 g, 5,1 mmol) y 2-bromopiridina (1,69 g, 7,65 mmol) en 1,4-dioxano (50 ml) y agua (10 ml) en atmósfera de N<2>se le añadieron Pd(PPh<3)4>(589 mg, 0,5 mmol) y Na<2>CO<3>(2,16 g, 20,4 mmol) y la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 8/1 a 3/1) para dar el compuesto del título (440 mg, 88%) en forma de un sólido de color rojo. LCMS-C: Tr 1,09 min;m/z213,0 [M+H]+.
c)5-Metil-6-(piridin-2-il)benzo[d]isoxazol-3-amina I124
Una suspensión de ácido acetohidroxámico (255 mg, 3,39 mmol) y t-BuOK (381 mg, 3,39 mmol) en DMF anhidra (30 ml) se agitó a 0 °C durante 1 h. Después, se añadió 2-fluoro-5-metil-4-(piridin-2-il)benzonitrilo I123 (240 mg, 1,13 mmol) y la mezcla se dejó calentar a TA y se agitó durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (50 ml * 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 8/1 a 3/1) para dar el compuesto del título (180 mg, 73 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 0,50 min;m/z226,0 [M+H]+.
lix) 7-Bromo-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-amina 1129
a) Ácido3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzoico I125
A una solución de 2-bromo-1-fluoro-4-metilbenceno (10,0 g, 53 mmol) y diisopropilamina (5,9 g, 58 mmol) en THF anhidro (200 ml) a -78 °C en atmósfera de N<2>se le añadió n-BuLi (solución 2,5 M en hexanos, 25,6 ml, 64,0 mmol) gota a gota y la mezcla se agitó a -78 °C durante 1 h. Se añadió exceso de CO<2>sólido (hielo seco) y la agitación se continuó a -78 °C durante 3 h. La mezcla se diluyó con agua (500 ml) y se extrajo con EtOAc (500 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (12,3 g, 100%) en forma de un sólido de color pardo, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-C: Tr 2,03 min;m/z232,8 [M+H]+.
b) Cloruro de3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzoílo I126
A una solución de ácido 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzoico I125 (12,3 g, 53 mmol) y DMF (4 gotas) en DCM (100 ml) a TA en atmósfera de N<2>se le añadió gota a gota cloruro de oxalilo (13,0 g, 106 mmol) y la mezcla se agitó durante 2 h. La mezcla se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (14,0 g, 100%) en forma de un sólido de color pardo, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
c)3-Bromo-2-fluoro-5-metilbenzamida I127
Una solución de cloruro de 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzoílo I126 (14,0 g, 53 mmol) en DCM (100 ml) se añadió gota a gota a una solución acuosa al 30% de hidróxido de amonio (100 ml) y la mezcla se agitó durante 2 h. La mezcla se diluyó con EtOAc (200 ml), se lavó con agua (200 ml * 3) y salmuera y la capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (12,0 g, 97%) en forma de un sólido de color pardo, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-C: Tr 1,01 min;m/z231,9 [M+H]+.
d)3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzonitrílo I128
Una solución de 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzamida 1127 (10,0 g, 43,0 mmol) y cloruro de tionilo (15,4 g, 129 mmol) en DMF (100 ml) se calentó a 100 °C durante 3 h. La mezcla se diluyó con EtOAc (200 ml) y se lavó con agua (400 ml x 5) y salmuera y la capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (5,0 g, 54%) en forma de un sólido de color pardo, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-C: Tr 2,50 min;m/z213,9 [M+H]+.
e)7-Bromo-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-amina I129
Una suspensión de ácido acetohidroxámico (5,27 g, 70,2 mmol) y t-BuOK (7,88 g, 70,2 mmol) en DMF anhidra (200 ml) se agitó a 0 °C durante 1 h. Después, se añadió 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzonitrilo I128 (5,0 g, 23,4 mmol) y la mezcla se dejó calentar a TA y se agitó durante una noche. La mezcla se diluyó con EtOAc (300 ml), se lavó con agua (600 ml x 4) y salmuera y la capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 10/1) para dar el compuesto del título (2,8 g, 52 %) en forma de un sólido de color amarillo. Lc Ms -C: Tr 0,50 min;m/z226,9 [M+H]+.
Síntesis de Ejemplos y Ejemplos de referencia
Ejemplos y Ejemplos de referencia 1-45 (Tabla A):
Procedimiento AA
LiHMDS (1 M en THF, 445 pl, 0,445 mmol) se añadió a una solución de 4-clorobenzo[d]isoxazol-3-amina (50 mg, 0,297 mmol) en THF (3 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió el cloruro de sulfonilo (0,445 mmol) y la reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. Los volátiles se redujeron a aproximadamente 1 ml antes de que se añadieran DCM (3 ml) y agua (3 ml) y la mezcla se agitó durante 10 minutos. La mezcla se pasó a través de un separador de fases, después la fracción orgánica se cargó en un cartucho de Siamina de 1 g (Biotage), el cartucho se lavó con MeOH (6 ml) y después el producto se eluyó con una solución de HCl (2 M, 1:1 de metanol:1,4-dioxano 6 ml). Después, los lavados de HCl se evaporaron al vacío para producir el producto deseado.
Procedimiento AB
LiHMDS (1 M en THF, 445 pl, 0,445 mmol) se añadió a una solución de 4-clorobenzo[d]isoxazol-3-amina (50 mg, 0,297 mmol) en THF (3 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió el cloruro de sulfonilo (0,445 mmol) y la reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. Los volátiles se redujeron a aproximadamente 1 ml antes de que se añadieran DCM (3 ml) y agua (3 ml) y la mezcla se agitó durante 10 minutos. La mezcla se pasó a través de un separador de fases, después la fracción orgánica se cargó en un cartucho de Siamina de 1 g (Biotage), el cartucho se lavó con MeOH (6 ml) y después el producto se eluyó con una solución de HCl (2 M, 1:1 de metanol:1,4-dioxano 6 ml). Después, los lavados de HCl se evaporaron al vacío para producir el producto en bruto que se cargó sobre gel de sílice y se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de SiO<2>, EtOAc al 0-100% en bencina de petróleo 40-60 °C) para producir el producto deseado.
Procedimiento AC
LiHMDS (1 M en THF, 445 pl, 0,445 mmol) se añadió a una solución de 4-clorobenzo[d]isoxazol-3-amina (50 mg, 0,297 mmol) en THF (3 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió el cloruro de sulfonilo (0,445 mmol) y la reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. Los volátiles se redujeron a aproximadamente 1 ml antes de que se añadieran DCM (3 ml) y agua (3 ml) y la mezcla se agitó durante 10 minutos. La mezcla se pasó a través de un separador de fases, después la fracción orgánica se cargó en un cartucho de Siamina de 1 g (Biotage), el cartucho se lavó con MeOH (10 ml) y después el producto se eluyó con una solución metanólica de HCl (~1,25 M, 10 ml). Después, los lavados de HCl se evaporaron al vacío para producir el producto deseado.
Procedimiento AD
Una solución de 4-clorobenzo[d]isoxazol-3-amina (50 mg, 0,298 mmol) y el cloruro de sulfonilo (2 equiv., 0,595 mmol) en piridina (1,5 ml) se irradió en el microondas durante 2 horas a 100 °C. Después de la refrigeración, la mezcla de reacción se cargó sobre gel de sílice y se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de SÍO<2>de 24 g, EtOAc al 0-100% en bencina de petróleo 40-60 °C) para producir el producto deseado. Procedimiento AE
Una suspensión del cloruro de sulfonilo (2 equiv., 1,19 mmol) y 4-clorobenzo[d]isoxazol-3-amina (100 mg, 0,593 mmol) en piridina (1,5 ml) se irradió en el microondas durante 2 horas a 100 °C. Después de la refrigeración, la mezcla se cargó sobre gel de sílice y se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de SiO<2>de 24 g, EtOAc al 0-100% en bencina de petróleo 40-60 °C y después MeOH al 0-40% en EtOAc) para producir el producto deseado.
Procedimiento AF
Una suspensión del cloruro de sulfonilo (2 equiv., 1,19 mmol) y 4-clorobenzo[d]isoxazol-3-amina (100 mg, 0,593 mmol) en piridina (1 ml) se irradió en el microondas durante 1 hora a 80 °C. Después de la refrigeración, la mezcla se cargó sobre gel de sílice y se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de SiO<2>de 24 g, EtOAc al 0-100% en bencina de petróleo 40-60 °C) para producir el producto deseado.
Tabla A
Ejemplos de referencia 46-71 (Tabla D):
Una mezcla de benzo[d]isoxazol-3-amina y un cloruro de sulfonilo en piridina (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se concentró y se diluyó con HCl acuoso al 5% (1 ml) y se sonicó durante un mínimo de 30 minutos. El precipitado resultante se recogió por filtración o extracción de DCM (2x1 ml) y se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (gradiente de EtOAc/bencina de petróleo 40-60 °C) o HPLC preparativa dirigida a masas para dar el producto deseado. Véase la Tabla B para los componentes de reacción y cantidades usadas así como para las condiciones de purificación.
Procedimiento BB
Una mezcla de benzo[d]isoxazol-3-amina y un cloruro de sulfonilo en piridina (0,5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 64 horas. La reacción se concentró y se diluyó con HCl acuoso al 5% (1 ml) y se sonicó durante un mínimo de 30 minutos. El precipitado resultante se recogió por filtración y una porción del material en bruto (50 mg o menos) se purificó por HPLC preparativa dirigida a masas para dar el producto deseado. Véase la Tabla B para los componentes de reacción y cantidades usadas.
Procedimiento BC
Una mezcla de benzo[d]isoxazol-3-amina y un cloruro de sulfonilo en piridina (0,5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se concentró y se diluyó con HCl acuoso al 5% (1 ml) y se sonicó durante un mínimo de 30 minutos. El precipitado resultante se recogió por filtración y una porción del material en bruto (50 mg o menos) se purificó por HPLC preparativa dirigida a masas para dar el producto deseado. Véase la Tabla B para los componentes de reacción y cantidades usadas.
Tabla B
Procedimiento CA
Una mezcla de benzo[d]isoxazol-3-amina y un cloruro de sulfonilo en piridina (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas, momento en el que se añadió una segunda porción de cloruro de bencenosulfonilo y se agitó durante 64 horas más. La reacción se concentró y se diluyó con HCl acuoso al 5% (1 ml) y se sonicó durante un mínimo de 30 minutos. El precipitado resultante se recogió por filtración y se purificó por HPLC preparativa dirigida a masas (hasta 50 mg de material en bruto) o por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-40%/bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el producto deseado. Véase la Tabla C para los componentes de reacción y cantidades usadas así como para las condiciones de purificación.
Tabla C
Tabla D
Ejemplos y Ejemplos de referencia 72-88 (Tabla E):
Se añadió NaH (al 60% en aceite mineral, 49 mg, 1,22 mmol) a una solución de 4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina (50 mg, 0,305 mmol) en THF (3,0 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió cloruro de sulfonilo (1 equiv., 0,305 mmol) y la reacción se agitó durante 16 horas. Los volátiles se redujeron a aproximadamente 1 ml antes de que se añadieran DCM (3 ml) y agua (3 ml) y la mezcla se agitó durante 10 minutos. La mezcla se pasó a través de un separador de fases, después la fracción orgánica se cargó en un cartucho de Si-amina de 1 g (Biotage), el cartucho se lavó con MeOH (6 ml) y después el producto se eluyó con una solución de HCl (1,25 M en metanol, 6 ml). Los lavados de HCl se evaporaron al vacío para producir el producto deseado.
Procedimiento EB
Se añadió NaH (al 60% en aceite mineral, 61 mg, 1,52 mmol) a una solución de 4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina (50 mg, 0,305 mmol) en DMF (3,0 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió cloruro de sulfonilo (1 equiv., 0,305 mmol) y la reacción se agitó durante 16 horas. La mezcla resultante se cargó sobre gel de sílice y se purificó por cromatografía en columna (bencina de petróleo 40-60 °C al 0-100% y después MeOH al 0-60% en EtOAc) para producir el producto deseado.
Procedimiento EC
Se añadió NaH (al 60% en aceite mineral, 22 mg, 0,914 mmol) a una solución de 4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina (50 mg, 0,305 mmol) en DMF (5 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió cloruro de sulfonilo (1 equiv., 0,305 mmol) y la reacción se agitó durante 16 horas. La mezcla resultante se inactivó con agua (3 ml), se agitó durante 10 minutos a temperatura ambiente, después se cargó sobre gel de sílice y se purificó por cromatografía en columna (bencina de petróleo 40-60 °C al 0-100% y después MeOH al 0-60% en EtOAc) para producir el producto deseado.
Procedimiento ED
Se añadió NaH (al 60% en aceite mineral, 5 o 10 equiv.) a una solución de 4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina (100 mg, 0,609 mmol) en THF (5,0 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió cloruro de sulfonilo (1 equiv., 0,609 mmol) y la reacción se agitó durante 16 horas. La mezcla resultante se cargó sobre gel de sílice y sepurificó por cromatografía en columna (bencina de petróleo 40-60 °C al 0-100% y después MeOH al 0-60% en EtOAc) para producir el producto deseado.
Procedimiento EF
Se añadió NaH (al 60% en aceite mineral, 122 mg, 3,05 mmol) a una solución de 4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina (100 mg, 0,609 mmol) en THF (5,0 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió cloruro de sulfonilo (1 equiv., 0,609 mmol) y la reacción se agitó durante 16 horas. La mezcla resultante se cargó sobre gel de sílice y se purificó por cromatografía en columna (bencina de petróleo 40-60 °C al 0-100% y después MeOH al 0-60% en EtOAc) y el sólido aislado se sonicó en MeOH (1 ml) y se recogió por filtración para producir el producto deseado.
Procedimiento EG
Se añadió NaH (al 60% en aceite mineral, 122 mg, 3,05 mmol) a una solución de 4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina (100 mg, 0,609 mmol) en THF (5,0 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió el cloruro de sulfonilo (1 equiv., 0,609 mmol) y la reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. Los volátiles se redujeron a aproximadamente 1 ml antes de que se añadieran cuidadosamente DCM (3 ml) y agua (3 ml) y se agitó durante 10 minutos. La mezcla se pasó a través de un separador de fases, después la fracción orgánica se cargó en un cartucho de Si-amina de 1 g (Biotage), el cartucho se lavó con MeOH (6 ml) y después el producto se eluyó con una solución de HCl (2 M, 1:1 de metanol:1,4-dioxano, 6 ml). Después, los lavados de HCl se evaporaron al vacío para producir el producto deseado.
Procedimiento EH
Una suspensión de 4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina (48 mg, 0,29 mmol) y NaH (al 60% en aceite mineral, 0,117 mg, 2,93 mmol) en DMF (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos antes de enfriarse a -78 °C. A esta mezcla enfriada se le añadió el cloruro de sulfonilo (1,5 equiv., 0,439 mmol) y la mezcla se agitó a -78 °C durante 1 hora y después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. La mezcla de reacción se cargó sobre gel de sílice y se purificó por cromatografía en columna (Biotage Isolera, cartucho de SiO2de 24 g, EtOAc al 0-100% en bencina de petróleo 40-60 °C y después MeOH al 0-40% en EtOAc) para dar un sólido que se suspendió en éter dietílico (25 ml) y se sonicó durante 5 minutos. El sólido se recogió por filtración y se secó al aire para dar el producto deseado.
Procedimiento EI
Una mezcla de 4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina (0,035 g, 0,21 mmol) y un cloruro de sulfonilo (1,05 equiv., 0,22 mmol) en piridina (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se concentró y se diluyó con HCl acuoso al 5% (1 ml) y se sonicó durante un mínimo de 30 minutos. La extracción con DCM (2 x 1 ml) y la purificación usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-100% en bencina de petróleo 40-60 °C) dieron el producto deseado.
Procedimiento EJ
A una solución de 4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina (1 equiv.) en THF (3 ml) se le añadió LiHMDS (1 M en THF, 1,5 equiv.). Después de 10 minutos de agitación, se añadió el cloruro de sulfonilo (1,5 equiv.) y la reacción se dejó en agitación durante 17 horas, abierta al aire. El THF se retiró al vacío, después se añadieron DCM (3 ml) y agua (3 ml) y se agitó durante 10 minutos. Tras la separación de las capas, la fracción orgánica se cargó sobre un cartucho de Siamina de 1 g (Biotage). El cartucho se lavó con MeOH (6 ml) y después se destiló azeotrópicamente con HCl 1,25 M en MeOH (6 ml). Después, los lavados de HCl se evaporaron al vacío para producir el producto deseado.
Tabla E
Ejemplos y Ejemplos de referencia 89-147 (Tabla F)
Procedimiento FA
A una solución de la amina (0,5 mmol, 1,0 equiv.) en THF anhidro (10 ml) a -78 °C en atmósfera de N2se le añadió gota a gota LiHMDS (solución 1 M en THF, 3 equiv.) y la mezcla se agitó a -78 °C durante 30 min. Después, se añadió gota a gota una solución del cloruro de sulfonilo (1,5 equiv.) en THF anhidro (2,0 ml) y la mezcla se dejó calentar a TA y se agitó durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna o TLC prep. para dar el compuesto del título. En la Tabla F se han señalado variaciones de las condiciones anteriores.
Procedimiento FB
piridinaR1NHÍR2S02CI
100 oC
A una solución de la amina (0,3 mmol, 1,0 equiv.) en piridina (5 ml) en atmósfera de N2se le añadió el cloruro de sulfonilo (2,0 equiv.) y la mezcla se calentó a 100 °C durante una noche. La reacción se interrumpió con HCl ac. 1 M, después se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna o TLC prep. para dar el compuesto del título. En la Tabla F se han señalado variaciones de las condiciones anteriores.
Procedimiento FC
n-BuLi R 2n/P
Ri NH2 R2S02CI -----------------------** n ' Ri
0 H
A una solución de la amina (0,5 mmol, 1,0 equiv.) en THF anhidro (10 ml) a -20 °C en atmósfera de N2se le añadió gota a gota n-BuLi (2,5 M en hexanos, 1,5 equiv.) gota y la mezcla se agitó a -20 °C durante 1 h. Después, se añadió gota a gota una solución del cloruro de sulfonilo (1,5 equiv.) en THF anhidro (2,0 ml) y la mezcla se dejó calentar a TA y se agitó durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep.(DCM/MeOH = 20/1) para dar el compuesto del título.
Procedimiento FD
A una solución de la amina (0,5 mmol, 1,0 equiv.) en THF anhidro (10 ml) a -78 °C en atmósfera de N2se le añadió gota a gota KHMDS (solución 1 M en THF, equivalentes especificados en la Tabla F) y la mezcla se agitó a -78 °C o 0 °C durante 30 min a 1 h (especificado en la Tabla F). Después, se añadió gota a gota una solución del cloruro de sulfonilo (equivalentes especificados en la Tabla F) en THF anhidro (2,0 ml) y la mezcla se dejó calentar a TA y se agitó durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna o TLC prep. para dar el compuesto del título.
Tabla F
Ejemplo de referencia 148: N-(benzo[d]isoxazol-3-il)-2,4-dimetoxibencenosulfonamida 148
Una solución de cloruro de 2,4-dimetoxibencenosulfonilo (0,18 g, 0,75 mmol) y benzo[d]isoxazol-3-amina (0,10 g, 0,75 mmol) en piridina (1 ml) se irradió en el microondas a 110 °C durante 2 horas. La mezcla resultante se cargó sobre gel de sílice y el producto se purificó dos veces por cromatografía en columna (cartucho de 4 g de SiÜ2, EtOAc al 0-45% en bencina de petróleo 40-60 °C y después cartucho de 4 g de SiO2, EtOAc al 0-35% en bencina de petróleo 40-60 °C) para producir dos lotes (78 mg y 5 mg) del compuesto del título (masa total 83 mg, rendimiento del 33%) en forma de sólidos de color blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 8,11 (d, J = 8,05 Hz, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,70 (d, J = 8,81 Hz, 1H), 7,57 - 7,50 (m, 1H), 7,47 - 7,40 (m, 1H), 7,37 - 7,29 (m, 1H), 6,50 (d, J = 2,27 Hz, 1H), 6,42 (dd, J = 2,25, 8,81 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,81 (s, 3H). LCMS-B: tr 3,20 min, m/z = 356,8 [M+Na]+, 334,8 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 149: N-(benzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 149
Una solución de cloruro de 2,6-dimetoxibenceno-1-sulfonilo I111 (0,088 g, 0,37 mmol) y benzo[d]isoxazol-3-amina (0,050 g, 0,37 mmol) en piridina (1 ml) se irradió en el microondas a 110 °C durante 2 horas, después a 120 °C durante2 horas. La mezcla de reacción se cargó sobre sílice y se purificó por cromatografía en columna (cartucho de 12 g de SÍO2, EtOAc al 0-35% en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título (3,9 mg, rendimiento del 3,1%) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 8,30 (s, 1H), 8,17 (dt, J = 1,04, 8,15 Hz, 1H), 7,55 - 7,47 (m, 1H), 7,47 - 7,34 (m, 2H), 7,34 - 7,28 (m, 1H), 6,60 (d, J = 8,52 Hz, 2H), 3,91 (s,<6 H). LCMS-B: tr 3,13 min,>m/z = 334,8 [M+H]+.
Ejemplo 150: N-(5-clorobenzo[tf]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 150
150
a) 5-Clorobenzo[d]isoxazol-3-amina A1
Se añadió ferc-butóxido potásico (793 mg, 7,07 mmol) a una suspensión de ácido acetohidroxámico (531 mg, 7,07 mmol) en DMF (10 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió 5-cloro-2-fluorobenzonitrilo (1,00 g, 6,43 mmol) y la reacción se calentó a 50 °C durante 1 hora. Tras el enfriamiento, la mezcla de reacción se diluyó con una solución saturada acuosa de NaCl (15 ml), la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 *100ml), los extractos orgánicos se combinaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y los volátiles se retiraron al vacío. El residuo se cargó sobre gel de sílice y el producto se purificó por cromatografía en columna (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de SiO2, EtOAc al 0-40% en bencina de petróleo 40-60 °C) para producir el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (507 mg, 47%).<1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó = 7,94 (dd,>J = 2,1, 0,6, 1H), 7,59 - 7,48 (m, 1H), 6,51 (s, 1H).
b) N-(5-clorobenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 150
Una suspensión de cloruro de 5-etil-2-metoxibenceno-1-sulfonilo (150 mg, 0,639 mmol) y 5-clorobenzo[d]isoxazol-3-amina A1 (108 mg, 0,639 mmol) en piridina (1,5 ml) se irradió en el microondas a 110 °C durante 2 horas. Se añadió una solución acuosa 10 M de KOH (1 ml) y la mezcla resultante se agitó durante 4 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se cargó sobre gel de sílice y el producto se purificó por cromatografía en columna (EtOAc al 0-100% en bencina de petróleo 40-60 °C) para producir el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (53 mg, 23%).<1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó = 8,11 (t,>J = 1,4, 1H), 7,71 (d, J = 2,3, 1H), 7,68 (d, J = 1,4, 2H), 7,48 (dd, J = 8,5, 2,3, 1H), 7,10 (d, J =<8 ,6 , 1H), 3,72 (s, 3H), 2,62 (c,>J = 7,6, 2H), 1,16 (t, J = 7,6, 3H). LCMS-A: tr 6,637 min; m/z 367,0 [M+H]+.
Ejemplo 151: N-(4-clorobenzo[tf]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 151
a) N-(4-clorobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-(fenilsulfonil)bencenosulfonamida A2
Una solución de 4-clorobenzo[d]isoxazol-3-amina (50 mg, 0,298 mmol) y cloruro de bencenosulfonilo (2 equiv., 0,595 mmol) en piridina (1,5 ml) se irradió en el microondas durante 2 horas a 100 °C. Después de la refrigeración, la mezcla de reacción se cargó sobre gel de sílice y se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 24 g de SiO2, EtOAc al 0-100% en bencina de petróleo 40-60 °C) para producir el compuesto del título.<1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó = 7,97 (d,>J =<8 ,6 , 1H), 7,90 - 7,77 (m, 6 H), 7,71 - 7,64 (m, 7H), 7,57 (d,>J = 7,7, 1H).
b) N-(4-clorobenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 151
Una suspensión de N-(4-clorobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-(fenilsulfonil)bencenosulfonamida A2 (50 mg, 0,11 mmol) en THF (10 ml) y solución acuosa 10 M de KOH (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (25 ml), la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (25 ml) se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La goma resultante se disolvió en una cantidad mínima de acetona antes de que se añadiera bencina de petróleo 40 60 °C (50 ml) y el precipitado se filtró y se secó al aire para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color castaño (10 mg, 29%).<1H RMN (400 MHz, DMSO-de)>ó = 7,89 - 7,80 (m, 2H), 7,41 - 7,30 (m, 4H), 7,26 (dd, J = 8,3, 0,8, 1H), 7,10 (dd, J = 7,5, 0,8, 1H). LCMS-A: tr 6,334 min, m/z 307,0 [M-H]-.
Ejemplo 152: 5-Etil-N-(7-fluorobenzo[tf]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida 152
a) 7-Fluorobenzo[d]isoxazol-3-amina A3
Se añadió terc-butóxido potásico (887 mg, 7,91 mmol) a una suspensión de ácido acetohidroxámico (594 mg, 7,91 mmol) en DMF (10 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió 2,3-difluorobenzonitrilo (1,00 g, 7,19 mmol) y la reacción se calentó a 50 °C durante 1 hora. Tras el enfriamiento, la mezcla de reacción se diluyó con una solución saturada acuosa de NaCl (15 ml), la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x100ml), los extractos orgánicos se combinaron, se secaron (Na2SO4) y se filtraron y los volátiles se retiraron al vacío. La goma resultante se cargó sobre gel de sílice y se purificó por cromatografía en columna (Biotage Isolera, cartucho de 24 g de SiO2, EtOAc al 0-100 % en bencina de petróleo 40-60 °C) para producir el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (303 mg, 27 %). 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó = 7,33 (dd, J = 7,6, 1,3, 1H), 7,30 - 7,26 (m, 1H), 7,26 - 7,19 (m, 1H), 4,45 (s, 2H). LCMS-B: tr 3,371 min, m/z 153,2 [M+H]+.
b) 5-Etil-N-(7-fluorobenzo[d]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida 152
Una solución de 7-fluorobenzo[d]isoxazol-3-amina A3 (100 mg, 0,657 mmol) y cloruro de 2-metoxi-5-etilsulfonilo I112 (154 mg, 0,657 mmol) en piridina (2 ml) se irradió en el microondas durante 2 horas a 100 °C. Después de la refrigeración, la mezcla de reacción se cargó sobre gel de sílice y se purificó por cromatografía en columna (Biotage Isolera, cartucho de 24 g de SiO2, EtOAc al 0-100 % en bencina de petróleo 40-60 °C) para producir el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (127 mg, 55 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó = 7,91 (dd, J = 8,1, 0,8, 1H), 7,73 (d, J = 2,3, 1H), 7,57 (dd, J = 11,9, 8,0, 1H), 7,48 (dd, J = 8,5, 2,3, 1H), 7,38 (td, J = 8,0, 4,1, 1H), 7,10 (d, J =<8 ,6 , 1H), 3,73 (s, 3H), 2,63 (c,>J = 7,6, 2H), 1,16 (t, J = 7,6, 3H). LCMS-A: tr 6,429 min, m/z 351,1 [M+H]+.
Ejemplo 153: N-(4-Cloro-5-metilbenzo[tf]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 153
153
a) 4-Cloro-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-amina A4
Se añadió terc-butóxido potásico (728 mg, 6,49 mmol) a una suspensión de ácido acetohidroxámico (487 mg, 6,49 mmol) en DMF (10 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió 2-cloro-6-fluoro-3-metilbenzonitrilo (1,00 g, 5,90 mmol) y la reacción se calentó a 50 °C durante 1 hora. Tras el enfriamiento, la mezcla de reacción se diluyó con una solución saturada acuosa de NaCl (15 ml), la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x100ml), los extractos orgánicos se combinaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y los volátiles se retiraron al vacío. El sólido resultante se sonicó en acetona (10 ml) antes de que se añadiera bencina de petróleo 40-60 °C (50 ml), el precipitado se recogió por filtración y se secó al aire para producir el producto en forma de un sólido de color blanco (524 mg, 49%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó = 7,51 (d, J = 8,5, 1H), 7,38 (d, J = 8,5, 1H), 6,15 (s, 2H), 2,38 (s, 3H). LCMS-B: tr 3,562 min, m/z 183,1 [M+H]+.
b) N-(4-Cloro-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 153
Una solución de 4-cloro-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-amina A4 (100 mg, 0,548 mmol) y cloruro de 2-metoxi-5-etilsulfonilo I112 (129 mg, 0,548 mmol) en piridina (2 ml) se irradió en el microondas durante 2 horas a 100 °C. Después de la refrigeración, la mezcla de reacción se añadió a agua, el precipitado se retiró por filtración y el filtrado se cargó sobre gel de sílice y se purificó por cromatografía en columna (Biotage Isolera, cartucho de 24 g de SiO2, EtOAc al 0-100% en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (33 mg, 16%).
1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó = 10,48 (s, 1H), 7,69 - 7,57 (m, 3H), 7,48 (dd, J = 8,5, 2,3, 1H), 7,15 (d, J = 8,5, 1H), 3,68 (s, 3H), 2,60 (c, J = 7,5, 2H), 2,42 (s, 3H), 1,15 (t, J = 7,6, 3H). LCMS-A: tr 6,665 min, m/z 381,1 [M+H]+.
Ejemplo 154: N-(4-clorobenzo[tf]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 154
Una mezcla de cloruro de 5-etil-2-metoxibencenosulfonilo I112 (0,414 g, 1,77 mmol) y 4-clorobenzo[d]isoxazol-3-amina (0,225 g, 1,34 mmol) en piridina (2,0 ml) se agitó a 30 °C durante 40 horas en una atmósfera de nitrógeno. La reacción se concentró, después se sonicó durante 2 horas con HCl acuoso (al 5%) y el precipitado resultante se recogió. El precipitado se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo al 0-100%/bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título en forma de dos fracciones (A y B) con un rendimiento combinado de 0,060 g, rendimiento del12%.
Fracción A: Rendimiento 0,038 g. 1H RMN (400 MHz, acetona-de) ó<8,88 (s a, 1H), 7,75 (d,>J = 2,3 Hz, 1H), 7,66 (dd, J = 8,5, 7,6 Hz, 1H), 7,57 (dd, J = 8,5, 0,6 Hz, 1H), 7,49 (dd, J = 8,5, 2,3 Hz, 1H), 7,42 (dd, J = 7,6, 0,6 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,66 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,21 (t, J = 7,6 Hz, 3H). LCMS-B: tr 3,766 min; m/z 367,1/369,1 [M+H]+.
Fracción B: Rendimiento 0,021 g. 1H RMN (400 MHz, acetona-de) ó<8,88 (s a, 1H), 7,75 (d,>J = 2,3 Hz, 1H), 7,65 (dd, J = 8,5, 7,6 Hz, 1H), 7,59 - 7,55 (m, 1H), 7,49 (dd, J = 8,5, 2,3 Hz, 1H), 7,44 - 7,40 (m, 1H), 7,14 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H), 2,66 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,21 (t, J = 7,6 Hz, 3H). LCMS-B: tr 3,755 min; m/z 367,1/369,1 [M+H]+.
Ejemplo 155: N-(4-clorobenzo[rf]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida 155
155
Una mezcla de 4-clorobenzo[d]isoxazol-3-amina (0,034 g, 0,200 mmol) y cloruro de 2-metoxibencenosulfonilo (0,092 g, 0,450 mmol) en piridina (1,0 ml) y trietilamina (0,1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se concentró y se diluyó con HCl acuoso al 5% (1 ml) y se sonicó durante un mínimo de 30 minutos. El precipitado resultante se recogió por filtración y se purificó usando HPLC preparativa dirigida a masas para dar el compuesto del título. 1H RMN (400 MHz, acetona-de)<6 7,94 - 7,91 (dd,>J = 7,8, 1,7 Hz, 1H), 7,69 - 7,63 (m, 2H), 7,60 - 7,57 (dd, J = 8,5, 0,7 Hz, 1H), 7,44 - 7,42 (dd, J = 7,6, 0,7 Hz, 1H), 7,25 - 7,22 (m, 1H), 7,16 - 7,11 (m, 1H), 3,94 -3,94 (s, 3H). HPLC-MS: tr 6,02 min; m/z 339,16/341,18 [M+H]+.
Ejemplo 156: N-(4-fluorobenzo[d]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida 156
156
Una mezcla de 4-fluorobenzo[d]isoxazol-3-amina (0,032 g, 0,21 mmol) y cloruro de 2-metoxibencenosulfonilo (0,109 g, 0,529 mmol) en piridina (1,0 ml) y trietilamina (0,1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se concentró y se diluyó con HCl acuoso al 5% (1 ml) y se sonicó durante un mínimo de 30 minutos. El precipitado resultante se recogió por filtración y se purificó usando HPLC preparativa dirigida a masas para dar el compuesto del título. 1H RMN (400 MHz, acetona-de)<6 9,73 - 9,45 (s a, 1H), 7,92 - 7,88 (dd,>J = 7,9, 1,7 Hz, 1H), 7,70 - 7,61 (m, 2H),<7 ,44 - 7,40 (d,>J = 8,5 Hz, 1H), 7,25 - 7,21 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,13 - 7,07 (m, 2H), 3,95 - 3,91 (s, 3H). HPLC-MS: tr 5,72 min; m/z 323,16 [M+H]+.
Ejemplo 157: N-(6-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida 157
I75
Una mezcla de 6-bromobenzo[d]isoxazol-3-amina I75 (0,039 g, 0,180 mmol) y cloruro de 2-metoxibencenosulfonilo (0,101 g, 0,490 mmol) en piridina (1,0 ml) y trietilamina (0,1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se concentró y se diluyó con HCl acuoso al 5% (1 ml) y se sonicó durante un mínimo de 30 minutos. El precipitado resultante se recogió por filtración y se purificó usando HPLC preparativa dirigida a masas para dar el compuesto del título. 1H RMN (400 MHz, acetona-de)<6 8,06 - 8,02 (dd,>J =<8 ,6 , 0,5 Hz, 1H), 7,90 - 7,87 (dd,>J = 7,9, 1,7 Hz, 1H), 7,85 - 7,83 (dd, J = 1,6, 0,5 Hz, 1H), 7,64 - 7,59 (ddd, J = 8,4, 7,4, 1,8 Hz, 1H), 7,58 - 7,54 (dd, J =<8 ,6 , 1,6 Hz, 1H), 7,21 - 7,18 (dd,>J = 8,4, 0,8 Hz, 1H), 7,10 - 7,05 (m, 1H), 3,88 - 3,85 (s, 3H). HPLC-MS: tr 6,32 min; m/z 383,1/385,2 [M+H]+.
Ejemplo 158: N-(6-clorobenzo[d]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida 158
Una mezcla de 6-clorobenzo[d]isoxazol-3-amina (0,033 g, 0,200 mmol) y cloruro de 2-metoxibencenosulfonilo (0,095 g, 0,460 mmol) se agitaron en piridina (1,0 ml) y trietilamina (0,1 ml) a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se concentró y se diluyó con HCl acuoso al 5% (1 ml) y se sonicó durante un mínimo de 30 min. El precipitado resultante se recogió por filtración y se purificó usando HPLC preparativa dirigida a masas para dar el compuesto del título. 1H RMN (400 MHz, acetona-de)<6 8,12 - 8,07 (dd,>J =<8 ,6 , 0,5 Hz, 1H), 7,91 - 7,87 (dd,>J = 7,9, 1.7 Hz, 1H), 7,68 - 7,65 (dd, J = 1,7, 0,5 Hz, 1H), 7,64 - 7,58 (ddd, J = 8,4, 7,4, 1,8 Hz, 1H), 7,44 - 7,39 (dd, J =<8 ,6 , 1.7 Hz, 1H), 7,21 - 7,17 (m, 1H), 7,10 - 7,05 (m, 1H), 3,88 - 3,86 (s, 3H). HPLC-MS: tr 6,26 min;>m/z 339,16/341,18 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 159: N-(4-clorobenzo[d]isoxazol-3-il)isoquinolin-8-sulfonamida 159
Una solución de 4-clorobenzo[d]isoxazol-3-amina (0,050 g, 0,30 mmol) en THF anhidro (2 ml) se enfrió a -78 °C en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió cuidadosamente una solución de bis(trimetilsilil)amida de litio (1,0 M en THF, 0,59 ml, 0,59 mmol) antes de agitar la mezcla a 0 °C durante 1 hora. La mezcla se enfrió hasta -78 °C, se añadió una solución de cloruro de8-isoquinolinsulfonilo (0,068 g, 0,30 mmol) en THF anhidro (1 ml) y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de agitar durante 3 horas, el análisis por TLC solo indicó la presencia de material de partida. La mezcla se enfrió hasta -78 °C, se añadió hidruro sódico (dispersión al 60% en aceite mineral, 0,059 g, 1,5 mmol) y la mezcla se devolvió a la temperatura ambiente y se agitó durante una noche. Se añadió agua (10 ml) y el pH se ajustó a ~3 con HCl ac. (2 M). La fase acuosa se extrajo con DCM (3 x 20 ml), los extractos orgánicos se combinaron y se secaron (MgSÜ4) y el disolvente se retiró al vacío. El residuo sólido se purificó por cromatografía en columna (Biotage Isolera, cartucho de 12 g de SiÜ2, EtOAc al 0-100% en benzina de petróleo a 40-60 °C, y después MeOH al 0-40% en EtOAc) para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (0,026 g, 24%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de)<6 10,31 (s, 1H), 8,53 (d,>J = 5,8 Hz, 1H), 8,28 - 8,21 (m, 1H), 8,09 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 7,89 - 7,82 (m, 1H), 7,39 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 7,5 Hz, 1H). LCMS-A: tr 5,43 min; m/z 360,1 [M+H]+.
Ejemplo 160: W-(7-yodo-4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 160
a) 7-yodo-4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina A5
Una porción de 4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina I9 (0,121 g, 0,581 mmol) se disolvió en N,N-dimetilformamida (2 ml) y después se añadió N-yodosuccinimida (0,131 g, 0,581 mmol). Después de que se completara la adición, la mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante 2 h. Al final de este periodo, la mezcla dereacción se vertió sobre hielo y después se diluyó con EtOAc (15 ml). La mezcla resultante se lavó con H2O (3 *8ml) y salmuera(8ml), se secó sobre Na2SO4y se filtró. Los volátiles se retiraron a presión reducida y el residuo se purificó dos veces por cromatografía en columna (cartucho de 12 g de SiO2, EtOAc al 0 - 35% en bencina de petróleo 40-60 °C y después cartucho de 12 g de SiO2, EtOAc al 0 - 25% en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título (0,038 g, rendimiento del 20%) en forma de un sólido de color blanquecino. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 56,78 (s, 1H), 4,73 (s, 2H), 4,54 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,50 (s, 3H). LCMS-A: tr 3,26 min, m/z 334,7 [M+H]+.
b) N-(7-yodo-4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 160
Una solución de 7-yodo-4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina A5 (0,024 g, 0,099 mmol) y cloruro de 2,6-dimetoxibencenosulfonilo I111 (0,023 g, 0,099 mmol) en piridina (0,5 ml) se irradió en el microondas a 110 °C durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se cargó en húmedo sobre un cartucho de sílice. El residuo se purificó por cromatografía en columna (cartucho de 12 g de SiO2, EtOAc al 0-70% en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título (0,032 g, rendimiento del 53%) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCla) 57,38 (t, J = 8,5 Hz, 1H),<6,86 (s, 1H), 6,58 (d,>J = 8,5 Hz, 2H), 4,52 (s, 2H), 4,04 (s, 3H), 3,88 (s,<6 H), 3,51 (s, 3H). LCMS-A: tr 5,86 min,>m/z 534,6 [M+H]+.
Ejemplo 161: W-(7-cloro-4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 161
a) 7-Cloro-4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina A6
Se disolvió 4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina I9 (0,150 g, 0,720 mmol) en N,N-dimetilformamida (2 ml) y después se añadió N-clorosuccinimida (96 mg, 0,72 mmol). Después de que se completara la adición, la mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante 2 horas. Al final de este periodo, la mezcla de reacción se vertió sobre hielo y después se diluyó con EtOAc (15 ml). La mezcla resultante se lavó con H2O (3 *8ml) y salmuera(8ml), se secó sobre Na2SO4y se filtró. Los volátiles se retiraron a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (cartucho de 12 g de SiO2, EtOAc al 0 - 40% en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título (0,0240 g, rendimiento del 14%) en forma de un sólido de color blanco.1H RMN (400Mhz ,CDCla) 56,77 (s,1H), 4,63 (d, J = 0,6 Hz, 2H), 3,97 (s, 3H), 3,49 (s, 3H).
b) N-(7-cloro-4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibenceno-sulfonamida 161
Una solución de 7-cloro-4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina A6(0,024 g, 0,099 mmol) y cloruro de 2,6-dimetoxibencenosulfonilo I111 (0,023 g, 0,099 mmol) en piridina (0,5 ml) se irradió en el microondas a 110 °C durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se cargó en húmedo en un cartucho de sílice. El residuo se purificó por cromatografía en columna (cartucho de 12 g de SiO2, EtOAc al 0-100 % en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título (0,0094 g, rendimiento del 21 %) en forma de un sólido de color blanco.1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,20 (s, 1H), 7,39 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,59 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,61 (d, J = 0,6 Hz, 2H), 4,04 (s, 3H), 3,88 (s,<6 H), 3,49 (s, 3H). LCMS-F: tr 6,39 min,>m/z 442,8 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 162: 5-metoxi-N-(4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-il)quinolin-8-sulfonamida 162
Una solución de 4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina I9 (0,0500 g, 0,240 mmol) y cloruro de 5-metoxiquinolin-<8>-sulfonilo (0,0619 g, 0,240 mmol) en piridina (0,500 ml) se irradió en el microondas a 110 °C durante 2 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió a DCM (10 ml). La capa orgánica se lavó con HCl 0,5 M (10 ml) y las capas se separaron con un cartucho de separación de fases. Las capas orgánicas recogidas se secaron al vacío y el residuo se purificó por cromatografía en columna (cartucho de 12 g de SiO<2>, EtOAc al 0-80% en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título (0,0110 g, rendimiento del 11%) en forma de un sólido de color blanquecino. 1H RMN (400 MHz, CDCls) ó 8,98 (dd,J =4,3, 1,8 Hz, 1H), 8,64 - 8,53 (m, 2H), 7,45 (dd,J= 8,5, 4,3 Hz, 1H), 6,91 (d,J =8,4 Hz, 1H), 6,87 (d,J =0,9 Hz, 1H), 6,54 (s, 1H), 4,44 (s, 2H), 4,05 (s, 3H), 4,03 (s, 3H), 3,36 (s, 3H). LCMS-B: tr 3,49 min,m/z= 429,8 [M+H]+.
Ejemplo 163: 2-hidroxi-6-metoxi-N-(4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 163
Una solución de 4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina I9 (0,0440 g, 0,211 mmol) y cloruro de 2,6-dimetoxibencenosulfonilo I111 (0,0500 g, 0,211 mmol) en piridina (0,500 ml) se irradió en el microondas a 120 °C durante 2 horas y después a 120 °C durante 1 hora. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió a DCM (10 ml). Los extractos orgánicos se lavaron con HCl 1 M (2 x 10 ml) y después se secaron sobre MgSO4. El material en bruto se purificó dos veces por cromatografía sobre gel de sílice (cartucho de 24 g de SiO2, EtOAc al 0 - 85 % en bencina de petróleo 40-60 °C y después cartucho de 12 g de SiO2, EtOAc al 0 - 75% en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título (1,5 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCls) ó 9,62 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,33 (t,J =8,4 Hz, 1H), 6,99 (c,J =0,9 Hz, 1H), 6,70 - 6,61 (m, 2H), 6,37 (dd,J= 8,3, 1,0 Hz, 1H), 4,51 (s, 1H), 4,03 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,42 (s, 3H). LCMS-A: tr 3,54 min,m/z394,8 [M+H]+
Ejemplo de referencia 164: 6-metoxi-N-(6-(metoximetil)-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)piridin-3-sulfonamida 164
Una solución de cloruro de 6-metoxipiridin-3-sulfonilo (0,0540 g, 0,260 mmol) y 6-(metoximetil)-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-amina I4 (0,050 g, 0,26 mmol) en piridina (0,500 ml) se irradió en el microondas a 120 °C durante 2 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se recogió en DCM y se lavó (x 2) con HCl 1 M. La capa orgánica se secó al vacío y después se cargó en húmedo sobre gel de sílice y el producto se purificó por cromatografía en columna (cartucho de 24 g de SiO<2>, EtOAc al 0-80% en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título (15,6 mg, rendimiento del 17%) en forma de un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 8,63 (dd,J =0,71, 2,62 Hz, 1H), 7,99 - 7,89 (m, 2H), 7,72 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 6,75 (dd,J= 0,71, 8,94 Hz, 1H), 4,54 (s, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,50 (s, 3H), 2,39 (s, 3H). LCMS-F: tr 6,39 min,m/z348,1 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 165: N-(6-(metoximetil)-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)piridin-3-sulfonamida 165
Una solución de cloruro de piridin-3-sulfonilo (0,0462 g, 0,260 mmol) y 6-(metoximetil)-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-amina I4 (0,050 g, 0,26 mmol) en piridina (0,500 ml) se irradió en el microondas a 120 °C durante 2 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se cargó en húmedo sobre gel de sílice y el producto se purificó por cromatografía en columna (cartucho de 24 g de SO<2>, EtOAc al 0-80% en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título (0,0220 g, rendimiento del 25%) en forma de un sólido de color amarillo. 1H Rm N (400 MHz,CDCI<3) 8 9,09 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8,18 (d,>J = 8,09 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 4,54 (s, 2H), 3,50 (s, 3H), 2,40 (s, 3H). LCMS-F: tr 6,12 min m/z 334,1 [M+H]+, 332,0 [M-H]-.
Ejemplo 166: 2,4-dimetoxi-N-(6-(metoximetil)-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 166
Una solución de cloruro de 2,4-dimetoxibencenosulfonilo (0,052 g, 0,22 mmol) y 6-(metoximetil)-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-amina I4 (0,042 g, 0,22 mmol) en piridina (0,500 ml) se irradió en el microondas a 110 °C durante 2 horas. La mezcla resultante se cargó sobre gel de sílice y el producto se purificó por cromatografía en columna (cartucho de 4 g de SiO2, EtOAc al 0-45% en bencina de petróleo 40-60 °C) para producir el compuesto del título (0,0413 g, rendimiento del 48%) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCh)87,96 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,71 (d, J = 8,33 Hz, 1H), 7,47 (s, 1H), 6,48 (d, J = 1,82 Hz, 1H), 6,42 (d, J = 8,36 Hz, 1H), 4,50 (s, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,47 (s, 3H), 2,37 (s, 3H). LCMS-A: tr 5,78 min, m/z = 392,8 [M+H]+, 414,7 [M+Na]+.
Ejemplo 167: N-(6-(hidroximetil)benzo[d]isoxazol-3-il)-2,4-dimetoxibencenosulfonamida 167
a) 3-Aminobenzo[d]isoxazol-6-carboxilato de metilo A9
A una solución de ácido etanohidroxámico (0,629 g, 8,37 mmol) en DMF (5 ml) se le añadió 2-metilpropan-2-olato potásico (0,94 g, 8,4 mmol) y la reacción se agitó durante 30 minutos. Se añadió 4-ciano-3-fluorobenzoato de metilo (1,0 g, 5,6 mmol) seguido de DMF (2 ml) y la reacción se agitó durante 2 horas más a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y agua (50 ml), la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron, se filtraron y se concentraron. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (cartucho de 12 g de SiO2, EtOAc al 0-50 % en bencina de petróleo 40 60 °C) para dar el compuesto del título (0,55 g, rendimiento del 51 %) en forma de un sólido de color blanco.1H RMN (400 MHz, CDCla)<8 8,12 (d,>J = 1,02 Hz, 1H), 7,96 (dd, J = 1,24, 8,29 Hz, 1H), 7,59 (dd, J = 0,77, 8,25 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H). LCMS: tr 2,97 min, m/z 193,0 [M+H]+.
b) 3-((2,4-Dimetoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-6-carboxilato de metilo A10
Una solución de cloruro de 2,4-dimetoxibenceno-1-sulfonilo (0,67 g, 2,8 mmol) y 3-aminobenzo[d]isoxazol-6-carboxilato de metilo A9 (0,55 g, 2,8 mmol) en piridina (4 ml) se irradió en el microondas a 130 °C durante 3 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y después se diluyó con DCM (40 ml). Los extractos orgánicos se lavaron con HCl 1 M (40 ml) y la capa acuosa se eXtrajo de nuevo con DCM (2 * 40 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron al vacío y el residuo se purificó dos veces por cromatografía en columna (cartucho de 24 g de SiÜ2, EtOAc al 0-35% en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar dos lotes del compuesto del título (0,369 g, impuro y 0,0310 g, rendimiento del 2,8%, pureza >95%) en forma de sólidos de color blanco.1H RMN (400 MHz, metanol-d4)88,13 - 8,06 (m, 2H), 7,97 (dd, J = 1,25, 8,47 Hz, 1H), 7,86 - 7,80 (m, 1H), 6,58 (cd, J = 2,29, 4,60 Hz, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,83 (s, 3H), 3,79 (s, 3H). LCMS: tr 3,26 min, m/z 392,8 [M+H]+, 415,8 [M+Na]+.
c) N-(6-(hidroximetil)benzo[d]isoxazol-3-il)-2,4-dimetoxibencenosulfonamida 167
A una suspensión de hidruro de litio y polvo de aluminio (0,0758 g, 2,00 mmol) en THF anhidro (4 ml) en atmósfera de nitrógeno se le añadió una solución de 3-((2,4-dimetoxifenil)sulfonamido)benzo [d]isoxazol-6-carboxilato de metilo A10 (impuro, 0,392 g, 0,500 mmol) en THF(8ml). La mezcla se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La reacción se interrumpió en atmósfera de nitrógeno mediante la adición gota a gota de THF húmedo seguido de 1 ml de agua. Después de que cesara el desprendimiento de gas, se añadió una solución de HCl acuoso 0,5 M y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre MgSO4y el disolvente se retiró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna (cartucho de 24 g de SiO2, EtOAc al 0 - 100 % en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título (0,191 g, rendimiento del 100 %) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCh) ó 8,08 (dd, J = 0,78, 8,30 Hz, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,69 (d, J = 8,82 Hz, 1H), 7,47 (t, J = 1,03 Hz, 1H), 7,30 (dd, J = 1,34, 8,29 Hz, 1H), 6,49 (d, J = 2,26 Hz, 1H), 6,42 (dd, J = 2,30, 8,79 Hz, 1H), 4,84 (s, 2H), 3,98 (s, 3H), 3,80 (s, 3H). LCMS-B: tr 3,02 min, m/z 364,8 [M+H]+, 386,8 [M+Na]+.
Ejemplo de referencia 168: 3-((5-metoxiquinolin)-8-sulfonamido)-5-metilbenzo[d]isoxazol-6-carboxamida 168
a) 3-Amino-5-metilbenzo[d]isoxazol-6-carboxilato de metilo A11
A una solución de ácido etanohidroxámico (0,126 g, 1,69 mmol) en DMF (2 ml) se le añadió 2-metilpropan-2-olato potásico (0,19 g, 1,7 mmol) y la reacción se agitó durante 30 minutos. Se añadió 4-ciano-5-fluoro-2-metilbenzoato de metilo (0,22 g, 1,1 mmol) seguido de DMF (3 ml) y la reacción se agitó durante 2 horas más a 40 °C. La reacción se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y agua (50 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron, se filtraron y se concentraron. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (cartucho de 12 g de SiO2, EtOAc al 0-50 % en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título (0,11 g, rendimiento del 48 %) en forma de un sólido de color blanco.1H RMN (400 MHz, metanol-d<4) ó 7,85 (s, 1H), 7,64 (t,>J = 0,79 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H), 2,62 (d, J = 0,85 Hz, 3H). LCMS: tr 3,02 min, m/z 207,0 [M+H]+.
b) Sal clorhidrato de 3-((5-metoxiquinolin)-8-sulfonamido)-5-metilbenzo[d]isoxazol-6-carboxilato de metilo A12
Una solución de cloruro de 5-metoxiquinolin-8-sulfonilo (0,12 g, 0,48 mmol) y 3-amino-5-metilbenzo[d]isoxazol-6-carboxilato de metilo A11 (0,10 g, 0,48 mmol) en piridina (3 ml) se irradió en el microondas a 110 °C durante 2 horas. La reacción se irradió en el microondas a 110 °C durante 1,5 horas más. La mezcla resultante se cargó sobre gel de sílice y el producto se purificó por cromatografía en columna (cartucho de 4 g de SO2, EtOAc al 0-45% en bencina de petróleo 40-60 °C). El producto se purificó adicionalmente por extracción en fase sólida (1 g, Si-amina, 3 volúmenes en vacío de MeOH seguido de 4 volúmenes en vacío de HCl metanólico). Los eluidos se recogieron y se secaron al vacío para dar el compuesto del título (17,7 mg, rendimiento del 7,9%) en forma de un sólido de color amarillo pálido.<1H RMN (400 MHz, metanol-d4) ó 9,40 - 9,33 (m, 2H), 8,77 (d,>J =<8,66 Hz, 1H), 8,14 - 8,05 (m, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,80 - 7,73 (m, 1H), 7,47 (d,>J = 8,73 Hz, 1H), 4,23 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 2,62 (s, 3H). LCMS: tr 3,35 min, m/z 427,8 [M+H]+.
c) 3-((5-Metoxiquinolin)-8-sulfonamido)-5-metilbenzo[d]isoxazol-6-carboxamida 168
A un tubo a presión de paredes gruesas de 15 ml equipado con barra de agitación magnética en atmósfera de nitrógeno se le añadieron sal clorhidrato de 3-((5-metoxiquinolin)-8-sulfonamido)-5-metilbenzo[d]isoxazol-6-carboxilato de metilo A12 (15,0 mg, 0,0323 mmol), solución de amoniaco (2,0 M en metanol, 0,50 ml, 1,0 mmol) y dicloruro de calcio (3,59 mg, 0,0323 mmol). El recipiente de reacción se cerró herméticamente y se calentó a 80 °C durante 3 días. El disolvente se retiró en una corriente de aire y se añadieron solución de amoniaco (7,0 M en metanol, 0,50 ml, 3,5 mmol) y dicloruro de calcio (3,6 mg, 0,032 mmol). El recipiente de reacción se cerró herméticamente y se calentó a 80 °Cdurante 24 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y el disolvente se retiró al vacío. El compuesto se purificó por cromatografía en columna (cartucho de 4 g de SiO2, EtOAc al 0-100 % en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título (0,00180 g, rendimiento del 13 %) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, metanol-d<4) ó 9,01 (dd,>J = 1,78, 4,24 Hz, 1H), 8,65 (dd, J = 1,78, 8,52 Hz, 1H), 8,43 (d, J = 8,47 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 12,46 Hz, 2H), 7,57 (dd, J = 4,28, 8,54 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 8,50 Hz, 1H), 4,09 (s, 3H), 2,57 (s, 3H). LCMS-B: tr 3,15 min, m/z 413,8 [M+H]+.
Ejemplo 169: N-(6-ciano-5-metilbenzo[tf]isoxazol-3-il)-2,4-dimetoxibencenosulfonamida 169
a) 3-Amino-5-metilbenzo[d]isoxazol-6-carbonitrilo A13
A una solución de ácido etanohidroxámico (0,176 g, 2,34 mmol) en DMF (5 ml) se añadió 2-metilpropan-2-olato potásico (0,26 g, 2,3 mmol) y la reacción se agitó durante 30 minutos. Se añadió 2-fluoro-5-metil-tereftalonitrilo (0,25 g, 1,6 mmol) seguido de DMF (3 ml) y la reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y agua (50 ml), la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron, se filtraron y se concentraron. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (cartucho de 12 g de SiO2, EtOAc al 0-50 % en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título (0,16 g, rendimiento del 59 %) en forma de un sólido de color blanquecino. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 7,72 (s, 1H), 7,47 (t, J = 0,86 Hz, 1H), 2,65 (d, J = 0,86 Hz, 3H). LCMS-B: tr 2,90 min, m/z 174,0 [M+H]+.
b) N-(6-ciano-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)-2,4-dimetoxibencenosulfonamida 169
Una solución de cloruro de 2,4-dimetoxibenceno-1-sulfonilo (0,22 g, 0,92 mmol) y 3-amino-5-metil-1,2-benzoxazol-6-carbonitrilo A13 (0,16 g, 0,92 mmol) en piridina (2,5 ml) se irradió en el microondas a 130 °C durante 2 horas. La reacción se puso a temperatura ambiente durante 50 minutos, y después se irradió en el microondas a 130 °C durante 2 horas más. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y después se diluyó con DCM (40 ml). Los extractos orgánicos se lavaron con HCl 1 M (40 ml) y la capa acuosa se extrajo de nuevo dos veces con DCM (2 x 40 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron al vacío, el residuo se cargó sobre gel de sílice y el producto se purificó por cromatografía en columna (cartucho de 24 g de SiO2, EtOAc al 0-45% en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar un sólido de color amarillo. El sólido se disolvió en MeOH caliente y DCM y se purificó por extracción en fase sólida (1 g de Si-amina, 3 volúmenes en vacío de MeOH seguido de 3 volúmenes en vacío de amoniaco metanólico ~1,25 M). El eluido ácido se secó al vacío para dar un sólido de color blanco. El sólido se recogió en MeOH y el MeOH se retiró al vacío (se repitió * 3). El residuo se purificó de nuevo por cromatografía en columna (cartucho de 24 g de SiO2, EtOAc al 45% en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar dos lotes del compuesto del título (22 y 78 mg, masa total 100 mg, rendimiento del 29%) en forma de sólidos de color blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 8,09 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,66 (d, J = 8,80 Hz, 1H), 6,52 (d, J = 2,25 Hz, 1H), 6,44 (dd, J = 2,24, 8,85 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 2,67 (s, 3H). LCMS-B: tr 3,30 min, m/z = 373,8 [M+H]+, 371,9 [M-H]-.
Ejemplo 170: 2,4-dimetoxi-N-(5-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 170
Una solución de cloruro de 2,4-dimetoxibenceno-l-sulfonilo (0,0799 g, 0,337 mmol) y 5-metilbenzo[d]isoxazol-3-amina I60 (0,050 g, 0,34 mmol) en piridina (1 ml) se irradió en el microondas a 110 °C durante 2 horas. La mezcla resultante se cargó sobre gel de sílice y el producto se purificó por cromatografía en columna (cartucho de 12 g de SiO<2>, EtOAc al 0-45% en bencina de petróleo 40-60 °C) para producir el compuesto del título (55,0 mg, rendimiento del 42%) en<forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 7,86 - 7,82 (m, 1H), 7,72 (d,>J =<8,81 Hz, 1H), 7,37 -7,28 (m, 2H), 6,49 (d,>J =<2,26 Hz, 1H), 6,43 (dd,>J<= 2,29, 8,82 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 2,47 (s, 3H). LCMS-A: tr 5,66 min,>m/z<348,8 [M+H]+, 347,1 [M-H]-.>
Ejemplo 171: N-(6-bromo-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)-2,4-dimetoxibencenosulfonamida 171
a) 6-Bromo-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-amina A14
A una solución de ácido etanohidroxámico (0,263 g, 3,50 mmol) en N,N-dimetilformamida (5 ml) se le añadió t-BuOK (393 mg, 3,50 mmol) y la reacción se agitó durante 30 minutos. Se añadió 4-bromo-2-fluoro-5-metilbenzonitrilo (0,50 g, 2,3 mmol) a la reacción, que se agitó durante a 2 horas más a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y agua (50 ml), la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron, se filtraron y se concentraron. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (cartucho de<12>g de SO<2>, EtOAc al 0-50 % en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título (0,30 g, rendimiento del 56 %) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 Mhz , CDCh)ó7,68 (s,<1>H),<7,37 (s, 1H), 4,35 (s a, 2H), 2,49 (s, 3H). LCMS-B: tr 3,18 min,>m/z<229,8 [M+H]+.>
b) N-(6-bromo-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)-2,4-dimetoxibencenosulfonamida 171
Una solución de cloruro de 2,4-dimetoxibencenosulfonilo (0,052 g, 0,22 mmol) y 6-bromo-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-amina A14 (0,050 g, 0,22 mmol) en piridina (1 ml) se irradió dos veces en el microondas a 110 °C durante 2 horas, después a 130 °C durante 2 horas. La mezcla resultante se cargó sobre gel de sílice y el producto se purificó por cromatografía en columna (cartucho de 4 g de SO<2>, EtOAc al 0-45% en bencina de petróleo 40-60 °C) para dar el compuesto del título (102 mg, rendimiento cuantitativo) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz,<CDCla) ó 7,98 - 7,94 (m, 1H), 7,70 - 7,65 (m, 2H), 6,50 (d,>J =<2,24 Hz, 1H), 6,43 (dd,>J<= 2,26, 8,82 Hz, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 2,51 (d,>J =<0,87 Hz, 4H). LCMS-A: tr 6,08 min,>m/z<426,9 [M+H]+.>
Ejemplo 172: N-(6-(Etoximetil)-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 172
A una solución de 6-(etoximetil)-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina I21 (250 mg, 1,13 mmol) en THF anhidro (25 ml) a -78 °C en atmósfera de N2se le añadió LiHMDS (solución 1 M en THF, 4,5 ml, 4,5 mmol) gota a gota y la mezcla se agitó a -78 °C durante 2 h. Después, se añadió gota a gota una solución de cloruro de 2,6-dimetoxibencenosulfonilo I111 (400 mg, 1,69 mmol) en THF anhidro (2 ml) y la mezcla se dejó calentar a TA y se agitó durante una noche. La mezcla se acidificó a pH 4-5 con HCl acuoso 2 M y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (DCM/MeOH = 100/1) para dar el compuesto del título (170 mg, pureza del 96%) en forma de un sólido de color blanco. La purificación adicional por HPLC prep. dio el compuesto del título (60 mg, pureza del 100%, rendimiento del 13%). LCMS-C: Tr 2,08 min; m/z 423,0 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfó) ó 9,53 (s, 1H), 7,51 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,09 (s, 1H), 6,78-6,76 (m, 3H), 4,55 (s, 2H), 3,91 (s, 3H), 3,77 (s,<6 H), 3,54 (c,>J =<6,8 Hz, 2H), 1,19 (t,>J =<6,8 Hz, 3H).>
Ejemplo 173: 2,6-Dimetoxi-N-(4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 173
A una solución de 4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina I9 (3,0 g, 14,4 mmol) en THF anhidro (200 ml) a -78 °C en atmósfera de N2se le añadió LiHMDS (solución 1 M en THF, 43,2 ml, 43,2 mmol) gota a gota y la mezcla se agitó a -78 °C durante 2 h. Después, se añadió gota a gota una solución de cloruro de 2,6-dimetoxibencenosulfonilo I111 (5,1 g, 21,6 mmol) en THF anhidro (10 ml) y la mezcla se dejó calentar a TA y se agitó durante una noche. La mezcla se acidificó a pH 4-5 con HCl acuoso 2 M y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. La reacción se repitió usando 4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-amina I9 (2,0 g, 9,6 mmol) en 150 ml de THF y los dos lotes se combinaron y se purificaron por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 8/1 a 2/1) para dar el compuesto del título (4,1 g, 42%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 1,96 min; m/z 409,0 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 9,58 (s, 1H), 7,52 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,09 (s, 1H), 6,78 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,76 (s, 1H), 4,51 (s, 2H), 3,91 (s, 3H), 3,77 (s,6H), 3,33 (s, 3H).
Ejemplo 174: 2,6-Dimetoxi-N-(4-metoxi-6-fenilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 174
A una solución de 4-metoxi-6-fenilbenzo[d]isoxazol-3-amina I17 (2,5 g, 10,4 mmol) en THF anhidro (60 ml) a -78 °C en atmósfera de N2se le añadió LiHMDS (solución 1 M en THF, 31,0 ml, 31,0 mmol) gota a gota y la mezcla se agitó a -78 °C durante 2 h. Después, se añadió gota a gota una solución de cloruro de 2,6-dimetoxibencenosulfonilo I111 (3,7 g, 15,6 mmol) en THF anhidro (20 ml) y la mezcla se dejó calentar a 0 °C y se agitó durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se lavó con EtOAc (50 ml x 2). La capa acuosa se acidificó a pH 3 con HCl acuoso 1 M y se extrajo con EtOAc (50 ml x3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 300/1) y se purificó adicionalmente por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 200/1) para dar el compuesto del título (1,5 g, 33%) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 9,61 (s, 1H),7,80 (d,J =7,2 Hz, 2H), 7,50 - 7,44 (m, 5H), 7,09 (s, 1H), 6,80 (d,J =<8 , 8>Hz, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,79 (s,<6>H); LCMS-C: Tr2,46 min;m/z441,0 [M+H]+.
Ejemplo 175: 3-Cloro-2,6-dimetoxi-N-(4-metoxi-6-(metoximetil)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 175
A una solución de 2,6-d¡metox¡-W-(4-metox¡-6-(metox¡met¡l)benzo[d]¡soxazol-3-il)bencenosulfonam¡da 173 (50 mg, 0,123 mmol) en DMF (10 ml) se le añad¡ó NCS (14 mg, 0,123 mmol) y la mezcla se calentó a 50 °C durante 2 h. Después, la mezcla se d¡luyó con EtOAc (150 ml) y se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na<2>SÜ<4>anh¡dro, se f¡ltró y se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có por TLC prep. (DCM/MeOH = 120/1) para dar el compuesto del título (15 mg, 27%) en forma de un sól¡do de color blanco.<l>C<m>S-C: Tr<2 , 21>m¡n;m/z441,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, metanol-d4)<6>7,56 (d,J= 9,1 Hz, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,91 (d,J= 9,1 Hz, 1H), 6,76 (s, 1H), 4,55 (s, 2H), 3,99 (s,<6>H), 3,76 (s, 3H), 3,41 (s, 3H).
Ejemplo 176: 2,6-Dimetoxi-N-(4-metoxi-6-(2-metoxifenil)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 176
Una mezcla de W-(6-bromo-4-metox¡benzo[d]¡soxazol-3-¡l)-2,6-d¡metox¡bencenosulfonam¡da 89 (30 mg, 0,068 mmol), ác¡do (<2>-metox¡fen¡l)borón¡co<( 21>mg, 0,135 mmol), Pd(PPh<3)4>(9 mg, 0,007 mmol) y Na<2>CO<3>(22 mg, 0,203 mmol) en 1,4-d¡oxano (4 ml) y agua (1 ml) se calentó a 100 °C en atmósfera de N<2>durante una noche. La mezcla se d¡luyó con agua y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgán¡cos comb¡nados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anh¡dro, se f¡ltraron y se concentraron a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có por TLC prep. (éter de pet./EtOAc = 1/2) para dar el compuesto del título (10 mg, 31%) en forma de un sól¡do de color blanco. LCMS-C: Tr 2,36 m¡n,m/z471,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de)<6>9,60 (s, 1H), 7,51 (t,J= 8,5 Hz, 1H), 7,44 - 7,37 (m, 2H), 7,22 (s, 1H), 7,16 (d,J=<8 , 8>Hz, 1H), 7,05 (t,J= 7,4 Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 6,79 (d,J=<8 , 6>Hz, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,81 (s,<6>H), 3,79 (s, 3H).
Ejemplo 177: 2,6-Dimetoxi-N-(4-metoxi-6-(3-metoxifenil)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 177
Una mezcla de W-(6-bromo-4-metox¡benzo[d]¡soxazol-3-¡l)-2,6-d¡metox¡bencenosulfonam¡da 89 (50 mg, 0,113 mmol), ác¡do (3-metox¡fen¡l)borón¡co (35 mg, 0,226 mmol), Pd(PPh<3)4>(14 mg, 0,011 mmol) y Na<2>CO<3>(36 mg, 0,339 mmol) en 1,4-d¡oxano<( 8>ml) y agua (2 ml) se calentó a 100 °C en atmósfera de N<2>durante una noche. La mezcla se dejó enfr¡ar a TA, se ajustó a pH 4-5, después se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (DCM/MeOH = 50/1) para dar el compuesto del título (8 mg, 15%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 2,35 min;m/z471,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) ó 9,63 (s, 1H), 7,51 (t,J= 8,5 Hz, 1H), 7,46 (d,J= 1,0 Hz, 1H), 7,41 (t,J= 7,9 Hz, 1H), 7,37 - 7,29 (m, 2H), 7,07 (s, 1H), 7,03 - 6,98 (m, 1H), 6,79 (d,J= 8,5 Hz, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,84 (s, 3H), 3,79 (s, 6H).
Ejemplo 178: 5-Etil-2-metoxi-N-(7-fenilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 178
Una suspensión de W-(7-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 137 (100 mg, 0,24 mmol), ácido fenilborónico (60 mg, 0,48 mmol), Pd(dppf)Cl2 (18 mg, 0,024 mmol) y K3PO4<3>H2O (260 mg, 0,97 mmol) en tolueno (5 ml), isopropanol (2 ml) y agua (5 ml) se calentó a 100 °C en atmósfera de N2 durante 2 h. La mezcla se dejó enfriar a TA, se diluyó con EtOAc y se lavó con agua (25 ml x 3). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por TLC preparativa (éter de pet./EtOAc = 2/1) para dar el compuesto del título (55 mg, 55%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr3,06 min;m/z409,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 11,8 (s, 1H), 8,08 - 8,02 (m, 1H), 7,89 - 7,78 (m, 3H), 7,72 (d,J =2,3 Hz, 1H), 7,55 -7,40 (m, 5H), 7,13 - 7,08 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 2,61 (c,J =7,5 Hz, 2H), 1,15 (t,J= 7,5 Hz, 3H).
Ejemplo 179: 5-Etil-2-metoxi-N-(6-fenilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 179
Una mezcla de W-(6-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 138 (120 mg, 0,3 mmol), Pd(dppf)Cl2 (45 mg, 0,06 mmol), ácido fenilborónico (150 mg, 1,2 mmol) y K3PO4<3>H2O (399 mg, 1,5 mmol) en agua (10 ml), tolueno (10 ml) e isopropanol (5 ml) se calentó a 85 °C en atmósfera de N2 durante 4 h. La mezcla se dejó enfriar a TA, se diluyó con agua (200 ml) y se extrajo con éter dietílico (200 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (60 mg, 50 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr3,10 min;m/z409,1 [M+H]+.1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 11,7 (s, 1H), 8,14 - 8,08 (m, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,79 - 7,74 (m, 2H), 7,73 - 7,67 (m, 2H), 7,54 - 7,39 (m, 4H), 7,12 -7,07 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,61 (c,J =7,5 Hz, 2H), 1,15 (t,J= 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo de referencia 180: N-(4-Clorobenzo[d]isoxazol-3-il)-2,3-dihidrobenzofuran-7-sulfonamida 180
A una solución de 5-bromo-W-(4-clorobenzo[d]isoxazol-3-il)-2,3-dihidrobenzofuran-7- sulfonamida 127 (100 mg, 0,23 mmol) en THF (10 ml) se le añadieron Pd al 10%/C (20 mg) y KOAc (20 mg, 0,28 mmol) y la mezcla se agitó a 40 °C en una atmósfera de H<2>durante 2 h y después a TA durante una noche. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (DCM/MeOH = 30/1) para dar el compuesto del título (22 mg 27%) en forma de un sólido de color amarillo claro. lCm S-D: Tr 2,32 min;m/z351,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 10,9 (s, 1H), 7,76 - 7,62 (m, 2H), 7,53 - 7,43 (m, 3H), 6,96 (t,J =7,7 Hz, 1H), 4,50 (t,J =8,8 Hz, 2H), 3,22 (t,J= 8,8 Hz, 2H).
Ejemplo de referencia 181: N-(4-Clorobenzo[tf]isoxazol-3-il)-5-etil-2,3-dihidrobenzofuran-7-sulfonamida 181
a) N-(4-Clorobenzo[d]isoxazol-3-il)-5-vinil-2,3-dihidrobenzofuran-7-sulfonamida A15
A una solución de 5-bromo-N-(4-clorobenzo[d]isoxazol-3-il)-2,3-dihidrobenzofuran-7- sulfonamida 127 (200 mg, 0,47 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml), EtOH (10 ml) y H2O (10 ml) se le añadieron K2CO3 (206 mg, 1,86 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2- dioxaborolano (140 mg, 0,93 mmol) y Pd(PPh3)4 (54 mg, 0,047 mmol) y la mezcla se calentó a 90 °C en una atmósfera de N2 durante una noche. Los disolventes se retiraron a presión reducida y el residuo se repartió entre DCM (50 ml), agua (45 ml) y HCl ac. 2 M (5 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 3/1) para dar el compuesto del título (120 mg 70%)<en forma de un sólido de color amarillo. LCm S-D: Tr 0,40 min;>m/z<377,0 [M+H]+.>
b) N-(4-clorobenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2,3-dihidrobenzofuran-7-sulfonamida 181
A una solución de N-(4-clorobenzo[d]isoxazol-3-il)-5-vinil-2,3-dihidrobenzofuran-7- sulfonamida A15 (120 mg, 0,32 mmol) en MeOH (15 ml) se le añadió Pd al 10%/C (24 mg) y la mezcla se agitó a TA en una atmósfera de H2 durante una noche. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (DCM/MeOH = 30/1) para dar el compuesto del título (33 mg, 27 %) en forma de un sólido de color blanco.<LCMS-D: Tr 2,59 min;>m/z<379,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 10,8 (s, 1H), 7,75 - 7,70 (m, 1H), 7,69 - 7,63 (m, 1H), 7,47 - 7,43 (m, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 4,46 (t,>J =<8,7 Hz, 2H), 3,18 (t,>J =<8,7 Hz, 2H), 2,56 (c,>J =<7,6 Hz, 2H), 1,13 (t,>J<= 7,6 Hz, 3H).>
Ejemplo de referencia 182: N-(Benzo[tf]isoxazol-3-il)-4-etil-2-metoxibencenosulfonamida 182
a) N-(Benzo[d]isoxazol-3-il)-2-metoxi-4-vinilbencenosulfonamida A16
A una solución de N-(benzo[d]isoxazol-3-il)-4-bromo-2-metoxibencenosulfonamida 141 (200 mg, 0,52 mmol) en tolueno (16 ml), agua<(8>ml) e isopropanol<( 8>ml) se le añadieron K2CO3 (288 mg, 2,09 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2- dioxaborolano (160 mg, 1,04 mmol) y Pd(PPh3)4 (60 mg, 0,052 mmol) y la mezcla se calentó a 90 °C en una atmósfera de N2 durante 2 h. La mezcla se diluyó con agua (50 ml) y HCl ac. 2 M (20 ml) y se extrajo con EtOAc (80 ml x 2). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 5/1) para dar el compuesto del título (150 mg, 76%) en forma de un sólido de color amarillo claro. LCMS-D: Tr2,47 min;m/z<331,0 [M+H]+, 353,0 [M+Na]+.>
b) N-(Benzo[d]isoxazol-3-il)-4-etil-2-metoxibencenosulfonamida 182
A una solución de N-(benzo[d]isoxazol-3-il)-2-metoxi-4-vinilbencenosulfonamida A16 (80 mg, 0,24 mmol) en MeOH (10 ml) se le añadió Pd al 10%/C (16 mg) y la mezcla se agitó a 25 °C durante una noche en una atmósfera de H2. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (éter de pet./EtOAc = 5/1) para dar el compuesto del título (20 mg, 25%) en forma de un sólido de color amarillo claro. LCMS-D: Tr2,55<min;>m/z<333,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de)>ó<11,7 (s, 1H), 8,07 (d,>J =<8,0 Hz, 1H), 7,79 (d,>J =<8,0 Hz, 1H), 7,66 - 7,55 (m, 2H), 7,44 - 7,31 (m, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,96 (d,>J =<8,4 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 2,63 (c,>J =<7,6 Hz, 2H), 1,17 (t,>J<= 7,6 Hz, 3H).>
Ejemplo de referencia 183: W-(Benzo[rf]isoxazol-3-il)-3-metoxi-[1,1,-bifenil]-4-sulfonamida 183
A una solución de N-(benzo[d]isoxazol-3-il)-4-bromo-2-metoxibencenosulfonamida 141 (100 mg, 0,26 mmol) en tolueno (7 ml), agua (7 ml) e isopropanol (2,5 ml) se le añadieron K<2>CO<3>(144 mg, 10 mmol), ácido fenilborónico (64 mg, 0,52 mmol) y Pd(PPh<3)4>(30 mg, 0,026 mmol) y la mezcla se calentó a 90 °C en una atmósfera de N<2>durante 2 h. La mezcla se diluyó con agua (50 ml) y HCl ac. 2 M (10 ml) y se extrajo con EtOAc (70 ml x 2). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 5/1) para dar el compuesto<del título (55 mg, 46%) en forma de un sólido de color amarillo claro. LCMS-D: Tr 2,79 min;>m/z<381,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 11,9 (s, 1H), 8,10 (d,>J =<8,0 Hz, 1H), 7,98 (d,>J =<8,0 Hz, 1H), 7,79 - 7,72 (m, 2H), 7,66 - 7,58>(m, 2H), 7,54 - 7,35 (m,<6>H), 3,89 (s, 3H).
Ejemplo 184: 3-(5-Etil-2-metoxifenilsulfonamido)-N-metilbenzo[d]isoxazol-7-carboxamida 184
a) N-(7-Bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A17
A una solución de N-(7-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 137 (2,3 g, 5,5 mmol), (2,4-dimetoxifenil)metanol (1,4 g, 8,4 mmol) y PPh3 (3,6 g, 14,2 mmol) en THF (400 ml) a 0 °C en atmósfera de N2 se le añadió DIAD (3,3 g, 16,4 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante el fin de semana. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 5/1) para dar el compuesto<del título (1 , 0 g, 32%) en forma de un sólido de color azul claro. LCm S-D: Tr 3,35 min;>m/z<583,1/585,1 [M+Na]+.>
b) 3-(N-((2,4-Dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxifenilsulfonamido) benzo[d]isoxazol-7-carboxilato de metilo A18
A una solución de N-(7-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A17 (250 mg, 1,34 mmol) en MeOH (5 ml) y DMF (45 ml) se le añadieron Et3N (675 mg,<6 , 68>mmol) y Pd(dppf)Cl2 (98 mg, 0,13 mmol) y la mezcla se calentó a 80 °C en una atmósfera de CO durante una noche. El disolvente se retiróa presión reducida y el residuo se diluyó con EtOAc (50 ml), se lavó con agua (50 ml * 3) y salmuera, se secó sobre Na2SÜ4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 4/1) para dar el compuesto del título (210 mg, 31%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 3,10 min; m/z 541,2 [M+H]+.
c) 3-(N-((2,4-Dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxifenilsulfonamido)-N-metilbenzo[d]isoxazol-7-carboxamida A19
Una mezcla de 3-(N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxifenilsulfonamido) benzo[d]isoxazol-7-carboxilato de metilo A18 (20 mg, 0,037 mmol) y CH3NH2(solución al 33% en EtOH, 4 ml) se calentó a 100 °C en un tubo cerrado herméticamente durante 30 min. El disolvente se retiró a presión reducida para dar el compuesto del título (20 mg, 100%), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-D: Tr 2,86 min; m/z 540,2 [M+H]+.
d) 3-(5-Etil-2-metoxifenilsulfonamido)-N-metilbenzo[d]isoxazol-7-carboxamida 184
Una mezcla de 3-(N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxifenilo sulfonamido)-N-metilbenzo[d]isoxazol-7-carboxamida A19 (40 mg, 0,07 mmol) y TFA (2 ml) se agitó a TA durante 3 h, después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por TLC preparativa para dar el compuesto del título (18 mg, 64%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,35 min; m/z 390,1 [M+H]+.<1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 11,9 (s, 1H), 8,31 - 8,11 (m, 2H), 8,00 - 7,90 (m, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,52 - 7,41 (m, 2H), 7,14 - 7,04 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 2,81 (s, 3H), 2,62 (c,>J = 8,0, 7,6 Hz, 2H), 1,15 (t, J = 7,9 Hz, 3H).
Ejemplo 185: 3-(5-Etil-2-metoxifenilsulfonamido)-N,N-dimetilbenzo[d]isoxazol-7-carboxamida 185
a) 3-(5-Etil-2-metoxifenilsulfonamido)benzo[d]isoxazol-7-carboxilato de metilo A20
Una mezcla de 3-(N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxifenilsulfonamido) benzo[d]isoxazol-7-carboxilato de metilo A18 (150 mg, 0,28 mmol) y TFA (5 ml) se agitó a TA durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 3/1) para dar el compuesto del título (80 mg, 74 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,63 min; m/z 391,1 [M+H]+, 413,1 [M+Na]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 11,9 (s, 1H), 8,39 - 8,32 (m, 1H), 8,19 - 8,12 (m, 1H), 7,72 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,56 - 7,44 (m, 2H), 7,12 - 7,05 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 2,62 (c, J = 7,5 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
b) Ácido 3-((5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-7-carboxílico A21
A una suspensión de 3-(5-etil-2-metoxifenilsulfonamido) benzo[d]isoxazol-7-carboxilato de metilo A20 (200 mg, 0,5 mmol) en MeOH (10 ml) y THF (10 ml) se le añadió NaOH ac. 2 M (1,28 ml) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se diluyó con agua y se ajustó a pH 2-3. El precipitado resultante se recogió por filtración para dar el compuesto del título (144 mg, 75%) en forma de un sólido de color blanquecino. LCMS-D: Tr 2,43 min; m/z 377,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 13,5 (s, 1H), 11,8 (s, 1H), 8,35 - 8,29 (m, 1H), 8,15 - 8,09 (m, 1H), 7,72 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,53 - 7,44 (m, 2H), 7,12 - 7,05 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 2,62 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
c) Cloruro de 3-(5-etil-2-metoxifenilsulfonamido)benzo[d]isoxazol-7-carbonilo A22
Una mezcla de ácido 3-((5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-7-carboxílico A21 (30 mg, 0,08 mmol) y SOCl2(5 ml) se calentó a 85 °C en una atmósfera de N2durante 3 h, después se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (31 mg, 100%), que se usó directamente en la etapa siguiente sin purificación adicional.
d) 3-(5-Etil-2-metoxifenilsulfonamido)-N,N-dimetilbenzo[d]isoxazol-7-carboxamida 185
A una solución de cloruro de 3-(5-et¡l-2-metox¡fen¡lsulfonam¡do)benzo[d]¡soxazol-7-carbon¡lo A22 (31 mg, 0,08 mmol) en THF (1 ml) se le añad¡ó gota a gota d¡met¡lam¡na (soluc¡ón al 40% en agua, 2 ml) y la mezcla se ag¡tó a TA durante 1 h. La mezcla se concentró a pres¡ón reduc¡da y el res¡duo se d¡luyó con agua, se ajustó a pH 2-3 y se extrajo con DCM (30 ml x3). Los extractos orgán¡cos comb¡nados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SÜ4anh¡dro, se f¡ltró y se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có por TLC prep. para dar el compuesto del título (18 mg, 56%) en forma de un sól¡do de color blanco. LCMS-D: Tr 2,36 m¡n; m/z 404,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 11,9 (s, 1H), 8,21 - 8,06 (m, 1H), 7,78 - 7,56 (m, 2H), 7,45 (s, 2H), 7,17 - 6,97 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,01 (s, 3H), 2,80 (s, 3H), 2,61 (m, 2H), 1,15 (m, 3H).
Ejemplo 186: 5-Etil-N-(7-(hidroximetil)benzo[tf]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida 186
A21 186
Una mezcla de ác¡do 3-(5-et¡l-2-metox¡fen¡lsulfonam¡do)benzo[d]¡soxazol-7-carboxíl¡co A21 (30 mg, 0,08 mmol) y BH3THF (soluc¡ón 1 M en THF, 3 ml, 3 mmol) se ag¡tó a TA en una atmósfera de N2durante 5 h. La reacc¡ón se ¡nterrump¡ó con agua y la mayor parte del THF se ret¡ró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se ajustó a pH 2-3 y se extrajo con DCM (15 ml x 3). Los extractos orgán¡cos comb¡nados se secaron sobre Na2SO4, anh¡dro se f¡ltraron y se concentraron a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có por cromatografía sobre gel de síl¡ce (DCM/MeOH = 30/1) para dar el compuesto del título (20 mg, 71%) en forma de un sól¡do de color rojo claro. LCMS-D: Tr 2,35 m¡n; m/z 363,1 [M+H]+.<1H RMN (400 MHz, DMSO-de)>ó 11,7 (s, 1H), 7,96 - 7,89 (m, 1H), 7,70 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,61 - 7,55 (m, 1H), 7,46 (dd, J = 8,5, 2,3 Hz, 1H), 7,34 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,12 - 7,05 (m, 1H), 5,39 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 4,70 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 3,73 (s, 3H), 2,61 (c, J = 7,2 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 187: 5-Etil-2-metoxi-N-(7-metilbenzo[tf]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 187
A una suspens¡ón de N-(7-bromobenzo[d]¡soxazol-3-¡l)-5-et¡l-2-metox¡bencenosulfonam¡da 137 (150 mg, 0,36 mmol) en 1,4-d¡oxano (18 ml) y agua (4,5 ml) se le añad¡eron K2CO3(150 mg, 1,09 mmol), ác¡do met¡lborón¡co (45 mg, 0,73 mmol) y Pd(dppf)Cl2(27 mg, 0,036 mmol) y la mezcla se calentó a 90 °C en una atmósfera de N2durante 4 h. La mezcla se concentró a pres¡ón reduc¡da y el res¡duo se repart¡ó entre EtOAc (50 ml), agua (40 ml) y HCl ac. 1 M (15 ml). Las capas se separaron y la capa orgán¡ca se lavó con HCl ac. 0,5 M (40 ml x 2) y salmuera, se secó sobre Na2SO4anh¡dro, se f¡ltró y se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có por HPLC preparat¡va para dar el compuesto del título (20 mg, 16%) en forma de un sól¡do de color blanco. LCMS-D: Tr 2,25 m¡n; m/z 347,1 [M+H]+, 369,1 [M+Na]+.<1H RMN (400 MHz, DMSO-de)>ó 11,7 (s, 1H), 7,89 - 7,82 (m, 1H), 7,70 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,50 - 7,38 (m, 2H), 7,25 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,12 - 7,04 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 2,60 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 2,39 (s, 3H), 1,15 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 188: 5-Etil-N-(7-etilbenzo[tf]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida 188
188
a) N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxi-N-(7-vinilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A23
A una suspensión de N-(7-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A17 (200 mg, 0,36 mmol) en 1,4-dioxano (15 ml) y agua (3 ml) se le añadieron 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioxaborolano (110 mg, 0,71 mmol), K2CO3(148 mg, 1,07 mmol) y Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0,036 mmol) y la mezcla se calentó a 90 °C en una atmósfera de N2durante 4 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se diluyó con EtOAc (30 ml) y se lavó con agua (25 ml x 3). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 2/1) para dar el compuesto del título (95 mg, 52%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 3,28 min; m/z 509,0 [M+H]+.
b) 5-Etil-2-metoxi-N-(7-vinilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A24
Una mezcla de N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxi-N- (7-vinilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A23 (95 mg, 0,18 mmol) y TFA (4 ml) se agitó a TA durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 2/1) para dar el compuesto del título (40 mg, 61 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,78 min; m/z 359,1 [M+H]+
c) 5-Etil-N-(7-etilbenzo[d]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida 188
A una solución de 5-etil-2-metoxi-N-(7-vinilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A24 (35 mg, 0,098 mmol) en EtOAc (5 ml) se le añadió Pd al 10%/C (7 mg) y la mezcla se agitó a TA en una atmósfera de H2durante una noche. La mezcla se filtró, el filtrado se concentró y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 4/1) para dar el compuesto del título (30 mg, 85%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,83 min; m/z 361,1 [M+H]+.<1H RMN (400 MHz, DMSO-de)>511,7 (s, 1H), 7,90 - 7,83 (m, 1H), 7,70 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,50 - 7,40 (m, 2H), 7,28 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,12 - 7,05 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 2,80 (c, J = 7,5 Hz, 2H), 2,61 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,22 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 1,15 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 189: N-(7-Ciclopropilbenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 189
a) N-(7-Ciclopropilbenzo[d]isoxazol-3-il)-N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A25
A una suspensión de N-(7-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-((2,4-dietilbencil)oxi)-5-etil-2- metoxibencenosulfonamida A17 (200 mg, 0,36 mmol) en 1,4-dioxano (15 ml) y H2O (3 ml) se le añadieron ácido ciclopropilborónico (61 mg, 0,71 mmol), K2CO3(148 mg, 1,07 mmol) y Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0,036 mmol) y la mezcla se calentó a 90 °C en una atmósfera de N2durante 4 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se diluyó con EtOAc (30 ml) y se lavó con agua (25 ml x3). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 3/1) para dar el compuesto del título (140 mg, 75 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 3,34 min; m/z 523,2 [M+H]+.
b) N-(7-Ciclopropilbenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 189
Una mezcla de N-(7-ciclopropilbenzo[d]isoxazol-3-il)-N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A25 (140 mg, 0,27 mmol) y TFA<( 6>ml) se agitó a TA durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 2/1) para dar el compuesto del título (80 mg,<81 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,86 min;>m/z<373,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 11,7 (s, 1H), 7,81 (dd,>J<= 7,0, 2,1 Hz, 1H), 7,70 (d,>J =<2,3 Hz, 1H), 7,50 - 7,43 (m, 1H), 7,27 - 7,19 (m, 2H), 7,12 -7,06 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 2,61 (c,>J =<7,6 Hz, 2H), 2,17 - 2,10 (m, 1H), 1,15 (t,>J =<7,5 Hz, 3H), 1,04 - 0,97 (m, 2H),>0,90 - 0,84 (m, 2H).
Ejemplo 190: N-(7-Ciclohexilbenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 190
a) N-(7-(ciclohex-1-en-1-il)benzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A26
A una suspensión de N-(7-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A17 (200 mg, 0,36 mmol) en 1,4-dioxano (15 ml) y agua (3 ml) se le añadieron ácido ciclohex-1-en-1-ilborónico (90 mg, 0,71 mmol), Pd(dppf)Cl2 (26 mg, 0,036 mmol) y K2CO3 (148 mg, 1,07 mmol) y la mezcla se calentó a 90 °C en atmósfera de N2 durante 4 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se diluyó con EtOAc (30 ml) y se lavó con agua (25 ml x 3). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 3/1) para dar el compuesto del título (150 mg, 75%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) N-(7-(Ciclohex-1-en-1-il)benzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A27
Una mezcla de N-(7-(ciclohex-1-en-1-il)benzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)- 5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A26 (150 mg , 0,26 mmol) y TFA (7 ml) se agitó a TA durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 2/1) para dar el<compuesto del título (65 mg, 60 %) en forma de un sólido de color blanco. LCm S-D: Tr 3,64 min;>m/z<413 [M+H]+.>
c) N-(7-Ciclohexilbenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 190
Una mezcla de N-(7-(ciclohex-1-en-1-il)benzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2- metoxibencenosulfonamida A27 (65 mg , 0,15 mmol) y Pd al 10%/C (13 mg) en EtOAc (10 ml) se agitó a TA en una atmósfera de H<2>durante 3 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (40 mg, 61%) en forma de un sólido<de color blanco. LCMS-D: Tr 3,34 min;>m/z<415,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 11,7 (s, 1H), 7,87 - 7,82 (m, 1H), 7,70 (d,>J =<2,3 Hz, 1H), 7,49 - 7,41 (m, 2H), 7,28 (t,>J =<7,6 Hz, 1H), 7,12 - 7,06 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 2,62 (c,>J =<7,6 Hz, 2H), 1,85 - 1,75 (m, 4H), 1,75 - 1,67 (m, 1H), 1,61 - 1,48 (m, 2H), 1,44 - 1,20 (m, 4H), 1,15 (t,>J<= 7,6 Hz, 3H).>
Ejemplo 191: 5-Etil-2-metoxi-W-(7-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 191
a) N-((2,4-Dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxi-N-(7-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A29
A una mezcla de N-(7-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A17 (150 mg, 0,27 mmol) en 1,4-dioxano (15 ml) y H2O (3 ml) se le añadieron K2CO3 (110 mg, 0,80 mmol), ácido (1-metil-1H-pirazol-4-il)borónico (67 mg, 0,33 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (20 mg, 0,027 mmol) y la mezcla se calentó a 90 °C en una atmósfera de N2 durante una noche. La mezcla se diluyó con 0,5 M ac. HCl (30 ml) y la mayor parte del disolvente orgánico se retiró a presión reducida. La mezcla acuosa restante se extrajo con<d>C<m>(40 ml x 3) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (DCM/MeOH = 100/1) para dar el compuesto del título (80 mg, 53%) en forma de un sólido de color amarillo claro, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 5-Etil-2-metoxi-N-(7-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 191
Una mezcla de N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxi-N-(7-(1-metil-1H-pirazol- 4-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A29 (80 mg, 0,14 mmol) y TFA (3 ml) se agitó a TA durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (DCM/MeOH = 80/1) para dar el<compuesto del título (50 mg, 86 %) en forma de un sólido de color amarillo claro. LCMS-D: Tr 2,59 min;>m/z<413,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 11,8 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,91 - 7,84 (m, 2H), 7,72 (d,>J =<2,3 Hz, 1H), 7,50 - 7,43 (m, 1H), 7,41 - 7,32 (m, 1H), 7,13 - 7,06 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 2,62 (c,>J =<7,6 Hz, 2H), 1,16 (t,>J<= 7,5 Hz, 3H).>
Ejemplo 192: 5-Etil-2-metoxi-N-(7-(pirimidin-5-il)benzo[rf]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 192
A una suspensión de N-(7-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2- metoxibencenosulfonamida 137 (200 mg, 0,49 mmol) en tolueno (16 ml), agua<(8>ml) e isopropanol<( 8>ml) se le añadieron ácido pirimidin-5-ilborónico (181 mg, 1,46 mmol), K3PO4 (518 mg, 1,95 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (36 mg, 0,049 mmol) y la mezcla se calentó a 90 °C en una atmósfera de N2 durante una noche. La mezcla se ajustó a pH 5-6 y se extrajo con EtOAc (20 ml x<3>). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (DCM/MeOH = 40/1) para dar el compuesto del título (18 mg, 9%) en forma de<un sólido de color pardo. LCMS-D: Tr 2,49 min;>m/z<411,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 11,9 (s, 1H), 9,34 - 9,18 (m, 2H), 8,17 (d,>J =<8,1 Hz, 1H), 8,06 (d,>J =<7,4 Hz, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,62 - 7,42 (m, 3H), 7,17 - 7,06 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 2,62 (c,>J =<7,6 Hz, 2H), 1,16 (t,>J<= 7,6 Hz, 3H).>
Ejemplo 193: 5-Etil-2-metoxi-N-(6-metilbenzo[tf]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 193
a) N-(6-Bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A30
A una solución de N-(6-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 138 (4,1 g, 10,0 mmol), (2,4-dimetoxifenil)metanol (2,5 g, 15,0 mmol) y PPh<3>(<6 , 6>g, 25,0 mmol) en THF (100 ml) a 0 °C en atmósfera de N<2>se le añadió DIAD (4,0 g, 20,0 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla se concentró a presiónreducida y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (4,0 g, 71%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) N-(2,4-Dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxi-N-(6-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A31
Una mezcla de N-(6-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A30 (120 mg, 0,214 mmol), CHaB(OH)2(64 mg, 1,07 mmol), Pd(dppf)Cl2(31 mg, 0,428 mmol) y K2CO3(148 mg, 1,07 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) y agua (2 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante una noche. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (72 mg,68%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
c) 5-Etil-2-metoxi-N-(6-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 193
Una mezcla de N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxi-N-(6-metilbenzo[d]isoxazol- 3-il)bencenosulfonamida A31 (72 mg, 0,145 mmol) y TFA (3 ml) se agitó a TA durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 3/1) para dar el compuesto del título (45 mg, 90 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,76 min; m/z 347,1 [M+H]+.<1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 11,6 (s, 1H), 7,94 - 7,87 (m, 1H), 7,68 (d,>J = 2,3 Hz, 1H), 7,49 - 7,42 (m, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,23 - 7,16 (m, 1H), 7,13 - 7,05 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 2,60 (c, J = 7,5 Hz, 2H), 2,43 (s, 3H), 1,14 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Ejemplo 194: 5-Etil-N-(6-etilbenzo[tf]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida 194
a) N-(2,4-Dimetoxibencil)-5-etil-N-(6-etilbenzo[d]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida A32
Una mezcla de N-(6-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A30 (200 mg, 0,356 mmol), ácido etilborónico (132 mg,1 ,78mmol), Pd(dppf)Cl2(52 mg, 0,071 mmol) y K2CO3(246 mg, 1,78 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) y agua (4 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante una noche. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se repartió entre DCM (200 ml) y agua (50 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (120 mg, 67 %) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 5-Etil-N-(6-etilbenzo[d]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida 194
Una mezcla de N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-N-(6-etilbenzo[d]isoxazol-3-il)-2- metoxibencenosulfonamida A32 (120 mg, 0,24 mmol) y TFA (5 ml) se agitó a TA durante una noche y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 3/1) para dar el compuesto del título (80 mg, 94 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,84 min; m/z 361,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d<6)>ó 11,6 (s, 1H), 7,97 - 7,90 (m, 1H), 7,69 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,49 - 7,37 (m, 2H), 7,26 - 7,19 (m, 1H), 7,11 -7,04 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 2,73 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 2,60 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,20 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 1,14 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 195: N-(6-Ciclopropilbenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 195
Una mezcla de N-(6-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 138 (206 mg, 0,5 mmol), ácido ciclopropilborónico (215 mg, 2,5 mmol), Pd(dppf)Cl2(73 mg, 0,1 mmol) y K2CO3(345 mg, 2,5 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) y agua (4 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante una noche. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 3/1) para dar el compuesto del título (80 mg, 43%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,86 min; m/z 373,1 [M+H]+.<1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 11,6 (s, 1H), 7,91 - 7,85 (m, 1H), 7,68 (d,>J = 2,3 Hz, 1H), 7,48 - 7,42 (m, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,12 - 7,04 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,60 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 2,10 - 2,00 (m, 1H), 1,14 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 1,07 - 0,99 (m, 2H), 0,83 - 0,75 (m, 2H).
Ejemplo 196: 5-Etil-2-metoxi-N-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 196
a) N-(2,4-D¡metox¡benc¡l)-5-et¡l-2-metox¡-N-(6-(1-met¡l-1H-p¡razol-4-¡l)benzo[d]¡soxazol-3-¡l)bencenosulfonam¡da A33
Una mezcla de N-(6-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A30 (120 mg, 0,214 mmol), ácido (1-metil-1H-pirazol-4-il)borónico (54 mg, 0,428 mmol), Pd(dppf)Ch (31 mg, 0,043 mmol) y K2CO3(148 mg, 1,07 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) y agua (2 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante una noche. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se repartió entre DCM (150 ml) y agua (50 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (90 mg, 75%) en forma de un sólido de color pardo. LCMS-D: Tr 3,05 min; m/z 563,0 [M+H]+.
b) 5-Et¡l-2-metox¡-N-(6-(1-met¡l-1H-p¡razol-4-¡l)benzo[d]¡soxazol-3-¡l)bencenosulfonam¡da 196
Una mezcla de N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxi-N-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il) benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A33 (90 mg, 0,16 mmol) y TFA (5 ml) se agitó a TA durante una noche y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (30 mg, 46 %) en forma de un sólido de color pardo. LCMS-D: Tr 2,57 min; m/z 413,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d<6) 6 11,6 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,06 - 7,95 (m, 2H), 7,78 (s, 1H), 7,70 (d,>J = 2,3 Hz, 1H), 7,64 - 7,56 (m, 1H), 7,50 - 7,42 (m, 1H), 7,13 - 7,05 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 2,61 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,15 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Ejemplo 197: 5-Etil-2-metoxi-N-(6-(pirimidin-5-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 197
Una mezcla de N-(6-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 138 (100 mg, 0,24 mmol), ácido pirimidin-5-ilborónico (45 mg,0,36mmol), Pd(PPh3)4(28 mg, 0,024 mmol) y K2CO3(166 mg, 1,2 mmol) en tolueno(8ml), agua(8ml) e isopropanol (2 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante 4 h. Se añadió NaOH ac. 2 M (15 ml) y la mezcla se agitó a TA durante 20 min. La mezcla se lavó con EtOAc (20 ml x 2), después se ajustó a pH 2 con HCl conc. y se extrajo con DCM (50 ml x 2). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (DCM/MeOH = 30/1) para dar el compuesto del título (15 mg, 15%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,97 min; m/z 411,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d<6) 6 11,8 (s, 1H), 9,24 (s, 3H), 8,21 - 8,15 (m, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,85 - 7,78 (m, 1H), 7,72 (d,>J = 2,3 Hz, 1H), 7,49 - 7,42 (m, 1H), 7,13 - 7,05 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 2,61 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,15 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 198: 5-Etil-2-metoxi-N-(4-metilbenzo[tf]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 198
198
a) N-(4-Bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A34
A una solución de N-(4-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 129 (2,1 g, 5,1 mmol), (2,4-dimetoxifenil)metanol (1,3 g, 7,7 mmol) y PPh3(3,35 g, 12,8 mmol) en THF (200 ml) a 0 °C en atmósfera de N2se le añadió DIAD (3,1 g, 15,3 mmol) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h, después se dejó calentar a TA y se agitó durante una noche. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 5/1) para dar el compuesto del título (1,2 g, 42%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 3,40 min; m/z 583,0 [M+H]+.
b) N((2,4-Dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxi-N-(4-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A35
Una mezcla de N-(4-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A34 (200 mg, 0,36 mmol), ácido metilborónico (43 mg, 0,71 mmol), K2CO3(148 mg, 1,07 mmol) y Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0,036 mmol) en 1,4-dioxano (15 ml) y agua (3 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante 4 h. La mezcla se ajustó a pH 2-3 y la mayor parte del disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con DCM (25 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EA = 5/1) para dar el compuesto del título (125 mg, 71%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
c) 5-Etil-2-metoxi-N-(4-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 198
Una mezcla de N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxi-N-(4-metil benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A35 (125 mg, 0,26 mmol) y TFA (3 ml) se agitó a TA durante 3 h y después se diluyó con DCM (100 ml), se lavó con agua, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 3/1) para dar el compuesto del título (85 mg, 92 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,69 min m/z 347,1 [M+H]+.<1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 10,6 (s, 1H), 7,58-7,56 (m, 1H), 7,52 7,46 (m, 3H), 7,18-7,14 (m, 2H), 3,73 (s, 3H), 2,62-2,56 (m, 5H), 1,14 (t,>J = 7,6 Hz, 3H)
Ejemplo 199: 5-Etil-N-(4-etilbenzo[tf]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida 199
a) N-(2,4-Dimetoxibencil)-5-etil-N-(4-etilbenzo[d]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida A36
Una mezcla de N-(4-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil- 2-metoxibencenosulfonamida A34 (200 mg, 0,36 mmol), ácido etilborónico (53 mg, 0,71 mmol), K2CO3(148 mg, 1,07 mmol) y Pd(dppf)Cl2(26 mg,0,036 mmol) en 1,4-dioxano (15 ml) y H2O (3 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante 4 h. La mezcla se ajustó a pH 2-3 y la mayor parte del disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (15 ml) y se extrajo con DCM (20 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 5/1) para dar el compuesto del título(120mg,66%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 5-Etil-N-(4-etilbenzo[d]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida 199
Una mezcla de N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-N-(4-etilbenzo[d]isoxazol-3-il)-2- metoxibencenosulfonamida A36 (120 mg, 0,23 mmol) y TFA (3 ml) se agitó a temperatura ambiente en atmósfera de N2durante 3 h, después se diluyó con DCM (100 ml), se lavó con agua, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 3/1) para dar el compuesto del título (75 mg, 89 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,80 min 361,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 10,5 (s, 1H), 7,60-7,49 (m, 4H), 7,22-7,18 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 8,09 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 2,59 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,25 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 1,14 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 200: N-(4-Ciclopropilbenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 200
a) N-(4-Ciclopropilbenzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A37
Una mezcla de N-(4-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil- 2-metoxibencenosulfonamida A34 (200 mg, 0,36 mmol), ácido ciclopropilborónico(61mg, 0,71 mmol), K2CO3(148 mg, 1,07 mmol) y Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0,036 mmol) en 1,4-dioxano (15 ml) y H2O (3 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante 4 h. La mezcla se ajustó a pH 2-3 y la mayor parte del disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (15 ml) y se extrajo con DCM(20ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 5/1) para dar el compuesto del título(120mg,66%) en forma de un sólido de color amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) N-(4-Ciclopropilbenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 200
Una mezcla de N-(4-ciclopropilbenzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil- 2-metoxibencenosulfonamida A37 (130 mg, 0,25 mmol) y TFA (3 ml) se agitó a TA en atmósfera de N2durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 3/1) para dar el compuesto del título (85 mg, 92 %) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 2,81 min, 373,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 10,6 (s, 1H), 7,58-7,57 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,53-7,42 (m, 3H), 7,18-7,16 (m, 1H), 6,86-6,84 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,72 (m, 1H), 2,60 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,14 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 1,02-0,98 (m, 2H), 0,82-0,78 (m, 2H).
Ejemplo 201: N-(4-ciclohexilbenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 201
201
a) N-(4-(Ciclohex-1-en-1-il)benzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A38
Una mezcla de N-(4-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A34 (200 mg, 0,36 mmol), ácido ciclohex-1-en-1-ilborónico (90 mg, 0,71 mmol), K2CO3(148 mg, 1,07 mmol) y Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0,036 mmol) en 1,4-dioxano (15 ml) y H2O (3 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante 4 h. La mayor parte del disolvente se retiró a presión reducida, y el residuo se diluyó con agua (30 ml), se ajustó a pH 1-2 y se extrajo con DCM (35 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 100/1) para dar el compuesto del título (150 mg, 75%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) N-(4-(Ciclohex-1-en-1-il)benzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A39
Una mezcla de N-(4-(ciclohex-1-en-1-il)benzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5- etil-2-metoxibencenosulfonamida A38 (150 mg, 0,27 mmol) y TFA (3 ml) se agitó a TA en atmósfera de N2durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 2/1) para dar el compuesto del título (80 mg, 73 %) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
c) N-(4-Ciclohexilbenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 201
Una mezcla de N-(4-(ciclohex-1-en-1-il)benzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxi bencenosulfonamida A39 (80 mg, 0,19 mmol) y Pd al 10%/C (16 mg) en EtOAc (10 ml) se agitó a TA en una atmósfera de H2durante 3 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (75 mg, 94%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 3,24 min, 415,2 [M+H]+.1H RMN (400 MHz, DMSO-de)610,5 (s, 1H), 7,58-7,48 (m, 4H), 7,26 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,19 (d, J =<8,8 Hz, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,62-3,56 (m, 1H), 2,59 (c,>J = 7,6 Hz, 2H), 1,91-1,71 (m, 5H), 1,45-1,23 (m, 5H), 1,15 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 202: 5-Etil-2-metoxi-W-(4-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 202
a) N-(2,4-Dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxi-N-(4-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A40
Una mezcla de N-(4-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A34 (200 mg, 0,36 mmol), ácido (1-metil-1H-pirazol-4-il)borónico (90 mg, 0,71 mmol), K2CO3(148 mg, 1,07 mmol) y Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0,036 mmol) en 1,4-dioxano (15 ml) y H2O (3 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante 4 h. La mayor parte del disolvente se retiró a presión reducida, y el residuo se diluyó con agua (30 ml), se ajustó a pH 1-2 y se extrajo con DCM (35 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 100/1) para dar el compuesto del título (105 mg, 53%) en forma de un sólido de color amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 5-Etil-2-metoxi-N-(4-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 202
Una mezcla de N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxi-N-(4-(1-metil-1H-pirazol-4-il) benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A40 (105 mg, 0,19 mmol) y TFA (2 ml) se agitó a TA en atmósfera de N2durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 80/1) para dar el compuesto del título (60 mg, 79 %) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 2,587 min, m/z 413,1 [M+H]+.<1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 10,2 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,66-7,45 (m, 4H), 7,39 (d,>J = 7,2 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 2,58 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,15 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 203: 5-Etil-2-metoxi-N-(4-(pirimidin-5-il)benzo[rf]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 203
A41 203
a) N-(2,4-Dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxi-N-(4-(pirimidin-5-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A41
Una mezcla de N-(4-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-((2,4-dimetoxibencil)oxi)-5-etil- 2-metoxibencenosulfonamida A34 (200 mg, 0,36 mmol), ácido pirimidin-5-ilborónico (43 mg, 0,71 mmol), K2CO3(148 mg, 1,07 mmol) y Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0,036 mmol) en 1,4-dioxano (15 ml) y H2O (3 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante 4 h. La mayor parte del disolvente se retiró a presión reducida, y el residuo se diluyó con agua (30 ml), se ajustó a pH 1-2 y se extrajo con DCM (35 ml x3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 60/1) para dar el compuesto del título (95 mg, 47 %) en forma de un sólido de color amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 5-Etil-2-metoxi-N-(4-(pirimidin-5-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 203
Una mezcla de N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxi-N-(4-(pirimidin-5-il) benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A41 (95 mg, 0,17 mmol) y TFA (2 ml) se agitó a TA en atmósfera de N2durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 40/1) para dar el compuesto del título (45 mg, 65%) en forma de un sólido de color rojo. LCMS-D: Tr 2,50 min, m/z 411,1 [M+H]+.<1H RMN (400 MHz, DMSO->de)610,5 (s, 1H), 9,24 (s, 1H), 8,97 (s, 2H), 7,86-7,79 (m, 2H), 7,53-7,38 (m, 3H), 7,13-7,11 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 2,55 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,11 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo de referencia 204: N-(5-Etilbenzo[rf]isoxazol-3-il)-3-metoxi-5,6,7,8-tetrahidronaftaleno-2-sulfonamida 204
Una mezcla de W-(5-bromobenzo[d]isoxazol-3-¡l)-3-metox¡-5,6,7,8- tetrahidronaftaleno-2-sulfonamida 113 (219 mg, 0,5 mmol), ácido etilborónico (185 mg, 2,5 mmol), Pd(dppf)Cl2(73 mg,0,1mmol) y K2CO3(345 mg, 2,5 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) y agua (20 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante una noche. Después, la mezcla se ajustó a pH 1 y la mayor parte del disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo con DCM (100 ml). El extracto orgánico se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 10/1 a 2/1) seguido de TLC preparativa (éter de pet./EtOAc = 1/1) para dar el compuesto del título (52 mg, 27%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 3,06 min, m/z 387,1 [M+H]+.<1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 11,4 (s,>1H), 7,83 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,51 - 7,43 (m, 2H), 6,84 (s, 1H), 3,71 (s, 3H), 2,77 - 2,65 (m,6H), 1,75 - 1,66 (m, 4H), 1,24 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo de referencia 205: W-(5-Ciclopropilbenzo[d]isoxazol-3-il)-3-metoxi-5,6,7,8-tetrahidronaftaleno-2-sulfonamida 205
Una mezcla de W-(5-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-3-metoxi-5,6,7,8- tetrahidronaftaleno-2-sulfonamida 113 (219 mg, 0,5 mmol), ácido ciclopropilborónico (215 mg, 2,5 mmol), Pd(dppf)Cl2(73 mg, 0,1 mmol) y K2CO3(345 mg, 2,5 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) y agua (4 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante una noche. Después, la mezcla se ajustó a pH 1 con HCl conc. y la mayor parte del disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (30 ml) y se extrajo con DCM (100 ml). El extracto orgánico se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 10/1 a 2/1) seguido de TLC preparativa (éter de pet./EtOAc = 1/1) para dar el compuesto del título (50 mg, 25 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 3,07 min, m/z 399,1 [M+H]+.<1H RMN (400 MHz,>DMSO-de)611,4 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,47 - 7,43 (m, 1H), 7,40 - 7,35 (m, 1H), 6,84 (s, 1H), 3,71 (s, 3H), 2,77 - 2,65 (m, 4H), 2,08 - 2,00 (m, 1H), 1,74 - 1,66 (m, 4H), 1,04 - 0,96 (m, 2H), 0,68 - 0,61 (m, 2H).
Ejemplo 206: N-(4-Cloro-5-etilbenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 206
Una mezcla de W-^-bromo^-clorobenzo^isoxazol^-il^-etil^-metoxi bencenosulfonamida 128 (200 mg, 0,449 mmol), ácido etilborónico (166 mg, 2,244 mmol), Pd(dppf)Cl2 (66mg, 0,09 mmol) y K2CO3(310 mg, 2,244 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) y agua (4 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante una noche. Después, la mezcla se ajustó a pH2con HCl ac.1M y la mayor parte del disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua y se extrajo con DCM. El extracto orgánico se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 2/1) seguido de TLC preparativa (DCM/MeOH = 10/1) para dar el compuesto del título (15 mg, 9%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,89 min, m/z 395,1 [M+H]+.<1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 10,4 (s, 1H), 7,64 (s, 2H), 7,61 - 7,57 (m, 1H), 7,49 - 7,44 (m, 1H), 7,15 - 7,10 (m, 1H), 3,66 (s, 3H), 2,80 (c,>J = 7,6 Hz, 2H), 2,60 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,21 - 1,11 (m,<6 H).>
Ejemplo 207: N-(4-Cloro-5-ciclopropilbenzo[rf]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 207
Una mezcla de W-(5-bromo-4-clorobenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxi bencenosulfonamida 128 (200 mg, 0,449 mmol), ácido ciclopropilborónico (193 mg, 2,244 mmol), Pd(dppf)Cl2 (66mg, 0,09 mmol) y K2CO3(310 mg, 2,244 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) y agua (4 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante una noche. Después, la mezcla se ajustó a pH 2 con HCl ac. 1 M y la mayor parte del disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua y se extrajo con DCM. El extracto orgánico se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 3/1) seguido de TLC preparativa (DCM/MeOH = 100/1) para dar el compuesto del título (20 mg, 11 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,91 min, m/z 407,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de)610,4 (s, 1H), 7,64 - 7,56 (m, 2H), 7,52 - 7,44 (m, 1H), 7,34 - 7,27 (m, 1H), 7,17 - 7,11 (m, 1H), 3,67 (s, 3H), 2,60 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 2,27 - 2,17 (m, 1H), 1,15 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 1,08 - 1,00 (m, 2H), 0,78 - 0,70 (m, 2H).
Ejemplo 208: N-(5-Ciclopropil-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 208
Una mezcla de W-(5-bromo-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxi bencenosulfonamida 108 (100 mg, 0,227 mmol), ácido ciclopropilborónico (97 mg, 1,133 mmol), Pd(dppf)Cl2(33 mg, 0,046 mmol) y K2CO3(156 mg, 1,133 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) y agua (4 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de N2durante una noche. Después, la mezcla se ajustó a pH 2 con HCl ac. 1 M y la mayor parte del disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua y se extrajo con DCM. El extracto orgánico se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de pet./EtOAc = 50/1 a 3/1) seguido de TLC preparativa (DCM/MeOH = 100/1) para dar el compuesto del título (30 mg, 33 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,87 min; m/z 403,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de)<6 10,4 (s, 1H), 7,63 (d,>J = 2,3 Hz, 1H), 7,50 - 7,45 (m, 1H), 7,32 - 7,26 (m, 1H), 7,19 - 7,12 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 2,61 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 2,22-2,15 (m, 1H), 1,15 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 1,03 - 0,94 (m, 2H), 0,76 - 0,64 (m, 2H).
Ejemplos 209, 210 y 211
a) ((3,5-Dimetoxibencil)oxi)dimetilsilano de terc-butilo A42
A una solución de (3,5-dimetoxifenil)metanol (10 g, 0,059 mol) e imidazol (6,07 g, 0,089 mol) en DMF (100 ml) a TA se le añadió TBSCl (9,86 g, 0,065 mol) y la mezcla se agitó durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se lavó con agua, se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 20/1 a 10/1) para dar el compuesto del título (13 g, 77%) en forma de un aceite incoloro, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 4-(((terc-Butildimetilsilil)oxi)metil)-2,6-dimetoxibencenosulfinato de litio A43
A una solución de ((3,5-dimetoxibencil)oxi)dimetilsilano de terc-butilo A42 (5 g, 0,018 mol) y TMEDA (2,26 g, 0,020 mol) en n-hexano (100 ml) a -70 °C se le añadió n-BuLi (solución 2,5 M en hexanos, 7,8 ml, 0,020 mol) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h. Después, la mezcla se enfrió de nuevo a -60 °C y se burbujeó con gas SO2durante 30 min. El precipitado resultante se recogió por filtración y se lavó con n-hexano para dar el compuesto del título (6,2 g,100%), que se usó directamente en la siguiente etapa.
c) Cloruro de 4-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-2,6-dimetoxibencenosulfonilo A44
A una mezcla de 4-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-2,6-dimetoxibencenosulfinato de litio A43 (6,2 g, 0,018 mol) en nhexano (100 ml) a 0 °C se le añadió SO2Cl2(2,39 g, 0,018 mol) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h. Los sólidos se recogieron por filtración, se lavaron con n-hexano, después se disolvieron en EtOAc y se lavaron con agua. La capa orgánica se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 20/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (2,4 g, 36%) en forma de un sólido de color amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
d) 4-(((terc-Butildimetilsilil)oxi)metil)-2,6-dimetoxi-N-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A45
A una solución de 4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina (819 mg, 4,99 mmol) en THF (20 ml) a -78 °C se le añadió LiHMDS (solución 1 M en THF, 5,98 ml, 5,98 mmol) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 30 min, y después se enfrió a -60 °C. Después, se añadió una solución de cloruro de 4-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-2,6-dimetoxibencenosulfonilo A44 (1,9 g, 4,99 mmol) en THF (20 ml) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla se ajustó a pH 5 con HCl ac. 1 M y se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 20/1) para dar el compuesto del título (170 mg, 7%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 3,33 min, m/z 509,0 [M+H]+.
e) 4-(Hidroximetil)-2,6-dimetoxi-N-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 209
A una solución de 4-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-2,6-dimetoxi-N- (4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A45 (170 mg, 0,334 mmol) en THF (10 ml) se le añadió TBAF (175 mg, 0,668 mmol) y la mezclase agitó a TA durante 3 h. La reacción se interrumpió con HCl ac. 1 M y la mezcla se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por TLC preparativa (DCM/MeOH = 100/1 a 50/1) para dar el compuesto del título (30 mg, 23%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 1,93 min, m/z 394,9 [M+H]+.<1H RMN (400 MHz, DMSO-cfó) ó 9,40 (s, 1H), 7,55 (t,>J = 8,2 Hz, 1H), 7,18 - 7,12 (m, 1H), 6,89 - 6,82 (m, 1H), 6,72 (s, 2H), 5,39 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 4,49 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,77 (s,<6 H).>
f) 4-(Bromometil)-2,6-dimetoxi-N-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A46
Una solución de 4-(hidroximetil)-2,6-dimetoxi-N-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il) bencenosulfonamida 209 (1,0 g, 2,53 mmol), CBr4(2,52 g, 7,60 mmol) y PPh3(1,99 g, 7,60 mmol) en DCM (20 ml) se agitó a TA durante una noche. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 50/1 a 10:1) para dar el compuesto del título (600 mg, 52%) en forma de un sólido de color amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
g) 4-(Azidometil)-2,6-dimetoxi-N-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A47
Una solución de 4-(bromometil)-2,6-dimetoxi-N-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il) bencenosulfonamida A46 (200 mg, 0,44 mmol) y NaN3(85 mg, 1,31 mmol) en DMF (5 ml) se calentó a 50 °C durante 3 h. La mezcla se vertió en agua y el precipitado se recogió por filtración. La torta de filtro se lavó con agua y se secó para dar el compuesto del título (100 mg, 54%) en forma de un sólido de color gris. LCMS-D: Tr 2,45 min, m/z 420,1 [M+H]+.
h) Clorhidrato de 4-(aminometil)-2,6-dimetoxi-N-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 210
Una solución de 4-(azidometil)-2,6-dimetoxi-N-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il) bencenosulfonamida A47 (300 mg, 0,716 mmol) y PPh3(207 mg, 0,788 mmol) en THF(8ml) y EtOH(6ml) se agitó a TA durante 3 h. Se añadieron agua (2 ml) y HCl concentrado (2 ml) y la mezcla se calentó a 55 °C durante 3 h. La mayor parte de los disolventes orgánicos se retiraron a presión reducida y el residuo acuoso se lavó con DCM. La fase acuosa se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (150 mg, 53%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 0,38 min, m/z 394,1 [M+H]+.<1H RMN (400 MHz, metanol-d4)>ó 7,54 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,06 - 7,01 (m, 1H), 6,87 (s, 2H),<6,86 - 6,82>(m, 1H), 4,12 (s, 2H), 4,07 (s, 3H), 3,89 (s,6H).
i) N-(3,5-Dimetoxi-4-(N-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)sulfamoil)bencil)acetamida 211
Una mezcla de clorhidrato de 4-(aminometil)-2,6-dimetoxi-N-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il) bencenosulfonamida 210 (130 mg, 0,33 mmol), NaHCO3(83 mg, 0,99 mmol) y anhídrido acético (101 mg, 0,99 mmol) en THF (5 ml) se agitó a TA durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por TLC preparativa para dar el compuesto del título (50 mg, 34%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 1,93 min, m/z 436,1 [M+H]+.<1H RMN (400 MHz, DMSO-d6)>ó 9,47 (s, 1H), 8,36 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 7,55 (m, 1H), 7,18 - 7,12 (m, 1H), 6,89 - 6,81 (m, 1H),<6,66 (s, 2H), 4,24 (d,>J = 5,9 Hz, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,76 (s,<6 H), 1,88 (s, 3H).>
Ejemplo 212: 2-Fluoro-6-metoxi-N-(4-metoxibenzo[rf]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 212
a) 2,6-Difluoro-N-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A48
A una solución de 4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-amina (4,0 g, 24,0 mmol) en THF (200 ml) a -78 °C en atmósfera de nitrógeno se le añadió LiHMDS (solución 1 M en THF, 31,2 ml, 31,2 mmol) gota a gota y la mezcla se agitó a -78 °C durante 3 h. Después, se añadió gota a gota una solución de cloruro de 2,6-difluorofenilsulfonilo (10,2 g, 48 mmol) en THF (20 ml) y la mezcla se dejó calentar lentamente a TA y se agitó durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (200 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 6/1 a 2/1) para dar el compuesto del título (2,9 g, 35 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 1,94 min, m/z 341,1 [M+H]+.
b) 2-Fluoro-6-metoxi-N-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 212
Una mezcla de 2,6-difluoro-W-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A48 (450 mg, 1,32 mmol) y NaOMe (428 mg, 7,92 mmol) en MeOH (6 ml) se calentó a 120 °C durante una noche y después se dejó enfriar a TA y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por TLC preparativa (DCM/MeOH = 50/1) para dar el compuesto del título (100 mg, 21%) en forma de un sólido de color blanco. lCm S-D: Tr 2,22 min, m/z 353,0 [M+H]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 10,6 (s, 1H), 7,62 (m, 1H), 7,56 (t, J = 8,3 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,00 - 6,92 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,80 (s, 3H).
Ejemplo 213: 2-Hidroxi-6-metoxi-N-(4-metoxibenzo[rf]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 213
Una mezcla de 2-fluoro-6-metoxi-W-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 212 (20 mg, 0,06 mmol), (6-metoxipiridin-3-il)metanol (50,1 mg, 0,36 mmol) y f-BuOK (20,2 mg, 0,18 mmol) en NMP (1 ml) se calentó a 120 °C durante 16 h. El análisis por LCMS indicó que solo se había formado el producto de la hidrólisis F. La mezcla se ajustó a pH <4 con HCl ac., se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El procedimiento se repitió con otro lote de 2-fluoro-6-metoxi-W-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 212 (52 mg, 0,15 mmol), los dos productos en bruto se combinaron y se purificaron por TLC prep. (EtOAc/éter de pet. = 1/13 y después DCM/MeOH = 50/1 a 100/1) para dar el compuesto del título (135 mg, 19%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,39 min; m/z 350,9 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 10,2 (s, 1H), 7,57 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,41 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,60-6,56 (m, 2H), 3,91 (s, 3H), 3,75 (s, 3H).
Ejemplo 214: 2-Metoxi-N-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-6-(metilamino)bencenosulfonamida 214
Una solución de 2-fluoro-6-metoxi-W-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 212 (30 mg, 0,085 mmol), metilamina HCl (23 mg, 0,34 mmol) y Et3N (52 mg, 0,51 mmol) en etanol (3 ml) se calentó a 120 °C en un tubo cerrado herméticamente durante una noche. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por TLC prep. (DCM) para dar el compuesto del título (4 mg, 13%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 2,49 min; m/z 364,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 7,56 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,30 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,33 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,24 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 2,79 (s, 3H).
Ejemplo 215: 2-(Ciclopropilmetoxi)-6-metoxi-N-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 215
A una solución de 2-fluoro-6-metoxi-W-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 212 (30 mg, 0,08 mmol) en THF (4 ml) se le añadió f-BuOK (27 mg, 0,24 mmol) seguido de ciclopropilmetanol (17 mg, 0,24 mmol) y la mezcla se calentó a 50 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (éter de pet./EtOAc = 1/1) para dar el compuesto del título (4,4 mg, 13%) en forma de un sólido de color gris. LCMS-D: Tr 2,54 min, m/z 405,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 9,33 (s, 1H), 7,57 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,48 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,85 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,77-6,75 (m, 2H), 3,91 (s, 3H), 3,89 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 3,77 (s, 3H), 0,86-0,83 (m, 1H), 0,43-0,24 (m, 4H).
Ejemplo de referencia 216: 2-Metoxi-W-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-6-((2-metoxipiridin-4-il)metoxi)bencenosulfonamida 216
A una solución de 2-fluoro-6-metoxi-W-(4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 212 (30 mg, 0,08 mmol) en NMP (3 ml) se le añadió f-BuOK (48 mg, 0,43 mmol) seguido de (2-metoxipiridin-4-il)metanol (118 mg, 0,85 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 6 h. La mezcla se diluyó con agua, se ajustó a pH 5-6 con HCl ac. 1 M y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (DCM/MeOH = 40/1) para dar el compuesto del título (5 mg, 12%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 2,43 min, m/z 472,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 9,65 (s, 1H), 8,07 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,51-7,39 (m, 2H), 7,07-6,98 (m, 3H), 6,79-6,75 (m, 3H), 5,22 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,83 (s, 3H), 3,81 (s, 3H).
Ejemplos y Ejemplos de referencia 217-222 (Tabla G)
Tabla G. Los siguientes ejemplos se sintetizaron de acuerdo con los procedimientos descritos para 215 o 216. En la tabla se han señalado variaciones de las condiciones.
Ejemplo 223: 2,6-Dimetoxi-N-(4-nitrobenzo[rf]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 223
A una solución de 4-nitrobenzo[d]isoxazol-3-amina 110 (478 mg, 2,63 mmol) en THF (9 ml) a -78 °C en atmósfera de nitrógeno se le añadió LiHMDS (solución 1 M en THF, 5,30 ml, 5,30 mmol) y la mezcla se agitó a -78 °C durante 3 h. Después, se añadió cloruro de 2,6-dimetoxisufonilo I111 (1,25 g, 5,27 mmol) y la mezcla se dejó calentar a TA y se agitó durante una noche. La reacción se interrumpió con agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (80 ml x 3). Losextractos orgánicos combinados se lavaron con agua (100 ml x 3) y salmuera (50 ml x 3), se secaron sobre Na2SÜ4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 1/0 a 50/1) para dar el compuesto del título (108 mg, 11%) en forma de un sólido de color amarillo. LCMS-D: Tr 2,23 min; m/z 380,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 10,2 (s, 1H), 8,19 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,92 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 3,71 (s, 6H).
Ejemplo 224: N-(4-Aminobenzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 224
A una solución de 2,6-dimetoxi-N-(4-nitrobenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 223 (70,0 mg, 0,18 mmol) en EtOAc (30 ml) se le añadió Pd al 10%/C (40,0 mg) y la mezcla se agitó a TA durante una noche en una atmósfera de hidrógeno. El catalizador se retiró por filtración, se aclaró con EtOAc y el filtrado se concentró a presión reducida. El procedimiento se repitió sobre un lote adicional de 2,6-dimetoxi-N-(4-nitrobenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 223 (30 mg, 0,079 mmol) y los productos en bruto se combinaron y se purificaron dos veces por TLC prep. (DCM/MeOH = 50/1) y dos veces por HPLC prep. para dar el compuesto del título (2,5 mg, 3%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,25 min; m/z 350,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, FDMSO-de) 6 7,52 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,25 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,66 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,43 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,78 (s, 6H).
Ejemplo 225: N-(5-((1H-Pirazol-1-il)metil)benzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 225
a) N-(5-Bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A49
A una solución de N-(5-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 135 (8,2 g, 19,9 mmol), (2,4 dimetoxifenil)metanol (5,03 g, 29,9 mmol) y PPh3(13,1 g, 49,9 mmol) en THF (400 ml) a 0 °C en atmósfera de nitrógeno se le añadió lentamente gota a gota DIAD (8,06 g, 39,9 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 5/1) para dar el compuesto del título (4,7 g, 42%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 3,39 min,m/z 583,1 [M+Na]+
b) 3-((N-(2,4-Dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d] isoxazol-5-carboxilato de metilo A50
Una mezcla de N-(5-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2- metoxibencenosulfonamida A49 (1,5 g, 2,67 mmol), Et3N (10 ml) y Pd(dppf)Cl2(732 mg, 1 mmol) en MeOH (150 ml) se calentó a 120 °C en una atmósfera de monóxido de carbono (20 bar) durante 7 h. La reacción se repitió con 1,7 g de N-(5-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2- metoxibencenosulfonamida A49 y 1,5 g de N-(5-bromobenzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2- metoxibencenosulfonamida A49 y la mezclas se combinaron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 100/1 a 3/1) para dar el compuesto del título (2,2 g, 49 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 3,17 min, m/z 563,1 [M+Na]+
c) Ácido 3-((N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-carboxílico A51
A una solución de 3-((N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxifenil) sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-carboxilato de metilo A50 (2,2 g, 4,07 mmol) en metanol (30 ml) se le añadió NaOH ac. 3 M (20 ml) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla se ajustó a pH 1 con HCl ac. y el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con DCM (200 ml). El extracto orgánico se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (1,9 g, 89%) en forma de un sólido de color amarillo claro. LCMS-D: Tr 2,99 min, m/z 549,1 [M+Na]+.
d) N-(2,4-Dimetoxibencil)-5-etil-N-(5-(hidroximetil)benzo[d]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida A52
A una solución de ácido 3-((N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-carboxílico (800 mg, 1,52 mmol) A51 en THF (5 ml) a 0 °C en atmósfera de nitrógeno se le añadió lentamente gota a gota BH3THF (solución 1 M en THF, 10 ml, 10 mmol) y la mezcla se dejó calentar a TA y se agitó durante 2 h. La mezcla se enfrió a 0 °C y la reacción se interrumpió mediante la lenta adición de metanol (20 ml). El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se diluyó con agua y se extrajo con DCM (200 ml). El extracto orgánico se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 100/0 a 40/1) para dar el compuesto del título (700 mg, 90%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,99 min, m/z 513,1 [M+H]+.
e) N-(5-((1H-Pirazol-1-il)metil)benzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A53
A una solución de N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-N-(5-(hidroximetil) benzo[d]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida A52 (200 mg, 0,39 mmol) y Et3N (197 mg, 1,95 mmol) en DCM (10 ml) a 0 °C en atmósfera de nitrógeno se le añadió cloruro de metanosulfonilo (89 mg, 0,78 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1,5 h y después se usó directamente en la siguiente etapa sin tratamiento ni aislamiento.
A una solución de pirazol (133 mg, 1,95 mmol) en DMF (20 ml) a 0 °C en atmósfera de nitrógeno se le añadió en porciones t-BuOK (219 mg, 1,95 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 1,5 h. Después, se añadió lentamente la mezcla de reacción que contenía metanosulfonato de (3-((N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido) benzo[d]isoxazol-5-il)metilo (asumiendo 0,39 mmol) y la mezcla resultante se agitó a TA durante 30 min. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se lavó con agua (x 3) y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 40/1) para dar el compuesto del título (60 mg, 27 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 3,01 min, m/z 563,2 [M+H]+.
f) N-(5-((1H-Pirazol-1-il)metil)benzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 225
Una mezcla de N-(5-((1H-pirazol-1-il)metil)benzo[d]isoxazol-3-il)-N- (2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A53 (60 mg, 0,107 mmol) y TFA (5 ml) se agitó a TA durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 20/1) para dar el compuesto del título (30 mg, 68 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 6,03 min, m/z 412,5 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 11,9 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,85 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,58-7,49 (m, 3H), 7,46 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,31 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 5,54 (s, 2H), 3,68 (s, 3H), 2,63 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 226: Trifluoroacetato de N-(5-(aminometil)benzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 226
a) 3-((N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-carboxamida A54
Una mezcla de ácido 3-((N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido) benzo[d]isoxazol-5-carboxílico A51 (600 mg, 1,14 mmol) y cloruro de tionilo (5 ml) se calentó a 85 °C durante 1,5 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en DCM (3 ml), se añadió gota a gota a NH4OH conc. (10 ml) a 0 °C y la mezcla se agitó a TA durante 30 min. La mayor parte del disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (20 ml). El precipitado resultante se recogió por filtración, se lavó dos veces con agua y se secó para dar el compuesto del título (400 mg, 67%) en forma de un sólido de color amarillo claro. LCMS-D: Tr 2,86 min, m/z 526,2 [M+H]+.
b) N-(5-(Aminometil)benzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A55
Una mezcla de 3-((N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxifenil) sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-carboxamida A54 (400 mg, 0,76 mmol) y BH3THF (solución 1 M en THF, 20 ml) se calentó a 75 °C en atmósfera de nitrógeno durante una noche. Después, la mezcla se enfrió a 0 °C y la reacción se interrumpió mediante la lenta adición de metanol (10 ml). El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se diluyó con agua y se extrajo con DCM (100 ml). El extracto orgánico se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 100/1 a 10/1) para dar el compuesto del título (150 mg, 39%) en forma de un sólido de color amarillo claro, que se usó directamente en la siguiente etapa.
c) Trifluoroacetato de N-(5-(aminometil)benzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 226
Una mezcla de N-(5-(aminometil)benzo[d]isoxazol-3-il)-N- (2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A55 (50 mg, 0,098 mmol) y TFA (5 ml) se agitó a TA durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (DCM/MeOH = 10/1) para dar el compuesto del título (30 mg, 86 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 1,93 min, m/z 362,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 11,8 (s a, 1H), 8,53 (s a, 3H), 8,11 (s, 1H), 7,83 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,70-7,68 (m, 2H), 7,48 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,13 (s, 2H), 3,71 (s, 3H), 2,64 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,17 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 227: ((3-((5-Etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-il)metil) carbamato de metilo 227
a) ((3-((N-(2,4-Dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d] isoxazol-5-il)metil) carbamato de metilo A56
A una solución de N-(5-(aminometil)benzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)- 5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A55 (70 mg, 0,137 mmol) y Et3N (69 mg, 0,685 mmol) en DCM (20 ml) a 0 °C se le añadió gota a gota cloroformiato de metilo (39 mg, 0,411 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 20 min. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se diluyó con agua y se extrajo con DCM. El extracto orgánico se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 100/0 a 40/1) para dar el compuesto del título (30 mg, 43%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) ((3-((5-Etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-il)metil) carbamato de metilo 227
Una mezcla de ((3-((N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido) benzo[d]isoxazol-5-il)metil)carbamato de metilo A56 (30 mg, 0,0558 mmol) y TFA (3 ml) se agitó a TA durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 40/1) para dar el compuesto del título (15 mg, 64 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,45 min, m/z 420,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 11,7 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,79 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,55-7,43 (m, 3H), 7,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,29 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 2,63 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 228: N-((3-((5-Etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-il)metil)acetamida 228
a) N-((3-((N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-il)metil)acetamida A57
A una solución de N-(5-(aminometil)benzo[d]isoxazol-3-il)-N-(2,4-dimetoxibencil)- 5-etil-2-metoxibencenosulfonamida A55 (100 mg, 0,195 mmol) y Et3N (98 mg, 0,975 mmol) en DCM (10 ml) a 0 °C en atmósfera de nitrógeno se le añadió cloruro de acetilo (31 mg, 0,391 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 30 min. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con DCM. El extracto orgánico se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (DCM/MeOH = 30/1) para dar el compuesto del título (60 mg, 56%) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) N-((3-((5-Etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-il)metil)acetamida 228
Una mezcla de N-((3-((N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido) benzo[d]isoxazol-5-il)metil)acetamida A57 (60 mg, 0,108 mmol) y TFA (5 ml) se agitó a TA durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 40/1) para dar el compuesto del título (30 mg, 68 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-D: Tr 2,35 min, m/z 404,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 11,7 (s a, 1H), 8,55 (s a, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,47-7,39 (m, 3H), 7,06 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,33 (d, J = 3,6 Hz, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,60 (c, J = 6,8 Hz, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,17 (t, J = 6,8 Hz, 3H).
Ejemplo 229: 5-Etil-N-(5-(hidroximetil)benzo[tf]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida 229
229
a) 3-((5-Etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-carboxilato de metilo A58
Una mezcla de 3-((N-(2,4-dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido) benzo[d]isoxazol-5-carboxilato de metilo A50 (435 mg, 0,8 mmol) y TFA (9 ml) se agitó a TA durante 3 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 2/1) para dar el compuesto del título (200 mg, 89%) en forma de un sólido de color amarillo claro. LCMS-D: Tr 2,69 min, m/z 391,1 [M+H]+. 1H RMN (400 Mhz , DMSO-d6) 5 11,9 (s a, 1H), 8,82 (s, 1H), 8,18 (dd, J = 9,2, 1,6 Hz, 1H), 7,72-7,70 (m, 2H), 7,48 (dd, J =<8 ,8 , 2,0 Hz, 1H), 7,10 (d,>J =<8,8 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 2,64 (c,>J = 7,6 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
b) Ácido 3-((5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-carboxílico A59
A una solución de 3-((5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol- 5-carboxilato de metilo A58 (220 mg, 0,56 mmol) en THF/MeOH (10 ml/10 ml) se le añadió NaOH ac. 2 M (1,4 ml, 2,8 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante una noche. El disolvente se retiró a presión reducida, el residuo se disolvió en agua (10 ml) y la solución se ajustó a pH 2-3. El precipitado resultante se recogió por filtración para dar el compuesto del título(180mg, 85%) en forma de un sólido de color amarillo claro. LCMS-D: Tr 2,51 min, m/z 377,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 13,2 (s, 1H), 11,86 (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 8,16 (dd, J =<8 ,8 , 1,2 Hz, 1H), 7,71-7,66 (m, 2H), 7,47 (dd,>J = 8,4, 1,6 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 2,63 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
c) 5-Etil-N-(5-(hidroximetil)benzo[d]isoxazol-3-il)-2-metoxibencenosulfonamida 229
Una mezcla de ácido 3-((5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-carboxílico A59 (50 mg, 0,13 mmol) y BH3THF (solución 1 M en THF, 5 ml, 5 mmol) se agitó a TA durante 5 h en atmósfera de nitrógeno. La reacción se interrumpió con agua (10 ml) y la mayor parte del THF se retiró a presión reducida. El residuo acuoso se ajustó a pH 2-3 y se extrajo con DCM (15 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 30/1) para dar el compuesto del título (30 mg, 62%) en forma de un sólido de color amarillo claro. LCMS-D: Tr 2,46 min, m/z 363,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 11,6 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,69 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,53 (s, 2H), 7,46 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,35 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,59 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,63 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 230: 3-((5-Etil-2-metoxifenil)sulfonamido)-N-metilbenzo[d]isoxazol-5-carboxamida 230
Una mezcla de 3-((5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-carboxilato de metilo A58 (50 mg, 0,13 mmol) y metilamina (solución al 33% en EtOH, 5 ml) se calentó a 90 °C durante 80 min en un tubo cerrado herméticamente.
El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se purificó por TLC prep. para dar el producto deseado (18 mg, 36%) en forma de un sólido de color amarillo claro. LCMS-D: Tr 2,39 min, m/z 390,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 11,8 (s, 1H), 8,53-8,51 (m, 2H), 8,03 (d, J =<8,8 Hz, 1H), 7,69 (d,>J = 2,0 Hz, 1H), 7,62 (d, J =<8,8 Hz, 1H), 7,42 (d,>J = 8,0 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,69 (s, 3H), 2,81 (d, J = 4,4 Hz, 3H), 2,62 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 231: 3-((5-Etil-2-metoxifenil)sulfonamido)-N,N-dimetilbenzo[d]isoxazol-5-carboxamida 231
Una solución de ácido 3-((5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-carboxílico A59 (70 mg, 0,19 mmol) en cloruro de tionilo (10 ml) se calentó a 85 °C durante 3 h en atmósfera de nitrógeno. Después, la mezcla se concentró a presión reducida para dar cloruro de 3-((5-etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-carbonilo, que se disolvió en THF (2,5 ml) y se trató con dimetilamina (solución al 40% en agua, 5 ml). La mezcla se agitó a TA durante una noche. La mayor parte del THF se retiró a presión reducida y el residuo acuoso se ajustó a pH 2-3. El precipitado se recogió por filtración para dar el compuesto del título (60 mg, 80%) en forma de un sólido de color amarillo claro.
LCMS-D: Tr 2,40 min, m/z 404,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 8,13 (s, 1H), 7,71-7,63 (m, 3H), 7,48 (dd, J= 8,8, 2,0 Hz, 1H), 7,10 (d,J =8,8 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,01 (s, 3H), 2,96 (s, 3H), 2,63 (c,J =7,6 Hz, 2H), 1,16 (t,J= 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 232: 3-((5-Etil-2-metoxifenil)sulfonamido)benzo[d]isoxazol-5-carboxamida 232
A una solución de cloruro de 3-((5-et¡l-2-metox¡fen¡l)sulfonam¡do)benzo[d]¡soxazol-5-carbon¡lo (63 mg, 0,16 mmol), preparado de acuerdo con el proced¡m¡ento descr¡to para 3-((5-et¡l-2-metox¡fen¡l)sulfonam¡do)-W,W-d¡met¡lbenzo[d]¡soxazol-5-carboxam¡da 231, en THF (2,5 ml) se le añad¡ó NH4OH conc. (5 ml) y la mezcla se ag¡tó a TA durante un f¡n de semana. La mayor parte del THF se ret¡ró a pres¡ón reduc¡da y el res¡duo acuoso se ajustó a pH 2-3. El prec¡p¡tado resultante se recog¡ó por f¡ltrac¡ón para dar el compuesto del título (37 mg, 62%) en forma de un sól¡do de color amar¡llo claro. LCMS-D: Tr 2,33 m¡n, m/z 376,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 11,8 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,04 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,69 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,68 (s, 3H), 2,61 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 233: N-(5-Cianobenzo[d]isoxazol-3-il)-5-etil-2-metoxibencenosulfonamida 233
Una soluc¡ón de 3-((5-et¡l-2-metox¡fen¡l)sulfonam¡do)benzo[d]¡soxazol-5-carboxam¡da 232 (22 mg, 0,058 mmol) en POCla se calentó a 110 °C durante una noche en atmósfera de n¡trógeno. La reacc¡ón se ¡nterrump¡ó con h¡elo-agua (25 ml) y la mezcla se extrajo con DCM (35 ml x 2). Los extractos orgán¡cos comb¡nados se lavaron con agua (50 ml x 3), se secaron sobre Na2SO4anh¡dro, se f¡ltraron y se concentraron a pres¡ón reduc¡da para dar el compuesto del título (19,8 mg, 90%) en forma de un sól¡do de color amar¡llo claro. LCm S-D: Tr 2,61 m¡n, m/z 358,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 12,0 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,07 (d, J = 8,8, 1,2 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,49 (dd, J = 8,4, 1,6 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 2,65 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 1,17 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 234: 5-Etil-2-metoxi-N-(5-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 234
a) N-(2,4-Dimetoxibencil)-5-etil-2-metoxi-N-(5-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida A60
Una mezcla de N-(5-bromobenzo[d]¡soxazol-3-¡l)-N-(2,4-d¡metox¡benc¡l)-5-et¡l-2- metox¡bencenosulfonam¡da A49 (112 mg, 0,2 mmol), ác¡do met¡l borón¡co (60 mg, 1 mmol), Pd(dppf)Cl2(29 mg, 0,04 mmol) y K2CO3(138 mg, 1 mmol) en 1,4-d¡oxano (10 ml) y agua (2 ml) se calentó a 90 °C en atmósfera de n¡trógeno durante una noche. El d¡solvente se ret¡ró a pres¡ón reduc¡da y el res¡duo se d¡luyó con agua (30 ml) y se extrajo con EtOAc (100 ml). El extracto orgán¡co se lavó con agua, y salmuera, se secó sobre Na2SO4anh¡dro, se f¡ltró y se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có por TLC prep. (éter de pet./EtOAc = 3/1) para dar el compuesto del título (60 mg, 61%) en forma de un sól¡do de color blanco. Lc Ms -D: Tr 2,72 m¡n, m/z 347,2 [M-DMB]+.
b) 5-Etil-2-metoxi-N-(5-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 234
Una mezcla de N-(2,4-d¡metox¡benc¡l)-5-et¡l-2-metox¡-N-(5-met¡lbenzo[d]¡soxazol-3-¡l) bencenosulfonam¡da A60 (60 mg, 0,12 mmol) y TFA (5 ml) se ag¡tó a TA durante 4 h y después se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có por TLC prep. (éter de pet./EtOAc = 2/1) para dar el compuesto del título (30 mg, 71 %) en forma de un sól¡dode color blanco. LCMS-D: Tr 2,72 min, m/z 347,2 [M+H]+.1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 7,78 (s, 1H), 7,69 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,49 - 7,44 (m, 3H), 7,10 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,72 (s, 3H), 2,61 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 2,40 (s, 3H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Ejemplos 235-238 (Tabla H)
Tabla H. Las siguientes dianas se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito para 5-etil-2-metoxi-N-(5-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 234
Ejemplos y Ejemplos de referencia 239-242 (Tabla I)
Procedimiento IA:
A una solución de la amina (0,2 mmol, 1,0 equiv.) en piridina (2 ml) se le añadió el cloruro de sulfonilo (1,5 equiv.) y la mezcla se calentó a 120 °C con irradiación de microondas durante 2 h. La mezcla se repartió entre agua y EtOAc, las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. para dar el compuesto del título. En la Tabla I se han señalado variaciones de las condiciones anteriores.
Tabla I. Los siguientes ejemplos se sintetizaron de acuerdo con el procedimiento IA. En la tabla se han señalado variaciones de las condiciones.
Ejemplo de referencia 243: W-(6-(3-Cianofenil)-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 243
A una solución de W-(6-bromo-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 89 (50 mg, 0,113 mmol) en 1,4-dioxano (8 ml) y agua (2 ml) se le añadieron ácido (3-cianofenil)borónico (34 mg, 0,226 mmol), Na2CO3(36 mg, 0,339 mmol) y Pd(PPh3)4(14 mg, 0,011 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo en una atmósfera de N2durante una noche. La mezcla se ajustó a pH 4-5 con HCl acuoso 1 M y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (DCM/MeOH = 100/1) para dar el compuesto del título (24 mg, 46 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 2,44 min, m/z 466,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 9,70 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,16 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,70 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,51 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 6,79 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,03 (s, 3H), 3,78 (s, 6H).
Ejemplo 244: 2,6-Dimetoxi-N-(4-metoxi-6-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 244
A una solución de W-(6-bromo-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 89 (50 mg, 0,113 mmol) en 1,4-dioxano (8 ml) y agua (2 ml) se le añadieron ácido metilborónico (14 mg, 0,226 mmol), Na2CO3(36 mg, 0,339 mmol) y Pd(PPh3)4(14 mg, 0,011 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo en una atmósfera de N2durante una noche. La mezcla se ajustó a pH 4-5 con HCl acuoso 1 M y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por HPLC prep. para dar el compuesto del título (8 mg, 19%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 2,18 min, m/z 379,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 9,45 (s, 1H), 7,49 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 6,97 (s, 1H), 6,77 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,70 (s, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,77 (s, 6H), 2,42 (s, 3H).
Ejemplo 245: 2,6-Dimetoxi-N-(4-metoxi-6-(piridin-4-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 245
A una solución de W-(6-bromo-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 89 (50 mg, 0,113 mmol) en 1,4-dioxano (8 ml) y agua (2 ml) se le añadieron ácido piridin-4-ilborónico (28 mg, 0,226 mmol), Na2CO3(36 mg, 0,339 mmol) y Pd(PPh3)4(14 mg, 0,011 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo en una atmósfera de N2durante una noche. La mezcla se ajustó a pH 4-5 con HCl acuoso 1 M y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (DCM/MeOH = 30/1) para dar el compuesto del título (22 mg, 44 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 0,58 min, m/z 442,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 9,75 (s, 1H), 8,69 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 7,84 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 7,63 (s, 1H), 7,50 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H), 6,78 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,03 (s, 3H), 3,78 (s, 6H).
Ejemplo 246: 2,6-Dimetoxi-N-(4-metoxi-6-(piridin-3-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 246
A una solución de W-(6-bromo-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 89 (50 mg, 0,113 mmol) en 1,4-dioxano (8 ml) y agua (2 ml) se le añadieron 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridina (47 mg, 0,226 mmol), Na2CO3(36 mg, 0,339 mmol) y Pd(PPh3)4(14 mg, 0,011 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo en una atmósfera de N2durante una noche. La mezcla se ajustó a pH 4-5 con HCl acuoso 1 M y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (DCM/MeOH = 30/1) para dar el compuesto del título (9 mg, 18 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 0,77 min, m/z 442,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 9,67 (s, 1H), 9,02 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,63 (dd, J = 4,8, 1,6 Hz, 1H), 8,21 (dt, J = 8,0, 2,0 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,54 - 7,48 (m, 2H), 7,17 (s, 1H), 6,79 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,03 (s, 3H), 3,79 (s, 6H).
Ejemplo 247: 2,6-Dimetoxi-N-(4-metoxi-6-(6-metoxipiridin-3-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 247
A una solución de W-(6-bromo-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 89 (50 mg, 0,113 mmol) en 1,4-dioxano (8 ml) y agua (2 ml) se le añadieron ácido (6-metoxipiridin-3-il)borónico (35 mg, 0,226 mmol), Na2CO3(36 mg, 0,339 mmol) y Pd(PPh3)4(14 mg, 0,011 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo en una atmósfera de N2durante una noche. La mezcla se ajustó a pH 4-5 con HCl acuoso 1 M y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (DCM/MeOH = 60/1) para dar el compuesto del título (45 mg, 85 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 2,33 min, m/z 472,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó 9,61 (s, 1H), 8,63 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 8,15 (dd, J = 8,7, 2,6 Hz, 1H), 7,51 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 6,94 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 3,79 (s, 6H).
Ejemplo 248: 2,6-Dimetoxi-N-(4-metoxi-6-(3-metoxi-5-metilfenil)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 248
a) 2-(3-Metoxi-5-metilfenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano A61
Una mezcla de 1-bromo-3-metoxi-5-metilbenceno (500 mg, 2,49 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (1,9 g, 7,49 mmol), acetato potásico (977 mg, 9,96 mmol) y Pd(dppf)Cl2(196 mg, 0,25 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) se calentó a reflujo en atmósfera de N2durante 3 h. La mezcla se diluyó con EtOAc (300 ml), se lavó con agua (50 ml x 3) y la capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (éter de pet./EtOAc = 20/1) para dar el compuesto del título (300 mg, 49 %) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 7,08 (s, 1H), 6,94 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,87 (s, 1H), 3,73 (s, 3H), 2,30 - 2,25 (m, 3H), 1,28 (s, 12H).
b)2,6-Dimetoxi-N-(4-metoxi-6-(3-metoxi-5-metilfenil)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 248
A una solución de N-(6-bromo-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 89 (50 mg, 0,11 mmol) en 1,4-dioxano(8ml) y agua (2 ml) se le añadieron 2-(3-metoxi-5-metilfenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano A61 (55 mg, 0,22 mmol), K2CO3(61 mg, 0,44 mmol) y Pd(PPh3)4(13 mg, 0,011 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo en una atmósfera de N2durante una noche. La mezcla se ajustó a pH 4-5 con HCl acuoso 1 M y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por HPLC prep. para dar el compuesto del título (4,3 mg,8%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 2,56 min, m/z 485,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 9,62 (s, 1H), 7,51 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,83 (s, 1H), 6,79 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,79 (s,6H), 2,36 (s, 3H).
Ejemplo 249: 2,6-Dimetoxi-N-(4-metoxi-6-(2-metoxipiridin-4-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 249
A una solución de N-(6-bromo-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 89 (50 mg, 0,11 mmol) en 1,4-dioxano (4 ml) y agua (1 ml) se le añadieron ácido (2-metoxipiridin-4-il)borónico (33 mg, 0,22 mmol), Na2CO3(35 mg, 0,33 mmol) y Pd(PPh3)4(13 mg, 0,011 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo en una atmósfera de N2durante una noche. La mezcla se vertió en agua y se extrajo con DCM. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por HPLC prep. para dar el compuesto del título (5 mg, 10 %) en forma de un sólido de color blanco. LCm S-C: Tr 2,29 min, m/z 472,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 9,71 (s a, 1H), 8,26 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,50 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 7,42 (dd, J = 5,4, 1,6 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,78 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,90 (s, 3H), 3,78 (s,<6 H).>
Ejemplo 250: 2,6-Dimetoxi-N-(4-metoxi-6-(5-metoxipiridin-3-il)benzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 250
A una solución de N-(6-bromo-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 89 (50 mg, 0,11 mmol) en 1,4-dioxano (4 ml) y agua (1 ml) se le añadieron 3-metoxi-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridina (52 mg, 0,22 mmol), Na2CO3(35 mg, 0,33 mmol) y Pd(PPh3)4(13 mg, 0,011 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo en una atmósfera de N2durante una noche. La mezcla se vertió en agua y se extrajo con DCM. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por HPLC prep. para dar el compuesto del título (5 mg, 10 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 2,25 min, m/z 472,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 9,67 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,38 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 7,81 - 7,79 (m, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,51 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 6,79 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,04 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 3,79 (s,<6 H).>
Ejemplo de referencia 251: W-(6-(3-Ciano-5-metoxifenil)-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 251
a) 3-Metoxi-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzonitrílo A62
Una mezcla de 3-bromo-5-metoxibenzonitrilo (500 mg, 2,35 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (1,8 g, 7,07 mmol), acetato potásico (923 mg, 9,4 mmol) y Pd(dppf)ChDCM (196 mg ,0,24 mmol) se calentó a reflujo en atmósfera de N2durante 4 h. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (EtOAc/éter de pet. = 1/5) para dar el compuesto del título (600 mg, 98%) en forma de un aceite de color amarillo. LCMS-C: Tr 2,66 min; m/z 260,0 [M+H]+.
b) N-(6-(3-Ciano-5-metoxifenil)-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 251
A una solución de N-(6-bromo-4-metoxibenzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 89 (415 mg, 0,94 mmol) en 1,4-dioxano (80 ml) y agua (20 ml) se le añadieron 3-metoxi-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzonitrilo A62 (500 mg, 2,82 mmol), Na2CO3(399 mg, 3,77 mmol) y Pd(Pph3)4(116 mg, 0,1 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo en una atmósfera de N2durante una noche. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (DCM/MeOH = 30/1) para dar el compuesto del título (40 mg,8,6%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 2,48 min, m/z 495,9 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 9,69 (s a, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,57 (m, 1H), 7,49 (s, 2H), 7,15 (s, 1H), 6,77 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,90 (s, 3H), 3,77 (s,6H).
Ejemplo 252: 2,6-Dimetoxi-N-(5-metil-7-fenilbenzo[d]isoxazol-3-il)bencenosulfonamida 252
A una solución de N-(7-bromo-5-metilbenzo[d]isoxazol-3-il)-2,6-dimetoxibencenosulfonamida 239 (50 mg, 0,117 mmol) en 1,4-dioxano(8ml) y agua (2 ml) se añadieron ácido fenilborónico (22 mg, 0,176 mmol), Na2CO3(50 mg, 0,468 mmol) y Pd(PPh3)4(14 mg, 0,012 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo en una atmósfera de N2durante una noche. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (30 ml x3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por TLC prep. (éter de pet./EtOAc = 3/1) para dar el compuesto del título (40 mg, 80 %) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-C: Tr 2,49 min; m/z 425,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 7,87 - 7,80 (m, 2H), 7,67 -7,55 (m, 2H), 7,48 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,42 - 7,32 (m, 2H), 6,69 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 3,70 (s,<6 H), 2,45 (s, 3H).>
Ensayos
Preparación de proteínas
KAT5
Biología molecular: Una secuencia de ADN con codones optimizados (para expresión en Escherichia coli) que codifica los restos de aminoácidos 2 a 461 (Uniprot Q92993-2) de la isoforma kAT5 humana fue sintetizada porGenScript USA Inc (Piscataway, Nueva Jersey, Estados Unidos). Esta se ligó en un vector de expresión de E. coli pET43a modificado diseñado para codificar un marcador de hexahistidina N-terminal seguido de un sitio de escisión de proteasa del virus del grabado del tabaco (TEV) y de la secuencia de KAT5. La secuencia proteica resultante se enumera a continuación.
MGHHHHHHGTENLYFQGSAEVGEIIEGCRLPVLRRNQDNEDEWPLAEILSVKDISGRKLFYVHYIDFNKRLDEWVTHE RLDLKKIQFPKKEAKTPTKNGLPGSRPGSPEREVKRKVEVVSPATPVPSETAPASVFPQNGAARRAVAAQPGRKRKS NCLGTDEDSQDSSDGIPSAPRMTGSLVSDRSHDDIVTRMKNIECIELGRHRLKPWYFSPYPQELTTLPVLYLCEFCLK YGRSLKCLQRHLTKCDLRHPPGNEIYRKGTISFFEIDGRKNKSYSQNLCLLAKCFLDHKTLYYDTDPFLFYVMTEYDCK GFHIVGYFSKEKESTEDYNVACILTLPPYQRRGYGKLLIEFSYELSKVEGKTGTPEKPLSDLGLLSYRSYWSQTILEILM GLKSESGERPQITINEISEITSIKKEDVISTLQYLNLINYYKGQYILTLSEDIVDGHERAMLKRLLRIDSKCLHFTPKDWSK RGKWAS*
Expresión de proteínas: Para producir proteína KAT5 recombinante, el plásmido de expresión se transformó en la cepa de E. coli BL21 DE3 y se cultivó con agitación a 37 °C en volúmenes de 1 l de caldo de cultivo Terrific (TB) complementado con ampicilina 100 pg/ml y cinc 50 pM hasta alcanzar una DO600 de 0,8. Los cultivos se transfirieron a 18 °C y la expresión de proteínas se indujo mediante la adición de Isopropil p-D-1-tiogalactopiranósido hasta una concentración final de 0,5 mM y los cultivos se agitaron durante una noche durante 16 horas más. Después de la expresión, los cultivos celulares se centrifugaron a 5000 x g durante 20 min y el sedimento celular se almacenó a -20 °C.
Purificación de proteínas: La purificación de proteínas se inició descongelando el sedimento celular (25 g en peso húmedo) en tampón de lisis (Hepes 50 mM pH 7,4, NaCl 500 mM, imidazol 5 mM, glicerol al 5 % [v/v], ChAPS 0,1 % [p/v], 2-mercaptoetanol 2 mM, MgCh 3 mM, lisozima 0,5 mg/ml, benzonasa endonucleasa [EMD Millipore], PMSF 1 mM, comprimidos de inhibidor de proteasa completa sin EDTA [Roche]) usando una relación 6 ml de tampón por cada 1 g de células. Las células se lisaron adicionalmente por sonicación usando un procesador de líquidos Misonix (6 pulsos x 30 segundos, amplitud 60 [70 vatios]) y después se centrifugaron a 48.000 x g a 4 °C. Se mezcló sobrenadante (lisado celular) con 20 ml de resina Q-Sepharose FF (GE Healthcare) preequilibrada con tampón Q (Hepes 20 mM pH 7,4, NaCl 1 M). La fracción sin unir de Q-Sepharose FF se incubó después con 5 ml de resina de purificación de marcador de His cOmplete (Roche), preequilibrada con tampón de lavado IMAC (hepes 20 mM pH 7,4, NaCl 500 mM, imidazol 35 mM). La resina se lavó con tampón de lavado IMAC y la KAT5 unida se eluyó con tampón de elución IMAC (hepes 20 mM pH 7,4, NaCl 500 mM, imidazol 300 mM). La proteína eluida con IMAC se desaló inmediatamente en tampón de almacenamiento (citrato de sodio 50 mM pH 6,5, NaCl 500 mM, glicerol 5 % [v/v]) usando 2 columnas de desalación HiPrep 26/10 (GE Healthcare) en serie. La proteína desalada se purificó adicionalmente pasándola a través de una columna HiLoad 26/60 Superdex 75 preequilibrada en tampón de almacenamiento. Por último, la proteína KAT5 se concentró hasta 1,5 mg/ml usando unidad de filtrado de centrífuga Amicon Ultra (Utra-15 PCPM 10 kDa), se congeló instantáneamente en nitrógeno líquido y se almacenó en un congelador a -70 °C.
KAT6A
Biología molecular: La secuencia de ADN que codificaba los restos de aminoácidos 507 a 778 (Uniprot Q92794-1) de KAT6A humana se amplificó mediante PCR y se ligó en un vector de expresión de E. coli pET modificado diseñado para codificar un marcador de solubilidad de NusA seguido de un marcador de hexahistidina y un sitio de escisión de proteasa del virus del grabado del tabaco (TEV) y de la secuencia de KAT6A. La secuencia proteica resultante se enumera a continuación.
MNKEILAVVEAVSNEKALPREKIFEALESALATATKKKYEQEIDVRVQIDRKSGDFDTFRRWLVVDEVTQPTKEITLEAA RYEDESLNLGDYVEDQIESVTFDRITTQTAKQVIVQKVREAERAMVVDQFREHEGEIITGVVKKVNRDNISLDLGNNAE AVILREDMLPRENFRPGDRVRGVLYSVRPEARGAQLFVTRSKPEMLIELFRIEVPEIGEEVIEIKAAARDPGSRAKIAVK TNDKRIDPVGACVGMRGARVQAVSTELGGERIDIVLWDDNPAQFVINAMAPADVASIVVDEDKHTMDIAVEAGNLAQA IGRNGQNVRLASQLSGWELNVMTVDDLQAKHQAEAHAAIDTFTKYLDIDEDFATVLVEEGFSTLEELAYVPMKELLEIE GLDEPTVEALRERAKNALATIAQAQEESLGDNKPADDLLNLEGVDRDLAFKLAARGVCTLEDLAEQGIDDLADIEGLTD EKAGALIMAARNICWFGDEATSGSGHHHHHHSAGENLYFQGAMGRCPSVIEFGKYEIHTWYSSPYPQEYSRLPKLYL CEFCLKYMKSRTILQQHMKKCGWFHPPVNEIYRKNNISVFEVDGNVSTIYCQNLCLLAKLFLDHKTLYYDVEPFLFYVL TQNDVKGCHLVGYFSKEKHCQQKYNVSCIMILPQYQRKGYGRFLIDFSYLLSKREGQAGSPEKPLSDLGRLSYMAYW KSVILECLYHQNDKQISIKKLSKLTGICPQDITSTLHHLRMLDFRSDQFVIIRREKLIQDHMAKLQLNLRPVDVDPECLRW TP
Expresión de proteínas: Para producir proteína KAT6A recombinante, el plásmido de expresión se transformó en la cepa de E. coli BL21 DE3 y se cultivó con agitación a 37 °C en volúmenes de 1 l de caldo de cultivo Terrific (TB) complementado con ampicilina 100 pg/ml hasta alcanzar una DO600 de 0,8. Los cultivos se transfirieron a 18 °C y la expresión de proteínas se indujo mediante la adición de Isopropil p-D-1-tiogalactopiranósido hasta una concentración final de 0,5 mM y los cultivos se agitaron durante una noche durante 16 horas más. Después de la expresión, los cultivos celulares se centrifugaron a 5000 x g durante 20 min y el sedimento celular se almacenó a -20 °C.
Purificación de proteínas: La purificación de proteínas se inició descongelando el sedimento celular (40 g en pesohúmedo) en tampón de lisis (Tris-HCl 25 mM pH 7,8, NaCI 500 mM, DTT 5 mM, Triton-X 1000,01 % [v/v], glicerol 5 % [v/v], MgCl22 mM, Imidazol 10 mM, 0,5 mg/ml de lisozima, benzonasa endonucleasa [EMD Millipore], PMSF 1 mM, comprimidos de inhibidor de proteasa completa sin EDTA [Roche]) usando una relación 5 ml de tampón por cada 1 g de células. Las células se lisaron adicionalmente por 3 pases (a 10.3421 kPa) a través de un triturador de células Avestin C5 helado y después se centrifugaron a 48.000 x g a 4 °C. El sobrenadante (lisado celular) se filtró a través de un filtro de 5 pm y se aplicó a una columna HiTrap IMAC Sepharose FF de 5 ml (GE Healthcare) preequilibrada con tampón de lavado IMAC (Tris-HCl 25 mM pH 7,8, NaCl 500 mM, DTT 5 mM, Triton-X 100 0,01 % [v/v], glicerol 5 % [v/v], Imidazol 20 mM) usando un sistema de purificación de cromatografía Profinia Affinity (Bio-Rad). La columna IMAC se lavó después con tampón de lavado IMAC y la KAT6A unida se eluyó con tampón de elución IMAC (Tris-HCl 25 mM pH 7,8, NaCl 500 mM, glicerol al 5 % [v/v], DTT 5 mM, Imidazol 250 mM). La proteína eluida por IMAC se purificó adicionalmente pasándola a través de una columna HiLoad 26/60 Superdex 200 preequilibrada en tampón de almacenamiento (Tris-HCl 25 mM pH 7.8, NaCl 500 mM, DTT 5 mM, glicerol 5 % [v/v]). Por último, la proteína KAT6A se concentró hasta < 1 mg/ml usando unidad de filtrado de centrífuga Amicon Ultra (Utra-15 PCPM 10 kDa), se congeló instantáneamente en nitrógeno líquido y se almacenó en un congelador a -70 °C.
KAT6B se obtuvo de SignalChem, ID del catálogo: K315-381BG
KAT7
Biología molecular: Una secuencia de ADN con codones optimizados que codifica los restos de aminoácidos 325 a 611 (Uniprot O95251-1) de la KAT7 humana fue sintetizada por GenScript USA Inc (Piscataway, Nueva Jersey, Estados Unidos). Esta se ligó en un vector de expresión de E. coli pET43a modificado diseñado para codificar un marcador de hexahistidina N-terminal seguido de un sitio de escisión de proteasa del virus del grabado del tabaco (TEV) y de la secuencia de KAT7. La secuencia proteica resultante se enumera a continuación.
MGHHHHHHGTENLYFQGSRLQGQITEGSNMIKTIAFGRYELDTWYHSPYPEEYARLGRLYMCEFCLKYMKSQTILRR HMAKCVWKHPPGDEIYRKGSISVFEVDGKKNKIYCQNLCLLAKLFLDHKTLYYDVEPFLFYVMTEADNTGCHLIGYFS KEKNSFLNYNVSCILTMPQYMRQGYGKMLIDFSYLLSKVEEKVGSPERPLSDLGLISYRSYWKEVLLRYLHNFQGKEI SIKEISQETAVNPVDIVSTLQALQMLKYWKGKHLVLKRQDLIDEWIAKEAKRSNSNKTMDPSCLKWTPPKGTAS
Expresión de proteínas: Para producir proteína KAT7 recombinante, el plásmido de expresión se transformó en la cepa de E. coli BL21 DE3 RIL y se cultivó con agitación a 37 °C en volúmenes de 1 l de caldo de cultivo Terrific (TB) complementado con ampicilina 100 pg/ml y cinc 50 pM hasta alcanzar una DO600 de 0,8. Los cultivos se transfirieron a 18 °C y la expresión de proteínas se indujo mediante la adición de Isopropil p-D-1-tiogalactopiranósido hasta una concentración final de 0,5 mM y los cultivos se agitaron durante una noche durante 16 horas más. Después de la expresión, los cultivos celulares se centrifugaron a 5000 x g durante 20 min y el sedimento celular se almacenó a -20 °C.
Purificación de proteínas: La purificación de proteínas se inició descongelando el sedimento celular (10 g en peso húmedo) en tampón de lisis (Hepes 50 mM pH 7,5, NaCl 300 mM, DTT 5 mM, Imidazol 5 mM, Brij 35 0,05 % [v/v], glicerol 10 % [v/v], MgCl23 mM, lisozima 0,5 mg/ml, benzonasa endonucleasa [EMD Millipore], PMSF 1 mM, comprimidos de inhibidor de proteasa completa sin EDTA [Roche]) usando una relación 10 ml de tampón por cada 1 g de células. Las células se lisaron adicionalmente por sonicación usando un procesador de líquidos Misonix (6 pulsos x 30 segundos, amplitud 60 [70 vatios]) y después se centrifugaron a 48.000 x g a 4 °C. Se incubó sobrenadante (lisado celular) con 1 ml de resina de purificación de marcador de His cOmplete (Roche), preequilibrada con tampón de lavado IMAC 1 (hepes 25 mM pH 7,5, NaCl 800 mM, imidazol 5 mM, glicerol al 10 % [v/v],Dt T5 mM, Brij 350,01 % [v/v], arginina 50 mM, ácido glutámico 50 mM). La resina se lavó secuencialmente con tampón de lavado IMAC 1 y tampón de lavado IMAC 2 (hepes 25 mM pH 7,5, NaCl 300 mM, imidazol 20 mM, glicerol al 10 % [v/v], DTT 5 mM, Brij 35 0,01 % [v/v], arginina 50 mM, ácido glutámico 50 mM). Se eluyó proteína KAT7 unida con tampón de elución IMAC (hepes 25 mM pH 7,5, NaCl 200 mM, imidazol 500 mM, glicerol al 10 % [v/v], DTT 5 mM Brij 350,01 % [v/v], arginina 50 mM, ácido glutámico 50 mM). La proteína de elución se recogió directamente en 4 volúmenes de tampón de desalación (citrato de sodio 50 mM pH 6,5, NaCl 200 mM, Brij 35 0,01 % [v/v], glicerol 10 % [v/v], DTT 5 mM) hasta llevar la concentración de imidazol final hasta 100 mM. La proteína eluida por IMAC se desaló inmediatamente en tampón de desalación usando 2 columnas de desalación HiPrep 26/10 (GE Healthcare) en serie. La proteína desalada se purificó adicionalmente pasándola a través de una columna HiLoad 26/60 Superdex 75 preequilibrada en tampón de almacenamiento (citrato 50 mM pH 6.5, NaCl 200 mM, glicerol al 10 % [v/v], DTT 5 mM). Por último, la proteína KAT7 se concentró hasta 3,5 mg/ml usando unidad de filtrado de centrífuga Amicon Ultra (Utra-15 PCPM 10 kDa), se congeló instantáneamente en nitrógeno líquido y se almacenó en un congelador a -70 °C.
KAT8
Biología molecular: Una secuencia de ADN con codones optimizados (para expresión en E. coli) que codifica los restos de aminoácidos 177 a 447 (Uniprot Q9H7Z6-1) de la KAT8 humana fue sintetizada por Thermo Fisher Scientific GENEART GmbH (Regensberg, Alemania). Esta se ligó en un vector de expresión de E. coli pPROEX Hta diseñado para codificar un marcador de hexahistidina N-terminal seguido de un sitio de escisión de proteasa del virus del grabado del tabaco (TEV) y de la secuencia de KAT8. La secuencia proteica resultante se enumera a continuación.
MSYYHHHHHHDYDIPTTENLYFQGAKYVDKIHIGNYEIDAWYFSPFPEDYGKQPKLWLCEYCLKYMKYEKSYRFHLG QCQWRQPPGKEIYRKSNISVYEVDGKDHKIYCQNLCLLAKLFLDHKTLYFDVEPFVFYILTEVDRQGAHIVGYFSKEKE SPDGNNVACILTLPPYQRRGYGKFLIAFSYELSKLESTVGSPEKPLSDLGKLSYRSYWSWVLLEILRDFRGTLSIKDLS QMTSITQNDIISTLQSLNMVKYWKGQHVICVTPKLVEEHLKSAQYKKPPITVDSVCLKWAP*
Expresión de proteínas: Para producir proteína KAT8 recombinante, el plásmido de expresión se transformó en la cepa de E. coli BL21 DE3 y se cultivó con agitación a 37 °C en volúmenes de 1 l de caldo de cultivo Terrific (TB) complementado con ampicilina 100 pg/ml hasta alcanzar una DO600 de 0,8. Los cultivos se transfirieron a 18 °C y la expresión de proteínas se indujo mediante la adición de Isopropil p-D-1-tiogalactopiranósido hasta una concentración final de 0,5 mM y los cultivos se agitaron durante una noche durante 16 horas más. Después de la expresión, los cultivos celulares se centrifugaron a 5000 x g durante 20 min y el sedimento celular se almacenó a -20 °C.
Purificación de proteínas: La purificación de proteínas se inició descongelando el sedimento celular (34 g en peso húmedo) en tampón de lisis (Hepes 20 mM pH 7,5, NaCl 500 mM, Imidazol 5 mM, glicerol al 5 % [v/v], Triton-X 100 0,01 % [v/v], 2-mercaptoetanol 5 mM, MgCl22 mM, lisozima 0,5 mg/ml, benzonasa endonucleasa [EMD Millipore], PMSF 1 mM, comprimidos de inhibidor de proteasa completa sin EDTA [Roche]) usando una relación 3 ml de tampón por cada 1 g de células. Las células se lisaron adicionalmente por 3 pases (a 10.3421 kPa) a través de un triturador de células Avestin C5 helado y después se centrifugaron a 48.000 x g a 4 °C. El sobrenadante (lisado celular) se filtró a través de un filtro de 0,2 pm y se aplicó a una columna HiTrap IMAC Sepharose FF de 5 ml (GE Healthcare) preequilibrada con tampón de lavado IMAC (Hepes 20 mM pH 7,5, NaCl 500 mM, TCEP 0,5 mM, Imidazol 5 mM) usando un sistema de purificación de cromatografía Profinia Affinity (Bio-Rad). La columna IMAC se lavó después secuencialmente con tampón de lavado IMAC 1 y tampón de lavado IMAC 2 (Hepes 20 mM pH 7,5, NaCl 500 mM, TCEP 0,5 mM, imidazol 10 mM) y se eluyó proteína KAT8 unida con tampón de elución IMAC (Hepes 20 mM pH 7,5, NaCl 500 mM, TCEP 0,5 mM, Imidazol 500 mM). La proteína eluida por IMAC se purificó adicionalmente pasándola a través de una columna HiLoad 26/60 Superdex 200 preequilibrada en tampón de almacenamiento (Hep 20 mM pH 7.5, NaCl 500 mM, TCEP 1 mM). Por último, la proteína KAT8 se concentró hasta < 0,2 mg/ml usando unidad de filtrado de centrífuga Amicon Ultra (Utra-15 PCPM 10 kDa), se congeló instantáneamente en nitrógeno líquido y se almacenó en un congelador a -70 °C.
Ensayo bioquímico de acetiltransferasa
Para determinar la inhibición de la actividad enzimática de KAT mediante compuestos de ensayo, se realizaron reacciones de ensayo en un volumen de 8 pl en placas de ensayo de volumen bajo de 384 pocillos. Las reacciones se realizaron en tampón de ensayo (Tris-HCl 100 mM, pH 7,8, NaCl 15 mM, EDTA 1 mM, Tween-20 0,01 %, Ditiotreitol 1 mM y albúmina de clara de huevo de pollo 0,01 % m/v).
Se prepararon reacciones con acetil coenzima A 1 pM, 100 nM de histona recombinante de longitud completa marcada por biotinilación limitada (KAT6A, KAT6B, KAT7: H3.1, KAT5, KAT8: H4), 10/ 5/ 8/ 40/ 20 nM de enzima KAT5/KAT6A/KAT6B/KAT7/KAT8, respectivamente, y un anticuerpo específico de acetil-lisina (H3,1: Cell Signaling Technology, H4: Abcam). Se prepararon series de diluciones de 11 puntos de los compuesto de ensayo en DMSO; se transfirió un volumen de 100 nl usando una herramienta de aguja en placas de ensayo que contienen sustratos, antes de añadir enzima para iniciar la reacción. Se incluyeron reacciones de control positivo (sin compuesto, solamente DMSO) y negativo (AcCoA omitido) en las mismas placas y recibieron la misma cantidad de DMSO que los pocillos tratados con el compuesto. Después de añadir todos los reactivos, las placas se sellaron con sellos adhesivos y se incubaron durante 90 min a temperatura ambiente. Se añadieron después 4 pl de tampón de ensayo que contenía perlas aceptoras de proteína A AlphaScreen® y perlas donantes de estreptavidina (PerkinElmer, Waltham, MA) hasta una concentración final de 8 pg/ml. Después de incubación durante 2 horas las placas se leyeron usando un lector de placas de múltiples marcadores EnVision 2103 (PerkinElmer) en modo HTS AlphaScreen®. Se obtuvieron valores de CI50 de las lecturas sin procesar (%I) para cada reacción en relación con controles en la misma placa (%I=(I-CN)/(CP-CN) donde CN/CP son los promedios de las reacciones negativa/positiva, respectivamente), ajustando después los datos de %I frente a la concentración del compuesto [I] con respecto a %I=(A+((B-A)/(1+((C/[I])aD)))) donde A es la asíntota inferior, B es la asíntota superior, C es el valor de CI50 y D es la pendiente.
Los resultados se muestran en las tablas 1 a 5 a continuación:
Tabla 1 (TIP60-KAT5)
Tabla 2 MOZ-KAT6A
Tabla 3 HBO-KAT7
Tabla 4 MOF-KA T8
Tabla 5QKF-KAT6B
Ensayo de biomarcadores de acetilación de lisina 23 de histona H3
Los compuestos se ensayaron con respecto a su capacidad para inhibir la acetilación del marcador H3K23 de histona en el siguiente ensayo:
La línea celular U2OS se sembró a una densidad de 9.000 células por pocillo en placas de cultivo tisular de calidad óptica de 96 pocillos en medio RPMI y suero bovino fetal al 10 % y se permitió que se adhirieran durante 24 horas en condiciones de cultivo convencionales (37 grados Celsius, CO25 %). Al final de este periodo se aspiró el medio. Se añadieron diluciones del compuesto en DMSO al medio, con pocillos de control negativo reservados para tratamiento con DMSO solamente y controles positivos de 100 % inhibición que recibían un compuesto inhibidor potente (por ejemplo, cas 2055397-28-7, ácido benzoico, 3-fluoro-5-(2-piridinil)-, 2-[(2-fluorofenil)sulfonil]hidrazida) (Baell, J., Nguyen, H.N., Leaver, D.J., Cleary, B.L., Lagiakos, H.R., Sheikh, B.N., Thomas T.J., Aryl sulfonohydrazides, documento WO2016198507A1, 2016) a una concentración de 10 pM y se transfirieron 200 pl a las células. Después de incubación durante 24 horas, las células se fijaron con formaldehído 3,7 % en PBS durante 20 minutos a temperatura ambiente, se lavaron (5 * 5 minutos) con solución salina tamponada con fosfato que contenía Tween 20 0,1 % y se bloquearon con tampón de bloqueo Odyssey (LI-COR, Lincoln, NE) que contenía TritonX100 0,1 %. Se añadió anticuerpo específico anti-H3K23ac (Abcam ab177275) en tampón de bloqueo Odyssey que contenía Tween 20 0,1 % y se incubaron durante 16 horas a 4 grados Celsius. Después de lavar (como anteriormente), se añadieron un anticuerpo secundario marcado con colorante Alexa647 (LifeTechnologies) y Hoechst 33342 (1 pg/ml, SigmaAldrich) durante 1 hora de incubación. Las placas se lavaron como se ha indicado previamente y se leyeron en una plataforma de captura de imágenes de alto contenido de Phenix PerkinElmer. Usando un sistema de análisis de imágenes Columbus, se localizaron núcleos individuales mediante tinción de Hoechst 33342 y se calculó el nivel de acetilación a partir de la intensidad relacionada con Alexa647 en la misma área. La intensidad media resultante por célula se convirtió directamente en porcentaje de inhibición en relación con los controles en la misma placa y los datos se ajustaron frente a un modelo logístico de cuatro parámetros para determinar la concentración inhibidora al 50 % (CI50).
Los resultados se muestran en la tabla 6 a continuación.
Tabla 6
Ensayo de biomarcadores de acetilación de lisina 14 de histona H3
Los compuestos se ensayaron para determinar su capacidad para inhibir la acetilación del marcador de lisina 14 de histona H3 en el siguiente ensayo:
La línea celular U2OS se sembró a una densidad de 3.000 células por pocillo en placas de cultivo tisular de calidad óptica de 384 pocillos en medio RPMI complementado con suero bovino fetal al 10 % y Hepes 10 mM. Se permitió que las células se adhirieran durante 24 horas en condiciones de cultivo convencionales (37 grados Celsius, CO2 5 %). Al final de este periodo las células se lavaron con medio sin suero. Se añadieron diluciones del compuesto preparadas en DMSO al medio sin suero, con pocillos de control negativo reservados para el tratamiento con DMSO solamente y controles positivos de 100 % de inhibición que recibieron un compuesto inhibidor potente (por ejemplo, ácido (Z)-4-fluoro-W-((3-hidroxifenil)sulfonil)-5-metil-[1,1'-bifenil]-3-carbohidrazónico) a 10 pM de concentración. Después de incubación durante 24 horas, las células se fijaron con formaldehído 4 % en PBS durante 15 minutos a temperatura ambiente, se lavaron con solución salina tamponada con fosfato y se bloquearon con tampón de bloqueo que contenía TritonX1000,2 % y BSA 2 %. Se añadió anticuerpo específico anti-H3K14ac (Cell Signalling Technologies) en tampón de bloqueo y se incubó durante una noche a 4 grados Celsius. Tras el lavado, se añadieron un anticuerpo secundario marcado con colorante AlexaFluor 488 (LifeTechnologies) y Hoechst 33342 (1 pg/ml, SigmaAldrich) durante 2 horas de incubación a temperatura ambiente. Las placas se lavaron y se leyeron en una plataforma de captura de imágenes de alto contenido de HCS PerkinElmer Opera. Usando un sistema de análisis de imágenes Columbus, se localizaron núcleos individuales mediante tinción de Hoechst 33342 y se calculó el nivel de acetilación a partir de la intensidad relacionada con AlexaFluor 488 en la misma área. La intensidad media resultante por célula se convirtió en porcentaje de inhibición en relación con los controles en la misma placa y los datos se ajustaron frente a un modelo logístico de cuatro parámetros para determinar la concentración inhibidora al 50 % (CI50).
Los resultados se muestran en la tabla 7 a continuación.
Tabla 7
Ensayo de biomarcadores de acetilación de lisina 7 de H2A.Z
Los compuestos se ensayaron para determinar su capacidad para inhibir el marcador de acetilación de lisina 7 de histona H2A.Z en el siguiente ensayo:
La línea celular U2OS se sembró a una densidad de 3.000 células por pocillo en placas de cultivo tisular de calidad óptica de 384 pocillos en medio RPMI complementado con suero bovino fetal al 10 % y Hepes 10 mM. Se permitió que las células se adhirieran durante 24 horas en condiciones de cultivo convencionales (37 grados Celsius, CO2 5 %). Al final de este periodo las células se lavaron con medio sin suero. Se añadieron diluciones del compuesto preparadas en DMSO al medio sin suero, con pocillos de control negativo reservados para el tratamiento con DMSO solamente y controles positivos de 100 % de inhibición que recibieron un compuesto inhibidor potente enantiómero 1 de 1, 1-dióxido de 7-yodo-W-(2-(oxazol-2-il)-2-feniletil)-2H-benzo[e][1,2,4]tiadiazina-3-carboxamida, que es el compuesto 146 de la solicitud relacionada GB1713962.7, presentada el 31 de agosto de 2018, a una concentración de 30 pM. Después de incubación durante 24 horas, las células se fijaron con formaldehído 4 % en PBS durante 15 minutos a temperatura ambiente, se lavaron con solución salina tamponada con fosfato y se bloquearon con tampón de bloqueo que contenía TritonX1000,2 % y BSA 2 %. Se añadió anticuerpo específico anti-H2A.ZK7ac (Abcam) en tampón de bloqueo y se incubó durante una noche a 4 grados Celsius. Tras el lavado, se añadieron un anticuerpo secundario marcado con colorante AlexaFluor 488 (LifeTechnologies) y Hoechst 33342 (1 pg/ml, SigmaAldrich) durante 2 horas de incubación a temperatura ambiente. Las placas se lavaron y se leyeron en una plataforma de captura de imágenes de alto contenido de HCS PerkinElmer Opera. Usando un sistema de análisis de imágenes Columbus, se localizaron núcleos individuales mediante tinción de Hoechst 33342 y se calculó el nivel de acetilación a partir de la intensidad relacionada con AlexaFluor 488 en la misma área. La intensidad media resultante por célula se convirtió en porcentaje de inhibición en relación con los controles en la misma placa y los datos se ajustaron frente a un modelo logístico de cuatro parámetros para determinar la concentración inhibidora al 50 % (CI50).
Los resultados se muestran en la tabla 8 a continuación:
Tabla 8
Referencias
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Claims (6)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de fórmula (I):
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: R1, R2, R3 y R4 se seleccionan independientemente de: (i) H; (ii) alquilo C1-3, opcionalmente sustituido por: hidroxi, alcoxi C1-2, NH2, fenilo, heteroarilo C5-6 alquil C1-4 carbamoílo, o acilamido; (iii) alcoxi C1-3, opcionalmente sustituido por cicloalquilo C3-6 o por uno o más grupos flúor; (iv) cicloalquilo C3-6; (v) halo; (vi) CORC, donde RC se selecciona de NRN1RN2, donde RN1 y RN2 se seleccionan independientemente de H y metilo; (vii) ciano, NH2, o NO2; y (viii) fenilo o heteroarilo C5-6opcionalmente sustituido con metilo, hidroxi o metoxi; Ar es un fenilo, opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados de (i) alquilo C1-4, opcionalmente sustituido por hidroxi, alcoxi C1-2, NH2, alquil C1-4carbamoílo, o por uno o más grupos flúor; (ii) cicloalquilo C3-6; (iii) hidroxi; ciano; NRN3RN4, donde RN3 y RN4 se seleccionan independientemente de H y metilo; o acilamido; (iv) halo; (v) alcoxi C1-3, opcionalmente sustituido por hidroxi, C(O)NH2, cicloalquilo C3-6, fenilo, heteroarilo C5-6 o por uno o más grupos flúor; (vi) fenoxi, opcionalmente sustituido por fluoro; (vii) fenilo o heteroarilo C5-6; o (viii) SF5o SO2CH3; y en el que al menos uno de R1, R2, R3 y R4 no es H.
  2. 2. El compuesto o sal según la reivindicación 1, en el que al menos uno de R1, R2, R3 y R4 es alquilo C1-3, opcionalmentesustituido por: hidroxi, alcoxi C1-2, NH2, fenilo, heteroarilo C5-6 alquil C1-4carbamoílo, o acilamido.
  3. 3. El compuesto o sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que al menos uno de R1, R2, R3 y R4 es alcoxi C1-3, opcionalmente sustituido por cicloalquilo C3-6o uno o más grupos flúor.
  4. 4. El compuesto o sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que al menos uno de R1, R2, R3 y R4 es (a) cicloalquilo C3-6; (b) CORC, donde RC se selecciona de NRN1RN2, donde RN1 y RN2 se seleccionan independientemente de H y metilo; (c) ciano, NH2o NO2; o (d) fenilo o heteroarilo C5-6opcionalmente sustituido con metilo, hidroxi o metoxi.
  5. 5. El compuesto o sal de acuerdo con la reivindicación 1, en el que: (a) R4 es metoxi, R2 es CH2OCH3o CH2OCH2CH3, y R1 y R3 son H; (b) R4 es metoxi, R2 es fenilo, opcionalmente sustituido por metilo o metoxi, y R1 y R3 son H; (c) R4 es metoxi, R2 es heteroarilo C5-6opcionalmente sustituido por metilo; (d) R4 es metoxi y R1, R2 y R3 son H; (e) R4 es cloro, R2 es C1-3alquilo bromo, y R1 y R3 son H; o (f) R3 es alquilo C1-3y R1, R2 y R4 son H. 6. El compuesto o sal de acuero con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que Ar está sustituido por alquilo C1-4, opcionalmente sustituido por hidroxi, alcoxi C1-2, NH2, alquil C1-4carbamoílo, o uno o más grupos flúor. 7. El compuesto o sal de acuero con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que Ar está sustituido por alcoxi C1-3, opcionalmente sustituido por hidroxi, C(O)NH2, cicloalquilo C3-6, fenilo, heteroarilo C5-6o uno de más grupos flúor. 8. El compuesto o sal de acuero con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que Ar está sustituido por (a) cicloalquilo C3-6; (b) hidroxi; (c) ciano; (d) NRN3RN4, donde RN3 y RN4 se seleccionan independientemente de H y metilo; o acilamido; (e) fenoxi, opcionalmente sustituido por fluoro; (f) fenilo o heteroarilo C5-6; o (g) SF5o SO2CH3. 9.
  6. 6. El compuesto o sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que Ar es: (a) 5-etil-2-metoxifenilo; (b) 5-CF3-2-metoxifenilo; o (c) 2,6-dimetoxifenilo. 10. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable. 11. Un compuesto o sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para uso en un procedimiento de terapia. 12. Un compuesto o sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para uso en el tratamiento del cáncer. 13. Un compuesto o sal para su uso de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el cáncer se selecciona de leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia mieloide aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mieloide crónica, leucemia no Hodgkin, enfermedad de Hodgkin, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, melanoma, cáncer de mama, cáncer de colon y recto, cáncer de colon, carcinoma de células escamosas y cáncer gástrico. 14. Un compuesto o sal para uso de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el compuesto se administra simultánea o secuencialmente con radioterapia y/o quimioterapia.
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