RS64932B1 - Jedinjenja - Google Patents

Description

Opis

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja koja deluju kao inhibitori lizin acetil transferaze (KAT) iz porodice MYST.

Osnova pronalaska

[0002] MYST porodica je najveća porodica KAT i dobila je ime po njenim članovima kvascima i sisarima: MOZ, Ybf2/ Sas3, Sas2 i TIP60 (Dekker 2014). MYST proteini posreduju u mnogim biološkim funkcijama uključujući regulaciju gena, popravku DNK, regulaciju ćelijskog ciklusa i razviće (Avvakumov 2007; Voss 2009). KAT proteini iz porodice MYST igraju ključnu ulogu u posttranslacionoj modifikaciji histona i stoga imaju dubok uticaj na strukturu hromatina u eukariotskom jezgru (Avvakumov 2007). Porodica trenutno obuhvata pet KAT-ova sisara: TIP60 (KAT5; HTATIP; MIM 601409), MOZ (KAT6A; MIM 601408; MYST3), MORF (KAT6b; KKF; MYST4), HBO (KAT8; HBO1; MYSTK8; MYST1) (Voss 2009). Ovih pet članova porodice MYST prisutni su kod ljudi i poznato je da je poremećaj funkcije MYST proteina povezan sa rakom (Avvakumov 2007). Najčešće korišćena imena za članove porodice MYST su:

MYST funkcionalni domeni

[0003] MYST proteini funkcionišu u kompleksima proteina sa više podjedinica uključujući adaptere kao što su ING proteini koji posreduju u vezivanju DNK (Avvakumov2007). Na primer, TIP60 je povezan sa NuA4 multiproteinskim kompleksom (koji obuhvata više od 16 članova) (Zhang 2017). Međutim, postojali su i neki izveštaji o motivu vezivanja DNK spirala-zavoj-spirala unutar strukture samog MOZ proteina (Holbert 2007), što ukazuje na sposobnost direktnog vezivanja za DNK.

[0004] Na aktivnost acetiltransferaze MYST proteina utiče MYST domen (katalitički domen). MYST domen sadrži motiv vezivanja acetil-koenzima A, koji je strukturno konzerviran sa drugim HAT, i neobičan C2HC-tip cink prst (Voss 2009). Smatra se da je visoko očuvan MYST domen, uključujući motiv vezivanja acetil-CoA i cink prst, definišuća karakteristika ove porodice enzima (Avvakumov 2007).

Uloga MYST proteina

[0005] Acetilacija histonskih ostataka je generalno povezana sa aktivacijom transkripcije. Međutim, u nekim slučajevima, transkripciona represija se takođe pripisuje MYST proteinima (Voss 2009). Poznato je da pojedinačni članovi porodice MYST učestvuju u širokom spektru važnih biohemijskih interakcija:

HBO1 pozitivno reguliše pokretanje replikacije DNK (Avvakumov2007; Aggarval 2004; Doion 2006; Iizuka 2006) preko acetilacije histonskih supstrata, što verovatno dovodi do pristupačnije konformacije hromatina (Avvakumov2007, Iizuka 2006). Takođe je poznato da HBO1 igra ulogu u patogenezi kancera dojke promovišući obogaćivanje ćelija sličnih matičnim ćelijama kancera (Duong 2013) i destabilizacijom receptora estrogena α (ERα) kroz ubikvinitiaciju, koja se odvija preko histonacetilirajuće aktivnosti HBO1 (Iizuka 2013). HBO1 je takođe umešan u akutnu mijeloidnu leukemiju (AML) (Shi 2015).

[0006] TIP60 (KAT5) je najviše proučavan član porodice MYST. TIP60 igra važnu ulogu ne samo u regulaciji transkripcije, već i u procesu popravljanja oštećenja DNK, posebno u dvolančanim prekidima DNK (DSB) (Gil 2017).

[0007] TIP60 može da acetilira p53, ATM i c-Mic. TIP60 i MOF posebno acetiliraju lizin 120 (K120) p53 nakon oštećenja DNK (Avvakumov2007). TIP60 je takođe impliciran kao važan za regulatornu biologiju T-ćelija (Treg). FOXP3 je glavni regulator u razvoju i funkciji Tregs i pokazalo se da je acetilacija FOXP3 od strane TIP60 od suštinskog značaja za aktivnost FOXP3 (Li 2007, Xiao 2014). Uzimajući ovo u obzir, uslovna delecija TIP60 kod miševa dovodi do fatalne autoimune bolesti nalik na nedostatak regulatornih T ćelija, oponašajući fenotip koji se vidi kod miševa sa FOXP3 nokautom (Xiao 2014). Kod kancera, Treg ćelije mogu olakšati napredovanje tumora potiskivanjem adaptivnog imuniteta protiv tumora.

[0008] MOF („mužjaci odsutni na prvom”) je prvobitno identifikovan kao jedna od komponenti kompenzacije doze kod Drosophila, i klasifikovan je kao član porodice MYST na osnovu funkcionalnih studija i analize sekvence. (Su 2016). Humani ortolog pokazuje značajnu sličnost sa MOF drozofile; koji sadrži mesto vezivanja za acetil-CoA, hromodomen (koji vezuje histone) i C2HC-tip cink prst (Su 2016). MOF je ključni enzim za acetilaciju histona H4K16, a kompleksi koji sadrže MOF uključeni su u različite esencijalne ćelijske funkcije sa vezama sa rakom (Su 2016). Pored globalnog smanjenja acetilacije histona, iscrpljivanje MOF u ćelijama sisara može dovesti do abnormalne transkripcije gena, posebno izazivajući abnormalnu ekspresiju određenih tumorskih supresorskih gena ili onkogena, što ukazuje na kritičnu ulogu MOF u tumorigenezi. (Su 2016). Na primer, pokazalo se da je KAT aktivnost MOF potrebna za održavanje MLL-AF9 leukemije i može biti važna za više podtipova AML-a (Valerio 2017).

[0009] KAT6B (Querkopf) je prvi put identifikovan u mutacionom skriningu za gene koji regulišu ravnotežu između proliferacije i diferencijacije tokom embrionalnog razvoja (Thomas 2000). Miševi homozigotni za mutantni alel KAT6B imaju ozbiljne defekte u razvoju moždane kore koji su rezultat ozbiljnog smanjenja i proliferacije i diferencijacije specifično kortikalne progenitorske populacije tokom embrionalnog razvoja. KAT6B je neophodan za održavanje populacije nervnih matičnih ćelija odraslih i deo je sistema koji reguliše diferencijaciju matičnih ćelija u neurone (Merson 2006). KAT6B je takođe mutiran u retkim oblicima leukemije (Vizmanos 2003).

[0010] MOZ lokus se rangira kao 12. najčešće amplifikovani region u svim tipovima kancera (Zack 2013). MOZ je unutar amplikona 8p11-p12, koji se vidi na frekvencijama oko 10-15% kod različitih karcinoma, posebno dojke i jajnika (Turner-Ivey 2014). MOZ je prvi put identifikovan kao fuzioni partner CREB-vezujućeg proteina (CBP) tokom ispitivanja specifične hromozomske translokacije kod akutne mijeloidne leukemije (AML) (Avvakumov 2007; Borrow 1996). Aktivnost MOZ KAT je neophodna za promovisanje ekspresije MEIS1 i HOKSa9, proteina koji se obično primećuju prekomerno izraženi kod nekih limfoma i leukemija. Povećan opstanak MOZ<+/->heterozigotnih miševa u Eµ-Myc transgenom modelu limfoma B-ćelija, gde gubitak jednog MOZ alela dovodi do biološki relevantnog smanjenja nivoa Meis1 i Hoxa9 u pre-B-ćelijama (Sheikh 2015).

[0011] Poznati su inhibitori nekih MYST. Na primer, prikazan je sledeći derivat anakardne kiseline (Ghizzoni 2012) kao inhibitor

[0012] Drugi poznati inhibitori uključuju (Zhang 2017):

[0013] Czudor et al " Novel compounds with potent CDK9 inhibitory activity for the treatment of myeloma", Bioorg Med Chem Lett, 2018, vol.28(4), p769-773 otkriva 2,4-disupstituisane derivate piriminda i njihovu aktivnost kao CDK9 inhibitora.

[0014] Stein et al " Discovery and structure-activity relationships of sulfonamide ETA-selective antagonists", J. Med Chem, 1995, vol.38(8), str.1344-1354 otkriva odnose strukture i aktivnosti antagonista sulfonamid ETAreceptora.

[0015] WO 2014/144545 (Genentech Inc, Xenon Pharmaceuticals Inc, published 18th September 2014) otkriva supstituisane benzoksazole i postupke njihove upotrebe.

[0016] WO 2018/102419 (Epizyme Inc, published 7th June 2018) otkriva jedinjenja koja sadrže sulfonsku grupu kao KAT inhibitore.

[0017] U svetlu utvrđene uloge KAT uopšte, a posebno MYST, u bolestima kao što je rak, postoji potreba za novim inhibitorima ovih proteina.

Otkrivanje pronalaska

[0018] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja inhibiraju aktivnost jednog ili više KAT iz porodice MYST, tj. TIP60, KAT6B, MOZ, HBO1 i MOF.

[0019] Prvi aspekt ovog pronalaska obezbeđuje jedinjenje formule (I):

ili njegovu farmaceutski prihvatljiut so, gde su:

R<1>, R<2>, R<3>i R<4>nezavisno izabrani od:

(i) H;

(ii) C1-3alkil, izborno supstituisan sa:

hidroksi,

C1-2alkoksi,

NH2,

fenil,

C5-6heteroaril,

C1-4alkil karbamoil, ili

acilamido;

(iii) C1-3alkoksi, izborno supstituisan sa C3-6cikloalkil ili sa jednom ili više fluoro grupa;

(iv) C3-6cikloalkil;

(v) Halo;

(vi) COR<C>, gde R<C>je izabran iz NR<N1>R<N2>, gde R<N1>i R<N2>su nezavisno izabrani od H i metila; (vii) cijano, NH2, ili NO2; i

(viii) fenil ili C5-6heteroaril, izborno supstituisan sa metilom, hidroksi ili metoksi;

Ar je fenil, izborno supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od:

(i) C1-4alkil, izborno supstituisan sa hidroksi, C1-2alkoksi, NH2, C1-4alkil karbamoil, ili sa jednom ili više fluoro grupa;

(ii) C3-6cikloalkil;

(iii) hidroksi; cijano; NR<N3>R<N4>, gde R<N3>i R<N4>su nezavisno izabrani od H i metila; ili acilamido;

(iv) Halo;

(v) C1-3alkoksi, izborno supstituisan sa hidroksi, C(O)NH2, C3-6cikloalkil, fenil, C5-6heteroaril, ili sa jednom ili više fluoro grupa;

(vi) fenoksi, izborno supstituisan sa fluorom;

(vii) fenil, ili C5-6heteroaril; ili

(viii) SF5ili tako2CH3;

i pri čemu najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>nije H.

[0020] Prvi aspekt takođe obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kako je definisano i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.

[0021] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupku terapije ili za upotrebu u lečenju kancera.

[0022] Kao što je dole opisano, jedinjenje kao što je definisano u prvom aspektu može se primenjivati istovremeno ili uzastopno sa radioterapijom i/ili hemoterapijom u lečenju kancera.

Definicije

[0023] Osim ako nije drugačije naznačeno, termin "supstituisan" kako se ovde koristi, odnosi se na roditeljsku grupu koja nosi jedan ili više supstituenata. Termin "supstituent" se ovde koristi u konvencionalnom smislu i odnosi se na hemijski deo koji je kovalentno vezan za roditeljsku grupu, ili ako je prikladno, fuzionisan za roditeljsku grupu. Izraz "izborno supstituisan" kako se ovde koristi, odnosi se na roditeljsku grupu koja može biti nesupstituisana ili koja može biti supstituisana.

[0024] C5-12heteroaril: Termin "C5-12heteroaril" kako se ovde koristi, odnosi se na monovalentnu grupu dobijenu uklanjanjem atoma vodonika iz aromatične strukture koja ima od 5 do 12 atoma u prstenu, od kojih su od 1 do 3 heteroatomi u prstenu. Termin 'aromatična struktura' se koristi da označi sistemi sa jednim prstenom ili fuzionisanim prstenovima koji imaju aromatične osobine, a izraz 'heteroatom u prstenu' se odnosi na atom azota, kiseonika ili sumpora.

[0025] U ovom kontekstu, prefiksi (npr. C5-12, C5-6, itd.) označavaju broj atoma koji čine aromatičnu strukturu, ili opseg broja atoma koji čine aromatičnu strukturu, bilo da su atomi ugljenika ili heteroatomi.

[0026] Primeri C5-12heteroaril strukture uključuju, ali nisu ograničene na, one izvedene iz:

N1: pirol (azol) (C5), piridin (azin) (C6); piridon (C6); indol (C9); hinolin (C10);

O1: furan (oksol) (C5);

S1. tiofen (tiol) (C5);

N1O1: oksazol (C5), izoksazol (C5), izoksazin (C6);

N2O1: oksadiazol (furazan) (C5);

N1S1: tiazol (C5), izotiazol (C5);

N2S1: tiadiazol (C5)

N2: imidazol (1,3-diazol) (C5), pirazol (1,2-diazol) (C5), piridazin (1,2-diazin)

(C6), pirimidin (1,3-diazin) (C6) (npr. citozin, timin, uracil), pirazin (1,4-diazin) (C5); benzimidazol (C9)

N3: triazol (C5), triazin (C6).

Halo: Termin "halo" kako se ovde koristi, odnosi se na grupu izabranu od fluora, hlora, broma i joda.

Cijano: Termin "cijano" kako se ovde koristi, odnosi se na grupu -C=N.

Hidroksi: izraz "hidroksil" kako se ovde koristi, odnosi se na grupu -OH.

Fenil: izraz "fenil" kako se ovde koristi, odnosi se na monovalentnu grupu dobijenu uklanjanjem atoma vodonika iz jedne aromatične strukture prstena koja ima 6 atoma ugljenika u prstenu (-C6H5).

Fenoksi: izraz "fenoksi" kako se ovde koristi, odnosi se na monovalentnu grupu dobijenu uklanjanjem atoma vodonika sa atoma kiseonika fenola (-O-C6H5).

C1-4alkil: Termin "C1-4alkil" kao što se ovde koristi, odnosi se na monovalentni deo dobijen uklanjanjem atoma vodonika sa atoma ugljenika zasićenog ugljovodoničnog jedinjenja koje ima od 1 do 4 atoma ugljenika.

[0027] Primeri zasićenih alkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, metil (C1), etil (C2), propil (C3), i butil (C4).

[0028] Primeri zasićenih linearnih alkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, metil (C1), etil (C2), n-propil (C3), i n-butil (C4).

[0029] Primeri zasićenih razgranatih alkil grupa uključuju izo-propil (C3), izo-butil (C4), sec-butil (C4) i terc-butil (C4).

[0030] C3-6cikloalkil: Termin "C3-6cikloalkil" kako se ovde koristi, odnosi se na monovalentni deo dobijen uklanjanjem atoma vodonika sa atoma ugljenika zasićenog cikličnog ugljovodonničkog jedinjenja koje ima od 3 do 6 atoma ugljenika. Primeri C3-6cikloalkil grupe uključuju, ali nisu ograničene na, ciklopropil (C3), ciklobutil (C4), ciklopentil (C5) i cikloneksil (C6).

[0031] C1-4alkoksi: Termin "C1-4alkoksi" kako se ovde koristi, odnosi se na monovalentni deo dobijen uklanjanjem atoma vodonika sa atoma kiseonika jedinjenja zasićenog alkohola koji ima od 1 do 4 atoma ugljenika. Može se predstaviti kao -O-C1-4alkil. Primeri C1-4alkoksi grupe uključuju, ali nisu ograničene na, metoksi (C1), etoksi (C2), propiloksi (C3), i butiloksi (C4).

[0032] C1-4alkil karbamoil: -NHC(=O)OR gde je R C1-4alkil grupa kao što je gore definisano. Primeri C1-4alkil karbamoil uključuju, ali nisu ograničeni na, -N(H)C(=O)OCH3, -N(H)C(=O)OCH2CH3i -N(H)C(=O)OC(CH3)3.

[0033] Acilamido: -NR(C=O)R' gde su R i R' nezavisno izabrani od H i C1-4alkil kao što je gore definisano. R i R' mogu takođe biti -(CH2)n-, gde je n 3 ili 4. Primeri acilamido grupe uključuju, ali nisu ograničeni na, -N(H)C(=O)CF3, N(H)C(=O)Me i:

[0034] C1-4alkil estar: Termin "C1-4alkil estar" kako se ovde koristi, odnosi se na monovalentni deo dobijen uklanjanjem atoma vodonika sa atoma kiseonika jedinjenja zasićene karboksilne kiseline koje ima od 1 do 5 atoma ugljenika. Može se predstaviti kao -O-C(O)-C1-4alkil. Primeri C1-4alkil estarske grupe uključuju, ali nisu ograničene na, acetoksi (-O-C(O)-CH3), propanoiloksi (-O-C(O)-CH2CH3), butanoiloksi (-O-C(O)-CH2CH2CH3) i pentanoiloksi (-O-C(O)-CH2CH2CH2CH3).

Drugi uključeni oblici

[0035] Osim ako nije drugačije naznačeno, u prethodno navedeno su uključeni dobro poznati jonski, oblici soli i solvatni oblici ovih supstituenata. Na primer, referenca na karboksilnu kiselinu (-COOH) takođe uključuje anjonski (karboksilatni) oblik (-COO-), njenu so ili solvat. Slično, referenca na amino grupu uključuje protonovani oblik (-N<+>HR<1>R<2>), ili so ili solvat amino grupe, na primer, hidrohloridna so. Slično, referenca na hidroksilnu grupu takođe uključuje anjonski oblik (-O-), ili njihova so ili solvat.

Soli

[0036] Može biti pogodno ili poželjno pripremiti, prečistiti i/ili rukovati odgovarajućom solju aktivnog jedinjenja, na primer, farmaceutski prihvatljivom solju. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli su razmatrani u Berge 1977.

[0037] Na primer, ako je jedinjenje anjonsko, ili ima funkcionalnu grupu koja može biti anjonska (npr. -COOH može biti -COO-), tada se može formirati so sa odgovarajućim katjonom. Primeri pogodnih neorganskih katjona uključuju, ali nisu ograničeni na, jone alkalnih metala kao što je Na<+>i K<+>, zemnoalkalni katjoni kao što je Ca<2+>i Mg<2+>i drugi katjoni kao što je Al<+3>. Primeri pogodnih organskih katjona uključuju, ali nisu ograničeni na, amonijum jon (tj. NH4<+>) i supstituisanim amonijum jonima (npr. NH3R<+>, NH2R2<+>, NHR3<+>, NR4<+>). Primeri nekih pogodnih supstituisanih amonijum jona su oni koji potiču od: etilamina, dietilamina, dicikloheksilamina, trietilamina, butilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, benzilamina, fenilbenzilamina, holina, megluminina, kao i trometaaminokiselina, kao i trometaminina. i arginin. Primer uobičajenog kvaternarnog amonijum jona je N(CH3)4<+>.

[0038] Ako je jedinjenje katjonsko, ili ima funkcionalnu grupu koja može biti katjonska (npr. NH2može biti -NH3<+>), tada se može formirati so sa odgovarajućim anjonom. Primeri pogodnih neorganskih anjona uključuju, ali nisu ograničeni na, one izvedene iz sledećih neorganskih kiselina: hlorovodonične, bromovodonične, jodovodonične, sumporne, sumporaste, azotne, azotaste, fosforne i fosforaste.

[0039] Primeri pogodnih organskih anjona uključuju, ali nisu ograničeni na, one koji su izvedeni iz sledećih organskih kiselina: 2-acetoksibenzojeva, sirćetna, askorbinska, asparaginska, benzojeva, kamforsulfonska, cimetna, limunska, edetska, etandisulfonska, etansulfonska, fumarna, glukheptonska, glukonska, glutaminska, glikolna, hidroksimaleinska, hidroksinaftalen karboksilna, izetionska, mlečna, laktobionska, laurinska, maleinska, jabučna, metansulfonska, mucinska, oleinska, oksalna, palmitinska, pamoinska, pantotenska, fenilsirćetna, fenilsulfonska, fenilsulfonska, propionska, piruvinska, salicilna, stearinska, sukcinska, sulfanilna, vinska, toluensulfonska, trifluorosirćetna kiselina i valerijanska kiselina. Primeri pogodnih polimernih organskih anjona uključuju, ali nisu ograničeni na, one izvedene iz sledećih polimernih kiselina: taninska kiselina, karboksimetil celuloza.

Solvati

[0040] Može biti pogodno ili poželjno pripremiti, prečistiti i/ili rukovati odgovarajućim solvatom aktivnog jedinjenja. Termin "solvat" se ovde koristi u konvencionalnom smislu da se odnosi na kompleks rastvorene supstance (npr. aktivno jedinjenje, so aktivnog jedinjenja) i rastvarača. Ako je rastvarač voda, solvat se prikladno može nazvati hidratom, na primer, monohidratom, dihidratom, trihidratom, itd.

Izomeri

[0041] Određena jedinjenja pronalaska mogu postojati u jednom ili više određenih geometrijskih, optičkih, enantiomernih, dijasteriomernih, epimernih, atropnih, stereoizomernih, tautomernih, konformacionih ili anomernih oblika, uključujući, ali bez ograničenja, cis- i trans-forme; E- i Z-oblici; c-, t- i r- oblici; endo- i egzo-forme; R-, S- i mezo-oblici; D- i L-oblici; d- i I-oblici; (+) i (-) forme; keto-, enol- i enolat-oblici; sin- i anti-forme; sinklinalni i antiklinalni oblici; α- i β-oblici; aksijalni i ekvatorijalni oblici; oblici čamca, stolice, tvist, koverte i polustolice; i njihove kombinacije, u daljem tekstu zajednički nazvani "izomeri" (ili "izomerni oblici").

[0042] Termin "hiralni" se odnosi na molekule koji imaju svojstvo međusobnog ne-preklapanja u ogledalu, dok se izraz "ahiralni" odnosi na molekule koji se međusobno mogu preklopiti u ogledalu.

[0043] Termin "stereoizomeri" se odnosi na jedinjenja koja imaju identičnu hemijsku konstituciju, ali se razlikuju u pogledu rasporeda atoma ili grupa u prostoru.

[0044] "Dijastereomer" se odnosi na stereoizomer sa dva ili više centara hiralnosti i čiji molekuli nisu međusobno lik i predmet u ogledalu. Dijastereomeri imaju različite fizičke osobine, npr. tačke topljenja, tačke ključanja, spektralna svojstva i reaktivnosti. Smeše dijastereomera se mogu odvojiti pod analitičkim procedurama visoke rezolucije kao što su elektroforeza i hromatografija.

[0045] "Enantiomeri" se odnose na dva stereoizomera jedinjenja koji se međusobno ne preklapaju u ogledalu.

[0046] Stereohemijske definicije i konvencije koje se ovde koriste uglavnom slede S. P. Parker, ur., McGrav-Hill Dictionary of Chemical Terms ( 1984) McGrav-Hill Book Compani, Njujork; i Eliel, E. i Vilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Jedinjenja pronalaska mogu da sadrže asimetrične ili hiralne centre, i stoga postoje u različitim stereoizomernim oblicima. Predviđeno je da svi stereoizomerni oblici jedinjenja pronalaska, uključujući, ali ne ograničavajući se na, dijastereomere, enantiomere i atropizomere, kao i njihove smeše, kao što su racemske smeše, čine deo ovog pronalaska. Mnoga organska jedinjenja postoje u optički aktivnim oblicima, tj. imaju sposobnost da rotiraju ravan polarizovane svetlosti. U opisu optički aktivnog jedinjenja, prefiksi D i L, ili R i S, se koriste za označavanje apsolutne konfiguracije molekula oko njegovog hiralnog centra (centara). Prefiksi d i I ili (+) i (-) se koriste za označavanje znaka rotacije ravni polarizovane svetlosti od strane jedinjenja, pri čemu (-) ili I znači da je jedinjenje levorotirajuće. Jedinjenje sa prefiksom (+) ili d je desnorotaciono. Za datu hemijsku strukturu, ovi stereoizomeri su identični osim što se odnose kao predmet i lik u ogledalu. Specifični stereoizomer se takođe može nazvati enantiomerom, a mešavina takvih izomera se često naziva enantiomerna smeša. Smeša enantiomera 50:50 se naziva racemska smeša ili racemat, što se može pojaviti tamo gde nije bilo stereoselekcije ili stereospecifičnosti u hemijskoj reakciji ili procesu. Izrazi "racemska smeša" i "racemat" odnose se na ekvimolarnu mešavinu dve enantiomerne vrste, lišene optičke aktivnosti.

[0047] U ovom pronalasku, atom ugljenika za koji su R<1>i Cy vezani mogu biti stereohemijski centar, tj. kada R<1>nije H i R<1>i Cy su različiti. Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu biti racemska smeša, ili mogu biti u enantiomernom višku ili suštinski enantiomerno čista.

[0048] Treba uzeti u obzir da su, osim kako je objašnjeno u nastavku za tautomerne oblike, posebno isključeni iz termina "izomeri", kako se ovde koristi, strukturni (ili konstitutivni) izomeri (tj. izomeri koji se razlikuju u vezama između atoma, a ne samo po položaju atoma u prostor). Na primer, referenca na metoksi grupu, -OCH3, ne treba se tumačiti kao referenca na njegov strukturni izomer, hidroksimetil grupu, -CH2OH. Slično tome, referencu na orto-hlorofenil ne treba tumačiti kao referencu na njegov strukturni izomer, meta-hlorofenil. Međutim, upućivanje na klasu struktura može uključiti strukturno izomerne oblike koji spadaju u tu klasu (npr. C1-7alkil uključuje n-propil i izo-propil; butil uključuje n-, izo-, sek- i terc-butil; metoksifenil uključuje orto-, meta- i para-metoksifenil).

[0049] Prethodno isključenje se ne odnosi na tautomerne oblike, na primer, keto-, enol- i enolatoblike, kao što su, na primer, sledeći tautomerni parovi: keto/enol (ilustrovano ispod), imin/enamin, amid/imino alkohol, amidin/amidin, nitrozo/oksim, tioketon/enetiol, N-nitrozo/hidroksiazo i nitro/aci-nitro.

[0050] Termin "tautomer" ili "tautomerni oblik" odnosi se na strukturne izomere različitih energija koji su međusobno konvertibilni preko niske energetske barijere. Na primer, protonski tautomeri (takođe poznati kao prototropni tautomeri) uključuju interkonverzije putem migracije protona, kao što su keto-enol i imin-enamin izomerizacije. Valentni tautomeri uključuju interkonverzije reorganizacijom nekih vezivnih elektrona.

[0051] Imajte na umu da su posebno uključena u termin "izomer" jedinjenja sa jednom ili više izotopskih supstitucija. Na primer, H može biti u bilo kom izotopskom obliku, uključujući<1>H,<2>H (D), i<3>H (T); C može biti u bilo kom izotopskom obliku, uključujući<12>C,<13>C, i<14>C; O može biti u bilo kom izotopskom obliku, uključujući<16>O i<18>O; i slično.

[0052] Primeri izotopa koji se mogu ugraditi u jedinjenja pronalaska obuhvataju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora i hlora, kao što su, ali ne ograničavajući se na<2>H (deuterijum, D),<3>H (tricijum),<11>C,<13>C,<14>C,<15>N,<18>F,<31>P,<32>P,<35>S,<36>Cl, i<125>I. Razna izotopski obeležena jedinjenja ovog pronalaska, na primer ona u koja su ugrađeni radioaktivni izotopi kao što su 3H, 13C i 14C. Takva izotopski obeležena jedinjenja mogu biti korisna u metaboličkim studijama, studijama kinetike reakcija, tehnikama detekcije ili snimanja, kao što je pozitronska emisiona tomografija (PET) ili jednofotonska emisiona kompjuterska tomografija (SPECT) uključujući testove raspodele leka ili supstrata u tkivu, ili u radioaktivnom tretmanu pacijenata. Deuterijumom obeležena ili supstituisana terapeutska jedinjenja pronalaska mogu imati poboljšana svojstva DMPK (metabolizam leka i farmakokinetika), u vezi sa distribucijom, metabolizmom i izlučivanjem (ADME). Zamena sa težim izotopima kao što je deuterijum može da pruži određene terapeutske prednosti koje su rezultat veće metaboličke stabilnosti, na primer, produženi poluživot in vivo ili smanjeni zahtevi za dozom. Jedinjenje obeleženo 18F može biti korisno za PET ili SPECT studije. Izotopski obeležena jedinjenja ovog pronalaska i njihovi prolekovi se generalno mogu pripremiti sprovođenjem postupaka otkrivenih u šemama ili u primerima i preparatima opisanim u nastavku zamenom lako dostupnih izotopski obeleženih reagensa za ne-izotopski obeleženi reagens. Dalje, supstitucija sa težim izotopima, posebno deuterijumom (tj., 2H ili D) može da pruži određene terapeutske prednosti koje su rezultat veće metaboličke stabilnosti, na primer povećanje in vivo poluživota ili smanjene potrebe za dozom ili poboljšanje terapeutskog indeksa. Podrazumeva se da se deuterijum u ovom kontekstu smatra supstituentom. Koncentracija takvog težeg izotopa, posebno deuterijuma, može se definisati faktorom obogaćivanja izotopom. U jedinjenjima iz ovog pronalaska, svaki atom koji nije posebno označen kao određeni izotop treba da predstavlja bilo koji stabilan izotop tog atoma.

[0053] Osim ako nije drugačije naznačeno, referenca na određeno jedinjenje uključuje sve takve izomerne oblike, uključujući (u potpunosti ili delimično) racemske i druge njihove mešavine.

[0054] Postupci za pripremu (npr. asimetrična sinteza) i odvajanje (npr. frakciona kristalizacija i hromatografski načini) takvih izomernih oblika su ili poznati u tehnici ili se lako dobijaju prilagođavanjem postupaka koji se ovde navode, ili poznatih postupaka, na poznat način.

Inhibicija

[0055] Jedinjenja ovog pronalaska inhibiraju aktivnost jednog ili više KAT iz porodice MYST, tj. TIP60, KAT6B, MOZ, HBO1 i MOF.

[0056] Inhibiciona aktivnost jedinjenja pronalaska će verovatno varirati između KAT iz porodice MYST.

[0057] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu selektivno inhibirati aktivnost jednog ili više KAT iz MYST porodice u odnosu na druge KAT porodice MYST, tj. inhibitorna aktivnost jedinjenja može biti veća za jedan ili više KAT porodice MYST u odnosu na jedan ili više drugih KAT iz porodice MYST.

[0058] Jedinjenja ovog pronalaska mogu (selektivno) inhibirati aktivnost jednog KAT iz porodice MYST. Prema tome, jedinjenja ovog pronalaska mogu inhibirati aktivnost TIP60, MORF, MOZ, HBO1 ili MOF.

[0059] Jedinjenja ovog pronalaska mogu inhibirati aktivnost dva KAT iz MYST porodice, na primer MOZ i MORF.

[0060] Jedinjenja ovog pronalaska mogu inhibirati aktivnost tri KAT iz MYST porodice, na primer MOZ, MORF i HBO1.

[0061] Jedinjenja ovog pronalaska mogu inhibirati aktivnost četiri KAT iz MYST porodice, na primer MOZ, MORF, HBO1 i TIP60.

[0062] Jedinjenja ovog pronalaska mogu inhibirati aktivnost svih pet KAT iz porodice MYST, tako da jedinjenja mogu inhibirati aktivnost TIP60, MORF, MOZ, HBO1 i MOF.

[0063] Jedinjenja ovog pronalaska mogu, posebno, inhibirati aktivnost MOZ i/ili KAT6B i/ili HBO1 i/ili TIP60.

Terapeutske indikacije

[0064] Jedinjenja koja su ovde otkrivena mogu pružiti terapeutsku korist kod brojnih poremećaja, posebno u lečenju ili prevenciji karcinoma.

Kancer

[0065] Inhibitori post-translacione acetilacije lizina posredovani sa KAT iz porodice MYST smatraju se obećavajućim anti-neoplastičnim agensima i stoga mogu biti korisni terapeutski agensi, npr. za upotrebu u lečenju kancera. Takvi agensi mogu takođe biti korisni kao terapeutski agensi za lečenje karcinoma koji pokazuju prekomernu ekspresiju MYST proteina.

[0066] "Kancer" može biti bilo koji oblik kancera. Konkretno, kancer može uključivati bilo koju ili više od sledećeg: leukemija, akutna limfocitna leukemija (ALL), akutna mijeloidna leukemija (AML), hronična limfocitna leukemija (CLL), hronična mijeloidna leukemija (CML), ne-Hodgkinov limfom, Hodgkin-ova bolest, kancer prostate, kancer pluća, melanom, kancer dojke, kancer debelog creva i rektuma, kancer debelog creva, karcinom skvamoznih ćelija i kancer želuca.

[0067] Alternativno, kancer može uključivati kancer adrenokortikalne žlezde, analni rak, kancer mokraćne bešike, kancer krvi, kancer kostiju, tumor mozga, kancer ženskog genitalnog sistema, kancer muškog genitalnog sistema, limfom centralnog nervnog sistema, kancer grlića materice, rabdomiosarkom u detinjstvu, sarkom u detinjstvu, kancer endometrijuma, sarkom endometrijuma, kancer jednjaka, kancer oka, kancer žučne kese, kancer gastrointestinalnog trakta, leukemija vlasastih ćelija, kancer glave i vrata, hepatocelularni kancer, hipofaringealni kancer, Kaposi-jev sarkom, kancer bubrega, maligni kancer larinksa, maligni kancer jetre, histiocitom, maligni timom, mezoteliom, multipli mijelom, mijelom, kancer nosne šupljine i paranazalnih sinusa, kancer nazofarinksa, kancer nervnog sistema, neuroblastom, kancer usne duplje, orofaringealni kancer, osteosarkom, kancer jajnika, kancer pankreasa, karcinom paratireoidee, kancer penisa, kancer ždrela, tumor hipofize, neoplazma plazma ćelija, primarni CNS limfom, kancer rektuma, respiratornog sistema, retinoblastom, kancer pljuvačne žlezde, kancer kože, kancer tankog creva, sarkom mekog tkiva, kancer želuca, kancer želuca, kancer testisa, kancer štitne žlezde, kancer urinarnog sistema, sarkom materice, kancer vagine, vaskularnog sistema, Waldenstrom-ova makroglobulinemija i/ili Wilmsov tumor.

[0068] Kanceri mogu biti određene vrste. Primeri tipova kancera uključuju limfom, melanom, karcinom (npr. adenokarcinom, hepatocelularni karcinom, medularni karcinom, papilarni karcinom, karcinom skvamoznih ćelija), astrocitom, gliom, meduloblastom, mijelom, meningiom, neuroblastom, sarkom, (npr., angiosarkom, hondrosarkom, osteosarkom).

[0069] Kancer može biti MYST sa prekomernom ekspresijom kancera. Kancer može prekomerno eksprimirati MYST protein u odnosu na nekancerozno tkivo. U nekim slučajevima, kancer prekomerno proizvodi MYST iRNK u odnosu na nekancerozno tkivo. Prekomerno eksprimirani MYST protein ili MYST iRNK može biti bilo koji KAT iz porodice MYST, tj. bilo koji od TIP60, KAT6B, MOZ, HBO1 i MOF. U nekim primerima izvođenja, kancer može prekomerno eksprimirati više od jednog KAT iz porodice MYST, npr. dva ili više izabranih iz grupe koju čine TIP60, KAT6B, MOZ, HBO1 i MOF. Kancer može biti kancer koji izbegava imunološko prepoznavanje, npr. preko Treg ćelija povezanih sa tumorom.

[0070] Alternativno ili dodatno, kancer može biti kancer sa prekomernom ekspresijom bromodomena: Ćelija kancera može prekomerno eksprimirati jedan ili više proteina koji sadrže bromodomen (ovde se nazivaju "proteini bromodomena") u odnosu na nekancerozno tkivo. Može da prekomerno proizvodi jednu ili više iRNK bromodomena u poređenju sa ne-kanceroznim tkivom. U nekim slučajevima, nivo bromodomenskog proteina i/ili iRNK u ćeliji je na nivou koji je približno jednak onom u nekonceroznoj ćeliji. Kancer može prekomerno eksprimirati jedan ili više bromodomenskih proteina izabranih iz grupe koju čine; protein bromodomena (odnosno BRD2, BRD3, BRD4, BRD7, BRD8, BRD9 i BRDT), TAF1/TAF1L, TFIID, SMARC2 (takođe nazvan BRM) i SMARC4 (takođe nazvan BRG1). Na primer, neki karcinomi debelog creva prekomerno eksprimiraju BRD8. Neke ćelije akutne mijeloidne leukemije prekomerno eksprimiraju BRD4.

Treg ćelije kao meta kancera

[0071] Treg ćelije su imunosupresivne ćelije, koje deluju na sprečavanje autoimunosti u zdravom imunološkom sistemu sisara. Međutim, neki karcinomi deluju tako da regulišu aktivnost Treg kako bi izbegli imuni sistem domaćina. Infiltracija Treg kod mnogih tipova tumora korelira sa lošim prognozama pacijenata, a iscrpljivanje Treg ćelija u modelima tumora pokazuje povećani antitumorski imuni odgovor (Melero 2015). U plućima je prijavljena Treg supresija imunog sistema domaćina povezana sa tumorom (Joshi 2015), (Tso 2012), dojke (Gobert 2009; Jan 2011), prostate (Miller 2006) i pankreasa (Vang X 2016) kancera. FOXP3 se smatra glavnim regulatorom Treg diferencijacije, razvoja i funkcije Treg ćelija.

[0072] Nekoliko studija je pokazalo da acetilacija FOXP3 igra ključnu ulogu u stabilnosti proteina FOXP3 i u regulisanju njegove sposobnosti pristupa DNK; a acetilaciju FOXP3 posreduju KAT (Dhuban 2017). Pokazalo se da smanjenje acetilacije FOXP3 posredovane TIP60 umanjuje razvoj Treg, što sugeriše dalji mehanizam kojim bi se inhibicija acetilacione aktivnosti MYST proteina mogla koristiti za intervenciju u bolestima kao što je rak.

Kombinovane terapije

[0073] Ovde opisani agensi mogu biti korisni u kombinaciji sa drugim terapijama protiv kancera. Oni mogu delovati sinergistički sa hemo- ili radioterapijom, i/ili sa ciljanim terapijama, uključujući, ali ne ograničavajući se na inhibitore FGFR1 i terapije koje ciljaju na hormonske receptore u jedru. Na primer, ovde opisani agensi mogu biti korisni u kombinaciji sa lekovima ciljanim na bromodomen uključujući BET inhibitore. BET inhibitori reverzibilno vezuju bromodomene BET proteina BRD2, BRD3, BRD4 i BRDT.

[0074] Inhibicija KAT proteina porodice MYST, da bi se smanjio stepen acetilacije histona lizinom (i drugih nuklearnih proteina koji su ovde opisani) verovatno će povećati osetljivost tumorskih ćelija na hemo- i radioterapiju tako što će oslabiti proces popravke oštećenja DNK, npr. popravka dvolančanih prekida DNK (DSB), čime se povećava učestalost smrti ćelija kancera izazvanih hemo- i radioterapijom. Zbog toga je verovatno da bi inhibicija KAT proteina iz porodice MYST dobro sinergirala sa niskim dozama hemo- ili radioterapije.

[0075] Prema tome, u nekim slučajevima, MYST proteinski antagonist koji je ovde otkriven može biti primenjen zajedno sa radioterapeutskim ili hemoterapijskim režimom. Može se davati istovremeno ili uzastopno sa radio i/ili hemoterapijom. Odgovarajući hemoterapeutski agensi i protokoli radioterapije biće lako uočljivi za stručnjake. Posebno, ovde opisano jedinjenje može da se kombinuje sa niskom dozom hemo ili radioterapije. Odgovarajuće doze za hemoterapiju ili radioterapiju "male doze" biće lako primetne za kvalifikovanog stručnjaka.

[0076] Konkretno, kada se jedinjenja iz ove aplikacije koriste za ukidanje supresije Treg, ona se mogu kombinovati sa inhibitorima imunih kontrolnih tačaka (Melero 2015, Wang L 2016). Dodatno, gde se jedinjenja ovog pronalaska koja poništavaju supresiju Treg mogu koristiti u kombinaciji sa radioterapijom, da bi se smanjilo smanjenje Treg funkcije u tumorima (Persa 2015, Jeong 2016)

Postupci lečenja

[0077] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se koristiti u postupku terapije. Takođe je obezbeđeno jedinjenje za upotrebu u postupku lečenja, koji obuhvata davanje subjektu kome je potrebno lečenje terapeutski efikasne količine jedinjenja pronalaska. Termin "terapeutski efikasna količina" je količina dovoljna da pokaže korisne efekte za pacijenta. Takva korist može biti barem ublažavanje najmanje jednog simptoma. Stvarna primenjena količina, brzina i vremenski tok primene zavisiće od prirode i težine onoga što se leči. Propisivanje lečenja, npr. odluke o doziranju, u nadležnosti je lekara opšte prakse i drugih lekara.

[0078] Kao što je gore opisano, ovde definisan tretman protiv kancera može se primeniti kao jedina terapija ili može uključivati, pored jedinjenja pronalaska, konvencionalnu hirurgiju ili radioterapiju ili hemoterapiju. Takva hemoterapija može uključivati jednu ili više od sledećih kategorija antitumorskih agenasa:

(i) drugi antiproliferativni/antineoplastični lekovi i njihove kombinacije, kako se koriste u medicinskoj onkologiji, kao što su agensi za alkilovanje (na primer cisplatin, oksaliplatin, karboplatin, ciklofosfamid, azotni iperirt, melfalan, hlorambucil, busulfan, temozolamid i nitrozolamid); antimetaboliti (na primer gemcitabin i antifolati kao što su fluoropirimidini kao što su 5 fluorouracil i tegafur, raltitreksed, metotreksat, citozin arabinozid i hidroksiurea); antitumorski antibiotici (na primer antraciklini kao što su adriamicin, bleomicin, doksorubicin, daunomicin, epirubicin, idarubicin, mitomicin-C, daktinomicin i mitramicin); antimitotički agensi (na primer vinka alkaloidi kao što su vinkristin, vinblastin, vindezin i vinorelbin i taksoidi kao što su taksol i docetaksel (Taxotere) i inhibitori polokinaze); i inhibitori topoizomeraze (na primer epipodofilotoksini kao što su etopozid i tenipozid, amsakrin, topotekan i kamptotecin);

(ii) citostatici kao što su antiestrogeni (na primer tamoksifen, fulvestrant, toremifen, raloksifen, droloksifen i jodoksifen), antiandrogeni (na primer bikalutamid, flutamid, nilutamid i ciproteron acetat, LHRH antagonisti, na primer, LHRH i leproserlin antagonisti buserelin), progestogeni (na primer megestrol acetat), inhibitori aromataze (na primer anastrozol, letrozol, vorazol i eksemestan) i inhibitore 5*-reduktaze kao što je finasterid;

(iii) sredstva protiv invazije (na primer inhibitori familije c-Src kinaze kao što je 4-(6-hloro-2,3-metilendioksianilino)-7-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]-5- tetrahidropiran-4-iloksihinazolin (AZD0530; Međunarodna patentna prijava WO 01/94341), N-(2-hloro-6-metilfenil)-2-{6-[4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]-2-metilpirimidin-4-ilamino}tiazol-5-karboksamid (dasatinib, BMS-354825; J. Med. Chem., 2004, 47, 6658-6661 i i 4-((2,4-dihloro-5-metoksifenil)amino)-6-metoksi-7-(3-(4-metilpiperazin-1-il)propoksi)hinolin-3-karbonitril (bosutinib, SKI-606; Cancer research (2003), 63(2), 375-81), i inhibitori metaloproteinaze kao što je marimastat, inhibitori funkcije receptora aktivatora plazminogena urokinaze ili antitela na heparanazu);

(iv) inhibitori funkcije faktora rasta: na primer takvi inhibitori uključuju antitela faktora rasta i antitela receptora faktora rasta (na primer trastuzumab anti erbB2 [HerceptinT], anti-EGFR antitelo panitumumab, anti erbB1 antitelo cetuksimab [Erbitux, C225 ] i bilo koji faktor rasta ili antitela receptora faktora rasta otkrivena u Stem 2005; takvi inhibitori takođe uključuju inhibitore tirozin kinaze, na primer inhibitore familije epidermalnih faktora rasta (na primer inhibitore tirozin kinaze porodice EGFR kao što je N-(3-hloro-4-fluorofenil)-7-metoksi-6-(3-morfolinopropoksi) hinazolin-4-amin (gefitinib, ZD1839), N-(3-etinilfenil)-6,7-bis(2-metoksietoksi)hinazolin-4-amin (erlotinib, OSI 774) i 6-akrilamido-N-(3- hloro-4-fluorofenil)-7-(3-morfolinopropoksi)-hinazolin-4-amin (CI 1033), inhibitori erbB2 tirozin kinaze kao što je lapatinib, inhibitori familije faktora rasta hepatocita, inhibitori familije faktora rasta koji potiču od trombocita kao što su imatinib, inhibitori serin/treonin kinaza (na primer inhibitori Ras/Raf signalizacije kao što su inhibitori farnezil transferaze, na primer sorafenib (BAI 43-9006)), inhibitori ćelijske signalizacije preko MEK i/ili AKT kinaza, inhibitori familija faktora rasta hepatocita, inhibitori c-kit, inhibitori abl kinaze, inhibitori kinaze IGF receptora (insulinu sličan faktor rasta); inhibitori aurora kinaze (na primer AZD1152, PH739358, VKS-680, MLN8054, R763, MP235, MP529, VKS-528 I AKS39459) i inhibitori kinaze zavisne od ciklina kao što su CDK2 i/ili CDK4 inhibitori;

(v) antiangiogeni i antilimfangiogeni agensi kao što su oni koji inhibiraju efekte faktora rasta vaskularnog endotela, [na primer anti vaskularni faktor rasta endotelnih ćelija A (VEGFA) antitelo bevacizumab (AvastinT), anti vaskularni faktor rasta endotelnih ćelija A (VEGFA). ) antitelo ranibizumab, anti-VEGF aptamer pegaptanib, anti vaskularni endotelni faktor rasta receptor 3 (VEGFR3) antitelo IMC-3C5, anti vaskularni faktor rasta endotelnih ćelija C (VEGFC) antitelo VGKS-100, anti vaskularni faktor rasta endotelnih ćelija D (VEGFD) antitelo VGKS-200, rastvorljivi oblik receptora 3 faktora rasta vaskularnog endotela (VEGFR3) VGKS-300 i inhibitori VEGF receptora tirozin kinaze kao što je 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metoksi- 7-(1-metilpiperidin-4-ilmetoksi)hinazolin (vandetanib; ZD6474; Primer 2 u WO 01/32651), 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloksi)-6-metoksi-7-(3-pirolidin-1-ilpropoksi)hinazolin (cediranib; AZD2171; Primer 240 unutar WO 00/47212), vatalanib (PTK787; WO 98/35985), pazopanib (GV786034), aksitinib (AG013736), sorafenib i sunitinib (SU11248; WO 01/60814), jedinjenja kao što su ona otkrivena u međunarodnim prijavama patenata WO97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 i WO 98/13354 i jedinjenja koja deluju drugim mehanizmima (na primer linomid, inhibitori funkcije integrina avb3 i angiostatin)];

(vi) agensi koji oštećuju vaskularne sisteme kao što je combretastatin A4 i jedinjenja otkrivena u međunarodnim prijavama patenata WO 99/02166, WO 00/40529, WO 00/41669, WO 01/92224, WO 02/04434 i WO 02/08213;

(vii) antisens terapije, na primer one koje su usmerene na gore navedene mete, kao što je ISIS 2503, anti-ras antisens;

(viii) pristupe genskoj terapiji, uključujući, na primer, pristupe za zamenu aberantnih gena kao što su aberantni p53 ili aberantni BRCA1 ili BRCA2, GDEPT (genski usmerena enzimska terapija za lekove) pristupi kao što su oni koji koriste citozin deaminazu, timidin kinazu ili enzim bakterijske nitroreduktaze i pristupi povećanju tolerancije pacijenata na hemoterapiju ili radioterapiju, kao što je genska terapija sa višestrukom rezistencijom; i

(ix) imunoterapijski pristupi, uključujući na primer ex vivo i in vivo pristupe za povećanje imunogenosti tumorskih ćelija pacijenata, kao što je transfekcija citokinima kao što su interleukin 2, interleukin 4 ili faktor stimulacije kolonije granulocitnih makrofaga, pristupi za smanjenje anergenosti T ćelija, pristupi koji koriste transfektovane imune ćelije kao što su dendritične ćelije transfektovane citokinom, pristupi koji koriste citokinom transficirane tumorske ćelijske linije i pristupi koji koriste anti idiotipska antitela

Primena

[0079] Aktivno jedinjenje ili farmaceutska kompozicija koja sadrži aktivno jedinjenje može se davati subjektu na bilo koji pogodan način primene, bilo sistemski/periferno ili na mestu željenog dejstva, uključujući, ali bez ograničenja, oralno (npr. gutanjem); lokalno (uključujući npr. transdermalno, intranazalno, okularno, bukalno i sublingvalno); plućno (npr. inhalacijom ili insuflacionom terapijom korišćenjem, npr. aerosola, npr. kroz usta ili nos); rektalno; vaginalno; parenteralno, na primer, injekcijom, uključujući subkutanu, intradermalnu, intramuskularnu, intravensku, intraarterijsku, intrakardijalnu, intratekalnu, intraspinalnu, intrakapsularnu, subkapsularnu, intraorbitalnu, intraperitonealnu, intratrahealnu, subkutikularnu, intraartikularnu subarahnoidnu, intravitrealnu i intrasternalnu; implantacijom depoa, na primer, subkutano, intravitrealno ili intramuskularno. Subjekat može biti eukariot, životinja, kičmenjak, sisar, glodar (npr. zamorac, hrčak, pacov, miš), miš (npr. miš), pas (npr. pas), mačka (npr. mačka), konj (npr. konj), primat, viši primat (npr. majmun ili bezrepi majmun), majmun (npr. marmozet, pavijan), bezrepi majmun (npr. gorila, šimpanza, orangutan, gibon) ili čovek.

Formulacije

[0080] Iako je moguće da se aktivno jedinjenje daje samostalno, poželjno je da se predstavi kao farmaceutska kompozicija (npr. formulacija) koja sadrži najmanje jedno aktivno jedinjenje, kao što je definisano gore, zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, pomoćnih sredstava, ekscipijenata, razblaživača, punioca, pufera, stabilizatora, konzervansa, lubrikanata ili drugih materijala dobro poznatih stručnjacima i izborno drugim terapeutskim ili profilaktičkim sredstvima.

[0081] Dakle, ovaj pronalazak dalje obezbeđuje farmaceutske kompozicije, kao što je gore definisano, i postupke za pravljenje farmaceutske kompozicije koje se sastoje od mešanja najmanje jednog aktivnog jedinjenja, kao što je gore definisano, zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, ekscipijenata, pufera, adjuvansa, stabilizatora, ili drugih materijala, kao što je ovde opisano.

[0082] Termin "farmaceutski prihvatljiv" kako se ovde koristi odnosi se na jedinjenja, materijale, kompozicije i/ili oblike doziranja koji su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima subjekta (npr. toksičnost, iritacija, alergijski odgovor ili drugi problem ili komplikacija, srazmerno razumnom odnosu koristi/rizik. Svaki nosač, ekscipijent itd. takođe mora biti "prihvatljiv" u smislu da je kompatibilan sa ostalim sastojcima formulacije.

[0083] Odgovarajući nosači, ekscipijenti itd. mogu se naći u standardnim farmaceutskim tekstovima, npr. Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. izdanje, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990.

[0084] Formulacije mogu pogodno biti predstavljene u obliku jedinične doze i mogu se pripremiti bilo kojim postupcima dobro poznatim u farmaciji. Takvi postupci uključuju korak dovođenja u vezu aktivnog jedinjenja sa nosačem koji čini jedan ili više pomoćnih sastojaka. Generalno, formulacije se pripremaju ujednačenim i intimnim dovođenjem u vezu aktivnog jedinjenja sa tečnim nosačima ili fino usitnjenim čvrstim nosačima ili sa oba, a zatim, ako je potrebno, oblikovanjem proizvoda.

[0085] Formulacije mogu biti u obliku tečnosti, rastvora, suspenzija, emulzija, eliksira, sirupa, tableta, pasta, granula, prahova, kapsula, kašeta, pilula, ampula, supozitorija, pesarija, masti, gelova, pasti, krema, sprejeva, disperzija, pena, losiona, ulja, bolusa, elektuarija ili aerosola.

[0086] Formulacije pogodne za oralnu primenu (npr. gutanjem) mogu biti predstavljene kao diskretne jedinice kao što su kapsule, kašete ili tablete, od kojih svaka sadrži unapred određenu količinu aktivnog jedinjenja; kao prah ili granule; kao rastvor ili suspenzija u vodenoj ili nevodenoj tečnosti; ili kao tečna emulzija ulje u vodi ili tečna emulzija voda u ulju; kao bolus; kao elektuar; ili kao pasta.

[0087] Tableta se može napraviti konvencionalnim sredstvima, na primer, kompresijom ili oblikovanjem, izborno sa jednim ili više pomoćnih sastojaka. Kompresovane tablete se mogu pripremiti komprimovanjem u odgovarajućoj mašini aktivnog jedinjenja u slobodnog tekućem obliku kao što je prah ili granule, izborno pomešane sa jednim ili više veziva (npr. povidon, želatin, akacija, sorbitol, tragant, hidroksipropilmetil celuloza); punioca ili razblaživača (npr. laktoza, mikrokristalna celuloza, kalcijum hidrogen fosfat); maziva (npr. magnezijum stearat, talk, silicijum dioksid); dezintegranata (npr. natrijum skrob glikolat, unakrsno vezani povidon, unakrsno vezana natrijum karboksimetil celuloza); površinski aktivna sredstva ili sredstva za dispergovanje ili vlaženje (npr. natrijum lauril sulfat); i konzervansi (npr. metil p-hidroksibenzoat, propil p-hidroksibenzoat, sorbinska kiselina). Oblikovane tablete se mogu napraviti oblikovanjem u odgovarajućoj mašini mešavine praškastog jedinjenja navlaženog inertnim tečnim razblaživačem. Tablete mogu izborno biti obložene ili urezane i mogu biti formulisane tako da obezbede sporo ili kontrolisano oslobađanje aktivnog jedinjenja u njima koristeći, na primer, hidroksipropilmetil celulozu u različitim proporcijama da bi se obezbedio željeni profil oslobađanja. Tablete mogu izborno da budu sa enteričkom oblogom, da bi se obezbedilo oslobađanje u delovima creva osim u želucu.

[0088] Formulacije pogodne za lokalnu primenu (npr. transdermalno, intranazalno, okularno, bukalno i sublingvalno) mogu biti formulisane kao mast, krema, suspenzija, losion, prah, rastvor, pasta, gel, sprej, aerosol ili ulje. Alternativno, formulacija može da sadrži flaster ili zavoj kao što je zavoj ili lepljivi flaster impregniran aktivnim jedinjenjima i izborno jedan ili više ekscipijenata ili razblaživača.

[0089] Formulacije pogodne za topikalnu primenu u ustima obuhvataju paste koje sadrže aktivno jedinjenje na aromatizovanoj bazi, obično saharozu i akaciju ili tragant; pastile koje sadrže aktivno jedinjenje na inertnoj bazi kao što su želatin i glicerin, ili saharoza i akacija; i vodice za ispiranje usta koje sadrže aktivno jedinjenje u pogodnom tečnom nosaču.

[0090] Formulacije pogodne za topikalnu primenu u oko takođe uključuju kapi za oči u kojima je aktivno jedinjenje rastvoreno ili suspendovano u pogodnom nosaču, posebno u vodenom rastvaraču za aktivno jedinjenje.

[0091] Formulacije pogodne za nazalnu primenu, gde je nosač čvrsta supstanca, uključuju grubi prah veličine čestica, na primer, u opsegu od oko 20 do oko 500 mikrona koji se primenjuje na način na koji se uzima burmut, tj. udisanje kroz nosni prolaz iz posude sa prahom koja se drži blizu nosa. Pogodne formulacije u kojima je nosač tečnost za primenu kao, na primer, sprej za nos, kapi za nos, ili primenom aerosola pomoću nebulizatora, uključuju vodene ili uljne rastvore aktivnog jedinjenja.

[0092] Formulacije pogodne za primenu inhalacijom uključuju one predstavljene kao aerosol sprej iz pakovanja pod pritiskom, uz upotrebu pogodnog potisnog gasa, kao što je dihlorodifluorometan, trihlorofluorometan, dihoro-tetrafluoroetan, ugljen-dioksid ili drugi pogodni gasovi.

[0093] Formulacije pogodne za lokalnu primenu preko kože uključuju masti, kreme i emulzije. Kada se formuliše u obliku masti, aktivno jedinjenje može izborno da se koristi ili sa parafinskom ili sa bazom masti koja se meša sa vodom. Alternativno, aktivna jedinjenja mogu biti formulisana u kremu na bazi kreme ulje u vodi. Ukoliko je poželjno, vodena faza krem baze može da sadrži, na primer, najmanje oko 30% tež./tež. polihidroksilnog alkohola, tj. alkohola koji ima dve ili više hidroksilnih grupa kao što su propilen glikol, butan-1,3- diol, manitol, sorbitol, glicerol i polietilen glikol i njihove smeše. Lokalne formulacije mogu poželjno uključiti jedinjenje koje poboljšava apsorpciju ili prodiranje aktivnog jedinjenja kroz kožu ili druga zahvaćena područja. Primeri takvih pojačivača penetracije kroz kožu uključuju dimetilsulfoksid i srodne analoge.

[0094] Kada je formulisana kao lokalna emulzija, uljana faza može izborno da sadrži samo emulgator (inače poznat kao emulgent), ili može da sadrži mešavinu najmanje jednog emulgatora sa mašću ili uljem ili sa mašću i uljem. Poželjno, hidrofilni emulgator je uključen zajedno sa lipofilnim emulgatorom koji deluje kao stabilizator. Takođe je poželjno uključiti i ulje i mast. Zajedno, emulgatori sa ili bez stabilizatora sačinjavaju takozvani emulgujući vosak, a vosak zajedno sa uljem i/ili masti čine takozvanu bazu za emulzifikaciju masti koja formira uljnu dispergovanu fazu formulacije kreme.

[0095] Pogodni emulgenti i stabilizatori emulzije uključuju Tween 60, Span 80, cetostearil alkohol, miristil alkohol, gliceril monostearat i natrijum lauril sulfat. Izbor odgovarajućih ulja ili masti za formulaciju zasniva se na postizanju željenih kozmetičkih svojstava, pošto rastvorljivost aktivnog jedinjenja u većini ulja koja će se verovatno koristiti u formulacijama farmaceutskih emulzija može biti veoma niska. Prema tome, poželjno je da krema bude nemasni proizvod koji ne ostavlja mrlje i koji se može prati, odgovarajuće konzistencije da bi se izbeglo curenje iz tuba ili drugih kontejnera. Pravog ili razgranatog lanca, mono- ili dvobazni alkil estri kao što su diizoadipat, izocetil stearat, propilen glikol diestar kokosovih masnih kiselina, izopropil miristat, deciloleat, izopropil palmitat, butil stearat, mešavina razgranatog 2-etilheksila 2-etilheksila mogu se koristiti estri poznati kao Crodamol CAP, pri čemu su poslednja tri poželjna. Oni se mogu koristiti sami ili u kombinaciji u zavisnosti od potrebnih svojstava.

[0096] Alternativno, mogu se koristiti lipidi visoke tačke topljenja kao što su beli meki parafin i/ili tečni parafin ili druga mineralna ulja.

[0097] Formulacije pogodne za rektalnu primenu mogu biti predstavljene kao supozitorije sa odgovarajućom bazom koja sadrži, na primer, kakao puter ili salicilat.

[0098] Formulacije pogodne za vaginalnu primenu mogu biti predstavljene kao pesarije, tamponi, kreme, gelovi, paste, pene ili formulacije u spreju koje sadrže pored aktivnog jedinjenja, takve nosače za koje je poznato da su odgovarajući.

[0099] Formulacije pogodne za parenteralnu primenu (npr. injekcijom, uključujući kožnu, subkutanu, intramuskularnu, intravensku i intradermalnu) uključuju vodene i nevodene izotonične, sterilne rastvore za injekcije bez pirogena koji mogu sadržati antioksidante, pufere, konzervanse, stabilizatore, bakteriostate, i rastvore koji čine formulaciju izotoničnom sa krvlju primaoca; i vodene i nevodene sterilne suspenzije koje mogu uključivati sredstva za suspendovanje i sredstva za zgušnjavanje, i lipozome ili druge sisteme mikročestica koji su dizajnirani da ciljaju jedinjenje na komponente krvi ili jedan ili više organa. Primeri pogodnih izotoničnih nosača za upotrebu u takvim formulacijama uključuju injekciju natrijum hlorida, Ringerov rastvor ili Ringerovu injekciju laktata. Tipično, koncentracija aktivnog jedinjenja u rastvoru je od oko 1 ng/mL do oko 10 µg/mL, na primer od oko 10 ng/ml do oko 1 µg/mL. Formulacije mogu biti predstavljene u zatvorenim kontejnerima sa jediničnim dozama ili višestrukim dozama, na primer, u ampulama i bočicama, i mogu se čuvati u zamrznutom sušenom (liofilizovanom) stanju koje zahteva samo dodavanje sterilnog tečnog nosača, na primer vode za injekcije, neposredno pre upotrebe. Rastvori i suspenzije za ekstemporanu injekciju mogu se pripremiti od sterilnih prahova, granula i tableta. Formulacije mogu biti u obliku lipozoma ili drugih sistema mikročestica koji su dizajnirani da ciljaju aktivno jedinjenje na komponente krvi ili jedan ili više organa.

Doziranje

[0100] Stručnjak u ovoj oblasti će ceniti da odgovarajuće doze jedinjenja i kompozicije koje sadrže jedinjenje mogu da variraju od pacijenta do pacijenta. Određivanje optimalne doze će generalno uključivati balansiranje nivoa terapeutske koristi u odnosu na bilo koji rizik ili štetne sporedne efekte. Odabrani nivo doze zavisiće od niza faktora uključujući, ali ne ograničavajući se na, aktivnost određenog jedinjenja, način primene, vreme primene, brzinu izlučivanja jedinjenja, trajanje tretmana, druge lekove, jedinjenja i/ili materijale koji se koriste u kombinaciji, ozbiljnost i vrstu stanja, pol, starost, težinu, stanje, opšte zdravlje i prethodnu medicinsku istoriju pacijenta. Količina jedinjenja i način primene će na kraju biti određen od strane lekara, veterinara ili kliničara, iako će se doza generalno birati tako da se postižu lokalne koncentracije na mestu delovanja koje postižu željeni efekat bez izazivanja značajnih štetnih ili neželjenih efekata.

[0101] Primena se može vršiti u jednoj dozi, kontinuirano ili povremeno (npr. u podeljenim dozama u odgovarajućim intervalima) tokom celog toka lečenja. Postupci za određivanje najefikasnijih načina i doze davanja su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti i variraće u zavisnosti od formulacije koja se koristi za terapiju, svrhe terapije, ciljne ćelije (ćelija) koja se tretira i subjekta koji se tretira. Pojedinačna ili višestruka primena se može sprovesti sa nivoom doze i šemom koju bira lekar koji leči, veterinar ili kliničar.

[0102] Generalno, pogodna doza aktivnog jedinjenja je u opsegu od oko 100 ng do oko 25 mg (tipičnije oko 1 ug do oko 10 mg) po kilogramu telesne težine subjekta dnevno. Kada je aktivno jedinjenje so, estar, amid, prolek ili slično, primenjena količina se izračunava na osnovu matičnog jedinjenja i tako se stvarna težina koja se koristi proporcionalno povećava.

[0103] U jednom aspektu, aktivno jedinjenje se primenjuje kod pacijenata prema sledećem režimu doziranja: oko 100 mg, 3 puta dnevno.

[0104] U jednom aspektu, aktivno jedinjenje se primenjuje kod pacijenata prema sledećem režimu doziranja: oko 150 mg, 2 puta dnevno.

[0105] U jednom aspektu, aktivno jedinjenje se primenjuje kod pacijenata prema sledećem režimu doziranja: oko 200 mg, 2 puta dnevno.

[0106] Međutim, u jednom aspektu, aktivno jedinjenje se primenjuje kod pacijenata prema sledećem režimu doziranja: oko 50 ili oko 75 mg, 3 ili 4 puta dnevno.

[0107] U jednom aspektu, aktivno jedinjenje se primenjuje kod pacijenata prema sledećem režimu doziranja: oko 100 ili oko 125 mg, 2 puta dnevno.

Tretman

[0108] Termin "tretman", kako se ovde koristi u kontekstu lečenja stanja, odnosi se generalno na lečenje i terapiju, bilo da se radi o čoveku ili životinji (npr. u veterinarskoj primeni), u kojoj se postiže neki željeni terapeutski efekat, npr., inhibicija napredovanja stanja, i uključuje smanjenje stope napretka, zaustavljanje stope napretka, regresiju stanja, poboljšanje stanja i izlečenje stanja. Lečenje kao profilaktička mera (tj. profilaksa, prevencija) je takođe uključeno.

[0109] Termin "terapeutski efikasna količina", kako se ovde koristi, odnosi se na onu količinu aktivnog jedinjenja, ili materijala, kompozicije ili doze koja sadrži aktivno jedinjenje, koja je efikasna za postizanje nekog željenog terapeutskog efekta, srazmernog razumnom odnosu korist/rizik, kada se primenjuje u skladu sa željenim režimom lečenja.

[0110] Slično tome, izraz "profilaktički efikasna količina", kako se ovde koristi, odnosi se na onu količinu aktivnog jedinjenja, ili materijala, kompozicije ili doze koja sadrži aktivno jedinjenje, koja je efikasna za stvaranje nekog željenog profilaktičkog efekta, srazmernog sa razumanim odnosom korist/rizik, kada se primenjuje u skladu sa željenim režimom lečenja.

Subjekat/pacijent

[0111] Subjekat/pacijent može biti životinja, sisar, placentni sisar, torbar (npr. kengur, vombat), monotremat (npr. kljunar), glodar (npr. zamorac, hrčak, pacov, miš), miš (npr. miš), lagomorf (npr. zec), ptica (npr. ptica), pas (npr. pas), mačka (npr. mačka), konj (npr. konj ), svinja (npr. svinja), ovca (npr. ovca), goveda (npr. krava), primat, viši primat (npr. majmun ili bezrepi majmun), majmun (npr. marmozet, pavijan), bezrepi majmun (npr. gorila, šimpanza, orangutang, gibon) ili čovek.

[0112] Dodatno, subjekat/pacijent može biti bilo koji od njegovih oblika razvoja, na primer, fetus. U jednom poželjnom izvođenju, subjekat/pacijent je čovek.

Opšti postupci sinteze

[0113] Jedinjenja pronalaska se mogu pripremiti primenom sledećih opštih postupaka i korišćenjem procedura koje su detaljno opisane za primere. Reakcioni uslovi koji se pominju su ilustrativni i neograničavajući, na primer, stručnjak u ovoj oblasti može da koristi raznovrstan opseg sintetičkih postupaka za sintezu željenih jedinjenja kao što su, ali ne ograničavajući se na postupke opisane u literaturi (na primer, ali bez ograničenja na March’s Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 7th Edition or Larock’s Comprehensive Organic Transformations: Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations).

[0114] Jedinjenja formule (I), kao što je gore opisano, mogu se pripremiti dole navedenim sintetičkim strategijama, gde se primenjuju gornje definicije.

Opšta sinteza 1

[0115] Šema 1A ilustruje formiranje sulfonamidne veze za formiranje jedinjenja sa strukturom I kuplovanjem relevantnog sulfonil hloridnog jedinjenja strukture G2 sa primarnim ili sekundarnim aminom kao što je benzizoksazol amin G3.

Šema 1A

[0116] Postupci za formiranje takvih sulfonamida će biti očigledne stručnjacima u ovoj oblasti, ali uključuju na primer upotrebu pogodne baze kao što je, ali ne ograničavajući se na piridin, LiHMDS, n-BuLi ili NaH, i upotrebu aktiviranih oblika sulfonske kiseline kao što je odgovarajući sulfonil halid. Formiranje sulfonil hlorida strukture G2 od odgovarajućih kiselina strukture G1 može se postići na primer upotrebom tionil hlorida ili cijanurinskog hlorida.

[0117] Alternativno, aktivirani oblik sulfonske kiseline kao što je, ali ne ograničavajući se na, pentafluorofenil sulfonat estar ili trihlorofenil sulfonat estar sa strukturom G5 može biti spojen sa relevantnim primarnim ili sekundarnim aminom, kao što je benzizoksazol amin G3 (Šema 1B).

Šema 1B

[0118] Formiranje sulfonatnog estra u G5 iz odgovarajućeg sulfonil hlorida G2 i relevantni fenol (R<5>može biti na primer pentafluorofenil ili trihlorofenil) može se postići korišćenjem pogodne baze kao što je ali bez ograničenja na piridin ili trietilamin. Postupci za formiranje sulfonamida u I će biti očigledni stručnjacima u ovoj oblasti, ali obuhvataju na primer upotrebu pogodne baze kao što je, ali bez ograničenja, LiHMDS.

Opšta sinteza 2

[0119] Šema 2A ilustruje formiranje sulfonil hlorida kao što je G2, kao supstituent koji je deo Ar.

Šema 2A

[0120] Ovo se može postići reakcijom relevantnog aril jedinjenja sa strukturom G6 sa na primer, ali ne ograničavajući se na hlorosulfonsku kiselinu. Alternativno, aril jedinjenje G6 može se uzastopno tretirati bazom, kao što je, ali ne ograničavajući se na n-BuLi, i sumpor dioksidom da bi se dobio litijum arilsulfinat koji se dalje oksiduje na primer sulfuril hloridom da bi se dobio željeni sulfonil hlorid u G2. Proizvod G2 mogu biti izolovani postupcima poznatim stručnjacima ili mogu biti formirani in situ i odmah se koristiti u sledećem koraku.

[0121] Pored toga, sulfonil hlorid u G2 mogu se formirati od aril tiola u strukturi G8 ilustrovano na šemi 2B.

Šema 2B

[0122] Postupci formiranja G2 obuhvataju, na primer, upotrebu pogodnog oksidansa kao što su, ali bez ograničenja na, vodonik peroksid i kalijum nitrat u prisustvu izvora hlorida kao što su, ali bez ograničenja na, hlorotrimetilsilan ili tionil hlorid. Tiol strukture G8 može se sintetisati iz jedinjenja strukture G7 gde (X) može biti halogen metodama poznatim stručnjacima, uključujući, ali ne ograničavajući se na nukleofilno izmeštanje u prisustvu ili odsustvu prelaznog metala. Alternativno, sulfonovanje aril jedinjenja kao što je G6 može dati odgovarajuću sulfonsku kiselinu strukture G1. Ovo se može postići bilo kojim pogodnim reagensom poznatim stručnjacima, na primer sumpor trioksidom ili sumpornom kiselinom.

Šema 2C

[0123] Sulfonska kiselina G1 može se konvertovati u sulfonil hlorid G2 metodama navedenim u opštoj sintezi 1, šema 1A.

Opšta sinteza 3

[0124] Šema 3A ilustruje formiranje benzisoksazol amina kao što je G3 od aril nitrila sa orto supstituentom X, kao što je struktura G9. Grupa (X) može biti, ali nije ograničena na, halogen kao što je hloro ili fluoro grupa i izabrana je tako da bude pogodna za primenjenu reakciju.

Šema 3A

[0125] Na primer, početni materijal G9 može reagovati sa oksimom kao što je, ali ne ograničavajući se na aceton oksim, ili sa na primer acetohidroksamskom kiselinom, u prisustvu pogodne baze kao što je, ali ne ograničavajući se na kalijum terc-butoksid, da bi se formirao benzizoksazol amin G3.

Opšta sinteza 4

[0126]

Šema 4A

[0127] Šema 4A ilustruje dodavanje R<7>grupa u jedinjenje strukture G10 (gde je R<6>predstavlja H ili odgovarajuću zaštitnu grupu uključujući ali bez ograničenja na 2,4-dimetoksibenzil (DMB); postupci za uklanjanje navedenih zaštitnih grupa biće poznati stručnjacima (npr. Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Edition), kao supstituent koji je deo Ar. Ovo se može postići korišćenjem bilo koje odgovarajuće reakcije kuplovanja koja je poznata stručnjaku, na primer Suzuki kuplovanja. Grupe R<7>B<1>i X su odabrane da budu pogodne za primenjenu reakciju kuplovanja. Na primer, u slučaju Suzuki reakcije kuplovanja, (X) može biti halogen, triflat ili druga pogodna grupa i B<1>predstavlja pogodno jedinjenje bora uključujući ali bez ograničenja na organobornu kiselinu ili boronat estar.

[0128] Primeri B<1>koji se mogu koristiti u Suzuki kuplovanju uključuju, ali nisu ograničeni na, one prikazane ispod.

[0129] Vrste R<7>B<1>jedinjenja koja se mogu koristiti u Suzuki kuplovanju uključuju, ali nisu ograničena na, ona prikazana ispod.

[0130] Dodatno šemi 4A, položaj (X) i (B<1>) može se obrnuti kao što je prikazano ispod na šemi 4B, da bi se dobilo isto konačno jedinjenje G11. Slično šemi 2A, grupe označene sa R<7>H i B<1>su odabrane da budu pogodne za primenjenu reakciju kuplovanja. Na primer, u slučaju Suzuki reakcije kuplovanja (X) može biti halogen, triflat ili druga pogodna grupa i B<1>R1 predstavlja pogodno jedinjenje bora uključujući, ali nije ograničeno na, organobornu kiselinu ili boronat estar.

Šema 4B

[0131] Različite reakcije kuplovanja mogu se koristiti za uvođenje R<7>grupe koja nije Suzuki kuplovanje, kao što su na primer reakcije kuplovanja katalizovane prelaznim metalom ili na primer jedinjenja kalaja (reakcija Stille tipa) i cinka (reakcija Negishi tipa). Pored toga, Chan-Lam tip kuplovanja se može koristiti kada je grupa (X) na primer, ali nije ograničena na, fenol (O-H) ili primarni ili sekundarni amin (R'R"N-H).

[0132] Tranzicije opisane u Šemi 4A i 4B takođe se mogu izvesti sa supstituentom R<1>, R<2>, R<3>ili R<4>na benzizoksazolnoj grupi u strukturi G13, predstavljeno šemom 4C ispod.

Šema 4C

[0133] Pored toga, supstituent R<7>može se uvesti pre formiranja sulfonamida i benzizoksazola na prekursoru nitrila G9 (kada je R<1>ili R<2>ili R<3>ili R<4>= X ili B<1>) u opštoj sintezi 3, šema 3D.

Opšta sinteza 5

[0134] Šema 5A ilustruje dodavanje azotom vezane R<8>grupe, kao supstituent koji je deo Ar ili na delu benzizoksazola da bi se dobilo jedinjenje strukture G16. Ovo se može postići korišćenjem bilo koje odgovarajuće reakcije kuplovanja koja je poznata stručnjaku, na primer, pomeranjem SnAr ili Buchvald kuplovanjem. Grupa označena sa (X) može biti, ali nije ograničena na, halogen i odabrana je tako da bude pogodna za primenjenu reakciju kuplovanja.

Šema 5A

[0135] Alternativno, za sintezu jedinjenja vezanih za etar, može se primeniti slična strategija kao što je prikazano u Šemi 5B. Ovo se može postići korišćenjem bilo koje odgovarajuće reakcije kuplovanja koja je poznata stručnjaku, na primer, SnAr ili Ullman tipa kuplovanja da bi se dobila jedinjenja sa strukturom G17.

Šema 5B

Oba prethodna kuplovanja mogu takođe biti obrnuta, tako da dodata grupa bude R<8>-X.

[0136] Pored toga, supstituent OR<8>ili NHR<8>mogu se uvesti pre formiranja sulfonamida i benzizoksazola na prekursoru nitrila G9 (kada je R<1>ili R<2>ili R<3>ili R<4>= X) u opštoj sintezi 3, šema 3D.

Opšta sinteza 6

[0137]

Šema 6A

[0138] Šema 6A ilustruje dodavanje amina (HNR<10>R<11>) da se formira odgovarajući amid, kao supstituent koji je deo Ar ili na ostatku benzizoksazola da bi se dobilo jedinjenje strukture G19.

Ovo se može postići spajanjem relevantne karboksilne kiseline sa primarnim aminom ili sekundarnim aminom NHR<10>R<11>. Postupci za formiranje takvih amida biće očigledne stručnjacima u ovoj oblasti, ali uključuju na primer upotrebu reagenasa kao što su HATU, HBTU, T3P i EDCI/HOBt, i upotrebu aktiviranih oblika karboksilne kiseline kao što je odgovarajući acil halogenid, mešani anhidrid ili N-hidroksisukcinimid estar. Amid G19 takođe može da se sintetiše direktno iz jedinjenja estra (kada je R<12>= Alk, kao što su, ali ne ograničavajući se na metil ili etil). Formiranje karboksilne kiseline (kada je R<12>= H) iz odgovarajućeg estra može se postići na primer hidrolizom sa bazom kao što je hidroksid alkalnog metala ili kiselina, na primer vodeni rastvor hlorovodonične kiseline.

[0139] Iz jedinjenja amida G19, mogu se izvesti dalje transformacije, kao što je, ali bez ograničenja, redukcija amida da bi se formirao amin ili dehidratacija amida da bi se formirao nitril. Postupci za izvođenje takve transformacije biće poznati stručnjacima u ovoj oblasti.

[0140] Pored toga, amid CONR<10>R<11>može se uvesti pre formiranja sulfonamida i benzizoksazola na prekursoru nitrila G9 (kada je R<1>ili R<2>ili R<3>ili R<4>= CO2R<12>, R<12>= Alk ili H) u opštoj sintezi 3, šema 3D.

Opšta sinteza 7

[0141] Konverzija (X) u strukturi G20 u šemi 7A u strukturu estra G18 (R<12>= alkil, kao što je metil ili etil) će biti očigledana stručnjacima u ovoj oblasti, ali će uključiti, na primer, reakciju karbonilacije koja se može postići upotrebom ugljen monoksida u prisustvu katalizatora prelaznog metala kao što je, ali ne ograničavajući se na PdCl2dppf.DCM; i alkoholni rastvarač kao što je ali bez ograničenja na metanol ili etanol. Formiranje karboksilne kiseline u strukturi G18 (R=H) se može postići na primer hidrolizom sa bazom kao što je hidroksid alkalnog metala ili kiselina, na primer vodeni rastvor hlorovodonične kiseline.

Šema 7A

[0142] Estar ili kiselina G18 u Šemi 7A može se redukovati na hidroksilno jedinjenje kao što je struktura G21. Postupci za takvu transformaciju će biti poznati stručnjacima u ovoj oblasti, ali uključuju na primer upotrebu redukcionih agenasa kao što su litijum aluminijum hidrid (za estar i karboksilnu kiselinu) i boran (za karboksilnu kiselinu).

[0143] Od hidroksilnog jedinjenja G21, dalje transformacije se mogu sprovesti, kao što su, ali ne ograničavajući se na, Mitsunobu ili reakcije nukleofilne supstitucije. Postupci za izvođenje takve transformacije biće poznati stručnjacima u ovoj oblasti.

[0144] Pored toga, estarska grupa se može uvesti pre formiranja sulfonamida i benzizoksazola na prekursoru nitrila G9 (kada je R<1>ili R<2>ili R<3>ili R<4>= X) u opštoj sintezi 3, šema 3D.

Opšta sinteza 5

[0145] Šema 8A ilustruje redukciju nitro grupe u strukturi G22 da formira odgovarajući amin u strukturi G23, kao supstituent koji je deo Ar ili benzizoksazolnog dela.

Šema 8A

[0146] Redukcija nitro grupe u primarni amin G23 će biti očigledna stručnjacima u ovoj oblasti i obuhvataja, ali nije ograničena na korišćenje uslova za redukciju kao što je prelazni metal (Fe, In, Zn) u prisustvu HCl, hidrogenacija u prisustvu prelaznog metala ili katalizatora prelaznog metala.

[0147] Od jedinjenja amina G23, mogu se izvesti dalje transformacije, kao što je, ali bez ograničenja, formiranje amidne veze. Postupci za izvođenje takve transformacije biće slične onima opisanim u Opštoj sintezi 6.

[0148] Pored toga, grupa amina se može uvesti pre formiranja sulfonamida i benzizoksazola na prekursoru nitrila G9 (kada je R<1>ili R<2>ili R<3>ili R<4>= NO2) u opštoj sintezi 3, šema 3D.

Opšta sinteza 9

[0149] Šema 9A ilustruje uvođenje nitrilne grupe u strukturu G25, kao supstituent koji je deo ili Ar ili na benzizoksazolnom delu.

Šema 9A

[0150] Postupak za takvu transformaciju će biti očigledan stručnjacima u ovoj oblasti i uključuje, ali nije ograničen na, izmeštanje SnAr, ili spajanje katalizovano prelaznim metalom sa odgovarajućim cijanidnim reagensom. Grupa označena sa (X) u strukturi G24 može biti, ali ne ograničavajući se na, halogen, triflat ili mezilat i izabran je da bude pogodan za primenjenu reakciju.

Dodatne preference

[0151] Sledeće preference se mogu primeniti na sve aspekte pronalaska kao što je gore opisano, ili se mogu odnositi na jedan aspekt. Preference se mogu kombinovati zajedno u bilo kojoj kombinaciji.

R<1>, R<2>, R<3>i R<4>

[0152] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>može biti H. U nekim od ovih izvođenja, jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>su H. U drugim od ovih izvođenja, dva R<1>, R<2>, R<3>i R<4>su H. U drugim od ovih izvođenja, tri od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>su H.

[0153] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>može biti C1-3alkil, izborno supstituisan sa:

hidroksi,

C1-2alkoksi,

NH2,

fenil,

C5-6heteroaril,

C1-4alkil karbamoil,

acilamido.

[0154] U ovim primerima izvođenja, najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>može biti C1-3alkil. Dalje, u ovim primerima izvođenja, C1-3alkil grupa može biti metil, etil ili propil. Ove grupe mogu biti nesupstituisane.

[0155] Ako je alkil grupa supstituisana, supstituent se može izabrati između:

(i) hidroksi; ili

(ii) nesupstituisani C1-2alkoksi, tj. metoksi, etoksi; ili

(iii) NH2; ili

(iv) fenil; ili

(v) C5-6heteroaril, npr. N-pirazolil; ili

(vi) C1-4alkil karbamoil, npr. NHC(O)Me; ili

(vii) acilamido, npr. NHCO2Me.

[0156] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>može biti C1-3alkoksi, izborno supstituisan sa C3-6cikloalkil ili pomoću jedne od više fluoro grupa. U ovim primerima izvođenja, C1-3alkoksi grupa može biti metoksi, etoksi ili propiloksi. Ove grupe mogu biti nesupstituisane. Ove grupe mogu biti supstituisane sa jednom ili više fluoro grupa, i mogu biti perfluorovane, npr. OCF3, OC2F5. Ove grupe mogu biti supstituisane sa jednom, dve, tri, četiri ili pet fluoro grupa. U nekom aspektu, ove grupe mogu biti supstituisane jednom; jednom ili dve; ili jednom, dve ili tri fluoro grupe. Alkoksi grupa može biti supstituisana sa C3-6cikloalkil, npr. ciklopropil. Dakle, ukupna grupa može biti OCH2(ciklopropil).

[0157] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>može biti C3-6cikloalkil. U ovim primerima izvođenja, C3-6cikloalkil grupa može biti ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil. Konkretno, C3-6cikloalkil grupa može biti ciklopropil.

[0158] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>može biti halo. U ovim primerima izvođenja, halo grupa može biti fluoro, hloro, bromo ili jodo.

[0159] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>može biti COR<C>, gde je R<C>je izabran iz NR<N1>R<N2>, gde je R<N1>i R<N2>su nezavisno izabrani od H i metila. U ovim primerima izvođenja, grupa može biti izabrana od C(O)NH2, C(O)NHCH3i C(O)N(CH3)2.

[0160] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>može biti cijano, NH2, NO2. U nekim od ovih izvođenja najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>može biti cijano. U drugim od ovih izvođenja najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>može biti NH2. U drugim od ovih izvođenja najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>može biti NO2.

[0161] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>može biti fenil ili C5-6heteroaril, čije grupe su izborno supstituisane metilom, hidroksi ili metoksi. U nekim od ovih izvođenja najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>može biti fenil. U drugim od ovih izvođenja najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>može biti C5-6heteroaril, na primer oksazolil, pirazolil, triazolil, piridil i pirimidinil. Fenil ili C5-6heteroaril grupa može biti nesupstituisana. U određenim primerima izvođenja, fenil grupa može biti supstituisana metilom ili metoksi. U određenim primerima izvođenja, C5-6heteroaril grupa može biti supstituisana sa jednom ili više metil grupa, tako da je ukupna grupa, na primer, dimetilpirazolil ili N-metilpirazolil.

[0162] U nekim primerima izvođenja, R<4>je metoksi.

[0163] U nekim primerima izvođenja, R<4>je metoksi, R<2>je CH2OCH3ili CH2OCH2CH3i R<1>i R<3>su H.

[0164] U nekim primerima izvođenja, R<4>je metoksi, R<2>je fenil, izborno supstituisan sa metilom ili metoksi, i R<1>i R<3>su H.

[0165] U nekim primerima izvođenja, R<4>je metoksi, R<2>je C5-6heteroaril, izborno supstituisan sa metilom.

[0166] U nekim primerima izvođenja, R<4>je metoksi i R<1>, R<2>i R<3>su H.

[0167] U nekim primerima izvođenja, R<4>je hloro, R<2>je C1-3alkil ili bromo, i R<1>i R<3>su H.

[0168] U nekim primerima izvođenja, R<4>je hloro i R<1>, R<2>i R<4>su H.

[0169] U nekim primerima izvođenja, R<3>je C1-3alkil i R<1>, R<2>i R<4>su H.

Ar

[0170] Ar je fenil, koji može biti nesupstituisan ili supstituisan.

[0171] U nekim primerima izvođenja, Ar je fenil.

[0172] U nekim primerima izvođenja, supstituent za Ar je C1-4alkil, izborno supstituisan sa hidroksi, C1-2alkoksi, NH2, C1-4alkil karbamoil, ili sa jednom ili više fluoro grupa. U ovim primerima izvođenja, C1-4alkil grupa može biti metil, etil, propil ili butil. Ove grupe mogu biti nesupstituisane. Ove grupe mogu biti supstituisane sa jednom ili više fluoro grupa, i mogu biti perfluorovane, npr. CF3, C2F5. Ako je alkil grupa supstituisana, supstituent se može izabrati između:

(i) hidroksi; ili

(ii) C1-2alkoksi, tj. metoksi, etoksi; ili

(iii) NH2; ili

(iv) C1-4alkil karbamoil, npr. NHC(O)CH3.

[0173] U nekim primerima izvođenja, supstituent za Ar je C3-6cikloalkil. U ovim primerima izvođenja, C3-6cikloalkil grupa može biti ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil. Konkretno, C3-6cikloalkil grupa može biti cikloheksil.

[0174] U nekim primerima izvođenja, supstituent za Ar je hidroksi; cijano; NR<N3>R<N4>, gde je R<N3>i R<N4>su nezavisno izabrani od H i metila; ili acilamido. U nekim od ovih izvođenja, supstituent može biti hidroksi. U drugom od ovih izvođenja, supstituent može biti cijano. U drugom od ovih izvođenja, supstituent može biti NR<N3>R<N4>, gde je R<N3>i R<N4>su nezavisno izabrani od H i metila -tako da supstituent može biti NH2, NHCH3ili N(CH3)2. U drugom od ovih izvođenja, supstituent može biti acilamido, kao što je NHCO2CH3.

[0175] U nekim primerima izvođenja, supstituent za Ar je halo. U ovim primerima izvođenja, halo grupa može biti fluoro, hloro, bromo ili jodo.

[0176] U nekim primerima izvođenja, supstituent za Ar je C1-3alkoksi, izborno supstituisan sa hidroksi, C(O)NH2, C3-6cikloalkil, fenil, C5-6heteroaril, ili pomoću jedne od više fluoro grupa. U ovim primerima izvođenja, C1-3alkoksi grupa može biti metoksi, etoksi ili propiloksi. Ove grupe mogu biti nesupstituisane. Ove grupe mogu biti supstituisane sa jednom ili više fluoro grupa, i mogu biti perfluorovane, npr. OCF3, OC2F5. Alkoksi grupa može biti supstituisana hidroksilom, tako da je ukupna grupa, na primer, OC2H4OH. Alkoksi grupa može biti supstituisana sa C(O)NH2, tako da je celokupna grupa, na primer, OCH2C(O)NH2. Alkoksi grupa može biti supstituisana sa C3-6cikloalkil, npr. ciklopropil, tako da ukupna grupa može biti, na primer, OCH2(ciklopropil). Alkoksi grupa može biti supstituisana fenilom, tako da je ukupna grupa, na primer, benziloksi. Alkoksi grupa može biti supstituisana sa C5-6heteroaril, npr. piridil, pirazolil, tako da je ukupna grupa, na primer, OCH2(N-metilpirazolil) ili OCH2(metoksipiridil).

[0177] U nekim primerima izvođenja, supstituent za Ar je fenoksi, izborno supstituisan sa fluorom. U nekim od ovih izvođenja supstituent može biti fenoksi. U drugim od ovih izvođenja, supstituent može biti OC6H4F.

[0178] U nekim primerima izvođenja, supstituent za Ar je fenil ili C5-6heteroaril. U nekim od ovih izvođenja, supstituent je fenil. U drugim od ovih izvođenja, supstituent može biti C5-6heteroaril, kao što je oksazolil ili N-pirazolil.

[0179] U nekim primerima izvođenja, supstituent za Ar je SF5ili tako2CH3. U nekim od ovih izvođenja, supstituent je SF5. U drugim od ovih izvođenja, supstituent je SO2NMe.

[0180] U nekim primerima izvođenja, Ar je 5-etil-2-metoksifenil.

[0181] U nekim primerima izvođenja, Ar je 5-CF3-2-metoksifenil.

[0182] U nekim primerima izvođenja, Ar je 2,6-dimetoksifenil.

[0183] U nekim primerima izvođenja, R<4>je metoksi, R<2>je izabran od CH2O CH3, CH2O CH2CH3i izborno supstituisani fenil, a Ar je 2,6-dimetoksibenzen. Ova jedinjenja mogu pokazati posebnu aktivnost protiv MOZ i MORF. Jedinjenja u kojima je R<2>je izabran od CH2OCH3i CH2OCH2CH3može pokazati selektivnu aktivnost protiv MOZ-a i MORF-a.

[0184] Jedinjenja od posebnog interesa uključuju ona iz primera.

PRIMERI

Akronimi

[0185] Radi pogodnosti, mnogi hemijski ostaci su predstavljeni korišćenjem dobro poznatih skraćenica, uključujući, ali ne ograničavajući se na, metil (Me), etil (Et), N-propil (nPr), izopropil (iPr), N-butil (nBu), terc-butil (tBu), fenil (Ph), benzil (Bn), metoksi (MeO), etoksi (EtO), trimetilsilil (TMS) i acetil (Ac).

[0186] Radi pogodnosti, mnoga hemijska jedinjenja su predstavljena korišćenjem dobro poznatih skraćenica, uključujući, ali ne ograničavajući se na, metanol (MeOH), deuterovani metanol (metanol-d4) etanol (EtOH), izopropanol (i-PrOH), etil acetat (EtOAc), sirćetna kiselina (AcOH), acetonitril (MeCN ili ACN), dihlorometan (metilen hlorid, DCM), trifluorosirćetna kiselina (TFA), N,N-dimetilformamid (DMF), tetrahidrofuran (THF), dimetilsulfoksid (DMSO), N-metil-2-pirolidon (NMP), deuterisani aceton (aceton-d6), deuterovani hloroform (CDCl3), deuterovani dimetilsulfoksid (DMSO-d6), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen (dppf), trietilamin (Et3N ili TEA), N,N-diizopropiletilamin (DIPEA ili DIEA), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen dihloropaladijum (II) (PdCl2(dppf)), trans-dihlorobis(trifenilfosfin)paladijum(II) (PdCl2(PPh3)2), tris(dibenzilidenaceton) dipaladijum(0) (Pd2(dba)3), tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (Pd(PPh3)4), 2,4-dimetoksibenzil (DMB), petrolej etar (Pet. etar), litijum bis(trimetilsilil)amid (LHMDS ili LiHMDS), kalijum bis(trimetilsilil)amid (KHMDS), natrijum bis(trimetilsilil)amid (NaHMDS), n-butillitijum (n-BuLi), N-bromosukcinimid (NBS), N-hlorosukcinimid (NCS), piridinijum str-toluensulfonat (PPTS), azobisizobutironitril (AIBN), tetrametiletilendiamin (TMEDA), terc-butildimetilsilil hlorid (TBSCI), tetra-n-butilamonijum fluorid (TBAF) i diizopropil azodikarboksilat (DIAD).

[0187] Pored toga, TLC se odnosi na tankoslojnu hromatografiju.

[0188] Ostale skraćenice: vreme zadržavanja (rt ili Rt), minuta(i) (min), čas (časovi) (h), sobna temperatura (RT), koncentrovana (konc.), atmosfera (atm), vodena (vod.), zasićena (zas.), ekv. (ekvivalent(i)).

Opšti eksperimentalni detalji

[0189] Osim ako nije drugačije navedeno, važe sledeće generalizacije.<1>H NMR spektri su snimljeni na Bruker Ultrashield Plus (400 MHz) ili Bruker AVANCE III (400 MHz). Multiplicitet signala je označen sledećim skraćenicama: s, singlet; d, dublet; t, triplet; k, kvartet; p, pentet; dd, dublet dubleta; dt, dublet tripleta; tt, triplet tripleta; br, širok; m, multiplet. Sve uočene konstante spajanja, J, prikazane su u hercima (Hz). Protoni koji se mogu zameniti nisu uvek uočeni.

[0190] LCMS podaci su generisani korišćenjem Agilent 6100 serije Single Quad (LCMS-A), Agilent 1260 Infinity serije UPLC/MS (LCMS-B), Agilent 1200 (LCMS-C i LCMS-D), Waters 2695 alliance ( LCMS-E), Agilent 6120 Single Quad (LCMS-F) ili maseno usmerena HPLC-MS. Izotopi hlora su prijavljeni kao<35>Cl, izotopi broma su prijavljeni kao ili kao<79>Br ili<81>Br ili oba<79>Br/<81>Br.

LCMS postupak A (LCMS-A):

[0191]

Instrument: Agilent 6100 Series Single Quad LC/MS

HPLC serije Agilent 1200

Pumpa: Kvartarna pumpa serije 1200 G1311A

Autosampler: 1200 serija G1329A termostatski autosampler

Detektor: Detektor sa promenljivom talasnom dužinom serije 1200 G1314B

LC uslovi:

[0192]

HPLC analiza reverzne faze

Kolona: Luna C8 (2) 5 µm 50 × 4,6 mm 100 A

Temperatura kolone: 30°C

Zapremina injekcije: 5 µL

Rastvarač A: voda 0,1 % mravlja kiselina

Rastvarač B: MeCN 0,1 % mravlja kiselina

Gradijent: 5-100 % rastvarač B tokom 10 min

Detekcija: 254 nm ili 214 nm

MS uslovi:

Izvor jona: Quadrupole

Jon Mode: Multimode-ES

Temperatura gasa za sušenje: 300°C Temperatura isparivača: 200 °C

Kapilarski napon (V): 2000 (pozitivan) Kapilarski napon (V): 4000 (negativan)

Opseg skeniranja: 100-1000

Veličina koraka: 0,1 sek

Vreme preuzimanja: 10 min

LCMS postupak B (LCMS-8):

[0194]

Instrument: Agilent 1260 Infiniti Series UPLC/MS Pumpa: 1260 Infinity G1312B Binarna pumpa Autosampler: 1260 Infinity G1367E 1260 HiP ALS Detektor: 1290 Infiniti G4212A 1290 DAD

LC uslovi:

[0195]

HPLC analiza reverzne faze

Kolona: Poroshell 120 EC-C182,7 µm 50 × 3,0 mm Temperatura kolone: 35 °C

Zapremina injekcije: 1 µL

Rastvarač A: voda 0,1 % mravlja kiselina Rastvarač B: MeCN 0,1 % mravlja kiselina Gradijent: 5-100 % rastvarač B tokom 3,8 min Detekcija: nadgledano na 254 nm i 214 nm

MS uslovi:

Izvor jona: Quadrupole

Jonski režim: API-ES

Temperatura gasa za sušenje: 350 °C

Kapilarski napon (V): 3000 (pozitivan)

Kapilarski napon (V): 3000 (negativan)

Opseg skeniranja: 100-1000

Veličina koraka: 0,1 sek

Vreme preuzimanja: 5 min

LCMS postupak C (LCMS-C):

[0197]

LC model: Agilent 1200

(Tip pumpe: binarna pumpa, tip detektora: DAD)

MS model: Agilent G6110A Quadrupole

LC uslovi:

[0198]

Kolona: Xbridge-C18, 2,5 µm, 2,1 × 30 mm Temperatura kolone: 30 °C

Snimanje talasne dužine: 214 nm, 254 nm

Mobilna faza: A: 0,07% HCOOH vodeni rastvor, B: MeOH

MS uslovi:

[0199]

MS: Izvor jona: ES+ (ili ES-) MS opseg: 50 - 900 m/z Fragmentor: 60 Protok gasa za sušenje: 10 L/min Pritisak nebulizatora: 35 psi Temperatura gasa za sušenje: 350 °C

Vcap: 3,5 kV

Tabela gradijenta:

Priprema uzorka:

[0200] Uzorak je rastvoren u metanolu, koncentracija oko 0,11 - 1 mg/mL, zatim filtriran kroz špric filter sa 0,22 µm. (Zapremina injekcije: 1 - 10µL)

LCMS postupak D (LCMS-D):

[0201]

LC model: Agilent 1200

(Tip pumpe: Binarna pumpa, Tip detektora: DAD)

MS model: Agilent G6110A Quadrupole

LCMS uslovi:

[0202]

LC: Kolona: Xsbridge-C18, 2,5 µm, 2,1×30 mm

Temperatura kolone: 30 °C

Snimanje talasne dužine: 214 nm, 254 nm

Mobilna faza: A: 0,07% HCOOH vodeni rastvor, B: MeOH

MS uslovi:

MS: Izvor jona: ES+ (ili ES-) MS opseg: 50 - 900 m/z

Fragmentor: 60 Protok gasa za sušenje: 10 L/min

Pritisak nebulizatora: 35 psi Temperatura gasa za sušenje: 350 °C

Vcap: 3,5 kV

Tabela gradijenta:

Priprema uzorka:

[0204] Uzorak je rastvoren u metanolu, koncentracija oko 0,11 - 1 mg/mL, zatim filtriran kroz špric filter sa 0,22 µm. (Zapremina injekcije: 1 - 10µL)

LCMS postupak E (LCMS-E):

Informacije o opremi:

[0205]

LC model: Waters 2695 alliance

(Tip pumpe: kvaternarna pumpa, detektor: 2996 fotodiodni niz)

MS model: Micromass ZQ

LC uslovi:

[0206]

LC: Kolona: Xsbridge-C18, 3,5µm, 2,1×50 mm Temperatura kolone: 30 °C

Snimanje talasne dužine: 214 nm, 254 nm

Mobilna faza: A: 0,07% HCOOH vodeni rastvor, B: MeOH

MS uslovi:

[0207]

MS: Izvor jona: ES+ (ili ES-) MS opseg: 50 - 900 m/z Kapilar: 3 kV Konus: 3 V Ekstraktor: 3 V

Protok gasa za sušenje: 600 L/h Konus: 50 L/h Temperatura desolvatacije: 300 °C

Temperatura izvora: 100 °C

Tabela gradijenta:

Priprema uzorka:

[0208] Uzorak je rastvoren u metanolu, koncentracija oko 0,11 - 1 mg/mL, zatim filtriran kroz špric filter sa 0,22 µm. (Zapremina injekcije: 1 - 10µL)

LCMS postupak F (LCMS-F)

[0209]

Instrument: Agilent 6120 Series Single Quad LC/MS

HPLC serije Agilent 1200

Pumpa: Kvartarna pumpa serije 1200 G1311A

Autosampler: 1200 serija G1329A termostatirani autosampler

Detektor: Detektor sa promenljivom talasnom dužinom serije 1200 G1314B

LC uslovi:

[0210]

HPLC analiza reverzne faze

Kolona: Luna C8 (2) 5 µm 50 × 4,6 mm 100 A

Temperatura kolone: 30 °C

Zapremina injekcije: 1 - 10 µL

Rastvarač A: voda 0,1 % mravlja kiselina

Rastvarač B: MeCN 0,1 % mravlja kiselina

Gradijent: 0-95 % rastvarač B tokom 10 min

Detekcija: 254 nm ili 214 nm

MS uslovi:

[0211]

Izvor jona: Quadrupole

Jon Mode: Multimode-ES & APCl

Temperatura gasa za sušenje: 250 °C Temperatura isparivača: 200 °C

Kapilarski napon (V): 4000 (pozitivan) Kapilarski napon (V): 4000 (negativan) Opseg skeniranja: 100-1000

Veličina koraka: 0,1 sek

Vreme preuzimanja: 10 min

Preparativna maseno usmerena HPLC

Instrument:

[0212]

Waters ZQ 3100 - Detektor mase

Waters 2545-Pumpa

Waters SFO System Fluidics Organizer Waters 2996 Diode Array Detector Waters 2767 Sample Manager

LC uslovi:

[0213]

HPLC analiza reverzne faze

Kolona: Xsbridge TM C185 µm 19 × 50 mm Zapremina injekcije 500 µL

Rastvarač A: voda 0,1% mravlja kiselina Rastvarač B: acetonitril 0,1% mravlja kiselina Gradijent: 25-100% B tokom 10 min Brzina protoka: 19 mL/min

Detekcija: 100-600nm

MS uslovi:

[0214]

Izvor jona: Single-Quadrupole

Jonski režim: ES pozitivan

Temperatura izvora: 150°C

Temperatura desolvacije: 350 °C

Detekcija: brojanje jona

Kapilarni (KV)-3.00

Konus (V): 30

Ekstraktor (V):3

RF sočivo (V): 0.1

Opseg skeniranja: 100-1000 Amu

Vreme skeniranja: 0,5 sek

Vreme preuzimanja: 10min

Protok gasa

Desolvacija L/sat-650

Konus L/sat-100

Preparativna HPLC (prep. HPLC):

[0215]

Tip instrumenta: serija Varian 940-LC;

Tip pumpe: kvartarna pumpa;

Tip detektora: Diodni niz detektora

HPLC uslovi:

[0216] Waters Sunfire prep C18 OBD, kolona 5 µm 19 × 100 mm, eluiranjem sa gradijentom MeOH u vodi sa 0,07% TFA pri brzini protoka od 15 mL/min. Talasna dužina akvizicije 214 nm, 254 nm.

[0217] Analitička tankoslojna hromatografija izvedena je na Merck silika gel 60 F254 pločama sa aluminijumskom podlogom koje su vizuelizovane gašenjem fluorescencije pod UV svetlom ili stavljanjem u bazni KMnO4ili Ninhidrin.

[0218] Preparativna tankoslojna hromatografija (preparativna TLC ili prep. TLC) je izvedena korišćenjem Tklst (Kina), grand gradusa: (HPTLC): 8±2 µm>80 %; (TLC): 10-40 µm. Tip: GF254. Jedinjenja su vizuelizovana UV (254 nm).

[0219] Hromatografija na koloni je izvedena korišćenjem sistema za prečišćavanje Biotage Isolera koristeći Grace ili RediSep<®>patrone od silicijum dioksida ili sa Tklst (Kina), grand gradusa, 100-200 mreža silika gela.

[0220] Mikrotalasno zračenje je postignuto korišćenjem mikrotalasnog reaktora CEM Explorer SP. Gde je bilo potrebno, anhidrovani rastvarači su kupljeni od Sigma-Aldrich ili su sušeni korišćenjem konvencionalnih metoda.

[0221] Osim ako nije drugačije navedeno, zakiseljavanje je vršeno koncentrovanim ili vodenim rastvorom HCl.

[0222] Dodatni kertridži koji se koriste su sledeći:

Fazni separator:

[0223]

Proizvođač: Biotage

Proizvod: ISOLUTE<®>Fazni separator (3 mL osim ako nije drugačije navedeno)

Si-aminski kertridži:

[0224]

Proizvođač: Biotage

Proizvod: Isolute<®>NH2, 1 g/6 mL

ili

Proizvođač: Silicicle

Proizvod: Si-amin 500 mg ili 1g

Sinteza intermedijera

i) 6-(metoksimetil)-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-amin I4

[0225]

a) Metil 4-cijano-5-fluoro-2-metilbenzoat I1

[0226] Smeša 4-bromo-2-fluoro-5-metilbenzonitrila (3.5 g, 16.4 mmol), Pd(dppf)Cl2·DCM (668 mg, 0.82 mmol) i Et3N (5.0 g, 49.1 mmol) u MeOH (80 mL) zagrevana je na 100°C pod atmosferom CO (0.2 MPa) preko noći. Dodat je dodatni Pd(dppf)Cl2·DCM (340 mg, 0.4 mmol) i zagrevanje je nastavljeno pod atmosferom CO (0.2 MPa) preko noći. Katalizator je uklonjen filtracijom, ispran sa MeOH i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 20/1 do 10/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.4 g, 74%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.48 min; m/z 216.1 [M+Na]<+>.

b) 2-Fluoro-4-(hidroksimetil)-5-metilbenzonitril 12

[0227] U rastvor metil 4-cijano-5-fluoro-2-metilbenzoata I1 (2.4 g, 12.4 mmol) u anhidrovanom THF (20 mL) na sobnoj temperaturi pod N2ukapavanjem je dodat LiBH4(2.0 M rastvor u THF, 12.4 mL, 24.8 mmol) i smeša je zagrevana na refluksu u trajanju od 2 h. Reakcija je ugašena vodom (80 mL) i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (90 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom (100 mL × 3), fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 20/1 do 10/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.6 g, 79%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt1.43 min; m/z 166.1 [M+H]<+>, 188.1 [M+Na]<+>.

c) 2-Fluoro-4-(metoksimetil)-5-metilbenzonitril 13

[0228] U rastvor 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-5-metilbenzonitrila I2 (800 mg, 8.8 mmol) i jodometana (3.4 g, 24.2 mmol) u DMF (12 mL) na 0°C dodat je NaH (60% tež./tež. disperzija u ulju, 379 mg, 9.7 mmol) i smeša je mešana na 0°C u trajanju od 30 min. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (50 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 20/1 do 10/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (660 mg, 76%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.44 min; m/z 180.1 [M+H]<+>, 202.1.1 [M+Na]<+>.

d) 6-(Metoksimetil)-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-amin 14

[0229] U rastvor acetohidroksamske kiseline (792 mg, 10.6 mmol) u anhidrovanom DMF (20 mL) na 0°C dodat je kalijum terc-butoksid (1.2 g, 10.6 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 h. Zatim je dodat 2-fluoro-4-(metoksimetil)-5-metilbenzonitril I3 (630 mg, 3.5 mmol) i smeša zagrevana je na 60°C preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (80 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 20/1 do 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.0 g, 77%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt1.75 min; m/z 193.1 [M+H]<+>.

ii) 4-Metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amin I9

[0230]

a) 4-Bromo-2-fluoro-6-metoksibenzonitril 15

[0231] U rastvor 4-bromo-2,6-difluorobenzonitrila (6.0 g, 27.5 mmol) u THF (100 mL) dodat je natrijum metanolat (1.5 g, 55.0 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 48 h. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (150 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 300/1 do 200/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.3 g, 68%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.53 min; m/z 251.8/253.8 [M+Na]<+>.

b) Metil 4-cijano-3-fluoro-5-metoksibenzoat 16

[0232] Smeša 4-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila I5 (4.3 g, 18.7 mmol), Pd(dppf)Cl2-DCM (768 mg, 0.94 mmol) i EtsN (5.7 g, 56.1 mmol) u MeOH (50 mL) zagrevana je na 100 °C pod atmosferom CO (0.2 MPa) preko noći. Katalizator je uklonjen filtracijom, ispran sa MeOH i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 200/1 do 50/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.9 g, 74%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.41 min; m/z 210.0 [M+H]<+>, 232.0 [M+Na]<+>.

c) 2-Fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitril I7

[0233] U rastvor LiBH4(2.0 M rastvor u THF, 13.9 mL, 27.8 mmol) u anhidrovanom THF (60 mL) na sobnoj temperaturi pod N2ukapavanjem je dodat rastvor metil 4-cijano-3-fluoro-5metoksibenzoata I6 (2.9 g, 13.9 mmol) u anhidrovanom THF (10 mL) i smeša je zagrevana na refluksu u trajanju od 1 h. Reakcija je ugašena sa 1 M aq. HCl i ekstrahovana sa EtOAc (100 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom (100 mL × 3), fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.5 g, 100%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.31 min; m/z 182.1 [M+H]<+>, 204.1 [M+Na]<+>.

d) 2-Fluoro-6-metoksi-4-(metoksimetil)benzonitril I8

[0234] U rastvor 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitrila I7 (2.7 g, 14.9 mmol) i jodometana (10.6 g, 74.5 mmol) u DMF (100 mL) na 0°C dodat je NaH (60% tež./tež. disperzija u ulju, 1.2 g, 29.8 mmol) u malim porcijama i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 min. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (100 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.2 g, 76%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.22 min; m/z 218.0 [M+Na]<+>.

e) 4-Metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amin I9

[0235] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (2.3 g, 30.8 mmol) u anhidrovanom DMF (1500 mL) na sobnoj temperaturi dodat je kalijum terc-butoksid (3.5 g, 30.8 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 h. Zatim je dodat 2-fluoro-6-metoksi-4-(metoksimetil)benzonitril I8 (2.0 g, 10.3 mmol) i mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 20/1 do 10/1 do 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (580 mg, 27%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.92 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.65 (s, 1H), 5.91 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.32 (s, 3H, zaklonjeni vodenim pikom). LCMS-D: Rt1.33 min; m/z 209.0 [M+H]<+>.

iii) 4-Nitrobenzo[d]izoksazol-3-amin I10

[0236]

[0237] U rastvor 2-fluoro-6-nitrobenzonitrila (1.0 g, 6.17 mmol) u DMF/H2O (32 mL/32 mL) dodata je acetohidroksaminska kiselina (2.78 g, 37.0 mmol) i K2CO3(10.23 g, 74.0 mmol) i smeša zagrevana je na 70°C u trajanju od 19 h. Dodata je voda (200 mL) i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (100 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 30/1 do 1/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (380 mg, 35%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.82 min; m/z 180.1 [M+H]<+>.

iv) 4-Metoksi-6-(1-metoksietil)benzo[d]izoksazol-3-amin 115

[0238]

a) 4-(1-Etoksivinil)-2-fluoro-6-metoksibenzonitril I11

[0239] U rastvor 4-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila I5 (2.0 g, 8.7 mmol) u THF (40 mL) dodat je tributil(1-etoksivinil)stanan (3.4 g, 9.6 mmol), Pd(PPh3)4(201 mg, 0.174 mmol) i LiCI (1.15 g, 27.0 mmol) i smeša zagrevana je na refluksu pod N2u trajanju od 48 h. Smeša je razblažena sa EtOAc i ispirana uzastopno vodom, 5% vodenim rastvorom amonijum hidroksida i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 200/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.6 g, 84%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.41 min; m/z 222.0 [M+H]<+>.

b) 4-Acetil-2-fluoro-6-metoksibenzonitril 112

[0240] U rastvor 4-(1-etoksivinil)-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila I11 (1.0 g, 4.5 mmol) u THF (10 mL) dodat je 2 M vodeni rastvor HCl(6.0 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 3 h. Smeša je razblažena dietil etrom i isprana zasićenim vodenim rastvorom NaHCOs i vodom. Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (710 mg, 81%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt1.42 min; m/z 194.0 [M+H]<+>.

c) 2-Fluoro-4-(1-hidroksietil)-6-metoksibenzonitril 113

[0241] U rastvor 4-acetil-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila I12 (700 mg, 3.6 mmol) u THF (30 mL) dodat je natrijum borohidrid (206 mg, 5.4 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (675 mg, 95%) kao bezbojno ulje. LCMS-C: Rt0.98 min; m/z 196.0 [M+H]<+>.

d) 2-Fluoro-6-metoksi-4-(1-metoksietil)benzonitril 114

[0242] U rastvor 2-fluoro-4-(1-hidroksietil)-6-metoksibenzonitrila I13 (670 mg, 3.4 mmol) i jodometana (1.5 g, 10.3 mmol) u DMF (20 mL) na 0°C dodat je NaH (60% tež./tež. disperzija u ulju, 274 mg, 6.8 mmol) u malim porcijama i smeša je mešana na 0°C u trajanju od 2 h. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (40 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (650 mg, 90%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt1.95 min; m/z 210.0 [M+H]<+>.

e) 4-Metoksi-6-(1-metoksietil)benzo[d]izoksazol-3-amin 115

[0243] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (698 mg, 9.3 mmol) u anhidrovanom DMF (20 mL) na 0°C dodat je kalijum terc-butoksid (1.04 g, 9.3 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 h. Zatim je ukapavanjem dodat rastvor 2-fluoro-6-metoksi-4-(1-metoksietil)benzonitrila I14 (650 mg, 3.1 mmol) u anhidrovanom DMF (10 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (50 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 300/1 do 200/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (130 mg, 19%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.90 (s, 1H), 6.64 (s, 1H), 5.92 (s, 2H), 4.39 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.15 (s, 3H), 1.36 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS-C: Rt0.73 min; m/z 223.0 [M+H]<+>.

v) 4-Metoksi-6-fenilbenzo[d]izoksazol-3-amin I17

[0244]

a) 3-Fluoro-5-metoksi-[1,1 '-bifenil]-4-karbonitril 116

[0245] U rastvor 4-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila I5 (6.0 g, 26.1 mmol) i fenilboronske kiseline (6.36 g, 52.2 mmol) u 1,4-dioksanu (200 mL) i vodi (50 mL) pod N2dodat je Pd(PPh3)4(2.99 g, 2.66 mmol) i Na2CO3(8.29 g, 78.2 mmol) i smeša zagrevana je na 100°C preko noći.

Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 50/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5.45 g, 93%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.48 min; m/z 228.0 [M+H]<+>.

b) 4-Metoksi-6-fenilbenzo[d]izoksazol-3-amin I17

[0246] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (8.15 g, 23.98 mmol) u anhidrovanom DMF (200 mL) na 0°C dodat je kalijum terc-butoksid (5.5 g, 24.0 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 h. Zatim je dodat 3-fluoro-5-metoksi-[1,1'-bifenil]-4-karbonitril I16 (5.45 g, 7.99 mmol) i smeša zagrevana je na 60°C u trajanju od 4 h. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 10/1 do 8/1 do 6/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.2 g, 38%) kao žuta čvrsta supstanca .<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.79 - 7.74 (m, 2H), 7.52 - 7.46 (m, 2H), 7.45 - 7.39 (m, 1H), 7.26 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 5.97 (s, 2H), 4.00 (s, 3H). LCMS-C: Rt2.15 min; m/z 241.0 [M+H]+

vi) 3-(3-Amino-4-metoksibenzo[d]izoksazol-6-il)fenol I19

[0247]

a) 3-Fluoro-3'-hidroksi-5-metoksi-[1,1'-bifenil]-4-karbonitril I18

[0248] U rastvor 4-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila I5 (650 mg, 2.8 mmol) i (3-hidroksifenil)boronske kiseline (1.2 g, 5.6 mmol) u 1,4-dioksanu (40 mL) i vodi (10 mL) pod N2dodat je Pd(PPh3)4(327 mg, 0.28 mmol) i Na2CO3(899 mg, 8.5 mmol) i smeša zagrevana je na 100°C preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (687 mg, 94%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.07 min; m/z 244.0 [M+H]<+>.

b) 3-(3-Amino-4-metoksibenzo[d]izoksazol-6-il)fenol I19

[0249] U rastvor acetohidrksaminske kiseline (636 mg, 8.5 mmol) u anhidrovanom DMF (60 mL) na 0°C dodat je kalijum terc-butoksid (952 mg, 8.5 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 h. Zatim je dodat 3-fluoro-3'-hidroksi-5-metoksi-[1,1'-bifenil]-4-karbonitril I18 (687 mg, 2.8 mmol) i smeša zagrevana je na 60°C u trajanju od 4 h. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 1/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (282 mg, 39%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.3 min; m/z 257.0 [M+H]<+>.

vii) 6-(Etoksimetil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amin I21

[0250]

a) 4-(Etoksimetil)-2-fluoro-6-metoksibenzonitril 120

[0251] U rastvor 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitrila I7 (1.15 g, 6.4 mmol) i jodoetana (5.0 g, 31.7 mmol) u DMF (40 mL) na 0°C dodat je NaH (60% tež./tež. disperzija u ulju, 508 mg, 12.7 mmol) u malim porcijama i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 min. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (100 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.0 g, 79%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.15 min; m/z 210.0 [M+H]<+>.

b) 6-(Etoksimetil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amin I21

[0252] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (1.1 g, 14.3 mmol) u anhidrovanom DMF (50 mL) na sobnoj temperaturi dodat je kalijum terc-butoksid (1.6 g, 14.3 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 h. Zatim je dodat 4-(etoksimetil)-2-fluoro-6-metoksibenzonitril I20 (1.0 g, 4.8 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 20/1 do 10/1 do 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (650 mg, 61%) kao žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.92 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 5.91 (s, 2H), 4.53 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.51 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.17 (t, J = 7.0 Hz, 3H). LCMS-C: Rt0.82 min; m/z 223.0 [M+H]<+>.

viii) 6-Bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amin I22

[0253]

[0254] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (2.0 g, 26.1 mmol) u anhidrovanom DMF (100 mL) na sobnoj temperaturi dodat je kalijum terc-butoksid (2.9 g, 26.1 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 h. Zatim je dodat 4-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzonitril I5 (2.0 g, 8.7 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (296 mg, 14%) kao bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.32 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.04 (s, 2H), 3.92 (s, 3H). LCMS-C: Rt1.4 min; m/z 244.0 [M+H]<+>.

ix) 7-Etoksibenzo[d]izoksazol-3-amin I26

[0255]

a) 2-Fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzonitril I23

[0256] Smeša 3-bromo-2-fluorobenzonitrila (3.0 g, 15.0 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolana) (11.4 g, 45 mmol), kalijum acetata (5.9 g, 60.0 mmol) i Pd(dppf)Cl2(2.2 g, 3.0 mmol) u DMSO (45 mL) i 1,4-dioksanu (15 mL) zagrevana je na 105°C pod N2u trajanju od 3 h. Smeša je razblažena sa EtOAc (30 mL) i isprana vodom (30 mL × 3). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran, koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.9 g, >100%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) 2-Fluoro-3-hidroksibenzonitril 124

[0257] U rastvor 2-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzonitrila I23 (1.9 g, 7.6 mol) u AcOH (19 mL) pod N2ukapavanjem je dodat H2O2(30% vodeni rastvor, 1.9 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 h zatim je sipan u smešu EtOAc i višak vodenog rastvora Na2SO3. Slojevi su zatim odvojeni i organski sloj je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran, koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (650 mg, 62%) kao prljavo bela voskasta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt0.93 min; m/z 138.1 [M+H]<+>.

c) 3-Etoksi-2-fluorobenzonitril 125

[0258] U rastvor 2-fluoro-3-hidroksibenzonitrila I24 (360 mg, 2.6 mmol) u DMF (30 mL) dodat je Cs2CO3(4.3 g, 13.1 mmol) i jodoetan (1.0 g, 6.6 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc (80 mL) i isprana vodom (50 mL × 3). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran, koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (220 mg, 51%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.31 min; m/z 166.1 [M+H]<+>.

d) 7-Etoksibenzo[d]izoksazol-3-amin 126

[0259] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (300 mg, 4.0 mmol) u DMF (15 mL) na 0°C pod N2dodat je kalijum terc-butoksid (450 mg, 4.0 mmol) i smeša je zagrevana na 30°C u trajanju od 1 h. Dodat je rastvor 3-etoksi-2-fluorobenzonitrila I25 (220 mg, 1.3 mmol) u DMF (10 mL) i smeša zagrevana je na 30°C preko noći. Dodat je EtOAc (80 mL) i smeša je isprana vodom (50 mL × 3). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran, koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (170 mg, 70%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt1.68 min; m/z 179.1 [M+H]<+>.

x) 7-(Ciklopropilmetoksi)benzo[d]izoksazol-3-amin I28

[0260]

a) 3-(Ciklopropilmetoksi)-2-fluorobenzonitril I27

[0261] U rastvor 2-fluoro-3-hidroksibenzonitrila I24 (360 mg, 2.6 mmol) u DMF (30 mL) dodat je Cs2CO3(4.3 g, 13.1 mmol), KI (87 mg, 0.5 mmol) i (bromometil)ciklopropan (880 mg, 6.6 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodat je EtOAc (80 mL) i smeša je isprana vodom (50 mL × 3). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran, koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (150 mg, 30%) kao crvena čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.54 min; m/z 192.1 [M+H]<+>.

b) 7-(Ciklopropilmetoksi)benzo[d]izoksazol-3-amin 128

[0262] Pripremljen od 3-(ciklopropilmetoksi)-2-fluorobenzonitrila I27 prema postupku opisanom za 7-etoksibenzo[d]izoksazol-3-amin I26, korak d. LCMS-D: Rt2.23 min; m/z 205.1 [M+H]<+>.

xi) 6-Etoksibenzo[d]izoksazol-3-amin I32

[0263]

a) 2-Fluoro-4-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)benzonitril I29

[0264] U rastvor 2-fluoro-4-hidroksibenzonitrila (20 g, 145.9 mmol) i PPTS (733 mg, 2.9 mmol) u DCM (500 mL) pod N2dodat je 3,4-dihidro-2H-piran (24.5 g, 292 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/0 do 100/2) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (27 g, 83%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) 6-((Tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)benzo[d]izoksazol-3-amin 130

[0265] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (13.7 g, 182.3 mmol) u DMF (60 mL) na 0°C pod N2dodat je kalijum terc-butoksid (20.4 g, 182.3 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Zatim je dodat 2-fluoro-4-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)benzonitril I29 (13.4 g, 60.8 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodat je EtOAc (500 mL) i smeša je isprana vodom (100 mL × 5). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (12.1 g, 85%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.31 min; m/z 235.1 [M+H]<+>.

c) 3-Aminobenzo[d]izoksazol-6-ol I31

[0266] U rastvor 6-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)benzo[d|izoksazol-3-amina I30 (3.5 g, 15 mmol) u THF (50 mL) dodat je 2 M vodeni rastvor HCl(20 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 h. Smeša je razblažena sa EtOAc (300 mL) i isprana vodom (x 2). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran, koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.1 g, 94%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

d) 6-Etoksibenzo[d]izoksazol-3-amin 132

[0267] Smeša 3-aminobenzo[d]izoksazol-6-ola I31 (300 mg, 2 mmol), Cs2CO3(2.0 g, 6 mmol), KI (66 mg, 0.4 mmol) i bromoetana (436 mg, 4 mmol) u DMF (30 mL) zagrevana je na 50°C pod N2preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc (300 mL) i isprana vodom (100 mL × 5). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (270 mg, 76%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt0.37 min; m/z 179.0 [M+H]<+>.

xii) 6-(Ciklopropilmetoksi)benzo[d]izoksazol-3-amin 133

[0268]

[0269] Pripremljen od 3-aminobenzo[d]izoksazol-6-ola I31 prema postupku opisanom za 6-etoksibenzo[d]izoksazol-3-amin I32, korak d (395 mg, 97%). LCMS-D: Rt2.27 min; m/z 205.1 [M+H]<+>.

xiii) 6-(1H-1,2,3-Triazol-1-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I36

[0270]

a) 4-Azido-2-fluorobenzonitril 134

[0271] Smeša 4-amino-2-fluorobenzonitrila (2.0 g, 14.7 mmol) u vodi (4 mL), ACN (32 mL), i koncentrovanoj HCl (10 mL) je mešana na sobnoj temperaturi pod N2preko noći. Zatim je u porcijama dodat NaNO2(2.0 g, 29.4 mmol) i mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi 2 h. Smeša je hlađena do 0°C, u porcijama je dodat NaN3(1.9 g, 29.4 mmol) i mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi 2 h. Dodata je voda (50 mL) i većina organskog rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom. Preostala vodena smeša je zatim ekstrahovana sa DCM (50 mL × 4) i kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/0 do 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.5 g, 62%) kao žuta čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) 2-Fluoro-4-(1H-1,2,3-triazol-1-il)benzonitril 135

[0272] Smeša 4-azido-2-fluorobenzonitrila I34 (500 mg, 3.1 mmol), etiniltrimetilsilana (454 mg, 4.6 mmol) i Cul (704 mg, 3.7 mmol) u THF (50 mL) zagrevana je na 50°C pod N2u trajanju od 24 h. Dodat je dodatni etiniltrimetilsilan (454 mg, 4.6 mmol) i smeša zagrevana je na 50°C dodatna 24 h, zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 10/1) da bi se dobio 2-fluoro-4-(5-(trimetilsilil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzonitril (410 mg), koji je rastvoren u 1 M rastvoru TBAF u THF (50 mL) i zagrevan na 45°C pod N2preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (200 mg, 34%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

c) 6-(1H-1,2,3-Triazol-1-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I36

[0273] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (239 mg, 3.16 mmol) u DMF (25 mL) na 0°C pod N2dodat je kalijum terc-butoksid (357 mg, 3.18 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Zatim je dodat rastvor 2-fluoro-4-(1H-1,2,3-triazol-1-il)benzonitrila I35 (200 mg, 1.06 mmol) u DMF (15 mL) i mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi preko noći. Dodat je EtOAc (100 mL) i smeša je isprana vodom (x 5). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet.

etar/EtOAc = 100/1 do 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (150 mg, 70%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt0.47 min; m/z 202.1 [M+H]<+>.

xiv) 6-(Pirimidin-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I39

[0274]

a) 2-Fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzonitril 137

[0275] Smeša 4-bromo-2-fluorobenzonitrila (1.0 g, 5.0 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolana) (1.3 g, 5.0 mmol), kalijum acetata (5.9 g, 20.0 mmol) i Pd(dppf)Cl2(2.0 g, 1.0 mmol) u DMSO (50 mL) i 1,4-dioksanu (10 mL) zagrevana je na 105°C pod N2u trajanju od 3 h. Smeša je razblažena sa EtOAc (200 mL) i isprana vodom (100 mL × 3). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran, koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc= 100/0 do 50/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.1 g, 89%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) 2-Fluoro-4-(pirimidin-2-il)benzonitril I38

[0276] U rastvor 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzonitrila I37 (464 mg, 2 mmol) i 2-bromopirimidina (736 mg, 4 mmol) u vodi (40 mL), toluenu (40 mL) i i-PrOH (10 mL) pod N2dodat je Pd(dppf)Cl2(146 mg, 0.2 mmol) i K3PO4·3H2O (1.33 g, 5.0 mmol) i smeša zagrevana je na 85°C u trajanju od 4 h. Smeša je razblažena sa EtOAc (200 mL) i isprana vodom (50 mL). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran, koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/ EtOAc = 50/1 do 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (270 mg, 68%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.38 min; m/z 200.1 [M+H]<+>.

c) 6-(Pirimidin-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin 139

[0277] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (306 mg, 4.07 mmol) u DMF (20 mL) na 0°C pod N2dodat je kalijum terc-butoksid (457 mg, 4.07 mmol) i smeša zagrevana je na 30°C u trajanju od 1 h. Zatim je dodat rastvor 2-fluoro-4-(pirimidin-2-il)benzonitrila I38 (270 mg, 1.36 mmol) u DMF (10 mL) i zagrevanje je nastavljeno na 30°C preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc (100 mL) i isprana vodom (50 mL × 3). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran, koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/ EtOAc = 50/1 do 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (200 mg, 69%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt0.38 min; m/z 213.1 [M+H]<+>, 235.1 [M+Na]<+>.

xv) 5-Bromobenzo[d]izoksazol-3-amin I40

[0278]

[0279] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (23.7 g, 0.315 mol) u DMF (800 mL) na 0°C pod N2dodat je t-BuOK (35.4 g, 0.315 mol) i smeša je mešana na 15°C u trajanju od 2 h. Zatim je dodat 5-Bromo-2-fluorobenzonitril (21.0 g, 0.105 mol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc (1.5 L) i isprana vodom (400 mL × 4). Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran, koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (19 g, 86%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.13 min; m/z 212.9/214.9 [M+H]<+>.

xvi) 4-Bromobenzo[d]izoksazol-3-amin I41

[0280]

[0281] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (11.25 g, 0.15 mol) u DMF (220 mL) na 0°C pod N2dodat je t-BuOK (16.8 g, 0.15 mol) i smeša je mešana na 25°C u trajanju od 1 h. Zatim je ukapavanjem dodat rastvor 2-bromo-6-fluorobenzonitrila (10.0 g, 0.05 mol) u DMF (80 mL) i mešanje je nastavljeno na 25°C preko noći. Smeša je razblažena vodom (200 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (400 mL). Organski ekstrakt je ispran vodom (400 mL × 3), sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (7.0 g, 66 %) kao svetlo crvena čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.05 min; m/z 212.9/214.9 [M+H]<+>.

xvii) 4-(Trifluorometil)benzo[d]izoksazol-3-amin I42

[0282]

[0283] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (2.25 g, 30 mmol) u DMF (80 mL) na 0°C pod N2dodat je t-BuOK (3.37 g, 30 mmol) i smeša zagrevana je na 30°C u trajanju od 1 h. Zatim je dodat rastvor 2-fluoro-6-(trifluorometil)benzonitrila (1.89 g, 10 mmol) u DMF (20 mL) i zagrevanje je nastavljeno na 30°C preko noći. Smeša je podeljena između EtOAc (300 mL) i vode (100 mL), slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran vodom (100 mL × 3), fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/ EtOAc = 50/1 do 1/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.3 g, 64%) kao bela čvrsta supstanca LCMS-D: Rt2.19 min; m/z 203.0 [M+H]<+>.

xviii) 5-Bromo-4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-amin I44

[0284]

a) 3-Bromo-2-hloro-6-fluorobenzonitril I43

[0285] U rastvor 2-hloro-6-fluorobenzonitrila (1.0 g, 6.4 mmol) u trifluorometansulfonskoj kiselini (10 mL) na 0°C pod N2dodat je NBS (1.1 g, 6.4 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je sipana na led i ekstrahovana sa EtOAc (30 mL × 2). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 200/1 do 100/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (705 mg, 47%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) 5-Bromo-4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-amin I44

[0286] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (5.1 g, 67.8 mmol) u DMF (150 mL) na 0°C pod N2dodat je t-BuOK (7.6 g, 6.4 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Zatim je dodat 3-Bromo-2-hloro-6-fluorobenzonitril I43 (5.3 g, 22.6 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc (500 mL) i isprana vodom (x 3), fiziološkim rastvorom, sušena preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.1 g, 52%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

xix) 5-Bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amin I48

a) 3-Bromo-6-fluoro-2-metoksibenzojeva kiselina I45

[0288] U rastvor diizopropilamina (5.4 g, 53.7 mmol) u THF (150 mL) na -78°C pod N2ukapavanjem je dodat n-BuLi (2.5 M rastvor u heksanima, 23.4 mL, 58.5 mmol) i smeša je mešana na -78°C u trajanju od 1 h. Dobijena smeša je dodata ukapavanjem u rastvor 1-bromo-4-fluoro-2-metoksibenzena (10.0 g, 48.8 mmol) u THF (50 mL) na -78°C i mešanje je nastavljeno u trajanju od 90 min. CO2je barbotiran kroz smešu u trajanju od 20 min uz mešanje na -78°C, zatim je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana u trajanju od 15 min. Reakciona smeša je podešena do pH=1 sa HCl i smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa DCM (500 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 100/1 do 30/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (8.0 g, 66%) kao bezbojno ulje. LCMS-D: Rt2.12 min; m/z 248.9/250.9 [M+H]<+>.

b) 3-Bromo-6-fluoro-2-metoksibenzamid 146

[0289] Smeša 3-bromo-6-fluoro-2-metoksibenzojeve kiseline I45 (8.0 g, 32.1 mmol) i SOCl2(30 mL) zagrevana je na 85°C u trajanju od 3 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je rastvoren u DCM (5 mL) i ukapavanjem je dodata u konc. NH4OH (20 mL) na 0°C. Smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature, mešana 20 min zatim ekstrahovana sa DCM (50 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 1/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (6.8 g, 80%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-E: Rt2.24 min; m/z 247.8/249.8 [M+H]<+>

c) 3-Bromo-6-fluoro-2-metoksibenzonitril I47

[0290] Smeša 3-bromo-6-fluoro-2-metoksibenzamida I46 (6.8 g, 25.6 mmol) i SOCl2(30 mL) zagrevana je na 80°C preko noći, zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen između vode i EtOAc, faze su odvojene i organski sloj je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.5 g, 55%) kao bezbojno ulje, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

d) 5-Bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amin I48

[0291] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (3.4 g, 45.7 mmol) u DMF (150 mL) na 0°C pod N2dodat je t-BuOK (5.1 g, 45.7 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 90 min. Zatim je dodat rastvor 3-bromo-6-fluoro-2-metoksibenzonitril I47 (3.5 g, 15.2 mmol) u DMF (30 mL) i smeša zagrevana je na 70°C preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc (1000 mL) i isprana vodom (x 3), fiziološkim rastvorom, sušena preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.2 g, 86%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.24 min; m/z 243.0/244.9 [M+H]<+>.

xx) 4-(Metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amin I51

[0292]

a) 2-(Bromometil)-6-hlorobenzonitril I49

[0293] Smeša 2-hloro-6-metilbenzonitrila (2.0 g, 13.2 mmol), NBS (2.5 g, 13.8 mmol) i AIBN (660 mg, 4.0 mmol) u CCl4 (60 mL) zagrevana je na 85°C pod N2preko noći. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/ EtOAc = 100/1 do 50/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.7 g, 37%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) 2-Hloro-6-(metoksimetil)benzonitril I50

[0294] Metal natrijum (115 mg, 4.8 mmol) je rastvoren u MeOH (5 mL) i THF (5 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 20 min. Zatim je dodat 2-(bromometil)-6-hlorobenzonitril I49 (560 mg, 2.4 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 5 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 50/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (340 mg, 77%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.75 - 7.70 (m, 3H), 4.82 (s, 2H), 3.35 (s, 3H).

c) 4-(Metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amin I51

[0295] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (422 mg, 5.6 mmol) u DMF (25 mL) na -78°C pod N2dodat je t-BuOK (630 mg, 5.6 mmol) i smeša je mešana na 0°C u trajanju od 1 h. Zatim je dodat 2-Hloro-6-(metoksimetil)benzonitril I50 (340 mg, 1.9 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, zatim zagrevana na 85°C preko noći. Smeša je razblažena vodom (70 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (100 mL × 2). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom (200 mL × 3), sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOA = 5/1 do 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (105 mg, 31%) kao svetlo žuto ulje. LCMS-D: Rt1.57 min; m/z 179.1 [M+H]<+>.

xxi) 4-Etoksibenzo[d]izoksazol-3-amin I53

[0296]

a) 2-Etoksi-6-fluorobenzonitril I52

[0297] Smeša 2-fluoro-6-hidroksibenzonitrila (2.0 g, 14.6 mmol), K2CO3(6.04 g, 43.8 mmol) i bromoetana (2.38 g, 21.9 mmol) u DMF (4 mL) je mešana na sobnoj temperaturi pod N2preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc (300 mL), isprana vodom (100 mL × 5), fiziološkim rastvorom, sušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.6 g, 67%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-E: Rt5.24 min; m/z 166.1 [M+H]<+>.

b) 4-Etoksibenzo[d]izoksazol-3-amin 153

[0298] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (2.18 g, 29 mmol) u DMF (40 mL) na 0°C pod N2dodat je t-BuOK (3.26 g, 29 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Zatim je dodat 2-etoksi-6-fluorobenzonitril I52 (1.6 g, 9.7 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa DCM (80 mL), isprana vodom (60 mL × 4), sušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (240 mg, 15%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-E: Rt5.05 min; m/z 179.0 [M+H]<+>.

xxii) 5-Metoksibenzo[d]izoksazol-3-amin I54

[0299]

[0300] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (1.49 mg, 19.8 mmol) u DMF (35 mL) na 0°C pod N2dodat je t-BuOK (2.23 mg, 19.8 mmol) i smeša zagrevana je na 30°C u trajanju od 1 h. Zatim je dodat rastvor 2-fluoro-5-metoksibenzonitrila (1.0 g, 6.6 mmol) u DMF (5 mL) i smeša zagrevana je na 30°C preko noći. Smeša je razblažena vodom (70 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (100 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom (200 mL × 3) zatim sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (110 mg, 11%) kao žuta čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

xxiii) 5-Etoksibenzo[d]izoksazol-3-amin I57

[0301]

a) 2-Fluoro-5-hidroksibenzonitril I55

[0302] Smeša 2-fluoro-5-metoksibenzonitrila (1.7 g, 1.2 mmol) i piridin·HCl (17 g) zagrevana je na 80°C pod N2u trajanju od 5 h, zatim razblažena sa DCM (40 mL) i isprana sa 2 M vodenim rastvorom HCl (8 mL) i vodom (2 × 40 mL). Organski sloj je ekstrahovan vodenim rastvorom K2CO3(50 mL × 2) i kombinovani vodeni ekstrakti su isprani sa DCM (70 mL × 2), zatim podešeni do pH 3-4 sa 2 M vodenim rastvorom HCl i ekstrahovani sa DCM (80 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (430 mg, 28%) kao prljavo bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) 5-Etoksi-2-fluorobenzonitril 156

[0303] U rastvor 2-fluoro-5-hidroksibenzonitrila I55 (430 mg, 3.1 mmol) u DMF (15 mL) dodat je K2CO3(1.3 g, 9.4 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod N2u trajanju od 30 min. Zatim je dodat bromoetan (512 mg, 4.7 mmol) i mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena vodom (70 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (100 mL × 2). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom (200 mL × 3), sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 30/1 do 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (480 mg, 92%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.44 min; m/z 166.0 [M+H]<+>188.0 [M+Na]<+>.

c) 5-Etoksibenzo[d]izoksazol-3-amin I57

[0304] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (645 mg, 8.7 mmol) u DMF (35 mL) na 0°C pod N2dodat je t-BuOK (978 mg, 8.7 mmol) i smeša zagrevana je na 30°C u trajanju od 1 h. Zatim je dodat rastvor 5-etoksi-2-fluorobenzonitrila I56 (480 mg, 2.9 mmol) u DMF (5 mL) i smeša zagrevana je na 30°C preko noći. Smeša je razblažena vodom (60 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (80 mL × 2). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom (150 mL × 2), sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (400 mg, 77%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.02 min; m/z 179.1 [M+H]<+>.

xxiv) 6-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I59

[0305]

a) 2-Hloro-4-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il) benzonitril I58

[0306] Smeša 3,5-dimetil-1H-pirazola (5 g, 0.052 mol), NaH (60% disperzija u ulju, 2.6 g, 0.065 mol) u DMF (50 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 h. Zatim je dodat rastvor 2-hloro-4-fluorobenzonitrila (6.74 g, 0.043 mol) u DMF (50 mL) i mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi 1 h. Reakcija je ugašena vodom i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (11.0 g, 92%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.58 min; m/z 232.1 [M+H]<+>.

b) 6-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I59

[0307] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (972 mg, 12.9 mmol) u DMF (20 mL) na 0°C pod N2dodat je t-BuOK (1.45 g, 12.9 mmol) i smeša zagrevana je na 30°C u trajanju od 1 h. Zatim je dodat 2-Hloro-4-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il) benzonitril I58 (1 g, 4.3 mmol) i smeša zagrevana je na 60°C u trajanju od 5 h. Smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću preparativne TLC (MeOH/DCM = 1/20) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (150 mg, 15%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.22 min; m/z 229.1 [M+H]<+>.

xxv) 5-Metilbenzo[d]izoksazol-3-amin I60

[0308]

[0309] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (8.33 g, 0.11 mol) u DMF (200 mL) dodat je t-BuOK (12.5 g, 0.11 mol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 čas. Zatim je dodat 2-Fluoro-5-metilbenzonitril (5 g, 0.37 mol) i smeša zagrevana je na 60°C preko noći. Smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (DCM/MeOH = 200/1 do 50/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.0 g, 55%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt1.75 min, m/z 149.0 [M+H]<+>.

xxvi) 6-(Metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amin I62

[0310]

a) 2-Fluoro-4-(metoksimetil)benzonitril I61

[0311] Smeša Mel (2.0 g, 13.2 mmol) i NaH (60% suspenzija u ulju, 790 mg, 19.8 mmol) u THF (50 mL) je mešana na 0°C u trajanju od 10 min, zatim je dodat 2-fluoro-4-(hidroksimetil)benzonitril (2.0 g, 13.2 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Reakcija je ugašena vodom i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografije na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.7 g, 78%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.01 min; m/z 166.0 [M+H]<+>187.9 [M+Na]<+>.

b) 6-(Metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amin I62

[0312] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (1.5 g, 9.1 mmol) u DMF (50 mL) dodat je t-BuOK (3.06 g, 27.2 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Zatim je dodat 2-fluoro-4-(metoksimetil)benzonitril I61 (1.5 g , 9.1 mmol) i smeša zagrevana je na 40°C preko noći. Smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografije na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1 g, 62%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt0.95 min, m/z 179.0 [M+H]<+>.

xxvii) 5-(Trifluorometoksi)benzo[d]izoksazol-3-amin I63

[0313]

[0314] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (2.2 g, 0.029 mol) u DMF (50 mL) dodat je t-BuOK (3.28 g, 0.029 mol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 časa. Zatim je dodat 2-Fluoro-5-(trifluorometoksi)benzonitril (2 g, 9.75 mmol) i smeša zagrevana je na 60°C preko noći. Smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.6 g, 75%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.43 min; m/z 219.0 [M+H]<+>.

xxviii) 5-Metil-6-(oksazol-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I65

[0315]

a) 2-Fluoro-5-metil-4-(oksazol-2-il)benzonitril I64

[0316] U rastvor oksazola (90 mg, 1.31 mmol) u THF (10 mL) na -70°C pod N2dodat je n-BuLi (2.5 M rastvor u heksanu, 1.1 mL, 2.66 mmol) i smeša je mešana 10 min. Dodat je čvrsti ZnCl2(380 mg, 2.79 mmol) i smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature. Dodat je 4-Bromo-2-fluoro-5-metilbenzonitril (200 mg, 0.93 mmol) i smeša zagrevana je na 60°C preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu (Pet. etar/EtOAc 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 mg, 27%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.51 min; m/z 203.0 [M+H]<+>.

b) 5-Metil-6-(oksazol-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I65

[0317] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (189 mg, 2.52 mmol) u DMF (10 mL) na 0°C pod N2dodat je t-BuOK (377 mg, 3.26 mmol) i smeša je mešana na 0°C u trajanju od 1 h. Zatim je dodat 2-Fluoro-5-metil-4-(oksazol-2-il)benzonitril I64 (170 mg, 0.84 mmol) i smeša je zagrevana na 50°C preko noći. Smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću preparativne TLC (DCM/MeOH = 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (90 mg, 50%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.10 min; m/z 216.0 [M+H]<+>.

xxix) 7-Bromobenzo[d]izoksazol-3-amin I66

[0318]

[0319] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (3.75 g, 0.05 mol) u DMF (60 mL) na 0°C dodat je t-BuOK (5.6 g, 0.05 mol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Zatim je ukapavanjem dodat rastvor 3-bromo-2-fluorobenzonitrila (5.0 g, 0.025 mol) u DMF (90 mL) i mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa DCM (300 mL), isprana vodom (250 mL × 4), fiziološkim rastvorom, sušena preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.0 g, 63%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.09 min, m/z 213.0/215.0 [M+H]<+>.

xxx) 7-(Pirimidin-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I68

[0320]

a) 2-Fluoro-3-(pirimidin-2-il)benzonitril I67

[0321] Smeša 2-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzonitrila I23 (1.5 g, 6.1 mmol), 2-bromopirimidina (1.9 g, 12.0 mmol), Pd(dppf)Cl2(1.3 g, 1.8 mmol) i K3PO4(6.5 g, 24.2 mmol) u vodi (60 mL), toluenu (60 mL) i i-PrOH (15 mL) zagrevana je na 85°C pod N2u trajanju od 4 h. Smeša je razblažena sa EtOAc (50 mL) i isprana vodom (80 mL × 3). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran, koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 4/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (450 mg, 38%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-E: Rt4.82 min; m/z 199.9 [M+H]<+>.

b) 7-(Pirimidin-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I68

[0322] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (243 mg, 3.2 mmol) u DMF (15 mL) na 0°C pod N2dodat je t-BuOK (363 mg, 3.2 mmol) i smeša je mešana 1 h. Zatim je ukapavanjem dodat rastvor 2-fluoro-3-(pirimidin-2-il)benzonitrila I67 (400 mg, 1.6 mmol) u DMF (5 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc (80 mL) i isprana vodom (60 mL × 3). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (230 mg, 67%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt0.80 min, m/z 213.1 [M+H]<+>.

xxxi) 6-(1H-Pirazol-1-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I70

[0323]

a) 2-Fluoro-4-(1H-pirazol-1-il)benzonitril I69

[0324] Smeša 4-bromo-2-fluorobenzonitrila (400 mg, 2.0 mmol), 1H-pirazola (177 mg, 2.6 mmol), Cul (381 mg, 2.0 mmol), K3PO4(849 mg, 4.0 mmol) i (1S,2S)-N<1>,N<2>-dimetilcikloheksan-1,2-diamina (28 mg, 0.2 mmol) u DMF (20 mL) zagrevana je na 100°C u mikrotalasnoj 1 h. Smeša je podeljena između EtOAc (200 mL) i vode (100 mL), slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran vodom (x 3), fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/ EtOAc = 100/1 do 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (120 mg, 32%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.20min, m/z 188.1 [M+H]<+>.

b) 6-(1H-Pirazol-1-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I70

[0325] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (215 mg, 2.9 mmol) u DMF (25 mL) na 0°C dodat je t-BuOK (322 mg, 2.9 mmol) i smeša je zagrevana na 30°C u trajanju od 2 h. Zatim je dodat 2-Fluoro-4-(1H-pirazol-1-il)benzonitril I69 (120 mg, 0.64 mmol) i smeša je zagrevana na 30°C preko noći. Smeša je podeljena između EtOAc (100 mL) i vode (50 mL), slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran vodom (x 3), fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (72 mg, 57%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

xxxii) 6-(2H-1,2,3-Triazol-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I72

[0326]

a) 2-Hloro-4-(2H-1,2,3-triazol-2-il)benzonitril I71

[0327] Smeša 2H-1,2,3-triazola (553 mg, 8.0 mmol) i NaH (60% disperzija u ulju, 192 mg, 4.8 mmol) u DMF (20 mL) je mešana na 0°C u trajanju od 30 min, zatim je dodat rastvor 2-hloro-4-fluorobenzonitrila (622 mg, 4.0 mmol) u DMF (10 mL). Smeša je mešana na 0°C u trajanju od 2 h zatim ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana u trajanju od 2 h. Smeša je podeljena između EtOAc (300 mL) i vode (100 mL), slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran vodom (x 3), fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (200 mg, 24%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.31 - 8.28 (m, 3H), 8.19 - 8.14 (m 2H).

b) 6-(2H-1,2,3-Triazol-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I72

[0328] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (221 mg, 2.9 mmol) u DMF (25 mL) na 0°C dodat je t-BuOK (330 mg, 2.9 mmol) i smeša zagrevana je na 30°C u trajanju od 2 h. Zatim je dodat 2-Hloro-4-(2H1,2,3-triazol-2-il)benzonitril I71 (200 mg, 0.98 mmol) i smeša je zagrevana na 30°C preko noći. Smeša je podeljena između EtOAc (100 mL) i vode (50 mL), slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran vodom (x 3), fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (90 mg, 46%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt1.93 min, m/z 202.1 [M+H]<+>.

xxxiii) 6-(Piridin-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I74

[0329]

a) 2-Fluoro-4-(piridin-2-il)benzonitril I73

[0330] Smeša 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzonitrila I37 (494 mg, 2.0 mmol), 2-bromopiridina (948 mg, 6.0 mmol), Pd(dppf)Cl2(293 mg, 0.4 mmol) i K3PO4·3H2O (2.66 g, 10.0 mmol) u H2O (40 mL), toluenu (40 mL) i i-PrOH (10 mL) zagrevana je na 85°C pod N2u trajanju od 4 h. Smeša je podeljena između EtOAc (200 mL) i vode (30 mL), slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 30/1 do 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (190 mg, 48%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.32 min, m/z 199.1 [M+H]<+>.

b) 6-(Piridin-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I74

[0331] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (216 mg, 2.88 mmol) u DMF (50 mL) na 0°C dodat je t-BuOK (323 mg, 2.88 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 h. Zatim je dodat rastvor 2-fluoro-4-(piridin-2-il)benzonitrila I73 (190 mg, 0.96 mmol) u DMF (10 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je podeljena između EtOAc (200 mL) i vode (50 mL), slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran vodom (50 mL × 3), fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 100/0 do 100/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (105 mg, 52%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt0.83 min, m/z 212.1 [M+H]<+>.

xxxiv) 6-Bromobenzo[d]izoksazol-3-amin I75

[0332]

[0333] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (13.7 g, 182 mmol) u DMF (60 mL) na 0°C dodat je t-BuOK (20.5 g, 182 mmol) i smeša je mešana na 0°C u trajanju od 1 h. Zatim je dodat rastvor 4-bromo-2-fluorobenzonitrila (12.2 g, 60.8 mmol) u DMF (30 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je podeljena između EtOAc (500 mL) i vode (200 mL), slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran vodom (x 2), fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 30/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (8.1 g, 63%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.34 min; m/z 213.0 /215.0 [M+H]<+>.

xxxv) 4-Metoksi-6-(piridin-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I77

a) 2-Fluoro-6-metoksi-4-(piridin-2-il)benzonitril I76

[0335] Smeša 4-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila I5 (244 mg, 1.06 mmol), piridin-2-ilboronske kiseline (195 mg, 1.59 mmol), CuCI (105 mg, 1.06 mmol), Pd(OAc)2(24 mg, 0.106 mmol), XPhos (100 mg, 0.212 mmol) i Cs2CO3(1.38 g, 4.24 mmol) u DMF (10.6 mL) je zagrevana pod atmosferom azota u 20 mL zaptivenoj epruveti na 100°C u trajanju od 16 h. Reakcija je ponovljena još tri puta u istoj razmeri i četiri reakcije su u gašene zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl, kombinovane i ekstrahovane sa EtOAc (80 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 10/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (190 mg, 20%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.13 min; m/z 229.0 [M+H]<+>.

b) 4-Metoksi-6-(piridin-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I77

[0336] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (178 mg, 2.37 mmol) u anhidrovanom DMF (20 mL) na 0°C dodat je kalijum terc-butoksid (266 mg, 2.37 mmol) i smeša je mešana na 0°C u trajanju od 1 h. Zatim je dodat 2-Fluoro-6-metoksi-4-(piridin-2-il)benzonitril I76 (180 mg, 0.79 mmol) i smeša zagrevana je na 40°C preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 200/1 do 100/1 do 60/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (70 mg, 37%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt 0.52 min; m/z 242.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.73 - 8.68 (m, 1H), 8.14 - 8.09 (m, 1H), 7.95 - 7.88 (m, 1H), 7.70 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.44 - 7.38 (m, 1H), 6.01 (s, 2H), 4.01 (s, 3H).

xxxvi) 4-Metoksi-7-fenilbenzo[d]izoksazol-3-amin I80

[0337]

a) 3-Bromo-2-fluoro-6-metoksibenzonitril I78

[0338] Rastvor Br2(507 mg, 3.2 mmol) u CCl4(4.0 mL) dodat je u rastvor 2-fluoro-6-metoksibenzonitrila (480 mg, 3.2 mmol) i Fe (8.0 mg, 0.1 mmol) u CCl4(4.0 mL) na -10°C tokom perioda od 30 min i smeša je zatim ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana preko noći. Smeša je podeljena između vode i EtOAc, slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom Na2SO3(x 2), fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (580 mg, 80%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.12 min; m/z229.9 [M+H]<+>.

b) 2-Fluoro-4-metoksi-[1,1'-bifenil]-3-karbonitril I79

[0339] U rastvor 3-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila I78 (600 mg, 2.6 mmol), fenilboronske kiseline (636 mg, 5.2 mmol) i Na2CO3(829 mg, 7.8 mmol) u 1,4-dioksanu (40 mL) i vodi (10 mL) pod N2dodat je Pd(PPh3)4(300 mg, 0.26 mmol) i smeša je zagrevana na 100°C preko noći. Smeša je podeljena između vode i EtOAc, slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 10/1 do 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (538 mg, 90%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.43 min; m/z 228.0 [M+H]<+>.

c) 4-Metoksi-7-fenilbenzo(d]izoksazol-3-amin I80

[0340] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (533 mg, 7.11 mmol) u anhidrovanom DMF (30 mL) na sobnoj temperaturi dodat je kalijum terc-butoksid (797 mg, 7.11 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Zatim je dodat 2-Fluoro-4-metoksi-[1,1'-bifenil]-3-karbonitril I79 (538 mg, 2.37 mmol) i smeša zagrevana je na 60°C preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 10/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (413 mg, 72%) kao narandžasta čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt1.33 min; m/z 209.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.84 - 7.79 (m, 2H), 7.61 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 6.67 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H).

xxxvii) 4-Metoksi-7-(1H-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I82

[0341]

a) 2-Fluoro-6-metoksi-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzonitril I81

[0342] U rastvor 3-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila I78 (720 mg, 3.31 mmol), 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (1.30 g, 6.26 mmol) i Na2CO3(995 mg, 9.39 mmol) u 1,4-dioksanu (50 mL) i vodi (10 mL) pod N2dodat je Pd(PPh3)4(358 mg, 0.30 mmol) i smeša zagrevana je na 100°C preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 100/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (485 mg, 63%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt1.26 min; m/z 232.0 [M+H]<+>.

b) 4-Metoksi-7-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo(d]izoksazol-3-amin I82

[0343] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (474 mg, 6.24 mmol) u anhidrovanom DMF (20 mL) na sobnoj temperaturi dodat je kalijum terc-butoksid (700 mg, 6.24 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Zatim je dodat 2-Fluoro-6-metoksi-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzonitril I81 (485 mg, 2.04 mmol) i smeša zagrevana je na 60°C preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 50/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (225 mg, 45%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt0.46 min; m/z 245.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.19 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.69 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.00 (s, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.90 (s, 3H).

xxxviii) 5-Hloro-4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amin I83

[0344]

[0345] U rastvor 4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amina I9 (300 mg, 1.4 mmol) u DMF (10 mL) dodat je NCS (192 mg, 1.4 mmol) i smeša zagrevana je na 50°C u trajanju od 2 h. Smeša je razblažena sa EtOAc (100 mL) i isprana sa H2O (40 mL × 3). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 7/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (190 mg, 54%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt1.21 min; m/z 242.9 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.32 (s, 1H), 6.19 (s, 2H), 4.55 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.41 (s, 3H).

xxxix) 4-Metoksi-6-(oksazol-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I86

a) 2-(Tributilstanil)oksazol I84

[0347] U rastvor oksazola (500 mg, 7.25 mmol) u THF (15 mL) na -78°C pod N2ukapavanjem je dodat n-BuLi (2.5 M rastvor u heksanima, 2.9 mL, 7.32 mmol) i smeša je mešana na -78°C u trajanju od 30 min. Zatim je dodat tributilhlorostanan (1.96 mL, 7.25 mmol) i smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana 1 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je preuzet u heksanima (50 mL). Dobijeni talog je uklonjen filtracijom i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.0 g, 77%) kao bezboljno ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.20 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 1.59 - 1.49 (m, 6H), 1.31 - 1.26 (m, 6H), 1.16 - 1.10 (m, 6H), 0.83 (t, J = 7.3 Hz, 9H).

b) 2-Fluoro-6-metoksi-4-(oksazol-2-il)benzonitril I85

[0348] U rastvor 4-bromo-2-fluoro-6-metoksibenzonitrila I5 (305 mg, 1.33 mmol) u 1,4-dioksanu (25 mL) dodat je 2-(tributilstanil)oksazol I84 (1.43 g, 3.98 mmol) i Pd(PPh3)4(154 mg, 0.133 mmol) i smeša je zagrevana na 90°C preko noći. Smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc= 8/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (370 mg, 96%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt1.86 min; m/z 218.9 [M+H]<+>.

c) 4-Metoksi-6-(oksazol-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I86

[0349] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (382 mg, 5.09 mmol) u DMF (25 mL) na 0°C dodat je kalijum terc-butoksid (570 mg, 5.09 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Zatim je dodat 2-Fluoro-6-metoksi-4-(oksazol-2-il)benzonitril I85 (370 mg, 1.7 mmol) i smeša zagrevana je na 60°C u trajanju od 2 h. Smeša je razblažena sa EtOAc i isprana vodom, fiziološkim rastvorom, sušena preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (100 mg, 26%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt 0.57 min; m/z 232.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.29 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.47 - 7.42 (m, 1H), 7.27 (s, 1H), 6.09 (s, 2H), 4.00 (s, 3H).

xl) 6-(Oksazol-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I90

[0350]

a) 4-Cijano-3-fluorobenzoil hlorid 187

[0351] U rastvor 4-cijano-3-fluorobenzojeve kiseline (1.0 g, 6.1 mmol) u DCM (20 mL) na 0°C ukapavanjem je dodat DMF (0.1 mL) i oksalil hlorid (1.86 g, 12.1 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.2 g) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.

b) 4-Cijano-N-(2,2-dimetoksietil)-3-fluorobenzamid I88

[0352] U rastvor 4-cijano-3-fluorobenzoil hlorida I87 (1.1 g, 6.06 mmol) i Et3N (1.84 g, 18 mmol) u DCM (20 mL) na 0°C dodat je 2,2-dimetoksietanamin (955 mg, 9.1 mmol) i smeša je mešana 2 h. Smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je ispran vodom i fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 1/1, v/v) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.2 g, 78%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt1.55 min, m/z 274.9 [M+Na]<+>.

c) 3-Amino-N-(2,2-dimetoksietil)benzo[d]izoksazol-6-karboksamid I89

[0353] U rastvor acetohidroksaminske kiseline (448 mg, 5.95 mmol) u DMF (30 mL) na 0°C dodat je t BuOK (889 mg, 7.92 mmol) u porcijama i smeša je mešana 1 h. Zatim je dodat 4-Cijano-N-(2,2-dimetoksietil)-3-fluorobenzamid I88 (500 mg, 1.98 mmol) i smeša je zagrevana na 40°C preko noći. Smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran vodom i fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 1/1, v/v) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (380 mg, 72%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt0.59 min, m/z 287.9 [M+Na]<+>.

d) 6-(Oksazol-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I90

[0354] Smeša 3-amino-N-(2,2-dimetoksietil)benzo[d]izoksazol-6-karboksamida I89 (240 mg, 0.9 mmol) i P2O5(193 mg, 1.36 mmol) u metansulfonskoj kiselini (10 mL) zagrevana je na 150°C pod mikrotalasnim zračenjem u trajanju od 30 min. Smeša je sipana u vodu, napravljna baznom sa vodenim rastvorom KOH i ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću prep. TLC (DCM/MeOH = 10/1, v/v) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 mg, 28%) kao čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt1.57 min, m/z201.9 [M+H]<+>.

xli) 5-Etil-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-sulfonil hlorid I94

a) 5-Etil-2-metoksipiridin I91

[0356] U rastvor 5-bromo-2-metoksipiridina (10.2 g, 54.25 mmol) u THF (200 mL) na -78°C pod N2ukapavanjem je dodat n-BuLi (2.5 M rastvor u heksanu, 24.0 mL, 60.0 mmol) i smeša je mešana na -78°C u trajanju od 1.5 h. Zatim je ukapavanjem dodat jodoetan (12.7 g, 81.4 mmol) i smeša je mešana na -78°C u trajanju od 20 min, zatim zagrevana do sobne temperature i mešana 30 min. Reakcija je ugašena vodom (5 mL) i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren in DCM, ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.8 g, 38%) kao bezbojno ulje. LCMS-D: Rt1.80 min; m/z 138.1 [M+H]<+>.

b) 5-Etilpiridin-2(1H)-on 192

[0357] Rastvor 5-etil-2-metoksipiridina i91 (1.6 g, 11.66 mmol) u konc. HCl (30 mL) zagrevan je na 100°C preko noći. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (800 mg, 56%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

c) 5-Etil-1-metilpiridin-2(1H)-on I93

[0358] Smeša 5-etilpiridin-2(1H)-ona I92 (800 mg, 6.5 mmol), K2CO3(1.8 g, 13 mmol) i jodometana (1.85 g, 13 mmol) u MeOH (20 mL) zagrevana je na 50°C pod N2preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je rastvoren u DCM (100 mL), ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 40/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (500 mg, 56%) kao bezbojno ulje. LCMS-D: Rt0.68 min; m/z 138.1 [M+H]<+>.

d) 5-Etil-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-sulfonil hlorid 194

[0359] Smeša hlorosulfonske kiseline (6 mL) i 5-etil-1-metilpiridin-2(1H)-ona I93 (0.6 g, 4.37 mmol) zagrevana je na 150°C pod N2u trajanju od 3 h, zatim ostavljena da se hladi do sobne temperature i sišpana u led (100 g). Smeša je ekstrahovana sa DCM (50 mL × 3) i kombinovani organski ekstrakti su isprani dva puta ledeno hladnom vodom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 100/1 do 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (200 mg, 12%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.87 - 7.84 (m, 1H), 7.71 (s, 1H), 3.47 (s, 3H), 2.39 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.09 (t, J = 7.5 Hz, 3H). LCMS-D: Rt1.58 min; m/z 236.0 [M+H]<+>.

xlii) 5-Bromo-2,3-dihidrobenzofuran-7-sulfonil hlorid I95

[0360]

[0361] 5-Bromo-2,3-dihidrobenzofuran (2.0 g, 10 mmol) dodat je lagano u hlorosulfonsku kiselinu (6 mL) na -5°C i smeša je mešana na -5°C ui trajanju od 30 min. Smeša je sipana u ledeno hladnu vodu (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (180 mL × 2). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom (250 mL × 3), sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 15/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.45 g, 48 %) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl8) δ 7.80 - 7.76 (m, 1H), 7.63 - 7.58 (m, 1H), 4.91 (m, 2H), 3.35 (m, 2H). LCMS-D: Rt2.74 min; m/z 318.8/320.8 [M+Na]<+>.

xliii) 4,6-Dimetoksi-2,3-dihidro-1H-inden-5-sulfonil hlorid I98

[0362]

a) 5, 7-Dimetoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-on I96

[0363] Smeša 3-(3,5-dimetoksifenil)propanske kiseline (5 g, 23.8 mmol) i metansulfonske kiseline (24 mL) zagrevana je na 90°C u trajanju od 10 min zatim je ostavljena da se hladi do sobne temperature i sipana u vodu. Smeša je podešena do pH 9 sa 10 M vodenim rastvorom KOH i ekstrahovana sa EtOAc (x 5). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.5 g, 76%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt1.76 min; m/z 193.1 [M+H]<+>.

b) 4,6-Dimetoksi-2,3-dihidro-1H-inden I97

[0364] Smeša 5,7-dimetoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-ona I96 (3.0 g, 15.6 mmol) i trietilsilana (7.3 g, 62.4 mmol) u TFA (20 mL) je mešana na sobnoj temperaturi pod N2u trajanju od 11 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.0 g, 72%) kao bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl8) δ 6.42 (s, 1H), 6.29 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 2.89 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.80 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.13 - 2.02 (m, 2H).

c) 4,6-Dimetoksi-2,3-dihidro-1H-inden-5-sulfonil hlorid I98

[0365] U rastvor 4,6-dimetoksi-2,3-dihidro-1H-indena I97 (1 g, 5.6 mmol) i TMEDA (0.72 g, 6.17 mmol) u n-heksanu (20 mL) na -70°C ukapavanjem je dodat n-BuLi (2.5 M u heksanu, 2.5 mL, 6.17 mmol) i smeša je ostavljena da se zagreva do 0°C i mešana u trajanju od 2 h. Smeša je zatim ponovo hlađena do -65°C, barbotirana sa SO2gasom u trajanju od 20 min, zatim ostavljena da se zagreva lagano do 10°C. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom i ispran suvim dietil etrom. Čvrsta supstanca je suspendovana u n-heksanu (20 mL), hlađena do 0°C i ukapavanjem je dodat SO2Cl2(0.83 g, 6.2 mmol). Smeša je mešana na 0°C pod N2u trajanju od 1 h, zatim filtrirana. Filter kolač je rastvoren in dietil etru i ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (550 mg, 35%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.72 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 2.96 (q, J = 7.6 Hz, 4H), 2.18 - 2.08 (m, 2H).

xliv) 2-Metoksi-5-fenoksibenzensulfonil hlorid I100

[0366]

a) 2-Metoksi-5-fenoksibenzensulfonska kiselina I99

[0367] U rastvor 1-metoksi-4-fenoksibenzena (2 g, 10 mmol) u DCM (15 mL) na 0°C ukapavanjem je dodat rastvor hlorosulfonske kiseline (0.35 mL) u DCM (10 mL) i smeša je mešana na 0°C u trajanju od 15 min. Smeša je sipana lagano u ledeno hladnu vodu (100 mL) i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ispran sa DCM (100 mL × 2) i sušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (560 mg, 40%) kao prljavo bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt0.62 min; m/z 281.0 [M+H]<+>.

b) 2-Metoksi-5-fenoksibenzensulfonil hlorid I100

[0368] Smeša 2-metoksi-5-fenoksibenzensulfonske kiseline I99 (250 mg, 0.9 mmol) i PCl5(284 mg, 1.3 mmol) u POCl3(3 mL) zagrevana je na 90°C pod N2u trajanju od 1 h. Smeša je zatim lagano dodata u ledeno hladnu vodu (20 mL) i ekstrahovana sa DCM (15 mL × 2). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (51 mg, 18%) kao žuto ulje. LCMS-D: Rt2.72 min; m/z 295.0 [M-Cl+OCH3]<+>, 317.0 [M-Cl+OCH3+Na]<+>.

xlv) 2,6-Dimetoksi-3-(trifluorometil)benzensulfonil hlorid I102

[0369]

a) 2,4-Dimetoksi-1-(trifluorometil)benzen I101

[0370] U smešu (2,4-dimetoksifenil)boronske kiseline (3.0 g, 16.5 mmol), CF3SO2Na (18.0 g, 115.4 mmol), Cu(OAc)2(748 mg, 4.1 mmol), imidazola (281 mg, 4.1 mmol), 2,4,6-kolidina (3.0 g, 33.0 mmol) i NH4Cl (11.3 g, 206.0 mmol) u vodi (16.5 mL) i DCM (100 mL) na 0°C ukapavanjem je dodat t-BuOOH (3.6 mL, 4.1 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 h. Slojevi su zatim odvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM. Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (900 mg, 27%) kao ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.42 - 7.36 (m, 1H), 6.45 - 6.37 (m, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.76 (s, 3H).

b) 2,6-Dimetoksi-3-(trifluorometil)benzensulfonil hlorid I102

[0371] U rastvor 2,4-dimetoksi-1-(trifluorometil)benzena I101 (1.5 g, 7.3 mmol) i TMEDA (0.93 g, 8.0 mmol) u n-heksanu (30 mL) na -78°C pod N2ukapavanjem je dodat n-BuLi (2.5 M u heksanu, 3.2 mL, 8.0 mmol) i smeša je mešana na 0°C u trajanju od 1 h. SO2gas je zatim barbotiran kroz smešu na -78°C u trajanju od 20 minuta i zatim je ostavljena da se zagreva do 0°C i mešana u trajanju od 1 h. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom i ispran heksanom. Filter kolač je suspendovan u n-heksanu (30 mL), hlađen do 0°C i ukapavanjem je dodat SO2Cl2(1.1 g, 8.0 mmol). Smeša je mešana na 0°C u trajanju od 1 h i čvrste supstance su sakupljene filtracijom i isprane hladnim n-heksanom. Filter kolač je rastvoren u etru i ispran vodom. Vodena faza je ekstrahovana etrom i kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.5 g, 68%) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl8) δ 7.90 - 7.84 (m, 1H), 6.98 - 6.92 (m, 1H), 4.09 (s, 3H), 4.04 (s, 3H).

xlvi) 3-Etil-2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorid I106

[0372]

a) 2,4-Dimetoksi-1-vinilbenzen I103

[0373] Suspenzija 1-bromo-2,4-dimetoksibenzena (4.0 g, 18.4 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolana (3.4 g, 22.1 mmol), Pd(dppf)Cl2·DCM (753 mg, 0.92 mmol) i K2CO3(7.6 g, 55.2 mmol) u 1,4-dioksanu (40 mL) i vodi (10 mL) zagrevana je na 90°C pod N2preko noći. Smeša je filtrirana kroz čep od celita i isprana sa EtOAc. Filtrat je razblažen vodom i ekstrahovan sa EtOAc (60 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.6 g, 86%) kao žuto ulje. LCMS-D: Rt2.28 min; m/z 165.0 [M+H]<+>.

b) Etil-2,4-dimetoksibenzen I104

[0374] U rastvor 2,4-dimetoksi-1-vinilbenzena I103 (2.6 g, 15.8 mmol) u EtOAc (50 mL) dodat je 10% Pd/C (300 mg) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod atmosferom H2preko noći. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz celit i ispran sa EtOAc. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.0 g, 83%) kao žuto ulje. LCMS-D: Rt2.39 min; m/z 167.1 [M+H]<+>.

c) 3-Etil-2,6-dimetoksibenzensulfonska kiselina I105

[0375] Pripremljen od etil-2,4-dimetoksibenzena I104 prema postupku opisanom za 2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorid I111. Nađeno je da je dobijeni proizvod većinom 3-etil-2,6-dimetoksibenzensulfonska kiselina. LCMS-D: Rt2.36 min; m/z 247.0 [M+H]<+>.

d) 3-Etil-2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorid I106

[0376] Smeša 3-etil-2,6-dimetoksibenzensulfonske kiseline I105 (300 mg, 1.22 mmol) i tionil hlorida (6 mL) zagrevana je na 95°C u trajanju od 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (322 mg, 100%) kao braon ulje, koje je korišćeno direktno u sledećem koraku.

xlvii) 7-Metoksihinolin-8-sulfonil hlorid I107

[0377]

[0378] Hlorosulfonska kiselina (1.8 g, 15.7 mmol) dodata je ukapavanjem u 7-metoksihinolin (500 mg, 3.14 mmol) na 0°C i smeša je zagrevana na 100°C u trajanju od 1 h. Smeša je ostavljena da se hladi do sobne temperature, sipana u led i zatim neutralizovana sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCOs. Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL × 3) i kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (280 mg, 34%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt0.27 min; m/z 239.9 [M-Cl+H2O]+

xlviii) 6-Metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-5-sulfonil hlorid 1108

[0380] U rastvor 5-metoksi-2,3-dihidro-1H-indena (3.1 g, 20.9 mmol) u DCM (40 mL) na -5°C pod N2ukapavanjem je dodata hlorosulfonska kiselina (6.5 g, 62.8 mmol) i smeša je mešana na -5°C u trajanju od 40 min. Reakcija je ugašena ledenom vodom (20 mL) i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL × 2). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom (50 mL × 3), sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.1 g, 60%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.<1>H NMR (400 MHz, CDCl8) δ 7.77 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 4.02 (s, 3H), 2.99 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.91 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.19 - 2.10 (m, 2H).

xlix) 3-Metoksi-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-sulfonil hlorid I109

[0381]

[0382] Pripremljen od 6-metoksi-1,2,3,4-tetrahidronaftalena i hlorosulfonske kiseline prema postupku opisanom za 6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-5-sulfonil hlorid I108 i korišćen direktno u sledećem koraku bez prečišćavanja.

I) 4-Bromo-2-metoksibenzensulfonil hlorid I110

[0383]

[0384] 1-Bromo-3-metoksibenzen (15.0 g, 80 mmol) dodat je lagano u hlorosulfonsku kiselinu (16 mL) na -5°C i smeša je mešana na -5°C u trajanju od 5 min. Smeša je sipana u ledeno hladnu vodu (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (80 mL × 2). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom (150 mL × 3), sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 50/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.6 g, 17%) kao žuta čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

li) 2,6-Dimetoksibenzensulfonil hlorid I111

[0385]

[0386] U rastvor 1,3-dimetoksibenzena (5.0 g, 36 mmol) i TMEDA (4.6 g, 39.8 mmol) u n-heksanu (100 mL) na 0°C pod N2ukapavanjem je dodat n-BuLi (2.5 M rastvor u heksanima, 16.0 mL, 39.8 mmol) uz održavanje interne reakcione temperature ispod 5°C. Smeša je mešana na 0°C u trajanju od 20 min zatim hlađena do -78°C i barbotirana sa SO2gasom u trajanju od 20 min. Smeša je zatim ostavljena da se lagano zagreva do 10°C i dobijeni talog je sakupljen filtracijom i ispran suvim dietil etrom. Čvrsta supstanca je suspendovana u n-heksanu (100 mL), hlađena do 0°C i ukapavanjem je dodat rastvor SO2Cl2(4.9 g, 36 mmol) u n-heksanu (20 mL) uz održavanje interne temperature ispod 3°C. Smeša je zatim mešana na 0°C u trajanju od 1 h i čvrste supstance su sakupljene filtracijom i isprane hladnim n-heksanom. Čvrste supstance su zatim podeljene između dietil etra i vode, slojevi su odvojeni i vodeni sloj je dalje ekstrahovan dietil etrom. Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.0 g, 47%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.97 (s, 6H).

lii) 5-Etil-2-metoksibenzensulfonil hlorid I112

[0387]

[0388] 1-Etil-4-metoksibenzen (5.0 g, 37 mmol) dodat je ukapavanjem u hlorosulfonsku kiselinu (20 mL) na 0°C i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h zatim sipana na led i ekstrahovana sa EtOAc (50 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 30/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.6 g, 53%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.70 min; m/z 256.9 [M+Na]<+>.

liii) 2,4-Dimetoksi-[1,1'-bifenil]-3-sulfonil hlorid I114

[0389]

a) 2,4-Dimetoksi-1, 1'-bifenil I113

[0390] Suspenzija 1-bromo-2,4-dimetoksibenzena (5.0 g, 23.0 mmol), fenilboronske kiseline (3.4 g, 27.6 mmol), Pd(PPh3)4(1.3 g, 1.15 mmol) i kalijum karbonata (7.3 g, 69.0 mmol) u 1,4-dioksanu (30 mL) i vodi (6 mL) zagrevana je na 90°C pod N2u trajanju od 16 h. Smeša je filtriran kroz čep od celita i isprana sa EtOAc. Filtrat je razblažen vodom i ekstrahovan sa EtOAc (30 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.8 g, 57%) kao žuto ulje. LCMS-D: Rt2.46 min; m/z 215.0 [M+H]<+>.

b) 2,4-Dimetoksi-[1,1'-bifenil]-3-sulfonil hlorid I114

[0391] U rastvor 2,4-dimetoksi-1,1'-bifenila I113 (1.0 g, 4.70 mmol) i TMEDA (601 mg, 5.20 mmol) u n-heksanu (40 mL) na 0°C pod N2ukapavanjem je dodat n-BuLi (2.5 M rastvor u heksanima, 2.1 mL, 5.20 mmol) uz održavanje interne reakcione temperature ispod 5°C. Smeša je mešana na 0°C u trajanju od 20 min zatim hlađena do -70°C i barbotirana sa SO2gasom u trajanju od 20 min. Smeša je zatim ostavljena da se lagano zagreva do 10°C i dobijeni talog je sakupljen filtracijom i ispran suvim dietil etrom. Čvrsta supstanca je suspendovana u n-heksanu (40 mL), hlađena do 0°C i rastvor SO2Cl2(634 mg, 4.7 mmol) u n-heksanu (5 mL) dodat je ukapavanjem uz održavanje interne temperature ispod 3°C. Smeša je zatim mešana na 0°C u trajanju od 1 h i čvrste supstance su sakupljene filtracijom i isprane hladnim n-heksanom. Čvrste supstance su zatim podeljene između dietil etra i vode, slojevi su odvojeni i vodeni sloj je dalje ekstrahovan dietil etrom. Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (590 mg, 40%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.48 - 7.35 (m, 4H), 7.34 - 7.21 (m, 2H), 6.87 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.29 (s, 3H).

liv) 3,5-Dimetoksi-[1,1'-bifenil]-4-sulfonil hlorid I116

[0392]

a) 3,5-Dimetoksi-1, 1'-bifenil I115

[0393] Suspenzija 1-bromo-3,5-dimetoksibenzena (5.0 g, 23.0 mmol), fenilboronske kiseline (2.8 g, 23.0 mmol), Pd(dppf)Cl2(0.57 g, 0.69 mmol) i kalijum karbonata (4.8 g, 34.6 mmol) u 1,4-dioksanu (80 mL) i vodi (20 mL) zagrevana je na 90°C pod N2u trajanju od 4 h. Smeša je razblažena vodom, ekstrahovana sa EtOAc i kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 500/1 do 200/1 do 100/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5.2 g, 100 %) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.47 min; m/z 215.0 [M+H]<+>.

b) 3,5-Dimetoksi-[1, 1'-bifenil]-4-sulfonil hlorid 1116

[0394] Pripremljen od 3,5-dimetoksi-1,1'-bifenila I115 prema postupku opisanom za 2,4-dimetoksi-[1,1'-bifenil]-3-sulfonil hlorid I114.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.62 - 7.55 (m, 2H), 7.54 - 7.44 (m, 3H), 6.81 (s, 2H), 4.04 (s, 6H).

lv) 4-Metoksi-6-((2,2,2-trifluoroetoksi)metil)benzo[d]izoksazol-3-amin I118

[0395]

a) 2-Fluoro-6-metoksi-4-((2,2,2-trifluoroetoksi)metil)benzonitril I117

[0396] U rastvor 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitrila I7 (500 mg, 2.76 mmol) u suvom THF (50 mL) na 0°C pod N2dodat je NaH (60% tež./tež. disperzija u ulju, 331 mg, 8.28 mmol), zatim 2,2,2-trifluoroetil trifluorometansulfonat (1.9 g, 8.28 mmol) i smeša je mešana na 0°C u trajanju od 1 h, zatim ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana preko noći. Smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Reakcija je ponovljena dva puta upotrebom 2-fluoro-4-(hidroksimetil)-6-metoksibenzonitrila I7 (100 mg, 0.55 mmol) i tri serije su spojene i prečišćene hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 5/1 do 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (577 mg, 57%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.43 min; m/z 263.9 [M+H]<+>.

b) 4-Metoksi-6-((2,2,2-trifluoroetoksi)metil)benzo[d]izoksazol-3-amin I118

[0397] Suspenzija acetohidroksaminske kiseline (86 mg, 1.14 mmol) i t-BuOK (128 mg, 1.14 mmol) u anhidrovanom DMF (10 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Zatim je dodat 2-Fluoro-6-metoksi-4-((2,2,2-trifluoroetoksi)metil)benzonitril I117 (100 mg, 0.38 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Reakcija je odgovarajuće uvećana upotrebom 2-fluoro-6-metoksi-4-((2,2,2-trifluoroetoksi)metil)benzonitrila I117 (400 mg, 1.52 mmol) i dve serije su spojene i prečiščene hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 20/1 do 5/1) da bi se dobio proizvod iz naslova (350 mg, 67%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.08 min; m/z 277.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.96 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 5.94 (s, 2H), 4.74 (s, 2H), 4.13 (q, J = 9.4 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H).

Ivi) 6-(Difluorometoksi)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amin I121

[0398]

a) 4-(Difluorometoksi)-2,6-difluorobenzonitril I119

[0399] U suspenziju KOH (22.0 g, 392 mmol) u acetonitrilu (30 mL) i vodi (30 mL) na -20°C dodat je 2,6-difluoro-4-hidroksibenzonitril (3.1 g, 20.0 mmol) u porcijama, zatim dietil (bromodifluorometil)fosfonat (10.0 g, 37.4 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (50 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.0 g, 97%) kao bezbojno ulje. LCMS-C: Rt2.11 min; m/z 205.9 [M+H]<+>.

b) 4-(Difluorometoksi)-2-fluoro-6-metoksibenzonitril I120

[0400] U rastvor 4-(difluorometoksi)-2,6-difluorobenzonitrila I119 (2.52 g, 12.3 mmol) u suvom THF (30 mL) dodat je NaOMe (1.32 g, 24.57 mmol) u porcijama i smeša je zagrevana na 40°C preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 10/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (663 mg, 25%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.11 min; m/z 217.9 [M+H]<+>.

c) 6-(Difluorometoksi)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amin I121

[0401] Suspenzija acetohidroksaminske kiseline (680 mg, 9.15 mmol) i t-BuOK (1.03 g, 9.15 mmol) u anhidrovanom DMF (50 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Zatim je dodat 5-(Difluorometoksi)-1-fluoro-2-izocijano-3-metoksibenzen I120 (663 mg, 3.05 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc (30 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušena preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 10/1 do 8/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (186 mg, 26%) kao svetlo narandžasta čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt1.14 min; m/z 231.0 [M+H]<+>.

Iviii) 5-Metil-6-(piridin-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin 1124

[0402]

a)2-Fluoro-5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzonitril 1122

[0403] Smeša 4-bromo-2-fluoro-5-metilbenzonitrila (500 mg, 2.34 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolana) (1.78 g, 2.34 mmol), kalijum acetata (918 mg, 9.36 mmol) i Pd(dppf)Cl2(188 mg, 0.23 mmol) u 1,4-dioksanu (20 mL) zagrevana je na refluksu pod N2u trajanju od 3 h. Smeša je razblažena vodom, ekstrahovana sa EtOAc (300 mL) i organski sloj je ispran vodom (50 mL × 3), sušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.56 g, 88%), koji je korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-C: Rt2.75 min; m/z 262.0 [M+H]<+>.

b) 2-Fluoro-5-metil-4-(piridin-2-il)benzonitril I123

[0404] U rastvor 2-fluoro-5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzonitrila I122 (1.32 g, 5.1 mmol) i 2-bromopiridina (1.69 g, 7.65 mmol) u 1,4-dioksanu (50 mL) i vodi (10 mL) pod N2dodat je Pd(PPh3)4(589 mg, 0.5 mmol) i Na2CO3(2.16 g, 20.4 mmol) i smeša zagrevana je na 100°C u trajanju od 3 h. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 8/1 do 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (440 mg, 88%) kao crvena čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt1.09 min; m/z 213.0 [M+H]<+>.

c) 5-Metil-6-(piridin-2-il)benzo[d]izoksazol-3-amin I124

[0405] Suspenzija acetohidroksaminske kiseline (255 mg, 3.39 mmol) i t BuOK (381 mg, 3.39 mmol) u anhidrovanom DMF (30 mL) je mešana na 0°C u trajanju od 1 h. Zatim je dodat 2-Fluoro-5-metil-4-(piridin-2-il)benzonitril I123 (240 mg, 1.13 mmol) i smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (50 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 8/1 do 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (180 mg, 73%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt0.50 min; m/z 226.0 [M+H]<+>.

lix) 7-Bromo-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-amin I129

[0406]

a) 3-Bromo-2-fluoro-5-metilbenzojeva kiselina I125

[0407] U rastvor 2-bromo-1-fluoro-4-metilbenzena (10.0 g, 53 mmol) i diizopropilamina (5.9 g, 58 mmol) u anhidrovanom THF (200 mL) na -78°C pod N2ukapavanjem je dodat n-BuLi (2.5 M rastvor u heksanima, 25.6 mL, 64.0 mmol) i smeša je mešana na -78°C u trajanju od 1 h. Dodat je višak čvrstog CO2(suvi led) i mešanje je nastavljeno na -78°C u trajanju od 3 h. Smeša je razblažena vodom (500 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (500 mL). Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (12.3 g, 100%) kao braon čvrsta supstanca, koja je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-C: Rt2.03 min; m/z 232.8 [M+H]<+>.

b) 3-Bromo-2-fluoro-5-metilbenzoil hlorid I126

[0408] U rastvor 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzojeve kiseline I125 (12.3 g, 53 mmol) i DMF (4 kapi) u DCM (100 mL) na sobnoj temperaturi pod N2ukapavanjem je dodat oksalil hlorid (13.0 g, 106 mmol) i smeša je mešana 2 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (14.0 g, 100%) kao braon čvrsta supstanca, koja je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.

c) 3-Bromo-2-fluoro-5-metilbenzamid I127

[0409] Rastvor 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzoil hlorid I126 (14.0 g, 53 mmol) u DCM (100 mL) dodat je ukapavanjem u 30% vodeni rastvor amonijum hidroksida (100 mL) i smeša je mešana 2 h. Smeša je razblažena sa EtOAc (200 mL), isprana vodom (200 mL × 3), fiziološkim rastvorom i organski sloj je sušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (12.0 g, 97%) kao braon čvrsta supstanca, koja je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-C: Rt1.01 min; m/z 231.9 [M+H]<+>.

d) 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzonitril I128

[0410] Rastvor 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzamida I127 (10.0 g, 43.0 mmol) i tionil hlorida (15.4 g, 129 mmol) u DMF (100 mL) zagrevana je na 100°C u trajanju od 3 h. Smeša je razblažena sa EtOAc (200 mL) i isprana vodom (400 mL × 5), fiziološkim rastvorom i organski sloj je sušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5.0 g, 54%) kao braon čvrsta supstanca, koja je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-C: Rt2.50 min; m/z 213.9 [M+H]<+>.

e) 7-Bromo-5-metilbenzo(d]izoksazol-3-amin I129

[0411] Suspenzija acetohidroksaminske kiseline (5.27 g, 70.2 mmol) i t BuOK (7.88 g, 70.2 mmol) u anhidrovanom DMF (200 mL) je mešana na 0°C u trajanju od 1 h. Zatim je dodat 3-Bromo-2fluoro-5-metilbenzonitril I128 (5.0 g, 23.4 mmol) i smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc (300 mL), isprana vodom (600 mL × 4), fiziološkim rastvorom i organski sloj je sušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.8 g, 52%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt0.50 min; m/z 226.9 [M+H]<+>.

Sinteza Primera i Referentnih primera

Primeri i Referentni primeri 1-45 (Tabela A):

[0412]

Postupak AA

[0413] LiHMDS (1 M u THF, 445 µL, 0.445 mmol) dodat je u rastvor 4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-amina (50 mg, 0.297 mmol) u THF (3 mL) i mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 10 minuta. Dodat je sulfonil hlorid (0.445 mmol) i reakcija je mešana 16 časova na sobnoj temperaturi. Isparljive materije su redukovane do približno 1 mL pre dodavanja DCM (3 mL) i vode (3 mL) i smeša je mešana 10 minuta. Smeša je propuštena kroz fazni separator, organska frakcija je zatim sipana na 1g Si-amin kertridž (Biotage) i kertridž je ispran sa MeOH (6 mL), proizvod je zatim eluiran rastvorom HCl (2 M, 1:1 metanol: 1,4-dioksan 6 mL). Ispiranja od HCl su zatim isparavana in vacuo da bi se proizveo željeni proizvod.

Postupak AB

[0414] LiHMDS (1 M u THF, 445 µL, 0.445 mmol) dodat je u rastvor 4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-amina (50 mg, 0.297 mmol) u THF (3 mL) i mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 10 minutes. Dodat je sulfonil hlorid (0.445 mmol) i reakcija je mešana 16 časova na sobnoj temperaturi. Isparljive materije su redukovane do približno 1 mL pre dodavanja DCM (3 mL) i vode (3 mL) i smeša je mešana 10 minuta. Smeša je propuštena kroz fazni separator, organska frakcija je zatim sipana na 1g Si-amin kertridža (Biotage) i kertridž je ispran sa MeOH (6 mL), proizvod je zatim eluiran rastvorom HCl (2 M, 1:1 metanol:1,4-dioksan 6 mL). Ispiranja od HCl su zatim isparavana in vacuo da bi se proizveo sirovi proizvod koji je sipan na silika gel i prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (Biotage Isolera, SiO2kertridž, 0-100% EtOAc u naftni benzinu 40-60°C) da bi se proizveo željeni proizvod.

Postupak AC

[0415] LiHMDS (1 M u THF, 445 µL, 0.445 mmol) dodat je u rastvor 4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-amina (50 mg, 0.297 mmol) u THF (3 mL) i mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 10 minuta. Dodat je sulfonil hlorid (0.445 mmol) i reakcija je mešana u trajanju od 16 časova na sobnoj temperaturi. Isparljive materije su redukovane do približno 1 mL pre dodavanja DCM (3 mL) i vode (3 mL) i smeša je mešana 10 minuta. Smeša je propuštena kroz fazni separator, organska frakcija je zatim sipana na 1g Si-amin kertridž (Biotage) i kertridž je ispran sa MeOH (10 mL), proizvod je zatim eluiran metanolskim rastvorom HCl (~1.25 M, 10 mL). Ispiranja od HCl su zatim isparavana in vacuo da bi se proizveo željeni proizvod.

Postupak AD

[0416] Rastvor 4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-amina (50 mg, 0.298 mmol) i sulfonil hlorida (2 ekv., 0.595 mmol) u piridinu (1.5 mL) je zračen u mikrotalasnoj u trajanju od 2 časa na 100°C. Posle hlađenja, the reakciona smeša je sipana na silika gel i prečišćena upotrebom hromatografije na koloni silika gela (Biotage Isolera, 24 g SiO2kertridž, 0-100% EtOAc u naftni benzinu 40-60°C) da bi se proizveo željeni proizvod.

Postupak AE

[0417] Suspenzija sulfonil hlorida (2 ekv., 1.19 mmol) i 4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-amina (100 mg, 0.593 mmol) u piridinu (1.5 mL) je zračena u mikrotalasnoj u trajanju od 2 časa na 100°C.

Posle hlađenja, smeša je sipana na silika gel i prečišćena upotrebom hromatografije na koloni silika gela (Biotage Isolera, 24 g SiO2kertridž, 0-100% EtOAc u naftni benzinu 40-60°C zatim 0-40% MeOH u EtOAc) da bi se proizveo željeni proizvod.

Postupak AF

[0418] Suspenzija sulfonil hlorida (2 ekv., 1.19 mmol) i 4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-amina (100 mg, 0.593 mmol) u piridinu (1 mL) je zračena u mikrotalasnoj 1 čas na 80°C. Posle hlađenja, smeša je sipana na silika gel i prečišćena upotrebom hromatografije na koloni silika gela (Biotage Isolera, 24 g SiO2kertridž, 0-100% EtOAc u naftni benzinu 40-60°C) da bi se proizveo željeni proizvod.

Tabela A

Referentni primeri 46-71 (Tabela D):

[0419]

Postupak BA

[0420] Smeša benzo[d]izoksazol-3-amina i sulfonil hlorida u piridinu (1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 časova. Reakcija je koncentrovana i razblažena sa 5% vodenim rastvorom HCl (1 mL) i ultrazvučno obrađena minimalno 30 minuta. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom ili DCM ekstrakcijom (2x1 mL) i prečišćen upotrebom hromatografije na koloni silika gela (EtOAc/naftni benzin 40-60°C gradijent) ili preparativne usmerene na masu HPLC da bi se dobio željeni proizvod. Videti Tabelu B za korišćene reakcione komponente i količine kao i uslove prečišćavanja.

Postupak BB

[0421] Smeša benzo[d]izoksazol-3-amina i sulfonil hlorida u piridinu (0.5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 64 časa. Reakcija je koncentrovana i razblažena sa 5% vodenim rastvorom HCl (1 mL) i ultrazvučno obrađena minimalno 30 minuta. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom i deo sirovog materijala (50 mg ili manje) je prečišćen pomoću preparativne usmerene na masu HPLC da bi se dobio željeni proizvod. Videti Tabelu B za korišćene reakcione komponente i količine.

Postupak BC

[0422] Smeša benzo[d]izoksazol-3-amina i sulfonil hlorida u piridinu (0.5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 časova. Reakcija je koncentrovana i razblažena sa 5% vodenim rastvorom HCl (1 mL) i ultrazvučno obrađena minimalno 30 minuta. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom i porcija sirovog materijala (50 mg ili manje) je prečišćena pomoću preparativne usmerene na masu HPLC da bi se dobio željeni proizvod. Videti Tabelu B za korišćene reakcione komponente i količine.

Tabela B

Postupak CA

[0423] Smeša benzo[d]izoksazol-3-amina i sulfonil hlorida u piridinu (1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 časova kada je dodata druga porcija benzensulfonil hlorida i mešana dodatna 64 časa. Reakcija je koncentrovana i razblažena sa 5% vodenim rastvorom HCl (1 mL) i ukltrazvučno obrađena minimalno 30 minuta. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom i prečišćen bilo preparativnom usmerenom na masu HPLC (do 50 mg sirovog materijala) ili hromatografijom na koloni silika gela (0-40% EtOAc/naftni benzin 40-60°C) da bi se dobio željeni proizvod. Videti Tabelu C za korišćene reakcione komponente i količine kao i uslove prečišćavanja.

Tabela C

Tabela D

Primeri i Referentni primeri 72-88 (Tabela E):

[0424]

Postupak EA

[0425] NaH (60% u mineralnom ulju, 49 mg, 1.22 mmol) dodat je u rastvor 4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amina (50 mg, 0.305 mmol) u THF (3.0 mL) i mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 10 minuta. Dodat je sulfonil hlorid (1 ekv., 0.305 mmol) i reakcija je mešana 16 časova. Isparljive materije su redukovane do približno 1 mL pre dodavanja DCM (3 mL) i vode (3 mL) i smeša je mešana 10 minuta. Smeša je propuštena kroz fazni separator, organska frakcija je zatim sipana na 1g Si-amin kertridža (Biotage) i kertridž je ispran sa MeOH (6 mL), proizvod je zatim eluiran sa rastvorom HCl (1.25 M u metanolu, 6 mL). Ispiranja od HCl su isparavana in vacuo da bi se proizveo željeni proizvod.

Postupak EB

[0426] NaH (60% u mineralnom ulju, 61 mg, 1.52 mmol) dodat je u rastvor 4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amina (50 mg, 0.305 mmol) u DMF (3.0 mL) i mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 10 minuta. Dodat je sulfonil hlorid (1 ekv., 0.305 mmol) i reakcija je mešana 16 časova. Dobijena smeša je sipana na silika gel i prečišćena hromatografijom na koloni (0-100% naftni benzin 40-60°C zatim 0-60% MeOH u EtOAc) da bi se proizveo željeni proizvod.

Postupak EC

[0427] NaH (60% u mineralnom ulju, 22 mg, 0.914 mmol) dodat je u rastvor 4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amina (50 mg, 0.305 mmol) u DMF (5 mL) i mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 10 minuta. Dodat je sulfonil hlorid (1 ekv., 0.305 mmol) i reakcija je mešana 16 časova. Dobijena smeša je ugašena vodom (3 mL), mešana 10 minuta na sobnoj temperaturi, zatim sipana na silika gel i prečišćena hromatografijom na koloni (0-100% naftni benzin 40-60°C zatim 0-60% MeOH u EtOAc) da bi se proizveo željeni proizvod.

Postupak ED

[0428] NaH (60% u mineralnom ulju, 5 ili 10 ekv.) dodat je u rastvor 4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amina (100 mg, 0.609 mmol) u THF (5.0 mL) i mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 10 minuta. Dodat je sulfonil hlorid (1 ekv., 0.609 mmol) i reakcija je mešana 16 časova. Dobijena smeša je sipana na silika gel i prečišćena hromatografijom na koloni (0-100% naftni benzin 40-60°C zatim 0-60% MeOH u EtOAc) da bi se proizveo željeni proizvod.

Postupak EF

[0429] NaH (60% u mineralnom ulju, 122 mg, 3.05 mmol) dodat je u rastvor 4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amina (100 mg, 0.609 mmol) u THF (5.0 mL) i mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 10 minuta. Dodat je sulfonil hlorid (1 ekv., 0.609 mmol) i reakcija je mešana 16 časova. Dobijena smeša je sipana na silika gel i prečišćena hromatografijom na koloni (0-100% naftni benzin 40-60°C zatim 0-60% MeOH u EtOAc) i izolovana čvrsta supstanca je ultrazvučno obrađena u MeOH (1 mL) i sakupljena filtracijom da bi se proizveo željeni proizvod.

Postupak EG

[0430] NaH (60% u mineralnom ulju, 122 mg, 3.05 mmol) dodat je u rastvor 4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amina (100 mg, 0.609 mmol) u THF (5.0 mL) i mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 10 minuta. Dodat je sulfonil hlorid (1 ekv., 0.609 mmol) i reakcija je mešana 16 časova na sobnoj temperaturi. Isparljive materije su redukovane do približno 1 mL pre pažljivog dodavanja DCM (3 mL) i vode (3 mL) i mešan 10 minuta. Smeša je propuštena kroz fazni separator, organska frakcija je zatim sipana na 1g Si-amin kertridža (Biotage) i kertridž je ispran sa MeOH (6 mL), proizvod je zatim eluiran sa rastvorom HCl (2 M, 1:1 metanol:1,4-dioksan, 6 mL). Ispiranja od HCl su zatim isparavana in vacuo da bi se proizveo željeni proizvod.

Postupak EH

[0431] Suspenzija 4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amina (48 mg, 0.29 mmol) i NaH (60% u mineralnom ulju, 0.117 mg, 2.93 mmol) u DMF (10 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 10 minuta pre hlađenja do -78°C. U ovu ohlađenu smešu dodat je sulfonil hlorid (1.5 ekv., 0.439 mmol) i smeša je mešana na -78°C u trajanju od 1 časa, zatim je zagrevana do sobne temperature i mešana 16 časova. Reakciona smeša je sipana na silika gel i prečišćena hromatografijom na koloni (Biotage Isolera, 24g SiO2kertridž, 0-100% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C zatim 0-40% MeOH u EtOAc) da bi se dobila čvrsta supstanca koja je suspendovana u dietil etru (25 mL) i ultrazvučno obrađena 5 minuta. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i sušena na vazduhu da bi se dobio željeni proizvod.

Postupak El

[0432] Smeša 4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amina (0.035 g, 0.21 mmol) i sulfonil hlorida (1.05 ekv., 0.22 mmol) u piridinu (1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 časova. Reakcija je koncentrovana i razblažena sa 5% vodenim rastvorom HCl (1 mL) i ultrazvučno obrađena minimalno 30 minuta. Ekstrakcija sa DCM (2 × 1 mL) i prečišćavanje upotrebom hromatografije na koloni silika gela (0-100% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) dalo je željeni proizvod.

Postupak EJ

[0433] U rastvor 4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amina (1 ekv.) u THF (3 mL) dodat je LiHMDS (1M u THF, 1.5 ekv.). Posle 10 minuta mešanja, dodat je sulfonil hlorid (1.5 ekv.) i reakcija je ostavljena da se meša 17 časova, otvorena ka vazfduhu. THF je uklonjen in vacuo, zatim su dodati DCM (3 mL) i voda (3 mL) i mešan 10 minuta. Posle odvajanja slojeva, organska frakcija je sipana na 1 g Si-amin kertridža (Biotage). Kertridž je ispran sa MeOH (6 mL), zatim skinut sa 1.25 M HCl u MeOH (6 mL). Ispiranja od HCl su zatim isparavana in vacuo da bi se proizveo željeni proizvod.

Tabela E

Primeri i Referentni primeri 89-147 (Tabela F)

Postupak FA

[0434]

[0435] U rastvor amina (0.5 mmol, 1.0 ekv.) u anhidrovanom THF (10 mL) na -78°C pod N2ukapavanjem je dodat LiHMDS (1 M rastvor u THF, 3 ekv.) i smeša je mešana na -78°C u trajanju od 30 min. Zatim je ukapavanjem dodat rastvor sulfonil hlorida (1.5 ekv.) u anhidrovanom THF (2.0 mL) i smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni ili prep. TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. Varijacije gornjih uslova su navedene u Tabeli F.

Postupak FB

[0436]

[0437] U rastvor amina (0.3 mmol, 1.0 ekv.) u piridinu (5 mL) pod N2dodat je sulfonil hlorid (2.0 ekv.) i smeša je zagrevana na 100°C preko noći. Reakcija je ugašena sa 1 M vodenim rastvorom HCl, zatim je dodata voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, anhidrovanim Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni ili prep. TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. Varijacije gornjih uslova su navedene u Tabeli F.

Postupak FC

[0438]

[0439] U rastvor amina (0.5 mmol, 1.0 ekv.) u anhidrovanom THF (10 mL) na -20°C pod N2ukapavanjem je dodat n-BuLi (2.5 M u heksanima, 1.5 ekv.) i smeša je mešana na -20°C u trajanju od 1 h. Zatim je ukapavanjem dodat rastvor sulfonil hlorida (1.5 ekv.) u anhidrovanom THF (2.0 mL) i smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (DCM/MeOH=20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

Postupak FD

[0440]

[0441] U rastvor amina (0.5 mmol, 1.0 ekv.) u anhidrovanom THF (10 mL) na -78°C pod N2ukapavanjem je dodat KHMDS (1 M rastvor u THF, ekvivalenti navedeni u Tabeli F) i smeša je mešana na -78°C ili 0°C u trajanju od 30 min do 1 h (navedeno u Tabeli F). Zatim je ukapavanjem dodat rastvor sulfonil hlorida (ekvivalenti navedeni u Tabeli F) u anhidrovanom THF (2.0 mL) i smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni ili prep. TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

Tabela F

Referentni primer 148: N-(benzo[d]izoksazol-3-il)-2,4-dimetoksibenzensulfonamid 148

[0442]

[0443] Rastvor 2,4-dimetoksibenzensulfonil hlorida (0.18 g, 0.75 mmol) i benzo[d]izoksazol-3-amina (0.10 g, 0.75 mmol) u piridinu (1 mL) je zračen u mikrotalasnoj na 110°C u trajanju od 2 časa. Dobijena smeša je sipana na silika gel i proizvod je prečišćen dva puta hromatografijom na koloni (4 g SiO2kertridž, 0-45% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C zatim 4g SiO2kertridž, 0-35% EtOAc u naftnom benzinu 40-60 °C) da bi se proizvele dve serije (78 mg i 5 mg) jedinjenja iz naslova (ukupna masa 83 mg, 33 % prinos) kao bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.11 (d, J = 8.05 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.81 Hz, 1H), 7.57 - 7.50 (m, 1H), 7.47 - 7.40 (m, 1H), 7.37 - 7.29 (m, 1H), 6.50 (d, J = 2.27 Hz, 1H), 6.42 (dd, J = 2.25, 8.81 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.81 (s, 3H). LCMS-B: rt 3.20 min, m/z = 356.8 [M+Na]<+>, 334.8 [M+H]<+>.

Referentni primer 149: N-(benzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamid 149

[0444]

[0445] Rastvor 2,6-dimetoksibenzen-1-sulfonil hlorida I111 (0.088 g, 0.37 mmol) i benzo[d]izoksazol-3-amina (0.050 g, 0.37 mmol) u piridinu (1 mL) je zračen u mikrotalasnoj na 110°C u trajanju od 2 časa, zatim na 120°C u trajanju od 2 časa. Reakciona smeša je sipana na siliku i prečišćena hromatografijom na koloni (12g SiO2kertridž, 0-35 % EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.9 mg, 3.1% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.30 (s, 1H), 8.17 (dt, J = 1.04, 8.15 Hz, 1H), 7.55 - 7.47 (m, 1H), 7.47 - 7.34 (m, 2H), 7.34 - 7.28 (m, 1H), 6.60 (d, J = 8.52 Hz, 2H), 3.91 (s, 6H). LCMS-B: rt 3.13 min, m/z = 334.8 [M+H]<+>.

Primer 150: N-(5-hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 150

[0446]

a) 5-Hlorobenzo[d]izoksazol-3-amin A 1

[0447] Kalijum terc-butoksid (793 mg, 7.07 mmol) dodat je u suspenziju acetohidroksaminske kiseline (531 mg, 7.07 mmol) u DMF (10 mL) i mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 minuta. Dodat je 5-Hloro-2-fluorobenzonitril (1.00 g, 6.43 mmol) i reakcija je zagrevana do 50°C u trajanju od 1 časa. Posle hlađenja, reakciona smeša je razblažena vodenim zasićenim rastvorom NaCl (15 mL), vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 × 100 mL), organske materije su kombinovane, sušene (Na2SO4), filtrirane i isparljive materije su uklonjene in vacuo. Ostatak je sipan na silika gel i proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (Biotage Isolera, 40 g SiO2kertridž, 0-40% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (507 mg, 47%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.94 (dd, J = 2.1, 0.6, 1H), 7.59 - 7.48 (m, 1H), 6.51 (s, 1H).

b) N-(5-hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 150

[0448] Suspenzija 5-etil-2-metoksibenzen-1-sulfonil hlorida (150 mg, 0.639 mmol) i 5-hlorobenzo[d]izoksazol-3-amina A1 (108 mg, 0.639 mmol) u piridinu (1.5 mL) je zračena u mikrotalasnoj na 110°C u trajanju od 2 časa. Dodat je 10 M vodeni rastvor KOH (1 mL) i dobijena smeša je mešana 4 časa na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je sipana na silika gel i proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (0-100% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (53 mg, 23%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.11 (t, J = 1.4, 1H), 7.71 (d, J = 2.3, 1H), 7.68 (d, J = 1.4, 2H), 7.48 (dd, J = 8.5, 2.3, 1H), 7.10 (d, J = 8.6, 1H), 3.72 (s, 3H), 2.62 (q, J = 7.6, 2H), 1.16 (t, J = 7.6, 3H). LCMS-A: rt 6.637 min; m/z 367.0 [M+H]<+>.

Primer 151: N-(4-hlorobenzo[d]lizoksazol-3-il)benzensulfonamid 151

[0449]

a) N-(4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-(fenilsulfonil)benzensulfonamid A2

[0450] Rastvor 4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-amina (50 mg, 0.298 mmol) i benzensulfonil hlorida (2 ekv., 0.595 mmol) u piridinu (1.5 mL) je zračen u mikrotalasnoj 2 časa na 100°C. Posle hlađenja, reakciona smeša je sipana na silika gel i prečišćena upotrebom hromatografije na koloni silika gela (Biotage Isolera, 24 g SiO2kertridž, 0-100% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.97 (d, J = 8.6, 1H), 7.90 - 7.77 (m, 6H), 7.71 - 7.64 (m, 7H), 7.57 (d, J = 7.7, 1H).

b) N-(4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 151

[0451] Suspenzija N-(4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-(fenilsulfonil)benzensulfonamida A2 (50 mg, 0.11 mmol) u THF (10 mL) i 10M vodenom rastvoru KOH (1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 časova. Reakciona smeša je razblažena vodom (25 mL) i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 × 50 mL), kombinovane organske materije su isprane fiziološkim rastvorom (25 mL) sušene (Na2SO4), filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijena guma je rastvorena u minimalnoj količini acetona pre dodavanja naftnog benzina 40-60°C (50 mL) i talog je filtriran i sušen na vazduhu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca boje kože (10 mg, 29%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.89 - 7.80 (m, 2H), 7.41 - 7.30 (m, 4H), 7.26 (dd, J=8.3, 0.8, 1H), 7.10 (dd, J=7.5, 0.8, 1H). LCMS-A: rt 6.334 min, m/z 307.0 [M-H]-.

Primer 152: 5-Etil-N-(7-fluorobenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid 152

[0452]

a) 7-Fluorobenzo[d]izoksazol-3-amin A3

[0453] Kalijum terc-butoksid (887 mg, 7.91 mmol) dodat je u suspenziju acetohidroksaminske kiseline (594 mg, 7.91 mmol) u DMF (10 mL) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 minuta. Dodat je 2,3-difluorobenzonitril (1.00 g, 7.19 mmol) i reakcija je zagrevana do 50°C u trajanju od 1 časa. Posle hlađenja, reakciona smeša je razblažena vodenim zasićenim rastvorom NaCl (15 mL), vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 × 100 mL) organske materije su kombinovane, sušene (Na2SO4) i filtrirane i isparljive materije su uklonjene in vacuo. Dobijena guma je sipana na silika gel i prečišćena hromatografijom na koloni (Biotage Isolera, 24g SiO2kertridž, 0-100% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (303 mg, 27%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.33 (dd, J=7.6, 1.3, 1H), 7.30 - 7.26 (m, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 1H), 4.45 (s, 2H). LCMS-B: rt 3.371 min, m/z 153.2 [M+H]<+>.

b) 5-Etil-N-(7-fluorobenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid 152

[0454] Rastvor 7-fluorobenzo[d]izoksazol-3-amina A3 (100 mg, 0.657 mmol) i 2-metoksi-5-etilsulfonil hlorida 1112 (154 mg, 0.657 mmol) u piridinu (2 mL) je zračen u mikrotalasnoj 2 časa na 100°C. Posle hlađenja, reakciona smeša je sipana na silika gel i prečišćena hromatografijom na koloni (Biotage Isolera, 24g SiO2kertridž, 0-100% EtOAc u naftnom benzinu 40-60 °C) da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (127 mg, 55%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.91 (dd, J=8.1, 0.8, 1H), 7.73 (d, J=2.3, 1H), 7.57 (dd, J=11.9, 8.0, 1H), 7.48 (dd, J=8.5, 2.3, 1H), 7.38 (td, J=8.0, 4.1, 1H), 7.10 (d, J=8.6, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.63 (q, J=7.6, 2H), 1.16 (t, J=7.6, 3H). LCMS-A: rt 6.429 min, m/z 351.1 [M+H]<+>.

Primer 153: N-(4-Hloro-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 153

[0455]

a) 4-Hloro-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-amin A4

[0456] Kalijum terc-butoksid (728 mg, 6.49 mmol) dodat je u suspenziju acetohidroksaminske kiseline (487 mg, 6.49 mmol) u DMF (10 mL) i mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 minuta. Dodat je 2-Hloro-6-fluoro-3-metilbenzonitril (1.00 g, 5.90 mmol) i reakcija je zagrevana do 50°C u trajanju od 1 časa. Posle hlađenja, reakciona smeša je razblažena vodenim zasićenim rastvorom NaCl (15 mL), vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 × 100 mL), organske materije su kombinovane, sušene (Na2SO4), filtrirane i isparljive materije su uklonjene in vacuo. Dobijena čvrsta supstanca je ultrazvučno obrađena u acetonu (10 mL) pre dodavanja naftnog benzina 40-60°C (50 mL), talog je sakupljen filtracijom i sušen na vazduhu da bi se proizveo proizvod kao bela čvrsta supstanca (524 mg, 49%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.51 (d, J=8.5, 1H), 7.38 (d, J=8.5, 1H), 6.15 (s, 2H), 2.38 (s, 3H). LCMS-B: rt 3.562 min, m/z 183.1 [M+H]<+>.

b) N-(4-Hloro-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 153

[0457] Rastvor 4-hloro-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-amina A4 (100 mg, 0.548 mmol) i 2-metoksi-5-etilsulfonil hlorida I112 (129 mg, 0.548 mmol) u piridinu (2 mL) je zračen u mikrotalasnoj 2 časa na 100°C. Posle hlađenja, reakciona smeša je dodata u vodu, talog je uklonjen filtracijom i filtrat je sipan na silika gel i prečišćen hromatografijom na koloni (Biotage Isolera, 24g SiO2kertridž, 0-100% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (33 mg, 16%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.48 (s, 1H), 7.69 - 7.57 (m, 3H), 7.48 (dd, J=8.5, 2.3, 1H), 7.15 (d, J=8.5, 1H), 3.68 (s, 3H), 2.60 (q, J=7.5, 2H), 2.42 (s, 3H), 1.15 (t, J=7.6, 3H). LCMS-A: rt 6.665 min, m/z 381.1 [M+H]<+>.

Primer 154: N-(4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 154

[0458]

[0459] Smeša 5-etil-2-metoksibenzensulfonil hlorida I112 (0.414 g, 1.77 mmol) i 4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-amina (0.225 g, 1.34 mmol) u piridinu (2.0 mL) je mešana na 30°C u trajanju od 40 časova pod atmosferom azota. Reakcija je koncentrovana, zatim ultrazvučno obrađena 2 časa vodenim rastvorom HCl (5%) i sakupljen je dobijeni talog. Talog je prečišćen upotrebom hromatografije na koloni silika gela (0-100% etil acetate/naftni benzin 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao dve frakcije (A i B) sa kombinovanim prinosom od 0.060 g, 12% prinos. Frakcija A: Prinos 0.038 g.<1>H NMR (400 MHz, aceton-d6) δ 8.88 (br s, 1H), 7.75 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 8.5, 7.6 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.5, 0.6 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 7.42 (dd, J = 7.6, 0.6 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 2.66 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.21 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LCMS-B: rt 3.766 min; m/z 367.1/369.1 [M+H]<+>.

[0460] Frakcija B: Prinos 0.021 g.<1>H NMR (400 MHz, aceton-d6) δ 8.88 (br s, 1H), 7.75 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.65 (dd, J = 8.5, 7.6 Hz, 1H), 7.59 - 7.55 (m, 1H), 7.49 (dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 7.44 - 7.40 (m, 1H), 7.14 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 2.66 (q, J= 7.6 Hz, 2H), 1.21 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LCMS-B: rt 3.755 min; m/z 367.1/369.1 [M+H]<+>

Primer 155: N-(4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid 155

[0461]

[0462] Smeša 4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-amina (0.034 g, 0.200 mmol) i 2-metoksibenzensulfonil hlorida (0.092 g, 0.450 mmol) u piridinu (1.0 mL) i trietilaminu (0.1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 časova. Reakcija je koncentrovana i razblažena sa 5% vodenim rastvorom HCl (1 mL) i ultrazvučno obrađena tokom minimalno 30 minuta. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom i prečišćen upotrebom preparativne usmerene na masu HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.<1>H NMR (400 MHz, aceton-d6) δ 7.94 - 7.91 (dd, J = 7.8, 1.7 Hz, 1H), 7.69 - 7.63 (m, 2H), 7.60 - 7.57 (dd, J = 8.5, 0.7 Hz, 1H), 7.44 - 7.42 (dd, J = 7.6, 0.7 Hz, 1H), 7.25 - 7.22 (m, 1H), 7.16 - 7.11 (m, 1H), 3.94 - 3.94 (s, 3H). HPLC-MS: rt 6.02 min; m/z 339.16/341.18 [M+H]<+>.

Primer 156: N-(4-fluorobenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid 156

[0463]

[0464] Smeša 4-fluorobenzo[d]izoksazol-3-amina (0.032 g, 0.21 mmol) i 2-metoksibenzensulfonil hlorida (0.109 g, 0.529 mmol) u piridinu (1.0 mL) i trietilaminu (0.1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 časova. Reakcija je koncentrovana i razblažena sa 5% vodenim rastvorom HCl (1 mL) i ultrazvučno obrađena tokom minimalno 30 minuta. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom i prečišćen upotrebom preparativne usmerene na masu HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.<1>H NMR (400 MHz, aceton-d6) δ 9.73 - 9.45 (br s, 1H), 7.92 - 7.88 (dd, J = 7.9, 1.7 Hz, 1H), 7.70 - 7.61 (m, 2H), 7.44 - 7.40 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.25 - 7.21 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.13 - 7.07 (m, 2H), 3.95 - 3.91 (s, 3H). HPLC-MS: rt 5.72 min; m/z 323.16 [M+H]<+>.

Primer 157: N-(6-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid 157

[0465]

[0466] Smeša 6-bromobenzo[d]izoksazol-3-amina I75 (0.039 g, 0.180 mmol) i 2-metoksibenzensulfonil hlorida (0.101 g, 0.490 mmol) u piridinu (1.0 mL) i trietilaminu (0.1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 časova. Reakcija je koncentrovana i razblažena sa 5% vodenim rastvorom HCl (1 mL) i ultrazvučno obrađena tokom minimalno 30 minuta. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom i prečišćen upotrebom preparativne usmerene na masu HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.<1>H NMR (400 MHz, aceton-d6) δ 8.06 - 8.02 (dd, J = 8.6, 0.5 Hz, 1H), 7.90 - 7.87 (dd, J = 7.9, 1.7 Hz, 1H), 7.85 - 7.83 (dd, J = 1.6, 0.5 Hz, 1H), 7.64 -7.59 (ddd, J = 8.4, 7.4, 1.8 Hz, 1H), 7.58 - 7.54 (dd, J = 8.6, 1.6 Hz, 1H), 7.21 - 7.18 (dd, J = 8.4, 0.8 Hz, 1H), 7.10 - 7.05 (m, 1H), 3.88 - 3.85 (s, 3H). HPLC-MS: rt 6.32 min; m/z 383.1/385.2 [M+H]<+>.

Primer 158: N-(6-hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid 158

[0467]

[0468] Smeša 6-hlorobenzo[d]izoksazol-3-amina (0.033 g, 0.200 mmol) i 2-metoksibenzensulfonil hlorida (0.095 g, 0.460 mmol) je mešana u piridinu (1.0 mL) i trietilaminu (0.1 mL) na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 časova. Reakcija je koncentrovana i razblažena sa 5% vodenim rastvorom HCl (1 mL) i ultrazvučno obrađena tokom minimalno 30 min. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom i prečišćen upotrebom usmerene na masu preparativne HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.<1>H NMR (400 MHz, aceton-d6) δ 8.12 - 8.07 (dd, J = 8.6, 0.5 Hz, 1H), 7.91 - 7.87 (dd, J = 7.9, 1.7 Hz, 1H), 7.68 - 7.65 (dd, J = 1.7, 0.5 Hz, 1H), 7.64 - 7.58 (ddd, J = 8.4, 7.4, 1.8 Hz, 1H), 7.44 - 7.39 (dd, J = 8.6, 1.7 Hz, 1H), 7.21 - 7.17 (m, 1H), 7.10 - 7.05 (m, 1H), 3.88 - 3.86 (s, 3H). HPLC-MS: rt 6.26 min; m/z 339.16/341.18 [M+H]+.

Referentni primer 159: N-(4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)isohinolin-8-sulfonamid 159

[0469]

[0470] Rastvor 4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-amina (0.050 g, 0.30 mmol) u anhidrovanom THF (2 mL) je hlađen do -78°C pod atmosferom azota. Rastvor litijum bis(trimetilsilil)amida (1.0 M u THF, 0.59 mL, 0.59 mmol) pažljivo je dodat pre nego što je smeša mešana na 0°C u trajanju od 1 časa. Smeša je hlađena do -78°C, dodat je rastvor 8-izohinolinsulfonil hlorida (0.068 g, 0.30 mmol) u anhidrovanom THF (1 mL) i smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature. Posle mešanja od 3 časa, TLC je pokazala samo prisustvo početnog materijala. Smeša je hlađena do -78°C, dodat je natrijum hidrid (60% disperzija u mineralnom ulju, 0.059 g, 1.5 mmol) i smeša je vraćena do sobne temperature i mešana preko noći. Dodata je voda (10 mL) i pH je podešen do ~3 sa vodenim rastvorom HCl (2 M). Vodena faza je ekstrahovana sa DCM (3 × 20 mL), organske materije su kombinovane, sušene (MgSO4) i rastvarač je uklonjen in vacuo. Čvrsti ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Biotage Isolera, 12 g SiO2kertridž, 0-100% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C, zatim 0-40% MeOH u EtOAc) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (0.026 g, 24%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.31 (s, 1H), 8.53 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.28 - 8.21 (m, 1H), 8.09 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.89 - 7.82 (m, 1H), 7.39 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 7.5 Hz, 1H). LCMS-A: rt 5.43 min; m/z 360.1 [M+H]<+>.

Primer 160: N-(7-jodo-4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamid 160

[0471]

a) 7-jodo-4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amin A5

[0472] Deo 4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amina I9 (0.121 g, 0.581 mmol) je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (2 mL) i zatim je dodat N-jodosukcinimid (0.131 g, 0.581 mmol). Posle završetka dodavanja, reakciona smeša je zagrevana na 50°C u trajanju od 2 h. Po završetku ovog perioda, reakciona smeša je sipana preko leda i zatim razblažena sa EtOAc (15 mL). Dobijena smeša je isprana sa H2O (3 × 8 mL) i fiziološkim rastvorom (8 mL), sušena preko Na2SO4i filtrirana. Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen dva puta hromatografijom na koloni (12 g SiO2kertridž, 0 - 35 % EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C zatim 12 g SiO2kertridž, 0 - 25 % EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.038 g, 20% prinos) kao prljavo bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.78 (s, 1H), 4.73 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.50 (s, 3H). LCMS-A: rt 3.26 min, m/z 334.7 [M+H]<+>.

b) N-(7-jodo-4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamid 160

[0473] Rastvor 7-jodo-4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amina A5 (0.024 g, 0.099 mmol) i 2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorida I111 (0.023 g, 0.099 mmol) u piridinu (0.5 mL) je zračen u mikrotalasnoj na 110°C u trajanju od 2h. Reakciona smeša je hlađena do sobne temperature i vlažno-punjena na silika kertridž. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (12g SiO2kertridž, 0-70% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.032 g, 53% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.58 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.52 (s, 2H), 4.04 (s, 3H), 3.88 (s, 6H), 3.51 (s, 3H). LCMS-A: rt 5.86 min, m/z 534.6 [M+H]<+>.

Primer 161: N-(7-hloro-4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamid 161

[0474]

a) 7-Hloro-4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amin A6

[0475] 4-Metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amin I9 (0.150 g, 0.720 mmol) je rastvoren in N,N-dimetilformamidu (2 mL) i zatim je dodat N-hlorosukcinimid (96 mg, 0.72 mmol). Po završetku dodavanja, reakciona smeša zagrevana je na 50°C u trajanju od 2 časa. Posle završetka ovog perioda, reakciona smeša je sipana preko leda i zatim razblažena sa EtOAc (15 mL). Dobijena smeša je isprana sa H2O (3 × 8 mL) i fiziološkim rastvorom (8 mL), sušena preko Na2SO4i filtrirana. Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (12 g SiO2kertridž, 0 - 40 % EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.0240 g, 14% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.77 (s, 1H), 4.63 (d, J = 0.6 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.49 (s, 3H).

b) N-(7-hloro-4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamid 161

[0476] Rastvor 7-hloro-4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amina A6 (0.024 g, 0.099 mmol) i 2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorida I111 (0.023 g, 0.099 mmol) u piridinu (0.5 mL) je zračen u mikrotalasnoj na 110°C u trajanju od 2 časa. Reakciona smeša je hlađena do sobne temperature i vlažno-punjena na silika kertridž. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (12g SiO2kertridž, 0-100% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.0094 g, 21% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.20 (s, 1H), 7.39 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.59 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.61 (d, J = 0.6 Hz, 2H), 4.04 (s, 3H), 3.88 (s, 6H), 3.49 (s, 3H). LCMS-F: rt 6.39 min, m/z 442.8 [M+H]<+>.

Referentni primer 162: 5-metoksi-N-(4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-il)hinolin-8-sulfonamid 162

[0477]

[0478] Rastvor 4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amina I9 (0.0500 g, 0.240 mmol) i 5-metoksihinolin-8-sulfonil hlorida (0.0619 g, 0.240 mmol) u piridinu (0.500 mL) je zračen u mikrotalasnoj na 110°C u trajanju od 2 časa. Reakcija je hlađena do sobne temperature i dodata u DCM (10 mL). Organski sloj je ispran sa 0.5 M HCl (10 mL) i slojevi su odvojeni pomoću kertridža za odvajanje faza. Sakupljeni organski slojevi su sušeni in vacuo i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (12g SiO2kertridž, 0-80% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.0110 g, 11% prinos) kao prljavo bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.98 (dd, J = 4.3, 1.8 Hz, 1H), 8.64 - 8.53 (m, 2H), 7.45 (dd, J = 8.5, 4.3 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 6.54 (s, 1H), 4.44 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 4.03 (s, 3H), 3.36 (s, 3H). LCMS-B: rt 3.49 min, m/z = 429.8 [M+H]<+>.

Primer 163: 2-hidroksi-6-metoksi-N-(4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 163

[0479]

[0480] Rastvor 4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amina I9 (0.0440 g, 0.211 mmol) i 2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorida I111 (0.0500 g, 0.211 mmol) u piridinu (0.500 mL) je zračen u mikrotalasnoj na 120°C u trajanju od 2 časa zatim na 120°C u trajanju od 1 časa. Reakcija je sakupljena do sobne temperature i dodati u DCM (10 mL). Organske materije su isprane sa 1M HCl (2 × 10 mL) zatim sušene preko MgSO4. Sirovi materijal je prečišćen dva puta pomoću hromatografije na silika gelu (24 g SiO2kertridž, 0 - 85% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C zatim 12 g SiO2kertridž, 0 - 75 % EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.5 mg).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.62 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.33 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.99 (q, J = 0.9 Hz, 1H), 6.70 - 6.61 (m, 2H), 6.37 (dd, J = 8.3, 1.0 Hz, 1H), 4.51 (s, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.42 (s, 3H). LCMS-A: rt 3.54 min, m/z 394.8 [M+H]<+>

Referentni primer 164: 6-metoksi-N-(6-(metoksimetil)-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)piridin-3-sulfonamid 164

[0481]

[0482] Rastvor 6-metoksipiridin-3-sulfonil hlorida (0.0540 g, 0.260 mmol) i 6-(metoksimetil)-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-amina I4 (0.050 g, 0.26 mmol) u piridinu (0.500 mL) je zračen u mikrotalasnoj na 120°C u trajanju od 2 časa. Reakcija je hlađena do sobne temperature zatim preuzeta u DCM i isprana (× 2) sa 1M HCl. Organski sloj je sušen in vacuo zatim vlažno-punjena na silika gel i proizvod je prečišćen pomoću hromatografije na koloni (24 g SiO2kertridž, 0-80% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (15.6 mg, 17% prinos) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.63 (dd, J = 0.71, 2.62 Hz, 1H), 7.99 - 7.89 (m, 2H), 7.72 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 6.75 (dd, J = 0.71, 8.94 Hz, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.50 (s, 3H), 2.39 (s, 3H). LCMS-F: rt 6.39 min, m/z 348.1 [M+H]<+>.

Referentni primer 165: N-(6-(metoksimetil)-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)piridin-3-sulfonamid 165

[0483]

[0484] Rastvor piridin-3-sulfonil hlorida (0.0462 g, 0.260 mmol) i 6-(metoksimetil)-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-amina I4 (0.050 g, 0.26 mmol) u piridinu (0.500 mL) je zračen u mikrotalasnoj na 120°C u trajanju od 2 časa. Reakcija je halđena do sobne temperature zatim vlažno-punjena na silika gel i proizvod je prečišćen pomoću hromatografije na koloni (24 g SiO2kertridž, 0-80% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.0220 g, 25% prinos) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.09 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.18 (d, J= 8.09 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.50 (s, 3H), 2.40 (s, 3H). LCMS-F: rt 6.12 min m/z 334.1 [M+H]<+>, 332.0 [M-H]-.

Primer 166: 2,4-dimetoksi-N-(6-(metoksimetil)-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 166

[0486] Rastvor 2,4-dimetoksibenzensulfonil hlorida (0.052 g, 0.22 mmol) i 6-(metoksimetil)-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-amina I4 (0.042 g, 0.22 mmol) u piridinu (0.500 mL) je zračen u mikrotalasnoj na 110°C u trajanju od 2 časa. Dobijena smeša je sipana na silika gel i proizvod je preišćen hromatografijom na koloni (4 g SiO2kertridž, 0-45% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova (0.0413 g, 48% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.96 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.71 (d, J = 8.33 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 6.48 (d, J = 1.82 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 8.36 Hz, 1H), 4.50 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.47 (s, 3H), 2.37 (s, 3H). LCMS-A: rt 5.78 min, m/z = 392.8 [M+H]<+>, 414.7 [M+Na]<+>.

Primer 167: N-(6-(hidroksimetil)benzo[d]izoksazol-3-il)-2,4-dimetoksibenzensulfonamid 167

[0487]

a) Metil 3-aminobenzo[d]izoksazol-6-karboksilat A9

[0488] U rastvor etanhidroksaminske kiseline (0.629 g, 8.37 mmol) u DMF (5 mL) dodat je kalijum 2-metilpropan-2-olat (0.94 g, 8.4 mmol) i reakcija je mešana u trajanju od 30 minuta. Dodat je metil 4-cijano-3-fluorobenzoat (1.0 g, 5.6 mmol) zatim DMF (2 mL) i reakcija je mešana dodatna 2 časa na sobnoj temperaturi. Reakcija je razblažena etil acetatom (50 mL) i vodom (50 mL), vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom i kombinovani organski slojevi su isprani vodom, sušeni, filtrirani i koncentrovani. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (12 g SiO2kertridž, 0-50% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.55 g, 51% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 (d, J = 1.02 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 1.24, 8.29 Hz, 1H), 7.59 (dd, J= 0.77, 8.25 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H). LCMS: rt 2.97 min, m/z 193.0 [M+H]<+>.

b) Metil 3-((2,4-dimetoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-6-karboksilat A10

[0489] Rastvor 2,4-dimetoksibenzen-1-sulfonil hlorida (0.67 g, 2.8 mmol) i metil 3-aminobenzo[d]izoksazol-6-karboksilata A9 (0.55 g, 2.8 mmol) u piridinu (4 mL) je zračen u mikrotalasnoj na 130°C u trajanju od 3 časa. Reakcija je hlađena do sobne temperature zatim razblažena sa DCM (40 mL). Organske materije su isprane sa 1M HCl (40 mL) i vodeni sloj je nazad-ekstrahovan sa DCM (2 × 40 mL). Kombinovaniorganski slojevi su sušeni in vacuo i ostatak je prečišćen dva puta pomoću hromatografije na koloni (24 g SiO2kertridž, 0-35% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobile dve serije jedinjenja iz naslova (0.369 g, nečisto i 0.0310 g, 2.8% prinos, >95% čistoća) kao bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.13 - 8.06 (m, 2H), 7.97 (dd, J = 1.25, 8.47 Hz, 1H), 7.86 - 7.80 (m, 1H), 6.58 (dq, J = 2.29, 4.60 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.79 (s, 3H). LCMS: rt 3.26 min, m/z 392.8 [M+H]<+>, 415.8 [M+Na]<+>.

c) N-(6-(hidroksimetil)benzo[d]izoksazol-3-il)-2,4-dimetoksibenzensulfonamid 167

[0490] U suspenziju litijum aluminijum hidrida u prahu (0.0758 g, 2.00 mmol) u anhidrovanom THF (4 mL) pod azotom dodat je rastvor metil 3-((2,4-dimetoksifenil)sulfonamido)benzo [d]izoksazol-6-karboksilata A10 (nečist, 0.392 g, 0.500 mmol) u THF (8 mL). Smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena pod azotom dodavanjem putem ukapavanja vlažnog THF zatim 1 mL vode. Pošto je prestalo oslobađanje gasa, dodat je 0.5 M vodeni rastvor HCl i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (3 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko MgSO4i rastvarač je uklonjen in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni (24 g SiO2kertridž, 0 - 100% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.191 g, 100% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.08 (dd, J = 0.78, 8.30 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.69 (d, J = 8.82 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 1.03 Hz, 1H), 7.30 (dd, J = 1.34, 8.29 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 2.26 Hz, 1H), 6.42 (dd, J = 2.30, 8.79 Hz, 1H), 4.84 (s, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.80 (s, 3H). LCMS-B: rt 3.02 min, m/z 364.8 [M+H]<+>, 386.8 [M+Na]<+>.

Referentni primer 168: 3-((5-metoksihinolin)-8-sulfonamido)-5-metilbenzo[d]izoksazol-6-karboksamid 168

[0491]

a) Metil 3-amino-5-metilbenzo[d]izoksazol-6-karboksilat A 11

[0492] U rastvor etanhidroksaminske kiseline (0.126 g, 1.69 mmol) u DMF (2 mL) dodat je kalijum 2-metilpropan-2-olat (0.19 g, 1.7 mmol) i reakcija je mešana 30 minuta. Dodat je metil 4-cijano-5-fluoro-2-metilbenzoat (0.22 g, 1.1 mmol) zatim DMF (3 mL) i reakcija je mešana dodatna 2 časa na 40°C. Reakcija je razblažena etil acetatom (50 mL) i vodom (50 mL). Vodeni sloj je ekstrahovana sa etil acetatom i kombinovani organski slojevi su isprani vodom, sušeni, filtrirani i koncentrovani. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (12 g SiO2kertridž, 0-50% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.11 g, 48% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.85 (s, 1H), 7.64 (t, J = 0.79 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 2.62 (d, J = 0.85 Hz, 3H). LCMS: rt 3.02 min, m/z 207.0 [M+H]<+>.

b) Metil 3-((5-metoksihinolin)-8-sulfonamido)-5-metilbenzo[d]izoksazol-6-karboksilat hidrohloridna so A 12

[0493] Rastvor 5-metoksihinolin-8-sulfonil hlorida (0.12 g, 0.48 mmol) i metil 3-amino-5-metilbenzo[d]izoksazol-6-karboksilata A11 (0.10 g, 0.48 mmol) u piridinu (3 mL) je zračen u mikrotalasnoj na 110°C u trajanju od 2 časa. Reakcija je zračena u mikrotalasnoj na 110°C tokom dodatnih 1.5 čas. Dobijena smeša je sipana na silika gel i proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (4 g SiO2kertridž, 0-45% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C). Proizvod je prečišćen dalje pomoću ekstrakcije čvrste faze (1 g, Si-amin, 3 zapremine MeOH zatim 4 zapremine metanolskog HCl). Kiseli eluenti su sakupljeni i sušeni in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (17.7 mg, 7.9% prinos) kao bledo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 9.40 - 9.33 (m, 2H), 8.77 (d, J = 8.66 Hz, 1H), 8.14 - 8.05 (m, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.80 - 7.73 (m, 1H), 7.47 (d, J= 8.73 Hz, 1H), 4.23 (s, 3H), 3.91 (s, 3H), 2.62 (s, 3H). LCMS: rt 3.35 min, m/z 427.8 [M+H]<+>.

c) 3-((5-Metoksihinolin)-8-sulfonamido)-5-metilbenzo[d]izoksazol-6-karboksamid 168

[0494] U 15 mL epruvetu pod pritiskom sa teškim zidovima opremljenu magnetnom šipkom za mešanje pod azotom dodata je metil 3-((5-metoksihinolin)-8-sulfonamido)-5-metilbenzo[d]izoksazol-6-karboksilat hidrohloridna so A12 (15.0 mg, 0.0323 mmol), rastvor amonijaka (2.0 M u metanolu, 0.50 mL, 1.0 mmol) i kalcijum dihlorid (3.59 mg, 0.0323 mmol). Reakciona posuda je hermetiški zatvorena i zagrevana na 80°C u trajanju od 3 dana. Rastvarač je uklonjen pod strujom vazduha i dodati su rastvor amonijaka (7.0 M u metanolu, 0.50 mL, 3.5 mmol) i kalcijum dihlorid (3.6 mg, 0.032 mmol). Reakciona posuda je hermetiki zatvorena i zagrevana na 80°C u trajanju od 24 časa. Reakcija je hlađena do sobne temperature i rastvarač je uklonjen in vacuo. Jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni (4 g SiO2kertridž, 0-100% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.00180 g, 13% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 9.01 (dd, J = 1.78, 4.24 Hz, 1H), 8.65 (dd, J = 1.78, 8.52 Hz, 1H), 8.43 (d, J = 8.47 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 12.46 Hz, 2H), 7.57 (dd, J = 4.28, 8.54 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.50 Hz, 1H), 4.09 (s, 3H), 2.57 (s, 3H). LCMS-B: rt 3.15 min, m/z 413.8 [M+H]<+>.

Primer 169: N-(6-cijano-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2,4-dimetoksibenzensulfonamid 169

[0495]

a) 3-Amino-5-metilbenzo[d]izoksazol-6-karbonitril A13

[0496] U rastvor etanhidroksaminske kiseline (0.176 g, 2.34 mmol) u DMF (5 mL) dodat je kalijum 2-metilpropan-2-olat (0.26 g, 2.3 mmol) i reakcija je mešana 30 minuta. Dodat je 2-Fluoro-5-metil-tereftalonitril (0.25 g, 1.6 mmol), zatim DMF (3 mL) i reakcija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je razblažena etil acetatom (50 mL) i vodom (50 mL), vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom i kombinovani organski slojevi su isprani vodom, sušeni, filtrirani i koncentrovani. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (12g SiO2kertridž, 0-50% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.16 g, 59% prinos) kao prljavo bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.72 (s, 1H), 7.47 (t, J= 0.86 Hz, 1H), 2.65 (d, J= 0.86 Hz, 3H). LCMS-B: rt 2.90 min, m/z 174.0 [M+H]<+>.

b) N-(6-cijano-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2,4-dimetoksibenzensulfonamid 169

[0497] Rastvor 2,4-dimetoksibenzen-1-sulfonil hlorida (0.22 g, 0.92 mmol) i 3-amino-5-metil-1,2-benzoksazol-6-karbonitrila A13 (0.16 g, 0.92 mmol) u piridinu (2.5 mL) je zračen u mikrotalasnoj na 130°C u trajanju od 2 časa. Reakcija je odstojala na sobnoj temperaturi u trajanju od 50 minuta, zatim zračena u mikrotalasnoj na 130°C dodatna 2 časa. Reakcija je hlađena do sobne temperature zatim razblažena sa DCM (40 mL). Organske materije su isprane sa 1M HCl (40 mL) i vodeni sloj je nazad ekstrahovan dva puta sa DCM (2 × 40 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni in vacuo i ostatak je sipan na silika gel i proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (24 g SiO2kertridž, 0-45% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobila žuta čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je rastvorena u vrelom MeOH i DCM i prečišćena ekstrakcijom čvrste faze (1g Si-amin, 3 zapremine MeOH zatim 3 zapremine ~1.25 M metanolskog amonijaka). Kiseli aluat je osušen in vacuo da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je preuzeta u MeOH i MeOH je uklonjen in vacuo (ponovljeno × 3). Ostatak je ponovo prečišćen hromatografijom na koloni (24 g SiO2kertridž, 45% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se dobile dve serije jedinjenja iz naslova (22 i 78 mg, ukupna masa 100 mg, 29% prinos) kao prljavo bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.66 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 6.52 (d, J = 2.25 Hz, 1H), 6.44 (dd, J = 2.24, 8.85 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 2.67 (s, 3H). LCMS-B: rt 3.30 min, m/z = 373.8 [M+H]<+>, 371.9 [M-H]-.

Primer 170: 2,4-dimetoksi-N-(5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 170

[0498]

[0499] Rastvor 2,4-dimetoksibenzen-1-sulfonil hlorida (0.0799 g, 0.337 mmol) i 5-metilbenzo[d]izoksazol-3-amina I60 (0.050 g, 0.34 mmol) u piridinu (1 mL) je zračen u mikrotalasnoj na 110°C u trajanju od 2 časa. Dobijena smeša je sipana na silika gel i proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (12 g SiO2kertridž, 0-45% EtOAc u naftnom benzinu 40-60°C) da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova (55.0 mg, 42% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.86 - 7.82 (m, 1H), 7.72 (d, J = 8.81 Hz, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 6.49 (d, J = 2.26 Hz, 1H), 6.43 (dd, J= 2.29, 8.82 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 2.47 (s, 3H). LCMS-A: rt 5.66 min, m/z 348.8 [M+H]<+>, 347.1 [M-H]-.

Primer 171: N-(6-bromo-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2,4-dimetoksibenzensulfonamid 171

[0500]

a) 6-Bromo-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-amin A14

[0501] U rastvor etanhidroksamne kiseline (0.263 g, 3.50 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5 mL) dodat je t-BuOK (393 mg, 3.50 mmol) i reakcija je mešana tokom 30 minuta. 4-Bromo-2-fluoro-5-metilbenzonitril (0.50 g, 2.3 mmol) dodat je u reakciju koja je mešana tokom dodatna 2 časa na sobnoj temperaturi. Reakcija je razblažena sa etil acetatom (50 mL) i vodi (50 mL), vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom i kombinovani organski slojevi su isprani vodom, osušeni, filtrirani i koncentrovani. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (12 g SiO2kertridž, 0-50% EtOAc u naftnom benzinu 40-60 °C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.30 g, 56% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.68 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 4.35 (br s, 2H), 2.49 (s, 3H). LCMS-B: rt 3.18 min, m/z 229.8 [M+H]<+>.

b) N-(6-bromo-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2,4-dimetoksibenzensulfonamid 171

[0502] Rastvor 2,4-dimetoksibenzensulfonil hlorida (0.052 g, 0.22 mmol) i 6-bromo-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-amina A14 (0.050 g, 0.22 mmol) u piridinu (1 mL) zračen je dva puta u mikrotalasnoj na 110 °C tokom 2 časa, zatim na 130 °C tokom 2 časa. Rezultujuća smeša je postavljena na silika gel i proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (4 g SiO2kertridž, 0-45% EtOAc u naftnom benzinu 40-60 °C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (102 mg, kvantitativni prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.98 - 7.94 (m, 1H), 7.70 - 7.65 (m, 2H), 6.50 (d, J = 2.24 Hz, 1H), 6.43 (dd, J = 2.26, 8.82 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 2.51 (d, J = 0.87 Hz, 4H). LCMS-A: rt 6.08 min, m/z 426.9 [M+H]<+>.

Primer 172: N-(6-(Etoksimetil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamid 172

[0503]

[0504] U rastvor 6-(etoksimetil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amina I21 (250 mg, 1.13 mmol) u anhidrovanom THF (25 mL) na -78 °C pod N2dodat je LiHMDS (1 M rastvor u THF, 4.5 mL, 4.5 mmol) u kapima i smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h. Zatim je u kapima dodat rastvor 2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorida I111 (400 mg, 1.69 mmol) u anhidrovanom THF (2 mL) i smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana preko noći. Smeša je acidifikovana do pH 4-5 sa 2 M vodenim rastvorom HCl i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (DCM/MeOH = 100/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (170 mg, 96% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. Further purification by prep. HPLC gave the title compound (60 mg, 100% čistoća, 13% prinos). LCMS-C: Rt2.08 min; m/z 423.0 [M+H]<+>;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.53 (s, 1H), 7.51 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.78-6.76 (m, 3H), 4.55 (s, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.77 (s, 6H), 3.54 (q, J= 6.8 Hz, 2H), 1.19 (t, J = 6.8 Hz, 3H).

Primer 173: 2,6-Dimetoksi-N-(4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 173

[0506] U rastvor 4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amina I9 (3.0 g, 14.4 mmol) u anhidrovanom THF (200 mL) na -78 °C pod N2dodat je LiHMDS (1 M rastvor u THF, 43.2 mL, 43.2 mmol) u kapima i smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h. Zatim je u kapima dodat rastvor 2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorida I111 (5.1 g, 21.6 mmol) u anhidrovanom THF (10 mL) i smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana preko noći. Smeša je acidifikovana do pH 4-5 sa 2 M vodenim rastvorom HCl i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Reakcija je ponovljena korišćenjem 4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-amina I9 (2.0 g, 9.6 mmol) u 150 mL of THF i dve serije su kombinovane i prečišćene hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 8/1 do 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.1 g, 42%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt1.96 min; m/z 409.0 [M+H]<+>;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.58 (s, 1H), 7.52 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.78 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.76 (s, 1H), 4.51 (s, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.77 (s, 6H), 3.33 (s, 3H).

Primer 174: 2,6-Dimetoksi-N-(4-metoksi-6-fenilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 174

[0507]

[0508] U rastvor 4-metoksi-6-fenilbenzo[d]izoksazol-3-amina I17 (2.5 g, 10.4 mmol) u anhidrovanom THF (60 mL) na -78 °C pod N2dodat je LiHMDS (1 M rastvor u THF, 31.0 mL, 31.0 mmol) u kapima i smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h. Rastvor 2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorida I111 (3.7 g, 15.6 mmol) u anhidrovanom THF (20 mL) je zatim dodat u kapima i dozvoljeno je da se smeša zagreje do 0 °C i mešana preko noći. Dodata je voda i smeša isprana sa sa EtOAc (50 mL × 2). Sloj vodenog rastvora je acidifikovan do pH 3 sa 1 M vodenim rastvorom HCl i ekstrahovan sa EtOAc (50 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 300/1) i dodatno prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 200/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.5 g, 33%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.61 (s, 1H), 7.80 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.50 - 7.44 (m, 5H), 7.09 (s, 1H), 6.80 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.79 (s, 6H); LCMS-C: Rt2.46 min; m/z 441.0 [M+H]<+>.

Primer 175: 3-Hloro-2,6-dimetoksi-N-(4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 175

[0509]

[0510] U rastvor 2,6-dimetoksi-N-(4-metoksi-6-(metoksimetil)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 173 (50 mg, 0.123 mmol) u DMF (10 mL) dodat je NCS (14 mg, 0.123 mmol) i smeša zagrevana je na 50 °C tokom 2 h. Smeša je zatim razblažena sa EtOAc (150 mL) i isprana vodom, fiziološkim rastvorom, sušena preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep-TLC (DCM/MeOH = 120/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (15 mg, 27%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.21 min; m/z 441.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.56 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.91 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.76 (s, 1H), 4.55 (s, 2H), 3.99 (s, 6H), 3.76 (s, 3H), 3.41 (s, 3H).

Primer 176: 2,6-Dimetoksi-N-(4-metoksi-6-(2-metoksifenil)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 176

[0511]

[0512] Smeša N-(6-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida 89 (30 mg, 0.068 mmol), (2-metoksifenil)boronske kiseline (21 mg, 0.135 mmol), Pd(PPh3)4(9 mg, 0.007 mmol) i Na2CO3(22 mg, 0.203 mmol) u 1,4-dioksanu (4 mL) i vodi (1 mL) zagrevana je na 100 °C pod N2preko noći. Smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (Pet. etar/ EtOAc = 1/2) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (10 mg, 31%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.36 min, m/z 471.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.60 (s, 1H), 7.51 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 7.44 - 7.37 (m, 2H), 7.22 (s, 1H), 7.16 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.05 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.79 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.81 (s, 6H), 3.79 (s, 3H).

Primer 177: 2,6-Dimetoksi-N-(4-metoksi-6-(3-metoksifenil)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 177

[0513]

[0514] Smeša N-(6-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamid 89 (50 mg, 0.113 mmol), (3-metoksifenil)boronske kiseline (35 mg, 0.226 mmol), Pd(PPh3)4(14 mg, 0.011 mmol) i Na2CO3(36 mg, 0.339 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) i vodi (2 mL) zagrevana je na 100 °C pod N2preko noći. Dozvoljeno je da se smeša ohladi do RT, podešena do pH 4-5 zatim razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (DCM/MeOH = 50/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (8 mg, 15%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.35 min; m/z 471.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.63 (s, 1H), 7.51 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.37 - 7.29 (m, 2H), 7.07 (s, 1H), 7.03 - 6.98 (m, 1H), 6.79 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.79 (s, 6H).

Primer 178: 5-Etil-2-metoksi-N-(7-fenilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 178

[0515]

[0516] Suspenzija N-(7-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida 137 (100 mg, 0.24 mmol), fenilboronske kiseline (60 mg, 0.48 mmol), Pd(dppf)Cl2(18 mg, 0.024 mmol) i K3PO4·3H2O (260 mg, 0.97 mmol) u toluenu (5 mL), izopropanolu (2 mL) i vodi (5 mL) zagrevana je na 100 °C pod N2tokom 2 h. Dozvoljeno je da se smeša ohladi do RT, razblažena sa EtOAc i isprana vodom (25 mL × 3). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću preparativne TLC (Pet. etar/EtOAc = 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (55 mg, 55%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.06 min; m/z 409.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.8 (s, 1H), 8.08 -8.02 (m, 1H), 7.89 - 7.78 (m, 3H), 7.72 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.55 - 7.40 (m, 5H), 7.13 - 7.08 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.61 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.15 (t, J = 7.5 Hz, 3H).

Primer 179: 5-Etil-2-metoksi-N-(6-fenilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 179

[0517]

[0518] Smeša N-(6-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida 138 (120 mg, 0.3 mmol), Pd(dppf)Cl2(45 mg, 0.06 mmol), fenilboronske kiseline (150 mg, 1.2 mmol) i K3PO4·3H2O (399 mg, 1.5 mmol) u vodi (10 mL), toluenu (10 mL) i izopropanolu (5 mL) zagrevana je na 85 °C pod N2tokom 4 h. Dozvoljeno je da se smeša ohladi do RT, razblažena sa vodom (200 mL) i ekstrahovana sa dietil etarom (200 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (60 mg, 50%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.10 min; m/z 409.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.7 (s, 1H), 8.14 - 8.08 (m, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.79 - 7.74 (m, 2H), 7.73 - 7.67 (m, 2H), 7.54 - 7.39 (m, 4H), 7.12 - 7.07 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.61 (q, J= 7.5 Hz, 2H), 1.15 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Referentni primer 180: N-(4-Hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-2,3-dihidrobenzofuran-7-sulfonamid 180

[0519]

[0520] U rastvor 5-bromo-N-(4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-2,3-dihidrobenzofuran-7-sulfonamida 127 (100 mg, 0.23 mmol) u THF (10 mL) dodat je 10% Pd/C (20 mg) i KOAc (20 mg, 0.28 mmol) i smeša je mešana na 40 °C pod H2atmosferom tokom 2 h zatim na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (DCM/MeOH = 30/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (22 mg 27%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.32 min; m/z 351.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.9 (s, 1H), 7.76 - 7.62 (m, 2H), 7.53 - 7.43 (m, 3H), 6.96 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 4.50 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.22 (t, J = 8.8 Hz, 2H).

Referentni primer 181: N-(4-Hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2,3-dihidrobenzofuran-7-sulfonamid 181

[0521]

a) N-(4-Hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-vinil-2,3-dihidrobenzofuran-7-sulfonamid A15

[0522] U rastvor 5-bromo-N-(4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-2,3-dihidrobenzofuran-7-sulfonamida 127 (200 mg, 0.47 mmol) u 1,4-dioksanu (20 mL), EtOH (10 mL) i H2O (10 mL) dodat je K2CO3(206 mg, 1.86 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2- dioksaborolan (140 mg, 0.93 mmol) i Pd(PPh3)4(54 mg, 0.047 mmol) i smeša je zagrevana na 90 °C pod N2atmosferom preko noći. Rastvarači su uklonjeni pod sniženim pritiskom i ostatak je podeljen između DCM (50 mL), vode (45 mL) i 2 M aq. HCl (5 mL). Slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na kolonii silika gela (Pet. etar/EtOAc = 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (120 mg 70%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt0.40 min; m/z 377.0 [M+H]<+>.

b) N-(4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2,3-dihidrobenzofuran-7-sulfonamid 181

[0523] U rastvor N-(4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-vinil-2,3-dihidrobenzofuran-7-sulfonamida A15 (120 mg, 0.32 mmol) u MeOH (15 mL) dodat je 10% Pd/C (24 mg) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod H2atmosferom preko noći. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (DCM/MeOH = 30/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (33 mg, 27%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.59 min; m/z 379.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.8 (s, 1H), 7.75 - 7.70 (m, 1H), 7.69 - 7.63 (m, 1H), 7.47 - 7.43 (m, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 4.46 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 3.18 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 2.56 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.13 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Referentni primer 182: N-(Benzo[d]izoksazol-3-il)-4-etil-2-metoksibenzensulfonamid 182

[0524]

a) N-(Benzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksi-4-vinilbenzensulfonamid A16

[0525] U rastvor N-(benzo[d]izoksazol-3-il)-4-bromo-2-metoksibenzensulfonamida 141 (200 mg, 0.52 mmol) u toluenu (16 mL), vodi (8 mL) i izopropanolu (8 mL) dodat je K2CO3(288 mg, 2.09 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolan (160 mg, 1.04 mmol) i Pd(PPh3)4(60 mg, 0.052 mmol) i smeša zagrevana je na 90 °C pod N2atmosferom tokom 2 h. Smeša je razblažena sa vodom (50 mL) i 2 M aq. HCl (20mL) i ekstrahovana sa EtOAc (80 mL × 2). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet.

etar/EtOAc = 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (150 mg, 76%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.47 min; m/z 331.0 [M+H]<+>, 353.0 [M+Na]<+>.

b) N-(Benzo[d]izoksazol-3-il)-4-etil-2-metoksibenzensulfonamid 182

[0526] U rastvor N-(benzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksi-4-vinilbenzensulfonamida A16 (80 mg, 0.24 mmol) u MeOH (10 mL) dodat je 10% Pd/C (16 mg) i smeša je mešana na 25 °C preko noći pod H2atmosferom. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (Pet. etar/EtOAc = 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20 mg, 25%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.55 min; m/z 333.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.7 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 - 7.55 (m, 2H), 7.44 - 7.31 (m, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.96 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.63 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.17 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Referentni primer 183: N-(Benzo[d]izoksazol-3-il)-3-metoksi-[1,1'-bifenil]-4-sulfonamid 183

[0527]

[0528] U rastvor N-(benzo[d]izoksazol-3-il)-4-bromo-2-metoksibenzensulfonamida 141 (100 mg, 0.26 mmol) u toluenu (7 mL), vodom (7 mL) i izopropanolu (2.5 mL) dodat je K2CO3(144 mg, 10 mmol), fenilboronska kiselina (64 mg, 0.52 mmol) i Pd(PPh3)4(30 mg, 0.026 mmol) i smeša zagrevana je na 90 °C pod N2atmosferom tokom 2 h. Smeša je razblažena sa vodom (50 mL) i 2 M aq. HCl (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (70 mL × 2). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (55 mg, 46%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.79 min; m/z 381.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.9 (s, 1H), 8.10 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.79 - 7.72 (m, 2H), 7.66 - 7.58 (m, 2H), 7.54 - 7.35 (m, 6H), 3.89 (s, 3H).

Primer 184: 3-(5-Etil-2-metoksifenilsulfonamido)-N-metilbenzo[d]izoksazol-7-karboksamid 184

[0529]

a) N-(7-Bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A17

[0530] U rastvor N-(7-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida 137 (2.3 g, 5.5 mmol), (2,4-dimetoksifenil)metanola (1.4 g, 8.4 mmol) i PPh3(3.6 g, 14.2 mmol) u THF (400 mL) na 0 °C pod N2dodat je DIAD (3.3 g, 16.4 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom vikenda. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.0 g, 32%) kao svetlo plava čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.35 min; m/z 583.1/585.1 [M+Na]<+>.

b) Metil 3-(N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksifenilsulfonamido) benzo[d]izoksazol-7-karboksilata A18

[0531] U rastvor N-(7-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A17 (250 mg, 1.34 mmol) u MeOH (5 mL) i DMF (45 mL) dodat je EtsN (675 mg, 6.68 mmol) i Pd(dppf)Cl2(98 mg, 0.13 mmol) i smeša zagrevana je na 80 °C pod atmosferom CO preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je razblažen sa EtOAc (50 mL), ispran vodom (50 mL × 3), fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 4/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (210 mg, 31%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.10 min; m/z 541.2 [M+H]<+>.

c) 3-(N-((2,4-Dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksifenilsulfonamido)-N-metilbenzo[d]izoksazol-7-karboksamid A19

[0532] Smeša metil 3-(N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksifenilsulfonamido) benzo[d]izoksazol-7-karboksilata A18 (20 mg, 0.037 mmol) i CH3NH2(33% rastvor u EtOH, 4 mL) zagrevana je na 100 °C u zatvorenoj epruveti tokom 30 min. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20 mg, 100%), koje je korišćeno u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-D: Rt2.86 min; m/z 540.2 [M+H]<+>.

d) 3-(5-Etil-2-metoksifenilsulfonamido)-N-metilbenzo[d]izoksazol-7-karboksamid 184

[0533] Smeša 3-(N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksifenil sulfonamido)-N-metilbenzo[d]izoksazol-7-karboksamida A19 (40 mg, 0.07 mmol) i TFA (2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h, zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću preparativne TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (18 mg, 64%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.35 min; m/z 390.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.9 (s, 1H), 8.31 - 8.11 (m, 2H), 8.00 - 7.90 (m, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.52 - 7.41 (m, 2H), 7.14 - 7.04 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.81 (s, 3H), 2.62 (q, J = 8.0, 7.6 Hz, 2H), 1.15 (t, J = 7.9 Hz, 3H).

Primer 185: 3-(5-Etil-2-metoksifenilsulfonamido)-N,N-dimetilbenzo[d]izoksazol-7-karboksamid 185

[0534]

a) Metil 3-(5-etil-2-metoksifenilsulfonamido)benzo[d]izoksazol-7-karboksilat A20

[0535] Smeša metil 3-(N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksifenilsulfonamido) benzo[d]izoksazol-7-karboksilata A18 (150 mg, 0.28 mmol) i TFA (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (80 mg, 74%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.63 min; m/z 391.1 [M+H]<+>, 413.1 [M+Na]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.9 (s, 1H), 8.39 - 8.32 (m, 1H), 8.19 - 8.12 (m, 1H), 7.72 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.56 - 7.44 (m, 2H), 7.12 - 7.05 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 2.62 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.16 (t, J= 7.6 Hz, 3H).

b) 3-((5-Etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-7-karboksilne kiseline A21

[0536] Suspenziji metil 3-(5-etil-2-metoksifenilsulfonamido) benzo[d]izoksazol-7-karboksilata A20 (200 mg, 0.5 mmol) u MeOH (10 mL) i THF (10 mL) dodat je 2 M aq. NaOH (1.28 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je razblažen sa vodom i podešen do pH 2-3. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (144 mg, 75%) kao prljavo bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.43 min; m/z 377.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.5 (s, 1H), 11.8 (s, 1H), 8.35 - 8.29 (m, 1H), 8.15 - 8.09 (m, 1H), 7.72 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.53 - 7.44 (m, 2H), 7.12 - 7.05 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 2.62 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.16 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

c) 3-(5-Etil-2-metoksifenilsulfonamido)benzo[d]izoksazol-7-karbonil hlorid A22

[0537] Smeša 3-((5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-7-karboksilne kiseline A21 (30 mg, 0.08 mmol) i SOCl2(5 mL) zagrevana je na 85 °C pod N2atmosferom tokom 3 h, zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (31 mg, 100%), koje je korišćeno direktno u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.

d) 3-(5-Etil-2-metoksifenilsulfonamido)-N,N-dimetilbenzo[d]izoksazol-7-karboksamid 185

[0538] U rastvor 3-(5-etil-2-metoksifenilsulfonamido)benzo[d]izoksazol-7-karbonil hlorida A22 (31 mg, 0.08 mmol) u THF (1 mL) dodat je dimetilamin (40% rastvor u vodi, 2 mL) u kapima i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je razblažen sa vodom, podešen do pH 2-3 i ekstrahovan sa DCM (30 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (18 mg, 56%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.36 min; m/z 404.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.9 (s, 1H), 8.21 - 8.06 (m, 1H), 7.78 - 7.56 (m, 2H), 7.45 (s, 2H), 7.17 - 6.97 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.01 (s, 3H), 2.80 (s, 3H), 2.61 (m, 2H), 1.15 (m, 3H).

Primer 186: 5-Etil-N-(7-(hidroksimetil)benzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid 186

[0539]

[0540] Smeša 3-(5-etil-2-metoksifenilsulfonamido)benzo[d]izoksazol-7-karboksilne kiseline A21 (30 mg, 0.08 mmol) i BH3·THF (1 M rastvor u THF, 3 mL, 3 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi pod N2atmosferom tokom 5 h. Reakcija je ugašena vodom i većina THF je uklonjena pod sniženim pritiskom. Ostatak je podešen do pH 2-3 i ekstrahovan sa DCM (15 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (DCM/MeOH = 30/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20 mg, 71%) kao svetlo crvena čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.35 min; m/z 363.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.7 (s, 1H), 7.96 - 7.89 (m, 1H), 7.70 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.61 - 7.55 (m, 1H), 7.46 (dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.12 - 7.05 (m, 1H), 5.39 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.70 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 3.73 (s, 3H), 2.61 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.16 (t, J= 7.6 Hz, 3H).

Primer 187: 5-Etil-2-metoksi-N-(7-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 187

[0541]

[0542] Suspenziji N-(7-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida 137 (150 mg, 0.36 mmol) u 1,4-dioksanu (18 mL) i vodi (4.5 mL) dodat je K2CO3(150 mg, 1.09 mmol), metilboronska kiselina (45 mg, 0.73 mmol) i Pd(dppf)Cl2(27 mg, 0.036 mmol) i smeša je zagrevana na 90 °C pod N2atmosferom tokom 4 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je podeljen između EtOAc (50 mL), vodom (40 mL) i 1 M aq. HCl (15 mL). Slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran sa 0.5 M aq. HCl (40 mL × 2), fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20 mg, 16%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.25 min; m/z 347.1 [M+H]<+>, 369.1 [M+Na]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.7 (s, 1H), 7.89 - 7.82 (m, 1H), 7.70 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.50 - 7.38 (m, 2H), 7.25 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.12 - 7.04 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.60 (q, J= 7.6 Hz, 2H), 2.39 (s, 3H), 1.15 (t, J= 7.6 Hz, 3H).

Primer 188: 5-Etil-N-(7-etilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid 188

[0543]

a) N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksi-N-(7-vinilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid A23

[0544] Suspenziji N-(7-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A17 (200 mg, 0.36 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL) i vodi (3 mL) dodat je 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolan (110 mg, 0.71 mmol), K2CO3(148 mg, 1.07 mmol) i Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0.036 mmol) i smeša zagrevana je na 90 °C pod N2atmosferom tokom 4 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je razblažen sa EtOAc (30 mL) i ispran vodom (25 mL × 3). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (95 mg, 52%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.28 min; m/z 509.0 [M+H]<+>.

b) 5-Etil-2-metoksi-N-(7-vinilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamidA24

[0545] Smeša N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksi-N-(7-vinilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida A23 (95 mg, 0.18 mmol) i TFA (4 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (40 mg, 61%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.78 min; m/z 359.1 [M+H]<+>

c) 5-Etil-N-(7-etilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid 188

[0546] U rastvor 5-etil-2-metoksi-N-(7-vinilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida A24 (35 mg, 0.098 mmol) u EtOAc (5 mL) dodat je 10% Pd/C (7 mg) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod H2atmosferom preko noći. Smeša je filtrirana, filtrat je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 4/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 85%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.83 min; m/z 361.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.7 (s, 1H), 7.90 - 7.83 (m, 1H), 7.70 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.50 -7.40 (m, 2H), 7.28 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.12 - 7.05 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.80 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 2.61 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.22 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.15 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primer 189: N-(7-Ciklopropilbenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 189

[0547]

a) N-(7-Ciklopropilbenzo[d]izoksazol-3-il)-N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A25

[0548] Suspenziji N-(7-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-((2,4-dietilbenzil)oksi)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A17 (200 mg, 0.36 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL) i H2O (3 mL) dodata je ciklopropilboronska kiselina (61 mg, 0.71 mmol), K2CO3(148 mg, 1.07 mmol) i Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0.036 mmol) i smeša zagrevana je na 90 °C pod N2atmosferom tokom 4 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je razblažen sa EtOAc (30 mL) i ispran vodom (25 mL × 3). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (140 mg, 75%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.34 min; m/z 523.2 [M+H]<+>.

b) N-(7-Ciklopropilbenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 189

[0549] Smeša N-(7-ciklopropilbenzo[d]izoksazol-3-il)-N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A25 (140 mg, 0.27 mmol) i TFA (6 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (80 mg, 81%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.86 min; m/z 373.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.7 (s, 1H), 7.81 (dd, J= 7.0, 2.1 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 7.50 - 7.43 (m, 1H), 7.27 - 7.19 (m, 2H), 7.12 - 7.06 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.61 (q, J= 7.6 Hz, 2H), 2.17 -2.10 (m, 1H), 1.15 (t, J= 7.5 Hz, 3H), 1.04 - 0.97 (m, 2H), 0.90 - 0.84 (m, 2H).

Primer 190: N-(7-Cikloheksilbenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 190

[0550]

a) N-(7-(cikloheks-1-en-1-il)benzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A26

[0551] Suspenziji N-(7-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A17 (200 mg, 0.36 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL) i vodi (3 mL) dodat je cikloheks-1-en-1-ilboronske kiseline (90 mg, 0.71 mmol), Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0.036 mmol) i K2CO3(148 mg, 1.07 mmol) i smeša zagrevana je na 90 °C pod N2tokom 4 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je razblažen sa EtOAc (30 mL) i ispran vodom (25 mL × 3). Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (150 mg, 75%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) N-(7-(Cikloheks-1-en-1-il)benzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A27

[0552] Smeša N-(7-(cikloheks-1-en-1-il)benzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)- 5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A26 (150 mg , 0.26 mmol) i TFA (7 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (65 mg, 60%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.64 min; m/z 413 [M+H]<+>.

c) N-(7-Cikloheksilbenzo[d]izoksazol-3-il) -5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 190

[0553] Smeša N-(7-(cikloheks-1-en-1-il)benzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A27 (65 mg , 0.15 mmol) i 10% Pd/C (13 mg) u EtOAc (10 mL) je mešana na sobnoj temperaturi pod H2atmosferom tokom 3 h. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (40 mg, 61%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.34 min; m/z 415.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.7 (s, 1H), 7.87 - 7.82 (m, 1H), 7.70 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 2H), 7.28 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.12 - 7.06 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 2.62 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.85 - 1.75 (m, 4H), 1.75 - 1.67 (m, 1H), 1.61 - 1.48 (m, 2H), 1.44 - 1.20 (m, 4H), 1.15 (t, J= 7.6 Hz, 3H).

Primer 191: 5-Etil-2-metoksi-N-(7-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 191

[0554]

a) N-((2,4-Dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksi-N-(7-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamidA29

[0555] Smeši N-(7-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A17 (150 mg, 0.27 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL) i H2O (3 mL) dodat je K2CO3(110 mg, 0.80 mmol), (1-metil-1H-pirazol-4-il)boronske kiseline (67 mg, 0.33 mmol) i Pd(dppf)Cl2(20 mg, 0.027 mmol) i smeša zagrevana je na 90 °C pod N2atmosferom preko noći. Smeša je razblažena sa 0.5 M aq. HCl (30 mL) i organski rastvarač je većinom uklonjen pod sniženim pritiskom. Preostali vodeni rastvor smeše je ekstrahovan sa DCM (40 mL × 3) i Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (DCM/MeOH = 100/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (80 mg, 53%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) 5-Etil-2-metoksi-N-(7-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 191

[0556] Smeša N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksi-N-(7-(1-metil-1H-pirazol- 4-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida A29 (80 mg, 0.14 mmol) i TFA (3 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (DCM/MeOH = 80/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 mg, 86%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.59 min; m/z 413.1 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.8 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.91 - 7.84 (m, 2H), 7.72 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.50 - 7.43 (m, 1H), 7.41 - 7.32 (m, 1H), 7.13 - 7.06 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 2.62 (q, J= 7.6 Hz, 2H), 1.16 (t, J= 7.5 Hz, 3H).

Primer 192: 5-Etil-2-metoksi-N-(7-(pirimidin-5-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 192

[0557]

[0558] Suspenziji N-(7-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida 137 (200 mg, 0.49 mmol) u toluenu (16 mL), vodi (8 mL) i izopropanolu (8 mL) dodata je pirimidin-5-ilboronska kiselina (181 mg, 1.46 mmol), K3PO4(518 mg, 1.95 mmol) i Pd(dppf)Cl2(36 mg, 0.049 mmol) i smeša je zagrevana na 90 °C pod N2atmosferom preko noći. Smeša je podešena do pH 5-6 i ekstrahovana sa EtOAc (20 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (DCM/MeOH = 40/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (18 mg, 9%) kao braon čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.49 min; m/z 411.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.9 (s, 1H), 9.34 - 9.18 (m, 2H), 8.17 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.62 - 7.42 (m, 3H), 7.17 - 7.06 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.62 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.16 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primer 193: 5-Etil-2-metoksi-N-(6-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 193

[0559]

a) N-(6-Bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A30

[0560] U rastvor N-(6-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida 138 (4.1 g, 10.0 mmol), (2,4-dimetoksifenil)metanola (2.5 g, 15.0 mmol) i PPh3(6.6 g, 25.0 mmol) u THF (100 mL) na 0 °C pod N2dodat je DIAD (4.0 g, 20.0 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.0 g, 71%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) N-(2,4-Dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksi-N-(6-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid A31

[0561] Smeša N-(6-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A30 (120 mg, 0.214 mmol), CH3B(OH)2(64 mg, 1.07 mmol), Pd(dppf)Cl2(31 mg, 0.428 mmol) i K2CO3(148 mg, 1.07 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) i vodi (2 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (72 mg, 68%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

c) 5-Etil-2-metoksi-N-(6-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 193

[0562] Smeša N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksi-N-(6-metilbenzo[d]izoksazol- 3-il)benzensulfonamid A31 (72 mg, 0.145 mmol) i TFA (3 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (45 mg, 90%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.76 min; m/z 347.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.6 (s, 1H), 7.94 - 7.87 (m, 1H), 7.68 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.49 - 7.42 (m, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.23 - 7.16 (m, 1H), 7.13 - 7.05 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 2.60 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 2.43 (s, 3H), 1.14 (t, J = 7.5 Hz, 3H).

Primer 194: 5-Etil-N-(6-etilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid 194

[0563]

a) N-(2,4-Dimetoksibenzil)-5-etil-N-(6-etilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid A32

[0564] Smeša N-(6-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A30 (200 mg, 0.356 mmol), etilboronske kiseline (132 mg, 1.78 mmol), Pd(dppf)Cl2(52 mg, 0.071 mmol) i K2CO3(246 mg, 1.78 mmol) u 1,4-dioksanu (20 mL) i vodi (4 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je podeljen između DCM (200 mL) i vode (50 mL). Slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (120 mg, 67%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) 5-Etil-N-(6-etilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid 194

[0565] Smeša N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-N-(6-etilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamida A32 (120 mg, 0.24 mmol) i TFA (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (80 mg, 94%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.84 min; m/z 361.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.6 (s, 1H), 7.97 - 7.90 (m, 1H), 7.69 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.49 - 7.37 (m, 2H), 7.26 - 7.19 (m, 1H), 7.11 - 7.04 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 2.73 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.60 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.20 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 1.14 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primer 195: N-(6-Ciklopropilbenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 195

[0566]

[0567] Smeša N-(6-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida 138 (206 mg, 0.5 mmol), ciklopropilboronske kiseline (215 mg, 2.5 mmol), Pd(dppf)Cl2(73 mg, 0.1 mmol) i K2CO3(345 mg, 2.5 mmol) u 1,4-dioksanu (20 mL) i vodi (4 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (80 mg, 43%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.86 min; m/z 373.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.6 (s, 1H), 7.91 - 7.85 (m, 1H), 7.68 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.48 - 7.42 (m, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.12 - 7.04 (m, 2H), 3.72 (s, 3H), 2.60 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.10 - 2.00 (m, 1H), 1.14 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.07 - 0.99 (m, 2H), 0.83 - 0.75 (m, 2H).

Primer 196: 5-Etil-2-metoksi-N-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 196

a) N-(2,4-Dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksi-N-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid A33

[0569] Smeša N-(6-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A30 (120 mg, 0.214 mmol), (1-metil-1H-pirazol-4-il)boronske kiseline (54 mg, 0.428 mmol), Pd(dppf)Cl2(31 mg, 0.043 mmol) i K2CO3(148 mg, 1.07 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) i vodi (2 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je podeljen između DCM (150 mL) i vode (50 mL). Slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (90 mg, 75%) kao braon čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.05 min; m/z 563.0 [M+H]<+>.

b) 5-Etil-2-metoksi-N-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 196

[0570] Smeša N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksi-N-(6-(1-metil-1H-pirazol-4-il) benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida A33 (90 mg, 0.16 mmol) i TFA (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 46%) kao braon čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.57 min; m/z 413.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.6 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.06 - 7.95 (m, 2H), 7.78 (s, 1H), 7.70 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.64 - 7.56 (m, 1H), 7.50 - 7.42 (m, 1H), 7.13 - 7.05 (m, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 2.61 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.15 (t, J = 7.5 Hz, 3H).

Primer 197: 5-Etil-2-metoksi-N-(6-(pirimidin-5-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 197

[0571]

[0572] Smeša N-(6-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida 138 (100 mg, 0.24 mmol), pirimidin-5-ilboronske kiseline (45 mg, 0.36 mmol), Pd(PPh3)4(28 mg, 0.024 mmol) i K2CO3(166 mg, 1.2 mmol) u toluenu (8 mL), vodi (8 mL) i izopropanolu (2 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2tokom 4 h.2 M aq. NaOH (15 mL) dodat je i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Smeša isprana sa sa EtOAc (20 mL × 2) zatim podešen do pH 2 sa konc. HCl i ekstrahovana sa DCM (50 mL × 2). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (DCM/MeOH = 30/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (15 mg, 15%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.97 min; m/z 411.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.8 (s, 1H), 9.24 (s, 3H), 8.21 - 8.15 (m, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.85 - 7.78 (m, 1H), 7.72 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.49 - 7.42 (m, 1H), 7.13 - 7.05 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.61 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.15 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primer 198: 5-Etil-2-metoksi-N-(4-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 198

[0573]

a) N-(4-Bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A34

[0574] U rastvor N-(4-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida 129 (2.1 g, 5.1 mmol), (2,4-dimetoksifenil)metanol (1.3 g, 7.7 mmol) i PPh3(3.35 g, 12.8 mmol) u THF (200 mL) na 0 °C pod N2dodat je DIAD (3.1 g, 15.3 mmol) i smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h zatim je dozvoljeno da se zagreje do RT i mešana preko noći. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.2 g, 42%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.40 min; m/z 583.0 [M+H]<+>.

b) N((2,4-Dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksi-N-(4-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid A35

[0575] Smeša N-(4-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A34 (200 mg, 0.36 mmol), metilboronske kiseline (43 mg, 0.71 mmol), K2CO3(148 mg, 1.07 mmol) i Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0.036 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL) i vodi (3 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2tokom 4 h. Smeša je podešena do pH 2-3 i većina rastvarača je uklonjenaa pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa vodom (10 mL) i ekstrahovan sa DCM (25 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EA = 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (125 mg, 71%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

c) 5-Etil-2-metoksi-N-(4-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 198

[0576] Smeša N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksi-N-(4-metil benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida A35 (125 mg, 0.26 mmol) i TFA (3 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h zatim razblažena sa DCM (100 mL), isprana vodom, sušena preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (85 mg, 92%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.69 min m/z 347.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.6 (s, 1H), 7.58-7.56 (m, 1H), 7.52-7.46 (m, 3H), 7.18-7.14 (m, 2H), 3.73 (s, 3H), 2.62-2.56 (m, 5H), 1.14 (t, J= 7.6 Hz, 3H)

Primer 199: 5-Etil-N-(4-etilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid 199

[0577]

a) N-(2,4-Dimetoksibenzil)-5-etil-N-(4-etilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid A36

[0578] Smeša N-(4-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A34 (200 mg, 0.36 mmol), etilboronske kiseline (53 mg, 0.71 mmol), K2CO3(148 mg, 1.07 mmol) i Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0.036 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL) i H2O (3 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2tokom 4 h. Smeša je podešen do pH 2-3 i većina rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa vodom (15 mL) i ekstrahovan sa DCM (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet.

etar/EtOAc = 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (120 mg, 66%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) 5-Etil-N-(4-etilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid 199

[0579] Smeša N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-N-(4-etilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamida A36 (120 mg, 0.23 mmol) i TFA (3 mL) je mešana na sobnoj temperaturi pod N2tokom 3 h zatim razblažena sa DCM (100 mL), isprana vodom, sušena preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (75 mg, 89%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.80 min 361.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.5 (s, 1H), 7.60-7.49 (m, 4H), 7.22-7.18 (m, 2H), 3.81 (s, 3H), 8.09 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.59 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.25 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 1.14 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primer 200: N-(4-Ciklopropilbenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 200

[0580]

a) N-(4-Ciklopropilbenzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A37

[0581] Smeša N-(4-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A34 (200 mg, 0.36 mmol), ciklopropilboronske kiseline (61 mg, 0.71 mmol), K2CO3(148 mg, 1.07 mmol) i Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0.036 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL) i H2O (3 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2tokom 4 h. Smeša je podešena do pH 2-3 i većina rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažena sa vodom (15 mL) i ekstrahovana sa DCM (20 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (120 mg, 66%) kao žuta čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) N-(4-Ciklopropilbenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 200

[0582] Smeša N-(4-ciklopropilbenzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A37(130 mg, 0.25 mmol) i TFA (3 mL) je mešana na sobnoj temperaturi pod N2tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (85 mg, 92%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.81 min, 373.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.6 (s, 1H), 7.58-7.57 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.53-7.42 (m, 3H), 7.18-7.16 (m, 1H), 6.86-6.84 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.72 (m, 1H), 2.60 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.14 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 1.02-0.98 (m, 2H), 0.82-0.78 (m, 2H).

Primer 201: N-(4-cikloheksilbenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 201

[0583]

a) N-(4-(Cikloheks-1-en-1-il)benzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A38

[0584] Smeša N-(4-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A34 (200 mg, 0.36 mmol), cikloheks-1-en-1-ilboronske kiseline (90 mg, 0.71 mmol), K2CO3(148 mg, 1.07 mmol) i Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0.036 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL) i H2O (3 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2tokom 4 h. Većina rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom, ostatak je razblažena sa vodom (30 mL), podešen do pH 1-2 i ekstrahovan sa DCM (35 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 100/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (150 mg, 75%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) N-(4-(Cikloheks-1-en-1-il)benzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A39

[0585] Smeša N-(4-(cikloheks-1-en-1-il)benzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5- etil-2-metoksibenzensulfonamida A38 (150 mg, 0.27 mmol) i TFA (3 mL) je mešana na sobnoj temperaturi pod N2tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (80 mg, 73 %) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

c) N-(4-Cikloheksilbenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 201

[0586] Smeša N-(4-(cikloheks-1-en-1-il)benzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksi benzensulfonamida A39 (80 mg, 0.19 mmol) i 10% Pd/C (16 mg) u EtOAc (10 mL) je mešana na sobnoj temperaturi pod H2atmosferom tokom 3 h. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (75 mg, 94%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.24 min, 415.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.5 (s, 1H), 7.58-7.48 (m, 4H), 7.26 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.62-3.56 (m, 1H), 2.59 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.91-1.71 (m, 5H), 1.45-1.23 (m, 5H), 1.15 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primer 202: 5-Etil-2-metoksi-N-(4-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 202

[0587]

a) N-(2,4-Dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksi-N-(4-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid A40

[0588] Smeša N-(4-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A34 (200 mg, 0.36 mmol), (1-metil-1H-pirazol-4-il)boronske kiseline (90 mg, 0.71 mmol), K2CO3(148 mg, 1.07 mmol) i Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0.036 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL) i H2O (3 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2tokom 4 h. Većina rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom, ostatak je razblažen sa vodom (30 mL), podešen do pH 1-2 i ekstrahovana sa DCM (35 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 100/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (105 mg, 53%) kao žuta čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) 5-Etil-2-metoksi-N-(4-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 202

[0589] Smeša N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksi-N-(4-(1-metil-1H-pirazol-4-il) benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida A40 (105 mg, 0.19 mmol) i TFA (2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi pod N2tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 80/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (60 mg, 79%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.587 min, m/z 413.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.2 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.66-7.45 (m, 4H), 7.39 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 2.58 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.15 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primer 203: 5-Etil-2-metoksi-N-(4-(pirimidin-5-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 203

[0590]

a) N-(2,4-Dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksi-N-(4-(pirimidin-5-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid A41

[0591] Smeša N-(4-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-((2,4-dimetoksibenzil)oksi)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A34 (200 mg, 0.36 mmol), pirimidin-5-ilboronske kiseline (43 mg, 0.71 mmol), K2CO3(148 mg, 1.07 mmol) i Pd(dppf)Cl2(26 mg, 0.036 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL) i H2O (3 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2tokom 4 h. Većina rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom, ostatak je razblažen sa vodom (30 mL), podešen do pH 1-2 i ekstrahovan sa DCM (35 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 60/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (95 mg, 47%) kao žuta čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) 5-Etil-2-metoksi-N-(4-(pirimidin-5-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 203

[0592] Smeša N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksi-N-(4-(pirimidin-5-il) benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida A41 (95 mg, 0.17 mmol) i TFA (2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi pod N2tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 40/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (45 mg, 65%) kao crvena čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.50 min, m/z 411.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.5 (s, 1H), 9.24 (s, 1H), 8.97 (s, 2H), 7.86-7.79 (m, 2H), 7.53-7.38 (m, 3H), 7.13-7.11 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.55 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.11 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Referentni primer 204: N-(5-Etilbenzo[d]izoksazol-3-il)-3-metoksi-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-sulfonamid 204

[0593]

[0594] Smeša N-(5-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-3-metoksi-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-sulfonamid 113 (219 mg, 0.5 mmol), etilboronske kiseline (185 mg, 2.5 mmol), Pd(dppf)Cl2(73 mg, 0.1 mmol) i K2CO3(345 mg, 2.5 mmol) u 1,4-dioksanu (20 mL) i vodi (20 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2preko noći. Smeša je zatim podešena do pH 1 i većina rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažena sa vodom (50 mL) i ekstrahovan sa DCM (100 mL). Organski ekstrakt je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 10/1 do 2/1) i nakon toga preparativnom TLC (Pet. etar/EtOAc = 1/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (52 mg, 27%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.06 min, m/z 387.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.4 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.51 - 7.43 (m, 2H), 6.84 (s, 1H), 3.71 (s, 3H), 2.77 - 2.65 (m, 6H), 1.75 - 1.66 (m, 4H), 1.24 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Referentni primer 205: N-(5-Ciklopropilbenzo[d]izoksazol-3-il)-3-metoksi-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-sulfonamid 205

[0595]

[0596] Smeša N-(5-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-3-metoksi-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-sulfonamida 113 (219 mg, 0.5 mmol), ciklopropilboronske kiseline (215 mg, 2.5 mmol), Pd(dppf)Cl2(73 mg, 0.1 mmol) i K2CO3(345 mg, 2.5 mmol) u 1,4-dioksanu (20 mL) i vodi (4 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2preko noći. Smeša je zatim podešena do pH 1 sa konc. HCl i većina rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa vodom (30 mL) i ekstrahovana sa DCM (100 mL). Organski ekstrakt je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 10/1 do 2/1) nakon toga preparativnom TLC (Pet. etar/EtOAc = 1/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 mg, 25%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.07 min, m/z 399.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.4 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.47 - 7.43 (m, 1H), 7.40 - 7.35 (m, 1H), 6.84 (s, 1H), 3.71 (s, 3H), 2.77 - 2.65 (m, 4H), 2.08 - 2.00 (m, 1H), 1.74 - 1.66 (m, 4H), 1.04 - 0.96 (m, 2H), 0.68 - 0.61 (m, 2H).

Primer 206: N-(4-Hloro-5-etilbenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 206

[0597]

[0598] Smeša N-(5-bromo-4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksi benzensulfonamida 128 (200 mg, 0.449 mmol), etilboronske kiseline (166 mg, 2.244 mmol), Pd(dppf)Cl2(66 mg, 0.09 mmol) i K2CO3(310 mg, 2.244 mmol) u 1,4-dioksanu (20 mL) i vodi (4 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2preko noći. Smeša je zatim podešena do pH 2 sa 1 M aq. HCl i većina rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa vodom i ekstrahovana sa DCM. Organski ekstrakt je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 2/1) nakon toga preparativnom TLC (DCM/MeOH = 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (15 mg, 9%) kao bela čvrsta supstanca.

[0599] LCMS-D: Rt2.89 min, m/z 395.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.4 (s, 1H), 7.64 (s, 2H), 7.61 - 7.57 (m, 1H), 7.49 - 7.44 (m, 1H), 7.15 - 7.10 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 2.80 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.60 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.21 - 1.11 (m, 6H).

Primer 207: N-(4-Hloro-5-ciklopropilbenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 207

[0600]

[0601] Smeša N-(5-bromo-4-hlorobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksi benzensulfonamida 128 (200 mg, 0.449 mmol), ciklopropilboronske kiseline (193 mg, 2.244 mmol), Pd(dppf)Cl2(66 mg, 0.09 mmol) i K2CO3(310 mg, 2.244 mmol) u 1,4-dioksanu (20 mL) i vodi (4 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2preko noći. Smeša je zatim podešena do pH 2 sa 1 M aq. HCl i većina rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa DCM. Organski ekstrakt je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 3/1) nakon toga preparativnom TLC (DCM/MeOH = 100/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20 mg, 11%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.91 min, m/z 407.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.4 (s, 1H), 7.64 - 7.56 (m, 2H), 7.52 - 7.44 (m, 1H), 7.34 - 7.27 (m, 1H), 7.17 - 7.11 (m, 1H), 3.67 (s, 3H), 2.60 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.27 -2.17 (m, 1H), 1.15 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 1.08 - 1.00 (m, 2H), 0.78 - 0.70 (m, 2H).

Primer 208: N-(5-Ciklopropil-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 208

[0602]

[0603] Smeša N-(5-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksi benzensulfonamida 108 (100 mg, 0.227 mmol), ciklopropilboronske kiseline (97 mg, 1.133 mmol), Pd(dppf)Cl2(33 mg, 0.046 mmol) i K2CO3(156 mg, 1.133 mmol) u 1,4-dioksanu (20 mL) i vodi (4 mL) zagrevana je na 90 °C pod N2preko noći. Smeša je zatim podešena do pH 2 sa 1 M aq. HCl i većina rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa vodom i ekstrahovan sa DCM. Organski ekstrakt je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Pet. etar/EtOAc = 50/1 do 3/1) nakon toga preparativnom TLC (DCM/MeOH = 100/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 33%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.87 min; m/z 403.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.4 (s, 1H), 7.63 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.50 - 7.45 (m, 1H), 7.32 - 7.26 (m, 1H), 7.19 - 7.12 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 2.61 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.22-2.15 (m, 1H), 1.15 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.03 - 0.94 (m, 2H), 0.76 - 0.64 (m, 2H).

Primers 209, 210 i 211

[0604]

a) terc-Butil((3,5-dimetoksibenzil)oksi)dimetilsilan A42

[0605] U rastvor (3,5-dimetoksifenil)metanola (10 g, 0.059 mol) i imidazola (6.07 g, 0.089 mol) u DMF (100 mL) na sobnoj temperaturi dodat je TBSCI (9.86 g, 0.065 mol) i smeša je mešana preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je ispran vodom, koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 20/1 do 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (13 g, 77%) kao bezbojno ulje, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) Litijum 4-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-2,6-dimetoksibenzensulfinat A43

[0606] U rastvor terc-butil((3,5-dimetoksibenzil)oksi)dimetilsilana A42 (5 g, 0.018 mol) i TMEDA (2.26 g, 0.020 mol) u n-heksanu (100 mL) na -70 °C dodat je n-BuLi (2.5 M rastvor u heksanima, 7.8 mL, 0.020 mol) i smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h. Smeša je zatim ponovno ohlađen do -60 °C i barbotiran sa SO2gasom tokom 30 min. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom i ispran sa n-heksanom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (6.2 g, 100%), koje je korišćena direktno u sledećem koraku.

c) 4-(((terc-Butildimetilsilil)oksi)metil)-2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorid A44

[0607] Smeši litijum 4-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-2,6-dimetoksi benzensulfinata A43 (6.2 g, 0.018 mol) u n-heksanu (100 mL) na 0 °C dodat je SO2Cl2(2.39 g, 0.018 mol) i smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h. Čvrste supstance su sakupljene filtracijom, isprane sa n-heksanom zatim rastvorene u EtOAc i isprane vodom. Organski sloj je je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 20/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.4 g, 36%) kao žuta čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

d) 4-(((terc-Butildimetilsilil)oksi)metil)-2,6-dimetoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid A45

[0608] U rastvor 4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amina (819 mg, 4.99 mmol) u THF (20 mL) na -78 °C dodat je LiHMDS (1 M rastvor u THF, 5.98 mL, 5.98 mmol) i smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min, zatim ohlađena do -60 °C. Dodat je rastvor 4-(((tertbutildimetilsilil)oksi)metil)-2,6-dimetoksibenzensulfonil hlorida A44 (1.9 g, 4.99 mmol) u THF (20 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je podešena do pH 5 sa 1 M aq. HCl i ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (170 mg, 7%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.33 min, m/z 509.0 [M+H]<+>.

e) 4-(Hidroksimetil)-2,6-dimetoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 209

[0609] U rastvor 4-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-2,6-dimetoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida A45 (170 mg, 0.334 mmol) u THF (10 mL) dodat je TBAF (175 mg, 0.668 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakcija je ugašena sa 1 M aq. HCl i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću preparativne TLC (DCM/MeOH = 100/1 do 50/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 23%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt1.93 min, m/z 394.9 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (s, 1H), 7.55 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.18 - 7.12 (m, 1H), 6.89 - 6.82 (m, 1H), 6.72 (s, 2H), 5.39 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.77 (s, 6H).

f) 4-(Bromometil)-2,6-dimetoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid A46

[0610] Rastvor 4-(hidroksimetil)-2,6-dimetoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il) benzensulfonamida 209 (1.0 g, 2.53 mmol), CBr4(2.52 g, 7.60 mmol) i PPh3(1.99 g, 7.60 mmol) u DCM (20 mL) je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 50/1 do 10:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (600 mg, 52%) kao žuta čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

g) 4-(Azidometil)-2,6-dimetoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid A47

[0611] Rastvor 4-(bromometil)-2,6-dimetoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il) benzensulfonamida A46 (200 mg, 0.44 mmol) i NaN3(85 mg,1.31 mmol) u DMF (5 mL) zagrevan je na 50 °C tokom 3 h. Smeša je sipana u vodu i talog je sakupljen filtracijom. Filter kolač je ispran vodom i osušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (100 mg, 54%) kao siva čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.45 min, m/z 420.1 [M+H]<+>.

h) 4-(Aminometil)-2,6-dimetoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid hidrohlorid 210

[0612] Rastvor 4-(azidometil)-2,6-dimetoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il) benzensulfonamida A47 (300 mg, 0.716 mmol) i PPh3(207 mg, 0.788 mmol) u THF (8 mL) i EtOH (6 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Dodata je voda (2 mL) i koncentrovana HCl (2 mL) i smeša zagrevana je na 55°C tokom 3 h. Većina organskih rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom i vodeni rastvor ostatka ispran je sa DCM. Faza vodenog rastvora je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (150 mg, 53%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt0.38 min, m/z 394.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanold4) δ 7.54 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.06 - 7.01 (m, 1H), 6.87 (s, 2H), 6.86 - 6.82 (m, 1H), 4.12 (s, 2H), 4.07 (s, 3H), 3.89 (s, 6H).

i) N-(3,5-Dimetoksi-4-(N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)sulfamoil)benzil)acetamid 211

[0613] Smeša 4-(aminometil)-2,6-dimetoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il) benzensulfonamid hidrohlorida 210 (130 mg, 0.33 mmol), NaHCOs (83 mg, 0.99 mmol) i anhidrida sirćetne kiseline (101 mg, 0.99 mmol) u THF (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću preparativne TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 mg, 34%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt1.93 min, m/z 436.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.47 (s, 1H), 8.36 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 7.55 (m, 1H), 7.18 - 7.12 (m, 1H), 6.89 - 6.81 (m, 1H), 6.66 (s, 2H), 4.24 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.76 (s, 6H), 1.88 (s, 3H).

Primer 212: 2-Fluoro-6-metoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 212

[0614]

a) 2,6-Difluoro-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid A48

[0615] U rastvor 4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-amina (4.0 g, 24.0 mmol) u THF (200 mL) na -78 °C pod azot dodat je LiHMDS (1 M rastvor u THF, 31.2 mL, 31.2 mmol) u kapima i smeša je mešana na -78 °C tokom 3 h. Rastvor 2,6-difluorofenilsulfonil hlorid (10.2 g, 48 mmol) u THF (20 mL) je zatim dodat u kapima i dozvoljeno je da se smeša polako zagreje do RT i mešana preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (200 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet.

etar/EtOAc = 6/1 do 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.9 g, 35%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt1.94 min, m/z 341.1 [M+H]<+>.

b) 2-Fluoro-6-metoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 212

[0616] Smeša 2,6-difluoro-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida A48 (450 mg, 1.32 mmol) i NaOMe (428 mg, 7.92 mmol) u MeOH (6 mL) zagrevana je na 120 °C preko noći zatim je dozvoljeno da se ohladi do RT i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću preparativne TLC (DCM/MeOH = 50/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (100 mg, 21%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.22 min, m/z 353.0 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.6 (s, 1H), 7.62 (m, 1H), 7.56 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.04 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.00 - 6.92 (m, 1H), 6.84 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.80 (s, 3H).

Primer 213: 2-Hidroksi-6-metoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 213

[0617]

[0618] Smeša 2-fluoro-6-metoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida 212 (20 mg, 0.06 mmol), (6-metoksipiridin-3-il)metanola (50.1 mg, 0.36 mmol) i t-BuOK (20.2 mg, 0.18 mmol) u NMP (1 mL) zagrevana je na 120 °C tokom 16 h. LCMS analiza je ukazala se formirao samo proizvod F hidrliza. Smeša je podešena do pH <4 sa aq. HCl, razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Procedura je ponovljena sa sledećom serijom 2-fluoro-6-metoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida 212 (52 mg, 0.15 mmol), dva sirova proizvoda su kombinovana i prečišćena sa prep. TLC (EtOAc/Pet. etar = 1/13 zatim DCM/MeOH = 50/1 do 100/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (135 mg, 19%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.39 min; m/z 350.9 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.2 (s, 1H), 7.57 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.60-6.56 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.75 (s, 3H).

Primer 214: 2-Metoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-6-(metilamino)benzensulfonamid 214

[0619]

[0620] Rastvor 2-fluoro-6-metoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida 212 (30 mg, 0.085 mmol), metilamin HCl (23 mg, 0.34 mmol) i EtsN (52 mg, 0.51 mmol) u ethanol (3 mL) zagrevana je na 120 °C u zatvorenoj epruveti preko noći. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen prep. TLC (DCM) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4 mg, 13%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.49 min; m/z 364.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.56 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 2.79 (s, 3H).

Primer 215: 2-(Ciklopropilmetoksi)-6-metoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 215

[0621]

[0622] U rastvor 2-fluoro-6-metoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida 212 (30 mg, 0.08 mmol) u THF (4 mL) dodat je t-BuOK (27 mg, 0.24 mmol) i nakon toga ciklopropilmetanol (17 mg, 0.24 mmol) i smeša je zagrevana na 50 °C preko noći. Smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc (20 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (Pet. etar/EtOAc = 1/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.4 mg, 13%) kao siva čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.54 min, m/z 405.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.33 (s, 1H), 7.57 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.48 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.77-6.75 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.89 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 3.77 (s, 3H), 0.86-0.83 (m, 1H), 0.43-0.24 (m, 4H).

Referentni primer 216: 2-Metoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-6-((2-metoksipiridin-4-il)metoksi)benzensulfonamid 216

[0623]

[0624] U rastvor 2-fluoro-6-metoksi-N-(4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida 212 (30 mg, 0.08 mmol) u NMP (3 mL) dodat je t-BuOK (48 mg, 0.43 mmol) i nakon toga (2-metoksipiridin-4-il)metanol (118 mg, 0.85 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 h. Smeša je razblažena sa vodom, podešena do pH 5-6 sa 1 M aq. HCl i ekstrahovana sa EtOAc (20 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (DCM/MeOH = 40/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5 mg, 12%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.43 min, m/z 472.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.65 (s, 1H), 8.07 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.51-7.39 (m, 2H), 7.07-6.98 (m, 3H), 6.79-6.75 (m, 3H), 5.22 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.81 (s, 3H).

Primeri i referentni primeri 217-222 (Tabela G)

[0625]

Tabela G. Sledeći primeri su sintetisani prema postupcima opisanim u 215 ili 216. Varijacije uslova su zabeležene u tabeli.

Primer 223: 2,6-Dimetoksi-N-(4-nitrobenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 223

[0626]

[0627] U rastvor 4-nitrobenzo[d]izoksazol-3-amina I10 (478 mg, 2.63 mmol) u THF (9 mL) na -78 °C pod azotom dodat je LiHMDS (1 M rastvor u THF, 5.30 mL, 5.30 mmol) i smeša je mešana na -78 °C tokom 3 h.2,6-Dimetoksisufonil hlorid I111 (1.25 g, 5.27 mmol) je zatim dodat i smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana preko noći. Reakcija je ugašena vodom i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (80 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom (100 mL × 3), fiziološkim rastvorom (50 mL × 3), sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 1/0 do 50/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (108 mg, 11%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.23 min; m/z 380.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.2 (s, 1H), 8.19 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.92 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.71 (s, 6H).

Primer 224: N-(4-Aminobenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamid 224

[0628]

[0629] U rastvor 2,6-dimetoksi-N-(4-nitrobenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida 223 (70.0 mg, 0.18 mmol) u EtOAc (30 mL) dodat je 10% Pd/C (40.0 mg) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći pod atmosferom vodonika. Katalizator je uklonjen filtracijom, ispran sa EtOAc i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Procedura je ponovljena na dodtnoj seriji 2,6-dimetoksi-N-(4-nitrobenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamida 223 (30 mg, 0.079 mmol) i sirovi proizvodi su kombinovani i prečišćeni dva puta sa prep. TLC (DCM/MeOH = 50/1) i dva puta sa prep. HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.5 mg, 3%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.25 min; m/z 350.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, FDMSO-d6) δ 7.52 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.43 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.78 (s, 6H).

Primer 225: N-(5-((1H-Pirazol-1-il)metil)benzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 225

[0630]

a) N-(5-Bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A49

[0631] U rastvor N-(5-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida 135 (8.2 g, 19.9 mmol), (2,4-dimetoksifenil)metanol (5.03 g, 29.9 mmol) i PPh3(13.1 g, 49.9 mmol) u THF (400 mL) na 0 °C pod azotom dodat je DIAD (8.06 g, 39.9 mmol) polako u kapima i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.7 g, 42%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.39 min, m/z 583.1 [M+Na]<+>

b) Metil 3-((N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d] izoksazol-5-karboksilata A50

[0632] Smeša N-(5-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A49 (1.5 g, 2.67 mmol), EtsN (10 mL) i Pd(dppf)Cl2(732 mg, 1 mmol) u MeOH (150 mL) zagrevana je na 120 °C pod atmosferom ugljen monoksida (20 bar) tokom 7 h.

Reakcija je ponovljena sa 1.7 g N-(5-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A49 i 1.5 g N-(5-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A49 i smeše su kombinovane i je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 100/1 do 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.2 g, 49%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.17 min, m/z 563.1 [M+Na]+

c) 3-((N-(2,4-Dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-karboksilna kiselina A51

[0633] U rastvor metil 3-((N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksifenil) sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-karboksilata A50 (2.2 g, 4.07 mmol) u metanolu (30 mL) dodat je 3 M aq. NaOH (20 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je podešena do pH 1 sa aq. HCl i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa vodom (100 mL) i ekstrahovan sa DCM (200 mL). Organski ekstrakt je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.9 g, 89%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.99 min, m/z 549.1 [M+Na]<+>.

d) N-(2,4-Dimetoksibenzil)-5-etil-N-(5-(hidroksimetil)benzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid A52

[0634] U rastvor 3-((N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido) benzo[d]izoksazol-5-karboksilne kiseline (800 mg, 1.52 mmol) A51 u THF (5 mL) na 0 °C pod azotom dodat je BH3·THF (1 M rastvor u THF, 10 mL, 10 mmol) polako u kapima i smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana tokom 2 h. Smeša je ohlađena do 0 °C i reakcija je ugašena sporim dodavanjem metanola (20 mL). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je razblažen sa vodom i ekstrahovan sa DCM (200 mL). Organski ekstrakt je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 100/0 do 40/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (700 mg, 90%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.99 min, m/z 513.1 [M+H]<+>.

e) N-(5-((1H-Pirazol-1-il)metil)benzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A53

[0635] U rastvor N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-N-(5-(hidroksimetil) benzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamida A52 (200 mg, 0.39 mmol) i Et3N (197 mg, 1.95 mmol) u DCM (10 mL) na 0 °C pod azotom dodat je metansulfonil hlorid (89 mg, 0.78 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.5 h zatim direktno korišćena u sledećem koraku bez i izolovanja.

[0636] U rastvor pirazola (133 mg, 1.95 mmol) u DMF (20 mL) na 0 °C pod azotom dodat je t-BuOK (219 mg, 1.95 mmol) u delovima i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.5 h. Reakciona smeša koja je sadržala (3-((N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido) benzo[d]izoksazol-5-il)metil metansulfonat (pretpostavljeno 0.39 mmol) je zatim polako dodata i rezultujuća smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski ekstrakt je ispran vodom (x 3), fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 40/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (60 mg, 27%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt3.01 min, m/z 563.2 [M+H]<+>.

f) N-(5-((1H-Pirazol-1-il)metil)benzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 225

[0637] Smeša N-(5-((1H-pirazol-1-il)metil)benzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A53 (60 mg, 0.107 mmol) i TFA (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 68%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt6.03 min, m/z 412.5 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.9 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.85 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.58-7.49 (m, 3H), 7.46 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.31 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 5.54 (s, 2H), 3.68 (s, 3H), 2.63 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.16 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primer 226: N-(5-(Aminometil)benzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid trifluoroacetat 226

[0638]

a) 3-((N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-karboksamid A54

[0639] Smeša 3-((N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido) benzo[d]izoksazol-5-karboksilne kiseline A51 (600 mg, 1.14 mmol) i tionil hlorida (5 mL) zagrevana je na 85 °C tokom 1.5 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u DCM (3 mL) i dodat u kapima konc. NH4OH (10 mL) na 0 °C i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Većina rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom i ostatak je razblažena sa vodom (20 mL). Dobijeni talog je sakupljen filtracijom, ispran dva puta sa vodom i osuušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (400 mg, 67%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.86 min, m/z 526.2 [M+H]<+>.

b) N-(5-(Aminometil)benzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid A55

[0640] Smeša 3-((N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksifenil) sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-karboksamida A54 (400 mg, 0.76 mmol) i BH3·THF (1 M rastvor u THF, 20 mL) zagrevana je na 75 °C pod azotom preko noći. Smeša je zatim ohlađena do 0 °C i reakcija je ugašena sporim dodavanjem metanola (10 mL). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je razblažen sa vodom i ekstrahovan sa DCM (100 mL). Organski ekstrakt je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 100/1 do 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (150 mg, 39%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

c) N-(5-(Aminometil)benzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid trifluoroacetat 226

[0641] Smeša N-(5-(aminometil)benzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A55 (50 mg, 0.098 mmol) i TFA (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (DCM/MeOH = 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 86%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt1.93 min, m/z 362.1[M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.8 (br s, 1H), 8.53 (br s, 3H), 8.11 (s, 1H), 7.83 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.70-7.68 (m, 2H), 7.48 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.13 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 2.64 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.17 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primer 227: Metil ((3-((5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-il)metil) karbamat 227

[0642]

a) Metil ((3-((N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d] izoksazol-5-il)metil) karbamat A56

[0643] U rastvor N-(5-(aminometil)benzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A55 (70 mg, 0.137 mmol) i EtsN (69 mg, 0.685 mmol) u DCM (20 mL) na 0 °C dodat je metil hloroformat (39 mg, 0.411 mmol) u kapima i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je razblažen sa vodom i ekstrahovan sa DCM. Organski ekstrakt je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 100/0 do 40/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 43%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) Metil ((3-((5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-il)metil) karbamat 227

[0644] Smeša metil ((3-((N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido) benzo[d]izoksazol-5-il)metil)karbamata A56 (30 mg, 0.0558 mmol) i TFA (3 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 40/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (15 mg, 64%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.45 min, m/z 420.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.7 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.79 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.55-7.43 (m, 3H), 7.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.29 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.58 (s, 3H), 2.63 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.16 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primer 228: N-((3-((5-Etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-il)metil)acetamid 228

[0645]

a) N-((3-((N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-il)metil)acetamid A57

[0646] U rastvor N-(5-(aminometil)benzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A55 (100 mg, 0.195 mmol) i EtsN (98 mg, 0.975 mmol) u DCM (10 mL) na 0 °C pod azotom dodat je acetil hlorid (31 mg, 0.391 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa DCM. Organski ekstrakt je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (DCM/MeOH = 30/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (60 mg, 56%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

b) N-((3-((5-Etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-il)metil)acetamid 228

[0647] Smeša N-((3-((N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido) benzo[d]izoksazol-5-il)metil)acetamid A57 (60 mg, 0.108 mmol) i TFA (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 40/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 68%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.35 min, m/z 404.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.7 (br s, 1H), 8.55 (br s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.47-7.39 (m, 3H), 7.06 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.33 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.72 (s, 3H), 2.60 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 1.91 (s, 3H), 1.17 (t, J = 6.8 Hz, 3H).

Primer 229: 5-Etil-N-(5-(hidroksimetil)benzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid 229

[0648]

a) Metil 3-((5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo(d]izoksazol-5-karboksilata A58

[0649] Smeša metil 3-((N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido) benzo[d]izoksazol-5-karboksilata A50 (435 mg, 0.8 mmol) i TFA (9 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (200 mg, 89%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.69 min, m/z 391.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.9 (br s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.18 (dd, J = 9.2, 1.6 Hz, 1H), 7.72-7.70 (m, 2H), 7.48 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 2.64 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.16 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

b) 3-((5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-karboksilne kiseline A59

[0650] U rastvor metil 3-((5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-karboksilata A58 (220 mg, 0.56 mmol) u THF/MeOH (10 mL/10 mL) dodat je 2 M aq. NaOH (1.4 mL, 2.8 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je rastvoren u vodi (10 mL) i rastvor je podešen do pH 2-3. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (180 mg, 85%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.51 min, m/z 377.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.2 (s, 1H), 11.86 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.16 (dd, J = 8.8, 1.2 Hz, 1H), 7.71-7.66 (m, 2H), 7.47 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 2.63 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.16 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

c) 5-Etil-N-(5-(hidroksimetil)benzo[d]izoksazol-3-il)-2-metoksibenzensulfonamid 229

[0651] Smeša 3-((5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-karboksilne kiseline A59 (50 mg, 0.13 mmol) i BH3·THF (1 M rastvor u THF, 5 mL, 5 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h pod azotom. Reakcija je ugašena vodom (10 mL) i većina THF je uklonjena pod sniženim pritiskom. Vodeni rastvor ostatka je podešen do pH 2-3 i ekstrahovan sa DCM (15 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 30/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 62%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.46 min, m/z 363.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.6 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.69 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.53 (s, 2H), 7.46 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.35 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.59 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.72 (s, 3H), 2.63 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.16 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primer 230: 3-((5-Etil-2-metoksifenil)sulfonamido)-N-metilbenzo[d]izoksazol-5-karboksamid 230

[0652]

[0653] Smeša metil 3-((5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-karboksilata A58 (50 mg, 0.13 mmol) i metilamina (33% rastvor u EtOH, 5 mL) zagrevana je na 90 °C tokom 80 min u zatvorenoj epruveti. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen prep. TLC da bi se dobio željeni proizvod (18 mg, 36%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.39 min, m/z 390.2[M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.8 (s, 1H), 8.53-8.51 (m, 2H), 8.03 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.81 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.62 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.16 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primer 231: 3-((5-Etil-2-metoksifenil)sulfonamido)-N,N-dimetilbenzo[d]izoksazol-5-karboksamid 231

[0654]

[0655] rastvor 3-((5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-karboksilne kiseline A59 (70 mg, 0.19 mmol) u tionil hloridu (10 mL) zagrevan je na 85 °C tokom 3 h pod azotom. Smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio 3-((5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-karbonil hlorid, koji je rastvoren u THF (2.5 mL) i tretrian sa dimetilaminom (40% rastvor u vodi, 5 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Većina THF je uklonjena pod sniženim pritiskom i vodeni rastvor ostatka je podešen do pH 2-3. Talog je saklupljen filtracijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (60 mg, 80%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.40 min, m/z 404.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.13 (s, 1H), 7.71-7.63 (m, 3H), 7.48 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.01 (s, 3H), 2.96 (s, 3H), 2.63 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.16 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primer 232: 3-((5-Etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-karboksamid 232

[0656]

[0657] U rastvor 3-((5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-karbonil hlorida (63 mg, 0.16 mmol), pripremljenom prema postupku opisanom za 3-((5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)-N,N dimetilbenzo[d]izoksazol-5-karboksamid 231, u THF (2.5 mL) dodat je konc. NH4OH (5 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom vikenda. Većina THF je uklonjena pod sniženim pritiskom i vodeni rastvor ostatka je podešen do pH 2-3. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (37 mg, 62%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.33 min, m/z 376.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.8 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.04 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.69 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 2.61 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.16 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primer 233: N-(5-Cijanobenzo[d]izoksazol-3-il)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamid 233

[0658]

[0659] Rastvor 3-((5-etil-2-metoksifenil)sulfonamido)benzo[d]izoksazol-5-karboksamida 232 (22 mg, 0.058 mmol) u POCl3zagrevan je na 110 °C preko noći pod azotom. Reakcija je ugašena sa ledom-vodom (25 mL) i smeša je ekstrahovana sa DCM (35 mL × 2). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodi (50 mL × 3), sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (19.8 mg, 90%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.61 min, m/z 358.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.0 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.8, 1.2 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 2.65 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.17 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primer 234: 5-Etil-2-metoksi-N-(5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 234

[0660]

a) N-(2,4-Dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksi-N-(5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid A60

[0661] Smeša N-(5-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)-N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksibenzensulfonamida A49 (112 mg, 0.2 mmol), metil boronske kiseline (60 mg, 1 mmol), Pd(dppf)Cl2(29 mg, 0.04 mmol) i K2CO3(138 mg, 1 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) i vodi (2 mL) zagrevana je na 90 °C pod azotom preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je razblažen sa vodom (30 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (100 mL). Organski ekstrakt je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (Pet. etar/EtOAc = 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (60 mg, 61%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.72 min, m/z 347.2[M-DMB]<+>.

b) 5-Etil-2-metoksi-N-(5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 234

[0662] Smeša N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-etil-2-metoksi-N-(5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il) benzensulfonamida A60 (60 mg, 0.12 mmol) i TFA (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (Pet. etar/EtOAc = 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 71%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-D: Rt2.72 min, m/z 347.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.78 (s, 1H), 7.69 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.49 - 7.44 (m, 3H), 7.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.72 (s, 3H), 2.61 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.40 (s, 3H), 1.16 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Primeri 235-238 (Tabela H)

[0663]

Tabela H. Sledeće ciljne strukture pripremljene su prema postupku opisanom za 5-etil-2-metoksi-N-(5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 234

Primeri i Referentni primeri 239-242 (Tabela I)

Postupak IA:

[0664]

[0665] U rastvor amina (0.2 mmol, 1.0 ekv.) u piridinu (2 mL) dodat je sulfonil hlorid (1.5 ekv.) i smeša zagrevana je na 120 °C pod mikrotalasnim zračenjem tokom 2 h. Smeša je podeljena između vodi i EtOAc, slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, sušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. Varijacije prethodnih uslova zabeležene su u Tabeli I.

Tabela I. Sledeći primeri su sintetisani prema postupku IA.

Varijacije uslova su zabeležene u tabeli.

Referentni primer 243: N-(6-(3-Cijanofenil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamid 243

[0666]

[0667] U rastvor N-(6-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamid 89 (50 mg, 0.113 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) i vodi (2 mL) dodata je (3-cijanofenil)boronska kiselina (34 mg, 0.226 mmol), Na2CO3(36 mg, 0.339 mmol) i Pd(PPh3)4(14 mg, 0.011 mmol) i smeša je zagrevana na refluksu pod N2atmosferom preko noći. Smeša je podešena do pH 4-5 sa 1 M vodenim rastvorom HCl i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (DCM/MeOH = 100/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (24 mg, 46%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.44 min, m/z 466.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.70 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.16 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.51 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.79 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.03 (s, 3H), 3.78 (s, 6H).

Primer 244: 2,6-Dimetoksi-N-(4-metoksi-6-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 244

[0668]

[0669] U rastvor N-(6-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida 89 (50 mg, 0.113 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) i vodi (2 mL) dodata je metilboronska kiselina (14 mg, 0.226 mmol), Na2CO3(36 mg, 0.339 mmol) i Pd(PPh3)4(14 mg, 0.011 mmol) i smeša zagrevana je na refluksu pod N2atmosferom preko noći. Smeša je podešena do pH 4-5 sa 1 M vodenim rastvorom HCl i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (8 mg, 19%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.18 min, m/z 379.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.45 (s, 1H), 7.49 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.77 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.70 (s, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.77 (s, 6H), 2.42 (s, 3H).

Primer 245: 2,6-Dimetoksi-N-(4-metoksi-6-(piridin-4-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 245

[0670]

[0671] U rastvor N-(6-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida 89 (50 mg, 0.113 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) i vodi (2 mL) dodata je piridin-4-ilboronska kiselina (28 mg, 0.226 mmol), Na2CO3(36 mg, 0.339 mmol) i Pd(PPh3)4(14 mg, 0.011 mmol) i smeša zagrevana je na refluksu pod N2atmosferom preko noći. Smeša je podešena do pH 4-5 sa 1 M vodenim rastvorom HCl i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (DCM/MeOH = 30/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (22 mg, 44%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt0.58 min, m/z 442.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.75 (s, 1H), 8.69 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 7.84 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 7.63 (s, 1H), 7.50 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 6.78 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.03 (s, 3H), 3.78 (s, 6H).

Primer 246: 2,6-Dimetoksi-N-(4-metoksi-6-(piridin-3-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 246

[0672]

[0673] U rastvor N-(6-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida 89 (50 mg, 0.113 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) i vodi (2 mL) dodat je 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioksaborolan-2-il)piridin (47 mg, 0.226 mmol), Na2CO3(36 mg, 0.339 mmol) i Pd(PPh3)4(14 mg, 0.011 mmol) i smeša zagrevana je na refluksu pod N2atmosferom preko noći. Smeša je podešena do pH 4-5 sa 1 M vodenim rastvorom HCl i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (DCM/MeOH = 30/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (9 mg, 18%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt 0.77 min, m/z 442.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.67 (s, 1H), 9.02 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.63 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 8.21 (dt, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.54 - 7.48 (m, 2H), 7.17 (s, 1H), 6.79 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.03 (s, 3H), 3.79 (s, 6H).

Primer 247: 2,6-Dimetoksi-N-(4-metoksi-6-(6-metoksipiridin-3-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 247

[0674]

[0675] U rastvor N-(6-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida 89 (50 mg, 0.113 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) i vodi (2 mL) dodata je (6-metoksipiridin-3-il)boronska kiselina (35 mg, 0.226 mmol), Na2CO3(36 mg, 0.339 mmol) i Pd(PPh3)4(14 mg, 0.011 mmol) i smeša zagrevana je na refluksu pod N2atmosferom preko noći. Smeša je podešena do pH 4-5 sa 1 M vodenim rastvorom HCl i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (DCM/MeOH = 60/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (45 mg, 85%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.33 min, m/z 472.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.61 (s, 1H), 8.63 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.15 (dd, J = 8.7, 2.6 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.94 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.91 (s, 3H), 3.79 (s, 6H).

Primer 248: 2,6-Dimetoksi-N-(4-metoksi-6-(3-metoksi-5-metilfenil)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 248

[0676]

a) 2-(3-Metoksi-5-metilfenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan A61

[0677] Smeša 1-bromo-3-metoksi-5-metilbenzena (500 mg, 2.49 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolana) (1.9 g, 7.49 mmol), kalijum acetata (977 mg, 9.96 mmol) i Pd(dppf)Cl2(196 mg, 0.25 mmol) u 1,4-dioksanu (20 mL) zagrevana je na refluksu pod N2tokom 3 h. Smeša je razblažena sa EtOAc (300 mL), ispran vodom (50 mL × 3) i Organski sloj je sušena preko Na2SO4, filtriran, koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Pet. etar/EtOAc = 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (300 mg, 49%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.08 (s, 1H), 6.94 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.30 - 2.25 (m, 3H), 1.28 (s, 12H).

b) 2,6-Dimetoksi-N-(4-metoksi-6-(3-metoksi-5-metilfenil)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 248

[0678] U rastvor N-(6-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida 89 (50 mg, 0.11 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) i vodi (2 mL) dodat je 2-(3-metoksi-5-metilfenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan A61 (55 mg, 0.22 mmol), K2CO3(61 mg, 0.44 mmol) i Pd(PPh3)4(13 mg, 0.011 mmol) i smeša zagrevana je na refluksu pod N2atmosferom preko noći. Smeša je podešena do pH 4-5 sa 1 M vodenim rastvorom HCl i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.3 mg, 8%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.56 min, m/z 485.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.62 (s, 1H), 7.51 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.79 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.79 (s, 6H), 2.36 (s, 3H).

Primer 249: 2,6-Dimetoksi-N-(4-metoksi-6-(2-metoksipiridin-4-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 249

[0679]

[0680] U rastvor N-(6-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida 89 (50 mg, 0.11 mmol) u 1,4-dioksanu (4 mL) i vodi (1 mL) dodata je (2-metoksipiridin-4-il)boronska kiselina (33 mg, 0.22 mmol), Na2CO3(35 mg, 0.33 mmol) i Pd(PPh3)4(13 mg, 0.011 mmol) i smeša zagrevana je na refluksu pod N2atmosferom preko noći. Smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa DCM. Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5 mg, 10%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.29 min, m/z 472.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.71 (br s, 1H), 8.26 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.50 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 7.42 (dd, J = 5.4, 1.6 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.78 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.78 (s, 6H).

Primer 250: 2,6-Dimetoksi-N-(4-metoksi-6-(5-metoksipiridin-3-il)benzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 250

[0681]

[0682] U rastvor N-(6-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida 89 (50 mg, 0.11 mmol) u 1,4-dioksanu (4 mL) i vodi (1 mL) dodat je 3-metoksi-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin (52 mg, 0.22 mmol), Na2CO3(35 mg, 0.33 mmol) i Pd(PPh3)4(13 mg, 0.011 mmol) i smeša zagrevana je na refluksu pod N2atmosferom preko noći. Smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa DCM. Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom.

[0683] Ostatak je prečišćen prep. HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5 mg, 10%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.25 min, m/z 472.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.67 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.38 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.81 - 7.79 (m, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.51 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.79 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.04 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 3.79 (s, 6H).

Referentni primer 251: N-(6-(3-Cijano-5-metoksifenil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamid 251

[0684]

a) 3-Metoksi-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzonitril A62

[0685] Smeša 3-bromo-5-metoksibenzonitril (500 mg, 2.35 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolana) (1.8 g, 7.07 mmol), kalijum acetata (923 mg, 9.4 mmol) i Pd(dppf)Cl2·DCM (196 mg ,0.24 mmol) zagrevana je na refluksu pod N2tokom 4 h. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (20mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (EtOAc/Pet. etar = 1/5) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (600 mg, 98%) kao žuto ulje. LCMS-C: Rt2.66 min; m/z 260.0 [M+H]<+>.

b) N-(6-(3-Cijano-5-metoksifenil)-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamid 251

[0686] U rastvor N-(6-bromo-4-metoksibenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida 89 (415 mg, 0.94 mmol) u 1,4-dioksanu (80 mL) i vodi (20 mL) dodat je 3-metoksi-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzonitril A62 (500 mg, 2.82 mmol), Na2CO3(399 mg, 3.77 mmol) i Pd(PPh3)4(116 mg, 0.1 mmol) i smeša je zagrevana na refluksu pod N2atmosferom preko noći. Smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (DCM/MeOH = 30/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (40 mg, 8.6%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.48 min, m/z 495.9 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.69 (br s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.57 (m, 1H), 7.49 (s, 2H), 7.15 (s, 1H), 6.77 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.77 (s, 6H).

Primer 252: 2,6-Dimetoksi-N-(5-metil-7-fenilbenzo[d]izoksazol-3-il)benzensulfonamid 252

[0687]

[0688] U rastvor N-(7-bromo-5-metilbenzo[d]izoksazol-3-il)-2,6-dimetoksibenzensulfonamida 239 (50 mg, 0.117 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) i vodi (2 mL) dodata je fenilboronska kiselina (22 mg, 0.176 mmol), Na2CO3(50 mg, 0.468 mmol) i Pd(PPh3)4(14 mg, 0.012 mmol) i smeša je zagrevana na refluksu pod N2atmosferom preko noći. Smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc (30 mL × 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep. TLC (Pet. etar/EtOAc = 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (40 mg, 80%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-C: Rt2.49 min; m/z 425.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSOd6) δ 7.87 - 7.80 (m, 2H), 7.67 - 7.55 (m, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.42 - 7.32 (m, 2H), 6.69 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.70 (s, 6H), 2.45 (s, 3H).

Analize

Priprema proteina

KAT5

[0689] Molekularna biologija: DNK sekvenca optimizovanog kodona (za ekspresiju u Escherichia coli) koja kodira aminokiselinske ostatke 2 do 461 (Uniprot Q92993-2) humane KAT5 izoforme je ntetisana od strane GenScript USA Inc (Piscataway, New Jersey, USA). Ovo je vezano u modifikovani pET43a E. coli ekspresioni vektor dizajniran da kodira N-terminalni heksahistidin tag i nakon čega je mesto cepanja proteaze mozaičnog virusa duvana (TEV) i zatim je KAT5 sekvenca. Rezultujuća sekvenca proteina je data u nastavku.

[0690] Ekspresija proteina: da bi se proizveo rekombinovani KAT5 protein, ekspresioni plazmid je transformisan u E. coli BL21 DE3 soj i uzgajan uz šejkiranje na 37°C u 1 L zapreminama Terrific broth (TB) sa dodatkom 100 µg/mL ampicilina i 50 µM cinka do dostizanja OD600 od 0.8. Kulture su prenete na 18°C i ekspresija proteina je indukovana dodavanjem Izopropil β-D-1-tiogalaktopiranozida do finalne koncentracije od 0.5 mM i kulture su šejkirane preko noći tokom dodatnih 16 časova. Nakon ekspresije, ćelijske kulture su centrifugirane na 5000 × g tokom 20 min i ćelijski talog je uskladišten u zamrznutom stanju na -20°C.

[0691] Prečišćavanje proteina: Prečišćavanje proteina je inicirano odmrzavanjem ćelijskog taloga (25 g vlažne težine) u puferu za lizu (50 mM Hepes pH 7.4, 500 mM NaCl, 5 mM imidazole, 5% [zapr/zapr] glicerol, 0.1% [tež/zapr] CHAPS, 2 mM 2-merkaptoetanol, 3 mM MgCl2, 0.5 mg/mL lizozim, benzonaza endonukleaze [EMD Millipore], 1 mM PMSF, tablete kompletnog inhibitora proteaze bez EDTA [Roche]) korišćenjem odnosa od 6 mL pufera na 1 g ćelija. Ćelije su dodatno lizirane sonikacijom korišćenjem Misonix Liquid Processor (6 × 30 sekundi puls, amplituda 60 [70 vati]) i zatim centrifugirane na 48,000 × g na 4°C. Supernatant (ćelijski lizat) je pomešan sa 20 mL Q-Sepharose FF smole (GE Healthcare) preekvilibrisane sa Q puferom (20 mM Hepes pH 7.4, 1 M NaCl). Nevezana frakcija od Q-Sepharose FF je zatim inkubirana sa 5 mL kompletne His-Tag smole za prečišćavanje (Roche), preekvilibrisane sa IMAC puferom za ispiranje (20 mM hepes pH 7.4, 500 mM NaCl, 35 mM imidazol). Smola je isprana sa IMAC puferom za ispiranje, i vezani KAT5 eluiran je sa IMAC puferom za eluiranje (20 mM hepes pH 7.4, 500 mM NaCl, 300 mM imidazol). IMAC-eluirani protein je odmah odsoljen u pufer za skladištenje (50 mM Na citrat pH 6.5, 500 mM NaCl, 5% [zapr/zapr] glicerol) korišćenjem 2 × HiPrep 26/10 kolona za odsoljavanje (GE Healthcare) u serijama. Odsoljeni protein je dodatno prečišćen propuštanjem kroz HiLoad 26/60 Superdex 75 kolonu preekvilibrisanu u puferu za skladištenje. Konačno, KAT5 protein je koncentrovan do 1.5 mg/mL korišćenjem Amicon Ultra centrifugal filter unit (Utra-15 MWCO 10 kDa), brzo zamrznut u tečnom azotu i uskladišten u zamrzivaču na - 70°C.

KAT6A

[0692] Molekularna biologija: DNK sekvenca koja kodira aminokiselinske ostatke 507 do 778 (Uniprot Q92794-1) humanog KAT6A je smplifikovana sa PCR i vezana je u modifikovani pET E. coli ekspresioni vektor dizajniran da kodira tag za rastvorljivost NusA i nakon čega je heksahistidinski tag i mesto isecanja proteaze mozaičnog virusa duvana (TEV) i KAT6A sekvenca. Rezultujuća sekvenca proteina je data u nastavku.

[0693] Ekspresija proteina: da bi se proizveo rekombinantni KAT6A protein, ekspresioni plazmid je transformisan u E. coli BL21 DE3 soj i uzgajan uz šejkiranje na 37°C u 1 L zapremine Terrific broth (TB) sa dodatkom 100 µg/mL ampicilina do postizanja OD600 od 0.8. Kulture su prenete na 18°C i ekspresija proteina je indukovana dodavanjem izopropil β-D-1-tiogalaktopiranozida do finalne koncentracije od 0.5 mM i kulture su šejkirane preko noći tokom dodatnih 16 časova. Nakon ekspresije, ćelijske kulture su centrifugirane na 5000 × g tokom 20 min i ćelijski talog je uskladišten zanrznut na -20°C.

[0694] Prečišćavanje proteina: Prečišćavanje proteina je inicirano odmrzavanjem ćelijskog taloga (40 g vlažne težine) u puferu za lizu (25 mM Tris-HCI pH 7.8, 500 mM NaCl, 5 mM DTT, 0.01% [zapr/zapr] Triton-X 100, 5% [zapr/zapr] glicerol, 2 mM MgCl2, 10 mM Imidazol, 0.5 mg/mL lizozim, benzonaza endonukleaza [EMD Millipore], 1 mM PMSF, tablete kompletnog inhibitora proteaze bez EDTA [Roche]) korišćenjem odnosa od 5 mL pufera na 1 g ćelija. Ćelije su dodatno lizirane sa 3 prolaza (na 15000 psi) preko ledom ohlađenog Avestin C5 aparata za mrvljenje ćelija i zatim centrifugirane na 48,000 × g na 4°C. Supernatant (ćelijski lizat) je filtriran preko 5 µm filtera i primenjen na 5 mL HiTrap IMAC Sepharose FF kolonu (GE Healthcare) preekvilibrisanu sa IMAC puferom za ispiranje (25 mM Tris-HCI pH 7.8, 500 mM NaCl, 5 mM DTT, 0.01% [zapr/zapr] Triton-X 100, 5% [zapr/zapr] glicerol, 20 mM Imidazol) korišćenjem Profinia sistema za prečišćavanje afinitetnom hromatografijom (Bio-Rad). IMAC kolona je zatim isprana sa IMAC puferom za ispiranje i vezani KAT6A protein je eluiran sa IMAC puferom za eluiranje (25 mM Tris-HCl pH 7.8, 500 mM NaCl, 5% [zapr/zapr] glicerol, 5 mM DTT, 250 mM Imidazol). IMAC-eluirani protein je dodatno prečišćen prolaskom kroz HiLoad 26/60 Superdex 200 kolonu pre-ekvilibrisanu u puferu za skladištenje (25 mM Tris-HCI pH 7.8, 500 mM NaCl, 5 mM DTT, 5% [zapr/zapr] glicerol). Konačno, KAT6A protein je je koncentrovan do ≤ 1 mg/mL korišćenjem Amicon ultra centrifugalne jedinice (Utra-15 MWCO 10 kDa), brzo zamrznut u tečnom azotu i uskladišten u zamrzivaču na - 70°C.

[0695] KAT6B je dobijen od SignalChem, catalog ID: K315-381 BG

KAT7

[0696] Molekularna biologija: DNK sekvenca optimizovanog kodona koja kodira aminokiselinske ostatke 325 do 611 (Uniprot 095251-1) humane KAT7 je sinetetisana od strane GenScript USA Inc (Piscataway, New Jersey, USA). Ovo je vezano u modifikovani pET43a E. coli ekspresioni vektor dizajniran da kodira N-terminalni heksahistidin tag i nakon čega je meto cepanja proteaze mozaičnog virusa (TEV) i KAT7 sekvenca. Rezultujuća sekvenca proteina je data u nastavku.

[0697] Ekspresija proteina: da bi se proizveo rekombinantni KAT7 protein, ekspresioni plazmid je transformisan u E. coli BL21 DE3 RIL soj i uzgajan uz šejkiranje na 37°C u 1 L zapreminama Terrific broth (TB) sa dodatkom 100 µg/mL ampicilina i 50 µM cinka do postizanja OD600 od 0.8. Kultuere su prenete na 18°C i ekspresija proteina je indukovan dodavanjem izopropil β-D-1-tiogalaktopiranozida do finalne koncentracije 0.5 mM i kulture su šejkirane preko noći tokom dodatnih 16 časova. Nakon ekspresije, ćelijske kulture su centrifugirane na 5000 × g tokom 20 min i ćelijski talog je uskladišten zamrznurt na -20°C.

[0698] Prečišćavanje proteina: Prečišćavanje proteina je inicijalizovano odmrzavanjem ćelijskog taloga (10 g vlažne težine) u puferu za lizu (50 mM Hepes pH 7.5, 300 mM NaCl, 5 mM DTT, 5 mM Imidazol, 0.05% [zapr/zapr] Brij 35, 10% [zapr/zapr] glicerol, 3 mM MgCl2, 0.5 mg/mL lizozim, benzonaza endonukleaza [EMD Millipore], 1 mM PMSF, tablete kompletnog inhibitora proteaze bez EDTA [Roche]) korišćenjem odnosa od 10 mL pufera po1 g ćelija. Ćelije su dalje lizirane sonikacijom korišćenjem Misonix Liquid Processor (6 × 30 sekundi puls, amplituda 60 [70 vati]) i zatim centrifugirani na 48,000 × g na 4°C. Supernatant (ćelijski lizat) je inkubiran sa 1 mL smole za prečišćavanje kompletnog His-Tag (Roche), pre-ekvilibrisanog sa IMAC pufera za ispiranje 1 (25 mM Hepes pH 7.5, 800 mM NaCl, 5 mM imidazol, 10% [zapr/zapr] glicerol, 5 mM DTT, 0.01% [zapr/zapr] Brij 35, 50 mM arginin, 50 mM glutaminske kiseline). Smola je sekvencijalno isprana sa IMAC puferom za ispiranje 1 i IMAC pufera za ispiranje 2 (25 mM hepes pH 7.5, 300 mM NaCl, 20 mM imidazol, 10% [zapr/zapr] glicerol, 5 mM DTT, 0.01 % [zapr/zapr] Brij 35, 50 mM arginin, 50 mM glutaminske kiseline). Vezani KAT7 protein je eluiran sa IMAC puferom za eluiranje (25 mM hepes pH 7.5, 200 mM NaCl, 500 mM imidazol, 10% [zapr/zapr] glicerol, 5 mM DTT 0.01% [zapr/zapr] Brij 35, 50 mM arginin, 50 mM glutaminske kiseline). Protein koji eluira je sakupljen direktno u 4 zapremine pufera za odsoljavanje (50 mM Na citrat pH 6.5, 200 mM NaCl, 0.01 % [zapr/zapr] Brij 35, 10% [zapr/zapr] glicerol, 5 mM DTT) da bi se dobila finalna koncentracija imidazola od 100 mM. IMAC-eluirani protein je odmah odsoljen u puferu za osoljavanje korišćenjem 2 × HiPrep 26/10 kolona za odsoljavanje (GE Healthcare) u serijama. Odsoljeni protein je dodatno prečišćen prolaskom kroz HiLoad 26/60 Superdex 75 kolonu pre-ekvilibrisanu u puferu za skladištenje (50 mM Na citrat pH 6.5, 200 mM NaCl, 10% [zapr/zapr] glicerol, 5 mM DTT). Konačno, KAT7 protein je je koncentrovan do 3.5 mg/mL korišćenjem Amicon filtera ultra centrifugalne jedinice (Utra-15 MWCO 10 kDa), brzo zamrznut u tečnom azotu i uskladišten u zamrzivaču na -70°C.

KAT8

[0699] Molekularna biologija: DNk sekvenca optimizovanog kodona (za ekspresiju u E. coli) koja kodira aminokiselinske ostatke 177 do 447 (Uniprot Q9H7Z6-1) humane KAT8 je sintetisana od strane Thermo Fisher Scientific GENEART GmbH (Regensberg, Germany). Ovo je vezano u pPROEX Hta E. coli ekspresio ni vektor dizajniran da kodira N-terminalni heksahistidin tag i nakon čega je mesto cepanja proteaze mozaičnog virusa duvana (TEV) i KAT8 sekvenca. Rezultujuća sekvenca proteina je data u nastavku.

[0700] Ekspresija proteina: da bi se proizveo rekombinantni KAT8 protein, ekspresioni plazmid je transformisan u E. coli BL21 DE3 soj i uzgajan uz šejkiranje na 37°C u 1 L zapreminama Terrific broth (TB) sa dodatkom 100 µg/mL ampicilina do postizanja OD600 od 0.8. Kulture su prenete na 18°C i ekspresija proteina je indukovana dodavanjem izopropil β-D-1-tiogalaktopiranozida do finalne koncentracije 0.5 mM i kulture su šejkirane preko noći tokom dodatnih 16 časova. Nakon ekspresije, ćelijske kulture su centrifugirane na 5000 × g tokom 20 min i ćelijski talog je uskladišten zamrznut na -20°C.

[0701] Prečišćavanje proteina: Prečišćavanje proteina je inicijalizovano odmrzavanjem ćelijskog taloga (34 g vlažne težine) u puferu za lizu (20 mM Hepes pH 7.5, 500 mM NaCl, 5 mM imidazol, 5% [zapr/zapr] glicerol, 0.01% [zapr/zapr] Triton-X 100, 5 mM 2-merkaptoetanol, 2 mM MgCl2, 0.5 mg/mL lizozim, benzonaza endonukleaza [EMD Millipore], 1 mM PMSF, tablete kompletnog inhibitora proteaze bez EDTA [Roche]) korišćenjem odnosa od 3 mL pufera na 1 g ćelija. Ćelije su dalje lizirane sa 3 prolaska (na 15000 psi) kroz ledom ohlađeni Avestin C5 aparat za mrvljenje ćelija i zatim centrifugirane na 48,000 × g na 4°C. Supernatant (ćelijski lizat) je filtriran kroz 0.2 µm filter i primenjen na 5 mL HiTrap IMAC Sepharose FF kolonu (GE Healthcare) preekvilibrisanu sa IMAC puferom za ispiranje 1 (20 mM Hepes pH 7.5, 500 mM NaCl, 0.5 mM TCEP, 5 mM Imidazol) korišćenjem Profinia sistema za prečišćavanje afinitetnom hromatografijom (Bio-Rad). IMAC kolona je zatim sekvencijalno isprana sa IMAC puferom za ispiranje 1 i IMAC puferom za ispiranje 2 (20 mM Hepes pH 7.5, 500 mM NaCl, 0.5 mM TCEP, 10 mM Imidazol) i vezani KAT8 protein je eluiran sa IMAC puferom za eluiranje (20 mM Hepes pH 7.5, 500 mM NaCl, 0.5 mM TCEP, 500 mM Imidazol). IMAC-eluirani protein je dodatno prečišćen prolaskom kroz HiLoad 26/60 Superdex 200 kolonu pre-ekvilibrisanu u puferu za skladištenje (20 mM Hepes pH 7.5, 500 mM NaCl, 1 mM TCEP). Konačno, KAT8 protein je je koncentrovan do ≤ 0.2 mg/mL korišćenjem Amicon filtera ultra centrifugalne jedinice (Utra-15 MWCO 10 kDa), brzo zamrznut u tečnom azotu i uskladišten u zamrzivaču na -70°C.

Biohemisjka analiza acetiltransferaze

[0702] Da bi se odredila inhibicija KAT enzimske aktivnosti od strane test jedinjenja, reakcije u analizi su izvedene u zapremini od 8 µL u analitičkim pločama male zapremine sa 384 bunarčiča. Reakcije su izvedene u test puferu (100 mM Tris-HCI, pH 7.8, 15 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0.01% Tween-20, 1 mM Ditiotreitol, i 0.01% m/zapr beli albumin iz kokošijeg jajeta).

[0703] reakcije su postavljene sa 1µM acetil koenzima A, 100 nM rekombinantnog histona pune dužeine obeleženog sa ograničnom biotinilacijom (KAT6A, KAT6B, KAT7: H3.1, KAT5, KAT8: H4), 10/ 5/ 8/ 40/ 20 nM KAT5/KAT6A/KAT6B/KAT7/KAT8 enzima respektivno, i acetil-lizin specifičnim antitelom (H3.1: Cell Signaling Technology, H4: Abcam). Serije razblaženja od 11-tačaka test jedinjenja su pripremljene u DMSO; zapremina od 100 nLje treneta korišćenjem pin alata u analitičke ploče koje sadrže supstrate, pre dodavanja enzima da se pokrene reakcija. Pozitivne (bez jedinjenja, samo DMSO) i negativne (izostavljen AcCoA) kontrolne reakcije su uključene na iste ploče i i primile su istu količinu DMSO kao bunarčići koji su tretirani jedinjenjem. Nakon dodavanja svih reagenasa, ploče su zatvorene sa adhezivnim zatvaračima i inkubirane tokom 90 min na sobnoj temperaturi. Zatim je dodato dodatnih 4 µL analitičkog pufera koji sadrži AlphaScreen<®>Protein A akceptorkse kuglice i Streptavidin donor kuglice (PerkinElmer, Waltham, MA) do finalne koncentracije od 8 µg/mL. Nakon inkubacije tokom 2 časa ploče su očitane korišćenjem EnVision 2103 multi label plate čitača (PerkinElmer) u HTS AlphaScreen<®>modu. IC50 vrednosti su dobijene iz sirovih očitavanja izračunavanjem procenta inhibicije (%I) tokom svake reakcije u odnosu na kontrole na istoj ploči (%I=(I-CN)/(CP-CN) gde su CN/ CP prosečne vrednosti negativnih/pozitivnih reakcija, respektivno), zatim fitovanjem podataka za %I nasuprot koncentracije jedinjenja [I] sa %I=(A+((B-A)/(1+((C/[I])^D)))) gd A je donja asimptota, B je gornja asimptota, C je IC50 vrednost, i D je nagib.

[0704] Rezultati su pikazani u tabelama 1 do 5 u daljem tekstu:

Tabela 1 (TIP60-KAT5)

Tabela 2 (MOZ-KAT6A)

Tabela 3 (HBO-KAT7)

Primer ili Ref. pr. IC50 (µM)

Tabela 4 (MOF-KA T8)

Tabela 5 (QKF-KAT6B)

Test acetilacije biomarkera Histon H3 lizin 23

[0705] Jedinjenja su testirana za njihovu sposobnost da inhibiraju acetilaciju histon H3K23 markera u sledećem testu:

Ćelijska linija U2OS je zasejana u gustini od 9000 ćelija po bunarčiću u pločama za kulturu tkiva optičkog kvaliteta sa 96 bunarčića u RPMI medijumu i 10% fetusnom goveđem serumu, i ostavljena da se prilepi tokom 24 časa pod standardnim uslovima kulture (37 stepeni Celzijusa, 5% CO2). Na kraju ovog perioda medijum je usisan. Razblaženja jedinjenja pripremljena u DMSO su dodata u medijum, sa bunarčićima za negativnu kontrolu rezervisanim za tretman samo sa DMSO i 100% inhibicionim pozitivnim kontrolama koje primaju potentno inhibitorno jedinjenje (npr. cas 2055397-28-7, benzojeva kiselina, 3-fluoro-5-(2-piridinil)-, 2-[(2fluorofenil)sulfonil]hidrazid) (Baell, J., Nguyen, H.N., Leaver, D.J., Cleary, B.L., Lagiakos, H.R., Sheikh, B.N., Thomas. T.J., Aryl sulfonohydrazides, WO2016198507A1, 2016) u koncentraciji 10 µM i 200 µL prebačenim u ćelije. Posle inkubacije od 24 časa, ćelije su fiksirane sa 3.7% formaldehidom u PBS u trajanju od 20 minuta na sobnoj temperaturi, isprane (5 × 5 minuta) sa fosfatno puferisanim fiziološkim rastvorom koji sadrži 0.1%Tween 20 i blokirane sa Odyssey blokirajućim puferom (LI-COR, Lincoln, NE) koji sadrži 0.1%TritonX100. Dodato je anti-H3K23ac specifično antitelo (Abeam ab177275) u Odyssey blokirajućem puferu koji sadrži 0.1%Tween 20 i inkubirano u trajanju od 16 časova na 4 stepeni Celzijusa. Posle ispiranja (kao gore), dodati su sekundarno antitelo obeleženo sa Alexa647 bojom (LifeTechnologies) i Hoechst 33342 (1 µg/mL, SigmaAldrich) za 1 čas inkubacije. Ploče su isprane kao prethodno i očitavane na PerkinElmer Phenix imadžing platformi visokog sadržaja. Upotrebom Columbus cevovoda za analizu slike, pojedinačna jedra su locirana pomoću Hoechst 33342 boje i nivo acetilacije je izračunat iz intenziteta povezanog sa Alexa647 u istom regionu. Dobijeni srednji intenzitet po ćeliji je direktno preveden u procenat inhibicije u odnosu na kontrole na istoj ploči i podaci su aprokismirani protiv četvoro-parametarskog logističkog modela da bi se odredila 50% inhibitorna koncentracija (IC50).

[0706] Rezultati su prikazani u tabeli 6 u daljem tekstu:

Tabela 6

Test acetilacije biomarkera Histon H3 lizin 14

[0707] Jedinjenja su testirana za njihovu sposobnost da inhibiraju acetilaciju histon H3 lizin 14 markera u sledećem testu:

Ćelijska linija U2OS je zasejana u gustini od 3000 ćelija po bunarčiću u pločama za kulturu tkiva optičkog kvaliteta sa 384 bunarčića u RPMI medijumu dopunjenom sa 10% fetusnim goveđim serumom i 10 mM Hepes. Ćelije su ostavljene da se prilepe tokom 24 časa pod standardnim uslovima kulture (37 stepeni Celzijusa, 5% CO2). Na kraju ovog perioda ćelije su isprane medijumom bez seruma. Razblaženja jedinjenja pripremljena u DMSO su dodata u medijum bez seruma, sa bunarčićima za negativnu kontrolu rezervisanim za tretman samo sa DMSO i 100% inhibicionim pozitivnim kontrolama koje primaju potentno inhibitorno jedinjenje (npr. (Z)-4-fluoro-N-((3-hidroksifenil)sulfonil)-5-metil-[1,1'-bifenil]-3-karbohidrazonska kiselina) u koncentraciji od 10 µM. Posle inkubacije od 24 časa, ćelije su fiksirane sa 4% formaldehidom u PBS u trajanju od 15 minuta na sobnoj temperaturi, isprane sa fosfatno puferisanim fiziološkim rastvorom i blokirane blokirajućim puferom koji sadrži 0.2 TritonX100 i 2% BSA. Dodato je anti-H3K14ac specifično antitelo (Cell Signalling Technologies) u blokirajućem puferu i inkubirano u preko noći na 4 stepeni Celzijusa. Posle ispiranja, dodati su sekundarno antitelo obeleženo sa AlexaFluor 488 bojom (ThermoFisher) i Hoechst 33342 (1 µg/mL, Life Technologies) za 2 časa inkubacije na sobnoj temperaturi. Ploče su isprane i očitavane na PerkinElmer Opera HCS imadžing platformi visokog sadržaja. Upotrebom Columbus cevovoda za analizu slike, pojedinačna jedra su locirana pomoću Hoechst 33342 boje i nivo acetilacije je izračunat iz intenziteta povezanog sa AlexaFluor 488 u istom regionu. Dobijeni srednji intenzitet po ćeliji je direktno preveden u procenat inhibicije u odnosu na kontrole na istoj ploči i podaci su aprokismirani protiv četvoro-parametarskog logističkog modela da bi se odredila 50% inhibitorna koncentracija (IC50).

[0708] Rezultati su prikazani u tabeli 7 u daljem tekstu:

Tabela 7

Test acetilacije biomarkera H2A.Z lizin 7

[0709] Jedinjenja su testirana za njihovu sposobnost da inhibiraju acetilaciju markera H2A.Z lizin 7 u sledećem testu:

Ćelijska linija U2OS je zasejana u gustini od 3000 ćelija po bunarčiću u pločama za kulturu tkiva optičkog kvaliteta sa 384 bunarčića u RPMI medijumu dopunjenom sa 10% fetusnim goveđim serumom i 10 mM Hepes. Ćelije su ostavljene da se prilepe tokom 24 časa pod standardnim uslovima kulture (37 stepeni Celzijusa, 5% CO2). Na kraju ovog perioda ćelije su isprane medijumom bez seruma. Razblaženja jedinjenja pripremljena u DMSO su dodata u medijum bez seruma, sa bunarčićima za negativnu kontrolu rezervisanim za tretman samo sa DMSO i 100% inhibicionim pozitivnim kontrolama koje primaju potentan inhibitorni enantiomer 1 jedinjenja 7-jodo-N-(2-(oksazol-2-il)-2-feniletil)-2H-benzo[e][1,2,4]tiadiazin-3-karboksamid 1,1-dioksida, koje je jedinjenje 146 prijave koja je istovremeno u postupku ispitivanja GB1713962.7 podnete 31.08.2018.,u koncentraciji od 30 µM. Posle inkubacije od 24 časa, ćelije su fiksirane sa 4% formaldehidom u PBS u trajanju od 15 minuta na sobnoj temperaturi, isprane sa fosfatno puferisanim fiziološkim rastvorom i blokirane blokirajućim puferom koji sadrži 0.2 TritonX100 i 2% BSA. Dodato je anti-H2A.ZK7ac specifično antitelo (Abcam) u blokirajućem puferu i inkubirano u preko noći na 4 stepeni Celzijusa. Posle ispiranja, dodati su sekundarno antitelo obeleženo sa AlexaFluor 488 bojom (ThermoFisher) i Hoechst 33342 (1 µg/mL, Life Technologies) za 2 časa inkubacije na sobnoj temperaturi. Ploče su isprane i očitavane na PerkinElmer Opera HCS imadžing platformi visokog sadržaja. Upotrebom Columbus cevovoda za analizu slike, pojedinačna jedra su locirana pomoću Hoechst 33342 boje i nivo acetilacije je izračunat iz intenziteta povezanog sa AlexaFluor 488 u istom regionu. Dobijeni srednji intenzitet po ćeliji je direktno preveden u procenat inhibicije u odnosu na kontrole na istoj ploči i podaci su aprokismirani protiv četvoro-parametarskog logističkog modela da bi se odredila 50% inhibitorna koncentracija (IC50).

[0710] Rezultati su prikazani u tabeli 8 u daljem tekstu:

Tabela 8

Reference

[0711]

Aggarwal and Calvi, Nature, 2004, 430, 372-376 doi:10.1038/nature02694

Avvakumov et al., Oncogene, 2007, 26, 5395-5407 doi:10.1038/sj.onc.1210608

Berge et al., J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19 doi:10.1002/jps.2600660104

Borrow et al., Nat. Genet., 1996, 14, 33-41 doi:10.1038/ng0996-33

Dekker et al., Drug, Discov. Today, 2014, 19, 654-660 doi:10.1016/j.drudis.2013.11.012 Doyon et al., Mol. Cell., 2006, 21, 51-64 doi:10.1016/j.molcel.2005.12.007

Dhuban et al., Sci. Immunol., 2017, 2, 9297 doi:10.1126/sciimmunol.aai9297

Duong et al., Cancer Res., 2013, 73, 5556-5568 doi:10.1158/0008-5472.CAN-13-0013 Ghizzoni et al., Eur. J. Med. Chem., 2012, 47, 337-344 doi:10.1016/j.ejmech.2011.11.001 Gil et al., J. Proteomics, 2017, 150, 297-309 doi:10.1016/j.jprot.2016.10.003

Gobert, M. et al., Cancer Research, 2009, 69, 2000-2009 doi:10.1158/0008-5472.CAN-08-2360 Holbert et al., J. Biol. Chem., 2007, 282, 36603-36613 doi:10.1074/jbc.M705812200 lizuka et al., Mol. Cell. Biol., 2006, 26, 1098-1108 doi:10.1128/MCB.26.3.1098-1108.2006 lizuka et al., Cancer Sci., 2013, 104, 1647-1655 doi:10.1111/cas.12303

Jeong, etal., Blood Res 2016 51(3), 152-154 doi:10.5045/br.2016.51.3.152

Joshi, et al., Immunity 2015, 43, 579-590 doi:10.1016/j.immuni.2015.08.006

Li, B. et al., PNAS, 2007, 104, 4571-4576 doi:10.1073/pnas.0700298104

Melero, et al. Nature Reviews Cancer, 2015, 15, 457-472 doi:10.1038/nrc3973

Merson et al., J. Neurosci., 2006, 26, 11359-11370 doi:10.1523/JNEUROSCI.2247-06.2006 Miller, A.M. et al. J. Immunol., 2006, 177, 7398-7405 doi:10.4049/jimmunol.177.10.7398 Persa, E. et al. Cancer Letters, 2015368(2), 252-261 doi:10.1016/j.canlet.2015.03.003 Sheikh et al., Blood, 2015, 125(12), 1910-21 doi:10.1182/blood-2014-08-594655

Shi et al, Nature Biotech, 2015, 33, 661-667 doi:10.1038/nbt.3235

Su et al., Int. J. Mol. Sci., 2016, 17, 1-18 doi:10.3390/ijms17101594

Stern et al., Crit. Rev. Oncol. Hematol., 2005, 54, 11-29doi:10.1016/j.critrevonc.2004.10.011 Thomas et al., Development, 2000, 127, 2537-2548 PMID:10821753

Tao, H. et al., Lung Cancer, 2012, 75, 95-101 doi:10.1016/j.lungcan.2011.06.002

Turner-Ivey et al., Neoplasia, 2014, 16(8): 644-655 doi:10.1016/j.neo.2014.07.007 Valerio et al., Cancer Research, 2017, 77(7), 1753-62 doi:10.1158/0008-5472.CAN-16-2374 Vizmanos et al., Genes Chromosomes Cancer, 2003, 36(4), 402-405doi:10.1002/gcc.10174 Voss et al., BioEssays, 2009, 31(10), 1050-1061 doi:10.1002/bies.200900051

Wang, L., et al. EBioMedicine, 2016, 13, 99-112 doi:10.1016/j.ebiom.2016.10.018 Wang, X. et al., Oncogene, 2017, 36, 3048-3058 doi:10.1038/onc.2016.458

Xiao, Y. et al., Cell reports, 2014, 7, 1471-1480 doi:10.1016/j.celrep.2014.04.021

Yan, M. et al., Breast Cancer Research, 2011, 13, R47 doi:10.1186/bcr2869

Zack et al., Nature Genetics 201345, 1134-1140 doi:10.1038/ng.2760

Zhang et al., Mini. Rev. Med. Chem., 2017, 17, 1-8doi:10.2174/1389557516666160923125031

Claims (14)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I):

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što: R<1>, R<2>, R<3>i R<4>su nezavisno izabrani od sledećih: (i) H; (ii) C1-3alkil, izborno supstituisan sa: hidroksi, C1-2alkoksi, NH2, fenil, C5-6heteroaril, C1-4alkil karbamoil, ili acilamido; (iii) C1-3alkoksi, izborno supstituisan sa C3-6cikloalkil ili sa jednom ili više fluoro grupa; (iv) C3-6cikloalkil; (v) halo; (vi) COR<C>, pri čemu R<C>je izabran od NR<N1>R<N2>, pri čemu R<N1>i R<N2>su nezavisno izabrani od H i metil; (vii) cijano, NH2, ili NO2; i (viii) fenil ili C5-6heteroaril, izborno supstituisan sa metil, hidroksi ili metoksi; Ar je fenil, izborno supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od sledećih: (i) C1-4alkil, izborno supstituisan sa hidroksi, C1-2alkoksi, NH2, C1-4alkil karbamoil ili jednom ili više fluoro grupa; (ii) C3-6cikloalkil; (iii) hidroksi; cijano; NR<N3>R<N4>, pri čemu R<N3>i R<N4>su nezavisno izabrani od H i metil; ili acilamido; (iv) halo; (v) C1-3alkoksi, izborno supstituisan sa hidroksi, C(O)NH2, C3-6cikloalkil, fenil, C5-6heteroaril, ili jednom ili više fluoro grupa; (vi) fenoksi, izborno supstituisan sa fluoro; (vii) fenil ili C5-6heteroaril; ili (viii) SF5ili SO2CH3; i pri čemu najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>nije H.
2. 2. Jedinjenje ili so prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>je C1-3alkil, izborno supstituisan sa: hidroksi, C1-2alkoksi, NH2, fenil, C5-6heteroaril, C1-4alkil karbamoil, ili acilamido.
3. 3. Jedinjenje ili so prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 2, naznačen time što najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>je C1-3alkoksi, izborno supstiuisan sa C3-6cikloalkil ili jednom ili više fluoro grupa.
4. 4. Jedinjenje ili so prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, naznačen time što najmanje jedan od R<1>, R<2>, R<3>i R<4>je (a) C3-6cikloalkil; (b) COR<C>, pri čemu R<C>je izabran od NR<N1>R<N2>, pri čemu R<N1>i R<N2>su nezavisno izabrani od H i metil; (c) cijano, NH2ili NO2; ili (d) fenil ili C5-6heteroaril, izborno supstituisan sa metil, hidroksi ili metoksi.
5. 5. Jedinjenje ili so prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što: (a) R<4>je metoksi, R<2>je CH2OCH3ili CH2OCH2CH3, i R<1>i R<3>su H; (b) R<4>je metoksi, R<2>je fenil, izborno supstituisan sa metil ili metoksi, i R<1>i R<3>su H; (c) R<4>je metoksi, R<2>je C5-6heteroaril, izborno supstituisan sa metil; (d) R<4>je metoksi i R<1>, R<2>i R<3>su H; (e) R<4>je hloro, R<2>je C1-3alkil ili bromo, i R<1>i R<3>su H; ili (f) R<3>je C1-3alkil i R<1>, R<2>i R<4>su H.
6. 6. Jedinjenje ili so prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, naznačeno time što Ar je supstituisan sa C1-4alkil, izborno supstituisan sa hidroksi, C1-2alkoksi, NH2, C1-4alkil karbamoil ili jednom ili više fluoro grupa.
7. 7. Jedinjenje ili so prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, naznačeno time što Ar je supstituisan sa C1-3alkoksi, izborno supstituisan sa hidroksi, C(O)NH2, C3-6cikloalkyl, fenil, C5-6heteroaryl, ili jednom ili više fluoro grupa.
8. 8. Jedinjenje ili so prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, naznačeno time što Ar je supstituisan sa (a) C3-6cikloalkil; (b) hidroksi; (c) cijano; (d) NR<N3>R<N4>, pri čemu R<N3>i R<N4>su nezavisno izabrani od H i metil; ili acilamido; (e) fenoksi, izborno supstituisan sa fluoro; (f) fenil ili C5-6heteroaril; ili (g) SF5ili SO2CH3.
9. 9. Jedinjenje ili so prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, naznačeno time što Ar je: (a) 5-etil-2-metoksifenil; (b) 5-CF3-2-metoksifenil; ili (c) 2,6-dimetoksifenil.
10. 10. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.
11. 11. Jedinjenje ili so prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9, za upotrebu u postupku lečenja.
12. 12. Jedinjenje ili so prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9, za upotrebu u lečenju kancera.
13. 13. Jedinjenje ili so za upotrebu prema patentnom zahtevu 12, naznačeno tme što kancer je izabran od leukemia, aktune limfocitne leukemije, akutne mijeloidne leukemije, hronične limfocitne leukemije, hronične mijeloidne leukemije, ne-Hodgkin-ove leukemije, Hodgkin-ove bolesti, kancera prostate, kancera pluća, melanoma, kancera dojke, kancera debelog creva i rektuma, kancera debelog creva, karcinoma skvamoznih ćelija i kancera želudca.
14. 14. Jedinjenje ili so za upotrebu prema patentnom zahtevu 12, naznačeno tme što jedinjenje se primenjuje istovremeno ili uzastoono sa terapijom zračenjem i/ili hemoterapijom. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Kneginje Ljubice 5, 11000 Beograd