ES2878156T3

ES2878156T3 - Métodos para predecir el beneficio terapéutico de una terapia anti-CD19 en pacientes

Info

Publication number: ES2878156T3
Application number: ES17728484T
Authority: ES
Inventors: Jan Endell; Mark Winderlich; Rainer Boxhammer
Original assignee: Morphosys AG
Current assignee: Morphosys AG
Priority date: 2016-05-30
Filing date: 2017-05-30
Publication date: 2021-11-18
Anticipated expiration: 2037-05-30
Also published as: SI3916392T1; SG11201810159TA; HRP20240670T1; MD3916392T2; CN109313194B; MA57021B1; EP3465214A1; HRP20210938T1; IL263103B2; KR102416144B1; US20190195879A1; MX2021014963A; JP7066639B2; MX388502B; NZ748468A; KR20190013980A; EP3916392B1; JP7511806B2; AU2017272608A1; DK3916392T3

Abstract

Un método para identificar un sujeto que tiene linfoma no Hodgkin (NHL) que responde al tratamiento con un anticuerpo anti-CD19, dicho método comprendiendo: a. proporcionar una muestra de sangre obtenida de dicho sujeto antes del tratamiento con dicho anticuerpo anti- CD19, b. determinar el nivel de por lo menos un biomarcador en dicha muestra seleccionada del grupo que consiste de: i. recuento de células NK periféricas, y ii. niveles de expresión de CD16 en células NK periféricas, c. comparar el nivel de dicho por lo menos un biomarcador en dicha muestra con un nivel de punto de corte predeterminado, en donde los niveles de dicho por lo menos un biomarcador en o por encima del nivel de punto de corte predeterminado es indicativo de un sujeto que se beneficiaría del tratamiento con un anticuerpo anti-CD19.

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos para predecir el beneficio terapéutico de una terapia anti-CD19 en pacientes

Campo de la invención

La presente divulgación está dirigida a identificar características y biomarcadores en pacientes que se benefician del tratamiento con anticuerpos anti-CD19.

Antecedentes

La CD19 es una glicoproteína transmembrana de 95 kDa de la superfamilia de inmunoglobulinas que contiene dos dominios extracelulares similares a las inmunoglobulinas y una cola citoplasmática extensa. La proteína es un receptor de superficie de linfocitos pan-B y se expresa ubicuamente desde las etapas más tempranas del desarrollo de las células pre-B en adelante hasta que se regula por disminución durante la diferenciación terminal en células plasmáticas. Es específica del linaje de linfocitos B y no se expresa en células madre hematopoyéticas ni en otras células inmunes, excepto en algunas células dendríticas foliculares. La CD19 funciona como un regulador positivo de la señalización del receptor de células B (BCR) y es importante para la activación y proliferación de células B y en el desarrollo de respuestas inmunes humorales. Actúa como una molécula coestimuladora junto con CD21 y CD81 y es fundamental para las respuestas de las células B a los antígenos dependientes de las células T. La cola citoplásmica de CD19 está asociada físicamente con una familia de tirosina quinasas que desencadenan vías de señalización descendentes a través de la familia src de proteínas tirosina quinasas. La CD19 es un objetivo atractivo para los cánceres de origen linfoide, ya que se expresa en gran medida en casi todas las leucemias linfocíticas crónicas (CLL) y linfomas no Hodgkin (NHL), así como en muchos otros tipos diferentes de leucemias, incluyendo leucemia linfocítica aguda (ALL) y leucemia de células pilosas (HCL).

El desarrollo clínico de anticuerpos dirigidos contra CD19 había estado previamente limitado por la internalización del antígeno de CD19, sin embargo, la tecnología mejorada de modificación de anticuerpos ha restaurado este potencial objetivo terapéutico. MOR00208 (anteriormente llamado XmAb5574) es un anticuerpo monoclonal humanizado modificado de Fc que se une a CD19. El aumento en la unión de MOR00208 Fc a FcyR, debido a mutaciones diseñadas de XmAb, mejora significativamente la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC) in vitro, la fagocitosis mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCP) y los efectos citotóxicos directos (apoptosis) sobre el tumor con respecto al anticuerpo no modificado. No se ha demostrado que MOR00208 medie la citotoxicidad dependiente del complemento.

MOR00208 se ha estudiado o se está estudiando actualmente en ensayos clínicos en CLL, ALL y NHL. Específicamente, se han completado un ensayo de Fase I titulado Seguridad y tolerabilidad de XmAb®5574 en leucemia linfocítica crónica, y un ensayo de Fase Ila titulado Estudio de anticuerpo anti-CD19 optimizado para Fc (MOR00208) para tratar la leucemia linfoblástica aguda de células B (B-ALL). Un ensayo de fase I del anticuerpo para CD19 diseñado de Fc XmAb5574 (MOR00208) demostró seguridad y eficacia preliminar en CLL en recaída (Woyach et al., Blood 124, no. 24: 3553-60 (4 de diciembre de 2014). Un ensayo de Fase Ila titulado Estudio de anticuerpo anti-CD19 optimizado para Fc (MOR00208) para tratar el linfoma no Hodgkin (NHL) ha completado el reclutamiento. Y los siguientes ensayos están planificados/en curso: un ensayo de Fase II/NI titulado Un ensayo para evaluar la eficacia y seguridad de MOR00208 con bendamustina (BEN) frente a rituximab (RTX) con Be N en pacientes adultos con linfoma de células B grandes difusas en recaída o refractarias (DLBCL) (B-MIND), un ensayo de Fase II titulado Estudio para evaluar la eficacia y seguridad de MOR00208 con idelalisib en pacientes con r/r CLL/SLL pretratados con BTKi, un ensayo de Fase II titulado Estudio para evaluar la seguridad y eficacia de lenalidomida con MOR00208 en pacientes con R-R DLBCL, y un ensayo de Fase II titulado MOR00208 de Fase II en combinación con lenalidomida para pacientes con CLL, SLL o PLL en recaída o refractaria, o pacientes mayores con CLL, SLL o PLL sin tratar. En otro ensayo actual de Fase II (COSMOS) se estudia la eficacia y seguridad de MOR00208 en combinación con idelalisib o venetoclax en pacientes con CLL, SLL en recaída o refractaria.

Se ha informado la eficacia de agente individual de MOR00208 en CLL y NHL. Sin embargo, las tasas de respuesta variable general de los pacientes a las terapias con anticuerpos monoclonales indican que se necesitan métodos para predecir con precisión qué pacientes es probable que respondan a dichas terapias con anticuerpos, de tal manera que el tratamiento pueda administrarse a aquellos pacientes que es más probable que reciban beneficios. Pueden encontrarse biomarcadores o características particulares de los pacientes para los cuales una concentración o intervalo particular para cada biomarcador se correlaciona con la capacidad de respuesta a dicha terapia.

Se evaluó la influencia del recuento de células asesinas naturales (NK) sobre la supervivencia de pacientes con DLBCL tratados con rituximab, ciclofosfamida, clorhidrato de doxorrubicina (hidroxidaunomicina), sulfato de vincristina (Oncovin) y prednisona (R-CHOP). Kim et al., Blood Research, 49:3, 162-169 (septiembre de 2014). Anteriormente, se ha informado que el recuento de células NK periféricas se asoció con el resultado clínico en pacientes con aalPI 2-3 DLBCL. Plonquet et al., Ann Oncol 2007; 18: 1209-15. La US 2014/328842 A1 divulga un método para identificar a un sujeto que tiene linfoma no Hodgkin (NHL) que responde a tratamiento con un anticuerpo anti-CD20, en donde la respuesta al tratamiento se basa en el polimorfismo de CD16 (también conocido como F^cyRIIIA). La US 2015/0239974 A1 divulga que la trogocitosis (cepillado de antígeno) inducido por un anticuerpo anti-CD22 humanizado) (hRBF4) desempeña un papel significativo en la determinación de la eficacia del anticuerpo y la respuesta a la enfermedad para el tratamiento de enfermedades de células B, como cánceres hematopoyéticos, disfunción del sistema inmune y/o enfermedad autoinmune.

Está claro que se necesitan esfuerzos e inversiones significativos para descubrir e identificar las características y biomarcadores de tales pacientes predictivos de la eficacia.

Resumen de la invención

MOR00208 se ha estudiado en pacientes con CLL, ALL, NHL y SLL. Por consiguiente, hasta la fecha se ha completado un análisis exhaustivo de los datos clínicos hasta la fecha para identificar las características o los biomarcadores de los pacientes que tienen más probabilidades de beneficiarse del tratamiento con MOR00208.

MOR00208 se dirige específicamente al antígeno de superficie de CD19 y media la muerte directa de células tumorales a través de su función efectora ADCC mejorada. En estudios preclínicos, se ha demostrado que MOR00208 mejora significativamente la ADCC, ADCP y los efectos citotóxicos directos (apoptosis) in vitro sobre líneas de células tumorales CD19+ que abarcan una amplia variedad de linfomas y leucemias humanos (linfoma de Burkitt, CLL, leucemia de células pilosas (HCL), leucemia mieloide crónica (CML) CD19+, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) y leucemia linfoblástica aguda (ALL), que expresan niveles de antígeno de CD19 que varían entre 15.000 y 105.000 moléculas/célula. También se han observado efectos similares en relación con las células de CLL o ALL de pacientes recién aisladas y también se espera que se traduzcan en células de linfoma no Hodgkin (NHL) primario ya que el intervalo de expresión informado para las células B de ALL y CLL cubre el intervalo observado para las células B de NHL (Ginaldi et al., 1998; Olejniczak et al., 2006). En base a la expresión superficial amplia y homogénea de CD19 en varios tipos de neoplasias de células B, el efecto de MOR00208 en el presente estudio puede transferirse a una amplia variedad de linfomas y leucemias humanos, como CLL, ALL, NHL y SLL y subtipos de los mismos.

Los datos del ensayo de Fase Ila titulado Estudio de anticuerpo anti-CD19 optimizado para Fc (MOR00208) para tratar el linfoma no Hodgkin (NHL) se han analizado a fondo. Como resultado de estos esfuerzos, la siguiente divulgación proporciona características y biomarcadores de pacientes en los que los anticuerpos anti-CD19 son eficaces.

Específicamente, se evaluaron por lo menos las siguientes características de los pacientes: a) edad, b) género, c) si los pacientes habían recibido una dosis de Rituximab en los últimos 6 meses, d) si los pacientes eran refractarios a Rituximab, e) si los pacientes tenían el alelo de alta o baja afinidad de FCgammaRIIIa, f) si los pacientes tienen el alelo de alta o baja afinidad FCgammaRIIa, g) si los pacientes tuvieron una duración de la respuesta al tratamiento anterior de más de 12 meses, h) recuentos de células T periféricas de referencia (células/pl), i) recuento de células NK periféricas de referencia (células/pl) y j) expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas (anticuerpos unidos por células, -ABC).

Tanto 1) el recuento de células NK periféricas de referencia como 2) la expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas mostraron claras correlaciones con las respuestas de los paciente scon la terapia de MOR00208. Específicamente, los pacientes que tienen un recuento de células NK periféricas de referencia más alto por pl se correlacionan con una tasa de control de la enfermedad (DCR) más alta. La DCR incluye pacientes que tienen respuesta completa (CR) respuesta parcial (PR) enfermedad estable (SD). Además, tales pacientes tenían una supervivencia libre de progresión (PFS) significativamente mejor en comparación con los pacientes que tenían recuentos de células NK más bajos. Además, los pacientes que tenían una expresión de CD16 de referencia en células NK de por lo menos 60.000 (ABC) se correlacionaron con una tasa de control de enfermedad (DCR) más alta.

Por lo tanto, los pacientes diagnosticados con CLL, ALL, NHL y SLL y que tienen a) un recuento de células NK periféricas alto o 2) una expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 60.000 ABC tienen más probabilidades de beneficiarse del tratamiento con MOR00208.

Tanto 1) los recuentos de células NK periféricas de referencia como 2) la expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas mostraron claras correlaciones con las respuestas de los pacientes con la terapia de MOR00208. Específicamente, los pacientes que tienen un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 50 células/pl se correlacionan con una tasa de control de enfermedad (DCR) más alta. La DCR incluye pacientes que tienen respuesta completa (CR) respuesta parcial (PR) enfermedad estable (SD). Además, los pacientes que tenían un recuento de células NK de referencia de por lo menos 50 células/pl tenían una supervivencia libre de progresión (PFS) significativamente mejor en comparación con los pacientes que tenían recuentos de células NK más bajos. Además, los pacientes que tenían una expresión de CD16 de referencia en células NK de por lo menos 60.000 (ABC) se correlacionaron con una tasa de control de enfermedad (DCR) más alta.

Por lo tanto, los pacientes diagnosticados con CLL, ALL, NHL y SLL y que tienen a) un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 50 células/pl o 2) una expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 60.000 ABC tienen más probabilidades de beneficiarse del tratamiento con MOR00208.

Tanto 1) los recuentos de células NK periféricas de referencia como 2) la expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas mostraron claras correlaciones con las respuestas de los pacientes con la terapia de MOR00208. Específicamente, los pacientes que tienen un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 100 células/pl se correlacionan con una tasa de control de enfermedad (DCR) más alta. La DCR incluye pacientes que tienen respuesta completa (CR) respuesta parcial (PR) enfermedad estable (SD). Además, los pacientes que tenían un recuento de células NK de referencia de por lo menos 100 células/pl tenían una supervivencia libre de progresión (PFS) significativamente mejor en comparación con los pacientes que tenían recuentos de células NK más bajos. Además, los pacientes que tenían una expresión de CD16 de referencia en células NK de por lo menos 60.000 (ABC) se correlacionaron con una tasa de control de enfermedad (DCR) más alta.

Por lo tanto, los pacientes diagnosticados con CLL, ALL, NHL y SLL y que tienen a) un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 100 células/pl o 2) una expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 60.000 ABC tienen más probabilidades de beneficiarse del tratamiento de MOR00208.

La invención proporciona un método para identificar a un sujeto que tiene linfoma no Hodgkin (NHL) que responde al tratamiento con un anticuerpo anti CD19, dicho método comprendiendo:

a. proporcionar una muestra de sangre obtenida de dicho sujeto antes del tratamiento con anticuerpo anti-CD19. b. determinar el nivel de por lo menos un biomarcador en dicha muestra seleccionada del grupo que consiste de: i. recuento de células NK periféricas, y

ii. niveles de expresión de CD16 en células NK periféricas,

c. comparar el nivel de dicho por lo menos un biomarcador en dicha muestra con un nivel de punto de corte predeterminado.

en donde los niveles de dicho por lo menos un biomarcador en o por encima de un nivel de punto de corte predeterminado es indicativo de un sujeto que se beneficiaría del tratamiento con un anticuerpo anti-CD19.

La invención también proporciona un anticuerpo anti-CD19 para su uso en el tratamiento de un paciente que tiene linfoma no de Hodgkin (NHL) identificado de acuerdo con el método de la invención.

Descripción de dibujos

La Figura 1 muestra las secuencias de aminoácidos de los dominios variables y las CDR de MOR00208.

La Figura 2 muestra las secuencias de aminoácidos de las cadenas ligeras y pesadas completas de MOR00208. La Figura 3 muestra el análisis de la característica operativa de recepción (ROC) de los recuentos de células NK periféricas como predictor de DCR.

La Figura 4 muestra el análisis ROC de los niveles de expresión de CD16 en células NK periféricas (ABC) como predictor de DCR.

La Figura 5 muestra el análisis ROC del recuento de células T periféricas como un predictor potencial de DCR. La Figura 6 muestra que los recuentos de células NK periféricas y los niveles de expresión de CD16 en células NK periféricas son variables independientes y no correlacionadas.

La Figura 7 muestra el diagrama de bosque con DCR en subgrupos de pacientes con características de valor de referencia y biomarcadores específicos

La Figura 8 muestra la diferencia de supervivencia libre de progresión entre pacientes que tienen por lo menos 100 células/pl de recuentos de células NK periféricas frente a pacientes que tienen recuentos de células NK más bajos.

La Figura 9 muestra la diferencia de supervivencia libre de progresión entre pacientes que tienen por lo menos 60.000 ABC en la expresión de CD16 en células NK periféricas frente a pacientes que tienen una expresión de CD16 más baja en células NK.

La Figura 10 muestra la diferencia de supervivencia libre de progresión entre pacientes que tienen por lo menos 500 células/pl de recuentos de células T periféricas frente a pacientes que tienen recuentos de células T más bajos.

Descripción detallada

El término "anticuerpo" significa anticuerpos monoclonales, incluyendo cualquier isotipo, como IgG, IgM, IgA, IgD e IgE. Un anticuerpo IgG se compone de dos cadenas pesadas idénticas y dos cadenas ligeras idénticas que están unidas por enlaces disulfuro. Cada cadena pesada y ligera contiene una región constante y una región variable. Cada región variable contiene tres segmentos llamados "regiones determinantes de la complementariedad" ("CDR") o "regiones hipervariables", que son principalmente responsables de la unión a un epítopo de un antígeno. Se denominan CDR1, CDR2 y CDR3, numeradas secuencialmente desde el extremo N-terminal. Las porciones más altamente conservadas de las regiones variables fuera de las CDR se denominan "regiones marco". Un "fragmento de anticuerpo" significa un fragmento Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab' F(ab')2 u otro fragmento, que contiene por lo menos una cadena pesada variable o ligera variable, cada una conteniendo CDR y regiones marcos.

"VH" se refiere a la región variable de una cadena pesada de inmunoglobulina de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo. "VL" se refiere a la región variable de la cadena ligera de inmunoglobulina de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo.

"Región Fc" significa la región constante de un anticuerpo, que en humanos puede ser de la subclase IgG1, 2, 3, 4 u otras. Las secuencias de las regiones Fc humanas están disponibles en IMGT, Human IGH C-REGIONs, www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/protein/human/IGH/IGHC/Hu_IGHCallgenes.html (recuperado el 16 de mayo de 2011).

El término paciente incluye a un humano.

El NHL es una enfermedad maligna heterogénea que se origina en los linfocitos. En los Estados Unidos (U.S.), la incidencia se estima en 65.000/año con una mortalidad de aproximadamente 20.000 (American Cancer Society, 2006; y SEER Cancer Statistics Review). La enfermedad puede presentarse en todas las edades, el inicio habitual comienza en adultos mayores de 40 años, con la incidencia aumentando con la edad. El NHL se caracteriza por una proliferación clonal de linfocitos que se acumulan en los ganglios linfáticos, la sangre, la médula ósea y el bazo, aunque puede estar afectado cualquier órgano principal. El sistema de clasificación actual usado por patólogos y practicantes clínicos es la clasificación de tumores de la Organización Mundial de la Salud (OMS), que organiza el NHL en neoplasias de células B o T precursoras y maduras. Actualmente, el PDQ está dividiendo el NHL en indolente o agresivo para su entrada en ensayos clínicos. El grupo de NHL indolente se compone principalmente de subtipos foliculares, linfoma linfocítico pequeño, MALT (tejido linfoide asociado a mucosas) y zona marginal; el indolente abarca aproximadamente el 50% de los pacientes con NHL de células B recién diagnosticados. El NHL agresivo incluye a pacientes con diagnósticos histológicos de células B grandes principalmente difusas (DLBL, DLBCL o DLCL) (40% de todos los pacientes recién diagnosticados tienen células grandes difusas), de Burkitt y células del manto. El curso clínico del NHL es altamente variable. Un determinante importante del curso clínico es el subtipo histológico. La mayoría de los tipos indolentes de NHL se consideran enfermedades incurables. Los pacientes responden inicialmente a la quimioterapia o a la terapia con anticuerpos y la mayoría recae. Los estudios hasta la fecha no han demostrado una mejora en la supervivencia con una intervención temprana. En pacientes asintomáticos, es aceptable “observar y esperar” hasta que el paciente se vuelva sintomático o el ritmo de la enfermedad parezca acelerarse. Con el tiempo, la enfermedad puede transformarse en una histología más agresiva. La supervivencia mediana es de 8 a 10 años, y los pacientes indolentes a menudo reciben 3 o más tratamientos durante la fase de tratamiento de su enfermedad. El tratamiento inicial del paciente con NHL sintomático indolente ha sido históricamente la quimioterapia de combinación. Los agentes más comúnmente usados incluyen: ciclofosfamida, vincristina y prednisona (CVP); o ciclofosfamida, adriamicina, vincristina, prednisona (CHOP). Aproximadamente del 70% al 80% de los pacientes responderán a su quimioterapia inicial, la duración de las remisiones dura del orden de 2-3 años. En última instancia, la mayoría de los pacientes recaen. El descubrimiento y uso clínico del anticuerpo anti-CD20, rituximab, ha proporcionado mejoras significativas en la respuesta y la tasa de supervivencia. El estándar actual de atención para la mayoría de los pacientes es rituximab CHOP (R-CHOP) o rituximab CVP (R-CVP). El interferón está aprobado para el tratamiento inicial del NHL en combinación con agentes alquilantes, pero tiene un uso limitado en los Estados Unidos. La terapia con rituximab ha demostrado ser eficaz en varios tipos de NHL, y actualmente está aprobado como tratamiento de primera línea tanto para NHL indolente (linfoma folicular) como agresivo (linfoma difuso de células B grandes). Sin embargo, hay limitaciones significativas del anticuerpo monoclonal (mAb) anti-CD20, incluyendo la resistencia primaria (50% de respuesta en pacientes indolentes en recaída), resistencia adquirida (50% de tasa de respuesta tras volver al tratamiento), respuesta completa rara (2% de tasa de respuesta completa en la población con recaída), y un patrón continuo de recaída. Finalmente, muchas células B no expresan CD20, y por tanto muchos trastornos de las células B no pueden tratarse usando una terapia de anticuerpos anti-CD20.

Además del NHL, hay varios tipos de leucemias que resultan de la desregulación de las células B. La leucemia linfocítica crónica (también conocida como “leucemia linfoide crónica” o “CLL”) es un tipo de leucemia en adultos provocada por una acumulación anormal de linfocitos B. En la CLL, los linfocitos malignos pueden parecer normales y maduros, pero no pueden hacer frente de manera eficaz a la infección. La CLL es la forma más común de leucemia en adultos. Los hombres tienen el doble de probabilidades de desarrollar CLL que las mujeres. Sin embargo, el factor de riesgo clave es la edad. Más del 75% de los casos nuevos se diagnostican en pacientes mayores de 50 años. Cada año se diagnostican más de 10.000 casos y la mortalidad es de casi 5.000 al año (American Cancer Society, 2006; y SEER Cancer Statistics Review). La CLL es una enfermedad incurable, pero progresa lentamente en la mayoría de los casos. Muchas personas con CLL llevan una vida normal y activa durante muchos años. Debido a su inicio lento, la CLL en etapa temprana generalmente no se trata, ya que se cree que la intervención temprana para la CLL no mejora el tiempo de supervivencia ni la calidad de vida. En cambio, la afección se monitoriza a lo largo del tiempo. Los tratamientos iniciales para la CLL varían dependiendo del diagnóstico exacto y la progresión de la enfermedad. Hay docenas de agentes usados para el tratamiento de la CLL. Los regímenes de quimioterapia de combinación como FCR (fludarabina, ciclofosfamida y rituximab) y BR (Ibrutinib y rituximab) son eficaces tanto en la CLL recién diagnosticada como en la recidivante. El trasplante alogénico de médula ósea (células madre) rara vez se usa como tratamiento de primera línea para la CLL debido a su riesgo.

Otro tipo de leucemia es el linfoma linfocítico pequeño (SLL) que se considera una variante de CLL que carece de la linfocitosis clonal necesaria para el diagnóstico de CLL, pero por lo demás comparte características patológicas e inmunofenotípicas (Campo et al., 2011). La definición de SLL requiere la presencia de linfadenopatía y/o esplenomegalia. Además, el número de linfocitos B en la sangre periférica no debe exceder de 5 x 109/l. En la SLL, el diagnóstico debe confirmarse mediante evaluación histopatológica de una biopsia de ganglios linfáticos siempre que sea posible (Hallek et al., 2008). La incidencia de la SLL es de aproximadamente el 25% de CLL en los Estados Unidos (Dores et al., 2007).

Otro tipo de leucemia es la leucemia linfoblástica aguda (ALL), también conocida como leucemia linfocítica aguda. La LLA se caracteriza por la sobreproducción y la multiplicación continua de glóbulos blancos malignos e inmaduros (también conocidos como linfoblastos) en la médula ósea. "Agudo" se refiere al estado inmaduro e indiferenciado de los linfocitos circulantes ("blastos"), y que la enfermedad progresa rápidamente con una esperanza de vida de semanas a meses si no se trata. La ALL es más común en la infancia con una incidencia máxima de 4 a 5 años de edad. Los niños de 12 a 16 años mueren más fácilmente que otros. Actualmente, por lo menos el 80% de la ALL infantil se considera curable. Cada año se diagnostican menos de 4.000 casos y la mortalidad es de casi 1.500 al año (American Cancer Society, 2006; y SEER Cancer Statistics Review).

El uso de un anticuerpo de CD19 en linfomas de células B no específicos se analiza en la WO2007076950 (US2007154473). El uso de un anticuerpo de CD19 en CLL, NHL y ALL se describe en Scheuermann et al., CD19 Antigen in Leukemia and Lymphoma Diagnosis and Immunotherapy, Leukemia and Lymphoma, vol. 18, 385-397 (1995).

Anticuerpos adicionales específicos para CD19 se describen en la WO2005012493 (US7109304), WO2010053716 (US12/266,999) (Immunomedics); WO2007002223 (US US8097703) (Medarex); WO2008022152 (12/377,251) y WO2008150494 (Xencor), WO2008031056 (US11/852,106) (Medimmune); WO 2007076950 (US 11/648,505) (Merck Patent GmbH); WO 2009/052431 (US12/253,895) (Seattle Genetics); y WO2010095031 (12/710,442) (Glenmark Pharmaceuticals), WO2012010562 y WO2012010561 (International Drug Development), WO2011147834 (Roche Glycart), y WO 2012/156455 (Sanofi).

El término "CD19" se refiere a la proteína conocida como CD19, que tiene los siguientes sinónimos: B4, antígeno de linfocitos B CD19, antígeno de superficie de linfocitos B B4, CVID3, antígeno de diferenciación CD19, MGC12802 y antígeno de superficie de células T Leu-12.

La CD19 humana tiene la secuencia de aminoácidos de:

MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPF LKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELF RWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLN QSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMW VMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLI FCLCSLVGILHLQRALVLRRKRKRMTDPTRRFFKVTPPPGSGPQNQYGNVLSLPTPTSGLG RAQRWAAGLGGTAPSYGNPSSDVQADGALGSRSPPGVGPEEEEGEGYEEPDSEEDSEFY ENDSNLGQDQLSQDGSGYENPEDEPLGPEDEDSFSNAESYENEDEELTQPVARTMDFLSP HGSAWDPSREATSLGSQSYEDMRGILYAAPQLRSIRGQPGPNHEEDADSYENMDNPDGP DPAWGGGGRMGTWSTR. (SEQ ID NO: 7)

"MOR00208" es un anticuerpo anti-CD19. La secuencia de aminoácidos de los dominios variables se proporciona en la Figura 1. La secuencia de aminoácidos de las regiones Fc de cadena pesada y ligera de MOR00208 se proporcionan en la Figura 2. "MOR00208" y "XmAb 5574" se usan como sinónimos para describir el anticuerpo mostrado en las Figuras 1 y 2. El anticuerpo MOR00208 se describe en la solicitud de patente de Estados Unidos N° 12/377.251.

La solicitud de patente de Estados Unidos N° 12/377.251 describe el anticuerpo denominado 4G7 H1.52 Hybrid S239D/I332E/4G7 L1.155 (más tarde llamado MOR00208) de la siguiente manera:

>4G7 H1.52 Hybrid S239D/I332E EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYN DGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELL GGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ FNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8)

> 4G7 L1.155 DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLN SGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIKRTVAAPSVFIF PPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9)

Una composición farmacéutica incluye un agente activo, por ejemplo, un anticuerpo para uso terapéutico en humanos. Una composición farmacéutica puede incluir adicionalmente portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables.

"Administrado" o "administración" se refiere a la administración de una composición farmacéutica mediante una forma inyectable como, por ejemplo, una vía intravenosa, intramuscular, intradérmica o subcutánea o vía mucosal, por ejemplo, como un espray nasal o aerosol para inhalación o como una solución, cápsula o comprimido ingerible.

El anticuerpo que se administra de acuerdo con la presente divulgación se administra al paciente en una cantidad terapéuticamente eficaz. Una "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad suficiente para proporcionar alguna mejora de las manifestaciones clínicas de una enfermedad o trastorno dados. Como ejemplo, los pacientes en el estudio ejemplificado recibieron una dosificación de MOR00208 a 12 mg/kg una vez a la semana y en mantenimiento una vez cada dos semanas o mensualmente.

La cantidad que es eficaz para un propósito terapéutico particular dependerá de la gravedad de la enfermedad o lesión, así como del peso y estado general del sujeto. Se entenderá que la determinación de una dosificación apropiada puede lograrse, usando experimentación rutinaria, construyendo una matriz de valores y probando diferentes puntos en la matriz, todo lo cual está dentro de las habilidades ordinarias de un médico o científico clínico capacitado.

Valor de referencia significa antes de la administración de la terapia deseada. Por ejemplo, antes de la administración del anticuerpo anti-CD19 deseado.

Se usó un análisis de características operativas del receptor (ROC) para analizar la predictividad, la sensibilidad, la especificidad y para determinar los puntos de corte de biomarcadores potenciales, como los recuentos de células NK, los niveles de expresión de CD16 en células NK y los recuentos de células T. Existen los siguientes métodos adicionales para estimar un punto de corte óptimo: “Precisión máxima”: el punto de corte que maximiza la precisión; b) “DOR máximo”: el punto de corte que maximiza la razón de probabilidades de diagnóstico; c) “Tasa de error”: el punto de corte que minimiza la tasa de error; d) “Área de precisión máxima”: el punto de corte que maximiza el área de precisión; e) “Sensibilidad Especificidad máximas”: el punto de corte que maximiza la suma de sensibilidad con especificidad; f) “Youden máximo”: el punto de corte que maximiza el índice de Youden; g) “Se = Sp”: el punto de corte en el que la sensibilidad es igual a la especificidad; h) “Distancia ROC mínima ”: el punto de corte que minimiza la distancia entre la curva y la esquina superior izquierda del gráfico; i) “Eficiencia máxima”: el punto de corte que maximiza la eficiencia; y j) “MCT mínimo”: el punto de corte que minimiza el término de coste de clasificación errónea. Ver Lopez-Raton, M., Rodriguez-Alvarez, M.X, Cadarso-Suarez, C. y Gude-Sampedro, F. (2014). Optimal Cutpoints: An R Package for Selecting Optimal Cutpoints in Diagnostic Tests. Journal of Statistical Software 61(8), 1-36.

También se han probado preclínicamente anticuerpos específicos para CD19 en combinación con otros fármacos. Por ejemplo, MOR00208 se había probado en combinación con mostazas nitrogenadas, análogos de purina, análogos de talidomida, inhibidor de fosfoinositido 3-quinasa, inhibidores de BCL-2 e inhibidores de tirosina quinasa de Bruton (BTK).

Una "mostaza nitrogenada" es un agente alquilante de ADN no específico que se usa como quimioterapia. Los agentes alquilantes añaden un grupo alquilo (CnH2n 1) a las bases de ácidos nucleicos, por ejemplo, añaden un grupo alquilo a la base de guanina del a Dn en el átomo de nitrógeno número 7 del anillo de imidazol. Los pasos de alquilación dan como resultado la formación de enlaces cruzados entre cadenas (ICL). Estas ICL son altamente citotóxicas, ya que bloquean procesos metabólicos fundamentales como la replicación y la transcripción. Las mostazas nitrogenadas incluyen ciclofosfamida, clorambucilo, uramustina, ifosfamida, melfalán y bendamustina.

La bendamustina se comercializa con los nombres Ribomustin® y Treanda®, y también se conoce como SDX-105, por Mundipharma International Corporation Limited (licenciatario de Astellas Pharma GmbH) y Cephalon para el tratamiento de leucemias linfocíticas crónicas (CLL), linfoma no Hodgkin (NHL) de células b indolente y otros linfomas. La bendamustina tiene la siguiente estructura:

Un análogo de purina es un antimetabolito, que imita la estructura de las purinas metabólicas, interfiriendo de este modo con la síntesis de ácidos nucleicos. La fludarabina, por ejemplo, puede incorporarse en el ARN y el ADN sustituyendo los nucleótidos de purina, adenina y guanina. Los análogos de purina inhiben el crecimiento de células de proliferación rápida de un individuo, por ejemplo, células cancerosas, células de la médula ósea o células presentes en el tracto gastrointestinal. Los análogos de purina incluyen mercaptopurina, azatioprina, tioguanina y fludarabina. La fludarabina o fosfato de fludarabina (Fludara®) es un fármaco de quimioterapia que se usa en el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica y los linfomas no Hodgkin indolentes. La fludarabina es un análogo de purina. La fludarabina inhibe la síntesis de ADN interfiriendo con la ribonucleótido reductasa y la ADN polimerasa y es específica de la fase S (ya que estas enzimas son muy activas durante la replicación del ADN). La fludarabina tiene la siguiente estructura:

Un "análogo de talidomida" incluye, pero no se limita a, la propia talidomida, lenalidomida (CC-5013, Revlimid™), pomalidomida (CC4047, Actimid™) y los compuestos divulgados en la WO2002068414 y la WO2005016326. El término se refiere a un compuesto químico sintético que usa la estructura de la talidomida como estructura principal (por ejemplo, se han añadido grupos laterales o dichos grupos se han eliminado de la estructura original). El análogo difiere en estructura de la talidomida y sus compuestos metabolitos, como por una diferencia en la longitud de una cadena de alquilo, un fragmento molecular, por uno o más grupos funcionales, o un cambio en la ionización. El término "análogo de la talidomida" también incluye los metabolitos de la talidomida. Los análogos de talidomida incluyen la mezcla racémica del enantiómero S y R de un compuesto respectivo y el enantiómero S o el enantiómero R individualmente. Se prefiere la mezcla racémica.

Los análogos de la talidomida incluyen los compuestos de las siguientes estructuras:

(A) Lenalidomida

Un "inhibidor de fosfoinositido 3-quinasa" es una clase de fármaco médico que funciona inhibiendo una o más de las enzimas fosfoinositido 3-quinasa, que son parte de la vía PI3K/AKT/mTOR, una vía de señalización importante para muchas funciones celulares como control del crecimiento, metabolismo e inicio de la traducción.

Hay una serie de clases e isoformas diferentes de PI3K. Las PI3K de clase 1 tienen una subunidad catalítica conocida como p110, con cuatro tipos (isoformas) - p110 alfa, p110 beta, p110 gamma y p110 delta. Los inhibidores actuales que se están estudiando inhiben una o más isoformas de las PI3K de clase I.

Los inhibidores de la fosfoinositida 3-quinasa incluyen por lo menos idelalisib, duvelisib y copanlisib. El idelalisib es comercializado por Gilead Sciences, Inc. (nombre comercial Zydelig, también llamado GS-1101 o CAL-101). El idelalisib está actualmente catalogado para el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica (CLL) recidivante, en combinación con rituximab, en pacientes para los que el rituximab solo se consideraría una terapia apropiada debido a otras comorbilidades; linfoma no Hodgkin de células B folicular recidivante (FL) en pacientes que han recibido por lo menos dos terapias sistémicas previas; linfoma linfocítico pequeño (SLL) recidivante en pacientes que han recibido por lo menos dos terapias sistémicas previas. La sustancia actúa como inhibidor de la fosfoinositida 3-quinasa; más específicamente, bloquea P1105, la isoforma delta de la enzima fosfoinositido 3-quinasa.

La fórmula del idelalisib es:

Un "inhibidor de la tirosina quinasa de Bruton (BTK)" es una clase de fármaco que funciona inhibiendo la enzima tirosina-proteína quinasa BTK, que desempeña un papel importante en el desarrollo de las células B. Específicamente, BTK contiene un dominio PH que se une al fosfatidilinositol (3,4,5)-trisfosfato (PIP3). La unión de PIP3 induce a Btk a fosforilar la fosfolipasa C, que a su vez hidroliza PIP2, un fosfatidilinositol, en dos segundos mensajeros, trifosfato de inositol (IP3) y diacilglicerol (DAG), que luego modulan la actividad de las proteínas en sentido descendente durante la señalización de las células B.

Los inhibidores de la tirosina quinasa de Bruton (BTK) incluyen ibrutinib. El ibrutinib es comercializado por Pharmacyclics, Inc y Janssen Pharmaceutical de Johnson & Johnson (nombre comercial Imbruvica, también llamado PCI-32765). El ibrutinib está catalogado actualmente para el tratamiento de pacientes con linfoma de células del manto (MCL) que han recibido por lo menos una terapia previa, leucemia linfocítica crónica (CLL) que han recibido por lo menos una terapia previa, leucemia linfocítica crónica con deleción 17p y macroglobulinemia de Waldenstrom. La fórmula del ibrutinib es 1-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-fenoxifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]-1-piperidinil]-2-propen-1-ona y tiene la siguiente estructura:

Un "inhibidor de BCL-2" es una clase de fármaco que funciona inhibiendo la proteína antiapoptótica del linfoma 2 de células B (Bcl-2), lo que lleva a la muerte celular programada de las células. El inhibidor de BCL-2 incluyen venetoclax. El venetoclax es comercializado por Abbvie y Genentech (nombre comercial VENCLEXTA™, también conocido como GDC-0199, ABT-199 y RG7601). El venetoclax está catalogado actualmente para el tratamiento de pacientes con leucemia linfocítica crónica (CLL) con deleción 17p, detectada por una prueba aprobada por la FDA, que han recibido por lo menos una terapia previa. La fórmula de venetoclax es 4-(4-{[2-(4-clorofenil)-4,4-dimetil-1-ciclohexen-1-il]metil}-1-piperazinil)-N-({3-nitro-4-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)amino]fenil}sulfonil)-2-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-iloxi)benzamida y tiene la siguiente estructura:

"Venetoclax", "ABT" y "ABT-199" se usan como sinónimos en la presente.

Realizaciones

Un aspecto es un método para identificar a un sujeto que tiene linfoma no Hodgkin (NHK) que responde al tratamiento con un anticuerpo anti-CD19, dicho método comprendiendo:

a. proporcionar una muestra obtenida de dicho sujeto antes del tratamiento con dicho anticuerpo anti-CD19, b. determinar el nivel de por lo menos un biomarcador en dicha muestra seleccionada del grupo que consiste de: i. recuento de células NK periféricas, y

ii. niveles de expresión de CD16 en células NK periféricas,

c. comparar el nivel de dicho por lo menos un biomarcador en dicha muestra con un nivel de corte predeterminado,

en donde los niveles de dicho por lo menos un biomarcador en o por encima del nivel de corte predeterminado es indicativo de un sujeto que se beneficiaría del tratamiento con un anticuerpo anti-CD19.

En realizaciones, la muestra es una muestra de sangre. En realizaciones, dicha muestra comprende células NK periféricas.

En realizaciones, el nivel de corte predeterminado de dicho biomarcador es un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 50 células/pl, por lo menos 75 células/pl, por lo menos 100 células/pl, por lo menos 125 células/pl, por lo menos 150 células/pl, por lo menos 175 células/pl, por lo menos 200 células/pl, por lo menos 225 células/pl o por lo menos 250 células/pl. En realizaciones, el nivel de corte predeterminado de dicho biomarcador son niveles de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 45.000 ABC, por lo menos 60.000 ABC, por lo menos 75.000 ABC o por lo menos 90.000 ABC.

En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 50 células/pl, o

b. niveles de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 60.000 (ABC).

En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 50 células/pl, y

En realizaciones, el nivel de punto de corte predeterminado es un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 50 células/pl. En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador son los niveles de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 60.000 (ABC).

En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 70 células/pl, o

En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 70 células/pl, y

En realizaciones, el nivel de punto de corte predeterminado es un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 70 células/pl. En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador son los niveles de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 60.000 (ABC).

En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 80 células/pl, o

En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 80 células/pl, y

En realizaciones, el nivel de punto de corte predeterminado es un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 80 células/pl. En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador son los niveles de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 60.000 (ABC).

En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 90 células/pl, o

En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 90 células/pl, y

En realizaciones, el nivel de punto de corte predeterminado es un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 90 células/pl. En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador son los niveles de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 60.000 (ABC).

En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 100 células/pl, o

En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 100 células/pl, y

En realizaciones, el nivel de punto de corte predeterminado es un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 100 células/pl. En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador son los niveles de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 60.000 (ABC).

Un aspecto es un método para identificar a un sujeto que tiene linfoma no Hodgkin (NHL), que responde al tratamiento con un anticuerpo anti-CD19, dicho método comprendiendo:

a. proporcionar una muestra de sangre obtenida de dicho sujeto antes del tratamiento con dicho anticuerpo anti-CD19,

b. determinar el nivel de por lo menos un biomarcador en dicha muestra seleccionado del grupo que consiste de: i. recuento de células NK periféricas, y

ii. niveles de expresión de CD16 en células NK periféricas,

c. comparar el nivel de dicho por lo menos un biomarcador en dicha muestra con un nivel de punto de corte predeterminado,

en donde el recuento de células NK periféricas de referencia es de por lo menos 50 células/pl, por lo menos 60 células/pl, por lo menos 70 células/pl, por lo menos 80 células/pl, por lo menos 90 células/pl o por lo menos 100 células/pl y los niveles de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas son de por lo menos 60.000 (ABC), y en donde el anticuerpo anti-CD19 comprende una región HCDR1 que comprende la secuencia SYVMH (SEQ ID NO: 1), una región HCDR2 que comprende la secuencia NPYNDG (^sE^qID NO: 2), una región HCDR3 que comprende la secuencia GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), una región LCDR1 que comprende la secuencia RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), una región LCDR2 que comprende la secuencia RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), y una región LCDR3 que comprende la secuencia MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

Un aspecto es un método para identificar a un sujeto que tiene linfoma no Hodgkin (NHL) que responde al tratamiento con un anticuerpo anti-CD19, dicho método comprendiendo:

b. determinar el nivel de por lo menos un biomarcador en dicha muestra seleccionada del grupo que consiste de: i. recuento de células NK periféricas, y

ii. niveles de expresión de CD16 en células NK periféricas,

en donde el recuento de células NK periféricas de referencia es de por lo menos 100 células/pl, o los niveles de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas son de por lo menos 60.000 (ABC), y en donde el anticuerpo anti-CD19 comprende una región HCDR1 que comprende la secuencia SYVMH (SEQ ID NO: 1), una región HCDR2 que comprende la secuencia NPYNDG (SEQ ID NO: 2), una región HCDR3 que comprende la secuencia GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), una región LCDR1 que comprende la secuencia RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), una región LCDR2 que comprende la secuencia RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), y una región LCDR3 que comprende la secuencia MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

En realizaciones, el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 100 células/pl, y

En realizaciones, el nivel de punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 50 células/pl, por lo menos 75 células/pl, por lo menos 100 células/pl, por lo menos 125 células/pl, por lo menos 150 células/pl, por lo menos 175 células/pl, por lo menos 200 células/pl, por lo menos 225 células/pl o por lo menos 250 células/pl. En realizaciones, el nivel de punto de corte predeterminado de dicho biomarcador son niveles de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 45.000 ABC, por lo menos 60.000 ABC, por lo menos 75.000 ABC o por lo menos 90.000 ABC.

También se divulga un método para tratar a un paciente que tiene leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma no Hodgkin (NHL), leucemia linfoblástica aguda (ALL) o linfoma linfocítico pequeño (SLL) con un anticuerpo anti-CD19, el método comprendiendo

a. obtener un recuento de células NK periféricas de referencia en el paciente, o un nivel de expresión de CD16 de referencia en las células NK periféricas del paciente, y

b. administrar una cantidad eficaz del anticuerpo anti-CD19 al paciente que tiene un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 50 células/pl, por lo menos 60 células/pl, por lo menos 70 células/pl, por lo menos 80 células/pl, por lo menos por lo menos 90 células/pl o por lo menos 100 células/pl o un nivel de expresión de CD16 de referencia en las células NK periféricas de por lo menos 60.000 (ABC).

b. administrar una cantidad eficaz del anticuerpo anti-CD19 al paciente que tiene un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 100 células/pl o un nivel de expresión de CD16 de referencia en las células NK periféricas de por lo menos 60.000 (ABC).

El método para tratar a un paciente con leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma no Hodgkin (NHL), leucemia linfoblástica aguda (ALL) o linfoma linfocítico pequeño (SLL) con un anticuerpo anti-CD19, puede comprender

a. obtener un recuento de células NK periféricas de referencia en el paciente, y

b. administrar una cantidad eficaz del anticuerpo anti-CD19 al paciente que tiene un recuento de células NK de por lo menos 50 células/pl, por lo menos 60 células/pl, por lo menos 70 células/pl, por lo menos 80 células/pl, por lo menos 90 células/pl o por lo menos 100 células/pl.

El método para tratar a un paciente con leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma no Hodgkin (NHL), leucemia linfoblástica aguda (ALL) o linfoma linfocítico pequeño (SLL) con un anticuerpo anti-CD19, pude comprender

b. administrar una cantidad eficaz del anticuerpo anti-CD19 al paciente que tiene un recuento de células NK de por lo menos 100 células/pl.

El método para tratar a un paciente que tiene leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma no Hodgkin (NHL), leucemia linfoblástica aguda (ALL) o linfoma linfocítico pequeño (SLL) con un anticuerpo anti-CD19, puede comprender

a. obtener niveles de expresión de CD16 de referencia en las células NK periféricas del paciente, y

b. administrar una cantidad eficaz del anticuerpo anti-CD19 al paciente que tiene niveles de CD16 en las células NK de por lo menos 60.000 (ABC).

Como se indica en otra parte en la presente, la invención proporciona un anticuerpo anti-CD19 para su uso en el tratamiento de un paciente que tiene linfoma no Hodgkin (NHL), en donde el paciente se identifica de acuerdo con el método de la invención.

En realizaciones, el anticuerpo anti-CD19 se administra a pacientes que tienen un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 50 células/pl, por lo menos 60 células/pl, por lo menos 70 células/pl, por lo menos 80 células/pl, por lo menos 90 células/pl o por lo menos 100 células/pl, y un nivel de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 60.000 (ABC).

En realizaciones, el anticuerpo anti-CD19 se administra a pacientes que tienen tanto un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 100 células/pl y un nivel de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 60.000 (ABC).

En realizaciones, el anticuerpo anti-CD19 se administra a pacientes que tienen un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 50 células/pl, por lo menos 75 células/pl, por lo menos 100 células/pl, por lo menos 125 células/pl, por lo menos 150 células/pl, por lo menos 175 células/pl, por lo menos 200 células/pl, por lo menos 225 células/pl o por lo menos 250 células/pl. En realizaciones, el anticuerpo anti-CD19 se administra a pacientes que tienen niveles de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 45.000 ABC, por lo menos 60.000 ABC, por lo menos 75.000 ABC o por lo menos 90.000 ABC.

También se divulga un método para tratar a un paciente que tiene leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma no Hodgkin (NHL), leucemia linfoblástica aguda (ALL) o linfoma linfocítico pequeño (SLL) con un anticuerpo anti-CD19, dicho método comprendiendo:

ii. niveles de expresión de CD16 en células NK periféricas,

d. administrar una cantidad eficaz de anticuerpo anti-CD19 al paciente que tiene un recuento de células NK periféricas de por lo menos 100 células/pl o un nivel de expresión de CD16 en las células NK periféricas de por lo menos 60.000 (ABC).

También se divulga un método para tratar a un paciente que tiene leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma no Hodgkin (NHL), leucemia linfoblástica aguda (ALL) o linfoma linfocítico pequeño (SLL) que comprende administrar una cantidad eficaz de un anticuerpo anti-CD19 al paciente si

a. el recuento de células NK periféricas de referencia del paciente es de por lo menos 100 células/pl o b. los niveles de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas son de por lo menos 60.000 (ABC).

También se divulga un método para tratar a un paciente que tiene leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma no Hodgkin (NHL), leucemia linfoblástica aguda (ALL) o linfoma linfocítico pequeño (SLL) que comprende a. obtener el recuento de células NK periféricas del paciente,

b. administrar una cantidad eficaz de un anticuerpo anti-CD19 a pacientes que tienen recuentos de células NK periféricas de por lo menos 100 células/pl.

También se divulga un método para tratar a un paciente que tiene leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma no Hodgkin (NHL), leucemia linfoblástica aguda (ALL) o linfoma linfocítico pequeño (SLL) que comprende a. obtener los niveles de expresión de CD16 en las células NK periféricas del paciente,

b. administrar una cantidad eficaz de un anticuerpo anti-CDl9 a pacientes que tienen niveles de expresión de CD16 en las células NK periféricas de por lo menos 60.000 (ABC).

En realizaciones, el anticuerpo anti-CD19 se administra a pacientes que tienen tanto un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 100 células/pl como un nivel de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 60.000 (ABC). En realizaciones, el anticuerpo anti-CD19 se administra a pacientes que tienen un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 50 células/pl, por lo menos 75 células/pl, por lo menos 100 células/pl, por lo menos 125 células/pl, por lo menos 150 células/pl, por lo menos 175 células/pl, por lo menos 200 células/pl por lo menos 225 células/pl, o por lo menos 250 células/pl. En realizaciones, el anticuerpo anti-CD19 se administra a pacientes que tienen niveles de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 45.000 ABC, por lo menos 60.000 ABC, por lo menos 75.000 ABC o por lo menos 90.000 ABC.

En realizaciones, el recuento de células NK periféricas de referencia o los niveles de CD16 de referencia (ABC) en las células NK periféricas se obtienen de una muestra de sangre tomada del paciente. En realizaciones, el recuento de células NK periféricas y/o los niveles de expresión de CD16 se miden antes de la administración del anticuerpo anti-CD19.

En realizaciones, el anticuerpo específico para CD19 comprende una región HCDR1 que comprende la secuencia SYVMH (SEQ ID NO: 1), una región HCDR2 que comprende la secuencia NPYNDG (^sE^qID ⁿO: 2), una región HCDR3 que comprende la secuencia GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), una región Lc Dr 1 que comprende la secuencia RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), una región LCDR2 que comprende la secuencia Rm Sn LNS (SEQ ID NO: 5) y una región LCDR3 que comprende la secuencia MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

En realizaciones, el recuento de células NK periféricas de referencia o los niveles de expresión de CD16 de referencia en las células NK periféricas se obtienen de una muestra de sangre tomada del paciente.

En la invención reivindicada, el paciente tiene linfoma no Hodgkin. En realizaciones, el linfoma no Hodgkin se selecciona del grupo que consiste de linfoma folicular, linfoma linfocítico pequeño, tejido linfoide asociado a mucosas, zona marginal, de células B grandes difuso, de Burkitt y células del manto. En una realización, el linfoma no Hodgkin es linfoma folicular. En una realización, el linfoma no Hodgkin es un linfoma no Hodgkin indolente. En una realización, el linfoma no Hodgkin es un linfoma linfocítico pequeño. En una realización, el linfoma no Hodgkin es tejido linfoide asociado a mucosas. En una realización, el linfoma no Hodgkin es un linfoma de zona marginal. En una realización, el linfoma no Hodgkin es un linfoma de células B grandes difuso. En una realización, el linfoma no Hodgkin es linfoma de Burkitt. En una realización, el linfoma no Hodgkin es linfoma de células del manto.

En realizaciones, el tratamiento da como resultado el efecto terapéutico seleccionado del grupo que consiste en tasa de control de la enfermedad (DCR) y mayor duración de supervivencia libre de progresión.

En realizaciones, el tratamiento comprende además la administración de una cantidad eficaz de mostaza nitrogenada. En una realización, la mostaza nitrogenada es bendamustina. En realizaciones, el tratamiento comprende además la administración de una cantidad eficaz de un análogo de purina. En realizaciones, el análogo de purina es fludarabina. En realizaciones, el tratamiento comprende además la administración de una cantidad eficaz de un inhibidor de la tirosina quinasa de Bruton (BTK). En realizaciones, el inhibidor de la tirosina quinasa de Bruton (BTK) es ibrutinib. En realizaciones, el tratamiento comprende además la administración de una cantidad eficaz de un inhibidor de fosfoinositido 3-quinasa. En una realización, el inhibidor de fosfoinosítido 3-quinasa es idelalisib. En realizaciones, el tratamiento comprende además la administración de una cantidad eficaz de un análogo de talidomida. En una realización, el análogo de talidomida es lenalidomida. En realizaciones, el tratamiento comprende además la administración de una cantidad eficaz de un inhibidor de BCL-2. En una realización, el inhibidor de BCL-2 es venetoclax.

Como el anticuerpo anti-CD19 ejemplificado y otros anticuerpos anti-CD19 se unen a CD19, se cree que pueden observarse resultados similares con otros anticuerpos anti-CD19. Otros anticuerpos anti-CD19 se describen en la solicitud de patente de Estados Unidos N° 12/377.251 (Xencor), WO2005012493, WO2010053716 (Immunomedics); WO2007002223 (Medarex); WO2008022152 (Xencor); WO2008031056 (Medimmune); WO 2007/076950 (Merck Patent GmbH); WO 2009/052431 (Seattle Genetics); y WO2010095031 (Glenmark Pharmaceuticals).

En realizaciones, el anticuerpo específico para CD19 comprende un anticuerpo que compite de manera cruzada con el anticuerpo que comprende una región HCDR1 que comprende la secuencia SYVMH (SEQ ID NO: 1), una región HCDR2 que comprende la secuencia NPYNDG (SEQ ID NO: 2), una región HCDR3 que comprende la secuencia GTYY^yG^tRVFDY (SEQ ID NO: 3), una región L^cD^r1 que comprende la secuencia RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), una región LCDR2 que comprende la secuencia RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) y una región LCDR3 que comprende la secuencia MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

En realizaciones, el anticuerpo específico para CD19 comprende un anticuerpo que se une al mismo epítopo que un anticuerpo que comprende una región HCDR1 que comprende la secuencia SYVMH (SEQ ID NO: 1), una región HCDR2 que comprende la secuencia NPYNDG (^sE^qID NO: 2), una región HCDR3 que comprende la secuencia GTYYy Gt RVFDY (SEQ ID NO: 3), una región Lc Dr 1 que comprende la secuencia RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), una región LCDR2 que comprende la secuencia RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) y una región LCDR3 que comprende la secuencia MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

En realizaciones, el anticuerpo específico para CD19 comprende una región HCDR1 de secuencia SYVMH (SEQ ID NO: 1), una región HCD^r2 de secuencia NPYNDG (SEQ ID NO: 2), una región HCDR3 de secuencia GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), una región LCDR1 de secuencia RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), una región LCDR2 de secuencia RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) y una región LCDR3 de secuencia MQHLEYPIT (^sE^qID NO: 6).

En realizaciones, el anticuerpo específico para CD19 comprende una cadena pesada variable de la secuencia

EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPY NDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWG QGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) y una cadena ligera variable de la secuencia

DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYR

MSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ

ID NO: 11).

En una realización, dicho anticuerpo comprende un dominio constante de cadena pesada de la secuencia ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFR VVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 12).

En una realización, el anticuerpo específico para CD19 comprende un dominio constante de cadena ligera de la secuencia RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KD STYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC. (SEQ ID NO: 13).

En una realización, el anticuerpo específico para CD19 comprende una cadena pesada que tiene la secuencia EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKY NEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFR VVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8)

En una realización, el anticuerpo específico para CD19 comprende una cadena ligera que tiene la secuencia DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLN SGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIKRTVAAPSVFIF PPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSK ADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9)

También se divulga en la presente una composición farmacéutica. La composición puede comprender un portador aceptable. La composición puede administrarse en una cantidad eficaz.

Ejemplos

Ejemplo 1: Recuento de células T y células NK

El alcance del estudio clínico de MOR00208C201 incluyó la evaluación de varios biomarcadores exploratorios. Como parte de esta iniciativa, se realizó el recuento de células T y NK periféricas de referencia en los sitios clínicos.

Las células T son un tipo de linfocito (un subtipo de glóbulos blancos) que desempeñan un papel central en la inmunidad mediada por células. Pueden distinguirse de otros linfocitos, como las células B y las células NK, por la presencia de un receptor de células T en la superficie celular.

Las células asesinas naturales o células NK son un tipo de linfocito citotóxico fundamental para el sistema inmunológico innato. Las células NK proporcionan respuestas rápidas a las células infectadas por virus, actúan aproximadamente 3 días después de la infección, y responden a la formación de tumores. Típicamente, las células inmunitarias detectan el complejo de histocompatibilidad principal (MHC) presentado en las superficies de las células infectadas, desencadenando la liberación de citoquinas, provocando lisis o apoptosis. Sin embargo, las células NK son únicas, ya que tienen la capacidad de reconocer células estresadas en ausencia de anticuerpos y MHC, lo que permite una reacción inmunológica mucho más rápida.

Materiales y métodos

TriTest CD3 FITC/CD16+CD56 PE/CD45 PerCP (con tubos TruCOUNT), BD Biosciences, Cat: 340403 (US); 342442 (Europa). Pipetas y puntas de pipeta capaces de administrar 20 pl, 50 pl y 450 pl, Gilson Inc. FACS Lysing Solutions, ^bD Biosciences, Cat: 349202.

Instrumentos: Citómetro de flujo, Vortex

Antecedentes de la citometría de flujo:

La sangre completa se tiñe con anticuerpos marcados con fluorocromo (reactivos TriTEST) que se unen específicamente a los antígenos de la superficie de los leucocitos. Las células viajan más allá del haz de láser y dispersan la luz láser. Las células teñidas emiten fluorescencia. Estas señales de dispersión y fluorescencia, detectadas por el instrumento, proporcionan información sobre el tamaño de la célula, la complejidad interna y la intensidad relativa de la fluorescencia. Los reactivos TriTEST emplean activación por fluorescencia, lo que permite la modulación directa de la fluorescencia de la población de linfocitos de células T y NK para reducir la contaminación de los glóbulos rojos nucleados o no lisados en la puerta.

Tinción

Para cada muestra de paciente, se etiquetó un tubo TruCOUNT con el número de identificación de la muestra. Se pipetearon 20 pl de reactivo TriTEST CD3/CD16+CD56/CD45 en el fondo del tubo. Se pipetearon 50 pl de sangre completa anticoagulada bien mezclada en el fondo del tubo. La sangre anticoagulada (EDTA) almacenada a temperatura ambiente (20-25° C) debe teñirse en el plazo de las 24 horas posteriores a la extracción y analizarse en el plazo de las 6 horas posteriores a la tinción (mantener a temperatura ambiente y protegida de la luz). El tubo se agitó en vórtice suavemente para mezclar. El tubo se incubó durante 15 minutos en la oscuridad a temperatura ambiente (20-25° C). Se añadieron al tubo 450 pl de solución de lisis 1X FACS. El tubo se agitó con vórtex y se incubó de nuevo durante 15 minutos en la oscuridad a temperatura ambiente (20-25° C).

Usando tubos TruCOUNT, se tiñe un volumen conocido de muestra directamente en un tubo TruCOUNT. El sedimento liofilizado en el tubo se disuelve, liberando un número conocido de perlas fluorescentes. Durante el análisis, el número absoluto (células/pl) de células positivas en la muestra puede determinarse comparando eventos celulares con eventos de perlas.

Citometría de flujo

Las células se agitaron en vórtice a fondo (a baja velocidad) para reducir la agregación antes de ejecutarlas en el citómetro de flujo.

Análisis de datos

Se inspeccionó visualmente el gráfico de puntos de CD45 frente a SSC. Los linfocitos aparecen como una población de células compactas brillantes con SSC de baja a moderada. Los monocitos (M) y los granulocitos (G) aparecen como poblaciones distintas. El análisis se completó cuando las poblaciones celulares de monocitos y linfocitos mostraron una separación clara.

Los linfocitos se modularon primero como población de células SSC baja, positivas para CD45. Se preseleccionaron CD16/CD56 frente a CD3. Las células T (T) deberían aparecer como un grupo positivo de CD3 brillante compacto. Las células NK (NK) deberían aparecer como un grupo positivo de CD16/CD56 compacto brillante. Se moduló el bloqueo y se contaron las células T y NK.

Los recuentos de eventos de perlas se realizaron usando un gráfico de CD16/CD56 frente a CD3 sin ninguna puerta preseleccionada. Las perlas deben aparecer como un grupo positivo doble PE/FITC.

Cálculo de recuentos absolutos

Se determinó el número absoluto (células/pl de sangre) de células T o células NK en la muestra comparando eventos celulares con eventos de perlas. Se realizó un análisis de datos con software MultiSET o manual (usando CellQuest u otro software). Para el recuento manual, el número (#) de eventos adquiridos celulares positivos se dividió por el número (#) de eventos de perlas adquiridas, luego se multiplicó por el (recuento total de perlas TruCOUNT (dependiente del lote) dividido por el volumen de muestra de sangre total de 50 pl). El resultado es el número absoluto de células por microlitro.

Ecuación:

número de eventos en la puerta

población que contiene células

(T o NK) # de perlas TruCOUNT totales r

^{X --------------------------------------------------------------------------------------} = #células/jul sangre número de eventos en la puerta 2 50 p l de sangre completa ^' población que contiene perlas

Ejemplo:

2709 células T 51 667 perlas

adquiridas X totales en tubo 280 células T/pl de sangre

10 000 perlas adquiridas 50|iZ

Ejemplo s: Cuantificación de CD16 en células NK

Como parte del estudio clínico de MOR00208C201, se cuantificó CD16 (un biomarcador exploratorio) en células NK periféricas centralmente por ICON Central Laboratories (Farmingdale, Nueva York).

Materiales y métodos

Anticuerpos: CD45 AmCyan (clon 2D1, BD Biosciences, N° de cat. 339192); CD3 FITC (clon UCHT1, BioLegend, N° de cat. 300406); FlTc de IgG de ratón (clon MOPC-21, BioLegend, N° de cat. 400110); CD16 PE (clon 3G8, BioLegend, N° de catálogo 302008); MOR00208; IgG PE de ratón (clon MOPC-21, BioLegend, N° de cat.

400114); CD56 PerCP-Cy5.5 (clon HCD56, BioLegend, N° de cat. 318322); e IgG de ratón PerCP-Cy5.5 (clon MOPC-21, BioLegend, N° de cat. 400150).

Material: remitentes aislados PharmaTherm (Intelsius, N° de catálogo PHT014); Tubo de preparación de células mononucleares BD Vacutainer® CPT™ - heparina sódica (16 x 125 mm/8 ml) (b D, N° de catálogo 362753); tubos de fondo redondo BD Falcon™ de 12x75 mm (BD, N° de catálogo 352052); Perlas CS&T (BD Biosciences N° de Cat 642212); Suero bovino fetal (FBS), inactivado por calor (Sigma F4135 o equivalente); PBS de Dulbecco sin Ca++y Mg++(Gibco, N° de Cat 14190 o equivalente); ^bD Falcon, colador celular, 100 pm, amarillo (BD Bioscience, N° de cat. 352360); Tampón FACS, 3% de FBS inactivado por calor en 1X DPBS; agua desionizada, stock de laboratorio; hielo triturado (húmedo); cubeta de hielo; papel de aluminio; tubos cónicos, 50 ml; tubos cónicos, 15 ml; puntas de pipeta con filtro estériles; Tampón de lisis ^bD Pharm Lyse (BD Biosciences, N° de cat. 555899); Kit de tinción violeta de células muertas fijable ViViD LIVE/DEAD®, para excitación de 405 nm (Life Technologies, N° de Cat L34955); perlas reactivas de amina ArC (Life Technologies, N° de Cat A10346); Perlas BD QuantiBRITE (BD Biosciences, N° de cat. 340495); y malla de nailon de 52 pm (Miami Aqua Culture, para Cat: nailon de 52 pm, 32% de área abierta tejida en el material).

Equipo: Centrífuga (capacidad refrigerada); Sismo de laboratorio (balancín de tubo); Mezclador Vortex; Campana de flujo laminar; Incubadora (Ajustada a 37° C, 5% de CO2); Advia (contador celular); Citómetro de flujo BD FACSCANTO II; Recipiente Desi-Vac™, 1,5 litros (VWR, N° de Cat 62344-930); Indicador Humidity Sponge™ (VWR, N° de Cat 61161-319); y Humedad Trazable en una Tarjeta (VWR, N° de Cat 15551-012).

T l 1. P n l n nifi i n D1 r PBM l l m n n l r n r rif ri a)

Procedimientos de preparación y etiquetado de PBMC

Se recogió sangre periférica del paciente en tubos CPT y se envió durante la noche desde los sitios clínicos al laboratorio central en transportadores aislados. Los tubos de CPT se centrifugaron durante 25 min a 1800 x g a RT con el freno encendido. Después de la centrifugación, los tubos de CPT se invirtieron inmediatamente y se colocaron durante 10 minutos en el sismo de laboratorio para resuspender la capa de PBMC en plasma autólogo y resolver la mayoría de los agregados celulares formados. En condiciones estériles, la suspensión homogeneizada de PBMC/plasma se decantó lentamente en el centro de un colador de células de 100 pm que descansaba en la parte superior de un tubo cónico de 50 ml estéril. Se añadió un volumen igual de 1X DPBS a la suspensión de PBMC/plasma (aproximadamente 4 ml) en un tubo cónico de 15 ml. Los tubos se centrifugaron a 300 x g durante 10 min a 4° C y se eliminó el sobrenadante. Los tubos se agitaron en vórtice para resuspender el sedimento celular. El sedimento celular se lavó con DBPS, se centrifugó, se eliminó el sobrenadante y se resuspendió mediante agitación con vórtice. La suspensión de PBMC lavada se añadió a un tubo Eppendorf que contenía 1 pl de solución madre de ViViD; se incubó durante 15 min en hielo y se mantuvo en la oscuridad (cubierto con papel de aluminio). Las PBMC ViViD teñidas se transfirieron a un nuevo tubo cónico etiquetado y luego se añadió tampón FACS enfriado con hielo. Las células se centrifugaron y se agitaron nuevamente con vórtice para la resuspensión. Se etiquetaron tubos de poliestireno Falcon para cada muestra (Tabla 1). Los anticuerpos o anticuerpos de control de isotipo se añadieron a los tubos apropiados. La alícuota de PBMC teñidas con ViViD se añadió a cada tubo (Tabla 1). Los tubos se agitaron con vórtice y se incubaron. Se añadió tampón FACS y las células se centrifugaron y volvieron a agitar con vórtice para resuspensión. Se añadió tampón de lisis BD Pharm Lyse y las células se agitaron en vórtice, se centrifugaron y aspiraron para eliminar el sobrenadante y se volvieron a agitar con vórtice para resuspender. Se añadió de nuevo tampón ^fA^cS y las células se centrifugaron y se agitaron de nuevo con vórtice resuspensión. Luego, se adquirieron muestras en el citómetro FACSCanto II y se estimaron los ABC (anticuerpos unidos por célula) a partir de MFI estandarizado como se describe en lyer S, et al., Expression of CD69 on activated T cells using Rphycoerythrin labeled beads, Cytometry, 1996; #AC78 (Suppl.8):113 y Iyer S., et al., QuantiBRITE: A New Standard for Fluorescence Quantitation, Becton Dickinson Immunocytometry Systems, San Jose, CA. 1997. White Paper Ejemplo 3: Prueba de NHL

El estudio del anticuerpo anti-CD19 optimizado para Fc (MOR00208) para tratar el linfoma no Hodgkin (NHL) ClinicalTrials.gov Identificador: NCT01685008 ya no está reclutando.

Los criterios de inclusión fueron los siguientes:

1. Pacientes masculinos o femeninos >18 años de edad.

2. Diagnóstico confirmado histológicamente de acuerdo con la clasificación REAL/OMS, de los siguientes linfomas de células B: a.FL, b.MCL, c.DLBCL, d.Otros NHL indolentes (por ejemplo, MZL/MALT).

3. El NHL de los pacientes debe haber progresado después de por lo menos 1 régimen previo que contenía rituximab.

4. Un sitio de enfermedad medible por resonancia magnética (MRI) o tomografía computarizada (CT) definida como por lo menos una lesión que mide por lo menos 1,5 x 1,5 cm, con la excepción: Para pacientes con MCL solamente, pacientes con enfermedad no medible pero se pueden inscribir sitios evaluables (médula ósea, bazo, sangre periférica, tracto gastrointestinal).

5. Los pacientes que hayan recibido previamente un autotrasplante de células madre deben estar por lo menos 4 semanas después del trasplante antes de la administración del fármaco del estudio y deben haber mostrado una recuperación hematológica completa.

6. Se interrumpió la terapia previa con anticuerpos monoclonales (excepto rituximab) o la administración de radioinmunoterapia durante por lo menos 60 días antes de la administración del fármaco del estudio.

7. Dejar de tomar rituximab durante por lo menos 14 días antes de la visita de selección y confirmar que no responde o tiene progresión de la enfermedad después del tratamiento con rituximab.

8. Los pacientes con LDCBG tenían una tomografía por emisión de positrones con [18F]fluorodesoxiglucosa (FDG-PET) positiva al inicio del estudio (criterios de respuesta de Cheson).

9. Esperanza de vida de >3 meses.

10. Estado funcional ECOG de <3.

11. Criterios de laboratorio en la selección: a) Recuento absoluto de neutrófilos (ANC) > 1,0 (1000/mm3) b) Recuento de plaquetas > 75 x 109/l sin transfusión previa en el plazo de 10 días de la primera administración del fármaco del estudio. c) Hemoglobina >8,0 g/dl (puede haber sido transfundido). d) Creatinina sérica <2,0 x límite superior del normal (ULN). e) Bilirrubina total <2.0 x LSN. f) Alanina transaminasa (ALT) y aspartato aminotransferasa (AST) <2,5 x LSN.

12. Si es una mujer en edad fértil, debe confirmarse una prueba de embarazo negativa antes de la inscripción y el uso de anticoncepción de doble barrera, anticonceptivo oral más anticonceptivo de barrera, o confirmación de haberse sometido a histerectomía total y/o ooforectomía, ligadura de trompas clínicamente documentadas. 13. Si es hombre, debe usarse un método anticonceptivo de barrera eficaz durante el estudio y durante 3 meses después de la última dosis si el paciente es sexualmente activo con una mujer en edad fértil.

14. Capaz de cumplir con todos los procedimientos, uso de medicamentos y evaluaciones relacionados con el estudio.

15. Ser capaz de comprender y dar su consentimiento informado por escrito y cumplir con el protocolo del estudio.

Los Criterios de exclusión fueron los siguientes:

1. Tratamiento previo con quimioterapia citotóxica, inmunoterapia, radioterapia u otra terapia específica de linfoma en el plazo de 14 días anteriores a la visita de selección o el paciente no se ha recuperado de los efectos secundarios de la terapia específica de linfoma anterior.

2. Tratamiento con un agente en investigación sistémico en el plazo de 28 días anteriores a la visita de selección.

3. Tratamiento previo con un anticuerpo o fragmentos anti-CD19.

4. Trasplante previo de células madre alogénicas.

5. Hipersensibilidad conocida o sospechada a los excipientes contenidos en la formulación del fármaco del estudio.

6. Enfermedad cardiovascular clínicamente significativa o insuficiencia cardíaca, miocardiopatía, arritmia clínicamente significativa preexistente, infarto agudo de miocardio en el plazo de 3 meses después de la inscripción, angina de pecho en el plazo de 3 meses después de la inscripción.

7. Evidencia clínica o de laboratorio de hepatitis B o hepatitis C activas.

8. Historial de infección por VIH.

9. Cualquier infección sistémica activa (viral, micótica o bacteriana) que requiera terapia antibiótica parenteral activa en el plazo de 4 semanas después de la administración del fármaco del estudio.

10. Tratamiento actual con agentes inmunosupresores distintos de los corticosteroides recetados (no más de 10 mg de equivalente de prednisona).

11. Cirugía mayor o radioterapia en el plazo de 4 semanas anteriores a la primera administración del fármaco del estudio.

12. Enfermedades sistémicas (cardiovasculares, renales, hepáticas, etc.) que impidan el tratamiento del estudio en opinión del investigador.

13. Historial o evidencia clínica de enfermedad del sistema nervioso central (SNC), meníngea o epidural, incluyendo metástasis cerebral.

14. Tratamiento activo/quimioterapia para otra enfermedad maligna primaria en los últimos 5 años.

15. Embarazo o lactancia en mujeres y mujeres en edad fértil que no utilizan un método anticonceptivo aceptable.

16. Historial de incumplimiento de los regímenes médicos o pacientes que se consideran potencialmente poco fiables y no cooperadores.

Los pacientes se trataron con MOR00208 de la siguiente manera. Los pacientes fueron tratados con dos ciclos de 28 días, donde MOR00208 se administró a una dosis de 12 mg/kg los días 1, 8, 15 y 22. Al final de los dos ciclos, los pacientes con enfermedad estable o mejor fueron tratados con un tercer ciclo de 28 días aplicando la misma dosis y programa que los dos primeros ciclos. Al final del tercer ciclo, los pacientes que tenían una respuesta parcial o mejor entraron en mantenimiento. En mantenimiento, se administró MOR00208 a una dosis de 12 mg/kg cada 14 o 28 días hasta la progresión de la enfermedad.

Al final del estudio, las características de los pacientes fueron las siguientes:

Tabla 2:

DLBCL, linterna de células B grandes difuso; ECOG PS, estado de rendimiento de Eastern Cooperative Oncology Group; iNHL, linterna no Hodgkin indolente (incluye linterna folicular y otro iNHL); MCL, linterna de células del manto; mos, meses. (%).

Otro iNHL significa un grupo heterogéneo de tipos de NHL indolentes, no agresivos, no especificados adicionales, por ejemplo, linterna de células marginales, linterna de zona marginal y linterna de tejido linfoide asociado a mucosas (MALT).

Los criterios de valoración principales y secundarios fueron los siguientes:

• Primario: Tasa de respuesta global (ORR) = CR PR

• Secundario:

o Tasa de control de enfermedades (DCR) = CR+PR+SD

o Supervivencia libre de progresión (PFS)

Tabla 3:

Los criterios de respuesta en este estudio son los definidos en la Tabla 4. Todos ellos se basan en los Criterios de Respuesta del Grupo de Trabajo Internacional (2007).

Tabla 4: Criterios de res uesta

continuación

La DCR (CR+PR+SD) se consideró el criterio de valoración de eficacia más relevante en el análisis de las características y los biomarcadores del paciente en este ensayo, ya que la mayoría de los pacientes con SD tenían una marcada reducción de la lesión objetivo pero, según el diseño del estudio, no se trataron más allá del ciclo 3. Por consiguiente, pacientes con MS se incluyeron en el análisis.

Se evaluaron por lo menos las siguientes características de los pacientes para determinar si existía una correlación entre la característica y la DCR observada de los pacientes tratados con el anticuerpo anti-CD19: a) edad, b) género, c) si los pacientes habían recibido una dosis de Rituximab en los últimos 6 meses, d) si los pacientes eran refractarios a rituximab, e) si los pacientes tenían el alelo de afinidad alta o baja FCgammaRIIIa, f) si los pacientes tenían el alelo de afinidad alta o baja FCgammaRIIa, g) si los pacientes tenían una duración de respuesta al tratamiento anterior de más de 12 meses, h) recuentos de células T periféricas basales (células/pl), i) recuento de células NK periféricas de referencia (células/pl) y j) expresión de cD l6 de referencia en células NK periféricas (anticuerpos unidos por células - ABC).

El Ejemplo 1 y el Ejemplo 2 anteriores se usaron para evaluar los recuentos de células NK periféricas de referencia, los recuentos de células T y la expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas. Los datos se muestran en la Tabla 2.

Se usó un análisis de la característica operativa del receptor (ROC) para analizar la predictividad, la especificidad y la sensibilidad y para determinar los puntos de corte de los potenciales biomarcadores de recuento de células NK, recuento de células T y expresión de CD16 (ABC) en células NK periféricas. Un gráfico ROC muestra el rendimiento de un método de clasificación binaria con salida ordinal continua o discreta. Muestra la sensibilidad (la proporción de observaciones positivas clasificadas correctamente) y la especificidad (la proporción de observaciones negativas clasificadas correctamente) a medida que el umbral de salida se mueve sobre el intervalo de todos los valores posibles. Ver Swets JA: The Relative Operating Characteristic in Psychology. Science 1973, 182: 990-1000, y Pepe MS: The statistical evaluation of medical tests for classification and prediction. Oxford: Oxford University Press; 2003.En el contexto de ROC, el área bajo la curva (AUC) mide el rendimiento de un clasificador y se aplica con frecuencia para la comparación de métodos. Una AUC más alta significa una mejor clasificación. La AUC para los recuentos de células N^k/T periféricas y para la expresión de CD16 en células NK es 0,66, 0,53 y 0,61 respectivamente (Figuras 3, 4 y 5).

En general, la determinación del punto de corte depende del objetivo al que se dirige el método respectivo. Varios criterios, como la precisión máxima, la razón máxima de posibilidades de diagnóstico, la tasa de error mínima, la sensibilidad máxima y/o la especificidad máxima, llevarían a una determinación diferente del punto de corte. Además, un equilibrio entre más de esos criterios, por ejemplo, la sensibilidad y la especificidad, también llevaría a una determinación específica del punto de corte.

Por lo tanto, existen varios métodos o criterios para seleccionar los puntos de corte óptimos, incluyendo métodos que maximizan la precisión, la sensibilidad especificidad, los valores predictivos, las razones de probabilidad de diagnóstico o la prevalencia. Debido a la asimetría de la curva de expresión de CD16-ROC (Ver Figura 4) la mayoría de los métodos dan como resultado un punto de corte de 60.000 ABC (los puntos con la mayor distancia entre la curva ROC y la línea bisectriz) mientras que la simetría de la curva ROC del recuento de células NK (ver Figura 3) explica por qué pueden obtenerse diferentes valores para el mejor punto de corte al aplicar diferentes métodos. En este estudio particular, para ambos biomarcadores se asignó más peso a la sensibilidad y, por lo tanto, se eligieron 100 células NK/pl y un nivel de expresión de CD16 de 60.000 ABC, respectivamente, como puntos de corte para analizar la DCR y la PFS dentro de los subgrupos. Para los recuentos de células T periféricas,

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un método para identificar un sujeto que tiene linfoma no Hodgkin (NHL) que responde al tratamiento con un anticuerpo anti-CD19, dicho método comprendiendo:

ii. niveles de expresión de CD16 en células NK periféricas,

en donde los niveles de dicho por lo menos un biomarcador en o por encima del nivel de punto de corte predeterminado es indicativo de un sujeto que se beneficiaría del tratamiento con un anticuerpo anti-CD19.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. un recuento de células NK de referencia dentro de por lo menos 50 células/pl, o

b. niveles de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 60.000 ABC.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 60 células/pl.

4. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 70 células/pl.

5. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 80 células/pl.

6. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. un recuento de células NK periféricas de referencia de por lo menos 100 células/pl.

7. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el punto de corte predeterminado de dicho biomarcador es:

a. niveles de expresión de CD16 de referencia en células NK periféricas de por lo menos 60.000 ABC.

8. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el anticuerpo anti-CD19 comprende una región HCDR1 que comprende la secuencia SYVMH (SEQ ID NO: 1), una región HCDR2 que comprende la secuencia NPYNDG (SEQ ID NO: 2), una región HCDR3 que comprende la secuencia GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), una región LCDR1 que comprende la secuencia RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), una región LCDR2 que comprende la secuencia RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) y una región LCDr3 que comprende la secuencia MQHlEy PIT (SEQ ID NO: 6).

9. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el anticuerpo anti-CD19 comprende una cadena pesada variable de la secuencia EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYIN PYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGT RVFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) y una cadena ligera variable de la secuencia

DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLI

YRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAG

TKLEIK (SEQ ID NO: 11).

10. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el anticuerpo anti-CD19 comprende una cadena pesada que tiene la secuencia EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYIN PYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGT RVFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKP SNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQD WLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSL TCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

(SEQ ID NO: 8) y una cadena ligera que tiene la secuencia

DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLI

YRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAG

TKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQ

SGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKS

FNRGEC (SEQ ID NO: 9).

11. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el linfoma no de Hodgkin se selecciona del grupo que consiste de linfoma folicular, linfoma linfocítico pequeño, linfoma de tejido linfoide asociado a mucosas, linfoma de zona marginal, linfoma de células B grandes difusas, linfoma de células marginales, linfoma de Burkitt y linfoma de células del manto.

12. Un anticuerpo anti-CD19 para su uso en el tratamiento de un paciente que tiene linfoma no Hodgkin (NHL), en donde el paciente se identifica de acuerdo con un método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores.

13. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-11 o el anticuerpo anti-CD19 para el uso de la reivindicación 12, en donde el linfoma no de Hodgkin es linfoma de células B grandes difusas.

14. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-11 o el anticuerpo anti-CD19 para el uso de la reivindicación 12, en donde el linfoma no de Hodgkin es linfoma folicular.

15. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-11 o el anticuerpo anti-CD19 para el uso de la reivindicación 12, en donde el linfoma no de Hodgkin es linfoma de células marginales.