ES2605383T3

ES2605383T3 - Inhibidores del virus de la hepatitis C

Info

Publication number: ES2605383T3
Application number: ES13739324.5T
Authority: ES
Inventors: Kyla; Canales Eda Bjornson; Jeromy J.; Karki Kapil Kumar Cottell; Ashley Anne; Kato Darryl Katana; Tetsuya; Link John O. Kobayashi; Ruben; Phillips Barton W. Martinez; Hyung-Jung; Sangi Michael Pyun; Adam James; Siegel Dustin Schrier; James G.; Tran Chinh Viet Taylor; Teresa Alejandra Trejo Martin; Randall W.; Yang Zheng-Yu; Vivian; JEFF y ZIPFEL SHEILA ZABLOCKI
Original assignee: Gilead Sciences Inc
Current assignee: Gilead Sciences Inc
Priority date: 2012-07-03
Filing date: 2013-07-02
Publication date: 2017-03-14
Anticipated expiration: 2033-07-02
Also published as: CN106117309A; EA201790661A2; KR20150034698A; KR20190124346A; US20160130300A1; TW201414740A; MD20180040A2; EA201790661A3; PL3159345T3; BR112014033080B1; SG10201912269YA; PH12014502862B1; EP3492464A1; HUE042345T2; HRP20190578T1; PH12020550552A1; PH12016502040A1; AU2016200201A1; JP2016041743A; LT3159345T

Abstract

Un compuesto de Fórmula IVa: **Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo

Description

Inhibidores del virus de la hepatitis C

5 Campo

Se divulgan nuevos inhibidores de molécula pequeña de replicación viral, composiciones que contienen tales compuestos, y también se divulgan métodos terapéuticos que comprenden la administración de tales compuestos.

Antecedentes

El virus de la hepatitis C (VHC), un miembro del género Hepacivirus dentro de la familia Flaviviridae, es la causa principal de enfermedad hepática crónica en todo el mundo. (Boyer, N. et al., J. Hepatol. 2000, 32: 98-112). En consecuencia, un enfoque significativo de la investigación antiviral actual se dirige hacia el desarrollo de métodos

15 mejorados para el tratamiento de infecciones crónicas por el VHC en seres humanos (Ciesek, S., von Hahn T., y Manns, MP., Clin. Liver Dis., 2011, 15, 597-609; Soriano, V. et al., J. Antimicrob. Chemother., 2011, 66, 1573-1686; Brody, H., Nature Outlook, 2011, 474, S1-S7; Gordon, C. P., et al., J. Med. Chem. 2005, 48, 1-20; Maradpour, D., et al., Nat. Rev. Micro. 2007, 5, 453-463).

Las curas virológicas de pacientes con infección por VHC crónica son difíciles de conseguir debido a la cantidad prodigiosa de producción de virus diariamente en pacientes infectados crónicamente y la mutabilidad espontánea elevada del VHC (Neumann, et al., Science 1998, 282, 103-7; Fukimoto, et al., Hepatology, 1996, 24, 1351-4; Domingo, et al., Gene 1985, 40, 1-8; Martell, et al., J. Virol. 1992, 66, 3225-9). El tratamiento para el VHC se complica adicionalmente por el hecho de que el VHC es genéticamente diverso y se expresa como varios genotipos

25 y numerosos subtipos diferentes. Por ejemplo, el VHC se clasifica en la actualidad en seis genotipos principales (denominados 1-6), muchos subtipos (denominados a, b, c, y así sucesivamente), y aproximadamente 100 cepas diferentes (numeradas como 1, 2, 3, y así sucesivamente).

El VHC se distribuye en todo el mundo con los genotipos 1, 2, y 3 predominantemente dentro de Estados Unidos, Europa, Australia, y el este de Asia (Japón, Taiwán, Tailandia y China). El genotipo 4 se encuentra en gran medida en Oriente Medio, Egipto y África Central mientras que los genotipos 5 y 6 se encuentran predominantemente en el Sur de África y en el Sudeste de Asia respectivamente (Simmonds, P. et al.,. J Virol. 84: 4597-4610, 2010).

La combinación de ribavirina, un análogo de nucleósido, e interferón-alfa (α) (IFN), se utiliza para el tratamiento de

35 múltiples genotipos de infecciones por el VHC crónicas en seres humanos. Sin embargo, la respuesta clínica variable observada en pacientes y la toxicidad de este régimen han limitado su utilidad. La adición de un inhibidor de proteasa del VHC (telaprevir o boceprevir) al régimen de ribavirina e IFN aumenta sustancialmente las tasas de respuesta virológica a continuación del tratamiento de 12 semanas (SVR12). Sin embargo, en la actualidad, el régimen solo está aprobado para pacientes con el genotipo 1 y permanecen la toxicidad y otros efectos secundarios.

Se ha demostrado que el uso de agentes actividades de actuación de dirección para tratar múltiples genotipos de infección por el VHC es desafiante debido a la actividad variable de agentes antivirales frente a los diferentes genotipos. Los inhibidores de proteasa del VHC con frecuencia han comprometido la actividad in vitro frente a los genotipos 2 y 3 del VHC en comparación con el genotipo 1 (véase, por ejemplo, la Tabla 1 de Summa, V. et al.,

45 Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2012, 56, 4161-4167; Gottwein, J. et al., Gastroenterology, 2011, 141, 1067-1079). Como resultado, también se ha demostrado que la eficacia clínica es altamente variable a través de genotipos del VHC. Por ejemplo, las terapias que son altamente eficaces frente a los genotipos 1 y 2 del VHC pueden tener una eficacia limitada o ninguna frente al genotipo 3. (Moreno, C. et al., Poster 895, 61st AASLD Meeting, Boston, MA, USA, 29 de Oct. - 2 de Nov., 2010; Graham, F., et al., Gastroenterology, 2011, 141, 881-889; Foster, G.R. et al., EASL 45th Annual Meeting, 14-18 de Abril, 2010, Viena, Austria). En algunos casos, los agentes antivirales tienen buena eficacia clínica frente a la genotipo 1, pero menor y más variable frente a los genotipos 2 y 3. (Reiser, M. et al., Hepatology, 2005, 41,832-835). Para superar la eficacia reducida en pacientes con el genotipo 3, pueden ser necesarias dosis sustancialmente más elevadas de agentes antivirales para conseguir reducciones sustanciales de carga viral (Fraser, IP et al., Resumen n.º 48, HEP DART 2011, Koloa, HI, diciembre de 2011).

55 También se necesitan agentes antivirales que sean menos susceptibles a la resistencia viral. Por ejemplo, las mutaciones de resistencia en las posiciones 155 y 168 en la proteasa del VHC causan con frecuencia una disminución sustancial de la eficacia antiviral de los inhibidores de proteasa del VHC (Mani, N. Ann Forum Collab HIV Res., 2012, 14, 1-8; Romano, KP et al., PNAS, 2010, 107, 20986-20991; Lenz O, Antimicrobial agents and chemotherapy, 2010, 54,1878-1887).

El documento WO2007/016441 divulga péptidos macrocíclicos que son útiles como inhibidores de la proteasa NS3 del virus de la hepatitis C (VHC), su síntesis, y su uso para tratar o prevenir infecciones por el VHC.

65 El documento WO2010/011566 divulga compuestos de quinoxalina macrocíclica y su uso como inhibidores de la proteasa NS3 del virus de la hepatitis C (VHC), y para tratar o prevenir infecciones por el VHC.

En vista de las limitaciones de la terapia del VHC actual, existe una necesidad de desarrollar terapias anti-VHC más eficaces. También podría ser útil proporcionar terapias que sean eficaces frente a múltiples genotipos y subtipos del VHC.

5 Sumario

Se divulgan nuevos compuestos que inhiben la proteasa NS3 del virus de la hepatitis C (VHC). En ciertas realizaciones, los compuestos divulgados inhiben múltiples genotipos del virus de la hepatitis C. Estos compuestos son útiles para el tratamiento de una infección por VHC y los síntomas relacionados.

10 Se divulga un compuesto de Fórmula (IV):

15 o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

J es alquilo C1-C4 o carbociclilo C3-C6, en el que alquilo C1-C4 o carbociclilo C3-C6 está opcionalmente sustituido con halógeno, -OH, arilo o ciano;

es carbociclileno C3-C5 que está unido a L y al resto del compuesto a través de dos carbonos adyacentes, en el que dicho carbociclileno C3-C6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4, haloalquilo C1-C3, halógeno,

-: OH, o ciano, o

es carbociclileno bicíclico C5-C8 que está unido a L y al resto del compuesto a través de dos carbonos adyacentes; L es alquileno C3-C6, alquenileno C3-C6 o -(CH2)3-ciclopropil-, opcionalmente sustituido con 1-4 halógenos, -OH, o

25 ciano; Q es alquilo C2-C4 o carbociclilo C3-C6 opcionalmente sustituido con alquilo C1-C3, halógeno, -OH, o ciano; E es alquilo C1-C3 o alquenilo C2-C3, opcionalmente sustituido con alquilo C1-C3, halógeno, -OH, o ciano; W es H, -OH, -Oalquilo (C1-C3), -Ohaloalquilo (C1-C3), halógeno o ciano; y Z2a es H o alquilo C1-C3, halógeno, -OH, o ciano.

30 En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula IVa, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula IVb, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula IVc, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula IVd, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula IVe, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula IVf, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula IVg, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

En una realización, se proporciona un compuesto de una cualquiera de las Fórmulas IVa, IVb, IVc, IVd, IVe, IVf, IVg,

o IVh, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

10 Métodos de tratamiento

Una realización proporciona un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en terapia médica (por ejemplo, para su uso en el tratamiento de una infección viral por Flaviviridae (por 15 ejemplo, una infección viral por VHC) o la proliferación del virus VHC o para retrasar el inicio de los síntomas del VHC en un paciente (por ejemplo, un mamífero tal como un ser humano).

Una realización proporciona un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en la preparación de un medicamento para tratar una infección viral por Flaviviridae (por ejemplo, una 20 infección viral por VHC) o la proliferación del virus VHC o para retrasar el inicio de los síntomas del VHC en un paciente con necesidad del mismo (por ejemplo, un mamífero tal como un ser humano).

Una realización proporciona un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico de la proliferación de un virus Flaviviridae, un virus VHC o 25 para su uso en el tratamiento terapéutico del retraso del inicio de los síntomas del VHC.

Una realización proporciona un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico de una infección por virus Flaviviridae (por ejemplo, una infección por el virus VHC).

30 Una realización proporciona el uso de un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para una infección por virus Flaviviridae (por ejemplo, una infección por el virus VHC) en un mamífero (por ejemplo, un ser humano).

En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto para su uso en un método para tratar infección por hepatitis C crónica. El método incluye la administración, a un paciente con necesidad del mismo, de un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, al paciente.

5 En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto para su uso en un método para tratar infección por hepatitis C en pacientes sin tratamiento previo. El método incluye la administración, a un paciente sin tratamiento previo, de un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

10 En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto para su uso en un método para tratar infección por hepatitis C en pacientes con experiencia en el tratamiento. El método incluye la administración, a un paciente con experiencia en el tratamiento, de un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto para su uso en un método para tratar una infección por

15 hepatitis C en un paciente no apto para interferón o un paciente intolerante al interferón. El método incluye la administración de un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, al paciente.

En ciertas realizaciones, el compuesto para su uso en el tratamiento que se describe en el presente documento incluye administrar el compuesto de Fórmula IVa-IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, al paciente

20 durante un periodo de duración fijo. En algunas realizaciones, el periodo de duración fijo es de 4 semanas, 6 semanas, 8 semanas, 10 semanas o 12 semanas. En otras realizaciones, el periodo de duración fijo no es de más de 12 semanas.

En algunas realizaciones, el compuesto se administra durante aproximadamente 12 semanas. En otras

25 realizaciones, el compuesto se administra durante aproximadamente 12 semanas o menos, durante aproximadamente 10 semanas o menos, durante aproximadamente 8 semanas o menos, durante aproximadamente 6 semanas o menos, o durante aproximadamente 4 semanas o menos.

El compuesto se puede administrar una vez al día, dos veces al día, una vez cada dos días, dos veces a la semana, 30 tres veces a la semana, cuatro veces a la semana, o cinco veces a la semana.

En ciertas realizaciones, los métodos de tratamiento descritos en el presente documento incluyen la administración de un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a un paciente que está infectado con el genotipo (GT) 1, 2, 3, 4, 5, o 6 del VHC (es decir, un método para tratar una infección por GT 1, 2, 3,

35 4,5o6delVHC).

Una realización proporciona un método para tratar una infección por VHC en un paciente con necesidad del mismo (por ejemplo, un mamífero tal como un ser humano), en el que el paciente está infectado con el genotipo 1 del VHC. El método incluye la administración de un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable

40 del mismo, al paciente.

Una realización proporciona un compuesto para su uso en un método para tratar una infección por VHC en un paciente con necesidad del mismo (por ejemplo, un mamífero tal como un ser humano), en el que el paciente está infectado con el genotipo 2 del VHC. El método incluye la administración de un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o

45 una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, al paciente.

Una realización proporciona un compuesto para su uso en un método para tratar una infección por VHC en un paciente con necesidad del mismo (por ejemplo, un mamífero tal como un ser humano), en el que el paciente está infectado con el genotipo 3 del VHC. El método incluye la administración de un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o

50 una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, al paciente.

Una realización proporciona un compuesto para su uso en un método para tratar una infección por VHC en un paciente con necesidad del mismo (por ejemplo, un mamífero tal como un ser humano), en el que el paciente está infectado con el genotipo 4 del VHC. El método incluye la administración de un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o

55 una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, al paciente.

Una realización proporciona un compuesto para su uso en un método para tratar una infección por VHC en un paciente con necesidad del mismo (por ejemplo, un mamífero tal como un ser humano), en el que el paciente está infectado con el genotipo 5 del VHC. El método incluye la administración de un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o

60 una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, al paciente.

Una realización proporciona un compuesto para su uso en un método para tratar una infección por VHC en un paciente con necesidad del mismo (por ejemplo, un mamífero tal como un ser humano), en el que el paciente está infectado con el genotipo 6 del VHC. El método incluye la administración de un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o

65 una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, al paciente.

En los métodos de tratamiento que se describen en el presente documento, la etapa de administración incluye la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula IVa-IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, al paciente con necesidad de tratamiento.

5 En ciertas realizaciones, se proporcionan métodos para inhibir la actividad del VHC. Tales métodos incluyen la etapa de tratar una muestra de la que se sospecha que contiene VHC con un compuesto o composición divulgados en el presente documento.

En una realización, los compuestos divulgados en el presente documento actúan como inhibidores de VHC, como 10 compuestos intermedios para tales inhibidores o tienen otras utilidades como se describe a continuación.

En ciertas realizaciones, los compuestos que se unen en el hígado se pueden unir con grados variables de reversibilidad.

15 En una realización, un método para tratar el VHC incluye la adición de un compuesto divulgado en el presente documento a la muestra. La etapa de adición comprende cualquier método de administración como se ha descrito anteriormente.

Si se desea, la actividad de VHC a continuación de la aplicación del compuesto se puede observar con cualquier

20 método incluyendo métodos directos e indirectos para detectar la actividad del VHC. Para determinar la actividad del VHC se contemplan todos los métodos cuantitativos, cualitativos y semicuantitativos. Por lo general, se aplica uno de los métodos de identificación sistemática descritos anteriormente, sin embargo, también se puede aplicar cualquier otro método tal como observación de las propiedades fisiológicas de un organismo vivo.

25 Muchos organismos contienen VHC. Los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento o profilaxis de afecciones asociadas con la activación del VHC en animales o en seres humanos.

Formulaciones farmacéuticas

30 "Farmacéuticamente aceptable" se refiere a adecuado para su uso en preparaciones farmacéuticas, que por lo general se considera que son seguras para un uso de este tipo, aprobadas oficialmente por una agencia reguladora de un gobierno nacional o estatal para un uso de este tipo, o que se enumeran en la farmacopea de Estados Unidos u otra farmacopea generalmente reconocida para uso en animales, y más particularmente en seres humanos.

35 "Vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente, o vehículo, u otro ingrediente que sea farmacéuticamente aceptable y con el que se administra un compuesto de la invención.

Los compuestos de la presente invención se formulan con vehículos convencionales (por ejemplo, ingrediente o material excipiente inactivo), que se seleccionarán de acuerdo con la práctica habitual. Los comprimidos contendrán 40 excipientes incluyendo sustancias de deslizamiento, cargas, aglutinantes y similares. Las formulaciones acuosas se preparan en forma estéril, y cuando están destinadas a una administración distinta de la administración oral, por lo general serán isotónicas. Todas las formulaciones contendrán opcionalmente excipientes tales como los que se exponen en el Handbook of Pharmaceutical Excipients (1986). Los excipientes incluyen ácido ascórbico y otros antioxidantes, agentes quelantes tales como EDTA, carbohidratos tales como dextrina, hidroxialquilcelulosa,

45 hidroxialquilmetilcelulosa, ácido esteárico y similares. Una realización proporciona la formulación como una forma de dosificación sólida que incluye una forma de dosificación oral sólida. El pH de las formulaciones varía de aproximadamente 3 a aproximadamente 11, pero habitualmente es de aproximadamente 7 a 10.

Cuando es posible administrar los principios activos solos, puede ser preferente presentarlos como formulaciones

50 (composiciones) farmacéuticas. Las formulaciones, para uso tanto veterinario como humano, de la invención comprenden al menos un principio activo, como se ha definido anteriormente, junto con uno o más vehículos aceptables del mismo y opcionalmente otros ingredientes terapéuticos. El vehículo o vehículos deben ser "aceptables" en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación y fisiológicamente inocuos para el receptor del mismo.

55 Las formulaciones incluyen las adecuadas para las vías de administración mencionadas anteriormente. Las formulaciones se pueden presentar de forma conveniente en forma de dosificación unitaria y se pueden preparar mediante cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica farmacéutica. Las técnicas y formulaciones por lo general se encuentran en Pharmaceutical Sciences de Remington (Mack Publishing Co., Easton, PA). Tales

60 métodos incluyen la etapa de poner en asociación el principio activo con ingredientes inactivos (por ejemplo, un vehículo, excipiente farmacéutico, etc.) que constituye uno o más ingredientes auxiliares. En general, las formulaciones se preparan poniendo en asociación de forma uniforme e íntima el principio activo con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos o ambos, y a continuación, si fuera necesario, se da forma al producto.

En ciertas realizaciones, las formulaciones adecuadas para administración oral se presentan como unidades separadas tales como cápsulas, o obleas o comprimidos cada uno conteniendo una cantidad del principio activo determinada previamente.

5 En ciertas realizaciones, las formulaciones farmacéuticas incluyen uno o más compuestos de la invención junto con uno o más vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables y opcionalmente otros agentes terapéuticos. Las formulaciones farmacéuticas que contienen el principio activo pueden estar en cualquier forma adecuada para el método de administración pretendido. Cuando se usan para uso oral se pueden preparar por ejemplo, comprimidos, trociscos, pastillas para chupar, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o gránulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras o blandas, jarabes o elixires. Las composiciones destinadas a uso oral se pueden preparar de acuerdo con cualquier método conocido en la técnica para la preparación de composiciones farmacéuticas y tales composiciones pueden contener uno o más agentes que incluyen agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes y agentes conservantes, para proporcionar una preparación de sabor agradable. Los comprimidos que contienen el principio activo en combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable no

15 tóxico que son adecuados para preparación de comprimidos son aceptables. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato cálcico o sódico, lactosa, monohidrato de lactosa, croscarmelosa sódica, povidona, fosfato cálcico o sódico; agentes de granulación y disgregantes, tales como almidón de maíz, o ácido algínico; agentes aglutinantes, tales como celulosa, celulosa microcristalina, almidón, gelatina o goma arábiga; y agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. La microencapsulación para retrasar la desintegración y adsorción en el tracto gastrointestinal y de ese modo proporciona una acción sostenida durante un periodo de tiempo más largo. Por ejemplo, se puede usar un material de retardo de tiempo tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo solo o con una cera.

La cantidad de principio activo que se combina con los ingredientes inactivos para producir una forma de dosificación

25 variará dependiendo del hospedador tratado y el modo de administración en particular. Por ejemplo, en algunas realizaciones, una forma de dosificación para administración oral a seres humanos contiene de aproximadamente 1 a 1000 mg de material activo formulado con una cantidad apropiada y conveniente de material vehículo (por ejemplo, ingrediente inactivo o material excipiente). En ciertas realizaciones, el material vehículo varía de aproximadamente un 5 a aproximadamente un 95 % de las composiciones totales (peso: peso). En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento contienen de aproximadamente 1 a 800 mg, de 1 a 600mg, de 1 a 400mg, de 1 a 200 mg, de 1 a 100mg o de 1 a 50mg del compuesto de Fórmula I, II, III o IV (tal como una cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento no contienen más de aproximadamente 400 mg del compuesto de Fórmula IVa-IVh, o una sal

35 farmacéuticamente aceptable del mismo. En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento contienen aproximadamente 100 mg del compuesto de Fórmula IVa-IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Se debería entender que además de los ingredientes mencionados anteriormente en particular, las formulaciones divulgadas en el presente documento pueden incluir otros agentes convencionales en la técnica que tienen relación con el tipo de formulación en cuestión, por ejemplo los adecuados para administración oral pueden incluir agentes saborizantes.

Además, se proporcionan composiciones para uso veterinario que comprenden al menos un principio activo como se 45 ha definido anteriormente junto con un vehículo veterinario.

Los vehículos veterinarios son materiales útiles para el fin de administrar la composición y pueden ser materiales sólidos, líquidos o gaseosos que de otro modo son inertes o aceptables en la clínica veterinaria y son compatibles con el principio activo. Estas composiciones veterinarias se pueden administrar por vía oral, por vía parenteral o mediante cualquier otra vía deseada.

La dosis eficaz de principio activo depende al menos de la naturaleza de la afección que se está tratando, toxicidad, de si el compuesto se está usando de forma profiláctica (dosis más bajas), el método de administración, y la formulación farmacéutica, y la determinará el médico usando estudios convencionales de aumento de dosis.

Vías de administración

Uno o más compuestos de Fórmulas IVa-IVh, (denominados en el presente documento principios activos), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, se administran mediante cualquier vía apropiada para la afección que se va a tratar. Las vías adecuadas incluyen oral, rectal, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal y parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa, intradérmica, intratecal y epidural), y similares. Se observara que la vía preferente puede variar por ejemplo con la afección del receptor. Una ventaja de los compuestos de la presente invención es que están biodisponibles por vía oral y se pueden dosificar por vía oral. Por consiguiente, en una realización, las composiciones farmacéuticas que se describen en el presente documento son

65 formas de dosificación oral. En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas que se describen en el presente documento son formas de dosificación sólida oral.

Un experto en la técnica reconocerá que los sustituyentes y otros restos de los compuestos de la fórmula genérica en el presente documento se deberían seleccionar para proporcionar un compuesto que sea lo suficientemente estable como para proporcionar un compuesto farmacéuticamente útil que se pueda formular en una composición farmacéutica aceptablemente estable. Se contempla que los compuestos que tienen una estabilidad de este tipo

5 entran dentro del alcance de la presente invención. Un experto en la materia debería entender que cualquier combinación de las definiciones y sustituyentes descritos anteriormente no debería dar como resultado en una especie o compuesto inoperable.

Terapia de combinación

En otra realización más, la presente solicitud divulga composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmulas IVa-IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con al menos un agente terapéutico adicional (es decir, principio activo), y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones, los agentes terapéuticos adicionales incluyen agentes antivirales adicionales.

15 El agente terapéutico adicional usado en combinación con los compuestos descritos en el presente documento incluye, pero no se limita a, cualquier agente que tenga un efecto terapéutico cuando se usa en combinación con el compuesto de la presente invención. Tales combinaciones se seleccionan basándose en la afección a tratar, de actividades cruzadas de los ingredientes y propiedades farmacológicas de la combinación. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, el agente terapéutico usado en combinación con los compuestos de Fórmulas IVa-IVh, incluye, pero no se limita a, uno o más de los siguientes: interferones, análogos de ribavirina, inhibidores de la proteasa NS3, inhibidores de NS5a, inhibidores de NS5b, inhibidores de la alfa-glucosidasa 1, hepatoprotectores, inhibidores no nucleósidos de VHC, análogos de nucleósido, y otros fármacos para tratar la infección por VHC. En algunas realizaciones, los agentes terapéuticos adicionales incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de la proteasa NS3,

25 inhibidores de NS5a, y/o inhibidores de NS5b. En algunas realizaciones, se proporciona una composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmulas IVa-IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y uno o más de un inhibidor de la proteasa NS3, un inhibidor de NS5a, y/o un inhibidor de NS5b. En algunas realizaciones, se proporciona una composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmulas IVa-IVh, o una sala farmacéuticamente aceptable del mismo y uno o más de un inhibidor de NS5a y/o un inhibidor de NS5b. En ciertas realizaciones, se proporcionan composiciones farmacéuticas que incluyen un compuesto de Fórmulas IVa-IVh, y uno o más agentes antivirales adicionales, en las que el agente antiviral adicional no es un interferón, ribavirina, o un análogo de ribavirina. En otras realizaciones, se proporcionan composiciones farmacéuticas que incluyen un compuesto de Fórmulas IVa-IVh, y uno o más agentes antivirales adicionales, en las que el agente antiviral adicional no es ribavirina ni un análogo de ribavirina.

35 En ciertas realizaciones, los compuestos divulgados en el presente documento se combinan con uno u otros principios activos más (por ejemplo, uno o más agentes antivirales adicionales) en una forma de dosificación unitaria para administración simultánea o secuencial a un paciente. La terapia de combinación se puede administrar como un régimen simultáneo o secuencial. Cuando se administra de forma secuencial, la combinación se administra en dos o más administraciones. En ciertas realizaciones, los principios activos se: (1) coformulan y administran o se suministran de forma simultánea en una composición farmacéutica combinada; (2) administran mediante de forma alternativa o en paralelo como una composición farmacéutica separada; o (3) mediante algún otro régimen. Cuando se administran en terapia alternativa, los principios activos se administran o se suministran de forma secuencial, por ejemplo, en comprimidos, píldoras o cápsulas separados, o mediante inyecciones diferentes en jeringas separadas.

45 En general, durante la terapia alternativa, una dosificación eficaz de cada principio activo se administra en forma secuencial, es decir, en serie, mientras que en la terapia de combinación, las dosificaciones eficaces de dos o más principios activos se administran en conjunto.

Los interferones a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, rIFN-alfa 2b pegilado (PEG-Intron), rIFN-alfa 2a pegilado (Pegasys), rIFN-alfa 2b (Intron A), rIFN-alfa 2a (Roferon-A), interferón alfa (MOR-22, OPC-18, Alfaferone, Alfanative, Multiferon, subalin), interferón alfacon-1 (Infergen), interferón alfa-n1 (Wellferon), interferón alfa-n3 (Alferon), interferón-beta (Avonex, DL-8234), interferón-omega (omega DUROS, Biomed 510), albinterferón alfa-2b (Albuferon), IFN alfa XL, BLX-883 (Locteron), DA-3021, interferón alfa-2b glicosilado (AVI-005), PEG-Infergen, interferón lambda PEGilado (IL-29 PEGilado), o belerofón, IFN alfa-2b XL, rIFN-alfa 2a, IFN alfa consenso, infergen,

55 rebif, IFN-beta pegilado, interferón alfa oral, feron, reaferon, intermax alfa, r-IFN-beta, e infergen + actimmune.

Los análogos de ribavirina a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, ribavirina (Rebetol, Copegus), levovirina VX-497, y taribavirina (Viramidina).

Los inhibidores de NS5A a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, ledipasvir (GS-5885), GS-5816, JNJ47910382, daclatasvir (BMS-790052), ABT-267, MK-8742, EDP-239, IDX-719, PPI-668, GSK-2336805, ACH-3102, A-831, A-689, AZD-2836 (A-831), AZD-7295 (A-689), y BMS-790052.

Los inhibidores de NS5B a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, inhibidor de polimerasa que es

65 sofosbuvir (GS-7977), tegobuvir (GS-9190), GS-9669, TMC647055, ABT-333, ABT-072, setrobuvir (ANA-598), filibuvir (PF-868554), VX-222, IDX-375, IDX-184, IDX-102, BI-207127, valopicitabina (NM-283), R1626, PSI-6130

(R1656), PSI-7851, BCX-4678, nesbuvir (HCV-796), BILB 1941, MK-0608, NM-107, R7128, VCH-759, GSK625433, XTL-2125, VCH-916, JTK-652, MK-3281, VBY-708, A848837, GL59728, A-63890, A-48773, A-48547, BC-2329, BMS-791325, y BILB-1941.

5 Los inhibidores de proteasa NS3 a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, GS-9451, GS-9256, simeprevir (TMC-435), ABT-450, boceprevir (SCH-503034), narlaprevir (SCH-900518), vaniprevir (MK-7009), MK-5172, danoprevir (ITMN-191), sovaprevir (ACH-1625), neceprevir (ACH-2684), Telaprevir (VX-950), VX-813, VX-500, faldaprevir (BI-201335), asunaprevir (BMS-650032), BMS-605339, VBY-376, PHX-1766, YH5531, BILN-2065, y BILN-2061,

Los inhibidores de la alfa-glucosidasa 1 a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, celgosivir (MX-3253), Miglitol, y UT-231B.

Los hepatoprotectores a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, IDN-6556, ME 3738, MitoQ, y LB-84451,

15 Los inhibidores no nucleósidos del VHC a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, derivados de bencimidazol, derivados de benzo-1,2,4-tiadiazina, y derivados de fenilalanina.

Los análogos de nucleósido a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, ribavirina, viramidina, levovirina, un Lnucleósido, o isatoribina y dicho interferón es α-interferón o interferón pegilado.

Otros fármacos para tratar infección por VHC a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, imiquimod, 852A, GS-9524, ANA-773, ANA-975, AZD-8848 (DSP-3025), PF-04878691, y SM-360320, inhibidores de ciclofilina (por ejemplo, DEBIO-025, SCY-635, o NIM811) o inhibidores de IRES del VHC (por ejemplo, MCI-067); emericasan (IDN

25 6556), ME-3738, GS-9450 (LB-84451), silibilina, o MitoQ. BAS-100, SPI-452, PF-4194477, TMC-41629, GS-9350, GS-9585, y roxitromicina.

Otros fármacos adicionales a modo de ejemplo para tratar la infección por VHC incluyen, pero no se limitan a, zadaxina, nitazoxanida (alinea), BIVN-401 (virostat), DEBIO-025, VGX-410C, EMZ-702, AVI 4065, bavituximab, oglufanida, PYN-17, KPE02003002, actilón (CPG-10101), KRN-7000, civacir, GI-5005, ANA-975 (isatoribina), XTL6865, ANA 971, NOV-205, tarvacina, EHC-18, y NIM811.

Además, otros fármacos adicionales a modo de ejemplo para tratar la infección por VHC incluyen, pero no se limitan a, timosina alfa 1 (Zadaxin), nitazoxanida (Alinea, NTZ), BIVN-401 (virostat), PYN-17 (altirex), KPE02003002, actilon

35 (CPG-10101), GS-9525, KRN-7000, civacir, GI-5005, XTL-6865, BIT225, PTX-111, ITX2865, TT-033i, ANA 971, NOV-205, tarvacina, EHC-18, VGX-410C, EMZ-702, AVI 4065, BMS-650032, Bavituximab, MDX-1106 (ONO-4538), Oglufanida, FK-788, VX-497 (merimepodib), DEBIO-025, ANA-975 (isatoribina), XTL-6865, o NIM811.

Procedimientos de síntesis generales

Los esquemas, procedimientos y ejemplos proporcionados en el presente documento describen la síntesis de compuestos divulgados en el presente documento así como compuestos intermedios usados para preparar los compuestos. Se debe observar que las etapas individuales descritas en el presente documento se pueden combinar. También se debe entender que los lotes separados de un compuesto se pueden combinar y a continuación se

45 pueden usar en la siguiente etapa de síntesis.

Los siguientes esquemas describen métodos que son útiles para preparar compuestos divulgados en el presente documento.

LF es un "fragmento de conector", (es decir, un precursor para L) en el que un enlace carbono-carbono insaturado

unido (por ejemplo, alqueno o alquino) a la parte de LF distal a

facilita, como un ejemplo no limitante, una

reacción catalizada por metal que da como resultado la conexión de LF a U para formar un grupo L. Los ejemplos no limitantes de reacciones catalizadas por metal que dan como resultado una conexión de este tipo incluyen metátesis de cierre de anillo catalizada por Ru o una reacción de acoplamiento cruzado catalizada por Pd (por ejemplo,

55 acoplamientos de Negishi, Heck, o Sonogashira).

Los espectros de resonancia magnética nuclear de 1H (RMN) en todos los casos eran coherentes con las estructuras propuestas. Los desplazamientos químicos (δ) característicos se proporcionan campo abajo en partes por millón a partir de tetrametilsilano usando abreviaturas convencionales para la denominación de los picos principales: por ejemplo s, singlete; d, duplete; t, triplete; c, cuadruplete; m, multiplete; a, ancho. Las siguientes abreviaturas se han usado para disolventes comunes usados en experimentos de resonancia magnética nuclear: CDCl3, deuterocloroformo; CD3OD, perdeuterometanol; CD3CN, perdeuteroacetonitrilo; d6-DMSO, perdeuterodimetilsulfóxido. Los espectros de masas se obtuvieron usando espectrómetros de masas de Thermo Scientific o Agilent Technologies equipados con ionización por electronebulización (ESI). Las masas se indican como 65 proporciones de masa con respecto a carga (m/z) de, por ejemplo, un ión del compuesto (representado por [M]+), un

ión formado a partir del compuesto con otro ión, tal como un ión hidrógeno (representado por [M+H]+), un ión sodio (representado por [M+Na]+), un ión formado a partir del compuesto por pérdida de un ión, tal como el compuesto desprotonado (representado por [M-H]-), etc. Las mediciones de HPLC analítica se realizaron en Agilent HPLC de Technologies Series 1100 usando una columna Phenomenex Kinetex C18, 2,6 um 100 A, 4,6 x 100 mm con un 5 programa de elución de un 2 % de disolvente B durante 0,55 min, gradiente de un 98 % de disolvente B durante 8 min que se mantiene a un 98 % de disolvente B durante 0,40 min antes de volver a un 2 % de disolvente B durante 0,02 min y manteniendo a un 2 % de disolvente B durante 2,03 min a un caudal de 1,5 ml/min (Disolvente A = H2O filtrada MiliQ + TFA al 0,1 %, Disolvente B = MeCN + TFA al 0,1 %). La expresión "cromatografía en capa fina (TLC)" se refiere a cromatografía sobre gel de sílice usando placas F254 de gel de sílice 60. El factor de retención ("fR") de

10 un compuesto es la distancia viajada por un compuesto dividida entre la distancia viajada por el frente del disolvente en una placa de TLC. Las expresiones tales como "elución temprana" y "elución tardía" se refieren al orden en el que un compuesto eluye o se recupera de un método de cromatografía basado en fase estacionaria sólida/fase móvil de disolvente líquido (por ejemplo, cromatografía sobre gel de sílice en fase normal o cromatografía líquida a alta presión en fase inversa (HPLC)).

El Esquema 1 demuestra una ruta general para S1-3, en el que J, R1, R, M, L, T, U, W y Q son como se definen en el presente documento, Z2a es como se define en la Fórmula IV o III, o es H o Z2a como se define en la Fórmula I o II.

20 En el esquema 1, el éster intermedio S1-1 se hidroliza con una base tal como hidróxido de litio cuando R es alquilo C1-C3 (por ejemplo, metilo), o con ácido tal como ácido trifluoroacético cuando R es tercbutilo. El producto de la hidrólisis del éster hidrólisis se acopla a continuación con un compuesto intermedio S1-2 a través de una reacción de acoplamiento (por ejemplo, usando un agente de acoplamiento de péptido tal como HATU y una base tal como DIPEA) para generar los compuestos de la estructura general S1-3.

El Esquema 2 muestra una síntesis general de un compuesto intermedio S26 en el que U, W, R1, J, y Q son como se definen en el presente documento. En el esquema 2, una especie de prolina apropiadamente sustituida y 30 protegida S22 experimenta una reacción de eterificación tal como SNAr (por ejemplo, tratamiento con Cs2CO3 y S2

1 en el que R2 es H y LG2 es halógeno), SN2 (por ejemplo, conversión previa de S22 en un brosilato (R2 es Bs) seguido de tratamiento con S21 en el que LG2 es -OH y base tal como DABCO), reacción de Mitsunobu (por ejemplo, el tratamiento de S22 con DIAD y trifenilfosfina seguido de S21 en el queLG2 es -OH) o reacción de acoplamiento cruzado catalizada con metal (LG2 es halógeno, R2 es H) para generar el compuesto intermedio S23. El compuesto intermedio S23 se desprotege (por ejemplo, HCl 4 N en dioxano cuando PG es Boc) para preparar el compuesto intermedio S24. La formación de enlace amida a través de activación del ácido carboxílico de S25 usando agentes de acoplamiento de péptido u otros métodos de activación de ácido carboxílico antes del tratamiento de S24 proporciona el compuesto intermedio S26.

El Esquema 3 muestra una síntesis general del compuesto intermedio S36 en el que LF-CH2-CH2 es L, y U, W, R1 , J, Q, M, T, y L son como se definen en el presente documento. En el esquema 3, un compuesto intermedio S31 se acopla a través de reacción de formación de enlace amida con un compuesto intermedio S32 para proporcionar el

15 compuesto intermedio S33. El acoplamiento cruzado catalizado por metal (por ejemplo, reacción de Suzuki usando viniltrifluoroborato potásico, Et3N, Pd(dppf)Cl2) para dar S34, seguido de metátesis de cierre de anillo (por ejemplo, Zhan 1 B) para dar S35, seguido de reducción del doble enlace (por ejemplo, H2, Pd al 10 %/C) proporciona el compuesto intermedio S36.

El Esquema 4 muestra una síntesis general de un compuesto intermedio S45 en el que LF-CH2-CH2 es L, y U, W, R1, J, Q, Q y L son como se definen en el presente documento. En el esquema 4, el compuesto intermedio S41 está 5 protegido con un grupo protector tal como Boc. S41 experimenta un acoplamiento cruzado catalizado con metal de transición (por ejemplo, acoplamiento de Sonogashira) con un compuesto intermedio S42 para proporcionar el compuesto intermedio S43. El triple enlace del compuesto intermedio S43 se reduce a un enlace sencillo por hidrogenación (por ejemplo, H2, cantidad catalítica de Pd al 10 %/C) para dar el compuesto intermedio S44. La desprotección de la Boc-amina seguido de acoplamiento en condiciones básicas (por ejemplo, trietilamina)

10 proporciona el compuesto intermedio S45.

El Esquema 5 muestra una síntesis general de un compuesto intermedio S59 en el que LF-CH2-CH2 es L, y U, W, R1, J, Q, T y L son como se definen en el presente documento. En el esquema 5, el compuesto intermedio S51 5 experimenta un acoplamiento cruzado catalizado con metal (tal como reacción de Sonogashira) con un compuesto intermedio S52 para proporcionar el compuesto intermedio S53. El triple enlace del compuesto intermedio S53 se reduce a un enlace sencillo en condiciones apropiadas tales como por hidrogenación (por ejemplo, usando H2 sobre cantidad catalítica de Pd al 10 %/C) para dar el compuesto intermedio S54. La desprotección del alcohol para proporcionar S55, seguido de activación (por ejemplo, DSC en condiciones básicas, por ejemplo trietilamina) 10 proporciona el compuesto intermedio S56. El acoplamiento de S56 y S57 en condiciones básicas proporciona S5

8. La desprotección de nitrógeno de la prolina (por ejemplo, HCl en dioxano cuando PG = Boc) seguido de una macrolactamación (por ejemplo, agente de acoplamiento tal como HATU en condiciones básicas) proporciona el compuesto intermedio S59.

El Esquema 6 muestra una síntesis general de los compuestos intermedios S66 y S67 en los que U, R1, J, Q, M, T y L son como se definen en el presente documento. En el compuesto intermedio S61 del esquema 6, W es OPG, en 5 el que PG es un grupo protector. S61 se desprotege primero para dar el compuesto intermedio S62. La alquilación del compuesto intermedio S62 con un electrófilo apropiado tal como S64 proporciona el compuesto intermedio S6

6. La reacción de S62 con anhídrido tríflico proporciona S63, que a continuación experimenta acoplamiento cruzado catalizado por metal con un compañero de acoplamiento nucleófilo apropiado tal como S65 (por ejemplo, reacción Sonogashira o Suzuki) para proporcionar el compuesto intermedio S67.

El Esquema 7 muestra una síntesis general del compuesto intermedio S713 en el que LF-CH2-CH2-CF2 es L, y W, R1, J, Q, M, y T son como se definen en el presente documento. En S713, L es alquilo C1-C3. En el Esquema 7, el 5 compuesto intermedio S71 experimenta en primer lugar intercambio litio halógeno y a continuación se trata con el compuesto intermedio S72 para generar el compuesto intermedio S73, que a continuación se condensa con el compuesto intermedio S74 para proporcionar la quinoxalina intermedia S75. La halogenación de S75 (por ejemplo, POCl3) proporciona el compuesto intermedio S76. El compuesto intermedio S76 se une a través de una formación de éter en el compuesto intermedio S77 a través de una reacción de SNAr (por ejemplo, Cs2CO3) para generar el

10 compuesto intermedio S78. La desprotección del N-PG del compuesto intermedio S78 proporciona S710. Una reacción de acoplamiento de enlace amida del compuesto intermedio S79 y del compuesto intermedio S710 (por ejemplo, EDC y HOBT, o HATU, NMM, DIPEA) proporciona el compuesto intermedio S711. La metátesis de cierre de anillo de S711 genera el compuesto intermedio S712. La reducción del doble enlace (por ejemplo, hidrogenación con paladio sobre carbono) proporciona el compuesto intermedio S713.

El Esquema 8 muestra una síntesis general del compuesto intermedio S85 en el que una 4-oxo prolina S81 apropiadamente protegida reacciona con el reactivo de Bredereck para generar la enaminona S82. La adición de una especie organometálica proporciona la enona S83, que experimenta reducción al hidroxilo intermedio S84 de una manera estereoselectiva (por ejemplo, reducción de Luche o reducción de CBS). La reducción de olefina posterior da el compuesto intermedio de hidroxi prolina 3-sustituida S85.

10 El Esquema 9 muestra una síntesis general del compuesto intermedio S93 en el que un triflato de vinilo S91 (preparado por ejemplo, con métodos en Kamenecka, T.M., et al.,. Tetrahedron Letters, 2001, 8571) experimenta acoplamiento cruzado catalizado por metal (por ejemplo, acoplamiento de Negishi) para generar el compuesto intermedio S92. La hidroboración y posterior oxidación del compuesto intermedio S92 proporciona el compuesto

15 intermedio S93.

El Esquema 10 muestra una síntesis general del compuesto intermedio de sulfonamida sustituida S103. El

20 ciclopropil-sulfonilcarbamato de terc-butilo S101 se desprotona (por ejemplo, n-BuLi) y se hace reaccionar con un electrófilo (por ejemplo, haluro de alquilo) para dar el compuesto intermedio de sulfonamida sustituida protegida S102, que a continuación se desprotege (por ejemplo, HCl 4 N en dioxano) para proporcionar el compuesto intermedio S103.

El Esquema 11 muestra una síntesis general de un compuesto intermedio S113 en el que E es como se define en el presente documento. En el Esquema 11, una sulfonamida S111 se acopla a un aminoácido protegido S112 usando un agente de acoplamiento tal como CDI y una base tal como DBU.

El Esquema 12 muestra una síntesis general de los compuestos intermedios S1210 y S1217, en los que LF es alquileno C1-C3. En el Esquema 12, ambas Síntesis comienzan con la monoprotección del compuesto intermedio S121 para producir S122, seguido de oxidación (por ejemplo, oxidación de Swern) para proporcionar el compuesto intermedio S123. La alfa cloración enantioselectiva (por ejemplo, organocatalizador S124 y NCS) proporciona el 5 cloroaldehído S125. La reacción de S125 con un derivado de bis-cinciometano (por ejemplo, reactivo de Nysted) proporciona el ciclopropano intermedio S126. El compuesto intermedio S126 se protege ortogonalmente para proporcionar el compuesto intermedio S127. La desprotección de -OPG de S127 proporciona el compuesto intermedio S128, que posteriormente se deshidrata (por ejemplo, reactivo de Grieco) en el compuesto intermedio S129 y por último O-PG2 se retira para proporcionar el compuesto intermedio S1210. Como alternativa, el 10 compuesto intermedio S126 se activa (por ejemplo, DSC y una base tal como piridina) para proporcionar el compuesto intermedio S1211 que se acopla al compuesto intermedio S1212 para proporcionar el carbamato intermedio S1213. El compuesto intermedio S1213 se desprotege para dar el compuesto intermedio S1214, que a continuación se oxida (por ejemplo, oxidación de Swern) para proporcionar el aldehído intermedio S1215. La olefinación (por ejemplo, reacción de Wittig) del compuesto intermedio S1215 proporciona el compuesto intermedio 15 S1216. La hidrólisis del éster (por ejemplo, LiOH cuando R es metilo, TFA cuando R = tercbutilo) proporciona el

compuesto intermedio S1217.

20 El Esquema 13 muestra una síntesis general del compuesto intermedio S135 en el que Q y T son como se definen en el presente documento y LF es alquileno C1-C3. La activación del compuesto intermedio S131 (por ejemplo, DSC) seguido de formación de carbamato entre el compuesto intermedio S132 y el éster de aminoácido intermedio S133 en condiciones básicas da el éster intermedio S134. La hidrólisis del éster (por ejemplo, LiOH cuando R = metilo o TFA cuando R = tercbutilo) proporciona el compuesto intermedio S135.

El Esquema 14 muestra una síntesis general del compuesto intermedio S147 en el que Q es como se define en el

presente documento y LF es alquileno C1-C3. La oxidación del compuesto intermedio S141 (por ejemplo, peryodinano de Dess-Martin) produce la cetona S142. El tratamiento de S142 con S143 (por ejemplo, R2 es -CF3) en presencia de un reactivo adecuado (tal como CsF) proporciona el compuesto intermedio S144. La desprotección de S144 (por ejemplo, TBAF) proporciona S145, que a continuación se añade a un isocianato S146 para dar el compuesto intermedio S147.

El Esquema 15 muestra una síntesis general de un compuesto intermedio (6)S153, generado a partir de la reacción 10 de Kulinkovich de un reactivo de Grignard S151 y un éster S152, de acuerdo con procedimientos convencionales como se describe en Kulinkovich, O.G. y Kananovich, D.G., Eur. J. Org, Chem. 2007, 2007, 2121.

15 El Esquema 16 muestra una síntesis general de un compuesto intermedio S164 enelqueQ, M,y Tsoncomose definen en el presente documento y LF es alquileno C1-C3. En el Esquema 16, la olefina S161 experimenta escisión oxidativa (por ejemplo, OsO4, NalO4) a aldehído S162, que a continuación se reduce al alcohol S163 (por ejemplo, NaBH4) y por último se deshidrata (por ejemplo, eliminación de Grieco) para proporcionar el compuesto intermedio S164.

El Esquema 17 muestra dos estrategias de síntesis general para producir el compuesto intermedio S173 en el que J

es como se define en el presente documento. En el Esquema 17, una 4-oxo prolina apropiadamente protegida S171

5 se desprotona y se alquila (por ejemplo, LiHMDS seguido de J-LG). Una segunda desprotonación con base seguido

de reprotonación a baja temperatura genera el compuesto intermedio estereoenriquecido S172, basándose en un

protocolo descrito (Blanco, M-J. e. al., J. Org. Chem. 1999, 64, 8786). La reducción de la cetona de una manera

estereoselectiva (por ejemplo, reducción de CBS) proporciona el alcohol S173. Cuando J es metilo, el Esquema 17

muestra una síntesis general alternativa en la que el compuesto intermedio S174 se hidrogena para generar una 10 mezcla de S175 y S176. La reducción de cetona de S175 de una manera estereoselectiva (por ejemplo, reducción

de CBS) proporciona el compuesto intermedio S173, en el que J es metilo.

15 El Esquema 18 muestra una síntesis general de los compuestos intermedios S184 y S185, en los que una 4-oxo prolina apropiadamente protegida S181 se hidroxila de una manera estereoselectiva (por ejemplo, MoOPh) para proporcionar el compuesto intermedio S182, que posteriormente se hace reaccionar con un agente de alquilación (por ejemplo, tetrafluoroborato de trimetiloxonio) para proporcionar el compuesto intermedio S183. La reducción de la cetona (por ejemplo, complejo de BH3•SMe2) proporciona los compuestos intermedios S184 y S185.

El Esquema 19 muestra una síntesis general de un compuesto intermedio S197 en el que Q es como se define en el presente documento y LF es alquileno C1-C3. En el Esquema 19, un epóxido intermedio S191 se convierte en el compuesto (±)-trans S193. La activación del alcohol intermedio (±)S193 (por ejemplo, DSC) produce carbonato (±)S194, que se trata con el compuesto intermedio S195 para proporcionar el carbamato intermedio S196. El compuesto intermedio S196 a continuación experimenta hidrólisis de éster (por ejemplo, LiOH cuando R = metilo o TFA cuando R = tercbutilo) para proporcionar el compuesto intermedio S197.

El Esquema 20 muestra una síntesis general de un compuesto intermedio S203 en el que LF-O es F, y U, W, R1, J, Q, M, T y L son como se definen en el presente documento. En el esquema 20, el compuesto intermedio S201 experimenta en primer lugar escisión oxidativa de una olefina (por ejemplo, OsO4, NalO4 y posterior reducción del

15 aldehído resultante (por ejemplo, NaBH4) para proporcionar el compuesto intermedio S202. El acoplamiento cruzado catalizado por metal de transición proporciona el compuesto intermedio S203.

El Esquema 21 muestra una síntesis general de un compuesto intermedio S217 en el que Q y T son como se definen en el presente documento. En el Esquema 21, la activación del diol monoprotegido S211 (por ejemplo,

5 DSC) seguido de acoplamiento con el éster intermedio de amino S213 proporciona el carbamato intermedio S214. El compuesto intermedio S214 a continuación se desprotege para desenmascarar la funcionalidad de alcohol (compuesto intermedio S215) que a continuación se alila para proporcionar el compuesto intermedio S216. El compuesto intermedio S216 a continuación experimenta hidrólisis de éster (por ejemplo, LiOH cuando R = metilo o TFA cuando R = tercbutilo) para proporcionar el compuesto intermedio S217.

El Esquema 22 muestra una síntesis general de un compuesto intermedio S223 en el que U, W, R1, J, y Q son como se definen en el presente documento. En el esquema 22, el compuesto intermedio S221 se desprotege

15 globalmente para proporcionar el compuesto intermedio de aminoácido S222. La funcionalidad de ácido del compuesto intermedio S222 a continuación se convierte en un éster de ácido carboxílico inestable en base (por ejemplo, éster de metilo), el compuesto intermedio S223.

Preparación de los compuestos intermedios seleccionados

20 Preparación del compuesto intermedio A1

Etapas 1-3. Preparación del compuesto intermedio A1: el compuesto intermedio A1 se preparó usando el procedimiento que se detalla en el Ejemplo 2.12 de la Publicación de Patente Internacional N.º WO 2008/064066 (en

5 lo sucesivo en el presente documento "WO ’066") (p. 75-76) sustituyendo el (1R,2S)-1-(terc-butoxicarbonilamino)-2vinilciclopropano-carboxilato de metilo (preparado de acuerdo con Beaulieu, P.L., et al., J. Org. Chem. 2005, 70, 5869) para el (1R,2S)-1-(terc-butoxicarbonilamino)-2-vinilciclopropano-carboxilato de etilo.

Preparación del compuesto intermedio A2 10

El compuesto intermedio A2 se preparó de manera similar al compuesto intermedio A1, sustituyendo la 1metilciclopropano-1-sulfonamida (preparada de acuerdo con el Ejemplo 1.2 del documento WO ’066, p. 47) por 15 ciclopropanosulfonamida.

Preparación del compuesto intermedio A3

20 Etapa 1. Preparación de A31: el éster de ciclopropano A31 se preparó a partir de (1R,2S)-1-(tercbutoxicarbonilamino)-2-vinilciclopropanocarboxilato de metilo (preparado de acuerdo con Beaulieu, P.L., et al., J. Org. Chem. 2005, 70, 5869) usando el procedimiento que se detalla en el Ejemplo 26 de la Publicación de Patente Internacional N.º WO 2009/005677 (en lo sucesivo en el presente documento "WO ’677") (p. 176).

25 Etapas 2-4. Preparación del compuesto intermedio A3: el compuesto intermedio A3 se preparó de manera similar al clorhidrato de (1R,2S)-1-amino-N-(ciclopropilsulfonil)-2-vinilciclopropano-carboxamida del Ejemplo 2.12 del documento WO ’066 (p. 75-76) sustituyendo A31 por (1R,2S)-1-(terc-butoxicarbonilamino)-2vinilciclopropano-carboxilato de etilo.

30 Preparación del compuesto intermedio A4

El compuesto intermedio A4 se preparó de manera similar al compuesto intermedio A3, sustituyendo la 1metilciclopropano-1-sulfonamida (preparada de acuerdo con el Ejemplo 1.2 del documento WO ’066, p. 47) por ciclopropanosulfonamida.

Preparación del compuesto intermedio A5

10 Etapas 1-3. Preparación del compuesto intermedio A5: el compuesto intermedio A5 se preparó de manera similar al clorhidrato de (1R,2S)-1-amino-N-(ciclopropilsulfonil)-2-vinilciclopropano-carboxamida del Ejemplo 2.12 del documento WO ’066 (p. 75-76) sustituyendo A51 (preparado de acuerdo con el Ejemplo 104 del documento WO ’677, p. 265) por (1R,2S)-1-(terc-butoxicarbonilamino)-2-vinilciclopropanocarboxilato de etilo.

15 Preparación del compuesto intermedio A6

20 El compuesto intermedio A6 se preparó de manera similar al compuesto intermedio A5, sustituyendo la 1metilciclopropano-1-sulfonamida (preparada de acuerdo con el Ejemplo 1.2 del documento WO ’066, p. 47) por ciclopropanosulfonamida.

Preparación del compuesto intermedio A7 25

El compuesto intermedio A7 se preparó de acuerdo con el Ejemplo 97,1.6 de la Publicación de Patente de Estados Unidos N.º 2009/274652 (en lo sucesivo en el presente documento "US ’652"), p. 72-73.

Preparación del compuesto intermedio A8

5 Etapas 1-2, Preparación del compuesto intermedio A8: el compuesto intermedio A8 se preparó de manera similar al clorhidrato de (1R,2S)-1-amino-N-(ciclopropilsulfonil)-2-vinilciclopropano-carboxamida del Ejemplo 2.12 del documento WO ’066 (p. 75-76) sustituyendo A81 (preparado de acuerdo con el procedimiento que se detalla en el Ejemplo 97,1.4 del documento US ’652, p. 72-3) por ácido (1R,2S)-1-(terc-butoxi-carbonilamino)-2vinilciclopropanocarboxílico y sustituyendo la 1-metilciclopropano-1-sulfonamida (preparada de acuerdo con el

10 Ejemplo 1.2 del documento WO ‘066, p. 47) por ciclopropanosulfonamida. A81 RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,22 (s a, 1 H), 6,05 - 5,75 (m, 1 H), 5,38 (s a, 1H), 2,04 (m, 2H), 1,68 (m, 2H), 1,61 (m, 3H), 1,52 (m, 9H), 1,42 (m, 1 H), 1,28 (m, 1 H), 0,85 (m, 2H).

Preparación del compuesto intermedio A9 15

Etapa 1-2, Preparación del compuesto intermedio A9: el compuesto intermedio A9 se preparó de manera similar al clorhidrato de (1R,2S)-1-amino-N-(ciclopropilsulfonil)-2-vinilciclopropano-carboxamida del Ejemplo 2.12 del

20 documento WO ’066 (p. 75-76) incluyendo A91 (preparado de acuerdo con el Ejemplo 1, Etapas 1L-1O de la Publicación de Patente Internacional N.º WO 2009/134987, p. 75-77) por ácido (1R,2S)-1-(terc-butoxicarbonilamino)2-vinilciclopropanocarboxílico.

Preparación del compuesto intermedio A10 25

El compuesto intermedio A10 se preparó de manera similar al compuesto intermedio A9, sustituyendo la 1metilciclopropano-1-sulfonamida (preparada de acuerdo con el Ejemplo 1.2 del documento WO ’066, p. 47) por 30 ciclopropanosulfonamida.

Preparación del compuesto intermedio A11

Etapa 1. Preparación de A111: A una solución de NaOH (46,2 g, 50 % p/p en agua) a ta se añadió BnEt3NCl (10,5 g, 46 mmol), malonato de di-tercbutilo (10 g, 46 mmol) y 1,2-dibromopropano (14 g, 69,3 mmol). La mezcla se agitó a ta durante una noche y se extrajo con DCM (3 X 100 ml). Las fases orgánicas se lavaron con agua (80 ml) y solución salina saturada (50 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro. La concentración al vacío produjo A111 que se usó posteriormente sin purificación adicional. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 1,83-1,62 (m, 1 H); 1,42 (s, 9H); 1,40 (s, 9H); 1,24-1,05 (m, 2H); 1,03-1,02 (d, 3H). Etapa 2. Preparación de A112: A una mezcla de t-BuOK (175 g, 1,56 mol) en éter (1,2 l) a 0 ºC se añadió agua (3,4 ml) seguido de la adición del diéster A111 (91 g, 0,35 mol). La mezcla se agitó a ta durante tres días, a continuación se inactivó con agua con hielo. La fase acuosa se extrajo con éter (2 X 400 ml), se acidificó con ácido cítrico, y a continuación se extrajo con EA (3 X 400 ml). Los extractos de acetato de etilo combinados se lavaron con agua (2 X 100 ml) y solución salina saturada (200 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, y se concentraron al vacío para producir A112 que se usó posteriormente sin purificación adicional. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,60 (s, 1 H); 1,70-1,64 (s, 1 H); 1,37 (s, 9H); 1,19-1,13 (m, 1 H); 1,03-1,00 (m, 4H). Etapa 3. Preparación de A113: A una mezcla A112 (33,5 g, 0,17 mol) y trietilamina (70 ml) en THF (200 ml) a 0 ºC se añadió cloroformiato de etilo (22 ml). La mezcla se agitó a 0 ºC durante 1 h. A la mezcla a 0 ºC se añadió azida sódica (54 g, 0,83 mol, 4,9 equiv.) en agua (100 ml), la mezcla se agitó durante 40 min. La mezcla se extrajo con EA (2 X 400 ml), se lavó con agua (100 ml) y solución salina saturada (100 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró al vacío para producir un residuo que se recogió en tolueno (100 ml) y se trató con alcohol bencílico (50 ml). A continuación, la mezcla se calentó a 70 ºC durante 2 h, se enfrió a ta, se ajustó a pH 8 con bicarbonato sódico, y a continuación se extrajo con éter (3 X 200 ml). La fase acuosa se ajustó a continuación a pH 5 con HCl 1 N y se extrajo con EA (2 X 300 ml). Los extractos de acetato de etilo combinados se lavaron con agua (100 ml) y solución salina saturada (80 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, y se concentraron al vacío para dar la amina A113 protegida con CBZ (16 g) que se usa posteriormente sin purificación adicional. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,85 (s, H); 7,28-7,15 (m, 5H); 4,97-5,03 (m, 2H); 1,33 (s, 9H); 1,33-1,17 (m, 2H); 1,10 (d, J = 6,8 Hz, 3H); 0,90-1,00 (m, 1 H). Etapas 4 y 5. Preparación de A114: A una solución de la amina A113 protegida con CBZ (16 g, 52 mmol) en DCM (250 ml) se añadió gota a gota TFA (250 ml, 3,24 mol) a ta y la mezcla se agitó a ta durante una noche. La mezcla se concentró al vacío, se ajustó a pH 8~9 usando carbonato sódico acuoso y se lavó con éter (3 X 80 ml). La fase acuosa se ajustó a continuación a pH 5~6 usando HCl 1 N y se extrajo con EA (2 X 300 ml). Las fases de acetato de etilo combinadas se lavaron con agua (80 ml) y solución salina saturada (80 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron para dar 13 g en forma de un aceite de color ligeramente amarillo que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Este material (8,0 g, 32 mmol) se recogió en metanol (200 ml), se trató con cloruro de tionilo (15 ml) a 0 ºC, a continuación se agitó a ta durante una noche. La mezcla resultante se concentró al vacío y se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre sílice (eluyente de PE/EA a 10:1-5:1) para dar el éster de metilo A114 (6 g). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,97 (s, 1 H); 7,37-7,26 (m, 5H); 4,99 (s, 2H); 3,61 (s, 3H); 1,48-1,45 (m, 1 H); 1,17-1,08 (m, 2H); 1,06-1,04 (d, 3H). Etapa 6. Preparación de A115: la carboxamida protegida con Cbz A114 (36 g, 0,15 mol), Boc2O (40 g, 0,18 mol) y Pd/C (3,6 g, 10 % p/p) se combinaron en metanol en atmósfera de H2 y se agitó a 32 ºC durante una noche. La mezcla de reacción se filtró para retirar el catalizador, se añadieron Boc2O (40 g, 0,18 mol) y Pd/C (3,6 g, 10 % p/p) adicionales y la reacción se colocó en una atmósfera de H2 con agitación a ta durante un fin de semana. La mezcla de reacción se filtró para retirar el catalizador, se concentró al vacío y se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre sílice (eluyente de PE/EA a 20:1-10:1) para producir la amina protegida con Boc

A115. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,48 (s, 1H), 3,59 (s, 3H), 1,43-1,41 (m, 1H), 1,34 (s, 9H), 1,21-1,18 (m, 1H), 1,07-1,01 (m, 4H). Etapa 7. Preparación de A116: A una solución de NaH2PO4 (1,9 g) en agua (160 ml) a 40 ºC se añadió Alcalasa (2,4 U/g, 16 ml). La mezcla se ajustó con un 50 % de hidróxido sódico acuoso a pH 8. A115 (2,80 g) en DMSO

5 (32 ml) se añadió al tampón gota a gota durante 30 min. La mezcla se agitó a 40 ºC y se mantuvo a pH 8 con la adición de un 50 % de NaOH durante 19 h. La mezcla se enfrió a ta, con éter (3 X 100 ml) y la fase orgánica se lavó con NaHCO3 sat. (2 x 40 ml), agua (2 x 40 ml) y solución salina saturada (40 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío para producir A116. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 5,18 (s a, 1 H); 3,71 (s, 3H); 1,43-1,18 (m, 2H); 1,34 (s, 9H); 1,07-1,01 (m, 4H). El análisis del producto usando una columna

10 CC3 chromegaChiral (0,46 cm I.D. X 25 cm L, 3 µl de inyección, 80/20 de hexano/lPA, 1 ml/min, 34 ºC, detección de UV a 220 nM) determinó que el exceso enantiomérico era de un 99,4 % (TR deseado = 5,238 min, TR no deseado = 6,745 min). Etapas 8 y 9. Preparación de A117: el LiOH•H2O sólido (19,1 g, 455 mmol) se recoge en 50 ml de MeOH/50 ml de agua a ta. Una vez que se ha disuelto todo el LiOH, el éster de metilo A116 (10,4 g, 45,5 mmol) se recoge en

15 100 ml de THF y se añade a la mezcla de reacción y se agita vigorosamente durante una noche. La solución resultante se diluye con agua (150 ml), se ajusta a pH ~ 3 con HCl 12 M y se extrae con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se lavan con solución salina saturada, se secan sobre MgSO4 anhidro y se concentran al vacío para producir un polvo fino de color blanco (9,2 g). Este material (1,5 g, 7 mmol) se recoge en THF (30 ml) y se trata con CDI (1,47 g, 9,1 mmol). La solución resultante se calentó a 65 ºC durante 2 h, se enfrió a ta y se

20 trató con DBU (2,1 ml, 13,9 mmol) y 1-metilciclopropano-1-sulfonamida (1,4 g, 10,5 mmol). La solución resultante se agita a ta durante una noche. La adición de HCl 1 M se usa para ajustar el pH ~ 1 antes de retirar la mayor parte del THF al vacío. La suspensión resultante se extrae con EtOAc y las bases orgánicas combinadas lavan con solución salina saturada, se secan sobre anhidro MgSO4 y se concentran al vacío para producir 2,29 g de acil sulfonamida A117. LCMS-ESI+ (m/z): [M+Na]+calc. para C14H24N2NaO5S: 355,41; encontrado: 355,84.

25 Etapa 10. Preparación del compuesto intermedio A11. La acil sulfonamida A117 (0,25 g, 0,75 mmol) en dioxano (1 ml) se trata con HCl (4 M en dioxano, 2,8 ml, 11,2 mmol) a ta. Después de 4 h, la reacción se concentra al vacío para producir 0,20 g del compuesto intermedio A11 de se usa posteriormente simplificación adicional. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 1,87-1,84 (m, 0,5 H); 1,77-1,65 (m, 1,5H); 1,58-1,46 (m, 2H); 1,54 (d, J = 8 Hz, 3H); 1,34-1,26 (m, 3+1 H); 1,02-0,92 (m, 1 H); 0,83-0,77 (m, 1 H).

30 Preparación del compuesto intermedio A12

35 Etapa 1. Preparación de A121: Un recipiente que contenía una solución de ácido carboxílico A91 (1 g, 4 mmol) en THF (15 ml) se trató con CDI (0,84 g, 5,2 mmol), se cerró herméticamente y se calentó a 75 ºC durante 2 h. La solución de color claro se divide a la mitad y se usa posteriormente sin purificación adicional para el resto de la Etapa 1 en la Preparación del compuesto intermedio A12 así como la preparación del compuesto intermedio A13 como se detalla a continuación. Esta solución se trata con 1-fluorociclopropano-1-sulfonamida (0,42 g,

40 3 mmol; preparada de acuerdo con las Etapas 1, 4, y 9 del Ejemplo 7 de la Publicación de Patente Internacional N.º WO 2009/14730, p. 107-110) y DBU (0,6 ml, 4 mmol) y se permite su agitación durante una noche a ta. La solución se acidificó a pH ~1 con HCl 1 M y se concentró al vacío para retirar la mayor parte del THF. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos combinados se lavaron con solución salina saturada, se secaron sobre MgSO4 anhidro y se concentraron al vacío a sequedad para proporcionar 0,73 g el compuesto

45 A121 que se usó sin purificación adicional. Etapa 2. Preparación del compuesto intermedio A12: la acil sulfonamida A121 (0,25 g, 0,67 mmol) se recogió en 1 ml de dioxano y se trató con HCl (4 M en dioxano, 2,5 ml, 11 mmol). La reacción se agitó a ta durante 2 h y se concentró al vacío a sequedad para proporcionar un rendimiento cuantitativo del compuesto intermedio A12. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 6,04 (td, JH-F = 55,6 Hz, J = 5,2 Hz, 1 H); 2,25-2,14 (m, 1 H); 1,78-1,62 (m, 2H);

50 1,52-1,38 (m, 4H).

Preparación del compuesto intermedio A13.

El compuesto intermedio A13 se preparó de manera similar al compuesto intermedio A12, sustituyendo la 1clorociclopropano-1-sulfonamida (preparada de acuerdo con Li, J, et al., Synlett, 2006, 5, pp. 725-728) por la 1clorociclopropano-1-sulfonamida en la Etapa 1. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 6,03 (td, JH-F = 54,8 Hz, J =6 Hz, 1 H); 2,32-2,18 (m, 1 H); 2,06-1,92 (m, 2H); 1,80-1,68 (m, 2+1 H); 1,56-1,44 (m, 1 H); 1,44-1,37 (m, 1 H).

Preparación del compuesto intermedio B1

Etapas 1 y 2. Preparación del compuesto intermedio B1: La enaminona B11 (4,0 g, 11,8 mmol, preparada de acuerdo con Camplo, M., et al.,. Tetrahedron 2005, 61, 3725) se disolvió en acetona (120 ml) y el recipiente de reacción se purgó con Ar. Se añadió Pd/C (al 10 % en peso de Pd, 820 mg) en una sola porción y el recipiente de 15 reacción se purgó dos veces con H2. La reacción se agitó bajo 1 atmósfera de H2 a ta durante 15 h y a continuación se filtró a través de una capa de Celite con acetona. El filtrado se concentró y se filtró a través de un lecho de gel de sílice con un 30 % de EtOAc en hexanos para proporcionar una mezcla a ~2:1 de las cetonas B12 y B13 (3,48 g) en forma de un sólido de color blanco. Esta mezcla (3,37 g, 11,3 mmol) se disolvió en THF (100 ml) en atmósfera de Ar. Una solución 1 M de (R)-(+)-2-metil-CBS-oxazaborolidina en tolueno (11,3 ml, 11,3 mmol) se añadió en una sola 20 porción y la solución resultante se enfrió a -78 ºC. A continuación se añadió una solución 1 M de BH3•SMe2 en CH2Cl2 (11,3 ml) gota a gota durante 5 min. La solución resultante se agitó durante 20 min y se retiró del baño de refrigeración. Después de un periodo adicional de 15 min, la reacción se puso en un baño de agua a temperatura ambiente. Después de un periodo adicional de 7 min, la reacción se interrumpió mediante la adición gota a gota de MeOH (20 ml). Después de agitar un periodo adicional de 2,5 h, la mezcla de reacción se concentró, se disolvió en 25 EtOAc (300 ml), y se lavó con HCl 0,2 M (200 ml). Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (100 ml). La fase orgánica combinada se filtró para retirar los sólidos, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo en bruto se disolvió en CH2Cl2 y se concentró sobre 20 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 25 a un 40 % de EtOAc en hexanos) proporcionó la separación parcial del compuesto intermedio B1 de otros productos diastereoméricos. Las fracciones mixtas se combinaron y se

30 concentraron sobre 9 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice proporcionó el compuesto intermedio B1 contaminado con componentes diastereoméricos secundarios en forma de un sólido de color blanco (1,96 g). RMN 1H (400 MHz, CDCl3, rotámeros observados) δ 4,25 - 4,15 (m, 1 H), 4,13 - 4,04 (m, 1 H), 3,91 - 3,79 (m, 1 H), 3,28 - 3,09 (m, 1 H), 2,41 - 2,23 (m, 1 H), 2,04 (s a, 1 H), 1,51 - 1,39 (m, 18H), 1,09 - 1,01 (m, 3H).

35 Preparación del compuesto intermedio B2

Etapas 1 y 2. Preparación de B21: trans-3-hidroxi-L-prolina (571 mg, 4,35 mmol, Chem-Impex International, Inc.) se suspendió en MeOH y se enfrió a 0 ºC. Se añadió cloruro de tionilo (1,6 ml, 22 mmol) durante 5 min y la solución se calentó a ta. Después de agitar durante 24 h, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar el éster de metilo, que se usó sin purificación adicional. El éster en bruto se suspendió en DCM (22 ml) y se trató con TEA (1,3 ml, 9,57 mmol). La mezcla agitada se enfrió a 0 ºC y se añadió cloruro de tritilo (1,21 g, 4,35 mmol). Se permitió que la mezcla de reacción llegara gradualmente a ta durante una noche, y a continuación se vertió en NaHCO3 acuoso saturado. La fase acuosa se extrajo tres veces con DCM. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 25 % a un 50 % de EtOAc/Hex para proporcionar alcohol B21 (1,27 g). Etapa 3. Preparación de B22: Alcohol B21 (1,23 g, 3,18 mmol) y 2 g 4 A MS se suspendieron en DCM (16 ml) y se trató con NMO (560 mg, 4,78 mmol) y TPAP (76 mg, 0,218 mmol). Después de agitar durante 30 min, la mezcla se filtró sobre un lecho corto de sílice y se eluyó con un 50 % de EtOAc/Hex. El filtrado se concentró y el residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 30 % de EtOAc/Hex para proporcionar la cetona B22 (0,99 g). Etapa 4. Preparación de B23: LiHMDS (1,0 M en THF, 5,8 ml, 5,8 mmol) se añadió a THF (22 ml) y la solución agitada se enfrió a -78 ºC. Se añadió una solución a ta de cetona B22 (2,14 g, 5,55 mmol) en THF (6 ml) gota a gota con una cánula durante 5 min. El matraz que había contenido la B22 se aclaró a continuación con THF (4 ml) y el aclarado se añadió gota a gota con una cánula a la mezcla de reacción. Después de 35 min, se añadió N-(5-cloro-2-piridil)bis(trifluorometanosulfonimida) (2,40 g, 6,11 mmol) en THF (6 ml) a la mezcla de reacción gota a gota mediante una jeringa durante 5 min. Después de otra 1 h, la mezcla de reacción se calentó a ta. Después de un periodo adicional de 30 min, la reacción se interrumpió mediante la adición de 20 ml de H2O y se diluyó con Et2O. La solución orgánica se lavó con un 10 % de NaOH y se secó sobre K2CO3, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se cargó sobre una columna de sílice que se había equilibrado previamente con un 1 % de TEA/Hex. El material se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 0 % a un 15 % de EtOAc/Hex dopado con un 1 % de TEA) para proporcionar el triflato de enol B23 (1,89 g). Etapa 5. Preparación de B24: El triflato de enol B23 (957 mg, 1,85 mmol) se disolvió en THF (9 ml) y se trató con Pd(PPh3)4 (107 mg, 0,0925 mmol) y dimetil cinc (2,0 M en PhMe, 1,9 ml, 3,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 5 h, a continuación se añadió más dimetil cinc (2,0 M en PhMe, 1,9 ml, 3,7 mmol) y la reacción se calentó a 50 ºC durante 15 min. Después de enfriar a ta, la mezcla se diluyó con Et2O. La solución orgánica se lavó con un 10 % de NaOH dos veces, a continuación se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo de B24 en bruto se usó sin purificación adicional. Etapas 6 y 7. Preparación de B25: El compuesto B24 (1,85 mmol teórico) se disolvió en 1:1 de MeOH/DCM (20 ml) y se trató con HCl (4,0 M en dioxano, 2 ml, 8,0 mmol). Después de agitar durante 2 h a ta, la mezcla de reacción se concentró y el material en bruto se usó sin purificación adicional. El producto en bruto de clorhidrato de amina se trató con Boc2O (2,02 g, 9,25 mmol), DCM (18 ml), MeOH (1,8 ml) y TEA (0,52 ml, 3,7 mmol). Después de agitar durante 2 h a ta, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con un 10 % de HCl, NaHCO3 acuoso saturado y solución salina saturada. La solución orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 15 % a un 40 % de EtOAc/Hex) para proporcionar el carbamato B25 (331 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C12H20NO4: 242,14; encontrado: 243,26. Etapa 8. Preparación del compuesto intermedio B2: El carbamato B25 (345 mg, 1,43 mmol) se disolvió en THF (7 ml) y se enfrió a 0 ºC. Se añadió el complejo de BH3•SMe2 (2,0 M en THF, 0,79 ml, 1,58 mmol) gota a gota y se permitió que la mezcla de reacción llegara a ta gradualmente. Después de 15 h, la reacción se interrumpió mediante la adición gota a gota de H2O (añadida hasta cesar el burbujeo), a continuación se enfrió a 0 ºC. Se añadieron peróxido de hidrógeno (30 % en p/p en H2O, 0,73 ml, 7,2 mmol) y NaOH (2,0 M en H2O, 0,86 ml, 1,72 mmol) en sucesión rápida y la mezcla agitada se calentó a 50 ºC durante 35 min. A continuación, la mezcla se diluyó con Et2O y se lavó sucesivamente con H2O, NaHCO3 acuoso saturado y solución salina saturada, a continuación se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El compuesto intermedio B2 se

usó en reacciones posteriores sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C12H22NO5: 260,15; encontrado: 259,99.

Preparación del compuesto intermedio B3

Etapa 1. Preparación de B31: El triflato de enol B23 (91 mg, 0,176 mmol) se disolvió en THF (1,7 ml) y se trató con bromuro de ciclopropil cinc (0,5 M en THF, 1,7 ml, 0,85 mmol) y Pd(PPh3)4 (20 mg, 0,018 mmol). La mezcla

10 de reacción agitada se calentó a 50 ºC durante 2 h y a continuación se enfrió a ta y se diluyó con EtOAc. La solución orgánica se lavó sucesivamente con NaHCO3 acuoso saturado y solución salina saturada, a continuación se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 0 % a un 20 % de EtOAc/Hex) para proporcionar ciclopropano B31 (43 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M-Tr+H]+calc. para C9H14NO2: 168,10; encontrado: 168,04.

15 Etapas 2 y 3. Preparación de B32: Se disolvió vinil ciclopropano B31 (43 mg, 0,11 mmol) en 1:1 de MeOH/DCM (10 ml) y se trató con HCl (4,0 M en dioxano, 1 ml, 4,0 mmol). Después de agitar durante 1,5 h a ta, la mezcla de reacción se concentró y el material en bruto se usó sin purificación adicional. El producto en bruto de la etapa 2 se trató con Boc2O (229 mg, 1,05 mmol), DMAP (13 mg, 0,105 mmol), DCM (5 ml) y TEA (0,293 ml, 2,10 mmol). Después de agitar durante 5 h a ta, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con un 10 % de HCl,

20 NaHCO3 acuoso saturado dos veces y solución salina saturada. La solución orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 30 % de EtOAc/Hex) para proporcionar el carbamato B32 (20 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M-(t-Bu)+H]+calc. para C10H14NO4: 212,09; encontrado: 211,91. Etapa 4. Preparación del compuesto intermedio B3: El carbamato B32 (152 mg, 0,569 mmol) se disolvió en THF

25 (5,7 ml) y se enfrió a 0 ºC. El complejo de BH3•SMe2 (2,0 M en THF, 0,31 ml, 0,63 mmol) se añadió gota a gota y se permitió que la mezcla de reacción llegara a ta gradualmente. Después de 20 h, la reacción se interrumpió mediante la adición gota a gota de H2O (añadida hasta que cesa el burbujeo), a continuación se enfrió a 0 ºC. Se añadieron peróxido de hidrógeno (30 % en p/p en H2O, 0,29 ml, 2,85 mmol) y NaOH (2,0 M en H2O, 0,43 ml, 0,86 mmol) en sucesión rápida y la mezcla agitada se calentó a 50 ºC durante 30 min. A continuación, la mezcla

30 se diluyó con Et2O y se lavó sucesivamente con H2O, NaHCO3 acuoso saturado y solución salina saturada, a continuación se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El compuesto intermedio B3 se usó sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M-(t-Bu)+H]+ calc. para C10H16NO5: 230,10; encontrado: 230,03.

Preparación del compuesto intermedio B4 35

El compuesto intermedio B4 ((2S,3S,4R)-3-etil-4-hidroxipirrolidina-1,2-dicarboxilato de di-terc-butilo) se preparó de acuerdo con Camplo, M., et al., Tetrahedron 2005, 61, 3725.

Preparación del compuesto intermedio B5

Etapa 1. Preparación de la enona B52: A una solución de B11 en tetrahidrofurano (7,35 ml) se añadió bromuro de etilmagnesio (3 M en éter dietílico, 1,47 ml 4,41 mmol) mediante una jeringa a -78 ºC bajo una atmósfera de 5 argón. Después de 2,5 h, la mezcla de reacción se dejó calentar a ta durante 30 min momento en el que la mezcla de reacción se diluyó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (20 ml). La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (20 ml dos veces), y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar el compuesto intermedio

10 B51 (308,8 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C17H28NO5: 326,2; encontrado: 326,2. Etapa 2. Preparación de B52: A una solución de la enona B51 (308 mg, 0,95 mmol) en metanol (4,7 ml) se añadió heptahidrato de cloruro de cerio(III) (566 mg, 1,52 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. La mezcla resultante se enfrió a -78 ºC, y se añadió borohidruro sódico (57,7 mg, 1,52 mmol) en forma de un sólido.

15 Después de 1 h, la mezcla de reacción se calentó a 0 ºC y se añadió cloruro de amonio acuoso saturado (20 ml). La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (20 ml dos veces), y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío para proporcionar el alcohol alílico B52 (319,3 mg) en forma de un aceite incoloro, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C17H29NO5: 328,2; encontrado: 328,2.

20 Etapa 3. Preparación del compuesto intermedio B5: A una solución del alcohol B52 (319 mg, 0,98 mmol) en etanol (4,9 ml) se añadió Pd/C (10 %, 103,9 mg, 0,097 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. La atmósfera se reemplazó por hidrógeno y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a ta. Después de 16 h, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (25 ml) y se filtró a través de una capa de Celite con lavados con acetato de etilo (10 ml tres veces). El filtrado se concentró al vacío para proporcionar el compuesto intermedio B5

25 (188 mg), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C17H32NO5: 330,2; encontrado: 330,3.

Preparación del compuesto intermedio B6

Etapa 1. Preparación de B61: Una solución de bromuro de isopropilmagnesio (2,9 M en MeTHF, 3,2 ml, 9,3 mmol) se añadió gota a gota a una solución enfriada de B11 (1,02 g, 3,00 mmol) en 60 ml de éter a -78 ºC en atmósfera de argón. La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 3 horas. La 35 mezcla de reacción se dé inactivo con NH4Cl acuoso sat. y se extrajo tres veces con éter. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaHCO3 acuoso sat. y solución salina saturada, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (un 0-30 % de acetato de etilo en hexanos) para producir B61 (743 mg) en forma de un aceite de color amarillo claro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3): δ 6,60 (dd, J = 10,8, 2,4 Hz, 1 H), 5,14 y 5,06 (rotámeros, d,

40 J = 2,4 Hz, 1 H), 3,96 (m, 2H), 2,91 (m, 1 H), 1,46 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 1,04 (d, J = 8,8 Hz, 6H). Etapa 2. Preparación de B62 y B63: CeCl3•7H2O (1,32 g, 3,50 mmol) se añadió a una solución de B61 (740 mg, 2,18 mmol) en 47 ml de metanol a temperatura ambiente en atmósfera de argón. Después de enfriar a 78 ºC, se añadió borohidruro sódico (127 mg, 3,34 mmol) lentamente en porciones. Después de dos horas, la mezcla de reacción se calentó a 0 ºC. Después de quince minutos, la mezcla de reacción se inactivó con NH4Cl

acuoso sat. y se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con solución salina saturada, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir una mezcla de B62 (principal) a ~3:1 y B63 (secundario) en forma de una película incolora (738 mg), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. RMN 1H (400 MHz, CDCl3): δ 5,68-5,48 (m, 1H), 4,90-4,31

5 (m, 2H), 4,05-3,15 (m, 2H), 2,90-2,61 (m, 1 H), 1,50-1,39 (s a, 18H), 1,02 (d, J = 9,2 Hz, 6H). Etapa 3. Preparación del compuesto intermedio B6: La mezcla de B62 y B63 a ~3:1 (341 mg, 1,00 mmol) se disolvió en 28 ml de acetato de etilo. A continuación se añadió paladio sobre carbono (10 % en peso, 109 mg, 0,11 mmol) y la mezcla se hidrogenó en una atmósfera de hidrógeno durante diecinueve horas. A continuación, la mezcla se filtró sobre Celite, se lavó con acetato de etilo, y el filtrado se concentró a presión reducida. El

10 residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-50 % de acetato de etilo en hexanos) para producir el compuesto intermedio B6 (141 mg) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3): δ 4,31-4,17 (m, 2H), 3,97-3,85 (m, 1 H), 3,21-3,07 (m, 1 H), 2,35-2,18 (m, 1 H), 1,92-1,78 (m, 1 H), 1,47-1,37 (m, 18H), 1,35-1,19 (m, 2H), 0,94 (d, J = 8,8 Hz, 6H).

15 Preparación del compuesto intermedio B7

Etapa 1. Preparación de B72: A una solución de alcohol B71 (500 mg, 1,33 mmol; preparada de acuerdo con

20 Barreling, P., et al.,. Tetrahedron 1995, 51, 4195) en DCM (6,65 ml) se añadió peryodinano de Dess-Martin (564 mg, 1,33 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 2 h, la mezcla de reacción se purificó directamente por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar cetona B72 (431 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C21H30NO5: 376,2; encontrado: 376,2.

25 Etapa 2. Preparación del compuesto intermedio B7: A una solución del compuesto intermedio B72 (410 mg, 1,09 mmol) y (R)-(+)-2-metil-CBS-oxazaborolidina (Aldrich, 1 M en tolueno, 1,09 ml, 1,09 mmol) en THF (5,45 ml) se añadió BH3-THF (1 M en tolueno, 2,18 ml, 2,18 mmol) a -78 ºC bajo una atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla de reacción se inactivó con solución acuosa saturada de cloruro de amonio (15 ml) y la mezcla resultante se dejó calentar a ta. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo dos veces (20 ml) con DCM.

30 Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico anhidro, y se concentraron al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar el compuesto intermedio B7 (390,9 mg, mezcla diastereomérica a 4:1) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C21H32NO5: 378,2; encontrado: 378,5.

35 Preparación del compuesto intermedio B8

Etapa 1. Preparación de B81. Se añadió n-BuLi (0,44 ml, 1,1 mmol, 2,5 M en hexano) a una solución fría (

40 78 ºC) de (S)-4-oxo-1-(9-fenil-9H-fluoren-9-il)pirrolidina-2-carboxilato de metilo (383 mg, 1 mmol, preparado como se describe en Sardina, F.J., Blanco, M.-J. J. Org. Chem. 1996, 61, 4748) en THF/HMPA (3,8 ml/0,4 ml). La solución resultante se agitó de -78 ºC a -50 ºC durante 1,5 h, y a continuación se añadió bromoacetonitrilo (0,2 ml, 3 mmol). La mezcla de reacción se agitó mientras que se permitía que la temperatura alcanzada -10 ºC (4 h). La mezcla de reacción se cargó con NH4Cl acuoso saturado (1 ml) y EtOAc (15 ml). La fase orgánica se

45 separó, y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (10 ml). Ambas fases orgánicas se combinaron, se lavaron con H2O y solución salina saturada, y se secaron sobre Na2SO4. La fase orgánica se concentró y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar la mezcla diastereomérica B81 (170 mg) en forma de un

aceite incoloro. Etapa 2. Preparación de B82. Se añadió KHMDS (0,4 ml, 0,4 mmol, 1 M en THF) a una solución fría de (-78 ºC) B81 (140 mg, 0,33 mmol) en THF/DMPU (1,5 ml/0,75 ml). La solución resultante se agitó a -78 ºC durante 1,5 h. A continuación se añadió HOAc (0,1 ml). La mezcla de reacción se cargó con NH4Cl acuoso saturado (1 ml) y

5 EtOAc (15 ml). La fase orgánica se separó, y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (10 ml). Ambas fases orgánicas se combinaron, se lavaron con H2O y solución salina saturada, y se secaron sobre Na2SO4. La fase orgánica se concentró y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar la cetona B82 (120 mg) en forma de un aceite incoloro. Etapa 3. Preparación del compuesto intermedio B8. A un matraz lavado abundantemente con nitrógeno, secado

10 en horno se añadió BH3•THF (0,28 ml, 0,28 mmol,) seguido de (R)-(+)-2-metil-CBS-oxazaborolidina (0,012 ml, 0,03 mmol, 1,0 M en tolueno). Una solución de B82 (120 mg, 0,28 mmol) en THF (0,5 ml) se añadió gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a ta durante 60 min, y a continuación se inactivo mediante la adición de HCl acuoso 1,0 M (0,2 ml). Se añadió EtOAc (20 ml) y la fase orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso sat. y solución salina saturada, y se secó sobre Na2SO4. La fase orgánica se concentró y se purificó por cromatografía sobre gel

15 de sílice para proporcionar el compuesto intermedio B8 (100 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M]+ calc. para C27H24N2O3: 424,49; encontrado: 424,77.

Preparación del compuesto intermedio C1

El 3-metil-N-(oxometilen)-L-valinato de metilo (compuesto intermedio C1) se preparó de acuerdo con la Etapa 3 del compuesto intermedio B1 de la Publicación de Patente Internacional N.º WO 2010/11566 (en lo sucesivo en el presente documento "WO’566"), p 14.

25 Preparación del compuesto intermedio C2

30 El compuesto intermedio C2 (3-metil-N-(oxometilen)-L-valinato de terc-butilo) se preparó de una manera similar al compuesto intermedio C1, sustituyendo el 3-metil-L-valinato de terc-butilo (Bachem AG) por 3-metil-L-valinato de metilo en la Etapa 3 del compuesto intermedio B1 del documento WO’566, p14.

Preparación del compuesto intermedio D1 35

Etapas 1 y 2. Preparación de la mezcla de trans-ciclopropanol D12 y D13: se introdujo THF (1000 ml) en un matraz de fondo redondo de tres bocas que contenía Mg (32,2 g, 1,34 mol). Una solución de 7-bromohept-1-eno (216 g, 1,22 mol) en THF (600 ml) se introdujo a un embudo de adición. Un cristal de yodo y 20 ml de solución de 7-bromohept-1-eno se añadieron a la reacción. La solución se calentó a reflujo, y el resto de la solución de 7bromohept-1-eno se añadió gota a gota. Después de completar la adición, la mezcla se calentó a reflujo durante un periodo adicional de 2 h y a continuación se permitió que se enfriara a ta para producir una solución de reactivo de Grignard D11, que a continuación se añadió gota a gota a una solución de formiato de etilo (30 g, 0,41 mol) y Ti(Oi-Pr)4 (115,2 g, 0,41 mol) en THF (1200 ml) a ta. Después de agitar durante una noche, la mezcla se vertió en 1600ml de un 10% de H2SO4 acuoso y se extrajo con MTBE (1500 ml tres veces). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con solución salina saturada, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar 31,0 g de una mezcla de los alcoholes de trans-ciclopropilo D12 y D13 en forma de un aceite de color amarillo. RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 5,77-5,70 (m, 1 H), 4,96-4,86 (m, 2H), 3,15-3,12 (m, 1 H), 2,03-1,98 (m, 2H), 1,75 (s a, 1 H), 1,45-1,37 (m, 2H), 1,20-1,15 (m, 1 H), 1,06-1,01 (m, 1 H), 0,89-0,82 (m, 1 H), 0,63-0,59 (m, 1 H), 0,24 (c, J = 6,0 Hz, 1 H). Etapa 3. Preparación de la mezcla de acetato de ciclopropilo D14 y D15: A un matraz de fondo redondo de 1000 ml se añadió la mezcla de alcohol de trans-ciclopropilo D12 y D13 (60,3 g, 0,48 mol), 700 ml de DCM y TEA (62,9 g, 0,62 mol) antes de enfriar la solución en un baño de acetona/hielo a una temperatura interna < 5 ºC. Se añadió cloruro de acetilo (41,3 g, 0,53 mol) gota a gota a la solución durante un periodo de 30 min árabe que se mantenía una temperatura interna < 10 ºC. La suspensión resultante a continuación se calentó a ta y se agitó durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con 350 ml de agua. La mezcla bifásica se transfirió a un embudo de decantación y la fase acuosa se retiró. La fase orgánica se lavó con 480 ml de HCl 2 N acuoso y a continuación con 500 ml de NaHCO3 acuoso sat. antes de secar sobre MgSO4. El disolvente se retiró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar una mezcla D14 y D15 (56,3 g) en forma de un aceite de color amarillo. Información de TLC (PE/EtOAc = 5/1) fR (material de partida) = 0,4; fR (producto) = 0,8. Etapa 4. Preparación de D13: A un matraz de fondo redondo de 1000 ml se añadió una solución de la mezcla de D14 y D15 (39 g, 0,23 mol) en 680 ml de MTBE saturado con tampón fosfato a pH 7 0,1 M acuoso. El matraz se puso en un baño de hielo para mantener una temperatura interna de aproximadamente 10 ºC a través de la reacción de hidrólisis que comenzó mediante la adición de 3,0 g de Novozyme 435. La reacción se envejeció a 10 ºC durante aproximadamente 6 h hasta que la conversión hubo alcanzado aproximadamente un 40 %. La mezcla de reacción se filtró, y la enzima inmovilizada en sólido se lavó tres veces con 200 ml de MTBE. La solución resultante de MTBE se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar D13 (11,3 g) en forma de un aceite de color amarillo. RMN 1H: (400 MHz, CDCl3) δ 5,80-5,75 (m, 1 H), 5,02-4,91 (m, 2H), 3,20-3,17 (m, 1 H), 2,09-2,03 (m, 3H), 1,50-1,43 (m, 2H), 1,26-1,22 (m, 1 H), 1,171,08 (m, 1 H), 1,07-0,89 (m, 1 H), 0,70-0,65 (m, 1 H), 0,32-0,27 (m, 1 H).

Etapa 5. Preparación de D16: Ciclopropanol D13 (17,7 g, 0,140 mol) se disolvió en 300 ml de MeCN a 0 ºC. A la solución se añadió DSC (72,0 g, 0,280 mol) y TEA (42,42 g, 0,420 mol). La mezcla de reacción se calentó a 40 ºC y se agitó durante una noche y a continuación se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar D16 (25,8 g) en forma de un sólido de color amarillo. RMN

5 1H: (400 MHz, CDCl3) δ 5,84-5,77 (m, 1 H), 5,05-4,96 (m, 2H), 4,09-4,03 (d, J = 24 Hz, 1 H), 2,86 (s, 4H), 2,122,06 (m, 2H), 1,58-1,51 (m, 2H), 1,33-1,27 (m, 3H), 1,09 (m, 1 H), 0,68-0,62 (m, 1 H). Etapa 6. Preparación de D17: A una solución de D16 (10 g, 0,0374 mol) en THF (374 ml) se añadió clorhidrato del éster de metilo de L-terc-leucina (10,2 g , 0,056 mol) y TEA (11,3 g, 0,112 mol). La solución se agitó durante una noche a 40 ºC. La mezcla se concentró al vacío. El residuo se diluyó con EtOAc y se lavó con agua y

10 solución salina saturada, se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar D17 (10,2 g) en forma de un aceite de color amarillo. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C16H28NO4: 298,2; encontrado: 298,0. Etapa 7. Preparación del compuesto intermedio D1: Una solución de D17 (20 g, 0,067 mol) en una mezcla de MeOH/H2O a 2:1 (447 ml/223 ml) se trató con LiOH•H2O (11,3 g, 0,269 mol) y a continuación se calentó a 60 ºC

15 durante 4 h. La mezcla de reacción se enfrió, se concentró hasta la mitad del volumen y se extrajo con MTBE. A continuación, la solución acuosa se acidificó con HCl 1 N acuoso (400 ml) y se extrajo con EtOAc (400 ml x 3), las fases orgánicas combinadas se lavaron con solución salina saturada, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar el compuesto intermedio D1 (18 g). RMN 1H: (400 MHz, CDCl3) δ 10,5-9,4 (a, 1 H), 5,82-5,71 (m, 1 H), 5,20-5,17 (m, 1 H), 4,99-4,91 (m, 2H), 4,19-4,16 (m, 1 H), 3,86-3,68 (m, 1 H), 2,09-2,03

20 (m, 2H), 1,53-1,32 (m, 2H), 1,30-1,20 (m, 2H), 1,18-1,13 (m, 1 H), 1,11-0,99 (s, 9H), 0,80-0,75 (m, 1 H), 0,49-0,47 (m, 1 H).

Preparación del compuesto intermedio D2

Etapa 1. Preparación del compuesto intermedio D2: A una suspensión de D16 (600 mg, 2,25 mmol) y sal de clorhidrato del ácido (S)-2-amino-2-ciclopentilacético (386 mg, 2,7 mmol, Betapharma Inc.) en THF (20 ml) se añadieron agua destilada (6 ml) y trietilamina (0,94 ml, 6,74 mmol). La solución homogénea se dejó en agitación 30 durante ~ 18 h. El THF se evaporó y el residuo acuoso se diluyó con agua (20 ml). La mezcla se basificó con NaOH 1 N (pH > 10) y a continuación se lavó dos veces (20 ml) con acetato de etilo. La fase acuosa se acidificó a continuación con HCl 1 N (pH < 2) y la solución resultante se extrajo dos veces (20 ml) con acetato de etilo. La fase orgánica combinada se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró para proporcionar el compuesto intermedio D2 (500 mg) en forma de un aceite de color marrón. Este se usó sin purificación en una etapa posterior. LCMS-ESI+

35 (m/z): [M+H]+ calc. para C16H26NO4: 296,2; encontrado: 296,3.

Preparación del compuesto intermedio D3

Etapa 1. Preparación del compuesto intermedio D3: A una suspensión de D16 (800 mg, 3 mmol) y ácido (S)-2amino-2-ciclohexilacético (519 mg, 3,3 mmol; Alfa Aesar) en agua (15 ml) se añadió K3PO4 (1,27 g, 6 mmol). La

5 solución homogénea se dejó en agitación a ta durante 5 h. A la mezcla de reacción se cargó con agua (15 ml) y EtOAc (15 ml). La fase orgánica se separó, y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (10 ml). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con HCl 1 N, H2O y solución salina saturada, y se secaron sobre Na2SO4. La concentración de la solución orgánica proporcionó el compuesto intermedio D3 (850 mg) en forma de un aceite que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C17H28NO4: 310,4; encontrado: 310,3.

10 Preparación del compuesto intermedio D4

Etapa 1. Preparación de D42: El alcohol bicíclico D41 (2,9 g, 29,5 mmol, preparado de acuerdo con la Sección A, compuesto intermedio 1 del documento de patente de Estados Unidos n.º 8.178.491 B2 (en lo sucesivo en el 5 presente documento "US ’491"), p 192,) se disolvió en DCM (60 ml) y se añadió TEA (8,2 ml, 59 mmol). La solución agitada se enfrió a 0 ºC y se añadió MsCl (3,4 ml, 44 mmol). La mezcla de reacción se dejó calentar a ta gradualmente. Después de 18 h, la mezcla de reacción se vertió en H2O. La fase acuosa se extrajo 2 x con DCM y a continuación los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 20 % a un 50 % de

10 EtOAc/Hex) para proporcionar D42 (3,73 g). Etapa 2. Preparación de D43: NaH (1,69 g, 42,3 mmol) se suspendió en 100 ml de THF y la mezcla se enfrió a 0 ºC. Se añadió malonato de dietilo (6,4 ml, 47 mmol) gota a gota durante 4 min y la mezcla citada se calentó a ta. Después de otra obra, se añadió el mesilato D42 (3,73 g, 21,2 mmol) en 20 ml de THF y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 15 h. Después de este periodo, la mezcla de reacción se enfrió a ta y se

15 vertió en NaHCO3 acuoso saturado. La fase acuosa se extrajo 2 x con EtOAc. A continuación, los compuestos

orgánicos se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 0 % a un 15 % de EtOAc/Hex) para proporcionar D43 (4,64 g). Etapa 3. Preparación de D44: el malonato D43 (4,64 g, 19,3 mmol) se disolvió en 20 ml de DMSO y a continuación se añadieron NaCl (1,24 g, 21,2 mmol) y agua (0,694 ml, 38,6 mmol). La mezcla agitada se calentó a 170 ºC durante 48 h y a continuación se enfrió a ta y se diluyó con Et2O. La solución orgánica se lavó con H2O dos veces, a continuación con solución salina saturada, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 5 % a un 15 % de EtOAc/Hex) para proporcionar D44 (2,83 g). Etapas 4 y 5. Preparación de D45: Una solución de éster de etilo D44 (2,83 g, 16,8 mmol) y LiOH (1 M en H2O, 34 ml, 34 mmol) en EtOH (68 ml) se agitó a ta durante una noche y a continuación se concentró a presión reducida para retirar EtOH. El material restante se diluyó con H2O y se lavó dos veces con DCM. La fase acuosa se acidificó a pH 1-2 con un 10 % de HCl y a continuación se extrajo tres veces con DCM. Esta solución de DCM se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El ácido carboxílico en bruto resultante se disolvió en DCM (100 ml) y se trató con DMF (5 gotas). Se añadió cloruro de oxalilo (2,2 ml, 25 mmol) con cuidado. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar D45, que se usó sin purificación adicional. Etapa 6. Preparación de D46: (S)-4-Bencil-2-oxazolidinona (3,57 g, 20,2 mmol) se disolvió en THF (80 ml) y se enfrió a -78 ºC. Se añadió n-BuLi (1,6 M en hexano, 12,6 ml, 20,2 mmol) gota a gota durante 7 min y la mezcla de reacción se dejó en agitación a -78 ºC durante 30 min. Esta solución, que contenía la oxazolidinona litiada se añadió a continuación con una cánula a una solución de cloruro de ácido D45 (16,8 mmol) a -78 ºC en THF (80 ml) durante 6 min. Después de agitar a -78 ºC durante un periodo adicional 30 min, la mezcla de reacción se inactivó mediante la adición de NaHSO4 acuoso 1 M. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y la fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 40 % de EtOAc/Hex) para proporcionar D46 (4,32 g). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C18H22NO3: 300,16; encontrado: 300,14. Etapa 7. Preparación de D47: Una solución de KHMDS (0,5 M en PhMe, 3,4 ml, 1,7 mmol) en THF (5 ml) se enfrió a -78 ºC y una solución de oxazolidinona D46 (465 mg, 1,55 mmol) separada a -78 ºC en THF (5 ml) se añadió gota a gota con una cánula. Después de 30 min, una solución a -78 ºC de trisil azida (576 mg, 1,86 mmol) en THF (5 ml) se añadió con una cánula. Tres minutos más tarde, la reacción se interrumpió mediante la adición de AcOH (0,41 ml, 7,13 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 30 ºC durante 2 h. Después de un periodo de refrigeración, la mezcla se vertió en solución salina saturada. La fase acuosa se extrajo tres veces con DCM. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 4 % a un 25 % de EtOAc/Hex) para proporcionar la azida D47 (367 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C18H21N4O3: 341,16; encontrado: 341,10. Etapa 8. Preparación de D48: La azida D47 (367 mg, 1,08 mmol) y bicarbonato de di-tercbutilo (471 mg, 2,16 mmol) se disolvieron en EtOAc (20 ml). se añadió Pd al 10 %/C (197 mg) y la atmósfera se reemplazó con H2. La suspensión se agitó bajo 1 atmósfera de H2 durante 20 h, a continuación se filtró sobre Celite y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 15 % a un 30 % de EtOAc/Hex) para proporcionar D48 (376 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M-(tBu)+H]+ calc. para C19H23N2O5: 359,16; encontrado: 359,43. Etapas 9 y 10. Preparación de D49: El carbamato D48 (376 mg, 0,907 mmol) se disolvió en THF (9 ml) y se enfrió a 0 ºC. Se añadieron H2O2 (30 % en H2O, 0,463 ml, 4,54 mmol) y LiOH (1 M en H2O, 2,7 ml, 2,7 mmol). La reacción se dejó en agitación a 0 ºC durante otras 2 h y a continuación se concentró a presión reducida. el concentrado resultante se vertió en H2O y la solución acuosa se lavó dos veces con Et2O, a continuación se acidificó a pH 1-2 y se extrajo tres veces con DCM. Los extractos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo en bruto resultante se disolvió en DCM (8 ml) y MeOH (1 ml) y se trató con trimetilsilildiazometano (2 M en hexano, 0,9 ml, 1,8 mmol). Después de agitar durante 40 min a ta, la reacción se interrumpió mediante la adición de un 10 % de AcOH/MeOH y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 4 % a un 25 % de EtOAc/Hex) para proporcionar D49 (167 mg). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 4,98 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 4,22 (t, J = 7,0 Hz, 1 H), 3,70 (s, 3H), 1,89 (m, 1 H), 1,77-1,46 (m, 4H), 1,42 (s, 9H), 1,22 (m, 2H), 0,28 (dd, J = 7,2 Hz, 13,3 Hz, 1 H), 0,13 (d, J = 3,7 Hz, 1 H). Etapa 11. Preparación de D410: El carbamato D49 (223 mg, 0,828 mmol) se disolvió en DCM (4 ml) y se trató con HCl (4,0 M en dioxano, 1 ml, 4,0 mmol). Después de agitar a ta durante 17 h, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar la sal de clorhidrato de amina D410, que se usó sin purificación. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C9H16NO2: 170,12; encontrado: 170,04. Etapas 12 y 13. Preparación del compuesto intermedio D4: la sal de clorhidrato de amina D410 (0,828 mmol, teórico) en H2O (1,4 ml) se trató con una solución recién preparada de D16 (1,35 mmol) en DMF (1,4 ml). Se añadió K3PO4 (703 mg, 3,31 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 2 h a ta. Después de dilución con EtOAc, la fase orgánica se lavó con un 10 % de HCl acuoso y solución salina saturada, a continuación se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 0 % a un 25 % de EtOAc/Hex) para proporcionar el carbamato esperado (239 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C18H28NO4: 322,20; encontrado: 323,00. Este material (239 mg, 0,744 mmol) se disolvió en MeOH y se trató con LiOH (1,0 M en H2O, 5,0 ml, 5,0 mmol). Después de agitar a ta durante 1 h, el MeOH se

retiró a presión reducida. La solución acuosa se acidificó a pH 1-2 con un 10 % de HCl acuoso y se extrajo tres veces con DCM. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar el compuesto intermedio D4 (229 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C17H26NO4: 308,2; encontrado: 307,9.

Preparación del compuesto intermedio D5

10 El compuesto intermedio D5 se preparó de acuerdo con el procedimiento que se detalla en Li, H., et al., Synlett 2011, 10, 1454.

Preparación de la mezcla del compuesto intermedio D6

Etapa 1. Preparación de la mezcla diastereomérica de carbamato D61: el compuesto intermedio C2 (1,34 g, 6,31 mmol), (±)-trans-1-metil-2-(pent-4-enil)ciclopropanol (590 mg, 4,208 mmol; preparado de acuerdo con el procedimiento para el compuesto intermedio C3, documento WO2011014487, p. 36), DMAP (514 mg, 20 4,21 mmol) y DIPEA (2,93 ml, 16,83 mmol) se combinaron en tolueno (14 ml). La reacción se calentó a 90 ºC durante 18 h. La reacción se diluyó con Et2O (25 ml) y HCl acuoso 1 N (75 ml), se agitó bien, y los componentes orgánicos se retiraron. La fase acuosa se extrajo tres veces con éter (50 ml), los componentes orgánicos se combinaron, se lavaron con solución salina saturada, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron para dar un aceite en bruto, que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para dar la mezcla

25 diastereomérica a 1:1 D61 en forma de un aceite transparente (820 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+Na]+ calc. para C20H35NNaO4: 376,3; encontrado: 376,2. Etapa 2: Preparación de la mezcla diastereomérica del compuesto intermedio D6. La mezcla diastereomérica D61 se recogió en DCM (2 ml) y se trató con TFA (2 ml) a temperatura ambiente. Después de 1,5 h, la reacción se concentró al vacío y se coevaporó con cloroformo repetidamente para retirar el TFA residual y se purificó por

30 cromatografía sobre gel de sílice para dar una mezcla diastereomérica a 1:1 del compuesto intermedio D6 en forma de un aceite de color marrón, (536 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+Na]+ calc. para C16H27NNaO4: 320,2; encontrado: 320,1.

Preparación del compuesto intermedio D7 35

Etapa 1. Preparación de D71: (1R,2R)-1-metil-2-(pent-4-enil)ciclopentanol (220,9 mg, 1,313 mmol; preparado de acuerdo con el procedimiento para el compuesto intermedio B26, Publicación de Patente Internacional N.º WO 5 2008/057209 (en lo sucesivo en el presente documento "WO ’209"), p. 45) y el compuesto intermedio C1 (337,1 mg, 1,969 mmol) se trataron con DIPEA (0,91 ml, 5,252 mmol) y DMAP (160,4 mg, 1,313 mmol) en tolueno (4,4 ml). La mezcla se calentó a 85 ºC durante 21 h. La solución se diluyó con éter (80 ml). La solución se lavó con HCl acuoso 1 N (30 ml) y solución salina saturada (30 ml) sucesivamente. La fase orgánica obtenida se secó sobre Na2SO4. Después de retirar el agente de secado mediante una filtración, el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo

10 se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (un 13 % de acetato de etilo en hexanos) para dar D71 (249,5 mg, 0,735 mmol) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (300 MHz, CDCl3, rotámeros expresados como valor total de H x fracción presente) δ 5,76-5,92 (m, 1 H), 5,12 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 5,02 (d, J = 16,8 Hz, 1 H), 4,96 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,13 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,81 (s, 3 x 4/10H), 3,73 (s, 3 x 6/10H), 1,80-2,15 (m, 7H), 1,04-1,74 (m, 6H), 1,36 (s, 3H), 1,04 (s, 9 x 4/10H), 0,97 (s, 9 x 6/10H).

15 Etapa 2. Preparación del compuesto intermedio D7: El éster D71 (249,5 mg, 0,735 mmol) se trató con una solución acuosa de LiOH 2 M (2 ml, 4,0 mmol) en MeOH/THF (4 ml / 4 ml) a ta durante 25 h. La mezcla de reacción se trató a continuación con HCl acuoso 1 N (5 ml) y solución salina saturada acuosa (25 ml) hasta acidificar ligeramente. La mezcla se extrajo tres veces con CH2Cl2 (30 ml). La fase orgánica se lavó con solución salina saturada acuosa (30 ml). La fase orgánica obtenida se secó sobre Na2SO4. Después de retirar el agente de secado por filtración, el

20 disolvente se retiró a presión reducida para dar el compuesto intermedio D7 (191,2 mg, 0,587 mmol) en forma de un aceite incoloro que se usó posteriormente sin purificación adicional. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 9,00 (s a, 1 H), 5,72-5,90 (m, 1 H), 5,12 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 5,00 (d, J = 16,8 Hz, 1 H), 4,94 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,13 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 1,80-2,16 (m, 7H), 1,04-1,74 (m, 6H), 1,35 (s, 3H), 1,02 (s, 9H).

25 Preparación de la mezcla del compuesto intermedio D8

Etapa 1. Preparación de D82: A una solución del compuesto intermedio D81 (500 mg, 3,24 mmol, preparado de acuerdo con el documento WO ’209, p. 36) en DCM (6,65 ml) se añadió peryodinano de Dess-Martin (1,37 g, 3,24 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 6 h, la mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite y se purificó directamente por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de

acetato de etilo/hexanos) para proporcionar la cetona D82 (252 mg) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 5,81 (ddt, J = 16,9, 10,2, 6,6 Hz, 1 H), 5,05 - 4,92 (m, 2H), 2,38 - 1,93 (m, 7H), 1,87 - 1,68 (m, 2H), 1,60 - 1,37 (m, 3H), 1,35 - 1,20 (m, 1 H). Etapa 2. Preparación de la mezcla diastereomérica D83: A una solución de cetona D82 (385 mg, 2,53 mmol) y

5 TMSCF3 (749 µl, 5,07 mmol) en THF (2,3 ml) se añadió CsF (7,0 mg, 46 µmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 2,5 h, la mezcla de reacción se diluyó con agua (10 ml) y la mezcla resultante se extrajo dos veces con DCM (10 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico anhidro, y se concentraron al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar el silil éter D83 (714 mg, mezcla diastereomérica a 1:1) en forma de un

10 aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 5,67 (ddt, J = 13,3, 10,1, 6,7 Hz, 1 H), 4,91 - 4,76 (m, 2H), 2,02 1,00 (m, 13H), 0,00 (s, 9H). Etapa 3. Preparación de la mezcla diastereomérica D84: A una solución de D83 (700 mg, 2,38 mmol) en THF (11,9 ml) se añadió TBAF (1 M en THF, 2,38 ml, 2,38 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 30 min, la mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (100 ml). La mezcla resultante se lavó con una

15 solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (75 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro, y se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar alcohol D84 (418 mg, mezcla diastereomérica a 1:1) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 5,81 (dt, J = 16,8, 6,6 Hz, 1 H), 5,09 - 4,88 (m, 2H), 2,20 - 1,91 (m, 4H), 1,86 - 1,08 (m, 10H).

20 Etapa 4. Preparación de la mezcla diastereomérica D85: Una solución de D84 (380 mg, 1,72 mmol), compuesto intermedio C1 (295,7 mg, 1,72 mmol), DIPEA (1,20 ml, 6,88 mmol) y DMAP (210 mg, 1,72 mmol) en tolueno (8,6 ml) se calentó a 85 ºC bajo una atmósfera de argón. Después de 20 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a ta y se diluyó con acetato de etilo (100 ml). La mezcla resultante se lavó con una solución 1 N de HCl (50 ml), una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (50 ml), y solución salina saturada (50 ml). La fase orgánica

25 se secó sobre sulfato sódico anhidro, y se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar carbamato D85 (550 mg, mezcla diastereomérica a 1:1) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 5,81 (ddt, J = 16,7, 9,8, 6,6 Hz, 1 H), 5,37 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 5,06 - 4,89 (m, 2H), 4,16 - 4,07 (m, 1 H), 3,75 (s, 3H), 2,84 2,29 (m, 2H), 2,27 - 1,89 (m, 3H), 1,85 -1,12 (m, 8H), 0,98 (s, 9H).

30 Etapa 5. Preparación de la mezcla diastereomérica del compuesto intermedio D8: A una solución de carbamato D85 (500 mg, 1,27 mmol) en DCE (6,4 ml) se añadió hidróxido de trimetilestaño (2,30 g, 12,7 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón, y la mezcla resultante se calentó a 65 ºC. Después de 21 h, se permitió que la mezcla de reacción se enfriara a ta y se diluyó con una solución 1 N de HCl (50 ml). La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se

35 concentraron al vacío para proporcionar el compuesto intermedio D8 (575 mg, mezcla diastereomérica a 1:1) en forma de un aceite incoloro, que se usó posteriormente sin purificación adicional. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 5,90 - 5,71 (m, 1 H), 5,32 (d, J = 9,3 Hz, 1 H), 5,07 - 4,89 (m, 2H), 4,16 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 2,83 - 2,30 (m, 2H), 2,27 - 1,87 (m, 3H), 1,83 - 1,12 (m, 8H), 1,04 (s, 9H).

40 Preparación de la mezcla del compuesto intermedio D9 y D10

Etapas 1 y 2: Preparación del racemato D91: el metal magnesio (1,32 g, 54,3 mmol) se añadió a un matraz de 2 45 bocas equipado con un condensador de reflujo y el recipiente se lavó abundantemente con Ar. Se añadió THF (42 ml) seguido de yodo (aprox. 5 mg). La suspensión agitada se calentó a 45 ºC y se añadió 5-bromopent-1-eno

(1,2 g, 8,1 mmol) en una porción. Después de agitar varios minutos, se añadió una cantidad adicional de 5bromopent-1-eno (5,5 g, 37 mmol) a una tasa para mantener un reflujo suave. La mezcla resultante se agitó a 50 ºC durante 15 min y a continuación se enfrió a temperatura ambiente y se usó inmediatamente en la siguiente etapa. Una suspensión de CuI (630 mg, 3,3 mmol) en THF (24 ml) en atmósfera de Argón se enfrió a -5 ºC. Una alícuota 5 del bromuro de pent-4-enilmagnesio (aprox. 0,95 M, 20 ml, 19 mmol) preparado en la etapa 1 se añadió durante 5 min, y la mezcla resultante se agitó durante un periodo adicional de 15 min. La mezcla de reacción se enfrió a continuación a -20 ºC, y se añadió (±)-exo-2,3-epoxinorbornano (1,5 g, 14 mmol) en forma de una solución en THF (5 ml) durante 1 min. Se usaron dos porciones adicionales de THF (2,5 ml cada una) para asegurar la transferencia completa, y la mezcla resultante se agitó durante 20 min. La reacción se retiró a continuación del baño de

10 refrigeración y se calentó a ta. Después de agitar durante un periodo adicional de 1,75 h, la reacción se interrumpió con NH4Cl acuoso saturado (5 ml) y se filtró con EtOAc (100 ml) y H2O (100 ml) a través de Celite. Las fases se separaron, y la fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar (±)-D91 en forma de un residuo incoloro (813 mg). RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 5,90 - 5,67 (m, 1 H), 5,04 - 4,86 (m, 2H), 3,12 (s, 1 H), 2,20 - 1,92 (m, 5H), 1,69 - 1,57 (m, 1 H), 1,55 - 1,12 (m, 9H), 1,03 - 0,84 (m, 1 H).

15 Etapa 3. Preparación de la mezcla diastereomérica del compuesto intermedio D9 y D10: La mezcla del alcohol (±)D91 (813 mg, 4,51 mmol) se disolvió en DMF (4,5 ml). Se añadió piridina (370 µl, 4,5 mmol) seguido de DSC (1,5 g, 5,8 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 45 ºC y se agitó durante 4 h. La mezcla de reacción se enfrió a continuación a 0 ºC y se añadió agua (4,5 ml) gota a gota durante 2 min. La mezcla de reacción se agitó durante 5 min y se retiró del baño de refrigeración. Después de un periodo adicional de 5 min, la mezcla de reacción se

20 enfrió a 0 ºC y se añadieron L-terc-leucina (835 mg, 6,37 mmol) y K3PO4 (2,70 g, 12,7 mmol). La mezcla se agitó durante 10 min y se retiró del baño de refrigeración. Después de agitar un periodo adicional de 24 h, la mezcla se diluyó con EtOAc (30 ml), se acidificó con HCl acuoso 1 M (15 ml), y se diluyó con HCl acuoso 0,2 M (15 ml). Las fases se separaron, y la fase orgánica se lavó con HCl acuoso 0,2 M (2 x 20 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para la mezcla diastereomérica del compuesto intermedio D9 y D10 (1,64 g). LCMS-ESI

25 (m/z): [M-H]-calc. para C19H30NO4: 336,2; encontrado: 336,0.

Preparación del compuesto intermedio D11

30 Etapa 1. Preparación de D111: A una mezcla de D1 (1,0 g, 3,53 mmol), peryodato sódico (2,26 g, 10,59 mmol) en 24 ml de THF y 12 ml de agua se añadió Os EnCat™ 40 (carga de 0,25 mmol/g, 282 mg, 0,071 mmol, Sigma-Aldrich). La mezcla se agitó durante 3 días. Se añadió agua (50 ml) y la mezcla se filtró. La torta de filtro se lavó con agua (volumen total de 400 ml) y acetato de etilo (volumen total de 600 ml). Las fases del filtrado se

35 separaron. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró para dar D111 (1,56 g) que se usó sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C14H24NO5: 286,2 encontrado: 286,1. Etapa 2. Preparación de D112: A una solución de D111 (3,05 g, 10,7 mmol) en MeOH (50 ml) a 0 ºC se añadió borohidruro sódico en porciones (809 mg, 21,4 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 6 h. La mezcla se diluyó con 50 ml de acetato de etilo y 50 ml de solución salina saturada y las fases se separaron. La

40 fase orgánica se extrajo con dos porciones de 25 ml de acetato de etilo. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró. La mezcla del producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc en hexanos: de un 10 % a un 100 %) para dar D112 (380 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C14H26NO5: 288,2; encontrado: 288,1. Etapa 3. Preparación del compuesto intermedio D11: A una solución de D112 (283 mg, 0,98 mmol) en THF

45 (2,8 ml) a 0 ºC se añadió 1-nitro-2-selenocianatobenceno (336 mg, 1,47 mmol) y tributilfosfina (363 µl, 1,47 mmol). El baño de refrigeración se retiró y la mezcla se agitó durante 25 minutos a ta. La reacción se enfrió de nuevo a 0 ºC y se trató con un 30 % de solución de peróxido de hidrógeno (0,665 ml, 5,85 mmol) y se agitó durante 1 h a ta y a continuación se calentó a 60 ºC durante 1 h. La reacción se diluyó con EtOAc y el producto deseado se extrajo en bicarbonato sódico acuoso. El extracto de bicarbonato se acidificó con HCl 2 N y se

50 extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró para dar el compuesto intermedio D11 (136 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C14H24NO4: 270,2; encontrado: 270,1.

Preparación de la mezcla del compuesto intermedio D12 y D13

Etapa 1: Preparación de D121: A una solución de K2O2O7 (121 g, 0,41 mol) en H2O (1,5 l) se añadió gota a gota H2SO4 (143 g, 1,46 mol) a ta y la mezcla se agitó durante 1 h. A continuación, la mezcla se enfrió a 0 ºC y se añadió D41 (80 g, 0,814 mol; preparado de acuerdo con la Sección A, compuesto intermedio 1 del documento US ’491, p 192,) en MTBE (1,5 l) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a ta durante 2 h. La fase acuosa se extrajo con MTBE (3 x 500 ml), se secó sobre MgSO4, se filtró, y se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó por destilación (3 kPa, pe: 60 - 62 ºC) para proporcionar D121 en forma de un líquido de color amarillo pálido (60 g). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 2,57 - 2,63 (m, 2H), 2,14 - 2,19 (d, J = 20 Hz, 2H), 1,52 - 1,57 (m, 2H), 0,89 - 0,94 (m, 1 H), -0,05 - -0,02 (m, 1 H). Etapa 2: Preparación de (±)D122: En atmósfera de Ar, una mezcla de THF (4,4 ml) y HMPA (1,8 ml) se enfrió a -78 ºC. Se añadió una solución 1 M de LiHMDS en THF (2,2 ml, 2,2 mmol). Se añadió la cetona D121 (202 mg, 2,10 mmol) en forma de una solución en THF (2 ml) durante 1 min, lavando con THF adicional (2 x 1 ml) para asegurar la transferencia completa. Después de 25 min, se añadió 5-yodopent-1-eno (preparado de acuerdo con Jin, J. et al., J. Org. Chem. 2007, 72, 5098-5103) (880 mg, 4,5 mmol) durante 30 s mediante una jeringa. Después de 10 min, la reacción se puso en un baño frío a -45 ºC y se calentó a -30 ºC durante 1,5 h. La reacción se interrumpió con NH4Cl acuoso saturado (15 ml) y se diluyó con EtOAc (30 ml) y H2O (15 ml). Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar un residuo en bruto que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 0 % a un 15 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar (+/-) D122 en forma de un aceite incoloro (162 mg). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 5,82 - 5,67 (m, 1 H), 5,03 - 4,87 (m, 2H), 2,61 - 2,51 (m, 1H), 2,11 (d, J = 19,1 Hz, 1 H), 2,08 - 1,99 (m, 3H), 1,61 - 1,40 (m, 5H), 1,36 -1,28 (m, 1 H), 0,92 - 0,81 (m, 1 H), -0,03 - -0,11 (m, 1 H). Etapa 3: Preparación de (±)D123 y (±)D124: Una solución de (±)D122 (142 mg, 0,865 mmol) en THF (4 ml) se enfrió a -78 ºC. Se añadió una solución de LiBHEt3 en THF 1 M (1,3 ml, 1,3 mmol) gota a gota durante 30 s. La reacción se agitó 15 min y se retiró del baño de refrigeración. Después de calentar a ta (15 min), la reacción se interrumpió con NH4Cl acuoso saturado (1 ml). La mezcla resultante se diluyó con Et2O (20 ml) y H2O (20 ml). Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo con Et2O (20 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron hasta un residuo en bruto. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 0 % a un 10 % de EtOAc en hexanos) proporcionó 133 mg de una mezcla de diastereómeros (±)D123 y (±)D124. El material combinado de dos experimentos (253 mg) se purificó adicionalmente por cromatografía sobre gel de sílice (de un 0 % a un 15 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar (±)D123 (150 mg) y (±)D124 (58 mg) en forma de aceites incoloros. RMN 1H para (±)D123 (300 MHz, CDCl3) δ 5,91 - 5,69 (m, 1 H), 5,07 - 4,88 (m, 2H), 3,97 (d, J = 6,7 Hz, 1 H), 2,19 - 1,99 (m, 3H), 1,84 - 1,73 (m, 1 H), 1,62 (d, J = 14,1 Hz, 1 H), 1,54 - 1,40 (m, 2H), 1,32 - 1,17 (m, 3H), 1,16 - 1,06 (m, 1 H), 0,60 - 0,43 (m, 2H). RMN 1H para (±)D124 (300 MHz, CDCl3) δ 5,95 - 5,73 (m, 1 H), 5,09 - 4,88 (m, 2H), 4,05 - 3,86 (m, 1 H), 2,17 -1,84 (m, 4H), 1,72 - 1,34 (m, 5H), 1,28 - 1,08 (m, 3H), 0,49 -0,36 (m, 1H), 0,21 - 0,11 (m, 1 H). Etapa 4: Preparación de la mezcla diastereomérica del compuesto intermedio D12 y D13: Una mezcla de (±)D123 (150 mg, 0,90 mmol) se disolvió en DMF (1,0 ml). Se añadieron piridina (75 µl, 0,92 mmol) y DSC (302 mg, 1,18 mmol), y la reacción se agitó a 45 ºC durante 21,5 h. La reacción se colocó a continuación en un baño de agua enfriada con hielo y se añadió H2O (1,0 ml) gota a gota mediante una jeringa durante 1 min. La mezcla se retiró del baño de refrigeración y se permitió su agitación durante 5 min. La mezcla se volvió a enfriar en un baño de agua enfriada con hielo y se añadió L-terc-leucina (154 mg, 1,17 mmol) seguido de K3PO4 (502 mg, 2,36 mmol). La mezcla de reacción se retiró del baño de refrigeración y se permitió su agitación a ta durante 24 h. A continuación, la mezcla se diluyó con EtOAc (40 ml) y HCl acuoso 1 M (20 ml). Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se lavó con HCl acuoso

0,2 M (2 x 20 ml), se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para dar la mezcla diastereomérica del compuesto intermedio D12 y D13 (300 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI-(m/z): [M-H]-calc. para C18H28NO4: 322,2; encontrado: 322,0).

Preparación del compuesto intermedio D12

Etapa 1: Preparación de D125: A una solución de (1S,4R)-cis-4-acetoxi-2-ciclopent-1-ol (Aldrich, 10 g, 70,4 mmol), trietilamina (48,8 ml, 350 mmol) y DMAP (4,29 g, 35,2 mmol) en diclorometano (352 ml) se añadió 10 cloruro de pivaloílo (10,8 ml, 87,75 mmol) gota a gota mediante una jeringa a 0 ºC bajo una atmósfera de argón. Después de 2 h, la mezcla de reacción se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (500 ml), y se extrajo con diclorometano (2 x 500 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío para proporcionar D125 (15,0 g) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 6,08 (s a, 2H), 5,54 (td, J = 8,0, 4,1 Hz, 2H), 2,88 (dt, J = 14,9, 7,5 Hz, 1

15 H), 2,07 (s, 3H), 1,69 (dt, J = 14,7, 4,1 Hz, 1 H), 1,20 (s, 9H). Etapa 2: Preparación de D126: A una solución de D125 (15,0 g, 70,4 mmol) en metanol (352 ml) se añadió carbonato potásico (9,73 g, 70,4 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 5 h, la mezcla de reacción se filtró y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo (500 ml) y la mezcla resultante se lavó con agua (500 ml) y solución salina saturada (500 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro, y se concentró al

20 vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar D126 (12,0 g) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 6,11 (d a, J = 5,5 Hz, 1 H), 5,97 (d a, J = 5,6 Hz, 1H), 5,48 (s a, 1H), 4,73 (s a, 1H), 2,82 (dt, J = 14,6, 7,3 Hz, 1H), 1,67 (s, 1H), 1,61 (dt, J = 14,5, 4,0 Hz, 1H), 1,20 (s, J = 3,8 Hz, 9H). Etapa 3: Preparación de D127: A una solución de cianuro de cobre(I) (5,10 g, 57,0 mmol) en éter dietílico

25 (95 ml) se añadió bromuro de pent-4-enilmagnesio (Novel Chemical Solutions, 0,5 M en THF, 114 ml, 57,0 mmol) gota a gota mediante una cánula durante un periodo de 30 min a 0 ºC bajo una atmósfera de argón. Después de 10 min, una solución de D126 (3,50 g, 19,0 mmol) en éter dietílico (10 ml) se añadió lentamente mediante una cánula. A continuación, se permitió que la mezcla de reacción se calentara lentamente a ta. Después de 16 h, la mezcla resultante se interrumpió con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (400 ml) y la mezcla

30 resultante se extrajo en acetato de etilo (2 x 400 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con solución salina saturada (400 ml), se secaron sobre sulfato sódico anhidro, y se concentraron al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar D127 (2,4 g) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 5,80 (ddt, J = 16,9, 10,2, 6,7 Hz, 1 H), 5,69 (dd, J = 5,8, 1,7 Hz, 1H), 5,65 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,00 (dd, J = 17,1, 1,3 Hz, 1H), 4,94 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 4,12

35 4,05 (m, 1H), 2,69 (ddd, J = 17,2, 6,4, 1,5 Hz, 1H), 2,54 - 2,45 (m, 1 H), 2,24 (d, J = 17,2 Hz, 1 H), 1,69 (s a, 1 H), 1,52 - 1,19 (m, 6H). Etapa 4: Preparación de (1S,2R,3R,5S)D123: A una solución de D127 (20 mg, 0,13 mmol), y dietil cinc (1 M en hexanos, 132 µl, 0,132 mmol) en éter dietílico (0,66 ml) se añadió diyodometano (21 µl, 0,26 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 2 h, la mezcla de reacción se inactivó con una solución de HCl acuoso 1 N

40 (0,66 ml). Después de 5 min, la mezcla de color amarillo resultante se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (5 ml) y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano (3 x 5 ml). Los extractos

orgánicos combinados se secaron sobre una solución de sulfato sódico anhidro, y se concentraron al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar (1S,2R,3R,5S)D123 (10 mg) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 5,83 (ddt, J = 16,9, 10,2, 6,7 Hz, 1 H), 5,02 (d, J = 17,2 Hz, 1 H), 4,96 (d, J = 11,3 Hz, 1 H), 4,00 (d, J = 6,7 Hz, 1 H),

5 2,19 - 2,02 (m, 3H), 1,82 (t, J = 7,2 Hz, 1 H), 1,64 (d, J = 14,2 Hz, 1 H), 1,55 - 1,42 (m, 2H), 1,38 - 1,20 (m, 4H), 1,19 - 1,08 (m, 1 H), 0,62 - 0,47 (m, 2H). Etapa 5: Preparación del compuesto intermedio D12: el alcohol (1S,2R,3R,5S)D123 (0,450 g, 2,7 mmol) se recogió en DMF (2,7 ml) y se trató posteriormente con DSC (0,92 g, 3,52 mmol) y piridina (0,22 ml, 2,8 mmol). La reacción a continuación se calentó a 50 ºC durante una noche. A continuación, la reacción se enfrió a 0 ºC y se

10 añadió agua (5,5 ml) gota a gota durante 1 min. La suspensión opaca resultante se agitó a ta durante 10 min antes de volver a enfriar a 0 ºC. La reacción se trató a continuación posteriormente con L-terc-leucina (0,462 g, 3,5 mmol) y K3PO4 (1,5 g, 7,0 mmol) y se permitió que se calentara a ta durante una noche con agitación vigorosa. La suspensión opaca resultante se diluyó con EtOAc y HCl acuoso 1 M. Se añadió HCl (12 M) adicional gota a gota para ajustar el pH ~ 3. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos combinados se

15 lavaron con solución salina saturada y se secaron sobre MgSO4 anhidro. Después de concentrar al vacío, el compuesto intermedio D12 se obtuvo (1,72 g) en forma de un aceite incoloro, viscoso que está contaminado con pequeñas cantidades de DMF y EtOAc. El material se usó en reacciones posteriores sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C18H30NO4: 324,2; encontrado 324,7.

20 Preparación del compuesto intermedio D14

Etapa 1. Preparación del compuesto intermedio D14. El carbonato D16 (862 mg, 3,23 mmol) se trató con clorhidrato 25 del ácido (S)-2-amino-2-(1-metilciclopentil)acético (750 mg, 3,87 mmol; preparado de acuerdo con Robl, J.A., et al.,.

J. Med. Chem., 2004, 47, 2587), THF (28 ml), H2O (8,4 ml) y TEA (1,4 ml, 9,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 16 h y el THF se retiró al vacío. El material restante se diluyó con H2O y el pH se ajustó a ~10-12 mediante la adición de un 10 % de NaOH acuoso. La fase acuosa se lavó dos veces con EtOAc y a continuación se acidificó a pH ~ 1-2 con un 10 % de HCl acuoso. La solución ácida se extrajo 3x con EtOAc. Las extracciones combinadas se

30 secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. Los lavados iniciales de EtOAc (de la solución acuosa básica) se lavaron con un 10 % de HCl acuoso, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. Los concentrados combinados se purificaron por cromatografía sobre gel de sílice (de un 50 % a un 100 % de EtOAc/Hex) para proporcionar el compuesto intermedio D14 (980 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C17H28NO4: 310,2; encontrado 310,0.

35 Preparación de la mezcla del compuesto intermedio D15

Etapa 1. Preparación de (±)-D15-1: A una solución de isopropóxido de titanio(IV) (11,3 g, 40,0 mmol) en THF (160 ml) se añadió bromuro de metil magnesio (3 M en Et2O, 20 ml, 60,0 mmol) gota a gota mediante una jeringa a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 10 min, la mezcla de reacción se enfrió a 0 ºC y se añadió una solución de propionato de metilo (3,80 ml, 40,0 mmol) en THF (10 ml) lentamente mediante una jeringa. Después de 5 min, se añadió bromuro de hept-6-enilmagnesio (Novel Chemical Solutions, 0,5 M en THF, 160 ml,

80 mmol) gota a gota mediante un embudo de adición durante 1 h. Después de 2,5 h, la mezcla de reacción se inactivó con un 10 % de ácido sulfúrico acuoso (100 ml) y la mezcla resultante se extrajo con éter dietílico (2 x 200 ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar (±)

5 D15-1 (3,03 g, 50 %) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 5,77 (ddt, J = 16,9, 10,2, 6,7 Hz, 1 H), 5,03 -4,86 (m, 2H), 2,04 (c, J = 6,1 Hz, 2H), 1,75 - 1,14 (m, 6H), 1,04 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 1,01 - 0,91 (m, 1 H), 0,89 - 0,71 (m, 2H), 0,02 (t, J = 5,5 Hz, 1 H). Etapa 2. Preparación de la mezcla diastereomérica del compuesto intermedio D15: La mezcla del alcohol racémico (±)-D15-1 (2,00 g, 13,0 mmol) se disolvió en DMF (13,0 ml). Se añadió piridina (1,05 ml, 13,0 mmol)

10 seguido de DSC (4,00 g, 15,6 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 50 ºC y se agitó durante 20 h. La mezcla de reacción a continuación se enfrió a ta y se añadió agua (13 ml) gota a gota durante 2 min. A continuación se añadieron L-terc-leucina (2,17 g, 13,0 mmol) y K3PO4 (8,28 g, 39,0 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 50 ºC. Después de 5 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a ta y se diluyó con agua (500 ml). La mezcla resultante se lavó con diclorometano (100 ml). La fase acuosa se acidificó a continuación a

15 pH 2 con una solución acuosa de HCl 2 N, y se extrajo con DCM (2 x 400 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron a presión reducida para dar la mezcla diastereomérica del compuesto intermedio D15 (4,5 g) en forma de un aceite de color naranja pálido, que se usó posteriormente sin purificación adicional.

20 Preparación del compuesto intermedio D16

El compuesto intermedio D16 se preparó en de una manera similar a la Preparación del compuesto intermedio D12, 25 huyendo el bromuro de but-3-enilmagnesio por bromuro de pent-4-enilmagnesio en la Etapa 3. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C17H28NO4: 310,2; encontrado 310,8.

Preparación del compuesto intermedio D17

Etapa 1. Preparación de la mezcla del compuesto intermedio D17. (±)-trans-1-metil-2-(but-3-enil)ciclopropanol (900 mg, .13 mmol), preparado de acuerdo con el procedimiento para el compuesto intermedio B2, Publicación de Patente Internacional N.º WO 2012/40040 (en lo sucesivo en el presente documento "WO ’040"), p. 38, se disolvió 35 en DMF (6 ml). Se añadió piridina (577 µl, 7,13 mmol) seguido de DSC (2,37 g, 9,27 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 40 ºC y se agitó durante 18 h. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió a 0 ºC y agua (6 ml) se añadió gota a gota durante 5 min. La mezcla de reacción se agitó durante 5 min y se retiró del baño de refrigeración. Después de un periodo adicional de 5 min, la mezcla de reacción se enfrió a 0 ºC y se añadieron L-terc-leucina (1,21 g, 9,27 mmol) y K3PO4 (4,69 g, 22,1 mmol). La mezcla se agitó durante 10 min y se retiró del baño de 40 refrigeración. Después de agitar un periodo adicional de 6 h, la mezcla se diluyó con EtOAc (30 ml), se acidificó con HCl acuoso 1 M (25 ml), y se diluyó con HCl acuoso 0,2 M (25 ml). Las fases se separaron, y la fase orgánica se lavó con HCl acuoso 0,2 M (2 x 20 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar la mezcla de carbamato diastereomérica D17 (2,10 g). LCMS-ESI+ (m/z): [M+Na]+ calc. para C15H25NNaO4: 306,2; encontrado:

306,1. Preparación del compuesto intermedio D18

Etapa 1. Preparación de D181: (preparado de acuerdo con el documento WO2011013141) A una solución de ácido (S)-4-amino-2-hidroxibutanoico (15 g, 126 mmol) en metanol (95 ml) se añadió ácido sulfúrico concentrado (8 ml), y la reacción se calentó a reflujo. Después de 18 h, la mezcla resultante se dejó enfriar a temperatura

10 ambiente y se concentró al vacío. El residuo se suspendió con acetato de etilo (95 ml) y D181 se recogió por filtración al vacío. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 5,69 (s a, 1 H), 4,31 (ddd, J = 9,2, 8,1, 2,2 Hz, 1 H), 3,49 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 3,41 (tt, J = 9,2, 1,7 Hz, 1 H), 3,33 (td, J = 9,4, 6,5 Hz, 1 H), 2,81 (s a, 1 H), 2,59 - 2,48 (m, 1 H), 2,09 (dc, J = 12,9, 9,1 Hz, 1 H). Etapa 2. Preparación de D182: A una solución de D181 (4,5 g, 44 mmol), ácido 4-nitrobenzoico (8,19 g,

15 49 mmol) y trifenilfosfina (22,4 g, 132 mmol) en tetrahidrofurano (220 ml) se añadió azodicarboxilato de diisopropilo (12,1 ml, 61,6 mmol) gota a gota mediante una jeringa a 23 ºC bajo una atmósfera de argón. Después de 20 h, la mezcla de reacción de color naranja turbia resultante se concentró al vacío y se añadieron metanol (200 ml) seguido de carbonato potásico (15 g, 109 mmol) y la reacción se agitó a 23 ºC. Después de un periodo adicional de 5 h, la mezcla resultante se diluyó con cloroformo (200 ml) y se filtró. El filtrado se concentró

20 al vacío y el residuo en bruto se recogió en agua (150 ml) y solución acuosa de ácido clorhídrico 1 N (50 ml). La fase acuosa se lavó con acetato de etilo (3 x 200 ml) para retirar los productos secundarios orgánicos, y se concentró al vacío para proporcionar el D182 en bruto que se usó directamente en la siguiente etapa. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) δ 4,28 (t, J = 8,4 Hz, 1 H), 3,43 -3,20 (m, 1 H), 2,56 -2,39 (m, 1 H), 1,96 (dc, J = 12,7, 8,7 Hz, 1 H).

25 Etapa 3. Preparación de D183: A una solución del compuesto D182 en bruto (5 g, 49,5 mmol) e imidazol (3,4 g, 49,5 mmol) en DMF (247 ml) se añadió TBSCl (7,5 g, 49,5 mmol) a 0 ºC bajo una atmósfera de argón. La mezcla resultante se dejó calentar a 23 ºC. Después de 7 h, se añadieron secuencialmente imidazol (7 g, 102 mmol) y TBSCl (16 g, 106 mmol) adicionales. Después de un periodo adicional de 16 h, la mezcla resultante se diluyó con solución acuosa de ácido clorhídrico 1 N (1 l) y se extrajo con acetato de etilo (1 l). La fase orgánica se separó y

30 se lavó con solución salina saturada (1 l), se secó con sulfato sódico anhidro, y se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar D183. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 5,99 (s, 1 H), 4,26 (t, J = 7,7 Hz, 1 H), 3,44 -3,33 (m, 1 H), 3,30 -3,19 (m, 1 H), 2,45 -2,29 (m, 1 H), 2,11 - 1,95 (m, 1 H), 0,91 (s, 9H), 0,02 (s, 3H), 0,00 (s, 3H). Etapa 4. Preparación de D184: A una solución de D183 (1,00 g, 4,65 mmol), DMAP (57,8 mg, 0,465 mmol) y

35 trietilamina (1,29 ml, 9,3 mmol) en diclorometano (23,3 ml) se añadió bicarbonato de di-tercbutilo (1,5 g, 6,97 mmol) a 23 ºC y en atmósfera de argón. Después de 20 h, la mezcla de reacción se purificó directamente por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar D184. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 4,31 (dd, J = 9,4, 7,9 Hz, 1 H), 3,79 (ddd, J = 11,0, 8,9, 2,2 Hz, 1 H), 3,53 3,41 (m, 1 H), 2,34 - 2,21 (m, 1 H), 1,92 (dc, J = 12,2, 9,2 Hz, 1 H), 1,53 (s, 9H), 0,91 (s, 9H), 0,17 (s, 3H), 0,13

40 (s, 3H). Etapa 5. Preparación de D185: A una solución de D184 (700 mg, 2,22 mmol) en tetrahidrofurano (11,1 ml) se añadió bromuro de pent-4-enilmagnesio (Novel Chemical Solutions, 0,5 M en 2-MeTHF, 4,89 ml, 2,44 mmol) a 78 ºC gota a gota mediante una jeringa bajo una atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla de reacción se inactivó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (50 ml) y se dejó calentar a temperatura

45 ambiente. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 ml), y los extractos orgánicos combinados se lavaron con solución salina saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar D185. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 5,77 -5,62 (m, 1 H), 4,95 (d, J = 15,8 Hz, 1 H), 4,92 (d, J = 10,2 Hz, 1 H), 4,26 (t ap, J = 8,4 Hz, 1 H), 3,77 - 3,69 (m, 1 H), 3,41 (td, J = 10,4,

50 6,7 Hz, 1H), 2,48 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,28 -2,17 (m, 1 H), 1,91 -1,78 (m, 2H), 1,77 -1,65 (m, 1 H), 1,60 (quin,

J = 7,3 Hz, 2H), 1,47 (s, 9H), 0,85 (s, 9H), 0,11 (s, 3H), 0,07 (s, 3H). Etapa 6. Preparación de D186: A una solución de D185 (740 mg, 1,92 mmol) y trietilsilano (6,10 ml, 38,4 mmol) en diclorometano (9,6 ml) se añadió dietileterato de trifluoruro de boro (308 µl, 2,50 mmol) a -78 ºC gota a gota mediante una jeringa bajo una atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla de reacción se dejó calentar a

5 temperatura ambiente. Después de un periodo adicional de 4 h, la reacción se interrumpió con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (10 ml), y se diluyó con una solución saturada de bicarbonato sódico (50 ml). La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (50 ml), y la fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró al vacío para proporcionar la amina libre en bruto que se usó directamente en la siguiente etapa. A una solución de la amina libre en bruto, y trietilamina (535 µl, 3,84 mmol) en tetrahidrofurano

10 (9,6 ml) se añadió anhídrido acético (146,5 µl, 1,55 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla resultante se concentró al vacío y el residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar D186 (mezcla diastereomérica a 2:1 que favorece el diastereómero deseado 1-((2S,3R)-3-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(pent-4enil)pirrolidin-1-il)etanona). RMN 1H (400 MHz, CDCl3, diastereómero secundario indicado por *) δ 5,80 - 5,64 (m,

15 1 H, 1H*), 5,01 - 4,82 (m, 2H, 2H*), 4,10 (d, J = 4,2 Hz, 1H*), 4,04 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 3,82 (dd, J = 10,3, 4,0 Hz, 1 H), 3,66 - 3,56 (m, 1H*), 3,55 - 3,29 (m, 2H, 1H*), 3,24 - 3,16 (m, 1H*), 2,37 - 2,25 (m, 1H*), 2,08 - 1,88 (m, 2H, 1H*), 2,03 (s, 3H*), 2,00 (s, 3H), 1,81 - 1,61 (m, 2H, 2H*), 1,50 -1,01 (m, 4H, 4H*), 0,85 (s, 9H*), 0,80 (s, 9H), 0,10 (s, 3H*), 0,09 (s, 3H*), 0,00 (s a, 6H). Etapa 7. Preparación de D187: A una solución de D186 (338 mg, 1,08 mmol) en tetrahidrofurano (21 ml) se

20 añadió TBAF (1 M en tetrahidrofurano, 21 ml, 21 mmol) a 0 ºC bajo una atmósfera de argón. Después de 17 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se purificó directamente por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar D187 (102 mg, mezcla diastereomérica a 2:1 que favorece el diastereómero deseado 1 de 1-((2S,3R)-3-hidroxi-2-(pent-4-enil)pirrolidin-1-il)etanona). RMN 1H (400 MHz, CDCl3 diastereómero secundario indicado por *) δ 5,84 -5,70 (m, 1 H, 1H*), 5,06 - 4,91 (m,

25 2H, 2H*), 4,25 (d, J = 3,7 Hz, 1H*), 4,20 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 3,98 (dd, J = 9,2, 4,2 Hz, 1 H), 3,76 - 3,68 (m, 1H*), 3,67 - 3,59 (m, 1H, 1H*), 3,55 - 3,46 (m, 1H, 2H*), 3,02 - 2,94 (m, 1 H), 2,22 - 1,85 (m, 2H, 2H*), 2,10 (s, 3H*), 2,07 (s, 3H), 1,82 - 1,59 (m, 2H, 2H*), 1,55 - 1,13 (m, 4H, 4H*). Etapa 8. Preparación de D188: A una solución de D187 (102 mg, 0,518 mmol) y piridina (8 µl, 0,104 mmol) se añadió DSC (159,2 mg, 0,621 mmol) a temperatura ambiente, y la mezcla resultante se calentó a 45 ºC. Después

30 de 16 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se añadieron agua (518 µl), L-tercleucina (86,5 mg, 0,518 mmol) y K3PO4 (330 mg, 1,55 mmol) de forma secuencial, y la mezcla resultante se calentó a 50 ºC. Después de 6 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se diluyó con solución acuosa de ácido clorhídrico 1 N (10 ml). La mezcla resultante se extrajo con diclorometano (2 3 10 ml), y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío para

35 proporcionar D188 (mezcla diastereomérica a 2:1 que favorece el ácido (S)-2-(((2S,3R)-1-acetil-2-(pent-4enil)pirrolidin-3-iloxi)carbonilamino)-3,3-dimetilbutanoico deseado). RMN 1H (400 MHz, CDCl3, diastereómero secundario indicado por *) δ 5,85 - 5,65 (m, 1H, 1H*), 5,39 (d, J = 9,3 Hz, 1H*), 5,34 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,07 - 4,87 (m, 3H, 3H*), 4,16 - 4,03 (m, 1H, 1H*), 3,83 -3,45 (m, 3H, 3H*), 2,30 - 1,95 (m, 8H), 2,30 - 1,95 (m, 2H, 3H*), 1,82 - 1,65 (m, 2H, 1H*), 2,11 (s, 3H), 2,09 (s, 3H*), 1,58 - 1,13 (m, 4H, 4H*), 1,01 (s a, 9H, 9H*).

40 Preparación de la mezcla del compuesto intermedio D19

Etapas 1 y 2: Preparación de D191: Una solución de KHMDS en THF 1,0 M (10 ml, 10 mmol) se diluyó con THF (10 ml) en atmósfera de Ar y la solución resultante se enfrió a -78 ºC en un baño de CO2:acetona. Se añadió

biciclo[3.1.1]heptan-2-ona (1,0 g, 9,1 mmol, véase: Yin, et al., J. Org. Chem. 1985, 50, 531) como una solución en THF (5 ml) durante 2 min, se lavó con una cantidad adicional de THF (2 x 2,5 ml) para asegurar la transferencia completa. La mezcla resultante se agitó durante 30 min, y se añadió N-(5-cloro-2piridil)bis(trifluorometanosulfonimida) (3,8 g, 9,7 mmol) como una solución en THF (10 ml) durante 2 min, lavando

5 con una cantidad adicional de THF (2 x 2,5 ml). La mezcla resultante se agitó durante 5 min y se retiró del baño de refrigeración. Después de agitar un periodo adicional de 30 min, la reacción se diluyó con Et2O (70 ml) y HCl acuoso 1 M (50 ml). Las fases se separaron, y la fase orgánica se lavó con NaOH acuoso 1 M (2 x 30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto. Esta se filtró a través de un lecho de sílice con un 30 % de EtOAc en hexanos para proporcionar un residuo en bruto de (1,24 g) que se usó directamente en la siguiente etapa. Etapa 2: A una solución de acetal de dietilo de 3-butenal (1,4 ml, 8,3 mmol) en atmósfera de Ar enfriada en un baño de agua enfriada con hielo se añadió una solución de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano (15,9 ml, 7,95 mmol) en THF 0,5 M durante 3 min. La reacción se agitó durante 20 h, permitiendo que el baño de refrigeración se agotara durante una noche. A continuación, se añadió una solución acuosa 3 M de NaOH (2,9 ml, 8,7 mmol), y, después

15 de agitar 20 min, la solución resultante se transfirió en su totalidad a un matraz que contenía el producto de la Etapa 1 (aprox. 5,16 mmol) y PdCl2(dppf)·CH2Cl2 (420 mg, 0,51 mmol). La mezcla resultante se calentó a 60 ºC. Después de agitar 14 h, la mezcla de reacción se diluyó con Et2O (50 ml) y H2O (50 ml). Las fases se separaron, y la fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 0 % a un 10 % de EtOAc en hexanos después de un equilibrio previo con un 1 % de Et3N en EtOAc) proporcionó el compuesto intermedio D191. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) 5,36 - 5,28 (m, 1 H), 4,59 (t, J = 5,6 Hz, 1 H), 3,73 - 3,58 (m, 2H), 3,54 - 3,39 (m, 2H), 2,72 -2,60 (m, 1 H), 2,45 - 2,34 (m, 3H), 2,23 - 2,08 (m, 4H), 1,89 1,76 (m, 2H), 1,67 (dt, J = 16,1, 6,9 Hz, 2H), 1,58 - 1,47 (m, 2H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 6H). Etapa 3: Preparación de D192: Una solución de la olefina D191 (660 mg, 2,77 mmol) en THF (25 ml) se enfrió en un baño de agua enfriada con hielo. A continuación se añadió BH3·Me2S como una solución 1 M en CH2Cl2

25 (2,9 ml, 2,9 mmol) durante 1 min. La solución resultante se agitó durante 2 h en el baño de agua enfriada con hielo y a continuación se permitió que se calentara a t.a. Después de agitar un periodo adicional de 3 h, la mezcla de reacción se volvió a enfriar en un baño de agua enfriada con hielo y se diluyó con NaOH acuoso 2 M (7 ml) seguido de un 30 % de H2O2 acuoso (7 ml). La mezcla resultante se agitó un periodo adicional de 16 h a medida que se permitía que el baño de refrigeración se agotara gradualmente. La mezcla se repartió entre Et2O (100ml) y H2O (50 ml), las fases se separaron, y la fase orgánica se lavó con NaOH acuoso 0,5 M (50 ml). La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 15 % a un 40 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar 570 mg del compuesto intermedio D192. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 4,60 (t, J = 5,6 Hz, 1 H), 3,76 - 3,60 (m, 3H), 3,58 - 3,42 (m, 2H), 2,39 - 2,05 (m, 4H), 1,91 - 1,48 (m, 9H), 1,43 - 1,35 (m, 1 H), 1,25 (t, J = 7,0 Hz, 6H),

35 1,06 - 0,98 (m, 1 H). Etapas 4 y 5: Preparación de D193: el acetal D192 (360 mg, 1,4 mmol) se disolvió en THF (8 ml) y H2O (2 ml). Se añadió monohidrato del ácido para-toluenosulfónico (40 mg, 0,2 mmol) y la solución resultante se agitó 16 h a

t.a. La reacción se diluyó con Et2O (50 ml) y H2O (30 ml) y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con Et2O (30 ml) y la fase orgánica combinada se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (15 ml). La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto que se usó inmediatamente en la siguiente etapa. Etapa 5: se suspendió bromuro de metil trifenilfosfonio (1,66 g, 4,6 mmol) en THF (40 ml) en atmósfera de Ar y se enfrió a través de un baño de CO2/acetona a -78 ºC. Una solución 1 M de NaHMDS en THF (4,2 ml, 4,2 mmol) se añadió gota a gota y la suspensión de color amarillo resultante se agitó durante 5 min. La mezcla se retiró del

45 baño de refrigeración y la agitación se continuó un periodo adicional de 30 min. La isquémica continuación, la mezcla se volvió a enfriar a -78 ºC y el residuo en bruto de la etapa anterior (aprox. 1,4 mmol) se añadió como una solución en THF (5 ml) durante 5 min, lavando con una cantidad adicional de THF (2 x 2,5 ml) para asegurar la transferencia completa. La mezcla resultante se agitó durante 5 min y a continuación se colocó en un baño de agua enfriada con hielo y se agitó durante un periodo adicional de 1 h. La reacción se interrumpió con NH4Cl acuoso saturado (20 ml) y se diluyó con Et2O (30 ml) y H2O (20 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró sobre 5 g gel de sílice. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 30 % de EtOAc en hexanos) proporcionó D193. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 6,01 - 5,81 (m, 1 H), 5,22 - 5,05 (m, 2H), 3,79 - 3,66 (m, 1 H), 2,43 - 2,25 (m, 2H), 2,24 - 2,04 (m, 4H), 1,83 -1,16 (m, 10H). Etapa 6: el compuesto intermedio D193 (270 mg, 1,5 mmol) se disolvió en DMF (2,0 ml). Se añadieron piridina

55 (125 µl, 1,5 mmol) y DSC (500 mg, 1,9 mmol), y la reacción se agitó a 45 ºC durante 15 h. A continuación, la reacción se colocó en un baño de agua enfriada con hielo y se añadió H2O (2,0 ml) gota a gota durante 30 s. La mezcla se retiró del baño de refrigeración y se permitió la agitación durante 10 min. La mezcla se volvió a enfriar en un baño de agua enfriada con hielo y se añadió L-tercleucina (259 mg, 1,97 mmol) seguido de K3PO4 (835 mg, 3,93 mmol). La mezcla de reacción se retiró del baño de refrigeración y se permitió su aplicación a t.a. durante 5,25 h. A continuación, la mezcla se diluyó con EtOAc (40 ml), HCl acuoso 1 M (20 ml), y H2O (15 ml). Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se lavó con HCl acuoso 0,2 M (2 x 25 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar una mezcla de diastereómeros D19 (505 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C19H32NO4: 338,2; encontrado: 337,8.

65 Preparación del compuesto intermedio E1

El compuesto intermedio E1 (2-cloro-6-metoxi-3-(metilsulfonil)quinoxalina) se preparó de acuerdo con Mahata, P.K., et al.,. Org. Lett. 2005, 7, 2169.

Preparación del compuesto intermedio E2

10 Etapa 1. Preparación de E21: En un matraz de fondo redondo, 3-(benciloxi)anilina (4,025 g, 20,20 mmol) y 1,1bis(metiltio)-2-nitroetileno (3,338 g, 20,20 mmol) en etanol (40 ml) se calentaron a reflujo durante 24 h con agitación constante. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo y se diluyó con éter (150 ml). La mezcla se filtró y se lavó con éter para proporcionar E21 (3,32 g) en forma de un sólido de color

15 amarillo que se usó directamente en la siguiente etapa. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C16H17N2O3S: 317,1; encontrado: 317,1. Etapa 2. Preparación de E22: A una suspensión de E21 (3,32 g, 10,49 mmol) en 25 ml de MeCN, se añadió POCl3 (2,93 ml, 31,5 mmol) gota a gota durante 15 min con agitación constante. La mezcla de reacción se calentó a 80 ºC y se agitó durante 5 h. A continuación, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se

20 neutralizó con solución acuosa saturada de NaHCO3 enfriado con hielo, se extrajo tres veces con CH2Cl2 (100 ml), se lavó con agua y solución salina saturada y se secó sobre Na2SO4 anhidro. El disolvente se retiró a presión reducida. El material en bruto se eluyó a través de un lecho de sílice con CH2Cl2. El disolvente se retiró a presión reducida y el sólido se lavó con MeCN para proporcionar E22 (1,56 g) en forma de un sólido de color blanquecino. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C16H14ClN2OS: 317,1; encontrado: 317,3.

25 Etapa 3. Preparación del compuesto intermedio E2. Una solución de mCPBA (1,87 g, 10,83 mmol) en CH2Cl2 (40 ml) se añadió gota a gota a una solución agitada de E22 (1,56 g, 4,92 mmol) en CH2Cl2 (40ml) a 0ºC durante un periodo de 30 min. La mezcla de reacción se agitó adicionalmente a temperatura ambiente durante 5 h. A continuación, se vertió en NaHCO3 acuoso saturado enfriado con hielo y se repartieron con CH2Cl2.A continuación, la fase orgánica se lavó posteriormente con agua y solución salina saturada y se secó sobre

Na2SO4 anhidro. El disolvente se retiró a presión reducida y el material en bruto se purificó por cromatografía en fase normal con CH2Cl2 para proporcionar el compuesto Intermedio E2 del título en forma de un sólido de color amarillo pálido. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C16H14ClN2O3S: 349,0; encontrado: 349,0.

Preparación del compuesto intermedio E3

Etapa 1. Preparación de E31: A una solución de 3-bromo-3,3-difluoroprop-1-eno (25,0 g, 159 mmol) y oxalato de

10 dietilo (21,6 ml, 159 mmol) en THF (380 ml), éter dietílico (90 ml) y n-pentano (90 ml) a -100 ºC se añadió gota a gota n-butillitio (2,5 M en hexano, 67 ml, 167,6 mmol) durante 30 min. La mezcla de reacción se agitó a -95 ºC durante 1 h y -78 ºC durante 2 h, y se inactivó con NH4Cl ac. (11 g en 150 ml de agua). La mezcla se extrajo con éter (tres veces). Las fases orgánicas se lavaron con HCl acuoso 1 N y solución salina saturada, y se secaron sobre Na2SO4, y se concentraron para dar el residuo en bruto, que se purificó por cromatografía sobre gel de

15 sílice (EtOAc en hexanos: 0 % a un 40 %) para dar E31 (7,0 g). RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 5,98-6,18 (m, 1 H), 5,78 (dd, J = 0,9 Hz, 13 Hz, 1 H), 5,60 (dd, J = 0,9 Hz, 11 Hz, 1 H), 4,38 (c, J = 6,9 Hz, 2H), 1,37 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Etapa 2. Preparación de E32 y E33: A una solución de E31 (14,0 g, 78,6 mmol) y diclorhidrato de 4metoxibenceno-1,2-diamina (15,08 g, 71,4 mmol) en EtOH (360 ml) a ta se añadió trietilamina (19,9 ml,

20 142,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante una noche. La mezcla se concentró. La suspensión en diclorometano (30 ml) y el filtrado proporcionó una cierta separación de los regioisómeros con E32 como la especie que precipita. (Rendimiento total de 16,5 g a partir de filtración y cromatografía posterior). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 11,940 (sa, 1 H), 7,850 (d, J= 9 Hz, 1 H), 6,985 (dd, J= 3 Hz, 9 Hz, 1H), 6,754 (d, J =2 Hz, 1 H), 6,625-6,498 (m, 1 H), 5,907 (dt, J = 17, 2 Hz, 1 H), 5,601 (d, J = 11 Hz, 1 H), 3,938 (s, 3H). La mezcla se

25 suspendió, se filtró y se concentró una vez más, a continuación se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc en hexanos: 5 % a un 34 %) para dar E33 (2,07 g) como el primer componente de elución. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 12,05 (s a, 1 H), 7,850 (d, J = 9Hz, 1 H), 6,986 (dd, J= 3 Hz, 9 Hz, 1 H), 6,761 (d, J= 3 Hz, 1 H), 6,597-6,526 (m, 1 H), 5,91 (dt, J = 17, 2 Hz, 1 H), 5,601 (d, J = 11 Hz, 1 H), 3,939 (s, 3H). Etapa 3. Preparación del compuesto intermedio E3: Una solución de E33 (2,07 g, 8,2 mmol en 1 ml de DMF se

30 trató con POCl3 (0,8 ml) y se calentó a 65 ºC durante 2,5 h. La reacción se diluyó con EtOAc se interrumpió vertiéndola en agua enfriada con hielo. La fase orgánica se lavó posteriormente con bicarbonato sódico acuoso saturado y solución salina saturada, se secó sobre sulfato sódico y se concentró para dar 2,1 g del compuesto intermedio E3. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,028 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,46 (dd, J = 3 Hz, 9 Hz, 1 H), 7,32(d, J = 3 Hz, 1 H), 6,549-6,478 (m, 1 H), 5,86 (dt, J = 17, 2 Hz, 1 H), 5,67 (d, J = 11 Hz, 1 H), 3,981 (s, 3H).

35 Preparación del compuesto intermedio E4

El compuesto intermedio E4 (2-cloro-3-(1,1-difluoroalil)quinoxalina) se preparó de una manera similar al compuesto intermedio E3, sustituyendo el 1,2-diaminobenceno por diclorhidrato de 4-metoxibenceno-1,2-diamina en la Etapa 2.

Preparación del compuesto intermedio E5

El compuesto intermedio E5 (2,6-dicloro-3-(metilsulfonil)quinoxalina) se preparó de acuerdo con Mahata, P.K., et al., 10 Org. Lett. 2005, 7, 2169.

Preparación del compuesto intermedio E6

15 Etapa 1. Preparación de E61: Un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 1 l se cargó con una solución de 3bromo-3,3-difluoroprop-1-eno (25 g, 159,3 mmol) en DMF (360 ml) y agua (90 ml). La solución resultante se trató con 2-oxoacetato de etilo (33 ml, 1 M en tolueno), e In (25 g). La mezcla de reacción se agitó durante una noche a ta y a continuación se extrajo con 3 x 300 ml de éter. Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con

20 1x100mldeNH4Cl acuoso saturado y 1 x 100 ml de solución salina saturada, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron al vacío para proporcionar E61 que se usó posteriormente sin purificación adicional. Etapa 2. Preparación de E62. Al hidroxiéster E61 (58,1 g, 323 mmol) se añadió DCM (700 ml) en un matraz de 3 bocas de 2 l equipado con agitación superior y una sonda de temperatura interna. A continuación se añadieron de forma secuencial TEMPO (5,4 g, 35 mmol), solución tampón (preparada por disolución de 4,2 g de NaHCO3 y

25 0,53gdeNa2CO3 por 100 ml de agua, 700 ml, 7v), y NaOCl (Clorox 6,15 % en peso, 422 ml, 395 mmol) al

matraz a 20 ºC. Después de 2 h la fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 300 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron al vacío para proporcionar E62. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 5,98-6,18 (m, 1 H), 5,78 (dd, J = 0,9 Hz, 13 Hz, 1 H), 5,60 (dd, J = 0,9 Hz, 11 Hz, 1 H), 4,38 (c, J = 6,9 Hz, 2H), 1,37 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

5 Etapa 3. Preparación de E63. A una solución de 3,3-difluoro-2,2-dihidroxipent-4-enoato de etilo E62 (57,4 g, 292 mmol) en THF (725 ml) y agua (131 ml) se añadió LiOH•H2O (22 g, 529 mmol) a 20 ºC. Después de 2,5 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo sólido se suspendió en agua (300 ml) y la mezcla resultante se acidificó a pH = 1 con solución acuosa de ácido clorhídrico concentrado. La mezcla resultante se agitó hasta que todos los sólidos se disolvieron (~1,5 h), y a continuación se añadió cloruro sódico hasta que la solución se

10 saturó. La solución resultante se extrajo con MTBE (2 x 500 ml) y acetato de etilo (2 x 500 ml), y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron al vacío. El residuo sólido de color naranja en bruto se suspendió en DCM (100 ml) y se agitó hasta que lo sólido se distribuyeron finalmente antes de añadir hexanos (75 ml) lentamente mediante un embudo de adición. Los sólidos resultantes se recogieron por filtración al vacío a través de un embudo con frita media y se lavó con 1:1 de diclorometano/ hexanos (2 x 10 ml)

15 para proporcionar el producto deseado. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,17 (s a, 1 H), 6,18-6,01 (m, 1 H), 5,64-5,52 (m, 2H). Etapa 4. Preparación de E64 y E65: Una solución de E63 (0,5 g, 3,3 mmol) en EtOH (12 ml) se trató con 3,4diaminobenzonitrilo (0,47 g, 3,5 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 80 ºC durante 1 h, a continuación se concentró al vacío. El residuo resultante se absorbió sobre gel de sílice, a continuación se purificó por

20 cromatografía en columna para dar E64 (0,5 g) como el primer componente de elución. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,01 (d, 1H), 7,65 (dd, 2H), 6,49 (m, 1H), 5,80 (dt, 1H), 5,60 (d, 1H). E65 (0,2 g) se recuperó como el segundo componente de elución. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,25 (d, 1 H), 7,87 (dd, 1 H), 7,41 (d, 1 H), 6,49 (m, 1H), 5,80 (dt, 1H), 5,59 (d, 1 H). Etapa 5. Preparación del compuesto intermedio E6: Una solución de E64 (0,5 g, 2 mmol en 4,5 ml de DMF se

25 trató con POCl3 (3 ml) y se calentó a 65 ºC durante 3 h. La reacción se diluyó con EtOAc y se interrumpió vertiéndola en agua enfriada con hielo. La fase orgánica se lavó posteriormente con NaHCO3 acuoso saturado y solución salina saturada, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró al vacío para dar 0,48 g del compuesto intermedio E6 (3-cloro-2-(1,1-difluoroalil)quinoxalina-6-carbonitrilo). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,52 (s, 1 H), 8,30 (d, 1 H), 8,13 (dd, 1 H), 6,55 (m, 1 H), 5,84 (dt, 1H), 5,72 (d, 1 H).

30 Preparación del compuesto intermedio E7

35 Etapa 1. Preparación de E71: A una solución de E31 (1,84 g, 10,93 mmol) y 4-(difluorometoxi)benceno-1,2diamina (1,90 g, 10,93 mmol, preparada de acuerdo con el Ejemplo de Referencia 30y del documento WO2003035065, p. 511,) en DMF (40 ml) a ta se añadió DIPEA (9,5 ml, 54,65 mmol) y HATU (6,23 g, 16,4 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 h, se diluyó con acetato de etilo (100 ml), se lavó con agua (100 ml) y solución salina saturada (50 ml). La mezcla se concentró al vacío. La

40 purificación por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc en hexanos: 20 % a un 60 %) proporcionó E71 (800 mg) como la última fracción de elución de dos con los espectros de masas similares. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C12H9F4N2O: 289,2; encontrado: 289,0. Etapa 2: Preparación del compuesto intermedio E7: Hidroxiquinoxalina E71 (800 mg, 2,8 mmol), POCl3 (1,65 ml, 3,0 mmol) y DMF (10 ml) se combinan a ta y a continuación se calientan a 65 ºC durante 2,5 h momento en el

45 que se añade una cantidad adicional de POCl3 (0,2 ml, 0,36 mmol). La reacción se calentó durante un periodo adicional de 3 h a 65 ºC a continuación se enfrió a ta. La reacción se interrumpió mediante la adición de agua fría (30 ml), y se recogió en acetato de etilo (50 ml), se lavó con Na2CO3 acuoso saturado (100 ml) seguido de solución salina saturada (50 ml), y se secó sobre MgSO4 anhidro. La solución resultante se concentró al vacío para dar el compuesto intermedio E7 (859 mg) que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+

50 (m/z): [M+H]+ calc. para C12H8ClF4N2O: 307,0; encontrado: 307,0.

Preparación del compuesto intermedio E8

El compuesto intermedio E8 (2-cloro-6-fluoro-3-(metilsulfonil)quinoxalina) se preparó de acuerdo con Mahata, P.K., et al.,. Org. Lett. 2005, 7, 2169.

Preparación del compuesto intermedio E9

10 La 2,7-dicloro-3-(prop-2-en-1-il)quinazolin-4(3H)-ona (compuesto intermedio E9) se preparó de acuerdo con Etapa 3 del compuesto intermedio D5 del documento WO ’040 p 53-4.

Preparación del Ejemplos

15 Los compuestos IVa-IVh son de acuerdo con la invención. Los otros compuestos son ejemplos de referencia.

Ejemplo 1. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

Etapa 1. Preparación de 11: Una mezcla que contenía Intermedio B4 (2,03 g, 6,44 mmol), compuesto intermedio E1 (1,6 g, 5,85 mmol) y carbonato de cesio (3,15 g, 9,66 mmol) en MeCN (40 ml) se agitó vigorosamente a ta en

5 una atmósfera de Ar durante 16 h. A continuación, la reacción se filtró a través de una capa de Celite y el filtrado se concentró al vacío. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar 11 en forma de un sólido de color blanco (2,5 g). LCMS-ESI+ (m/z): [M-Boc+2H]+ calc. para C20H27ClN3O4: 408,9; encontrado: 408,6. Etapa 2. Preparación de 12: A una solución de 11 (2,5 g, 4,92 mmol) en dioxano (10 ml) se añadió ácido

10 clorhídrico en dioxano (4 M, 25 ml, 98,4 mmol) y la reacción se agitó a ta durante 5 h. La reacción en bruto se

concentró al vacío para dar 12 en forma de un sólido de color blanco (2,49 g) que se usó en posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M]+ calc. para C20H26ClN3O4: 407,9; encontrado: 407,9. Etapa 3. Preparación de 13: A una solución de 12 (2,49 g, 5,61 mmol) en DMF (35 ml), compuesto intermedio D1 (1,75 mg, 6,17 mmol) y DIPEA (3,9 ml, 22,44 mmol) se añadió COMU (3,12 g, 7,29 mmol) y la reacción se

5 agitó a ta durante 3 h. La reacción se interrumpió con una solución de acuoso ácido cítrico al 5 % y se extrajo con EtOAc, se lavó posteriormente con solución salina saturada, se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró para producir 13 en forma de una espuma de color naranja (2,31 g) que se usó sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M]+ calc. para C35H49ClN4O7: 673,3; encontrado: 673,7. Etapa 4. Preparación de 14: A una solución de 13 (2,31 g, 3,43 mmol), TEA (0,72 ml, 5,15 mmol) y

10 viniltrifluoroborato potásico (0,69 mg, 5,15 mmol) en EtOH (35 ml) se añadió PdCl2(dppf) (0,25 g, 0,34 mmol, Frontier Scientific). La reacción se roció con argón durante 15 min y se calentó a 80 ºC durante 2 h. La reacción se adsorbió directamente sobre gel de sílice y se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice para dar 14 en forma de un aceite de color amarillo (1,95 g). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H53N4O7: 665,4; encontrado: 665,3.

15 Etapa 5. Preparación de 15: A una solución de 14 (1,95 g, 2,93 mmol) en DCE (585 ml) se añadió catalizador de Zhan 1B (0,215 g, 0,29 mmol, Strem) y la reacción se roció con Ar durante 15 min. La reacción se calentó a 80 ºC durante 1,5 h, se permitió que se enfriara a ta y se concentró. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para producir 15 en forma de un aceite de color amarillo (1,47 g; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H49N4O7: 637,4; encontrado: 637,3).

20 Etapa 6. Preparación de 16: Una solución de 15 (0,97 g, 1,52 mmol) en EtOH (15 ml) se trató con Pd/C (Pd al 10 % en peso, 0,162 g). La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y se agitó a ta durante 2 h. La reacción se filtró a través de Celite, el lecho se lavó con EtOAc y se concentró para dar 16 en forma de un sólido espumoso de color marrón (0,803 g) que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H51N4O7: 639,4; encontrado: 639,3.

25 Etapa 7. Preparación de 17: A una solución de 16 (0,803 g, 1,26 mmol) en DCM (10 ml) se añadió TFA (5 ml) y se agitó a ta durante 3 h. Se añadieron 2 ml adicionales de TFA y la reacción se agitó durante otra 1,5 h. La reacción se concentró hasta un aceite de color marrón que se recogió en EtOAc (35 ml). La solución orgánica se lavó con agua. Después de la separación de las fases, se añadió NaHCO3 acuoso sat. con agitación hasta que la fase acuosa alcanzó un pH ~ 7-8. Las fases se separaron de nuevo y la fase acuosa se extrajo con EtOAc dos

30 veces. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con ácido cítrico acuoso 1 M y solución salina saturada, se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron para producir 16 en forma de un sólido espumoso de color marrón (0,719 g) que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C31H43N4O7: 583,3; encontrado: 583,4. Etapa 8. Preparación del Ejemplo 1: A una solución de 17 (0,200 g, 0,343 mmol), compuesto intermedio A10

35 (0,157 g, 0,515 mmol), DMAP (0,063 g, 0,51 mmol) y DIPEA (0,3 ml, 1,72 mmol) en DMF (3 ml) se añadió HATU (0,235 g, 0,617 mmol) y la reacción se agitó a ta durante una noche. La reacción se diluyó con MeCN y se purificó directamente por HPLC en fase inversa (Gemini, un 30-100 % de MeCN/H2O + TFA al 0,1 %) y se liofilizó para dar el Ejemplo 1 (118,6 mg) en forma de un una sal de TFA sólida. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,63 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H55F2N6O9S: 833,4; encontrado: 833,5. RMN 1H (400 MHz,

40 CD3OD) δ 9,19 (s, 1H); 7,80 (d, J = 8,8 Hz, 1H); 7,23 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1H); 7,15 (d, J = 2,4 Hz, 1H); 5,89 (d, J = 3,6 Hz, 1H); 5,83 (td, JH-F = 55,6 Hz, J = 6,4 Hz, 1H); 4,56 (d, J = 7,2 Hz, 1H); 4,40 (s, 1H) 4,38 (ap d, J = 7,2 Hz, 1 H); 4,16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H); 3,93 (s, 3H); 3,75 (dt, J = 7,2, 4 Hz, 1H); 3,00-2,91 (m, 1H); 2,81 (td, J = 12, 4,4 Hz, 1H); 2,63-2,54 (m, 1H); 2,01 (s a, 2H); 1,88-1,64 (m, 3H); 1,66-1,33 (m, 11H) 1,52 (s, 3H); 1,24 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 1,10 (s, 9H); 1,02-0,96 (m, 2H); 0,96-0,88 (m, 2H); 0,78-0,68 (m, 1 H); 0,55-0,46 (m, 1 H).

45 Ejemplo 2. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2(difluorometil)ciclopropil]-9-etil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

El Ejemplo 2 se preparó de una manera similar al Ejemplo 1, sustituyendo el compuesto intermedio A9 por el compuesto intermedio A10 en la Etapa 8. El Ejemplo 2 se aisló (37,9 mg) con una pureza de aproximadamente un 5 85 % en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,54 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H53F2N6O9S: 819,35; encontrado: 819,51. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 10,26 (s, 1H); 7,90 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 7,26 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H); 7,10 (d, J = 2,4 Hz, 1H); 6,68 (s a, 1H); 6,01 (td, JH-F = 55,6 Hz, J = 6,8 Hz, 1H); 5,87 (d, J = 3,6 Hz, 1H); 5,38, (d, J = 10 Hz, 1H); 4,50-4,40 (m, 3H); 4,10 (dd, J = 12, 3,6 Hz, 1 H); 3,95 (s, 3H); 3,793,72 (m, 1H); 2,96-2,82 (m, 3H); 2,63-2,56 (m, 1H); 2,14 (t, J = 6,8 Hz, 1H); 1,98-1,86 (m, 1H); 1,84-1,28 (m, 13H);

10 1,23 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 1,16-0,92 (m, 3H); 1,09 (s, 9H); 0,74-0,64 (m, 1H); 0,48 (c, J = 6,4 Hz, 1H).

Ejemplo 3. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2etilciclopropil}-9-etil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

El Ejemplo 3 se preparó de una manera similar al Ejemplo 1, sustituyendo el compuesto intermedio A3 por el compuesto intermedio A10 en la Etapa 8. El Ejemplo 3 se aisló (0,035 g) con una pureza de aproximadamente un

20 88 % en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,63 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H57N6O9S: 797,4; encontrado: 797,5. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,98 (s, H); 7,80 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 7,23 (d, J = 9,2, 2,8 Hz, 1H); 7,15 (d, J = 2,8 Hz, 1H); 5,89 (d, J = 3,6 Hz, 1H); 4,58 (d, J = 7,6 Hz, 1H); 4,41-4,32 (m, 2H); 4,16 (dd, J = 12,4 Hz, 3,6 Hz, 1H); 3,93 (s, 3H); 3,74 (dt, J = 6,8, 2,8 Hz, 1H); 3,20-2,91 (m, 2H); 2,86-2,76 (m, 1H); 2,61-2,53 (m, 1H); 1,88-1,68 (m, 4H); 1,66-1,34 (m, 9H); 1,34-1,20 (m, 5H); 1,18-1,04 (m, 3H); 1,10 (s, 9H);

25 1,00-0,92 (m, 7H); 0,79-0,69 (m, 1 H); 0,50 (d a, J = 7,2 Hz, 1 H).

Ejemplo 4. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-9-etil-N-[(1R,2R)-2-etil-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8

30 carboxamida

El Ejemplo 4 se preparó de una manera similar al Ejemplo 1, sustituyendo el compuesto intermedio A4 por el compuesto intermedio A10 en la Etapa 8. El Ejemplo 4 se aisló (0,018 g) con una pureza de aproximadamente un 5 88 % en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,75. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H59N6O9S: 811,4; encontrado: 811,6. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,91 (s, 1H); 7,80 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 7,23 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1H); 7,16 (d, J = 2,8 Hz, 1H); 5,90 (d, J = 3,6 Hz, 1H); 4,59 (d, J = 6,8 Hz, 1H); 4,38 (s, 1H); 4,37 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,16 (dd, J = 11,6, 6,8 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H); 3,74 (dt, J = 6,8, 3,6 Hz, 1H); 3,10-2,91 (m, 1H); 2,90-2,7 (m, 1H); 2,63-2,55 (m, 1H); 1,86-1,69 (m, 3H); 1,65-1,36 (m, 13H), 1,52 (s, 3H); 1,24 (t, J = 7,2 Hz, 3H);

10 1,16-1,06 (m, 2H); 1,10 (s, 9H); 1,02-0,85 (m, 7H); 0,79-0,68 (m, 1H); 0,50 (d a, J = 6,8 Hz, 1H).

Ejemplo 5. Preparación de (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2(difluorometil)ciclopropil]-11-etil-16-metoxi-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida

Etapa 1. Preparación de 51: HATU (555 mg, 1,46 mmol, Oakwood) y DIPEA (1,10 ml, 6,35 mmol) se añadieron a una mezcla de 12 (533 mg, 1,20 mmol) y el compuesto intermedio D5 (414 mg, 1,33 mmol) en 12 ml de DMF 5 en atmósfera de argón. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y solución salina saturada, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-35 % de acetato de etilo en hexanos) para producir 51 (713 mg) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H54ClN4O7: 701,36; encontrado:

10 701,58. Etapa 2. Preparación de 52: Pd(dppf)Cl2•CH2Cl2 (94 mg, 0,115 mmol, Strem) se añadió a una mezcla desoxigenada de 51 (710 mg, 1,01 mmol), viniltrifluoroborato potásico (213 mg, 1,59 mmol) y trietilamina (0,210 ml, 1,52 mmol) en 11 ml de EtOH a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 78 ºC en atmósfera de argón durante una hora. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se

15 vertió en agua y se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y solución salina saturada, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir 52 (699 mg), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H57N4O7: 693,41; encontrado: 693,47. Etapa 3. Preparación de 53: Una mezcla de 52 (699 mg, 1,01 mmol) y catalizador de Zhan 1 B (81 mg, 0,111 mmol, Strem) en 200 ml de DCE se desoxigenó en atmósfera de argón durante 25 minutos. A continuación, la mezcla se calentó a 95 ºC durante 45 minutos. La mezcla de reacción se calentó a 95 ºC durante 10 minutos adicionales, se enfrió a temperatura ambiente, y a continuación se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-30 % de acetato de etilo en hexanos) para

5 producir 53 (336 mg) en forma de un sólido de color marrón claro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H53N4O7: 665,38; encontrado: 665,53. Etapa 4. Preparación de 54: Se añadió paladio sobre carbono (10 % en peso de Pd, 102 mg, 0,096 mmol) a una solución de 53 (330 mg, 0,497 mmol) en 8 ml de etanol y 3,5 ml de acetato de etilo. La mezcla se agitó en una atmósfera de hidrógeno durante 100 minutos y a continuación se filtró sobre Celite, lavando con acetato de etilo.

10 El filtrado se concentró a presión reducida para producir 54 (64 mg) en forma de una película sólida de color amarillo claro-marrón, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H55N4O7: 667,40; encontrado: 667,52. Etapa 5. Preparación de 55: se añadió TMSOTf (0,53 ml, 2,91 mmol) gota a gota a una solución de 54 (329 mg, 0,494 mmol) en 10 ml de diclorometano en atmósfera de argón a temperatura ambiente. Después de una hora,

15 se añadió una cantidad adicional de 0,3 ml de TMSOTf. Después de un periodo adicional de una hora, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. La película resultante se recogió en 12 ml de tolueno y se concentró a presión reducida. Este proceso se repitió una segunda vez para producir 55 (301 mg), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C33H47N4O7: 611,34; encontrado: 611,46.

20 Etapa 6. Preparación del Ejemplo 5: HATU (129 mg, 0,339 mmol) y DIPEA (0,22 ml, 1,27 mmol) se añadieron a una mezcla de 55 (134 mg, 0,22 mmol) y compuesto intermedio A9 (95 mg, 0,328 mmol) en 6,6 ml de MeCN en atmósfera de argón. Después de agitar durante 5 h, la mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y solución salina saturada, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por HPLC

25 preparativa en fase inversa (15-100 % de acetonitrilo en agua, con un tampón de un 0,1 % de ácido trifluoroacético) para producir el Ejemplo 5 (43 mg) en forma de un sólido de color amarillo claro, sal del ácido trifluoroacético, después de liofilización. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,11 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 847,38; encontrado: 847,62. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): δ 9,31 (s, 1H), 7,80 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 15,4, 2,8 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,87 (td, JH-F =56Hz, J=6Hz, 1H),

30 5,87-5,83 (m, 1H), 4,59 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,38 (s, 1H), 4,23-4,14 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,06-2,94 (m, 2H), 2,772,67 (m, 1H), 2,65-2,58 (m, 1H), 2,07-2,01 (m, 2H), 1,98-1,74 (m, 4H), 1,72-1,52 (m, 4H), 1,50-1,20 (m, 12H), 1,18-1,02 (m, 8H), 1,06 (s, 9H).

Ejemplo 6. Preparación de (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1

35 metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-11-etil-16-metoxi-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24ahexadecahidro-10h-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10carboxamida

40 El Ejemplo 6 se preparó de una manera similar al Ejemplo 5, sustituyendo el compuesto intermedio A10 por el compuesto intermedio A9 en la Etapa 6. El Ejemplo 6 se aisló (29 mg) en forma de un sólido de color blanco. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,26 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H59F2N6O9S: 861,40; encontrado: 861,20. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,91 (s, 1H), 7,82 (d, J = 12 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 12 Hz 1H), 7,13-7,06 (m, 1H),

45 6,48 (s, 1 H), 5,95 (td, JH-F = 56 Hz, J = 6 Hz, 1 H), 5,82 (d, J= 4,4 Hz, 1 H), 5,33 (d, J =10Hz, 1 H), 4,95-4,91 (m, 1 H), 4,38-4,31 (m, 2H), 4,10-3,88 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 2,98-2,89 (m, 1 H), 2,67-2,59 (m, 1 H), 2,05-1,65 (m, 4H), 1,64-1,21 (m, 12H), 1,40 (s, 3H), 1,17-0,80 (m, 12H), 1,09 (s, 9H).

Ejemplo 7. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1 R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-14-metoxi-1a-metil-3,6-dioxo1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

Etapa 1. Preparación de 12 (base libre): el carbamato 11 (350 mg, 0,689 mmol) se añadió a un matraz que contenía una mezcla a 4:1 de acetato de t-butilo:DCM (3,5 ml). A esta solución se añadió a continuación ácido 10 metanosulfónico (447 µl, 6,89 mmol). La mezcla de reacción se dejó en agitación durante 20 min a ta, a continuación se diluyó con cloruro de metileno (20 ml) y bicarbonato sódico acuoso saturado (20 ml). La solución se dejó en agitación hasta que la evolución del gas cesó, a continuación las sustancias orgánicas se retiraron y la fase acuosa se extrajo dos veces con cloruro de metileno (20 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron a continuación con solución salina saturada, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al

15 vacío. El sólido de color blanco resultante 12 (base libre, 280 mg) se usó en la siguiente reacción sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+calc. para C20H27ClN3O4: 408,2; encontrado: 408,1. Etapa 2. Preparación de la mezcla 71: la amina 12 (281 mg, 0,689 mmol) se combinó con la mezcla diastereomérica del compuesto intermedio D6 (266 mg, 0,895 mmol), DIPEA (600 µl, 3,45 mmol) y DMF (2 ml). A continuación se añadió HATU (340 mg, 0,895 mmol) a la mezcla de reacción, que se agitó a 40 ºC durante 5 h. A

20 continuación la mezcla de reacción se diluyó con agua (10 ml) y se recogió en cloruro de metileno (10 ml). Las

fases orgánicas se separaron y la fase acuosa se extrajo una vez con cloruro de metileno (10 ml). Las fases orgánicas se lavaron a continuación con solución salina saturada, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo en bruto significó a continuación por cromatografía sobre gel de sílice para dar 71 como una mezcla diastereomérica a 1:1 (280 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H52ClN4O7: 687,4; encontrado: 687,3. Etapa 3. Preparación de 72: se añadió Pd(dppf)Cl2 (29 mg, 0,0407 mmol) a una mezcla desgasificada de 71 (280 mg, 0,407 mmol), viniltrifluoroborato potásico (55 mg, 0,733 mmol) y trietilamina (91 µl, 0,651 mmol) en 2 ml de etanol a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 80 ºC en atmósfera de N2 durante una hora. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con tolueno (10 ml), se concentró al vacío a un pequeño volumen de disolvente, y se volvió a diluir en tolueno (1 ml). A continuación, la mezcla se cargó directamente en una columna de sílice y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar 72 como una mezcla diastereomérica a 1:1 que se llevó a la siguiente etapa sin concentrar totalmente a sequedad. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H55N4O7: 679,4; encontrado: 679,4. Etapa 4. Preparación de 73 y 74: la mezcla diastereomérica 72 (276 mg, 0,407 mmol) y catalizador de Zhan 1 B (32 mg, 0,0407 mmol, Strem) se disolvieron en 80 ml de DCE y se desgasificó en atmósfera de N2 durante 25 minutos. A continuación, la mezcla se calentó a 100 ºC durante 1 h. A continuación, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 0 % a un 30 % de acetato de etilo en hexanos) para producir los diastereómeros individuales 73 (20 mg, fracción de elución temprana) y 74 (25 mg, fracción de elución tardía) en forma de residuos de color marrón claro. Fracción de elución temprana: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H51N4O7: 651,4; encontrado: 651,3. Fracción de elución tardía: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H51N4O7: 651,4; encontrado: 651,3. Etapa 5. Preparación de 75: se añadió paladio sobre carbono (10 % en p/p, 25 mg) a una solución de 73 (20 mg, 0,0307 mmol) en una mezcla de acetato de etilo y dioxano a 1:1 (2 ml). La mezcla se agitó en una atmósfera de hidrógeno durante 30 min y a continuación se filtró a través de un lecho de Celite, y se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró a presión reducida para producir 75 (16 mg) en forma de una película de color marrón claro, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H53N4O7: 653,4; encontrado: 653,4. Etapa 6. Preparación de 76: el compuesto intermedio 75 (16 mg, 0,023 mmol) se disolvió en HCl 2 M en dioxano (2 ml) y se calentó a 80 ºC durante 1,5 h a través de un reactor de microondas. La mezcla de reacción se concentró a continuación al vacío para dar 76 (15 mg) en forma de un residuo de color marrón, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H44N4O7: 597,3; encontrado: 597,3. Etapa 7. Preparación del Ejemplo 7: HATU (11,9 mg, 0,031 mmol) y DIPEA (22 µl, 0,126 mmol) se añadieron a una mezcla de 76 (15 mg, 0,025 mmol) y A10 (11,5 mg, 0,0377 mmol) en 1 ml de DMF. Después de agitar durante una noche a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vertió en agua, se acidificó a pH 1 con HCl acuoso 1 N, y se extrajo tres veces con cloruro de metileno (15 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y solución salina saturada, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por HPLC prep. en fase inversa (5-100 % de acetonitrilo en agua, con tampón de ácido trifluoroacético al 0,1 %) seguido de cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar el Ejemplo 7 (4,3 mg) en forma de una película sólida de color blanco. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,07 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 847,4; encontrado: 847,4. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,88 (s, 1H), 7,83 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 9,1 Hz, 2,8 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,98 (td, JH-F = 55,7, J = 6,7 Hz, 1H), 5,95 (d, J = 9,6, 1 H), 5,32 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,45 (dd, J = 13,0 Hz, 9,6 Hz, 2H), 4,32 (d, J = 9,7 Hz, 1 H), 4,13 (dd, J = 15,5 Hz, 8,8 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 2,99 -2,84 (m, 1H), 2,82 - 2,68 (m, 1H), 2,62 - 2,47 (m 1H), 2,16 - 2,02 (m, 1H) 2,00-1,85 (m, 1H) 1,84-1,69 (m, 1H), 1,70 -1,15 (m, 11H), 1,52 (s, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,20 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 1,14 -0,77 (m, 5H) 1,09 (s, 9H), 0,11 (m, 1H).

Ejemplo 8. Preparación de (1aS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-14-metoxi-1a-metil-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida

Ejemplo 8 se preparó de una manera similar al Ejemplo 7, sustituyendo el 74 de elución tardía por el 73 de elución temprana en la Etapa 5. El Ejemplo 7 se aisló (2,9 mg) en forma de un sólido de color blanco. Tiempo de Ret para 5 HPLC analítica: 9,09 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 847,4; encontrado: 847,4.

Ejemplos 9 y 10. Preparación de (7S,10S,11S,12R)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-11-etil-16-metoxi-5,8-dioxo-3aR-(trifluorometil)1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12

10 metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida y (7S,10S,11S,12R)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1-metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-11-etil16-metoxi-5,8-dioxo-3aS-(trifluorometil)-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida Etapa 1. Preparación de 91: A una solución del compuesto intermedio D8 (322 mg, 0,85 mmol) y 12 (316 mg,

5 0,78 mmol) en MeCN (3,9 ml) se añadió HATU (323 mg, 0,85 mmol) seguido de DIPEA (678 µl, 3,90 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 2 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, y el residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar la amida 91 (476 mg, mezcla diastereomérica a 1:1) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H53ClF3N4O7: 769,4; encontrado: 769,5.

10 Etapa 2. Preparación de 92: A una solución de 91 (470 mg, 612 µmol), TEA (128 µl, 918 µmol) y viniltrifluoroborato potásico (123 mg, 918 µmol) en EtOH (3,06 ml) se añadió PdCl2(dppf) (50 mg, 61 µmol). La mezcla de reacción se desoxigenó con argón durante 10 min y se calentó a 78 ºC. Después de 1 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a ta y se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar la vinil quinoxalina 92

15 (329 mg, mezcla diastereomérica a 1:1) en forma de un aceite de color amarillo. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H56F3N4O7: 761,4; encontrado: 761,6. Etapa 3. Preparación de 93: A una solución de 92 (329 mg, 485 µmol) en DCE (97 ml) se añadió catalizador de Zhan 1B (35 mg, 49 µmol, Strem) y la mezcla de reacción se desoxigenó durante 10 minutos con argón. A continuación, la mezcla de reacción se calentó a 100 ºC. Después de 30 min, la mezcla de reacción se dejó enfriar a ta y se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar el macrociclo 93 (301 mg, mezclas diastereoméricas a 7:4) en forma de un aceite de color amarillo claro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H52F3N4O7: 733,4; encontrado: 733,5. Etapa 4. Preparación de 94: A una solución de 93 (300 mg, 410 µmol) en etanol (2,00 ml) se añadió Pd/C (10 % de Pd, 43 mg, 41 µmol) a ta bajo una atmósfera de argón. La atmósfera de la reacción se reemplazó con gas hidrógeno y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a ta. Después de 30 min, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (10 ml) y se filtró a través de una capa de Celite con lavados de acetato de etilo (3 x 5 ml). El filtrado se concentró al vacío para proporcionar el macrociclo 94 (295 mg, mezcla diastereomérica a 7:4), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H54F3N4O7: 735,4; encontrado: 735,5. Etapa 5. Preparación de 95: A una solución de 94 (295 mg, 401 µmol) en DCM (2 ml) se añadió TMSOTf (72,6 µl, 401 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 1,5 h, se añadió TMSOTf (362,9 ml, 2,00 mmol) adicional. Después de 1 h, se añadió TMSOTf (362,9 µl, 2,00 mmol) adicional. Después de 2 h, la mezcla de reacción se añadió lentamente a una solución de NaOH acuoso 0,25 N (enfriado previamente a 0 ºC, 3 ml). La mezcla resultante se diluyó con una solución acuosa de HCl 1 N (5 ml), y se extrajo con DCM (3 x 5 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron para proporcionar ácido carboxílico 95 (353 mg, mezcla diastereomérica a 7:4) en forma de un sólido de color castaño, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H45F3N4O7: 679,3; encontrado: 679,5. Etapa 6. Preparación del Ejemplo 9 y del Ejemplo 10: A una solución del ácido 95 (150 mg, 220 µmol) y compuesto intermedio A10 (101 mg, 330 µmol) en MeCN (1,1 ml) se añadió HATU (127 mg, 330 mmol) seguido de DIPEA (191 µl, 1,10 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, y el residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0100 % de acetato de etilo/hexanos). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se volvieron a purificar por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-50 % de acetona/hexanos) para proporcionar la primera elución.

El Ejemplo 9 (40 mg) en forma de un polvo de color blanco y el Ejemplo 10 (70 mg) de segunda elución en forma de un polvo de color blanco. Ejemplo 9 de primera elución: Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,42 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C43H58F5N6O9S: 929,4; encontrado: 929,5. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,83 (s, 1H), 7,92 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,0, 2,6 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 5,99 (s a, 1H), 5,96 (td, JH-F 55,5, J = 6,6 Hz, 1H), 5,70 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,63 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 4,38 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,22 - 4,04 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,12 - 2,89 (m, 1H), 2,71 - 2,51 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,15 -1,82 (m, 4H), 1,83 - 1,34 (m, 8H), 1,36 - 0,98 (m, 12H), 1,26 (s, 9H), 0,92 -0,79 (m, 4H). Ejemplo 10 de segunda elución: Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,55 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C43H58F5N6O9S: 929,4; encontrado: 929,5. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,61 (s, 1H), 7,91 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 9,0, 3,0 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 5,98 -5,91 (m, 1H), 5,83 (td, JH-F 55,5, J = 6,6 Hz, 1H), 5,33 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 4,72 - 4,63 (m, 1H), 4,46 -4,38 (m, 1 H), 4,32 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,25 - 4,14 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,73 (d a, J = 7,6 Hz, 1H), 3,23 - 3,07 (m, 1H), 2,86 - 2,37 (m, 2H), 2,14 - 1,79 (m, 2H), 1,78 - 1,38 (m, 8H), 1,51 (s, 3H), 1,35 - 1,08 (m, 8H), 1,25 (s, 9H), 1,05 (s a, 3H), 0,93 - 0,68 (m, 6H).

Ejemplos 11 y 12, Preparación de (7S,10S,11S,12R)-7-terc-butil-N-[(1 R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2(difluorometil)ciclopropil]-11-etil-16-metoxi-5,8-dioxo-3aR-(trifluorometil)-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24ahexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10carboxamida y (7S,10S,11S,12R)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2-(difluorometil)ciclopropil]11-etil-16-metoxi-5,8-dioxo-3aS-(trifluorometil)-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida Preparación del Ejemplo 11 y del Ejemplo 12: A una solución del ácido 95 (150 mg, 220 µmol) y compuesto intermedio A9 (96 mg, 330 µmol) en MeCN (1,1 ml) se añadió HATU (127 mg, 330 µmol) seguido de DIPEA (191 µl, 1,10 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, y el residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-50 % de acetona/hexanos). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se volvieron a purificar por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-50 % de acetona/hexanos) para proporcionar el Ejemplo 11 (29 mg) de primera elución en forma de un polvo de color blanco y el Ejemplo 12 (60,2 mg) de segunda elución en forma de un polvo de color blanco. Ejemplo 11 de primera elución: Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,44 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. C42H56F5N6O9S: 915,4; encontrado: 915,6. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 10,17 (s a, 1H), 7,83 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,21 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1H), 7,17 - 7,07 (m, 1H), 5,99 (s a, 1H), 5,97 (td, JH-F 55,5, J = 6,6 Hz, 1H), 5,82 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 4,55 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,39 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,20 - 4,03 (m, 2H), 3,95 (s, J = 5,9 Hz, 3H), 2,97 - 2,82 (m, 2H), 2,79 - 2,49 (m, 3H), 2,24 - 1,81 (m, 8H), 1,80 - 1,11 (m, 12H), 1,10 - 0,98 (m, 4H), 1,07 (s, 9H), 0,95 0,81 (m, 3H). Ejemplo 12 de segunda elución: Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,48 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. C42H56F5N6O9S: 915,4; encontrado: 915,6. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 10,07 (s, 1H), 7,93 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,28 - 7,20 (m, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,17 - 5,68 (m, 3H), 4,67 - 4,55 (m, 1 H), 4,37 -4,23 (m, 2H), 4,17 4,05 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,75 - 3,66 (m, 1H), 3,22 - 3,04 (m, 1H), 3,02 - 2,31 (m, 6H), 2,30 - 1,83 (m, 10H), 1,85 1,13 (m, 13H), 1,06 (s, 9H), 0,95 - 0,79 (m, 1 H).

Ejemplo 13. Preparación de (1R,4S,4aR,8S,11S,12S,13R,25aR)-8-terc-butil-N-[(1R,2R)-1[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2-(difluorometil)ciclopropil]-12-etil-17-metoxi-6,9-dioxo2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-hexadecahidro-1H,11H-1,4:10,13-dimetanoquinoxalino[2,3k][1,10,3,6]benzodioxadiazaciclononadecino-11-carboxamida Etapa 1. Preparación de la mezcla diastereomérica de 131 y 132: A una solución de 12 (354 mg, 0,87 mmol), mezcla de los compuestos intermedios D9 y D10 (323 mg, 0,96 mmol) y BEP (263 mg, 0,96 mmol; TCI America)

5 se añadió DIPEA (0,45 ml, 2,61 mmol) y la reacción se agitó a 50 ºC durante 2 h. La reacción se interrumpió con solución acuosa sat. de NaHCO3 y se extrajo con EtOAc, la fase orgánica se lavó con solución salina saturada, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-30 % de EtOAc/hexanos) para producir una mezcla inseparable de los diastereómeros 131 y 132 (338 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H56ClN4O7: 727,38; encontrado: 727,46.

10 Etapa 2. Preparación de la mezcla diastereomérica de 133 y 134: A una solución de la mezcla de 131 y 132 (338 mg, 0,46 mmol), TEA (0,10 ml, 0,69 mmol) y viniltrifluoroborato potásico (93 mg, 0,69 mmol) en EtOH (30 ml) se añadió PdCl2(dppf) (38 mg, 0,046 mmol, Strem Chemicals). La reacción se desoxigenó con N2 durante 10 min y se calentó a 80 ºC durante 1 h. La reacción se interrumpió con solución acuosa sat. de NaHCO3 y se extrajo con EtOAc, posteriormente se lavó con solución salina saturada, se secó sobre sulfato de magnesio y se

15 concentró. El residuo se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice para dar una mezcla inseparable de los diastereómeros 133 y 134 (285 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H59N4O7: 719,44; encontrado: 719,70. Etapa 3 y 4. Preparación de 135: A una solución de la mezcla diastereomérica de 133 y 134 (285 mg, 0,40 mmol) en DCE (100 ml) se añadió catalizador de Zhan 1B (30 mg, 0,04 mmol, Strem) y la reacción se

20 desoxigenó durante 30 minutos con N2. La reacción se calentó a 100 ºC durante 45 min, se permitió que se enfriara a ta y se concentró. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para producir el producto de olefina macrocíclica (125 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H55N4O7: 691,41; encontrado: 691,58) que se recogió en EtOH (6 ml) y se trató con Pd/C (10 %, 120 mg). La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y se agitó a ta durante 1,5 h. La reacción se filtró sobre Celite, se lavó con EtOAc y se concentró para dar 135 en forma de un aceite (125 mg) que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H57N4O7: 693,42; encontrado: 693,46. Etapa 5. Preparación de 136: A una solución de 135 (50 mg, 0,072 mmol) en DCM (4 ml) se añadió TFA (1 ml) y se agitó a ta durante 6 h. La reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con H2O, tampón acuoso a pH 7, se secó sobre sulfato de magnesio, y se concentró para dar 136 en forma de un residuo que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H49N4O7: 637,36; encontrado: 637,40. Etapa 6. Preparación del Ejemplo 13: A una solución de 136 (46 mg, 0,072 mmol), compuesto intermedio A9 (28 mg, 0,11 mmol), TBTU (34 mg, 0,10 mmol) y DMAP (13 mg, 0,11 mmol) en DCM (5 ml) se añadió DIPEA (0,038 ml, 0,22 mmol) y la reacción se agitó a ta durante 16 h. La reacción se interrumpió con agua, se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHCO3 acuoso sat. y solución salina saturada, se secó sobre sulfato de magnesio, y se concentró. El material en bruto se purificó por HPLC en fase inversa (Gemini, 30-85 % de MeCN/H2O + TFA al 0,1 %) y se liofilizó para dar el Ejemplo 13 (14,5 mg) en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,39 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C43H59F2N6O9S: 873,40; encontrado: 873,42. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,28 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,26 (dd, J = 6,4, 2,8 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,04 - 5,74 (m, 2H), 5,50 (s, 1H), 4,55 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,47 (s, 1 H), 4,26 - 4,16 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,03 - 2,95 (m, 2H), 2,78 - 2,66 (m, 2H), 2,17 (a, 2H), 2,05 (s, 3H), 1,90 - 1,85 (m, 1H), 1,76 - 1,74 (m, 2H), 1,61 1,21 (m, 20H), 1,15 - 1,11 (m, 2H), 1,08 (s, 9H), 0,93 - 0,90 (m, 1 H).

Ejemplo 14. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-ciclopentil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida Etapa 1. Preparación de 141: A una solución de 12 (223 mg, 0,50 mmol) y compuesto intermedio D2 (221 mg, 0,75 mmol) en acetonitrilo (5 ml) se añadió HATU (306 mg, 0,80 mmol) seguido de DIPEA (0,43 ml, 2,5 mmol) a temperatura ambiente. Después de 19 h, el disolvente se retiró a presión reducida y el residuo resultante se diluyó con acetato de etilo (15 ml). La solución resultante se lavó con HCl acuoso 1 M (10 ml). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 3 10 ml) y la fase orgánica combinada se lavó con solución salina saturada (15 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró. El residuo en bruto resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar 141 (173 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H50ClN4O7: 685,33; encontrado: 685,49. Etapa 2. Preparación de 142: A una solución de 141 (173 mg, 0,25 mmol) en EtOH (3 ml) se añadió viniltrifluoroborato potásico (51 mg, 0,38 mmol), PdCl2(dppf) (21 mg, 0,025 mmol) y TEA (0,053 ml, 0,38 mmol) secuencialmente y la mezcla resultante se calentó a 80 ºC. Después de 1 h, se añadió una cantidad adicional de viniltrifluoroborato potásico (17 mg, 0,12 mmol) y se continuó con la agitación a 80 ºC. Después de 2,5 h, se añadió una cantidad adicional de viniltrifluoroborato potásico (8 mg, 0,06 mmol) y la reacción se agitó durante un periodo adicional de 10 minutos a 80 ºC. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo (20 ml), y se lavó con solución salina saturada (20 ml). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (10 ml), y la fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para proporcionar 142 en forma de un residuo que se usó sin purificación en la siguiente etapa. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H53N4O7: 677,38; encontrado: 677,50. Etapa 3. Preparación de 143: A una solución de 142 en DCE desoxigenado (0,006 M) se añadió catalizador de Zhan 1B (18 mg, 0,025 mmol, Strem) y la reacción se desoxigenó durante otros 10 minutos con Ar. La reacción se calentó a 100 ºC. Después de 1,5 h, se añadió catalizador de Zhan 1B (9 mg, 0,012 mmol) y la reacción se agitó durante otros 30 min. La mezcla de reacción se dejó enfriar a ta y se concentró hasta un volumen de 45 ml. Esto se purificó directamente por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar 143 en forma de un aceite de color marrón (70 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H49N4O7: 649,35; encontrado: 649,50. Etapa 4. Preparación de 144: A una solución de 143 (70 mg, 0,11 mmol) en EtOH (5 ml) se añadió Pd/C (Pd al 10 % en peso, 12 mg) en atmósfera de argón. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la reacción se agitó a ta durante 16 h. La reacción se filtró sobre Celite, se lavó con EtOH y se concentró para dar 144 en forma de un aceite de color marrón que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H51N4O7: 651,37; encontrado: 651,60. Etapa 5. Preparación de 145: A una solución de 144 (70 mg, 0,11 mmol) en DCM (3 ml) se añadió TMSOTf (0,103 ml, 0,53 mmol) y la reacción se agitó a ta durante 1 h. La reacción se concentró para proporcionar 145 que se usó para la siguiente etapa sin purificación. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H43N4O7: 595,31; encontrado: 595,43. Etapa 6. Preparación del Ejemplo 14: A una solución de 145 (36,8 mg, 0,06 mmol) y compuesto intermedio A10 (28 mg, 0,09 mmol) en acetonitrilo (1,5 ml) se añadió HATU (38 mg, 0,1 mmol) seguido de DIPEA (0,065 ml, 0,37 mmol) a temperatura ambiente. Después de 20 minutos, la mezcla de reacción se purificó directamente por HPLC en fase inversa (columna Gemini 5u C18 110A, 15-100 % de MeCN/H2O + TFA al 0,1 %) y se liofilizó para proporcionar el Ejemplo 14 en forma de un sólido de color amarillo (24 mg) en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,03 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F2N6O9S: 845,4; encontrado: 845,6. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,31 (s, 1H), 7,80 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,03 - 5,66 (m, 2H), 4,53 (dd, J = 13,2, 9,6 Hz, 2H), 4,18 (dd, J = 17,2, 7,1 Hz, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,68 (dt, J = 6,8, 2,8 Hz, 1 H), 3,13 (quin, J = 1,7 Hz, 1H), 3,02 - 2,92 (m, 1H), 2,85 - 2,78 (m, 1H), 2,62 -2,55 (m, 1 H), 2,30 -2,17 (m, 1H), 2,02 (s, 2H), 1,97 -1,86 (m, 3H), 1,86 - 1,79 (m, 1H), 1,80 - 1,41 (m, 17H), 1,40 - 1,28 (m, 3H), 1,22 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 1,03 - 0,87 (m, 4H), 0,76 -0,68 (m, 1H), 0,51 - 0,44 (m, 1 H).

Ejemplo 15. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-ciclopentil-N-[(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2(difluorometil)ciclopropil]-9-etil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10

metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

5 Etapa 1. Preparación del Ejemplo 15. A una solución de 145 (27 mg, 0,045 mmol) y compuesto intermedio A9 (20 mg, 0,067 mmol) en acetonitrilo (1,3 ml) se añadió HATU (27 mg, 0,072 mmol) seguido de DIPEA (0,047 ml, 0,27 mmol) a temperatura ambiente. Después de 20 minutos, la mezcla de reacción se purificó directamente por HPLC en fase inversa (columna Gemini 5u C18 110A, 15-100 % de MeCN/H2O + TFA al 0,1 %) y se liofilizó para proporcionar el Ejemplo 15 en forma de un sólido de color amarillo (18,6 mg) en forma de una sal de TFA. Tiempo de

10 Ret para HPLC analítica: 8,89 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H53F2N6O9S: 831,4; encontrado: 831,6. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,32 (s, 1H), 7,79 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,03 -5,66 (m, 2H), 4,53 (t, J = 10,0 Hz, 2H), 4,22 -4,14 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,67 (dt, J = 6,5, 2,9 Hz, 1H), 3,13 (quin, 1,6 Hz, 1H), 3,04 - 2,92 (m, 3H), 2,85 - 2,77 (m, 1H), 2,63 - 2,55 (m, 1H), 2,26 -2,19 (m, 1H), 2,05 -2,02 (m, 2H), 1,99 - 1,86 (m, 3H), 1,84 - 1,42 (m, 12H), 1,41 - 1,25 (m, 4H), 1,22 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,15 - 1,03

15 (m, 3H), 1,01 - 0,90 (m, 2H), 0,76 - 0,68 (m, 1H), 0,49 - 0,45 (m, 1H).

Ejemplo 16. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-ciclohexil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8

20 carboxamida

Etapa 1. Preparación de 161: A una solución del compuesto intermedio D3 (190 mg, 0,60 mmol) y 12 (264 mg, 0,60 mmol) en DMF (5 ml) se añadió DIPEA (0,31 ml, 1,8 mmol) seguido de COMU (257 mg, 0,60 mmol) a ta. 5 Después de 2 h, el disolvente se retiró a presión reducida y el residuo resultante se diluyó con acetato de etilo (15 ml). La solución resultante se lavó con una solución acuosa de ácido cítrico al 10 %. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 3 10 ml) y la fase orgánica combinada se lavó con solución salina saturada (15 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró. El residuo en bruto resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar 161 (260 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+

10 (m/z): [M+H]+ calc. para C37H51ClN4O7: 700,28; encontrado: 700,03. Etapa 2. Preparación de 162: A una solución de 161 (260 mg, 0,37 mmol) en EtOH (5 ml) se añadieron viniltrifluoroborato potásico (75 mg, 0,56 mmol), PdCl2(dppf) (30 mg, 0,037 mmol) y TEA (0,079 ml, 0,56 mmol) secuencialmente. La reacción se desoxigenó con Ar durante 12 min y se calentó a 78 ºC durante 2 h. La reacción se enfrió a ta, se diluyó con acetato de etilo (20 ml), y se lavó con solución salina saturada (20 ml). La fase

15 acuosa se extrajo con acetato de etilo (10 ml), y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentraron para proporcionar un residuo en bruto. El residuo en bruto resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar 162 en forma de un aceite de color amarillo (250 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H54N4O7: 691,87; encontrado: 691,54.

Etapa 3. Preparación de 163: A una solución de 162 (250 mg, 0,36 mmol) en DCE desoxigenado (0,005 M) se añadió catalizador de Zhan 1B (26 mg, 0,036 mmol, Strem) y la reacción se desoxigenó durante otros 10 minutos con Ar. La reacción se calentó a 70 ºC durante 2 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar a ta y se concentró. El residuo resultante se purificó directamente por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar 163 en forma de un aceite de color amarillo (250 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H50N4O7: 663,82; encontrado: 663,42. Etapa 4. Preparación de 164: A una solución de 163 (200 mg, 0,3 mmol) en EtOAc (10 ml) se añadió Pd/C (Pd al 10 % en peso, 100 mg) en atmósfera de argón. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la reacción se agitó a ta durante 1,5 h. La reacción se filtró sobre Celite, se lavó con EtOH y se concentró para dar 164 en forma de un aceite (180 mg) que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H52N4O7: 665,83; encontrado: 665,36. Etapa 5. Preparación de 165: A una solución de 164 (165 mg, 0,25 mmol) en DCM (5 ml) se añadió TFA (2 ml) y la reacción se agitó a ta durante 4 h. El disolvente se retiró a presión reducida la reacción se diluyó con acetato de etilo (15 ml). La solución resultante se lavó con NaHCO3 acuoso sat. y se concentró para proporcionar 165 que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C33H44N4O7: 609,73; encontrado: 609,47. Etapa 6. Preparación del Ejemplo 16: A una solución de 165 (70 mg, 0,12 mmol) y compuesto intermedio A10 (65 mg, 0,21 mmol) en DCM (1 ml) se añadió DIPEA (0,08 ml, 0,46 mmol) seguido de HATU (88 mg, 0,23 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con NH4Cl acuoso y solución salina saturada. El material en bruto se purificó por HPLC en fase inversa (columna Gemini, 58-98 % de MeCN/H2O + TFA al 0,1 %) y se liofilizó para proporcionar el Ejemplo 16 (40 mg) en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,21 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H56F2N6O9S: 859,99; encontrado: 859,60. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,28 (s, 1H), 7,76 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,10 (s, 1H), 5,97 - 5,82 (m, 2H), 4,88 (m, 2H), 4,51-4,46 (m, 3H), 4,19-4,11 (m, 3H), 3,90 (s, 3H), 3,70-3,29 (m, 6H), 2,97-2,52 (m, 3H), 2,06 - 1,41 (m, 20H), 1,39 - 1,17 (m, 4H), 1,09 - 0,89 (m, 4H), 0,65 (m, 1 H), 0,46 - 0,44 (m, 1H).

Ejemplo 17. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida Etapas 1 y 2, Preparación de 172: Una mezcla del compuesto intermedio B4 (273 mg, 0,865 mmol), compuesto intermedio E3 (234 mg, 0,865 mmol) y carbonato de cesio (310 mg, 0,952 mmol) en MeCN (2,5 ml) se calentó a 85 ºC durante 36 horas. En un proceso alternativo, DMF se usó como disolvente. Se añadió agua (10 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró para proporcionar 171, que se usó posteriormente sin purificación adicional o después de purificación mediante cromatografía. El residuo se trató con 35 equiv de HCl 4 N en dioxano a ta durante 2,5 horas. Después de la adición de éter dietílico, la sal clorhidrato de 172 precipitó. La sal se recogió por filtración al vacío y se secó a presión reducida (375 mg). En un proceso alternativo, la desprotección se realizó en presencia de MSA en tBuOAc y DCM. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C23H30F2N3O4: 450,2; encontrado: 450,1. Etapa 3. Preparación de 173: Una mezcla de 172 (370 mg, 0,761 mmol), compuesto intermedio D11 (205 mg, 0,761 mmol), HATU (347 mg, 0,914 mmol) y DIPEA (0,795 ml, 4,57 mmol) en DMF (3 ml) se agitó a ta durante una noche. La mezcla se diluyó con 100 ml de agua y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró. La mezcla del producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc en hexanos: 30 %) para dar 173 (236 mg). En un proceso alternativo, 172 y el compuesto intermedio D11 se mezclaron con EDC y HOBT en presencia de NMM en DMF para dar 173. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H51F2N4O7: 701,4; encontrado: 701,3. Etapa 4. Preparación de 174: Una solución de 173 (236 mg, 0,34 mmol) en DCE (67 ml) se desoxigenó con argón durante 40 minutos. Se añadió catalizador de Zhan 1B (25 mg, 0,034 mmol, Strem) y la reacción se calentó en un baño de aceite a 100 ºC durante 40 minutos. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc en hexanos: de un 5 % a un 65 %) para dar el compuesto 174 (229 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M-F]+ calc. para C35H46FN4O7: 653,3; encontrado: 653,2. Etapa 5. Preparación de 175: Una solución de 174 (229 mg, 0,34 mmol) en 50 ml de etanol se hidrogenó con 1 atmósfera de gas hidrógeno sobre 220 mg de Pd al 10 % en peso/C (húmedo) durante 2,5 horas. La filtración a través de Celite y concentración a presión reducida dio un residuo en bruto de 175 (184 mg). En un proceso alternativo, 174 se hidrogenó a gas hidrógeno en presencia de Rh. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H49F2N4O7: 675,4; encontrado: 675,3. Etapa 6. Preparación de 176: el éster 175 (184 mg, 0,27 mmol) en 2 ml de DCM se trató con 1 ml TFA y se agitó a ta durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró y a continuación se repartió entre agua y acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con agua, se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró para dar 176 (153 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C31H41F2N4O7: 619,3; encontrado: 619,2. Etapa 7. Preparación del Ejemplo 17: Una mezcla de ácido carboxílico 176 (153 mg, 0,247 mmol), compuesto intermedio A10 (90 mg, 0,297 mmol), HATU (113 mg, 0,297 mmol), DMAP (45 mg, 0,37 mmol) y DIPEA (0,215 ml, 1,24 mmol) en DMF (1,5 ml) se agitó a ta durante 40 minutos. La mezcla se diluyó con HCl acuoso 2 N (2 ml) y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró. La mezcla del producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc en hexanos: 30 % - 95 %) para dar el Ejemplo 17 (95 mg). Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,79 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H53F4N6O9S: 869,3; encontrado: 869,2. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,948 (s a, 1H), 7,99 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,57 (s a, 1H), 5,97 (td, JH-F = 52 Hz, J = 6,8 Hz, 1H),

5 5,92 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,322 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,42 (ap d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,40 (ap s, 1H), 4,34 (ap d, J = 10 Hz, 1H), 4,08 (dd, J = 12,0, 3,6 Hz, 1H), 3,99 -3,94 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,67 (m, 1H), 2,52 (m, 2H), 2,06 (m, 1H), 1,93 (m, 2H), 1,77 (m, 2H), 1,63 (m, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,56 -1,42 (m, 4H), 1,25 (m, 1 H), 1,19 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,09 (s, 9H), 1,10-0,93 (m, 2H), 0,85 (m, 2H), 0,69 (m, 1H), 0,49 (m, 1 H).

10 Ejemplo 18. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-14-metoxi-9-metil-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida

Etapa 1. Preparación de 181: el compuesto intermedio B1 (1,94 g, 6,44 mmol) se disolvió en MeCN (30 ml) en atmósfera de Ar. El compuesto intermedio E1 (2,02 g, 7,4 mmol) y Cs2CO3 (7,5 mmol) se añadieron, y la mezcla resultante se agitó durante 8 h a ta. El compuesto intermedio adicional E1 (200 mg, 0,73 mmol) y Cs2CO3 (245 mg, 0,75 mmol) se añadieron y la mezcla de reacción se agitó un periodo adicional de 15 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite con EtOAc y se concentró. El residuo en bruto resultante se disolvió en CH2Cl2, se concentró sobre 12 g de gel de sílice, y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 5 % a un 20 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar 181 en forma de una espuma de color blanco (2,63 g). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C24H33ClN3O6: 494,2; encontrado: 494,1. Etapa 2. Preparación de 182: la quinoxalina sustituida 181 (905 mg, 1,84 mmol) se disolvió en acetato de tercbutilo (7 ml) y CH2Cl2 (1,75 ml). Se añadió MeSO3H (600 µl, 9,2 mmol) gota a gota durante 45 s, y la solución de color amarillo resultante se agitó a ta durante 50 min. Se añadió una cantidad adicional de MeSO3H (100 µl, 1,5 mmol) gota a gota y la reacción se agitó un periodo adicional de 10 min. La mezcla de reacción se transfirió a una mezcla agitada de EtOAc (20 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (30 ml). Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar la amina 182 en forma de un residuo incoloro (680 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C19H25ClN3O4: 394,2; encontrado: 394,2. Etapa 3. Preparación de 183: la amina 182 (680 mg, 1,73 mmol) y el compuesto intermedio D1 (600 mg, 2,1 mmol) se disolvieron en DMF (10 ml). Se añadió DIPEA (925 µl, 5,30 mmol) seguido de HATU (880 mg, 2,3 mmol). La reacción se agitó 110 min a ta y se diluyó con NaHCO3 acuoso saturado (30 ml) y EtOAc (30 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con solución salina semisaturada (2 x 40 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró hasta un residuo en bruto. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 20 % de EtOAc en hexanos) proporcionó 183 en forma de un residuo incoloro (703 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+calculado para C34H48ClN4O7: 659,3; encontrado: 659,4. Etapa 4. Preparación de 184: una mezcla heterogénea agitada de 183 (703 mg, 1,07 mmol), PdCl2(dppf)•CH2Cl2 (48 mg, 0,059 mmol) y viniltrifluoroborato potásico (290 mg, 2,16 mmol) en EtOH (11 ml) se roció con argón durante 15 min. Se añadió trietilamina (320 µl, 2,3 mmol) y la mezcla se calentó a 75 ºC durante 70 min. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc (40 ml) y solución salina semisaturada (30 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 20 % a un 30 % de EtOAc en hexanos) proporcionó 184 en forma de un residuo de color amarillo (490 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H51N4O7: 651,4; encontrado: 651,3. Etapa 5. Preparación de 185: 184 (490 mg, 0,179 mmol) se disolvió en DCE (250 ml) y la solución se roció con Ar durante 15 min. Se añadió catalizador de Zhan 1B (66 mg, 0,090 mmol, Strem) como una solución en DCE (5 ml) y la solución resultante se agitó a 85 ºC en atmósfera de Ar durante 105 min. La mezcla de reacción se enfrió a ta y se adsorbió sobre gel de sílice (7,5 g). La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 30 % de EtOAc en hexanos) proporcionó 185 en forma de un residuo amorfo (290 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H47N4O7: 623,3; encontrado: 623,3. Etapa 6: Preparación de 186: la olefina 185 (290 mg, 0,072 mmol) se disolvió en EtOAc (5,5 ml) y EtOH (5,5 ml) y el recipiente de reacción se purgó con Ar. Se añadió Pd/C (Pd al 10 % en peso, 92 mg) en una sola porción y el recipiente de reacción se purgó dos veces con H2. La reacción se agitó a ta bajo 1 atm de H2 durante 1,5 h y se filtró a través de una capa de Celite y se concentró para proporcionar un residuo en bruto de 186 que se usó sin purificación adicional (LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H49N4O7: 625,4; encontrado: 625,0. Etapa 7. Preparación de 187: 186 (0,466 mmol) se disolvió en CH2Cl2 (4,3 ml) en una atmósfera de Ar. Se añadió TMSOTf (210 µl, 1,16 mmol) gota a gota durante 30 s. La reacción se agitó 65 min y se añadió una porción adicional de TMSOTf (50 µl, 0,28 mmol). La reacción se agitó un periodo adicional de 100 min y se añadió una porción adicional de TMSOTf (100 µl, 0,55 mmol). La reacción se agitó un periodo adicional de 105 min y se concentró al vacío. El residuo en bruto resultante se disolvió en CH2Cl2 (20 ml) y se añadió NaOH acuoso 0,2 M (10 ml). La mezcla se agitó durante 5 min y se acidificó con HCl acuoso 1 M (20 ml). Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo con CH2Cl2 (2 x 20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar 187 en forma de un sólido de color marrón (273 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C30H41N4O7: 569,3; encontrado: 568,9. Etapa 8. Preparación del Ejemplo 18: A una suspensión del ácido 187 (28 mg, 0,049 mmol) y compuesto intermedio A10 (26,5 mg, 0,087 mmol) en MeCN (1,3 ml) se añadió DIPEA (55 µl, 0,31 mmol). A la solución resultante se añadió HATU (30,5 mg, 0,080 mmol). La reacción se agitó a ta durante 1 h y se añadió una porción adicional del compuesto intermedio A10 (3 mg, 0,01 mmol). Después de un periodo adicional de 15 min, la reacción se diluyó con EtOAc (30 ml) y HCl acuoso 1 M (20 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 40 % de acetona en hexanos) proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 18 en forma de un sólido de color blanco amorfo (26,4 mg). Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,42 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H53F2N6O9S: 819,4 ; encontrado: 819,1. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 9,68 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 6,14 -5,70 (m, 1H), 5,65 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 5,56 -5,50 (m, 1H), 4,53 -4,40 (m, 3H), 4,12 (dd, J = 11,9, 4,3 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,81 -3,74 (m, 1H), 3,06 -2,64 (m, 4H), 2,10 -1,35 (m, 13H), 1,13 (d, J = 7,5 Hz, 3H), 1,09 (s, 9H), 1,04 - 0,65 (m, 6H), 0,52 - 0,41 (m, 1H).

Ejemplo 19. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2(difluorometil)ciclopropil]-14-metoxi-9-metil-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

Etapa 1. Preparación del Ejemplo 19: A una suspensión del ácido 187 (8,8 mg, 0,015 mmol) y compuesto intermedio A9 (7,4 mg, 0,025 mmol) en MeCN (0,5 ml) se añadió DIPEA (14 µl, 0,08 mmol). A la solución resultante 5 se añadió HATU (9,1 mg, 0,024 mmol). La reacción se agitó a ta durante 1 h y se añadieron una porción adicional del compuesto intermedio A9 (5 mg, 0,02 mmol) y HATU (5 mg, 0,01 mmol). Después de un periodo adicional de 1,5 h, la reacción se diluyó con EtOAc (30 ml), HCl acuoso 0,2 M (10 ml), y solución salina saturada (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto. La purificación por cromatografía 10 sobre gel de sílice (de un 10 % a un 40 % de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 19 en forma de un sólido de color blanco amorfo (8,5 mg). Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,69 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H51F2N6O9S: 805,3 ; encontrado: 805,2. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 10,12 (s, 1H), 7,83 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,77 (s, 1 H), 6,25 -5,76 (m, 1H), 5,57 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 5,51 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 4,49 - 4,37 (m,

15 3H), 4,13 (dd, J = 12,2, 4,3 Hz, 1 H), 3,94 (s, 3H), 3,79 - 3,72 (m, 1H), 3,01 - 2,69 (m, 4H), 2,13 - 2,06 (m, 1H), 2,01 - 1,22 (m, 9H), 1,14 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,09 (s, 9H), 1,06 - 0,82 (m, 6H), 0,76 - 0,62 (m, 1H), 0,54 - 0,41 (m, 1H).

Ejemplo 20. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2etilciclopropil}-14-metoxi-9-metil-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,1020 metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

Etapa 1. Preparación del Ejemplo 20: A una suspensión del ácido 187 (10 mg, 0,018 mmol) y compuesto intermedio

25 A3 (6,3 mg, 0,023 mmol) en MeCN (0,5 ml) se añadió DIPEA (15 µl, 0,086 mmol). A la solución resultante se añadió HATU (9,0 mg, 0,024 mmol). La reacción se agitó a ta durante 2,5 h y se añadió una porción adicional del compuesto intermedio A3 (6,5 mg, 0,024 mmol). Después de un periodo adicional de 45 min, la reacción se diluyó con EtOAc (2 ml) y HCl acuoso 1 M (1,5 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (4 x 1,5 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar

30 un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía sobre gel de sílice (de un 20 % a un 25 % a un 30 % de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 20 en forma de un sólido de color blanco amorfo (8,0 mg). Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,40 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H55N6O9S: 783,4; encontrado: 783,2. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 9,98 (s, 1H), 7,83 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,42 (s, 1H), 5,57 (d, J = 3,8 Hz, 1 H), 5,36 (d,

35 J = 9,9 Hz, 1H), 4,48 - 4,34 (m, 3H), 4,11 (dd, J = 11,8, 4,1 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,79 - 3,72 (m, 1H), 2,98 - 2,68 (m, 4H), 1,95 - 0,80 (m, 33H), 0,76 - 0,61 (m, 1H), 0,53 - 0,41 (m, 1 H).

Ejemplo 21. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-etil-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-14-metoxi-9-metil-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida

Etapa 1. Preparación del Ejemplo 21: A una suspensión del ácido 187 (94,9 mg, 0,167 mmol) y compuesto intermedio A4 (74,5 mg, 0,263 mmol) en MeCN (2,5 ml) se añadió DIPEA (180 µl, 1,0 mmol). A la solución resultante 10 se añadió HATU (9,0 mg, 0,024 mmol). La reacción se agitó a ta durante 110 min y se añadieron porciones adicionales del compuesto intermedio A4 (31 mg, 0,11 mmol) y DIPEA (50 µl, 0,29 mmol). Después de un periodo adicional de 40 min, la reacción se diluyó con EtOAc (30 ml), HCl acuoso 0,2 M (20 ml), y solución salina saturada (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto. La purificación por 15 cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 40 % de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 21 en forma de un sólido de color blanco amorfo (102,1 mg). Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,83 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H57N6O9S: 797,4; encontrado: 797,5. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,76 (s, 1 H), 7,80 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,17 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 5,58 - 5,42 (m, 2H), 4,48 - 4,36 (m, 3H), 4,09 (dd, J = 11,8, 4,2 Hz, 1H), 3,92 (s,

20 3H), 3,79 - 3,74 (m, 1H), 2,97 - 2,66 (m, 4H), 1,80 - 0,88 (m, 33H), 0,84 - 0,77 (m, 1H), 0,77 - 0,61 (m, 2H), 0,52 - 0,40 (m, 1H).

Ejemplo 22. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2S)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2-(2fluoroetil)ciclopropil]-14-metoxi-9-metil-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,1025 metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

Etapa 1. Preparación del Ejemplo 22: A una suspensión del ácido 187 (30,1 mg, 0,0529 mmol) y compuesto

30 intermedio A5 (35 mg, 0,12 mmol) en MeCN (0,5 ml) se añadió DIPEA (85 µl, 0,49 mmol). A la solución resultante se añadió HATU (34,5 mg, 0,0907 mmol). La reacción se agitó a ta durante 90 min y se diluyó con EtOAc (30 ml), HCl acuoso 0,2 M (20 ml), y solución salina saturada (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto que se disolvió en CH2Cl2 y se adsorbió sobre 2 g de gel de sílice. La purificación

35 por cromatografía sobre gel de sílice (de un 15 % a un 55 % de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 22 en forma de un sólido de color blanco amorfo (35,5 mg). Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,54 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H54FN6O9S: 801,4; encontrado: 801,3. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,95 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,68 (s, 1H), 5,56 (d, J = 3,9 Hz, 1 H), 5,43 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 4,57 - 4,29 (m, 5H), 4,12 (dd,

5 J = 11,8, 4,1 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,78 - 3,71 (m, 1H), 2,97 - 2,67 (m, 4H), 2,12 - 1,25 (m, 14H), 1,15 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 1,10 (s, 9H), 1,06 - 0,89 (m, 4H), 0,76 - 0,62 (m, 1H), 0,53 - 0,42 (m, 1 H).

Ejemplo 23. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2S)-2-(2-fluoroetil)-1-{[(1-metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-14-metoxi-9-metil-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a

10 tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida

15 Etapa 1. Preparación del Ejemplo 23: A una suspensión del ácido 187 (30,5 mg, 0,0536 mmol) y compuesto intermedio A6 (24,8 mg, 0,0824 mmol) en MeCN (0,5 ml) se añadió DIPEA (60 µl, 0,34 mmol). A la solución resultante se añadió HATU (32,3 mg, 0,0850 mmol). La reacción se agitó a ta durante 75 min y se añadió una porción adicional del compuesto intermedio A6 (9 mg, 0,03 mmol). Después de un periodo adicional de 75 min la reacción se diluyó con EtOAc (30 ml), HCl acuoso 0,2 M (20 ml), y solución salina saturada (10 ml). Las fases se

20 separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto que se disolvió en CH2Cl2 y se adsorbió sobre 2 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 15 % a un 55 % de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 23 en forma de un sólido de color blanco amorfo (37,1 mg). Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,64 min. LCMS-ESI+ (m/z):

25 [M+H]+ calc. para C40H56FN6O9S: 815,4; encontrado: 815,6. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,63 (s, 1H), 7,83 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,75 (s, 1H), 5,56 (d, J = 3,9 Hz, 1 H), 5,50 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,56 -4,34 (m, 5H), 4,13 (dd, J = 11,8, 4,2 Hz, 1 H), 3,95 (s, 3H), 3,82 - 3,75 (m, 1H), 2,98 - 2,70 (m, 4H), 2,07 - 2,00 (m, 1 H), 2,00 - 1,93 (m, 1H), 1,88 - 1,44 (m, 12H), 1,32 - 1,26 (m, 1H), 1,17 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 1,12 (d, J = 10,6 Hz, 9H), 1,07 - 0,83 (m, 4H), 0,81 - 0,65 (m, 2H), 0,52 - 0,44 (m, 1 H).

30 Ejemplo 24. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2S)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2(2,2-difluoroetil)ciclopropil]-14-metoxi-9-metil-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

Etapa 1. Preparación del Ejemplo 24: A una suspensión del ácido 187 (30,2 mg, 0,0531 mmol) y compuesto intermedio A7 (25,9 mg, 0,0850 mmol) en MeCN (0,5 ml) se añadió DIPEA (60 µl, 0,34 mmol). A la solución resultante se añadió HATU (32 mg, 0,084 mmol). La reacción se agitó a ta durante 75 min y se añadió una porción adicional del compuesto intermedio A7 (3,0 mg, 0,0098 mmol). Después de un periodo adicional de 30 min la 5 reacción se diluyó con EtOAc (30 ml), HCl acuoso 0,2 M (20 ml), y solución salina saturada (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto que se disolvió en CH2Cl2 y se adsorbió sobre 2 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 15 % a un 55 % de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 24 en forma 10 de un sólido de color blanco amorfo (35,5 mg). Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,62 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H53F2N6O9S: 819,4; encontrado: 819,2, RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,99 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,69 (s, 1H), 5,99 - 5,64 (m, 1 H), 5,56 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 5,40 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,47 -4,39 (m, 3H), 4,14 -4,08 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,78 - 3,72 (m, 1H), 2,96 - 2,67 (m, 4H), 2,29 - 2,16 (m, 2H), 1,83 - 1,24 (m, 12H), 1,15 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 1,09 (s, 9H), 1,05 - 0,82 (m,

15 4H), 0,74 - 0,63 (m, 1H), 0,53 - 0,42 (m, 1H).

Ejemplo 25. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2S)-2-(2,2-difluoroetil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-14-metoxi-9-metil-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22, 22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8

20 carboxamida

Etapa 1. Preparación del Ejemplo 25: A una suspensión del ácido 187 (30,3 mg, 0,0532 mmol) y compuesto

25 intermedio A8 (28,3 mg, 0,0887 mmol) en MeCN (0,5 ml) se añadió DIPEA (60 µl, 0,34 mmol). A la solución resultante se añadió HATU (32,4 mg, 0,0852 mmol). La reacción se agitó a ta durante 2,5 h y se diluyó con EtOAc (30 ml), HCl acuoso 0,2 M (20 ml), y solución salina saturada (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto que se disolvió en CH2Cl2 y se adsorbió sobre 2 g de gel de sílice. La purificación

30 por cromatografía sobre gel de sílice (de un 15 % a un 55 % de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 25 en forma de un sólido de color blanco amorfo (33,9 mg). Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,66 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H55F2N6O9S: 833,4; encontrado: 833,4. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,62 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,18 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1 H), 7,08 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 6,64 (s, 1H), 6,04 -5,66 (m, 1 H), 5,54 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,47 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,50

35 4,38 (m, 3H), 4,11 (dd, J = 11,8, 4,2 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,82 - 3,71 (m, 1H), 2,98 - 2,68 (m, 4H), 2,27 - 2,11 (m, 2H), 1,96 - 1,41 (m, 12H), 1,32 (dd, J = 9,6, 5,4 Hz, 1H), 1,15 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 1,10 (s, 9H), 1,05 - 0,64 (m, 6H), 0,51 - 0,42 (m, 1H).

Ejemplo 26. Preparación de (1R,4S,4aR,8S,11S,12S,13R,25aR)-8-terc-butil-N-[(1R,2R)-1

40 [(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2-(difluorometil)ciclopropil]-17-metoxi-12-metil-6,9-dioxo2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-hexadecahidro-1H,11H-1,4:10,13-dimetanoquinoxalino[2,3k][1,10,3,6]benzodioxadiazaciclononadecino-11-carboxamida Etapa 1. Preparación de 262: A una solución de 261 (311 mg, 0,710 mmol; preparado de manera similar a 181 del Ejemplo 18 sustituyendo el compuesto intermedio B2 por el compuesto intermedio B1 en la etapa 1) en

5 dioxano (1,8 ml) se añadió HCl 4 M en dioxano (1,8 ml, 7,2 mmol). La reacción se agitó durante 15,5 h a ta y a continuación se concentró a presión reducida para dar 262 en forma de un sólido de color blanco amorfo que se usó sin purificación adicional en la siguiente etapa. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C16H19ClN3O4: 352,1; encontrado: 352,2. Etapas 2 y 3. Preparación de la mezcla diastereomérica 263 y 264: el clorhidrato de amina 262 (0,710 mmol)

10 se disolvió junto con una mezcla a 1:1 de la mezcla de los compuestos intermedios D9 y D10 (266 mg, 0,788 mmol) y DIPEA (600 µl, 3,4 mmol) en DMF (4,5 ml). Se añadió HATU (360 mg, 0,95 mmol) en una porción. La reacción se agitó 1,75 h a ta y se diluyó con NaHCO3 acuoso saturado (20 ml), agua (10 ml) y EtOAc (30 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó dos veces con una mezcla de agua (30 ml) y solución salina saturada (5 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró hasta un residuo en

15 bruto que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 30 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar un residuo incoloro (380 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H48ClN4O7: 671,3; encontrado: 671,6). Una mezcla heterogénea de este residuo agitada, PdCl2(dppf)•CH2Cl2 (35 mg, 0,043 mmol) y viniltrifluoroborato potásico (156 mg, 1,16 mmol) en EtOH (7 ml) se roció con argón durante varios minutos. Se añadió trietilamina (170 µl, 1,2 mmol) y la mezcla se calentó a 70 ºC durante 55 min. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc (40 ml), y se lavó con agua (30 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron para proporcionar un residuo que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 15 % a un 30 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar la mezcla diastereomérica de 263 y 264 en forma de un residuo de color amarillo (277 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H51N4O7: 663,4; encontrado: 663,3. Etapa 4. Preparación de 265: la mezcla diastereomérica de 263 y 264 (277 mg, 0,419 mmol) se disolvió en DCE (140 ml) y la solución se roció con Ar durante 15 min. Se añadió catalizador de Zhan 1B (37 mg, 0,050 mmol, Strem) y la solución resultante se agitó a 85 ºC en atmósfera de Ar durante 1,5 h. A continuación, la mezcla de reacción se concentró y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 20 % a un 50 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar 265 en forma de un residuo amorfo (105 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H47N4O7: 635,3; encontrado: 635,3. Etapas 5 y que 6. Preparación de 266: A una solución de 265 (105 mg, 0,165 mmol) en EtOAc:EtOH a 1:1 (4 ml) se añadió Pd/C (Pd al 10 % en peso, 43 mg). El recipiente de reacción se purgó dos veces con H2 y se agitó a ta bajo 1atm de H2 durante 1 h. La mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite y se concentró para proporcionar un residuo en bruto (106 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H49N4O7: 637,4; encontrado: 637,3). A continuación, este residuo se disolvió en THF (0,8 ml). Se añadieron MeOH (0,4 ml), agua (0,4 ml) y LiOH•H2O (67 mg, 1,6 mmol) y la mezcla se agitó a 45 ºC durante 14,5 h. La reacción se interrumpió gota a gota con HCl acuoso 1 N (1,3 ml) y se diluyó con CH2Cl2 (30 ml) y HCl acuoso 1 N (20 ml). Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo con CH2Cl2 (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar 266 en forma de un residuo (93,8 mg) que se usó directamente en la Etapa 7. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H47N4O7: 623,3; encontrado: 623,3. Etapa 7. Preparación del Ejemplo 26: A una suspensión del ácido 266 (93,8 mg, 0,151 mmol) y compuesto intermedio A9 (58 mg, 0,20 mmol) en MeCN se añadió DIPEA (120 µl, 0,69 mmol). A la solución resultante se añadió HATU (73,5 mg, 0,193 mmol). La reacción se agitó a ta durante 100 min y se añadió una porción adicional del compuesto intermedio A9 (6 mg, 0,02 mmol). Después de un periodo adicional de 30 min, se añadieron adicionalmente el compuesto intermedio A9 (9 mg, 0,03 mmol), HATU (9 mg, 0,02 mmol) y DIPEA (10 µl, 0,06 mmol). La reacción se agitó durante un periodo adicional de 50 min y se diluyó con EtOAc (25 ml), HCl acuoso 0,2 M (20 ml) y solución salina saturada (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (25 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 25 % a un 40 % de acetona en hexanos) proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 26 en forma de un sólido de color blanco amorfo (113 mg). Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,19 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H57F2N6O9S: 859,4; encontrado: 859,2. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 10,02 (s, 1H), 7,80 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,21 - 7,15 (m, 2H), 7,07 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,13 - 5,79 (m, 1H), 5,63 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 5,50 - 5,45 (m, 1H), 4,51 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,44 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,18 - 4,12 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,02 - 2,77 (m, 3H), 2,66 - 2,57 (m, 1H), 2,18 - 0,90 (m, 36H).

Ejemplo 27. Preparación de (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-16-metoxi-11-metil-5,8-dioxo1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10h-9,12metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida Etapa 1. Preparación de 27-1: el clorhidrato de amina 26-2 (217 mg, 0,504 mmol), se trató con BEP (207 mg, 0,756 mmol), compuesto intermedio D5 (283 mg, 0,909 mmol), EtOAc (9 ml), NMP (1 ml) y DIPEA (0,44 ml, 2,5 mmol), a continuación se calentó a 50 ºC. Después de 1,5 h, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc. La solución orgánica se lavó sucesivamente con NaHCO3 acuoso saturado y solución salina saturada, a continuación se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 9 % a un 40 % de EtOAc/Hex) para proporcionar la amida 271 (235 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H52ClN4O7: 687,35; encontrado: 688,13. Etapa 2. Preparación de 272: la amida 271 (235 mg, 0,342 mmol) se trató con viniltrifluoroborato potásico (69 mg, 0,513 mmol), Pd(dppf)Cl2•DCM (28 mg, 0,0342 mmol), EtOH (3,4 ml) y TEA (0,072 ml, 0,513 mmol), a continuación se calentó a reflujo. Después de 50 min, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con H2O y solución salina saturada. Los extractos orgánicos se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 9 % a un 40 % de EtOAc/Hex) para proporcionar la vinil quinoxalina 272 (219 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H55N4O7: 679,41; encontrado: 679,49. Etapas 3 y 4. Preparación de 273: la vinil quinoxalina 272 (219 mg, 0,323 mmol) se suspendió en DCE (65 ml) y se trató con catalizador de Zhan 1B (41 mg, 0,065 mmol, Strem). La suspensión se desoxigenó con burbujeo de N2 durante 17 min, a continuación se calentó a reflujo durante 90 min. A continuación, la mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 15 % a un 50 % de EtOAc/Hex) para proporcionar el macrociclo deseado (165 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H51N4O7: 651,38; encontrado: 651,40). El producto macrocíclico de la etapa 3 se disolvió en EtOH (10 ml) y EtOAc (2 ml) y se trató con Pd al 10 % en peso/C (95 mg). Se burbujeó hidrógeno desde un globo a través de la suspensión durante 1 min y la mezcla se agitó bajo una atmósfera de H2 (1 atm) durante un periodo adicional de 1,5 h. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró a presión reducida para proporcionar el macrociclo deseado 273 que se usó sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H53N4O7: 653,39; encontrado: 653,32. Etapa 5. Preparación de 274: El producto en bruto de la etapa 4 se disolvió en DCM y se trató con TMSOTf (0,23 ml, 1,3 mmol). Después de agitar a ta durante 1 h 15 min, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió de nuevo en DCM y se añadió con pipeta a un embudo de decantación que contenía NaOH acuoso 1 M. La mezcla se agitó durante 1 min, a continuación se acidificó a pH 1~2 con un 10 % de HCl acuoso. La fase acuosa se extrajo tres veces con DCM y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar el ácido carboxílico 274 (119 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H45N4O7: 597,33; encontrado: 597,40.

Etapa 6. Preparación del Ejemplo 27: el ácido carboxílico 274 (105 mg, 0,177 mmol) y el compuesto intermedio A10 (65 mg, 0,212 mmol) se trataron con TBTU (68 mg, 0,212 mmol), DMAP (26 mg, 0,212 mmol), DCM (1,8 ml) y DIPEA (0,31 ml, 1,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 30 min, a continuación se añadió más amina A10 (40 mg, 0,131 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo. Después de un periodo adicional de 5 1,25 h, la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por HPLC para proporcionar el Ejemplo 27 (80 mg) con una pureza de aproximadamente un 90 % en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,06 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 847,39; encontrado: 847,69. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,23 (s, 1H), 7,87 - 7,72 (m, 1H ), 7,31 - 7,14 (m, 2H), 5,84 (td, J = 55,6, 6,5 Hz, 1 H), 5,58 (d, J = 22,6 Hz, 1H), 4,94 -4,81 (m, 1H), 4,37 (d, J = 15,8 Hz, 1 H), 4,29 -4,10 (m, 2H), 3,94 (s, 3H),

10 3,01 (ddd, J = 15,1, 9,9, 5,3 Hz, 1H), 2,84 (p, J = 7,4 Hz, 1H), 2,75 (ddd, J = 13,3, 10,2, 6,0 Hz, 1 H), 2,03 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 1,97 - 1,74 (m, 4H), 1,73 -1,55 (m, 6H), 1,53 (s, 3H), 1,48 -1,21 (m, 8H), 1,19 -1,02 (m, 14H), 0,99 - 0,80 (m, 2H).

Ejemplo 28. Preparación de (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2

15 (difluorometil)ciclopropil]-16-metoxi-11-metil-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida

20 Etapa 1. El ácido carboxílico 274 (20 mg, 0,034 mmol) y el compuesto intermedio A9 (35 mg, 0,12 mmol) se trataron con TBTU (22 mg, 0,067 mmol), DMAP (8 mg, 0,07 mmol), DCM (1 ml) y DIPEA (0,117 ml, 0,674 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 15 h, a continuación se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por HPLC para proporcionar el Ejemplo 28 (22 mg) con una pureza de aproximadamente un 90 % en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,90 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para

25 C40H55F2N6O9S: 833,37; encontrado: 833,61. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,23 (s, 1H), 7,79 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,34 - 7,10 (m, 2H), 5,86 (td, J = 55,8, 6,5 Hz, 1H), 5,61 (s, 1 H), 4,54 (t, J = 9,7 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 4,28 -4,07 (m, 2H), 3,95 (d, J = 17,8 Hz, 3H), 3,08 -2,91 (m, 2H), 2,90 -2,79 (m, 1H), 2,73 (ddd, J = 13,3, 10,3, 6,0 Hz, 1H), 2,04 (s, 2H), 1,97 - 1,74 (m, 4H), 1,64 (ddd, J = 18,7, 11,6, 4,0 Hz, 4H), 1,49 - 1,19 (m, 11 H), 1,18 -0,94 (m, 14H), 0,94 - 0,80 (m, 1 H).

30 Ejemplo 29. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-14-metoxi-3,6-dioxo-9-propil-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida

35 Etapa 1. Preparación de 291: A una solución del compuesto intermedio B5 (188 mg, 0,57 mmol) y compuesto intermedio E1 (233 mg, 0,86 mmol) en MeCN (2,85 ml) se añadió carbonato de cesio (280 mg, 9,18 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 19 h, la mezcla de reacción a continuación se filtró a través de una capa de Celite y el filtrado se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar la quinoxalina sustituida 291 (240 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C26H37ClN3O6: 522,2; encontrado: 522,3. Etapa 2. Preparación de 292: a una solución 291 (240 mg, 0,46 mmol) en dioxano (1 ml) se añadió ácido clorhídrico 4 M en dioxano (4 ml, 1 mmol) y la reacción se agitó a ta. Después de 15 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío para proporcionar el clorhidrato de amina 292 (200 mg) en forma de un sólido de color blanquecino, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C21H29ClN3O4: 422,2; encontrado: 422,2. Etapa 3. Preparación de 293: A una solución de 292 (200 mg, 0,46 mmol) y compuesto intermedio D1 (170 mg, 0,51 mmol) en MeCN (2,3 ml) se añadió HATU (192 mg, 0,51 mmol) seguido de DIPEA (400 µl, 2,30 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 1,5 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, y el residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar la amida 293 (67 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H52ClN4O7: 687,3; encontrado: 687,5. Etapa 4. Preparación de 294: A una solución de 293 (67 mg, 98 µmol), TEA (20 µl, 150 µmol) y viniltrifluoroborato potásico (19,7 mg, 150 µmol) en EtOH (500 µl) se añadió PdCl2(dppf) (8 mg, 9,8 µmol). La mezcla de reacción se desoxigenó con argón durante 10 min y se calentó a 78 ºC. Después de 40 min, la mezcla de reacción se dejó enfriar a ta y se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar la vinil quinoxalina 294 (40,2 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H55N4O7: 679,4; encontrado: 679,6. Etapa 5. Preparación de 295: A una solución de 294 (40 mg, 59 µmol) en DCE (11,8 ml) se añadió catalizador de Zhan 1B (4 mg, 6 µmol, Strem) y la mezcla de reacción se desgasificó durante 10 minutos con argón. A continuación, la mezcla de reacción se calentó a 100 ºC. Después de 1 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a ta y se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar el macrociclo 295 (31 mg) en forma de un aceite de color amarillo claro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H51N4O7: 651,4; encontrado: 651,5. Etapa 6. Preparación de 296: A una solución del macrociclo 295 (31 mg, 47 µmol) en etanol (500 µl) se añadió Pd/C (10 % en peso, 5 mg, 5 µmol) a ta bajo una atmósfera de argón. El recipiente de reacción se evacuó y se volvió a cargar con 1 atm de gas hidrógeno (3 x) y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a ta. Después de 1 h, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (10 ml) y se filtró a través de una capa de Celite con lavados con acetato de etilo (3 x 5 ml). El filtrado se concentró al vacío para proporcionar el macrociclo 296 (31 mg), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H53N4O7: 653,4; encontrado: 653,5. Etapa 7. Preparación de 297: A una solución de 296 (31 mg, 47 µmol) en DCM (0,5 ml) se añadió TMSOTf (44 µl, 0,25 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 25 min, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se secó de forma azeotrópica a partir de tolueno (2 3 2 ml) para proporcionar el ácido carboxílico 297 (35 mg) en forma de un aceite de color amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H45N4O7: 597,3; encontrado: 597,4. Etapa 8. Preparación del Ejemplo 29: A una solución de 297 (35 mg, 49 µmol) y compuesto intermedio A10 (22 mg, 74 µmol) en MeCN (245 µl) se añadió HATU (28 mg, 74 µmol) seguido de DIPEA (43 µl, 250 µmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 3 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, se purificó mediante HPLC preparativa (columna Gemini 5u C18 110Å, 5-100 % de MeCN/H2O, modificador de ácido trifluoroacético al 0,1 %) y se liofilizó para proporcionar el Ejemplo 29 (22,3 mg) en forma de una sal de TFA en forma de polvo de color blanco. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,81 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H56F2N6O9S: 847,4; encontrado: 847,5. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,83 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 7,93 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,36 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 11,0 Hz, 1 H), 7,14 (s, 1 H), 5,97 (td, JH-F = 55 Hz, J = 7,2 Hz, 1 H), 5,84 (s a, 1 H), 5,41 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 4,66 - 4,34 (m, 3H), 4,13 (d ap, J = 11,8 Hz, 1 H), 4,08 (s, 1 H), 3,97 (s, 3H), 3,78 -3,71 (m, 1 H), 3,09 -2,65 (m, 5H), 2,14 - 2,04 (m, 1 H), 1,87 - 1,34 (m, 8H), 1,52 (s, 3H), 1,12 (s, 9H), 1,08 - 0,84 (m, 10H), 0,76 - 0,62 (m, 1 H), 0,50 (dd, J = 12,6, 6,6 Hz, 1 H).

Ejemplo 30. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-14-metoxi-9-(2-metilpropil)-3,6-dioxo1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida Etapa 1. Preparación de 301: Una mezcla del compuesto intermedio B6 (139 mg, 0,405 mmol), compuesto intermedio E1 (170 mg, 0,625 mmol) y carbonato de cesio (203 mg, 0,623 mmol) en 3,3 ml de acetonitrilo se

5 agitó a temperatura ambiente en atmósfera de argón durante una noche. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite, lavando con acetato de etilo, y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-30 % de acetato de etilo en hexanos) para producir 301 (170 mg) en forma de una película transparente. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C27H39ClN3O6: 536,24; encontrado: 536,31.

10 Etapa 2. Preparación de 302: Una solución de cloruro de hidrógeno en dioxano (4,0 M, 0,16 ml, 0,64 mmol) se añadió a una solución de 301 (168 mg, 0,314 mmol) en 3,3 ml de dioxano a temperatura ambiente. Después de treinta minutos, se añadió una cantidad adicional de 4 equivalentes de HCl y la mezcla se agitó durante una noche. A continuación se añadió una cantidad adicional de 25 equivalentes de HCl. Después de treinta minutos, se añadió una cantidad adicional de 19 equivalentes de HCl. Después de una obra, se añadió una cantidad

15 adicional de 29 equivalentes de HCl. Después de treinta minutos, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para producir 302 (148 mg, 85 % de pureza), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C22H31ClN3O4: 436,19; encontrado: 436,25. Etapa 3. Preparación de 303: HATU (144 mg, 0,379 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,28 ml, 1,58 mmol) se añadieron a una mezcla de 302 (148 mg, 0,315 mmol) y compuesto intermedio D1 (99 mg, 0,348 mmol) en 3,5 ml de DMF en atmósfera de argón. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (3 x). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y solución salina saturada, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-50 % de acetato de etilo en hexanos) para producir 303 (136 mg) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H54ClN4O7: 701,36; encontrado: 701,47. Etapa 4. Preparación de 304: Pd(dppf)2Cl2•CH2Cl2 (35 mg, 0,043 mmol) se añadió a una mezcla desgasificada de 303 (135 mg, 0,193 mmol), viniltrifluoroborato potásico (41 mg, 0,306 mmol) y trietilamina (0,040 ml, 0,289 mmol) en 2,1 ml de etanol a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 78 ºC bajo una atmósfera de argón durante 45 minutos. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (tres veces). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y solución salina saturada, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir 304 (133 mg), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H57N4O7: 693,41; encontrado: 693,48. Etapa 5. Preparación de 305: Una mezcla de 304 (133 mg, 0,192 mmol) y catalizador de Zhan 1B (16 mg, 0,022 mmol, Strem) en 38 ml de DCE se desoxigenó bajo una atmósfera de argón durante 25 minutos. A continuación, la mezcla se calentó a 95 ºC durante 50 minutos. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-50 % de acetato de etilo en hexanos) para producir 305 (70 mg) en forma de una película de color amarillo claro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H53N4O7: 665,38; encontrado: 665,50. Etapa 6. Preparación de 306: se añadió paladio sobre carbono (Pd al 10 % en peso, 22 mg, 0,0208 mmol) a una solución de 305 (69 mg, 0,104 mmol) en 3 ml de etanol. A continuación, la mezcla se agitó en una atmósfera de hidrógeno durante 1 hora y a continuación se filtró sobre Celite, lavando con acetato de etilo. El filtrado se concentró a presión reducida para producir 306 (64 mg) en forma de una película sólida de color amarillo claromarrón, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H55N4O7: 667,40; encontrado: 667,43. Etapa 7. Preparación de 307: se añadió TMSOTf (0,050 ml, 0,274 mmol) gota a gota a una solución de 306 (30 mg, 0,045 mmol) en 1,2 ml de diclorometano bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente. Después de 45 minutos, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. La película resultante se recogió en 5 ml de tolueno y se concentró a presión reducida. Este proceso se repitió una segunda vez para producir 307 (27 mg), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C33H47N4O7: 611,34; encontrado: 611,41. Etapa 8. Preparación del Ejemplo 30: se añadieron HATU (28 mg, 0,074 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,050 ml, 0,281 mmol) a una mezcla de 307 (27 mg, 0,045 mmol) y compuesto intermedio A10 (22 mg, 0,072 mmol) en 2,2 ml de acetonitrilo en atmósfera de argón. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (3 x). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y solución salina saturada, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-50 % de acetato de etilo en hexanos) y HPLC preparativa en fase inversa (15-100 % de acetonitrilo en agua, con un tampón de ácido trifluoroacético al 0,1 %) para producir la sal del ácido trifluoroacético del Ejemplo 30 (18 mg) en forma de un sólido de color amarillo claro, después de liofilización. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,96 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H59F2N6O9S: 861,40; encontrado: 861,30. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): δ 9,17 (s, 1H), 7,80 (d, J = 8,8 H, 1H), 7,23 (dd, J = 8,8, 2,8 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 5,81 (td, JH-F = 56 Hz, J = 7,6 Hz, 1 H); 5,77 (d, J = 3,2 Hz, 1 H), 4,55 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,39 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 4,16 (dd, J = 11,8, 4 Hz, 1 H), 3,91 (s, 3H), 3,79-3,71 (m, 1 H), 2,98-2,90 (m, 1 H), 2,84 (dd, J = 12,6, 4,8 Hz, 1 H), 2,79-2,72 (m, 1 H), 2,06-1,91 (m, 3H), 1,77 (m, 3H), 1,64-1,44 (m, 6H), 1,51 (s, 3H), 1,44-1,32 (m, 3H), 1,15-1,07 (m, 1 H), 1,10 (s, 9H), 1,06-0,96 (m, 3H), 1,04-1,01 (m, 6H), 0,93-0,89 (m, 2H), 0,79-0,68 (m, 1 H), 0,52-0,47 (m, 1 H).

Ejemplo 31. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-9-ciclopropil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida Etapa 1. Preparación de 311: una muestra sin purificar del compuesto intermedio B3 se trató con el compuesto intermedio E1 (217 mg, 0,797 mmol), MeCN (5,7 ml) y Cs2CO3 (371 mg, 1,14 mmol). Después de agitar a ta

5 durante 17 h, la mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 20 % a un 40 % de EtOAc/Hex) para proporcionar la quinoxalina 311 (143 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M-Boc+2H]+calc. para C18H21ClN3O4: 378,12; encontrado: 378,59. Etapa 2. Preparación de 312: la quinoxalina 311 (143 mg, 0,299 mmol) se disolvió en DCM (10 ml) y se trató con HCl (4,0 M en dioxano, 5 ml, 20,0 mmol). Después de agitar durante 2 h a ta, la mezcla de reacción se

10 concentró y el producto en bruto 312 se usó sin purificación adicional. Etapa 3. Preparación de 313: el clorhidrato de amina en bruto 312 se trató con BEP (115 mg, 0,419 mmol), compuesto intermedio D1 (120 mg, 0,423 mmol), EtOAc (9 ml), NMP (1 ml) y DIPEA (0,37 ml, 2,1 mmol), a continuación calentó a 50 ºC. Después de 1,5 h, la mezcla de reacción se diluyó con Et2O. La solución orgánica se lavó sucesivamente con NaHCO3 acuoso saturado y solución salina saturada, a continuación se secó sobre

15 MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 15 % a un 30 % de EtOAc/Hex) para proporcionar la amida 313 (166 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C33H44ClN4O7: 643,29; encontrado: 643,48. Etapa 4. Preparación de 314: la amida 313 (166 mg, 0,258 mmol) se trató con viniltrifluoroborato potásico (52 mg, 0,387 mmol), Pd(dppf)Cl2•DCM (21 mg, 0,0258 mmol), EtOH (2,6 ml) y TEA (0,054 ml), y a continuación

20 se calentó a reflujo. Después de 50 min, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con H2O y solución salina saturada. Los extractos orgánicos se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 15 % a un 40 % de EtOAc/Hex) para proporcionar la vinil quinoxalina 314 (145 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H47N4O7: 635,34; encontrado: 635,58. Etapas 5 y 6. Preparación de 315: la vinil quinoxalina 314 (145 mg, 0,228 mmol) se suspendió en DCE (46 ml) y se trató con catalizador de Zhan 1B (33 mg, 0,0456 mmol, Strem). La suspensión se desoxigenó con burbujeo de N2 durante 22 min, a continuación se calentó a reflujo durante 50 min. A continuación, la mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 25 % a un 35 % de EtOAc/Hex) para proporcionar el macrociclo deseado (54 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M +H]+ calc. para C33H43N4O7: 607,31; encontrado: 607,67). El producto macrocíclico de la etapa 5 se disolvió en EtOH (10 ml) y se trató con Pd al 10 %/C (45 mg). Se burbujeó hidrógeno desde un globo a través de la suspensión durante 1 min y la hidrogenación (1 atm) se continuó durante un periodo adicional de 1,5 h. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró a presión reducida para proporcionar el macrociclo deseado 315 que se usó sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C33H45N4O7: 609,33; encontrado: 609,95. Etapa 7. Preparación de 316: El producto en bruto 315 se disolvió en THF y se trató con LiOH (1,0 M en H2O, 5 ml, 5 mmol). Después de agitar a ta durante 3 d, la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 20 h. La mezcla a continuación se vertió en H2O y se acidificó a pH ~1-2 con un 10 % de HCl. La fase acuosa se extrajo tres veces con DCM. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 80 % a un 100 % de EtOAc/Hex) para proporcionar el ácido carboxílico 316 (24 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M +H]+ calc. para C32H43N4O7: 595,31; encontrado: 595,12. Etapa 8. Preparación del Ejemplo 31: el ácido carboxílico 316 (24 mg, 0,040 mmol) y compuesto intermedio A10 (25 mg, 0,081 mmol) se trataron con TBTU (23 mg, 0,081 mmol), DMAP (10 mg, 0,081 mmol), DCM (2 ml) y DIPEA (0,070 ml, 0,40 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 15 h y a continuación se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por HPLC para proporcionar el Ejemplo 31 (13 mg, 34 %) con una pureza de aproximadamente un 90 % en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,92 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F2N6O9S: 845,37; encontrado: 845,67. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,13 (s, 1 H), 7,79 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,23 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1 H), 7,13 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 6,05 5,65 (m, 2H), 4,55 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 4,47 (d, J = 11,7 Hz, 2H), 4,27 (dd, J = 12,0, 3,7 Hz, 1 H), 3,94 (s, 3H), 3,78 (dd, J = 6,8, 2,8 Hz, 1 H), 2,99 - 2,86 (m, 1 H), 2,80 (td, J = 13,2, 4,1 Hz, 1 H), 1,98 (d, J = 28,8 Hz, 2H), 1,92

-: 1,67 (m, 4H), 1,65 - 1,41 (m, 10H), 1,33 (d, J = 27,7 Hz, 3H), 1,20 - 1,06 (m, 9H), 1,04 -0,84 (m, 6H), 0,82 - 0,62 (m, 3H), 0,61 - 0,41 (m, 2H), 0,06 (dd, J = 9,2, 4,9 Hz, 1 H).

Ejemplo 32. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-9-bencil-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida

Etapa 1. Preparación de 321: A una solución del compuesto intermedio B7 (390 mg, 1,00 mmol) y compuesto intermedio E1 (272 mg, 1,00 mmol) en MeCN (5 ml) se añadió carbonato de cesio (390 mg, 1,00 mmol) a ta bajo 5 una atmósfera de argón. Después de 24 h, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (50 ml). La mezcla resultante se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (50 ml) y solución salina saturada (50 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro, y se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar quinoxalina 321 (550 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C30H37ClN3O6:

10 570,2; encontrado: 570,2. Etapa 2. Preparación de 322: A una solución de 321 (549 mg, 0,96 mmol) en dioxano (2 ml) se añadió ácido clorhídrico 4 M en dioxano (2 ml, 1 mmol) y la reacción se agitó a ta. Después de 24 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío para proporcionar el clorhidrato de amina 322 (461 mg) en forma de un sólido de color blanquecino, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+

15 calc. para C25H29ClN3O4: 470,2; encontrado: 470,2. Etapa 3. Preparación de 323: A una solución de 322 (461 mg, 0,96 mmol) y compuesto intermedio D1 (369 mg, 1,10 mmol) en MeCN (5 ml) se añadió HATU (418 mg, 1,10 mmol) seguido de DIPEA (869 µl, 5,00 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 24 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, y el residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para

20 proporcionar 323 (202,6 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H52ClN4O7: 735,3; encontrado: 735,4. Etapa 4. Preparación de 324: A una solución de 323 (202 mg, 276 µmol), TEA (56 µl, 414 µmol) y viniltrifluoroborato potásico (56 mg, 414 µmol) en EtOH (2,76 ml) se añadió PdCl2(dppf) (22,5 mg, 27,6 µmol). La mezcla de reacción se desgasificó con argón durante 10 min y se calentó a 78 ºC. Después de 1 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a ta y se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar 324 (163 mg) en forma de un aceite de color amarillo. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H55N4O7: 727,4; encontrado: 727,5. Etapa 5. Preparación de 325: A una solución de 324 (163 mg, 220 µmol) en DCE (44 ml) se añadió catalizador de Zhan 1B (16 mg, 22 µmol, Strem) y la mezcla de reacción se desgasificó durante 10 minutos con argón. A continuación, la mezcla de reacción se calentó a 100 ºC. Después de 45 min, la mezcla de reacción se dejó enfriar a ta y se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar 325 (125 mg) en forma de un aceite de color amarillo claro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H51N4O7: 699,4; encontrado: 699,4. Etapa 6. Preparación de 326: A una solución del macrociclo 325 (124 mg, 178 µmol) en etanol (890 µl) se añadió Pd/C (Pd al 10 % en peso, 19 mg, 18 µmol) a ta bajo una atmósfera de argón. El recipiente de reacción se evacuó y se volvió a cargar con gas hidrógeno (3 x) y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a ta bajo 1 atm de H2. Después de 2,5 h, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (5 ml) y se filtró a través de una capa de Celite con lavados con acetato de etilo (3 x 5 ml). El filtrado se concentró al vacío para proporcionar 326 (139 mg), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H53N4O7: 701,4; encontrado: 701,5. Etapas 7 y 8. Preparación del Ejemplo 32: A una solución de 326 (124 mg, 178 µmol) en DCM (3 ml) se añadió TFA (2 ml) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 3 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se secó de forma azeotrópica a partir de tolueno (2 x 2 ml) para proporcionar el ácido carboxílico deseado en forma de un aceite de color amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. (126 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H45N4O7: 645,3; encontrado: 645,4). A una solución de este ácido carboxílico (120 mg, 178 µmol) y compuesto intermedio A10 (119 mg, 392 µmol) en MeCN (1 ml) se añadió HATU (151 mg, 392 µmol) seguido de DIPEA (155 µl, 890 µmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 30 min, la mezcla de reacción se concentró al vacío, y el residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se volvieron a purificar mediante HPLC preparativa (columna Gemini 5u C18 110A, 5100 % de MeCN/H2O, modificador de ácido trifluoroacético al 0,1 %) y se liofilizaron para proporcionar la sal de TFA del Ejemplo 32 (23 mg) en forma de un polvo de color blanco. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,81 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C45H57F2N6O9S: 895,4; encontrado: 895,6. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,24 (s, 1 H), 7,73 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,47 - 7,27 (m, 4H), 7,21 - 7,12 (m, 1 H), 6,65 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 5,83 (td, JH-F = 55 Hz, J = 7,2 Hz, 1 H), 5,77 (s a, 1 H), 4,63 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 4,50 - 4,28 (m, 3H), 3,93 (s, 2H), 3,79 3,71 (m, 1 H), 3,11 - 2,99 (m, 1 H), 2,97 - 2,85 (m, 1 H), 2,82 - 2,61 (m, 3H), 1,92 (s a, 2H), 1,82 - 1,70 (m, 2H), 1,63 - 1,44 (m, 4H), 1,52 (s, 3H), 1,15 (s, 9H), 1,04 (s a, 2H), 1,02 - 0,96 (m, 2H), 0,95 -0,88 (m, 4H), 0,78 - 0,66 (m, 1 H), 0,56 - 0,46 (m, 1 H).

Ejemplo 33. Preparación de (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1S,2R)-1[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2-(difluorometil)ciclopropil]-15-metoxi-10-metil-4,7-dioxo1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9carboxamida

Etapas 1 y 2. Preparación de la mezcla diastereomérica de 331 y 332: la quinoxalina 182 (220 mg, 0,56 mmol) se disolvió junto con una mezcla diastereomérica a 1:1 de los compuestos intermedios D12 y D13 (208 mg, 5 0,643 mmol) en MeCN (5 ml). Se añadieron DIPEA (280 µl, 1,6 mmol) y HATU (360 mg, 0,95 mmol), y la reacción se agitó durante 1,25 h a ta. A continuación, la reacción se diluyó con EtOAc (30 ml), NaHCO3 acuoso saturado (15 ml), H2O (10 ml), y solución salina saturada (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró hasta un residuo en bruto que se disolvió en CH2Cl2 y se adsorbió sobre gel de sílice (5 g). La purificación por 10 cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 30 % de EtOAc en hexanos) proporcionó una espuma de color blanco (352 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H52ClN4O7: 699,4; encontrado: 699,1). Una mezcla heterogénea agitada de este residuo, PdCl2(dppf)•CH2Cl2 (30,7 mg, 0,0376 mmol) y viniltrifluoroborato potásico (135 mg, 1,01 mmol) en EtOH (5 ml) se roció con argón durante varios minutos. Se añadió trietilamina (160 µl, 1,1 mmol) y la mezcla se calentó a 75 ºC durante 1 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y 15 se diluyó con EtOAc (30 ml), H2O (15 ml) y solución salina saturada (15 ml). Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron para proporcionar un residuo en bruto que se disolvió en CH2Cl2 y se adsorbió sobre gel de sílice (3 g). La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 40 % de EtOAc en hexanos) produjo la mezcla inseparable de 331 y 332 en forma de un residuo de color amarillo (258 mg). LCMS-ESI+ (m/z):

20 [M+H]+ calc. para C39H55N4O7: 691,4; encontrado: 691,7. Etapa 3: Preparación de 333: la mezcla diastereoméricas de 331 y 332 (258 mg, 0,373 mmol) se disolvió en DCE (125 ml) y la solución se roció con Ar durante 10 min. Se añadió catalizador de Zhan 1B (41 mg, 0,056 mmol, Strem) como una solución en DCE (3,3 ml) y la solución resultante se agitó a 85 ºC en atmósfera de Ar durante 105 min. A continuación, la mezcla de reacción se concentró sobre 5 g de gel de sílice y se purificó

por cromatografía sobre gel de sílice (de un 0 % a un 25 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar el macrociclo 333 en forma de un residuo amorfo (81,9 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H51N4O7: 663,4; encontrado: 663,3. Etapas 4 y 5: Preparación de 334: A una solución de 333 (81,9 mg, 0,124 mmol) en EtOAc:EtOH a 1:1 (4 ml) se

5 añadió Pd/C (Pd al 10 % en peso, 19 mg). El recipiente de reacción se purgó dos veces con H2 y se agitó a ta bajo 1atm de H2 durante 2,5 h. La mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite y se concentró para proporcionar un residuo en bruto. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 (1,2 ml) y se añadió TMSOTf (90 µl, 0,50 mmol). La mezcla se agitó a ta durante 4,5 h. A continuación, la reacción se concentró al vacío y se disolvió en CH2Cl2 (5 ml). Se añadió NaOH acuoso 0,2 M (5 ml) y la mezcla bifásica se agitó a ta durante 5 min. A

10 continuación, la mezcla se acidificó con HCl acuoso 1 M (20 ml) y se diluyó con CH2Cl2 (20 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con CH2Cl2 (2 x 20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar 334 en forma de un residuo en bruto (76,1 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C33H45N4O7: 609,3; encontrado: 608,9. Etapa 6: Preparación del Ejemplo 33: A una suspensión del ácido 334 (43 mg, 0,072 mmol) y compuesto

15 intermedio A9 (40,9 mg, 0,14 mmol) en MeCN (800 µl) se añadió DIPEA (100 µl, 0,57 mmol). A la solución resultante se le añadió HATU (37 mg, 0,097 mmol), y la reacción se agitó a ta durante 15 h. A continuación, la reacción se diluyó con EtOAc (20 ml), HCl acuoso 0,2 M (10 ml) y solución salina saturada (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 y se

20 concentró sobre 2 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 15 % a un 55 % de acetona en hexanos) proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 33 en forma de un sólido de color blanco amorfo (29,6 mg). Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,07 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C4H55F2N6O9S: 845,4; encontrado: 845,2. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 10,21 (s, 1 H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1 H), 7,09 (d, J = 2,7 Hz, 1

25 H), 6,79 (s, 1 H), 6,21 - 5,76 (m, 1 H), 5,65 (d, J = 3,9 Hz, 1 H), 5,29 (d, J = 9,7 Hz, 1 H), 4,99 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 4,47 - 4,29 (m, 4H), 4,16 -4,09 (m, 1 H), 3,93 (s, 3H), 2,99 - 2,85 (m, 2H), 2,80 - 2,64 (m, 2H), 2,24 - 2,16 (m, 1 H), 2,13 -2,05 (m, 1 H), 2,01 -0,95 (m, 29H), 0,56 - 0,45 (m, 1 H), 0,45 - 0,35 (m, 1 H).

Ejemplo 34. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2

30 etilciclopropil}-9-etil-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

35 Ejemplo 34 se preparó de una manera similar al Ejemplo 17, sustituyendo el compuesto intermedio A3 por el compuesto intermedio A10 en la Etapa 7. El Ejemplo 34 se aisló (5,7 mg) con una pureza de aproximadamente un 95 %. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,81 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H55F2N6O9S: 833,4; encontrado: 833,25. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 10,027 (s a, 1 H), 7,98 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,29 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1 H), 7,09 (d, J= 2,8 Hz, 1 H), 6,32 (s a, 1 H), 5,92 (d, J =3,6 Hz, 1 H), 5,30 (d, J =10,0 Hz, 1 H), 4,42 -4,33

40 (m, 3H), 4,08 (dd, J = 11,6, 4,0 Hz, 1 H), 3,96 (s, 3H), 3,65 (m, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,51 (m, 2H), 2,02 (m, 1 H), 1,86 1,40 (m, 11 H) 1,34 - 1,14 (m, 7H), 1,09 (s, 9H), 1,10 - 0,82 (m, 6H), 0,72 (m, 1 H), 0,48 (m, 1 H).

Ejemplo 35. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2S)-2-(2,2-difluoroetil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,

45 19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b] quinoxalina-8-carboxamida

Ejemplo 35 se preparó de una manera similar al Ejemplo 17, sustituyendo el compuesto intermedio A8 por el compuesto intermedio A10 en la Etapa 7. El Ejemplo 35 se aisló (12,8 mg) con una pureza de aproximadamente un 5 90 %. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,78 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F4N6O9S: 883,4; encontrado: 883,2. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,69 (s a, 1 H), 7,98 (d, J =9,2 Hz, 1 H), 7,29 (dd, J= 9,2, 2,8 Hz, 1 H), 7,09 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 6,53 (s a, 1 H), 5,91 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 5,84 (tt, JH-F = 56 Hz, J = 3,6 Hz, 1 H), 5,33 (d, J = 6,4 Hz, 1 H), 4,43 (m, 2H), 4,34 (ap d, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,08 (dd, J = 11,6, 4,0 Hz, 1 H), 3,96 (s, 3H), 3,99 - 3,94 (m, 1 H), 3,68 (m, 1 H), 2,58 - 2,52 (m, 3H), 2,20 (m, 2H), 1,82 -1,58 (m, 7H) 1,54 - 1,40 (m, 5H), 1,36 - 1,18 (m, 6H),

10 1,09 (s, 9H), 1,10 - 1,00 (m, 1 H), 0,85 (m, 2H), 0,69 (m, 1H), 0,49 (m, 1 H).

Ejemplo 36. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,21aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-14-metoxi-3,6-dioxo-1a,3,4,5,6,9,10,17b,18,18a,19,20,21,21atetradecahidro-1H,8H-7,10-metanodiciclopropa[13,14:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12

15 b]quinoxalina-8-carboxamida

Etapa 1. Preparación de 361: A una solución de yoduro de trimetilsulfoxonio (72 mg, 0,32 mmol) en DMSO/THF (1:1, 2 ml) se añadió hidruro sódico (60 %, 12 mg, 0,32 mmol) y se agitó a ta durante 2 h. El macrociclo 15 (103 mg, 0,16 mmol) se añadió gota a gota en THF (3 ml). La mezcla se calentó a 65 ºC y se agitó durante 16 h.

Después de enfriar a ta, la mezcla se diluyó con EtOAc/H2O, se extrajo con EtOAc, se secó sobre MgSO4 anhidro, y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-25 % de EtOAc/hexanos) para dar 361 (27 mg) en forma de un residuo. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H51N4O7: 651,38; encontrado: 651,52.

5 Etapa 2. Preparación de 362: A una solución de 361 (26 mg, 0,04 mmol) en DCM (1 ml) se añadió TMSOTf (0,036 ml, 0,2 mmol) y se agitó a ta durante 2 h. La reacción se pipeteó en NaOH 1 N en agitación (2 ml). Después de 10 min, la mezcla se diluyó con DCM y se acidificó a pH 3 con HCl acuoso 1 N. Después de la extracción de la fase acuosa con DCM, los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 anhidro, y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-10 % de EtOAc/MeOH)

10 para dar 362 (24 mg) en forma de un residuo que se usó sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H43N4O7: 595,31; encontrado: 595,43. Etapa 3. Preparación del Ejemplo 36: A una solución de 362 (24 mg, 0,041 mmol), compuesto intermedio A10 (16 mg, 0,053 mmol), TBTU (19 mg, 0,06 mmol) y DMAP (8 mg, 0,06 mmol) en DCM (2 ml) se añadió DIPEA (0,021 ml, 0,12 mmol) y la reacción se agitó a ta durante 16 h. Además se añadieron el compuesto intermedio

15 A10 (16 mg, 0,053 mmol), TBTU (19 mg, 0,06 mmol), DMAP (8 mg, 0,06 mmol) y DIPEA (0,021 ml, 0,12 mmol) y la reacción se agitó a ta durante 4 h. La reacción se interrumpió con agua, se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHCO3 acuoso sat. y solución salina saturada, se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró al vacío. El material en bruto se purificó por HPLC en fase inversa (Gemini, 45-85 % de MeCN/H2O+TFA al 0,1%) y se liofilizó para dar el Ejemplo 36 (3 mg) en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,06 min.

20 LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F2N6O9S: 845,37; encontrado: 845,43. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,31 (s, 1 H), 7,72 (d, J = 10 Hz, 1 H), 7,20 - 7,17 (m, 2H), 5,60 - 5,82 (m, 2H), 5,51 (s, 1 H), 4,72 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,43 (d, J = 11,6 Hz, 1 H), 4,31 (s, 1 H), 4,26 - 4,22 (dd, J = 11,6, 4 Hz , 1 H), 3,94 (s, 3H), 3,78 (m, 1 H),2,60 (m, 1 H), 2,27 (m, 1 H), 2,04 (s, 3H), 1,68 (m, 3H), 1,59 (m, 2H), 1,54 - 1,15 (m, 11 H), 1,09 (s, 9H), 0,95 - 0,86 (m, 8H), 0,47 (m, 1 H).

25 Ejemplo 37. Preparación de (1R,4S,4aR,8S,11S,12S,13R,25aR)-8-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-12-etil-17-metoxi-6,9-dioxo-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25ahexadecahidro-1H,11H-1,4:10,13-dimetanoquinoxalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioxadiazaciclononadecino-11carboxamida

Etapa 1. Preparación del Ejemplo 37: A una solución de 136 (76 mg, 0,12 mmol), compuesto intermedio A10 (44 mg, 0,14 mmol), HATU (55 mg, 0,14 mmol) y DMAP (21 mg, 0,18 mmol) en DMF (2 ml) se añadió DIPEA

35 (0,11 ml, 0,6 mmol) y la reacción se agitó a ta durante 16 h. Se añadieron el compuesto intermedio adicional A10 (44 mg, 0,14 mmol), HATU (55 mg, 0,14 mmol), DMAP (21 mg, 0,18 mmol), seguido de DIPEA (0,11 ml, 0,6 mmol) y la reacción se agitó a 40 ºC durante 50 h. La reacción se interrumpió con agua, se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHCO3 acuoso sat. y solución salina saturada, se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró al vacío. El material en bruto se purificó por HPLC en fase inversa (Gemini, 45-85 % de MeCN/H2O + TFA al 0,1 %) y se liofilizó para dar

40 el Ejemplo 37 (30 mg) en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,44 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C44H61F2N6O9S: 887,42; encontrado: 887,50. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,24 (s, 1 H), 7,76 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,20 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1 H), 7,12 (m, 1 H), 5,95 - 5,66 (m, 2H), 5,43 (s, 1 H), 4,51 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 4,41 (s, 1 H), 4,20 - 4,10 (m, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,94 - 2,88 (m, 1 H), 2,73 - 2,63 (m, 2H), 2,11 (a, 2H), 2,02 - 0,83 (m, 41 H).

45 Ejemplo 38. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-14-metoxi-9-metil-5-(1-metilciclopentil)-3,6-dioxo1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

50 Etapa 1. Preparación de 381: la amina 182 (192 mg, 0,487 mmol) se trató con BEP (246 mg, 0,898 mmol), compuesto intermedio D14 (278 mg, 0,898 mmol), EtOAc (9 ml), NMP (1 ml) y DIPEA (0,42 ml, 2,4 mmol), a continuación se calentó a 50 ºC. Después de 1 h, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc. La solución orgánica se lavó sucesivamente con NaHCO3 acuoso sat. y solución salina saturada, a continuación se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 15 % a un 35 % de EtOAc/Hex) para proporcionar amida 381 (264 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H50ClN4O7: 685,34; encontrado: 685,82.

Etapa 2. Preparación de 382: la amida 381 (264 mg, 0,385 mmol) se trató con viniltrifluoroborato potásico (82 mg, 0,615 mmol), Pd(dppf)Cl2•DCM (33 mg, 0,041 mmol), EtOH (4,0 ml) y TEA (0,086 ml, 0,62 mmol), a continuación se calentó a reflujo. Después de 55 min, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con H2O y solución salina saturada. Los extractos orgánicos se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 15 % a un 30 % de EtOAc/Hex) para proporcionar la vinil quinoxalina 382 (168 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H53N4O7: 677,39; encontrado: 677,38. Etapas 3 y 4. Preparación de 383: la vinil quinoxalina 382 (225 mg, 0,332 mmol) se suspendió en DCE (66 ml) y se trató con catalizador de Zhan 1 B (42 mg, 0,067 mmol, Strem). La suspensión se desgasificó con burbujeo de N2 durante 28 min, a continuación se calentó a reflujo durante 90 min. A continuación, la mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 15 % a un 30 % de EtOAc/Hex) para proporcionar el macrociclo deseado (168 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H49N4O7: 649,36; encontrado: 649,33). El macrociclo se disolvió en EtOH (25 ml) y EtOAc (5 ml) y se trató con Pd/C (Pd al 10 % en peso, 95 mg). Se burbujeó hidrógeno desde un globo a través de la suspensión durante 1 min la reacción se agitó bajo una atmósfera de H2 durante un periodo adicional de 1,5 h. Después de la finalización, la mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró al vacío para proporcionar el macrociclo deseado 383 que se usó sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H51N4O7: 651,38; encontrado: 651,42. Etapa 5. Preparación de 384: el compuesto 383 sin purificar de la etapa anterior se disolvió en DCM (10 ml) y se trató con TMSOTf (0,23 ml, 1,3 mmol). Después de agitar a ta durante 1 h 15 min, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo se disolvió de nuevo en DCM y se pipeteó en NaOH acuoso 1 M. La mezcla se agitó durante 1 min, a continuación se acidificó a pH ~ 1-2 con un 10 % de HCl acuoso. La fase acuosa se extrajo tres veces con DCM y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 0 % a un 20 % de MeOH/EtOAc) para proporcionar el ácido carboxílico 384 (131 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+ H ]+calc. para C32H43N4O7: 595,31; encontrado: 595,29. Etapa 6. Preparación del Ejemplo 38: el ácido carboxílico 384 (131 mg, 0,220 mmol) y el compuesto intermedio A10 (81 mg, 0,264 mmol) se trataron con TBTU (85 mg, 0,264 mmol), DMAP (32 mg, 0,264 mmol), DCM (2,6 ml) y DIPEA (0,38 ml, 2,2 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 14 h, a continuación se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por HPLC para proporcionar el Ejemplo 38 (74 mg) con una pureza de aproximadamente un 90 % en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,93 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F2N6O6S: 845,37; encontrado: 845,57. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,12 (s, 1 H), 7,77 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,20 (dd, J = 9,0 Hz, 2,7 Hz, 1 H), 7,16 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 5,81 (td, J = 55,9, 6,6 Hz, 1 H), 5,59 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 4,52 (d, J = 6,8 Hz, 1 H), 4,50 (s, 1 H), 4,40 (d, J = 12,0 Hz, 1H),4,18(dd, J = 11,9 Hz, 3,9 Hz, 1 H), 3,93 (s, 3H), 3,74 (m, 1 H), 2,97-2,90 (m, 1 H), 2,85-2,75 (m, 2H), 2,01 (m, 2H), 1,85-1,41 (m, 21 H), 1,12 (s, 3H), 1,08 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 0,96 (m, 2H), 0,91 (t, J = 4,3 Hz, 2H), 0,70 (m, 1H), 0,48 (m, 1 H).

Ejemplo 39. Preparación de (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-11-etil-16-metoxi-3a metil-5,8-dioxo1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida Etapa 1. Preparación de 391: el éter de quinoxalina 11 (588,7 mg, 1,159 mmol) se disolvió en TFA (5 ml). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. El TFA se retiró al vacío para dar la sangre TFA de 391 (631,2 mg) en forma de un polvo incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C16H19ClN3O4: 352,1; encontrado: 352,1. Etapa 2. Preparación de 392: la sal de TFA de 391 (631,2 mg, 1,159 mmol) se disolvió en CH2Cl2/MeOH (3 ml/3 ml). A la solución se añadió una solución de TMSCHN2 (hexano 2 M, 3 ml, 5,177 mmol) a ta. La solución se agitó durante 30 min para producir a suspensión que se filtró a través de un embudo de vidrio con frita para retirar los sólidos. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar un residuo que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (100 % de acetato de etilo) para producir el éster de metilo 392 (213,0 mg) en forma de cristales incoloros. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C17H21ClN3O4: 366,1; encontrado: 366,1. Etapa 3. Preparación de 393: el compuesto intermedio D7 (191,2 mg, 0,587 mmol) y el éster de metilo 392 (414,1 mg, 1,132 mmol) se trataron con HATU (860,0 mg, 2,264 mmol) y DIPEA (0,59 ml, 3,396 mmol) en DMF (8 ml) a ta durante 4 h. La reacción se interrumpió con H2O (50 ml) y se extrajo con EtOAc (50 ml tres veces). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con solución salina saturada (50 ml) y se secaron sobre Na2SO4 anhidro. Después de la retirada del agente de secado por filtración, el disolvente se retiró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (20 % de acetato de etilo en hexanos) para dar la amida deseada 393 (573,9 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+Na]+ calc. para C33H49ClN4NaO7: 695,3; encontrado: 695,3. Etapa 4. Preparación de 394: la amida 393 (573,9 mg, 0,8524 mmol), trifluorovinilborato potásico (171,3 mg, 1,279 mmol) y PdCl2dppf•CH2Cl2 (62,4 mg, 0,085 mmol) se trataron con Et3N (0,18 ml, 1,279 mmol) en EtOH (8 ml) en una atmósfera de nitrógeno y se calentó a reflujo suavemente durante 30 min. La reacción se diluyó con PhMe (30 ml) y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (20 % de acetato de etilo en hexanos) para dar la vinil quinoxalina deseada 394 (542,0 mg, 0,8152 mmol) en

forma de una espuma de color naranja. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H52N4NaO7: 687,4; encontrado: 687,3. Etapa 5. Preparación de 395: la vinil quinoxalina 394 (542,0 mg, 0,8152 mmol) se trató con catalizador de Zhan 1 b (59,8 mg, 0,08 mmol, Strem) en DCE (41 ml). La mezcla se calentó a 80 ºC durante 1 h. Se añadió una

5 cantidad adicional de catalizador de Zhan 1 b (59,8 mg, 0,08 mmol, Strem) y la mezcla se calentó a 80 ºC durante un periodo adicional de 30 min. El disolvente se retiró al vacío y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (20 % de acetato de etilo en hexanos) para producir el macrociclo 395 (401,0 mg, 0,6297 mmol) en forma de un aceite de color naranja. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H49N4O7: 637,4; encontrado: 637,3.

10 Etapa 6. Preparación de 396: el macrociclo 395 (401,0 mg, 0,6297 mmol) se recogió en 1,4-dioxano (15 ml) y se trató con Pd/C (Pd al 10 % en peso, 200,0 mg) y MgO (200,0 mg) agitado en una atmósfera de hidrógeno. La mezcla se agitó a ta durante 1 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite (5 g) usando EtOAc (80 ml). El disolvente se retiró al vacío para dar el macrociclo 396 (425,3 mg) en forma de un aceite de color naranja. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H51N4O7: 639,4; encontrado: 639,3.

15 Etapa 7. Preparación de 397: el macrociclo 396 (74,8 mg, 0,110 mmol) se trató con una solución acuosa de LiOH 2 M (1,6 ml, 3,15 mmol) en MeOH/THF (4 ml /4 ml) a ta durante 8 h, 50 ºC durante 2 h y a continuación a 60 ºC durante 3 horas. La mezcla se enfrió a 0 ºC usando un baño de agua con hielo. A la mezcla se le añadió solución salina saturada (30 ml). El conjunto se extrajo con CH2Cl2 (30 ml tres veces). La fase orgánica se lavó con solución salina saturada (30 ml) y se secó sobre Na2SO4 anhidro. Después de retirar el agente de secado

20 por filtración, el disolvente se retiró al vacío para dar el ácido carboxílico 397 (370,6 mg, 0,5932 mmol) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H49N4O7: 625,4; encontrado: 625,3. Etapa 8. Preparación del Ejemplo 39: el ácido carboxílico 397 (100,0 mg, 0,1601 mmol) y el compuesto intermedio A10 (73,2 mg, 0,2401 mmol) se trataron con HATU (91,3 mg, 0,2401 mmol) y DIPEA (0,14 ml, 0,8005 mmol) en DMF (3 ml) a ta durante 5 h. La reacción se interrumpió con H2O (30 ml) y se extrajo con EtOAc

25 (30 ml tres veces). La fase orgánica se lavó con solución salina saturada (30 ml) y se secó sobre Na2SO4 anhidro. Después de retirar el agente de secado por filtración, el disolvente se retiró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 25 % a un 100 % de acetato de etilo en hexanos). Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron al vacío y el residuo se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de fluido supercrítico (DAICEL Chiralpak IC 10 x 250 mm, 18,9 ml/min, 35 %

30 de MeOH, 2 MPa, 40 ºC) para dar el Ejemplo 39 (80,5 mg, 0,0920 mmol, 57 %) en forma de un polvo incoloro. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,35 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C43H61F2N6O9S: 875,4; encontrado: 875,4. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) δ 7,81 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 7,27 (s, 1 H), 7,24 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 6,68 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 5,74-6,30 (m, 3H), 4,73 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,73 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,40-4,60 (m, 1 H), 4,22 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,95 (s, 3H), 3,61 (c, J = 7,2 Hz, 2H), 3,16-3,30 (m, 1 H), 2,50-2,77 (m, 2H), 2,20-0,60

35 (m, 21 H), 1,35 (s, 3H) 1,12 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,18 (s, 3H), 1,02 (s, 9H).

Ejemplo 40. Preparación de (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2(difluorometil)ciclopropil]-11-etil-16-metoxi-3a-metil-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24ahexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10

40 carboxamida

El Ejemplo 40 se preparó de una manera similar al Ejemplo 39, sustituyendo el compuesto intermedio A9 por el

45 compuesto intermedio A10 en la Etapa 8. El Ejemplo 40 se aisló (70,9 mg) con una pureza de aproximadamente un 92 %. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,24 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H59F2N6O9S: 861,4; encontrado: 861,4. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) δ 7,80 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 7,25 (s, 1 H), 7,23 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 6,70 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 5,60-6,10 (m, 3H), 4,69 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,39 (dd, J = 12,0, 6,0 Hz, 1 H), 4,2 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,03-4,10 (m, 1 H), 3,94 (s, 3H), 3,12-3,28 (m, 1 H), 2,89-3,05 (m, 1 H), 2,50-2,76 (m, 2H), 2,30-0,80 (m, 19H), 1,36 (s, 3H) 1,25 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,04 (s, 9H).

Ejemplo 41, Preparación de (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(1R,2S)-2-(2,2-difluoroetil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-11-etil-16-metoxi-3a-metil-5,8-dioxo1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida

10 El Ejemplo 41 se preparó de una manera similar al Ejemplo 39, sustituyendo el compuesto intermedio A8 por el compuesto intermedio A10 en la Etapa 8. El Ejemplo 41 se aisló (4,3 mg) con una pureza de aproximadamente un 92 %. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,36 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H59F2N6O9S: 889,4; encontrado: 889,5. RMN 1H (300 MHz, CD3COCD3) δ 7,83 (d, J = 7,83 Hz, 1 H), 7,19-7,30 (m, 1 H), 5,74-6,30 (m, 3H), 4,70 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,19 (dd, J = 12,0, 6,0 Hz, 1 H), 4,24 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,12 (d, J = 12,0, 9,6 Hz, 1

15 H), 3,96 (s, 3H), 3,10-3,26 (m, 1 H), 2,56-2,80 (m, 2H), 2,30-0,80 (m, 25H), 1,54 (s, 3H), 1,42 (s, 3H), 1,12 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,06 (s, 9H).

Ejemplo 42 y Ejemplo 43. Preparación de (1aS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-1a-etil-14-metoxi-9-metil-3,6-dioxo

20 1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida y (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-1a-etil-14-metoxi-9-metil-3,6-dioxo1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10

25 metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida Etapa 1. Preparación de 431: A una solución del mezcla de los compuestos intermedios D15 (281 mg, 0,81 mmol) y el compuesto intermedio 182 (290 mg, 0,74 mmol) en MeCN (3,7 ml) se añadió HATU (308 mg,

5 0,81 mmol) seguido de DIPEA (640 µl, 3,68 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 17 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, y el residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar 431 (121 mg, mezcla diastereomérica a 1:1) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H52ClN4O7: 687,3; encontrado: 687,5. Etapa 2. Preparación de 432: A una solución de la mezcla diastereomérica 431 (121 mg, 176 µmol), TEA (38 µl,

10 264 µmol) y viniltrifluoroborato potásico (35,4 mg, 264 µmol) en EtOH (0,88 ml) se añadió PdCl2(dppf) (14,4 mg, 17,6 µmol). La mezcla de reacción se desgasificó con argón durante 10 min y se calentó a 78 ºC. Después de 25 min, la mezcla de reacción se dejó enfriar a ta y se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar 432 (105 mg, mezcla diastereomérica a 1:1) en forma de un aceite de color amarillo. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H55N4O7: 679,4; encontrado: 679,5. Etapa 3. Preparación de 433: A una solución de la mezcla diastereomérica 432 (105 mg, 155 µmol) en DCE (31 ml) se añadió el catalizador de Zhan 1B (11,3 mg, 15,5 µmol, Strem) y la mezcla de reacción se desgasificó durante 10 minutos con argón. A continuación, la mezcla de reacción se calentó a 100 ºC. Después de 15 min, la mezcla de reacción se dejó enfriar a ta y se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar 433 (52,3 mg, mezcla diastereomérica a 1:1) en forma de un aceite de color amarillo claro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H51N4O7: 651,4; encontrado: 651,5. Etapa 4. Preparación de 434: A una solución de la mezcla diastereomérica 433 (52 mg, 80 µmol) en etanol (0,4 ml) se añadió Pd/C (Pd al 10 % en peso, 9 mg, 8 µmol) a ta bajo una atmósfera de argón. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a ta. Después de 45 min, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (1 ml) y se filtró a través de una capa de Celite con lavados con acetato de etilo (3 x 1 ml). El filtrado se concentró al vacío para proporcionar 434 (49 mg, mezcla diastereomérica a 1:1), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H52N4O7: 653,4; encontrado: 653,6. Etapa 5. Preparación de 435: A una solución de la mezcla diastereomérica 434 (49 mg, 67 µmol) en DCM (0,5 ml) se añadió TMSOTf (60 µl, 0,34 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 3 h, la mezcla de reacción se añadió lentamente a una solución acuosa de NaOH 0,25 N (enfriada previamente a 0 ºC, 1 ml). La mezcla resultante se diluyó con una solución acuosa de HCl 1 N (5 ml), y se extrajo con DCM (3 x 5 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron para proporcionar 435 (71 mg, mezcla diastereomérica a 1:1) en forma de un sólido de color castaño, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H45N4O7: 597,3; encontrado: 597,5. Etapa 6. Preparación del Ejemplos 42 y 43: A una solución de la mezcla diastereomérica 435 (71 mg, ~67 µmol) y compuesto intermedio A10 (54 mg, 178 µmol) en MeCN (1,00 ml) se añadió HATU (69 mg, 178 µmol) seguido de DIPEA (155 µl, 0,89 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, y el residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-100 % de acetato de etilo/hexanos). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se volvieron a purificar mediante HPLC preparativa (columna Gemini 5u C18 110Å, 50-100 % de MeCN/H2O, modificador de ácido trifluoroacético al 0,1 %) y se liofilizaron para proporcionar el Ejemplo 42 (10 mg) y el Ejemplo 43 (10 mg) en forma de polvos de color blanquecino. El Ejemplo 42: Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,04 min. [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 847,4; encontrado: 847,6. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,98 (s, 1 H), 7,73 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,20 -7,13 (m, 2H), 5,70 (td, J = 55,8, 6,4 Hz, 1 H), 5,65 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 5,44 (s a, 1 H), 4,55 - 4,42 (m, 1 H), 4,20 -4,03 (m, 1 H), 3,87 (s, 3H), 3,17 - 3,08 (m, 1 H), 2,85 - 2,72 (m, 1 H), 2,71 - 2,59 (m, 1 H), 2,18 - 2,06 (m, 1 H), 2,03 - 1,83 (m, 4H), 1,80 - 1,53 (m, 5H), 1,50 (s a, 3H), 1,46 (s, 3H), 1,40 - 1,31 (m, 1 H), 1,33 - 1,09 (m, 5H), 1,06 (s, 9H), 1,05 - 0,95 (m, 6H), 0,92 - 0,73 (m, 3H). Ejemplo 43: Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,17 min. [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 847,4; encontrado: 847,6. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,03 (s, 1 H), 7,68 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 7,14 -7,09 (m, 2H), 5,68 (td, JH-F = 55,5, 6,7 Hz, 1 H), 5,59 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 4,45 (d, J = 6,8 Hz, 1 H), 4,29 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,12 (s, 1 H), 4,08 (dd, J = 12,1, 4,3 Hz, 1 H), 3,82 (s, 3H), 2,90 - 2,79 (m, 1 H), 2,79 - 2,70 (m, 1 H), 2,66 - 2,56 (m, 1 H), 2,43 - 2,31 (m, 1 H), 1,95 - 1,85 (m, 2H), 1,75 - 1,62 (m, 1 H), 1,61 - 1,42 (m, 5H), 1,44 (s a, 3H) 1,40 (s, 3H), 1,34 - 1,02 (m, 8H), 1,00 (s, 9H), 0,99 - 0,89 (m, 5H), 0,85 - 0,74 (m, 3H).

Ejemplo 44. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-14-metoxi-1a,9-dimetil-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida

Etapa 1. Preparación de 441: se añadieron HATU (544 mg, 1,43 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,83 ml, 4,76 mmol) a una mezcla de 182 (429 mg, 1,09 mmol) y una mezcla de los compuestos intermedios D6 (395 mg, 5 1,33 mmol) en 12 ml de acetonitrilo en atmósfera de argón. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-30 % de acetato de etilo en hexanos) para producir 441 (545 mg; mezcla de diastereómeros a 1:1) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H50ClN4O7: 673,33; encontrado: 673,47. Etapa 2. Preparación de 442: se añadió Pd(dppf)Cl2•CH2Cl2 (74 mg, 0,091 mmol, Strem) a una mezcla 10 desoxigenada de 441 (542 mg, 0,805 mmol), viniltrifluoroborato potásico (168 mg, 1,25 mmol) y trietilamina (0,170 ml, 1,21 mmol) en 9 ml de EtOH a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 78 ºC bajo una atmósfera de argón durante 75 minutos. Después de enfriar a ta, se añadieron 6 ml de tolueno y la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-35 % de acetato de etilo en hexanos) para producir 442 (438 mg; mezcla de diastereómeros a 1:1) en forma de una

15 película de color amarillo. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H53N4O7: 665,38; encontrado: 665,55.

Etapa 3. Preparación de 443 y 444: una mezcla diastereomérica 442 (437 mg, 0,658 mmol) y catalizador de Zhan 1B (81 mg, 0,072 mmol, Strem) en 131 ml de DCE se desoxigenó bajo una atmósfera de argón durante 25 minutos. A continuación, la mezcla se calentó a 95 ºC durante 50 minutos. Se añadió una cantidad adicional de 7 mg de catalizador de Zhan 1B y la mezcla de reacción se calentó a 95 ºC durante 10 minutos. Después de 5 enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-40 % de acetato de etilo en hexanos) para producir los diastereómeros individuales 443 (143 mg, componente de elución temprana) en forma de una película de color amarillo claro y 444 (118 mg, componente de elución tardía) en forma de un sólido de color amarillo claro. Compuesto de elución temprana 443: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H49N4O7: 637,35; encontrado: 637,45. Compuesto

10 de elución tardía 444: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H49N4O7: 637,35; encontrado: 637,59. Etapa 4. Preparación de 445: se añadió paladio sobre carbono (Pd al 10 % en peso, 48 mg, 0,045 mmol) a una solución de 443 (143 mg, 0,225 mmol) en 6 ml de etanol. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la reacción se agitó durante 90 minutos. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró al vacío para producir 445 (130 mg) en forma de una película sólida de color marrón, que

15 se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H51N4O7: 639,37; encontrado: 639,53. Etapa 5. Preparación de 446: se añadió TMSOTf (0,53 ml, 2,91 mmol) gota a gota a una solución de 445 (130 mg, 1,27 mmol) en 3,8 ml de diclorometano bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente. Después de una hora, se añadió una cantidad adicional de 0,22 ml de TMSOTf. Después de un periodo adicional de una

20 hora, se añadieron 0,20 ml de TMSOTf. Después de 40 minutos, se añadieron 0,25 ml de TMSOTf. Después de una obra, la mezcla de reacción se recogió en 10 ml de diclorometano y se inactivó mediante la adición de 20 ml de HCl acuoso 1 N con agitación. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con solución salina saturada, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para producir 446 (113 mg) en forma de un sólido de

25 color blanquecino, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C31H43N4O7: 583,31; encontrado: 583,45. Etapa 6. Preparación del Ejemplo 44: se añadieron HATU (53 mg, 0,139 mmol) y DIPEA (0,080 ml, 0,459 mmol) a una mezcla de 446 (51 mg, 0,088 mmol) y el compuesto intermedio A10 (49 mg, 0,161 mmol) en 1,5 ml de MeCN en atmósfera de argón. Después de agitar durante una noche, se añadió una cantidad adicional de 13 mg

30 del compuesto intermedio A10. Después de una hora, la mezcla de reacción se recogió en 15 ml de acetato de etilo y se vertió en 20 ml de HCl acuoso 1 N. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y solución salina saturada, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-40 % de acetato de etilo en hexanos) para producir el Ejemplo 44 (41 mg) en forma de un

35 sólido de color blanquecino. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,86 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H55F2N6O9S: 833,36; encontrado: 833,51. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 7,79 (d, J = 10 Hz, 1 H), 7,28-7,21 (m, 2H), 6,77 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 5,81 (td, JH-F = 56 Hz, J = 6,4 Hz, 1 H), 5,73-5,70 (m, 1 H), 4,56 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,40 (d, J = 11,6 Hz, 1 H), 4,26-4,16 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,05-2,91 (m, 1 H), 2,90-2,82 (m, 1 H), 2,77-2,68 (m, 1 H), 2,06-1,94 (m, 2H), 1,88-1,74 (m, 1 H), 1,72-1,58 (m, 3H), 1,58-1,44 (m, 4H), 1,53 (s, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,43

40 1,36 (m, 1 H), 1,12-1,02 (m, 2H), 1,09 (s, 9H), 1,07 (d, J = 4 Hz, 3H), 1,00-0,94 (m, 2H), 0,92-0,84 (m, 3H), 0,160,11 (m, 1 H).

Ejemplo 45. Preparación de (1aS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-14-metoxi-1a,9-dimetil-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a45 tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida

50 El Ejemplo 45 se preparó de una manera similar al Ejemplo 44, sustituyendo el compuesto de elución tardía 444 por el compuesto de elución temprana 443 en la etapa 4. El Ejemplo 45 se aisló (23 mg) en forma de un sólido de color blanquecino. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,92 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H55F2N6O9S: 833,36; encontrado: 833,54. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 7,79 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,25-7,19 (m, 2H), 6,55 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 5,78 (td, JH-F = 61 Hz, J = 6 Hz, 1 H), 5,52-5,48 (m, 1 H), 4,58 (d, J = 6,4 Hz, 1 H), 4,52 (d, J = 12 Hz, 1 H), 4,17-4,10 (m, 1 H), 4,04 (d, J = 6,4 Hz, 1 H), 3,93 (s, 3H), 3,22-3,14 (m, 1 H), 2,88-2,80 (m, 1 H),

5 2,78-2,66 (m, 1 H), 2,08-1,90 (m, 2H), 1,76-1,64 (m, 1 H), 1,63-1,50 (m, 7H), 1,51 (s, 3H), 1,47-1,36 (m, 2H), 1,46 (s, 3H), 1,18-1,06 (m, 1 H), 1,12 (s, 9H), 1,07 (m, 3H), 1,00-0,80 (m, 4H), 0,10-0,04 (m, 1 H).

Ejemplo 46 y 47. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-18,18-difluoro-14-metoxi-9-metil-3,6-dioxo

10 1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida y (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-18-fluoro-14-metoxi-9-metil-3,6-dioxo1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10

15 metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

Etapa 1. Preparación de 461: Una mezcla del compuesto intermedio B1 (627 mg, 2,08 mmol), compuesto intermedio E3 (548 mg, 1,91 mmol) y carbonato de cesio (744 mg, 2,28 mmol) en 7 ml de DMF se agitó a 85 ºC 5 bajo una atmósfera de argón durante 36 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en 30 ml de agua y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y solución salina saturada, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-30 % de acetato de etilo en hexanos) para producir 461 (891 mg) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-ESI+ (m/z):

10 [M+H]+ calc. para C27H36F2N3O6: 536,25; encontrado: 536,35. Etapa 2. Preparación de 462: el éter de quinoxalina 461 (478 mg, 0,893 mmol) se disolvió en 4,2 ml de acetato de terc-butilo y 1,1 ml de diclorometano a temperatura ambiente. Se añadió MeSO3H (0,30 ml, 4,67 mmol) gota a gota y la mezcla de reacción se agitó a ta durante 2 h. La mezcla de reacción se transfirió a una mezcla agitada de EtOAc (20 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (30 ml). Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío para proporcionar la amina 462 en forma de una película sólida de color amarillo (346 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C22H28F2N3O4: 436,20; encontrado: 436,29. Etapa 3. Preparación de 463: se añadieron HATU (396 mg, 1,04 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,57 ml, 3,29 mmol) a una mezcla de 462 (345 mg, 0,793 mmol) y el compuesto intermedio D11 (260 mg, 0,965 mmol) en 9 ml de acetonitrilo en atmósfera de argón. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-40 % de acetato de etilo en hexanos) para producir 463 (545 mg) en forma de una película sólida transparente. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H49F2N4O7: 687,35; encontrado: 687,57. Etapa 4. Preparación de 464: Una mezcla de 463 (480 mg, 0,699 mmol) y catalizador de Zhan 1B (61 mg, 0,083 mmol, Strem) en 140 ml de DCE se desoxigenó con argón durante 18 minutos. A continuación, la mezcla se calentó a 95 ºC durante 70 minutos. Se añadió una cantidad adicional de 20 mg de catalizador de Zhan 1B y la mezcla se agitó a 95 ºC durante una hora. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-35 % de acetato de etilo en hexanos) para producir una mezcla inseparable de 464 (principal), y aproximadamente un 15 % de 471 (secundario; 233 mg en total) en forma de un sólido de color blanquecino. Componente principal 464: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H45F2N4O7: 665,38; encontrado: 665,50. Componente secundario 471: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H44FN4O7: 639,31; encontrado: 639,49. Etapa 5. Preparación de mezcla de 465 y 472: se añadió paladio sobre carbono (Pd al 10 % en peso, 70 mg, 0,066 mmol) a una solución de la mezcla de 464 y 471 (232 mg, 0,353 mmol) de la etapa previa en 9 ml de etanol. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y se agitó durante 7 h. La reacción se filtró sobre Celite, lavando con etanol. El filtrado se concentró al vacío para producir una mezcla de 465 (principal) y 472 (secundario; 216 mg total) en forma de un sólido de color blanquecino, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Componente principal 465: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H47F2N4O7: 661,33; encontrado: 661,52. Componente secundario 472: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H48FN4O7: 643,34; encontrado: 643,57. Etapa 6. Preparación de mezcla de 466 y 473: se añadió TMSOTf (0,35 ml, 1,90 mmol) gota a gota a una solución de una mezcla de 465 y 472 (215 mg, 0,326 mmol) de la etapa previa en 6,5 ml de diclorometano bajo una atmósfera de argón a ta. Después de 1 h, se añadió una cantidad adicional de 0,18 ml de TMSOTf. Después de un periodo adicional de una hora, se añadieron 0,30 ml de TMSOTf. Después de 2 h, se añadieron 0,18 ml de TMSOTf. Después de 1 h, se añadió una cantidad adicional de 0,18 ml de TMSOTf. Después de 45 minutos, la mezcla de reacción se recogió en 25 ml de diclorometano y se inactivó mediante la adición de 30 ml de HCl acuoso 1 N con agitación. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 40 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con solución salina saturada, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para producir una mezcla inseparable de 466 (principal) y 473 (secundario; 187 mg total), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Componente principal 466: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C30H39F2N4O7: 605,27; encontrado: 605,44. Componente secundario 473: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C30H39FN4O7: 587,28; encontrado: 587,38. Etapa 7. Preparación del Ejemplo 46 y del Ejemplo 47: se añadieron HATU (160 mg, 0,421 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,25 ml, 1,44 mmol) a una mezcla de 466 y 473 (150 mg, 0,248 mmol) de la etapa previa y el compuesto intermedio A10 (150 mg, 0,496 mmol) en 6,5 ml de acetonitrilo en atmósfera de argón. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se recogió en 30 ml de acetato de etilo y se vertió en 30 ml de HCl acuoso 1 N. La fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y solución salina saturada, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-50 % de acetato de etilo en hexanos) y HPLC preparativa en fase inversa (50-100 % de acetonitrilo en agua, con tampón de ácido trifluoroacético al 0,1 %) para producir la sal del ácido trifluoroacético del Ejemplo 46 (107 mg) en forma de un sólido de color amarillo claro y la sal del ácido trifluoroacético de la mezcla de diastereómeros a 1:1 del Ejemplo 47 (12 mg) en forma de un sólido de color amarillo claro. Ejemplo 46: Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,60 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H51F4N6O9S: 855,33; encontrado: 855,63. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): δ 9,23 (s, 1 H), 7,94 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,31 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1 H), 7,28 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 5,78 (td, JH-F = 66 Hz, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,68-5,66 (m, 1 H), 4,57 (d, J = 6,4 Hz, 1 H), 4,41 (d, J = 12 Hz, 1 H), 4,35 (s, 1 H), 4,22-4,16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1 H), 3,97 (s, 3H), 3,72-3,66 (m, 1 H), 2,86-2,76 (m, 1 H), 2,64-2,48 (m, 1 H), 2,11-1,94 (m, 3H), 1,86-1,74 (m, 3H), 1,73-1,62 (m, 1 H), 1,58-1,54 (m, 2H), 1,50 (s, 3H), 1,49-1,44 (m, 1 H), 1,42-1,38 (m, 1 H), 1,11-1,04 (m, 4H), 1,09 (s, 9H), 1,02-0,94 (m, 2H), 0,93-0,86 (m, 2H), 0,78-0,66 (m, 1 H), 0,54-0,46 (m, 1 H). Ejemplo 47 (mezcla de diastereómeros a 1:1): Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,45 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H52F3N6O9S: 837,34; encontrado: 837,63. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): δ 9,13 (s, 1 H), 7,89 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,27 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1 H), 7,24 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 5,99-5,43 (m, 1 H), 5,79 (td, JH-F = 55 Hz, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,53-5,50 (m, 1 H), 4,57-4,44 (m, 2H), 4,11 (s, 1 H), 4,35 (s, 1 H), 4,22-4,13 (dd, J = 12,4, 4 Hz, 1 H), 3,95 (s, 3H), 3,83-3,79 (m, 1 H), 2,94-2,80 (m, 2H), 2,28-2,14 (m, 1 H), 2,061,96 (m, 2H), 1,88-1,69 (m, 4H), 1,58-1,54 (m, 2H), 1,51 (s, 3H), 1,44-1,36 (m, 1 H), 1,32-1,26 (m, 1 H), 1,14-1,04 (m, 4H), 1,10 (s, 9H), 1,02-0,86 (m, 4H), 0,74-0,64 (m, 1 H), 0,58-0,48 (m, 1 H).

Ejemplo 48. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(1R,2S)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2etenilciclopropil}-14-metoxi-9-metil-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida Etapa 1: Preparación del Ejemplo 48: A una suspensión del ácido 187 (9,7 mg, 0,017 mmol) y el compuesto

5 intermedio A1 (13 mg, 0,049 mmol) en MeCN (0,4 ml) se añadió DIPEA (40 µl, 0,23 mmol). A la solución resultante se añadió HATU (12,5 mg, 0,033 mmol). La reacción se agitó a ta durante 1 h y se diluyó con EtOAc (2 ml), HCl acuoso 0,2 M (1 ml), y solución salina saturada (1 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 2 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto que se disolvió en CH2Cl2 y se adsorbió sobre 1 g de gel de sílice. La

10 purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 50 % de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 48 en forma de un sólido de color blanco amorfo (8,4 mg). Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,52 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H53N6O9S: 781,4; encontrado: 781,2. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,91 (s, 1 H), 7,83 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1 H), 7,10 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 6,73 (s, 1 H), 5,86 -5,72 (m, 1 H), 5,57 (d, J = 3,8 Hz, 1 H),

15 5,48 (d, J = 9,9 Hz, 1 H), 5,27 - 5,15 (m, 1 H), 5,15 - 5,07 (m, 1 H), 4,48 - 4,35 (m, 3H), 4,12 (dd, J = 11,8, 4,1 Hz, 1 H), 3,94 (s, 3H), 3,81 - 3,71 (m, 1 H), 2,98 -2,75 (m, 4H), 2,16 - 2,09 (m, 1 H), 1,94 (dd, J = 8,2, 5,8 Hz, 1 H), 1,87 - 1,24 (m, 9H), 1,17 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 1,09 (s, 9H), 1,04 - 0,91 (m, 5H), 0,75 - 0,65 (m, 1 H), 0,52 - 0,42 (m, J = 6,0 Hz, 1 H).

20 Ejemplo 49. Preparación de (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-15-metoxi-10-metil-4,7-dioxo1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9carboxamida

Etapa 1: Preparación del Ejemplo 49: A una suspensión del ácido 334 (30 mg, 0,049 mmol) y el compuesto intermedio A10 (31 mg, 0,10 mmol) en MeCN (700 µl) se añadió DIPEA (70 µl, 0,40 mmol). Se añadió HATU (32 mg, 30 0,084 mmol) a la solución resultante, y la reacción se agitó a ta durante 1,5 h. A continuación se añadió una porción adicional del compuesto intermedio A10 (6 mg, 0,02 mmol). La reacción se agitó durante un periodo adicional de 30 min y a continuación se diluyó con EtOAc (30 ml), HCl acuoso 0,2 M (15 ml) y solución salina saturada (15 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 y 35 se adsorbió sobre 2 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 50 % de acetona en hexanos) proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 49 en forma de un sólido de color blanco amorfo (30,5 mg). Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,15 min.

LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H57F2N6O9S: 859,4; encontrado: 859,2. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,86 (s, 1 H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,45 (s, 1 H), 7,18 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1 H), 7,08 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 6,14 - 5,71 (m, 1 H), 5,61 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 5,28 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 5,00 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 4,49 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 4,42 - 4,31 (m, 2H), 4,12 (dd, J = 11,6, 4,0 Hz, 1 H), 3,93 (s, 3H), 3,00 - 2,63 (m, 4H), 2,25 - 2,16 (m, 1 H), 2,09 - 1,90 (m, 4H),

5 1,81 - 0,95 (m, 26H), 0,92 -0,75 (m, 3H), 0,57 - 0,45 (m, 1 H), 0,44 - 0,36 (m, 1 H).

Ejemplo 50. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-9-(cianometil)-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8

10 carboxamida

El Ejemplo 50 se preparó de una manera similar al Ejemplo 1, sustituyendo el compuesto intermedio B8 por el

15 compuesto intermedio B4 en la etapa 1. El Ejemplo 50 se purificó por HPLC en fase inversa (columna Gemini, 5898 % de ACN/H2O + TFA al 0,1 %) y se liofilizó para proporcionar un sólido (5 mg) en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,29 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H51F2N7O9S: 844,94; encontrado: 844,58. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,71 (s, 1 H), 7,79 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,22 (m, 2H), 6,25 (m, 1 H), 6,08 - 5,80 (m, 1 H), 4,39 (m, 1 H), 4,29 (m, 2H), 4,13 (m, 1 H), 3,92 (s, 3H), 3,65 (m, 1 H), 3,06 -2,83 (m, 4H),

20 2,55 (m, 1 H), 2,14 - 1,47 (m, 17H), 1,03 (s, 9H), 0,92 (m, 4H), 0,65 (m, 1 H), 0,45 - 0,43 (m, 1 H).

Ejemplo 51. Preparación de (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-N-{(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2etilciclopropil}-11-etil-16-metoxi-3a-metil-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida

El Ejemplo 51 se preparó de una manera similar al Ejemplo 39, sustituyendo el compuesto intermedio A3 por el compuesto intermedio A10 en la etapa 8. El Ejemplo 51 se aisló (12,3 mg) con una pureza de aproximadamente un

30 96,5 %. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,38 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C43H63N6O9S: 839,4; encontrado: 839,5. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) δ 7,60 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 6,98-7,08 (m, 2H), 6,53 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 5,57-5,83 (m, 2H), 4,52 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 4,24 (dd, J = 10,8, 6,0 Hz, 1 H), 4,02 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,82 (dd, J = 10,8, 2,4 Hz, 1 H), 3,73 (s, 3H), 2,93-3,10 (m, 1 H), 2,80-2,90 (m, 2H), 2,30-2,58 (m, 2H), 0,60-2,10 (m, 32H), 0,84 (s, 9H).

Ejemplo 52. Preparación de (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-11-etil-N-[(1R,2S)-2-(2-fluoroetil)1-{[(1-metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-16-metoxi-3a-metil-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12, 20, 21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12b]quinoxalina-10-carboxamida

El Ejemplo 52 se preparó de una manera similar al Ejemplo 39, sustituyendo el compuesto intermedio A6 por el compuesto intermedio A10 en la etapa 8. El Ejemplo 52 se aisló (12,3 mg) con una pureza de aproximadamente un

10 96,5 %. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,60 min. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,31 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C44H64FN6O9S: 871,4; encontrado: 871,5. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) δ 7,81 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,20-7,30 (m, 2H), 6,73 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 5,75-6,02 (m, 2H), 4,74 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 4,54 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,36-4,49 (m, 1 H), 4,23 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,04 (dd, J = 12,0, 2,4 Hz, 1 H), 3,75 (s, 3H), 3,28-3,16 (m, 1 H), 2,502,70 (m, 2H), 2,30-0,80 (m, 35H), 1,04 (s, 9H).

15 Ejemplo 53. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)5tercbutilN[(1R,2R)1[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]2(difluorometil)ciclopropil]9etil18,18difluoro3,6dioxo1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro8H7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12b]quinoxalina8carboxamida

El Ejemplo 53 se preparó de una manera similar al Ejemplo 17 sustituyendo el compuesto intermedio E4 por el compuesto intermedio E3 en la Etapa 1 y compuesto intermedio A9 por el compuesto intermedio A10 en la Etapa 7.

25 El Ejemplo 53 se aisló (8,8 mg) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H48F4N6O8S: 825,32; encontrado: 825,75. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 10,13 (s, 1 H), 8,15 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,91 -7,74 (m, 2H), 7,69 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,92 (s, 1 H), 5,47 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,48 (t, J = 10,3 Hz, 2H), 4,36 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 4,12 (dd, J = 12,1, 3,6 Hz, 1 H), 3,70 - 3,59 (m, 1 H), 3,08 - 2,75 (m, 1 H), 2,58 - 2,38 (m, 1 H), 2,14 (t, J = 6,8 Hz, 1 H), 1,95 - 1,67 (m, 4H), 1,47 (tt, J = 13,9, 7,1 Hz, 4H), 1,35 (s, 2H), 1,20 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 1,15 -

30 0,64 (m, 19H), 0,51 (c, J = 6,4 Hz, 1 H).

Ejemplo 54. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)5tercbutilN{(1R,2R)1[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]2etilciclopropil}9etil18,18difluoro3,6dioxo1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro8H7,10

35 metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12b]quinoxalina8carboxamida

El Ejemplo 54 se preparó de una manera similar al Ejemplo 53 reemplazando el compuesto intermedio A9 por el compuesto intermedio A3. El Ejemplo 54 se aisló (10,0 mg) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-ESI+ (m/z):

5 [M+H]+ calc. para C39H52F2N6O8S: 803,35; encontrado: 803,79. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,88 (s, 1 H), 8,12 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,88 -7,69 (m, 2H), 7,66 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,68 (s, 1 H), 5,95 (d, J = 3,4 Hz, 1 H), 5,46 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 4,45 (dd, J = 13,8, 9,7 Hz, 2H), 4,09 (dd, J = 12,0, 3,6 Hz, 2H), 3,71 -3,57 (m, 1 H), 2,53 (dd, J = 21,4, 14,6 Hz, 1 H), 1,85 -1,39 (m, 10H), 1,38 - 0,96 (m, 20H), 1,01 (dd, J = 17,2, 9,5 Hz, 3H), 1,04 - 0,78 (m, 6H), 0,70 (s, 1 H), 0,49 (dd, J = 12,7, 6,3 Hz, 1 H).

10 Ejemplo 55. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-3,6-dioxo-14-(2,2,2-trifluoroetoxi)1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

15 El compuesto intermedio 551 se preparó siguiendo las Etapas 1 a 6 del Ejemplo 1, sustituyendo el compuesto intermedio E2 por el compuesto intermedio E1 en la Etapa 1. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H49N4O7: 625,36; encontrado: 625,25.

5 Etapa 1. Preparación de 552. El quinoxalinol 551 (24 mg, 0,038 mmol) se suspendió en DMF (2 ml) y se trató con Cs2CO3 (63 mg, 0,19 mmol) y trifluorometanosulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo (0,055 ml, 0,38 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 5 h, a continuación se diluyó con EtOAc. La fase orgánica se lavó con H2O y solución salina saturada, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar 552, que se usó sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H50F3N4O7:

10 707,36; encontrado: 707,38. Etapa 2. Preparación de 553. El trifluoroetil éter 552 (0,038 mmol teórico) se trató con DCM (4 ml) y TMSOTf (0,14 ml, 0,77 mmol) a TA. Después de 1 h, la reacción se interrumpió mediante la adición de NaOH 1 M (2 ml). Después de agitar vigorosamente durante 5 min, la mezcla se vertió en un embudo de decantación seguido de un 10 % de HCl (20 ml). La fase acuosa se extrajo 3x con DCM. Los extractos orgánicos combinados se secaron

15 sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar 553, que se usó sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+calc. para C32H42F3N4O7: 651,30; encontrado: 651,18. Etapa 3. Preparación del Ejemplo 55. El ácido carboxílico 553 (0,038 mmol teórico) se trató con el compuesto intermedio A10 (23 mg, 0,077 mmol), TBTU (25 mg, 0,077 mmol), DMAP (9 mg, 0,077 mmol), DCM (1 ml) y DIPEA (0,134 ml, 0,768 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 20 h, a continuación se concentró a

20 presión reducida y se purificó por HPLC en fase inversa para proporcionar el Ejemplo 55 en forma de una sal de TFA (7 mg, 18 % durante 3 etapas). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H54F5N6O9S: 901,36; encontrado: 902,08. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,18 (s, 1 H), 7,86 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,32 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1 H), 7,25 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 6,02 - 5,63 (m, 2H), 4,76 - 4,62 (m, 2H), 4,56 (d, J = 7,1 Hz, 1 H), 4,39 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,15 (dt, J = 17,2, 8,6 Hz, 1 H), 3,74 (dd, J = 6,7, 2,8 Hz, 1 H), 3,05 -2,89 (m, 1 H), 2,82 (td, J = 13,2, 4,2 Hz, 1 H),

25 2,65 -2,50 (m, 1 H), 2,02 (d, J = 10,4 Hz, 2H), 1,78 (dt, J = 23,5, 10,7 Hz, 3H), 1,68 -1,26 (m, 14H), 1,22 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 1,10 (s, 9H), 0,97 (d, J = 2,5 Hz, 2H), 0,95 - 0,84 (m, 2H), 0,71 (s, 1 H), 0,51 (t, J = 9,8 Hz, 1 H).

Ejemplo 56. Preparación de (3aR,7S,10S,11S,12R,24aR)-7-terc-butil-11-etil-N-[(1R,2R)-2-etil-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-16-metoxi-3a-metil-5,8-dioxo

30 1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida

35 El Ejemplo 56 se preparó de una manera similar al Ejemplo 39, sustituyendo el compuesto intermedio A9 por el compuesto intermedio A3 en la Etapa 8. El Ejemplo 56 se aisló (8,8 mg, 0,0103 mmol, 53,7 %). Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,56 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C44H65N6O9S: 853,45; encontrado: 853,5. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) δ 7,81 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 7,20-7,30 (m, 2H), 6,73 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 5,76-6,01 (m, 2H), 4,75 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 4,46 (dd, J = 12,0, 6,0 Hz, 1 H), 4,23 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,00-4,08 (m, 1 H), 3,95 (s, 3H), 2,50

40 2,78 (m, 3H), 0,80-2,30 (m, 30H), 1,54 (s, 3H), 1,35 (s, 3H), 1,05 (s, 9H).

Ejemplo 57. Preparación de (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2S)-1[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2-(2,2-difluoroetil)ciclopropil]-15-metoxi-10-metil-4,7-dioxo1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11

45 metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9carboxamida

Etapa 1. Preparación del Ejemplo 57. A una suspensión del ácido 334 (14,9 mg, 0,0245 mmol) y clorhidrato de amina A7 (16,3 mg, 0,0535 mmol) en MeCN (500 µl) se añadió DIPEA (40 µl, 0,23 mmol). Se añadió HATU 5 (15,5 mg, 0,0408 mmol) a la solución resultante, y la reacción se agitó a ta durante 17 h. A continuación, la reacción se diluyó con EtOAc (2 ml), HCl acuoso 0,2 M (1,5 ml) y solución salina saturada (1,5 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (4 x 1,5 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 y se concentró sobre 1,5 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 40 % de acetona en 10 hexanos) proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 57. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H57F2N6O9S: 859,4; encontrado: 859,0. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 10,00 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1 H), 7,09 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,75 (s, 1 H), 6,07 - 5,57 (m, 2H), 5,26 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 5,01 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,50 - 4,29 (m, 3H), 4,12 (dd, J = 11,7, 3,9 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,00 -2,62 (m, 4H), 2,34 -0,96 (m, 33H), 0,95 -0,78 (m, 1H), 0,51 (dd, J = 13,0, 7,9 Hz, 1H), 0,39 (d,

15 J = 4,2 Hz, 1 H).

Ejemplo 58. Preparación de (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)6tercbutilN[(1R,2S)2(2,2difluoroetil)1{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]15metoxi10metil4,7dioxo1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23bhexadecahidro1H,9H8,11

20 metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12b]quinoxalina9carboxamida

25 Etapa 1. Preparación del Ejemplo 58. A una suspensión del ácido 334 (14,5 mg, 0,0238 mmol) y clorhidrato de amina A8 (16,0 mg, 0,0502 mmol) en MeCN (500 µl) se añadió DIPEA (40 µl, 0,23 mmol). Se añadió HATU (15,5 mg, 0,0408 mmol) a la solución resultante, y la reacción se agitó a ta durante 17 h. A continuación, la reacción se diluyó con EtOAc (2 ml), HCl acuoso 0,2 M (1,5 ml) y solución salina saturada (1,5 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (4 x 1,5 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se

30 filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 y se concentró sobre 1,5 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 40 % de acetona en hexanos) proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 58. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C43H59F2N6O9S: 873,4; encontrado: 873,3. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 9,72 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1 H), 7,09 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,12 - 5,54 (m,

35 2H), 5,25 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 5,01 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,50 - 4,30 (m, 3H), 4,13 (dd, J = 11,7, 4,2 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,03 - 2,65 (m, 4H), 2,34 - 0,97 (m, 33H), 0,94 - 0,76 (m, 3H), 0,60 - 0,45 (m, 1 H), 0,45 - 0,34 (m, 1H).

Ejemplo 59. Preparación de (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2R)-1[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2-(difluorometil)ciclopropil]-10-etil-19,19-difluoro-15-metoxi-4,7-dioxo1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9carboxamida

Etapa 1. Preparación de 591. Una solución del compuesto intermedio D16 (0,50 g, 1,6 mmol) en DMF (7 ml) se

10 trató posteriormente con COMU (0,80 g, 1,9 mmol), DIPEA (1,2 ml, 6,7 mmol) y el compuesto intermedio 172 (0,65 g, 1,3 mmol) y se agitó durante una noche a ta. La reacción se interrumpió con una solución de ácido cítrico 1 M (5 ml) y se extrajo con EA. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con solución salina saturada, se secaron sobre MgSO4 anhidro, y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (15-100 % de EA/hex) para proporcionar 591. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para

15 C40H55F2N4O7: 741,88; encontrado: 741,51. Etapa 2. Preparación de 592. Una solución de 591 (0,51 g, 0,69 mmol) en DCE (140 ml) se roció con argón durante 30 min antes de la adición de catalizador de Zhan 1B (0,051 g, 0,07 mmol). La reacción se calentó a 85 ºC durante 45 min, y se añadió otra porción de catalizador de Zhan 1B. Después de un periodo adicional de 30 min, la reacción se enfrió a ta, se concentró al vacío y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (5100 % de EA/hex) para producir 592. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H51F2N4O7: 713,83; encontrado: 713,54. Etapa 3. Preparación de 593. Una solución de 592 se recogió en EtOH (8 ml). Se añadió Pd/C (0,072 g, 10 % en p/p) y la atmósfera se reemplazó con H2. Después de 1 h, se añadió catalizador adicional. Después de 4 h, se añadieron EA y catalizador adicional. Después de un periodo adicional de 3 h, la reacción se filtró, se concentró al vacío, y el residuo se recogió en EtOH (8 ml) y se trató con 0,5 g de Pd/C (10 % en p/p) y la atmósfera se reemplazó con H2. La reacción se agitó durante una noche, y a continuación se trató de nuevo como se ha descrito previamente para producir el compuesto 593 que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H53F2N4O7: 715,85; encontrado: 715,52. Etapa 4. Preparación de 594. Una solución de 593 (0,40 g, 0,56 mmol) en DCM (1,5 ml) se trató con 2,5 ml de TFA a ta. Después de 1,5 h, la reacción se concentró al vacío. El residuo se recogió en EA, se lavó con NaHCO3 acuoso saturado y solución salina saturada y a continuación se secó sobre MgSO4 anhidro. La concentración al vacío produjo 594 que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H45F2N4O7: 659,74; encontrado: 659,56. Etapa 5. Preparación del Ejemplo 59: Una solución de 594 (0,20 g, 0,30 mmol) en DMF (2 ml) se trató posteriormente con HATU (0,21 g, 0,55 mmol), DIPEA (0,27 ml, 1,5 mmol), DMAP (0,056 g, 0,46 mmol) y el compuesto intermedio A9 (0,13 g, 0,46 mmol) y se agitó durante 5 h a ta. La mezcla de reacción se purifica mediante HPLC preparativa para producir la sal de TFA del Ejemplo 59. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,20 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H55F4N6O9S: 895,98; encontrado: 895,60. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,31 (s, 1 H); 7,94 (d, J = 9,2 Hz, 1 H); 7,32 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1 H); 7,21 (d, J = 2,4 Hz, 1 H); 5,98 (s a, 1 H); 5,85 (td, JH-F =55,2Hz, J=6Hz, 1 H); 4,94 (d, J=7,6Hz, 1 H); 4,58 (d, J=7,2Hz, 1 H); 4,35 (d, J = 7,2 Hz, 1 H); 4,33 (s a, 1 H); 4,18 (dd, J = 12, 3,6 Hz, 1 H); 3,97 (s a, 3H); 2,98 (m, 1 H); 2,64-2,41 (m, 2H); 2,22 (m, 1 H); 2,15-1,92 (m, 4H); 1,84-1,22 (m, 14H); 1,18 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 1,14-0,98 (m, 2H); 1,08 (s, 9H); 0,60-0,48 (m, 2H).

Ejemplo 60. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2(difluorometil)ciclopropil]-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-9-propil-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida Etapa 1. Preparación de 601: A una solución del compuesto intermedio B5 (160 mg, 0,590 mmol) y el compuesto intermedio E3 (194 mg, 0,590 mmol) en MeCN (2,95 ml) se añadió carbonato de cesio (192 mg,

5 0,590 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 24 h, la mezcla de reacción se filtró a continuación a través de una capa de Celite y el filtrado se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar la quinoxalina sustituida 601. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C29H40F2N3O6: 564,28; encontrado: 564,44. Etapa 2. Preparación de 602: A una solución de 601 (193 mg, 0,343 mmol) en acetato de terc-butilo (1,36 ml)

10 se añadió una solución de ácido metanosulfónico (111 µl, 1,72 mmol) en diclorometano (0,34 ml) y la reacción se agitó a ta. Después de 2 h, la mezcla de reacción se diluyó con una solución saturada de bicarbonato sódico (20 ml) y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (2 x 20 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío para proporcionar el clorhidrato de amina 602, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para

15 C24H32F2N3O4: 464,23; encontrado: 464,35. Etapa 3. Preparación de 603: A una solución de 602 (133 mg, 0,289 mmol) y el compuesto intermedio D11 (133 mg, 0,412 mmol) en MeCN (1,7 ml) se añadió HATU (157 mg, 0,412 mmol) seguido de DIPEA (298 µl, 1,72 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, y el residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de

20 etilo/hexanos) para proporcionar amida 603. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H53F2N4O7: 715,38; encontrado: 715,55. Etapa 4. Preparación de 604: A una solución de 603 (188 mg, 264 µmol) en DCE (52,8 ml) se añadió catalizador de Zhan 1 B (19,4 mg, 26,4 µmol) y la mezcla de reacción se desgasificó durante 10 minutos con argón. A continuación, la mezcla de reacción se calentó a 100 ºC. Después de 1 h, la mezcla de reacción se dejó

5 enfriar a ta y se concentró al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar el macrociclo 604. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H49F2N4O7: 687,35; encontrado: 687,54. Etapa 5. Preparación de 605: A una solución del macrociclo 604 (119 mg, 173 µmol) en etanol (1,0 ml) se añadió Pd/C (10 % en peso, 18,4 mg, 17,3 µmol) a ta bajo una atmósfera de argón. El recipiente de reacción se

10 evacuó y se volvió a cargar con 1 atm de gas hidrógeno (3 x) y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a ta. Después de 1 h, la mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite con lavados con acetato de etilo (3 x 2 ml). El filtrado se concentró al vacío para proporcionar el macrociclo 605, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H51F2N4O7: 689,36; encontrado: 689,56.

15 Etapa 6. Preparación de 606: A una solución de 605 (150 mg, 218 µmol) en DCM (1,1 ml) se añadió TMSOTf (197 µl, 1,09 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 2 h, la mezcla de reacción se transfirió a una solución de NaOH 0,5 N (5 ml) enfriara previamente a 0 ºC. La mezcla resultante se acidificó con una solución de HCl 1 N a pH = 2 y se extrajo con diclorometano (3 x 5 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío para proporcionar ácido carboxílico 606, que se usó

20 directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H43F2N4O7: 633,30; encontrado: 633,49. Etapa 7. Preparación del Ejemplo 60: A una solución de 606 (100 mg, 158 µmol) y el compuesto intermedio A9 (69,0 mg, 237 µmol) en MeCN (790 µl) se añadió HATU (91,5 mg, 237 µmol) seguido de DIPEA (137 µl, 790 µmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 3 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, se

25 purificó por HPLC preparativa (columna Gemini 5u C18 110Å, 5-100 % de MeCN/H2O, modificador de ácido trifluoroacético al 0,1 %) y se liofilizó para proporcionar el Ejemplo 60 en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,89 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H53F4N6O9S: 869,35; encontrado: 859,66. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,29 (s a, 1 H), 7,94 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,31 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,19 (s a, 1 H), 5,87 (s a, 1 H), 5,84 (td, JH-F = 55,8 Hz, J= 5,4 Hz, 1 H), 4,56 (d, J =6,9 Hz, 1 H), 4,40 (d, J =12,6Hz, 1

30 H), 4,36 (s, 1 H), 4,17 (dd, J = 11,9, 3,4 Hz, 1 H), 3,96 (s a, 4H), 3,68 (s a, 1 H), 3,01 - 2,91 (m, 1 H), 2,71 - 2,61 (m, 1 H), 2,61 - 2,43 (m, 1 H), 2,02 (s a, 4H), 1,88 - 1,59 (m, 4H), 1,59 - 1,35 (m, 4H), 1,33 - 1,20 (m, 3H), 1,09 (s, 9H), 1,04 - 0,95 (t ap, J = 7,0 Hz, 5H), 0,79 - 0,65 (m, 1 H), 0,49 (d, J = 6,5 Hz, 1 H).

Ejemplo 61. Preparación de (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1

35 metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-10-etil-19,19-difluoro-15-metoxi-4,7-dioxo1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9carboxamida

Ejemplo 61 se preparó de una manera similar al Ejemplo 59 sustituyendo el compuesto intermedio A10 por el compuesto intermedio A9 en la Etapa 5. La sal de TFA del Ejemplo 61 se aisló. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,28 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C43H57F4N6O9S: 909,38; encontrado: 909,59. RMN 1H (400 MHz,

45 CD3OD) δ 9,28 (s, 1 H); 7,95 (d, J= 9,2Hz, 1 H); 7,33 (dd, J= 9,2, 2,4Hz, 1 H); 7,23 (d, J= 2,4 Hz, 1 H); 6,0 (s a, 1 H); 5,83 (s a, 1 H); 5,83 (td, JH-F = 55 Hz, J= 6 Hz, 1 H); 4,94 (d, J= 7,6 Hz, 1 H); 4,61 (d, J= 7,6 Hz, 1 H); 4,34 (d, J = 7,6 Hz, 1 H); 4,32 (s a, 1 H); 4,18 (m, 1 H); 3,97 (s, 3H); 2,63-2,47 (m, 2H); 2,28-2,17 (m, 1 H); 2,12-1,96 (m, 4H); 1,83-1,26 (m, 14H); 1,53 (s, 3H); 1,19 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 1,08 (s, 9H); 0,94-0,88 (m, 2H); 0,62-0,48 (m, 2H).

Etapa 1. Preparación del Ejemplo 621: se añadieron HATU (214 mg, 0,563 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,30 ml, 1,72 mmol) a una mezcla de 462 (186 mg, 0,428 mmol) y el compuesto intermedio D16 (157 mg, 0,508 mmol) en 10 ml de acetonitrilo en atmósfera de argón. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-30 % de acetato de etilo en hexanos) para producir el compuesto intermedio 621. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H53F2N4O7: 727,38; encontrado: 727,51. Etapa 2. Preparación de 622: Una mezcla de 621 (275 mg, 0,378 mmol) y catalizador de Zhan 1 B (34 mg, 0,046 mmol, Strem) en 75 ml de DCE se desoxigenó con argón durante 17 minutos. A continuación, la mezcla se calentó a reflujo durante 80 minutos. Se añadió una cantidad adicional de 8 mg de catalizador de Zhan 1B y la mezcla se calentó a reflujo durante veinte minutos. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-25 % de acetato de etilo en hexanos) para producir el compuesto intermedio 622. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H49F2N4O7: 699,35; encontrado: 669,50. Etapa 3. Preparación de mezcla de 623: se añadió paladio sobre carbono (Pd al 10 % en peso, 60 mg, 0,057 mmol) a una solución de 622 (207 mg, 0,297 mmol) en 7 ml de etanol. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la mezcla se agitó durante una noche. La reacción se filtró sobre Celite, lavando con etanol. El filtrado se concentró al vacío para producir el compuesto intermedio 623, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H51F2N4O7: 701,36; encontrado: 701,65. Etapa 4. Preparación de 624: se añadió TFA (1,6 ml, 20,9 mmol) lentamente a una solución de 623 (202 mg, 0,289 mmol) en 4,5 ml de diclorometano. Después de 3,5 horas, la mezcla se concentró a presión reducida casi hasta sequedad. El residuo resultante se recogió en 30 ml de acetato de etilo, se lavó con 20 ml de agua, 20 ml de NaHCO3 sat. (ac.), y se separó. Las fases acuosas se extrajeron con acetato de etilo (3 x 20 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 30 ml de solución salina saturada, se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para producir el compuesto intermedio 624, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C33H43F2N4O7: 645,30; encontrado: 645,53. Etapa 5. Preparación del Ejemplo 62: se añadieron HATU (113 mg, 0,297 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,17 ml, 0,978 mmol) a una mezcla de 624 (120 mg, 0,186 mmol) y el compuesto intermedio A9 (110 mg, 0,379 mmol) en 6 ml de acetonitrilo en atmósfera de argón. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se recogió en 30 ml de acetato de etilo y se lavó con 20 ml de HCl acuoso 1 N. La fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con un 50 % de solución salina saturada, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-50 % de acetato de etilo en hexanos) y HPLC preparativa en fase inversa (50-100 % de acetonitrilo en agua, con tampón de ácido trifluoroacético al 0,1 %) para producir la sal del ácido trifluoroacético del Ejemplo 62. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,03 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H53F4N6O9S: 881,35; encontrado: 881,57. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): δ 9,27 (s, 1 H), 7,94 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,33 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1 H), 7,27 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 5,84 (td, JH-F = 56 Hz, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,75 (d, J = 3,6 Hz, 1 H), 4,94 (d, J =7,2 Hz, 1 H), 4,55 (d, J =7,2Hz, 1 H), 4,35 (d, J = 12 Hz, 1 H), 4,32 (s, 1 H), 4,224,16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1 H), 3,97 (s, 3H), 3,01-2,94 (m, 1 H), 2,81-2,72 (m, 1 H), 2,66-2,40 (m, 1 H), 2,36-2,28 (m, 1 H), 2,10-1,94 (m, 4H), 1,82-1,72 (m, 2H), 1,70-1,22 (m, 10H), 1,14-1,02 (m, 7H), 1,10 (s, 9H), 0,61-0,49 (m, 2H).

Ejemplo 63. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-18,18-difluoro-14-metoxi-1a-metil-3,6-dioxo1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

Etapa 1. Preparación de 631: el clorhidrato de amina 172 (500 mg, 1,03 mmol) se combinó con la mezcla de compuesto intermedio D17 (378,5 mg, 1,34 mmol), DIPEA (1,8 ml, 10,3 mmol) y DMF (3 ml). A continuación se 5 añadió HATU (587,1 mg, 1,55 mmol) a la mezcla de reacción, que se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. A continuación, la mezcla de reacción se diluyó con agua (20 ml) y HCl 1 N (10,5 ml) y se recogió en cloruro de metileno (20 ml). Los extractos orgánicos se separaron y la fase acuosa se extrajo tres veces con cloruro de metileno (10 ml). A continuación, los extractos orgánicos combinados se lavaron con solución salina saturada, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. A continuación, el residuo en bruto se purificó por

10 cromatografía sobre gel de sílice para dar 631 en forma de una mezcla diastereomérica a 1:1. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H53F2N4O7: 715,4; encontrado: 715,4. Etapa 2. Preparación de 632 y 633: la mezcla diastereomérica de 631 (496 mg, 0,695 mmol) y catalizador de Zhan 1B (53,8 mg, 0,0695 mmol, Strem) se disolvieron en 140 ml de DCE anhidro y se pulverizó con N2 durante 30 minutos. A continuación, la mezcla se calentó a 100 ºC durante 90 minutos, y se añadió una porción adicional

15 de catalizador de Zhan 1 B (54 mg, 0,695 mmol, Strem). A continuación, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 0 % a un 40 % de acetato de etilo en hexanos) para producir los diastereómeros individuales 632 (fracción de elución temprana) y 633 (fracción de elución tardía). Fracción de elución temprana: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+

calc. para C36H49F2N4O7: 687,4; encontrado: 687,2. Fracción de elución tardía: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H49F2N4O7: 687,4; encontrado: 687,3. Etapa 3. Preparación de 634: se añadió paladio sobre carbono (10 % en p/p, 155 mg) a una solución de 632 (155 mg, 0,226 mmol) en etanol (3 ml). La mezcla se agitó en una atmósfera de hidrógeno durante 1 h y a

5 continuación se filtró a través de un lecho de Celite, y se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró a presión reducida para producir 634, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H51F2N4O7: 689,4; encontrado: 689,3. Etapa 6. Preparación de 635: el compuesto intermedio 634 (153,5 mg, 0,222 mmol) se disolvió en una mezcla de TFA:DCM a 1:1 (6 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. A continuación, la mezcla de reacción

10 se concentró al vacío para dar 635, que se usó en la etapa posterior sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H44N4O7: 633,3; encontrado: 633,. Etapa 7. Preparación del Ejemplo 63: se añadieron HATU (99,2 mg, 0,261 mmol) y DIPEA (271 µl, 2,1 mmol) a una mezcla de 635 (140,5 mg, 0,222 mmol) y A10 (100 mg, 0,316 mmol) en 1 ml de DMF. Después de agitar durante una noche a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vertió en agua, se acidificó a pH 1 con HCl

15 acuoso 1 N, y se extrajo tres veces con cloruro de metileno (15 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y solución salina saturada, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por HPLC preparativa en fase inversa (5-100 % de acetonitrilo en agua, con tampón de ácido trifluoroacético al 0,1 %) para proporcionar el Ejemplo 63. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,951 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F4N6O9S: 883,4; encontrado: 883,2. RMN 1H

20 (400 MHz, CD3OD) δ 7,96 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,33 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1 H), 7,23 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,03 (d, J = 3,9 Hz, 1 H), 5,80 (td, J = 55,8, 6,7 Hz, 1 H), 4,61 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 4,46 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 4,26 - 4,14 (m, 2H), 4,01 - 3,91 (m, 3H), 2,65 - 2,47 (m, 2H), 2,11 - 1,85 (m, 5H), 1,84 - 1,61 (m, 3H), 1,61 - 1,46 (m, 10H), 1,46 - 1,32 (m, 3H), 1,33 -1,17 (m, 4H), 1,09 (d, J = 15,9 Hz, 10H), 1,04 - 0,95 (m, 1 H), 0,94 - 0,84 (m, 2H), 0,21 0,12 (m, 1 H).

25 Ejemplo 64. Preparación de (1aS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-18,18-difluoro-14-metoxi-1a-metil-3,6-dioxo1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida

El Ejemplo 64 se preparó de una manera similar al Ejemplo 63, sustituyendo el compuesto de elución tardía 633 por el compuesto de elución temprana 632 en la Etapa 3. El Ejemplo 64 se aisló a continuación. Tiempo de Ret para

35 HPLC analítica: 8,535 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 883,4; encontrado: 883,3. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,97 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 7,45 - 7,16 (m, 2H), 5,97 - 5,52 (m, 2H), 4,74 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 4,50

-: 4,16 (m, 1 H), 4,06 -3,86 (m, 5H), 2,77 -2,57 (m, 1H), 2,51 -2,18 (m, 2H), 2,16 -1,86 (m, 5H), 1,75 - 1,32 (m, 16H), 1,33 - 1,03 (m, 14H), 1,02 - 0,76 (m, 2H), 0,42 - -0,09 (m, 1 H).

40 Ejemplo 65. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-9-propil1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

Etapa 1. Preparación del Ejemplo 65: A una solución de 606 (52 mg, 82 µmol) y el compuesto intermedio A10 (37,5 mg, 123 µmol) en MeCN (411 µl) se añadió HATU (47,5 mg, 123 µmol) seguido de DIPEA (73 µl, 411 µmol) a 5 ta bajo una atmósfera de argón. Después de 20 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, se purificó por HPLC preparativa (columna Gemini 5u C18 110Å, 5-100 % de MeCN/H2O, modificador de ácido trifluoroacético al 0,1 %) y se liofilizó para proporcionar el Ejemplo 65 en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,99 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F4N6O9S: 883,36; encontrado: 883,60. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,26 (s, 1 H), 7,95 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,33 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1 H), 7,22 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 5,89 (d, J = 3,2 Hz, 1

10 H), 5,81 (td, JH-F = 55,5 Hz, J = 6,5 Hz, 1 H), 4,59 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 4,40 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 4,36 (s, 1 H), 4,17 (dd, J = 12,2, 3,8 Hz, 1 H), 3,97 (s, 3H), 3,73 - 3,66 (m, 1 H), 2,73 -2,64 (m, 1 H), 2,63 - 2,45 (m, 1 H), 2,01 (s a, 3H), 1,85 - 1,62 (m, 4H), 1,62 - 1,53 (m, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,48 - 1,22 (m, 5H), 1,08 (s, 9H), 1,01 (t ap, J = 7,3 Hz, 4H), 0,94 - 0,87 (m, 2H), 0,80 - 0,69 (m, 1 H), 0,50 (d, J = 7,1 Hz, 1 H).

15 Ejemplo 66. Preparación de (4aR,8S,11S,12S,13R,25aR)-8-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2(difluorometil)ciclopropil]-12-etil-17-metoxi-6,9-dioxo-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-hexadecahidro1H,11H-10,13-metanoquinoxalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioxadiazaciclononadecino-11-carboxamida Etapa 1. Preparación de 661 y 662. A una solución del compuesto intermedio 703 (283 mg, 0,42 mmol) en CH2Cl2 (5 ml) se añadió TMSOTf (380 µl, 2,1 mmol). Después de agitar durante 2 h, la mezcla de reacción se vertió en NaOH 1 N en agitación (12 ml). La mezcla se transfirió a un embudo de separación, se acidificó a pH 3 con HCl 1 N, se extrajo con CH2Cl2, se secó sobre sulfato de magnesio, y se concentró. El residuo en bruto se

5 purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-10 % de MeOH/EtOAc) para producir una mezcla de 661 y 662. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H47N4O7: 623,34; encontrado: 623,66. Etapa 2. Preparación de 663 y 664. A una solución de 661 y 662 (58 mg, 0,09 mmol), el compuesto intermedio A9 (32 mg, 0,11 mmol), TBTU (42 mg, 0,13 mmol) y DMAP (16 mg, 0,14 mmol) en DMF (3 ml) se añadió DIPEA (47 µl, 0,27 mmol) y la reacción se agitó a ta durante 23 h. La reacción se interrumpió con agua,

10 se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHCO3 sat. y solución salina saturada, se secó sobre sulfato de magnesio, y se concentró. El material en bruto se purificó por HPLC en fase inversa (Gemini, 30-85 % de ACN/H2O + TFA al 0,1 %) y se liofilizó para dar la sal de TFA de la mezcla de compuestos intermedios 663 y 664. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H57F2N6O9S: 859,39; encontrado: 859,65. Etapa 3. Preparación del Ejemplo 66: una mezcla de 663 y 664 (5 mg, 0,005 mmol) se recogió en EtOH (2 ml) y

15 se trató con Pd/C (10 %, 5 mg). La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y se agitó a ta durante 2,5 h. La reacción se filtró sobre Celite, se lavó con EtOAc y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-10 % de MeOH/EtOAc) y se liofilizó para dar el compuesto precursor. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,15 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H59F2N6O9S: 862,01; encontrado: 862,37. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,94 - 7,73 (m, 1 H), 7,25 (m, 1 H), 6,87 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 6,05 (m, 2H), 4,83 - 4,74 (m,

20 1 H), 4,70 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 4,52 -4,28 (m, 2H), 4,16 (m, 2H), 4,05 -3,86 (m, 4H), 3,86 - 3,45 (m, 4H), 3,22 3,00 (m, 1 H), 2,89 (s, 1 H), 2,77 - 2,55 (m, 1 H), 2,25 (t, J = 7,3 Hz, 1 H), 2,09 -0,81 (m, 35H).

Ejemplo 67. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2S)-2-(2,2-difluoroetil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22, 22a25 tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida

30 El Ejemplo 67 se preparó de una manera similar al Ejemplo 1 sustituyendo el compuesto intermedio A8 por el compuesto intermedio A10 en la Etapa 8. La sal de TFA del Ejemplo 67 se aisló. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,85 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 847,99; encontrado: 847,64. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,00 (s, 1 H); 7,79 (d, J = 9,2 Hz, 1 H); 7,23 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1 H); 7,15 (d, J = 2,4 Hz, 1 H); 5,89 (tt, JH-F = 54 Hz, J =4,4Hz, 1 H); 5,89 (s a, 1 H); 4,61 (d, J= 7,2 Hz, 1 H); 4,39 (s a, 1 H); 4,37 (d, J =9,2 Hz, 1

35 H); 4,16 (dd, J = 9,2 Hz, 7,2 Hz, 1 H); 3,92 (s, 3H); 3,78-3,72 (m, 1 H); 3,10-2,88 (m, 1 H); 2,86-2,74 (td, J = 12, 4,4 Hz, 1 H); 2,62-2,53 (m, 1 H); 2,18-2,04 (m, 1 H); 1,88-1,46 (m, 14H); 1,53 (s, 3H); 1,28-1,20 (m, 4H); 1,10 (s, 9H); 1,02-0,96 (m, 2H); 0,96-0,86 (m, 2H); 0,78-0,67 (m, 1H); 0,54-0,47 (m, 1H).

Ejemplo 68. Preparación de (4aR,8S,11S,12S,13R,25aS)-8-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2

40 (difluorometil)ciclopropil]-21,21-difluoro-17-metoxi-12-metil-6,9-dioxo-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25ahexadecahidro-1H,11H-10,13-metanoquinoxalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioxadiazaciclononadecino-11-carboxamida Etapa 1. Preparación de 681 y 682 (mezcla): se añadió TMSOTf (0,6 ml, 3,3 mmol) a una solución del compuesto intermedio 623 (424 mg, 0,606 mmol) en 7 ml de diclorometano a temperatura ambiente. Después

5 de 1 hora, se añadió una cantidad adicional de 0,2 ml de TMSOTf. Después de un total de tres horas, la mezcla de reacción se concentró para producir una mezcla de los isómeros 681 y 682, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C33H43F2N4O7: 645,30; encontrado: 645,49. Etapa 2. Preparación de 683 y 684 (mezcla): se añadieron HATU (209 mg, 0,550 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,25 ml, 1,43 mmol) a la mezcla de 681 y 682 de la etapa previa (176 mg, 0,273 mmol) y el compuesto

10 intermedio A9 (161 mg, 0,555 mmol) en 4 ml de acetonitrilo y 2 ml de DMF en atmósfera de argón. Después de una hora, se añadió una cantidad adicional de 100 mg del compuesto intermedio A9. Después de dos horas, la mezcla de reacción se recogió en 30 ml de acetato de etilo y se lavó con 20 ml de HCl acuoso 1 N. La fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con un 50 % de solución salina saturada, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo

15 resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-50 % de acetato de etilo en hexanos) y HPLC preparativa en fase inversa (50-100 % de acetonitrilo en agua, con tampón de ácido trifluoroacético al 0,1 %) para producir las sales del ácido trifluoroacético de una mezcla de 683 y 684. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc.

para C41H53F4N6O9S: 881,35; encontrado: 881,50. Etapa 3. Preparación del Ejemplo 68: se añadió paladio sobre carbono (Pd al 10 % en peso, 2 mg, 0,0019 mmol) se añadió a una solución de la mezcla de 683 y 684 de la etapa previa (4,5 mg, 0,0045 mmol) en 1 ml de etanol. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la mezcla se agitó durante dos horas. La reacción se filtró

5 sobre Celite, lavando con etanol. El filtrado se concentró al vacío para producir el Ejemplo 68. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,81 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F4N6O9S: 883,36; encontrado: 883,64. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): δ 7,94 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 7,34-7,30 (m, 2H), 6,13 (td, JH-F = 57 Hz, J =6,8 Hz, 1 H), 5,88-5,84 (m, 1 H), 4,62 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 4,38-4,30 (m, 2H), 4,20-4,05 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 2,87-2,76 (m, 2H), 2,34-2,16 (m, 2H), 1,92-1,54 (m, 6H), 1,46-1,36 (m, 3H), 1,34-1,12 (m, 8H), 1,20 (d, J = 7,6 Hz, 3H), 1,08

10 0,96 (m, 4H), 1,04 (s, 9H), 0,93-0,78 (m, 4H).

Ejemplo 69. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-14-etoxi-9-etil-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8

15 carboxamida

Etapa 1. Preparación de 692. El quinoxalinol 551 (54 mg, 0,086 mmol) se suspendió en ACN (2 ml) y se trató

20 con Cs2CO3 (84 mg, 0,259 mmol) y bromoetano (0,032 ml, 0,432 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. La reacción se filtró y el material en bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida para proporcionar 692. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H52N4O7: 652,38; encontrado: 653,41. Etapa 2. Preparación de 693. El compuesto intermedio 692 (0,086 mmol teórico) se trató con DCM (10 ml) y TMSOTf (1,0 ml) a TA. Después de 1 h, la reacción era completa determinado por LCMS. La reacción se

25 concentró a presión reducida para proporcionar 693, que se usó sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H44N4O7: 596,32; encontrado: 597,38. Etapa 3. Preparación del Ejemplo 69. El ácido carboxílico 693 (0,0,086 mmol teórico) se trató con el compuesto intermedio A10 (40 mg, 0,130 mmol), TBTU (47 mg, 0,147 mmol), DMAP (18 mg, 0,147 mmol), DCM (3 ml) y DIPEA (0,075 ml, 0,432 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 20 h, a continuación se concentró a presión reducida y se purificó por HPLC en fase inversa para proporcionar el Ejemplo 69 en forma de una sal de TFA. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H56F2N6O9S: 846,38; encontrado: 847,75.

5 Ejemplo 70. Preparación de (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2R)-1[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2-(difluorometil)ciclopropil]-10-etil-15-metoxi-4,7-dioxo1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9carboxamida

Etapa 1. Preparación de 701: A una solución de 12 (575 mg, 1,41 mmol), D12 (410 mg, 1,26 mmol) y HATU (696 mg, 1,80 mmol) en DMF (12 ml) se añadió DIPEA (1,0 ml, 5,64 mmol) y la reacción se agitó a ta. Después 15 de agitar durante 2 h, se añadió HATU (350 mg, 0,92 mmol) y DIPEA (0,5 ml, 2,8 mmol) adicionales a la reacción, y la mezcla se agitó durante 14 h. La reacción se interrumpió con solución sat. de NaHCO3 y se extrajo con EtOAc, posteriormente se lavó con solución salina saturada, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (10-30 % de EtOAc/hexanos) para producir el compuesto intermedio 701. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H54ClN4O7: 713,37;

20 encontrado: 713,95.

Etapa 2. Preparación de 702: A una solución de 701 (542 mg, 0,76 mmol), TEA (0,16 ml, 1,14 mmol) y viniltrifluoroborato potásico (153 mg, 1,14 mmol) en EtOH (10 ml) se añadió PdCl2(dppf) (62 mg, 0,08 mmol). La reacción se desgasificó con N2 durante 10 min y se calentó a 80 ºC durante 1 h. La reacción se interrumpió con solución sat. de NaHCO3 y se extrajo con EtOAc, posteriormente se lavó con solución salina saturada, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El residuo se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (020 % de EtOAc/hexanos) para dar el compuesto intermedio 702. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H57N4O7: 705,42; encontrado: 705,05. Etapa 3 y 4. Preparación de 703: A una solución de 702 (470 mg, 0,66 mmol) en DCE (100 ml) se añadió catalizador de Zhan 1B (49 mg, 0,07 mmol) y la reacción se desgasificó durante 30 minutos con N2. La reacción se calentó a 100 ºC durante 1 h, se permitió que se enfriara a ta y se concentró. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para dar el producto (358 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H53N4O7: 677,39; encontrado: 677,52) que se recogió en EtOH (6 ml) y EtOAc (2 ml) y se trató con Pd/C (10 %, 350 mg). La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y se agitó a ta durante 1,5 h. La reacción se filtró sobre Celite, se lavó con EtOAc y se concentró (358 mg del compuesto intermedio 703) que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H55N4O7: 679,41; encontrado: 679,44. Etapa 5. Preparación de 704: A una solución de 703 (100 mg, 0,15 mmol) en DCM (1 ml) se añadió TFA (1 ml) y se agitó a ta durante 2 h. La reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con H2O, se basificó a pH 7 con solución sat. de NaHCO3, se secó sobre sulfato de magnesio, y se concentró para dar un residuo del compuesto intermedio 704 que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H47N4O7: 623,34; encontrado: 623,44. Etapa 6. Preparación del Ejemplo 70: A una solución de 704 (94 mg, 0,15 mmol), el compuesto intermedio A9 (65 mg, 0,22 mmol), TBTU (87 mg, 0,27 mmol) y DMAP (27 mg, 0,22 mmol) en DCM (3 ml) se añadió DIPEA (0,13 ml, 0,75 mmol) y la reacción se agitó a ta durante 2 h. La reacción se interrumpió con agua, se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHCO3 sat. y solución salina saturada, se secó sobre sulfato de magnesio, y se concentró. El material en bruto se purificó por HPLC en fase inversa (Gemini, 30-85 % de ACN/H2O+TFA al 0,1%) y se liofilizó para dar el Ejemplo 70 (23 mg) en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,32 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H57F2N6O9S: 859,39; encontrado: 859,54. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,31 (s, 1 H), 7,83 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,26 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1 H), 7,20 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 6,09 5,68 (m, 2H), 5,51 (s, 1 H), 5,07 -4,97 (m, 1 H), 4,70 -4,55 (m, 1 H), 4,42 -4,29 (m, 2H), 4,22 (dd, J = 12,0, 4,1 Hz, 1H), 3,96 (s, 2H), 3,75 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 3,02 (m, 2H), 2,93 - 2,67 (m, 1H), 2,56 (m, 1 H), 2,13 -1,04 (m, 30H), 1,00 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 0,90 (m, 3H), 0,65 - 0,46 (m, 2H).

Ejemplo 71, Preparación de (4aR,8S,11S,12S,13R,25aR)-8-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2(difluorometil)ciclopropil]-17-metoxi-12-metil-6,9-dioxo-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-hexadecahidro1H,11H-1,3:10,13-dimetanoquinoxalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioxadiazaciclononadecino-11-carboxamida y Etapa 1: A una solución de la amina 182 (315 mg, 0,80 mmol), DIPEA (350 µl, 2,0 mmol) y una mezcla de ácidos D19 a 1:1 (270 mg, 0,80 mmol) en MeCN (8 ml) se añadió HATU (400 mg, 1,05 mmol). La solución

5 resultante se agitó durante 2,5 h a t.a., momento en el que se diluyó con EtOAc (50 ml) y HCl acuoso 0,2 N (30 ml). Las fases se separaron, y la fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 % a un 30 % de EtOAc en hexanos) proporcionó 474 mg de un aceite incoloro que se usó directamente en la siguiente etapa. Etapa 2: Una suspensión del producto de la etapa 1 (474 mg, aproximadamente 0,65 mmol), PdCl2(dppf)•CH2Cl2

10 (40 mg, 0,049 mmol) y viniltrifluoroborato potásico (189 mg, 1,41 mmol) en EtOH (8 ml) se roció con Ar durante varios minutos y se añadió Et3N (200 µl, 1,4 mmol). La mezcla resultante se calentó bajo una atmósfera de Ar a 75 ºC a través de un baño de aceite. Después de agitar 2,25 h, la mezcla de reacción se enfrió a t.a. y se diluyó con EtOAc (35 ml) y solución salina semisaturada (20 ml). Las fases se separaron, y la fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto. La purificación por

15 cromatografía sobre gel de sílice proporcionó un aceite de color amarillo que se usó directamente en la siguiente etapa. Etapa 3: Una solución del producto de la Etapa 3 (395 mg, 0,56 mmol) en 1,2-DCE (180 ml) se roció con Ar durante 10 min. A continuación se añadió catalizador de metátesis de Zhan 1B (61 mg, 0,083 mmol) como una solución en DCE (4 ml), y la solución resultante se calentó a 85 ºC. Después de agitar 1,75 h, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se concentró sobre gel de sílice (5 g), y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (de un 10 a un 15 a un 25 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar 116 mg de un producto

5 de elución rápida y 84 mg de un producto de elución lenta. Etapa 4-5 (diastereómero de elución rápida): el producto de elución rápida de la Etapa 3 se disolvió en EtOAc:EtOH a 1:1 (4 ml). Se añadió Pd/C (Pd al 10 % en peso, 45 mg), y el recipiente de reacción se purgó dos veces con 1 atm de H2. La mezcla de reacción se agitó durante 2,5 h bajo 1 atm de H2 y a continuación se filtró a través de Celite con EtOAc para proporcionar un residuo en bruto. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 (1 ml) y se

10 trató con TFA (2 ml). Después de agitar 2 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se repartió entre EtOAc (15 ml) y un 15 % de NaHCO3 acuoso saturado (10 ml). Las fases se separaron, y la fase orgánica se lavó con solución salina saturada (10 ml), se secó sobre Na2SO4, y se filtró para proporcionar 711. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H47N4O7: 623,3; encontrado: 623,2. Etapa 4-5 (diastereómero de elución lenta): el producto de elución lenta de la Etapa 3 se disolvió en EtOAc (1 ml)

15 y EtOH (7 ml). Se añadió Pd/C (Pd al 10 % en peso, 85 mg), y el recipiente de reacción se purgó dos veces con 1 atm de H2. La mezcla de reacción se agitó durante 3 h bajo 1 atm de H2 y a continuación se filtró a través de Celite con EtOAc para proporcionar un residuo en bruto. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 (1 ml) y se trató con TFA (2 ml). Después de agitar 2 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se repartió entre EtOAc (15 ml) y un 15 % de NaHCO3 acuoso saturado (10 ml). Las fases se separaron, y la fase orgánica se lavó con solución

20 salina saturada (10 ml), se secó sobre Na2SO4, y se filtró para proporcionar 712. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H47N4O7: 623,3; encontrado: 623,2. Etapa 6: Preparación del Ejemplo 71: A una suspensión del ácido 711 (49 mg, 0,079 mmol) y el clorhidrato de amina A9 (41 mg, 0,14 mmol) en MeCN (1 ml) se añadió DIPEA (100 µl, 0,57 mmol). HATU (45 mg, 0,12 mmol) se añadió a la solución resultante, y la reacción se agitó a ta durante 14,5 h. A continuación, la reacción se diluyó

25 con EtOAc (20 ml), HCl acuoso 0,2 M (10 ml) y solución salina saturada (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 y se concentró sobre 2 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 4 % a un 45 % de acetona en hexanos) proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 71. LCMS

30 ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H57F2N6O9S: 859,4; encontrado: 859,1. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 10,13 (s, 1 H), 7,81 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,63 (s, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1 H), 7,09 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 5,97 (td, J = 55,5, 6,9 Hz, 1H), 5,59 -5,45 (m, 2H), 4,96 (dd, J = 14,4, 6,2 Hz, 1 H), 4,51 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 4,13 (dt, J = 12,0, 7,7 Hz, 2H), 3,93 (s, 3H), 2,99 - 2,63 (m, 4H), 2,40 - 2,23 (m, 2H), 2,15 - 0,83 (m, 34H).

35 Ejemplo 72. Preparación de (4aS,8S,11S,12S,13R,25aS)-8-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2(difluorometil)ciclopropil]-17-metoxi-12-metil-6,9-dioxo-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-hexadecahidro1H,11H-1,3:10,13-dimetanoquinoxalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioxadiazaciclononadecino-11-carboxamida

Etapa 1: Preparación del Ejemplo 72: A una suspensión del ácido 712 (49 mg, 0,079 mmol) y el clorhidrato de amina A9 (38 mg, 0,13 mmol) en MeCN (1 ml) se añadió DIPEA (100 µl, 0,57 mmol). Se añadió HATU (41 mg, 0,11 mmol) a la solución resultante, y la reacción se agitó a ta durante 14,5 h. A continuación, la reacción se diluyó 45 con EtOAc (20 ml), HCl acuoso 0,2 M (10 ml) y solución salina saturada (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo en bruto. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 y se concentró sobre 2 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (de un 4 % a un 45 % de acetona en hexanos)

proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó a partir de agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 72. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H57F2N6O9S: 859,4; encontrado: 859,0. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,72 (s, 1 H), 9,36 (s, 1 H), 7,86 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 7,25 - 7,17 (m, 2H), 5,98 - 5,88 (m, 1 H), 5,69 (td, J = 55,4, 6,9 Hz, 1 H), 4,81 -4,69 (m, 1H), 4,68 -4,56 (m, 2H), 4,33 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,35 (dd, J = 9,7,

5 7,0 Hz, 1 H), 3,24 - 3,13 (m, 1H), 2,97 - 2,87 (m, 1H), 2,87 -2,72 (m, 2H), 2,57 - 2,45 (m, 1 H), 2,38 - 2,28 (m, 1H), 2,17 - 0,71 (m, 34H).

Ejemplo 73. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-9-etil-14-metoxi-N-[(1R,2R)-2-metil-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,1010 metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

El Ejemplo 73 se preparó de una manera similar al Ejemplo 1 sustituyendo el compuesto intermedio A11 por el

15 compuesto intermedio A10 en la Etapa 8. La sal de TFA del Ejemplo 73 se aisló. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,72 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H57N6O9S: 797,98; encontrado: 797,54. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,84 (s, 1 H); 7,79 (d, J = 9,2 Hz, 1 H); 7,22 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1 H); 7,13 (d, J = 2,4 Hz, 1 H); 5,87 (d, J = 3,2 Hz, 1 H); 4,57 (d, J = 7,2 Hz, 1 H); 4,39 (s a, 1 H); 4,37 (d a, J= 10Hz, 1H); 4,15 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H); 3,92 (s, 3H); 3,74 (m, 1H); 3,10-2,88 (m, 1 H); 2,80 (td, J =12,4, 4 Hz, 1 H); 2,58 (m, 1 H); 1,89-1,66 (m, 3H);

20 1,66-1,38 (m, 11H); 1,52 (s, 3H); 1,23 (t, J =7,2 Hz, 3H); 1,16 (d, J = 6 Hz, 3H); 1,10 (s, 9H); 1,02-0,84 (m, 4H); 0,780,66 (m, 1 H); 0,55-0,20 (m, 1 H).

Ejemplo 74. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1fluorociclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a

25 tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida

30 El Ejemplo 74 se preparó de una manera similar al Ejemplo 1 sustituyendo el compuesto intermedio A12 por el compuesto intermedio A10 en la Etapa 8. La sal de TFA del Ejemplo 74 se aisló. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,81 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H52F3N6O9S: 837,35; encontrado: 837,54. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,26 (s, 1 H); 7,79 (d, J = 9,2 Hz, 1 H); 7,22 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1 H); 7,14 (d, J = 2,4 Hz, 1 H); 5,89 (d, J = 3,6 Hz, 1 H); 5,82 (td, JH-F = 56 Hz, J = 6,4 Hz, 1 H); 4,56, (d, J = 7,2 Hz, 1 H); 4,39 (s, 1 H); 4,38 (d, J = 12 Hz, 1 H); 4,16 (dd, J = 12, 7,2 Hz, 1 H); 3,92 (s, 3H); 3,78-3,72 (m, 1 H); 3,10-2,89 (m, 1 H); 2,80 (td, J = 12, 4 Hz, 1 H); 2,63-2,54 (m, 1 H); 2,02 (m, 2H); 1,95-1,66 (m, 3H); 1,66-1,36 (m, 9H); 1,22 (t, J =7,2 Hz, 3H); 1,14-1,04 (m, 2H); 1,09 (s, 9H); 1,04-0,92 (m, 2H); 0,78-0,68 (m, 1H); 0,57-0,46 (m, 1H).

5 Ejemplo 75. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-1-{[(1clorociclopropil)sulfonil]carbamoil}-2-(difluorometil)ciclopropil]-9-etil-14-metoxi-3,6-dioxo1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

El Ejemplo 75 se preparó de una manera similar al Ejemplo 1 sustituyendo el compuesto intermedio A13 por el compuesto intermedio A10 en la Etapa 8. La sal de TFA del Ejemplo 75 se aisló. Tiempo de Ret para HPLC

15 analítica: 8,89 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H52ClF2N6O9S: 853,32; encontrado: 853,94. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,24 (s, 1 H); 7,79 (d, J = 9,2 Hz, 1 H); 7,22 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1 H); 7,13 (d, J = 2,4 Hz, 1 H); 5,88 (d, J = 3,2 Hz, 1 H); 5,84 (td, JH-F = 55,6 Hz, J = 6,8 Hz, 1 H); 4,57 (d, J = 7,2 Hz, 1H); 4,39 (s a, 1H); 4,38 (d, J = 12 Hz, 1H); 4,16 (dd, J = 12,7,2 Hz, 1 H); 3,92 (s, 3H); 3,77-3,73 (m, 1 H); 3,00-2,88 (m ,1 H); 2,86-2,75 (m, 1 H); 2,64-2,54 (m, 1 H); 2,10-1,90 (m, 4H); 1,90-1,37 (m, 12H); 1,23 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 1,10 (s, 9H); 1,02-0,96 (m, 2H);

20 0,78-0,64 (m, 1 H); 0,56-0,45 (m, 1 H).

Ejemplo 76. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-18,18-difluoro-14-metoxi-1a,9-dimetil-3,6-dioxo1,a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10

25 metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b] quinoxalina-8-carboxamida Etapa 1. Preparación de 761: se añadieron HATU (502 mg, 1,32 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,70 ml, 4,02 mmol) a una mezcla de 462 (434 mg, 0,998 mmol) y el compuesto intermedio D17 (350 mg, 1,24 mmol) en 16 ml de

5 acetonitrilo en atmósfera de argón. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-25 % de acetato de etilo en hexanos) para producir 761. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H51F2N4O7: 701,36; encontrado: 701,57. Etapa 2. Preparación de 762 y 763: una mezcla diastereomérica de 761 (550 mg, 0,786 mmol) y catalizador de

10 Zhan 1B (69 mg, 0,094 mmol, Strem) en 157 ml de DCE se desoxigenó bajo una atmósfera de argón durante 25 minutos. A continuación, la mezcla se calentó a reflujo durante 90 minutos. Se añadió una cantidad adicional de 35 mg de catalizador de Zhan 1B y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 45 minutos. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-35 % de acetato de etilo en hexanos) para producir los diastereómeros

15 individuales 762 (componente de elución temprana) en forma de una película sólida de color blanco y 763 (componente de elución tardía) en forma de una película sólida de color marrón. Componente de elución temprana 762: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H47F2N4O7: 673,33; encontrado: 673,45. Componente de elución tardía 763: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H47F2N4O7: 673,33; encontrado: 673,47. Etapa 3. Preparación de 764: se añadió paladio sobre carbono (Pd al 10 % en peso, 51 mg, 0,048 mmol) a una solución de 762 (175 mg, 0,260 mmol) en 9 ml de etanol. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la reacción se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se lavó con etanol. El filtrado se concentró al vacío para producir 764, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H49F2N4O7: 675,35; encontrado: 675,53.

5 Etapa 4. Preparación de 765: se añadió TFA (1,2 ml, 15,6 mmol) lentamente a una solución de 764 (155 mg, 0,230 mmol) en 3,4 ml de diclorometano. Después de 4 horas, la mezcla se concentró a presión reducida casi hasta sequedad. El residuo resultante se recogió en 25 ml de acetato de etilo, se lavó con 15 ml de agua, 15 ml de NaHCO3 sat. (ac.), y se separó. Las fases acuosas se extrajeron con acetato de etilo (3 x 20 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 30 ml de solución salina saturada, se secaron sobre MgSO4 anhidro, se

10 filtraron y se concentraron al vacío para producir 765, que se usó en la siguiente etapa simplificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z) : [M+ H]+ calc. para C31H41F2N4O7: 619,29; encontrado: 619,44. Etapa 5. Preparación del Ejemplo 76: se añadieron HATU (160 mg, 0,421 mmol) y DIPEA (0,20 ml, 1,15 mmol) a una mezcla de 765 (140 mg, 0,226 mmol) y el compuesto intermedio A10 (139 mg, 0,457 mmol) en 7,5 ml de MeCN en atmósfera de argón. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se recogió en 30 ml

15 de acetato de etilo y se lavó con 20 ml de HCl acuoso 1 N. Las fases se separaron la fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con solución salina saturada, se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-45 % de acetato de etilo en hexanos) y HPLC preparativa en fase inversa (50-100 % de acetonitrilo en agua, con tampón de ácido trifluoroacético al 0,1 %) para producir la sal del ácido

20 trifluoroacético del Ejemplo 76 (Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,80 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H53F4N6O9S: 869,35; encontrado: 869,59. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 9,19 (s, 1 H), 7,94 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,32 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1 H), 7,27 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 5,78 (td, JH-F = 56 Hz, J = 7,2 Hz, 1 H), 5,76-5,74 (m, 1 H), 4,56 (d, J = 6,4 Hz, 1 H), 4,48 (d, J = 12 Hz, 1 H), 4,27-4,19 (m, 1 H), 4,22 (s, 1 H), 3,97 (s, 3H), 2,762,70 (m, 1 H), 2,62-2,43 (m, 1 H), 2,14-1,94 (m, 3H), 1,90-1,80 (m, 1 H), 1,80-1,62 (m, 3H), 1,56-1,52 (m, 2H),

25 1,51 (s, 3H), 1,49 (s, 3H), 1,41-1,36 (m, 1 H), 1,27-1,18 (m, 1 H), 1,11 (s, 9H), 1,09-1,04 (m, 5H), 1,03-0,94 (m, 2H), 0,87-0,81 (m, 3H), 0,17-0,12 (m, 1 H).

Ejemplo 77. Preparación de (1aS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-18,18-difluoro-14-metoxi-1a,9-dimetil-3,6-dioxo

30 1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

35 El Ejemplo 77 se preparó de una manera similar al Ejemplo 76, sustituyendo el compuesto de elución tardía 763 por el compuesto de elución temprana 762 en la etapa 3. A continuación se aisló el Ejemplo 76. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,46 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H53F4N6O9S: 869,35; encontrado: 869,53. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 7,95 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,32 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,28 (s, 1 H), 6,58-6,54 (m, 1 H), 5,75 (td, JH-F = 55 Hz, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,54-5,50 (m, 1 H), 4,65 (d, J = 6,8 Hz, 1 H), 4,46 (d, J = 12,8 Hz, 1 H), 4,26-4,18 (m, 1

40 H), 3,97 (s, 3H), 2,92-2,71 (m, 1 H), 2,50-1,94 (m, 6H), 1,68-1,57 (m, 2H), 1,56-1,52 (m, 2H), 1,51 (s, 3H), 1,50-1,47 (m, 1 H), 1,46-1,38 (m, 3H), 1,44 (s, 3H), 1,27-1,18 (m, 2H), 1,17-1,01 (m, 3H), 1,09 (s, 9H), 0,94-0,82 (m, 4H), 0,170,12 (m, 1 H).

Ejemplo 78. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,19E,22aR)-5-terc-butil-14-ciano-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1

45 metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,17,17a,18,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida

5 Etapa 5: A una solución de 784 (90 mg, 0,135 mmol) en EtOH (0,7 ml) se añadió NaBH4 (21 mg, 0,54 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 1 h. Después de este tiempo, la mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite y se concentró para dar el compuesto intermedio 785, que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H45F2N5O6 : 669,76; encontrado: 669,73. Etapas 6 y 7: Preparación del Ejemplo 78: A una solución de 785 (35 mg, 0,31 mmol) en DCM (0,4 ml), se

10 añadió TFA (0,2 ml) y la mezcla se agitó a 20 ºC durante 3 horas. Los disolventes se retiraron al vacío para proporcionar un residuo se usó posteriormente sin purificación adicional. A una suspensión de este residuo (33 mg, 0,05 mmol) y el compuesto intermedio A10 (27 mg, 0,1 mmol) en DCM (0,3 ml) se añadió TBTU (26 mg, 0,08 mmol) y DIPEA (35 µl, 0,2 mmol) a ta. Después de 1 h, la solución se purificó directamente por HPLC en fase inversa (columna Gemini 5u C18 110A, 50-100 % de ACN/H2O + TFA al 0,1 %) y se liofilizó para

15 proporcionar la sal de TFA del Ejemplo 78. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 7,994 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H49F4N7O8S: 863,92; encontrado: 864,20. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,35 (s, 1H), 7,29 (d,1 H), 7,18 (dd,1 H), 6,64 (d, 1 H), 6,01-5,82 (m, 2H), 5,41 (m, 2H), 4,57 - 4,07 (m, 5H), 3,52 (m, 1 H), 2,55-2,28 (m, 2H), 2,06 - 1,98 (m, 2H), 1,85 (m, 1 H), 1,69 - 1,37 (m, 9H), 1,33 (m, 2H), 1,06-0,87 (m, 16H), 0,70 (m, 2H), 0,49 (m, 1 H).

20 Ejemplo 79. Preparación de (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-15-cloro-N-[(1R,2R)-1[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2-(difluorometil)ciclopropil]-10-metil-4,7-dioxo1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9carboxamida

Etapa 1. Preparación de 791. La sulfonil quinoxalina E5 (920 mg, 3,32 mmol) se suspendió en MeCN (17 ml), y a continuación se trató con el compuesto intermedio B1 (1,00 g, 3,32 mmol) y Cs2CO3. Después de 17 h, la mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por 10 cromatografía en columna sobre gel de sílice (de un 10 % a un 30 % de EtOAc/Hex) para proporcionar el éter 79

1. LCMS-ESI+ (m/z): [M-Boc+2H]+ calc. para C18H22Cl2N3O3: 398,10; encontrado: 398,12. Etapa 2. Preparación de 792. El carbamato de tercbutilo 791 (513 mg, 1,03 mmol) se disolvió en DCM (10 ml) y se trató con HCl (4,0 ml en dioxano, 5 ml, 20 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 1,5 h, a continuación se concentró a presión reducida para proporcionar el clorhidrato de amina 792, que se usó sin

15 purificación. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C18H22Cl2N3O3: 398,10; encontrado: 398,16. Etapa 3. Preparación de 793. El clorhidrato de amina 792 (1,03 mmol teórico) y el compuesto intermedio D12 (336 mg, 1,04 mmol) se combinaron y se trataron con BEP (285 mg, 1,04 mmol), EtOAc (9 ml), NMP (1 ml) y DIPEA (0,90 ml, 5,2 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 50 ºC durante 3 horas, a continuación se enfrió a TA. Después de un periodo adicional de 15 h, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc. La solución orgánica

20 se lavó con NaHCO3 acuoso saturado y solución salina saturada, a continuación se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (de un 10 % a un 25 % de EtOAc/Hex) para proporcionar la amida 793. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H49Cl2N4O6: 703,30; encontrado: 703,91. Etapa 4. Preparación de 794. La cloro quinoxalina 793 (541 mg, 0,769 mmol) se trató con viniltrifluoroborato potásico (154 mg, 1,15 mmol), aducto de Pd(dppf)Cl2 y diclorometano (63 mg, 0,077 mmol), EtOH (8 ml) y trietilamina (0,16 ml, 1,15 mmol). La mezcla agitada se calentó a reflujo durante 1 h, a continuación se enfrió a TA y se diluyó con EtOAc. La solución orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso saturado y solución salina saturada, a continuación se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (de un 10 % a un 30 % de EtOAc/Hex) para proporcionar la vinil quinoxalina 794. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H52ClN4O6: 695,36; encontrado: 695,10. Etapa 5. Preparación de 795. La vinil quinoxalina 794 (390 mg, 0,561 mmol) se trató con DCE (112 ml) y catalizador de Zhan-B (38 mg, 0,0561 mmol). La mezcla agitada se desgasificó con burbujeo de N2 durante 25 min, a continuación se calentó a reflujo en una atmósfera de Ar. Después de 1,5 h, la mezcla se enfrió a TA y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (de un 10 % a un 30 % de EtOAc/Hex) para proporcionar el macrociclo 795. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H48ClN4O6: 667,33; encontrado: 667,86. Etapa 6. Preparación de 796. El macrociclo 795 (198 mg, 0,297 mmol) se trató con EtOAc (100 ml) y un 5 % de Rh/alúmina (100 mg). El gas H2 se burbujeó a través de la solución durante 1 min y la mezcla de reacción se agitó a TA en una atmósfera de H2. Después de 45 min, se añadió más Rh/alúmina al 5 % (200 mg). De nuevo, el gas H2 se burbujeó a través de la solución durante 1 min y la mezcla de reacción se agitó a TA en una atmósfera de H2. Después de otra 1 h, la mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró a presión reducida. El material (796) se usó sin purificación. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H50ClN4O6: 669,34; encontrado: 669,63. Etapa 7. Preparación de 797. El macrociclo 796 (0,297 mmol teórico) se trató con DCM (10 ml) y TFA (10 ml). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 14 h, a continuación se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se disolvió en EtOAc y la solución orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso saturado y ácido cítrico 1 M. se añadió solución salina saturada después de lava del ácido cítrico para separar la emulsión que se había formado. La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (100 % de de EtOAc) para proporcionar el 797 impuro que se usó sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H42ClN4O6: 613,28; encontrado: 613,22. Etapa 8. Preparación del Ejemplo 79. El ácido carboxílico 797 (0,264 mmol teórico) se trató con el compuesto intermedio A9 (156 mg, 0,537 mmol), TBTU (170 mg, 0,528 mmol), DMAP (65 mg, 0,528 mmol), DCM (2 ml) y DIPEA (0,23 ml, 1,3 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 19 h y a continuación se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por HPLC en fase inversa para proporcionar el Ejemplo 79 en forma de una sal de TFA. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H52ClF2N6O8S: 849,32; encontrado: 849,16. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,17 (s, 1 H), 7,86 (t, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,77 (t, J = 3,5 Hz, 1 H), 7,55 (dd, J = 8,8, 2,3 Hz, 1 H), 5,84 (td, J = 55,7, 6,7 Hz, 1 H), 5,62 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 4,98 (t, J = 10,6 Hz, 1 H), 4,53 (t, J = 9,3 Hz, 1 H), 4,42 - 4,26 (m, 2H), 4,19 (dd, J = 12,0, 3,9 Hz, 1 H), 3,34 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 2,99 (tt, J = 8,2, 4,8 Hz, 2H), 2,78 (ddt, J = 21,6, 14,2, 5,7 Hz, 2H), 2,28 - 2,12 (m, 1 H), 2,08 - 1,16 (m, 19H), 1,16 - 0,96 (m, 17H), 0,58 (dd, J = 8,3, 4,1 Hz, 1H), 0,55 - 0,44 (m, 1 H).

Ejemplo 80. Preparación de (3aR,7S,10S,11S,12R)-1-acetil-7-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-16-metoxi-11-metil-5,8-dioxo1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10h-9,12metanopirrolo[2’,3’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida Etapa 1. Preparación de 801: la amina 182 (195 mg, 0,495 mmol) y el compuesto intermedio D18 (192,8 mg, 0,544 mmol) se disolvieron en DMF (10 ml). Se añadió DIPEA (430 µl, 2,48 mmol) seguido de HATU (207 mg,

5 0,544 mmol) a temperatura ambiente. Después de 1,5 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo en bruto se purificó directamente por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar 801 (proporción diastereomérica de 2:1 que favorece el producto deseado). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H53CIN5O8: 730,3; encontrado: 730,48. Etapa 2. Preparación de 802: Una mezcla heterogénea agitada de 801 (314 mg, 0,431 mmol),

10 PdCl2(dppf)•CH2Cl2 (35,2 mg, 0,043 mmol) y viniltrifluoroborato potásico (86,6 mg, 0,646 mmol) en EtOH (2,2 ml) se roció con argón durante 15 min. Se añadió trietilamina (320 µl, 2,3 mmol) y la mezcla se calentó a 80 ºC. Después de 40 min, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con tolueno (5 ml). La mezcla resultante se concentró y el residuo en bruto se purificó directamente por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar 802 (proporción diastereomérica

15 de 2:1 que favorece el producto deseado). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H56N5O8: 722,4; encontrado: 722,54.

Etapa 3. Preparación de 803: 802 (228 mg, 0,320 mmol) se disolvió en DCE (64 ml) y la solución se roció con Ar durante 15 min. Se añadió catalizador de Zhan 1B (23 mg, 0,032 mmol) y la solución resultante se agitó a 100 ºC bajo una atmósfera de Ar. Después de 45 min, la mezcla de reacción se enfrió a ta, se concentró al vacío y se purificó directamente por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 0-100 % de acetato de

5 etilo/hexanos) para proporcionar 803 (proporción diastereomérica de 5:2 que favorece el producto deseado). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H52N5O8: 694,37; encontrado: 694,53. Etapa 4: Preparación de 804: la olefina 803 (164 mg, 0,237 mmol) se disolvió en etanol (1,19 ml) y el recipiente de reacción se purgó con Ar. Se añadió Pd/C (Pd al 10 % en peso, 25 mg) en una sola porción y el recipiente de reacción se purgó tres veces con H2. La reacción se agitó a ta bajó 1 atm de H2 durante 2 h y se diluyó con

10 acetato de etilo (10 ml). La mezcla resultante se filtró a través de una capa de Celite y se concentró para proporcionar un residuo en bruto de 804 (proporción diastereomérica de 5:2 que favorece el producto deseado) que se usó sin purificación adicional (LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H54N5O8: 696,39; encontrado: 696,56. Etapa 5. Preparación de 805: A una solución de 804 (164 mg, 240 µmol) en DCM (1,2 ml) se añadió TFA

15 (0,45 ml) a ta. Después de 7 h, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y la mezcla resultante se extrajo con solución acuosa de hidróxido sódico 1 N (40 ml). A continuación, la fase acuosa se acidificó lentamente a pH = 3 con ácido clorhídrico concentrado, y se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío. El residuo se secó de forma azeotrópica con tolueno (3 x 5 ml) para proporcionar 805 (proporción diastereomérica de 5:2

20 que favorece el producto deseado) que se usó sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C33H46N5O8: 640,33; encontrado: 640,48. Etapa 6. Preparación del Ejemplo 80: A una solución de 805 (140 mg, 219 µmol) y el compuesto intermedio A10 (133 mg, 438 µmol) en MeCN (1,1 ml) se añadió HATU (169 mg, 438 µmol) seguido de DIPEA (190 µl, 1,09 mmol) a ta bajo una atmósfera de argón. Después de 15 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, se

25 purificó por HPLC preparativa (columna Gemini 5u C18 110Å, 5-100 % de MeCN/H2O, modificador de ácido trifluoroacético al 0,1 %) y se liofilizó para proporcionar el Ejemplo 80 (proporción diastereomérica de 5:2 que favorece el producto deseado) en forma de una sal sólida de TFA de color amarillo claro. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 7,91 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H58F2N7O10S: 890,39; encontrado: 890,64. RMN 1H (400 MHz, CD3OD, diastereómero secundario indicado por *) δ 9,18 (s, 1 H), 9,14 (s, 1H*), 7,78 (d a,

30 J = 9,0 Hz, 1H, 1H*), 7,21 (d a, J = 9,0 Hz, 1H, 1H*), 7,18 (s a, 1H, 1H*), 5,80 (td a, JH-F = 55,8 Hz, J = 6,8 Hz, 1H, 1H*), 5,64 (s a, 1H, 1H*), 5,23 (d, J = 4,7 Hz, 1H*), 5,15 (d, J = 4,7 Hz, 1 H), 4,56 (d, J = 6,7 Hz, 1H, 1H*), 4,46 (d, J = 12,1 Hz, 1H*), 4,41 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 4,30 -4,22 (m, 1H, 1H*), 4,22 - 4,07 (m, 1H, 1H*), 4,02 - 3,79 (m, 1H, 1H*) 3,92 (s a, 3H, 3H*), 3,73 -3,52 (m, 2H, 2H*), 3,05 - 2,68 (m, 3H, 3H*), 2,40 - 2,21 (m, 1H, 1H*), 2,13 -1,94 (m, 4H, 4H*), 1,83 (s, 2H, 2H*), 1,75 -1,20 (m, 12H, 12H*), 1,12 (s, 9H*),1,1 0 (s, 9H), 1,06 (d a,

35 J = 7,3 Hz, 3H, 3H*), 0,92 -0,85 (m, 4H, 4H*).

Ejemplo 81. Preparación de (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-19,19-difluoro-15-metoxi-10-metil-4,7-dioxo1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11

40 metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9carboxamida

45 El Ejemplo 81 se preparó de una manera similar al Ejemplo 62, sustituyendo el compuesto intermedio A10 por el compuesto intermedio A9 en la Etapa 5. El Ejemplo 81 se aisló. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,36 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H55F4N6O9S: 895,36; encontrado: 895,59. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): δ 9,23 (s, 1 H), 7,93 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,31 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1 H), 7,26 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 5,80 (td, JH-F = 56 Hz, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,73 (d, J =3,2 Hz, 1 H), 4,94 (d, J =7,2Hz, 1 H), 4,56 (d, J = 6,8 Hz, 1 H), 4,36 (d, J =6,8 Hz, 1 H), 4,32 (s, 1 H), 4,22-4,16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1 H), 3,97 (s, 3H), 2,79-2,71 (m, 1 H), 2,61-2,52 (m, 1 H), 2,26-2,16 (m, 1 H), 2,08-1,92 (m, 4H), 1,82-1,64 (m, 3H), 1,60-1,54 (m, 3H), 1,53-1,46 (m, 1 H), 1,52 (s, 3H), 1,44-1,26 (m, 5H), 1,08 (s, 9H), 1,07-0,98 (m, 4H), 0,94-0,84 (m, 3H), 0,60-0,48 (m, 2H).

5 Ejemplo 82. Preparación de (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-19,19-difluoro-10-metil-4,7-dioxo1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9carboxamida

El compuesto intermedio 821 se preparó de una manera similar al compuesto intermedio 462, sustituyendo el compuesto intermedio E3 por el E4 en la Etapa 1. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C26H34F2N3O5: 506,25;

15 encontrado: 506,59.

El Ejemplo 82 se preparó de una manera similar al Ejemplo 62, sustituyendo el compuesto intermedio 821 por el compuesto intermedio 462 en la Etapa 1. El Ejemplo 82 se aisló. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H52F4N6O8S: 864,35; encontrado: 865,43. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,82 (s, 1 H), 7,89 - 7,72 (m, 2H), 7,67 (t,

20 J = 7,6 Hz, 1 H), 6,93 (s, 1 H), 6,12 -5,65 (m, 2H), 5,34 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 4,90 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 4,45 (t, J = 9,3 Hz, 2H), 4,27 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 4,13 (dd, J = 11,9, 3,9 Hz, 1 H), 2,77 - 2,64 (m, 2H), 2,27 - 2,12 (m, 1 H), 2,13 - 1,86 (m, 4H), 1,82 - 1,19 (m, 15H), 1,18 - 0,98 (m, 13H), 0,89 - 0,77 (m, 2H), 0,53 (dd, J = 13,3, 8,1 Hz, 1 H), 0,43 (d, J = 4,2 Hz, 1 H).

25 Ejemplo 83. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-dioxo-14-(trifluorometoxi)1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

Etapa 1. Preparación de 831: se añadió HATU (3,06 g, 8,05 mmol) lentamente a una solución de ácido 3,3difluoro-2-oxopent-4-enoico (1,03 g, 6,86 mmol) en 10 ml de DMF. A continuación se añadió una mezcla de 4(trifluorometoxi)benceno-1,2-diamina (1,29 g, 6,71 mmol) y DIPEA (1,4 ml, 8,05 mmol) en 12 ml de DMF. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se vertió en 175 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (4 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con un 50 % de solución salina saturada, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El sólido resultante se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (0-25 % de acetato de etilo en hexanos) para producir el compuesto intermedio 831, el producto de elución tardía. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C12H8F5N2O2: 307,04; encontrado: 307,29. Etapa 2. Preparación de 832: Una solución de 831 (924 mg, 3,01 mmol) en 2 ml de DMF se trató con POCl3 (0,56 ml, 6,04 mmol) y se calentó a 80 ºC durante 2,5 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con 25 ml de EtOAc y se añadió lentamente a 20 ml de agua con agitación vigorosa. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron posteriormente con bicarbonato sódico acuoso saturado y solución salina saturada, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró a presión reducida para dar el compuesto intermedio 832. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C12H7ClF5N2O: 324,01; encontrado: 324,13. Etapa 3. Preparación de 833: Cs2CO3 (606 mg, 1,86 mmol) se añadió a una mezcla del compuesto intermedio 832 (460 mg, 1,54 mmol) y el compuesto intermedio B4 (564 mg, 1,79 mmol) en 12 ml de DMF a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 85 ºC durante una noche. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se vertió en 50 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (4 x 40 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 90 ml de solución salina saturada al 50 %, se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron a presión reducida. El sólido resultante se purificó a través de cromatografía en columna sobre gel de sílice (0-30 % de acetato de etilo en hexanos) para dar 833. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C28H35F5N3O6: 604,24; encontrado: 604,20. Etapa 4. Preparación de 834: el éter de quinoxalina 833 (290 mg, 0,647 mmol) se disolvió en 4,1 ml de acetato de terc-butilo y 1,1 ml de diclorometano a temperatura ambiente. Se añadió MeSO3H (0,25 ml, 3,88 mmol) gota a gota y la mezcla de reacción se agitó a ta durante 2 h. La mezcla de reacción se transfirió a una mezcla agitada de EtOAc (20 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (30 ml). Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío para proporcionar la amina 834. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C23H27F5N3O4: 504,18; encontrado: 504,31. Etapa 5. Preparación de 835: se añadieron HATU (260 mg, 0,684 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,40 ml, 2,30 mmol) a una mezcla de 834 (258 mg, 0,512 mmol) y el compuesto intermedio D11 (177 mg, 0,657 mmol) en 7 ml de acetonitrilo en atmósfera de argón. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-20 % de acetato de etilo en hexanos) para producir 835. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H48F5N4O7: 755,34; encontrado: 755,49. Etapa 6. Preparación de 836: Una mezcla de 835 (215 mg, 0,285 mmol) y catalizador de Zhan 1 B (29 mg, 0,040 mmol, Strem) en 60 ml de DCE se desoxigenó con argón durante 15 minutos. A continuación, la mezcla se calentó a reflujo durante 90 minutos. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-40 % de acetato de etilo en hexanos) para producir 836. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H44F5N4O7: 727,31; encontrado: 727,43. Etapa 7. Preparación de 837: se añadió paladio sobre carbono (Pd al 10 % en peso, 40 mg, 0,038 mmol) a una solución de 836 (129 mg, 0,178 mmol) en 9 ml de etanol. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la reacción se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se lavó con etanol. El filtrado se concentró al vacío para producir un residuo, que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (0-30 % de acetato de etilo en hexanos) para producir 837. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H46F5N4O7: 729,32; encontrado: 729,45.

5 Etapa 8. Preparación de 838: se añadió TFA (0,62 ml, 8,09 mmol) lentamente a una solución de 837 (79 mg, 0,109 mmol) en 1,8 ml de diclorometano. Después de 4 horas, la mezcla se concentró a presión reducida casi hasta sequedad. Expresivo resultante se recogió en 10 ml de acetato de etilo, se lavó con 8 ml de agua, 8 ml de NaHCO3 sat. (ac.), y se separó. Las fases acuosas se extrajeron con acetato de etilo (3 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 10 ml de solución salina saturada, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se

10 filtraron y se concentraron al vacío para producir 838, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C31H38F5N4O7: 673,26; encontrado: 673,10. Etapa 9. Preparación del Ejemplo 83: añadieron HATU (84 mg, 0,221 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,095 ml, 0,547 mmol) se a una mezcla de 838 (72 mg, 0,107 mmol) y el compuesto intermedio A10 (66 mg, 0,217 mmol) en 4 ml de acetonitrilo en atmósfera de argón. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se

15 recogió en 20 ml de acetato de etilo y se lavó con 10 ml de HCl acuoso 1 N. La fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con un 50 % de solución salina saturada, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-50 % de acetato de etilo en hexanos) y HPLC preparativa en fase inversa (50-100 % de acetonitrilo en agua, con tampón de ácido trifluoroacético al 0,1 %) para producir la sal del ácido

20 trifluoroacético del Ejemplo 83. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,12 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H50F7N6O9S: 923,32; encontrado: 923,10. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): δ 9,26 (s, 1H), 8,01-7,91 (m, 2H), 7,78-7,63 (m, 1 H), 5,95 (d, J = 3,6 Hz, 1 H), 5,83 (td, JH-F =61Hz, J=6,0Hz, 1 H), 4,59 (d, J=7,2Hz, 1 H), 4,42 (d, J = 12,4 Hz, 1 H), 4,35 (s, 1 H), 4,22-4,11 (m, 1 H), 3,72-3,66 (m, 1 H), 2,71-2,49 (m, 2H), 2,18-1,94 (m, 3H), 1,90-1,75 (m, 3H), 1,74-1,62 (m, 2H), 1,60-1,48 (m, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,50-1,24 (m, 4H), 1,22-1,18 (m, 2H),

25 1,08 (s, 9H), 1,07-0,84 (m, 5H), 0,81-0,64 (m, 1 H), 0,54-0,44 (m, 1 H).

Ejemplo 84. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,19E,22aR)-5-terc-butil-14-ciano-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,21,22,22adodecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8

30 carboxamida

Etapa 1: Preparación del Ejemplo 84. El Ejemplo 78 en bruto (8,7 mg, 0,01 mmol) se disolvió de nuevo en ACN

35 (0,3 ml) y se trató con DDQ (3,4 mg, 0,015 mmol). Después de 10 min, la solución se purificó directamente por HPLC en fase inversa (columna Gemini 5u C18 110Å, 50-100 % de ACN/H2O + TFA al 0,1 %) y se liofilizó para proporcionar la sal de TFA del Ejemplo 84. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,385 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H47F4N7O8S: 861,90; encontrado: 862,89. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,21 (s, 1 H), 8,25 (d,1 H), 8,20 (d,1 H), .7,91 (dd, 1 H),6,32 (m, 2H), 5,97-5,61 (m, 2H), 4,82 (m, 1 H),

40 4,58 - 4,13 (m, 4H), 3,71-3,49 (m, 3H), 2,61 (m, 2H), 2,23 (m, 1 H), 2,00 - 1,80 (m, 3H), 1,56 - 1,20 (m, 10H), 1,20 (m, 3H), 1,07 (m, 8H), 0,98-0,82 (m, 3H), 0,55 (m, 1 H).

Ejemplo 85. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-14-(difluorometoxi)-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1{[(1-metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a

45 tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b] quinoxalina-8carboxamida

El Ejemplo 85 se preparó de una manera similar al Ejemplo 83, usando el compuesto intermedio E7 en lugar de 832 en la etapa 3. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,725 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H50F6N6O9S:

5 904,92; encontrado: 905,16. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,23 (s, 1 H), 7,88 (d,1 H), 7,76 (d,1 H), .7,62 (dd, 1 H), 7,03 (dd, 1 H), 5,94-5,65 (m, 3H), 4,57 - 4,14 (m, 4H), 3,66 (m, 1 H), 2,57 (m, 2H), 2,01 - 1,97 (m, 3H), 1,82 - 1,77 (m, 3H), 1,64 (m, 1 H), 1,57 - 1,33 (m, 10H), 1,20 (m, 3H), 1,06-0,87 (m, 12H), 0,87 (m, 2H), 0,48 (m, 1 H).

Ejemplo 86. Preparación de (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1

10 metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-15-fluoro-10-metil-4,7-dioxo1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9carboxamida Etapa 1. Preparación de 861: A una solución de E8 (1,5 g, 5,75 mmol) y B1 (1,9 g, 6,34 mmol) en MeCN (50 ml) se añade Cs2CO3 (3,09 g, 9,49 mmol). Después de agitar a ta durante 60 h, la mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró. El residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (5-35 % de EtOAc/hexanos) para producir el producto 861. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C23H30ClFN3O5 -Boc: 482,13; encontrado: 382,04. Etapa 2. Preparación de 862: A una solución de 861 (747 mg, 1,55 mmol) en CH2Cl2 (5 ml) se añade HCl (5 ml, 4 M en dioxano) y se permite su agitación durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró para dar un residuo que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C18H23C12FN3O3 - HCl: 382,13; encontrado: 382,08. Etapa 3. Preparación de 863: A una solución de 862 (397 mg, 0,95 mmol), D12 (308 mg, 0,95 mmol) y BEP (312 mg, 1,14 mmol) en EtOAc (9 ml) y NMP (1 ml) se añadió DIPEA (0,7 ml, 3,8 mmol) y la reacción se agitó a 50 ºC durante una noche. La reacción se interrumpió con solución sat. de NaHCO3 y se extrajo con EtOAc, se lavó posteriormente con solución salina saturada, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El producto en bruto se purificó por gel de sílice para producir 863. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H49ClFN4O6: 687,33; encontrado: 687,44. Etapa 4. Preparación de 864: A una solución de 863 (266 mg, 0,39 mmol), TEA (0,08 ml, 0,58 mmol) y viniltrifluoroborato potásico (78 mg, 0,58 mmol) en EtOH (8 ml) se añadió PdCl2(dppf) (32 mg, 0,04 mmol). La reacción se desgasificó con N2 durante 10 min y se calentó a 75 ºC durante 1 h. La reacción se interrumpió con solución sat. de NaHCO3 y se extrajo con EtOAc, se lavó posteriormente con solución salina saturada, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El residuo se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (025 % de EtOAc/hexanos) para dar 864. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H52FN4O6: 679,39; encontrado: 679,52. Etapa 5 y 6. Preparación de 865: A una solución de 864 (262 mg, 0,38 mmol) en DCE (50 ml) se añadió catalizador de Zhan 1 B (28 mg, 0,04 mmol) y la reacción se desgasificó durante 25 minutos con N2. La reacción se calentó a 100 ºC durante 1 h, se permitió que se enfriara a ta y se concentró. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-30 % de EtOAc/hexanos) para dar el producto de olefina (182 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H48FN4O6: 651,36; encontrado: 651,38) que se recogió en EtOH (5 ml) y EtOAc (1 ml) y se trató con Pd/C (10 %, 55 mg). La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y se agitó a ta durante 1,25 h. La reacción se filtró sobre Celite, se lavó con EtOAc y se concentró para dar 865 que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H50FN4O6: 653,37; encontrado: 653,46. Etapa 7. Preparación de 866: A una solución de 865 (182 mg, 0,28 mmol) en DCM (3 ml) se añadió TFA (3 ml) y CIA citó a ta durante 18 h. La reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con H2O, se basificó a pH 7 con solución

sat. de NaHCO3, se lavó con solución de ácido cítrico 1 M, se secó sobre sulfato de magnesio, y se concentró para dar un residuo de 866 que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H42FN4O6: 597,31; encontrado: 597,15. Etapa 8. Preparación del Ejemplo 86: A una solución de 866 (24 mg, 0,04 mmol), el compuesto intermedio A10

5 (18 mg, 0,06 mmol), TBTU (23 mg, 0,07 mmol) y DMAP (7 mg, 0,06 mmol) en DMF (3 ml) se añadió DIPEA (35 µl, 0,20 mmol) y la reacción se agitó a ta durante 3 horas. Se añadieron el compuesto intermedio adicional A10 (18 mg, 0,06 mmol), TBTU (23 mg, 0,07 mmol), DMAP (7 mg, 0,06 mmol) y DIPEA (35 µl, 0,20 mmol) y la reacción se agitó a ta durante 16 h. El material en bruto se purificó por HPLC en fase inversa (Gemini, 30-85 % de ACN/H2O + TFA al 0,1 %) y se liofilizó para dar el Ejemplo 86 en forma de una sal de TFA. Tiempo de Ret

10 para HPLC analítica: 9,25 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H54F3N6O8S: 847,37; encontrado: 847,18. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,18 (s, 1H), 8,13 - 7,84 (m, 2H), 7,59 - 7,21 (m, 2H), 6,07 - 5,58 (m, 2H), 5,00 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 4,57 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 4,45 - 4,27 (m, 2H), 4,20 (dd, J = 12,0, 4,0 Hz, 1 H), 3,11 - 2,94 (m, 3H), 2,92 -2,70 (m, 4H), 2,32 - 2,14 (m, 1 H), 2,10 - 1,94 (m, 2H), 1,86 (m, 1 H), 1,77 (d, J = 14,5 Hz, 1 H), 1,74 1,21 (m, 15H), 1,21 - 1,01 (m, 10H), 1,00 - 0,84 (m, 2H), 0,60 (m, 1H), 0,53 (m, 1 H).

15 Ejemplo 87. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-14-ciano-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20, 21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida

Etapas 1 y 2. Preparación del Ejemplo 87. A una solución de Ejemplo 84 (100 mg, 0,11 mmol) en EtOAc (3 ml) se añadió Pd/C (Pd al 10 % en peso, 30 mg). El recipiente de reacción se purgó dos veces con H2 y se agitó a ta bajo 1

25 atmdeH2 durante 6 h. Después de este tiempo, la mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite y se concentró. La reacción redujo el anillo de quinoxalina. El material en bruto se disolvió de nuevo en ACN (5 ml) y se trató con DDQ (34 mg, 0,15 mmol). Después de 1 h, la solución se purificó directamente por HPLC en fase inversa (columna Gemini 5u C18 110A, 50-100 % de ACN/H2O + TFA al 0,1 %) y se liofilizó para proporcionar la sal de TFA del Ejemplo 87. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,463 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H49F4N7O8S:

30 863,92; encontrado: 864,18. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,24 (s, 1 H), 8,27 (d,1 H), 8,20 (d,1 H), 7,91 (dd, 1 H), 5,93-5,82 (m, 3H), 4,88 (m, 1 H), 4,58 - 4,13 (m, 5H), 3,71-3,49 (m, 3H), 2,59 (m, 2H), 2,03 - 1,96 (m, 3H), 1,82 - 1,77 (m, 3H), 1,65 - 1,35 (m, 11 H), 1,20 (m, 3H), 1,06-0,87 (m, 8H), 0,71 (m, 2H)., 0,48 (m, 1 H).

Ejemplo 88. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-14-cloro-N-[(1 R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1

35 metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-18,18-difluoro-9-metil-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19, 20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8carboxamida

Etapa 1. Preparación de 881: se añadió HATU (4,56 g, 12 mmol) lentamente a una solución de ácido 3,3difluoro-2-oxopent-4-enoico (1,52 g, 10,1 mmol) en 14 ml de DMF. A continuación se añadió una mezcla de 45 clorobenceno-1,2-diamina (1,43 g, 10 mmol) y DIPEA (2,1 ml, 12 mmol) en 20 ml de DMF. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se vertió en 30 ml de HCl acuoso 1 N y se extrajo con acetato de etilo (5 x 40 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El sólido resultante se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (0-45 % de acetato de etilo en hexanos) para producir el compuesto intermedio 881 como el producto de elución tardía. 10 RMN 1H (400 MHz, CDCl3): δ 12,1 (s, 1 H), 7,99 (m, 1 H), 7,61-7,58 (m, 1 H), 7,33-7,31 (m, 1 H), 6,61-6,48 (m, 1

H), 5,96 -5,90 (m, 1 H), 5,67-5,63 (m, 1 H). Etapa 2. Preparación de 882: Una solución del compuesto intermedio 881 (648 mg, 2,53 mmol) en 2 ml de DMF se trató con POCl3 (0,49 ml, 5,26 mmol) y se calentó a 80 ºC durante 3 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con 20 ml de EtOAc y se añadió lentamente a 15 ml de agua con agitación vigorosa. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron posteriormente con bicarbonato sódico acuoso saturado y solución salina saturada, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró a presión reducida para dar el compuesto intermedio 882. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,184 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 8,01 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,82 (dd, J = 9,4, 2 Hz, 1 H), 6,56-6,43 (m, 1 H), 5,88 (m, 1 H), 5,70 (d, J = 10,8 Hz, 1 H). Etapa 3. Preparación de 883: se añadió Cs2CO3 (660 mg, 2,03 mmol) a una mezcla del compuesto intermedio 882 (425 mg, 1,54 mmol) y el compuesto intermedio B1 (570 mg, 1,89 mmol) en 9 ml de DMF a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 85 ºC durante una noche. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se vertió en 40 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (4 x 30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 75 ml de solución salina saturada al 50 %, se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron a presión reducida. El sólido resultante se purificó a través de cromatografía en columna sobre gel de sílice (0-20 % de acetato de etilo en hexanos) para dar 883. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C26H33ClF2N3O5: 540,20; encontrado: 540,12. Etapa 4. Preparación de 884: el éter de quinoxalina 883 (458 mg, 0,848 mmol) se disolvió en 4,2 ml de acetato de terc-butilo y 1,2 ml de diclorometano a temperatura ambiente. Se añadió MeSO3H (0,30 ml, 4,67 mmol) gota a gota y la mezcla de reacción se agitó a ta durante 2 h. La mezcla de reacción se transfirió a una mezcla agitada de EtOAc (20 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (30 ml). Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío para proporcionar la amina 884 en forma de una película sólida de color amarillo LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C21H25ClF2N3O3: 440,15; encontrado: 440,29. Etapa 5. Preparación de 885: se añadieron HATU (360 mg, 0,947 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,51 ml, 2,91 mmol) a una mezcla de 884 (320 mg, 0,727 mmol) y el compuesto intermedio D11 (237 mg, 0,880 mmol) en 10 ml de acetonitrilo en atmósfera de argón. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-20 % de acetato de etilo en hexanos) para producir 885. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H46ClF2N4O6: 691,30; encontrado: 691,50. Etapa 6. Preparación de 886: Una mezcla de 885 (390 mg, 0,564 mmol) y catalizador de Zhan 1B (55 mg, 0,075 mmol, Strem) en 100 ml de DCE se desoxigenó con argón durante 15 minutos. A continuación, la mezcla se calentó a reflujo durante 110 minutos. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-25 % de acetato de etilo en hexanos) para producir 886. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C33H42ClF2N4O6: 663,27; encontrado: 663,33. Etapa 7. Preparación de mezcla de 887: se añadió rodio sobre alúmina (Rh al 5 % en peso, 31 mg, 0,015 mmol) a una solución de 886 (90 mg, 0,136 mmol) en 9 ml de etanol. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la mezcla se agitó durante una noche. La reacción se filtró sobre Celite, lavando con etanol. El análisis de LC/MS indicaba que permanecía aproximadamente un 60 % del material de partida. Una solución del residuo en 8 ml de etanol se volvió a someter a condiciones de hidrogenación utilizando 25 mg de Rodio sobre alúmina (Rh al 5 % en peso) durante una noche. La reacción se filtró sobre Celite, lavando con etanol. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar un residuo, que se purificó a través de cromatografía en columna sobre gel de sílice (030 % de acetato de etilo en hexanos) para producir 887. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C33H44ClF2N4O6: 665,28; encontrado: 665,48. Etapa 8. Preparación de 888: se añadió TFA (0,45 ml, 5,86 mmol) lentamente a una solución de 887 (52 mg, 0,078 mmol) en 2 ml de diclorometano. Después de 3 horas, la mezcla se concentró a presión reducida casi hasta sequedad. El residuo resultante se recogió en 10 ml de acetato de etilo, se lavó con 8 ml de agua, 8 ml de NaHCO3 sat. (ac.), y se separó. Las fases acuosas se extrajeron con acetato de etilo (3 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 10 ml de solución salina saturada, se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para producir 88-8, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C29H36ClF2N4O6: 609,22; encontrado: 609,42. Etapa 9. Preparación del Ejemplo 88: se añadieron HATU (58 mg, 0,153 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,065 ml, 0,374 mmol) a una mezcla de 888 (45 mg, 0,074 mmol) y el compuesto intermedio A10 (49 mg, 0,161 mmol) en 2,5 ml de acetonitrilo en atmósfera de argón. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se recogió en 15 ml de acetato de etilo y se lavó con 10 ml de HCl acuoso 1 N. La fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con un 50 % de solución salina saturada, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-50 % de acetato de etilo en hexanos) y HPLC preparativa en fase inversa (50-100 % de acetonitrilo en agua, con tampón de ácido trifluoroacético al 0,1 %) para producir la sal del ácido trifluoroacético del Ejemplo 88. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,92 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H48ClF4N6O8S: 859,28; encontrado: 859,42. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): δ 9,23 (s, 1 H), 8,10 (s, 1 H), 7,90 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,81 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 5,81 (td, JH-F = 56 Hz, J = 6,0 Hz, 1 H), 5,69-5,66 (m, 1 H), 4,56 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,43 (d, J = 12 Hz, 1 H), 4,34 (s, 1 H), 4,22-4,16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1 H), 3,71-3,66 (m, 1 H), 2,83-2,76 (m, 1 H), 2,61-2,48 (m, 1 H), 2,11-1,94 (m, 4H), 1,88-1,72 (m, 4H), 1,71-1,62 (m, 1 H), 1,58-1,54 (m, 2H), 1,51 (s, 3H), 1,50-1,36 (m, 2H), 1,09 (s, 9H), 1,08-1,01 (m, 3H), 1,01-0,94 (m, 2H), 0,93-0,86 (m, 2H), 0,800,68 (m, 1 H), 0,52-0,46 (m, 1 H).

Ejemplo 89. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,19E,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo1,1a,3,4,5,6,9,10,18,21,22,22a-dodecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

10 Etapa 1. Preparación de 891: 174 (95 mg, 0,14 mmol) en 0,4 ml de DCM se trató con 0,4 ml de TFA y se agitó a ta durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con 5 ml de DCM y a continuación se trató con agua y bicarbonato sódico saturado a pH 6,5. Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó una vez más con agua, a continuación se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró para dar 891. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C31H39F2N4O7: 617,3; encontrado: 616,7.

15 Etapa 2. Preparación del Ejemplo 89: Una mezcla de 891 de la etapa 1 (41 mg, 0,066 mmol), compuesto intermedio A10 (24 mg, 0,079 mmol), HATU (30 mg, 0,079 mmol) y DIPEA (0,057 ml, 0,33 mmol) en DMF (0,4 ml) se agitó a ta durante una noche. La mezcla se diluyó con HCl 2 N (1 ml) y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró. La mezcla del producto en bruto se purificó por HPLC preparativa en fase inversa (10-99 % de acetonitrilo en agua, con tampón de ácido

20 trifluoroacético al 0,1 %) para dar el Ejemplo 89. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,65 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H51F4N6O9S: 867,3; encontrado: 866,9. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,890 (s, 1 H), 7,98 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,28 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1 H), 7,06 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 6,75 (s a, 1 H), 6,30 - 5,93 (m, 2H), 5,92 (td, JH-F = 52 Hz, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,47 (d, J = 10 Hz, 1H), 4,53 (d, J = 12 Hz, 1 H), 4,48 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 6,8 Hz, 1 H), 4,07 (dd, J = 11,6, 3,2 Hz, 1 H), 3,98 - 3,94 (m, 1 H), 3,95 (s, 3H), 3,57 (m, 1 H), 2,60 - 2,48

25 (m, 2H), 2,20 (m, 1 H), 2,06 (m, 1 H), 1,90 (m, 1 H), 1,80 (m, 1 H), 1,63 (m, 2H), 1,50 (s, 3H), 1,56 - 1,36 (m, 2H), 1,26 (m, 1 H), 1,19 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,09 (s, 9H), 1,03-0,93 (m, 2H), 0,85 (m, 2H), 0,76 (m, 1 H), 0,53 (m, 1 H).

Ejemplo 90. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-9-etil-18-fluoro-14-metoxi-3,6-dioxo

La purificación adicional de una síntesis del compuesto 17 mediante HPLC preparativa en fase inversa (60-88 % de acetonitrilo en agua, con tampón de ácido trifluoroacético al 0,1 %) permitió el aislamiento del ejemplo 93 como un 5 producto secundario menor. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,64 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H54F3N6O9S: 851,4; encontrado: 851,4. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,93 (s a, 1 H), 7,88 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,22 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 7,06 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 6,55 (s, 1 H), 5,91 (td, JH-F = 136 Hz, J = 8 Hz, 1 H), 5,81 (td, JH-F = 52 Hz, J = 8 Hz, 1 H), 5,30 (d, J = 9,7 Hz, 1 H), 4,44 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 4,38 (d, J = 6,7 Hz, 1 H), 4,32 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 4,07 (m, 1 H), 3,93 (s, 3H), 3,72 (m, 1 H), 2,59 (m, 1 H), 2,35 (m, 1 H), 2,06 (m, 4H), 1,88 (m, 1 H),

10 1,78 (m, 1 H), 1,71 - 1,52 (m, 4H), 1,48 (s, 3H), 1,48 - 1,41 (m, 2H), 1,23 (m, 2H) 1,21 (t, J = 8,0 Hz, 3H), 1,08 (s, 9H), 1,05 - 0,90 (m, 2H), 0,84 (m, 2H), 0,66 (m, 1 H), 0,48 (m, 1 H).

Ejemplo 91. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(1R,2S)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2etenilciclopropill-9-etil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,1015 metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

El Ejemplo 91 se preparó de una manera similar al Ejemplo 1 sustituyendo el compuesto intermedio A1 por el

20 compuesto intermedio A10 en la Etapa 8. La sal de TFA del Ejemplo 91 se aisló. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,72 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H55N6O9S: 795,96; encontrado: 795,94. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,03 (s, 1 H); 7,80 (d, J =9,2 Hz, 1 H); 7,24 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1 H); 7,16 (d, J = 2,4 Hz, 1 H); 5,90 (d, J = 3,6 Hz, 1 H); 5,68 (m, 1 H); 5,25 (d, J = 17,2 Hz, 1,6 Hz, 1 H); 5,10 (d, J = 11,2, 1,6 Hz, 1 H); 4,57 (d, J = 6,8 Hz, 1 H); 4,39 (s a, 1 H); 4,37 (d, J = 9,2 Hz, 1 H); 4,16 (dd, J =12,8, 4,4 Hz, 1 H); 3,93 (s, 3H); 3,77-3,72 (m,

25 1 H); 3,02-2,88 (m, 1 H): 2,86-2,75 (m, 1 H); 2,64-2,54 (m, 1 H); 2,18 (c, J = 8,8 Hz, 1 H): 1,90-1,66 (m, 4H); 1,661,40 (m, 6H); 1,38-1,32 (m, 1 H); 1,30-1,20 (m, 5H); 1,10 (s, 9H); 1,14-1,02 (m, 2H); 0,77-0,68 (m, 1 H); 0,54-0,45 (m, 1H).

Ejemplo 92. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(1R,2S)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2

30 etenilciclopropil}-9-etil-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida

El Ejemplo 92 se preparó de una manera similar al Ejemplo 17, sustituyendo el compuesto intermedio A1 por el compuesto intermedio A10 en la etapa 7. EL ejemplo 92 se aisló. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,75 min. 5 LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H53F2N6O9S: 831,36; encontrado: 831,25. RMN 1H (400 MHz, Cloroformo-d) δ 9,98 (s, 1 H), 7,96 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,40 - 7,19 (m, 1 H), 7,08 (s, 1 H), 6,56 (s, 1 H), 5,91 (d, J = 3,8 Hz, 1 H), 5,86 -5,64 (m, 1 H), 5,34 (d, J = 9,7 Hz, 1 H), 5,21 (d, J = 17,2 Hz, 1 H), 5,10 (d, J = 10,3 Hz, 1H),4,534,26(m,2H),4,15-4,02(m, 1 H), 3,95 (s, 3H), 3,73 - 3,57 (m, 1 H), 2,97 - 2,81 (m, 1 H), 2,64 - 2,37 (m, 2H), 2,21 - 2,06 (m, 1 H), 2,06 - 1,88 (m, 2H), 1,88 - 1,55 (m, 4H), 1,55 - 1,12 (m, 10H), 1,07 (s, 9H), 1,02 - 0,78 (m, 5H), 0,78 - 0,61

10 (m, 1 H), 0,47 (c, J = 7,3, 6,2 Hz, 1 H).

Ejemplo 93. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-9-etil-N-[(2R)-2-etil-1-{[(1metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10

El Ejemplo 93 se preparó de una manera similar al Ejemplo 17, sustituyendo el compuesto intermedio A4 por el

20 compuesto intermedio A10 en la etapa 7. El ejemplo 93 se aisló. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,03 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 847,39; encontrado: 846,99. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,95 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 7,27 (m, 1 H), 7,08 (s, 1 H), 6,65 (s, 1 H), 5,91 (s, 1 H), 5,41 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 4,82 (m, 2H), 4,47 (d, J = 6,2 Hz, 1 H), 4,35 (dd, J = 35,7, 10,7 Hz, 2H), 4,07 (m, 1 H), 3,94 (s, 3H), 3,63 (m, 1 H), 2,50 (m, 2H), 1,95 (m, 2H), 1,94 (m, 2H), 1,78 (m, 3H), 1,64 (m, 4H), 1,48 (m, 6H), 1,19 (m, 4H), 1,07 (s, 9H), 1,05 - 0,88 (m, 4H),

25 0,88 - 0,75 (m, 1 H), 0,67 (m, 1 H), 0,47 (m, 1 H).

Ejemplo 94. Preparación de (1aR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(2R)-1-[(ciclopropilsulfonil)carbamoil]-2(difluorometil)ciclopropil]-9-etil-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8

30 carboxamida El Ejemplo 94 se preparó de una manera similar al Ejemplo 17, sustituyendo el compuesto intermedio A9 por el compuesto intermedio A10 en la etapa 7. El ejemplo 94 se aisló. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,71 min.

5 LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H51F4N6O9S: 855,34; encontrado: 855,26. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 10,22 (s, 1 H), 8,02 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,33 (d, J = 12 Hz, 1 H), 7,12 (s, 1 H), 5,95 (td, JHF = 52 Hz, J = 8 Hz, 1 H), 5,50 (d, J = 9,7 Hz, 1 H), 4,53 (d, J = 6,4 Hz, 1 H), 4,46 (dd, J = 26,4, 10,7 Hz, 2H), 4,13 (d, J = 11,5 Hz, 1 H), 4,00 (s, 3H), 3,68 (m, 1 H), 2,91 (m, 1 H), 2,57 (m, 3H), 2,13 (m, 2H), 1,94 (m, 2H), 1,73 (m, 3H), 1,50 (m, 3H), 1,33 (m, 3H), 1,22 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,13 (s, 9H), 1,00 - 0,95 (m, 4H), 0,95 -0,85 (m, 1 H), 0,69 (m, 1 H), 0,51 (m, 1 H).

10 Ejemplo 95. Preparación de (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-15-ciano-N-[(1R,2R)-2-(difluorometil)1-{[(1-metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-19,19-difluoro-10-metil-4,7-dioxo1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9

15 carboxamida

El compuesto intermedio 951 se preparó de una manera similar al compuesto intermedio 462, sustituyendo E6 por 20 el compuesto intermedio E3 en la Etapa 1. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C27H33F2N4O5: 531,24; encontrado: 531,2.

El Ejemplo 95 se preparó de una manera similar al Ejemplo 62, sustituyendo el compuesto intermedio 951 por el compuesto intermedio 462 en la Etapa 1 y sustituyendo el compuesto intermedio A10 por el compuesto intermedio 25 A9 en la Etapa 5. El Ejemplo 95 se aisló. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 8,86 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H52F4N7O8S: 890,35; encontrado: 889,94. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,34 (s, 1 H), 7,80 (m, 2H), 7,42 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 6,85 (s, 1 H), 6,69 (s, 1 H), 5,38 (m, 1 H), 5,29 (m, 3H), 5,02 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 4,46 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 4,10 - 3,97 (m, 2H), 3,84 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 3,74 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 2,42 - 2,29 (m, 1 H), 2,10 (s, 1 H), 1,87 - 1,72 (m, 1 H), 1,69 - 1,48 (m, 4H), 1,38 (d, J = 14,8 Hz, 2H), 1,30 - 1,08 (m, 4H), 0,99 (s, 5H), 0,89 (m,

30 3H), 0,69 (s, 10H), 0,64 (m, 1 H), 0,43 (s, 1 H), 0,11 (m, 1 H), 0,01 (m, 1 H).

Ejemplo 96. Preparación de (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,21E,24aR,24bS)-6-terc-butil-15-cloro-N-[(1R,2R)-2

(difluorometil)-1-{[(1-metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-10-metil-4,7,18-trioxo1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,20,23,24,24a,24b-tetradecahidro-1H,9H,18H-8,11metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6,12]dioxatriazaciclononadecino[11,12-b]quinazolina-9carboxamida

El Ejemplo 96 se preparó de una manera similar al Ejemplo 89, sustituyendo el compuesto intermedio 961 por el compuesto intermedio 174 en la Etapa 1. El compuesto intermedio 961 se preparó de una manera similar al 10 intermedio 174 del Ejemplo 17, sustituyendo E9 por E3 y B1 por B4 en la Etapa 1, y sustituyendo el compuesto intermedio D16 por el compuesto intermedio D11 en la Etapa 3. El Ejemplo 96 se aisló. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,18 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H52ClF2N6O9S: 877,32; encontrado: 877,61. RMN 1H (400 MHz, Cloroformo-d) δ 9,76 (s, 1 H), 8,03 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,39 (m, 1 H), 7,27 (m, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 5,92 (m, 1 H), 5,87 - 5,73 (m, 1 H), 5,68 (m, 1 H), 5,64 - 5,51 (m, 1 H), 5,21 (m, 1 H), 4,93 (m, 2H), 4,52 - 4,32 (m, 3H), 4,15

15 3,94 (m, 2H), 2,86 - 2,71 (m, 1H), 2,26 (m, 1 H), 2,15 (m, 2H), 2,10 - 2,02 (m, 1 H), 2,02 - 1,84 (m, 2H), 1,77 (m, 2H), 1,61 (s, 3H), 1,50 (m, 4H), 1,42 - 1,17 (m, 6H), 1,17 - 0,92 (m, 10H), 0,92 - 0,78 (m, 2H), 0,51 - 0,37 (m, 1H).

Ejemplo 97. Preparación de (1aS,2aR,6S,9S,10S,11R,23aR,23bS)-6-terc-butil-15-ciano-N-[(2R)-2-(difluorometil)-1{[(1-metilciclopropil)sulfonil]carbamoil}ciclopropil]-10-metil-4,7-dioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b20 hexadecahidro-1H,9H-8,11-metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12b]quinoxalina-9-carboxamida

El compuesto intermedio 971 se preparó de una manera similar al intermedio 795, sustituyendo E2 por E5 en la Etapa 1, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C43H55N4O7: 739,41; encontrado: 739,31.

5 Etapa 1. Preparación de 97-2. La olefina macrocíclica 971 (0,84 g, 1,14 mmol) se disolvió en 114 ml de etanol y 114 ml de acetato de etilo. Después de desgasificar con Argón, se añadieron 0,84 g de Pd al 5 %/C de tipo Degussa y la mezcla se hidrogenó durante 4 horas a 101 kPa. La filtración a través de Celite, concentración y cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de un 40 % -60 % de acetato de etilo en hexanos) proporcionó el

10 compuesto intermedio 972. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H51N4O7: 651,38; encontrado: 651,32. Etapa 2. Preparación de 973. Una solución enfriada con hielo del macrociclo fenol 972 (0,47 g, 0,73 mmol) y trietilamina (0,81 ml, 5,81 mmol) en 3 ml de DCM se trató con solución de anhídrido trifluorometanosulfónico, 1 M en cloruro de metileno (0,18 ml, 1,09 mmol) gota a gota. Después de agitar durante 2 horas, la reacción se interrumpió con agua y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con agua y solución salina saturada, se secó sobre Na2SO4, se filtra y se concentró. La cromatografía sobre gel de sílice usando un

5 gradiente de un 5 % -50 % de acetato de etilo en hexanos dio 973 como el pico de primera elución (55 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H50F3N4O9S: 783,33; encontrado: 782,96. Etapa 3. Preparación de 974. Una mezcla desgasificada del macrociclo triflato 973 (408 mg, 0,52 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (30,11 mg, 0,03 mmol), cianuro de cinc, 98 % (61,21 mg, 0,52 mmol) en 2,6 ml de DMF durante 10 minutos. La reacción se calentó a 80 ºC durante 1 hora. Se añadieron 60 mg de

10 tetraquis(trifenilfosfina)paladio y 120 mg de cianuro de zinc adicionales y el calentamiento se continuó durante 30 minutos. La reacción se interrumpió con solución saturada de cloruro de amonio y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de 5 % -70 % de acetato de etilo en hexanos para dar el compuesto intermedio 974. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H50N5O6: 660,38;

15 encontrado: 660,10. Etapa 4. Preparación de 975. Una solución de 974 (290 mg, 0,44 mmol) en 1 ml de DCM se trató con 0,5 ml de TFA y se agitó durante una noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró Y se concentró. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de 10 % -70 % de acetato de etilo en hexanos para dar el

20 compuesto intermedio 975 (216 mg) en forma de un sólido de color blanco. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C33H42N5O6: 604,31; encontrado: 604,00. Etapa 5. Preparación del Ejemplo 97. Una mezcla de 975 (50 mg, 0,08 mmol), HATU (37,79 mg, 0,1 mmol), en 0,3 ml de DMF se agitó 5 min, a continuación se añadieron A10 (50 mg, 0,08 mmol) y DIPEA (0,06 ml, 0,33 mmol). Después de 45 min a ta, la reacción era incompleta (LCMS). Se añadieron otros 20 mg de A10 y se

25 agitó durante 2 horas. se añadieron 2 ml de HCl 1 N, y la mezcla se extrajo con DCM. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de un 30 % -65 % de acetato de etilo en hexanos. Las fracciones del producto combinadas contenían una cierta parte de DMF residual. Se añadió agua, que generó un precipitado (14 mg). El filtrado se extrajo con acetato de etilo, y los extractos se combinaron con el precipitado. La solución resultante se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró, se concentró y se secó a

30 presión reducida para dar el Ejemplo 97. Tiempo de Ret para HPLC analítica: 9,06 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H54F2N7O8S: 854,98; encontrado: 853,88. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,77 (s a, 1 H), 8,05 (m, 1 H), 7,93 (m, 1 H), 7,62 (m, 1 H), 7,20 (m, 1 H), 7,08 (m, 1 H), 6 - 5,65 (m, 1 H), 5,56 (m, 1 H), 5,17 (m, 1 H), 4,90 (m, 1 H), 4,38 (m, 2H), 4,22 (m, 1 H), 4,06 (m, 1 H), 3,57 (m, 1 H), 2,88 (m, 1 H), 2,70 (m, 5H), 2,28 - 2,08 (m, 1 H), 2,04 - 1,30 (m, 12H), 1,29 - 1,09 (m, 9H), 1,08 - 0,96 (m, 4H), 0,85 - 0,67 (m, 3H), 0,43 (m, 1 H), 0,34 (m, 1

35 H), 0,19 -0,03 (m, 1 H).

Los siguientes compuestos se pueden preparar con los métodos de síntesis de la presente divulgación, o mediante medios por lo general bien conocidos en la técnica:

en los que V es una estructura de Fórmula:

5 y en la que E y G son como se han definido anteriormente.

Actividad biológica

10 Expresión y purificación de generación de proteasas de NS3 de genotipo 1a, 2a, y 3 de plásmidos de expresión de proteasa de NS3

La secuencia codificante del dominio de proteasa de NS3 del VHC del genotipo 1 b (cepa con-1) se amplificó por PCR a partir de un plásmido que codifica el replicón I389luc-ubi-neo/NS3-3’/ET (Reblikon, Mainz, Alemania). El cebador 5’-PCR se diseñó para codificar una etiqueta de hexahistidina K3 N-terminal y para insertar un sitio de escisión de proteasa del virus del grabado del tabaco recombinante (RTEV) en marco en la secuencia codificante de NS3. El fragmento de ADN resultante se clonó en el vector de expresión de la proteína pET28 (Invitrogen, Carlsbad, CA) produciendo el p28-N6H-Tev-NS3(181)1b.

Las secuencias codificantes para el dominio de proteasa del VHC de genotipo 3 se amplificó mediante RT-PCR usando un Kit para RT-PCR Titan One Tube (Roche, Indianapolis, IN) y el ARN se extrajo de suero humano positivo para VHC (BBI Diagnostics, MA) usando un Kit para Virus QIAmp UltraSens (Qiagen, Valencia, CA). Se diseñaron cebadores de PCR en la posición 5’ para codificar las etiquetas de hexa-histidina N-terminal y para insertar sitios de escisión de proteasa de rTEV en marco en las secuencias codificantes de proteasa de NS3. Los fragmentos de ADN resultantes se clonaron en pET28 produciendo los vectores de expresión p28-N6H-Tev-NS3(181)1a y p28-N6H-TevNS3(181)3, respectivamente.

Expresión de proteína de proteasa de NS3

Las bacterias BL21AI (Invitrogen, Carlsbad, CA) se transformaron con vectores de expresión de NS3 del genotipo 1 b o 3 y se usaron para inocular un recipiente de fermentación de 20 l (Sartorius BBI System Inc., Bethlehem, PA), que contenía 18 l de medio 2YT recién preparado suplementado con 50 µpg/ml de kanamicina. Cuando las densidades celulares alcanzaron una DO600 de 1, la temperatura de los cultivos se redujo de 37 ºC a 28 ºC y la inducción se inició inmediatamente mediante la adición de concentraciones finales ZnSO4 30 µM, L-arabinosa 14 mM y β-D-tiogalactósido de isopropilo 1 mM (IPTG). Las células se recogieron por centrifugación cuatro horas después de la inducción y se almacenaron en forma de sedimentos congelados a -80 ºC antes de la purificación de la proteína NS3.

Purificación de proteasas de NS3

Purificación de proteasa de NS3 del genotipo 1b

Los sedimentos celulares se descongelaron y se volvieron a suspender en 10 ml/g de células en tampón de lisis que contenía Tris 50 mM a pH 7,6, NaCl 300 mM, 3-[(3-colamidopropil)dimetilamonio]-1-propanosulfonato al 0,1 % (CHAPS), glicerol al 5 %, y β-mercaptoetanol 2 mM. A continuación, las suspensiones celulares se sometieron a ultrasonidos, se filtraron a través de estopilla, y se pasaron tres veces a través de un microfluidizador a 13.333,3 Tm/m2. Los lisados resultantes se centrifugaron a 15500 rpm durante 45 minutos y los sobrenadantes se cargaron en una columna de HisTrap HP (GE Lifesciences) equilibrada previamente con cinco volúmenes de tampón A de Ni (Tris 50 mM a pH 7,6, NaCl 300 mM, CHAPS al 0,1 %, glicerol al 5 %, β-mercaptoetanol 2 mM, imidazol-HCl 50 mM). Las proteínas se eluyeron con un gradiente de un 0-100 % de tampón A de Ni más imidazol-HCl 500 mM y las fracciones se recogieron y se combinaron. La combinación de HisTrap se diluyó a 1:10 con tampón SP-A buffer (Tris 50 mM a pH 7,0, glicerol al 10 %, ditiotreitol 2 mM (DTT)) y se cargó sobre una columna HiTrap SP-HP (GE Lifesciences) equilibrada con tampón SP-A. La proteasa de NS3 se eluyó con un gradiente de un 0-100 % de tampón de SP-B (tampón de SP-A más NaCl 1 M). Se tomaron alícuotas de las combinaciones concentradas de las fracciones de SP que contenían NS3, se congelaron de forma instantánea en nitrógeno líquido y se almacenaron a 80 ºC.

Purificación de proteasa de NS3 del genotipo 3

Los sedimentos bacterianos recogidos a partir de la expresión de la proteasa de NS3 del VHC del genotipo 3 se homogeneizaron en tampón de lisis (Tris 25 mM, pH 7,5, tampón que contenía NaCl 150 mM y fluoruro de fenilmetanosulfonilo 1 mM (PMSF)) y se pasaron a través de un microfluidizador a 13.333,3 Tm/m2 . Los lisados celulares homogeneizados se centrifugaron a 30.000 x g durante 30 minutos a 4 ºC. Los sedimentos de P1 resultantes se lavaron con tampón de lavado I (Tris 25 mM, pH 7,5 que contenía CHAPS al 1 %) seguido de centrifugación a 10.000 x g durante 30 minutos a 4 ºC. Los sedimentos de P2 resultantes se lavaron con tampón de lavado II (tampón de CAPS 50 mM, pH 10,8, que contenía NaCl 2 M y urea 2 M) seguido de centrifugación a

30.000 x g durante minutos a 4 ºC. Los sedimentos de P3 resultantes se volvieron a suspender en tampón de solubilización (20 ml de Tris 25 mM, pH 7,5 que contenía NaCl 150 mM y urea 8 M) y se incubaron a 4 ºC durante una hora. las proteínas solubiliza se pasaron a través de un filtro de 0,45 micrómetros. Las concentraciones de proteína se midieron y las soluciones se ajustaron a DTT 40 mM, se incubaron durante 30 minutos a 4 ºC que a continuación se diluyeron rápidamente en tampón de replegamiento (Tris 25 mM, pH 8,5, Guanidina-HCl 0,8 M, L-Arginina 0,4 M, ZnSO4 10 mM) a la vez que se agitaba. Las soluciones de proteína se incubaron a 4 ºC durante una noche para permitir el replegamiento. Las proteasas replegadas se centrifugaron a 30.000 x g durante 10 minutos para retirar los precipitados residuales. Las concentraciones finales de proteína a continuación se midieron y se tomaron alícuotas de las proteasas de NS3, se congelaron de forma instantánea en nitrógeno líquido y se almacenaron a -80 ºC.

Determinación de Ki para proteasa de NS3 de los genotipos 1b y 3a

El dominio de la proteasa de NS3 purificada (aminoácidos 1-181) del virus del genotipo 1 b y 3a se generaron como anteriormente. El sustrato depsipeptídico fluorogénico internamente inactivado Ac-DED(Edans)

5 EEAbuψ[COO]ASK(Dabcil)-NH2 y un péptido sintético que contenía los residuos del núcleo hidrófugo del cofactor de la proteína NS4A (KKGSVVIVGRIILSGRKK; péptido NS4A) se obtuvieron en Anaspec, Inc. (San José, CA). Otros agentes químicos y bioquímicos eran de calidad reactiva o mejor y se adquirieron en proveedores estándar.

Las reacciones se desarrollaron a temperatura ambiente en tampón que consistía en HEPES 50 mM, glicerol al 40 %, Triton X-100 al 0,05 %, DTT 10 mM, y DMSO al 10 %. Las soluciones de ensayo finales contenían proteasa del genotipo 1 b de 50 pM o proteasa del genotipo 3a 200 pM, péptido de NS4A 20 µM, y sustrato 4 µM (genotipo 1b) o sustrato 2 µM (genotipo 3a). Las concentraciones de inhibidor variaban de 100 nM a 5 pM en diluciones de 3 veces, y los controles sin inhibidor se incluyeron.

15 Las diluciones del compuesto se prepararon en DMSO a una concentración final de 20 x. Las mezclas de reacción se prepararon en placas de ensayo de 96 pocillos. Una solución de enzima y péptido de NS4A en tampón de ensayo (volumen de 25 µl con ambos reactivos a una concentración final de 4 x) se mezcló con 45 µl de tampón de ensayo y 5 µl de cualquiera de inhibidor o DMSO, y se incubó previamente a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción comenzó mediante la adición de 25 µl de solución de sustrato a una concentración final de 4 x. Las placas se mezclaron vigorosamente durante 5-10 segundos y se permitió que las reacciones evolucionaran durante 90 minutos. La fluorescencia se midió cada 30 s entre 90 y 120 minutos de tiempo de reacción usando un lector de placas multimodo Tecan InfiniTe M1000 o PerkinElmer Envision con una longitud de onda de excitación de 340 nm y una longitud de onda de emisión de 490 nm.

25 Las tasas se calcularon a partir de las curvas de evolución en el estado estacionario, en el momento de 90-120 minutos después de la adición del sustrato. Para determinar la Ki, las tasas se representaron gráficamente como una función de la concentración de inhibidor, y los datos se ajustaron con la ecuación 1 (Morrison, J. F., Biochimica et Biophysica Acta 1969, 185, 269-286) para calcular la Kiap usando GraphPad Prism 5. La fracción activa de la enzima se determinó por titulación del sitio activo con inhibidores potentes conocidos. La Ki se calculó a partir de Kiap/(1 + [[S]/Km]). Los resultados de Ki para los compuestos representativos para el genotipo 1 b y 3a (Ki 1B y Ki 3A, respectivamente) se informan en la Tabla 1.

35 Evaluación de la actividad antiVHC basada en células

La potencia antiviral (CE50) se determinó en ambas líneas celulares estables de replicón del VHC subgenómico y células de replicón del VHC transfectadas transitorias. La expresión concentración eficaz semimáxima (CE50) se refiere a la concentración de un fármaco que induce una respuesta a medio camino entre el valor inicial y máximo después de del tiempo de exposición es específica a continuación.

Los replicones del VHC subgenómicos estables para el genotipo 1 a, 1 b, 2a, 3a, y 4a se establecieron en células obtenidas a partir de Huh-7 como se describe en Lohmann et al., (Lohmann V, Korner F, Koch J, et al., Replication of subgenomic hepatitis C virus RNAs in a hepatoma cell line. Science 1999; 285:119-3). Cada línea celular estable

45 contiene un replicón del VHC bicistrónico que codifica un gen indicador de luciferasa de Renilla humanizado (hRLuc) fusionado con un gen de resistencia a neomicina seleccionable, seguido de un IRES de EMCV y la región codificante de NS3-NS5B del VHC. La selección de las células que expresan de forma constitutiva el replicón del VHC se consiguió en presencia del antibiótico de selección, neomicina (G418). La actividad de luciferasa se midió como un marcador para niveles de replicación del VHC intracelulares.

El replicón estable del genotipo 1 a se obtuvo a partir de la cepa H77 del VHC y contenía las mutaciones adaptativas P1496L y S2204I. El replicón estable del genotipo 1 b se obtuvo a partir de de la cepa Con1 del VHC y contenía las mutaciones adaptativas E1202G, T1280I, y K1846T. El replicón estable del genotipo 2a se obtuvo a partir de la cepa JFH-1 del VHC y no requería mutaciones adaptativas. El replicón estable del genotipo 3a se obtuvo a partir de la

55 cepa S52 del VHC y contenía las mutaciones adaptativas P1121 L, A1198T y S22101 (equivalente a S2204I en el genotipo 1). El replicón estable del genotipo 4a se obtuvo a partir de la cepa ED43 del VHC y contenía las mutaciones adaptativas Q1691R y S2204I. Todas las líneas celulares de replicón se propagaron en células obtenidas a partir de Huh-7 y se mantuvieron en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con un 10 % de suero bovino fetal (FBS) y 0,5 mg/ml de G418.

Se establecieron replicones del VHC transfectados de forma transitoria para las variantes D168A resistentes al inhibidor de proteasa de genotipo 1 a, 1 b, 3a y NS3/4a en el genotipo 1 b o R155K en el genotipo 1a. Los replicones transfectados de forma transitoria también son replicones subgenómicos biscistrónicos pero no contienen el marcador seleccionable de neomicina presente en replicones estables. Estos replicones codifican el IRES del virus 5 de la polio seguido indicador hRLuc, el IRES de EMCV y por último la región codificante de NS3-NS5B del VHC. Los replicones de tipo silvestre de genotipo 1 a (H77) y 1 b (Con1) se obtuvieron a partir de la misma cepa y contenían las mismas mutaciones adaptativas que se han enumerado anteriormente. El replicón transitorio de genotipo 3a se obtuvo a partir de la cepa S52 del VHC que se ha mencionado anteriormente, pero contenía las mutaciones adaptativas P1112L, K1615E y S2210I ligeramente diferentes. De forma específica, la mutación adaptativa 10 secundaria A1198T (A166T) en el dominio de proteasa del replicón del genotipo 3a estable se sustituyó por K1615E (K583E) en la helicasa de NS3, sin efecto en la eficacia de la replicación. La retirada de A166T ubicada en el dominio de proteasa minimiza el impacto de esta variante en inhibidores que se dirigen al dominio de proteasa y representa un dominio de proteasa más cercano al de tipo silvestre para el genotipo 3a. Se introdujeron replicones resistentes que codificaban mutaciones de inhibidores de la proteasa NS3/4 en el gen NS3 de tipo silvestre de 1 b o

15 1 a mediante mutagénesis dirigida. Los ARN transcritos in vitro de todos los replicones transitorios se transfectaron en líneas de células obtenidas a partir de Huh-7 sin tratamiento previo mediante electroporación. La actividad de luciferasa se midió como un marcador para niveles de replicación del VHC intracelular.

Para realizar los ensayos de CE50, las células de cada replicón del VHC se distribuyeron en placas de 384 pocillos.

20 Los compuestos se disolvieron en DMSO a una concentración de 10 mM y se diluyeron en DMSO usando un instrumento de pipeteo automatizado. Los compuestos diluidos en serie tres veces se añadieron directamente a las células usando un instrumento automatizado. El DMSO se usó como un control negativo (disolvente; sin inhibición), y una combinación de tres inhibidores del VHC incluyendo un inhibidor de proteasa; un inhibidor de NS5A y un inhibidor de nucleósido se usó a concentraciones > 100 x CE50 como un control positivo (100 % de inhibición).

25 Setenta y dos horas más tarde, las células se lisaron y la actividad de luciferasa de Renilla se cuantificó de acuerdo con las recomendaciones del fabricante (Promega-Madison, WI). Se realizó regresión no lineal para calcular los valores de CE50.

Los resultados se muestran en las Tablas 1 y 2: 30

Tabla 1: Valores de actividad biológica para líneas celulares de replicón del VHC subgenómicas estables

Ejemplo: Ki 1B (nM) Ki 3A (nM) CE50 1A RLUC* (nM) CE50 1B RLUC* (nM) CE50 2A RLUC* (nM) CE50 3A RLUC* (nM) CE50 4A RLUC* (nM)

1: 0,03 0,07 4,4 3,9 4,1 46 3,1

2: 0,01 0,04 4,0 3,1 3,9 77 2,7

3: 0,18 0,56 11,7 9,8 28 546 10

4: 0,17 0,56 10,7 9,6 16 271 7,9

5: 0,04 0,17 8,7 7,4 11 405 6,9

6: 0,20 0,62 35 36 34 1361 34

7: 0,05 0,06 4,9 3,8 4,2 67 3,2

8: 0,07 0,42 16 8,6 20 465 13

9: 0,15 0,59 17 7,9 23 1268 11

10: 0,16 0,52 30 22 49 978 26

11: 0,23 0,88 28 17 34 1162 19

12: 0,27 1,2 34 18 25 2013 21

13: 0,04 0,18 13 9,5 26 685 11

14: 0,07 0,24 9,7 6,8 7,0 308 7,3

15: 0,05 0,30 11 6,8 9,8 550 7,8

16: 0,09 0,21 12 7,4 6,2 201 8,1

17: 0,04 0,06 3,9 3,3 3,7 15 2,9

18: 0,03 0,10 3,9 2,6 5,0 70 2,8

19: 0,02 0,13 4,0 2,6 4,6 89 3,1

20: 0,12 0,53 8,1 5,2 19 392 5,9

21: 0,10 0,45 6,8 4,7 12 263 6,2

22: 0,07 1,3 15 7,5 27 727 11

23: 0,08 1,1 13 7,5 23 587 9,9

24: 0,05 0,92 12 7,5 20 663 9,2

25: 0,05 0,39 8,8 6,3 13 409 7,1

26: 0,05 0,17 6,3 4,3 12 297 6,0

27: 0,03 0,08 6,6 5,2 6,7 266 6,1

28: 0,03 0,08 6,7 4,6 6,2 266 4,1

29: 0,06 0,12 10 8,9 11 137 7,2

30: 0,14 0,63 55 35 47 2437 31

31: 0,13 4,9 40 18 63 2071 20

32: 0,18 0,87 59 30 35 2311 30

33: 0,03 0,06 7,6 2,8 4,9 16 2,3

34: 0,10 0,28 12 13 18 322 9,7

35: 0,07 0,23 9,1 11 7,4 162 7,6

36: 0,10 1,7 23 14 53 585 9,1

37: 0,10 0,19 24 22 16 575 15

38: 0,03 0,70 7,8 4,2 5,4 151 5,5

39: 0,08 0,20 34 39 41 321 26

40: 0,08 0,18 25 22 48 360 18

41: 0,18 0,79 135 142 106 2606 135

42: 0,10 0,75 20 16 17 343 14

43: 0,06 0,16 4,9 3,8 5,2 92 3,6

44: 0,03 0,08 3,1 2,1 2,9 53 2,2

45: 0,04 0,48 21 8,3 24 549 13

46: 0,03 0,05 3,1 2,7 3,8 17 2,5

47: 0,07 0,19 3,8 3,6 12 58 4,2

48: 0,07 0,09 2,0 1,8 9,7 73 2,2

49: 0,04 0,07 3,7 4,1 5,2 20 3,5

50: 63 100 4444 4444 379 19708 4444

51: 0,31 0,84 40 39 103 1221 30

52: 0,25 1,3 195 245 380 2307 161

53: 0,03 0,09 51 7,7 13 18 2,8

54: 0,11 0,50 33 18 76 260 13

55: 0,09 0,20 13 3,8 12 140 3,5

56: 0,38 1,0 41 37 57 1026 57

57: 0,07 0,28 12 11 21 166 4,9

58: 0,07 0,17 12 9,7 12 134 12

59: 0,04 0,06 5,4 11 13 20 5,6

60: 0,04 0,08 11 4,8 7,7 45 5,4

61: 0,06 0,09 13 10 8,7 28 11

62: 0,04 0,03 3,4 3,0 5,0 8,5 2,4

63: 0,03 0,01 4,2 2,9 3,2 11 3,2

64: 0,07 1,2 100 38 48 671 34

65: 0,08 0,07 12 8,4 7,7 30 8,1

66: 0,04 0,06 37 20 105 1786 25

67: 0,04 0,32 11 12 24 383 12

68: 0,05 0,63 13 7,7 18 364 9,4

69: 0,07 0,17 5,2 4,9 11 64 5,8

70: 0,05 0,05 8,4 8,5 15 41 6,4

71: 0,03 0,14 6,5 5,3 23 160 5,3

72: 0,05 4,1 365 300 740 1819 383

73: 0,11 0,82 7,9 7,5 22 178 7,2

74: 0,03 0,12 8,0 5,0 18 374 8,3

75: 0,03 0,12 9,9 6,4 18 240 10

76: 0,03 0,06 2,4 2,2 2,4 9,0 1,9

77: nt nt 23 12 29 741 16

78: 0,21 0,82 267 394 195 1115 225

79: 0,06 0,06 7,0 5,8 4,1 71 5,6

80: 0,49 13 1127 344 748 44444 1182

81: 0,04 0,05 4,0 3,6 3,6 12 4,3

82: 0,03 0,04 8,5 9,3 4,7 25 10

83: 0,09 0,48 62 58 19 1219 42

84: 0,04 0,08 5,9 5,7 7,2 27 6,4

85: 0,05 0,03 16 17 7,7 304 9,2

86: 0,04 0,07 5,6 5,5 5,9 42 5,7

87: 0,02 0,05 4,8 3,9 3,3 14 3,8

88: 0,02 0,29 9,3 4,6 2,7 105 4,1

89: 0,03 0,05 6,0 6,1 4,3 19 4,6

90: 0,06 0,13 12 9,6 8,8 114 10,4

91: nt nt 2,4 1,9 4,0 149 2,4

92: nt nt 3,3 3,2 4,6 58 3,2

93: nt nt 12 14 15 116 11

94: nt nt 3,8 5,2 3,3 32 3,0

96: nt nt 12 11 5,4 77 8,9

97: nt nt 6,3 4,6 5,8 67 5,3

nt - no ensayado *RULC: luciferasa de Renilla

Tabla 2: Valores de actividad biológica para líneas celulares de replicón del VHC transfectadas de forma transitoria

CE50 3A WT* (nM): CE50 1A WT* (nM) CE50 1A R155K† (nM) CE50 1B WT* (nM) CE50 1B D168A‡ (nM)

1: 17 3,2 4,9 2,2 17

2: nt 2,4 7,0 1,0 33

3: nt 6,6 32 3,5 128

4: 68 7,1 20 6,5 66

nt: 3,7 17 3,2 91

6: nt 26 58 11 216

7: 14 3,8 6,7 2,3 20

8: nt 8,8 28 4,8 89

9: nt 12 208 2,5 360

nt: 37 131 10 493

11: nt 20 159 9,4 605

12: nt 14 283 5,7 640

13: nt 8,6 59 3,1 209

14: nt 7,4 21 4,0 99

nt: 6,5 20 3,0 182

16: nt 9,4 22 5,8 61

17: 6,1 2,9 2,8 1,7 4,3

18: nt 2,3 5,0 1,2 24

19: nt 2,1 3,4 1,1 28

Nt: 3,4 17 2,7 90

21: nt 4,1 15 3,8 70

22: nt 8,6 48 2,6 242

23: nt 9,5 36 3,6 173

24: nt 9,3 49 3,2 284

nt: 4,4 17 3,6 116

26: nt 3,6 12 1,9 109

27: nt 6,0 20 4,3 70

28: nt 3,0 9 3,4 54

29: nt 4,8 11 3,1 48

nt: 41 296 31 503

31: nt 27 154 6,6 805

32: nt 44 547 14 653

33: 5,3 2,6 2,5 1,6 4,2

34: 46 15 18 9 64

35: 12 17 10 38

36: 128 16 271 9,4 333

37: 69 29 51 22 159

38: nt 4,5 8,4 2,8 25

39: 89 23 63 16 105

40: 156 17 74 8,6 129

41: 539 164 505 154 715

42: nt 17 35 10 109

43: nt 3,8 8,7 2,4 41

44: 7,0 2,4 4,0 1,4 15

45: nt 13 35 5,3 88

46: 6,788 2,4 3,2 1,2 4,5

47: 17 5,4 6,1 2,0 12

48: 13 1,7 4,0 1,1 6,5

49: 6,3 3,5 3,8 2,8 4,2

50: 26825 4444 3830 4444 4444

51: 265 28 92 24 318

52: 538 150 516 161 887

53: 15 5,3 5,6 2,0 11

54: 147 19 27 10 123

55: 71 8,0 32 2,3 53

56: 226 63 168 59 252

57: 54 12 17 7,5 48

58: 38 12 18 14 23

59: 15 10 6,8 6,8 6,4

60: 9,8 5,8 8,6 2,3 15

61: 13 12 10 9,3 6,7

62: 4,0 3,5 2,7 1,5 2,0

63: 6,9 4,1 4,0 2,1 3,4

64: 256 37 50 17 104

65: 17 9,4 8,1 6,4 11

66: 735 35 240 14 396

67: 107 14 42 10 86

68: 139 14 37 4,4 78

69: 42 8,2 15 3,9 28

70: 17 7,7 5,4 6,1 7,3

71: 49 9,1 30 3,8 66

72: 642 600 227 165 687

73: 45 8,8 25 6,2 75

74: 138 8,8 44 2,1 56

75: 56 14 45 3,5 51

76: 3,4 2,0 2,1 1,0 2,8

77: 472 21 34 5,0 80

78: 194 189 225 156 248

79: 9,2 6,1 7,1 3,0 11

80: nt 403 2862 53 443

81: 4,3 3,7 2,5 2,4 2,7

82: 16 7,8 6,2 4,1 5,7

83: 300 62 133 27 202

84: 11 5,4 4,0 2,5 5,2

85: 101 12 22 7,0 57

86: 16 4,0 3,7 3,4 10

87: 7,7 2,9 2,8 1,3 4,0

88: 35 5,0 14 5,5 24

89: 5,5 6,0 3,7 3,2 5,1

90: 43 nt nt nt nt

91: 25 2,3 3,5 1,3 9,2

92: 8,0 3,0 3,0 1,7 5,3

93: 26 13 13 14 39

94: 10 3,2 3,1 1,9 9,2

96: 12 5,2 3,8 4,1 3,6

97: 5,8 3,6 3,7 2,5 8,8

nt: no ensayado *WT = tipo silvestre † variantes de R155K resistentes al inhibidor de proteasa de NS3/4a en el genotipo 1 a ‡ variantes de D168A resistentes al inhibidor de proteasa de NS3/4a en el genotipo 1 b

Los datos en las Tablas 1 y 2 representan un promedio en el tiempo de cada ensayo para cada compuesto. Para ciertos compuestos, se han realizado múltiples ensayos durante el periodo de duración del proyecto. Por lo tanto, los datos informados en las Tablas 1 y 2 incluyen los datos informados en el documento de prioridad, así como los datos

5 generados en el periodo de intervención.

Composiciones farmacéuticas

Lo que sigue a continuación ilustra formas de dosificación farmacéutica representativas, que contienen un

10 compuesto de Fórmulas I, II, III, o IV (tal como uno cualquiera de IVa-IVh) (’Compuesto X’), para uso terapéutico o profiláctico en seres humanos.

(i) Comprimido 1 mg/comprimido

Compuesto X= 100,0 Lactosa 77,5 Povidona 15,0 Croscarmelosa sódica 12,0 Celulosa microcristalina 92,5 Estearato de magnesio 3,0

300,0

(ii) Comprimido 2 mg/comprimido

Compuesto X= 20,0

Celulosa microcristalina 410,0 Almidón 50,0 Glicolato sódico de almidón 15,0 Estearato de magnesio 5,0

500,0

(iii) Cápsula mg/cápsula

Compuesto X= 10,0 Dióxido de silicio coloidal 1,5 Lactosa 465,5

Almidón pregelatinizado 120,0

Estearato de magnesio 3,0 600,0

(iv) Inyección (1 mg/ml) mg/ml

Compuesto X= (forma de ácido libre) 1,0

Fosfato sódico dibásico 12,0

Fosfato sódico monobásico 0,7

Cloruro sódico 4,5

Solución de hidróxido sódico 1,0 N (ajuste del pH a 7,0-7,5) c.s.

Agua para inyección c.s. ad 1 ml

Las formulaciones mencionadas anteriormente se pueden obtener mediante procedimientos convencionales bien 5 conocidos en la técnica farmacéutica.

Se debe interpretar que el uso de los términos "un" y "uno" y "el" y referencias similares en el contexto de la presente divulgación (especialmente en el contexto de las siguientes reivindicaciones) cubre tanto las formas en singular como en plural, a menos que se indique de otro modo en el presente documento o el contexto lo contradiga

10 claramente. Todos los métodos descritos en el presente documento se pueden realizar en cualquier orden adecuado a menos que se indique de otro modo en el presente documento o el contexto lo contradiga claramente de otro modo.

El uso de valores numéricos individuales se expresa como aproximaciones como si los valores fueron precedidos

15 por el término "alrededor de" o "aproximadamente". De forma análoga, los valores numéricos en los diversos intervalos especificados en la presente solicitud, a menos que se indique expresamente de otro modo, se expresan como aproximaciones como si los valores mínimo y máximo dentro de los intervalos expresados fueran ambos precedidos por el término "alrededor de" o "aproximadamente". De este modo, las variaciones por encima y por debajo de los intervalos expresados se pueden usar para conseguir sustancialmente los mismos resultados como

20 valores dentro de los intervalos. Como se usa en el presente documento, los términos "alrededor de" y "aproximadamente" cuando se refieren a un valor numérico tendrán sus significados sencillos y ordinarios para una persona con una experiencia habitual en la materia con los que la materia objeto divulgada está más relacionada o la técnica relevante con respecto al intervalo o elemento en cuestión. La cantidad de ampliación del límite numérico estricto depende de muchos factores. Por ejemplo, algunos de los factores que se pueden considerar incluyen la

25 criticidad del elemento y/o el efecto que una cantidad de variación dada tendrá sobre el rendimiento de la materia objeto reivindicada, así como otras consideraciones conocidas por los expertos en la materia. Como se usa en el presente documento, el uso de diferentes cantidades de dígitos significativos para diferentes valores numéricos no pretende limitar cómo servirá el uso de los términos "alrededor de" o "aproximadamente" para ampliar un valor o intervalo numérico en particular. Por lo tanto, como una cuestión general, "alrededor de" o "aproximadamente"

30 amplían el valor numérico. Además, la divulgación de los intervalos se concibe como un intervalo continuo que incluye cada valor entre los valores mínimo y máximo más la ampliación del intervalo proporcionado por el uso del término "alrededor de" o "aproximadamente". Por lo tanto, la enumeración de intervalos de valores en el presente documento está destinada simplemente a servir como un método abreviado para hacer referencia de forma individual a cada valor separado que entra dentro del intervalo, a menos que se indique de otro modo en el presente documento, y cada valor separado se incorpora en la memoria descriptiva como si se mencionara de forma individual en el presente documento.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de Fórmula IVa:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es un compuesto de Fórmula IVb:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

15 3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es un compuesto de Fórmula IVb:
4. Un compuesto de Fórmula IVc:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, que es un compuesto de Fórmula IVd:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, que es un compuesto de Fórmula IVd:

15 7. Un compuesto de Fórmula IVe:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 7, que es un compuesto de Fórmula IVf:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 7, que es un compuesto de Fórmula IVf:

15 10. Un compuesto de Fórmula IVg:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
11. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 10, que es un compuesto de Fórmula IVh:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
12.

Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 10, que es un compuesto de Fórmula IVh:
13.

Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
14. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o una sal farmacéuticamente aceptable del 5 mismo para su uso en terapia médica.
15. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 13 para su uso en el tratamiento de una infección por el virus de la hepatitis C.

10 16. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico de una infección por el virus de la hepatitis C.