ES2590708T3

ES2590708T3 - Método para preparar ésteres grasos de creatina, ésteres grasos de creatina preparados de este modo y usos de los mismos

Info

Publication number: ES2590708T3
Application number: ES12352002.5T
Authority: ES
Inventors: Sophie Dezard; Frédéric TARAN; Alexandra TROTIER-FAURION; Aloïse MABONDZO
Original assignee: Commissariat a lEnergie Atomique et aux Energies Alternatives CEA
Current assignee: Commissariat a lEnergie Atomique et aux Energies Alternatives CEA
Priority date: 2012-07-30
Filing date: 2012-07-30
Publication date: 2016-11-23
Anticipated expiration: 2032-07-30
Also published as: US10144705B2; CA2879583A1; DK2692719T3; CA2879583C; US20150299112A1; EP2692719B1; JP2015526428A; JP6403671B2; AU2013298773A1; NZ704155A; AU2013298773B2; EP2692719A1; WO2014019855A1

Abstract

Método para preparar un éster graso de creatina o derivado del mismo que comprende al menos una etapa que consiste en hacer reaccionar una creatinina diprotegida con una molécula que lleva al menos un grupo funcional alcohol y de fórmula (I): R'-OH (I) en la que R' representa un radical hidrocarburo que contiene al menos 4 átomos de carbono elegido del grupo que consiste en un radical alquilo con 4 a 30 átomos de carbono, un radical alquenilo con 4 a 30 átomos de carbono, un radical arilo con 6 a 30 átomos de carbono y un radical glucosilo opcionalmente sustituido con uno o más grupos de sustitución seleccionados de un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo alcoxi, un halógeno, un ciano, un trifluorometilo o un nitro; en el que un derivado de éster graso de creatina es un éster graso de creatina en el que al menos uno de los átomos de hidrógeno del grupo metilguanidinilo está sustituido con un grupo de ácido carboxílico (-COOH).

Description

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DESCRIPCION

Metodo para preparar esteres grasos de creatina, esteres grasos de creatina preparados de este modo y usos de los mismos

Campo tecnico

La presente invencion pertenece al dominio de los derivados de creatina y de forma notable a los esteres grasos de creatina.

Mas en particular, la presente invencion se refiere a un metodo para preparar (o producir) esteres grasos de creatina llevando a cabo una etapa de apertura de anillo sobre la creatinina diprotegida usando una molecula que lleva un grupo funcional alcohol.

La presente invencion tambien se refiere a esteres grasos de creatina particulares preparados de este modo y a los diferentes usos de estos nuevos esteres grasos de creatina en investigacion, tratamiento, tecnicas de imagen o diagnostico.

Estado de la tecnica anterior

La creatina es un nutriente endogeno producido de forma natural por el higado y los rinones en la mayoria de los vertebrados. Los usos de la creatina son muchos, incluyendo su uso como complemento para incrementar la masa muscular y potenciar el rendimiento muscular, asi como en aplicaciones emergentes en el tratamiento de diversos trastornos tales como, sin limitacion, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, diversos trastornos neuromusculares, hipoxia y encefalopatias isquemicas tales como apoplejia, cardiopatia, diversas distrofias musculares [1] y diversos trastornos cutaneos [2]. La creatina tambien se puede usar como agente antiinflamatorio [3]. De forma notable, la administracion local de creatina se puede lograr por absorcion a traves de la piel [4].

Tipicamente, la creatina se absorbe en las celulas musculares por receptores especificos y se convierte en fosfocreatina por la creatina cinasa. Las celulas musculares, incluyendo el musculo esqueletico y el miocardio, funcionan utilizando la energia celular liberada a partir de la conversion de trifosfato de adenosina (ATP) en difosfato de adenosina (ADP). La cantidad de fosfocreatina en la celula muscular determina la cantidad de tiempo que le llevara al musculo recuperar la actividad y regenerar ATP. La fosfocreatina es una fuente rapidamente accesible de fosfato requerida para la regeneracion de ATP y uso mantenido del musculo. Por ejemplo, la energia usada para expandir y contraer los musculos se suministra por el ATP. El ATP se metaboliza en el musculo escindiendo un radical fosfato para liberar la energia necesaria para contraer el musculo. El difosfato de adenosina (ADP) se forma como un subproducto de este metabolismo.

Las fuentes mas comunes de ATP son de glucogeno y fosfato de creatina. El fosfato de creatina se ve favorecido como una fuente disponible debido a que puede resintetizar ATP a una tasa mayor de la que se logra tipicamente utilizando glucogeno. Por lo tanto, el incremento en la cantidad de creatina en el musculo incrementa las reservas musculares de fosfocreatina y se ha demostrado que incrementa el rendimiento muscular y el incremento en la masa muscular.

Sin embargo, la propia creatina es poco soluble en una solucion acuosa (aproximadamente 10-15 mg/ml). Ademas, la creatina no se absorbe bien desde el tubo gastrointestinal a un 14 % o menos tasa de absorcion desde el tubo GI. La creatina tambien tiene una biodisponibilidad oral baja debido, en parte, a (i) lipofilicidad baja y por lo tanto mala permeabilidad de membrana, y (ii) conversion rapida en creatinina en el entorno acido del estomago [5]. Por tanto, los productos actuales requieren la administracion de grandes cantidades, tipicamente 5 gramos o mas, de creatina para que sea eficaz, lo que provoca efectos secundarios como meteorismo, dolor gastrointestinal (GI), diarrea, y similares.

Las deficiencias del metabolismo de la creatina, incluyen deficiencias enzimaticas de su biosintesis (deficiencias en AGAT y GAMT de transmision autosomica recesiva) y de su transporte intracerebral (gen SLC6A8/CT1, relacionado con X). La incidencia de la enfermedad es de aproximadamente un 2 % de todo el retraso mental ligado al cromosoma X en etiologia desconocida. Estas deficiencias dan como resultado un retraso grave con una prevalencia sobre el lenguaje, un sindrome extrapiramidal, trastornos de comportamiento y en determinados casos epilepsia. La enfermedad aparece la mayoria de las veces durante la ninez, pero recientemente se informo de casos en adultos.

Parece que la respuesta a un tratamiento por creatina es favorable solo en el caso de una deficiencia en la sintesis de creatina, pero no en el caso de una deficiencia de transporte intracerebral de creatina. De hecho, en este caso, los hallazgos de los dos anos de tratamiento por creatina por administracion oral asociada con sus precursores L- arginina y L-glicina no mostro una mejora autentica ni un incremento en los niveles de creatina intracerebral. Por tanto, esta es una situacion clinica en la que la ausencia de transportadores funcionales de creatina en la barrera hematoencefalica (BHE) evita la entrada de creatina en el cerebro, lo que afecta a las funciones cerebrales. Una definicion y una evaluacion mejores de nuevas estrategias para la optimizacion farmacologica para esta enfermedad

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metabolica cerebral son actualmente, por tanto, mas que necesarias.

Estas enfermedades y los efectos secundarios e insuficiencias descritas anteriormente se pueden evitar por la administracion de esteres de creatina, que se convierten en creatina por las esterasas endogenas encontradas en una variedad de celulas y liquidos biologicos [1]. Los esteres de creatina son mas lipofilos que la creatina y por lo tanto tienen una mayor biodisponibilidad. Adicionalmente, el grupo funcional de acido carboxilico de creatina se enmascara a traves de la esterificacion en esteres de creatina, evitando de este modo la formacion del producto no deseado creatinina.

Todos los metodos de esteres grasos de creatina descritos en patentes y solicitud de patente implican la reaccion catalizada por acidos de Bronsted de la creatina con alcoholes. Los esteres de creatina se pueden formar por reaccion de la creatina con alcoholes por catalisis con clorhidrato gaseoso [6]. Los esteres grasos de creatina tambien se pueden formar a partir de la sintesis directa por produccion de acido in situ de un catalizador acido [7-8]. La solicitud de patente [7] divulga esteres de creatina obtenibles por esta sintesis (parrafo [0022]). En estos esteres de creatina, el grupo hidrocarbilo que sustituye el atomo de oxigeno de la funcion ester puede comprender de 1 a 25 atomos de carbono.

Otros derivados de creatina se divulgan en la tecnica anterior. Los anhidridos de acidos grasos de creatina se preparan por reaccion directa de creatina con haluro de acilo graso [9]. Las creatinilamidas se producen por guanidinilacion de peptido sarcosina para producir aminoacidos con creatinilo [10]. Tambien se describe el enlace amida entre el grupo guanidilo de la creatinina y el acido graso [11]. No obstante, en manos de los inventores, la preparacion de esteres grasos como anhidridos grasos de acuerdo con estas patentes y solicitudes de patente dieron rendimientos muy bajos. Estos metodos estan bien adaptados para alcoholes de bajo peso molecular tales como EtOH, nPrOH y nBuOH, pero los rendimientos se reducen drasticamente en el caso de alcoholes grasos de cadena larga.

Claramente, hay necesidad de un proceso que permita una produccion eficaz de esteres grasos de creatina. De hecho, una sintesis eficaz de esteres grasos de creatina seria un progreso significativo en los campos terapeutico y de diagnostico.

Analisis de la invencion

La presente invencion resuelve los problemas tecnicos enumerados anteriormente y proporciona una solucion a la necesidad mencionada anteriormente. De hecho, los inventores describen la produccion de esteres grasos de creatina usando alcoholes grasos con un rendimiento global de un 45 %. La eficacia de este proceso es mayor que la de los descritos previamente en la literatura y permite obtener derivados de creatina que son dificiles de preparar por tecnicas conocidas.

Ademas, la sintesis de acuerdo con la presente invencion es barata y se puede aplicar a la escala de multigramos para necesidades terapeuticas.

A continuacion, el metodo de preparacion de acuerdo con la presente invencion se puede llevar a cabo por cualquier alcohol graso, pero tambien por cualquier molecula que lleve un grupo funcional alcohol tal como, por ejemplo, glucosa.

Mas en particular, la presente invencion se refiere a un metodo para preparar un ester graso de creatina o derivado del mismo que comprende al menos una etapa que consiste en hacer reaccionar una creatinina diprotegida con una molecula que lleva al menos un grupo funcional alcohol y de formula (I):

R'-OH (I)

en la que R' representa un radical hidrocarburo que contiene al menos 4 atomos de carbono.

En lo que precede y en lo que sigue, la creatina (acido 2-(1-metilguanidino)acetico) se representa por la siguiente formula (II):

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acido 2-(1 -metilguanidino)acetico

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La creatina tambien se puede representar por la siguiente formula (II'):

(NH2)-C(NH)-N(CH3)-CH2-COOH (II')

En la presente invencion, un ester graso de creatina se representa por la formula (III):

(NH2)-C(NH)-N(CH3)-CH2-COOR' (III)

En la presente invencion, un derivado de ester graso de creatina es un ester graso de creatina en el que al menos uno de los atomos de hidrogeno del grupo metilguanidinilo esta sustituido con un grupo de acido carboxilico (- COOH). De forma ventajosa, el derivado de creatina se representa por la siguiente formula (IV):

(NR2R3)-C(NRi)-N(CH3)-CH2-COOR' (IV)

en la que el radical R' representa un radical hidrocarburo que contiene al menos 4 atomos de carbono y los radicales Ri, R2 y R3, identicos o diferentes, representan un atomo de hidrogeno o un grupo de acido carboxilico y al menos uno de entre los radicales Ri, R2 y R3 es un grupo de acido carboxilico.

Particularmente, en el derivado de creatina representado por la formula (IV), solo un radical de entre Ri, R2 y R3 es un grupo de acido carboxilico y los dos otros radicales son atomos de hidrogeno. Mas en particular, el radical Ri es un grupo de acido carboxilico y los radicales R2 y R3 son atomos de hidrogeno. En este caso, el derivado de creatina es de la siguiente formula (V):

(NH2)-C(N(COOH))-N(CH3)-CH2-COOR' (V)

en la que el radical R' representa un radical hidrocarburo que contiene al menos 4 atomos de carbono.

En lo que precede y en lo que sigue, la creatinina (2-imino-1-metilimidazolidin-4-ona) se representa por la siguiente formula (VI):

imagen2

(VI)

En la presente invencion, la creatinina diprotegida es una creatinina en la que los dos atomos de hidrogeno que sustituyen los dos atomos de nitrogeno se reemplazan por dos grupos protectores, identicos o diferentes. Queda claro que la proteccion no se lleva por el grupo metilo que sustituye el 3° atomo de nitrogeno de la creatinina. En una creatinina diprotegida, los dos grupos protectores son ventajosamente identicos.

Cualquier grupo protector adaptado conocido por un experto en la tecnica se puede usar en el contexto de la presente invencion.

De forma ventajosa, el grupo protector implementado en la presente invencion se representa por la formula (VII):

-C(O)-OR4 (VII)

en la que el radical R4 representa un grupo hidrocarburo.

El grupo hidrocarburo R4 es un grupo hidrocarburo con 1 a 20 atomos de carbono tal como un radical alquilo con 1 a 20 atomos de carbono, un radical alquenilo con 2 a 20 atomos de carbono, un radical alcoxi con 1 a 20 atomos de carbono, un radical arilo con 6 a 20 atomos de carbono, y un radical ariloxi con 6 a 20 atomos de carbono.

Dentro del alcance de la presente invencion y a menos que se indique de otro modo, por «grupo alquilo con 1 a 20 atomos de carbono» se quiere decir un grupo (hetero)alquilo lineal, ramificado o ciclico, opcionalmente sustituido,

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con 1 a 20 atomos de carbono, de manera notable con 1 a 15 atomos de carbono y en particular, con 1 a 10 atomos de carbono, siendo el/los heteroatomo(s) del grupo heteroalquilo N, O, P o S.

Dentro del alcance de la presente invencion, por «grupo alquenilo con 2 a 20 atomos de carbono» se quiere decir un grupo (hetero)alquenilo lineal, ramificado o ciclico, opcionalmente sustituido, con 2 a 20 atomos de carbono, de manera notable con 2 a 15 atomos de carbono y en particular, con 2 a 10 atomos de carbono, siendo el/los heteroatomo(s) del grupo heteroalquenilo N, O, P o S.

Dentro del alcance de la presente invencion, por «grupo alcoxi con 1 a 20 atomos de carbono» se quiere decir un atomo de oxigeno sustituido con un alquilo con 1 a 20 atomos de carbono como se define antes.

Dentro del alcance de la presente invencion, por «grupo arilo con 6 a 20 atomos de carbono», se quiere decir un grupo (hetero)aromatico mono- o policiclico, opcionalmente sustituido, que tiene de 6 a 20 atomos de carbono, de manera notable de 6 a 14 atomos de carbono, en particular, de 6 a 8 atomos de carbono, siendo el/los heteroatomo(s) del grupo heteroaromatico N, O, P o S.

Dentro del alcance de la presente invencion, por «grupo ariloxi con 6 a 20 atomos de carbono» se quiere decir un atomo de oxigeno sustituido con un arilo con 6 a 20 atomos de carbono como se define antes.

Dentro del alcance de la presente invencion, por «opcionalmente sustituido» se quiere decir un radical que puede estar sustituido con uno o mas grupos seleccionados de un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo alcoxi, un halogeno, un hidroxi, un ciano, un trifluorometilo o un nitro.

Dentro del alcance de la presente invencion, por «halogeno» se quiere decir un fluor, cloro, bromo o yodo.

Particularmente, el grupo protector R4 implementado en la presente invencion se elige del grupo que consiste en un grupo benzoilo opcionalmente sustituido, un grupo terc-butoxicarbonilo (BOC) y un fluorenilmetoxicarbonilo (FMOC). Mas en particular, el grupo protector implementado en la presente invencion es un grupo benzoilo opcionalmente sustituido y de manera notable un grupo benzoilo.

El radical R' presente en la molecula que lleva al menos un grupo funcional alcohol y de formula (I), en el ester graso de creatina de formula (III) y en el ester graso de creatina derivado de formula (IV) o (V) es un radical hidrocarburo que contiene al menos 4 atomos de carbono. De forma ventajosa, el radical R' se elige en el grupo que consiste en un radical alquilo con 4 a 30 atomos de carbono, un radical alquenilo con 4 a 30 atomos de carbono, y un radical arilo con 6 a 30 atomos de carbono.

Dentro del alcance de la presente invencion y a menos que se indique de otro modo, por «grupo alquilo con 4 a 30 atomos de carbono» se quiere decir un grupo (hetero)alquilo lineal, ramificado o ciclico, opcionalmente sustituido, con 4 a 30 atomos de carbono, de manera notable con 4 a 25 atomos de carbono y en particular, con 4 a 20 atomos de carbono, siendo el/los heteroatomo(s) del grupo heteroalquilo N, O, P o S.

Dentro del alcance de la presente invencion, por «grupo alquenilo con 4 a 30 atomos de carbono» se quiere decir un grupo (hetero)alquenilo lineal, ramificado o ciclico, opcionalmente sustituido, con 4 a 30 atomos de carbono, de manera notable con 4 a 25 atomos de carbono y en particular, con 4 a 20 atomos de carbono, siendo el/los heteroatomo(s) del grupo heteroalquenilo N, O, P o S.

Dentro del alcance de la presente invencion, por «grupo arilo con 6 a 30 atomos de carbono», se quiere decir un grupo (hetero)aromatico mono- o policiclico, opcionalmente sustituido, que tiene de 6 a 30 atomos de carbono, de manera notable de 6 a 25 atomos de carbono, en particular, de 6 a 20 atomos de carbono, siendo el/los heteroatomo(s) del grupo heteroaromatico N, O, P o S.

En un 1° modo de realizacion particular de la presente invencion, el radical R' presente en la molecula que lleva al menos un grupo funcional alcohol y de formula (I), en el ester graso de creatina de formula (III) y en el ester graso de creatina derivado de formula (IV) o (V) se representa por la siguiente formula (VIII):

-CH2-R'1 (VIII)

en la que R'1 es un radical hidrocarburo que contiene al menos 3 atomos de carbono. De forma ventajosa, el radical R' se elige en el grupo que consiste en un radical alquilo con 3 a 30 atomos de carbono, un radical alquenilo con 3 a 30 atomos de carbono, y un radical arilo con 6 a 30 atomos de carbono.

Dentro del alcance de la presente invencion y a menos que se indique de otro modo, por «grupo alquilo con 3 a 30 atomos de carbono» se quiere decir un grupo (hetero)alquilo lineal, ramificado o ciclico, opcionalmente sustituido, con 3 a 30 atomos de carbono, de manera notable con 3 a 25 atomos de carbono y en particular, con 3 a 20 atomos de carbono, siendo el/los heteroatomo(s) del grupo heteroalquilo N, O, P o S.

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Dentro del alcance de la presente invencion, por «grupo alquenilo con 3 a 30 atomos de carbono» se quiere decir un grupo (hetero)alquenilo lineal, ramificado o cfclico, opcionalmente sustituido, con 3 a 30 atomos de carbono, de manera notable con 3 a 25 atomos de carbono y en particular, con 3 a 20 atomos de carbono, siendo el/los heteroatomo(s) del grupo heteroalquenilo N, O, P o S.

En un 2° modo de realizacion particular de la presente invencion, el radical R' presente en la molecula que lleva al menos un grupo funcional alcohol y de formula (I), en el ester graso de creatina de formula (III) y en el ester graso de creatina derivado de formula (IV) o (V) es un radical glucosilo opcionalmente sustituido.

En lo que sigue, la glucosa se puede representar por la siguiente formula de Fischer (IX):

O=CH-CHOH-CHOH-CHOH-CHOH-CH2OH (IX)

De forma alternativa, la glucosa se puede representar por la formula (X):

(X)

Por «radical glucosilo», se quiere decir un radical de formula C6H11O5 derivado de glucosa por eliminacion de uno de los grupos hidroxilo de la misma. El grupo hidroxilo eliminado se puede llevar por uno de los 5 atomos de carbono C1, C2, C3, C4 o C6 (la nomenclatura de los carbonos se refiere a la formula (X)).

Por «radical glucosilo sustituido», se quiere decir un radical glucosilo sustituido con uno o mas grupos de sustitucion seleccionados de un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo alcoxi, un halogeno, un ciano, un trifluorometilo o un nitro.

En un 1° modo de realizacion, el grupo hidroxilo eliminado es el del atomo de carbono C6 y por tanto el radical glucosilo se puede representar por la siguiente formula (XI):

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(XI)

En este 1° modo de realizacion, un radical glucosilo sustituido se puede representar por la siguiente formula (XII):

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en la que los radicales R5, R6, R7 y Rs, identicos o diferentes, representan un grupo de sustitucion como se define previamente.

De forma ventajosa, los radicales R5, R6, R7 y Rs son grupos identicos y de manera notable cada uno representa un grupo bencilo.

De forma alternativa, los radicales R5, R6, R7 y Rs representan cada uno un grupo seleccionado de un grupo alquilo tal como un grupo metilo o un grupo etilo y un grupo arilo tal como un grupo bencilo. En particular, el radical R5 es un grupo metilo y los radicales R6, R7 y Rs son grupos bencilo.

En un 2° modo de realizacion, el grupo hidroxilo eliminado es el del atomo de carbono Ci y por tanto el radical glucosilo se puede representar por la siguiente formula (XIII):

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(XIII)

En este 2° modo de realizacion, un radical glucosilo sustituido se puede representar por la siguiente formula (XIV):

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(XIV)

en la que los radicales Rg, R10, R11 y R12, identicos o diferentes, representan un grupo de sustitucion como se define previamente.

De forma ventajosa, los radicales Rg, R10, R11 y R12 son grupos identicos y de manera notable cada uno representa un grupo bencilo.

De forma alternativa, los radicales Rg, R10, R11 y R12 representan cada uno un grupo seleccionado de un grupo alquilo tal como un grupo metilo o un grupo etilo y un grupo arilo tal como un grupo bencilo.

En la presente invencion, los compuestos de formulas (I), (II), (II'), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), (IX), (X), (XI), (XII), (XIII) y (XIV) pueden presentar uno o mas radioisotopos, de forma ventajosa elegidos de yodo-123, yodo-125, yodo- 126, yodo-133, yodo-131, yodo-124, indio-111, indio-113m, bromo-77, bromo-76, galio-67, galio-68, rutenio-95, rutenio-97, tecnecio-99m, fluorine-19, fluor-18, carbono-13, carbono-11, nitrogeno-15, nitrogeno-13, oxigeno-17, oxigeno-15, oxigeno-14, escandio-47, telurio122m, tulio-165, itrio-199, cobre-64, cobre-62, gadolidio-68 y rubidio-82.

De forma ventajosa, el metodo de preparacion de un ester graso de creatina o derivado del mismo de acuerdo con la presente invencion comprende las siguientes etapas sucesivas que consisten en:

a) hacer reaccionar creatinina con un agente protector para obtener una creatinina diprotegida, como se define antes;

b) hacer reaccionar la creatinina diprotegida obtenida en la etapa (a) con una molecula que lleva al menos un grupo funcional alcohol y de formula (I) como se define antes para obtener un ester graso de creatina diprotegido; y

c) desproteger el ester graso de creatina o derivado del mismo diprotegido obtenido en la etapa (b), para obtener dicho ester graso de creatina o derivado del mismo como se define antes.

La etapa (a) del metodo de preparacion de acuerdo con la presente invencion consiste en proteger el grupo guanidina de la creatinina.

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Esta proteccion se puede llevar a cabo por cualquier metodo de proteccion conocido por un experto en la tecnica. Este ultimo sabra, en funcion de los grupos protectores que deben introducirse en la creatinina, como elegir el agente protector y las condiciones experimentales mas apropiadas.

Como ya se ha explicado, los grupos que protegen el grupo guanidina de la creatinina son de forma ventajosa de formula (VI). En estas condiciones, la etapa (a) consiste en poner en contacto la creatinina con un agente protector que puede producir un grupo protector como se define previamente, para obtener una creatinina diprotegida. De forma ventajosa, dicho agente protector es de formula (XV):

Cl-C(O)-OR4 (XV)

en la que el radical R4 representa un grupo hidrocarburo, como se define previamente.

La etapa (a) se puede llevar a cabo por cualquier metodo de proteccion conocido por un experto en la tecnica. Este ultimo sabra, en funcion del agente protector que se emplea, como elegir el metodo de proteccion mas apropiado.

Por ejemplo, cuando dicho agente protector es de formula (XV), el disolvente en la solucion que contiene creatinina y este agente protector es tipicamente diclorometano (DCM) y de manera notable DCM anhidro. Esta solucion tambien puede contener cualquier compuesto quimico que puede facilitar la formacion de creatinina diprotegida. Por ejemplo, dicho compuesto quimico facilitador puede ser la base de Hunig o N,N-diisopropiletilamina (DIEPA). Para un equivalente de creatinina, la solucion implementada puede contener entre 1,5 y 7 equivalentes y de manera notable entre 2 y 4 equivalentes de agente protector. De forma similar, para un equivalente de creatinina, la solucion implementada puede contener entre 1,5 y 7 equivalentes y de manera notable entre 2 y 4 equivalentes de DIEPA. De forma ventajosa, la cantidad de agente protector y de DIEPA expresados en equivalentes es identica en la solucion implementada.

La etapa (a) se puede realizar en atmosfera inerte y, por ejemplo, en nitrogeno.

La solucion implementada durante la etapa (a) del metodo de acuerdo con la presente invencion se puede someter a agitacion para que la creatinina y el agente protector reaccionen conjuntamente. Cualquier tecnica mecanica que permita la agitacion se puede usar para este proposito. Como ejemplos de dichas tecnicas, se pueden mencionar agitacion manual, tratamiento con ultrasonidos, agitacion mecanica o una combinacion de dichas tecnicas. Estas tecnicas pueden requerir el uso de un agitador magnetico y de una barra imantada o un bano ultrasonico o de un agitador mecanico con varillas, paletas, helices, etc. Esta agitacion puede durar durante de 1 min a 1 h, de manera notable de 15 a 45 min a una temperatura comprendida entre 0 y 10 °C, de manera notable entre 2 y 6 °C y continuar entre 6 y 18 h, de manera notable entre 10 y 15 h a una temperatura comprendida entre 8 y 40 °C, de manera notable 12 y 30 °C y, particularmente, a temperatura ambiente (TA) (es decir, 20 °C ± 4 °C).

La creatinina diprotegida obtenida despues de la etapa (a) se purifica facilmente. De hecho, una vez que se logra la etapa (a) del metodo de acuerdo con la presente invencion, la creatinina diprotegida asi obtenida se puede purificar antes de la etapa (b) por cualquier tecnica de purificacion conocida por un experto en la tecnica. A modo de ejemplos no limitantes, se pueden mencionar la cromatografia, cromatografia ultrarrapida, cromatografia ultrarrapida en gel de silice y de manera notable en gel de silice con gradiente de heptano/acetato de etilo, una HPLC semipreparativa, etc.

En el metodo de la presente invencion, la etapa (b) consiste en producir un ester graso de creatina diprotegido, lo que se realiza haciendo reaccionar la creatinina diprotegida con la molecula que lleva al menos un grupo funcional alcohol y de formula (I) como se define antes. La reaccion consiste en una adicion nucleofila de la molecula de formula (I) en la creatinina diprotegida.

En un modo de realizacion en particular, la solucion de disolvente implementada durante la etapa (b) es la molecula que lleva al menos un grupo funcional alcohol y de formula (I). Se puede decir que la etapa (b) se realiza sin disolvente, lo que quiere decir sin ningun otro disolvente distinto de la molecula que lleva al menos un grupo funcional alcohol y de formula (I).

De forma alternativa, se puede anadir un disolvente adicional a la solucion que contiene la creatinina diprotegida y la molecula que lleva al menos un grupo funcional alcohol y de formula (I). Como ejemplo de disolvente adicional utilizable, se puede citar el tolueno.

En la solucion implementada en la etapa (b), para un equivalente de creatinina diprotegida, la cantidad de molecula que lleva al menos un grupo funcional alcohol y de formula (I) expresada en equivalente esta comprendida entre 1 y 15, de manera notable entre 1 y 10. La tabla 5 a continuacion en el presente documento presenta diferentes moleculas que llevan al menos un grupo funcional alcohol y de formula (I) y la cantidad de las mismas usada en la etapa (b) de la presente invencion.

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La etapa (b) se lleva a cabo durante de 1 a 20 h, de manera notable durante de 2 a 16 h, y particularmente, durante de 2 a 10 h. Tfpicamente, se puede llevar a cabo durante aproximadamente 3 h (es decir, 3 h ±30 min), aproximadamente 4 h (es decir, 4 h ± 30 min), aproximadamente 5 h (es decir, 5 h ± 30 min) o aproximadamente 6 h (es decir, 6 h ± 1 h). Esta etapa (b) se lleva a cabo a presion atmosferica y a una temperatura comprendida entre 60 y 100 °C, de manera notable 70 y 90 °C y, particularmente, a alrededor de 80 °C (es decir, 80 °C ± 5 °C).

Una vez que se logra la etapa (b) del metodo de acuerdo con la presente invencion, el ester de creatinina diprotegido asf obtenida se puede purificar antes de la etapa (c) por cualquier tecnica de purificacion conocida por un experto en la tecnica. A modo de ejemplos no limitantes, se pueden mencionar la cromatograffa, cromatograffa ultrarrapida, cromatograffa ultrarrapida en gel de sflice y de manera notable en gel de si'lice con gradiente de heptano/acetato de etilo, una HPLC semipreparativa, etc.

La estructura y pureza del ester graso de creatina diprotegido se determina despues de la purificacion en gel de si'lice por cromatograffa de lfquidos-espectrometrfa de masas (CL/EM), cromatograifa en capa fina (TLC), resonancia magnetica nuclear (RMN) y, en particular, RMN de 1H y RMN de 13C, espectroscopfa de infrarrojo (espectroscopfa IR) y/o determinacion del punto de fusion.

La etapa de desproteccion (c) se lleva a cabo pasando del ester graso de creatina diprotegido obtenido en la etapa (b) al ester graso de creatina de formula (III) o al ester graso de creatina derivado de formula (IV) o (V).

La eliminacion de los grupos protectores de las funciones amina del ester graso de creatina diprotegido, es decir, la desproteccion, se puede llevar a cabo por cualquier metodo de desproteccion conocido por un experto en la tecnica. Este ultimo sabra, en funcion de los grupos protectores que se emplean, como elegir el metodo de desproteccion mas apropiado.

De forma ventajosa, cuando el grupo protector es un compuesto de formula (VII), la etapa (c) se logra por hidrogeno en presencia de paladio soportado sobre alumina o carbon vegetal. Esta reaccion se lleva a cabo en un disolvente de forma ventajosa seleccionado de dicloroetano (DCE), diclorometano (DCM), acetonitrilo (CH3CN) o una mezcla de DCM y un alcohol inferior. Por "alcohol inferior" se quiere decir en el contexto de la presente invencion un alcohol alifatico que tiene de 1 a 3 atomos de carbono, tal como metanol, etanol y propanol. Mas en particular, la mezcla de DCM/alcohol inferior usada como disolvente en la etapa de desproteccion (c) es una mezcla de DCM/metanol.

Esta etapa de desproteccion (c) se lleva a cabo durante de 1 a 6 h, de manera notable durante de 2 a 4 h y, particularmente, durante aproximadamente 3 h (es decir, 3 h ± 30 min). Esta etapa de desproteccion (c) tambien se lleva a cabo a presion atmosferica y a una temperatura comprendida entre 8 y 40 °C, de manera notable 12 y 30 °C y, particularmente, a temperatura ambiente (TA) (es decir, 20 °C ± 4 °C).

En un modo de realizacion particular, la etapa de desproteccion (c) se puede repetir al menos una vez, en condiciones identicas a o diferentes de la 18 etapa de desproteccion. Una repeticion de este tipo puede ser necesaria si se obtiene un ester graso de creatina monoprotegido despues de implementar la 18 etapa (c).

Las reacciones qufmicas llevadas a cabo para preparar los esteres de creatina de acuerdo con los modos de realizacion particulares de la presente invencion se representan en el esquema 1.

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La presente invencion tambien se refiere a compuestos que se pueden preparar por un metodo de acuerdo con la presente invencion y, mas en particular, por un metodo en el que el alcohol de formula R'-OH es glucosa o glucosa sustituida.

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En otras palabras, el compuesto de acuerdo con la presente invencion es un compuesto de formula (III), (IV) o (V): (NH2)-C(NH)-N(CH3)-CH2-COOR' (III)

(NR2R3)-C(NR1)-N(CH3)-CH2-COOR' (IV)

o

(NH2)-C(N(COOH))-N(CH3)-CH2-COOR' (V)

en la que:

- los radicales Ri, R2 y R3, identicos o diferentes, representan un atomo de hidrogeno o un grupo de acido carboxilico y al menos uno de entre los radicales Ri, R2 y R3 es un grupo de acido carboxilico,

- el radical R’ es un radical glucosilo opcionalmente sustituido, o una sal del mismo.

Todos los diferentes modos de realizacion divulgados para los radicales Ri, R2, R3 y R' se aplican al compuesto de acuerdo con la presente invencion.

En el contexto de la invencion, "sal" se refiere a sales de adicion de acido y sales de adicion de base. Dichas sales se pueden formar por medios convencionales, por ejemplo, por reaccion de una forma de acido libre o una forma de base libre de un compuesto de la invencion con uno o varios equivalentes de un acido o base apropiado, opcionalmente en un disolvente, o en un medio en el que la sal sea insoluble, extrayendo a continuacion dicho disolvente, o dicho medio, usando tecnicas convencionales (por ejemplo, a vacio o por liofilizacion). Las sales tambien se pueden preparar reemplazando un contraion de un compuesto de la invencion en forma de una sal con otro contraion, por ejemplo, usando una resina de intercambio ionico apropiada.

En especial con el proposito de administrarse a un cuerpo humano o animal, las sales de los compuestos de acuerdo con la invencion son ventajosamente sales farmaceuticamente aceptables.

En particular, cuando los compuestos de acuerdo con la invencion estan en forma de una sal, siendo esta ultima una sal de metal alcalino, en particular sal de sodio o potasio, o sal de metal alcalinoterreo, en particular magnesio o calcio, o incluso una sal con una amida organica, mas particularmente con un aminoacido tal como arginina o lisina.

Cuando los compuestos de acuerdo con la invencion que tienen una funcion amina estan en forma de una sal de esta amina, la sal es una sal de acido inorganico tal como, por ejemplo, acido clorhidrico, acido sulfurico, o acido bromhidrico, o en forma de una sal organica, tal como, por ejemplo, acido acetico, acido formico, acido triflico, acido tartarico, acido oxalico, acido citrico, acido trifluoroacetico, o acido metanosulfonico.

Adicionalmente, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende al menos un compuesto de acuerdo con la invencion tal como se divulga previamente, en un vehiculo aceptable. El vehiculo dependera del uso de la composicion y el experto en la tecnica sera capaz de elegir el vehiculo mas apropiado sin esfuerzo inventivo.

Como ya se ha explicado, la creatina se puede usar como complemento para reforzar el organismo, incrementar la masa muscular y potenciar el rendimiento muscular. De hecho, el aporte complementario de creatina puede dar como resultado un efecto fisiologico positivo sobre los musculos tales como, por ejemplo, musculos esqueleticos o cardiacos. Como consecuencia, la composicion de acuerdo con la presente invencion puede ser aditivo alimenticio o un complemento nutricional. La composicion de acuerdo con la presente invencion puede ser util para animales o para seres humanos tales como, por ejemplo, deportistas, ancianos, ninos, adolescentes o personas vegetarianas.

Informacion adicional sobre dicho uso se puede encontrar en [10-11 ].

La presente invencion se refiere adicionalmente a una composicion farmaceutica, de diagnostico o para tecnicas de imagen que comprende al menos un compuesto de acuerdo con la invencion tal como se ha divulgado previamente, en un vehiculo farmaceutico aceptable.

En el contexto de la presente invencion, "vehiculo farmaceutico aceptable" se refiere a uno o varios aditivos, excipientes, tampones, espesantes y/o agentes auxiliares farmaceuticos convencionales conocidos por un experto en la tecnica.

Los esteres grasos de creatina y derivados de los mismos de acuerdo con la presente invencion proporcionan un

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nuevo remedio para el tratamiento de la enfermedad del transportador con carencia de creatina en el cerebro. Ademas, algunas otras patologias se pueden explorar en vista de estos resultados preliminares prometedores.

Tambien se divulga el uso de dichos derivados que pueden cruzar la BHE in vitro e in vivo sin la implicacion del transportador de vehiculo grande en el soluto (Solute Large Carrier Transporter, SLC6A8). De modo que la creatina normalmente excluida por la BHE en pacientes con transportador con carencia de creatina se puede producir despues de la escision de los esteres grasos de creatina dentro de las celulas endoteliales cerebrales y liberarse en el parenquima cerebral. Tambien se divulga la vectorizacion potencial de los esteres grasos de creatina que son potencialmente utilizables in vivo.

Por tanto, los compuestos y composiciones de acuerdo con la presente invencion se pueden usar en medicina y de manera notable en medicina terapeutica, en diagnostico medico y en tecnicas de imagen medicas tales como tomografia de emision de positrones (TEP). En efecto, el hecho de que parte de la creatina y/o parte del ester graso del ester graso de creatina o del derivado del mismo pueda presentar radioisotopo(s) como se ha divulgado previamente puede ser util en el diagnostico y las tecnicas de imagen. Por ejemplo, el radical glucosilo presente en el compuesto de acuerdo con la presente invencion puede estar sustituido al menos con un radioisotopo tal como 18F para su uso en tecnicas de imagen medicas y mas en particular en TEP.

Los compuestos y composiciones medicas de acuerdo con la presente invencion se pueden usar para el tratamiento o la prevencion de al menos una enfermedad, trastorno o afeccion seleccionado del grupo que consiste en enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, un trastorno neuromuscular, hipoxia, una encefalopatia isquemica tal como apoplejia, una cardiopatia, una distrofia muscular, un trastorno cutaneo e inflamacion.

Los compuestos y composiciones medicas de acuerdo con la presente invencion se pueden usar para el tratamiento de la enfermedad del transportador con carencia de creatina en el cerebro.

En otras palabras, tambien se divulga un metodo para tratar o prevenir al menos una enfermedad, trastorno o afeccion seleccionado del grupo que consiste en enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, un trastorno neuromuscular, hipoxia, una encefalopatia isquemica tal como apoplejia, una cardiopatia, una distrofia muscular, un trastorno cutaneo e inflamacion, que consiste en administrar a un sujeto que lo necesita, una cantidad terapeutica de un compuesto de acuerdo con la invencion o de una composicion de acuerdo con la invencion.

Tambien se divulga un metodo para tratar la enfermedad del transportador con carencia de creatina en el cerebro, que consiste en administrar a un sujeto que lo necesita, una cantidad terapeutica de un compuesto de acuerdo con la invencion o de una composicion de acuerdo con la invencion.

Informacion adicional sobre dichos metodos de tratamiento se puede encontrar en [1 -4].

Otras caracteristicas y ventajas de la presente invencion seran adicionalmente evidentes para el experto en la tecnica al leer los ejemplos a continuacion, que se dan como ilustracion y no como limitacion, con referencia a las figuras adjuntas.

Breve descripcion de los dibujos

La figura 1 presenta la translocacion del ester graso de creatina C18 a traves de la BHE.

La figura 2 presenta la conversion de C18 en creatina.

La figura 3 presenta la translocacion del ester graso de creatina C2 a traves de la BHE.

Analisis detallado de modos de realizacion particulares

Se adquieren todos los reactivos de Aldrich (Steinheim, Alemania). Se realizo una TLC en placas F 254 de Merck usando un sistema de disolventes especificado. Se realizo una CL/EM analitica y preparativa en el sistema Waters Autopurify System (SCBM). Se realizo una evaluacion biologica de las dianas en yyy (SPI). Se registraron los espectros de RMN de 1H y 13C a 400 MHz en un espectrometro Bruker.

I. RESULTADOS PRELIMINARES COMPARATIVOS

1.1. Sintesis directa de esteres a partir de creatina

Los inventores trataron de preparar el ester estearoilico de creatina usando los metodos divulgados en [7-8]. Los resultados se presentan en la tabla 1:

Tabla 1

Sustrato (1 mM): Reactivos Condiciones Rendimiento

Creatina, hidrato: Alcohol estearilico 10 eq SOCI2 3 eq 40qC, durante la noche 0 %

Creatina, hidrato: KOH Alcohol estearilico 10 eq SOCI2 3 eq Produccion de cloruro de acilo in situ Sal potasica de creatina Reflujo 1 h 0 %

Creatina anhidra: Alcohol estearilico 10 eq SOCI2 3 eq Tubo sellado 80qC 6h 0,1 % Purificado por CL/EM

Creatina anhidra: Alcohol estearilico 10 eq SOCI2 3 eq Microondas 160aC 20min 0 % Produccion de creatina, cloruro de acilo

Creatina anhidra: Alcohol estearilico 10 eq CH3SO3H 3 eq 130aC 2h30 0 %

Creatina anhidra: Etanol, SOCI2 Reflujo 60QC 1h TA 72h 50 % cristalizado

1.2. Proteccion de creatina

Los inventores intentaron preparar esteres grasos de creatina usando creatina protegida. Se desarrollaron dos 5 grupos protectores (GP) sobre creatina (vease la tabla 2) de acuerdo con [12-13] (vease el esquema 2).

imagen9

Tabla 2: proteccion de creatina

Reactivo protector: Esteq. Condiciones (TA) Base Esteq. Rendimiento

FmocCl: 3 eq DCM DIEPA 3 eq 5 %

FmocCl: 1 eq DCM TMSCl/DIEPA 4 eq/3 eq 11 %

Z2O: 4 eq Dioxano/agua NaOH 1 eq 0 %

ZCl: 3 eq DCM DIEPA 3 eq 33 %

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Con creatina, solo se produjo el derivado monoprotegido. Desafortunadamente, este compuesto no era reactivo para la siguiente etapa de la sintesis. Ademas, los inventores aislaron un nuevo compuesto no util obtenido por la adicion del cloroacetilo en el metileno.

15 Ademas, la sintesis con el grupo FMOC dio lugar a la creatinina diprotegida despues de la autociclacion en el medio de reaccion.

1.3. Sintesis de esteres a partir de la creatina monoprotegida 20 Los protocolos y rendimientos se resumen en la tabla 3.

Tabla 3

Sustrato: Reactivos Rendimiento

(Z)creatina: DMF/DCC/DMAP 0 %

(Z)creatina: THF/TEA/cloruro de triclorobenzoilo 0 %

(Z)creatina: Alcohol estearfl ico/4-p i rro lidinop iridina 1,3 %

(Z)creatina-TriCl benzoilo: Produccion in situ alcohol estearilico/NaH/THF 0 %

Incluso con la activacion de la funcion de acido de la creatina por cloruro de triclorobenzoilo en la creatina protegida, 25 solo se obtuvieron rendimientos muy bajos.

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II. SINTESIS DE ESTER ESTEAROILICO DE CREATINA DE ACUERDO CON LA PRESENTE INVENCION

II.1. Procedimiento general

Esta smtesis se lleva a cabo abriendo el anillo de creatinina diprotegida, (Z2)-creatinina, por alcohol estearoflico seguido de desproteccion en hidrogeno/Pd. A continuacion en el presente documento, el esquema 3 muestra las secuencias de smtesis de la preparacion del ester estearoflico de creatina:

imagen10

Se anadio cloroformiato de benzoflo (4,2 ml - 3 eq) a una solucion de diisopropiletilamina (5,2 ml - 3 eq) con creatinina (1,124 g - 1 eq) en 100 ml de diclorometano anhidro en nitrogeno. Se anade gota a gota el cloroformiato de bencilo en un bano de hielo. Se deja que la mezcla reaccione con agitacion 30 min en el bano de hielo y durante la noche a temperatura ambiente.

Se controla la reaccion por CCM (sflice, heptano/acetato de etilo) y CL/EM. Se extrae el medio de reaccion por adicion de diclorometano y agua. Se lava la fase de diclorometano 3 veces con agua y se seca por sulfato de magnesio.

Se concentra la solucion de diclorometano por evaporacion a vacfo y se deja que cristalice. Se obtienen 3,25 g de (Z2)-creatinina en bruto (87 %). Se puede purificar la (Z2)-creatinina en gel de si'lice (gradiente de heptano/acetato de etilo) para la determinacion de la estructura. Se usa el producto en bruto para realizar la etapa de esterificacion.

B. Ester estearoflico de (Z2)-creatina

Se dejo que el alcohol estearoflico (0,5 g - 2 eq) reaccionara con 1 eq de (Z2)-creatinina en bruto en un tubo calentado a 80 °C durante 5 h. Se realiza un seguimiento de la reaccion por (sflice, heptano/acetato de etilo) y CL/EM.

Se purifica el ester estearoflico de (Z2)-creatina en bruto en gel de sflice (gradiente de heptano/acetato de etilo) para proporcionar 286 mg de ester estearoflico de (Z2)-creatina puro con un rendimiento de un 50 %.

C. Ester estearoflico de creatina

Se disuelve el ester estearoflico de (Z2)-creatina puro (140 mg) en solucion de diclorometano anhidro/metanol (6 ml/12 ml) en nitrogeno. Se anade Pd/A^Os al 5 % (20 mg). Se desgasifica la mezcla de reaccion a vacfo, se congela para la purga y se rompe el vacfo por hidrogeno. Se realiza la purga con hidrogeno tres veces. A continuacion, se deja que el medio reaccione hasta alcanzar la temperatura ambiente y reacciona con agitacion energica.

Se realiza un seguimiento de la reaccion por CCM (sflice, heptano/acetato de etilo) y CL/EM. Cuando se completa la reaccion, en general despues de 3 h, la filtracion en un filtro de 0,5 pm da una solucion de ester estearoflico de creatina.

Se evapora el ester estearoflico de creatina a vacfo para proporcionar 75 mg (rendimiento cuantitativo).

II.2. Variantes del metodo de acuerdo con la presente invencion A. Proteccion de creatinina

imagen11

Tabla 4

Reactivo protector: Esteq. Condiciones Base Esteq. Rendimiento

BOC2O: 5 eq TA, Dioxano/agua NaOH 1 eq 0,6 %

BOC2O: 6 eq TA, DCM DIEPA 6 eq 43 %

FmocCl: 1,5 eq TA, DCM DIEPA 1,5 eq 28 %

ZCl: 3 eq TA, DCM DIEPA 3 eq 87 %

5 Se sometieron a prueba diferentes reactivos protectores para preparar la creatinina protegida. Los resultados se presentan en la tabla 4.

La reaccion de creatinina con BOC2O presento un rendimiento muy bajo en condiciones acuosas y la reaccion BOC2O en condiciones anhidras dio lugar a un compuesto nuevo e inutil con 3 funciones Boc por adicion del grupo 10 Boc en el metileno con un rendimiento aislado de un 43 %.

Afortunadamente, la reaccion con el cloroformiato de benzoilo (ZCl) proporciono un 87 % de creatinina diprotegida usada como producto "en bruto" despues de la cristalizacion en hexano.

15 B. Adicion nucleofila de alcoholes en la creatinina diprotegida

Se sometieron a prueba diferentes moleculas que llevaban un grupo alcohol para determinar la adicion nucleofila sobre la creatinina diprotegida. Los resultados se presentan en la tabla 5.

20 Tabla 5

R': Esteq. Condiciones Rendimiento

C1: como disolvente TA 2 h 92 %

C2: como disolvente 80 2C 4 h 72 %

iPrOH: 4 eq 80 °C 4 h 5,5 %

C4: 10 eq 60 °C 4 h 60 %

C8: 4 eq 80 °C 4 h 40 %

Octanol-2: 4 eq 80 °C 4 h 5 %

C9: 8 eq 80 °C 5 h 25 %

C12: 8 eq 80 °C 7 h 47 %

C16: 6 eq 80 °C 7 h 55 %

C18: 1,5 eq 80 °C 16 h 25 %

C18 rad: 10 eq 80 °C 5 h 28 % (HPLC)

C18 ins: 4 eq 80 °C 5 h 20 %

Glucosa: 1 eq 80 °C 3 h 30 0,5 %

Z3,OMe Glu C6-OH: 3,25 eq 80 °C 5 h 21 %

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En la tabla 5, "C18 rad" quiere decir compuesto marcado en 14C, "C18 ins" una cadena alifatica C18 que presenta insaturacion/insaturaciones y "Z3,OMe Glu C6-OH" quiere decir una glucosa en la que 3 de los 4 grupos alcohol llevados por los atomos de carbono 1, 2, 3 y 4 estan protegidos, mientras que el grupo alcohol llevado por el atomo de carbono 6 esta libre y reacciona durante la etapa de apertura de anillo en el metodo de acuerdo con la presente invencion.

La adicion nucleofila de alcoholes se produce de forma espontanea en metanol a temperatura ambiente usando el alcohol como disolvente. El producto diprotegido en bruto mostro una reactividad mejor probablemente debido a que la impureza acida cataliza la adicion.

Se incrementa la longitud de la cadena alifatica necesaria para reaccionar calentando hasta 80 °C. El tiempo de reaccion fue de aproximadamente 3 h. El incremento del tiempo de reaccion puede degradar el compuesto deseado para proporcionar compuestos secundarios como compuestos obtenidos por la desproteccion de un grupo protector y la transesterificacion por alcohol en exceso.

Finalmente, los inventores obtuvieron rendimientos de un 45 % para la adicion de alcoholes alifaticos con longitud de cadena comprendida entre 8 y 18 carbonos.

C. Desproteccion de esteres grasos de (Z2)-creatina

La desproteccion de los grupos Z da lugar a la recuperacion de la funcion guanidina, bien conocida por su caracter muy polar.

Se prefirio paladio sobre albumina a paladio sobre carbon vegetal debido a que la recuperacion del producto deseado necesita etapas de lavado del catalizador con menos cantidades de metanol.

Se obtuvo sistematicamente creatinina como subproducto debido a la propension a la ciclacion de estos derivados. Se elimina facilmente la creatinina en columna de fase inversa. La desproteccion de la cadena alifatica corta no fue exitosa debido a que se completo la formacion de creatinina por autociclacion y no se pudo obtener ester de creatina.

Los resultados sobre la desproteccion se presentan en la tabla 6.

Tabla 6

R': Reactivos Condiciones Rendimiento

C1: TMSI, CH3CN 50 °C, 30 min 40 mg/ml Cuantitativo, rendimiento HPLC

C1: MeOH Pd/C 5 % PA, 1 h TA 40 mg/ml 0 % (creatinina)

C1: DCE Pd/C 5 % PA, 4 h TA 40 mg/ml 0 % (creatinina)

C4: DCM Pd/C 5 % PA, 4 h TA 20 mg/ml 7 % (aislado por CL/EM)

C8: CH3CN Pd/Al2O3 5 % PA, 4 h TA 1 mg/ml 0 % (mono)

C8: DCM/MeOH (1/1) Pd/AfeOs 5 % PA, 3 h TA 10 mg/ml 100 % (+44)

C8: ACN/MeOH (1/1) Pd/A^Os 5 % PA, 4 h TA 10 mg/ml 13 %

C9: DCE Pd/C 5 % PA, 3 h TA 10 mg/ml 50 %

C12: CH3CN Pd/Al2O3 5 % PA, 4 h TA 1 mg/ml 0 % (mono)

C12: DCM/MeOH (1/4) Pd/AfeOs 5 % PA, 4 h TA 10 mg/ml 100 % (+44)

C12: DCM/MeOH (1/2) Pd/AfeOs 5 % PA, 4 h TA 10 mg/ml 100 % (+44)

C16: CH3CN Pd/Al2O3 5 % PA, 3 h TA 4 mg/ml 0 % (mono)

C16: DCM/MeOH (1/1) Pd/AfeOs 5 % PA, TA 10 mg/ml 100 %

C18: DCM/MeOH (1/2) Pd/AfeOs 5 % PA, 3 h TA 8 mg/ml 90 %

C18 rad: DCM/MeOH (1/1) Pd/AfeOs 5 % PA, 3 h TA 2 mg/ml 65 %

C18 ins: DCE Pd/C 5 % PA, 2 h TA 20 mg/ml 0 % (analogo saturado)

Glucosa: DCM/MeOH (1/1) Pd/A^O3 5 % PA, 3 h TA 3 mg/ml Disponible pic molecular

Dependiendo del disolvente usado y de la proporcion de DCM/metanol o acetonitrilo, los inventores produjeron la

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forma carbonatada del ester graso de creatina (+44) aislado por cromatografia preparativa CL/EM.

La desproteccion de compuestos insaturados (C18 ins) dio los analogos saturados. Se debe usar el metodo con TMSI/CH3CN para estos compuestos.

En la tabla 6, "0 % (mono)" quiere decir que se obtuvo el ester graso de creatina monoprotegido y que fue necesaria la etapa de desproteccion adicional para preparar la forma desprotegida.

Finalmente, los compuestos preparados eran poco o nada solubles en agua o medio biologico y poco o nada estables en solucion organica. Tuvieron que conservarse en una forma solida y proceder con el protocolo biologico justo antes de su uso.

Este es el motivo por el que los inventores decidieron desarrollar mas esteres hidrofilos por reaccion con glucosa protegida. En dichos compuestos, el resto de glucosa actua como ligando para favorecer el transporte de los derivados de creatina en particular a traves de la BHE.

III. TRANSLOCACION DE ESTERES GRASOS DE CREATINA A TRAVES DEL MODELO DE BHE BASADO EN CELULAS IN VITRO

El modelo de BHE basado en celulas in vitro que se usa para evaluar la permeabilidad de esteres grasos consiste en un cultivo conjunto de celulas gliales y celulas endoteliales cerebrales.

Se anade un tampon de transporte (NaCl 150 mM, KCl 5,2 mM, CaCl2 2,2 mM, MgCl2 0,2 mM, NaHCO3 6 mM, glucosa 2,8 mM y Hepes 5 mM): 1500 pl a la camara basolateral (que representa el parenquima cerebral) y 500 pl a la camara apical (que representa la sangre).

Se introducen los esteres grasos en el compartimento apical. Despues de 60 min, se retiran alicuotas de las camaras apical y basolateral para la determinacion de la concentracion del farmaco. Se calcula el porcentaje de farmaco de la dosificacion inicial que cruzo la BHE como sigue: P (%) = [(Bf x 1500)/(A0 x 500)] x 100 donde Bf es la cantidad de compuestos sometidos a prueba en el compartimento basolateral en el punto final. A0 es la cantidad inicial en el compartimento apical en el punto temporal 0.

Despues de 60 min de incubacion con esteres grasos de creatina, los inventores notaron que los esteres grasos C18 pero no los C2 presentaron una buena permeabilidad a traves de la barrera hematoencefalica.

De hecho, en el caso de ester graso de creatina C18, el nivel intracelular de ester estearoilico de creatina se incremento dentro de las celulas endoteliales cerebrales despues de la incubacion de las celulas con este compuesto (figura 1). De manera notable, este tremendo incremento en el ester estearoilico de creatina coincidio sorprendentemente con la aparicion de un contenido de creatina (aproximadamente 700 nM) dentro de las celulas endoteliales cerebrales asi como en el compartimento basal (aproximadamente 31 nM) (figura 2), lo que sugiere la interaccion potencial de la creatina proporcionada con las celulas (por ejemplo, celulas neuronales) del parenquima cerebral.

En el caso del ester graso de creatina C2, los inventores no encontraron translocacion de este compuesto dentro de las celulas endoteliales cerebrales o en el compartimento basal del modelo de barrera hematoencefalica basado en celulas in vitro. Los inventores no encontraron pruebas de la aparicion de contenido de creatina dentro de las celulas o en el compartimento del parenquima cerebral (figura 3).

Tomados conjuntamente, los presentes hallazgos informan por primera vez de translocacion diferencial en toda la BHE entre esteres grasos de creatina. En resumen, los inventores aportan las primeras pruebas de la utilidad de la estrategia molecular de diseno para conseguir creatina dentro de las celulas endoteliales cerebrales el compartimento del parenquima cerebral despues de la administracion de esteres grasos de creatina. Por tanto, los esteres grasos de creatina pueden representar los candidatos prometedores para el desarrollo de nuevos farmacos utiles en el tratamiento del transportador con carencia de creatina.

Referencias

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[2] Solicitud de patente US 2002/0049253 en nombre de Kaddurah-Daouk y publicada el 25 de abril de 2002.

[3] Solicitud de patente US 2003/0212130 en nombre de Miller et al. y publicada el 13 de noviembre de 2003.

[4] Patente US 6.413.552 en nombre de Stoll y publicada el 2 de julio de 2002.

[5] Articulo de Edgar y Shiver, 1925, "The equilibrium between creatine and creatinine in aqueous solution. The effects of hydrogen ion", J. Amer. Chem. Soc., vol. 47, paginas 1179-1188.

[6] Solicitud de patente CN 1616420 en nombre de XinMao Dacron Chemical General y publicada el 18 de mayo de

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[8] Solicitud de patente CN 1900056 en nombre de Tiangcheng Pharmaceutical Co. Lt. y publicada el 24 de enero de

10 2007.

[9] Solicitud internacional WO 2008/101309 en nombre de Multi Formulations Ltd. y publicada el 28 de agosto de 2008.

15 [10] Solicitud de patente US 2011/0269986 en nombre de Burov et al. y publicada el 3 de noviembre de 2011.

[11] Solicitud de patente US 2008/0200705 en nombre de Chaudhuri et al. y publicada el jueves, 21 de agosto de 2008.

20 [12] Articulo de Gers et al., 2004, "Reagents for efficient conversion of amines to protected guanidines", Synthesis,

vol. 2004, paginas 37-42.

[13] Articulo de Robles et al., 1999, "Towards nucleopeptides containing any trifunctional amino acid", Tetrahedron, vol. 55, paginas 13251-13261.

Claims

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

REIVINDICACIONES

1. Metodo para preparar un ester graso de creatina o derivado del mismo que comprende al menos una etapa que consiste en hacer reaccionar una creatinina diprotegida con una molecula que lleva al menos un grupo funcional alcohol y de formula (I):

R'-OH (I)

en la que R' representa un radical hidrocarburo que contiene al menos 4 atomos de carbono elegido del grupo que consiste en un radical alquilo con 4 a 30 atomos de carbono, un radical alquenilo con 4 a 30 atomos de carbono, un radical arilo con 6 a 30 atomos de carbono y un radical glucosilo opcionalmente sustituido con uno o mas grupos de sustitucion seleccionados de un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo alcoxi, un halogeno, un ciano, un trifluorometilo o un nitro;

en el que un derivado de ester graso de creatina es un ester graso de creatina en el que al menos uno de los atomos de hidrogeno del grupo metilguanidinilo esta sustituido con un grupo de acido carboxilico (-COOH).
2. Metodo de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el radical R' se representa por la siguiente formula (VIII):

-CH2-R'i (VIII)

en la que R'1 es un radical hidrocarburo que contiene al menos 3 atomos de carbono.
3. Metodo de acuerdo con la reivindicacion 1 o 2, en el que dicho metodo comprende las siguientes etapas sucesivas que consisten en:

a) hacer reaccionar creatinina con un agente protector para obtener una creatinina diprotegida;

b) hacer reaccionar la creatinina diprotegida obtenida en la etapa (a) con una molecula que lleva al menos un grupo funcional alcohol y de formula (I) para obtener un ester graso de creatina diprotegido; y

c) desproteger el ester graso de creatina o derivado del mismo diprotegido obtenido en la etapa (b), para obtener dicho ester graso de creatina o derivado del mismo.
4. Metodo de acuerdo con la reivindicacion 3, en el que dicho agente protector es de la formula (XII):

Cl-C(O)-OR4 (XII)

en la que el radical R4 representa un grupo hidrocarburo.
5. Metodo de acuerdo con la reivindicacion 3 o 4, en el que el disolvente en la solucion que contiene creatinina y el agente protector implementado en la etapa (a) es diclorometano (DCM) y de manera notable DCM anhidro.
6. Metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, en el que la solucion que contiene creatinina y el agente protector implementado en la etapa (a) contiene la base de Hunig o N,N-diisopropiletilamina (DIEPA).
7. Metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6, en el que, en la etapa (b), para un equivalente de creatinina diprotegida, la cantidad de molecula que lleva al menos un grupo funcional alcohol y de formula (I) expresada en equivalente esta comprendida entre 1 y 15, de manera notable entre 1 y 10.
8. Metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 7, en el que dicha etapa (b) se lleva a cabo durante de 1 a 20 h, de manera notable durante de 2 a 16 h, y particularmente, durante de 2 a 10 h.
9. Metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 8, en el que dicha etapa (b) se lleva a cabo a una temperatura comprendida entre 60 y 100 °C, de manera notable 70 y 90 °C y, particularmente, alrededor de 80 2C (es decir, 80 °C ± 5 °C).
10. Compuesto que se puede preparar por un metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, teniendo dicho compuesto la formula (III), (IV) o (V):

(NH2)-C(NH)-N(CH3)-CH2-COOR' (III)

(NR2R3)-C(NR1)-N(CH3)-CH2-COOR' (IV)

5

10

15

20

25

30

o

(NH2)-C(N(COOH))-N(CH3)-CH2-COOR'

(V)

en la que:

- los radicales R1, R2 y R3, identicos o diferentes, representan un atomo de hidrogeno o un grupo de acido carboxilico y al menos uno de entre los radicales Ri, R2 y R3 es un grupo de acido carboxilico,

- el radical R' es un radical glucosilo opcionalmente sustituido con uno o mas grupos de sustitucion seleccionados de un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo alcoxi, un halogeno, un ciano, un trifluorometilo o un nitro,

o una sal del mismo.
11. Composicion que comprende al menos un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 10, en un vehiculo aceptable, en la que dicha composicion es un aditivo alimenticio o un complemento nutricional.
12. Composicion farmaceutica, de diagnostico o para tecnicas de imagen que comprende al menos un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 10, en un vehiculo farmaceutico aceptable.
13. Compuesto de acuerdo con la reivindicacion 10 o composicion de acuerdo con la reivindicacion 12 para su uso como medicamento.
14. Compuesto de acuerdo con la reivindicacion 10 o composicion de acuerdo con la reivindicacion 12 para su uso en el tratamiento o prevencion de al menos una enfermedad, trastorno o afeccion seleccionado del grupo que consiste en enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, un trastorno neuromuscular, hipoxia, una encefalopatia isquemica tal como apoplejia, una cardiopatia, una distrofia muscular, un trastorno cutaneo e inflamacion.
15. Compuesto de acuerdo con la reivindicacion 10 o composicion de acuerdo con la reivindicacion 12 para su uso en el tratamiento de la enfermedad del transportador con carencia de creatina en el cerebro.