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ES2566387T3 - Compuestos heterocíclicos condensados de pirid-2-ilo, y composiciones y usos de los mismos - Google Patents

Compuestos heterocíclicos condensados de pirid-2-ilo, y composiciones y usos de los mismos Download PDF

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ES2566387T3
ES2566387T3 ES08727238.1T ES08727238T ES2566387T3 ES 2566387 T3 ES2566387 T3 ES 2566387T3 ES 08727238 T ES08727238 T ES 08727238T ES 2566387 T3 ES2566387 T3 ES 2566387T3
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ES
Spain
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pyridin
unsubstituted
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compound
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Zhi-Liang Wei
John Kincaid
Michael G. Kelly
Donogh O'mahony
Carl Kaub
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Original Assignee
Evotec OAI AG
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Abstract

Un compuesto de acuerdo con la formula Ia:**Fórmula** en la que R1 es heteroarilo sin sustituir o sustituido con uno o más grupos R4; R2 es alquilo o cicloalquilo C1-C6 sustituidos o sin sustituir; R3 es halo, alquilo o cicloalquilo C1-C6 sustituidos o sin sustituir; cada R4 se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en H, alquilo, acilo, acilamino, alquilamino, alquiltio, alcoxi, alcoxicarbonilo, alquilarilamino, arilalquiloxi, amino, arilo, arilalquilo, sulfo, sulfo sustituido, sulfonilo sustituido, sulfinilo sustituido, sulfanilo sustituido, azido, carbamoílo, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, dialquilamino, halo, heteroariloxi, heteroarilo, heteroalquilo, hidroxi, nitro y tiol; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.

Description

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DESCRIPCION
Compuestos heterodclicos condensados de pirid-2-ilo, y composiciones y usos de los mismos Campo
En el presente documento se proporcionan compuestos heterodclicos condensados de la clase tetrahidropirido[4,3- d]pirimidinas y composiciones farmaceuticas que comprenden dichos compuestos. Tambien se proporcionan sus usos en procedimientos para prevenir y/o tratar afecciones en mairnferos, tales como (pero no limitadas a) artritis, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, asma, infarto de miocardio, smdromes dolorosos (agudo y cronico o neuropatico), trastornos neurodegenerativos, esquizofrenia, trastornos cognitivos, ansiedad, depresion, enfermedad inflamatoria intestinal y trastornos autoinmunes, y promover la neuroproteccion.
Antecedentes
Se buscan estrategias terapeuticas para el abordaje eficaz del dolor y los trastornos o enfermedades del sistema nervioso central.
La Solicitud de Patente Internacional, Numero de Publicacion WO 02/08221 desvela compuestos de diarilpiperazina y relacionados que se dice que son utiles en el tratamiento de afecciones con dolor cronico y agudo, del picor y de la incontinencia urinaria.
El documento WO02/053558 describe ciertos derivados de quinazolona como antagonistas del receptor adrenergico alfa 1A/B y ambos documentos WO03/076427 y WO04/041259 describen compuestos de la misma clase para su uso en el tratamiento de la disfuncion sexual femenina. El documento WO04/56774 describe ciertos analogos sustituidos de arilamida del acido bifenil-4-carboxflico que tienen una posible aplicacion como moduladores del receptor. Ademas, el documento WO03/104230 describes ciertos derivados de pirimidina bidclicos y la Solicitud Publicada de los EE.UU. N.° de Serie 20030092908 y el documento WO02/087513 describen inhibidores de la PDE7 heterodclicos condensados.
Las Patentes de los EE.UU. N.° 3.424.760 y 3.424.761 describen ambas una serie de 3-ureidopirrolidinas que se dice que muestran actividades analgesica, psicofarmacologica y sobre el sistema nervioso central. Estas patentes desvelan espedficamente los compuestos 1-(1-fenil-3-pirrolidinil)-3-fenil urea y 1-(1-fenil-3-pirrolidinil)-3-(4- metoxifenil) urea respectivamente. Las Solicitudes de Patente International, Numeros de Publicacion WO 01/62737 y WO 00/69849 desvelan una serie de derivados de pirazol que se indica que son utiles en el tratamiento de trastornos y enfermedades asociadas al receptor de NPY subtipo Y5, tal como la obesidad. El documento WO 01/62737 desvela espedficamente el compuesto 5-amino-N-isoquinolin-5-il-1-[3-(trifluorometil)fenil]-1H-pirazol-3-carboxamida. El documento WO 00/69849 desvela espedficamente los compuestos 5-metil-N-quinolin-8-il-1-[3-(trifluorometil)fenil]- 1H-pirazol-3-carboxamida, 5-metil-N-quinolin-7-il-1-[3-trifluorometil)fenil]-1H-pirazol-3-carboxamida, 5-metil-N- quinolin-3-il-1-[3-(trifluorometil)fenil]-1H-pirazol-3-carboxamida, N-isoquinolin-5-il-5-metil-1-[3-(trifluorometil)fenil]-1H- pirazol-3-carboxamida, 5-metil-N-quinolin-5-il-1-[3-(trifluorometil)fenil]-1H-pirazol-3-carboxamida, 1-(3-clorofenil)-N- isoquinolin-5-il-5-metil-1H-pirazol-3-carboxamida, N-isoquinolin-5-il-1-(3-metoxifenil)-5-metil-1H-pirazol-3-
carboxamida, 1-(3-fuorofenil)-N-isoquinolin-5-il-5-metil-1H-pirazol-3-carboxamida, 1-(2-cloro-5-trifluorometilfenil)-N- isoquinolin-5-il-5-metil-1N-pirazol-3-carboxamida, 5-metil-N-(3-metilisoquinolin-5-il)-1-[3-(trifluorometil)fenil]-1N- pirazol-3-carboxamida, 5-metil-N-(1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-5-il)-1-[3-(trifluorometil)fenil]-1H-pirazol-3-
carboxamida.
La Solicitud de Patente Alemana Numero 2502588 describe una serie de derivados de piperazina. Esta solicitud desvela espedficamente el compuesto N-[3-[2-(dietilamino)etil]-1,2-dihidro-4-metil-2-oxo-7-quinolinil]-4-fenil-1- piperazincarboxamida.
El documento US2006258689 A1 se cita como el estado de la tecnica mas cercano. Desvela tetrahidropirido[4,3- d]pirimidinas, que son representantes estructuralmente cercanos de los compuestos reivindicados en el presente documento, en el contexto del tratamiento o abordaje del dolor y los trastornos del sistema nervioso central en general y el dolor visceral en particular.
Resumen
Se proporcionan en el presente documento compuestos heterodclicos condensados, y composiciones farmaceuticas de los mismos, que tienen potencia y selectividad en la prevencion y tratamiento de afecciones que se han asociado a disfunciones y trastornos neurologicos e inflamatorios.
En particular, los compuestos, composiciones farmaceuticas y procedimientos proporcionados son utiles para tratar, prevenir o mejorar una gama de afecciones en marnfferos tales como, pero no limitadas a, dolor de causas o etiologfa diversas, por ejemplo, dolor agudo, cronico, inflamatorio y neuropatico, dolor dental y cefalea (tal como migrana, cefalea en racimos y cefalea tensional). En algunas realizaciones, los compuestos, composiciones farmaceuticas y procedimientos proporcionados son utiles para el tratamiento del dolor inflamatorio y la hiperalgesia y alodinia asociadas. En algunas realizaciones, los compuestos, composiciones farmaceuticas y procedimientos
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proporcionados son utiles para el tratamiento del dolor neuropatico y la hiperalgesia y alodinia asociadas (por ejemplo, neuralgia del trigemino o herpetica, neuropatia diabetica, causalgia, dolor mantenido simpaticamente y smdromes de desaferenciacion tales como avulsion del plexo braquial). En algunas realizaciones, los compuestos, composiciones farmaceuticas y procedimientos proporcionados son utiles como agentes antiinflamatorios para el tratamiento de la artritis y como agentes para tratar la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Alzheimer, el asma, el infarto de miocardio, los trastornos neurodegenerativos, la enfermedad inflamatoria intestinal y los trastornos autoinmunes, los trastornos renales, la obesidad, los trastornos de la alimentacion, el cancer, la esquizofrenia, la epilepsia, los trastornos del sueno, los trastornos cognitivos, la depresion, la ansiedad, la presion sangumea y los trastornos lipidicos.
En consecuencia, en un aspecto, se proporcionan compuestos heterodclicos condensados que tienen la formula 1a:
imagen1
en la que
R1 es heteroarilo sin sustituir o sustituido con uno o mas grupos R4;
R2 es alquilo o cicloalquilo C1-C6 sustituidos o sin sustituir;
R3 es halo, alquilo o cicloalquilo C1-C6 sustituidos o sin sustituir;
cada R4 se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en H, alquilo, acilo, acilamino, alquilamino, alquiltio, alcoxi, alcoxicarbonilo, alquilarilamino, arilalquiloxi, amino, arilo, arilalquilo, sulfo, sulfo sustituido, sulfonilo sustituido, sulfinilo sustituido, sulfanilo sustituido, azido, carbamoflo, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, dialquilamino, halo, heteroariloxi, heteroarilo, heteroalquilo, hidroxi, nitro y tiol;
o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable de los mismos.
En ciertas realizaciones, con respecto a la formula 1, R3 es Cl, F, Me, Et, i-Pr o ciclopropilo. En realizaciones adicionales, R3 es Cl, F, Me o CF3.
En otro aspecto, se proporcionan compuestos heterodclicos condensados que tienen la formula 2a o 2c:
imagen2
en las que R1, R2 y R4 son como se han descrito para la formula 1 o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable de los mismos.
En ciertas realizaciones, los compuestos de acuerdo con las formulas 1a-2c son enantiomericamente puros. En ciertas realizaciones, se proporcionan composiciones farmaceuticas que comprenden compuestos enantiomericamente puros de acuerdo con las formulas 1a-2c. En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto enantiomericamente puro de acuerdo con las formulas 1a-2c o una composicion farmaceutica que comprende un compuesto enantiomericamente puro de acuerdo con las formulas 1a-2c para su uso en procedimientos de tratamiento.
En consecuencia, en un aspecto, se proporcionan compuestos heterodclicos condensados que tienen la formula 3b, 3c, 3e o 3f:
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imagen3
en las que R2 y R4 son como se han descrito para la formula 1; y R5 es R4; o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable de los mismos.
En ciertas realizaciones, los compuestos de acuerdo con las formulas 3b-3f son enantiomericamente puros. En ciertas realizaciones, se proporcionan composiciones farmaceuticas que comprenden compuestos enantiomeros puros de acuerdo con las formulas 3b-3f. En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto enantiomericamente puro de acuerdo con las formulas 3b-3f o una composicion farmaceutica que comprende un compuesto enantiomericamente puro de acuerdo con las formulas 3b-3f para su uso en procedimientos de tratamiento.
En otro aspecto, se proporcionan composiciones farmaceuticas que comprenden un compuesto heterodclico condensado proporcionado en el presente documento y un vehmulo, excipiente o diluyente farmaceutico. La composicion farmaceutica puede comprender uno o mas de los compuestos heterodclicos condensados descritos en el presente documento.
Se entendera que los compuestos heterodclicos condensados proporcionados en el presente documento utiles en las composiciones farmaceuticas y procedimientos de tratamiento desvelados en el presente documento, pueden ser farmaceuticamente aceptables tal como se preparan y se usan.
En otro aspecto, se proporcionan usos en procedimientos que deben entenderse en el presente documento en adelante como "compuestos para sus usos en procedimientos", para prevenir, tratar o mejorar una afeccion de entre las enumeradas en el presente documento, y en particular, dicha afeccion puede estar asociada a, por ejemplo, la artritis, el asma, el infarto de miocardio, los trastornos lipidicos, los trastornos cognitivos, la ansiedad, la esquizofrenia, la depresion, las disfunciones de la memoria tales como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad inflamatoria intestinal y los trastornos autoinmunes, procedimiento que comprende administrar a un mairnfero que lo necesite una cantidad de uno o mas de los compuestos como se proporcionan en el presente documento, o una composicion farmaceutica de los mismos, eficaz para prevenir, tratar o mejorar la afeccion.
En otro aspecto mas, se proporcionan usos en procedimientos para prevenir, tratar o mejorar una afeccion que da origen a respuestas dolorosas o que se relaciona con desequilibrios en el mantenimiento de la actividad basal de los nervios sensoriales en un marnffero. Los compuestos heterodclicos condensados proporcionados en el presente documento tienen uso como analgesicos para el tratamiento del dolor de causas o etiologfa diversas, por ejemplo el dolor agudo, inflamatorio (tal como el dolor asociado a la osteoartritis y a la artritis reumatoide); diversos smdromes de dolor neuropatico (tal como la neuralgia postherpetica, la neuralgia del trigemino, la distrofia simpatica refleja, la neuropatfa diabetica, el smdrome de Guillian Barre, la fibromialgia, el dolor del miembro fantasma, el dolor postmastectomfa, la neuropatfa periferica, la neuropatfa por VIH y las neuropatfas inducidas por quimioterapia y otras neuropatfas iatrogenicas); dolor visceral (tal como el asociado a la enfermedad por reflujo gastroesofagico, el smdrome del intestino irritable, la enfermedad inflamatoria intestinal, la pancreatitis y diversos trastornos ginecologicos y urologicos), dolor dental y cefalea (tal como la migrana, la cefalea en racimos y la cefalea tensional).
En un aspecto, se proporcionan usos en procedimientos para prevenir, tratar o mejorar una enfermedad o trastorno neurodegenerativo en un mamffero. Una enfermedad o trastorno neurodegenerativo puede ser, por ejemplo, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Alzheimer y la esclerosis multiple; enfermedades y trastornos que dan como resultado o que estan mediados por neuroinflamacion tales como, por ejemplo, la encefalitis; enfermedades y trastornos neuropsiquiatricos de origen central tales como, por ejemplo, mama depresiva, enfermedad bipolar, ansiedad, esquizofrenia, trastornos de la alimentacion, trastornos del sueno y trastornos de la cognicion; epilepsia y trastornos convulsivos; disfuncion de prostata, vejiga e intestino tal como, por ejemplo, incontinencia urinaria, retardo miccional, hipersensibilidad rectal, incontinencia fecal, hipertrofia prostatica benigna y la enfermedad inflamatoria intestinal; enfermedades y trastornos respiratorios y de las vfas respiratorias tales como, por ejemplo, rinitis alergica, asma y enfermedad de las vfas respiratorias reactivas y enfermedad pulmonar obstructiva cronica; enfermedades y trastornos que dan como resultado o estan mediados por inflamacion, tales como, por ejemplo artritis reumatoide y osteoartritis, infarto de miocardio, diversas enfermedades y trastornos autoinmunes; picor/prurito tal como, por ejemplo, psoriasis; obesidad; trastornos lipfdicos; cancer; y trastornos renales. Normalmente, los procedimientos
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comprenden administrar una cantidad eficaz para tratar la afeccion o para prevenir la afeccion de uno o mas de los compuestos como se proporcionan en el presente documento, o una composicion farmaceutica de los mismos, al mairnfero que lo necesite.
Ademas de los usos en procedimientos de tratamiento expuestos anteriormente, la presente invencion se prolonga al uso de cualquiera de los compuestos de la invencion para la preparacion de medicamentos que pueden administrarse para dichos tratamientos.
En aspectos adicionales, se proporcionan procedimientos para sintetizar los compuestos heterodclicos condensados descritos en el presente documento, con protocolos y vfas de smtesis representativos que se describen a continuacion. En ciertas realizaciones, se proporcionan procedimientos de fabricacion de compuestos enantiomericamente puros de acuerdo con la formula 1a mediante smtesis asimetrica. En ciertas realizaciones, se proporcionan procedimientos de fabricacion de compuestos enantiomericamente puros de acuerdo con la formula 1a mediante resolucion quiral.
Otros objetos y ventajas seran evidentes para los expertos en la materia a partir de una consideracion de la descripcion detallada siguiente.
Descripcion detallada de las realizaciones preferidas
Se pretende que los siguiente terminos tengan los significados presentados con ellos a continuacion y son utiles en la comprension de la descripcion y el ambito pretendido de la presente invencion.
Cuando se describen los compuestos, las composiciones farmaceuticas que contienen dichos compuestos y los procedimientos de uso de dichos compuestos y composiciones, los siguientes terminos tienen los siguientes significados a menos que se indique lo contrario. Debe entenderse ademas que los terminos "grupos" y "radicales" pueden considerarse intercambiables cuando se usan en el presente documento.
Los artmulos "un" y "una" pueden usarse en el presente documento para referirse a uno o a mas de uno (es decir, al menos uno) de los objetos gramaticales del artmulo. A modo de ejemplo, "un analogo" significa un analogo o mas de un analogo.
"Acilo" se refiere a un radical -C(O)R20, donde R20 es hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, arilalquilo, heteroalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo como se definen en el presente documento. Los ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, formilo, acetilo, ciclohexilcarbonilo, ciclohexilmetilcarbonilo, benzoflo, bencilcarbonilo y similares.
"Acilamino" se refiere a un radical -NR C(O)R , donde R es hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, arilalquilo, heteroalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo y R22 es hidrogeno, alquilo, alcoxi, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, arilalquilo, heteroalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo, como se definen en el presente documento. Los ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, formilamino, acetilamino, ciclohexilcarbonilamino, ciclohexilmetilcarbonilamino, benzoMamino, bencilcarbonilamino y similares.
"Aciloxi" se refiere al grupo -OC(O)R23 donde R23 es hidrogeno, alquilo, arilo o cicloalquilo.
"Alquenilo sustituido" se refiere a los grupos enumerados en la definicion de "sustituido" en el presente documento y, en particular, se refiere a un grupo alquenilo que tiene 1 o mas sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y en particular de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados entre el grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halogeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril-S(O)2-.
"Alcoxi" se refiere al grupo -OR24 dondeR24 es alquilo. El alcoxi de ejemplo incluye metoxi, etoxi, n-propoxi, i-propoxi, n-butoxi y heptoxi. Son grupos alcoxi particulares los alcoxi inferiores, es decir, con entre 1 y 6 atomos de carbono.
"Alcoxi sustituido" se refiere a los grupos enumerados en la definicion de "sustituido" en el presente documento y, en particular, se refiere a un grupo alcoxi que tiene 1 o mas sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y en particular de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados entre el grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halogeno, heteroarilo, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril- S(O)2-.
"Alcoxicarbonilamino" se refiere al grupo -NR25C(O)OR26, donde R25 es hidrogeno, alquilo, arilo o cicloalquilo y R26 es alquilo o cicloalquilo.
"Alquilo" se refiere a grupos radicales alcano saturados monovalentes en particular que tienen hasta aproximadamente 11 atomos de carbono, mas en particular, de 1 a 8 atomos de carbono y aun mas en particular, de 1 a 6 atomos de carbono. La cadena hidrocarbonada puede ser ya sea de cadena lineal o ramificada. Este termino
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se ejemplifica mediante grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, /so-butilo, ferc-butilo, n-hexilo, n-octilo, ferc-octilo y similares. La expresion "alquilo inferior" se refiere a grupos alquilo que tienen de 1 a 6 atomos de carbono.
"Alquilo sustituido" se refiere a los grupos enumerados en la definicion de "sustituido" en el presente documento y, en particular, se refiere a un grupo alquilo que tiene 1 o mas sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y en particular de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados entre el grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halogeno, hidroxilo, heteroarilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril- S(O)2-.
"Alquileno" se refiere a grupos radicales alqueno saturados divalentes que tienen de 1 a 11 atomos de carbono y mas en particular de 1 a 6 atomos de carbono que pueden ser de cadena lineal o ramificada. Este termino se ejemplifica mediante grupos tales como metileno (-CH2-), etileno (-CH2CH2-), los isomeros de propileno (por ejemplo, -CH2CH2CH2- y -CH(CHa)CH2-) y similares.
"Alquileno sustituido" se refiere a los grupos enumerados en la definicion de "sustituido" en el presente documento y, en particular, se refiere a un grupo alquileno que tiene 1 o mas sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y en particular de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados entre el grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, halogeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril-S(O)2-.
"Alquenilo" se refiere a grupos hidrocarbilo olefrnicamente insaturados monovalentes que tienen preferentemente 2 a 11 atomos de carbono, en particular, de 2 a 8 atomos de carbono, y mas en particular, de 2 a 6 atomos de carbono, que pueden ser de cadena lineal o ramificada y que tienen al menos 1 y en particular de 1 a 2 sitios de insaturacion olefrnica. Los grupos alquenilo particulares incluyen etenilo (-CH=CH2), n-propenilo (-CH2CH=CH2), isopropenilo (- C(CH3)=CH2), vinilo y vinilo sustituido y similares.
"Alquenileno" se refiere a grupos hidrocarbilo olefrnicamente insaturados divalentes en particular que tienen hasta aproximadamente 11 atomos de carbono y mas en particular 2 a 6 atomos de carbono que pueden ser de cadena lineal o ramificada y que tienen al menos 1 y en particular de 1 a 2 sitios de insaturacion olefrnica. Este termino se ejemplifica mediante grupos tales como etenileno (-CH=CH-), los isomeros de propenileno (por ejemplo, - CH=CHCH2- y -C(CH3)=CH- y -CH=C(CH3)-) y similares.
"Alquinilo" se refiere a grupos hidrocarbilo acetilenicamente o alqumicamente insaturados en particular que tienen de 2 a 11 atomos de carbono, y mas en particular 2 a 6 atomos de carbono que pueden ser de cadena lineal o ramificada y que tienen al menos 1 y en particular de 1 a 2 sitios de insaturacion alquinilo. Los ejemplos de grupos alquinilo no limitantes particulares incluyen acetilenico, etinilo (-CECH), propargilo (-CH2CECH) y similares.
"Alquinilo sustituido" se refiere a los grupos enumerados en la definicion de "sustituido" en el presente documento y, en particular, se refiere a un grupo alquinilo que tiene 1 o mas sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y en particular de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados entre el grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halogeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril-S(O)2-.
"AlcanoMo" o "acilo" como se usan en el presente documento, se refieren al grupo R27-C(O)-, donde R27 es hidrogeno o alquilo como se ha definido anteriormente.
"Arilo" se refiere a un grupo hidrocarbonado aromatico monovalente derivado de la retirada de un atomo de hidrogeno de un solo atomo de carbono de un sistema de anillo aromatico parental. Los grupos arilo pueden ser monodclicos o una estructura de anillo condensado bidclica donde al menos uno de los anillos es una estructura de anillo aromatica que contiene en particular 6 atomos de carbono. Los grupos arilo tfpicos incluyen, pero no se limitan a, grupos derivados de aceantrileno, acenaftileno, acefenantrileno, antraceno, azuleno, benceno, criseno, coroneno, fluoranteno, fluoreno, hexaceno, hexafeno, hexaleno, as-indaceno, s-indaceno, indano, indeno, naftaleno, octaceno, octafeno, octaleno, ovaleno, penta 2,4 dieno, pentaceno, pentaleno, pentafeno, perileno, fenaleno, fenantreno, piceno, pleiadeno, pireno, pirantreno, rubiceno, trifenileno, trinaftaleno y similares. En particular, un grupo arilo comprende de 6 a 14 atomos de carbono. En particular, el grupo arilo puede contener 6 atomos de carbono. Los grupos arilo de ejemplo incluyen fenilo e indan-1-ona.
"Arilo sustituido" incluye los grupos enumerados en la definicion de "sustituido" en el presente documento y, en particular, se refiere a un grupo arilo que puede estar opcionalmente sustituido con 1 o mas sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, en particular 1 a 3 sustituyentes, seleccionados entre el grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alquenilo, alquenilo sustituido, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halogeno, hidroxilo, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi
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sustituido, tioariloxi, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril-S(O)2-.
"Arilo condensado" se refiere a un arilo que tiene dos de sus carbonos de anillo en comun con un segundo anillo de arilo o con un anillo alifatico.
"Alcarilo" se refiere a un grupo arilo, como se ha definido anteriormente, sustituido con uno o mas grupos alquilo, como se han definido anteriormente.
"Aralquilo" o "arilalquilo" se refieren a un grupo alquilo, como se ha definido anteriormente, sustituido con uno o mas grupos arilo, como se han definido anteriormente.
"Ariloxi" se refiere a grupos -O-arilo en los que "arilo" es como se ha definido anteriormente.
oq oq oq oq
"Alquilamino" se refiere al grupo alquil-NR R , en el que cada uno de R y R se selecciona independientemente entre hidrogeno y alquilo.
"Arilamino" se refiere al grupo aril-NR R , en el que cada uno de R y R se selecciona independientemente entre hidrogeno, arilo y heteroarilo.
"Alcoxiamino" se refiere a un radical -N(H)OR32 donde R32 representa un grupo alquilo o cicloalquilo como se define en el presente documento.
"Alcoxicarbonilo" se refiere a un radical -C(O)alcoxi donde alcoxi es como se define en el presente documento.
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"Alquilarilamino" se refiere a un radical -NR R donde R representa un grupo alquilo o cicloalquilo grupo y R es un arilo como se define en el presente documento.
"Alquilsulfonilo" se refiere a un radical -S(O)2R35 donde R35 es un grupo alquilo o cicloalquilo como se define en el presente documento. Los ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, metilsulfonilo, etilsulfonilo, propilsulfonilo, butilsulfonilo y similares.
"Alquilsulfinilo" se refiere a un radical -S(O)R35 donde R35 es un grupo alquilo o cicloalquilo como se define en el presente documento. Los ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, metilsulfinilo, etilsulfinilo, propilsulfinilo, butilsulfinilo y similares.
"Alquiltio" se refiere a un radical -SR35 donde R35 es un grupo alquilo o cicloalquilo como se define en el presente documento que puede estar opcionalmente sustituido como se define en el presente documento. Los ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, metiltio, etiltio, propiltio, butiltio y similares.
"Amino" se refiere al radical -NH2.
"Amino sustituido" se refiere a los grupos enumerados en la definicion de "sustituido" en el presente documento y, en particular, se refiere al grupo -N(R36)2 donde cada R36 se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, arilo, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido y donde ambos grupos R se unen para formar un grupo alquileno. Cuando ambos grupos R son hidrogeno, -N(R36)2 es un grupo amino.
"Aminocarbonilo" se refiere al grupo -C(O)NR37R37 donde cada R37 es independientemente hidrogeno, alquilo, arilo y cicloalquilo, o donde los grupos R37 se unen para formar un grupo alquileno.
OQ OQ OQ OQ
"Aminocarbonilamino" se refiere al grupo -NR C(O)NR R donde cada R es independientemente hidrogeno, alquilo, arilo o cicloalquilo, o donde dos grupos R se unen para formar un grupo alquileno.
"Aminocarboniloxi" se refiere al grupo -OC(O)NR R donde cada R es independientemente hidrogeno, alquilo, arilo o cicloalquilo, o donde los grupos R se unen para formar un grupo alquileno.
"Arilalquiloxi" se refiere a un radical -O-arilalquilo donde arilalquilo es como se define en el presente documento.
"Arilamino" significa un radical -NHR40 donde R40 representa un grupo arilo como se define en el presente documento.
"Ariloxicarbonilo" se refiere a un radical -C(O)-O-arilo donde arilo es como se define en el presente documento.
"Arilsulfonilo" se refiere a un radical -S(O)2R41 donde R41 es un grupo arilo o heteroarilo como se define en el presente documento.
"Azido" se refiere al radical -N3.
"Bicicloarilo" se refiere a un grupo hidrocarbonado aromatico monovalente derivado de la retirada de un atomo de hidrogeno de un solo atomo de carbono de un sistema de anillo bicicloaromatico parental. Los grupos bicicloarilo
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tfpicos incluyen, pero no se limitan a, grupos derivados de indano, indeno, naftaleno, tetrahidronaftaleno y similares. En particular, un grupo arilo comprende de 8 a 11 atomos de carbono.
"Bicidoheteroarilo" se refiere a un grupo bicicloheteroaromatico monovalente derivado de la retirada de un atomo de hidrogeno de un solo atomo de un sistema de anillo bicicloheteroaromatico parental. Los grupos bicicloheteroarilo tipicos incluyen, pero no se limitan a, grupos derivados de benzofurano, bencimidazol, bencindazol, benzodioxano, cromeno, cromano, cinolina, ftalazina, indol, indolina, indolizina, isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isoindolina, isoquinolina, benzotiazol, benzoxazol, naftiridina, benzoxadiazol, pteridina, purina, benzopirano, benzopirazina, piridopirimidina, quinazolina, quinolina, quinolizina, quinoxalina, benzomorfano, tetrahidroisoquinolina, tetrahidroquinolina y similares. Preferentemente, el grupo bicicloheteroarilo es un bicicloheteroarilo de entre 9-11 miembros, prefiriendose en particular heteroarilo de 5-10 miembros. Son grupos bicicloheteroarilo particulares los derivados de benzotiofeno, benzofurano, benzotiazol, indol, quinolina, isoquinolina, bencimidazol, benzoxazol y benzodioxano.
"Carbamoflo" se refiere al radical -C(O)N(R42)2 donde cada grupo R42 es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo o arilo, como se definen en el presente documento, que puede estar opcionalmente sustituido como se define en el presente documento. En una realizacion espedfica, el termino "carbamono" se refiere a -C(O)-NH2. En una realizacion alternativa "carbamofl alquilo inferior" significa el radical NH2CO-alquilo inferior-. Los grupos carbamofl alquilo inferiores particulares incluyen carbamofletilo y carbamoflmetilo.
"Carboxi" se refiere al radical -C(O)OH.
"Carboxiamino" se refiere al radical -N(H)C(O)OH.
"Compuestos de la presente invencion", y expresiones equivalentes, pretenden incluir los compuestos como se han descrito anteriormente en el presente documento, en particular los compuestos de acuerdo con cualquiera de las formulas enumeradas y/o descritas en el presente documento, expresion que incluye los profarmacos, las sales farmaceuticamente aceptables y los solvatos, por ejemplo, hidratos, cuando el contexto asf lo permita. De forma similar, la referencia a intermedios, esten ellos mismos reivindicados o no, pretende incluir sus sales, y solvatos, cuando el contexto asf lo permita.
"Cicloalquilalquilo" se refiere a un radical en el que un atomo de hidrogeno de un grupo alquilo esta sustituido por un grupo cicloalquilo. Los grupos cicloalquilalquilo tfpicos incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilmetilo, ciclobutilmetilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilmetilo, cicloheptilmetilo, ciclooctilmetilo, ciclopropiletilo, ciclobutiletilo, ciclopentiletilo, ciclohexiletilo, cicloheptiletilo y ciclooctiletilo y similares.
"Heterocicloalquilalquilo" se refiere a un radical en el que un atomo de hidrogeno de un grupo alquilo esta sustituido por un grupo heterocicloalquilo. Los grupos heterocicloalquilalquilo tfpicos incluyen, pero no se limitan a, pirrolidinilmetilo, piperidinilmetilo, piperazinilmetilo, morfolinilmetilo, pirrolidiniletil, piperidiniletilo, piperaziniletilo, morfoliniletilo y similares.
"Halo" o "halogeno" significan fluoro (F), cloro (Cl), bromo (Br) o yodo (I).
"Hidrogeno" significa, en el contexto de un sustituyente, que -H esta presente en la posicion del compuesto y tambien incluye su isotopo, el deuterio.
"Alcanofl amino inferior" significa un grupo amino con un grupo organico funcional R-CO-, donde R representa un grupo alquilo inferior.
"Alcoxi inferior" significa 1 a 6 atomos de carbono en una cadena alqrnlica lineal que puede ser lineal o ramificada y que esta unida por un atomo de oxfgeno.
"Alquil sulfonamida inferior" se refiere a una alquil amida inferior de sulfonamida de formula -SO2NR*R*, donde R* es hidrogeno o alquilo inferior, y al menos un R* es alquilo inferior.
"Cicloalquilo" se refiere a grupos hidrocarbilo dclicos que tienen de 3 a aproximadamente 10 atomos de carbono y que tienen un solo anillo dclico o multiples anillos condensados, incluyendo sistemas de anillo condensados y unidos, que opcionalmente pueden estar sustituidos con de 1 a 3 grupos alquilo. Dichos grupos cicloalquilo incluyen, a modo de ejemplo, estructuras de anillo sencillas tales como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclooctilo, 1- metilciclopropilo, 2-metilciclopentilo, 2-metilciclooctilo, y similares, y estructuras de anillos multiples tales como adamantilo y similares. Los grupos cicloalquilo particulares tienen entre 4 y 7 miembros de anillo de carbono, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo.
"Cicloalquilo sustituido" incluye los grupos enumerados en la definicion de "sustituido" en el presente documento y, en particular, se refiere a un grupo cicloalquilo que tiene 1 o mas sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes y, en particular, de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados entre el grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halogeno, hidroxilo, ceto,
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nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril-S(O)2-.
"Cicloalcoxi" se refiere al grupo -OR43 donde R43 es cicloalquilo. Dichos grupos cicloalcoxi incluyen, a modo de ejemplo, ciclopentoxi, ciclohexoxi y similares.
"Cicloalquenilo" se refiere a grupos hidrocarbilo dclicos que tienen de 3 a 10 atomos de carbono y que tienen un solo anillo ciclico o multiples anillos condensados, incluyendo sistemas de anillo condensados y unidos y que tiene al menos uno y en particular de 1 a 2 sitios de insaturacion olefmica. Dichos grupos cicloalquenilo incluyen, a modo de ejemplo, estructuras de anillo sencillas tales como ciclohexenilo, ciclopentenilo, ciclopropenilo y similares.
"Cicloalquenilo sustituido" se refiere a los grupos enumerados en la definicion de "sustituido" en el presente documento y, en particular, se refiere a un grupo cicloalquenilo que tiene 1 o mas sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes y, en particular, de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados entre el grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halogeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil- S(O)2- y aril-S(O)2-.
"Cicloalquenilo condensado" se refiere a un cicloalquenilo que tiene dos de sus atomos de carbono de anillo en comun con un segundo anillo alifatico o aromatico y que tiene su insaturacion olefmica situada para transmitir aromaticidad al anillo cicloalquenilo.
"Cianato" se refiere al radical -OCN.
"Ciano" se refiere al radical -CN.
"Dialquilamino" significa un radical -NR44R45 donde R44 y R45 representan independientemente un alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloheteroalquilo, cicloheteroalquilo sustituido, heteroarilo o grupo heteroarilo sustituido como se definen en el presente documento.
"Etenilo" se refiere a -(C=C)- sustituido o sin sustituir.
"Etileno" se refiere a -(C-C)- sustituido o sin sustituir.
"Etinilo" se refiere a -(CeC)-.
"Halo" o "halogeno" se refiere a fluoro, cloro, bromo y yodo. Son grupos halo preferidos ya sea fluoro o cloro.
"Hidroxi" se refiere al radical -OH.
"Nitro" se refiere al radical -NO2.
"Sustituido" se refiere a un grupo en el que uno o mas atomos de hidrogeno estan cada uno independientemente reemplazados por un sustituyente o sustituyentes iguales o diferentes. Los sustituyentes tfpicos incluyen, pero no se limitan a, -X, -R46, -O', =O, -OR46, -SR46, -S', =S, -NR46R47, =NR46, -CX3, -CF3, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, =N2, - N3, -S(O)2O', -S(O)2OH, -S(O]2R46, -OS(O2)O', -OS(O)2R46, -P(O)(O')2, -P(O)(OR46)(O'), -OP(O)(OR46)(OR47), - C(O)R46, -C(S)R46, -C(O)OR46, -C(O)NR46R47, -C(O)O-, -C(S)OR46, -NR48C(O)NR46R47, -NR48C(S)NR46R47, - NR49C(NR48)nR46R47 y -C(NR48)NR46R47, donde cada X es independientemente un halogeno; cada R46, R47, R48 y R49 son independientemente hidrogeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, alquilo sustituido, cicloheteroalquilo, cicloheteroalquilo sustituido, heteroalquilo, heteroalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo, heteroarilalquilo sustituido, -NR50R51, -C(O)R50 * o -S(O)2R50 u, opcionalmente, R50 y R51 junto con el atomo al que estan unidos los dos forman un cicloheteroalquilo o un anillo de cicloheteroalquilo sustituido; y R50 y R51 son independientemente hidrogeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, alquilo sustituido, arilalquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, alquilo sustituido, cicloheteroalquilo, cicloheteroalquilo sustituido, heteroalquilo, heteroalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo o heteroarilalquilo sustituido.
Los ejemplos de arilos sustituidos representativos incluyen los siguientes
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En estas formulas uno de R y R puede ser hidrogeno y al menos uno de R y R se selecciona cada uno
independientemente entre alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloheteroalquilo, alcanoflo, alcoxi, ariloxi, heteroariloxi,
alquilamino, arilamino, heteroarilamino, NR54COR55 *, NR54SOR55, NR54SO2R57, COO-alquilo, COO-arilo, CONR54R55,
CONR54OR55, NR54R55, SO2NR54R55, S-alquilo, S-alquilo, SO-alquilo, SO2-alquilo, S-arilo, SO-arilo, SO2-arilo; o R52 y
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R53 pueden estar unidos para formar un anillo dclico (saturado o insaturado) de 5 a 8 atomos, que contiene opcionalmente uno o mas heteroatomos seleccionados entre el grupo N, O o S. R54, R55 y R56 son independientemente hidrogeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, perfluoroalquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, alquilo sustituido o heteroalquilo o similares.
"Hetero" cuando se usa para describir un compuesto o un grupo presente en un compuesto significa que uno o mas atomos de carbono en el compuesto o grupo se han reemplazado por un heteroatomo de nitrogeno, oxigeno o azufre. Hetero puede aplicarse a cualquiera de los grupos hidrocarbilo descritos anteriormente tales como alquilo, por ejemplo heteroalquilo, cicloalquilo, por ejemplo heterocicloalquilo, arilo, por ejemplo heteroarilo, cicloalquenilo, heterocicloalquenilo y similares que tienen de 1 a 5 y, especialmente, de 1 a 3 heteroatomos.
"Heteroarilo" se refiere a un grupo heteroaromatico monovalente derivado de la retirada de un atomo de hidrogeno de un solo atomo de un sistema de anillo heteroaromatico parental. El grupo heteroarilo puede ser un grupo monodclico (en cuyo caso sera normalmente un anillo de 5 a 7 miembros, mas normalmente de 5 o 6 miembros), como alternativa, el grupo heteroarilo puede ser un grupo bicicloheteroarilo, en particular, un sistema de anillo condensado que comprende 2 anillos condensados de 5 miembros, un anillo condensado de 5 y 6 miembros o dos anillos condensados de 6 miembros, donde el grupo heteroarilo comprende anillos condensados, al menos uno de dichos anillos debe contener un heteroatomo y al menos uno de dichos anillos debe ser aromatico (ambos requisitos pueden o no cumplirse en el mismo anillo). El grupo heteroarilo puede ser, por ejemplo, un anillo monodclico de cinco o seis miembros que puede contener hasta aproximadamente cuatro heteroatomos normalmente seleccionados entre nitrogeno, azufre y oxigeno. Normalmente, el anillo de heteroarilo contendra hasta 4 heteroatomos, mas normalmente hasta 3 heteroatomos, mas por lo general hasta 2, por ejemplo un unico heteroatomo. En una realizacion, el anillo de heteroarilo contiene al menos un atomo de nitrogeno de anillo. Los atomos de nitrogeno en los anillos de heteroarilo pueden ser basicos, como en el caso de un imidazol o piridina, o esencialmente no basico como en el caso de un nitrogeno de indol o pirrol. En general, el numero de atomos de nitrogeno basicos presentes en el grupo heteroarilo, incluyendo cualesquier sustituyentes de grupo amino del anillo, sera inferior a cinco. Los grupos heteroarilo tipicos incluyen, pero no se limitan a, grupos derivados de acridina, arsindol, carbazol, p-carbolina, cromano, cromeno, cinolina, furano, imidazol, indazol, indol, indolina, indolizina, isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isoindolina, isoquinolina, isotiazol, isoxazol, naftiridina, oxadiazol, oxazol, perimidina, fenantridina, fenantrolina, fenazina, ftalazina, pteridina, purina, pirano, pirazina, pirazol, piridazina, piridina, pirimidina, pirrol, pirrolizina, quinazolina, quinolina, quinolizina, quinoxalina, tetrazol, tiadiazol, tiazol, tiofeno, triazol, xanteno y similares. En particular, el grupo heteroarilo es un heteroarilo de entre 5-15 miembros, siendo grupos particulares los heteroarilos de 5-10 miembros. Son grupos heteroarilo particulares los derivados de tiofeno, pirrol, benzotiofeno, benzofurano, indol, piridina, quinolina, imidazol, oxazol y pirazina. En particular, los ejemplos de grupos heteroarilo de cinco miembros incluyen, pero no se limitan a grupos pirrol, furano, tiofeno, imidazol, furazano, oxazol, oxadiazol, oxatriazol, isoxazol, tiazol, isotiazol, pirazol, triazol y tetrazol. En particular, los ejemplos de grupos heteroarilo de seis miembros incluyen, pero no se limitan a piridina, pirazina, piridazina, pirimidina y triazina.
Los ejemplos de heteroarilos representativos incluyen los siguientes:
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en los que cada Y se selecciona entre carbonilo, N, NR58, O y S; y R58 es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, heteroarilo, heteroalquilo o similares.
Como se usa en el presente documento, el termino "cicloheteroalquilo" se refiere a un anillo no aromatico heterodclico estable y a anillos condensados que contienen uno o mas heteroatomos seleccionados independientemente entre N, O y S. Un sistema de anillo heterodclico condensado puede incluir anillos carbodclicos y necesita incluir solo un anillo heterodclico. Los ejemplos de anillos heterodclicos incluyen, pero no se limitan a, piperazinilo, homopiperazinilo, piperidinilo y morfolinilo, y se muestran en los siguientes ejemplos ilustrativos:
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en los que cada X se selecciona entre CR58, CR582, NR58, O y S; y cada Y se selecciona entre NR58, O y S; y R58 es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, heteroarilo, heteroalquilo o similares. 5 Estos anillos de cicloheteroalquilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o mas grupos seleccionados entre el grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halogeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril-S(O)2-. Los grupos sustituyentes incluyen carbonilo o tiocarbonilo que 10 proporcionan, por ejemplo, derivados de lactama y de urea.
Los ejemplos de cicloheteroalquenilos representativos incluyen los siguientes:
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CO CO CO CO
en los que cada X se selecciona entre CR , CR 2, NR , O y S; y cada Y se selecciona entre carbonilo, N, NR , O 15 y S; y R58 es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, heteroarilo, heteroalquilo o similares.
Los ejemplos de arilo representativos que tienen heteroatomos que contienen una sustitucion incluyen los siguientes:
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CO CO CO CO
20 en los que cada X se selecciona entre CR , CR 2, NR , Oy S; y cada Y se selecciona entre carbonilo, NR , O y S; y R58 es independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, heteroarilo, heteroalquilo o similares.
"Hetero sustituyente" se refiere a un grupo funcional que contiene un atomo de halo, O, S o N que puede estar presente como un R4 en un grupo R4C presente como sustituyente directamente en un atomo de anillo de los 25 compuestos proporcionados en el presente documento o puede estar presente como un sustituyente en los grupos arilo y alifaticos "sustituidos" presentes en los compuestos.
Los ejemplos de hetero sustituyentes incluyen:
halo,
NO2, -NH2, -NHR59, -N(R59)2,
NRCOR, -NR59SOR59, -NR59SO2R59, OH, CN,
CO2H,
R59-OH,-O-R59, -COOR59,
CON(R59)2, -CONROR59,
SO3H, -R59-S, -SO2N(R59)2,
S(O)R59, -S(O)2R59
en los que cada R59 es independientemente un grupo arilo o alifatico, opcionalmente con sustitucion. Entre los hetero sustituyentes que contienen grupos R59, se da preferencia a los materiales que tienen grupos arilo y alquilo R59 como se definen en el presente documento. Son hetero sustituyentes preferidos los enumerados anteriormente.
Grupo "donador de enlace de hidrogeno" se refiere a un grupo que contiene un grupo funcional O-H o N-H. Los 40 ejemplos de grupos "donadores de enlace de hidrogeno" incluyen -OH, -NH2 y -NH-R59a y en el que R59a es alquilo, acilo, cicloalquilo, arilo o heteroarilo.
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"Dihidroxifosforilo" se refiere al radical -PO(OH)2.
"Dihidroxifosforilo sustituido" se refiere a los grupos enumerados en la definicion de "sustituido" en el presente documento y, en particular, se refiere a un radical dihidroxifosforilo en el que uno o los dos grupos hidroxilo estan sustituidos. Se describen sustituyentes adecuados en detalle a continuacion.
"Aminohidroxifosforilo" se refiere al radical -PO(OH)NH2.
"Aminohidroxifosforilo sustituido" se refiere a los grupos enumerados en la definicion de "sustituido" en el presente documento y, en particular, se refiere a un aminohidroxifosforilo en el que el amino grupo esta sustituido con uno o dos sustituyentes. Se describen sustituyentes adecuados en detalle a continuacion. En ciertas realizaciones, el grupo hidroxilo tambien puede estar sustituido.
Grupo "heterocicloalquilo que contiene nitrogeno" significa un grupo dclico no aromatico de 4-7 miembros que contiene al menos un atomo de nitrogeno, por ejemplo, pero sin limitacion, morfolina, piperidina (por ejemplo, 2- piperidinilo, 3-piperidinilo y 4-piperidinilo), pirrolidina (por ejemplo, 2-pirrolidinilo y 3-pirrolidinilo), azetidina, pirrolidona, imidazolina, imidazolidinona, 2-pirazolina, pirazolidina, piperazina y N-alquil piperazinas tales como N- metil piperazina. Los ejemplos particulares incluyen azetidina, piperidona y piperazona.
"Tioalcoxi" se refiere al grupo -SR60 donde R60 es alquilo.
"Tioalcoxi sustituido" se refiere a los grupos enumerados en la definicion de "sustituido" en el presente documento y, en particular, se refiere a un grupo tioalcoxi que tiene 1 o mas sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes y, en particular, de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados entre el grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halogeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril-S(O)2-.
"Sulfanilo" se refiere al radical HS-. "Sulfanilo sustituido" se refiere a un radical tal como RS- en el que R es cualquier sustituyente descrito en el presente documento. En particular, R es alquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir o heteroarilo sustituido o sin sustituir.
"Sulfinilo" se refiere al radical divalente -S(O)-. "Sulfinilo sustituido" se refiere a un radical tal como -SOR61a, en el
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que R es cualquier sustituyente descrito en el presente documento. En particular, R es alquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir o heteroarilo sustituido o sin sustituir.
"Aminosulfonilo" o "sulfonamida" se refieren al radical H2N(O2)S-, y "aminosulfonilo sustituido" "sulfonamida sustituida" se refieren a un radical tal como R622N(O2)S- en el que cada R62 es independientemente cualquier sustituyente descrito en el presente documento.
"Sulfonilo" se refiere al radical divalente -S(O2)-. "Sulfonilo sustituido" se refiere a un radical tal como -S(O2)R61, en el 61 61
que R es cualquier sustituyente descrito en el presente documento. En particular, R es alquilo sustituido o sin
sustituir o arilo sustituido o sin sustituir.
"Aminosulfonilo" o "sulfonamida" se refieren al radical H2N(O2)S-, y "aminosulfonilo sustituido" "sulfonamida sustituida" se refieren a un radical tal como R622N(O2)S- en el que cada R62 es independientemente cualquier sustituyente descrito en el presente documento.
"Sulfonamida" se refiere a un grupo de compuestos que contienen el grupo qmmico -SO2NH2.
"Sulfona" se refiere al grupo -SO2R63. En realizaciones particulares, R63 se selecciona entre alquilo inferior, alquilo, arilo y heteroarilo.
"Sulfo" o "acido sulfonico" se refieren a un radical tal como -SO3H.
"Sulfo sustituido" o "ester del acido sulfonico" se refieren a un radical tal como -SO3R61b en el que R61b es alquilo sustituido o sin sustituir o arilo sustituido o sin sustituir.
"Tioariloxi" se refiere al grupo -SR64 donde R64 es arilo.
"Tioceto" se refiere al grupo =S.
"Tiol" se refiere al grupo -SH.
Un experto habitual en la tecnica de la smtesis organica reconocera que el numero maximo de heteroatomos en un anillo heterodclico estable, qmmicamente factible, ya sea aromatico o no aromatico, se determina por el tamano del anillo, el grado de insaturacion y la Valencia de los heteroatomos. En general, un anillo heterodclico puede tener de uno a cuatro heteroatomos, siempre que el anillo heteroaromatico sea qmmicamente factible y estable.
"Farmaceuticamente aceptable" significa aprobado por una agencia reguladora del gobierno Federal o un gobierno
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estatal, o enumerado en la Farmacopea de los EE.UU. u otra farmacopea reconocida en general para su uso en animales y mas en particular en seres humanos.
"Vetuculo farmaceuticamente aceptable" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o vetnculo con el que se administra un compuesto de la invencion.
"Sal farmaceuticamente aceptable" se refiere a las sales de adicion de acido y sales de adicion de base inorganicas y organicas, atoxicas, de los compuestos de la presente invencion, en particular, son farmaceuticamente aceptables y poseen la actividad farmacologica deseada del compuesto parental. Estas sales pueden prepararse in situ durante el aislamiento y purificacion finales de los compuestos utiles en la presente invencion. Dichas sales incluyen: (1) sales de adicion de acido, formadas con acidos inorganicos tales como acido clortudrico, acido bromtudrico, acido sulfurico, acido nftrico, acido fosforico y similares; o formadas con acidos organicos tales como acido acetico, acido propionico, acido hexanoico, acido ciclopentanopropionico, acido glicolico, acido piruvico, acido lactico, acido malonico, acido succmico, acido malico, acido maleico, acido fumarico, acido tartarico, acido dtrico, acido benzoico, acido 3-(4-hidroxibenzoil)benzoico, acido cinamico, acido mandelico, acido metanosulfonico, acido etanosulfonico, acido 1,2-etano-disulfonico, acido 2-hidroxietanosulfonico, acido bencenosulfonico, acido 4-clorobencenosulfonico, acido 2-naftalenosulfonico, acido 4-toluenosulfonico, acido canforsulfonico, acido 4-metilbiciclo[2.2.2]-oct-2-eno-1- carbox^lico, acido glucoheptonico, acido 3-fenilpropionico, acido trimetilacetico, acido butilacetico terciario, acido lauril sulfurico, acido gluconico, acido glutamico, acido hidroxinaftoico, acido salidlico, acido estearico, acido muconico y similares; o (2) sales formadas cuando un proton acido presente en el compuesto parental se reemplaza por un ion metalico, por ejemplo, un ion de metal alcalino, un ion alcalinoterreo o un ion de aluminio; o se coordina con una base organica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, N-metilglucamina y similares. Las sales incluyen adicionalmente, a modo de ejemplo solamente, sodio, potasio, calcio, magnesio, amonio, tetraalquilamonio y similares; y cuando el compuesto contiene un grupo funcional basico, sales de acidos organicos o inorganicos atoxicos, tales como clorhidrato, bromhidrato, tartrato, mesilato, acetato, maleato, oxalato y similares. La expresion "cation farmaceuticamente aceptable" se refiere a un contraion cationico aceptable atoxico de un grupo funcional acido. Dichos cationes se ejemplifican mediante cationes de sodio, potasio, calcio, magnesio, amonio, tetraalquilamonio y similares.
"Solvato" significa una asociacion ffsica de un compuesto util en la presente invencion con una o mas moleculas de disolvente. Esta asociacion ffsica incluye los enlaces de hidrogeno. En ciertos casos, el solvato sera susceptible de aislamiento, por ejemplo cuando una o mas moleculas de disolvente se incorporan en la red cristalina del solido cristalino. "Solvato" abarca tanto la fase de solucion como los solvatos aislables. Los compuestos de la invencion pueden prepararse por ejemplo en forma cristalina y pueden estar solvatados o hidratados. Los solvatos adecuados incluyen los solvatos farmaceuticamente aceptables, tales como hidratos, y ademas incluyen tanto los solvatos estequiometricos como los solvatos no estequiometricos. Los disolventes convencionales incluyen agua, etanol, acido acetico y similares, por tanto, los solvatos representativos incluyen hidratos, etanolatos y metanolatos.
"Sujeto" se refiere a seres humanos y a marnfferos no humanos. En ciertas realizaciones, un sujeto es un ser humano. Los terminos "humano", "paciente" y "sujeto" se utilizan indistintamente en el presente documento.
"Cantidad terapeuticamente eficaz" significa la cantidad de un compuesto que, cuando se administra a un sujeto para tratar una enfermedad, es suficiente para efectuar dicho tratamiento para la enfermedad. La "cantidad terapeuticamente eficaz" puede variar dependiendo del compuesto, la enfermedad y su gravedad, y la edad, peso, etc., del sujeto que se trata.
Tambien se ha de entender que los compuestos que tienen la misma formula molecular pero difieren en la naturaleza o secuencia de union de sus atomos o la disposicion de sus atomos en el espacio se denominan "isomeros". Los isomeros que difieren en la disposicion de sus atomos en el espacio se denominan "estereoisomeros".
Los estereoisomeros que no son imagenes especulares uno de otro se denominan "diastereoisomeros" y los que son imagenes especulares no superponibles entre sf se denominan "enantiomeros". Cuando un compuesto tiene un centro asimetrico, por ejemplo, esta unido a cuatro grupos diferentes, es posible un par de enantiomeros. Un enantiomero puede caracterizarse mediante la configuracion absoluta de su centro asimetrico y se describe mediante las reglas de secuenciacion de R y S de Cahn y Prelog, o mediante la manera en la que la molecula rota el plano de luz polarizada, y se senala como dextrogiro o levogiro (es decir, como isomeros (+) o (-) respectivamente). Un compuesto quiral puede existir ya sea como enantiomero individual o como una mezcla de los mismos. Una mezcla que contiene proporciones iguales de los enantiomeros se llama "mezcla racemica".
Como se usa en el presente documento un compuesto enantiomerico puro esta sustancialmente libre de otros enantiomeros o estereoisomeros del compuesto (es decir, en exceso enantiomerico). En otras palabras, una forma "S" del compuesto esta sustancialmente libre de la forma "R" del compuesto y esta, por tanto, en exceso enantiomerico de la forma "R". La expresion "enantiomericamente puro" o "enantiomero puro" representa que el compuesto comprende mas del 75 % en peso, mas del 80 % en peso, mas del 85 % en peso, mas del 90 % en peso, mas del 91 % en peso, mas del 92 % en peso, mas del 93 % en peso, mas del 94 % en peso, mas del 95 % en peso, mas del 96 % en peso, mas del 97 % en peso, mas del 98 % en peso, mas del 98,5 % en peso, mas del
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99 % en peso, mas del 99,2 % en peso, mas del 99,5 % en peso, mas del 99,6 % en peso, mas del 99,7 % en peso, mas del 99,8 % en peso o mas del 99,9 % en peso, del enantiomero. En ciertas realizaciones, los pesos se basan en el peso total de todos los enantiomeros o estereoisomeros del compuesto.
Como se usa en el presente documento y a menos que se indique lo contrario, la expresion "compuesto R enantiomericamente puro" se refiere a al menos aproximadamente el 80 % en peso de compuesto R y como maximo aproximadamente el 20 % en peso de compuesto S, al menos aproximadamente el 90 % en peso de compuesto R y como maximo aproximadamente el 10 % en peso de compuesto S, al menos aproximadamente el 95 % en peso de compuesto R y como maximo aproximadamente el 5 % en peso de compuesto S, al menos aproximadamente el 99 % en peso de compuesto R y como maximo aproximadamente el 1 % en peso de compuesto S, al menos aproximadamente el 99,9% en peso de compuesto R o como maximo aproximadamente el 0,1 % en peso de compuesto S. En ciertas realizaciones, los pesos se basan en el peso total del compuesto.
Como se usa en el presente documento y a menos que se indique lo contrario, la expresion "compuesto S enantiomericamente puro" o "compuesto S" se refiere a al menos aproximadamente el 80 % en peso de compuesto S y como maximo aproximadamente el 20 % en peso de compuesto R, al menos aproximadamente el 90 % en peso de compuesto S y como maximo aproximadamente el 10 % en peso de compuesto R, al menos aproximadamente el 95 % en peso de compuesto S y como maximo aproximadamente el 5 % en peso de compuesto R, al menos aproximadamente el 99 % en peso de compuesto S y como maximo aproximadamente el 1 % en peso de compuesto R o al menos aproximadamente el 99,9 % en peso de compuesto S y como maximo aproximadamente el 0,1 % en peso de compuesto R. En ciertas realizaciones, los pesos se basan en el peso total del compuesto.
En las composiciones proporcionadas en el presente documento, un compuesto enantiomericamente puro o una sal, solvato, hidrato o profarmaco farmaceuticamente aceptables del mismo pueden estar presentes con otros principios activos o inactivos. Por ejemplo, una composicion farmaceutica que comprende el compuesto R enantiomericamente puro puede comprender, por ejemplo, aproximadamente el 90% de excipiente y aproximadamente el 10% de compuesto R enantiomericamente puro. En ciertas realizaciones, el compuesto R enantiomericamente puro en dichas composiciones puede, por ejemplo, comprender, al menos aproximadamente el 95 % en peso de compuesto R y como maximo aproximadamente el 5 % en peso de compuesto S, en peso total del compuesto. Por ejemplo, una composicion farmaceutica que comprende compuesto S enantiomericamente puro puede comprender, por ejemplo, aproximadamente el 90 % de excipiente y aproximadamente el 10 % de compuesto S enantiomericamente puro. En ciertas realizaciones, el compuesto S enantiomericamente puro en dichas composiciones puede, por ejemplo, comprender, al menos aproximadamente el 95 % en peso de compuesto S y como maximo aproximadamente el 5 % en peso de compuesto R, en peso total del compuesto. En ciertas realizaciones, el principio activo puede formularse con poco o nada de excipiente o vehmulo.
Los compuestos de la presente invencion pueden poseer uno o mas centros asimetricos; por tanto, dichos compuestos pueden producirse como estereoisomeros (R) o (S) o como mezclas de los mismos. A menos que se indique lo contrario, se pretende que la descripcion o denominacion de un compuesto particular en la memoria descriptiva y las reivindicaciones incluya tanto los enantiomeros individuales como las mezclas, racemicas u otras, de los mismos. Los procedimientos para la determinacion de la estereoqmmica y la separacion de estereoisomeros son bien conocidos en la tecnica.
"Profilaxis" significa una medida tomada para la prevencion de una enfermedad.
"Prevenir" o "prevencion" se refieren a una reduccion en el riesgo de adquirir una enfermedad o trastorno (es decir, provocando que al menos uno de los smtomas clmicos de la enfermedad no se desarrolle en un sujeto que puede estar expuesto o predispuesto a la enfermedad pero que todavfa no experimenta o muestra smtomas de la enfermedad).
"Tratar" o "tratamiento" de cualquier enfermedad o trastorno se refieren, en una realizacion, a mejorar la enfermedad o trastorno (es decir, detener o reducir el desarrollo de la enfermedad o al menos uno de los smtomas clmicos de la misma). En otra realizacion "tratar" o "tratamiento" se refieren a mejorar al menos un parametro ffsico, que puede no ser discernible por el sujeto. En otra realizacion mas, "tratar" o "tratamiento" se refieren a la modulacion de la enfermedad o trastorno, ya sea ffsicamente, (por ejemplo, estabilizacion de un smtoma discernible), fisiologicamente, (por ejemplo, estabilizacion de un parametro ffsico) o ambos. En otra realizacion mas, "tratar" o "tratamiento" se refieren a retrasar el comienzo de la enfermedad o trastorno.
LOS COMPUESTOS
En ciertos aspectos, en el presente documento se proporcionan compuestos heterodclicos condensados utiles para prevenir y/o tratar una amplia gama de afecciones, entre ellas, la artritis, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Alzheimer, el ictus, la uveitis, el asma, el infarto de miocardio, el tratamiento y profilaxis de los smdromes dolorosos (agudo y cronico o neuropatico), el traumatismo craneoencefalico, la lesion medular aguda, los trastornos neurodegenerativos, la alopecia (perdida de cabello), la enfermedad inflamatoria intestinal y los trastornos o afecciones autoinmunes en mairnferos.
En un aspecto, en el presente documento se proporcionan compuestos heterodclicos condensados de acuerdo con
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la formula 1a:
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en la que
R es heteroarilo sin sustituir o sustituido con uno o mas grupos R ;
R2 es alquilo o cicloalquilo C1-C6 sustituidos o sin sustituir;
R3 es halo, alquilo o cicloalquilo C1-C6 sustituidos o sin sustituir;
cada R4 se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en H, alquilo, acilo, acilamino, alquilamino, alquiltio, alcoxi, alcoxicarbonilo, alquilarilamino, arilalquiloxi, amino, arilo, arilalquilo, sulfo, sulfo sustituido, sulfonilo sustituido, sulfinilo sustituido, sulfanilo sustituido, azido, carbamoflo, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, dialquilamino, halo, heteroariloxi, heteroarilo, heteroalquilo, hidroxi, nitro y tiol; o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable de los mismos.
En otro aspecto, en el presente documento se proporcionan compuestos heterodclicos condensados de acuerdo con la formula 2a o 2c:
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en las que
R1, R2 y R4 son como se han descrito para la formula 1a; o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable de los mismos.
En ciertas realizaciones, el compuesto es de acuerdo con la formula 1a, 2a o 2c.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 1a, 2a o 2c R2 es alquilo o cicloalquilo C1-C6 sustituidos o sin sustituir; y los compuestos son enantiomericamente puros. En ciertas realizaciones, se proporcionan composiciones farmaceuticas que comprenden compuestos enantiomericamente puros de acuerdo con la formula 1a, 2a o 2c. En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto enantiomericamente puro de acuerdo con la formula 1a, 2a o 2c o una composicion farmaceutica que comprende un compuesto enantiomericamente puro de acuerdo con la formula 1a, 2a o 2c para su uso en procedimientos de tratamiento.
En algunas realizaciones, con respecto a las formulas 1-2c, R1 se selecciona entre
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sustituidos o sin sustituir.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 1-2c, R1 se selecciona entre
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sustituidos o sin sustituir.
En algunas realizaciones, con respecto a las formulas 1-2c, R1 se selecciona entre bicicloheteroarilo sustituido o sin sustituir.
En algunas realizaciones, con respecto a las formulas 1-2c, R1 se selecciona entre quinolinilo, isoquinolinilo, metilendioxifenilo, imidazopiridilo, benzoxazolilo e indolilo sustituidos o sin sustituir.
En ciertas realizaciones, R1 es un grupo piridilo o pirimidina sustituido.
En algunas realizaciones, con respecto a las formulas 1-2c, R1 es un piridilo sustituido.
En algunas realizaciones, con respecto a las formulas 1-2c, R1 es un pirid-3-ilo sustituido. En ciertas realizaciones, el R1 pirid-3-ilo esta disustituido. En realizaciones preferidas, el R1 pirid-3-ilo esta monosustituido.
En algunas realizaciones, con respecto a las formulas 1-2c, el sustituyente en el R1 pirid-3-ilo se selecciona entre halo, amido, alquilo, alcoxi, sulfonilo, sulfonamidilo, haloalquilo y trihaloalquilo.
En realizaciones preferidas, la sustitucion en el R1 pirid-3-ilo se selecciona entre Cl, F, CF3, Me, OMe, SO2R2, NR2R2 y SO2NR2R2. En realizaciones mas preferidas, la sustitucion en el R1 pirid-3-ilo se selecciona entre Cl, Me y SO2Me.
En algunas realizaciones, con respecto a las formulas 1-2c, R1 es un pirimidin-5-ilo sustituido. En ciertas realizaciones, el R1 pirimidin-5-ilo esta disustituido. En realizaciones preferidas, el R1 pirimidin-5-ilo esta monosustituido.
En algunas realizaciones, con respecto a las formulas 1-2c, el sustituyente en el R1 pirimidin-5-ilo se selecciona entre halo, amido, alquilo, alcoxi, sulfonilo, sulfonamidilo, haloalquilo y trihaloalquilo.
En realizaciones preferidas, la sustitucion en el R1 pirimidin-5-ilo se selecciona entre Cl, F, CF3, Me, OMe, SO2R2, 2' 2' 2 2' 1
NR R y SO2NR R . En realizaciones mas preferidas, la sustitucion en R pirimidin-5-ilo se selecciona entre Cl, Me
y SO2Me.
En algunas realizaciones, con respecto a las formulas 1-2c, R1 se selecciona entre
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en los que el subrndice n' se selecciona entre 1-5 y cada uno de R5 se selecciona independientemente entre hidrogeno, alquilo sustituido o sin sustituir, acilo sustituido o sin sustituir, acilamino sustituido o sin sustituir, alquilamino sustituido o sin sustituir, alquiltio sustituido o sin sustituir, alcoxi sustituido o sin sustituir, ariloxi, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilo sustituido, alquilarilamino sustituido o sin sustituir, arilalquiloxi, arilalquiloxi sustituido, amino, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, sulfo, sulfo sustituido, sulfonilo sustituido, sulfinilo sustituido, sulfanilo sustituido, azido, carbamoMo sustituido o sin sustituir, carboxilo, ciano, cicloalquilo sustituido o sin sustituir, cicloheteroalquilo sustituido o sin sustituir, dialquilamino sustituido o sin sustituir, halo, heteroariloxi, heteroarilo sustituido o sin sustituir, heteroalquilo sustituido o sin sustituir, hidroxi, nitro y tiol.
En ciertas realizaciones, el subrndice n' es 1,2 o 3.
En realizaciones adicionales, el subrndice n' es 1 o 2.
En ciertas realizaciones, cada R5 es H.
En ciertas realizaciones, cada R5 es independientemente alquilo o alquilo sustituido.
En ciertas realizaciones, cada R5 es independientemente Cl o F.
En ciertas realizaciones, cada R5 es independientemente alcoxi o alcoxi sustituido.
En ciertas realizaciones, cada R5 es independientemente amino o amino sustituido.
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En ciertas realizaciones, cada R5 es independientemente carbamoflo.
En ciertas realizaciones, cada R5 es independientemente sulfo o sulfo sustituido.
En ciertas realizaciones, cada R5 es independientemente sulfonilo o sulfonilo sustituido.
En ciertas realizaciones, cada R5 es independientemente aminosulfonilo o aminosulfonilo sustituido.
En ciertas realizaciones, cada R5 es independientemente SO2NH2.
En ciertas realizaciones, cada R5 se selecciona independientemente entre Me, Et, Pr, iso-Pr, Ph, Cl, F, Br, CN, OH, OMe, OEt, OPh, COPh, CO2Me, CH2-N-morfolino, CH2-N-(4-Mepiperidino), NH2, CONH2, CF3, CHF2, OCF3, CHF2, t- Bu, SMe, CH=CH-CO2H, SOMe, SO2Me, SO2CF3, SO2NH2, SO3H, SO3Me, ciclopropilo, triazolilo, morfolinilo y piridilo.
En ciertas realizaciones, el subrndice n' es 1 y R5 se selecciona entre Me, Cl, F, OMe y CF3.
Con respecto a la formula 1a, en ciertas realizaciones, un compuesto es de acuerdo a la formula 3b, 3c, 3e o 3f:
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en las que R2 es como se ha descrito para la formula 1a y R5 es como se ha descrito anteriormente. En ciertas realizaciones, los compuestos de acuerdo con la formula 3b, 3c, 3e o 3f son enantiomericamente puros. En ciertas realizaciones, se proporcionan composiciones farmaceuticas que comprenden compuestos enantiomericamente puros de acuerdo con la formula 3b, 3c, 3e o 3f. En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto enantiomericamente puro de acuerdo con la formula 3b, 3c, 3e o 3f o una composition farmaceutica que comprende un compuesto enantiomericamente puro de acuerdo con la formula 3b, 3c, 3e o 3f para su uso en procedimientos de tratamiento.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 3b-3f, R5 es H.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 3b-3f, R5 es Me, Et, Pr, iso-Pr, Ph, Cl, F, CN, OH, OMe, OEt, OPh, CF3, CHF2, OCF3, OCHF2, t-Bu, SO2Me, SO2CF3 y SO3Me.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 3b-3f, R5 es Cl, F, Me, CF3 o OMe.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 1a-3f, R2 se selecciona entre Me, Et, n-Pr, t-Bu, CF3, CH2OH, CH2CH2OH, CH2CH2OAc, CH2(CH2)2OH, CH2CH2NHMe, CH2NMe2, CH2CH2NMe2, CH2CONH2, CH2CONMe2, CH2COOH, CH2CH2COOH, CH2(CH2)2COOH, CH2OMe y CH2CH2OMe.
2 2 2 2 2 En realizaciones adicionales, con respecto a las formulas 1a-3f, R se selecciona entre CH2NR R , CH2CH2NR R ,
CH2CH2CH2NR2R2 y en el que R2 y R2 pueden juntarse para formar un anillo heteroticlico.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 1a-3f, R2 se selecciona entre ciclopropilo, ciclobutilo o ciclohexilo.
En realizaciones particulares, con respecto a las formulas 1a-3f, R2 es Me o Et.
En realizaciones mas particulares, con respecto a las formulas 1a-3f, R2 es CH2OH o CH2CH2OH.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 1a-3f, R3 se selecciona entre ciclopropilo, ciclobutilo o ciclohexilo.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 1a-3f, R3 es H.
En realizaciones particulares, con respecto a las formulas 1a-3f, R3 es Me, Cl, F o CF3.
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En realizaciones mas particulares, con respecto a las formulas 1a-3f, R3 es Cl.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 1-3f, R2 es Me.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 1-3f, R2 es Et.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 1-3f, R2 es CH2OH.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 1-3f, R2 es CH2CH2OH.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 1-3f, R5 es H.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 1-3f, R5 es Cl.
En ciertas realizaciones, con respecto a las formulas 1-3f, R5 es CF3.
En ciertas realizaciones, cuando R3, R4 o R5 es alquilo; el grupo alquilo es alquilo C1-C8. En otra realizacion, el grupo alquilo es alquilo C1-C6. En una realizacion adicional, el grupo alquilo es alquilo C1-C4.
En una realizacion, el grupo alquilo esta opcionalmente sustituido con uno o mas grupos (tales como 1 a 3 sustituyentes, en particular un grupo sustituyente, grupo sustituyente que puede seleccionarse independientemente entre halo, ciano, nitro, trifluorometilo, trifluorometoxi, azido, -NR10SO2R9, -SO2NR9R10, -C(O)R9, -C(O)OR9, - OC(O)R9, -NR10C(O)R9, -C(O)NR9R10, -NR9R10, -(CR10R11)mOR10 y en el que m es un numero entero de 1 a 5.
En una realizacion, cada R9 se selecciona independientemente entre H, alquilo C1-C8, -(CH2)t(arilo C6-C10), - (CH2)t(heteroarilo C5-C10), -(CH2)t(cicloalquilo C3-C10) y -(CH2)t(heterocicloalquilo C5-C10), en el que t es un numero entero de 0 a 4.
En una realizacion, cada R9 es como se ha descrito anteriormente, y cualesquier grupos arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo presentes, pueden estar asimismo sustituidos por alquilo C1-C4, halo, alcoxi C1-C4, haloalquilo C1-4, hidroxialquilo C1-C4 o haloalcoxi C1-C4 o hidroxi.
En una realizacion, cada R es como se ha descrito anteriormente, y cada uno de R y R representa independientemente H o alquilo C1-C6.
En una realizacion, cada R9 es como se ha descrito anteriormente y cada uno de R12 y R13 representa independientemente H o alquilo C1-C4.
En una realizacion, cada uno de R10 y R11 representa independientemente H o alquilo C1-C6.
En una realizacion, cada R9 es distinto de H.
En ciertas realizaciones, cuando R4 o R5 es alcoxi, el grupo alcoxi es -OR9; y R9 es como se ha descrito en las realizaciones anteriores; siempre que R9 sea distinto de H.
En ciertas realizaciones, cuando R4 o R5 es acilo; el grupo acilo es -C(O)R9; y R9 es como se ha descrito en las realizaciones anteriores.
En ciertas realizaciones, cuando R4 o R5 es alcoxicarbonilo; el grupo alcoxicarbonilo es -C(O)OR9; y R9 es como se ha descrito en las realizaciones anteriores; siempre que R9 sea distinto de H.
En ciertas realizaciones, cuando R4 o R5 es acilamino, el grupo acilamino es -NR10C(O)R9; y R9 y R10 son como se han descrito en las realizaciones anteriores; siempre que r"9 sea distinto de H.
En ciertas realizaciones, cuando R4 o R5 es aciloxi; el grupo aciloxi es -OC(O)R9; y R9 es como se ha descrito en las realizaciones anteriores; siempre que R9 sea distinto de H.
En ciertas realizaciones, cuando R4 o R5 es sulfo; el grupo sulfo es -SO3R9; y R9 es como se ha descrito en las realizaciones anteriores.
En ciertas realizaciones, cuando R4 o R5 es sulfonilo; el grupo sulfonilo es -SO2R9; y R9 es como se ha descrito en realizaciones anteriores; siempre que R9 sea distinto de H.
En ciertas realizaciones, cuando R4 o R5 es sulfinilo; el grupo sulfinilo es -SOR9; y R9 es como se ha descrito en las realizaciones anteriores; siempre que R9 sea distinto de H.
En ciertas realizaciones, cuando R4 o R5 es aminosulfonilo; el grupo aminosulfonilo es -SO2NR9R10; y R9 y R10 son como se han descrito en las realizaciones anteriores.
En ciertas realizaciones, cuando R4 o R5 es amino; el grupo amino es -NR9R10; y R9 y R10 son como se han descrito
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en las realizaciones anteriores.
En ciertas realizaciones, cuando R4 o R5 es carbamoMo; el grupo carbamoMo es -CO2NR9R10; y R9 y R10 son como se han descrito en las realizaciones anteriores.
En ciertas realizaciones, cuando R4 o R5 es alquiltio; el grupo alquiltio es -SR9; y R9 es como se ha descrito en las realizaciones anteriores; siempre que R9 sea distinto de H.
Con respecto a la formula 1a, en ciertas realizaciones, el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en
[6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-[(R)-1-(6-trifluorometil-piridin-3-il)-etil]-amina;
[6-(5-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-[(R)-1-(6-trifluorometil-piridin-3-il)-etil]-amina;
[6-(5-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-[(R)-ciclopropil-(6-trifluorometil-piridin-3-il)-metil]-
amina;
(R)-3-[6-(5-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-3-(6-metoxi-piridin-3-il)-propan-1-ol;
(R) -3-(6-Metoxi-piridin-3-il)-3-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-propan-1-ol;
(S) -2-[6-(5-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-2-(6-metoxi-piridin-3-il)-etanol; (s)-2-(6-Metoxi-piridin-3-il)-2-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-etanol; (R)-3-(6-Metil-piridin-3-il)-3-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-propan-1-ol; (R)-3-[6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-3-(6-trifluorometil-piridin-3-il)-propan-1- ol; y
[6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-[(R)-1-(2-metil-pirimidin-5-il)-etil]-amina.
Se exponen de manera no limitativa realizaciones adicionales dentro del ambito proporcionado en el presente documento, en otra parte del presente documento y en los ejemplos. Debe entenderse que estos ejemplos son solo para fines ilustrativos y no deben interpretarse como limitantes de ninguna manera.
COMPOSICIONES FARMACEUTICAS
Cuando se emplean como productos farmaceuticos, los compuestos heterodclicos condensados proporcionados en el presente documento se administran normalmente en forma de una composicion farmaceutica. Dichas composiciones pueden prepararse de una manera bien conocida en la tecnica farmaceutica y comprenden al menos un compuesto activo.
En general, los compuestos proporcionados en el presente documento se administran en una cantidad terapeuticamente eficaz. La cantidad de compuesto administrada realmente sera determinada normalmente por un medico, a la luz de las circunstancias relevantes, incluyendo la afeccion que se trata, la via de administracion elegida, el compuesto real administrado, la edad, el peso y la respuesta del paciente individual, la gravedad de los smtomas del paciente y similares.
Las composiciones farmaceuticas proporcionadas en el presente documento puede administrarse por una diversidad de vfas incluyendo la oral, rectal, transdermica, subcutanea, intravenosa, intramuscular e intranasal. Dependiendo de la via de liberacion pretendida, los compuestos proporcionados en el presente documento se formulan preferentemente como composiciones ya sea inyectables u orales o como pomadas, como lociones o como parches, todos para la administracion transdermica.
Las composiciones para la administracion oral pueden tomar la forma de soluciones o suspensiones lfquidas a granel o polvos a granel. Mas habitualmente, sin embargo, las composiciones se presentan en formas de dosificacion unitarias para facilitar la dosificacion exacta. La expresion "formas de dosificacion unitarias" se refiere a unidades ffsicamente individuales adecuadas como dosis unitarias para sujetos humanos y otros mairnferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapeutico deseado, en asociacion con un excipiente farmaceutico adecuado. Las formas de dosificacion unitaria tfpicas incluyen ampollas o jeringas precargadas y medidas previamente de las composiciones lfquidas o pfldoras, comprimidos, capsulas o similares en el caso de las composiciones solidas. En dichas composiciones, el compuesto de acido furansulfonico es por lo general un componente minoritario (de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 50 % en peso o preferentemente de aproximadamente el 1 a aproximadamente el 40 % en peso) siendo el resto diversos vehnculos o excipientes y coadyuvantes de procesamiento utiles para formar la forma de dosificacion deseada.
Las formas lfquidas adecuadas para la administracion oral pueden incluir un vehnculo acuoso o no acuoso adecuado con tampones, agentes de suspension y dispersion, colorantes, sabores y similares. Las formas solidas pueden incluir, por ejemplo, cualquiera de los siguientes ingredientes, o compuestos de una naturaleza similar: un aglutinante tal como celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; un excipiente tal como almidon o lactosa, un agente disgregante tal como acido algmico, Primogel o almidon de mafz; un lubricante tal como estearato de magnesio; una sustancia de deslizamiento tal como dioxido de silicio coloidal; un agente edulcorante tal como sacarosa o sacarina; o un agente aromatizante tal como menta, salicilato de metilo o aroma de naranja.
Las composiciones inyectables se basan normalmente en solucion salina esteril inyectable o solucion salina tamponada con fosfato u otros vehnculos inyectables conocidos en la tecnica. Como anteriormente, el compuesto
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activo en dichas composiciones es normalmente un componente minoritario, siendo con frecuencia de aproximadamente el 0,05 al 10 % en peso, siendo el resto el vehnculo inyectable y similar.
Las composiciones transdermicas se formulan normalmente en forma de una pomada o crema topicas que contienen el activo ingrediente o ingredientes activos, generalmente en una cantidad que vana de aproximadamente el 0,01 a aproximadamente el 20 % en peso, preferentemente de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 20% en peso, preferentemente de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 10% en peso y mas preferentemente de aproximadamente el 0,5 a aproximadamente el 15 % en peso. Cuando se formula en forma de una pomada, los principios activos normalmente se combinaran con una base de pomada ya sea parafmica o miscible en agua. Como alternativa, los principios activos pueden formularse en una crema con, por ejemplo, una base de crema aceite-en-agua. Dichas formulaciones transdermicas son bien conocidas en la tecnica y generalmente incluyen ingredientes adicionales para potenciar la penetracion dermica o la estabilidad de los principios activos o la formulacion. Todas estas formulaciones transdermicas e ingredientes conocidos se incluyen dentro del ambito proporcionado en el presente documento.
Los compuestos proporcionados en el presente documento tambien pueden administrarse mediante un dispositivo transdermico. En consecuencia, la administracion transdermica puede conseguirse usando un parche de tipo de membrana ya sea de deposito o poroso, o de una variedad de matriz solida.
Los componentes descritos anteriormente para composiciones administrables por via oral, administrables por via inyectable o topica, son meramente representativos. Otros materiales asf como tecnicas de procesamiento y similares se exponen en la Parte 8 de Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a edicion, 1985, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, incorporado en el presente documento por referencia.
Los componentes descritos anteriormente para composiciones administrables por via oral, administrables por via inyectable o topica, son meramente representativos. Otros materiales asf como tecnicas de procesamiento y similares se exponen en la Parte 8 de Remington's The Science and Practice of Pharmacy, 21a edicion, 2005, Editorial: Lippincott Williams & Wilkins, incorporado en el presente documento por referencia.
Los compuestos de la presente invencion tambien pueden administrarse en formas de liberacion sostenida o desde sistemas de liberacion de farmacos de liberacion sostenida. Una descripcion de materiales de liberacion sostenida representativos pueden encontrarse en Remington's Pharmaceutical Sciences.
Los siguientes ejemplos de formulacion ilustran composiciones farmaceuticas representativas de la presente invencion. La presente invencion, sin embargo, no se limita a las siguientes composiciones farmaceuticas.
Formulacion 1 - Comprimidos
Un compuesto de la invencion se mezclo en forma de un polvo seco con un aglutinante de gelatina seca en una relacion de peso aproximada de 1:2. Se anadio una cantidad minoritaria de estearato de magnesio como lubricante. La mezcla se conformo en comprimidos de 240-270 mg (80-90 mg de compuesto de amida activo por comprimido) en una prensa de comprimidos.
Formulacion 2 - Capsulas
Un compuesto de la invencion se mezclo en forma de un polvo seco con un diluyente de almidon en una relacion de peso aproximada de 1:1. La mezcla se cargo en capsulas de 250 mg (125 mg de compuesto de amida activo por capsula).
Formulacion 3 - Liquido
Un compuesto de la invencion (125 mg), sacarosa (1,75 g) y goma de xantano (4 mg) se mezclaron, se pasaron a traves de un tamiz de los EE.UU. de N.° de malla 10 y, despues, se mezclaron con una solucion previamente preparada de celulosa microcristalina y carboximetilcelulosa de sodio (11:89, 50 mg) en agua. Se diluyeron benzoato de sodio (10 mg), un aromatizante y un colorante con agua y se anadieron con agitacion. Despues, se anadio agua suficiente para producir un volumen total de 5 ml.
Formulacion 4 - Comprimidos
Un compuesto de la invencion se mezclo en forma de un polvo seco con un aglutinante de gelatina seca en una relacion de peso aproximada de 1:2. Se anadio una cantidad minoritaria de estearato de magnesio como lubricante. La mezcla se conformo en comprimidos de 450-900 mg (150-300 mg de compuesto de amida activo) en una prensa de comprimidos.
Formulacion 5 - Inyeccion
Un compuesto de la invencion se disolvio o suspendio en un medio acuoso inyectable de solucion salina esteril tamponada acuosa a una concentracion de aproximadamente 5 mg/ml.
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Formulacion 6 - Topica
Se fundieron alcohol esteanlico (250 g) y vaselina filante (250 g) a aproximadamente 75 °C y despues se anadio una mezcla de un compuesto de la invencion (50 g), metilparabeno (0,25 g), propilparabeno (0,15 g), lauril sulfato de sodio (10 g) y propilenglicol (120 g) disueltos en agua (aproximadamente 370 g) y la mezcla resultante se agito hasta que se congelo.
Compuestos para su uso EN PROCEDIMIENTOS DE TRATAMIENTO
Los presentes compuestos heterodclicos condensados se usan como agentes terapeuticos para el tratamiento de afecciones en mairnferos. En consecuencia, los compuestos y composiciones farmaceuticas de la presente invencion encuentran uso como agentes terapeuticos para prevenir y/o tratar afecciones neurodegenerativas, autoinmunes e inflamatorias en marnfferos incluyendo los seres humanos. Por tanto, y como se ha indicado anteriormente, la presente invencion incluye dentro de su ambito, y se prolonga a, los compuestos enumerados para su uso en procedimientos de tratamiento, y para la preparacion de medicamentos utiles para dichos procedimientos.
En un aspecto de uso en un procedimiento de tratamiento, en el presente documento se proporciona el uso de un procedimiento de tratamiento de un mamffero susceptible de padecer o que padece una afeccion asociada a la artritis, el asma, el infarto de miocardio, la enfermedad inflamatoria intestinal y los trastornos autoinmunes, procedimiento que comprende administrar una cantidad eficaz de una o mas de las composiciones farmaceuticas que se acaban de describir.
En otro aspecto mas del procedimiento de uso en el tratamiento, en el presente documento se proporciona el uso de un procedimiento de tratamiento de un mamffero susceptible de padecer o que padece una afeccion que da origen a respuestas dolorosas o que se relaciona con desequilibrios en el mantenimiento de la actividad basal de nervios sensoriales. Los presentes compuestos tienen uso como analgesicos para el tratamiento del dolor de causas o etiologfa diversas, por ejemplo el dolor agudo, inflamatorio (tales como el dolor asociado a la osteoartritis y a la artritis reumatoide); diversos smdromes de dolor neuropatico (tal como la neuralgia postherpetica, la neuralgia del trigemino, la distrofia simpatica refleja, la neuropatfa diabetica, el smdrome de Guillian Barre, la fibromialgia, el dolor del miembro fantasma, el dolor postmastectomfa, la neuropatfa periferica, la neuropatfa por VIH y las neuropatfas inducidas por quimioterapia y otras neuropatfas iatrogenicas); el dolor visceral, (tal como el asociado a la enfermedad por reflujo gastroesofagico, el smdrome del intestino irritable, la enfermedad inflamatoria intestinal, la pancreatitis y diversos trastornos ginecologicos y urologicos), el dolor dental y la cefalea (tal como la migrana, la cefalea en racimos y la cefalea tensional).
En aspectos adicionales de uso en un procedimiento de tratamiento, en el presente documento se proporcionan procedimientos de tratamiento de un mamffero susceptible de padecer o que padece enfermedades y trastornos neurodegenerativos tales como, por ejemplo, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Alzheimer y la esclerosis multiple; enfermedades y trastornos que dan como resultado o que estan mediados por neuroinflamacion tales como, por ejemplo, la encefalitis; enfermedades y trastornos neuropsiquiatricos de origen central tales como, por ejemplo, mama depresiva, enfermedad bipolar, ansiedad, esquizofrenia, trastornos de la alimentacion, trastornos del sueno y trastornos de la cognicion; epilepsia y trastornos convulsivos; disfuncion de prostata, vejiga e intestino tal como, por ejemplo, incontinencia urinaria, retardo miccional, hipersensibilidad rectal, incontinencia fecal, hipertrofia prostatica benigna y la enfermedad inflamatoria intestinal; enfermedades y trastornos respiratorios y de las vfas respiratorias tales como, por ejemplo, rinitis alergica, asma y enfermedad de las vfas respiratorias reactivas y enfermedad pulmonar obstructiva cronica; enfermedades y trastornos que dan como resultado o estan mediados por inflamacion, tales como, por ejemplo artritis reumatoide y osteoartritis, infarto de miocardio, diversas enfermedades y trastornos autoinmunes; picor/prurito tal como, por ejemplo, psoriasis; obesidad; trastornos lipfdicos; cancer; y trastornos renales, el procedimiento comprende administrar una cantidad eficaz para tratar la afeccion o para prevenir la afeccion de una o mas de las composiciones farmaceuticas que se acaban de describir.
Como un aspecto adicional se proporcionan los presentes compuestos heterodclicos condensados para su uso como un producto farmaceutico, especialmente en el tratamiento o prevencion de las afecciones y enfermedades mencionadas anteriormente. Los inventores tambien proporcionan el uso de los presentes compuestos en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o prevencion de una de las condiciones y enfermedades mencionadas anteriormente.
Los niveles de dosis de inyeccion vanan de aproximadamente 0,1 mg/kg/hora a por lo menos 10 mg/kg/hora, todo durante de aproximadamente 1 a aproximadamente 120 horas y especialmente de 24 a 96 horas. Tambien puede administrarse un bolo de precarga de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 10mg/kg, o mas, para conseguir niveles adecuados de estado estacionario. La dosis total maxima no se espera que exceda de aproximadamente 2 g/dfa para un paciente humano de 40 a 80 kg.
Para la prevencion y/o tratamiento de afecciones a largo plazo, tales como afecciones neurodegenerativas y autoinmunes, el regimen de tratamiento por lo general se extiende a lo largo de muchos meses o anos por lo que se prefiere la dosificacion oral para la comodidad y la tolerancia del paciente. Con la dosificacion oral, son regfmenes representativos de uno a cinco y en especial de dos a cuatro y normalmente tres dosis orales por dfa. Usando estos
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patrones de dosificacion, cada dosis proporciona de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 20 mg/kg del compuesto proporcionado en el presente documento, proporcionando las dosis preferidas, cada una, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg/kg y especialmente de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 mg/kg.
Generalmente se seleccionan dosis transdermicas para proporcionar concentraciones en sangre similares o inferiores que las que se consiguen usando dosis de inyeccion.
Cuando se usan para prevenir la aparicion de una afeccion neurodegenerativa, autoinmune o inflamatoria, los compuestos proporcionados en el presente documento se administraran a un paciente en riesgo de desarrollar la afeccion, normalmente con el consejo y bajo la supervision de un medico, en los niveles de dosificacion descritos anteriormente. Los pacientes en riesgo de desarrollar una afeccion particular incluyen generalmente los que tienen antecedentes familiares de la afeccion, o los que se han identificado, mediante deteccion o ensayo genetico, que son particularmente susceptibles de desarrollar la afeccion.
Los compuestos proporcionados en el presente documento pueden administrarse como el agente activo unico o pueden administrarse en combinacion con otros agentes, incluyendo otras aminas activas y derivados. La administracion en combinacion puede realizarse mediante cualquier tecnica evidente para los expertos en la materia, incluyendo, por ejemplo, la administracion separada, secuencial, simultanea y alterna.
PROCEDIMIENTOS DE SfNTESIS GENERALES
Los compuestos heterodclicos condensados proporcionados en el presente documento pueden prepararse a partir de materiales de partida facilmente disponibles usando los siguientes metodos y procedimientos generales. Vease, por ejemplo, la Figura 1 y los Esquemas de Smtesis 1-10 a continuacion. Se apreciara que donde se dan condiciones de procedimiento tfpicas o preferidas (es decir, temperaturas de reaccion, tiempos, relaciones molares de reactivos, disolventes, presiones, etc.), tambien pueden usarse otras condiciones de procedimiento a menos que se indique lo contrario. Las condiciones de reaccion optimas pueden variar con los reactivos o disolventes particulares utilizados, pero dichas condiciones pueden ser determinadas por un experto en la materia mediante procedimientos de optimizacion habituales.
De forma adicional, como sera evidente para los expertos en la materia, pueden ser necesarios grupos protectores convencionales para evitar que ciertos grupos funcionales experimenten reacciones no deseadas. La eleccion de un grupo protector adecuado para un grupo funcional particular, asf como las condiciones adecuadas para la proteccion y desproteccion son bien conocidas en la tecnica. Por ejemplo, se describen numerosos grupos protectores, y su introduccion y retirada, en T. W. Greene y P. G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Segunda Edicion, Wiley, Nueva York, 1991 y las referencias citadas en el mismo.
Los compuestos proporcionados en el presente documento, por ejemplo, pueden prepararse mediante la reaccion de un derivado de cloro con una amina apropiadamente sustituida y el producto se afsla y purifica mediante procedimientos convencionales conocidos. Dichos procedimientos incluyen (pero no se limitan a) la recristalizacion, la cromatograffa en columna o la HPLC. Los siguientes esquemas se presentan con detalles en cuanto a la preparacion de heterociclos condensados representativos que se han enumerado anteriormente en el presente documento. Los compuestos proporcionados en el presente documento pueden prepararse a partir de materiales y reactivos de partida conocidos o disponibles en el mercado por un experto en la tecnica de la smtesis organica.
Los compuestos enantiomericamente puros proporcionados en el presente documento pueden prepararse de acuerdo con cualesquier tecnicas conocidas por los expertos en la materia. Por ejemplo, pueden prepararse mediante smtesis quiral o asimetrica a partir de un precursor opticamente puro adecuado, u obtenerse a partir de un racemato mediante cualquier tecnica convencional, por ejemplo, mediante resolucion cromatografica usando una columna quiral, CCF o mediante la preparacion de diastereoisomeros, la separacion de los mismos y la regeneracion del enantiomero deseado. Vease, por ejemplo, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", por J. Jacques, A. Collet y S. H. Wilen, (Wiley-Interscience, Nueva York, 1981); S. H. Wilen, A. Collet y J. Jacques, Tetrahedron, 2725 (1977); E. L. Eliel Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); y S. H. Wilen Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions 268 (E. L. Eliel ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972, Stereochemistry of Organic Compounds, Ernest L. Eliel, Samuel H. Wilen y Lewis N. Manda (1994 John Wiley & Sons, Inc.), y Stereoselective Synthesis A Practical Approach, Mihaly Nogradi (1995 VCH Publishers, Inc., NY, Ny).
En ciertas realizaciones, un compuesto enantiomericamente puro de formula 1 puede obtenerse mediante la reaccion del racemato con un acido o base opticamente activo adecuado. Los acidos o bases adecuados incluyen los descritos en Bighley y col., 1995, Salt Forms of Drugs and Absorption, en Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, vol. 13, Swarbrick & Boylan, eds., Marcel Dekker, Nueva York; ten Hoeve y H. Wynberg, 1985, Journal of Organic Chemistry 50: 4508-4514; Dale & Mosher, 1973, J. Am Chem Soc. 95: 512; y CRC Handbook of Optical Resolution via Diastereomeric Salt Formation, los contenidos de los cuales estan por la presente incorporados por referencia en sus totalidades.
Tambien pueden recuperarse compuestos enantiomericamente puros ya sea del diastereomero cristalizado o de las aguas madres, dependiendo de las propiedades de solubilidad del agente de resolucion acido particular empleado y
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del enantiomero acido particular usado. La identidad y la pureza optica del compuesto particular recuperado de este modo pueden determinarse mediante polarimetna u otros procedimientos analfticos conocidos en la tecnica. Despues, los diastereoisomeros pueden separarse, por ejemplo, mediante cromatograffa o cristalizacion fraccionada, y el enantiomero deseado puede regenerarse mediante el tratamiento con una base o acido apropiados. El otro enantiomero puede obtenerse del racemato de una forma similar o tratarse a partir de los licores de la primera separacion.
En ciertas realizaciones, el compuesto enantiomericamente puro puede separarse del compuesto racemico mediante cromatograffa quiral. Estan disponibles diversas columnas quirales y eluyentes para su uso en la separacion de los enantiomeros y las condiciones adecuadas para la separacion pueden determinarse empmcamente mediante procedimientos conocidos para un experto en la materia. Las columnas quirales de ejemplo disponibles para su uso en la separacion de los enantiomeros proporcionados en el presente documento incluyen, pero no se limitan a CHIRALCEL® OB, CHIRALCEL® OB-H, CHIRALCEL® OD, CHIRALCEL® OD-H, CHIRALCEL® OF, CHIRALCEL® OG, CHIRALCEL® OJ y CHIRALCEL® OK.
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Esauema de Smtesis 1: Smtesis General de 4-a I □ u i I a m i n o-6-f5-cl □ ro o i ri d i n-2-i I :-5.6.7.3- tetra h i d ro p i ri d o T4-, 3-dl p i ri m i d i n a s
MH HCOjH/FtftOHh HN
X = F. CL 8f. elc.
POCI-,
Se prepararon derivados de 6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina N-alquil sustituida desprotegiendo primero la 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4(4aH)-ona y haciendo reaccionar el producto con una 2-halo-piridina apropiada para proporcionar la 6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin- 4(4aH)-ona que se hizo reaccionar con POCl3 seguido de condensacion con una alquilamina apropiada para proporcionar la 4-alquilamino-6-(piridin-2-il)-5,6.7.8-tetrahidropirido[4.3-d1pirimidina apropiada. Como ejemplo representativo, se representa la smtesis de N-(alquil)-6-(5-cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4- amina en el Esquema 1.
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Se preparo 4-alquilamino-6-(piridin-2-il)-5.6.7.8-tetrahidropirido[4.3-d1pirimidina haciendo reaccionar primero la 6- bencil-5,6,7,8-tetrahidro-3H-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ona con POCh para obtener el derivado de 4-cloro. El derivado de cloro se hizo reaccionar con una alquilamina apropiada para proporcionar la 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3- d]pirimidin-4-amina N-sustituida correspondiente. La desproteccion del grupo N-bencilo, seguida de la condensacion
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con una piridina 2-sustituida apropiada usando SNAr o reaccion de acoplamiento de Buchwald proporciono el derivado de 4-alquilamino-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina correspondiente (Esquema 2).
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Diversas 4-alquilamino-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d1pirimidinas se prepararon usando un procedimiento general que se muestra en el Esquema 3. Se trato 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin- 4(3H)-ona con POCl3 para proporcionar 6-bencil-4-cloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina que se trato con metoxido de sodio para proporcionar 6-bencil-4-metoxi-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina. La desbencilacion y hacer reaccionar el producto con una 2-halo-piridina apropiada en condiciones de SNAr o de reaccion de acoplamiento de Buchwald proporciono la 4-metoxi-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina que se hizo reaccionar con POCl3/POBr3. El desplazamiento del grupo 4-halo resultante utilizando diversas alquilaminas a traves del desplazamiento SNAr puede proporcionar diversas 4-alquilamino-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3- d1pirimidinas.
Los siguientes ejemplos biologicos y de smtesis se ofrecen para ilustrar los compuestos, composiciones farmaceuticas y procedimientos proporcionados en el presente documento y no deben interpretarse de ninguna manera como limitantes del ambito proporcionado en el presente documento. En los ejemplos a continuation, todas las temperaturas estan en grados Celsius (a menos que se indique de otra manera). Las smtesis de estos compuestos representativos se realizaron de acuerdo con los procedimientos expuestos anteriormente y utilizando los reactivos, materiales de partida y procedimientos de purification apropiados conocidos para los expertos en la materia.
Compuestos de ejemplo proporcionados en el presente documento
Los siguientes compuestos pueden prepararse de acuerdo con los procedimientos proporcionados en el presente documento. A menos que se indique lo contrario, las reacciones en microondas se realizaron en un sintetizador de microondas Biotage Initiator fabricado por Biotage AB, Inc. o un modelo de microondas Emrys Optimizer fabricado por Personal Chemistry, Inc.
SfNTESIS DE INTERMEDIOS
INTERMEDIO 1
6-Bencil-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4(3H)-ona
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Una mezcla de clorhidrato de 1-bencil-4-oxopiperidin-3-carboxilato de etilo (50,0 g, 0,168 mol), acetato de
formamidina (16,2 g, 0,201 mol), 4,37 M de metoxido de sodio en metanol (190 ml) y metanol (200 ml) se calento a 85 °C durante 16 horas en un recipiente de reaccion sellado de 350 ml. La mezcla se dejo enfriar y se concentro al vado. El residuo se disolvio en NaOH 1 N (150 ml) y se vertio sobre hielo. Se anadio acido acetico glacial a la mezcla hasta que el pH de la mezcla fue de 7 y precipito un solido de color castano. El solido se filtro, se lavo con 5 agua y eter frio y se seco en alto vado para proporcionar el compuesto del tflulo en forma de un solido de color castano (26,2 g, 61,4 %).
MS: 242,2 [M+1]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 2,29 (t, 2H, J = 5,8 Hz), 2,61 (t, 2H, J = 5,8 Hz), 3,26 (s, 2H), 3,64 (s, 2H), 7,21-7,36 (m, 6H), 7,96 (s, 1H).
INTERMEDIO 2
10 6-Bencil-4-cloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina
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Una mezcla de 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4(3H)-ona (5,0 g, 0,02 mol), cloruro de fosforilo (3,30 ml, 0,035 mol) y acetonitrilo (80 ml) y DMF (cantidad catalflica) se calento a 70 °C durante 1 hora. La mezcla se concentro al vado y el residuo restante de color negro se recogio en diclorometano (250 ml) y se vertio sobre 15 hielo. La mezcla se neutralizo cuidadosamente con la adicion de bicarbonato de sodio solido. La fase organica se separo y se seco sobre sulfato de sodio y se concentro al vado. La mezcla se purifico mediante columna de gel de sflice con EtOAc/hexano (0-100 %) para proporcionar el compuesto del tflulo en forma de un aceite de color amarillo (3 g, 57,8 %).
MS: 260 [M+1]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 8,80 (s, 1H), 7,40-7,24 (m, 5H), 3,76 (s, 2H), 3,57 (s, 2H), 2,92 (t, 20 2H), 2,80 (t, 2H).
INTERMEDIO 3
4-Cloro-5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidina
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A. 5,6,7,8-Tetrahidro-3H-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ona
O
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Una mezcla de 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4(3H)-ona (Intermedio 1, 18,0 g, 0,0738 mol), trietilamina (48 ml, 0,34 mol), hidroxido de paladio (10 g, 0,07 mol) en metanol (242 ml) se calento a 60 °C. Se anadio acido formico (7,6 ml, 0,20 mol) gota a gota a la mezcla durante un periodo de 15 minutos. La mezcla se
calento a 65 °C durante tres horas, se dejo enfriar y se filtro sobre Celite. El filtrado se concentro al vado para
30 proporcionar el compuesto del tflulo en forma de un solido de color amarillo que se uso como tal para la siguiente
etapa (9,62 g, 77,6 %). MS: 152,2 [M+1]+.
B. 5,6,7,8-Tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidin-4(3H)-ona
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En un tubo para microondas de 20 ml se combinaron 5,6,7,8-tetrahidro-3H-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ona (0,280 g, 35 1,83°mmol), 2-cloro-5-metilpiridina (0,47 g, 3,7°mmol), 1,4-dioxano (2,5 ml), N,N-diisopropiletilamina (0,64 ml,
3,7°mmol) y N,N-dimetilacetamida (0,5 ml). La mezcla se calento a traves de microondas a 150 °C durante 4 horas. La mezcla se redujo al vado y se recogio en cloroformo:IPA (3:1) (50 ml). La fase organica se lavo con bicarbonato de sodio y salmuera (50 ml, 1 vez), se seco sobre sulfato de sodio y se redujo al vado. El residuo se purifico mediante cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (metanol al 0-10 %/cloruro de metileno) para proporcionar un 40 solido de color amarillo brillante (0,215 g, 47,9 %). MS: 243,3 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 12,50 (s a, 1H), 8,05 (s, 1H) 7,98 (d, 1H), 7,41 (dd,1H), 6,84 (d, 1H), 4,24, (s, 2H),
3,77 (t ,2H), 2,67 (t ,2H), 2,15 (s 3H).
C. 4-Cloro-5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidina
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En un matraz de fondo redondo de 250 ml se combinaron 5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3- 5 d]pirimidin-4(3H)-ona (0,250 g, 1,03°mmol), cloruro de fosforilo (0,8 ml, 8°mmol) y 1,2-dicloroetano (10 ml). Se anadio N,N-dimetilanilina (0,01 g, 0,1°mmol) gota a gota y la mezcla se calento a reflujo durante 2 horas. La mezcla se redujo al vado para proporcionar un aceite de color marron oscuro. El aceite se recogio en cloruro de metileno (50 ml) y se vertio sobre hielo. La mezcla se neutralizo cuidadosamente con bicarbonato de sodio sat. ac. La fase organica se separo y se seco sobre sulfato de sodio y se redujo al vado. El residuo se purifico mediante 10 cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (metanol al 0-10 %/cloruro de metileno) para proporcionar un solido de
color amarillo brillante. (0,141 g, 52,4 %).
MS: 260,8 [M+H]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 8,83 (s, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,50 (d, 1H), 6,99 (d, 1H), 4,67 (s, 2H), 3,89 (t, 2H), 2,98 (t, 2H), 2,16 (s, 3H).
15 INTERMEDIO 4
4-Metoxi-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina
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A) 6 -Bencil-4-metoxi-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina
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20 Un matraz de 1 l se cargo con 6-bencil-4-cloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (39,6 g, 0,152 mol) y metanol (300 ml), y la mezcla se calento para disolver la cloropirimidina. Se anadio 4,37 M de metoxido de sodio en metanol (105 ml) lentamente a la mezcla caliente y la mezcla agitada se volvio rapidamente turbia. La suspension resultante se calento a reflujo durante 2 h. Despues de que se enfriara, la mezcla se concentro al vado a aproximadamente 100 ml. El residuo se vertio en agua (600 ml) y se extrajo con CH2Cl2 (200 ml, 2 veces). Las fases organicas 25 combinadas se lavaron con salmuera (400 ml), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vado a un aceite de color marron claro (38,9 g, 100 %). mS: 256,1 [M+1]+.
B) 4 -Metoxi-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina
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Un matraz de 250 ml se cargo con 6-bencil-4-metoxi-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (4,08 g, 16,0°mmol), 30 paladio al 10 % sobre carbon vegetal (400 mg) y metanol (100 ml). La reaccion se evacuo y se purgo con hidrogeno tres veces y se hidrogeno (1 atm) durante una noche. La mezcla se filtro a traves de un filtro de membrana "Dry disk" y se concentro al vado para proporcionar un aceite de color naranja (2,56 g).
1H RMN (400 MHz, CDCls): 8,57 (s, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,87 (s, 2H), 3,18 (t, 2H, J = 6,9 Hz), 2,82 (t, 2H, J = 6,9 Hz). INTERMEDIO 5
35 4-Bromo-6-(5-cloropmdm-2-N)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pmmidma
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A) 6-(5-cloropiridin-2-il)-4-metoxi-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina.
Se taparon 2-bromo-5-cloropiridina (13,42 g, 0,067 mol), tris(dibencilidenacetona)-dipaladio(0) (1,32 g, 1,43°mmol), terc-butoxido de sodio (8,55 g, 0,088 mol) con una membrana de goma y se purgaron con N2. Se anadio una mezcla de 4-metoxi-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (9,55 g, 0,0549 mol) en tolueno rociado con nitrogeno seco y la mezcla de reaccion se rocio con nitrogeno durante 30 minutos adicionales. Despues, la mezcla de reaccion se coloco en un bano de aceite a 100 °C y se calento durante una noche. Despues de que se enfriara, la mezcla se diluyo con acetato de etilo (180 ml), se filtro y se concentro al vado. El residuo se absorbio en 43 g de sflice y se purifico en gel de sflice en columna (EtOAc al 0-60 %/hexano) para proporcionar un solido de color naranja claro.
B) 4-bromo-6-(5-cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina.
Se anadio oxibromuro de fosforo (14 g, 49°mmol) en porciones durante 2 min a una suspension agitada de 6-(5- cloropiridin-2-il)-4-metoxi-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (3,36 g, 12,1°mmol), anisol (50 ml) y acetonitrilo (50 ml) en un matraz de 250 ml. La mezcla agitada se aclaro brevemente y despues se calento a reflujo. La mezcla se retiro del calor despues de 4,5 h. La mezcla enfriada se diluyo con CH2Cl2 (100 ml) y se vertio sobre una mezcla de hielo triturado (250 g) y KOH acuoso al 50 % (20 ml; 0,18 mol). El pH de la mezcla se ajusto a 12 con KOH ac. 2 M y se extrajo con CH2Cl2 (300 ml). La fase acuosa se diluyo con salmuera (200 ml) y se extrajo con CH2Cl2 (100 ml, 2 veces). Las fases de cH2CI2 combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado (200 ml), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a un aceite de color marron que se purifico mediante columna de gel de sflice (acetato de etilo al 0-50 %/hexano) para proporcionar un solido de color amarillo (1,48 g).
INTERMEDIOS 6 y 7
(R)-1-(6-(Trifluorometil) piridin-3-il)etanamina y (S)-1-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)etanamina
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A) N-metoxi-N-metil-6-(trifluorometil)nicotinamida
A una mezcla agitada de clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (9,47 g, 97,1°mmol) y piridina (18,6 ml, 230°mmol) en CH2Cl2 (100 ml) se le anadio una solucion de cloruro de 6-(trifluorometil)nicotinoflo (18,50 g, 88,28°mmol) en CH2Cl2 (250 ml) durante 3-5 min. La mezcla de reaccion se agito a ta durante una noche y despues se inactivo cuidadosamente con 150 ml de solucion saturada de NaHCO3 ac. y la mezcla se agito durante aproximadamente 1 hora. La mezcla se diluyo con CH2Cl2 (50 ml) y la fase organica se separo y se lavo con solucion de NaHCO3 ac. (100 ml) y salmuera (50 ml), se seco (Na2sO4), se filtraron y se evaporaron. El residuo se redisolvio en tolueno (aproximadamente 50 ml) y se evaporo de nuevo para retirar la piridina formando un azeotropo. Esto se repitio con tolueno (aproximadamente 50 ml). El producto se aislo en forma de un aceite incoloro (con una pequena cantidad de material cristalino) (19,1 g, 92 %). MS: 235,4 [M+1]+;
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1H RMN (400 MHz, CDCI3): 9,05 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 8,22 (dd, 1H, J = 8,0, 1,6 Hz), 7,76 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 3,57 (s, 3H), 3,42 (s, 3H).
B) 1-(6-(trifluorometil) piridin-3-il) etanona
Se disolvio N-metoxi-N-metil-6-(trifluorometil)nicotinamida (19,1 g, 81,6°mmol) en tetrahidrofurano (410 ml). El sistema se purgo con N2 y despues se enfrio a 0 °C. Se anadio 1,4 M de bromuro de metilmagnesio en tolueno/THF (75:25) (87,4 ml, 122,4°mmol) gota a gota usando un embudo de adicion. Al final de la adicion, la mezcla era blanquecina turbia. La mezcla se agito a 0 °C durante 1 hora y se inactivo cuidadosamente mediante la adicion gota a gota de HCl ac. 1 M (150 ml) y se diluyo con eter etflico (300 ml) y EtOAc (100 ml). La fase organica se separo y se lavo con NaOH ac. 0,1 M (200 ml) y salmuera (50 ml, 2 veces), se seco (Na2SO4) y se concentro para proporcionar un solido de color amarillo claro (15,04 g, 98 %).
MS: 190,2 [M+1]+;
1H RMN (CDCla): 9,25 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 8,42 (dd, 1H, J = 8,0, 1,6 Hz), 7,82 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 2,70 (s, 3H).
C) (R)-2-metil-N-((R)-1-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)etil)propano-2-sulfinamida y (R)-2-metil-N-((S)-1-(6- (trifluorometil)piridin-3-il)etil)propano-2-sulfinamida
A una solucion de 1-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)etanona (15,0 g, 79,3°mmol) en tetrahidrofurano (450 ml) en atmosfera de N2 se le anadio tetraetoxititanio (28,8 ml, 132°mmol). Despues, se anadio (R)-(+)-2-metilpropano-2- sulfinamida solida (8,01 g, 66,1°mmol) y la reaccion se calento a reflujo durante una noche. La solucion de imina resultante se enfrio a -45 a -50 °C y se inserto mediante una canula en un matraz que contema tetrahidroborato de sodio (12,5 g, 330°mmol) y tetrahidrofurano (100 ml) que se enfrio a -45 a -50 °C. La solucion turbia de color naranja resultante se agito a -40 °C durante 4 h y despues se calento lentamente a ta y se agito a ta durante 2 dfas. Despues de que se enfriara a 0 °C, la mezcla de reaccion se inactivo cuidadosamente mediante la adicion gota a gota de MeOH (100 ml) seguido de la adicion gota a gota de agua (40 ml). La mezcla se agito durante aproximadamente 20 minutos y despues se concentro en un rotavapor a sequedad. Se anadio EtOAc (500 ml) y la mezcla se agito durante aproximadamente 1 h y despues se anadio salmuera (50 ml) en porciones. La mezcla se filtro a traves de Celite y la torta de filtro se lavo con EtOAc (100 ml, 3 veces). El filtrado se lavo con solucion NaHCO3 saturado ac., agua y salmuera, se seco (Na2SO4), se concentro para proporcionar un solido ceroso de color amarillo claro (22,40 g, 96 %) La RMN 1H del producto en bruto indica la relacion aproximadamente 93:7 de dos diastereomeros. El producto se recristalizo en EtOAc (150 ml) y se lavo con EtOAc frio (20 ml, 3 veces) para proporcionar un solido cristalino de color blanco (12,22 g, 52,5%) como el isomero (R,R). Las aguas madre se concentraron y se purificaron mediante cromatograffa en columna de gel de sflice para proporcionar isomero (R,R) adicional (5 g, 21 %) y el isomero (R,S) (1,1 g) que se recristalizo en metilciclohexano para proporcionar un solido de color blanquecino. La RMN 1H (CDCl3 y DMSO-d6) de cada fraccion recristalizada (R, R y R, S) indica menos del 1 % del otro isomero y buenas purezas en todos los casos.
Isomero (R,R): MS: 295,4 [M+1]+;
1H RMN (400 MHz, CDCla): 8,73 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 7,90 (dd, 1H, J = 8,0, 2,4 Hz), 7,69 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 4,68 (m, 1H), 3,53 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 1,59 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,25 (s, 9H).1H RMN (d6-DMSO): 8,80 (d, 1H, J= 1,6 Hz), 8,11 (dd, 1H, J= 8,0, 2,0 Hz), 7,90 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 5,94 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 4,57 (p, 1H, J = 7,2 Hz), 1,46 (d, 3H, J = 7,2 Hz), 1,13 (s, 9H).
Isomero (R,S): 1H RMN (400 MHz, CDCh): 8,73 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 7,84 (dd, 1H, J = 8,0, 1,6 Hz), 7,67 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 4,72 (m, 1H), 3,42 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 1,60 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,23 (s, 9H). 1H RMN (d6-DMSO): 8,77 (d,
1H, J = 1,6 Hz), 8,06 (dd, 1H, J = 8,0, 2,0 Hz), 7,90 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 5,67 (d, 1H, J = 6,0 Hz), 4,62 (p, 1H, J = 6,4 Hz), 1,52 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,12 (s, 9H).
D) (R)-1-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)etanamina.
Se anadio (R)-2-metil-N-((R)-1-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)etil)propano-2-sulfinamida (12,75 g, 43,32°mmol) a un matraz de 200 ml seguido de la adicion de 1,4-dioxano (58 ml). Se anadio 6,0 M de HCl acuoso (28,9 ml) y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante 1,5 horas para asegurar que todo el cloruro de sulfinilo se destruyo. El disolvente se evaporo y el residuo se trato con CH2Cl2 (200 ml) y NaOH ac. 1 M (200 ml). La fase organica se separo y la fase acuosa se extrajo con CH2Cl2 (50 ml, 2 veces). Las fases organicas se combinaron y se secaron con Na2SO4, y se concentraron para obtener un lfquido incoloro transparentes (8,30 g). Analisis por HPLC quiral (columna Chiralpak AD-H 250 * 4,6°mm, hexano/iPrOH/Et2NH: 95/5/0,05): 97,8 % de isomero R (10,69 min), 0,63 % de isomero S (9,63 min).
MS: 191,2 [M+1]+;
1H RMN (400 MHz, CDCh): 8,72 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 7,92 (dd, 1H, J = 8,0, 2,0 Hz), 7,66 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 4,30 (c, 1H, J = 6,8 Hz), 1,62 (s, 2H), 1,43 (d, 3H, J = 6,8 Hz).
E) (S)-1-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)etanamina.
A (R)-2-metil-N-((S)-1-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)etil)propano-2-sulfinamida (355 mg, 1,21°mmol) en un vial para centelleo de 20 ml se le anadio 1,4-dioxano (1,6 ml) y 6,0 M de HCl ac. (0,80 ml). La reaccion se agito a ta durante aproximadamente 2 horas y despues se evaporo el dioxano. Se anadio agua (3 ml) y se anadio NaOH 1 M ac. hasta que se obtuvo un pH > 12. La fase acuosa basica se extrajo con CH2O2 (5 ml, 2 veces). Las fases organicas
combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y se evaporaron para obtener un Kquido de color amarillo claro transparente (123 mg, 54%). Analisis por HPLC quiral (columna Chiralpak AD-H 250 x 4,6°mm, hexano/PrOH/Et2NH: 95/5/0,05): 97 % de isomero S (9,61 min), no hay evidencia significativa del isomero R a 10,7 min.
5 MS: 191,2 [M+1]+;
1H RMN (400 MHz, CDCls): 8,72 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 7,92 (dd, 1H, J = 8,0, 2,0 Hz), 7,66 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 4,30 (c, 1H, J = 6,8 Hz), 1,55 (s, 2H), 1,43 (d, 3H, J = 6,8 Hz).
INTERMEDIO 8
(S)-2-Amino 2-(4-(trifluorometil)fenil)etanol
10
Se anadio tetrahidroaluminato de litio (0,62 g, 0,016 mol) lentamente, en pequenas porciones, a una mezcla enfriada en hielo de 4-(trifluorometil)-L-fenilglicina (1,8 g, 8,2°mmol) en tetrahidrofurano (60 ml). La mezcla se calento lentamente a ta durante un periodo de 1 h y despues se calento a reflujo durante una noche. La solucion se enfrio a 0 °C y se inactivo con solucion acuosa 2,0 M de NaOH. El precipitado se retiro por filtracion y la torta de filtro se lavo 15 con THF. El filtrado se concentro y se extrajo con CH2Cl2 (50 ml, 3 veces). Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4) y se concentraron al vado para proporcionar un solido de color amarillo claro (0,9 g, 59 %). LC-MS: 206,2 [M+1]+.
INTERMEDIO 9
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(S)-2-Amino-2-(6-metoxipiridin-3-il)etanol
20
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A) 2-Metoxi-5-vinilpiridina.
A una suspension de bromuro de trifenilmetilfosfonio (31,2 g, 0,0875 mol) en THF (150 ml) a -78 °C en una atmosfera de nitrogeno se le anadio n-BuLi 2,5 M (38,0 ml, 0,0948 mol) en hexano durante un periodo de 30 min. La reaccion se calento a temperatura ambiente para proporcionar una solucion de iluro de color rojo oscuro. A la 25 solucion de iluro, enfriada en hielo, se le introdujo 6-metoxinicotinaldehido (10,0 g, 0,0729 mol) en THF (30 ml). La reaccion se dejo alcanzar la temperatura ambiente y se agito a ta durante 3 h. Despues, la suspension resultante se calento a 60 °C durante 30 minutos y se calento a 60 °C durante 1 hora. Despues de que se enfriara, la reaccion se diluyo con agua (500 ml). El producto se extrajo en eter etflico, se lavo con salmuera, se seco (MgSO4) y se concentro. El residuo se purifico con columna de gel de sflice (EtOAc al 0-40 %/hexano) para proporcionar un aceite 30 de color amarillo claro. LC-MS: 136,0 [M+1]+; 1H RMN (400 MHz, CDCls): 8,12 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 7,70 (dd, 1H, J = 8,4, 2,4 Hz), 6,72 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,65 (dd, 1H, J = 17,6, 11,2 Hz), 5,64 (d, 1H, J = 17,6 Hz), 5,22 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 3,94 (s, 3H).
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B) (R)-1-(6-Metoxipiridin-3-il)etano-1,2-diol.
Un matraz de 500 ml se cargo con alcohol terc-butilico (130 ml), agua (130 ml) y AD-mix-p (36,5 g). La agitacion a ta produjo dos fases claras; la fase acuosa inferior aparece de color amarillo brillante. La mezcla se enfrio a 0 °C despues de lo cual algunas de las sales disueltas precipitaron. Se anadio 2-metoxi-5-vinilpiridina (3,5 g, 26°mmol) de una vez y la suspension heterogenea se agito vigorosamente a 0 °C durante 6 h. La CL-EM indico la finalizacion de la reaccion. Mientras la mezcla se agitaba a 0 °C, se anadio sulfito de sodio solido (39 g) y la mezcla se dejo calentar a ta y se agito durante 1 h. Se anadio EtOAc (250 ml) a la mezcla de reaccion y despues de la separacion de las fases, la fase acuosa se extrajo adicionalmente con EtOAc (100 ml, 3 veces). Las fases organicas combinadas se secaron sobre MgSO4 anhidro y se concentraron al vado. El residuo se purifico mediante columna de gel de sflice (EtOAc al 0-100 %/hexano) para proporcionar el diol en forma de un solido de color blanco (2,76 g, 63 %). LC-MS: 170,2 [M+1]+.
C) (R)-2-Hidroxi-2-(6-metoxipiridin-3-il)etil 4-metilbencenosulfonato.
A una solucion agitada de (R)-1-(6-metoxipiridin-3-il)etano-1,2-diol (2,7g, 0,016 mol) y piridina (10 ml) en CH2Cl2 (100 ml) a 0 °C se le anadio cloruro de p-toluenosulfonilo (3,6 g, 0,019 mol) en pequenas porciones. La mezcla se calento lentamente a ta y se agito durante 24 h y despues se diluyo con CH2Cl2 (100 ml). La fase organica se lavo con NaHCO3 ac., salmuera, se seco (Na2SO4) y se concentro para proporcionar un solido (6,0 g). LC-MS: 324,0 [M+H]+.
D) (R)-2-Metoxi-5-(oxiran-2-il)piridina.
A una solucion agitada de 4-metilbencenosulfonato de (R)-2-hidroxi-2-(6-metoxipiridin-3-il)etilo en MeOH (150 ml) a 0 °C se le anadio carbonato de potasio (4,4 g, 0,032 mol) y la mezcla se agito a ta durante una noche. La mezcla se filtro a traves de Celite y la torta de filtro se lavo con MeOH. El filtrado se concentro y el residuo se trato con EtOAc (150 ml) y Na2CO3 ac. La fase organica se separo y se lavo con salmuera, se seco (Na2SO4) y se concentro. El residuo se purifico mediante columna de gel de sflice para proporcionar el epoxido deseado en forma de un aceite incoloro (1,02 g, 42 %). 1H RMN (400 MHz, CDCh): 8,14 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 7,40 (dd, 1H, J = 8,8, 2,4 Hz), 6,73 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 3,93 (s, 3H), 3,84 (m, 1H), 3,16 (m, 1H), 2,83 (m, 1H).
E) (S)-2-Azido-2-(6-metoxipiridin-3-il)etanol.
A una solucion agitada de (R)-2-metoxi-5-(oxiran-2-il)piridina (1,02 g, 6,75°mmol) en acetonitrilo (100 ml) se le anadieron azida de sodio (1,8 g, 27°mmol) y perclorato de litio (11 g, 0,10 mol) y la mezcla se agito a 60 °C durante 4 h. La CCF indico la finalizacion de la reaccion. Despues de que se enfriara, la mezcla se filtro a traves de Celite y el filtrado se concentro. El residuo se trato con agua y se extrajo con EtOAc (50 ml, 3 veces). Las fases organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 ac. y salmuera, se secaron (Na2SO4) y se concentraron. El residuo se purifico mediante columna de gel de sflice (EtOAc al 0-50 %/hexano) para proporcionar un aceite de color amarillo claro (0,9 g, 69 %).
LC-MS: 195,2 (M+H)
1H RMN (CDCl3): 8,14 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 7,58 (dd, 1H, J = 8,4, 2,4 Hz), 6,79 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 4,64 (t, 1H, J = 6,4 Hz), 3,95 (s, 3H), 3,75 (d, 2H, J = 6,4 Hz), 1,90 (s a, 1H).
F) (S)-2-Amino-2-(6-metoxipiridin-3-il)etanol.
Una mezcla de (S)-2-azido-2-(6-metoxipiridin-3-il)etanol (0,90 g, 4,6°mmol), EtOAc (50 ml) y Pd al 10 %-C (100 mg) se agito en atmosfera de H2 (1 atm) durante 1 h. El catalizador se retiro por filtracion y el filtrado se concentro al vacfo para proporcionar un aceite espeso (0,78 g, 100 %).
LC-MS: 169,2 [M+1]+;
1H RMN (400 MHz, d6-DMSO): 8,08 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 7,68 (dd, 1H, J = 8,4, 2,4 Hz), 6,75 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 4,78 (t, 1H, J = 5,6 Hz), 3,85-3,80 (m, 4H), 3,38 (m, 1H), 3,31 (m, 1H), 1,83 (s a, 2H).
INTERMEDIO 10
(R)-3-Amino-3-(6-metilpiridin-3-il)propan-1-ol
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A una solution de 5-bromo-2-metilpiridina (5 g, 29,06°mmol) en NMP (60 ml), se le anadieron Pd(OAc)2 (0,325g, 1,45°mmol) y P(o-tol)3 (0,883 g, 2,9°mmol). Posteriormente, una solucion de acrilato de terc-butilo (13,02g, 101,7°mmol) en Et3N (16,1 ml, 116,2°mmol) se anadio en atmosfera de N2 a la mezcla anterior y se agito a 90 °C. Despues de 16 h, se anadio agua a la mezcla de reaction y se extrajo con Et2O (3 veces). La fase organica combinada se seco sobre Na2SO4 anhidro y se concentro al vatio para proporcionar un residuo. La purification del residuo mediante cromatografia en columna (SiO2, malla 100-200, Et2O/eter de petroleo 1:9) proporciono el compuesto del fitulo. MS: 220 [M+H]+;
1H RMN (300 MHz, CDCl3): 6 8,6 (s, 1 H), 7,7 (d, J= 5,8 Hz, 1 H), 7,5 (d, J= 16,0 Hz, 1 H), 7,1 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,4 (d, J = 16,0 Hz, 1 H), 2,6 (s, 3 H) y1,5 (s, 9 H).
B) 3-(bencil((S)-1-feniletil)amino)-3-(6-metilpiridin-3-il)propanoato de (R)-terc-butilo
A una solucion de (SJ-N-bencil-1-feniletanamina (3,64 g, 17,26°mmol) en THF (40 ml) a -70 °C, se le anadio gota a gota n-BuLi (1,6 M, 14,7°mmol) durante un periodo de 30 min y se agito adicionalmente. Despues de 1 h, se anadio una solucion de 3-(6-metilpiridin-3-il)acrilato de (E)-terc-butilo (2,7 g, 12,3°mmol) en THF lentamente a la mezcla anterior y se agitaron adicionalmente. Despues de 2 h, se anadio solucion sat. de NH4Cl a la mezcla de reaccion y se extrajo con EtOAc (3 veces). La fase organica combinada se seco sobre Na2SO4 anhidro y se concentro al vado para proporcionar un residuo. La purificacion del residuo mediante cromatografia en columna (A^O3 neutro, Et2O/eter de petroleo 5:95) proporciono el compuesto del fitulo. MS: 431,6 [M+H]+;
1H RMN (300 MHz, CDCh): 6 8,5 (dd, J = 2 Hz, 1 H) 7,2-8,7 (m, 13 H), 6,4 (d, J = 16,0 Hz, 1 H), 3,96 (t, J = 6,8 Hz, 1 H), 3,9 (c, J = 6,8 Hz, 1 H), 3,6 (s, 2 H), 2,4-2,6 (m, 5 H), 1,6(s, 2 H) y1,2 (s, 9 H).
C) (R)-3-(bencil((S)-1-feniletil)amino)-3-(6-metilpiridin-3-il)propan-1-ol
A una solucion de LiAlH4 (1,24 g, 32,79°mmol) en THF (80 ml) a 0 °C, se le anadio gota a gota una solucion de 3- (bencil((S)-1-feniletil)amino)-3-(6-metilpiridin-3-il)propanoato de (R)-terc-butilo (4,7 g, 10,93°mmol) en THF y se calentaron a 75 °C. Despues de 4 h, la mezcla de reaccion se inactivo con EtOAc y se filtro. El filtrado se lavo con exceso de EtOAc y se seco en alto vado para proporcionar un residuo. La purificacion del residuo mediante cromatografia en columna (A^O3 neutro, Et2O/eter de petroleo 15:85) proporciono el compuesto del fitulo. MS: 361,5 ([M-H]+);
1H RMN (300 MHz, CDCh): 6 7,2-8,5 (m, 13 H), 4,0-4,1 (m, 2 H), 3,4-3,6 (m, 3 H), 3,3-3,4 (m, 1 H), 2,6-2,7 (m, 3 H), 2,0-2,2 (m, 3 H) y1,1 (d, J= 5,6 Hz, 3 H).
D) (R)-3-amino-3-(6-metilpiridin-3-il)propan-1-ol
A una solucion de (R)-3-(bencil((S)-1-feniletil)amino)-3-(6-metilpiridin-3-il)propan-1-ol (2,1 g, 5,83°mmol) en MeOH de HPLC (40 ml), se le anadieron AcOH (0,34 ml, 5,8°mmol), Pd(OH)2 (0,42g) y HCOONH4(1,8g, 29,16°mmol) y se calentaron a reflujo. Despues de 1 h, la mezcla de reaccion se filtro a traves de un lecho de Celite y el filtrado se concentro al vado para proporcionar un residuo. La purificacion del residuo mediante cromatografia en columna (Al2O3 neutro, NH3 ac./MeOH/CH2Cl2, 1:20:80) proporciono el compuesto del fitulo.
^H-RMN (300 MHz, CDCh): 6 7,2-8,4 (m, 3 H), 4,2 (t, J = 3,6 Hz, 1 H), 3,8 (t, J = 5,1 Hz, 2 H), 2,6 (s, 3 H), 2,2 (a, 3 H) y 1,7-1,8 (m, 2 H).
INTERMEDIOS 11 y12
(R)-3-Amino-3-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)propan-1 -ol y (S)-3-amino-3-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)propan-1 - ol
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A) 2-(1,3-dioxolan-2-il)-1-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)etanol
A una suspension de 6-(trifluorometil)nicotinaldeMdo (23,5 g, 0,134 mol) en tetrahidrofurano (500 ml) a 0 °C en una atmosfera de nitrogeno se le anadio solution 0,5 M de bromuro (1,3-dioxolan-2-ilmetil)-magnesio en tetrahidrofurano (400 ml, 0,20 mol) y la reaction se calento a temperatura ambiente y despues se calento a reflujo durante una noche. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se inactivo con agua. La fase acuosa se extrajo mediante EtOAc y las fases organicas se combinaron, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico mediante columna de gel de silice (EtOAc al 0-50 %/hexano) para proporcionar un aceite de color amarillo.
B) 5-(1-azido-2-(1,3-dioxolan-2-il)etil)-2-(trifluorometil)piridina
Una mezcla de 2-(1,3-dioxolan-2-il)-1-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)etanol (18,54 g, 0,070 mol) y azida difenilfosfonica (36 ml, 0,17 mol) en tolueno (40 ml) se enfrio a 0 °C y se anadio 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno puro (25 ml, 0,17 mol). La mezcla de reaccion se agito a 0 °C durante 2 horas y despues a 20 °C durante una noche. La mezcla se lavo con agua y HCl al 5 %. La fase acuosa se extrajo con CH2G2. Las fases organicas combinados se concentraron al vacfo y el residuo se purifico mediante columna de gel de silice (EtOAc al 0-100 %/hexano) para proporcionar un aceite incoloro.
C) 3-azido-3-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)propanal
Una solucion de 5-(1-azido-2-(1,3-dioxolan-2-il)etil)-2-(trifluorometil)piridina (7,44 g, 25,8°mmol) en tetrahidrofurano (60 ml) se trato con HCl ac. al 20 % (60 ml) a 0 °C. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Despues de la finalization de la reaccion, se anadio eter etflico y la fase organica se separo, se seco sobre MgSO4 y se concentro para proporcionar un aceite en bruto sin purification adicional.
D) 3-azido-3-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)propan-1-ol
A una solucion agitada del 3-azido-3-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)propanal en bruto (5,0 g, 20,5°mmol) en tetrahidrofurano (100 ml) a 0 °C se le anadio tetrahidroborato de sodio (1,52 g, 40,1°mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 10 minutos. Despues de la finalizacion de la reaccion, se anadio salmuera y la mezcla se extrajo con eter. La fase organica se seco y se concentro para proporcionar un aceite en bruto que se purifico mediante cromatograffa en gel de silice para proporcionar un aceite de color amarillo claro.
E) 3-amino-3-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)propan-1-ol
Una mezcla de 3-azido-3-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)propan-1-ol (7,29 g, 29,6°mmol), acetato de etilo (320 ml) y Pd al 10 %-C (3,2 g) se agito en atmosfera de H2 (1 atm) durante una noche. El catalizador se retiro por filtration y el filtrado se concentro para proporcionar el producto del tftulo.
F) (S)-3-amino-3-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)propan-1-ol y (R)-3-amino-3-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)propan-1-ol
Se resolvio 3-amino-3-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)propan-1-ol racemico (1,10 g, 5,00°mmol) mediante HPLC quiral (condiciones: columna cHlRALPAK aD-H, 20 * 250°mm, hexano/EtoH [88:12] a 20 ml/min, UV a 230 nm) para proporcionar (S)-3-amino-3-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)propan-1-ol y (R)-3-amino-3-(6-(trifluorometil)piridin-3-
il)propan-1-ol. HpLc analftica quiral: columna ChIRALpAk AD-H, 250 * 4,6°mm, hexano/EtoH [90:10] a 1,0 ml/min, UV a 230 nm); tiempo de retention del isomero (S): 18,68 min (> 99 % de ee); tiempo de retention del isomero (R):
5
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40
23,56 min (> 99 % de ee).
INTERMEDIOS 13 y14
(S)-1-(2-Metilpirimidin-5-il)etanamina y (R)-1-(2-metilpirimidin-5-il)etanamina
imagen39
A) 2-metilpirimidina-5-carbaldeddo
A una suspension agitada de clorhidrato de acetamidina (19,4 g, 0,20 mol) y sal de vinamidinio (48,91 g, 0,183 mol) en acetonitrilo (240 ml) se le anadio una solucion de NaOH al 40 % en peso en agua (27,4 g, 0,274 mol) durante un periodo de 30 minutos. Despues de que se completara la adicion, la mezcla de reaccion resultante se agito a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se concentro al vado y se diluyo con agua (250 ml) y se extrajo con EtOAc (250 ml, 3 veces). Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron al vado. El residuo se purifico mediante cromatografia en gel de sflice (EtOAc al 0-100 %/hexanos) para proporcionar un solido de color blanco.
B) 1-(2-metilpirimidin-5-il)etanol
A una solucion agitada de 2-metilpirimidina-5-carbaldeddo (5,00 g, 38,9°mmol) en tetrahidrofurano (85 ml) se le anadieron lentamente 33 ml de solucion de bromuro de metilmagnesio 1,4 M en tetrahidrofurano a 0 °C. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1 hora y despues se inactivo con agua (50 ml) y se extrajo con EtOAc (200 ml, 3 veces). Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron al vado. El residuo se purifico mediante cromatografia en gel de sflice (EtOAc al 0-100 %/hexano) para proporcionar un aceite incoloro.
C) 5-(1-azidoetil)-2-metilpirimidina
A una mezcla agitada de 1-(2-metilpirimidin-5-il)etanol (2,48 g, 17°mmol) y azida difenilfosfonica (9,3 ml, 41°mmol) en tolueno (54,5 ml) a 0 °C se le anadio 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno puro (6,2 ml, 41°mmol). La mezcla de reaccion se agito a 0 °C durante 30 minutos y despues se agito a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se diluyo con EtOAc (100 ml) y se lavo con agua (100 ml, 2 veces). La fase organica se concentro al vado y se purifico mediante cromatografia en gel de sflice (EtOAc al 0-100 %/hexano) para proporcionar un aceite incoloro.
D) 1-(2-metilpirimidin-5-il)etanamina
Una mezcla de 5-(1-azidoetil)-2-metilpirimidina (2,20 g, 12,8°mmol), acetato de etilo (170 ml) y paladio al 10 % sobre carbono (1,32 g) se agito en atmosfera de hidrogeno (1 atm) durante una noche. La mezcla se filtro y se concentro. El residuo se purifico mediante columna de gel de sflice (MeOH al 0-50 %/EtOAc con Et3N al 10%) para proporcionar un aceite incoloro. 1H RMN (300 MHz, CD3OD): 8,71 (s, 2 H), 4,12 (c, 1H, J = 6,6 Hz), 2,67 (s, 3 H), 1,44 (d, J = 6,6 Hz, 3H).
E) (S)-1-(2-metilpirimidin-5-il)etanamina y (R)-1-(2-metilpirimidin-5-il)etanamina
Se resolvio 1-(2-metilpirimidin-5-il)etanamina racemica (2,78 g, 20,3°mmol) mediante HPLC quiral (preparacion de la muestra: la muestra se disolvio en 4 ml de EtOH (calentado) y se anadieron 8 ml de hexano). Condiciones de HPLC: columna CHIRALPAK AD-H a 0 °C [bano de hielo], 20 x 250°mm, hexano/EtOH/Et2NH [85:15:0,03] a 20 ml/min, deteccion UV a 230 nm) para proporcionar (S)-1-(2-metilpirimidin-5-il)etanamina (1,19 g, > 99% de ee) y (R)-1-(2- metilpirimidin-5-il)etanamina (1,16 g, >99 % de ee).
INTERMEDIOS 15 y16
(R)-Ciclopropil(6-(trifluorometil)piridin-3-il)metanamina y (S)-ciclopropil(6-(trifluorometil)piridin-3- il)metanamina
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A) Ciclopropil(6-(trifluorometil)piridin-3-il)metanona.
A una solucion agitada de N-metoxi-N-metil-6-(trifluorometil)nicotinamida (1,00 g, 4,27°mmol) en tetrahidrofurano (30 ml) a 0 °C se le anadio 0,5 M de bromuro de ciclopropilmagnesio en tetrahidrofurano (20 ml, 0,01 mol) gota a gota durante 15 minutos. La mezcla se agito a 0 °C durante 30 minutos y despues a temperatura ambiente durante una noche. La reaccion se inactivo con HCl 1 N. El disolvente se retira por bombeo y la fase de agua se extrajo con acetato de etilo. Los materiales organicos se combinaron y se secaron con MgSO4, se filtraron y se concentraron para obtener un aceite en bruto de color marron. El producto en bruto se purifico mediante columna de gel de silice (acetato de etilo al 0-60 %/hexano) para obtener un solido de color amarillo palido.
B) (R)-N-((R)-Ciclopropil(6-(trifluorometil)piridin-3-il)metil)-2-metilpropano-2-sulfinamida y (R)-N-((S)-ciclopropil(6- (trifluorometil)piridin-3-il)metil)-2-metilpropano-2-sulfinamida.
A una solucion agitada de Ti(OEt)4 (1,1 ml, 5,5°mmol) y ciclopropil(6-(trifluorometil)piridin-3-il)metanona (0,84 g, 3,9°mmol) en tetrahidrofurano (20 ml) en atmosfera de N2 se le anadio (R)-2-metilpropano-2-sulfinamida (0,57 g, 4,7°mmol). La mezcla se calento a 70 °C y se calento durante una noche. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente y despues a -78 °C y se inserto mediante una canula lentamente en una solucion a -78°C de tetrahidroborato de sodio (0,49 g, 13°mmol) en 20 ml de THF. La reaccion se calento lentamente a temperatura ambiente y se agito durante una noche y despues se inactivo con metanol. La solucion se filtro a traves de Celite y la torta de filtro se lavo con acetato de etilo. El filtrado se lavo con salmuera, se seco (Na2SO4), se filtro y se concentro. La RMN muestra aproximadamente el 10 % de isomero S en el material en bruto (0,77 g, 62 %). Los diastereomeros se separaron mediante columna de gel de silice (acetato de etilo al 0-80 %/hexano). El isomero R,R (principal) es menos polar, mientras que el isomero R,S es mas polar.
C) (R)-ciclopropil(6-(trifluorometil)piridin-3-il)metanamina.
Se combinaron (R)-N-((R)-ciclopropil(6-(trifluorometil)piridin-3-il)metil)-2-metilpropano-2-sulfinamida (0,245 g,
0,765°mmol), etanol (2,7 ml) y 4,0 M de cloruro de hidrogeno en dioxano (2,7 ml) y la mezcla se agito a ta durante una noche. La reaccion se concentro hasta un aceite y despues se redisolvio y se lavo con etanol 3 veces y se concentro. El residuo se seco en el alto vado durante una noche para obtener un solido de color blanco.
D) (S)-Ciclopropil(6-(trifluorometil)piridin-3-il)metanamina.
Se combinaron (S)-N-((R)-ciclopropil(6-(trifluorometil)piridin-3-il)metil)-2-metilpropano-2-sulfinamida (0,245 g,
0,000765 mol), etanol (2,7 g, 0,059 mol) y 4,0 M de cloruro de hidrogeno en dioxano (2,7 ml, 0,011 mol) y se agitaron durante 30 minutos. La mezcla se dejo agitar durante una noche. El disolvente se elimino y el residuo se disolvio en etanol. Despues de lavar con etanol 3 veces mas, la mezcla se concentro y el residuo se seco en alto vado durante una noche para obtener un solido.
sJntesis de compuestos representativos
Procedimiento A
(Procedimiento generico para la smtesis de la biblioteca)
imagen41
Derivados de [6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina N-(CH(R2)R1)-sustituida
Una serie de sesenta viales para microondas de 0,5-2 ml etiquetados se cargaron con la amina N-(CH(R2)R1) 5 sustituida (0,4°mmol, 5 equiv), una varilla de agitation y una solution de 4-cloro-5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2- il)pirido[4,3-d]pirimidina (20 mg, 0,08°mmol) y N,N-diisopropiletilamina (40 pl, 0,2°mmol) en acetonitrilo (1 ml). Para aminas liberadas como sales de HCl o que contienen una cadena lateral acido carboxflico, se anadio diisopropiletilamina adicional (5 equiv, 65 pl). Los viales tapados se calentaron en un microondas a 200 °C durante el tiempo apropiado: las aminas que no soportan impedimento esterico o grupos aceptores de electrones se calentaron 10 durante 1,5 h; y las que soportan ya sea impedimento esterico o un grupo aceptor de electrones se calentaron durante 2 h. La reaction se controlo tomando alicuotas de los viales de reaction y analizandolas mediante CL-EM. Despues de la finalization de la reaccion (analisis CL-EM), el disolvente se retiro mediante evaporation centrifuga y el residuo solido se disolvio en DMSO (0,5-1,0ml). Las soluciones o suspensiones de DMSO se sometieron a purification (HPLC de fase inversa accionada por masa con dietilamina 50°mM en agua/acetonitrilo). Se registraron 15 la CL-EM y la RMN 1H (DMSO-d6) para confirmar la identidad y la pureza.
Compuesto 34 (no de acuerdo con la invencion)
[6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-((R)-1 -p-tolil-etil)-amina
imagen42
El compuesto se preparo de acuerdo con el Procedimiento A.
20 LC-MS: 360,4 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5: 8,20 (s, 1H), 8,01 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,47 (dd, J = 2,2, 8,6 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,10 (d aparente, J = 8,0 Hz, 3H), 6,99 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,41 (quintuplete aparente, J = 7,2 Hz, 1H), 4,33 (d, J = 16,9 Hz, 1H), 4,28 (d, J = 16,9 Hz, 1H), 3,92-3,78 (m, 2H), 2,69 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 1,51 (d, J = 7,1 Hz, 3H).
Compuesto 35 (no de acuerdo con la invencion)
25 [6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-((S)-1-p-tolil-etil)-amina
imagen43
El compuesto se preparo de acuerdo con el Procedimiento A.
LC-MS: 360,1 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5: 8,20 (s, 1H), 8,01 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,47 (dd, J = 2,2, 8,6 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,10 (d aparente, J = 8,0 Hz, 3H), .6,99 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,41 (quintuplete 30 aparente, J = 7,2 Hz, 1H), 4,33 (d, J = 16,9 Hz, 1H), 4,28 (d, J = 16,9 Hz, 1H), 3,92-3,78 (m, 2H), 2,69 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 1,51 (d, J = 7,1 Hz, 3H).
Compuesto 37 (no de acuerdo con la invencion)
(S)-2-[6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-2-fenil-etanol
imagen44
El compuesto se prepare de acuerdo con el Procedimiento A.
LC-MS: 362,2 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 8,19 (s, 1H), 8,03 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,48 (dd, J = 2,2, 8,6 Hz, 1H), 7,41 (d aparente, J = 8,4 Hz, 2H), 7,30 (t aparente, J = 7,5 Hz, 2H), 7,21 (tt, J = 2,0, 7,3 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 5 7,9 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 5,35 (dd, J = 5,4, 8,0 Hz, 1H), 4,99 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 4,37 (s, 2H), 3,91-3,365
(m, 4H), 2,70 (m, 2 H), 2,18 (s, 3H), 0,98 (t, J= 7,1 Hz, 1H).
Procedimiento B
(Procedimiento generico para la smtesis de la biblioteca) (Procedimiento Alternativo)
imagen45
10 Derivados de [6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina N-(C(R2)R1) sustituida
Una serie de cincuenta viales para microondas de 0,5-2 ml etiquetados se cargaron con la amina N-(C(R2)R1) sustituida (0,38°mmol, 5 equiv), una varilla de agitacion y una solution de 4-cloro-5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin- 2-il)pirido[4,3-d]pirimidina (20 mg, 0,08°mmol) y N,N-diisopropiletilamina (DIEA) (40 pl, 0,2°mmol) en acetonitrilo (1 ml). Se anadio DIEA adicional (65 pl, 5 equiv) a aminas que soportan un grupo fenol. Los viales tapados se
15 calentaron en un microondas a 200 °C durante el tiempo apropiado: las aminas que no soportan impedimento
esterico o grupos aceptores de electrones se calentaron durante 1,5 h; y las que soportan ya sea impedimento
esterico o un grupo aceptor de electrones se calentaron durante 2 h. El disolvente se retiro mediante evaporation centrifuga y el residuo solido se disolvio en DMSO (0,5-1,0ml). Las soluciones o suspensiones de DMSO se sometieron a purification (HPLC de fase inversa con dietilamina 50°mM en agua/MeCN). Se registraron la CL-EM y 20 la RMN 1H (DMSO-d6) para confirmar la identidad y la pureza.
Compuesto 41 (no de acuerdo con la invencion)
(R)-2-[6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-2-fenil-etanol
imagen46
El compuesto se prepare de acuerdo con el Procedimiento B.
25 LC-MS: 362,3 [M+H]+;; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 8,19 (s, 1H), 8,03 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,48 (dd, J = 2,2, 8,6 Hz, 1H), 7,41 (d aparente ,J = 8,4 Hz, 2H), 7,30 (t aparente, J = 7,5 Hz, 2H), 7,21 (tt, J = 2,0, 7,3 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 5,35 (dd, J= 5,4, 8,0 Hz, 1H), 4,99 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 4,37 (s, 2H), 3,91-3,365 (m, 4H), 2,70 (m, 2 H), 2,18 (s, 3H), 0,98 (t, J = 7,1 Hz, 1H).
Compuesto 42 (no de acuerdo con la invencion)
30 [6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-((R)-1-fenil-propil)-amina
5
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imagen47
El compuesto se prepare de acuerdo con el Procedimiento B.
LC-MS: 360,4 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 6 8,20 (s, 1H), 8,02 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,48 (dd, J = 2,3, 8,7 Hz, 1H), 7,42 (d aparente, J = 8,5 Hz, 2H), 7,36-7,27 (m, 3H), 7,19 (tt, J = 2,2, 7,3 Hz, 1H), 7,09 (d,J = 8,2 Hz, 1H),
7,00 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,21 (c aparente, J = 8,7 Hz, 1H), 4,46-4,38 (m, 2H), 2,75-2,63 (m, 2H), 3,91-3,78 (m, 2H), 2,18 (s, 3H), 2,00-1,81 (m, 2H), 0,94 (t, 3H).
Compuesto 48 (no de acuerdo con la invencion)
[(S)-1-(4-Fluoro-fenil)-etil]-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina
imagen48
El compuesto se prepare de acuerdo con el Procedimiento B.
CL-EM: 364,2 [M+H]+; RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 6 8,21 (s, 1H), 8,01 (s con est. fino, 1H), 7,48 (dd, J = 2,2, 8,9 Hz, 1H), 7,46-7,40 (m, 2H), 7,17-7,09 (m, 3H), 6,99 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,44 (quintuplete aparente, J = 7,3 Hz, 1H), 4,35 (d, J = 6,9, Hz, 1H), 4,29 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 3,91-3,78 (m, 2H), 2,70 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 2,17 (s, 3H), 1,53 (d, J =
5,1 Hz, 3H).
Compuesto 49 (no de acuerdo con la invencion)
[(R)-1-(4-Fluoro-fenil)-etil]-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina
imagen49
El compuesto se prepare de acuerdo con el Procedimiento B.
CL-EM: 364,3 [M+H]+; RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 6 8,21 (s, 1H), 8,01 (s con est. fino, 1H), 7,48 (dd, J = 2,2, 8,9 Hz, 1H), 7,46-7,40 (m, 2H), 7,17-7,09 (m, 3H), 6,99 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,44 (quintuplete aparente, J = 7,3 Hz, 1H), 4,35 (d, J = 6,9, Hz, 1H), 4,29 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 3,91-3,78 (m, 2H), 2,70 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 2,17 (s, 3H), 1,53 (d, J =
5,1 Hz, 3H).
Procedimiento C
Compuesto 40 (no de acuerdo con la invencion)
[(R)-1-(4-Cloro-fenil)-etil]-[6-(5-cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina
5
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A) (R)-6-Bencil-N-(1-(4-clorofenil)etil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina
Dos viales para microondas de 20 ml se cargaron con una media porcion de 6-bencil-4-cloro-5,6,7,8- tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (3,50 g, 13,5°mmol), (R)-1-(4-cloro-fenil)etilamina (4,20 g, 27,0°mmol), N,N- diisopropiletilamina (4,7 ml, 27°mmol) y acetonitrilo (20 ml); y la mezcla se calento en un microondas a 200 °C durante 2,5 h. La mezcla se concentro al vado y el residuo se recogio en CH2Cl2 (100 ml) y acetato de etilo (20 ml), se lavo con NaH2PO4 ac. 0,5 M (pH 4, 100 ml), se seco (Na2SO4) y se concentro. El residuo se purifico en columna de gel de sflice (MeOH al 0-5 %/Ch2CI2) para proporcionar una espuma de color amarillo palido (4,46 g).
LC-MS:, 379,5 [M+H]+;
1H RMN (400 MHz, CDCI3): 8,41 (s, 1H), 7,40-7,24 (m, 9H), 5,40 (p, 1H,J = 7,0 Hz), 4,38 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 3,78 y 3,73 (AB, 2H, J = 13,2 Hz), 3,36 y 3,32 (AB, 2H, J = 14,8 Hz), 2,85-2,75 (m, 4H), 1,54 (d, 3H, J = 6,9 Hz).
B) (R)-N-(1-(4-Clorofenil)etil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina
Un matraz de 250 ml equipado con un condensador se cargo con (R)-6-bencil-N-(1-(4-clorofenil)etil)-5,6,7,8- tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (4,43 g, 11,7°mmol), 1,2-dicloroetano (50 ml), cloroformiato de a-cloroetilo (1,5 ml, 14°mmol) y finalmente N,N-diisopropiletilamina (2,4 ml, 14°mmol) y la solucion de color rojo-marron resultante se coloco en un bano de aceite a 60 °C. Se anadio cloroformiato de a-cloroetilo adicional (2,0 ml, 18,4°mmol, 1,6 equiv) despues de 2,5 h. Despues de 4 h la mezcla se concentro a un aceite marron y el residuo se disolvio en metanol (50 ml) y se calento a reflujo durante 1 h. Despues de que se enfriara, la mezcla se concentro al vado y el residuo se repartio entre acetato de etilo/CH2Cl2 4/1 (100 ml) y NaH2PO4 ac. 0,5 M (100 ml). La fase organica se extrajo con acido dtrico 1 M (25 ml, 2 veces) y las fases acuosas combinadas se basificaron a pH > 12 con KOH acuoso al 50 % (50 ml) y se extrajeron con CH2Cl2 (250 ml, 50 ml). Los extractos de CH2Cl2 combinados se secaron (Na2SO4) y se concentraron para proporcionar una espuma solida de color naranja (4,0 g), que se purifico mediante columna de alumina basica (MeOH al 0-5 %/CH2Cl2) para proporcionar una espuma de color amarillo claro (1,48 g).
LC-MS: 289,4 [M+H]+;
1H RMN (400 MHZ, CDCI3): 8,42 (s, 1H), 7,29 (s, 4H), 5,41 (p, 1H, J = 7,0 Hz), 4,42 (d, 1H, J = 7,1 Hz), 3,71 y 3,67 (AB, 2H, J = 16,0 Hz), 3,16 (t, 2H, J = 5,8 Hz), 2,74 (t, 2H, J = 5,8 Hz), 1,56 (d, 3H, J = 6,9 Hz).
C) (R)-N-(1-(4-Clorofenil)etil)-6-(5-cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina
Una mezcla de (R)-N-(1-(4-clorofenil)etil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (80,0 mg, 0,277°mmol), 2- bromo-5-cloropiridina (69 mg, 0,36°mmol), tolueno seco (5 ml), Xantphos (10 mg, 0,02°mmol), terc-butoxido de sodio (40 mg, 0,42°mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (6,3 mg, 0,0069°mmol) en atmosfera de N2 se calento en un bano de aceite a 100 °C durante 1,5 h. La mezcla se absorbio en gel de sflice y se purifico mediante columna (MeOH al 0-5 %/CH2Cl2) para proporcionar un polvo de color castano claro.
LC-MS: 400,1 [M+H]+;
1H RMN (400 MHz, d6-DMSO): 8,21 (s, 1H), 8,18 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,73 (dd, 1H, J = 9,1, 2,7 Hz), 7,44-7,34 (m, 4H), 7,19 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,08 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 5,41 (p, 1H, J = 7,1 Hz), 4,41 y 4,34 (AB, 2H,J = 17,0 Hz), 3,97-3,83 (m, 2H), 2,72 (t, 2H, J = 5,6 Hz), 1,52 (d, 3H, J = 7,0 Hz).
Procedimiento D
Compuesto 50
(R)-6-(5-MetNpmdm-2-N)-N-(1-(6-(trifluorometN)pmdm-3-M)etN)-5,6,7,8-tetrahidropmdo[4,3-d]pmmidm-4-amma
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A una solution agitada de diclorhidrato de (R)-1-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)etanamina (44 mg, 0,17°mmol) y N,N- diisopropiletilamina (73 pl, 0,42°mmol) en acetonitrilo (1,1 ml) se le anadio 4-cloro-5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin- 2-il)pirido[4,3-d]pirimidina (30 mg, 0,1°mmol). La reaction se tapo y se calento en el microondas durante 10 horas a 180 °C. La mezcla de reaccion se inactivo con exceso de agua y se dejo en agitation durante 10-15 minutos. El producto precipitado se filtro, se lavo con agua y se seco en horno de vatio para obtener el compuesto del tUulo en forma de un solido de color castano.
LC-MS: 415,2 [M+H]+;
1H RMN (400 MHz, d6-CDCls): 8,83 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,07 (dd, 1H), 8,02 (d, 1H), 7,86 (d, 1H), 7,47 (dd, 1H), 7,31 (d, 1H,), 6,98 (d, 1H), 5,54-5,47 (m, 1H), 4,37 (c, 2H), 4,06-3,76 (m, 2H), 2,71 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,61 (d, 3H).
Procedimiento E
Compuesto 51 (no de acuerdo con la invention)
(S)-6-(5-Cloropiridin-2-il)-N-(1-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)etil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina
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Se anadieron 4-bromo-6-(5-cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (25 mg, 0,077°mmol), (S)-1- (6-(trifluorometil)piridin-3-il)etanamina (73,0 mg, 0,384°mmol), N,N-diisopropiletilamina (40,1 pl, 0,230°mmol) y acetonitrilo (1,0 ml) a un vial para microondas de 0,5 a 2 ml. La mezcla se hizo reaccionar en el reactor de microondas durante 2,5 horas a 200 °C. La mezcla resultante se trato con CH2Cl2 y se lavo con NaH2PO4 1 M, se seco (Na2SO4) y se evaporo. El residuo se purifico mediante columna de gel de sflice para obtener un solido de color amarillo claro (18,6 mg).
LC-MS: 435,4 [M+H]+;
1H RMN (400 MHz, CDCls): 8,78 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 8,40 (s, 1H), 8,16 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 7,87 (dd, 1H, J = 8,0, 2,0 Hz), 7,64 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,51 (dd, 1H, J = 8,8, 2,4 Hz), 6,76 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 5,54 (m, 1H), 4,87 (d, 1H, J =
6,4 Hz), 4,49 y 4,44 (AB, 2H, J = 16,0 Hz), 3,79 (t, 2H,J = 5,6 Hz), 2,94 (t, 2H, J = 5,6 Hz), 1,70 (d, 3H, J = 6,8 Hz).
Procedimiento F
Compuesto 52
[6-(5-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-[(R)-1-(6-trifluorometil-piridin-3-il)-etil]-
amina
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Se anadieron 4-bromo-6-(5-cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (250 mg, 0,768°mmol), (R)- 1-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)etanamina (219 mg, 1,15°mmol), N,N-diisopropiletilamina (401 pl, 2,30°mmol) y acetonitrilo (0,75 ml) a un vial para microondas de 0,5-2 ml. La reaccion se calento en el reactor de microondas a 200 °C durante 2,5 horas. Los solidos se filtraron de la solucion y se lavaron con acetonitrilo (0,5 ml, 2 veces) y eter (3 ml, 2 veces) (219 mg de un solido de color amarillo claro). El filtrado se evaporo y el residuo se redisolvio en CH2Cl2 (10 ml) y se lavo con NaH2PO4 1 M (8 ml, 2 veces). La fase organica se seco con Na2SO4, se filtro y se evaporo para proporcionar un solido de color naranja. El producto en bruto se purifico mediante columna para proporcionar67 mg de un solido de color amarillo claro. Los 2 productos que se obtuvieron se combinaron (219 mg + 67 mg). Para retirar algo de la impureza de color amarillo, se anadio eter etflico (3 ml) y la mezcla se agito durante aproximadamente 1 hora, despues, la solucion se decanto de los solidos. Los solidos se lavaron con eter etflico (2 ml, 2 veces) para proporcionar un solido de color beige claro (264 mg, rendimiento del 79 %).
LC-MS: 435,3 [M+H]+;
1H RMN (400 MHz, CDCls): 8,78 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 8,40 (s, 1H), 8,16 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 7,87 (dd, 1H, J = 8,0, 2,0 Hz), 7,64 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,51 (dd, 1H, J = 8,8, 2,4 Hz), 6,76 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 5,53 (m, 1H), 4,93 (d, 1H, J =
6,4 Hz), 4,49 y 4,44 (AB, 2H, J = 16,4 Hz), 3,79 (t, 2H,J = 5,6 Hz), 2,94 (t, 2H, J = 5,6 Hz), 1,70 (d, 3H, J = 7,2 Hz).
Procedimiento G
Compuesto 53
[6-(5-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-[(R)-ciclopropil-(6-trifluorometil-piridin-3-
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A una solucion agitada de diclorhidrato de (R)-ciclopropil(6-(trifluorometil)piridin-3-il)metanamina (53 mg, 0,184°mmol) y N,N-diisopropiletilamina (60 ul, 0,4°mmol) en acetonitrilo (1,2 ml) se le anadio 4-bromo-6-(5- cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (30 mg, 0,092°mmol). La mezcla de reaccion se calento en reactor de microondas a 180 °C durante 8 horas. Se anadio agua y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. Las fases organicas se combinaron, se secaron (MgSO4) y se concentraron para obtener un aceite de color marron que se purifico usando HPLC (semipreparativa, agua al 30-80 %/acetonitrilo) para proporcionar un solido de color marron claro (13 mg).
LC-MS: 461,0 [M+H]+;
1H RMN (400 MHz, CDCls): 8,81 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,17 (d, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,63 (d, 1H), 7,52 (dd, 1H), 6,78 (d, 1H), 5,16 (m, 1H), 4,62 (c, 1H), 4,52 (s, 2H), 3,86-3,69 (m, 2H), 2,95 (t, 2H), 1,33-1,28 (m, 1H), 0,77 (d, 2H), 0,55 (c, 2H).
Procedimiento H
Compuesto 54 (no de acuerdo con la invencion)
[6-(5-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-[(S)-ciclopropil-(6-trifluorometil-piridin-3-
il)-metil]-amina
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A una solucion agitada de diclorhidrato de (S)-ciclopropil(6-(trifluorometil)piridin-3-il)metanamina (0,048 g, 0,17°mmol) y N,N-diisopropiletilamina (96 ul, 0,55°mmol) en acetonitrilo (1,8 ml) se le anadio 4-bromo-6-(5- cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (0,045 g, 0,14°mmol). La reaccion se calento en microondas durante 7 horas a 180 °C. La mezcla se concentro y el residuo se purifico mediante columna de gel de sflice seguida de HPLC semipreparativa para obtener 7,8 mg de solido de color blanco.
LC-MS: 459,0 [M+H]+;
1H RMN (400 MHz, CDCls): 8,84 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,96 (d, 1H), 7,66 (d, 1H), 7,57 (dd, 1H), 6,89 (d, 1H), 4,81-4,63 (m, 3H), 3,83 (m, 2H), 3,13 (m, 2H), 1,25 (s, 2H), 0,80 (t, 2H), 0,53 (m, 2H).
Procedimiento I
Compuesto 55 (no de acuerdo con la invencion)
(S)-2-(6-(5-Metilpiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino)-2-(4-(trifluorometil)fenil)etanol
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Una mezcla de reaccion de 4-cloro-5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidina (150 mg, 0,58°mmol) y (S)-2-amino-2-(4-(trifluorometil)fenil)etanol (180 mg, 0,86°mmol) en acetonitrilo (3 ml) y N,N-diisopropiletilamina (0,20 ml, 1,2°mmol) se realizo en un reactor de microondas a 180 °C durante 2 h. La cL-EM indico que el amino alcohol se habia consumido y la conversion aproximadamente al 50 % del cloruro. Se anadio (S)-2-amino-2-(4- (trifluorometil)fenil)etanol (100 mg) adicional y a la mezcla se le realizo la reaccion de microondas a 160 °C durante otras 2 h. La mezcla de reaccion se trato con Na2CO3 ac. y EtOAc (150 ml). La fase organica se separo y se lavo con salmuera, se seco (Na2SO4) y se concentro. El residuo se purifico mediante HPLC semipreparativa para proporcionar un polvo de color blanco.
LC-MS: 430,2 [M+H]+;
1H RMN (400 MHz, d6-DMSO): 8,19 (s, 1H), 8,03 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 7,67 y 7,63 (AB, 4H, J = 8,4 Hz), 7,49 (dd, 1H, J = 8,4, 2,4 Hz), 7,13 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,00 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 5,39 (m, 1H), 5,08 (t, 1H, J = 6,0 Hz), 4,40 (s, 2H), 3,90-3,71 (m, 4H), 2,71 (m, 2H), 2,18 (s, 3H).
Procedimiento O
5 Compuesto 58
(R)-3-(6-Metoxi-piridin-3-il)-3-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-propan- 1 -ol
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Una mezcla de reaccion de 4-cloro-5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidina (45 mg, 0,17°mmol) 10 y (R)-3-amino-3-(6-metoxipiridin-3-il)propan-1-ol (31 mg, 0,17°mmol) (preparada de forma similar de acuerdo con el procedimiento para el Intermedio 10) en acetonitrilo (2 m) y W,W-diisopropiletilamina (60 pl, 0,34°mmol) se sometio a irradiacion de microondas a 180 °C durante 1 h. La mezcla de reaccion se concentro y se purifico mediante HPLC semipreparativa para proporcionar una espuma de color amarillo claro.
LC-MS: 407,1 [M+H]+;
15 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO): 8,21 (s, 1H), 8,18 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 8,01 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 7,75 (dd, 1H, J = 8,4,
2,4 Hz), 7,47 (dd, 1H, J = 8,8, 2,0 Hz), 7,14 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 6,96 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,77 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 5,40 (m, 1H), 4,61 (t, 1H, J = 4,8 Hz), 4,31 (s, 2H), 3,90-3,75 (m, 5H), 3,53-3,37 (m, 2H), 2,69 (m, 2H), 2,20-2,10 (m, 4H), 1,99-1,89 (m, 1H).
Procedimiento P
20 Compuesto 59
(S)-2-[6-(5-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-2-(6-metoxi-piridin-3-il)-etanol
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Una mezcla de reaccion de 4-cloro-6-(5-cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (55 mg, 0,20°mmol) y (S)-2-amino-2-(6-metoxipiridin-3-il)etanol (33 mg, 0,20°mmol) en acetonitrilo (2 ml) y A/,W-diisopropiletilamina (68 pl, 25 0,39°mmol) se sometio a irradiacion de microondas a 180 °C durante 2 h. La mezcla de reaccion se concentro y se
purifico mediante HPLC semipreparativa (100 * 20,2°mm, columna C18; CH3CN al 25-50 %-agua [Et2NH 10°mM]) para proporcionar un solido de color blanquecino.
LC-MS: 413,3 [M+H]+;
1H RMN (400 MHz, d6-DMSO): 8,24 (s, 1H), 8,18 (m, 2H), 7,76-7,70 (m, 2H), 7,08 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 7,03 (d, 1H, J 30 = 7,6 Hz), 6,77 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 5,31 (m, 1H), 5,01 (t, 1H, J = 5,6 Hz), 4,39 (s, 2H), 3,95-3,65 (m, 7H), 2,72 (m,
2H).
Procedimiento Q
Compuesto 60
(S)-2-(6-Metoxi-piridin-3-il)-2-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-etanol
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Una mezcla de reaccion de 4-cloro-5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidina (55 mg, 0,21°mmol) y (S)-2-amino-2-(6-metoxipiridin-3-il)etanol (35 mg, 0,21°mmol) en acetonitrilo (2 ml) y A/,W-diisopropiletilamina (73 pl, 0,42°mmol) se sometio a irradiacion de microondas a 180 °C durante 2 h. La mezcla de reaccion se concentro y se purifico mediante HPLC semipreparativa (100 * 20,2°mm, columna C18; CH3CN al 25-50 %-agua [Et2NH 10°mM])
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para proporcionar un solido de color amarillo claro.
LC-MS: 393,3 [M+H]+;
1H RMN (400 MHz, d6-DMSO): 8,22 (s, 1H), 8,18 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 7,75 (dd, 1H, J = 8,4,
2,4 Hz), 7,47 (dd, 1H, J = 8,8, 2,4 Hz), 7,00 (t, 2H, J = 8,8 Hz), 6,76 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 5,31 (m, 1H), 5,01 (t, 1H, J = 5,6 Hz), 4,35 (s, 2H), 3,90-3,65 (m, 7H), 2,71 (m, 2H), 2,17 (s, 3H).
Procedimiento R
Compuesto 61
(R)-3-(6-Metil-piridin-3-il)-3-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-propan-1-
ol
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Una mezcla de reaccion de 4-cloro-5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metiipindin-2-ii)pirido[4,3-d]pirimidina (35 mg, 0,14°mmol) y (R)-3-amino-3-(6-metilpiridin-3-il)propan-1-ol (15 mg, 0,090°mmol) en acetonitrilo (1,5 ml) y A/,W-diisopropiletilamina (31 |jl, 0,18°mmol) se sometio a irradiacion de microondas a 180 °C durante 2 h. La mezcla de reaccion se concentro y se purifico mediante HPLC semipreparativa (100 * 20,2°mm, columna C18; CH3CN al 30-60 %-agua [Et2NH 10°mM]) para proporcionar una espuma de color amarillo claro. LC-MS: 391,4 [M+H]+.
Procedimiento S
Compuesto 64
[6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-[(R)-1-(2-metil-pirimidin-5-il)-etil]-amina
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Una mezcla de reaccion de 4-cloro-5,6,7,8-tetramdro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidina (120 mg, 0,46°mmol) y (R)-1-(2-metilpirimidin-5-il)etanamina (120 mg, 0,87°mmol) en acetonitrilo (1 ml) y W,A/-diisopropiletilamina (500 jl, 3°mmol) se sometio a irradiacion de microondas a 185 °C durante 3,5 h. La mezcla de reaccion se concentro y el residuo se purifico mediante HPLC semipreparativa (100 * 20,2°mm, columna C18; CH3CN al 30-55 %-agua [Et2NH 10°mM]) para proporcionar un solido de color claro. LC-MS: 362,4 [M+H]+;
1H RMN (400 MHz, d6-DMSO): 8,72 (s, 2H), 8,23 (s, 1H), 8,01 (d, 1H, J= 2,4 Hz), 7,47 (dd, 1H, J = 8,4, 2,4 Hz), 7,22 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 6,96 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 5,40 (m, 1H), 4,37 y 4,31 (AB, 2H, J = 16,8 Hz), 3,84 (m, 2H), 2,71 (t, 2H, J = 5,6 Hz), 2,57 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 1,59 (d, 3H, J= 7,2 Hz).
ENSAYOS
Los compuestos proporcionados en el presente documento pueden evaluarse usando ensayos en celulas aisladas, tales como ensayos de flujo de entrada de calcio o electrofisiologicos, usando ensayos bioqmmicos, tales como ensayos de union a receptores P2X2 y P2X3, o pueden evaluarse en modelos animales de dolor o de funcion urinaria. Se describen ejemplos de ensayos a continuacion.
Los receptores purinergicos P2X2 y P2X3 se expresan en una diversidad de tejidos, incluyendo diversos ganglios sensoriales y simpaticos, tales como los ganglios de la rafz dorsal (GRD), nudosos (ND), del trigemino (TG) y cervicales superiores (GCS) y tambien en las celulas del musculo liso (Burnstock, Trends Pharmacol. Sci. 27: 16676, 2006). En varias regiones, se coexpresan receptores P2X2 y P2X3 y estudios funcionales han demostrado la presencia de receptores P2X2/3 heteromericos cuyas propiedades difieren de las de cualquier receptor homomerico. Ademas, se han descrito receptores P2X2/3 quimericos, que contienen el dominio citoplasmatico N-terminal de P2X2 condensado con el primer dominio transmembrana de P2X3; estos canales quimericos conservan el perfil farmacologico de los receptores P2X3 homomericos, mientras que adquiere el fenotipo no desensibilizante del receptor P2X2 homomerico (Neelands y col., Br. J. Pharmacol. 140: 202-10, 2003). El comportamiento no desensibilizante del receptor quimerico es especialmente util para la deteccion.
Los miembros de la familia P2X son canales de cationes no selectivos abiertos por ligando cuya actividad puede caracterizarse mediante el uso de procedimientos electrofisiologicos, o mediante la medicion del flujo de entrada de iones calcio usando colorantes fluorescentes sensibles al calcio. La aplicacion de agonistas tales como el ATP o un
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analogo de ATP, tal como 5'-trifosfato de a,p-metilenadenosina (apMeATP, Sigma-Aldrich), provoca la apertura del canal, dando como resultado el flujo de corriente y el flujo de entrada de calcio (Bianchi y col., Eur. J. Pharmacol. 376: 127-38, 1999).
Los compuestos proporcionados en el presente documento pueden ensayarse para determinar la actividad antagonista en los receptores P2X3 y P2X2/3 mediante la medicion de su capacidad de influir en la apertura del canal por el ATP, el apMeATP u otros agonistas. Los ensayos funcionales de la actividad de los receptores incluyen, pero no se limitan a: (i) el flujo de entrada de iones de calcio medido mediante la fluorescencia de un colorante sensible al calcio y; (ii) el flujo de entrada de iones que es resultado de la apertura del canal medido mediante procedimientos electrofisiologicos. Estos procedimientos pueden usarse para evaluar la funcion del canal cuando el receptor pertinente se expresa de manera heterologa en celulas de mairnferos o de anfibios. Estos procedimientos tambien pueden usarse para evaluar los compuestos proporcionados en el presente documento en las neuronas primarias de roedores y otras celulas primarias de mamfferos y en estirpes celulares que normalmente expresan el receptor de interes.
Los compuestos pueden evaluarse adicionalmente para determinar su capacidad de unirse a los receptores P2X3 y P2X2/3 usando enfoques bioqmmicos.
Los compuestos tambien pueden evaluarse para determinar su capacidad para modificar la senalizacion del sistema nervioso sensorial y autonomo cuando se sabe que los receptores que tienen un papel (por ejemplo, la senalizacion aferente de la vejiga urinaria, la sensacion de dolor de nervios sensoriales). Finalmente, los compuestos proporcionados en el presente documento pueden ser ensayarse in vivo en modelos animales pertinentes conocidos para un experto en la materia, tales como, por ejemplo, los modelos de dolor neuropatico, inflamatorio o visceral, o modelos de incontinencia urinaria.
Se ofrecen los siguientes ejemplos biologicos para ilustrar los compuestos, composiciones farmaceuticas y procedimientos proporcionados en el presente documento y no deben interpretarse de ninguna manera como limitantes del ambito de los mismos.
Ensayo de captacion de calcio
Clones y estirpes celulares:
Se clonaron P2X3 humano (n.° de referencia NM_002559), P2X2 (n.° de referencia NM_170682) y P2X3 (n.° de referencia NM_031075) y P2X2 de rata (n.° de referencia NM_053656) en un vector de expresion de mai^ero (por ejemplo, pcDNA5/TO o pcDNA3 de Invitrogen). El clon quimera P2X2/3 humano se creo como se describe por Neelands y col., y despues se clono en un vector de expresion como anteriormente. Los receptores se expresaron en celulas (por ejemplo, HEK293 o 1321N1 (obtenidas de la ECACC)) a traves de transfeccion transitoria usando transfeccion mediada por lfpidos estandar, o mediante creacion de transfectantes estables para cada receptor. Para la expresion del receptor heteromerico P2X2/3, el vector de expresion de P2X3 se transfecto de forma estable en una estirpe celular que ya expresaba de forma estable el P2X2. La funcion del heteromero P2X2/3 se aislo usando procedimientos farmacologicos. Las estirpes celulares se mantuvieron en DMEM + Glutamax al 5 %, el nivel apropiado de antibiotico selectivo y SFB inactivado por calor al 10 %.
Ensayo de antagonistas de P2X:
La actividad funcional de los compuestos en el receptor P2X se determino midiendo su capacidad para inhibir el flujo de entrada de calcio inducido por agonista. Los compuestos se ensayaron para determinar la actividad antagonista frente a la quimera P2X2/3, el homomero P2X3 o el heteromero P2X2/3. Al comienzo de cada dfa de deteccion, se determino la CE50 del agonista. Posteriormente, el % de inhibicion y las CI50 del compuesto se determinaron usando una concentracion de agonista predeterminada (C50-90 dependiendo de la estirpe celular) como estfmulo. Los agonistas utilizados fueron apMeATP, ATP u otros analogos de ATP. Los compuestos pueden ensayarse en concentraciones que vanan de 1 pM a 10°|jM.
Para ensayar la actividad antagonista, las celulas que expresaban el receptor apropiado se sembraron en placas de 96 o 384 pocillos 18-24 horas antes del ensayo. El dfa del ensayo, las celulas se cargaron con colorante fluorescente sensible al calcio (por ejemplo, reactivo Fluo-4 sin lavado - Invitrogen, numero F36206 del catalogo o el Kit de ensayo de calcio PBX BD™ - BD numero 640175 del catalogo) en solucion salina tamponada de Hank (HBSS) con CaCl2 suplementario hasta 10°mM. Las placas se incubaron a 37 °C y despues se equilibraron a temperatura ambiente. El antagonismo del flujo de entrada de calcio inducido por agonista se midio usando un lector de placas de formacion de imagenes fluorescentes (por ejemplo FLIPRtetra, Molecular Devices, Sunnyvale, CA). El ensayo comprendfa dos etapas: una fase de pretratamiento seguida de una fase de tratamiento. Los compuestos se ensayaron de la siguiente manera: Para la fase de pretratamiento, se anadieron 50 jl de concentracion 3x del compuesto de ensayo en HBSS a las celulas que conteman 100 jl de medios de carga de colorante para conseguir una concentracion final de compuesto de ensayo de 1x. Para la fase de tratamiento, en un intervalo establecido despues del pretratamiento (1-30 minutos), se anadieron 50 jl de compuesto de ensayo 1x mas solucion de agonista 4x, dando como resultado una concentracion final de compuesto 1X y agonista 1X. La fluorescencia se midio en intervalos de 0,1-3 segundos - con una longitud de onda de excitacion de 494 nM y una longitud de onda de
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emision de 515 nM. Las respuestas se midieron como (fluorescencia maxima despues de la adicion de agonista) menos (fluorescencia basal antes del tratamiento). El porcentaje de inhibicion se calculo de la siguiente manera:
(Respuesta del Compuesto - Respuesta del Control)
Porcentaje de inhibicion = 1 - ------------------------------------------------------------------------------------ X 100
(Respuesta del Agonista - Respuesta del Control)
Los valores de CI50 se determinaron mediante el analisis de los datos de dosis-respuesta en un ajuste log^stico de 4 parametros usando GraphPad Prizm.
Experimentos electrofisiologicos
Pinzamiento zonal de celulas enteras:
Los registros de celulas enteras se realizaron usando el amplificador de pinzamiento zonal Multiclamp700A y el programa de adquisicion Clampex (Molecular Devices Corporation). Los registros de celulas enteras se obtuvieron de celulas 1321N1 o HEK transfectadas de forma estable o transitoriamente con vectores de expresion de P2X3 y/o de P2X2. Las soluciones se aplicaron ya sea durante periodos de 1 a 3 segundos mediante un sistema de liberacion de 8 valvulas y flujo por gravedad, o durante periodos de milisegundos usando el sistema de perfusion de cambio rapido Dynaflow (Cellectricon Inc.). La solucion de la pipeta interna podfa incluir cloruro de cesio 140°mM, EGTA 10°mM y Hepes 5°mM a pH 7,2; la solucion externa normal era NaCl 140°mM, KCl 5°mM, CaCl2 1°mM, MgCh 2°mM, Hepes 25°mM y glucosa 10°mM. Las curvas de concentracion-respuesta se obtuvieron mediante el registro de las corrientes en respuesta a aplicaciones breves de agonista en intervalos de 1-3 min donde la solucion externa normal se perfundfa durante los intervalos. Para obtener las curvas de inhibicion, los antagonistas se preaplicaron a las celulas durante un periodo de tiempo definido antes de una aplicacion corta del agonista + antagonista. Los periodos de preaplicacion de antagonista y aplicaciones de agonista + antagonista fueron constantes para toda la serie de concentraciones de ensayo. Las corrientes evocadas por agonista se midieron en las celulas fijadas en voltaje a -60 o -80 milivoltios. Los valores de CI50 se determinaron mediante el analisis de los datos de dosis- respuesta en un ajuste logfstico de 4 parametros utilizando GraphPad Prizm u Origin.
Registro de fijacion de voltaje de dos electrodos automatizado:
Se aislaron ovocitos de Xenopus (Nasco) mediante disociacion enzimatica usando colagenasa (Worthington, 2 mg/ml). Despues, los ovocitos se inyectaron individualmente con ARNm de P2X3, P2X2 o una combinacion de P2X2 y P2X3. Cada ovocito recibio ~64 nl de solucion de ARN en agua a una concentracion de ~0,01 pg/pl. Los ovocitos inyectados se almacenaron en solucion de incubacion de ovocitos convencional, ND96, que contema (en mM) NaCl 96, KCl 2, MgCl2 1, CaCl2 1-5 y gentamicina 50 pg/ml a 16 °C. Se observo la corriente inducida por agonista causada por la apertura del canal P2X en los ovocitos 1-5 dfas despues de la inyeccion. Para los registros automaticos, se colocaron 8 ovocitos en las camaras de registro. Cada ovocito se atraveso por 2 electrodos de vidrio que teman resistencias de 0,5 a 1 MOhm cuando se estaban llenos con una solucion de KCl 3 M. El avance del electrodo y el atravesamiento de los ovocitos estaban bajo el control del software (OPUSXPRESS 1.1, Molecular Devices Corporation). Las soluciones se prepararon en placas de 96 pocillos y se pipetearon roboticamente en las camaras de registro de ovocitos mediante una pipeta de 8 canales. La inhibicion por los antagonistas se determino mediante el calculo del % de corriente restante cuando los ovocitos se estimularon con agonista en presencia del compuesto de ensayo en comparacion con la corriente maxima en presencia de agonista solo. La secuencia de aplicacion de la solucion al ovocito fue la siguiente: una concentracion espedfica (por ejemplo, CE50, CEs0 o CE90) del agonista se anadio primero para provocar la respuesta maxima. Despues del pulso, los ovocitos se lavaron durante varios minutos con ND96. Despues, se anadio el compuesto de ensayo, en una concentracion particular, seguido del compuesto en la misma concentracion junto con el agonista. Las concentraciones de los compuestos podfan variar de 0,3 a 10.000 nM. Los valores de CI50 se determinaron mediante el analisis de los datos de dosis- respuesta usando un ajuste logfstico de 4 parametros usando el software GraphPad Prizm u Origin.
Fijacion de voltaje de dos electrodos manual:
Se atravesaron ovocitos individuales manualmente con 2 electrodos y las corrientes evocados por agonista se midieron usando un amplificador de pinzamiento de ovocitos (Warner Instrument Corp.) y el software de adquisicion Clampex (Molecular Devices Corporation). Las soluciones se administraron usando flujo por gravedad y se aplicaron como anteriormente. La corriente inducida por agonista se midio en ausencia y en presencia de antagonista. Los antagonistas se ensayaron en una serie de concentraciones para obtener una curva de inhibicion como se ha descrito anteriormente.
Cribados de selectividad:
Se ensayaron compuestos que inhiben la activacion de P2X3 y/o P2X2/3 para determinar su actividad frente a otros receptores P2X para determinar su selectividad para miembros espedficos de la familia P2X. La lista de receptores ensayados incluye, pero no se restringe a, P2X1, P2X2, P2X4, P2X5, P2X6 y P2X7. Los tipos de ensayo utilizados para la determinacion de la selectividad incluyen: 1) el Flujo de Entrada de Calcio en celulas que expresaban de
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forma heterologa el receptor pertinente, 2) la Determinacion Electrofisiologica de la inhibicion del receptor ya sea en celulas de mairnfero o en los ovocitos de Xenopus que expresaban de forma heterologa el receptor de interes. Los procedimientos y analisis de datos fueron similares a los descritos anteriormente para P2X3 y P2X2/3.
Union de radioligando:
Se realizaron experimentos de radioligandos para determinar la afinidad de los compuestos de ensayo por los receptores P2X3 homomerico y P2X2/3 heteromerico. Estos estudios tambien proporcionaron informacion valiosa sobre el mecanismo de accion del antagonismo. Las metodologfas generales utilizadas para los experimentos de union de radioligandos para los receptores P2X3 y P2X2/3 son descritas por Jarvis y col., J. Pharmacol. Exp. Ther. 10: 407-16, 2004.
En resumen, las membranas celulares se prepararon a partir de celulas que expresaban de forma estable o transitoria receptores P2X2 o P2X3/3. Las celulas se cultivaron hasta la confluencia, se lavaron, se aislaron y se almacenaron en forma de sedimentos a -80 °C hasta su uso. Algunos estudios podfan requerir la adicion de Apirasa o hexoquinasa (Sigma-Aldrich) durante la preparacion de las membranas para minimizar la desensibilizacion del receptor mediada por ATP durante la preparacion de las membranas. Las membranas se prepararon resuspendiendo el sedimento celular en tampon de homogeneizacion, homogeneizando y centrifugando para obtener un sedimento de membrana. Las concentraciones totales de protema se determinaron usando procedimientos convencionales.
Los estudios de desplazamiento de union se dirigieron usando procedimientos adaptados de Jarvis y col. En condiciones optimizadas, los experimentos de competencia de ligando se realizan usando un radioligando ([3H]A- 317491, Abbott), u otros radioligandos de alta afinidad, y una gama de diferentes concentraciones de compuestos de ensayo en tampon de union. Los estudios de saturacion de ligando se realizaron usando un intervalo de concentraciones de radioligando. Todas las reacciones de union se terminaron mediante filtracion rapida a traves de un filtro de fibra de vidrio. Las membranas se lavaron, se incubaron en lfquido de centelleo y se contaron en un contador de centelleo. Los valores de CI50 se determinaron usando una ecuacion de Hill logfstica de cuatro parametros.
Metabolismo de farmacos y farmacocinetica Permeabilidad de Caco-2:
La permeabilidad de Caco-2 se midio de acuerdo con el procedimiento descrito en Yee, Pharm. Res. 14: 763-6, 1997. Las celulas Caco-2 se cultivaron sobre soportes de filtro (sistema de insercion de multiples pocillos Falcon HTS) durante 14 dfas. El medio de cultivo se retiro de los compartimentos tanto apical como basolateral y las monocapas se preincubaron con 0,3 ml precalentados de tampon apical y 1,0 ml de tampon basolateral durante 0,75 horas a 37 °C en un bano de agua agitador a 50 ciclos/min. El tampon apical consistfa en solucion salina equilibrada de Hanks, monohidrato de D-glucosa 25°mM, tampon biologico MES 20 mM, CaCh 1,25°mM y MgCh 0,5°mM (pH 6,5). El tampon basolateral consistfa en solucion salina equilibrada de Hanks, monohidrato de D-glucosa 25°mM, tampon biologico HEPES 20 mM, CaCh 1,25°mM y MgCh 0,5°mM (pH 7,4). Al final de la preincubacion, los medios se retiraron y se anadio solucion de compuesto de ensayo (10 |jM) en tampon al compartimiento apical. Los insertos se trasladaron a los pocillos que conteman tampon basolateral fresco y se incubaron durante 1 h. La concentracion de farmaco en el tampon se midio mediante analisis CL/EM.
El caudal (F, masa/tiempo) se calculo a partir de la pendiente de aparicion acumulada de sustrato en el lado receptor y el coeficiente de permeabilidad aparente (Pap) se calculo a partir de la siguiente ecuacion:
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donde AS es el area superficial para el transporte (0,3 cm2), VD es el volumen de donante (0,3 ml), MD es la cantidad total de farmaco en el lado del donante at = 0. Todos los datos representaban la media de 2 insertos. La integridad de la monocapa se determino mediante transporte amarillo Lucifer.
Union de dofetilida humana:
Se suspendio pasta celular de celulas HEK-293 que expresaban el producto HERG en un volumen 10 veces superior de tampon Tris 50°mM ajustado a pH 7,5 a 25 °C con HCl 2 M que contema MgCh 1°mM, KCl 10 mM. Las celulas se homogeneizaron usando un homogeneizador Polytron (a la maxima potencia durante 20 segundos) y se centrifugaron a 48.000g durante 20 minutos a 4 °C. El sedimento se resuspendio, se homogeneizo y se centrifugo una vez mas de la misma manera. El sobrenadante resultante se desecho y se resuspendio el sedimento final (volumen 10 veces superior de tampon Tris 50°mM) y se homogeneizo a la potencia maxima durante 20 segundos. El homogeneizado de membrana se dividio en almuotas y se almaceno a -80 °C hasta su uso. Una almuota se utilizo para la determinacion de la concentracion de protema usando un Kit Rapido de Ensayo de Protemas y un lector de placas ARVO SX (Wallac). Toda la manipulacion, la solucion madre y el equipo se mantuvieron en hielo en todo momento. Para los ensayos de saturacion, los experimentos se realizaron en un volumen total de 200 pl. La
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saturacion se determino incubando 20 jl de [3H]-dofetilida y 160 |jl de homogeneizados de membrana (20-30 jg de protema por pocillo) durante 60 min a temperatura ambiente en ausencia o presencia de dofetilida 10 jM a concentraciones finales (20 jl) para la union total o inespedfica, respectivamente. Todas las incubaciones se terminaron mediante filtracion rapida al vado sobre papeles de filtro de fibra de vidrio empapados con polieterimida (PEI) usando el recolector de celulas Skatron seguido de dos lavados con tampon Tris 50°mM (pH 7,5 a 25 °C). La radiactividad unida al receptor se cuantifico mediante el recuento de centelleo lfquido usando un contador Packard LS.
Para el ensayo de competencia, los compuestos se diluyeron en placas de polipropileno de 96 pocillos como diluciones de 4 puntos en formato semilogantmico. Todas las diluciones se realizaron en DMSO primero y despues se transfirieron a tampon Tris 50°mM (pH 7,5 a 25 °C) que contema MgCh 1°mM, KCl 10°mM de manera que la concentracion final de DMSO se volvio igual al 1 %. Los compuestos se dosificaron por triplicado en placas de ensayo (4 jl). Los pocillos de union total y de union inespedfica se establecieron en 6 pocillos como vedculo y dofetilida 10°jM a la concentracion final, respectivamente. El radioligando se preparo a una concentracion final de 5,6x y esta solucion se anadio a cada pocillo (36 jl). El ensayo se inicio mediante la adicion de perlas de Ensayo de proximidad de centelleo (SPA) de poli-L-lisina YSi (50 jl, 1 mg/pocillo) y membranas (110 jl, 20 jg/pocillo). La incubacion continuo durante 60 min a temperatura ambiente. Las placas se incubaron durante 3 horas a temperatura ambiente para que las perlas se asentaran. La radiactividad unida al receptor se cuantifico mediante el conteo con el contador de placas WALLAC MICROBETA.
Ensayo HERG:
Las celulas HEK 293 que expresaban de forma estable el canal de potasio HERG se usaron para el estudio electrofisiologico. La metodologfa para la transfeccion estable de este canal en celulas HEK puede encontrarse en otro sitio (Zhou y col., Biophys J. 74: 230-41, 1998). Antes del dfa de la experimentacion, las celulas se recogieron de los matraces de cultivo y se sembraron sobre cubreobjetos de vidrio en un medio Medio Esencial Mmimo (MEM) convencional con suero fetal de ternera (SFT) al 10%. Las celulas cultivadas en placas se almacenaron en una incubadora a 37 °C mantenida en una atmosfera de O2 al 95 %/CO2 al 5 %. Las celulas se estudiaron entre 15-28 horas despues de la recogida.
Las corrientes HERG se estudiaron usando tecnicas de pinzamiento zonal convencionales en el modo de celulas enteras. Durante el experimento las celulas se superfusionaron con una solucion externa patron de la siguiente composicion (mM); NaCl, 130; KCl, 4; CaCl2, 2; MgCh, 1; Glucosa, 10; HEPES, 5; pH 7,4 con NaOH. Los registros de celulas enteras se realizaron usando un amplificador de pinzamiento zonal y pipetas de parche que teman una resistencia de 1-3 MOhm cuando se llenaban con la solucion interna patron de la siguiente composicion (mM); KCl, 130; MgATP, 5; MgCh, 1,0; HEPES, 10; EGTA 5, pH 7,2 con KOH. Solo aquellas celulas con resistencias de acceso inferiores a 15 MOhm y resistencias de sellado >1 Gohm se aceptaron para experimentacion adicional. Se aplico compensacion de la resistencia en serie hasta un maximo del 80 %. No se hizo ninguna resta de fugas. Sin embargo, la resistencia de acceso aceptable depende del tamano de las corrientes registradas y del nivel de compensacion de la resistencia en serie que puede usarse con seguridad. Despues de la consecucion de la configuracion de celula entera y del tiempo suficiente para la dialisis celular con solucion de pipeta (>5 min), se aplico a la celula un protocolo de voltaje convencional para provocar corrientes de membrana. El protocolo de voltaje fue el siguiente. La membrana se despolarizo a partir de un potencial de mantenimiento de -80 mV a +40 mV durante 1000 ms. A esto le siguio una rampa de voltaje descendente (velocidad 0,5 mV ms-1) de nuevo al potencial de mantenimiento. El protocolo de voltaje se aplico a una celula de forma continua durante todo el experimento cada 4 segundos (0,25 Hz). Se midio la amplitud de la corriente maxima obtenida aproximadamente a -40 mV durante la rampa. Una vez que se obtuvieron respuestas de corrientes evocadas estables en la solucion externa, se aplico vedculo (DMSO al 0,5% en la solucion externa patron) durante 10 a 20 min mediante una bomba peristaltica. Siempre que hubiera cambios mmimos en la amplitud de la respuesta a la corriente evocada en la condicion de vedculo control, el compuesto de ensayo ya sea de 0,3, 1, 3, 10°mM se aplicaba durante un periodo de 10 min. El periodo de 10 min inclrna el tiempo en el que la solucion de suministro pasaba a traves del tubo desde el deposito de solucion a la camara de registro a traves de la bomba. El tiempo de exposicion de las celulas a la solucion de compuesto era de mas de 5 min despues de que la concentracion de farmaco en el pocillo de la camara alcanzaba la concentracion de que se probaba. Hada un periodo de lavado posterior de 10 a 20 min para evaluar la reversibilidad. Por ultimo, las celulas se expusieron a alta dosis de dofetilida (5°mM), un bloqueante de IKr espedfico, para evaluar la corriente endogena insensible.
Todos los experimentos se realizaron a temperatura ambiente (23 ± 1 °C). Las corrientes de membrana evocadas se registraron en lmea en un ordenador, se filtraron a 500-1 KHz (Bessel -3 dB) y se muestrearon a 1-2 KHz usando el amplificador de pinzamiento zonal y el software de analisis de datos espedfico. Se midio la amplitud maxima de corriente, que se produjo aproximadamente a -40 mV, fuera de lmea en el ordenador.
La media aritmetica de los diez valores de amplitud se calculo en condiciones de vedculo control y en presencia de farmaco. El porcentaje de disminucion de IN en cada experimento se obtuvo mediante el valor de corriente normalizado usando la siguiente formula: IN = (1 - ID/IC) x 100, donde ID es el valor de corriente medio en presencia de farmaco e IC es el valor de corriente medio en condiciones de control. Se realizaron experimentos separados para cada concentracion de farmaco o control emparejado con el tiempo y la media aritmetica de cada experimento
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se define como el resultado del estudio.
Semivida en microsomas hepaticos humanos (HLM, del ingles human liver microsomes)
Los compuestos de ensayo (1 jM) se incubaron con MgCl2 3,3 mM y HLM 0,78 mg/ml (HL101) en tampon de fosfato de potasio 100°mM (pH 7,4) a 37 °C en una placa de 96 pocillos profundos. La mezcla de reaccion se dividio en dos grupos, un grupo P450 y un grupo sin P450. Se anadio NADPH solamente a la mezcla de reaccion del grupo P450. Una alfcuota de muestras del grupo P450 se recogio en el punto temporal 0, 10, 30 y 60 min, donde el punto temporal 0 min indicaba el momento en el que se anadio NADPH a la mezcla de reaccion del grupo P450. Una alfcuota de muestras del grupo sin P450 se recogio en los puntos temporales -10 y 65 min. Las alfcuotas recogidas se extrajeron con solucion de acetonitrilo que contema un patron interno. La protema precipitada se centrifugo en una centnfuga (2000 rpm, 15 min). La concentracion de compuesto en el sobrenadante se midio mediante el sistema CL/EM/EM. El valor de semivida se obtuvo representando el logaritmo natural de la relacion del area de pico de los compuestos/el patron interno frente al tiempo. La pendiente de la lmea de mejor ajuste a traves de los puntos proporciono la tasa de metabolismo (k). Este se convirtio en un valor de semivida usando la siguiente ecuacion:
Semivida = In2 / k
Ensayos de eficacia In Vivo
Los antagonistas de P2X3, P2X2/3 pueden ensayarse en diversos modelos animales de enfermedades humanas, incluyendo modelos de dolor neuropatico, inflamatorio y visceral y modelos de funcion de la vejiga. Los antagonistas de P2X3 pueden administrarse antes o despues de la induccion del modelo dependiendo del modelo espedfico y de las caractensticas farmacocineticas del compuesto. La via de administracion puede incluir la intraperitoneal (i.p.), la subcutanea (s.c.), la oral (p.o.), la intravenosa (i.v.), la intratecal (i.t.) o la intraplantar. Los criterios de valoracion para estos estudios pueden incluir la alodinia mecanica, la hiperalgesia termica, la alodinia fria, las respuestas disminuidas al dolor inducido por formalina, las contorsiones y contracciones disminuidas o la mecanosensibilidad alterada de la vejiga segun sea apropiado para el modelo como se describe a continuacion.
Modelo de formalina:
Los compuestos de ensayo se administraron en diversos momentos antes de la administracion intraplantar de formalina. Una solucion diluida de formalina (25-50 jl de formaldehndo al 1-2,5 %/solucion salina) se administro s.c. en la superficie plantar de la pata trasera izquierda con ligera restriccion. Inmediatamente despues de la inyeccion, los animales se colocaron en un soporte de malla dentro de una camara de observacion transparente lo suficientemente grande como para permitir la libre circulacion de los animales durante el estudio. Los comportamientos se puntuaron usando la puntuacion manual o la puntuacion automatizada.
Puntuacion manual: Usando un temporizador de tres canales, el observador registro el tiempo (t en segundos) de tolerancia al peso (t-i), levantamiento de la pata (t2) y lamer/morder/temblar (t3) disminuidos. Los resultados se ponderaron de acuerdo con el procedimiento de Dubuisson y Dennis, Pain, 4: 161-174, 1977, usando la formula t-i+2t2+3t3/180 donde 180 s es el tiempo de evaluacion para cada incremento. Los comportamientos se captaron en incrementos de 3 min alternantes comenzando en el tiempo = 0 min (es decir, 0-3 min, 6-9 min etc.) y terminando a los 60 min.
Puntuacion automatizada: Una banda de metal pequena que pesaba 0,5 g se coloco en la pata izquierda. Se administro la formalina y el animal se coloco sin restriccion en el interior de una camara de observacion sobre un sistema de deteccion electromagnetica (Automated Nociception Analyzer, Universidad de California, San Diego). El numero de estremecimientos de la pata se registro electronicamente.
Dolor inflamatorio inducido por ATP y ap-metilen ATP (op meATP):
A las ratas se les administro hasta 1 jMol de apmeATP, ATP, adenosina o PBS en un volumen de hasta 100 jl por via subcutanea en la superficie dorsal de la pata trasera. Inmediatamente despues de la inyeccion, los animales se colocaron en un soporte dentro de una camara de observacion transparente lo suficientemente grande como para permitir la libre circulacion de los animales. La duracion de los estremecimientos y lametazos se registraron durante un intervalo de 20 minutos para evaluar el comportamiento nocifensivo. Las respuestas se midieron usando los procedimientos, ya sea el manual o el automatizado, descritos anteriormente para el ensayo de la formalina. Los ensayos de comportamiento adicionales pueden incluir la evaluacion de la alodinia mecanica y de la hiperalgesia termica. Para el ensayo, los compuestos se administraron antes de la inyeccion del agonista.
Modelo del adyuvante completo de Freund (CFA, del ingles Complete Freund’s Adjuvant):
Los animales recibieron una inyeccion s.c. de 100 jl de adyuvante completo de Freund que contema 100 jg de Mycobacterium tuberculosis cepa H37Ra en la superficie plantar de la pata trasera derecha con anestesia por isoflurano. La hinchazon y la inflamacion fueron visibles en el plazo de 1 hora despues de la administracion. El ensayo nociceptivo puede comenzar 24 h despues de la administracion del CFA. Los compuestos se administraron
en general 0,5-12 horas antes del ensayo.
Dolor agudo inducido por carragenina:
Los animales recibieron una inyeccion subcutanea de 100 pl de carragenina al 2 % en la superficie plantar de la pata trasera derecha con anestesia por isoflurano. La hinchazon y la inflamacion fueron visibles en el plazo de 1 hora 5 despues de la administracion. El ensayo nociceptivo puede comenzar 3-24 h despues de la administracion de carragenina (Hargreaves y col., Pain, 32: 77-88, 1988). Los compuestos se administraron en general 0,5-12 horas antes del ensayo.
Modelo de lesion por estrangulamiento cronico (modelo CCI, del ingles Chronic Constriction Injury, o Bennett):
10 El modelo CCI se realizo de acuerdo con el procedimiento descrito por Bennett y Xie, Pain, 33: 87-107, 1988. En resumen, con anestesia por isoflurano, el nervio ciatico derecho se expuso a nivel de la mitad del muslo mediante diseccion roma a lo largo del biceps femoral. Proximal a la bifurcacion del nervio ciatico, aproximadamente 7°mm de nervio se liberaron de tejido adherente y se ataron 4 ligaduras sueltas de catgut cromado 4.0 alrededor del nervio. El espacio entre las ligaduras era de aproximadamente 1°mm. La herida se cerro en fases y la piel se cerro con grapas 15 o suturas no de seda. Los animales con operacion simulada se trataron de forma identica con la excepcion de que el nervio ciatico no se ligo. El ensayo nociceptivo puede hacerse 7-21 dfas despues de la cirugfa. Los compuestos se administraron generalmente 0,5-12 horas antes del ensayo.
Corte transversal del nervio espinal (SNT, del inges Spinal Nerve Transection, o modelo de Chung):
Con anestesia por pentobarbital (60 mg/kg, i.p.), las ratas se colocaron en una posicion de decubito prono sobre una 20 superficie plana, esteril. Se hizo una incision en la lmea media de L4-S2 y los musculos paraespinales izquierdos se separaron de las apofisis espinosas. Los nervios espinales L5 y L6 se ligaron estrechamente con una sutura de seda tratada con silicio 4-0, de acuerdo con el procedimiento descrito por Kim y Chung, Pain, 50: 355-363, 1992. El nervio espinal L4 se preservo cuidadosamente de ser quirurgicamente lesionado. La piel se cerro con grapas para heridas y los animales se devolvieron a sus jaulas. Las ratas que presentaron deficits neurologicos postoperatorios 25 prolongados o poco acicalamiento se excluyeron de los experimentos. Los animales se evaluaron para determinar las respuestas nociceptivas antes de la cirugfa (penodo basal), y despues en diversos puntos temporales tras la administracion de los compuestos de ensayo. El ensayo nociceptivo puede hacerse 7-21 dfas despues de la cirugfa. Los compuestos se administraron generalmente 0,5-12 horas antes del ensayo.
Neuropatfa dolorosa inducida por quimioterapia:
30 La neuropatfa por quimioterapia se indujo mediante la administracion i.p. de 1 mg/kg de taxol administrado una vez/dfa en 4 dfas alternos (dosis total = 4 mg/kg) (Polomano y col., Pain, 94: 293-304, 2001). El ensayo nociceptivo puede hacerse 9-30 dfas despues del inicio de la administracion del Taxol. Los compuestos se administraron generalmente 0,5-12 horas antes del ensayo.
Ensayo nociceptivo:
35 Alodinia mecanica: El ensayo de alodinia mecanica se realizo usando el procedimiento arriba-abajo de Dixon, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicology. 20: 441-462, 1980, modificado para umbrales mecanicos por Chaplan y col., J. Neurosci. Methods 53: 55-63, 1994. Para evaluar la alodinia tactil, las ratas se colocaron en compartimentos de plexiglas, transparentes, con un suelo de malla de alambre y se las dejo habituarse durante un periodo de al menos 15 minutos. Despues de la habituacion, una serie de monofilamentos de von Frey se presentaron a la superficie 40 plantar de la pata izquierda (operada) de cada rata. Cada presentacion duro un periodo de 4-8 segundos o hasta que se observara un comportamiento nociceptivo de retirada. El estremecimiento, la retirada de la pata o el lametazo de la pata se consideraron respuestas de comportamiento nociceptivo. El umbral de retirada del 50 % se calculo usando el procedimiento descrito por Chaplan y col., J. Neurosci. Methods 53: 55-63, 1994.
Hiperalgesia termica: Las latencias de retirada de la pata trasera frente a un estimulo termico nocivo se 45 determinaron usando un aparato de ensayo plantar (Ugo Basile) siguiendo la tecnica descrita por Hargreaves y col., Pain 32: 77-88, 1988. La fuente de calor radiante se enfoco sobre la superficie plantar de la pata ipsilateral y se determino la latencia de retirada de la pata. Un aumento de la latencia de retirada de la pata demostro la inversion de la hiperalgesia. Hiperalgesia mecanica: El ensayo de presion de la pata puede usarse para evaluar la hiperalgesia mecanica. Para este ensayo, los umbrales de retirada de la pata trasera (PWT, del ingles paw 50 withdrawal thresholds) frente a un estfmulo mecanico nocivo se determinaron usando un analgesfmetro (Ugo Basile) como se describe en Stein y col., Pharmacol. Biochem. Behav. 31: 451-455, 1988.
Hiperalgesia mecanica: El ensayo de presion de la pata puede usarse para evaluar la hiperalgesia mecanica. Para este ensayo, los umbrales de retirada de la pata trasera (PWT, del ingles paw withdrawal thresholds) frente a un estfmulo mecanico nocivo se determinaron usando un analgesfmetro (Ugo Basile) como se describe en Stein y col., 55 Pharmacol. Biochem. Behav. 31: 451-455, 1988. El peso maximo que puede aplicarse a la pata trasera se fijo en 250 g y el punto final se tomo como la retirada completa de la pata. El PWT se determino una vez para cada rata en
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cada punto temporal y solo se ensayo la pata afectada (ipsilateral).
Alodinia fria: Para medir la alodinia fna, una gota de acetona se aplico a la superficie plantar de la pata a traves de la parte inferior de la rejilla sobre la que los animales estaban de pie utilizando una jeringa Hamilton de 50 pl. El procedimiento se realizo 5 veces con un intervalo de 3 minutos entre cada vez. El temblor vigoroso se registro como una respuesta positiva y se registro el tiempo de temblor. Como alternativa, la alodinia fna puede ensayarse usando el procedimiento del bano de agua fna en el que los animales se colocan en un bano de agua fna con el agua a una profundidad de 1,5-2,0°cm y a una temperatura de 3-4 grados centfgrados y se cuenta el numero de levantamientos de pata.
Distension colo-rectal (CRD, del ingles Colo-rectal Distension):
Antes de la induccion del modelo, los animales fueron privados de comida, pero se les permitio el acceso al agua a discrecion durante 16 h antes de la induccion del modelo. Un globo de latex de 5°cm se unio a un sistema de barostato compuesto de un medidor de flujo y un programa de control de la presion mediante un tramo de tubo. Con anestesia por isoflurano, el globo se inserto en el colon distal a traves del ano a una distancia de 5°cm del ano y se pego a la base de la cola. Despues de la anestesia, el animal se coloco sin restricciones en una jaula de polipropileno limpia y se le dejo que se aclimatara durante 30 minutos. El balon se inflo progresivamente desde 0- 75°mmHg en incrementos de 5°mm cada 30 segundos. El umbral de reaccion del colon se define como la presion que induce la primera contraccion abdominal. La contraccion abdominal indicativa de dolor visceral se relaciona con el encorvamiento, la posicion jorobada, el lametazo de la parte inferior del abdomen, las ondas de contraccion repetidas de la musculatura oblicua ipsilateral con giro hacia el interior de la extremidad posterior ipsilateral, el estiramiento, el aplastamiento de la parte inferior del abdomen contra el suelo (Wesselman, Neurosci. Lett., 246: 7376, 1998). Como alternativa, los electrodos pueden colocarse en la musculatura oblicua externa para los registros electromiograficos de las contracciones abdominales. En este caso, la actividad EMG se cuantifico durante el inflado del globo del colon. Los compuestos se administraron en general 0,5-12 horas antes del ensayo.
Ensayo de contorsion con acido acetico:
Una solucion de acido acetico al 0,6% (10ml/kg) se administro i.p. a ratas y se conto el numero de estrangulamientos abdominales en el plazo de 30 min. Los compuestos se administraron en general 0,5-12 horas antes del ensayo.
Registros del nervio aferente de la vejiga:
Para determinar el papel preciso de la inhibicion de los receptores P2X3 y P2X2/3 en la respuesta de la miccion, los compuestos de ensayo se examinaron para determinar su capacidad de modular la senalizacion aferente desde la vejiga urinaria. Los compuestos se evaluaron en la preparacion de vejiga urinaria/nervio pelvico descrita por Vlaskovska y col., J. Neuroscience, 21: 5670-7, 2001 y Cockayne y col., J. Physiol. 567: 621-39, 2005. En resumen, todo el tracto urinario unido a las vertebras inferiores y los tejidos circundantes se aislo en bloque y se superfusiono en una camara de registro con solucion de Krebs oxigenada (CO2 al 5 % y O2 al 95 %). La vejiga se cateterizo a traves de la uretra para la perfusion intraluminal. Un segundo cateter de doble lumen se inserto en la vejiga para medir la presion intraluminal y para drenar la vejiga. Despues de que se preparara la vejiga, el nervio pelvico que sale de las vertebras se diseco y se atraveso con un electrodo de vidrio de succion. La actividad del nervio se midio usando procedimientos electrofisiologicos convencionales. Tras un periodo de estabilizacion de 60 minutos, se realizaron distensiones repetidas en rampa hasta que la respuesta aferente se estabilizo. Esta respuesta aferente estabilizada se utilizo para comparar la mecanosensibilidad de las aferencias de la vejiga entre los diferentes grupos de tratamiento.
Ensayo de contraccion isovolumetrica de la vejiga:
Se anestesiaron ratas hembra Sprague-Dawley, se sometieron a traqueotoirna y se les inserto una canula en la arteria carotida y la vena femoral. Se accedio a la vejiga urinaria a traves de una incision abdominal y los ureteres se ligaron y se seccionaron transversalmente. Para las mediciones de infusion y la presion de lfquido, a la vejiga urinaria se le inserto una c.
Despues de la cirugfa, a la vejiga se le infundio solucion salina hasta que se obtuvieron contracciones estables de la vejiga inducidas por volumen. Una vez que se obtuvieron volumenes umbral y frecuencias de contraccion estables, el animal se dosifico con el compuesto y se midio la frecuencia de contraccion.
Modelos de recarga y de cistitis de funcion de la vejiga:
Los animales se anestesiaron y se realizo una cistometna cerrada transuretral como se ha descrito previamente (Dmitrieva y col., Neuroscience 78: 449-59, 1997; Cockayne y col., Nature 407: 1011-5, 2000). La vejiga se cateterizo de forma transuretral con un cateter de polipropileno PE-10. Cada cistometrograma consistio en llenar lentamente la vejiga con solucion salina normal a traves del cateter transuretral y despues registrar la presion asociada al llenado a traves de un transductor de presion. Las contracciones superiores a un valor umbral predeterminado se interpretan como contracciones de miccion. Para cada cistometrograma se registraron el
volumen al que se produjeron las contracciones activas (umbral de miccion) y el numero de contracciones por cistometrograma. Despues se determinaron los efectos de los compuestos.
Tambien pueden obtenerse cistometrogramas en modelos animales de cistitis en los que las vejigas se irritan mediante la inyeccion de ciclofosfamida (150 mg/kg, i.p.) 24 horas antes de la cistometna o mediante la infusion de 5 acido acetico hasta al 1 % durante la cistometna.
Los ejemplos de smtesis y biologicos descritos en la presente solicitud se ofrecen para ilustrar los compuestos, composiciones farmaceuticas y procedimientos proporcionados en el presente documento y no deben interpretarse de ninguna manera como limitantes de su ambito. En los ejemplos, todas las temperaturas estan en grados Celsius (a menos que se indique lo contrario). Los compuestos que pueden prepararse de acuerdo con los procedimientos 10 proporcionados en el presente documento junto con sus datos de actividad biologica se presentan en la siguiente Tabla. Las smtesis de estos compuestos representativos se realizan de acuerdo con los procedimientos expuestos anteriormente.
Compuestos de ejemplo proporcionados en el presente documento
Los siguientes compuestos pueden prepararse de acuerdo con los procedimientos de smtesis descritos en el 15 presente documento. Se realizo un ensayo de captacion de calcio como se ha descrito anteriormente y los resultados se muestran en la Tabla 1 en la que la actividad de cada compuesto se expresa en la Tabla 1 de la siguiente manera:
TABLA 1: Compuestos heteroaclicos condensados de ejemplo
ID
ESTRUCTURA PM EM (Observado) CI50 de P2X3 (nM) CI50 de P2X2/3 (nM)
50
Qjlral XI "jTCUf n "rT-'T 414,43 415,2 15 279
52
Qulral ti N^| N W F F 434,85 435,3 33
53
^ Qulral "Vn CFj 460,89 461 3555
57
Qu|r3l 426,91 427,2 103 318
58
Qulral XI W 406,49 407,1 29 83
59
„OH Qjlial 412,88 413,3 90 276
60
„<5h ojiiai HN'ANi^l Sr^N'YfYJ1 Ht'O'' 392,46 393,3 27 97
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(continuacion)
ID
ESTRUCTURA PM EM (Observado) CI50 de P2X3 (nM) CI50 de P2X2/3 (nM)
61
.■'■'''OH °Jllal w 390,49 391,4 28 133
63
."'"'OH W TTT XTI c 444,46 445,6 24 335
64
Guirai V-N HN^pN 361,45 362,4 17 260
Evaluacion farmacocinetica de los compuestos despues de la administracion intravenosa y oral en ratas.
Se aclimataron Ratas macho Sprague-Dawley durante al menos 24 horas antes de la iniciacion del experimento. Durante el periodo de aclimatacion, los animales recibieron comida y agua a discrecion. Sin embargo, se retiro la comida, pero no el agua, de las jaulas de los animales al menos 12 horas antes de la iniciacion del experimento. Durante las primeras 3 horas de experimentacion, los animales recibieron solo agua a discrecion. Al menos se ensayaron tres animales cada uno para la dosificacion intravenosa y oral. Para la formulacion intravenosa, los compuestos se disolvieron (de 0,25 a 1 mg/ml) en una mezcla de sulfoxido de dimetilo al 3 %, PEG 400 al 40 % y el porcentaje restante de Captisol al 40 % en agua (p/v). Se pesaron los animales antes de la dosificacion. El peso corporal determinado se uso para calcular el volumen de dosis para cada animal.
Volumen de dosis (ml/kg) = 1 mg/kg/concentracion de la formulacion (mg/ml)
En los casos donde las concentraciones de la formulacion eran de menos de 0,5 mg/ml, el volumen de dosificacion eran de aproximadamente 2 ml/kg.
Para la formulacion oral, los compuestos de la presente invencion se suspendieron (de 0,5 a 0,75 mg/ml) en una mezcla del 5 % de Tween 80 al 10 % en agua (v/v) y el 95 % de metilcelulosa al 0,5 % en agua (p/v). Las ratas de la via oral normalmente se dosificaron a traves de una sonda nasogastrica siguiendo la misma formula de volumen de dosis que la via intravenosa para conseguir un nivel de dosis de 1a 5 mg/kg. Para la dosificacion intravenosa, se recogieron muestras de sangre (utilizando una jeringa preheparinizada) a traves del cateter de la vena yugular a los 2, 5, 15, 30, 60, 120, 180, 300, 480 y 1440 minutos despues de la dosificacion. Para la dosificacion por via oral, se recogieron muestras de sangre (utilizando una jeringa preheparinizada) a traves del cateter de la vena yugular antes de la dosificacion y a los 5, 15, 30, 60, 120, 180, 300, 480 y 1440 minutos despues de la dosificacion. Se obtuvieron aproximadamente 250 ul de sangre del animal en cada punto de tiempo. Se reemplazaron por volumenes iguales de solucion salina normal al 0,9 % para evitar la deshidratacion. Las muestras de sangre entera se mantuvieron en hielo hasta la centrifugacion. Despues, las muestras de sangre se centrifugaron a 14.000 rpm durante 10 minutos a 4 °C y la fase superior de plasma se transfirio a un vial limpio y se almaceno a -80 °C. Las muestras de plasma resultantes se analizaron mediante espectrometria de masas en tandem con cromatograffa Kquida. Despues de la medicion de las muestras de plasma y las soluciones de dosificacion, se represento la curva concentracion de plasma-tiempo. La exposicion del plasma se calculo como el area bajo la curva de concentracion-tiempo extrapolada a tiempo infinito (ABCinf). El ABCinf se promedio y se calculo la biodisponibilidad oral (%F) para cada animal como:
ABCirrf (via oral)/ABCinf (via intravenosa), normalizadas a sus respectivos niveles de dosis
La %F puede presentarse como la F % media de todos los animales dosificados por via oral con el compuesto de la invencion en el nivel especificado.
Union a protemas plasmaticas
La union a protemas plasmaticas de los compuestos de la invencion se midio en el plasma humano y de rata, respectivamente. Una solucion madre del compuesto ensayado se preparo en 1 mg/ml en solucion de DMSO. La solucion madre se adiciono en el plasma blanco para obtener una concentracion de compuesto final de 1 pg/ml para
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el ensayo. El procedimiento de dialisis de equilibrio (El dializador de equilibro - 96TM MWCO 5K Daltons, Harvard Apparatus) se utilizo para los fines del ensayo.
El plasma adicionado con compuesto (de 1 |jg/ml) y tampon fosfato (0,1 M, pH 7,4), 200 jl cada uno, se anadieron en los lados opuestos de la membrana en un dializador de equilibrio de 96 pocillos, respectivamente. La placa del dializador se cubrio y se incubo durante una noche (16 horas) a 37 °C en la incubadora de rotor de 8 placas (rotor de 8 placas Big Shot III, Harvard Apparatus). Se tomaron alfcuotas (100 jl) del plasma y los compartimentos de tampon, respectivamente. Los efectos de la matriz se eliminaron mediante la adicion del mismo volumen de plasma blanco en las muestras de los compartimientos de tampon y anadiendo el mismo volumen de tampon fosfato en las muestras de los compartimentos de plasma. Las muestras se extrajeron mediante el uso del procedimiento de extraccion de precipitacion de protemas normal (3:1) (acetonitrilo con patron interno). Los sobrenadantes se tomaron para el analisis Cl/EM/EM. El porcentaje de union plasma-protema puede calcularse usando el siguiente procedimiento:
%Libre = [Farmaco Libre/Feirmaco Total]*100 = [(Area del Pico)tampon/(Area del Pico)piasma]*100
%Unido = 100 - %Libre
A partir de la descripcion anterior, a los expertos en la materia se les ocurriran diversas modificaciones y cambios en las composiciones y procedimientos proporcionados en el presente documento. Se pretende que solo las modificaciones de este tipo dentro del ambito de las reivindicaciones adjuntas esten incluidas en la misma.
Al menos algunos de los nombres qmmicos de los compuestos de la invencion como se proporcionan y se exponen en la presente solicitud, pueden haber sido generados de manera automatizada mediante el uso de un programa de software de nomenclatura qmmica disponible en el mercado, y no se han verificado independientemente. Los programas representativos que realizan esta funcion incluyen la herramienta de nomenclatura Lexichem vendida por Open Eye Software, Inc. y la herramienta de Autonom Software vendida por MDL, Inc. En el caso en el que el nombre qmmico indicado y la estructura representada difieran, la estructura representada prevalecera.
Las estructuras qmmicas que se muestran en el presente documento se prepararon usando ISIS®/DRAW. Cualquier valencia abierta que aparezca en un carbono, oxfgeno o nitrogeno en las estructuras del presente documento indica la presencia de un atomo de hidrogeno. Cuando existe un centro quiral en una estructura pero no se muestra ninguna estereoqmmica espedfica para el centro quiral, ambos enantiomeros asociados a la estructura quiral estan abarcados por la estructura.

Claims (22)

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    15
    20
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    REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de acuerdo con la formula Ia:
    imagen1
    en la que
    R1 es heteroarilo sin sustituir o sustituido con uno o mas grupos R4;
    R2 es alquilo o cicloalquilo C1-C6 sustituidos o sin sustituir;
    R3 es halo, alquilo o cicloalquilo C1-C6 sustituidos o sin sustituir;
    cada R4 se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en H, alquilo, acilo, acilamino, alquilamino, alquiltio, alcoxi, alcoxicarbonilo, alquilarilamino, arilalquiloxi, amino, arilo, arilalquilo, sulfo, sulfo sustituido, sulfonilo sustituido, sulfinilo sustituido, sulfanilo sustituido, azido, carbamoflo, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, dialquilamino, halo, heteroariloxi, heteroarilo, heteroalquilo, hidroxi, nitro y tiol; o una sal o solvato farmaceuticamente aceptables del mismo.
  2. 2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que R3 es Cl, F, Me, Et, i-Pr, o ciclopropilo.
  3. 3. Un compuesto enantiomericamente puro de acuerdo con la reivindicacion 1 que tiene la formula 2a o 2c:
    imagen2
    en las que R1, R2 y R4 son como en la Reivindicacion 1; o una sal o solvato farmaceuticamente aceptables del mismo.
  4. 4. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que R es bicicloheteroarilo sustituido o sin sustituir.
  5. 5. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que R1 es piridilo sin sustituir o pirimidinilo sin sustituir.
  6. 6. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que R1 se selecciona entre quinolinilo, isoquinolinilo, metilendioxifenilo, imidazopiridilo, benzoxazolilo e indolilo sustituidos o sin sustituir.
  7. 7. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que R1 es
    imagen3
    y en el que el subrndice n' se selecciona entre 1-5 y cada uno de R5 se selecciona independientemente entre hidrogeno, alquilo sustituido o sin sustituir, acilo sustituido o sin sustituir, acilamino sustituido o sin sustituir, alquilamino sustituido o sin sustituir, alquiltio sustituido o sin sustituir, alcoxi sustituido o sin sustituir, ariloxi, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilo sustituido, alquilarilamino sustituido o sin sustituir, arilalquiloxi, arilalquiloxi sustituido, amino, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, sulfo, sulfo sustituido, sulfonilo sustituido, sulfinilo sustituido, sulfanilo sustituido, azido, carbamoflo sustituido o sin sustituir, carboxilo, ciano, cicloalquilo sustituido o sin sustituir,
    5
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    cicloheteroalquilo sustituido o sin sustituir, dialquilamino sustituido o sin sustituir, halo, heteroariloxi, heteroarilo sustituido o sin sustituir, heteroalquilo sustituido o sin sustituir, hidroxi, nitro y tiol.
  8. 8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 7, en el que el subrndice n' es 1,2 o 3.
  9. 9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 7, en el que el subrndice n' es 1 o 2.
  10. 10. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 7-9, en el que cada R5 se selecciona independientemente entre H, Me, Et, Pr, iso-Pr, Ph, Cl, F, Br, CN, OH, OMe, OEt, OPh, COPh, CO2Me, CH2-N- morfolino, CH2-N-(4-Mepiperidino), NH2, CONH2, CF3, CHF2, OCF3, OCHF2, t-Bu, SMe, CH=CH-CO2H, SOMe, SO2Me, SO2CF3, SO2nH2, SO3H, SO3Me, ciclopropilo, triazolilo, morfolinilo y piridilo.
  11. 11. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el compuesto es de acuerdo con la formula 3b, 3c, 3e o 3f:
    imagen4
    y en las que R2 es como en la reivindicacion 1; yR5 como en la reivindicacion 7.
  12. 12. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 7-11, en el que cada R5 se selecciona independientemente entre H, Me, Et, Pr, iso-Pr, Ph, Cl, F, CN, OH, OMe, OEt, OPh, CF3, CHF2, OCF3, OCHF2, t-Bu, SO2Me, SO2CF3 y SO3Me.
  13. 13. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 7-11, en el que R5 es H, Cl, F, Me, CF3, SO2Me o OMe.
    2
  14. 14. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en el que R se selecciona entre Me, Et, n-Pr, t-Bu, CF3, CH2OH, CH2CH2OH, CH2CH2OAc, CH2(CH2)2OH, CH2CH2NHMe, CH2NMe2, CH2CH2NMe2, CH2CONH2, CH2CONMe2, CH2COOH, CH2CH2COOH, CH2(CH2)2COOH, CH2OMe y CH2CH2OMe.
  15. 15. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en el que R2 se selecciona entre
    o' 9" 91 9" 91 9" 91 9"
    CH2NR2R2, CH2CH2NR2R2 y CH2CH2CH2NR2 R2; y en el que R2 y R2 pueden juntarse para formar un anillo heterodclico.
  16. 16. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en el que R2 se selecciona entre ciclopropilo, ciclobutilo o ciclohexilo.
  17. 17. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en el que R2 es Me.
  18. 18. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en el que R2 es CH2OH o CH2CH2OH.
  19. 19. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, seleccionado entre el grupo que consiste en:
    [6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-[(R)-1-(6-trifluorometil-piridin-3-il)-etil]-amina;
    [6-(5-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-[(R)-1-(6-trifluorometil-piridin-3-il)-etil]-amina;
    [6-(5-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-[(R)-ciclopropil-(6-trifluorometil-piridin-3-il)-
    metil]-amina;
    (R)-3-[6-(5-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-3-(6-metoxi-piridin-3-il)-propan-1-
    ol;
    (R) -3-(6-Metoxi-piridin-3-il)-3-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-propan-1-ol;
    (S) -2-[6-(5-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-2-(6-metoxi-piridin-3-il)-etanol; (S)-2-(6-Metoxi-piridin-3-il)-2-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-etanol; (R)-3-(6-Metil-piridin-3-il)-3-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-propan-1-ol; (R)-3-[6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-3-(6-trifluorometil-piridin-3-il)- propan-1-ol; y
    [6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-[(R)-1-(2-metil-pirimidin-5-il)-etil]-amina; o una sal o solvato farmaceuticamente aceptables del mismo.
  20. 20. Una composicion farmaceutica que comprende un velmculo farmaceuticamente aceptable y una cantidad farmaceuticamente eficaz de un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-19.
    5 21. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-19, para su uso como un producto
    farmaceutico.
  21. 22. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-19, para su uso en un procedimiento para el tratamiento o prevencion de una enfermedad o afeccion seleccionada entre: dolor incluyendo el dolor agudo, inflamatorio y neuropatico, dolor visceral, dolor cronico, dolor dental y cefalea incluyendo la migrana, la cefalea en
    10 racimo y la cefalea tensional, la enfermedad de Parkinson, y esclerosis multiple; enfermedades y trastornos que dan como resultado o que estan mediados por neuroinflamacion, traumatismo craneoencefalico y encefalitis; enfermedades y trastornos neuropsiquiatricos mediados centralmente, mama depresiva, enfermedad bipolar, ansiedad, esquizofrenia, trastornos de la alimentacion, trastornos del sueno y trastornos de la cognicion; disfuncion de prostata, vejiga e intestino, incontinencia urinaria, retardo miccional, hipersensibilidad rectal, incontinencia fecal, 15 hipertrofia prostatica benigna y enfermedad inflamatoria intestinal; enfermedades y trastornos respiratorios y de las vfas respiratorias, rinitis alergica, asma y enfermedad de las vfas respiratorias reactivas y enfermedad pulmonar obstructiva cronica; enfermedades y trastornos que dan como resultado o estan mediados por inflamacion, artritis reumatoide y osteoartritis, infarto de miocardio, diversas enfermedades y trastornos autoinmunes, uveitis y ateroesclerosis; picor/prurito, psoriasis; obesidad; trastornos lipfdicos; cancer; presion sangumea; afecciones por 20 lesion de la medula espinal que son resultado de, o estan relacionadas con, la disfuncion inmunitaria; y trastornos renales.
  22. 23. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 22, en el que el dolor visceral esta asociado a la enfermedad por reflujo gastroesofagico, el smdrome del intestino irritable, la enfermedad inflamatoria intestinal, la pancreatitis y diversos trastornos ginecologicos y urologicos.
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