ES2428291T3 - Modulador del receptor de andrógenos para el tratamiento del cáncer de próstata y enfermedades asociadas con el receptor de andrógenos - Google Patents

Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula: **Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

Modulador del receptor de androgenos para el tratamiento del cancer de prostata y enfermedades asociadas con el receptor de androgenos

Campo de la invenci6n

La presente invencion se refiere a derivados de 8-oxo-6-tioxo-5,7-diazoespiro[3,4]octano, su uso medico en el tratamiento de afecciones asociadas con el receptor de androgenos, tales como enfermedades relacionadas con la edad, por ejemplo, cancer de prostata, y a composiciones farmaceuticas que contienen tales compuestos.

Antecedentes de la invenci6n

El cancer de prostata es la incidencia de cancer mas comun y la segunda causa de muerte por cancer en los hombres occidentales. Cuando el cancer esta confinado localmente, la enfermedad se puede curar mediante cirugia

o radiacion. Sin embargo, 30% de dichas recidivas de cancer con enfermedad metastasica distante y otras presentan una enfermedad avanzada en el diagnostico. La enfermedad avanzada se trata mediante castracion y/o administracion de antiandrogenos, la denominada terapia de privacion de androgenos. La castracion reduce los niveles circulantes de androgenos y reduce la actividad del receptor de androgenos (RA). La administracion de antiandrogenos bloquea de funcion del RA compitiendo aparte de la union a los androgenos y por lo tanto reduce la actividad de los RA. Aunque inicialmente eficaces, estos tratamientos fracasan rapidamente y el cancer se vuelve refractario a hormonas. Recientemente, la expresion en exceso del RA se ha identificado y validado como una causa de cancer de prostata refractario a hormonas (Nat. Med., 2004, 10, 33-39). La expresion en exceso del RA es suficiente para causar la progresion de la hormona sensible a cancer de prostata refractario a hormonas, lo que sugiere que inhibidores del RA mejores que los farmacos actuales pueden ralentizar la progresion del cancer de prostata. Se demostro que el RA y sus ligandos de union son necesarios para el crecimiento de cancer de prostata refractario a hormonas, lo que indica que el RA es todavia una diana para esta enfermedad. Tambien se demostro que la expresion en exceso del RA convierte los anti-androgenos de antagonistas a agonistas en el cancer de prostata refractario a hormonas (un antagonista de RA inhibe la actividad de RA y un agonista de RA estimula la actividad de RA). Los datos de este trabajo explican por que la castracion y los anti-androgenos fracasan en la prevencion de la progresion del cancer de prostata y revela propiedades no reconocidas del cancer de prostata refractario a hormonas. La bicalutamida (nombre de marca: Casodex) es el anti-androgenos utilizado mas comunmente. Si bien tiene efecto inhibidor sobre el RA en el cancer de prostata sensible a hormonas, fracasa en la supresion del RA cuando el cancer se convierte en refractario a hormonas. Dos debilidades de los antiandrogenos actuales son las culpables del fracaso para prevenir la progresion del cancer de prostata de una fase sensible a hormonas a una enfermedad refractaria a hormonas y para tratar eficazmente el cancer de prostata refractario a hormonas. Una de ellas consiste en sus actividades antagonicas debiles y la otra consiste en sus fuertes actividades agonisticas cuando RA se expresa en exceso en el cancer de prostata refractario a hormonas. Por lo tanto, se necesitan mejores inhibidores de RA con actividades antagonicas mas potentes y actividades agonisticas minimos para retrasar la progresion de la enfermedad y para tratar el cancer de prostata refractario a hormonas fatal. Los antiandrogenos no esteroideos, se han preferido por encima de los compuestos esteroides para el cancer de prostata, ya que son mas selectivos y tienen menos efectos secundarios. Una amplia variedad de tales compuestos se describe en las Patentes de los Estados Unidos Nums. 4.097.578, 5.411.981, y 5.705.654, las solicitudes publicadas de los Estados Unidos Nums. 2004/0009969 y 2007/0004753, y las solicitudes internacionales PCT Nums. WO 97/00071, WO 00/17163 y WO 06/124118. Por lo tanto, la identificacion de compuestos que tienen una alta potencia para suscitar antagonismo sobre la actividad de los androgenos, y que tienen una actividad agonista minima superaria el cancer de prostata refractario a hormonas (CPRH) y evitaria o desaceleraria de la progresion del cancer de prostata sensible a hormonas (CPSH). Existe una necesidad en la tecnica para la identificacion de moduladores selectivos del receptor de androgenos, tales como moduladores que sean no esteroideos, no toxicos, y selectivos del tejido. El documento US 5646172 se refiere a imidazolidinas espiroclclicas que tienen actividad antiandrogenica. El documento US 6172076 B1 se refiere a piperidinas espiroclclicas que inhiben la prenil-proteina transferasa y la prenilacion de la proteina oncogenica Ras.

Compendio de la invenci6n

Se presentan una serie de compuestos que modulan la funcion de los receptores de hormonas nucleares, especialmente el receptor de androgenos. Estos compuestos pueden causar la desaparicion de las celulas de cancer de prostata y tumores.

En una realizacion, el compuesto puede ser A51 o A52.

En una realizacion, una composicion farmaceutica incluye una cantidad terapeuticamente eficaz del compuesto A51

o A52, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y un portador, diluyente o coadyuvante farmaceuticamente aceptable.

15 La composicion farmaceutica puede incluir una solucion de dimetilsulfoxido, solucion salina tamponada con fosfato, y agua. La composicion farmaceutica puede incluir dimetilsulfoxido, una carboximetilcelulosa, un polisorbato, y agua.

Una realizacion de un metodo incluye la prevencion o el tratamiento de una enfermedad o trastorno relacionado con 20 la actividad del receptor nuclear.

Un metodo para prevenir o tratar un trastorno hiperprolifrativo, tal como el cancer de prostata sensible a hormonas o el cancer de prostata refractario a hormonas, puede incluir la administracion de compuesto A51 o A52, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, a un sujeto en necesidad de tal prevencion o tratamiento, evitando o

25 tratando de este modo el trastorno hiperproliferativo. El compuesto se puede administrar en una dosis en el intervalo de aproximadamente 1 mg por kg de peso corporal por dia a aproximadamente 50 mg por kg de peso corporal por dia. El compuesto se puede administrar, por ejemplo, mediante inyeccion intravenosa, mediante inyeccion en el tejido, por via intraperitoneal, por via oral, o por via nasal.

30 En una realizacion, el compuesto A51 o A52 es un antagonista de un receptor nuclear o un antagonista de un receptor de androgenos.

Descripci6n de los dibujos

35 La Figura 1 es un diagrama de barras que representa el efecto antagonista de los compuestos A51 y A52 sobre las celulas cancerosas SA.

La Figura 2 es un diagrama de barras que representa el efecto antagonista de los compuestos A51 y A52 sobre las celulas cancerosas SA.

40 La Figura 3 es un diagrama de barras que representa el efecto antagonista de los compuestos A51 y A52 sobre las celulas cancerosas RH.

La Figura 4 es un grafico que representa el comportamiento farmacocinetico del compuesto A52.

45 La Figura 5 es un grafico que representa el efecto del compuesto A52 sobre el tamafo del tumor LNCaP-AR expresado en exceso a 10 mg/kg.

La Figura 6 presenta imagenes que muestran la desaparicion de la actividad de Luciferasa despues de 17 dias de 50 tratamiento con el compuesto A52.

Descripci6n detallada

La presente invencion se refiere a los compuestos A51 y A52, los usos medicos de tales como moduladores de receptores de androgenos y a composiciones farmaceuticas que contienen dichos compuestos y sales de los mismos. Los compuestos A51 y A52 se pueden utilizar para suscitar agonismo o suscitar antagonismo sobre la funcion del receptor nuclear. Los compuestos se pueden utilizar suscitar antagonismo sobre el receptor de androgenos. El uso de los compuestos no se limita a afectar al receptor de androgenos, sino que, por ejemplo, tambien puede ser util para el tratamiento de otras enfermedades relacionadas con la funcion del receptor nuclear.

Los compuestos A51 o A52 pueden estar presentes como sales, que tambien estan dentro del alcance de esta invencion. Se prefieren las sales farmaceuticamente aceptables (es decir, no toxicas, fisiologicamente aceptables). Si los compuestos A51 o A52 tienen, por ejemplo, al menos un centro alcalino pueden formar sales de adicion de acido. Estas se forman, por ejemplo, con acidos inorganicos fuertes, tales como acidos minerales, por ejemplo acido sulfurico, acido fosforico o un acido hidrohalogenado, con acidos carboxilicos organicos fuertes, tales como acidos alcanocarboxilicos de 1 a 4 atomos de carbono que estan insustituidos o sustituidos, por ejemplo, con halogeno, por ejemplo acido acetico, tales como acidos dicarboxilicos saturados o insaturados, por ejemplo acido oxalico, malonico, succinico, maleico, fumarico, ftalico o tereftalico, tales como acidos hidroxicarboxilicos, por ejemplo acido ascorbico, glicolico, lactico, malico, tartarico o citrico, tales como aminoacidos, (por ejemplo acido aspartico o glutamico o lisina o arginina), o acido benzoico, o con acidos sulfonicos organicos, tales como acidos alquil- (C1-C4)

o aril-sulfonicos que estan insustituidos o sustituidos, por ejemplo, con halogeno, por ejemplo acido metil- o ptolueno-sulfonico. Las sales de adicion de acido correspondientes tambien se pueden formar teniendo, si se desea, un centro alcalino presente adicionalmente. Los compuestos que tienen al menos un grupo acido (por ejemplo COOH) tambien pueden formar sales con bases. Las sales adecuadas con bases son, por ejemplo, sales de metales, tales como sales de metales alcalinos o de metales alcalinoterreos, por ejemplo sales de sodio, potasio o magnesio, o sales con amoniaco o una amina organica, tales como morfolina, tiomorfolina, piperidina, pirrolidina, una mono-, di- o tri-alquilamina inferior, por ejemplo etil, terc-butil, dietil, diisopropil, trietil, tributil o dimetilpropilamina, o una mono-, di- o tri-hidroxialquil(inferior)amina, por ejemplo mono-, di- o tri-etanolamina. Las correspondientes sales internas se pueden formar adicionalmente. Tambien se incluyen las sales que no son adecuadas para usos farmaceuticos pero que se pueden emplear, por ejemplo, para el aislamiento o purificacion de compuestos libres o de sus sales farmaceuticamente aceptables. Las sales preferidas de los compuestos que contienen un grupo alcalino incluyen monohidrocloruro, hidrogenosulfato, metanosulfonato, fosfato o nitrato. Las sales preferidas de los compuestos que contienen un grupo acido incluyen sales de sodio, potasio y magnesio y aminas organicas farmaceuticamente aceptables.

El termino quot;moduladorquot; utilizado en esta invencion se refiere a un compuesto quimico con capacidad para potenciar

(p. ej., actividad quot;agonisticaquot;) o inhibir (p. ej., actividad quot;antagonicaquot;) una propiedad funcional de la actividad o proceso biologico (p. ej., actividad de la enzima o union al receptor); tales potenciacion o inhibicion pueden ser condicionadas por la aparicion de un evento especifico, tal como la activacion de una via de transduccion de sefales, y/o se pueden poner de manifiesto solo en tipos de celulas concretos.

Sintesis

Los compuestos A51 o A52 de la invencion se pueden preparar como se muestra en los siguientes esquemas de reaccion y en la descripcion de los mismos, asi como los procedimientos pertinentes publicados en la literatura que pueden ser utilizados por un experto en la tecnica. Los reactivos y procedimientos ilustrativos para estas reacciones aparecen mas adelante y en los Ejemplos de trabajo. El significado de las variables esta en los compuestos A51 o A52.

Como se ilustra en el Esquema 1, los compuestos de formula A4 se pueden preparar a partir del intermedio A3 con un electrofilo apropiado. Los intermedios de formula A3 se pueden obtener haciendo reaccionar los intermedios A1 con A2 en un disolvente apropiado tal como N,N-dimetilformamida. Los intermediarios A1 y A2 se pueden obtener comercialmente, se pueden preparar por metodos conocidos en la bibliografia, o se pueden preparar facilmente por un experto en la tecnica. Los compuestos de formula A3 se pueden tratar con acido para proporcionar los compuestos de formula A5. Los compuestos de formula A5 se pueden tratar con el reactivo de Lawesson para obtener compuestos de formula AG.

Esquema 2: Sintesis de A51

Sintesis de 3 - (trifluorometil)piridin-N-oxido, A8

A una mezcla de 3-(trifluorometil)piridina A7(1,47 g, 10 mmoles) y metiltrioxorrenio (0,0025g, 0,01 mmoles) en diclorometano (2 ml) se le afadio peroxido de hidrogeno al 30% (4 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 horas. Se afadio una pequefa porcion de MnO2 (3 mg) y el medio se agito durante 1 hora adicional y despues se afadio diclorometano (50 ml). El medio se lavo con salmuera, se seco sobre MgSO4 y se concentro para obtener el compuesto AS en forma de un polvo de color blanquecino (1,56 g, 9,6 mmoles, 96%). RMN H1 (400 MHz, CDCl3) 5 7,22-7,23 (m, 2H), 8,15 (d, J = 3,6, 1H), 8,23 (s, 1H); RMN C13 (100 MHz, CDCl3) 5 120,50 (c, J = 3,5 Hz), 121,58 (c, J = 271,4 Hz), 126,48, 130,10 (c, J = 34,5 Hz), 136,52 (c, J = 3,7 Hz), 141,89.

Sintesis de 2-ciano-3-(trifluorometil)piridina, A9

A una solucion de 3-(trifluoremetil)piridina-N-oxido AS (1,3 g, 8 mmoles) en acetonitrilo se le afadieron cianuro de trimetilsililo (0,99 g, 10 mmoles) y trietilamina (2,02 g, 20 mmoles). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 24 horas y a continuacion se lavo con Na2CO3 saturado y se extrajo con diclorometano. La capa organica se seco sobre MgSO4 y se concentro para producir un residuo de color pardo que se cromatografio (EtOAc: pentano, 01:02). El Compuesto A9 se obtuvo en forma de un solido de color amarillo claro (0,715 g, 4,16 mmoles, 52%). RMN H1 (400 MHz, CDCl3) 5 7,73 (dd, J1 = 8,0 Hz, J = 4,8 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,91 (d, J = 4,8 Hz, 1H); RMN C13 (100 MHz, CDCl3) 5 114,18, 121,74 (c, J = 272,3 Hz), 126,65, 130,45 (c, J = 33,8 Hz), 131,25, 134,66 (c, J = 4,2 Hz), 153,44.

Sintesis de 2-ciano-3-(trifluorometil)-5-nitropiridina, A10

A una mezcla de A9 (0,688 g, 4 mmoles) y nitrato de tetrametilamonio (1,09 g, 8 mmoles) en 1,2-dicloroetano se le afadio anhidrido trifluoroacetico (1,68 g, 8 mmoles). La mezcla se sello y se calento a 60°C durante 48 horas. La mezcla se lavo con bicarbonato de sodio saturado y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre MgSO4 y se concentro para producir un residuo de color amarillo que se cromatografio (EtOAc: pentano, 1:4) para producir el compuesto A10 (0,095 g, 0,44 mmoles, 11%) y la sustancia de partida restante. RMN H1 (400 MHz, CDCl3) 5 8,91 (d, J = 2,4 H2, 1H), 9,69 (d, J = 2,4 Hz, 1H); RMN C13 (100 MHz, CDCl3) 5 112,70, 120,65 (c, J = 273,5 Hz), 129,11, 130,40 (c, J = 4,4 Hz), 131,58 (c, J = 35,5 Hz), 144,22, 148,23.

Sintesis de 2-ciano-3-(trifluorometil)-5-aminopiridina, A11

Una mezcla de 2-ciano-3-(trifluorometil)-5-nitropiridina A10 (0,095 g, 0,44 mmoles) y polvo de hierro (0,112 g, 2 mmoles) en acetato de etilo (1 ml) y acido acetico (1 ml) se calento durante 15 horas. Las particulas solidas se filtraron a traves de Celite y el producto filtrado se concentro y se cromatografio (EtOAc: pentano, 01:01) para

producir el compuesto A11 (0,075 g, 0,4 mmoles, 91%). RMN H1 (400 MHz, CDCl3) 5 6,36 (s ancho, 2H), 7,38 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,26 (d, J = 2,4 Hz, 1H).

Alternativamente, la 2-ciano-3-(trifluorometil)-5-nitropiridina A10 se puede hacer reaccionar con hidrogeno sobre Ni Raney para obtener 2-ciano-3-(trifluorometil)-5-aminopiridina, A11.

Sintesis de 5-isotiocianato-3-trifluorometilpiridino-2-carbonitrilo, A12

A una mezcla heterogenea de 2-ciano-3-(trifluorometil)-5-nitropiridina A11 (0,075 g, 0,4 mmoles) en agua (2 ml) se le afadio tiofosgeno (50 1l). La mezcla se agito durante 2 horas y despues se lavo con agua y se extrajo con cloroformo. La capa organica se seco sobre MgSO4 y se concentro para producir el compuesto A12 (0,087 g, 0,38 mmoles, 95%). RMN H1 (400 MHz, CDCl3) 5 7,85 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,72 (d, J = 2,4 Hz, 1H); RMN C13 (100 MHz, CDCl3) 5 113,61, 121,04 (c, J = 273,1 Hz), 127,41, 130,38 (c, J = 4,3 Hz), 131,44 (c, J = 34,4 Hz), 133,55, 144,75, 150,30.

Sintesis de 1-(4-metilfenil)aminociclobutanonitrilo, B1

Se afadio gota a gota cianuro de trimetilsililo (0,93 ml, 7 mmoles) a una mezcla de p-toluidina (0,535 g, 5 mmoles) y ciclobutanona (0,42 g, 6 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 6 h y despues se concentro a vacio para obtener un liquido de color pardo que se sometio a cromatografia (diclorometano) para producir B1 (0,912 g, 4,9 mmoles, 98%) en forma de un solido amarillento.

Sintesis de A51

Una mezcla de A12 (0,057 g, 0,265 mmoles) y B1 (0,05 g, 0,265 mmoles) en DMF (0,5 ml) se agito a temperatura ambiente durante 24 h. A esta mezcla se le afadieron metanol (2 ml) y HCl ac. HCl 2 N (1 ml). La segunda mezcla se mantuvo a reflujo durante 2 h. Despues de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se vertio en agua fria (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (20 ml). La capa organica se seco sobre MgSO4, se concentro y se cromatografio (diclorometano) para producir el compuesto A51 (0,066 g, 0,159 mmoles, 60%) en forma de un polvo de color blanco.

N-Metil-4-(1-cianociclobutilamino)-2-fluorobenzamida, B2

Se afadio cianuro de sodio (1,47 g, 30 mmoles) a una mezcla de N-metil-4-amino-2-fluorobenzamida (1,68 g, 10 mmoles) y ciclobutanona (1,4 g, 20 mmoles) en acido acetico al 90% (20 ml). La mezcla de reaccion se agito a 80°C durante 24 horas. La mezcla se lavo con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre sulfato de magnesio y se concentro hasta sequedad a vacio. El solido se lavo con una mezcla 50:50 de eter etilico y hexano (10 ml) para eliminar cianhidrina de ciclobutanona para proporcionar despues de la filtracion B2 (2,19 g, 8,87 mmoles, 89%). RMN H1 (CDCl3, 400 MHz) 5 1,87-1,95 (m, 1H), 2,16-2,27 (m, 1H), 2,35-2,41 (m, 2H), 2,76-2,83 (m, 2H), 2,97 (d, J = 4,4 Hz, 3H), 4,68 (s ancho, 1H), 6,29 (dd, J =14,3, 1,8 Hz, 1H), 6,48 (dd, J =8,3, 1,8 Hz, 1H), 6,75 (c, J = 4,4 Hz, 1H), 7,90 (dd, J = 8,3. 8,3 Hz, 1H); RMN C13 (CDCl3, 100 MHz) 5 15,7, 26,7, 33,9, 49,4, 100,2 (d, J = 29,5 Hz), 110,6, 111,0 (d, J = 11,8 Hz), 133,1 (d, J = 4,2 Hz), 148,4 (d, J = 12,0 Hz), 162,0 (d, J = 244,1 Hz), 164,4 (d, J = 3,6 Hz).

Sintesis de 4-70-(-6-ciano-5-trifluorometilpiridin-3-il)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaespiro[3,4]oct-5-il]-2-fluoro-N-metilbenzamida, A52

Una mezcla de A12 (0,03 g, 0,13 mmoles) y B2 (0,032 g, 0,13 mmoles) en DMF (0,5 ml) se calento bajo irradiacion de microondas a 80°C durante 20 horas. A esta mezcla se le afadieron metanol (2 ml) y HCl ac. 2 N (1 ml). La segunda mezcla se mantuvo a reflujo durante 2 horas. Despues de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se vertio en agua fria (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (15 ml). La capa organica se seco sobre MgSO4, se concentro y se cromatografio (diclorometano:acetona, 95:5) para producir A52 (0,022 g, 0,046 mmoles, 35%) en forma de un polvo de color blanco.

5 8,3, 8,3 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 9,08 (d, J = 2,1 Hz, 1H); RMN C13 (CDCl3, 100 MHz) 5 13,6, 27,0, 31,7, 67,6, 113,7, 118,1, 118,4, 121,4 (c, J = 272,9 Hz), 126,5, 130,0, 130,5 (c, J = 34,5 Hz), 132,2, 133,7, 134,0, (c, J = 4,2 Hz), 138,7 (d, J = 10,7 Hz), 152,2, 160,5 (d, J = 249,4 Hz), 162,6,174,1,179,0; 19F RMN (CDCl3, 100 MHz) 5 110,94, -62,57,

10 Esquema 3: Sintesis de A52

En otras realizaciones, la presente invencion esta dirigida al metodo de sintesis de A52 descrito a continuacion. En algunas realizaciones, los Ejemplos 1-8 se pueden realizar secuencialmente para sintetizar A52. Sin embargo, como un experto en la tecnica apreciara, esta invencion no se limita a las etapas descritas en los Ejemplos 1-8 puesto que

15 las etapas equivalentes a las de mas abajo tambien estan abarcadas por la presente invencion. Los expertos en la tecnica reconoceran compuestos adicionales que se pueden preparar utilizando metodologia similar.

Sintesis de 3-(trifluorometil)piridin-2(1H)-ona, 2

Una solucion de 2-cloro-3-(trifluorometil)piridina 1 (5,00 g, 27,54 mmoles) en una mezcla de acido acetico glacial (50 ml) y agua (5 ml) se sometio a reflujo durante 7 dias. La mezcla se diluyo con agua (100 ml) y se afadio NaOH acuoso 6N hasta que se alcanzo un pH de aproximadamente 5 a aproximadamente 6. La mezcla se extrajo con

25 acetato de etilo (3 x 40 ml), las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, y a continuacion, se eliminaron todos los disolventes a presion reducida. El residuo resultante se disolvio en acetato de etilo y se afadio hexano para precipitar un producto. Despues de la filtracion, se obtuvo la 3-(trifluorometil)piridin-2(1H)-ona 2 en forma de un polvo de color blanco (4,16 g, 25,51 mmoles, 93%). RMN H1 (400 MHz, DMSO) 5 12,31 (s ancho, 1H), 7,91 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 6,30 (t, J = 6,7

30 Hz, 1H).1

Sintesis de 5-nitro-3-(trifluorometil) piridin-2(1H)-ona, 3

35 Una mezcla de 3-(trifluorometil)piridin-2(1H)-ona 2 (2,00 g, 12,26 mmoles) y acido sulfurico (H2SO4, 3,5 ml, 30%) se calento a 90°C y se afadio acido nitrico (HNO3, 2,5 ml, 65%). La mezcla se agito a 90°C durante 8 horas y se afadio acido nitrico adicional (1 ml, 65%). La mezcla se agito durante un periodo adicional de 6 horas a 90°C y a continuacion se vertio en un vaso de precipitados que contenia hielo (30 ml). La mezcla se diluyo con agua (30 ml) y

40 se afadio NaOH acuoso 6N hasta un pH de aproximadamente 4 a aproximadamente 5. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 40 ml), las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y todos los disolventes se eliminaron a presion reducida. El residuo se disolvio en acetato de etilo y el producto se precipito mediante la adicion de hexano. Despues de la filtracion, se obtuvo la 5-nitro-3-(trifluorometil)piridin-2(1H)-ona 3 en forma de un polvo de color amarillo (1,58 g, 7,59 mmoles, 62%).

45 RMN H1 (400 MHz, DMSO) 5 13,47 (s ancho, 1H), 8,95 (d, J =2,7 Hz, 1H, 8,46 (d, J = 2,5 Hz, 1H).2

Sintesis de 2-cloro-5-nitro-3-(trifluorometil) piridina, 4

5 Una mezcla de 5-nitro-3-(trifluorometil)piridin-2(1H)-ona 3 (1,50 g, 7,21 mmoles), POCl3 (2,76 g, 18,02 mmoles) y PCl5 (1,4 g, 10,09 mmoles) se calienta a aproximadamente 110-120°C durante 8 horas y despues se vierte en agua con hielo. La mezcla se neutraliza con NaHCO3 y se extrae con acetato de etilo (3 x 40 ml). Las fases organicas combinadas se secan sobre Na2SO4 y todos los disolventes se eliminan a presion reducida para obtener la 2-cloro-5nitro-3-(trifluorometil)piridina 4.

10 Sintesis de 6-cloro-5-(trifluorometil) piridin-3-amina, 5

15 La 2-cloro-5-nitro-3-(trifluorometil)piridina 4 (1,57 g, 6,93 mmoles) se disuelve en tetrahidrofurano (THF) (10 ml) y se afadio a una suspension de Niquel Raney (200 mg) en THF (20 ml). El gas hidrogeno se hizo burbujear lentamente a traves de la solucion agitada durante 24 horas utilizando un globo. La mezcla se filtra a traves de Celite® (asequible de Word Minerals, Inc., Lompoc, California) y el disolvente se elimino a presion reducida para obtener 6cloro-5-(trifluorometil)piridin-3-amina 5.

20 Sintesis de 1,1-dimetiletilcarbamato N-6-cloro-5-(trifluorometil)piridin-3-ilo, 6

25 La 6-cloro-5-(trifluorometil)piridin-3-amina bruta 5 (bruta 1,3 g, 6,61 mmoles) se disuelve en piridina (10 ml) y se afade 4-dimetilaminopiridina (DMAP) (50 mg). Se afadio gota a gota dicarbonato de di-terc-butilo (2,17 g) y la mezcla se agito a 22°C durante 4 horas. Se afade tolueno (20 ml) y todos los disolventes se eliminan a presion reducida. El residuo se filtra a traves de un tapon de gel de silice (hexano/acetato de etilo 2:1) para obtener N-6cloro-5-(trifluorometil) piridin-3-ilcarbamato de terc-butilo G.

30 Sintesis de 5-amino-3-(trifluorometil)piridino-2-carbonitrilo, 8

35 El N-6-cloro-5-(trifluorometil)piridin-3-ilcarbamato de terc-butilo G (2,4 g, 6,61 mmoles) se disuelve en dimetilacetamida (DMA) (25 ml) y se afade fenantrolina (120 mg, 0,66 mmoles). La mezcla se calienta a 80°C y se afade KCN (0,47 g, 7,27 mmoles). Despues de agitar la mezcla durante 10 min, se afade CuCN (118 mg, 0,13 mmoles) y la mezcla se agita durante 2 horas a 110°C. La mezcla enfriada se vierte en un tampon de fosfato (150 ml, pH 7), se afade acetato de etilo (50 ml) y la mezcla se filtra a traves de Celite®. Las capas se separan y la fase

40 acuosa se extrae con acetato de etilo (3 x 40 ml). Las fases organicas combinadas se lavan con NaCl acuoso saturado (4 x 30 ml), se seca sobre Na2SO4 y todos los disolventes se eliminan a presion reducida para producir el crudo N-t-butoxicarbonilnitrilo 7.

El N-t-butoxicarbonilnitrilo bruto 7 se disuelve en diclorometano (20 ml) y se afade acido trifluoroacetico (TFA) (4 ml).

45 La mezcla se agita durante 3 horas y se evapora. El residuo se purifica mediante cromatografia en columna sobre gel de silice (hexano/acetato de etilo 2:1) para obtener 5-amino-3-(trifluorometil)piridina-2-carbonitrilo S.

Sintesis de 5-isotiocianato-3-(trifluorometil)piridina-2-carbonitrilo, 9

5 El 5-amino-3-(trifluorometil)piridino-2-carbonitrilo S (1,141 g, 6,1 mmoles) se mezcla con cloroformo (5 ml) y agua (40 ml) para producir una suspension de color blanco. Se afade tiofosgeno (0,701 ml, 9,15 mmoles) y la reaccion se agita durante 2 horas a 22°C para producir un sistema bifasico claro. Se afade cloroformo (20 ml) y se separan las fases. La capa acuosa se extrae con cloroformo (30 ml) y la capa organica combinada se lava con NaHCO3 sodico acuoso saturado y agua, se seca sobre MgSO4 y el disolvente se elimino a presion reducida. El 5-isotiocianato-3

10 (trifluorometil)piridino-2-carbonitrilo bruto 9 se seca a vacio y se utiliza tal cual en la siguiente etapa, por ejemplo, en la etapa descrita en el Ejemplo 8 de mas abajo.

Sintesis de 4-(7-(6-ciano-5-(trifluorometil)piridin-3-il)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaespiro[3,4]octan-5-il)-2metilbenzamida 11. A52

El 5-isotiocianato-3-(trifluorometil)picolinonitrilo bruto 9 (1,390 g, 6,07 mmoles) se coloca en un matraz de fondo redondo de 50 ml y se afade al matraz 4-(1-cianociclobutilamino)-2-fluoro-N-metilbenzamida 10 (0,5 g, 2,022 20 mmoles). La mezcla se deja a vacio (usando una bomba de aceite) durante 1 hora. Se afade N, N-dimetilformamida (DMF) (6 ml), el matraz se sella bajo argon con un tapon y se calienta a 80°C en un reactor de microondas CEM durante 20 horas. Se afaden metanol (10 ml) y HCl 2 N (6 ml) y la mezcla se somete a reflujo durante 2 horas. La mezcla se diluye con agua (30 ml) y se afade NaHCO3 (30 ml). La mezcla se extrae con acetato de etilo (3 x 20 ml).

25 Las capas organicas combinadas se lavan con NaCl acuoso saturado (20 ml), se seca sobre Na2SO4, se filtra y se concentra a presion reducida. El producto bruto se purifica por cromatografia en columna sobre gel de silice (diclorometano/acetona 95:5) para obtener 4-(7-(6-ciano-5-(trifluorometil)piridin-3-il)-8-oxo-6-tioxo-5,7diazaespiro[3,4]octan-5-il)-2-fluoro-N-metilbenzamida 11.

30 Esquema 4 Sintesis de A52

Ejemplo 1: Sintesis de 2-bromo-5-nitro-3-(trifluorometil)piridina, 21

35 La 5-nitro-3-(trifluorometil)piridin-2(1H)-ona 3 se obtiene mediante las rutas previstas en los Ejemplos 1 y 2 del Esquema 3, anteriores.

Una mezcla de 5-nitro-3-(trifluorometil) piridin-2(1H)-ona 3, POBr3 (1,5 equivalentes), PBr3 (4 equivalentes) y Br2 (2

40 equivalentes) se calienta a aproximadamente 90-110°C y a continuacion se vierte en agua con hielo. La mezcla se neutraliza y se extrae. Las fases organicas combinadas se secan sobre Na2SO4 y todos los disolventes se eliminan a presion reducida para obtener 2-bromo-5-nitro-3-(trifluorometil)piridina 21 con un rendimiento de 88%.

Alternativamente, el POBr3 se sustituye por POCl3 para producir una mezcla en el producto que tiene una razon de sustituyentes bromo a cloro de 6:01 o mejor. Sintesis de 5-nitro-3-(trifluorometil)pirindino-2-carbonitrilo, 22

La 2-bromo-5-nitro-3-(trifluorometil)piridina 21 se disuelve en dimetilacetamida (DMA) y se afade fenantrolina (0,2 equivalentes). La mezcla se calienta a 160°C y se afade CuCN (2 equivalentes). La mezcla se agita durante 40 minutos. La cromatografia se lleva a cabo para producir 5-nitro-3-(trifluorometil)piridino-2-carbonitrilo 22 con un

10 rendimiento de 67%.

Sintesis de 5-amino-3-(trifluorometil) piridina-2-carbonitrilo, 8

15 Se calienta una mezcla de 5-nitro-3-(trifluorometil)piridino-2-carbonitrilo 22 y polvo de hierro en acido acetico. Se obtiene 5-amino-3-(trifluorometil)piridina-2-carbonitrilo, S con un rendimiento de 91%.

Sintesis de 4-(7-(6-ciano-5-(trifluorometil)piridin-3-il)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaespiro[3,4]octan-5-il)-2-fluoro-N-20 metilbenzamida 11, A52

El 5-amino-3-(trifluorometil)piridino-2-carbonitrilo S se trata como se ha descrito en el Ejemplo 7 del Esquema 3, anteriormente, para obtener 5-isotiocianato-3-(trifluorometil)piridino-2-carbonitrilo 9.

25 El 5-isotiocianato-3-(trifluorometil)piridino-2-carbonitrilo, 9 se hace reaccionar con 4-(1-cianociclobutilamino)-2-fluoroN-metilbenzamida 10 como se discute en el Ejemplo 8 del Esquema 3, de mas arriba, para obtener 4-(7-(6-ciano-5(trifluorometil)piridin-3-il)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaespiro[3,4]octan-5-il)-2-fluoro-N-metilbenzamida 11 (A52).

Esquema 5: Sintesis alternativa de A52 30 Sintesis de 3-(trifluorometil)-5-isotiocianatopiridino-2-carbonitrilo (A)

Una solucion de 2-hidroxi-3-(trifluorometil)piridina C en una mezcla de N-yodosuccinimida (NIS), acetonitrilo y dimetilformamida (DMF) se calienta a 80°C durante 2 horas para producir 2-hidroxi-3-trifluorometil-5-(yodo)piridina I 5 (rendimiento superior al 80%). La 2-hidroxi-3-trifluorometil-5-(yodo)piridina I se mezcla a continuacion con POCl3 en DMF y se calienta a 130°C en un horno de microondas durante 20 minutos para producir la 2-cloro-3-trilluorometil-5yodo)piridina J (rendimiento de 50 a 55%). La 2-cloro-3-trifluorometil-5-(yodo)piridina K se hace reaccionar en una solucion de pMBnNH2, acetato de paladio(II),, 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo (BINAP), trietilamina, y carbonato de cesio en tolueno para producir 5-((4-metoxifenil))metilamino)-2-cloro-3-(trifluorometil)piridina K (rendimiento de 10 40%). La 5-((4-metoxifenil))metilamino)-2-cloro-3-(trifluorometil)piridina K se hace reaccionar en una solucion de cianuro de cinc, tris(dibencilidenacetona)dipaladio (Pd2(Dba3), y 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno (dppf) en DMF para proporcionar la 5-(4-metoxibencilamino)-2-ciano-3-(trifluorometil)piridina K (rendimiento de 92%). La 5-(4metoxibencilamina)-2-ciano-3-(trifluorometil)piridina K se hace reaccionar en una solucion de diclorometano y acido trifluoroacetico para proporcionar 2-ciano-3-trifluorometil-5-(amino)piridina H (rendimiento mayor de 95%). La 215 ciano-3-trifluorometil-5-(amino)piridina H se hace reaccionar con tiofosgeno en agua a 25°C durante 2 horas para

proporcionar el 5-isotiocianato-3-(trifluorometil)piridino-2-carbonitrilo A (rendimiento de 74% a 95%).

Sintesis de intermedio de 4-(1-cianociclobutilamino)-2-fluoro-N-metilbenzamida B

Una solucion de cloruro de 2,4-difluoro-benzoilo D en una solucion de metilamina y tetrahidrofurano (THF) se hace reaccionar para producir 2,4-difluoro-N-metilbenzamida M (rendimiento cuantitativo). La 2,4-difluoro-Nmetilbenzamida M se mezcla con en una solucion de acetonitrilo y 4-metoxi-bencenometanamina y se calienta en un

25 microondas durante 20 minutos a 190°C para producir la 2-fluoro-4-(4-metoxibencilamino)-N-metilbenzamida S (rendimiento de 40%). La 2-fluoro-4-(4-metoxibencilamino)-N-metilbenzamida S se hace reaccionar en una solucion de diclorometano y acido trifluoroacetico para producir 2-fluoro-4-amino-N-metilbenzamida T (rendimiento mayor de 95%). La 2-fluoro-4-amino-N-metilbenzamida T se hace reaccionar con una solucion de cianuro de sodio y ciclobutanona para producir 4-(1-cianociclobutilamino)-fluoro-N-metilbenzamida B.

Acoplamiento de A y B para producir 4-(7-(6-ciano-5-(trilfuorometil)piridin-3-il)-8-oxo-6-tioxo-5,7diazaespiro[3,4]octan-5-il)-2-fluoro-N-metilbenzamida, A52

El 5-isotiocianato-3-(trifluorometil)piridino-2-carbonitrilo, 9, A se hace reaccionar con la 4-(1-cianociclobutilamino)-2fluoro-N-metilbenzamida B en solucion de DMF por calentamiento en un microondas a 80°C durante 20 horas. A continuacion, se afaden metanol y acido clorhidrico y la reaccion se deja proceder durante 2 horas para producir 4(7-(6-ciano-5-(trilfuorometil)piridin-3-il)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaespiro[3,4]octan-5-il)-2-fluoro-N-metilbenzamida, A52 (rendimiento 35 a 87%).

Actividad

Utilidad

Los compuestos de la presente invencion modulan la funcion de los receptores de hormonas nucleares, en particular el receptor de androgenos, e incluyen compuestos que son, por ejemplo, agonistas selectivos o antagonistas selectivos del receptor de androgenos (AR). Por lo tanto, los presentes compuestos son utiles en el tratamiento de afecciones asociadas con AR. Una quot;afeccion asociada con ARquot;, segun se utiliza en la presente memoria, indica una afeccion o trastorno que puede ser tratado mediante la modulacion de la funcion o la actividad de un AR en un sujeto, en donde el tratamiento comprende la prevencion, el alivio parcial o la curacion de la afeccion o trastorno. La modulacion se puede producir localmente, por ejemplo, dentro de ciertos tejidos del sujeto, o mas extensamente a traves de un sujeto que este siendo tratado de tal afeccion o trastorno. Preferiblemente, los compuestos con potente actividad antagonica se utilizan para el tratamiento de cancer de prostata relacionado con androgenos.

Combinacion

La presente invencion incluye dentro de su alcance composiciones farmaceuticas que comprenden, como ingrediente activo, una cantidad terapeuticamente eficaz de al menos uno de los compuestos de la invencion, solo o combinado con un portador o diluyente farmaceutico. Opcionalmente, los compuestos de la presente invencion se pueden usar solos, combinados con otros compuestos de la invencion, o combinados con uno o mas de otros agentes terapeuticos, por ejemplo, un antibiotico u otra sustancia farmaceuticamente activa.

Analisis Farmacologico

Los compuestos de esta invencion se identificaron a traves de escrutinio de celulas de cancer de prostata sensible a hormonas y refractario a hormonas para determinar las actividades antagonicas y agonisticas. Los compuestos con actividad antagonica son farmacos potenciales para el tratamiento del cancer de prostata, tanto sensible a hormonas como refractario a hormonas.

La actividad biologica de los compuestos de la invencion se midio por los niveles secretados de antigeno prostatico especifico (PSA). Esta bien establecido que los niveles de PSA son indicadores de las actividades de AR en el cancer de prostata. Para examinar si los compuestos afectan a la funcion de AR en un entorno fisiologico, los autores de la presente invencion determinaron los niveles de secrecion de PSA endogeno inducida por R3881 en las celulas cancerosas sensibles a hormonas (SH) y refractarios a hormonas (RH). Las celulas RH son celulas LNCaP manipuladas geneticamente para expresar niveles elevados de la proteina del receptor de androgenos (celulas LNCaP/AR), analogos a los niveles observados en los pacientes con cancer de RH que recaen mientras que toman antiandrogenos actuales tales como la bicalutamida, que adquieren propiedades agonisticas cuando el RA es altamente expresado. Las celulas LNCaP (o celulas LNCaP/AR) se mantuvieron en medio de Iscove que contenia FBS al 10%. Cinco dias antes del tratamiento con farmaco, las celulas hicieron crecer en medio de Iscove que contenia CS-FBS al 10% para la privacion de androgenos. Las celulas se dividieron y se cultivaron en medio de Iscove que contenia CS-FBS al 10% con concentraciones apropiadas de R1881 y de los compuestos de ensayo. Despues de 5 dias de incubacion, los niveles de PSA secretados se analizaron utilizando kits de ELISA para PSA (American Qualex, San Clemente, CA) (Veanse la Fig. 1 y la Fig. 3). El analisis MTS tambien se utilizo para examinar la inhibicion del crecimiento de los compuestos (vease la Fig. 2).

Datos farmacocineticos

La farmacocinetica de A52 se evaluo in vivo utilizando ratones FVB 8 semanas de edad que fueron adquiridos de Charles River Laboratories. Los ratones se dividieron en grupos de tres para cada momento (Vease la Fig. 4). Dos ratones no fueron tratados con el farmaco y otros dos ratones fueron tratados con solucion de vehiculo. Cada grupo fue tratado con 10 mg por kilogramo de peso corporal. El farmaco se disolvio en una mezcla 50: 10: 1: 989 de DMSO: Carboximetilcelulosa: T Tween 80: H2O (solucion de vehiculo) y se administro por via oral. Despues de la administracion del farmaco, los animales fueron sacrificados mediante de inhalacion de CO2 en diferentes momentos: 1 min, 5 min, 15 min, 30 min, 2 h, 4 h, 8 h, 16 h. Los animales se sangraron inmediatamente despues de la exposicion a CO2 mediante puncion cardiaca (jeringa BD de 1 ml + aguja 27G de 5/8).

Las muestras de suero se analizaron para determinar la concentracion de farmaco mediante HPLC (bomba Waters 600, controlador Waters 600 y detector Waters 2487) que estaba equipada con una columna C18 Alltima (31, 150 mm x 4,6 mm). Todos los compuestos RD se detectaron a 254 nm de longitud de onda y la bicalutamida se detecto a 270 nm de longitud de onda.

Las muestras para analisis mediante HPLC se prepararon de acuerdo con el siguiente procedimiento:

•

Las celulas de la sangre se separaron del suero mediante centrifugacion.

•

A 400 1l de suero se les afadieron 80 1l de una solucion de 10 mM de RD75 en acetonitrilo como patron interno y 520 1l de acetonitrilo. Se produjo la precipitacion.

•

La mezcla se sometio a vortice durante 3 minutos y a continuacion se coloco bajo ultrasonidos durante 30 minutos.

•

Las particulas solidas se separaron por filtracion o se separaron por centrifugacion.

•

El producto filtrado se seco bajo un flujo de argon hasta sequedad. La muestra fue reconstruida hasta 80 1l con acetonitrilo antes de analizar mediante HPLC para determinar la concentracion de farmaco.

•

La curva patron del farmaco se utiliza para mejorar la precision.

Analisis in vivo

Todos los experimentos con animales se realizaron conforme a las directrices del Comite de Investigacion Animal de la Universidad de California en Los Angeles. Los animales fueron adquiridos de Taconic y mantenidos en una torre de flujo laminar en una colonia de flora definida. Las celulas LNCaP-AR y LNCaP-vector se mantuvieron en medio RPMI con un suplemento de FBS al 10%. Se inyectaron 106 celulas en 100 1l de Matrigel 1:1 a medio RPMI por via subcutanea en los flancos de ratones SCID macho intactos o castrados. El tamafo del tumor se midio semanalmente en tres dimensiones (largo x ancho x profundidad), utilizando calibres. Los ratones fueron asignados al azar a grupos de tratamiento cuando el tamafo del tumor alcanzo aproximadamente 100 mm3. Los farmacos se administraron por via oral todos los dias a la dosis de 10 mg/kg. (Vease la Fig. 5 y en la Fig. 6). A una dosis diaria de 10 mg/kg, se encontro que los compuestos A51 y A52 para retardar el crecimiento del tumor por completo.

Tambien se probaron otras dosis. A una dosis diaria de 1 mg/kg, se encontro que los compuestos A51 y A52 tenian un efecto leve. A una dosis diaria de 25-50 mg/kg, se encontro que los compuestos A51 y A52 inducian cierta citotoxicidad tumoral.

Se utilizaron lineas celulares de cancer de prostata para xenoinjertos. Por ejemplo, se elaboraron un xenoinjerto LNCaP, un xenoinjerto LAPC4, un xenoinjerto LAPC9, y xenoinjertos de las contrapartes refractarias a hormonas de estas lineas celulares. Otras lineas celulares incluyeron lineas celulares V-cap, CWR22 y LAPC4. Se generaron dos lineas celulares que expresan en exceso los receptores de androgenos, LNCaP AR y LAPC4 AR. Se encontro que la progresion del cancer de prostata en estas lineas celulares manipuladas geneticamente diferian de sus contrapartes parentales. Bajo ablacion de androgenos, las lineas LAPC4 AR y LNCaP AR continuaron creciendo, comportandose por lo tanto como celulas refractarias a hormonas.

Se encontro que algunas de las lineas celulares no eran bien aceptadas por los ratones en la formacion de tumores cuando se xenoinjertaron. Sin embargo, con LNCaP, 2 millones de celulas produjeron una aceptacion de 95%. Se pueden utilizar tan pocas como 1 millon de celulas. Estas celulas requirieron al menos 25% de Matrigel, pero no mas de 50%. Dado que se requieren altas concentraciones de celulas para una buena tasa de aceptacion del tumor, se encontro que una aguja 27G era la aguja apropiada mas pequefa.

Se encontro que la linea celular LAPC4 era muy dificiles de desarrollar en los animales. Las celulas necesitan ser resuspendidas y filtradas a traves de un filtro de malla de micras, por ejemplo, un filtro de malla de 40-100 micras, debido a que con frecuencia forman grandes agregados. La resuspension y la circulacion a traves de un filtro ayuda a normalizar el numero de celulas entre cada animal y por lo tanto da resultados mas consistentes. LAPC4 requiere Matrigel a aproximadamente 25%-50%, por ejemplo, Matrigel al 50%, pero se puede injertar con exito a una concentracion inferior a 105 celulas.

Se encontro que la aceptacion del tumor en ratones SCID era mejor que en ratones atimicos. Por ejemplo, se encontro que la aceptacion del tumor en todos los animales individuales en ratones atimicos era muy inconsistente. Se utilizaron ratones SCID CB17 en el estudio.

Las inyecciones se realizaron por via subcutanea en el flanco derecho del raton. Se encontro que la inyeccion lenta ayudaba a producir un tumor redondo que era mas facil de medir y se podia medir con mayor precision. Ademas, a causa del uso de Matrigel, se considero apropiada la inyeccion de no mas de 200 1l. Se considero apropiada la inyeccion de 100-200 1l. La inyeccion de un volumen demasiado grande produjo escapes al retirar la aguja.

Un metodo alternativo para ayudar a evitar los escapes de la aguja puede ser retirada para calentar la jeringa cargada con Matrigel:medios:celulas un par de segundos para producir una forma de tipo gel. Cuando se inyecta el liquido de tipo gel, no debe producirse ningun escape. Sin embargo, permitir que el Matrigel se caliente durante un tiempo demasiado prolongado puede hacer que la suspension se solidifique y se vuelva no inyectable.

Composiciones farmaceuticas y administracion

Los compuestos de la invencion son utiles como composiciones farmaceuticas preparadas con una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de la invencion, tal como se define en la presente memoria, y un portador

o diluyente farmaceuticamente aceptable.

Los compuestos de la invencion se pueden formular como composiciones farmaceuticas y administrarse a un sujeto que necesite tratamiento, por ejemplo un mamifero, tal como un paciente humano, en una variedad de formas adaptadas a la ruta de administracion elegida, por ejemplo, oralmente, nasalmente, intraperitonealmente, o parenteralmente, por las rutas intravenosa, intramuscular, topica o subcutanea, o mediante inyeccion en el tejido. Tales composiciones y preparaciones deben contener al menos 0,01% de un compuesto o compuestos de la invencion. El porcentaje de las composiciones y preparaciones puede, por supuesto, variarse y puede, por ejemplo, encontrarse entre aproximadamente 0,05% y aproximadamente 2% del peso de una forma de dosificacion unitaria dada. La cantidad de compuestos en tales composiciones terapeuticamente utiles es tal que se obtendra un nivel de dosificacion eficaz.

Por lo tanto, los compuestos de la invencion se pueden administrar sistemicamente, p. ej., oralmente, combinados con un vehiculo farmaceuticamente aceptable tal como un diluyente inerte o un portador comestible asimilable, o mediante inhalacion o insuflacion. Se pueden encerrar en capsulas de gelatina de cubierta dura o blanda, pueden comprimirse en comprimidos, o pueden incorporarse directamente al alimento de la dieta del paciente. Para la administracion terapeutica oral, los compuestos se pueden combinar con uno o mas excipientes y usarse en forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, trociscos, capsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas, y similares. Los compuestos pueden ser combinados con un portador inerte en polvo fino e inhalados o insuflados por el sujeto. Tales composiciones y preparaciones deben contener al menos 0,1% de un compuesto o compuestos de la invencion. El porcentaje de las composiciones y preparaciones puede, por supuesto, variarse y se puede encontrar convenientemente entre aproximadamente 2% y aproximadamente 60% del peso de una forma de dosificacion unitaria dada. La cantidad de compuestos en tales composiciones terapeuticamente utiles es tal que se obtendra un nivel de dosificacion eficaz.

Los comprimidos, trociscos, pildoras, capsulas, y similares tambien pueden contener lo siguiente: aglutinantes tales como goma de tragacanto, acacia, almidon de maiz, o gelatina; excipientes tales como fosfato dicalcico; un agente disgregante tal como almidon de maiz, almidon de patata, acido alginico, y similares; un lubricante tal como estearato de magnesio; y un agente edulcorante tal como sacarosa, fructosa, lactosa o aspartamo, o se puede afadir un agente aromatizante tal como menta, aceite de gaulteria, o aroma de cereza. Cuando la forma de dosificacion unitaria es una capsula, esta puede contener, ademas de los materiales del tipo anterior, un portador liquido, tal como un aceite vegetal o un polietilenglicol. Pueden estar presentes otros varios materiales en forma de recubrimientos o para modificar de otro modo la forma fisica de la forma de dosificacion unitaria solida. Por ejemplo, los comprimidos, pildoras, o capsulas pueden recubrirse con gelatina, cera, goma laca, azucar, y similares. Un jarabe o elixir puede contener el compuesto activo, sacarosa o fructosa como agente edulcorante, metil y propilparabenos como conservantes, un colorante y aromatizante tal como aroma de cereza o naranja. Por supuesto, cualquier material utilizado en la preparacion de cualquier forma de dosificacion unitaria debe ser farmaceuticamente aceptable y sustancialmente no toxico en las cantidades empleadas. Ademas, los compuestos de la invencion pueden incorporarse en preparaciones y dispositivos de liberacion sostenida. Por ejemplo, los compuestos se pueden incorporar en capsulas de liberacion controlada, comprimidos de liberacion controlada, y pildoras de liberacion controlada.

Los compuestos de la invencion tambien se pueden administrar por via intravenosa o intraperitoneal mediante infusion o inyeccion. Las soluciones de los compuestos se pueden preparar en agua, mezcladas opcionalmente con un tensioactivo no toxico. Las dispersiones tambien pueden prepararse en glicerol, polietilenglicoles liquidos, triacetina, y mezclas de los mismos y en aceites. En la condiciones habituales de almacenamiento y uso, estas preparaciones pueden contener un conservante para prevenir el crecimiento de microorganismos.

Las formas de dosificacion farmaceuticas adecuadas para inyeccion o infusion pueden incluir soluciones o dispersiones acuosas esteriles o polvos esteriles que comprenden los compuestos de la invencion que estan adaptados para la preparacion extemporanea de soluciones o dispersiones inyectables o infusibles esteriles, opcionalmente encapsuladas en liposomas. En todos los casos, la forma de dosificacion final debe ser esteril, fluida y estable bajo las condiciones de fabricacion y almacenamiento. El portador o vehiculo liquido puede ser un disolvente o medio de dispersion liquido que comprende, por ejemplo, agua, etanol, un poliol (p. ej., glicerol, propilenglicol, polietilenglicoles liquidos, y similares), aceites vegetales, esteres de glicerilo no toxicos, y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez apropiada puede mantenerse, por ejemplo, mediante la formacion de liposomas, mediante el mantenimiento del tamafo de particula requerido en el caso de las dispersiones, o mediante el uso de tensioactivos. La prevencion de la accion de los microorganismos puede ser provocada por varios agentes antibacterianos y antifungicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, acido sorbico, timerosal, y similares. En muchos casos, sera preferible incluir agentes isotonicos, por ejemplo, azucares, tampones o cloruro de sodio. La absorcion prolongada de las composiciones inyectables puede ser provocada por el uso en las composiciones de agentes que retrasan la absorcion, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.

Las soluciones inyectables esteriles se preparan incorporando los compuestos de la invencion en la cantidad requerida en el disolvente apropiado con varios de los otros ingredientes enumerados anteriormente, segun se requiera, seguido por esterilizacion mediante filtracion. En el caso de los polvos esteriles para la preparacion de soluciones inyectables esteriles, los metodos preferidos de preparacion son las tecnicas de secado a vacio y de secado por congelacion, que producen un polvo del ingrediente activo mas cualquier ingrediente adicional deseado presente en las soluciones previamente esterilizadas por filtracion.

Para administracion topica, los compuestos de la invencion se pueden aplicar en forma pura. Sin embargo, generalmente sera deseable administrarlos a la piel en forma de composiciones o formulaciones, combinados con un portador dermatologicamente aceptable, que puede ser un solido o un liquido.

Los portadores solidos utiles incluyen solidos finamente divididos tales como talco, arcilla, celulosa microcristalina, silice, alumina, y similares. Otros portadores solidos incluyen nanoparticulas o microparticulas polimericas no toxicas. Los portadores liquidos utiles incluyen agua, alcoholes o glicoles o combinaciones de agua/alcohol/glicol, en las que los compuestos de la invencion se pueden disolver o dispersar a niveles eficaces, opcionalmente con la ayuda de tensioactivos no toxicos. Se pueden afadir coadyuvantes tales como fragancias y agentes antimicrobianos adicionales para optimizar las propiedades para un uso dado. Las composiciones liquidas resultantes pueden aplicarse a partir de almohadillas absorbentes, utilizadas para impregnar vendajes y otros apositos, o pulverizarse sobre el area afectada usando pulverizadores de tipo bomba o aerosol.

Tambien se pueden emplear espesantes tales como polimeros sinteticos, acidos grasos, sales y esteres de acidos grasos, alcoholes grasos, celulosas modificadas o materiales minerales modificados con portadores liquidos para formar pastas, geles, pomadas, jabones extensibles, y similares, para aplicacion directamente a la piel del usuario.

Los ejemplos de composiciones dermatologicas utiles que se pueden utilizar para liberar los compuestos de la presente invencion a la piel son conocidos en la tecnica, por ejemplo, vease �acquet et al. (Patente de los Estados Unidos Num. 4.608.392), Geria (Patente de los Estados Unidos Num. 4.992.478), Smith et al. (Patente de los Estados Unidos Num. 4.559.157), y Wortzman (Patente de los Estados Unidos Num. 4.820.508), todas las cuales se incorporan a la presente como referencia.

Las dosificaciones utiles de los compuestos A51 y A52 se pueden determinar mediante la comparacion de su actividad in vitro, y mediante la comparacion de su actividad in vivo en modelos animales. Los metodos para la extrapolacion de las dosificaciones eficaces en ratones y otros animales a seres humanos son conocidos en la tecnica, por ejemplo, vease la Patente de los Estados Unidos Num. 4.938.949, que se incorpora a la presente como referencia.

Por ejemplo, la concentracion de los compuestos en una composicion liquida, tal como una locion, puede ser de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 25% en peso, o de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 10% en peso. La concentracion en una composicion semisolida o solida tal como un gel o un polvo puede ser de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 5% en peso, o de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2,5% en peso.

La cantidad de los compuestos de la invencion requerida para su uso en el tratamiento variara no solo con la sal concreta seleccionada, sino tambien con la ruta de administracion, la naturaleza de la afeccion que se este tratando y la edad y el estado del paciente y estara en ultima instancia a la discrecion del medico o clinico.

Las dosis eficaces y las rutas de administracion de los agentes de la invencion son convencionales. La cantidad exacta (dosis eficaz) del agente variara de sujeto a sujeto, dependiendo de, por ejemplo, la especie, la edad, el peso, y condicion general o clinica del sujeto, la gravedad o el mecanismo de cualquier trastorno que se este tratando, el agente o vehiculo concreto utilizado, el metodo y el programa de administracion, y similares. Una dosis terapeuticamente eficaz puede ser determinada empiricamente, por procedimientos convencionales conocidos por los expertos en la tecnica. Vease, p. ej.� The Pharmacological Basis of Therapeutics, Goodman y Gilman, eds., Macmillan Publishing Co., New �ork. Por ejemplo, una dosis eficaz puede estimarse inicialmente en analisis de cultivo celular o en modelos animales adecuados. El modelo animal tambien se puede usar para determinar los intervalos de concentracion y vias de administracion apropiados. Tal informacion puede usarse a continuacion para determinar las dosis utiles y las rutas para la administracion en seres humanos. Una dosis terapeutica tambien se puede seleccionar por analogia con las dosis para los agentes terapeuticos comparables.

El modo particular de administracion y el regimen de dosificacion sera seleccionado por el medico a cargo, teniendo en cuenta las particularidades del caso (p. ej., el sujeto, la enfermedad, el estado de la enfermedad en cuestion, y si el tratamiento es profilactico). El tratamiento puede implicar dosis diarias o multiples de uno o varios compuestos durante un periodo de unos pocos dias a meses, o incluso afos.

En general, sin embargo, una dosis adecuada estara en el intervalo de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 500 mg/kg por dia, p. ej., de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 500 mg/kg de peso corporal por dia, tal como de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal del receptor por dia. Por ejemplo, una dosis adecuada puede ser de aproximadamente 1 mg/kg, 10 mg/kg, o 50 mg/kg de peso corporal por dia.

Los compuestos de la invencion se administran convenientemente en una forma de dosificacion unitaria; por ejemplo, que contiene de aproximadamente 0,0005 a aproximadamente 500 mg, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg, de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 10 mg, o aproximadamente 5 mg de ingrediente activo por forma de dosificacion unitaria.

Los compuestos de la invencion se pueden administrar para alcanzar concentraciones plasmaticas maximas de, por ejemplo, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 75 1M, aproximadamente 1 a 50 1M, de aproximadamente 2 a aproximadamente 30 1M, o de aproximadamente 5 a aproximadamente 25 1M. Las concentraciones plasmaticas deseables ilustrativas incluyen, al menos, o no mas de 0,25, 0,5, 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100 o 200 mM. Esto puede conseguirse, por ejemplo, por la inyeccion intravenosa de una solucion de 0,05 a 5% de los compuestos de la presente invencion, opcionalmente en solucion salina, o administrada por via oral como un bolo que contiene de aproximadamente 1-1000 mg de los compuestos. Los niveles en sangre deseables pueden mantenerse mediante infusion continua para proporcionar de aproximadamente 0,0005 a aproximadamente 25 mg por kg de peso corporal por hora, por ejemplo al menos, o no mas de 0,0005, 0,005, 0,05, 0,5, 5, o 25 mg/kg/h. Alternativamente, dichos niveles se pueden obtener mediante infusiones intermitentes que contienen de aproximadamente 0,002 a aproximadamente 100 mg por kg de peso corporal, por ejemplo, al menos no mas de 0,002, 0,02, 0,2, 2, 20, 50, o 100 mg de los compuestos por kg de peso corporal.

Los compuestos de la invencion se pueden presentar convenientemente en una dosis unica o en forma de dosis divididas administradas a intervalos apropiados, por ejemplo, como dos, tres, cuatro o mas sub-dosis por dia. La propia subdosis puede dividirse adicionalmente, p. ej., en un numero de administraciones discretas ligeramente espaciadas; tales como inhalaciones multiples de un insuflador.

Ejemplo: formulacion intravenosa

Un compuesto A51 o A52 puede estar en una formulacion adecuada para la administracion intravenosa. En una realizacion, el compuesto se disuelve en aproximadamente 10% a aproximadamente 25% de dimetilsulfoxido (DMSO). Se mezcla a continuacion 1� solucion salina tamponada con fosfato (PBS) en la solucion como balance, y la solucion se somete a sonicacion con un sonicador de bafo de agua hasta que es homogenea.

A una concentracion de compuesto de 1,5 mg/ml, 5 minutos de sonicacion pueden ser suficientes para disolver el compuesto. A una concentracion de compuesto de 2 mg/ml, pueden ser necesarios mas de 5 minutos de sonicacion para disolver el compuesto y se puede afadir un polietilenglicol para mantener el compuesto en suspension. Por ejemplo, se puede afadir PEG-400 (un polietilenglicol) de 5 a 40%, por ejemplo, PEG-400 de 5-10%.

Se encontro que la solucion anterior, incluyendo cualquiera de A51 o A52, era estable a temperatura ambiente durante al menos una semana.

Antes de la administracion, la solucion anterior se debe someter a sonicacion durante unos pocos minutos. Se encontro que un volumen de administracion apropiado maximo para los ratones era 0,2 mL.

Cuando se administra a ratones, se observo endurecimiento de la piel e irritacion de la piel alrededor del sitio de inyeccion, y esto se atribuyo a la utilizacion de DMSO. Aunque los compuestos A51 y A52 son solubles en etanol, se encontro que etanol reducia la estabilidad de los compuestos in vivo.

Durante un periodo de 2 semanas despues de la administracion de la solucion anterior, se observo que los ratones perdian 15% del peso corporal.

Ejemplo: Formulacion oral

Un compuesto A51 o A52 puede estar en una formulacion adecuada para la administracion oral. En una realizacion, el compuesto se disuelve en DMSO al 100%.

Se pueden afadir productos quimicos adicionales, tales como una carboximetilcelulosa, un polisorbato o agua. Por ejemplo, los componentes de la solucion distintos de A51 o A52 pueden estar presentes a concentraciones de aproximadamente 10% a aproximadamente 20% de DMSO, de aproximadamente 1% a aproximadamente 2% de carboximetilcelulosa (CMC), y 0,1% de Tween 80 (un polisorbato), siendo el resto agua. La concentracion del compuesto A51 o A52 en la formulacion oral puede ser de aproximadamente 1,5 mg/ml. La solucion se homogeneiza mecanicamente durante al menos 30 segundos. Se encontro que el compuesto A51 o A52 permanecia en suspension durante un par de horas y, por lo tanto, la formulacion oral se debe administrar en el plazo de un par de horas desde la preparacion.

Cuando se incluyo en la solucion mas de 2% de carboximetilcelulosa (CMC), se encontro que la formulacion era muy viscosa, de modo que cuando se administro a un animal de ensayo con una jeringa de alimentacion forzada, gran parte de la formulacion se quedo en las paredes de la jeringa, evitando la administracion exacta del farmaco. Se encontro que una solucion de DMSO al 10% que incluia CMC y Tween 80 mantenia el compuesto en suspension cuando se aplico homogeneizacion mecanica. Es decir, no era necesario mas de 10% de DMSO. Se debe utilizar un minimo de DMSO, ya que se encontro que irritaba a los ratones, y se asocio con una perdida de hasta el 10% del peso corporal de los ratones a lo largo de un periodo de 2 semanas despues de la administracion.

Se encontro que un volumen de administracion apropiado maximo para los ratones era 0,2 ml.

Se encontro que la vida media del compuesto era mas larga cuando se administro por via intravenosa que cuando se administra por via oral. Sin embargo, la dosificacion oral diaria dio como resultado una concentracion en suero en estado estacionario aceptable del compuesto, comparable a la concentracion en estado estacionario observada con la bicalutamida. La administracion oral puede ser mas conveniente que la administracion intravenosa.

Los compuestos A51 y A52 tienen un efecto beneficioso sobre los tumores en un analisis in vivo administrados como se describe.

Las realizaciones ilustradas y comentadas en esta memoria descriptiva tienen la unica finalidad de ensefar a los expertos en la tecnica el mejor modo conocido por los autores de la presente invencion realizar y usar la invencion. Nada en esta memoria descriptiva se debe considerar como limitantes del alcance de la presente invencion. Todos los ejemplos presentados son representativos y no limitantes. Las realizaciones anteriormente descritas de la invencion pueden ser modificadas o variadas, sin apartarse de la invencion, como apreciaran los expertos en la tecnica a la luz de las ensefanzas anteriores. Por lo tanto, ha de entenderse que, dentro del alcance de las reivindicaciones, la invencion puede ponerse en practica de un modo distinto al descrito especificamente.

Claims (11)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto que tiene la formula:

   o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

2. 2.

   El compuesto de la reivindicacion 1 que tiene la formula

3. 3.

   El compuesto de la reivindicacion 1 que tiene la formula

4. 4.

   Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para su uso como un medicamento.

5. 5. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o una sal farmaceuticamente 20 aceptable del mismo para su uso en:

   (a)

   el tratamiento de una enfermedad o trastorno relacionado con la actividad del receptor nuclear;

   (b)

   el tratamiento de un trastorno hiperproliferativo;

   (c)

   el tratamiento de cancer de prostata;

   (d)

   el tratamiento de cancer de prostata sensible a las hormonas, o 25 (e) el tratamiento de cancer de prostata refractario a hormonas en un mamifero.

6. 6. Una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y un portador, diluyente

   o coadyuvante farmaceuticamente aceptable. 30

7. 7.

   La composicion farmaceutica de la reivindicacion 6, en donde el compuesto es:

8. 8.

   La composicion farmaceutica de la reivindicacion 6, en donde el compuesto es:

9. 9.

   La composicion farmaceutica de una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, que esta en una forma que es adecuada para la administracion a un mamifero sistemicamente.

   5 10. La composicion farmaceutica de una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en donde la composicion farmaceutica esta en una forma que es adecuada para la administracion mediante inyeccion intravenosa, mediante inyeccion en el tejido, por via intraperitoneal, por via oral o por via nasal.

10. 11. La composicion farmaceutica de una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en donde la composicion 10 farmaceutica es una solucion, dispersion, suspension, polvo, capsula, tableta o una pildora.
11. 12. Una composicion farmaceutica segun una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 11 para uso como medicamento.

    15 13. Una composicion farmaceutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 11 para su uso en:

    (a)

    el tratamiento de una enfermedad o trastorno relacionado con la actividad del receptor nuclear;

    (b)

    el tratamiento de un trastorno hiperproliferativo;

    (c)

    el tratamiento de cancer de prostata;

    (d) el tratamiento de cancer de prostata sensible a las hormonas, o 20 (e) el tratamiento de cancer de prostata refractario a hormonas en un mamifero.