ES2310408T3

ES2310408T3 - Metodo mejorado para preparar extractos de ginkgo que tienen un contenido bajo de 4'-o-metilpiridoxina y/o biflavonas.

Info

Publication number: ES2310408T3
Application number: ES06742753T
Authority: ES
Inventors: Clemens Erdelmeier; Hermann Hauer; Egon Koch; Friedrich Lang
Original assignee: Dr Willmar Schwabe GmbH and Co KG
Current assignee: Dr Willmar Schwabe GmbH and Co KG
Priority date: 2005-05-03
Filing date: 2006-04-28
Publication date: 2009-01-01
Anticipated expiration: 2026-04-28
Also published as: DK1868625T3; EP1868625B1; MX2007013398A; DE102005061948A1; KR100933721B1; BRPI0611093A2; PE20061296A1; RU2367459C2; AR054270A1; BRPI0611093B1; UA84519C2; CA2606843C; RU2007143632A; DE602006001949D1; US8642099B2; SI1868625T1; JP2009173663A; US20080286391A1; WO2006117169A1; US20060251746A1

Abstract

Un método para producir un extracto de ginkgo biloba que tiene un contenido reducido de 4''-O-metilpiridoxina y/o biflavonas, caracterizado por las siguientes etapas del método: a) extraer hojas de ginkgo biloba usando acetona con agua, un alcanol que contiene agua, que tiene 1 a 3 átomos de carbono, o metanol anhidro, b) separar el disolvente orgánico concentrando el disolvente hasta obtener un contenido de a lo sumo 10% en peso, en el que el agua puede agregarse durante las etapas de destilación finales, c) diluir con agua la disolución acuosa que queda, hasta obtener un contenido de sólidos de 5 a 25% en peso, enfriar hasta una temperatura por debajo de 25ºC, y permitir el reposo hasta la formación de un precipitado, d) tratar con sulfato de amonio la disolución acuosa que queda, y luego realizar al menos una extracción usando metiletilcetona o una mezcla de metiletilcetona y acetona, e) concentrar el extracto obtenido y diluir con una mezcla de etanol y agua para obtener una disolución que contiene 50% en peso de agua y 50% en peso de etanol, con un contenido de sólidos de 10% en peso, f) tratar la disolución con un compuesto de plomo o una poliamida insoluble, g) extraer la disolución filtrada usando un disolvente alifático o cicloalifático con un punto de fusión de 60 a 100ºC, h) concentrar la disolución acuosa alcohólica que queda, tratar después con sulfato de amonio y extraer con metiletilcetona y etanol, i) concentrar la fase orgánica obtenida hasta obtener un contenido de sólidos de 50 a 70% en peso, k) disolver el concentrado en un alcanol acuoso que tiene 1 a 3 átomos de carbono, y opcionalmente filtrar, l) filtrar sobre una resina de adsorción para reducir el contenido de biflavonas y/o sobre un intercambiador de iones ácido para reducir el contenido de 4''-O-metilpiridoxina, en el que las sustancias a eliminar se retienen en la resina y/o el intercambiador de iones ácido, y m) secar el concentrado a presión reducida para obtener un extracto seco que tiene un contenido de agua menor que 5%.

Description

Método mejorado para preparar extractos de ginkgo que tienen un contenido bajo de 4'-O-metilpiridoxina y/o biflavonas.

La presente invención se refiere a un método mejorado de múltiples etapas para preparar un extracto de ginkgo biloba que tiene un contenido reducido de 4'-O-metilpiridoxina y/o biflavonas, en el que la reducción del contenido se efectúa por filtración a través de una resina de adsorción y/o un intercambiador de iones ácido, y las sustancias a eliminar se retienen en la resina y/o en el intercambiador de iones ácido. Además, la invención se refiere a un extracto de ginkgo biloba que tiene un contenido reducido de 4'-O-metilpiridoxina y/o biflavonas que puede obtenerse mediante el método de acuerdo con la presente invención, así como a su uso.

Los extractos de las hojas de ginkgo biloba se usan como medicamentos desde hace décadas. En la actualidad se los usa para el tratamiento de distintos tipos de demencia, y sus síntomas, así como trastornos de la circulación sanguínea cerebral y periférica. Los ingredientes con los cuales se asocia la eficacia son las lactonas de terpenos (ginkgólidos A, B, C y bilobalida), así como los glicósidos de flavonas (quercetina, kaempferol e isoramnetina). Las hojas de ginkgo biloba también contienen componentes que no contribuyen a la eficacia deseada, sino que pueden ser responsables de riesgos y efectos colaterales. Además de los ingredientes vegetales no polares, tales como ácidos ginkgólicos, aquellos componentes son la 4'-O-metilpiridoxina y las biflavonas. Por lo tanto, en un extracto de ginkgo, que es eficaz y al mismo tiempo es tan seguro como sea posible y presente la menor cantidad de efectos secundarios posibles, estos compuestos no deberían estar presentes en la mayor medida posible.

La 4'-O-metilpiridoxina puede provocar síntomas de envenenamiento, tales como ataques convulsivos e inconsciencia. Por consiguiente, este compuesto también se conoce como ginkgotoxina. Las biflavonas contenidas en el ginkgo presentan un potencial inmunotóxico y pueden provocar alergias de contacto. Estas biflavonas contenidas en ginkgo son predominantemente los compuestos amentoflavona, bilobetina, ginkgetina, isoginkgetina y sciadopitisina.

4'-O-Metilpiridoxina:

1

Biflavonas:

2

Amentoflavona:: R^{1} = R^{2} = R^{3} = H

Bilobetina:: R^{1} = R^{3} = H, R^{2} = OCH_{3}

Ginkgetina:: R^{3} = H, R^{1} = R^{2} = OCH_{3}

Isoginkgetina:: R^{1} = H, R^{2} = R^{3} = OCH_{3}

Sciadopitisina:: R^{1} = R^{2} = R^{3} = OCH_{3}

En el documento EP 1037646 B1 se han descrito métodos para reducir simultáneamente el contenido de 4'-O-metilpiridoxina y biflavonas, así como los extractos obtenidos. En dicha publicación, la 4'-O-metilpiridoxina se retiene usando un intercambiador de cationes ácido, y las biflavonas se adsorben en carbón activado. Preferiblemente, estas etapas de reducción de contenido se realizan después de la etapa f) del método de acuerdo con EP 1 037 646 B1 (página 3), es decir, después de "tratar la disolución con un compuesto de plomo o una poliamida insoluble". El método del documento EP 1037646 B1 se basa en el método descrito originalmente en DE 3940091 C2.

En EP 1037646 B1, la reducción del contenido de biflavonas y 4'-O-metilpiridoxina se realiza en una etapa del método (etapa f)), en la que están presentes contenidos relativamente elevados de sales de plomo y sales de amonio, de modo que es necesario emplear una mayor cantidad de intercambiador de iones.

Además, las reducciones en el contenido de biflavonas y 4'-O-metilpiridoxina solamente se describen y reivindican en combinación. Sin embargo, dependiendo de los límites que posiblemente se establezcan en el futuro, y considerando el requisito de realizar una modificación de la composición del extracto tan pequeña como sea posible, puede ser deseable eliminar solamente las biflavonas o la 4'-O-metilpiridoxina.

Además, los contenidos de menos de 50 ppm de 4'-O-metilpiridoxina y menos de 100 ppm de biflavonas a los que se aspira en el documento EP 1037646 B1 aún son comparativamente elevados. Como en EP 1 037 646 B1 no se describe un ejemplo comparativo, tampoco resulta posible observar a partir de esta referencia el grado de reducción real del contenido obtenido en los Ejemplos 2 y 3.

Por consiguiente, el objeto subyacente a la presente invención es proporcionar un método para preparar extractos de ginkgo que tengan un contenido bajo de 4'-O-metilpiridoxina y/o un contenido bajo de bioflavonas, que no presente las desventajas indicadas previamente y, en particular,

\bullet: en el que se empleen adsorbentes reciclables y/o muy baratos,

\bullet: que produzca contenidos de 4'-O-metilpiridoxina menores que 10 ppm, y en particular preferiblemente menores que 2 ppm, y/o contenidos de biflavonas menores que 20 ppm, preferiblemente menores que 10 ppm y en particular preferiblemente menores que 5 ppm, y

\bullet: que produzca extractos que tengan contenidos preferidos de flavonoides de 20 a 30% en peso (en particular preferiblemente 22,0 a 27,0%), de lactonas de terpenos de 4,5 a 8,5% en peso (en particular preferiblemente 5,0 a 7,0%, preferiblemente 2,8 a 3,4% de los ginkgólidos A, B y C, y 2,6 a 3,2% de bilobalida), y de ácidos ginkgólicos (a lo sumo de 5 ppm), en el que dichos contenidos de flavonoides de 22,0 a 27,0%, de lactonas de terpenos de 5,0 a 7,0% (2,8 a 3,4% de ginkgólidos A, B y C, y 2,6 a 3,2% de bilobalida), y de ácidos ginkgólicos (a lo sumo de 5 ppm) satisfacen los requisitos de la Farmacopea Alemana 2003 ("Deutsches Arzneibuch"; DAB).

De acuerdo con la DAB, los flavonoides se determinan en forma de quercetina, kaempferol e isoramnetina después de una hidrólisis ácida, y se calculan como glicósidos flavonoides.

Este objeto podría alcanzarse separando las biflavonas con resinas de adsorción, y/o separando la 4'-O-metilpiridoxina con intercambiadores de iones ácidos.

Con el fin de producir los extractos de acuerdo con la presente invención, preferiblemente se pone en práctica el siguiente método, en el que las etapas a) a i), así como m), son como se ha descrito esencialmente en DE 3940091 C2, cuya descripción total, en particular con respecto a los detalles del método, se incorporará en la presente solicitud a modo de referencia:

a): extraer las hojas de ginkgo biloba (fármaco) a una temperatura de 20-100ºC, preferiblemente 40-60ºC, usando acetona que contiene agua, con un contenido de 20-90% en peso, un alcanol que contiene agua que tiene 1 a 3 átomos de carbono (metanol, etanol, n-propanol e isopropanol), y un contenido de 20-90% en peso de metanol anhidro, en el que la relación fármaco:disolvente es 1:4 a 1:20, preferiblemente 1:5 a 1:10,

b): separar el disolvente orgánico evaporando el disolvente hasta un contenido de a lo sumo 10% en peso (preferiblemente a lo sumo 5% en peso), en el que se puede añadir agua durante las etapas de destilación finales,

c): diluir con agua la disolución acuosa que queda, hasta obtener un contenido de sólidos de 5 a 25% en peso (preferiblemente 15 a 20% en peso), enfriar la disolución hasta una temperatura por debajo de 25ºC (preferiblemente aproximadamente 10 a 12ºC), y permitir que la disolución acuosa que queda repose hasta que se forme un precipitado,

d): tratar con sulfato de amonio la disolución acuosa que queda (preferiblemente hasta un contenido de hasta 40% en peso, en particular preferiblemente 25 a 35% en peso), y luego extraer la disolución al menos una vez usando metiletilcetona o una mezcla de metiletilcetona y acetona (preferiblemente en una relación de 9:1 a 4:6, en particular 6:4),

e): concentrar el extracto obtenido (preferiblemente hasta obtener un contenido de sólidos de 50 a 70% en peso) y diluir el extracto con una mezcla de etanol y agua para obtener una disolución que contiene 50% en peso de agua y 50% en peso de etanol, y que tiene un contenido de sólidos de 10% en peso,

f): tratar la disolución con un compuesto de plomo (preferiblemente con acetato de plomo, acetato de hidróxido de plomo, nitrato de plomo o una suspensión acuosa de hidróxido de plomo) hasta que se obtiene un cambio de color, de marrón a pardo, o una poliamida insoluble (preferiblemente poliamida 6, poliamida 6,6 o polivinilpirrolidona reticulada (polividona)),

g): extraer la disolución filtrada usando un disolvente alifático o cicloalifático con un punto de fusión de 60 y 100ºC,

h): concentrar la disolución acuosa alcohólica que queda, tratar luego la disolución con sulfato de amonio y extraer la disolución con metiletilcetona y etanol, (preferiblemente la disolución se concentra a presión reducida, hasta obtener un contenido de etanol de a lo sumo aproximadamente 5%, se añade con sulfato de amonio hasta un contenido de 20% en peso, y se extrae con el disolvente en una relación de 8:2 a 5:5, preferiblemente 6:4),

i): concentrar la fase orgánica obtenida hasta obtener un contenido de sólidos de 50 a 70% en peso,

k): disolver el concentrado en un alcanol acuoso que tiene 1 a 3 átomos de carbono, y opcionalmente filtrar el producto,

l): filtrar sobre una resina de adsorción y/o un intercambiador de iones ácido, en el que las sustancias a eliminar se retienen en la resina y/o el intercambiador de iones ácido, y

m): secar el concentrado (preferiblemente a una temperatura máxima de 60 a 80ºC) a presión reducida, para obtener un extracto seco que tiene un contenido de agua menor que 5%.

El método de acuerdo con la presente invención tiene la ventaja de que la etapa de reducción de contenido se realiza al final del método. Por consiguiente, se ha de emplear una menor cantidad del intercambiador de iones ácido, y se obtienen contenidos particularmente bajos de 4'-O-metilpiridoxina y/o biflavonas.

Las resinas de adsorción preferidas en la etapa l) son resinas basadas en estirenos/divinilbencenos opcionalmente sustituidos, tales como Diaion HP-20, HP-21 o Sepabeads SP-207 y SP-850. Los intercambiadores de iones ácidos preferidos son intercambiadores de iones fuertemente ácidos, tales como Merck I o Amberlite IR-120. La filtración incluye opcionalmente el lavado habitual usando disolvente adicional. El alcanol acuoso en la etapa k) es metanol, etanol, n-propanol o isopropanol acuoso, preferiblemente con un contenido de 20-90% en peso, respectivamente, preferiblemente etanol acuoso, prefiriéndose en particular una concentración de 40 a 60% en peso.

Un sujeto de la presente invención lo constituyen los extractos, en particular los extractos secos, que pueden obtenerse con el método de acuerdo con la presente invención, y que presentan los siguientes contenidos:

\bullet: menos de 10 ppm y en particular menos de 2 ppm de 4'-O-metilpiridoxina, y/o

\bullet: menos de 20 ppm, preferiblemente menos de 10 ppm y en particular menos de 5 ppm de biflavonas.

Además, un sujeto de la presente invención lo constituyen los extractos, en particular los extractos secos, que pueden obtenerse con el método de acuerdo con la presente invención, y que presentan los siguientes contenidos adicionales:

\bullet: 20 a 30% en peso, preferiblemente 22,0 a 27,0% en peso de flavonoides,

\bullet: 4,5 a 8,5% en peso, preferiblemente 5,0 a 7,0% en peso de lactonas de terpenos, y

\bullet: menos de 10 ppm, preferiblemente no más de 5 ppm de ácidos ginkgólicos.

Otro sujeto de la presente invención lo constituyen los extractos, en particular los extractos secos, que pueden obtenerse con el método de acuerdo con la presente invención, y que presentan los siguientes contenidos:

\bullet: 20 a 30% en peso, preferiblemente 22,0 a 27,0% en peso flavonoides,

\bullet: 2,5 a 4,5% en peso de ginkgólidos A, B y C en total, preferiblemente 2,8 a 3,4% en peso de ginkgólidos A, B y C en total,

\bullet: 2,0 a 4,0% en peso, preferiblemente 2,6 a 3,2% en peso de bilobalida,

\bullet: menos de 10 ppm, preferiblemente no más de 5 ppm de ácidos ginkgólicos, y

\bullet: menos de 10 ppm, en particular preferiblemente menos de 2 ppm de 4'-O-metilpiridoxina, y/o

\bullet: menos de 20 ppm, preferiblemente menos de 10 ppm y en particular preferiblemente menos de 5 ppm de biflavonas.

De acuerdo con la Farmacopea Europea, los extractos secos generalmente tienen un residuo seco de al menos 95% en peso.

Los extractos de acuerdo con la presente invención pueden administrarse en forma de polvos, gránulos, comprimidos, grageas (comprimidos recubiertos) o cápsulas, preferiblemente por vía oral. Con el fin de preparar comprimidos, el extracto se mezcla con coadyuvantes apropiados aceptables para el uso farmacéutico, tales como lactosa, celulosa, dióxido de silicio, croscarmelosa y estearato de magnesio, y se comprime en comprimidos, sobre los que opcionalmente se aplica un recubrimiento apropiado, por ejemplo hecho de hidroximetilcelulosa, polietilenglicol, pigmentos (tales como dióxido de titanio, óxido de hierro) y talco. El extracto de acuerdo con la presente invención también puede colocarse en cápsulas, opcionalmente con la adición de coadyuvantes, tales como estabilizadores, cargas y similares. La dosificación es tal que se administran 10 a 2000 mg, preferiblemente 50 a 1000 mg, y en particular preferiblemente 100 a 500 mg de extracto por día.

Otro sujeto de la presente invención lo constituyen los medicamentos, los productos alimentarios y otras preparaciones que contienen estos extractos, opcionalmente en combinación con otras sustancias, tales como ingredientes activos y/o coadyuvantes aceptables para el uso farmacéutico. El término "producto alimentario", tal como se usa en la presente memoria, particularmente hace referencia a productos alimentarios dietéticos, suplementos para productos dietéticos, y también suplementos para alimentos médicos y dietéticos.

Ejemplos Preparación de la disolución de extracto usada en los Ejemplos 1 y 2, y también en los Ejemplos Comparativos 1 y 2

Se extrajeron hojas secas de ginkgo biloba (fármaco) a una temperatura de aproximadamente 50ºC usando siete veces su peso (p/p) (es decir, la relación de fármaco-disolvente es 1:7) de acetona/agua 60/40 (p/p) (etapa a)).

El disolvente orgánico se separó en gran medida del extracto (etapa b)), y la disolución acuosa concentrada que queda se diluyó con agua hasta obtener un contenido de sólidos de aproximadamente 10% en peso. La disolución se enfrió hasta una temperatura de aproximadamente 12ºC con agitación, y se eliminó el precipitado resultante (etapa c)).

Se añadió aproximadamente 30% en peso de sulfato de amonio a la disolución acuosa que queda, y la disolución formada se extrajo usando una mezcla de metiletilcetona y acetona en una relación de 6:4 (etapa d)).

El extracto obtenido se concentró en gran medida, y el concentrado obtenido de este modo se diluyó con agua y etanol, de modo que se obtuvo una disolución que contenía 50% en peso de agua y 50% en peso de etanol, con un contenido de sólidos de aproximadamente 10% en peso (etapa e)). Se filtró la disolución y se añadió el filtrado con una disolución acuosa de acetato de hidróxido de plomo (etapa f)).

Después de una filtración adicional, la disolución acuosa alcohólica que queda se extrajo con heptano (etapa g)).

Luego, la disolución acuosa que queda se concentró a presión reducida hasta obtener un contenido de etanol de aproximadamente 5%, y se añadió sulfato de amonio hasta obtener un contenido de aproximadamente 20% en peso, en base al contenido de agua.

La disolución obtenida se extrajo usando una mezcla de metiletilcetona y etanol en una relación de 6:4 (etapa h)).

La fase orgánica resultante se extrajo en gran medida (contenido de sólidos de aproximadamente 55% en peso) (etapa i)). Luego, el producto se diluyó con etanol y agua, de modo que se obtuvo una disolución con un contenido de etanol de aproximadamente 75% y un contenido de sólidos de aproximadamente 15% (etapa k)).

Ejemplo 1

Extracto de ginkgo que tiene un contenido reducido de 4'-O-metilpiridoxina

Se ajustaron con agua 1249 g de la disolución de extracto, obtenida de acuerdo con el método de preparación descrito previamente, hasta alcanzar un contenido de etanol de aproximadamente 40% (p/p), y se aplicó a 50 ml (que corresponden a 0,28 ml/g del extracto seco) de Amberlite IR-120 (intercambiador de iones fuertemente ácido) (columna: aproximadamente 2 x 16,5 cm; caudal: aproximadamente 8 ml/minuto) (etapa l)), seguido de un lavado con 200 ml de etanol al 50% (p/p). La disolución resultante se concentró en un evaporador giratorio, y se secó a vacío a 50ºC (etapa m)): 179,4 g.

Como se puede apreciar en la siguiente tabla, se obtuvo un contenido de 4'-O-metilpiridoxina de 0,4 ppm sin modificar esencialmente los contenidos de los ingredientes relevantes para la eficacia.

Ejemplo Comparativo 1

Extracto de ginkgo sin reducción de contenido de acuerdo con la etapa l) de la presente invención

Se concentraron por evaporación 98,4 g de la disolución de extracto empleada en el Ejemplo 1, y se secó a vacío a 50ºC: 14,7 g.

Ejemplo 2a)

Extracto de ginkgo que tiene un contenido reducido de biflavonas

Se ajustaron con agua 500 g de la disolución de extracto obtenida de acuerdo con el método de preparación descrito previamente, hasta alcanzar un contenido de etanol de aproximadamente 40% (p/p), y se aplicó a 400 ml (que corresponden a 5,7 ml/g del extracto seco) de Sepabeads SP-850 (resina de adsorción) (columna: aproximadamente 4 x 32 cm; caudal: aproximadamente 8 ml/minuto) (etapa l)), seguido de un lavado con aproximadamente 2 l de 40% de etanol (p/p) en total. Se concentró 10% de la disolución resultante (259,3 g) en un evaporador giratorio, y se liofilizó (etapa m)): 6,92 g. El 90% restante de la disolución se empleó en el ejemplo 2b).

Como se puede apreciar en la siguiente tabla, se obtuvieron contenidos de biflavona menores que 1 ppm, respectivamente, sin modificar esencialmente los contenidos de los ingredientes relevantes para la eficacia.

Ejemplo 2b)

Extracto de ginkgo que tiene un contenido reducido de 4'-O-metilpiridoxina y biflavonas

Se aplicó 90% de la disolución obtenida en el Ejemplo 2a) (2334,1 g) a 25 ml (que corresponden a 0,40 ml/g del extracto seco) de Amberlite IR-120 (intercambiador de iones fuertemente ácido) (columna: aproximadamente 1,5 x 11 cm; caudal: aproximadamente 10 ml/minuto) (etapa l)), seguido de un lavado con 100 ml de etanol al 40% (p/p). La disolución resultante se concentró en un evaporador giratorio y se liofilizó (etapa m)): 61,67 g.

Como se puede apreciar en la siguiente tabla, se obtuvo un contenido de 4'-O-metilpiridoxina de 0,4 ppm y contenidos de biflavonas menores que 1 ppm, respectivamente, sin modificar esencialmente los contenidos de los ingredientes relevantes para la eficacia.

Ejemplo Comparativo 2

Se concentraron por evaporación 50 g de la disolución de extracto empleada en el Ejemplo 2a), y se liofilizaron: 7,05 g.

Ejemplo Comparativo 3

Extracto de ginkgo con reducción del contenido de biflavona y reducción del contenido de 4'-O-metilpiridoxina después de un tratamiento con un compuesto de plomo (etapa f)) de acuerdo con EP 1037646 B1

Se extrajeron hojas secas de ginkgo biloba (fármaco) a una temperatura de aproximadamente 50ºC usando siete veces su peso (p/p) (es decir, relación de fármaco-disolvente es 1:7) de acetona/agua 60/40 (p/p).

El disolvente orgánico se separó en gran medida del extracto, y la disolución acuosa concentrada que queda se diluyó con agua hasta obtener un contenido de sólidos de aproximadamente 10% en peso, se enfrió hasta una temperatura de aproximadamente 12ºC con agitación, y se eliminó el precipitado resultante.

Se añadió aproximadamente 30% en peso de sulfato de amonio a la disolución acuosa que queda, y la disolución formada se extrajo usando una mezcla de metiletilcetona y acetona en una relación de 6:4.

El extracto obtenido se concentró en gran medida, y el concentrado obtenido de este modo se diluyó con agua y etanol, de modo que se obtuvo una disolución que contenía 50% en peso de agua y 50% en peso de etanol, con un contenido de sólidos de aproximadamente 10% en peso. La disolución se filtró, y el filtrado se añadió con una disolución acuosa de acetato de hidróxido de plomo (etapa f)).

Se agitaron 150 ml de la disolución obtenida de este modo (porción de extracto seco: 7,1%; contenido de etanol: aproximadamente 50%) con 2,5 g (que corresponden a 0,17 g/g de producto final) de carbón activado, durante 30 minutos a temperatura ambiente. El filtrado se aplicó a una columna con 4,2 ml (que corresponden a 0,28 ml/g de producto final) de un intercambiador de cationes fuertemente ácido (Merck I). La columna intercambiadora de iones se lavó 4 veces con 5 ml de EtOH (al 50%).

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Los eluatos combinados se extrajeron con agitación usando 3 x 70 ml de n-hexano. La fase de etanol/agua se concentró en un evaporador giratorio, y se diluyó con agua hasta 100 g. La disolución de extracto obtenida de este modo se extrajo una vez con 40 ml, 2 veces con 30 ml y una vez con 20 ml de una mezcla de metiletilcetona:etanol en una relación de 3:2, en la que se añadieron 15 g de sulfato de amonio para efectuar la separación de fases.

La fase orgánica se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente después de añadir 25 g de sulfato de amonio. Se separó el sulfato de amonio no disuelto, así como también la fase acuosa formada. La disolución de extracto se concentró en un evaporador giratorio a 50ºC, y se secó a vacío a 60ºC: 14,8 g.

Como se puede observar en la siguiente tabla, se obtuvo un contenido de 4'-O-metilpiridoxina de 52 ppm y un contenido de biflavona de 31,3 ppm; de este modo, se logran contenidos significativamente mayores y resultados de reducción de contenido inferiores, comparados con el Ejemplo 2b) de acuerdo con la presente invención.

La determinación de los contenidos de flavonoides, lactonas de terpenos y ácidos ginkgólicos indicados en la Tabla 1 se realizó de acuerdo con la DAB.

La determinación cuantitativa de la 4'-O-metilpiridoxina se realizó por medio de una detección con HPLC y fluorescencia, después de efectuar un enriquecimiento con cartuchos Sep Pak Plus C18, seguido de un enriquecimiento con cartuchos Bond Elut LRC-SCX, en la que se empleó una columna Phenomenex Prodigy ODS-3 de HPLC de 5 \mu y un gradiente de ácido trifluoroacético (pH 2): metanol = 9:1 (v/v) \rightarrow metanol.

La determinación de los contenidos de las biflavonas indicadas en la Tabla 1 se realizó por medio de una detección con HPLC y UV a 340 nm, empleando una columna Waters Nova Pak C18 con un gradiente de agua: acetonitrilo de 9:1 (v/v) + 0,3% en volumen de ácido fosfórico (85%) \rightarrow acetonitrilo + 0,3% en volumen de ácido fosfórico.

En cada caso, la calibración se realizó usando sustancias de referencia con un grado elevado de pureza definida.

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(Tabla pasa a página siguiente)

3

Claims

1. Un método para producir un extracto de ginkgo biloba que tiene un contenido reducido de 4'-O-metilpiridoxina y/o biflavonas, caracterizado por las siguientes etapas del método:

a): extraer hojas de ginkgo biloba usando acetona con agua, un alcanol que contiene agua, que tiene 1 a 3 átomos de carbono, o metanol anhidro,

b): separar el disolvente orgánico concentrando el disolvente hasta obtener un contenido de a lo sumo 10% en peso, en el que el agua puede agregarse durante las etapas de destilación finales,

c): diluir con agua la disolución acuosa que queda, hasta obtener un contenido de sólidos de 5 a 25% en peso, enfriar hasta una temperatura por debajo de 25ºC, y permitir el reposo hasta la formación de un precipitado,

d): tratar con sulfato de amonio la disolución acuosa que queda, y luego realizar al menos una extracción usando metiletilcetona o una mezcla de metiletilcetona y acetona,

e): concentrar el extracto obtenido y diluir con una mezcla de etanol y agua para obtener una disolución que contiene 50% en peso de agua y 50% en peso de etanol, con un contenido de sólidos de 10% en peso,

f): tratar la disolución con un compuesto de plomo o una poliamida insoluble,

g): extraer la disolución filtrada usando un disolvente alifático o cicloalifático con un punto de fusión de 60 a 100ºC,

h): concentrar la disolución acuosa alcohólica que queda, tratar después con sulfato de amonio y extraer con metiletilcetona y etanol,

k): disolver el concentrado en un alcanol acuoso que tiene 1 a 3 átomos de carbono, y opcionalmente filtrar,

l): filtrar sobre una resina de adsorción para reducir el contenido de biflavonas y/o sobre un intercambiador de iones ácido para reducir el contenido de 4'-O-metilpiridoxina, en el que las sustancias a eliminar se retienen en la resina y/o el intercambiador de iones ácido, y

m): secar el concentrado a presión reducida para obtener un extracto seco que tiene un contenido de agua menor que 5%.

2. Método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el alcanol acuoso en la etapa k) es etanol acuoso.

3. Método de acuerdo con la reivindicación 2, en el que el etanol acuoso es etanol con un contenido de 40 a 60% en peso.

4. Método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la resina de adsorción de la etapa l) es una resina basada en estirenos/divinilbencenos opcionalmente sustituidos.

5. Método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el intercambiador de iones ácido de la etapa l) es un intercambiador de iones fuertemente ácido.

6. Extracto de hojas de ginkgo biloba caracterizado porque tiene los siguientes contenidos:

\bullet: menos de 20 ppm de 4'-O-metilpiridoxina y/o

\bullet: menos de 20 ppm de biflavonas, seleccionados del grupo que comprende amentoflavona, bilobetina, ginkgetina, isoginkgetina y sciadopitisina.

7. Extracto de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizado porque tiene un contenido de 4'-O-metilpiridoxina de menor que 2 ppm.

8. Extracto de acuerdo con la reivindicación 6 ó 7, caracterizado porque tiene un contenido de biflavonas menor que 10 ppm.

9. Extracto de acuerdo con la reivindicación 6 ó 7, caracterizado porque tiene un contenido de biflavonas de menor que 5 ppm.

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10. Extracto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9, caracterizado porque tiene los siguientes contenidos:

\bullet: 20 a 30% en peso de flavonoides, seleccionados del grupo que comprende quercetina, kaempferol y glicósidos de isoramnetina,

\bullet: 4,5 a 8,5% en peso de lactonas de terpenos, y

\bullet: menos de 10 ppm de ácidos ginkgólicos.

11. Extracto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9, caracterizado porque tiene los siguientes contenidos:

\bullet: 22,0 a 27,0% en peso de flavonoides, seleccionados del grupo que comprende quercetina, kaempferol y glicósidos de isoramnetina,

\bullet: 5,0 a 7,0% en peso de lactonas de terpenos, y

\bullet: a lo sumo 5 ppm de ácidos ginkgólicos.

12. Extracto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9, caracterizado porque tiene los siguientes contenidos:

\bullet: 2,8 a 3,4% en peso de ginkgólidos A, B y C en total,

\bullet: 2,6 a 3,2% en peso de bilobalida, y

\bullet: a lo sumo 5 ppm de ácidos ginkgólicos.

13. Uso de un extracto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 6 a 12, para la fabricación de un medicamento, un producto alimentario u otra preparación para el tratamiento de la demencia y sus síntomas, y/o de trastornos de la circulación sanguínea cerebral o periférica.

14. Medicamento, producto alimentario u otra preparación, caracterizado porque tiene un contenido de un extracto de ginkgo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 12.