ES2308256T3

ES2308256T3 - 6-aril-7-halo-imidazo(1,2-a)pirimidinas como agentes anticancerosos.

Info

Publication number: ES2308256T3
Application number: ES04784454T
Authority: ES
Inventors: Nan Zhang; Semiramis Ayral-Kaloustian
Original assignee: Wyeth Holdings LLC; Wyeth LLC
Current assignee: Wyeth Holdings LLC; Wyeth LLC
Priority date: 2003-09-24
Filing date: 2004-09-17
Publication date: 2008-12-01
Anticipated expiration: 2024-09-17
Also published as: BRPI0414778A; US20080255157A1; JP4695595B2; EP1684763A1; US7285555B2; DE602004014525D1; CN100486580C; US7915266B2; WO2005030218A1; CA2537520A1; US20050065167A1; CN1856311A; DK1684763T3; EP1684763B1; MXPA06002939A; PL1684763T3; AU2004275728A1; JP2007506745A; ATE398452T1

Abstract

Compuesto representado por la Fórmula (I): (Ver fórmula) en la que: R 1 se selecciona de entre (Ver fórmula) R 2 es un grupo de fórmula (Ver fórmula) R 3 es H, o alquilo C1-C3; R 4 es H, o alquilo C1-C3; o R 3 y R 4 forman, cuando se enlazan opcionalmente entre sí, un anillo heterocíclico saturado de 6 a 8 miembros que tiene 1-2 átomos de nitrógeno, 0-1 átomos de oxígeno y 0-1 átomos de azufre, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C3; R 5 es H, alquilo C1-C3 o fluoroalquilo C1-C3; Y es un grupo de fórmula -O(CH2)nQ; n es un número entero de 2, 3 ó 4; Q es -OH, o -NR 6 R 7 ; R 6 y R 7 son independientemente H o alquilo C1-C3; o R 6 y R 7 forman...

Description

6-aril-7-halo-imidazo[1,2-a]pirimidinas como agentes anticancerosos.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a compuestos de 6-aril-7-halo-imidazo[1,2-a]pirimidina o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, y a composiciones que contienen dichos compuestos, en los que dichos compuestos son agentes antineoplásicos útiles para el tratamiento del cáncer en mamíferos. Los compuestos de la invención son útiles para el tratamiento o la prevención de tumores cancerosos que expresan multirresistencia (MDR) o que son resistentes debido a MDR. Además, los compuestos de la invención son útiles para el tratamiento o la inhibición del crecimiento de células de tumores cancerosos y enfermedades relacionadas en un mamífero que lo necesite mediante la estimulación de la polimerización de microtúbulos.

Antecedentes de la invención

La mayoría de los citostáticos utilizados en la actualidad inhiben la formación de precursores esenciales de la biosíntesis de ADN, o bloquean las ADN-polimerasas, o interfieren con la función de molde del ADN, debido a que el ADN fue la principal diana para el desarrollo de fármacos terapéuticos para quimioterapia. Por desgracia, la inhibición de la formación de precursores esenciales de la biosíntesis de ADN, o el bloqueo de las ADN-polimerasas, o la interferencia con la función de molde del ADN, también afecta a los tejidos normales.

Los fármacos que interfieren con los microtúbulos constituyen una de las principales categorías de agentes antineoplásicos (Rowinsky, E. K. y Tolcher, A. W. Antimicrotubule agents. En: V. T. Devita, Jr., S. Hellman y S. A. Rosenberg (eds.), Cancer Principles and Practice, Ed. 6, págs. 431-452. Filadelfia: Lippincott Williams and Wilkins, 2001). Actúan interfiriendo en la función de los microtúbulos celulares, en particular en el huso mitótico. La alteración de la función normal del huso da lugar a la muerte celular por apoptosis.

En la actualidad hay tres clases principales de agentes farmacológicos conocidos que interfieren con los microtúbulos. Cada uno tiene una región de unión distinta en la \beta-tubulina y presenta efectos distintos en la función de los microtúbulos. Estas clases son: 1) agentes que actúan en el sitio del taxano, que estimulan la formación de microtúbulos y estabilizan los microtúbulos; 2) agentes que actúan en el sitio de la vinca/péptidos, que desestabilizan los microtúbulos y, a menudo, provocan la formación de polímeros anómalos u agregados a altas concentraciones; y 3) agentes que actúan en el sitio de la colquicina, que también desestabilizan los microtúbulos y generalmente no provocan la formación de otros polímeros (Hamel, E. Antimitotic natural products and their interactions with tubulin. Med. Res. Rev., 16: 207-231, 1996). La mayoría de los ligandos de las tres clases de sitios son productos naturales o derivados semisintéticos de productos naturales.

El paclitaxel y su derivado semisintético docetaxel (Taxotere®) interfieren en la formación de microtúbulos y estabilizan los microtúbulos. El paclitaxel (Taxol®) es un diterpeno aislado de la corteza del tejo occidental (del Pacífico), Taxus brevifolia, y es un representante de una nueva clase de agentes terapéuticos que tienen un sistema de anillos del taxano. También se encontró en otros miembros de la familia Taxaceae, incluidos el tejo del Canadá (Taxus canadensis) localizado en Gaspesia, Canadá oriental, y Taxus baccata, localizado en Europa, cuyas hojas contienen paclitaxel y análogos, con lo que proporcionan una fuente renovable de paclitaxel y sus derivados. El extracto crudo se analizó por primera vez durante el decenio de 1960, y su principio activo se aisló en 1971, y se identificó su estructura química (M. C. Wani et al, J. Am. Chem. Soc., 93, 2325 (1971)). Además, los análisis adicionales demostraron una amplia gama de actividad en células de melanoma, leucemia, varios carcinomas, sarcomas y linfomas no hodgkinianos, así como varios tumores sólidos en animales. El paclitaxel y sus análogos han sido producidos mediante síntesis parcial a partir de 10-desacetilbacatina III, un precursor obtenido de las hojas y ramillas del tejo, y mediante síntesis total (Holton, et al., J. Am. Chem. Soc. 116: 1597-1601 (1994), y Nicolaou, et al., Nature 367: 630-634 (1994)). El paclitaxel ha demostrado tener actividad antineoplásica. Más recientemente, se ha comprobado que la actividad antitumoral del paclitaxel se debe a la estimulación de la polimerización de microtúbulos (Kumar, N., J. Biol. Chem. 256: 10435-10441 (1981); Rowinsky, et al., J. Natl. Cancer Inst., 82: 1247-1259 (1990); y Schiff, et al., Nature, 277: 665-667 (1979)). El paclitaxel ha demostrado su eficacia en varios ensayos clínicos con tumores humanos (McGuire, et al., Ann. Int. Med., 111: 273-279 (1989); Holmes, et al., J. Natl. Cancer Inst., 83: 1797-1805 (1991); Kohn et al., J. Natl. Cancer Inst., 86: 18-24 (1994); y A. Bicker et al., Anti-Cancer Drugs, 4, 141-148 (1993).

Dos agentes que actúan en el sitio del taxano (paclitaxel y docetaxel) y tres agentes que actúan en el sitio de la vinca/péptidos (vinblastina, vincristina y vinorelbina) se utilizan en el ámbito clínico para el tratamiento de varios cánceres humanos. Los taxanos han demostrado ser más útiles contra tumores sólidos (por ejemplo, de pulmón, de mama, de ovario) que los alcaloides de la vinca, lo que indica que los agentes que estimulan la formación de microtúbulos pueden ser mejores en el ámbito clínico que aquellos que desestabilizan los microtúbulos. Los agentes que actúan en el sitio de la colquicina no se utilizan en terapéutica.

A pesar de la amplia utilización en el ámbito clínico del paclitaxel y el docetaxel, estos fármacos presentan varias limitaciones, por lo que es necesario encontrar agentes mejorados. En primer lugar, muchos tumores presentan resistencia intrínseca (por ejemplo, tumores de colon) o se convierten en resistentes después de múltiples ciclos de tratamiento, debido, por lo menos en parte, a la expresión de transportadores de fármacos situados en las membranas de las células cancerosas, que bombean los fármacos al exterior de las células, con lo que disminuye su eficacia (Gottesman, M. M. Mechanisms of cancer drug resistance. Annu. Rev. Med., 53: 615-627, 2002). El más conocido de estos transportadores es la glucoproteína P. Por consiguiente, existe una necesidad de encontrar nuevos agentes con efectos similares a los del taxano en la polimerización de microtúbulos, que no sean sustratos de la glucoproteína P o de otras bombas similares, y que sean capaces, por tanto, de superar esta causa de la resistencia al taxano en los pacientes.

En segundo lugar, el paclitaxel y el docetaxel tienen escasa solubilidad en agua, y el paclitaxel debe formularse en Cremophor EL, un vehículo que provoca reacciones graves de hipersensibilidad (Li, C. L., Newman, R. A., y Wallace, S. Reformulating paclitaxel. Science & Medicine, Ene./Feb.: 38-47, 1999). Los pacientes reciben de forma típica medicación previa con corticosteroides y antihistamínicos antes de la administración de paclitaxel, para reducir al mínimo estos efectos tóxicos. Por consiguiente, hay una necesidad de encontrar nuevos agentes con efectos similares a los del taxano en la polimerización de microtúbulos, que tengan elevada solubilidad en agua, y que puedan administrarse en solución salina fisiológica u otro vehículo adecuado no tóxico.

En tercer lugar, el paclitaxel es un producto natural que tiene una estructura muy compleja, y el docetaxel es un derivado semisintético estrechamente relacionado. Por consiguiente, hay una necesidad de encontrar compuestos que se obtengan fácilmente por síntesis, que sean estructuralmente diferentes de los taxanos, y que tengan efectos similares a los del taxano en la polimerización de microtúbulos.

Por consiguiente, sigue habiendo una necesidad en la técnica de encontrar agentes citotóxicos para su utilización en tratamientos antineoplásicos. En particular, hay una necesidad de encontrar agentes citotóxicos capaces de inhibir o tratar el crecimiento de tumores, que tengan un efecto similar al paclitaxel e interfieran en el proceso de formación de microtúbulos. Además, hay una necesidad en la técnica de encontrar agentes que aceleren la polimerización de tubulina y estabilicen los microtúbulos ensamblados.

Además, sería ventajoso proporcionar nuevos compuestos útiles para el tratamiento o la inhibición de la proliferación celular, el crecimiento neoplásico y el crecimiento de tumores malignos en mamíferos, en los que dichos compuestos tengan actividad antineoplásica similar a la del paclitaxel.

Además, sería ventajoso proporcionar nuevos compuestos útiles para el tratamiento o la inhibición del crecimiento de tumores cancerosos que expresan multirresistencia (MDR) o que son resistentes debido a MDR.

Sería asimismo ventajoso proporcionar nuevos compuestos útiles para el tratamiento o la inhibición del crecimiento de tumores cancerosos en un mamífero que presentan resistencia intrínseca o adquirida a agentes quimioterápicos, y en particular a agentes antimitóticos.

En la técnica se ha descrito la preparación y la utilización de triazolopirimidinas sustituidas para su empleo como fungicidas en agricultura en las patentes US nº 5.593.996; nº 5.756.509; nº 5.948.783; nº 5.981.534; nº 5.612.345; nº 5.994.360; nº 6.020.338; nº 5.985.883; nº 5.854.252; nº 5.808.066; nº 5.817.663; nº 5.955.252; nº 5.965.561; nº 5.986.135; nº 5.750.766; nº 6.117.865; nº 6.117.876; nº 6.124.301; nº 6.204.269; nº 6.255.309; nº 6.268.371; nº 6.277.856; nº 6.284.762; 6.297.251; nº 6.387.848; la publicación de solicitud de patente US2002/0045631A1; US2002/0061882A1; US20030055069A1, y las publicaciones internacionales nº WO98/46607; WO98/46608;
WO99/48893; W099/41255; WO00/18227; WO01/35738A2; WO02/46195A1; WO02/067679A1; WO02/083676A1; EPO 834513A2; EPO 782997A2; EP0550113B1; FR2784381A1; EPO989130A1; WO98/41496; WO94/20501; EPO 945453A1; EPO 562615A1; EPO 562615B1; EP 0 550113A2; EP 0943241B1; EP 0 988790 B1, y que tienen la siguiente fórmula general:

1

\vskip1.000000\baselineskip

También es conocida la utilización de las triazolopirimidinas como agentes antineoplásicos que tienen la fórmula estructural

2

descritas en el documento WO02/02563 A2.

La 5,7-dihidroxiimidazo[1,2-a]pirimidina sin la sustitución fenilo en la posición 6 es conocida (R. P. Rao et al, J. Het. Chem. 1021 (1973)). También es conocida la 5,7-dicloroimidazo[1,2-a]pirimidina sin la sustitución fenilo en la posición 6 (G. R. Revankar, et al, J. Med. Chem. 18, 1253 (1975)).

El documento EP 0.770.615 proporciona un procedimiento para la síntesis de dihaloazolopirimidinas de fórmula

3

en la que:

X_{1} es cloro o bromo;

R es fenilo opcionalmente sustituido;

X, Y, y Z son CR_{1} o N, y se describe asimismo la síntesis de 5,7-dihidroxi-6-(2-cloro-6-fluorofenil)benzimidazopiridina que tiene la fórmula estructural

4

\vskip1.000000\baselineskip

En el documento JP2001043978 se describen diazaindolizinas representadas por la estructura genérica

5

en la que dichos compuestos son útiles como elementos electroluminiscentes.

\vskip1.000000\baselineskip

En el documento WO 03/022850 A1 se describen imidazo[1,2-a]pirimidinas representadas por la siguiente fórmula general

6

en la que dichos compuestos son útiles como fungicidas.

\vskip1.000000\baselineskip

Los compuestos de la presente invención constituyen una nueva clase de agentes similares al taxano que satisfacen las necesidades descritas anteriormente en la presente memoria, y que difieren de forma significativa de las clases de compuestos, conocidas previamente, que interfieren con los microtúbulos. Los compuestos de la presente invención se unen al sitio de la vinca de la \beta-tubulina; sin embargo, tienen muchas propiedades que son similares a las de los taxanos y distintas de las de los agentes que se unen al sitio de la vinca. En particular, los compuestos de la presente invención aumentan la polimerización de la tubulina rica en la proteína asociada a los microtúbulos (MAP) en presencia de GTP a bajas relaciones molares de compuesto:tubulina, de forma similar a la del paclitaxel y el docetaxel. Ejemplos representativos de compuestos de la presente invención también provocan la polimerización de la tubulina de elevada pureza en ausencia de GTP en condiciones experimentales adecuadas, una actividad que es la característica distintiva de los taxanos. Los compuestos de la presente invención muestran una potente citotoxicidad en muchas líneas celulares de cánceres humanos en cultivo, incluidas líneas que sobreexpresan los transportadores de membrana MDR (la glucoproteína P), MRP y MXR, lo que los convierte en activos frente a líneas celulares que son resistentes al paclitaxel y a la vincristina.

Sumario de la invención

Según la presente invención, se proporcionan compuestos representados por la Fórmula (I):

\vskip1.000000\baselineskip

7

en la que:

R^{1} se selecciona de entre

8

\vskip1.000000\baselineskip

R^{2} es un grupo de fórmula

9

\vskip1.000000\baselineskip

R^{3} es H, o alquilo C_{1}-C_{3};

R^{4} es H, o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{3} y R^{4} forman, cuando se enlazan opcionalmente entre sí, un anillo heterocíclico saturado de 6 a 8 miembros que tiene 1-2 átomos de nitrógeno, 0-1 átomos de oxígeno y 0-1 átomos de azufre, y opcionalmente sustituido con alquilo C_{1}-C_{3};

R^{5} es H, alquilo C_{1}-C_{3} o fluoroalquilo C_{1}-C_{3};

Y es un grupo de fórmula -O(CH_{2})_{n}Q;

n es un número entero de 2, 3 o 4; Q es -OH, o -NR^{6}R^{7};

R^{6} y R^{7} son independientemente H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{6} y R^{7} forman, cuando se enlazan opcionalmente junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, un anillo heterocíclico saturado de 4 a 6 miembros que tiene 1-2 átomos de nitrógeno, 0-1 átomos de oxígeno y 0-1 átomos de azufre, y opcionalmente sustituido con R^{8};

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

L^{1}, L^{2}, L^{3} y L^{4} son, cada uno independientemente, H, F, Cl, Br o CF_{3};

X es Cl o Br; o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

Un ejemplo de n es 3. Q puede ser, por ejemplo, -NR^{6}R^{7}. Ejemplos de R^{6} y R^{7} son, respectivamente, metilo y H o metilo. L^{1} y L^{4} pueden ser, por ejemplo, F. L^{2} y L^{3} pueden ser, por ejemplo, H. Un ejemplo de X es Cl. R^{3} puede ser, por ejemplo, H o metilo. Un ejemplo de R^{4} es H. R^{5} puede ser, por ejemplo, CF_{3}.

Una forma de realización preferida de la invención son los compuestos de Fórmula (la):

\vskip1.000000\baselineskip

10

\vskip1.000000\baselineskip

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

Una forma de realización preferida de la invención son los compuestos de Fórmula (Ib):

\vskip1.000000\baselineskip

11

\vskip1.000000\baselineskip

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

Otra forma de realización preferida de la presente invención proporciona compuestos de Fórmula (I) o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en los que R^{2} es un grupo de fórmula

\vskip1.000000\baselineskip

12

\newpage

Entre el grupo de compuestos más preferidos de la presente invención según la Fórmula (Ia), incluidas las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, se encuentran aquellos en los que:

R^{2} es

\vskip1.000000\baselineskip

13

\vskip1.000000\baselineskip

n es 3;

X es Cl o Br;

Y es un grupo de fórmula -O-(CH_{2})_{n}Q;

R^{3} es H o metilo;

R^{4} es H;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{5} es CF_{3};

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

L^{1} y L^{4} son F;

L^{2} y L^{3} son H;

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

Entre el grupo de compuestos más preferidos de la presente invención según la Fórmula (Ib), incluidas las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, se encuentran aquellos seleccionados de entre los subgrupos a) y b) presentados a continuación:

a)

R^{2} es

\vskip1.000000\baselineskip

14

n es 3;

X es Cl o Br;

Y es un grupo de fórmula -O-(CH_{2})_{n}Q;

R^{3} es H o metilo;

R^{4} es H;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{5} es CF_{3};

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

L^{1} y L^{4} son F;

L^{2} y L^{3} son H;

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; y

\vskip1.000000\baselineskip

b)

R^{2} es

\vskip1.000000\baselineskip

15

\vskip1.000000\baselineskip

n es 3;

X es Cl;

Y es un grupo de fórmula -O(CH_{2})_{n}Q;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{4} es H;

R^{6} es metilo;

R^{7} es H o metilo;

L^{1} y L^{4} son F;

L^{2} y L^{3} son H;

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

Los compuestos preferidos de la presente invención según la Fórmula (I), incluidas las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, son aquellos en los que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8}.

Entre el grupo de compuestos más preferidos de la presente invención según la Fórmula (I), incluidas las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, se encuentra el subgrupo presentado a continuación:

R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8};

R^{2} es

16

n es 3;

X es Cl;

Y es un grupo de fórmula -O(CH_{2})_{n}Q;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{6} es metilo;

R^{7} es H o metilo;

L^{1} y L^{4} son F;

L^{2} y L^{3} son H;

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Entre el grupo de compuestos más preferidos de la presente invención según la Fórmula (Ia), incluidas las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, se encuentran aquellos del grupo siguiente:

R^{2} es

17

X es Cl;

n es 3;

Y es -O(CH_{2})_{n}Q;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{3} es H o metilo;

R^{4} es H;

R^{5} es CF_{3};

R^{6} es metilo;

R^{7} es H o metilo;

L^{1} y L^{4} son F;

L^{2} y L^{3} son H;

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

Definiciones

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "alquilo", solo o en combinación, significa un radical alquilo de cadena lineal o ramificada, que contiene 1 a 3, preferiblemente de 1 a 2, átomos de carbono. Los ejemplos de dichos radicales incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, y similares.

Fluoroalquilo significa un grupo alquilo de hasta 3 átomos de carbono, en el que cada hidrógeno puede ser sustituido independientemente por un átomo de flúor.

El término hidruro de metal alcalino incluye hidruro de litio, potasio o sodio.

El término hidróxido de metal alcalino incluye hidróxido de litio, potasio o sodio.

El término carbonato de metal alcalino incluye carbonato de litio, potasio o sodio.

Fenilo, tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a un anillo aromático carbonado de 6 miembros.

Cicloalquilo, tal como se utiliza en la presente memoria, significa un anillo monocíclico carbocíclico saturado que tiene de 6 a 8 átomos de carbono, opcionalmente sustituido con alquilo C_{1}-C_{3}. Los ejemplos representativos no limitantes incluyen: ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo.

Tal como se utiliza en la presente memoria, un anillo heterocíclico saturado es un anillo de 4 a 6 miembros, que tiene 1-2 átomos de nitrógeno, 0-1 átomos de oxígeno y 0-1 átomos de azufre, opcionalmente sustituido con alquilo C_{1}-C_{3}. Los ejemplos representativos no limitantes incluyen: morfolina, piperidina, pirrolidina, piperazina y azetidina.

El término t-BOC, tal como se utiliza en la presente memoria, significa ter-butoxi-carbonilo.

Se incluyen en el alcance de la presente invención los isómeros (R) y (S) de los compuestos de Fórmula (I) que tienen un centro quiral, y los racematos de los mismos.

La presente invención proporciona la utilización de un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento o a la inhibición del crecimiento de células de tumores cancerosos y enfermedades relacionadas en un mamífero.

La presente invención también proporciona la utilización de un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento o a la prevención de tumores que expresan multirresistencia (MDR) o que son resistentes debido a MDR en un mamífero.

Además, la presente invención proporciona la utilización de un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento, a la inhibición del crecimiento, o a la erradicación de un tumor en un mamífero que lo necesite, en el que dicho tumor es resistente a por lo menos un agente quimioterápico.

Además, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Los compuestos de la presente invención pueden contener un átomo de carbono asimétrico, y algunos de los compuestos de la presente invención pueden contener uno o más centros asimétricos y pueden dar lugar, por tanto, a estereoisómeros, tales como enantiómeros y diastereómeros. Los estereoisómeros de la presente invención se nombran de acuerdo con el sistema de Cahn-lngold-Prelog. Aunque se muestra sin atender a la estereoquímica en la Fórmula (I), la presente invención incluye todos los estereoisómeros individuales posibles, así como las mezclas racémicas y otras mezclas de los estereoisómeros R y S (mezclas escalémicas que son mezclas de cantidades distintas de enantiómeros) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Se incluyen en el alcance de la presente invención los isómeros (R) y (S) de los compuestos de Fórmula general (I) que tienen un centro quiral, y los racematos de los mismos. La presente invención abarca todos los estereoisómeros de los compuestos, bien sea exentos de otros estereoisómeros o bien mezclados con otros estereoisómeros en cualquier proporción, y, por tanto, incluye, por ejemplo, una mezcla racémica de enantiómeros, así como una mezcla diastereomérica de isómeros. La configuración absoluta de cualquier compuesto puede determinarse por cristalografía convencional de rayos X.

Pueden obtenerse isómeros ópticos en forma pura mediante técnicas estándar de separación o síntesis específica de enantiómeros.

Son particularmente preferidos los isómeros de Fórmula (I) en los que R^{1} es el grupo

\vskip1.000000\baselineskip

18

\vskip1.000000\baselineskip

que tienen la configuración (S).

\vskip1.000000\baselineskip

Los compuestos específicamente preferidos de la presente invención según la Fórmula (I) son los siguientes compuestos o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, seleccionados de entre el grupo constituido por:

7-Cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-(2,2,2-trifluoroetil)imidazo[1,2-a]pirimidin-5-ami-
na,

3-[4-(7-Cloro-5-cicloheptilimidazo[1,2-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]-N,N-dimetilpropan-1-amina,

7-Cloro-6-{4-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-(2,2,2-trifluoroetil)imidazo[1,2-a]pirimidin-5-ami-
na,

N-{3-[4-(7-cloro-5-ciclohexilimidazo[1,2-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propil}-N,N-dimetilamina,

7-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-(2,2,2-trifluoro-1-metiletil)imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina, y

7-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-(2,2,2-trifluoro-1-metiletil)imidazo[1,2-a]piri-
midin-5-amina.

\vskip1.000000\baselineskip

Los compuestos específicamente preferidos de la presente invención según la Fórmula (Ia) son los siguientes compuestos o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, seleccionados de entre el grupo constituido por:

7-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina, y

7-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]imidazo[1,2-a]piri-
midin-5-amina.

\vskip1.000000\baselineskip

Los compuestos específicamente preferidos de la presente invención según la Fórmula (Ib) son los siguientes compuestos o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, seleccionados de entre el grupo constituido por:

7-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina y

7-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina.

\newpage

En otro aspecto de la presente invención se proporciona un compuesto de Fórmula (II):

19

en la que:

R^{1} se selecciona de entre el

20

R^{2} es un grupo de fórmula

21

R^{3} es H, o alquilo C_{1}-C_{3};

R^{4} es H, o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{3} y R^{4} forman juntos, opcionalmente, un anillo heterocíclico saturado de 6 a 8 miembros que tiene 1-2 átomos de nitrógeno, 0-1 átomos de oxígeno y 0-1 átomos de azufre, y opcionalmente sustituido con alquilo C_{1}-C_{3};

R^{5} es H, alquilo C_{1}-C_{3} o fluoroalquilo C_{1}-C_{3};

Y es H, F, Cl, o un grupo de fórmula -O-(CH_{2})_{n}Q;

n es un número entero de 2, 3 o 4;

Q es -OH, o -NR^{6}R^{7};

R^{6} y R^{7} son independientemente H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

L^{1}, L^{2}, L^{3} y L^{4} son, cada uno son independientemente, H, F, Cl, Br o CF_{3};

X es Cl o Br;

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento o a la inhibición del crecimiento de células de tumores cancerosos y enfermedades relacionadas en un mamífero,

o destinado al tratamiento o a la prevención de tumores que expresan multirresistencia (MDR) o que son resistentes debido a MDR en un mamífero.

En una forma de realización preferida de dicho aspecto de la presente invención el medicamento comprende un compuesto según la Fórmula (IIa):

22

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En una forma de realización preferida de dicho aspecto de la presente invención el medicamento comprende un compuesto según la Fórmula (IIb):

23

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En otra forma de realización preferida de dicho aspecto de la presente invención el medicamento comprende un compuesto según la Fórmula (II), o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en el que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8}.

En otra forma de realización preferida de dicho aspecto de la presente invención el medicamento comprende un compuesto según la Fórmula (II), o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en el que R^{2} es un grupo de fórmula

24

En una forma de realización más preferida de dicho aspecto de la presente invención, el medicamento comprende un compuesto según la Fórmula (II), incluidas sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en el que:

R^{2} es el grupo

25

R^{3} es H, o alquilo C_{1}-C_{3};

R^{4} es H;

R^{5} es fluoroalquilo C_{1}-C_{3};

Y es F, o un grupo -O(CH_{2})_{n}Q;

n es 3;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o un alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

L^{1} y L^{4} son cada uno F;

L^{2} y L^{3} son cada uno H;

X es Cl;

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

En una forma de realización más preferida de dicho aspecto de la presente invención, el medicamento comprende un compuesto según la Fórmula (IIa), incluidas sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en el que:

R^{2} es el grupo

\vskip1.000000\baselineskip

26

\vskip1.000000\baselineskip

R^{3} es H, o alquilo C_{1}-C_{3};

R^{4} es H;

R^{5} es fluoroalquilo C_{1}-C_{3};

Y es F, o un grupo -O(CH_{2})_{n}Q;

n es 3;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o un alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

L^{1} y L^{4} son cada uno F;

L^{2} y L^{3} son cada uno H;

X es Cl;

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8};

R^{2} es el grupo

27

Y es F, o un grupo -O(CH_{2})_{n}Q;

n es 3;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

L^{1} y L^{4} son cada uno F;

L^{2} y L^{3} son cada uno H;

X es Cl;

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

En una forma de realización más preferida de dicho aspecto de la presente invención, el medicamento comprende un compuesto según la Fórmula (IIb), incluidas sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en el que:

R^{2} es el grupo

28

R^{3} es H, o alquilo C_{1}-C_{3};

R^{4} es H;

R^{5} es fluoroalquilo C_{1}-C_{3};

Y es F, o un grupo -O(CH_{2})_{n}Q;

n es 3;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o un alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

L^{1} y L^{4} son cada uno F;

L^{2} y L^{3} son cada uno H;

X es Cl;

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

En una forma de realización específica de la presente invención, el medicamento comprende un compuesto o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, seleccionado de entre el grupo constituido por:

5-Acepan-1-il-7-cloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina,

7-Cloro-5-piperidin-1-il-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina,

7-Cloro-N-(2,2,2-trifluoroetil)-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina,

7-Cloro-5-cicloheptil-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina,

7-Cloro-6-{4-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-(2,2,2-trifluoroetil)imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina,

7-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-(2,2,2-trifluoro-1-metiletil)imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina.

\vskip1.000000\baselineskip

En una forma de realización específica de la presente invención, el medicamento comprende un compuesto o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, según la Fórmula (IIa), seleccionado de entre el grupo constituido por:

\vskip1.000000\baselineskip

En una forma de realización específica de la presente invención, el medicamento comprende un compuesto o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, según la Fórmula (IIb), seleccionado de entre el grupo constituido por:

\vskip1.000000\baselineskip

Además, la presente invención proporciona la utilización de compuestos de fórmula (II) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento, a la inhibición del crecimiento, o a la erradicación de un tumor en un mamífero que lo necesite, en el que dicho tumor es resistente a por lo menos un agente quimioterápico.

\vskip1.000000\baselineskip

Descripción detallada de la invención

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse a partir de: (a) materiales de partida comercializados, (b) materiales de partida conocidos que pueden prepararse como se describe en los procedimientos de la literatura, o (c) nuevos intermediarios descritos en los esquemas y procedimientos experimentales de la presente memoria.

Las reacciones se llevan a cabo en un disolvente apropiado para los reactivos y materiales empleados, que es adecuado para la transformación que se lleva a cabo. Los expertos en la técnica de síntesis orgánica apreciarán que los varios grupos funcionales presentes en la molécula deben ser compatibles con las transformaciones químicas propuestas. Para ello, puede ser necesario sopesar el orden de las etapas de síntesis. Debe prestarse la atención adecuada a la protección de los grupos reactivos funcionales para evitar reacciones secundarias no deseadas.

Los sustituyentes de los materiales de partida pueden ser incompatibles con algunas de las condiciones de reacción. Los expertos en la materia apreciarán dichas limitaciones relativas a los sustituyentes que son compatibles con las condiciones de reacción. Las reacciones se llevan a cabo en atmósfera inerte, cuando convenga.

Los compuestos de Fórmulas (I) y (II) en los que R^{1} es

\vskip1.000000\baselineskip

29

\vskip1.000000\baselineskip

pueden prepararse empleando un procedimiento presentado en el Esquema I, en el que R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5} y X son tal como se han definido anteriormente en la presente memoria. La reacción del compuesto (III, US 6.156.925) con 2-aminoimidazol (IV) en condiciones alcalinas, utilizando aminas terciarias, tales como tributilamina, a una temperatura de hasta 190ºC, proporciona el compuesto (V). La halogenación con agentes halogenantes POX_{3}, en el que X es Cl o Br, tales como oxicloruro de fósforo u oxibromuro de fósforo, da lugar al compuesto 5,7-dihalo (VI). La sustitución del grupo 5-bromo o 5-cloro del compuesto 5,7-dihalo (VI) con un exceso de una amina (VIl) en un disolvente aprótico adecuado, tal como dimetilsulfóxido o dimetilformamida, proporciona el compuesto de fórmula (II) en el que R^{1} es

\vskip1.000000\baselineskip

30

\newpage

Esquema 1

31

Los compuestos de Fórmulas (I) y (II) en los que R^{1} es

\vskip1.000000\baselineskip

32

\vskip1.000000\baselineskip

Y representa un grupo -O(CH_{2})_{n}Q pueden prepararse, como alternativa, como se muestra en el Esquema II, mediante la reacción de (VIII) sustituyendo L^{5}, que es un grupo saliente escindible, en particular un átomo de flúor, con un alcohol de Fórmula (IX) en presencia de una base fuerte, que incluye hidróxido de metal alcalino, carbonato de metal alcalino e hidruro de alquilo, por ejemplo, hidruro de sodio, en disolventes adecuados. Los disolventes adecuados incluyen disolventes apróticos tales como dimetilsulfóxido, dimetilformamida, y similares. La reacción se lleva cabo en forma práctica a una temperatura en el intervalo desde aproximadamente 0ºC hasta aproximadamente 100ºC, para dar lugar a (X), un compuesto de fórmulas (I) y (II) en el que Y representa un grupo -O(CH_{2})_{n}Q.

\vskip1.000000\baselineskip

Esquema II

33

\vskip1.000000\baselineskip

Los compuestos de Fórmulas (I) y (II) en los que R^{1} es un grupo cicloalquilo C_{6}-C_{8} pueden prepararse como se muestra en el Esquema III-VI. Como se ha descrito en el Esquema III, el éster (XI) se hace reaccionar con el cloruro de ácido (XII), preparado a partir del correspondiente ácido carboxílico en el que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8}, en presencia de diisopropilamida de litio (LDA) para dar lugar a la cetona (XIII), que se hace reaccionar después con 2-aminoimidazol (IV) en condiciones alcalinas, utilizando aminas terciarias, tales como tributilamina, a una temperatura de hasta 190ºC, para dar lugar al imidazo[1,2-a]pirimidin-7-ol (XIV).

\newpage

Esquema III

34

Como se muestra en el Esquema IV, el imidazo[1,2-a]pirimidin-7-ol (XIV) se hace reaccionar con el alcohol (XV) en presencia de una base fuerte que incluye un hidróxido de metal alcalino, carbonato de metal alcalino e hidruro de metal alcalino, por ejemplo , hidruro de sodio en un disolvente aprótico incluye dimetilsulfóxido, dimetilformamida y similares, para dar lugar al éter (XVI). La reacción del éter (XVI) con agentes halogenantes, POX_{3} en los que X es Cl o Br tales como oxicloruro de fósforo u oxibromuro de fósforo en presencia de N,N-dietilanilina da lugar al compuesto (XVII), que se hace reaccionar después con 2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona (DDQ), para dar lugar al éter (XVIII), un compuesto de fórmulas (I) y (II) en el que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8}, Y es -O-(CH_{2})_{n}Q y Q es OH.

Además, la reacción del imidazo[1,2-a]pirimidin-7-ol (XIV) con agentes halogenantes, POX_{3} en los que X es Cl o Br tales como oxicloruro de fósforo u oxibromuro de fósforo da lugar a (XIX), un compuesto de fórmula (II) en el que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8}, e Y es F.

\vskip1.000000\baselineskip

Esquema IV

35

En lo que respecta al Esquema V, el imidazo[1,2-a]pirimidin-7-ol (XIV), en el que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8}, se hace reaccionar con el amino-alcohol (XX), en el que R^{6} y R^{7} son distintos de H, en presencia de una base fuerte que incluye un hidróxido de metal alcalino, carbonato de metal alcalino, e hidruro de metal alcalino, por ejemplo, hidruro de sodio en presencia de un disolvente aprótico que incluye: dimetilformamida, dimetilsulfóxido, y similares, para dar lugar a la amina (XXI). La reacción de la amina (XXI) con agentes halogenantes, POX_{3} en los que X es Cl o Br tales como oxicloruro de fósforo u oxibromuro de fósforo, da lugar al éter (XXII), un compuesto de fórmulas (I) y (II) en el que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8}, Y es -O(CH_{2})_{n}Q, Q es NR^{6}R^{7}, y R^{6} y R^{7} son distintos de H.

\vskip1.000000\baselineskip

Esquema V

36

Como se muestra en el Esquema VI, el imidazo[1,2-a]pirimidin-7-ol (XIV), en el que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8}, se hace reaccionar el aminoalcohol (XXIII), en el que R^{6} es H, en presencia de una base fuerte que incluye un hidróxido de metal alcalino, carbonato de metal alcalino e hidruro de metal alcalino, por ejemplo, hidruro de sodio en presencia de un disolvente aprótico que incluye: dimetilformamida, dimetilsulfóxido, y similares, para dar lugar a la amina (XXIV). La protección del nitrógeno de la amina (XXIV) por reacción con dicarbonato de di-ter-butilo (t-Boc)_{2}O da lugar a la amina protegida con t-Boc (XXV), que se hace reaccionar después con agentes halogenantes, POX_{3} en los que X es Cl o Br tales como oxicloruro de fósforo u oxibromuro de fósforo en presencia de N,N-dietilanilina, para dar lugar al compuesto halo (XXVI). La reacción posterior del compuesto halo (XXVI) con ácido trifluoroacético (TFA) proporciona la amina (XXVII), un compuesto de fórmulas (I) y (II) en el que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8}, Y es
-O(CH_{2})_{n}Q, Q es NR^{6}R^{7}, y R^{6} es H.

\vskip1.000000\baselineskip

Esquema VI

37

Se entiende que la presente invención abarca todas las formas cristalinas e hidratadas de los compuestos de Fórmulas (I) y (II), y sus sales farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención son las derivadas a partir de ácidos orgánicos e inorgánicos que forman sales farmacéuticamente aceptables, tales como: láctico, cítrico, acético, tartárico, fumárico, succínico, maleico, malónico, clorhídrico, bromhídrico, fosfórico, nítrico, sulfúrico, metanosulfónico, bencenosulfónico, L-aspártico, R- o S-mandélico, palmítico, y ácidos conocidos similares aceptables. Otra sal es la sal del ácido trifluoroacético (TFA). Son particularmente preferidas las sales de clorhidrato, fumarato y succinato.

Por consiguiente, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención en combinación o asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable. En particular, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden compuestos de Fórmula (I) o Fórmula (II).

Sobre la base de los resultados de los procedimientos estándar de análisis farmacológico descritos en la presente memoria, los compuestos de la presente invención son útiles como agentes para el tratamiento, la inhibición o el control del crecimiento de células de tumores cancerosos y enfermedades relacionadas en un mamífero que lo necesite. Los compuestos de la invención son útiles como agentes para el tratamiento, la inhibición o el control del crecimiento de células de tumores cancerosos y enfermedades relacionadas en un mamífero que lo necesite mediante la interacción con la tubulina y los microtúbulos, y la estimulación de la polimerización de microtúbulos. Los compuestos de la invención son también útiles para el tratamiento o la prevención de tumores cancerosos que expresan multirresistencia (MDR) o que son resistentes debido a MDR.

En particular, cuando se pone en contacto un sistema que contiene tubulina con una cantidad eficaz de un compuesto de fórmulas (I) o (II) se estimula la polimerización de microtúbulos y se estabilizan los microtúbulos, y al estimular la polimerización de microtúbulos y estabilizar los microtúbulos dichos compuestos de fórmulas (I) o (II) son útiles como agentes para el tratamiento, la inhibición o el control del crecimiento de células de tumores cancerosos y enfermedades relacionadas. Además, los compuestos de fórmulas (I) o (II) son útiles para el tratamiento o la prevención de tumores cancerosos que expresan multirresistencia (MDR) o que son resistentes debido a MDR. El sistema que contiene tubulina puede estar en una célula tumoral, con lo que se inhibe la enfermedad neoplásica mediante la administración de una cantidad eficaz de un compuesto descrito en la presente invención. Pueden tratarse mamíferos y, en particular, seres humanos. Además, dicho sistema que contiene tubulina puede estar en un paciente. En el caso del tratamiento del cáncer, se cree que muchas neoplasias tales como leucemia, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de tiroides, cáncer de ovario, cáncer renal, cáncer de próstata y cánceres de mama pueden tratarse mediante la administración de cantidades eficaces de los compuestos de fórmulas (I) o (II). Tal como se utiliza en la presente memoria, cáncer se refiere a todos los tipos de cánceres, o neoplasias o tumores benignos o malignos. Los cánceres preferidos para el tratamiento utilizando los métodos proporcionados en la presente memoria incluyen carcinoma, sarcoma, linfoma o leucemia. Por carcinoma se entiende un tumor epitelial benigno o maligno, que incluye, sin limitarse a los mismos, carcinoma de mama, carcinoma de próstata, carcinoma de pulmón no microcítico, carcinoma de colon, carcinoma de melanoma, carcinoma de ovario, o carcinoma renal. Un hospedador preferido es un ser humano

La dosis concreta utilizada del principio activo puede variar en función del compuesto particular empleado, la forma de administración y la gravedad del trastorno que se va a tratar. No obstante, se obtienen, en general, resultados satisfactorios cuando los compuestos de la invención se administran en cantidades de aproximadamente 0,10 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día. Una pauta preferida para obtener resultados óptimos sería desde aproximadamente 1 mg hasta aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal por día, y se emplean unidades de dosificación de modo que se administra un total de aproximadamente 70 mg hasta aproximadamente 1400 mg del compuesto activo en un período de 24 horas a un individuo de aproximadamente 70 kg de peso corporal.

La pauta posológica para el tratamiento de mamíferos puede ajustarse para proporcionar la respuesta terapéutica óptima. Por ejemplo, pueden administrarse varias dosis divididas cada día, o puede reducirse la dosis proporcionalmente según lo requieran las necesidades de la situación terapéutica. Una ventaja claramente práctica es que estos compuestos activos pueden administrarse de cualquier forma que sea conveniente, tal como por vía oral, intravenosa, intramuscular o subcutánea.

Los compuestos activos de la invención pueden administrarse preferiblemente por vía oral, por ejemplo, con un diluyente inerte o con un excipiente comestible asimilable, o pueden estar incluidos en cápsulas de gelatina dura o blanda, o pueden comprimirse para formar comprimidos, o pueden incorporarse directamente a los alimentos de la dieta. Para la administración terapéutica por vía oral, estos compuestos activos pueden añadirse a excipientes y utilizarse en forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, pastillas para chupar, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas, y similares. Dichas composiciones y preparaciones deben contener por lo menos 0,1% del compuesto activo. Naturalmente, el porcentaje de las composiciones y preparaciones puede variarse, y puede situarse de forma práctica entre aproximadamente 2% y aproximadamente 60% del peso de la unidad. La cantidad de compuesto activo en dichas composiciones útiles en terapéutica es suficiente para obtener una dosis adecuada. Las composiciones o preparaciones preferidas según la presente invención se elaboran de modo que una forma de dosis unitaria por vía oral contiene entre 10 y 1000 mg de compuesto activo.

Los comprimidos, pastillas para chupar, pastillas, cápsulas, y similares también pueden contener lo siguiente: un aglutinante tal como goma tragacanto, goma arábiga, almidón de maíz o gelatina; excipientes tales como fosfato dicálcico; un agente desintegrante tal como almidón de maíz, almidón de patata, ácido algínico, y similares; un lubricante tal como estearato de magnesio; y un edulcorante tal como sacarosa, lactosa; o puede añadirse sacarina o un agente saborizante tal como menta, aceite de gaulteria o saborizante de cereza. Cuando la forma de dosis unitaria es una cápsula, puede contener, además del tipo de materiales mencionados anteriormente, un excipiente líquido. Otros materiales diversos pueden estar presentes en forma de recubrimientos o como aditivos para modificar de alguna otra manera la forma física de la dosis unitaria. Por ejemplo, los comprimidos, pastillas o cápsulas pueden recubrirse con goma laca, azúcar, o ambas. Un jarabe o elixir puede contener el compuesto activo, sacarosa como agente edulcorante, metil- y propilparabenos como conservantes, un colorante y un saborizante tal como sabor de cereza o de naranja. Naturalmente, cualquier material utilizado en la preparación de cualquier dosis unitaria debe ser farmacéuticamente puro y sustancialmente no tóxico en las cantidades utilizadas. Además, dichos compuestos activos pueden incorporarse en preparaciones y formulaciones de liberación sostenida.

Dichos compuestos activos también pueden administrarse por vía parenteral o intraperitoneal. Las soluciones o suspensiones de dichos compuestos activos en forma de base libre o de sal farmacológicamente aceptable pueden prepararse en agua mezclada de forma adecuada con un tensioactivo tal como hidroxipropilcelulosa. Las dispersiones también pueden prepararse en glicerol, polietilenglicoles líquidos y sus mezclas en aceites. En condiciones normales de almacenamiento y utilización, estas preparaciones contienen un conservante para prevenir la proliferación de microorganismos.

Las formas farmacéuticas adecuadas para su utilización en inyecciones incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables. En todos los casos, la forma debe ser estéril y debe ser líquida para que pueda administrarse fácilmente con jeringa. Debe ser estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento, y debe protegerse de la acción contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El excipiente puede ser un disolvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido), mezclas adecuadas de los mismos, y aceites vegetales.

La administración intravenosa es una forma preferida de administración de los compuestos de la invención. Para la administración intravenosa, los ejemplos no limitantes de excipientes adecuados incluyen solución salina fisiológica, agua bacteriostática, Cremophor ELTM (BASF, Parsippany, N.J.) o solución salina tamponada con fosfato (PBS). La composición debe ser estéril y debe ser líquida para que pueda administrarse fácilmente con jeringa. Debe ser estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento, y debe protegerse de la acción contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El excipiente puede ser un disolvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido, y similares), y mezclas adecuadas de los mismos. La prevención de la acción de microorganismos puede lograrse utilizando varios agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal, y similares. En muchos casos, será preferible incluir en la composición agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol, cloruro de sodio. La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede lograrse incluyendo en la composición un agente que retarda la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio
y gelatina.

Tal y como se utiliza en la presente invención, el término proporcionar una cantidad eficaz de un compuesto significa bien la administración directa de dicho compuesto, o la administración de un profármaco, derivado o análogo que se transformará en el interior del organismo en la cantidad eficaz del compuesto.

Además de su utilidad descrita anteriormente, algunos de los compuestos de la presente invención son útiles para la preparación de otros compuestos de la presente invención.

Los compuestos de los ejemplos de la presente invención se evaluaron en diversos procedimientos estándar de análisis farmacológico que demostraron que los compuestos de la presente invención poseen actividad significativa como estimuladores de la polimerización de microtúbulos, y son agentes antineoplásicos. Por consiguiente, sobre la base de la actividad demostrada en los procedimientos estándar de análisis farmacológico, los compuestos de la presente invención son útiles como agentes antineoplásicos. Los cánceres asociados se seleccionan de entre el grupo constituido por cáncer de mama, de colon, de pulmón, de próstata, melanoma, epidérmico, leucemia, de riñón, de vejiga, bucal, de laringe, de esófago, de estómago, de ovario, de páncreas, de hígado, de piel, y de cerebro. En particular, los compuestos de la presente invención exhiben un efecto similar al del paclitaxel. A continuación se presentan los procedimientos de análisis utilizados y los resultados obtenidos.

\vskip1.000000\baselineskip

Procedimientos estándar de análisis farmacológico Materiales y métodos Medios y reactivos para cultivo celular

El medio es RPMI-1640 con L-glutamina, enriquecido con suero de ternero fetal termoinactivado al 10%, 100 unidades/ml de penicilina, y 100 \mug/ml de estreptomicina (Gibco, Grand Island, NY). La tubulina rica en la proteína asociada a microtúbulos (MAP), que contiene aproximadamente 70% de tubulina y 30% de MAP (nº ML113), y la tubulina de alta pureza (> 99% de pureza, nº TL238), ambas procedentes de cerebro bovino, se obtienen de Cytoskeleton, Inc., Denver, CO. El tampón PEM (piperazina-N,N'-bis [2-ácido etanosulfónico] 80 mM, pH 6,9, ácido etilenglicol-bis((\beta-aminoetil-éter)-N,N,N',N'-tetraacético 1 mM, cloruro de magnesio 1 mM) y guanosina-5'-trifosfato (GTP) se obtienen asimismo de Cytoskeleton. El [^{3}H]paclitaxel, de actividad específica 14,7 Ci/mmol, se adquiere de Moravek Biochemicals (Brea, CA). La [^{3}H]vinblastina, de actividad específica 9,60 Ci/mmol, y las columnas MicroSpin G-50 se obtienen de Amersham Biosciences (Piscataway, NJ). La [^{3}H]colquicina, de actividad específica 76,5 Ci/mmol, se obtiene de New England Nuclear (Boston, MA). Otros reactivos se obtienen de Sigma (St. Louis, MO).

\vskip1.000000\baselineskip

Líneas celulares

Las líneas celulares de cáncer humano se obtienen, a no ser que se indique lo contrario, de la American Type Culture Collection (Rockville, MD). Las siguientes líneas celulares progenitoras sensibles a fármacos, y sus líneas homólogas derivadas resistentes a fármacos, se obtienen de las líneas originales como se indica a continuación: (a) la línea S1 (línea progenitora a partir de un subclón de la línea de carcinoma de colon humano LS174T) y la línea derivada S1-M1-3,2 (denominada S1-M1 en la presente memoria) que expresa la proteína transportadora de fármacos MXR, fueron obtenidas del Dr. L. Greenberger, Wyeth Research (Rabindran, S. K., He, H., Singh, M., Brown, E., Collins, K. I., Annable, T., y Greenberger, L. M. Reversal of a novel multidrug resistance mechanism in human colon carcinoma cells by fumitremorgin C. Cancer Res., 58: 5850-5858, 1998); (b) la línea progenitora de leucemia promielocítica humana HL-60 y la línea derivada HL-60/ADR, que expresa la proteína transportadora de fármacos MRP1, fueron obtenidas del Dr. M. Center, University of Kansas (McGrath, T., y Center, M. S. Adriamycin resistance in HL60 cells in the absence of detectable P-glycoprotein. Biochem. Biophys. Res. Commun., 145: 1171-1176, 1987), a través del Dr. L. Greenberger, Wyeth Research; y (c) la línea progenitora KB-3-1 (denominada KB en la presente memoria, clonada a partir de un carcinoma epidermoide humano) y las líneas derivadas KB-8-5 y KB-V1, que expresan niveles moderados y muy elevados, respectivamente, de la proteína transportadora de fármacos MDR1 (glucoproteína P) fueron obtenidas del Dr. M. Gottesman, National Cancer Institute (Shen, D. W., Cardarelli, C., Hwang, J., Cornwell, M., Richert, N.,Ishii, S., Pastan, I., y Gottesman, M. M. Multiple drug-resistant human KB carcinoma cells independently selected for high-level resistance to colchicine, adriamycin, or vinblastine show changes in expression of specific proteins. J. Biol. Chem., 261: 7762-7770, 1986) a través del Dr. L. Greenberger, Wyeth Research.

\vskip1.000000\baselineskip

Procedimientos estándar de análisis farmacológico de la citotoxicidad

Se utilizan dos ensayos estándar distintos para el análisis de la citotoxicidad: el ensayo "MTS" y el ensayo "SRB".

El ensayo MTS, que está comercializado en forma de kit por Promega (Madison, WI; CellTiter 96 AQueous, Ensayo no radiactivo de proliferación celular), se basa en la conversión por células viables, pero no por células muertas, de la sal de tetrazolio, MTS (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolio, sal interna), en un formazano coloreado hidrosoluble que se detecta por espectrofotometría. Los compuestos se analizan a nueve concentraciones, con el objeto de determinar los valores de la CI_{50}. Para el procedimiento de análisis, las células se recogen por tripsiniziación (o, en el caso de células no adherentes, por resuspensión simple), se lavan, se cuentan y se distribuyen en pocillos de placas de microvaloración de fondo plano de 96 pocillos a una concentración de 1000 células por pocillo en 200 \mul de medio. Además, una fila de pocillos en una placa distinta recibe células como se ha indicado anteriormente (placa de "tiempo 0"). Todas las placas se incuban a 37ºC en aire húmedo con 5% de CO_{2} durante aproximadamente 24 h.

En el día 2, los compuestos de la prueba se diluyen y se añaden a los pocillos. Los compuestos se disuelven en DMSO a una concentración de 10 mg/ml. Para cada compuesto se preparan nueve diluciones de 2 veces en serie en DMSO. Diez microlitros de cada dilución en DMSO se transfieren a 100 \mul del medio, se mezcla bien, y después se transfieren 5 \mul de esta dilución por cuadruplicado a pocillos que contienen células. La concentración final elevada de cada compuesto es típicamente 1-5 \muM. Las placas se transfieren de nuevo al incubador durante tres días. En el momento de la adición del fármaco a las placas del experimento, se lleva cabo el ensayo con MTS en la placa de "tiempo 0". Así se obtiene el "valor de MTS a tiempo 0", que está relacionado con el número de células viables por pocillo en el momento de la adición del fármaco.

Después de tres días en cultivo con los compuestos de prueba (día 5, en total), se lleva cabo el ensayo con MTS en todos los pocillos de las placas del experimento. Se promedian los valores de absorbancia de los pocillos con muestra por cuadruplicado y se dividen por el promedio de los valores a "tiempo 0". El promedio de los pocillos testigo sin fármaco, dividido por el promedio del valor a "tiempo 0", representa el aumento máximo del desarrollo del color relativo de MTS debido al crecimiento de las células durante los tres días finales del cultivo. El promedio de los pocillos testigo con elevada concentración de fármaco, dividido por el valor a "tiempo 0", representa el mínimo del desarrollo del color relativo para las células que habían sido completamente destruidas. Los nueve valores para cada compuesto se representan frente a la concentración, y la concentración que produce un desarrollo del color relativo a medio camino entre el máximo y el mínimo se considera el valor de la CI_{50}. Los compuestos más potentes presentaban los valores mínimos de CI_{50}.

El ensayo estándar para el análisis de la citotoxicidad con SRB se lleva a cabo con arreglo a métodos previamente descritos (Discafani, C. M., Carroll, M.L., Floyd Jr., M. B. F., Hollander, I. J., Husain, Z., Johnson, B. D., Kitchen, D., May, M. K., Malo, M. S., Minnick Jr., A. A., Nilakantan, R., Shen, R., Wang Y-F., Wissner, A., Greenberger, L. M. Irreversible inhibition of epidermal growth factor receptor tyrosine kinase with in vivo activity by N-[4-[3-bromophenyl)amino]-6-quinaxolinyl]-2-butynamide (CL-387,785). Biochem. Pharmacol., 57: 917-925, 1999). En resumen: se siembran células en 100 \mul de medio en placas de microvaloración de fondo plano de 96 pocillos en la mañana del día 1, y se deja que las células se adhieran a las placas durante 2-6 h. Los compuestos se diluyen en serie en medio en forma de soluciones madre 2X, y se añaden 100 \mul de dichas soluciones madre a las células por duplicado. Los compuestos se incuban con las células durante 3 días. Al final del período de incubación se lleva a cabo el ensayo con sulforrodamina B (SRB), que valora el contenido de proteínas como medida de la supervivencia celular, como se ha descrito previamente (Skehan, P., Storeng, R., Scudiero, D., Monks, A., McMahon, J., Vistica, D., Warren, J. T., Bokesch, H., Kenney, S., Boyd, M. R. New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer-drug screening. J. Natl. Cancer Inst., 82: 1107-1112, 1990), con algunas modificaciones. El medio se decanta suavemente de las placas y se sustituye con 200 \mul por pocillo de medio frío exento de suero, que contiene una concentración final de ácido tricloroacético de 10%. Las placas se incuban durante 1 h a 4º, se lavan 5 veces en agua destilada fría, y se secan con aire durante toda la noche. Las células fijadas se tiñen durante 10 min con 80 \mul por pocillo de solución de SRB al 0,04% preparada en ácido acético glacial al 1%. La solución de tinción se decanta, las placas se lavan 5 veces en ácido acético glacial al 1%, y después se secan con aire hasta que quedan completamente secas. El producto celular teñido se disuelve en 150 \mul por pocillo de base Trizma 10 mM, con agitación, durante 20 minutos. La absorbancia se lee en un lector de placas de marcado múltiple Victor V (Perkin Elmer, Gaithersburg, MD).

\vskip1.000000\baselineskip

Procedimiento estándar de análisis farmacológico de polimerización de tubulina

Se llevan a cabo dos variaciones de este procedimiento: una utilizando tubulina rica en MAP, y otra utilizando tubulina pura.

La tubulina rica en MAP se disuelve en tampón PEM enfriado con hielo que contiene GTP 1 mM (tampón GPEM) a una concentración de 1,3 mg/ml. La solución se centrifuga a la máxima velocidad en una microcentrifugadora Eppendorf modelo 5415C (Brinkmann Instruments, Westbury, NY) durante 10 min a 4ºC inmediatamente antes de su utilización. La solución de tubulina se añade a los pocillos de la mitad del área de una placa de 96 pocillos (Costar nº 3696, Corning, Inc., Corning, NY) que ya contenía los compuestos de interés. Cada compuesto se analiza por duplicado a una concentración final de 0,3 \muM en un volumen de 110 \mul por pocillo. La concentración final de DMSO en todos los pocillos es 0,3%. Las reacciones testigo, que recibían solamente el disolvente del compuesto, se llevan acabo por cuadruplicado. La placa se coloca en un lector de placas SpectraMax Plus (Molecular Devices Corp. Sunnyvale, CA) mantenido con un termostato a 24ºC, y la absorbancia de cada pocillo a 340 nm, que es una medida de la aparición de turbidez debida a la formación de polímeros de tubulina, se determina cada minuto durante 60 minutos. La absorbancia a tiempo 0 para cada pocillo se resta de las lecturas subsiguientes de absorbancia para dicho pocillo, y después se promedian los duplicados.

El procedimiento seguido en el caso de la tubulina pura es similar, con la salvedad de que se introducen los siguientes cambios: la tubulina pura se disuelve en tampón PEM frío que contiene glicerol al 10% sin GTP añadido, a una concentración de 1,5 a 1,8 mg/ml (15 a 18 \muM). El sobrenadante obtenido tras la centrifugación se dispensa en la mitad de una placa de 96 pocillos que ya contenía los compuestos. Cada compuesto se analiza por duplicado a una concentración final de 24,3 \muM. El lector de placas se mantiene con un termostato a 35ºC.

\vskip1.000000\baselineskip

Procedimiento estándar de análisis farmacológico de la unión competitiva

La unión de los compuestos de los ejemplos de la presente invención a la tubulina de elevada pureza se estudió utilizando métodos de inhibición competitiva. El heterodímero de \alpha\beta-tubulina contiene sitios de unión para las tres clases principales de agentes farmacológicos que actúan en los microtúbulos: taxanos, agentes que actúan en el sitio de la vinca/péptidos, y agentes que actúan en el sitio de la colquicina. Para estudiar la posible competición en los sitios de la vinca/péptidos y los sitios de la colquicina, se llevan a cabo incubaciones en condiciones que no favorecen la polimerización, debido a que la vinblastina y la colquicina se unen preferentemente al heterodímero no polimerizado. Por otra parte, para estudiar la posible competición en el sitio del taxano, se utiliza tubulina polimerizada (microtúbulos) debido a que el paclitaxel se une preferentemente a los microtúbulos.

La tubulina de elevada pureza se disuelve en tampón PEM sin GTP, y se utiliza a una concentración final de 1,0 a 1,3 mg/ml (10 a 13 \muM). A partes alícuotas de la solución de tubulina se añaden varios competidores (por cuadruplicado) a concentraciones finales de 100 \muM, y [^{3}H]vinblastina o [^{3}H]colquicina a concentraciones finales de 100 nM o 50 nM, respectivamente. Estas soluciones se incuban a 24ºC durante 1 h, y después se aplican a columnas de MicroSpin G-50, que se centrifugan durante 2 min a 3000 rpm en una microcentrifugadora Eppendorf 5415C. Se mezcla una parte alícuota del efluente de cada columna (que contiene tubulina y radioligando unido) con líquido de centelleo, y se cuenta en un espectrofotómetro de centelleo líquido. Los testigos incluyen muestras sin competidor, y muestras con vincristina, colquicina o paclitaxel no marcados. La capacidad de cada competidor para inhibir la unión del radioligando se expresa como porcentaje de la unión del testigo en ausencia de cualquier competidor.

Para la competición con [^{3}H]paclitaxel, la tubulina de elevada pureza se disuelve en tampón PEM con glutamato 0,75 M y didesoxi-GTP 25 \muM; la concentración final de proteínas es 0,25 a 0,35 mg/ml (2,5 a 3,5 \muM). Estas condiciones estimulan la formación rápida de polímeros cortos y estables de microtúbulos (Hamel, E., del Campo, A. A., y Lin, C. M. Stability of tubulin polymers formed with dideoxiguanosine nucleotides in the presence and absence of microtubule-associated proteins. J. Biol. Chem., 259: 2501-2508, 1984). Esta solución se incuba durante 30 min a 37ºC para permitir la formación de los microtúbulos. A continuación se añaden [^{3}H]paclitaxel (concentración final de 2,1 \muM, 1,2 Ci/mmol) y competidor (concentración final de 20 \muM, con la salvedad de que es 5 \muM en el caso del paclitaxel no marcado) a partes alícuotas de la solución de tubulina polimerizada, y se continúa la incubación a 37ºC durante otros 30 min. Los testigos incluyen muestras sin competidor y muestras con vincristina, colquicina o paclitaxel no marcados. Después se centrifugan las reacciones a la máxima velocidad en una microcentrifugadora Eppendorf 5415C durante 20 min a temperatura ambiente, para sedimentar las proteínas de los microtúbulos. Se mezclan partes alícuotas de cada sobrenadante por triplicado con líquido de centelleo y se cuentan en un espectrofotómetro de centelleo líquido. A partir de la cantidad de radioactividad en los sobrenadantes y la radiactividad total inicial medida se calcula la cantidad de [^{3}H]paclitaxel unido a las proteínas de microtúbulos sedimentadas. La capacidad de cada competidor para inhibir la unión del radioligando a las proteínas sedimentadas se expresa como porcentaje de los testigos sin competidor.

\vskip1.000000\baselineskip

Resultados 1. Procedimiento estándar de análisis farmacológico de la citotoxicidad 1.1. Con células COLO 205

COLO 205 es una línea celular de carcinoma de colon humano que se utiliza para el análisis comparativo de los ejemplos de la presente invención y de varios compuestos de referencia (Tabla 1). Esta línea es sensible al paclitaxel y a la vincristina.

TABLA 1 Actividad de compuestos de los ejemplos de la invención y de compuestos de referencia en el procedimiento estándar de análisis farmacológico de la citotoxicidad con MTS en células^{1} COLO 205

38

\vskip1.000000\baselineskip

1.2. Con células KB, KB-8-5 y KB-V1

Las líneas KB expresan diferentes cantidades de la bomba de membrana de la glucoproteína P (MDR1), que produce resistencia a la acción de muchos compuestos citotóxicos, incluidos paclitaxel y vincristina. La línea KB progenitora no expresa la glucoproteína P; la línea KB-8-5 expresa niveles moderados de la proteína, y la línea KB-V1 expresa niveles muy elevados. La capacidad de la glucoproteína P para reconocer y exportar un posible agente citotóxico puede inferirse a partir del cambio en los valores de la CI_{50} en estas líneas (Loganzo, F., Discafani, C. M., Annable, T., Beyer, C., Musto, S., Hari, M., Tan, X., Hardy, C., Hernandez, R., Baxter, M., Singanallore, T., Khafizova, G., Poruchynsky, M.S., Fojo,T., Nieman, J.A., Ayral-Kaloustian,S., Zask, A., Andersen, R. J., y Greenberger, L. M. HTI-286, a synthetic analogue of the tripeptide hemiasterlin, is a potent antimicrotubule agent that circumvents P-glycoprotein-mediated resistance in vitro and in vivo. Cancer Res., 63: 1838-1845, 2003). Si un compuesto es reconocido por la glucoproteína P, su valor de CI_{50} aumentará de forma sustancial (varios cientos de veces) al pasar de KB a KB-8-5 a KB-V1; si un compuesto no es reconocido, tendrá valores de CI_{50} similares (una diferencia de 3 veces o menos) en las tres líneas. Por ejemplo, como se muestra en la Tabla 2, las células KB-8-5 son moderadamente resistentes a paclitaxel (19 veces), vincristina (11 veces), colquicina (3,4 veces) y doxorrubicina (3,0 veces). En contraposición, el compuesto del ejemplo 6 de la presente invención presenta un cambio de 1,4 en los valores de CI_{50}. Además, el compuesto del ejemplo 4, analizado en el procedimiento de ensayo de la citotoxicidad con SRB (Tabla 3), presenta una relación de 2,5, en comparación con una relación de 16 para el paclitaxel.

Pueden determinarse incluso ligeras interacciones de los compuestos con la glucoproteína P empleando la línea KB-V1, que expresa un nivel de esta proteína superior al que se encuentra típicamente en las muestras clínicas procedentes de diversos tumores (Goldstein, L. J.,Galski, H., Fojo, T., Willingham, M., Lai, S.L., Gazdar, A., Pirker, R., Green, A., Crist, W., Brodeur, G. M., Lieber, M., Cossman, J., Gottesman, M. M., y Pastan, I. Expression of a multidrug resistance gene in human cells. J. Natl. Cancer Inst. (Bethesda), 81: 116-124, 1989). Las células KB-V1 presentan una elevada resistencia a paclitaxel (> 345 veces), vincristina (> 156 veces), colquicina (116 veces), mitoxantrona (77 veces) y doxorrubicina (> 130 veces). El compuesto del ejemplo 6 de la presente invención presenta un cambio de 4,6 veces en la CI_{50}, en comparación con la línea KB progenitora (Tabla 2). Esto indica que el compuesto del ejemplo 6 apenas es reconocido por la glucoproteína P y, por consiguiente, que dicho compuesto supera la resistencia, mediada por la glucoproteína P, a la muerte celular. El compuesto del ejemplo 4, analizado en el procedimiento de ensayo de la citotoxicidad con SRB (Tabla 3), presenta una relación de 99, en comparación con una relación de > 1.360 para el paclitaxel en el mismo ensayo, lo que indica que aunque el compuesto del ejemplo 4 muestra un mayor reconocimiento por la glucoproteína P que el compuesto del ejemplo 6, es también mucho menos reconocido que el paclitaxel.

TABLA 2 Actividad del compuesto del ejemplo 6 de la invención y de compuestos de referencia en el procedimiento estándar de análisis farmacológico de la citotoxicidad con MTS empleando células KB, KB-8.5 y KB-VI

39

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 3 Actividad del compuesto del ejemplo 4 de la invención y del paclitaxel en el procedimiento estándar de análisis farmacológico de la citotoxicidad con SRB empleando células KB, KB-8.5 y KB-VI

40

\vskip1.000000\baselineskip

1.3. Con células HL-60 y HL-60/ADR

Las células HL-60/ADR sobreexpresan la proteína de multirresistencia MRP1 que media la resistencia a algunos agentes quimioterápicos (Gottesman, M. M., Fojo, T., y Bates, S. E. Multidrug resistance in cancer: role of ATP-dependent transporters. Nature Rev. Cancer, 2: 48-58, 2002). Los valores de CI_{50} del compuesto del ejemplo 6 de la presente invención, así como de compuestos de referencia, en células HL-60/ADR se comparan con los valores de la línea progenitora sensible HL-60. Los resultados, que se presentan en la Tabla 4, indican que mientras que las células HL-60/ADR muestran resistencia a vincristina (8,2 veces), colquicina (7,4 veces), mitoxantrona (17 veces) y doxorrubicina (93 veces), dichas células no muestran resistencia al compuesto del ejemplo 6. Esto indica que el compuesto del ejemplo 6 no es reconocido por la MRP1 y, por consiguiente, supera la resistencia celular mediada por dicho transportador.

TABLA 4 Actividad del compuesto del ejemplo 6 de la invención y de compuestos de referencia en el procedimiento estándar de análisis farmacológico de la citotoxicidad con MTS empleando células HL-60 y HL-60/AR

41

\vskip1.000000\baselineskip

1.4. Con células S1 y S1-M1

Las células S1-M1 sobreexpresan el transportador MXR que media en la resistencia a algunos agentes quimioterápicos (Gottesman, M. M., Fojo, T., y Bates, S. E. Miltidrug resistance in cancer: role of ATP-dependent transporters. Nature Rev. Cancer, 2: 48-58, 2002). Los valores de CI_{50} del compuesto del ejemplo 6 de la presente invención, así como de los compuestos de referencia, en células S1-M1 se comparan con los valores en la línea progenitora sensible S1. Los resultados, que se presentan en la Tabla 5, indican que mientras que las células S1-M1 muestran resistencia a mitoxantrona (> 300 veces) y a doxorrubicina (74 veces), no muestran resistencia al compuesto del ejemplo 6. Esto indica que el compuesto del ejemplo 6 no es reconocido por MXR y que, por consiguiente, supera la resistencia celular mediada por dicho transportador.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 5 Actividad del compuesto del ejemplo 6 de la invención y de compuestos de referencia en el procedimiento estándar de análisis farmacológico de la citotoxicidad con MTS empleando células S1 y S1-M1

42

\vskip1.000000\baselineskip

2. Efectos de los compuestos sobre la polimerización de tubulina rica en MAP y la tubulina pura in vitro

En este ensayo, las reacciones testigo con tubulina rica en MAP muestran un perfil de absorbancia en forma de S, caracterizado por tres fases: en primer lugar, una fase de retardo durante la que no tienen lugar cambios en la absorbancia; en segundo lugar, una fase de polimerización en la que aumenta la absorbancia; y en tercer lugar, una fase de meseta, en la que la absorbancia ha alcanzado un máximo y apenas tienen lugar cambios. Los compuestos que aumentan la polimerización, tales como paclitaxel y docetaxel, disminuyen o eliminan la fase de retardo, aumentan la velocidad de la fase de polimerización, y a menudo aumentan la altura de la meseta. Los inhibidores de la polimerización, tales como vincristina y colquicina, reducen o previenen el aumento de la absorbancia. El compuesto del ejemplo 6 de la presente invención tiene un efecto similar al del taxano en la reacción de polimerización. Este efecto se ha expresado cuantitativamente en la Tabla 6 dividiendo la media de la A_{340} de cada muestra a los 20 min por la media de la A_{340} del testigo a los 20 min, para proporcionar un aumento, en veces, sobre el testigo. El paclitaxel y el docetaxel presentan factores de aumento de 1,8 y 5,4, respectivamente. El compuesto del ejemplo 6 de la presente invención presenta un factor de 1,7. En contraposición, la vincristina presenta un factor de aumento de 0,5, debido a que inhibe parcialmente la polimerización de tubulina rica en MAP.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 6 Actividad del compuesto del ejemplo 6 de la invención y de compuestos de referencia en el procedimiento estándar de análisis farmacológico de polimerización de tubulina empleando tubulina rica en MAP

43

La tubulina pura sin GTP añadido no muestra polimerización en las reacciones testigo. El docetaxel y el paclitaxel son capaces de provocar la polimerización de la tubulina pura en estas condiciones. El compuesto del ejemplo 6 de la presente invención provoca asimismo la polimerización de la tubulina pura sin GTP de forma similar a la del docetaxel. La Tabla 7 muestra la medida de la absorbancia en cuatro puntos temporales después del comienzo de las reacciones para una única concentración de compuesto. A esta concentración (24,3 \muM), el docetaxel y el compuesto del ejemplo 6 causan un rápido aumento de la absorbancia en los primeros 5 min de la reacción hasta alcanzar una meseta. Los estabilizadores de microtúbulos vincristina y colquicina no presentaron actividad en este ensayo.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 7 Actividad del compuesto del ejemplo 6 de la invención y de compuestos de referencia en el procedimiento estándar de análisis farmacológico de polimerización de tubulina empleando tubulina pura

44

\vskip1.000000\baselineskip

Unión de los compuestos a la tubulina

El sitio al que se unen los compuestos de la presente invención en la tubulina de alta pureza procedente de cerebro bovino se determina mediante estudios de inhibición competitiva empleando los ligandos radiactivos [^{3}H]vinblastina, [^{3}H]colquicina y [^{3}H]paclitaxel. Los resultados, que se muestra en la Tabla 8, indican que el compuesto del ejemplo 6 inhibe la unión de la [^{3}H]vinblastina al heterodímero de tubulina (17% del testigo), pero no inhibe la unión de la [^{3}H]colquicina al heterodímero de tubulina, o la del [^{3}H]paclitaxel a los microtúbulos. Estos datos constituyen pruebas sólidas de que el compuesto de dicho ejemplo se une al sitio de la vinca/péptidos de la tubulina y no a los sitios de la colquicina o del taxano. Entre los compuestos testigo analizados, la vincristina inhibía la unión de la [^{3}H]vinblastina pero no la de la [^{3}H]colquicina, y la colquicina inhibía la unión de la [^{3}H]colquicina pero no la de la [^{3}H]vinblastina. La vincristina y la colquicina también parecían inhibir la unión del [^{3}H]paclitaxel a los microtúbulos; no obstante, esto no se debe a la competición por la unión, sino a la despolimerización de los microtúbulos a los que se une el [^{3}H]paclitaxel. Está claro que el compuesto del ejemplo 6 de la presente invención no reduce la unión del [^{3}H]paclitaxel a los microtúbulos, lo que indica que no compite con la unión del [^{3}H]paclitaxel ni despolimeriza los microtúbulos a los que se une el [^{3}H]paclitaxel.

TABLA 8 Actividad del compuesto del ejemplo 6 de la invención y de compuestos de referencia en el procedimiento estándar de análisis farmacológico^{1} de la unión competitiva

45

Los compuestos de la presente invención presentan una potente actividad citotóxica frente a múltiples líneas celulares de cáncer humano en cultivo, incluidas líneas que son resistentes a paclitaxel y vincristina debido a la sobreexpresión del transportador de fármacos. Los compuestos aumentan la velocidad inicial de la polimerización de tubulina rica en MAP, de forma semejante a la de los taxanos y diferente de los efectos inhibidores de los agentes despolimerizantes tales como los alcaloides de la vinca y la colquicina. Los compuestos también provocan la polimerización de la tubulina pura en ausencia de GTP. Los compuestos de la presente invención se unen al sitio de la vinca/péptidos de la tubulina.

Los siguientes ejemplos ilustran de forma adicional la presente invención. No obstante, deberá entenderse que la invención no se limita exclusivamente a los ejemplos particulares presentados a continuación.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 1 Preparación de 5-acepan-1-il-7-cloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina

46

\vskip1.000000\baselineskip

Etapa A

5,7-dicloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina

Una mezcla de 2-(2,4,6-trifluorofenil)malonato de dietilo (US 6.156.925) (870 mg, 3,0 mmol), 2-aminoimidazol (Hel. Acta. Chim. 76, 2066 (1993)) (274 mg, 3,3 mmol), y 1,0 ml de tributilamina se agita en atmósfera de nitrógeno a 160ºC durante 0,5 h, y se enfría hasta la temperatura ambiente. La mezcla se disuelve en acetato de etilo y la capa orgánica se lava con ácido clorhídrico 1,0 N (x3) y cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio, y se concentra. El residuo se disuelve en acetato de etilo (5 ml), y a esta solución se le añaden hexanos (50 ml). El material precipitado se recoge por filtración y se lava con hexanos, para dar lugar a 6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina-5,7-diol en forma de sólido de color canela (180 mg). EM: m/z 279,9(M-H).

Una mezcla de 6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina-5,7-diol (180 mg) en 1 ml de oxicloruro de fósforo se calienta a reflujo durante 6 h. El exceso de oxicloruro de fósforo se elimina en vacío, y el residuo resultante se disuelve en cloruro de metileno. La capa orgánica se lava con agua, se seca con sulfato de magnesio, y se concentra. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 10% en hexanos hasta acetato de etilo al 33% en hexanos. La concentración proporciona 5,7-dicloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina en forma de sólido blanco (62 mg). EM: m/z 318,0 (M+H).

\newpage

Etapa B

5-Acepan-1-il-7-cloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina

Una solución de 5,7-dicloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina (16 mg, 0,05 mmol) y hexametilenoimina (100 mg, 1,0 mmol) en 1 ml de cloruro de metileno se agita a temperatura ambiente durante 16 h. La solución orgánica se lava con ácido clorhídrico 0,1 N y cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio, y se concentra. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 20% en hexanos hasta acetato de etilo al 50% en hexanos. La concentración proporciona 5-acepan-1-il-7-cloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina en forma de sólido amarillo (15 mg, p.f. 106-108ºC). EM: m/z 381,0 (M+H).

El compuesto del Ejemplo 2 se sintetiza de forma análoga a la del Ejemplo 1.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 2 7-Cloro-5-piperidin-1-il-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina; EM: m/z 367,3 (M+H)

47

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 3 Preparación de 7-cloro-N-(2,2,2-trifluoroetil)-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina

48

Una solución de 5,7-dicloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina (16 mg, 0,05 mmol) y 2,2,2-trifluoroetilamina (200 mg, 2,0 mmol) en 1 ml de N,N-dimetilformamida se agita a temperatura ambiente durante 16 h. Se le añade una solución de cloruro de sodio saturado, y el producto se extrae con acetato de etilo. La solución orgánica se lava con cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio, y se concentra. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 20% en hexanos hasta acetato de etilo al 50% en hexanos. La concentración proporciona 7-cloro-N-(2,2,2-trifluoroetil)-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina en forma de sólido blanco (16 mg, p.f. 155-157ºC). EM: m/z 381,0 (M+H).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 4 Preparación de 7-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-(2,2,2- trifluoroetil)imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina

49

A una solución de 7-cloro-N-(2,2,2-trifluoroetil)-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina (19 mg, 0,05 mmol) y 3-dimetilamino-1-propanol (51 mg, 0,5 mmol) en 0,5 ml de dimetilsulfóxido a temperatura ambiente se le añade hidruro de sodio (60% en aceite mineral, 20 mg, 0,5 mmol). La mezcla se calienta a 50ºC durante 30 minutos, y se enfría hasta la temperatura ambiente. Se le añade una solución de cloruro de sodio saturado, y el producto se extrae con acetato de etilo. La solución orgánica se lava con cloruro de sodio saturado (x3), se seca con sulfato de magnesio, y se concentra. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo hasta alcohol metílico al 30% en acetato de etilo. La concentración proporciona 7-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-(2,2,2-trifluoroetil)imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina forma de sólido de color canela (12 mg, p.f. 52-55ºC). EM: m/z 464,3 (M+H).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 5 7-Cloro-5-cicloheptil-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina

50

Etapa A

3-cicloheptil-3-oxo-2-(2,4,6-trifluorofenil)propanoato de etilo

Una mezcla de ácido 2,4,6-trifluorofenilacético (570 mg, 3,0 mmol), yodoetano (1,56 g, 10 mmol) y carbonato de potasio (1,38 g, 10 mmol) en 5 ml de dimetilsulfóxido se agita a 50ºC durante 3 h, y se enfría hasta la temperatura ambiente. La mezcla se reparte entre éter dietílico y agua. La capa orgánica se lava con agua y cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio, y se filtra a través de Magnesol. El filtrado se concentra, para dar lugar a 2,4,6-trifluorofenilacetato de etilo en forma de aceite de color amarillo claro (581 mg, 2,66 mmol).

Una mezcla de ácido cicloheptanocarboxílico (5,0 g, 35,2 mmol) en 25 ml de cloruro de tionilo se somete a reflujo durante 1 h, y se concentra. La forma cruda del cloruro de ácido cicloheptanocarboxílico así obtenido se utiliza directamente en la siguiente etapa.

Una solución de trifluorofenilacetato de etilo (436 mg, 2,0 mmol) en 3 ml de tetrahidrofurano se enfría hasta -78ºC, y se le añade diisopropilamida de litio (2,0 M en heptano/tetrahidrofurano/etilbenceno, 1,0 ml, 2,0 mmol) gota a gota, con agitación. La mezcla se agita a -78ºC durante 1 h, y se añade cloruro de ácido cicloheptanocarboxílico (321 mg, 2,0 mmol) gota a gota. La mezcla se calienta hasta la temperatura ambiente y se acidifica con 2 ml de ácido clorhídrico 1,0 N. El producto se extrae con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio, y se concentra. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de hexanos hasta acetato de etilo al 10% en hexanos. La concentración proporciona 3-cicloheptil-3-oxo-2-(2,4,6-trifluorofenil)propanoato de etilo en forma de aceite incoloro (410 mg). EM: m/z 341,2 (M-H).

\vskip1.000000\baselineskip

Etapa B

7-Cloro-5-cicloheptil-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina

Una mezcla de 3-cicloheptil-3-oxo-2-(2,4,6-trifluorofenil)propanoato de etilo (342 mg, 1,0 mmol), 2-aminoimidazol (Helv. Acta. Chim. 76, 2066 (1993) ) (83 mg, 1,0 mmol) y 0,5 ml de tributilamina se agita en atmósfera de nitrógeno a 160ºC durante 1,5 h y se enfría hasta la temperatura ambiente. La mezcla se disuelve en acetato de etilo y la capa orgánica se lava con ácido clorhídrico 1,0 N (x2) y cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio, y se concentra, para dar lugar a 5-cicloheptil-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidin-7-ol crudo en forma de aceite oscuro (294 mg).

Una mezcla del 5-cicloheptil-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidin-7-ol anterior (294 mg) en 2 ml de oxicloruro de fósforo se calienta en condiciones de reflujo durante 6 h. El exceso oxicloruro de fósforo se elimina en vacío, y el residuo resultante de se disuelve en cloruro de metileno. La capa orgánica se lava con agua, se seca con sulfato de magnesio, y se concentra. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 10% en hexanos hasta acetato de etilo al 33% en hexanos. La concentración proporciona 7-cloro-5-cicloheptil-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina en forma de sólido blanco (24 mg). EM: m/z 380,2 (M+H).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 6 3-[4-(7-Cloro-5-cicloheptilimidazo[1,2-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]-N,N- dimetilpropan-1-amina

\vskip1.000000\baselineskip

51

\vskip1.000000\baselineskip

Una mezcla de 3-cicloheptil-3-oxo-2-(2,4,6-trifluorofenil)propanoato de etilo (342 mg, 1,0 mmol), 2-aminoimidazol (Hel. Acta Chim. 76, 2066 (1993)) (83 mg, 1,0 mmol) y 0,5 ml de tributilamina se agita en atmósfera de nitrógeno a 160ºC durante 1,5 h y se enfría hasta la temperatura ambiente. La mezcla se disuelve en acetato de etilo y la capa orgánica se lava con ácido clorhídrico 1,0 N (x2) y cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio, y se concentra, para dar lugar al 5-cicloheptil-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidin-7-ol crudo en forma de aceite oscuro.

A una solución del 5-cicloheptil-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidin-7-ol anterior y 3-dimetilamino-1-propanol (206 mg, 2,0 mmol) en 3,0 ml de dimetilsulfóxido a temperatura ambiente se le añade hidruro de sodio (60% en aceite mineral, 80 mg, 2,0 mmol). La mezcla se calienta a 40ºC durante 2 h, y se enfría hasta la temperatura ambiente. Se le añade una solución de cloruro de sodio saturado, y el producto se extrae con acetato de etilo. La solución orgánica se lava con cloruro de sodio saturado (x3), se seca con sulfato de magnesio, y se concentra. Al residuo se le añaden 5 ml de oxicloruro de fósforo y 2 ml de N,N-dietilanilina, y la mezcla se calienta a 110ºC durante 1 h. El exceso de oxicloruro de fósforo se elimina en vacío, y el residuo resultante se reparte entre acetato de etilo y solución de carbonato de sodio al 5%. La capa orgánica se lava con cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio, y se concentra. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo hasta alcohol metílico al 20% en acetato de etilo. La concentración proporciona 3-[4-(7-cloro-5-cicloheptilimidazo[1,2-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]-N,N-dimetilpropan-1-amina en forma de aceite de color marrón (24 mg). EM: m/z 463,3 (M+H).

El 2-(2,4,6-trifluorofenil)malonato de dietilo se describe en el documento US 6.156.925. El 2-aminoimidazol se prepara como se describe en Helv. Acta. Chim. 76, 2066 (1993).

Claims

1. Compuesto representado por la Fórmula (I):

\vskip1.000000\baselineskip

52

\vskip1.000000\baselineskip

en la que:

R^{1} se selecciona de entre

\vskip1.000000\baselineskip

53

\vskip1.000000\baselineskip

R^{2} es un grupo de fórmula

\vskip1.000000\baselineskip

54

\vskip1.000000\baselineskip

R^{3} es H, o alquilo C_{1}-C_{3};

R^{4} es H, o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{5} es H, alquilo C_{1}-C_{3} o fluoroalquilo C_{1}-C_{3};

Y es un grupo de fórmula -O(CH_{2})_{n}Q;

n es un número entero de 2, 3 ó 4;

Q es -OH, o -NR^{6}R^{7};

R^{6} y R^{7} son independientemente H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

X es Cl o Br;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

\vskip1.000000\baselineskip

2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{2} es un grupo de fórmula

\vskip1.000000\baselineskip

55

\vskip1.000000\baselineskip

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

\vskip1.000000\baselineskip

3. Compuesto según la reivindicación 1 ó 2, en el que n es 3.

4. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que Q es -NR^{6}R^{7}.

5. Compuesto según la reivindicación 4, en el que R^{6} es metilo y R^{7} es H o metilo.

6. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que L^{1} y L^{4} son F.

7. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que L^{2} y L^{3} son H.

8. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que X es Cl.

9. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que R^{3} es H o metilo.

10. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que R^{4} es H.

11. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que R^{5} es CF_{3}.

12. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que la Fórmula (I) está representada por la Fórmula (Ia):

\vskip1.000000\baselineskip

56

\newpage

13. Compuesto según la reivindicación 1, en el que: la Fórmula (I) está representada por la Fórmula (Ia):

\vskip1.000000\baselineskip

57

\vskip1.000000\baselineskip

R^{2} es

\vskip1.000000\baselineskip

58

\vskip1.000000\baselineskip

n es 3;

X es Cl o Br;

Y es un grupo de fórmula -O-(CH_{2})_{n}Q;

R^{3} es H o metilo;

R^{4} es H;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{5} es CF_{3};

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

L^{1} y L^{4} son F;

L^{2} y L^{3} son H;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

\newpage

14. Compuesto según la reivindicación 13, en el que:

R^{2} es

\vskip1.000000\baselineskip

59

\vskip1.000000\baselineskip

X es Cl;

n es 3;

Y es -O(CH_{2})_{n}Q;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{3} es H o metilo,

R^{4} es H;

R^{5} es CF_{3};

R^{6} es metilo;

R^{7} es H o metilo;

L^{1} y L^{4} son F;

L^{2} y L^{3} son H;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

\vskip1.000000\baselineskip

15. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que la Fórmula (I) está representada por la Fórmula (Ib):

\vskip1.000000\baselineskip

60

\vskip1.000000\baselineskip

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

\newpage

16. Compuesto según la reivindicación 1 en el que la Fórmula (I) está representada por la Fórmula (Ib):

\vskip1.000000\baselineskip

61

\vskip1.000000\baselineskip

R^{2} es

\vskip1.000000\baselineskip

62

\vskip1.000000\baselineskip

n es 3;

X es Cl o Br;

Y es un grupo de fórmula -O-(CH_{2})_{n}Q;

R^{3} es H o metilo;

R^{4} es H;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{5} es CF_{3};

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

L^{1} y L^{4} son F;

L^{2} y L^{3} son H;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

\newpage

17. Compuesto según la reivindicación 14, en el que:

R^{2} es

\vskip1.000000\baselineskip

63

\vskip1.000000\baselineskip

n es 3;

X es Cl;

Y es un grupo de fórmula -O(CH_{2})_{n}Q;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{4} es H;

R^{6} es metilo;

R^{7} es H o metilo;

L^{1} y L^{4} son F;

L^{2} y L^{3} son H;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

\vskip1.000000\baselineskip

18. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8}, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

19. Compuesto según la reivindicación 1, en el que:

R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8};

R^{2} es

\vskip1.000000\baselineskip

64

\vskip1.000000\baselineskip

n es 3;

X es Cl;

Y es un grupo de fórmula -O(CH_{2})_{n}Q;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{6} es metilo;

R^{7} es H o metilo;

L^{1} y L^{4} son F;

L^{2} y L^{3} son H;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

\vskip1.000000\baselineskip

20. Compuesto según la reivindicación 1, seleccionado de entre el grupo constituido por:

3-[4-(7-Cloro-5-cicloheptilimidazo[1,2-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]-N,N- dimetilpropan-1-amina,

7-Cloro-6-{4-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-(2,2,2- trifluoroetil)imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina,

N-{3-[4-(7-cloro-5-ciclohexilimidazo[1,2-a]pirimidin-6-il)-3,5- difluorofenoxi]propil}-N,N-dimetilamina,

7-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-(2,2,2-trifluoro-1-metiletil)imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina;

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

21. Compuesto según la reivindicación 4, seleccionado de entre el grupo constituido por:

7-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]imidazo[1,2-a]piri-
midin-5-amina,

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

22. Compuesto según la reivindicación 1, seleccionado de entre el grupo constituido por:

7-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil]-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina, y

7-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina,

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

23. Utilización de un compuesto de Fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento o a la inhibición del crecimiento de células de tumores cancerosos y enfermedades relacionadas en un mamífero.

24. Utilización de un compuesto de Fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento o a la prevención de tumores que expresan multirresistencia (MDR) o que son resistentes debido a MDR en un mamífero.

25. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

\newpage

26. Utilización de un compuesto de fórmula (II)

\vskip1.000000\baselineskip

65

\vskip1.000000\baselineskip

en la que:

R^{1} y X son tal como se han definido en la reivindicación 1,

R^{2} es un grupo de fórmula

66

en la que Y es H, F, Cl, o un grupo de fórmula -O(CH_{2})_{n}Q; y n, Q, L^{1}, L^{2} ,L^{3} y L^{4}, R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{6}, R^{7} y R^{8} son tal como se han definido en la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento o a la inhibición del crecimiento de células de tumores cancerosos y enfermedades relacionadas en un mamífero.

\vskip1.000000\baselineskip

27. Utilización de un compuesto de fórmula (II) según la reivindicación 26, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento o a la prevención de tumores que expresan multirresistencia (MDR) o que son resistentes debido a MDR en un mamífero.

28. Utilización de un compuesto de fórmula (II) según la reivindicación 26, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento, a la inhibición del crecimiento, o a la erradicación de un tumor en un mamífero, en el que dicho tumor es resistente a por lo menos un agente quimioterápico.

29. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28, en el que R^{2} es un grupo de fórmula

\vskip1.000000\baselineskip

67

\vskip1.000000\baselineskip

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

\vskip1.000000\baselineskip

30. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 26 a 29, en la que n, Q, R^{6}, R^{7}, L^{1}, L^{4}, X, R^{3}, R^{4} y R^{5} son tal como se han definido en cualquiera de las reivindicaciones 3 a 11.

\newpage

31. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28, en la que la Fórmula (II) está representada por la Fórmula (Ia):

\vskip1.000000\baselineskip

68

\vskip1.000000\baselineskip

R^{2} es el grupo

\vskip1.000000\baselineskip

69

\vskip1.000000\baselineskip

R^{3} es H, o alquilo C_{1}-C_{3};

R^{4} es H;

R^{5} es fluoroalquilo C_{1}-C_{3};

Y es F, o un grupo de fórmula -O(CH_{2})_{n}Q;

n es 3;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{6} y R^{7} son cada uno independientemente H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

L^{1} y L^{4} son cada uno F;

L^{2} y L^{3} son cada uno H;

X es Cl

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\newpage

32. Utilización según la reivindicación 26 a 28, en la que:

R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8};

R^{2} es el grupo

70

Y es F, o un grupo -O-(CH_{2})_{n}Q;

n es 3;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

L^{1} y L^{4} son cada uno F;

L^{2} y L^{3} son cada uno H;

X es Cl;

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

33. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28, en la que la Fórmula (II) está representada por la Fórmula (IIb):

71

\vskip1.000000\baselineskip

R^{2} es el grupo

\vskip1.000000\baselineskip

72

R^{3} es H, o alquilo C_{1}-C_{3};

R^{4} es H;

R^{5} es fluoroalquilo C_{1}-C_{3};

Y es F, o un grupo -O(CH_{2})_{n}Q;

n es 3;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o un alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

L^{1} y L^{4} son cada uno F;

L^{2} y L^{3} son cada uno H;

X es Cl;

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

34. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28, en la que el compuesto se selecciona de entre el grupo constituido por:

5-Acepan-1-il-7-cloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina,

7-Cloro-5-piperidin-1-il-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina,

7-Cloro-N-(2,2,2-trifluoroetil)-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidin-5-amina, y

7-Cloro-5-cicloheptil-6-(2,4,6-trifluorofenil)imidazo[1,2-a]pirimidina,

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

35. Composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (II)

\vskip1.000000\baselineskip

73

\vskip1.000000\baselineskip

en el que:

R^{1}, R^{2} y X son tal como se han definido en la reivindicación 26, e Y es H, F, Cl, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

36. Utilización de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento, a la inhibición del crecimiento, o a la erradicación de un tumor en un mamífero, en el que dicho tumor es resistente a por lo menos un agente quimioterápico.