ES2218223T3

ES2218223T3 - Uso de docetaxel para el tratamiento de carcinoma hepatocelular.

Info

Publication number: ES2218223T3
Application number: ES00964144T
Authority: ES
Inventors: Chin-Wen Chi; Heng-Liang Lin; Tsung-Yun Liu; Wing-Yiu Lui; Gar-Yang Chau
Original assignee: Aventis Pharma SA
Current assignee: Aventis Pharma SA
Priority date: 1999-08-31
Filing date: 2000-08-29
Publication date: 2004-11-16
Anticipated expiration: 2020-08-29
Also published as: KR20020060166A; DE60011794T2; HUP0203197A3; IL147489A; KR100670416B1; EA200200313A1; RS50148B; EP1214061A2; JP4866522B2; PL353198A1; CZ2002739A3; EA004804B1; ME00624B; CA2382294C; PT1214061E; UA72927C2; CA2382294A1; WO2001015675A3; NO328527B1; DE60011794D1

Abstract

El uso de una composición para la preparación de un fármaco para el tratamiento del carcinoma hepatocelular, comprendiendo dicha composición como ingrediente activo, el docetaxel o uno de sus hidratos.

Description

Uso de docetaxel para el tratamiento de carcinoma hepatocelular.

Esta invención se refiere al tratamiento del carcinoma hepatocelular.

El carcinoma hepatocelular (HCC) es uno de los cánceres más comunes en los países del Sudeste de Asia y África. En Taiwán, el HCC es la causa principal de muerte en los enfermos masculinos de cáncer. La tasa de supervivencia de los pacientes de HCC es muy baja. Esto se debe principalmente a la carencia de tratamientos eficaces. La radiación y la quimioterapia no han resultado ser satisfactorias hasta la fecha; la cirugía es el tratamiento más eficaz para el HCC. Sin embargo, la cirugía es apropiada solo para enfermos con pequeños tumores susceptibles de resección.

Recientemente, los fármacos antimitóticos tales como el paclitaxel han recibido renovado interés. El paclitaxel fue aislado originalmente de la corteza del árbol del tejo. El efecto antitumoral del paclitaxel se conoce desde 1971. El paclitaxel inhibe la división de las células tumorales por su acción sobre el ensamblaje de los microtúbulos. El análisis in vitro usando células tumorales ha revelado que el paclitaxel detiene las células principalmente en la fase G2/M del ciclo celular (Schiff PB y Horwitz SB, Proc. Natl. Acad. Sci 77, 1561-1565, 1980). Estudios recientes han demostrado que el paclitaxel es efectivo frente a varias células tumorales malignas tales como el tumor cerebral, cáncer gástrico y de próstata, cáncer de mama, melanoma y cáncer de ovario.

Sin embargo, el paclitaxel no es efectivo frente al carcinoma hepatocelular. Una prueba clínica de fase II del paclitaxel en enfermos de HCC se describe en British Journal of Cancer, 78 (I), 34-39, 1998. El artículo concluye que el paclitaxel no tenía efecto anti-canceroso significativo en enfermos de HCC.

Como se explicó anteriormente, se ha encontrado que el efecto citotóxico del paclitaxel es dependiente del ciclo celular, ocurriendo la parada del ciclo celular principalmente en la fase G2/M. Sin embargo, se ha descubierto recientemente que el docetaxel puede tener una citotoxicidad no dependiente del ciclo celular en células de HCC. Esto indica que el efecto citotóxico del docetaxel se consigue en las células de HCC por un mecanismo diferente del efecto cototóxico de paclitaxel. Más aún, la actividad in vitro del docetaxel frente a las células de HCC es significativamente mayor que la del paclitaxel a concentraciones de hasta 1 \muM. Dada la naturaleza altamente citotóxica de los taxoides, una mayor actividad a bajas concentraciones sugiere que el docetaxel, al contrario que el paclitaxel, será de uso práctico en el tratamiento clínico del carcinoma hepatocelular.

De acuerdo con esto, la presente invención proporciona el uso del docetaxel o un hidrato del mismo en la producción de un medicamento para utilizar en el tratamiento del carcinoma hepatocelular.

El docetaxel es un compuesto conocido. Tiene la fórmula

1

Los procedimientos para la preparación del docetaxel se describen en los documentos de patente europea EP-A-253738 y EP-A-336841.

El docetaxel puede emplearse, por ejemplo, en forma anhidra o como un hidrato. Cuando se utiliza aquí, las referencias a docetaxel incluyen las referencias a hidratos del mismo.

Los hidratos de docetaxel pueden prepararse disolviendo el docetaxel anhidro en un disolvente orgánico tal como acetona, etanol, acetonitrilo o N,N-dimetilformamida, y recristalizando el hidrato de docetaxel añadiendo la solución así obtenida al agua. Un hidrato de docetaxel es típicamente un dihidrato, un trihidrato o un tetrahidrato. En particular, el trihidrato se ha encontrado que es particularmente estable, y el trihidrato de docetaxel es por tanto el preferido. El trihidrato de docetaxel puede prepararse por los procedimientos descritos en el documento de patente europea EP-A-770070.

El docetaxel es inesperadamente activo frente a carcinomas hepatocelulares. En particular, puede usarse para tratar carcinomas de las células del hígado, variantes fibrolaminares y colangiocarcinomas hepatocelulares mixtos.

En la presente invención, el docetaxel puede administrarse por cualquier ruta convencional conocida para la administración del docetaxel. De forma que, puede, por ejemplo, ser administrado parenteralmente. Típicamente, se administra por vía intravenosa, preferiblemente por infusión intravenosa.

En la presente invención, el docetaxel se formula típicamente para la administración como una composición farmacéuticamente aceptable que contiene docetaxel y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Vehículos y diluyentes adecuados incluyen disolventes y medios para suspensión no tóxicos, por ejemplo medios acuosos estériles. Preferiblemente, las composiciones toman la forma de soluciones o suspensiones acuosas, por ejemplo, soluciones adecuadas para la inyección o infusión, que pueden contener agentes emulsionantes, colorantes, conservantes o estabilizantes.

Las composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración parenteral incluyen soluciones o suspensiones estériles, acuosas o no acuosas. Soluciones y suspensiones adecuadas, estériles, no acuosas, incluyen soluciones y suspensiones en aceites vegetales naturales tales como aceite de oliva, aceite de sésamo o vaselina líquida o en ésteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Soluciones acuosas estériles adecuadas incluyen soluciones de docetaxel en agua. Típicamente, el pH de las soluciones acuosas estériles adecuadas para la administración parenteral se ajusta apropiadamente. Más aún, tales soluciones acuosas estériles se hacen isotónicas generalmente, por ejemplo con una cantidad suficiente de cloruro sódico o glucosa. Se prefiere particularmente que estas soluciones adecuadas para la administración por infusión tengan un pH similar al de la sangre y se hagan isotónicas.

La esterilización debe ser llevada a cabo mediante calefacción o por otros medios que no afecten adversamente la composición.

Las composiciones farmacéuticas que contienen docetaxel adecuadas para el uso de la presente invención pueden además contener un tensioactivo. Los tensioactivos preferidos son los polisorbatos, ésteres de glicoles polioxietilénicos y ésteres-éteres del polietilenglicol y aceites de ricino. Ejemplos de tensioactivos adecuados y de composiciones farmacéuticas que contienen los tensioactivos, pueden encontrarse en el documento de patente AU-A-666859.

El docetaxel puede también formularse para el uso en la presente invención como una composición liofilizada. Tales composiciones liofilizadas tienen buena estabilidad física y química y pueden, por tanto, guardarse por periodos extendidos de tiempo. Las composiciones liofilizadas que contienen docetaxel pueden prepararse por liofilización de una solución acuosa de docetaxel por las técnicas clásicas. Pueden comprender además agentes de carga como la lactosa. Pueden también comprender agentes de ajuste de la tonicidad tales como azúcares y polímeros. Ejemplos de agentes de ajuste de la tonicidad adecuados incluyen glucosa, dextrosa y manitol y polímeros, por ejemplo polivinilpirrolidona.

Una composición liofilizada puede redisolverse cuando se va a usar en el medio inyectable compatible y farmacéuticamente aceptable. El liofilizado puede ser ventajosamente disuelto en agua doblemente destilada de calidad inyectable, en un volumen equivalente al volumen inicial de la solución que se liofiliza.

Una composición farmacéutica que contiene docetaxel adecuada para el uso de la invención presente contiene típicamente al menos 0,01% en peso del producto terapéuticamente activo. Generalmente una composición farmacéutica contiene del 0,01 a 1000 mg, preferiblemente de 0,1 a 500 mg, del producto terapéuticamente activo.

Preferiblemente, una solución adecuada para inyección intravenosa contiene de 38 a 42, más preferiblemente alrededor de 40 mg/ml del producto activo. Típicamente, tales soluciones se proporcionan en viales que contienen 20 mg o 80 mg del producto activo.

Preferiblemente, una solución adecuada para la infusión contiene de 0,1 a 11, preferiblemente de 0,1 a 10, más preferiblemente de 0,3 a 0,9 mg/ml del producto activo.

El tratamiento terapéutico con docetaxel de acuerdo con la presente invención puede ser llevado a cabo simultáneamente con otros tratamientos terapéuticos que incluyen el tratamiento con otros fármacos antineoplásicos, anticuerpos monoclonales, inmunoterapia o radioterapia o modificadores de la respuesta biológica. Modificadores de la respuesta biológica adecuados incluyen linfoquinas y citoquinas tales como las interleuquinas, interferón (\alpha, \beta o \delta) y TNF (factor de necrosación tumoral). Otros agentes quimioterapéuticos que son de utilidad en el tratamiento de los trastornos debidos a la proliferación celular anormal incluyen los agentes alquilantes, por ejemplo las mostazas nitrogenadas tales como la mecloratamina, ciclofosfamida, melfalano y cloranbutilo, sulfonatos de alquilo tales como el busulfano, las nitrosoureas tales como carmustina, lomustina, semustina y estreptozocina, triazenos como dacarbazina, antimetabolitos tales como análogos del ácido fólico, por ejemplo metotrexato, análogos de pirimidina tales como el fluorouracilo y la citarabina, análogos de purina tales como la mercaptopurina y la tioguanina, productos naturales, como por ejemplo los alcaloides de Catharantus rosae tales como la vinblastina, vincristina y vindestina, epipodofiotoxinas tales como etopósido y tenipósido, antibióticos tales como dactinomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, bleomicina, plicamicina y mitomicina, enzimas tales como L-asparaginasa, agentes varios tales como complejos de coordinación del platino, por ejemplo cis-platino, ureas sustituidas tales como hidroxiurea, derivados de metilhidrazina tales como procarbazina, supresores adrenocorticales tales como mitotano y aminoglutetimida, hormonas y antagonistas tales como adrenocorticosteroides tales como prednisona, progestinas tales como caproato de hidroxiprogesterona, acetato de metoxiprogesterona y acetato de megestrol, estrógenos tales como dietiletilbestrol y etinilestradiol, antiestrógenos tales como tamoxifeno, y andrógenos tales como propionato de testosterona y fluoximesterona.

Se prefiere el tratamiento concomitante con ciclofosfamida, 5-fluorouracilo, etopósido, vinorelbina o metotrexato, ya que puede producirse el sinergismo entre estos compuestos y el docetaxel. Además, el 2-metoxiestradiol es activo frente a los carcinomas hepatocelulares y se ha encontrado que es bien tolerado después de un mes de tratamiento diario en ratones (Klauber et al, Cancer Research, 57, 81-86, 1997). El tratamiento concomitante con 2-metoxiestradiol es, por tanto. preferido también, particularmente cuando se requiere un tratamiento crónico.

En la presente invención, el docetaxel se administra a una dosis que permite el tratamiento del carcinoma hepatocelular. La dosis varía de acuerdo con la ruta de administración y las características físicas del paciente. Las dosis adecuadas incluyen aquéllas que son terapéuticamente eficaces para el tratamiento de los trastornos debidos a la proliferación celular anormal. El docetaxel puede administrarse tan a menudo como sea necesario para obtener el efecto terapéutico deseado.

Una dosis típica de docetaxel para el tratamiento de un paciente humano es de 50 a 150, preferiblemente de 60 a 100, más preferiblemente de alrededor de 100 mg de docetaxel/m^{2} de superficie de la piel del paciente. Cuando el docetaxel se administra por infusión, la velocidad de infusión es típicamente de 1 a 200, preferiblemente alrededor de 100 mg/m^{2} de docetaxel por hora.

La dosis anterior puede repetirse como se requiera. Típicamente, se repite diaria o semanalmente. Preferiblemente, se repite cada 3 semanas. Por ejemplo, el docetaxel puede administrarse a una dosis de alrededor de 100 mg/m^{2}como infusión intravenosa en el espacio de una hora cada tres semanas.

El siguiente ejemplo ilustra la invención.

Ejemplo Materiales y métodos

A no ser que se indique lo contrario, los métodos usados son técnicas bioquímicas clásicas. Todas las líneas de células usadas pueden obtenerse comercialmente.

Cultivo de células

Los experimentos descritos en detalle a continuación usan líneas de células de hepatoma humanas Hep3B (denominación ATCC HB 8064), HepG2 (denominación ATCC HB 8065) y HA22T/VGH, y la línea celular de hepatoma murino Hepa 1-6. Estas células se cultivaron en DMEM (GIBCO, BRL) que contenía 10% de suero fetal bovino (Hyclone), 0,01 mg/ml de gentamicina y 0,1 mM de aminoácidos no esenciales. Las células se cultivaron en unos incubadores de CO_{2} a 37ºC, con 5% de CO_{2} y 95% de aire filtrado.

Tratamiento con fármacos

En los experimentos descritos en detalle a continuación se trataron las células de hepatoma con varias concentraciones de paclitaxel (0,001-10 \muM) y docetaxel (0,001-10 \muM) durante 24 horas y 72 horas. Se disolvió el paclitaxel en dimetilsulfóxido (DMSO) y el docetaxel en etanol para obtener las soluciones madre. La concentración final del vehículo fue menor del 0,1%.

Estudio de la viabilidad celular: ensayo de MTT

Las células se cultivaron en placas de cultivo celular de 96 pocillos (COSTAR) a una densidad de 4x10^{4} células/ml. Después del tratamiento con los fármacos durante 24 ó 72 horas, se desechó el medio de cultivo y se reemplazó con el mismo volumen (100 \mul) de medio fresco que contenía MTT (bromuro de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difenil-tetrazolio; 0,456 mg/ml;) y se incubaron durante 1,5 horas a 37ºC. El medio fresco se desechó y se añadieron 100 \mul de DMSO. Se determinó la viabilidad celular por medio de la comparación colorimétrica leyendo valores de DO (densidad óptica) en un lector de microplacas (SPECTRA MAX 250) a una longitud de onda de 570
nm.

Los resultados se muestran en la Figura 1, en la que los círculos rellenos representan los datos después del tratamiento durante 24 horas y los círculos en blanco representan los datos después del tratamiento durante 72 horas. Los datos se expresan como la media \pm error estándar de la media de muestras de tres experimentos independientes en duplicado.

Prueba de exclusión del yoduro de propidio (IP)

Se cultivaron las células en recipientes de 5-cm^{3} (CORNING) y se trataron con paclitaxel y docetaxel como se ha descrito anteriormente. Se añadió yoduro de propidio (10 \mug/ml) y se incubó con las células durante 15 minutos a 37ºC. A continuación se separó el medio antes de recoger las células adherentes. Se recogieron las células suspendidas y las adheridas a la superficie y se resuspendieron en 500 \mul de PBS para análisis de citometría de flujo como se describe a continuación. Se eliminaron las señales de los restos celulares por medio de técnicas de selección de señal de FSC-SSC.

Análisis por citometría de flujo del contenido de ADN

Se añadió a los sedimentos celulares un tampón de lisis (Triton X-1000 al 5%, Na_{2}EDTA.2H_{2}O 0,2 \mug/ml, y albúmina de suero bovino, 1% en PBS) y se dejaron sobre hielo durante 15 minutos. Se añadió entonces a la mezcla metanol al 100% enfriado a -20ºC y se centrifugó a 300 x g durante 5 minutos. Se desechó el sobrenadante y el sedimento celular se lavó con PBS. El sedimento lavado se tiñó con una solución de tinción de DNA (50 \mug/ml de yoduro de propidio, y 5 kunitz/ml de NRasa A) durante 30 minutos a 4ºC en la oscuridad. El contenido de ADN de cada célula se midió con un citómetro de flujo FACSCalibur de Becton Dickinson como se describe a continuación.

Citometría de flujo

Se analizaron las células (10000) en un citómetro de flujo FACSCalibur de Becton Dickinson usando un láser iónico de argón (15 mWatt) con rayo de luz incidente de 488 nm. Para el ensayo de exclusión del yoduro de propidio, se recogió la fluorescencia roja a través de un filtro de 585 nm y se eliminaron las señales de los restos celulares por medio de técnicas de selección de señal de FSC-SSC. Los datos se tomaron y analizaron por medio de la aplicación FACS/CELLQuest usando un ordenador Power Macintosh 7600/120. Se determinaron las células apoptóticas y las células en ciclos específicos por medio de la aplicación ModFit LT.

Los resultados de la citometría de flujo se muestran en las Tablas 1 y 2 y en la Figura 2. La Tabla 1 muestra los datos de la permeabilidad de la membrana celular de las células de hepatoma después del tratamiento con paclitaxel y docetaxel. La Tabla 2 detalla el porcentaje de células apoptóticas (sub-G0/G1) halladas después del tratamiento con paclitaxel y docetaxel. La Figura 2 muestra un análisis de histograma de ADN que detalla los efectos de paclitaxel y docetaxel en el progreso del ciclo celular.

TABLA 1 Permeabilidad de la membrana celular de las células de hepatoma después del tratamiento con paclitaxel y docetaxel

2

Los datos se expresan como la media \pm estándar de la media de muestras en duplicado procedentes de tres experimentos independientes. Las células se trataron con fármacos durante 24-72 horas, y se midió la permeabilidad de la membrana por análisis de citometria de flujo de exclusión de propidio en células de hepatoma viables. Los datos se expresan como porcentajes de células con membranas celulares intactas comparadas con el testigo.

TABLA 2 Apoptosis inducida por paclitaxel y docetaxel

\vskip1.000000\baselineskip

3

Los datos se expresan como porcentajes de células apoptóticas (sub-G0/G1) determinados por citometria de flujo.

\vskip1.000000\baselineskip

Análisis electroforético de la fragmentación del ADN

Se evaluó la fragmentación del ADN de acuerdo con el método de Herrmann et al , Nucleic Acids Res., 22, 5506-5507, 1994.

Resumiendo, se trataron células HEP G2 (2x10^{7}) durante 72 horas con paclitaxel y docetaxel como se ha descrito anteriormente y se centrifugaron. Los sedimentos de células así obtenidos se resuspendieron en tampón de lisis NP-40 (1% NP-40 en EDTA 20 mM, Tris-HCl 50 mM, pH 7,5). Después de la lisis de las células durante unos pocos segundos, se recogieron los sobrenadantes (5 minutos a 1600 x g). Se repitió la extracción con el mismo tampón de lisis. Se añadieron SDS (concentración final 1%) y NRasa (concentración final 2,5 \mug/ml) a los sobrenadantes y se incubaron durante 2 horas a 56ºC seguido de digestión con la proteinasa K (2,5 \mug/\mul) durante 2 horas a 37ºC. A continuación se añadió la mezcla a acetato de amonio 10 M antes de precipitarla con etanol al 100% durante 30 minutos a -20ºC. Se recogió el ADN por centrifugación (10 minutos a 12.000 x g) seguido por electroforesis en gel de agarosa al 1,5%.

Los resultados se muestran en la Figura 3. En la Figura 3, M es un marcador de 100 pares de bases. La calle 1 muestra el medio testigo. Las calles 2 y 3 muestran la media de los grupos de tratamiento con paclitaxel (0,1 y 1 \muM). Las calles 4 y 5 muestran la media de los grupos de tratamiento con docetaxel (0,1 y 1 \muM).

Resultados Estudios de la viabilidad celular

La Figura 1 muestra los efectos, dependientes de la dosis, de paclitaxel y docetaxel en la viabilidad celular de las líneas de células de hepatoma (Hep G2, Hep 3B, HA22T/VGH y Hepa 1-6). Como es evidente por la Figura 1, el docetaxel consiguió una disminución de la viabilidad a 0,01 y 0,1 \muM en casi todos los casos.

En las células Hep G2, la viabilidad celular mostró una tendencia a la disminución después del tratamiento con paclitaxel o docetaxel. La viabilidad de las células Hep G2 fue de 61,81% y 39,45% del testigo para los grupos del paclitaxel (10 \muM) a las 24 y 72 horas, respectivamente. Para las células Hep G2 tratadas con docetaxel, la máxima reducción de la viabilidad se observó con el docetaxel 1 \muM, sin observarse una mayor disminución de la viabilidad con el docetaxel 10 \muM. La viabilidad fue del 65,03% y 48,99% para las células tratadas con docetaxel 1 \muM a las 24 y 72 horas, respectivamente.

En el caso de las células Hep 3B es digno de mención que se observó una significativa reducción de la viabilidad (37,06%) después del tratamiento con el docetaxel 0,01 \muM durante 72 horas.

En las células Hepa 1-6 tratadas con docetaxel, se observó la máxima citotoxicidad (65,34% y 30,71%) en los grupos de tratamiento del docetaxel 1 \muM a las 24 y 72 horas, respectivamente.

Prueba de exclusión del yoduro de propidio (IP)

La Tabla 1 muestra que la permeabilidad de la membrana de las células Hep G2 y Hep 3B después del tratamiento con paclitaxel y docetaxel fue dependiente de la dosis y del tiempo de tratamiento.

En el caso de las células HA22T/VGH, se observó un menor aumento de la permeabilidad de la membrana después del tratamiento con paclitaxel (0,01-1 \muM) durante 72 horas comparado con los grupos del docetaxel. Es digno de mención que sólo el 55,44% de las células tenían las membranas intactas después de tratamiento con docetaxel 0,01 \muM durante 72 horas, mientras que después de la misma dosis de paclitaxel, el 92,58% de las células tratadas tenían las membranas intactas.

Análisis del ciclo celular

La Figura 2 muestra que el tratamiento de las células Hep G2 con 1 \muM de paclitaxel durante 24 horas resultó en una detención obvia en la fase G2/M. Se observaron histogramas de ADN similares a las 72 horas después del tratamiento.

Como se muestra en la Tabla 2, se hallaron células apoptóticas (sub-G0/G1) después del tratamiento con docetaxel 0,001 \muM, 0,01 \muM, 0,1 \muM, y 1 \muM durante 24 horas, con porcentajes apoptóticos de 31,02%, 45,24%, 38,77% y 28,33%, respectivamente. A las 72 horas de tratamiento con docetaxel (0,001-1 \muM), los porcentajes apoptóticos fueron 21,92%, 42, 45%, 42,44% y 56,66%, respectivamente.

En las células Hep 3B, el tratamiento con 0,1 \muM ó 1 \muM de paclitaxel durante 24 horas resultó en una detención G2/M, y la incubación con 0,1 \muM ó 1 \muM de paclitaxel durante 72 horas resultó en un aumento de porcentajes de sub-G0/G1 de 38,37% o 47,01%, respectivamente. En cambio, en el caso de células Hep 3B tratadas con 0,01 \muM, 0,1 \muM o 1 \muM de docetaxel durante 24 horas o 72 horas, se produjeron altos niveles de poblaciones sub-G0/G1 de 59,14%, 58,69% y 65,74% a las 24 horas y 64,12%, 81,66% y 79,33% a las 72 horas.

En las células HA22T/VGH, las mayores concentraciones de paclitaxel (0,001 \muM a 1 \muM) concuerdan con el elevado porcentaje de células G2/M a las 24 horas. No se observó una población significativa de sub-G0/G1 en los grupos de tratamiento de 0,1 \muM o 1 \muM de paclitaxel a las 72 horas. En cambio, es significativo que las células HA22T/VGH tratadas con 0,01 \muM de docetaxel a las 24 horas tenían un porcentaje de sub-G0/G1 mayor (41,75%) que las células de los grupos de 0,1 \muM de docetaxel (18,61%) o 1 \muM (22,94%). Cuando se trataron las células con docetaxel durante 72 horas, se encontraron porcentajes significativos sub-G0/G1 en los grupos de tratamiento con 0,01 \muM (56,64%), 0,1 \muM (58,61%) y 1 \muM (60,98%) en las células HA22T/VGH tratadas con docetaxel.

Para las células Hepa 1-6, el tratamiento con paclitaxel (0,01, 0,1 ó 1 \muM) durante 24 horas resultó en un aumento de las poblaciones sub-G0/G1 (24,02%, 55,64% ó 64,38%, respectivamente), y se observó detención en la fase G2/M en los grupos de tratamiento del paclitaxel 0,1 \muM y 1 \muM. Cuando las células Hepa 1-6 se trataron con 0,1 \muM y 1 \muM de paclitaxel durante 72 horas, se observó que la mayor parte de las células estaban muertas y no se encontró ningún perfil de ciclo celular obvio. El tratamiento con docetaxel (0,01 \muM, 0,1 \muM y 1 \muM ) de células Hepa 1-6 resultó en la formación de células sub-G0/G1 (52,81%, 50,764% y 53,8% a las 24 horas y 31,25%, 53,95% y 62,49% a las 72 horas, respectivamente).

Análisis de fragmentación del ADN

La Figura 3 muestra que el tratamiento con el paclitaxel (0,1 y 1 \muM) y el docetaxel (0,1 y 1 \muM) indujo fragmentación del ADN en células Hep G2.

Claims

1. El uso de una composición para la preparación de un fármaco para el tratamiento del carcinoma hepatocelular, comprendiendo dicha composición como ingrediente activo, el docetaxel o uno de sus hidratos.

2. El uso de una composición según la reivindicación 1, donde el hidrato es el trihidrato.

3. El uso de una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, para la preparación de un fármaco para el tratamiento del hepatocarcinoma donde el fármaco se va a usar por administración parenteral.

4. El uso de una composición según la reivindicación 3, que es apropiada para administración como una infusión y contiene de 0,1 a 11 mg/ml de compuesto activo.