MXPA02002041A - Uso de docetaxel para el tratamiento del carcinoma hepatocelular. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se basa en el descubrimiento de que el docetaxel es significativamente mas activo contra las celulas de carcinoma hepatocelular que el paclitaxel a concentraciones de hasta 1 ?M. En consecuencia, se proporciona el uso del docetaxe1, o un hidrato del mismo, en la manufactura de un medicamento para el uso en el tratamiento de carcinoma hepatocelular.

Description

USO DE DOCETAXEL PARA EL TRATAMIENTO DEL CARCINOMA HEPATOCELULAR Campo de la Invención Esta invención se refiere al tratamiento de carcinoma hepatocelular . Antecedentes de la Invención El carcinoma hepatocelular (HCC) es uno de los tipos más comunes de cáncer en paises del Sureste de Asia y África. En Taiwán, el HCC es la primera causa de muerte en pacientes masculinos con cáncer. La tasa de supervivencia de pacientes con HCC es muy bajo. Esto se debe principalmente a la carencia de tratamientos efectivos. La irradiación y quimioterapia no han probado hasta ahora ser satisfactorias; la cirugía es el tratamiento más efectivo para el HCC. Sin embargo, la cirugía solo es apropiada para pacientes con tumores pequeños que se pueden seccionar. Recientemente, medicamentos antimitóticos tales como el paclitaxel han recibido un interés renovado. El paclitaxel se aisló originalmente de la corteza del árbol Ye . El efecto anti-tumor del paclitaxel se conoce desde 1971. El paclitaxel inhibe la división celular del tumor por su acción en el ensamblado microtubular . Los análisis in vitro que usan células de tumor han revelado que el REF 135512 paclitaxel atrapa células principalmente en la fase G2/M del ciclo celular (Schiff PB y Hor itz SB, Proc. Nati. Acad. Sci 77, 1561-1565, 1980) . Estudios recientes han mostrado que el paclitaxel es efectivo contra varias células de tumor maligno tales como tumor cerebral, cáncer gástrico y de próstata, cáncer de pecho, melanoma y cáncer de ovarios. Sin embargo, el paclitaxel no es efectivo contra el carcinoma hepatocelular. ün ensayo clínico de fase II del paclitaxel para pacientes con HCC se reporta en el British Journal of Cáncer, 78 (1), 34-39, 1998. El articulo concluye que el paclitaxel no tiene efecto anticáncer importante en pacientes con HCC. Como se explica arriba, el efecto citotóxico del paclitaxel se ha encontrado que depende del ciclo celular, con el arresto del ciclo celular ocurriendo principalmente en la fase G2/I1. Sin embargo, se ha encontrado ahora que el docetaxel puede realizar una citotoxicidad no dependiente del ciclo celular en células HCC. Esto indica que el efecto citotóxico del docetaxel en células HCC se realiza por un mecanismo diferente del paclitaxel. Además, la actividad in vitro del docetaxel contra células HCC es significativamente mayor que el del paclitaxel a concentraciones de hasta 1 µM. Dada la naturaleza altamente citotóxica de los taxoides, una «afa*. •& .,& .. actividad incrementada a una baja concentración sugiere que el docetaxel, distinto al paclitaxel, será de uso práctico en el tratamiento clínico del carcinoma hepatocelular . Descripción de la Invención En consecuencia, la presente invención proporciona el uso del docetaxel o un hidrato del mismo en la manufactura de un medicamento para usarse en el tratamiento del carcinoma hepatocelular. También se proporciona un método de tratamiento de un paciente que sufre de carcinoma hepatocelular, cuyo método comprende administrar a tal paciente una cantidad efectiva de docetaxel o un hidrato del mismo. La invención también proporciona un método para aliviar la condición de un paciente que sufre de carcinoma hepatocelular, cuyo método comprende administrar al paciente una cantidad efectiva de docetaxel o un hidrato del mismo. El docetaxel es un compuesto conocido. Este tiene la fórmula AtoriMfc.a fc Los procesos para la preparación del docetaxel se describen en las EP-A-253738 y EP-A-336841. El docetaxel puede usarse, por ejemplo, en forma anhidra o como un hidrato. Como se usa en la presente, las referencias al docetaxel incluyen referencias a hidratos del mismo. Los hidratos de docetaxel pueden prepararse disolviendo docetaxel anhidro en un solvente orgánico tal como acetona, etanol, acetonitrilo o N,N-dimetilformamida, y recristalizando el hidrato de docetaxel agregando la solución asi obtenida a agua. El hidrato de docetaxel típicamente es un dihidrato, un trihidrato o un tetrahidrato. En particular, el trihidrato se ha encontrado para ser particularmente estable, y el trihidrato de docetaxel es, en consecuencia, el preferido. El trihidrato de docetaxel puede prepararse por los procesos colocados en la EP-A-770070. El docetaxel es inesperadamente activo contra carcinomas hepatocelulares. En particular, puede usarse para tratar carcinomas celulares del higado, variantes fibrolamelares y colangiocarcinomas hepatocelulares mezclados . En la presente invención, el docetaxel puede administrarse por cualquier ruta convencional conocida para la administración del docetaxel. De esta manera, este puede, por ejemplo, administrarse parenteralmente. Tipicamente, se administra intravenosamente, preferiblemente por infusión intravenosa. En la presente invención, el docetaxel se formula tipicamente para la administración como una composición farmacéuticamente aceptable que contiene docetaxel y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. Los portadores y diluyentes apropiados incluyen solventes no tóxicos y medios de suspensión, por ejemplo medio acuoso estéril. Preferiblemente, las composiciones toman la forma de soluciones acuosas o suspensiones, por ejemplo, soluciones apropiadas para inyección o infusión, que pueden contener agentes emulsificantes, colorantes, conservadores o estabilizantes. Las composiciones farmacéuticas apropiadas para la administración parenteral, incluyen soluciones o suspensiones estériles acuosas o no acuosas. Las soluciones y suspensiones estériles no acuosas apropiadas incluyen soluciones y suspensiones en aceites vegetales naturales tales como aceite de olivo, aceite de ajonjolí o petróleo liquido o en esteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Las soluciones acuosas estériles apropiadas incluyen soluciones de docetaxel en agua. Tipicamente, el pH de las soluciones acuosas l¡m£Á.lm ?ij'MA*l-X . .-,,.^*„.... ... m.^S .. ^±^ „.--, '... ,. - .. ,. ,.. ,.» A ^,»*^« -^ •> estériles apropiadas para administración parenteral, se ajusta apropiadamente, además, tales soluciones acuosas estériles se hacen generalmente isotónicas, por ejemplo con una cantidad suficiente de cloruro de sodio o glucosa. Es particularmente preferido que las soluciones apropiadas para la administración por infusión, tengan un pH similar al de la sangre, y se hacen isotónicas. La esterilización puede llevarse a cabo calentando o por cualquier otro medio que no afecte adversamente la composición. Las composiciones farmacéuticas que contienen docetaxel apropiadas para usarse en la presente invención, puede comprender, además, un agente tensoactivo. Los agentes tensoactivos preferidos son polisorbatos, esteres de polioxietilen glicol y éster-éteres de polietilen glicol y aceites de ricino. Los ejemplos de agentes tensoactivos apropiados, y de composiciones farmacéuticas que contienen los agentes tensoactivos, pueden encontrarse en la AU-A-666859. El docetaxel también puede formularse para usarse en la presente invención como una composición liofilizada. Tales composiciones liofilizadas tienen una buena estabilidad fisica y química y pueden, por lo tanto, almacenarse por largos periodos. Las composiciones liofilizadas que contienen docetaxel, pueden prepararse liofilizando una solución acuosa de docetaxel por técnicas estándar. Estas pueden comprender, además, agentes de volumen tales como lactosa. También pueden comprender agentes de ajuste de tonicidad tales como azúcares y polimeros. Los ejemplos de agentes del ajuste de la tonicidad apropiados incluyen glucosa, dextrosa y manitol, y polimeros, por ejemplo, polivinilpirrolidona. Una composición liofilizada puede volverse a disolver al momento de usarse en cualquier medio inyectable compatible y farmacéuticamente aceptable. El liofilizado puede tomarse ventajosamente con agua de doble destilado de grado de inyección, en un volumen equivalente al volumen inicial de la solución a liofilizarse . Una composición farmacéutica que contiene docetaxel apropiado para usarse en la presente invención, contiene tipicamente al menos 0.01% en peso del producto terapéuticamente activo. Generalmente, una composición farmacéutica contiene desde 0.01 hasta 1000 mg, preferiblemente desde 0.1 hasta 500 mg, del producto terapéuticamente activo. Preferiblemente, una solución apropiada para una inyección intravenosa contiene desde 38 hasta 42, más preferiblemente alrededor de 40 mg/ml del producto activo. Tipicamente, tales soluciones se proporcionan en frascos que contienen 20 mg o 80 mg del producto activo.

Preferiblemente, una solución apropiada para la infusión contiene desde 0.1 hasta 11, preferiblemente desde 0.1 hasta 10, más preferiblemente desde 0.3 hasta 0.9 mg/ml del producto activo. El tratamiento terapéutico con docetaxel de conformidad con la presente invención, puede realizarse concurrentemente con otros tratamientos terapéuticos que incluyen el tratamiento con otros medicamentos antineoplásticos, anticuerpos monoclonales, inmunoterapia o radioterapia o modificadores de la respuesta biológica. Los modificadores de la respuesta biológica incluyen linfocinas y citocinas tales como interleucinas, interferones (a, ß ó d) y TNF. Otros agentes quimioterapéuticos que son útiles en el tratamiento de desórdenes debidos a la proliferación celular anormal, incluyen agentes alquilantes, por ejemplo mostazas de nitrógeno tales como ecloretamina, ciclofosfamida, melfalan y clorambucil, alquil sulfonatos tales como busulfan, nitrosoureas tales como carmustina, lamustina, semustina y estreptozocina, triazenos tales como dacarbazina, antimetabolitos tales como análogos de ácido fólico, por ejemplo metotrexato, análogos de pirimidina tales como fluorouracil y citarabina, análogos de purina k¡á.?,r tfe&¿»J w tftSu ¡Má tales como mercaptopurina y tioguanina, productos naturales, por ejemplo vinca alcaloides tales como vinblastina, vincristina y vindesina, epipodofilotoxinas tales como etoposida y teniposida, antibióticos tales como dactinomicina, daunorubicina, doxorubicina, bleomicina, plicamicina y mitomicina, enzimas tales como L-asparaginasa, diferentes agentes tales como complejos de coordinación de platino, por ejemplo, cisplatina, ureas substituidas tales como hidroxiureas, derivados de metil-hidrazina tales como procarbazina, supresores adrenocorticales tales como mitotano y aminoglutetimida, hormonas y antagonistas tales como adrenocorticoesteroides tales como prednisona, progestinas tales como caproato de hidroxiprogesterona, acetato de metoxiprogesterona y acetato de megestrol, estrógenos tales como dietilstiboestrol y etiniloestradiol, antiestrógenos tales como tamoxifen, y andrógenos tales como propionato de testosterona y fluoximesterona . Puede realizarse un tratamiento concurrente con ciclofosfamida, 5-fluorouracil, etoposido, vinorelbina o metotrexato se prefiere, como un sinergismo entre estos compuestos y el docetaxel. Además, el 2-metoxiestradiol es activo contra carcinomas hepatocelulares y se ha encontrado que es bien tolerado después de 1 mes de tratamiento diario en ratones (Klauber y colaboradores, Cáncer Research, 57, 81-86, 1997) . También se prefiere, por lo tanto, el tratamiento concurrente con 2- metoxiestradiol, particularmente cuando se requiere un tratamiento crónico. En la presente invención, el docetaxel se administra a una dosis que permite el tratamiento del carcinoma hepatocelular. La dosis varia de conformidad con la via de administración y las características físicas del paciente. Las dosis apropiadas incluyen aquellas que son terapéuticamente efectivas para el tratamiento de desórdenes debidos a la proliferación anormal de células. El docetaxel puede administrarse tan frecuentemente como sea necesario para obtener el efecto terapéutico deseado. Una dosis típica de docetaxel para el tratamiento de un humano está desde 50 hasta 150, preferiblemente 60 hasta 100, más preferiblemente alrededor de 100 mg de docetaxel/m2 de área de superficie de la piel del paciente. Cuando el docetaxel se administra por infusión, la relación de infusión está tipicamente desde 1 hasta 200, preferiblemente alrededor de 100 mg/m2 de docetaxel por hora. La dosis anterior puede repetirse como se requiera. Tipicamente, se repite diariamente o semanalmente. Preferiblemente, se repite cada 3 semanas. Por ejemplo, el docetaxel puede administrarse a una dosis de alrededor de 100 mg/m2 como una infusión intravenosa durante 1 hora cada 3 semanas. Los siguientes ejemplos ilustran la invención. Ejemplo. Materiales y Métodos . Salvo que se indique lo contrario, los métodos usados son técnicas bioquímicas estándar. Las líneas de células usadas están todas comercialmente disponibles. Cul tivo de Células . Los experimentos detallados a continuación involucran líneas de célula de hepatoma humano Hep3B (designación ATCC HB 8064), HepG2 (designación ATTC HB 8065) y HA22T/VGH, y línea de célula de hepatoma de murina Hepa 1-6. Estas células se cultivan en DMEM (GIBCO, BRL) conteniendo suero de bovino fetal al 10% (Hyclone), 0.01 mg/ml de gentamicina y 0.1 mM de aminoácido no esencial. Las células crecen en un incubador de C02 a 37 °C, con 5% de C02 y 95% de aire filtrado. Tra tamiento con Medicamentos . En los experimentos detallados a continuación, las células de hepatoma se tratan con diferentes concentraciones de paclitaxel (0.001-10 µM) y docetaxel (0.001-10 µM) durante 24 horas y 72 horas. El paclitaxel se disuelve en dimetiisulfóxido (DMSO) y el docetaxel se disuelve en etanol como soluciones madre (concentrados) . La concentración final del vehículo fue de menos del 0.1%. Estudi o de Viabilidad Cel ular: Ensayo MTT. Se cultivaron células en un agrupamiento de cultivo de célula de 96 pozos (COSTAR) a una densidad de 4 xlO4 células/ml. Después del tratamiento de medicamento durante 24 horas o 72 horas, se descartó el medio y se reemplazó con un volumen igual (100 µl) de medio fresco que contiene MTT (0.456 mg/ml; bromuro de 3- [4, 5-dimetiltiazol-2-il] -2, 5-difenil-tetrazolio) y se incubó durante 1.5 horas a 37 °C. Se descartó después el medio fresco, y se agregó entonces 100 µl de DMSO. Se determinó la viabilidad celular por comparación calorimétrica leyendo los valores OD de un lector de microplaca (SPECTRA MAX 250) a una longitud de onda de 570 nm. Los resultados se muestran en la Figura 1, en la cual los círculos rellenos representan los datos después del tratamiento durante 24 horas y los circuios abiertos representan los datos después del tratamiento durante 72 horas. Los datos son la media ± error estándar de la media de las muestras duplicadas de tres experimentos independientes . ?m.á mÁL?¡mmmisi t ?más *¿¿^^^^^¡^ Ensayo de Excl usión del Yoduro de Propidio (Pl) . Las células crecieron en matraces de 5-cm2 (CORNING) y se trataron con paclitaxel y docetaxel como se establece arriba. Se agregó después yoduro de propidio (10 µg/ml) durante 15 minutos de incubación a 37°C. Después, se colectó el medio antes de cosechar las células adherentes. Ambas células suspendidas y enlazadas, se colectaron y se volvieron a suspender con 500 µl de PBS para análisis de flujo citométrico como se coloca a continuación. Las señales de rastros se removieron por desconexión FSC-SSC. Análi si s de Fl ujo Ci tométrico del Contenido de ADN. Se agregó solución amortiguadora de lisado (Tritón X-100 al 0.5%, 0.2 µg/ml de Na2EDTA.2H20, y albúmina de suero de bovino al 1% en PBS) a las células peletizadas que se dejaron en hielo durante 15 minutos. Se agregó después metanol al 100% pre-enfriado a -20°C a la mezcla, que se centrifugó después a 300 xg durante 5 minutos. El sobrenadante se descartó y la célula peletizada se lavó con PBS. El peletizado lavado se manchó con solución de manchado de ADN (50 µg/ml de yoduro de propidio, y 5 kunidades/ml de RNasa A) durante 30 minutos a 4°C en la oscuridad. El contenido de ADN de cada célula se midió usando un citómetro de flujo FACSCalijur Becton Dikinson como se coloca a continuación.

Ci tometría de Flujo. Se analizaron células (10000) en un citómetro de flujo FACSCalibur Becton Dickinson usando un láser de ion de argón (15 m Watt) con un haz incidental a 488 nm. Para el ensayo de exclusión Pl, se colectó fluorescencia roja a través de un filtro de 585 nm y las señales de rastros de célula se removieron por desconexión FSC-SSC. Los datos se adquirieron y analizaron usando un programa FACS/CELLQuest en una computadora Power Macintosh 7600/120. Las células apoptóticas y las células en fases de ciclo específico, se determinaron por el programa ModFit LT. Los resultados de la citrometría de flujo se muestran en las Tablas 1 y 2 y en la Figura 2. La Tabla 1 da figuras para la permeabilidad de la membrana de célula de las células de hepatoma, después del tratamiento con paclitaxel y docetaxel. La Tabla 2 detalla el porcentaje de células apoptóticas (subGO/Gl) encontradas después del tratamiento con paclitaxel y docetaxel. La Figura 2 muestra un análisis de histograma de ADN detallando el efecto del paclitaxel y docetaxel en el progreso del ciclo celular.

TABLA 1. Permeabilidad de membrana de célula de células de hepatoma después del tratamiento con paclitaxel y docetaxel.

Los datos son la media ± error estándar de la media de las muestras duplicadas en al menos tres experimentos independientes. Las células se trataron con medicamentos durante 24-72 horas, y la permeabilidad de membrana se midió por análisis de flujo citométrico de exclusión de propidio en células de hepatoma viables. Los datos son el porcentaje de células con membrana de célula intacta como se compara con el control.

TABLA 2 Apoptosis inducida por Pacli taxel y Docetaxel .

Las Figuras son el % de cél ulas apoptóti cas (sub-GO/Gl) como se determina por la ci tometría de fl ujo . Análisis de Electroforesis de Fragmen tación de ADN. La evaluación de la fragmentación de ADN fue de conformidad con el método de Herrmann y colaboradores, Nucleics Acids Res., 22, 5506-5507, 1994. Brevemente, se trataron células HEP G2 (2X10 ) durante 72 horas con paclitaxel y docetaxel como se establece arriba, y se centrifugaron. Las células peletizadas asi obtenidas, se volvieron a suspender con solución amortiguadora de lisis NP-40 (NP-40 al 1% en EDTA 20 mM, Tris-HCl 50 mM, pH 7.5). Después de la lisis de las células durante algunos segundos, se colectaron los sobrenadantes (5 minutos a 1600 x g) . La extracción llltt-rt- i *il?tA?"-*-'*?t* **'*•'"'*• - ir1*4, *-'-"- se repitió con la misma solución amortiguadora de lisis.

Se agregó SDS (concentración final 1%) y RNasa (concentración final 2.5 µg/µl) a los sobrenadantes, y se incubaron durante 2 horas a 56°C seguido por la digestión con proteinasa K (2.5 µg/µl) durante 2 horas a 37°C.

Después, la mezcla se agregó al acetato de amonio 10 M antes de la precipitación del etanol al 100% durante 30 minutos a -20°C. El ADN se colectó por centrifugación (10 minutos a 12000 x g) seguido por electroforesis en gel de agarosa al 1.5%. Los resultados se muestran en la Figura 3. en la Figura 3, M es un marcador de 100 pares base. La banda 1 muestra un control medio. Las bandas 2 y 3 muestran los grupos medios de tratamiento de paclitaxel (0.1 y 1 µM) . Las bandas 4 y 5 muestran los grupos medios de tratamiento de docetaxel (0.1 y 1 µM) . Resultados . Estudio de Viabilidad de Célula . La Figura 1 muestra el efecto dependiente de la dosis del paclitaxel y docetaxel en la viabilidad de células en lineas de células de hepatoma (Hep G2, Hep 3B, HA22T/VGH y Hepa 1-56) . Como es evidente de la Figura 1, el docetaxel alcanza una viabilidad reducida a 0.01 y 0.1 µM en casi cada caso. m&um, i&mÍ jt í->"- ™ j- Ato, En las células Hep G2, la viabilidad celular muestra una tendencia a la reducción después de un tratamiento con paclitaxel o docetaxel. La viabilidad de las células Hep G2 fue de 61.81% y 39.45% de control para grupos de paclitaxel (10 µM) a 24 y 72 horas, respectivamente, para células Hep G2 tratadas con docetaxel, la reducción máxima de la viabilidad se observó a 1 µM de docetaxel, sin encontrar reducción adicional en la viabilidad a 10 µM de docetaxel. La viabilidad fue del 65.03% y 48.99% para células tratadas con docetaxel 1 µM a 24 y 72 horas, respectivamente . En las células Hep 3B es notable que la reducción importante de la viabilidad (37.06%) se observa después de un tratamiento con 0.01 µM de docetaxel durante 72 horas. En las células Hepa 1-6 tratadas con docetaxel, la citotoxicidad máxima (65.34% y 30.71%) se encontró en grupos de tratamiento con 1 µM de docetaxel a 24 y 72 horas, respectivamente. Ensayo de Exclusión de Yoduro de Propidio (Pl) . La Tabla 1 muestra que la permeabilidad de la membrana de células Hep G2 y células Hep 3B después del tratamiento con paclitaxel y docetaxel, fue dependiente de la dosis y el tiempo.

Para células HA22T/VGH, se observó menos incremento en la permeabilidad en la membrana después del tratamiento con paclitaxel (0.01-1 µM) durante 72 horas como se compara con el de grupos de docetaxel. Es de notar que solo el 55.44% de las células tuvieron membranas intactas después del tratamiento con 0.01 µM de docetacel durante 72 horas, en tanto que, después de la misma dosis de paclitaxcel, el 92.58 de las células tratadas tenia membranas intactas. Análisis de Ciclo Celular. Las Figuras 2, 2i,2?i y 2iii muestra que las células Hep G2 tratadas con 1 µM de paclitaxel durante 24 horas, resultan en un arresto obvio de la fase G2/M. se observan histogramas de ADN similares a 72 horas después de la exposición. Como se muestra en la Tabla 2, se encuentran células apoptóticas (sub-GO/Gl) después del tratamiento con 0.001 µM, 0.01 µM, 0.1 µM y 1 µM de docetaxel durante 24 horas con porcentajes apoptóticos de 31.02%, 45.24%, 38.77% y 28.33%, respectivamente. A las 72 horas después del tratamiento con docetaxel (0.001-1 µM) , los porcentajes apoptóticos fueron de 21.92%, 42.45%, 42.44% y 56.66%, respectivamente .

En las células Hep 3B, un tratamiento con 0.1 µm ó 1 µM de paclitaxel durante 24 horas, resulta en un arresto de G2/M y la incubación con 0.1 µM ó 1 µM de paclitaxel durante 72 horas, resulta en un incremento en los porcentajes de sub-GO/Gl hasta 38.37% ó 47.01%, respectivamente. En contraste, las células Hep 3B tratadas con 0.01 µM, 0.1 µM ó 1 µM de docetaxel durante 24 horas ó 72 horas, se elevan hasta niveles altos de poblaciones de sub-GO/Gl de 59.14%, 58.69% y 65.74% a 24 horas y 64.12%, 81.66% y 79.33% a 72 horas. En células HA22T/VGH, las concentraciones incrementadas de paclitaxel (0.001 µM hasta 1 µM) se correlacionan con el porcentaje elevado de células G2/M a 24 horas. No se observa población importante de sub-GO/Gl en grupos de tratamiento con 0.1 µM ó 1 µM de paclitaxel a 72 horas. En contraste, es importante que las células HA22T/VGH tratadas con 0.01 µM de docetaxel a 24 horas tengan un porcentaje mayor de sub G0/G1 (41.75%) que los grupos de docetaxel de 0.1 µM (18.61%) ó 1 µM (22.94%). Cuando las células se tratan con docetaxel durante 72 horas, se encuentran porcentajes importantes de sub G0/G1 en células HA22T/VGH tratadas con 0.01 µM (56.64%), 0.1 µM (58.61%) y 1 µM (60.98%) de docetaxel.

Id»-ta. d. *^ .»-*«**. ». . jiijfiHn - i • futrir-i ft Para células Hepa 1-6, el tratamiento con paclitaxel (0.01, 0.1 ó 1 µM) durante 24 horas, resulta en una formación incrementada de poblaciones de sub-GO/Gl (24.02%, 55.64% ó 64.38%, respectivamente), y se observa un arresto de la fase G2/M en grupos de tratamiento con 0.1 µM y 1 µM de paclitaxel. Cuando se tratan células Hepa 1-6 con 0.1 µM y 1 µM de paclitaxel durante 72 horas, la mayoría de las células mueren y no es obvio un perfil de ciclo celular. El tratamiento con docetaxel (0.01 µM, 0.1 µM y 1 µM) de células Hepa 1-6, resulta en la formación de células sub-GO/Gl (52.81%, 50.76% y 53.8% a 24 horas y 31.25%, 53.95% y 62.49% a 72 horas, respectivamente) . Análisi s de Fragmentación de ADN. La Figura 3 muestra que el tratamiento con paclitaxel (0.1 y 1 µM) y docetaxel (0.1 y 1 µM) induce la fragmentación del ADN en células Hep G2. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención. t A.UL.? ?* t to&üi . k t a¿ .. - .?+*~>~ ~ ^** — * - -*-^*«-mn

Claims (1)

1. Reivindicaciones . Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones . 1. Una composición para usarse en el tratamiento de carcinoma hepatocelular, caracterizada porque comprende, como ingrediente activo, el docetaxel o un hidrato del mismo. 2. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el hidrato es el trihidrato. 3. La composición de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizada porque es para administración parenteral. . La composición de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque es apropiada para administración intraperitoneal, subcutánea, intravenosa, intramuscular o intraesternal, y contiene desde 38 hasta 42 mg/ml del compuesto activo. 5. La composición de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque es apropiada para la administración por infusión, y contiene desde 0.1 hasta 11 mg/ml del compuesto activo. im\.m^mmm m Smmm\mmmi^?mW?ltmm\^. ^t.. ...i¿«.