ES2203626T3 - Preparacion de agentes de diagnostico. - Google Patents

Abstract

SE PREPARAN MICROCAPSULAS POR PULVERIZACION EN SECO DE UNA SOLUCION O DISPERSION DE UN MATERIAL FORMADO DE PARED. LOS MATERIALES FORMADORES DE PARED COMPRENDEN PROTEINAS TALES COMO ALBUMINA O GELATINA.

Description

Preparación de agentes de diagnóstico.

La presente invención se refiere a la preparación de agentes de diagnóstico que comprenden microcápsulas huecas de naturaleza proteica utilizadas para potenciar la visualización por ultrasonidos.

Es sabido desde hace algún tiempo que las burbujas de aire en el cuerpo pueden utilizarse para ecocardiografía. Con esta finalidad se pueden inyectar líquidos que contienen burbujas al torrente sanguíneo (ver Ophir et al. (1980) "Ultrasonic Imaging" 2, 67-77, que estabilizaba burbujas sobre una membrana de colágeno, los documentos US-A-4 446 442 (Schering) y EP-A-131 540 (Schering)) y los documentos EP-A-224934 y EP-A-324938 dan a conocer la utilización de burbujas preparadas por sonicación de una disolución de albúmina. Sin embargo, aparentemente no se puede controlar la distribución de tamaños de las burbujas y las burbujas desaparecen cuando se someten a la presión que se experimenta en el ventrículo izquierdo (Shapiro et al. (1990) J.Am. Coll. Cardiology, 16(7), 1603-1607).

Con la misma finalidad, el documento EP-A-52575 da a conocer partículas sólidas que llevan gas en su interior, siendo el gas liberado al torrente sanguíneo desde las partículas.

El documento EP 458 745 (Sintetica) da a conocer un procedimiento para preparar microglobos llenos de aire o gas mediante polimerización interfacial de polímeros sintéticos tales como polilactidas y poliglicolidas. El documento WO 91/12823 (Delta) da a conocer un procedimiento parecido que utiliza albúmina. Wheatley et al. (1990) Biomaterials 11, 713-717, da a conocer una gelación ionotrópica de alginato para formar microburbujas de un diámetro de más de 30 \mum. El documento WO-A-91/09629 da a conocer liposomas para utilizar como agentes de contraste para ultrasonidos.

Przyborowski et al. (1982), Eur. J. Nucl. Med. 7, 71-72, da a conocer la preparación de microesferas de albúmina de suero humano (HSA) mediante secado por pulverización, para el marcaje radiactivo y posterior utilización en la visualización escintigráfica del pulmón. No se mencionaba que las microesferas fuesen huecas, y cuando los presenten inventores repitieron el trabajo, únicamente prepararon microesféras sólidas. A menos que fuesen huecas, éstas partículas no son apropiadas para ecocardiografía. Además, en el procedimiento de Przyborowski et al. fue necesario eliminar la albúmina no desnaturalizada de las microesferas, y aparentemente se obtuvo un amplio intervalo de tamaños de microesferas, ya que resultó necesaria una etapa adicional de tamizado.

El artículo de Przyborowski et al. se refiere a dos métodos que se habían dado a conocer previamente para la obtención de partículas de albúmina para escintigrafía de pulmón. Aldrich y Johnston (1974), Int. J. Appl. Rad. Isot. 25, 15-18, dan a conocer la utilización de un disco giratorio para generar partículas de 3-70 \mum de diámetro que seguidamente se desnaturalizan en aceite caliente. El aceite se elimina y las partículas se marcan con radioisótopos. Raju et al. (1978), Isotopenpraxis 14 (2), 57-61, utilizaron el mismo procedimiento del disco giratorio pero desnaturalizaron la albúmina mediante un simple calentamiento de las partículas. En ningún caso se mencionaron las microcápsulas huecas.

Según la presente invención, un procedimiento para la preparación de microcápsulas huecas, comprende la atomización de una disolución o dispersión de una proteína formadora de pared o un material polisacarídico en un vehículo líquido para convertirla en un gas, para obtener las microcápsulas huecas mediante evaporación del vehículo líquido, esencialmente sin reducir la solubilidad en agua de por lo menos el exterior de las microcápsulas.

Según un aspecto adicional de la invención, las microcápsulas que se pueden obtener mediante un procedimiento de la invención, presentan un tamaño tal que más del 30% presentan un diámetro dentro del intervalo de 2 \mum y por lo menos el 90% presentan un diámetro comprendido entre 1 y 8 \mum.

El material formador de pared y las condiciones del procedimiento se deben escoger de forma que el producto sea suficientemente no tóxico y no inmunogénico durante el uso. El material formador de pared puede ser hidrófilo y biodegradable. Preferentemente, es una proteína, por ejemplo las globulinas y preferentemente, gelatina, colágeno y albúminas del suero. Preferentemente tales proteínas son de origen humano (es decir, derivadas a partir de humanos o con una estructura que se corresponde con la de la proteína humana). Más preferentemente, es albúmina del suero humano (HA) derivada a partir de donaciones de sangre o, idealmente, a partir de la fermentación de microorganismos (incluyendo líneas celulares) que se han transformado o transfectado para expresar HA.

Las técnicas para expresar HA (cuyo término incluye análogos y fragmentos de la albúmina humana, por ejemplo los del documento EP-A-322094, y polímeros de la albúmina monomérica) se dan a conocer en, por ejemplo, los documentos EP-A-201239 y EP-A-286424. Los "análogos y fragmentos" de la HA incluyen todos los polipéptidos (i) que son capaces de formar una microcápsula en el procedimiento de la invención y (ii) en los que una región continua de por lo menos el 50% (preferentemente por lo menos el 75%, 80%, 90% ó 95%) de la secuencia de aminoácidos es homóloga en por lo menos un 80% (preferentemente por lo menos homóloga en el 90%, 95% o 99%) respecto a una región continua de por lo menos el 50% (preferentemente el 75%, 80%, 90% o 95%) de la albúmina humana. Es particularmente preferida la HA que se ha preparado mediante técnicas de ADN recombinante. Así, la HA se puede preparar expresando en levadura o en cualquier otro microorganismo una secuencia nucleotídica que codifica para la HA y purificando el producto, tal como es conocido en la técnica. Tal material no presenta los ácidos grasos asociados con el material derivado de suero. Preferentemente, la HA se encuentra sustancialmente exenta de ácidos grasos; es decir, contiene menos del 1% del nivel de ácidos grasos encontrado en el material derivado de suero. Preferentemente, el ácido graso es indetectable en la HA.

En la siguiente descripción de unas formas de realización preferidas, el término "proteína" se utiliza porque es lo que prefieren los presentes inventores pero debe entenderse que pueden utilizarse otros materiales biocompatibles formadores de pared, tal como se discute anteriormente.

La disolución o dispersión de proteína presenta preferentemente entre 0,1 y 50% peso/volumen de proteína, más preferentemente entre alrededor de 5,0 y 25%, particularmente cuando la proteína es albúmina. Lo óptimo es alrededor del 20%. Se pueden utilizar mezclas de materiales formadores de pared, en cuyo caso los porcentajes en las dos últimas frases se refieren al contenido total de material formador de pared.

La preparación a pulverizar puede contener otras sustancias distintas del material formador de pared y del disolvente o vehículo líquido. Así, la fase acuosa puede contener entre 1 y 20% en peso de compuestos hidrófilos solubles en agua tales como azúcares y polímeros como estabilizantes, p. ej. polivinil alcohol (PVA), polivinilpirrolidona (PVP), polietilenglicol (PEG), gelatina, ácido poliglutámico y polisacáridos tales como almidón, dextrano, agar, xantano y similares. Se pueden utilizar fases acuosas similares como vehículo líquido en el que se suspende el producto de microesfera final antes del uso. Se pueden utilizar emulsionantes (0,1-5% en peso) incluyendo los emulsionantes más aceptables fisiológicamente, por ejemplo lecitina de huevo o lecitina de soja, o lecitinas sintéticas tales como lecitinas sintéticas saturadas, por ejemplo, dimiristoil fosfatidil colina, dipalmitoil fosfatidil colina o diestearoil fosfatidil colina o lecitinas sintéticas insaturadas, tales como dioleil fosfatidil colina o dilinoleil fosfatidil colina. Los emulsionantes también incluyen surfactantes tales como ácidos grasos libres, ésteres de ácidos grasos con compuestos polioxialquileno tales como polioxipropilenglicol y polioxietilenglicol; éteres de alcoholes grasos con polioxialquilenglicoles; ésteres de ácidos grasos con sorbitan polioxialquilado; jabones; estearato de glicerol-polialquileno; ricinoleato de glicerol-polioxietileno; homo- y copolímeros de polialquilenglicoles; aceite de soja y aceite de castor polietoxilados así como también derivados hidrogenados; éteres y ésteres de la sacarosa u otros carbohidratos con ácidos grasos, alcoholes grasos, pudiendo estar éstos opcionalmente polioxialquilados; mono-, di- y triglicéridos de ácidos grasos saturados o insaturados, glicéridos o aceite de soja y sacarosa.

Se pueden incorporar aditivos en la pared de las microesferas para modificar las propiedades físicas tales como dispersibilidad, elasticidad y permeabilidad al agua.

De entre los aditivos útiles, se pueden citar los compuestos que pueden "hidrofobizar" la pared para hacer decrecer la permeabilidad al agua, tales como grasas, ceras e hidrocarburos de alto peso molecular. Los aditivos que hacen mejorar la dispersibilidad de las microesferas en el vehículo líquido inyectable son compuestos amfipáticos tales como los fosfolípidos; éstos compuestos también hacen incrementar la permeabilidad al agua y la velocidad de biodegradibilidad.

Los aditivos que hacen incrementar la elasticidad de la pared son los plastificantes tales como miristato de isopropilo y similares. Además, aditivos muy útiles están constituidos por polímeros semejantes a los de la propia pared pero con peso molecular relativamente bajo. Por ejemplo, las propiedades de la pared se pueden modificar ventajosamente (suavidad y biodegrabilidad potenciadas) incorporando poliglicolidas o polilactidas de bajo peso molecular (entre 1000 y 15.000 Dalton) como aditivos. Además el polietilenglicol de peso molecular de moderado a bajo (p. ej. PEG 2000) es un aditivo útil como suavizante.

La cantidad de aditivos a incorporar en la pared es extremadamente variable y depende de las necesidades. En algunos casos no se utiliza ningún aditivo en absoluto; en otros casos, es posible utilizar cantidades de aditivos que pueden alcanzar aproximadamente el 20% en peso de la pared.

La disolución o dispersión de proteína (preferentemente disolución), a la que en lo sucesivo nos referiremos como "preparación de proteína", se atomiza y se seca por pulverización mediante cualquier procedimiento apropiado que resulte en microcápsulas discretas con un diámetro comprendido entre 1,00 y 50,0 \mum. Estas cifras se refieren a por lo menos el 90% de la población de microcápsulas, midiendo el diámetro con un "Coulter Master Sizer II". El término "microcápsulas" significa partículas huecas que encierran un espacio, cuyo espacio se llena con un gas o un vapor pero no con materiales sólidos. No se forman partículas de formas muy diferentes que se parecen a la venta de productos de confitería comercializados en el Reino Unido como "Maltesers" (Marca registrada). No es necesario que el espacio se encuentre totalmente cerrado (aunque esto se prefiera) y no es necesario que las microcápsulas sean precisamente esféricas, aunque generalmente son esféricas. Si las microcápsulas no son esféricas, los diámetros citados anteriormente se refieren al diámetro de una microcápsula esférica correspondiente que tenga la misma masa y encierre el mismo volumen de espacio hueco que la microcápsula no esférica.

La atomización comprende la formación de un aerosol de la preparación de proteína, por ejemplo, forzando la preparación a través de por lo menos un orificio bajo presión, o utilizando un atomizador centrífugo en una cámara de aire caliente u otro gas inerte. La cámara debe ser lo suficientemente grande como para que las gotas mayores eyectadas no choquen contra las paredes antes del secado. El gas o vapor en la cámara es limpio (es decir, preferentemente estéril y exento de pirógenos) y no tóxico cuando se administra al torrente sanguíneo en las cantidades concomitantes con la administración de las microcápsulas en ecocardiografía. La velocidad de evaporación del líquido de la preparación de proteína debe ser lo suficientemente elevada para formar microcápsulas huecas pero no tan elevada como para que revienten las microcápsulas. La velocidad de evaporación se puede controlar variando la velocidad de la corriente del gas, la concentración de proteína en la preparación de proteína, la naturaleza del vehículo líquido, la velocidad de alimentación de la disolución y, lo más importante, la temperatura del gas encontrada por el aerosol. Con una concentración de 15-25% de albúmina en agua, una temperatura del gas en la entrada de por lo menos alrededor de 100ºC, preferentemente por lo menos 110ºC, generalmente es suficiente para asegurar que las cápsulas sean huecas y la temperatura puede ser de hasta 250ºC sin que las cápsulas revienten. Es óptima una temperatura de alrededor de 180-240ºC, preferentemente alrededor de 210-230ºC y la más preferida alrededor de 220ºC, por lo menos para la albúmina. Puesto que la temperatura del gas encontrada por el aerosol también dependerá de la velocidad a la que se suministra el aerosol y del contenido de líquido de la preparación de proteína, se puede registrar la temperatura en la salida para asegurar una temperatura adecuada en la cámara. Se ha constatado que resulta apropiada una temperatura de salida de 40-150ºC. Sin embargo, aparte de este factor, se ha constatado que el control de la velocidad del flujo no es tan útil como el control de los otros parámetros.

Típicamente las microcápsulas comprenden un 96-98% de HA monomérica y presentan una vida in vivo limitada para la visualización por ultrasonidos. Sin embargo, éstas microcápsulas se pueden utilizar para la visualización por ultrasonidos, o se pueden almacenar o transportar antes de realizar la segunda etapa del procedimiento de dos etapas descrito en la solicitud parental.

Se ha observado que el procedimiento de la invención se puede controlar para obtener microesferas con las características deseadas. Así, se puede variar la presión a la que la disolución de proteína se suministra la boquilla de pulverización, por ejemplo desde 1,0-10,0 x 10^{5} Pa, preferentemente 2,0-6,0 x 10^{5} Pa, y la más preferida alrededor de 5 x 10^{5} Pa. Se pueden variar otros parámetros tal como se expone anteriormente y a continuación. De esta forma, se pueden obtener microesferas nuevas.

Otro aspecto de la invención proporciona microesferas huecas en las que más del 30%, preferentemente más del 40%, 50%, o 60% de las microesferas presentan un diámetro comprendido en un intervalo de 2 \mum y por lo menos el 90%, preferentemente por lo menos el 95% o 99%, presentan un diámetro comprendido en el intervalo entre 1,0 y 8,0 \mum.

Así el intervalo intercuartílico puede ser de 2 \mum, con un diámetro medio de 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0 ó 6,5 \mum.

Así, por lo menos el 30%, 40%, 50% o 60% de las microesferas pueden presentar diámetros comprendidos en el intervalo entre 1,5 - 3,5 \mum, 2,0-4,0 \mum, 3,0-5,0 \mum, 4,0-6,0 \mum, 5,0-7,0 \mum o 6,0-8,0 \mum. Preferentemente dicho porcentaje de microesferas presentan diámetros dentro de un intervalo de 1 \mum, tal como entre 1,5-2,5 \mum, 2,0-3,0 \mum, 3,0-4,0 \mum, 4,0-5,0 \mum, 5,0-6,0 \mum, 6,0-7,0 \mum o 7,0-8,0 \mum.

Otro aspecto de la presente invención proporciona microesferas huecas con paredes de naturaleza proteica en las que por lo menos el 90%, preferentemente por lo menos el 95% ó 99% de las microesferas presentan un diámetro comprendido en el intervalo entre 1,0-8,0 \mum; por lo menos el 90%, preferentemente por lo menos el 95% ó 99% de las microesferas presentan un grosor de pared de 40-500 nm, preferentemente de 100-500 nm.

A continuación se describirán los aspectos preferidos de la presente invención mediante ejemplos y haciendo referencia a la figura 1, que es una vista en perspectiva de un corte parcial desde el frente y un lado de un aparato de secado por pulverización apropiado para el procedimiento de la invención.

Ejemplo 1

Un secador por pulverización apropiado (figura 1) está comercializado por A/S Niro Atomizer, Soeborg, Dinamarca, bajo la designación comercial de "Mobile Minor". Los detalles de su construcción se proporcionan en esta memoria justo antes de las reivindicaciones. El secador comprende un atomizador centrífugo (tipo M-02/B Minor), que funciona con una turbina de aire a una presión del aire de como mínimo 4 bares y hasta un máximo de 6 bares. A 6 bares se alcanza una velocidad de la rueda del atomizador de aproximadamente 33.000 rpm. Mediante una válvula localizada en el panel del instrumento se abre o se cierra la entrada de aire comprimido al atomizador. El consumo máximo de aire comprimido del atomizador es de 17 Nm^{3}/h a una presión de 6 bares. Todas las partes que están en contacto con la materia prima líquida y el polvo están fabricadas de acero inoxidable AISI 316, excepto el tubo de alimentación de la bomba y la rueda del atomizador, que están fabricados de acero inoxidable AISI 329, a fin de resistir una fuerza centrífuga elevada.

La cámara de secado tiene un interior fabricado de acero inoxidable AISI 316, bien aislado con Rockwool, y un exterior cubierto con una lámina de acero medio. La cámara de secado está provista de una luz lateral y un cristal de observación para la inspección durante el funcionamiento. El techo de la cámara de secado tiene el interior fabricado de acero inoxidable AISI 316 y el exterior de acero inoxidable AISI 304.

Un dispensador de aire fabricado de acero inoxidable AISI 304 se utiliza para la distribución del aire en la cámara de secado con la finalidad de lograr el mejor efecto posible de secado. Un conducto de aire, fabricado de acero inoxidable AISI 316, proporciona el transporte lateral del aire expulsado y el polvo hacia el ciclón, que se fabrica de acero inoxidable AISI 316 y se diseña para separar el polvo del aire.

Una válvula de cierre de tipo válvula de mariposa, también fabricada de acero inoxidable AISI 316 y que presenta una junta de caucho de silicona, se utiliza para descargar el polvo bajo el ciclón en un recipiente de vidrio que recoge el polvo colocado firmemente bajo el ciclón mediante un dispositivo de resorte.

Un ventilador fabricado de silumin, con un motor de jaula de ardilla de 3 fases, 0,25 kW, y una correa de transmisión en V con goma, hace pasar el aire y el polvo a través de la cámara de secado y el ciclón.

Un calentador de aire calienta el aire de secado mediante electricidad (consumo total 7,5 kWh/h, infinitamente variable) y puede dar temperaturas de aire de entrada de hasta aproximadamente 350ºC, aunque generalmente esta temperatura es demasiado elevada para preparar las microcápsulas de la invención.

Se puede añadir un equipo de atomización de boquilla de dos fluidos, fabricado de acero inoxidable AISI 316, que consiste en un conducto de entrada con soporte de boquilla y boquilla, a colocar en el techo de la cámara de secado. El equipo incluye un separador de aceite/agua, una válvula reductora y un indicador de presión para aire comprimido en la boquilla de dos fluidos. Consumo de aire comprimido: 8-15 kg/h a una presión de 0,5-2,0 bares (0,5-2,0 x 10^{5} Pa).

Una bomba de alimentación apropiada para el transporte de la preparación de materia prima formadora de pared al dispositivo atomizador es una bomba peristáltica. La bomba está provista de un motor (1 x 220V, 50 Hz, 0,18 kW) y un engranaje continuamente variable para el ajuste manual. El conducto de alimentación fabricado de un manguito de silicona conduce desde el tanque de alimentación (suministro local) a través de la bomba de alimentación hasta el dispositivo de atomización.

Un filtro absoluto de aire, que consiste en un prefiltro, un cuerpo del filtro de acero inoxidable y un filtro absoluto de aire, se utiliza para el tratamiento del aire que entra para convertirlo en completamente limpio.

Una disolución al 20% de rHA estéril exenta de pirógeno en agua exenta de pirógeno (apropiada para la inyección) se bombeó hasta la boquilla de un atomizador de boquilla de dos fluidos montado en la unidad comercial del secador por pulverización descrita anteriormente. La velocidad de la bomba peristáltica se mantuvo a aproximadamente 10 ml/minuto de forma que con una temperatura del aire en la entrada de 220ºC la temperatura del aire en la salida se mantenía a 95ºC.

El aire comprimido se suministró a la boquilla de atomización de dos fluidos a 2,0-6,0 bares (2,0-6,0 x 10^{5}Pa). En este intervalo se obtienen microcápsulas con un tamaño medio de 4,25-6,2 \mum.

Típicamente, un incremento en el tamaño medio (al reducir la presión de atomización) conduce a un incremento de la cantidad de microcápsulas con un tamaño por encima de 10 \mum (ver Tabla 1)

TABLA 1 Efecto de la presión de atomización sobre la frecuencia de microcápsulas con un diámetro de más de 10 \mum.

Presión de atomización	% Frecuencia de más de 10 \mum
(x 10^{5} Pa)
6,0	0,8
5,0	0,3
3,5	6,6
2,5	8,6
2,0	13,1

Ejemplo 2

Se repitió el procedimiento del ejemplo 1 pero con las siguientes diferencias: se utilizó un atomizador centrífugo en lugar de un boquilla de dos fluidos; la temperatura de entrada era de 150ºC (manteniéndose la temperatura del aire en la salida a 105ºC); y el aire comprimido se suministró a la boquilla a 1,0-6,0 x 10^{5} Pa. La rueda giraba a 20-40.000 rpm y las gotitas liberadas, y por consiguiente las microcápsulas, con un diámetro medio en el intervalo comprendido entre 1,0 y 8,0 \mum.

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Detalles adicionales sobre la construcción del atomizador

En la figura 1, con el número 1 se designa el dispositivo de alimentación. 2 es el dispensador de aire del techo que asegura un control eficaz del recorrido de la corriente de aire. El aire arremolinado se dirige alrededor del atomizador de disco giratorio. 3 es un atomizador giratorio o atomizador de boquilla. 4 muestra un sistema de conducto interconectador de acero inoxidable que se puede separar fácilmente para limpiarlo. 5 son las escaleras para acceder a la parte superior de la cámara. 6 es el interruptor para una válvula de aire para activar un sistema neumático de elevación cuando se levanta la tapa de la cámara. 7 es un ciclón de acero inoxidable altamente eficaz en el que se separan el polvo del aire de secado expulsado. 8 es un recipiente de vidrio en el que se recoge el polvo. 9 es un panel del instrumento localizado en el centro. 10 es un ventilador de expulsión centrífuga con un motor de 3 fases. 11 es un regulador para controlar la corriente de aire y 12 es un calentador eléctrico de aire que proporciona temperaturas del aire de secado de hasta 350ºC. La temperatura del aire de secado se puede ajustar continuamente utilizando un interruptor temporizado del porcentaje. El consumo máximo de energía es de 7,5 kW.

Capacidad evaporativa

Aire de secado	Temperatura del	Temperatura del	Capacidad
	aire en la entrada	aire en la salida	evaporativa
85 kg/h	150ºC	80ºC	1,3 kg/h
85 kg/h	170ºC	85ºC	1,7 kg/h
80 kg/h	200ºC	90ºC	2,5 kg/h
80 kg/h	240ºC	90ºC	3,4 kg/h
75 kg/h	350ºC	90ºC	7,0 kg/h

Peso y dimensión

Peso	280 kgs
Longitud	1800 mm
Altura	2200 mm
Anchura	925 mm

Energía

La unidad solo puede funcionar con un suministro de energía de 3 fases (50 ó 60 Hz) a voltajes alternativos de 440, 415, 400, 380, 220, 200 V.

Todas las partes que están en contacto con el líquido o el producto están fabricadas de acero inoxidable AISI 316 resistente a ácidos.

Claims (9)

1. Procedimiento para la preparación de microcápsulas huecas, que comprende la atomización de una disolución o dispersión de una proteína formadora de pared o un material polisacarídico en un vehículo líquido para convertirla en un gas, para obtener las microcápsulas huecas mediante evaporación del vehículo líquido, esencialmente sin reducir la solubilidad en agua de por lo menos el exterior de las microcápsulas.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el material formador de pared es una proteína.

3. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que la proteína es colágeno, gelatina o albúmina del suero.

4. Procedimiento según la reivindicación 3, en el que la proteína es albúmina del suero humano, o un análogo o fragmento de la misma, preparado mediante técnicas de ADN recombinante.

5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en el que la disolución o dispersión comprende entre un 10 y un 30% de la proteína.

6. Microcápsulas que se pueden obtener mediante un procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, de las cuales más del 30% presentan un diámetro comprendido en un intervalo de 2 \mum y por lo menos el 90% presentan un diámetro comprendido entre 1 y 8 \mum.

7. Microcápsulas según la reivindicación 6, de proteína, que presentan un diámetro de 0,01-50,0 \mum.

8. Microcápsulas según las reivindicaciones 6 ó 7, que comprenden el 96-98% de proteína monomérica.

9. Microcápsulas según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en las que el intervalo intercuartílico de diámetros es de 2 \mum o inferior y el diámetro medio está comprendido entre 2 y 8 \mum.