ES2278925T3 - Uso de compuestos estrogenicos en combinacion con compuestos progestogenicos en terapias de sustitucion hormonal. - Google Patents

Abstract

Uso de un compuesto estrogénico seleccionado del grupo consistente en sustancias representadas por la siguiente fórmula: (Ver fórmula) en cuya fórmula R1, R2, R3, R4 independientemente son un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxilo o un grupo alkoxi con 1-5 átomos de carbono; cada uno de los R5, R6, R7 es un grupo hidroxi; y no más de 3 de los R1, R2, R3, R4 son átomos de hidrógeno; precursores capaces de liberar una sustancia según la fórmula anteriormente mencionada cuando son utilizados en el presente método, dichos precursores siendo derivados de sustancias representadas por la fórmula, en la que el átomo de hidrógeno de al menos uno de los grupos hidroxilo en dicha fórmula ha sido sustituido por un radical acilo de un ácido carboxílico, sulfónico o sulfámico hidrocarbonado de 1 a 25 átomos de carbono, un grupo tetrahidrofuranilo; tetrahidropirano; o una cadena recta o ramificada de un residuo glicosídico conteniendo 1-20 unidades glicosídicas por residuo; y mezclas de una o varias de las sustancias y/o de los precursores citados anteriormente; en la fabricación de una composición farmacéutica usada en un método de sustitución hormonal en mamíferos, dicho método comprendiendo la administración oral de dicho compuesto estrogénico y de un compuesto progestogénico a un mamífero en una cantidad eficaz para prevenir y tratar síntomas de hipoestrogenismo.

Description

Uso de compuestos estrogénicos en combinación con compuestos progestogénicos en terapias de sustitución hormonal.

Campo técnico de la invención

La presente invención se refiere al uso de un compuesto estrogénico en la producción de una composición farmacéutica para el uso en un método de sustitución hormonal en mamíferos. Más particularmente la invención se refiere a un método de sustitución hormonal que comprende la administración oral a un mamífero de una combinación de un compuesto estrogénico y de un compuesto progestogénico en una cantidad eficaz para prevenir o tratar síntomas de hipoestrogenismo.

Antecedentes de la invención

En una terapia de sustitución hormonal (HRT), a veces también definida como terapia de sustitución de estrógenos, los estrógenos son administrados para prevenir o tratar síntomas causados por una deficiencia estrogénica o hipoestrogenismo. El hipoestrogenismo puede producirse tanto en hembras como en machos, y pueden causar trastornos y dolencias tales como la osteoporosis (pérdida de masa ósea), arteriosclerosis, síntomas climatéricos como sofocos, sudores, atrofia urogenital, trastornos del humor, insomnio, palpitaciones. La deficiencia estrogénica también ha sido asociada con trastornos cognitivos y la enfermedad de Alzheimer.

El hipoestrogenismo, y en particular hipoestrogenismo crónico, es observado a menudo en mujeres perimenopáusicas y postmenopáusicas. No obstante, esto puede ser debido también al hipogonadismo o a una castración, así como a una insuficiencia ovárica primaria, a un tratamiento contra el cáncer de mama por ejemplo con un inhibidor de aromatasa y un tratamiento hormonal análogo de liberación de gonadotropina para enfermedades ginecológicas benignas como la endometriosis, adenomiosis, fibroides uterinos (leiomiomas), dismenorrea, menorragia y
metrorrhagia.

La HRT emplea la administración continua de un estrógeno en cantidades eficaces durante períodos de tiempo prolongados. La administración de estrógenos se ha asociado, no obstante, a una proliferación endométrica en mujeres y actualmente se acepta ampliamente el hecho de que una terapia "no opuesta" con estrógenos aumenta sustancialmente el riesgo de sufrir cáncer endométrico (Cushing et al., 1998. Obstet. Gynecol. 91,35-39; Tavani et al., 1999. Drugs Aging, 14, 347-357). También se ha verificado un aumento significante de cáncer de mama con el uso a largo plazo (10-15 años) de una terapia estrogénica (Tavani et al., 1999. Drugs Aging, 14,347-357; Pike et al., 2000. Steroids, 65, 659-664).

Para contrarrestar los efectos negativos de una terapia estrogénica no opuesta, se aplica comúnmente un tratamiento progestogénico adjunto en la actualidad. El tratamiento de hipoestrogenismo por administración de una combinación de agentes estrogénicos y progestogénicos está descrito en las patentes US 5,827,843 y EP-A-O 136 011. Se considera que la administración regular de progestógenos inhibe la estimulación estrogénica continua del endometrio a través de un efecto antiproliferativo y produce la reducción de la incidencia de carcinoma endométrico en mujeres postmenopáusicas que reciben una terapia de sustitución estrogénica (Beral et al., 1999. J. Epidemiol. Bioestat., 4, 191-210). Tal tratamiento adjunto, generalmente mediante el uso de progestógenos sintéticos, es proporcionado sea en regímenes continuos combinados con estrógeno, o añadido de forma consecutiva, normalmente durante aproximadamente 14 días cada mes, a un tratamiento estrogénico continuo.

Los estrógenos andógenos y exógenos cumplen funciones nerviosas centrales y metabólicas importantes en el organismo femenino: unos niveles estrogénicos normales contribuyen de forma decisiva al bienestar de una mujer. A pesar del uso difundido de estrógenos en métodos de HRT, sigue habiendo problemas sin resolver. Los estrógenos conocidos, en particular los estrógenos biogénicos (es decir estrógenos presentes de forma natural en el cuerpo humano), muestran serias deficiencias farmacocinéticas. Los estrógenos biogénicos como el estradiol, estrona, sulfato de estrona, ésteres de estradiol y de estriol son biodisponibles únicamente en un grado muy bajo cuando se toman oralmente. Este grado puede variar tanto de una persona a otra, que no se puede recomendar ninguna dosificación general. La eliminación rápida de estos estrógenos de la sangre es otro problema relacionado. Por ejemplo, la vida media del estrógeno biogénico humano principal 17\beta-estradiol es de aproximadamente 1 hora. El resultado es que, entre periodos de administración separados (diarios), los niveles de suero sanguíneo de tales estrógenos biogénicos tienden a fluctuar considerablemente. De esta manera, poco después de la administración, la concentración de suero es en general varias veces superior a la concentración óptima. Además, si el periodo de administración siguiente se retrasa, las concentraciones de suero disminuirán rápidamente hasta un nivel en el que el estrógeno ya no será fisiológicamente activo.

El esteroide estrogénico sintéticamente alterado más importante es el 17\alpha-etinil estradiol (EE). Este estrógeno es usado pocas veces en métodos de HRT ya que la administración prolongada de EE ha sido asociada a un aumento del riesgo de tromboembolia, que se considera particularmente perjudicial en mujeres menopáusicas y postmenopáusicas. Aparte del EE, en algunos casos se ha empleado mestranol; el mestranol es un "profármaco" que se metaboliza en EE en el organismo. Cuando se aplica oralmente en seres humanos, el EE posee una biodisponibilidad mucho mejor que los estrógenos biogénicos mencionados anteriormente, pero su biodisponibilidad oral varía extremadamente de un individuo a otro. Varios autores lo han señalado así como el hecho de que las concentraciones en la sangre resultaban ser altamente fluctuantes después de la administración oral de esta sustancia.

Además de los problemas farmacocinéticos, los estrógenos conocidos también implican deficiencias farmacodinámicas. Después de una resorción en el lumen intestinal, los ingredientes activos administrados oralmente entran en el organismo a través del hígado. Este hecho tiene una importancia específica para agentes estrogénicos puesto que el hígado es un órgano hacia el que se dirigen los estrógenos; una ingesta oral de estrógenos produce fuertes efectos estrogénicos en el hígado. La actividad de secreción que es controlada por los estrógenos en el hígado humano incluye la síntesis incrementada de proteínas de transporte CBG, SHBG, TBG, varios factores que son importantes para la fisiología de coagulación de la sangre, y lipoproteínas. Si los estrógenos biogénicos son introducidos en el organismo femenino al mismo tiempo que se impide su paso a través del hígado (por ejemplo mediante aplicación transdérmica), las funciones del hígado mencionadas permanecen ampliamente invariadas. Las dosis equivalentes terapéuticamente de estrógenos biogénicos, cuando son administradas oralmente, implican respuestas evidentes de parámetros hepáticos, tales como un aumento de SHBG, CBG, angiotensinogena y HDL (alta densidad lipoproteínica). Estos efectos hepáticos de estrógenos son observados también con el uso de formulaciones estrogénicas equinas (llamadas también estrógenos conjugados). El etinilestradiol y dietilestilbestrol (DES) tienen una estrogenicidad hepática incluso superior. Elger et al., J. Steroid Biochem. Molec. Biol. (1995), 55(3/4), 395-403, han revelado que el EE o DES tienen una estrogenicidad hepatocelular mucho más elevada que la estrogenicidad sistémica: en relación con una actividad inhibitoria de secreción de FSH estos estrógenos son 4 a 18 veces más activos en el hígado que el sulfato de
estrona.

Los déficits mencionados anteriormente tienen una importancia clínica considerable cuando se aplican estrógenos biogénicos y sintéticos comúnmente conocidos. Consecuentemente sigue existiendo la necesidad de producir estrógenos que no muestren estos déficits y que puedan ser administrados oralmente de forma adecuada en métodos de HRT para sustituir eficazmente la secreción ovárica endógena de estradiol, es decir para tratar o prevenir síntomas de hipoestrogenismo.

Resumen de la invención

Los inventores han descubierto inesperadamente que estos objetivos son alcanzados mediante unas sustancias estrogénicas representadas por la siguiente fórmula

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fórmula en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} independientemente son un átomo de hidrógeno, un grupo hidróxilo o un grupo alcoxi con 1-5 átomos de carbono; cada uno de los R_{5}, R_{6}, R_{7} es un grupo hidróxilo; y un máximo de 3 de los R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} son átomos de hidrógeno.

Un grupo conocido y representativo de estas sustancias estrogénicas es 1,3,5(10)-estratrieno-3,15\alpha,16\alpha,17\beta-tetrol, también conocido por los nombres de estetrol, oestetrol y 15\alpha-hidroxiestriol. El estetrol es un estrógeno que es producido por el hígado fetal durante el embarazo humano. Los niveles de estetrol no conjugado en el plasma materno alcanzan un valor máximo de aproximadamente 1,2 ng/ml al término del embarazo y son aproximadamente 12 veces superiores en el plasma fetal que en el materno (Tulchinsky et al., 1975. J. Clin. Endocrinol. Metab., 40, 560-
567).

En 1970, Fishman et al., "Fate of 15\alpha-hydroxyestriol-^{3}H in Adult Man", J Clin Endocrinol Metab (1970) 31, 436- 438, revelaron los resultados de un estudio donde se administró tritio marcado 15\alpha-hidroxiestriol (estetrol) por vía intravenosa a dos mujeres adultas. Se descubrió que el estetrol era rápida y completamente excretado en la orina como el glucosiduronato y que no se producía prácticamente ningún metabolismo excepto la conjugación.

Entre 1975 y 1985, varios investigadores han investigado las propiedades del estetrol y revelado su potencia estrogénica y actividad uterotrófica. Las publicaciones más pertinentes que aparecieron durante este periodo son mencionadas a continuación:

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Levine et al., 1984. Efectos vasculares uterinos de estetrol en ovejas no preñadas. Am. J. Obstet. Gynecol., 148:73, 735-738: "Cuando es administrado por intravenosa en ovejas no preñadas, el estetrol es 15 a 30 veces menos potente que el estriol y 17\beta-estradiol en una vasodilación uterina".

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Jozan et Al., 1981. Los diferentes efectos del estradiol, estriol, estetrol y estrona en células de cáncer de mama humano (MCF-7) en un cultivo de tejido a largo plazo. Acta Endocrinologica, 98, 73-80: "La potencia agonistica de estetrol es el 2% de la magnitud observada durante la proliferación de una celula in vitro de 17\beta-estradiol".

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Holinka et al., 1980. Comparación de los efectos del estetrol y tamoxifeno con los de estriol y estradiol en el útero de rata inmadura. Biol. Reprod. 22, 913-926: "El estetrol administrado subcutáneamente tiene una actividad uterotrófica muy débil y se considera menos potente que 17\beta-estradiol y estriol".

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Holinka et al., 1979. Efectos in vivo del estetrol en el útero de rata inmadura. Biol. Reprod. 20, 242-246: "El estetrol administrado subcutáneamente tiene una actividad uterotrófica muy débil y se considera menos potente que 17\beta-estradiol y estriol".

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Tseng et al., 1978. Heterogeneidad de sitios de unión de estradiol saturables en núcleos de endometrio humano. Estetrol studies. J. Steroid Biochem. 9, 1145-1148: "La unión relativa de receptores de estetrol con receptores de estrógeno en el endometrio humano es el 1,5% de 17\beta-estradiol".

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Martucci et al., 1977. Dirección del metabolismo de estradiol como control de su actividad hormonal de acción uterotrófica de metabolitos del estradiol. Endocrin. 101, 1709-1715: "La administración continua de estetrol desde un depósito subcutáneo expone una actividad uterotrófica muy débil y es considerablemente menos potente que el 17\beta-estradiol y estriol".

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Tseng et al., 1976. Competición de estetrol y etinilestradiol con el estradiol para una unión nuclear en un endometrio humano. J. Steroid Biochem. 7, 817-822: "La unión constante relativa de estetrol con el receptor de estrogeno en el endometrio humano es el 6,25% comparado con el 17\beta-estradiol (100%)".

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Martucci et al., 1976. Unión de receptores de estrógeno uterinos de catecolestrogenos y de estetrol (1,3,5(10)-estratrieno-3,15alfa,16alfa, 17beta-tetrol). Steroids, 27, 325-333: "La afinidad de unión relativa del estetrol con un receptor estrogeno citosol uterino de rata es el 0,5% de 17\beta-estradiol (100%). Además, la afinidad de unión relativa de estetrol en un receptor estrógenico nuclear uterino de rata es el 0,3% de 17\beta-estradiol (100%)".

Todas las publicaciones tienen en común el hecho de que los autores han investigado la potencia estrogénica del estetrol. Todos sin excepción concluyeron que el estetrol es un estrógeno débil. En algunos artículos citados se ha descubierto que la potencia estrogénica del estetrol era inferior a la de otro estrógeno biogénico, es decir, 17\beta-estradiol, que es considerado un estrógeno relativamente débil (por ejemplo en comparación con el etinilestradiol). Teniendo en cuenta estos descubrimientos, no es sorprendente que el interés por el estetrol haya disminuido desde los años ochenta y que no haya salido ninguna publicación sobre las propiedades del estetrol desde entonces.

La patente U.S. 5,468,736 (Hodgen) describe un método de terapia de sustitución hormonal que implica la administración de un estrógeno junto con una cantidad de antiprogestina (antiprogestógeno), que inhibe la proliferación endométrica inducida por el estrógeno en mujeres. En el ejemplo 3 se menciona el uso combinado de estetrol y lilopristona. No se ha proporcionado ningún indicio en los ejemplos con respecto al modo y a la frecuencia de administración o en referencia al nivel de dosificación empleado. Una desventaja asociada al uso de antiprogestógenos, como la lilopristona, está en el riesgo de inducir una morfología endométrica anormal, es decir hiperplasia cística, como se ha observado en mujeres que recibían un tratamiento antiprogestógenico contra la endometriosis (Murphy et al., 1995. Fertil. Steril., 95, 761-766).

La patente estadounidense 5,340,586 (Pike et al.) se refiere a composiciones y métodos que son eficaces para tratar mujeres ooforectomizadas, donde se provee una cantidad eficaz de una composición estrogénica y de una composición androgénica durante un periodo de tiempo. En la patente estadounidense se ha declarado que las composiciones estrogénicas naturales y sintéticas que pueden ser usadas incluyen hormonas y congéneres estrogénicos naturales, incluyendo pero no limitados a éstos, estradiol, benzoato de estradiol, cipionato de estradiol, valerato de estradiol, estrona, dietilestilbestrol, sulfato de estrona de piperazina, etinilestradiol, mestranol, fosfato de poliestradiol, estriol, hemisuccinato de estriol, quinestrol, estropipato, pinestrol y sulfato de potasio de estrona, y además los estrógenos equinos, tales como la equilenina, sulfato de equilenina y estetrol también pueden ser empleados. Salvo el inventario exhaustivo de estrógenos conocidos, en esta patente estadounidense no se hace ninguna otra referencia al estetrol (que se indica erróneamente como un estrógeno equino).

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La misma lista exhaustiva de estrógenos está indicada en los siguientes documentos de patentes:

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Patente estadounidense 4,762,717 (Crowley): Método anticonceptivo comprendiendo la administración secuencial de (1) una combinación de liberación hormonal de lutropina (LHRH) y estrógeno y (2) una combinación de LHRH y estrógeno y progestógeno.

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Patente estadounidense 5,130,137 (Crowley): Método de tratamiento de desorden secretor ovárico benigno comprendiendo la administración secuencial de (1) una combinación de liberación hormonal de lutropina (LHRH) y estrógeno y (2) una combinación de LHRH y de estrógeno y progestógeno.

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Patente estadounidense 5,211,952 (Spicer et al.): Método anticonceptivo comprendiendo la administración de una composición hormonal de liberación de gonadotropina (GnRH) en una cantidad eficaz para inhibir la ovulación, y la administración de estrógeno y progestógeno para mantener niveles del suero superiores a un nivel mínimo definido.

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Patente estadounidense 5,340,584 (Spicer et al.): Método para prevenir la concepción o tratar trastornos ginecológicos benignos comprendiendo la administración de una composición de GnRH durante un primer periodo de tiempo en una cantidad eficaz para suprimir la producción ovárica de estrógeno y de progesterona, administrando simultáneamente una composición estrogénica en una cantidad eficaz para prevenir síntomas de deficiencia estrogénica y simultáneamente la administración de un progestógeno en una cantidad eficaz para mantener el nivel de suero de dicho progestógeno en un nivel eficaz para reducir la proliferación celular endométrica.

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Patente estadounidense 5,340,585 (Pike et al.): Método para el tratamiento de trastornos ginecológicos benignos en una paciente en la que el riesgo de estimulación endométrica mediante composiciones estrogénicas es minimizado o inexistente, comprendiendo la administración de una composición de GnRH en una cantidad eficaz para suprimir la producción ovárica de estrógeno y progesterona y la administración de una composición estrogénica en una cantidad eficaz para prevenir síntomas de deficiencia estro- génica.

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Patente WO 00/73416 (Yifang et al.): Método para regular la fertilidad de un huésped, comprendiendo el contacto de células ováricas del huésped con una cantidad segura y eficaz de una composición farmacéutica que comprende un oligonucleótido antisentido que es complementario a la secuencia nucleótida del receptor hormonal de estimulación de folículos (FSH). La posibilidad de administración combinada de tal oligonucleótido antisentido con un esteroide estrogénico es mencionada en la solicitud.

Los beneficios de la presente invención pueden ser obtenidos sin la coadministración de antiprogestógenos, composiciones de LHRH, composiciones de GnRH y/u oligonucleótidos antisentido que son complementarios a la secuencia de nucleótidos del receptor hormonal de estimulación de folículos (FSH) tal como se ha propuesto en las patentes mencionadas anteriormente. Además, la presente invención puede ser aplicada de forma apropiada a individuos que no han sido ooforectomizados, o en los que el riesgo de estimulación endométrica por composiciones estrogénicas no ha sido minimizado o es inexistente, a parte de a través de la coadministración de un progestógeno. Además, el presente método no requiere el uso de una formulación de liberación lenta tal y como se especifica en la mayoría de las publicaciones mencionadas anteriormente.

Se ha observado que ninguna de las publicaciones anteriores describen la administración oral de estetrol. Las únicas vías de administración descritas aquí son la administración (depósito) intravenosa y subcutánea. Para cada una de estas vías de administración se puede concluir que el rendimiento de estetrol es muy inferior por ejemplo al del 17\beta-estradiol. Dado que no había ninguna razón para asumir el hecho de que se pueda obtener un resultado diferente en caso de administración oral, no es sorprendente que una administración oral de estetrol no haya sido llevada a cabo y que no se pueda encontrar ningún informe sobre este efecto en la técnica anterior.

Debido a la baja potencia estrogénica de las sustancias en forma de estetrol empleadas según la invención, es sorprendente que estas sustancias puedan ser usadas eficazmente en métodos de HRT, particularmente en métodos de HRT empleando la administración oral de tales sustancias. Aunque los inventores no desean ser condicionados por una teoría, se cree que la eficacia inesperada de sustancias de tipo estetrol administradas oralmente proviene de la combinación de las propiedades farmacocinéticas (ADME) y farmacodinámicas favorables imprevistas de estas sustancias.

En cuanto a las propiedades farmacocinéticas de las presentes sustancias estrogénicas, los inventores han descubierto que su biodisponibilidad oral es sorprendentemente alta y que su vida media in vivo es considerablemente más larga que la de otros estrógenos biogénicos. De esta manera, aunque el estetrol y sustancias de tipo estetrol tienen una potencia estrogénica relativamente baja, éstas pueden ser empleadas eficazmente en un método oral de HRT ya que su baja potencia es compensada por una biodisponibilidad oral relativamente alta en combinación con una estabilidad metabólica alta, como se ha comprobado con una media de vida larga.

Una ventaja importante de la administración oral de estetrol y sustancias de tipo estetrol reside en el hecho de que se considera que los efectos hepáticos de las sustancias de tipo estetrol son mínimos puesto que éstas son raramente metabolizadas durante la llamada "primera fase". El efecto de la primera fase de los fármacos administrados oralmente, se refiere al proceso de degradación del medicamento por el hígado durante una transición del medicamento desde la ingestión inicial hasta la circulación en el flujo sanguíneo.

Otra propiedad ventajosa de las sustancias estrogénicas presentes reside en el hecho de que la globulina de unión hormonal sexual (SHBG) enlaza raramente estas sustancias estrogénicas, lo que significa que a diferencia de la mayoría de los estrógenos conocidos, los niveles de suero son representativos de niveles de SHBG de bioactividad e independientes.

También otro beneficio importante de las sustancias estrogénicas presentes deriva de su insensibilidad respecto a las interacciones con otros fármacos (interacciones entre medicamento y medicamento). Se conoce bien el hecho de que ciertos fármacos puedan reducir la eficacia de los estrógenos, como el etinilestradiol, y que otros fármacos puedan aumentar su actividad, produciendo un aumento posible de efectos secundarios. De manera similar los estrógenos pueden interferir en el metabolismo de otros fármacos. En general, el efecto de otros fármacos sobre los estrógenos es debido a una interferencia con la absorción, el metabolismo o la excreción de estos estrógenos, mientras que el efecto de los estrógenos sobre otros fármacos es debido a una competición de vías metabólicas.

El grupo clínicamente más importante de interacciones de fármacos a base de estrógenos ocurre con fármacos que pueden inducir enzimas microsómicas hepáticas, las cuales pueden reducir los niveles en plasma de estrógenos por debajo de un nivel terapéutico (por ejemplo, agentes anticonvulsivos; fenitoína, primidona, barbitúricos, carbamazepina, etosuximida, y metosuximida; fármacos antituberculosos como la rifampicina; fármacos antifungicidas como la griseofulvina). Las sustancias estrogénicas presentes son menos dependientes de la regulación por incremento o regulación por decremento del número de enzimas microsómicas hepáticas (por ejemplo P450's) y también menos sensible a la competición con otros sustratos P450. De forma similar, éstos no interfieren significativamente en el metabolismo de otros fármacos.

Los conjugados de la mayoría de los estrógenos, por ejemplo formados en el hígado, son excretados en la bilis y pueden ser destruidos por las bacterias intestinales en el colon para liberar la hormona activa que puede ser posteriormente reabsorbida (recirculación enterohepática). Existen informes clínicos que sostienen la idea de que una recirculación enterohepática de estrógenos se reduce en mujeres que toman antibióticos como la ampicilina, tetraciclina, etc. Las formas conjugadas de las sustancias estrogénicas presentes son difícilmente excretadas en la bilis, lo que significa que éstas son sustancialmente insensibles a los fármacos que influyen en la recirculación enterohepática de otros estrógenos.

Las observaciones anteriores sirven para explicar por qué las sustancias estrogénicas de la invención apenas sufren las interacciones entre medicamento y medicamento y producen en consecuencia un impacto muy consistente, es decir previsible. De esta manera, la eficacia de las sustancias estrogénicas de la invención es extremadamente fiable.

Descripción detallada de la invención

En consecuencia, un aspecto de la presente invención se refiere al uso de un compuesto estrogénico en la producción de una composición farmacéutica para usar en un método de sustitución hormonal en mamíferos, cuyo método comprende la administración oral de un compuesto estrogénico y de un compuesto progestogénico a un mamífero en una cantidad eficaz para prevenir o tratar síntomas de hipoestrogenismo, donde el compuesto estrogénico es seleccionado del grupo consistente en:

sustancias representadas por la fórmula siguiente

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en cuya fórmula R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} independientemente son un átomo de hidrógeno, un grupo hidróxilo o un grupo alcoxi con 1-5 átomos de carbono; cada uno de los R_{5}, R_{6}, R_{7} es un grupo hidroxilo; y no más de 3 de R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} son átomos de hidrógeno; precursores capaces de liberar una sustancia según la fórmula anteriormente mencionada cuando se usa en el presente método, cuyos precursores son derivados de las sustancias representadas por la fórmula, donde el átomo de hidrógeno de al menos uno de los grupos hidroxilo en dicha fórmula ha sido sustituido por un radical acilo de un ácido carboxílico, sulfónico o sulfámico hidrocarbonado de 1-25 átomos de carbono: tetrahidrofuranilo; tetrahidropiranol: o un residuo glicosidico de cadena recta o ramificada conteniendo 1-20 unidades glicosídicas por residuo;

y mezclas de una o más de las sustancias y/o precursores mencionados anteriormente. El término "administración oral" tal como se usa aquí incluye también la administración oral por alimentación for- zada.

El método de HRT según la invención puede ser empleado de forma ventajosa para tratar todas las formas conocidas de hipoestrogenismo, por ejemplo el hipoestrogenismo asociado a mujeres perimenopáusicas y postmenopáusicas, hipoestrogenismo derivado de hipogonadismo o castración, así como el hipoestrogenismo causado por una insuficiencia ovárica primaria, tratamiento por ejemplo del cáncer de mama con inhibidor de aromatasa y tratamiento análogo hormonal de liberación de gonadotropina por ejemplo para enfermedades ginecológicas benignas. Ejemplos de manifestaciones de hipoestrogenismo que pueden ser tratados o evitados eficazmente con el presente método tanto en mujeres como en hombres, incluyen osteoporosis, arteriosclerosis, trastornos cognitivos y enfermedad de Alzheimer. El método también puede ser empleado ventajosamente en el tratamiento (profiláctico) de síntomas climatéricos como los sofocos, sudores, atrofia urogenital, trastornos de humor, insomnio y palpitaciones. El presente método es particularmente adecuado para tratar o prevenir la osteoporosis y los síntomas climatéricos.

El término "compuesto estrogénico" tal como se usa a lo largo de este documento incluye sustancias que son capaces de provocar una respuesta estrogénica in vivo, así como precursores que son capaces de liberar tal compuesto estrogénico in vivo cuando se usan según la presente invención. Para que los compuestos estrogénicos puedan provocar tal respuesta, éstos deben unirse habitualmente a un receptor de estrógenos, cuyos receptores están presentes en varios tejidos en el interior del cuerpo de un mamífero. El término "compuesto progestogénico" es definido como una sustancia que es capaz de producir una respuesta progestogénica in vivo o un precursor que es capaz de liberar tal sustancia in vivo. Habitualmente, los compuestos progestogénicos son capaces de unirse a un receptor de proges-
tógenos.

Se debe tener en cuenta que la presente invención no sólo incluye el uso de compuestos estrogénicos y progestogénicos específicamente mencionados en esta solicitud, sino también metabolitos de estas hormonas que exponen una funcionalidad in vivo comparable. En este contexto se ha observado que, por ejemplo, el levonorgestrel es un metabolito de norgestimato y que el estriol es un metabolito de 17beta-estradiol. Ambos progestógenos y estrógenos pueden ser aplicados en formulaciones de anticonceptivos y/o en una terapia de sustitución hormonal. El término "sustancias estrogénicas" tal como se utiliza en este documento no incluye sustancias estrogénicas marcadas con tritio (^{3}H) tales como el estetrol marcado con tritio.

Las presentes sustancias estrogénicas se distinguen de los estrógenos biogénicos y sintéticos que son aplicados habitualmente en formulaciones farmacéuticas en que éstas contienen al menos 4 grupos hidroxilo. Las presentes sustancias son especiales por el hecho de que el anillo dividido en 5 miembros en el esqueleto esteroide comprende más bien 3 sustituyentes de hidroxilo que 0-2. Estrógenos conocidos conteniendo al menos grupos 4-hidroxilo y derivados de éstos son:

1,3,5(10)-estratrieno-2, 3, 15\alpha, 16\alpha, 17\beta-pentol 2-metiléter

1,3,5(10)-estratrieno-2, 3, 15\beta, 16\alpha, 17\beta-pentol 2-metiléter

1,3,5(10)-estratrieno-2, 3, 16\alpha, 17\beta-tetrol

1,3,5(10)-estratrieno-3, 4, 16\alpha, 17\beta-tetrol 4-metiléter

1,3,5(10)-estratrieno-3, 15\alpha, 16\alpha, 17\beta-tetrol

1,3,5(10)-estratrieno-3, 15\alpha, 16\alpha, 17\beta-tetrol tetraacetato

1,3,5(10)-estratrieno-3, 15\beta, 16\beta, 17\beta-tetrol tetraacetato

Preferiblemente, la sustancia estrogénica aplicada como el compuesto activo en la presente composición es un estrógeno natural, es decir un estrógeno que está presente en la naturaleza y especialmente en mamíferos. Aún más preferiblemente, la sustancia estrogénica es un estrógeno también llamado biogénico, es decir un estrógeno que se produce naturalmente en el cuerpo humano, un precursor de un estrógeno biogénico o sus mezclas derivadas. Puesto que los estrógenos biogénicos están presentes naturalmente en el cuerpo fetal y femenino, no se prevé ningún efecto secundario, en particular cuando los niveles en suero producidos por la administración exógena de tales estrógenos no exceden sustancialmente las concentraciones de origen natural. Puesto que los niveles en suero de estetrol en el feto son varias veces superiores a los que se han comprobado en hembras en gestación y sabiendo que el feto es particularmente vulnerable, se considera que el estetrol es un estrógeno biogénico particularmente seguro. No se prevé ningún efecto secundario, en particular cuando los niveles en suero obtenidos por la administración exógena de tales estrógenos no exceden sustancialmente concentraciones (fetales) producidas naturalmente. Con estrógenos sintéticos tales como el etinilestradiol, existe un riesgo (dependiendo de la dosis) de efectos secundarios indeseables, tales como una tromboembolia, retención de líquidos, náuseas, hinchazón, colelitiasis, dolor de cabeza y dolor de
pecho.

En una forma de realización preferida de la presente invención la sustancia estrogénica contiene 4 grupos hidroxilo. También, en la fórmula anteriormente mencionada, R_{1} representa preferiblemente un átomo de hidrógeno. En dicha fórmula preferiblemente al menos 2, más preferiblemente al menos 3 de los grupos R_{1}, R_{2}, R_{3} y R_{4} representan un átomo de hidrógeno.

Las sustancias estrogénicas según la fórmula incluyen varios enantiómeros ya que los átomos de carbono que transportan sustituyentes de hidroxilo R_{5}, R_{6} y R_{7} son quiralmente activos. En una forma de realización preferida, la presente sustancia estrogénica es 15\alpha-hidroxi sustituida. En otra forma de realización preferida la sustancia es 16\alpha-hidroxi sustituida. También en otra forma de realización preferida, la sustancia es 17\beta-hidroxi sustituida. Más preferiblemente las sustancias estrogénicas son 15\alpha, 16\alpha, 17\beta-trihidroxi sustituidas.

En otra forma de realización preferida de la presente invención R_{3} representa un grupo hidroxilo o un grupo alcoxi. En otra forma de realización preferida los grupos R_{1}, R_{2} y R_{4} representan átomos de hidrógeno, en tal caso, si R_{3}, R_{5}, R_{6} y R_{7} son grupos hidroxilo, la sustancia es 1,3,5(10)-estratrieno-3,15,16,17-tetrol. Un isómero preferido de esta última sustancia es 1,3,5(10)-estratrieno-3,15\alpha,16\alpha,17\beta-tetrol (estetrol).

La invención incluye también el uso de precursores de las sustancias estrogénicas que constituyen el compuesto activo en el presente método. Estos precursores son capaces de liberar las sustancias estrogénicas mencionadas anteriormente cuando se usan en el presente método, por ejemplo como resultado de una conversión meta-
bólica.

Algunos ejemplos típicos de precursores que pueden ser empleados de manera adecuada según la invención son ésteres que pueden ser obtenidos mediante una reacción de los grupos hidroxilo de las sustancias estrogénicas con sustancias que contienen uno o más grupos carboxi (M^{+} ^{-}OOC-), donde M^{+} representa un hidrógeno o catión (akali)metálico. Por lo que, en una forma de realización particularmente preferida, los precursores son derivados de las sustancias estrogénicas, donde el átomo de hidrógeno de al menos uno de los grupos hidroxilo en dicha fórmula ha sido sustituido por -CO-R, donde R es un radical de hidrocarbono comprendiendo 1-25 átomos de carbono. Preferiblemente R es hidrógeno, o un radical alquilo, alquenilo o arilo comprendiendo 1-20 átomos de carbono.

El presente método emplea normalmente una administración oral ininterrumpida del compuesto estrogénico durante un periodo de al menos 10 días, preferiblemente de al menos 20 días. El término "ininterrumpido" como se usa aquí, significa que el compuesto estrogénico es administrado en intervalos relativamente regulares, sin interrupciones (terapéuticamente) significantes. Naturalmente, puede haber interrupciones de poca importancia sin afectar la eficacia global del presente método, y de hecho estas aberraciones se incluyen en la presente invención. En una forma de realización preferida, y de forma más aritmética, se considera que el régimen de administración es continuo cuando el intervalo más largo entre 2 administraciones consecutivas no es superior a más de 3,5 veces el intervalo medio. Aún más preferiblemente, dicho intervalo más largo no es superior a 2,5 veces, más preferiblemente a 1,5 veces el intervalo medio.

Los beneficios de la presente invención son más pronunciados cuando se usa el compuesto de estrógeno en una terapia de sustitución hormonal con un plazo más largo para minimizar los efectos negativos de un hipoestrogenismo crónico. En consecuencia, el método de terapia de sustitución hormonal, preferiblemente, comprende la administración del compuesto estrogénico durante un periodo de al menos 1 mes, más preferiblemente de al menos 3
meses.

En el método presente, el compuesto estrogénico y compuesto progestogénico puede ser administrado en unidades de dosis orales separadas. No obstante, también es posible y de hecho muy apropiado combinar estos dos compuestos en una única unidad de dosis oral.

La invención puede reducirse de manera adecuada para realizarla en forma de una variedad de métodos de HRT que son conocidos por el experto en la técnica. Entre estos métodos existen también los llamados métodos "combinados". Los métodos combinados utilizan preparaciones que contienen una combinación de un estrógeno y un progestógeno. Los métodos combinados tienen en común el hecho de basarse en un régimen que incluye la administración de la preparación combinada mencionada anteriormente, seguida de un intervalo sin administración de aproximadamente 7 días durante el que se produce una hemorragia por supresión, simulando las menstruaciones naturales. De esta manera, los intervalos de 21 días de administración hormonal alternan con 7 días durante los cuales no se administra ninguna hormona.

Como alternativa a los métodos combinados mencionados anteriormente, se ha propuesto el método llamado también "secuencial". El método secuencial comprende típicamente dos fases consecutivas, es decir una fase en la que no se administran ni estrógeno ni progestógeno y otra fase en la que se administra una combinación de estrógeno y progestógeno. En los primeros métodos secuenciales, al igual que los métodos combinados mencionados anteriormente, había un intervalo sin administración de aproximadamente 7 días. Más recientemente, se han propuesto métodos secuenciales que no incluyen un periodo sin administración (o placebo), lo que significa que se administra estrógeno durante el ciclo entero y que se coadministra progestógeno sólo durante una parte de este ciclo. La patente WO 95/17895 (Ehrlich et al.) describe este método secuencial ininterrumpido.

También otro ejemplo de un método de HRT incluido en la presente invención es el método llamado "combinado continuo", que es una versión particular del método combinado que utiliza una administración ininterrumpida combinada de un compuesto progestogénico y de un compuesto estrogénico durante un periodo de tiempo prolongado, por ejemplo de más de 50 días. En contraste con los métodos combinados comunes y secuenciales, no se producen menstruaciones regulares en el método combinado continuo ya que la administración continua de progestógeno en las cantidades indicadas induce amenorrea.

En una forma de realización de la invención, que se refiere al método continuo combinado, el presente método comprende la administración oral ininterrumpida de la combinación del compuesto estrogénico y compuesto progestogénico durante un periodo de al menos 28, preferiblemente de al menos 60 días.

En otra forma de realización de la invención, que se refiere a métodos secuenciales y combinados en los que se emplea un intervalo significante sin administración, el método de la invención comprende un intervalo de al menos 2 días, preferiblemente de 3-9 días, más preferiblemente de 5-8 días, durante el cual no se administra ningún compuesto progestogénico ni compuesto estrogénico y en el que la reducción obtenida en la concentración en suero del compuesto progestogénico y del compuesto estrogénico induce menstruaciones.

También otra forma de realización de la invención, que concierne un método secuencial sin una pausa significante, se caracteriza por el hecho de que comprende la administración oral ininterrumpida del compuesto estrogénico durante un periodo de al menos 28 días, preferiblemente de al menos 60 días, y en que, siguiendo la administración combinada del compuesto estrogénico y compuesto progestogénico, el compuesto estrogénico y ningún compuesto progestogénico es administrado durante 3 a 18 días consecutivos, preferiblemente durante 5 a 16 días consecutivos y la reducción obtenida en la concentración en suero del compuesto progestogénico normalmente debería ser suficiente para inducir menstruaciones.

En los presentes métodos ininterrumpidos la administración del compuesto estrogénico puede ocurrir normalmente en intervalos comprendidos entre 6 horas y 7 días, preferiblemente entre 12 horas y 3 días. La vida media in vivo relativamente elevada de los compuestos estrogénicos presentes en comparación con estrógenos más conocidos hace más factible el hecho de emplear intervalos de administración oral que son significativamente más largos que 1 día. Por cuestiones prácticas, y particularmente con respecto al usuario, es preferible administrar oralmente el compuesto estrogénico así como el compuesto progestogénico al menos una vez al día, más preferiblemente una vez al día.

En todos los métodos mencionados anteriormente se prefiere administrar oralmente el compuesto estrogénico y el compuesto progestogénico al menos una vez al día durante un periodo de al menos 10 días, preferiblemente de al menos 20 días. En caso de método secuencial sin pausa o de método combinado continuo, es preferible administrar oralmente el compuesto estrogénico y/o el compuesto progestogénico al menos una vez al día durante un periodo de al menos 30 días, más preferiblemente de al menos 60 días, más preferiblemente de al menos 150 días. Los métodos secuenciales ininterrumpidos en los que se emplea la administración continua de estrógeno son caracterizados por un control cíclico excelente.

Las preocupaciones generales sobre la llamada administración no opuesta de estrógeno, es decir una administración de estrógeno sin progestógeno coadministrado que puede causar una hiperplasia del endometrio, son menos aplicables a los compuestos estrogénicos de la presente invención. En consecuencia, en una forma de realización particularmente preferida, el presente método de HRT es realizado según un método secuencial sin pausa.

Se pueden obtener buenos resultados con el presente método si el compuesto estrogénico es administrado oralmente en una cantidad inferior a 1 mg por kg de peso corporal al día, preferiblemente inferior a 400 \mug por kg de peso corporal al día, más preferiblemente inferior a 200 \mug por kg de peso corporal al día. Para conseguir un impacto significante con la administración del presente compuesto estrogénico, es aconsejable administrarlo oralmente en una cantidad de al menos 1 \mug por kg de peso corporal al día. Preferiblemente, la cantidad administrada oralmente es de al menos 2 \mug por kg de peso corporal al día. Más preferiblemente, la cantidad administrada oralmente es de al menos 5 \mug por kg de peso corporal al día.

En el presente método, en particular cuando se aplica a seres humanos, el compuesto estrogénico es administrado normalmente en una dosis media de al menos 0,05 mg al día, preferiblemente de al menos 0,1 mg al día. La dosificación máxima es mantenida normalmente por debajo de 40 mg al día, preferiblemente por debajo de 20 mg al día. La dosis de compuesto progestogénico empleada normalmente es equivalente a una dosificación oral media de 30-750 \mug de levonorgestrel al día, preferiblemente una dosificación oral media de 50-400 \mug de levonorgestrel al día.

En el presente método, el compuesto estrogénico es administrado preferiblemente en una cantidad eficaz para conseguir una concentración en suero sanguíneo de al menos 1 nanogramo por litro, más preferiblemente de al menos 10 nanogramos por litro, más preferiblemente de al menos 100 nanogramos por litro. En general la concentración en suero sanguíneo resultante del compuesto estrogénico no excederá 100 \mug por litro, preferiblemente no excederá 50 \mug por litro, más preferiblemente no excederá 25 \mug por litro.

Según la presente invención, el compuesto progestogénico es administrado de manera ventajosa en una cantidad que es equivalente a una dosificación oral diaria de 0,3 a 20 \mug de levonorgestrel por kg de peso corporal, preferiblemente de 0,5-5 \mug de levonorgestrel por kg de peso corporal.

Algunos ejemplos de progestógenos que pueden ser usados de manera adecuada de acuerdo con la presente invención incluyen: progesterona, levonorgestrel, norgestimato, noretisterona, didrogesterona, drospirenona, 3-beta-hidroxidesogestrel, 3-cetodesogestrel (=etonogestrel), 17-deacetil norgestimato, 19-norprogesterona, acetosipregnenolona, alilestrenol, anagestona, clormadinona, ciproterona, demegestona, desogestrel, dienogest, dihidrogesterona, dimetisterona, etisterona, diacetato de etinodiol, acetato de flurogestona, gastrinona, gestodeno, gestrinona, hidroximetilprogesterona, hidroxiprogesterona, linestrenol (=linoestrenol), medrogestona, medroxiprogesterona, megestrol, melengestrol, nomegestrol, noretindrona (=noretisterona), noretinodrel, norgestrel (incluye d-norgestrel y di-norgestrel), norgestrienona, normetisterona, progesterona, quingestanol, (17alfa)-17-hidroxi-11-metileno-19-norpregna-4,15-dien-20-in-3-ona, tibolona, trimegestona, acetofenuro de algestona, nestorona, promegestona, ésteres de 17-hidroxiprogesterona, 19-nor-17-hidroxiprogesterona, 17alfa-etinil-testosterona, 17alfa-etinil-19-nor-testosterona, oxima d-17beta-acetoxi-13beta-etil-17alfa-etinil-gon-4-en-3-ona y precursores de estos compuestos que son capaces de liberar estos progestógenos in vivo cuando son usados en el presente método. Preferiblemente el progestógeno usado en el presente método es seleccionado del grupo consistente en progesterona, desogestrel, etonogestrel, gestodeno, dienogesto, levonorgestrel, norgestimato, noretisterona, drospirenona, trimegestona, didrogesterona, precursores de estos progestógenos y mezclas de estos.

El presente método incluye también la coadministración de principios activos además del compuesto progestogénico y el estrogénico. Por ejemplo, los andrógenos pueden ser coadministrados de forma ventajosa para prevenir síntomas de hipoandrogenicidad. De esta manera, una forma de realización preferida de la invención comprende la coadministración de un compuesto androgénico. El compuesto androgénico es coadministrado de forma adecuada en una cantidad eficaz para suprimir síntomas de hipoandrogenicidad. Se ha asociado la hipoandrogenicidad con los trastornos de humor, cambios desfavorables en parámetros hemoestáticos y deficiencia de masa
ósea.

El término "compuesto androgénico" es definido como una sustancia que es capaz de activar in vivo la respuesta androgénica o un precursor que es capaz de liberar dicha sustancia in vivo. Los compuestos generalmente androgénicos pueden ser unidos a un receptor andrógeno.

Los compuestos androgénicos que pueden ser empleados de manera adecuada en el presente método pueden ser seleccionados del grupo consistente en deshidroepiandrosterona (DHEA), danazol, gestrinona, ésteres de testosterona, precursores capaces de liberar estos andrógenos cuando se usan en el presente método y mezclas de éstos. Preferiblemente los ésteres de testosterona utilizados comprenden un grupo acilo que comprende al menos 6, más preferiblemente de 8-20 y preferiblemente de 9-13 átomos de carbono. Los andrógenos que pueden ser usados de manera más ventajosa en el presente método son DHEA y/o undecanoato de testosterona.

Se observa por ejemplo que la DHEA y el undecanoato de testosterona son precursores de testosterona, y que dichos precursores no exhiben en sí prácticamente ninguna afinidad con los receptores andrógenos en el cuerpo femenino. La eficacia de los andrógenos en el método de la invención es determinada por su forma funcionalmente activa, que puede ser bastante diferente de la forma en la que éstos son administrados.

En una forma de realización preferida, se provee el andrógeno en una cantidad equivalente a una dosificación oral diaria de 5 a 250 mg de DHEA, que es equivalente a una dosificación oral diaria de 1 a 50 mg de undecanoato de testosterona. Más preferiblemente el andrógeno es provisto en una cantidad que es equivalente a una dosificación oral diaria de 10 a 120 mg de DHEA. Más preferiblemente el andrógeno es administrado en una cantidad que es equivalente a una dosificación oral diaria de 20 a 60 mg de DHEA.

Para obtener el impacto deseado del presente método es aconsejable administrar las unidades de dosificación en una cantidad que supone un aumento del nivel de andrógenos en suero sanguíneo de no más de 5 nmol de testosterona equivalente por litro, preferiblemente de menos de 3 nmol de testosterona equivalente por litro y más preferiblemente de menos de 1,5 nmol de testosterona equivalente por litro.

Preferiblemente, en el método presente no se hace uso de una composición hormonal de liberación de gonadotropina tal como se ha descrito en las patentes estadounidenses mencionadas anteriormente 5,211,952, 5,340,584 y 5,340,585. De manera similar, en el método presente preferiblemente no se hace uso de una composición hormonal de liberación de lutropina tal como se ha descrito en las patentes estadounidenses 4,762,717 y 5,130,137. Además, el presente método preferiblemente no comprende la coadministración de un anti-progestógeno tal como se ha descrito en la patente estadounidense 5,468,736. El método también puede ser aplicado de forma adecuada sin la coadministración de un oligonucleótido antisentido que es complementario a la secuencia de nucleótidos del receptor de la hormona de estimulación de folículos (FSH) (WO 00/73416).

Preferiblemente el presente método no se aplica a hembras ooforectomizadas o hembras en las que una estimulación endométrica por composiciones estrogénicas es minimizada o inexistente, si no es por medio de una administración combinada de progestógeno y estrógeno, por ejemplo como resultado de una histerectomía.

Otro aspecto de la invención se refiere a un kit farmacéutico comprendiendo al menos 20 unidades de dosificación oral conteniendo el compuesto estrogénico tal como se ha definido aquí antes y/o el compuesto progestogénico y/o el compuesto androgénico tal como se ha descrito anteriormente aquí, donde al menos 10 unidades contienen entre 0,01 y 20 mg, preferiblemente entre 0,05 y 10 mg del compuesto estrogénico, al menos 10 unidades contienen el compuesto progestogénico en una cantidad equivalente a 30-750 \mug de levonorgestrel y al menos 10 unidades de dosis contienen el compuesto androgénico en una cantidad equivalente a 5 a 250 mg de deshidroepiandrosterona.

En el presente kit, el compuesto estrogénico puede estar combinado de manera adecuada con el compuesto progestogénico y el androgénico en una unidad de dosis individual. Por consiguiente, el kit comprende preferiblemente al menos 10 unidades de dosificación conteniendo entre 0,01 y 20 mg del compuesto estrogénico, el compuesto progestogénico en una cantidad equivalente a 30-750 \mug de levonorgestrel y el compuesto androgénico en una cantidad equivalente a 5 a 250 mg de dehidroepiandrosterona. Un kit farmacéutico que es particularmente adecuado para el uso en métodos combinados y secuenciales comprenderá en general 20 a 35 unidades de dosificación orales, donde 10 a 35 unidades contienen una combinación del compuesto estrogénico y del compuesto progestogénico en las cantidades indicadas, 0 a 25 unidades no contienen compuesto progestogénico pero sí contienen el compuesto estrogénico en las cantidades indicadas, y 0 a 8 unidades no contienen compuesto estrogénico ni compuesto progesto-
génico.

Un kit farmacéutico que es particularmente apropiado para usar en un régimen combinado continuo o un régimen combinado comprende al menos 20 unidades de dosificación oral que contienen o bien la combinación del compuesto progestogénico y compuesto estrogénico o ninguno de estos dos compuestos (placebo) y de cuyas unidades de dosificación, al menos 15, preferiblemente al menos 20 contienen la combinación del compuesto estrogénico y compuesto progestogénico y 0 a 8 no contienen compuesto estrogénico ni compuesto progestogénico. Si se va a usar este tipo de kit en un método combinado continuo, ventajosamente el kit puede comprender al menos 28, preferiblemente al menos 60 unidades de dosificación, cuyas unidades de dosificación contienen todas la combinaciones del compuesto estrogénico y compuesto progestogénico en las cantidades indicadas anteriormente.

En caso de que se piense usar el presente kit en un método de HRT que emplee un intervalo sin administración destinado a inducir menstruaciones (por ejemplo un método combinado o un método secuencial con pausa) el kit comprenderá en general al menos 3 unidades, preferiblemente al menos 5 unidades sin compuesto estrogénico ni compuesto progestogénico.

En una forma de realización particularmente preferida de la invención el presente kit está diseñado para usarlo en un método secuencial. Tal kit comprenderá en general 20 a 35 unidades de dosificación oral de las cuales 10 a 32 unidades contienen la combinación del compuesto estrogénico y compuesto progestogénico, y 3 a 18 unidades contienen el compuesto estrogénico y ningún compuesto progestogénico. Un kit particularmente preferido está diseñado para usarlo en un método secuencial sin pausa significante. En este tipo de kit, que comprenderá en general 20 a 35 unidades de dosificación oral, 10 a 20 unidades contienen una combinación del compuesto estrogénico y compuesto progestogénico, 10 a 18 unidades contienen el compuesto estrogénico y ningún compuesto progestogénico y como máximo 1 unidad sin compuesto estrogénico ni compuesto progestogénico.

Los kits farmacéuticos según la presente invención contienen normalmente sólo uno o más de los siguientes tipos de unidades de dosificación oral: unidades que contienen la combinación del compuesto estrogénico y compuesto progestogénico; unidades que contienen el compuesto estrogénico y ningún compuesto progestogénico; y unidades que funcionan eficazmente como placebo. Preferiblemente el kit comprende al menos 20 unidades que contienen la combinación del compuesto estrogénico y compuesto progestogénico o el compuesto estrogénico y ningún compuesto progestogénico.

Si se va a usar el presente kit en un protocolo combinado o secuencial, las unidades de dosificación oral son dispuestas preferiblemente en el kit en una secuencia fija correspondiente al orden de administración previsto. Se pueden proveer indicaciones sobre el envase. El envase puede ser un tubo o una caja o una tira. La caja puede ser circular, cuadrada, o formada de otro modo con los comprimidos dispuestos separadamente en el interior para facilitar la administración. Pueden aparecer indicaciones de fecha adyacentes a cada pastilla correspondiendo a los días en los que se debe tomar cada pastilla. Preferiblemente aparece sobre el envase alguna indicación de la secuencia en la que los comprimidos deben ser tomados sea cual sea su forma.

En términos generales, las unidades de dosificación oral en el presente kit son preparadas según procedimientos farmacéuticos bien conocidos. El(los) ingrediente(s) activo(s) es (son) combinado(s) con un excipiente farmacéuticamente aceptable y convertido en una forma farmacéuticamente aceptable para una administración oral, por ejemplo una pastilla, cápsula, tableta, granulado, píldora, polvo o gránulos. El excipiente puede incluir vehículos farmacéuticos apropiados como diluyentes, aglutinantes y lubricantes. Por ejemplo gomas, almidones y azúcares son usados habitualmente en forma de vehículos farmacéuticos. Los comprimidos y otras unidades de dosificación oral pueden contener de forma adecuada materiales tales como aglutinantes (por ejemplo hidroxipropilmetilcelulosa, polivinilpirrolidina, otros materiales celulósicos y almidón), diluyentes (por ejemplo lactosa y otros azúcares, almidón, fosfato dicálcico y materiales celulósicos), agentes de desintegración (por ejemplo polímeros de almidón y materiales celulósicos) y agentes lubrificantes (por ejemplo, estearatos y talco).

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El(los) ingrediente(s) activo(s) puede(n) comprender desde aproximadamente 0,01% en peso hasta aproximadamente 50% en peso de la formulación en la unidad de dosificación, el resto comprendiendo un excipiente. El(los) ingrediente(s) activo(s) son compuestos con el vehículo elegido y por ejemplo en el caso de la pastilla, éstos se disponen en un aparato de moldeo de pastilla para formar las pastillas. De forma alternativa, el material compuesto puede ser incorporado en forma de polvo o gránulos en una cápsula. Varias otras opciones que pueden ser usadas de forma adecuada de acuerdo con la presente invención son conocidas por el experto en el arte de la técnica farmacéutica.

La presente invención es ilustrada de forma más detallada por los ejemplos siguientes, los cuales, no obstante, no deben ser considerados limitantes. Las características descritas en la descripción precedente, en los ejemplos siguientes y en las reivindicaciones pueden, tanto separadamente como en cualquier combinación de éstos, ser materializadas para realizar la invención en sus distintas formas.

Ejemplos Ejemplo 1

La cornificación vaginal fue elegida como el criterio de evaluación tisular específico y sensible al estrógeno para determinar la estrogenicidad del estetrol (E4), después de una administración oral, en ratas hipoestrogénicas. El 17\alpha-etinilestradiol (EE) y vehículo (10% etanol/aceite de sésamo) sirvieron de control en estos ensayos biológicos.

El aumento de peso uterino en la rata es usado más habitualmente como medida de estrogenicidad. No obstante, el peso uterino también responde a la progesterona, testosterona, y a otros agentes que no se definen de forma característica como estrógenos. A principio de los años 1920, se descubrió que el fluido folicular del ovario de cerdo contenía un(os) factor(es) que provocaba una cornificación/queratinización del epitelio vaginal en la rata (Allen and Doisy, 1923, JAMA, 81, 819-821; Allen and Doisy, 1924, Am. J. Physiol., 69, 577-588). La respuesta llamada de cornificación vaginal en ratas proporcionaba después un ensayo biológico para una prueba de estrogenicidad. La cornificación/queratinización vaginal epitelial en ratas ovariectomizadas puede ser producida solamente por compuestos considerados como verdaderos estrógenos (Jones et al, 1973, Fert. Steril. 24, 284-291). La cornificación/queratinización vaginal epitelial representa, en consecuencia, un criterio de evaluación altamente selectivo para determinar la potencia de los estrógenos (Reel et al., 1996, Fund. Appli. Toxicol. 34, 288-305).

Ratas CD hembras adultas intactas fueron ovariectomizadas para inducir una deficiencia estrogénica. Se realizaron lavados vaginales a diario durante siete días para asegurarse que las ratas presentaban frotis vaginales de animales castrados (predominio de leucocitos en el frotis vaginal, y en apariencia similar a un frotis vaginal diestrual). Los frotis vaginales de animales castrados indican que se consiguió una ovariectomía completa. El tratamiento se inició después de 7 días de persistencia (día 0 = primer día de dosificación). Los animales tomaron dosis una vez al día durante 7 días consecutivos. Se continuaron los lavados vaginales diarios durante 7 días después de iniciar la dosificación para detectar una cornificación vaginal, como una indicación de respuesta estrogénica. Una gota de lavados vaginales fue colocada sobre una placa de cristal y examinada por microscopía óptica para detectar la presencia o ausencia de células cornificadas epiteliales. Los lavados vaginales fueron obtenidos antes de una dosificación durante los días 0 a 6 y antes de una necroscopia el 7° día.

El ensayo biológico de la cornificación vaginal fue realizado para determinar el perfil estrogénico de E4 cuando se administra oralmente (po) a ratas adultas ovariectomizadas. El EE fue usado como un control positivo. El vehículo (10% de etanol/aceite de sésamo) servía de control negativo. Los esteroides fueron disueltos en etanol absoluto y luego introducidos en la concentración final con aceite de sésamo (10% de etanol en aceite de sésamo). Una respuesta vaginal estrogénica se desarrolló en todas las ratas (8/8) que tomaron 50 \mug/kg/día de EE el 7° día (Tabla 1). De forma similar, se observó una cornificación vaginal epitelial en todas las ratas (8/8) tratadas po bien con 0,1, 0,3, 1,0, o 3,0 mg/kg/día de E4 el 7° día (Tabla 1), mientras que en los animales tratados con el vehículo no se verificó ninguna cornificación epitelial vaginal (0/8). Incluso en ratas que tomaron dosis relativamente bajas de E4 (por ejemplo 0,1 y 0,3 mg/kg/día), la aparición de cornificación vaginal (definida como la cantidad de animales que responden en los días 1-3 del estudio) fue tan rápida como en animales tratados con EE (Tabla 1), demostrando características inmejorables de biodisponibilidad de estetrol después de una administración oral.

TABLA 1 Respuesta vaginal estrogénica en ratas ovariectomizadas tratadas oralmente (po) con 17\alpha-etinilestradiol (EE) o estetrol (E4). Los datos son expresados como el número de ratas que presentan una cornificación vaginal con respecto al número de ratas (proporción) tratadas

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Ejemplo 2

La rata ovariectomizada envejecida fue usada como modelo para la enfermedad de osteoporosis humana. Este es un modelo animal establecido, recomendado por la Administración de Alimentos y Medicamentos de Estados Unidos (FDA), para evaluar y valorar los agentes potenciales para la prevención y terapia de la osteoporosis. La eficacia antirresortiva del estetrol (E4) fue probada mediante una medición ex vivo de la densidad total mineral ósea trabecular y la resistencia ósea después de 4 semanas de tratamiento con necroscopia. El 17\alpha-etinil-estradiol (EE) y el vehículo (1% ethanol/aceite de arachidis) sirvieron de controles en este ensayo biológico.

Ratas hembras de tres meses Sprague-Dawley fueron o bien operadas en falso (Sham) u ovariectomizadas (OVX) un día antes del estudio de dosificación. Los animales fueron anestesiados usando una mezcla anestésica de quetamina/xilazina y fueron sometidos a una ovariectomía bilateral o fueron tratados en falso. Se afeitó una sección de pelo en la superficie dorsal y se realizó una incisión a lo largo de la región lumbar de la espina. La piel fue separada de la fascia subyacente para poder efectuar una segunda incisión a través de la musculatura abdominal más o menos caudal a los riñones. Los ovarios fueron luego extirpados y retirados y la musculatura fue cerrada con una única sutura. La incisión de la piel fue cerrada usando grapas quirúrgicas.

Diez animales por grupo de tratamiento tomaron dosis orales una vez al día durante cuatro semanas consecutivas. La dosificación se inició el 1er día después de extraer quirúrgicamente los ovarios y se administró mediante una alimentación oral por sonda usando una jeringa y una aguja de alimentación forzada de acero inoxidable con dosis de 0,1 mg/kg/día de EE, o bien de 2,5, 0,5 o 0,1 mg/kg/día de E4. El control del vehículo fue administrado a diario a un grupo de animales OVX y a ratas operadas en falso. Después del tratamiento, las ratas anestesiadas fueron sometidas a una punción cardiaca y asfixiadas por inhalación de CO_{2}. Se extirparon tibia y fémur, se retiró el tejido blando de éste y se fijaron y almacenaron en 70% de etanol/solución salina a 4°C (tibia) o solución salina a 4°C (fémur) hasta otro análisis.

Se realizó una tomografía computerizada cuantitativa periférica ex vivo (pQCT) sobre la tibia izquierda tomada por excisión usando un Stratec XCT-RM y un software asociado (Stratec Medizintechnik Gmbh, Pforzheim, Alemania, software version 5.40). Se realizaron las exploraciones al 12% de la longitud total de la extremidad proximal de la tibia. Las posiciones fueron comprobadas usando vistas de exploración y se adquirió un corte perpendicular de 0,5 mm al eje longitudinal del eje tibial de cada sitio. Las exploraciones se analizaron usando un umbral para el reconocimiento del límite externo. Se determinó el contenido mineral óseo total y trabecular, el área y la densidad en cada sitio. Los valores principales son mostrados en la Tabla 2. Además, en la Figura 1 aparecen los datos de pQCT para indicar una densidad mineral ósea total.

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TABLA 2 Datos de densitometría pQCT de la tibia proximal de ratas Sham y OVX tratadas oralmente (po) con 17\alpha-etinilestradiol (EE), estetrol (E4) o un vehículo. Los datos son expresados como los valores principales obtenidos para cada grupo (n=10)

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La comparación de los datos de densitometría de pQCT de la tibia proximal de ratas operadas en falso y OVX demostró una pérdida constante ósea total y trabecular en el grupo OVX, como estaba previsto (Tabla 2, figura 1). Además, se produjo un aumento consecuente en función de la dosis para cada uno de los parámetros asociados con un contenido mineral óseo total y trabecular y densidad mineral ósea en los animales tratados oralmente con E4 (Tabla 2, Figura 1). En comparación con las ratas OVX hipoestrogénicas que recibieron el tratamiento con vehículo solo, 0,5 y 2,5 mg/kg/día de E4 evitaron la resorción ósea como se ha ejemplificado por loa niveles de densidad mineral ósea total equivalentes a ratas operadas en falso (Figura 1). Además, la actividad antirresortiva conseguida con la dosis más alta de E4 (2,5 mg/kg/día) era equivalente al efecto visto con el control positivo de EE.

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Una evaluación ex vivo de resistencia ósea biomecánica fue efectuada con una prueba de indentación del fémur distal. Antes del ensayo mecánico se realizó el enjuague del fémur en una solución salina fría y se retiró cuidadosamente cualquier resto de tejido blando pegado. Un segmento de 3 mm de la metáfisis femoral distal fue cortado directamente proximal al cóndilo femoral con una sierra Diamond de baja velocidad con un riego constante de solución salina. La carga fue aplicada con un indentador cilíndrico (con una cara de prueba plana de 1,6 mm de diámetro) en el centro de la cavidad medular sobre la cara distal del segmento. Se dejó penetrar el indentador en la cavidad a un desplazamiento constante de 6 mm/min a una profundidad de 2 mm antes de invertir la carga.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 3 Prueba de indentación del fémur distal de ratas Sham y OVX tratadas oralmente (po) con 17a-etinilestradiol (EE), estetrol (E4) o un vehículo. Los datos son expresados como los valores principales obtenidos para cada grupo (n=10)

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La carga máxima, rigidez y energía absorbida fueron determinadas con curvas de desplazamiento de carga. La resistencia definitiva fue calculada dividiendo la carga máxima entre el área de indentador. Los valores principales de carga máxima, rigidez, energía y resistencia definitiva aparecen en la Tabla 3. Además, los principales valores de resistencia definitiva son mostrados en la Figura 2. En comparación con las ratas operadas en falso, la fuerza mecánica de un hueso cavernoso resulta ser extremadamente reducida en ratas OVX tratadas con un vehículo solo (Tabla 3, Figura 2). Las reducciones de carga máxima, rigidez, energía y resistencia definitiva fueron de -68%, -68%, -27%
y -68%, respectivamente, claramente asociadas a la pérdida de densidad mineral ósea en ratas con deficiencia estrogénica. El tratamiento oral de ratas OVX hipoestrogénicas con E4 evitaba las declinaciones de carga máxima, rigidez, energía y resistencia definitiva, en función de la dosis (Tabla 3, Figura 2). Además, la eficacia obtenida con la dosis máxima de E4 (2.5 mg/kg/día) aparece ser incluso superior a la del control positivo de EE (Tabla 3, figura 2).

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Ejemplo 3

Se usó la rata ovariectomizada (OVX) morfinodependiente como modelo para sofocos postmenopáusicos. Se comprobó el poder del estetrol (E4) para prevenir los aumentos de temperatura cutánea terminal, acompañados en general por una caída de temperatura corporal central, después de una prueba de supresión opiácea inducida por naloxona. El 17\alpha-etinil-estradiol (EE) y un vehículo (hidroxipropil-beta-ciclodextrina 20% en peso/vol) sirvieron de controles en este ensayo biológico.

El síntoma más característico y común de la menopausia humana es el sofoco, que es experimentado por más del 70% de las mujeres menopáusicas. Aunque se desconoce el mecanismo exacto subyacente de esta inestabilidad vasomotriz, las características esenciales del sofoco son un reflejo de una adaptación centralmente mediada de un descenso progresivo de los niveles de estrógenos. En mujeres que sufren sofocos, los síntomas son manifestados por 1) aumentos regionales rápidos de la temperatura cutánea; 2) reducción de la temperatura corporal interna; 3) aumento del ritmo cardíaco sin cambio de presión sanguínea; y 4) aumentos en intervalos de tiempo cortos de liberación de hormona lutropina (lutropina) y \beta-endorfina.

El modelo de rata ovariectomizada morfinodependiente (OVX) ha sido propuesto por diferentes investigadores (Katovich et al, 1986, Maturitas, 67-76; Merchenthaler et al. 1998, Maturitas, 307-316) como modelo animal para los sofocos. Durante la supresión opiácea con la naloxona antagonista de la morfina, la temperatura corporal terminal (TST) aumenta y este aumento es acompañado por una caída de la temperatura corporal interna. Además, los cambios de temperatura son acompañados por variaciones en la LH y una taquicardia transitoria. Estos eventos son similares en magnitud y naturaleza temporal a los que se observan durante los sofocos menopáusicos.

Ratas OVX de 8 semanas fueron tratadas oralmente (po) con estetrol (E4), 17\alpha-etinilestradiol (EE) o un vehículo de control (20% en peso/vol de hidroxipropil-beta-ciclodextrina) durante siete días consecutivos antes, y en la mañana de una supresión opiácea inducida por naloxona en animales morfinodependientes. Tres días antes del inicio de la dosificación, los animales fueron anestesiados usando una mezcla de quetamina/xilazina anestésica y sometidos a una ovariectomía bilateral. Se afeitó una sección de pelo sobre la superficie dorsal y se realizó una incisión a lo largo de la región lumbar de la columna vertebral. La piel fue separada de la fascia subyacente para poder realizar una segunda incisión a través de la musculatura abdominal aproximadamente caudal a los riñones. Los ovarios fueron posteriormente exteriorizados y retirados y la musculatura fue cerrada con una única sutura. La incisión de la piel fue cerrada usando grapas quirúrgicas. Seis ratas por grupo de tratamiento tomaron dosis una vez al día durante ocho días consecutivos antes de e incluyendo el día de supresión opiácea inducida por naloxona (la sesión de sofocos). La dosificación comenzó tres días después de extirpar quirúrgicamente los ovarios y fue administrada por alimentación oral forzada usando una jeringa y una aguja de acero inoxidable de alimentación forzada. La dependencia a la morfina fue inducida mediante la implantación de unas pastillas subcutáneas conteniendo 75 mg de morfina. La primera pastilla fue implantada cinco días antes de los sofocos bajo una ligera anestesia por inhalación. Tres días antes del periodo de sofocos, otras dos pastillas de morfina fueron implantadas en las mismas condiciones.

Para las manipulaciones con sofocos, los animales fueron dispuestos en una jaula de ensayo. Siguiendo un periodo de adaptación de 5 a 10 minutos, las ratas fueron anestesiadas con quetamina HCl aproximadamente durante 10 minutos antes del periodo de sofocos. Un electrodo sensible a la temperatura fue fijado en la superficie ventral de la cola con esparadrapo y el electrodo fue conectado a un registrador de temperaturas de varios canales. La temperatura cutánea terminal fue registrada hasta su estabilización y los animales recibieron una inyección de naloxona HCl (1 mg/kg). Los registros de temperaturas siguieron después durante un periodo de 60 minutos y la temperatura fue registrada en intervalos de 5 minutos. AI final del periodo de sofocos, todos los animales fueron matados usando una asfixia por CO^{2} seguida de una dislocación cervical.

Tal y como se esperaba, el control de vehículo no fue efectivo para la prevención de los aumentos de TST inducida por naloxona en ratas OVX adictas a la morfina (figura 3). El 17\alpha-etinilestradiol (EE), en la dosis individual de ensayo de 0,3 mg/kg/día, impedía los aumentos de TST inducida por naloxona en las ratas OVX adictas a la morfina (figura 3). El tratamiento oral con estetrol (E4) mostró un claro efecto en función de la dosis (Figura 3). Las tres dosis máximas de E4 (0,3, 1,0 y 3,0 mg/kg/día) atenuaban todas el TST, con la dosis más elevada (3,0 mg/kg/día) teniendo una respuesta supresora similar al estrógeno oral potente, 17\alpha-etinilestradiol (EE).

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Para evaluar la biodisponibilidad oral del estetrol (E4) y para determinar la vida media de eliminación, se realizaron estudios de dosis orales únicas (po) y subcutáneas (sc) en ratas hembras Sprague Dawley seguidos de frecuentes tomas de muestra de sangre durante un intervalo de 24 horas.

Ratas hembras Sprague Dawlei fueron equipadas con un catéter permanente Silastic en el corazón, tal como ha sido descrito por Kuipers et al. (1985, Gastroenterology, 88, 403-411). Se dejó que las ratas se recuperaran de la cirugía 5 días y se les administró 0,05, 0,5, o 5 mg/kg de E4 en 0,5 ml de aceite de arachidis. Para una administración sc, se inyectó E4 en el área del cuello usando una jeringa de 1 ml y una aguja de 20 g. Para una administración po de E4, las ratas fueron ligeramente anestesiadas con halotano/N_{2}O/O_{2} y se aplicó directamente E4 de forma intragástrica usando un entubador de plástico en el estómago. Posteriormente se tomaron muestras de sangre a través del catéter en el corazón en tubos heparinizados en periodos de 0,5, 1, 2, 4, 8 y 24 horas. Los eritrocitos fueron eliminados por centrifugado a 5000 xg durante 10 minutos a 4°C y el plasma sanguíneo fue almacenado a -20°C. Después de descongelar las muestras de plasma, se empleó una extracción líquido-líquido (hexano y éter dietílico) para preparar las muestras con un contenido de E4 en plasma para un análisis de HPLC (Perkin Elmer 200) y una espectrometria de masa en serie usando un espectrómetro de masa en serie PE Sciex 3000 y una interfaz APCI. Con cada lote de muestra, se registró una curva de calibración con 6 calibradores. La curva de calibración fue calculada usando una regresión lineal (coeficiente de correlación > 0,98), que permitió la cuantificación de concentraciones en plasma. Se recogieron los datos para cada plasma de rata, en muestras durante diferentes intervalos de tiempo.

Los datos de concentración en plasma de E4 fueron analizados con "WinNonLin, versión 3.1" y los parámetros farmacocinéticos implicados de C_{max}, vida media y AUC_{0-24}. Especialmente, usando niveles de dosis inferiores e intermedios de 0,05, 0,5 mg/kg, el E4 demostró una biodisponibilidad oral similar a la biodisponibilidad obtenida con una administración sc (80-100%). En el nivel de dosis máximo de ensayo, 5,0 mg/kg de E4, las cinéticas de absorción produjeron una biodisponibilidad oral aproximada del 30 al 60% de E4 administrado sc. De manera interesante, el E4 tuvo una vida media relativamente larga de 2 a 3 horas, permitiendo la detección de niveles bioactivos de E4 no conjugado en todo los periodos de tiempo durante un intervalo de 24 horas.

Ejemplo 5

Se utilizó un ensayo de fijación de esteroides competitivo establecido (Hammond y Lahteenmaki. 1983. Clin Chem Acta 132: 101-110) para determinar la afinidad de fijación relativa del estetrol (E4), 17\alpha-etinilestradiol (EE2), 17\beta-estradiol (E2), testosterona (T) y 5\alpha-dihidrotestosterona (DHT) para la globulina que enlaza las hormonas sexuales humanas (SHBG).

La SHBG humana fue purificada a partir de suero de ratón transgénico, como se ha descrito previamente (Avvakumov GV et al., 2000. J Biol Chem 275: 25920-25925). La SHBG humana preparada de esta manera fue sometida a un ensayo para ser pura a >99% por electroforesis en gel de poliacrilamida en condiciones de desnaturalización. Sus características de fijación de esteroides son indistinguibles de la SHBG en suero humano (Avvakumov GV et al., 2000 J Biol Chem 275: 25920-25925). El ensayo in vitro incluye el uso de SHBG humana purificada y [^{3}H]DHT o [^{3}H]estradiol como ligandos marcados. La SHBG humana fue tratada durante 30 min. a temperatura ambiente con una suspensión de carbón revestido con dextrano (DCC) en una solución salina con tampón de fosfato (PBS) para eliminar cualquier ligando de esteroides. Después de un centrifugado (2,000 x g durante 10 min.) para sedimentar el DCC, el sobrenadante conteniendo la SHBG humana fue diluido en PBS en una concentración de 1 nM basada en su capacidad de fijación de esteroides.

Partes alícuotas duplicadas (100 \mul) de esta solución de SHBG humana fueron posteriormente incubadas con un volumen similar de o bien [^{3}H]DHT o [^{3}H]estradiol de 10 nM, junto con 100 \mul de PBS solo o la misma cantidad de PBS conteniendo concentraciones en aumento de ligandos de esteroides no marcados como competidores en tubos de ensayo de poliestireno. Tras la incubación durante 1 hora a temperatura ambiente, las mezclas de reacción fueron colocadas en un baño de hielo durante 15 min. más. Partes alícuotas (600 \mul) de la suspensión helada de DCC fueron luego añadidas a cada tubo, y después de una mezcla breve de 2 segundos, cada tubo fue incubado en un baño con hielo durante 10 min. o bien 5 min. dependiendo de los ligandos marcados empleados, respectivamente [^{3}H]DHT o [^{3}H]estradiol. Los ligandos no enlazados adsorbidos en DCC fueron posteriormente eliminados por centrifugado (2,000 x g durante 15 min. a 4ºC), y las cantidades de ligandos marcados [^{3}H] enlazados a la SHBG fueron calculados en un cóctel de centelleo ACS de 2 ml usando un espectrofotómetro de centelleo líquido. Las cantidades medias de ligandos marcados [^{3}H] enlazados a la SHBG en cada concentración de competidor (B) fueron expresadas como un porcentaje de las cantidades medias de ligandos marcados [^{3}H] enlazados a la SHBG en ausencia de competidor (B_{0}), y fueron trazados con respecto a la concentración de competidor en cada tubo de ensayo.

Los resultados de los ensayos de enlace competitivos son mostrados en la Figura 4. Como aparece claramente con estos ensayos de enlace competitivos, el estetrol no se enlaza del todo a la SHBG humana cuando es probado con ligandos marcados [^{3}H]DHT o [^{3}H]estradiol. Esto aparece de manera destacada en contraste con esteroides de etinilestradiol, 17\beta-estradiol, testosterona y 5\alpha-dihidrotestosterona, los cuales, en este orden, muestran una afinidad de unión relativa en aumento para la SHBG humana. De forma importante, el enlace del estetrol a la SHBG fue insignificante en comparación con los otros estrógenos probados de etinilestradiol y 17\beta-estradiol.

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Ejemplo 6

Los compuestos estrogénicos presentes pueden ser procesados de forma adecuada, junto con aditivos, excipientes y/o agentes aromatizantes habituales en farmacia galénica, de acuerdo con los métodos convencionales en las formas usuales de administración. Para una administración oral, adecuada existen, en particular, comprimidos, píldoras, cápsulas, píldoras, suspensiones, o soluciones.

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Comprimidos de estetrol: 1,000 comprimidos de 185 mg, comprendiendo 1,5 mg de estetrol y 0.15 mg de levonorgestrel, son producidos a partir de la formulación siguiente:

Estetrol	1,500 g
Levonorgestrel	0,150 g
Polivinilpirrolidona (Kollidon 25® ex BASF)	13,500 g
Lactosa	135,645 g
Celulosa microcristalina (Avicel PH 101®)	26,250 g
Glicerilpalmitoestearato (Precirol ®)	2,775 g
Sílice anhidro coloidal (Aerosil 200 ®)	1,000 g
Crospovidona (poliplasdona XL ®)	4,000 g
Agente colorante	0,180 g

Comprimidos conteniendo también 50 mg de deshidroepiandrosterona pueden ser obtenidos a partir de una formulación similar.

Claims (16)

1. Uso de un compuesto estrogénico seleccionado del grupo consistente en

sustancias representadas por la siguiente fórmula:

10

en cuya fórmula R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} independientemente son un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxilo o un grupo alkoxi con 1-5 átomos de carbono; cada uno de los R_{5}, R_{6}, R_{7} es un grupo hidroxi; y no más de 3 de los R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} son átomos de hidrógeno;

precursores capaces de liberar una sustancia según la fórmula anteriormente mencionada cuando son utilizados en el presente método, dichos precursores siendo derivados de sustancias representadas por la fórmula, en la que el átomo de hidrógeno de al menos uno de los grupos hidroxilo en dicha fórmula ha sido sustituido por un radical acilo de un ácido carboxílico, sulfónico o sulfámico hidrocarbonado de 1 a 25 átomos de carbono, un grupo tetrahidrofuranilo; tetrahidropirano; o una cadena recta o ramificada de un residuo glicosídico conteniendo 1-20 unidades glicosídicas por residuo; y mezclas de una o varias de las sustancias y/o de los precursores citados anteriormente; en la fabricación de una composición farmacéutica usada en un método de sustitución hormonal en mamíferos, dicho método comprendiendo la administración oral de dicho compuesto estrogénico y de un compuesto progestogénico a un mamífero en una cantidad eficaz para prevenir y tratar síntomas de hipoestrogenismo.

2. Uso según la reivindicación 1, donde los síntomas de hipoestrogenismo son seleccionados del grupo consistente en osteoporosis, arterioesclerosis, síntomas climatéricos, trastornos cognoscitivos y enfermedad de Alzheimer.

3. Uso según la reivindicación 1 o 2, donde R_{3} representa un grupo hidroxilo o un grupo alcoxi.

4. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 3, donde al menos 3 de los grupos R_{1}, R_{2}, R_{3} y R_{4} representan átomos de hidrógeno.

5. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 4, donde el método incluye la administración oral ininterrumpida del compuesto estrogénico durante un período de al menos 10 días, preferiblemente de al menos 20 días.

6. Uso según la reivindicación 5, donde el método incluye la administración oral ininterrumpida durante un período de al menos 10 días de una combinación del compuesto estrogénico y de un compuesto progestogénico.

7. Uso según la reivindicación 6, donde el método incluye la administración oral ininterrumpida de la composición del compuesto estrogénico y del compuesto progestogénico durante una duración de al menos 28 días, preferiblemente de al menos 60 días.

8. Uso según la reivindicación 6, donde el método incluye un intervalo de al menos 2 días, preferiblemente 3 a 9 días durante el cual ningún compuesto progestogénico y ningún compuesto estrogénico es administrado y la disminución resultante de la concentración en el suero del compuesto progestogénico y del compuesto estrogénico induce la menstruación.

9. Uso según la reivindicación 6, donde el método incluye la administración oral ininterrumpida del compuesto estrogénico durante una duración de al menos 28 días, preferiblemente de al menos 60 días, y donde después de la administración combinada del compuesto estrogénico y del compuesto progestogénico, el compuesto estrogénico sin ningún compuesto progestogénico es administrado durante 3 a 10 días consecutivos y la disminución resultante de la concentración en el suero del compuesto progestónico induce la menstruación.

10. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 9, donde el método incluye la administración oral al menos una vez al día del compuesto estrogénico y/o del compuesto progestogénico durante un período de al menos 10 días, preferiblemente de al menos 20 días.

11. Uso según una de las reivindicaciones 1-10, donde el compuesto estrogénico es administrado oralmente en una cantidad inferior a 1 mg al día por kg de peso corporal, preferiblemente inferior a 400 \mug al día por kg de peso corporal, más preferiblemente 200 \mug de peso corporal al día.

12. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 11, donde el compuesto estrogénico es administrado oralmente en una cantidad inferior a 1 \mug al día por kg de peso corporal, preferiblemente inferior a 2 \mug al día por kg de peso corporal, y más preferiblemente de al menos 5\mug al día por kg de peso corporal.

13. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 12, donde el compuesto progestogénico es administrado en una cantidad que es equivalente a una dosificación oral diaria de 0,3 a 20 \mug de levonorgestrel por kg de peso corporal, preferiblemente de 0,5 a 5 \mug de levonorgestrel por kg de peso corporal.

14. Kit farmacéutico que incluye al menos 20 unidades de dosificación oral conteniendo el compuesto estrogénico tal como se ha definido en la reivindicación 1 y/o un compuesto progestogénico y/o un compuesto androgénico, donde al menos 10 unidades contienen entre 0,01 y 20 mg del compuesto estrogénico, al menos 10 unidades contienen el compuesto progestogénico en una cantidad equivalente a 30 a 750 \mug de levonorgestrel y al menos 10 unidades de dosificación contienen la dosificación de compuesto androgénico en una cantidad equivalente a 5 a 250 mg de dehidroepiandrosterona.

15. Kit farmacéutico según la reivindicación 14, que incluye al menos 10 unidades de dosificación oral conteniendo entre 0,01 y 20 mg del compuesto estrogénico, una cantidad del compuesto progestogénico equivalente a 30 a 750 \mug de levonorgestrel y una cantidad del compuesto androgénico equivalente a 5 a 250 \mug de dehidroepiandrosterona.

16. Kit farmacéutico según la reivindicación 14 o 15, donde el compuesto androgénico es seleccionado del grupo consistente en dehidroepiandrosterona (DHEA), danazol, gestrinona, ésteres de testosterona, precursores capaces de liberar estos andrógenos cuando son utilizados en el presente método y mezclas de éstos.