[go: up one dir, main page]

ES2261844T3 - Mimeticos de la fsh para el tratamiento de la infertilidad. - Google Patents

Mimeticos de la fsh para el tratamiento de la infertilidad.

Info

Publication number
ES2261844T3
ES2261844T3 ES03023514T ES03023514T ES2261844T3 ES 2261844 T3 ES2261844 T3 ES 2261844T3 ES 03023514 T ES03023514 T ES 03023514T ES 03023514 T ES03023514 T ES 03023514T ES 2261844 T3 ES2261844 T3 ES 2261844T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
ethylcarbazolyl
oxo
pyran
pentyl
carboxamide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES03023514T
Other languages
English (en)
Inventor
Nabil El Tayer
Sharad Magar
Adulla Reddy
David Buckler
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Applied Research Systems ARS Holding NV
Original Assignee
Applied Research Systems ARS Holding NV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Applied Research Systems ARS Holding NV filed Critical Applied Research Systems ARS Holding NV
Application granted granted Critical
Publication of ES2261844T3 publication Critical patent/ES2261844T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en: 1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]etilamino-N-metil- (2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida); 1-metil-1-[3-(9-etilcarbazolil)carbamoil]-etilamino- N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida); 1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]isoamilamino-N- metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida); 1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]isobutilamino-N- metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida); 1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]feniletilamino-N- metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida); 1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]2-hidroxietilamino- N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida); 1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]metilamino-N-metil- (2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida); 1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]metilamino-N-etil- (2-oxo-6-pentil-2H¿piran-3-carboxamida); y 1-Metil-1-[3-(9-etilcarbazolil)carbamoil]-etilamino- (2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida); o una sal de adición del mismo aceptable farmacéuticamente.

Description

Miméticos de la FSH para el tratamiento de la infertilidad.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a productos derivados amino no peptídicos, su uso terapéutico, así como composiciones farmacéuticas que comprenden estos productos derivados. Los compuestos de la invención poseen actividad como agonistas de la Hormona de Estimulación del Folículo (FSH) y son útiles en el tratamiento de la infertilidad.
Sumario de la técnica relacionada
En los EE.UU. hay anualmente 2,4 millones de parejas que sufren de infertilidad que son candidatos potenciales para el tratamiento. La hormona de estimulación del folículo, o extraída de la orina o producida por tecnología de NDA recombinante, es un producto proteico que se administra por vía parenteral utilizado por especialistas para la inducción de la ovulación (OI) y para controlar la hiperestimulación de los ovarios (COH). Aunque se indica un OI para conseguir que un folículo ovule, se indica un COH para recoger múltiples oocitos para utilizar en diversos tecnologías de reproducción asistida in vitro (por ejemplo, para fertilización in vitro). El uso clínico de preparaciones que contienen FSH comenzaron en los años 1960.
La hormona de estimulación del folículo (FSH) es una hormona glicoproteica heterodimérica derivada de la pituitaria, que comparte similitudes estructurales con la hormona de lutenización (LH) y la hormona de estimulación del tiroides (TSH), las cuales también se producen en la glándula pituitaria, y la gonadotropina coriónica (CG), que se produce en la placenta. Las hormonas son relativamente grandes (28-39 kilodaltons) y se componen de una subunidad \alpha común unida de forma no covalente a una diferente subunidad \beta que confiere especificidad de unión al receptor.
Se sabe que los receptores celulares para estas hormonas son miembros de la clase de receptores unidos a membrana acoplados a proteínas G, los cuales, cuando se activan, estimulan un incremento en la actividad de la adenilil-ciclasa. Esto da como resultado un incremento en el nivel del segundo mensajero intracelular 3', 5'monofosfato de adenosina (cAMP), que a su vez causa un aumento en la síntesis y secreción de esteroides. Las representaciones de hidropaticidad de las secuencias de aminoácidos de estos receptores revelan tres dominios generales: (1) una región terminal de amino hidrófilo, que se considera un dominio extracelular de terminal de amino, (2) siete segmentos hidrófobo de longitud de apertura de membrana, que se considera un dominio de transmembrana, y (3) una región carboxi-terminal que contiene sitios de fosforilación potencial (residuos de serina, treonina y tirosina), que se considera el dominio carboxi-terminal intracelular o citoplásmico. La familia de receptores de hormonas glicoproteicas se distinguen de los otros receptores acoplados a proteínas G, tales como los receptores \beta2-adrenérgico, rodopsina y sustancia K, por el gran tamaño del dominio de terminal amino hidrófilo, el cual está involucrado en la unión de la hormona.
El receptor de FSH se expresa en las células de Sertoli testiculares y en las células granulosas de ovario. Aunque se ha reconocido la necesidad de proporcionar esencialmente receptor de FSH humano puro, no es práctica la purificación de preparaciones naturales y serían probablemente insuficientes para permitir la determinación de la secuencia de aminoácidos. Recientemente, un grupo ha clonado el receptor de FSH de rata de codificación de cDNA, deducido la secuencia de aminoácidos, y lo ha expresado en células de mamífero (Sprengel, Mol. Endocrinol. 4; 525 (1990)). Otro grupo, intentando clonar el receptor de TSH, aparentemente también clonó e identificó una porción de la región de transmembrana del receptor de FSH humano (Parmentier, Science 246; 1620(1989)).
El uso de FSH está limitado por su alto coste, la falta de dosificación por vía oral, y la necesidad de monitorización extensiva por médicos especialistas. Por lo tanto, es deseable la identificación de una molécula pequeña no peptídica sustituta de la FSH que potencialmente pudiese desarrollarse para administración por vía oral.
Los documentos JP-A-53.031.669, DE-A-3.636.278, Lasch et al., FEBS Lett. (1988), 227(2), Endröczi et al., Acta Physiol. Hung. (1994), 82(2), 131-8, y Yoshimoto et al., J. Biochem. (1985), 98(4), 975-9, describen todos ellos compuestos heterocíclicos o compuestos no peptídicos.
Compendio de la invención
Ahora nosotros hemos encontrado compuestos no peptídicos para el tratamiento de la infertilidad que imitan la acción de la FSH. Tales compuestos tienen una utilidad de uso superior comparada con la FSH debido a su biodisponibilidad por vía oral. Son adecuados para la prescripción por un Ob/Gyn, requieren supervisión mínima, y tiene costes sustancialmente más bajos comparados con el tratamiento de la FSH.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 representa el esquema de la síntesis de los compuestos comparativos de Fórmula XVI y Fórmula XVII.
La Figura 2 representa el esquema de la síntesis del compuesto comparativo de Fórmula XVIII.
La Figura 3 representa el esquema de la síntesis del compuesto comparativo de Fórmula XIX.
La Figura 4 representa el esquema de la síntesis del compuesto comparativo de Fórmula XXV.
La Figura 5 representa el esquema de la síntesis del compuesto comparativo de Fórmula XXVI.
La Figura 6 representa los resultados del análisis de LDR de los compuestos comparativos XVI, XVII, y XIX comparados con la FSH.
La Figura 7 representa los resultados del ensayo biológico en células primarias de granulosa de rata para los compuestos comparativos XVI y XVII, comparados con la FSH.
La presente invención proporciona los compuestos que se definen en la reivindicación 1. Las realizaciones preferidas son según se definen en las reivindicaciones 2 a 8. Los compuestos preferidos son como se definen a continuación.
1-[3-(9-etilcarbazolil)carbomoil]etilamino-N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
1-Metil-1-[3-(9-etilcarbazolil)carbamoil]-etilamino-N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]isoamilamino-N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]isobutilamino-N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]feniletilamino-N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]2-hidroxietilamino-N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]metilamino-N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]metilamino-N-etil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida); y
1-Metil-1-[3-(9-etilcarbazolil)carbamoil]-etilamino-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
o una sal de adición del mismo aceptable farmacéuticamente.
Será apreciado por todos aquellos expertos en la técnica que los compuestos de la invención pueden contener un centro quiral y así existirán en dos formas enantioméricas. La presente invención incluye el uso de los enantiómeros individuales y las mezclas de los enantiómeros. Los enantiómeros pueden separarse con métodos conocidos por aquellos expertos en la técnica, por ejemplo por formación de complejos diastereoméricos o derivados que puedan separarse, por ejemplo, por cristalización o separación cromatográfica. Alternativamente, pueden sintetizarse enantiómeros específicos por síntesis asimétrica utilizando reactivos, substratos, catalizadores o disolventes ópticamente activos, o al convertir un enantiómero en el otro por una transformación asimétrica.
Los derivados amino no peptídicos de la presente invención representan moléculas pequeñas sustitutos de la FSH para el tratamiento de la infertilidad. Por tanto, la invención comprende una composición farmacéutica que comprende un compuesto según se define en la reivindicación 1 y un vehículo, diluyente, o excipiente del mismo aceptable farmacéuticamente.
Adicionalmente la invención comprende una composición farmacéutica que comprende un compuesto según se define en la reivindicación 1 y un vehículo, diluyente, o excipiente del mismo aceptable farmacéuticamente en combinación con la FSH.
Adicionalmente la invención comprende una composición farmacéutica que comprende un compuesto según se define en la reivindicación 1 y un vehículo, diluyente, o excipiente del mismo aceptable farmacéuticamente en combinación con el compuesto anti-estrógeno citrato de Clomifeno (Cassidenti, et al. (1992) Hum. Reprod., 7:344-348).
Adicionalmente la invención comprende una composición farmacéutica que comprende un compuesto según se define en la reivindicación 1 y un vehículo, diluyente, o excipiente del mismo aceptable farmacéuticamente en combinación con la gonadotropina coriónica humana (hCG) o la hormona luteinizante de la pituitaria (LH) (Breckwoldt et al. (1971) Fer. Steril., 22:451-455); Diedrich et al. (1988) Hum. Reprod., 3:39-44).
Adicionalmente la invención comprende el uso de un compuesto según se define en la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento.
Los compuestos pueden utilizarse para un tratamiento de la infertilidad que comprende administrar una cantidad eficaz como agonista de la FSH de una cualquiera de las composiciones farmacéuticas citadas.
Como agonistas de la FSH, los compuestos de la invención son también herramientas de investigación útiles para el estudio del papel de la FSH y del receptor de la FSH en procesos biológicos in vitro.
Preparaciones farmacéuticas
Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto según se define en la reivindicación 1 y un vehículo, diluyente o excipiente aceptable farmacéuticamente para el mismo también están dentro del alcance de la presente invención. Así, la presente invención también proporciona compuestos para uso como medicamento. En particular, la invención proporciona los compuestos según se definen en la reivindicación 1 para utilizarlos como agonistas de la FSH, para el tratamiento de la infertilidad, o solos o en combinación con otros medicamentos. En valoraciones in vitro se encontró que estos compuestos imitan la acción de la FSH ya que exhiben respuesta de dosis logarítmica positiva en valoraciones de cribado de muestras (FSHR con luciferasa en CHO) y son negativas en el ensayo de control (luciferasa en CHO). Concordantemente, los compuestos de la invención son herramientas de investigación útiles para analizar el papel de la FSH en los procesos biológicos.
Los compuestos representativos también muestran actividad en el ensayo biológico en células primarias de granulosa de rata, que se utiliza para detectar la conversión de la testosterona en estradiol en presencia de FSH o un agonista de la FSH. El ensayo de la luciferasa en CHO y el ensayo biológico en células primarias de granulosa de rata están descritos con detalle más adelante en la presente memoria.
Los compuestos de la invención, junto con un adyuvante, vehículo, diluyente o excipiente convencional pueden colocarse en forma de composiciones farmacéuticos y dosificaciones unitarias de los mismas, y en tal forma puede emplearse como sólidos, tales como comprimidos o cápsulas rellenas, o líquidos tales como disoluciones, suspensiones, emulsiones, elixires, o cápsulas rellenas con ellos, todas para uso por vía oral, o en forma de disoluciones inyectables estériles para vía parenteral (incluyendo el uso subcutáneo). Tales composiciones farmacéuticas y sus formas de dosificación unitarias pueden comprender ingredientes en proporciones convencionales, con o sin compuestos o principios activos adicionales, y tales formas de dosificación unitaria pueden contener cualquier cantidad efectiva adecuada del ingrediente activo proporcionado con el intervalo de dosis diaria pretendido a ser empleado. Comprimidos conteniendo 10 miligramos de ingrediente activo o, más ampliamente, 0,1 a 100 miligramos, por comprimido son por consecuencia formas de dosificación unitarias representativas adecuadas.
Definiciones
Los siguientes párrafos proporcionan definiciones de los diversos restos químicos que completan los compuestos de la invención y esta prevista su aplicación a lo largo de la memoria y reivindicaciones a menos que se establezca expresamente otra cosa.
La expresión "sales o complejos aceptables farmacéuticamente" se refieren a sales o complejos que retienen la actividad biológica deseada de los compuestos anteriormente identificados y exhiben un efecto mínimo o ningún efecto toxicológico no deseado. Ejemplos de tales sales incluyen, pero no se limitan a sales de adición de ácidos formados con ácidos inorgánicos (por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico y otros semejantes), y sales formadas con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido benzoico, ácido tánico, ácido pamoico, ácido algínico, ácido poliglutámico, ácido metanosulfónico, ácido naftalenosulfónico, ácido naftalenodisulfónico, y ácido poligalaturónico. También pueden administrarse los compuestos como sales cuaternarias farmacéuticamente aceptables conocidas por aquellos expertos de la técnica, las cuales incluyen específicamente las sales de amonio cuaternario de fórmula -NR + Z,
en las que R es hidrógeno, alquilo, o benzoílo, y Z es un ion de signo contrario, que incluye cloruro, bromuro, ioduro, -O-alquilo, toluensulfonato, metilsulfonato, sulfonato, fosfato, o carboxilato (tales como benzoato, succinato, acetato, glicolato, maleato, citrato, tartrato, ascorbato, benzoato, cinamoato, mandeloato, benziloato, y difenilacetato).
Ejemplos comparativos Ejemplo 1 Síntesis de 3-(9-etilcarbazolil)amida del ácido 1-[(2-Oxo-6-pentil-2H-piran)-3-carbonil]pirrolidin-2-carboxílico (Fórmula XVI) (Figura 1:Esquema 1)
Paso A
Síntesis del éster t-butílico del ácido 1-[(2-Oxo-6-pentil-2H-piran)-3-carbonil]pirrolidin-2-carboxílico
Se añadió gota a gota una disolución de di-isopropil carbodiimida (DIC, 2,5 mmol) a una disolución de Boc-L-prolina (6 mmol, Advanced ChemTech, Louisville, EE.UU.) en diclorometano (20 mL) enfriada a 0ºC. Después de que la disolución se hubiese agitado a 0ºC durante 30 min, se filtró el subproducto sólido (DIC urea). Se añadió al filtrado 3-amino-9-etilcarbazol (5 mmol, Aldrich Chemical Company, Milwaukee, EE.UU.) y se agitó la disolución durante 16 h a temperatura ambiente. Se monitorizó el final de la reacción por TLC. Se evaporó la disolución hasta sequedad bajo vacío. Se disolvió el residuo en acetato de etilo (250 mL) y se lavó sucesivamente con carbonato de sodio 10% acuoso, ácido cítrico 10% acuoso, agua y salmuera saturada. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se evaporó el acetato de etilo para dar un producto oleoso 1-(t-Butoxicarbonil)-N-[3-(9-etilcarbazolil)]-2-pirrolidinacarboxamida (rendimiento 75%); pureza por HPLC: 90%; Masa: deseada M+H encontrada (Preceptive Biosystem's Voyager-Maldi TOF). Este compuesto se utilizó en el paso siguiente sin purificación adicional.
Paso B
Formación de 3-(9-etilcarbazolil)amida del ácido 1-[(2-Oxo-6-pentil-2H-piran)-3-carbonil]pirrolidin-2-carboxílico (Fórmula XVI)
Se disolvió en ácido trifluoroacético/ diclorometano (25 mL) la N-Boc-pirrolidinacarboxamida obtenida en el paso A y se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se evaporó la disolución de TFA bajo vacío. Se disolvió el residuo seco en DMF y se añadieron dos equivalentes de trietilamina, seguido por un equivalente de un anhídrido simétrico (generado in situ a partir de ácido 2-oxo-6-pentil-2H-piran-carboxílico y diisopropilcaobodiimida) y se agitó la disolución durante 14 h. Se evaporó la DMF bajo alto vacío. Se disolvió el residuo en acetato de etilo, Se lavó la capa orgánica con carbonato de sodio 10% acuoso, ácido cítrico 10% acuoso, agua y salmuera saturada. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro. Se decoloró la capa orgánica con carbón y se evaporó bajo vacío para dar como resultado un material gomoso marrón claro. Se purificó el material crudo con HPLC de fase reversa preparativa utilizando TFA-acetonitrilo al 1% y agua como fase móvil. Pureza por HPLC > 95%. Masa: calculada para C_{30}H_{33}N_{3}O_{4}: 499,6; encontrada:500,6 (M+H) (Preceptive Biosystem's Voyager-Maldi TOF).
La síntesis de 3-(9-etilcarbazolil)amida del ácido 1-[(2-Oxo-6-pentil-2H-piran)-carbonil]-piperidin-2-carboxílico (Fórmula XVII) se consiguió utilizando el mismo procedimiento que antes utilizando ácido N-Boc-pipecolínico hecho a partir de ácido dl-pipecolínico (Aldrich Chemical Company, Milwaukee, EE.UU.) en vez de Boc-L-prolina.
Ejemplo 2 Síntesis de 2-(2-Etil-n-hexil)-N-[(1-carboxamido-2-terazolil)etil]-3-isoquinolinacarboxamida (Fórmula XVII) (Figura 2; Esquema 2)
Paso A
Síntesis de la amida de resina de amida de Rink y N-Fmoc-D-histidina
Se hinchó con diclorometano durante 10 min resina de amida de Rink F-moc (1,0 g. 0,45 mmol/g sustitución), disponible en NovaBiochem (San Diego, EE.UU.). Adicionalmente se lavó la resina tres veces con dimetilformamida. Se eliminó el grupo F-moc con piperidina al 20% en DMF durante 30 min. Se hicieron lavados repetidos adicionales con DMF (3 x 2 min), diclorometano (DCM, 3 x 2 min), DMF (1 x 1 min). Entonces se añadieron N-Fmoc-D-histidina (disponible en Advanced ChemTech, Louisville, EE.UU.) en DMF [10 mL, 2,0 mmol (4 equivalentes con respecto a la carga de resina)], 2 mmol de hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriol-1-il)-1,1,3,3,-tetrametiluronio (HATU) y 4 mmol de diisopropiletilamina (DIEA, 640 \muL) para hacer una pasta. Se agitó esta pasta a temperatura ambiente durante 2 h. Se sometió una pequeña muestra de resina al ensayo de Sarin-Kaiser para completar la reacción. Entonces se filtró la resina y se lavó con DMF (3 x 2 min), MeOH (2 x 2 min), diclorometano (2 x 2 min) y DMF
(2 x 2 min).
Paso B
Síntesis de N-[(1-Carboxamido-2-tetrazoil)etil]-3-isoquinolina-carboxamida unida a una resina de amida de Rink
Se desprotegió el compuesto obtenido en el paso A eliminando el grupo Fmoc- con piperidina al 20% en DMF durante 30 min. Se realizaron lavados de la resina adicionales con DMF (3 x 2 min), diclorometano (DCM, 3 x 2 min), DMF (1 x 1 min). Después se añadieron ácido (S)-(-)-1,2,3,4-tetrahidro-3-isoquinoleina carboxílico (disponible en Advanced ChemTech, Louisville, EE.UU.) en DMF [10 mL, 2,0 mmol (4 equivalentes con respecto a la carga de resina), 2 mmol de HATU y 4 mmol de diisopropiletilamina (DIEA, 640 \muL) para hacer una pasta. Se agitó esta pasta a temperatura ambiente durante 2 h. Se sometió una pequeña muestra de resina al ensayo de Sarin-Kaiser para completar la reacción. Entonces se filtró la resina y se lavó con DMF (3 x 2 min), MeOH (2 x 2 min), diclorometano (2 x 2 min) y DMF (2 x 2 min).
Paso C
Síntesis de 2-(2-Etil-n-hexil)-N-[(1-carboxamido-2-terazolil)etil]-3-isoquinolinacarboxamida unida a la resina
Se eliminó el grupo Fmoc- del nitrógeno de tetrahidroisoquinolina por tratamiento con piperidina al 20% en DMF durante 30 min. Entonces se lavó la resina con DMF (3 x 2 min), diclorometano (3 x 2 min), y DMF (1 x 1 min). Después se añadió disolución 0,2M de 2-etilhexanal (Aldrich Chemical Company, Milwaukee, EE.UU.) en ácido acético al 2% en orto formiato de trimetilo (TMOF) y se llevó a cabo la reacción durante 2 h para formar un derivado de imina in situ. Después se añadió disolución 0,2M de cianoborohidruro de sodio (NaCNBH_{3}) en TMOF a la mezcla de reacción anterior para conseguir una concentración final de 0,1M y se continuó la reacción a temperatura ambiente durante 14 h. Se lavó la resina con TMOF (3 x 2 min), DMF (3 x 2 min), MeOH (3 x 2 min), diclorometano (2 x 2 min) y se secó bajo vacío durante 4 h.
\newpage
Paso D
Formación de 2-(2-Etil-n-hexil)-N-[(1-carboxamido-e-terazolil)etil]-3-isoquinolinacarboxamida (Fórmula XVIII)
Se añadió (10 mL/g) de reactivo de escisión previamente enfriado (ácido trifluoracético/triisopropilsilano: H_{2}O; 90:2,5:2,5:5; v/v) a la resina seca y se dejó agitando durante 2 h a temperatura ambiente. Se filtró la mezcla de TFA a un vial de 20 mL y se evaporó el TFA en un rotavapor bajo vacío. Se añadió dietiléter para precipitar el compuesto junto con el alcohol tritílico. Se disolvió la mezcla en acetonitrilo al 20% antes de la purificación por HPLC en fase reversa.
Paso E
Purificación del compuesto XVIII
Se disolvió el compuesto crudo del paso D en acetonitrilo al 10% acuoso y se cargó en una columna C18 de HPLC preparativa Delta. Se utilizó un gradiente lineal con TFA acetonitrilo al 1% y agua como fase móvil. Pureza por HPLC > 95%. Masa (Perceptive Biosystem's Voyager.Maldi TOF): calculada para C_{24}H_{30}N_{5}O_{2}: 425,6; encontrada 426,6 (M+H).
Ejemplo 3 Síntesis de 3-(9-etilcarbazolil)amida del ácido 1-[(2-Oxo-6-pentil-2H-piran)-3-carbonil]-4-hidroxipirrolidon-2-carboxílico (Fórmula XIX) (Figura 3:Esquema 3)
Paso A
Síntesis de 3-(9-etilcarbazolil)amida del ácido 1-butoxicarbonil-4-hidroxxipirrolidin-2-carboxílico
Se añadieron a intervalos de 5 min hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriol-1-il)-1,1,3,3,-tetrametiluronio (HBTU, 5 mmol), diisopropiletilamina (DIEA, 10 mmol) seguidos por 3-amino-9-etilcarbazol (5 mmol, Aldrich Chemical Company, Milwaukee, EE.UU.) a una disolución de N-Boc-trans-hidroxi-L-prolina (5 mmol, Sigma Chemical Company, St. Louis, EE.UU.) en diclorometano (20 mL) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 1 h, se evaporó la disolución hasta sequedad bajo vacío. Se disolvió el residuo en acetato de etilo (250 mL) y se lavó sucesivamente con carbonato de sodio 10% acuoso, ácido cítrico 10% acuoso, agua y salmuera saturada. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se evaporó el acetato de etilo para dar un producto oleoso 1-(t-Butoxicarbonil)-4-hidroxipirrolidina-2-[3-(9-etilcarbazoil)]carboxamida (rendimiento 85%); pureza por HPLC: 90%. Este compuesto se utilizó en el paso siguiente sin purificación adicional.
Paso B
Formación de 3-(9-etilcarbazolil)amida del ácido 1-[3-(2-Oxo-6-pentilpiran)carbonil]-4-hidroxipirrolidin-2-carboxílico
Se disolvió en ácido trifluoroacético/ diclorometano (25 mL) la 1-(t-butoxicarbonil-4-hidroxipirrolidina-2-[3-(9-etilcarbazolil)]carboxamida obtenida en el paso A y se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se evaporó la disolución de TFA bajo vacío. Se disolvió el residuo seco en diclorometano y se añadieron al éster activado del ácido 2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxílico (generado in situ de 5 mmol de ácido 2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxílico, 5 mmol de HBTU y 10 mmol de diisopropiletilamina) y se agitó la disolución durante 1 h. Se evaporó el disolvente bajo vacío y se disolvió el residuo en acetato de etilo, Se lavó la capa orgánica con carbonato de sodio 10% acuoso, ácido cítrico 10% acuoso, agua y salmuera saturada. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro y después se evaporó bajo vacío para dar como resultado un material gomoso marrón claro. Se purificó el material crudo con HPLC de fase reversa preparativa utilizando TFA-acetonitrilo al 1% y agua como fase móvil. Pureza por HPLC > 95%. Masa: calculada para C_{30}H_{33}N_{3}O_{5}: 415,6; encontrada:516 (Preceptive Biosystem's Voyager-Maldi TOF).
Ejemplo 4 Síntesis de 2-[(1-Carboxamido-2-terazolil)etilcarbamoil]-(D,L)-2-(2-etil-n-hexilamin)tetralina (Fórmula XXV) (Figura 4; Esquema 4)
Paso A
Síntesis de la amida de resina de amida de Rink y N-Fmoc-D-histidina
Se hinchó con diclorometano durante 10 min resina de amida de Rink F-moc (1,0 g. 0,45 mmol/g sustitución), disponible en NovaBiochem (San Diego, EE.UU.). Adicionalmente se lavó la resina tres veces con dimetilformamida. Se eliminó el grupo F-moc con piperidina al 20% en DMF durante 30 min. Se hicieron lavados repetidos adicionales con DMF (3 x 2 min), diclorometano (DCM, 3 x 2 min), DMF (1 x 1 min). Entonces se añadieron N-Fmoc-D-histidina (disponible en Advanced ChemTech, Louisville, EE.UU.) en DMF [10 mL, 2,0 mmol (4 equivalentes con respecto a la carga de resina)], 2 mmol de hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriol-1-il)-1,1,3,3,-tetrametiluronio (HATU) y 4 mmol de diisopropiletilamina (DIEA, 640 \muL) para hacer una pasta. Se agitó esta pasta a temperatura ambiente durante 2 h. Se sometió una pequeña muestra de resina al ensayo de Sarin-Kaiser para completar la reacción. Entonces se filtró la resina y se lavó con DMF (3 x 2 min), MeOH (2 x 2 min), diclorometano (2 x 2 min) y DMF (2 x 2 min).
Paso B
Síntesis de 2-[(1-Carboxamido-2-tetrazoil)etilcarbamoil]-(D,L)-2-aminotetralina unida a una resina de amida de Rink
Se desprotegió el compuesto obtenido en el paso A eliminando el grupo Fmoc- con piperidina al 20% en DMF durante 30 min. Se realizaron lavados de la resina adicionales con DMF (3 x 2 min), diclorometano (DCM, 3 x 2 min), DMF (1 x 1 min). Después se añadieron ácido Fmoc-(D,L)-2-aminotetralina-carboxílico (disponible en Acros) en DMF [10 mL, 2,0 mmol (4 equivalentes con respecto a la carga de resina), 2 mmol de HATU y 4 mmol de diisopropiletilamina (DIEA, 640 \muL) para hacer una pasta. Se agitó esta pasta a temperatura ambiente durante 2 h. Se sometió una pequeña muestra de resina al ensayo de Sarin-Kaiser para completar la reacción. Entonces se filtró la resina y se lavó con DMF (3 x 2 min), MeOH (2 x 2 min), diclorometano (2 x 2 min) y DMF (2 x 2 min).
Paso C
Síntesis de 2-[(1-Carboxamido-2-terazolil)etilcarbamoil]-(D,L)-2-(2-etil-n-hexilamin)tetralina unida a la resina
Se eliminó el grupo Fmoc- del nitrógeno de aminotetralina por tratamiento con piperidina al 20% en DMF durante 30 min. Entonces se lavó la resina con DMF (3 x 2 min), diclorometano (3 x 2 min), y DMF (1 x 1 min). Después se añadió disolución 0,2M de 2-etilhexanal (Aldrich Chemical Company, Milwaukee, EE.UU.) en ácido acético al 2% en trimetil orto formiato (TMOF) (10 mL/g de resina) y se llevó a cabo la reacción durante 2 h para formar un derivado de imina in situ. Después se añadió disolución 0,2M de cianoborohidruro de sodio (NaCNBH_{3}) en TMOF a la mezcla de reacción anterior para conseguir una concentración final de 0,1M y se continuó la reacción a temperatura ambiente durante 14 h. Se lavó la resina con TMOF (3 x 2 min), DMF (3 x 2 min), MeOH (3 x 2 min), diclorometano (2 x 2 min) y se secó bajo vacío durante 4 h.
Paso D
Formación de 2-[(1-Carboxamido-2-terazolil)etilcarbamoil]-(D,L)-2-(2-etil-n-hexilamin)tetralina (Fórmula XXV)
Se añadió (10 mL/g) de reactivo de escisión previamente enfriado (ácido trifluoracético/triisopropilsilano:H_{2}O; 90:2,5:2,5:5; v/v) a la resina seca y se dejó agitando durante 2 h a temperatura ambiente. Se filtró la mezcla de TFA a un vial de 20 mL y se evaporó el TFA en un rotavapor bajo vacío. Se añadió dietiléter para precipitar el compuesto junto con el alcohol tritílico. Se disolvió la mezcla en acetonitrilo al 20% antes de la purificación por HPLC en fase reversa.
Paso E
Purificación del compuesto XXV
Se disolvió el compuesto crudo del paso D en acetonitrilo al 10% acuoso y se cargó en una columna C18 de HPLC preparativa Delta. Se utilizó un gradiente lineal con TFA acetonitrilo al 1% y agua como fase móvil. Pureza por
HPLC > 95%. Masa (Perceptive Biosystem's Voyager.Maldi TOF): calculado para C_{24}H_{30}N_{5}O_{2}: 439,6; encontrada: 440,6 (M+H).
Ejemplo 5 Síntesis de 3-(9-Etilcarbazolil)amino-piridin-2-il-3-(2-Oxo-6-pentil-2H-piran)-3-carboxmida (Fórmula XXVI) (Figura 5:Esquema 5)
Paso A
Síntesis de 2-[3-(9-etilcarbazolil)amino]-3-nitropiridina
Se añadió 2-amino-9-etilcarbazol (5 mmol, Aldrich Chemical Company, Milwaukee, EE.UU.) a una disolución de 2-cloro-3-nitropiridina (5 mmol, Aldrich Chemical Company, Milwaukee, EE.UU.) en tolueno (10 mL) a temperatura ambiente. Se calentó la mezcla a reflujo durante un periodo de 16 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, se diluyó la mezcla con acetato de etilo y se lavó sucesivamente con bicarbonato de sodio y salmuera saturados. Se recogió la capa orgánica, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró in vacuo para dar un producto oleoso. Este producto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (eluyente: 1:1 acetato de etilo:hexano) para dar 2-[3-(9-Etilcarbazolil)amino]-3-nitropiridina (rendimiento 68%); pureza por HPLC: > 95%;. Este compuesto se utilizó en el paso siguiente.
Paso B
Síntesis de 2-[3-(9-Etilcarbazolil)amino-3-aminopiridina
Se añadió paladio 10% sobre carbón (10% p/p) a una disolución metanólica de 2-[3-(9-Etilcarbazolil)amino]-3-nitropiridina obtenida en el paso A y la mezcla se sometió a hidrogenación utilizando un hidrogenador Parr a 40 psi durante un periodo de 12 h. Después se filtro la pasta formada por Celita para eliminar el catalizador y se evaporó el filtrado hasta sequedad para obtener como resultado un producto oleoso, 2-[3-(9-etilcarbazolil)amino]-3-aminopiridina. Se utilizó en el siguiente paso.
Paso C
Formación de 3-(9-Etilcarbazolil)amino-piridin-2-il-3-(2-Oxo-6-pentil-2H-piran)-3-carboxmida (Fórmula XXVI)
Se añadieron hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriol-1-il)-1,1,3,3,-tetrametiluronio (HBTU, 3 mM; Advanced
ChemTech, Louisville, EE.UU.) seguidos de 6 mM de diisopropiletilamina (DIEA; Aldrich Chemical Company, Milwaukee, EE.UU.) a una disolución de ácido 2-Oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxílico (3 mM, Aldrich Chemical Company, Milwaukee, EE.UU.) en 10 mL de diclorometano a temperatura ambiente. Después de 10 min se añadió gota a gota una disolución de 3 mM de 2-[3-(9-etilcarbazolil)amino]-3-aminopiridina (obtenido en el paso B), y se agitó la mezcla resultante durante 2 h a temperatura ambiente. Se lavó la mezcla del producto crudo con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se cromatografió sobre gel de sílice (eluyente: 1:1 acetato de etilo:hexano hasta 100% de acetato de etilo) para conseguir un 71% de compuesto XXVI puro. Pureza por HPLC: > 95%;. Masa: calculada para C_{30}H_{30}N_{4}O_{3}: 495; encontrada:496 (M+H) (Finnigan LCQ),
Ejemplo 6 Método de ensayo de FSH Resumen general
Se guardaron todos los compuestos en placas de pocillos profundos de 96 pocillos en DMSO a una concentración nominal de 10 mM (asumiendo síntesis y rendimientos perfectos). Se cribaron los compuestos buscando actividad de agonista en el receptor de FSH utilizando el receptor de FSH recombinante transfectado de forma estable y expresado en células de ovario de hámster chino (células CHO) esencialmente como se describe en el trabajo de Kelton, et al. (Molecular and Cellular Endocrinology, 1992, 89,141-151). Dado que se conoce que el receptor de FSH actúa vía una proteína G (Gs) para activar la adenilil-ciclasa y por lo tanto aumenta los niveles intracelulares de cAMP, el ensayo de cribado de alto rendimiento (HTS) utilizó un sistema de genes indicadores que consistía en el elemento de respuesta a cAMP acoplado corriente arriba con respecto al gen indicador, que en este caso codificaba la enzima luciferasa. Un agonista en el receptor de FSH aumenta el cAMP en la célula, lo cual da como resultado una activación de CREB (la proteína de unión al elemento de respuesta al cAMP). Esta molécula interacciona con el elemento CRE corriente arriba con respecto al gen y da como resultado un aumento en la transcripción de los genes situados corriente abajo con respecto al elemento. Se añadió el substrato para la luciferasa (Packard Instruments Company, Meriden, CT, EE.UU.) a las células después de una incubación apropiada con los compuestos de la invención o FSH (utilizada como control positivo). Se midió la cantidad de luciferasa expresada cuantificando la luminiscencia producida por la enzima utilizando un contador de centelleo/luminiscencia TopCount funcionando en el modo de contar un fotón único. Un compuesto que actúe como agonista en el receptor debería producir luz de las células tratadas en proporción a su concentración en la incubación. La luminiscencia debería ser saturable a altas concentraciones del
compuesto.
Ensayo primario de HTS en detalle
Los compuestos de la invención, en placas de pocillo profundo (placas principales) se pusieron en un soporte robotizado junto con un número apropiado de placas de ensayo y de placas hijas. Se transfirió una parte alícuota de 10 \mul de cada placa principal a la correspondiente placa hija y se añadieron 90 \mul de DME/F12 y se mezclaron en cada pocillo. Entonces se tomaron 20 \mul de cada placa hija y se dispensaron en la placa de ensayo. Después de la adición de una parte alícuota de FSH (equivalente a una respuesta de EC_{100} de esta hormona [concentración final de 5e-11 M]) a cada uno de tres pocillos en la placa, se añadieron 80 \mul de medio (DME/F12 + 2% de suero) y una parte alícuota de 100 \mul de células (4 x 10^{5}/mL en el mismo medio) y se incubó la placa a 37ºC durante 3 h 30 min. A este tiempo se sacó la placa del incubador y se aspiró el medio en cada pocillo y se lavaron las células adheridas al fondo de la placa con 300 \mul de PBS que contenían 1 mM de Ca^{2+} y 1 mM de Mg^{2+}. Se aspiró el PBS y se añadieron 100 \mul de PBS a cada pocillo. Se añadieron 100 \mul de Luclita (preparada como describe el fabricante) a cada pocillo y se agitó suavemente la placa durante 40 s antes de colocarla en el lector de placas Topcount, Después de dejar 3,5 min para que la placa se adaptara a la obscuridad en la máquina, se cuantificó la cantidad de luminiscencia generada utilizando el modo de contar un fotón único. Se trasmitieron los datos electrónicamente del Topcount al terminal del ordenador de proceso del robot y se redenominaron con una ID que correspondía a la ID de la placa principal original. Se evaluaron los datos utilizando un macro de Excel y se analizaron posteriormente en el mismo ensayo a diferentes concentraciones los compuestos que mostraban una actividad comparable a la producida por una EC_{100} de la FSH misma. Se generaron curvas LDR (dosis-respuesta logarítmicas) para estos compuestos en células de CHO que contenían el receptor de FSH y también se compararon estas curvas con aquellas en las que o las células expresaban un receptor diferente ligado a Gs o en las que las células carecían de cualquier receptor transfectado (para confirmar la especificidad del receptor).
A los compuestos que mostraron especificidad por el receptor y actividad a bajas concentraciones se les pasó a los ensayos secundarios que incluyeron curvas de dosis-respuesta en células Y1 que co-expresaban el receptor de FSH humano o en células de granulosa de rata.
La Figura 6 representa los resultados del ensayo de FSH de los compuestos XVI, XVII y XIX. Para comparar, también se muestran los resultados de la FSH. Se generaron y se representaron las curvas de dosis-respuesta de cada compuesto. Según la gráfica, la FSH tiene una EC_{50} de 1,47 pM, el compuesto XVI tiene una EC_{50} de 38,8 nM, el compuesto XVII tiene una EC_{50} de 3,9 nM, y el compuesto XIX tiene una EC_{50} de 1,12 \muM. Está dibujada la línea que mejor se ajusta a la FSH. También se muestran los resultados del ensayo utilizando medio solamente y forskolina. El ensayo se realizó utilizando muestras duplicadas de cada compuesto.
Ejemplo 7 Ensayo en células de granulosa de rata
Esencialmente se realizó el ensayo biológico para la FSH en células primarias de granulosa de rata como está descrito (Dahl et al. (1989) Methods Enzymol., 168: 414-423). Se detectó la conversión de testosterona en estradiol en presencia de concentraciones nanomolares bajas de FSH utilizando este ensayo. En este ensayo in vitro, se midió la conversión de androstendiona en estrógeno por células de la granulosa en la presencia de FSH para los compuestos XVI y XVII. Para comparar, también se evaluó la FSH en el ensayo.
Se pusieron en placas células a 5.000, 8.000, 10.000 y 20.000/células/pocillo/200 \mul de medio GAB en placas de cultivo de tejidos de 96 pocillos recubiertos con poli-D-lisina. Se incubaron las placas a 37ºC en un incubador con 5% CO_{2}/95% de aire durante 3 días. Se lavaron los cultivos antes de la estimulación con FSH o LH. Se añadieron a los cultivos 50 \mul de concentraciones 4 x de rhFSH, rhLH o forskolina. Para definir el intervalo de la curva de dosis-respuesta se diluyó el rhFSH de forma que la concentración final sobre las células estaba entre 10^{-7} a 10^{-5} M con tres dosis por logaritmo a 1, 2 y 5. Se diluyó la forskolina de forma que la concentración final sobre las células era 1 \muM. Se incubaron las células a 37ºC en 5% de CO_{2}. Se recogieron los sobrenadantes de las células tres días más tarde y se diluyeron 1:100 con medio GAB para la medida de estradiol por RIA. Se realizó el RIA de acuerdo con las indicaciones del fabricante excepto porque se preparó un estándar de estradiol en etanol absoluto a 100 ng/mL, y después se diluyó adicionalmente con medio GAB, en vez de tampón del kit. Se representó la concentración de la hormona en el eje de las X frente a la cantidad de estradiol producida por las células en el eje de las Y utilizando el programa de gráficos Origin.
Como se representa en la Figura 7, los compuestos XVI y XVII muestran incremento en la producción de estradiol al incrementar la dosis a concentraciones entre 200 nM y 5 \muM. Por encima de esta concentración el compuesto mostró un decremento en la producción-presumiblemente porque esto causaba una desensibilización de los receptores de FSH a estimulación posterior. Los resultados muestran que los compuestos XVI y XVII estimulaban la producción de estradiol con EC_{50} de 1,4 \muM y 1,2 \muM, respectivamente. También se muestran los resultados del ensayo utilizando medio solamente.

Claims (8)

1. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:
1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]etilamino-N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
1-metil-1-[3-(9-etilcarbazolil)carbamoil]-etilamino-N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]isoamilamino-N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]isobutilamino-N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]feniletilamino-N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]2-hidroxietilamino-N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]metilamino-N-metil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
1-[3-(9-Etilcarbazolil)carbamoil]metilamino-N-etil-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida); y
1-Metil-1-[3-(9-etilcarbazolil)carbamoil]-etilamino-(2-oxo-6-pentil-2H-piran-3-carboxamida);
o una sal de adición del mismo aceptable farmacéuticamente.
2. El compuesto según la reivindicación 1 para uso como medicamento.
3. Uso de un compuesto según la reivindicación 1 ó 2 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la infertilidad.
4. Uso de un compuesto según la reivindicación 1 ó 2 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de trastornos mediados por la FSH.
5. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 1 ó 2 y un vehículo, diluyente o excipiente del mismo aceptable farmacéuticamente.
6. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 1 ó 2 y un vehículo, diluyente o excipiente del mismo aceptable farmacéuticamente, en combinación con FSH.
7. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 1 ó 2 y un vehículo, diluyente o excipiente del mismo aceptable farmacéuticamente, en combinación con citrato de Clomifeno.
8. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 1 ó 2 y un vehículo, diluyente o excipiente del mismo aceptable farmacéuticamente, en combinación con gonadotropina coriónica humana (hCG) u hormona luteinizante de la pituitaria humana.
ES03023514T 1998-08-07 1999-08-05 Mimeticos de la fsh para el tratamiento de la infertilidad. Expired - Lifetime ES2261844T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US9571298P 1998-08-07 1998-08-07
US95712P 1998-08-07

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2261844T3 true ES2261844T3 (es) 2006-11-16

Family

ID=22253270

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES03023514T Expired - Lifetime ES2261844T3 (es) 1998-08-07 1999-08-05 Mimeticos de la fsh para el tratamiento de la infertilidad.
ES99939686T Expired - Lifetime ES2228084T3 (es) 1998-08-07 1999-08-05 Mimeticos de la fsh para el tratamiento de la infertilidad.

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES99939686T Expired - Lifetime ES2228084T3 (es) 1998-08-07 1999-08-05 Mimeticos de la fsh para el tratamiento de la infertilidad.

Country Status (12)

Country Link
US (3) US6235755B1 (es)
EP (1) EP1102763B1 (es)
JP (1) JP4511042B2 (es)
AR (1) AR021755A1 (es)
AT (2) ATE329911T1 (es)
AU (1) AU772373B2 (es)
CA (1) CA2339018A1 (es)
DE (2) DE69921147T2 (es)
ES (2) ES2261844T3 (es)
IL (1) IL141063A (es)
PT (2) PT1102763E (es)
WO (1) WO2000008015A2 (es)

Families Citing this family (76)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6025355A (en) 1997-05-19 2000-02-15 Cambridge Neuroscience, Inc. Pharmaceutically active compounds and methods of use
AU760174B2 (en) 1999-02-09 2003-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Lactam inhibitors of FXa and method
PT1268418E (pt) * 2000-03-27 2006-08-31 Applied Research Systems Derivados da pirrolidina farmacologicamente activos com inibidores bax
HRP20020705A2 (en) 2000-03-27 2004-12-31 Applied Research Systems Pharmaceutically active pyrrolidine derivatives
GB0010757D0 (en) 2000-05-05 2000-06-28 Astrazeneca Ab Chemical compounds
US6511973B2 (en) 2000-08-02 2003-01-28 Bristol-Myers Squibb Co. Lactam inhibitors of FXa and method
IL156811A0 (en) * 2001-01-19 2004-02-08 Pharmacopeia Inc Bisaryl derivatives and pharmaceutical compositions containing the same
US6900213B2 (en) 2001-01-19 2005-05-31 Pharmacopeia Drug Discovery, Inc. Bisaryl derivatives having FSH modulatory activity
HUP0303258A3 (en) 2001-02-23 2004-06-28 Merck & Co Inc N-substituted nonaryl-heterocyclic nmda/nr2b antagonists and pharmaceutical compositions containing them
AU2002338334B8 (en) 2001-04-03 2008-09-18 Merck & Co., Inc. N-substituted nonaryl-heterocyclo amidyl NMDA/NR2B antagonists
ES2299567T3 (es) * 2001-05-05 2008-06-01 Smithkline Beecham Plc N-aroilaminas ciclicas.
GB0115862D0 (en) * 2001-06-28 2001-08-22 Smithkline Beecham Plc Compounds
PT1406628E (pt) * 2001-07-02 2006-06-30 Akzo Nobel Nv Derivados de tera-hidroquinolina
GB0121941D0 (en) 2001-09-11 2001-10-31 Astrazeneca Ab Chemical compounds
AU2002340562B2 (en) * 2001-10-22 2008-10-23 Merck Serono Sa Compositions of FSH with high sialylation degree and their use for the preparation of medicaments
CA2499732A1 (en) * 2002-09-20 2004-04-15 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Piperazine derivatives and methods of use
CN100386318C (zh) * 2002-12-20 2008-05-07 欧加农股份有限公司 四氢喹啉衍生物及其作为fsh受体调节剂的用途
TWI306855B (en) 2002-12-20 2009-03-01 Organon Nv Tetrahydroquinoline derivatives
TWI322012B (en) 2002-12-20 2010-03-21 Organon Nv Tetrahydroquinoline derivatives
CN100404508C (zh) * 2002-12-20 2008-07-23 欧加农股份有限公司 四氢喹啉衍生物
UA88879C2 (en) * 2003-09-02 2009-12-10 Эплайд Рисерч Системз Эрс Холдинг Н.В. Fsh glycosylation mutant
CN1926237A (zh) * 2004-01-28 2007-03-07 森托尼克斯制药有限公司 用于治疗不育症的异二聚体促卵泡激素－Fc(FSH－Fc)融合蛋白
US7691848B2 (en) 2005-03-02 2010-04-06 Wyeth Pyrrolobenzodiazepine arylcarboxamides and derivatives thereof as follicle-stimulating hormone receptor antagonists
WO2006095922A1 (ja) * 2005-03-10 2006-09-14 Kyoto Pharmaceutical Industries, Ltd. テトラヒドロイソキノリン化合物およびその医薬用途
UA92009C2 (ru) 2005-05-04 2010-09-27 Н.В. Органон Производные 4-фенил-5-оксо-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолина для лечения бесплодия
UA92007C2 (ru) 2005-05-04 2010-09-27 Н.В. Органон Производные 4-фенил-5-оксо-1,4,5,6,7,8-гексагидрохинолина для лечения бесплодности
UA92008C2 (en) 2005-05-04 2010-09-27 Н.В. Органон 4-PHENYL-5-OXO-l,4,5,6,7,8-HEXAHYDROQUINOLINE DERIVATIVES AS MEDICAMENTS FOR THE TREATMENT OF INFERTILITY
PL1879866T3 (pl) 2005-05-04 2011-07-29 N V Organon Pochodne dihydropirydynowe
CA2607882A1 (en) 2005-05-12 2006-11-23 Wyeth Pyrrolobenzodiazepines and heterocyclic carboxamide derivatives as follicle stimulating hormone receptor (fsh-r) antagonists
EP1893615A1 (en) 2005-06-09 2008-03-05 Wyeth a Corporation of the State of Delaware Pyrrolobenzodiazepine pyridine carboxamides and derivatives as follicle-stimulating hormone receptor antagonists
US20090018142A9 (en) * 2006-05-02 2009-01-15 Zhengping Zhuang Use of phosphatases to treat tumors overexpressing N-CoR
CA2652061A1 (en) * 2006-05-17 2007-11-29 Marvin C. Gershengorn Pyrimidine low molecular weight ligands for modulating hormone receptors
US7935715B2 (en) 2006-07-28 2011-05-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Compounds which modulate the CB2 receptor
CN101662939B (zh) 2007-02-06 2015-11-25 利克斯特生物技术公司 氧杂双环庚烷和氧杂双环庚烯，它们的制备及用途
AU2008307541B2 (en) 2007-10-01 2015-02-12 Lixte Biotechnology, Inc. HDAC inhibitors
WO2009061652A1 (en) 2007-11-07 2009-05-14 Boehringer Ingelheim International Gmbh Compounds which modulate the cb2 receptor
TW200944523A (en) 2008-02-08 2009-11-01 Organon Nv (Dihydro)pyrrolo[2,1-a]isoquinolines
WO2010005782A1 (en) 2008-07-10 2010-01-14 Boehringer Ingelheim International Gmbh Sulfone compounds which modulate the cb2 receptor
WO2010147612A1 (en) 2009-06-18 2010-12-23 Lixte Biotechnology, Inc. Methods of modulating cell regulation by inhibiting p53
EP2318005B1 (en) 2008-08-01 2017-11-01 Lixte Biotechnology, Inc. Neuroprotective agents for the prevention and treatment of neurodegenerative diseases
US8227473B2 (en) 2008-08-01 2012-07-24 Lixte Biotechnology, Inc. Oxabicycloheptanes and oxabicycloheptenes, their preparation and use
KR20110063438A (ko) 2008-09-25 2011-06-10 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 Ｃｂ2 수용체를 선택적으로 조절하는 설포닐 화합물
EP2387567B1 (en) 2009-01-14 2014-06-11 The Salk Institute for Biological Studies Compounds that protect against amyloid diseases
WO2010096371A2 (en) 2009-02-18 2010-08-26 Boehringer Ingelheim International Gmbh Heterocyclic compounds which modulate the cb2 receptor
US8071587B2 (en) 2009-05-27 2011-12-06 N. V. Organon (Dihydro)imidazoiso[5,1-A]quinolines
TWI461426B (zh) * 2009-05-27 2014-11-21 Merck Sharp & Dohme （二氫）咪唑並異〔５，１－ａ〕喹啉類
US8299103B2 (en) 2009-06-15 2012-10-30 Boehringer Ingelheim International Gmbh Compounds which selectively modulate the CB2 receptor
WO2010147791A1 (en) * 2009-06-16 2010-12-23 Boehringer Ingelheim International Gmbh Azetidine 2 -carboxamide derivatives which modulate the cb2 receptor
TW201116531A (en) 2009-07-29 2011-05-16 Organon Nv Ring-annulated dihydropyrrolo[2,1-a]isoquinolines
US8431564B2 (en) 2009-07-29 2013-04-30 Merck Sharp & Dohme B.V. Ring-annulated dihydropyrrolo[2,1-α]isoquinolines
TW201116515A (en) * 2009-07-31 2011-05-16 Organon Nv Dihydrobenzoindazoles
USRE46608E1 (en) 2009-09-01 2017-11-14 Catabasis Pharmaceuticals, Inc. Fatty acid niacin conjugates and their uses
SG178948A1 (en) 2009-09-01 2012-04-27 Catabasis Pharmaceuticals Inc Fatty acid niacin conjugates and their uses
US8383651B2 (en) 2009-09-22 2013-02-26 Boehringer Ingelheim International Gmbh Compounds which selectively modulate the CB2 receptor
JP2013517271A (ja) 2010-01-15 2013-05-16 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃｂ２受容体を調節する化合物
WO2011109324A1 (en) 2010-03-05 2011-09-09 Boehringer Ingelheim International Gmbh Tetrazole compounds which selectively modulate the cb2 receptor
JP5746764B2 (ja) 2010-07-22 2015-07-08 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃｂ２受容体を調節する化合物
WO2013006308A2 (en) 2011-07-01 2013-01-10 Merck Patent Gmbh Dihydropyrazoles
ES2649995T3 (es) 2011-07-18 2018-01-16 Merck Patent Gmbh Benzamidas
CN104080784B (zh) 2012-01-10 2017-07-18 默克专利有限公司 用作卵泡刺激素调节剂的苯甲酰胺衍生物
JP6386382B2 (ja) 2012-02-08 2018-09-05 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングＭｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｉｔ ｂｅｓｃｈｒａｅｎｋｔｅｒ Ｈａｆｔｕｎｇ 卵胞刺激ホルモン受容体のアゴニストとしての重水素化されたチアゾリジノン類似体
CA2909160C (en) 2013-04-09 2021-05-25 Lixte Biotechnology, Inc. Formulations of oxabicycloheptanes and oxabicycloheptenes
EP2803668A1 (en) 2013-05-17 2014-11-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Novel (cyano-dimethyl-methyl)-isoxazoles and -[1,3,4]thiadiazoles
CN105658650B (zh) 2013-06-24 2019-01-08 默克专利有限公司 用作卵泡刺激素受体调节剂的咪唑化合物及其用途
RU2663898C2 (ru) 2013-06-24 2018-08-13 Мерк Патент Гмбх Пиразольные соединения в качестве модуляторов fshr и их применение
US11433047B2 (en) * 2015-10-09 2022-09-06 Neurotheryx Canada Ltd. Pharmaceutical compositions comprising one or more pyrone compounds, and their use for treating inflammatory and neurodegenerative diseases
JP7246309B2 (ja) 2016-12-08 2023-03-27 リクスト・バイオテクノロジー，インコーポレイテッド 免疫応答を調節するためのオキサビシクロヘプタン
US10729689B2 (en) * 2017-10-26 2020-08-04 University Of Puerto Rico Carbazole EHop-016 derivatives as anti-cancer and anti-migratory agents
BR112022007627A2 (pt) 2019-10-25 2022-07-12 Gilead Sciences Inc Compostos moduladores do glp-1r
CN115335374B (zh) 2020-01-29 2025-05-27 吉利德科学公司 Glp-1r调节化合物
US11851419B2 (en) 2020-11-20 2023-12-26 Gilead Sciences, Inc. GLP-1R modulating compounds
US12091404B2 (en) 2021-03-11 2024-09-17 Gilead Sciences, Inc. GLP-1R modulating compounds
WO2022192430A1 (en) 2021-03-11 2022-09-15 Gilead Sciences, Inc. Glp-1r modulating compounds
AU2022263410B2 (en) 2021-04-21 2024-08-01 Gilead Sciences, Inc. Carboxy-benzimidazole glp-1r modulating compounds
KR20250157379A (ko) 2023-03-08 2025-11-04 훼링 비.브이. 소분자 fsh 수용체 조절제
CN117510475A (zh) * 2023-11-01 2024-02-06 江苏缘龙医院管理有限责任公司 干扰RNA-蛋白相互作用的Musashi蛋白抑制剂及其应用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3947569A (en) * 1972-04-12 1976-03-30 American Home Products Corporation Process for preparing the releasing hormone of luteinizing hormone (LH) and of follicle stimulating hormone (FSH), salts and compositions thereof, and intermediates therefor
JPS5331669A (en) * 1976-09-06 1978-03-25 Kissei Pharmaceut Co Ltd Novel n-acylpiperidinecaroxyanilide derivatives and their preparation
US4800432A (en) * 1986-10-24 1989-01-24 The Grass Valley Group, Inc. Video Difference key generator
DE3636278A1 (de) * 1986-10-24 1988-05-05 Hoechst Ag Herbizide mittel auf der basis von cyclischen (alpha)-iminocarbon-saeureaniliden sowie neue (alpha)-iminocarbonsaeureanilide und verfahren zu ihrer herstellung
US5071823A (en) 1988-10-12 1991-12-10 Mitsubishi Paper Mills Limited Image-receiving sheet for transfer recording
DE3842010A1 (de) * 1988-12-14 1990-06-21 Hoechst Ag Kompetitive gonadoliberin-antagonisten
JPH07501085A (ja) * 1992-09-03 1995-02-02 ベーリンガー　インゲルハイム　コマンディトゲゼルシャフト 新規なアミノ酸誘導体、その製造方法及びこれらの化合物を含む医薬組成物
US5455229A (en) * 1992-12-23 1995-10-03 Eli Lilly And Company Method for minimizing and containing ischemic and reperfusion injury
PE45195A1 (es) * 1994-03-03 1996-01-17 Boehringer Ingelheim Kg Derivado de aminoacido, procedimiento para su preparacion y composicion farmaceutica que lo contiene
AU753540B2 (en) * 1998-03-05 2002-10-24 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Non-peptide GnRH agents

Also Published As

Publication number Publication date
JP2002522433A (ja) 2002-07-23
IL141063A0 (en) 2002-02-10
US20020147345A1 (en) 2002-10-10
US6235755B1 (en) 2001-05-22
US6423723B1 (en) 2002-07-23
WO2000008015A2 (en) 2000-02-17
PT1102763E (pt) 2005-01-31
ATE279407T1 (de) 2004-10-15
JP4511042B2 (ja) 2010-07-28
ATE329911T1 (de) 2006-07-15
DE69931975D1 (de) 2006-07-27
ES2228084T3 (es) 2005-04-01
US6653338B2 (en) 2003-11-25
IL141063A (en) 2005-06-19
EP1102763B1 (en) 2004-10-13
DE69931975T2 (de) 2006-10-05
AU5393199A (en) 2000-02-28
WO2000008015A3 (en) 2000-05-11
CA2339018A1 (en) 2000-02-17
AR021755A1 (es) 2002-08-07
DE69921147D1 (de) 2004-11-18
EP1102763A2 (en) 2001-05-30
PT1380582E (pt) 2006-08-31
AU772373B2 (en) 2004-04-22
DE69921147T2 (de) 2005-02-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2261844T3 (es) Mimeticos de la fsh para el tratamiento de la infertilidad.
Williams et al. 1-(((7, 7-Dimethyl-2 (S)-(2 (S)-amino-4-(methylsulfonyl) butyramido) bicyclo [2.2. 1] heptan-1 (S)-yl) methyl) sulfonyl)-4-(2-methylphenyl) piperazine (L-368,899): an orally bioavailable, non-peptide oxytocin antagonist with potential utility for managing preterm labor
US10913769B2 (en) Synthetic peptide amides and dimers thereof
Guerlavais et al. New active series of growth hormone secretagogues
US20040171520A1 (en) Peptidomimetics of biologically active metallopeptides
EP3152225B1 (en) Peptides as oxytocin agonists
Hiebl et al. Large‐scale synthesis of hematoregulatory nonapeptide SK&F 107647 by fragment coupling
Kaur et al. Modifications of the pyroglutamic acid and histidine residues in thyrotropin-releasing hormone (TRH) yield analogs with selectivity for TRH receptor type 2 over type 1
Kaur et al. Synthesis, receptor binding, and activation studies of N (1)-alkyl-L-histidine containing thyrotropin-releasing hormone (TRH) analogues
Hruby et al. Design of nonpeptides from peptide ligands for peptide receptors
Maeda et al. Synthesis and evaluation of isothiocyanate-containing derivatives of the δ-opioid receptor antagonist Tyr-Tic-Phe-Phe (TIPP) as potential affinity labels for δ-opioid receptors
EP1380582B1 (en) FSH mimetics for the treatment of infertility
EP1423373B1 (en) Substituted amides, sulfonamides and ureas useful for inhibiting kinase activity
AU2004202858B2 (en) FSH mimetics for the treatment of infertility
TW455580B (en) 3-aminoethyl-N-amidino-2,5-dihyropyrrole-derivatives having arginine mimentic properties and pharmaceutical compositions containing these compounds
US20040014676A1 (en) SRC kinase inhibitors useful for treating osteoporosis
Caporale et al. Synthesis and structural studies of new analogues of PTH (1–11) containing Cα-tetra-substituted amino acids in position 8
US7223763B2 (en) Substituted sulfonamides and ureas useful for inhibiting kinase activity
Yadav et al. Design, Synthesis, Development, and Biological Evaluation of Third‐Generation Tubulin Inhibitors for Treatment of Cancer
WO2023077977A1 (zh) 秋水仙碱衍生物的制备方法及其用途