DE69232093T2

DE69232093T2 - Methylenoxindolderivate und verfahren zu ihrer herstellung

Info

Publication number: DE69232093T2
Application number: DE69232093T
Authority: DE
Inventors: Franco Buzzetti; Maristella Colombo; Antonio Longo
Original assignee: Pharmacia and Upjohn SpA
Current assignee: Pfizer Italia SRL
Priority date: 1991-07-12
Filing date: 1992-07-10
Publication date: 2002-05-16
Anticipated expiration: 2012-07-11
Also published as: JP3188701B2; GB9115160D0; MX9204008A; EP0552329A1; ZA925169B; EP0525472A3; ES2165357T3; NZ243454A; DE69232093D1; IL102383A; EP0552329B1; AU2277792A; JPH06501494A; FI931061A7; IL102383A0; KR930702337A; HUT67496A; CA2091058C; PT552329E; IE922253A1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue 3-Methylean-2-oxindolderivat, ein Verfahren zu ihrer Herstellung, pharmazeutische Zusammensetzungen, die sie enthalten, und ihre Verwendung als therapeutische Mittel.
Die vorliegende Erfindung stellt Verbindungen der folgenden allgemeinen Formel (I) bereit
wobei
R eine Gruppe
ist, in der
R&sub4; Hydroxy oder NHR&sub7; ist, wobei Wasserstoff oder C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl ist;
R&sub5; Wasserstoff ist; und
R&sub6; Wasserstoff ist;
n 0, 1 oder 2 ist;
R&sub1; Wasserstoff, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl oder C&sub2;&submin;&sub6;-Alkanoyl ist;
R&sub2; Wasserstoff, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl, Halogen, Cyan, Carboxyl, Nitro oder -NHR&sub7; ist, wobei R&sub7; oben definiert ist;
R&sub3; Wasserstoff, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl oder C&sub2;&submin;&sub6;-Alkanoyl ist; oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
In den Verbindungen der vorliegenden Erfindung kann jeder der Substituenten R, -OR&sub1; und R&sub2; unabhängig sowohl an der Benzol- oder an der Pyrrol- Einheit des kondensierten Indol-Ringsystems sein. Die Erfindung beinhaltet in ihrem Umfang alle möglichen Isomere, Stereoisomere, insbesondere Z- und E-Isomere und ihre Mischungen, und die Metaboliten und die metabolitischen Vorstufen oder Biovorstufen (sonst bekannt als Pro-drugs) der Verbindungen der Formel (I).
Der Substituent R ist bevorzugt gebunden an Position 2 oder 3 des Indolrings, insbesondere an Position 3.
Wenn n 2 ist, kann jede der -OR&sub1;-Gruppen die gleiche oder eine verschiedene sein.
Ein Substituent -OR&sub1; ist bevorzugt gebunden an Position 4, 5, 6 oder 7, insbesondere an Position 5 oder 7.
Der Substituent R&sub2; ist bevorzugt an der Benzolring-Einheit insbesondere gebunden an Position 5.
Natürlich kann nur einer der Substituenten R, -OR&sub1; und R&sub2; an die gleiche Positions des Indol-Ringsystems gebunden sein.
Der Substituent R&sub4; ist bevorzugt gebunden an Position 4 oder 5, insbesondere an Position 5.
Wenn R&sub4; -NHR&sub7; ist, wobei oben definiert ist, dann hat der R&sub2;-Substituent bevorzugt nicht die gleiche Bedeutung. Umgekehrt, wenn R&sub2; -NHR&sub1; ist, wobei R&sub7; oben definiert ist, ist der R&sub4;-Substituent bevorzugt ein Anderes als -NHR&sub7;.
Die Alkylgruppen und die Alkyl-Einheiten in den Alkanoylgruppen, können verzweigte oder gerade Alkylketten sein. Eine C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylgruppe ist bevorzugt eine C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylgruppe, z. B. Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, sec-Butyl oder tert-Butyl, insbesondere Methyl oder Ethyl. Eine C&sub2;&submin;&sub6;-Alkanoylgruppe ist bevorzugt eine C&sub2;&submin;&sub4;-Alkanoylgruppe, insbesondere Acetyl, Propionyl oder Butyryl.
Ein Halogen ist bevorzugt Chlor, Brom oder Fluor, insbesondere Brom.
Pharmazeutisch annehmbare Salze der erfindungsgemässen Verbindungen beinhalten Säureadditionssalze mit anorganischen Säuren, z. B. Salpeter-, Chlorwasserstoff-, Bromwasserstoff-, Schwefel-, Perchlor- und Phosphorsäuren, oder organischen Säuren, z. B. Essig-, Propion-, Glykol-, Milch-, Oxal-, Malon-, Äpfel-, Malein-, Wein-, Zitronen-, Benzoe-, Zimt-, Mandel- und Salicylsäuren, und Salze mit anorganischen Basen, B. Alkalimetall-, insbesondere Natrium- oder Kaliumbasen, oder Erdalkalimetallbasen, insbesondere Calcium- oder Magnesiumbasen, oder mit organischen Basen, z. B. Alkylaminen, bevorzugt Triethylamin.
Wie oben erwähnt, beinhaltet die vorliegende Erfindung in ihrem Umfang pharmazeutisch annehmbare Biovorstufen (sonst bekannt als Pro-drugs) der Verbindungen der Formel (I), d. h. Verbindungen, die eine Formel besitzen, die sich von der obigen Formel (I) unterscheidet, aber die nichtsdestotrotz nach der Verabreichung an einen Menschen direkt oder indirekt III vivo in eine Verbindung der Formel (I) umgewandelt werden. Bevorzugte erfindungsgemässe Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I), wobei R oben definiert ist, R&sub4; Hydroxy oder Amino ist und R&sub5; und R&sub6; Wasserstoff sind; R&sub1; Wasserstoff oder C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl ist; n 0 oder 1 ist; R&sub2; Wasserstoff, Carboxy, Amino oder Nitro ist; R&sub3; Wasserstoff ist; und die pharmazeutiscH annehmbaren Salze davon.
Besonders bevorzugte erfindungsgemässe Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I), in denen R oben definiert ist, R&sub4; Hydroxy oder Amino ist; und R&sub5; und R&sub6; Wasserstoff sind; n 0 oder 1 ist; R&sub1; Wasserstoff ist; R&sub2; Wasserstoff, Amino oder Carboxy ist; R&sub3; Wasserstoff ist; und die pharmazeutisch annehmbaren Salze davon.
Beispiele von speziellen erfindungsgemässen Verbindungen sind die folgenden Verbindungen, die gegebenenfalls entweder Z- oder E-Diastereomere oder Z,E-Mischungen der genannten Diastereomere sein können:
5-Hydroxy-3-[(3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;
5-Amino-3-[(3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;
5-Hydroxy-3-[(5'-hydroxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;
5-Hydroxy-3-[(7'-hydroxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;
5-Amino-3-[(5'-hydroxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;
5-Hydroxy-3-[(5'-amino-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;
5-Hydroxy-3-[(5'-carboxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;
5-Amino-3-[(7'-hydroxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;
und gegebenenfalls die pharmazeutisch annehmbaren Salze davon.
Die erfindungsgemässen Verbindungen und die pharmazeutisch annehmbaren Salze davon können mittels eines Verfahrens erhalten werden, umfassend die Kondensation eines Aldehyds der Formel (II)
wobei
R&sub1;, R&sub2;, R&sub3; und n oben definiert sind, mit einer Verbindung der Formel (III)
wobei
R&sub4;, R&sub5; und R&sub6; oben definiert sind, und, falls gewünscht, Umwandeln einer Verbindung der Formel (I) in eine andere Verbindung der Formel (I), und/oder, falls gewünscht, Umwandeln einer Verbindung der Formel (I) in ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, und/oder, falls gewünscht, Umwandeln eines Salzes in eine freie Verbindung, und/oder, falls gewünscht, Trennen einer Mischung von Isomeren einer Verbindung der Formel (I) in die einzelnen Isomere. Jeder der Substituenten R&sub2;, -OR&sub1; und -CHO in einer Verbindung der Formel (II) kann unabhängig sowhl an der Benzol- oder an der Pyrrol-Einheit des Indolrings sein.
Die Reaktion einer Verbindung der Formel (II) mit einer Verbindung der Formel (III) ist ein Analogieverfahren, das gemäss bekannten Methoden durchgeführt werden kann, die nachfolgend beschrieben werden; bevorzugt in Anwesenheit eines basischen Katalysators, z. B. Pyridin, Piperidin, Dimethylamin oder einem geeigneten Alkalimetallhydroxid oder -alkoxid.
Zum Beispiel kann die Reaktion einer Verbindung der Formel (II) mit einer Verbindung der Formel (III) unter den Bedingungen der Knoevenagel- Reaktionen durchgeführt werden, die z. B. durch G. Jones in Organic Reactions 15, 204 (1967), beschrieben sind. Geeignete Katalysatoren sind organische Basen, wie Pyridin, Piperidin oder Diethylamin. Die Kondensation kann in einem inerten organischen Lösungsmittel, z. B., Pyridin, Ethanol, Methanol, Benzol oder Dioxan, bei Temperaturen, die sich von etwa 0 bis etwa 100ºC erstrecken, durchgeführt werden.
Bevorzugt wird die Reaktion in warmer Ethanollüsung in Anwesenheit eines Piperidinkatalysators durchgeführt.
Eine Verbindung der Formel (I) kann in eine andere Verbindung der Formel (I) mittels bekannter Methoden umgewandelt werden. Zum Beispiel kann die Etherspaltung einer Verbindung der Formel (I), wobei einer oder mehrere R&sub1;-Substituenten C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl sind, um eine Verbindung der Formel (I), wobei eine oder mehrere R&sub1;-Substituenten Wasserstoff sind, mittels gut bekannten Methoden der organischen Chemie durchgeführt werden. Im Falle eines phenolischen Methylethers kann die Spaltung z. B. mit Bortribromid durchgeführt werden, wie durch J.F.N. McOmie in Tetrahedron 24, 2289 (1968), beschrieben. Es ist ratsam, etwa 1 mol des Bortribromids für jede Ethergruppe zusammen mit einem zusätzlichen Mol des Reagenzes für jede Gruppe, die einen potentiell basischen Stickstoff oder Sauerstoff enthält, zu verwenden. Die Reaktion kann in einem inerten organischen Lösungsmittel, wie Methylenchlorid, Pentan oder Benzol, unter einer inerten Atmosphäre, z. B. Stickstoff, bei Temperatur, die sich von etwa -78ºC bis etwa Raumtemperatur erstrecken, durchgeführt werden.
Die Acylierung einer Verbindung der Formel (I), wobei eine oder mehrere von -OR&sub1; und/oder R&sub4; Wasserstoff ist, um eine entsprechende Verbindung der Formel (I), wobei eine oder mehrere von -OR&sub1; und/oder R&sub4; eine C&sub2;&submin;&sub6;- Alkanoyloxygruppe ist, kann durch Reaktion mit einem reaktiven Derivat einer geeigneten Carbonsäure, wie einem Anhydrid oder Halogenid, in Anwesenheit eines basischen Mittels bei einer Temperatur, die sich von etwa 0 bis etwa 50ºC erstreckt, erhalten werden. Bevorzugt wird die Acylierung durch Reaktion mit dem entsprechenden Anhydrid in Anwesenheit einer organischen Base, wie Pyridin, durchgeführt.
Die optionale Salzbildung einer Verbindung der Formel (I) sowie die Umwandlung eines Salzes in die freie Verbindung und die Trennung einer Mischung von Isomeren in die einzelnen Isomere kann mittels herkömmlicher Methoden durchgeführt werden.
Zum Beispiel kann die Trennung einer Mischung von geometrischen Isomeren, z. B. cis- und trans-Isomeren, durch fraktionierte Kristallisation aus einem geeigneten Lösungsmittel oder durch Chromatografie, entweder Säulenchromatografie oder Hochdruck-Flüssigkeitschromatografie, durchgeführt werden.
Die Verbindungen der Formel (II) können mittels bekannten Methoden aus den Verbindungen der Formel (IV) erhalten werden:
Zum Beispiel können die 3-Formylindolderivate der Formel (II) aus einer Verbindung (IV) durch Formylierung mit N-Methylformanilid und Phosphoroxychlorid gemäss der gut bekannten Vilsmeyer-Haack-Methode (für eine Übersicht siehe W.G. Jackson et al., J. Am. Chem. Soc. 103, 533 (1981)) erhalten werden. Die 2-Formylindolderivate werden erhalten, falls die 3-Position besetzt ist.
Die Verbindungen der Formeln (III) und (IV) sind bekannt oder können durch bekannte Verfahren aus bekannten Verbindungen erhalten werden.

PHARMAKOLOGIE:

Die erfindungsgemässen Verbindungen besitzen spezifische Tyrosinkinase-inhibierende Aktivität. Daher können sie zur Behandlung von Krebs und anderen pathologischen proliferativen Zuständen nützlich sein, wie zum Inhibieren der Entwicklung der atheromatösen Plaque, in Säugern, einschliesslich Menschen.
Typische therapeutische Indikationen gemäss der Letzteren Verwendung sind Wiederverschluss nach koronarer Angioplastik und im allgemeinen die Verringerung von Krankheiten der Koronararterien.
Neuere Untersuchungen zur molekularen Basis der neoplastischen Umwandlung identifizierten eine Familie von Genen, mögliche Onkogene, deren anomale Expression die Tumorgenese verursacht.
Zum Beispiel besitzen die RNA-Tumorviren solch eine Onkogensequenzs deren Expression die neoplastische Umwandlung von infizierten Zellen bestimmt. Mehrere ihrer durch Onkogene kodierten Proteine, wie pp60v-arc, p70gag-yes, p130gag-fps und p70gag-fgr zeigen Proteintyrosinkinaseaktivität, d. h. sie katalysieren den Transfer des y-Phosphats von Adenosintriphosphat (ATP) auf Tyrosinreste in Proteinsubstraten. In normalen Zellen zeigen mehrere Rezeptoren für Wachstumsfaktoren, z. B. die Rezeptoren für PDGF, EGF, α-TGF und Insulin, Tyrosinkinaseaktivität.
Durch Binden des Wachstumsfaktors (GF) wird die Rezeptortyrosinkinase aktiviert, um Autophosphorylierung zu erleiden und eng benachbarte Moleküle am Tyrosin zu phosphorylieren. Daher wird angenommen, dass die Phosphorylierung dieser Thyrosinkinaserezeptoren eine wichtige Rolle in der Signalübertragung spielt und dass die Hauptfunktion der Tyrosinkinaseaktivität in normalen Zellen das Regulieren des Zellwachstums ist.
Stören dieser Aktivität durch onkogene Tyrosinkinasen, die entweder überproduziert sind und/oder veränderte Substratspezifität zeigen, kann zum Verlust der Wachstumskontrolle und/oder zur neoplastischen Umwandlung führen. Folglich kann ein spezifischer Inhibitor für Dyrosinkinasen nützlich beim Untersuchen des Mechanismus der Carcinogenese, Zellproliferation und -differenzierung sein, und er kann bei der Prävention und Chemotherapie von Krebs und von anderen pathologischen proliferativen Zuständen wirksam sein.
Die Tyrosin-spezifische Proteinkinaseaktivität dieser Verbindungen wird mittels der unten beschriebenen in vitro-Tests gezeigt.

v-abl-Kinasereinigung:

Das Enzym, das als Abelson-Tyrosinkinase p95v-abl verwendet wird, wurde wie folgt hergestellt und isoliert: 1 l Kulturen von HB-130-Zellen in LB-Medium, angereichert mit Ampicillin, wurden bei 30ºC, wie durch Wang et al. in J. Biol. Chem. 260, 64 (1985), beschrieben, gezogen. Die Expression des v-abl-Proteins würde durch Verschieben der Temperatur auf 42ºC für 3 bis 4 Stunden induziert. Die Bakterienzellen wurden auf Eis gesammelt, zentrifugiert und in flüssigem Stickstoff eingefroren. Das Zellpellet wurde wie durch Ferguson et al. in J. Biol. Chem. 260, 3652 (1985) und Biochem. J. 257, 321 (1989), beschrieben, lysiert. Kurz gesagt, wurden die Bakterienproteine durch differenzielle Solubilisierung mit Natriumdesoxycholat, NaCl und β-Octylglucopyranosid in verschiedenen Schritten entfernt. Urilösliches v-abl-Protein wurde mit 2 M KSCH solubilisiert und gegen 100 Volumen von 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 1 mM EDTA und 0,1 mM Dithiothreitol (Puffer A) dialysiert. Die löslichen Proteine wurden mittels Chromatografie auf einer vorgepackten Mono-Q-Anionenaustauschersäule in einem f.p.l.c.- System abgetrennt. Die v-abl-Aktivität wurde mit einem linearen KCl- Gradienten (O-I M Puffer A) eluiert. Aktive Fraktionen wurden gepoolt, auf 50% in Glycerin eingestellt und in kleinen Aliquoten bei -20ºC gelagert:

Myelin Basic Protein-Phosphorylierungsassay:

Die in vitro-Tests mit Myelin Basic Protein als Substrat wurden wie folgt durchgeführt: Proteinphosphorylierung wurde durchgeführt, indem 40 ng von der gereinigten v-abl-Kinase, 1,5 uC1 [γ-³²P] ATP, 10 uM kaltes ATP, 56 uM Myelin Basic Protein in 50 ul 25 mM Tris-HCl, pH 8,0, enthaltend 10 mM MgCl&sub2;, 0,1 mM Dithiothreitol (Kinasepuffer), bei 22ºC inkubiert wurden. Die Reaktion wurde durch Zugabe von gleichen Volumen von zweifach konzentriertem Laemmli-Elektrophoresepuffer [U.K. Laemmli, Nature (London), 230, 680 (1970)] gestoppt. Proben wurden noch einmal für 3 Minuten gekocht und in SDS-PAGE (15% Acrylamid) aufgetrennt. Gele wurden getrocknet und für 15 bis 30 Minuten bei -70ºC autoradiografischen Filmen ausgesetzt. Banden wurden mittels Audioradiografie lokalisiert, aus dem Gel herausgeschnitten und in einem Flüssig-Szintillationszähler gezählt.

Autophosphorylierungsassay:

Für das Autophosphorylierungsassay wurde die v-abl-Kinase mit Antiphosphotyrosin-Antikörpern immunopräzipitiert und der resultierenden Immunokomplex in 50 ul Kinasepuffer in Anwesenheit von 10 uM ATP und 10 uCi [γ-³²P]-ATP analysiert. Die Reaktion wurde nach 15 Minuten bei Raumtemperatur mit kochendem Laemmli-Puffer gestoppt. Die Proben wurden nochmals für 3 Minuten gekocht und in SDS-PAGE (8% Acrylamid) getrennt. Die Gele wurden getrocknet und für bis zu 3 Stunden bei -70ºC autoradiografischen Filmen ausgesetzt. Banden wurden wie oben mittels Audioradiografie lokalisiert, herausgetrennt und gezählt.
In Tabellen I und II wird eine repräsentative erfindungsgemässe Verbindung mit dem entsprechenden, nicht-hydroxylierten Analogon, das durch die allgemeine Formel der Patentanmeldung WO91/13055 umfasst ist, verglichen. Der Vergleich zeigt, dass die Einführung einer Hydroxylgruppe die inhibierende Aktivität auf die Autophosphorylierung signifikant erhöht, während sie die Wirksamkeit gegenüber exogenen Substraten nur leicht erhöht.

Tabelle I: Myelin Basic Protein-Phosphorylierungsassay

IC&sub5;&sub0; (uM)
5-Hydroxy-3-[(3'-indolyl)methylen]-2-oxindol 0,4
3-[(3'-indolyl)methylen]-2-oxindol 0,6

Tabelle II: Autophosphorylierungsassay

IC&sub5;&sub0; (uM)
5-Hydroxy-3-[(3'-indolyl)methylen]-2-oxindol 0,4
3-[(3'-indolyl)methylen]-2-oxindol 10
Im Hinblick auf ihre hohe Aktivität und niedrige Toxizität können die erfindungsgemässen Verbindungen gefahrlos in der Medizin eingesetzt werden. Zum Beispiel wurde gefunden, dass die ungefähre akute Toxizität (LD&sub5;&sub0;), bestimmt durch einfache Verabreichung von steigenden Dosen und gemessen am 7. Tag nach der Behandlung, der erfindungsgemässen Verbindungen in der Maus vernachlässigbar ist.
Die erfindungsgemässen Verbindungen können in einer Vielfalt von Applikationsformen verabreicht werden, z. B. oral in Form von Tabletten, Kapseln, Zucker- oder überzugsbeschichteten Tabletten, flüssigen Lösungen oder Suspensionen; rektal in Form von Suppositorien; parenteral, z. B. intramuskulär oder durch intravenöse Injektion oder Infusion; oder topisch.
Die Dosis ist abhängig vom Alter, Gewicht und Zustand des Patienten und der Verabreichungsroute; zum Beispiel kann sich die Dosis, die an die orale Verabreichung an erwachsene Menschen angepasst ist, von etwa 10 bis etwa 150 bis 200 mg pro Gabe, von 1 bis 5 mal täglich erstrecken. Natürlich können diese Dosisbereiche angepasst werden, um die optimale therapeutische Antwort hervorzurufen.
Die Erfindung schliesst pharmazeutische Zusammensetzungen, umfassend eine Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon in Verbindung mit einem pharmazeutisch annehmbaren Arzneimittelträger (der ein Träger oder Streckstoff sein kann) ein. Die Erfindung stellt auch eine pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend einen geeigneten Träger und/oder Streckstoff und, als Wirkstoff, eine Verbindung, ausgewählt aus 3-[(1'-Methyl-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol, 3-[(3-Indolyl)methylen]-1- methyl-2-oxindol und den pharmazeutisch annehmbaren Salzen davon, bereit, wobei die Verbindung oder das Salz entweder das Z- oder E-Diastereoisomer oder eine Z,E-Mischung von Diastereomeren sein kann.
Die Verbindungen, die oben als Wirkstoff der pharmazeutischen Zusammensetzungen beschrieben sind, werden durch die Erfindung auch zur Verwendung als Tyrosinkinaseinhibitor, z. B. als ein Antiproliferationsmittel, ein Antikrebsmittel oder zur Behandlung von Krankheiten der Koronararterien bereitgestellt.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen, die die erfindungsgemässen Verbindungen enthalten, werden normalerweise gemäss herkömmlichen Methoden hergestellt und in einer pharmazeutisch geeigneten Form verabreicht.
Zum Beispiel können die festen oralen Formen zusammen mit der aktiven Verbindung Streckstoffe, z. B. Lactose, Dextrose, Saccharose, Cellulose, Maisstärke oder Kartoffelstärke; Gleitmittel, z. B. Silicat, Talk, Stearinsäure, Magnesium- oder Calciumstearat und/oder Polyethylenglykole; Bindemittel, z. B. Stärken, Gummi arabicum, Gelatine, Methylcellulose, Carboxymethylcellulose oder Polyvinylpyrrolidon; Aufschlussmittel, z. B. Stärke, Alginsäure, Alginate oder Natriumstärkeglykolate, aufschäumende Mischungen; Farbstoffe; Süssungsmittel; Benetzungsmittel, wie Lecithin, Polysorbate, Laurylsulfate; und im allgemeinen nicht-toxische und pharmakologisch inaktive Substanzen, die in pharmazeutischen Formulierungen verwendet werden, enthalten. Die pharmazeutischen Zubereitungen können in bekannter Weise hergestellt werden, z. B. mittels Mischen, Granulieren, Tablettieren, Zuckerbeschichtungs- oder Überzugsbeschichtungsverfahren.
Die flüssigen Dispersionen zur oralen Verabreichung können z. B. Sirupe, Emulsionen und Suspensionen sein.
Der Sirup kann als Träger z. B. Saccharose oder Saccharose mit Glycerin und/oder Mannitol und/oder Sorbitol enthalten.
Die Suspensionen und die Emulsionen können als Träger z. B. ein natürliches Harz, Agar, Natriumalginat, Pectin, Methylcellulose, Carboxymethylcellulose oder Polyvinylalkohol enthalten.
Die Suspensionen oder Lösungen für intramuskuläre Injektionen können zusammen mit der aktiven Verbindung einen pharmazeutisch annehmbaren Träger, z. B. steriles Wasser, Olivenöl, Ethyloleat, Glykole, z. B. Propylenglykol, und, falls gewünscht, eine geeignete Menge an Lidocain-hydrochlorid enthalten.
Die Lösungen zur intravenösen Injektion oder Infusion können als Träger z. B. steriles Wasser enthalten oder sie können bevorzugt in Form von sterilen, wässrigen, isotonischen Salzlösungen sein.
Die Suppositorien können zusammen mit der aktiven Verbindung einen pharmazeutisch annehmbaren Träger, z. B. Kakaobutter, Polyethylenglykol ein Polyoxyethylensorbitan-Fettsäureester-Tensid oder Lecithin enthalten.
Zusammensetzungen für die topische Applikation, z. B. Cremes, Lotionen oder Pasten, können durch Mischen des aktiven Inhaltsstoffs mit einem herkömmlichen ölhaltigen oder emulgierenden Träger hergestellt werden.
Ein weiterer erfindungsgemässer Gegenstand ist ein kombiniertes Verfahren zur Behandlung von Krebs in Säugern, einschliesslich Menschen, die eine solche Behandlung benötigen; das Verfahren umfasst das Verabreichen von
(1) einer Verbindung der Formel (I) oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon und
(2) einem zusätzlichen Antitumormittel ausreichend in der Menge und nahe genug zusammen in der Zeit, um einen therapeutisch nützlichen Effekt hervorzurufen.
Ein erfindungsgemässer Gegenstand ist es auch, Produkte, die eine Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz und ein zusätzliches Antitumormittel enthalten, als eine kombinierte Zubereitung zur simultanen, getrennten oder aufeinanderfolgenden Verwendung in der Antikrebstherapie bereitzustellen.
Der Begriff "Antitumormittel" umfasst beides, ein einzelnes Antitumor-Arzneimittel und "Cocktails", d. h. eine Mischung solcher Arzneimittel gemäss der klinischen Praxis.
Antitumormittel, die mit einer erfindungsgemässen Verbindung formuliert oder alternativ in einem kombinierten Verfahren zur Behandlung verabreicht werden können, sind z. B. Doxorubicin, Daunomycin, Epirubicin, Idarubicin, Etoposid, Fluoruracil, Mephalan, Cyclophosphamid, Bleomycin, Vinblastin und Mitomycin oder eine Mischung von zwei oder mehreren davon.
Die erfindungsgemässen Verbindungen können daher in einer Behandlung zum Verbessern eines Krebses verwendet werden. Sie können einem Patienten verabreicht werden, der an einem Krebs leidet, der mit einem Antitumormittel, z. B. einem Anthracyclinglycosid, wie Doxorubicin, Daunomycin, Epirubicin oder Idarubicin, wie oben genannt, behandelbar ist, zusammen mit dem antiproliferativen Mittel. Eine erfindungsgemässe Verbindung und ein Antitumormittel, wie ein Anthracyclinglycosid, können verabreicht werden, um den Zustand des Patienten zu verbessern, der eine Leukämie, wie myeloplastische Leukämie, Lymphom, Sarkom, Neuroblastom, Wilms-Tumor oder malignes Neoplasma der Blase, Brust, Lunge oder Schilddrüse hat.
Die folgenden Beispiele illustrieren die Erfindung, limitieren sie aber nicht.

BEISPIEL 1

5-Bydroxy-3-[(3'-indolyl)methylen]-2-oxindol:

(I, R wie definiert, n = 0, R&sub2; = R&sub3; = R&sub5; = R&sub6; = H, R&sub4; = 5-OH)
Eine Lösung von 3-Indolcarboxaldehyd (145 mg, 1 mmol), 5-Hydroxy-2- oxindol (149 mg, 1 mmol) und Piperidin (60 mg, 0,7 mmol) in absolutem Ethanol (10 ml) wird für 3 Stunden bei 60ºC unter Stickstoff erwärmt. Dann wird die Reaktionsmischung abgekühlt und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird der Säulenchromatografie über Silicagel unter Verwendung von Methylenchlorid/Ethanol (4%) als Eluent unterworfen. Die reine Titelverbindung wird so in 60%-iger Ausbeute (166 mg) erhalten. Alternativ wird die Reaktionsmischung im Vakuum konzentriert und dann auf 0 bis 5ºC abgekühlt, der Niederschlag filtriert, der Rückstand mit eisgekühltem Ethanol gewaschen und schliesslich im Vakuum getrocknet. Verbindungen mit höhere Reinheit werden durch weitere Kristallisation aus Ethanol erhalten.
MS m/z: 276
IR (cm&supmin;¹, KBr): 3600-2500 (NH, OH), 1650 (CO), 1600, 1580, 1530, 1480 (C=C)
Schmelzpunkt: 293ºC (Zersetzung)
Gemäss dem oben beschriebenen Verfahren können die folgenden Verbindungen hergestellt werden:
5-Amino-3-[(3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;
5-Hydroxy-3-[(5'-hydroxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;
MS m/z: 282
IR (cm&supmin;¹, KBr): 3600-2600 (NH, OH), 1655 (CO), 1605, 1585, 1535 (C=C)
5-Hydroxy-3-[(7'-hyroxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;
5-Amino-3-[(5'-hydroxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;
5-Hydroxy-3-[(5'-amino-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;
5-Hydroxy-3-[(5'-carboxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;
5-Amino-3-((7'-hyroxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol.

BEISPIEL 2

5-Hydroxy-3-[(5'-hydroxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol:

(I, R wie definiert, n = 1, R&sub1; = R&sub2; = R&sub3; = R&sub5; = R&sub6; = H, R&sub4; = 5-OH)
Das Ausgangsmaterial für dieses Etherspaltungsbeispiel ist 5-Methoxy- 3-[(5'-methoxy-3'-indolyl)methylen)-2-oxindol, das gemäss dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren erhalten werden kann.
Zu einer gerührten Lösung von 5-Methoxy-3-[(5'-methoxy-3'-indolyl)- methylen]-2-oxindol (310 mg, 1 mmol) in wasserfreiem Dichlormethan (10 ml) wird bei -78ºC unter Stickstoff über einen Zeitraum von. 10 Minuten eine 1,0 M-Lösung von Bortribromid in Dichlormethan (3 ml, 3 mmol) zugegeben. Die resultierende Mischung wird für eine weitere Stunde: bei -78ºC gerührt und dann auf Raumtemperatur erwärmt. Nach Rühren für 1,5 Stunden bei 20 bis 25ºC wird die Mischung auf -10ºC gekühlt und dann durch tropfenweise Zugabe von Wasser (10 ml) über einen Zeitraum von 10 Minuten gequencht. Nach Zugabe von Ethylacetat wird die organische Schicht abgetrennt, mit Wasser gewaschen, mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird aus Ethanol kristallisiert, um 198 mg der reinen Titelverbindung (Ausbeute 70%) zu ergeben.
MS m/z: 282
IR (cm&supmin;¹, KBr): 3600-2600 (NH, OH), 1655 (CO), 1605, 1585, 1535 (C=C) Gemäss dem oben beschriebenen Verfahren und ausgehend von dem entsprechenden Methylether können die in Beispiel 1 genannten Hydroxylverbindungen erhalten werden.

BEISPIEL 3

5-Nitro-3-indolaldehyd:

(II, n = 0, R&sub2; = 5-NO&sub2;, R&sub3; = H)
Eine Mischung von N-Methylformanilid (176 mg, 1,3 mmol) und Phosphoroxychlorid (199 mg, 1,3 mmol) wird für 15 Minuten bei 20 bis 25ºC unter Stickstoff gerührt. Dann wird eine Lösung von 5-Nitroindol (162 mg, 1 mmol) in 1,2-Dichlorethan (5 ml) zugegeben und die Mischung unter Rückfluss 3 Stunden erwärmt. Nach Kühlen wird die Mischung auf Eiswasser gegossen, der Niederschlag abfiltriert und mit Wasser gewaschen. Anschliessend wird der Rückstand über Silicagel unter Verwendung von Benzol/Ethylacetat als Eluent chromatografiert. Die reine Titelverbindung wird in 80%-iger Ausbeute (152 mg) erhalten.
MS m/z: 190
IR (cm&supmin;¹, KBr): 3140, 3090 (NH), 1650 (CO), 1511, 1345 (NO&sub2;)
Diese Nitro-Zwischenprodukte ergeben Endprodukte mit R&sub2; = NH&sub2;, erhältlich aus den ersteren durch Reduktion. Durch analoges Vorgehen können die folgenden geschützten Zwischenprodukte hergestellt werden, die nach Entschützen an einer geeigneten Stelle der Synthese ebenso Endprodukte der Formel (I) mit freiem Hydroxyl (R&sub2; = OH) ergeben:
3-Carboxymethoxy-3-indolaldehyd; und
3-Methoxy-3-indolaldehyd.

BEISPIEL 4

Tabletten mit einem Gewicht von jeweils 0,150 g, enthaltend 25 mg der aktiven Substanz, können wie folgt hergestellt werden:

Zusammensetzung (für 10.000 Tabletten):

5-Hydroxy-3-[(3'-indolyl)methylen]-2-oxindol 250 g
Lactose 800 g
Maisstärke 415 g
Talkpulver 30 g
Magnesiumstearat 5 g
5-Hydroxy-[(3'-indolyl)methylen]-2-oxindol, Lactose und die Hälfte der Maisstärke werden gemischt; die Mischung wird dann durch ein Sieb mit 0,5 mm Maschenweite gezwängt. Maisstärke (10 g) wird in warmem Wasser (90 ml) suspendiert und die resultierende Paste wird verwendet, um das Pulver zu granulieren. Das Granulat wird getrocknet, auf einem Sieb mit 1,4 mm Maschenweite zerstäubt, dann wird die verbleibende Menge der Stärke, Talk und Magnesiumstearat zugegeben, vorsichtig gemischt und zu Tabletten verarbeitet.

REFERENZBEISPIEL 1

Kapseln mit einem Gewicht von jeweils 0,200 g, enthaltend 20 mg der aktiven Substanz können hergestellt werden.
Zusammensetzung für 500 Kapseln:
3-[(5'-Amino-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol 10 g
Lactose 80 g
Maisstärke 5 g
Magnesiumstearat 5 g
Diese Formulierung wird in zweiteilige harte Gelatinekapseln eingeschlossen und auf 0,200 g für jede Kapsel dosiert.

Claims

1. Verbindung der Formel (I)

wobei

R eine Gruppe

ist, in der

R&sub4; Hydroxy oder NHR&sub7; ist, wobei R&sub7; Wasserstoff oder C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl ist;

R&sub5; Wasserstoff ist; und

R&sub6; Wasserstoff ist;

n 0, 1 oder 2 ist;

R&sub1; Wasserstoff, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl oder C&sub2;&submin;&sub6;-Alkanoyl ist;

R&sub2; Wasserstoff, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl, Halogen, Cyan, Carboxyl, Nitro oder -NHR&sub7; ist, wobei oben definiert ist;

R&sub3; Wasserstoff, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl oder C&sub2;&submin;&sub6;-Alkanoyl ist; oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.

2. Verbindung der Formel (I) gemäss Anspruch 1, wobei R in Anspruch 1 definiert ist, R&sub4; Hydroxy oder Amino ist, und R&sub5; und R&sub6; Wasserstoff sind;

R&sub1; Wasserstoff C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl ist; n 0 oder 1 ist; R&sub2; Wasserstoff, Carboxy, Amino oder Nitro ist; R&sub3; Wasserstoff ist; und die pharmazeutisch annehmbaren Salze davon.

3. Verbindung der Formel (I) gemäss Anspruch 1, wobei R in Anspruch 1 definiert ist, R&sub4; Hydroxy oder Amino ist; und R&sub5; und R&sub6; Wasserstoff sind 0 oder 1 ist; R&sub1; Wasserstoff ist; R&sub2; Wasserstoff, Amino oder Carboxy ist; R&sub3; Wasserstoff ist; und die pharmazeutisch annehmbaren Salze davon.

4. Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den folgenden; die gegebenenfalls entweder Z- oder E-Diastereoisomere oder Z,E-Mischungen der genannten Diastereoisomere sein können:

5-Hydroxy-3-[(3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;

5-Amino-3-[(3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;

5-Hydroxy-3-[(5'-hydroxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;

5-Hydroxy-3-[(7'-hydroxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;

5-Amino-3-[(5'-hydroxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;

5-Hydroxy-3-[(5'-amino-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;

5-Hydroxy-3-[(5'-carboxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;

5-Amino-3-[(7'-hydroxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol;

und gegebenenfalls die pharmazeutisch annehmbaren Salze davon.

5. Verfahren zum Herstellen einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon gemäss Anspruch 1, das Verfahren umfassend die Kondensation eines Aldehyds der Formel (II)

wobei

R&sub1;, R&sub2;, R&sub3; und n in Anspruch 1 definiert sind, mit einer Verbindung der Formel (III)

wobei

R&sub4;, R&sub5; und R&sub6; in Anspruch 1 definiert sind, und, falls gewünscht, Umwandeln einer Verbindung der Formel (I) in eine andere Verbindung der Formel (I), und/oder, falls gewünscht, Umwandeln einer Verbindung der Formel (I) in ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, und/oder, falls gewünscht, Umwandeln eines Salzes in eine freie Verbindung, und/oder, falls gewünscht, Trennen einer Mischung von Isomeren einer Verbindung der Formel (I) in die einzelnen Isomere.

6. Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend einen geeigneten Träger und/oder Streckstoff und, als Wirkstoff, eine Verbindung der Formel (I) gemäss Anspruch 1 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.

7. Verbindung der Formel (I) oder ein Salz davon gemäss Anspruch 1 zur Verwendung als Thyrosinkinaseinhibitor.

8. Verbindung der Formel (I) oder ein Salz davon gemäss Anspruch 1 zur Verwendung als antiproliferatives Mittel.

9. Verbindung der Formel (I) oder ein Salz davon gemäss Anspruch 1 zur Verwendung als Antikrebsmittel oder bei der Behandlung von Krankheiten der Koronararterien.

10. Produkte, enthaltend eine Verbindung der Formel (I) oder ein Salz davon gemäss Anspruch 1 und ein zusätzliches Antitumormittel als kombiniertes Präparat zur gleichzeitigen, getrennten oder aufeinanderfolgenden Verwendung in der Antikrebstherapie.