[go: up one dir, main page]

DE69029018T2 - Verfahren zum Nachweis von benachbarten und entfernt lokalisierten Allelen als Haplotypen mittels Intronsequenzanalyse - Google Patents

Verfahren zum Nachweis von benachbarten und entfernt lokalisierten Allelen als Haplotypen mittels Intronsequenzanalyse

Info

Publication number
DE69029018T2
DE69029018T2 DE69029018T DE69029018T DE69029018T2 DE 69029018 T2 DE69029018 T2 DE 69029018T2 DE 69029018 T DE69029018 T DE 69029018T DE 69029018 T DE69029018 T DE 69029018T DE 69029018 T2 DE69029018 T2 DE 69029018T2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
locus
sequence
dna sequence
hla
amplified dna
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
DE69029018T
Other languages
English (en)
Other versions
DE69029018D1 (de
Inventor
Malcolm J Simons
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Genetic Technologies Ltd
Original Assignee
Genetype AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27503418&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=DE69029018(T2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Genetype AG filed Critical Genetype AG
Application granted granted Critical
Publication of DE69029018D1 publication Critical patent/DE69029018D1/de
Publication of DE69029018T2 publication Critical patent/DE69029018T2/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6881—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for tissue or cell typing, e.g. human leukocyte antigen [HLA] probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
    • C12Q1/683—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism involving restriction enzymes, e.g. restriction fragment length polymorphism [RFLP]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6858—Allele-specific amplification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/172—Haplotypes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring And Recording Apparatus For Diagnosis (AREA)
  • Measurement And Recording Of Electrical Phenomena And Electrical Characteristics Of The Living Body (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

  • Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Detektion von Allelen und Haplotypen sowie Reagenzien dafür.
  • Teilweise aufgrund einer Anzahl neuer Analysetechniken ist es zu einer beträchtlichen Vergrößerung des Wissens über genetische Informationen, insbesondere beim Menschen, gekommen. Allelvarianten von Gen-Loci sind mit malignen und nichtmalignen monogenen und multigenen Erkrankungen in Korrelation gesetzt worden. Zu monogenen Erkrankungen, für die das defekte Gen identifiziert worden ist, gehören beispielsweise Duchenne-Muskeldystrophie, Sichelzellenanämie, Lesch-Nyhan- Syndrom, Hämophilie, β-Thalassämie, zystische Fibrose, polyzystische Nierenerkrankungen, ADA-Mangel, α-1-Antitrypsin-Mangel, Wilms-Tumor und Retinoblastom. Andere vermutlich monogene Erkrankungen, für die das Gen nicht identifiziert worden ist, umfassen geistige Retardierung durch vererbbare X-Inaktivierung ("fragile X syndrom") und Huntington-Chorea.
  • Es sind auch Gene identifiziert worden, die mit multigenen Erkrankungen, wie Diabetes, Dickdarmkrebs und vorzeitige Koronaratherosklerose, in Zusammenhang stehen.
  • Neben der Identifizierung von Individuen, bei denen das Risiko für genetische Erkrankungen besteht oder die diese aufweisen, ist die Detektion von Allelvarianten eines Gen-Locus zur Organtransplantation, in der Gerichtsmedizin, für Vaterschaffstests und eine Vielzahl anderer Zwecke beim Menschen eingesetzt worden. Bei kommerziell wichtigen Pflanzen und Tieren sind Gene nicht nur analysiert, sondern auch genetisch verändert und in andere Organismen übertragen worden.
  • Es ist eine Anzahl von Techniken eingesetzt worden, um Allelvarianten von Gen-Loci zu detektieren, einschließlich der Analyse polymorpher Restriktionsfragmentlängen- (RFLP)-Muster, der Verwendung von Oligonukleotidsonden und DNA- Amplifikationsverfahren. Eine der kompliziertesten Gruppen von Allelvarianten, der Haupthistokompatibilitätskomplex (MHC), ist eingehend untersucht worden. Die Probleme, denen man beim Versuch, den HLA-Typ eines Individuums zu bestimmen, begegnet, sind exemplarisch für Probleme, wie sie bei der Charakterisierung anderer Gen-Loci auftreten.
  • Der Haupthistokompatibilitätskomplex ist eine Gruppe von Genen, die einen Bereich am kurzen Arm von Chromosom 6 besetzen. Dieser Komplex, der als Humanleukozytenantigen(HLA)-Komplex bezeichnet wird, umfaßt zumindest 50 Loci. Zum Zweck der HLA-Gewebstypisierung werden zwei Hauptklassen von Loci erkannt. Die Klasse I- Loci kodieren für Transplantationsantigene, und sie werden als A, B und C bezeichnet. Die Klasse II-Loci (DRA, DRB, DQA1, DQB, DPA und DPB) kodieren für Produkte, die die Immunreaktionsfähigkeit steuern. Von den Klasse II-Loci sind alle mit Ausnahme des DRA-Locus polymorph. Das heißt, die DRα-Antigenpolypeptidsequenz ist invariant.
  • HLA-Bestimmungen werden für Vaterschaftstests, Transplantatsverträglichkeitstests, in der Gerichtsmedizin, zur Blutkomponententherapie, bei anthropologischen Untersuchungen und bei Erkrankungsassoziations-Korrelationen zur Diagnose von Erkrankungen oder Vorhersage von Anfälligkeit für eine Krankheit verwendet. Aufgrund der Fähigkeit von HLA zur Unterscheidung von Individuen und der Notwendigkeit, den HLA-Typ zur Transplantation abzustimmen, sind Analyseverfahren angestrebt worden, um die Allele des Gen-Locus, der mit dem Komplex in Zusammenhang steht, unzweifelhaft zu charakterisieren. Bisher ist DNA-Typisierung unter Einsatz von RFLP und Oligonukleotidsonden eingesetzt worden, um Klasse II-Locus-Allele zu typisieren. Allele von Klasse I-Loci und Klasse II-DR- und DQ-Loci werden typischerweise durch serologische Verfahren bestimmt. Die Allele des Klasse II-DP-Locus werden durch geprimte Lymphozytentypisierung (PLT) ermittelt.
  • Jedes der HLA-Analyseverfahren weist Nachteile auf. Serologische Verfahren erfordern Standard-Seren, die nicht leicht erhältlich sind und ständig ergänzt werden müssen. Außerdem basiert die Serotypisierung auf der Reaktion der HLA-Genprodukte in der Probe mit den Antikörpern in den Reagensseren. Die Antikörper erkennen die Expressionsprodukte der HLA-Gene an der Oberfläche von Zeilen mit Kern. Die Bestimmung des fötalen HLA-Typs durch serologische Verfahren kann aufgrund der mangelnden Reifung der Expression der Antigene in fötalen Blutzellen schwierig sein.
  • Oligonukleotidsondentypisierung kann innerhalb von zwei Tagen durchgeführt werden und ist durch die jüngste Verwendung von Polymerasekettenreaktion(PCR)- Amplifikation weiter verbessert worden. Oligosondentypisierung auf PCR-Basis ist an Klasse II-Loci durchgeführt worden. Es dauert 5 bis 10 Tage, bis geprimte Lymphozytentypisierung abgeschlossen ist, und sie umfaßt Zellkultivierung mit den ihr eigenen Schwierigkeiten und Schwankungen.
  • RFLP-Analyse ist ist mit einer Dauer von 5 bis 7 Tagen zeitaufwendig. Die Analyse der Fragmentmuster ist komplex. Außerdem erfordert die Technik die Verwendung markierter Sonden. Die am häufigsten verwendete Markierung, ³²P, weist wohlbekannte Nachteile auf, wie sie mit der Verwendung von Radionukliden in Verbindung stehen.
  • Ein rasches, zuverlässiges Verfahren zur Gen-Locus-Analyse ist in hohem Maße wünschenswert.
  • Die US-PS-4.683.195 (an Mullis et al. veröffentlicht am 28. Juli 1987) beschreibt ein Verfahren zum Amplifizieren, Detektieren und/oder Klonieren von Nukleinsäuresequenzen. Das Verfahren umfaßt die Behandlung getrennter komplementärer DNA- Stränge mit zwei Oligonukleotidprimern, das Verlängern der Primer zur Bildung komplementärer Extensionsprodukte, die als Template zum Synthetisieren der gewünschten Nukleinsäuresequenz wirken, und das Detektieren der amplifizierten Sequenz. Das Verfahren wird allgemein als Polymerasekettenreaktionssequenzamplifikationsverfahren oder PCR bezeichnet. Abwandlungen des Verfahrens werden in der US-PS-4.683.194 (an Saiki et al., veröffentlicht am 28. Juli 1987) beschrieben. Das Polymerasekettenreaktionssequenzamplifikationsverfahren wird auch von Saiki et al., Science, 230.1350-1354 (1985) und Scharf et al., Science, 324:163-166 (1986) beschrieben.
  • Die US-PS-4.582.788 (an Erich, veröffentlicht am 15. April 1986) beschreibt ein HLA- Typisierungsverfahren auf Basis von Restriktionslängenpolymorphismus (RFLP) und dabei verwendeten cDNA-Sonden. Das Verfahren wird durch das Spalten der HLA-DNA eines Individuums mit einer Restriktionsendonuklease, die ein polymorphes Spaltungmuster erzeugt, Durchführung von Genom-Blotting des Digests unter Verwendung einer markierten cDNA-Sonde, die zu einer am Polymorphismus beteiligten HLA-DNA-Sequenz komplementär ist, sowie das Vergleichen des resultierenden genomischen Blottingmusters mit einem Standard durchgeführt. Locusspezifische Sonden für Klasse II-Loci (DQ) werden ebenfalls beschrieben.
  • Kogan et al., "New Engl. J.Med." 317:985-990 (1987) beschreibt ein verbessertes PCR- Sequenzamplifikationsverfahren, bei dem eine wärmestabile Polymerase (Taq- Polymerase) und Hochtemperaturamplifikation eingesetzt werden. Die beim Verfahren eingesetzen strengen Bedingungen sorgen für ausreichende Replikationstreue, damit die Analyse der amplifizierten DNA durch Ermitteln der DNA-Sequenzlängen durch visuelle Untersuchung eines mit Ethidiumbromid gefärbten Gels ermöglicht wird. Das Verfahren wurde eingesetzt, um mit Hämophilie A assoziierte DNA zu analysieren, in der zusätzliche Tandem-Wiederholungen einer DNA-Sequenz mit der Erkrankung assoziiert sind und die amplifizierten Sequenzen wesentlich länger als nicht mit der Erkrankung in Verbindung stehende Sequenzen waren.
  • Simons und Erlich, S.952-958, in:"Immunology of HLA" Band 1: Springer-Verlag, New York (1989) geben eine Zusammenfassung der RFLP-Sequenz-Interrelationen an den DPA- und DPB-Locin. Durch Southern-Blotting mit Sonden analysierte RFLP- Fragmentmuster lieferten unterschiedliche Muster für DPw1-5-Allele und die entsprechenden DPB1-Allelsequenzen, charakterisierten zwei subtypische Muster für DPw2 und DPw4 und identifizierten neue DPw-Allele.
  • Simons et al., S.959-1023, in: "Immunology of HLA", Band 1: Springer-Verlag, New York (1989) gibt eine Zusammenfassung der Restriktionslängenpolymorphismen von HLA-Sequenzen für Klasse II-Loci, wie durch den 10. Internationalen Workshop für Southern-Blot-Analyse ermittelt. Es wurde gezeigt, daß die Southern-blot-Analyse zur Typisierung der Hauptklassen an HLA-Loci geeignet ist.
  • Eine Serie aus drei Artikeln [Rommens et al., Science 245:1059-1065 (1989), Riordan et al., Science 245:1066-1072 (1989) und Kerem et al., Science 245:1073-1079 (1989) berichten über ein neues als "Jumping" bezeichnetes Genanalyseverfahren, das verwendet wird, um die Position des CF-Gens, die Sequenz des CF-Gens und den Defekt im Gen bzw. seinen Prozentsatz in der Erkrankungspopulation zu identifizieren.
  • DiLelia et al., The Lancet i: 497-499 (1988) beschreibt ein Screening-Verfahren zum Detektieren der beiden Hauptallele, die für Phenylketonurie bei Kaukasiern mit nordeuropäischer Abstammung verantwortlich sind. Die Mutationen, die sich in etwa in der Mitte von Exon 12 und an der Exon 12-Verbindungsstelle mit der intervenierenden Sequenz 12 befinden, werden durch PCR-Amplifikation eines 245 bp-Bereichs von Exon 12 und der flankierenden intervenierenden Sequenzen detektiert. Die amplifizierte Sequenz umfaßt beide Mutationen und wird unter Verwendung von Sonden analysiert, die für jedes der Allele spezifisch sind (ohne vorherige elektrophoretische Trennung).
  • Dicker et al., BioTechniques 7:830-837 (1989) und Mardis et al., Biotechniques 7:840- 850 (1989) berichten von automatisierten Techniken zum Sequenzieren von DNA- Sequenzen, insbesondere durch PCR hergestellten Sequenzen.
  • Jeder der oben beschriebenen Literaturverweise ist hierin vollständig durch Verweis eingeschlossen.
  • Die vorliegende Erfindung stellt ein Verfahren zur Detektion von zumindest einem Allel eines Gen-Locus bereit und kann zur direkten Bestimmung des Haplotyps verwendet werden. Das Verfahren umfaßt das Amplifizieren von genomischer DNA mit einem Primerpaar, das eine Intronsequenz umspannt und eine DNA-Sequenz definiert, die sich in genetischer Verbindung mit einem zu detektierenden Allel befindet. Die primerdefinierte DNA-Sequenz enthält eine ausreichende Anzahl an Intronsequenznukleotiden, um das Allel zu charakterisieren. Die genomische DNA wird amplifiziert, um eine für das Allel charakteristische amplifizierte DNA-Sequenz zu erzeugen. Die amplifizierte DNA-Sequenz wird analysiert, um das Vorhandensein einer genetischen Variation in der amplifizierten DNA-Sequenz, wie eine Änderung in der Länge der Sequenz, den Erhalt oder Verlust einer Restriktionsstelle oder die Substitution eines Nukleotids, zu detektieren. Die Variation ist für das zu detektierende Allel charakteristisch.
  • Die vorliegende Erfindung basiert auf dem Ergebnis, daß Intronsequenzen genetische Variationen enthalten, die für benachbarte und entfernte Allele auf demselben Chromosom charakteristisch sind. Insbesondere können DNA-Sequenzen, die eine ausreichende Anzahl an Intronsequenznukleotiden umfassen, zur direkten Haplotypbestimmung verwendet werden.
  • Das Verfahren kann eingesetzt werden, um Allele von Gen-Loci für jeden eukaryotischen Organismus zu detektieren. Von besonderem Interesse sind Loci, die mit malignen und nichtmalignen monogenen und multigenen Erkrankungen assoziiert sind, sowie die Identifizierung einzelner Organismen oder Spezies sowohl bei Pflanzen als auch bei Tieren. Bei einer bevorzugten Ausführungsform wird das Verfahren eingesetzt, um HLA-Alleltyp und -haplotyp zu bestimmen.
  • Es werden auch Sets beschrieben, die ein oder mehrere beim Verfahren verwendete Reagenzien umfassen.
  • Die vorliegende Erfindung stellt ein Verfahren zur Detektion von Allelen und Haplotypen durch Analyse von Intronsequenzvariation bereit. Die vorliegende Erfindung basiert auf der Entdeckung, daß die Amplifikation von Intronsequenzen, die Verbindungsungleichgewicht mit benachbarten und entfernten Loci aufweisen, verwendet werden können, um Allele dieser Loci zu detektieren. Das erfindungsgemäße Verfahren liest Haplotypen als direkten Output der Introntypisierungsanalyse, wenn ein einzelner, individueller Organismus getestet wird. Das Verfahren ist besonders nützlich bei Menschen, ist aber allgemein auf alle Eukaryoten anwendbar, und wird vorzugsweise verwendet, um Pflanzen- und Tierspezies zu analysieren.
  • Das Verfahren umfaßt das Amplifizieren von genomischer DNA mit einem Primerpaar, das eine Intronsequenz umspannt und eine DNA-Sequenz in genetischer Verbindung mit einem zu detektierenden Allel definiert. Primerstellen befinden sich in konservierten Bereichen in den Introns oder Exons, die die zu amplifizierende Intronsequenz begrenzen. Die primerdefinierte DNA-Sequenz enthält eine ausreichende Anzahl an Intronsequenznukleotiden, um das Allel zu charakterisieren. Die amplifizierte DNA- Sequenz wird analysiert, um das Vorhandensein einer genetischen Variation, wie z.B. eine Änderung in der Länge der Sequenz, den Erhalt oder Verlust einer Restriktionsstelle oder die Substitution eines Nukleotids, zu detektieren.
  • Die Intronsequenzen liefern genetische Variationen, die, zusätzlich zu den bei Exonsequenzen zu findenden, die Proben-DNA weiter unterscheiden, wodurch zusätzliche Information über den einzelnen Organismus geliefert wird. Diese Information ist besonder wertvoll für die Identifizierung von Individuen, wie bei Vaterschaftsbestimmungen oder Anwendungen in der Gerichtsmedizin. Die Information ist auch bei anderen Anwendungen wertvoll, wo Heterozygote (zwei verschiedene Allele) von Homozygoten (zwei Kopien eines Allels) zu unterscheiden sind.
  • Im spezielleren liefert die vorliegende Erfindung Information bezüglich der Intronvariation. Unter Verwendung der Verfahren und Reagenzien gemäß vorliegender Erfindung sind zwei Typen von Intronvariation, die mit Gen-Loci assoziiert sind, gefunden worden. Der erste ist die allelassoziierte Intronvariation. Das heißt, das Intronvariationsmusters ist mit dem Alleltyp am benachbarten Locus assoziiert. Der zweite Variationstyp ist mit entfernten Allelen (Haplotypen) assoziiert. Das heißt, die Variation ist in einzelnen Organismen mit demselben Genotyp am Primärlocus vorhanden. Es können Unterschiede zwischen Sequenzen derselben benachbarten und entfernten Locusarten auftreten. Eine auf ein Individuum begrenzte Variation ist jedoch selten.
  • Weiters variiert eine amplifizierte DNA-Sequenz, die ausreichende Intronsequenzen enthält, je nach dem in der Probe vorhandenen Allel. Das heißt, die Introns enthalten genetische Variationen (z.B. Längenpolymorphismen aufgrund von Insertionen und/oder Deletionen und Änderungen in der Anzahl oder Position der Restriktionsstellen), die mit dem speziellen Allel des Locus und mit den Allelen entfernter Loci assoziiert sind.
  • Es werden auch die bei der Durchführung der erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Reagenzien beschrieben. Die Reagenzien können in Form eines Sets bereitgestellt werden, das ein oder mehrere der beim Verfahren verwendeten Reagenzien umfaßt.
    • Definitionen
  • Der Begriff "Allel", wie hierin verwendet, bezeichnet eine genetische Variation, die mit einem Kodierbereich assoziiert ist; d.h., eine Alternativform des Gens.
  • Der Begriff "Bindung" (linkage), wie hierin verwendet, bezieht sich auf das Ausmaß, in dem Bereiche genomischer DNA miteinander vererbt werden. Bereiche auf verschiedenen Chromosomen weisen keine Bindung auf und werden zu 50% miteinander vererbt. Benachbarte Gene, die immer gemeinsam vererbt werden, weisen 100%ige Bindung auf.
  • Der Begriff "Bindungsungleichgewicht" ("linkage disequilibrium"), wie hierin verwendet, bezeichnet das Miteinanderauftreten von zwei Allelen an verbundenen Loci, sodaß die Frequenz des Miteinanderauftretens der Allele größer ist als man aufgrund der getrennten Auffretensfrequenzen eines jeden Allels erwartet würde. Allele, die miteinander mit Frequenzen, die von ihren getrennten Frequenzen erwartet würden, auftreten, bezeichnet man als in "Bindungsgleichgewicht" befindlich.
  • Wie hierin verwendet, ist "Haplotyp" ein Bereich genomischer DNA auf einem Chromosom, der durch Rekombinationsstellen so begrenzt ist, daß Gen-Loci innerhalb eines haplotypischen Bereichs üblicherweise als Einheit vererbt werden. Es können jedoch gelegentlich genetische Neuanordnungen innerhalb eines Haplotyps auftreten. Daher ist einer Begriff Haplotyp ein operativer Begriff, der sich auf das Auftreten verbundener Loci auf einem Chromosom bezieht.
  • Wie hierin verwendet, bezeichnet der Begriff "Intron" untranslatierte DNA-Sequenzen zwischen Exons gemeinsam mit untranslatierten 5'- und 3'-Bereichen, die mit einem Gen-Locus assoziiert sind. Außerdem wird der Begriff verwendet, um die Abstandssequenzen zwischen Gen-Loci (intergene Abstandssequenzen) zu bezeichnen, die nicht mit einem Kodierbereich assoziiert sind und umgangssprachlich als "Junk bzw. Abfall" bezeichnet werden. Während in der Fachwelt der Begriff "Intron" traditionellerweise verwendet wird, um nur die untranslatierten Sequenzen zwischen Exons zu bezeichnen, wurde diese erweiterte Definiton durch das Fehlen eines in der Fachwelt anerkannten Begriffs für alle Nicht-Exon-Sequenzen notwendig gemacht.
  • Wie hierin verwendet, ist eine "intervenierende Sequenz" ein Intron, das sich zwischen zwischen zwei Exons innerhalb eines Gens befindet. Der Begriff umfaßt nicht stromauf und stromab befindliche Nichtkodiersequenzen, die mit dem Gen-Locus assoziiert sind.
  • Wie hierin verwendet, bezeichnet der Begriff "amplifizierte DNA-Sequenz" DNA- Sequenzen, die Kopien eines Abschnitts einer DNA-Sequenz und ihrer komplementären Sequenz sind, welche Kopien in der Nukleotidsequenz der ursprünglichen DNA- Sequenz und ihrer komplementären Sequenz entsprechen.
  • Der Begriff "Komplement" wie hierin verwendet, bezeichnet eine DNA-Sequenz, die zu einer bestimmten DNA-Sequenz komplementär ist.
  • Der Begriff "Primerstelle", wie hierin verwendet, bezeichnet den Bereich der Ziel-DNA, an den ein Primer hybridisiert.
  • Der Begriff "Primerpaar", wie hierin verwendet, bezeichnet einen Primersatz, der einen stromauf befindlichen 5'-Primer, der mit dem 5'-Ende der zu amplifizierenden DNA- Sequenz hybridisiert, und einen stromab befindlichen 3'-Primer umfaßt, der mit dem Komplement des 3'-Endes der zu amplifizierenden Sequenz hybridisiert.
  • Der Begriff "exonbegrenzte Primer", wie hierin verwendet, bezeichnet ein Primerpaar, das Primer aufweist, die sich innerhalb oder unmittelbar außerhalb eines Exons in einem konservierten Abschnitt des Introns befinden, welche Primer eine DNA-Sequenz amplifizieren, die ein Exon oder einen Abschnitt davon und nicht mehr als einen kleinen Para-Exonbereich des/der benachbarten Intron(s) umfassen.
  • Der Begriff "intronumspannende Primer", wie hierin verwendet, bezeichnet ein Primerpaar, das zumindest einen Abschnitt eines Introns amplifiziert, welcher amplifizierte Intronbereich Sequenzen umfaßt, die nicht konserviert sind. Die intronumspannenden Primer können sich in konservierten Bereichen der Introns oder in benachbarten, stromauf und/oder stromab gelegenen Exonsequenzen befinden.
  • Der Begriff "Gen-Locus", wie hierin verwendet, bezeichnet den Bereich der genomischen DNA, der das für ein Protein kodierende Gen umfaßt, das beliebige stromauf oder stromab gelegene transkribierte Nichtkodierbereiche und assoziierte Regulationsbereiche umfaßt. Daher ist ein HLA-Locus der Bereich der genomischen DNA, der das für ein HLA-Genprodukt kodierende Gen umfaßt.
  • Wie hierin verwendet, bezeichnet der Begriff "benachbarter Locus" entweder (1) den Locus, indem sich eine DNA-Sequenz befindet, oder (2) den nächsten stromauf oder stromab gelegenen Gen-Locus für Intron-DNA-Sequenzen, die nicht mit einem Gen- Locus assoziiert sind.
  • Wie hierin verwendet, bezeichnet der Begriff "eptfernter Locus" entweder (1) einen Locus, der sich stromauf oder stromab von dem Locus befindet, an dem sich eine DNA- Sequenz befindet, oder (2) bei Intronsequenzen, die nicht mit einem Gen-Locus assoziiert sind, einen Locus, der sich stromauf oder stromab vom nächsten stromauf oder stromab gelegenen Gen-Locus zur Intronsequenz befindet.
  • Der Begriff "locusspezifischer Primer", wie hierin verwendet, bezeichnet einen Primer, der unter den beim Amplifikationsverfahren eingesetzten Bedingungen zumindest für ein Allel des Locus spezifisch mit einem Abschnitt des angeführten Gen-Locus oder seinem komplementären Strang hybridisiert und nicht mit anderen DNA-Sequenzen hybridisiert.
  • Wie hierin verwendet, bezeichnen die Begriffe "Endonuklease" und "Restriktionsendonuklease" ein Enzym, das doppelstrangige DNA mit einer speziellen Nukleotidsequenz schneidet. Die Spezifititäten zahlreicher Endonukleasen sind wohlbekannt und sind in einer Vielzahl von Veröffentlichungen zu finden, z.B. "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", von Maniatis et al., Cold Spring Harbor Laboratory 1982. Dieses Handbuch ist in seiner Gesamtheit durch Verweis hierin eingeschlossen.
  • Der Begriff "Restriktionsfragmentlängenpolymorphismus" (oder RFLP), wie hierin verwendet, bezeichnet Unterschiede bei den DNA-Nukleotidsequenzen, die Fragmente mit unterschiedlichen Längen erzeugen, wenn sie von einer Restriktionsendonuklease gespalten werden.
  • Der Begriff "primerdefinierte Längenpolymorpismen" (oder PDLP), wie hierin verwendet, bezeichnet Unterschiede in den Längen amplifizierter DNA-Sequenzen aufgrund von Insertionen oder Deletionen im Intronbereich des Locus, der in der amplifizierten DNA-Sequenz enthalten ist.
  • Der Begriff "HLA-DNA", wie hierin verwendet, bezeichnet DNA, die jene Gene umfaßt, die für HLA-Antigene kodieren. HLA-DNA ist in allen menschlichen Zellen mit Kern zü finden.
    • Primer
  • Das erfindungsgemäße Verfahren basiert auf der Amplifikation ausgewählter Intronbereiche genomischer DNA. Diese Methode wird durch die Verwendung von Primern erleichtert, die selektiv DNA amplifizieren, die mit einem oder mehreren Allele eines Gen-Locus von Interesse und nicht mit anderen Gen-Loci assoziiert ist.
  • Ein locuspezifisches Primerpaar enthält einen 5' stromauf gelegenen Primer, der das 5'- Ende der amplifizierten Sequenz durch Hybridisierung mit dem 5'-Ende der zu amplifizierenden Zielsequenz definiert, und einen 3' stromab gelegenen Primer, der das 3'-Ende der amplifizierten Sequenz durch Hybridisieren mit dem Komplement des 3'- Endes der zu amplifizierenden DNA-Sequenz definiert. Die Primer im Primerpaar hybridisieren unter den gemäß vorliegender Erfindung eingesetzten Bedingungen nicht mit der DNA anderer Gen-Loci.
  • Für jeden Primer des locuspezifischen Primerpaares hybridisiert der Primer mit zumindest einem Allel des zu amplifizierenden DNA-Locus oder seinem Komplement. Es kann ein Primerpaar für jedes Allel eines gewählten Locus hergestellt werden, welches Primerpaar nur DNA für den gewählten Locus amplifiziert. Auf diese Weise können Kombinationen aus Primerpaaren verwendet werden, um genomische DNA eines bestimmten Locus unabhängig davon zu amplifizieren, welches Allel in einer Probe vorhanden ist. Vorzugsweise amplifiziert das Primerpaar DNA von zumindest zwei, mehr bevorzugt mehr als zwei Allele eines Locus. Bei einer am meisten bevorzugten Ausführungsform sind die Primerstellen konserviert und amplifizieren so alle Haplotypen. Es werden jedoch auch Primerpaare oder Kombinationen daraus in Erwägung gezogen, die sich spezifisch an die häufigsten in einer bestimmten Populationsgruppe vorhandenen Allele binden.
  • Die amplifizierte DNA-Sequenz, die durch die Primer definiert wird, enthält eine ausreichende Anzahl von Intronsequenznukleotiden, um zwischen zumindest zwei Allele eines benachbarten Locus zu unterscheiden, und vorzugsweise das Allel des Locus zu identifizieren, das in der Probe vorhanden ist. Für manche Zwecke kann die Sequenz auch so ausgewählt werden, daß sie ausreichende genetische Variationen enthält, um zwischen einzelnen Organismen mit dem gleichen Alle oder zwischen Haplotypen zu unterscheiden.
    • Sequenzlänge
  • Die Länge der amplifizierten Sequenz, die erforderlich ist, um ausreichende genetische Variabilität zu enthalten, um die Unterscheidung zwischen allen Allelen eines Locus zu ermöglichen, steht in direkter Beziehung zum Ausmaß des Polymorphismus des Locus (der Anzahl an Allelen). Das heißt, mit zunehmender Anzahl an Allelen des untersuchten Locus nimmt die Größe einer amplifizierten Sequenz, die ausreichende genetische Variationen zur Identifizierung eines jeden Allels enthält, zu. Bei einer bestimmten Populationsgruppe können ein oder mehrere der erkannten Allele für jeden gegebenen Locus von dieser Gruppe fehlen und müssen bei der Ermittlung einer Sequenz, die ausreichende Variabilität für diese Gruppe enthält, nicht berücksichtigt werden. Herkömmlicherweise werden die Primerpaare jedoch so ausgewählt, daß sie eine DNA-Sequenz amplifizieren, die ausreicht, um zwischen allen erkannten Allelen des untersuchten Locus zu unterscheiden. Dieselben Überlegungen gelten, wenn ein Haplotyp bestimmt wird.
  • Beispielsweise ist der am wenigsten polymorphe HLA-Locus DPA, der zur Zeit 4 erkannte Allele aufweist. Bei diesem Locus enthält ein Primerpaar, das nur einen Abschnitt des variablen Exons, das für die Allelvariation kodiert, amplifiziert, ausreichende genetische Variabilität, um zwischen den Allelen zu unterscheiden, wenn sich die Primerstellen in einem geeigneten Bereich des variablen Exons befinden. Exonbegrenzte Primer können verwendet werden, um eine amplifizierte Sequenz herzustellen, die nicht mehr als etwa 200 Nukleotide (nt) enthält. Mit steigender Zahl der Allele des Locus muß sich jedoch die Anzahl genetischer Variationen in der Sequenz erhöhen, um alle Allele zu unterscheiden. Die Hinzufügung invarianter Exonsequenzen sorgt nicht für zusätzliche genetische Variation. Wenn etwa 8 oder mehr Allele zu unterscheiden sind, wie beim DQA1-Locus und stärker variablen Loci, sollten sich die amplifizierten Sequenzen in zumindest ein Intron im Locus erstrecken, vorzugsweise ein Intron, das an das variable Exon angrenzt.
  • Außerdem sind, wenn Allele des Locus vorliegen, die sich durch ein einziges Basenpaar im variablen Exon unterscheiden, Intronsequenzen in den amplifizierten Sequenzen enthalten, um für ausreichende Variabilität zu sorgen, um Allele zu unterscheiden. Beispielsweise unterscheiden sich beim DQA1-Locus (mit 8 zur Zeit erkannten Allelen) und dem DPB-Locus (mit 24 Allelen), das DQA1.1/1.2- (nun als DQA1 0101/0102 bezeichnet) und das DPB2.1/4.2- (nun als DPB0201/0402 bezeichnet) Allel durch ein einziges Basenpaar. Um diese Allele zu unterscheiden, sind amplifizierte Sequenzen erforderlich, die einen Intronsequenzbereich umfassen. Je nach der Position der Sequenz sind etwa 300 bis 500 Nukleotide ausreichend. Das heißt, es sind 300 bis 500 Nukleotide ausreichend, die primär Intronsequenznukleotide umfassen, die dem variablen Exon ausreichend nahe sind.
  • Bei Loci mit ausgeprägteren Polymorphismen (wie z.B. DQB mit 14 zur Zeit erkannten Allelen, DPB mit 24 zur Zeit erkannten Allelen, DRB mit 34 zur Zeit erkannten Allelen und bei jedem der Klasse I-Loci) müssen die amplifizierten Sequenzen größer sein, um für ausreichende Variabilität zu sorgen, um zwischen allen Allelen zu unterscheiden. Eine amplifizierte Sequenz, die zumindest etwa 0,5 Kilobasen (Kb), vorzugsweise zumindest etwa 1,0 Kb, mehr bevorzugt zumindest etwa 1,5 Kb, enthält, stellt im allgemeinen eine ausreichende Anzahl an Restriktionsstellen für Loci mit ausgeprägteren Polymorphismen bereit. Die amplifizierten Sequenzen, die verwendet werden, um in hohem Maße polymorphe Loci zu charakterisieren, haben im allgemeinen eine Länge zwischen etwa 800 und etwa 2.000 Nukleotiden (nt), vorzugsweise zwischen etwa 1.000 und etwa 1.800 Nukleotiden.
  • Wenn Haplotypinformation bezüglich entfernter Allele erwünscht ist, haben die Sequenzen im allgemeinen eine Länge zwischen etwa 1.000 und etwa 2.000 nt. Längere Sequenzen sind erforderlich, wenn die amplifizierte Sequenz in hohem Maß konservierte Bereiche umfassen, wie Exons oder in hohem Maße konservierte Intronbereiche, umfassen, z.B. Promotoren, Operatoren und andere DNA- Regulationsbereiche. Längere amplifizierte Sequenzen (die mehr Intronnukleotidsequenzen enthalten) sind ebenfalls erforderlich, da der Abstand zwischen den amplifizierten Sequenzen und dem zu detektierenden Alle zunimmt.
  • In hohem Maße konservierte Bereiche, die in der amplifizierten DNA-Sequenz enthalten sind, wie z.B. Exonsequenzen oder in hohem Maße konservierte Intronsequenzen (z.B. Promotoren, Enhancer oder andere Regulationsbereiche) können für wenig oder keine genetische Variation sorgen. Daher tragen solche Bereich nicht oder nur minimal zu den genetischen Variationen bei, die in der amplifizierten DNA- Sequenz vorliegen. Wenn solche Bereiche in der amplifizierten DNA-Sequenz enthalten sind, können zusätzliche Nukleotide erforderlich sein, um ausreichende genetische Variationen zu umfassen, um Allele zu unterscheiden, verglichen mit einer amplifizierten DNA-Sequenz gleicher Länge, die nur Intronsequenzen enthält.
    • Position der amplifizierten DNA-Sequenz
  • Die amplifizierte DNA-Sequenz ist in einem Bereich genomischer DNA angeordnet, der genetische Variation enthält, die sich in genetischer Verbindung mit dem zu detektierenden Allel befindet. Vorzugsweise ist die Sequenz in einer Intronsequenz angrenzend an ein Exon des Gen-Locus angeordnet. Mehr bevorzugt umfaßt die amplifizierte Sequenz eine intervenierende Sequenz, die an ein Exon angrenzt, das für die mit dem Locus assoziierte Allelvariabilität kodiert (ein variables Exon). Die Sequenz umfaßt vorzugsweise zumindest einen Abschnitt eines der Introns, das an ein variables Exon angrenzt, und kann einen Abschnitt des variablen Exons umfassen. Wenn zusätzliche Sequenzinformation erforderlich ist, umfaßt die amplifizierte DNA-Sequenz vorzugsweise ein variables Exon und die gesamten oder einen Teil der beiden angrenzenden Intronsequenzen.
  • Alternativ dazu kann sich die amplifizierte Sequenz in einem Intron befinden, das nicht an ein Exon des Gen-Locus angrenzt. Solche Introns sind in den stromab oder stromauf befindlichen flankierenden Genbereichen oder sogar in einer intervenierenden Sequenz in einem weiteren Gen-Locus angeordnet, der sich in Bindungsungleichgewicht mit dem zu detektierenden Allel befindet.
  • Bei einigen Gen-Loci sind möglicherweise keine genomischen DNA-Sequenzen verfügbar. Wenn nur cDNA-Sequenzen verfügbar sind und keine Intron-Positionen innerhalb der Sequenz identifiziert sind, werden Primer in Intervallen von etwa 200 nt ausgewählt und verwendet, um genomische DNA zu amplifizieren. Wenn die amplifizierte Sequenz etwa 200 nt enthält, wird die Position des ersten Primers etwa 200 nt zu einer Seite der Position des zweiten Primers bewegt, und die Amplifikation wird wiederholt, bis entweder (1) eine amplifizierte DNA-Sequenz erzeugt wird, die größer als erwartet ist, oder (2) keine amplifizierte DNA-Sequenz erzeugt wird. In jedem Fall ist die Position einer Intron-Sequenz bestimmt worden. Die gleiche Methode kann eingesetzt werden, wenn nur die Sequenz einer Markerstelle verfügbar ist, die stark mit dem Gen-Locus verbunden ist, wie im Fall vieler Gene, die mit Erbkrankheiten assoziiert sind.
  • Wenn die amplifizierte DNA-Sequenz nicht das gesamte oder einen Abschnitt eines Introns umfaßt, das an das/die variablen Exon(s) angrenzt, muß die Sequenz auch einer zweiten Anforderung entsprechen. Die amplifizierte Sequenz muß dem/den variablen Exon(s) ausreichend nahe sein, um Rekombination und Verlust des Bindungsungleichgewichts zwischen der amplifizierten Sequenz und dem/den variablen Exon(s) auszuschließen. Diese Anforderung wird erfüllt, wenn sich die Bereiche der genomischen DNA innerhalb von etwa 5 Kb, vorzugsweise innerhalb von etwa 4 Kb, am meisten bevorzugt innerhalb von 2 Kb vom/von den variablen Exon(s) befinden. Die amplifizierte Sequenz kann sich außerhalb des Gen-Locus befinden, liegt aber vorzugsweise innerhalb des Gen-Locus.
  • Vorzugsweise umfaßt die durch die Primer definierte amplifizierte DNA-Sequenz bei jedem Primerpaar zumindest 200 Nukleotide, und mehr bevorzugt zumindest 400 Nukleotide einer intervenierenden Sequenz, die an das/die variablen Exon(s) angrenzt. Obwohl das variable Exon üblicherweise in einer bestimmten Anzahl an Nukleotiden weniger Variationen bietet als eine angrenzende intervenierende Sequenz sorgt jede dieser Variationen für allelrelevante Information. Daher bietet der Einschluß des variablen Exons einen Vorteil.
  • Da die PCR-Methode verwendet werden kann, um Sequenzen mit mehreren Kb zu amplifizieren, können die Primer so angeordnet werden, daß zusätzliche Exons oder intervenierende Sequnzen in der amplifizierten Sequenz enthalten sind. Selbstverständlich vergrößert die erhöhte Größe der amplifizierten DNA-Sequenz die Wahrscheinlichkeit eines Replikationsfehlers, sodaß die Zugabe invarianter Bereiche gewisse Nachteile verursacht. Es ist jedoch nicht so wahrscheinlich, daß diese Nachteile eine Analyse auf Basis der Länge der Sequenz oder des RFLP-Fragmentmusters beeinflussen, wie eine, die auf dem Sequenzieren des Amplifikationsproduktes basiert. Bei bestimmten Allelen, insbesondere jenen mit in hohem Maße ähnlichen Exonsequenzen, können amplifizierte Sequenzen mit mehr als etwa 1 oder 1,5 Kb notwendig sein, um zwischen allen Allelen eines speziellen Locus zu unterscheiden.
  • Die Enden der amplifizierten DNA-Sequenz werden durch das bei der Amplifikation verwendete Primerpaar definiert. Jede Primersequenz muß einem konservierten Bereich der genomischen DNA-Sequenz entsprechen. Daher wird die Position der amplifizierten Sequenz bis zu einem gewissen Grad durch die Notwendigkeit diktiert, die Primer in konservierten Bereichen zu positionieren. Wenn keine ausreichende Intronsequenzinformation verfügbar ist, um konservierte Intronbereiche zu bestimmen, können die Primer in konservierten Bereichen der Exons positioniert sein und verwendet werden, um Intronsequenzen zwischen diesen Exons zu amplifizieren.
  • Wenn für den Gen-Locus keine entsprechend positionierten, konservierten Sequenzen einzigartig sind, kann ein zweiter Primer, der innerhalb der durch das erste Primerpaar erzeugten amplifizierten Sequenz positioniert ist, verwendet werden, um für eine amplifizierte DNA-Sequenz zu sorgen, die für den Gen-Locus spezifisch ist. Zumindest einer der Primer des zweiten Primerpaares befindet sich in einem konservierten Bereich der amplifizierten DNA-Sequenz, die durch das erste Primerpaar definiert ist. Das zweite Primerpaar wird nach der Amplifikation mit dem ersten Primerpaar verwendet, um einen Abschnitt der amplifizierten DNA-Sequenz zu amplifizieren, der durch das erste Primerpaar erzeugt wird.
  • Es gibt drei Haupttypen genetischer Variationen, die detektiert und verwendet werden können, um ein Alle zu identifizieren. Diese Variationen sind, geordnet nach der Einfachheit ihrer Detektion, (1) eine Änderung der Länge der Sequenz, (2) eine Änderung des Vorhandenseins oder der Position zumindest einer Restriktionsstelle und (3) die Substitution eines oder einiger Nukleotide, die nicht zu einer Änderung der Restriktionsstelle führt. Andere Variationen innerhalb der amplifizierten DNA-Sequenz sind ebenfalls detektierbar.
  • Es gibt drei Arten von Techniken, die eingesetzt werden können, um die Variationen zu detektieren. Die erste ist das Sequenzieren der amplifizierten DNA-Sequenz. Das Sequenzieren ist das zeitaufwendigste und auch das am meisten aufklärende Analyseverfahren, da damit jede Art von genetischer Variation in der amplifizierten Sequenz detektiert wird. Beim zweiten Analyseverfahren werden allelspezifische Oligonukleotid- oder sequenzspezifische Oligonukleotidsonden (ASO- oder SSOSonden) verwendet. Sonden können einzelne Nukleotidänderungen, die zu jeder der Arten genetischer Variationen führen, detektieren, solange die exakte Sequenz der variablen Stelle bekannt ist. Bei einer dritten Art von Analyseverfahren werden Sequenzen mit unterschiedlichen Längen (z.B. aufgrund einer Insertion oder Löschung oder einer Änderung in der Position einer Restriktionstelle) und/oder unterschiedlicher Sequenzanzahl (aufgrund von Erhalt oder Verlust an Restriktionsstellen) detektiert. Ein bevorzugtes Detektionsverfahren ist jenes durch Gel- oder Kapillarelektrophorese. Um Änderungen in den Längen der Fragmente oder der Anzahl der Fragmente aufgrund von Änderungen der Restriktionsstellen zu detektieren, muß die amplifizierte Sequenz vor der Analyse der Fragmentlängenmuster mit einer geeigneten Restriktionsendonuklease gespalten werden.
  • Die erste genetische Variation ist ein Unterschied in der Länge der primerdefinierten amplifizierten DNA-Sequenz, was hierin als primerdefinierter Längenpolymorphismus (PDLP) bezeichnet wird, welcher Längenunterschied zwischen zumindest zwei Allelen des Gen-Locus unterscheidet. Die PDLPs sind das Ergebnis von Insertionen oder Deletionen großer Strecken (im Vergleich zur Gesamtlänge der amplifizierten DNA- Sequenz) von DNA im Abschnitt der durch das Primerpaar definierten Intronsequenz. Um PDLPS zu detektieren, befindet sich die amplifizierte DNA-Sequenz in einem Bereich, der Insertionen oder Deletionen mit einer Größe enthält, die durch das gewählte Verfahren detektiert werden kann. Die amplifizierte DNA-Sequenz sollte eine Länge aufweisen, die für optimale Auftrennung der Längendifferenzen sorgt. Bei der Elektrophorese sorgen DNA-Sequenzen mit einer Länge von etwa 300 bis 500 Basen für optimale Auftrennung der Längendifferenzen. Es können Nukleotidsequenzen unterschieden werden, die sich in der Länge um nicht mehr als 3 nt, vorzugsweise 25 bis 50 nt, unterscheiden. Es sind jedoch auch Sequenzen mit einer Länge von nicht weniger als 800 bis 2.000 nt unterscheidbar, die die sich um zumindest etwa 50 nt unterscheiden. Gelelektrophorese und Kapillarelektrophorese unterliegen ähnlichen Auftrennungsgrenzen. Vorzugsweise betragen die Längendifferenzen zwischen amplifizierten DNA-Sequenzen zumindest 10, mehr bevorzugt 20, am meisten bevorzugt 50 oder mehr nt zwischen den Allelen. Vorzugsweise hat die amplifizierte DNA-Sequenz zwischen 300 und 1.000 nt und umfaßt Längendifferenzen von zumindest 3, vorzugsweise 10 oder mehr nt.
  • Vorzugsweise befindet sich die amplifizierte Sequenz in einem Bereich, der PDLP- Sequenzen liefert, die die meisten oder alle Allele eines Locus unterscheiden. Ein Beispiel für die Identifizierung auf PDLP-Basis von 5 der 8 DQA1-Allele wird in den Beispielen im Detail beschrieben.
  • Wenn die zu detektierende Variation eine Änderung einer Restriktionsstelle ist, enthält die amplifizierte DNA-Sequenz notwendigerweise zumindest eine Restriktionsstelle, die (1) in einem Allel und nicht in einem anderen vorhanden ist, (2) offensichtlich in einer anderen Position in der Sequenz von zumindest zwei Allelen angeordnet ist oder (3) bei der Kombinationen daraus vorliegen. Die amplifizierte Sequenz ist vorzugsweise so angeordnet, daß die Restriktionsendonukleasenspaltung Fragmente mit detektierbar anderen Längen erzeugt und nicht zwei oder mehr Fragmente mit in etwa gleicher Länge. Bei Alleldifferenzen, die durch ASO- oder SSO-Sonden detektiert werden, umfaßt die amplifizierte DNA-Sequenz einen Bereich mit von etwa 200 bis etwa 400 nt, der in einem oder mehreren Allelen vorhanden ist und in einer oder mehreren anderen Allelen nicht vorhanden ist. Bei einer am meisten bevorzugten Ausführungsform enthält die Sequenz einen Bereich, der durch eine Sonde detektierbar ist und nur einem Allel des Gen-Locus vorhanden ist. Es können jedoch Kombinationen aus Sonden, die mit manchen Allelen reagieren und mit anderen nicht, zum Charakterisieren der Allele verwendet werden.
  • Für das hierin beschriebene Verfahren wird in Erwägung gezogen, daß für in hohem Maße polymorphe Loci die Verwendung von mehr als einer amplifizierten DNA- Sequenz und/oder der Einsatz von mehr als einem Analyseverfahren pro amplifizierter DNA-Sequenz erforderlich ist, insbesondere für Loci, wo sich die Allele durch einzelne Nukleotidsubstitutionen unterscheiden, die für das Allel nicht einzigartig sind, oder wenn Information bezüglich entfernter Allele (Haplotypen) erwünscht ist. Im spezielleren kann es notwendig sein, eine PDLP-Analyse mit einer RFLP-Analyse zu kombinieren, zwei oder mehr amplifizierte DNA-Sequenzen zu verwenden, die sich in verschiedenen Positionen befinden, oder eine einzelne amplifizierte DNA-Sequenz mit einer Vielzahl von Endonukleasen zu spalten, um alle Allele mancher Loci zu unterscheiden. Diese Kombinationen sollen im Schutzumfang der vorliegenden Erfindung enthalten sein.
  • Beispielsweise werden bei der Analyse der Haplotypen des DQA1-Locus, wie in den Beispielen beschrieben, PDLPs und RFLP-Analyse eingesetzt, bei der drei verschiedene Enzymdigeste verwendet werden, um die 8 Allele und 20 der 32 Haplotypen des Locus zu unterscheiden.
    • Längen- und Sequenzhomologie der Primer
  • Jeder locusspezifische Primer umfaßt eine Anzahl von Nukleotiden, die unter den bei der Hybridisierung eingesetzten Bedingungen ausreicht, um mit einem Allel des zu amplifizierenden Locus zu hybridisieren und von Hybridisierung mit Allelen anderer Loci frei zu sein. Die Spezifität des Primers erhöht sich mit der Anzahl an Nukleotiden in seiner Sequenz unter Bedingungen, die für die gleiche Strenge sorgen. Daher sind längere Primer wünschenswert. Bei Sequenzen mit weniger als 15 Nukleotiden ist es weniger sicher, daß sie für einen bestimmten Locus spezifisch sind. Das heißt, bei Sequenzen mit weniger als 15 Nukleotiden ist es in umgekehrtem Verhältnis zur Länge der Nukleotidsequenz wahrscheinlicher, daß sie in einem Abschnitt der DNA vorhanden sind, der mit anderen Gen-Loci assoziiert ist, insbesondere Loci mit anderem herkömmlichen Ursprung oder evolutionär eng verwandtem Ursprung.
  • Jeder Primer umfaßt vorzugsweise zumindest etwa 1 5 Nukleotide, mehr bevorzugt zumindest etwa 20 Nukleotide. Der Primer umfaßt vorzugsweise nicht mehr als etwa 30 Nukleotide, mehr bevorzugt etwa 25 Nukleotide. Am meisten bevorzugt haben die Primer zwischen etwa 20 und etwa 25 Nukleotide.
  • Eine Anzahl der bevorzugten Primer wird hierin beschrieben. Jeder dieser Primer hybridisiert mit zumindest etwa 15 aufeinanderfolgenden Nukleotiden des bezeichneten Bereichs der Allelsequenz. Bei vielen der Primer ist die Sequenz nicht für alle anderen Allele des Locus identisch. Bei jedem der Primer weisen zusätzliche bevorzugte Primer Sequenzen auf, die den Sequenzen des homologen Bereichs anderer Allele des Locus oder ihren Komplementen entsprechen.
  • Wenn zwei Sätze von Primerpaaren nacheinander verwendet werden, wobei das zweite Primerpaar das Produkt des ersten Primerpaares amplifiziert, können die Primer die gleiche Größe wie jene aufweisen, die für die erste Amplifikation verwendet werden. Es können jedoch bei der zweiten Amplifikation kleinere Primer verwendet werden und für die erforderliche Spezifität sorgen. Diese kleineren Primer können, falls gewünscht, so ausgewählt werden, daß sie allelspezifisch sind. Die Primer des zweiten Primerpaares können 15 oder weniger, vorzugsweise 8 bis 12, mehr bevorzugt 8 bis 10 Nukleotide aufweisen. Wenn zwei Sätze von Primerpaaren verwendet werden, um zwei amplifizierte Sequenzen herzustellen, wird die zweite amplifizierte DNA-Sequenz in der darauffolgenden Analyse genetischer Variation verwendet und muß den zuvor für die amplifizierte DNA-Sequenz erörterten Anforderungen entsprechen.
  • Die Primer weisen vorzugsweise eine Nukleotidsequenz auf, die mit einem Abschnitt der zu amplifizierenden DNA-Sequenz oder ihrem Komplement identisch ist. Es kann aber auch ein Primer verwendet werden, der zwei Nukleotide aufweist, die sich von der Ziel-DNA-Sequenz oder ihrem Komplement unterscheiden. Alle Nukleotide, die mit der Sequenz oder ihrem Komplement nicht identisch sind, befinden sich vorzugsweise nicht am 3'-Ende des Primers. Das 3'-Ende des Primers weist vorzugsweise zumindest zwei, vorzugsweise drei oder mehr Nukleotide auf, die zu der Sequenz komplementär sind, an die sich der Primer bindet. Alle Nukleotide, die nicht mit der zu amplifizierenden Sequenz oder ihrem Komplement identisch sind, sind in der Primersequenz vorzugsweise nicht angrenzend. Mehr bevorzugt sind nichtkomplementäre Nukleotide in der Primersequenz durch zumindest drei, mehr bevorzugt zumindest 5 Nukleotide abgetrennt. Die Primer sollten eine Schmelztemperatur (Tm) von etwa 55 bis 75ºC aufweisen. Vorzugsweise beträgt die Tm von etwa 60ºC bis etwa 65ºC, um strenge Amplifikationsbedingungen zu erleichtern.
  • Die Primer können unter Verwendung einer Anzahl von Verfahren hergestellt werden, beispielsweise das Phosphotriester- und das Phosphodiesterverfahren oder automatisierte Ausführungsformen davon. Die Phosphodiester- und das Phosphotriesterverfahren werden in Cruthers, "Science" 230: 281-285 (1985); Brown et al., "Meth.Enzymol." 68:109 (1979); und Nrang et al., "Meth.Enzymol." 68:90 (1979) beschrieben. Bei einem automatisierten Verfahren werden als Ausgangsmaterialien Diethylphosphoramidite verwendet, die, wie von Beaucage et al., "Tetrahedron Letters" 22:1859-1962 (1981) beschrieben, synthetisiert werden können. Ein Verfahren zum Synthetisieren von Primeroligonukleotidsequenzen auf einem modifizierten festen Träger wird in der US-PS-4.458.066 beschrieben. Jede der obigen Literaturstellen ist in ihrer Gesamtheit durch Verweis hierin eingeschlossen.
  • Exemplarische Primersequenzen zur Analyse von Klasse I- und Klasse II-HLA-Loci; Rinderleukozytenantigenen und zystischer Fibrose werden hierin beschrieben.
    • Amplifikation
  • Die locuspezifischen Primer werden bei einem Amplifikationsverfahren verwendet, um eine ausreichende Menge an DNA für das Analyseverfahren herzustellen. Zur Herstellung von RFLP-Fragmentmustern oder PDLP-Mustern, die durch Elektrophorese analysiert werden, sind etwa 1 bis etwa 500 ng DNA erforderlich. Ein bevorzugtes Amplifikationsverfahren ist die Polymerasekettenreaktion (PCR). PCR-Amplifikationsverfahren werden in der US-PS-4.683.195 (an Mullis et al., veröffentlicht am 28. Juli 1987); der US-PS-4.83.194 (an Saiki et al., veröffentlicht am 28. Juli 1987); Saiki et al., "Science" 230:1350-1354 (1985); Scharf et al., "Science" 324:163-166 (1986); Kogan et al., "New.Engl.J.Med." 317:985-990 (1987) und Saiki, Gyllensten und Erlich, "The Polymerase Chain Reaction in Genome Analysis: A Practical Approach", Hrs. Davies, S.141-152 (1988) I.R.L. Press, Oxford, beschrieben. Jede der obigen Literaturstellen ist in ihrer Gesamtheit durch Verweis hierin eingeschlossen.
  • Vor der Amplifikation wird eine Probe der DNA des Organismus des Individuums entnommen. Alle Zellen mit Kern enthalten genomische DNA und sind daher potentielle Quellen der erforderlichen DNA. Bei höher entwickelten Tieren werden typischerweise anstelle von Gewebeproben periphere Blutzellen verwendet. Nicht mehr als 0,01 bis 0,05 cm³ peripheres Blut liefern ausreichend DNA zur Amplifikation. Haar, Samen und Gewebe können ebenfalls als Proben verwendet werden. Im Fall von Fötenanalysen können Plazentazellen oder Fötenzellen verwendet werden, die im Fruchtwasser enthalten sind. Die DNA wird von Zellen mit Kern unter Bedingungen isoliert, die den DNA-Abbau minimieren. Typischerweise umfaßt die Isolierung das Spalten der Zeilen mit einer Protease, die DNA bei einer Temperatur und einem pH- Wert, die die Wahrscheinlichkeit der DNase-Aktivität verringern, nicht angreift.Bei peripheren Blutzellen reicht die Lyse der Zellen mit einer hypotonen Lösung (Wasser) aus, um die DNA freizusetzen.
  • Die DNA-Isolierung aus Zellen mit Kern wird von Kan et al., "N.Engl.J.Med." 297: 1080-1084 (1977); Kan et al., "Nature" 251:392-392 (1974); und Kan et al., "PNAS" 75:5631-5635 (1978) beschrieben. Jede der obigen Literaturstellen ist in ihrer Gesamtheit durch Verweis hierin eingeschlossen. Extraktionsverfahren für Proben, wie z.B. Blut, Samen, Haarfollikel, Samen, Schleimmembranepithel und andere Quellen genomischer DNA sind wohlbekannt. Bei Pflanzenzellen setzt die Spaltung der Zellen mit Zellulase DNA frei. Daraufhin wird DNA wie oben beschrieben gereinigt.
  • Die extrahierte DNA kann vor dem Amplifizieren durch Dialyse, Chromatographie oder andere bekannte Verfahren zur Reinigung von Polynukleotiden gereinigt werden. Typischerweise wird die DNA vor dem Amplifizieren nicht gereinigt.
  • Die amplifizierte DNA-Sequenz wird hergestellt, indem der Abschnitt der DNA und sein Komplement, die durch das Primerpaar begrenzt sind, als Templat verwendet wird. Als erster Schritt des Verfahrens werden die DNA-Stränge in einstrangige DNA geteilt. Diese Strangtrennung kann durch eine Reihe von Verfahren, einschließlich physikalischer oder chemischer Mittel, erreicht werden. Ein bevorzugtes Verfahren ist das physikalische Verfahren zum Abtrennen der Stränge durch Erwärmen der DNA, bis sie im wesentlichen (zu etwa 93%) denaturiert ist. Die Hitzedenaturierung erfolgt bei Temperaturen im Bereich von etwa 80 bis 105ºC für Zeitspannen im Bereich von etwa 15 bis 30 s. Typischerweise ist das Erhitzen der DNA auf eine Temperatur von 90 bis 93ºC für etwa 30 s bis etwa 1 min ausreichend.
  • Das/die hergestellte(n) Primerextensionsprodukt(e) ist/sind zum primerdefinierten Bereich der DNA komplementär und hybridisieren damit, sodaß ein Duplex aus gleichlangen Strängen gebildet wird. Die Duplexe der Extensionsprodukte und ihre Template werden dann in einstrangige DNA geteilt. Wenn die komplementären Stränge der Duplexe getrennt sind, können die Stränge als Template für den nächsten Synthesezyklus weiterer DNA-Stränge verwendet werden.
  • Jeder der Syntheseschritte kann unter Einsatz von Bedingungen durchgeführt werden, die für die DNA-Amplifikation geeignet sind. Im allgemeinen wird der Amplifikationsschritt in einer gepufferten wäßrigen Lösung, vorzugsweise bei einem pH von etwa 7 bis etwa 9, mehr bevorzugt etwa pH 8, durchgeführt. Ein geeigneter Amplifikationspuffer enthält Tris-HCl als Puffermittel in einem Bereich von etwa 10 bis 100 mM. Der Puffer umfaßt auch ein einwertiges Salz, vorzugsweise in einer Konzentration von zumindest etwa 10 mM und nicht mehr als etwa 60 mM. Bevorzugte einwertige Salze sind KCl, NaCl und (NH&sub4;)&sub2;SO&sub4;. Der Puffer enthält auch MgCl&sub2; mit etwa 5 bis 50 mM. Es können auch andere Puffersysteme, wie Hepes- oder Glycin-NaOH- und Kaliumphosphatpuffer, verwendet werden. Typischerweise beträgt das Gesamtvolumen des Amplifikationsreaktionsgemisches etwa 50 bis 100 µl.
  • Vorzugsweise wird dem Puffer, der die getrennten DNA-Templatstränge enthält, bei genomischer DNA ein molarer Überschuß des Primerpaares von etwa 10&sup6;:1 Primer:Templat zugegeben. Ein großer molarer Überschuß der Primer verbessert die Effizienz des Amplifikationsverfahrens. Im allgemeinen werden etwa 100 bis 150 ng eines jeden Primers zugegeben
  • Dem Amplifikationsgemisch werden die Desoxyribonukleotidtriphosphate dATP, dCTP, dGTP und dTTP in Mengen zugegeben, die ausreichen, um die amplifizierten DNA- Sequenzen herzustellen. Vorzugsweise sind die dNTPs in einer Konzentration von etwa 0,75 bis etwa 4,0 mM, mehr bevorzugt etwa 2,0 mM, vorhanden. Die resultierende Lösung wird für von etwa 30 s bis etwa 1 min auf etwa 90 bis 93ºC erhitzt, um die Stränge der DNA zu trennen. Nach diesem Erhitzungszeitraum wird die Lösung auf die Amplifikationstemperatur abgekühlt.
  • Nach der Trennung der DNA-Stränge wird zugelassen, daß sich die Primer an die Stränge annelieren. Die Annelierungstemperatur variiert nach der Länge und dem GC- Gehalt der Primer. Diese Variablen werden in der Tm eines jeden Primers reflektiert. Exemplarische HLA-DQA1-Primer gemäß vorliegender Erfindung, wie nachstehend beschrieben, erfordern Temperaturen von etwa 55ºC. Die exemplarischen HLA-Klasse I- Primer gemäß vorliegender Erfindung erfordern etwas höhere Temperaturen von etwa 62ºC bis etwa 68ºC. Der Extensionsreaktionsschritt wird nach dem Annelieren der Primer an die genomische DNA durchgeführt.
  • Ein geeignetes Mittel zum Induzieren oder Katalysieren der Primerextensionsreaktion wird dem Amplifikationsgemisch je nach der Stabilität des Mittels unter den Denaturierungsbedingungen entweder vor oder nach dem Schritt der Strangtrennung (Denaturierung) zugegeben. Die DNA-Synthesereaktion wird unter Bedingungen zugelassen, die nach dem Stand der Technik wohlbekannt sind. Diese Synthesereaktion (Primerextension) kann von Raumtemperatur bis hinauf zu einer Temperatur ablaufen, über der die Polymerase nicht mehr effizient arbeitet. Das Erhöhen der Amplifikationstemperatur erhöht die Strenge der Bedingungen der Reaktion. Wie bereits angeführt, sind strenge Bedingungen notwendig, um zu gewährleisten, daß die amplifizierte Sequenz und die DNA-Templatsequenz die gleiche Nukleotidsequenz enthalten, da die Substitution von Nukleotiden die Restriktionsstellen oder Sondenbindungsstellen in der amplifizierten Sequenz ändern kann.
  • Das induzierende Mittel kann jede(s) Verbindung oder System sein, die/das die Synthese von Primerextensionsprodukten erleichtert, vorzugsweise Enzyme. Für diesen Zweck geeignete Enzyme sind DNA-Polymerasen (wie beispielsweise E.coli-DNA- Polymerase I, Klenow-Fragment der E.coli-DNA-Polymerase I, T4-DNA-Polymerase), Reverse Transkriptase und andere Enzyme (einschließlich hitzestabiler Polymerasen) die die Kombination der Nukleotide auf geeignete Weise erleichtern, um die Primerextensionsprodukte zu bilden. Am meisten bevorzugt ist die Taq-Polymerase oder andere hitzestabile Polymerasen, die die DNA-Synthese bei erhöhten Temperaturen (etwa 60 bis 90ºC) erleichtern. Taq-Polymerase wird z.B. von Chien et al., "J.Bacteriol." 127:1550-1557 (1976) beschrieben. Dieser Artikel ist in seiner Gesamtheit durch Verweis hierin eingeschlossen. Wenn der Extensionsschritt bei etwa 72ºC durchgeführt wird, ist etwa 1 min für jeweils 1.000 zu amplifizierende Basen der Ziel-DNA erforderlich.
  • Die Synthese der amplifizierten Sequenz wird am 3'-Ende eines jeden Primers initiiert und schreitet den Templat-DNA-Strang entlang zum 5'-Ende des Templats hin fort, bis die Synthese endet, wodurch DNA-Sequenzen unterschiedlicher Längen hergestellt werden. Der neu synthetisierte Strang und sein komplementärer Strang bilden ein doppelstrangiges Molekül, das bei den darauffolgenden Schritten des Verfahrens verwendet wird. Im nächsten Schritt werden die Stränge des doppelstrangigen Moleküls wie oben beschrieben getrennt (denaturiert), um einstrangige Moleküle bereitzustellen.
  • Neue DNA wird an den einstrangigen Templatmolekülen synthetisiert. Falls notwendig, können weitere Polymerase, Nukleotide und Primer zugegeben werden, damit die Reaktion unter den oben beschriebenen Bedingungen abläuft. Nach diesem Schritt besteht die Häflte des Extensionsproduktes aus der amplifizierten Sequenz, die durch die beiden Primer begrenzt ist. Die Schritte der Strangtrennung und Extensionsproduktsynthese können so oft wie notwendig wiederholt werden, um die erforderliche Menge der amplifizierten DNA-Sequenz herzustellen. Die Menge der erzeugten amplifizierten Sequenz nimmt exponentiell zu. Typischerweise sind etwa 25 bis 30 Zyklen ausreichend, um eine für die Analyse geeignete Menge der amplifizierten DNA-Sequenz herzustellen.
  • Das Amplifikationsverfahren kann schrittweise durchgeführt werden, wobei nach jedem Schritt neue Reagenzien zugegeben werden, oder gleichzeitig, wobei alle Reagenzien in einem Anfangsschritt zugegeben werden, oder zum Teil schrittweise und zum Teil gleichzeitig, wobei nac einer bestimmten Anzahl von Schritten frisches Reagens zugegeben wird. Das Amplifikationsreaktionsgemisch kann zusätzlich zur genomischen Proben-DNA die vier Nukleotide, das Primerpaar im molaren Überschuss und das induzierende Mittel, z.B. Taq-Polymerase, enthalten.
  • Trotz des anfänglichen Vorhandenseins aller Reagenzien läuft jeder Schritt des Verfahrens der Reihe nach ab. Zusätzliche Materialien können zugegeben werden, falls erforderlich. Typischerweise wird die Polymerase bei Verwendung einer hitzestabilen Polymerase nicht nachgefüllt. Nach der angemessenen Anzahl an Zyklen zur Herstellung der gewünschten Menge der amplifizierten Sequenz kann die Reaktion durch Inaktivierung der Enzyme, Trennen der Komponenten der Reaktion oder Unterbrechen des Temperaturzyklus beendet werden.
  • Bei einer bevorzugten Ausführungsform des Verfahrens umfaßt die Amplifikation die Verwendung eines zweiten Primerpaares zur Durchführung einer zweiten Amplifikation nach der ersten. Das zweite Primerpaar definiert eine DNA-Sequenz, die ein Abschnitt der ersten amplifizierten Sequenz ist. Das heißt, zumindest einer der Primer des zweiten Primerpaares definiert ein Ende der zweiten amplifizierten Sequenz, das sich innerhalb der Enden der ersten amplifizierten Sequenz befindet. Auf diese Weise trägt die Verwendung des zweiten Primerpaares dazu bei, zu gewährleisten, daß jede bei der zweiten Amplifikationsreaktion hergestellte amplifizierte Sequenz für den getesten Locus spezifisch ist. Das heißt, es ist unwahrscheinlich, daß Nicht-Zielsequenzen, die durch ein locusspezifisches Paar kopiert werden können, Sequenzen enthalten, die mit einem zweiten locusspezifischen Primerpaar hybridisieren, das sich innerhalb der ersten amplifizierten Sequenz befindet.
  • Bei einer weiteren Ausführungsform ist das zweite Primerpaar für ein Allel des Locus spezifisch. Auf diese Weise weist die Detektion des Vorhandenseins einer zweiten amplifizierten Sequenz darauf hin, daß das Allel in der Probe vorhanden ist. Das Vorhandensein einer zweiten amplifizierten Sequenz kann durch Quantifizieren der DNA-Menge am Beginn und am Ende der zweiten Amplifikationsreaktion ermittelt werden. Verfahren zum Quantifizieren der DNA sind wohlbekannt und umfassen das Bestimmen der optischen Dichte bei 260 (OD&sub2;&sub6;&sub0;) und vorzugsweise zusätzlich das Bestimmen des Verhältnisses zwischen der optischen Dichte bei 260 und der optischen Dichte bei 280 (OD&sub2;&sub6;&sub0;/OD&sub2;&sub8;&sub0;), um die Menge an DNA im Vergleich zum Protein in der Probe zu ermitteln.
  • Vorzugsweise enthält die erste Amplifikation nur für eine begrenzte Anzahl an Primerextensionszyklen, z.B. weniger als 15, vorzugsweise etwa 10 bis 12 Zyklen, ausreichend Primer, so daß die durch das Verfahren erzeugte Menge an amplifizierter Sequenz für die zweite Amplifikation ausreicht, aber die Bestimmung, ob Amplifikation mit dem zweiten Primerpaar stattgefunden hat, nicht stört. Alternativ dazu kann die Amplifikationsreaktion weitere Zyklen hindurch fortgesetzt und aliquotiert werden, um entsprechende DNA-Mengen für eine oder mehrere zweite Amplifikationreaktionen bereitzustellen. Etwa 100 bis 150 ng eines jeden Primers des zweiten Primerpaares wird dem Amplifikationsreaktionsgemisch zugegeben. Der zweite Primersatz wird vorzugsweise nach den anfänglichen Zyklen mit dem ersten Primerpaar zugegeben. Die Menge des ersten Primerpaares kann im Vergleich zum zweiten Primerpaar begrenzt sein, sodaß nach der Zugabe des zweiten Paares im wesentlichen alle amplifizierten Sequenzen von zweiten Paar erzeugt werden.
  • Wie zuvor angeführt, kann die DNA quantifiziert werden, um zu ermitteln, ob bei der zweiten Amplifikation eine amplifizierte Sequenz erzeugt wurde. Wenn Protein im Reaktionsgemisch die Quantifizierung (üblicherweise aufgrund des Vorhandenseins der Polymerase) stört, kann das Reaktionsgemisch gereinigt wird, wie etwa unter Verwendung eines Filters mit einem Molekulargewichts-cut-off von 100.000. Derartige Filter werden von Millipore und Centricon im Handel angeboten.
    • Analyse der amplifizierten DNA-Sequenz
  • Wie zuvor erörtert, hängt das zum Analysieren der amplifizierten DNA-Sequenz zwecks Charakterisierung des/der in der Proben-DNA vorhandenen Allels/Allele eingesetzte Verfahren von der genetischen Variation in der Sequenz ab. Wenn Unterscheidungen zwischen den Allelen primerdefinierte Längenpolymorphismen umfassen, werden die amplifizierten Sequenzen auf Basis der Länge, vorzugsweise unter Einsatz von Gel- oder Kapillarelektrophorese, getrennt. Wenn die Sondenhybridisierung zur Analyse eingesetzt wird, werden die amplifizierten Sequenzen mit markierten Sonden umgesetzt. Wenn die Analyse auf RFLP-Fragmentmustern basiert, werden die amplifizierten Sequenzen mit einer oder mehreren Restriktionsendonukleasen gespalten, um ein Digest herzustellen, und die resultierenden Fragmente werden auf Basis der Länge, vorzugsweise unter Einsatz von Gel- oder Kapillarelektrophorese, getrennt. Wenn die einige Variation, die die amplifizierte Sequenz umfaßt, eine Sequenzvariation ist, die nicht zu einer Änderung der Länge oder einer Änderung einer Restriktionsstelle führt und für die Detektion durch eine Sonde ungeeignet ist, werden die amplifizierten DNA-Sequenzen sequenziert.
  • Verfahren für jeden Schritt der verschiedenen Analyseverfahren sind wohl bekannt und werden nachstehend beschrieben.
    • Herstellung von RFLP-Fragmentmustern Restriktionsendonukleasen
  • Eine Restriktionsendonuklease ist ein Enzym, das DNA an einer spezifischen Nukleotidsequenz, die als Restriktionsstelle bezeichnet wird, hydrolytisch spaltet oder schneidet. Es können Endonukleasen, die stumpfendige DNA-Fragmente erzeugen (die Hydrolyse der Phosphodiesterbindungen an beiden DNA-Strängen tritt an derselben Stelle auf) sowie Endonukleasen verwendet werden, die Fragmente mit kohäsiven Enden erzeugen (die Hydrolysestellen an den Strängen sind durch wenige Nukleotide voneinander getrennt).
  • Restriktionsenzyme werden von einer Reihe von Firmen im Handel angeboten, einschließlich Sigma Pharmaceuticals, Bethesda Research Labs, Boehringer-Manheim und Pharmacia. Wie zuvor angeführt, spaltet eine gemäß vorliegender Erfindung verwendete Restriktionsendonuklease eine amplifizierte DNA-Sequenz gemäß vorliegender Erfindung, sodaß ein Digest hergestellt wird, der einen Satz von Fragmenten mit unterschiedlichen Fragmentlängen umfaßt. Insbesondere unterscheiden sich die Fragmente von einem Allel eines Locus in ihrer Größe von den Fragmenten für andere Allele des Locus. Die durch Trennung und Visualisierung der Fragmente einer Vielzahl von Digesten erzeugten Muster reichen aus, um jedes Allel des Locus zü unterscheiden. Im spezielleren werden die Endonukleasen so gewählt, daß unter Verwendung einer Vielzahl von Digesten der amplifizierten Sequenz, vorzugsweise weniger als 5, mehr bevorzugt 2 oder 3 Digeste, die Allele eines Locus unterschieden werden können.
  • Bei der Wahl einer Endonuklease ist die wichtige Überlegung die Anzahl an Fragmenten, die für amplifizierte Sequenzen der verschiedenen Allelen eines Locus erzeugt werden. Im spezielleren muß eine ausreichende Anzahl an Fragmenten hergestellt werden, um zwischen den Allelen zu unterscheiden, und, falls erforderlich, für Individualitätsbestimmungen zu sorgen. Jedoch darf die Anzahl der Fragmente nicht so groß oder so ähnlich in der Größe sein, daß ein Muster erzeugt wird, das von jenen der anderen Haplotypen durch das spezielle Detektionsverfahren nicht unterscheidbar ist. Vorzugsweise haben die Fragmente für jedes Allel unterschiedliche Größen. Das heißt, die Fragmente für ein Allel unterscheiden sich für jedes Endonukleasedigest einer speziellen amplifizierten Sequenz vorzugsweise für jedes andere Allel des Locus um zumindest 10, vorzugsweise 20, mehr bevorzugt 30, und am meisten bevorzugt 50 oder mehr Nukleotide.
  • Für Fachleute ist es leicht, zu bestimmen, ob eine Endonuklease RFLP-Fragmente mit unterschiedlichen Fragmentlängen erzeugt. Die Ermittlung kann beim erfindungsgemäßen Verfahren experimentell durch Spalten einer amplifizierten Sequenz für jedes Allel mit der bezeichneten Endonuklease erfolgen. Die Fragmentmuster können dann analysiert werden. Unterscheidbare Muster sind leicht zu erkennen, indem man ermittelt, ob der Vergleich zwischen zwei oder mehr Digestmustern ausreicht, um charakteristische Unterschiede zwischen den Mustern der Allelen zu zeigen.
  • Die Anzahl an Digesten, die für jede spezielle Analyse hergestellt werden müssen, hängt von der gewünschten Information und speziellen zu analysierenden Probe ab. Da HLA-Analysen für eine Vielzahl von Zwecken, von Individuumsbestimmungen für die. Gerichtsmedizin und Vaterschaffstests bis zur Gewebetypisierung für Transplantationen, verwendet werden, wird der HLA-Komplex exemplarisch verwendet.
  • Ein einzelner Digest kann ausreichen, um zu ermitteln, daß ein Individuum nicht die Person sein kann, deren Blut am Ort eines Verbrechens gefunden wurde. Im allgemeinen jedoch reicht für Übereinstimmungsanwendungen (Gerichtsmedizin, Vaterschaftstest), wenn sich die DNA-Proben nicht unterscheiden, die Verwendung von 2 bis 3 Digesten für jeden von zwei bis drei HLA-Loci aus. Zur vollständigen HLA- Typisierung muß jeder Locus bestimmt werden.
  • Bei einer bevorzugten Ausführungsform werden Proben-HLA-DNA-Sequenzen in Aliquote unterteilt, die ähnliche DNA-Mengen pro Aliquot enthalten, und werden mit Primerpaaren (oder Kombinationen aus Primerpaaren) amplifiziert, um amplifizierte DNA-Sequenzen für eine Anzahl von HLA-Loci herzustellen. Jedes Amplifikationsgemisch enthält nur Primerpaare für einen HLA-Locus. Die amplifizierten Sequenzen werden vorzugsweise gleichzeitig verarbeitet, so daß aus einer Probe eine Anzahl von Digest-RFLP-Fragmentmustern hergestellt werden kann. Auf diese Weise kann der HLA-Typ für eine Anzahl von Allelen gleichzeitig ermittelt werden.
  • Alternativ dazu sorgt die Herstellung einer Anzahl von RFLP-Fragmentmustern für zusätzliche Vergleiche von Mustern, um Proben für gerichtsmedizinische und Vaterschaftstests-Analysen zu unterscheiden, wo die Analyse eines Locus häufig nicht ausreichend Information für die Bestimmung liefert, wenn die Proben-DNA das gleiche Allel wie die DNA aufweist, mit der sie verglichen wird.
    • Herstellung von RFLP-Fragmenten
  • Nach der Amplifikation wird die amplifizierte DNA-Sequenz mit einer Endonuklease kombiniert, die die amplifizierte DNA-Sequenz an einer spezifischen Restriktionstelle hydrolytisch spaltet oder schneidet. Die Kombination der Endonuklease mit der. amplifizierten DNA-Sequenz erzeugt ein Digest, das einen Satz von Fragmenten mit unterschiedlichen Fragmentlängen enthält. Die US-PS-4.582.788 (an Erlich, veröffentlicht am 15. April 1986) beschreibt ein HLA-Typisierungsverfahren auf Basis von Restriktionslängenpolymorphismus (RFLP). Dieses Patent ist in seiner Gesamtheit durch Verweis hierin eingeschlossen.
  • Bei einer bevorzugten Ausführungsform werden zwei oder mehr Aliquote des Amplifikationsreaktionsgemisches mit in etwa gleichen DNA-Mengen pro Aliquot hergestellt. Zweckmäßigerweise werden etwa 5 bis 10 µl eines 100 µl- Reaktionsgemisches für jedes Aliquot verwendet. Jedes Aliquot wird mit einer anderen Endonuklease kombiniert, um eine Vielzahl von Digesten herzustellen. Auf diese Weise können unter Verwendung einer Anzahl von Endonukleasen für eine spezielle amplifizierte DNA-Sequenz leicht locusspezifische Kombinationen von Endonukleasen bestimmt werden, die eine Vielzahl von Allelen eines speziellen Locus unterscheiden. Nach der Herstellung der Digeste kann jedes der Digeste verwendet werden, um RFLP- Muster zu bilden. Vorzugsweise können vor der Musterbildung zwei oder mehr Digeste gepoolt werden.
  • Alternativ dazu können zwei oder mehr Restriktionsendonukleasen verwendet werden, um ein einziges Digest herzustellen. Das Digest unterscheidet sich von einem, bei dem jedes Enzym getrennt verwendet wird und die resultierenden Fragmente gepoolt werden, das durch ein Enzym hergestellte Fragmente eine oder mehrere Restriktionsstellen umfassen können, die von einem anderen Enzym im Digest erkannt werden. Muster, die durch die gleichzeitige Spaltung durch zwei oder mehr Enzyme hergestellt werden, umfassen mehr Fragmente als gepoolte Produkte getrennter Spaltungen, bei denen diese Enzyme verwendet werden, und sind komplizierter zu analysieren.
  • Weiters können eine oder mehrere Restriktionsendonukleasen verwendet werden, um zwei oder mehr amplifizierte DNA-Sequenzen zu spalten. Das heißt, zur vollständigeren Auftrennung aller Allele eines Locus kann es wünschenswert sein, amplifizierte DNA-Sequenzen herzustellen, die zwei verschiedene Bereiche umfassen. Die amplifizierten DNA-Sequenzen können mit zumindest einer Restriktionsendonuklease kombiniert und und gespalten werden, um RFLP-Muster herzustellen.
  • Die Spaltung der amplifizierten DNA-Sequenz mit der Endonuklease kann in einer wäßrigen Lösung unter Bedingungen durchgeführt werden, die die Endonukleaseaktivität begünstigen. Typischerweise wird die Lösung auf einen pH von etwa 6,5 bis 8,0 gepuffert. Es werden milde Temperaturen, vorzugsweise etwa 20ºC bis etwa 45ºC, mehr bevorzugt physiologische Temperaturen (25º bis 40ºC) eingesetzt. Restriktionsendonukleasen erfordern normalerweise Magnesiumionen und in manchen Fällen Kofaktoren (ATP und 5-Adenosylmethionin) oder andere Mittel für ihre Aktivität. Daher sind im Spaltgemisch, falls erforderlich, eine Quelle für solche Ionen, beispielsweise anorganische Magnesiumsalze, und andere Mittel vorhanden. Geeignete Bedingungen werden vom Hersteller der Endonuklease beschrieben und variieren im allgemeinen je nachdem, ob die Endonuklease zur optimalen Aktivität Bedingungen hoher, mittlerer oder geringer Salzkonzentration erfordern.
  • Die DNA-Menge im Spaltgemisch liegt typischerweise im Bereich von 1 bis 20 Gew.-%. In den meisten Fällen liefern 5 bis 20 µg der gesamten bis zur Vollständigkeit gespaltenen DNA eine adäquate Probe zur Herstellung von RFLP-Fragmenten. Es wird ein Endonukleaseüberschuß, vorzugsweise 1 bis 5 Units/µg DNA, verwendet.
  • Der Satz von Fragmenten im Digest wird vorzugsweise weiter verarbeitet, um RFLP- Muster herzustellen, die analysiert werden. Wenn gewünscht, kann das Digest vor der weiteren Verarbeitung durch Ausfällen und erneutes Suspendieren gereinigt werden, wie von Kan et al., PNAS 75.5631-5635 (1978) beschrieben. Dieser Artikel ist in seiner Gesamtheit durch Verweis hierin eingeschlossen.
  • Sobald sie hergestellt wurden, werden die Fragmente durch wohlbekannte Verfahren analysiert. Vorzugsweise werden die Fragmente unter Verwendung von Elektrophorese analysiert. Gelelektrophoreseverfahren werden nachstehend im Detail beschrieben. Kapillarelektrophoreseverfahren können automatisiert werden (wie unter Verwendung des analytischen Kapillarelektrophoresesystems Modell 207A von Applied Biosystems, Foster City, CA) und werden in Chin et al., American Biotechnology Laboratory New Edition, Dezember 1989, beschrieben.
    • Elektrophoretische Trennung von DNA-Fragmenten
  • Elektrophorese ist die Trennung von DNA-Sequenzfragmenten, die in einem Trägermedium enthalten sind, nach Größe und Ladung unter dem Einfluß eines angelegten elektrischen Feldes. Für Gele zur Nukleotidgrößenbestimmung werden typischerweise Gelfolien oder -platten, z.B. Agarose, Agarose-Acrylamid oder Polyacrylamid, verwendet. Die Elektrophoresebedingungen beeinflussen den gewünschten Auftrennungsgrad der Fragmente. Ein Auftrennungsgrad, der Fragmente trennt, die sich in der Größe um nicht mehr als 10 Nukleotide voneinander unterscheiden, ist üblicherweise ausreichend. Vorzugsweise können die Gele Fragmente auftrennen, die sich um 3 bis 5 Nukleotide unterscheiden. Für manche Zwecke jedoch (wenn die Unterschiede in der Sequenzlänge groß sind), kann für die Analyse eine Unterscheidung der Sequenzdifferenzen von zumindest 100 nt ausreichend empfindlich sein.
  • Die Herstellung und Färbung analytischer Gele ist wohlbekannt. Beispielsweise wird in Boerwinkle et al., PNAS, 86:212-216 (1989) ein unter Verwendung von Ethidiumbromid gefärbtes 3% Nusieve-1% Agarosegel beschrieben. Die Detektion von DNA in Polyacrylamidgelen unter Verwendung von Silberfärbung wird in Goldman et al., Electrophoresis, 3:24-26 (1982); Marshall, Electrophoresis, 4:269-272 (1983); Tegelstrom, Electrophoresis, 7:226-229 (1987); und Allen et al., Biotechniques 7: 736-744 (1989) beschrieben. Das von Allen et al. beschriebene Verfahren, bei dem rehydratisierbare Ultradünnschicht-Polyacrylamidgele mit großer Porengröße verwendet werden, die mit Silber gefärbt werden, wird vorgezogen. Jeder dieser Artikel ist in seiner Gesamtheit durch Verweis hierin eingeschlossen. Größenmarker können auf dem gleichen Gel laufen gelassen werden, um eine Schätzung der Größe der Restriktionsfragmente zuzulassen. Der Vergleich mit einer oder mehreren Vergleichsprobe(n) kann zusätzlich zur oder anstelle der Verwendung von Größenmarkern erfolgen. Die Größenmarker oder Vergleichsproben werden üblicherweise in einer der oder beiden Bahnen am Rand des Gels laufen gelassen, und vorzugsweise auch in zumindest einer Mittelbahn. Bei der Durchführung der Elektrophorese werden die DNA-Fragmente auf ein Ende der Gelplatten (üblicherweise als "Ursprung" bezeichnet) aufgebracht und die Fragmente trennen sich durch den elektrisch erleichterten Transport durch das Gel, wobei das kürzeste Fragment vom Ursprung zum anderen (Anoden-) Ende der Platte mit der größten Geschwindigkeit elektrophoretisch bewegt wird. Ein Agaroseplattengel wird typischerweise unter Verwendung von etwa 100 V 30 bis 45 min lang einer Elektrophorese unterzogen. Ein Polyacrylamidplattengel wird typischerweise unter Einsatz von etwa 200 bis 1.200 Volt 45 bis 60 min lang einer Elektrophorese unterzogen.
  • Nach der Elektrophorese wird das Gel zur Visualisierung bereit gemacht. Die DNA- Fragmente können visualisiert werden, indem das Gel mit einer nukleinsäurespezifischen Färbung, wie Ethidiumbromid, oder vorzugsweise mit Silber als Färbemittel, gefärbt wird, wobei dies für DNA nicht spezifisch ist. Ethiumbromidfärbung wird in Boerwinkle et al., oben, beschrieben. Silberfärbung wird in Goldman et al., oben, Marshall, oben, Tegelstrom, oben, und Allen et al., oben, beschrieben.
    • Sonden
  • Allelspezifische Oligonukleotide oder Sonden werden verwendet, um DNA-Sequenzen zu identifizieren, die Bereiche aufweisen, die mit der Sondensequenz hybridisieren. Die durch ein locusspezifisches Primerpaar definierten amplifizierten DNA-Sequenzen. können als Sonden bei RFLP-Analysen verwendet werden, bei denen genomische DNA eingesetzt wird. Die US-PS-4.582.788 (an Erlich, veröffentlicht am 15. April 1986) beschreibt ein exemplarisches HLA-Typisierungsverfahren auf der Basis der Analyse von RFLP-Mustern, die durch genomische DNA erzeugt werden. Bei der Analyse werden cDNA-Sonden verwendet, um getrennte DNA-Fragmente bei einer Southern-blot- Analyse zu analysieren. Wie im Patent angeführt, sind "komplementäre DNA-Sonden, die für eine (locusspezifische) oder mehrere (multilocus) spezielle HLA-DNA-Sequenzen spezifisch sind, die am Polymorphismus beteiligt sind, essentielle Komponenten des Hybridisierungsschritts des Typisierungsverfahrens" (Spalte 6, Z. 3-7).
  • Die amplifizierten DNA-Sequenzen des erfindungsgemäßen Verfahrens können bei dem in diesem Patent beschriebenen Verfahren oder beim erfindungsgemäßen Verfahren als Sonden eingesetzt werden, um das Vorhandensein einer amplifizierten DNA-Sequenz eines speziellen Allels zu detektieren. Im spezielleren kann eine amplifizierte DNA- Sequenz mit einem bekannten Allel hergestellt und als Sonde verwendet werden, um das Vorhandensein des Allels in Proben-DNA zu detektieren, die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren amplifiziert wird.
  • Vorzugsweise jedoch weist eine Sonde, wenn sie verwendet wird, um Allele in den amplifizierten DNA-Sequenzen gemäß vorliegender Erfindung zu unterscheiden, (im Vergleich zur Länge der amplifizierten DNA-Sequenz) eine relativ kurze Sequenz auf, was die Sequenzhomologie anderer Allele des Locus mit der Sondensequenz minimiert. Das heißt, die Sonden entsprechen einem Bereich der amplifizierten DNA-Sequenz, der die größte Anzahl an Nukleotiddifferenzen zu den amplifizierten DNA-Sequenzen anderer Allele, die unter Verwendung dieses Primerpaares hergestellt werden, aufweist.
  • Die Sonden können unter Verwendung bekannter Markierungstechniken mit einem detektierbaren Atom, Rest oder Liganden markiert werden. Typischerweise werden Radiomarkierungen, üblicherweise ³²P, verwendet. Die Sonden können durch Nicktranslation mit einem α-³²P-dNTP (Rigby et al., "J.Mol.Biol.", 113:237(1977)) oder nach anderen verfügbaren Verfahren markiert werden, um die locusspezifischen Sonden zur Verwendung bei den im Patent beschriebenen Verfahren herzustellen. Die Sonden werden vorzugsweise mit einem Enzym wie Wasserstoffperoxidase markiert. Das Kuppeln von Enzymmarkern an Nukleotidsequenzen ist wohlbekannt. Jede der obigen Literaturstellen ist in ihrer Gesamtheit durch Verweis hierin eingeschlossen.
  • Bei dem von Southern, "J.Mol.Biol." 98.503-517 (1975) beschriebenen, als "Southern blotting" bekannten Analyseverfahren handelt es sich um ein Analyseverfahren, das auf der Verwendung von Sonden beruht. Beim Southern blotting werden die DNA- Fragmente einer Elektrophorese unterzogen, auf einen festen Träger übertragen und an diesem, der Nukleinsäure bindet, befestigt, sowie mit einer entsprechend markierten cDNA-Sonde hybridisiert. Markierte Hybride werden durch Autoradiographie oder vorzugsweise durch Verwendung von Enzymmarkierungen detektiert.
  • Regenzien und Bedingungen zum Blotten werden in Southern, oben; Wahl et al., PNAS 6:3683-3687 (1979); Kan et al., PNAS, oben, der US-PS-4:302.204 und "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" von Maniatis et al., Cold Spring Harbor Laboratory 1982, beschrieben. Nachdem der Transfer abgeschlossen ist, wird das Papier vom Gel getrennt und getrocknet. Hybridisierung (Annelieren) der getrennten einstrangigen DNA auf dem Papier an eine Sonde wird durch Inkubieren des Papiers mit der Sonde unter Hybridisierungsbedingungen durchgeführt. Siehe Southern, oben; Kan et al., PNAS, oben, und US-PS-4.302.204, Spalte 5, Zeile 8 et seq. Komplementäre DNA-Sonden, die für ein Allel, einen Locus (locusspezifisch) oder mehr spezifisch sind, stellen essentielle Komponenten des Hybridisierungsschritts des Typisierungsverfahrens dar. Locusspezifische Sonden können nach dem oben beschriebenen Amplifikationsverfahren für locuspezifische amplifizierte Sequenzen hergestellt werden. Die Sonden werden durch Markieren, wie oben beschrieben, detektierbar gemacht.
  • Der Abschlußschritt des Southern blotting-Verfahrens besteht in der Identifizierung von markierten Hybriden auf dem Papier (oder Gel bei der Ausführungsform mit Lösungshybridisierung). Autoradiographie kann eingesetzt werden, um Hybride, die Radiomarkierungen enthalten, zu detektieren. Enzymmarkierungen werden durch Verwendung eines für das Enzym spezifischen Farbentwicklungssystems detektiert. Im allgemeinen spaltet das Enzym ein Substrat, welche Spaltung das Substrat dazu bringt, entweder Farbe zu entwickeln oder seine Farbe zu ändern. Die Farbe kann in natürlichem Licht sichtbar oder ein Fluorochrom sein, das durch Licht mit einer bekannten Wellenlänge angeregt wird.
    • Sequenzieren
  • Genvariationen in amplifizierten DNA-Sequenzen, die Alleldifferenz in der Proben- DNA widerspiegeln, können auch durch das Sequenzieren der amplifizierten DNA- Sequenzen detektiert werden. Verfahren zum Sequenzieren von Oligonukleotidsequenzen sind wohlbekannt und werden beispielsweise in "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" von Maniatis et al., Cold Spring Harbor Laboratory 1982, beschrieben. Zur Zeit kann das Sequenzieren unter Verwendung einer Reihe im Handel erhältlicher Instrumente automatisiert werden. Aufgrund des Zeitaufwandes, der gegenwärtig erforderlich ist, um Sequenzierungsinformation zu erhalten, werden für klinische Analysen andere Analyseverfahren, wie Gelelektrophorese der amplifizierten DNA-Sequenzen oder eines Restriktionsendonukleasedigests davon vorgezogen.
    • Sets
  • Wie zuvor erwähnt, umfassen die Sets gemäß vorliegender Erfindung eines oder mehrere der Reagenzien, die bei den oben beschriebenen Verfahren verwendet werden. Bei einer Ausführungsform umfaßt ein Set zumindest ein genlocusspezifisches Primerpaar in einem geeigneten Behälter. Vorzugsweise enthält das Set zwei oder mehr. locusspezifische Primerpaare. Bei einer Ausführungsform sind die Primerpaare für verschiedene Loci und befinden sich in getrennten Behältern. Bei einer weiteren Ausführungsform sind die Primerpaare für den gleichen Locus spezifisch. Bei dieser Ausführungsform befinden sich die Primerpaare vorzugsweise im selben Behälter, wenn sie für verschiedene Allele des gleichen Gen locus spezifisch sind, und in verschiedenen Behältern, wenn sie für verschiedene Abschnitte der gleichen Allelsequenz spezifisch sind. Sätze von Primerpaaren, die sequentiell verwendet werden, können in getrennten Behältern in einem Set bereitgestellt werden. Die Primer eines jeden Paares können sich in getrennten Behältern befinden, insbesondere, wenn ein Primer in jedem Satz Primerpaare verwendet wird. Jedes Paar wird jedoch vorzugsweise in einer Konzentration bereitgestellt, die die Verwendung der Primer bei den Konzentrationen, die für alle Amplifkationen erforderlich sind, für die es verwendet wird, erleichtert.
  • Die Primer können in einem kleinen Volumen (z.B. 100 µl) einer geeigneten Lösung, wie sterilem Wasser oder Tris-Puffer, bereitgestellt werden und gefroren sein. Alternativ dazu können die Primer luftgetrocknet sein.
  • Bei einer weiteren Ausführungsform umfaßt ein Set, in getrennten Behältern, zwei oder mehr Endonukleasen, die für die erfindungsgemäßen Verfahren nützlich sind. Das Set enthält vorzugsweise eine locusspezifische Kombination von Endonukleasen. Die Endonukleasen können in einer geeigneten Lösung, wie normaler Salzlösung oder physiologischem Puffer mit 50% Glycerin (bei etwa -20ºC) vorliegen, um die Enzymaktivität beizubehalten.
  • Das Set kann eines oder mehrere locusspezifische Primerparre gemeinsam mit locusspezifischen Kombinationen von Endonukleasen enthalten und kann außerdem einen Vergleich umfassen. Der Vergleich kann eine amplifizierte DNA-Sequenz sein, die durch ein locusspezifisches Primerpaar definiert ist, oder DNA mit einem bekannten HLA-Typ für einen Locus von Interesse.
  • Weitere Reagenzien, wie z.B. Amplifikationspuffer, Spaltpuffer, eine DNA-Polymerase und Nukleotidtriphosphate, können getrennt oder im Set bereitgestellt werden. Das Set kann zusätzlich Gelpräparate und Färbungsreagenzien oder vorgeformte Gele enthalten.
  • Analysen exemplarischer Genloci werden nachstehend beschrieben.
    • HLA-Typ-Analyse
  • Das erfindungsgemäße Analyseverfahren für Genvariation in einer amplifizierten DNA- Sequenz zur Ermittlung von Alleldifferenz in Proben-DNA kann eingesetzt werden, um den HLA-Typ zu bestimmen. Primerpaare, die spezifisch genomische DNA amplifizieren, die mit einem HLA-Locus assoziiert ist, werden nachstehend im Detail beschrieben. Bei einer bevorzugten Ausführungsform definieren die Primer eine DNA- Sequenz, die alle Exons enthält, die für mit dem HLA-Locus assoziierte Allelvariabilität und die gemeinsam mit zumindest einem Abschnitt einer der angrenzenden Intronsequenzen für diese Sequenzen kodieren. Für Klasse I-Loci sind die variablen Exons das zweite und das dritte Exon. Für Klasse II-Loci ist das variable Exon das zweite Exon. Die Primer sind vorzugsweise so angeordnet, daß ein wesentlicher Abschnitt der amplifizierten Sequenz den Intronsequenzen entspricht.
  • Die Intronsequenzen stellen Restriktionsstellen bereit, die im Vergleich zu cDNA- Sequenzen zusätzliche Information über das Individuum, z.B. den Haplotyp, liefern. Der Einschluß von Exons innerhalb der amplifizierten DNA-Sequenzen sorgt nicht für so viele Genvariationen, die eine Unterscheidung zwischen Allelen ermöglichen, wie Intronsequenz gleicher Länge, insbesondere für konstante Exons. Diese zusätzliche Intronsequenzinformation ist besonders wertvoll für Vaterschaftstests und in der Gerichtsmedizin. Sie ist auch insofern bei der Typisierung zur Transplantatübereinstimmung wertvoll, als die variablen Längen der Intronsequenzen, die in der von den Primern erzeugten amplifizierten Sequenz enthalten sind, es ermöglichen, daß eine Unterscheidung zwischen bestimmten Heterozygoten (zwei verschiedenen Allelen) und. Homozygoten (zwei Kopien eines Allels) getroffen wird.
  • Alleldifferenzen in den DNA-Sequenzen von HLA-Loci werden nachstehend veranschaulicht. Die Tabellen veranschaulichen die Sequenzhomologie verschiedener Allele und geben exemplarische Primerbindungsstellen an. Tabelle 1 ist eine Darstellung der Ausrichtung der Nukleotide der Klasse I A2-, A3-, Ax-, A24- (früher als A9 bezeichnet), B27-, B58- (früher als B17 bezeichnet), C1-, C2- und C3-Allelsequenzen in den intervenierenden Sequenzen (IVS) I und III. (Die Gensequenzen und ihre Nummerierung, die in den Tabellen und in der gesamten Beschreibung verwendet wird, ist in den Sequenz-Datenbanken der Genbank und/oder European Molecular Biology Laboratories (EMBL) zu finden. Diese Sequenzen sind in ihrer Gesamtheit durch Verweis hierin eingeschlossen.) Unterstrichene Nukleotide stellen die Bereiche der Sequenz dar, an die sich exemplarische locusspezifische oder Klasse I-spezifische Primer binden.
  • Tabelle 2 veranschaulicht die Ausrichtung der Nukleotide in IVS I und II der DQA3- (nun DQA1 0301), DQA1.2- (nun DQA1 0102) und DQA4.1-(nun DQA1 0501)-Allele des DQA1-Locus (früher als die DR4-, DR6- bzw. DR3-Allele des DQA1-Locus bezeichnet). Unterstrichene Nukleotide stellen die Bereiche der Sequenz dar, an die sich exemplarische DQA1-locusspezifische Primer binden.
  • Tabelle 3 veranschaulicht die Ausrichtung der Nukleotide in IVS I, Exon 2 und IVS II von zwei Individuen mit dem DQw1v-Allel (nachstehend für die obere bzw. die untere Sequenz in der Tabelle als DQw1va und DQw1vb bezeichnet), die Dqw2- und DQw8- Allele des DQB1-Locus. In den DQw1vb-, DQw2- und DQw8-Allelsequenzen angegebene Nukleotide sind jene, die sich von der DQw1va-Sequenz unterscheiden. Exon 2 beginnt und endet bei nt 599 bzw. nt 870 der DQw1va-Allelsequenz. Unterstrichene Nukleotide stellen die Bereiche der Sequenz dar, an die sich exemplarische DQB1-locusspezifische Primer binden.
  • Tabelle 4 veranschaulicht die Ausrichtung der Nukleotide in IVS I, Exon 2 und IVS II der DPB4.1-, DPB9- New- und DPw3-Allele des DPB1-Locus. In den DPB9-, New- und DPw3-Allelsequenzen angegebene Nukleotide sind jene, die sich von der DPB4.1- Sequenz unterscheiden. Exon 2 beginnt und endet bei nt 7644 bzw. nt 7907 der DPB4.1-Allelsequenz. Unterstrichene Nukleotide stellen die Bereiche der Sequenz dar, an die sich exemplarische DPB1-locusspezifische Primer binden. Tabelle 1 Tabelle 2 Tabelle 3 Tabelle 4
    • Primer für HLA-Loci
  • Nachstehend sind exemplarische HLA-locusspezifische Primer angeführt. Jeder der Primer hybridisiert mit zumindest etwa 15 aufeinanderfolgenden Nukleotiden des bezeichneten Bereichs der Allelsequenz. Es wird auch die Bezeichnung eines exemplarischen bevorzugten Primers gemeinsam mit seiner Sequenz gezeigt. Bei vielen der Primer ist die Sequenz nicht für alle der anderen Allele des Locus identisch. Bei jedem der folgenden bevorzugten Primer weisen zusätzliche bevorzugte Primer Sequenzen auf, die den Sequenzen des homologen Bereichs anderer Alleie des Locus oder ihren Komplementen entsprechen.
  • Bei einer Ausführungsform werden Klasse I-Loci unter Verwendung eines A-, B- oder C- locusspezifischen Primers gemeinsam mit einem Klasse I-locusspezifischen Primer amplifiziert. Der Klasse I-Primer hybridisiert vorzugsweise mit IVS III-Sequenzen (oder ihren Komplementen) oder, mehr bevorzugt, mit IVS I-Sequenzen (oder ihren Komplementen). Der Begriff "Klasse I-spezifischer Primer", wie hierin verwendet, bedeutet, daß der Primer unter den eingesetzten Bedingungen mit einer Allelsequenz (oder ihrem Komplement) für zumindest zwei verschiedene Klasse I-Loci hybridisiert und nicht mit Klasse II-Locusallelsequenzen hybridisiert. Vorzugsweise hybridisiert der Klasse I-Primer mit zumindest einem Allel eines jeden der A-, B- und C-Loci. Mehr bevorzugt hybridisiert der Klasse I-Primer mit einer Vielzahl von, am meisten bevorzugt mit allen Klasse I-Allelloci oder ihren Komplementen. Exemplarische Klasse I- locusspezifische Primer sind ebenfalls nachstehend angeführt. HLA-Primer A-locusspezifische Primer Allelposition: Bezeichnung: Sequenz: B-locusspezifische Primer C-locusspezifische Primer Klasse I-locispezifische Primer DQA1-locusspezifische Primer DRA-locusspezifische Primer CRB-locusspezifische Primer DQB1-locusspezifische Primer: DPB1-locusspezifische Primer
    • Primerpaare für HLA-Analysen
  • Es versteht sich, daß für jedes Primerpaar der stromauf gelegene 5'-Primer mit dem 5'- Ende der zu amplifizierenden Sequenz hybridisiert und der stromab gelegene 3'-Primer mit dem Komplement des 3'-Endes der Sequenz hybridisiert. Die Primer amplifizieren eine Sequenz zwischen den Bereichen der DNA, an die sich die Primer binden, und ihre komplementäre Sequenz, die die Bereiche umfaßt, an die sich die Primer binden. Ob sich der Primer an den für HLA kodierenden Strang oder sein Komplement bindet, hängt daher bei jedem der oben beschriebenen Primer davon ab, ob der Primer für dieses spezielle Primerpaar als stromauf gelegener 5'-Primer oder stromab gelegener 3'- Primer fungiert.
  • Bei einer Ausführungsform umfaßt ein Klasse I-locusspezifisches Primerpaar einen Klasse I-locusspezifischen Primer und einen A-, B- oder C-locusspezifischen Primer. Vorzugsweise ist der Klasse I-locusspezifische Primer der stromauf gelegene 5'-Primer und hybridisiert mit einem Abschnitt des Komplements von IVS I. In diesem Fall ist der locusspezifische Primer vorzugsweise der stromab gelegene 3'-Primer und hybridisiert mit IVS III. Die Primerpaare amplifizieren eine Sequenz mit etwa 1,0 bis etwa 1,5 Kb.
  • Bei einer weiteren Ausführungsform umfaßt das Primerpaar zwei locusspezifische Primer, die eine DNA-Sequenz amplifizieren, die das/die variable(n) Exon(s) nicht umfaßt. Bei einem Beispiel dieser Ausführungsform sind der 3' stromab gelegene Primer und der 5' stromauf gelegene Primer Klasse I-locusspezifische Primer, die mit IVS III bzw. ihrem Komplement hybridisieren. In diesem Fall wird eine Sequenz mit etwa 0,5 Kb amplifiziert, die der Intronsequenz entspricht.
  • Vorzugsweise werden für jeden Primer des Primerpaares locusspezifische Primer für den speziellen Locus und nicht für die HLA-Klasse verwendet. Aufgrund der Differenzen in den Klasse II-Gensequenzen sind locusspezifische Primer, die nur für einen Locus spezifisch sind, an der Amplifikation der DRB-, DQA1-, DQB- und DPB-Loci beteiligt. Daher ist bei jeder der bevorzugten Klasse II-Locusprimerpaare jeder Primer des Paares nur an der Amplifikation des bezeichneten Locus und keiner anderen Klasse II-Loci beteiligt.
    • Analyseverfahren
  • Bei einer Ausführungsform umfaßt die amplifizierte Sequenz ausreichend Intronsequenzen, um Längenpolymorphismen zu ergeben. Die primerdefinierten Längenpolymorphismen (PDLPs) weisen auf das HLA-Locusallel in der Probe hin. Bei manchen HLA-Loci erzeugt die Verwendung eines einzelnen Primerpaares primerdefinierte Längenpolymorphismen, die zwischen einigen der Allele des Locus unterscheiden. Bei anderen Loci werden zwei oder mehr Primerpaare in getrennten Amplifikationen verwendet, um die Allele zu unterscheiden. Bei anderen Loci wird die amplifizierte DNA-Sequenz mit einer oder mehreren Restriktionsendonukleasen gespalten, um die Allele zu unterscheiden. Die primerdefinierten Längenpolymorphismen sind bei Screeningverfahren besonders nützlich.
  • In einer weiteren Ausführungsform stellt die Erfindung ein verbessertes Verfahren bereit, bei dem PCR-Amplifikation einer genomischen HLA-DNA-Sequenz eines HLA-Locus eingesetzt wird. Nach der Amplifikation wird die amplifizierte DNA-Sequenz mit zumindest einer Endonuklease kombiniert, um ein Digest zu erzeugen. Die Endonuklease spaltet die amplifizierte DNA-Sequenz, sodaß ein Satz von Fragmenten mit unterschiedlichen Fragmentlängen entsteht. Üblicherweise wird die amplifizierte Sequenz unterteilt, und es werden zwei oder mehr Endonuklasendigeste hergestellt. Die Digeste können entweder getrennt oder kombiniert verwendet werden, um RLP-Muster herzustellen, die zwischen Individuen unterscheiden können. Es können zusätzliche Digeste hergestellt werden, um für erhöhte Spezifität zu sorgen, so daß auch zwischen eng verwandten Individuen mit dem gleichen HLA-Typ unterschieden werden kann.
  • Bei einer bevorzugten Ausführungsform kann das Vorhandensein eines speziellen Allels verifiziert werden, indem ein zweistufiges Amplifikationsverfahren durchgeführt wird, bei dem eine durch ein erstes Primerpaar erzeugte amplifizierte Sequenz durch ein zweites Primerpaar amplifiziert wird, das sich an eine Sequenz innerhalb der ersten amplifizierten Sequenz bindet und diese definiert. Das erste Primerpaar kann für ein oder mehrere Allele des HLA-Locus spezifisch sein. Das zweite Primerpaar ist vorzugsweise für ein Allel des HLA-Locus und nicht für eine Vielzahl von Allelen spezifisch. Das Vorhandensein einer amplifizierten Sequenz weist auf das Vorhandensein des Allels hin, was durch die Bildung charakteristischer RFLP-Muster bestätigt wird.
  • Um RFLP-Muster zu analysieren werden Fragmente im Digest aufgrund ihrer Größe getrennt und dann sichtbar gemacht. Im Fall der Typisierung bezüglich eines speziellen HLA-Locus ist die Analyse darauf gerichtet, die beiden DNA-Allelsequenzen zu detektieren, die diesen Locus in jedem Individuum einzigartig charakterisieren. Üblicherweise wird dies durchgeführt, indem die gleichen Digest-RFLP-Muster mit einem durch eine Vergleichsprobe mit bekanntem HLA-Alleltyp erzeugten Muster verglichen werden. Wenn das Verfahren jedoch für Vaterschaffstests oder in der Gerichtsmedizin verwendet wird, muß die Analyse nicht das Identifizieren eines speziellen Locus oder Loci umfassen, sondern kann durchgeführt werden, indem einzelne oder mehrfache RFLP-Muster eines Individuums mit jenen eines anderen Individuums verglichen werden, wobei die gleiche Restriktionsendonuklease und die gleichen Primer verwendet werden, um Ähnlichkeiten und Unterschiede zwischen den Mustern zu bestimmen.
  • Die Anzahl der Digeste, die für jede spezielle Analyse hergestellt werden müssen, hängt von der gewünschten Information und der speziell zu analysierenden Probe ab. Beispielsweise kann ein Digest ausreichen, um zu ermitteln, daß ein Individuum nicht die Person sein kann, deren Blut am Ort eines Verbrechens gefunden wurde. Im allgemeinen reicht für Übereinstimmungsanwendungen (Gerichtsmedizin, Vaterschaftstests) die Verwendung von zwei bis drei Digesten für jeden von zwei bis drei HLA-Loci aus. Zur vollständigen HLA-Haplotypisierung, z.B. zwecks Transplantation, kann es erforderlich sein, zusätzliche Loci zu analysieren.
  • Wie zuvor beschrieben, können Kombinationen aus Primerpaaren beim Amplifikationsverfahren verwendet werden, um einen speziellen HLA-DNA-Locus ungeachtet des in der Probe vorhandenen Allels zu amplifizieren. Bei einer bevorzugten Ausführungsform werden HLA-DNA-Proben in Aliqote unterteilt, die ähnliche DNA- Mengen pro Aliquot enthalten, und mit Primerparen (oder Kombinationen aus Primerpaaren ) amplifiziert, um amplifizierte DNA-Sequenzen für zusätzliche HLA-Loci zu erzeugen. Jedes Amplifikationsgemisch enthält nur Primerpaare für einen HLA-Locus. Die amplifizierten Sequenzen werden vorzugsweise gleichzeitig bearbeitet, sodaß aus einer Probe eine Anzahl von Digest-RFLP-Fragmentmustern hergestellt werden kann. Auf diese Weise kann der HLA-Typ für eine Anzahl von Allelen gleichzeitig ermittelt werden.
  • Alternativ dazu sorgt die Herstellung einer Anzahl von RFLP-Fragmentmustern für zusätzliche Vergleiche von Mustern, um Proben für gerichtsmedizinische und Vaterschafts-Analysen zu unterscheiden, bei denen die Analyse eines Locus häufig nicht ausreicht, um ausreichende Informationen für die Bestimmung zu liefern, wenn die Proben-DNA das gleiche Allel wie die DNA, mit der sie verglichen wird, aufweist.
  • Die Verwendung von HLA-Typen bei Vaterschaffstests oder für Transplantationstests und bei der Diagnose und Prognose von Krankheiten wird in "Basic & Clinical Immunology", 3. Aufl. (1980), Lange Medical Publications, S.187-190, beschrieben, das in seiner Gesamtheit durch Verweis hierin eingeschlossen ist. HLA-Bestimmungen fallen in zwei allgemeine Kategorien. Die erste umfaßt das Übereinstimmen von DNA von einem Individuum und einer Probe. Zu dieser Kategorie gehören gerichtsmedizinische Bestimmungen und Vaterschaffstests. Zur Analyse nach Kategorie 1 ist der spezielle HLA-Typ nicht so wichtig, wie ob die DNA der Individuen verwandt ist. Die zweite Kategorie ist jene der Gewebetypisierung, wie zur Verwendung bei Transplantationen. In diesem Fall hängt das Abstoßen des gespendeten Bluts oder Gewebes davon ab, ob der Rezipient und der Donor das gleiche oder unterschiedliche Antigene exprimieren. Das steht im Gegenstz zu Analysen der ersten Kategorie, bei denen Unterschiede in der HLA-DNA entweder in den Introns oder Exons bestimmend sind.
  • Bei gerichtsmedizinischen Anwendungen werden die Analysen der Proben-DNA des Tatverdächtigen und der am Ort des Verbrechens gefundenen DNA gleichzeitig durchgeführt und verglichen, um zu ermitteln, ob die DNA vom selben Individuum stammt. Die Bestimmung umfaßt vorzugsweise die Analyse von zumindest drei Digesten amplifizierter DNA des DQA1-Locus und vorzugsweise auch des A-Locus. Mehr bevorzugt umfaßt die Bestimmung auch die Analyse von zumindest drei Digesten amplifizierter DNA eines zusätzlichen Locus, z.B. des DPB-Locus. Auf diese Weise ist die Wahrscheinlichkeit, daß Unterschiede zwischen den DNA-Proben festgestellt werden können, ausreichend.
  • Für Vaterschaftstests umfaßt die Analyse des Vergleich der DNA des Kindes, der Mutter und des vermutlichen Vaters, um die Wahrscheinlichkeit zu bestimmen, daß das Kind die obligate Haplotyp-DNA vom vermutlichen Vater geerbt hat. Das heißt, jede DNA- Sequenz beim Kind, die nicht in der DNA der Mutter vorhanden ist, muß mit der übereinstimmen, die vom vermutlichen Vater stammt. Eine Analyse von zwei bis drei Digesten bezüglich des DQA1- und vorzugsweise auch bezüglich des A-Locus reicht üblicherweise aus. Mehr bevorzugt umfaßt die Bestimmung auch die Analyse von Digesten eines zusätzlichen Locus, z.B. des DPB-Locus.
  • Für Gewebstypisierungsbestimmungen zur Transplantationsübereinstimmung reicht oft die Analyse von drei Loci (HLA-A, -B und -DR) aus. Vorzugsweise umfaßt die abschließende Analyse den Vergleich zusätzlicher Loci, einschließlich DQ und DP.
    • Herstellung von RFLP-Fragmentmustern
  • Die nachstehende Tabelle 5 mit exemplarischen Fragmentmusterlängen zeigt unterschiedliche Muster. Beispielsweise spaltet Bsrl, wie in der Tabelle gezeigt, A2-, A3und A9-allelamplifizierte Sequenzen, die durch die Primer SGD005.IIVS1.LNP und SGD009.AIVS3.R2NP definiert werden, in Fragmentsätze mit der folgenden Nukleotidanzah (740, 691), (809, 335, 283) bzw. (619, 462, 256, 93). Die Fragmentmuster weisen klar darauf hin, welches der drei A-Allele vorhanden ist. Die folgende Tabelle 5 veranschaulicht eine Anzahl exemplarischer Endonukleasen, die unterscheidungskräftige RFLP-Fragmentmuster für exemplarische A-Allelsequenzen erzeugen.
  • Tabelle 5 veranschaulicht den Satz von RFLP-Fragmenten, die durch die Verwendung der bezeichneten Endonukleasen zur Analyse von drei A-Locusallelen erzeugt werden. Für jede Endonuklease ist die Anzahl an Nukleotiden eines jeden der Fragmente in einem durch die Endonuklease erzeugten Satz angeführt. Der erste Abschnitt der Tabelle veranschaulicht RFLP-Fragmentlängen unter Verwendung der als SGD009.AIVS3.R2NP und SGD005.IIVS1.LNP bezeichneten Primer, die die längere der beiden exemplarischen Sequenzen erzeugen. Der zweite Abschnitt der Tabelle veranschaulicht RFLP-Fragmentlängen unter Verwendung der als SGD006.AIVS3.R1NP und SGD005.IIVS1.LNP bezeichneten Primer, die die kürzere der Sequenzen erzeugen. Der dritte Abschnitt der Tabelle veranschaulicht die Längen der Fragmente einer DQA1- locusspezifischen amplifizierten Sequenz, die durch die als SGD001.DQA1.LNP und SGD003.DQA1.RNP bezeichneten Primer definiert ist.
  • Wie in der Tabelle gezeigt, erzeugt jede der Endonukleasen ein charakteristisches RFLP- Fragmentmuster, durch das leicht unterschieden werden kann, welches der drei A-Allele in einer Probe vorhanden ist. Tabelle 5 RFLP-FRAGMENTMUSTER
    • Screening-Analyse auf genetische Erkrankungen
  • Unter Einsatz des erfindungsgemäßen Verfahrens können Träger genetischer Erkrankungen und die durch die Krankheit Betroffenen identifiziert werden. Je nach der Erkrankung kann die Screening-Analyse verwendet werden, um das Vorhandensein eines oder mehrere Allele, die mit der Erkrankung in Zusammenhang stehen, oder das Vorhandensein von mit der Erkrankung in Zusammenhang stehenden Haplotypen zu detektieren. Weiters können mit dem Verfahren durch die Analyse von Haplotypen genetische Erkrankungen detektiert werden, die nicht mit Kodierbereichvariationen assoziiert sind, sondern in regulatorischen oder anderen untranslatierten Bereichen des Genlocus zu finden sind. Als Beispiel für das Screeningsverfahren ist nachstehend die. Analyse von zystischer Fibrose (CF) angeführt.
  • Zystische Fibrose ist eine autosomale rezessive Erkrankung, die das Vorhandensein eines mutanten Gens auf jedem Chromosom erfordert. CF ist die häufigste genetische Erkrankung bei Kaukasiern und kommt einmal in 2.000 Lebendgeburten vor. Nach Schätzungen ist jeder vierzigste Kaukasier Träger der Krankheit.
  • Vor kurzem wurde eine spezifische Deletion dreier benachbarter Basenpaare im offenen Leserahmen des vermutlichen CF-Gens berichtet, das zum Verlust eines Phenylalaninrestes an Position 508 des vorhergesagten 1480 Aminosäuren-Polypeptids führt [Kerem et al., "Science 245:1073-1080 (1989)]. Auf Basis von Haplotypanalysen kann die Löschung für die meisten CF-Mutationen in nordeuropäischen Populationen (etwa 68%) verantwortlich sein. Bei manchen südeuropäischen Populationen herscht Berichten zufolge eine zweite Mutation vor. Weitere Daten weisen darauf hin, daß mehrere andere Mutationen die Erkrankung verursachen können.
  • Untersuchungen von Haplotypen der Eltern von CF-Patienten (die notwendigerweise einen normalen und einen mit der Erkrankung assoziierten Haplotyp aufweisen) wiesen darauf hin, daß zumindest 178 Haplotypen mit dem CF-Locus assoziiert sind. Von diesen Haplotypen sind 90 nur mit der Krankheit assoziiert; 78 sind nur bei Gesunden zu finden; und 10 sind sowohl mit der Krankheit als auch mit Gesunden assoziiert (Kerem et al., oben). Die Krankheit wird offensichtlich durch mehrere verschiedene Mutationen verursacht, von denen manche in der Population in sehr geringer Frequenz vorkommen. Wie durch die Haplotypinformation gezeigt, sind mehr Haplotypen mit dem Locus assoziiert, als für die Krankheit verantwortliche mutante Allele vorhanden sind.
  • Es kann Jahre dauern, bis ein Genscreeningprogramm (auf Basis der Amplifikation von Exonbereichen und der Analyse der resultierenden amplifizierten DNA-Sequenz mit für jede der Mutationen spezifischen Sonden oder mit Enzymen, die für jede Mutation. charakteristische RFLP-Muster erzeugen) entwickelt wird. Solche Tests sind von der Detektion und Charakterisierung einer jeden der Mutationen oder zumindest jener Mutationen abhängig, die etwa 90 bis 95 % oder mehr der Erkrankungsfälle verursachen. Die Alternative besteht darin, nur 70 bis 80 % der CF-assoziierten Gene zu detektieren. Diese Alternative wird im allgemeinen als unannehmbar betrachtet und sorgt in der Welt der Wissenschaft für große Bedenken.
  • Durch das erfindungsgemäße Verfahren werden Haplotypen, die mit dem Locus assoziiert sind, direkt bestimmt und können jene Haplotypen unter den 178 gegenwärtig bekannten Haplotypen detektiert werden, die mit dem Erkrankungslocus assoziiert sind. Weitere mit der Erkrankung assoziierte Haplotypen lassen sich durch die rasche DNA-Analyse zahlreicher CF-Patienten nach den erfindungsgemäßen Verfahren leicht bestimmen. Weiters können auch jegliche Mutationen, die mit Nichtkodierregulationsbereichen assoziiert sind, nach dem Verfahren detektiert werden und werden durch das Screeningverfahren identifiziert.
  • Anstatt zu versuchen, jeden Defekt im Kodierbereich, der die Krankheit verursacht, zu bestimmen und dann zu detektieren, amplifiziert das erfindungsgemäße Verfahren Intronsequenzen, die mit dem Locus assoziiert sind, um Allel- und Suballelmuster zu bestimmen. Im Gegensatz zur Verwendung mutationsspezifischer Sonden, wo nur bekannte Sequenzdefekte detektiert werden können, weisen neue PDLP- und RFLP- Muster, die durch Intronsequenzen erzeugt werden, auf das Vorhandensein eines zuvor unerkannten Haplotyps hin.
  • Die gleiche Analyse kann für Phenylalaninhydroxylase-Locusmutationen durchgeführt werden, die Phenylketonurie erzeugen, und für β-Globinmutationen, die β-Thalassämie und Sichelzellenerkrankung verursachen, sowie für andere Loci, von denen bekannt ist, daß sie mit einer genetischen Erkrankung assoziiert sind. Weiters ist weder die Mutationsstelle, noch die Position für ein Erkrankungsgen erforderlich, um mit der Erkrankung assoziierte Haplotypen zu bestimmen. Amplifizierte Intronsequenzen in den. Bereichen, die RFLP-Marker nahe flankieren, wie sie bei der Huntington-Krankheit und vielen anderen Erbkrankheiten bekannt sind, können ausreichend Information liefern, um Screening bezüglich mit der Krankheit assoziierter Haplotypen durchzuführen.
  • Progressive Muskeldystrophie (MD) ist eine geschlechtsspezifische Krankheit. Das mit der Krankheit assoziierte Gen umfaßt eine 2,3 Millionen-Basenpaar-Sequenz, die für 3.685 Aminosäureprotein, Dystrophin, kodiert. Eine Mutationskarte für 128 Patienten mit 34 Patienten mit Becker-Muskeldystrophie und 160 Patienten mit Duchenne- Muskeldystrophie identifizierte 115 Deletionen und 13 Duplikationen in der Kodierbereichssequenz [Den Dunnen et al., "Am.J.Hum.Genet." 45:835-847 (1989)]. Obwohl die Krankheit mit einer großen Anzahl an Mutationen assoziiert ist, die stark variieren, haben die Mutationen eine nichtzufällige Verteilung in der Sequenz und sind an zwei Hauptmutationsherden ("hot spots") lokalisiert, Den Dunnen et al., oben. Weiters ist ein Rekombinationsherd innerhalb der Gensequenz identifiziert worden [Grimm et al., "Am.J.Hum.Genet." 45:368-372 (1989)].
  • Zur Analyse von MD werden vorzugsweise Haplotypen auf jeder Seite des Rekombinationsherdes bestimmt. Primerpaare, die amplifizierte DNA-Sequenzen definieren, befinden sich vorzugsweise nahe dem Herd, innerhalb von etwa 1 bis 10 Kbp, auf beiden Seiten davon. Außerdem sind aufgrund der großen Größe des Gens Primerpaare, die amplifizierte DNA-Sequenzen definieren, vorzugsweise nahe jedem Ende der Gensequenz positioniert und am meisten bevorzugt auch in einer Zwischenposition auf jeder Seite des Herdes. Auf diese Weise können mit der Krankheit assoziierte Haplotypen identifiziert werden.
  • Es ist gezeigt worden, daß andere Krankheiten, insbesondere bösartige Erkrankungen, das Ergebnis eines geerbten rezessiven Gens gemeinsam mit einer somatischen Mutation des normalen Gens sind. Eine bösartige Erkrankung, die auf einen solchen "Heterogenitätsverlust" zurückzuführen ist, ist Retinoblastom, ein Krebs bei Kindern. Der Verlust des normalen Gens durch Mutation ist durch die Detektion des Vorhandenseins einer Mutation in allen somatischen Zellen (die auf Keimzellenursprung hinweist) und die Detektion einer zweiten Mutation bei manchen somatischen Zellen gezeigt worden [Scheffer et al., "Am.J.Hum.Genet." 45:252-260 (1989)]. Die Krankheit kann durch das Amplifizieren von genomischen DNA-Sequenzen aus somatischen Zellen detektiert werden, welche Sequenzen ausreichend Intronsequenznukleotide umfassen. Die amplifizierten DNA-Sequenzen umfassen vorzugsweise Intronsequenzen, die sich nahe einer oder mehreren der Markierungen befinden, die von Scheffer et al., oben, beschrieben werden. Vorzugsweise werden eine amplifizierte DNA-Sequenz, die sich nahe einer Intragenmarkierung befindet, sowie eine amplifizierte DNA-Sequenz, die sich nahe einer Flankierungsmarkierung befindet, verwendet.
  • Eine exemplarische Analyse bezüglich CF wird in den Beispielen im Detail beschrieben. Die Analyse der Genloci für andere monogene und multigene genetische Erkrankungen kann auf ähnliche Weise durchgeführt werden.
  • Wie die obige Beschreibung angibt, ist das erfindungsgemäße Verfahren zur Analyse von Intronsequenzen im allgemeinen auf die Detektion jeder Art genetischer Eigenschaft anwendbar. Andere monogene und multigene Eigenschaften können nach den erfindungsgemäßen Verfahren leicht analysiert werden. Weiters sind die erfindungsgemäßen Analyseverfahren auf alle eukaryotischen Zellen anwendbar und werden vorzugsweise an jenen von Pflanzen und Tieren verwendet. Beispiele für die Analyse von BoLA (Rinder-MHC-Determinanten) zeigen die allgemeine Anwendbarkeit der erfindungsgemäßen Verfahren weiter.
  • Die vorliegende Erfindung wird durch die folgenden spezifischen, aber nichteinschränkenden Beispiele weiter veranschaulicht. Verfahren, die konstruktiv auf die Praxis reduziert sind, werden in der Gegenwart beschrieben, und Verfahren, die im Labor durchgeführt wurden, werden in der Vergangenheit beschrieben.
    • BEISPIEL 1 Gerichtsmedizinische Tests
  • Vom peripheren Blut des Tatverdächten extrahierte DNA und DNA aus am Ort des Verbrechens gefundenem Blut werden analysiert, um zu ermitteln, ob die beiden DNA- Proben vom selben Individuum oder von verschiedenen Individuen stammen.
  • Die extrahierte DNA aus jeder Probe wird verwendet, um zwei Replikaaliquote pro Probe zu bilden, wobei jedes Aliquot 1 µg Proben-DNA aufweist. Jedes Replikat wird in einem Gesamtvolumen von 100 µl mit einem Primerpaar (1 µg eines jeden Primers), dNTPs (jeweils 2,5 mM) und 2,5 Units Taq-Polymerase in Amplifikationspuffer (50 mM KCl; 10 mM Tris-HCl, pH 8,0; 2,5 mM MgCl&sub2;; 100 µg/ml Gelatine) kombiniert, um 4 Amplifikationsreaktionsgemische zu bilden. Das erste Primerpaar enthält die als SGD005.IIVS1.LNP und SGD009.AIVS3.R2NP (A-locusspezifisch) bezeichneten Primer. Das zweite Primerpaar enthält die als SGD001.DQA1.LNP und SGD003.DQA1.RNP (DQA-locusspezifisch) bezeichneten Primer. Jeder Primer wird unter Verwendung eines DNA-Synthesizers von Applied Biosystems, Modell 308A, synthetisiert. Die Amplifikationsreaktionsgemische werden als SA (DNA des Verdächtigen, A- locusspezifische Primer), SD (DNA des Verdächtigen, DQA1-locusspezifische Primer), CA (DNA vom Ort des Verbrechens, A-locusspezifische Primer) und CD (DNA vom Ort des Verbrechens, DQA1-locusspezifische Primer) bezeichnet.
  • Jedes Amplifikationsreaktionsgemisch wird 30 s lang auf 94ºC erhitzt. Die Primer werden durch Abkühlen des Reaktionsgemisches auf 65ºC für jedes der Alocusspezifischen Amplifikationsgemische und auf 55ºC für jedes der DQA1locusspezifischen Amplifikationsgemische und Beibehalten der jeweiligen Temperaturen für 1 Minute anneliert Der Primerextensionsschritt wird durch Erhitzen eines jeden der Amplifikationsgemische auf 72ºC für 1 Minute durchgeführt. Der Denaturierungs-, Annelierungs- und Extensionszyklus wird für jedes Amplifikationsgemisch 30mal wiederholt.
  • Jedes Amplifikationsgemisch wird aliquotiert, um drei Restriktionsendonukleasenspaltgemische pro Amplifikationsgemisch herzustellen. Die A-Locus-Reaktionsgemische werden mit den Endonukleasen Bsrl, Cfr101 undDrall kombiniert. Die DQA1- Reaktionsgemische werden mit Alul, Cvijl und Ddel kombiniert.
  • Um jedes Spaltgemisch herzustellen, wird jede der drei Replikaaliquote von 10 µl eines jeden Amplifikationsgemisches mit 5 Units des jeweiligen Enzyms 60 min lang bei 37ºC unter Bedingungen, wie sie vom Hersteller einer jeden Endonuklease empfohlen werden, kombiniert.
  • Nach der Spaltung werden die drei Spaltgemische für jede der Proben (SA, SD, CA und CD) gepoolt und auf einem 6,5%-igen Polyacrylamidgel 45 min lang bei 100 Volt Elektrophorese unterzogen. Nach der Elektrophorese wird das Gel mit Ethidiumbromid gefärbt.
  • Die Proben enthalten Fragmente mit den folgenden Längen:
  • Die Analyse zeigt, daß das Blut vom Ort des Verbrechens und vom Tatverdächtigen. nicht vom selben Individuum stammen. Das Blut vom Ort des Verbrechens und vom Verdächtigen sind A3, A9, DQA1, 0501, DQA1 0301 bzw. A9, A9, DQA1 0501, DQA1 0501.
    • BEISPIEL 2 Vaterschaftstest
  • Chorionzottengewebe wurde durch transzervikale Biopsie von einem 7 Wochen alten Conceptus (Fötus) erhalten. Blutproben wurden durch Venenpunktion von der Mutter (M) und vom mutmaßlichen Vater (AF) entnommen. DNA wurde von der Chorionzottenbiopsie und von den Blutproben extrahiert. DNA wurde unter Verwendung eines nichtionischen Detergens (Tween 20) und Proteinase K von der Probe von der Mutter extrahiert. DNA wurde von der Probe vom Vater durch hypotonische Lyse extrahiert. Im spezielleren wurden 100 µl Blut in PBS auf 1,5 ml verdünnt und zentrifugiert, um den Leukozytenfilm zu entfernen. Nach zwei hypotonischen Lysebehandlungen mit erneutem Suspendieren von Zellen mit Leukozytenfilm in Wasser wurden die Pellets gewaschen, bis die Rötung verschwand. Die farblosen Pellets wurden in Wasser erneut suspendiert und 20 min lang gekocht. Es wurden 5 10 mm-Chorionzottenblättchen erhalten. Ein Blättchen wurde in 200 µl Wasser getaucht. NaOH wurde auf 0,05 M zugegeben. Die Probe wurde 20 min lang gekocht und dann mit HCl neutralisiert. Bei keiner der Proben wurde weitere Reinigung durchgeführt.
  • Die extrahierte DNA wurde zur Amplifikation von Sequenzen, die mit den HLA-Loci DQA1 und DPB1 assoziiert waren, einer PCR unterworfen. Die verwendeten Primer waren: (1) als 5'-Primer für den DQA1-Locus der als SGD001.DQA1.LNP (DQA 5'IVS1) bezeichnete Primer (der den nt 23-39 der DQA1 0301-Allelsequenz entspricht) und als 3-Primer für den DQA1-Locus der als SGD003.DQA1.RNP bezeichnete Primer (DQA 3'IVS2, der dem nt 789-806 der DQA1 0301-Sequenz entspricht; (2) als DPB-Primer, die als 5'IVS1 nt 7604-7624 und 3'IVS2 7910-7929 bezeichneten Primer. Die Amplifikationsreaktionsgemische waren: 150 ng eines jeden Primers; 25 µg Test-DNA; 10 mM Tris-HCl, pH 8,3; 50 mM KCl; 1,5 mM MgCl&sub2;; 0,01 % (Gew./Vol.) Gelatine; 200 µM dNTPs; Wasser auf 100 µl und 2,5 U Taq-Polymerase.
  • Die Amplifikation wurde durch 10minütiges Erwärmen des Amplifikationsreaktionsgemisches auf 94ºC vor der Zugabe von Taq-Polymerase durchgeführt. Für DQA1 wurde die Amplifikation bei 94ºC 30 s lang, dann bei 55ºC 30 s lang und dann bei 72ºC 1 min lang 30 Zyklen hindurch durchgeführt, wobei mit 72ºC für 10 min geendet wurde. Für DPB wurde die Amplifikation bei 96ºC 30 s lang, dann bei 65ºC 30 s lang durchgeführt, wobei mit 65ºC für 10 min geendet wurde.
  • Durch Testgel-Elektrophorese, die das Vorhandensein doppelstrangiger DNA der vorhergesagten Größe im Amplifikationsreaktionsgemisch zeigte, wurde gezeigt, daß die Amplifikation technisch zufriedenstellend war. Das Testgel war 2% Agarose in TBE (Tris-Borat-EDTA)-Puffer, das mit 15 pl der Amplifikationsreaktionsgemisches pro Bahn beladen wurde, und wurde bei 200 V 2 h lang einer Elektrophorese unterzogen, bis der Markierungsfarbstoff zwischen 6 und 7 cm in das 10 cm-Gel wanderte.
  • Die amplifizierten DQA1- und DPB1-Sequenzen wurden Restriktionsendonukleasespaltung unterzogen, wobei Ddel und Mboll (8 bzw. 12 Units bei 37ºC 3 h lang) für DQA1, und Rsal und Fokl (8 bzw. 11 Units bei 37ºC über Nacht) für DPB1 in 0,5 bis 2,0 µl vom Zulieferer, Pharmacia, empfohlen Enzympuffern, gemeinsam mit 16-18 µl des amplifizierten Produktes verwendet wurden. Die gespaltene DNA wurde auf Gelelektrophorese (3% Nusieve) nach Fragmentgröße-Länge getrennt. Die RFLP-Muster wurden unter UV-Licht untersucht, nachdem das Gel mit Ethidiumbromid gefärbt worden war.
  • Die Fragmentmusteranalyse wird durch Allelzuordnung der nichtmütterlichen Allele unter Einsatz erwarteter Fragmentgrößen auf Basis der Sequenzen bekannter Endonukleaserestriktionsstellen durchgeführt. Die Fragmentmusteranalyse zeigte, daß das obligate väterliche DQA1-Allel DQA1 0102 ist und das DPB-Allel DPw1 ist. Die Fragmentmuster stimmten damit überein, daß AF der biologische Vater ist.
  • Um die Wahrscheinlichkeit echter Vaterschaft zu berechnen, wurden HLA-Typen zugeordnet. Mütterliche und AF-DQA1-Typen stimmten mit jenen überein, die aufgrund der HLA Klasse II-Gentypen vorhergesagt wurden, die durch serologische Tests unter Einsatz lymphozytentoxischer Antiseren ermittelt wurden.
  • Wenn man davon ausging, daß sich Allele der beiden HLA-Loci im Verbindungsgleichgewicht befanden, war die kombinierte Wahrscheinlichkeit der Nichtvaterschaff gegeben durch:
  • 0,042 x 0,314 = 0,013
  • d.h. die Wahrscheinlichkeit der Vaterschaft ist (1-0,013) oder 98,7%.
  • Die relative Chance auf Vaterschaft ist somit 74:75, d.h. die Chance, daß der AF nicht der biologische Vater ist, beträgt etwa 1 von 75. Die Streitparteien betrachteten dieses Ergebnis als ausreichende Bestätigung dafür, daß der vermutliche Vater der Vater des Fötus ist.
    • BEISPIEL 3 Analyse des HLA DQA1-Locus
  • Die drei Haplotypen des HLA-DQA1-0102-Locus wurden wie nachstehend beschrieben analysiert. Diese Haplotypen sind DQA1 0102 DR15 Dw2; DQA1 0102 DR16 Dw21; und DQA1 0102 DR13 Dw19. Die Unterscheidung zwischen den Haplotypen ist besonders schwierig, weil es eine Differenz um ein Basenpaar zwischen den 0102- Allelen und den 0101- und 0103-Allelen gibt, wobei die Differenz nicht einzigartig in DQA1-Allelsequenzen ist.
  • Bei dem für die Amplifikation verwendeten Verfahren handelt es sich um dasselbe, wie in Beispiel 1 beschrieben; mit der Ausnahme, daß bei der Amplifikation 30 Zyklen mit 94ºC für 30 s, 60ºC für 30 s und 72ºC für 60 s verwendet wurden. Die Sequenzen der Primer waren:
  • SGD001 -- 5' TTCTGAGCCAGTCCTGAGA 3'; und
  • SGD 003 -- 5' GATCTGGGGACCTCTTGG 3'.
  • Diese Primer hybridisieren an Sequenzen, die sich etwa 500 bp stromauf vom 5"-Ende des zweiten Exons und 50 bp stromab vom zweiten Exon befinden, und erzeugen amplifizierte DNA-Sequenzen im Bereich von 700 bis 800 bp.
  • Nach der Amplifikation wurden die amplifizierten DNA-Sequenzen einer Elektrophorese auf einem 4%-Polyacrylamidgel unterzogen, um den PDLP-Typ zu bestimmen. In diesem Fall wanderten die amplifizierten DNA-Sequenzen für die 0102- Allele gemeinsam mit den (haben die gleiche Länge wie die) 0101-Allele, und darauffolgende Enzymspaltung ist erforderlich, um sie zu unterscheiden.
  • Die amplifizierten DNA-Sequenzen wurden unter Verwendung des Restriktionsenzyms Alul (Bethesda Research Laboratories) gespalten, das DNA an der Sequenz AGCT spaltet. Die Spaltung wurde durchgeführt, indem 5 Units (1 µl) Enzym mit 10 µl der amplifizierten DNA-Sequenz (zwischen etwa 0,5 und 1 µg DNA) im vom Hersteller bereitgestellten Enzympuffer nach den Anweisungen des Herstellers gemischt wurden, um ein Digest zu bilden. Das Digest wurde dann zur vollständigen enzymatischen Spaltung 2 h lang bei 37ºC inkubiert.
  • Die Produkte der Spaltreaktion werden mit etwa 0,1 µg "Leiter"-Nukleotidsequenzen (Nukleotidvergleichssequenzen, die bei einer Länge von 123 bp beginnen und sich um 123 bp in der Länge bis auf eine Endgröße von etwa 5.000 bp erhöhen; im Handel angeboten von Bethesda Research Laboratories, Bethesda MD) vermischt und wurden unter Verwendung eines 4%igen horizontalen ultradünnen Polyacrylamidgels (E-C Apparatus, Clearwater FLA) einer Elektrophorese unterzogen.
  • Die Banden im Gel wurden unter Einsatz von Silberfärbetechnik [Allen et al., Biotechniques 7:736-744 (1989)] sichtbar gemacht (gefärbt).
  • Drei unterschiedliche Fragmentmuster, die den drei Haplotypen entsprechen, wurden unter Verwendung von Alul hergestellt. Die Muster (in Fragmenten mit Basenpaargröße) waren:
  • 1. DR15 DQ6 Dw2: 120, 350, 370, 480
  • 2. DR13 DQ6 Dw19: 120, 330, 350, 480
  • 3. DR16 DQ6 Dw21: 120, 330, 350
  • Das Verfahren wurde unter Verwendung eines 6,5%igen vertikalen Polyacrylamidgels und Ethidiumbromidfärbung wiederholt und lieferte die gleichen Ergebnisse. Die Fragmentmuster waren unter Verwendung der ultradünnen Gele und der Silberfärbung jedoch leichter zu unterscheiden.
  • Das ist ein Beispiel für die Analyse nach dem erfindungsgemäßen Verfahren. Unter Einsatz der gleichen Vorgangsweise wurden 20 der anderen 32 DR/DQ-Haplotypen für DQA1 identifiziert, wobei das gleiche Primerpaar und zwei zusätzliche Enzyme (Ddel und Mboll) eingesetzt wurden. PDLP-Gruppen und Fragmentmuster für jeden der DQA1-Haplotypen mit den drei Endonukleasen werden in Tabelle 6 dargestellt. Tabelle 6
  • Dieses Beispiel veranschaulicht die Fähigkeit des erfindungsgemäßen Verfahrens, die Allele und Haplotypen eines Genlocus zu unterscheiden. Im speziellen zeigt das Beispiel, daß die PDLP-Analyse 5 der 8 Allele stratifiziert. Diese drei Restriktionsendonuklesendigeste unterscheiden jedes der 8 Allele und viele der 35 bekannten Haplotypen des Locus. Es ist zu erwarten, daß die Verwendung zusätzlicher Endonukleasendigeste für diese amplifizierte DNA-Sequenz alle bekannten Haplotypen unterscheidet und potentiell andere zuvor unerkannte Haplotypen identifiziert. Alternativ dazu ist zu erwarten, daß die Verwendung der gleichen oder anderer Endonukleasendigeste für eine weitere amplifizierte DNA-Sequenz in diesem Locus die Haplotypen unterscheidet.
  • Außerdem lassen sich durch die Analyse amplifizierter DNA-Sequenzen am DRA-Locus in der telorneren Richtung und DQB in der zentromeren Richtung, vorzugsweise gemeinsam mit der Analyse eines zentralen Locus, alle Haplotypen für den Bereich unterscheiden.
  • Die gleichen Verfahren sind problemlos auf andere Loci anwendbar.
    • BEISPIEL 4
  • Analyse des HLA-DQA1-Locus
  • Die DNA eines Individuums wird analysiert, um zu ermitteln, welcher der drei Haplotypen des HLA-DQA1 0102-Locus vorhanden ist. Genomische DNA wird amplifiziert, wie in Beispiel 3 beschrieben. Jeder der amplifizierten DNA-Sequenzen wird sequenziert, um die Haplotypen des Individuums zu identifizieren. Es wird gezeigt, daß das Individuum die Haplotypen DR15 DQ6 Dw2; DR13 DQ6 Dw19 aufweist.
  • Das Verfahren wird wie in Beispiel 3 beschrieben durch die Herstellung des Alul- Digests wiederholt. Jedes der Digestfragmente wird sequenziert. Es wird gezeigt, daß das Individuum die Haplotypen DR15 DQ6 Dw2; DR13 DQ6 Dw19 aufweist.
    • BEISPIEL 5 DQA1-allelspezifische Amplifikation
  • Es wurden Primer synthetisiert, die sich spezifisch an das 0102- und das 0301-Allel des DQA1-Locus binden. Der 5'-Primer war der in Beispiel 3 verwendete SGD 001-Primer. Die Sequenzen der 3'-Primer sind nachstehend angeführt.
  • 0102 5' TTGCTGAACTCAGGCCACC 3'
  • 0301 5' TGCGGAACAGAGGCAACTG 3'
  • Die Amplifikation wurde wie in Beispiel 3 beschrieben unter Einsatz von 30 Zyklen einer Standard (94ºC, 60ºC, 72ºC)-PCR-Reaktion durchgeführt. Die Templat-DNAs für jedes der 0101-, 0301- und 0501-Allele wurden getrennt amplifiziert. Wie durch Gelelektrophorese ermittelt, amplifizierten der 0102-allelspezifische Primer nur 0102- Templat-DNA und der 0301-allelspezifische Primer nur 0301- Templat-DNA. Somit war jeder der Primer allelspezifisch.
    • BEISPIEL 6 Detektion von zystischer Fibrose
  • Es wird das für die in Beispiel 3 beschriebene Amplifikation verwendete Verfahren wiederholt. Die Sequenzen der Primer werden nachstehend veranschaulicht. Die ersten beiden Primer sind stromauf angeordnete Primer, und der dritte ist ein stromab gelegener Primer. Die Primer amplifizieren eine DNA-Sequenz, die die gesamte intervenierende Sequenz 1 umfaßt:
  • 5' CAG AGG TCG CCT CTG GA 3';
  • 5' AAG GCC AGC GU GTC TCC A 3'; und
  • 3' CCT CAA AAT TGG TCT GGT 5'.
  • Diese Primer hybridisieren an das Komplement der Sequenzen, die von nt 136-152 und nt 154-172 und sind an nt 187-207 positioniert. [Die Nukleotidzahlen sind bei Riordan et al., "Science" 245:1066-1072 (1989) zu finden.]
  • Nach der Amplifikation werden die amplifizierten DNA-Sequenzen auf einem 40%igen Polyacrylamidgel einer Elektrophorese unterzogen, um den PDLP-Typ zu bestimmen. Die amplifizierten DNA-Sequenzen werden unter Verwendung eines jeden der Restriktionsenzyme Alul, Mnll und Rsal (Bethesda Research Laboratories) getrennt gespalten. Die Spaltung wird durchgeführt, wie in Beispiel 3 beschrieben. Die Produkte der Spaltreaktion werden einer Elektrophorese unterzogen und unter Verwendung eines 4%igen horizontalen ultradünnen Polyacrylamidgels und Silberfärbung sichtbar gemacht, wie in Beispiel 3 beschrieben.
  • Es werden unterscheidungskräfte Fragmentmuster erzeugt, die den mit der Erkrankung assoziierten und normalen Haplotypen entsprechen.
    • BEISPIEL 7 Analyse von Rinder-HLA-Klasse I
  • Rinder-HLA Klasse I-Allele und -Haplotypen werden auf die gleiche Weise analysiert, wie in Beispiel 3 beschrieben. Die Primer sind nachstehend angeführt.
    • Rinderprimer (homolog zu Klasse I HLA)
  • Tm
  • 5'-Primer: 5' TCC TGG TCC TGA CCG AGA 3' (62º)
  • 3'-Primer: 1) 3' A TGT GCC TTT GGA GGG TCT 5' (62º)
  • (für das etwa 600 bp-Produkt)
  • 2) 3' GCC AAC AT GAT CCG CAT 5' (62º)
  • (für das etwa 900 bp-Produkt)
  • Für die Sequenz mit etwa 900 bp reicht die PDLP-Analyse aus, um die Allele 1 und 3 (893 bzw. 911 bp) zu unterscheiden. Digeste werden, wie in Beispiel 3 beschrieben, unter Verwendung von Alul und Ddel hergestellt. Die folgenden Muster werden für die 900 bp-Sequenz hergestellt.
  • Allel 1, Alul-Digest: 712, 181
  • Allel 3, Alul-Digest: 430, 300; 181
  • Allel 1, Ddel-Digest: 445, 201, 182, 28
  • Allel 3, Ddel-Digest: 406, 185, 182, 28, 16
  • Die 600 bp-Sequenz erzeugt ebenfalls unterscheidungskräftige Fragmentmuster für diese Allele. Diese Muster unterscheiden sich jedoch nicht so drastisch wie die durch die 600 bp-Sequenzdigeste erzeugten Muster.
    • Beispiel 8 Herstellung von Primern
  • Jeder der folgenden Primer wird unter Verwendung eines DNA-Synthesizers Modell 308A von Applied Biosystems synthetisiert. HLA-Locusprimer A-locusspezifische Primer B-locusspezifische Primer C-locusspezifische Primer Klasse I-locusspezifische Primer DQA1-locusspezifische Primer DRA-locusspezifische Primer DRB-locusspezifische Primer DQB1-locusspezifische Primer DPB1-locusspezifische Primer

Claims (43)

1. Verfahren zur Detektion zumindest eines Kodierbereichallels eines Multiallel- Genlokus, umfassend das Amplifizieren genomischer DNA mit einem Primerpaar, das sich über eine Nicht-Kodierbereichsequenz erstreckt, wobei das Primerpaar eine DNA- Sequenz definiert, die sich in genetischer Verbindung mit dem genetischen Lokus befindet und eine ausreichende Anzahl an Nicht-Kodierbereichsequenznukleotiden enthält, um eine amplifizierte DNA-Sequenz herzustellen, die für dieses Allel charakteristisch ist.
2. Verfahren nach Anspruch 1, worin die amplifizierte DNA-Sequenz zumindest etwa 300 N ukleotide umfaßt, die Nicht-Kodierbereichsequenzen entsprechen.
3. Verfahren nach Anspruch 1, worin die Nicht-Kodierbereichsequenz an ein Exon angrenzt, das für das Allel kodiert.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, worin die amplifizierte DNA-Sequenz für zumindest ein nicht angrenzendes Allel charakteristisch ist.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, worin die amplifizierte DNA-Sequenz für zumindest ein angrenzendes Allel und zumindest ein nicht angrenzendes Allel charakteristisch ist.
6. Verfahren nach Anspruch 5, worin die amplifizierte DNA-Sequenz zumindest etwa 1.000 Nukleotide umfaßt, die Nicht-Kodierbereichsequenzen entsprechen.
7. Verfahren zur Detektion von zumindest einem Allel eines Multiallel-Genlokus, umfassend:
a) das Amplifizieren genomischer DNA mit einem Primerpaar, das sich über eine Nicht- Kodierbereichsequenz erstreckt, wobei das Primerpaar eine DNA-Sequenz definiert, die sich in genetischer Verbindung mit dem Allel befindet und eine ausreichende Anzahl an Nicht-Kodierbereichsequenznukleotiden enthält, um eine für das Allel charakteristische amplifizierte DNA-Sequenz herzustellen; und
b) das Analysieren der amplifizierten DNA-Sequenz, um das Vorhandensein einer genetischen Variation in der amplifizierten Sequenz zu detektieren.
8. Verfahren nach Anspruch 7, worin die Variation in der amplifizierten DNA-Sequenz eine Variation in der Länge der primer-definierten amplifizierten DNA-Sequenz ist.
9. Verfahren nach Anspruch 7, worin die Variation in der amplifizierten DNA-Sequenz eine Änderung im Vorhandensein zumindest einer Restriktionsstelle in der primerdefinierten amplifizierten DNA-Sequenz ist.
10. Verfahren nach Anspruch 7, worin die Variation in der amplifizierten DNA-Sequenz eine Änderung in der Position zumindest einer Restriktionsstelle in der primerdefinierten amplifizierten DNA-Sequenz ist.
11. Verfahren nach Anspruch 7, worin die Variation in der amplifizierten DNA-Sequenz eine Substitution von zumindest einem Nukleotid in der primer-definierten amplifizierten DNA-Sequenz ist.
12. Verfahren nach Anspruch 7, worin der genetische Lokus ein Haupt- Histokompatibilitätslokus ist.
13. Verfahren nach Anspruch 7, worin das Allel mit einer monogenen Erkrankung assoziiert ist.
14. Verfahren nach Anspruch 13, worin die monogene Erkrankung zystische Fibrose ist.
15. Verfahren nach Anspruch 7, worin zumindest etwa 70% der primer-definierten amplifizierten DNA-Sequenz Nicht-Kodierbereichsequenzen entsprechen.
16. Verfahren nach Anspruch 7, worin die primer-definierte amplifizierte DNA-Sequenz eine Länge von 300 bis 500 Nukleotiden aufweist.
17. Verfahren zur Herstellung von RFLP-Fragmenten, die für Allele eines HLA-Lokus eines Individuums charakteristisch sind, das folgende Schritte umfaßt:
a) das Amplifizieren genomischer HLA-DNA vom Individuum mit einem Primerpaar, das für den HLA-Lokus spezifisch ist und sich unter Bedingungen, die zur Herstellung einer amplifizierten DNA-Sequenz geeignet sind, über eine Nicht-Kodierbereichsequenz erstreckt; und
b) das Herstellen eines Digests durch Kombinieren der amplifizierten DNA-Sequenz mit zumindest einer Endonuklease, die die amplifizierte DNA-Sequenz spaltet, sodaß ein Satz von Fragmenten mit charakteristischen Fragmentlängen entsteht.
18. Verfahren nach Anspruch 17, das zusätzlich den Schritt der Herstellung von RFLP- Mustern aus dem Digest umfaßt.
19. Verfahren nach Anspruch 17, worin die Primer eine DNA-Sequenz definieren, die alle Exons enthält, die für die mit dem HLA-Lokus assoziierte Allelvariabilität kodieren.
20. Verfahren zur Herstellung von RFLP-Fragmenten für einen HLA-Lokus eines Individuums, das folgende Schritte umfaßt:
a) das Amplifizieren genomischer HLA-DNA vom Individuum mit einem Primerpaar, das für den HLA-Lokus spezifisch ist und das sich unter zur Herstellung einer amplifizierten DNA-Sequenz geeigneten Bedingungen über eine Nicht- Kodierbereichsequenz erstreckt, wobei die Primer eine DNA-Sequenz definieren, die alle Exons enthält, die für die mit dem HLA-Lokus assoziierte Allelvariabilität kodieren; und
b) die Herstellung eines Digests durch Kombinieren der amplifizierten DNA-Sequenz mit zumindest einer Endonuklease, die die amplifizierte DNA-Sequenz spaltet, sodaß ein Satz von Fragmenten mit charakteristischen Fragmentlängen ensteht.
21. Verfahren zur Herstellung von RFLP-Mustern für einen HLA-Lokus eines Individuums, das folgende Schritte umfaßt:
a) das Amplifizieren der HLA-DNA vom Individuum mit einem Primerpaar, das für den HLA-Lokus spezifisch ist und das sich unter zur Herstellung einer amplifizierten DNA- Sequenz geeigneten Bedingungen über eine Nicht-Kodierbereichsequenz erstreckt, wobei sich die Primer in der intervenierenden Sequenz 1 und der intervenierenden Sequenz III befinden, wenn der HLA-Lokus ein Klasse I-Lokus ist, und in der intervenierenden Sequenz I und der intervenierenden Sequenz II, wenn der Lokus ein Klasse II-Lokus ist;
b) die Herstellung eines Digests durch Kombinieren der amplifizierten DNA-sequenz mit zumindest einer Endonuklease, die die amplifizierte DNA-Sequenz spaltet, sodaß ein Satz von Fragmenten mit charakteristischen Fragmentlängen entsteht; und
c) die Herstellung von RFLP-Mustern aus dem Digest.
22. Verfahren nach Anspruch 21, worin die Amplifizierung umfaßt:
a) das Kombinieren eines HLA-Lokus-spezifischen Primerpaares mit HLA-DNA vom Individuum unter Hybridisierungsbedingungen für eine ausreichende Zeitspanne, damit jeder Primer im Primerpaar ein Extensionsprodukt erzeugt, das, wenn es von seinem Komplement getrennt wird, als Schablone für die Synthese des Extensionsproduktes des anderen Primers dienen kann, um ein Gemisch herzustellen;
b) die Behandlung des Gemisches unter denaturierenden Bedingungen, um die Primer von ihren Extensionsprodukten abzutrennen;
c) die Behandlung des Gemisches mit dem HLA-Lokus-spezifischen Primerpaar, sodaß ein Primerextensionsprodukt synthetisiert wird, wobei jede der in Schritt (b) hergestellten Schablonen als Schablone verwendet wird, was zur Amplifizierung der HLA-DNA führt; und
d) die Wiederholung der Schritte (b) und (c), um eine amplifizierte DNA-Sequenz herzustellen.
23. Verfahren nach Anspruch 21, worin ein zweites Primerpaar, das für den HLA-Lokus spezifisch ist, ebenfalls verwendet wird, um die HLA-DNA zu amplifizieren.
24. Verfahren nach Anspruch 21, worin die Herstellung des RFLP-Fragmentmusters umfaßt:
a) das Kombinieren der amplifizierten DNA-Sequenz mit zumindest einer Endonuklease, die die amplifizierte DNA-Sequenz spaltet, sodaß ein Satz von Fragmenten mit charakteristischen Fragmentlängen entsteht;
b) das Trennen der Fragmente auf Basis der Fragmentlänge, um getrennte Fragmente herzustellen; und
c) das Sichtbarmachen der getrennten Fragmente, um RFLP-Fragmentmuster zu erzeugen.
25. Verfahren nach Anspruch 24, worin die Fragmente unter Einsatz von Gelelektrophorese getrennt und unter Verwendung einer Nukleotid-spezifischen Färbung sichtbar gemacht werden.
26. Verfahren, um zu ermitteln, ob DNA in einer Probe von einem bestimmten Individuum stammt, das folgende Schritte umfaßt:
a) das Amplifizieren von DNA vom Individuum und von DNA von der Probe mit einem Primerpaar, das für einen HLA-Lokus spezifisch ist und das sich unter Bedingungen, die geeignet sind, um eine amplifizierte DNA-Sequenz vom Individuum und von der Probe herzustellen, über eine Nicht-Kodierbereichsequenz erstreckt, wobei sich die Primer bei einem HLA-Klasse I-Lokus in den intervenierenden Sequenzen I und III und bei einem Klasse II-Lokus in den intervenierenden Sequenzen I und II befinden;
b) das Kombinieren der amplifizierten DNA-Sequenz vom Individuum und der amplifizierten Proben-DNA von der Probe mit zumindest einer Endonuklease, die die amplifizierte DNA-Sequenz in eine Vielzahl Spaltsequenzen mit ausreichend unterschiedlichen Längen spaltet, um zwischen Allelen des HLA-Lokus zu unterscheiden, für eine Zeitspanne, die ausreicht, daß die amplifizierte DNA unter Erhalt eines Digests gespalten wird; und
c) das Vergleichen der vom Digest erzeugten polymorphen Restriktionsfragmentlängenmuster vom Individuum und von der Probe.
27. Verfahren, um zu ermitteln, ob ein Individuum der Vater eines Kindes ist, folgende Schritte umfassend:
a) das Amplifizieren von DNA vom Individuum, von DNA vom Kind und von DNA von der Mutter des Kindes mit einem Primerpaar, das für einen HLA-Lokus spezifisch ist und sich unter Bedingungen, die geeignet sind, um amplifizierte DNA-Sequenzen zu erzeugen, über eine Nicht-Kodierbereichsequenz erstrecken, wobei sich die Primer bei einem HLA-Klasse I-Lokus in den intervenierenden Sequenzen I und III und bei einem Klasse II-Lokus in den intervenierenden Sequenzen I und II befinden;
b) das Kombinieren der amplifizierten DNA-Sequenz vom Individuum und der amplifizierten Proben-DNA vom Kind mit zumindest einer Endonuklease, die die amplifizierte DNA-Sequenz in eine Vielzahl Spaltsequenzen mit ausreichend unterschiedlichen Längen spaltet, um zwischen Allelen des HLA-Lokus zu unterscheiden, um einen Digest zu erzeugen; und
c) das Vergleichen von polymorphen Restriktionsfragmentlängenmustern, die vom Digest vom Individuum, von der Mutter des Kindes und vom Kind erzeugt werden.
28. Ein HLA-Lokus-spezifischer Primer, der aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus einem Klasse I-Lokus-spezifischen Primer, einem Klasse I-A-Lokus-spezifischen Primer, einem Klasse I-B-Lokus-spezifischen Primer und einem Klasse I-C-Lokus-spezifischen Primer besteht.
29. HLA-Lokus-spezifischer Primer nach Anspruch 28, worin der Primer eine Sequenz aufweist, die zumindest 15 aufeinanderfolgenden Nukleotiden entspricht, die aus der Gruppe ausgewählt sind, bestehend aus:
30. Verfahren, welches die Herstellung eines HLA-Klasse I-Lokus-spezifischen Primerpaares umfaßt, wobei das Primerpaar eine DNA-Sequenz definiert, die sich in genetischer Verbindung mit dem HLA-Klasse I-Lokus befindet und eine ausreichende Anzahl an Nicht-Kodierbereichsequenznukleotiden enthält, um eine amplifizierte DNA- Sequenz herzustellen, die für ein Allel des HLA-Klasse I-Lokus charakteristisch ist.
31. Verfahren, welches die Herstellung eines HLA-Klasse II-Lokus-spezifischen Primerpaares umfaßt, wobei das Primerpaar eine DNA-Sequenz definiert, die sich in genetischer Verbindung mit dem HLA-Klasse II-Lokus befindet und eine ausreichende Anzahl an Nicht-Kodierbereichsequenznukleotiden enthält, um eine amplifizierte DNA- Sequenz herzustellen, die für ein Allel des HLA-Klasse II-Lokus charakteristisch ist.
32. Verfahren, welches die Herstellung einer von einem HLA-Lokus-spezifischen Primerpaar definierten DNA-Sequenz umfaßt, wobei sich die DNA-Sequenz in genetischer Verbindung mit dem HLA-Lokus befindet und eine ausreichende Anzahl an Nicht-Kodierbereichsequenznukleotiden enthält, um eine amplifizierte DNA-Sequenz herzustellen, die für ein Allel des Lokus charakteristisch ist.
33. Set, das zumindest ein HLA-Lokus-spezifisches Primerpaar in einem geeigneten Behälter umfaßt, worin das HLA-Lokus-spezifische Primerpaar aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus einem HLA-Klasse I-Lokus-spezifischen Primerpaar und einem HLA-Klasse II-Lokus-spezifischen Primerpaar besteht, wobei das Primerpaar eine DNA- Sequenz definiert, die sich in genetischer Verbindung mit Nicht- Kodierbereichsequenznukleotiden befindet, um eine amplifizierte DNA-Sequenz zu erzeugen, die für ein Allel des HLA-Klasse I-Lokus charakteristisch ist.
34. Set nach Anspruch 33, das zusätzlich zumindest eine Endonuklease umfaßt, die eine vom HLA-Lokus-spezifischen Primerpaar definierte DNA-Sequenz in eine Vielzahl Spaltsequenzen mit ausreichend unterschiedlichen Längen spaltet, um zwischen den Allelen des HLA-Lokus zu unterscheiden.
35. Verfahren nach Anspruch 1, worin der genetische Lokus zumindest 4 Allele aufweist.
36. Verfahren nach Anspruch 1, worin der genetische Lokus zumindest 8 Allele aufweist.
37. Verbessertes DNA-Analyseverfahren, in dem Kodierbereichallele eines Multiallel- Genlokus durch Identifizierung der für die Allele charakteristischen Sequenzpolymorphismen bestimmt werden, wobei die Verbesserung das Identifizieren von Sequenzpolymorphismen, die für die Allele in einer Nicht-Kodierbereichsequenz charakteristisch sind, umfaßt, wobei die Nicht-Kodierbereichsequenz eine Länge von nicht mehr als etwa 2 kb aufweist.
38. Verfahren nach Anspruch 37, worin die Nicht-Kodierbereichsequenz eine Länge von nicht mehr als etwa 1 kb aufweist.
39. Verfahren nach Anspruch 37, worin sich die für die Allele charakteristischen Sequenzpolymorphismen innerhalb von 5 kb eines variablen Exons des Genlokus befinden.
40. Verfahren nach Anspruch 37, worin sich die für die Allele charakteristischen Sequenzpolymorphismen innerhalb von 2 kb eines variablen Exon des Genlokus befinden.
41. Verfahren nach Anspruch 37, worin der für das Kodierbereich-Allel charakteristische Sequenzpolymorphismus in einer intervenierenden Sequenz, die an ein variables Exon des Lokus angrenzt, vorhanden ist.
42. Verfahren nach Anspruch 41, worin der Genlokus ein HLA-Klasse I-Lokus ist und die intervenierende Sequenz die intervenierende Sequenz 1, 2, 3 oder 4 ist.
43. Verfahren nach Anspruch 41, worin der Genlokus ein HLA-Klasse II-Lokus ist und die intervenierende Sequenz eine intervenierende Sequenz 1 oder 2 ist.
PATENTANSPRÜCHE für Vertragsstaat: ES
1. Verfahren zur Detektion zumindest eines Kodierbereichallels eines Multiallel- Genlokus, umfassend das Amplifizieren genomischer DNA mit einem Primerpaar, das sich über eine Nicht-Kodierbereichsequenz erstreckt, wobei das Primerpaar eine DNA- Sequenz definiert, die sich in genetischer Verbindung mit dem genetischen Lokus befindet und eine ausreichende Anzahl an Nicht-Kodierbereichsequenznukleotiden enthält, um eine amplifizierte DNA-Sequenz herzustellen, die für dieses Alle charakteristisch ist.
2. Verfahren nach Anspruch 1, worin die amplifizierte DNA-Sequenz zumindest etwa 300 Nukleotide umfaßt, die Nicht-Kodierbereichsequenzen entsprechen.
3. Verfahren nach Anspruch 1, worin die Nicht-Kodierbereichsequenz an ein Exon angrenzt, das für das Allel kodiert.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, worin die amplifizierte DNA-Sequenz für zumindest ein nicht angrenzendes Allel charakteristisch ist.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, worin die amplifizierte DNA-Sequenz für zumindest ein angrenzendes Allel und zumindest ein nicht angrenzendes Allel charakteristisch ist.
6. Verfahren nach Anspruch 5, worin die amplifizierte DNA-Sequenz zumindest etwa 1.000 Nukleotide umfaßt, die Nicht-Kodierbereichsequenzen entsprechen.
7. Verfahren zur Detektion von zumindest einem Allel eines Multiallel-Genlokus, umfassend:
a) das Amplifizieren genomischer DNA mit einem Primerpaar, das sich über eine Nicht- Kodierbereichsequenz erstreckt, wobei das Primerpaar eine DNA-Sequenz definiert, die sich in genetischer Verbindung mit dem Allel befindet und eine ausreichende Anzahl an Nicht-Kodierbereichsequenznukleotiden enthält, um eine für das Allel charakteristische amplifizierte DNA-Sequenz herzustellen; und
b) das Analysieren der amplifizierten DNA-Sequenz, um das Vorhandensein einer genetischen Variation in der amplifizierten Sequenz zu detektieren.
8. Verfahren nach Anspruch 7, worin die Variation in der amplifizierten DNA-Sequenz eine Variation in der Länge der primer-definierten amplifizierten DNA-Sequenz ist.
9. Verfahren nach Anspruch 7, worin die Variation in der amplifizierten DNA-Sequenz eine Änderung im Vorhandensein zumindest einer Restriktionsstelle in der primerdefinierten amplifizierten DNA-Sequenz ist.
10. Verfahren nach Anspruch 7, worin die Variation in der amplifizierten DNA-Sequenz eine Änderung in der Position zumindest einer Restriktionsstelle in der primerdefinierten amplifizierten DNA-Sequenz ist.
11. Verfahren nach Anspruch 7, worin die Variation in der amplifizierten DNA-Sequenz eine Substitution von zumindest einem Nukleotid in der primer-definierten amplifizierten DNA-Sequenz ist.
12. Verfahren nach Anspruch 7, worin der genetische Lokus ein Haupt- Histokompatibilitätslokus ist.
13. Verfahren nach Anspruch 7, worin das Allel mit einer monogenen Erkrankung assoziiert ist.
14. Verfahren nach Anspruch 13, worin die monogene Erkrankung zystische Fibrose ist.
15. Verfahren nach Anspruch 7, worin zumindest etwa 70% der primer-definierten amplifizierten DNA-Sequenz Nicht-Kodierbereichsequenzen entsprechen.
16. Verfahren nach Anspruch 7, worin die primer-definierte amplifizierte DNA-Sequenz eine Länge von 300 bis 500 Nukleotiden aufweist.
17. Verfahren zur Herstellung von RFLP-Fragmenten, die für Allele eines HLA-Lokus eines Individuums charakteristisch sind, das folgende Schritte umfaßt:
a) das Amplifizieren genomischer HLA-DNA vom Individuum mit einem Primerpaar, das für den HLA-Lokus spezifisch ist und sich unter Bedingungen, die zur Herstellung einer amplifizierten DNA-Sequenz geeignet sind, über eine Nicht-Kodierbereichsequenz erstreckt; und
b) das Herstellen eines Digests durch Kombinieren der amplifizierten DNA-Sequenz mit zumindest einer Endonuklease, die die amplifizierte DNA-Sequenz spaltet, sodaß ein Satz von Fragmenten mit charakteristischen Fragmentlän gen entsteht.
18. Verfahren nach Anspruch 17, das zusätzlich den Schritt der Herstellung von RFLP- Mustern aus dem Digest umfaßt.
19. Verfahren nach Anspruch 17, worin die Primer eine DNA-Sequenz definieren, die alle Exons enthält, die für die mit dem HLA-Lokus assoziierte Allelvariabilität kodieren.
20. Verfahren zur Herstellung von RFLP-Fragmenten für einen HLA-Lokus eines Individuums, das folgende Schritte umfaßt:
a) das Amplifizieren genomischer HLA-DNA vom Individuum mit einem Primerpaar, das für den HLA-Lokus spezifisch ist und das sich unter zur Herstellung einer amplifizierten DNA-Sequenz geeigneten Bedingungen über eine Nicht- Kodierbereichsequenz erstreckt, wobei die Primer eine DNA-Sequenz definieren, die alle Exons enthält, die für die mit dem HLA-Lokus assoziierte Allelvariabilität kodieren; und
b) die Herstellung eines Digests durch Kombinieren der amplifizierten DNA-Sequenz mit zumindest einer Endonuklease, die die amplifizierte DNA-Sequenz spaltet, sodaß ein Satz von Fragmenten mit charakteristischen Fragmentlängen ensteht.
21. Verfahren zur Herstellung von RFLP-Mustern für einen HLA-Lokus eines Individuums, das folgende Schritte umfaßt:
a) das Amplifizieren der HLA-DNA vom Individuum mit einem Primerpaar, das für den HLA-Lokus spezifisch ist und das sich unter zur Herstellung einer amplifizierten DNA- Sequenz geeigneten Bedingungen über eine Nicht-Kodierbereichsequenz erstreckt, wobei sich die Primer in der intervenierenden Sequenz I und der intervenierenden Sequenz III befinden, wenn der HLA-Lokus ein Klasse I-Lokus ist, und in der intervenierenden Sequenz I und der intervenierenden Sequenz II, wenn der Lokus ein Klasse II-Lokus ist;
b) die Herstellung eines Digests durch Kombinieren der amplifizierten DNA-sequenz mit zumindest einer Endonuklease, die die amplifizierte DNA-Sequenz spaltet, sodaß ein Satz von Fragmenten mit charakteristischen Fragmentlängen entsteht; und
c) die Herstellung von RFLP-Mustern aus dem Digest.
22. Verfahren nach Anspruch 21, worin die Amplifizierung umfaßt:
a) das Kombinieren eines HLA-Lokus-spezifischen Primerpaares mit HLA-DNA vom Individuum unter Hybridisierungsbedingungen für eine ausreichende Zeitspanne, damit jeder Primer im Primerpaar ein Extensionsprodukt erzeugt, das, wenn es von seinem Komplement getrennt wird, als Schablone für die Synthese des Extensionsproduktes des anderen Primers dienen kann, um ein Gemisch herzustellen;
b) die Behandlung des Gemisches unter denaturierenden Bedingungen, um die Primer von ihren Extensionsprodukten abzutrennen;
c) die Behandlung des Gemisches mit dem HLA-Lokus-spezifischen Primerpaar, sodaß ein Primerextensionsprodukt synthetisiert wird, wobei jede der in Schritt (b) hergestellten Schablonen als Schablone verwendet wird, was zur Amplifizierung der HLA-DNA führt; und
d) die Wiederholung der Schritte (b) und (c), um eine amplifizierte DNA-Sequenz herzustellen.
23. Verfahren nach Anspruch 21, worin ein zweites Primerpaar, das für den HLA-Lokus spezifisch ist, ebenfalls verwendet wird, um die HLA-DNA zu amplifizieren.
24. Verfahren nach Anspruch 21, worin die Herstellung des RFLP-Fragmentmusters umfaßt:
a) das Kombinieren der amplifizierten DNA-Sequenz mit zumindest einer Endonuklease, die die amplifizierte DNA-Sequenz spaltet, sodaß ein Satz von Fragmenten mit charakteristischen Fragmentlängen entsteht;
b) das Trennen der Fragmente auf Basis der Fragmentlänge, um getrennte Fragmente herzustellen; und
c) das Sichtbarmachen der getrennten Fragmente, um RFLP-Fragmentmuster zu erzeugen.
25. Verfahren nach Anspruch 24, worin die Fragmente unter Einsatz von Gelelektrophorese getrennt und unter Verwendung einer Nukleotid-spezifischen Färbung sichtbar gemacht werden.
26. Verfahren, um zu ermitteln, ob DNA in einr Probe, von einem bestimmten Individuum stammt, das folgende Schritte umfaßt:
a) das Amplifizieren von DNA vom Individuum und von DNA von der Probe mit einem Primerpaar, das für einen HLA-Lokus spezifisch ist und das sich unter Bedingungen, die geeignet sind, um eine amplifizierte DNA-Sequenz vom Individuum und von der Probe herzustellen, über eine Nicht-Kodierbereichsequenz erstreckt, wobei sich die Primer bei einem HLA-Klasse I-Lokus in den intervenierenden Sequenzen I und III und bei einem Klasse II-Lokus in den intervenierenden Sequenzen I und II befinden;
b) das Kombinieren der amplifizierten DNA-Sequenz vom Individuum und der amplifizierten Proben-DNA von der Probe mit zumindest einer Endonuklease, die die amplifizierte DNA-Sequenz in eine Vielzahl Spaltsequenzen mit ausreichend unterschiedlichen Längen spaltet, um zwischen Allelen des HLA-Lokus zu unterscheiden, für eine Zeitspanne, die ausreicht, daß die amplifizierte DNA unter Erhalt eines Digests gespalten wird; und
c) das Vergleichen der vom Digest erzeugten polymorphen Restriktionsfragmentlängenmuster vom Individuum und von der Probe.
27. Verfahren, um zu ermitteln, ob ein Individuum der Vater eines Kindes ist, folgende Schritte umfassend:
a) das Amplifizieren von DNA vom Individuum, von DNA vom Kind und von DNA von der Mutter des Kindes mit einem Primerpaar, das für einen HLA-Lokus spezifisch sind und sich unter Bedingungen, die geeignet sind, um amplifizierte DNA-Sequenzen zu erzeugen, über eine Nicht-Kodierbereichsequenz erstrecken, wobei sich die Primer bei einem HLA-Klasse I-Lokus in den intervenierenden Sequenzen I und III und bei einem Klasse II-Lokus in den intervenierenden Sequenzen I und II befinden;
b) das Kombinieren der amplifizierten DNA-Sequenz vom Individuum und der amplifizierten Proben-DNA vom Kind mit zumindest einer Endonuklease, die die amplifizierte DNA-Sequenz in eine Vielzahl Spaltsequenen mit ausreichend unterschiedlichen Längen spaltet, um zwischen Allelen des HLA-Lokus zu unterscheiden, um einen Digest zu erzeugen; und
c) das Vergleichen von polymorphen Restriktionsfragmentlängenmustern, die vom Digest vom Individuum, von der Mutter des Kindes und vom Kind erzeugt werden.
28. Verfahren, das die Herstellung eines HLA-Lokus-spezifischen Primers umfaßt, der aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus einem Klasse I-Lokus-spezifischen Primer, einem Klasse I-A-Lokus-spezifischen Primer, einem Klasse I-B-Lokus-spezifischen Primer und einem Klasse I-C-Lokus-spezifischen Primer besteht.
29. HLA-Lokus-spezifischer Primer nach Anspruch 28, worin der Primer eine Sequenz aufweist, die zumindest 15 aufeinanderfolgenden Nukleotiden entspricht, die aus der Gruppe ausgewählt sind, bestehend aus:
30. Verfahren, welches die Herstellung eines HLA-Klasse I-Lokus-spezifischen Primerpaares umfaßt, wobei das Primerpaar eine DNA-Sequenz definiert, die sich in genetischer Verbindung mit dem HLA-Klasse I-Lokus befindet und eine ausreichende Anzahl an Nicht-Kodierbereichsequenznukleotiden enthält, um eine amplifizierte DNA- Sequenz herzustellen, die für ein Allel des HLA-Klasse I-Lokus charakteristisch ist.
31. Verfahren, welches die Herstellung eines HLA-Klasse II-Lokus-spezifischen Primerpaares umfaßt, wobei das Primerpaar eine DNA-Sequenz definiert, die sich in genetischer Verbindung mit dem HLA-Klasse II-Lokus befindet und eine ausreichende Anzahl an Nicht-Kodierbereichsequenznukleotiden enthält, um eine amplifizierte DNA- Sequenz herzustellen, die für ein Allel des HLA-Klasse II-Lokus charakteristisch ist.
32. Verfahren, welches die Herstellung einer von einem HLA-Lokus-spezifischen Primerpaar definierten DNA-Sequenz umfaßt, wobei sich die DNA-Sequenz in genetischer Verbindung mit dem HLA-Lokus befindet und eine ausreichende Anzahl an Nicht-Kodierbereichsequenznukleotiden enthält, um eine amplifizierte DNA-Sequenz herzustellen, die für ein Allel des Lokus charakteristisch ist.
33. Set, das zumindest ein HLA-Lokus-spezifisches Primerpaar in einem geeigneten Behälter umfaßt, worin das HLA-Lokus-spezifische Primerpaar aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus einem HLA-Klasse I-Lokus-spezifischen Primerpaar und einem HLA-Klasse II-Lokus-spezifischen Primerpaar besteht, wobei das Primerpaar eine DNA- Sequenz definiert, die sich in genetischer Verbindung mit Nicht- Kodierbereichsequenznukleotiden befindet, um eine amplifizierte DNA-Sequenz zu erzeugen, die für ein Allel des HLA-Klasse I-Lokus charakteristisch ist.
34. Set nach Anspruch 33, das zusätzlich zumindest eine Endonuklease umfaßt, die eine vom HLA-Lokus-spezifischen Primerpaar definierte DNA-Sequenz in eine Vielzahl Spaltsequenzen mit ausreichend unterschiedlichen Längen spaltet, um zwischen den Allelen des HLA-Lokus zu unterscheiden.
35. Verfahren nach Anspruch 1, worin der genetische Lokus zumindest 4 Allele aufweist.
36. Verfahren nach Anspruch 1, worin der genetische Lokus zumindest 8 Allele aufweist.
37. Verbessertes DNA-Analyseverfahren, in dem Kodierbereichallele eines Multiallel- Genlokus durch Identifizierung der für die Allele charakteristischen Sequenzpolymorphismen bestimmt werden, wobei die Verbesserung das Identifizieren von Sequenzpolymorphismen, die für die Allele in einer Nicht-Kodierbereichsequenz charakteristisch sind, umfaßt, wobei die Nicht-Kodierbereichsequenz eine Länge von nicht mehr als etwa 2 kb aufweist.
38. Verfahren nach Anspruch 37, worin die Nicht-Kodierbereichsequenz eine Länge von nicht mehr als etwa 1 kb aufweist.
39. Verfahren nach Anspruch 37, worin sich die für die Allele charakteristischen Sequenzpolymorphismen innerhalb von 5 kb eines variablen Exons des Genlokus befinden.
40. Verfahren nach Anspruch 37, worin sich die für die Allele charakteristischen Sequenzpolymorphismen innerhalb von 2 kb eines variablen Exon des Genlokus befinden.
41. Verfahren nach Anspruch 37, worin der für das Kodierbereich-Allel charakteristische Sequenzpolymorphismus in einer intervenierenden Sequenz, die an ein variables Exon des Lokus angrenzt, vorhanden ist.
42. Verfahren nach Anspruch 41, worin der Genlokus ein HLA-Klasse I-Lokus ist und die intervenierende Sequenz die intervenierende Sequenz 1, 2, 3 oder 4 ist.
43. Verfahren nach Anspruch 41, worin der Genlokus ein HLA-Klasse II-Lokus ist und die intervenierende Sequenz eine intervenierende Sequenz 1 oder 2 ist.
DE69029018T 1989-08-25 1990-08-20 Verfahren zum Nachweis von benachbarten und entfernt lokalisierten Allelen als Haplotypen mittels Intronsequenzanalyse Expired - Lifetime DE69029018T2 (de)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US39821789A 1989-08-25 1989-08-25
US40549989A 1989-09-11 1989-09-11
US46586390A 1990-01-16 1990-01-16
US07/551,239 US5192659A (en) 1989-08-25 1990-07-11 Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE69029018D1 DE69029018D1 (de) 1996-12-05
DE69029018T2 true DE69029018T2 (de) 1997-05-22

Family

ID=27503418

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE69029018T Expired - Lifetime DE69029018T2 (de) 1989-08-25 1990-08-20 Verfahren zum Nachweis von benachbarten und entfernt lokalisierten Allelen als Haplotypen mittels Intronsequenzanalyse

Country Status (17)

Country Link
US (4) US5192659A (de)
EP (1) EP0414469B1 (de)
JP (2) JP3206812B2 (de)
KR (1) KR910004814A (de)
AT (1) ATE144797T1 (de)
AU (2) AU654111B2 (de)
CA (1) CA2023888C (de)
DD (1) DD299319A5 (de)
DE (1) DE69029018T2 (de)
DK (1) DK0414469T3 (de)
ES (1) ES2095859T3 (de)
FI (1) FI904200A7 (de)
GR (1) GR3022410T3 (de)
HK (1) HK1008053A1 (de)
IL (1) IL95467A (de)
NZ (1) NZ235051A (de)
SG (1) SG47747A1 (de)

Families Citing this family (1158)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5192659A (en) * 1989-08-25 1993-03-09 Genetype Ag Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes
US20040197775A1 (en) * 1989-08-25 2004-10-07 Genetype A.G. Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes
IL98793A (en) * 1990-07-11 1995-10-31 Genetype Ag Genomic mapping method by direct haplotyping using intron sequence variations
NL9002259A (nl) * 1990-10-17 1992-05-18 Eurodiagnostics B V Werkwijze voor het bepalen van een genotype door het vergelijken van de nucleotidensequentie van leden van een genfamilie, alsmede kit voor het opsporen van genetische variaties.
GB9024005D0 (en) * 1990-11-05 1990-12-19 British Bio Technology Process for amplifying nucleic acid
CA2105585A1 (en) * 1991-03-06 1992-09-07 Pedro Santamaria Dna sequence-based hla typing method
US5424184A (en) * 1991-05-08 1995-06-13 Regents Of The University Of Minnesota DNA sequence-based HLA class I typing method
CA2081582A1 (en) * 1991-11-05 1993-05-06 Teodorica Bugawan Methods and reagents for hla class i dna typing
IL103935A0 (en) * 1991-12-04 1993-05-13 Du Pont Method for the identification of microorganisms by the utilization of directed and arbitrary dna amplification
US6110742A (en) * 1992-04-15 2000-08-29 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Synthetic antisense oligodeoxynucleotides targeted to AChE
EP0575845A3 (de) * 1992-06-23 1998-01-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Verfahren für Charakterisierung von HLA-DP
GB9301453D0 (en) * 1993-01-26 1993-03-17 Clonit Spa Nucleotide proves
CA2185902A1 (en) * 1994-03-18 1995-09-28 Federick Ausubel Cleaved amplified rflp detection methods
US6110709A (en) * 1994-03-18 2000-08-29 The General Hospital Corporation Cleaved amplified modified polymorphic sequence detection methods
US5599666A (en) * 1994-03-28 1997-02-04 Promega Corporation Allelic ladders for short tandem repeat loci
US5976798A (en) * 1994-03-30 1999-11-02 Mitokor Methods for detecting mitochondrial mutations diagnostic for Alzheimer's disease and methods for determining heteroplasmy of mitochondrial nucleic acid
US6027883A (en) * 1994-03-30 2000-02-22 Mitokor Optimal procedure for isolation of mutant mitochondrial alleles
WO1995034640A1 (en) * 1994-06-13 1995-12-21 Henry Ford Health System A novel neuronal-neonatal gene: neuronatin
US6479235B1 (en) 1994-09-30 2002-11-12 Promega Corporation Multiplex amplification of short tandem repeat loci
US7008771B1 (en) 1994-09-30 2006-03-07 Promega Corporation Multiplex amplification of short tandem repeat loci
CA2118048C (en) * 1994-09-30 2003-04-08 James W. Schumm Multiplex amplification of short tandem repeat loci
US5843660A (en) * 1994-09-30 1998-12-01 Promega Corporation Multiplex amplification of short tandem repeat loci
US5545539A (en) * 1994-10-18 1996-08-13 Genzyme Corporation Method for nucleotide sequence amplification
EP0708178A1 (de) * 1994-10-19 1996-04-24 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Motoneuronlebenserhaltungsgen: ein Gen für spinale Muskelatrophie
US6309843B1 (en) 1994-10-25 2001-10-30 The Curators Of The University Of Missouri Glycoprotein for use in determining endometrial receptivity
US20030152909A1 (en) * 1994-11-16 2003-08-14 Mitrani Eduardo N. In vitro micro-organs, and uses related thereto
US5908749A (en) * 1995-02-17 1999-06-01 Tge Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for high resolution HLA typing
US20120160687A1 (en) 1995-03-17 2012-06-28 President And Fellows Of Harvard College Characterization of individual polymer molecules based on monomer-interface interactions
US6362002B1 (en) * 1995-03-17 2002-03-26 President And Fellows Of Harvard College Characterization of individual polymer molecules based on monomer-interface interactions
US6653134B2 (en) * 1995-03-28 2003-11-25 Cp Hahnemann University Isolated stromal cells for use in the treatment of diseases of the central nervous system
US5777093A (en) 1995-05-16 1998-07-07 Ramot-University Authority For Applied Research & Industrial Development Ltd. cDNAs associated with ataxia-telangiectasia
KR19990044317A (ko) * 1995-09-01 1999-06-25 라미 핀클러 ; 하나넬 크바탄스키 아밀포스파타제2Ｃ - ＰＰ 2Ｃα-발현의 조작 및 검출
DE69610933T2 (de) * 1996-02-20 2001-05-23 The Perkin Elmer Corp., Foster City Verfahren und reagenzien zur typisierung von hla-genen der klasse i
US5811239A (en) * 1996-05-13 1998-09-22 Frayne Consultants Method for single base-pair DNA sequence variation detection
US6156512A (en) * 1996-05-23 2000-12-05 Promega Corp Allelic ladders for short tandem repeat loci
FR2749308B1 (fr) * 1996-06-03 1998-07-24 Bio Merieux Sondes nucleotidiques et procede pour determiner le typage hla dqb1
CA2274985C (en) * 1996-12-12 2010-08-24 Hermona Soreq Synthetic antisense oligodeoxynucleotides targeted to human acetylcholinesterase
CA2274737A1 (en) * 1996-12-12 1998-06-18 Visible Genetics, Inc. Method and kit for hla class i typing
US6524795B1 (en) 1997-03-10 2003-02-25 Interleukin Genetics, Inc. Diagnostics for cardiovascular disorders
US6143496A (en) * 1997-04-17 2000-11-07 Cytonix Corporation Method of sampling, amplifying and quantifying segment of nucleic acid, polymerase chain reaction assembly having nanoliter-sized sample chambers, and method of filling assembly
US7973156B2 (en) * 1997-08-21 2011-07-05 Quark Pharmaceuticals Inc. Hypoxia-regulated genes
EP1015471A1 (de) 1997-08-21 2000-07-05 Quark Biotech, Inc. Hypoxieregulierte gene
US20030104973A1 (en) * 1997-08-21 2003-06-05 Quark Biotech, Inc. Hypoxia-regulated genes
US6284496B1 (en) 1997-10-03 2001-09-04 University Of South Florida DNA vector for determining the presence of out-of-reading-frame mutations
AUPP012097A0 (en) * 1997-10-30 1997-11-27 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Assessing lipid metabolism
US7687057B2 (en) 1998-01-09 2010-03-30 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem In vitro micro-organs, and uses related thereto
US20010055809A1 (en) * 1998-01-30 2001-12-27 Harpal S. Mangat Extending tissue preservation
BR9907990A (pt) 1998-01-30 2000-10-24 Genesense Technologies Inc Sequência de oligonucleotideos complementares aos genes tiorredoxina ou tiorredoxina reductase e métodos de utilização dos mesmos para modular o crescimento de células
EP0953650A1 (de) 1998-04-20 1999-11-03 Innogenetics N.V. Verfahren für die HLA Typisierung
US6733967B1 (en) 1998-04-21 2004-05-11 Interleukin Genetics, Inc. Fetal testing for prediction of low birth weight
US20080206206A1 (en) 1998-05-07 2008-08-28 University Of South Florida Bone marrow-derived neuronal cells
US6759192B1 (en) * 1998-06-05 2004-07-06 Genset S.A. Polymorphic markers of prostate carcinoma tumor antigen-1(PCTA-1)
US6344443B1 (en) 1998-07-08 2002-02-05 University Of South Florida Peptide antagonists of tumor necrosis factor alpha
US7605149B1 (en) 1998-07-13 2009-10-20 University Of South Florida Modulation of the phospholipase A2 pathway as a therapeutic
US7002003B1 (en) 1998-07-30 2006-02-21 University Of South Florida Method for the inhibition of function of STAT transcription factors
US6703228B1 (en) 1998-09-25 2004-03-09 Massachusetts Institute Of Technology Methods and products related to genotyping and DNA analysis
EP1001037A3 (de) * 1998-09-28 2003-10-01 Whitehead Institute For Biomedical Research Vorselektion und Isolierung eines Einzelnukleotidpolymorphismus
US6242223B1 (en) * 1998-09-28 2001-06-05 Creighton University Primers for use in detecting beta-lactamases
IL142094A0 (en) * 1998-09-29 2002-03-10 Gamida Cell Ltd Methods of controlling proliferation and differentiation of stem and progenitor cells
US6565727B1 (en) * 1999-01-25 2003-05-20 Nanolytics, Inc. Actuators for microfluidics without moving parts
US20040235107A1 (en) * 1999-01-29 2004-11-25 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Biosynthesis of TA antibiotic
EP1026248A3 (de) 1999-01-29 2002-09-18 RAMOT UNIVERSITY AUTHORITY FOR APPLIED RESEARCH & INDUSTRIAL DEVELOPMENT LTD. Gencluster
BR0009403A (pt) * 1999-02-04 2001-11-27 Technion Res & Dev Foundation Método de expansão/conservação das células detronco hemopoiéticas indiferenciadas ou dascélulas progenitoras, método de preparação deum meio condicionado de célula estomacal útil naexpansão/conservação das células de troncohemopoiéticas indiferenciadas ou das célulasprogenitoras, método de transplante de célulasde tronco hemopoiéticas indiferenciadas ou decélulas progenitoras em um recipiente, tampão debiorreator e biorreator
EP1173610B1 (de) * 1999-04-09 2010-08-25 Innogenetics N.V. Methode zur amplifizierung von hla klasse i allelen
CA2373808C (en) * 1999-05-14 2011-04-19 Henry Ford Health System Bone marrow transplantation for treatment of central nervous system damage
US8017112B2 (en) 1999-05-14 2011-09-13 Henry Ford Health System Transplantation of bone marrow stromal cells for treatment of neurodegenerative diseases
US20050169896A1 (en) * 1999-05-14 2005-08-04 Henry Ford Health System Bone marrow transplantation for treatment of stroke
US20070160615A1 (en) * 1999-06-01 2007-07-12 Jun Tan Methods and compounds for disruption of CD40R/CD40L signaling in the treatment of Alzheimer's disease
US6787318B1 (en) * 1999-06-01 2004-09-07 Roskamp Research Institute, Llc Assay for evaluating the therapeutic effectiveness of agents in reducing Alzheimer's disease pathology
US7534605B2 (en) * 1999-06-08 2009-05-19 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem CD44 polypeptides, polynucleotides encoding same, antibodies directed thereagainst and method of using same for diagnosing and treating inflammatory diseases
US7655423B2 (en) * 1999-06-14 2010-02-02 Henry Ford Health System Nitric oxide donors for inducing neurogenesis
US7135498B1 (en) 1999-06-14 2006-11-14 Henry Ford Health System Nitric oxide donors for inducing neurogenesis
ATE408402T1 (de) * 1999-06-14 2008-10-15 Ford Henry Health System Stickstoffmonoxid-donoren zum induzieren von neurogenese
EP1192453B1 (de) 1999-06-22 2012-02-15 President and Fellows of Harvard College Bestimmung von biopolymeren entsprechend der molekularen oder atomaren skala
DE1233365T1 (de) * 1999-06-25 2003-03-20 Genaissance Pharmaceuticals Inc., New Haven Verfahren zur herstellung und verwendung von Haplotype Daten
WO2001000859A1 (en) * 1999-06-25 2001-01-04 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Method of inducing angiogenesis by micro-organs
US7058517B1 (en) 1999-06-25 2006-06-06 Genaissance Pharmaceuticals, Inc. Methods for obtaining and using haplotype data
AU784224B2 (en) 1999-06-30 2006-02-23 Interleukin Genetics, Inc. Diagnostics and therapeutics for diseases associated with an IL-1 inflammatory haplotype
US6875582B1 (en) 1999-08-19 2005-04-05 Omniscience Pharmaceuticals, Inc. Methods and targets of antibiotic resistance
US6998232B1 (en) 1999-09-27 2006-02-14 Quark Biotech, Inc. Methods of diagnosing bladder cancer
WO2001048243A1 (en) * 1999-12-27 2001-07-05 Yale University Identification of hla class i polymorphisms
US6544506B2 (en) 2000-01-05 2003-04-08 Yeda Research & Development Co. Ltd. Veto cells effective in preventing graft rejection and devoid of graft versus host potential
US7385106B2 (en) * 2000-01-24 2008-06-10 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Plants tolerant of environmental stress conditions, methods of generating same and novel polynucleotide sequence utilized thereby
EP1294748B1 (de) 2000-03-27 2010-06-30 Technion Research and Development of Foundation, Ltd. Einkettige haupthistokompatibilitätskomplexe der klasse i (mhc-i), kodierende konstrukte und methoden ihrer erzeugung
AU2001253091A1 (en) * 2000-04-03 2001-10-15 Genaissance Pharmaceuticals, Inc. Haplotypes of the gp1ba gene
US6844154B2 (en) * 2000-04-04 2005-01-18 Polygenyx, Inc. High throughput methods for haplotyping
AU2001253366A1 (en) * 2000-04-10 2001-10-23 Genaissance Pharmaceuticals, Inc. Haplotypes of the slc5a3 gene
WO2001079223A2 (en) * 2000-04-12 2001-10-25 Genaissance Pharmaceuticals, Inc. Haplotypes of the akr1b1 gene
WO2001079240A2 (en) * 2000-04-17 2001-10-25 Genaissance Pharmaceuticals, Inc. Haplotypes of the rangap1 gene
AU2001255404A1 (en) * 2000-04-17 2001-10-30 Genaissance Pharmaceuticals, Inc. Haplotypes of the dnal4 gene
IL135884A (en) * 2000-04-30 2005-08-31 Yissum Res Dev Co Method for measuring non-transferrin bound iron
US7659054B1 (en) 2000-05-23 2010-02-09 Nuvelo, Inc. Methods for genetic analysis of DNA to detect sequence variances
US7435541B2 (en) * 2000-05-23 2008-10-14 Sequenom, Inc. Restriction enzyme genotyping
US6931326B1 (en) 2000-06-26 2005-08-16 Genaissance Pharmaceuticals, Inc. Methods for obtaining and using haplotype data
HUP0300810A2 (hu) 2000-07-20 2003-08-28 M.G.V.S. Ltd. Mesterséges értranszplantátum, valamint ennek létrehozása és alkalmazása
US20040037828A1 (en) 2002-07-09 2004-02-26 Bar-Ilan University Methods and pharmaceutical compositions for healing wounds
US20030114410A1 (en) 2000-08-08 2003-06-19 Technion Research And Development Foundation Ltd. Pharmaceutical compositions and methods useful for modulating angiogenesis and inhibiting metastasis and tumor fibrosis
DK2078531T3 (da) 2000-08-08 2012-09-10 Technion Res & Dev Foundation Farmaceutiske sammensætninger og fremgangsmåder, der kan anvendes til modulering af angiogenese
EP1337670A4 (de) 2000-08-16 2004-07-14 Whatman Inc Transfusionsmedizinfiltriermittel zur abreicherung von leukozyten als quelle für genetisches material für genotypisierungsstudien
EP1683874A3 (de) 2000-08-29 2006-10-11 YEDA RESEARCH AND DEVELOPMENT Co. LTD. Verfahren zur Isolierung von Genen, die für Proteine mit spezifischer Funktion kodieren, und zur Auslese von pharmazeutisch aktiven Wirkstoffen
US7632522B2 (en) * 2000-09-28 2009-12-15 Nanocyte Inc. Use of stinging cells/capsules for the delivery of active agents to keratinous substances
US20070281037A9 (en) * 2000-09-28 2007-12-06 Nanocyte Inc. Sterile preparations and compositions including stinging capsules and methods of producing and using same
EP1379127B1 (de) * 2000-09-28 2013-04-17 Nanocyte Inc. Methoden, zusammensetzungen und vorrichtungen unter verwendung von stechzellen/kapseln zur abgabe eines therapeutischen mittels oder eines kosmetischen mittels in ein gewebe
US8071740B2 (en) 2000-11-17 2011-12-06 Vascular Biogenics Ltd. Promoters exhibiting endothelial cell specificity and methods of using same for regulation of angiogenesis
KR100917854B1 (ko) 2000-11-17 2009-09-18 바스큘라 바이오제닉스 리미티드 내피세포 특이성을 나타내는 프로모터 및 이를 이용하는방법
AU2002221013A1 (en) * 2000-11-30 2002-06-11 Yeda Research And Development Co..Ltd. Methods of utilizing cultured non-gvhd inducing t lymphocytes to treat disease
KR20040101889A (ko) * 2001-01-17 2004-12-03 라모트 앳 텔-아비브 유니버시티 리미티드 식충성 식물 유래의 키티나제, 이를 암호화하는폴리뉴클레오타이드 서열 및 이의 분리방법 및 사용방법
AU2002230061A1 (en) * 2001-01-31 2002-08-12 Tolaren Induction of tolerance by apoptotic and/or necrotic cells
US20050202098A1 (en) 2001-01-31 2005-09-15 Tolaren Disease therapy using dying or dead cells
US20030027135A1 (en) * 2001-03-02 2003-02-06 Ecker David J. Method for rapid detection and identification of bioagents
US20040121313A1 (en) * 2002-12-06 2004-06-24 Ecker David J. Methods for rapid detection and identification of bioagents in organs for transplantation
US7718354B2 (en) 2001-03-02 2010-05-18 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid identification of pathogens in humans and animals
US7226739B2 (en) 2001-03-02 2007-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc Methods for rapid detection and identification of bioagents in epidemiological and forensic investigations
US7666588B2 (en) * 2001-03-02 2010-02-23 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid forensic analysis of mitochondrial DNA and characterization of mitochondrial DNA heteroplasmy
CA2441594A1 (en) * 2001-03-22 2002-10-03 Scentgene Pollination Ltd. Method of enhancing entomophilous
JP3945993B2 (ja) * 2001-03-29 2007-07-18 富士通株式会社 半導体記憶装置
AUPR446801A0 (en) 2001-04-18 2001-05-17 University Of Queensland, The Novel compositions and uses therefor
US6770622B2 (en) 2001-06-08 2004-08-03 Gary A. Jarvis N-terminally truncated galectin-3 for use in treating cancer
US7125664B2 (en) * 2001-06-20 2006-10-24 Dahlia Minc-Golomb Method for identifying genes that are upstream regulators of other genes of interest
US20030104428A1 (en) * 2001-06-21 2003-06-05 President And Fellows Of Harvard College Method for characterization of nucleic acid molecules
US8073627B2 (en) * 2001-06-26 2011-12-06 Ibis Biosciences, Inc. System for indentification of pathogens
US7217510B2 (en) 2001-06-26 2007-05-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for providing bacterial bioagent characterizing information
WO2003008534A2 (en) * 2001-07-19 2003-01-30 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Polypeptides having carotenoids isomerase catalytic activity, nucleic acids encoding same and uses thereof
WO2003017817A2 (en) 2001-08-16 2003-03-06 Bar Ilan University Diagnosis, prevention and treatment of cancer
US20040136972A1 (en) 2001-09-07 2004-07-15 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of treating disease by transplantation of developing allogeneic or xenogeneic organs or tissues
EP1435977A4 (de) * 2001-09-19 2005-06-08 Ford Henry Health System Herztransplantation von stammzellen zur behandlung von herzinsuffizienz
EP2277887A3 (de) 2001-10-19 2011-02-16 Vascular Biogenics Ltd. Polynukleotidkonstrukte, pharmazeutische Zusammensetzungen und Verfahren zur gezielten Abwärtsregulation der Angiogenese und Therapie gegen Krebs
FR2831168B1 (fr) * 2001-10-22 2004-02-06 Rocher Yves Biolog Vegetale Procede d'obtention d'un extrait riche en acides nucleiques a partir d'une matiere vegetale
WO2003048298A2 (en) 2001-12-05 2003-06-12 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Nanoparticles containing polymeric nucleic acid homologs, pharmaceutical compositions and articles of manufacture containing same and methods of use thereof
US20040267458A1 (en) * 2001-12-21 2004-12-30 Judson Richard S. Methods for obtaining and using haplotype data
US20050085432A1 (en) * 2001-12-26 2005-04-21 Aviva Lapidot Methods of using conjugates of saccharides and acetamidino or guanidino compounds for treating bacterial infections
IL152904A0 (en) 2002-01-24 2003-06-24 Gamida Cell Ltd Utilization of retinoid and vitamin d receptor antagonists for expansion of renewable stem cell populations
WO2003062404A1 (en) * 2002-01-25 2003-07-31 Gamida-Cell Ltd. Methods of expanding stem and progenitor cells and expanded cell populations obtained thereby
US7781396B2 (en) * 2002-01-31 2010-08-24 Tel Aviv University Future Technology Development L.P. Peptides directed for diagnosis and treatment of amyloid-associated disease
US20040052928A1 (en) * 2002-09-06 2004-03-18 Ehud Gazit Peptides and methods using same for diagnosing and treating amyloid-associated diseases
US20030148288A1 (en) * 2002-02-01 2003-08-07 Yi-Wei Tang Colorimetric genetic test for clinically significant TNF polymorphism and methods of use thereof
US6992176B2 (en) 2002-02-13 2006-01-31 Technion Research & Development Foundation Ltd. Antibody having a T-cell receptor-like specificity, yet higher affinity, and the use of same in the detection and treatment of cancer, viral infection and autoimmune disease
AU2003214614B2 (en) * 2002-03-18 2008-11-20 Gamida-Cell Ltd. Methods of inducing differentiation in ex vivo expanded stem cells
US7611723B2 (en) * 2002-03-26 2009-11-03 Nanocyte Inc. Stinging cells expressing an exogenous polynucleotide encoding a therapeutic, diagnostic or a cosmetic agent and methods compositions and devices utilizing such stinging cells or capsules derived therefrom for delivering the therapeutic, diagnostic or cosmetic agent into a tissue
US20040121442A1 (en) * 2002-05-05 2004-06-24 Ilan Chet Fungal chitinase, polynucleotide sequences encoding same, promoters of same, and uses thereof
US20050221326A1 (en) * 2002-06-12 2005-10-06 Avi Orr-Urtreger Oligonucleotides antibodies and kits including same for treating prostate cancer and determining predisposition thereto
AU2003242967A1 (en) * 2002-07-12 2004-02-02 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Method and device for inducing biological processes by micro-organs
AU2003247143B2 (en) 2002-08-01 2009-07-16 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method and composition for protecting neuronal tissue from damage induced by elevated glutamate levels
EP1396962A1 (de) * 2002-08-05 2004-03-10 Sony International (Europe) GmbH Busdienstschnittstelle
AU2003275065A1 (en) * 2002-09-20 2004-04-08 Wayne State University Molecular targets of cancer and aging
US20040110205A1 (en) * 2002-09-23 2004-06-10 Hui Wang Methods and systems for nanopore data analysis
US7329545B2 (en) * 2002-09-24 2008-02-12 Duke University Methods for sampling a liquid flow
US6911132B2 (en) * 2002-09-24 2005-06-28 Duke University Apparatus for manipulating droplets by electrowetting-based techniques
US7267981B2 (en) 2002-10-07 2007-09-11 Technion Research & Development Foundation Ltd. Human foreskin fibroblasts for culturing ES cells
US20040146949A1 (en) * 2002-10-25 2004-07-29 Jun Tan Methods and compounds for disruption of CD40R/CD40L signaling in the treatment of alzheimer's disease
EP1578999B1 (de) 2002-10-30 2013-01-16 Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Verfahren zur messung von nichttransferringebundenem eisen
US20050054097A1 (en) * 2002-11-17 2005-03-10 Tony Peled EX-VIVO expansion of hematopoietic system cell populations in mononuclear cell cultures
AU2003302701A1 (en) * 2002-11-29 2004-06-23 Technion Research And Development Foundation Ltd. Method of dynamically culturing embryonic stem cells
EP1578399A4 (de) 2002-12-06 2007-11-28 Isis Pharmaceuticals Inc Verfahren für die rasche identifikation von pathogenen bei tier und mensch
US7491699B2 (en) * 2002-12-09 2009-02-17 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Peptide nanostructures and methods of generating and using the same
ES2536448T3 (es) 2002-12-12 2015-05-25 R.B.T. (Rakuto Bio Technologies) Ltd. Uso de lignina peroxidasa en el aclaramiento de piel y pelo
KR101156745B1 (ko) 2002-12-16 2012-06-15 테크니온 리서치 앤드 디벨롭먼트 파운데이션 리미티드 지지세포 비함유, 이종 비함유의 인간 배아줄기세포의 조제방법 및 이들을 사용하여 조제되는 줄기세포 배양물
US7511127B2 (en) 2002-12-31 2009-03-31 Cargill, Incorporated Compositions, methods and systems for inferring bovine breed
ATE546548T1 (de) 2003-01-02 2012-03-15 Rappaport Family Inst For Res Verfahren zur prognose des nutzens einer antioxidationshemmenden therapie zur vorbeugung von herz-kreislauf-erkrankungen bei hyperglykämischen patienten
EP2058275A1 (de) 2003-01-07 2009-05-13 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Peptidnanostrukturen mit einem verkapselten Fremdstoff und Verfahren zu ihrer Herstellung
EP1599598A4 (de) 2003-03-04 2007-08-08 Yeda Res & Dev Pon-polypeptide, diese codierende polynukleotide und zusammensetzungen und verfahren unter verwendung davon
US20050054103A1 (en) * 2003-03-07 2005-03-10 Tony Peled Expansion of renewable stem cell populations using modulators of PI 3-kinase
US8017113B2 (en) 2003-03-12 2011-09-13 Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences Compositions and methods for diagnosing and treating an inflammation
US20100022414A1 (en) 2008-07-18 2010-01-28 Raindance Technologies, Inc. Droplet Libraries
US7294701B2 (en) * 2003-04-02 2007-11-13 Technion Research & Development Foundation Ltd. Antibody fragment capable of modulating multidrug resistance and compositions and kits and methods using same
US7524938B2 (en) 2003-04-04 2009-04-28 Yeda Research And Development Co., Ltd. Antibodies and pharmaceutical compositions containing same useful for inhibiting activity of metalloproteins
CA2520023C (en) 2003-04-08 2013-02-05 Yeda Research And Development Co. Ltd Stem cells having increased sensitivity to sdf-1 and methods of generating and using same
FR2853551B1 (fr) 2003-04-09 2006-08-04 Lab Francais Du Fractionnement Formulation stabilisante pour compositions d'immunoglobulines g sous forme liquide et sous forme lyophilisee
US8046171B2 (en) * 2003-04-18 2011-10-25 Ibis Biosciences, Inc. Methods and apparatus for genetic evaluation
US8057993B2 (en) 2003-04-26 2011-11-15 Ibis Biosciences, Inc. Methods for identification of coronaviruses
US7964343B2 (en) * 2003-05-13 2011-06-21 Ibis Biosciences, Inc. Method for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture
US8158354B2 (en) * 2003-05-13 2012-04-17 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture
EP1625199B1 (de) 2003-05-22 2015-03-11 Evogene Ltd. Verfahren zur erhöhung der abiotischen stresstoleranz und/oder biomasse in pflanzen und damit erzeugte pflanzen
AU2005234725B2 (en) 2003-05-22 2012-02-23 Evogene Ltd. Methods of Increasing Abiotic Stress Tolerance and/or Biomass in Plants and Plants Generated Thereby
US7554007B2 (en) 2003-05-22 2009-06-30 Evogene Ltd. Methods of increasing abiotic stress tolerance and/or biomass in plants
US20050020499A1 (en) * 2003-05-27 2005-01-27 Bar Ilan University Methods of attenuating cocaine seeking behavior employing glial cell-derived neurotrophic factor (GDNF) and pharmaceutical compositions and articles of manufacture suited for use in practice of the method
US8129514B2 (en) * 2003-06-19 2012-03-06 Evogene Ltd. Nucleotide sequences for regulating gene expression in plant trichomes and constructs and methods utilizing same
EP1636333A4 (de) * 2003-06-19 2007-10-24 Evogene Ltd Nukleotidsequenzen zur regulation der genexpression in pflanzentrichomen sowie diese verwendende konstrukte und verfahren
KR101215821B1 (ko) 2003-06-30 2012-12-28 텔 아비브 유니버시티 퓨쳐 테크놀로지 디벨롭먼트 엘.피. 아밀로이드 관련 질환을 진단 및 처치하기 위한 펩타이드, 그것에 대한 항체, 및 그 사용방법
TWI372050B (en) 2003-07-03 2012-09-11 Astex Therapeutics Ltd (morpholin-4-ylmethyl-1h-benzimidazol-2-yl)-1h-pyrazoles
WO2005012256A1 (en) 2003-07-22 2005-02-10 Astex Therapeutics Limited 3, 4-disubstituted 1h-pyrazole compounds and their use as cyclin dependent kinases (cdk) and glycogen synthase kinase-3 (gsk-3) modulators
WO2005019417A2 (en) * 2003-08-14 2005-03-03 The Bio Balance Corporation Bacterial strains, compositions including same and probiotic use thereof
WO2005017025A2 (en) 2003-08-15 2005-02-24 The President And Fellows Of Harvard College Study of polymer molecules and conformations with a nanopore
US8546082B2 (en) 2003-09-11 2013-10-01 Ibis Biosciences, Inc. Methods for identification of sepsis-causing bacteria
US20060240412A1 (en) * 2003-09-11 2006-10-26 Hall Thomas A Compositions for use in identification of adenoviruses
US8394945B2 (en) * 2003-09-11 2013-03-12 Ibis Biosciences, Inc. Compositions for use in identification of bacteria
US20100035239A1 (en) * 2003-09-11 2010-02-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for use in identification of bacteria
US20080138808A1 (en) * 2003-09-11 2008-06-12 Hall Thomas A Methods for identification of sepsis-causing bacteria
US8097416B2 (en) 2003-09-11 2012-01-17 Ibis Biosciences, Inc. Methods for identification of sepsis-causing bacteria
US7517647B2 (en) * 2003-09-29 2009-04-14 New York University Genetic screen for bioactive peptides
WO2005031362A2 (en) 2003-10-02 2005-04-07 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Novel antibacterial agents and methods of identifying and utilizing same
IL158287A0 (en) 2003-10-07 2004-05-12 Yeda Res & Dev Antibodies to nik, their preparation and use
HRP20110397T1 (hr) 2003-10-07 2011-06-30 Yeda Research And Development Co. Antitijela za nik, njihovo dobivanje i upotreba
RU2006113588A (ru) * 2003-10-23 2006-08-10 Пфайзер Продактс Инк. (Us) Вакцина для периодонтального заболевания
WO2005040400A2 (en) * 2003-10-24 2005-05-06 Mmi Genomics, Inc. Methods and systems for inferring traits to manage non-beef livestock
EP1689786B1 (de) 2003-11-30 2014-05-14 Yeda Research And Development Co., Ltd. Verfahren und mittel zur immunmodulierung und verfahren zur identifizierung von immunmodulatoren
US8163895B2 (en) 2003-12-05 2012-04-24 Ibis Biosciences, Inc. Compositions for use in identification of orthopoxviruses
WO2005059100A2 (en) * 2003-12-12 2005-06-30 New York University Methods and compositions relating to cystatin c
US20100221233A1 (en) * 2003-12-15 2010-09-02 University Of South Florida Compositions and methods for enhancing neuroprotection via administration of stem cells and blood brain barrier permeabilizers
EP2289567A3 (de) 2003-12-22 2011-06-22 Regentis Biomaterials Ltd. Matrix aus natürlich vorkomendem vernetztem Protein
WO2005061463A1 (en) 2003-12-23 2005-07-07 Astex Therapeutics Limited Pyrazole derivatives as protein kinase modulators
US8007847B2 (en) * 2004-01-13 2011-08-30 Eytan Biderman Feeding formula appliance
US7423139B2 (en) * 2004-01-20 2008-09-09 Insight Biopharmaceuticals Ltd. High level expression of recombinant human erythropoietin having a modified 5′-UTR
US20060147946A1 (en) * 2004-01-27 2006-07-06 Pinchas Akiva Novel calcium channel variants and methods of use thereof
WO2005072057A2 (en) 2004-01-30 2005-08-11 Quark Biotech, Inc. Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of fibrotic conditions and other diseases
US7666592B2 (en) 2004-02-18 2010-02-23 Ibis Biosciences, Inc. Methods for concurrent identification and quantification of an unknown bioagent
US7456149B2 (en) 2004-03-02 2008-11-25 Acceleron Pharma, Inc. ALK7 and myostatin inhibitors and uses thereof
US8119336B2 (en) 2004-03-03 2012-02-21 Ibis Biosciences, Inc. Compositions for use in identification of alphaviruses
US8352031B2 (en) 2004-03-10 2013-01-08 Impulse Dynamics Nv Protein activity modification
WO2006028508A2 (en) 2004-03-23 2006-03-16 President And Fellows Of Harvard College Methods and apparatus for characterizing polynucleotides
US20050239889A1 (en) * 2004-04-26 2005-10-27 Jean Gosselin In vivo release of endogenous anti-microbial mediators by leukotriene B4 (LTB4) administration
EP2458619B1 (de) 2004-05-24 2017-08-02 Ibis Biosciences, Inc. Massenspektrometrie mit selektivem Ionfilter durch digitale Schwelle
US20050266411A1 (en) * 2004-05-25 2005-12-01 Hofstadler Steven A Methods for rapid forensic analysis of mitochondrial DNA
CN101948846A (zh) 2004-06-14 2011-01-19 伊沃基因有限公司 参与植物纤维发育的多核苷酸和多肽和使用它们的方法
US8680062B2 (en) 2004-07-06 2014-03-25 Deliversir Ltd. System for delivering therapeutic agents into living cells and cells nuclei
US7811753B2 (en) 2004-07-14 2010-10-12 Ibis Biosciences, Inc. Methods for repairing degraded DNA
US20090156471A1 (en) * 2004-07-15 2009-06-18 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Use of anti-amyloid agents for treating and typing pathogen infections
US20090181092A1 (en) * 2004-07-16 2009-07-16 Spinal Restoration, Inc. Methods for Treating Joints and Discs with a Carrier Matrix and Cells
EP1623996A1 (de) * 2004-08-06 2006-02-08 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Verbessertes Verfahren zur Auswahl eines Proteins von einer Bibliothek
US7585626B1 (en) 2004-08-19 2009-09-08 Quest Diagnostics Investments Incorporated Methods for nucleic acid amplification
WO2006030442A2 (en) * 2004-09-16 2006-03-23 Gamida-Cell Ltd. Methods of ex vivo progenitor and stem cell expansion by co-culture with mesenchymal cells
CA2580126C (en) 2004-09-28 2014-08-26 Quark Biotech, Inc. Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of alopecia, acute renal failure and other diseases
ATE479762T1 (de) 2004-09-29 2010-09-15 Collplant Ltd Kollagenproduzierende pflanzen sowie verfahren zu deren erzeugung und verwendung
US7968287B2 (en) 2004-10-08 2011-06-28 Medical Research Council Harvard University In vitro evolution in microfluidic systems
EP1809374A4 (de) * 2004-10-12 2008-09-10 Closed Loop Therapies Ltd Verfahren und implantate zur behandlung von supraventrikulärer arrhythmie
UY29177A1 (es) 2004-10-25 2006-05-31 Astex Therapeutics Ltd Derivados sustituidos de purina, purinona y deazapurina, composiciones que los contienen métodos para su preparación y sus usos
MY179032A (en) 2004-10-25 2020-10-26 Cancer Research Tech Ltd Ortho-condensed pyridine and pyrimidine derivatives (e.g.purines) as protein kinase inhibitors
GB0428082D0 (en) * 2004-12-22 2005-01-26 Welcome Trust The Ltd Therapeutic compounds
KR101334511B1 (ko) 2004-12-30 2013-11-29 아스텍스 테라퓨틱스 리미티드 Ｃｄｋ, ｇｓｋ 및 오로라 키나아제의 활성을 조절하는피라졸 화합물
US20080082678A1 (en) * 2005-01-16 2008-04-03 Zlango Ltd. Communications Network System and Methods for Using Same
EP1844403A4 (de) * 2005-01-16 2010-06-23 Zlango Ltd Bildzeichenkommunikation
WO2007080558A2 (en) * 2006-01-16 2007-07-19 Zlango Ltd. Communications network system and methods for using same
AU2006207321B2 (en) 2005-01-21 2012-09-06 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical compounds
US20090036435A1 (en) 2005-01-21 2009-02-05 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical Compounds
CA2594483C (en) 2005-01-28 2014-08-26 Duke University Apparatuses and methods for manipulating droplets on a printed circuit board
EP3028765B1 (de) 2005-01-31 2020-01-08 Realbio Technologies Ltd. Methode zum sequenziellen transferieren von flüssigkeiten durch eine querstromkapillarvorrichtung
WO2006090388A2 (en) 2005-02-25 2006-08-31 The State Of Israel, Ministry Of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization, (A.R.O.), Volcani Center Fruit cell culture extract for treating inflammation
CA2600184A1 (en) 2005-03-03 2006-09-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for use in identification of adventitious viruses
US8084207B2 (en) * 2005-03-03 2011-12-27 Ibis Bioscience, Inc. Compositions for use in identification of papillomavirus
WO2006109075A2 (en) 2005-04-13 2006-10-19 Astex Therapeutics Limited Hydroxybenzamide derivatives and their use as inhibitors of hsp90
US8834862B2 (en) * 2005-04-19 2014-09-16 Nanocyte Inc. Methods, compositions and devices utilizing stinging cells/capsules for conditioning a tissue prior to delivery of an active agent
JP2008543277A (ja) * 2005-05-11 2008-12-04 ジェネティック テクノロジーズ リミテッド 胎児細胞を富化する方法
EP1888034A2 (de) 2005-05-26 2008-02-20 Yissum Research Development Company, of The Hebrew University of Jerusalem Zusammensetzungen und diese verwendende verfahren zur abgabe von mitteln in ein zielorgan; geschützt durch eine blutbarriere
CN101243178A (zh) 2005-06-16 2008-08-13 特拉维夫大学拉莫特有限公司 用于治疗cns疾病的分离细胞和包含这种细胞的细胞群
US20070225242A1 (en) * 2005-06-21 2007-09-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method and composition for treating and preventing tumor metastasis in vivo
ES2435774T3 (es) * 2005-07-07 2013-12-23 Yissum Research Development Company, Of The Hebrew University Of Jerusalem Agentes de ácido nucleico para la regulación negativa de H19, y métodos de uso del mismo
JP5086254B2 (ja) 2005-07-07 2012-11-28 フルクルム エスピー リミテッド Ｓｐ１ポリペプチド、変性ｓｐ１ポリペプチドおよびそれらの使用
EP1904638A2 (de) 2005-07-18 2008-04-02 Metabogal Ltd. Mukosale oder enterale verabreichung biologisch aktiver makromoleküle
US8026084B2 (en) * 2005-07-21 2011-09-27 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid identification and quantitation of nucleic acid variants
WO2007023491A2 (en) 2005-08-24 2007-03-01 Yeda Research And Development Co. Ltd. Universal donor-derived tolerogenic cells for inducing non-syngeneic transplantation tolerance
LT1917276T (lt) 2005-08-26 2018-05-25 Ares Trading S.A. Glikozilinto interferono beta gavimo būdas
WO2007026353A2 (en) 2005-08-29 2007-03-08 Technion Research & Development Foundation Ltd. Media for culturing stem cells
WO2007034487A1 (en) 2005-09-22 2007-03-29 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Nucleic acid constructs, pharmaceutical compositions and methods of using same for treating cancer
US20070087437A1 (en) * 2005-10-14 2007-04-19 Jifan Hu Methods for rejuvenating cells in vitro and in vivo
RU2487166C2 (ru) 2005-10-24 2013-07-10 Эвоген Лтд Изолированные полипептиды, кодирующие их полинуклеотиды, экспрессирующие их трансгенные растения и способы их использования
CA2632288A1 (en) 2005-11-29 2007-06-07 Gamida-Cell Ltd. Methods of improving stem cell homing and engraftment
US8846393B2 (en) 2005-11-29 2014-09-30 Gamida-Cell Ltd. Methods of improving stem cell homing and engraftment
US20100137163A1 (en) 2006-01-11 2010-06-03 Link Darren R Microfluidic Devices and Methods of Use in The Formation and Control of Nanoreactors
WO2007080129A1 (en) 2006-01-13 2007-07-19 A Chan Holding B.V. Treatment and diagnosis of abnormal bone density with an inhibitor of the glypican-sclerostin interaction
EP1977312A2 (de) 2006-01-16 2008-10-08 Zlango Ltd. Bildzeichenkommunikation
US10221228B2 (en) 2006-02-03 2019-03-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8450269B2 (en) 2006-02-03 2013-05-28 Prolor Biotech Ltd. Long-acting growth hormone and methods of producing same
US20140113860A1 (en) 2006-02-03 2014-04-24 Prolor Biotech Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8048848B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Prolor Biotech Ltd. Long-acting interferons and derivatives thereof and methods thereof
US8946155B2 (en) 2006-02-03 2015-02-03 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US10351615B2 (en) 2006-02-03 2019-07-16 Opko Biologics Ltd. Methods of treatment with long-acting growth hormone
US8476234B2 (en) 2006-02-03 2013-07-02 Prolor Biotech Inc. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US20150038413A1 (en) 2006-02-03 2015-02-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
WO2007092252A2 (en) 2006-02-03 2007-08-16 Modigene Inc Long-acting polypeptides and methods of producing same
US8048849B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Modigene, Inc. Long-acting polypeptides and methods of producing same
US8759292B2 (en) 2006-02-03 2014-06-24 Prolor Biotech, Llc Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US9458444B2 (en) 2006-02-03 2016-10-04 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US9249407B2 (en) 2006-02-03 2016-02-02 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
CN101416063A (zh) 2006-02-06 2009-04-22 拉帕波特家族医学科学研究所 用于诊断t1dm的方法和试剂盒
US8343733B2 (en) 2006-03-06 2013-01-01 Zetiq Technologies Ltd. Methods and compositions for identifying a cell phenotype
AU2007228341B2 (en) 2006-03-23 2013-10-17 Pluri Biotech Ltd Methods for cell expansion and uses of cells and conditioned media produced thereby for therapy
US20090226909A1 (en) 2006-03-28 2009-09-10 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Methods and kits for Determining Predisposition to Warfarin Resistance
DK3719018T3 (da) 2006-04-25 2025-09-29 Astex Therapeutics Ltd Purin og deazapurinderivater som farmaceutiske forbindelser
US7951819B2 (en) 2006-04-26 2011-05-31 Cancer Research Technology Limited Imidazo[4, 5-B]pyridin-2-one and oxazolo[4, 5-B] pyridin-2-one compounds and analogs thereof as cancer therapeutic compounds
US9562837B2 (en) 2006-05-11 2017-02-07 Raindance Technologies, Inc. Systems for handling microfludic droplets
US20080014589A1 (en) 2006-05-11 2008-01-17 Link Darren R Microfluidic devices and methods of use thereof
US20070281883A1 (en) * 2006-06-05 2007-12-06 Hanna Rosenfeld Development of follicle stimulating hormone agonists and antagonists in fish
CN100526461C (zh) * 2006-07-10 2009-08-12 中国农业科学院棉花研究所 获得植物内含子序列扩增多态性的方法及其专用引物
WO2008010228A2 (en) 2006-07-20 2008-01-24 Yeda Research And Development Co. Ltd. Photosyntheticorganisms and compositions and methods of generating same
WO2008026198A2 (en) 2006-08-28 2008-03-06 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of generating glial and neuronal cells and use of same for the treatment of medical conditions of the cns
WO2008143627A2 (en) 2006-09-14 2008-11-27 Ibis Biosciences, Inc. Targeted whole genome amplification method for identification of pathogens
CN101595251B (zh) 2006-10-05 2014-06-11 技术研究及发展基金有限公司 微管及其制备方法
US7888059B2 (en) * 2006-10-05 2011-02-15 Yeda Research And Development Co. Ltd. Highly purified and stabilized Na,K-ATPase isoforms and methods of producing same
US20080260678A1 (en) * 2006-10-10 2008-10-23 University Of Colorado Molecular band-aid
WO2008044041A1 (en) 2006-10-12 2008-04-17 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
EP2073807A1 (de) 2006-10-12 2009-07-01 Astex Therapeutics Limited Pharmazeutische kombinationen
GB0620259D0 (en) 2006-10-12 2006-11-22 Astex Therapeutics Ltd Pharmaceutical compounds
JP2010507387A (ja) 2006-10-25 2010-03-11 クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド 新規のｓｉＲＮＡおよびその使用方法
US20080131887A1 (en) * 2006-11-30 2008-06-05 Stephan Dietrich A Genetic Analysis Systems and Methods
MX2009006660A (es) 2006-12-20 2009-08-20 Evogene Ltd Polinucleotidos y polipeptidos involucrados en el desarrollo de fibra vegetal y metodos de uso.
JP5442448B2 (ja) 2006-12-22 2014-03-12 アステックス、セラピューティックス、リミテッド Ｆｇｆｒインヒビターとしての二環式ヘテロ環式化合物
CA2672213C (en) 2006-12-22 2016-02-16 Astex Therapeutics Limited Bicyclic amine derivatives as protein tyrosine kinase inhibitors
EP2111449B1 (de) * 2007-01-16 2012-03-07 Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Nukleinsäurewirkstoffe zur stilllegung von h19 zwecks behandlung rheumatoider arthritis
WO2008093331A1 (en) * 2007-01-29 2008-08-07 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Antibody conjugates for circumventing multi-drug resistance
US8911996B2 (en) 2007-01-31 2014-12-16 Technion Research & Development Foundation Limited Electrospun scaffolds and methods of generating and using same
CA2676932C (en) 2007-02-01 2015-11-24 Technion Research & Development Foundation Ltd. Albumin fibers and fabrics and methods of generating and using same
US8772046B2 (en) 2007-02-06 2014-07-08 Brandeis University Manipulation of fluids and reactions in microfluidic systems
EP2126132B1 (de) * 2007-02-23 2013-03-20 Ibis Biosciences, Inc. Verfahren für schnelle forensische dna-analyse
ES2662036T3 (es) 2007-02-28 2018-04-05 Yeda Research And Development Company Limited Secuencias que se dirigen al núcleo
GB0704932D0 (en) 2007-03-14 2007-04-25 Astex Therapeutics Ltd Pharmaceutical compounds
US20100204266A1 (en) * 2007-03-23 2010-08-12 Ibis Biosciences, INC Compositions for use in identification of mixed populations of bioagents
EP2514766A3 (de) 2007-03-29 2013-06-05 Technion Research & Development Foundation Ltd. Antikörper, Verfahren und Kits zur Diagnose und Behandlung von Melanomen
BR122020016899B1 (pt) 2007-04-09 2021-06-22 Evogene Ltd Método para aumentar o teor de óleo, taxa de crescimento, biomassa, vigor e/ou rendimento de uma planta, e, construção de ácido nucleico isolado
EP2140030B1 (de) * 2007-04-10 2014-01-08 Stichting Biomedical Primate Research Centre Mittel und verfahren zur haplotypisierung von mhc-drb-loci in säugern und verwendungen davon
EP1980625A1 (de) * 2007-04-10 2008-10-15 Stichting Biomedical Primate Research Center Mittel und Verfahren zur Haplotypisierung von MHC-DRB-Loci bei Säugern und Verwendung dafür
WO2008130623A1 (en) 2007-04-19 2008-10-30 Brandeis University Manipulation of fluids, fluid components and reactions in microfluidic systems
JP2010524454A (ja) 2007-04-19 2010-07-22 モレキュラー ディテクション インコーポレーテッド 抗生物質耐性細菌の検出および分析のための方法、組成物、およびキット
PT2144633E (pt) * 2007-04-23 2014-10-27 Deliversir Ltd Um sistema para a administração de agentes terapêuticos em células vivas e núcleos de células
US9556210B2 (en) 2007-04-23 2017-01-31 Sabag-Rfa Ltd. System for delivering therapeutic agents into living cells and cells nuclei
US9156865B2 (en) 2007-04-23 2015-10-13 Deliversir Ltd System for delivering therapeutic agents into living cells and cells nuclei
WO2008132753A2 (en) 2007-05-01 2008-11-06 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Methods and kits for detecting fetal cells in the maternal blood
BRPI0810343B1 (pt) 2007-05-07 2021-03-30 Protalix Ltd Dispositivo descartável para o cultivo e colheita de tecidos vegetais e/ou células, método de cultivo e colheita de um tecido vegetal e/ou células vegetais em um volume maior do que 400 litros e sistema de cultivo da célula vegetal
WO2008151023A2 (en) 2007-06-01 2008-12-11 Ibis Biosciences, Inc. Methods and compositions for multiple displacement amplification of nucleic acids
JP5508258B2 (ja) 2007-06-04 2014-05-28 ベン グリオン ユニバーシティ オブ ザ ネガフ リサーチ アンド ディベロップメント オーソリティ トリアリール化合物および前記化合物を含む組成物
US20090004662A1 (en) 2007-06-18 2009-01-01 Applera Corporation Method and compositions for nucleic acid amplification
EP2500428A3 (de) 2007-07-11 2012-12-26 Yeda Research and Development Co. Ltd. Nucleinsäurekonstruktsysteme zur Diagnose oder Behandlung eines Zellzustands
WO2009010968A2 (en) 2007-07-15 2009-01-22 Yitzchak Hillman Disease treatment via antimicrobial peptides or their inhibitors
IL184627A0 (en) 2007-07-15 2008-12-29 Technion Res & Dev Foundation Agents for diagnosing and modulating metastasis and fibrosis as well as inflammation in a mammalian tissue
CA3019282C (en) 2007-07-24 2021-11-23 Evogene Ltd. Polynucleotides, polypeptides encoded thereby, and methods of using same for increasing abiotic stress tolerance and/or biomass and/or yield in plants expressing same
CN105622756B (zh) 2007-08-02 2020-07-28 吉利德生物制剂公司 Lox和loxl2抑制剂及其应用
WO2009021233A2 (en) * 2007-08-09 2009-02-12 Advanced Liquid Logic, Inc. Pcb droplet actuator fabrication
CN102083455B (zh) 2007-08-15 2015-01-07 耶达研究及发展有限公司 Mmp-9的调节剂及其用途
PL2192907T3 (pl) 2007-08-16 2018-10-31 Remedor Biomed Ltd. Kompozycje erytropoetyny i fibronektyny do zastosowań terapeutycznych
CN101855549A (zh) 2007-09-12 2010-10-06 耶达研究及发展有限公司 在免疫豁免部位内治疗肿瘤的方法
RU2010109698A (ru) 2007-09-19 2011-09-27 Плуристем Лтд. (Il) Адгезивные клетки жировой ткани или плаценты и их использование в лечебных целях
GB0720038D0 (en) 2007-10-12 2007-11-21 Astex Therapeutics Ltd New compounds
GB0720041D0 (en) 2007-10-12 2007-11-21 Astex Therapeutics Ltd New Compounds
US20100086914A1 (en) * 2008-10-03 2010-04-08 Roche Molecular Systems, Inc. High resolution, high throughput hla genotyping by clonal sequencing
CA2702655A1 (en) 2007-10-19 2009-04-23 Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences Compositions comprising semaphorins for the treatment of angiogenesis related diseases and methods of selection thereof
TW200930818A (en) 2007-10-30 2009-07-16 Applied Biosystems Method and kits for multiplex amplification of short tandem repeat loci
EP2599790A1 (de) 2007-11-26 2013-06-05 Yissum Research Development Company of The Hebrew University of Jerusalem Zusammensetzungen mit faserigen Polypeptiden und Polysacchariden
AU2008337286B2 (en) 2007-12-19 2014-08-07 Cancer Research Technology Limited Pyrido[2,3-b]pyrazine-8-substituted compounds and their use
US20110119791A1 (en) 2007-12-27 2011-05-19 Evogene Ltd. Isolated polypeptides, polynucleotides useful for modifying water user efficiency, fertilizer use efficiency, biotic/abiotic stress tolerance, yield and biomass in plants
US8185323B1 (en) 2008-01-06 2012-05-22 Degen Zhuo Method of identifying exons and introns and diagnostic uses thereof
GB0806527D0 (en) 2008-04-11 2008-05-14 Astex Therapeutics Ltd Pharmaceutical compounds
CA2721507C (en) 2008-04-18 2017-10-03 Collplant Ltd. Methods of generating and using procollagen
EP2936976A1 (de) 2008-04-21 2015-10-28 Danziger Innovations Ltd. Pflanzliche virale expressionsvektoren und verwendung davon zur erzeugung genotypischer variationen in pflanzengenomen
GB0807609D0 (en) * 2008-04-25 2008-06-04 Cancer Rec Tech Ltd Therapeutic compounds and their use
US8847008B2 (en) * 2008-05-22 2014-09-30 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant utility
US9393273B2 (en) 2008-05-27 2016-07-19 Pluristem Ltd. Methods of treating inflammatory colon diseases
DK2620493T3 (da) 2008-05-28 2019-07-01 Univ Ramot Mesenkymale stamceller til behandling af CNS-sygdomme
US8722348B2 (en) * 2008-05-28 2014-05-13 Wayne State University Method and composition for a protein transduction technology and its applications
US8431692B2 (en) 2008-06-06 2013-04-30 Quark Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treatment of ear disorders
GB0810902D0 (en) 2008-06-13 2008-07-23 Astex Therapeutics Ltd New compounds
WO2010033285A2 (en) 2008-06-26 2010-03-25 Spectrum Health Method for treating and preventing radiation damage using genetically modified mesenchymal stem cells
WO2009158563A1 (en) * 2008-06-26 2009-12-30 Spectrum Health Method for treating or preventing radiation damage by in vivo gene therapy
US9952211B2 (en) 2008-06-29 2018-04-24 Realbio Technologies Ltd. Liquid-transfer device particularly useful as a capturing device in a biological assay process
US12038438B2 (en) 2008-07-18 2024-07-16 Bio-Rad Laboratories, Inc. Enzyme quantification
US20120122800A1 (en) 2008-08-08 2012-05-17 Genisphere, LLC Hatfield, Pennsylvania Long-Acting DNA Dendrimers and Methods Thereof
AU2009279434A1 (en) * 2008-08-08 2010-02-11 Navigenics, Inc. Methods and systems for personalized action plans
BR122021014172B1 (pt) * 2008-08-18 2022-09-06 Evogene Ltd Método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa e/ou tolerância ao estresse de falta de nitrogênio de uma planta
SI2331547T1 (sl) 2008-08-22 2014-11-28 Novartis Ag Pirolopirimidinske spojine kot CDK inhibitorji
CN105708862B (zh) 2008-09-02 2020-11-06 普拉里斯坦有限公司 来自胎盘组织的粘附细胞及其在治疗中的用途
US8367392B2 (en) * 2008-09-05 2013-02-05 Transalgae Ltd. Genetic transformation of algal and cyanobacteria cells by microporation
US20110305682A1 (en) 2008-09-11 2011-12-15 Ben Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Compositions and Methods for Treating S. Pneumonia Infection
GB2477868A (en) * 2008-09-12 2011-08-17 Navigenics Inc Methods and systems for incorporating multiple environmental and genetic risk factors
BRPI0919020A2 (pt) 2008-09-12 2017-08-22 Univ South Florida Uso de células de linhagem monocitária enriquecidas para tratar isquemia e para tratar angina pectoris
WO2010033599A2 (en) 2008-09-16 2010-03-25 Ibis Biosciences, Inc. Mixing cartridges, mixing stations, and related kits, systems, and methods
EP2344893B1 (de) 2008-09-16 2014-10-15 Ibis Biosciences, Inc. Mikroplatten-handhabungssysteme und verfahren
US8148163B2 (en) * 2008-09-16 2012-04-03 Ibis Biosciences, Inc. Sample processing units, systems, and related methods
US9029318B2 (en) 2008-09-24 2015-05-12 Tel Hashomer Medical Research, Infrastructure And Services Ltd. Peptides and compositions for prevention of cell adhesion and methods of using same
CA2736729A1 (en) 2008-09-29 2010-04-01 Ben Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Amyloid beta-peptides and methods of use thereof
US20100261189A1 (en) * 2008-10-03 2010-10-14 Roche Molecular Systems, Inc. System and method for detection of HLA Variants
CA2736350C (en) 2008-10-30 2021-06-22 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficiency
WO2010055525A1 (en) 2008-11-17 2010-05-20 Technion Research & Development Foundation Ltd. Method for predicting a patient's responsiveness to anti-folate therapy
WO2010058396A1 (en) 2008-11-19 2010-05-27 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. A cd44vra antibody and diagnostic and therapeutic methods using same
WO2010061383A1 (en) 2008-11-26 2010-06-03 Biodalia Microbiological Technologies Ltd. A method of in-situ enrichment of foods with fructan
WO2010064231A1 (en) 2008-12-02 2010-06-10 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Methods of analyzing a-i rna editing and nucleic acid constructs capable of same
US20120014927A1 (en) 2008-12-03 2012-01-19 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Methods and kits for determining predisposition to cancer
WO2010064248A2 (en) 2008-12-05 2010-06-10 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of diagnosing and treating motor neuron diseases
MX350550B (es) 2008-12-29 2017-09-08 Evogene Ltd Polinucleotidos, polipeptidos codificados, y metodos para utilizarlos para aumentar la tolerancia al estres, abiotico, biomasa y/o rendimiento en plantas que los expresan.
SG10201504379VA (en) 2008-12-29 2015-07-30 Tel Hashomer Medical Res Infrastructure & Services Ltd Peptides and compositions for prevention of cell adhesion and methods of using same
EP2376653A2 (de) 2008-12-29 2011-10-19 Yissum Research Development Company of The Hebrew University of Jerusalem Verfahren zur vorhersage der ansprechbarkeit auf eine interferonbehandlung und behandlung einer infektion mit hepatitis c
WO2010076794A1 (en) 2008-12-31 2010-07-08 Technion Research & Development Foundation Ltd. Method of denitrifying brine and systems capable of same
US9107935B2 (en) 2009-01-06 2015-08-18 Gilead Biologics, Inc. Chemotherapeutic methods and compositions
IL196820A0 (en) 2009-02-01 2009-11-18 Yissum Res Dev Co Devitalized, acellular scaffold matrices derived from micro-organs seeded with various cells
WO2010086867A2 (en) 2009-02-02 2010-08-05 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Peptides, pharmaceutical compositions comprising same and uses thereof
WO2010089707A1 (en) 2009-02-04 2010-08-12 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods and kits for determining sensitivity or resistance of prostate cancer to radiation therapy
WO2010093465A1 (en) 2009-02-11 2010-08-19 Caris Mpi, Inc. Molecular profiling of tumors
WO2010093943A1 (en) * 2009-02-12 2010-08-19 Ibis Biosciences, Inc. Ionization probe assemblies
US20110311494A1 (en) 2009-02-26 2011-12-22 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Methods of reprogramming renal cells
CA2753616C (en) 2009-03-02 2018-07-17 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
ES2564265T3 (es) 2009-03-09 2016-03-21 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Composiciones para prevención y tratamiento de enfermedades neurodegenerativas
WO2010103517A1 (en) 2009-03-12 2010-09-16 Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences Soluble compositions for the treatment of cxcr3-ligand associated diseases
WO2010111231A1 (en) 2009-03-23 2010-09-30 Raindance Technologies, Inc. Manipulation of microfluidic droplets
US20120020954A1 (en) 2009-03-30 2012-01-26 Anat Achiron Methods of predicting clinical course and treating multiple sclerosis
US8912142B2 (en) 2009-04-01 2014-12-16 The Medical Research, Infrastructure and Health Services Fund of the Tel Aviv Medical Center Method of regulating proliferation and differentiation of keratinocyes
WO2010116375A1 (en) 2009-04-08 2010-10-14 Yeda Research And Development Co. Ltd. Isolated peptides for regulating apoptosis
GB0906470D0 (en) 2009-04-15 2009-05-20 Astex Therapeutics Ltd New compounds
CA2795268A1 (en) 2009-04-21 2010-10-28 Genetic Technologies Limited Methods for obtaining fetal genetic material
AU2010243211B2 (en) 2009-04-30 2014-01-30 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Anti CEACAM1 antibodies and methods of using same
US9182403B2 (en) 2009-05-19 2015-11-10 Zetiq Technologies Ltd. Kits for and methods of differential staining of cervical cancer cells and/or tissues
GB0908905D0 (en) 2009-05-26 2009-07-01 Sentinel Oncology Ltd Pharmaceutical compounds
US20120078163A1 (en) 2009-05-27 2012-03-29 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Method of generating connective tissue
WO2010137013A1 (en) 2009-05-27 2010-12-02 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Crystallized photosystem i units from the pea plant and their use in solid state devices
EP2435072A2 (de) 2009-05-27 2012-04-04 Yeda Research and Development Co. Ltd. Proteasom-hemmer und ihre verwendungen
WO2010137020A1 (en) 2009-05-28 2010-12-02 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of treating inflammation
DK3276004T3 (da) 2009-06-08 2020-04-06 Quark Pharmaceuticals Inc Fremgangsmåder til behandling af kronisk nyresygdom
EP3626051A3 (de) 2009-06-10 2020-04-22 Evogene Ltd. Isolierte polynukleotide und polypeptide sowie verfahren zur verwendung davon zur erhöhung der stickstoffverwendungseffizienz, des ertrags, der wachstumsrate, der stärke, der biomasse, des ölgehalts und/oder der abiotischen stresstoleranz
CA2765779A1 (en) 2009-06-24 2010-12-29 Fund For Medical Research Development Of Infrastructure And Health Servi Ces - At Rambam Medical Center Methods and kits for isolating placental derived microparticles and use of same for diagnosis of fetal disorders
US12203113B2 (en) 2009-07-09 2025-01-21 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US9663778B2 (en) 2009-07-09 2017-05-30 OPKO Biologies Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
WO2011004379A1 (en) 2009-07-10 2011-01-13 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Compositions and methods for treating cancer
EP2454000A4 (de) 2009-07-17 2016-08-10 Ibis Biosciences Inc Systeme zur identifizierung von biowirkstoffen
WO2011008971A1 (en) * 2009-07-17 2011-01-20 Ibis Biosciences, Inc. Lift and mount apparatus
ES2753986T3 (es) 2009-07-21 2020-04-15 Tel Hashomer Medical Res Infrastructure & Services Ltd Un método de diagnóstico de cáncer
GB0913442D0 (en) 2009-07-31 2009-09-16 Univ Ramot Cell-targeting nanoparticles comprising polynucleotide agents and uses thereof
EP2467470A2 (de) 2009-08-17 2012-06-27 Technion Research & Development Foundation Ltd. Pericytvorläuferzellen sowie verfahren zu ihrer herstellung und verwendung
EP2467162A4 (de) * 2009-08-21 2013-10-02 Gilead Biologics Inc Therapeutische verfahren und zusammensetzungen
WO2011022670A1 (en) * 2009-08-21 2011-02-24 Arresto Biosciences, Inc In vivo screening assays
BR112012008054A2 (pt) 2009-08-21 2017-05-23 Gilead Biologics Inc domínios catalíticos de lisil oxidase e loxl2
CN102713601A (zh) * 2009-08-21 2012-10-03 吉联亚生物科技有限公司 体外筛选试验
CN102481311A (zh) 2009-08-21 2012-05-30 比欧洛吉科斯公司 经由植物转录的分子预防和治疗有益昆虫的疾病
EP2467169A4 (de) * 2009-08-21 2013-01-02 Gilead Biologics Inc In-vivo-screening-assays
WO2011024172A2 (en) 2009-08-27 2011-03-03 Technion Research & Development Foundation Ltd. Liposomal compositions and uses of same
EP2475784A1 (de) 2009-09-08 2012-07-18 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Verfahren zur diagnose von amyotropher lateralsklerose (als)
EP2475381A2 (de) 2009-09-08 2012-07-18 Yeda Research and Development Co. Ltd. Verfahren zur mobilisierung eines hämatopoetischen vorläufers
US20120171213A1 (en) 2009-09-10 2012-07-05 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Method of treating tumors
US8735124B2 (en) 2009-09-17 2014-05-27 Yeda Research And Development Co. Ltd. Isolated PON1 polypeptides, polynucleotides encoding same and uses thereof in treating or preventing organophosphate exposure associated damage
CN102498127B (zh) 2009-09-17 2015-02-25 雷蒙特亚特特拉维夫大学有限公司 用于治疗氧化应激相关障碍的肽类
EP2478093A2 (de) 2009-09-17 2012-07-25 Yeda Research and Development Co. Ltd. Isolierte pon1-polypeptide, polynucleotide zu deren codierung und verwendung davon bei der behandlung oder vorbeugung von schäden im zusammenhang mit organophosphataussetzung
US20110081706A1 (en) * 2009-10-02 2011-04-07 TransAlgae Ltd Method and system for efficient harvesting of microalgae and cyanobacteria
WO2011041695A1 (en) * 2009-10-02 2011-04-07 Ibis Biosciences, Inc. Determination of methylation status of polynucleotides
MX353880B (es) 2009-10-14 2018-01-31 Yissum Research Development Company Of The Hebrew Univ Of Jerusalem Ltd Star Composiciones para controlar ácaros varroa en abejas.
US8962584B2 (en) 2009-10-14 2015-02-24 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. Compositions for controlling Varroa mites in bees
EP2957641B1 (de) * 2009-10-15 2017-05-17 Ibis Biosciences, Inc. Multiple-displacement-amplifikation
WO2011048600A1 (en) 2009-10-21 2011-04-28 Danziger Innovations Ltd. Generating genotypic variations in plant genomes by gamete infection
US20160186266A1 (en) 2009-10-27 2016-06-30 Carislife Sciences, Inc. Molecular profiling for personalized medicine
IL201999A (en) 2009-11-08 2017-10-31 Medical Res & Development Fund For Health Services Bnai Zion Medical Center The State Of Israel A knockout mouse of the 1 – mo gene, a gene associated with morbidly extreme obesity
WO2011058555A1 (en) 2009-11-12 2011-05-19 Yeda Research And Development Co. Ltd. A method of editing dna in a cell and constructs capable of same
WO2011058557A1 (en) 2009-11-12 2011-05-19 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Compositions comprising pedf and uses of same in the treatment and prevention of ovary-related syndromes
CA2783437C (en) 2009-11-12 2020-08-04 Technion Research & Development Foundation Ltd. Culture media, cell cultures and methods of culturing pluripotent stem cells in an undifferentiated state
WO2011061736A1 (en) 2009-11-17 2011-05-26 Protalix Ltd. Alkaline alpha galactosidase for the treatment of fabry disease
EP2504472A1 (de) 2009-11-24 2012-10-03 Collplant Ltd. Verfahren zur erzeugung von kollagenfasern
AU2010324658A1 (en) 2009-11-26 2012-05-03 Quark Pharmaceuticals, Inc. siRNA compounds comprising terminal substitutions
WO2011064669A2 (en) 2009-11-30 2011-06-03 Pluristem Ltd. Adherent cells from placenta and use of same in disease treatment
WO2011067745A2 (en) 2009-12-06 2011-06-09 Rosetta Green Ltd. Compositions and methods for enhancing plants resistance to abiotic stress
US8778904B2 (en) 2009-12-09 2014-07-15 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating diseases, disorders or injury of the CNS
AU2010337936B2 (en) 2009-12-28 2016-06-23 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficiency
AU2010337829B2 (en) 2009-12-29 2015-03-19 Gamida-Cell Ltd. Methods for enhancing natural killer cell proliferation and activity
JP6196040B2 (ja) 2010-01-05 2017-09-13 バスキュラー バイオジェニックス リミテッド 特異的な抗血管形成アデノウイルス剤の使用法
WO2011084193A1 (en) 2010-01-07 2011-07-14 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide compounds comprising non-nucleotide overhangs
EP2523681A1 (de) 2010-01-12 2012-11-21 Vascular Biogenics Ltd. Verfahren zur herstellung von adenovirusvektoren und damit hergestellte virale zubereitungen
CA2787311C (en) 2010-01-27 2017-08-15 Yeda Research And Development Co. Ltd. Antibodies that inhibit metalloproteins
US8815896B2 (en) 2010-02-01 2014-08-26 The Institute Of Cancer Research: Royal Cancer Hospital 1-(5-tert-butyl-2-phenyl-2H-pyrazol-3-yl)-3-[2-fluoro-4-(1-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-B]pyridin-7-yloxy)-phenyl]-urea and related compounds and their use in therapy
SG183174A1 (en) 2010-02-04 2012-09-27 Gilead Biologics Inc Antibodies that bind to lysyl oxidase-like 2 (loxl2) and methods of use therefor
WO2011099006A2 (en) 2010-02-11 2011-08-18 Yeda Research And Development Co. Ltd. Enzymatic systems for carbon fixation and methods of generating same
US9366632B2 (en) 2010-02-12 2016-06-14 Raindance Technologies, Inc. Digital analyte analysis
US8535889B2 (en) 2010-02-12 2013-09-17 Raindance Technologies, Inc. Digital analyte analysis
US9399797B2 (en) 2010-02-12 2016-07-26 Raindance Technologies, Inc. Digital analyte analysis
US10351905B2 (en) 2010-02-12 2019-07-16 Bio-Rad Laboratories, Inc. Digital analyte analysis
CA2791058A1 (en) 2010-02-24 2011-09-01 Ben Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Methods for inhibiting necrosis
WO2011107939A1 (en) 2010-03-01 2011-09-09 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods of predicting efficacy of an anti-vegfa treatment for solid tumors
WO2011107994A1 (en) 2010-03-04 2011-09-09 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of measuring protein stability
AU2011224570B2 (en) 2010-03-08 2014-08-14 Monsanto Technology Llc Polynucleotide molecules for gene regulation in plants
WO2011111034A1 (en) 2010-03-08 2011-09-15 Yeda Research And Development Co. Ltd. Recombinant protein production in heterologous systems
CN102918159A (zh) 2010-03-11 2013-02-06 雅各布·埃德尔 产生氢的方法
US9073990B2 (en) 2010-04-05 2015-07-07 Bar-Llan University Protease-activatable pore-forming polypeptides
WO2011128897A1 (en) 2010-04-12 2011-10-20 Technion Research & Development Foundation Ltd. Populations of pancreatic progenitor cells and methods of isolating and using same
EP2557913B1 (de) 2010-04-12 2016-08-03 Ben Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Sulfotransferase einer roten mikroalge und verwendungen davon
RU2012148398A (ru) 2010-04-18 2014-05-27 Иеда Рисеч Энд Девелопмент Ко. Лтд. МОЛЕКУЛЫ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ МОЛЕКУЛ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНЕЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ErbB/ErbB ЛИГАНДАМИ
CA2797200C (en) 2010-04-28 2020-03-31 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
GB201007286D0 (en) 2010-04-30 2010-06-16 Astex Therapeutics Ltd New compounds
US20130053277A1 (en) 2010-05-04 2013-02-28 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods of identifying inhibitors of polypeptides-of-interest
EP2566500B1 (de) 2010-05-05 2017-04-12 Rappaport Family Institute for Research in the Medical Sciences Ccl1 zur verwendung für therapeutische zwecke
IL208820A0 (en) 2010-10-19 2011-01-31 Rachel Teitelbaum Biologic female contraceptives
WO2011141914A1 (en) 2010-05-13 2011-11-17 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Isolated populations of adult renal cells and methods of isolating and using same
WO2011151833A1 (en) 2010-06-03 2011-12-08 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Methods of treating diabetes and compositions capable of same
BR112012031045A2 (pt) 2010-06-07 2017-06-20 Ashur Fabian Osnat métodos para detecção de uma condição, para determinar a eficácia de um tratmento terapêutico de uma condição, e para a seleção de um sujeito que sofre de uma condição, e, kit.
WO2012005857A1 (en) 2010-06-08 2012-01-12 President And Fellows Of Harvard College Nanopore device with graphene supported artificial lipid membrane
WO2011158242A2 (en) 2010-06-16 2011-12-22 Futuragene Israel Ltd. Pest -resistant plants containing a combination of a spider toxin and a chitinase
EP2582842A2 (de) 2010-06-16 2013-04-24 Yissum Research Development Company of The Hebrew University of Jerusalem Verfahren zur diagnose und behandlung von krebs
US9045755B2 (en) 2010-06-24 2015-06-02 Quark Pharmaceuticals, Inc. Double stranded RNA compounds to RhoA and use thereof
WO2012007945A2 (en) 2010-07-12 2012-01-19 The State Of Israel, Ministry Of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization, (A.R.O.), Volcani Center Isolated polynucleotides and methods and plants using same for regulating plant acidity
CA2804728A1 (en) 2010-07-15 2012-01-19 Technion Research & Development Foundation Ltd. Nucleic acid construct for increasing abiotic stress tolerance in plants
CA2805478A1 (en) 2010-07-15 2012-01-19 Technion Research & Development Foundation Ltd. Isolated high affinity entities with t-cell receptor like specificity towards native complexes of mhc class ii and diabetes-associated autoantigenic peptides
WO2012007951A1 (en) 2010-07-15 2012-01-19 Technion Research & Development Foundation Ltd. Isolated high affinity entities with t-cell receptor like specificity towards native complexes of mhc class ii and glutamic acid decarboxylase (gad) autoantigenic peptides
EP2595637B1 (de) 2010-07-22 2017-11-01 Cellect Biotherapeutics Ltd. Immunregulatorische zellen mit verstärkter gezielter zelltodwirkung
WO2012014205A1 (en) 2010-07-27 2012-02-02 Technion Research & Development Foundation Ltd. Isolated mesenchymal progenitor cells and extracellular matrix produced thereby
WO2012014208A2 (en) 2010-07-27 2012-02-02 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods and systems for assessing clonality of cell cultures
JP2013535966A (ja) 2010-07-27 2013-09-19 テクニオン リサーチ アンド ディベロップメント ファウンデーション リミテッド 引き抜かれた毛包由来のケラチン生成細胞から誘導多能性幹細胞を生成させる方法
US8901074B2 (en) 2010-08-04 2014-12-02 Ramot At Tel-Aviv University Methods of treating autoimmune diseases of the central nervous system (CNS) and neurodegenerative diseases
WO2012025914A1 (en) 2010-08-22 2012-03-01 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Induced pluripotent stem cells derived from human pancreatic beta cells
WO2012025925A1 (en) 2010-08-24 2012-03-01 Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences Methods of improving transplantation using sdf-1alpha
CA3158003A1 (en) 2010-08-30 2012-03-08 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing nitrogen use efficiency, yield, growth rate, vigor, biomass, oil content, and/or abiotic stress tolerance
EP2613799A1 (de) 2010-09-07 2013-07-17 Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Readthrough-acetylcholinesterase (ache-r) zur behandlung bzw. prävention von morbus parkinson
WO2012032510A1 (en) 2010-09-07 2012-03-15 Yeda Research And Development Co. Ltd. Primers for amplifying dna and methods of selecting same
WO2012032519A2 (en) 2010-09-07 2012-03-15 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods of diagnosing parkinson's disease
SG10202109393RA (en) 2010-09-07 2021-10-28 Technion Res & Dev Foundation Novel Methods And Culture Media For Culturing Pluripotent Stem Cells
US20130183322A1 (en) 2010-09-08 2013-07-18 Yeda Research And Development Co., Ltd. Immunosuppressive drug combination for a stable and long term engraftment
CN105907713A (zh) 2010-09-08 2016-08-31 耶达研究及发展有限公司 抗第三方中枢记忆性t细胞在抗白血病/淋巴瘤治疗中的用途
WO2012035539A1 (en) 2010-09-15 2012-03-22 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Methods of expanding and redifferentiating islet beta cells
US20130210901A1 (en) 2010-09-20 2013-08-15 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Method of treating neurodegenerative diseases
WO2012045012A2 (en) 2010-09-30 2012-04-05 Raindance Technologies, Inc. Sandwich assays in droplets
EP2627766B1 (de) 2010-10-17 2016-05-25 Yeda Research and Development Co. Ltd. Verfahren und zusammensetzungen zur behandlung von insulinassoziierten erkrankungen
WO2012052878A1 (en) 2010-10-19 2012-04-26 Vascular Biogenics Ltd. Isolated polynucleotides and nucleic acid constructs for directing expression of a gene-of-interest in cells
WO2012056452A2 (en) 2010-10-27 2012-05-03 Nanocyte (Israel) Ltd. Pharmaceutical compositions and delivery devices comprising stinging cells or capsules
US10066024B2 (en) 2010-10-28 2018-09-04 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of generating antibodies to metalloenzymes
UY33705A (es) 2010-11-03 2012-04-30 Yissum Res Dev Co Plantas transgenicas con rendimientos de sacarificacion mejorados y metodos para generarlas
US9410132B2 (en) 2010-11-04 2016-08-09 Ben-Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Acyl-CoA: diacylglycerol acyltransferase 1-like gene (PtDGAT1) and uses thereof
EP2640848A1 (de) 2010-11-15 2013-09-25 Life Technologies Corporation Verfahren und kits zur multiplex-amplifikation von short-tandem-repeat-loci
EP2640737B1 (de) 2010-11-15 2018-08-29 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Dipeptidanaloga zur behandlung von störungen im zusammenhang mit amyloid-fibrillenbildung
EP2640404B1 (de) 2010-11-17 2017-02-22 Ben Gurion University of The Negev Research and Development Authority T-zelltherapie für neurodegenerative erkrankungen
GB201020179D0 (en) 2010-11-29 2011-01-12 Astex Therapeutics Ltd New compounds
WO2012073238A1 (en) 2010-12-02 2012-06-07 Technion Research & Development Foundation Ltd. Methods of generating corneal cells and cell populations comprising same
WO2012078536A2 (en) 2010-12-06 2012-06-14 Quark Pharmaceuticals, Inc. Double stranded oligonucleotide compounds comprising positional modifications
EP2463382A1 (de) 2010-12-07 2012-06-13 Enterologics, Inc. Verfahren zur Identifizierung von E.-coli-M-17
CA2816495C (en) 2010-12-15 2020-10-13 Kadimastem Ltd. Insulin producing cells derived from pluripotent stem cells
US20120165272A1 (en) 2010-12-21 2012-06-28 Recopharma Ab Tear Substitutes
BR122021002248B1 (pt) 2010-12-22 2022-02-15 Evogene Ltd Método para aumentar a tolerância ao estresse abiótico, produção, biomassa, e/ou taxa de crescimento de uma planta
CN107648341A (zh) 2010-12-28 2018-02-02 卡梅迪斯有限公司 用于治疗和预防感染的植物提取物
BR112013018516B1 (pt) 2011-01-20 2023-11-07 Protalix Ltd Construto de expressão de ácido nucleico, método de produção de uma proteína alfa-galactosidase humana recombinante, proteína alfagalactosidase humana, composição farmacêutica, e, uso de uma proteína alfagalactosidase humana ou de uma composição
WO2012104851A1 (en) 2011-01-31 2012-08-09 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of diagnosing disease using overlap extension pcr
US9364803B2 (en) 2011-02-11 2016-06-14 Raindance Technologies, Inc. Methods for forming mixed droplets
EP3736281A1 (de) 2011-02-18 2020-11-11 Bio-Rad Laboratories, Inc. Zusammensetzungen und verfahren für molekulare etikettierung
US20130330349A1 (en) 2011-02-23 2013-12-12 Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences High affinity molecules capable of binding a type a plexin receptor and uses of same
CN103597078B (zh) 2011-03-02 2016-12-14 富途锐基尼以色列有限公司 具有功能失调的t3ss蛋白的抗菌性转基因植物
EP2680864B1 (de) 2011-03-03 2019-05-08 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Genetisch modifizierte muskelzellen mit expression von neurotrophen faktoren
US9796979B2 (en) 2011-03-03 2017-10-24 Quark Pharmaceuticals Inc. Oligonucleotide modulators of the toll-like receptor pathway
JP6132775B2 (ja) 2011-03-03 2017-05-24 クォーク ファーマシューティカルズ インコーポレーティッドＱｕａｒｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． Ｔｏｌｌ様受容体経路のオリゴヌクレオチド修飾因子
WO2012120500A2 (en) 2011-03-06 2012-09-13 Merck Serono S.A. Low fucose cell lines and uses thereof
US9061006B2 (en) 2011-03-08 2015-06-23 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Compositions and methods for diagnosing and treating phenylketonuria (PKU)
US20140086839A1 (en) 2011-03-17 2014-03-27 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Quinolone analogs for treating autoimmune diseases
IN2013MN01438A (de) 2011-03-17 2015-06-12 Univ Ramot
AU2012231884B2 (en) 2011-03-18 2017-03-09 Stichting Vumc A method of analysing a blood sample of a subject for the presence of a disease marker
EP3260533B1 (de) 2011-03-22 2019-09-11 Pluristem Ltd. Verfahren zur behandlung von strahlungs- oder chemischen verletzungen
CN103648517B (zh) 2011-03-24 2016-04-20 纽瑞姆制药（1991）有限公司 神经保护肽
WO2012131680A2 (en) 2011-03-28 2012-10-04 Yeda Research And Development Co. Ltd. Compositions and methods for treating inflammation
WO2012137202A1 (en) 2011-04-05 2012-10-11 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Composition comprising an iron indicator attached to a microparticle and uses of same for quantifying non-transferrin bound iron (ntbi) and cellular labile iron (lci)
ES2627154T3 (es) 2011-04-06 2017-07-26 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Métodos de seguimiento y análisis de perfiles de actividad metabólica, usos diagnósticos y terapéuticos de los mismos
WO2012140519A2 (en) 2011-04-15 2012-10-18 Pluristem Ltd. Methods and systems for harvesting cells
GB201106817D0 (en) 2011-04-21 2011-06-01 Astex Therapeutics Ltd New compound
GB201106814D0 (en) 2011-04-21 2011-06-01 Astex Therapeutics Ltd New compounds
CN107012118A (zh) 2011-05-02 2017-08-04 韦恩州立大学 蛋白质诱导的多能细胞技术及其用途
MX384304B (es) 2011-05-03 2025-03-14 Evogene Ltd Polipéptidos y polinucleótidos aislados y métodos para su uso, para aumentar el rendimiento, la biomasa, el índice de crecimiento, el vigor, el contenido de aceite, la tolerancia al estrés abiótico de las plantas y la eficiencia en el uso de nitrógeno.
EP2704793B1 (de) 2011-05-04 2019-07-17 Ramot at Tel Aviv University, Ltd. Regulierung einer molekularen amyloid-beta -zusammensetzung zur behandlung von morbus alzheimer
WO2012153333A1 (en) 2011-05-09 2012-11-15 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Regeneration and repair of mesenchymal tissue using amelogenin
WO2012153336A2 (en) 2011-05-12 2012-11-15 Rakuto Bio Technologies Ltd. Methods and device for lightening skin complexion
WO2012156976A1 (en) 2011-05-16 2012-11-22 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods of producing artemisinin in non-host plants and vectors for use in same
WO2012160563A2 (en) 2011-05-23 2012-11-29 Yeda Research And Development Co. Ltd. Use of akt phosphorylation as a biomarker for prognosing neurodegenerative diseases and treating same
WO2012160526A2 (en) 2011-05-23 2012-11-29 Ofir Menashe Formulations of microorganism comprising particles and uses of same
CN107325164A (zh) 2011-05-31 2017-11-07 和黄生物膜医疗解决方案有限公司 细胞聚集体的分散和脱离
WO2012164565A1 (en) 2011-06-01 2012-12-06 Yeda Research And Development Co. Ltd. Compositions and methods for downregulating prokaryotic genes
US10166295B2 (en) 2011-06-02 2019-01-01 Opko Biologics Ltd. Pegylated OXM variants
WO2012167142A2 (en) 2011-06-02 2012-12-06 Raindance Technolgies, Inc. Enzyme quantification
ES2670596T3 (es) 2011-06-14 2018-05-31 Yeda Research And Development Co. Ltd. Terapia de combinación para prevenir la formación del DCIS y la progresión hasta cáncer de mama
RU2014101662A (ru) 2011-06-23 2015-07-27 Каиима Био Агритех Лтд. Мягкая пшеница, растения или их части с частично или полностью мультиплицированным геномом, гибриды и их продукты, а также способы их получения и применения
US8658430B2 (en) 2011-07-20 2014-02-25 Raindance Technologies, Inc. Manipulating droplet size
PH12014500175A1 (en) 2011-07-20 2014-03-03 Kaiima Bio Agritech Ltd Maize plants having a partially or fully multiplied genome and uses thereof
EP2550982A1 (de) 2011-07-27 2013-01-30 Technion Research & Development Foundation Ltd. Vorrichtungen für chirurgische Anwendungen
ES2632212T3 (es) 2011-08-04 2017-09-11 Yeda Research And Development Co. Ltd. miR-135 y composiciones que lo comprenden para el tratamiento de afecciones médicas asociadas con la serotonina
EP2741753A2 (de) 2011-08-09 2014-06-18 Yeda Research and Development Co. Ltd. Herunterregulierung von mir-7 zur förderung der beta-zellen-differenzierung und insulinproduktion
US20140212568A1 (en) 2011-08-14 2014-07-31 Kaiimam Bio Agritech Ltd. Durum wheat plants having a partially or fully multiplied genome and uses thereof
WO2013035070A1 (en) 2011-09-07 2013-03-14 Yeda Research And Development Co. Ltd. Olfactory signature and odorant mixture having the same
CN103890195A (zh) 2011-09-08 2014-06-25 耶达研究及发展有限公司 用于肺癌的新型风险生物标志物
KR102073901B1 (ko) 2011-09-08 2020-02-05 예다 리서치 앤드 디벨럽먼트 캄파니 리미티드 항 제3자 중심 기억 ｔ 세포, 이의 제조 방법, 및 이식 및 질환 치료에서의 이의 용도
WO2013040057A1 (en) 2011-09-13 2013-03-21 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
BR112014005979A8 (pt) 2011-09-13 2017-09-12 Monsanto Technology Llc Métodos e composições quimicas agricolas para controle de planta, método de redução de expressão de um gene ppg oxidase em uma planta, cassete de expressão microbiana, método para fazer um polinucleotídeo, método de identificação de polinucleotídeos úteis na modulação de expressão do gene ppg oxidase e mistura herbicida
US10760086B2 (en) 2011-09-13 2020-09-01 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
PL2755467T4 (pl) 2011-09-13 2018-01-31 Monsanto Technology Llc Sposoby i kompozycje do kontroli chwastów
US10829828B2 (en) 2011-09-13 2020-11-10 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
BR112014005958A2 (pt) 2011-09-13 2020-10-13 Monsanto Technology Llc métodos e composições químicas agrícolas para controle de planta, método de redução de expressão de um gene accase em uma planta, cassete de expressão microbiana, método para fazer um polinucleotídeo, método de identificação de polinucleotídeos úteis na modulação de expressão do gene accase e composição herbicida
US10806146B2 (en) 2011-09-13 2020-10-20 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
US9840715B1 (en) 2011-09-13 2017-12-12 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for delaying senescence and improving disease tolerance and yield in plants
US9920326B1 (en) 2011-09-14 2018-03-20 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for increasing invertase activity in plants
WO2013054320A1 (en) 2011-10-11 2013-04-18 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Antibodies to carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule (ceacam)
EP2771464B1 (de) 2011-10-27 2018-03-21 Yeda Research and Development Co. Ltd. Verfahren zur behandlung von karzinomen
GB201118654D0 (en) 2011-10-28 2011-12-07 Astex Therapeutics Ltd New compounds
GB201118652D0 (en) 2011-10-28 2011-12-07 Astex Therapeutics Ltd New compounds
GB201118675D0 (en) 2011-10-28 2011-12-14 Astex Therapeutics Ltd New compounds
GB201118656D0 (en) 2011-10-28 2011-12-07 Astex Therapeutics Ltd New compounds
AU2012332517B9 (en) 2011-11-03 2017-08-10 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for neuroprotection
EP2776565A1 (de) 2011-11-08 2014-09-17 Quark Pharmaceuticals, Inc. Verfahren und zusammensetzungen und zur behandlung von erkrankungen, störungen oder läsionen des nervensystems
US9736998B2 (en) 2011-11-23 2017-08-22 Danziger Dan Flower Farm Otomeria plants
EP2782930B1 (de) 2011-11-27 2018-07-11 Yeda Research and Development Co. Ltd. Verfahren zur angiogeneseregulierung und zusammensetzungen dafür
KR20140102730A (ko) 2011-12-08 2014-08-22 예다 리서치 앤드 디벨럽먼트 캄파니 리미티드 포유류 태아 폐 세포와 이를 치료용으로 사용하는 방법
UA116097C2 (uk) 2011-12-11 2018-02-12 Зе Стейт Оф Ізраел, Міністрі Оф Агрікалче Енд Руерал Девелопмент, Агрікалчерал Рісьоч Організейшн, (А.Р.О.), Волкані Сентре Спосіб модуляції провідності устячка рослини
WO2013093921A1 (en) 2011-12-20 2013-06-27 Collplant Ltd. Collagen coated synthetic polymer fibers
CN104470542A (zh) 2011-12-22 2015-03-25 耶达研究及发展有限公司 用于稳定和长期植入的联合疗法
US20130164193A1 (en) 2011-12-22 2013-06-27 Life Technologies Corporation Sequential lateral flow capillary device for analyte determination
AU2012359984A1 (en) 2011-12-28 2014-07-10 Kaiima Bio Agritech Ltd. Cultivated sorghum plant having a partially or fully multiplied genome and uses of same
CN104080480A (zh) 2012-01-01 2014-10-01 奇比艾企业有限公司 用于选择性递送治疗剂和诊断剂的endo180靶向微粒
EP2802657B1 (de) 2012-01-12 2018-05-02 Quark Pharmaceuticals, Inc. Kombinationstherapie zur behandlung von gehör-und gleichgewichtsstörungen
WO2013114363A2 (en) 2012-01-30 2013-08-08 Yeda Research And Development Co.Ltd. Antimicrobial agents
EP2809780B1 (de) 2012-02-01 2018-05-02 Protalix Ltd. Inhalierbare flüssige formulierungen der dnase i
WO2013118120A2 (en) 2012-02-06 2013-08-15 Rosetta Green Ltd. Isolated polynucleotides expressing or modulating micrornas or targets of same, transgenic plants comprising same and uses thereof in improving nitrogen use efficiency, abiotic stress tolerance, biomass, vigor or yield of a plant
GB201202027D0 (en) 2012-02-06 2012-03-21 Sareum Ltd Pharmaceutical compounds
EP2814950A1 (de) 2012-02-13 2014-12-24 Gamida-Cell Ltd. Durch mesenchymale stammzellen konditioniertes medium und verfahren zur herstellung und verwendung davon
CN109535245A (zh) 2012-02-14 2019-03-29 奥普科生物制品有限公司 长效凝血因子和生产它们的方法
BR112014021067A2 (pt) 2012-02-19 2018-10-30 Protalix Ltd formas unitárias de dosagem oral e usos das mesmas para o tratamento da doença de gaucher
EP3401394A1 (de) 2012-02-22 2018-11-14 Exostem Biotec Ltd Erzeugung von neuralen stammzellen
EP3401393B1 (de) 2012-02-22 2020-02-19 Exostem Biotec Ltd Mikrornas zur erzeugung von astrocyten
EP2833714A1 (de) 2012-03-01 2015-02-11 The State of Israel - Ministry of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization (ARO) (Volcani Center) Männliche sterile knoblauchpflanzen, hybride nachkommen davon sowie verfahren zur herstellung und verwendung davon
WO2013132495A1 (en) 2012-03-07 2013-09-12 Yeda Research And Development Co. Ltd. Compositions for inhibition of quiescin sulfhydryl oxidase (qsox1) and uses of same
EP2828280B1 (de) 2012-03-22 2018-05-02 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Multimere plif-peptide und verwendungen davon
AU2013250767A1 (en) 2012-04-18 2014-10-09 Quiet Therapeutics Ltd. Lipidated glycosaminoglycan particles for the delivery of nucleic acids
JP2015520128A (ja) 2012-04-19 2015-07-16 オプコ バイオロジクス リミテッド 長時間作用性オキシントモジュリン変異体とその作製方法
WO2013160895A1 (en) 2012-04-24 2013-10-31 Biokine Therapeutics Ltd. Peptides and use thereof in the treatment of large cell lung cancer
JP6181158B2 (ja) 2012-05-09 2017-08-16 イェダ リサーチ アンド デベロップメント カンパニー リミテッド ＴＮＦ−α阻害剤としてのＴＡＣＥプロドメインの変異体およびその医学的使用
US8865158B2 (en) 2012-05-22 2014-10-21 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Bacteriophages for reducing toxicity of bacteria
WO2013175480A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 A.B. Seeds Ltd. Compositions and methods for silencing gene expression
US20130315891A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Matthew Charles Formulations of human tissue kallikrein-1 for parenteral delivery and related methods
GB201209609D0 (en) 2012-05-30 2012-07-11 Astex Therapeutics Ltd New compounds
GB201209613D0 (en) 2012-05-30 2012-07-11 Astex Therapeutics Ltd New compounds
US9731048B2 (en) 2012-06-03 2017-08-15 Ben-Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Functionalized titanium binding peptides and implants coated with same
ES2625548T3 (es) 2012-06-04 2017-07-19 DiaMedica Therapeutics Inc. Isoformas de glicosilación de la calicreína-1 tisular humana
CN104684576B (zh) 2012-06-04 2019-08-06 奥普科生物制品有限公司 聚乙二醇化的oxm变体
EP2870110A1 (de) 2012-07-03 2015-05-13 Nanospun Technologies Ltd. Verfahren und vorrichtungen für adsorption und biologischen abbau von erdöl
US20150190499A1 (en) 2012-07-19 2015-07-09 Zoetis Llc Bovine influenza c virus compositions
US9175266B2 (en) 2012-07-23 2015-11-03 Gamida Cell Ltd. Enhancement of natural killer (NK) cell proliferation and activity
US9567569B2 (en) 2012-07-23 2017-02-14 Gamida Cell Ltd. Methods of culturing and expanding mesenchymal stem cells
WO2014018724A1 (en) 2012-07-27 2014-01-30 Zoetis Llc Tick toxin compositions
EP3594331A1 (de) 2012-07-29 2020-01-15 Yeda Research and Development Co. Ltd. Verwendung des reduktiven glycinpfades zur erzeugung formatotropher und autotropher mikroorganismen
EP2879678B1 (de) 2012-07-31 2023-03-01 Yeda Research and Development Co. Ltd. Enoxacin zur behandlung von amyotropher lateralsklerose
WO2014024183A1 (en) 2012-08-06 2014-02-13 Brainstorm Cell Therapeutics Ltd. Methods of generating mesenchymal stem cells which secrete neurotrophic factors
WO2014033723A1 (en) 2012-09-03 2014-03-06 A.B. Seeds Ltd. Method of improving abiotic stress tolerance of plants and plants generated thereby
CN104755632B (zh) 2012-09-06 2017-10-03 生命技术公司 多重y‑str分析
US9611473B2 (en) 2012-09-12 2017-04-04 Quark Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded nucleic acid compounds
CA2880290C (en) 2012-09-12 2020-10-27 Quark Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded oligonucleotide molecules targeting p53 and methods of use thereof
AU2013315524B2 (en) 2012-09-12 2019-01-31 Quark Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded oligonucleotide molecules to p53 and methods of use thereof
WO2014041544A1 (en) 2012-09-12 2014-03-20 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Immunoparticles and methods of generating and using same
US11105809B2 (en) 2012-10-09 2021-08-31 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Methods and kits for predicting prognosis of cancer using soluble mortalin in blood
WO2014062989A2 (en) 2012-10-18 2014-04-24 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for plant pest control
CN104918639B (zh) 2012-10-22 2018-01-26 萨拜格Rfa公司 用于将治疗剂递送到活细胞和细胞核中的系统
US10942184B2 (en) 2012-10-23 2021-03-09 Caris Science, Inc. Aptamers and uses thereof
KR20150090072A (ko) 2012-10-23 2015-08-05 카리스 라이프 사이언스 스위스 홀딩스 게엠베하 압타머 및 이의 용도
WO2014064682A1 (en) 2012-10-24 2014-05-01 Yeda Research And Development Co. Ltd. Combinations of epidermal growth factor receptor targeting antibodies for treating cancer
US9926564B2 (en) 2012-10-29 2018-03-27 Yeda Research And Development Co. Ltd. Aptamers, multimeric aptamers and uses thereof
CA2891393A1 (en) 2012-11-20 2014-05-30 Opko Biologics Ltd. Method of increasing the hydrodynamic volume of polypeptides by attaching to gonadotrophin carboxy terminal peptides
HK1213189A1 (zh) 2012-11-29 2016-06-30 耶达研究及发展有限公司 预防肿瘤转移、癌症治疗和预後及鉴定为推定转移抑制剂的试剂的方法
WO2015079413A2 (en) 2013-11-28 2015-06-04 Yeda Research And Development Co. Ltd. Synaptojanin-2 inhibitors and uses thereof
US9939443B2 (en) 2012-12-19 2018-04-10 Caris Life Sciences Switzerland Holdings Gmbh Compositions and methods for aptamer screening
CA2896762A1 (en) 2013-01-01 2014-07-10 A.B. Seeds Ltd. Methods of introducing dsrna to plant seeds for modulating gene expression
US10683505B2 (en) 2013-01-01 2020-06-16 Monsanto Technology Llc Methods of introducing dsRNA to plant seeds for modulating gene expression
WO2014108850A2 (en) 2013-01-09 2014-07-17 Yeda Research And Development Co. Ltd. High throughput transcriptome analysis
WO2014108854A1 (en) 2013-01-09 2014-07-17 Fusimab Ltd. Monospecific anti-hgf and anti-ang2 antibodies and bispecific anti-hgf/anti-ang2 antibodies
CN104937412B (zh) 2013-01-17 2018-05-25 诺威尔卢斯德克有限公司 用于鉴定患者特定驱动突变物的方法和系统
US10000767B2 (en) 2013-01-28 2018-06-19 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for plant pest control
EP2950808B1 (de) 2013-02-04 2019-08-21 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Erzeugung von zytotoxischen tumorspezifischen zelllinien und verwendungen davon
BR112015019778A2 (pt) 2013-02-22 2017-08-22 Zoetis Services Llc Administração in ovo de fatores de crescimento para o aperfeiçoamento de desempenho de ave doméstica
WO2014136117A1 (en) 2013-03-06 2014-09-12 Protalix Ltd. USE OF PLANT CELLS EXPRESSING A TNFalpha POLYPEPTIDE INHIBITOR IN THERAPY
AU2014224171B2 (en) 2013-03-06 2018-02-01 Protalix Ltd. Tnf alpha inhibitor polypeptides, polynucleotides encoding same, cells expressing same and methods of producing same
WO2014135984A2 (en) 2013-03-07 2014-09-12 Recopharma Ab Glycosylated mucin-immunoglobulin fusion protein coated device
AR095232A1 (es) 2013-03-13 2015-09-30 Monsanto Technology Llc Métodos y composiciones para el control de malezas
BR112015022797A2 (pt) 2013-03-13 2017-11-07 Monsanto Technology Llc método para controle de ervas daninhas, composição herbicida, cassete de expressão microbiano e método de produção de polinucleotídeo
US20140283211A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Monsanto Technology Llc Methods and Compositions for Plant Pest Control
US10568328B2 (en) 2013-03-15 2020-02-25 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
WO2014153394A1 (en) 2013-03-21 2014-09-25 Genisphere, Llc Cellular delivery of dna intercalating agents
ES2883580T3 (es) 2013-03-21 2021-12-09 Collplant Ltd Composiciones que comprenden colágeno y PRP para la regeneración de tejidos y su método de producción
BR112015024558A2 (pt) 2013-03-24 2017-07-18 Biokine Therapeutics Ltd método para tratamento de leucemia mieloide.
US9765116B2 (en) 2013-04-18 2017-09-19 Carmel Haifa University Economic Corporation Ltd. Inhibitors of the Eph-A receptor and uses thereof
MX2015014582A (es) 2013-04-21 2016-07-15 Yeda Res & Dev Agentes para regulacion hacia abajo de la actividad y/o cantidad de bcl-xl y/o bcl-w.
ES2831424T3 (es) 2013-04-23 2021-06-08 Yeda Res & Dev Células madre pluripotentes naif aisladas y métodos para generarlas
CN105555796B (zh) 2013-04-25 2019-09-17 耶达研究及发展有限公司 抑制肽对治疗炎性疾病的用途
GB201307577D0 (en) 2013-04-26 2013-06-12 Astex Therapeutics Ltd New compounds
US20140343982A1 (en) * 2013-05-14 2014-11-20 Landmark Graphics Corporation Methods and systems related to workflow mentoring
WO2014188423A1 (en) 2013-05-21 2014-11-27 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Treatment of mast cell related pathologies
RU2015151047A (ru) 2013-05-27 2017-06-29 Ракуто Био Текнолоджис Лтд. Содержащие ферментную систему косметические композиции
EP3013380B1 (de) 2013-06-24 2022-11-23 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Bauchnetzgerüst und abgabesystem
MX359191B (es) 2013-07-19 2018-09-18 Monsanto Technology Llc Composiciones y métodos para controlar leptinotarsa.
US9850496B2 (en) 2013-07-19 2017-12-26 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for controlling Leptinotarsa
WO2015015489A1 (en) 2013-07-30 2015-02-05 Biolinerx Ltd. Antibody for treating diabetes and autoimmune diseases
US20160208247A1 (en) 2013-07-31 2016-07-21 Qbi Enterprises Ltd. Methods of use of sphingolipid polyalkylamine oligonucleotide compounds
EP3027222A1 (de) 2013-07-31 2016-06-08 QBI Enterprises Ltd. Sphingolipid-polyalkylamin-oligonukleotidverbindungen
IL228026B (en) 2013-08-19 2018-05-31 Technion Res & Dev Foundation Discovery of genetic sequences using pna sensors and isotachophoresis
CN105980615A (zh) 2013-08-28 2016-09-28 卡里斯生命科学瑞士控股有限公司 寡核苷酸探针及其用途
ES2702674T3 (es) 2013-08-29 2019-03-04 Yeda Res & Dev Inhibidores selectivos de la isoforma alfa2 de Na,K-ATPasa y el uso para la reducción de la presión intraocular
WO2015033343A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Compositions and methods for expressing recombinant polypeptides
IL228284A (en) 2013-09-03 2016-12-29 Technion Res & Dev Foundation Implants from cellular scaffolding and blood vessel stalk
WO2015033344A1 (en) 2013-09-05 2015-03-12 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods and kits for inhibiting pathogenicity of group a streptococcus (gas) or group g streptococcus (ggs)
WO2015037009A1 (en) 2013-09-16 2015-03-19 Plexicure Ltd. Isolated proteins capable of binding plexin-a4 and methods of producing and using same
EP3046929B1 (de) 2013-09-17 2019-01-16 Yeda Research and Development Co., Ltd. Aus erk gewonnene peptide und verwendungen davon
CN105960453A (zh) 2013-10-01 2016-09-21 卡迪马干细胞有限公司 从人多能干细胞定向分化星形胶质细胞用于肌萎缩侧索硬化(als)的治疗和药物筛选
US11901041B2 (en) 2013-10-04 2024-02-13 Bio-Rad Laboratories, Inc. Digital analysis of nucleic acid modification
US20150158926A1 (en) 2013-10-21 2015-06-11 Opko Biologics, Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
RU2746943C2 (ru) 2013-10-21 2021-04-22 Опко Байолоджикс Лтд. Полипептиды длительного действия и способы их получения и введения
US10767156B2 (en) 2013-10-24 2020-09-08 Yeda Research And Development Co., Ltd. Polynucleotides encoding BREX system polypeptides and methods of using same
SG11201603230UA (en) 2013-10-25 2016-05-30 Univ Wayne State Methods, systems and compositions relating to cell conversion via protein induced in-vivo cell reprogramming
CA2928315C (en) 2013-10-31 2023-03-21 Biokine Therapeutics Ltd. Methods of treating acute myeloid leukemia with a flt3 mutation
WO2015066681A1 (en) 2013-11-04 2015-05-07 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for controlling arthropod parasite and pest infestations
GB201320729D0 (en) 2013-11-25 2014-01-08 Cancer Rec Tech Ltd Therapeutic compounds and their use
GB201320732D0 (en) 2013-11-25 2014-01-08 Cancer Rec Tech Ltd Methods of chemical synthesis
EP3074391B1 (de) 2013-11-28 2019-07-31 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Rna-polymerase-hemmer und verwendungen davon
US9885688B2 (en) 2013-11-29 2018-02-06 Technion Research And Development Foundation Limited Continuous cell detection by isotachophoresis
WO2015079446A1 (en) 2013-11-29 2015-06-04 Technion Research & Development Foundation Limited Metod and device for accelerated surface-based reactions
UA119253C2 (uk) 2013-12-10 2019-05-27 Біолоджикс, Інк. Спосіб боротьби із вірусом у кліща varroa та у бджіл
DK3080302T3 (da) * 2013-12-10 2020-10-26 Conexio Genomics Pty Ltd Metoder og sonder til identifikation af genalleler
US10053712B2 (en) 2013-12-10 2018-08-21 Yeda Research And Development Co. Ltd. Use of enzymes which catalyze pyruvate synthesis from formate and acetyl-CoA and bacteria expressing same
US9944977B2 (en) 2013-12-12 2018-04-17 Raindance Technologies, Inc. Distinguishing rare variations in a nucleic acid sequence from a sample
CN109336883B (zh) 2013-12-20 2022-06-14 阿斯特克斯治疗有限公司 双环杂环化合物及其治疗用途
MX368629B (es) 2014-01-15 2019-10-08 Monsanto Technology Llc Metodos y composiciones para el control de malezas utilizando polinucleotidos de 5-enolpiruvilshikimato-3-fosfato sintasa (epsps).
WO2015114633A1 (en) 2014-01-30 2015-08-06 Yissum Research And Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Actin binding peptides and compositions comprising same for inhibiting angiogenes is and treating medical conditions associated with same
CN106470699A (zh) 2014-02-03 2017-03-01 耶路撒冷希伯来大学的益生研究开发有限公司 使用酪蛋白激酶i抑制剂以消耗干细胞的用途
CN106715695B (zh) 2014-02-05 2020-07-31 耶达研究及发展有限公司 用于治疗和诊断的微rna和包含所述微rna的组合物
WO2015118538A1 (en) 2014-02-06 2015-08-13 Yeda Research And Development Co. Ltd. Anti cd84 antibodies, compositions comprising same and uses thereof
US20170101633A1 (en) 2014-02-10 2017-04-13 Protalix Ltd. Method of maintaining disease stability in a subject having gaucher's disease
WO2015121859A1 (en) 2014-02-11 2015-08-20 Brainstorm Cell Therapeutics Ltd. Method of qualifying cells
WO2015132784A1 (en) 2014-03-03 2015-09-11 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Method and device for detection of pseudomonas aeruginosa
RU2715893C2 (ru) 2014-03-26 2020-03-04 Астекс Терапьютикс Лтд Комбинации ингибитора fgfr и ингибитора igf1r
SMT202100115T1 (it) 2014-03-26 2021-05-07 Astex Therapeutics Ltd Combinazioni di inibitori di fgfr e cmet per il trattamento del cancro
JO3512B1 (ar) 2014-03-26 2020-07-05 Astex Therapeutics Ltd مشتقات كينوكسالين مفيدة كمعدلات لإنزيم fgfr كيناز
EP2923709A1 (de) 2014-03-28 2015-09-30 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Mehrstufiger Mehrkomponenten-Malariaimpfstoff
BR112016022711A2 (pt) 2014-04-01 2017-10-31 Monsanto Technology Llc composições e métodos para controle de pragas de inseto
CA2945438C (en) 2014-04-10 2023-08-22 Bonus Therapeutics Ltd. Bone repair compositions
WO2015159293A2 (en) 2014-04-14 2015-10-22 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. A method and kit for determining the tissue or cell origin of dna
US10590467B2 (en) 2014-04-17 2020-03-17 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods and kits for analyzing DNA binding moieties attached to DNA
US11427647B2 (en) 2014-04-27 2022-08-30 Famewave Ltd. Polynucleotides encoding humanized antibodies against CEACAM1
CA2946262C (en) 2014-04-27 2022-07-26 Ccam Biotherapeutics Ltd. Humanized antibodies against ceacam1
EP3058085B1 (de) 2014-04-28 2021-02-17 Yeda Research and Development Co., Ltd. Mikrobiomreaktion auf mittel
WO2015170320A2 (en) 2014-05-04 2015-11-12 Forrest Innovations Ltd. Compositions and methods of using same for controlling pathogenically infected mosquitoes
EP3145947B1 (de) 2014-05-22 2025-02-12 Yeda Research and Development Co., Ltd. Rekombinante mikroorganismen zur kohlenstofffixierung
US20170095512A1 (en) 2014-06-02 2017-04-06 Kadimastem Ltd. Methods of inducing myelination and maturation of oligodendrocytes
US20170253881A1 (en) 2014-06-02 2017-09-07 Technion Research & Development Foundation Limited Compositions and methods of selectively inhibiting irp1 and treating inflammation
AU2015280252A1 (en) 2014-06-23 2017-01-12 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for regulating gene expression via RNA interference
EP3145951A1 (de) 2014-06-24 2017-03-29 InSight Biopharmaceuticals Ltd. Verfahren zur reinigung von antikörpern
US11807857B2 (en) 2014-06-25 2023-11-07 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for delivering nucleic acids to plant cells and regulating gene expression
US10883994B2 (en) 2014-06-25 2021-01-05 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Identification of cancer stem cells markers and use of same for diagnosis and treatment
US10583084B2 (en) 2014-06-26 2020-03-10 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Liposomal formulations for delivery of nucleic acids
WO2016005985A2 (en) 2014-07-09 2016-01-14 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Method for reprogramming cells
CN107001442B (zh) 2014-07-15 2021-04-27 耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展公司 Cd44的分离的多肽及其应用
CN106715719B (zh) 2014-07-21 2022-08-02 福尔生物治疗有限公司 用于确定患者特定突变的药物反应的方法
WO2016013008A1 (en) 2014-07-21 2016-01-28 Novellusdx Ltd. Methods and systems for determining oncogenic index of patient specific mutations
CA2955842A1 (en) 2014-07-29 2016-02-04 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for controlling insect pests
EP3194572B1 (de) 2014-07-30 2023-10-25 Yeda Research and Development Co. Ltd. Medien zur kultivierung pluripotenter stammzellen
US10303846B2 (en) 2014-08-14 2019-05-28 Memed Diagnostics Ltd. Computational analysis of biological data using manifold and a hyperplane
WO2016030899A1 (en) 2014-08-28 2016-03-03 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of treating amyotrophic lateral scleroses
EP2992895A1 (de) 2014-09-08 2016-03-09 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Mehrstufiger Dreikomponenten-Malariaimpfstoff
CA2959716A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Yeda Research And Development Co. Ltd. Anti-her3 antibodies and uses of same
EP3191523B1 (de) 2014-09-08 2019-08-07 Yeda Research and Development Co., Ltd. Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung von krebs mit resistenz gegenüber einem tyrosinkinasehemmer (tki)
US20170283844A1 (en) 2014-09-11 2017-10-05 The State of Israel, Ministry of Agriculture & Rural Development, Argricultural Research Organiza Methods of producing mogrosides and compositions comprising same and uses thereof
IL234638A0 (en) 2014-09-14 2014-12-02 Yeda Res & Dev NMDA receptor antagonists for the treatment of Gaucher disease
CN106999608A (zh) 2014-09-21 2017-08-01 耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展公司 为了治疗脂质相关病症而下调mir‑132
US10570368B2 (en) 2014-11-13 2020-02-25 Enzootic Holdings Ltd. Functional sex-reversal of decapod crustacean females
WO2016079736A2 (en) 2014-11-17 2016-05-26 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of treating diseases related to mitochondrial function
CN107429291A (zh) 2014-11-17 2017-12-01 耶达研究及发展有限公司 分析微生物组的方法
EA038931B9 (ru) 2014-11-20 2022-02-18 Йиссум Рисерч Дивелопмент Компани Оф Зе Хебрю Юниверсити Оф Иерусалим Лтд. Композиции и способы получения полипептидов с модифицированным профилем гликозилирования в клетках растений
CN107208070B (zh) 2014-11-26 2021-09-07 技术创新动力基金（以色列）有限合伙公司 细菌基因的靶向消除
US10883111B2 (en) 2014-11-27 2021-01-05 Danziger Innovations Ltd. Nucleic acid constructs for genome editing
AU2015358890B2 (en) 2014-12-10 2019-06-13 Opko Biologics Ltd. Methods of producing long acting CTP-modified growth hormone polypeptides
WO2016092555A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Yeda Research And Development Co. Ltd. Isolated phosphotriesterase polypeptides, polynucleotides encoding same and uses thereof in treating or preventing organophosphate exposure associated damage
CN107209184B (zh) 2014-12-11 2020-04-24 米密德诊断学有限公司 用于诊断多种感染的标记组合及其使用方法
EP3233099A1 (de) 2014-12-17 2017-10-25 Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem, Ltd. Phagentherapie gegen enterokokken
WO2016103269A1 (en) 2014-12-23 2016-06-30 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Populations of neural progenitor cells and methods of producing and using same
US20180011092A1 (en) 2014-12-30 2018-01-11 Cell Cure Neurosciences Ltd. Assessing retinal pigment epithelial cell populations
SG11201705379VA (en) 2014-12-30 2017-08-30 Cell Cure Neurosciences Ltd Rpe cell populations and methods of generating same
HK1245822A1 (zh) 2015-01-04 2018-08-31 Protalix Ltd 一种经修饰的dnase及其应用
WO2016116935A1 (en) 2015-01-21 2016-07-28 Yeda Research And Development Co. Ltd. Use of rasa2 as a prognostic and therapeutic marker for melanoma
RU2723049C2 (ru) 2015-01-22 2020-06-08 Монсанто Текнолоджи Ллс Композиции и способы борьбы с leptinotarsa
JOP20200201A1 (ar) 2015-02-10 2017-06-16 Astex Therapeutics Ltd تركيبات صيدلانية تشتمل على n-(3.5- ثنائي ميثوكسي فينيل)-n'-(1-ميثيل إيثيل)-n-[3-(ميثيل-1h-بيرازول-4-يل) كينوكسالين-6-يل]إيثان-1.2-ثنائي الأمين
EP3261612A1 (de) 2015-02-26 2018-01-03 Yeda Research and Development Co. Ltd Verfahren zur förderung des haarwuchses
US20180071280A1 (en) 2015-02-26 2018-03-15 Urifer Ltd. Modulators of cell death processes
US20180066262A1 (en) 2015-03-09 2018-03-08 Caris Science, Inc. Oligonucleotide probes and uses thereof
EP3268475B1 (de) 2015-03-11 2020-10-21 Yissum Research and Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Köderoligonukleotide zur behandlung von krankheiten
CA2979541C (en) 2015-03-12 2019-07-16 Zoetis Services Llc Pyolysin methods and compositions
IL237852A0 (en) 2015-03-19 2016-03-24 Yeda Res & Dev Antibodies against amphigoline, medical preparations containing them and their use
EP3273971A4 (de) 2015-03-27 2018-12-05 Yeda Research and Development Co. Ltd. Verfahren zur behandlung von motoneuronenerkrankungen
BR112017021016A2 (pt) 2015-03-31 2018-07-03 Yeda Research And Development Co Ltd preparação de proteína, composição farmacêutica, proteína de fusão, polinucleotídeo isolado, estrutura de ácido nucleico, método para tratamento de doença ou condição associada ao excesso de glutamato, e método de purificação de um polipeptídeo
EP3277260B1 (de) 2015-04-01 2021-05-12 The State of Israel, Ministry of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization (ARO) (Volcani Center) Pflanzenextrakte aus erodium crassifolium l'her und verwendungen davon
US10478494B2 (en) 2015-04-03 2019-11-19 Astex Therapeutics Ltd FGFR/PD-1 combination therapy for the treatment of cancer
CA2981732C (en) 2015-04-07 2024-03-12 Boris Khalfin Compositions for treating and/or preventing cell or tissue necrosis specifically targeting cathepsin c and/or cela1 and/or cela3a and/or structurally related enzymes thereto
EP3081575A1 (de) 2015-04-12 2016-10-19 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Anti-plasmodium-parasiten-antikörper
ES2951653T3 (es) 2015-04-27 2023-10-24 Medical Res Infrastructure & Health Services Fund Tel Aviv Medical Ct Moléculas dirigidas a EGR1 para el tratamiento de afecciones inflamatorias e hiperproliferativas
WO2016174673A1 (en) 2015-04-29 2016-11-03 The State Of Israel, Ministry Of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization (Aro) (Volcani Center) Anti-phytopathogenic compositions
WO2016174652A1 (en) 2015-04-30 2016-11-03 Technion Research & Development Foundation Limited Chimeric antigen receptors and methods of their use
CN108026566A (zh) 2015-05-04 2018-05-11 特拉维夫大学拉莫特有限公司 用于使dna片段化的方法和试剂盒
US20180161300A1 (en) 2015-05-11 2018-06-14 Yeda Research And Development Co., Ltd. Citrin inhibitors for the treatment of cancer
US11219636B2 (en) 2015-05-17 2022-01-11 The Medical Research, Infrastructure and Health Services Fund of the Tel Aviv Medical Center Compositions and methods for treating cancer
WO2016185457A1 (en) 2015-05-19 2016-11-24 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of promoting lymphangiogenesis
WO2016185481A2 (en) 2015-05-20 2016-11-24 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method of targeting senescent cells
CA2986203A1 (en) 2015-05-21 2016-11-24 Yeda Research And Development Co. Ltd. Bacterial populations for promoting health
WO2016193969A2 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Opko Biologics Ltd. Pegylated oxyntomodulin variants
US10883103B2 (en) 2015-06-02 2021-01-05 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for delivery of a polynucleotide into a plant
CN108024517A (zh) 2015-06-03 2018-05-11 孟山都技术公司 用于将核酸引入到植物中的方法和组合物
NL2014935B1 (en) 2015-06-08 2017-02-03 Applied Immune Tech Ltd T cell receptor like antibodies having fine specificity.
WO2016203476A1 (en) 2015-06-18 2016-12-22 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods and compositions for diagnosing and treating urothelial cancer
EP4026563B1 (de) 2015-06-18 2025-10-29 Yeda Research and Development Co. Ltd Konditionierungsprotokolle und verwendung davon zur geweberegeneration
PL3310347T3 (pl) 2015-06-19 2021-12-27 Opko Biologics Ltd. Długo działające czynniki krzepnięcia i sposoby wytwarzania
FR3037970B1 (fr) * 2015-06-23 2018-11-30 Idemia Identity And Security Kit de pcr pour l'electrophorese capillaire
CA2991045A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Caris Science, Inc. Therapeutic oligonucleotides binding c1q
BR112018000903A2 (pt) 2015-07-16 2018-09-11 Biokine Therapeutics Ltd. composições e métodos para o tratamento de câncer
DK3322425T3 (da) 2015-07-16 2023-06-12 Yeda Res & Dev Genmodificerede anti-tredjeparts-centralhukommelse-t-celler og brug af samme i immunterapi
US10668094B2 (en) 2015-07-19 2020-06-02 Yeda Research And Development Co. Ltd. Selective inhibitors of Alpha2-containing isoforms of Na,K-ATPase and use thereof for reduction of intraocular pressure
WO2017013661A1 (en) 2015-07-22 2017-01-26 Phytopharma International Ltd. Bee-ingestible compositions, methods of using same for producing honey and honey produced thereby
WO2017019918A1 (en) 2015-07-28 2017-02-02 Caris Science, Inc. Targeted oligonucleotides
EP3328995B1 (de) 2015-07-29 2021-03-31 Hadasit Medical Research Services And Development Herstellung von netzhautpigmentepithelzellen in grossem umfang
US20180221393A1 (en) 2015-08-03 2018-08-09 Biokine Therapeutics Ltd. Cxcr4 binding agents for treatment of diseases
US20180237774A1 (en) 2015-08-04 2018-08-23 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of screening for riboswitches and attenuators
CN108138144A (zh) 2015-08-05 2018-06-08 细胞治疗神经科学有限公司 视网膜色素上皮细胞的制备
CN108138145A (zh) 2015-08-05 2018-06-08 细胞治疗神经科学有限公司 用于治疗视网膜疾病的光感受器的制备
EP3334449B1 (de) 2015-08-10 2021-09-29 The Medical Research, Infrastructure, And Health Services Fund Of The Tel Aviv Medical Center Verfahren und pharmazeutische zusammensetzungen zur verbesserung der wundheilung mithilfe von cd24
US20180237790A1 (en) 2015-08-13 2018-08-23 Forrest Innovation Ltd. Formulations and compositions for delivery of nucleic acids to plant cells
PT3334454T (pt) 2015-08-14 2022-12-20 Univ Melbourne Composições de mycoplasma bovis
WO2017033188A1 (en) 2015-08-24 2017-03-02 Yeda Research And Development Co. Ltd. Algal oil and biofuel and methods of producing same
US10765706B2 (en) 2015-09-03 2020-09-08 University Of South Florida Method of stem cell delivery into the brain during chronic disease using blood brain barrier permeabilizers
US10647981B1 (en) 2015-09-08 2020-05-12 Bio-Rad Laboratories, Inc. Nucleic acid library generation methods and compositions
WO2017042814A1 (en) 2015-09-10 2017-03-16 Yeda Research And Development Co. Ltd. Use of perforin positive immature dendritic cells in disease treatment
LT3353177T (lt) 2015-09-23 2020-08-25 Janssen Pharmaceutica Nv Tricikliniai heterociklai, skirti vėžio gydymui
MX378230B (es) 2015-09-23 2025-03-10 Janssen Pharmaceutica Nv 1,4-benzodiazepinas biheteroarilo sustituidas y usos de las mismas para el tratamiento del cáncer.
GB201517217D0 (en) 2015-09-29 2015-11-11 Astex Therapeutics Ltd And Cancer Res Technology Ltd Pharmaceutical compounds
CN108473472B (zh) 2015-10-02 2021-02-12 圣提内尔肿瘤学有限公司 作为p70s6激酶抑制剂的2-氨基喹唑啉衍生物
EP3365376A1 (de) 2015-10-25 2018-08-29 Yeda Research and Development Co., Ltd. Auf quiescin-sulfhydryl-oxidase (qsox1) abzielende antikörper und verwendungen davon
EP4545633A3 (de) 2015-10-26 2025-07-09 Cell Cure Neurosciences Ltd. Herstellung von retinalen pigmentepithelzellen
CA3002767C (en) 2015-10-27 2023-03-14 Zvi VOGEL Compositions comprising cannabidiol and second therapeutic agents for the treatment of cancer
IL242380A0 (en) 2015-10-29 2016-02-01 Yeda Res & Dev A method for inducing the division of cardiomyocytes and treating heart diseases
EP3370791A1 (de) 2015-11-03 2018-09-12 Ariel-University Research and Development Company Ltd. Zusammensetzungen zur regeneration und reparatur von nervengewebe
EP3374524B1 (de) 2015-11-11 2025-01-29 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Verfahren zum nachweis von 5-hydroxymethylcytosin und zur diagnose von krebs
EP3384286B1 (de) 2015-11-30 2023-04-19 Kadimastem Ltd. Verfahren zur differenzierung und reinigung endokriner pankreaszellen
EP3176183A1 (de) 2015-12-02 2017-06-07 Yeda Research and Development Co. Ltd Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung von krebs ohne resistenz gegen einen tyrosinkinasehemmer (tki)
US11213609B2 (en) 2015-12-16 2022-01-04 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Particles comprising decellularized omentum
EP3397344A4 (de) 2015-12-28 2019-08-28 B.G. Negev Technologies and Applications Ltd. at Ben-Gurion University Zusammensetzung und verfahren zur behandlung von amyotropher lateralsklerose
US10828318B2 (en) 2016-01-06 2020-11-10 Yeda Research And Development Co. Ltd. Compositions and methods for treating malignant, autoimmune and inflammatory diseases
WO2017122203A1 (en) 2016-01-11 2017-07-20 Technion Research & Development Foundation Limited Methods of determining prognosis of sepsis and treating same
BR112018014902A2 (pt) 2016-01-21 2018-12-18 The State Of Israel Ministry Of Agriculture & Rural Development Agricultural Res Organization Aro Vo plantas partenocárpicas do tipo solanácea, frutos e sementes de uma planta, produtos processados comestíveis, métodos de produção e de reprodução de uma planta,
IL243839B (en) 2016-01-28 2018-01-31 Sp Nano Ltd Conductive wires
IL243838A (en) 2016-01-28 2017-07-31 Sp Nano Ltd The composition containing sp1 protein and carbon nanoparticles and its uses
WO2017130205A1 (en) 2016-01-31 2017-08-03 Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. Autosomal-identical pluripotent stem cell populations having non-identical sex chromosomal composition and uses thereof
AU2017214733B2 (en) 2016-02-04 2022-09-29 Yeda Research And Development Co. Ltd. Peptides and use of same in the treatment of diseases, disorders or conditions associated with a mutant p53
WO2017138008A2 (en) 2016-02-14 2017-08-17 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of modulating protein exocytosis and uses of same in therapy
EP3414346B1 (de) 2016-02-14 2019-11-13 Yeda Research and Development Co. Ltd. Mikrobiombasierte diagnose, vorhersage und behandlung von rezidivierender fettleibigkeit
AU2017220830A1 (en) 2016-02-16 2018-09-06 Yeda Research And Development Co. Ltd. Non-protein phenylalanine analogues for inhibiting cyanobacteria and plant growth
JP7366541B2 (ja) 2016-02-19 2023-10-23 コード バイオセラピューティクス インコーポレイテッド 核酸キャリア及び治療上の使用方法
WO2017145162A1 (en) 2016-02-23 2017-08-31 Chaya Brodie Generation of cancer stem cells and use thereof
EP3423495B1 (de) 2016-03-01 2021-10-20 Yissum Research Development Company of The Hebrew University of Jerusalem Ltd. Gegen menschlichen poliovirus-rezeptors (pvr) spezifische antikörper
EP3907292A1 (de) 2016-03-03 2021-11-10 Memed Diagnostics Ltd. Rna-analyse zur diagnose eines infektionstyps
US20190216891A1 (en) 2016-03-06 2019-07-18 Yeda Research And Development Co., Ltd. Method for modulating myelination
IL244649A0 (en) 2016-03-17 2016-06-30 Yeda Res & Dev Methods for the isolation of barrel-like proteases and the identification of peptides that are cleaved by Alidan
US10731166B2 (en) 2016-03-18 2020-08-04 Caris Science, Inc. Oligonucleotide probes and uses thereof
EP3440461A4 (de) 2016-04-06 2019-11-06 Technion Research & Development Foundation Limited Infiltrierende immunzellanteile zur vorhersage einer anti-tnf-antwort in dickdarmbiopsien
US10421785B2 (en) 2016-04-11 2019-09-24 Bar-Ilan University Delta receptor agonist peptides and use thereof
CN109475581A (zh) 2016-05-22 2019-03-15 耶达研究及发展有限公司 为了移植及诱导耐受性而使用肺细胞的方法
US12018331B2 (en) 2016-05-23 2024-06-25 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods of diagnosing cancer using cancer testis antigens
IL245861A0 (en) 2016-05-25 2016-09-04 Yeda Res & Dev Use of substances to treat drug-resistant tumors
WO2017205686A1 (en) 2016-05-25 2017-11-30 Caris Science, Inc. Oligonucleotide probes and uses thereof
US20190100732A1 (en) 2016-06-02 2019-04-04 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Assay for the removal of methyl-cytosine residues from dna
EP3464322B1 (de) 2016-06-05 2023-04-05 Tel HaShomer Medical Research Infrastructure and Services Ltd. Neuartige moleküle zur behandlung von entzündungen
EP3468610A1 (de) 2016-06-09 2019-04-17 OPKO Biologics Ltd. Langwirkende oxyntomodulinformulierung und verfahren zur herstellung und verabreichung davon
WO2017221225A1 (en) 2016-06-19 2017-12-28 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Screening for chemotherapy resistance in human haploid cells
IL246378A0 (en) 2016-06-21 2016-11-30 Technion Res & Dev Foundation A hybrid matrix of polymers that adhere to the mucosa and a lipidic drug release system for the treatment of oral cancer
US10961504B2 (en) 2016-06-27 2021-03-30 Yeda Research And Development Co. Ltd. Veto cells generated from memory T cells
EP3482200B1 (de) 2016-07-10 2022-05-04 Memed Diagnostics Ltd. Proteinsignaturen zur unterscheidung zwischen bakteriellen und viralen infektionen
WO2018011796A1 (en) 2016-07-10 2018-01-18 Memed Diagnostics Ltd. Early diagnosis of infections
AU2017296175B2 (en) 2016-07-11 2023-11-02 Bonus Therapeutics Ltd. Cell compositions for tissue regeneration
CA3030534A1 (en) 2016-07-11 2018-01-18 The National Institute For Biotechnology In The Negev, Ltd. Fusion proteins with extended serum half life
IL291373B2 (en) 2016-07-11 2023-10-01 Yissum Res Dev Co Of Hebrew Univ Jerusalem Ltd Methods and systems for growing cells in culture
JP7319187B2 (ja) 2016-07-11 2023-08-01 オプコ バイオロジクス リミテッド 長時間作用型凝固因子ｖｉｉおよびその製造方法
IL246722A0 (en) 2016-07-11 2016-09-29 Yeda Res & Dev Combination therapy to increase endogenous nitric oxide (no) synthesis
ES3034904T3 (en) 2016-07-18 2025-08-27 Univ Ramot Modular platform for targeted therapeutics
US20190203270A1 (en) 2016-07-24 2019-07-04 Yeda Research And Development Co., Ltd. Methods and kits for analyzing dna binding moieties attached to dna
US10982252B2 (en) 2016-08-08 2021-04-20 Technology Innovation Momentum Fund (Israel) Limited Partnership Bacterial systems for analyzing ubiquitylated polypeptides
US12205677B2 (en) 2016-08-10 2025-01-21 Memed Diagnostics Ltd. System and method for analysis of biological data
US10633706B2 (en) 2016-08-10 2020-04-28 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Analysis of methylation status and copy number
AU2017311684B2 (en) 2016-08-14 2023-05-04 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Mesenchymal cell-derived exosomes to treat neurological disorders
IL247368A0 (en) 2016-08-18 2016-11-30 Yeda Res & Dev Diagnostic and therapeutic uses of exosomes
WO2018037416A1 (en) 2016-08-25 2018-03-01 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods and compositions for treating autoimmune diseases
IL265127B2 (en) 2016-08-28 2025-04-01 The State Of Israel Ministry Of Agriculture & Rural Development Agricultural Res Organization Aro Vo Method for controlling fungal infection in plants
EP3506906A4 (de) * 2016-08-31 2020-08-12 Taro Pharmaceutical Industries Ltd. Topische fenoldopam-formulierungen zur behandlung von hautkrankheiten
WO2018047154A1 (en) 2016-09-07 2018-03-15 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Anti-nkp46 antibodies and therapeutic use of same
WO2018051347A1 (en) 2016-09-14 2018-03-22 Yeda Research And Development Co. Ltd. Crisp-seq, an integrated method for massively parallel single cell rna-seq and crispr pooled screens
WO2018051355A1 (en) 2016-09-19 2018-03-22 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Tamoxifen or tamoxifen in combination with arginine/citrulline for the use in the treatment of muscular dystrophy
WO2018060998A1 (en) 2016-09-29 2018-04-05 Memed Diagnostics Ltd. Methods of prognosis and treatment
WO2018065985A1 (en) 2016-10-06 2018-04-12 Moran Bercovici Device and method for isotachophoretic focusing large sample volumes
IL248468A0 (en) 2016-10-13 2017-01-31 Technion Res & Dev Foundation Use of caspase-3 inhibitors and caspase-3 activators in the manufacture of medicament for treating cancer and wound healing
IL248385A0 (en) 2016-10-18 2017-02-01 Yeda Res & Dev Treatment of circadian rhythm disorder
EP3538651A1 (de) 2016-11-10 2019-09-18 Yeda Research and Development Co., Ltd. Phosphotriesterasen zur behandlung oder prävention von schäden im zusammenhang mit organophosphatbelastung
CN110234765A (zh) 2016-11-28 2019-09-13 耶达研究及发展有限公司 分离的多核苷酸和多肽及使用它们来表达感兴趣的表达产物的方法
WO2018100574A1 (en) 2016-11-30 2018-06-07 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of treating liver toxicity and disorders
CA3026989C (en) 2016-12-01 2023-07-11 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Combined treatment for nerve injuries
KR20190091483A (ko) 2016-12-15 2019-08-06 더 내셔널 인스티튜트 포 바이오테크놀로지 인 더 네게브 엘티디. 항-pcna 단클론성 항체 및 이의 용도
WO2018134824A1 (en) 2017-01-18 2018-07-26 Yeda Research And Development Co. Ltd. Genetically modified veto cells and use of same in immunotherapy
CN110234997B (zh) 2017-01-25 2023-06-16 St创新诊断有限公司 诊断恶性疾病的方法
IL250479A0 (en) 2017-02-06 2017-03-30 Sorek Rotem Genetically engineered cells expressing a disarm system that confers resistance to phages and methods for their production
IL268357B2 (en) 2017-02-08 2025-07-01 Hadasit Med Res Service Photoreceptor cells for the treatment of retinal diseases
IL250799A0 (en) 2017-02-26 2017-04-30 The Nat Inst For Biotechnology In The Negev Ltd Soluble chimeras of dr3 and pro-pilot ether and their use
IL250916A0 (en) 2017-03-02 2017-06-29 Geiger Benjamin Methods for growing t cells in culture and their use
EP3592377A4 (de) 2017-03-09 2021-02-17 Diamedica Inc. Darreichungsformen von gewebekallikrein 1
WO2018167778A1 (en) 2017-03-12 2018-09-20 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of diagnosing and prognosing cancer
WO2018167780A1 (en) 2017-03-12 2018-09-20 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of prognosing and treating cancer
CA3056653A1 (en) 2017-03-16 2018-09-20 Bio Time, Inc. Methods for the treatment of retinal diseases
DK3607050T3 (da) 2017-04-05 2023-11-13 Yeda Res & Dev Ex vivo-dyrkningssystem og metoder til brugen af samme
IL252151A0 (en) 2017-05-07 2017-07-31 Fainzilber Michael Treatment of stress disorders
US12091445B2 (en) 2017-05-10 2024-09-17 Ariel Scientific Innovations Ltd. Methods of purifying antibodies
ES2939298T3 (es) 2017-05-21 2023-04-20 Medical Res Infrastructure & Health Services Fund Tel Aviv Medical Ct Combinación de marcadores para el diagnóstico del cáncer
US20200172604A1 (en) 2017-05-23 2020-06-04 Technion Research & Development Foundation Limited Agents which inhibit gads dimerization and methods of use thereof
GB201708665D0 (en) 2017-05-31 2017-07-12 Tropic Biosciences Uk Ltd Compositions and methods for increasing extractability of solids from coffee beans
GB201708662D0 (en) 2017-05-31 2017-07-12 Tropic Biosciences Uk Ltd Compositions and methods for increasing shelf-life of banana
WO2018220582A1 (en) 2017-05-31 2018-12-06 Tropic Biosciences UK Limited Methods of selecting cells comprising genome editing events
JOP20190280A1 (ar) 2017-06-02 2019-12-02 Janssen Pharmaceutica Nv مثبطات fgfr2 لعلاج سرطان الأوعية الصفراوية
WO2018229767A1 (en) 2017-06-13 2018-12-20 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods for improving cell protein production yields
WO2018229764A1 (en) 2017-06-13 2018-12-20 Yeda Research And Development Co. Ltd. Treatment of advanced or progressive multiple sclerosis
WO2019001419A1 (en) 2017-06-27 2019-01-03 Janssen Pharmaceutica Nv NEW COMPOUNDS OF QUINOLEINONE
US11466323B2 (en) 2017-07-13 2022-10-11 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Dual-probe digital droplet PCR strategy for specific detection of tissue-specific circulating DNA molecules
EP4403646A3 (de) 2017-07-13 2025-01-08 Yissum Research and Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Dna-ziele als gewebespezifische methylierungsmarker
EP3652342A1 (de) 2017-07-13 2020-05-20 Yissum Research and Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Erkennung gewebespezifischer dna
JP2020527054A (ja) 2017-07-15 2020-09-03 アレフ ファームス 培養肉組成物
IL253642A0 (en) 2017-07-24 2017-09-28 Seger Rony Combined treatment for cancer
WO2019030759A1 (en) 2017-08-08 2019-02-14 Technology Innovation Momentum Fund (Israel) Limited Partnership CHLORAMPHENICOL-RESISTANT TRUNCATED PROTEIN AND USES THEREOF
IL253984A0 (en) 2017-08-14 2017-09-28 Yeda Res & Dev Immunotherapy against aranviruses that bind through transferrin receptor 1 (tfr1
EP3673267A4 (de) 2017-08-21 2021-03-24 Savicell Diagnostic Ltd. Verfahren zur diagnose und behandlung von lungenkrebs
WO2019038771A1 (en) 2017-08-23 2019-02-28 Technion Research & Development Foundation Limited COMPOSITIONS AND METHODS FOR ENHANCING ALCOHOL TOLERANCE IN YEAST
EP3675893A4 (de) 2017-08-30 2021-05-26 Hadasit Medical Research Services&Development Ltd. Verfahren zur behandlung und diagnose von metastasierendem leberkrebs
WO2019053731A1 (en) 2017-09-18 2019-03-21 B. G. Negev Technologies And Applications Ltd., At Ben-Gurion University SUCCINATE REGULATORY POLYPEPTIDES AND USE THEREOF
DK3684930T3 (da) 2017-09-19 2022-06-07 Tropic Biosciences Uk Ltd Modificering af ikke-kodende plante-RNA-molekylers specificitet for inaktivering af genekspression
CA3075956A1 (en) 2017-09-19 2019-03-28 The State Of Israel, Ministry Of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization (Aro) (Volcani Center) Genome-edited birds
EP3701034A4 (de) 2017-10-23 2021-07-28 Carmel Haifa University Economic Corporation Ltd. Gelbrostresistenzgen wtk1 (yr15) und seine verwendung
WO2019082184A1 (en) 2017-10-24 2019-05-02 Elani Dalia METHODS OF TREATING ISCHEMIC DISEASE
WO2019084158A1 (en) 2017-10-26 2019-05-02 Ultima Genomics, Inc. METHODS AND SYSTEMS FOR SEQUENCE CALL
IL255664A0 (en) 2017-11-14 2017-12-31 Shachar Idit Hematopoietic stem cells with enhanced properties
JP7329510B2 (ja) 2017-11-24 2023-08-18 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． ピラゾロピリジノン化合物
MX2020005344A (es) 2017-11-24 2020-08-13 Janssen Pharmaceutica Nv Compuestos de pirazolopiridinona.
BR112020010830A2 (pt) 2017-11-29 2020-11-10 Weedout Ltd. composições, kits e métodos para controlar erva daninha do gênero amaranthus
US20200390800A1 (en) 2017-11-29 2020-12-17 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Methods of preventing or treating neurogenic shock
WO2019106680A1 (en) 2017-12-03 2019-06-06 Yeda Research And Development Co. Ltd. Treatment of an ischemic heart disease
EP3723785A1 (de) 2017-12-17 2020-10-21 Yeda Research and Development Co. Ltd Komplexe modulatoren des cop9-signalosoms (csn) und deren verwendung
EP3731965A1 (de) 2017-12-28 2020-11-04 Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Verfahren zur wiedergabe von biorhythmen auf einem mikrofluidischen chip
US12455279B2 (en) 2018-01-25 2025-10-28 Mia Levite Personalized immunotherapy for rejuvenating activating and strengthening exhausted and dysfunctional T cells, reducing PD-1, and improving immune function
IL257225A (en) 2018-01-29 2018-04-09 Yeda Res & Dev Treatment of sarcoma
CA3087291A1 (en) 2018-01-29 2019-08-01 Lavie Bio Ltd. Plant microbial preparations, compositions and formulations comprising same and uses thereof
IL257269A (en) 2018-01-31 2018-04-09 Olender Tsviya Signaling is directed to the endoplasmic reticulum
EP3746179A4 (de) 2018-02-04 2021-11-10 Technion Research & Development Foundation Limited Verfahren und zusammensetzungen zur behandlung und vorbeugung von diabetes
CN113874711A (zh) 2018-02-08 2021-12-31 菲诺法特公司 用于实时细胞监测的装置和方法
WO2019155459A1 (en) 2018-02-08 2019-08-15 Yeda Research And Development Co. Ltd. Inhibitors of the 20s proteasome
EP3749368A1 (de) 2018-02-08 2020-12-16 Yeda Research and Development Co. Ltd Verfahren zur identifizierung und verwendung von mitteln zur behandlung von mit darmbarrierefunktionsstörungen einhergehenden krankheiten
EP3752641A1 (de) 2018-02-18 2020-12-23 Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Zellfreie dna-entfaltung und verwendung davon
US11571433B2 (en) 2018-02-23 2023-02-07 Carmel Haifa University Economic Corporation Ltd. Methods for treating memory impairment and cognitive dysfunction
EP3759493A1 (de) 2018-02-28 2021-01-06 The Medical Research, Infrastructure and Health Services Fund of the Tel Aviv Medical Center Verfahren zur diagnose und behandlung von blasenkrebs
WO2019175869A1 (en) 2018-03-12 2019-09-19 Yeda Research And Development Co. Ltd Treatment of a heart disease
US11781183B2 (en) 2018-03-13 2023-10-10 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Diagnostic use of cell free DNA chromatin immunoprecipitation
JP7691823B2 (ja) 2018-03-15 2025-06-12 ビオンド バイオロジクス リミテッド 可溶性免疫受容体ｃｄ２８を減少させるための方法および組成物
WO2019186569A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Yeda Research And Development Co. Ltd. Use of electric field gradients to control gene expression
JP7518498B2 (ja) 2018-03-29 2024-07-18 テクニオン・リサーチ・アンド・ディベロップメント・ファウンデーション・リミテッド Ｐｔｅｎ阻害剤を含む小胞およびその使用
IL258467A (en) 2018-03-29 2018-07-04 Ilana Kolodkin Gal Methods of disrupting a biofilm and/or preventing formation of same
WO2019198084A1 (en) 2018-04-12 2019-10-17 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Anti-aging compositions and methods of use
CN112135906B (zh) 2018-04-23 2024-08-13 格扎Ad有限公司 被衣壳单元包封的核酸折纸结构
WO2019207587A1 (en) 2018-04-26 2019-10-31 Technion Research & Development Foundation Limited A device and a method for determining cell indentation activity
EP3788626A1 (de) 2018-04-29 2021-03-10 Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem, Ltd. Verfahren zur auswahl einer patientenspezifischen therapie
GB201807192D0 (en) 2018-05-01 2018-06-13 Tropic Biosciences Uk Ltd Compositions and methods for reducing caffeine content in coffee beans
WO2019220441A1 (en) 2018-05-15 2019-11-21 Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. Compositions and methods for treating cancer resistant to an anti-cancer agent
IL259392A (en) 2018-05-15 2018-08-01 Yeda Res & Dev Vaccination with cancer neoantigens
WO2019229745A1 (en) 2018-05-27 2019-12-05 Biolinerx Ltd. Agi-134 combined with a checkpoint inhibitor for the treatment of solid tumors
CA3102975A1 (en) 2018-06-07 2019-12-12 The State Of Israel, Ministry Of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization (Aro) (Volcani Center) Methods of regenerating and transforming cannabis
EP3802839A1 (de) 2018-06-07 2021-04-14 The State of Israel, Ministry of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization (ARO) (Volcani Center) Nukleinsäurekonstrukte und verfahren zu deren verwendung
WO2020003311A1 (en) 2018-06-25 2020-01-02 Yeda Research And Development Co. Ltd. Systems and methods for increasing efficiency of genome editing
AU2019297677B2 (en) 2018-07-04 2024-11-07 Ukko Inc. Methods of de-epitoping wheat proteins and use of same for the treatment of celiac disease
WO2020012467A2 (en) 2018-07-08 2020-01-16 Yeda Research And Development Co. Ltd. Person-specific assessment of probiotics responsiveness
KR20210044220A (ko) 2018-07-11 2021-04-22 카 메디컬 리미티드 SIRPalpha-4-1BBL 변이체 융합 단백질 및 이의 사용 방법
EP4566617A3 (de) 2018-07-11 2025-10-01 Immunity Pharma Ltd. Peptidverbindungen und therapeutische verwendungen davon
CN112823208A (zh) 2018-07-31 2021-05-18 科弗朗有限公司 烟草转基因事件及用于检测与使用烟草转基因事件的方法
IL261156A (en) 2018-08-14 2020-02-27 Fass Deborah Chimeric quiescin sulfhydryl oxidase (qsox1) antibodies and uses of same
EP3863637A1 (de) 2018-08-16 2021-08-18 Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Behandlung zur genreaktivierung
EP3841201A1 (de) 2018-08-24 2021-06-30 Yeda Research and Development Co. Ltd Verfahren zur modulation der m2-makrophagenpolarisation und verwendung derselben in der therapie
US20210353611A1 (en) 2018-09-20 2021-11-18 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of treating amyotrophic lateral sclerosis
MX2021003320A (es) 2018-09-21 2021-05-14 Janssen Pharmaceutica Nv Tratamiento del colangiocarcinoma.
WO2020065647A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Biolinerx Ltd. Methods of selecting treatment for cxcr4-associated cancer
WO2020069029A1 (en) 2018-09-26 2020-04-02 Emendobio Inc. Novel crispr nucleases
IL262658A (en) 2018-10-28 2020-04-30 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Prevention of age related clonal hematopoiesis and diseases associated therewith
KR20250162599A (ko) 2018-11-08 2025-11-18 이슘 리서치 디벨롭먼트 컴퍼니 오브 더 히브루 유니버시티 오브 예루살렘 엘티디. 부착 비의존성 세포 및 그 용도
IL263184A (en) 2018-11-21 2020-05-31 Yarden Yosef Method of treating cancer and compositions for same
JP7462632B2 (ja) 2018-11-30 2024-04-05 カリス エムピーアイ インコーポレイテッド 次世代分子プロファイリング
US12441776B2 (en) 2018-11-30 2025-10-14 Eirgen Pharma Ltd. Oxyntomodulin peptide analog formulations
US12478571B2 (en) 2018-12-17 2025-11-25 Pontis Biologics, Inc. Enzyme based compositions and methods for removing dental calculi
AU2019413504A1 (en) 2018-12-26 2021-06-03 Janssen Pharmaceutica Nv Thienopyridinone compounds
EP3914698B1 (de) 2019-01-23 2024-12-11 Yeda Research and Development Co. Ltd Kulturmedien für pluripotente stammzellen
IL264768A (en) 2019-02-10 2020-08-31 Sagi Irit Anti-matrix metalloproteinase 7 (mmp-7) inhibitory antibody and uses thereof
IL264854A (en) 2019-02-14 2020-08-31 Bahat Anat Spt5 inhibitors and methods of use thereof
WO2020170239A1 (en) 2019-02-21 2020-08-27 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods of generating organoids for high throughput screening of drugs
JP2022521010A (ja) 2019-02-21 2022-04-04 イッスム・リサーチ・デベロプメント・カムパニー・オブ・ザ・ヘブリュー・ユニバシティー・オブ・エルサレム リミテッド 薬物誘導性腎毒性を減少させるための方法
BR112021017265A2 (pt) 2019-03-05 2021-12-21 The State Of Israel Ministry Of Agriculture & Rural Development Agricultural Res Organization Aro Vo Agente de edição de dna, população de células de aves, ave quimérica, método para gerar uma ave quimérica e método para induzir letalidade em um embrião macho de uma ave
US11446237B2 (en) 2019-03-08 2022-09-20 Taro Pharmaceutical Industries Ltd. Stable topical compositions of fenoldopam
EP3939047B1 (de) 2019-03-10 2025-09-17 Ultima Genomics, Inc. Verfahren und systeme für sequenz-calling
GB201903520D0 (en) 2019-03-14 2019-05-01 Tropic Biosciences Uk Ltd Modifying the specificity of non-coding rna molecules for silencing genes in eukaryotic cells
JP7685954B2 (ja) 2019-03-14 2025-05-30 ビオンド バイオロジクス リミテッド 低分子脱落遮断剤
GB201903521D0 (en) 2019-03-14 2019-05-01 Tropic Biosciences Uk Ltd No title
GB201903519D0 (en) 2019-03-14 2019-05-01 Tropic Biosciences Uk Ltd Introducing silencing activity to dysfunctional rna molecules and modifying their specificity against a gene of interest
IL265486A (en) 2019-03-19 2020-09-30 Yeda Res & Dev Bistable type ii opsins and uses thereof
WO2020194317A1 (en) 2019-03-28 2020-10-01 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method of treating lipid-related disorders
JP7747521B2 (ja) 2019-03-29 2025-10-01 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． 尿路上皮癌の治療のためのｆｇｆｒチロシンキナーゼ阻害剤
WO2020201138A1 (en) 2019-03-29 2020-10-08 Janssen Pharmaceutica Nv Fgfr tyrosine kinase inhibitors for the treatment of urothelial carcinoma
US12419902B2 (en) 2019-03-31 2025-09-23 Yeda Research And Development Co. Ltd. Anti-viral and anti-tumoral compounds
WO2020202162A1 (en) 2019-04-03 2020-10-08 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Primers for multiplex pcr
EP3956477A2 (de) 2019-04-17 2022-02-23 Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Marker für die methylierung von krebszellen und verwendung davon
IL266433B (en) 2019-05-02 2020-11-30 Sagi Irit Preparations containing the propeptide of lysyl oxidase and their uses
WO2020230133A1 (en) 2019-05-13 2020-11-19 Yeda Research And Development Co. Ltd. Cell-free mirna biomarkers for prognosis and diagnosis of neurodegenerative diseases
CN114096241A (zh) 2019-05-16 2022-02-25 技术研究及发展基金有限公司 大麻素及其用途
IL266728B (en) 2019-05-19 2020-11-30 Yeda Res & Dev Identification of recurrent mutant neopeptides
CA3140611A1 (en) 2019-05-22 2020-11-26 Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. Methods of culturing human pluripotent cells
EP3983531A1 (de) 2019-06-12 2022-04-20 Hadasit Medical Research Services and Development Ltd. Verfahren zur herstellung von oligodendrocyten
EP3983540A1 (de) 2019-06-16 2022-04-20 Yeda Research and Development Co. Ltd Verfahren zur stabilisierung intrazellulärer rna
EP3990488A4 (de) 2019-06-27 2023-09-13 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Semaphorin-3a-antikörper und verwendungen davon
JP2022538647A (ja) 2019-07-04 2022-09-05 ウッコ インコーポレイテッド 脱エピトープ化されたアルファグリアジン、ならびにセリアック病およびグルテン過敏症の管理のためのその使用
EP3997114A1 (de) 2019-07-11 2022-05-18 KAHR Medical Ltd. Heterodimere und verfahren zur verwendung davon
EP3999851A4 (de) 2019-07-16 2023-04-12 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung von tuberkulose
IL268111A (en) 2019-07-16 2021-01-31 Fainzilber Michael Methods of treating pain
EP4004548B1 (de) 2019-07-29 2026-01-14 Yeda Research and Development Co. Ltd Verfahren zur behandlung und diagnose von lungenkrebs
WO2021019536A1 (en) 2019-07-30 2021-02-04 The State Of Israel, Ministry Of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization (Aro) (Volcani Center) Methods of controlling cannabinoid synthesis in plants or cells and plants and cells produced thereby
EP4014046A1 (de) 2019-08-12 2022-06-22 Yeda Research and Development Co. Ltd Dna-reparaturbluttest zur vorhersage des ansprechens von lungenkrebspatienten auf eine immuntherapie
WO2021028921A1 (en) 2019-08-12 2021-02-18 Biond Biologics Ltd. Antibodies against ilt2 and use thereof
WO2021028911A1 (en) 2019-08-14 2021-02-18 Lavie Bio Ltd. Bacterial strains having fungicidal activity, compositions comprising same and use thereof
GB201911928D0 (en) 2019-08-20 2019-10-02 Otsuka Pharma Co Ltd Pharmaceutical compounds
WO2021033176A1 (en) 2019-08-22 2021-02-25 Ariel Scientific Innovations Ltd. Scaled-up methods for purifying antibodies
EP4021463A1 (de) 2019-08-27 2022-07-06 Yeda Research and Development Co. Ltd Behandlung von bakterieller vaginose
WO2021048852A1 (en) 2019-09-11 2021-03-18 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of treating breast cancer
US11414852B2 (en) 2019-09-22 2022-08-16 Bio Clean Environmental Services, Inc. Removable trash filter basket with hinged wier for catch basins
JP2022548949A (ja) 2019-09-23 2022-11-22 イッサム リサーチ デベロップメント カンパニー オブ ザ ヘブリュー ユニバーシティー オブ エルサレム エルティーディー． 不安定なｍＲＮＡによって特徴付けられた遺伝性疾患の治療
IL269674B (en) 2019-09-25 2020-08-31 Roy Bar Ziv Assembling protein complexes on a chip
GB201913921D0 (en) 2019-09-26 2019-11-13 Sentinel Oncology Ltd Pharmaceutical compounds
IL270306A (en) 2019-10-30 2021-05-31 Yeda Res & Dev Prevention and treatment of pre-myeloid and myeloid malignancies
WO2021084526A1 (en) 2019-10-31 2021-05-06 Yeda Research And Development Co. Ltd. Engineered autotrophic bacteria for co2 conversion to organic materials
US20220386594A1 (en) 2019-11-11 2022-12-08 Ibi-Ag Innovative Bio Insecticides Ltd. Insect control nanobodies and uses thereof
WO2021100034A1 (en) 2019-11-19 2021-05-27 Protalix Ltd. Removal of constructs from transformed cells
IL270800A (en) 2019-11-20 2021-05-31 Yeda Res & Dev A method for treating Alzheimer's disease
CA3163319A1 (en) 2019-12-02 2021-06-10 Caris Mpi, Inc. Pan-cancer platinum response predictor
JP2023510427A (ja) 2019-12-02 2023-03-13 ビオンド バイオロジクス リミテッド 免疫療法中の可溶性ｃｄ２８レベル
IL271656A (en) 2019-12-22 2021-06-30 Yeda Res & Dev System and methods for identifying cells that have undergone genome editing
EP4077731A1 (de) 2019-12-22 2022-10-26 Yeda Research and Development Co. Ltd Diagnose einer frontotemporalen demenz
GB201919219D0 (en) 2019-12-23 2020-02-05 Otsuka Pharma Co Ltd Cancer biomarkers
IL271778A (en) 2019-12-31 2021-06-30 Ichilov Tech Ltd Methods for treating atopic dermatitis
WO2021137231A1 (en) 2019-12-31 2021-07-08 Kahr Medical Ltd. Methods of culturing t cells with a 4-1bbl fusion polypeptide and uses of same
WO2021137230A1 (en) 2019-12-31 2021-07-08 Kahr Medical Ltd. Methods of culturing t cells and uses of same
WO2021137241A1 (en) 2020-01-02 2021-07-08 Edity Therapeutics Ltd. Delivery compositions and methods
IL272074B2 (en) 2020-01-15 2024-12-01 Immunity Pharma Ltd Peptide compounds and methods of treating diseases using same
IL272194A (en) 2020-01-22 2021-07-29 Yeda Res & Dev Multi-target antibodies for use in the treatment of diseases
WO2021152584A1 (en) 2020-01-28 2021-08-05 Ariel Scientific Innovations Ltd. Methods of analyzing cell membranes
IL295179A (en) 2020-01-29 2022-09-01 Memed Diagnostics Ltd Methods for diagnosis and classification of viral infections
EP4096647A1 (de) 2020-01-30 2022-12-07 Yeda Research and Development Co. Ltd Behandlung einer akuten lebererkrankung mit tlr-mik-inhibitoren
IL272389A (en) 2020-01-30 2021-08-31 Yeda Res & Dev Kits containing antibodies to PD-L1 and their uses in therapy
IL272390A (en) 2020-01-30 2021-08-31 Yeda Res & Dev Cancer treatment methods
WO2021152586A1 (en) 2020-01-30 2021-08-05 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of analyzing microbiome, immunoglobulin profile and physiological state
KR20220151168A (ko) 2020-02-09 2022-11-14 엔엘씨 파르마 엘티디 Sars-cov-2에 대한 신속한 검출 테스트
IL272586A (en) 2020-02-10 2021-08-31 Yeda Res & Dev A method for cell cluster analysis
IL295514A (en) 2020-02-12 2022-10-01 Janssen Pharmaceutica Nv Fgfr tyrosine kinase inhibitors for the treatment of high-risk non-muscle invasive bladder cancer
TWI900527B (zh) 2020-02-12 2025-10-11 比利時商健生藥品公司 用於治療尿路上皮癌的ｆｇｆｒ酪胺酸激酶抑制劑和抗ｐｄ１藥劑
WO2021181388A1 (en) 2020-03-09 2021-09-16 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods of diagnosing and treating p53 mutant cancer
EP4121118A4 (de) 2020-03-15 2024-04-17 Nanocarry Therapeutics Ltd. Nano-abgabesystem und seine therapeutische und diagnostische verwendung
US20230127559A1 (en) 2020-03-16 2023-04-27 Yeda Research And Development Co. Ltd. Peptide analogs and use of same in treating diseases, disorders or conditions associated with mutant p53 protein
WO2021199039A1 (en) 2020-03-29 2021-10-07 Yeda Research And Development Co. Ltd. Variants of beta-glucocerebrosidase for use in treating gaucher disease
AU2021248783A1 (en) 2020-03-31 2022-12-01 Biomuse Ltd. Bacteria for the prevention and treatment of smoke-induced lung damage
WO2021205444A1 (en) 2020-04-06 2021-10-14 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of diagnosing cancer and predicting responsiveness to therapy
WO2021205459A1 (en) 2020-04-07 2021-10-14 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Cannabidiol-containing compositions and uses thereof
WO2021205453A1 (en) 2020-04-07 2021-10-14 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods for nucleic acid detection
IL297228A (en) 2020-04-13 2022-12-01 Exoprother Medical Ltd Cell-derived vesicles comprising wild-type p53 protein for antiviral therapy
IL297319A (en) 2020-04-13 2022-12-01 Yissum Res Dev Co Of Hebrew Univ Jerusalem Ltd Use of metabolic regulators for the treatment of covid-19
US20210322483A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Ichilov Tech Ltd. Cell-derived particles presenting heterologous cd24 and use thereof in therapy
WO2022113069A1 (en) 2020-11-24 2022-06-02 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. E protein channel blockers and orf3 inhibitors as anti-covid-19 agents
KR20230035524A (ko) 2020-05-01 2023-03-14 이슘 리서치 디벨롭먼트 컴퍼니 오브 더 히브루 유니버시티 오브 예루살렘 엘티디. Covid-19 치료제로서 e 단백질 채널 차단제 및 orf3 억제제
WO2021229577A1 (en) 2020-05-12 2021-11-18 Collplant Ltd. Collagen as a delivery tool for metal-based anti-viral agents
IL274811B (en) 2020-05-20 2021-05-31 Yeda Res & Dev Spatial information is developed for the analysis of individual cells
EP4521115A3 (de) 2020-06-10 2025-06-11 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Verfahren zum nachweis von methyliertem cpg
EP4168438A4 (de) 2020-06-22 2024-07-10 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Proteinmodule mit mehreren untereinheiten, zellen zur expression davon und verwendungen davon
WO2021260675A1 (en) 2020-06-24 2021-12-30 Yeda Research And Development Co. Ltd. Agents for sensitizing solid tumors to treatment
US20230270764A1 (en) 2020-07-14 2023-08-31 Raz Yirmiya Composition comprising cannabinoids, terpenes, and flavonoids for treating depression
IL276599A (en) 2020-08-09 2022-03-01 Yeda Res & Dev T cell receptor unique to mage-a1 and its uses
IL276627A (en) 2020-08-10 2022-03-01 Yeda Res & Dev Compositions for diagnosis and treatment of coronavirus infections
US12071479B2 (en) 2020-08-12 2024-08-27 Biond Biologics Ltd. Antibodies against ILT2 and use thereof
US20230309480A1 (en) 2020-08-18 2023-10-05 International Rice Research Institute Methods of increasing outcrossing rates in gramineae
WO2022038539A2 (en) 2020-08-18 2022-02-24 Yeda Research And Development Co. Ltd. Anti-viral and anti-tumoral compounds
WO2022044012A1 (en) 2020-08-25 2022-03-03 Technion Research & Development Foundation Limited Ultrasensitive rna quantification using nanopores
AU2021333983A1 (en) 2020-08-27 2023-01-05 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Biomarkers for cancer therapy using MDM2 antagonists
EP4210702A1 (de) 2020-09-14 2023-07-19 JANSSEN Pharmaceutica NV Fgfr-inhibitorkombinationstherapien
IL277488A (en) 2020-09-21 2022-04-01 Yeda Res & Dev Weight regulation method
WO2022064494A2 (en) 2020-09-23 2022-03-31 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods and compositions for treating coronaviral infections
GB202015187D0 (en) 2020-09-25 2020-11-11 Sentinel Oncology Ltd A pharmaceutical salt
IL277743A (en) 2020-10-01 2022-04-01 Yeda Res & Dev A method for diagnosing breast cancer
IL301914A (en) 2020-10-05 2023-06-01 Protalix Ltd Dicer-like knock-out plant cells
EP4225950A4 (de) 2020-10-05 2025-02-26 4C Biomed Limited Marker für die reaktion auf pd-1/pd-l1-immuntherapie
JP2023545740A (ja) 2020-10-07 2023-10-31 プロタリクス リミテッド 長期活性ＤＮａｓｅ
WO2022079719A1 (en) 2020-10-15 2022-04-21 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method of treating myeloid malignancies
IL278401A (en) 2020-10-29 2022-05-01 Yeda Res & Dev Polynucleotides for editing RNA and a method for using them
KR20230107296A (ko) 2020-11-09 2023-07-14 1이 테라퓨틱스 엘티디. 촉매 서열에 기반한 박테리아 감염을 치료 또는 예방하는 방법
US20240008494A1 (en) 2020-11-24 2024-01-11 The State Of Israel, Ministry Of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization Composition of predatory nematodes and methods of using same
WO2022115498A1 (en) 2020-11-26 2022-06-02 Ukko Inc. Modified high molecular weight glutenin subunit and uses thereof
IL279559A (en) 2020-12-17 2022-07-01 Yeda Res & Dev Controlling ubiquitination of mlkl for treatment of disease
AU2021416356A1 (en) 2020-12-28 2023-08-10 1E Therapeutics, Ltd. P21 mrna targeting dnazymes
AU2021411103B2 (en) 2020-12-28 2025-04-24 1E Therapeutics, Ltd. P21 mrna target areas for silencing
US20240410020A1 (en) 2021-01-03 2024-12-12 Asaf HELLMAN Cancer driver mutation diagnostics
WO2022149142A2 (en) 2021-01-10 2022-07-14 Supermeat The Essence Of Meat Ltd. Pluripotent stem cell aggregates and microtissues obtained therefrom for the cultured meat industry
WO2022153286A1 (en) 2021-01-14 2022-07-21 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of producing vitamin d
IL280340B (en) 2021-01-21 2022-04-01 Yeda Res & Dev Antibodies, peptides and combinations of same for the treatment or prevention of coronavirus infection
EP4280874A1 (de) 2021-01-21 2023-11-29 Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Rnai-nanopartikel und verfahren zur verwendung davon in der landwirtschaft
IL305315A (en) 2021-02-18 2023-10-01 Yeda res & development co ltd Methods for producing vaccines
WO2022175951A1 (en) 2021-02-18 2022-08-25 Yeda Research And Development Co. Ltd. Genetically modified bacteria for generating vaccines
GB202103080D0 (en) 2021-03-04 2021-04-21 Otsuka Pharma Co Ltd Cancer biomarkers
IL281561A (en) 2021-03-16 2022-10-01 Yeda Res & Dev Methods and devices for ex-utero mouse embryonic development
AU2022247325A1 (en) 2021-03-30 2023-10-05 Biomx Ltd. Pseudomonas bacteriophage and uses thereof
IL282188A (en) 2021-04-08 2022-11-01 Yeda Res & Dev Combined use of ketamine and bretigabine for the treatment of psychiatric disorders
CN117651568A (zh) 2021-04-20 2024-03-05 比昂生物制剂公司 细胞内递送组合物
US20240415904A1 (en) 2021-05-12 2024-12-19 Biomx Ltd. Staphylococcus bacteriophage and uses thereof
BR112023023935A2 (pt) 2021-05-19 2024-01-30 Janssen Pharmaceutica Nv Inibidores de tirosina quinase de fgfr para o tratamento de tumores sólidos avançados
WO2022249182A2 (en) 2021-05-25 2022-12-01 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Diagnosis of autism spectrum disorder by multiomics platform
IL283563A (en) 2021-05-30 2022-12-01 Yeda Res & Dev Profiling of amps for the diagnosis, monitoring and treatment of microbiome-related diseases
WO2022259242A1 (en) 2021-06-06 2022-12-15 Yeda Research And Development Co. Ltd. Combined treatment for cancer
CA3230677A1 (en) 2021-06-13 2022-12-22 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Method for reprogramming human cells
KR20240035997A (ko) 2021-06-16 2024-03-19 시드엑스 테크놀로지스 인코포레이티드 마티올라 종자들을 선별하는 방법들
NL2028466B1 (en) 2021-06-16 2022-12-21 Sakata Holland B V Methods of sorting matthiola seeds
WO2023275590A1 (en) 2021-06-29 2023-01-05 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Detection of phosphoinositides in blood cells as a biomarker for alpha synuclein associated pathologies and a method of treatment of parkinson's disease and the related neurodegenerations
EP4362662A1 (de) 2021-07-02 2024-05-08 Tropic Biosciences UK Limited Verzögerung oder verhinderung des bräunens bei bananenfrüchten
AU2022313138A1 (en) 2021-07-18 2024-02-29 Gamida-Cell Ltd. Therapeutic nk cell populations
WO2023002492A1 (en) 2021-07-22 2023-01-26 Yeda Research And Development Co. Ltd. Codon optimization of nucleic acids
EP4130028A1 (de) 2021-08-03 2023-02-08 Rhazes Therapeutics Ltd Manipulierter tcr-komplex und verfahren zur verwendung davon
GB202111193D0 (en) 2021-08-03 2021-09-15 Phoremost Ltd Pharmaceutical compounds
JP2024536647A (ja) 2021-08-03 2024-10-07 ジェニシティー リミテッド 操作されたｔｃｒ複合体及びそれを使用する方法
JP2024531212A (ja) 2021-08-10 2024-08-29 ガミダ セル リミテッド 改変ｎｋ細胞、その作製方法及びその使用
WO2023031943A2 (en) 2021-09-06 2023-03-09 Biond Biologics Ltd. Cd28 shedding blocking agents
GB202112865D0 (en) 2021-09-09 2021-10-27 Tropic Biosciences Uk Ltd Resistance to black sigatoka disease in banana
GB202112866D0 (en) 2021-09-09 2021-10-27 Tropic Biosciences Uk Ltd Resistance to fusarium wilt in a banana
IL286430A (en) 2021-09-14 2023-04-01 Yeda Res & Dev Multispecific antibodies for use in the treatment of diseases
JP2024538993A (ja) 2021-10-12 2024-10-28 タリス バイオメディカル エルエルシー エルダフィチニブ製剤及び膀胱内投与のためのシステム
IL312140A (en) 2021-10-18 2024-06-01 Belgian Volition Srl Use of nanopore sequencing for determining the origin of circulating dna
IL287372A (en) 2021-10-18 2023-05-01 Trojan Bio Ltd Bifunctional antigen-related molecules
AU2022381929B2 (en) 2021-11-03 2025-07-03 Biond Biologics Ltd. Intracellular delivery compositions
JP2024542847A (ja) 2021-12-08 2024-11-15 イェダ リサーチ アンド デベロップメント カンパニー リミテッド 肺の再生のための多分化能性肺前駆細胞
CN118843619A (zh) 2021-12-15 2024-10-25 伊姆尼克斯制药公司 中性粒细胞胞吐抑制剂
WO2023119301A1 (en) 2021-12-26 2023-06-29 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods of screening and treating fragile x syndrome
WO2023148732A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Method for selecting an improved genetically modified plant
WO2023157003A1 (en) 2022-02-16 2023-08-24 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods for shortening lag phase duration in microorganisms
TW202400174A (zh) 2022-02-18 2024-01-01 美商塔里斯生物醫學有限責任公司 用於膀胱內施用的Erdafitinib調配物及滲透系統
WO2023195009A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Genetically modified bacteria and use thereof
WO2023209708A1 (en) 2022-04-25 2023-11-02 Yeda Research And Development Co. Ltd. Compositions for altering cyclic adp-ribose secondary messenger signalling
US20250277032A1 (en) 2022-04-25 2025-09-04 Biond Biologics Ltd. Anti-ilt3 antibodies and use thereof
WO2023214405A1 (en) 2022-05-01 2023-11-09 Yeda Research And Development Co. Ltd. Reexpression of hnf4a to alleviate cancer-associated cachexia
WO2023218450A1 (en) 2022-05-09 2023-11-16 Yeda Research And Development Co. Ltd. A commensal fungus and uses thereof
WO2023223326A1 (en) 2022-05-17 2023-11-23 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Optimization of translation in chloroplasts
WO2023233413A1 (en) 2022-06-01 2023-12-07 Yeda Research And Development Co. Ltd. eIF4G1-eIF1 INHIBITORS AND USE THEREOF
US20250354155A1 (en) 2022-06-07 2025-11-20 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods of treating x-linked genetic diseases
IL317798A (en) 2022-06-20 2025-02-01 Yeda Res & Dev Particles containing double-stranded RNA and their use in agriculture
EP4554614A1 (de) 2022-07-11 2025-05-21 Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Verbesserung der adoptiven zelltransfertherapie (act)-behandlung
WO2024038457A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. A method for determining the tissue or cell of origin of dna
JP2025541324A (ja) 2022-12-13 2025-12-18 キャノピー イムノ‐セラピューティクス リミテッド 重症筋無力症を治療するためのｉｇ様融合タンパク質
IL300306A (en) 2023-01-30 2024-08-01 Yissum Res Dev Co Of Hebrew Univ Jerusalem Ltd Methods for immunotherapy targeted against CD48
AU2024222187A1 (en) 2023-02-13 2025-10-02 Janssen Pharmaceutica Nv Fgfr tyrosine kinase inhibitors for the treatment of high-risk non-muscle invasive bladder cancer
CN120731076A (zh) 2023-02-13 2025-09-30 塔里斯生物医药公司 膀胱内施用厄达替尼以用于治疗膀胱癌
WO2024173716A1 (en) 2023-02-17 2024-08-22 Taris Biomedical Llc Erdafitinib for intravesical administration for use in the treatment of bladder cancer
IL302363A (en) 2023-04-23 2024-11-01 Yeda Res & Dev An inhibitory monoclonal antibody against matrix metalloproteinase-7 for the treatment of endometriosis
WO2024236584A1 (en) 2023-05-18 2024-11-21 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Cfdna as biomarker for inflammatory bowel diseases
WO2024246905A1 (en) 2023-06-01 2024-12-05 Yeda Research And Development Co. Ltd. Enzymes, polynucleotides encoding same, and methods of using same for producing mescaline
IL303582A (en) 2023-06-08 2025-01-01 Yeda Res & Dev Non-invasive diagnosis of bone marrow
GB202311018D0 (en) 2023-07-19 2023-08-30 Sentinel Oncology Ltd Pharmaceutical compounds
IL304887A (en) 2023-07-31 2025-02-01 Yeda Res & Dev T-cell receptor directed against RAS neoantigen
WO2025027613A1 (en) 2023-08-03 2025-02-06 Yeda Research And Development Co. Ltd. Lipid nanoparticles comprising fatty amine polyphosphocholinated conjugates
WO2025056602A1 (en) 2023-09-11 2025-03-20 Elastin Biosciences Ltd. Pharmaceutical compositions and use thereof in treatment of conditions and diseases related to elastin deficiency and/or aging
WO2025059602A1 (en) 2023-09-14 2025-03-20 Taris Biomedical Llc Methods of treating bladder cancer using intravesical administration of erdafitinib
WO2025062392A1 (en) 2023-09-20 2025-03-27 Biond Biologics Ltd. Anti-ilt3 blockade combinations
WO2025109597A1 (en) 2023-11-22 2025-05-30 Yeda Research And Development Co. Ltd. T cell receptors directed against androgen receptor mutation
WO2025126206A1 (en) 2023-12-11 2025-06-19 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method for synthesizing dopamine
WO2025126208A1 (en) 2023-12-12 2025-06-19 Accellta Ltd. Media for maintaining, differentiating, or both, pluripotent stem cells
WO2025150045A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Gabriel Nussbaum Bacterial targets, therapeutics, compositions, kits and methods of use in treating and/or preventing cancer
WO2025158445A1 (en) 2024-01-28 2025-07-31 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods for parallel measurment of protein-dna binding within cells
WO2025163638A1 (en) 2024-01-29 2025-08-07 Yeda Research And Development Co. Ltd. Enzymes and methods of using same
WO2025203031A2 (en) 2024-03-26 2025-10-02 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods of cancer detection by discordant methylation in cfdna
WO2025215647A1 (en) 2024-04-11 2025-10-16 Biond Biologics Ltd. Combination cancer treatment with staggered dosing
WO2025233940A1 (en) 2024-05-06 2025-11-13 Yeda Research And Development Co. Ltd. Anti insect compositions, methods for producing same, and use of same
WO2025248531A1 (en) 2024-05-30 2025-12-04 Yeda Research And Development Co. Ltd. Modified yeast cell and a method of using same
WO2025257825A1 (en) 2024-06-09 2025-12-18 Yeda Research And Development Co. Ltd. Non-invasive myelodysplastic syndrome diagnostics
WO2026009222A1 (en) 2024-07-01 2026-01-08 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of microbial profiling

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4582788A (en) * 1982-01-22 1986-04-15 Cetus Corporation HLA typing method and cDNA probes used therein
US4582778A (en) * 1983-10-25 1986-04-15 Sullivan Donald F Multi-function photopolymer for efficiently producing high resolution images on printed wiring boards, and the like
US4683194A (en) * 1984-05-29 1987-07-28 Cetus Corporation Method for detection of polymorphic restriction sites and nucleic acid sequences
US4683202A (en) * 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4683195A (en) * 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4772549A (en) * 1986-05-30 1988-09-20 Biotechnology Research Partners, Ltd. Polymorphisms related to lipid metabolism: ApoB, ApoCII, ApoE, ApoAIV
US6194561B1 (en) * 1986-03-13 2001-02-27 Roche Molecular Systems, Inc. Characterization and detection of sequences associated with autoimmune diseases
US5310893A (en) * 1986-03-31 1994-05-10 Hoffmann-La Roche Inc. Method for HLA DP typing
US4965190A (en) * 1986-07-31 1990-10-23 Howard Hughes Medical Institute Methods for the identification of mutations in the human phenylalanine hydroxylase gene using DNA probes
WO1988003175A1 (en) * 1986-10-29 1988-05-05 Biotechnology Research Partners, Ltd. Apoai-ciii-aiv, apoaii, apob, apoci, and ldl receptor polymorphisms for genetic fingerprinting and predictive of atherosclerosis
WO1989012697A1 (en) * 1988-06-22 1989-12-28 The Board Of Regents Of The University Of Washingt Method for detecting abnormal genes
CA1339731C (en) * 1988-10-12 1998-03-17 Charles T. Caskey Multiplex genomic dna amplification for deletion detection
US5192659A (en) * 1989-08-25 1993-03-09 Genetype Ag Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes

Also Published As

Publication number Publication date
AU6131990A (en) 1991-02-28
GR3022410T3 (en) 1997-04-30
IL95467A (en) 1995-07-31
IL95467A0 (en) 1991-06-30
HK1008053A1 (en) 1999-04-30
AU672519B2 (en) 1996-10-03
US5789568A (en) 1998-08-04
ES2095859T3 (es) 1997-03-01
DD299319A5 (de) 1992-04-09
ATE144797T1 (de) 1996-11-15
FI904200A0 (fi) 1990-08-24
CA2023888C (en) 2004-06-08
SG47747A1 (en) 1998-04-17
KR910004814A (ko) 1991-03-29
AU7285094A (en) 1994-11-24
US20030119003A1 (en) 2003-06-26
FI904200A7 (fi) 1991-02-26
US5192659A (en) 1993-03-09
AU654111B2 (en) 1994-10-27
US5612179A (en) 1997-03-18
EP0414469A3 (en) 1992-09-23
DK0414469T3 (da) 1997-04-14
CA2023888A1 (en) 1991-02-26
JP3206812B2 (ja) 2001-09-10
EP0414469B1 (de) 1996-10-30
JP2001309796A (ja) 2001-11-06
JPH03139300A (ja) 1991-06-13
EP0414469A2 (de) 1991-02-27
DE69029018D1 (de) 1996-12-05
NZ235051A (en) 1992-01-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE69029018T2 (de) Verfahren zum Nachweis von benachbarten und entfernt lokalisierten Allelen als Haplotypen mittels Intronsequenzanalyse
DE60025840T2 (de) Methode zum nachweis von variationen oder polymorphismen
AU581582B2 (en) Dna probes to fingerprint genomes at hypervariable or minisatellite regions
DE69929542T2 (de) Komplexitätsmanagement und analyse genomischer dna
DE3789679T2 (de) Genetische Sonden.
DE69507646T2 (de) Mikrosatelliteverbindung für detektion genetisches polymorphismen
DE68909266T2 (de) Markierung durch gleichzeitige Ligation und Restriktion.
DE69900949T2 (de) Dns amplifizierung aus einzelnen zellen
DE68926784T2 (de) Verfahren zur charakterisierung von hla dp
DE69603723T2 (de) Verfahren zum nachweis von nukleinsäuren
US7008771B1 (en) Multiplex amplification of short tandem repeat loci
HK1008053B (en) Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes
AU3103400A (en) Multiplex amplification of short tandem repeat loci
CA2517017A1 (en) Methods for detection of genetic disorders
DE68929070T2 (de) Verwendung von dna-proben mit variabler anzahl von tandem-repetitiven stellen zur genetischen identifizierung
DE60014350T2 (de) Verfahren zur erkennung und/oder analyse, unter verwendung von primertechniken, von einfachen nukleotidpolymorphismen in restriktionsfragmenten speziell aus amplifizierten restriktionsfragmenten generiert durch aflp
Cariello et al. Mutational analysis using denaturing gradient gel electrophoresis and PCR
DE69131691T2 (de) Genomische genkartierungsmethode durch direkten nachweis von haplotypen mittels intronsequenzanalyse
CN103649332A (zh) 用于β地中海贫血性状的新型相关标记
DE69620413T2 (de) Verfahren zur bestimmung des hautfärbung-genotyps eines schweins
DE69636725T2 (de) Verfahren zur trennung und/oder erkennung von dns-molekülen
EP0342717A2 (de) Polynukleotidproben
DE602006000713T2 (de) Verfahren zur Verbesserung der Unterscheidung von einer einzelnen Basenfehlanpaarung durch die Verwendung von "hurdle" DNAs und Sonden mit artifiziellen Fehlpaarungen
DE69608462T2 (de) Mikrosatellitensequenzen zur bestimmung des genotyps von hunden
US8101354B2 (en) Method for screening for a tobiano coat color genotype

Legal Events

Date Code Title Description
8364 No opposition during term of opposition
8327 Change in the person/name/address of the patent owner

Owner name: GENETIC TECHNOLOGIES LTD., FITZROY, VICTORIA, AU

8310 Action for declaration of annulment
8328 Change in the person/name/address of the agent

Representative=s name: GLAWE, DELFS, MOLL, PATENTANWAELTE, 20148 HAMBURG

8313 Request for invalidation rejected/withdrawn