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DD295376A5 - Neue uroniumsalze, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung - Google Patents

Neue uroniumsalze, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung Download PDF

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DD295376A5
DD295376A5 DD34244290A DD34244290A DD295376A5 DD 295376 A5 DD295376 A5 DD 295376A5 DD 34244290 A DD34244290 A DD 34244290A DD 34244290 A DD34244290 A DD 34244290A DD 295376 A5 DD295376 A5 DD 295376A5
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DD
German Democratic Republic
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uronium salts
uronium
salts
synthesis
Prior art date
Application number
DD34244290A
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Inventor
Peter Henklein
Michael Beyermann
Elke Euthin
Ruediger Pipkorn
Ruediger Von Baehr
Original Assignee
Charite Der Humboldt-Universitaet,De
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Abstract

Die Erfindung betrifft neue Uroniumsalze, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung. Die erfindungsgemaeszen Verbindungen weisen eine hohe Loeslichkeit in organischen Loesungsmitteln auf. Uroniumsalze sind geeignete Kondensationsmittel fuer die Synthese von b-Lactamen, Estern, Amiden und Peptiden. Die neuen Uroniumsalze werden durch Umsetzung von Harnstoffderivaten mit Alkali- oder Ammoniumsalzen von N-Hydroxyverbindungen bzw. Phenolen hergestellt. Die Anwendungsgebiete der Erfindung sind die chemische und die pharmazeutische Industrie.{Uroniumsalze; Kondensationsmittel; Peptidsynthese; Amide; Ester; b-Lactame; Harnstoffderivate; N-Hydroxyverbindungen; Phenole; Chemie; Pharmazie}

Description

worin X für N-Oxypyrid-2-on oder Pentafluorophenyloxy steht, Y ein Gegenion, vorzugsweise C! , BF4" oder PF6" bedeutet und Z für (-CH2-In mit η = 4-6 OdBr-CH2-CH2-O-CH2-CH2- steht, als Kondensationsmittel.
4. Verwendung von Uroniumsalzen der Formel I nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Verbindungen der Formel I zur Synthese von ß-Lactamen, Estern, Amiden oder Peptiden eingesetzt werden.
5. Verwendung von Uroniumsalzen der Formel I nach Anspruch 3 und 4, worin in Formel I X für N-Oxypyrid-2-on,Zfür (-CH2-J5und Y" für BF4" (Verbindung VII) oder PF6" (Verbindung VIII) stehen,
C+-O-N
C+-O-N
VII für die automatisierte Peptidsynthese.
Hierzu 1 Seite Zeichnung
viii -^
Die Erfindung betrifft neue Uroniumsalze der allgemeinen Formel I,
worin X für N-Oxypyrid-2-on oder Pentafluorophenyloxy steht, Y ein Gegenion, vorzugsweise Cl , BF4 oder PF6 bedeutet und Z für (-CHHn mit π = 4-6 oder -CHr-CH2-O-CH2-CHz- steht, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung. Uroniumsalze sind wichtige Kondensationsmittel in der Peptidchemie, zur Synthese von ß-Lauamen, Amiden und Estern. In den letzten 15 Jahren sind eineReiheneuer Kondensationsreagenzien, vor allem zur Synthese von Peptiden eingeführt worden. Zu den gegenwärtig gebräuchlichsten Reagenzien zählt das von Castro (8. Castro, et al., Tetrahedron Letters 14,1219 [1975]) entwickelte Benztriazo!-1-oxy-tris-(dimethylamino)-phosphoniumhexafluorophosphat (BOP) (EP-289353). Das Reagens
erwies sich auch als geeignet für die Synthese von Estern (Molka, D., et al., Nouv. J. Chim. 6, [5], 277 (1982)) und zur Herstellung der ß-Lactambindung (Kim Suggak et al., Bull. Korean. Chem. Soc. 9 [3], 189 (1989]). Wesentliche Nachteile sind jedoch das für die Herstellung des BOP benötigte cancerogene Hexamethylenphosphorsäuretriamid, das während der Reaktion als Nebenprodukt erneut anfällt und das nach Aufnahme in die „Seveso-Liste" nur begrenzt zugänglich ist (R.Z.Schmidt, Gesamte Hyg. Ihre Grenzgebiete (1979], 25,662). Bemühungen um einen Austausch der Dimethylaminogruppe gegen Alkylaminogruppen oder Piperidinogruppen führten zu einer nicht zu vertretbaren Verlangsamung der Reaktinsgeschwindigkeit (Castro, B., Amer. Peptidsymposium 1983). Als Alternative wurde von Knorr 1989 (R. Knorr et al., 20. Europäisches Peptidsymposium Tübingen; Fi. Knorr, Tetrahedron Letters 30 [15] 1927 [1989]) 2-(1-H-Benzotriazol-1-yl-1.1.3.3-tetramethyl-uronium-hexafluorophosphat bzw. -tetrafluoroborat sowie eine Reihe weiterer Derivate vorgeschlagen. Das von R. Knorr favorisierte 2-(1 -H-Benzotriazol-1-yl)· 1.1.3.3-tetramethyluronium-tetrafluoroborat (TBTU), das eine vergleichbar hohe Reaktivität wie BOP besitzt, hat den für peptidchemische Arbeiten erheblichen Nachteil der schlechten Löslichkeit in Methylenchlorid. Die für eine automatisierte Peptidsynthese notwendigen Ausgangskonzentrationen sind ebenfalls schwer zu erreichen. N-Hydroxybenzotriazol stört darüber hinaus das Monitoring während der Synthese. Ein Einsatz dieser Uroniumsalze für die automatisierte Peptidsynthese ist daher nur bedingt möglich.
Tetramethyluroniumchlorid, ein seit langem bekanntes Kondensationsreagens, besitzt wegen seiner großen Hygroskopizität nur eingeschränkte Bedeutung (T. Fujisawa et al., Chem. Letters 1982,1891). Den gleichen Nachteil, einschließlich formylierender und chlorierender Wirkungen, besitzt das als Aktivierungsreagens zur Synthese von Estern vorgeschlagene N1N-Dimethylchloromethyleniminiumchlorid (F. Stadler, HeIv. chim. Acta 61,1675, [1978]). M.Zaoral stellte mit diesem Reagens Amiüe (Tetrahedron Letters 1960, 9) und H.Eilingsfeld (Angew. Chem. 72, 836 [1972]) Säurechloride her. In den letzten Jahren haben Uroniumsalze Bedeutung als Gelatine-Härter in Filmemulsionen erhalten (Jpn-P (OPI] 51945/'74 und 59625/76, GB-PS 1383630, US-PS 4063952 und EP-PS 0162308). Ziel der Erfindung ist die Herstellung und der Einsatz neuer Kondensatinsreagenzien, die leicht zugänglich sind und die die Synthese von ß-La-uamen, Estern, Amiden und Peptiden mit einer hohen Ausbeute gewährleisten. Sie sollten sich durch gute Löslichkeit in organischen Lösungsmitteln auszeichnen; die dadurch erreichbare hohe Anfangskonzentration der Reaktanten begünstigt den Einsatz für die automatisierte Peptidsynthese. Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, neue Uroniumsalze herzustellen, die eine hohe Raum-Zeit-Ausbeute, geringe Nebenproduktbildung gewährleisten, verbesserte Lösungseigenschaften aufweisen und aus leicht zugänglichen, nicht cancerogenen Ausgangsstoffen herstellbar sind
Erfindungsgemäß wird die Aufgabe dadurch gelöst, daß Uroniumsalze der Formel I,
worin X N-Oxypyrid-2-on oder Pentafluorophenyloxy, Y ein Chlorid-, Tetrafluoroborat- oder Hexafluorophosphation, Z -(CH2Inmit η = 4-6 oder-CH2-CH2-O-CH2-CHj-bedeuten, durch Umsetzung von Uroniumchloriden der Formel II, worin Z die in Formel I angegebene Bedeutung hat,
•/ -m
mit einem Alkali- oder Ammoniumsalz von N-Hydroxyverbindungen oder Phenolen der Formel III,
MOX III
worin M für ein Alkalimetall- oder Ammoniumion steht und X die in Formel I angegebene Bedeutung hat, erhalten werden. D?r Austausch des Chloridions gegen das Tetrafluoroborat- oder Hexafluorophosphation erfolgt in üblicher Weise (vgl. R. Knorr, B. Castro) dadurch, daß entweder die Umsetzung in Gegenwart von MBF4 (V) oder MPFe (Vl) stattfindet, wobei M ein Alktilimetall- oder Ammoniumion darstellt oder daß nach der Umsetzung die Verbindung der Formel I, wenn Y" für Cl" steht, zur Reaktion gebracht wird.
Die Ausgangsverbindungen der Formel Il werden in einfacher Weise durch Umsetzung von Harnstoffen der Formel IV
mit einem Säurechlorid, vorzugsweise Oxalylchlorid oder Phosgen, hergestellt.
Die Uroniumsalze der Formel I zeichnen sich überraschenderweise durch eine wesentlich verbesserte Löslichkeit in DMF und Methylenchlorid im Vergleich zu BOP und TBTU aus. Die Löslichkeit beträgt bei den neuen Uroniumsalzen bis zu 1,5 Mol/l. Diese Konzentration ist für die automatisierte Peptidsynthese sehr gut geeignet. Weiterhin sind die Folgeprodukte dieser Uroniumsalze bedeutend besser aus den Syntheseharzen auswaschbar als die der bisher bekannten Uroniumsalze, wodurch ein Monitorring beim Säulenverfahren zuverlässiger ermöglicht wird. Das störonde N-Hydroxybenzotriazol wird vermieden.
Die neuen Verbindungen sind aus nicht cancerogenen Stoffen in einfacher Weise zugänglich. Sie gewährleisten bei der Synthese von ß-Lactamen, Amiden und Estern sowie bei der Herstellung von Peptiden sowohl nach der klassischen Synthese in Lösung als auch nach der Festphasensynthese eine hohe Raum-Zeit-Ausbeute bei geringer Nebenproduktbildung. Alle anfallenden Nebenprodukte lassen sich durch einfache Waschoperationen entternen.
Als besonders für die Peptidsynthese geeignet haben sich Verbindungen der allgemeinen Formel I erwiesen, bei denen Z für (-CH2-Io steht. X N-Oxypyrid-2-on und Y" sowohl BF4" als auch PF6" bedeuten können.
r h _o > >
Die Erfindung wird im folgenden anhand von Ausführungsbeispielen erläutert.
Ausführungsbeispiele Beispiel 1
Allgemeine) Vorschrift für die Herstellung der Uronium-tetrafluoroborate nach der Phosgenmethode 10OmMoI einer 2,5-4 N Phosgenlösung werden gerührt und zu dieser Lösung innerhalb von 15N':n. die entsprechende Harnstofflösung in 30ml Methylenchlorid getropft. E? wird auf 5O0C erwärmt und 4 Stunden bei üieser Temperatur weiter gerührt. Anschließend wird das überschüssige Phosgen und der größte Teil des Methylenchlorids in Vakuum abdestiiliert. Der Rückstand wird in Acetonitril aufgenommen und mit NaBF4 versetzt. Es wird 20h gerührt und danach eine Suspension des entsprechenden Salzes der N-Hydroxyverbindung oder des entsprechenden Phenols in 50ml Acetonitril addiert. Es wird 2 weitere Stunden gerührt und anschließend auf ein Drittel des Volumens eingeengt. Die ausgefallenen Kristalle werden abgesaugt, mit Ether gewaschen und getrocknet.
Beispiel 2 Uroniumtatrafluoroborate nach der Oxalylchlorid-Mothode
1 Mol des entsprechenden Harnstoffs wird in Methylenchlorid gelöst und 84 ml (0,95 Mol) Oxalylchlorid innerhalb von 30 Minuten langsam addiert. Die Reaktionsmischung wird auf 45°C erwärmt und 4-5 Stunden bei dieser Terr peratur gerührt. Es wird auf '/3 des Volumens eingeengt und mit Ether das Produkt gefällt bzw. das ausfallende Öl mit Ether digeriert. Die weitere Umsetzung erfolgt wie bei Knorr et al. beschrieben.
Beispiel 3 2-(2-Oxo-1(2H)-pyridyl)-1.1.3.3-bispentamethylenuronium-tetrafluoroborat(TOPPipU!
Hergestellt nach Beispiel 1 oder 2 aus I.I.S.S-bispentamethylenharnstoff (Carbodipiperidid) durch Umsetzung mit dem Na-SaIz des 2-oxopyridinium-N-o;;ides und NaBF4.
MG: 377,16
Fp.: 152-1530C
FAB-MS: 290 (M+-BF4) 195 (Carbodipiperidid)
13C-NMR: 160,781; 156,962; 141,245; 134,940; 121,951; 1C7,085; 50,831; 24,751; 22,301
Beispiel 4
2-(2-Oxo-1(2H)-pyridyl)-1.1.3.3-bistetramethylenuroniumtetrafluorobort.t (TOPPyrU) Hergestellt analog Beispiel 1 oder 2 aus 1.1.3.3-Bistetramethylenharnstoff (Carbodipyrrolidid, Dipyrrolidino-harnstoff) durch Umsdtzung mit dem Na-SaIz des 2-Oxypyridinium-N-oxids und NaBF4.
MG: Fp.: 147-148°C
Beispiel 5 2-(Pentafluorophenyl)-1.1.3.3-bispentamethylenuronium-tetrafluoroborat Hergestellt nach Beispiel 1 oder 2 aus Carbodipiperidid, dem Natriumsalz des Pentafluorophenols und NaBF4.
MG: 450,16
Fp.: 178-1810C
13C=: = 158,065; 138,039; 127,889; 50,594; 25,143; 22,489
FAB-MS: =363(M*-BF4)
Beispiele 2-(2-Oxo-1(2H)-pyridyl)-1.1.3.3-bispentamethylen-hoxafluorophosphat Hergestellt nach Beispiel 1 oder 2 aus Carbodipiperidid und NH4PF6.
Beispiel 7 Z-VaI-GIy-OEt 2mMo' Z-VaI-OH und 2mMol (754mg) des unter Beispiel 3 gewonnenen UroniumsalzesTOPPipU werden in 3ml DM gelöst, 4mMol (588μΙ) DIEA (diisopropylethylamin) addiert und zu einer Lösung von 2mMol GIy-OEt χ HCI und 2mMol DIEA (344μΙ) gegeben. N^ch 15 Minuten ist die Reaktion beendet. Es wird wie üblich aufgearbeitet. Ausbeute 91 %
Fp.:164°C /a/20D=-25,1 c = 1 Ethanol Literatur: Fp.:164°C /a/200=-24,9 c = 1 Ethanol Lit.: V. Dourtoglon, Tetrahedron Letters 15,1269 (1978)
Beispiele
Boc-lle-lle-OMe Analog Beispiel 7 aus Boc-Ile-OH und He-OMo Ausbeute: 87% Fp.: 148-149'C /a/20D = -33,8 c = 1 Ethanol Fp.: 149-1500C IaI 20D = -33,9 c = 1 Ethanol Lit.: V. Dourtoglon, Tetrahedron Letters 15,1269(1978)
Beispiel 9 Neurotonsin
Neurotensin wurde an 300mg Leu-Wang-Harz (0,37meq/g) nach der Fmoc-Technik unter Verwendung von nach Beispiel 3 hergestelltem TOPPipU synthetisiert. Die Synthese erfolgte nach dem für BOP und TBTU üblichen Verfahren unter Verwendung von 2 Äquivalenten Aminosäure, 2 Äquivalenten TOPPipU und 4 Äquivalenten DIEA als Base. Die Abspaltung vom Harz wurde mit 95% TFA unter Verwendung von Ethandithiol-1,2 durchgeführt. Bei Kupplungszeiten von 15 Minuten wurde ein 96%iges Rohprodukt erhalten, das mit dem auf anderem Wege synthetisierten Produkt (BOP, TBTU) identisch war.
Beispiel 10 Cholecystokinin-Oktapeptid(CCK-8)
1 g DOD-Harz (Breipohl et al.) (0,5meq/g) werden von der Fmoc-Gruppe befreit, und nach der Fmoc-Technik unter Verwendung von nach Beispiel 3 hergestelltem TOPPipU wird das Oktapeptid Fmoc-Tyr-Met-Gly-Trp-Asp-Phe-NH2 aufgesetzt.
(Kupplungszeiten: 15 Minuten; Aminosäureüberschuß 2 Äquivalente, 2 Äquivalente TOPPipU) Das sulfatierte Oktapeptid wurde nach Sulfatierung mit Pyridiniumacetylsulfat (PAS) und anschließender Abspaltung der Fmoc-Schutzyruppe erhalten.
Ausbeute: 91 mg IaHO0= -24,7c= 1 DMF

Claims (1)

  1. Patentansprüche:
    1. Neue Uroniumsalze der Formel I1
    worin X für N-Oxypyrid-2-on oder Pentafluorophenyloxy steht, Y ein Gegenion, vorzugsweise Cl , BF4" oder PF6" bedeutet und Z für (-CH2-In mit η = 4-6 OdOr-CH2-CH2-O-CH2-CH2- stc-i n. 2. Verfahren zur Herstellung neuer Uroniumsalze der Formel I,
    c*--x
    worin X für N-Oxypyrid-2-on oder Pentafluorophenyloxy, Y für ein Gegenion, vorzugsweise für Cl", BF4" oder PF6" und Z für (-CH2-)n mit η = 4-6 OdOr-CH2-CH2-O-CH2-CH2- stehen, dadurch gekennzeichnet, daß Uroniumchloride der Formel II,
    die durch Chlorieren der Harnstoffe der Formel IV,
    IV
    worin Z die in Formel I angegebene Bedeutung hat, gebildet werden, mit einem Alkali- oder Ammoniumsalz der For iel III,
    MOX
    worin M für ein Alkali- oder Ammoniumion steht und X die in Formel I angegebene Bedeutung hat, gegebenenfalls in Gegenwart von MBF4 oder MPF6 der Formeln V und Vl, worin M die in Formel III angegebene Bedeutung hat, umgesetzt werden oder die Verbindung der Formel I, wenn Y" für Cl" steht, mit MBF4 (V) oder MPF6 (Vl) zur Reaktion gebracht werden. 3. Verwendung von Uroniumsalzen der Formel I,
    ·»--γ
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