DE2608336A1

DE2608336A1 - Neue organische verbindungen, ihre herstellung und verwendung

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Publication number: DE2608336A1
Application number: DE19762608336
Authority: DE
Inventors: Wilfried Bauer; Edmond Sandrin
Original assignee: Sandoz AG
Current assignee: Sandoz AG
Priority date: 1975-03-11
Filing date: 1976-03-01
Publication date: 1976-09-30
Also published as: FI760539A7; NL7602395A; AU509661B2; IE44284L; PT64881B; AU1189376A; FR2303560B1; IE44284B1; IL49180A0; NO760707L; GB1546517A; JPS51115467A; PT64881A; IL49180A; CA1092601A; FR2303560A1; NZ180247A

Description

SAWDOZ-PATENT-GMBH 7850 Lörrach

Case 100-4314

Neue organische Verbindungen, ihre Herstellung und Verwendung

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Verbindungen der Formel I,

SB SB

CH CH.

χ i- ,Z

R₁ -CH-CO-X-Y-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-Z I 3

worin R₁ (i) H,

(ii) NH₂,

(iii) H-AIa-NH-f

H-Tyr-NH-;

H-Cys-NH-;

H-VaI-NH-;

H-Lys-NH-?

H-(a-amino-isobutyryl)-NH-;

H-Phe-NH-f

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Case 100-4314

(Iv)	NH₂-NH-CO-NH-;
(ν)	C^H_C.NH-CO-GIy-NH-; D O
	H-Ala-Gly-NH-;
	H-VaI-GIy-NH-;
	Η-α-Phenyl-Gly-NH-;
(Vi)	R-A-CO-NH-,

(vii)

(viii)

(ix)

(X)

worin R₂ für niederes Alkyl, Phenyl oder Phenyl, das durch Halogen, Hydroxy, Amino, niederes Alkyl oder niederes Alkoxy substituiert ist, A für eine direkte Bindung, ein Alkylenradikal mit jeweils bis zu 6 Kohlenstoffatomen oder für -NH-stehen, R₂-AIa-NH-?

R₂-AIa-GIy-NH-; worin R₃ obige Bedeutung hat,

CgH₅.A¹.CO-M-NH-,

worin A¹ für einen Alkylenradikal mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen steht und -M- -(mono- oder di-Hal)-Phe-, -GIy- °der -AIa- bedeutet, T-(mono- oder di-Hal)-Phe-NH-, worin T-für H-, H- Val— oder Benzoyl

steht,

Vn ^C worin A obige Bedeutung hat und

-L- für -VaI-, -VaI- (mono- oder di-Hal) -Phe-, -cc-Phenyl-Gly- und η für eine ganze Zahl zwischen 4 und 10 stehen, ~ bedeutet,

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- 3 - 100-4314

B für H oder beide B für eine direkte Bindung zwischen den S-Atomen steht,

X für -Lys-, -Nie- oder -Cys- und
Υ für -Asn-, -GIn- oder -Thr- stehen und Z für die Reste (i) H? (ii) COOH; (iii) COOR₃ (wobei R₃ eine niedere Alkylgruppe bedeutet); (iv) -CO-NR₄R₅ (wobei R₄ und R,. unabhängig voneinander Wasserstoff oder eine niedere Alkylgruppe bedeuten); (v) -CON^jCH₂)_n, (wobei η obige Bedeutung besitzt); (vi) CH_OH; (vii) -CO-Asparaginol; -CO-Leucinol; -CO-Isoleucinol; -CO-Valinolf -CO-Norleucinol; -CO-Glutaminol; -CO-Threoninol; (viii)-CO-Leu? -CO-Ser; -CO-Iso-Leu; -CO-VaI und

ihre entsprechende Amide, worin der Amidteil den Rest

-CO-NR. R_c oder -CO-nTcH,, ) ,bedeutet (wobei n, R₄ und 4 5 v_>/ 2 η . 4

R₅ obige Bedeutung besitzten), oder (ix) -CO-TlIrOR₃ oder -CO-SerOR₃, (wobei R₃ obige Bedeutung besitzt); (x) -CO-NH-(CH₂).-0H (worin k eine ganze Zahl zwischen 2 und 6 bedeutet), oder -CO-NH-CH-[CH₉]_Ί OH (worin I₁

I ^Δ ¹I ^λ

^L[CH ] OH 2

und I₂ unabhängig voneinander eine- ganze Zahl zwischen 1 und 6 bedeuten); (xi) -CO-N 0; (xii) -CO-NH-R₆ (worin R_ß einen 5 oder 6-gliedrigen gesättigten heterocyclischen Ring bedeutet, der ein Sauerstoffatom als Ringglied enthält, oder einen 5 oder 6-gliedrigen Lactonring bedeutet) stehen, wobei in der Formel I die Radikale R^, X, Y und Z wie auch bei den übrigen Einheiten der Peptidsequenz wenigstens eine Einheit in der D-Form vorliegen kann,

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- 4 - 100-4314

wobei wenn X Lys und Y Asn bedeuten und alle übrigen Einheiten der Peptidsequenz 3 bis 14 in der D- oder L-Form vorliegen, und wenn

(i) R₁ H-Ala-Gly-NH- oder

H-(D)-AIa-GIy-NH- bedeuten, Z nicht für COOH, COOR₃, CH₂OH oder

CONR₄R₅ stehen kann oder, wenn (ii) R₁ H, NH₂ oder H-(D)-AIa-GIy-NH-

bedeutet,
Z nicht für H, COOH, CONR₄R oder

CON (CH₀). , _ stehen kann ν—^ 2. 4 oder 5

oder, wenn
(iii) R₁ H-(a-amino-isobutyryl)-NH- oder

H-(D)-AIa-NH- bedeutet, Z nicht für H oder COOH stehen kann

oder, wenn
(iv) R₁ H-Ala-Gly-NH- bedeutet,

Z nicht für H stehen kann oder, wenn

. (v) R H-AIa-NH-, oder —

R₂'-CO-NH- bedeutet, (wobei R„* für niederes Alkyl oder unsubstituiertes Phenyl steht), Z nicht für COOH stehen kann, und

wobei wenn R. H-Cys-NH oder H-(D)-CyS-NH und/oder X -Cys- oder -(D)-Cys bedeuten, B-B nicht für eine direkte Bindung stehen kann.

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Halogen bedeutet Brom, Fluor und vorzugsweise Chlor. Die Bedeutung niederes Alkyl oder niederes Alkoxy umfasst bis zu 6 Kohlenstoffatome, bedeutet aber vorzugsweise 2 oder 1 Kohlenstoffatome.

Bedeutet R_ substituiertes Phenyl, so ist dieses vorzugsweise mono- oder di-substituiert, insbesondere aber mono-substituiert. Ein Substituent befindet sich vorzugsweise in der Para Stellung.

Im Falle A oder wenn A Alkylen bedeutet, enthalten diese vorzugsweise bis zu 3 Kohlenstoffatome.» In bezug auf die Bedeutung (viii) bedeutet A vorzugsweise Trimethylen. In bezug auf die Bedeutung (x) bedeutet A vorzugsweise Methylen.

Beispiele von -(mono- oder di-Hal)-Phe-Teilen sind -(2Cl)Phe-; -(3Cl)Phe-; -(4Cl)P.he- oder -(3,4-diCl)Phe-. η bedeutet vorzugsweise eine ganze Zahl 5 oder 4. R, bedeutet vorzugsweise z.B. H-(mono oder di-Hal)-PlIe-NH-, Phenyl-CO-NH-, H-VaI-(mono- oder di-Hal)-Phe-NH-_r Phenylbutyryl-NH- oder ein Rest enthaltend -(D)-AIa, Benzoyl-(mono- oder di-Hal)-Phe-NH-, Cyclohexylacetyl-α-phenyl-GIy-NH-, Cyclohexylacetyl-Val-dnono- oder di-Hal)-Phe-NH-, Cyclohexylacetyl-Val-NH-, H-VaI-NH, H, H-(cc-amino-isobutyryl)-NH-? H-(mono- oder di-Hal)-Phe-NH-;~ X bedeutet vorzugsweise Lys und insbesondere Nie, Y bedeutet vorzugsweise GIn und insbesondere Asn. k bedeutet vorzugsweise 2 oder 3.

Wenn Z die Bedeutung (x) oder (xii) besitzt, umfasst diese vorzugsweise eine -CO-NH-CH-CH₂-O- Sequenz, und bedeutet zum Beispiel -CO·NH«CH(CH₂-OH)CH₂-CH₂-CH₂-OH; -CO-NH-CH(CH₂OH)-CH₃-CH₂ OH; -CO-NH-CH-CH₃ -CH₂■CO Ό

-CO-NH'CH CH--CO·0·CH.,; -CO-NH·CH-CH- -CH₀ O'CH«; I Z ι Z j Z Z ι Z

-CO-NH-CH

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Z bedeutet vorzugsweise nicht H, CH₂OH₁ COOH oder COOR₃.

Bei der oben angegebenen vorzugsweisen Bedeutung liegen die Aminosäuren sowohl in der D wie auch in der L—Form vor.

Die vorliegende Erfindung umfasst Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der obigen

Formel. Sie können nach für die Synthese von Verbindungen dieser Art allgemein bekannten Methoden oder entsprechender chemischer Aequivalente hergestellt werden.

Beispielsweise können die Verbindungender obigen Formel hergestellt werden,

a) indem man mindestens eine Schutzgruppe, die in einer geschützten Verbindung mit der Formel I angegebenen Sequenz vorhanden ist, entfernt, oder

b) indem man zwei Peptideinheiten, von denen jede mindestens eine Aminosäure in geschützter oder ungeschützter Form enthält, durch eine Amidbindung miteinander verknüpft, wobei die Peptidbindung in der Weise erfolgen soll, dass die in der Formel I enthaltene Aminosäuresequenz hergestellt wird und anschliessend gegebenenfalls die Verfahrensstufe a) ausgeführt wird, oder

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- 7 - ' 100-4314

c) indem man eine Gruppe Z in einer anderen Gruppe Z mit der oben angeführten Definition überführt, wobei eine ungeschützte oder geschützte Verbindung der Formel I erhalten wird" und in letzterem Fall der Verfahrens schritt a) ausgeführt wird., oder .

d) indem man eine Verbindung der Formel I_f woring B für Wasserstoff steht, oxydiert, wobei eine Verbindung der Formel I erhalten wird, worin B-B eine direkte Bindung bedeutet.

Es handelt sich hierbei um in der Peptidchemie an sich bekannten Methoden; sie können analog zu denen in den nachstehenden Beispielen beschriebenen Verfahren ausgeführt werden.

Insofern die Herstellung der Ausgangsprodukte nicht besonders beschrieben wird, sind diese Verbindungen bekannt oder können nach an sich bekannten Methoden hergestellt und gereinigt werden. Ebenso können diese analog zu denen in den Beispielen beschriebenen Verfahren hergestellt werden.

Die Verbindungen können in SaI zforrrr oder in Form ihrer Komplexe vorliegen.

Als Säureadditionssalze sind besonders Salz von der Salzsäure und Essigsäure zu nennen.

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Unter Komplexen sind die komplexartigen bekannten in der Art in ihrer Struktur noch nicht abgeklärten Verbindungen zu verstehen, die beim Zusatz gewisser anorganischer oder organischer Stoffe zu den Verbindungen der Formel I entstehen. Solche anorganische Stoffe sind Verbindungen, die sich von Metallen, wie Calcium, Magnesium, Aluminium, Cobalt und insbesondere von Zink, ableiten, vor allem schwerlösliche Salze, wie Phosphate, Pyrophosphate und Polyphosphate sowie Hydroxyde dieser Metalle, ferner AlkalimetallpoIyphosphate. Organische Stoffe sind beispielsweise nicht antigene Gelatine, z.B. Oxypolygelatine, Polyvinylpyrrolidon und Carboxymethylcellulose, ferner Sulfonsäure- oder Phosphorsäureester von Alginsäure, Dextran, Polyphenolen und Polyalkoholen, vor allem Polyphloretinphosphat und Phytinsäure, sowie Polymerisate von Aminosäuren, z.B. Protamin, Polyglutaminsäure oder Polyasparaginsäure.
Die Verbindungen zeichnen sich pharma-

kologische Aktivität aus. Insbesondere bewirken sie eine Hemmung der GH-Sekretion. Sie finden deshalb Verwendung beim Diabetes Mellitus, bei der Behandlung der Acromegalie, der Angiopathie_f sowie beim Einsatz dieser Verbindungen zu diagnostischen Zwecken. Die erfindungsgemäss hergestellten

Verbindungen können

in pharmazeutisch akzeptabler Salzform oder in Form ihrer Komplexe verabreicht werden. Solche Salz- oder Komplexformen können nach an sich bekannten Methoden aus den freien Basen oder umgekehrt hergestellt werden. Die vorliegende Erfindung umfasst auch pharmazeutische

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- Si - 100-4314

Präparate enthaltend eine Verbindung der Formel I in pharmazeutisch akzeptabler Salz- oder Komplexform und in Mischung mit einem Träger oder einem Lösungsmittel. Solche pharmazeutische Präparate können als Tabletten oder als Injektions- oder Infusionslösungen vorliegen. Eine pharmazeutische Lösung ist vorzugsweise bei einem pH zwischen 5 und 8 gepuffert.

Die vorliegende Erfindung erfasst auch pharmazeutische Zubereitungen die Verbindungen der Formel I enthalten, worin R₁ H-(a-amino)-isobutyryl-NH- oder H-(D)-AIa-NH, X Lys, Y Asn, Z -CONR₄R₅ oder -CO-N (CH₃J_{4 Qder 5} bedeuten. Vorzugsweise steht jedes B für Wasserstoff.

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- ^lc - 100-4314

In den nachfolgenden Beispielen erfolgen alle Temperaturangaben in Celsiusgraden und sind unkorrigiert.

Es werden folgende Abkürzungen verwendet:

Cbo = Carbobenzyloxy

MBzI = p-Methoxybenzyl

Iabu = H- (ct-amino-isobutyryl)-

(4Cl)Phe = p-Chlorophenylalanyl

ACOH = Essigsäure

OCP = Trichlorpheny!ester

Trp = L-Tryptophanyl

OSu = 0-Succinimid

Alle Endverbindungen sind in Hydrochloridsalzform charakterisiert. Sofern keine anderen Angaben gemacht werden, liegen die Aminosäuren in der L-Form vor.

20

In der nachfolgenden Tabelle bezieht sich [⁰O_n auf

ACOH 1% v/v (c= 1), wenn nichts anderes gesagt wird.

(1) bezieht sich auf ACOH 20% v/v (c = 1)

(2) bezieht sich auf ACOH 1% v/v (c = 0,25)

(3) bezieht sich auf ACOH 30% v/v (c = 1)

(4) bezieht sich auf ACOH 40% v/v (c = 1)

(5) bezieht sich auf ACOH 50% v/v (c = 1)

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Beispiel Ir H-(4Cl) Phe-Cys-liys-Asn-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH

Man löst 480 mg Cbo-(4Cl)Phe-Cys(MBzI)-Lys(BOC)-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys(Cbo)-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys(MBzI)-OBzI, 410 mg H-Try-OH, 320 mg H-Cys-OH · HCl und 1,2 ml Thioanisol bei 0° in 5 ml Trifluoressxgsäure und gibt 10 ml Bortris (trifluoracetat) 2 molar in Trifluoressigsäure hinzu. Man schüttelt die Mischung 1 Stunde bei Raumtemperatur, kühlt ab und versetzt mit 50 ml tert.-Butylalkohol, engt im Vakuum ein und versetzt den Rückstand mit einer Lösung von 0,01 M 2-Mercapto-äthanol in Aether. Anschliessend wird zentrifugiert. Der feste Rückstand wird in wenig 10% Essigsäure gelöst und durch Chromatographie an Sephadex G 25 im System 0,01 M Mercaptoäthanol in 10% Essigsäure gereinigt. Der Rückstand kann auch in 30% Essigsäure oder in einem Gemisch von n-Butanol/Eisessig/Wasser (z.B. 4:2:1) gelöst und durch Chromatographie an Sephadex G 25 im System 0,01 M Mercaptoäthanol in 30% Essigsäure bzw. im Gemisch Butanol/Eisessig/Wasser gereinigt werden. Die Fraktionen, welche das gewünschte Produkt enthalten, werden vereinigt, in 0,1 η Salzsäure gelös- und lyophilisiert, wobei die Titelverbindung erhalten wird.

Smp. 195 ° (Zers.); [α]£° = - 20,5 °'in AcOH (c = 1) Das Ausgangsmaterial wird wie folgt hergestellt:

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Cbo—Lys_(BOC)^—Asn—PJie—OMe

74,8 g Cbo-Lys(BOC)-ONP werden in einer Lösung von 51 g H-Asn-Phe-OMe · HCl und 21 ml Triäthylamin in 300 ml Dimethylformamid umgesetzt. Nach Aufarbeitung entsteht die Titelverbindung.

Smp. 175 °f Mr» = - 4,4 ° in Dimethylformamid
(c = 1,0)

92 g Cbo-Lys(BOC)-Asn-Phe-OMe werden in einer
Lösung von 2 1 Dioxan und 400 ml Wasser suspendiert. Man versetzt mit Palladiumkohle und hydriert unter Normaldruck. Nach Aufarbeitung entsteht die Titelverbindung.

Smp. 122 °; [a]^⁰ = - 8,3 ° in Dimethylformamid
(c = 1,0)

20 g H-CyS(MBzI)-OMeXH₃SO₃H und 7 ml Triäthylamin werden in 120 ml Dimethylformamid gelöst und mit
18,2 g Cbo-(4Cl) Phe-ONP versetzt. Man lässt
16 Stunden stehen und engt bei Raumtemperatur ein,

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wobei Cbo-(4Cl)Phe-Cys(MBzI)-OMe (Smp. 115 °) nach Aufarbeitlang erhalten wird. Letzteres löst man in Methanol und gibt Hydrazinhydrat hinzu, Man lässt einen Tag bei Raumtemperatur stehen. Die Titelverbindung erhält man nach Aufarbeitung.

Smp. 158 °; [cc]^ = - 9,9 ° in Dimethylformamid (c = 1)

6 g Cbo-(4Cl)Phe-Cys(MBzI)-NH-NH werden in 80 ml Dimethylformamid gelöst,-auf - 20 ° abgekühlt, mit 6 ml 5,3 N Salzsäure in Dioxan, dann mit 1,3 ml tert.-Butylnitrit versetzt und während 10 Minuten bei - 20 ° gerührt. Nach Zugabe von 5,5 ml Triäthylamin bei - 20 ° versetzt man mit 8,4 g H-Lys(BOC)-Asn-Phe-OMe, lässt über Nacht bei O ° stehen, engt ein, versetzt mit Wasser bei O ° bis pH 2. Der Niederschlag wird abfiltriert und mit Wasser gewaschen. Das entstandene Cbo-(4Cl)Phe-Cys (MBzI) -Lys (BOC) -Asn-Phe-OMe wird aus Methanol umkristallisiert, hierauf in Dimethylformamid gelöst und mit 7 ml Hydrazin-Hydrat versetzt. Man lässt einen Tag bei Raumtemperatur stehen, engt ein und kristallisiert den Rückstand aus Methanol um, wobei die Titelverbindung erhalten wird.

on

Smp. 260 °i [cx]p = - 23 ° in Dimethylformamid (c « 1,0)

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- ¹⁴ - 100-4314

§2£-i:Y£i9^°il2hr-Phe-Thr-Ser^C^s (MBzI) -OB zl

Auf analoge Weise wie in Absatz d) werden 2,3 g BOC-Lys(Cbo)-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-NH mit 1,86 g H-Cys(MBzl)-OBzl umgesetzt; man erhält die Titelverbindung.

Smp. 169 °; [α]_β ^Ο = - 16 ° in Dimethylformamid (c = 1) .

2,3g BOC-Lys(Cbo)-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys(MBzI)-OBzI werden in einem Gemisch von 10 ml Methylenchlorid und 6 ml Trifluoressigsäure gelöst und 25 Minuten bei Raumtemperatur stehengelassen. Anschliessend wird H-Lys(Cbo)-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys(MBzI)-OBzI· Trifluoracetat mit Aether gefällt, abfiltriert und gut mit Aether ausgewaschen. Der Rückstand wird in 7 ml Dimethylformamid gelöst, mit 1,5 g BOC-Trp-OCP und mit 0,3 ml Triethylamin versetzt und über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Das Produkt wird mit Aether / Essigester (1 : 1) ausgefällt und filtriert. Man trocknet und erhält die Titelverbindung.

Smp. 167 °; M^° = - 1?ί5 ° in Dimethylformamid (c = 1)

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- 15 - 100-4314

g) BOC^Phe^Trg-LYSJCbo^-Thr^Phe-Thr-Ser^CYSjtMBzl^-OBzl

36 g BOC~Trp-Lys(Cbo)-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys(MBzI)-OBzI werden mit 20 g BOC-Phe-ONP auf analoge Weise wie in Absatz f) umgesetzt; man erhält die Titel verbindung.

Smp. 210 °i [cx]p° = 15 ° in Dimethylformamid (c = 1,0).

1,5 g BOC-Phe-Trp-Lys(Cbo)-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys(MBzI)-OBzI werden in 30 ml Methylenchlorid und 30 ml Trifluoressigsäure gelöst. Man lässt 25 Minuten bei Raumtemperatur stehen, dampft im Vakuum ein und fällt mit Aether. Nach Filtrieren, Waschen mit Aether und Trocknen erhält man H-Phe-Trp-Lys(Cbo)-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys(MBzI)-OBzI·Trifluoracetat.

0,9 g Cbo-(4Cl)Phe-Cys(MBzI)-Lys(BOC)-Asn-Phe-NH-NH₂ werden in 20 ml Dimethylformamid gelöst, auf - 20 ° abgekühlt und mit 0,6 ml 5,3 N Salzsäure in Dioxan, dann 0,1 ml tert.-Butylnitrit versetzt und 15 Minuten bei - 20 ° gerührt. Man gibt 0,7 ml Triäthylamin und 1,5 g H-Phe-Trp-Lys(Cbo)-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-(MBzl)-OBzl · Trifluoracetat zu. Man lässt über Nacht bei 0 ° stehen, dampft im Vakuum ein, verrührt mit 100 ml Wasser, filtriert, wäscht den Rückstand mit Wasser, dann mit Methanol,

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wärmt in Methanol, filtriert und erhält die Titelverbindung .

OCs
Smp. 270 °i [«!ρ = - 19f3 ° in Dimethylformamid

Auf analoge Weise werden nach Aufbau der entsprechenden geschützten Verbindungen die folgenden Verbindungen der Formel A nach Abspaltung der Schutzgruppen erhalten,

P-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Q A

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Bsp. NO.

Smp. /

r ι²⁰ [a]

NH-CO-Cys-Lys-Asn

NH-CO-Cys-Lys-Gln

H-Tyr-Cys-Lys-Asn NH,

-CO-Cys-Lys-Asn

_e=J- (CH₂)₃-CO-Cys-Lys-Asn

-CO-Gly-Cys-Lys-Asn

•NH-CO-Gly-Cys-Lys-Asn

H-Cys-Cys-Lys-Asn H-Cys-Cys-Asn H-Lys-Cys-Lys-Asn H-(4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn H-(4Cl)Phe-Cys-Lys-Asn H-Iabu-Cys-Lys-Asn H-Iabu-Cys-Lys-Thr Cys-OH
Cys-OH
Cys-OH
Cys-OH

Cys-OH
Cys-OH

Cys-OH

CyS-NH₂

160° / -17.2°

150° / -24.6°

160° / -20.0°

170° / -19.8°

160° / -33.1°

170° / -27.7°

160° / -34.3°

160° / -24.5°

170° / -23.3°

175° / -27.8°

170° / -22.4°

175° / -23.2°

165° / -21.0°

165° V -20.2°

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100-4 314

Bsp NO Smp
[α]

-C0-(4Cl)Phe-Cys-Lys-Asn

V (CH ) -CO-GIy-Cys-Nle-Gln ^~~y (CH₂) -CO-Cys-Lys-Asn f~\ NH-CO-Cys-Lys-Asn

NH-CO-Cys-Lys-Gln

•NH-CO-Cys-Nle-Asn NH-CO-Gly-Cys-Nle-Gln

NH₂-NH-CO-Cys-Lys-Asn

(CH₂J₃-CO-(D)AIa-CyS-LyS-ASn

Benzoyl-Cys-Nle-Asn Benzoyl-Cys-Lys-Asn (JrCO- (4Cl) Phe-Cys-Nle-Asn

H-(D)-Ala-Gly-Cys-Lys-Asn H-Ala-Gly-Cys-Lys-Asn Cys-NH,

Cy s-NH,

Cys-NH,

Cys-NH

CyS-NH₂
CyS-NH₂

CyS-NH₂
Cys-NH

CyS-NH₂
Cys-Val-NH,

160° / -18.7°

155° / -18.7°

145° / -19.5°

160° /_m -25.3°^U}

135° / -29.5°

145° / -10.7°

150° / -13.4°

130° / -15.8°

140^ö / -13.7°

160° / -34.4°

155° / -37.9°

Cys

-O

220° / -47° (2)

210° / -45° (2)

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A29 A3O A31 A3 2 A33 A34 A35

H-(4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn H-Iabu-Cys-Nle-Asn H-Iabu-*Cys-Lys-Asn H-(D)-Ala-Gly-Cys-Lys-Asn H-(D)-Ala-Gly-Cys-Nle-Asn H-(D)-Val-Cys-Lys-Asn H-(a-Phenylglycyl)-Cys-Lys-Asn H-(D)-VaI-(4Cl)Phe-Cys-Lys-Asn H-(D)-Ala-Cys-Lys-Asn H-Cys-Lys-Asn

Cyclohexylacetyl-(D)-Val-Cys-Lys-Asn

Cyclohexylacetyl-(a-Phenylglycyl)-Cys-Lys-Asn

Cyclohexylacetyl-(D)-VaI-(4Cl)Phe-Cys-Ly s-A s η

Benzoyl-(3,4-dichloro)Phe-Cys-Lys-Asn Benzoyl-(3,4-dichloro)Phe-Cys-Nle-Asn H-(D)-Ala-Gly-Cys-Nle-Asn Cys-Asparaginol

Cys-Asparaginol

Cys-Asparagi·
nol

CyS-NH₂
CyS-NH₂

CyS-NH₂
CyS-NH₂
CyS-NH₂
CyS-NH₂

CyS-NH₂

155° / -22.5°

150° / -44.3°

160° / -47.4°

150° / -52.7°

165° / -49.50(1)

175° / -47.0°

180° / -33.3°

165° / -30.9°

180° / -27.5°

160° / -19,8^o(3)

¹⁶⁵° / -19.6°

165° / _23.7°(3)

¹⁸⁰° { -22.5°

^{1750 7} -23.5^o

160^p / ->23.9°(4)

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lGO-4 314

	P	260	Q	B336
Bsp No	H-(D)-Phe-Cys-Nle-Asn	Cys-NH
A4 5	H-Phe-Cys-Nle-Asn	CyS-NH₂	175° /
A46	H-(3Cl)Phe-Cys-Nle-Asn	Cys-Asparagi- nol	170° / -30.8°(3)
A47	H- (2Cl)Phe-Cys-Nle-Asn	Cys-Asparagi- nol	165° / -35.0°(3)
A48	H-(3,4diCl)Phe-Cys-Nle-Asn	Cys-Asparagi- nol	170° / -29.8°(3]
A4 9		CH₂-C=O	162° / -25,5°(3]
	H-(4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn	Cys-NH-CH '
A50	H-(4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn	CyS-NH-[CH₂] ₂-OH	165° /
A51	H-(4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn	Cy₅-NH-CCH₂₁₃-OH	135°/ -38.5°
A52	H-(4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn	Cys-Threoninol	132°/ -39.2°
A53	H-(4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn	Cys-Thr-O-CH-	142°/ -41.5°
A54	H-(4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn	Cys-Ser-0- 'CH	150°/ -4 3.6°
A55	H-(4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn	Cys-Ser-NH₂	145°/ -41.0°
A56		CH₂OH	153°/ -40.2°
	H-(4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn	Cys-NH-CH-CH OH
A57	H-(4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn	Cys-Glutaminol	138°/ -37.7°
A58	153°/ -29.5°

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100-4314

Bsp No.	P	Q	Cys-Asparaginol Cys-Asparaginol	Smp. / r i²⁰ [a]_D
A59 A6O A61 A62 A63 A64	H- (4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn H-(4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn H-(4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn H-(D)-Phe-Cys-Nle-Asn	CH-CH₀-OH CyS-NH-CH-CH₂-OH CH-CH₀-CH-OH Cys-NH-CH-CH -OH ^CH₂-CH Cys-NH-CH C=O ^CH₂-O ^ Cys-Asparaginol	142°/ -26.8° 135°/ -27.8° 153°/ -29.3° 162°/ -25.5° 165°/ -27.4° 168°/ — 36 .2
H-(D)-VaI-(4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn H-(D)-Ala-(4Cl)Phe-Cys-Nle-Asn

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²² " Case 100-4314

Beispiel 2;

H-(D)-Ala-Gly-Cys-Nle-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Tlir-Phe-Thr-Ser-Cys-Asparaginol

Man löst 0,4 g der Verbindung von Beispiel A33 in einem Gemisch von Methanol und 0,5 % Essigsäure und bringt den pH durch Zugabe von Ammoniumhydroxyd-Lösung unter Rühren auf pH 6. Man versetzt langsam unter Rühren mit 0,1 m Kaliumferricyanid-Lösung, bis die gelbe Farbe bestehen bleibt. Nach weiteren 15 Minuten Rühren wird der pH mit Essigsäure auf 4-5 eingestellt. Man filtriert durch eine kurze Säule von Bio Rad AG 3/x4 (Cr^ Form) [= schwach basischen Anionen-Austauscher]. Das Filtrat lässt man anschliessend langsam bei 0 ° durch eine Säule mit Bio Rex 70 (-COOH Form) [= schwach saurer Kationen-Austauscher] durchfliessen. Die Säule wird darauf mit einem Essigsäure-Gradienten mit steigender Essigsäure-Konzentration oder mit einem Essigsäure-Pyridin-Gradienten eluiert. Fraktionen, die das gewünschte Produkt enthalten, werden vereinigt und lyophilisiert. Das Lyophilisat wird in wenig n-Butanol/ Eisessig/Wasser (2:1:1) oder 30% Essigsäure gelöst und durch Chromatographie an Sephadex G 25 in demselben Gemisch gereinigt. Man vereinigt die Fraktionen, die das gewünschte Produkt enthalten, lyophilisiert und erhält die Titelverbindung.

[a]tr = - 36 ° (c = 1 in 95% Essigsäure).

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Auf analoger Weise werden aus den entsprechenden Verbindungen mit freier SH-Funktion (Beispiele 1/ Al-7, AlO-32, A34-64) die entsprechenden Verbindungen mit einer S-S-Brücke hergestellt.

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Claims

Patentansprüche:

worin R, (i) H, (ii) NH₂, (iii) H-AIa-NH-; H-Tyr-NH-; H-Cys-NH-; H-VaI-NH-; H-Lys-NH-? H-(α-amino-isobutyryl)-NH-; H-Phe-NH-; (iv) NH₂-NH-CO-NH-; (ν) C II .NH-CO-GIy-NH- ; H-AIa-GIy-NH-; H-VaI-GIy-NH-; II-cx-Phenyl~Gly-NH-; (vi) R₂-A-CO-NH-,

(vii)

worin R„ für niederes Alkyl, Phenyl oder Phenyl, das durch Halogen, Hydroxy, Amino, niederes Alkyl oder niederes Alkoxy substituiert ist, A für eine direkte Bindung, ein Alkylenradikal mit jeweils bis zu 6 Kohlenstoffatomen oder für -NH-stehen,
R₂-AIa-NH-;

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R₂-AIa-GIy-NH-;
worin R_ obige Bedeutung hat, (Viii) C-H-.A¹.CO-M-NH-,

worin A für einen Alkylenradikal mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen steht und -M- -(mono- oder di-Hal)-Phe-, -GIy- oder -AIa- bedeutet, (ix) T-(mono- oder di-Hal)-Phe-NH-,

worin T-für H-, H- Val- oder Benzoylsteht,
(x) (CH₀) _n CiLA¹XO-L-NH,

worin A obige Bedeutung hat und • -L-für -VaI-, -VaI-(mono- oder di-Hal)-Phe-, -ct-Phenyl-Gly- und η für eine ganze Zahl zwischen 4 und 10 stehen, bedeutet,
B für H oder beide B für eine direkte Bindung zwischen den S-Atomen steht,
X für -Lys-, -Nie- oder -Cys- und
Y für -Asn-, -GIn- oder -Thr- stehen und Z für die Reste (i) H; (ii) COOH; (iii) COOR₃ (wobei R_ eine niedere Alkylgruppe bedeutet); (iv) -CO-NR₄R₅ (wobei R. und R₅ unabhängig voneinander Wasserstoff oder eine niedere Alkylgruppe bedeuten) ; (v)

, (wobei η obige Bedeutung besitzt); (vi)

H₂)

CH₃OH; (vii) -CO-Asparaginol; -CO-Leucinol; -CO-Isoleucinol; -CO-Valinol; -CO-Norleucinol; -CO-Glutaminol; -CO-Threoninol; (viii)-CO-Leu; -CO-Ser; -CO-Iso-Leu; -CO-VaI und

ihre entsprechende Amide, worin der Amidteil den Rest -CO-NR.R_q oder -CO-nTch.,) , bedeutet (wobei n, R. und

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R₅ obige Bedeutung besitzten), oder (ix) -CO-ThrOR₃ oder -CO-SerOR-, (wobei R obige Bedeutung besitzt);

(x) -CO-NH-(CH₂),-0H (worin k eine ganze Zahl zwischen 2 und 6 bedeutet), oder -CO-NH-CH-[CH ] ₁ OH (worin I₁ und

'-[CHJ₁ OH

1_? unabhängig voneinander eine ganze Zahl zwischen 1 und 6 bedeutet); (xi) -CO-n]jD; (xii) -CO-NH-R₆ (worin R_g einen 5 oder 6-gliedrigen gesättigten heterocyclischen Ring bedeutet, der ein Sauerstoffatom als Ringglied enthält, oder einen 5 oder 6-gliedrigen Lactonring bedeutet) stehen, wobei in der Formel I die Radikale R₁, X, Y und Z wie auch bei den übrigen Einheiten der Peptxdsequenz wenigstens eine Einheit in der D-Form vorliegen kann, wobei wenn X Lys und Y Asn bedeuten und alle übrigen Einheiten der Peptidsequenz 3 bis 14 in der D- oder L-Form vorliegen, und wenn

(i) R₁ H-AIa-GIy-NH- oder

H-(D)-AIa-GIy-NH- bedeuten, Z nicht für COOH, COOR₃, CH₂OH oder

CONR.R,- stehen kann oder, wenn (ii) R₁ H, NH₂ oder H-(D)-AIa-GIy-HH-

bedeutet,
Z nicht für H, COOH, CONR.R_c oder

CON (CH,.) . , ,. stehen kann ^-^ 2 4 oder 5

oder, wenn (iii) R, H- (oc-amino-isobutyryl)-NH- oder

H-(D)-AIa-NH- bedeutet, Z nicht für H oder COOH stehen kann

oder, wenn (iv) R₁ H-Ala-Gly-NH- bedeutet,

Z nicht für H stehen kann oder, wenn

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26Ü8336

(ν) R, H-AIa-NH, oder

R '-CO-NH- bedeutet, (wobei R₉' für niederes Alkyl oder unsubstituiertes Phenyl steht), Z nicht für COOH stehen kann, und

wobei wenn R H-Cys-NH oder H-(D)-Cys-NH und/oder X -Cys- oder -{D)-Cys bedeuten, B-B nicht für eine direkte Bindung stehen kann.

2. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel I,

SB SB

CH CH

R -CH-CO-X-Y-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-Z

worin R,, B, X, Y und Z obige Bedeutung haben, sowie Säureadditionssalze und Komplexe dieser Verbindungen, dadurch gekennzeichnet, dass man die

Verbindungen der obigen Formel r—..

aus der Peptidchemie bekannten Methoden darstellt und gegebenenfalls anschliessend auf an sich bekannte Weise in ihre Saureadditionssalze und Komplexe überführt.

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3. Verbindungen der Formel I nach Anspruch 1, worin wenn R. H-(a-amino)-isobutyryl-NH- oder H-(D)-AIa-NH, X Lys, Y Asn bedeuten, Z nicht für -CO-NR₄R₅ oder -CO-N^JCH₂)_{4 oder 5} stehen kann.
4. Verfahren nach Anspruch 2 für die Herstellung der Verbindungen der Formel I nach Anspruch 3.
5. Helmittel, dadurch gekennzeichnet, dass sie Verbindungen der Formel I nach Anspruch 1 enthalten.
6. Heilmittel, dadurch gekennzeichnet, dass sie Verbindu düngen der Formel I, worin R₁ H-(a-amino)-isobutyryl-NH- oder H-(D)-AIa-NH, X Lys, Y Asn bedeuten und Z für -CO-NR₄R₅ oder -CO-N JCH₃J_{4 Qder 5} stehen kann, enthalten.

SANDOZ-PATENT-GMBH

3700/BA/ER/IL

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