CZ304204B6

CZ304204B6 - Deriváty aplidinu

Info

Publication number: CZ304204B6
Application number: CZ2002-4233A
Authority: CZ
Inventors: Ignacio Rodriguez; ConcepciĂłn Polanco; Felix Cuevas; Paloma MĂ©ndez; Carmen Cuevas; Pilar Gallego; Simon Munt; Ignacio Manzanares
Original assignee: Pharma Mar, S. A.
Priority date: 2000-06-30
Filing date: 2001-07-02
Publication date: 2014-01-02
Also published as: WO2002002596A3; NZ523367A; JP5289662B2; CZ20024233A3; ES2305083T3; HUP0301387A3; WO2002002596A2; NO20026242D0; CY1108549T1; BRPI0112375B1; DK1294747T3; SI1294747T1; PL208651B1; CA2414609C; EP1294747A2; KR100866056B1; IL153680A; UA76718C2; KR20030013477A; CA2414609A1

Abstract

Deriváty aplidinu obecného vzorce uvedeného dále, kde substituenty mají specifický význam.

Description

Navrhovaný vynález popisuje způsoby syntézy aplidinu a nových protinádorových derivátů, způsoby jejich přípravy a použití.

Dosavadní stav techniky

Aplidin má cyklickou strukturu s postranními řetězci:

NMe-L-Tyr®

L-Pro⁵

Ist² (isostatine)

NMe-D-Leu

L-Pro

Pyr® (piruvyl) jádro didemninů

Aplidin

Didemniny jsou skupinou cyklických depsipeptidů, které byly izolovány z různých druhů Trididemnum (Rinehart, Jr. et al. J. Am. Chem. Soc., 103, 1857-59 (1981), Rinehart, Jr. et al. Science, 212, 933-935 (1981)) a které mají silné protinádorové a antivirové účinky. Aplidin jedním z přirozených didemninů, které vykazuje nejsilnější protinádorové účinky. Popis izolace z přiroze20 ných didemninů, který vykazuje nejsilnější protinádorové účinky. Popis izolace a protinádorových účinků aplidinu je uveden v patentu US 5 834 586.

Celá řada syntetických a přirozených analogů aplidinu již byla popsána dříve (Rinehart, Jr. et al. J. Med. Chem., 1996, 39, 2819-2834) včetně různých úprav postranních řetězců, ale za zacho25 vání stejné makrocyklické struktury.

Byla již také popsána struktura příbuzná didemninům označená jako tamandariny (Fenical, W. et al., J. Org. Chem. 2000, 65, 782-792), izolované z neidentifikované větve rodiny Didemnidae. Tyto molekuly se odlišují pouze přítomností kyseliny hydroxyisovalerové (Hiv³), na místě kyseliny hydroxyisovalerylpropionové (Hip³). Bylo zjištěno, že se jedná o vysoce aktivní peptidy s antivirovým, protinádorovým a imunosupresivním účinkem.

TÁMANDARfNE B: R=fí OMe

Závažné odkazy týkající se stavu techniky dále zahrnují WO 98/17 302, který se týká celkové syntézy amino (Hip) analogu didemninu A; WO 98/17 275 A popisujícím semisyntetické studie vztahující se k analogům didemninu; WO 93/00 362 A, který se týká nových peptidů (didemninů), jejich přípravy a jejich použití; dále EP 0 393 883 A popisujícího nové cytotoxické cyklické depsipeptidy z tunikátu trididemninu sodného; US 3 034 058, který se týká semi-syntetických analogů alanyl didemninu; dokument R. Sakai et al.: Journal of Medicinal Chemistry; 39; č. 14; 1996; str. 2819-2834, který se týká vztahů mezi strukturou a účinností didemninů; dokument Vervoort et al.: J. Org. Chem. 2000, 65, str. 782-792, který se týká tamandarinu A atamandarinu B; ES 2 102 322A se týká přípravy didemninu A; WO 0176616 A se týká tamandarinových a didemninových analogů a způsobů jejich přípravy a jejich použití. US 6 509 315 se týká didemninových analogů a fragmentů a způsobů jejich přípravy a jejich použití. R. Sakai et al.; J. Org. Chem. Vol. 59, str. 5192-5205 popisuje způsob přípravy analogu didemninu a US 4 493 796 Rinehart et al. popisuje didemninové analogy.

Všechny sloučeniny zde popsané ve výše uvedených odkazech jsou mimo rozsah sloučenin předkládaného vynálezu.

Podstata vynálezu

Vynález se týká cyklického derivátu depsipeptidu obecného vzorce aa5

kde

X je nezávisle -C(R)₂-, -O-, -S-, nebo -NR-, kde R je nezávisle H nebo organická skupina vybraná zC_rCp alkylové skupiny, C₂—C₎₂ alkenylové skupiny, C6-C,_s arylové skupiny, aral-2CZ 304204 B6 kýlové skupiny a jejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, které obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, C,-C,₂ alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami;

Y je CO nebo -COCHCH3CO-;

R₄ je H nebo organická skupina vybraná z aminoskupiny RCONH-, acylové skupiny RCOC,-C,₂ alkylové skupiny, C₂-C,₂ alkenylové skupiny, arylové skupiny, aralkylové skupiny, ajejich substituovaných derivátů, kteréjsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, které obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, C|C_I2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami;

kde v každém případě

R je C|—C|₂ alkylová skupina, C₂-C,₂ alkenylová skupina, C₆-C,₈ arylová skupina, aralkylová skupina, ajejich substituované deriváty, kteréjsou substituované heterocyklickou skupinou obsahující jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, C|—Ci₂ alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, případně chráněnou amino skupinou, guanidinovou skupinou nebo halogenovou skupinou;

X, je O nebo S; a když Y je CO, pak

a) X₂ je CR, O (a R₂ chybí), S (a R₂ chybí), nebo N, kde R je nezávisle H nebo organická skupina vybraná z C|-C|₂ alkylové skupiny, C₂-C]₂ alkenylové skupiny, C₆-C|₈ arylové skupiny, aralkylové skupiny ajejich substituovaných derivátů, kteréjsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, které obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, C|-C_i2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; a

Ri a R₂ jsou každý nezávisle H nebo organická skupina vybraná z C|-C_t2 alkylové skupiny, C₂C|₂ alkenylové skupiny, C₆-C|₈ arylové skupiny, aralkylové skupiny, amidové skupiny RCONHnebo acylové skupiny RCO-, kde R je a Cí-C,₂ alkylová skupina, C₂-Ci₂ alkenylová skupina, C₆-C₁₈ arylová skupina, aralkylová skupina ajejich substituované deriváty, kteréjsou substituované jednou nebo více C]—C_]2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; a

Ri nebo R₂, když X₂ je N, dále je -SO₂R, kde R je jak definováno výše; nebo

b) aa8 je sloučenina vzorce kde R; je organická skupina vybraná z C,-C_i2 alkylové skupiny, C₂-C_l2 alkenylové skupiny, C_ĎC|₈ arylové skupiny, aralkylové skupiny, skupiny RSO₂- nebo acylové skupiny RCO-, kde R je Cj—C|₂ alkylová skupina, C₂-C,₂ alkenylová skupina, C₆-C₁₈ arylová skupina, aralkylová skupina, ajejich substituované deriváty, kteréjsou substituované jednou nebo více merkapto skupinami případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo

- j CZ 304204 B6

c) Ri a R₂ s X₂ tvoří případně substituovaný C₃-Ci₂ cykloalkyl, případně substituovaný C₆-Ci₈aryl nebo případně substituovanou heterocyklickou skupinu vybranou z kumarinylu, quinolinylu, pyridylu, pirazinylu, pyrimidylu, furylu, pyrrolylu, thienylu, thiazolylu, oxazolylu, imidazolylu, indolylu, benzofuranylu, benzothiazolu, tetrahydrofuranylu, tetrahydropyranylu, piperidinylu a morfolinu; kde případné substituenty jsou vybrané zCi-C,₂ alkylové skupiny, C₂-Ci₂ alkenylové skupiny, C₆-C|₈ arylové skupiny, aralkylové skupiny, a jejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovanými skupinami; nebo

d) aa8 je nahrazen organickou skupinou vybranou zCe-Cis arylové skupiny, aralkylové skupiny, skupiny RSO₂- nebo acylové skupiny RCO-, kde Rje C|-C_l2 alkylová skupina, C₆-Ci₈arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, C]—Cj₂ alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; když Y je -COCHCH₃CO-, pak

a) X₂ je N, a R| a R₂ jsou každý nezávisle H nebo organická skupina vybraná z C|-C_J2 alkylové skupiny, C₂-C₎₂ alkenylové skupiny, Cň-C|₈ arylové skupiny, aralkylové skupiny, amidové skupiny RCONH-, skupiny -SO₂R nebo acylové skupiny RCO-, kde R je a C,-C|₂ alkylová skupina, C₂-C|₂ alkenylová skupina, Cf,-C|₈ arylová skupina, aralkylová skupina, ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami obsahujícími jeden, dva nebo tři heteroatomy vybranými z atomů N, O nebo S, C,-Ci₂ alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo

b) aa8 je sloučenina vzorce kde R₃ je skupina RSO₂-, kde Rje C,-C|₂ alkylová skupina nebo R₃ je C₂-C|₂ alkenylová skupina, alkenylová skupina, aralkylová skupina ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo

c) R, a R₂ s X₂ tvoří případně substituovanou C₃-C|₂ cykloalkylovou skupinu, případně substituovanou C₆-C,₈ arylovou skupinu nebo případně substituovanou heterocyklickou skupinu vybranou z kumarinylu, quinolinylu, pyridylu, pirazinylu, pyrimidylu, furylu, pyrrolylu, thienylu, thiazolylu, oxazolylu, imidazolylu, indolylu, benzofuranylu, benzothiazolu, tetrahydrofuranylu, tetrahydropyranylu, piperidinylu a morfolinu; kde případné substituenty jsou vybrané zC,-Ci₂alkylové skupiny, C₂-Ci₂ alkenylové skupiny, C₆-C_l8 arylové skupiny, aralkylové skupiny, ajejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovanými skupinami; nebo

d) aa8 je nahrazen organickou skupinou vybranou zC₆-Ci₈ arylové skupiny, aralkylové skupiny, skupiny RSO₂-, kde Rje C,-C,₂ alkylová skupina, C₆-C_i8 arylová skupina nebo aralkylová skupina, ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více Ci-C|₂

-4CZ 304204 B6 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami;

kde aralkylové skupiny jsou tvořeny Cj—C_í2 alkylovou skupinou substituovanou C₆-C₎₈ arylovou skupinou;

a jeho farmaceuticky přijatelných solí.

Navrhovaný vynález popisuje deriváty aplidinu pro použití v medicíně, konkrétně pak určené pro léčbu nádorů. Navrhovaný vynález rovněž popisuje farmakologické přípravky, které tyto látky obsahují ajsou určené pro léčbu nádorů, například solidních nádorů a použití těchto látek pro přípravu léčiv určených pro léčbu nádorů. Tato léčiva jsou určena pro léčbu solidních nádorů, jako jsou rakovina močového měchýře, prsu, tlustého střeva, jater, NSLC, vaječníků, pankreatu, hltanu, prostaty, cév, SLC, retinoblastomů, melanomů, fibrosarkomů, chondrosarkomů, nebo osteosarkomů, nebo pro léčbu leukemií/lymfomů jako jsou ALL (promyelocytická leukémie), ALL (akutní lymfoblastická leukémie), CML (chronická myelogenní leukémie), ALL (Bbuněčná leukémie), leukémie (vlasatá B-buněčná leukémie), leukémie (plazmatické buňky), lymfom (T buněčný), lymfom (kožní T buňky), lymfom (nediferencovaný), lymfom (Burkittův Bbuněčný), lymfom (histiocytický), lymfom (B-buněčný), lymfom (Burkittův ascitický).

Příklady farmaceutických prostředků podle navrhovaného vynálezu, mohou být pevné lékové formy (např. tablety, váčky, kapsle nebo granule) nebo kapalné lékové formy (roztoky, suspenze nebo emulze) s vhodným složením určeným pro orální, povrchovou nebo parenterální aplikaci a mohou obsahovat buď čistou látku podle navrhovaného vynálezu, nebo může být tato látka přítomná v kombinaci s nějakým nosičem nebo jinou farmakologicky aktivní složkou. Všechny tyto látky musí být sterilní, pokud mají být aplikovány parenterálně. Je také možné, navázat látky podle navrhovaného vynálezu na nosič, kterým může být protein nebo jiné vhodné agens použitelné pro aplikaci do lidského nebo zvířecího organismu. Navázání látky na nosič může být buď přímé, nebo nepřímé prostřednictvím vhodné spojky. Aplikace látek nebo prostředků podle navrhovaného vynálezu může být provedeno jakoukoliv vhodnou technikou, jako je nitrožilní infúze, orální aplikace, intraperitoneální nebo intravenózní aplikace. Nejvhodnější infúzní časy jsou do 24 hodin, lépe pak 2 až 12 hodin a nejlépe 2 až 6 hodin. Nejvhodnější jsou krátké infuze, které nevyžadují, aby byl pacient hospitalizován přes noc. Nicméně pokud je třeba je možné aplikovat léčivo I v dlouhodobých 12 až 24 hodin trvajících infúzích. Tyto infúze by měly probíhat ve vhodném intervalu 2 až 4 týdnů. Farmaceutické prostředky obsahující látky podle navrhovaného vynálezu mohou být aplikovány také ve formě lipozómů, nanokuliček, v postupně se uvolňujících lékových formách nebo pomocí jiných standardních způsobů aplikace.

Správná dávka se bude odlišovat v závislosti na lékové formě, způsobu aplikace, konkrétním místě aplikace, pacientovi a typu léčeného nádoru. Je rovněž nezbytné vzít v úvahu další faktory jako je věk, tělesná váha, pohlaví pacienta, jeho dieta, čas aplikace, míra vylučování, stav pacienta, kombinace léčiv, reakce přecitlivělosti a závažnost onemocnění. Aplikace může být pak kontinuální nebo periodická až do maximální tolerované dávky.

Látky podle navrhovaného vynálezu mohou být použity s ostatními léčivy v kombinované terapii. Ostatní léčiva mohou být součástí příslušné lékové formy, nebo mohou být aplikována nezávisle a až buď současně, nebo vjiný vhodný okamžik. Použití jiných látek není omezené a vhodnými kandidáty mohou být:

a) látky s antimitotickým účinkem, zejména pak takové, které působí proti strukturám cytoskeletu, jako jsou látky působící proti tvorbě mikrotubulů, jako jsou taxany (např. taxol, paklitaxel, taxotere, docetaxel), podofylotoxiny nebo vinca alkaloidy (vincristine, vinblastine);

b) antimetabolity jako jsou 5—fluorouracil, cytarabin, gemcitabin, analogy purinu jako jsou pentostatin, methotrexát);

-5 CZ 304204 B6

c) alkylační agens jako jsou dusíkaté yperity (jako je cyclofosfamid nebo ifosfamid);

d) látky napadající DNA jako jsou antracyklická antibiotika jako je adriamycin, doxorubicin, farmorubicin nebo epirubicin;

e) látky působící cílové topoizomery, jako je etoposid;

f) hormony a agonisté nebo antagonisté hormonů jako jsou estrogeny, antiestrogeny (tamoxifen, příbuzné látky) a androgeny, flutamin, leuprorelín, goserelin, cyprotrone nebo octreotid;

g) látky zabraňující přenosu signálu v nádorových buňkách, včetně derivátů protilátek jako je herceptin;

h) alkylační činidla jako jsou látky obsahující platinu (cis-platina, carbonplatina, oxaliplatina, paraplatina) nebo nitromočovina;

i) látky potenciálně zabraňující tvorbě metastáz jako jsou inhibitory metaloproteáz z mezibuněčné hmoty;

j) genová terapie a antisens agens;

k) terapeutické protilátky; a

l) další bioaktivní látky pocházející z moře, zejména pak ekteinascidiny jako je ET-743.

V jedné konkrétní variantě je popsána sloučenina obecného vzorce:

kde:

X je nezávisle -C(R)₂-, -O-, -S-, nebo -NR-, kde R je nezávisle El nebo organická skupina jako např. alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich substituované deriváty substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, která může být chráněná, guanidinovou skupinou nebo halogenem;

X₂ je nezávisle CR, O (a R₂ není přítomna), S (a R₂ není přítomna), nebo N, kde R je nezávisle H nebo organická skupina, a jejich deriváty substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, která může být chráněná, guanidinovou skupinou nebo halogenem; Y je -(COR')_nCO-, kde n je 0 nebo 1

-6CZ 304204 B6 a R' nebo organická skupina jako např. alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich deriváty substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, která může být chráněná, guanidinovou skupinou, nebo halogenem;

Xi je O nebo S;

Ri, R₂ a R₄ jsou nezávisle H nebo organická skupina jako např. amid RCONH- nebo acyl RCO-, kde Rje definováno jako, alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich deriváty substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, která může být chráněná, guanidinovou skupinou, nebo halogenem, a Ri nebo R₂ kde X₂ je N, a R4, může dále být-SO₂R, kde Rje definováno;

nebo R, a R₂ s X₂ mohou tvořit N-substituovaný prolin, kdy N-substituovaný prolin aa8 je podle obecného vzorce:

kde R₃ je nezávisle H nebo organická skupina jako např. RSO₂- nebo acyl RCO-, kde R je definováno, nebo R₃ je alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich deriváty substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, která může být chráněná, guanidinovou skupinou, nebo halogenem;

nebo R| a R₂ s X₂ mohou tvořit cykloalkyl, aryl nebo heterocyklickou skupinu, která může být substituována jednou nebo více skupinami R₃; nebo R,, R₂, X₂, R4 a skupina R₄ nesoucí dusík může tvořit oxadiazaspiroalkan N-substituovaný s R₅, kde R₅ je nezávisle H nebo organická skupina jako např. RSO₂- nebo acyl RCO-, kde Rje definováno jako alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich deriváty substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, která může být chráněná, guanidinovou skupinou nebo halogenem;

nebo aa8 je nahrazeno organickou skupinou např. RSO₂- nebo acyl RCO-, kde R je definováno jako alkylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich deriváty substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, guanidinovou skupinou, nebo halogenem; a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Nejvhodnější látky jsou ty, kde X je -NR-, kde Rje definováno. Lépe pak, X je -NH- nebo -Me-, a nejlépe X je NH-.

Další vhodné látky podle navrhovaného vynálezu jsou ty, kde X je -O-.

Skupina Y je nejlépe -COR'CO-, kde R'je alkyl, a zejména pak kde R'je -CHCH₃Další vhodné látky podle navrhovaného vynálezu jsou ty, kde Y je -CO-.

Vzhledem k těmto podmínkám, nej vhodnější skupinou látek je ta, kde X je -NH- nebo -O- a Y je -COCHCH₃CO- nebo -CO-.

Výhodně R4 je methyl.

-7CZ 304204 B6

Výhodně X, je =0.

Výhodně X₂R, je aralkyloxy skupina, která může být substituovaná, jako např. benzyloxy skupina.

Další vhodné látky podle navrhovaného vynálezu jsou ty, kde X₂Ri je amino skupina, která může být substituovaná, lépe pak takové, kde X₂R| je skupina -NHR_t, kde Ri je alkyl, který může být substituovaný, alkenyl, aryl, nebo aralkyl, zejména pak alkyl nebo aryl, jako jsou fenyl nebo butyl.

Další vhodné látky podle navrhovaného vynálezu jsou ty, kde X₂R| alkyl, který může být substituovaný kde X₂R, je propyl, isopropyl, pentyl nebo biotin.

Další vhodné látky podle navrhovaného vynálezu jsou ty, kde -C(=X₂)RiR₂ tvoří acyl aminokyseliny, který může být substituovaný. Vhodné substituované acyly aminokyselin mohou být prolin, který může být substituovaný, glycin, který může být substituovaný, valin, který může být substituovaný, konkrétně pak vhodný substituovaný prolin může být norvalin-prolin, alanin-prolin, který může být substituovaný, Boc-prolin, alkyl—prolin, který může být substituovaný, nebo vhodný substituovaný glycin může být heterocyclem substituovaný glycin, valin, který může být substituovaný je zejména valin, Boc-valin, nebo alkyl-valin.

Vhodný substituovaný prolin je norvalin-prolin, Z-norvalin-prolin, alanin-prolin, Z-alaninprolin, Boc-alanin-prolin, isobutyrylprolin nebo D-lactylprolin který může být chráněný, nebo heterocyklem substituovaný glycin může být kumarinyl-glycin, a valin, který může být substituovaný je valin, Boc-valin, nebo isobutyrylvalin.

Další vhodnou skupinou látek podle navrhovaného vynálezu jsou ty, kde Xi je S a X₂R, je skupina -NHR|, kde R, je alkyl, alkenyl, aryl, aralkyl, který může být substituovaný. R] je nejlépe alkyl nebo aryl, konkrétně pak fenyl nebo butyl.

Ri a R₂ s X₂ mohou tvořit heterocyklický kruh, který může být substituovaný jednou nebo I více skupinami R₃. Touto heterocyklickou skupinou může být například kumarin.

Vhodné látky podle navrhovaného vynálezu jsou ty, kde aa8 je nahrazeno organickou skupinou RSO₂-, kde R je, jak bylo definováno, např. methyl. R_b R₂, X₂, R4 a dusík obsahující R4 mohou tvořit oxadiazaspiroalkan N-substituovaný s R₅, kde R₅ je H. N-substituovaný oxadiazaspiroalkan je nejlépe 6-oxa-l,7diazaspiro[4,4]nonan.

Příklady látek podle navrhovaného vynálezu jsou:

3-[Aip]-Z-didemnin A,

8-[fenyl-močovina]-didemnin A,

8- [Butyl-močovina]-didemnin A,

3-[val]-8-[isobutyryl]-aplidin,

9- [norvalin]-aplidin,

3-[Hiv]—9-[isobutyryl]- aplidin,

3-[Val]- 9-[isobutyryl ]- aplidin,

3-[hiv]-8-[isobutyryl]-didemnin A,

3-[Hiv]-9-[Ala]-aplidin,

3-[Hiv]-9-[Nva]-aplidin,

8-[fenylthiomoěovina]-didemnin A,

-8CZ 304204 B6

8-[kumarin]-didemnin A,

8-[butylthiomočovina]-didemnin A,

3-[Hiv]-9-[D-Lac]-aplidin,

8- [methylsulfonyl]-didemnin A,

3-[val]-Z-didemnin A,

3-[Hiv]-8-[Val]-didemnin A,

3-[Hiv]—8-[butyryl]—aplidin,

3-[val]-didemnin A,

3-[Hiv]-didemnin A,

Z-didemnin A,

9- [Z-Nva]-aplidin,

3-[Hiv]-9-[Z-ala]-aplidin,

8-[Gly]-8-[kumarin]-didemnin A,

8-[biotin]-didemnin A,

3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[Boc]-aplidin,

3-[Hiv]-Z-didemnin A,

3-[Hiv]-9-[Z-Nva]-aplidin,

7.8- [spiro]—9—[pyr]—aplidin,

3-[Hiv]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidin,

3-[Hiv]-9-[Boc-Ala]-aplidin,

7.8- [spiro]-9-[Boc]-aplidin,

3-[Hiv]-8-[Boc-Val]-aplidin,

8-[Val]-9-[isobutyryl]-didemnin A,

3-[Hiv]-8-[hexanoyl]-didemnin A,

3-[Val]-9-[Lac(OTBDMS)]-aplidin,

3-[Aip]-didemnin A,

3-[Hiv]-9-[D-Lac(OTBDMS)]-aplidin,

7.8- [spiro]-9-[isobutyryl]-aplidin,

3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[Pyr]-aplidin,

3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[isobutyryl]-aplidin,

3—[Hiv]—7,8—[spiro]—9—[akryloyl]—aplidin, [Aip]³—aplidin.

V dalších aspektech podle navrhovaného vynálezu jsou popisovány látky podle obecného vzorce:

-9CZ 304204 B6

a příbuzné struktury.

V další konkrétní variantě, navrhovaný vynález popisuje syntetickou cestu přípravy aa3 = [Hiv]³nebo [Val]³ nebo [Aip]³, jako část série výrazně účinných a vzácných látek s protinádorovým účinkem o kterých se očekává využití v klinické léčbě jakmile budou dostupná dostatečná množství a jejich jednoduché izomery, u kterých dochází k permutacím aminokyselinových zbytků. Tento postup je kontrolován jak z hlediska vzniku enantiomer, tak stereomer, je rychlý a má řadu výhod standardních syntetických postupů v kapalné fázi.

Jedna vhodná varianta navrhovaného vynálezu je uvedena jako vzorec 1, kde aa3 je nezávisle aaminokyselina L nebo D konfigurace. Pokud je přítomno, X je nezávisle C(R)_2> O, S, nebo NR; kde R je nezávisle H nebo organická skupina, kterou může být jako alkylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, ajejich deriváty substituované jednou nebo více heterocyklickou skupinou, alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, amino skupinou, guanidinovou skupinou, nebo halogenem. Kde R obsahuje nejlépe 1 až asi 12 uhlíkových atomů, lépe pak 1 až asi 8 uhlíkových atomů, ještě lépe 1 až asi 6 uhlíkových atomů, a nejlépe 1,2, 3 nebo 4 uhlíkových atomů. Methyl, ethyl a propyl včetně isopropylu jsou pravděpodobně nejvhodnější alkylové skupiny pro látky podle navrhovaného vynálezu. Skupina aa3 je nejlépe ct-(cť_hydroxyisovaleryljpropionyl (Hip), (X= O, Y = -COCHCH3CO-) -série A, nebo a-(oť-aminoisovaleryl)propionyl (Aip), (X= NH, Y = -COCHCH3CO-) -série N, nebo valin (X = NH, Y= -CO-) -série V, nebo α-hydroxyisovaleryl (X= -Ο-, Y = -CO-) -série H, nebo N-methylvalin (X= NMe, Y = -CO-) -série M. Skupina aa8 je nezávisle cc-aminokyselina L nebo D konfigurace, pokud je přítomna; X2 je definováno v závislosti na Y.

R3 je nejlépe pyruvát, aralkyloxykarbonylová skupina nebo aminokyselina nebo peptid. Alkylové skupiny by měly mít nejlépe od 1 do asi 12 uhlíkových atomů, lépe pak od 1 do asi 8 uhlíkových atomů, ještě lépe od 1 do asi 6 uhlíkových atomů, a nejlépe od 1, 2, 3 nebo 4 uhlíkové atomy. Methyl, ethyl a propyl včetně isopropylu jsou nejvhodnější alkylové skupiny v látkách podle navrhovaného vynálezu. Jak je zde použit, termín alkyl, pokud není uvedeno jinak, popisuje jak cyklické, tak necyklické skupiny, přičemž cyklické skupiny by měly obsahovat alespoň tři uhlíkové atomy. Nej vhodnější aminokyseliny jsou chráněné nebo nechráněné D nebo L glycin, valin, leucin, isoleucin, fenylalanin, tyrosin, tryptofan, methionin, cystein, aspartát, asparagin, glutamová kyselina, glutamin, lysin, arginin, prolin, serin, threonin, histidin a hydroxyprolin. Nejvhodnější peptidy jsou tvořeny z výše uvedených aminokyselin.

Jak je zde používán, termín „organická skupina“ popisuje uhlovodíkovou skupinu, kterou může být alifatická skupina, cyklická skupina, nebo kombinace alifatických a cyklických skupin (např. aralkylové skupiny). V kontextu navrhovaného vynálezu, termín „alifatická skupina“ popisuje nasycený nebo nenasycený, lineární nebo přímý uhlovodík. Tento termín je používán tak, že zahrnuje například alkyl, alkenyl a alkynylové skupiny. Termín „alkylová skupina“ popisuje

- 10CZ 304204 B6 nasycenou lineární nebo větvenou uhlovodíkovou skupinu zahrnující např., methyl, ethyl, isopropyl, isobutyl, t-butyl, heptyl, dodecyl, oktadecyl, amyl, 2-ethylhexyi, 2-methylbutyl, 5methylhexyl, a podobně. Termín „alkenylová skupina“ popisuje nenasycenou lineární nebo větvenou uhlovodíkovou skupinu s jednou nebo více dvojnými vazbami mezi uhlíky, jako je např. vinyl. Termín „alkynylová skupina“ popisuje nenasycenou lineární nebo větvenou uhlovodíkovou skupinu s jednou nebo více trojnými vazbami mezi uhlíky. Termín „cyklická skupina“ popisuje uhlovodíkovou skupinu uzavřenou do kruhu, která může být klasifikována jako alicyklická skupina, aromatická skupina, nebo heterocyklická skupina. Termín „alicyklická skupina“ popisuje cyklickou uhlovodíkovou skupinu s vlastnostmi, podobnými alifatickým skupinám. Termín „aromatická skupina“ nebo „arylová skupina“ popisuje mono- nebo polycyklickou aromatickou uhlovodíkovou skupinu. Termín „heterocyklická skupina“ popisuje uzavřený kruhový uhlovodík, kdy jeden nebo více atomů tvořících kruh jsou atomy jiné než atomy uhlíku (např. dusík, kyslík, síra apod.).

Nejvhodnější alkoxy skupiny v látkách podle navrhovaného vynálezu jsou skupiny obsahující jednu nebo více vazeb s kyslíkem a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů, lépe pak od asi 1 do asi 8 uhlíkových atomů, a nejlépe 1 až asi 6 uhlíkových atomů, a nejlépe 1, 2, 3 nebo 4 uhlíkové atomy.

Vhodné heteroaromatické skupiny v látkách podle navrhovaného vynálezu obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy kterými mohou býtN, O nebo S atomy, např., kumarinyly včetně 8-kumarinylu, quinolinyly včetně 8-chinolinylu, pyridylu, pyrazinylu, pyrimidylu, furylu, pyrrolylu, thienylu, thiazolylu, oxazolylu, imidazolylu, indolylu, benzofuranylu a benzothiazolu. Vhodné heteroalicyklické skupiny v látkách podle navrhovaného vynálezu obsahují, jeden, dva nebo tři heteroatomy např. N, O nebo S atomy včetně např., tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, piperidinyl, morfolino a pyrrolindinyl skupiny.

Vhodné karboxylové arylové skupiny podle navrhovaného vynálezu mohou být látky s jedním nebo více cykly, včetně látek složených z několika cyklů, které obsahují oddělené a/nebo fúzované arylové skupiny. Obvyklá karboxylová arylová skupina obsahuje 1 až 3 nezávislé nebo fúzované cykly a od 6 do asi 18 uhlíkových atomů v cyklu. Nejvhodnější karbocyklická arylová skupina je fenyl, včetně substituovaných fenylů, jako jsou 2-substituovaný fenyl, 3-substituovaný fenyl, 2,3-substituovaný fenyl, 2,5-substituovaný fenyl, 2,3,5-substituovaný fenyl a 2,4,5substituovaný fenyl kde jeden nebo více substituentů fenylu jsou elektronegativní skupiny jako např. halogen, kyano, nitro, alkanoyl, sulfinyl, sulfonyl a podobně, naftyl včetně l-naftyl a 2naftyl, bifenyl, fenantryl a antracyl.

Chráněná aminokyselina může být chráněna pomocí různých skupin známých v současném stavu techniky, které jsou vhodné pro tento účel. Vhodnými chránícími skupinami pro aminy jsou např. karbamáty, amidy, a další chránicí skupiny, jako jsou alky, arylalkyl, sulfo— nebo halo—arylalkyl, haloalkyl, alkylsilylalkyl, arylalkyl, cykloalkylalkyl, alkylarylalkyl, heterocyklylalkyl, nitroarylalkyl, acylaminoalkyl, nitroaryldithioarylalkyl, dicykloalkylkarboxamidoalkyl, cykloalkyl, alkenyl, arylalkenyl, nitroarylalkenyl, heterocyklylalkenyl, heterocyklyl, hydroxyheterocyklyl, alkyldithio, alkoxy- nebo halo- nebo alkylsulfinyI arylalkyl, heterocyklylacyl, a další karbamáty a alkanoyl, haloalkanoyl, arylalkanoyl, alkenoyl, heterocyklylacyl, aroyl, arylaroyl, haloaroyl, nitroaroyl, a další amidy, stejně tak jako alkyl, alkenyl, alkylsilylalkoxyalkyl, alkoxyalkyl, kyanoalkyl, heterocyklyl, alkoxyarylalkyl, cykloalkyl, nitroaryl, arylalkyl, alkoxy- nebo hydroxyarylalkyl a řada dalších skupin. Tyto skupiny mohou být případně substituovány výše uvedenými substitučními skupinami.

Odkazy na skupiny, které mohou substituovat v látkách podle navrhovaného vynálezu, zahrnují konkrétní skupiny, které mohou být substituovány v jedné nebo několika vhodných pozicích jednou nebo více vhodnými skupinami, např. halogenem, jako je fluorid, chlorid, bromid a iodid; kyano skupinou, hydroxylem, nitro-, azido-, alkanoylem, jako je C)_₆ alkanoyl jako např. acyl a podobně, karboxamido, alkylovou skupinou včetně skupin obsahujících od 1 do asi 2 uhlíko- 11 CZ 304204 B6 vých atomů, nebo od 1 do asi 6 uhlíkových atomů a nejlépe od 1 do 3 uhlíkových atomů; alkenylové a alkynylové skupiny včetně skupin obsahujících jednu nebo více nenasycených vazeb a od do asi 12 uhlíkových atomů nebo od 2 do asi 6 uhlíkových atomů alkoxy skupiny včetně těch, které obsahují jednu nebo více kyslíkových vazeb a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů nebo od 1 do asi 6 uhlíkových atomů, aryloxy skupiny, jako např. fenoxy; alkylthio skupiny včetně těch skupin obsahujících jednu nebo více thioéterových vazeb a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů nebo od 1 do asi 6 uhlíkových atomů, včetně těch skupin obsahujících jednu nebo více sulfinylových vazeb a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů nebo od 1 do asi 6 uhlíkových atomů, alkylsulfínylové skupiny včetně takových skupin obsahujících jednu nebo více sulfonylových vazeb a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů nebo od 1 do asi 6 uhlíkových atomů, aminoalkylové skupiny které obsahují jeden nebo více atomů dusíku a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů nebo od 1 do asi 6 uhlíkových atomů, karbocyklický aryl obsahující 6 nebo více uhlíkových atomů, konkrétně fenyl (např. R může být substituovaný nebo nesubstituovaný bifenyl) a arylalkyl jako je benzyl.

Jak je v současném stavu techniky známo, vyšší stupeň substituce není jen tolerovaný, je také velmi často žádaný. U látek podle navrhovaného vynálezu je substituce předpokládána. Pro zjednodušení diskuse a upřesnění některých termínů používaných v této přihlášce, termíny „skupina“ a „struktura“ jsou používány pro odlišení chemických entit vhodných pro substituci, nebo které je možné substituovat a které neumožňují nebo nemohou být substituovány. Tedy, pokud je použit termín „skupina“ pro popis substituentu, popisovaný chemický materiál zahrnuje nesubstituovanou skupinu a takovou skupinu obsahuj ící např. atomy O, N a S, v řetězci stejně jako karbonylovou skupinu nebo jinou obvyklou substituci. Termín „struktura“ je použit pro popis chemické látky nebo substituentu ale zahrnuje pouze nesubstituované chemické struktury.

Např. termín „alkylová skupina“ tak jak je používán, zahrnuje nejen samotný uhlovodíkový otevřený řetězec nasyceného alkylového substituentu, jako je methyl, ethyl, propyl, isobutyl a podobně, ale také substituenty nesoucí další substituenty známé v současném stavu techniky, jako je např. hydroxy-, alkoxy-, amino-, karboxyl, karboxamido-, atom halogenu, kyano-, nitro-, alkylsulfonyl, atd. Tedy termín „alkylová skupina zahrnuje další skupiny, haloalkyly, alkoholy, thioly, karboxyly, aminy, hydroxyalkyly, sulfoalkyly, atd. Na druhou stranu termín „alkylová struktura“ je omezena tak, že zahrnuje pouze samotný uhlovodíkový otevřený řetězec nasyceného alkylového substituentu, jako je methyl, ethyl, propyl, isobutyl a podobně. V dalších aspektech navrhovaného vynálezu jsou popisovány syntetické techniky.

Je popisován způsob přípravy fragmentu didemninu se strukturou:

NHBoc

OBn způsob zahrnuje navázání Boc-D-allo-Ileu-OH s lithium enolátem 3-fenylpropionové kyseliny. Karbonylová skupina fragmentu didemninu podle vzorce:

OBn

ŇHBoc může být redukována tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce

- 12CZ 304204 B6

NHBoc

Hydroxy skupina látky podle vzorce

může být chráněna tak, aby vznikl fragment didemninů podle vzorce

Následovným odstraněním chránění benzylesterové skupiny vznikne fragment didemninů podle vzorce

Dalším způsobem podle navrhovaného vynálezu pro přípravu fragmentu didemninů zahrnuje navázání prvního reaktantů podle vzorce

a druhého reaktantů podle vzorce

XR Me tak, aby vznikl fragment didemninů podle vzorce

- 13 CZ 304204 B6

kde X patří do skupiny zahrnující -O- a -NH-; kde Rje aminová chránící skupina; a kde Rje hydroxy chránící skupina. Vhodné X je -O- a Rje tent-butyldimethylsilyl; nebo X je -NHa Rje

Boc.

Dalším způsobem podle navrhovaného vynálezu pro přípravu fragmentu didemninu zahrnuje navázání prvního reaktantu podle vzorce

a druhého reaktantu podle vzorce

XR tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce

kde X patří do skupiny zahrnující -O-, -NMe, a -NH-; kde R je aminová chránící skupina; a kde Rje H. Vhodné X je -O- a R je H; nebo X je -NH- a Rje Boc; nebo X je -NMe- a Rje Boc. Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje hydrolýzu fragmentu didemninu podle vzorce:

- 14CZ 304204 B6

tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce

kde X patří do skupiny zahrnující -OH a -NH₂.

Další způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje hydrolýzu fragmentu didemninu

tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce

kde X patří do skupiny zahrnující —NH₂ a —NHMe.

Další způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu fragmentu didemninu navázáním 20 prvního reaktantu podle vzorce

- 15CZ 304204 B6

NH a druhého reaktantů podle vzorce

tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce

kde X patří do skupiny zahrnující -0-, -NMe, a -NH-; kde Y je -(COCHCH₃)_nCO-; kde n je 0 nebo 1.

tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce

- 16CZ 304204 B6

kde X patří do skupiny zahrnující -O-, a -NH-; kde Y je -(COCHCH₃)_nCO-; kde n je 0 nebo 1.

Další způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu fragmentu didemninů navázáním prvního reaktantů podle vzorce

io a druhého reaktantů podle vzorce

tak, aby vznikl fragment didemninů podle vzorce

Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje odstranění chránící benzylesterové skupiny z fragmentu didemninů podle vzorce

- 17CZ 304204 B6

tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce

Další způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu fragmentu didemninu navázáním prvního reaktantu podle vzorce

tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce

- 18CZ 304204 B6

kde X patří do skupiny zahrnující -0-, a -NH-; kde Y je -(COCHCHqjnCO-; kde n je 0 nebo 1.

Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje odstranění chránící skupiny z fragmentu didemni nu podle vzorce

kde X patří do skupiny zahrnující — O—, a—NH-; kde Y je -(COCHCHqjnCO—; kde n je 0 nebo 1.

Další způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu fragmentu didemninu zacyklo váním fragmentu podle vzorce

- 19CZ 304204 B6

kde X patří do skupiny zahrnující -0-, a -NH-; kde Y je -(COCHCH₃)„CO-; kde n je 0 nebo 1. 5 Způsob zahrnuje hydrolýzu analogu didemninu

tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce

kde X patří do skupiny zahrnující -0-, a -NH-; kde Y je -(COCHCH₃)_nCO-; kde n je 0 nebo 1.

Další způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním prvního reaktantu podle vzorce

-20CZ 304204 B6

kde X patří do skupiny zahrnující -0-, a -NH-; kde Y je -(COCHCH₃)„CO-; kde n je 0 nebo 1.

Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje odstranění chránící skupiny z fragmentu didemni io nu podle vzorce:

tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce

kde X patří do skupiny zahrnující -0-, a-NH-; kde Y je -(CC)CHCH₃)_nCO-; kde n je 0 nebo 1.

Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním fragmen tu podle vzorce

-21 CZ 304204 B6

a druhého reaktantu podle vzorce

tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce

Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje odstranění chránící skupiny z fragmentu didemninu podle vzorce:

tak, aby vznikl fragment didemninu podle vzorce

Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu didemninu podle vzorce

na fragment

-22CZ 304204 B6

tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce

Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu io didemninu podle vzorce

a fragmentu podle vzorce 15

O

tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce

kde X patří do skupiny zahrnující O-, a -NH-, a Rje i-propyl; kde X je -O- a Rje n-propyl, a Rje n-pentyl.

-23 CZ 304204 B6

a fragmentu podle vzorce

tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce

kde

X=O, NH R=

X=O

O o OTBDMS

R=

OTBDMS

X=O

R=

O

A/

NHBoc

-24CZ 304204 B6 x=o x=o o

R=

ÍIHZ

R= -CO-OtBu

Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje odstranění chránící skupiny z analogu didemninů podle vzorce:

kde

X=O, NH R=

X=O

O OH R=

OH

X=O R= nh₂

X=O _R; nh₂

X=O R= H

a fragmentu podle vzorce

io ŇHBoc

Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje odstranění chránící skupiny z analogu didemninu podle vzorce:

tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce

-26CZ 304204 B6

a isobutyrylchloridu tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce

-27CZ 304204 B6 a fragmentu podle vzorce

kde Rje Boc, isobutyryl, pyruvyl, nebo akryloyl.

a fragmentu podle vzorce

tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce

-28CZ 304204 B6

kde R je SO₂Me, nebo Z-Nva.

tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce

kde R2 je Nva.

-29CZ 304204 B6

tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce

kde Rje Boc, isobutyryl, nebo pyruvyl.

Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu didemninu podle vzorce ___ OUo

a fragmentu podle vzorce

-30CZ 304204 B6

O

tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce

a fragmentu podle vzorce

O

-31 CZ 304204 B6

a fragmentu podle vzorce

tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce

Způsob podle navrhovaného vynálezu zahrnuje přípravu analogu didemninu navázáním analogu 15 didemninu podle vzorce

a methylsulfonylchloridu, tak aby vznikl analog didemninu podle vzorce

-32CZ 304204 B6

a fragmentu podle vzorce

X=C=N-R tak, aby vznikl analog didemninu podle vzorce

kde X je O, a S; kde Rje butyl a fenyl.

Je zřejmé, že tyto techniky slouží pouze k ilustraci navrhovaného vynálezu a mohou být podle potřeby upraveny. Konkrétně, je možné použít jiné chránící skupiny pro ochranu amino a hydro20 xy skupin. Pro zavedení požadovaných skupin je možné použít i jiné chemikálie. Substituenty se mohou podle požadavků odlišovat vzhledem k obecnému vzorci pro látky podle navrhovaného vynálezu a příkladů nej výhodnějších variant. Upravené techniky rovněž spadají do rámce navrhovaného vynálezu.

-33 CZ 304204 B6

Pro rozšíření může být nezbytné ujistit se, zda popis zahrnuje všechny varianty nejvýhodnějších aplikací, a že zajišťuje nárok v plném rozsahu vzhledem k současnému stavu techniky, který je zde uveden ve formě odkazů jako GB 0016148,9 a GB 0103750,6.

Přehled obrázků na výkresech

Látky podle navrhovaného vynálezu mohou být připraveny syntetickou cestou. Způsob přípravy aplidinu a jeho derivátů, který je zde popsán, může být rovněž použít pro syntézu širokého ío spektra didemninů.

Struktury některých takových látek jsou uvedeny v obr. 1:

Obr. 1

[HiV]³-aplidin (i), A = C, B = O Tamandarin A (IV), A = CH (konformace S), B = OH

Aplidin (Π), A = C, B = 0 Didemnin Β (ΙΠ), A = CH (konf. S), B = OH

[Val] 3-aplidin (V), A = C,B = 0,R = H [MeValf-aplidin (VI), A - C, B - O, R - Me [Aip]³-aplidin (Vil), A = C, B = O

Aa3 deriváty aplidinu jsou syntetické depsipeptidy strukturou podobné aplidinu (látka II) (aa3 = Hip, označovaný také jako dehydrodidemnin B) což je přirozený didemnin izolovaný zhouby Aplidium albicans (obr. 1). Připravené molekuly se odlišují přítomností kyseliny hydroxyisovalerové (Hiv) (látka 1), nebo valinu (látka V), methylvalinu (látka VI), a-(a'-aminoisovaleryl)propionylu (Aip) (látka VII) namísto hydroxyisovalerylpropionové (Hip) (11) jednotky, která se nachází u všech přirozeně se vyskytujících variant didemninů. Podobnost těchto dvěmi struktur byla rovněž zjištěna mezi didemninem B (látka III), nejznámější člen rodiny desippeptidů a nově izolovanými cyklickými depsipeptidy z neidentifikovaných Brazilských sumek Ascidiacea kmene Didemnidae: Tamandarin A (látka IV). Látka I, V, VI a Vil jsou syntetické deriváty didemninu.

-34CZ 304204 B6

Strukturní podobnost mezi III a IV je také zodpovědná za jejich podobnou biologickou aktivitu. Srovnáním obou látek bylo zjištěno, že IV má podobnou protinádorovou aktivitu jak bylo zjištěno klonogenní technikou stejně jako inhibiční vliv na biosyntézu proteinů a bylo také prokázáno, že může vykazovat vyšší aktivitu v v vitro systému než 111 proti karcinomu pankreasu. Přesto bylo zjištěno, že látka IV nemá žádnou specifitu proti některému typu nádorů, což prokázal NCI60 panel buněk. Didemnin B, jak bylo prokázáno, je toxický v dávkách blízkých těm, které jsou nezbytné pro dosažení terapeutické účinnosti a jedná se, podobně jako v případě látky IV, spíše o širokospektrý toxin, než selektivní agens.

[Hiv]³—aplidin (1) naproti tomu vykazuje stejné pozitivní vlastnosti jako aplidin (II) v porovnání s didemninem B (III(, zejména pak vyšší specifitu proti pevným nádorům, jako je rakovina tlustého střeva, chondrosarkom a osteosarkom, což bylo zjištěno pomocí MTS techniky. [Val]³—aplidin (V) a [MeValý-aplidin (VI) jsou další nové látky, které v vitro vykazují vysokou úroveň protiná15 dorové aktivity. Látky V, VI a VII jsou pravděpodobně schopné vzhledem k aplidinu zvýšit intenzitu vodíkových vazeb v aktivním místě a tím se jejich aktivita zvyšuje. Navíc přítomnost amidové vazby nahrazující esterovou vazbu může zvýšit stabilitu jádra cyklodepsipeptidu.

Popisujeme zde první totální syntézu různých sérií derivátů aplidinu. Jako příklad je retrosynte20 tická analýza uvedena v obr. 2.

Klíčovými kroky jsou makrokrystalizace lineárních prekurzorů 6 a praktická stereoselektivní syntéza Ist-aa3-Leu-Pro jednotka (Al), a fragment Dl. Konečná vazba makrokrystalu 4 s různými postranními řetězci dá vzniknout aa3-aa8-aplidinu a derivátům. Důkladnost této syntetické techniky byla úspěšně prokázána při vývoji praktické syntézy aplidinu 11 (aa3=Hip).

Obr.2

X = O; Y= -CO- (SHPL serte)

X =NH; Y= -CO- (SVPL serte)

X =NMe; Y= -CO- (SMPL serte)

X = O; Y= -COCHCO- (SAPL serte) ch₃

X = NH; Y= -COCHCO- (SNPL serte) I ch₃

-35CZ 304204 B6

Tvorba makrocyklického jádra je klíčový krok ve všech syntetických drahách. Úspěšného zacyklení všech čtyř možných amidových vazeb bylo již dosaženo dříve pří syntéze didemninů.

Přesto, v současném stavu techniky, vazba spojující N(Me)-O(Me)-Tyr a Pro byla zvolena jako jádro makrokrystalizace, což je odvozeno od dřívějších postupů, vyvinutých během totální syntézy aplidinu 11 (G. Jou, I. Gonzales, F. Albericio, P. Lloyd-Williams, E. Giralt., J. Org. Chem. 1997, 62, 354-366 a patent ES 2102322).

io

Schéma 1

O OH

ŇHBoc

Fenacyl bromid

Et_aN

PacO'

OH

AA

Me

NHBoc

D3

ŇHBoc

D1

Makrocyklické jádro cílové molekuly je odpojeno od Ist-aa3-Leu-Pro levé jednotky tetrapeptidu Al adipeptidu Boc-Thr-(Z-NMeOMe-Tyr)-OH Dl.

Syntéza pravého fragmentu dipeptidu Dl již byla popsána. Přesto syntéza načrtnutá v schématu l umožňuje přípravu tohoto meziproduktu v kilogramovém množství. Kyselé funkční skupiny

Boc-Thr(OH)-OH byly chráněny fenacylbromidem tak, aby vznikl přímo alkohol D3, který je esterifikovaný Z-N(Me)-O(Me)-Tyr-OH pomocí DCC v přítomnosti DMAP což dá vzniknout D2. Odstraněním fenacylových skupin pomocí Zn v kyselině octové dá vzniknout čistému fragmentu D l.

Tvorba prekurzoru Al je načrtnuta v schématu 2 pro různé série. Pro série SHPL, SVPL a SMPL, první vazebný krok mezi Leu-Pro-OBzl (A5) a komerčně dostupnou kyselinou (Bl) dá přímo

-36CZ 304204 B6 alkohol A3 který je připravený pro další reakci s isostatinem (Cl). Pro syntézu sérií SAPL a SNPL se syntetická dráha odlišuje od předchozí vtom, že Bl je β-ketoester kyseliny oc-(cťhydroxyiso-valeryl)propionové respektive a-(a'-aminoisovaleryl)propionové.

Syntéza fragmentu B2 (SAPL a SNPL série) je naznačena v schématu 3, Hydrogenolýza z B2 na Bl je provedena těsně před vazebnou reakcí s A5.

Schéma 2

DCC

DMAP

SAPLA1 serie, X = O SNPLA1 serie, X = NH

SHPLA1 serie, X = O

SVPLA1 serie, X = NH

SMPLA1 serie, X = NMe

-37CZ 304204 B6

Schéma 3

O

1/TBDMS-CI/lmid/DMF

OH —-->·

OH 2/ KOH/H₂O/THF (S)-2-Hydroxy-3methylbutanová kyselina acid

OH OTBDMS

SAPLB4

1/CDI/THF

2/

OLi

Λ

ΌΒπ

Of

OTBDMS

SAPLB3

1/ LDA/THF, -78°C

Mel

AV·

TBDMSO ⁵

SAPLB2

1/ CDI/THF

OH NHBoc

Boc-Val-OH

OLi

Λ

NHBoc

SNPLB3

O 1/LDA/THF,-78°C ^0Bn 21 Mel

BocNH

SNPLB2

OBn

Příprava kompletního fragmentu Al závisí na dostupnosti isostatinu, který může být připraven ve velkých objemech z Boc-D-alloisoleucinu (C5) s chráněnou aminoskupinou. Syntetické dráha pro přípravu Cl je uvedena v schématu 4.

Aktivace karboxylové funkční skupiny Boc-D-allo-Ile pomocí carbonyldiimidazolu je následováno kondenzací s lithium enolátem 3-fenylpropionové kyseliny dá vzniknout ketoesteru C4, Stereoselektivní redukce pomocí KBH₄ v methanolu dá vzniknout C3, Chráněním sekundárním hydroxylové skupiny jako je TBDMS éther (C2) a hydrogenolýzou vzniklého benzylesteru, dá vzniknout isostatinu (Cl).

Schéma 4

Následné kroky, které dají vzniknout látkám I, II, V a VII jsou uvedené v schématu 5. Navázáním fragmentů Al a Dl s HBTU/HOBt dá vzniknout lineárnímu prekurzoru typu 7. Hydrogenolýza Cbz a benzylem chráněných skupin probíhá čistě a hladce pomocí Pd(OH)₂ tak, aby vznikla látka 6. Makrokrystalizační krok pomocí HATU/HOAt dá vzniknout meziproduktu 5 v dobrém

-38 CZ 304204 B6 výtěžku (75%). Chlorovodík v dioxanu je použit pro odštěpení Boc chráněných skupin což dá vzniknout aminu 4. Tato látka je pak navázána na Z-NMe-D-Leu-OH tak aby vznikla látka 3, která je vystavena hydrogenolýze pomocí PdC. Vzniklá látka 2 je navázána na Pyr-Pro-OH postranní řetězec pomocí DIPCDI tak aby vznikly požadované produkty.

Je zajímavé, že prekurzory typu 2, což jsou analogy ve všech aspektech, které byly popsány výše, didemninu A slouží jako výchozí stavební bloky pro syntézu některých zajímavých variant látek, neboť N-konec, volná sekundární aminoskupina, umožňuje navázání různých acylových skupin k cyklickému depsipeptidu.

Schéma 5

SAPL3, x = o.

Y= -COCHCH₃COSNPL3, X=NH,

Y = -COCHCH3COSHPL3, X = O, Y = C=O SVPL3, X = NH, Y = C=O

SAPL2, X=O,

Y= -cochch₃coSNPL2, X=NH,

Y =-COCHCHgCOSHPL2, X = O, Y = C=O SVPL2, X = NH, Y = C=O

I (SHPL1), X = O, Y = C=O

II (SAPL.1), X = O, Y = -COCHCHaCOV (SVPL1), X = NH, Y = C=O

VII (SŇPL1), X = NH, Y = -COCHCH3COl, 11, V, Vil

-39CZ 304204 B6

V dřívějších pracech (Rinehart et al J. Med. Chem., 1996, 39, 28192834) bylo zjištěno, že acyl deriváty didemninu A (dl )3 jsou aktivní jako výchozí látky pro látky 2, Pro sérii aa3 jsme zjistili aktivitu rovněž pro látky 3.

Tabulky 1 a 2 ukazují hodnotu IC₅₀ pro látky 1.

io

Tabulka 1: Cytotoxicita látek příbuzných [aa3]-aplidinu IC₅₀ (Molární)

Látka/ Serie	P388	A549	HT29	MEL28
Aplidin (II)/ SAPL1	l,80E-10	I,80E-10	4,50E-10	4,50E-10
[Hiv]³-aplidine (I)/ SHPL1	4,74E-10	4.74E-10	4,74E-10	4,74E-10
[Val]³-aplidin (V)/SVPL1	l,13E-10	l,13E-10	1.13E-10	l,13E-10
[Aip]³-aplidin (VII)/SNPL1		9,01E-10	9,01E-10

DU145

Technika dle Berjeron etal., Biochem a Biof Res. Comm., 1984, 121,3, 848-854,

P388 = myší lymfom,

A549 = lidský plicní karcinom,

HT29 = lidský karcinom tlustého střeva,

MEL-28 = lidský melanom,

DU 145 = lidský karcinom prostaty.

-40CZ 304204 B6

Tabulka 2, hodnoty IC₅₀ (molární) pro rodinu aplidinů

Solidní nádory	Linie	Didemnin B	Aplidin
[HiV]³-
		9LSAPL1	SAPL1
Aplidin
		III	II
SHPL1				T
močový měchýř	5637	2,50E-08	3,59E-08	1 9,02E-08
mléčná žláza	MX-1	L54E-06	l,67E-07	N/A
tlusté střevo	HT-29	8,07E-08	6,87E-07	1.02E-08
žaludek	Hs746t	6.60E-09	2,52E-08	7,16E-08
játra	SK-HEP- 1	9,21 E-08	9,44E-08	2,65E-07
NSCL	i A549	1,21 E-04	2,40E-05	N/A
vaječníky	SK-OV-3	l,63E-07	7,20E-08	-
pankreas	PANG-1	l,52E-10	l,7E-07	-
hltan	FADU	9,79E-08	7,29E-08	3,71 E-08
prostata	PC-3	9,00E-08	5,13-07	-
prostata	DU-145	-	-	N/A
prostata	LNCAP	-	-	L46E-08
cévy	786-0	2,90E-07	8,31 E-08	-
SCL	NCI-	-	-	N/A
	H187
retmoblastom	Y-79	-	-	-
melanom	Mel-28	-	-	4,86E-07
fibrosarkom	SIN 694	3,28E-06	l,49E-06	NIA
chondrosarkom	CHSA	-	-	3,45E-09
osteosarkom	OSA-FH	-	-	5,89E-09

-41 CZ 304204 B6

	Didemnin B	Aplidin	(Hiv)³
Leukémie/Lymfomy	Linie	9LSAPL1 III	SAPL1 II	Aplidin SHPL1 I N/A
ALL (promyelocytická leukémie)	HL-60	l,44E-07	7,89E-08
ALL (akutní lymfobalstická)	Molt3	5,45E-07	5,95E-07	l,77E-08
CML (chronická myelogenní) 07	K562	3,31 E-06	5,72E-07	5,21 E-
ALL (B-buněčná)	CCRF- SB	6,55E-07	4,72E-07	-
leukémie (vlasaté B-buňky)	Mo-B	-	-	-
leukémie (plazmatické buňky)	ARH-77	-	l,78E-07	-
lymfom (T-buněčný)	H9	2,13E-07	5,25E-07	N/A
lymfom (kožní T-buňky)	Hut 78	3,56E-08	4,47E-08	-
lymfom (nediferenciovaný)	MCI 16	8,84E-09	9,21 E-07	3,82E-07
lymfom (Burkittův B-buněčný)	RAMOS	-	-	-
lymfom (histiocytický)	U-937	l,87E-07	5,62E-07	-
lymfom (B buněčný)	MoB	-	-	-
lymfom (Burkittův ascit)	P3HR1	5,58E-08	5,34E-08	-
Metoda:		MTT	MTT	MTS

(nové)

N/A = neaktivní

Látky takto připravené jsou zobrazeny ve schématech 5 a 6. Tyto látky zahrnují N“-propionyl[aa]³-dA, N-butyryl-[aaJ¹-dA, N“-isobutyryl-[aa]³-dA, a N“-pentanoyl-[aa]³-dA. Analogy s dvěma podjednotkami acylu na N-konci aa3-dA jádra byly připraveny sledováním strukturních faktorů ovlivňujících specifitu pro různé druhy nádorů. Diacyly isobutyryl-Pro-OH, O-isobutyryl-Lac-Pro-OH, N-Benzyl-Ala-Pro-OH byly připraveny a kondenzovány s látkami typu 2 pomocí techniky D1PCDI tak aby byl získán po odstranění chránících skupin a přečištění [aa]-³[isobutyryl]⁹ aplidin, [O-isobutyryl-Lac]⁹-aplidin, [Ala]⁹-aplidin.

o

Nejvhodnější derivát aplidinu: látky ze sérií Η, V

-42CZ 304204 B6

8ISHPL1, X = O, R = iPr 8BSHPL1, X = O, R = nPr 8HSHPL1, X = O, R = nPentyl 8ISVPL1, X = NH, R = iPr

R /

DIPCDI

9ISHPL1, X = O, R = -CO-iPr 91SVPL1, X = NH, R = -CO-iPr

9LSHPL2(Í), X = O, R =

9LSHPL2(D), X = O, R =

9LSVPL2(C), X = NH, R =

O

A- o bTBDMS

OTBDMS

O

TBFA

THF iden

9LSHPL1(L), X = O, R = (Tamandarin A) θ

9LSHPL1(D), X = O, R = 'OTBDMS

9NVSHPL2, X = NH,

NHZ

8PSHPL2, X = O, R = -CO-OtBu O

9BASHPL2, X = O, R =

O 'ŇHBoc

9ZASHPL2, X = O, R = A'NHZ tóen

Pd(OH)2 iPrOH, H₂O

HCl

Dioxane iden

9LSVPL1(Í), X = NH, R

O

JJ

Ό ==tt

9NVSHPL1,X = NH,R =

NH,

8PSHPL1, X = O, R = H.HCl O

9ASHPL1, X = O, R =

ŇHgCI

-43 CZ 304204 B6

o

9I8VSHPL1, X = O

Spirocyklické látky je možné rovněž navázat tak, aby vznikly aktivní látky:

9SBSHPL1.X = O, R = Άοβυ

O

9S1SHPL1, X = O, R = ‘'j' o '

9SASHPL1, X = O, R =

O

9SPSHPL1, X = O, R =

Schéma 6

-44CZ 304204 B6

Syntéza spirocyklických fragmentů je uvedena v schématu 7. Syntéza je odvozena od dříve popsané látky 8 viz a) Seebach, D. et al. J. Am. Chem. Soc. 1983, 105, 5390-5398, b) Genin, M. J. et al. J. Org. Chem. 1993, 58, 2334-2337,

i

D-Leu-OBn.HCI

HOAt/DCC/NMM

Boc i

Boc

CO₂Bn

OsO₄/NalO₄

MeOH/H₂0

O

TEA/DCM

CO₂Bn

MeOH

H2/Pd(C)

R = —\

Schéma 7

Nejvhodnější deriváty aplidinu: látky ze série A

-45CZ 304204 Β6

OMe οϋ'^ΜθΡ r ο οη ΓÁ^NH

IqAqxNH ηΖ

Ό π:

D1PCDI

MeSO₂CI

8MAPL1

8PUAPL1, X = O, R = Ph 8BUAPL1, X = O. R - Bu 8PTAPL1,X = S,R = Ph 8BTAPL.1, X = S. R = Bu

-46CZ 304204 B6

9NVSAPL1, R =

PdlOHfe

IPA/H₂O

9NVSAPL2, R =

Spirocyklické látky je možné aktivní látky:

rovněž navázat na látky z předcházející série tak, aby vznikly

HOW O o A

DIPCDI

O ,O

9SPSAPL1,

Schéma 8

-47CL 304204 B6

Tabulka 3: Cytotoxicita derivátů aplidinu - IC₅₀ (molární)

Série	Popis	MOM	P388	A549
SNPL3	3-[Aip]-Z-didemnin A	1076		9.29E-11
8PUSAPL1	8-[Fenylmočovina]-didemnin A	1062		9,42E-11
8BUSAPL1	8-[Butylmočovina]-didemnin A	1042		9,59E-11
8ISVPL1	3-[val]-8-[isobutyryl]- aplidin	956		l,05E-10
9NVSAPLI	9-[norvalin]-aplidin	1139		4,39E-10
9ISHPL1	3-[Hiv]-9-[Isobutyryl]- aplidin	1054		4,74E-10
91SVPL1	3-[Val]-9-[Isobutyryl]- aplidin	1053		4,75E-10
8ISHPL1	3-[hiv]-8-[isobutyryl]- didemnin A	957		5,22E-10
9ASHPL1	3-[Hiv]-9-[Ala]- aplidin	1091		9,16E-10
8PSHPL2	3-[Hiv]-8-[Boc-Pro]- didemnin A	1084		9,22E-10
9NVSHPL1	3-[Hiv]-9-[Nva]- aplidin	1083		9,23E-10
8PTSAPL1	8-[Fenylthiomočovina]-didemnin A	1078		9,27E-10
8CSAPL1	8-[Kumarin]-didemnin A	1062		9,41E-10
8BTSAPL1	8-[Butylthiomočovina]-didemnin A 3-[Hiv]-9-[L-Lac]- aplidin (Tamandarine	1058		9,45E-10
9LSHPL1(L) A) 10	1056		9,47E-
9LSHPL1(D) 3-[Hiv]-9-[D-Lac]- aplidin	1056		9,47E-10
9LSVPL1(L) 3-[Val]-9-[Lac]- aplidin	1055		9,48E-10
8MSAPL1	8-[Methylsulfonyl]-didemnin A	1021		9,79E-10
SVPL3	3-[val]-Z-didemnin A	1020	9,8E-10	9,8E-10
8PSHPL1	3-[Hiv]-8-[Pro]- didemnin A	984		E01E-09
8VSHPL1	3-[Hiv]-8-[Val]- didemnin A	986		1,01 E-09
8BSHPL1	3-[Hiv]-8-[butyryl]- aplidin	957		1.04E-09
SVPL2	3-[val]-didemnin A	886	1,1E-O9	l,13E-09
SHPL2	3-[Hi v]-didemnin A	886	1,1 E-09	l,13E-09
SAPL3	Z-Didemnin A	1077	9,3E-09	2,32E-09
9NVSAPL2	9-[Z-Nva]-aplidin	1273	7.9E-09	3,93E-09
9ZASHPL2	3-[Hiv]-9-[Z-ala]- aplidin	1189		4,21 E-09
SAPL2	Didemnin A	943	5,30E-09	4,24E-09
8G9CSAPL1	8-[GIy]-9-[Kumarin]- didemnin A	1172		4,26E-09
8BISAPL1	8-[Biotin]-didemnin A	1169		4,27E-09

9SBSHPL1	3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Boc]- aplidin	1096	4,56E-09
SHPL3	3-[Hiv]-Z-didemnin A	1021	4,9E-09 4,9E-09
9NVSHPL2	3-[Hiv]-9-[Z-Nva]- aplidin	1217	8,22E-09
9SPSAPL1	7,8-[Spiro] -9-[pyr]-aplidin	1122	8,55E-09
9LSHPL2(L)	3-[Hiv]-9-[lac(OTBDMS)]- aplidin	1170	8.55E-09
9BASHPL2	3-[Hiv]-9-[Boc-Ala]- aplidin	1155	8,65E-09
9SBSAPL1	7,8- [Spiro] -9- [Boc] -aplidin	1152	8.68E-09
8VSHPL2	3-[Hiv]-8-[Boc-Val]- aplidin	1086	9,21E-09
8V91SHPL1	8-[Val]-9-[lsobutyryl]- didemnin A	1056	9,46E-09
8HSHPL1	3-[Hiv]-8-[hexanoyl ]- didemnin A	985	1.01E-08
9LSVPL2(L)	3-[Val]-9-[Lac(OTBDMS)]- aplidin	1169	1.02E-08
SNPL2	3-[Aip]-didemnin A	942	l,06E-08
9LSHPL2(D) 3-[Hiv]-9-[D-Lac(OTBDMS)]- aplidin	1170	8.55E-08
9SISAPL1	7,8-[Spiro]-9-[Isobutyryl]-aplidin	1122	8,91E-08
9SPSHPL1	3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Pyr]- aplidin	1066	9,38E-08
9SISHPL1	3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Isobutyryl]- aplidin	1066	9.38E-08
9SASHPL1	3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Akriloyl ]- aplidin	1064	9,39E-08

Série	Popis	HT29
DU145
SNPL3	3-[Aip]-Z-didemnin A	9,29E-11
8PUSAPL1	8-[Fenylmočovina]-didemnin A	9,42E-11
8BUSAPL1	8-[Butylmočovina]-didemnin A	9.59E-11
8ISVPL1	3-[val]-8-[isobutyryl]- aplidin	l,05E-10
9NVSAPL1	9-[norvalin]-aplidin	4,39E-10
91SHPL1	3-[Hiv]-9-[Isobutyryl]- aplidin	4,74E-10
9ISVPL1	3-[Val]-9-[Isobutyryl]- aplidin	4,75E-10
8ISHPL1	3-[hiv]-8-[isobutyryl]- didemnin A	5.22E-10
9ASHPL1	3-[Hiv]-9-[Ala]- aplidin	9.16E-10
8PSHPL2	3-[Hiv]-8-[Boc-Pro]- didemnin A 9,22E10
9NVSHPL1	3-[Hiv]-9-[Nva]- aplidin	9.23E10
8PTSAPL1	8-[Fenylthiomočovina]-didemnin A 9,27E10
8CSAPL1	8-[Kumarin]-didemnin A	9,41E10

MEL28

8BTSAPL1 8-[Butylthiomočovina]-didemnin A 9.45E-10

3-[Hiv]-9-[L-Lac]- aplidin

-49CZ 304204 B6

9LSHPL1(L)	(Tamandarin A)	9,47E-10
9LSHPL1(D)	3-[Hiv]-9-[D-Lac]- aplidin	9,47E-10
9LSVPL1(L)	3-[Val]-9-[Lac]- aplidin	9,48E-10
8MSAPL1	8-[Methylsulfonyl]-didemnin A	9,79E-10
SVPL3	3-[val]-Z-didemnin A	9,8E-10	9.8E-10
10
8PSHPL1	3-[Hiv]-8-[Pro]- didemnin A	1.01E-09
8VSHPL1	3-[Hiv]-8-[Val]- didemnin A	1.01E-09
8BSHPL1	3-[Hiv]-8-[butyryl]- aplidin	l,04E-09
SVPL2	3-[val]-didemnin A	1.13E-09	l,13E-09
09
SHPL2	3-[Hiv]-didemnin A	l,13E09	l,13E-09
SAPL3	Z-Didemnin A	4,64E-09	4,64E-09
9NVSAPL2	9-[Z-Nva]-aplidin	3,93E-09	3,93E-09
3,93E-09
9ZASHPL2	3-[Hiv]-9-[Z-ala]- aplidin	4,21E-09
SAPL2	Didemnin A	8,48E-09	1.13E-09
8G9CSAPL1	8-[Gly]-9-[Kumarin]- didemnin A	4,26E-09
8BISAPL1	8-[Biotin]-didemnin A	4,27E-09
9SBSHPL1	3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Boc]- aplidin	i 4,56E-09
SHPL3	3-[Hiv]-Z-didemnin A	4,9E-09	4,9E-09
09
9NVSHPL2	3-[Hiv]-9-[Z-Nva]- aplidin	8,22E-09
9SPSAPL1	7,8-[Spiro]-9-[pyr]-aplidin	8,9E-09
9LSHPL2(L)	3-[Hiv]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidin	8,55E-09
9BASHPL2	3-[Hiv]-9-[Boc-Ala]- aplidin	8.65E-09
9SBSAPL1	7,8-[Spiro]-9-[Boc]-aplidin	8,68E-09
8VSHPL2	3-[Hiv]-8-[Boc-Val]- aplidin	9,21E09
8V9ISHPL1	8-[Val]-9-[Isobutyryl]- didemnin A 9,46E-09
8HSHPL1	3-[Hiv]-8-[hexanoyl]- didemnin A	l,01E-08
9LSVPL2(L)	3-[Val]-9-[Lac(OTBDMS)]- aplidin	8.55E09
SNPL2	3-[Aip]-didemnin A		1.06E08
9LSHPL2(D)	3-[Hiv]-9-[D-Lac(OTBDMS)]- aplidin	8,55E08
9SISAPL1	7,8-[Spiro]-9-[Isobutyryl]-aplidin	8,91E08
9SPSHPL1	3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Pyr]- aplidin	9, 38E08

9,8E1,13E

4,9E-50CZ 304204 B6

9SISHPL1 3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Isobutyryl]-aplidin 9,38E08

9SASHPL1 3-[Hiv]-7,8-[Spiro]-9-[Akriloyl]- aplidin 9,39EO8

Spiro = [(5R)-l-(subtituent na 9)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxo 7 9 l,7-diazaspiro[4,4]nonan] ' (1) tato látka byla popsána v literatuře: Joc Org. Chem. 2000, 65, 782-792, Její syntéza byla publikována před jejím objevením (1): Org. Lett., 2000, vol 0, No. 0, A-D Technika: Berjeron et al., Biochem a Biof Res. Comm., 1984, 121,3, 848-854

388 = myší lymfom.

A549 = lidský karcinom plic.

HT-29 = lidský karcinom tlustého střeva.

MEL-28 = lidský melanom.

DUI45 = lidský karcinom prostaty

Seznam zkratek

Obecné:
AA	aminokyselina
Ist	isostatin
Hip	hydroxyisovalerylpropionová kyselina
Hiv	hydroxyisovalerová kyselina
Aip	aminoisovalerylpropionová kyselina
Lac	kyselina mléčná
LC	kapalinová chromatografie
HPLC	vysokotlaká kapalinová chromatografie
TLC	chromatografie v tenké vrstvě
M.P.	teplota tání
Rt	retenční čas
Kvant.	kvantitativní výnos
ES1-MS	hmotnostní spektrometrie
Chránící skupiny:
Bn	benzyl
Boc	tert-butyloxykarbonyl
TBDMS tert-butyldimethylsilyl
Z	benzyloxykarbonyl
Pac	kyselina fenolová
Rozpouštědla:
THF	tetrahydrofuran
Hex	hexan
ACN	acetonitril
DCM	dichlormethan

-51 CZ 304204 B6

EtOAc kyselina octová DMF dimethylformamid MTBE methyl-tertbutyl-ether Et₂O diethylether t-BuOH tert-butanol TFA kyselina trifluoroctová

MeOH methanol EtOH ethanol IPA isopropanol

Reagens:

CDI

HOBt

1,1 '-karbonyldiimidazol 1 -hydroxybenzotriazol

HBTU N—[(1 H-benzotriazoI-l-yl)(dimethylamino)methylene]-Nmethanaminiumhexafluorfosfát N-oxid

BOPU-C1 bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)fosfochlorid

HATU N-[(dimethylamino)-lH-l,2,3-triazolo[4,5]pyridin-l-ylmethylen]-N-methylmethanarniniumhexafluorfosfát N-oxid

HOAt l-hydroxy-7-aza-benzotriazol

DCC dicyclohexylcarbodiimid

D1PCDI N,N'-diisopropylkarbodiimid

TBAF tetrabutylammonium fluorid

AcOH kyselina octová p-TsOH p-toluensulfonová kyselina

DMAP 4-dimethylaminopyridin

NMM N-methylmorfolin

DIPEA diisopropylethylamin

TEA triethylamin

TFA kyselina trifluoroctová

Příklady provedení vynálezu

Všechny následující postupy byly prováděny v inertní argonové atmosféře. Všechna rozpouštědla měla laboratorní čistotu (pro reakce) nebo HPLC čistotu (pro reakční směs nebo jako přečišťovací rozpouštědlo). Bezvodá rozpouštědla byla použita přímo od výrobce. Tetrahydrofuran byl těsně před použitím předestilován aby byl odstraněn stabilizátor. Všechny ostatní látky byly komerčně dostupné chemikálie s maximální možnou čistotou. Analytická chromatografie v tenké vrstvě (TLC) byla prováděna na hliníkových deskách potažených silikagelem Merck (60, F254) předem potažených fluorescenčním indikátorem. Vizualizace byla provedena pomocí ultrafialového světla (254 nm), fosfomolybdenové kyseliny (5% w/v) v 95% ethanolu, nebo vanilinu. Vodíková a uhlíková magnetická rezonanční spektra ('H, ^l3C-NMR) byla naměřena pomocí Varian-300 (300 MHz) spektrometru s Fourierovou transformací a chemické posuny byly vyjádřeny jako díly milionu („parts per million“ = ppm) vzhledem k CHC1₃ jako vnitřnímu standardu (7,26 ppm pro 'H a 77,0 pro ^l3C). Násobky jsou označeny jako singlet (s), dvojice (d), dvojice dvojic (dd), dvojice trojic (dt), trojice (t), čtveřice (q) mnohonásobek (m), a broad singlet (bs), a vazebné konstanty (J) jsou vyjádřeny v Hz. Optická rotace (ve stupních) byla měřena pomocí polarimetru Jasco P1020. Hmotnostní spektra po ionizaci elektrosprejem byla stanovena na

-52CZ 304204 B6 přístroji Hewlett Packard série 1100 MSD. Základní chromatografie na koloně byla prováděna pomocí silikagelu firmy Merck 60 (240 až 400 mesh) nebo RP Cl8 (40-63 Dm) pomocí systému rozpouštědel uvedených individuálně pro každý jednotlivý experiment. Následující postupy popisují syntézu meziproduktů vedoucích k přípravě aplidinu (SAPL), [Aiv]3-aplidin (SNPL), [Hiv]³—aplidin (SHPL), [Val]³-aplidin (SVPL), a [MeValf-aplidin (SMPL).

Příklad 1: Syntéza benzyl (4R, 5S)-4-(tert-butoxykarbon_\lamino)-5-meth\l-3-oxoheptanoátu (C4)

1) CDl/THF

ΌΗ

NHBoc

OBn

ŇHBoc

OLi

Boc-D-allo-ileu-OH

C4

K roztoku Boc-D-allole-OH (15,26 g, 65,9 mmol) v suchém THF (200 ml) při 0 °C v atmosféře argonu, bylo přidáno CD1 (16,04 g, 98,96 mmol). Po 15 min, byla směs zahřáta na pokojovou teplotu, a míchána 16 hodin. Vzniklý roztok byl ochlazen na -78 °C a pomocí kanyly přidán do míchaného lithium enolátu 3-fenylpropionové kyseliny ochlazené na -78 °C (625 ml, 0,37 M), (připravena přikapáváním roztoku kyseliny benzoové (33,34 ml), v THF (165 ml) k roztoku diisopropylamidu lithného (0,36M) v THF/hex 3:1 (642 ml) při -78 °C], Teplota by měla být udržována pod -75 °C. Reakční směs byla míchána při -78 °C po dobu 60 min. Poté byla ohřátá na -10 °C (30 min), znovu ochlazena na -78 °C a uhašena nasyceným vodným roztokem chloridu amonného (200 ml), a poté extrahována pomocí DCM (3x500 ml) při pokojové teplotě. Smíchané extrakty byly promyty postupně nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ (500 ml) a roztokem soli (200 ml). Vysušení (Na₂SO₄) následované odstraněním rozpouštědla dalo vzniknout olejovité kapalině, která byla převedena na Cl8 silikagel a nanesena na vrchol kolony LCPRC 18 [Lichroprep RPC-18 (40 až 60 mikronů)]. Vymývání probíhalo pomocí gradientu ACNH₂O (60 až 100% ACN)] a dalo vzniknout produktu C4 ve formě bezbarvé olejovité látky (16,7 g, 70%). [a]²⁰D-2O,O (c 1, CHC1₃), TLC: Rf= 0,32 (Merck, RP-C18, ACN-H₂O 7:3).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃) 8 0,77 (d, 3H), 0,94 (t, 3H), 1,25 (s, 9H), 1,60 (m, 1H), 1,90 (m, 2H), 3,58 (s, 2H), 4,47 (dd, 1H), 5,00 (d, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,35 (bs, 5H).

Příklad 2: Syntéza (3S, 4R, 5S)-N-(tert-butoxykarbonyl)izostatinylbenzyl esteru (C3)

NHBoc

OBn

NHBoc

OBn

C4

C3

C4 (16,7 g, 45,9 mmol) byl rozpuštěn v methanolu (690 ml) při 0 °C. Borohydrid draselný (7,43 g, 137,8 mmol) byl přidáván k míchanému roztoku a po 30 min byla reakce zastavena vodným roztokem HCI (0,1 N) na f 4, a extrahován pomocí DCM (300 ml). Extrakt byl promyt postupně vodným roztokem NaHCO₃ (100 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (100 ml). Po vysušení (Na₂SO₄) a odstranění použitého rozpouštědla byl získán požadovaný alkohol C3 (15,7 g, 93%) jako bezbarvý olejovitý roztok. Rf = 0,45 (hex-EtOAc 2:1); [a]_D = -9,5 (c 0,76, CHC1₃); Rf= 0,45 (EtOAc-Hex 1:2).

-53 CZ 304204 B6 'HNMR (300 MHz, CDC1₃) 8 0,81 (d, 3H), 0,90 (t. 3H), 1,20 (m, 1H), 1,36 (m, 1H), 1,40 (s, 9H), 1,90 (m, 1H), 2,55 (dd, 1H), 2,70 (dd, 1H), 3,20 (d, 1 H), 3,61 (m, 1 H), 3,90 (m, 1 H), 4,40 (d, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,40 (bs, 5H).

Příklad 3: Syntéza Boc-(3S. 4R, SS)-Ist(TBDMS)-OBn (C2)

K roztoku C3 (15,7 g, 42,9 mmol) v suchém DMF (65 ml) při 0 °C, byl postupně přidán imidazol (8,77 g, 128,8 mmol), DMAP (1,57 g, 12,81 mmol), a TBDMSC1 (19,42 g, 128,8 mmol). Reakční směs byla vytemperována na pokojovou teplotu přes noc, poté byla rozdělena mezi Et₂O (200 ml) a postupně promyta vodným roztokem HCl (100 ml, 0,1 N), vodným roztokem NaHCCft (100 ml) a roztokem soli (50 ml). Po vysušení (Na₂SO₄) a odstranění rozpouštědla, byl zbytek přečištěn bleskovou LC (silikagel, hex) tak, aby vznikl C2 (19,96 g, 97%).

[a]_D = 10,6 (c 1,01, CHC1₃); Rf = 0,73 (EtOAc-Hex 1:2).

‘HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,15 (s, 6H), 0,82 (s, 9H), 0,85 (d, 3H), 0,89 (t, 3H), 1,18 (m, 1H), 1,35 (m, 1H), 1,41 (s, 9H), 1,77 (m, 1H), 2,45 (dd, 1H), 2,60 (dd, 1H), 3,62 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,40 (d, 1H), 5,05 (d, 1H), 5,15 (d, 1H), 7,40 (bs, 5H).

Příklad 4: Syntéza Boc-(3S, 4R, SS)-Ist(TBDMS)-OH (Cl)

K. roztoku C2 (10,48 g, 21,8 mmol) v THF (110 ml), po odstranění plynu a převrstvení argonem, bylo přidáno Pd/C 10% (2,096 g, 20 % hmotnosti). Směs byla míchána pod H₂ (1 atm) po dobu 16 h, a poté přefdtrována přes 0,45mm teflonový filtr a zakoncertována snížením tlaku tak, aby vzniklo 7,8 g bezbarvé olejovité látky. Bezbarvé krystaly (6 g, 70 %) byly získány po krystalizaci v ACN při -20 °C. [α]^2θο 1,8 (c 0,594, DCM) [Lit. [ct |_D = 1,74° (c 2,64, CHC1₃) Synthesis, 1991, 294]; Rf= 0,45 (Merck HPTLC, RP-C18, ACN-H₂O 8:2) 'HNMR (300 MHz, CDCl·,) δ 0,18 (s, 6H), 0,82 (s, 9H), 0,85 (d, 3H), 0,89 (t, 3H), 1,10- 1,20 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,80 (m, 1H), 2,50 (m, 2H), 3,58 (m, 1H), 4,11 (m, 1H).

-54CZ 304204 B6

Příklad 5: Syntéza (2S)-2-tert-Butyl(dimethyl)silyloxy-3-methylbutyrové kyseliny (SAPLB4)

ΌΗ

OH

γ OH OTBDMS (S)-2-hydroxy-3 methylbutyrová kyselina

SAPI-B4

K míchanému roztoku (S)-2-hydroxy-3-methylbutyrové kyseliny (22,12 g, 181,9 mmol) v DMF (91 ml) při 0 °C v atmosféře argonu byl přidán imidazol (27,24 g, 400,11 mmol) a DMAP (6,94 g, 54,56 mmol). Po 5 min byl přidán, tert-butyldimethylchlorosilan (60,31 g,

400,11 mmol). Reakční směs byla ohřátá na 23 °C a míchána přes noc. Surová reakční směs byla rozdělena mezi Et₂O (250 ml) a vodný roztok HC1 (250 ml, 0.1 N). Organická fáze byla promyta postupně vodným roztokem NaHCO₃ (250 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (250 ml), vysušena (Na₂SO₄), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku tak aby vznikl bis-silylovaný produkt jako nažloutlá olejovitá kapalina. Roztok tohoto produktu tak, aby byl v THF (100 ml) byl přidán po kapkách (10 min) k vychlazenému (0 °C) roztoku KOH (30,478, 543 mmol) v THF/H₂O (543 ml: 181 ml). Po 40 min byla reakční směs rozdělena mezi H₂O (300 ml) a Et₂O (500 ml). Vodná fáze byla rozdělena mezi ledový (0 °C) vodný roztok HC1 (200 ml, 3N) a EtOAc (5 x 250 ml). Kombinované organické extrakty byly vysušeny (Na₂SO₄) filtrovány a zakoncentrovány za sníženého tlaku, aby vznikl požadovaný SAPLB4 jako nažloutlá olejovitá kapalina (38,38 g, 91%).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃)δ 0,02 (m, 6H), 0,90 (m, 15H), 2,08 (m, IH), 4,06 (d, IH).

Příklad 6: Syntéza benzyl (4S)-4-tert-butyl(dimethyl)silyloxy-S-methyl-3-oxohexanoátu (SAPLB3)

1) CDI/THF y oh

OTBDMS

OBn

OTBDMS

SAPLB4

OLi

SAPLB3

K roztoku (S)-2-(tert-butyldimethylsilyloxy)-3-methylbutyrová kyselina (15,31 g, 65,9 mmol) v suchém THF (200 ml) při 0 °C v atmosféře argonu, byl přidán CDI (16,04 g, 98,96 mmol). Po 15 min, byla reakční směs temperována na pokojovou teplotu, a míchána po 16 h. Vzniklý roztok byl ochlazen na -78 °C, a přidán pomocí kanyly k dobře míchanému roztoku lithium enolátu kyseliny 3-fenylpropionové (625 ml, 0,37 M) ochlazenému na-78 °C, [připraven přikapáváním roztoku kyseliny 3-fenylpropionové (33,34 ml), v THF (165 ml) k roztoku diisopropylamidu lithného (0,36M) v THF/hex 3:1 (642 ml) při -78 °C]. Teplota by měla být udržována pod < -75 °C. Reakční směs byla míchána při -78 °C po dobu 60 min. Poté byla ponechána ohřát na -10 °C (30 min), znovu ochlazena na -78 °C a reakce byla zastavena vodným roztokem chloridu amonného (200 ml, nasycený roztok), poté extrahována pomocí DCM (3x500 ml) při pokojové teplotě. Smíchané extrakty byly promyty postupně vodným roztokem NaHCO₃ (500 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (200 ml). Vysušení (Na₂SO₄) následované odstraněním rozpouštědla dalo vzniknout olejovité látce, která byla převedena na Cl 8 silikagel a nanesena na vrchol kolony FC-RPC 18 [Lichroprep RPC-18 (40 až 60 mikronů)]. Vymývání probíhalo pomocí gradientu ACN—H₂O (60 až 100% ACN)] a dalo vzniknout produktu SAPLB3 ve formě bezbarvé olejovité látky (16,1 g, 70%).

-55 CZ 304204 B6 [a]_D = -25 (c 0,5, MeOH); Rf = 0,32 (Merck, RP-C18, ACN-H₂O 7:3).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,02 (m, 6H), 0,92 (m, 15H), 1,92 (m, 1H), 3,63 (s, 2H), 3,80 (s, 2H), 3,38 (d, 1H), 5,17 (d, 1H), 5,20 (d, 1H), 7,35 (bs, 5H).

Příklad 7: Syntéza benzyl(4S)-4-tert-butoxykarbonyIamino-S-methyI-3-oxohexanoátu (SNPLB3)

ΌΗ

NHBoc

OBn

Boc-Val-OH

OLi

NHBoc

SNPLB3

Postup je stejný jako v případě syntézy SAPLB3 z Boc-Val-OH (10 g, 46,0 mmol), popsaná látkaje získána po přečištění pomocí bleskové LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 10:1 až 5:1) ve formě olejovité kapaliny (6,9 g, 43%).

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,77 (d, J = 7 3H), 0,98 (d, J = 7, 3H), 1,44 (s, 9H), 2,22 (m, 1H). 3,58 (s, 2H), 4,31 (m, 1H), 5,03 (m, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,34 (bs, 5H).

ESI-MS vypočteno pro Ci₉H₂7NO₃: 349,19, stanoveno (m/z): 372,1 (M+Na)‘ .

Příklad 8: Syntéza benzyl(2RS,4S)-4-tent-butyl(dimethyl)silyloxy-2,5dimethyl-3-oxohexanoátu (SAPLB2) θ θ 1) LDA/THF,-78’C

OTBDMS

TBDMSO

OBn

SAPLB3

SAPLB2

Ester SAPLB3 (15,12 g, 41,49 mmol) v suchém THF (43 ml) byl přidán po kapkách k roztoku diisopropylaminu lithného při —78 °C [připraven přidáním butyllithia (1,6M roztok v hex;

31,12 ml, 49,79 mmol) po kapkách k diisopropylaminu (7,26 ml, 51,86 mmol) v suchém THF (83 ml) v atmosféře Ar při -78 °C po dobu 30 min], Reakční směs byla míchána 0,5 h, poté byl přidán jodomethan (52,11 ml, 829,8 mmol). Reakční směs byla temperována na 23 °C a poté, míchání pokračovalo 24 h. Byl přidán další jodomethan (2,67 ml, 42 mmol) a reakční směs byla míchána dalších 24 h nebo dokud nezmizel výchozí materiál. Reakční směs byla poté rozdělena mezi vodný roztok NH₄C1 (50 ml, nasycený roztok) a EtOAc (2x 200 ml). Organická fáze byla promyta postupně vodným roztokem NaHCO₃ (100 ml, nasycený roztok), a roztokem soli (100 ml), vysušena (Na₂SO₄), fdtrována a zakoncentrována tak, aby vznikla žlutá olejovitá kapalina (12 g). Čistý produkt (SAPLB2) byl získán po přečištění na LC-silikagelovém gradientu hex-Et₂O 100:0 až 100:2 jako diastereomerická směs epimerů C2 (10 g, 63%).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,01 (s, 3H), 0,02 (s, 3H), 0,91 (m, 15H), 1,30 (d, 3H), 2,01 (m, H), 4,01 (m, 1 H), 5,10 (d, 1H), 5,15 (d, 1 H), 7,34 (bs, 5H).

-56CZ 304204 B6

Příklad 9: Syntéza benzyl (2RS,4S)=4-tert-butoxykarbonylamino-2,5-dimethyI-3-oxohexanoátu (SNPLB2)

Postup je stejný jako v případě syntézy SAPLB2, výchozí látkou je SNPLB3 (10 g, 46,0 mmol), požadovaná látka je získána po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 10:1 až 5:1) jako diastereomerická směs (1:1) epimerů C2 (4,4 g, 62%). Rf = 0,4 a 0,37 (silikagel, Hex/EtOAc 3:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,72 (m, 3H), 0,86 (m, 3H), 1,37 (m, 3H), 1,44 (s, 9H), 2,22 (m, 1H), 3,79 (m, 1H), 4,43 (m, 1H), 5,02 (m, 1H), 5,16 (m, 2H), 7,34 (m, 5H).

ESI-MS vypočteno pro C20H29NO5: 363,20, stanoveno (m/z): 364,1 (M+H)⁺.

Příklad 10: Syntéza Leu-Pro-OBn ve formě hydrochloridu (A5)

A5

Do nádoby obsahující Boc-Leu-Pro-OBn (113,8 g, 272 miriol) byl přidán za stálého míchání roztok chlorovodíku v dioxanu (209 ml, 5,3 N) a míchání pokračovalo po následujících 5 h nebo do dokončení reakce TLC (vymizení výchozího materiálu. Rf = 0,47 (hex—EtOAc 2:1, silikagel. Roztok byl zakoncentrován za sníženého tlaku a vzniklá olejovitá kapalina byla promyta CHCI₃(3x50 ml), CHC1₃-MTBE (30 až 50 ml), MTBE (50 ml) a hex (50 ml). Vzniklý roztok byl vysušen ve vakuu (16 h) tak aby byly odstraněny zbytky HC1, tak aby vznikla požadovaná látka jako bílý prášek. A5 (96,4 g, 100%) byla použita přímo, bez dalšího přečišťování v následujících krocích. [ot]_D ²² -85,21⁰ (c = 1, CHC1₃).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) 5 0,92 (d, J = 7,1, 3H), 0,96 (d, J = 7,1, 3H), 1,55 (m, 1H), 1,82 2,14 (m, 5H), 2,26 (m, 1H), 3,42 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 4,32 (bs, 1H), 4,64 (m, 1H), 5,01 (d, J = 11,5, 1H), 5,16 (d, J= 11,5, 1H), 7,34 (m, 5H), 8,40 (bs,3H).

ESI-MS vypočteno pro Ci₈H₂₆N₂O₃: 318,19, stanoveno (m/z): 319,2 (M+H)⁺. 35

-57CZ 304204 B6

Příklad 11: Syntéza TBDMS-Hip-Leu-Pro-OBn (SAPLA4)

H2/Pó-C(10%)

THF/rt

SAPLB2

Do nádoby obsahující odplyněný roztok SAPLB2 (20g, 52,88 mmol) v THF anh. (158 ml), vybavené přívodními a odvodními trubicemi pro plyn, byl přidán 10% Pd/c (6,0 g, 30 % hmotnosti) v atmosféře Ar. Poté, je systémem proháněn proud vodíku po dobu 8 h, nebo dokud konverze TLC není kompletní (vymizení výchozího materiálu). Vzniklá směs je probublána Ar, aby byl odstraněn vodík, a filtrována v atmosféře Ar v trychtýři ze šinutého skla skrz sítko z celitu, do vychlazené nádoby (-5 °C) obsahující HOBt (7,17 g, 52,88 mmol) a HBTU (21,0 g, 55,53 mmol). Poté byl přidán další THF (158 ml) aby byl promyt celit. K reakční směsi (-5 °C) byl přidán NMM (5,8 ml, 52,88 mmol) a po 5 min vychlazená (-5 °C) směs obsahující: A5 (31,96 g, 89,81 mmol), NMM (16 ml, 145 mmol) a DMF (120 ml), který byl čerstvě připraven. Reakční směs byla temperována pokojovou teplotu a míchána po dobu 14 h. Surová reakční směs byla filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. K reziduálnímu roztoku DMF, byl přidán EtOAc (300 m) a byl postupně promyt vodným roztokem HC1 (200 ml, 0,1 N), vodným roztokem NaHCO₃ (200 ml, nasycený roztok) a promyt roztokem soli (300 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄) filtrována a zakoncentrována. Vzniklý produkt byl nanesen na silikagel (EtOAc byl rozpouštědlem), a chromatograficky rozdělen promýváním gradientem EtOAc:hex 1:5 až 1:1 tak, aby vznikl SAPLA4 (26,8 g, 78%) jako hustá bezbarvá olejovitá kapalina. Tento produkt je 1:1 směs diastereomerů. Rf = 0,5 (silikagel, Hex/EtOAc 1:1, tmavě modrá/vanilin).

IR (film, DCM) 3295, 3060 a 3040, 2957, 2934, 2880, 2858, 1736, 1634, 1528, 1454, 1387, 1252, 1171, 1070 cm¹.

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,01 (s, 3H), 0,03 (s, 3H), 0,85 - 0,97 (m, 12H), 0,92 (s, 9H), 0,93 (s, 9H), 1,33 (d, J = 7,0, 3H), 1,37 (d, J = 7,0, 3H), 2,40-2,65 (m, 3H), 1,92 - 2,28 (m, 4H), 3,64 - 3,76 m, 1H), 4,69 - 4,82 (m, 1H), 5,05 (d, J = 11,8, 1H), 5,20 (d, J = 11,8, 2H), 6,73 (d, J = 8,9, 1H), 6,98 (d, J = 9,0, 1H), 7,34 (bs, 5H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ -5,24, -4,81, 15,70, 17,43, 17,57, 18,84, 21,48, 21,61, 18,05, 23,28, 24,43, 24,55, 24,76, 25,68, 28,87, 31,36, 31,77, 41,27, 41,67, 48,68, 48,55, 48,89, 58,71,

66,84, 83,84, 83,29, 211,62.

128,09, 128,47, 135,40, 169,24, 170,67, 170,89, 171,16, 171,20, 209,11, m/z (FAB) 611,5 [(M + Na)⁺, 15], 589,5 [(M+H) , 100]; m/z (FABHRMS) 589,369 045, C₃₂H₅₂N₂O₆Si vyžaduje (M+H)⁺, 589,367 291

-58CZ 304204 B6

Příklad 12: Syntéza Boc-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA4)

SNPLB2

K odplyněnému roztoku SNPLB2 (2,3 g, 6,32 mmol) v suchém THF (30 ml) byl přidán 10%

Pd/C (0,74 g, 16 hmotn. %) a poté byla směs hydrogenována za atmosférického tlaku po dobu 5 h min nebo dokud konverze TLC není kompletní (vymizení výchozího materiálu). Vzniklá směs byla filtrována skrz celitový filtr a bylo přidáno další THF (20 ml), aby byl celit dobře promyt.K io filtrovanému roztoku (při -5 °C) byl přidán BOP-C1 (1,77 g, 6,96 mmol) a NMM (765 μΐ,

6,91 mmol) a po 30 min ochlazený (-5 °C) roztok obsahující: A5 (3,15 g, 8,85 mmol), NMM (1,88 ml, 8,84 mmol) a DMF (14 ml) připravený před 10 min. Reakční směs byla temperována na pokojovou teplotu a míchána po dobu 17 h. Surová reakční směs byla temperována na pokojovou teplotu a míchána po dobu 17 h. Surová reakční směs byla filtrována a pevná fáze byla promyta pomocí EtOAc (100 ml). Smíchané organické fáze byly postupně promyty vodným roztokem

K.HSO4 (50 ml, 10%), vodným roztokem NaHCO₃ (50 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (50 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄) filtrována a zakoncentrována ve vakuu, vzniklý materiál byl poté chromatograficky rozdělen na silikagelu a promýván gradientem EtOAc:hex 1:4 až 1:1 tak, aby byl získán SNPLA4 (750 mg, 20 %) jako bílá pevná látka. Tento produkt je a směs diastereomerů. Rf = 0,26 a 0,17 (silikagel, Hex/EtOAc 1:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,74 - 1,04 (m, 12H), 1,31-1,70 (m, 6H), 1,43 (s, 9H), 2,01 (m,

3H), 2,22 (m, 2H), 3,60 (m, 2H), 3,77 (m, 1H), 4,40 (m, 1 H), 4,58 (m, 1 H), 4,69 (m, 1 H), 5,14 (m, 2H), 6,75 (d, J = 8,7, 1H), 7,04 (d, J = 7,8, 1H), 7,34 (bs, 5H).

^,3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 16,91, 20,22, 21,94, 23,53, 24,80, 25,06, 28,48, 48,29, 14,41,

41,29, 41,41, 46,98, 49,45, 49,64, 51,26, 59,06, 63,70, 64,27, 67,08, 79,86, 80,10, 128,32,

128,48, 128,74, 135,74, 156,28, 169,15, 169,32, 171,18, 171,91.

ESI-MS vypočteno pro C₃iH₄7N₃O₇: 573,34, stanoveno (m/z): 574,4 [(M+H)] .

Příklad 13: Syntéza Hiv-Leu-Pro-OBn (SHPLA4)

A5

DCC/NMM

Hydroxyisovalerová kyselina

-59CZ 304204 B6

Do nádoby obsahující A5 (2,06 g, 4,78 mmol) v DCM (5 ml) při 0 °C, byl přidán za stálého míchání NMM (506 mg, 5,01 mmol). Po 15 min byla přidána po částech(2S)-2-hydroxy-3methylbutanová kyselina (hydroxyisovalerová kyselina) (487 mg, 4,78 mmol) a DCC (986 mg, 4,78 mmol). Reakční směs byla temperována na 23 °C a míchána po dobu 14 h. Suspenze byla naředěna CHC1₃ (25 ml) a rozdělena mezi vodný roztok HC1 (10 ml, 1 N), vodný roztok NaHCO₃(10 ml, nasycený roztok) a roztok soli (10 ml) vysušena (Na₂SO₄) a zakoncentrovány za sníženého tlaku. Získaný roztok byl přečištěn bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 1:1 až 1:3) tak, aby vznikl SHPLA4 (1,13 g, 80%) jako bílá pevná látka. Rf = 0,46 (hex-EtOAc 1:2).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,81 (d, J = 7,0, 3H), 0,92 (m, 6H), 0,97 (d, J = 7,0, 3H), 1,42 (m, 1H), 1,63 (m, 2H), 2,00 (m, 3H), 2,19 (m, 2H), 3,60 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,88 (d, J = 4,8, 1H),

4,46 (m, 1H), 4,80 (m, 1H), 5,06 (d, J = 12,3, 1H), 5,14 (d, J = 12,3, 1H), 7,32 (m, 5H), 7,41 (d, J = 8,4 Hz, 1H).

Příklad 14: Syntéza Boc-Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA4)

NHBoc

A5

BocHN

OH

OBn

DCC/HOBVNMM

Boc-Val-OH

SVPLA4

Do nádoby obsahující Boe-Valin-OH (652 mg, 3 mmol) v DCM (6 ml) při 0 °C byl přidán NMM (0,35 ml, 3,15 mmol). Směs byla míchána 15 min a postupně byl přidán, A5 (1,065 g, 3 mmol), HOBt (405 mg, 3,0 mmol) a DCC (650 mg, 3,15 mmol). Reakční směs byla temperována na 23 °C a míchána 14 h. Suspenze byla naředěna DCM (25 m) a promyta postupně vodným roztokem KHSO₄ (2x10 ml, 10%), vodným roztokem NaHCO₃ (2x10 ml, nasycený roztok), a roztokem soli (10 ml), vysušena nad Na₂SO₄ filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku. Získaná směs byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 2:1 až 1:1) tak, aby vznikl SVPLA4 (1,48 g, 93%) jako bílá pevná látka. Rf = 0,57 (hex-EtOAc 1:2).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,83 - 0,95 (m, 12H), 1,2-1,4 (m, 1H), 1,42 (s, 9H), i-40-1,51 (m, 1 Η), 1,60 - 1,75 (m, 1 Η), 1,82 - 2,20 (m, 5H), 3,50 - 3,60 (m, 1H), 3,74 - 3,78 (m, 1 H),

3,91 3,96 (m, 1 H), 4,52 - 4,57 (s, 1 H), 4,75 - 4,77 (m, 1 H), 5,04 (bs, 1 H), 5,05 (d, J = 12,3, 1 H), 5,17 (d,J= 12,3, 1 H), 6,60 (d, J = 8,4, 1 H), 7,26 - 7,35 (m, 5H).

ESI-MS vypočteno pro 0₂₈Η₄₃Ν₃0₆: 517,32, stanoveno (m/z): 518,2 [(M+H)]⁺.

-60CZ 304204 B6

Příklad 15: Syntéza Boc-Me-Val-Leu-Pro-OBn (SMPLA4) ^NBoc

Boc-(Me)Val-OH

A5

DCC/HOBt/NMM

DCM

Postup je stejný jako pro syntézu SVPLA4, vychází z A5 (1,07 mg, 3,00 mmol) a Boc(Me)ValOH (694 mg, 3,00 mmol), požadovaná látka je získána jako bílá pevná látka (1,39 g, 87%) po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 2:1 až 1:1), Rf = 0,51 (Hex-EtOAc 1:2).

ίο 'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,83-0,91 (m, 12H), 1,45 (s,9H), 1,932,03 (m, 4H), 2,18 - 2,22 (m, 2H), 2,76 (s, 3H), 3,40 - 3,50 (m, 2H), 3,55 - 3,62 (m, 1H), 3,75 - 3,85 (m, 1 H), 4,00 - 4,10 (m, 1 H), 4,50 - 4,60 (m, 1 H), 4,704,82 (m, 1H), 5,07 (d, J = 11,2, 1H), 5,24 (d, J = 11,2, 1H), 6,20 (m, 0,5H), 6,50 (m, 0,5 H), 7,26 - 7,35 (m, 5H).

^,3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 18,43, 19,77, 21,53, 23,23, 24,47, 24,77, 25,89, 25,30, 28,85,

41,25,46,67, 48,51,58,75,64,05,66,79, 128,06, 128,18, 128,44, 135,49, 170,12, 170,80, 171,66

ESI-MS vypočteno pro C29H₄₅N₃O₆: 531,33, stanoveno (m/z): 532,3 (M+H)⁺.

Příklad 16: Syntéza Hip-Leu-Pro-OBn (SAPLA3)

Do nádoby obsahující SAPLA4 (15,86 g, 26,97 mmol) byl přidán čirý bezbarvý roztok IM tetrabutylammonium fluoridu v THF (80,9 ml, 80,9 mmol) a reakční směs byla prudce míchána při pokojové teplotě po dobu 15 min (nebo úplné konverze TLC). Reakce byla zastavena přidáním H₂O (4 ml) a silikagelu (50 g). Surový materiál byl zakoncentrován a přečištěn bleskovou LC (silikagel, gradient hex:EtOAc 2:1 až 1:1) tak, aby byl získán SAPLA3 (12,2 g, 95%) jako bílá pevná látka (směs diastereomerů). Rf= 0,36 a 0,29 (silikagel, hex:CHCl₃:IPA; 1:5:1).

IR (film, DCM) v 3450-3293, 3060 a 3040, 2961, 2946, 2883, 2852, 1746, 1632, 1533, 1454, 1357, 1387, 1265, 1173, 1095, 1045, 1018 cm’¹.

Ή NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 0,71 (d, J = 6,8, 3H), 0,81 (d, .1 = 6,6, 3H), 0,88 (d, J = 6,5, 3H), 0,91 (d, J = 6,5, 3H), 0,94 (d, J = 6,5, 3H), 0,99 (d, J= 7,1, 3H), 1,07 (d, J = 6,5, 3H), 1,36 (d, 6,5, 3H), 1,43 - 1,52 (m, 2H), 1,60 - 1,66 (m, IH), 1,93 - 2,10 (m, 3H), 2,12 - 2,23 (m, 2H), 3,53 - 3,58 (m, IH), 3,65 (q, J = 7,1, IH), 3,67 - 3,73 (m, IH), 3,89 (q, J = 7,1, IH), 3,96 (d,

-61 CZ 304204 B6

J = 4,2, 1H), 4,22 (d, J = 4,1, 1H), 4,54 - 4,56 (m, 1H), 4,58 - 4,62 (m, 1H), 4,69 - 4,73 (m, 1H), 5,1 (d, J= 12,1, IH), 5,18 (d, J = 12,1, IH), 6,57 (d, J - 8,5, IH), 6,63 (d, J = 8,5, IH), 7,28-,38 (m, 5H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 14,26, 15,85, 16,48, 20,07, 20,53, 22,02, 22,25, 25,37, 25,46, 29,45? 29,53, 31,59, 32,09, 41,13, 42,29, 49,93, 50,91, 51,02, 59,52, 67,60, 81,02, 128,78, 1,29,2, 169,48, 171,58, 172,17, 209,76.

m/z (FAB) 497,4 [(M + Na), 12], 475,5 [(M+H)*, 100], m/z (FABHRMS) 497,263 162, C₂₆H₃₈N₂O6 vyžaduje (M+Na)⁺ 497,262 757, analýzou vypočteno pro C₂6H₃₈N₂O₆: C, 65,82; H, 8,02; N, 5,91, stanoveno: C, 65,97; H, 8,18; N, 5,76.

Příklad 17: Syntéza Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA3)

HCI/dioxan

K roztoku SNPLA4 (750 mg, 1,30 mmol) v dioxanu (15 ml, anhydrid), byl přidán roztok chlorovodíku v dioxanu (39 ml, 5,3 N) a reakční směs byla míchána 5 h nebo dokud nebyla konverze TLC kompletní (vymizení výchozího materiálu). Roztok byl zakoncentrován za sníženého tlaku a vzniklá olejovitá kapalina byla promyta CHC1₃ (15 ml), MTBE (15 ml) a hex (15 ml). Získaná směs byla vysušena ve vakuu, aby byly odstraněny zbytky HCI, tak aby vznikla požadovaná látka. SNPLA3 (660 mg, quart.) byl použit v dalším kroku bez dalšího přečišťování.

ESI-MS vypočteno pro C₂6H₃9N₃O₅: 473,29, stanoveno 474,2 (M+H)⁺

Příklad 18: Syntéza Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA3)

HCI/Dioxan

SVPLA3

Do nádoby obsahující SAPLA4 (215 mg, 0,41 mmol) byl přidán roztok chlorovodíku v dioxanu (1,5 ml, 5,3 N) a reakční směs byla míchána po dobu 5 h nebo dokud konverze TLC nebyla kompletní, The roztok byl zakoncentrován za sníženého tlaku a vzniklá olejovitá kapalina byla promyta CHC1₃ (5 ml), MTBE (5 ml) a hex (15 ml). Získaná směs byla vysušena ve vakuu, aby byl odstraněn zbytek HCI, tak aby vznikla pěnovitá pevná látka SVPLA3 (185 mg, Kvant.), která je použita v následujících krocích bez dalšího přečišťování.

-62 CZ 304204 B6 'HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,86 - 0,90 (m, 6H), 1,04 (d, J = 6,3, 3H), 1,12 (d, J = 6,3, 3H), 1,45 - 1,55 (m, 1H), 1,60- 1,80 (m, 2H), 1,82-2,11 (m, 2H), 2,11 -2,25 (m, 1H), 2,25-2,40 (m, 1H), 3,50 - 3,70 (m, 1H), 3,80 - 3,95 (m, 2H), 4,52 - 4,5 7 (s, 1H), 4,70 - 4,85 (m, 1H), 5,05 (d,J= 12, 1H), 5,20 (d,J= 12,3, 1H), 7,27 - 7,37 (m, 5H), 7,91 (m, 1H), 8,62 (bs, 2H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 18,79, 21,83, 23,11, 2č,50, 24,67, 24,90, 25,34, 28,92, 30,23, 33,25, 40,40, 47,04, 49,46, 49,94, 59,26, 60,02, 66,88, 128,16, 128,27, 128,51, 135,48, 167,54, 170,80, 171,94.

Příklad 19: Syntéza (Me)Val-Leu-Pro-OBn (SMPLA3)

HCI/Dioxan

SMPLA3

Postup je stejný jako pro syntézu SVPLA3, vychází z SMPLA4 (940 mg, 1,94 mmol) požadovaná látka (828 mg, kvant.) byla získána jako bílá pevná látka. Tato látka byla použita v následujících krocích bez dalšího přečišťování.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,93 (d, J = 6,3, 6H), 1,07 (d, J = 6,3, 3H), 1,21 (d, J = 6,3, 3H), 1,47 (m, 1H), 1,73 (m, 2H), 2,00 (m, 3H), 2,23 (m, 1H), 2,52 (m, 1H), 2,83 (bs, 3H), 3,56-3,65 (m, 2H), 3,77 (m, 1H), 4,59 (m, 1H), 4,66 (m, 1H), 5,07 (d, J = 12,3, 1H), 5,19 (d, J = 12,3, 1H), 7,27 - 7,38 (m,5H), 7,90 (m, 1H), 9,11 (m, 0,5H), 9,61 (m, 0,5H).

^l3C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 13,98, 18,37, 19,57, 21,33, 22,52, 23,163, 24,74, 28,77, 29,78, 31,54, 32,54, 39,87, 46,75, 50,09, 58,91, 66,85, 122,12, 128,06, 128,24, 128,47, 135,43, 166,22, 170,73, 171,54.

ESI-MS vypočteno pro C24H38CIN3O4: 431,2, stanoveno (m/z): 432,2 (M+H)^f.

Příklad 20: Syntéza Boc-Ist(TBDMS)-Hip-Leu-Pro-OBn (SAPLA2)

DCC/DMAP/DCM

-63 CZ 304204 B6

K roztoku SAPLA3 (12,2 g, 25,44 mmol) v anhydridu DCM (75 ml) při -5 °C v atmosféře Ar, byl přidán postupně DMAP (0,932 g, 7,6 mmol), Cl (11,89 g, 30,53 mmol) a DCC (6,613 g, 32,05 mmol), a teplota byla udržována na < -5 °C (lázeň sůl-led). Reakční směs byla míchána po dobu 14 h při -5 °C a poté, filtrována a zakoncentrována. Surový materiál byl naředěn ACN, ochlazen (-10 °C), opět filtrován a zakoncentrován. Vzniklý materiál byl rozpuštěn v EtOAc (400 m) a postupně promyt vodným roztokem KHSO₄ (2x200 ml, 10%), roztokem soli (200 ml), vodným roztokem. NallCXY (200 ml, nasycený roztok) a propláchnut roztokem soli (200 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku tak aby vznikl požadovaný produkt, jako bezbarvá olejovitá kapalina která byla chromatograficky rozdělena na silikagelu promyta gradientem Elex-EtOAc 3:1 až 2:1, tak aby byl získán SAPLA2 (19,35 g, 90%) jako bílá pěnovitá látka (směs diastereomerů).

IR (film, DCM) v 3365-3200, 3069, 3038, 2959, 2930, 2882, 2857, 1746, 1688, 1640, 1533, 1456, 1389, 1258, 1171, 1086 cm '.

'HNMR (500 MHz, CDClj) δ 0,01 (s, 3H), 0,03 (s, 3H), 0,05 (s, 3H), 0,07 (s, 3H), 0,77 - 1,03 (m, 18H), 0,84 (s, 9H), 0,85 (s, 9H), 1,33 (d, J = 7,4, 3H), 1,32 - 1,36 (m, 2H), 1,49 (d, J = 7,5, 3), 1,38- 1,62 (m, 3H), 1,42 (s, 9H), 1,44 (s, 9H), 1,51-1,77 (m, 1H), 1,88 - 2,37 (m, 3H), 2,17 - 2,33 (m, 2H), 2,47 - 2,74 (m, 2H), 3,34 - 3,72 (m, 1H), 3,72 - 3,82 (m, 1H), 3,99 - 4,40 (m, 1H), 4,03, 4,16 (m, 1H), 4,49 (d, J = 10,3, 1H), 4,54 - 4,59 (m, 1H), 4,63 - 4,70 (m, 2H), 4,75 (d, J = 4,5, 1H), 4,77-4,81 (m, 1H), 4,95 - 5,19 (m, 2H), 5,22 (d, J = 5,2, 1H), 5,32 (d, J = 10,5, 1H), 6,38 (d, J = 10,9, 1H), 6,71 (d, J = 7,4, 1 H), 6,76 (d, J = 8,4, 1H), 8,60 (d, J = 9,5, 1H).

ⁿCNMR (75 MHz, CDCb) δ -5,05, -4,49, 11,83, 12,03, 13,01, 13,51, 13,83, 14,08,

17,10, 17,85, 19,14, 19,65, 21,57, 22,09, 22,96, 23,28, 24,36, 24,60, 24,85, 25,73, 26,97,

28,35, 28,46, 28,93, 29,09, 29,65, 34,12, 34,16, 40,45, 40,85, 41,18, 42,20, 46,74, 46,16,

48,34, 48,90, 49,42, 57,62, 58,81, 58,96, 60,46, 66,62, 66,88, 68,18, 69,69, 78,98, 79,24,

82,95, 128,08-128,49, 135,48, 135,61, 155,85, 158,27, 157,44, 168,40, 169,07, 170,65, 171,42, 171,79, 203,09, 205,97.

16,92,

27,33,

47,99,

79,84,

70,86, m/z (FAB) 846,6 [(M+H)⁺, 15], 746,6 (100); m/z (FABHRMS) 868,516 630, C₄₅H₂₅N3O₁₀Si vyžaduje (M+Na)⁺ 868,511 930.

Příklad 21: Syntéza Boc-Ist(TBDMS)-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA2)

DCC/HOBt/NMM

Do nádoby obsahující SNPLA3 (chlorhydrát) (660 mg, 1,12 mmol) v DCM (15 ml, anh) při 0 °C, byl přidán NMM (0,19 ml). Po 15 min byl přidán postupně, Cl (632 mg, 1,62 mmol), HOBt (266 mg, 1,73 mmol), a DCC (331 mg, 1,60 mmol). Nádoba byla temperována na pokojovou teplotu a míchání probíhalo přes noc. Syrová reakční směs byla rozdělena mezi DCM (50 ml)

-64CZ 304204 B6 a vodným roztokem K.HSO4 (2x20 ml, 10%). Organická fáze byla promyta postupně vodným roztokem NaHCO₃ (2x20 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (20 ml), vysušena (Na₂SO₄), filtrována a zakoncentrovány za sníženého tlaku. Vzniklá bílá pevná látka byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 4:1 až 1:1) aby vznikla požadovaná látka jako bílá pevná látka (700 mg, 73%, směs diastereomerů).

'H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 0,05 (s, 3H), 0,08 (s, 3H), 0,09 (s, 3H), 0,68 - 1,05 (18H, m), 0,87 (9H, s), 1,05 - 1,85 (12H, m), 1,42 (9H, s), 1,852,10 (3H, m), 2,11 - 2,31 (2H, m), 2,32 - 2,46 (2H, m), 2,47 - 2,60 (m, 2H), 3,34 - 3,90 (2H, m), 3,93 - 4,30 (2H, m), 4,50 - 4,89 (6H, m), 4,90 - 5,12 (2H, m), 5,07 (d, J = 12,2, 2H), 5,18 (d, J = 12,2, 2H), 5,60 (1H, d, J = 9,7), 5,67 (1H, d, J = 10,2), 5,89 (1H, d, J = 11,2), 6,56 (1H, d, J = 7,3), 6,70 (1H, d, J = S. 3), 6,76 (1 H, d, J = 6,8), 6,94 (d, J = 6,8, 1 H), 7,01-7,19 (m, 1 H), 7,32 (bs, 5H), 8,17 (1H, d, J = 7,8), 8,28 (d, J = 7,8, 1H).

ESI-MS vypočteno pro C^HvgAOgSi: 844,54, stanoveno (m/z): 845,5 (M+H)⁺.

Příklad 22: Syntéza Boc-Ist(TBDMS)-Hi-Leu-Pro-OBn (SHPLA2)

SHPLA2

Postup je stejný jako pro syntézu SAPLA2, vychází z SHPLA4 (850 mg, 2,0 mmol) a Cl (935 mg, 2,4 mmol) požadovaná látka byla získána (1,53 g, 97%) po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 3:1 až 2:1). Rf= 0,63 (hex-EtOAc 2:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃) směs BocNH rotamerů: δ 0,04 (s, 3H), 0,06 (s, 3H), 0,88 (s, 9H), 0,78 - 1,04 (m, 18H), 1,10 - 2,80 (m, 11H), 1,44 (s, 9H), 1,46 (s, 9H), 3,57 (m, 2H), 3,74 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 4,23 (d, J = 4,8, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,90 (d, J = 10, 1H), 5,05 (m, 1H), 5,20 (d, J = 10, 1H), 5,23 (d, J = 10. 1H), 6,64 (d, J = 6,4, 1H), 6,88 (d,

J = 8,6, 1H), 7,32 (m, 5H), 8,54 (d, J = 8,3, 1H).

^l3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ -5,14, -4.58, 11,84, 12,97, 17,78, 17,92, 18,98, 21,05, 23,11, 23,49, 25,61, 26,92, 28,36, 28,70, 30,12, 33,68, 38,72, 42,86, 46,51, 48,18, 58,67, 60,24, 66,52, 71,14, 79,40, 82,66, 127,96, 128,01, 128,33, 135,36, 157,30, 169,92, 171,10, 171,69, 171,97. ESI-MS: vypočteno pro C₄₂H₇₁N₃O₉: 789,50, stanoveno 790,5 (M+H)⁺.

-65CZ 304204 B6

Příklad 23: Syntéza Boc-lst(TBDMS)-Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA2)

C1

DCC/HOBVNMM

Postup je stejný jako pro syntézu SNPLA2, vychází z SVPLA3 (hydrochlorid) (l,2 g, 2,64 mmol), C l (l ,23 g, 3,17 mmol), DCC (654 mg, 3,17 mmol), HOBt (464 mg, 3,43 mmol), NMM (0,35 ml) a DCM (6 ml). Požadovaná látka byla získána jako bílá pevná látka (1,87 g, 89%) po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 3:1 až 2:1).

'HNMR (500 MHz, C₁₃C1₃) δ 0,07 (bs, 6 H), 0,81 -0,96 (m, 27H), 1,11 - 1,38 (m,3H), 1,391,47 (bs, 7H), 1,51 (bs, 3H), 1,58-1,70 (m, 3H), 1,7C 1,84 (m, 1H), 1,86-2,60 (m, 4H), 2,282,58 (m, 2H), 3,58 - 3,662 (m, 1H), 3,62 - 3,73 (m, 1H), 3,73 - 3,90 (m, 1H), 4,05 - 4,12 (m, 1H), 4,13-4,19 (m, M), 4,19 - 4,23 (m, 1 H), 4,49 - 4,54 (m, M), 4,77 - 5,06 (m, 2H), 5,18 (d,J= 12,3, 1H), 5,55 (bs, 1H), 6,44-6,61 (m, 2 H), 7,30 - 7,35 (m, 5 H), 7,947,98 (m, 1H).

EST-MS vypočteno pro C42H72N4O8SÍ: 788,51, stanoveno (m/z): 789,5 (M+H)⁺.

Příklad 24: Syntéza Boc-Ist(TBDMS)-(Me)Val-Leu-Pro-OBn (SMPLA2)

DCC/NMM

DCM

Do nádoby obsahující SMPLA3 (hydrochlorid) (176 mg, 0,38 mmol), v DCM (2 ml, anhydrid) při 0 °C, byl přidán NMM (41 Ol, 0,38 mmol). Po 15 min byl přidán postupně Cl (176 mg, 0,46 mmol) a DCC (93 mg, 0,46 mmol). Nádoba byla temperována na pokojovou teplotu nepřetržitě míchána přes noc. Reakční směs byla rozdělena mezi DCM (10 ml) a vodným roztokem KHSO4 (2x5 ml, 10%). Organická fáze byla promyta postupně vodným roztokem NaHCO₃(2x5 ml, nasycený roztok), roztokem soli (5 ml), vysušena (Na₂SO₄), filtrována a zakoncentrová30 ny za sníženého tlaku. Vzniklá bílá pevná látka byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, gradient Hex-EtOAc 3:1 až 2:1) tak, aby vznikl SMPLA2 (127 mg, 42%) jako bílá pevná látka. Rf = 0,51 (Hex-EtOAc 1:1).

-66CZ 304204 B6 'H NMR (300 MHz, CDCl₃)5-0,08 (s, 3 H), 0,05 (s, 3H), 0,75-0,86 (m, 27H), 1,00-1,43 (m, 11H), 1,52- 1,65 (m, 1 H), l,68-l,80(m, 1 H), 1,832,01 (m, 3H), 2,08 - 2,24 (m, 2H), 2,40 (m, 2 H), 2,87 (s, 3H), 3,50 - 3,57 (m, 3H), 3,71 - 3,76 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 4,47 - 4,63 (m, 4H), 5,01 (d, J= 12,9, 1H), S.ll (d, J = 12,9, 1H), 6,41 (d, J = 7,8, 0,5 H), 6,62 (d, J = 7,8, 1 H), 7,01 (d, J = 7,8, 0,5 H), 7,23 - 7,28 (m, 5 H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 11,56, 13,57, 13,98, 17,83, 18,87, 19,46, 21,77, 22,94, 23,11, 24,50, 24,71, 24,80, 25,64, 25,76, 25,97, 27,29, 28,18, 28,75, 30,40, 34,18, 39,28, 40,85, 46,58, 48,61, 57,03, 58,65, 62,26, 66,63, 69,21, 78,72, 127,92, 128,05, 128,11, 128,33, 135,42, 155,91, 169,76, 170,48, 171,56, 172,01.

ESI-MS vypočteno pro C₄₃H₇₄N₄O₈S1: 802,53, stanoveno (m/z): 825,5 (M+Na)⁺.

Příklad 25: Syntéza Ist-Hip-Leu-OBn (SAPLA1)

HCl/dioxan

K roztoku obsahujícím SAPLA2 (19,32 g, 22,8 mmol) v bezvodém dioxanu (78 ml), byl přidán roztok kyseliny chlorovodíkové v bezvodém dioxanu (4,2 N, 220 ml, 924 mmol). Vzniklý roztok byl míchá při 21 °C po dobu 4,30 h nebo dokud nevymizel zcela výchozí materiál (TLC). Poté byl roztok zakoncentrován za sníženého tlaku. Získaná směs byla rozpuštěna v DCM (25 ml) a zakoncentrována tak, aby byl odstraněn zbytek HCI. Vzniklý produkt byl vysušen ve vakuu, dokud nebylo zcela odstraněno zbývající HCI (3 h) tak, aby vzniklo 17,3 g SAPLAI (15,1 g, kvant.) jako bílá pěnovitá látka (směs diastereomerů).

Příklad 26: Syntéza Ist-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA1)

HCl/dioxan

Postup je stejný jako pro syntézu SAPLAI, vychází z SNPLA2 (700 mg, 0,82 mmol), požadovaná látka byla získána jako bílá pevná látka (545 mg, kvant.) po precipitaci Et₂O (směs diastereomerů).

-67 CZ 304204 B6 'H NMR (300 MHz, CDCU) δ 0,86 - 1,04 (m, 18H), 1,02- 1,22 (m,3H), 1,23-1 > (m, 5H), 1,60 - 1,80 (m, 2H), 1,82 - 2,01 (m, 3H), 2,24 (m, 2H), 2,40 -2,5 (m, 2H), 3,24 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,60 (m, 1H), 3,70 - 4,05 (m, 2H), 4,46 (m, 2H), 4,47 - 4,75 (m, 2H), 5,10 (bs, 2H), 7,34 (bs, 5H), 7,98 (bs, 1H), 8,10 (bs, 1H).

ESI-MS vypočteno pro C34H54N4O7: 630,40, stanoveno (m/z): 631,4 (M+H)⁺.

Příklad 27: Syntéza Ist-Hiv-Leu-Pro-OBn (SHPLA1)

HCl/Dioxari

SHPLA1

Postup je stejný jako pro syntézu SAPLA1, vychází z SHPLA2 (1,53 g, 1,94 mmol), požadovaná látka (1,12 g, kvant.) byla získána jako bílá pevná látka po precipitací Et₂O, 'HNMR (300 MHz, CDCI3) δ 0,86 - 1,04 (m, 18H), 1,10-1,22 (m, 3H), 1,42 (m, 2H), 1,70 (m, 2H), 1,97 (m, 3H), 2,24 (m, 2H), 2,83 (m, 1H), 2,97 (m, 1 H), 3,34 (m, 1 H), 3,61 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,90 (m, 1 H), 4,56 (m, 2H), 4,75 (m, 1H), 5,04 (d, J = 11, 1H), 5,18 (d, J = 11, 1H), 7,34 (bs, 5H), 8,21 (bs, 3H).

ESI-MS vypočteno pro C31H49N3O7: 575,36, stanoveno (m/z): 576,3 (M+H)⁺.

Příklad 28: Syntéza Ist-Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA1)

HCI/Dioxan

Postup je stejný jako pro syntézu SAPLAI, vychází z SVPLA2 (1,87 mg, 2,36 mmol), požadovaná látka (1,40 g, kvant.) byla získána jako bílá pevná látka po precipitací Et₂O.

'HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,82 - 1,01 (m, 15H), 1,01 - 1,10 (m, 3H), 1,20 - 1,79 (m, 5H), 1,81 - 2,05 (m, 4H), 2,05 - 2,15 (m, 2H), 2,50 - 2,68 (m, 2H), 2,82 - 3,1 (m, 1H), 3,20 - 3,35 (m, 1H), 3,50-3,70 (m, 1H), 3,80 - 3,90 (m, 1H), 4,18-4,30 (m, 1H), 4,35 -4,45 (m, 1H), 4,45 -4,55 (m, 1H), 4,604,70 (m, 1H), 5,02 (d, J = 12,3, 1H), 5,15 (d,J= 12,3, 1H), 7,28 - 7,38 (m, 5H), 7,5 (bs, 1H), 7,9 (bs, 31 -1), 8,15 (bs, 1H).

-68CZ 304204 B6 ^l3C NMR (75 MHz, CDC1,) δ 14,67, 18,29, 19,32, 21,48, 23,14, 24,48, 24,76, 25,81, 30,29, 33,41, 40,31, 46,96, 49,35, 59,14, 59,94, 60,67, 66,94, 128,11, 128,32, 128,54, 135,32, 171,58, 171,74, 171,80, 172,57.

ESI-MS vypočteno pro C31H50N4O6: 574,35, stanoveno (m/z): 575,3 (M+H)*.

Příklad 29: Syntéza N-tert-butyloxykarbonylthreoninfenacylesteru (D3)

K míchané směsi Boc-Thr-OH (21,91 g, 0,1 mol) v EtOAc (200 ml) při 0 °C, byl přidán TEA (14 ml, 0,1 mol) a bromoacetofenon (19,0 g, 0,1 mol). Reakční směs byla temperována na 20 °C, míchána 2 dny a poté naředěna EtOAc (500 ml). Po postupném promytí vodným roztokem HCl (200 ml, 0,1 N), H₂O (100 ml), vodným roztokem NaHCO₃ (200 ml, 1 N) a roztokem soli (200 ml), vysušení (Na₂SO₄), byla reakční směs filtrována a zakoncentrována ve vakuu, získaná směs byla rozetřena na prášek s Et₂O a filtrována. Vzniklá pevná látka byla vysušena ve tmě tak, aby byl získán D3 (28,6 g, 85%). Rf = 0,55 (hex-EtOAc 1:1, silikagel); M.p. = 114,2 °C; [ct]_D ²²-29,4° (c 2, EtOAc).

'HNMR (300 MHz, CDCI3): δ = 1,31 (d, J = 6,6, 3H), 1,46 (s, 9H), 3,77 (br d, OH), 4,44 (dd, J =9,6, I H), 4,6 (q, 1 H), 5,34 (d, J = 16,5, 1 H), 5,37 (br d, OH), 5,68 (d, J = 16,8, 1H), 7,51 (t, 2H), 7,65 (t, IH), 7,92 (dd, 2H).

Příklad 30: SyntézaN-benzyloxykarbonyl-N,O-dimethyl-L-l.yrozinu (El)

K míchanému roztoku Z-Tyr-OH (63,24 g, 200 mmol) v THF (900 ml) při 0 °C byl postupně přidán jemně rozetřený KOH (112,72 g, 2 mol), a poté tetrabutylhydrogensulfátamonný (6,36 g, 10% hmotnosti). Poté byl přidán dimethylsulfát (127,2 ml, 1,33 mol) po kapkách v intervalu 30 min, zatímco teplota reakční směsi byla udržována pod 4 °C. Reakční směs byla míchána po dobu dalších 30 min a poté byla přidána H₂O (950 ml). Po 5 h míchání při 0 °C, byla reakční směs naředěna etherem (1500 ml), vodná fáze byla oddělena a organická fáze byla extrahována vodným roztokem NaHCO₃ (2 x 500 ml, nasycený roztok). Smíchané vodné fáze byly okyseleny na f 1 pomocí vodného roztoku 1M KHSO₄, a extrahovány pomocí EtOAc (5x500 ml). Organic-69CZ 304204 B6 ké fáze byly smíchány, vysušeny (Na₂SO₄), filtrovány a zakoncentrovány. Získaná směs byla precipitována ethylétherem filtrována tak aby vznikl El jako bílá pevná látka (53,85 g, 78%). [oc]_D ²² -57,16° (c 2,23 CHC1₃) (lit [a]D -48° (c = 2,23 CDC1₃) δ). JAGS, 112,21, 1990).

Příklad 31: Syntéza O-(benzyloxykarbonyl-N,O-dimethyl-L-tyrosyl)-N-tertbutyloxykarbonylL-threoninfenacylesteru (D2)

K roztoku D3 (33,72 g, 100 mmol) v DCM při 0 °C byl přidán DMAP (3,66 g, 30 mmol) a El (34,33 g, 100 mmol). Po 10 min míchání při 0 °C, byl přidán DCC (22,7 g, 110 mmol). Reakční směs byla vytemperována na pokojovou teplotu a míchána přes noc. Poté byla reakční směs filtrována a filtrát zakoncentrován dosucha. Získaná směs byla naředěna ACN (100 ml), opět filtrována a filtrát byl zakoncentrován. Získaná směs byla rozpuštěna v EtOAc (200 ml) a rozdělena postupně mezi vodný roztok KHSO₄ (100 ml, 10%), vodný roztok NaHCO₃ (100 ml, nasycený roztok) a roztok soli (100 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄), filtrována a zakoncentrována. Získaná směs byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, grád. EtOAc-Hex 1:4 až 1:2) tak, aby byl získán D2 (65,5 g, 98%). [a]_D ²² -39,56° (c 1,06 CHC1₃); Rf = 0,55 (EtOAc.Hex 1:1).

Příklad 32: Syntéza O-(benzyloxykarbonyl-N,O-dimethyl-L-tyrosyl)-N-tertbutyloxykarbonylL-threonin (Dl)

Zn/AcOH:H₂O

D1

K homogennímu roztoku D2 (24,49 g, 38,4 mmol) ve vodném AcOH (211 ml, 90%) při 0 °C, byl přidán práškový Zn (18,658, 288,3 mmol). Vzniklá směs byla míchána při 0 °C po dobu 3 h, dokud byl patrný výchozí materiál (následoval TLC). Reakční směs byla filtrována přes celit a promyta EtOAc (200 ml). Filtrát byl zakoncentrován za sníženého tlaku a získaná směs byla naředěna Et₂O (200 ml) a filtrována. Filtrát byl postupně rozdělen mezi vodný roztok KHSO₄(100 ml, 10%) a roztok soli (100 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄) a zakoncentrována

-70CZ 304204 B6 tak, aby vznikla olejovitá kapalina, která byla přečištěna bleskovou LC (Lichroprep RPC18, ACN:H₂O 1:1 (800 ml, poté 7:3 (600 ml)] tak, aby byl získán Dl (15,538, 74%) jako bílá pevná látka. [a]_D ²⁴ -27,6° (c 2,187, DCM); lit [cc]_D -20,5° (c 2, DCM). JOC, 62, 2, 1997, Rf=0,58 [ACN/H₂O (7:3)].

IR (film, DCM) v 3400, 3050, 2900, 1715, 1613, 1514, 1456, 1402, 1368, 1248, 1165, 1061. 1036 cm '.

'HNMR (200 MHz, CDC1₃) δ 1,29 (d, J = 6,5, 3H), 1,45 (s, 9H), 2,74 (s, 3H), 2,75 (s, 3H), 2,76 -3,31 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 4,42-4,52 (m, 1 H), 4,66-4,83 (m, IH), 5,01 - 5,16 (m, 2H), 5,30 - 5,53 (m, 2H), 6,72 - 6,81 (m, 2H), 6,95 - 7,09 (m, 2H), 7,35 (bs, 5H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 16,82, 28,23, 31,71, 31,97, 33,82, 33,68, 55,14, 56,87, 56,75,

m/z (FAB) 567,1 [(M+Naf, 461, 545,1 [(M+H)⁺, 71,445,1 (100); m/z (FABHRMS) 567,233 280, C₂₈H₃₅N₂O9 vyžaduje [(M+Na)⁺, 567,231 851.

Příklad 30: Syntéza Boc-Thr(Z-N(Mel-O(Me)-Tyr-Ist-Hip-Leu-Pro-OBn (SAPL7).

SAPLA1

HBTU/HOBí/DIPEA +

O

OMe

DCM/DMF

OMe

D1

SAPL7

Do nádoby obsahující HBTU (9,079 g, 23,9 mmol), HOBt (3,490 g, 22,8 mmol), SAPLAl (15,258 g, 22,8 mmol) a Dl (12,417 g, 22,8 mmol), byl v atmosféře Ar při -5 °C přidán kanylou roztok anhydridu DCM (296 ml) a anhydridu DMF (148 ml). Po 5 min míchání, byl po kapkách stříkačkou přidán DIPEA (15,9 ml, 91,2 mmol), a teplota byla udržována na < -5 °C. Vzniklá reakční směs byla míchána po dobu 21 h při -5 °C. Poté byl přidán MTBE (300 ml) a KHSO₄(200 ml, 10%), a vzniklá směs byla filtrována a zakoncentrována na 300 ml. Byl přidán další MTBE (200 ml), fáze byly odděleny, a organická fáze byla postupně promyta vodným roztokem. KHSO₄ (200 ml, 10%), roztokem soli (200 ml), vodným roztokem. NaHSO₄ (200 ml, nasycený roztok) a propláchnuta roztokem soli (200 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄) a zakoncentrována za sníženého tlaku, aby vznikla požadovaná žlutá olejovitá kapalina (30 g). Olejovitá kapalina byla naředěna v MTBE a za stálého míchání promyta hex. Vzniklá pevná sraženina a byl přidán další hex. Pevná fáze byla filtrována tak, aby byl získán SAPL7 (18,33 g, 69%

-71 CZ 304204 B6 výtěžek) jako bílá pevná látka. Tento produkt je směs dvou diastereomerů. Rf = 0,80 a 0,59 (hex: EtOAc 1:2).

IR (film, DCM) v 3350, 2961, 2927, 2893, 1744, 1688, 1638, 1514, 1454, 1368, 1304, 1248, 1171, 1067, 1036 cm’¹.

¹H NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 0,74 - 0,92 (m, 1811), 1,05 - 1,15 (m, 211), 1,18 - 1,20 (m, 2H),

1.23 (d, J = 6,8, 311), 1,25 (d, J = 6,8, 311), 1,29 (d, J = 6,9, 311), 1,42 (s, 9H), 1,45 (s, 9H), 1,50 - 1,66 (m, 311), 1,89 - 2,02 (m, 4H), 2,17-2,25 (m, 2H), 2,37 - 2,42 (m, 1H), 2,81 (s, 311), 2,88 (s, 311), 2,91 (s, 3H), 2,95 (s, 311), 2,84 - 2,93 (m, 2H), 3,17-3,25 (m, 1H), 3,53-3,59 (m, 1H), 3,75 (s, 311), 3,88 - 3,98 (m, 4H), 4,49 (d, J = 3,1, 111), 4,51 (d, J = 3,1, 1H), 4,534,57 (m, 1H), 4,68-4,72 (m, 111), 4,96 - 4,99 (m, 1H), 5,025,33 (m, 4H), 5,02 (d, J = 3,2, 1H),

5.23 (d, J = 3,1, 1H), 5,26 - 5,33 (m, 111), 5,47 (ld, J = 9,5, 111), 6,74 (d, J = 7,8, 211), 6,77 (d, J = 7,7, 2H), 7,08 (d, J= 7,7, 2H), 7,17 (d, J = 7,5, 1H), 7,21 (d, J = 9, 5, 1H), 7,23 - 7,36 (m, 1014), 7,75 (d, J = 7,9, 1H), 7,79 (d, J = 8,2, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 11,95, 13,27, 15,16, 16,47, 17,33, 18,79, 21,28, 23,65, 24,65, 24,72, 27,09, 28,08, 28,93, 31,20, 31,32, 33,62, 33,98., 38,38, 41,01, 47,12, 49,38, 54,96, 55,17, 57,89, 58,83, 60,01, 60,16, 67,18, 71,05, 71,32, 80,34, 81,24, 113,89, 127,51, 128,59, 129,69, 129,77, 135,62, 136,77, 156,93, 158,27, 169,87, 170,62, 171,15, 171,85, 172,39,204,88, m/z (FAB) 1181,2 [(M+Na)+, 20], 1159,2 [(M+H)⁺, 80], 1059,2 (100). Vypočteno pro C₆₂H₈₇N₅O|₆: C, 64,30; H, 7,52; N, 6,05, stanoveno: C, 64,14; H, 7,66; N, 5,95

Příklad 34: Syntéza Boc-Thr(Z-N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPL7).

Postup je stejný jako pro syntézu syntéza SAPL7, vychází z SNPLA1 (150 mg, 0,22 mmol) a Dl (122 mg, 0,22 mmol), požadovaná látka byla získána jako bílá pevná látka (130 mg, 51%) po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 2:1 až 1:3) (směs diastereomerů).

'HNMR (300 MHz, CDCI₃) δ 0,74 - 1,03 (m, 18H), 1,16- 1,37 (m, 10H), 1,45 (s, 9H), 1,68 (m, 3H), 1,99 (m, 4H), 2,22 (m, 2H), 2,48 (m, 1H), 2,82 (s, 3H), 2,84 - 3,10 (m, 2H), 3,19 (m, 1H), 3,51 - 3,69 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,72 - 4,02 (m, 3H), 4,18 (m, 1 H), 4,50 - 4,73 (m, 4H), 5,00 -72CZ 304204 B6 io

5,27 (m, 5H), 5,49 (m, 2H), 6,54 (d, J = 9,2, IH), 6,78 (d, J = 6,8, 2H), 7,02 (d, J = 6,8, 2H), 7,18 (m, 1 H), 7,23 - 7,36 (m, 1 OH), 7,52 (d, J = 6,8, 1 H).

ESI-MS vypočteno pro C₆2H₈₈N₆Oi₅: 1156,63, stanoveno 1158,3 (M+H).

Příklad 35: Syntéza Boc-Thr(Z-N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Hiv-Leu-Pro-OBn (SHPL7).

N OBn

NH

O OH

O „sNH₃ ⁺CT

SHPLA1

DCM7DMP

SAPLD1

HBTU/HOBW3IPEA

SHPL7

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL7, vychází z SHPLAl (l,12 g, l,94 mmol) a SAPLDl (544,6 mg, 1,94 mmol), požadovaná látka (1,045 g, 61%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 1:1 až 1:2). Rf = 0,46 (hex-EtOAc 1:2).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,74 - 1,02 (m, 18H), 1,20 (m, 5H), 1,40 (s, 3H), 1,46 (s, 9H), 1,62 (m, 2H), 1,82 - 2,20 (m, 3H), 2,20 (m, 2H), 2,50 (m, 1H), 2,78 (s, 3H), 2,90 (m, IH), 3,20 (m, IH), 3,58 (m, IH), 3,67 (s, 3H), 3,79 (m, IH), 3,88 (m, 1H), 4,06 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 4,82 (m, 2H), 4,94 (m, IH), 4,98 (m, IH), 5,08 (m, IH), 5,28 (m, 3H), 5,56 (d, J = 6,2, IH), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 6,98 (d, J = 6,5, IH), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,34 (tn, 10H), 7,52 (d, J = 6,2, IH).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 13,77, 13,95, 16,75, 17,46, 18,31, 20,78, 20,96, 23,09, 24,35, 24,53, 26,74, 27,93, 28,63, 30,17, 33,76, 39,06, 40,01, 46,69, 48,17, 54,89, 57,04, 57,68, 58,65, 60,20, 60,60, 66,74, 67,08, 68,31, 70,30, 78,49, 79,90, 113,62, 127,36, 127,70, 128,14, 128,18, 128,31, 129,64, 135,19, 136,31, 155,86, 156,61, 158,09, 169,77, 170,70, 171,06, 171,17, 171,78.

ESI-MS vypočteno pro C₅9H₈₃N₅Oi5: 1101,59, stanoveno 1102,7 (M+H)⁺.

-73 CZ 304204 B6

Příklad 36: Syntéza Boc-Thr(Z-N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Val-Leu-Pro-Bn (SVPL7).

SVPLA1

HBTU/HOBt/DIPEA +

SVPL7

D1

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL7, vychází z SVPLAl (1,44 g, 2,37 mmol) a Dl (1,29 g, 2,37 mmol), požadovaná látka (1,96 g, 75%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 2:1 až 1:3). Rf = 0,56 (EtOAc).

ίο 'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,83 - 0,95 (m, 15H), 1,0 - 1,22 (m, 4H), 1,23 - 1,44 (m, 9H), 1,60 - 1,65 (m, 1H), 1,87 - 2,01 (m, 4H), 2,09 - 2,20 (m, 3H), 2,77 (bs, 8H), 2,84 - 3,01 (m, 1H), 3,17 - 3,24 (m, 1H), 3,51 - 3,60 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,80 - 3,90 (m, 2H) 4,03 - 4,15 (m, 1H), 4,25 - 4,40 (m, 2H), 4,40 - 4,52 (m, 1H), 4,70 - 4,80 (m, 2H), 5,00 - 5,26 (m, 4H), 5,34 5,36 (m, 1H), 5,58 (m, 1H), 6,75 (d, 2H, J = 7,8), 6,96 - 7,09 (m, 1H), 7,04 (d, 2H, J = 8,1), 7,04

-7,12(m, 1H), 7,16-7,20(m, 1H), 7,18-7,30(m, 10H).

^l3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 11,43, 13,63, 17,17, 18,35, 19,21, 21,40, 23,23, 24,49, 24,67, 26,87, 28,10, 28,79, 30,48, 32,11, 33,841, 38,47, 40,37, 41,22, 46,80, 48,61, 55,04, 56,88, 57,95, 58,75, 59,25, 60,82, 66,87, 67,33, 69,40, 70,50, 76,44, 80,45, 113,58, 127,51, 127,74, 127,88, 128,10, 128,25, 128,33, 128,46, 128,72, 129,64, 129,77, 135,35, 136,37, 156,77, 158,29, 169,83, 170,57, 171,3, 171,4, 172,81.

ESI-MS vypočteno pro C5qH₈4N₆O|4: 1100,60, stanoveno (m/z): 1101,7 (M+H)⁺.

-74CZ 304204 B6

Příklad 37: Syntéza Boc-Thr(N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Hip-Leu-Pro-OH (SAPL6).

o

SAPL7

SAPL6

K roztoku SAPL7 (18,33 g, 15,8 mmol) v THF (bez stabilizátoru, 500 ml) odplyněný a pročištěnému v atmosféře argonu, byl přidán Pd(OH)2-C (20 % Pd, 7,33 g, 40 % hmotnosti). Reakční směs byla míchána v atmosféře H₂ (1 atm) po dobu 20 h, poté fdtrována přes 0,45μ teflonový filtr a zakoncentrována za sníženého tlaku tak aby vznikl požadovaný produkt jako bílá pevná látka. Byl přidán toluen (30 ml), a zakoncentrován za sníženého tlaku ve vakuu tak, aby vznikl SAPL6 (14,78 g, kvant.) jako bílá pevná látka.

'H NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 0,79 - 1,08 (m, 18H), 1,09 - 1,18 (m, 3H), 1,26 (bs, 3H), 1,29 (d, J = 7,1, 3H), 1,47 (s, 9H), 1,50 - 1,66 (m, 3H), 1,841,94 (m, 1H), 1,90 - 2,28 (m, 4H), 2,35 2,50 (m, 4H), 2,30 - 2,35 (m, 1H), 2,44 - 3,18 (m, 4H), 2,60 (m, 3H), 3,53 - 3,61 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,884,07 (m, 4H), 4,12 - 4,72 (m, 4H) 5,18 - 5,24 (m, 1H), 5,24 (bs, 1H), 6,84 (d, J = 7,9, 2H), 7,08 (d, J = 8,0, 2H), 7,13 (d, J= 8,2, 1 H), 7,18 (d, J= 8,2, 1H), 7,62 - 7,68 (bs, 1H).

m/z (FAB) 972,7 [(M+K)⁺, 33], 934,9 (M)⁺, 100],

Příklad 38: Syntéza Boc-Thr(N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Aip-Leu-Pro-OH (SNPL6).

SNPL7

SNPL6

K roztoku SNPL7 (130 mg, 0,11 mmol) ve směsi IPA:H2O (2:1, 4 ml :2ml) odplyněnému a pročištěnému v atmosféře argonu, byl přidán Pd(OH)2-C (20% Pd, 45 mg, 35 % hmotnosti). Reakční směs byla míchána v atmosféře H₂ (1 atm) po dobu 20 h, poté filtrována přes 0,45μ teflonový filtr a zakoncentrována za sníženého tlaku tak aby vznikla pevná bílá látka. Byl přidán IPA (10 ml), a roztok byl zakoncentrován za sníženého tlaku a ve vysokém vakuu tak, aby vznikl SNPL6 (100 mg, kvant.) jako bílá pevná látka.

ESI-MS vypočteno pro C₄₇H₇₆N₆Oi3: 932,55, stanoveno 934,0 (M+H)⁺.

-75 CZ 304204 B6

Příklad 39: Syntéza Boc-Thr(N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Hiv-Leu-Pro-OH (SHPL6).

SHPL7 SHPL6

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL6, vychází z SHPL7 (1,045 g, 0,95 mmol).

Požadovaná látka (825 g, 99%) byla získána jako bílá pevná látka, ío ESI-MS vypočteno pro C44H71N5O13: 877,50, stanoveno 878,5 (M+H)\

Příklad 40: Syntéza Boc-Thr(N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist“Val-Leu-Pro-OH (SVPL6).

SVPL7 SVPL6

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL6, vychází z SVPL7 (250 mg, 0,23 mmol). Požadovaná látka (195 mg, 97%) byla získána jako bílá pevná látka.

ESI-MS vypočteno pro C₄₄H72N₆Oi2: 876,56, stanoveno (m/z): 877,5 (M+H).

Příklad 41: Syntéza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-Ist-Hip-Leu-Pro (SAPL6).

SAPL6 ' SAPLS

-76CZ 304204 B6

Do vychlazené 51 reakční nádoby (-5 °C) vybavené mechanickým míchadlem obsahující ACN (3,2 L) v atmosféře Ar, byl přidán HATU (14,436 g, 37,9 mmol) a HOAt (5,254 g, 38,6 mmol) za stálého míchání. Poté byl přidán SAPL6 (14,77 g, 15,8 mmol) rozpuštěný v ACN (500 ml). NMM (3,65 ml, 33,18 mmol) byl přidán po kapkách stříkačkou a teplota byla udržována pod -5 °C. Vzniklá reakční směs byla temperována na pokojovou teplotu a byla míchána po dobu 20 h. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku. Surový produkt byl naředěn EtOAc (500 ml) a roztok byl přefiltrován tak, aby byla odstraněna sraženina. Roztok byl promyt postupně vodným roztokem KHSO₄ (2x500 ml), roztokem soli (500 ml), vodným roztokem. NaHCO₃(500 ml, nasycený roztok) a propláchnut roztokem soli (500 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄) a zakoncentrována za sníženého tlaku, aby vznikl požadovaný produkt jako žlutá pevná látka (17,52 g), která byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, grád hex:EtOAc 3:1 až 1:1) tak, aby vznikl SAPL5 (9,83 g, 68%) jako bílá pevná látka. Rf = 0,60 (Hex:EtOAc 1:3). [ot]_D -209,4 (c 0,3, CHC1₃).

IR (film, DCM) v 3343, 2961, 2927, 2893, 1734, 1640, 1514, 1454, 1368, 1302, 1248, 1167, 1018 cm*'.

Ή NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 0,78 (d, J = 7,1, 3H), 0,85 (d, J = 7,0, 3H), 0,87 (d, J = 7,0, 3H), 0,89 -0,93 (m, 9H), 1,10 - 1,20 (m, 1H), 1,20 (d, J = 6,4, 3H), 1,30 (d, J = 6,9, 3H), 1,36 (m, 2H), 1,40 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,48 - 1,72 (m, 2H), 1,72 - 1,78 (m, 1H), 1,83 - 1,88 (m, 1H), 2,01 -2,17(m, 3H), 2,27-2,29 (m, 1H), 2,47-2,53 (m, 1H), 2,53 (s, 3H), 2,93 (bs, 1H), 3,14 3,19 (m, 2H), 3,34-3,37 (dd, JI = 14,8, J2 = 4,1, 1H), 3,54 - 3,56 (dd, JI = 10,5, J2 = 4,1, 1H), 3,58 - 3,63 (m, 1H), 3,68 - 3,72 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,94 - 3,98 (m, 1H), 3,98 (q, J = 7,5 1H), 4,07-4,11 (3d, J = 3,8, 1H), 4,57-4,61 (m, 2H), 4,77-4,81 (m, 1H), 4,97 -4,98 (q, J = 3,5, 1H), 5,02 (d, J = 10,5, 1H), 5,18 (d, J = 4,2, 1H), 6,81 (d, J = 8,5, 2H), 7,05 (d, J = 8,5, 2H), 7,19 (d, J= 10,2, 1H), 7,64 (d, J = 10, 1, 1H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 14,68, 14,97, 15,27, 16,61, 18,457 20,64, 23,50, 24,71, 24,78,

m/z (FAB) 938,9 [(M+Na)^T, 55), 916,9 [(M+H)⁺, 1001; m/z (FABHRMS) 916,532 120, C₄₇H₇₃N₅O_I3, vyžaduje (M+H)} = 916,528 300.

Příklad 42: Syntéza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-lst-Aip-Leu-Pro (SNPLS).

MM

OMe

O

SNPL5

HATU /HOA1/ NMM

ACN

SNPL5

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL5, vychází z SNPL6 (100 mg, 0,11 mmol), požadovaná látka (40 mg, 57%) byla získána jako bílá pevná látka po bleskové LC (silikagel, EtOAc:hex 4:1 čistý EtOAc). Rf = 0,4 (EtOAc).

-77CZ 304204 B6 'H NMR (300 MHz, CDCb) δ 0,76 (d, J = 6,8, 3H), 0,83 -0,96 (m, 15H), 1,10 - 1,20 (m, 1H), 1,25 (d, J = 6,4, 3H), 1,27 (d, J = 6,3 3H), 1,32 (d, J - 6,8, 3H), 1,41 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,50 1,70 (m, 2H), 1,99-2,31 (m, 5H), 2,61 (s, 3H), 2,91 -3,04 (m, 1H), 3,11 - 3,37 (m, 2H), 3,483,64 (m, 3H), 3,69 - 3,81 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 4,18 (m, 2H), 4,46 - 4,67 (m, 3H), 4,81 (t, J = 10,7, 1H), 5,01 (m, 1H), 6,85 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,33 (d, J = 8,7, 1H), 7,65 (d, J = 9,2, 1H), 7,86 (d, J = 10,7,1H).

ESI-MS vypočteno pro C₄₇H₇₄N₆Oi₂ 914,54, stanoveno m/z 915,5 (M+H)^r.

Příklad 43: Syntéza cyklo-N(Me)-O-(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-Ist-Hiv-Leu-Pro (SHPLS).

SHPL6

SHPL5

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL5, vychází z SHPL6 (2,45 g, 2,78 mmol), požadovaná látka (2,1 g, 88%) byla získána jako bílá pevná látka po krystalizaci DCM/n-heptane (1:3). Rf=0,33 (hex-EtOAc 1:3).

'HNMR (300 MHz, CDCb) δ 0,82 - 1,04 (m, 18H), 1,19 (m, 5H), 1,41 (s, 9H), 1,42 (m, 2H), 1,63 (m, 1H), 1,77 (m, 1H), 1,90 (m, 1H), 2,00-2,22 (m, 3H), 2,44 (m, 1H), 2,58 (s, 3H), 2, (m,lH), 3,14 (m, 1H), 3,26 (m, 1 H), 3,36 (m, 1 H), 3,58 (m, 1 H), 3,68 (m, 2H), 3,78 (s, 3H> 3,96 (m, 1 H). 4,12 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,94 (m, 1H), 5,03 (m. 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,54 (d, J = 7,3, 1H), 7,69 (d, J = 6,4 1 H) ¹³C NMR (75 MHz, CDCb) δ 14,57, 15,15, 18,11, 18,45, 20,67, 23,40, 24,70, 26,91, 27,89,

30,20, 33,57, 33,90, 38,51, 39,07, 46,62, 48,13, 55,16, 56,05, 56,23, 56,94, 65,67, 68,60, 71,13, 79,41, 80,01, 113,97, 129,69, 130,25, 155,75, 158,49, 168,51, 169,57, 170,24, 170,94, 171,06, 173,59.

ESI-MS vypočteno pro C₄₄H₆9N₅O|₂ 859,49, stanoveno m/z 86,4 (M+H)⁺.

Příklad 44: Syntéza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-Ist-Val-Leu-Pro(SVPLS).

SVPL6 SVPL5

-78 CZ 304204 B6

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL5, vychází z SVPL6 (90 mg, 0,1 mmol), 30 mg (35%) požadované látky bylo získáno jako bílá pevná látka po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc od 1:4 do 1:10). Rf = 0,35 (EtOAc).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,85 - 1,00 (m, 18H), 1,14- 1,38 (m, 8H), 1,44 (s, 9H), 1,57 (m,

2H), 1,76 - 1,95 (m, 2H), 2,01 -2,21 (m, 2H), 2,33 (dd, Jl = 7,3, J2 = 14,7, 1H), 2,53 (m, 1H),

2,57 (s, 3H), 3,17 (dd,J 1 = 10,7, J2 = 14,7, 1H), 3,35 (dd, Jl = 4,4, J2 = 14,2, 1H), 3,56 (dd, Jl =

3,9, J2= 10,3, 1H), 3,59-3,77 (m, 4H), 3,78 (s, 3H), 4,06 (dt, Jl =3,9, J2 = 9,3, 1H), 4,33 (dd, io Jl =2,9, J2 = 9,3, 1H), 4,38 (dd, Jl = 6,8, J2 = 10,3, 1H), 4,58 (dd, Jl = 5,4, J2 = 7,3, 1H), 4,79 (t, J = 10,3, 1H), 4,98 (d, J = 9,3, 1H), 5,03 (dd, J1 = 2,4, J2 = 6,3, 1H), 6,81 (bs, 1H), 6,84 (d, J =

8,3, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,24 (d, J = 9,8, 1H), 7,54 (d, J = 9,8, 1H).

^I3C NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 11,48, 14,50, 15,20, 18,86, 19,44, 21,03, 23,64, 24,83, 24,96, 15 26,97, 28,01, 28,135, 30,21, 33,53, 33,96, 38,56, 38,61, 41,05, 41,66, 46,84, 48,53, 55,24, 55,51,

56,31,57,14, 59,75, 65,85, 70,60, 80,52, 114,11, 129,75, 130,33, 156,77, 158,67, 168,53, 170,21, 170,29, 170,73, 171,02, 174,34.

ESI-MS vypočteno pro C₄₄H₇₀N₆O]i 858,51, stanoveno m/z 859,5 (M+H)⁺.

Příklad 45: Syntéza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Thr)-Ist-Hip-Leu-Pro (SAPL4).

SAPL4

Do nádoby obsahující SAPLS (8,79 g, 9,6 mmol) v bezvodém dioxanu (93 ml), byl přidán roztok kyseliny chlorovodíkové bezvodém dioxanu (5,3 N, 122 ml, 647 mmol). Vzniklý roztok byl míchán při pokojové teplotě po dobu 8 h, nebo dokud nezreagoval všechen výchozí materiál. Když byla reakce ukončena, roztok byl zakoncentrován za sníženého tlaku. Získaná směs byla naředěna CHC1₃ (100 ml) a opět zakoncentrována. Surový produkt ve formě bílé pěnovité látky byl odpařen s CDCl₃/hex tak, aby vznikl SAPL4 (8,17 g, 100% výtěžek) jako bílá pevná látka.

m/z (FAB) 838,3 [(M+Na)⁺, 28], 816,3 [(M+H)⁺, 100].

-79CZ 304204 B6

Příklad 46: Syntéza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Thr)-Ist-Aip-Leu-Pro (SNPLS4).

HCI-Dioxan

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL4, vychází z SNPLS (40 mg, 43 pmol), požadovaná látka (36 mg, kvant.) byla získána jako bílá pevná látka po precipitací s Et₂O.

ESI-MS: vypočteno pro C₄₂H₆N₅0n 815,47, stanoveno m/z 815,5 (M)+.

Příklad 47: Syntéza cyklo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Thr)-Ist-Hiv-Leu-Pro (SHPL4).

HCl fáioxan

SVPL5

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL4, vychází z SHPL5 (500 mg, 0,58 mmol). Požadovaný produkt (440 mg, kvant.) byl získán jako bílá pevná látka po precipitací s Et₂O,

ESI-MS: vypočteno pro C39H61N5O10 759,44, stanoveno m/z 760,4 (M+H)*.

Příklad 48: Syntéza cyk!o-N(Me)-0(Me)-Tyr-0-(Thr)-Ist-Val-Leu-Pro (SVPL4).

HCl /dioxan

SVPL5

-80CZ 304204 B6

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL4, vychází z SVPL5 (25 mg, 29 μιηοΐ). Požadovaná látka (22 mg) byla získána jako bílá pevná látka po koevaporaci s MTBE.

ESI-MS: vypočteno pro C₃₉H₆₂N₆O₉: 758,5, stanoveno (m/z) 759,5 [(M+H)]⁴.

Příklad 49: Syntéza Z-N-methyl-D-leucinu (Hl)

Ref: Coggins, J. R.; Benoiton, N. L. Can. J. Chem 1971,49, 1968

Z-(D)-Leu-OH

K míchanému roztoku Z-D-Leu-OH (10,32 g, 38,9 mmol) v bezvodém THF (120 ml) při 0 °C v atmosféře Ar, byl přidán po kapkách stříkačkou jodomethan (8,55 ml, 136,1 mmol). Poté byl postupně přidán hydrid sodný (4,80 g, 120,6 mmol, 60% rozptýlený v minerálním oleji) a teplota byla udržována na 0 °C. Reakční směs byla míchána při pokojové teplotě po dobu 24 h. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a získaná směs byla rozpuštěna v EtOAc (120 ml) a extrahována vodným roztokem NaHCO₃ (300 ml, nasycený roztok). Vodná fáze byla promyta EtOAc (2x100 ml). Vodná fáze byla ochlazena, byla přidána pevná kyselina citrónová až f 1-2, a roztok byl extrahován pomocí EtOAc (4x250 ml), vysušena (Na₂SO₄), filtrována a zakoncentrována. Produkt byl krystalizován v EtOAc-heptan (1:3) tak aby byl získán Hl (7,84 g, 72%) jako bílá krystalická látka. Mp: 71 až 72 °C. [a]_D ²⁵ + 23° (c 1, EtOH).

Příklad 50: Syntéza Z-didemninu A (SAPL3)

Do nádoby obsahující HATU (8,76 g, 23,0 mmol), HOAt (3,17 g, 23,1 mmol) SAPL4 (7,09 g, 15,8 mmol) a Hl (3,486 g, 12,5 mmol), byl přidán bezvodý DCM (100 ml) a bezvodý DMF

-81 CZ 304204 B6 (50 ml) a roztok byl v atmosféře Ar míchán při -5 °C (ledová lázeň). Po kapkách stříkačkou byl přidán NMM (2,3 ml, 21,0 mmol), a teplota byla udržována na -5 °C. Vzniklá reakční směs byla míchána při -5 °C po dobu 2 h, poté temperována na pokojovou teplotu dalších 14 h. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku. Surový produkt byl promyt EtOAc (100 ml) a roztok byl filtrován tak, aby byl odstraněn precipitát. Roztok byl promyt postupně vodným roztokem KHSO4 (2x100 ml, 10%), roztokem soli (100 ml), vodným roztokem NaHCO3 (100 ml, nasycený roztok) a propláchnut roztokem soli (100 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄) a zakoncentrována za sníženého tlaku aby vznikl požadovaný produkt jako žlutá pevná látka, která byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, gradient hex:EtOAc 2:1 až 1:1) tak, aby vznikl SAPL3 (7,98 g, 89% výtěžek) jako bílá pevná látka. Rf = 0,18 (hex/EtOAc 1:1).

'H NMR (300 MHz, CDClj) δ 0,79 - 1,00 (m, 24H), 1,10 - 2,25 (m, 10H), 1,18 (d, J = 6,3, 3H), 1,25 (s, 3H), 1,32 (d, J = 6,8, 3H), 2,28-2,34 (m, 1H), 2,49 (dd, JI = 10,7, J2 = 17,0, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,83 (s, 3H), 2,95 (m, 1H), 3,02 - 3,24 (m, 2H), 3,31 - 3,40 (dd, JI = 3,9, J2 = 14,1, 1H), 3,533,64 (m, 2H), 3,65 - 3,75 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,92 - 4,20 (m, 3H), 4,58 (t, J = 4,8, 1H), 4,75 -4,85 (m, 3H), 5,00 (m, 1H), 5,12-5,26 (m, 3H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 6,86 (bs, 1H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,21 - 7,44 (m, 6H), 7,92 (d, J = 8,3, 1H).

^HC NMR (75 MHz, CDCI₃) δ 14,05, 15,18, 16,73, 18,52, 20,83, 22,62, 22,96, 23,66, 24,55, 24,81, 25,03, 25,28,26,90, 27,86, 28,95, 31,28, 31,81, 33,91, 34,02, 38,51, 38,61, 47,03, 49,61,

55,21, 55,38, 55,50, 57,28, 66,10, 67,65, 67,93, 70,47, 81,44, 114,09, 127,83, 128,46, 129,74, 130,29, 158,60, 168,36, 169,59, 170,28, 171,20, 172,22,204,80.

ESI-MS vypočteno pro C₅₇H₈₄N₆O|₄ 1076,60, stanoveno m/z 1077,6 (M+H) .

Příklad 51: Syntéza [Aip]³ Z-didemninu A (SNPL3).

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SNPL4 (35 mg, 41 μιηοΐ) a Hl (17 mg, 61 μιηοΐ), požadovaná látka (36 mg, 81%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 1:4 až čistý EtOAc). Rf = 0,30 (EtOAc).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,74 (d, J = 6,3, 3H), 0,80 - 1,00 (m, 21H), 1,10 - 2,25 (m, 10H), 1,21 (d, J = 5,8, 3H), 1,24 (s, 3H), 1,34 (d, J = 6,3, 3H), 2,61 (s, 3H), 2,86 (s, 3H), 3,12 - 3,25 (dd, JI = 1 1,2, J2 = 14,1, 1H), 3,27 - 3,36 (dd, JI = 4,3, J2 = 14,1, 1H), 3,52 - 3,63 (m, 3H), 3,69 - 3,81 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 4,09 (m, 3H), 4,47 - 4,63 (m, 3H), 4,76 - 4,92 (m, 2H), 5,00 (m, 1H), 5,08 (m, 1H), 5,18 (s, 2H), 6,85 (d, J = 8,3, 2H), 6,97 (d, J = 6,97), 1H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,35 (bs, 5H), 7,48 (d, J = 8,3, 1H), 7,67 (d, J = 8,3, 1H), 7,87 (d, J = 10,2, 1H).

ESI-MS vypočteno pro C57N85N7O13: 1075,62, stanoveno m/z: 1076,6 (M+H)⁺.

-82CZ 304204 B6

Příklad 52: Syntéza [Hiv]³ Z-didemninu A (SHPL3).

HATU/HOAt/NMM

DCM /DMF

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SHPL4 (116 mg, 0,15 mmol) a Hl (63 mg, 0,23 mmol), požadovaná látka (86 mg, 52%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 1:1 až 1:2). Rf == 0,27 (hex-EtOAc 1:2).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,80 - 1,08 (m, 24H), 1,18 (m, 3H), 1,21 (m, 4H), 1,58 (m, 2H), 1,74 (m, IH), 1,80-2,42 (m, 6H), 2,56 (s, 3H), 2,80 (s, 3H), 2,88 (m, 1 H), 3,15 (m, IH), 3,32 (m, IH), 3,60 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,83 (m, IH), 3,98 (m, IH), 4,42 (m, IH), 4,58 (m, IH), 4,75 (m, IH), 4,84 (m, IH), 4,92 (d, J = 3,8, IH), 5,00 (m, IH), 5,20 (m, 2H), 6,65 (d, J = 6,3, IH), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,34 (m, 5H), 7,50 (d, J = 6,7, IH), 7,75 (d, J = 7,2, IH).

C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 14,21, 15,39, 17,64, 18,63, 20,74, 21,88, 22,84, 23,48, 24,22, 24,75, 27,05, 27,84, 29,34, 29,99, 33,42, 33,865, 35,81, 38,52, 39,37, 46,63, 48,14, 55,13, 55,47, 55,53, 55,87, 56,92, 65,68, 67,72, 68,60, 70,61, 79,09, 113,95, 127,71, 127,86, 128,35, 129,63, 130,22, 158,48, 168,46, 169,36, 169,84, 170,29, 170,93, 171,00, 173,73.

ESI-MS: vypočteno pro C₅₄H₈oN₆Oi₃ 1020,58, stanoveno m/z 1021,5 (M+H) .

Příklad 53: Syntéza [Val]³ Z-didemninu A (SVPL3).

-83 CZ 304204 B6

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SVPL4 (20 mg, 25 pmol) a SAPLH1 (11 mg, 37,5 pmol), požadovaná látka (19 mg, 72%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient hex-EtOAc 1:1 až 1:5). Rf = 0,44 (EtOAc).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,85 - 1,06 (m, 21 H), 1,10 - 1,4 (m, 5H), 1,16 (d, J = 6,6, 3H), 1,50 - 1,63 (m, 6 H), 1,72 - 1,87 (m, 2 H), 1,88 - 2,40 (m, 6H), 2,58 (s, 3H), 2,86 (s, 3H), 3,17 (dd, JI = 10,5, J2 = 14,2, IH), 3,36 (dd, JI = 3,9, J2 = 14,2, IH), 3,43 (bs, IH), 3,51 -3,72 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 3,98 - 4,16 (m, IH), 4,40 - 4,47 (m, 2H), 4,58 (dd, JI = 5,7, J2 = 7,8, IH), 4,67-4,85 (m, 2H), 4,80-5,09 (m, IH), 5,16 (d, J = 12,4, IH), 5,24 (d, J = 12,4, 1 H), 6,84 (d, J = 8,4, 1H), 6,90 - 6,94 (bs, 1 H), 7,09 (d, J = 8,4, 1H), 7,28 (m, 6H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 14,37, 15,70, 18,55, 19,82, 21,40, 21,99, 22,81, 23,17, 23,98, 24,62, 25,00, 25,24, 27,28, 28,26, 29,93, 30,23, 33,58, 34,10, 36,16, 38,78, 41,98, 47,10, 48,79, 54,73, 55,45, 56,62, 57,40, 59,51, 66,02, 68,18, 70,37, 71,03, 114,30, 128,00, 128,27, 128,72, 129,86, 130,56, 136,49, 158,28, 158,85, 168,75, 169,27, 170,40, 170,75, 171,04, 173,91, 175,03,

ES1-MS vypočteno pro C₅₄H₈|N₇O₁₂: 1019,59, stanoveno (m/z): 1020,5 (M+H)⁺.

Příklad 54: Syntéza didemninu A (SAPL2)

Ha/PdíOHfe-C

THF

SAPL2

K roztoku SAPL3 (6,59 g, 6,1 mmol) v THF (bez stabilizátoru, 262 ml) odplyněnému a přečištěnému argonem, byl přidán Pd(OH)2-C (20%, 3,29 g, 50 % hmotnosti). Reakční směs byla míchána v atmosféře H₂ (1 atm) po dobu 20 h, poté filtrována přes 0,45pm teflonový filtr a zakoncentrována za sníženého tlaku tak aby vznikl produkt ve formě bílé pevné látky. Byl přidán CHC1₃ (2x25 ml), a reakční směs byla opět zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby vznikl SAPL2 (5,51 g, 96%) jako bílá pevná látka. Rf = 0,22 (CHC1₃: tBuOH 90:10).

'H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 0,82 - 0,92 (m, 24H), 1,1 1 - 1,19 (m, IH), 1,22 (d, J = 6,9, 3H), 1,32 (d, J = 6,8, 3H), 1,30 - 1,35 (m, IH), 1,35 - 1,63 (m, 6H), 1,71 - 1,81 (m, 2H), 1,93-2,07 (m, 1H), 2,07 - 2,18 (m, 2H), 2,282,34 (m, 1H), 2,49 - 2,52 (dd, J1 = 11, J2 = 10,5, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,72 (bs, 3H), 2,79 (bs, 3H), 2,86 - 2,94 (bs, IH), 2,72 - 2,79 (bd, J = 10,5, IH), 3,153,18 (dd, JI = 14,5), J2= 10,5, IH), 3,33 - 3,36 (dd, JI = 14,5, J2 = 4,5, IH), 3,54 - 3,57 (dd, JI = 10,5, J2 = 4,5 IH), 3,56-3,61 (m, IH), 3,78 (s, 3H), 3,96 - 4,00 (m, IH), 4,03 - 4,08 (m, IH), 4,11 -4,80 (bs, IH), 4,56-4,62 (m, IH), 4,68-4,81 (m, 3H), 4,99-5,01 (q, J = 3,5, IH), 5,16 (bs, IH), 6,83 (d, J = 8,5, 2H), 6,95 (bs, IH), 7,07 (d, J = 8,5, 2H), 7,21 - 7,25 (bs, IH), 7,95 (bs, IH).

^L’C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 11,55, 14,95, 15,26, 16,82, 18,56, 20,89, 22,00, 23,08, 23,76, 2,58,

25,10, 27,12, 29,35, 29,35, 29,65, 29,69, 31,36, 33,96, 34,14, 38,51, 38,64, 40,14, 55,38, 55,56,

57,31, 66,17, 67,85, 79,58, 80,96, 80,98, 81,57, 114,12, 130,33, 158,63, 168,41, 169,33, 169,70,

170,38, 171,24, 172,28, 172,28, 172,93, 204,83.

-84CZ 304204 B6 m/z (FAB) 944,2 [(M + H)⁺, 100],

Příklad 55: Syntéza [Aip]³-didemninu A (SNPL2)

H₂/Pd(OH)2-C

IPA/HjO

K roztoku SNPL3 (33 mg, 35 μηιοί) ve směsi IPA/H₂O (2 ml: 1 ml) odplyněné a pročištěné argonem, byl přidán Pd(OH)2-C (20%, 20 mg, 60 % hmotnosti). Reakční směs byla míchána v atmo10 sféře H₂ (1 atm) po dobu 20 h, poté filtrována přes 0,45μιη teflonový fdtr a zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby vznikl požadovaný produkt jako bílá pevná látka. Byl přidán IPA (2x5 ml), a roztok byl opět zakoncentrován za sníženého tlaku tak, aby vznikl SNPL2 (32 mg, 97%) jako bílá pevná látka.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,78 (d, J = 6,8, 3H), 0,82 - 0,92 (m, 21H), 1,11 - 2,58 (m, 21H), 2,41 (s,3H), 2,62 (s, 3H), 2,75 - 3,00 (m, 4H), 3,15 - 3,18 (dd, JI = 10,7, J2 = 14,7, 1H), 3,33 3,36 (dd, JI = 14,5, J2 = 4,2, IH), 3,51 - 3,78 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,92 (m, IH), 4,01 - 4,20 (m, 2H), 4,50 (t, J = 4,8, IH), 4,59 (t, J = 6,3, 111), 4,75-4,91 (m, 2H), 5,05 (m, 1 H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,70 (d, J = 5,8, IH), 7,78 (d, J = 9,7, 1 H), 7,89 (d, J = 6,3,

IH), 8,14 (d,J = 7,8, IH).

ESI-MS vypočteno pro C49H79N7O11 941,58, stanoveno m/z 942,7 (M+H)⁺.

Příklad 56: Syntéza [HiV]³- didemninu A (SHPL2)

H₂/Pd(OH)2-C

THF

SHPL2

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL2, vychází z SHPL3 (86 mg, 0,08 mmol), požadovaná 30 látka (73 mg, 97%) byla získána jako bílá pevná látka. Rf = 0,37 (CHCf/MeOH 95:5).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,82 - 1,02 (m, 24H), 1,12 - 2,42 (m, 16H), 2,54 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,95 (m, IH), 3,15 (m, lH),3,35(m, IH), 3,523,90 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 4,04 (m, IH), 4,38 (m, IH), 4,48 (m, IH), 4,57 (m, 1 H), 4,88 (m, IH), 4,91 (d, J = 5,3, IH), 5,22 (m, IH), 6,84 (d,

-85 CZ 304204 B6

J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,54 (d, J = 9,2, 1H), 7,60 (d, J = 9,4, 1H), 8,68 (d, J = 6,2, 1H).

^I3C NMR (75 MHz, CDCR) δ 14,07, 16,13, 17,90, 18,56, 20,98, 21,74, 22,94, 23,60, 24,44, 24,78, 25,06, 27,17, 27,92, 30,09, 33,34, 33,89, 38,71, 40,30, 46,86, 48,22, 54,99, 55,23, 56,97,

57,21, 65,81, 68,53, 70,37, 79,47, 114,03, 129,76, 130,29, 158,57, 168,18, 169,40, 169,86, 170,20, 170,92, 174,16.

ESI-MS: vypočteno pro C₄₆H₇₄N₆0n 886,54, stanoveno m/z 887,2 (M+H)⁺.

Příklad 57: Syntéza [Val]³ Z-didemninu A (SVPL2)

H₂/Pd(OH)2-C

THF

SVPL2

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL2, vychází z SVPL3 (19 mg, 18 gmol), požadovaná látka (16 mg, 97%) byla získána jako bílá pevná látka. Rf = 0,36 (CHCf/MeOH 95:5).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ -0,82 - 1,02 (m, 21H), 1,85 - 1,32 (m, 9H), 1,42 - 1,83 (m, 7H), 1,87-2,33 (m, 8H), 2,34 (bs, 3H), 2,60 (bs, 1 H), 2,85 (dd, Ji = 5,7, J2 = 7,8, 1H), 3,16 (dd, JI = 10,8, J2= 14,2, 1H), 3,37 (dd, JI =4,2, J2 = 14,2, 1H), 3,48 (bs, 1H), 3,57 - 3,68 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 3,95 - 4,15 (m, 2H), 4,45 - 4,52 (m, 2H), 4,61 (dd, JI = 4,8, J2 = 7,8, 1H), 4,77 (t, J = 9,9, 1H), 5,02 - 5,15 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,4, 1H), 7,09 (d, J = 8,4, 1H), 7,59 - 7,62 (m, 2H), 7,78-7,81 (m, 2H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 14,46, 16,14, 18,50, 19,83, 21,50 23,98, 27,33, 28,27, 28,33, 29,94, 33,71, 34,16, 38,94, 41,93, 42,1

55,03, 55,50, 56,72, 57,55, 59,22, 59,56, 66,16, 168,71; 169,74, 170,23, 171,18, 175,10.

22,55, 22,81, 22,95, 23,46, , 45,72, 47,18, 48,94, 53,64, 14,36, 118,53, 120,85, 130,02, 130,58,

70,71,

ESI-MS vypočteno pro C₄₆H₇₅N₇0|o: 885,56, stanoveno (m/z): 856,5 (M+H)⁺.

Příklad 58: Syntéza Pyr-Pro-OBn (F2)

-86CZ 304204 B6

K roztoku H-Pro-OBn-HCl (10,0 g, 41,3 mmol) v bezvodérri DMF (50 ml) při 0 °C v atmosféře Ar, byl přidán po kapkách stříkačkou NMM (4,55 ml, 43,8 mmol) zatímco teplota byla udržována na 0 °C. Poté byl postupně přidán HOBt (18,98 g, 124 mmol). Po 15 min byl přidán po kapkách stříkačkou pyruvát (8,61 g, 97,79 mmol) rozpuštěný v bezvodém DCM (10 ml) zatímco teplota byla udržována pod 3 °C. Nakonec byl přidán po kapkách připojeným trychtýřem DCC (22,17 g, 107,46 mmol) rozpuštěný v DCM (80 ml). Reakční směs byla temperována na pokojovou teplotu (2 h) a míchána dalších 12 h. Reakční směs byla filtrována, aby byla odstraněna sraženina a roztok byl zakoncentrován za sníženého tlaku. Získaná směs byla rozpuštěna v EtOAc (500 ml) a promyta postupně vodným roztokem KHSO₄ (100 ml, 10%), vodným roztokem NaHCO₃ (400 ml, nasycený roztok), roztokem soli (400 ml), vysušena (Na₂SO₄) a filtrována.

Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a získaná směs byla promyta ACN (100 ml), ochlazena při -30 °C po dobu 2 h a filtrována tak, aby byl odstraněn nadbytek N,N-dicyklohexylmočoviny. Vzniklá hnědá olejovitá kapalina (15,82 g) byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, grád. hex až hex:EtOAc 2:1), aby vznikl požadovaný F2 (9,06g, 66% výtěžek) jako bílá pevná látka. Rf = 0,25 (hex:EtOAc 2:1).

IR (film, DCM) v 3035, 2956, 2884, 1744, 1717, 1645, 1499, 1443, 1383, 1352, 1273, 1175, 1092 cm 'H NMR (200 MHz, CDC1₃) δ 1,75 - 2,40 (m, 4H), 2,37 (s, 3H), 2,44 (s, 3H), 3,45 - 3,82 (m, 2H), 4,52 - 4,61 (m, IH), 4,88 - 4,97 (m, IH), 5,14 - 5,15 (m, 2H), 5,17 - 5,20 (m, 2H), 7,34 (bs, 5H).

¹³C NMR (50 MHz, CDC1₃) S 22,11,25,22, 26,5, 27,10, 28,53, 31,48, 47,53, 44,81, 59,76, 67,02,

67,31, 128,11, 128,64, 135,24, 170,1, 170,2, 198,0.

m/z (Cl) 293 [(M+NH₄)₊, 100]. Anal. vypočteno pro C₁₅H_I7NO₄: C, 65,44; H, 6,22; N, 5,08, stanoveno: C, 65,04; H, 6,01; N, 5,11.

Příklad 59: Syntéza Pyr-Pro-OH (Fl)

Roztok F2 (8,63 g, 31,34 mmol) a palladium na aktivním uhlí (10%, 86 mg, 10% w/w) v odplyněném MeOH (125 ml) bylo přeneseno do vysokotlakého Parrova reaktoru a pročištěno plynným dusíkem (2x30psi). Reakční směs byla převrstvena vodíkem (30 psi) a míchána při 23 °C po dobu 4,5 h. Poté byla reakční směs filtrována přes 0,45pm teflonový filtr a zakoncentrována za sníženého tlaku. Získaná směs (6,29 g) byla potažena SiO₂, nanesena na vrchol kolony (LC 5,5 x 10,0 cm) a promývána hex:EtOAc 1:2 tak, aby byl získán Fl (4,64 g, 80%) jako bílá pevná látka. Rf = 0,22 (hex:EtOAc 1:1). [ct]_D ²⁰ 92,4 (c 0, 12, CHC1₃). M.p. 67 až 69 °C.

IR (film, DCM) v 3450-3000, 2961-2870, 1719, 1643, 1615, 1452, 1354, 1205, 1175, 1094, 1018 cm“¹.

-87CZ 304204 B6 'H NMR (200 MHz, CDCI₃) δ 1,85 - 2,45 (m, 4H), 2,43 a 2,47 (s, 3H), 3,42 - 3,85 (m, 2H), 4,52

- 4,61 (m, 1H), 4,88 - 4,97 (m, 1H), 7,21 - 7,40 (bs, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 22,03, 25,23, 26,48, 27,00, 28,23, 31,44, 47,57, 48,37, 59,61, 59,39, 162,47, 162,52, 175,04, 176,29, 197,18.

m/z (Cl) 220 [M+N2H7J+, 15], 203 [(M+NH4)+, 100], 186 [(M+H)⁺, 16], Anal. vypočteno pro CsHl 1NO₄: C, 51,88; H, 5,99; N, 7,56, stanoveno: C, 52,13; H, 5,85; N, 7,65.

Příklad 60: Syntéza aplidinů (SAPL1)

SAPL2 SAPL1

K ledovému (3 °C) roztoku Fl (4,908 g, 26,5 mmol) v bezvodém DCM (40 ml) v atmosféře dusíku byl přidán, roztok DIPCDI (1,806 g, 14,3 mmol) v DCM (10 ml) a roztok byl míchán při 3 °C po dobu 60 min. Poté byl roztok SAPL2 (5,0 g, 5,3 mmol) v DCM (50 ml) přenesen pomocí kanyly k výše uvedenému roztoku v atmosféře dusíku. Po 90 h (4 dny) při této teplotě, byl přidán vodný roztok HCI (50 ml, 0,1 N), a reakční směs byla míchána po dobu 15 min. Poté byla organická fáze ponechána usadit a rozdělena mezi vodný roztok K.HSO₄ (50 ml, 5%), vodný roztok NaHCO₃ (50 ml, 5%) a roztok soli (25 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO₄), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku. Vzniklá světle žlutá látka byla přečištěna bleskovou LC (Lichroprep RP-18, 40 až 63 μιη, gradient MeOH:H20:TFA od 70:30:01, do 90:10:0,1) tak, aby byl získán SAPL1 (5,4 g, 93%) (směs rotamerů). Rf = 0,40 a 0,28 (DCM:AcOEt, 2:3), 0,52 a 0,45 (CHCh-MeOH, 9,5:0,5); [a]_D-95,9° (c 1,8, CHC1₃).

Ή NMR (200 MHz, CDCI₃) δ 0,84 - 0,93 (m, 24H), 1,16 - 1,70 (m, 9H), 1,72 - 1,81 (m, 1H), 1,81-1,90 (m, 1H), 1,90-2,24 (m, 6H), 2,30-2,39 (m, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,51 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 2,52-2,64 (m, 1H), 2,85 (bs, 1H), 2,94 (bs, 114), 3,09 (s, 3H), 3,13 (s, 3H), 3,15 -3,18 (m, 1H), 3,21 - 3,26 (dd, JI = 15,8, J2 = 6,1, 1H), 3,32 - 3,36 (dd, JI = 14,5, J2 = 4,1, 1H), 3,54 3,60 (m, 1H), 3,66 - 3,72 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,80 - 3,87 (m, 1H), 3,963,99 (m, 1H), 4,03 4,11 (m, 2H), 4,15-4,23 (2q, J = 7,5, 1H), 4,55 - 4,57 (2d, JI =5,5, J2 = 2,2, 1H), 4,59-4,62 (t, 1H), 4,56 - 4,64 (dd, JI = 6,5, J2 = 2,5, 1H), 4,68 - 4,71 (t, 1H), 4,76 - 4,81 (t, 1H), 5,10 5,18 (m, 1H), 5,17 (d, = 3,5, 1H), 5,18 (d, J = 3,5, 1H), 5,27 - 5,31 (m, 2H), 6,82 (d, J = 8,5, 2H), 6,83 (d, J = 8,5, 2H), 7,05 (d, J = 8,5, 2H), 7,06 (d, J = 8,5, 2H), 7,02 (d, i = 7,1, 1 H), 7,16 (d, J = 9,5, 1 H), 7,17 (d, J = 9,5, 1 H), 7,59 (d, i = 5,5, 1H), 7,77 (d, J = 9,5, 1H), 7,83 (d, J = 9,4, 1H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC!₃) δ 11,63, 1 1,68, 14,11, 14,70, 15,26, 15,30, 16,00, 16,20, 16,88,

16,93, 18,62, 18,85, 20,89, 20,94, 21,62, 21,36, 23,44, 23,57, 23,84, 23,93, 24,662, 24,77, 24,85,

25,02, 26,22, 26,34, 27,09, 27,6, 27,06, 27,30, 27,95, 27,99, 29,33, 29,69, 31,3131,37, 33,97,

34,06, 36,02, 36,45, 38,68, 38,76, 41,01, 41,15, 47,00, 48,42, 48,48, 48,86, 49,20, 49,51, 54,65,

54,75, 55,26, 55,58, 55,61, 57,14, 57,27, 57,47, 57,79, 66,24, 67,80, 67,99, 70,34, 70,67, 81,0,

-88CZ 304204 B6

81,52, 114,10, 130,31, 156,02, 158,65, 161,12, 161,60, 168,20, 169,53, 169,59, 170,45, 171,25, 171,801, 171,95, 172,26, 172,33, 197,5,204,80, 204,85. m/z (FAB) 1132,6 [(M+Na)⁺, 42], 1110,8 [(M+H)⁺, 100],

Příklad 61: Syntéza [Aip]³-aplidinu (SNPL1)

SNPL1

Postup je stejný jako pro syntézu SAPLl, vychází z SNPL2 (10 mg, 10,6 μιηοΐ) a Fl (10 mg, 54 pmol). Požadovaná látka (8 mg, 68 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl8, isokratické ACN/H₂O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 25x21 mm, při 270 nm, t_R = 10,5 a 12,0 min).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,80 - 1,03 (m, 24H), 1,11 - 1,70 (m, 9H), 1,72 - 1,81 (m, 1H), 1,81 - 1,90 (m, 1 Η), 1,90 - 2,24 (m, 6H), 2,30 - 2,39 (m, 1H), 2,53 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 2,65 (s, 3H), 2,52 - 2,66 (m, 2H), 2,94 (m, 1H), 3,07 (s, 3H), 3,11 (s, 3H), 3,15 - 3,18 (m, 1H), 3,22 3,31 (dd, JI = 4,3, J2 = 15,1, 1H), 3,54 - 3,60 (m, 2H), 3,67 - 3,92 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,98 (m, 1H), 4,13 - 4,29 (m, 3H), 4,45 - 4,75 (m, 4H), 4,81 (t. J = 9,7, 1H), 5,09 (m, 1H), 5,18 (m, 1H), 5,26 - 5,44 (m, 3H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,30 (d, J = 8,3, 1H),

7,36 (d, J = 8,3, 1H), 7,68 (d, J = 9,7, 1H), 7,87 (d, J = 4,3, 1H), 8,09 (d, J = 9,7, 1H), 8,28 (d, J= 10,2, 1H).

ESI-MS vypočteno pro CsTHggNgOu: 1108,64, stanoveno (m/z): 1110,3 (M+H)⁺.

Příklad 62: Syntéza [Hiv]³-aplidinu (SHPL1)

SHPL1

Postup je stejný jako pro syntézu SAPLl, vychází z SHPL2 (72 mg, 0,081 mmol) a Fl (75 mg, 0,405 mmol). Požadovaná látka (68 mg, 79%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění

-89CZ 304204 B6 bleskovou LC (Lichroprep RPC18, gradient ACN/H₂O/TFA 70:30:0,5 až 90:10:0,5). Rf-0,49 (ACN/H₂O/TFA 90:10:1).

'HNMR (300 MHz, CDCI₃) δ 0,80 - 1,10 (m, 24H), 1,12- 1,50 (m, 18H), 1,50-2,30 (m, 6H), 2,42 (m, 1H), 2,53 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 2,96 - 3,40 (m, 3H), 3,05 (s, 3H), 3,10 (s, 3H), 3,63 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (m, 1 H), 4,01 (m, 1 H), 4,30 (m, 1 H), 4,63 (m, 1H), 4,69 (m, 1H), 4,86 (m, 1H), 5,02 (d, J = 4,8, 1H), 5,09 (m, 1H), 5,20 (m, 1H), 5,30 (m, 1 H), 6,83 (d, J = 8,3, 2H), 6,89 (d, J = 6,3, 1 H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,29 (d, J = 9,7, 1H), 7,34 (m, 2H), 7,43 (d, J = 5,3, 1 H), 7,74 (d, J = 9,7, 1H), 7,80 (d, J = 10,2, 1H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 14,22, 14,30, 16,49, 16,76, 17,84, 19,17, 21,08, 21,41, 21,54,

22,54, 23,79, 23,94, 24,05, 24,16, 24,82, 24,96, 25,05, 25,98, 26,45, 27,37, 27,57, 28,21, 28,59,

30.31, 30,83, 31,56, 31,62, 33,74, 34,24, 36,02, 36,25, 38,91, 38,96, 39,46, 39,86, 46,92, 48,44,

48,71, 49,06, 54,95, 55,49, 57,16, 57,68, 58,23, 59,13, 66,16, 66,28, 69,10, 70,83, 71,14, 79,12,

114.31, 129,96, 130,12, 130,59, 158,86, 168,69, 168,81, 169,75, 169,82, 170,18, 170,45, 170,52, 170,69, 170,84, 171,21, 171,28, 172,47, 173,17, 174,66, 174,82, 197,63,201,38.

ES-MS vypočteno pro C₅₄H₈₃N₇O_I4: 1053,60, stanoveno (m/z): 1054,9 (M+H).

Příklad 63: Syntéza [Val]³-aplidinu (SVPL1)

SVPL2

SVPL1

Postup je stejný jako pro syntézu SAPLl, vychází z SVPL2 (IO mg, ll pmol) a Fl (10,5 |mg, 57 pmol). Požadovaná látka (8 mg, 69%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 CIS, isokratická ACN/H₂O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, t_R = 10,9 a 12,3 min).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,82 - 1,02 (m, 24H), 1,13 - 1,38 (m, 9H), 1,55 (m, 2H), 1,67 1,81 (m, 4H), 1,95 - 2,02 (m, 3H), 2,10 - 2,17 (m, 2H), 2,26 - 2,39 (m, 2H), 2,56 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 2,58 (s, 3H), 2,74 - 2,92 (m, 1H), 3,10 (s, 3H), 3,15 (s, 3H), 3,20 (m, 1H), 3,36 (dd, Ji=4,4, J2 = 14,2, 1H), 3,49 - 3,72 (m, 5H), 3,79 (s, 3H), 3,97 - 4,13 (m, 2H), 4,38 (dd, Ji = 4,6, J2 = 14,2, 1H), 4,49 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,68 - 4,81 (m, 2H), 5,11 (m, 1H), 5,26 - 5,30 (m, 1H), 5,33 - 5,40 (m, 1H), 6,84 (d, J = 7,8, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,36 - 7,52 (m, 2H), 7,48 (d, J =

9,6, 1H), 7,61 (d, J = 6,8, 1H).

ESI-MS vypočteno pro C₅₄H₈₄N_SO₁₃ 1052,62, stanoveno (miz): 1053,6 (M+H)⁺.

-90CZ 304204 B6

Příklad 64: Syntéza [Hiv]³-[isobutyryl]⁸-didemninu A (SISHPL1)

K roztoku SHPL2, (10 mg, 11,2 μπιοί) v DCM (200 01) při 0 °C v atmosféře Ar, byl přidán DIPEA (3 01, 16,8 pmol) a isobutyryl chloride (1,4 01, 13,4 μιτιοί). Po 3 h při 22 °C, DCM (3 ml) byl přidán a reakční směs byla promyta postupně s vodným roztokem. HU (2 ml, 0.1N), vodným roztokem. NaHCCf (2 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (2 ml), vysušena (Na₂SO₄) filtrována a zakoncentrována ve vakuu. Přečištění získané směsi proběhlo na HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl 8, isokratická ACN/H₂O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 rim, t_R = 19 min) požadovaná látka (10 mg, 94%) jako bílá pevná látka.

H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,82 - 1,10 (24H, m), 1,13 - 1,65 (18H, m), 1,72 - 2,58 (6H, m),

2,56 (s, 3H), 2,89 (s, 3H), 2,92 (m, 2H), 3,13 (m, 2H), 3,36 (dd, J1 = 4,6, J2 = 15,6, 1H), 3,54 3,73 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,40 (m, IH), 4,60 (m, IH), 4,89 (m, IH), 4,99 (d, J = 5,3, 1H), 5,03 (m, 1 H), 5,20 (m, 1 H), 6,73 (d, J = 9,3, 1 H), 6,84 (d, J = 9,6, 2H), 7,08 (d, J =

9,6, 2H), 7,55 (d, J = 8,6, 1H), 7,82 (d, J = 11, 1H).

^I3C NMR (75 MHz, CDCE) δ 14,63, 15,69, 17,92, 19,03, 19,31, 19,66, 21,03, 22,29, 23,19, 23,85, 24,71, 25,14, 27,27, 28,22, 30,39, 30,51, 31,15, 33,80. 34,25, 35,61, 38,85, 39,63, 46,98, 48,51, 53,29, 53,65, 55,49, 56,01, 56,35, 57,26, 66,07, 69,07, 70,94, 79,33, 114,31, 130,08,

130,60, 158,84, 168,79, 169,75, 170,34, 170,68, 171,36, 171,73, 174,02, 179,84,

ESI-MS vypočteno pro C5₀H₈oN₆0|₂, 956,58, stanoveno (m/z): 957,5 (M+H)⁺.

Příklad 65: Syntéza [Val]³-[isobutyryl]⁸-didemninu A (8ISVPL1)

Postup je stejný jako pro syntézu 81SHPL1, vychází z SVPL2 (20 mg, 22,6 μηιοί). Požadovaná látka (19 mg, 88 %) byla získána po přečištění na HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl 82, isokratická ACN/H₂O 85:15, průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, t_K = 19 min).

-91 CZ 304204 B6 'H NMR (300 MHz, CDC1₃)5O,81 -1,02 (m, 24 H), 1,14- 1,38 (m, 5H), 1,15 (d, J = 6,6, 3H), 1,19 (d, J = 6,6, 3H), 1,38 - 1,80 (m, 7H), 1,802,40 (m, 6 H), 2,57 (s, 3H), 2,58 - 2,64 (m, 1H), 2,85 - 2,92 (m, 1H), 2,93 (s, 3H), 3,16 (dd, JI = 10,5, J2 = 14,4, 1 H), 3,36 (dd, JI = 4,5, J2 = 14,4, 1H»3,39 (bs, lH),3,56(dd, 1H, J = 4,5, 10,8),3,59-3,72 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 4,01 (td,

JI = 3,3, J2 = 10,2, 1H), 4,39 - 4,47 (m, 2H), 4,58 (dd, JI = 5,7, J2 = 7,5, 1H), 4,79 (t, J =

9,9 1 H), 5,03 - 5,14 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,4, 2H), 7,04 (d, J = 7,8, 1H), 7,08 (d, J = 8,4, 1H),

7,36 (d, J = 9,0, 1H), 7,45 (d, J = 10,2, 1H), 7,51 (d, J = 10,2, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 175,10, 173,18, 171,14, 170,72, 170,42, 169,38, 168,73, 158,87,

130,60, 130,02, 114,33, 71,31, 70,50, 66,1, 59,47, 57,42, 56,56, 55,51, 54,93, 53,84, 48,83, 47,13, 41,94, 38,94, 35,67, 34,17, 33,63, 31,32, 31,10, 29,96, 28,32, 27,25, 25,30, 25,05, 24,82, 24,01,23,22,21,42, 19,88, 19,72, 11,25, 18,51, 15,60, 14,32, 11,96,

ESI-MS vypočteno pro C5oH₈|N₇On: 955,60, stanoveno 956,8 (M+H)*.

Příklad 66: Syntéza [Hiv]³-[Butyryl]⁸-didemninu A (8BSHPL1)

Postup je stejný jako pro syntézu 81SHPL1, vychází z SVPL2 (10 mg, 11,2 μιηοΐ). Požadovaná látka (9 mg, 84 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění by HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl8, isokratická ACN/H₂O 85:15, průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, t_R = 18,6 min).

H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,11 - 1,72 (m, 18H), 1,75-2,51 (m, 6H),

2,56 (s, 3H), 2,84 (s, 3H), 2,92 (m, 2H), 3,15 (m, 2H), 3,35 (dd, JI = 5,0, J2 = 15,6, 1H), 3,543,77 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,40 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,89 (m, 1H), 4,98 (d, JI = 6,0, 1H), 5,04 (m, 1H), 5,20 (m, 1H), 6,78 (d, JI = 9,6, 1H), 6,84 (d, JI = 9,6, 2H), 7,08 (d, JI = 9,6,2H), 7,54 (d, J1 = 9,6, 1H), 7,82 (d, J1 = 10,6, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 14,15, 14,55, 15,72, 17,96, 18,67, 19,01, 21,05, 22,37, 23,13, 23,84, 24,71, 25,14, 27,30, 28,21, 29,92, 30,38, 30,63, 33,78, 34,25, 35,69, 35,97, 38,85, 39,61, 46,98, 48,52, 53,27, 55,49, 55,99, 56,25, 57,27, 66,07, 69,07, 70,96, 79,40, 114,31, 130,08, 130,59, 158,85, 168,78, 169,73, 170,42, 170,64, 171,36, 171,65, 174,07, 175,79.

ESI-MS vypočteno pro CsoH8oN₆Oi₂: 956,60, stanoveno (m/z): 957,8 (M+H)⁺.

-92CZ 304204 B6

Příklad 67: Syntéza [Hiv]³-[hexanoyl]⁸-didemninu A (8HSHPL1)

Postup je stejný jako pro syntézu S1SHPL1, vychází z SHPL2 (10 mg, 11,2 pmol), požadovaná látka (9 mg, 82 %) byla získána jako bílá pevná látka, po přečištění pomocí HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, isokratická ACN/H₂O 85:15, průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, t_R = 27,8 min).

Ή NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,11 - 1,72 (m, 22H), 1,80-2,51 (m, 6H),

2,56 (s, 3H), 2,84 (s, 3H), 2,93 (m, 2H), 3,14 (m, 2H), 3,35 (dd, Jl = 4,4, J2 = 14,1, IH), 3,54 3,76 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,41 (m, IH), 4,60 (m, IH), 4,88 (m, IH), 4,98 (d,Jl =

5,3, IH), 5,03 (m, IH), 5,19 (m, IH), 6,76 (d, Jl = 8,7, IH), 6,84 (d, Ji = 8,7, 2H), 4,98 (d, Jl =

5,3, IH), 5,03 (m, IH), 5,19 (m, IH), 6,76 (d, Jl = 8,7, IH), 6,84 (d, Ji = 8,7, 2H), 7,08 (d, Jl =

8,7, 2H), 7,51 (d, J1 = 8,8, 1H), 7,81 (d, J1 = 9,7, 1H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 13,94, 14,34, 15,49, 17,73, 18,772 20,811 22,14, 22,46, 22,90,

23,60, 24,47, 24,69, 24,90, 27,08, 27,97, 30,14, 30,40, 31,54., 33,53, 33,76, 34,02, 35,47, 38,62, 39,40, 46,76, 48,28, 53,04, 55,26, 55,78, 55,902 57,04, 65,842, 68,82, 70,72, 79,17, 114,07, 129,84, 130,36, 158,61, 168,542, 169,51, 170,15, 170,41, 171,122, 171,42, 173,86, 175,75.

ESI-MS vypočteno pro C5₂H₈₄N₆O_]2: 984,61, stanoveno (m/z): 985,8 (M+H) .

Příklad 68: Syntéza isobutyryl-Pro-OBn

H-Pro-OBn.HCI

NMM/DCM

K roztoku H-Pro-OBn.HCl (500 mg, 2,07 mmol) v DCM (10 ml) při 0 °C, byl přidán v atmosféře argonu NMM (680 μΐ, 6,21 mmol). Po 10 min, byl přidán isobutyrylchlorid (240 μιη, 2,27 mmol) a reakční směs byla temperována na 20 °C a míchána 5 h. Reakční směs byla filtrována a filtrát byl postupně promyt vodným roztokem. HCI (15 ml, IN), vodným roztokem NaHCO₃ (10 ml, nasycený roztok), a roztokem soli (10 ml), poté vysušena (Na₂SO₄), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby vznikla požadovaná látka 560 mg (98%). Rf = 0,42 (hex:EtOAc 1:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 1,20 - 1,40 (2d, 6H), 1,90 - 2,35 (m, 4H), 2,35 (q, IH), 3,40 3,80 (m, 2H), 4,30 (m, 1H), 5,20 (m, 2H), 7,40 (m, 5H).

-93 CZ 304204 B6

Příklad 69: Syntéza isobutyryl-Pro-OH

H₂, Pd-C

MeOH

Isobutiryl-Pro-OH

K roztoku isobutyryl-Pro-OBn (430 mg, 1,56 mmol) v odplyněném MeOH byl přidán Pd/C (10%) (43 mg, 10% w/w) a poté postupně převrstven Ar a probublán vodíkem. Reakční směs byla míchána v atmosféře H₂ 14 h poté odplyněna a filtrována. Roztok byl zakoncentrován a získaná směs byla krystalizována v MTBE/hex tak, aby vzniklo 140 mg (48 %) požadovaného produktu jako bílá pevná látka.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 1,20 (m, 6H), 1,90 - 2,10 (m, 3H), 2,50 (m, 1H), 2,70 (q, 1H),

3,40 - 3,70 (m, 2H), 4,60 (dd, 1H).

ESI-MS vypočteno pro C9Hi₅NO₃: 185,11, stanoveno (m/z): 186,1 (M+H)⁺.

Příklad 70: Syntéza [Hiv]³-[isobutyryl]⁹-aplidinu (9ISHPL1)

DIPCDl

DCM

K roztoku Isobutyryl-Pro-OH (10 mg, 54 μιηοΐ) v DCM (150 μΐ) při 0 °C, byl přidán DIPCDl (5 μΐ, 32 μητοΙ). Míchání pokračovalo 60 min a poté byla reakční směs přenesena do nádoby obsahující SHPL2 (10 mg, 11,2 μιηοΐ) v DCM (150 μΐ). Po 4 dnech při 2 až 4 °C byla reakční směs naředěna DCM (2 ml) a promyta postupně vodným roztokem HCI (1 ml, 0,1 N), vodným roztokem. NaHCO₃ (1 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (1 ml), organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄), filtrována a zakoncentrována. Získaná směs byla přečištěna pomocí HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, isokratická RCN/H₂O 85:15, průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, t_R = 13 a 14 min) aby vznikl požadovaný 9ISHPL1 (9 mg, 72%) jako bílá pevná látka.

'HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,12- 1,50 (m, 18H), 1,52-2,70 (m, 10H),

2,56 (s, 3H), 3,00 - 3,44 (m, 4H), 3,08 (s, 3H), 3,55 - 3,72 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 4,00 (m, 3H), 4,26 (m, 1H), 4,62 (m, 2H), 4,86 (m, 1H), 5,02 (d, J = 5,3, 1H), 5,30 (m, 2H), 6,84 (d, J = 9,0, 2H), 7,07 (d, J = 9,0, 2H), 7,29 (d, J = 11 -0, 1H), 7,80 (d, J = 9,0, 1H); 7,88 (d, J = 11, 1H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 14,44, 16,9 1, 17,94, 18,96, 19,03, 19,15, 21,07, 21,59, 23,87, 24,10, 24,89, 25,08, 26,04, 27,54, 28,21, 28,87, 30,33, 31,61, 32,64, 33,77, 34,24, 36,19, 39,07, 39,33, 39,81, 46,87, 47,52, 48,45, 54,74, 55,49, 56,20, 57,08, 58,50, 66,41, 69,13, 71,48, 79,16, 114,27, 130,30, 130,59, 158,80, 168,55, 169,88, 170,86, 171,06, 171,22, 173,63,174,92, 176,19.

-94CZ 304204 B6

ESI-MS vypočteno pro C₅₅H₈₇N₇O|₃: 1053,64, stanoveno (m/z): 1054,6 (M+H)⁺.

Příklad 71: Syntéza [Val]³-[isobutyryl]⁹-aplidinu (91SVPL1)

DIPCDI

DCM

Postup je stejný jako pro syntézu 9ISHPL1, vychází z SVPL2 (10 mg, 11,2 pmol), požadovaná látka (9 mg, 77%) byla získána jako bílá pevná látka pro přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl8, isokratická ACN/H₂O 85:15, průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 rim, t_R = 15,3 min).

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,82 - 1,01 (m, 24H), 1,14-1,37 (m, 12H), 1,148 - 2,35 (m, 8H), 2,55 (s, 3H), 2,57 - 2,68 (m, 1H), 2,77 - 2,83 (m, 1H), 3,12 (s, 3H), 3,19 - 3,23 (m, 1H), 3,35 3,41 (m, 2H), 3,52 - 3,56 (m, 1H), 3,58 - 3,70 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 4,03 - 4,13 (m, 1H), 4,33 4,35 (m, 1H), 4,44 - 4,48 (m, 1H), 4,55 - 4,66 (m, 2H), 4,70 - 4,83 (m, 1H), 5,35 - 5,39 (m, 2H),

6,82 (d, J = 8,4, 2H), 7,06 (d, J = 8,4, 2H), 7,25 (bs, 2H), 7,37 (d, 10, 5, 1 H), 7,46 (d. J = 8,7, 1 H), 7,60 (d, J = 9,3, 1 H), 8,07 (bs, 1 H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 12,10, 14,44, 16,84, 18,63, 18,95, 19,92, 21,31, 21,61, 23,91, 24,05, 24,86, 25,00, 25,30, 26,06, 27,41, 28,33, 28,93, 30,00, 31,76, 32,65, 33,59, 31,16, 36,21, 39,17, 41,71, 42,19, 47,08, 47,57, 48,88, 54,37, 54,65, 55,50, 56,15, 57,33, 58,70, 59,33, 66,45, 70,92, 71,54, 114,29, 130,28, 130,59, 158,82, 168,41, 170,08, 170,52, 170,69, 171,03, 172,65,

173,80, 175,68, 176,42.

ESI-MS vypočteno pro C₅5H₈₈N₈O]₂: 1052,65, stanoveno (m/z): 1053,8 (M+H).

Příklad 72: Syntéza Z-NV a-Pro-OMe

ftH-Z

H-Pro-OMe.HCI Z-NVa-OH

DCC/HOBt/NMM

DCM / DMF

Postup je stejný jako pro syntézu F2 z ZNVa-OH (261 mg, 1,04 mmol), H-Pro-OMe.HCI (156,6 mg, 0,94 mmol), požadovaná látka (315 mg, 87%) byla získána jako bezbarvá olejovitá kapalina po přečištění na LC-silikagelu (hex-EtOAc, gradient 3:1 až 1:1). Rf= 0,42 (hexEtOAc 1:1).

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,97 (t, J = 6,9, 2H), 1,44 (six. J = 7,5, 2H), 1,53 - 1,65 (m, 1H), 1,68- 1,77 (m, 1H), 1,82-2,09 (m, 3H), 2,17-2,24 (m, 1H). 3,43 -3,80 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 4,45 - 4,55 (m, 2H), 5,07 (s, 2H), 5,51 (d, J = 8,4, 1H), 7,32 - 7.35 (m, 5H).

-95 CZ 304204 B6

Příklad 73: SyntézaNVa-Pro-OH
⁰ NH-Z	LiOH/THF	⁰ NH-Z
MeOH-H₂O
Z-NVa-Pro-OMe		Z-NVa-Pro-OH

K roztoku Z-NVa-Pro-OMe (36 mg, 99 μιηοΐ) ve směsi THF a MeOH (130 μΐ: 130 μΐ) při 0 °C, by) přidán vodný roztok UOH (130 μΙ, 15 % hmotnosti). Po 6 h stálého míchání byla reakční směs rozdělena mezi H₂O (3 ml) a diethyléther (3x2 ml). Organická fáze byla poté extrahována pomocí NaHCOj (3x 2 ml). Smíchané vodné fáze byly neutralizovány (f= 5) vodným roztokem HC1 (0,1 N) a rozděleny mezi Et₂O (3x3 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄), filtrována a zakoncentrována tak, aby vznikla požadovaná látka (36 mg) jako bezbarvá olejovitá kapalina.

'H NMR (300 MHz, CDClj) δ 0,96 (t, J = 6,9, 2H), 1,41 (six, J = 7,4, 2H), 1,53 - 1,65 - 1,77 (m, 2H), 1,82 - 2,10 (m, 3H), 2,17 - 2,24 (m, 1H), 3,523,81 (m, 2H), 4,45 - 4,58 (m, 2H), 5,07 (bs, 2H), 5,81 (d, J = 8,4, 1H), 7,307,35 (m, 5H), 7,41 (bs, 1H).

EST-MS vypočteno pro C|8H₂₄N₂O₅: 347,17, stanoveno (m/z): 349,2 (M+H).

Příklad 74: Syntéza [ZNVa-Pro]⁹-aplidinu (9NVSAPL2)

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL1, vychází z SAPL2 (18 mg, 19 pmol) a Z-NVa-Pro-OH (34 mg, 97 pmol), požadovaná látka (16 mg, 66%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, isokratická ACN/H₂O 85:15 průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, t_R = 29 min).

’H NMR (300 MHz, CDClj) δ 0,84 - 0,96 (m, 27H), 1,12 - 1,85 (m, 19H), 2,00-2,25 (m, 7H), 2,30 - 2,40 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,62 (dd, JI = 10,5, J2 = 17,7, 1H), 2,93 (d, 4,2, 1H), 3,14 (s, 3H), 3,14 - 3,20 (m, 1H), 3,28 - 3,34 (m, 2H), 3,50 - 3,67 (m, 4H), 3,77 - 3,80 (m, 1H), 3,79 (s,3H), 3,82-3,91 (m, 1 H), 4,00-4,17 (m, 2H), 4,27 (dd, JI = 6,3, J2 = 13,2, 1 H), 4,43-4,51 (m, 2H), 4,58 - 4,63 (m, 1H), 4,69 - 4,75 (m, 1H), 4,77 - 4,82 (m, 1H), 5,07 (d, 1H, J = 12,9, 2H), 5,13 (d, J = 12,9, 1H), 5,32 - 5,41 (m, 2H), 6,07 (d, J = 8,7, 11-1), 6,83 (d, J = 8,4, 2H), 7,06 (d, J = 8,4, 2H), 7,17 (d, J = 9,9, 1 H), 7,32 (m, 5H), 7,83 (d, J = 9,0, 1 H).

^L’C NMR (75 MHz, CDClj) δ 11,67, 13,74, 14,56, 15,24, 16,39, 16,85, 18,61, 20,94, 21,26, 23,34, 23,70, 24,76, 24,90, 25,02, 26,00, 27,17, 27,81, 28,54, 31,29, 31,40, 33,30, 33,85, 33,86,

-96CZ 304204 B6

36,19, 38,62, 38,84, 41,31, 46,91, 47,21, 49,38, 49,49, 52,50, 54,96, 55,24, 55,25, 56,50, 57,17, 57,96, 62,53, 66,40, 67,93, 70,64, 81,37114,04, 127,89, 127,77, 128,32, 129,97, 130,29, 136,84, 156,72, 158,55, 168,48, 169,36, 169,58, 170,52, 171,27, 171,71, 172,54, 173,22,205,08.

EST-MS vypočteno pro C₆7Hi₀₀N₈Oi₆: 127,73, stanoveno (m/z): 1273,7 (M+H)\

Příklad 75: Syntéza [Hiv]³-[Z-NVa-Pro]⁹-aplidinu (9NVSHPL2)

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL1, vychází z SHPL2 (10 mg, 11,2 μιτιοί), a Z-NVa-ProOH (20 mg, 56 μηιοί), požadovaná látka (8 mg, 60%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, isokratická ACN/H₂O 85:15 průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, t_R = 26,7 min).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,12-1,80 (m, 22H), 1,82 -2,35 (m, 6H),

2,42 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,96 - 3,38 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 3,48 - 3,72 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 3,88 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,18 (m, 1H), 4,47 (m, 1H), 4,68 (m, 2H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, JI =

5,3, 1 H), 5,08 (m, 2H), 5,28 (m, 1H), 5,42 (m, 1H), 6,10 (d, J = 8,3, 1 H), 6,84 (d, J = 8,3, 2h), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,31 (m, 6H), 7,72 (d, J = 4,3, 1 H), 7,78 (d, J = 8,7, 1 H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃) δ 12,06, 13,88, 14,22, 16,85, 17,76, 18,89, 19,18, 21,12, 21,47, 23,72, 23,98, 25,08, 26,25, 27,57, 28,15, 28,79, 30,32, 31,61, 33,45, 33,72, 34,07, 35,95, 38,92, 39,59, 39,90, 46,87, 47,44, 48,46, 52,76, 55,21, 55,49, 56,77, 57,17, 58,37, 66,41, 66,65, 69,22,

71,14, 79,07, 114,24, 127,87, 128,00, 128,56, 130,25, 130,55, 157,00, 158,79, 168,82, 169,86, 170,36, 170,58, 170,77, 171,30, 171,86, 173,28, 174,94.

ESI-MS vypočteno pro C64H9₆N₈Oi5 1216,7, stanoveno m/z: 1217,5 (M+H)].

Příklad 76: Syntéza [NVa-Pro]⁹-aplidinu (9NVSAPL1)

9NVSAPL2

9NVSAPL1

Odplyněná směs z 9NVSAPL2 (10 mg, 7,8 μιηοΐ) a Pd/C (10%, 5 mg) a IPA:H₂O (0,2 ml:0,l ml), byla nasycena (a udržována při l atm) v atmosféře vodíku za stálého míchání po

-97CZ 304204 B6 dobu 14 h. Poté byla reakční směs filtrována (teflon 0,45 pm) a zakoncentrována ve vakuu tak, aby byla získána požadovaná látka (8,8 mg) jako bílá pevná látka.

'HNMR (300 MHz, CDCfl) δ 0,85 - 0,95 (m, 27H), 1,18 ~ 1,51 (m, 18H), 1,50 -2,45 (m, 7H), 2,59 - 2,83 (m, 1H), 2,57 (s, 3H), 2,57 - 2,80 (m, 3H), 2,81 - 2,95 (m, 1H), 3,14 (s, 3H), 3,15 3,40 (m, 3H), 3,52-3,79 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 4,45 - 4,52 (m, 1 H), 4,61 -4,65 (m, 1H), 4,704,85 (m, 2H), 5,17 (d, J = 3,3, 1H), 5,36 - 5,39 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,1, 2H), 7,86 (d, J = 8,7, 2H), 7,19 (d, J = 10,2, 1H), 7,82 (d, J = 9,0 1H), 7,80 - 7,85 (m, 1 H).

ESI-MS vypočteno pro C5994_oN₈Oi4: 1 138,69, stanoveno (m/z): 1139,7 [(M+H)]*.

Příklad 77: Syntéza [HiV]³-[NVa-Pro]⁹-aplidinu (9NVSHPL1)

Postup je stejný jako pro syntézu 9NVSAPL1, vychází z 9NVSHPL2 (10 mg, 8,2 pmol), požadovaná látka (8 mg) byla získána jako bílá pevná látka.

'HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,82 - 1,10 (m, 30H), 1,12- 1,85 (m, 22H), 1,92 - 2,35 (m, 6H),

2,42 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,10 - 3,45 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 3,50 - 3,70 (m, 5H), 3,78 (s, 3H),

3,82 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 5,02 (d, J = 5,3, 1H), 5,32 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,38 (d, J = 8,7, 1H), 7,60 (d, J = 4,3, 1H), 7,80 (d, J = 9,3, 1H).

‘’C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 14,13, 14,30, 16,80, 17,81, 18,72, 19,15, 21,09, 21,55, 23,73, 23,96, 25,07, 26,16, 27,55, 28,17, 28,72, 29,91, 30,33, 31,52, 33,80, 34,17, 36,00, 38,94, 39,51, 39,84, 46,88, 47,51, 48,45, 55,01, 55,49, 56,91, 57,15, 58,10, 66,37, 69,17, 71,10, 79,12, 114,29, 130,21, 130,57, 158,82, 163,66, 169,91, 169,86, 170,38, 170,75, 170,82, 171,30, 173,22, 174,79.

ESI-MS vypočteno pro C₅₆H9oN₈0₁₃ 1082,66, stanoveno m/z: 1083,7 (M+H)⁺.

Příklad 78: Syntéza [HivV]³-[L-Lac(OTBDMS)]⁹-aplidinu [9LSHPL2(L)].

9LSHPL2(L)

SHPL2

-98CZ 304204 B6

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL1, vychází z SHPL2 (10 mg, ll,2pmol) a (L)Lac(OTBDMS)-Pro-OH (17 mg, 56 μιηοΐ), požadovaná látka (9 mg, 68%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl8, gradient ACN/H?O 85:15 až 100:0 v 10 min. (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, t_R = 30,1 min).

^lH NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,08 (s, 3H), 0,10 (s, 3H), 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,11 - 1,72 (m, 18H), 1,75-2,51 (m, 6H), 2,41 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,00 - 3,40 (m, 5H), 3,11 (s,3H), 3,53 - 3,82 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,02 (m, 1H). 4,27 (m, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,63 (m, 2H), 4,87 (m, 1H), 5,01 (d, J = 4,8, 1H), 5,27 (m, 2H), 6.84 (d, J = 8,7, 2H), 7,07 (d, J = 8,7, 2H), 7,29 (d, J = 9,7, 1H), 7,63 (d, J = 5,8, 1H), 7,88 (d, J = 9.7, 1H).

^I3C NMR (75 MHz CDC1₃) δ -4,26, -4.12. 12,04, 14,40, 16,91, 17,97, 19,14, 20,60, 21,11, 21,66, 23,82, 24,11, 24,96, 25,08, 26,11, 26,37, 27,53, 28,18, 28,37, 30,33, 31,69, 33,75, 34,19, 36,23, 39,00, 39,36, 39,81, 46,87, 47,64, 48,45, 54,91, 55,37, 55,48, 56,81, 57,08, 58,37, 66,38,

69,14, 69,89, 71,42, 79,19, 82,66, 114,23, 130,36, 130,59, 157,77, 168,43, 469,86, 170,72, 171,01, 171,21, 172,03, 173,62, 174,91.

ESI-MS vypočteno pro C₆oH₉9N₇Oi₄Si: 1169,7, stanoveno m/z: 1170,9 (M+H) .

Příklad 79: Syntéza [Hiv]³-[D-Lac(OTBDMS)]⁹-aplidinu [9LSHPL2(D)]_

SHPL2

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL1, vychází z SHPL2 (10 mg, 11,2 pmol) a (D)Lac(OTBDMS)-Pro-OH (17 mg, 56 μιτιοί), požadovaná látka (9 mg, 68%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl8, gradient ACN/H₂O 85:15 až 100:0 v 10 min (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, t_R = 30,4 min).

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,03 (m, 3H), 0,06 (m, 3H), 0,87 (s, 9H), 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,11 - 1,72 (m, 18H), 1,75 -2,30 (m, 6H), 2,41 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,00 - 3,40 (m, 5H), 3,06 (s, 3H), 3,56 (m, 1H), 3,65 (m, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,17 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,39 (m, 1 H), 4,61 (m, 2H), 4,86 (m, 1 H), 5,00 (d, J = 4,8, 1H), 5,25 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,29 (d, J = 9, 7, 1H), 7,74 (d, J = 5,3, 1H), 7,87 (d, J = 9,7, 1H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃) 8 -4,87, -4,84, 12,04, 14,38, 16,89, 17,94, 19,14, 20,24, 21,08, 21,60, 23,85, 24,12, 24,90, 25,06, 25,13, 26,01, 26,53, 27,53, 27,83, 28,20, 30,33, 31,51, 33,76, 34,20, 36,16, 38,99, 39,35, 39,82, 46,78, 47,02, 48,46, 54,79, 55,42, 55,48, 57,08, 57,18, 58,28, 66,39, 69,11, 71,43, 72,61, 79,18, 114,25, 130,29, 130,59. 158,79, 168,45, 169,86, 170,77,

170,81, 170,97, 171,20, 172,53, 173,67, 174,84.

ESI-MS vypočteno pro C6oH₉₉N₇Oi₄Si: 1169,7, stanoveno m/z: 1170,8 (M+H)}.

-99CZ 304204 B6

Příklad 80: Syntéza [Val]³-[L-Lac(OTBDMS)]⁹-aplidinu (9LSVPL2(L)].

SVPL2

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL1, vychází z SVPL2 (10 mg, 11,2 pmol) a (L)Lac(OTBDMS)-Pro-OH (17 mg, 56 pmol), požadovaná látka (9 mg, 68%) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 Cl8, isokratická ACN/H₂O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, t_R = 17,8 min).

'HNMR (300 MHz, CDCl·,) δ 0,14 (s, 6H), 0,71 - 1,06 (m, 27H), 1,101,42 (m, 1 OH), 1,43-1,84 (m, 8H), 1,85 - 2,40 (m, 1 IH), 2,57 (s, 3H), 2,80 (d, J = 14,7, 1 H), 3,15 (s, 3H), 3,15 - 3,23 (m, 1 H), 3,33 - 3,42 (m, 2H), 3,54 (dd, JI = 4,2, J2 = 10,8, 1 H), 3,58 - 3,69 (m, 3 H), 3,79 (s,

3H), 3,88 - 3,90 (m, 1 H), 4,05 - 4,12 (bt, 1 H), 4,32 (bs, 1 H), 4,43 - 4,68 (m, 4H), 4,77 (t,

J = 10,5, IH), 5,31 - 5,35 (m, 2H), 6,83 (d, J = 8,4, 2H), 7,08 (d, J = 8,7, 2H), 7,39 (d, J = 9,9,

1H), 7,45 (d, J = 9,0, 1H), 7,60 (d, J = 10,5, 1H), 7,83 (d, J = 4,5, 1H).

^I3C NMR (75 MHz, CDCE) δ -4,67, -4.49, 11,84, 14,13, 16,67, 18,19, 18,41, 19,68, 20,48,

21,15, 21,40, 23,61, 23,92, 24,72, 24,80, 25,06, 26,24, 27,17, 28,04, 28,13, 29,78, 31,57, 33,33,

33,81, 35,99, 38,84, 41,56, 41,95, 46,83, 47,52, 46,68, 54,09, 54,64, 55,26, 56,63, 57,13, 58,36, 59,12, 66,20, 70,10, 70,57, 71,27, 77,20, 114,01, 130,13, 130,36, 158,55, 168,09, 169,76, 170,07, 170,48, 170,77, 172,21, 172,33, 173,58, 175,45.

EST-MS vypočteno pro 0₅₉94οΝ₈Οΐ4: 1 168,72, stanoveno (m/z): 1169,8 (M+H)⁺.

Příklad 81: Syntéza [Hiv]³-[L-Lac]⁹-aplidinu [9LSHPL1(L)]: Tamandarin A.

9LSHPL2(L) 9LSHPL1(L)

K roztoku 9LSHPL2(L) (16 mg, 14 pmol) v THF (500 pml, bezvodý) při 0 °C byla reakční směs zakoncentrována ve vakuu a surový produkt byl přečištěn bleskovou LC (silikagel, gradient DCM:MeOH 1 až 5 %), tak, aby byla získána požadovaná látka (813 mg, 88 %) jako bílá pevná látka.

Experimentální podmínky byly publikovány: Fenical, W. et al., J. Org. Chem. 2000, 65, 782792.

- 100CZ 304204 B6 'H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 0,82 - 0,96 (m, 18H), 1,02 (d, J = 3,4, 3H), 1,04 (d, J = 3,4, 3H), 1,14- 2,28 (m, 14H), 1,24 (s, 3H), 1,34 (d, J = 6,8, 3H), 1,43 (d, J = 6,8, 3H), 2,44 (dd, J1 =7,8, J2= 17,1, 1H), 2,58 (s,3H), 3,00 (bs, 1H), 3,10 (s, 3H), 3,14 - 3,31 (m, 2H), 3,37 - 3,43 (m, 2H), 3,56 - 3,72 (m, 5H), 3,79 (s, 3H), 3,90 (t, J = 7,8, 1H), 4,02 (dt, JI = 3,4, J2 = 9,8, 1H), 4,25 (d, J = 3,9, 1H), 4,30 (t, J = 6,8, 1H), 4,37 (dd, JI = 7,3, J2 = 8,3, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,71 (t, J = 7,4, 1H), 4,87 (t, J = 11,2, 1 H), 5,03 (d, J = 4,9, 1 H), 5,29 (dd, JI = 3,4, J2 = 11,7, 1 H), 5,42 (m, 1 H), 6,83 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,34 (d, J = 9,8, 1H), 7,48 (d, J = 5,4, 1H), 7,76 (d, J = 9,8, 1H).

ESI-MS vypočteno pro C₅₄H₈₅N₇Oi₄: 1055,6, stanoveno: 1056,7 (M+H)⁺.

Příklad 82: Syntéza [Hiv]³-[D-Lac]⁹-aplidinu [9LSHPL1(D)|.

9LDSHPL2 9LSHPL1(D)

Postup je stejný jako pro syntézu 9LSHPLl(L), vychází z 9LSHPL2(D) (20 mg, 17 pmol) a TBAF (50 pl, ÍM v THF), což dá vzniknout požadovanému produktu (14 mg, 78 %) jako bílá pevná látka, po přečištění bleskovou LC (silikagel, grád. DCM:MeOH l až 5 %).

'HNMR (300 MHz, CDCl₃) δ 0,78 - l,08 (m, 18H), 1,02 (d. J = 3,9, 3H), 1,04 (d, J = 3,4, 3H), 1,10 - 2,36 (m, 14H), 1,20 (d, J = 6,3, 3H), 1,34 (d, J = 6,3, 3H), 1,37 (d, J = 6,3, 3H), 2,38 2,50 (dd, JI = 7,8, J2 = 17,5, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,10 (s, 3H), 3,13 - 3,20 (m, 1H), 3,22 - 3,28 (m, 1H), 3,37 - 3,42 (dd, JI =3,9, J2 = 4,3, 1H), 4,61 -4,68 (m, 3H), 3,69 - 3,76 (m, 3H), 3,77 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (t, J = 7,8, 1H), 3,97 - 4,07 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,41 (q, J = 6,3, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,71 (m, 1H), 4,86 (t, J= 10,7, 1H), 5,01 (d, J = 4,8, 1H), 5,21 -5,37(m,2H),

6,83 (d, J = 8,3, 2H), 7,06 (d, J = 8,3, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,77 (d, J = 9,2, 1H).

ESI-MS vypočteno pro C₅4H₈₅N₇Oi₄: 10,55,62, stanoveno: 1056,6 (M+H)⁺.

Příklad 83: Syntéza [VaI]³-[L-Lac]⁹-aplidinu [9LSVPL1(L)].

9LSVPL2 9LSVPL1(L)

Postup je stejný jako pro syntézu 9LSHPL1, vychází z 9LSVPL2 (5 mg, 4,3 pmol), což dá vzniknout požadovanému produktu (4 mg, 88 %) jako bílá pevná látka, po přečištění bleskovou LC (silikagel, gradient DCM:MeOH l až 5 %).

- ΙΟΙ CZ 304204 B6 'HNMR (300 MHz, CDClfi δ 0,82 - 1,02 (m, 18H), 1,16 - 1,42 (m, 4H), 1,32 (d, J = 3,0, 3H), 1,40 (d, J = 6,6, 3H), 1,56 - 1,83 (m, 8H), 1,95 - 2,34 (m, 11H), 2,58 (s, 3H), 2,84 (d, J = 14,7, IH), 3,15 (s, 3H), 3,15 - 3,23 (m, M), 3,36 - 3,42 (m, IH), 3,55 (dd, Jl = 9,0, J2 = 10,5, 2H), 3,64-3,66 (m, 3 H), 3,95 (dd, Jl = 3,3, J2 = 9,9, 1H),4,O8 (td, Jl = 7,5, J2 = 17,1, IH), 4,32 (bs, M), 4,41 (dd, Jl = 6,6, J2 = 9,9, IH), 4,48 (dd, Jl = 5,1, J2 = 10,5, IH), 4,61 (dd, Jl = 6,0, J2 = 6,6, IH), 4,69 - 4,80 (m, 2H), 5,29 - 5,35 (m, IH), 5,57 (m, IH), 6,84 (d, J = 8,1,2H), 7,08 (d, J = 8,7, 2H), 7,37 (d, J = 3,9, IH), 7,40 (d, J = 5,4, M), 7,60 (d, J = 10,8, 1 H), 7,72 (d, J = 3,9, IH).

ESI-MS vypočteno pro C₅₄H₈₆N₈O|₃: 1054,63, stanoveno: 1055,8 (M+H)⁺.

Syntéza jednotky spiro[4,4]nonanu:

Příklad 84: Syntéza N-[(2R)-2-allyl-N-(tert-butoxykarbonyl)prolyl]D-leucinu (9)

i

Boc

D-Leu-OBn.HCi

HOAt/DCC/NMM

K vychlazenému (0 °C) roztoku č.8 (1,53 g, 6 mmol) v bezvodém DCM (33 ml) v atmosféře argonu, byl přidán: HOat (980 mg, 7,2 mmol), D-Leu-OBn.pTsOH (2,65 g, 12 mmol), NMM (1,21 g, 12 mmol) a DCC (1,48 g, 7,2 mmol). Reakční směs byla míchána 2 h při 0 °C a poté 12 h při pokojové teplotě, byl přidán další D-Leu-OBn.pTsOH (0,66 g, 3 mmol) a NMM (0,30 g, 3 mmol) a reakční směs byla míchána 3 h. Reakční směs byla filtrována a rozpouštědlo bylo zakoncentrováno ve vakuu. Získaná směs byla rozpuštěna v EtOAc (30 ml) a promyta postupně NaHCO₃ (2x25 ml, nasycený roztok), kyselina citrónová (2x25 ml, 10 %) a roztokem soli (25 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO₄) a zakoncentrována za sníženého tlaku. Získaná směs byla přečištěna LC-silikagelem (hex-EtOAc, 6:1) tak, aby vznikl požadovaný produkt č. 9 (2,63 g, 96 %) jako bezbarvá olejovitá kapalina. [a]_D ^{20 =} 12,4° (c 1, MeOH). HPLC (kolona pBondapack Cl8 (Waters), 10 m, 3,9x300 mm, průtok: 1 ml/min, při 214 nm, promývací směs CAN/0,05% TFA (40:60)] t_R = 9,08 min).

'HNMR (300 MHz, DMSO-d₆) S 0,86 (m, 6H), 1,37 (s, 9H), 1,551,72 (m, 5H), 2,00 (m, 2H), 2,64 (m, IH), 2,86 (m, IH), 3,15 (m, IH), 3,55 (m, 1H), 4,41 (m, IH), 5,05 - 5,11 (m, 4H), 5,63 -5,72 (m, IH), 7,28 - 7,35 (m, 5H).

ⁱ³C-NMR (75 MHz, aceton-d₆) δ 21,6, 22,8, 24,6, 28,3, 34,7, 38,2, 41,3, 49,38, 51,0, 66,9, 69,7, 80,1, 119,1, 128,3, 132,7, 153,9, 172,8.

Citace pro syntézu produktu č.8: a) Seebach, D. et al. J. Am. Chem. Soc. 1983, 105, 5390-5398, b) Genin, M. J. et al., J. Org. Chem. 1993, 58, 23342337.

- 102CZ 304204 B6

Příklad 85: Syntéza (5/<8/?5j-l-(Ztv7-butoxykarbonyl|-7-[(l R)-l-benzyloxykarbonyl-3methylbutyl]-8-hydroxy-6-oxo-l ,7diazospiro[4,4]nonan (10)

OsO₄ / NalO₄

MeOH/H₂O (2/1)

CO₂Bn

K roztoku č. 9 (l,56, 3,42 mmol) v MeOH/H₂O (2:1, 108 ml) v atmosféře argonu, byl přidán roztok OsO₄ (2,5% hmotnosti, 2,9 ml) v tert-butanolu. Míchání pokračovalo dalších 10 min a poté byl přidán NaIO₄ (2,195 g, 10,3 mmol). Po 24 h míchání byla reakční směs naředěna H₂O (100 ml) a extrahována pomocí EtOAc (3x50 ml). Smíchané organické fáze byly promyty roztokem soli (50 ml), vysušeny (Na₂SO₄) a zakoncentrovány za sníženého tlaku. Získaná směs byla přečištěna LC silikagelem (hex-EtOAc, gradient 80:20 až 0:100 %) tak, aby vznikly požadované diastereomery s 10a a 10b (směs 1,17 g, 76%) jako bílá pevná látka.

10a: HPLC (kolona Novapack C,₈ (Waters), 3,9 x 150 mm, 00 = 1 ml / min, 0 = 214 nm, promývací roztok: CH₃CN / 0,05 % TFA, (40/60)) t_R = 14,45 min. m.p.: 140 až 141 °C. [a]_D ²⁰-4° (c 1, MeOH).

¹ H-NMR (300 MHz, aceton-d₆) δ 0,90 (m, 6H), 1,29 (s, 9H), 1,642,30 (m, 9H); 2,68 (dd, IH, JI = 6, J2 = 13, IH), 3,37 (m, 2H), 4,51 (dd, IH), 5,13 (d, J = 15, 2H), 5,79 (t, J = 5, 2H), 7,40 (m, 5H).

ⁱ³C-NMR (75 MHz, aceton-d₆) δ 21,8, 23,8, 24,1, 24,9, 28,5, 39,6, 40,8, 41,5, 48,5, 66,8, 79,4,

79.8, 81,2, 129,1, 129,3, 128,6, 171,7, 172,0,

ESI-MS: vypočteno pro C₂₅H₃₆N₂O₆: 460,26, stanoveno m/z: 483,4 (M+Na).

10b: HPLC (kolona Novapack C|_g (Waters), 3,9x150 mm, 00 = 1 ml / min, 0 = 124 nm, promývací roztok: CH₃CN / 0,05 % TFA, (40/60)) t_R = 18,75 min. M.p.: 134 až 135 °C. [cc]_D ²⁰ +26 (c 1,2, MeOH).

'H-NMR (300 MHz, aceton-d₆) δ 0,90 (6H, m), 1,40 (9H, s). 1,50 - 2,60 (9H, m), 3,40 (2H, m), 4,20 - 5,40 (5H, m), 7,40 (5H, m).

¹³C-NMR (75 MHz, aceton-d₆) δ 021,3, 23,2, 24,1,24,9, 28,3, 38,9, 40,2, 42,5, 47,9, 53,2,

66.8, 77,5, 79,4, 80,6, 129,1, 171,2, 174,1.

ESI-MS vypočteno pro C^K^^CE: 460,26, stanoveno m/z: 483,5 (M+Na).

- 103 CZ 304204 B6

Příklad 86: Syntéza (5R,)-7-[(lR)-l-benzyloxykarbonyl-3-methylbutyl]-6-oxo-l,7-diazospiro-[4,4]nonanu jako trifluoroctové soli (11)

K roztoku č. 10 (430 mg, 0,93 mmol) v TFA (10 ml), byl přidán NaBH₄ (106 mg, 2,8 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 2 h a poté byla zakoncentrována za sníženého tlaku. Získaná směs byla rozdělena mezi H₂O (5 ml) a DCM (20 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄) a zakoncentrována ve vakuu tak, aby vznikl požadovaný produkt č. 11 jako oranžová olejovitá kapalina (318 mg). [α]²⁰ο +15 (c 1, MeOH).

'H-NMR (300 MHz, aceton-d₆) δ 0,91 (m, 6H), 1,50 (m, IH), 1,66 - 1,94 (m, 2H), 2,11 - 2,72 (m, 6H), 3,48 - 3,72 (m, 4H), 4,74 (dd, J1 = 6, J2 = 15, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,37 (m, 5H).

¹³C-NMR (75 MHz, aceton-d₆) δ 21,2, 23,2, 23,9, 25,5, 30,2, 34,6, 38,0, 42,2, 46,62, 53,9, 67,6. 69,6, 129,3, 161,1, 161,6, 170,9, 172,6

ESI-MS vypočteno pro C₂₀H₂₈N₂O₃: 344,21, stanoveno m/z: 345,3 (M+H)⁺.

Příklad 87: Syntéza (SR)-l-(/e/V-butoxykarbon\l)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxol,7-diazospiro[4,4]nonanu (12)

K roztoku č. 11 (150 mg, 0,44 mmol) v ACN (5 ml), byl přidán za stálého míchání tetramethylammoniumhydroxylpentahydrát (158 mg, 0,87 mmol) a Boc₂O (144 mg, 0,66 mmol). Po 6 h byl přidán další TMAH.5 H₂O (158 mg) a Boc₂O (192 mg). Reakční směs byla míchána po dobu 2 dní a poté byla rozdělena mezi H₂O (10 ml) a DCM (25 ml). Vodné fáze byly lyofilyzovány a přečištěny na LC-silikagelu (DCM-MeOH, gradient 92:8 až 60:40) tak, aby byl získán produkt č. 12 (100 mg, 64%) jako bílá pevná látka.

Příklad 88: Syntéza (SR)-l-(isobutyryI)-7-[(l R)-l-benzyloxykarbonyl-3-methyIbutyl]-6oxo-1,7-diazospiro [4,4]nonanu (13)

TFA

CO₂Bn (CH₃)₂CHCOCl tea/ch₂ci₂

- 104CZ 304204 B6

K roztoku č. 11 (169 mg, 0,49 mmol) v bezvodém DCM (10 ml) při 0 °C v atmosféře argonu, byl přidán TEA (199 mg, 1,96 mmol), DMAP (6 mg, 0,049 mmol) a po kapkách isobutyryl chloride (104 mg, 0,98 mmol). Reakční směs byla vytemperována na pokojovou teplotu a míchána 24 h. Surová směs byla rozdělena mezi H₂O (10 ml) a DCM (10 ml). Organická fáze byla promyta roztokem soli (10 ml) vysušena (Na₂SO₄) a zakoncentrována ve vakuu. Čistý produkt č. 13 (150 mg, 74 %) byla získána jako bílá pevná látka, po přečištění pomocí LC-silikagelu (hexEtOAc, gradient 60:40 až 0:100).

HPLC [kolona Novapack C|₈ (Waters), 3,9 x 150 mm, 00 = lml / min, 0=214 nm, promývací roztok: CH₃CN / 0,05 % TFA, (50/50)] t_R = 4,50 min. M.p.: 87 °C. [a]²⁰D + 9,6 (c 1,4, MeOH).

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,90 (2d, J = 7, 6H), 1,09-1,12 (2d, 6H), 1,37 (septuplet, J = 6, IH), 1,61-2,10 (m, 7H), 2,64 (m, 2H), 3,14 (dd, JI =9, J2 = 17, IH), 3,64 (m, 3H), 4,85 (dd, J1 = 5, J2 = 10, 1H), 5,14 (d, J = 6, 2H), 7,32 (m, 5H).

’³C NMR (75 MHz, CDCI₃) δ 18,6, 18,7, 021,2, 23,1, 24,0, 24,8, 29,5, 32,5, 35,7, 37,6, 40,5,

47,8, 52,7, 66,7, 76,3, 170,8, 174,3, 174,9.

ES1-MS vypočteno pro C₂₄H₃₄N₂O₄: 414,25, stanoveno m/z: 415,4 (M+H)⁺.

Příklad 89: Syntéza (5R)-l-(pyruvyl)-7-[(lR)-l-benzyloxykarbonyl-3-methylbutyl]-6-oxo1,7-diazospiro [4,4]nonanu (14)

Pyruvil chlorid byl připraven podle techniky popsané v literatuře, Pansare, S. V. Gnana R. R. „Asymmetric Allyation a reduction on an Efedrine-Derived Template: Stereoselective Synthedis of a-Hydroxy Acids a Derivatives“, J. Org. Chem. 1998, 63, 4120-4124. K pyruvátu (115 mg, 1,31 mmol) byl přidán α,α-d ich loromethy Imethy léter (188 mg, 1,57 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 20 min a vzniklý roztok byl zahřát na 50 až 55 °C a poté míchán dalších 30 min. Reakční směs byla ochlazena na pokojovou teplotu a byl přidán DCM (3 ml).

K roztoku č. 11 (150 mg, 0,33 mmol) v bezvodém DCM (4 ml) při 0 °C v atmosféře argonu, byl přidán TEA (200 mg, 1,98 mmol) a DMAP (4 mg, 0,033 mmol) a čerstvě připravený roztok pyruvil chloridu při 0 °C. Reakční směs byla vytemperována na pokojovou teplotu a míchána 6 hodin. Surová směs byla promyta postupně kyselinou citrónovou (5 ml, 10 %), vodným roztokem NaHCO₃ (nasycený roztok, 5 ml) a roztokem soli (5 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄) a zakoncentrována. Čistý produkt č. 14 (77 mg, 56%) jako olejovitá kapalina byla získán po přečištění na LC-silikagelu (hex-EtOAc, 1:3).

HPLC (kolona Novapack 08 (Waters), 3,9 x 150 mm, 00=1 ml / min, 0=214 nm, promývací roztok: ACN / 0,05 % TFA, (50/50)) t_R = 5,870 a 6,72 min.

'H-NMR (200 MHz, CDC1₃) δ 0,92 a 0,95 (2d, J = 6, 6H), 1,42 (m, IH), 1,61 - 2,39 (m, 7H), 2,44 (s, 3H), 2,77 (m, IH), 3,22 (m, IH), 3,563,78 (m, 2H), 3.92 (m, IH), 4,67 a 4,85 (dd, J, = 6, J2 = 10) 1H), 5,21 (s, 2H), 7,34 (m, 5H).

- 105 CZ 304204 B6

66,8, 68,6, 135,0, 166,0, 170,8, 173,0, 198,0.

ESI-MS vypočteno pro C23H30N2O5: 414,22, stanoveno m/z: 415,4 (M+H)⁺.

Příklad 90: Syntéza (5R)-l-(2-methylakryloyl)-7-[(lR)-l-benzyloxykarbonyl-3-methylbutyl]-6-oxo-l ,7-diazospiro[4,4]nonanu (15)

N^CO₂Bn CH₂=C(CH₃)COCI

H < .TFA

TEA / DMAP /DCM °^:

Postup je stejný jako pro syntézu č. 13, vychází z č.l l (200 mg, 0,43 mmol) a methyl akry loyl chloridu (89 mg, 0,86 mmol), požadovaná látka (70 mg, 50 %) byla získána jako bezbarvá olejovitá kapalina, po přečištění na LC (silikagel ge, hex-EtOAc, 2:l). HPLC (kolona Novapack C|₈ (Waters), 3,9 x 150 mm, 00=1 ml / min, 0=214 nm, promývací roztok: ACN / 0,05 % TFA, (25/75)] R, = 6,38 min.

H-NMR (200 MHz, CDCI3) δ 0,91 (t, J = 6, 6H), 1,44 (m, 1H), 1,64 - 1,93 (m, 5H), 1,93 (s, 3H), 1,96 - 2,12 (m, 2H), 2,78 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 3,56 - 3,68 (m, 3H), 4,80 a 4,77 (2d, J = 10, 1H), 5,16 (s, 2H), 5,19 (d, J = 9, 2H), 7,32 (m, 5H).

ESI-MS vypočteno pro C24H32N2O4: 412,24, stanoveno: 413,3 (M+H)*.

Příklad 91: Syntéza (5R)-l-(isobutyryl)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxo-l,7-diazospiro[4,4]nonanu (16)

Odplyněný roztok č. 13 (134 mg, 0,32 mmol) obsahující 10 % Pd/C (27 mg) byl hydrogenován v atmosféře 16 psi po dobu 24 hodin. Reakční směs byla fdtrována skrz celitové sítko a poté byl fdtrovaný roztok zakoncentrován za sníženého tlaku tak, aby vznikl požadovaný produkt č. 16 (100 mg, 95 %) jako bezbarvá olejovitá kapalina.

M.p. 68 až 69 °C. [a]²⁰D-2° (c 1,1, MeOH).

H-NMR [300 MHz, aceton-d₆) δ 0,87 - 0,91 (2d, J = 7, 6H), 1,091,12 (2d, 6H), 1,46 (m, 1H),

1,70 (m, 2H), 1,90-2,10 (m, 5H), 2,49 (m, 1H), 2,70 (m, 1 H), 3,30 (m, 1 H), 3,49 (dt, JI = 8, J2= 10, 1 H), 3,61 -3,75 (m, 2H), 4,71 (dd, J, = 5, 11, 1H).

- 106CZ 304204 B6 ^l3C-NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 016,4, 16,60021,1, 23,0, 24,3, 25,0, 30,8, 32,6, 36,6, 36,9, 40,6, 48,0, 53,4, 67,5, 171,8, 174,2, 176,2.

ES-MS vypočteno pro C|7H₂₈N₂O₄: 324,20, stanoveno: 323,3 (M-l)⁺.

Příklad 92: Syntéza (SR)-l-(pyruvyl)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxo-l,7-diazospiro[4,4]nonanu (17)

Odplyněný roztok č. 13 (79 mg, 0,26 mmol) v methanolu (20 ml) obsahující Pd-C (10 %, 22 mg) byl hydrogenován za atmosférického tlaku po dobu 45 min. Filtrovaný roztok byl zakoncentrován za sníženého tlaku tak, aby vznikl požadovaný produkt č. 17 (79 mg, 95 %) jako bílá pevná látka. HPLC (kolona Novapack C|₈ (Waters), 3,9 x 150 mm, D 0 = 1 ml/min, 0=214 nm, promývací roztok: ACN / 0,05 % TFA, (20/80)] Rt = 13,14 min.

'H-NMR (200 MHz, CDC1₃) δ 0,93 (m, 6H), 1,43 (m, 1H). 1,71 - 2,22 (m, 7H), 2,34 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 2,74 (m, 1 H), 3,31 (m, 1H), 3,74 (m, 2H), 3,92 (m, 1H), 4,80 (dd, Jl = 6, J2 = 10, 1H), 7,07 (bs, 1H).

^I3C-MNR (200 MHz, CDC1₃) δ 21,3, 23,2, 24,7, 25,1, 27,1, 29,9, 36,0, 37,0, 41,0, 49,3, 53,6, 69,1, 162, 172,7, 173,7, 197,5.

ESI-MS vypočteno pro C₂3H₃₀N₂O₅: 324,17, stanoveno m/z: 325,1 (M+H)⁺.

Příklad 93: Syntéza (5R)-l-(2-methylakryloyl)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxol,7-diazospiro[4,4]nonanu (18)

K roztoku č. 15 (65 mg, 0,16 mmol) v methanolu (2,5 ml) byl přidán vodný roztok NaOH (1,6 ml, 1 N) a H₂O (1,6 ml) a reakční směs byla míchána při pokojové teplotě 1 h. Vzniklá směs byla zakoncentrována za sníženého tlaku a získaná směs byla rozdělena mezi H₂O (20 ml) a DCM (20 ml). Vodná fáze byla okyselena až na f=2 vodným roztokem HCI (10 ml, 0,1 N) a extrahována pomocí DCM (3x20 ml). Smíchané organické fáze byly promyty roztokem soli (25 ml), vysušeny (Na₂SO₄) zakoncentrovány za sníženého tlaku tak, aby vznikl požadovaný produkt č. 18 (44 mg, 85%) jako bílá pevná látka. HPLC (kolona Novapack Cis (Waters), 3,9 x 150 mm, 00 = 1 ml/min, 0=214 nm, promývací roztok: ACN / 0,05 % TFA, (25/75)] Rt = 6,38 min.

- 107CZ 304204 B6 ’Η-NMR (300 MHz, CDCh) δ 0,86 (d, J = 5, 3H), 0,89 (d, J = 5, 3H), 1,42 (m, 1H), 1,55-2,25 (m, 8H), 2,56 (m, 1H), 3,19 - 3,44 (m, 2H), 3,57 - 3,67 (m, 2H), 4,78 (d, J = 11, 1H), 4,82 (d, J = 11, 1H), 5,18(d,J = 6, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI.0 δ 19,5, 21,2, 23,1, 24,2, 25,1, 30,9, 36,51, 37,6, 40,9, 50,5, 53,7^ 67,5, 117,5, 140,6, 170,8, 174,2

ESI-MS vypočteno pro C17H26N2O4: 322,19, stanoveno: 323,2 (M+H) .

Příklad 94: Syntéza [(5R)-l-(tert-buthoxykarbonyl)-7-[(l R)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6oxo-1,7-diazo-spiro[4,4]7,9-aplidinu (9SBSAPL1)

HATU/HOA1

NMM/DCM

9SBSAPL1

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SAPL4 (lOmg, 13 pmol), č. 12 (5 mg, 14 pmol), vychází z č.l 1 (200 mg, 0,43 mmol) a methylakryloyl chloridu (89 mg, 0,86 mmol), HATU (12,4 mg), HOAt (4,5 mg), NMM (3,3 01), DCM (140 01) a DMF (70 01) požadovaná látka (11 mg, 73 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C]₈, isokratická ACN/H₂O 85:15 (průtok: 7 ml/miri, 250x21 mm, při 270 nm t_R = 30 min).

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,85 - 0,97 (m, 24 H), 1,19- 1,34 (m, 18 H), 1,48 (s, 9H), 1,502,20 (m, 6 H), 2,32 - 2,36 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,582,72 (m, 2H), 2,97 - 3,08 (m, 1H), 3,10 3,22 (m, 3H), 3,34 (dd, 1H, J = 3,9, 13,8), 3,46 - 3,79 (m, 6H), 3,79 (s, 3 H), 4,03 - 4,12 (m, 2H), 4,28 (dd, 1H, J = 6,6, 13,2), 4,57 - 4,63 (m, 2H), 4,79 - 4,88 (m, 2H), 5,15 (d, 1H, J = 3,3), 5,21 - 5,23 (m, 1H), 6,84 (d, 2 H, J = 8,4), 7,07 (d, 2H, J = 8,7), 7,28 (d, 1H, J = 10,8), 7,79 (d, 1H, J = 6,6), 7,82 (d, 1H, J = 9,9).

’³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 15,21, 15,43, 16,79, 17,23, 18,69, 18,77, 21,24, 23,67, 23,95, 24,10, 24,90, 25,10, 25,38, 27,04, 28,23, 28,75, 29,93, 31,61, 34,50, 33,88, 34,16, 36,20, 36,57, 38,76, 39,09, 39,78, 41,29, 47,27, 47,76, 49,60, 49,96, 52,66, 55,50, 56,26, 57,38, 58,18, 66,74, 66,86, 68,34, 70,53, 80,75, 81,93, 114,33, 130,23, 130,54, 168,08, 169,83, 170,18, 170,80, 171,43, 172,55, 175,04,205,04.

ESI-MS vypočteno pro C6oH₉₃N₇0|₅ 1151,7, stanoveno m/z: 1152,4 (M+H) .

- 108CZ 304204 B6

Příklad 95: Syntéza [Hiv]3-[(SR)-l-(tert-butoxykarbonyI)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxo-l,7-diazospiro[4,4]nonan]-7-9-aplidinu (9SBSHPL1)

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází zSHPL4 (10 mg, 13 mmol), č. 12 (5 mg, 14 mmol), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 01), DCM (150 01) a DMF (50 01), požadovaná látka (10 mg, 70 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C|g, isokratická ACN/H₂O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm t_R = 28,1 min).

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,80 - 1,07 (m, 24H), 1,08 - 1,67 (m, 12H), 1,48 (s, 9H), 1,68 2,30 (m, 1 OH), 2,41 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,68 (m, 1 H), 2,94 (m, 1 H), 3,07 - 3,40 (m, 4H), 3,42 - 3,72 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,77 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, J = 4,8, 1H), 5,25 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J 8,3, 2H), 7,31 (d, J = 9,7, 1H), 7,50 (d, J = 5,8, 1H), 7,85 (d, J = 9,7, 1H).

^LC NMR (75 MHz, CDCI₃) δ 12,07, 14,25, 17,12, 17,92, 19,15, 21,11, 21,18, 23,80, 24,00, 24,06, 24,86, 25,08, 25,15, 27,58, 28,21, 28,82, 30,33, 31,18, 33,78, 34,28, 35,77, 36,65, 39,07, 39,45, 39,86, 46,91, 48,14, 48,47, 52,62, 55,49, 57,13, 58,42, 66,36, 66,80, 69,14, 70,84, 79,19, 80,55, 114,27, 130,29, 130,59, 154,12, 158,81, 168,25, 169,84, 170,72, 170,80, 170,90, 171,25, 174,89.

ESI-MS vypočteno pro C57H89N7O14 1095,6, stanoveno m/z: 1096,9 (M+H)⁺.

Příklad 96: Syntéza [(SR)-l-(isobutyryl)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxo-l,7diazo—spiro[4,4]nonan]⁷⁹—aplidinu (9SISAPL1).

.^x,OMe

^SAPL4 9S1SAPL1

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SAPL4 (l l mg, 12,9 pmol), č. 16 (5 mg, 15,4 μιηοΐ), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (3,6 Ol), DCM (155 Ol) a DMF (78 Ol), poža- 109 CZ 304204 B6 dováná látka (10 mg, 69 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep

PEP 100 C_]g, isokratická ACN/H₂O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm t_R = min).

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,86 - 1,00 (m, 24H), 1,12 (d, J = 6,9, 3H), 1,18 (d, J = 6,6, 3H), 1,34 (r, J = 6,6, 2H), 0,90 - 1,30 (m, 7H), 1,562,25 (m, 16 H), 2,30 - 2,80 (m, 3H), 2,55 (s, 3H), 2,95 - 3,06 (m, 1H), 3,153,25 (m, 3 H), 3,65 (dd, 1H), 3,52 - 3,79 (m, 6H), 3,79 (s, 3H), 3,98 4,15 (m, 1H), 4,28 (dd, JI = 6,6, J2 = 10,3, 1H), 4,59 (m, 2H), 4,79 - 4,85 (m, 2H), 5,17 (d, J = 3,6, 1H), 5,40 - 5,44 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,4, 2H), 7,06 (d, J = 8,7, 2H), 7,24 (d, J = 11,1, 1H), 7,90 (d, J = 9,3, 1H), 8,56 (d, J = 5, 1, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 11,50, 14,92, 15,22, 16,68, 16,95, 18,50, 18,59, 18,81, 20,94, 23,42, 23,80, 24,49, 24,68, 24,90, 25,11, 26,91, 27,98, 30,93, 31,30, 35,58, 33,88, 34,16, 35,84, 36,24, 38,64, 38,84, 39,71, 41,29, 47,01, 47,76, 49,42, 49,62, 52,66, 55,26, 55,73, 57,12, 58,21, 66,57, 67,40, 68,10, 70,79, 81,57, 114,07, 130,05, 130,31, 158,57, 168,12, 169,66, 170,08, 170,56, 171,13, 171,96, 172,37, 174,04, 175,41,205,04.

ESI-MS vypočteno pro C₅₉H9iN₇O|₄ 1121,66, stanoveno: 1122,8 (M+H)⁺.

Příklad 97: Syntéza [HiV]3-[(SR)-l-(tert-buthoxykarbonyl)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxo-l,7-diazospiro[4,4]nonan]⁷’⁹-aplidinu (9S1SHPL1)

HATU/HOAt

NMW/DCM

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SHPL4 (10 mg, 13 μιηοΐ), č. 16 (4,5 mg, 14 μιηοΐ), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 μΙ), DCM (150 μΐ) a DMF (50 μΐ), požadovaná látka (10 mg, 72 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C_)S, isokratická ACN/H₂O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm t_R = 16,9 min).

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,80 - 1,07 (m, 24H), 1,08 - 1,47 (m, 12H), 1,48 - 2,30 (m, 16H), 2,36 (m, 2H), 2,65 (m, 1H), 2,96 (m, 1H), 3,18 (m, 2H), 3,36 (m, 2H), 3,65 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 1 H), 4,02 (m, 1H), 4,25 (m, 1 H), 4,63 (m, 1 H), 4,72 (m, 2H), 4,87 (m, 111), 5,02 (d, J = 4,8, 1H), 5,45 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,7, 2H), 7,07 (d, J = 8,7, 2H), 7,27 (d, J = 4,8, 1H), 7,88 (d, J = 9,7, 1H), 8,32 (d, J = 4,8, 1H).

ESI-MS vypočteno pro C₅6H₈₇N₇O|₃ 1065,6, stanoveno m/z: 1066,7 (M+H)' .

-110CZ 304204 B6

Příklad 98: Syntéza [(5R)-l-(pyruvyl)-7-[(l R)-l-karboxy-3-methylbutyl]-6-oxo-l,7-diazospiro[4,4]nonan]⁷⁹-aplidinu (9SPSAPL1)

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SAPL4 (10 mg, 11,7 pmol), 17 (5 mg, 15,4 μηιοί), HATU (12 mg), HOAt (5 mg), NMM (5 μΐ), DCM (140 μΐ) a DMF (70 μΙ)„ požadovaná látka (9 mg, 63 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP

100 Cis, isokratická ACN/H₂O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm t_R = 14„4min).

'H-NMR (300 MHz, CDClj) δ 0,90 - 1,00 (m, 24 H), 1,05 - 1,40 (m, 12 H), 1,40 - 2,25 (m, 16H), 2,27 - 2,41 (m, 1H), 2,42 - 2,70 (m, 3H), 2,54 (s, 3H), 2,92 - 2,98 (m, 1 H), 3,12 - 3,38 (m, 4 H), 3,54 - 3,78 (m, 4 H), 3,79 (s, 3H), 4,01 - 4,12 (m, 2H), 4,20 - 4,26 (m, 2H), 4,57 4,62 (m, 2H), 4,77 - 4,82 (m, 2H), 535,18 (d, J = 3,0, 2H), 5.37 - 5,42 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,7, 2H), 7,07 (d, J = 8,7, 2H), 7,20 (d, J = 9,6, 1H), 7,85 (d, J = 9,6, 1H), 98,04 (d, J = 5,4, 1H).

^I3C NMR (75 MHz, CDClj) δ 11,86, 14,97, 15,47, 16,78, 17,12, 18,84, 21,20, 21,27, 23,62, 24,14, 15,03, 25,15, 25,30, 27,35, 27,51, 28,19, 30,46, 31,52., 34,27, 35,95, 39,01, 40,07, 41,59,

47,25, 49,72, 53,08, 55,51, 55,81, 57,38, 58,21, 66,66, 68,19, 69,23 , 70,74, 81,69, 85,15, 114,33,

130,13, 130,56, 158,85, 161,12, 168,49, 169,81, 169,91, 170,81, 171,38, 171,69, 172,60, 173,34, 197,64, 205,19.

ESI-MS vypočteno pro C₅₈H₈₇N₇O|5: 1121,63, stanoveno 1122,3 (M+H). 25

Příklad 99: Syntéza [Hiv]³—[(SR)— 1—(pyruvyl)—7—[(1R)— 1— karboxy-3—methylbutyl]6-oxo— 1,7— diazospiro[4,4]nonan]⁷⁹aplidinu (9SPSHPL1)

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SHPL4 (10 mg, 13 μιηοΐ), č. 17 (4,5 mg, 14 μιηοΐ), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 μΙ), DCM (150 μΐ) a DMF (50 μΐ), požadoCZ 304204 B6 váná látka (10 mg, 72 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP

100 C₁₈, isokratická ACN/H₂O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm t_R = 13,6 min).

'HNMR (300 MHz, CDCl,) δ 0,80 - 1,10 (24H, m), 1,11 - 1,80 (12H, m), 1,81 - 2,30 (10H, m), 2,45 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 3,07 - 3,43 (m, 6H), 3,52 - 3,77 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 5,03 (d, J = 4,3, 1H), 5,45 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,29 (d, J = 8,7, 1H), 7,81 (d, J = 9,2, 1H), 7,87 (d, J = 4,8, 1H).

ESI-MS vypočteno pro C55H83N7O14: 1065,6, stanoveno 1066,4 (M+H)⁺.

Příklad 100: Syntéza [Hiv]₃-[(5R)-l-(akryloyl)-7-[(lR)-l-karboxy-3-methylbutyl]6-oxo-l,7diazaspiro [4,4]nonan]^7_9-aplidinu (9SASHPL1) .0 _

HATU/HOAt

NMM/DCM

Postup je stejný jako pro syntézu SAPL3, vychází z SHPL4 (10 mg, 13 pmol), č. 18 (5,8 mg, 14 pmol), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 μΐ), DCM (150 μΐ) a DMF (50 μΐ), požadovaná látka (10 mg, 72 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C|₈, isokratická ACN/H₂O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm t_R = 16,4 min).

Ή-NMR (300 MHz, CDC1Q δ 0,85 -0,96 (m, 18H), 1,02- 1,05 (m, 6H), 1,14- 1,45 (m, 12H), 1,49-1,64 (m,4H), 1,68-1,77 (m, 1H), 1,89-2,05 (m, 3H), 1,99 (s,3H), 2,10-2,28 (m, 4H), 2,43 (dd, JI = 7,8, J2 = 17,1, 1H), 2,57 (s, 3H), 2,60 - 2,68 (m, 1H), 2,97 (bs, 1H), 3,13 - 3,40 (m, 4H), 3,54 - 3,77 (m, SH), 3,79 (s, 3H), 3,89 - 4,07 (m, 2H), 4,27 (m, IH), 4,64 (m, 1H), 4,73 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 5,03 (d, J = 4,4, 1H), 5,30 (d, J = 20, 1H), 5,30 - 5,39 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,29 (s, 1H), 7,88 (d, J = 9,8, 1H), 8,23 (d, J = 7,4, 1 H).

ESI-MS vypočteno pro C₅₆H₈₅N₇O|3: 1063,6, stanoveno 1064,6 (M+H)⁺.

Příklad 101: Syntéza [Hiv]’-[Z-Ala]⁹-aplidinu (9ZASHPL2).

- 112

Do nádoby obsahující Z-Ala-Pro-OH (36 mg, 112 pmol) v DCM (0,4 ml) při 0 °C, v atmosféře argonu, byl přidán DIPCDI (10 pl, 64 pmol) a reakční směs byla míchána 60 min. Poté byl přidán roztok SHPL2 (20 mg, 22,5 pmol) v DCM (0,2 ml) a po 3 dnech byla reakce zastavena přidáním vodného roztoku HCl (3 ml, 0,1 N). Reakční směs byla míchána po dobu 5 min a poté naředěna DCM (4 ml) a promyta postupně vodným roztokem KHSO₄ (4 ml, 10 %), vodným roztokem. NaHCO₃ (4 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (4 ml). Organická fáze byla vysušena (Na2SO₄), filtrována a zakoncentrována. Přečištění získané směsi bylo provedeno pomocí HPLC (HyperPrep PEP 100 C₎₈, isokratická ACN/H₂O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm, t_R = 18,2 min), čímž byl získán 9ZASHPL2 (30 mg, 67 %) jako bílá pevná látka.

Ή-NMR (300 MHz, CDC1₃) 5 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,12- 1,50 (m, 18H), 1,52 -2,70 (m, 6H), 2,45 (rn, IH), 2,56 (s, 3H), 2,96 - 3,38 (m, 4H), 3,10 (s, 3H). 3,52 - 3,72 (m, 5H), 3,85 (m, IH), 3,78 (s, 3H), 4,01 (m, IH), 4,18 (m, 1 H), 4,51 (m, 1 H), 4,64 (m, 1 H), 4,72 (m, 1 H), 4,87 (m, 1 H), 5,02 (d, Ji = 5,3, IH), 5,06 (m, 2H), 5,25 (m, IH), 5,42 (m, IH), 6,10 (d, J = 8,3, 1 H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,31 (m, 6H), 7,70 (d, J = 4,3, 1H), 7,77 (d, J = 9,7, 1H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 13,97, 16,63, 17,02, 17,48, 18,93, 20,86, 21,15, 23,45, 23,76,

70,94, 78,78, 114,00, 127,75, 128,3é, 129,90, 130,26, 156,31, 158,53, 168,67, 169,57, 170,06, 170,25, 170,65, 171,97, 173,08, 174,67.

ESI-MS vypočteno pro C₆₂H₉₂N₈Oi5 1 188,67, stanoveno m/z 1189,7 (M+H)⁺.

Příklad 102: Syntéza [Hiv]³-[Boc-Ala]⁹-aplidinu (9BASHPL2).

ŇHBoc

9BASHPL2

SHPL2

Postup je stejný jako pro syntézu 9ZASHPL2, z SHPL2 (10 mg, 11,2 pmol), Boc—Ala—Pro—OH (17 mg, 57 pmol), DIPCDI (5 pl) a DCM (300 pl), požadovaná látka (9 mg, 70 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C,₈, gradient ACN/H₂O 85:15 až 100:0 v 10 min (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm t_R = 14,5 min).

Ή-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,82 - 1,10 (m, 24H), 1,12 - 1,50 (m, 15H), 1,40 (s, 9H), 1,52 2,70 (m, 9H), 2,45 (m, IH), 2,60 (s, 3H), 3,003,43 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 3,62 (m, 5H), 3,79 (s, 3H), 3,90 (m, IH), 4,02 (m, IH), 4,20 (m, 1H), 4,41 (m, 1H), 4,67 (m, 2H), 4,87 (m, IH), 5,02 (d, JI =4,3, IH), 5,26 (m, IH), 5,40 (m, IH), 5,76 (d, J = 7,8. IH), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,32 (d, J = 9,7, 1H), 7,73 (d, J = 4,8, 1H), 7,80 (d, J = 9,7, 1H).

^I3C NMR (75 MHz, CDCI₃) δ 14,34, 16,88, 17,20, 17,77, 19,17, 21,10, 21,41, 23,72, 24,03,

- 113 CZ 304204 B6

114,29, 130,21, 130,54, 156,06, 158,83, 168,80, 169,87, 170,51, 170,64, 170,94, 171,31, 172,59, 173,45, 174,92.

ESI-MS vypočteno pro CsgE^NgO^ 1154,68, stanoveno m/z 1155,6 (M+H)⁺.

Příklad 103: Syntéza [Hiv]^{1 * 3 *}-[Ala]⁹ aplidinu (9ASHPL1)

9ABSHPL2

9ASHPL1

Do nádoby obsahující 9BASHPL2 (8 mg, 6,92 μιτιοί), byl přidán roztok kyseliny chlorovodíkové v bezvodém dioxanu (l ,5 ml, 5,3 N, 7,9 mmol). Vzniklý roztok byl míchán při pokojové teplotě po dobu 5 h, nebo dokud zcela nevymizí výchozí materiál (TLC). Poté je roztok zakoncentrován za sníženého tlaku a získaná směs byla rozpuštěna v DCM a opět zakoncentrována. Produkt byl precipitován jako bílý prášek DCM /hex (2 ml/4 ml), tak, aby byl získán 9ASHPL1 (7,2 mg) jako bílá pevná látka.

ESI-MS vypočteno pro C5₄H₈₆N₈Oi3 1054,6, stanoveno m/z: 1055,6 (M+H)⁺.

Příklad 104: Syntéza [Hiv]³-[Boc-Pro]⁸-didemninu A (SPSHPL2)

Postup je stejný jako pro syntézu 9ZASHPL2, z SHPL2 (10 mg, 11,2 μιηοΐ), Boc-Ala-Pro-OH (13 mg, 57 μιηοΐ), DIPCDI (5 μΐ) a DCM (300 μΐ), požadovaná látka (9 mg, 74 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C₎₈, gradient ACN/H₂O 85:15 až 100:0 v 10 min (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 nm t_R = 18,7 min).

¹ H-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,82- 1,10 (m, 24H), 1,12-2,30 (m, 22H), 1,47 (s, 9H), 2,41 (m,

1H), 3,04 (s, 3H), 3,10 - 3,74 (m, 7H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,31 (m, 1H),

4,59 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, J = 4,8, 1 H), 5,16 (m, 1 H), 5,36 (m, 1 H), 6,84 (d, J = 8,3,

2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,17 (d, J = 6,3, 1H), 7,35 (d, J = 9,7, 1H), 7,85 (d, J = 9,7, 1H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 14,41, 16,76, 17,97, 19,12, 21,03, 21,66, 23,92, 24,00, 24,77,

25,09, 25,20, 27,53, 28,21, 28,72, 29,67, 30,35, 31,23, 33,80, 34,30, 36,24, 39,05, 39,37, 39,80,

-114CZ 304204 B6

46,90, 47,33, 48,42, 54,48, 55,49, 55,58, 55,84, 57,12, 58,08, 66,31, 69,11, 71,05, 79,23, 80,23, 114,29, 130,23, 130,59, 154,91, 158,82, 168,37, 169,88, 170.,66, 170,86, 171,28, 171,40, 174,10, 174,79.

ESI-MS vypočteno pro C₅₆H₉|N₇O|₄: 1085,6, stanoveno m/z: 1086,7 (M+H)⁺.

Příklad 105: Syntéza [Hiv]³-[Pro]⁸-didemninu A (8PSHPL1)

Postup je stejný jako pro syntézu 9ASHPL1, vychází z 8PSHPL2 (7 mg, 6,4 μιηοΐ), požadovaná látka (6 mg) byla získána jako bílá pevná látka.

ESI-MS vypočteno pro C₅|H₈iN₇0i₂: 983,59, stanoveno m/z: 984,6 (M+H)⁺.

Příklad 106: Syntéza [Hiv]³-[Boc-Val]⁸-didemninu A (8VSHPL2)

Postup je stejný jako pro syntézu 9ZASHPL2, vychází z SEIPL2 (10 mg, 11,2 pmol), Boc-ValOH (12 mg, 56 μιηοΐ), DIPCDI (5 μΐ) a DCM (300 μΐ), požadovaná látka (9 mg, 82 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C,₈, gradient ACN/H₂O 85:15 až 100:0 v 10 min (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 mm, t_R = 22,1 min).

‘H-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,82 - 1,10 (m, 30H), 1,12 - 1,82 (m, 12H), 1,45 (s, 9H), 1,84 2,40 (m, 6H), 2,56 (s, 3H), 3,85 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 4,24 (m, 1 H), 4,41 (m, 1H), 4,61 (m, 1 H), 4,88 (m, 1 H), 4,99 (d, JI = 5,3, 1 H), 5,07 (m, 1 H), 5,19 (m, 1 H), 5,60 (d, J = 8,3, 1 H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,03 (d, J = 8,7, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,46 (d, J = 10,2, 1H), 7,84 (d, J = 9,2, 1H).

ESI-MS vypočteno pro C₅₍₎H9|N₇O|4.' 1085,6, stanoveno m/z: 1086,7 (M+H)⁺.

- 115 CZ 304204 B6

Příklad 107: Syntéza [Hiv]³-[Val]⁸-didemninu A (SVSHPL1)

NH₃ ⁺cr

8VSHPL2

8VSHPL1

Postup je stejný jako pro syntézu 9ASHPL1, vychází z 8VSHPL2 (8 mg, 7,4 pmol), požadovaná látka (7 mg) byla získána jako bílá pevná látka.

ESI-MS vypočteno pro íýil [χΑΥΑ: 985,61, stanoveno m/z: 986,6 (M+H)⁺.

Příklad 108: Syntéza [Hiv]³-[Val]⁸-[isobutyryl]⁹-didennninu A (8V91SHPL1)

8V9ISHPL1

8VSHPL1

K roztoku 8VSHPL1 (6 mg, 5,8 pmol) v DCM (200 pl) při 0 °C v atmosféře Ar, byl přidán NMM (3,3 pl, 30 pmol) a isobutyryl chlorid (2 pl, 19 pmol). Po 5 h míchání při pokojové teplotě byla reakční směs naředěna DCM (5 ml) a promyta postupně vodným roztokem KHSO₄ (5 ml, IO %), vodným roztokem HCXENa (5 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (5 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby byl získán 8V91SHPL1 (6 mg, 97%) jako bílá pevná látka.

'H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 0,82 - l,]0 (m, 36H), l,12 - l,85 (m, 10H), 1,90 - 2,45 (m, 6H), 2,56 (s,3H), 2,90 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 3,13 (m, 2H), 3,36 (dd, JI = 4,3, J2 = 14,1, 1H), 3,64 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,87 (m, 1H), 3,97 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,34 (m, 2H), 4,61 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,98 (d, J = 4,8, 1H), 5,17 (m, 2H), 6,24 (d, J = 6,3, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,32 (d, J = 6,3, 1H), 7,35 (d, J = 4,3, 1H), 7,81 (d, J = 9,7, 1H).

ESI-MS vypočteno pro CssHggNyOu: 1055,6, stanoveno m/z: 1056,7 (M+H)⁺.

-116CZ 304204 B6

Příklad 109: Syntéza [kumarin]⁸-didemninu A (SCSAPL1)

8CSAPL1

Postup je stejný jako pro syntézu 9ZASHPL2, vychází z SAPL2 (20 mg, 21 μιηοΙ) a kumarin-3karboxylové kyseliny (20 mg, 107 μιηοΙ), požadovaná látka (18 mg, 76 82 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (HyperPrep PEP 100 C_!S, gradient ACN/H₂O 85:15 (průtok: 7 ml/min, 250x21 mm, při 270 mm, t_R = 16,5 min).

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,78 - 1,00 (m, 24H), 1,20 - 2,50 (m, 22H), 2,56 (s, 3H), 2,92 (s, 3H), 3,08 -3,25 (m, 2H), 3,90 (m, 1H), 3,60 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,92-4,25 (m, 3H), 4,60 (m, 1 H), 4,80 (m, 2H), 5,15 (m, 1H), 5,18 (d, J = 3,4, 1H), 5,28 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,20 (d, J = 6,3, 1H), 7,37 (m, 2H), 7,45 (d, J = 9,7, 1H), 7,58 (m, 2H), 7,96 (m, 1H), 8,23 (m, 1H).

ESI-MS vypočteno pro CsgHg^Ois: 1114,58, stanoveno m/z: 1116,8 (M+H)⁴.

Příklad 110: Syntéza methyl esteru kumarin-3-karbonylaminooctové kyseliny (8G9C2)

Do lahve s kulatým plochým dnem obsahující methylglycin (89 mg, 1,00 mmol), 3-karboxykumarin, bezvodý DCM (25 ml) v atmosféře Ar, byl přidán při pokojové teplotě N'-(3-dimethylaminopropyl)-N-ethyl-karbodiimid hydrochlorid (EDC) (479 mg, 2,50 mmol) a DMAP (489 mg, 4,00 mmol). Vzniklá směs byla míchána po dobu 1 h 30 min (celková konverze byla sledována jako změna TLC). Poté byl přidán DCM (20 ml) a roztok byl promyt postupně vodným roztokem. NaHCO₃ (10 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (10 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄), filtrována a zakoncentrována. Vzniklá oranžová pevná látka byla přečištěna bleskovou LC (silikagel, grád. hex.EtOAc 1:1 až 2:1) tak, aby byla získána požadovaná látka (445 mg) jako bezbarvá olejovitá kapalina. Rf= 0,08 (Hex/EtOAc 1:1).

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 3,79 (s, 3H), 4,25 (d, J = 5,4, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,74 (d, J = 7,3, 1H), 7,68 (m, 2H), 8,91 (s, 1H), 9,25 (s, 1H).

ESI-MS vypočteno pro Ci₃HnNO₅: 261,06, stanoveno: 283,1 (M+Na)⁺.

-117CZ 304204 B6

Příklad 111: Syntéza kyseliny kumarin-3-karbonylaminooctové kyseliny (8G9C1)

K roztoku methyl esteru kumarin-3-karbonylaminooctové kyseliny (312 mg, 1,19 mmol), v THF (12 ml) v atmosféře Ar při 0 °C (v ledové lázni), byl přidán po kapkách roztok LiOH v H₂O (0,2 M). Reakční směs byla důkladně míchána při pokojové teplotě, dokud reakce nebyla kompletní TLC (2 h). Roztok byl částečně zakoncentrován a byl přidán Et₂O (10 ml). Organická fáze byla promyta NaHCO₃ (10 ml, nasycený roztok) směs vodných fází byla okyselena 10 % K.HSO4 (f = 3 až 4) a extrahována pomocí étheru (3x20 ml). Organická fáze byla zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby vznikl požadovaný 8G9C1 (280 mg, 95 %) jako bílá pevná látka.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 4,18 (d, J = 5,3, 2H), 7,41 (m, IH), 7,45 (d, J = 7,8, IH), 7,74 (d, J = 7,3, 1H), 7,78 (t, J = 8,3, 1H), 7,85 (d, J = 7,8, 1H), 8,89 (s, 1H), 9,41 (m, 1H).

ESI-MS vypočteno pro C|₂H₉NO₅: 247,05, stanoveno: 248,0 (M+H)\

Příklad 112: Syntéza [Gly]⁸-[kumarin]⁹-didemninu A (SG9CSAPL1)

Postup je stejný jako pro syntézu 9ZASHPL2, vychází z SAPL2 (20 mg, 21 pmol) a kyseliny kumarin-3-karbonylaminooctové (26 mg, 105 pmol), požadovaná látka (18 mg, 72 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (Symetry PrepTM Cl 8, isokratická ACN/H₂O 60:40 průtok: 3 ml/min, 150x7,5 mm, při 270 mm, t_R = 17,5 min).

'H-NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 0,85 - 0,94 (m, 24H), 1,23 - 2,17 (m, 21H), 2,30-2,44 (m, IH), 2,56 (s, 3H), 3,01 (s, 3H), 3,10 - 3,24 (m, 2H), 3,40 (dd, Ji = 5,4, J2 = 14,2, IH), 3,59 - 3,74 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,99 - 4,21 (m, 4H), 4,37 - 4,44 (m, IH), 4,60 (m, IH), 4,68 (m, 1 H), 4,81 (t, J = 9,8, 1H), 5,18 (d, J = 3,4, 1 H), 5,25 (dd, J1 = 2,9, J2 = 5,9,1 H), 5,20 - 5,45 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,19 - 7,28 (m, 1H), 7,347,42 (m, 2H), 7,63 - 7,72 (m, 2H), 7,88 (d, J = 8,3, 2H), 9,00 (s, 1H), 9,57 (m, 1H).

ESI-MS vypočteno pro C₆]H₈₅N70i6: 1171,61, stanoveno m/z: 1172,5 (M+H)⁺.

-118CZ 304204 B6

Příklad 113: Syntéza N-methylsulfonyl-Pro-OBz (P2)

SO₂Me

Pro-OBn (HC1)

P2

K roztoku Pro-OBn (HC1) (300 mg, 1,24 mmol) v DCM (25 ml, bezvodý při 0 °C v atmosféře Ar, po kapkách stříkačkou byl přidán DIPEA (0,7 μΐ) a methansulfonyl chlorid (116 μΐ). Reakční směs byla míchána při pokojové teplotě přes noc. Poté byl přidán DCM (10 ml) a roztok byl promyt postupně vodným roztokem KHSO₄ (15 ml, 10 %), vodným roztokem NaHCO₃ (15 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (15 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby byl získán čistý produkt P2 (350 mg, 1,24 mmol) jako bílá pevná látka. Rf= 0,55 (Hex/AcOEt 1:1).

H-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 1,91 - 2,08 (m, 3H), 2,19-2,31 (m, 1H), 2,93 (s, 3H), 3,83 3,54 (m, 2H), 3,65 (s, 3H), 4,51 (dd, Ji = 3,4, J2 = 8,3, 1H), 5,15 (d, J = 12,2, 1 H), 5,18 (d, J = 12,2, 1H), 7,31 (m, 5H).

ESI-MS vypočteno pro C,₃Hi7NO₄S: 283,09, stanoveno m/z: 284,1 (M+H)⁺.

Příklad 114: Syntéza N-methylsulfonyl-Pro-OH (Pl)

P2

Odplyněná směs N-methylsulfonyl-Pro-OBz (P2) (250 mg, 0,88 mmol) a Pd(OH)₂/C (20 % Pd, 100 mg, 40 % hmotnosti) v IPA:H₂O (26 ml: 13 ml), byla nasycena H₂ a udržována při 1 atmosféře vodíku za stálého míchání po dobu 3 h. Poté byla reakční směs filtrována přes teflonový filtr (0,45 μιη), a zakoncentrována ve vakuu tak, aby byla získána požadovaná látka (128 mg, 75 % výtěžek) jako bílá pevná látka bez dalšího přečištění.

Ή-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 1,94 - 2,04 (m, 2H), 2,07 - 2,14 (m, 1H), 2,22 - 2,35 (m, 1H), 2,96 (s, 3H), 3,44 (m, 2H), 4,44 (dd, J1 = 3,9, J2 = 8,8, 2H), 9,10 (m, 1H).

^,3C-MNR (75 MHz, CDC1₃) δ 24,96, 31,08, 38,46, 48,06, 60,66, 174,75.

ESI-MS vypočteno pro C₆HnNO₄S: 194,22, stanoveno: 194,0 (M+H)⁺.

-119CZ 304204 B6

Příklad 115: Syntéza [methylsulfonyl]⁹-aplidinu (9MSAPL1)

Postup je stejný jako pro syntézu 9ZASHPL2, vychází z SAPL2 (10 mg, 10,7 μηιοί) aN-methylsulfonyl-Pro-OH (10 mg, 53 μιηο1), požadovaná látka (9 mg, 74 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění HPLC (Symetry PrepTM Cl 8, isokratická ACN/H₂O 60:40 průtok: 3 ml/min, 150x7,8 mm, při 270 mm, t_R = 9 min).

'H-NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 0,78 - 1,00 (m, 24H), 1,20 - 2,50 (m, 26H), 2,56 (s, 3H), 2,93 (m, 1H), 3,04 (s, 3H), 3,06 (s, 3H), 3,08 - 3,26 (m, 2H), 3,28 - 3,50 (m, 2H), 3,60 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 4,05 (m, 2H), 4,17 (m, 1H), 4,60 (m, 2H), 4,81 (m, 2H), 5,10 (m, 1H), 5,19 (d, J= 3,4, 1H), 5,33 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 6,86 (m, 1H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,09 (m, 1H), 7,82 (d, J = 9,2, 1H).

ESI-MS vypočteno pro CYHj^NúO^S: 1117,60, stanoveno: 1118,7 (M+H)⁺.

Příklad 116: Syntéza [methylsu)fonyl]⁸-didemninu A (SMSAPL1)

SAPL2

K roztoku SAMP2 (10 mg, 10,7 μιηοΐ) v DCM (200 μΐ, bezvodý) při 0 °C v atmosféře Ar, byl 25 přidán DIPEA (3 01) a methylsulfonylchlorid (0,85 μΐ). Reakční směs byla míchána při 5 °C přes noc. Poté byl přidán DCM (10 ml) a roztok byl promyt postupně vodným roztokem KHSO₄ (5 ml, 10 %), vodným roztokem NaHCO₃ (5 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (5 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO4), fdtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby byl získán čistý 8MSAPL1 (11 mg) jako bílá pevná látka.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,83 - 0,97 (m, 24H), 1,10 - 1,45 (m, 10H), 1,50 - 1,65 (m, 5H), 1,76 - 1,82 (m, 2H), 2,00 - 2,20 (m, 3H), 2,27 - 2,36 (m, 1H), 2,45 - 2,55 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,02 (s, 3H), 3,08 (d, J = 16,6, 1 H), 3,17 (dd, Ji = 10,7, J2 = 14,1, 1 H), 3,37 (m, 1 H), 3,60 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,99 - 4,11 (m, 3H), 4,49 (m, 1 H), 4,59 (m, 1 H),

- 120CZ 304204 B6

4,78 (m, 2H), 5,06 (m, 1 H), 5,19 (d, J = 3,9, 1 H), 6,68 (d, J = 8,8, 1 H), 6,84 (d, J = 8.3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,33 (d, J = 9,8, IH), 7,61 (d, J = 8,8 1 H).

ESI-MS vypočteno pro C₅oH₈₀N₆Oi₄S: 1020,55, stanoveno: 1022,1 (M+H)⁺.

Příklad 117: Syntéza [biotin]^s-didemninu A (8BISAPL1)

8BISAPL1

I0

K roztoku HATU (24 mg, 61 pmol), HOAt (8 mg, 63 pmol), SAPL2 (20 mg, 21,4 pmol) a dbiotinu (7,8 mg, 32 pmol), v bezvodém DCM (400 pl) byl při 0 °C v atmosféře Ar přidán po kapkách stříkačkou NMM. Vzniklá směs byla míchána po dobu 2 h při 0 °C a poté při pokojové teplotě dalších 14 h. Do směsi byl pak přidán DCM (10 ml) a roztok byl promyt postupně vodíš ným roztokem. KHSO₄ (5 ml, 10 %), vodným roztokem NaHCO₃ (5 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (5 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku. Požadovaná látka (18 mg, 72 %) byla získána jako bílá pevná látka po přečištění

HPLC (Symetry Prep C,₈, gradient ACN/H₂O 60:40 až 100:0 v 10 min. (průtok: 3 ml/min, 150x7,8 mm, při 270 nm, t_R = 6 min).

Ή-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 0,78 - 1,00 (m, 24H), 1,20 - 1,98 (m, 23H), 2,00 - 2,62 (m, 7H), 2,53 (s, 3H), 2,80 - 3,00 (m, 2H), 2,86 (s, 3H), 3,16 (m, 2H), 3,35 (m, 2H), 3,57 (m, 2H), 3,70 (m, IH), 3,79 (s, 3H), 4,01 (m, 2H), 4,10 (m, 1 H), 4,31 (m, 1 H), 4,46 (m, 1 H), 4,56 (m, 1 H), 4,82 (m, 2H), 5,00 (m, IH), 5,14 (m, 2H), 5,67 (s, IH), 6,23 (s, IH), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,28 (d, J = 8,5, 1H), 7,35 (d, J = 7,8, IH), 8,01 (d, J = 8,7, 1 H).

ESI-MS vypočteno pro C₅9H92N₈Oi4S: 1168,65, stanoveno: 1169,6 (M+H)⁺.

Příklad 118: Syntéza [fenylmočovina]8-didemninu A (8PUSAPL1)

SAPL2

K roztoku SAPL2 (10 mg, 10,7 pmol) v bezvodém DCM (200 μΐ) byl přidán při 0 °C v atmosféře 35 Ar fenylisokyanát (1,3 μΐ, 12 pmol) a reakční směs byla míchána při pokojové teplotě 4 hodiny.

- 121 CZ 304204 B6

Poté byl přidán DCM (10 ml) a roztok byl promyt postupně vodným roztokem KHSO₄ (5 ml, 10%), vodným roztokem NaHCOj (5 ml, nasycený roztok) a roztokem soli (5 ml). Organická fáze byla vysušena (Na₂SO₄), filtrována a zakoncentrována za sníženého tlaku tak, aby byl získán čistý produkt SPUSAPL1 (11 mg, 94 %) jako bílá pevná látka.

'H NMR (300 MHz, CDClj) δ 0,85 - 0,94 (m, 24H), 1,11 - 1,43 (m, 4H), 1,22 (d, J = 6,8, 3H), 1,35 (d, J = 6,8, 3H), 1,49-1,83 (m, 5H), 1,73 (s, 3H), 2,02 (m, 1H), 2,14 (m, 2H), 2,34 (dt, J1 = 3,4, J2 = 6,8, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,91 (s, 3H), 3,04 (d, J = 16,6, 1H), 3,17 (dd, JI = 11,2, J2 = 14,6, 1H), 3,36 (dd, JI = 3,9, J2 = 14,2, 1H), 3,57 (dd, JI = 4,4, J2 = 10,7, 1 H), 3,59 - 3,63 (m, 1H), 3,67 - 3,75 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,96 - 4,10 (m, 2H), 4,19 (q, J = 6,8, 1 H), 4,58 (m, 1 H), 4,74 (dd, JI = 3,9, J2 = 8,8, 1 H), 4,78 - 4,85 (m, 1 H), 5,05 (m, 2H), 5,17 (d, J = 3,4, 1H), 6,52 (s, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,03 - 7,09 (m, 3H), 7,22 - 7,32 (m, 4H), 7,39 (d, J = 8,3, 2H), 7,93 (d, J = 8,8, 1H).

^HC NMR (75 MHz, CDClj) δ 15,51, 17,16, 18,74, 2 22,41, 23,29, 23,98, 24,94, 25,10, 25,32, 26,97, 28,18, 30,36, 31,57, 34,44, 36,51, 38,86, 41,64, 45,23, 47,30, 49,80, 50,08, 54,60, 55,50, 56,06, 57,51, 62,77, 66,45, 68,17, 70,72, 81,93, 114,36, 120,76, 123,86, 129,12, 130,04, 130,57, 138,78, 141,00, 157,78, 158,87, 169,92, 170,68, 171,49, 172,43, 173,44, 181,47, 192,38, 204,93, 206,66.

ESI-MS vypočteno pro CíóHsjNjOij: 1161,60, stanoveno: 1062,6 (M+H)⁺.

Příklad 119: Syntéza [fenylthiomočovina]⁸-didemninu A (8PTSAPL1)

DCM

Postup je stejný jako pro syntézu 8PUSAPL1, vychází z SAPL2 (10 mg, 10,7 μτηοΐ) a fenylthioisokyanátu (1,3 μΐ, 12 μηιοί), po 15 h míchání je požadovaná látka (11 mg, 93 %), byla získána bez nutnosti dalšího přečištění jako bílá pevná látka.

'H NMR (300 MHz, CDClj) δ 0,84 - 0,99 (m, 24H), 1,14 - 1,46 (m, 9H), 1,46 - 1,78 (m, 9H), 1,98-2,19 (m, 3H), 2,34 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,91 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 3,08 - 3,21 (m, 1H), 3,36 (dd, JI =4,4, J2 = 14,1, 1H), 3,55 - 3,64 (m, 2H), 3,66 - 3,74 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,964,12 (m, 2H), 4,21 (q, J = 6,8, 1H), 4,59 (t, J = 5,3, 1H), 4,75 (dd, Ji = 3,4, J2 = 8,3, 1H), 4,83 (t, J= 10,3, 1H), 5,05 - 5,12 (m, 2H), 5,16 (d, J = 3,4, IH), 6,30 (t, J = 7,3, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,21 - 7,37 (m, 6H), 7,93 (d, J = 8, 8, 1 H), 8,08 (d, J = 8,8, IH).

'-’C NMR (75 MHz, CDClj) δ 15,28, 15,85, 17,15, 18,73, 21,12, 22,73, 23,66, 24,01, 25,13, 25,33, 26,62, 28,16, 29,92, 31,53, 32,42, 32,90, 34,41, 36,77, 38,86, 41,69, 47,28, 50,12, 55,50, 56,48, 57,51, 59,87, 66,47, 70,75, 81,91, 114,37, 125,25, 125,95, 126,57, 127,54, 129,12, 129,77, 130,06, 130,57, 135,43, 158,88, 168,54, 169,90, 170,70, 171,49, 172,38, 190,41.

ESI-MS vypočteno pro C56H₈jN₇O|2S: 1077,58, stanoveno: 1078,5 (M+H)\

- 122 CZ 304204 B6

Příklad 120: Syntéza [butylmočovina]⁸-didemninu A (SBUSAPL1)

SAPL2

Postup je stejný jako pro syntézu 8PUSAPL1, vychází z SAPL2 (10 mg, 10,7 μιηοΐ) a butylthioisokyanátu (1,4 μΐ, 12 μιηοΐ), po 4 h stálého míchání byla požadovaná látka (9 mg, 78 %) získána bez dalšího přečištění jako bílá pevná látka.

'H NMR (300 MHz, CDCb) δ 0,85 - 0,94 (m, 24H), 1,10- 1,80 (m, 24H), 2,03 (m, 1 H»2,13 (m, 2H), 2,33š (m, IH), 2,55 (s, 3H), 2,72 (s, 3H), 3,02 (d, .1 = 16,1, IH), 3,17 (dd, Ji = 11,2, J2 = 14,2, IH), 3,23 - 3,40 (m, 3H), 3,62 - 3,78 (m, 3H), 3,79 (s, 3H),4,03 (m, 2H), 4,19 (q, J =6,8, IH), 4,58 (m, 2H), 4,71 (dd, Ji = 3,4, J2 = 8,3, IH), 4,82 (m, IH), 5,00 (m, 2H), 5,16 (d, J = 3,4, IH), 5,22 - 5,28 (m, 2 H), 6,85 (d, J = 8,8, 2H), 7,08 (d, J = -8,3, 2H), 7,21 - 7,29 (m, IH), 7,96 (d, J = 9,2, IH).

ESI-MS vypočteno pro C54H87N7O13: 1041,64, stanoveno: 1042,7 (M+H)⁺.

Příklad 121: Syntéza [butylthiomočovina]⁸-didemninu A (8BTSAPL1)

SAPL2

SCN

DCM

Postup je stejný jako pro syntézu 8PUSAPL1, vychází z SAPL2 (10 mg, 10,7 μιτιοί) a butylthioisokyanátu (1,5 μΐ, 12 pmol), po 15 h je požadovaná látka (10 mg, 86 %) získána jako bílá pevná látka bez nutnosti dalšího přečištění.

'H NMR (300 MHz, CDCb) δ 0,86 - 0,97 (m, 24H), 1,14 - 1,78 (m, 27H), 1,99 - 2,14 (m, 3H), 2,34 (m, IH), 2,55 (s, 3H), 2,88 (s, 3H), 3,01 (d, J = 16,6, 1 H), 3,16 (dd, JI = 11,2, J2 = 14,6, IH), 3,36 (dd, JI = 4,4, J2 = 14,2, IH), 3,49 - 3,74 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 4,02 (d, J = 6,8, 2H), 4,21 (q, J =6,8, IH), 4,58 (m, 1 H), 4,70 (dd, JI = 2,9, J2 = 8,3. 1 H), 4,82 (t, J = 10,3, IH), 5,075,12 (m, 2H), 5,09 (d, J = 3,9, IH), 5,60 (m, IH), 6,36 (dd, JI = 5,4, J2 = 8,3, IH), 6,84 (d, J = 8,8, 2H), 7,08 (d, J = 8,8, 2H), 7,84 (d, J = 8,3, 1 H), 7,91 (d, J = 9,3, IH).

- 123 CZ 304204 B6

LSI MS vypočteno pro C₅4H₈₇N7Oi₂S: 1057,61, stanoveno: 1080,7 (M+Na)^f.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Cyklický derivát depsipeptidu obecného vzorce kde:

X je nezávisle -C(R)₂-, -O-, -S-, nebo -NR-, kde R je nezávisle H nebo organická skupina vybraná zC\-C_{2 alkylové skupiny, C₂-C_I2 alkenylové skupiny, C₆-C,₈ arylové skupiny, aralkylové skupiny a jejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, které obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, Ci-C₎₂ alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami;

Y , je CO nebo -COCHCH3CO-;

R4 je H nebo organická skupina vybraná z aminoskupiny RCONH-, acylové skupiny RCO-, Cj—C|₂ alkylové skupiny, C₂-Ci₂ alkenylové skupiny, C₆-C|₈ arylové skupiny, aralkylové skupiny, a jejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, které obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, Cí— C|₂ alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami;

kde v každém případě

R je C|—C12 alkylová skupina, C₂-C|₂ alkenylová skupina, C6-C₎₈ arylová skupina, aralkylová skupina a jejich substituované deriváty, které jsou substituované heterocyklickou skupinou obsahující jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, Ci~C,₂ alkoxy skupinou, hydroxy skupinou, merkapto skupinou, případně chráněnou amino skupinou, guanidinovou skupinou nebo halogenovou skupinou;

Xi je O nebo S; a když Y je CO, pak

- 124CZ 304204 B6

a) X₂ je CR, O (a R2 chybí), S (a R₂ chybí), nebo N, kde R je nezávisle H nebo organická skupina vybraná z C|-C|₂ alkylové skupiny, C₂-Ci₂ alkenylové skupiny, C₆-Ci₈ arylové skupiny, aralkylové skupiny ajejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami, které obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z atomů N, O, nebo S, C₍-C|₂ alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; a

Ri a R₂ jsou každý nezávisle H nebo organická skupina vybraná z C|-C₎₂ alkylové skupiny, C₂C12 alkenylové skupiny, C₆-Ci₈ arylové skupiny, aralkylové skupiny, amidové skupiny RCONHnebo acylové skupiny RCO-, kde R je a Cj—C_]2 alkylová skupina, C₂-Ci₂ alkenylová skupina, C₆-Ci₈ arylová skupina, aralkylová skupina ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více C]—Cj₂ alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; a

b) aa8 je sloučenina vzorce kde R₃ je organická skupina vybraná z C,-C,₂ alkylové skupiny, C₂-Ci₂ alkenylové skupiny, C₆C|g arylové skupiny, aralkylové skupiny, skupiny RSO₂- nebo acylové skupiny RCO-, kde R je Ci—C|₂ alkylová skupina, C₂-C|₂ alkenylová skupina, C₆-C|₈ arylová skupina, aralkylová skupina ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo

c) Ri a R₂ s X₂ tvoří případně substituovaný C3-C12 cykloalkyl, případně substituovaný C₆-Cj₈aryl nebo případně substituovanou heterocyklickou skupinu vybranou z kumarinylu, quinolinylu, pyridylu, pirazinylu, pyrimidylu, furylu, pyrrolylu, thienylu, thiazolylu, oxazolylu, imidazolylu, indolylu, benzofuranylu, benzothiazolu, tetrahydrofuranylu. tetrahydropyranylu, piperidinylu a morfolinu; kde případné substituenty jsou vybrané z Cj-C_i2 alkylové skupiny, C₂-Ci₂ alkenylové skupiny, C₆—Cis arylové skupiny, aralkylové skupiny, ajejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo

d) aa8 je nahrazen organickou skupinou vybranou z C₆-C,₈ arylové skupiny, aralkylové skupiny, skupiny RSO₂- nebo acylové skupiny RCO, kde R je C|-Ci₂ alkylová skupina, C₆-C|₈ arylová skupina, aralkylová skupina, a jejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, C|-C,₂ alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami;

když Y je -COCHCH3CO-, pak

c) X₂ je N, a Ri a R₂ jsou každý nezávisle H nebo organická skupina vybraná z C|-C₎₂ alkylové skupiny, C₂-Ci₂ alkenylové skupiny, C₆-Ci₈ arylové skupiny, aralkylové skupiny, amidové skupiny RCONH-, skupiny -SO₂R nebo acylové skupiny RCO- kde R je a C|—Ci₂ alkylová skupina, C₂-Ci₂ alkenylová skupina, C₆-C|₈ arylová skupina, aralkylová skupina, ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více heterocyklickými skupinami obsahujícími jeden, dva nebo tři heteroatomy vybranými z atomů N, O nebo S, C1-C_!2 alkoxy skupina- 125CZ 304204 B6 mi, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo d) aa8 je sloučenina vzorce

O kde R; je skupina RSO₂-, kde Rje C|-C₎₂ alkylová skupina nebo R₃ je C₂-C_]2 alkenylová skupina, aralkylová skupina, ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo

c) R| a R₂ s X₂ tvoří případně substituovanou C₃-C₁₂ cykloalkylovou skupinu, případně substituovanou Cs-Cis arylovou skupinu nebo případně substituovanou heterocyklickou skupinu vybranou z kumarinylu, quinolinylu, pyridylu, pirazinylu, pyrimidylu, furylu, pyrrolylu, thienylu, thiazolylu, oxazolylu, imidazolylu, indolylu, benzofuranylu, benzothiazolu, tetrahydrofuranylu, tetrahydropyranylu, piperidinylu a morfolinu; kde případné substituenty jsou vybrané zC]-Ci₂alkylové skupiny, C₂-C,₂ alkenylové skupiny, C₆-C|g arylové skupiny, aralkylové skupiny, ajejich substituovaných derivátů, které jsou substituované jednou nebo více karbonylovými skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, případně chráněnými amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami; nebo

d) aa8 je nahrazen organickou skupinou vybranou z C₆--Ci8 arylové skupiny, aralkylové skupiny nebo skupiny RSO₂-, kde Rje C|-C_]2 alkylová skupina, C₆-Cig arylová skupina nebo aralkylová skupina, ajejich substituované deriváty, které jsou substituované jednou nebo více C|-C_]2 alkoxy skupinami, hydroxy skupinami, merkapto skupinami, amino skupinami, guanidinovými skupinami nebo halogenovými skupinami;

kde aralkylové skupiny jsou tvořeny Ci-C,₂ alkylovou skupinou substituovanou C₆-C|₈ arylovou skupinou;

ajeho farmaceuticky přijatelné soli.

2. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 1, kde X je -NR-, a kde Rje, jak bylo definováno v nároku 1.

3-[Aip]-aplidin.

3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[isobutyryl]-aplidin,

3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[pyr]-aplidin,

3-[Hiv]-9-[D-lac(OTBDMS)]-aplidin,

3-[Val]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidin,

- 128 CZ 304204 B6

3-[Hiv]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidin,

3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[Boc]-aplidin,

3-[Hiv]-didemnin A,

3-[Val]-didemnin A,

3-[Hiv]-8-[hexanoyl]-didemnin A,

3-[Hiv]-8-[Val]-9-[isobutyryl]-didemnin A,

3-[Hiv]-8-[Boc-Val]-didemnin A,

3-[Hiv]-9-[Boc-Ala]-aplidin,

3-[Hiv]-9-[Z-Nva]-aplidin,

3-[Hiv]_Z-didemnin A,

3-[Hiv]-9-[Z-Ala]-aplidin,

3-[Hiv]-8-[butyryl]-didemnin A,

3-[Hiv]-8-[Val]-didemnin A,

3-[Val]-Z-didemnin A,

3-[Hiv]-9-[Nva]-aplidin,

3-[Hiv]-9-[Ala]-aplidin,

3-[Hiv]-8-[isobutyryl]-didemnin A,

3-[Val]-9-[isobutyryl]-aplidin,

3—[Hiv]—9—[isobutyryl]—aplidin,

3-[Val]-8-[isobutyryl]-didemnin A,

3. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 2, kde X je -NH- nebo -NMe

4. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 3, kde X je -NH-.

5 3-[Hiv]-7,8-[spiro]-9-[akryloyl]-aplidin,

5. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 1, kde X je -O-.

6. Cyklický derivát depsipeptidu podle některého z nároků 1 až 5, kde Y je -CO-.

7,8-[spiro]-9-[isobutyryl]-aplidin,

7.8- [spiro]-9-[Boc]-aplidin,

7.8— [spiro]—9—[pyr]—aplidin,

7. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 1, kde X je -NH- nebo -O- a Y je -COCHCH₃CO nebo -CO-.

8-[Biotin]-didemnin A,

8-[Gly]-9-[kumarin]-didemnin A,

8- [methylsulfonyl]-didemnin A,

8-[butylthiomočovina]-didemnin A,

8-[kumarin]-didemnin A,

8-[fenylthiomočovina]-didemnin A,

8-[butylmočovina]-didemnin A,

8-[fenylmočovina]-didemnin A,

8. Cyklický derivát depsipeptidu podle kteréhokoliv z předcházejících nároků 1 až 7, kde R4 je methyl.

9-[Z-Nva]-aplidin,

9—[norvalin]-aplidin,

9- [methylsulfonyl]-aplidin.

9. Cyklický derivát depsipeptidu podle kteréhokoliv z předcházejících nároků 1 až 8, kde X] je O.

- 126CZ 304204 B6

10. Cyklický derivát depsipeptidu podle kteréhokoliv z předcházejících nároků 1 až 9, kde X₂R, je případně substituovaná aralkyloxy skupina.

11. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 10, kde X₂R| je benzyloxy skupina.

12. Cyklický derivát depsipeptidu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, kde X₂R| je případně substituovaná amino skupina.

13. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 12, kde X₂R| je skupina -NHR,, kde R] je případně substituovaná C,-C₎₂ alkylová skupina, C₂-C,₂ alkenylová skupina, C₆-C,₈ arylová skupina nebo aralkylová skupina.

14. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 13, kde R, je C|-C,₂ alkylová skupina nebo C₆C|g arylová skupina.

15. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 14, kde R| je fenylová skupina nebo butylová skupina.

16. Cyklický derivát depsipeptidu podle některého z nároků 1 až 9, kde X₂Ri je případně substituovaná Ci—Ci2 alkylová skupina.

17. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 16, kde X₂R| je propylová skupina, isopropylová skupina, pentylová skupina nebo biotinová skupina.

18. Cyklický derivát depsipeptidu podle některého z nároků 1 až 9, kde -C(=O)X₂RiR₂ tvoří případně substituovanou acylovou skupinu aminokyseliny.

19. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 18, kde případně substituovaná acylová skupina aminokyseliny je substituovaný prolin.

20. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 19, kde substituovaný prolin je případně substituovaný norvalin-prolin, případně substituovaný alanin-prolin, Boc-prolin, případně substituovaný alkylprolin.

21. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 19, kde substituovaný proline je norvalinprolin, Z-norvalin-prolin, alanin-prolin, Z-alanin-prolin, Boc-alanin-prolin, isobutyryl-prolin nebo případně chráněný D-laktyl-prolin.

22. Cyklický derivát depsipeptidu podle některého z nároků 1 až 8, kde X| je S a X₂R| je skupina -NHRi, kde R| je případně substituovaná Cí-C|₂ alkylová skupina, C₂-Ci₂ alkenylová skupina, C₆-Ci₈ arylová skupina nebo aralkylová skupina.

23. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 22, kde R, je C]-C|₂ alkylová skupina nebo C₆C|8 arylová skupina.

24. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 23, kde R, je fenylová skupina nebo butylová skupina.

25. Cyklický derivát depsipeptidu podle některého z nároků 1 až 9, kde R, a R₂ s X₂ tvoří případně substituovanou heterocyklickou skupinu.

26. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 25, kde heterocyklická skupina je kumarin.

- 127CZ 304204 B6

27. Cyklický derivát depsipeptidů podle některého z nároků 1 až 8, kde aa8 je nahrazeno organickou skupinou RSO₂-, kde Rje, jak bylo definováno v nároku 1.

28. Cyklický derivát depsipeptidů podle nároku 27, kde Rje methyl.

29. Cyklický derivát depsipeptidů podle nároku 1, kterýje vybraný ze sloučeniny, kterou je:

30. Cyklický derivát depsipeptidů podle nároku 1, kterýje vybraný ze sloučeniny, kterou je

31. Cyklický derivát depsipeptidu podle nároku 29, kterým je 8-[fenylmočovina]-didemnin A.

io

32. Cyklický derivát depsipeptidu podle některého z předcházejících nároků 1 až 31, který je ve formě farmaceuticky přijatelné soli.

Konec dokumentu