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CN116059391B - 抗cldn-18.2抗体药物偶联物及其用途 - Google Patents

抗cldn-18.2抗体药物偶联物及其用途 Download PDF

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CN116059391B
CN116059391B CN202211033879.0A CN202211033879A CN116059391B CN 116059391 B CN116059391 B CN 116059391B CN 202211033879 A CN202211033879 A CN 202211033879A CN 116059391 B CN116059391 B CN 116059391B
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antibody
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cancer
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张静
符策雄
刘洪川
周岳华
姚盛
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Shanghai Junshi Biosciences Co Ltd
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Abstract

本发明提供了与CLDN‑18.2特异性结合的抗CLDN‑18.2抗体药物偶联物和包含其的组合物。还提供了使用本发明的抗体药物偶联物的方法和用途。

Description

抗CLDN-18.2抗体药物偶联物及其用途
技术领域
本发明提供了与CLDN-18.2特异性结合的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物和包含其的组合物。还提供了使用本发明的抗体药物偶联物的方法和用途。
背景技术
胃癌是全世界范围内发病率最高的癌症之一。据世界卫生组织癌控项目的统计数据，全球每年死于癌症的患者高达700万，其中死于胃癌的患者占70万例。与常规的胃癌治疗方案相比，基于抗体的治疗方案由于具有高特异性和低副作用，具有深远的应用前景。
Claudin，又称CLDN，是一类建立细胞旁屏障并控制细胞间分子流动的细胞表面蛋白家族，目前已发现至少有26种。Claudin蛋白家族成员是紧密连接的重要结构成分，在保持上皮细胞极性、控制细胞旁扩散、以及调控细胞生长分化方面起到重要作用。Claudin分子跨细胞膜四次，N端和C端均落在细胞质中。不同的Claudin成员在不同组织中表达，且其功能的改变与癌症形成相关联。Claudin 1、Claudin 18和Claudin 10的表达水平变化分别与肠癌、胃癌和肝细胞癌相关。
Claudin 18(CLDN18)有两种选择性剪接变异体CLDN-18.1和CLDN-18.2。Claudin18.1(CLDN-18.1)选择性地在正常肺和胃上皮中表达。Claudin 18.2(CLDN-18.2)在正常胃上皮短寿细胞中呈现微量表达，但在肿瘤细胞中，Claudin 18.2在多种癌症类型中均呈现强烈表达，如75％的胃癌患者高表达Claudin 18.2，50％的胰腺癌患者高表达Claudin18.2，30％的食管癌患者高表达Claudin 18.2，在肺癌等中也有高表达。
抗体药物偶联体(antibody drug conjugate，ADC)由抗体或其抗原结合片段(靶向)、接头和小分子药物三部分组成。抗体或其抗原结合片段经由可裂解或不可裂解的接头与具有生物活性例如细胞毒性的小分子药物如细胞毒素缀合，充分利用了抗体或其抗原结合片段靶向于感兴趣的细胞(靶向细胞)的特异性或结合高表达抗原的特异性以及小分子药物的高效性，降低或避免了对非靶向细胞的毒副作用。这意味着，与传统肿瘤化疗药物相比，用于肿瘤的抗体药物偶联物能精准地靶向肿瘤细胞并降低对非肿瘤细胞的影响。
Ganymed公司开发的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物IMAB-362-vcMMAE目前处于临床前阶段。
本领域仍需要在亲和力、特异性等方面优异的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物。
发明内容
本发明提供了新型抗CLDN-18.2抗体药物偶联物，其具有针对人CLDN-18.2的高亲和力和高特异性等优势。本发明提供的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物可作为独立的疗法或与其它疗法/或其他抗癌药剂联合，用于诸如癌症的治疗。
本发明提供了一种结构如式(I-1)所示的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物(ADC)或其药学上可接受的盐：
Ab-(L-D)m 式(I-1)
其中，
L是接头单元；
D为具有细胞毒性的小分子药物；
m表示偶联于Ab的L-D单元的平均数，且m选自1-8,优选2-7,更优选2-5；
Ab为抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段,其包含
(I)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:72所示的HCDR1和HCDR2，和如SEQ ID NO:73或3所示的HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(II)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:41和SEQ IDNO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(III)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:40和SEQID NO:12所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(IV)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:40和SEQID NO:12所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(V)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:74所示的HCDR1和HCDR2，和如SEQ ID NO:30或75所示的HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些实施方式中，本发明所述小分子药物D为单甲基澳瑞他汀(monomethylauristatin)或美登素(maytansine)类生物碱；优选地，所述单甲基澳瑞他汀为单甲基澳瑞他汀E(MMAE)或单甲基澳瑞他汀F(MMAF)，且所述美登素类为N2'-脱乙酰基-N2'-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素(DM1)，N2'-脱乙酰基-N2'-(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(DM3)或N2'-脱乙酰基-N2'-(4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)-美登素(DM4)。
在一些实施方式中，本发明所述L选自N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶基二硫代)戊酸酯(SPP)、N-琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯(SIAB)、N-琥珀酰亚胺基4-(马来酰亚胺甲基)环己烷羧酸酯(SMCC)、6-马来酰亚氨基己酰基(MC)、马来酰亚氨基丙酰基(MP)、缬氨酸-瓜氨酸(VC)、丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe)、对氨基苄氧羰基(PAB)和MC-VC-PAB(马来酰亚氨基己酰基-缬氨酸(valine)-瓜氨酸(citrulline)-对氨基苄氧羰基)；优选地，所述L为6-马来酰亚氨基己酰基(MC)或MC-VC-PAB。
在一些实施方式中，本发明所述抗CLDN-18.2抗体药物偶联物如下式所示：
或
其中m和Ab如权利要求1所定义。
在一些实施方式中，本发明所述抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段包含：
(I)氨基酸序列如SEQ ID NO:55、57、82或83所示或与其任一者具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:56所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链可变区；或
(II)氨基酸序列如SEQ ID NO:60、76或78所示或与其任一者具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:61所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链可变区；或
(III)氨基酸序列如SEQ ID NO:76所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链可变区；或
(IV)氨基酸序列如SEQ ID NO:79所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链可变区；和氨基酸序列如SEQ ID NO:80所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链可变区；或
(V)氨基酸序列如SEQ ID NO:55所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:81所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链可变区。
在一些实施方式中，本发明所述抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段包含：
(1)氨基酸序列如SEQ ID NO:64所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:65所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链；或
(2)氨基酸序列如SEQ ID NO:68所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:69所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链；或
(3)氨基酸序列如SEQ ID NO:84所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:85所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链；或
(4)氨基酸序列如SEQ ID NO:86所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:87所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链；或
(5)氨基酸序列如SEQ ID NO:88所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:89所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链；或
(6)氨基酸序列如SEQ ID NO:90所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:91所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链；或
(7)氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:93所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链；或
(8)氨基酸序列如SEQ ID NO:94所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:95所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链；或
(9)氨基酸序列如SEQ ID NO:96所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:97所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链；或
(10)氨基酸序列如SEQ ID NO:98所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:99所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链；或
(11)氨基酸序列如SEQ ID NO:100所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:101所示或与其具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链。
在一些实施方式中，本发明所述抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段包含：
(I)氨基酸序列如SEQ ID NO:64所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:65所示的轻链；或
(II)氨基酸序列如SEQ ID NO:68所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:69所示的轻链。
在一些实施方式中，本发明所述抗体或抗原结合片段为鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、或全人抗体。
在一些实施方式中，本发明所述抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段为Fab、Fab'、Fab'-SH、Fv、scFv、F(ab')2或sdAb。
在一些实施方式中，本发明所述抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段为任何IgG亚型，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4；优选地，所述抗体是低或无岩藻糖基化的。
在一些实施方式中，本发明所述抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段是低岩藻糖基化的。
在一些实施方式中，本发明所述抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段是无岩藻糖基化的。
在又一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含如本文所述的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体或赋形剂。
在又一个方面，本发明提供了如本文所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或本文所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防CLDN-18.2介导的疾病或病症的药物中的用途，优选地，所述疾病或病症为癌症。
在又一个方面，本发明提供了一种治疗和/或预防CLDN-18.2介导的疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用如本文所述的抗体药物偶联物或如本文所述的药物组合物，优选地，所述疾病或病症为癌症。
在又一个方面，本发明提供了如本文所述的抗体药物偶联物或本文所述的药物组合物，其用于治疗和/或预防CLDN-18.2介导的疾病或病症，优选地，所述疾病或病症为癌症。
在一些实施方式中，本发明所述癌症选自胃癌、食道癌、胃食管癌、胰腺癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌、肠癌和膀胱癌药物。
在又一个方面，本发明提供了一种药物组合，其包含如本文所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或本文所述的药物组合物，以及一种或多种另外的治疗剂。
在又一个方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括如本文所述的抗体药物偶联物、或本文所述的药物组合物。
附图说明
图1a、1b、1c和1d：抗CLDN-18.2抗体药物偶联物在细胞实验中与胃癌细胞株NUGC4-CLDN-18.2表面上过表达的人CLDN-18.2的亲和力。
图2a和2b：抗CLDN-18.2抗体药物偶联物在细胞实验中进入过表达人CLDN-18.2的胃癌细胞株NUGC4-CLDN-18.2细胞的内吞活性。
图3a和3c：抗CLDN-18.2抗体药物偶联物抑制过表达人CLDN-18.2的胃癌细胞株NUGC4-CLDN-18.2细胞的增殖；图3b：人源化抗CLDN-18.2抗体药物偶联物抑制野生型胃癌细胞株NUGC4细胞的增殖。
图4：抗CLDN-18.2抗体药物偶联物在NUGC4 CLDN-18.2皮下移植瘤模型中的抗肿瘤作用。
图5：抗CLDN-18.2抗体药物偶联物在NUGC4 CLDN-18.2皮下移植瘤模型中的抗肿瘤作用。
图6：抗CLDN-18.2抗体药物偶联物在GA0006皮下移植瘤模型中的抗肿瘤作用。
具体实施方式
定义
除非另有说明，本发明的实施将采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些都在本领域的技术范围内。
为了可以更容易地理解本发明，某些科技术语具体定义如下。除非本文其它部分另有明确定义，否则本文所用的科技术语都具有本发明所属领域普通技术人员通常理解的含义。关于本领域的定义及术语，专业人员具体可参考Current Protocolsin MolecularBiology(Ausubel)。氨基酸残基的缩写是本领域中所用的指代20个常用L-氨基酸之一的标准3字母和/或1字母代码。本文(包括权利要求书)所用单数形式包括其相应的复数形式，除非文中另有明确规定。
术语“约”在与数字数值联合使用时意为涵盖具有比指定数字数值小5％的下限和比指定数字数值大5％的上限的范围内的数字数值。
术语“和/或”应理解为意指可选项中的任一项或可选项中的任意两项或更多项的组合。
术语“CLDN-18.2”或“Claudin18.2”，是Claudin 18的两个剪接变异体之一。该术语指来自任何脊椎动物(包括哺乳动物如灵长类动物(例如人))和啮齿类动物(例如，小鼠和大鼠)的任何天然CLDN-18.2，除非另有说明。该术语涵盖“全长”未加工的CLDN-18.2以及由细胞内加工产生的任何形式的CLDN-18.2或其任何片段。该术语还包括天然存在的CLDN-18.2的变体，例如，剪接变体或等位变体。在一个优选实施方式中，CLDN-18.2是指来自人和食蟹猴CLDN-18.2全长或其片段(诸如其缺乏信号肽的成熟片段)。
术语“百分比(％)氨基酸序列同一性”或简称“同一性”定义为在将氨基酸序列进行比对(并在必要时导入空位)以获取最大百分比序列同一性，且不将任何保守取代视为序列同一性的部分之后，候选氨基酸序列中的氨基酸残基与参比氨基酸序列中的相同氨基酸残基的百分比。可使用本领域各种方法进行序列比对以便测定百分比氨基酸序列同一性，例如，使用公众可得到的计算机软件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGN(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以决定测量比对的适宜参数，包括对所比较的序列全长获得最大比对所需的任何算法。
术语“免疫应答”是指由例如淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞、粒细胞和由上述细胞或肝产生可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用，该作用导致从人体选择性损害、破坏或清除侵入的病原体、感染病原体的细胞或组织、癌细胞或者在自体免疫或病理性炎症的情况下的正常人细胞或组织。
术语“信号转导途径”或“信号转导活性”是指通常由蛋白质间相互作用诸如生长因子对受体的结合启动的生化因果关系，所述关系导致信号从细胞的一部分传递至细胞的另一部分。一般地，传递包括引起信号转导的系列反应中的一种或多种蛋白质上的一个或多个酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基的特定磷酸化。倒数第二过程通常包括细胞核事件，从而导致基因表达的变化。
术语“活性”或“生物活性”，或术语“生物性质”或“生物特征”此处可互换使用，包括但不限于表位/抗原亲和力和特异性、在体内或体外中和或拮抗CLDN-18.2活性的能力、IC50、抗体的体内稳定性和抗体的免疫原性质。本领域公知的抗体的其它可鉴定的生物学性质或特征包括，例如，交叉反应性(即通常与靶定肽的非人同源物，或与其它蛋白质或组织的交叉反应性)，和保持哺乳动物细胞中蛋白质高表达水平的能力。使用本领域公知的技术观察、测定或评估前面提及的性质或特征，所述技术包括但不局限于ELISA、FACS或BIACORE等离子体共振分析、不受限制的体外或体内中和测定、受体结合、细胞因子或生长因子的产生和/或分泌、信号转导和不同来源(包括人类、灵长类或任何其它来源)的组织切片的免疫组织化学。
术语“抗体”是指具有所需生物活性的任何形式的抗体。因此，其以最广义使用，具体包括但不限于单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、人源化抗体、全人抗体、嵌合抗体和骆驼源化单结构域抗体。
术语“分离的抗体”是指结合化合物的纯化状态，且在这种情况下意指该分子基本不含其它生物分子，例如核酸、蛋白质、脂质、糖或其它物质例如细胞碎片和生长培养基。术语“分离(的)”并非意指完全不存在这类物质或不存在水、缓冲液或盐，除非它们以明显干扰本文所述结合化合物的实验或治疗应用的量存在。
术语“单克隆抗体”是指获自基本均质抗体群的抗体，即组成该群的各个抗体除可少量存在的可能天然存在的突变之外是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原表位。相比之下，常规(多克隆)抗体制备物通常包括大量针对不同表位(或对不同表位有特异性)的抗体。修饰语“单克隆”表明获自基本均质抗体群的抗体的特征，且不得解释为需要通过任何特定方法产生抗体。
术语“全长抗体”，是指在天然存在时包含四条肽链的免疫球蛋白分子：两条重(H)链(全长时约50-70kDa)和两条轻(L)链(全长时约25kDa)通过二硫键互相连接。每一条重链由重链可变区(在本文中缩写为VH)和重链恒定区(在本文中缩写为CH)组成。重链恒定区由3个结构域CH1、CH2和CH3组成。每一条轻链由轻链可变区(在本文中缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可被进一步细分为具有高可变性的互补决定区(CDR)和其间隔以更保守的称为框架区(FR)的区域。每一个VH或VL区由按下列顺序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR组成。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白对宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq))的结合。
术语“Fc区”用于定义含有至少一部分的恒定区的免疫球蛋白重链的C-末端区域。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一个实施方式中，人IgG重链Fc区从重链的Cys226或从Pro230延伸至羧基端。然而，Fc区的C-端赖氨酸(Lys447)可以存在或可以不存在。除非本文中另外指出，Fc区或恒定区中的氨基酸残基的编号根据EU编号系统，也称为EU索引，如Kabat,E.A.等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，PublicHealth Service National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991),NIHPublication91-3242中所述。
术语抗体(“亲代抗体”)的“抗原结合片段”包括抗体的片段或衍生物，通常包括亲代抗体的抗原结合区或可变区(例如一个或多个CDR)的至少一个片段，其保持亲代抗体的至少一些结合特异性。抗体结合片段的实例包括但不限于Fab，Fab'，F(ab')2和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子，例如sc-Fv；由抗体片段形成的纳米抗体(nanobody)和多特异性抗体。当抗原的结合活性在摩尔浓度基础上表示时，结合片段或衍生物通常保持其抗原结合活性的至少10％。优选结合片段或衍生物保持亲代抗体的抗原结合亲和力的至少20％、50％、70％、80％、90％、95％或100％或更高。还预期抗体的抗原结合片段可包括不明显改变其生物活性的保守或非保守氨基酸取代(称为抗体的“保守变体”或“功能保守变体”)。术语“结合化合物”是指抗体及其结合片段两者。
术语“单链Fv”或“scFv”抗体是指包含抗体的VH和VL结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单条多肽链中。Fv多肽一般还包含VH和VL结构域之间的多肽接头，其使scFv能够形成用于抗原结合的所需结构。
术语“结构域抗体”是只含有重链可变区或轻链可变区的免疫功能性免疫球蛋白片段。在某些情况下，两个或更多个VH区与肽接头共价连接形成二价结构域抗体。二价结构域抗体的2个VH区可靶向相同或不同的抗原。
术语“二价抗体”包含2个抗原结合部位。在某些情况下，2个结合部位具有相同的抗原特异性。然而，二价抗体可以是双特异性的。
术语“双抗体”是指具有两个抗原结合部位的小抗体片段，所述片段包含在同一多肽链(VH-VL或VL-VH)中与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)。通过使用短得不允许在同一链的两个结构域之间配对的接头，迫使该结构域与另一链的互补结构域配对并产生两个抗原结合部位。
术语“嵌合抗体”是具有第一抗体的可变结构域和第二抗体的恒定结构域的抗体，其中第一抗体和第二抗体来自不同物种。通常，可变结构域获自啮齿动物等的抗体(“亲代抗体”)，而恒定结构域序列获自人抗体，使得与亲代啮齿动物抗体相比，所得嵌合抗体在人受试者中诱导不良免疫应答的可能性较低。
术语“人源化抗体”是指含有来自人和非人(例如小鼠、大鼠)抗体的序列的抗体形式。一般而言，人源化抗体包含基本所有的至少一个、通常两个可变结构域，其中所有或基本所有的超变环相当于非人免疫球蛋白的超变环，而所有或基本所有的构架(FR)区是人免疫球蛋白序列的构架区。人源化抗体任选可包含至少一部分的人免疫球蛋白恒定区(Fc)。
术语“全人抗体”是指只包含人免疫球蛋白蛋白质序列的抗体。如在小鼠中、在小鼠细胞中或在来源于小鼠细胞的杂交瘤中产生，则全人抗体可含有鼠糖链。同样，“小鼠抗体”是指仅包含小鼠免疫球蛋白序列的抗体。或者，如果在大鼠中、在大鼠细胞中或在来源于大鼠细胞的杂交瘤中产生，则全人抗体可含有大鼠糖链。同样，“大鼠抗体”是指仅包含大鼠免疫球蛋白序列的抗体。
“同种型”抗体是指由重链恒定区基因提供的抗体种类(例如，IgM、IgE、IgG诸如IgGl、IgG2或IgG4)。同种型还包括这些种类之一的修饰形式，其中修饰已被产生来改变Fc功能，例如以增强或减弱效应子功能或对Fc受体的结合。
术语“表位”是指抗体所结合的抗原区域。表位可以由连续的氨基酸形成或者通过蛋白的三级折叠而并置的非连续氨基酸形成。
“亲和力”或“结合亲和力”指反映结合对子的成员之间相互作用的固有结合亲和力。分子X对其配偶物Y的亲和力可以通常由平衡解离常数(KD)代表，平衡解离常数是解离速率常数和结合速率常数(分别是kdis和kon)的比值。亲和力可以由本领域已知的常见方法测量。用于测量亲和力的一个具体方法是本文中的ForteBio动力学结合测定法。
术语“不结合”蛋白或细胞是指，不与蛋白或细胞结合，或者不以高亲和力与其结合，即结合蛋白或细胞的KD为1.0×10-6M或更高，更优选1.0×10-5M或更高，更优选1.0×10-4M或更高、1.0×10-3M或更高，更优选1.0×10-2M或更高。
术语“高亲和性”对于IgG抗体而言，是指对于抗原的KD为1.0×10-6M或更低，优选5.0×10-8M或更低，更优选1.0×10-8M或更低、5.0×10-9M或更低，更优选1.0×10-9M或更低。对于其他抗体亚型，“高亲和性”结合可能会变化。例如，IgM亚型的“高亲和性”结合是指KD为10-6M或更低，优选10-7M或更低，更优选10-8M或更低。
术语“抗体依赖的细胞毒性”、“抗体依赖的细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指细胞介导的免疫防御，其中免疫系统效应细胞主动地将细胞膜表面抗原与抗体，例如Claudin18.2抗体，结合的靶细胞例如癌细胞裂解。
术语“补体依赖的细胞毒性”或“CDC”是指IgG和IgM抗体的效应功能，当与表面抗原结合时引发典型的补体途径，包括形成膜攻击复合体以及靶细胞裂解。本发明的抗体，与Claudin 18.2结合时，引发对癌细胞的CDC。
术语“核酸”或“多核苷酸”是指脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)及其呈单链或双链形式的聚合物。除非明确地限制，否则术语包括具有与参照核酸相似的结合性质并且以与天然存在的核苷酸相似的方式被代谢的含有已知的天然核苷酸的类似物的核酸(参见，属于Kariko等人的美国专利No.8,278,036，其公开了尿苷被假尿苷替代的mRNA分子，合成所述mRNA分子的方法以及用于在体内递送治疗性蛋白的方法)。除非另有所指，否则特定核酸序列还隐含地包括其保守修饰的变体(例如，简并密码子取代)、等位基因、直系同源物、SNP和互补序列以及明确指出的序列。具体地，简并密码子取代可通过生成其中一个或多个选择的(或全部)密码子的第三位被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现(Batzer等人，Nucleic Acid Res.19:5081(1991)；Ohtsuka等人，J.Biol.Chem.260:2605-2608(1985)；和Rossolini等人，Mol.Cell.Probes 8:91-98(1994))。
“构建体”是指任何重组多核苷酸分子(诸如质粒、粘粒、病毒、自主复制多核苷酸分子、噬菌体或线性或环状单链或双链DNA或RNA多核苷酸分子)，衍生自任何来源，能够与基因组整合或自主复制，构成如下多核苷酸分子，其中已经以功能操作的方式连接(即，可操作地连接)一或多个多核苷酸分子。重组构建体通常会包含可操作地连接至转录起始调节序列的本发明的多核苷酸，这些序列会导引多核苷酸在宿主细胞中的转录。可使用异源及非异源(即，内源)启动子两者导引本发明的核酸的表达。
“载体”是指任何重组多核苷酸构建体，该构建体可用于转化的目的(即将异源DNA引入到宿主细胞中)。一种类型的载体为“质粒”，是指环状双链DNA环，可将额外DNA区段连接至该环中。另一类型的载体为病毒载体，其中可将额外DNA区段连接至病毒基因组中。某些载体能够在被引入到的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体及游离型哺乳动物载体)。在引入到宿主细胞中后，其他载体(例如，非游离型哺乳动物载体)整合至宿主细胞的基因组中，且因此与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够导引被操作性连接的基因的表达。本文将此类载体称为“表达载体”。
本文所用术语“表达载体”是指能够在转化、转染或转导至宿主细胞中时复制及表达目的基因的核酸分子。表达载体包含一或多个表型选择标记及复制起点，以确保维护载体及以在需要的情况下于宿主内提供扩增。
用于细胞或受体的“活化”、“刺激”和“处理”可具有相同含义，例如细胞或受体用配体活化、刺激或处理，除非上下文另外或明确规定。“配体”包括天然和合成配体，例如细胞因子、细胞因子变体、类似物、突变蛋白和来源于抗体的结合化合物。“配体”还包括小分子，例如细胞因子的肽模拟物和抗体的肽模拟物。“活化”可指通过内部机制以及外部或环境因素调节的细胞活化。“应答/反应”，例如细胞、组织、器官或生物体的应答，包括生化或生理行为(例如生物区室内的浓度、密度、粘附或迁移、基因表达速率或分化状态)的改变，其中改变与活化、刺激或处理有关，或者与例如遗传编程等内部机制有关。
如本文中所用，术语任何疾病或病症的“治疗”或“医治”在一个实施方式中是指改善疾病或病症(即，减缓或阻止或减少疾病的进展或其临床症状的至少一个)。在另一个实施方式中，“治疗”或“医治”是指缓解或改善至少一个身体参数，包括可能不能被患者辨别出的那些物理参数。在另一个实施方式中，“治疗”或“医治”是指在身体上(例如，可辨别的症状的稳定)、生理上(例如，身体参数的稳定)或在这两方面调节疾病或病症。除非在本文中明确描述，否则用于评估疾病的治疗和/或预防的方法在本领域中通常是已知的。
“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，诸如非人灵长类动物、绵羊、狗、猫、马、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。如本文中所用，术语“cyno”或“食蟹猴”是指食蟹猴。
“联合”一种或多种其它治疗剂的施用包括同时(共同)施用和任意次序的连续施用。
“治疗有效量”、“治疗有效剂量”和“有效量”是指本发明的CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段当单独或与其它治疗药物组合给予细胞、组织或受试者时，有效预防或改善一种或多种疾病或病况的症状或该疾病或病况的发展的量。治疗有效剂量还指足以导致症状改善的抗体或其抗原结合片段的量，例如治疗、治愈、预防或改善相关医学病况或者提高这类病况的治疗、治愈、预防或改善的速度的量。当对个体施用单独给予的活性成分时，治疗有效剂量仅是指该成分。当组合施用时，治疗有效剂量是指引起治疗效果的活性成分的综合量，不论是组合、依次给予还是同时给予。治疗剂的有效量将导致诊断标准或参数提高至少10％；通常至少20％；优选至少约30％；更优选至少40％，最优选至少50％。
“癌症”和“癌性”指或描述哺乳动物中特征通常为细胞生长不受调控的生理疾患。此定义中包括良性和恶性癌症以及休眠肿瘤或微转移。癌症的例子包括但不限于癌，淋巴瘤，母细胞瘤，肉瘤，和白血病。此类癌症的更具体例子包括鳞状细胞癌，肺癌(包括小细胞肺癌，非小细胞肺癌，肺的腺癌，和肺的鳞癌)，腹膜癌，肝细胞癌，胃的癌或胃癌(包括胃肠癌)，胰腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝瘤(hepatoma)，乳腺癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜癌或子宫癌，唾液腺癌，肾癌或肾的癌，肝癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝的癌，及各种类型的头和颈癌，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)，小淋巴细胞性(SL)NHL，中级/滤泡性NHL，中级弥漫性NHL，高级成免疫细胞性NHL，高级成淋巴细胞性NHL，高级小无核裂细胞性NHL，贮积病(bulky disease)NHL，套细胞淋巴瘤，AIDS相关淋巴瘤，和瓦尔登斯特伦氏(Waldenstrom)巨球蛋白血症)，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，急性成淋巴细胞性白血病(ALL)，毛细胞性白血病，慢性成髓细胞性白血病，和移植后淋巴增殖性病症(PTLD)，以及与瘢痣病(phakomatoses)，水肿(诸如与脑瘤有关的)和梅格斯氏(Meigs)综合征有关的异常血管增殖。
抗CLDN-18.2抗体
在一个方面，本发明提供了抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段。术语“抗CLDN-18.2抗体”、“抗CLDN-18.2”、“CLDN-18.2抗体”或“结合CLDN-18.2的抗体”是指能够以足够的亲合力结合CLDN-18.2蛋白或其片段以致所述抗体可以用作靶向CLDN-18.2中的诊断剂和/或治疗剂。
可采用用于产生抗体的任何合适方法来产生本发明的抗体。任何合适形式的CLDN-18.2都可用作产生抗体的免疫原(抗原)。通过举例而非限制，任何CLDN-18.2变体或其片段都可用作免疫原。在一些实施方式中，产生鼠源的单克隆抗人CLDN-18.2抗体的杂交瘤细胞可通过本领域公知的方法产生。来源于啮齿动物(如小鼠)的抗体在体内用作治疗药物时可能引起不需要的抗体免疫原性，重复使用导致人体产生针对治疗性抗体的免疫应答，这类免疫应答至少导致丧失治疗功效，而严重的则导致潜在致死过敏反应。降低啮齿动物抗体的免疫原性的一种方法包括嵌合抗体的产生，其中将小鼠可变区与人恒定区融合(Liu等(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:3439-43)。然而，嵌合抗体中的完整啮齿动物可变区的保留仍可能在患者中引起有害的免疫原性。将啮齿动物可变结构域的互补决定区(CDR)环移植到人构架上(即人源化)已被用于进一步将啮齿动物序列减至最低(Jones等(1986)Nature 321:522；Verhoeyen等(1988)Science 239:1534)。
在一些实施方式中，本发明的嵌合或人源化抗体可基于所制备的鼠单克隆杂交瘤抗体的序列来制备。编码重链和轻链免疫球蛋白的DNA可以从目标鼠杂交瘤中获得，并且使用标准分子生物学技术进行工程改造以包含非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。
在一些实施方式中，本发明所述的嵌合CLDN-18.2抗体，可使用本领域已知的方法将杂交瘤来源的免疫球蛋白重链和轻链可变区与人IgG恒定区有效连接(参见例如属于Cabilly等人的美国专利No.4,816,567)，获得嵌合型重链和嵌合型轻链来制备。在一些实施方式中，本发明的嵌合抗体包含的恒定区可选自任何人IgG亚型，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，优选IgG4。
在一些实施方式中，本发明的嵌合CLDN-18.2抗体可由嵌合型轻链与嵌合型重链表达质粒“混合和匹配”转染表达细胞获得，此类“混合和匹配”的抗体的CLDN-18.2结合可使用上述结合测定和其它常规结合测定(例如，ELISA)来进行测试。
本发明的所述抗体的可变区CDR的精确氨基酸序列边界可使用许多公知的方案的任何方案来确定，包括基于抗体的三维结构和CDR环的拓扑学的Chothia(Chothia等人.(1989)Nature 342:877-883；Al-Lazikani等人,“Standard conformations for thecanonical structures of immunoglobulins”,Journal of Molecular Biology,273,927-948(1997))基于抗体序列可变性的Kabat(Kabat等人,Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第4版，U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987))，AbM(University of Bath)，Contact(University College London)，国际ImMunoGeneTics database(IMGT)(1999NucleicAcids Research,27,209-212)，以及基于利用大量晶体结构的近邻传播聚类(affinitypropagation clustering)的North CDR定义。本发明抗体的CDR可以由本领域的技术人员根据本领域的任何方案(例如不同的指派系统或组合)确定边界。
应该注意，基于不同的指派系统获得的同一抗体的可变区的CDR的边界可能有所差异。即不同指派系统下定义的同一抗体可变区的CDR序列有所不同。因此，在涉及用本发明定义的具体CDR序列限定抗体时，所述抗体的范围还涵盖了这样的抗体，其可变区序列包含所述的具体CDR序列，但是由于应用了不同的方案(例如不同的指派系统或组合)而导致其所声称的CDR边界与本发明所定义的具体CDR边界不同。
具有不同特异性(即，针对不同抗原的不同结合位点)的抗体具有不同的CDR。然而，尽管CDR在抗体与抗体之间是不同的，但是CDR内只有有限数量的氨基酸位置直接参与抗原结合。使用Kabat,Chothia、AbM、Contact和North方法中的至少两种，可以确定最小重叠区域，从而提供用于抗原结合的“最小结合单位”。最小结合单位可以是CDR的一个子部分。正如本领域技术人员明了，通过抗体的结构和蛋白折叠，可以确定CDR序列其余部分的残基。因此，本发明也考虑本文所给出的任何CDR的变体。例如，在一个CDR的变体中，最小结合单位的氨基酸残基可以保持不变，而根据Kabat或Chothia定义的其余CDR残基可以被保守氨基酸残基替代。
本发明所述的人源化抗体，可以使用本领域已知的方法将鼠源CDR区插入人种系框架区。参见Winter等人的美国专利No.5,225,539及Queen等人的美国专利No.5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370。
在一些实施方式中，氨基酸变化包括氨基酸缺失、插入或置换。在一些实施方式中，本发明的抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段包括具有已通过氨基酸缺失、插入或置换突变的，但仍与上述抗体(特别地在上述序列中描绘的CDR区中)有至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列的那些抗体。在一些实施方式中，本发明的抗体与具体序列中描绘的CDR区相比较时，在CDR区中已通过氨基酸缺失、插入或置换的氨基酸突变不超过1、2、3、4或5个。
在一些实施方式中，编码本发明抗体的多核苷酸包括已通过核苷酸缺失、插入或置换突变的，但仍然与上文中所述的序列中描绘的CDR对应编码区具有至少约60、70、80、90、95或100％同一性的多核苷酸。
在一些实施方式中，可在本文中所提供抗体的Fc区中引入一个或多个氨基酸修饰，以此产生Fc区变体。Fc区变体可包含在一或多个氨基酸位置处包含氨基酸修饰(例如置换)的人Fc区序列(例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)。
在一些实施方式中，可能需要产生经半胱氨酸工程改造的抗体，例如“硫代MAb”，其中抗体的一或多个残基经半胱氨酸残基置换。
在一些实施方式中，可以对抗体进行改变以增加或降低其糖基化程度和/或改变其糖基化模式。对抗体的糖基化位点的添加或缺失可通过改变氨基酸序列以便产生或移除一或多个糖基化位点而方便地实现。举例而言，可实施一或多种氨基酸取代以消除或多个糖基化位点，由此消除该位点处的糖基化。可制备具有改变类型的糖基化的抗体，例如具有减小量的岩藻糖基残基的低或无岩藻糖化抗体或具有增加的等分GlcNac结构的抗体。这类改变的糖基化模式已显示可增加抗体的ADCC能力。
在一些优选实施方式中，本发明提供这样的抗体，该抗体是低或无岩藻糖基化的，从而可以显著地增加抗体与效应细胞上表达受体的结合亲和力，由此导致抗体具有增强的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性。可以通过MALDI-TOF质谱法测量，相对于与Asn 297连接的所有糖结构(例如复合型、杂合型及高甘露糖型结构)的总和，计算在Asn297处糖链内的岩藻糖的平均量，由此确定岩藻糖的量，例如WO2008/077546中所述。Asn297是指位于Fc区中大约位置297处(Fc区残基的EU编号)的天冬氨酸残基；然而，由于抗体中微小的序列变化，Asn297也可能位于位置297上游或下游约±3个氨基酸位置，即位置294与300之间。参见例如US2003/0157108；US2004/0093621。可以在能够产生去岩藻糖基化或低岩藻糖基化抗体的细胞系中产生此类抗体变体。此类细胞的实例包括蛋白质岩藻糖基化缺陷的Lecl3 CHO细胞(Ripka,J.等，Arch.Biochem.Biophys.249(1986):533-545；US2003/0157108。在一些实施方式中，使用岩藻糖苷酶切除抗体的岩藻糖残基。在一些实施方式中，使用糖型调节剂来控制抗体的岩藻糖残基。糖型调节剂可以是CDFS01，可商购自上海奥浦迈生物科技有限公司。去岩藻糖基化可通过本领域公知的常规方法进行。
抗体的岩藻糖基化的水平可在结构上加以界定。如本文所述，“非岩藻糖基化”或“无岩藻糖基化”是指在抗体中，岩藻糖的含量低于5％，例如约0％、低于1％、低于2％、低于3％、低于4％。术语“低岩藻糖基化”是指在抗体中，岩藻糖的含量是约为大于等于5％且低于30％；例如抗体中岩藻糖的含量约为5％-10％、10％-15％、15％-20％、20％-25％、25％-30％、10％-20％、20％-30％、10％-30％。术语“低岩藻糖基化或无岩藻糖基化”是指在抗体中岩藻糖的含量低于30％。
在一些实施方式中，本文中所提供的抗体可进一步经修饰为含有本领域中已知且轻易获得的其他非蛋白质部分。适合抗体衍生作用的部分包括，但不限于，水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括，但不限于，聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1，3-二烷、聚-1，3，6-三烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)、及葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇、及其混合物。
抗体表达
在又一个方面，本发明提供了一种多核苷酸，其编码如本文所述的抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段。所述多核苷酸可以包含编码抗体的轻链可变区和/或重链可变区的氨基酸序列的多核苷酸，或包含编码抗体的轻链和/或重链的氨基酸序列的多核苷酸。
在又一个方面，本发明提供了一种表达载体，其包含如本文所述的多核苷酸，优选地，所述载体为真核表达载体。在一些实施方式中，如本文所述的多核苷酸包含在一个或多个表达载体中。
在又一个方面，本发明提供了一种宿主细胞，其包含如本文所述的多核苷酸或如本文所述的表达载体，优选地，所述宿主细胞是真核细胞，更优选哺乳动物细胞。
在又一个方面，本发明提供了一种用于制备如本文所述的抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在适合于所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下在本文所述的宿主细胞中表达所述抗体或其抗原结合片段，并从所述宿主细胞回收所表达的抗体或其抗原结合片段。
本发明提供用于表达本发明的重组抗体的哺乳动物宿主细胞，包括可获自美国典型培养物保藏中心(ATCC)的许多永生化细胞系。这些尤其包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NS0、SP2/0细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞、A549细胞、293T细胞和许多其它细胞系。哺乳动物宿主细胞包括人、小鼠、大鼠、狗、猴、猪、山羊、牛、马和仓鼠细胞。通过测定哪种细胞系具有高表达水平来选择特别优选的细胞系。
在一个实施方式中，本发明提供制备抗CLDN-18.2抗体的方法，其中所述方法包括，将表达载体导入哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养足够的一段时间，以允许抗体在宿主细胞中表达，或者更优选抗体分泌到宿主细胞生长的培养基中,来产生抗体。可采用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收抗体。
很可能由不同细胞系表达或在转基因动物中表达的抗体彼此具有不同的糖基化。然而，由本文提供的核酸分子编码的或包含本文提供的氨基酸序列的所有抗体是本发明的组成部分，而不论抗体的糖基化如何。同样，在某些实施方式中，非岩藻糖基化抗体是有利的，因为它们通常在体外和体内具有比其岩藻糖基化对应物更强力的功效，并且不可能是免疫原性的，因为它们的糖结构是天然人血清IgG的正常组分。
药物偶联物
本发明提供了一种结构如式(I-1)所示的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物(ADC)或其药学上可接受的盐：
Ab-(L-D)m 式(I-1)
其中，
L是接头单元；
D为具有细胞毒性的小分子药物；
m表示偶联于Ab的L-D单元的平均数，且m选自1-8,优选2-7,更优选2-5；
Ab为抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段,其包含
(I)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:72所示的HCDR1和HCDR2，和如SEQ ID NO:73或3所示的HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(II)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:41和SEQ IDNO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(III)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:40和SEQID NO:12所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(IV)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:40和SEQID NO:12所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(V)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:74所示的HCDR1和HCDR2，和如SEQ ID NO:30或75所示的HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些实施方式中，本发明所述抗CLDN-18.2抗体药物偶联物如下式所示：
或
其中m和Ab如本文所定义。
在一些实施方式中，本发明所述抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段包含：
(I)氨基酸序列如SEQ ID NO:55、57、82或83所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:56所示的轻链可变区；或
(II)氨基酸序列如SEQ ID NO:60、76或78所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQID NO:61所示的轻链可变区；或
(III)氨基酸序列如SEQ ID NO:76所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ IDNO:77所示的轻链可变区；或
(IV)氨基酸序列如SEQ ID NO:79所示的重链可变区；和氨基酸序列如SEQ ID NO:80所示的轻链可变区；或
(V)氨基酸序列如SEQ ID NO:55所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:81所示的轻链可变区。
在一些实施方式中，本发明所述抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段包含：
(1)氨基酸序列如SEQ ID NO:64所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:65所示的轻链；或
(2)氨基酸序列如SEQ ID NO:68所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:69所示的轻链；或
(3)氨基酸序列如SEQ ID NO:84所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:85所示的轻链；或
(4)氨基酸序列如SEQ ID NO:86所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:87所示的轻链；或
(5)氨基酸序列如SEQ ID NO:88所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:89所示的轻链；或
(6)氨基酸序列如SEQ ID NO:90所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:91所示的轻链；或
(7)氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:93所示的轻链；或
(8)氨基酸序列如SEQ ID NO:94所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:95所示的轻链；或
(9)氨基酸序列如SEQ ID NO:96所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:97所示的轻链；或
(10)氨基酸序列如SEQ ID NO:98所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:99所示的轻链；或
(11)氨基酸序列如SEQ ID NO:100所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:101所示的轻链。
药物组合物和药物制剂
在又一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含如本文所述的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体或赋形剂。
应理解，本发明提供的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物可以整合制剂中合适的运载体、赋形剂和其他试剂以联合给药，从而提供改善的转移、递送、耐受等。
术语“药物组合物”指这样的制剂，其允许包含在其中的活性成分的生物学活性有效的形式存在，并且不包含对施用所述制剂的受试者具有不可接受的毒性的另外的成分。
可以通过将具有所需纯度的本发明的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐与一种或多种任选的药用辅料(Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol,A.编辑(1980))混合来制备包含本文所述的抗CLDN-18.2抗体的药物制剂，优选地以水溶液或冻干制剂的形式。
本发明的药物组合物或制剂还可以包含一种或多种其它活性成分，所述活性成分是被治疗的特定适应证所需的，优选具有不会不利地影响彼此的互补活性的那些活性成分。在一些实施方式中，其它的活性成分为化疗剂、免疫检查点抑制剂、生长抑制剂、抗生素或已知的各种抗肿瘤或抗癌剂，所述活性成分以对于目的用途有效的量合适地组合存在。在一些实施方式中，本发明的药物组合物还包含编码抗CLDN-18.2抗体的多核苷酸的组合物。
在又一个方面，本发明提供了一种药物组合，其包含如本文所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或本文所述的药物组合物，以及一种或多种另外的治疗剂。
在又一个方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括如本文所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或本文所述的药物组合物，优选其进一步包括给药装置。
医药用途
在又一个方面，本发明提供了如本文所述的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐，或本文所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防CLDN-18.2介导的疾病或病症的药物中的用途，优选地，所述疾病或病症为癌症。
在又一个方面，本发明提供了如本文所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，或本文所述的药物组合物，其用于治疗和/或预防CLDN-18.2介导的疾病或病症，优选地，所述疾病或病症为癌症。
在又一个方面，本发明提供了一种治疗和/或预防CLDN-18.2介导的疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用如本文所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，或本文所述的药物组合物，优选地，所述疾病或病症为癌症。
在一些实施方式中，所述癌症选自胃癌、食道癌、胃食管癌、胰腺癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌、肠癌和膀胱癌药物。
在一些实施方式中，本发明给药方式包括但不限于口服、静脉内、皮下、肌内、动脉内、关节内(例如在关节炎关节中)、通过吸入、气雾剂递送或肿瘤内给予等。
在一些实施方式中，本发明提供了向受试者联合施用治疗有效量的一种或多种疗法(例如治疗方式和/或其它治疗剂)。在一些实施方式中，所述疗法包括手术治疗和/或放射疗法。
在一些实施方式中，本发明提供的方法或用途还包括向个体施用一种或多种疗法(例如治疗方式和/或其它治疗剂)。可以单独或与疗法中的其它治疗剂组合使用本发明的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐。例如，可以与至少一种另外的治疗剂共施用。
在一个实施方式中，本发明的癌症疾病治疗方法还包括施用CLDN-18.2表达稳定或增加剂。CLDN-18.2的表达优选在癌细胞的细胞表面。CLDN-18.2表达稳定或增加剂可以是奥沙利铂和/或5-FU。
本发明包括所叙述特定实施方式的所有组合。本发明的进一步实施方式及可应用性的完整范畴将自下文所提供的详细描述变得显而易见。然而，应理解，尽管详细描述及特定实施例指示本发明的优选实施方式，但仅以说明的方式提供这些描述及实施例，因为本发明的精神及范畴内的各种改变及修改将自此详细描述对熟悉此项技术者变得显而易见。出于所有目的，包括引文在内的本文所引用的所有公开物、专利及专利申请将以引用的方式全部并入本文。
实施例
提供以下实施例以证明并进一步解释本发明的一些优选的实施方式和方面，不应被解释为限制其范围。
实施例1、抗CLDN-18.2抗体
本发明所述的抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段包括申请号为PCT/CN2021/106125中描述的任意一个抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段，该申请公开的全部内容通过引入全文并入本文。在一些方案中，在本发明的药物偶联物和组合物中使用的抗CLDN-18.2抗体的序列如下表1和表2所示。
表1.人源化抗CLDN-18.2抗体可变区和CDR序列(KABAT方案)
表2.人源化抗CLDN-18.2抗体可变区和CDR序列(KABAT方案)
实施例2、抗CLDN-18.2抗体药物偶联物(ADC1)的制备
2.1抗CLDN-18.2抗体偶联至接头-细胞毒素MC-VC-PAB-MMAE以制备偶联物
药物来源：vc-MMAE，即MC-VC-PAB-MMAE(接头-细胞毒素，CAS号：646502-53-6)，购自上海皓元医药股份有限公司。
抗CLDN-18.2抗体偶联至接头-细胞毒素MC-VC-PAB-MMAE以制备偶联物的制备方法如下：
第一步：
第二步：
ADC-3-MMAE(JS107-3-MMAE)的制备
第一步：将抗体JS012-Chi9-hu7(1.0eq.)置换到缓冲液(pH 7.0，50mM PBS/2mMEDTA)中，向置换后的溶液中加入TCEP(三(2-羰基乙基)磷，2.9eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h，得到抗体还原后的溶液；第二步：向抗体还原后的溶液中加入10％DMA(N,N-二甲基乙酰胺)，vc-MMAE(7.0eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h。将反应液置换到缓冲溶液(50mMPBS/150mM NaCl/pH 7.0)中，浓缩后得到本发明抗CLDN-18.2抗体药物偶联物ADC-3-MMAE，储存于-60～-90℃。其中m＝2-5，n＝2-5。ADC-3-MMAE用反相高效液相色谱法检测，ADC毒素和抗体的比例DAR＝3.97。ADC-3-MMAE的SEC-HPLC(分子排阻色谱法)纯度为98.9％。
ADC-4-MMAE(JS107-4-MMAE)的制备
第一步：将抗体JS012-chi2-hu2-v3-2(1.0eq.)置换到缓冲液(pH7.0，50mM PB/2mM EDTA)中，向置换后的溶液中加入TCEP(2.9eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h，得到抗体还原后的溶液；第二步：向抗体还原后的溶液中加入10％DMA，vc-MMAE(7.0eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h。将反应液置换到缓冲溶液(50mM PBS/150mM NaCl/pH 7.0)中，浓缩后得到本发明抗CLDN-18.2抗体药物偶联物ADC-4-MMAE，产品储存于-60～-90℃储存。其中m＝2-5，n＝2-5。
采用上述相同方法测得ADC-4-MMAE的DAR＝4.55；SEC-HPLC纯度为99.3％。
ADC-2-MMAE(阳性对照，IMAB362抗体药物偶联物，JS107-2-MMAE)的制备
采用与上述类似的方法，制备阳性对照抗体IMAB362的偶联物。采用上述相同方法测得其DAR＝3.60，SEC-HPLC为99.4％。
ADC-5-MMAE(JS107-5-MMAE)的制备
第一步：将抗体JS012-chi2-hu2-v3-2a(1.0eq.)置换到缓冲液(pH 7.0，50mM PB/2mM EDTA)中，向置换后的溶液中加入TCEP(2.2eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h，得到抗体还原后的溶液；第二步：向抗体还原后的溶液中加入10％DMA，vc-MMAE(5.5eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h。将反应液置换到缓冲溶液(50mM PBS/150mM NaCl/pH 7.0)中，浓缩后得到本发明抗CLDN-18.2抗体药物偶联物ADC-5-MMAE，产品储存于-60～-90℃储存。其中m＝2-5，n＝2-5。
采用上述相同方法测得ADC-5-MMAE的DAR＝4.1；SEC-HPLC纯度为99.5％。
ADC-11-MMAE(JS107-11-MMAE)的制备
第一步：将抗体JS012-chi2-hu27(1.0eq.)置换到缓冲液(pH 7.0，50mM PB/2mMEDTA)中，向置换后的溶液中加入TCEP(2.75eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h，得到抗体还原后的溶液；第二步：向抗体还原后的溶液中加入10％DMA，vc-MMAE(10.0eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h。将反应液置换到缓冲溶液(50mM PBS/150mM NaCl/pH 7.0)中，浓缩后得到本发明抗CLDN-18.2抗体药物偶联物ADC-11-MMAE，产品储存于-60～-90℃储存。其中m＝2-5，n＝2-5。
采用上述相同方法测得ADC-11-MMAE的DAR＝2.49；SEC-HPLC纯度为92.5％。
ADC-12-MMAE(JS107-12-MMAE)的制备
第一步：将抗体JS012-chi2-hu29(1.0eq.)置换到缓冲液(pH 7.0，50mM PB/2mMEDTA)中，向置换后的溶液中加入TCEP(2.5eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h，得到抗体还原后的溶液；第二步：向抗体还原后的溶液中加入10％DMA，vc-MMAE(6.0eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h。将反应液置换到缓冲溶液(50mM PBS/150mM NaCl/pH 7.0)中，浓缩后得到本发明抗CLDN-18.2抗体药物偶联物ADC-12-MMAE，产品储存于-60～-90℃储存。其中m＝2-5，n＝2-5。
采用上述相同方法测得ADC-12-MMAE的DAR＝2.22；SEC-HPLC纯度为92.6％。
ADC-13-MMAE(JS107-13-MMAE)的制备
第一步：将抗体JS012-chi2-hu10 V2(1.0eq.)置换到缓冲液(pH7.0，50mM PB/2mMEDTA)中，向置换后的溶液中加入TCEP(2.5eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h，得到抗体还原后的溶液；第二步：向抗体还原后的溶液中加入10％DMA，vc-MMAE(6.0eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h。将反应液置换到缓冲溶液(50mM PBS/150mM NaCl/pH 7.0)中，浓缩后得到本发明抗CLDN-18.2抗体药物偶联物ADC-13-MMAE，产品储存于-60～-90℃储存。其中m＝2-5，n＝2-5。
采用上述相同方法测得ADC-13-MMAE的DAR＝2.37；SEC-HPLC纯度为95.0％。
ADC-14-MMAE(JS107-14-MMAE)的制备
第一步：将抗体JS012-chi9-hu2(1.0eq.)置换到缓冲液(pH 7.0，50mM PB/2mMEDTA)中，向置换后的溶液中加入TCEP(2.8eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h，得到抗体还原后的溶液；第二步：向抗体还原后的溶液中加入10％DMA，vc-MMAE(6.0eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h。将反应液置换到缓冲溶液(50mM PBS/150mM NaCl/pH 7.0)中，浓缩后得到本发明抗CLDN-18.2抗体药物偶联物ADC-14-MMAE，产品储存于-60～-90℃储存。其中m＝2-5，n＝2-5。
采用上述相同方法测得ADC-14-MMAE的DAR＝2.34；SEC-HPLC纯度为97.0％。
ADC-15-MMAE(JS107-15-MMAE)的制备
第一步：将抗体JS012-chi9-hu7 V2(1.0eq.)置换到缓冲液(pH 7.0，50mM PB/2mMEDTA)中，向置换后的溶液中加入TCEP(2.75eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h，得到抗体还原后的溶液；第二步：向抗体还原后的溶液中加入10％DMA，vc-MMAE(6.0eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h。将反应液置换到缓冲溶液(50mM PBS/150mM NaCl/pH 7.0)中，浓缩后得到本发明抗CLDN-18.2抗体药物偶联物ADC-15-MMAE，产品储存于-60～-90℃储存。其中m＝2-5，n＝2-5。
采用上述相同方法测得ADC-15-MMAE的DAR＝2.99；SEC-HPLC纯度为94.8％。
ADC-16-MMAE(JS107-16-MMAE)的制备
第一步：将抗体JS012-chi9-hu8 V2(1.0eq.)置换到缓冲液(pH 7.0，50mM PB/2mMEDTA)中，向置换后的溶液中加入TCEP(2.2eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h，得到抗体还原后的溶液；第二步：向抗体还原后的溶液中加入10％DMA，vc-MMAE(10eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h。将反应液置换到缓冲溶液(50mM PBS/150mM NaCl/pH 7.0)中，浓缩后得到本发明抗CLDN-18.2抗体药物偶联物ADC-16-MMAE，产品储存于-60～-90℃储存。其中m＝2-5，n＝2-5。
采用上述相同方法测得ADC-16-MMAE的DAR＝2.62；SEC-HPLC纯度为95.2％。
ADC-17-MMAE(JS107-17-MMAE)的制备
第一步：将抗体JS012-chi10-hu9(1.0eq.)置换到缓冲液(pH 7.0，50mM PB/2mMEDTA)中，向置换后的溶液中加入TCEP(3.2eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h，得到抗体还原后的溶液；第二步：向抗体还原后的溶液中加入10％DMA，vc-MMAE(10eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h。将反应液置换到缓冲溶液(50mM PBS/150mM NaCl/pH 7.0)中，浓缩后得到本发明抗CLDN-18.2抗体药物偶联物ADC-17-MMAE，产品储存于-60～-90℃储存。其中m＝2-5，n＝2-5。
采用上述相同方法测得ADC-17-MMAE的DAR＝3.86；SEC-HPLC纯度为96.1％。
ADC-18-MMAE(JS107-18-MMAE)的制备
第一步：将抗体JS012-chi27-hu36(1.0eq.)置换到缓冲液(pH 7.0，50mM PB/2mMEDTA)中，向置换后的溶液中加入TCEP(5.5eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h，得到抗体还原后的溶液；第二步：向抗体还原后的溶液中加入10％DMA，vc-MMAE(13eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h。将反应液置换到缓冲溶液(50mM PBS/150mM NaCl/pH 7.0)中，浓缩后得到本发明抗CLDN-18.2抗体药物偶联物ADC-18-MMAE，产品储存于-60～-90℃储存。其中m＝2-5，n＝2-5。
采用上述相同方法测得ADC-18-MMAE的DAR＝2.92；SEC-HPLC纯度为97.1％。
ADC-19-MMAE(JS107-19-MMAE)的制备
第一步：将抗体JS012-chi27-hu3 V2(1.0eq.)置换到缓冲液(pH7.0，50mM PB/2mMEDTA)中，向置换后的溶液中加入TCEP(2.9eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h，得到抗体还原后的溶液；第二步：向抗体还原后的溶液中加入10％DMA，vc-MMAE(10eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h。将反应液置换到缓冲溶液(50mM PBS/150mM NaCl/pH 7.0)中，浓缩后得到本发明抗CLDN-18.2抗体药物偶联物ADC-19-MMAE，产品储存于-60～-90℃储存。其中m＝2-5，n＝2-5。
采用上述相同方法测得ADC-19-MMAE的DAR＝2.85；SEC-HPLC纯度为97.3％。
2.2抗CLDN-18.2抗体偶联至接头-细胞毒素MC-MMAF以制备偶联物
药物来源：MC-MMAF(接头-细胞毒素，CAS号：863971-19-1)，购自上海皓元医药股份有限公司。
抗CLDN-18.2抗体偶联毒素MC-MMAF的制备方法如下：
第一步：
第二步：
ADC-3-MMAF(JS107-3-MMAF)的制备
第一步：将JS012-chi9-hu07(1.0eq.)置换到缓冲液(pH 7.0，50mM PB/2mM EDTA)中，向置换后的溶液中加入TCEP(2.9eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h，得到抗体还原后的溶液；第二步：向抗体还原后的溶液中加入10％DMA，MC-MMAF(8.0eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h。反应液置换到缓冲溶液(50mM PBS/150mM NaCl/pH 7.0)中，浓缩后得到本发明抗CLDN-18.2抗体药物偶联物ADC-3-MMAF。产品储存于-60～-90℃储存。其中m＝2-5，n＝2-5。
采用上述相同方法测得ADC-3-MMAF的DAR＝4.13；SEC-HPLC纯度为99.1％。
ADC-4-MMAF(JS107-4-MMAF)的制备
第一步：将JS012-chi2-hu2-v3-2(1.0eq.)溶液置换到缓冲液(pH 7.0，50mM PB/2mM EDTA)中，向置换后的溶液中加入TCEP(2.9eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h，得到抗体还原后的溶液；第二步：向抗体还原后的溶液中加入10％DMA，MC-MMAF(8.0eq.)，控制温度在25℃，搅拌反应2h。反应液置换到缓冲溶液(50mM PBS/150mM NaCl/pH 7.0)中，浓缩后得到ADC-4-MMAF。产品储存于-60～-90℃储存。其中m＝2-5，n＝2-5。
采用上述相同方法测得ADC-4-MMAF的DAR＝3.85；SEC-HPLC纯度为97.0％。
ADC-2-MMAF(阳性对照，IMAB362抗体药物偶联物)的制备
采用与上述类似的方法，制备阳性对照抗体IMAB362的偶联物。采用上述相同方法测得其DAR＝3.62，SEC-HPLC为98.10％。
实施例3：抗CLDN-18.2抗体药物偶联物的结合活性检测
将过表达人CLDN-18.2的胃癌细胞株NUGC4-CLDN-18.2细胞分别与梯度稀释成系列浓度的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物(起始浓度为100μg/mL，3倍梯度稀释)在4℃孵育30min，然后洗涤并与荧光标记的二抗一起孵育。最后用BD CantoII流式细胞仪检测荧光强度。荧光信号越强，表示抗体与靶标亲和力越高。通过GraphPad拟合抗体剂量依赖性的结合曲线(图1a-1d)并计算EC50，阳性对照分别是相应的单克隆抗体，阴性对照为抗-KLH IgG1。
如图1a-1d所示，ADC-2-MMAE、ADC-2-MMAF、ADC-3-MMAE、ADC-4-MMAE、ADC-4-MMAF和ADC-5-MMAE均能够结合在胃癌细胞株NUGC4-CLDN-18.2细胞表面上高表达的人CLDN-18.2。其中本发明药物偶联物ADC-3-MMAE、ADC-4-MMAE、ADC-4-MMAF和ADC-5-MMAE结合能力EC50值优于对应的单克隆抗体JS107-3(JS012-Chi9-hu7)、JS107-4(JS012-Chi2-hu2-v3-2)和JS107-5(JS012-Chi2-hu2-v3-2a)。
实施例4：抗CLDN-18.2抗体药物偶联物的内吞活性检测
将抗CLDN-18.2抗体药物偶联物用CypHer 5E Mono NHS Ester染料标记，当用CypHer5E标记的抗体药物偶联物与细胞表面的Claudin 18.2结合后，偶联物与抗原的复合物会进入细胞核内，在核内的酸性环境下偶联物上的CypHer5E染料就会释放很强的荧光信号，通过FACS检测可以检测到荧光信号的释放。荧光信号越强，表示药物的内吞活性越强。
将CypHer5E标记的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物稀释成系列浓度梯度(起始浓度为100μg/mL，3倍梯度稀释)，分别与过表达人CLDN-18.2的胃癌细胞株NUGC4-CLDN-18.2细胞在37℃孵育4h，然后洗涤并用BD CantoII流式细胞仪检测荧光强度。通过GraphPad拟合抗体剂量依赖性的结合曲线(图2a-b)并计算EC50，对照组是相应的单抗和抗-KLH IgG1。
如图2a所示，ADC-2-MMAE、ADC-2-MMAF、ADC-3-MMAE、ADC-4-MMAE和ADC-4-MMAF均能介导很强的内吞活性。ADC-3-MMAE、ADC-4-MMAE和ADC-4-MMAF内吞活性相当。ADC-2-MMAE和ADC-2-MMAF内吞活性相当。ADC-3-MMAE、ADC-4-MMAE和ADC-4-MMAF内吞活性显著强于ADC-2-MMAE和ADC-2-MMAF。图2b结果显示，ADC-5-MMAE的内吞活性强于其单克隆抗体JS107-5(JS012-Chi2-hu2-v3-2a)。
实施例5：抗CLDN-18.2抗体药物偶联物抑制细胞增殖的作用
将过表达人CLDN-18.2的胃癌细胞株NUGC4-CLDN-18.2细胞分别与梯度稀释成系列浓度的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物(起始浓度为50μg/mL，5倍梯度稀释)在37℃细胞培养箱共培养48h，然后加入Cell titer Glo试剂，室温孵育5～10min。最后用酶标仪检测化学发光值(Luminescence)。化学发光值越小，表示活细胞数越少，抗体抑制细胞增殖作用越强。通过GraphPad拟合抗体剂量依赖性的结合曲线(图3a-3c)并计算EC50(表3)，对照组为相应的单克隆抗体。
如图3a-3c所示，ADC-2-MMAE、ADC-2-MMAF、ADC-3-MMAE、ADC-4-MMAE和ADC-4-MMAF均具有抑制过表达人CLDN-18.2的胃癌细胞株NUGC4-CLDN-18.2细胞的增殖的活性(图3a)，其对未过表达人CLDN-18.2的野生型胃癌细胞株NUGC4细胞仅在高浓度点具有抑制增殖作用(图3b)。如图3c所示，ADC-5-MMAE也具有抑制过表达人CLDN-18.2的胃癌细胞株NUGC4-CLDN-18.2细胞的增殖的活性。
从表3可知，ADC-2-MMAE的增殖抑制活性弱于ADC-2-MMAF，而ADC-3-MMAE的增殖抑制活性与ADC-4-MMAE和ADC-4-MMAF相当，均优于ADC-2-MMAE和ADC-2-MMAF。
表3.抗CLDN-18.2抗体药物偶联物抑制NUGC4-CLDN-18.2细胞增殖的作用(IC50)
抗CLDN-18.2抗体药物偶联物 IC50(ng/mL)
ADC-2-MMAE 45.14
ADC-2-MMAF 14.79
ADC-4-MMAE 10.99
ADC-4-MMAF 9.355
ADC-3-MMAE 12.70
实施例6：抗CLDN-18.2抗体药物偶联物在人胃癌NUGC4CLDN-18.2皮下移植瘤模型 中的抗肿瘤药效研究-1
1、测试目的
评价本发明抗体药物偶联物在人胃癌NUGC4 CLDN-18.2皮下移植瘤模型中的抗肿瘤作用。
2、测试过程
取130只6-8周龄雌性BALB/c nude小鼠(上海灵畅生物科技有限公司)，于右侧背部皮下接种2.0×106(个/0.1mL)NUGC4CLDN-18.2细胞。当肿瘤平均体积为104mm3时根据肿瘤体积挑选36只动物随机分为6组，每组6只动物，分别为
生理盐水对照组(阴性对照组)；
ADC-2-MMAE阳性对照组，4mg/kg；
ADC-3-MMAE治疗组，4mg/kg；
ADC-3-MMAF治疗组，4mg/kg；
ADC-4-MMAE治疗组，4mg/kg；
ADC-4-MMAF治疗组，4mg/kg。
所有组动物静脉单次给药，给药20天后结束实验。每周测量肿瘤体积及体重2次，记录小鼠体重和肿瘤体积。实验结束时，将小鼠安乐死，计算肿瘤抑制率TGI％(TGI＝(1-(Ti-T0)/(Vi-V0))))。Ti：治疗组和阳性对照组在给药第i天的肿瘤体积均值；T0：治疗组和阳性对照组在给药第0天的肿瘤体积均值；Vi：阴性对照组在给药第i天的肿瘤体积均值；V0：阴性对照组在给药第0天的肿瘤体积均值。
如图4所示，在实验结束时，生理盐水对照组平均肿瘤体积为2113mm3。
ADC-2-MMAE阳性对照组、ADC-3-MMAE治疗组和ADC-4-MMAE治疗组的平均肿瘤体积分别为668mm3、154mm3和46mm3，与生理盐水对照组相比，肿瘤抑制率分别为71.9％、97.5％和102.9％。表明在4mg/kg的剂量水平ADC-3-MMAE和ADC-4-MMAE可以显著抑制人胃癌NUGC4CLDN-18.2细胞皮下移植瘤的生长，且抑制效果优于阳性对照ADC-2-MMAE。
ADC-3-MMAF治疗组和ADC-4-MMAF治疗组的平均肿瘤体积分别为824mm3和319mm3，与生理盐水对照组相比，肿瘤抑制率分别为64.2％和89.3％。表明在4mg/kg的剂量水平ADC-3-MMAF和ADC-4-MMAF可以显著抑制人胃癌NUGC4 CLDN-18.2细胞皮下移植瘤的生长。
实施例7：抗CLDN-18.2抗体药物偶联物在人胃癌NUGC4 CLDN-18.2皮下移植瘤模 型中的抗肿瘤药效研究-2
1、测试目的
评价本发明抗体药物偶联物在人胃癌NUGC4 CLDN-18.2皮下移植模型中的抗肿瘤作用。
2、测试过程
取130只6-7周龄雌性BALB/c nude小鼠(上海灵畅生物科技有限公司)，于右侧背部皮下接种2.0×106(个/0.1mL)NUGC4CLDN-18.2细胞。当肿瘤平均体积为104mm3时根据肿瘤体积挑取42只动物随机分为7组，每组6只动物，分别为
生理盐水对照组(阴性对照组)；
ADC-2-MMAE阳性对照组，2mg/kg；
ADC-2-MMAE阳性对照组，3mg/kg；
ADC-4-MMAE治疗组，2mg/kg；
ADC-4-MMAE治疗组，3mg/kg；
ADC-5-MMAE治疗组，2mg/kg；
ADC-5-MMAE治疗组，3mg/kg。
所有组动物静脉单次给药，给药21天后结束实验。每周测量肿瘤体积及体重2次，记录小鼠体重和肿瘤体积。实验结束时，将小鼠安乐死，计算肿瘤抑制率TGI％(TGI＝(1-(Ti-T0)/(Vi-V0)))。Ti：治疗组和阳性对照组在给药第i天的肿瘤体积均值；T0：治疗组和阳性对照组在给药第0天的肿瘤体积均值；Vi：阴性对照组在给药第i天的肿瘤体积均值；V0：阴性对照组在给药第0天的肿瘤体积均值。
如图5所示，在实验结束时，生理盐水对照组平均肿瘤体积为1549mm3。
阳性对照组和治疗组的结果如图5所示并总结如下。
测试组 平均肿瘤体积 肿瘤抑制率
ADC-2-MMAE，2mg/kg阳性对照组 851mm3 48.1％
ADC-2-MMAE，3mg/kg阳性对照组 633mm3 63.1％
ADC-4-MMAE，2mg/kg治疗组 834mm3 49.3％
ADC-4-MMAE，3mg/kg治疗组 568mm3 67.6％
ADC-5-MMAE，2mg/kg治疗组 729mm3 56.5％
ADC-5-MMAE，3mg/kg治疗组 438mm3 76.6％
表明在2和3mg/kg剂量水平下的ADC-4-MMAE和ADC-5-MMAE可以显著抑制人胃癌NUGC4 CLDN-18.2细胞皮下移植瘤的生长，具有良好的剂量效应，且均分别优于阳性对照ADC-2-MMAE。
实施例8：抗CLDN-18.2抗体药物偶联物在人胃癌GA0006皮下移植瘤模型中的抗肿 瘤药效研究
1、测试目的
评价本发明抗体药物偶联物在人胃癌GA0006皮下移植模型中的抗肿瘤作用。
2、测试过程
取87只4-8周龄雌性BALB/c nude小鼠(江苏集萃药康生物科技有限公司)，于右侧背部皮下接种直径为3×3×3mm3的GA0006瘤块。待肿瘤平均体积169.57mm3时，根据肿瘤大小挑取36只动物随机分组分为6组，每组6只动物，分别为
生理盐水对照组(阴性对照组)；
ADC-2-MMAE阳性对照组，8mg/kg；
ADC-4-MMAE治疗组，4mg/kg；
ADC-4-MMAE治疗组，8mg/kg；
ADC-5-MMAE治疗组，4mg/kg；
ADC-5-MMAE治疗组，8mg/kg。
所有组动物静脉单次给药，给药25天后结束实验。每周测量肿瘤体积及体重2次，记录小鼠体重和肿瘤体积。实验结束时，将小鼠安乐死，计算肿瘤抑制率TGI％(TGI＝1-T/C(％))。T/C(％)为肿瘤增值率，即在某一时间点，治疗组和对照组肿瘤体积的百分比值。T和C分别为治疗组和对照组在某一特定时间点的肿瘤体积(TV)。
如图6所示，在实验结束时，生理盐水对照组平均肿瘤体积为904.54mm3。阳性对照组和治疗组的结果如图6所示并总结如下。
测试组 平均肿瘤体积 肿瘤抑制率
ADC-2-MMAE，8mg/kg阳性对照组 461.11mm3 49.52％
ADC-4-MMAE，4mg/kg治疗组 470.58mm3 41.96％
ADC-4-MMAE，8mg/kg治疗组 400.18mm3 55.74％
ADC-5-MMAE，4mg/kg治疗组 363.22mm3 57.03％
ADC-5-MMAE，8mg/kg治疗组 239.88mm3 74.10％
结果表明在4mg/kg和8mg/kg剂量水平下的ADC-4-MMAE和ADC-5-MMAE均可以显著抑制人胃癌GA0006细胞皮下移植瘤的生长，且肿瘤抑制作用可比或优于阳性对照ADC-2-MMAE。

Claims (14)

1.一种结构如式(I-1)所示的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物(ADC)或其药学上可接受的盐：
Ab-(L-D)m式(I-1)
其中，
L是接头单元；
D为具有细胞毒性的小分子药物；
m表示偶联于Ab的L-D单元的平均数，且m选自1-8；
其中所述抗CLDN-18.2抗体药物偶联物如下式所示：
Ab为抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段，其包含
(I)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:7、SEQID NO:8和SEQ ID NO:9所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(II)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:40和SEQ IDNO:12所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
2.如权利要求1所述的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中m选自2-7。
3.如权利要求1所述的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中m选自2-5。
4.如权利要求1-3中任一项所述的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述抗CLDN-18.2抗体或其抗原结合片段包含：
(I)氨基酸序列如SEQ ID NO:55所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:56所示的轻链可变区；或
(II)氨基酸序列如SEQ ID NO:60所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:61所示的轻链可变区。
5.如权利要求1-3中任一项所述的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述抗CLDN-18.2抗体包含：
(1)氨基酸序列如SEQ ID NO:64所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:65所示的轻链；或
(2)氨基酸序列如SEQ ID NO:68所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:69所示的轻链。
6.如权利要求1-3中任一项所述的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述抗体或抗原结合片段为鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、或全人抗体。
7.如权利要求1-3中任一项所述的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述抗体或抗原结合片段为Fab、Fab'、Fab'-SH、Fv、scFv、F(ab')2、sdAb。
8.如权利要求1-3中任一项所述的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述抗体为IgG亚型。
9.如权利要求8所述的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述IgG亚型为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
10.如权利要求8所述的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述抗体是低或无岩藻糖基化的。
11.一种药物组合物，其包含如权利要求1-10中任一项所述的抗CLDN-18.2抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体或赋形剂。
12.如权利要求1-10中任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或权利要求11所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防CLDN-18.2介导的癌症的药物中的用途，所述癌症选自胃癌、食道癌、胃食管癌、胰腺癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌、肠癌和膀胱癌药物。
13.一种药物组合，其包含如权利要求1-10中任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或权利要求11所述的药物组合物，以及一种或多种另外的治疗剂。
14.一种试剂盒，其包括如权利要求1-10中任一项所述的抗体药物偶联物、或权利要求11所述的药物组合物。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107667118A (zh) * 2015-04-15 2018-02-06 加尼梅德药物有限公司 包含针对密封蛋白18.2之抗体的药物缀合物
CN111777681A (zh) * 2020-07-06 2020-10-16 上海岺樾生物医药科技有限公司 一种结合紧密连接蛋白-18.2的抗体及其用途

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
ATE430580T1 (de) 2001-10-25 2009-05-15 Genentech Inc Glycoprotein-zusammensetzungen
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
ES2937245T3 (es) 2005-08-23 2023-03-27 Univ Pennsylvania ARN que contiene nucleósidos modificados y métodos de uso del mismo
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
EP3765522A4 (en) * 2018-03-14 2022-05-18 Beijing Xuanyi Pharmasciences Co., Ltd. ANTI-CLAUDIN 18.2 ANTIBODIES
AU2019270865B2 (en) * 2018-05-18 2023-03-30 LaNova Medicines Limited Anti-claudin 18.2 antibodies and uses thereof
CN110606891B (zh) * 2018-06-17 2022-12-06 上海健信生物医药科技有限公司 一种针对人cldn18.2的抗体分子，抗原结合片段及其医药用途
CN112654638B (zh) * 2018-08-27 2022-12-30 南京圣和药业股份有限公司 一种抗Claudin18.2抗体及其应用
CN112707965A (zh) * 2019-09-30 2021-04-27 和铂医药(苏州)有限公司 靶向cldn18.2的抗体及其制备方法和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107667118A (zh) * 2015-04-15 2018-02-06 加尼梅德药物有限公司 包含针对密封蛋白18.2之抗体的药物缀合物
CN111777681A (zh) * 2020-07-06 2020-10-16 上海岺樾生物医药科技有限公司 一种结合紧密连接蛋白-18.2的抗体及其用途

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