BRPI0818511B1 - Compostos de miméticos de giro reverso e uso dos mesmos para tratar ou prevenir leucemia mielóide aguda - Google Patents

Abstract

compostos de miméticos de giro reverso e uso dos mesmos (1). são revelados os compostos conformacionalmente contidos que são novos e mimetizam a estrutura secundária da regiões de giro reverso dos peptídeos e proteínas biologicamente ativos também possuindo estrutura bicíclica, bem como os seus derivados incluindo promedicamentos. tais estruturas miméticas de giro reverso e promedicamentos possuem utilidade em uma gama grande de campos, incluindo o uso como agentes de diagnóstico e terapêuticos. a invenção também se refere ao emprego de tais compostos para a preparação de um medicamento para tratar ou prevenir o câncer incluindo leucemia mielóide aguda.

Description

Campo Técnico

[001]A presente invenção se refere, de modo geral, aos novos compostos de miméticos de giro reverso e sua aplicação no tratamento de condições médicas, por exemplo, doenças cancerígenas, e composições farmacêuticas compreendendo os miméticos.

Técnica Anterior

[002]A classificação aleatória das moléculas para possível atividade como agentes terapêuticos ocorreu por muitos anos e resultou em várias descobertas de medicamentos importantes. Enquanto avanços na biologia molecular e química computacional conduziram ao interesse aumentado no que foi denominado “projeto de medicamento racional” tais técnicas não provaram ser tão rápidas ou confiáveis conforme previsto inicialmente. Assim, em anos recentes, houve um interesse renovado e retorno à classificação aleatória de medicamento. Para este fim, avanços específicos foram feitos em novas tecnologias com base no desenvolvimento de bibliotecas de química combinatória e a classificação de tais bibliotecas na pesquisa por elementos biologicamente ativos.

[003]Inicialmente, as bibliotecas combinatórias de química foram geralmente limitadas aos elementos de origem de peptídeo ou de nucleotídeo.

[004]Embora bibliotecas combinatórias contendo elementos de origem de peptídeo e de nucleotídeo tenham valor significativo, existe ainda a necessidade na técnica de bibliotecas contendo elementos de origem diferente. Por exemplo, bibliotecas de peptídeo tradicionais em uma grande extensão meramente variam a se- quencia de aminoácido para gerar elementos da biblioteca. Embora seja bem reconhecido que as estruturas secundárias dos peptídeos são importantes para atividade biológica, tais bibliotecas de peptídeo não fornecem uma estrutura secundária conti- da para eles elementos de biblioteca.

[005]Para este fim, alguns pesquisadores ciclizaram peptídeos com pontes de dissulfeto na tentativa de prover uma estrutura secundária mais contida (Tumelty e outros, J. Chem. Soc. 1067-68, 1994; Eichler e outros, Peptide Res. 7:300-306, 1994). Contudo, tais peptídeos ciclizados são geralmente ainda muito flexíveis e são fracamente biodisponíveis e assim alcançaram apenas sucesso limitado.

[006]Mais recentemente, foram desenvolvidos os compostos não peptídeo que mais proximamente mimetizam a estrutura secundária dos giros reversos encontrada nas proteínas biologicamente ativas ou peptídeos. Por exemplo, a Patente US número 5.440.013 de Kahn e Pedidos PCT publicados números. WO94/03494, WO01/00210A1 e WO01/16135A2 de Kahn revelam, cada um, compostos não pep- tídicos, conformacionalmente contidos, que mimetizam a estrutura tridimensional dos giros reversos. Além disto, a Patente US número 5.929.237 e sua continuação em parte, Patente US número 6.013.458 ambas de Kahn, revelam compostos conforma- cionalmente contidos que mimetizam a estrutura secundaria de regiões de giro reverso dos peptídeos e proteínas biologicamente ativas. A síntese e identificação dos miméticos de giro reverso, conformacionalmente contidos e sua aplicação às doenças foram bem revistas por Obrecht (Advances in Med. Chem, 4, 1-68, 1999).

[007]Embora avanços significativos tenham sido feitos na síntese e identificação dos miméticos de giro reverso conformacionalmente contidos, permanece a necessidade na técnica de moléculas pequenas que mimetizem a estrutura secundária dos peptídeos. Existe também uma necessidade na técnica de bibliotecas contendo tais elementos, bem como técnicas para sintetização e classificação dos elementos da biblioteca contra alvos de interesse, especificamente alvos biológicos para identificar elementos bioativos da biblioteca.

[008]No tempo médio, um proto-oncogene é um gene normal que pode se tornar um oncogene devido às mutações ou expressão aumentada. cMyc (MYC) é conhecido como um dos proto-oncogenes e desregulação de c-Myc é considerada um de uma série de eventos oncogênicos necessários para tumorigênese de mamíferos (Pelengaris S, Khan M. The many faces of c-MYC. Arch Biochem Biophys. 2003; 416:129-136). A desregulação de MYC através de uma variedade de mecanismos, foi verificada como estando associada às leucemias mielóides (Hoffman B, Amanullah A, Shafarenko M, Liebermann DA. O proto-oncogene The protooncogene c-Myc in hematopoietic development and leukemogenesis. Oncogene. 2002; 21: 3414-3421). Além disso, foi verificado que c-Myc induz rapidamente a leucemia mileoide aguda (Hui Luo e outros "c- Myc rapidly induces acute myeloid leukemia in mice without evidence of lymphoma-associated antiapoptotic mutations," Blood, 1 Outubro de 2005, volume 106, Number 7, pp 2452-2461).

[009]Uma vez que c-Myc pode ser suprarregulado na leucemia mielóide aguda, a função oncogênica de c-Myc tem sido estudada e seu papel exato na leu- cemogênese mielóide tem sido estudado. Recentemente, algum cientista verificou que Myc preferivelmente estimulou o crescimento das células progenitoras mielóides em metilcelulose e mostrou que Myc é um efetor a jusante importante da leucemo- gênese mielóide (IBID).

[0010]A verificação de que c-Myc desempenha um papel importante na leu- cemogênese mielóide indica que por inibição de uma ativação da proteína de c-Myc, uma leucemia mielóide aguda pode ser curada ou prevenida.

[0011]Por outro lado, enzimas da superfamília do citocromo P450 (CY) são as maiores determinantes da meia vida e executam efeitos farmacológicos de muitos medicamentos terapêuticos. A subfamília de citocromo humano P450 (CYP) 3A inclui CYP3A4, que é o mais abundante no fígado humano (~40%) e metaboliza mais de 50% dos medicamentos usados clinicamente (Shimada e outros 1994; Rendic and Di Carlo 1997). Devido ao papel chave de CYP3A4 no metabolismo do medicamento, inativação significativa desta enzima resultaria em interações medicamento- sas-medicamento farmacocinético marcantes. A inibição de CYP3A4 pode causar toxicidade medicamentosa grave através da exposição melhorada aos medicamentos coadministrados (Dresser e outros, 2000). Por exemplo, quando inibidores CYP3A4 irreversíveis, tais como, eritromicina ou claritromicina são coadministrados com terfenadina, astemizol ou pimozido, os pacientes podem experimentar “Torsades de pointes” (uma arritmia ventricular com risco de morte associada ao prolongamento de QT) (Spinier e outros 1995; Dresser e outros 2000). Os pacientes com câncer, por vezes, sofrem múltiplos regimes de tratamento, o que aumenta o risco de interações medicamentosas seguido por reações adversas ao medicamento.

[0012]Portanto, no desenvolvimento dos agentes terapêuticos, especialmente quando eles devem ser administrados em combinação com outros medicamentos, existe a necessidade de se prover compostos possuindo menos atividade inibidora de CYP3A4.

Revelação da Invenção Problema Técnico

[0013]O objetivo da presente invenção é prover novos compostos que mime- tizam a estrutura secundária das regiões de giro reverso dos peptídeos biologicamente ativos e proteínas e possuem atividade biológica, tal como, efeito anticâncer.

[0014]Outro objetivo da presente invenção é prover novos compostos que inibem a sinalização Wnt.

[0015]Ainda outro objetivo da presente invenção é prover novos compostos que podem ser usados como farmacêuticos, especificamente possuindo menos atividade reguladora de CYP3A4 (IC50 mais alto).

[0016]Ainda outro objetivo da presente invenção é prover novos compostos para tratamento ou prevenção de leucemia mielóide aguda através da infrarregula- ção da expressão de c-Myc.

Solução Técnica

[0017]A presente invenção se refere a um novo tipo de compostos confor- macionalmente contidos e derivados incluindo promedicamentos dos mesmos, que mimetizam a estrutura secundária das regiões de giro reverso dos peptídeos e proteínas biologicamente ativos. Esta invenção também revela bibliotecas contendo tais compostos, bem como a síntese e classificação dos mesmos.

[0018]Os compostos da presente invenção possuem a seguinte fórmula geral (I):

onde E é -ZR3- ou -(C=O)NH-, -(C=O)O-, -(C=O)S-, -S(O)2- ou uma ligação; e cada R1, R2, R3, R4 e R5 é o mesmo ou diferente e independentemente uma fração de cadeia lateral de aminoácido ou um derivado de cadeia lateral de aminoácido. O composto mimético de giro reverso pode estar presente como um estereoisômero isolado ou uma mistura de estereoisômeros ou como um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0019]Em determinadas modalidades, R1 dos compostos da fórmula (I) pode ser indazolila ou indazolila substituída.

[0020]Exemplos específicos de R1, R2, R3, R4 e R5 são providos na descrição detalhada que se segue.

[0021]Em uma modalidade, onde E é CHR3 os compostos desta invenção possuem a fórmula (II) que se segue:

onde W é conforme definido acima e R1, R2, R3, R4 e R5 são conforme defi-nidos na descrição detalhada que se segue.

[0022]Em determinadas modalidades, os compostos desta invenção possu-em a Fórmula geral (III) que se segue:

onde R1, R4, R6, X1, X2 e X3 são definidos na descrição detalhada que se segue.

[0023]A presente invenção também está relacionada aos promedicamentos usando as bibliotecas contendo um ou mais compostos da Fórmula (I). Um promedi- camento é projetado tipicamente para liberar o medicamento ativo no corpo durante ou após absorção por hidrólise enzimática e/ou química. A abordagem do promedi- camento é um meio eficaz para aperfeiçoar a biodisponibilidade oral ou administração i.v. de medicamentos fracamente solúveis em água por derivatização química com relação aos compostos mais solúveis em água. A abordagem de promedica- mento, de modo geral mais usada para aumentar a solubilidade aquosa dos medicamentos contendo um grupo hidroxila é produzir ésteres contendo um grupo ionizá- vel; por exemplo, grupo fosfato, grupo carboxilato, grupo alquilamino (Fleisher e ou-tros, Advanced Drug Delivery Reviews, 115-30, 1996; Davis e outros, Cancer Res., 7247-7253, 2002, Golik e outros, Bioorg. Med. Chem. Lett. 1837-1842, 1996). Exemplos de grupo funcional que pode ser liberado no corpo podem incluir fosfato, porém quaisquer outros grupos funcionais que são convencionalmente usados como grupo ionizável em um promedicamento podem ser usados.

[0024]Em determinadas modalidades, os promedicamentos da presente invenção possuem a seguinte fórmula geral (IV): (III)-R7 (IV) onde (III) é a Fórmula (III) conforme descrita acima; um dentre R1, R4, R6, X1, X2 e X3 é ligado ao R7 através de Y; Y é um oxigênio, enxofre ou nitrogênio em R1, R4 ou R6 ou um oxigênio em X1, X2 ou X3; e R7 é hidroxialquila, glicosila, fosforiloxi- metiloxicarbonila, piperidina carbonilóxi substituída ou não, ou um sal da mesma; ou Y-R7 é um resíduo de aminoácido, uma combinação de resíduos de amino ácido, fosfato, hemimalato, hemisuccinato, dimetilaminoalquilcarbamato, dimetilaminoace- tato ou um sal dos mesmos; e quando não ligado a R7: R1, R4, R6, X1, X2 e X3 são definidos na descrição detalhada que se segue.

[0025]Em determinadas modalidades, os promedicamentos da presente invenção são capazes de servir como um substrato para uma fosfatase, um carboxila- to ou outras enzimas e são desta forma convertidos nos compostos possuindo a fórmula geral (III). A presente invenção é também dirigida às bibliotecas contendo um ou mais compostos da Fórmula (I) acima, bem como métodos para sintetização de tais bibliotecas e métodos para classificar as mesmas para identificação dos compostos biologicamente ativos. Em um aspecto correlato, a presente invenção provê, adicionalmente, novos compostos que possuem menos atividade inibidora de CYP3A4. A presente invenção também provê novos compostos que possuem atividade de inibição contra sinalização Wnt. A presente invenção também provê novos compostos que podem se usados para a preparação de um medicamento para um tratamento ou prevenção de leucemia mielóide aguda.

Efeitos Vantajosos

[0026]A presente invenção provê novos compostos de miméticos de giro reverso. Os compostos da presente invenção exibem menos atividade inibidora de CY2A4 (IC50 mais alto) o que permite compostos como farmacêuticos em potencial, especialmente quando devem ser administrados em combinação com outros medicamentos. Os compostos da presente invenção mostraram forte atividade inibidora contra sinalização de Wnt. Os compostos inibiram o crescimento das células cancerígenas de AML e podem ser usados no tratamento ou prevenção de uma leucemia mielóide aguda.

Breve Descrição dos Desenhos

[0027]Será feita referência agora em detalhes à modalidade preferida da presente invenção, exemplos da mesma sendo ilustrados nos desenhos anexados ao presente documento. As modalidades são descritas a seguir, de modo a explicar a presente invenção com referência às figuras.

[0028]A figura 1 provê um esquema sintético geral para preparação de mi- méticos de giro reverso da presente invenção.

[0029]A figura 2 mostra um efeito dos compostos de teste (Compostos A, B e C) na atividade de CYP3A4. O gráfico se baseia na medição do IC50 para os Compostos da presente invenção do ensaio de inibição de CYP3A4, onde a inibição da atividade de CYP3A4 foi medida em várias concentrações do composto para obter o valor de IC50. Procedimentos detalhados são revelados no Exemplo 1.

[0030]A figura 3 mostra os resultados da medição de IC50 do Composto D para as células SW480 no TopFlash Reporter Gene Biossay (Bioensaio de gene repórter TopFlash).

[0031]A figura 4 mostra a inibição do crescimento de células cancerígenas de AML por compostos de teste de acordo com a concentração dos compostos de teste (Compostos A e C). Melhor Modo de Realizar a Invenção

[0032]Conforme usado no relatório descritivo e nas reivindicações apensas, a menos que especificado de outra forma, os termos que se seguem apresentam o significado indicado: “Amino” se refere ao radial -NH2.

[0033]“Amidino” se refere ao radical -C=NH)-NH2. Um ou ambos hidrogênios do grupo amina de amidino podem ser substituídos por um ou dois grupos alquila, conforme definido no presente documento. Os radicais amidino derivatizados com alquila são também referidos como “alquilamidino” e “dialquilamidino”, respectivamente.

[0034]“Ciano” se refere ao radical -CN.

[0035]“Carbóxi” se refere ao radical -COOR, onde R é hidrogênio ou alquila, conforme definido no presente documento.

[0036]“Acila” se refere ao radical -COR, onde R é alquila, arila, cicloalquila, heterociclila, conforme definido no presente documento. Por exemplo, R pode ser metila, butenila, ciclopropila e semelhantes. A alquila ou arila pode ser opcionalmente substituída com os substituintes conforme descrito para um grupo alquila ou arila, respectivamente. Grupos acila exemplares incluem, sem limitação, fenilacila, benzi- lacila, acila C1-6 (por exemplo, acetila) e semelhantes.

[0037]“Alquilssulfonato” se refere ao radical -OS(O)2-NR2, onde R é alquila conforme definido no presente documento.

[0038]“Amidossulfonato” se refere ao radical -OS(O)2-NR2, cada R sendo independentemente hidrogênio ou alquila. Aminossulfonatos exemplares incluem - OS(O)2N2, -OS(O)2NHMe.

[0039]“Aminocarbonila” se refere ao radical -C(O)NR2, cada R sendo independentemente hidrogênio, alquila, amino, cicloalquilalquila, heterociclila, alcoxial- quila, hidroxialquila, hidroxila, alcóxi, arilalquila, heterociclilalquila ou dois Rs em con- junto com o átomo de nitrogênio ao qual eles são anexados formam uma heterocicli- la, conforme definido no presente documento. Quando um de R for hidrogênio, o outro R será alquila C1-4 , aminocarbonila pode ser representada por “alquilformami- dila C1-4 “.

[0040]“N-formamidila” se refere ao radical -NHC(O)H.

[0041]“Fenilssulfonila” se refere ao radical -S(O)2-R, quando R é fenila, a fe- nila podendo ser substituída adicionalmente com alquila ou cloro.

[0042]“Fenilssulfonato” se refere ao radical -O-S(O2)-R, onde R é fenila, a fenila podendo ser substituída adicionalmente com alquila ou cloro.

[0043]“Alquilssulfonila” se refere ao radical -S(O)2, onde R é alquila conforme definida no presente documento. Radicais alquilssulfonila exemplares incluem metilssulfonila.

[0044]“Alquiltio” se refere ao radical -SR onde R é alquila conforme definida no presente documento.

[0045]“Ariltio” se refere ao radical -SR onde R é arila, conforme definida no presente documento. O grupo arila de ariltio pode ser adicionalmente substituído com alquila ou cloro.

[0046]“Arilóxi” se refere ao radical -OR, onde R é arila conforme definida no presente documento. O grupo arila pode ser adicionalmente substituído com alquila, alcóxi e semelhantes.

[0047]“Aciloxialquila” se refere ao radical -R’ -OC(O)-R, onde R é alquila, arila, cicloalquila, heterociclila conforme definido no presente documento; e R’ é uma alquila.

[0048]“Guanidino” se refere ao radical -NH-C(=NH)-NH2. Um ou ambos hi- drogênios do grupo amina do guanidino podem ser substituídos com um ou dois grupos alquila, conforme definido no presente documento. Os radicais guanidino de- rivatizados de alquila são também referidos como “alquilguanidino” e “dialquilguani- dino”, respectivamente.

[0049]“Nitro” se refere ao radical -NO2.

[0050]“Alquila” se refere a um radical de cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificada consistindo unicamente de átomos de carbono e hidrogênio. Uma alquila pode ser saturada (contendo carbonos ligados em conjunto por ligações simples apenas) ou insaturada (contendo carbonos ligados em conjunto por pelo menos uma ligação dupla ou ligação tripla). Uma alquila possuindo um a doze átomos de carbono é também referida como “frações de alquila de cadeia inferior” e pode ser representada por “alquila C1-12 “. Em outras modalidades uma alquila pode compreender um a quatro átomos de carbono e ser representada por “alquila C1-4”. Em outras modalidades, uma alquila pode compreender dois a cinco átomos de carbono e ser representada por “alquila C2-5”. Uma alquila é anexada ao restante da molécula por uma ligação simples. Exemplos de alquilas saturadas incluem, sem limitação, metila, etila, n-propila, 1-metiletil (iso-propila), n-butila, n-pentila, 1,1-dimetiletil (t-butila), 3- metilexila, 2-metilexila e semelhantes. Exemplos de alquilas insaturadas incluem, sem limitação, etenila (isto é, vinila), prop-1-enila (isto é alila), but-1-enila, pent-1- enila, penta-1,4-dienila, etinila (isto é, acitilenila), prop-1-inila e semelhantes.

[0051]Uma alquila pode também ser um radical de hidrocarboneto monocí- clico ou bicíclico, que pode incluir sistemas de anel fundidos ou ligados em ponte. Uma alquila cíclica é também referida como “cicloalquila”. Em determinadas concretizações, uma cicloalquila pode compreender três a seis átomos de carbono e ser representada por “cicloalquila C3-6”. Exemplos de radicais cicloalquila monocíclica incluem, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila, cicloeptila e ciclooctila. Uma cicloalquila insaturada contém uma ligação dupla endo (isto é, uma ligação dupla no anel). Exemplos de cicloalquila insaturada incluem cicloexenila. Exemplos de radicais cicloalquila bicíclica incluem, por exemplo, norbornila (isto é, biciclo [2.2.1] heptila), 7,7-dimetil-biciclo[2.2.1]heptila e semelhantes.

[0052]A menos que declarado de outra forma, especificamente no relatório descritivo, o termo “alquila” inclui ambas alquila e “alquila substituída” que se refere a um radical alquila no qual um ou mais átomos de hidrogênio são substituídos por um ou mais substituintes independentemente selecionados de: acila, amidino, alquilami- dino, dialquilamidino, alcóxi, arila, ciano, cicloalquila, guanidino, alquilguanidino, di- alquilguanidino, halo, heterociclila, hidrazinila, hidroxila, nitro, -OC(O)-R11, -N(R11)2, - C(O)OR11, -C(O)N(R11)2, -N(R11)C(O)R11, -N(R11)C(O)R11, -N(R11)S(O)tR11 (onde t é 1 ou 2), -S(O)tOR11 (onde t é 1 ou 2), -S(O)pR11 (onde p é 0, 1 ou 2) e -S(O)tN(R11)2 (onde t é 1 ou 2), onde cada R11 é independentemente hidrogênio, alquila, arila, ari- lalquila, heterociclila ou heterociclilalquila, conforme definido no presente documento.

[0053]“Alcóxi” se refere a um radical representado pela fórmula alquila-O-, onde alquila é conforme definido no presente documento. A porção alquila pode ser adicionalmente substituída por um ou mais halogênios. Um alcóxi pode também ser representado pelo número de carbonos no grupo alquila, por exemplo, alcóxi C1-6 ou alcóxi C1-3.

[0054]“Arila” se refere a um radical derivado do sistema de anel monocíclico ou bicíclico aromático por remoção de um átomo de hidrogênio de um átomo de carbono do anel. O sistema de anel monocíclico ou bicíclico aromático compreende seis a doze átomos de carbono (isto é, arila C6-12), onde pelo menos um dos anéis no sistema de anel é completamente insaturado, isto é, contém um sistema de elétron- π deslocalizado (4n + 2), cíclico de acordo com a teoria de Hückel. Opcionalmente, um ou dois átomos do anel da arila podem ser heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Exemplos de radicais arila incluem, porém não estão limitados à fenila e naftila. A menos que de outra forma citado especificamente no relatório descritivo, o termo “arila” significa a inclusão de ambos arila e “arila substituída”, que se refere a um radical arila no qual um ou mais átomos de hidrogênio são substituídos por um ou mais substituintes independentemente selecionados de: alquila, acila, amidino, amidossulfonato, alcóxi, arilóxi, ciano, guanidino, alquilguanidi- no, dialquilguanidino, halo, hidrazinila, hidroxila, nitro, heterociclila, -OC(O)-R11, - N(R11)2, -C(O)OR11, -C(O)N(R11)2, -N(R11)C(O)R11, -N(R11)C(O)R11, -N(R11)S(O)tR11 (onde t é 1 ou 2), -S(O)tOR11 (onde t é 1 ou 2), -S(O)pR11 (onde p é 0, 1 ou 2) e - S(O)tN(R11)2 (onde t é 1 ou 2), onde cada R11 é independentemente hidrogênio, alquila, arila, arilalquila, heterociclila ou heterociclilalquila.

[0055]“Arilalquila” se refere a um radical alquila onde um ou mais hidrogê- nios da alquila são substituídos com um ou mais grupos arila, conforme definido no presente documento. Nas várias concretizações, arilalquila inclui de 7 a 15 carbonos e pode ser representada por arilalquila C7-15. Em determinadas modalidades, arilal- quila é arilalquila C1-4 onde uma alquila C1-4 é substituída com um grupo arila ou dois grupos arila, os últimos sendo referidos como “diarilalquila” ou “bisarilalquila”. Exemplos de arilalquila C1-4 incluem, porém não são limitados à arilmetila, ariletila, arilpro- pila, arilbutila, bisarilmetila, bisariletila, bisarilpropila, bisarilbutila. Radicais arilalquila exemplares incluem, sem limitação, benzila, naftilmetila, difenilmetila, 3,3- bisfenilpropila e semelhantes. A menos que de outra forma declarado especificamente no relatório descritivo, o termo “arilalquila” significa a inclusão de ambas arilalquila e “arilalquila substituída”, onde a parte alquila e/ou a parte arila do radical arilalquila pode ser substituída conforme descrito no presente documento para o radical alquila e radical arila, respectivamente.

[0056]“Cicloalquilalquila” se refere a um radical alquila onde um ou mais hi- drogênios da alquila são substituídos com um ou mais grupos c conforme definido no presente documento. Em determinadas modalidades, cicloalquilalquila é cicloalqui- lalquila C1-2, tal como, cicloalquilmetila, cicloalquiletila e semelhantes. Radicais ciclo- alquilalquila exemplares incluem, sem limitação, cicloexilalquila (por exemplo, cicloe- xilmetila e cicloexiletila) e ciclopentilalquila (por exemplo, ciclopentilmetila e ciclopen- tietila) e semelhantes. A menos que de outra forma declarado especificamente no relatório descritivo, o termo “cicloalquilalquila” significa a inclusão de ambas cicloal- quilalquila e “cicloalquilalquila substituída”, onde a parte alquila e/ou a parte cicloal- quila do radical cicloalquilalquila podem ser substituídas, conforme descrito no presente documento, pelo radical alquila e radical cicloalquila, respectivamente.

[0057]“Glicosila” se refere a um radical por remoção do grupo hemiacetal de uma forma cíclica de um monossacarídeo (por exemplo, glicose), dissacarídeo, oli- gossacarídeo (compreendendo três a dez monossacarídeos) ou polissacarídeo (compreendendo mais de dez monossacarídeos).

[0058]“Halo” ou “halogênio” se refere aos radicais flúor, cloro, bromo ou iodo.

[0059]“Haloalquila” se refere a um radical alquila, conforme definido no presente documento, que é substituído por um ou mais radicais halo, conforme definido no presente documento. Haloalquilas exemplares incluem, sem limitação: trifluorme- tila, difluormetila, triclorometila, 2,2,2-trifluoretila, 1-fluormetil-2-fluoretila, 3-bromo-2- fluorpropila, 1-bromometil-2-bromoetila, e semelhantes. Uma alquila substituída com um ou mais flúors é também referida como “perfluoralquila”, por exemplo. Uma alquila substituída com um ou mais flúor é também referida como “perfluoralquila”, por exemplo, “perfluoralquila C1-4”. A parte alquila do radical haloalquila pode ser opcionalmente substituída conforme definido no presente documento por um grupo alquila.

[0060]“Heterociclila” se refere a um radical do anel heterocíclico estável que compreende dois a onze átomos de carbono e de um a três heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre. Em determinadas modalidades, a heteroci- clila contém um ou dois heteroátomos. A menos que declarado de outra forma especificamente no relatório descritivo, o radical heterociclila pode ser um sistema de anel monocíclico ou bicíclico, que pode incluir sistemas de anel fundidos ou ligados em ponte. Em determinadas modalidades, a heterociclila pode ser um anel monocí- clico de 5, 6 ou 7 elementos. Em outras modalidades, a heterociclila pode ser um anel bicíclico fundido de 8, 9, 10, 11 ou 12 elementos. Os heteroátomos no radical heterociclila podem ser opcionalmente oxidados. Um ou mais átomos de nitrogênio, caso presentes, podem ser opcionalmente quaternizados. O radical heterociclila pode ser não aromático ou aromático (isto é, pelo menos um anel no radical heterocicli- la possui um sistema de elétron-n (4n + 2) deslocalizado de acordo com a teoria de Hückel). A heterociclila pode ser anexada ao restante da molécula através de qualquer átomo do(s) anel(anéis). Exemplos de radicais heterocíclicos não aromáticos incluem, porém não são limitados a dioxolanila, decaidroisoquinolila, imidazolinila, imidazolidinila, isotiazolidinila, isoxazolidinila, morfolinila, octaidroindolila, octai- droisoindolila, 2-oxopiperazinila, 2-oxopiperidinila, 2-oxopirrolidinila, oxazolidinila, piperidinila (também referida como "piperidila"), piperazinila, 4-piperidonila, 3- pirrolinila, pirrolidinila, pirazolidinila, quinuclidinila, tiazolidinila, tetraidrofurila, tritianila, tetraidropiranila, tiomorfolinila e tiamorfolinila. Exemplos de radicais heterocíclicos aromáticos incluem, porém não estão limitados a azepinila, acridinila, benzimidazoli- la, benzindolila, 1,3-benzodioxolila, benzofuranila, benzooxazolila, benzoisoxazolila, benzo[d]tiazolila, benzotiadiazolila, benzo[b][1,4]dioxepinila, benzo[b][1,4]oxazinila, 1,4-benzodioxanila, benzoxazolila, benzodioxolila, benzodioxinila, benzopiranila, benzopirazolila, benzofuranila, benzofuranonila, benzotienila(benzotiofenila), ben- zotieno[3,2-d]pirimidinila, benzotriazolila, carbazolila, cromona, cinolinila, ciclopen- ta[d]pirimidinila, dibenzofuranila, dibenzotiofenila, furanila, furanonila, furo[3,2- c]piridinila, isotiazolila, imidazolila, indazolila, indolila, indazolila, isoindolila, indolinila, isoindolinila, isoquinolila, indolizinila, isoxazolila, 5,8-metano-5,6,7,8- tetraidroquinazolinila, naftiridinila, 1,6-naftiridinonila, oxadiazolila, 2-oxoazepinila, oxazolila, oxiranila, 5,6,6a,7,8,9,10,10a-octaidrobenzo[h]quinazolinila, fenazinila, fe- notiazinila, fenoxazinila, ftalazinila, pteridinila, purinila, pirrolila, pirazolila, pirazol[3,4- d]pirimidinila, piridinila (também referida como piridila), pirido[3,2-d]pirimidinila, piri- do[3,4-d]pirimidinila, pirazinila, pirimidinila, piridazinila, pirrolila, quinazolinila, quinoxalinila, quinolinila, isoquinolinila, tetraidroquinolinila, 1,2,3,4- tetraidrocarbazolila, 5,6,7,8-tetraidroquinazolinila, tiazolila, tiadiazolila, triazolila, tetrazolila, triazin-2-ila, tieno[2,3-d]pirimidinila, tieno[3,2-d]pirimidinila, tieno[2,3- c]pridinila e tiofenila (isto é, tienila). A menos que declarado de outra forma especificamente no relatório descritivo, o termo “heterociclila” indica inclusão de ambas he- terociclila e “heterociclila substituída”, que se refere a um radical heterociclila substituído por um ou mais substituintes selecionados dentre alquila, acila, oxo (por exemplo, piridinonila, pirolidonila), arila, arilalquila, aciloxialquila, amidino, alcóxi, ciano, guanidino, alquilguanidino, dialquilguanidino, halo, hidrazinila, hidroxila, nitro, - OC(O)-R11, -N(R11)2, -C(O)OR11, -C(O)N(R11)2, -N(R11)C(O)R11, -N(R11)C(O)R11, - N(R11)S(O)tR11 (onde t é 1 ou 2), -S(O)tOR11 (onde t é 1 ou 2), -S(O)pR11 (onde p é 0, 1 ou 2) e -S(O)tN(R11)2 (onde t é 1 ou 2), onde cada R11 é independentemente hidrogênio, alquila, arila, arilalquila, heterociclila ou heterociclilalquila.

[0061]“Heterociclilalquila” se refere a um radical alquila, onde um ou mais hi- drogênios da alquila são substituídos com um ou mais grupos heterociclila, conforme definido aqui. Se a heterociclila for uma heterociclila contendo nitrogênio, a heteroci- clila pode ser anexada ao radical alquila no átomo de nitrogênio. Em determinadas modalidades, a parte alquila da heterociclilalquila contém 1-4 átomos de carbono e pode ser representada por heterociclilalquila C1-4. Exemplos de radicais heterocicli- lalquila incluem, sem limitação, morfolinilalquila, tal como, morfolinilmetila, piperidi- lalquila, tal como, piperidilmetila, imidazolidinilalquila, tal como, imidazolidinilmetila e semelhantes. Exemplos adicionais de radicais heterociclilalquila, onde a parte hete- rociclila é aromática incluem, porém não estão limitados a: piridilmetila, piridiletila, piridilpropila, piridilbutila, quinolinilmetila, quinoliniletila, quinolinilpropila, quinolinilbu- tila, indazolilmetila, indazoliletila, indazolilpropila, indazolilbutila, benzpirazolilmetila, benzpirazoliletila, benzpirazolilpropila, benzpirazolilbutila, isoquinolinilmetila, isoqui- nolinil etila, isoquinolinilpropila, isoquinolinilbutila, benzotriazolilmetila, benzotriazoli- letila, benzotriazolilpropila, benzotriazolilbutila e semelhantes. A menos que de outra forma declarado especificamente no relatório descritivo, o termo “heterociclilalquila” inclui ambas heterociclilalquila e “heterociclilalquila substituída”, onde a parte alquila e/ou parte heterociclila do radical heterociclilalquila pode ser substituída conforme descrito no presente documento para o radical alquila e o radical heterociclila, respectivamente.

[0062]Os compostos ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem conter um ou mais centros assimétricos e podem assim dar surgimento aos enantiôme- ros, diastereômeros e outras formas estereoisoméricas que podem ser definidas, em termos de estereoquímica absoluta, como (R)- ou (S)- ou como (D)- ou (L)- para aminoácidos. Quando os compostos descritos no presente documento contêm ligações duplas olefínicas ou outros centros de assimetria geométrica, e a menos que de outra forma especificado, pretende-se que os compostos incluam ambos isôme- ros geométricos E e Z (por exemplo, cis ou trans). Da mesma forma, pretende-se que todos os isômeros possíveis, bem como suas formas racêmicas e opticamente puras e todas as formas tautoméricas estejam incluídos.

[0063]Conforme usado no presente documento, “aminoácido” destina-se a incluir os a-aminoácidos ocorrendo naturalmente e/ou aminoácidos não naturais, tais como, e—aminoácidos e ácidos homoamino. Exemplos de aminoácidos incluem, porém não estão limitados a: alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, glutamina, ácido glutâmico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina, valina, fosfoserina, fosfotre- onina, fosfotirosina, 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, demosina, isodemosina, gama- carboxiglutamato, ácido hipúrico, ácido octaidroindol-2-carboxílico, estatina, ácido 1,2,3,4-tetraidroisoquinolina-3-carboxílico, penicilamina, ornitina, 3-metilistidina, nor-valina, beta-alanina, ácido gama-aminobutílico, cirtulina, homocisteína, homoserina, metil-alanina, para-benzoilfenilalanina, fenilglicina, propargilglicina, sarcosina, metio- nina sulfona, t-butilglicina, 3,5-dibromotirosina e 3,5-diidotirosina.

[0064]“Resíduo de aminoácido” ou “fração de cadeia lateral de aminoácido” se refere à porção de um aminoácido que permanece após perda da molécula de água (ou álcool) quando o aminoácido é condensado com uma molécula. Tipicamente, um aminoácido é condensado com uma molécula, incluindo um composto de qualquer uma das Fórmulas (I)-(IV), por formação de uma ligação de peptídeo. Em determinadas modalidades, o grupo amino funcional do aminoácido pode ser condensado com um grupo do ácido carboxílico ou seu equivalente reativo (por exemplo, anidrido carboxílico) da molécula. Em outras modalidades, o grupo funcional do ácido carboxílico do aminoácido pode ser condensado com um grupo amina da molécula. Tipicamente, uma molécula de água é perdida durante a formação da ligação de peptídeo. Exemplos dos “resíduos de aminoácido” ou “fração de cadeia de ami- noácido” incluem, porém não estão limitados aos resíduos de alanina, arginina, as- paragina, ácido aspártico, cisteína, glutamina, ácido glutâmico, glicina, histidina, iso- leucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina, valina, fosfoserina, fosfotreonina, fosfotirosina, 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, demosina, isodemosina, gama-carboxiglutamato, ácido hipúrico, ácido octaidroindol- 2-carboxílico, ácido 1,2,3,4-tetraidroisoquinolina-3-carboxílico, penicilamina, ornitina, 3-metilistidina, norvalina, beta-alanina, ácido gama-aminobutílico, cirtrulina, homocis- teína, homoserina, metil-alanina, para-benzoilfenilalanina, fenilglicina, propargilglici- na, sarcosina, metionina sulfona, t-butilglicidina, 3,4-dibromotirosina, 3,5- diiodotirosina, treonina glicosilada, serina glicosilada e asparagina glicosilada.

[0065]Um “derivado de cadeia lateral de aminoácido” se refere a um derivado de qualquer fração de cadeia lateral de aminoácido conforme descrito na Tabela 1. Em determinadas modalidades, o derivado da cadeia lateral de aminoácido é alquila, acila, alcóxi, arila, arilalquila, heterociclila ou heterociclilalquila, conforme defi- nido no presente documento. Tabela 1

[0066]Um “estereoisômero” se refere a um composto fabricado dos mesmos átomos ligados pelas mesmas ligações, porém possuindo estruturas tridimensionais diferentes, que não são intercambiáveis. Portanto, é contemplado que vários estere- oisômeros e misturas dos mesmos que incluem “enantiômeros” se referem a dois estereoisômeros cujas moléculas não são imagens idênticas sobrepostas uma da outra.

[0067]Um “tautômero” se refere a um deslocamento de próton de um átomo da molécula para outro átomo da mesma molécula.

[0068]“Promedicamentos” indica um composto que pode ser convertido em condições fisiológicas ou por solvólise em um composto biologicamente ativo descrito no presente documento. O termo “promedicamento” se refere a um precursor de um composto biologicamente ativo que é farmaceuticamente aceitável. Um pro- medicamento pode ser inativo quando administrado a um indivíduo, porém é convertido in vivo em um composto ativo, por exemplo, por hidrólise. O composto de medicamento frequentemente oferece vantagens de solubilidade, compatibilidade de tecido ou liberação retardada em um organismo de mamífero (vide, Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985), pp. 7-9, 21-24 (Elsevier, Amsterdam). Uma discussão dos promedicamentos é provida em Higuchi, T., e outros, "Pro-drugs as Novel Delivery Systems," A.C.S. Symposium Series, Vol. 14, e em Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, ambos sendo completamente incorporados como referência ao presente documento.

[0069]O termo “promedicamento” inclui quaisquer veículos ligados covalen- temente, que liberam o composto ativo in vivo quando tal medicamento é administrado a um indivíduo mamífero. Os promedicamentos de um composto ativo, conforme descritos no presente documento, podem ser preparados por modificação dos grupos funcionais presentes no composto ativo, pelo que as modificações são clivadas, tanto na manipulação de rotina quanto in vivo, em relação ao composto ativo de origem. Os promedicamentos incluem compostos onde um grupo hidroxila, amino ou mercapto é ligado a qualquer grupo que, quando o promedicamento do composto ativo é administrado a um indivíduo mamífero, cliva para formar um grupo hidroxila livre, amino livre ou mercapto livre, respectivamente. Exemplos dos promedicamen- tos incluem, porém não estão limitados aos derivados de acetato, succinato, fosfato, hemissucinato, malato, hemimalato, formato e benzoato do álcool ou grupos funcionais amina nos compostos ativos e semelhantes. Outros exemplos dos promedica- mentos incluem, porém não estão limitados aos derivados de aminoácido dos grupos funcionais do álcool ou amina nos compostos ativos e semelhantes.

[0070]A presente invenção se refere aos compostos conformacionalmente contidos que mimetizam a estrutura secundária das regiões de giro reverso do pep- tídeo e proteínas biológicos (também referidos como “miméticos de giro reverso” e é também dirigida às bibliotecas químicas relacionadas aos mesmos.

[0071]As estruturas miméticas de giro reverso da presente invenção são úteis como agentes bioativos, incluindo (porém não limitado) ao uso como agentes de diagnóstico, profilático e/ou terapêutico. As bibliotecas de estrutura mimética de giro reverso desta invenção são úteis na identificação dos agentes bioativos possuindo tais usos. Na prática da presente invenção, as bibliotecas podem conter de dez a centenas e milhares (ou mais) de estruturas de giro reverso individual (também referidas aqui como “elementos”).

[0072]Em um aspecto da presente invenção, a estrutura mimética de giro reverso é revelada como possuindo a seguinte fórmula (I):

onde E é -ZR3- ou -(C=O)-, onde Z é CH ou N; W é -(C=O)-, -(C=O)O-, - (C=O)S-, -S(O)2- ou uma ligação; e cada um dentre R1, R2, R3, R4 e R5 é o mesmo ou diferente e independentemente uma fração da cadeia lateral de aminoácido ou derivado de cadeia lateral de aminoácido. O composto mimético de giro reverso pode estar presente como um estereoisômero isolado ou uma mistura de estereoisô- meros ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[0073]Em determinadas modalidades, R1 dos compostos da Fórmula (I) é indazolila ou indazolila substituída.

[0074]Em determinada modalidade dos compostos descritos no parágrafo precedente, R1 dos compostos da fórmula (I) pode ser indazolila ou indazolila substituída possuindo um ou mais substituintes selecionados independentemente de alquila C1-7, arila C6-12, arilalquila C7-15, arilalquila C7-15 substituída, cicloalquilalquila, hi- droxialquila, acila C1-10, amino, halogênio, nitro, aciloxialquila C2-10, aminocarbonila, aminocarbonilalquila, dialquilaminocarbonilalquila, alcoxicarbonilalquila, hidroxialqui- la, cianoalquila C1-3, morfolinilalquila C1-3, alcoxialquilamida e cicloalquilcarbonila.

[0075]Em determinadas modalidades, R2, R4 e R5 dos compostos da Fórmula (I) são independentemente selecionados do grupo consistindo em: alquila C1-12 ou alquila C1-12 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de: halogênio, ciano, alcóxi C1-6, amino, guanidino, alquilguanidino C1-4, dialquilguanidino C1-4, amidino, alquilamidino C1-4, dialquilamidi- no C1-4, alquilamino C1-5, dialquilamino C1-5, aminocarbonila, morfolinila, metil- piperazinila, fenila e hidroxila; alquenila C2-12 ou alquenila C2-12 substituída possuindo um ou mais substi- tuintes independentemente selecionados de: amino, guanidino, alquilguanidino C1-4, dialquilguanidino C1-4, amidino, alquilamidino C1-4, dialquilamidino C1-4, alquilamino C1-5, dialquilamino C1-5 e hidroxila; arila C6-12 ou arila C6-12 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de: halogênio, amino, guanidino, alquilguanidino C1-4, dialquilguanidino C1-4, amidino, alquilamidino C1-4, dialquilamidino C1-4, alquilamino C1-5, dialquilamino C1-5, e hidroxila; alcóxi C1-6 ; dialquilamino C1-5; heterociclilalquila C6-13 que possui 1 a 2 heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre ou heterociclilalquila C6-13 substituída que possui 1 a 2 heteroátomos selecionados de nitroglênio, oxigênio ou enxofre e possui um ou mais substituintes independentemente selecionados de: halogênio, alquila C1-6, alcóxi C16, ciano e hidroxila; e arilalquila C7-13 ou arilalquila C7-13 substituída possuindo um ou mais substi- tuintes independentemente selecionados de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-6, alcóxi C1-6, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo, acetilenila e hidroxila; e R3 é selecionado do grupo consistindo em: hidrogênio; alquila C1-12 ou alquila C1-12 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: halogênio, ciano, alcóxi C1-6, amino, gua- nidino, alquilguanidino C1-4, dialquilguanidino C1-4, amidino, alquilamidino C1-4, dial- quilamidino C1-4, alquilamino C1-5, dialquilamino C1-5 e hidroxila; alquenila C2-12 ou alquenila C2-12 substituída possuindo um ou mais substi- tuintes independentemente selecionados dentre: amino, guanidino, alquilguanidino C1-4, dialquilguanidino C1-4, amidino, alquilamidino C1-4, dialquilamidino C1-4, alquila- mino C1-5, dialquilamino C1-5, e hidroxila; arila C6-12 ou arila C6-12 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de: halogênio, amino, guanidino, alquilguanidino C1-4, dialquilguanidino C1-4, amidino, alquilamidino C1-4, dialquilamidino C1-4, alquilamino C1-5, dialquilamino C1-5, e hidroxila; alcóxi C1-6; heterociclilalquila C6-13 que possui 1 a 2 heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre ou heterociclilalquila C6-13 substituída que possui 1 a 2 heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre e possui um ou mais substituintes independentemente selecionados de: halogênio, alquila C1-6, alcóxi C16, ciano e hidroxila; e arilalquila C7-13 ou arilalquila C7-13 substituída possuindo um ou mais substi- tuintes independentemente selecionados de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-6, alcóxi C1-6, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo, acetilenila e hidroxila.

[0076]Em determinadas modalidades, R2, R4 e R5 dos compostos da Fórmula (I) são independentemente selecionados do grupo consistindo em: aminoalquila C2-5; guanidinoalquila C2-5, alquila C1-4 guanidinoalquila C2-5, di- alquilguanidino C1-4-alquila C2-5; amidinoalquila C2-5; alquilamidino C1-4 alquila C2-5; dialquilamidino C1-4-alquila C2-5; alcóxi C1-3; alquila C1-12 ; arila C6-12; arilalquila C6-12; alquenila C2-12 ; fenila ou fenila substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxiC1-3, nitro, car- bóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; naftila ou naftila substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, car- bóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; benzila ou benzila substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidrazina, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, cia- no, sulfurilo, alquila C1-4, acetilenila e hidroxila; bisfenilmetila ou bisfenilmetila substituída possuindo um ou mais substituin- tes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4; alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; piridila ou piridila substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; piridilalquila C1-4 ou piridilalquila C1-4 substituída possuindo um ou mais subs- tituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidra- zino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; pirimidilalquila C1-4, ou pirimidilalquila C1-4 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; triazin-2-ilalquila C1-4 ou triazin-2-ilalquila C1-4 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guani- dino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; imidazolilalquila C1-4 ou imidazolilalquila C1-4 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guani- dino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; N-amidinopiperazinil-N -alquila C0-4, N-amidinopiperidinilalquila C1-4, e 4-aminocicloexilalquila C0-2; e R3 é selecionado do grupo consistindo em: hidrogênio, aminoalquila C2-5; guanidinoalquila C2-5; alquilguanidino C1-4 - alquila C2-5,dialquilguanidino C1-4-alquila C2-5; amidinoalquila C2-5; alquilamidino C1-4- alquila C2-5; dialquilamidino C1-4-alquila C2-5; alcóxi C1-3; alquila C1-12; arila C6-12; arilalquila C6-12; alquenila C2-12; fenila ou fenila substituída possuindo um ou mais substituintes selecionados independentemente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquilamino C1-4, dial- quilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; naftila ou naftila substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, car- bóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; benzila ou benzila substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidrazina, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, cia- no, sulfurilo e hidroxila; bisfenilmetila ou bisfenilmetila substituída possuindo um ou mais substituin- tes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4; alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; piridila ou piridila substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; piridilalquila C1-4 ou piridilalquila C1-4 substituída possuindo um ou mais subs- tituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidra- zino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; pirimidilalquila C1-4, ou pirimidilalquila C1-4 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; triazin-2-ilalquila C1-4 ou triazin-2-ilalquila C1-4 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guani- dino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; imidazolilalquila C1-4 ou imidazolilalquila C1-4 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guani- dino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; N-amidinopiperazinil-N-alquila C0-4, N-amidinopiperidinilalquila C1-4, e 4-aminocicloexilalquila C0-2.

[0077]Em determinadas modalidades, R1 dos compostos da Fórmula (I) é in- dazolila ou indazolila substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de metila; isopropila; ciclopropilmetila; hidroxietila; ciclopropil- carbonila; aminocarbonila; cianometila; morfoliniletila; aminocarbonilmetila; dimetila- minocarbonilmetila; metoxietilpropionamida; etoxicarbonilmetila; acetoxietila; fenila; benzila; e arilalquila C7-15 possuindo um ou mais substituintes selecionados independentemente de amino e nitro.

[0078]Em determinadas modalidades, R1 dos compostos da Fórmula (I) é selecionado do grupo consistindo em 2-metil-2H-indazolila, 1-metil-1H-indazolila, 3- ciclopropilcarbonil-1H- indazolila, 1-hidroxietil-1H-indazolila, 1H-indazolila, 2- ciclopropilmetil-2H-indazolila, 3-amino-1H-indazolila, 1-benzil-1H-indazolila, 3-cloro- 1H-indazolila, 6-cloro-1H-indazolila, 3 -fenil-1H-indazolila, 1-benzil-3-fenil-1H- indazolila, 1-nitrobenzil-1H-indazolila, 1-aminobenzil-1H-indazolila, 2-metil-3- ciclopropilcarbonil-2H-indazolila, 1-metil-3-aminocarbonil-1H-indazolila, carbonil- indazolila, 2-isopropil-2H-indazolila, 2-aminocarbonilmetil-2H-indazolila, 1-cianometil- 3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolila, 2-cianometil-3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolila, 1- morfolinil-N-etil-1H-indazolila, 2-morfolinil-N-etil-2H-indazolila, 2- dimetilaminocarbonilmetil-2H-indazolila, 2-metoxietilpropionamida-2H-indazolila, 1- etoxicarbonilmetil-1H-indazolila, 2-etoxicarbonilmetil-2H-indazolila e 1-acetoxietil-1H- indazolila.

[0079]Em determinadas modalidades, R2, R4 e R5 dos compostos da Fórmula (I) são independentemente selecionados do grupo consistindo em: alquila C1-2 ou alquila C1-2 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre acila, carbóxi, alquiltio, aminocarbonila, mor- folinila, metil-piperazinila, fenila, ciano, alquilamino C1-5, dialquilamino C1-5, hidroxila, alcóxi C1-6 e fenilssulfonila; alquenila C2-12 ou alquenila C2-12 substituída possuindo um ou mais substi- tuintes independentemente selecionados de acila, carbóxi, alquiltio e fenilssulfonila; arila C6-12 substituída que foi substituída com amidossulfonato; arilalquila C1-4 ou arilalquila C1-4 substituída possuindo um ou mais substi- tuintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidrazi- no, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, cicloalquila C3-6, halogênio, perfluoralquila C14, alquila C1-6, acetilenila, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo, hidroxila, alqui- loxiC1-6 acila C1-6, morfolinilalquila C1-6, arila, arilóxi, (alquil)(arilalquil)amino, heteroci- clila, acila, amidossulfonato, aminocarbonila, alquilssulfonato, alquilssulfonila, alquil- tio, ariltio, fenilssulfonato, fenilssulfonila, morfolinilalcoxi C1-3, N-formamidila e pirroli- donila; heterociclila ou heterociclila substituída possuindo um ou mais substituintes selecionados independentemente dentre: amino, amidino, guanidino, hidrazino, al- quilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-6, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; heterociclilalquila C1-4 ou heterociclilalquila C1-4 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guani- dino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, cicloalquila C3-6, halogênio, per- fluoralquila C1-4, alquila C1-6 , alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo, hidroxila, al- quilóxi C1-6 acila C1-6, morfolinilalquila C1-6, arilalquila, arila, heterociclila, acila, fenils- sulfonila, cicloalquilalquila, aciloxialquila, aminocarbonila e alquilformamidila C1-4; cicloalquila ou cicloalquila substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidrazino, al- quilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; e cicloalquilalquila ou cicloalquilalquila substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; e R3 é selecionado do grupo consistindo em: Hidrogênio; alquila C1-12 ou alquila C1-12 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de acila, carbóxi, alquiltio e fenilssulfonila; alquenila C2-12 ou alquenila C2-12 substituída possuindo um ou mais substi- tuintes selecionados independentemente de acila, carbóxi, alquiltio e fenilssulfonila; arila C6-12 substituída que foi substituída com amidossulfonato; arilalquila C1-4 ou arilalquila C1-4 substituída possuindo um ou mais substi- tuintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidrazi- no, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, cicloalquila C3-6, halogênio, perfluoralquila C14, alquila C1-6, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo, hidroxila, alquilóxi C1-6 acila C1-6, morfolinilalquila C1-6, arila, arilóxi (alquil)arilalquil)amino, heterociclila, acila, amidossulfonato, aminocarbonila, alquilssulfonato, alquilssulfonila, alquiltio, ariltio, fenilssulfonato, fenilssulfonila, morfolinilalcoxi C1-3, N-formamidila e pirrolidonila; heterociclila ou heterociclila substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre, amino, amidino, guanidino, hidrazino, al- quilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; heterociclilalquila C1-4 ou heterociclilalquila C1-4 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guani- dino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, cicloalquila C3-6, halogênio, per- fluoralquila C1-4, alquila C1-6, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo, hidroxila, alcó- xi C1-6 acila C1-6, morfolinil alquila C1-6, arilalquila, arila, heterociclila, acila, fenilssul- fonila, cicloalquilalquila, aciloxialquila, aminocarbonila e alquilformamidila C1-4; cicloalquila ou cicloalquila substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquila- mino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila; e cicloalquilalquila ou cicloalquilalquila substituída possuindo um ou mais subs- tituintes independentemente selecionados dentre: amino, amidino, guanidino, hidra- zino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-4, alquila C1-4, alcóxi C1-3, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila.

[0080]Em determinada modalidade dos compostos descritos no parágrafo precedente, arilalquila C1-4 é benzila, acetilenilbenzila, alcoxibenzila C1-4, hidroxiben- zila, bisfenilmetila, naftilmetila ou 3,3-bisfenilpropila; e heterociclilalquila C1-4 é ben- zotriazolilalquila C1-4, benzopirazolilalquila C1-4, indazolilalquila C1-4, isoquinolilalquila C1-4, benzotiazolilalquila C1-4, quinolinilalquila C1-4, imidazolinilalquila C1-4, tienilalquila C1-4, tetraidrofuranilalquila C1-4, piridinilalquila C1-4, benzimidazolilalquila C1-4 ou indo- lilalquila C1-4.

[0081]Na modalidade onde E é CHR3, o composto mimético de giro reverso desta invenção possui a estrutura da fórmula (II):

onde W é -(C=O)-, -(C=O)NH-, -(C=O)O-, -(C=O)S-, -S(O)2- ou uma ligação; e cada um de R1, R2, R3, R4 e R5 é o mesmo ou diferente e independentemente uma fração de cadeia lateral amino ou um derivado de cadeia lateral de aminoácido.

[0082]Em determinadas modalidades, R1 dos compostos da Fórmula (II) é indazolila ou indazolila substituída e pode ser indazolila ou indazolila substituída possuindo um ou mais substituintes selecionados independentemente de alquila C17, arila C6-12, arilalquila C7-15, arilalquila C7-15 substituída, cicloalquilalquila, hidroxial- quila, acila C1-10, amino, halogênio, nitro, aciloxialquila C2-10, aminocarbonila, amino- carbonilalquila, dialquilaminocarbonilalquila, alcoxicarbonilalquila, hidroxialquila, cia- noalquila C1-3, morfolinilalquila C1-3, alcoxialquilamida e cicloalquilcarbonila.

[0083]R2, R4 e R5 são independentemente selecionados do grupo consistindo em: alquila C1-12 ou alquila C1-12 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de: halogênio, ciano, alcóxi C1-6, amino, guanidino, alquilguanidino C1-4, dialquilguanidino C1-4, amidino, alquilamidino C1-4, dialquilamidi- no C1-4, alquilamino C1-5, dialquilamino C1-5, aminocarbonila, morfolinila, metil- piperazinila, fenila e hidroxila; alquenila C2-12 ou alquenila C2-12 substituída possuindo um ou mais substi- tuintes independentemente selecionados de: amino, guanidino, alquilguanidino C1-4, dialquilguanidino C1-4, amidino, alquilamidino C1-4, dialquilamidino C1-5, dialquilamino C1-5 e hidroxila; arila C6-12 ou arila C6-12 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de: halogênio, amino, guanidino, alquilguanidino C14, dialquilguanidino C1-4, amidino, alquilamidino C1-4, dialquilamidino C1-4, alquilamino C1-5, dialquilamino C1-5, e hidroxila; alcóxi C1-6; dialquilamino C1-5; heterociclilalquila C6-13 que possui 1 a 2 heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre ou heterociclilalquila C6-13 substituída que possui 1 a 2 heteroátomos selecionados de nitroglênio, oxigênio ou enxofre e possui um ou mais substituintes independentemente selecionados de: halogênio, alquila C1-6, alcóxi C16, ciano e hidroxila; e arilalquila C7-13 ou arilalquila C7-13 substituída possuindo um ou mais substi- tuintes independentemente selecionados de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-6, alcóxi C1-6, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo, acetilenila, hidroxila, fosfato, dimetilaminoacetato, dimetila- minoalquilcarbamato e dietil-fosfono-acetamido; e R3 é selecionado do grupo consistindo em: hidrogênio; alquila C1-12 ou alquila C1-12 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: halogênio, ciano, alcóxi C1-6, amino, gua- nidino, alquilguanidino C1-4, dialquilguanidino C1-4, amidino, alquilamidino C1-4, dial- quilamidino C1-4, alquilamino C1-5, dialquilamino C1-5 e hidroxila; alquenila C2-12 ou alquenila C2-12 substituída possuindo um ou mais substi- tuintes independentemente selecionados dentre: amino, guanidino, alquilguanidino C1-4, dialquilguanidino C1-4, amidino, alquilamidino C1-4, dialquilamidino C1-4, alquila- mino C1-5, dialquilamino C1-5, e hidroxila; arila C6-12 ou arila C6-12 substituída possuindo um ou mais substituintes inde- pendentemente selecionados de: halogênio, amino, guanidino, alquilguanidino C1-4, dialquilguanidino C1-4, amidino, alquilamidino C1-4, dialquilamidino C1-4, alquilamino C1-5, dialquilamino C1-5, e hidroxila; alcóxi C1-6; heterociclilalquila C6-13 que possui 1 a 2 heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre ou heterociclilalquila C6-13 substituída que possui 1 a 2 heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre e possui um ou mais substituintes independentemente selecionados de: halogênio, alquila C1-6, alcóxi C16, ciano e hidroxila; e arilalquila C7-13 ou arilalquila C7-13 substituída possuindo um ou mais substi- tuintes independentemente selecionados de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquilamino C1-4, dialquilamino C1-4, halogênio, perfluoralquila C1-6, alcóxi C1-6, nitro, carbóxi, ciano, sulfurilo e hidroxila.

[0084]Em determinada modalidade dos compostos descritos no parágrafo precedente, R1 dos compostos da Fórmula (II) pode ser indazolila ou indazolila substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de me- tila; isopropila; ciclopropilmetila; hidroxietila; ciclopropilcarbonila; aminocarbonila; cianometila; morfoliniletila; aminocarbonilmetila; dimetilaminocarbonilmetila; metoxie- tilpropionamida; etoxicarbonilmetila; acetoxietila; fenila; benzila e arilalquila C7-15 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de amino e nitro e exemplos específicos de R1 podem incluir, porém não limitado a: 2- metil-2H-indazolila, 1-metil-1H-indazolila, 3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolila, 1- hidroxietil-1H-indazolila, 1H-indazolila, 2-ciclopropilmetil-2H-indazolila, 3-amino-1H- indazolila, 1-benzil-1H-indazolila, 3-cloro-1H-indazolila, 6-cloro-1H-indazolila, 3-fenil- 1H-indazolila, 1-benzil-3-fenil-1H-indazolila, 1-nitrobenzil-1H-indazolila, 1- aminobenzil-1H-indazolila, 2-metil-3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolila, 1-metil-3- aminocarbonil-1H-indazolila, carbonil-indazolila, 2-isopropil-2H-indazolila, 2- aminocarbonilmetil-2H-indazolila, 1-cianometil-3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolila, 2- cianometil-3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolila, 1-morfolinil-N-etil-1H-indazolila, 2- morfolinil-N-etil-2H-indazolila, 2-dimetilaminocarbonilmetil-2H-indazolila, 2- metoxietilpropionamida-2H-indazolila, 1-etoxicarbonilmetil-1H-indazolila, 2- etoxicarbonilmetil-2H-indazolila e 1-acetoxietil-1H-indazolila.

[0085]Em determinada modalidade dos compostos descritos no parágrafo precedente, R2 e R5 são independentemente alquila C1-12, arila C6-12, arilalquila C7-12, heterociclilalquila C6-11, hidroxibenila ou benzila substituída possuindo os substituin- tes selecionados de fosfato, dimetilaminoacetato, (2-dimetilamino-etil)-carbamato e dietil-fosfono-acetamido.

[0086]R3 é hidrogênio ou alquila C1-12; e R4 é alquila C1-12, arilalquila C7-12 ou alquenila C2-12.

[0087]Estes compostos podem ser preparados por utilização das moléculas de componente de partida (doravante referidas como “peças componentes”). Em resumo, na síntese das estruturas miméticas de giro reverso possuindo a Fórmula (I), as estruturas miméticas de giro reverso da Fórmula (I) podem ser preparadas por acoplamento seqüencial das peças componentes individuais tanto escalonadamente na solução quanto por síntese da fase sólida, conforme geralmente praticado na síntese de peptídeo de fase sólida, seguido por ciclização para render as estruturas miméticas de giro reverso desta invenção. Alternativamente, a primeira e segunda peças componentes são acopladas para formar um primeiro-segundo intermediários combinados, caso necessário terceira e/ou quartas peças componentes são acopladas para formar um terceiro-quarto intermediários combinados (ou, se comercialmente disponível, um terceiro intermediário simples pode ser usado), o priemiro- segundo intermediário e o terceiro-quarto intermediário (ou terceiro intermediário) são então acoplados para prover um primeiro-segundo-terceiro-quarto intermediários (ou primeiro-segundo-terceiro intermediários) que são ciclizados para render as es- truturas miméticas de giro reverso desta invenção.

[0088]Peças componentes específicas e o conjunto das mesmas para preparar os compostos da presente invenção são ilustradas na figura 1. Por exemplo, uma “primeira peça componente” pode apresentar a fórmula S1 que se segue:

onde R1 é conforme definido acima e R é um grupo protetor apropriado para uso na síntese de peptídeo, onde este grupo de proteção pode ser unido a um suporte polimérico para permitir síntese da fase sólida. Grupos R apropriados incluem grupos alquila e, em uma concretização preferida, R é um grupo metila. Na figura 1, um dos grupos R é um suporte polimérico (sólido), indicado por “Pol” na figura. Tais primeiras peças componentes podem ser prontamente sintetizadas por aminação redutiva de H2N-C-R1 com CH(OR)2-CHO ou por uma reação de deslocamento entre H2N-C-R1 e CH(OR)2-CH2-LG (onde LG se refere a um grupo abandonador, por exemplo, um grupo halogênio (Hal).

[0089]Uma “segunda peça componente” pode apresentar a fórmula S2 que se segue:

onde P é um grupo protetor amino apropriado para uso na síntese de peptí- deo. L1 é hidroxila ou um grupo de ativação carbóxi, e R2 é conforme definido acima. Grupos protetores preferidos incluem t-butil dimetilssilila (TBDMS), t-butiloxicarbonila (BOC), metiloxicarbonila (MOC), 9H-fluorenilmetiloxicarbonila (FMOC) e aliloxicarbo- nila (Alloc). Aminoácidos protegidos N se encontram comercialmente disponíveis; por exemplo, aminoácidos FMOC estão disponíveis de uma variedade de fontes. De modo que a segunda peça componente seja reativa com a primeira peça componente, L1 é um grupo de ativação de carboxila e a conversão dos grupos carboxila nos grupos carboxila ativados pode ser prontamente obtida pelos métodos conhecidos na técnica para ativação dos grupos carboxila. Grupos ácido carboxílico ativados apropriados incluem haletos de ácido, onde L1 é um haleto, tal como, cloreto ou brometo, anidridos ácidos, onde L1 é um grupo acila, tal como, acetila, ésteres reativos, tais como, ésteres N-hidroxisuccinimida e ésteres pentafluorfenila e outros intermediários, tais como, o intermediário ativo formado na reação de acoplamento usando uma carbodiimida, tal como, dicicloexilcarbodiimida (DCC). Consequentemente, os aminoácidos protegidos N comercialmente disponíveis podem ser convertidos nas formas carboxílicas ativadas por meio conhecido de um versado na técnica.

[0090]No caso do derivado azido de um aminoácido servir como a segunda peça componente, tais compostos podem ser preparados do aminoácido correspondente pela reação revelada em Zaloom e outros (J. Org. Chem. 46:5173-76, 1981).

[0091]Uma “terceira peça componente” desta invenção pode apresentar a fórmula S3 que se segue:

onde R4, E e L1 são conforme definidos acima. Terceiras peças componentes apropriadas se encontram comercialmente disponíveis de uma variedade de fontes ou podem ser preparadas por métodos bem conhecidos na química orgânica.

[0092]A figura 1 ilustra a preparação dos compostos da Fórmula (I).

[0093]Assim, conforme ilustrado acima, os compostos miméticos de giro reverso da Fórmula (I) podem ser sintetizados por reação de uma primeira peça componente com uma segunda peça componente para render um primeiro-segundo intermediário combinado, seguido por reação do primeiro-segundo intermediário combinado com terceiras peças componentes sequencialmente para prover um primeiro- segundo-terceiro-quarto intermediário combinado e então ciclizando este intermediário para render a estrutura mimética de giro reverso.

[0094]As sínteses das peças componentes representativas desta invenção são descritas nos Exemplos de Preparação.

[0095]As estruturas miméticas de giro reverso das fórmulas (I) e (II) podem ser fabricadas por técnicas análogas à síntese do componente modular revelado acima, porém com modificações apropriadas para as peças componentes.

[0096]As estruturas miméticas de giro reverso da presente invenção são úteis como agentes bioativos, tais como, agentes de diagnóstico, profiláticos e terapêuticos. Por exemplo, as estruturas miméticas de giro reverso da presente invenção podem ser usadas para modulação de um fator de transcrição de sinalização de célula relacionado aos peptídeos em um animal de sangue quente, por um método compreendendo administração ao animal de uma quantidade eficaz do composto da fórmula (I).

[0097]Adicionalmente, as estruturas miméticas de giro reverso da presente invenção podem também ser eficazes para inibir a ligação do peptídeo aos domínios PTB em um animal de sangue quente; para modulação do receptor acoplado à proteína G (GPCR) e canal de íon em um animal de sangue quente; para modulação das citocinas em um animal de sangue quente.

[0098]Foi verificado que os compostos da fórmula (I), especialmente compostos da Fórmula (III) são eficazes para inibir ou tratar os transtornos modulados por via de sinalização Wnt, tal como câncer.

[0099]A Fórmula (III) é mostrada acima, onde cada R1, R4 e R6 é o mesmo ou diferente e independentemente uma fração da cadeia lateral de aminoácido ou um derivado da cadeia lateral de aminoácido, X1 pode ser hidrogênio, hidroxila ou halogênio e X2 e X3 podem ser independentemente hidrogênio, hidroxila ou quaisquer grupos que possam tornar o composto um promedicamento, tais como, fosfato, carboxilato, carbamato e amina substituída.

[00100]Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula (III), R1 é indazolila ou indazolila substituída possuindo um ou mais substituintes selecionados independentemente de alquila C1-7, arila C6-12, arilalquila C7-15, arilalqui- la C7-15 substituída, cicloalquilalquila, hidroxialquila, acila C1-10, amino, halogênio, nitro, aciloxialquila C2-10, aminocarbonila, aminocarbonilalquila, dialquilaminocarboni- lalquila, alcoxicarbonilalquila, hidroxialquila, cianoalquila C1-3, morfolinilalquila C1-3, alcoxialquilamida e cicloalquilcarbonila e exemplos específicos destes substituintes podem ser metila; isopropila; ciclopropilmetila; hidroxietila; ciclopropilcarbonila; ami-nocarbonila; cianometila; morfoliniletila; aminocarbonilmetila; dimetilaminocarbonil- metila; metoxietilpropionamida; etoxicarbonilmetila; acetoxietila; fenila; benzila e ari- lalquila C7-15 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de amino e nitro; R4 é alquila C1-6 , alcóxi C1-6 , alquenila C2-6 ou perfluoralquila C1-6 ; R6 é arila C6-12 ou arila C6-12 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados do grupo consistindo em: halogênio, hidroxila, cia- no, alquila C1-6 , acetilenila e alcóxi C1-6; ou heterociclila C5-12 ou heterociclila C5-12 substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de: halogênio, hidroxila, ciano, alquila C1-6 e alcóxi C1-6 ; X1 é hidrogênio, hidroxila ou halogênio; e cada um de X2 e X3 é independentemente halogênio, hidroxila, fosfato, dime- tilaminoacetato, (2-dimetilamino-etil)-carbamato, dietil-fosfono-acetamido ou halogê- nio.

[00101]Em determinada modalidade dos compostos descritos no parágrafo precedente, R1 é selecionado do grupo consistindo em 2-metil-2H-indazolila, 1-metil-1H- indazolila, 3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolila, 1-hidroxietil-1H-indazolila, 1H- indazolila, 2-ciclopropilmetil-2H-indazolila, 3-amino-1H-indazolila, 1-benzil-1H- indazolila, 3-cloro-1H-indazolila, 6-cloro-1H-indazolila, 3-fenil-1H-indazolila, 1-benzil- 3-fenil-1H-indazolila, 1-nitrobenzil-1H-indazolila, 1-aminobenzil-1H-indazolila, 2-metil- 3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolila, 1-metil-3-aminocarbonil-1H-indazolila, carbonil- indazolila, 2-isopropil-2H-indazolila, 2-aminocarbonilmetil-2H-indazolila, 1-cianometil- 3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolila, 2-cianometil-3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolila, 1- morfolinil-N-etil-1H-indazolila, 2-morfolinil-N-etil-2H-indazolila, 2- dimetilaminocarbonilmetil-2H-indazolila, 2-metoxietilpropionamida-2H-indazolila, 1- etoxicarbonilmetil-1H-indazolila, 2-etoxicarbonilmetil-2H-indazolila e 1- acetoxietil-1H- indazolila; e R4 é alquila C1-3 ou alila; e R6 é fenila ou fenila substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de: halogênio, hidroxila, ciano, alquila C1-6, acetenila e alcóxi C1-6; ou piridila ou piridila substituída possuindo um ou mais substituintes independentemente selecionados de: halogênio, hidroxila, ciano, alquila C1-6 e alcóxi C1-6.

[00102]Em outro aspecto desta invenção, os promedicamentos derivados dos compostos possuindo a Fórmula geral (I) são revelados. Os promedicamentos geralmente aumentam a solubilidade aquosa e assim a biodisponibilidade dos compostos possuindo a Fórmula Geral (I). Em determinadas modalidades, os promedi- camentos da presente invenção possuem a Fórmula Geral (IV) que se segue: (III)-R7 (IV) onde um dentre R1, R4, R6, X1, X2 e X3 é ligado ao R7 através de Y; onde: Y é um oxigênio, enxofre ou nitrogênio em R1, R4 ou R6 ou um oxigênio em X1, X2 ou X3; e R7 é hidroxialquila, glicosila, fosforiloximetiloxicarbonila, piperidina carboniló- xi substituída ou não, ou um sal da mesma; ou Y-R7 é um resíduo de aminoácido, uma combinação de resíduos de amino ácido, fosfato, hemimalato, hemisuccinato, dimetilaminoalquilcarbamato, dimetilaminoacetato ou um sal dos mesmos; e quando não ligados a R7: R1, R4, R6, X1, X2 e X3 são definidos conforme apresentado na Fórmula (III). Em outro aspecto desta invenção, são reveladas as bibliotecas contendo estruturas miméticas de giro reverso da presente invenção. Uma vez montadas, as bibliotecas da presente invenção podem ser classificadas para identificar elementos individuais possuindo bioatividade. Tal classificação das bibliotecas por elementos bioativos pode envolver, por exemplo, avaliação da atividade de ligação dos elementos da biblioteca ou avaliação do efeito dos membros da biblioteca em um ensaio funcional. A classificação é normalmente realizada por contato dos elementos da biblioteca (ou um subconjunto de elementos da biblioteca) com um alvo de interesse, tal como, por exemplo, um anticorpo, uma enzima, um receptor ou uma linhagem de célula. Os elementos da biblioteca que são capazes de interagir com o alvo de interesse são referidos no presente documento como “elementos bioativos da biblioteca” ou “miméticos bioativos”. Por exemplo, um mimético bioativo pode ser um elemento da biblioteca que é capaz de ligação a um anticorpo ou receptor, ou que é capaz de inibir uma enzima ou que é capaz de promover ou antagonizar uma resposta funcional associada, por exemplo, com uma linhagem de célula. Em outras palavras, a classificação das bibliotecas da presente invenção determina quais elementos da biblioteca são capazes de interagir com um ou mais alvos biológicos de interesse. Adicionalmente, quando a interação ocorre, o mimético bioativo (ou miméticos) pode então ser identificado dos elementos da biblioteca. A identificação de um mimético simples (ou número limitado) de mimético(s) ativo(s) da biblioteca rende estruturas miméticas de giro reverso que são propriamente biologicamente ativos e assim são úteis como agentes de diagnóstico, profiláticos ou terapêuticos e podem ser adicionalmente usados para avançar significativamente na identificação dos compostos de líderes nestes campos.

[00103]A síntese dos miméticos de peptídeo da biblioteca da presente in-venção pode ser realizada usando técnicas de síntese de peptídeo conhecidas em combinação com as primeira, segunda e terceira peças de componente desta invenção. Mais especificamente, qualquer sequencia de aminoácido pode ser adicionada ao término N e/ou término C do mimético de giro reverso conformacionalmente contido. Para este fim, os miméticos podem ser sintetizados em um suporte sólido (tal como uma resina PAM) por técnicas conhecidas (vide, por exemplo, John M. Stewart and Janis D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 1984, Pierce Chemical Comp., Rockford, III.) ou em uma resina ligada a silila por anexação o álcool (vide Randolph e outros, J. Am Chem. Soc. 117:5712-14, 1995).

[00104]Além disto, uma combinação de ambas as técnicas de solução e síntese da fase sólida pode ser utilizada para sintetizar os miméticos de peptídeo desta invenção. Por exemplo, um suporte sólido pode ser utilizado para sintetizar a se- quencia de peptídeo linear até o ponto em que o giro reverso conformacionalmente contido é adicionado à sequencia. Uma estrutura mimética de giro reverso confor- macionalmente contida e apropriada que foi anteriormente sintetizada por técnicas de síntese de solução pode então ser adicionada, como o próximo “aminoácido”, à síntese de fase sólida (por exemplo, o mimético de giro reverso conformacionalmen- te contido, que possui ambos um término N e um término C, podendo ser utilizado como o próximo aminoácido a ser adicionado ao peptídeo linear). Quando da incorporação das estruturas miméticas de giro reverso conformacionalmente contidas na sequência, aminoácidos adicionais podem então ser adicionados para completar a ligação do peptídeo ao suporte sólido. Alternativamente, as sequencias de peptídeo protegidas lineares de término N e término C podem ser sintetizadas em um suporte sólidos, removidas do suporte e então acopladas às estruturas miméticas de giro reverso contidas na solução usando técnicas de acoplamento da solução conhecidas.

[00105]Em um aspecto desta invenção, são revelados os métodos para construção de bibliotecas. Técnicas de química combinatória tradicionais (vide, por exemplo, Gallop e outros, J. Med. Chem. 37:1233-1251, 1994) permitem que um grande número de compostos seja rapidamente preparado por combinação da se- quencia de reagentes com uma plataforma molecular. Técnicas combinatórias foram usadas para construir bibliotecas de peptídeos derivadas de aminoácidos ocorrendo naturalmente. Por exemplo, utilizando 20 misturas de 20 aminoácidos apropriadamente protegidos e diferentes e acoplando cada um a um dos 20 aminoácidos, uma biblioteca de 400 (isto é, 202) dipeptídeos é criada. Repetindo-se o procedimento sete vezes isto resulta na preparação de uma biblioteca de peptídeo compreendida de cerca de 26 bilhões (isto é, 208) octapeptídeos.

[00106]Especificamente, a síntese dos miméticos de peptídeo da biblioteca da presente invenção pode ser estabelecida usando técnicas de síntese dos peptí- deos conhecidas, por exemplo, o Esquema Geral de Biblioteca de Miméticos de Giro Reverso, como se segue:

[00107]A síntese dos miméticos de peptídeo das bibliotecas da presente in venção foi realizada usando um Bloco de Reator FlexChem que possui placas de 96 poços por técnicas conhecidas. No esquema acima “Pol” representa uma resina de bromoacetal (Advanced Chem Tech) e o procedimento detalhado é ilustrado a se- guir. Etapa 1

[00108]Uma resina de bromoacetal (37 mg, 0,98 mmol/g) e uma solução de R1-amina em DMSO (1,4 mL) foram colocadas em um bloco Robbins (FlexChem) possuindo placas de 96 poços. A mistura de reação foi agitada a 60°C usando um forno de rotação [Robbins Scientific] por 12 horas. A resina foi lavada com DMF, MeO e então DCM. Etapa 2

[00109]Uma solução de Fmoc-NH-CH(R2)-COOH (4 equivalentes), PyBob (4 equivalentes), HOAt (4 equivalentes) e DIEA (12 equivalentes) comercialmente disponível, em DMF foi adicionada à resina. Após a mistura de reação ter sido agitada por 12 horas a temperatura ambiente, a resina foi lavada com DMF, MeO e então DCM. Etapa 3

[00110]Antes da reação foram adicionados 25% de piperidina em DMF, à re- sina intumescida por DMF, e a mistura de reação foi agitada por 30 minutos a temperatura ambiente. Esta etapa de desproteção foi repetida novamente e a resina foi lavada com DMF, Metanol e então DCM. Uma solução de ácido de hidrazina (4 equivalentes), HOBt (4 equivalentes) e DIC (4 equivalentes) em DMF foi adicionada à resina e a mistura de reação foi agitada por 12 horas a temperatura ambiente. A resina foi lavada com DMF, MeOH e então DCM. Etapa 4

[00111]A resina obtida na Etapa 3 foi tratada com ácido fórmico (1,2 mL cada poço) por 18 horas a temperatura ambiente. Após a resina ter sido removida por filtração, o filtrado foi condensado sob uma pressão reduzida usando SpeedVac (SAVANT) para fornecer o produto como um óleo. O produto foi diluído com água/acetonitrila a 50% e então liofilizado após resfriamento.

[00112]De modo a gerar estas bibliotecas de bloco, os ácidos de hidrazina intermediários chave foram sintetizados de acordo com o procedimento ilustrado no Exemplo de Preparação 1.

[00113]A tabela 2 mostra os compostos que foram preparados de acordo com a presente invenção, a preparação representativa dos mesmos sendo fornecida nos Exemplos de Preparação. Tabela 2 - Biblioteca de Miméticos de Giro Reverso

[00114]O que se segue são os dados de NMR de alguns dos compostos preparados de acordo com o procedimento acima: (6S,9aS)-8-((1H-indazol-7-iI)metil)-2-alil-N-benziI-6-(4-hidróxi-benzil)-4,7- dioxo-hexaidro-2H-pirazino[2,1c][1,2,4]triazina-1(6H)-carboxamida (Composto número 3 na Tabela 2) 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 8,09 (s,1H), δ 7,73 (d, J = 3,0 Hz, 1H), δ 7,37-7,22 (m, 5H), δ 7,1 1-7,03 (m, 2H), δ 6,90 (d, J = 9,0 Hz, 1H), δ 6,74 (d, J = 6,0 Hz, 1H), δ 6,57 (d, J = 6,0 Hz, 2H), δ 5,65-4,56 (m, 1H), δ 5,48-5,35 (m, 1H), δ 5,31 (1, 7= 3,0 Hz, 1H), δ 5,16-4,95 (m, 3H), δ 4,55 (d, J = 15,0 Hz, 1H), δ 4,40-4,12 (m, 2H), δ 3,46-3,23 (m, 8H) .

[00115](6S,9aS)-2-alil-N-benzil-6-(4-hidróxi-benzil)-8-((1-(3-nitrobenzil)-1H- indazol-7-il)metil)-4,7-dioxo-hexaidro-2H-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazina-1(6H)- carboxamida (Composto número 20 na Tabela 2) 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 8,24 (s, 1H), δ 8,09 (d, J = 9,0 Hz, 1H), δ 7,83-7,12 (m, 3H), δ 7,10 (t, J = 9,0 Hz, 1H), δ 7,32-7,17 (m, 4H), δ 7,10 (t, J = 9,0 Hz, 1H), δ 6,92-6,83 (m, 3H), δ 6,61 (d, J = 9,0 Hz, 1H), δ 5,79-5,68 (m, 1H), δ 5,41-5,36 (m, 1H), δ 5,12-4,88 (m, 4H), δ 4,65 (d, J = 18,0 Hz, 1H), δ 4,28-4,18 (m, 2H), δ 3,55-3,40 (m, 4H), δ 3,25-3,07 (m, 3H), δ 2,85 (dd, J = 3,0 Hz, J = 12,0 Hz, 1H) (6S,9aS)-2-alil-8-((1-(3-aminobenzil)-1H-indazol-7-il)metil)-N-benzil-6-(4- hidróxi-benzil)-4,7-dioxo-hexaidro-2H-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazina1(6H)-carboxamida (Composto número 6 na Tabela 2) 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ8,09 (s, 1H), δ 7,73-7,68 (m, 1H), δ 7,38-7,21 (m, 5H), δ 7,11 (t, J = 9,0 Hz, 1H), δ 7,00-6,95 (m, 4H), δ 6,69-6,64 (m, 3H), δ 6,44 (d, y= 9,0 Hz, 1H), δ 6,23-6,18 (m, 2H), δ 5,71 (s, 2H), δ 5,59-5,49 (m, 1H), δ 5,415,34 (m, 1H), δ 5,18-5,13 (m, 2H), δ 5,04 (d, J = 9,0 Hz, 1H), δ 4,84 (t, J = 15,0 Hz, 2H), δ 4,45-4,25 (m, 2H), δ 3,44-3,22 (m, 6H), δ 2,99-2,95 (m, 2H), 4-(((6S,9aS)-8-((1H-imidazol-7-il)metil)-2-alil-l-(benzilcarbamoil)-4,7-dioxo- octaidro-1H-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-6-il)metil)fenil fosfato de sódio (Composto número 23 na Tabela 2) 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 8,08 (s, 1H), δ 7,72 (t, J = 6,0 Hz, 1H), δ 7,34-7,09 (m, 6H), δ 7,00-6,92 (m, 3H), δ 5,56-5,47 (m, 1H), δ 5,40-5,36 (m, 1H), δ 5,18 (t, J = 6,0 Hz, 1H), δ 4,92-4,57 (m, 5H), δ 4,33-4,14 (m, 2H), δ 3,61-3,48 (m, 2H), δ 3,28-3,14 (m, 5H) , Benzilamida do ácido (6S,9aS)2-alil-6-(4-hidróxi-benzil)-8-(1H-indazoI-4- ilmetil)-4,7-dioxo-hexaidro-pirazino[2,1c][1,2,4] triazina-1-carboxílico (Composto número 2 na Tabela 2) 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 9,23 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,80 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 7,17-7,48 (m, 8H), 6,85 (t, J = 8,4 Hz, 3H), 6,65 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 5,72-5,77 (m, 1H), 5,36-5,41 (dd, J = 3,6 Hz, 10,8 Hz, 1H), 4,89-5,09 (m, 5H), 4,64 (d, J = 15 Hz, 1H), 4,13-4,22 (m, 2H), 3,39-3,60 (m, 2H), 3,02-3,25 (m, 8H) (6S,9aS)-2-alil-N-benzil-6-(4-hidróxi-benzil)-8-((2-metil-2H-indazol-7-il)metil)- 4,7-dioxo-hexaidro-2H-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazina-l(6H)-carboxamina (Composto número 18 na Tabela 2) 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 7,88 (s, 1H), δ 7,59 (d, J = 9,0 Hz, 1H), δ 7,38-7,22 (m, 4H), δ 7,12-7,03 (m, 2H), δ 6,94 (d, J = 9,0 Hz, 2H), δ 6,71 (t, J = 6,0 Hz, 1H), δ 6,58 (d, J = 6,0 Hz, 2H), δ 5,61-5,49 (m, 2H), δ 5,35 (t, J = 6,0 Hz, 1H), δ 5,11-4,91 (m, 1H), δ 4,40-4,34 (m, 2H), δ 4,17 (s, 3H), δ 3,40-3,25 (m, 6H), Benzilamideno do ácido (6S,9aS)2-alil-6-(4-hidróxi-benzil)-8-(1-metil-1H- indazol-4-ilmetil)-4,7-dioxo-hexaidro-pirazino [2,1-c][1,2,4]triazina-1-carboxílico (Composto número 19 na Tabela 2) 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 8,08 (s, 1H), 7,21-7,38 (m, 8H), 6,99 (d, J = 8,4 Hz), 6,89-6,94 (m, 1H), 6,62-6,69 (m, 3H), 5,40-5,59 (m, 2H), 5,34 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 5,17-5,23 (m, 1H), 5,07 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 4,67-4,96 (m, 2H), 4,26-4,45 (m, 1H), 4,08 (s, 3H), 3,23-3,44 (m, 9H). Sal dissódico do éster do ácido fosfórico mono-{4-[(6S,9aS)2-aliI-1-benzilcarbamoil-8-(1-metil-1H-indazol-4-ilmetil)-4,7-dioxo- octaidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-6-ilmetil]-fenila} (Composto número 30 na Tabela 2) .

[00116]1H NMR(D2O, 300 MHz) δ 7,99 (s, 1H), 7,09-7,44 (m, 12H), 6,91 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 5,58-5,61 (m, 2H), 5,32 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 4,96-5,01 (m, 2H), 4,634,77 (m, 2H), 4,23-4,46 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 3,52-3,82 (m, 3H), 3,25-3,37 (m, 6H).

[00117]Benzilamida do ácido (6S,9aS)2-alil-8-(2-ciclopropilmetil-2H-indazol- 7-ilmetil)-6-(4-hidróxi-benzil)-4,7-dioxo-hexaidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazina-1- carboxílico (Composto número 14 na Tabela 2) 1H NMR ( CDCl3) : δ 8,041 (s, 1H), 7,641-7,599 (d, J =12,6 Hz, 1H), 7,371-6,957 (m, 9 H), 6,723-6,669 (t, J =12,3 Hz, 1H), 6,613-6,585 (d, J =8,4 Hz, 2H), 5,652-5,561 (dt , J = 3,9 Hz, J = 10,5 Hz, 2H), 5,162-4,853 (m, 4 H), 4,444-4,287 (dt , J = 6,0 Hz, J = 15,0 Hz, 2H), 4,266-4,242 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 3,682-3,537 (m, 8 H) .

[00118]Sal dissódico do éster do éster do ácido fosfórico mono-{4-[(6S,9aS) 2-alil-1-benzilcarbamoil-8-(2-ciclopropil metil-2H-indazol-7-ilmetil)-4,7-dioxo-octaidro- pirazino[2,1-c](12,4)triazin-6-ilmetil]-fenila} (Composto número 31 na Tabela 2) 1H NMR ( D2O) : δ 8,179 (s, 1H), 7,629-7,604 (d, J =7,5 Hz, 1H), 7,341-7,002 (m, 1 1H), 5,666-5,433 (m, 2H), 5,298-5,257 (t, J =6,6 Hz, 1H), 5,070-5,019 (d, J =75,3 Hz, 1H), 4,834-4,723 (m, 1H), 4,517-4,460 (d, J = 17,1Hz, 1H), 4,419-4,367 (d, J = 15,6Hz, 1H), 4,245-4,136 (m, 3 H), 3,656-3,598 (d, J = 17,4 Hz, 1H), 3,539-3,463 (t, J = 11,7 Hz, 1H), 3,384-3,151 (m, 6 H), 1,330-1,239 (t, J = 7,5 Hz, J = 2,4 Hz, 1H), 0,546-0,323 (m, 4 H), Sal dissódico do éster do ácido fosfórico mono-{4-[(6S,9aS)2-alil-1- benzilcarbamoil-8-(1H-indazol-4-ilmetil)-4,7-dioxo-octaidro-pirazino[2,1- c][1,2,4]triazin-6-ilmetill]-fenila} (Composto número 33 na Tabela 2) 1H NMR(D2O, 300 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,67 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,31-7,52 (m, 6H), 7,06-7,14 (m, 6H), 5,53-5,65 (m, 2H), 5,34 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 5,01-5,16 (m, 2H), 4,67-4,90 (m, 3H), 4,28-4,47 (m, 2H), 3,57-3,75 (m, 2H), 3,32-3,43 (m, 7H) Benzilamida do ácido (6S,9aS)2-alil-8-(3-amino-1H-indazol-7-ilmetil)-6-(4- hidróxi-benzil)-4,7-dioxo-hexaidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazina-1-carboxílico (Composto número 5 na Tabela 2) 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 7,60 (d, J = 8,1 Hz, 1H), δ 7,53-7,25 (m, 5H), δ 7,13 (d, J = 6,9 Hz, 1H), δ 7,01 (t, J = 7,5 Hz, 1H), δ 6,84 (d, J = 8,1 Hz, 2H), δ 6,65 (t, J = 5,7 Hz, 1H), δ 6,57 (d, J = 8,1 Hz, 2H), δ 5,70-5,61 (m, 1H), δ 5,28 (t, J = 5,7 Hz, 1H), δ 5,21 (d, J = 10,2 Hz, 1H), δ 5,09 (d, J = 17,1 Hz, 1H), δ 4,954,91 (m, 2H), δ 4,55 (d, J = 14,4 Hz, 1H), δ 4,45 (dd, J = 6,3 Hz , J = 14,7 Hz, 1H), δ 4,34 (dd, J = 6,0 Hz , J = 15,0 Hz, 1H), δ 3,52-3,27 (m, 7H) Éster etílico do ácido acético 2-{7-[(6S,9aS) 2-aIiI-1-benziIcarbamoil-6-(4- hidróxi-benzil)-4,7-dioxo-octaidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-8-ilmetil)-indazol-1-il} (Composto número 11 na Tabela 2). 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 8,05 (s, 1H), 7,71 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,22-7,38 (m, 6H), 7,12 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 6,97-7,03 (m, 3H), 6,68-6,71 (m, 3H), 5,30-5,56 (m, 4H), 4,99-5,06 (m, 2H), 4,75-4,88 (m, 3H), 4,27-4,47 (m, 4H), 3,25-3,47 (m, 9H), 1,91 (s, 3H)

[00119]Benzilamida do ácido (6S,9aS)2-alil-6-(4-hidróxi-benzil)-8-[1-(2- hidróxi-etil)-1H-indazol-7-ilmetil]-4,7-dioxo-hexaidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazina-1- carboxílico (Composto número 17 na Tabela 2) . 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 8,04 (s, 1H), 7,70 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,21-7,38 (m, 5H), 6,99-7,12 (m, 5H), 6,66-6,69 (m, 3H), 5,44-5,55 (m, 3H), 5,35 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 4,90-5,01 (m, 2H), 4,56-4,77 (m, 3H), 4,24-4,44 (m, 2H), 4,03-4,11 (m, 2H), 3,17-3,48 (m, 8H), 3,02 (t, J = 5,7 Hz, 1H)

[00120]Benzilamida do ácido (6S,9aS)2-alil-8-(3-cloro-1H-indazol-7-ilmetil)-6- (4-hidróxi-benzil)-4,7-dioxo-hexaidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazina-1-carboxílico (Composto número 15 na Tabela 2). 1H NMR ( CDCl3) : δ 11,506 (s, 1H), 7,697-7,670 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,392-7,096 (m, 8 H), 6,912-6,884 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,738-6,698 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 6,556-6,529 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 5,682-5,549 (dt, J = 6,3 Hz, J = 10,2 Hz, 1H), 5,3665,291 (m, 2H), ), 5,187-5,153(d, J = 10,2 Hz, 1H), 5,075-5,039 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,028-4,982 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 4,572-4,4,524 (d, J = 14,4 Hz, 1H), 4,462-4,294 (dt, J = 6,0 Hz, J = 15,0 Hz, 2H), 3,439-3,253 (m, 8H) Sal dissódico do éster do ácido fosfórico mono-{4-[(6S,9aS) 2-alil-1- benzilcarbamoil-8-(3-cloro-1H-indazol-7-iImetil)-4,7-dioxo-octaidro-pirazino[2,1- c][1,2,4]triazin-6-ilmetil]fenila} (Composto número 35 na Tabela 2) 1H NMR (D2O) : δ 7,604-7,574 (t, J =9,0 Hz, 1H) 7,369-7,166 (m, 7H), 7,071-6,991 (q, J = 6,0 Hz, 4H), 5,640-5,447 (m, 2H), 5,262-5,223 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,965-4,931 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 4,894-4,683 (m, 3 H), 4,392-4,183 (dd, J = 15,6 Hz, J = 47,4 Hz, 2H), 3,678-3,250 (m, 8H) Benzilamida do ácido (6S,9aS)2-alil-8-(1-benzil-3-fenil-1H-indazol-7-ilmetil)- 6-(4-hidróxi-benzil)-4,7-dioxo-hexaidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazina-1-carboxílico (Composto número 10 na Tabela 2)

[00121]1H NMR ( CDCl3) : δ 7,538-7,186 (m, 17 H), 7,110-6,951 (m, 3 H), 6,979-6,951 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,738-6,697 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 6,622-6,593 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 5,676-5,499 (m, 4 H), 5,367-5,329 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 5,120-4,984 (q, J = 15,0 Hz, 2H), 5,059-5,034 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,984-4,884 (d, J = 30 Hz, 1H), 4,478-4,303 (dt, J = 6,0 Hz, J = 15,0 Hz, J = 26,3 Hz, 2H), 3,766-3,601 (m, 2H), 3,452-3,224 (m, 6 H). Benzilamida do ácido (6S,9aS) benzilamida do ácido 2-alil-6-(4-hidróxi- benzil)-4,7-dioxo-8-(3-fenil-1H-indazol-7-ilmetil)-hexaidro-pirazino[2,1- c][1,2,4]triazina-1-carboxílico (Composto número 21 na Tabela 2) 1H NMR (CDCl3) : δ 8,037-8,012 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,997-7,973 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,522-7,472 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 7,522-7,100 (m, 10H), 6,926-6,898 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,726-6,686 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 6,557-6,529 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 5,6905,539 (dt, J = 6,0 Hz, J = 10,2 Hz, 1H), 5,374 -5,292 (m, 2H), 5,175-5,141 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 5,1 10-5,062 (d, J = J 4,4 Hz, 1H), 5,027-4,970 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 4,614-4,566 (d, J = 14,4 Hz, 1H), 4,458-4,284 (ddd, J = 6,0 Hz, J = 14,7 Hz J = 20,7 Hz, 2H), 3,491-3,228 (m, 8 H). Benzilamida do ácido (6S,9aS)2-alil-8-(1-benzil-1H-indazol-3-ilmetil)-6-(4- hidróxi-benzil)-4,7-dioxo-hexaidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazina-1-carboxílico (Composto número 9 na Tabela 2) 1H NMR ( CDCl3) : δ 7,984-7,957 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,397-7,129 (m, 14H), 6,938-6,910 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,695-6,654 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 6,480-6,452 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 5,688-5,538 (dt, J = 6,6 Hz, J = 16,8 Hz, 1H), 5,405-5,356 (dd, J = 5, I Hz, J = 9,6 Hz, 1H), 5,326-5,287 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 5,174~5,126 (d, J = 14,4 Hz, 1H), 5,1 15-5,079 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,996-4,938 (d, J = 17,4 Hz, 1H), 4,890-4,841 (d, J = 14,7 Hz, 1H), 4,459-4,283 (ddd, J = 6,3 Hz, J = 15,0 Hz J = 31,8 Hz, 2H), 3,550-3,212 (m, 8H) .

[00122]Benzilamida do ácido (6S,9aS)2-alil-8-(5-cloro-1H-indazol-7-ilmetil)-6- (4-hidróxi-benzil)-4,7-dioxo-hexaidro- pirazino[2,1-c][1,2,4]triazina-1-carboxílico (Composto número 16 na Tabela 2) 1H NMR ( CDCl3) : δ 8.064 (s, 1H), 7,735-7,730 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,404-7,245 (m, 8 H), 7,124-7,1 19 (d, J =1,5 Hz, 1H), 6,932-6,904 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,730-6,690 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 6,578-6,550 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 5,708-5,575 (dt, J = 6,3 Hz, J = 12,6Hz, 1H), 5,393-5,300 (m, 2H), 5,230-5,197 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 5,0645,005 (d, J = 17,7 Hz, 2H), 4,563-4,516 (d, J = 14,1 Hz, 1H), 4,474-4,297 (ddd, J = 6,0 Hz, J = 14,7 Hz, J = 20,7 Hz, 2H), 3,458-3,255 (m, 8H) .

[00123]Benzilamida do ácido (6S,9aS) 2-aliI-8-(3-ciclopropanocarbonil-1H- indazol-7-ilmetil)-6-(4-hidróxi-benzil)-4,7-dioxo-hexaidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazina- 1-carboxílico (Composto número 12 na Tabela 2) . 1H-NMR(300MHz, CDCl3) δ 8,32~8,29(dd, J = 2,0 Hz, J = 2,0 Hz, 1H) δ 7,34~7,14(m, 8H) δ 6,84(d, J = 8,3Hz , 2H) δ 6,70(t, J = 5,9Hz , 1H) δ 6,49(d, J = 8,4Hz , 2H) δ 5,60-5,49(m, 1H) δ 5,34~5,24(m, 2H) δ 5,12(d, J = 10,3Hz , 2H) δ 4,93(d, J = 17,1 Hz , 1H) δ 4,42~4,25(m, 2H) δ 3,35(d, J = 7,8Hz , 2H) δ 3,31~3,27(m, 2H) δ 3,25-3,17(m, 2H) δ 1,28-1,15(m, 3H) δ 1,04~0,97(m, 2H) Benzilamida do ácido (6S,9aS)2-alil-6-(4-hidróxi-benzil)-8-(1H-indazol-3- ilmetiI)-4,7-dioxo-hexaidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazina-1-carboxílico (Composto número 1 na Tabela 2) 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 10,55 (s, 1H), 8,00 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,187,36 (m, 8H), 6,80 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,68 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 6,35 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 5,58-5,68 (m, 1H), 5,02-5,31 (m, 5H), 4,75 (d, J = 14,7 Hz, 1H), 4,23-4,40 (m, 2H), 3,27-3,57 (m, 8H) Éster do sal dissódico do ácido fosfórico mono-{4-[(6S,9aS)2-alil-1- benzilcarbamoil-8-(1-benzil-3-fenil-1H-indazol-7-ilmetil)-4,7-dioxo-octaidro- pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-6-ilmetil]-fenila} (Composto número 36 na Tabela 2) 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) : δ 3,02-3,36 (m, 1H), 3,28-3,36(m, 4H), 3,48 (d, J = 17,1Hz, 1H), 3,62 (dd, J = 11,3 Hz, J = 21,7 Hz , 2H), 3,80 (dd, J = 3,6 Hz, J = 11,5 Hz , 1H), 4,25 (dd, J = 4,7 Hz, J = 15,2 Hz , 1H), 4,33-4,38 (m, 1H), 4,40 (dd, J = 6,7 Hz, J = 15,1 Hz , 1H), 4,83 (d, J = 14,8 Hz , 1H), 4,98 (d, J = 14,8 Hz , 1H), 5,11 (t, J = 10,5 Hz , 2H), 5,18 (dd, J = 2,6 Hz, J = 6,3 Hz , 1H), 5,46-5,58 (m, 2H), 6,69 (t, J = 6,4 Hz , NH), 6,79 (d, J = 8,4 Hz , 2H), 6,92-6,95 (m, 4H), 7,12-7,29 (m, 10H), 7,42-7,55 (m, 6H),

[00124]As bibliotecas da presente invenção são classificadas quanto à bioa- tividade por várias técnicas e métodos. Em geral, o ensaio de classificação pode ser realizado por (1) contato dos miméticos de uma biblioteca com um alvo biológico de interesse, tal como um receptor, para permitir que ocorra a ligação entre os miméti- cos da biblioteca e o alvo e (2) detecção do evento de ligação por um ensaio apropriado, tal como o ensaio calorimétrico revelado por Lam e outros (Nature 354:82-84, 1991) ou Griminski e outros (Biotechnology 12: 1008-1011,1994) (ambos sendo incorporados ao presente documento como referência). Em uma modalidade preferida, os elementos da biblioteca estão na solução e o alvo é imobilizado em uma fase sólida. Alternativamente, a biblioteca pode ser imobilizada em uma fase sólida e pode ser sondada por contato da mesma com o alvo na solução.

[00125]A atividade de inibição contra sinalização de Wnt foi medida pelo repórter TopFlash. O valor de IC50 mais baixo significa a atividade de inibição maior. Um composto pode ser classificado como ativo se IC50 for 10 μM ou menor. Quando IC50 for 5 ~ 10μM, o composto poderá ser um candidato a farmacêutico. O composto será julgado como forte se IC50 for 1 ~ 5 μM e um composto será julgado como muito forte se IC50 for 1μM ou menor.

[00126]A maioria dos compostos da presente invenção mostrou IC50 de 5 μM ou menor, o que significa que eles possuem uma atividade de inibição forte contra sinalização de Wnt.

[00127]A tabela 3 a seguir mostra os compostos para o teste de bioatividade selecionados da biblioteca da presente invenção e os valores IC50 dos mesmos, os quais foram medidos pelo ensaio de gene Repórter, conforme descrito no Exemplo 2. Tabela 3 IC50 (μM) Medido pelo Ensaio de Gene Repórter TopFlash dos Compostos de biblioteca selecionados

[00128]A fórmula (I) possui menos atividade inibidora de CYP3A4 (IC50 maior). Os detalhes da medição menor da atividade inibidora de CYP3A4 são revelados no Exemplo 1. A atividade inibidora de CYP3A4 menor significa que os compostos da presente invenção são mais famacologicamente favoráveis em termos de reações adversas.

[00129]A tabela 4 a seguir mostra os compostos para teste de bioatividade selecionados da biblioteca da presente invenção e os valores IC50 dos mesmos, os quais foram medidos pela Classificação da Atividade Inibidora de P450 CYP3A4 conforme descrita no Exemplo 1. Tabela 4: IC50 (μM) medido pela Classificação da Atividade Inibidora de P450 CYP3A4 dos compostos selecionados da biblioteca Número Estrutura Peso molecular da fórmula Inibição de

[00130]A presente invenção também está relacionada aos métodos para prevenção ou tratamento de uma leucemia mielóide aguda compreendendo adminis- tração ao indivíduo do composto apresentando a Fórmula (I) acima.

[00131]Em um aspecto, a presente invenção provê compostos que inibem a formação de um complexo de β-catenina, p300 e TCF ligando a proteína c-Myc e formação de um complexo de β-catenina, p300 e TCF ligando ao promotor de survi- vina. Em outro aspecto, a presente invenção provê compostos, especificamente aqueles possuindo a Fórmula (II) que controlam a proteína c-Myc.

[00132]Foi verificado de acordo com a presente invenção que os compostos da Fórmula Geral (I) afetam a proliferação celular e inibem o crescimento de células cancerígenas de AML, conforme descrito no Exemplo 3.

[00133]GI50 de MV-4-11 mostra atividade inibidora do crescimento celular contra células cancerígenas de AML. O valor de GI50 mais baixo significa atividade de inibição maior. Um composto pode ser classificado como ativo se GI50 for 10 μM ou menos. Quando GI50 for 5 ~10 μM, o composto pode ser um candidato a farmacêutico. Um composto será julgado como forte se GI50 for de 1 ~ 5 μM e um composto será julgado muito forte se GI50 for 1 μM ou menor.

[00134]A maioria dos compostos da presente invenção mostrou GI50 de 5 μM ou menor, o que significa que eles possuem atividade de inibição contra células cancerígenas de AML.

[00135]A Tabela 5 mostra os compostos para o teste de bioatividade selecionados da biblioteca da presente invenção e valores GI50 dos mesmos, os quais foram medidos pelo Ensaio de Inibição de Crescimento Celular, conforme descrito no Exemplo 3. Tabela 5: Atividade de Inibição de Crescimento Celular (GI50) nas Células Cancerígenas de AML dos Compostos de Biblioteca Selecionados

[00136]Os exemplos que se seguem e não limitantes ilustram os compostos e o emprego desta invenção. Exemplo de Preparação 1 Preparação do ácido (N-Fmoc-N’-R4-hidrazino)-acético

[00137]Um frasco de dois litros, dois gargalos e de fundo redondo foi equipado com um batente e vidro e um tubo de cálcio Uma solução de R4-hidrazina (20 g, 139 mmol, onde R4 é metila) em THF (300 mL) foi adicionada e uma solução de DiBoc (33 g, 153 mmol) em THF foi adicionada. A solução aquosa de bicarbonato de sódio saturada (500 mL) foi adicionada, gota a gota, através de um funil de adição por 2 horas com agitação vigorosa. Após 6 horas, uma solução de Fmoc-Cl (39 g, 153 mmol) em THF foi adicionada lentamente. A suspensão resultante foi agitada por 6 horas a 0°C. A mistura foi extraída com acetato de etila (EA, 500 mL) e a camada orgânica foi retida. A solução foi seca com sulfato de sódio e evaporada in vacuo. A próxima etapa se seguiu sem purificação.

[00138]Um frasco de um litro, dois gargalos e de fundo redondo foi equipado com um batente de vidro e um tubo de cálcio. Uma solução do produto da etapa anterior em MeOH (300 mL) foi adicionada e HCl concentrado (30 mL, 12 N) foi adicionado lentamente através de um funil de adição com agitação magnética em banho de água gelada e agitada por toda noite. A mistura foi extraída com EA (1000 mL) e a camada orgânica foi retida. A solução foi seca com sulfato de sódio e evaporada in vacuo. O resíduo foi purificado por recristalização com n-hexano e EA para fornecer N-Fmoc-N’-metil hidrazina (32,3 g, 83%). 1HNMR (DMSO-D6) δ 7,90-7,88 (d, J = 6 Hz, 2H,), δ 7,73-7,70 (d, J = 9 Hz, 2H,), 7,44-7,31 (m, 4H), 4,52-4,50 (d, J = 6 Hz, 2H), 4,31-4,26 (t, J = 6 Hz, 1H), 2,69 (s, 1H). (2 Preparação do éster t-butílico do ácido (N-Fmoc-N’-R4-hidrazino)

[00139]Um frasco de um litro, dois gargalos e fundo redondo foi equipado com um batente de vidro e condensador de refluxo conectado a um tubo de cálcio. Uma solução de N-Fmoc-N’R4 hidrazina (20 g, 75 mmol) em tolueno (300 mL) foi adicionada. Uma solução de acetato de t-butilcromo (22 g, 11 mmol) em tolueno (50 mL) foi adicionada lentamente. Cs2CO3 (49 g, 149 mmol) foi adicionado lentamente. NaI (11 g, 74 mmol) foi adicionado lentamente com agitação vigorosa. A mistura de reação foi agitada em temperatura de refluxo por 1 dia. A mistura do produto foi filtrada e extraída com EA (500 mL). A solução foi seca sobre sulfato de sódio e evaporada in vacuo. O produto foi purificado por cromatografia com solução de hexano: EA = 2 : 1 para fornecer éster t-butílico do ácido (N-Fmoc-N’-metil-hidrazino)-acético (19,8 g, 70%). 1H-NMR (CDCl3-d) δ 7,78-7,75 (d, J = 9 Hz, 2H5), δ 7,61-7,59 (d, J = 6 Hz, 2H,), 7,43-7,26 (m, 4H), 4,42-4,40 (d, J = 6 Hz, 2H), 4,23 (b, 1H), 3,57 (s, 2H), 2,78 (s, 3H), 1,50 (s, 9H). (3) Preparação de ácido (N-Fmoc-N-metil-hidrazino)-acético

[00140]Um frasco de um litro, dois gargalos e fundo redondo foi equipado com um batente de vidro e condensador de refluxo conectado a um tubo de cálcio. Éster t-butílico do ácido (N-Fmoc-N’-R4-hidrazino)-acético foi adicionado. Uma solu- ção de HCl (150 mL, solução 4M em dioxano) foi adicionada lentamente com agitação vigorosa em um banho de água gelada. A mistura de reação foi agitada a tem- peratura ambiente por 1 dia. A solução foi completamente concentrada sob pressão reduzida a 40°C. Uma solução aquosa, saturada de NaCO3 (100 mL) foi adicionada e a camada aquosa foi lavada com éter dietílico (100 mL). HCl concentrado foi adicionado lentamente, gota a gota, a 0°C (pH 2-3). A mistura foi extraída e a camada orgânica foi retida (500 mL, MC). A solução foi seca com sulfato de sódio e evaporada in vacuo. O resíduo foi purificado por recristalização com n-hexano e acetato de etila para fornecer ácido(N-Fmoc-N’-metil-hidrazino)-acético (12 g, 72%).

[00141]1H-NMR (DMSOd6) δ 12,38 (s, 1H), 8,56 (b, 1H), 7,89-7,86 (d, J = 9 Hz, 2H), 7,70-7,67 (d, J = 9 Hz, 2H), 7,43-7,29 (m, 4H), 4,29-4,27 (d, J = 6 Hz, 2H), 4,25-4,20 (t, J = 6 Hz, 1H), 3,47 (s, 2H), 2,56 (s, 3H),. Exemplo de Preparação 2 Benzilamida do ácido (6S,9aS)2-alila—6-(4-hidróxi-benzil)-8-(1-metil-1H- indazol-4-ilmetil)-4,7-dioxo-hexaidro-pirazino[2,1 -c][1,2,4]triazina-1 -carboxílico

[00142]De modo a preparar o composto título, o Esquema Geral da Biblioteca de Mimético de Giro Reverso que é descrito no relatório descritivo acima foi executado pelo esquema que se segue.

[00143]No esquema acima, ‘Pol’ representa uma resina bromoacetal (Ad-vanced Chem Tech) e o procedimento detalhado é ilustrado a seguir. Etapa 1

[00144]Uma resina de bromoacetal (37 mg, 0,98 mmol/g) e uma solução de (1-metil-1H-indazol-4-il)metanamina em DMSO (1,4 mL) foram colocadas em um bloco Robbins (FlexChem) contendo placas de 96 poços. A mistura de reação foi agitada a 60°C usando um forno giratório [Robbins Scientific] por 12 horas. A resina foi lavada com DMF, MeOH e então DCM. Etapa 2

[00145]Uma solução disponível comercialmente de Fmoc-Tyr(OtBu)-OH (4 equivalentes) , PyBob (4 equivalentes), HOAt (4 equivalentes) e DIEA (12 equivalentes) em DMF foi adicionada à resina. Após a mistura de reação ser agitada por 12 horas a temperatura ambiente, a resina foi lavada com DMF, MeOH e então DCM. Etapa 3

[00146]A resina intumescida por DMF antes da reação recebeu adição de piperidina a 25% em DMF e a mistura de reação foi agitada por 30 minutos a temperatura ambiente. Esta etapa de desproteção foi repetida novamente e a resina foi lavada com DMF, Metanol e então DCM. Uma solução de ácido de hidraina (4 equivalentes), HOBt (4 equivalentes) e DIC (4 equivalentes) em DMF foi adicionada a resina e a mistura de reação foi agitada por 12 horas a temperatura ambiente. A re- sina foi lavada com DMF, MeO e então DCM. Etapa 4

[00147]A resina obtida na Etapa 3 foi tratada com ácido fórmico (1,2 mL cada poço) por 18 horas a temperatura ambiente. Após a resina ser removida por filtração, o filtrado foi condensado sob pressão reduzida empregando SpeedVac [SAVANT] para fornecer o produto como um óleo. O produto foi diluído com água/acetonitrila a 50% e então liofilizado após resfriamento. 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 8,08 (s, 1H), 7,21-7,38 (m, 8H), 6,99 (d, J = 8,4 Hz), 6,89-6,94 (m, 1H), 6,62- 6,69 (m, 3H), 5,40-5,59 (m, 2H), 5,34 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 5,17-5,23 (m, 1H), 5,07 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 4,67-4,96 (m, 2H), 4,26-4,45 (m, 1H), 4,08 (s, 3H), 3,23-3,44 (m, 9H) Exemplo de Preparação 3 Preparação de benzilamida do ácido (6S,9aS)2-alila-8-(3- ciclopropanocarbonil-1H-indazol-7-ilmetil)-6-(4-hidróxi-benzil)-4,7-dioxo-hexaidro- pirazino[2,1 -c][1,2,4]-triazina-1 -carboxílico

Peso Molecular 647,72

[00148]Para preparar o composto título, o Esquema Geral da Biblioteca de Mimético de Giro Reverso que é descrito no relatório descritivo acima foi executado pelo esquema que se segue.

[00149]No esquema acima, ‘Pol’ representa uma resina bromoacetal (Ad-vanced Chem. Tech.) e o procedimento detalhado é ilustrado a seguir. Etapa 1

[00150]Uma resina de bromoacetal (37 mg, 0,98 mmol/g) e uma solução de 7-(aminometil)-3-(ciclopropanocarbonil)-1H-indazol-1-carboxilato de t-butila em DMSO (1,4 mL) foram colocadas em um bloco Robbins (FlexChem) contendo placas de 96 poços. A mistura de reação foi agitada a 60°C usando um forno giratório [Robbins Scientific] por 12 horas. A resina foi lavada com DMF, MeOH e então DCM. Etapa 2

[00151]Uma solução disponível comercialmente de Fmoc-Tyr(OtBu)-OH (4 equivalentes), PyBob (4 equivalentes), HOAt (4 equivalentes) e DIEA (12 equivalentes) em DMF foi adicionada à resina. Após a mistura de reação ser agitada por 12 horas a temperatura ambiente, a resina foi lavada com DMF, MeOH e então DCM. Etapa 3

[00152]A resina intumescida por DMF antes da reação recebeu adição de piperidina a 25% em DMF e a mistura de reação foi agitada por 30 minutos a temperatura ambiente. Esta etapa de desproteção foi repetida novamente e a resina foi lavada com DMF, Metanol e então DCM. Uma solução de ácido de hidraina (4 equivalentes), HOBt (4 equivalentes) e DIC (4 equivalentes) em DMF foi adicionada a resina e a mistura de reação foi agitada por 12 horas a temperatura ambiente. A resina foi lavada com DMF, MeO e então DCM. Etapa 4

[00153]A resina obtida na Etapa 3 foi tratada com ácido fórmico (1,2 mL cada poço) por 18 horas a temperatura ambiente. Após a resina ser removida por filtração, o filtrado foi condensado sob pressão reduzida empregando SpeedVac [SAVANT] para fornecer o produto como um óleo. O produto foi diluído com água/acetonitrila a 50% e então liofilizado após resfriamento. 1H- NMR(300MHz, CDCl3) δ 8,32~8,29(dd, J = 2,0Hz , J = 2,0Hz , 1H) δ 7,34~7,14(m, 8H) δ 6,84(d, J = 8,3Hz , 2H) δ 6,70(t, J = 5,9Hz , 1H) δ 6,49(d, J = 8,4Hz , 2H) δ 5,60~5,49(m, 1H) δ 5,34~5,24(m, 2H) δ 5,12(d, J = 10,3Hz , 2H) δ 4,93(d, J = 17,1Hz, 1H) δ 4,42~4,25(m, 2H) δ 3,35(d, J = 7,8Hz , 2H) δ 3,31~3,27(m, 2H) δ 3,25-3,17(m, 2H) δ 1,28-1,15(m, 3H) δ 1,04~0,97(m, 2H). Exemplo de Preparação 4 Preparação de Benzilamida do ácido (6S,9aS)2-alila—6-(4-hidróxi-benzil)-8- [1-(2-hidróxi-etil)-1H-indazol-7-ilmetil]-4,7-dioxo-hexaidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazina- 1-carboxílico

Peso molecular: 623,70

[00154]De modo a preparar o composto título, o Esquema Geral da Biblioteca de Mimético de Giro Reverso que é descrito no relatório descritivo acima foi executado pelo esquema que se segue.

[00155]No esquema acima, ‘Pol’ representa uma resina bromoacetal (Ad-vanced Chem Tech) e o procedimento detalhado é ilustrado a seguir. Etapa 1

[00156]Uma resina de bromoacetal (37 mg, 0,98 mmol/g) e uma solução de carbonato de t-butila 2-(7-aminometil)-1H-indazol-1-il)etila em DMSO (1,4 mL) foram colocadas em um bloco Robbins (FlexChem) contendo placas de 96 poços. A mistura de reação foi agitada a 60°C usando um forno giratório [Robbins Scientific] por 12 horas. A resina foi lavada com DMF, MeOH e então DCM. Etapa 2

[00157]Uma solução disponível comercialmente de Fmoc-Tyr(OtBu)-OH (4 equivalentes) , PyBob (4 equivalentes), HOAt (4 equivalentes) e DIEA (12 equivalentes) em DMF foi adicionada à resina. Após a mistura de reação ser agitada por 12 horas a temperatura ambiente, a resina foi lavada com DMF, MeOH e então DCM. Etapa 3

[00158]A resina intumescida por DMF antes da reação recebeu adição de piperidina a 25% em DMF e a mistura de reação foi agitada por 30 minutos a temperatura ambiente. Esta etapa de desproteção foi repetida novamente e a resina foi lavada com DMF, Metanol e então DCM. Uma solução de ácido de hidraina (4 equivalentes), HOBt (4 equivalentes) e DIC (4 equivalentes) em DMF foi adicionada a resina e a mistura de reação foi agitada por 12 horas a temperatura ambiente. A resina foi lavada com DMF, MeO e então DCM. Etapa 4

[00159]A resina obtida na Etapa 3 foi tratada com ácido fórmico (1,2 mL cada poço) por 18 horas a temperatura ambiente. Após a resina ser removida por filtração, o filtrado foi condensado sob pressão reduzida empregando SpeedVac [SAVANT] para fornecer o produto como um óleo. O produto foi diluído com água/acetonitrila a 50% e então liofilizado após resfriamento. 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 8,04 (s, 1H), 7,70 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,21-7,38 (m, 5H), 6,99-7,12 (m, 5H), 6,66-6,69 (m, 3H), 5,44-5,55 (m, 3H), 5,35 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 4,90- 5,01 (m, 2H), 4,56-4,77 (m, 3H), 4,24-4,44 (m, 2H), 4,03-4,11 (m, 2H), 3,17-3,48 (m, 8H), 3,02 (t, J = 5,7 Hz, 1H). Exemplo de Preparação 5 Preparação de fosfato dissódico de 4-((2-alil-1-(benzilcarbamoil)-8-((2-metil- 2H-indazol-7-il)metil)-4,7-dioxo-octaidro-1H-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-6- il)metil)fenila(2)

[00160]A uma solução de 2-alil-N-benzil-6-(4-hidroxibenzil)-8-((2-metil-2H- indazol-7-il)metil)-4,7-dioxo-hexaidro-2H-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazina-1(6H)- carboxamida (1) (1,0 equivalente) em THF (10 mL/mmol) foi adicionado POCl3 (4,0 equivalentes) e TEA (3,0 equivalentes) a 0°C. Após ser agitada a temperatura ambiente por 1 hora, uma solução aquosa, saturada de NaHCO3 foi derramada lentamente e agitada por 1 hora. A mistura resultante foi lavada com EtOAc e então a camada aquosa foi acidificada com solução aquosa 1N HCl a 0°C e então extraída com EtO- Ac. A camada orgânica foi seca com Na2SO4 e foi concentrada in vacuo. O resíduo foi recristalizado com EtOAc e n-hexano para fornece um composto intermediário (2) como um sólido branco. O sólido foi ajustado com solução aquosa de 0,1N NaOH para pH 11,0 e liofilizado para obter o composto desejado (3) (87%). EXEMPLO 1 Classificação da atividade inibidora de P450 CYP3A4 Compostos de Teste:

[00161]O ensaio foi conduzido em um volume de 200 μL em placas de mi- crotitulação de 96 poços empregando CYP3A4 hepático, humano, expresso em DNAc (supersome, BD Gentest™ #456202). 7-Benzilóxi-4-trifluormetil-coumarina (BFC) foi usada como um substrato para CYP3A4. Artigos de teste e substrato BFC foram dissolvidos em acetonitrila a 100%. O volume final de acetonitrila na mistura de incubação foi inferior a 1% (volume/volume). Tampão de fosfato de potássio (pH 7,4, concentração final 0,1 M), MgCl2 (concentração final de 8,3 mM), EDTA (concentração final de 1,67 mM), uma solução mestra do artigo de teste, um supersome CYP3A4 e NADPH (concentração final de 0,25 mM) foram adicionados a cada poço. A reação foi iniciada pela adição do substrato (BFC, concentração final de 30 M) após pré-incubação de 10 minutos a 37°C. Após 10 minutos de incubação a 37°C, a reação foi terminada por adição de 75 μL de acetonitrila : 0,5 M Tris-base = 4 : 1 (vo- lume/volume). Após isto, o sinal fluorescente foi medido usando um fluorômetro. Me- babólito de BFC, 7-hidróxi-4-trifluormetil-coumarino, foi medido usando um comprimento de onda de excitação de 409 nm e um comprimento de onda de emissão de 530 nm. A figura 2 mostra IC50 do composto de teste A do ensaio de inibição de CYP3A4. Os compostos A, B e C mostraram inibição fraca de uma enzima de CYP3A4. Tabela 6

EXEMPLO 2 Bioensaio de gene repórter TopFlash para a medição de IC50 contra células SW480

[00162]O composto de teste (Composto D) usado neste exemplo foi preparado no Exemplo de Preparação 3.

[00163]Células SW480 foram transfectadas com o uso do reagente de trans- fecção Superfect™ (Qiagen, 301307). As células foram tripsinizadas rapidamente 1 dia antes da transfecção e colocadas em placa de 6 poços (5 x 105 células/poço) de modo que elas eram 50-80% confluentes no dia da transfecção.

[00164]Quatro microgramas (TopFlash) e um micrograma (pRL-nulo) de DNAs foram diluídos em 150 μL de meio isento de soro e foram adicionados 30 μL de reagente de transfecção Superfect™. A mistura de DNA-Superfect foi incubada a temperatura ambiente por 15 minutos e então, 1 mL de FBS DMEM a 10% foi adicionado a este complexo por um adicional de 3 horas de incubação. Enquanto os complexos estavam em formação, as células foram lavadas com PBS duas vezes sem antibióticos.

[00165]Os complexos de regente de transfecção Superfect™-DNA foram aplicados às células antes da incubação a 37°C em CO2 a 5% por 3 horas. Após incubação, meio de recuperação com FBS a 10% foi adicionado para trazer o volume final para 1,18 mL. Após 3 horas de incubação, as células foram colhidas e semeadas novamente na placa de 96 poços (3 x 104 células/poço). Após incubação por toda noite a 37°C com CO2 a 5%, as células foram tratadas com o Composto D por 24 horas. Finalmente, a atividade foi verificada por meio de ensaio de luciferase (Promega, E1960). A figura 3 ilustra os resultados da medição de IC50 do Composto D para células SW480. O IC50 foi de 0,83±0,007 μM. EXEMPLO 3 Atividade de inibição do crescimento celular em células cancerígenas de AML (Ensaio de Inibição do Crescimento de Células) Compostos de Teste:

[00166]O ensaio de inibição de crescimento celular foi realizado para investigar a taxa de inibição de proliferação celular pelos compostos de teste. Células MV- 4-11 (linhagem de célula de leucemia mielóide aguda, humana) foram cultivadas no meio da Dulbecco modificado de Iscove (IMDM) incluindo soro bovino fetal a 10% (FBS), 1 x penicilina/estreptomicina (10.000 unidades/mL de Penicilina, 10.000 g/mL de Estreptomicina em NaCl a 0,85%). As células MV-4-11 foram colhidas com o meio IMDM e 5 x 104 células/poço foram transfectadas para cada poço das placas de cultura de 96 poços (Nunc, #167008). Os compostos de teste foram tratados com a diluição em série e duplicados para cada concentração. Para a diluição em série, os compostos de teste foram diluídos repetidamente com o mesmo volume dos meios no bloco de ensaio de 96 poços (costar, #3956). Após a diluição, cada composto foi adicionado a cada poço. A absorvência de fundo foi também medida durante o tratamento dos compostos de teste por adição dos meios IMDM na substituição do composto de teste na placa de controle negativo. As placas foram incubadas por 3 dias (72 oras) a 37°C no incubador umidificado contendo CO2 a 5%. No último dia, 20 μL de CellTiter 96 Aqueous One Solution (Promega #G3581) foram adicionados à cultura em cada poço e as placas foram incubadas por algumas horas a 37°C no incubador umidificado contendo CO2 a 5%. Após a incubação, a absorvência de cada célula foi medida em 490 nm usando um EnVision (Perkinelmer, USA). Os valores de GI50 foram calculados usando um programa Prism 3.0. Os resultados mostraram que os compostos de teste afetaram a proliferação inicial e inibiram o crescimento das células cancerígenas de AML. A figura 4 mostra o resultado da inibição do Composto A. GI50 do Composto A e Composto C foi de 0,220 μM e de 0,037 μM, respectivamente.

[00167]Conforme descrito acima, a presente invenção provê novos compostos de miméticos de giro reverso, que podem ser usados como compostos farmacêuticos, especialmente nas células cancerígenas de AML. A invenção foi descrita em detalhes com referência às suas modalidades. Contudo, será apreciado pelos versados na técnica que modificações podem ser feitas nestas modalidades, sem fugir dos princípios e espírito da invenção, o escopo da mesma sendo definido nas reivindicações apensas e seus equivalentes.

Claims (2)

1. Composto CARACTERIZADO pelo fato de que possui a estrutura da

em que: R1 é selecionado do grupo que consiste em 2-metil-2H-indazolila, 1-metil-1H- indazolila, 3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolila, 1-hidroxietil-1H-indazolila, 1H- indazolila, 2-ciclopropilmetil-2H-indazolila, 3-amino-1H-indazolila, 1-benzil-1H- indazolila, 3-cloro-1H-indazolila, 6-cloro-1H-indazolila, 3-fenil-1H-indazolila, 1-benzil- 3-fenil-1H-indazolila, 1-nitrobenzil-1H-indazolila, 1-aminobenzil-1H-indazolila, 2-metil- 3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolila, 1-metil-3-aminocarbonil-1H-indazolila, carbonil- indazolila, 2-isopropil-2H-indazolila, 2-aminocarbonilmetil-2H-indazolila, 1-cianometil- 3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolila, 2-cianometil-3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolila, 1- morfolinil-N-etil-1H-indazolila, 2-morfolinil-N-etil-2H-indazolila, 2- dimetilaminocarbonilmetil-2H-indazolila, 2-metoxietilpropionamida-2H-indazolila, 1- etoxicarbonilmetil-1H-indazolila, 2-etoxicarbonilmetil-2H-indazolila e 1-acetoxietil-1H- indazolila; R4 é alila; R6 é fenila ou fenila substituída tendo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: halogênio, hidroxila, ciano, alquila C1-6, acetilenila e alcóxi C1-6; ou piridila ou piridila substituída tendo um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre: halogênio, hidroxila, ciano, alquila C1-6 e alcóxi C1- 6; X1 é hidrogênio, hidroxila ou halogênio; e cada um de X2 e X3 é independentemente hidrogênio, hidroxila, fosfato, di- metilaminoacetato, (2-dimetilamino-etil)-carbamato, dietil-fosfono-acetamido ou halo- gênio.

2. Uso do composto, como definido na reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que é na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir leucemia mielóide aguda.

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