BR9914355B1 - Derivados de mononitrato de isosorbida e sua utilização como agentes vasodilatadores com tolerância reduzida - Google Patents

Description

"DERIVADOS DE MONONITRATO DE ISOSORBIDA E SOA

UTILIZAÇÃO COMO AGENTES VASODILATADORES COM TOLERÂNCIA REDUZIDA".

Campo da Invenção A presente invenção se refere a novos derivados de mononitrato de isosorbida, que possuem uma forte atividade vasodilatadora e que, ao mesmo tempo, apresentam uma tolerância significativamente reduzida.

Estado da Técnica Os ésteres de ácido nitrico de compostos orgânicos, comumente conhecidos como nitratos orgânicos, são conhecidos e têm sido utilizados como agentes vasodilatadores. Dentre os mesmos, a utilidade dos mono- e di-nitratos de isosorbida é bem conhecida e ainda tem se descrito também compostos com atividades vascular e coronária baseados na reação de substituição do grupo hidroxila livre do mononitrato de isosorbida. Por exemplo, o documento de patente US-A-4.891.373, descreve derivados de aminopropanol correspondentes às fórmulas: indicados para o tratamento de angina do peito e hipertensão sistêmica e pulmonar.

Por outro lado, o documento de patente US-A- 5.665.766 descreve o 5-mononitrato de 2-acetilsalicilato de isosorbida, de fórmula: assim como sua atividade antiagregante de plaquetas.

Um dos principais inconvenientes dos compostos de nitratos orgânicos mencionados, reside no fato de que tais compostos resultam bastante sensíveis em relação ao fenômeno conhecido como taquifilaxia ou tolerância, com referência a que seu efeito no organismo diminui durante um tratamento prolongado ou que requer que sejam elevadas sensivelmente de maneira gradual as doses administradas, ou ainda que seja realizada uma lavagem farmacológica. É também conhecido que uma maneira de reduzir a tolerância dos nitratos orgânicos consiste em introduzir na molécula grupos tiol, por exemplo, por meio de aminoácidos contendo enxofre. Assim, na patente Européia EP-B-0362575, se descrevem nitratos orgânicos que incorporam moléculas de cisterna e, principalmente, moléculas de metionina.

No pedido de patente WO-A-92/04337, se descrevem nitratos orgânicos derivados de anel de tiazolidina, com atividade vasodilatadora e uma reduzida tolerância.

No pedido de patente WO-A-93/03037 se descreve uma grande variedade de nitratos orgânicos vasodilatadores, com tolerância diminuída e de estruturas muito variáveis, entre as quais se inclui de maneira genérrca, quer dizer, sem especificar nem descrever um único produto específico, derivados de mononitrato de isosorbida, de acordo com a seguinte estrutura química: em que R5 representa um átomo de hidrogênio, um grupo C1-C6 alquila, um grupo fenila, etc.

Os nitratos orgânicos descritos nos documentos mencionados não resolvem por si só os problemas originados pela tolerância dos nitratos orgânicos, uma vez que apresentam problemas relativos à baixa atividade vasodilatadora, intensidade na redução da tolerância, etc., pelo que subsiste a necessidade de se dispor de novos nitratos orgânicos, que mantendo uma elevada atividade vasodilatadora, apresentem um grau de tolerância reduzido e de maneira mais persistente.

Objeto da Invenção 0 objeto da invenção é um novo tipo de compostos derivados de mononitrato de isosorbida, capazes de provocar um potente efeito vasodilatador, apresentando um reduzido ou nenhum efeito de tolerância.

Constitui também um objeto da invenção, o uso de novos compostos derivados de mononitrato de isosorbida para a fabricação de medicamentos para o tratamento de distúrbios relacionados a disfunções do sistema circulatório, em particular ao nivel do sistema coronário.

Descrição da Invenção Os novos derivados do mononitrato de isosorbida e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, que constituem o objeto da invenção, correspondem à seguinte fórmula geral (I) : em que A e B representam individualmente quaisquer dos grupos: onde Z é um átomo de oxigênio ou enxofre e R representa um grupo C1-C4 alquila, um grupo arila ou um grupo aralquila, eventualmente substituído, ou o grupo: em que R1 é hidrogênio ou um grupo C1-C4 alquila, um grupo arila ou um grupo aralquila, eventualmente substituído.

Todos estes com a condição de que: a) um dentre A ou B é sempre -ONO2, mas nunca os dois ao mesmo tempo; b) quando Z for um átomo de enxofre, R será um grupo C1-C4 alquila, um grupo arila ou um grupo aralquila, eventualmente substituído; e c) quando Z for um átomo de oxigênio, R será o grupo em que R1 representa os grupos indicados acima.

Dentro dos novos derivados da invenção, é preferido que quando Z for um átomo de enxofre, R seja uma cadeia curta de um grupo Ci-C4 alquila e quando Z for um átomo de oxigênio, R1 seja um átomo de hidrogênio ou uma cadeia curta de um grupo C1-C4 alquila. Mais preferencialmente, dentro dos critérios acima mencionados, B representa o grupo -ONO2, isto é, os compostos em que o éster de nitrato se encontra na posição 5 no sistema de anel da isosorbida.

As preferências mencionadas acima não devem de nenhuma maneira ser consideradas como limitativas do escopo da presente invenção.

No caso de R1 ser hidrogênio, os compostos da invenção podem ser representados como quaisquer de seus dois tautômeros: e ambas estruturas tautômeras devem ser consideradas como dentro do objeto da presente invenção.

Podem ser mencionados os seguintes exemplos de compostos específicos, dentro do objeto da presente invenção: - 5-mononitrato de 2-(2'-etiltio)nicotinato de isosorbida, de fórmula (1): - 2-mononitrato de 5-(2'-etiltio)nicotinato de isosorbida, de fórmula (2): - 5-mononitrato de 2-(2'-mercapto)nicotinato de isosorbida, de fórmula (3): - 2-mononitrato de 5-(2'-mercapto)nicotinato de isosorbida de fórmula (4): - 5-mononitrato de 2-acetilmercaptoisosorbida., de fórmula (5) : - 5-mononitrato de 2-(2'-metiltio)nicotinato de isosorbida, de fórmula (6): - 2-mononitrato de 5-(2'-metiltio)nicotinato de isosorbida, de fórmula (7) assim como seus sais farmaceuticamente aceitáveis, especialmente seus sais de cloridratos. O composto (1) e seu cloridrato e o composto (5), são particularmente preferidos.

Os compostos da presente invenção podem ser obtidos por meio de técnicas de esterificação, a partir de produtos de partida conhecidos ou acessíveis descritos na literatura básica de química orgânica, conhecida dos especialistas na técnica, por exemplo, as publicações do Chemical Abstract Service ou a Enciclopédia Beilstein de produtos orgânicos ou em qualquer outra apropriada publicação disponível nas bibliotecas universitárias.

Por exemplo, quando Z for um átomo de oxigênio, os compostos podem ser obtidos a partir da isosorbida ou a partir do correspondente mononitrato de isosorbida, através de uma reação de esterificação da mesma com o correspondente ácido carboxilico ou um derivado ativado deste, por exemplo, um cloreto de ácido, um anidrido de ácido, um éster ativo, etc. Se o produto de partida for isosorbida, será necessário proceder a uma etapa posterior da nitração do grupo hidroxila livre da isosorbida, o que não é necessário quando se usa como material de partida quaisquer dos mononitratos de isosorbida na posição 5 ou na posição 2 da estrutura de anel do dito composto.

Quando R1 representa um átomo de hidrogênio, estes compostos possuem um grupo tiol livre e podem ser oxidados, formando dímeros de dissulfetos. Nesse caso, os dimeros podem ser revertidos aos correspondentes monômeros, mediante reação com trifenilfosfina em água, conforme descrito na publicação de R. Humphrey (1964) , Analytical Chem., 36, 1812 e de L.E. Overman (1974), Synthesis, 59.

Quando Z for um átomo de enxofre, a situação é bastante similar, uma vez que é suficiente partir do correspondente ácido tiocarboxílico, no lugar do ácido carboxilico acima mencionado e utilizar técnicas bem conhecidas para os especialistas, para formação da ligação de tioéster. Por outro lado, se quaisquer das reações implicam na epimerização de um centro quiral, pode ser usado como composto de partida o enantiômero adequado de isosorbida, por exemplo, a isomanida.

Os testes realizados demonstraram que os novos derivados de mononitrato de isosorbida da invenção mostram uma atividade vasodilatadora comparável, no mínimo, com aquela do mononitrato de isosorbida em si, e em alguns casos altamente superior. Além disso, apresentam uma tolerância significativamente inferior, quando comparado com aquela observada no dito composto e em alguns casos chega a ser praticamente nula.

Consequentemente, os compostos da invenção podem ser usados de forma muito eficiente na fabricação de um medicamento com efeito vasodilatador para o tratamento de disfunções do sistema circulatório, em particular em nível cardiovascular e coronário.

Dessa forma, os compostos de fórmula geral (I), assim como seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser usados, através do uso de técnicas farmacêuticas convencionais, na fabricação de medicamentos que podem ser administrados através de diferentes rotas.

Por exemplo, tais medicamentos podem ser administrados oralmente na forma de preparações farmacêuticas, tais como comprimidos, cápsulas, xaropes e suspensões. Por via parenteral, podem ser administrados na forma de soluções ou emulsões, etc. Podem também ser administrados de forma tópica, na forma de cremes, pomadas, bálsamos, etc., e pela via transdérmica, por exemplo, através do uso de emplastros e bandagens. Os ditos medicamentos podem também ser aplicados diretamente no reto como supositórios. As preparações podem compreender veículos fisiologicamente aceitáveis, excipientes, ativadores, agentes quelantes, estabilizadores, etc. No caso de injeções, podem ser incorporados tampões fisiologicamente aceitáveis, agentes solubilizadores ou agentes isotônicos. A dose diária pode ser variada, dependendo dos sintomas específicos, da idade, do peso dos pacientes, do modo específico de administração, etc., e uma dose diária normal para uma pessoa adulta, pode se situar entre 1 e 500 mg e pode ser administrada como uma única dose ou dividida em diversas doses durante o dia.

Nos exemplos que são apresentados a seguir, são descritos em detalhes processos adequados para obtenção de diversos dos compostos de acordo com a fórmula geral (I) .

Em vista desses exemplos, está dentro do conhecimento geral dos especialistas na técnica, a obtenção de compostos não explicitamente aqui exemplificados, através de modificações adequadas para os referidos exemplos.

Consequentemente, os exemplos aqui apresentados não devem ser interpretados como limitativos do escopo da invenção, mas apenas como uma explicação adicional detalhada, que orienta o especialista na técnica a um entendimento mais profundo da invenção.

Exemplos Os compostos obtidos nos Exemplos abaixo, são identificados através de seus dados espectroscópicos de infravermelho (IR) e/ou de ressonância magnética nuclear de próton (1H RMN) e de carbono 13 (13C-RMN) .

Os espectros de IR foram realizados em filme evaporado com CHCI3 ou em comprimido de KBr, em um aparelho Perkin Elmer FTIR, modelo 1700. A posição dos picos ou bandas mais significativos é indicada em cm-1.

Os espectros de ressonância magnética nuclear foram realizados em um aparelho Varian Gemini-200.

No espectro de 1H-RMN são indicados a freqüência de trabalho e o solvente usado para realizar o espectro. A posição dos sinais se indica em δ (ppm), usando como referência o sinal dos prótons do solvente. São tomados coirto valores de referência 7,24 ppm para o clorofórmio deuterado e 2,49 ppm para o dimetilsulfóxído deuterado.

Dentro dos parênteses são indicados o número de prótons correspondentes a cada sinal, medidos por integração eletrônica e o tipo de sinal é indicado usando as seguintes abreviaturas: s (singlete), d (doblete) , t (triplete), dd (doblete de dobletes), sb (sinal amplo), sc (sinal complexo), d.e. D20 (desaparece durante realização do espectro após adição de algumas gotas de água de deutério) .

No espectro de 13-C-RMN, são indicados a freqüência de trabalho e o solvente de cada espectro. A posição dos sinais se indica em δ (ppm), usando como referência o sinal dos prótons do solvente. São tomados como valores de referência 77,00 ppm para o clorofórmio deuterado e 39,50 ppm para o dimetilsulfóxido deuterado.

Também, foram realizados experimentos de ressonância magnética nuclear, usando a seqüência de pulsos APT (Attached Proton Test).

Na parte experimental dos exemplos se utilizam as seguintes abreviaturas: AcOEt = Acetato de etila DMS0-d6 = Dimetilsulfóxido hexadeuterado EtOEt = Éter dietílico Exemplo 1 - Obtenção de cloridrato de 5-mononitrato de 2- (2'-etiltio)nicotinato de isosorbida (1) Etapa 1 Em um frasco de vidro de 50 ml, fornecido com um refrigerante de refluxo, fechado com um tubo de CaCl2 e com agitação magnética, se dissolvem 4,25 g (23,2 mmol) de ácido 2-etiltionicotínico em 20 ml de cloreto de tionila (1,64 g/ml; 275,6 mmol). A mistura reacional é submetida ao refluxo durante 3,5 horas. Após esse período, a mistura é resfriada e se elimina o excesso de cloreto de tionila sob pressão reduzida, enquanto se adicionam porções de tolueno.

Após secagem sob pressão reduzida, são obtidos 4,67 g de um produto sólido amarelado, correspondente ao cloreto de ácido de interesse. Rendimento: 100%.

Etapa 2 Em um frasco de vidro de 50 ml, fornecido com agitação magnética e um refrigerante de refluxo, se dissolvem 4,67 g (23,2 mmol) do cloreto de ácido obtido na etapa acima sob atmosfera de Ar, em 25 ml de piridina A solução é resfriada em um banho de gelo e são adicionadas 4,44 g (23,2 mmol) de 5-mononitrato de isosorbida. A mistura reacional é agitada à temperatura ambiente, sob atmosfera de Ar durante 19 horas. Após esse período o solvente é eliminado sob pressão reduzida. 0 resíduo é dissolvido em 50 ml de CHC13 e depois lavado: primeiro com 50 ml de água, depois com 50 ml de uma solução aquosa de HC1 a 5% e de novo com 50 ml de água. A fase orgânica é seca sobre MgSOí anidro, filtrada e o solvente é eliminado sob pressão reduzida. Após secagem sob pressão reduzida, são obtidos 7,25 g do produto de interesse. Rendimento: 88%.

Etapa 3 Em um frasco de vidro de três gargalos de 250 ml, fornecido com um refrigerante de refluxo, fechado com um tubo de CaCl2 e com agitação magnética e com um funil de adição com pressão compensada, são dissolvidas 6,0 g (16,85 mmol) do produto obtido na etapa anterior, em 150 ml de EtOEt. A solução é agitada à temperatura ambiente e é adicionado, gota a gota, 30 ml de uma solução de EtOEt saturada com HC1 (solução anterior preparada mediante borbulhamento de HC1 gasoso diretamente no EtOEt, até saturação da mesma), produzindo um precipitado sólido branco. O sólido é filtrado e lavado com um excesso de EtOEt e seco sob pressão reduzida. São obtidas 6,55 g do produto de interesse. Rendimento: 99%. 1H-RMN (200 MHz, DMSO-d6) : 10,26 (1H, s, d.e. D20, HC1), 8,60 (1H, dd, J=5 Hz, J=l,8 Hz, CHar) , 8,20 (1H, dd, J=7,7 Hz, J=2 Hz, CHar), 7,22 (1H, dd, J=3 Hz, J=8 Hz, CHar), 5,43 (1Η, SC, CH-ONO2), 5,30 (1H, d, J=3 Hz, CH-O-CO) , 5,05 (1H, t, J=5,5 Hz, CH), 4,65 (1H, d, J=5 Hz, CH), 4,20-3,80 (4H, sc, CH2), 3,17 (2H, q, J=7,6 Hz, CH2-S) , 1,23 (3H, t, J=7,6 Hz, CH3) . 13C-RMN (50 MHz, DMSO-de): 164,06 (C=0), 161,34 (Car-COO) , 152,88 (CHar), 139, 63 (CHar) , 122,48 (Car-S), 119,13 (CHar) , 86,19 (CH-0N02), 82,64 (CH), 81,78 (CH), 78,10 (CH-O-CO), 72,90 (CH2), 69,33 (CH2) , 23, 84 (CH2-S), 14,31 (CH3) .

Exemplo 2; Obtenção de cloridrato de 2-mononitrato de 5- (2'-etiltio)nicotinato de isosorbida (2) Etapa 1 Se utiliza o mesmo método utilizado na etapa 2 do Exemplo 1, empregando como produto de partida o 2- mononitrato de isosorbida. O produto de interesse é obtido com um rendimento químico de 88%.

Etapa 2 Em um frasco de vidro de três gargalos de 500 ml, fornecido com um refrigerante de refluxo, fechado com um tubo de CaCl2 e com agitação magnética e com um funil de adição com pressão compensada, são dissolvidas 7,0 g (19,66 mmol) do produto obtido na etapa anterior, em uma mistura de 200 ml de EtOEt + 100 ml de CH2CI2. A solução é agitada à temperatura ambiente e é adicionado, gota a gota, 30 ml de uma solução de EtOEt saturada com HC1 (solução anterior preparada mediante borbulhamento de HC1 gasoso diretamente no EtOEt, até saturação da mesma), produzindo um precipitado sólido branco. O sólido é filtrado e lavado com um excesso de EtOEt e seco sob pressão reduzida. São obtidas 7,05 g do produto de interesse. Rendimento: 91%. 1H-RMN (200 MHz, DMS0-d6) : 8,63 (1H, dd, J=5 Hz, J=l, 8 Hz, CHar), 8,33 (1H, sb, d.e. D20, HC1) , 8,23 (1H, dd, J=8 Hz, J=l, 8 Hz, CHar), 7,24 (1H, dd, J=3 Hz, J=7,8 Hz, CHar) , 5,44 (1H, d, J=3,2 Hz, CH-OCO), 5,33 (1H, sc, CH0N02) , 4,91 (1H, t, J=5, 6 Hz, CH), 4,67 (1H, d, J=5,4 Hz, CH) , 4,20-3,80 (4H, sc, CH2), 3,08 (2H, q, J=7,2 Hz, CH2-S) , 1,20 (3H, t, J=7,2 Hz, CH3) . 13C-RMN (50 MHz, DMSO-de) : 163, 74 (C=0) , 161,53 (Car-COO) , 152,77 (CHar), 139,24 (CHar) , 122,05 (Car-S) , 119,01 (CHar) , 86, 65 (CH-ONO2), 84,13 (CH) , 80, 79 (CH) , 74, 48 (CH-O-CO) , 70,78 (CH2-0) , 70,70 (CH2-0) , 23, 67 (CH2) , 14,14 (CH3) .

Exemplo 3 - Obtenção de 5-mononitrato de 2— (2' — mercapto)nicotinato de isosorbida (3) Etapa 1 Em um frasco de vidro de 100 ml, fornecido com um refrigerante de refluxo, fechado com um tubo de CaCl2 e com agitação magnética, se suspendem 3,0 g (19,35 mmol) de ácido 2-mercaptonicotínico em 30 ml de cloreto de tionila (1,64 g/ml; 413,4 mmol). A mistura reacional é deixada ao refluxo por 2 horas, observando-se a dissolução do sólido durante esse período. A mistura é resfriada e o excesso de cloreto de tionila é eliminado sob pressão reduzida, enquanto se adicionam porções de tolueno. Após secagem sob pressão reduzida, são obtidas 3,35 g de um sólido amarelo alaranjado, correspondente ao cloreto de ácido de interesse. Rendimento: 100%.

Etapa 2 Em um frasco de vidro de 250 ml, fornecido com um refrigerante de refluxo e agitação magnética, se suspendem 3,0 g (17,29 mmol) do cloreto de ácido obtido na etapa anterior, sob atmosfera de Ar, em 75 ml de piridina. A solução é resfriada em um banho de gelo e são adicionadas 3,30 g (17,29 mmol) de 5-mononitrato de isosorbida. A mistura reacional é deixada agitar à temperatura ambiente, sob atmosfera de Ar, durante 19 horas, em cujo período de tempo a mistura se torna escura. Quando a reação é concluída, o solvente é eliminado sob pressão reduzida. O resíduo é dissolvido em 250 ml de CHCI3 e depois lavado: primeiro com 250 ml de água, depois com 250 ml de uma solução aquosa de HC1 a 5% e de novo com 250 ml de água. A fase orgânica é seca sobre MgS04 anidro, filtrada e o solvente é eliminado sob pressão reduzida. Após secagem sob pressão reduzida, são obtidos 5,45 g de um sólido amarelo, que é recristalizado em isopropanol para se obter 4,83 g de um sólido branco, que é reagido em meio ácido durante 20 minutos com trifenilfosfina (1:1,25 molar) em metanol, com 10% de água. 0 solvente é eliminado sob pressão reduzida e o resíduo é dissolvido em AcOEt, lavando-se a solução com alguma quantidade de água. A fase orgânica é seca e o solvente é eliminado sob pressão reduzida, recuperando-se o produto de interesse mediante cromatografia preparativa.

Rendimento: 35,7%. ^H-RMN (200 MHz, CD3COCD3) : 7,90 (1H, dd, J=6,1 Hz, J=l, 6 Hz, CHar) , 7,70 (1H, dd, J=7,2 Hz, J=l,6 Hz, CHar), 6,97 (1H, dd, J=6,4 Hz, J=7,2 Hz, CHar) , 5, 63-5,55 (1H, sc, CH- 0N02), 5,38 (1H, d, J=3,4 Hz, CH-O-CO) , 5,09 (1H, t, J=5,l Hz, CH) , 4,75 (1H, d, J=4,8 Hz, CH) , 4,20-3, 85 (4H, sc, CH2) . IR (p.KBr): 3438, 2925, 1735, 1639, 1571, 1281, 1095.

Exemplo 4 - Obtenção de 2-mononitrato de 5 — (2' — mercapto)nicotinato de isosorbida (4).

Em um frasco de vidro de 250 ml, fornecido com um refrigerante de refluxo e agitação magnética, se suspendem 3,0 g (17,29 mmol) do cloreto de ácido obtido na etapa 1 do Exemplo 3, sob atmosfera de Ar, em uma mistura de 50 ml de piridina e 25 ml de CHC13. A suspensão é resfriada em um banho de gelo e são adicionadas 3,30 g (17,29 mmol) de 2- mononitrato de isosorbida. A mistura reacional é deixada agitar à temperatura ambiente, sob atmosfera de Ar, durante 19 horas, em cujo período de tempo a mistura se torna escura. Quando a reação é concluída, o solvente é eliminado sob pressão reduzida. O resíduo é dissolvido em 300 ml de CHCI3 e depois lavado: primeiro com 300 ml de água, depois com 300 ml de uma solução aquosa de HC1 a 5% e de novo com 300 ml de água. A fase orgânica é seca sobre MgSCh anidro, filtrada e o solvente é eliminado sob pressão reduzida.

Após secagem sob pressão reduzida, são obtidos 5,10 g de um sólido branco amarelado, que é recristalizado em isopropanol para se obter 4,55 g de um sólido branco, que é reagido em meio ácido durante 20 minutos com trifenilfosfina (1:1,25 molar) em metanol, com 10% de água. 0 solvente é eliminado sob pressão reduzida e o resíduo é dissolvido em AcOEt, lavando-se a solução com alguma quantidade de água. A fase orgânica é seca e o solvente é eliminado sob pressão reduzida, recuperando-se o produto de interesse mediante cromatografia preparativa. Rendimento: 37,6%. ^-RMN (200 MHz, CD3COCD3) : 7,98 (1H, dd, J=4,2 Hz, J=1,0 Hz, CHar) / 7,76 (1H, dd, J=4,9 Hz, J=1,0 Hz, CHar) , 7,34 (1H, dd, J=4,5 Hz, J=4,8 Hz, CHar) , 5,50-5,36 (2H, sc, CH- 0N02 + CH-O-CO) , 5,02 (1H, t, J=3,7 Hz, CH), 4,74 (1H, d, J=3,4 Hz, CH), 4,20-3,90 (4H, sc, CH2) . IR (p.KBr): 3395, 2876, 1727, 1653, 1631, 1593, 1291, 1276.

Exemplo 5 - Obtenção de 5-mononitrato de 2- acetilmercaptoisosorbida (5).

Etapa 1 Em um frasco de vidro de 1 L, fornecido com um refrigerante de refluxo, um funil de adição com uma pressãocompensada e agitação magnética, são misturadas 60 g (411 mmol) de isomanida, 88 g (461 mmol) de cloreto de paratoluenosulfonila, 296 ml de CCI4, 33 ml de CH2CI2 e 247 ml de H20. Se produz uma atmosfera de Ar e se adiciona, gota a gota, mantendo a temperatura de reação a 5°C, uma solução de 29,9 g (453 mmol) de KOH a 85%. O tempo de adição é de 1 hora e vinte minutos. A mistura resultante é agitada a 5°C durante 7 horas. 0 sólido é filtrado e lavado com duas porções de 125 ml de H20 e depois seco sob pressão reduzida. 0 sólido obtido é recristalizado em 1200 ml de CClí, filtrado a quente e o filtrado é deixado resfriar. Os cristais obtidos são filtrados e lavados, produzindo 54,5 g de uma fração A do produto de interesse, monotosilato de isomanida. 0 sólido resultante após a filtração a quente, é recristalizado em 1000 ml de CCI4, obtendo-se 29,5 g de uma fração B do produto de interesse.

Etapa 2 Em um frasco de vidro de 500 ml, fornecido com refrigerante de refluxo e agitação magnética, são misturadas 22,7 g (76 mmol) de monotosilato de isomanida e 13,0 g (113 mmol) de tioacetato de potássio, em 113 ml de n-butanol. Se produz uma atmosfera de Ar e a mistura reacional é deixada ao refluxo por 1 hora. A mistura é resfriada, filtrada e lavada com 200 ml de etanol e os solventes são eliminados sob pressão reduzida. São obtidos 20 g de um sólido.

Uma análise através de cromatografia de camada fina com uma amostra independente mostra que o produto de interesse não é a maior parte do produto bruto. O produto bruto obtido é tratado com 300 ml de n- butanol e 40 ml de ácido tioacético e submetido a refluxo por 1 hora. A mistura é deixada resfriar e filtrada sobre uma camada de Si02. Os solventes do filtrado são evaporados sob pressão reduzida, sendo obtido um produto bruto que é submetido à cromatografia Flash.

Para a separação cromatográfica é utilizada uma mistura de CHC13/AcOEt (4:1) como eluente. É obtida uma fração de 4,14 g de 2-acetilmercaptoisosorbida, suficientemente pura para ser usada na etapa de síntese subsequente. São obtidas diversas frações do produto de interesse com um alto grau de impurezas. Essas últimas frações são submetidas à cromatografia preparativa de fase reversa, para purificação do produto desejado.

Etapa 3 É preparada uma mistura para nitração mediante lenta e cuidadosa adição de 2,4 ml de HN03 a 60%, sobre uma mistura de 10 ml de anidrido acético e 10 ml de ácido acético. As misturas são preparadas a 0°C.

Em um frasco de vidro de 100 ml fornecido com um refrigerante de refluxo e agitação magnética, são dissolvidas 2,51 g (12,3 mmol) do produto obtido na etapa anterior, a 0°C, em 14,5 ml de ácido acético e, após agitação por alguns instantes, a mistura nitrada feita anteriormente é adicionada gota a gota, durante 20 minutos, mantendo ainda a temperatura a 0°C. A mistura reacional é agitada por 2 horas a 0°C, o produto bruto é derramado sobre 200 ml de água e a mistura resultante é extraída com porções de 3 x 200 ml de AcOEt. Cada uma das três porções é lavada separadamente com porções de 2 x 220 ml de uma solução saturada de NHC03 e 200 ml de água. A solução obtida é seca sobre Na2S04, filtrada e os solventes são eliminados sob pressão reduzida. São obtidos 2,4 g de um produto bruto que são submetidas à cromatografia Flash, usando uma mistura de CHCl3/AcOEt (25:1) como eluente. São obtidos 2,08 g do produto de interesse. Rendimento: 68%. 1H-RMN (200 MHz, CDC13) : 5,36-5,24 (1H, sc, CH-0N02) , 4,90- 4,80 (1H, sc, CH) , 4, 44-4,37 (1H, sc, CH) , 4,22-4,10 (1H, sc, CH) , 4,10-3,98 (2H, sc, CH2) , 3, 92-3,78 (2H, sc, CH2) , 2,33 (3H, s, CH3) . 13C-RMN (50 MHz, CDC13) : 194,48 (C=0) , 86,50 (CH-0N02) , 81,44 (CH), 81,22 (CH) , 78,48 (CH2) , 69,25 (CH2) , 45, 92 (CH- S), 30, 48 (CH3) . IR (cm"1) : 300-2800, 1700, 1650, 1630, 1280, 1080, 960.

Exemplo 6 - Obtenção de 5-mononitrato de 2— (2 — metiltio)nicotinato de isosorbida (6).

Em um frasco de vidro de 50 ml, fornecido com agitação magnética e um refrigerante de refluxo, se suspendem 2,0 g (10,7 mmol) do cloreto de ácido 2- metiltionicotínico, sob atmosfera de Ar, em 12 ml de piridina. A mistura é resfriada em um banho de gelo e são adicionadas 2,04 g (10,7 mmol) de 5-mononitrato de isosorbida. A mistura reacional é agitada à temperatura ambiente, sob atmosfera de Ar, durante 15 horas. Após esse período de tempo, o solvente é eliminado sob pressão reduzida. O resíduo é dissolvido em 50 ml de CHCI3 e depois lavado: primeiro com 50 ml de água, depois com 50 ml de uma solução aquosa de HC1 a 5% e de novo com 50 ml de água. A fase orgânica é seca sobre MgSC>4 anidro, filtrada e o solvente é eliminado sob pressão reduzida. Após secagem sob pressão reduzida, são obtidos 2,80 g do produto de interesse. Rendimento: 77%. ^-RMN (200 MHz, DMS0-d6) : 8,68 (1H, dd, J=5 Hz, J=l,8 Hz, CHar) , 8,22 (1H, dd, J=7,7 Hz, J=2 Hz, CHar) , 7,26 (1H, dd, J=3 Hz, J=8 Hz, CHar), 5,54 (1H, td, J=2 Hz, J=6 Hz, CH- 0N02), 5,34 (1H, d, J=3 Hz, CH-O-CO) , 5,06 (1H, t, J=5,5 Hz, CH), 4,58 (1H, d, J=5 Hz, CH), 4,18-3,82 (4H, sc, CH2) , 2,45 (3H, s, CH3-S) . 13C-RMN (50 MHz, DMSO-d6) : 163,91 (C=0) f 161,64 {C^-COO) f 152,80 (CHar), 139,27 (CHar), 122,20 (Car-S), 118,83 (CHar) , 85, 97 (CH-ONO2), 82,41 (CH), 81,53 (CH), 77,87 (CH-O-CO), 72, 67 (CH2), 69, 07 (CH2) , 13,34 (CH3) .

Exemplo 7 - Obtenção de 2-mononitrato de 5-(2'- metiltio)nicotinato de isosorbida (7).

Em um frasco de vidro de 50 ml, fornecido com agitação magnética e um refrigerante de refluxo, são suspensas 2,0 g (10,7 mmol) do cloreto de ácido 2- metiltionicotínico, sob atmosfera de Ar, em 12 ml de piridina. A mistura é resfriada em um banho de gelo e são adicionadas 2,04 g (10,7 mmol) de 2-mononitrato de isosorbida. A mistura reacional é agitada à temperatura ambiente, sob atmosfera de Ar, durante 15 horas. Após esse período de tempo, o solvente é eliminado sob pressão reduzida. O resíduo é dissolvido em 50 ml de CHCI3 e depois lavado: primeiro com 50 ml de água, depois com 50 ml de uma solução aquosa de HC1 a 5% e de novo com 50 ml de água. A fase orgânica é seca sobre MgS04 anidro, filtrada e o solvente é eliminado sob pressão reduzida. Após secagem sob pressão reduzida, são obtidos 2,75 g do produto de interesse. Rendimento: 75%. "'"Η-ΕΜΝ (200 ΜΗζ, DMSO-d6) : 8,90 (1Η, dd, J=5 Hz, J=l,8 Hz, CHar), 8,27 (1H, dd, J=7,7 Hz, J=2 Hz, CHar) , 7,27 (1H, dd, J=3 Hz, J=7,8 Hz, CHar) , 5,42-5,31 (1H, sc, J=2 Hz, J=6 Hz, CH-0N02), 5,60 (1H, d, J=3,2 Hz, CH-O-CO) , 5,06 (1H, t, J=5,5 Hz, CH), 4,92 (1H, d, J=5,6 Hz, CH) , 4,10-3,88 (4H, sc, CH2), 1,24 (3H, s, CH3-S). 13C-RMN (50 MHz, DMSO-d6) : 163,71 (C=0) , 161,89 (Can-COO) , 152,77 (CHar) , 139, 04 (CHar) , 121,92 (Car-S), 118,87 (CHar) , 86,56 (CH-ONOz), 84,05 (CH), 80,69 (CH), 74,41 (CH-O-CO), 70, 69 (CH2), 70,61 (CH2) , 13,37 (CH3) .

Exemplo 8 - Testes de Vasodilatação O método usado nos ensaios é substancialmente o mesmo que o descrito nas seguintes referências: * Furchgot, R.F. "Methods in Nitric Oxide Research".

Feelisch & Stamler Edits., John Wiley & Sons, Chichester, Inglaterra, páginas 567-581; * Trongvanichnam, K. e outros, Jpn. J. Pharmacol. 1996; 71:167-173; * Salas, E. e outros, Eur. J. Pharmacol. 1994; 258:47-55.

Os compostos diferentes são tratados em 5 diferentes concentrações, numa faixa de concentração que varia de 0,001 A 10 mm, usando de 6 a 9 anéis arteriais para cada composto. Os resultados obtidos são comparados aos do 5-mononitrato de isosorbida, que é usado como produto de referência.

Os resultados são mostrados na Tabela 1 abaixo e são expressos em CE50 (concentração efetiva 50), quer dizer, a concentração de cada composto testado em que é produzida uma vasodilatação de 50% no anel arterial previamente contraído com 1 μΜ de norepinefrina.

Tabela 1 - Testes de Vasodilatação Conforme pode ser observado, os dois compostos testados apresentam uma potente atividade vasodilatadora, pelo menos similar à atividade do produto de referência e o composto (1_) apresenta uma atividade vasodilatadora superior à atividade do produto de referência.

Exemplo 9 - Ensaios de Tolerância Os diferentes compostos testados são administrados de forma subcutânea em ratos, com uma dosagem de 10 mg/kg, a cada oito horas durante três dias, e o ensaio é depois realizado ex vivo, para testar a capacidade de vasodilatar os segmentos arteriais dos ratos após a administração subcutânea do composto. A metodologia seguida é substancialmente a mesma que a descrita nas seguintes referências: * De Garavilla, L. e outros, Eur. J. Pharmacol, 1996; 313:89-96; * Keith, R.A. e outros, J. Pharmacol. Exp. Ther. 1982; 221:525-531.

Os diferentes compostos são testados em cinco concentrações diferentes, numa faixa de concentração que varia de 0,001 A 10 mm, usando de 6 a 9 anéis arteriais para cada composto. Os resultados obtidos são comparados aos do 5-mononitrato de isosorbida, que é usado como produto de referência e com aqueles obtidos dos animais em que não foi administrado qualquer composto.

Os resultados obtidos, também mostrados como CE50, são apresentados na Tabela 2.

Tabela 2 - Teste de Tolerância Deve ser entendido que um composto desenvolve tolerância quando a CE50 do produto nos anéis vasculares dos animais que foram submetidos à administração do composto, conforme especificado acima, é superior à CE50 do composto nos anéis vasculares dos animais que não foram submetidos à administração do composto. A CE50 do composto de 5-mononitrato de isosorbida no grupo de animais em que o dito composto foi administrado, foi sete vezes superior quando comparado com aquela dos animais não tratados; CE50 do Grupo B / CE50 do Grupo A = 7, o que indica um forte desenvolvimento de tolerância para 0 produto de referência. Ao contrário, para os dois compostos testados, (1) e (5), que fazem parte do objeto da invenção, a CE50 obtida para ambos foi significativamente menor, o que indica um desenvolvimento de tolerância bastante inferior quando comparado ao produto de referência. Além disso, para o composto (_5) , o desenvolvimento da tolerância é praticamente nulo, sob essas condições de teste.

Claims (5)

1. - Composto caracterizado em que é 5-mononitrato de 2-(2' -etiltio)nicotinato de isosorbida e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

2. - Composto caracterizado em que é 2-mononitrato de 5-(2'-etiltio)nicotinato de isosorbida e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

3. - Composto caracterizado em que é 5-mononitrato de 2-(2'-mercapto)nicotinato de isosorbida e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

4. - Composto caracterizado em que é 2-mononitrato de 5-(2'-mercapto)nicotinato de isosorbida e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

5. - Composto caracterizado em que é 5-mononitrato de 2-acetilmercaptoisosorbida.