BE1011151A3 - Utilisation d'une composition pharmaceutique dans le traitement et/ou la prevention de l'ischemie. - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne l'utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant un véhicule pharmaceutique adéquat et un principe actif choisi parmi le groupe constitué par les citroflavonoïdes, le dobésilate de calcium, l'ail-rutoside, le tribénoside, l'hespéridine méthylichalcone, l'extrait de marron d'Inde, le naftazone, l'esculozide, l'aescine, la troxéritine, la coumarine, la diosmine, le o-(Béta-hydroxyéthyl) rutoside, les oligomères procyanidoliques, les extraits de ruscus et d'hespéridine méthylichalcone, les ruscosides, les extraits de petit houx et cassis, les extraits d'entocyanodisiques de myrtilles, les principes actifs de ces composés et/ou un mélange d'entre eux, pour la préparation d'un médicament dans le traitement et/ou la prévention de l'ischémie et/ou des pathologies associées à l'ischémie.

Description

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   UTILISATION D'UNE COMPOSITION PHARMACEUTIOUE DANS LE
TRAITEMENT ET/OU   LA-PREVENTION DE L'ISCHEMIE   Objet de l'invention
La présente invention est relative à l'application thérapeutique   et/cu   prophylactique d'une composition pharmaceutique dans le traitement et/ou la prévention de l'ischémie et de pathologies associées à l'ischémie. 



  Etat de la technique et arrière-plan technologique
Pour traiter certaines maladies variqueuses, il a été proposé différents composés actifs, dont la plupart sont présents dans des extraits de plantes. De tels composés sont notamment décrits dans les documents suivants : demande de brevet français FR-2692145, demande de brevet   français   FR-2668705, brevet européen EP-0541874Bl, demande internationale de brevet W093/20046, demande internationale de brevet   W093/20045,   brevet européen EP-   0566445-31,   demande de brevet européen EP-0210781-A1 et demande de brevet européen EP-0112770-Al. 



   De même, des composés actifs isolés à partir d'extraits de plantes ont été utilisés pour le traitement   de l'ischémie ou   des pathologies associées à l'ischémie. 

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   Cependant, la structure des composés actifs isolés de ces plantes est complexe, et il est difficile, sinon impossible, d'obtenir de tels produits par voie de synthèse, car leur coût de synthèse serait trop élevé. De plus, le fait que ces produits sont souvent des extraits de plantes signifie qu'ils sont en présence d'autres molécules susceptibles de produire également des effets secondaires, ce qui limite par conséquent la commercialisation de ces produits dans certains pays qui ne donnent pas d'autorisation de mise sur le marché de produits extraits de plantes. 



  Buts de l'invention
La présente invention vise à fournir un nouveau procédé thérapeutique et/ou prophylactique de l'ischémie et/ou des pathologies associées à l'ischémie. 



   Un but particulier de la présente invention vise à obtenir un procédé utilisant des agents thérapeutiques non ou peu toxiques, présentant peu ou pas d'effets secondaires, et dont la synthèse ou l'extraction à partir de produits vivants soit simple et peu coûteuse. 



  Eléments caractéristiques de l'invention
La présente invention concerne l'utilisation d'une composition pharmaceutique, comprenant un véhicule pharmaceutique et une quantité suffisante d'un composé actif choisi parmi le groupe constitué par les citroflavonoides, le dobésilate de calcium, l'ail-rutoside, le tribénoside, l'hespéridine méthylchalcone, l'extrait de marron d'Inde, le naftazone, l'esculozide, l'aescine, la troxérutine, la coumarine, la diosmine, le   o- (ss-   hydroxyéthyl) rutoside, les extraits de Mélilot et de 

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 rutoside, les oligomères procyanidoliques, les extraits de ruscus et d'hespéridine méthylichalcone, les ruscosides, les extraits de petit houx et cassis, les extraits d'entocyanodisiques de myrtilles, les principes actifs isolés de ces composés et/ou un mélange d'entre eux,

   pour la préparation d'un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention de l'ischémie et/ou des pathologies associées à l'ischémie. 



   Les composés actifs mentionnés ci-dessus sont des produits généralement isolés de plantes et/ou des extraits de plantes, commercialisés par différentes firmes pharmaceutiques sous différentes marques. Ces différents composés actifs, identifiés par leur marque et les sociétés qui les commercialisent, sont repris dans le tableau 1 cidessous.

   Tableau 1 : Composés actifs de la composition selon l'invention 
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<tb> 
<tb> Principe <SEP> actif <SEP> Marque <SEP> société
<tb> Citroflavonoides <SEP> Agruton-C <SEP> Sanofi-Winthrop
<tb> Citroflavonoides <SEP> Daflon <SEP> Eutherapie-Servier
<tb> Dobésilate <SEP> de <SEP> Calcium <SEP> Doxium <SEP> Synthelabo
<tb> Ail-Rutoside <SEP> Ex-Ail <SEP> Solvay
<tb> Tribénoside <SEP> Glyvenol <SEP> Ciba-Geigy
<tb> Hespéridine <SEP> Hemocoavit <SEP> Wynlit/BioTherabel
<tb> méthylichalcone
<tb> Marron <SEP> d'Inde <SEP> Intrait <SEP> de <SEP> Pharmethic
<tb> Marron <SEP> d'Inde
<tb> Naftazone <SEP> Mediaven <SEP> Will-Pharma
<tb> Esculoside <SEP> Mictasol-P <SEP> Medgenix
<tb> Aescine <SEP> Reparil <SEP> Madaus
<tb> 
 

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 EMI4.1 
 
<tb> 
<tb> Principe <SEP> actif <SEP> Marque <SEP> société
<tb> Troxérutine <SEP> Veinamitol <SEP> 

  Vitalpharma
<tb> Coumarine <SEP> Venalot-Depot <SEP> Boots
<tb> Troxérutine
<tb> Diosmine <SEP> Ven <SEP> Dretex <SEP> Therabel
<tb> o- <SEP> (ss-hydroxyéthyl) <SEP> Venoruton <SEP> Zyma
<tb> rutoside
<tb> Troxérutine <SEP> Venox <SEP> Eumedis/Therabel
<tb> Diosmine <SEP> Dafl-on <SEP> Servier
<tb> Extraits <SEP> de <SEP> Mélilot <SEP> et <SEP> Esbérivène <SEP> Knoll
<tb> rutosides
<tb> Oligomères <SEP> Endothelon <SEP> Sanofi
<tb> procyanidoliques
<tb> Extraits <SEP> de <SEP> ruscus <SEP> et <SEP> Cyclo <SEP> 3 <SEP> Fabre
<tb> hespéridine
<tb> méthylichalcone
<tb> Ruscosides <SEP> Cirkan <SEP> Sinbio-Fabre
<tb> Troxérutine <SEP> Réoflux <SEP> Negma
<tb> Diosmine <SEP> Dioveinor <SEP> Imnothéra
<tb> Extraits <SEP> de <SEP> petit <SEP> houx <SEP> Veinobiase <SEP> Laboratoire
<tb> et <SEP> cassis <SEP> Fournier <SEP> SchwartzPharma
<tb> Extraits <SEP> Difrarel <SEP> Labo 

  <SEP> Leurquin
<tb> d'endocyanodisiques <SEP> de <SEP> Mediolanum
<tb> myrtilles
<tb> 
 
De tels produits ainsi que leur posologie et leur forme d'administration préférée, sont décrits également dans les   documents"Répertoire   commenté des médicaments" (Centre Belge d'Information PharmacoThérapeutique, Bruxelles, 1994) et   Vidal   1997 (éd. Du 

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   Vidal,   33 Av. de Wagram, Paris, France). 



   On entend par"principe actif isolé d'un composé actif de l'invention", la partie active ayant un effet thérapeutique et/ou prophylactique vis-à-vis de sa cible biochimique telle que décrite ci-dessous, et susceptible d'avoir des propriétés comparables et/ou améliorées dans le domaine thérapeutique et/ou prophylactique à celles du composé actif décrit ci-dessous. 



   On entend   pa :"quantité   suffisante d'un composé actif", une quantité suffisante de ce composé pour traiter, soulager, dissiper ou atténuer les symptômes ou les dysfonctionnements du corps humain ou animal associés aux maladies susmentionnées et/ou pour prévenir ou diminuer la possibilité d'en être atteint. Par conséquent, l'application du traitement thérapeutique susmentionné est relative à un traitement prophylactique ou un traitement curatif desdites maladies. Le pourcentage de ce composé actif peut varier selon de très larges gammes, uniquement limitées par la tolérance et le niveau d'acceptation du composé par le patient. Ces limites sont en particulier   déterminées   par la fréquence d'administration. 



   Le véhicule pharmaceutique utilisé varie selon le mode d'administration choisi (intraveineux,    intramusculaire, oral, etc. ) et peut comporter différentes   formes telles que des tablettes, enrobées ou non enrobées, des pilules, des capsules, des solutions, des sirops, etc. 



   Les compositions pharmaceutiques seront préparées selon des procédés généralement utilisés par les   galéniciens   et les pharmaciens, et peuvent comprendre tout type de véhicule pharmaceutique adéquat, solide, liquide et/ou gazeux (y compris de   l'eau),   non ou peu toxiques. 

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   La composition pharmaceutique selon l'invention peut également comporter un adjuvant ou un autre composé pharmaceutique connu de l'homme du métier pour ses effets thérapeutiques et/ou prophylactiques sur les maladies susmentionnées ou pour ses propriétés susceptibles de diminuer les effets secondaires associés au composé actif présent dans la composition pharmaceutique de l'invention. 



   On entend   par, ischémie   ou pathologies associées à l'ischémie", les maladies vasculaires choisies parmi le groupe constitué par l'infarctus du myocarde, l'ischémie cérébrale, l'insuffisance veineuse chronique, les athériopathies,   c'est-à-dire   des lésions dues à l'athérosclérose affectant les artères des patients, le phénomène de Raynaud lié à des vasospasmes conduisant à une vasoconstriction des artères, les ulcères, l'altération de la perméabilité capillaire, la fragilité des capillaires, les cicatrisations, les altérations de la peau, les défauts rétiniens d'origine ischémique, la baisse d'acuité auditive d'origine ischémique, les troubles associés aux séjours en haute latitude, l'angine de poitrine engendrée par de courts moments d'obstruction coronarienne, l'hypertension pulmonaire,

   l'ischémie hépatique, la maladie de Parkinson, les myopathies et les syndromes associés à des problèmes vasculaires tels que le diabète, où une hypertension et une altération du flux sanguin apparaissent dans les membres inférieurs. 



   Un autre aspect de la présente invention concerne l'utilisation de la composition pharmaceutique selon l'invention dans le cas de diminution de la production d'énergie par les cellules diverses et différenciées, associée au vieillissement. C'est le cas de 

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 défauts intellectuels d'un sujet âgé, du syndrome vertigineux et de la baisse d'adaptation perspective due à une modification de la régulation du métabolisme. 



   Un dernier aspect de la présente invention concerne l'utilisation de la composition pharmaceutique selon l'invention dans le domaine des transplantations. 



   Ladite composition pharmaceutique peut être utilisée directement sur le patient ou destinée à un traitement ex vivo du malade, dans lequel un organe, un tissu ou un liquide physiologique provenant d'un autre patient humain ou animal, est traité par l'adjonction de ladite composition pharmaceutique directement à l'organe, au tissu ou au liquide physiologique préalablement à son implantation sur le patient. Cette application concerne en particulier le domaine des transplantations cardiaques. 



   Les Inventeurs ont remarqué de manière inattendue que les composés susmentionnés connus pour leur application dans le traitement des varices, pouvaient avoir avantageusement un effet de type prophylactique et/ou thérapeutique sur les maladies susmentionnées. 



   Ces effets prophylactiques et/ou thérapeutiques sont notamment décrits dans les exemples joints en annexe, en référence aux figures, donnés à titre d'illustration non limitative de l'objet de l'invention. 



  Brève description des figures La figure 1 représente de manière schématique la cascade d'activation de la cellule endothéliale par l'hypoxie ainsi que ses conséquences au niveau de l'adhérence et de l'activation des neutrophiles. 

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  La figure 2 représente de manière schématique la cascade d'activation des cellules endothéliales par l'hypoxie et ses conséquences au niveau de la paroi vasculaire. 



  La figure 3 représente la mesure de l'activité respiratoire des mitochondries en fonction de l'addition de différents composés actifs. 



  La figure 4 représente de manière schématique la chaîne des transporteurs d'électrons au niveau de la membrane mitochondriale interne. 



  Exemples Exemple 1   : Description générale   du mécanisme d'action des composés actifs de l'invention
Les cellules endothéliales (CE), de par leur localisation à l'interface sang-tissu, sont responsables du maintien de l'homéostasie vasculaire. Elles remplissent ainsi toute une série de fonctions et interagissent constamment avec les leucocytes circulants et les cellules musculaires lisses (CML) de la média. Toute perturbation de leur métabolisme peut donc entraîner des altérations du fonctionnement des tissus sous-jacents. 



   Parce qu'elles sont localisées à l'interface sang-tissu, les CE sont les premières à souffrir de toute modification du flux sanguin et notamment d'une diminution de celui-ci lors des stases. Ces stases conduisent à un appauvrissement de l'apport en oxygène et en nutriments aux tissus et le métabolisme des CE semble très sensible à de telles situations [Hinshaw et al., 1988 ; Tsao et al., 1990]. 



   L'hypoxie, qui peut notamment résulter d'une telle stase, induit une activation importante des cellules 

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 endothéliales qui libèrent alors des médiateurs de l'inflammation capables d'activer les neutrophiles et d'en induire l'infiltration ainsi que des facteurs de croissance pour les CML. Cette cascade d'événements conduit finalement à des modifications structurelles et fonctionnelles de la paroi veineuse. 



  Exemple 2 : Effet de l'hypoxie sur les fonctions endothéliale-
Afin d'étudier les modifications du métabolisme des cellules endothéliales lorsque l'approvisionnement en oxygène est réduit, on incube in vitro des CE isolées à partir de la veine ombilicale humaine sous hypoxie. Dans ces conditions expérimentales, on n'observe pas de mortalité des CE pendant les deux premières heures d'incubation. Par contre, d'importantes modifications de leur métabolisme sont observées : les CE sont fortement activées par l'hypoxie de manière similaire à l'activation initiée par la thrombine ou l'histamine. 



   Le premier signe de cette activation est une augmentation de la concentration cytosolique en calcium [Arnould et   al.,   1992]. Cette augmentation est liée à une diminution de la concentration en ATP. Le calcium est un messager secondaire important dans toutes les cellules. Dans les CE, il est notamment capable d'activer la phospholipase A2, première enzyme d'une voie métabolique conduisant à la synthèse de médiateurs de l'inflammation. Les Inventeurs ont effectivement mis en évidence une activation de la phospholipase A2 dans les CE soumises à une hypoxie. Cette activation conduit à une synthèse accrue de prostaglandines [Michiels et al.,   1993].   Elle induit également la synthèse de PAF, qui est un médiateur 

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 inflammatoire très puissant [Arnould et al., 1993]. 



   L'hypoxie entraîne donc une activation importante des CE qui libèrent alors des prostaglandines et synthétisent du PAF en grande quantité. Cette voie d'activation est résumée à la figure 1. Cette synthèse de médiateurs inflammatoires peut avoir des conséquences importantes sur l'homéostasie vasculaire en modulant les fonctions des différents types cellulaires avec lesquels les CE sont en contact. 



   Afin de visualiser plus en détail quelles pourraient être ces conséquences, on étudie l'adhérence 
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 d'un type de leucocytes particuliers, les polymorphonucléaires neutrophiles (PMN). In vitro, lorsque des CE sont soumises à une hypoxie, leur adhésivité pour les PMN augmente fortement. Cette adhérence est en partie due à la synthèse de PAF par les CE activées par l'hypoxie [Arnould et al., 1993]. Non seulement les PMN deviennent adhérents aux CE hypoxiques, mais cette adhérence est responsable de leur activation [Arnould et al., 1994] (figure 1). 



   Il est également connu que les CE synthétisent des molécules vasoactives qui modulent les fonctions des CML. Il était donc intéressant de savoir si l'hypoxie pouvait également perturber les interactions physiologiques entre CE et CML. Les expériences suggèrent que les CE activées par un manque d'oxygène libèrent différents facteurs mitogéniques pour les CML (prostaglandine F2a et basic fibrosblast growth factor), ce qui induit la prolifération de ces cellules [Michiels et al., 1994]. 

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   Exemple   3 : Origine présumée de la maladie veineuse  
Au vu des résultats décrits en utilisant le modèle expérimental où des CE sont exposées in vitro à une hypoxie, l'origine des pathologies susmentionnées semble basée sur une cascade d'événements initiée par cette hypoxie et qui conduit finalement aux modifications structurelles et fonctionnelles observées dans les systèmes vasculaires. 



   La figure 2 illustre cette hypothèse. La stase veineuse puisqu'elle perturbe la circulation sanguine engendre une diminution de l'apport en oxygène et donc une hypoxie. Cette hypoxie peut activer les CE, cellules qui forment la première couche de la paroi veineuse. Ces cellules libèrent alors différentes molécules inflammatoires et mitogéniques. Les molécules inflammatoires sont capables d'induire l'adhérence de certains leucocytes. Cela est vrai non seulement pour les CE en culture mais également pour l'endothélium d'une veine humaine complète que ce soit une veine ombilicale [Arnould et al.,   1995]   ou une veine saphène. De plus, lors du processus d'adhérence, les neutrophiles sont activés et peuvent relarguer protéases et radicaux libres.

   Ces molécules sont connues pour avoir la capacité de dégrader de nombreuses molécules biologiques dont les composants de la matrice extracellulaire comme le collagène. 



   D'autre part, les CE activées par l'hypoxie synthétisent aussi des facteurs mitogènes pour les CML qui en induisent la prolifération. De plus, on sait que les CML qui prolifèrent sont dans un phénotype synthétique au contraire du phénotype contractile normalement présent dans la paroi de veines normales. Lorsqu'elles sont synthétiques, les CML synthétisent plus de composants de la 

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 matrice extracellulaire et perdent l'expression des filaments contractiles. Prolifération et synthèse accrue des composants de la matrice extracellulaire conduisent à l'épaississement de la paroi veineuse alors que la perte des filaments d'actine rend compte de la perte de la contractilité globale de la veine. 



   A partir des résultats expérimentaux obtenus sur le modèle des CE exposées à une hypoxie, une nouvelle hypothèse concernant l'origine des pathologies susmentionnées peut être proposée : ce serait une cascade d'interactions cellulaires faisant intervenir leucocytes et SML et initiée par l'activation des CE par la stase veineuse qui conduirait finalement aux modifications structurelles et fonctionnelles observées. 



  Exemple 4 : Mécanisme biochimique d'action des composés actifs
Avec les composés de l'invention, on observe par exemple une inhibition de la diminution du contenu en ATP, de l'activation de la phospholipase A2 et de l'adhérence des PMN induites par l'hypoxie. Ils sont aussi capables d'inhiber l'adhérence des PMN à l'endothélium d'une veine ombilicale humaine complète lorsque celle-ci est incubée dans des conditions hypoxiques. Ces résultats indiquent clairement une action protectrice importante de ces composés sur l'endothélium soumis à une hypoxie, ce qui pourrait apporter une explication rationnelle à leur effet thérapeutique. 



   L'inhibition par ces médicaments de la cascade d'activation des CE induite par l'hypoxie est due à leur effet inhibiteur de la chute du contenu en ATP. Cette diminution est l'événement initiateur de l'activation des 

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 CE car il est directement couplé à une entrée d'ions calcium dans la cellule. 



   Il fallait ensuite comprendre comment ces composés peuvent maintenir le contenu en ATP des CE sous hypoxie. Deux hypothèses sont envisageables : soit les composés activent la glycolyse, soit ils préservent l'activité respiratoire mitochondriale. Les Inventeurs ont découvert que ces composés n'activent pas la glycolyse dans les CE soumises à une-hypoxie mais plutôt qu'ils retarderaient l'activation de la glycolyse directement induite par l'hypoxie. Ces résultats suggèrent qu'ils pouvaient agir au niveau de la mitochondrie en maintenant plus longtemps une activité respiratoire sous hypoxie. 



  Cette hypothèse est confirmée en mesurant l'activité respiratoire exprimée par le contrôle respiratoire (RCR) (figure 3) de mitochondries de foie de rats traités per os. 



  Exemple 5 : Effet du bilobalide sur les mitochondries du cerveau dans des conditions normales
Différentes concentrations en bilobalide ont été testées sur le RCR des mitochondries isolées à partir du cerveau de rats. Cinq concentrations ont été utilisées : 4,6, 8,10 et 12 mg/kg. Les rats ont reçu ces doses de bilobalide per os pendant 14 jours. Les mitochondries ont été isolées suivant la méthode décrite par Nowicki et al. 



  (J. Cérébral Blood Flow and Métabolism, 2, pp. 33-40    (1982) ). La respiration mitochondriale est mesurée dans une   électrode à oxygène de Clark reliée à un enregistreur. Le RCR représente le contrôle respiratoire. Il représente le rapport entre la consommation en oxygène en présence de substrats endogènes (glutamate/malate) et la consommation après phosphorylation de l'ADP en ATP. Cette technique a 

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 été développée par Chance et Williams (Nature, 175, pp.   1120-1121 (1955) ). On obtient en effet dose-dépendant avec   une augmentation du RCR de 3,7 jours pour les contrôles à un RCR de 4,6 pour des concentrations de 8 et 10 mg/kg. On obtient un maximum de 24% d'augmentation à 10 mg/kg. Ces résultats montrent bien une protection de ce produit sur la respiration mitochondriale. 



  Exemple 6 : Effet du bilobalide sur les mitochondries du cerveau en situation d'ischémie
Une ischémie de 15 minutes a été réalisée sur des rats contrôles et des rats traités avec du bilobalide pendant 14 jours. L'ischémie est réalisée par décapitation. 



  Les rats ont été traités per os avec des doses de bilobalide de 10 mg/kg pendant 14 jours. Lorsque le RCR est mesuré en présence de glutamate/malate pour une ischémie de 15 minutes, on observe un RCR de 3 pour les contrôles pour un RCR de 3,9 pour les rats traités avec le bilobalide. Le bilobalide possède donc une action de protection sur la diminution de l'activité respiratoire induite par l'ischémie. Cette protection se manifeste au niveau de l'activité du complexe I et de la chaîne de transport des mitochondries. Le taux de contrôle respiratoire mesuré en présence de glutamate/malate reflète indirectement l'activité du complexe I de la chaîne de transfert d'électrons. 



   La mesure sur le complexe I des mitochondries a été réalisée par une sonication préalable des mitochondries afin de permettre l'accès des substrats de dosage au complexe I. Celui-ci est dosé suivant la réduction du ferricytochrome C à 550 nm. La suspension de mitochondries se trouvant dans un tampon phosphate de K à 

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 25 nM, pH 7,4, contenant du MgCl2, 10 UM de cytochrome C et 2,5 mg/ml d'albumine bovine est soniquée 30 secondes à 0   OC.   On ajoute 2 mM de KCW et la réaction est démarrée par ajout de 7,5 mM NADH. Les mitochondries sont incubées à 37 OC et l'on suit la réduction du ferricyanure à 550 nm. 



  Une correction est apportée pour la réduction du cytochrome   C   en présence de Rotenone qui inhibe le complexe I. Les résultats sont exprimé en   gnole   de ferricytochrome   C   réduit par minute. 



   L'activité du complexe I a été mesurée sur des mitochondries de rats traités 14 jours avec 10 mg/kg de bilobalide per os et après une ischémie de 15 minutes du cerveau. On obtient pour les rats contrôles une activité de 36 mU/mg de protéine alors que les mitochondries de rats traités montrent une activité de 44 mU/mg de protéine. On constate donc une protection importante de l'activité du complexe I des mitochondries. Une même protection du complexe I est aussi observée sur des mitochondries isolées de cerveau de rats n'ayant pas subi de période d'ischémie. 



  Exemple 7 : Effet du bilobalide sur les mitochondries du foie
Le bilobalide à des concentrations de 8 mg/kg de patient a été administré per os à des rats pendant 14 jours. Les mitochondries du foie de ces rats ont été isolées selon la méthode décrite par Remacle (J. Cell. 



  Biol. 79,291, 1978). L'activité respiratoire des mitochondries de rats traités a montré un RCR de 13,25 comparé à un RCR de 7,6 pour les rats témoins. Une ischémie de 10 minutes par perfusion a été réalisée sur les foies dans un milieu constitué de NaCl 0,137 M, KC1 5,4 mM, MgS04 

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 0,8 mM, glucose 11 mM,   Na2HP03   0,34 mM, NaHCO3 24,4 mM, KH2P04 6,35 mM et bilobalide 8   mg/l.   Le milieu est dégazé préalablement sous une atmosphère contenant 95% de N2 et 5% de   Cules   mitochondries sont isolées et leur activité respiratoire déterminée. 



   Pour les témoins, les rats ont reçu de l'eau pendant 14 jours et les foies perfusés avec la même solution que les tests. Un RCR de 5,24 a été observé pour les mitochondries de rats traités et de 3,73 pour les rats témoins. 



   Ces résultats démontrent que le bilobalide possède une activité anti-ischémique qui se révèle à la fois in vitro (CE soumises à une hypoxie) et in vivo (ischémie hépatique et cérébrale sur rats traités) et que cette activité est due au moins en partie à une protection des mitochondries qui augmentent leur activité respiratoire et donc leur synthèse d'ATP. 



   Chacun des composés actifs cités ci-dessus, comme le bilobalide, peuvent augmenter le RCR de mitochondries isolées à partir de foie de rats non traités lorsque celles-ci sont préincubées 1 heure en présence de ces médicaments. Ils peuvent donc agir directement sur les mitochondries. Il est très intéressant de noter qu'à partir de ces résultats, on peut séparer les médicaments en deux classes différentes : l'extrait de mélilot, l'extrait de Ruscus, les oligomères procyanoliques et les   hydroxyéthylrutosides   qui augmentent le RCR en augmentant le stade 3 de la respiration (voir figure 3) alors que le bilobalide, l'aescine, la naftoquinone et la dosmine augmentent le RCR en diminuant le stade 4 de la respiration.

   Deux mécanismes d'action différents semblent 

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 donc être impliqués mais ils conduisent tous les deux à augmenter l'activité respiratoire mitochondriale et protège ainsi contre la diminution du contenu en ATP pendant l'hypoxie. 



   Le processus de la phosphorylation oxydative de l'ATP est un processus complexe faisant intervenir différents complexes enzymatiques ou transporteurs d'électrons générant un gradient de protons (complexes I, III, IV), l'ATP synthase- (complexe V) directement responsable de la synthèse d'ATP et l'adénine translocase qui est le transporteur nécessaire à l'importation d'ADP et à l'exportation de l'ATP (figure 4). Afin de mettre en évidence quelle pourrait être la cible enzymatique de ces médicaments, chaque complexe a été inhibé par un inhibiteur spécifique et on a   étudié   si ces préparations pouvaient relever cette inhibition tout en mesurant le RCR. Les résultats montrent qu'aucun de ces médicaments n'a d'effet sur les complexes IV et V.

   Par contre, les médicaments qui augmentent le RCR en diminuant le stade 4 protègent fortement le complexe III et dans une moindre mesure le complexe I. Par ailleurs, en mesurant directement l'activité de l'adénine translocase, on a montré que les médicaments qui augmentent le stade 3 de la respiration augmentent l'activité de ce transporteur. 



   Une autre propriété intéressante de l'invention est que l'on peut obtenir un effet synergique par la combinaison de différentes molécules agissant sur différentes cibles, par exemple, une molécule agissant sur les complexes I et III qui se traduit par une diminution du stade 4 de la respiration mitochondriale et une ou plusieurs molécules agissant sur l'adénine translocase qui se traduit par une augmentation du stade 3 de la 

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 respiration mitochondriale. La double protection ainsi obtenue donne un résultat global avantageux, puisqu'il dépasse la protection maximale possible avec chacun des composés. 



   Deux cibles enzymatiques des composés actifs ont été identifiées. L'action des composés sur ces deux cibles a comme conséquence d'augmenter la production d'ATP par les mitochondries et d'empêcher que cette production ne diminue dans des conditions ischémiques. Ainsi, ils protègent les cellules des conséquences d'un déficit énergétique qui pour les CE peut conduire à leur activation, au recrutement, à l'adhérence et à l'activation de leucocytes et à la prolifération de CML (figure 2). Dans le cadre de l'hypothèse de l'origine des veines variqueuses présentées ci-dessus, cette action explique comment ces médicaments peuvent prévenir la maladie et elle donne pour la première fois une explication rationnelle à leur potentiel thérapeutique. 



   Le fait que ces molécules avaient toutes comme propriété de maintenir le taux de production de l'ATP des mitochondries élevé même dans des situations non physiologiques comme les périodes d'ischémie ou de diminution de ces activités mitochondriales dues à l'âge ou à des pathologies associées au vieillissement fait qu'elles peuvent être utilisées dans ces différentes pathologies. Un facteur limitant est la biodisponibilité de ces molécules au niveau de l'organisme, notamment du fait de la résorption et de leur passage dans des tissus cibles à protéger. Cependant, cette biodisponibilité peut être améliorée par des techniques actuelles de conditionnement et d'enrobage et/ou de"drug targetting".

Claims (4)

1. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant un véhicule pharmaceutique adéquat et un principe actif choisi parmi le groupe constitué par les citroflavonoides, le dobésilate de calcium, l'ail-rutoside, le tribénoside, l'hespéridine méthylichalcone, l'extrait de marron d'Inde, le naftazone, l'esculozide, l'aescine, la troxérutine, la coumarine, la diosmine, le 0- (ss-hydroxyéthyl) rutoside, les extraits de Mélilot et de rutoside, les oligomères procyanidoliques, les extraits de ruscus et d'hespéridine méthylichalcone, les ruscosides, les extraits de petit houx et cassis, les extraits d'entocyanodisiques de myrtilles, les principes actifs de ces composés et/ou un mélange d'entre eux,

   pour la préparation d'un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention de l'ischémie et/ou des pathologies associées à l'ischémie ou à un déficit énergétique.
2. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que les pathologies associées à l'ischémie sont choisies parmi le groupe constitué par l'infarctus du myocarde, l'ischémie cérébrale, l'insuffisance veineuse chronique, les athériopathies, c'est-à-dire des lésions dues à l'athérosclérose affectant les artères des patients, le phénomène de Raynaud lié à des vasospasmes conduisant à une vasoconstriction des artères, les déficits rétiniens d'origine ischémique, la baisse d'acuité auditive d'origine ischémique, les troubles dus à un séjour en haute latitude, les ulcères, l'altération de la perméabilité capillaire, la fragilité capillaire, les cicatrisations, les altérations de la peau, l'angine de poitrine engendrée par de courts moments d'obstruction coronarienne, l'hypertension pulmonaire,

   l'ischémie <Desc/Clms Page number 20> hépatique, la maladie de Parkinson, le diabète et/ou les transplantations cardiaques.
3. 3. Procédé de traitement ex vivo d'un patient, dans lequel un organe, un tissu et/ou un liquide physiologique provenant d'un autre patient humain ou animal est traité par l'adjonction d'une composition pharmaceutique comprenant un véhicule pharmaceutique adéquat et un principe actif choisi parmi le groupe constitué par les citroflavonoides, le dobésilate de calcium, l'ail-rutoside, le tribénoside, l'hespéridine méthylichalcone, l'extrait de marron d'Inde, le naftazone, l'esculozide, l'aescine, la troxérutine, la coumarine, la diosmine, le o- (ss-hydroxyéthyl) rutoside, les oligomères procyanidoliques, les extraits de ruscus et d'hespéridine méthylichalcone, les ruscosides, les extraits de petit houx et cassis, les extraits d'entocyanodisiques de myrtilles, les principes actifs de ces composés et/ou un mélange d'entre eux,

   à l'organe et/ou au tissu préalablement à son implantation sur le patient.
4. 4. Utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant un véhicule pharmaceutique adéquat et un principe actif choisi parmi le groupe constitué par les citroflavonoides, le dobésilate de calcium, l'ail-rutoside, le tribénoside, l'hespéridine méthylichalcone, l'extrait de marron d'Inde, le naftazone, l'esculozide, l'aescine, la troxérutine, la coumarine, la diosmine, le o- (ss-hydroxyéthyl) rutoside, les oligomères procyanidoliques, les extraits de ruscus et d'hespéridine méthylichalcone, les ruscosides, les extraits de petit houx et cassis, les extraits d'entocyanodisiques de myrtilles, les principes actifs de ces composés et/ou un mélange d'entre eux,

   pour la préparation d'un médicament destiné au <Desc/Clms Page number 21> traitement et/ou à la prévention des déficiences liées au vieillissement comme les défauts intellectuels du sujet âgé, le syndrome vertigineux ou la baisse d'adaptation perspective due à une modification de régulation des métabolismes.