MXPA05011585A

MXPA05011585A - Genes de glifosato-n-acetil transferasa (gat) novedosos.

Info

Publication number: MXPA05011585A
Application number: MXPA05011585A
Authority: MX
Inventors: Roger Kemble
Original assignee: Pioneer Hi Bred Int
Priority date: 2003-04-29
Filing date: 2004-04-29
Publication date: 2006-05-25
Also published as: CA2662092C; BRPI0409816B1; AU2004260931B2; JP2007500514A; EP2322629A2; EP1620557A2; CN1863914B; BRPI0409816A; CA2662092A1; CA2521284A1; CA2521284C; WO2005012515A2; CN1863914A; EP2535414A1; BRPI0409816B8; WO2005012515A8; WO2005012515A3; HRP20050930A2; AU2004260931B9; EP2535414A8

Abstract

En la presente se proporcionan proteinas novedosas, incluyendo proteinas capaces de catalizar la acetilacion del glifosato y otras proteinas estructuralmente relacionadas. Tambien se proporcionan polinucleotidos novedosos capaces de codificar estas proteinas, composiciones que incluyen una o mas de estas proteinas novedosas y/o polinucleotidos, celulas recombinantes y plantas transgenicas que comprenden estos compuestos novedosos, metodos de diversificacion que implican los compuestos novedosos, y metodos para usar los compuestos. Algunos de los metodos y compuestos novedosos proporcionados en la presente se pueden usar para volver un organismo, tal como una planta, resistente a glifosato.

Description

GENES DE GLIFOSATO-N-ACETILTRANSFERASA (GAT) NOVEDOSOS ANTECEDENTES DE LA INVENCION La selectividad .del cultivo a herbicidas específicos puede ser conferida al diseñar genes en cultivos que codifican enzimas apropiadas de metabolización del herbicida. En algunos casos estas enzimas y los ácidos nucleicos que las codifican, se originan en una planta. En otros casos, ellas son derivadas de otros organismos, tales como microbios. Ver, por ejemplo, Padgette y colaboradores (1996) "Ne weed control opportunities : Development of soybeans with a Round UP Ready™ gene" y Vasil (1996) "Phosphinotricin-resistant crops", ambos en ííer icide-.Resístant Crops, ed. Duke (CRC Press, Boca Ratón, Florida) pp. 54-84 y pp. 84-91) . En realidad, las plantas transgénicas se han diseñado para expresar una variedad de genes de tolerancia/metabolización del herbicida, a partir de una variedad de organismos. Por ejemplo, la acetohidroxi ácido sintasa, que se ha encontrado que hace a las plantas que expresan esta enzima resistentes a múltiples tipos de herbicidas, se ha introducido en una variedad de plantas (ver, por ejemplo, Hattori y colaboradores (1995) Mol. Gen. Genet. 246:419). Otros genes que confieren tolerancia a herbicidas incluyen: un gen que codifica una proteína quimérica del cxtocromo P4507A1 de rata y la NADPH-citocromo P450 oxidoreductasa de levadura (Shiota y colaboradores (1994) Plant Physiol, 106:17), genes para glutationa reductasa y superóxido dismutasa (Aono y colaboradores (1995) Plant Cell Physiol. 36:1687, y genes para varios fosfotransferasas (Datta y colaboradores (1992) Plant Mol. Biol. 20: 619) . ün herbicida que es el sujeto de mucha investigación a este respecto es la N-fosfonometilglicina, comúnmente referida como glifosato. El glifosato es el herbicida de mayor venta en el mundo, con ventas proyectadas para alcanzar 5 billones de dólares para el 2003. Este es un herbicida de amplio espectro que extermina plantas tanto de hoja ancha como de tipo hierba. Un modo exitoso de la resistencia de glifosato a nivel comercial en plantas transgénicas es mediante la introducción de 5-enolpiruvilshiquinato-3-fosfato sintasa (después en la presente referida como EPSP sintasa o EPSPS) de CP-4 de Agrobacterium modificado. El transgen es dirigido al cloroplasto donde es capaz de continuar sintetizando EPSP a partir del ácido fosfoenolpirúvico (PEP) y shiquimato-3-fosfato en la presencia de glifosato. En contraste, la EPSP sintasa nativa es inhibida por el glifosato. Sin el transgen, las plantas rociadas con glifosato rápidamente mueren debido a .la inhibición de la EPSP sintasa que interrumpe la ruta corriente abajo necesaria para la biosíntesis del aminoácido aromático, hormona y vitamina. Las plantas transgénicas de soya resistentes a glifosato CP4 son comercializadas, por ejemplo, por Monsanto bajo el nombre "Round UP Ready™". En el medio ambiente, el mecanismo predominante mediante el cual el glifosato es degradado es a través del metabolismo de la microflora del suelo. El metabolito primario de glifosato en el suelo se ha identificado como ácido aminometilfosfónico (AMPA) , que es finalmente convertido en amoniaco, fosfato y dióxido de carbono. El esquema metabólico propuesto describe la degradación del glifosato en el suelo a través de la ruta de AMPA se muestra en la Fig. 8. Una ruta metabólica alternativa para la descomposición del glifosato por ciertas bacterias del suelo, la ruta de sarcosina, ocurre por medio de la segmentación inicial del enlace C-P para dar fosfato inorgánico y sarcosina, como es representado en la Fig. 9. Otro paquete de herbicida/cultivo transgénico exitoso es glufosinato (fosfinotricina) y el atributo Liberty Link™ comercializado, por ejemplo, por Aventis. El glufosinato también es un herbicida de amplio espectro. Su objetivo es la enzima glutamato sintasa del cloroplasto. Las plantas resistentes llevan el gen bar de Stxeptomyces hygroscopicus y logran la resistencia mediante la actividad de N-acetilación del bar, que modifica y desintoxica el glufosinato . Una enzima capaz de acetilar la amina primaria de AMPA es reportada en la solicitud de PCT No. WO 00/29596. La enzima no se describió como que es capaz de acetilar un compuesto con una amina secundaria (por ejemplo, glifosato) . Mientras que una variedad de estrategias de resistencia a herbicida están disponibles como es mencionado en lo anterior, procedimientos adicionales tendrían valor comercial considerable. La presente invención proporciona polinucleótidos y polipéptidos novedosos para conferir tolerancia a herbicida, así como otros numerosos beneficios como llegarán a ser evidentes durante la revisión de la descripción. BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención proporciona métodos y reactivos para volver un organismo, tal como una planta, resistente a glifosato mediante una o más de las modalidades descritas enseguida. Una modalidad de la invención proporciona polipéptidos novedosos referidos en la presente como polipéptidos de glifosato-N-acetiltransferasa ("GAT") . Los polipéptidos GAT se caracterizan por su similitud estructural entre sí, por ejemplo, en términos de similitud de secuencia, cuando los polipéptidos GAT son alineados entre sí. Los polipéptidos GAT de la presente invención poseen actividad de glifosato-N-acetíltransferasa, es decir, la habilidad para catalizar la acetilación del glifosato. Estos polipéptidos GAT transfieren el grupo acetilo de acetil CoA al N del glifosato. Además, algunos polipéptidos GAT transfieren el grupo propionilo de propionil CoA al N del glifosato. Algunos polipéptidos GAT también son capaces de catalizar la acetilación de análogos de glifosato y/o metabolitos de glifosato, por ejemplo, ácido aminometilfosfónico . Polipéptidos GAT ejemplares corresponden a SEQ ID NO: 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 621, 623, 625, 627, 629, 631, 633, 635, 637, 639, 641, 643, 645, 647, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 663, 665, 667, 669, 671, 673, 675, 677, 679, 681, 683, 685, 687, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 701, 703, 705, 707, 709, 711, 713, 715, 717, 719, 721, 723, 725, 727, 729, 731, 733, 735, 737, 739, 741, 743, 745, 747, 749, 751, 753, 755, 757, 759, 761, 763, 765, 767, 769, 771, 773, 775, 777, 779, 781, 783, 785, 787, 789, 791, 793, 795, 797, 799, 801, 803, 805, 807, 809, 811, 813, 815, 817, 819, 821, 823, 825, 833, 835, 837, 8.39, 841, 843, 845, 847, 849, 851, 853, 855, 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871, 873, 875, 877, 879, 881, 883, 885, 887, 889, 891, 893, 895, 897, 899, 901, 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971 y 972. También se proporcionan polinucleótidos novedosos referidos en la presente como polinucleótidos GAT, por ej emplo, SEQ ID NO: 516, 517, 518, 519, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 620, 622, 624, 626, 628, 630, 632, 634, 636, 638, 640, 642, 644, 646, 648, 650, 652, 654, 656, 658, 660, 662, 664, 666, 668, 670, 672, 674, 676, 678, 680, 682, 684, 686, 688, 690, 692, 694, 696, 698, 700, 702, 704, 706, 708, 710, 712, 714, 716, 718, 720, 722, 724, 726, 728, 730, 732, 734, 736, 738, 740, 742, 744, 746, 748, 750, 752, 754, 756, 758, 760, 762, 764, 768, 770, 772, 774, 776, 778, 780, 782, 784, 786, 788, 790, 792, 794, 796, 798, 800, 802, 804, 806, 808, 810, 812, 814, 816, 818, 820, 822, 824, 832, 834, 836, 838, 840, 842, 844, 846, 848, 850, 852, 854, 856, 858, 860, 862, 864, 866, 868, 870, 872, 874, 876, 878, 880, 882, 884, 886, 888, 890, 892, 894, 896, 898, 900, 902, 924, 926, 908, 910, 912, 914, 916, 918, 920, 922, 924, 926, 928, 930, 932, 933, 934, 935, 936, 937, 938, 939, 940, 941, 942, 943, 944, 945, 947, 949, 951 y 952. Los polinucleótidos GAT se caracterizan por su habilidad para codificar polipéptidos GAT. En algunas modalidades de la invención, un polinucleótido GAT es diseñado para mejor expresión de la planta al reemplazar uno o más codones parentales con un codón sinónimo que es preferencialmente utilizado en plantas con relación al codón parental. En otras modalidades, un polinucleótido GAT es modificado mediante la introducción de una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido de tránsito de cloroplasto N-terminal. En otras modalidades un polinucleótido GAT es modificado mediante la inserción de uno o más codones que contienen G+C (tales como GCG o GCT) inmediatamente corriente abajo de y adyacente al codón Met de iniciación. Los polipéptidos GAT, polinucleótidos GAT y actividad de glifosato-N-acetiltransferasa se describen en más detalle enseguida. La invención además incluye ciertos fragmentos de los polipéptidos GAT y polinucleótidos GAT descritos en la presente. La invención incluye variantes no nativas de los polipéptidos y polinucleótidos descritos en la presente, en donde uno o más aminoácidos del polipéptido codificado han sido mutados. En ciertas modalidades preferidas, los polipéptidos GAT de la presente invención se caracterizan como sigue. Cuando óptimamente se alinea con una secuencia de aminoácidos de referencia seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO:300, 445 y 457 para generar un registro de similitud de por lo menos 460 usando la matriz BLOSUM62, una sanción de existencia de espacio de 11, y una sanción de extensión de espacio de 1, una o más de las siguientes posiciones conforman a las siguientes restricciones: (i) en las posiciones 18 y 38, un residuo de aminoácido Z5; (ii) en la posición 62, un residuo de aminoácido Zl; (iii) en la posición 124, un residuo de aminoácido Z6; y (iv) en la posición 144, un residuo de aminoácido Z2, en donde: Zl es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de ?, I, L, M y V; Z2 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z5 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P. La invención además proporciona un polipéptido aislado o recombinante que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de los grupos que consisten de: (a) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 577; (b) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 578; (c) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 621; (d) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 579; (e) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 602; (f) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95% idéntica a la SEQ ID NO: 697; (g) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 712; ( ) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 613; (i) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 89% idéntica a la SEQ ID NO: 677; (j) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 584; (k) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 707; (1) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 616; (m) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 612; (n) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 590. La invención además proporciona un polipéptido aislado o recombinante que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de los grupos que consisten de: (a) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 919 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO:917, 919, 921, 923, 925, 927, 833, 835, 839, 843, 845, 859, 863, 873, 877, 891, 895, 901, 905, 907, 913, 915 o 950) ; (b) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 929 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO: 929, 931, 835, 843, 849 o 867) ; (c) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 847 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO:845 o 847); (d) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 851; (e) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 853; (f) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 855 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO : 835 o 855); (g) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 857; (h) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 861 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO:839, 861 o 883); (i) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 871; ( ) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 875; (k) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 881; (1) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO:885 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO:845 o 885); (m) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 887; (n) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 889 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO: 863, 889, 891 o 903); (o) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 893; (p) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 897; (q) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 899; (r) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 909 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO : 883 o 909); (s) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 911; (t) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 837; (u) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 841; (v) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 865; (w) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 869; y (x) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 879. En algunas modalidades de la invención, la secuencia de aminoácidos del polipéptido comprende Met, Met-Ala, o Met-Ala-Ala en el lado N-terminal del aminoácido correspondiente a la posición 2 de la secuencia de aminoácidos de referencia. La invención además proporciona un polipéptido aislado o recombinante que comprende una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95% idéntica a las posiciones 2-146 de la SEQ ID NO: 929 y que comprende un residuo Gly o un residuo Asn en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 33 de la SEQ ID NO: 929 (tal como, por ejemplo, la SEQ ID NO: 837, 849, 893, 897, 905, 921, 927, 929 o 931) . En algunas modalidades de la invención, la secuencia de aminoácidos del polipéptido comprende Met, Met-Ala, o Met-Ala-Ala en el lado N-terminal del aminoácido correspondiente a la posición 2 de la secuencia de aminoácidos de referencia . La invención además proporciona una construcción de ácido nucleico que comprende un polinucleótido de la invención. La construcción puede ser un vector, tal como un vector de transformación de planta. En algunos aspectos un vector de la invención comprenderá una secuencia T-DNA. La construcción opcionalmente puede incluir una secuencia regulatoria (por ejemplo, un promotor) operablemente enlazada a un polinucleótido GAT, donde el promotor es heterólogo con respecto al polinucleótido y efectivo para causar suficiente expresión del polipéptido codificado para incrementar la tolerancia de glifosato de una célula de planta transformada con la construcción de ácido nucleico. En algunos aspectos de la invención, un polinucleótido GAT funciona como un marcador seleccionable, por ejemplo, en una planta, bacteria, actinomiceto, levadura, algas u otros hongos. Por ejemplo, un organismo que se ha transformado con un vector que incluye un marcador seleccionable de polinucleótido GAT puede ser seleccionado en base a su habilidad para crecer en la presencia de glifosato. Un gen marcador GAT puede ser usado para la selección o detección de células transformadas que expresan el gen. La invención además proporciona vectores con atributos apilados, es decir, vectores que codifican un polipéptido GAT y que también incluye una secuencia de polinucleotidos que codifica un segundo polipéptido que confiere un atributo fenotipico detectado en una célula u organismo que expresa un segundo polipéptido a un nivel efectivo, por ejemplo resistencia a enfermedad o resistencia a peste. El atributo fenotipico detectable también puede funcionar como un marcador seleccionable, por ejemplo, al conferir resistencia a herbicida o al proporcionar alguna clase de marcador visible. En una modalidad, la invención proporciona una composición que comprende dos o más polinucleotidos de la invención. De preferencia, los polinucleotidos GAT codifican polipéptidos GAT que tienen parámetros cinéticos diferentes, es decir, una variante GAT que tiene una Km inferior puede ser combinado con uno que tiene una Kcat más alta. En una modalidad adicional, los polinucleotidos GAT diferentes pueden ser acoplados a una secuencia de tránsito de cloroplastos con otra secuencia de señal para de esta manera proporcionar la expresión del polipéptido GAT en diferentes compartimientos celulares, organelos o secreción de uno o más de los polipéptidos GAT. Por consiguiente, las composiciones que contienen dos o más polinucleótidos GAT o polipéptidos codificados son una característica de la invención. En algunos casos, estas composiciones son librerías de ácidos nucleicos que contienen, por ejemplo, por lo menos tres o más de tales ácidos nucleicos . Las composiciones producidas al digerir los ácidos nucleicos de la invención con una endonucleasa de restricción, o una DNAsa o una RNAsa, o de otra manera la f agmentación de los ácidos nucleicos, por ejemplo, el corte mecánico, segmentación química, etc., también son una característica de la invención, como son las composiciones producidas al incubar un ácido nucleico de la invención con trifosfato de desoxiribonucleótido y un ácido nucleico polimerasa, tal como un ácido nucleico polimerasa termoestable . Las células transducidas por un vector de la invención, o que de otra manera incorporan un ácido nucleico de la invención son un aspecto de la invención. En una modalidad preferida, las células expresan un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la invención. En algunas modalidades, las células que incorporan los ácidos nucleicos de la invención son células de plantas.

Las plantas transgénicas, células de plantas transgénicas y explantas de plantas transgénicas que incorporan los ácidos nucleicos de la invención también son una característica de la invención. En algunas modalidades, las plantas transgénicas, células de plantas transgénicas o explantas de plantas transgénicas expresan un polipéptido exógeno con actividad de glifosato-N-acetiltransferasa codificada por el ácido nucleico de la invención. La invención también proporciona semillas transgénicas producidas por las plantas transgénicas de la invención. La invención además proporciona plantas transgénicas, células de plantas transgénicas, explantas de plantas transgénicas o semillas transgénicas que tienen tolerancia incrementada a glifosato debido a la expresión de un polipéptido con actividad de glifosato-N-acetiltransferasa y un polipéptido que imparte tolerancia al glifosato mediante otro mecanismo, tal como una 5-enolpiruvilshiquimato-3-fosfato sintasa tolerante a glifosato y/o un glifosato óxido-reductasa tolerante a glifosato. En una modalidad adicional, la invención proporciona plantas transgénicas o explantas de plantas transgénicas que tienen tolerancia incrementada a glifosato, asi como tolerancia a un herbicida adicional debido a la expresión de un polipéptido con actividad de glifosato-N-acetiltransferasa, un polipéptido que imparte tolerancia a glifosato mediante otro mecanismo, tal como una 5-enolpiruvilshiquimato-3-fosfato sintasa tolerante a glifosato y/o un glifosato óxido-reductasa tolerante a glifosato y un polipéptido que imparte tolerancia a herbicida adicional, tal como una hidroxifenilpiruvatodioxigenasa mutada, una acetolactato sintasa tolerante a sulfonamida, un acetohidroxi ácido sintasa tolerante a sulfonamida, una acetolactato sintasa tolerante a imidazolinona, una acetohidroxi de ácido sintasa tolerante a imidazolinona, una fosfinotricina acetiltransferasa y una protoporfirinogeno oxidasa mutada. La invención también proporciona plantas transgénicas, células de plantas transgénicas, explantas de plantas transgénicas, o semillas transgénicas que tienen tolerancia incrementada a glifosato, así como tolerancia a un herbicida adicional debido a la expresión de un polipéptido con actividad de glifosato-acetil transferasa y un polipéptido que imparte tolerancia a un herbicida adicional, tal como, una hidroxifenilpiruvatodioxigenasa mutada, una acetolactato sintasa tolerante a sulfonamida, una acetohidroxi ácido sintasa tolerante a sulfonamida, un acetolactato sintasa tolerante a imidazolinona, una acetohidroxi ácido sintasa tolerante a imidazolinona, una fosfinotricin acetiltransferasa y una protoporfirinogen oxidasa mutada. La invención también proporciona plantas transgénicas, células de plantas transgénicas, explantas de plantas transgénicas, o semillas transgénicas que tienen tolerancia incrementada a glifosato asi como atributos deseables adicionales que pueden ser conferidos por uno o más transgenes adicionales. Los métodos para producir los polipéptidos de la invención al introducir los ácidos nucleicos que los codifican en células y luego al expresar y opcionalmente recuperarlos de las células por medio de cultivos son una característica de la invención. En modalidades preferidas, las células que expresan los polipéptidos de la invención son células de plantas transgénicas. Los métodos para incrementar el nivel de expresión de un polipéptido de la invención en una planta o célula de planta al insertar en la secuencia de codificación de polipéptido uno o dos codones ricos en G/C (tal como GCG o GCT) inmediatamente adyacente a y corriente abajo del codón ATG de metionina de iniciación, y/o al sustituir en la secuencia de codificación de polipéptido uno o más codones que son menos frecuentemente utilizados en plantas para codones que codifican el (los) mismo (s) aminoácido (s) que son más frecuentemente utilizados en plantas, y al introducir la secuencia de codificación modificada en una planta o célula de planta y que expresa la secuencia de codificación modificada, también son una característica de la invención. Los polipéptidos que son específicamente enlazados por un antisuero polxclonal, que reacciona contra un antigeno derivado de la SEQ ID NO: 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 621, 623, 625, 627, 629, 631, 633, 635, 637, 639, 641, 643, 645, 647, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 663, 665, 667, 669, 671, 673, 675, 677, 679, 681, 683, 685, 687, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 701, 703, 705, 707, 709, 711, 713, 715, 717, 719, 721, 723, 725, 727, 729, 731, 733, 735, 737, 739, 741, 743, 745, 747, 749, 751, 753, 755, 757, 759, 761, 763, 765, 767, 769, 771, 773, 775, 777, 779, 781, 783, 785, 787, 789, 791, 793, 795, 797, 799, 801, 803, 805, 807, 809, 811, 813, 815, 817, 819, 821, 823, 825, 833, 835, 837, 839, 841, 843, 845, 847, 849, 851, 853, 855, 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871, 873, 875, 877, 879, 881, 883, 886, 887, 889, 891, 893, 895, 897, 899, 901, 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971 y 972 pero no a una secuencia relacionada que ocurre de manera natural, por e emplo, tal como un péptido representado por una subsecuencia de aquellos del número de acceso GenBank C7AA70664, asi como anticuerpos que son producidos al administrar un antigeno derivado de cualquiera de uno o más de SEQ ID NO: 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 621, 623, 625, 627, 629, 631, 633, 635, 637, 639, 641, 643, 645, 647, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 663, 665, 667, 669, 671, 673, 675, 677, 679, 681, 683, 685, 687, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 701, 703, 705, 707, 709, 711, 713, 715, 717, 719, 721, 723, 725, 727, 729, 731, 733, 735, 737, 739, 741, '743, 745, 747, 749, 751, 753, 755, 757, 759, 761, 763, 765, 767, 769, 771, 773, 775, 777, 779, 781, 783, 785, 787, 789, 791, 793, 795, 797, 799, 801, 803, 805, 807, 809, 811, 813, 815, 817, 819, 821, 823, 825, 833, 835, 837, 839, 841, 843, 845, 847, 849, 851, 853, 855, 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871, 873, 875, 877, 879, 881, 883, 886, 887, 889, 891, 893, 895, 897, 899, 901, 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971 y 972, y que enlazan específicamente a tales antígenos y que no específicamente enlazan a un polipéptido que ocurre de manera natural correspondiente a aquellos de número de acceso de GenBank CAA. 70664, todos son características de la invención. Otro aspecto de la invención se relaciona a métodos de diversificación de polinucleótido para producir polinucleótidos y polipéptidos GAT novedosos al recombinar o mutar los ácidos nucleicos de la invención in vitro o in vivo. En una modalidad, la recombinación produce por lo menos una librería de polinucleótidos GAT recombinantes . Las librerías así producidas son una variedad de la invención, como son las células que comprenden la librería. Además, los métodos para producir un polinucleótido GAT modificado al mutar un ácido nucleico de la invención con modalidades de la invención. Los polinucleótidos y polipéptidos GAT recombinantes y Hurtantes producidos por los métodos de la invención también son modalidades de la invención. En algunos aspectos de la invención, la diversificación se logra al utilizar la recombinación recursiva, que se puede realizar in vitro, in vivor in silico, o una combinación de los mismos. Algunos ejemplos de métodos de diversificación descritos en más detalle enseguida son una familia de métodos de entre mezclamiento y métodos de entremezclamiento sintéticos. La invención proporciona métodos para producir una planta transgénica resistente a glifosato, o célula de planta que implica transformar una planta o célula de planta con un polinucleótido que codifica una glifosato-N-acetiltransferasa, y opcionalmente regenerar una planta transgénica a partir de la célula de planta transformada. En algunos aspectos, el polinucleótido es un polinucleótido GAT, opcionalmente el polinucleótido GAT derivada de una fuente bacteriana. En algunos aspectos de la invención, el método puede comprender cultivar la planta o célula de planta transformada en un concentración de glifosato debido al crecimiento de una planta de tipo silvestre de la misma especie sin inhibir el crecimiento de la planta transformada. El método puede comprender el cultivo de la planta o célula de planta transformada o progenie de la planta o célula de planta en concentraciones incrementadas de glifosato y/o una concentración de glifosato que es letal a una planta o célula de planta de tipo silvestre de la misma especie. Una planta transgénica resistente a glifosato producida por este método puede ser propagada, por ejemplo al cruzarla con una segunda planta, tal que por lo menos algo de progenie de la cruza exhibe tolerancia al glifosato. La invención además proporciona métodos para controlar selectivamente malas hierbas en un campo que contiene un cultivo que implica plantar el campo con semillas o plantas de cultivo que son tolerantes al glifosato como un resultado de que son transformadas con un gen que codifica una glifosato-N-acetiltransferasa, y al aplicar al cultivo y a las malas hierbas y en el campo una cantidad suficiente de glifosato para controlar las malas hierbas sin afectar significativamente el cultivo. La invención además proporciona métodos para controlar malas hierbas en un campo y prevenir la emergencia de mala hierbas resistentes al glifosato en un campo que contiene un cultivo que implica plantar el campo con semillas o plantas de cultivo que son tolerantes al glifosato como resultado de ser transformadas con un gen que codifica una glifosato-N-acetiltransferasa y un gen que codifica un polipéptido que imparte tolerancia al glifosato mediante otro mecanismo, tal como una 5-N-enolpiruvilshiquimato-3-fosfato sintasa tolerante a glifosato y/o una glifosato-óxido-reductasa tolerante a glifosato en aplicar al cultivo de las malas hierbas en el campo una cantidad suficiente de glifosato para controlar las malas hierbas sin afectar significativamente el cultivo. En una modalidad adicional la invención proporciona métodos para controlar malas hierbas en un campo y prevenir la emergencia de malas hierbas resistentes a herbicida en un campo que contiene un cultivo que implica plantar el campo con semillas o plantas de cultivo que son tolerantes a glifosato como un resultado de ser transformados por un gen que codifica una glifosato-N-acetiltransferasa, un gen que codifica un polipéptido que imparte tolerancia al glifosato mediante otro mecanismo, tal como una 5-enolpiruvilshiquinato-3-fosfato sintasa tolerante a glifosato y/o una glifosato óxido-reductasa tolerante a glifosato un gen que codifica un polipéptido que imparte tolerancia a un herbicida adicional, tal como una hidroxifenilpiruvatodioxigenasa mutada, una acetolactato sintasa tolerante a sulfonamida, un acetohidroxi ácido sintasa tolerante a sulfonamida, un acetolactatosintasa tolerante a imidazolinona, un acetohidroxi ácido sintasa tolerante a imidazolinona, una fosfinotricina acetiltransferasa y una protoporfirinogen oxidasa mutada y al aplicar al cultivo y a las malas hierbas en el campo una cantidad suficiente de glifosato un herbicida adicional, tal como, un inhibidor de hidroxifenilpiruvatodioxigenasa, sulfonamida, imidazolinona, biolafos, fosfinotricina, azafenidin, butafenacil, sulfosato, glufosinato, y un inhibidor de protox para controlar las malas hierbas sin afectar significativamente el cultivo. La invención además proporciona métodos para controlar malas hierbas en un campo y prevenir la emergencia de malas hierbas resistentes a herbicida en un campo que contiene un cultivo que implica plantar el campo con semillas o plantas de cultivo que son tolerantes a glifosato como un resultado de ser transformadas con un gen que codifica un glifosato-N-acetiltransferasa y un gen que codifica un polipéptido que imparte tolerancia a un herbicida adicional, tal como un hidroxifenilpiruvatodioxigenasa mutada, un acetolactato sintasa tolerante a sulfonamida, una acetohidroxiácido sintasa tolerante a sulfonamida, un acetolactato sintasa tolerante a imidazolinona, un acetohidroxi ácido sintasa tolerante a imidazolinona, una fosfinotricina acetiltransferasa y una protoporfirinogen oxidasa mutada y al aplicar al cultivo de las malas hierbas semejante a una cantidad suficiente de glifosato y un herbicida adicional, tal como un inhibidor hidroxifenilpiruvatodioxigenasa, sulfonamida, imidazolinona, bialafos, fosfinotricina, azafenidin, butafenacil, sulfosato, glufosinato y un inhibidor de protox para controlar las malas hierbas sin afectar significativamente el cultivo. La invención además proporciona métodos para producir una planta genéticamente transformada que es tolerante a glifosato que implica insertar en el genoma de una célula de planta que involucra el DNA de doble hebra determinante que comprende: (i) un promotor que funciona en células de plantas para causar la producción de una secuencia de RNA; (ii) una secuencia de DNA estructural que causa la producción de una secuencia de RNA que codifica un GAT; y (iii) una región 3' no traducida que funciona en células de plantas para causar la adición de un estiramiento de poliadenil nucleótidos al extremo 3' de la secuencia RNA; donde el promotor es heterólogo con respecto a la secuencia de DNA estructural y adaptado para causar suficiente expresión del polipéptido codificado para incrementar la tolerancia a glifosato de una célula de planta transformada con una molécula de DNA; obteniendo una célula de planta transformada y regenerar de la célula de planta transformada una planta genéticamente transformada que tiene tolerancia incrementada a glifosato. La invención además proporciona métodos para producir un cultivo que implica cultivar una planta de cultivo que es tolerante a glifosato como un resultado de ser transformado con un gen que codifica una glifosato-N-acetiltransferasa, bajo condiciones tales que la planta de cultivo produce un cultivo; y cosechar un cultivo en la planta de cultivo. Este método frecuentemente incluye en aplicar glifosato a la planta de cultivo en una concentración efectiva para controlar las malas hierbas. Las plantas de cultivo ejemplares incluyen algodón, maíz y soya. La invención también proporciona computadoras, medios medibles en computadora y sistemas integrados, incluyendo bases de datos que están compuestos de registros de secuencia incluyendo cadenas de caracteres correspondientes a SEQ ID NO: 1-10, 16, 48, 190, 193, 196, 202, 205, 268, 3C0, 442, 445, 448, 454, 457, 515-830 y 832-972. Tales sistemas integrados opcionalmente incluyen uno o más conjunto de instrucciones para seleccionar, alinear, traducir, traducir a la inversa o visualizar cualquiera de una o más cadenas de caracteres correspondientes a SEQ ID NO:1-10, 16, 48, 190, 193, 196, 202, 205, 268, 300, 442, 445, 448, 454, 457, 515-830 y 832-972, entre si y/o con cualquier secuencia de ácido nucleico o aminoácidos adicional. BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS La Figura 1 representa N-acetilación del glifosato catalizada por una glifosato-N-acetiltransferasa ("GAT") . La Figura 2 muestra la detección espectroscópica de masas de N-acetilglifosato producido por un cultivo de Bacillus ejemplar que expresa una actividad GAT nativa. La Figura 3 es una tabla que ilustra la identidad relativa entre las secuencias GAT aisladas de diferentes cepas de bacterias y yitl de Bacillus subtilis . La Figura 4 es un mapa del plásmido pMAXY2120 para la expresión y purificación de la enzima GAT a partir de cultivos de E. coli . La Figura 5 es una salida de espectrometría de masas que muestra la producción de N-acetilglifosato incrementada a través del tiempo en una mezcla de reacción de enzima GAT típica. La Figura 6 es una gráfica de los datos cinéticos de una enzima GAT de la cual se calculó una KM de 2.9 mM para glifosato . La Figura 7 es una gráfica de los datos cinéticos tomados de los datos de la Figura 6 a partir de los cuales se calculó una KM de 2 uM para Acetil CoA. La Figura 8 es un esquema que describe la degradación de glifosato en el suelo a través de la ruta AMPA. La Figura 9 es un esquema que describe la ruta de sarcosina de la degradación de glifosato. La Figura 10 es la matriz de BLOSUM62. La Figura 11 es un mapa del plásmido pMAXY2190. La Figura 12 representa una construcción de T-DNA con el marcador seleccionado de gat. La Figura 13 representa un vector de expresión de levadura con el marcador seleccionable GAT. La Figura 14 ilustra el efecto del glifosato sobre la altura de la planta en la formación de espiguillas. La Figura 15A y 15B proporciona una comparación de los parámetros cinéticos Km, kcat y kdt/Kra, respectivamente, para varias enzimas GAT avanzadas en ya sea la ausencia de KCL adicionados (barras no sombreadas) en la presencia de KCl 20 mM (barras sombreadas) como es descrito en el Ejemplo 18. Las barras de error representan la desviación estándar de ensayos múltiples, donde es disponible. La Figura 16A, 16B y 16C proporciona una comparación de los parámetros cinéticos Km, kcat y kcat/ m, respectivamente, de varias enzimas GAT de la invención (barras no sombreadas) son los parámetros cinéticos de algunas enzimas GAT evolucionadas adicionadas de la invención (barras sombreadas) como es descrito en el Ejemplo 19. Las barras de error representan la desviación estándar de múltiples ensayos donde es disponible. La Figura 17 representa la actividad GAT restante después de la incubación en varias temperaturas como es descrito en el Ejemplo 16. La Figura 18 representa el efecto del pH sobre Kcat y KM como es descrito en el Ejemplo 30. DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La presente invención se relaciona a una clase novedosa de enzimas que exhiben actividad de -acetiltransferasa . En un aspecto, la invención se relaciona a una clase novedosa de enzimas capaces de acetilar el glifosato y análogos de glifosato, por ejemplo, enzimas que poseen la actividad de glifosato N-acetiltransferasa ("GAT") . Tales enzimas se caracterizan por la habilidad para acetilar la amina secundaria de un compuesto. En algunos compuestos de la invención, este compuesto es un herbicida, por ejemplo, glifosato, como es ilustrado esquemáticamente en la Figura 1. Este compuesto también puede ser un análogo de glifosato o un producto metabólico de la degradación de glifosato, por ejemplo, ácido aminometilfosfónico . Aunque la acetilación de glifosato es una etapa catalítica clave en una ruta metabólica para el catabolismo de glifosato, la acetilación enzimática del glifosato mediante enzimas que ocurren de manera natural, aisladas o recombinantes no se ha descrito previamente. Asi, los ácidos nucleicos y polipéptidos de la invención proporcionan una nueva ruta bioquímica para diseñar la resistencia al herbicida. En un aspecto, la invención proporciona genes novedosos que codifican polipéptidos GAT. Los polinucleótidos GAT aislados y rccombinantes correspondientes a polinucleótidos que ocurren de manera natural, así como polinucleótidos GAT recombinantes y diseñados, por ejemplo, diversificados, son una característica de la invención. Los polinucleótidos GAT son e emplificados por SEQ ID NO: 516 517, 518 519, 520 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528 529, 530 531, 532 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540 541, 542 543, 544 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552 553, 554 555, 556 557, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564 565, 566 567, 620 622, 624, 626, 628, 630, 632, 634, 636 638, 640 642, 644 646, 648, 650, 652, 654, 656, 658, 660 662, 664 666, 668 670, 672, 674, 676, 678, 680, 682, 684 686, 688 690, 692 694, 696, 698, 700, 702, 704, 706, 708 710, 712 714, 716 718, 720, 722, 724, 726, 728, 730, 732 734 , 736 738, 740 742, 744, 746, 748, 750, 752, 754, 756 758, 760 762, 764 768, 770, 772, 774, 776, 778, 780, 782 784, 786 788, 790 792, 794, 796, 798, 800, 802, 804, 806 808, 810 812, 814 816, 818, 820, 822, 824, 832, 834, 836 838, 840 842, 844 846, 848, 850, 852, 854, 856, 858, 860 862, 864 866, 868 870, 872, 874, 876, 878, 880, 882, 884 886, 888, 890, 892, 894, 896, 898, 900, 902, 924, 926, 908, 910, 912, 914, 916, 918, 920, 922, 924, 926, 928, 930, 932, 933, 934, 935, 936, 937, 938, 939, 940, 941, 942, 943, 944, 945, 947, 949, 951 y 952. Las secuencias de polinucleótido y polipéptido GAT especificas se proporcionan como ejemplos para ayudar a ilustrar la invención, y no se proponen para limitar el alcance del género de los polinucleótidos y polipéptidos GAT descritos y/o reivindicados en la presente. La invención también proporciona métodos para generar y seleccionar librerías diversificadas para producir polinucleótidos GAT adicionales, incluyendo polinucleótidos que codifican polipéptidos GAT con características mejoradas y/o incrementadas como por ejemplo, Km alterada para glifosato, proporción incrementada de catálisis, estabilidad incrementada, etc., basado en la selección de un constituyente de polinucleótidos de la librería para las nuevas o mejoradas actividades descritas en la. presente. Tales polinucleótidos son especialmente de manera favorable empleadas en la producción de plantas transgénicas resistentes al glifosato. Los polipéptidos GAT de la invención exhiben una actividad enzimática novedosa. Específicamente, la acetilación enzimática del glifosato herbicida sintético no se ha reconocido antes de la presente invención. Así, los polipéptidos en la presente descritos, por ejemplo, como es ej emplificado por SEQ ID NO: 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 621, 623, 625, 627, 629, 631, 633, 635, 637, 639, 641, 643, 645, 647, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 663, 665, 667, 669, 671, 673, 675, 677, 679, 681, 683, 685, 687, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 701, 703, 705, 707, 709, 711, 713, 715, 717, 719, 721, 723, 725, 727, 729, 731, 733, 735, 737, 739, 741, 743, 745, 747, 749, 751, 753, 755, 757, 759, 761, 763, 765, 767, 769, 771, 773, 775, 777, 779, 781, 783, 785, 787, 789, 791, 793, 795, 797, 799, 801, 803, 805, 807, 809, 811, 813, 815, 817, 819, 821, 823, 825, 833, 835, 837, 839, 841, 843, 845, 847, 849, 851, 853, 855, 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871, 873, 875, 877, 879, 881, 883, 886, 887, 889, 891, 893, 895, 897, 899, 901, 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971 y 972 definen una ruta bioquímica novedosa para la desintoxicación de glifosato que es funcional in vivo, por ejemplo, en plantas. Por consiguiente, los ácidos nucleicos y polipéptidos de la invención son de utilidad significante en la generación de plantas resistentes a glifosato al proporcionar nuevos ácidos nucleicos, polipéptidos y rutas bioquímicas para el diseño de la selectividad de herbicida en plantas transgénicas . DEFINICIONES Antes de describir la presente invención en detalle, se va a entender que esta invención no está limitada a composiciones o sistemas biológicos particulares, que, por supuesto, pueden variar. También se va a entender que la terminología utilizada en la presente es para el propósito de describir modalidades particulares solamente, y no se propone para ser limitativa. Como se utiliza en esta especificación y las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una" y "el" incluyen referencias plurales a menos que el contenido claramente lo dicte de otra manera. Así, por ejemplo, la referencia a "un dispositivo" incluye una combinación de dos o más de tales dispositivos, la referencia a "una construcción de fusión de gen" incluye mezclas de construcciones y los similares. A menos que se defina de otra manera, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente tienen el mismo significado, como es entendido comúnmente por un experto ordinario en la técnica a la cual la invención pertenece. Aunque cualquiera de los métodos y materiales similares equivalentes a aquellos descritos en la presente pueden ser utilizados en la práctica para la prueba de la presente invención, ejemplos específicos de materiales y métodos apropiados se describen en la presente. En la descripción y la reivindicación de la presente invención, la siguiente terminología será utilizada de acuerdo con las definiciones expuestas enseguida. Por consiguiente, para propósitos de la presente invención, el término "glifosato" puede ser considerado que incluye cualquier forma herbicidamente efectiva de N-fosfonometilglicina (incluyendo cualquier sal de la misma) y otras formas que resultan en la producción del anión de glifosato in planta. El término "análogo de glifosato" se refiere a cualquier análogo estructural que tiene la habilidad para inhibir la EPSPS a niveles tal que el análogo de glifosato es herbicidamente efectivo. Como se utiliza en la presente, el término "actividad de glifosato-N-acetiltransferasa" o "actividad GAT" se refiere a la habilidad para catalizar la acetilación del grupo amina secundaria de glifosato, como es ilustrado, por ejemplo, en la Figura 1. Una "glifosato-N-acetiltransferasa" o "GAT" es una enzima que cataliza la acetilación del grupo amina del glifosato, un análogo de glifosato y/o un metabolito primario de glifosato (es decir, AMPA o sarcosina) . En algunas modalidades preferidas de la invención, un GAT es capaz de transferir el grupo acetilo de acetil CoA a la amina secundaria de glifosato y la amina primaria de AMPA. Además, algunas GATs también son capaces de transferir el grupo propionilo de propionil CoA a glifosato, indicando que GAT también es una aciltransferasa . Las GATs ejemplares descritas en la presente son activas desde aproximadamente pH 5-9, con actividad óptima en un intervalo de aproximadamente pH 6.5-8.0. La actividad puede ser cuantificada utilizando varios parámetros cinéticos que son bien conocidos en la técnica, por ejemplo, kcat/ KM y kcat/KM. Estos parámetros cinéticos pueden ser determinados como es descrito enseguida en el Ejemplo 7 o el Ejemplo 19. Los términos "polinucleótido", "secuencia de nucleótidos" y "ácido nucleico" se utilizan para referirse a un polímero de nucleótidos (A, C, T, U, G, etc. o análogo de nucleótidos que ocurren de manera natural o artificial) por ejemplo, DNA o EJSÍA, o una representación de los mismos, por ejemplo, una cadena de caracteres, etc., dependiendo del contexto relevante. Un polinucleótido dado o polinucleótido complementario puede ser determinado de cualquier secuencia de nucleótidos específica. De manera similar, una "secuencia de aminoácidos" es un polímero de aminoácidos (una proteína, polipéptido, etc.) o una cadena de caracteres que representan un polímero de aminoácidos, dependiendo del contexto. Los términos "proteína", "polipéptido" y "péptido" se utilizan intercambiablemente en la presente.

Un polinucleótido, polipéptido, u otro componente es "aislado" cuando es parcial o completamente separado de los componentes con los cuales están normalmente asociados (otras proteínas, ácidos nucleicos, células, reactivos sintéticos, etc.). Un ácido nucleico o polipéptido es "recombinante" cuando es artificial o diseñado, o derivado de una proteína o ácido nucleico artificial o diseñado. Por ejemplo, un polinucleótido que es insertado en un vector o cualquier otra ubicación heteróloga, por ejemplo, un genoma de un organismo recombinante, tal que no es asociado con secuencias de nucleótidos que normalmente flanquean el polinucleótido como es encontrado en la naturaleza es un polinucleótido recombinante. Una proteína expresada in vi tro o in vivo de un polinucleótido recombinante es un ejemplo de un polipéptido recombinante. Del mismo modo, una secuencia de polinucleótido que no aparece en la naturaleza, por ejemplo, una variante de un gen que ocurre de manera natural, es recombinante . Los términos "polipéptido de glifosato-N-acetiltransferasa" y "polipéptido GAT" se utilizan intercambiablemente para referirse a cualquiera de una familia de polipéptidos novedosos proporcionados en la presente . Los términos "polinucleótido de glifosato-N-acetiltransferasa" y "polinucleótido GAT" se utilizan intercambiablemente para referirse a un polinucleótido que codifica un polipéptido GAT . Una "subsecuencia" o "fragmento" es cualquier porción de una secuencia completa. La numeración de un polímero de aminoácidos o nucleótidos corresponde a la numeración de un polímero de aminoácido seleccionado de ácido nucleico cuando la posición de un componente monomérico dado (residuo de aminoácido, nucleótido incorporado, etc.) de un polímero corresponde a la misma posición de residuo en un polipéptido o polinucleótido de referencia seleccionado. Un vector es una composición para facilitar la transducción/transformación de la célula mediante un ácido nucleico seleccionado, o la expresión del ácido nucleico en la célula. Los vectores incluyen, por ejemplo, plásmidos, cósmidos, virus, YACs, bacterias, poli-lisina, vectores de integración de cromosoma, vectores episomales, etc. "Sustancialmente una longitud completa de un polinucleótido o secuencia de aminoácidos" se refiere a por lo menos aproximadamente 70%, generalmente por lo menos aproximadamente 80%, o de manera típica aproximadamente 90% o más de una secuencia. Como se utiliza en la presente, un "anticuerpo" se refiere a una proteína que comprende uno o más polipéptidos sustancialmente o parcialmente codificados por genes de inmunoglobulina o fragmentos de genes de inmunoglobulina. Los genes de inmunoglobulina reconocidos incluyen los genes de región constante kappa, lambda, alfa, gamma, delta, epsilón y mu, así como un sinnúmero de genes de región variable de inmunoglobulina. Las cadenas ligeras son clasificadas ya sea como kappa o lambda. Las cadenas pesadas son clasificadas como gamma, mu, alfa, delta, o epsilón, que a su vez define las clases de inmunoglobulina, IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente. Una unidad estructural de inmunoglobulina típica (anticuerpo) comprende un tetrámero. Cada tetrámero está compuesto de dos pares idénticos de cadenas de polipéptido. Cada par que tiene una cadena "ligera" (aproximadamente 25 kD) y una cadena "pesada" (aproximadamente 50-70 kD) . El N-terir.inal de cada cadena define una región variable de aproximadamente 100 a 110 o más aminoácidos principalmente responsables para el reconocimiento del antígeno . Los términos cadena ligera variable (Vi) y cadena pesada variable (VH) se refieren a estas cadenas ligera y pesada, respectivamente. Los anticuerpos existen como inmunoglobulinas intactas o con un número de fragmentos bien caracterizados producidos por la digestión con varias peptidasas. Así, por ejemplo, la pepsina digiere un anticuerpo muy bajo de los enlaces de disulfuro en la región de articulación para producir F(ab)'2, un dímero de Fab que por sí mismo es una cadena ligera unida a VH-CH1 por un enlace de bisulfuro. El F(ab)'2 puede ser reducido bajo condiciones moderadas para romper el enlace de disulfuro en la región articulada para de esta manera convertir el dimero F ( a ) '2 en un monómero Fab' . El monómero Fab' es esencialmente Fab con parte de la región articulada (ver, Paul, Ed. (1998) Fundamental Xmmimology (4a Edición, aven Press, NY) , para una descripción más detallada de otros fragmentos de anticuerpo) . Mientras que varios fragmentos de anticuerpo son definidos en términos de la digestión de un anticuerpo intacto, un experto apreciará que tales fragmentos Fab' pueden ser sintetizados de novo ya sea químicamente o al utilizar la metodología de DNA recombinante . Así, el término anticuerpo como se utiliza en la presente también incluye fragmentos de anticuerpo ya sea producidos por la modificación de anticuerpos completos o sintetizados de novo usando metodologías de DNA recombinantes . Los anticuerpos incluyen anticuerpos de cadena individual, incluyendo anticuerpos Fv de cadena individual (sFv) en los cuales una cadena pesada variable y una cadena ligera variable están unidad conjuntamente (directamente o a través de un enlazador de péptido) para formar un polipéptido continuo. Un "péptido de tránsito de cloroplasto" es una secuencia de aminoácidos que es traducida en conjunción con una proteína y dirige una proteína de cloroplasto u otros tipos de plástida presentes en la célula en la cual se hace la proteína. "Secuencia de tránsito de Cloroplasto" se refiere a una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido de tránsito de cloroplasto. Un "péptido de señal" es una secuencia de aminoácidos que es traducida en conjunción con una proteína y dirige la proteína al sistema secretorio (Chrispeels (1991) Am. Rev. Plant Phys Plant Mol. Biol. 42:21-53). Si la proteína va a ser dirigida a una vacuola como una señal de dirección vacuolar puede además ser adicionada o si es al retículo endoplásmico una señal de retención de retículo endoplásínico que puede ser adicionada. Si la proteína va a ser dirigida al núcleo, cualquier péptido de señal presente debe ser removido y en cambio incluir una señal de localización nuclear (Raikhel. (1992) Plant Phys. 100:1627-1632) . Los términos "di ersificación" y "diversidad", como son aplicados a un polinucleótido, se refieren a una generación de una pluralidad de formas modificadas de un polinucleótido parental, o pluralidad de polinucleótidos parentales. En el caso donde el polinucleótido codifica un polipéptido, la diversidad en la secuencia de nucleótidos del polinucleótido puede dar por resultado la diversidad en el polipéptido codificado correspondiente, por ejemplo, una acumulación diversa de polinucleótidos que codifica una pluralidad de variantes de polipéptido. En algunas modalidades de la invención, esta diversidad de secuencia es explotada por la detección/selección de una librería de polinucleótidos diversificados para variantes con atributos funcionales deseables, por ejemplo un polinucleótido que codifica un polipéptido GAT con características funcionales incrementadas . El término "codificación" se refiere a la habilidad de una secuencia de nucleótidos para codificar uno o más aminoácidos . El término no requiere un codón de inicio o de detención. Una secuencia de aminoácidos puede ser codificada en cualquiera de las seis diferentes estructuras de lectura proporcionadas por una secuencia de polinucleótidos y su complemento . Cuando se utiliza en la presente, el término "variante artificial" se refiere a un polipéptido que tiene actividad GAT, que es codificada por un polinucleótido GAT modificado, por ejemplo, una forma modificada de cualquiera de SEQ ID NO: 516, 517, 518, 519, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 620, 622, 624, 626, 628, 630, 632, 634, 636, 638, 640, 642, 644, 646, 648, 650, 652, 654, 656, 658, 660, 662, 664, 666, 668, 670, 672, 674, 676, 678, 680, 682, 684, 686, 688, 690, 692, 694, 696, 698, 700, 702, 704, 706, 708, 710, 712, 714, 716, 718, 720, 722, 724, 726, 728, 730, 732, 734, 736, 738, 740, 742, 744, 746, 748, 750, 752, 754, 756, 758, 760, 762, 764, 768, 770, 772, 774, 776, 778, 780, 782, 784, 786, 788, 790, 792, 794, 796, 798, 800, 802, 804, 806, 808, 810, 812, 814, 816, 818, 820, 822, 824, 832, 834, 836, 838, 840, 842, 844, 846, 848, 850, 852, 854, 856, 858, 860, 862, 864, 866, 868, 870, 872, 874, 876, 878, 880, 882, 884, 886, 888, 890, 892, 894, 896, 898, 900, 902, 924, 926, 908, 910, 912, 914, 916, 918, 920, 922, 924, 926, 928, 930, 932, 933, 934, 935, 936, 937, 938, 939, 940, 941, 942, 943, 944, 945, 947, 949, 951 y 952 o de un polinucleótido GAT que ocurre de manera natural aislado de un organismo. El polinucleótido modificado, desde el 'cual se produce una variante artificial cuando se expresa en un hospedero adecuado, se obtiene a través de la intervención humana mediante la modificación de un polinucleótido GAT. El término "construcción de ácido nucleico" o "construcción de polinucleótido" significa una molécula de ácido nucleico, ya sea de una sola hebra o de doble hebra, que es aislado de un gen que ocurre de manera natural o que se ha modificado para contener segmentos de ácidos nucleicos de una manera que de otra manera no existiría en la naturaleza. El término "construcción de ácido nucleico es sinónimo con el término "cásete de expresión" cuando la construcción de ácido nucleico contiene las secuencias de control requeridas para la expresión de una secuencia de codificación de la presente invención. El término "secuencias de control" se define en la presente para incluir todos los componentes, que son necesarios y ventajosos para la expresión de un polipéptido de la presente invención. Cada secuencia de control puede ser nativa o extraña a la secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido. Tales secuencias de control incluyen, pero no están limitados, a una secuencia de guía, secuencia de poliadenilación, secuencia de propéptido, secuencia de promotor, secuencia de péptido de señal y secuencia de terminador de transcripción. A lo mínimo, las secuencias de control incluyen un promotor y señales de detención transcripcionales y traduccionales . Las secuencias de control pueden ser proporcionadas con los enlazadores para el propósito de introducir sitios de restricción específicos que facilitan la ligación de las secuencias de control con la región de codificación de la secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido. El término "operablemente enlazado" se define en la presente como una configuración en la cual una secuencia de control es apropiadamente colocada en una posición con relación a la secuencia de codificación de la secuencia de DNA tal que la secuencia de control dirige la expresión de un polipéptido- Cuando se utiliza en la presente, el término "secuencia de codificación" se propone para cubrir una secuencia de nucleótidos, que directamente especifica la secuencia de aminoácidos de su producto de proteina. Los limites de la secuencia de codificación son generalmente determinados por una estructura de lectura abierta, que usualmente comienza con el codón de inicio ATG. La secuencia de codificación típicamente incluye un cDNA, cDNA, y/o una secuencia de nucleótido recombinante . En el presente contexto, el término "expresión" incluye cualquier etapa implicada en la producción de un polipéptido que incluye, pero no limitado a, transcripción, modificación post-transcripcional, traducción, modificación post-traduccional y secreción. En el presente contexto, el término "vector de expresión" cubre una molécula de DNA, lineal o circular, que comprende un segmento que codifica un polipéptido de la invención, y que está operablemente enlazado a segmentos adicionales que proporcionan su transcripción. El término "célula hospedera", como se utiliza en la presente, incluye cualquier tipo de célula que es susceptible a la transformación con una construcción de ácido nucleico . El término "planta" incluye plantas completas, órganos/estructuras vegetativas de retoño (por ejemplo, hojas, tallos y tubérculos), raices, flores órganos/estructuras florales (por ejemplo, brácteas, sépalos, pétalos, estambres, carpelos, anteras y óvulos) , semillas (incluyendo embrión, endosperma y recubrimiento de semillas) y frutos (ovario inmaduro), tejido de plantas (por ejemplo, tejido vascular, tejido a tierra y similares) y células (por ejemplo, células de protección, células de huevo, tricomas y los similares), y progenie de los mismos. La clase de plantas que pueden ser utilizadas en el método de la invención es generalmente tan amplia como la clase de plantas superiores e inferiores disponibles para las técnicas de transformación, incluyendo angiospermas · (plantas monocotiledóneas y dicotiledóneas) , gimnospermas, heléchos y algas multicelulares. Esto incluye plantas de una variedad de niveles ploides, incluyendo aneuploides, poliploides, diploides, haploides y hemicigotas. El término "heterólogo" como se utiliza en la presente describe una relación entre dos o más elementos que indica que los elementos no se encuentran normalmente en proximidad de entre si en la naturaleza. Asi, por ejemplo, una secuencia de polinucleótido es "heteróloga a" un organismo o una segunda secuencia de polinucleótido si se origina de una especie extraña, o, si es de la misma especie, es modificado de su forma original. Por ejemplo, un promotor operablemente enlazado a una secuencia de codificación heteróloga se refiere a una secuencia de codificación de una especie diferente de aquella de la cual se derivó el promotor, o, si es de la misma especie, una secuencia de codificación que no está naturalmente asociada con el promotor (por ejemplo, una secuencia de codificación genéticamente diseñada o un alelo de un ecotipo o variedad diferente). Un ejemplo de un polipéptido heterólogo es un polipéptido expresado de un polinucleótido recombinante en un organismo transgénico. Los polinucleótidos y polipéptidos heterologos son formas de moléculas recombinantes . Una variedad de términos adicionales son definidos o de otra manera caracterizados en la presente. GLIFOSATO-N-ACETILTRANSFERASAS En un aspecto, la invención proporciona una familia novedosa de enzimas aisladas o recombinantes referidas en la presente como "glifosato-N-acetiltransferasas", "GATs", o "enzimas GAT". GATs son enzimas que tienen actividad GAT, de preferencia suficiente actividad para conferir algún grado de tolerancia al glifosato en una planta transgénica diseñada para expresar el GAT. Algunos ejemplos de GATs incluyen polipéptidos GAT, descritos en más detalle enseguida. La tolerancia a glifosato mediada por GAT es una función compleja de la actividad GAT, los niveles de expresión de GAT en la planta transgénica, la planta particular, y otros numerosos factores, incluyendo pero no limitados a la naturaleza y la sincronización de la aplicación del herbicida. Un experto en la técnica puede determinar sin experimentación indebida el nivel de actividad GAT requerido para efectuar la tolerancia al glifosato en un contexto particular. La actividad GAT se puede caracterizar usando los parámetros cinéticos convencionales ~kcat r M y kcat/KM . kcat se puede pensar como una medición de la proporción de acetilación, particularmente en altas concentraciones de sustrato, KM es una medición de la afinidad del GAT para sus sustratos (por ejemplo, acetil CoA, propionil CoA y glifosato) y kcat/KM es una medición de la eficiencia catalítica que toma tanto afinidad del sustrato y la proporción catalítica en cuenta. kcat/Km es particularmente importante en la situación donde la concentración de un sustrato es por lo menos parcialmente limitada por la proporción. En general, una GAT con una kcat o kcat/KM más alta es un catalizador más eficiente que otra kcar o menor kcat/KM. Una GAT con una KM inferior es un catalizador más eficiente que otra GAT con un M superior. Así, para determinar si una GAT es más efectiva otra, se pueden comparar los parámetros cinéticos para las dos enzimas. La importancia relativa de kcat, kcat/KM y KM variará dependiendo del contexto en el cual la GAT será esperada que funcione, por ejemplo, la concentración efectiva anticipada que es glifosato con relación a la M para glifosato. La actividad GAT también puede ser caracteri ada en términos de cualquiera de un número de características funcionales, incluyendo pero no limitados a estabilidad, susceptibilidad a la inhibición o activación por otras moléculas. POLIPEPTIDOS DE GLIFOSATO-N-ACETILTRANSFERASA En un aspecto, la invención proporciona una familia novedosa de polipéptidos aislados o recombinantes referidos en la presente como "polipéptidos de glifosato-N-acetiltransferasa" o "polipéptidos GAT". Los polipéptidos GAT se caracterizan por su similitud estructural como una familia novedosa de GATs. Muchos pero no todos los polipéptidos GAT son GA s. La distinción es que GATs se definen en términos de función, mientras que los polipéptidos GAT se definen en términos de estructura. Un subconjunto de los polipéptidos GAT consiste de aquellos polipéptidos GAT que tienen actividad GAT, de preferencia a un nivel que funcionará para conferencia resistencia al glifosato en una planta transgénica que expresa la proteína unida al efectivo. Algunos polipéptidos GAT preferidos para el uso en conferir la tolerancia a glifosato tiene una koat de por lo menos 1 min-1, o más de preferencia por lo menos 10 min-1, 100 min-1 o 1000 min-1. Otros polipéptidos GAT preferidos para el uso en conferir tolerancia al glifosato tienen una KM no mayor que 100 it , o más de preferencia no mayor que 10 itiM, 1 mM o 0.1 mM. Todavía otros polipéptidos GAT preferidos para el uso en conferir tolerancia al glifosato tienen una Kcat/KM de por lo menos 1 mM^min'1 o mayor, de preferencia por lo menos 10 mM ½??_1, 100 mM_1min_1, 1000 mM_1min_1 o 10, 000 mM_1min_1. Los polipéptidos GAT ejemplares se han aislado y caracterizado de una variedad de cepas bacterianas. Un ejemplo de un polipéptido GAT monomérico que se ha aislado y caracterizado tiene un radio molecular de aproximadamente 17 kD. Una enzima GAT ejemplar aislada de una cepa de B. licheniformis, SEQ ID NO: 7, exhiben una Km para glifosato de aproximadamente 2.9 mM y una Kra para acetil CoA de aproximadamente 2 uM, con una kcat igual a 6/mimito. El término "polipéptido GAT" se refiere a cualquier polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que puede ser óptimamente alineada con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 300, 445 y 457 para generar un registro de similitud de por lo menos 460 usando la matriz BLOSUM62, una sanción de existencia de espacio de 11, y la sanción de extensión de espacio de 1, donde por lo menos una de las siguientes posiciones conforman las siguientes restricciones: (i) en las posiciones 18 y 38, hay un residuo de aminoácidos Z5; (ii) en la posición 62 hay un residuo de aminoácidos Zl; (iii) en la posición 124 hay un residuo de aminoácidos Z6; (iv) en la posición 144 hay un residuo de aminoácidos Z2, en donde: Zl es un residuo de aminoácidos seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; Z2 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z5 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P. En algunos aspectos de la invención pertenecen a polipéptidos GAT que comprende una secuencia de aminoácidos que puede ser óptimamente alineada con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 300, 445 y 457 para generar un registro de similitud de por lo menos 440, 445, 450, 455, 460, 465, 470, 475, 480, 485, 490, 495, 500, 505, 510, 515, 520, 525, 530, 535, 540, 545, 550, 555, 560, 565, 570, 575, 580, 585, 590, 595, 600, 605, 610, 615, 620, 625, 630, 635, 640, 645, 650, 655, 660, 665, 670, 675, 680, 685, 690, 695, 700, 705, 710, 715, 720, 725, 730, 735, 740, 745, 750, 755 o 760 usando la matriz BLOSUM62, una sanción de existencia de espacio de 11, y una sanción de extensión de espacio de 1, en donde una o más de las siguientes posiciones conforman a las siguientes restricciones: (1) en las posiciones 18 y 38, un residuo de aminoácidos Z5; (ii) en la posición 62, un residuo de aminoácido Zl ; (iii) en la posición 124, un residuo de aminoácido Z6; y (iv) en la posición 144, un residuo de aminoácido Z2, en donde: Zl es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y Y; Z2 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z5 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P. Dos secuencias son "óptimamente alineadas" cuando ellas se alinean para el registro de solicitud usando una matriz de substitución de aminoácidos definida (por ejemplo, BLOSOM62), sanción de existencia de espacio y sanción de extensión de espacio para llegar al registro más alto posible para ese par de secuencias. La matriz de sustitución de aminoácidos y su uso en la cuantificación de la similitud entre dos secuencias son bien conocidos en la técnica y descritas, por ejemplo, en Dayhoff y colaboradores (1978) ¡A model of evolutionary change in proteins" in "Atlas of Protein Sequence and Structure", Vol . 5, Suppl . 3 (ed. M.O. Dayhoff), pp . 345-352. Nati. Biomed. Res. Found. Washington, DC y Henikoff y colaboradores (1992) Proc. Nat' . Acad. Sci. USA 89:10915-10919. La matriz de BLOSUM62 (Fig. 10) frecuentemente se utiliza como una matriz de sustitución de registro de error en protocolos de alineación de secuencia tal como Gapped BLAST 2.0. La sanción de existencia de espacios es impuesta para la introducción de un espacio de aminoácido individual en una de las secuencias alineadas, y la sanción de extensión de espacio es impuesta para cada posición de aminoácido vacio adicional insertada en un espacio ya abierto. La alineación es definida por las posiciones de aminoácidos de cada secuencia en la cual la alineación comienza y termina, y opcionalmente por la inserción de un espacio o múltiples espacios en una o ambas secuencias para llegar al registro más alto posible. Mientras que la alineación óptima y el registro se pueden realizar manualmente, el proceso se facilita mediante el uso de un algoritmo de alineación implementado en computadora, por ejemplo gapped BLAST 2.0, descrito en Altschul y colaboradores (1997) Nucí. Acids Res. 25:3389-3402, dispuesto y disponible al público en el National Center for Biotechnology Information (NCBI) Website (¾;vn¾ . ncbi . nlm,nih . goy) . Las alineaciones óptimas, incluyendo múltiples alineaciones, se pueden preparar usando, por ejemplo, PS1-BLAST, disponible a través del sitio de la red NCBI descrito por Altschul y colaboradores (1997) Nucí. Acis Res. 25:3389-3402. Con respecto a una secuencia de aminoácidos que es óptimamente alineada con una secuencia de referencia, un residuo de aminoácido "corresponde a" la posición de la secuencia de referencia con la cual los residuos se emparejaron en la alineación. La "posición" es denotada por un número que secuencialmente identifica cada aminoácido en la secuencia de referencia basada en su posición relativa a la N— erminal. Por ejemplo, en la SEQ ID NO: 300, la posición 1 es M, posición 2 es I, posición 3 es E, etc. Cuando una secuencia de prueba es óptimamente alineada con la SEQ ID NO: 300, un residuo en la secuencia de prueba que se alinea con la E en la posición 3 se dice que "corresponde a la posición 3" de la SEQ ID NO: 300. Debido a las supresiones, inserción, truncamiento, fusiones, etc., que se deben tomar en cuenta cuando se determina una alineación óptima, en general el número de residuo de aminoácidos en una secuencia de prueba como es determinado al simplemente contar desde N-terminal no necesariamente será el mismo como el número de su posición correspondiente en la secuencia de referencia. Por ejemplo, en un caso donde hay una supresión de una secuencia de prueba alineada, no habrá aminoácido que corresponda a una posición en la secuencia de referencia en el sitio de la supresión. Donde hay una inserción en la secuencia de referencia alineada, esa inserción no corresponderá a cualquier posición de aminoácido en una secuencia de referencia. En el caso de truncamientos o fusiones pueden haber estiramientos de aminoácidos en ya sea la secuencia de referencia o alineada que no corresponde a cualquier aminoácido en la secuencia correspondiente. El término "polipéptido GAT" además se refiere a cualquier polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: a) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 577; (b) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 578; (c) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 621; (d) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 579; (e) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 602; (f) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95% idéntica a la SEQ ID NO: 697; (g) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 721; (h) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 613; (i) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 89% idéntica a la SEQ ID NO: 677; (j) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 584; (k) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 707; (1) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 616; (m) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 612; y (n) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 590. El término "polipéptido GAT" además se refiere a cualquier polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 89% de identidad de secuencia con los residuos 1-96 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 677; una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 95% de identidad de secuencia con los residuos 1-96 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 697; una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 96% de identidad de secuencia con los residuos 1-96 de la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 584, 612 y 721; una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 97% de identidad de secuencia con los residuos 1-96 de la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de la SEQ ID NO: 578, 613 y 621; una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 98% de identidad de secuencia con los residuos 1-96 de la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO:577, 579, 590, 602, 616 y 707. El término "polipéptido GAT" además se refiere a cualquier polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 89% de identidad de secuencia con los residuos 51-146 -de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 677; una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 95% de identidad de secuencia con los residuos 51-146 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 697; una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 96% de identidad de secuencia con los residuos 51-146 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 584, 612 y 721; una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 97% de identidad de secuencia con los residuos 51-146 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 578, 613 y 621; una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 98% de identidad de secuencia con los residuos 51-146 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 577, 579, 590, 602, 616 y 707. El término "polipéptido GAT" además se refiere a cualquier polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 919; (b) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 929; (c) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO:847 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO:845 o 847); (d) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 851; (e) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 853; (f) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 855 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO: 835 o 855); (g) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 857; (h) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 861; (i) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 871; (j) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 875; (k) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 881; (1) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 885; (m) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 887; (n) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 889; (o) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 893; (p) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 897; (q) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 899; (r) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 909; (s) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 911; (t) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 837; (u) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 841; (v) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 865; (w) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 869/ y (x) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 879. El término "polipéptido GAT" además se refiere a cualquier polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95% idéntica a los residuos 2-146 de la SEQ ID NO: 29 y que comprende un residuo Gly o un residuo Asn en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 33 de la SEQ ID NO: 929. El término "polipéptido GAT" además se refiere a cualquier polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que comparte por lo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o más identidad de secuencia con un polipéptido GAT ejemplar divulgado en la presente. Asi', por ejemplo, los polipéptidos GAT de la invención incluyen polipéptidos que comprende una secuencia de aminoácidos que comparte por lo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o más identidad de secuencia con cualquiera de SEQ ID NG:953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971 y 972. Como se utiliza en la presente, el término "identidad" o "por ciento de identidad" cuando se utiliza con respecto a un par particular de secuencias de aminoácidos alineadas se refiere al por ciento de identidad de secuencia de aminoácidos que es obtenido mediante el análisis Clustal W (versión W 1.8 disponible de European Bioinformatics Institute, Cambridge, UK) , contando el número de igualaciones idénticas en la alineación y al dividir tal número de igualaciones idénticas entre el más grande de (i) la longitud de las secuencias alineadas, y (ii) 96, y usando los siguientes parámetros Clustal W de error para lograr alineaciones de emparejamiento lentas/precisas - Sanción Abierta de Espacio : 10; Sanción de Extensión de Espacio: 0.10; matriz de peso de Proteina: serie Gonnet; matriz de peso de DNA: IUB; alineaciones de emparejamiento doble Lento/Rápido = Alineación SLO o FULL. En otro aspecto, la invención proporciona un polipéptido aislado o recombinante que comprende por lo menos 20, o alternativamente, por lo menos 50, por lo menos 75, por lo menos 100, por lo menos 125, por lo menos 130, por lo menos 135, por lo menos 140, por lo menos 141, por lo menos 142, por lo menos 143, por lo menos 144 o por lo menos 145 aminoácidos contiguos de una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 577; (b) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 578; (c) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 621; (d) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 579; (e) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 602; (f) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95% idéntica a la SEQ ID NO: 697; (g) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 721; (h) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 613; (i) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 89% idéntica a la SEQ ID NO: 677; (j ) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 584; (k) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 07; (1) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 616; (m) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 612; (n) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 590. En otro aspecto, la invención proporciona un polipéptido que comprende los residuos 2-146 de una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO:568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 621, 623, 625, 627, 629, 631, 633, 635, 637, 639, 641, 643, 645, 647, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 663, 665, 667, 669, 671, 673, 675, 677, 679, 681, 683, 685, 687, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 701, 703, 705, 707, 709, 711, 713, 715, 717, 719, 721, 723, 725, 727, 729, 731, 733, 735, 737, 739, 741, 743, 745, 747, 749, 751, 753, 755, 757, 759, 761, 763, 765, 767, 769, 771, 773, 775, 777, 779, 781, 783, 785, 787, 789, 791, 793, 795, 797, 799, 801, 803, 805, 807, 809, 811, 813, 815, 817, 819, 821, 823, 825.

En algunas modalidades de la invención, la secuencia de aminoácidos del polipéptido comprende Met, Met-Ala, o Met-Ala-Ala en el lado N-terminal del aminoácido correspondiente a la posición 2 de la secuencia de aminoácidos de referencia. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención pueden ser óptimamente alineados con una secuencia de aminoácidos de referencia seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 300, 445 y 457 para generar un registro de similitud de por lo menos 460 usando la matriz BLOSUM62, una sanción de existencia de espacio de 11 y una sanción de extensión de espacio de 1, en donde por lo menos uno de las siguientes composiciones conforma las siguientes restricciones: (i) en las posiciones 18 y 38, hay un residuo de aminoácido Z5; (ii) en la posición 62 hay un residuo de aminoácido Zl; (iii) en la posición 124 hay un residuo de aminoácido Z6; (iv) en la posición 144 hay un residuo de aminoácido Z2, en donde, Zl es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; Z2 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z5 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P, y además en donde los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponden a las siguientes posiciones, por lo menos 90% conforme a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 2, 4, 15, 19, 26, 28, 31, 45, 51, 54, 86, 90, 91, 97, 103, 105, 106, 114, 123, 129, 139 y/o 145 el residuo de aminoácido es Bl; y (b) en las posiciones 3, 5, 8, 10, 11, 14, 17, 24, 27, 32, 37, 47, 48, 49, 52, 57, 58, 61, 63, 68, 69, 79, 80, 82, 83, 89, 92, 100, 101, 104, 119, 120, 125, 126, 128, 131 y/o 143 el residuo de aminoácido es B2 ; en donde Bl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M, F, W, Y y V; y B2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, N, D, C, Q, E, G, H, K, P, S y T. Cuando se utiliza para especificar un aminoácido o residuo de aminoácido, las designaciones de una sola letra A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, W, y Y tienen su significado estándar como es utilizado en la técnica y como es proporcionado en la Tabla 1 en la presente . Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención pueden ser óptimamente alineados con una secuencia de aminoácidos de referencia seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 300, 445 y 457 para generar un registro de similitud de por lo menos 460 usando la matriz BLOSOM62, una sanción de existencia de espacio de 11 y una sanción de extensión de espacio de 1, en donde por lo menos uno de las siguientes composiciones conforma las siguientes restricciones: (i) en las posiciones 18 y 38, hay un residuo de aminoácido Z5; (ii) en la posición 62 hay un residuo de aminoácido Zl ; (iii) en la posición 124 hay un residuo de aminoácido Z6; y (iv) en la posición 144 hay un residuo de aminoácido Z2, en donde, Zl es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; Z2 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z5 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P, y además en donde los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponden a las siguientes posiciones, por lo menos 80% conforme a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 2, 4, 15, 19, 26, 28, 51, 54, 86, 90, 91, 97, 103, 105, 106, 114, 129, 139 y/o 145 el residuo de aminoácido es Zl; y (b) en las posiciones 31 y/o 45 el residuo de aminoácido es Z2; (c) en la posición 8 es el residuo de aminoácido Z3; (d) en la posición 89 el residuo de aminoácido es 13 o Z6; (e) en las posiciones 82, 92, 101 y/o 120 el residuo de aminoácido es Z4; (f) en las posiciones 3, 11, 27 y/o 79 el residuo de aminoácido es Z5; (g) en la posición 18 el residuo de aminoácido es Z4 o Z5; (h) en la posición 123 el residuo de aminoácido es Zl o Z2; (i) en las posiciones 12, 33, 35, 39, 53, 59, 112, 132, 135, 140 y/o 146 la secuencia de aminoácido es Zl o Z3; (j) en la posición 30 el residuo de aminoácido es Zl; (k) en la posición 6 el residuo de aminoácido es Z6; (1) en la posición 81 el residuo de aminoácido es Z2 o Z4; (m) en la posición 113 el residuo de aminoácido es Z3; (n) en la posición 138 el residuo de aminoácido es Z4; (o) en la posición 142 el residuo de aminoácido es Z2 ; (p) en las posiciones 57 y/o 126 el residuo de aminoácido es Z3 o Z4; (q) en la posición 5, 17 y 61 el residuo de aminoácido es Z4; (r) en la posición 24 el residuo de aminoácido es Z3 ; (s) en la posición 104 el residuo de aminoácido es Z5; (t) en la posición 52, y/o 69 el residuo de aminoácido es Z3; (u) en la posición 14 y 119 el residuo de aminoácido es Z5; (v) en las posiciones 10, 32, 63 y/o 83 el residuo de aminoácido es Z5; (w) en las posiciones 48 y/o 80 el residuo de aminoácido es Z6; (x) en la posición 40 el residuo de aminoácido es Zl o Z2 ; (y) en la posición 96 el residuo de aminoácido es Z3 o Z5; (z) en la posición 65 el residuo de aminoácido es Z3, Z4 o Z6; (aa) en las posiciones 84 y/o 115 el residuo de aminoácido es Z3; (ab) en la posición 93 el residuo de aminoácido es Z4; (ac) en la posición 130 el residuo de aminoácido es Z2; (ad) en la posición 58 el residuo de aminoácido es Z3, Z4 o Z6; (ae) en la posición 47 el residuo de aminoácido es Z4 o Z6; (af) en las posiciones 49 y/o 100 el residuo de aminoácido es Z3 o Z4; (ag) en la posición 68 el residuo de aminoácido es Z4 o Z5; (ah) en la posición 143 el residuo de aminoácido es Z4; (ai) en la posición 131 el residuo de aminoácido es Z5; (aj) en las posiciones 125 y/o 128 el residuo de aminoácido es Z5; (ak) en la posición 67 el residuo de aminoácido es Z3 o Z4; (al) en la posición 60 el residuo de aminoácido es Z5; y (am) en la posición 37 el residuo de aminoácido es Z4 o Z6; en donde Zl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; Z2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z3 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de N, Q, S y T; Z4 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, H y K; Z5 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención además comprenden residuos de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las posiciones especificadas en (a) - (am) , en donde por lo menos 90% conforman a las restricciones de residuo de aminoácidos especificadas en (a)- (am) . Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención adicionalmente comprenden residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones, en donde por lo menos 90% conforme a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 1, 7, 9, 13, 20, 36, 42, 47, 50, 56, 64, 70, 72, 75, 76, 78, 94, 98, 106, 110, 117, 118, 121 y/o 141 el residuo de aminoácido es Bl; y (b) en las posiciones 16, 21, 22, 23, 25, 29, 34, 41, 43, 44, 55, 66, 71, 73, 74, 77, 85, 87, 88, 95, 99, 102, 108, 109, 111, 116, 122, 127, 133, 134, 136 y/o 137 el residuo de aminoácido es B2; en donde Bl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M, F, W, Y y V; y B2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, N, D, C, Q, E, G, H, K, P, S, y T. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención adicionalmente comprenden residuos de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 1, 7, 9, 13, 20, 42, 46, 50, 56, 64, 70, 72, 75, 76, 78, 94, 98, 107, 110, 117, 118, 121 y/o 141 el residuo de aminoácido es Bl; y (b) en las posiciones 16, 21, 22, 23, 25, 29, 34, 36, 41, 43, 44, 55, 66, 71, 73, 74, 77, 85, 87, 88, 95, 99, 102, 108, 109, 111, 116, 122, 127, 133, 134, 136 y/o 137 el residuo de aminoácido es B2; en donde Bl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M, F, W, Y y V; y B2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, N, D, C, Q, E, G, H, K, P, S, y T. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención adicionalmente comprenden residuos de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones, en donde por lo menos 90% conforme a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 1, 7, 9, 20, 42, 50, .72, 75, 76, 78, 94, 98, 110, 121 y/o 141 el residuo de aminoácido es Zl, (b) en las posiciones 13, 46, 56, 70, 107, 117 y/ 118 el residuo de . aminoácido es Z2; (c) en las posiciones 23, 55, 71, 77, 88 y/o 109 el residuo de aminoácido es Z3; (d) en las posiciones 16, 21, 41, 73, 85, 99 y/o 111 Z4; (e) en las posiciones 34 y/o 95 el residuo de aminoácido es Z5; (f) en las posiciones 22, 25, 29, 43, 44, 66, 74, 87, 102, 108, 116, 122, 127, 133, 134, 136 y/o 137 el residuo de aminoácido es Z6; en donde Zl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; Z2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z3 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de N, Q, S y T; Z4 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, H y K; Z5 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y 6 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención además comprenden un residuo de aminoácido en la posición 36 que es seleccionado del grupo que consiste de Zl y Z3. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención además comprenden un residuo de aminoácido en la posición 64 que es seleccionado del grupo que consiste de Zl y Z2. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención además comprende residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones, en donde por lo menos 80% conforman a las siguientes restricciones: (a) en la posición 2 el residuo de aminoácido es I o L; (b) en la posición 3 el residuo de aminoácido es E; (c) en la posición 4 el residuo de aminoácido es V o I; (d) en la posición 5 el residuo de aminoácido es K; (e) en la posición 6 el residuo de aminoácido es P, (f) en la posición 8 el residuo de aminoácido es N; (g) en la posición 10 el residuo de aminoácido es E; (h) en la posición 11 el residuo de aminoácido es D o E; (i) en la posición 12 el residuo de aminoácido es T; (j) en la posición 14 el residuo de aminoácido es E o D; (k) en la posición 15 el residuo de aminoácido es L; (1) en la posición 17 el residuo de aminoácido es H; (m) en la ' posición 18 el residuo de aminoácido es R, E o K; (n) en la posición 19 el residuo de aminoácido es I o V; (o) en la posición 24 el residuo de aminoácido es Q (p) en la posición 26 el residuo de aminoácido es M, L, V o I; (q) en la posición 27 el residuo de aminoácido es E, (r) en la posición 28 el residuo de aminoácido es a 0 v; (s) en la posición 30 el residuo de aminoácido es M; (t ) en la posición 31 el residuo de aminoácido es Y o F; (u) en la posición 32 el residuo de aminoácido es E o D; (v) en la posición 33 el residuo de aminoácido es T o S; (w) en la posición 35 el residuo de aminoácido es L; (x ) en la posición 37 el residuo de aminoácido es R, G, E o Q; (y) en la posición L 39 el residuo de aminoácido es ? 0 S; (z] en la posición 40 el residuo de aminoácido es F o L; (aa) en la posición 45 el residuo de aminoácido es Y o F; (ab) en la posición 47 el residuo de aminoácido es R o G; (ac) en la posición 48 el residuo de aminoácido es G; (ad) en la posición 49 el residuo de aminoácido es K, R o Q; (ae) en la posición 51 el residuo de aminoácido es I o V; (af) en la posición 52 el residuo de aminoácido es S; (ag) en la posición 53 el residuo de aminoácido es I o V; (ah) en la posición 54 el residuo de aminoácido es A; (ai) en la posición 57 el residuo de aminoácido es H o N; (aj) en la posición 58 el residuo de aminoácido es Q, K, R o P; (ak) en la posición 59 el residuo de aminoácido es A; (al) en la posición 60 el residuo de aminoácido es E; (am) en la posición 61 el residuo de aminoácido es H o R; (an) en la posición 63 el residuo de aminoácido es E o D; (ao) en la posición 65 el residuo de aminoácido es E, P Q; (ap )) en la posición 67 el residuo de aminoácido es Q o R; (aq) en la posición 68 el residuo de aminoácido es K o E; (ar) en la posición 69 el residuo de aminoácido es Q; (as) en la posición 79 el residuo de aminoácido es E; (at) en la posición 80 el residuo de aminoácido es G; ( au) en la posición 81 el residuo de aminoácido es Y, H o F; (av) en la posición 82 el residuo de aminoácido es R; (aw) en la posición 83 el residuo de aminoácido es E o D; (ax) en la posición 84 el residuo de aminoácido es Q; (ay) en la posición 86 el residuo de aminoácido es A; (az) en la posición 89 el residuo de aminoácido es G, T o S; (ba) en la posición 90 el residuo de aminoácido es L, (bb) en la posición 91 el residuo de aminoácido es L, I o V; (be) en la posición 92 el residuo de aminoácido es R o K; (bd) en la posición 93 el residuo de aminoácido es H (be) en la posición 96 el residuo de aminoácido es E o Q; (bf) en la posición 97 el residuo de aminoácido es i; (bg) en la posición 100 el residuo de aminoácido es K 0 N; (bh) en la posición 101 el residuo de aminoácido es K 0 R; (bi) en la posición 103 el residuo de aminoácido es A 0 V; (bj) en la posición 104 el residuo de aminoácido es D; (bk) en la posición 105 el residuo de aminoácido es M, L o I; (bl! ) en la posición 106 el . residuo de aminoácido es L; (bm) en la posición 112 el residuo de aminoácido es T o A; (bn) en la posición 113 el residuo de aminoácido es S o T; (bo) en la posición 114 el residuo de aminoácido es A; (bp) en la posición 115 el residuo de aminoácido es S; (bq) en la posición 119 el residuo de aminoácido es K o R; (br) en la posición 120 el residuo de aminoácido es K o R; (bs) en la posición 123 el residuo de aminoácido es F o L; (bt) en la posición 125 el residuo de aminoácido es E; (bu) en la posición 126 el residuo de aminoácido es Q o H; (bv) en la posición 128 el residuo de aminoácido es E o D (bw) en la posición 129 el residuo de aminoácido es V 0 I; (bx) en la posición 130 el residuo de aminoácido es F; (by) en la posición 131 el residuo de aminoácido es D o E; (bx) en la posición 132 el residuo de aminoácido es T; (ca) en la posición 135 el residuo de aminoácido es V, ( cb) en la posición 138 el residuo de aminoácido es H; (ce) en la posición 139 el residuo de aminoácido es i; (cd) en la posición 140 el residuo de amino cido es L o M; (ce) en la posición 142 el residuo de amino cido es Y; (cf) en la posición 143 el residuo de aminoácido es K 0 R; (cg) en la posición 145 el residuo de aminoácido es L o I; y (ch) en la posición 146 el residuo de aminoácido es T. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención además comprenden residuos de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las posiciones especificadas en (a) - (ch) anterior, en donde por lo menos 90% conforman a las restricciones de residuos de aminoácidos especificadas en (a) - (ch) . Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención pueden ser óptimamente alineados con una secuencia de aminoácidos de referencia seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 300, 445 y 457 para generar un registro de similitud de por lo menos 460 usando la matriz BLOSUM62, una sanción de existencia de espacio 11, y una sanción de extensión de espacio de 1, en donde por lo menos una de las siguientes posiciones conforme las siguientes restricciones: (i) en las posiciones 18 y 38, hay un residuo de aminoácido Z5; (ii) en la posición 62, hay un residuo de aminoácido Zl; (iii) en la posición 124, hay un residuo de aminoácido Z6; y (iv) en la posición 144, hay un residuo de aminoácido Z2, en donde: Zl es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; Z2 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z5 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P, y además en donde los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones, por lo menos 80% conforman a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 9, 76, 94 y 110 el residuo de aminoácido es A; (b) en las posiciones 29 y 108 el residuo de aminoácido es C; (c) en la posición 34 el residuo de aminoácido es D; (d) en la posición 95 el residuo de aminoácido es E; (e) en la posición 56 el residuo de aminoácido es F; (f) en las posiciones 43, 44, 66, 74, 87, 102, 116, 122, 127 y 136 el residuo de aminoácido es G; (g) en la posición 41 el residuo de aminoácido es H; (h) en la posición 7 el residuo de aminoácido es I; (i) en la posición 85 el residuo de aminoácido es K; (j) en las posiciones 20, 42. 50. 78 y 121 el residuo de aminoácido es L; (k) en las posiciones 1 y 141 el residuo de aminoácido es M; (1) en las posiciones 23 y 109 el residuo de aminoácido es N; (m) en las posiciones 22, 25, 133, 134 y 137 el residuo de P; (n) en la posición 71 el residuo de aminoácido es Q; (o) en las posiciones 16, 21, 73, 99 y 111 el residuo de aminoácido es R (p) en la posición 55 el residuo de aminoácido es S; (q) en la posición 77 el residuo de aminoácido es T; (r) en la posición 107 el residuo de aminoácido es W; y (s) en la posición 13, 46, 70 y 118 el residuo de aminoácido es Y. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención además comprenden secuencias de aminoácidos en donde los residuos de aminoácidos cumplen por lo menos con una de las siguientes restricciones: (a) en la posición 36 el residuo de aminoácido es M, L o T; (b) en la posición 72 el residuo de aminoácido es L o I; (c) en la posición 75 el residuo de aminoácido es M o V; (d) en la posición 64 el residuo de aminoácido es L, I o F; (e) en la posición 88 el residuo de aminoácido es T o S; y (f) en la posición 117 el residuo de aminoácido es Y o F. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención comprenden una secuencia de aminoácidos en donde los residuos de aminoácido cumplen por lo menos una de las siguientes restricciones adicionales : (a) en la posición 14 el residuo de aminoácido es D; (b) en la posición 18 el residuo de aminoácido es E; (c) en la posición 26 el residuo de aminoácido es M o V; (e) en la posición 30 el residuo de aminoácido es i; (f) en la posición 32 el residuo de aminoácido es D; (g) erla posición 36 el residuo de aminoácido es D; (j) en la posición 53 el residuo de aminoácido es V; (k) en la posición 58 el residuo de aminoácido es ; (1) en la posición 61 el residuo de aminoácido es R; (m) en la posición 62 el residuo de aminoácido es L; (n) en la posición 64 el residuo de aminoácido es I o F; (o) en la posición 65 el residuo de aminoácido es P; (P) en la posición 72 el residuo de amoniácido es i; (q) en la posición 75 el residuo de aminoácido es V; (r) en la posición 88 el residuo de aminoácido es R; (s) en la posición 89 el residuo de aminoácido es G; (t) en la posición 91 el residuo de aminoácido es L; (u) en la posición 98 el residuo de aminoácido es I; (v) en la posición 105 el residuo de aminoácido es i; (w) en la posición 112 el residuo de aminoácido es A; (x) en la posición 124 el residuo de aminoácido es G o C; (y) en la posición 128 el residuo de aminoácido es D; (z) en la posición 140 el residuo de aminoácido es M; (aa) en la posición 143 del residuo de aminoácido es R; y (ab) en la posición 144 el residuo de aminoácido es W. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención-comprenden una secuencia de aminoácidos en donde por lo menos uno de los residuos de aminoácido que corresponde a las posiciones especificadas en (a) hasta (ab) como es descrito en lo anterior, por lo menos 80% conforman a las restricciones de residuos de aminoácidos especificadas en (a) hasta (ab) . Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención tiene una secuencia de aminoácidos que comprende residuos de aminoácidos por lo menos uno de los cuales cumple con las siguientes restricciones adicionales: (a) en la posición 41 el residuo de aminoácido es H; (b) en la posición 138 el residuo de aminoácido es H; (c) en la posición 34 el residuo de aminoácido es N; y (d) en la posición 55 el residuo de aminoácido es S. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 577; (b) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 578; (c) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 621; (d) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 579; (e) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 602; (f) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95% idéntica a la SEQ ID NO: 697; (g) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 721; (h) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 613; (i) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 89% idéntica a la SEQ ID NO: 677; (j) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 584 ; (k) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 707; (1) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 616; (m) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 612; (n) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 590. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 577; (b) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 578; (c) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 621; (d) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 579; (e) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98¾ idéntica a la SEQ ID NO: 602; (f) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95% idéntica a la SEQ ID NO: 697; (g) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 721; (h) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 613; (i) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 89% idéntica a la SEQ ID NO: 677; ( ) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 584; (k) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 707; (1) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 616; (m) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 612; (n) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 590, en donde por lo menos una de las siguientes posiciones además conforman las siguientes restricciones: (i) en las posiciones 18 y 38, hay un residuo de aminoácido Z5; (ii) en la posición 62, hay un residuo de aminoácido Zl; (iii) en la posición 124, hay un residuo de aminoácido Z6; (iv) en la posición 144, hay un residuo de aminoácido Z2, en donde: Zl es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; 22 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y, Z5 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P. Algunos polipéptidos preferidos GAT de la invención comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 577; (b) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO:578; (c) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 621; (d) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 579; (e) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 602; (f) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95% idéntica a la SEQ ID NO: 697; (g) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 721; (h) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 613; (i) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 89% idéntica a la SEQ ID NO: 677; (j ) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 584; (k) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 707; (1) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 616; (m) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 612; (n) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 590, en donde los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones, por lo menos 90% conforme a las siguientes restricciones adicionales: (a) en las posiciones 2, 4, 15, 19, 26, 28, 31, 45, 51, 54, 86, 90, 91, 97, 103, 105, 106, 114, 123, 129, 139 y/o 145 el residuo de aminoácido es Bl; y (b) en las posiciones 3, 5, 8, 10, 11, 14, 17, 24, 27, 32, 37, 47, 48, 49, 52, 57, 58, 61, 68, 69, 70, 80, 82, 83, 89, 92, 100, 101, 104, 110, 120, 125, 126, 128, 131 y/o 143 el residuo de aminoácido es B2; en donde Bl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M, F, W, Y y V; y B2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, N, D, C, Q, E, G, H, , P, S y T. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 577; (b) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 578; (c) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 621; (d) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 579; (e) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 602; (f) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95% idéntica a la SEQ ID NO: 697; (g) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 721; (h) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 613; (i) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 89% idéntica a la SEQ ID NO: 677; (j) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 584; (k) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 707; (1) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 616; (m) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 612; (n) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 590, en donde los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones, por lo menos 80% conforme a las siguientes restricciones adicionales: (a) en las posiciones 2, 4, 15, 19, 26, 28, 51, 54, 86, 90, 91, 97, 103, 105, 106, 114, 129, 139 y/o 145 el residuo es Zl; (b) en las posiciones 31 y/o 45 el residuo de aminoácido es Z2; (c) en la posición 8 el residuo de aminoácido es Z3; (d) en la posición 89 el residuo de aminoácido es Z3 o Z6; (e) en las posiciones 82, 92, 101 y/o 120 el residuo de aminoácido es Z4; (f) en las posiciones 3, 11, 27 y/o 79 el residuo de aminoácido es Z5; (g) en la posición 18 el residuo de aminoácido es Z4 o Z5; (h) en la posición 123 el residuo de aminoácido es Zl o 12 ; (i) en las posiciones 12, 33, 35, 39, 53, 59, 112, 132, 135, 140 y/o 146 el residuo de aminoácido es Zl o Z3; (j) en la posición 30 el residuo de aminoácido es Zl; (k) en la posición 6 el residuo de aminoácido es Z6; (1) en la posición 81 el residuo de aminoácido es Z2 o Z4; (m) en la posición 113 el residuo de aminoácido es Z3; (n) en la posición 138 el residuo de aminoácido es Z4; (o) en la posición 142 el residuo de aminoácido es Z2; (p) en las posiciones 57 y/o 126 el residuo de aminoácido es Z3 o Z4; (q) en la posición 5, 17 y 61 el residuo de aminoácido es Z4; (r) en la posición 24 el residuo de aminoácido es Z3; (s) en la posición 104 el residuo de aminoácido es Z5; (t) en la posición 52, y/o 69 el residuo de aminoácido es Z3; (u) en la posición 14 y 119 el residuo de aminoácido es Z5; (v) en las posiciones 10, 32, 63 y/o 83 el residuo de aminoácido es Z5; (w) en las posiciones 48 y/o 80 el residuo de aminoácido es Z6; (x) en la posición 40 el residuo de aminoácido es Zl o Z2; (y) en la posición 96 el residuo de aminoácido es Z3 o Z5; (z) en la posición 65 el residuo de aminoácido es Z3, Z4 o Z6; (aa) en las posiciones 84 y/o 115 el residuo de aminoácido es Z3; (ab) en la posición 93 el residuo de aminoácido es Z4; (ac) en la posición 130 el residuo de aminoácido es Z2; (ad) en la posición 58 el residuo de aminoácido es Z3, Z4 o Z6; (ae) en la posición 47 el residuo de aminoácido es Z4 o Z6; (af) en las posiciones 49 y/o 100 el residuo de aminoácido es Z3 o Z4; (ag) en la posición 68 el residuo de aminoácido es Z4 o Z5; (ah) en la posición 143 el residuo de aminoácido es Z4; (ai) en la posición 131 el residuo de aminoácido es Z5; (aj) en las posiciones 125 y/o 128 el residuo de aminoácido es Z5; (ak) en la posición 67 el residuo de aminoácido es Z3 o Z4; (al) en la posición 60 el residuo de aminoácido es Z5; y (am) en la posición 37 el residuo de aminoácido es Z4 o Z6; en donde Zl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z3 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de N, Q, S y T; Z4 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, H y K; Z5 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención además comprenden residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las posiciones especificadas en (a)-(am), en donde por lo menos 90% conforman a las restricciones de residuos de aminoácidos especificadas en (a) - (am) . Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención comprenden residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones en donde por lo menos 90% conforman a las siguientes restricciones adicionales: (a) en las posiciones 1, 7, 9, 13, 20, 36, 42, 47, 50, 56, 64, 70, 72, 75, 76, 78, 94, 98, 107, 110, 117, 118, 121 y/o 141 el residuo de aminoácido es Bl; y (b) en las posiciones 16, 21, 22, 23, 25, 29, 34, 41, 43, 44, 55, 66, 71, 73, 74, 77, 85, 87, 88, 95, 99, 102, 108, 109, 111, 116, 122, 127, 133, 134, 136 y/o 137 el residuo de aminoácido es B2; en donde Bl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M, F, W, Y y V; y B2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, N, D, C, Q, E, G, H, K, P, S, y T . Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención comprenden residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones en donde por lo menos 90% conforman las siguientes restricciones adicionales: (a) en las posiciones 1, 7, 9, 13, 20, 36, 42, 47, 50, 56, 64, 70, 72, 75, 76, 78, 94, 98, 106, 110, 117, 118, 121 y/o 141 el residuo de aminoácido es Bl; y (b) en las posiciones 16, 21, 22, 23, 25, 29, 34, 36, 41, 43, 44, 55, 66, 71, 73, 74, 77, 85, 87, 88, 95, 99, 102, 108, 109, 111, 116, 122, 127, 133, 134, 136 y/o 137 el residuo de aminoácido es B2; en donde Bl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M, F, W, Y y V; y B2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, N, D, C, Q, E, G, H, K, P, S, y T . Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención comprenden residuos de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones en donde por lo menos 90% conforman a las siguientes restricciones adicionales: (a) en las posiciones 1, 7, 9, 20, 42, 50, 72, 75, 76, 78, 94, 98, 110, 121 y/o 141 el residuo de aminoácido es Zl; (b) en las posiciones 13, 46, 56, 70, 107, 117 y/o 118 el residuo de aminoácido es Z2; (c) en las posiciones 23, 55, 71, 77, 88 y/o 109 el residuo de aminoácido es Z3; (d) en las posiciones 16, 21, 41, 73, 85, 99 y/o 111 el residuo de aminoácido es Z4; (e) en las posiciones 34 y/o 95 el residuo de aminoácido es Z5; (f) en la posición 22, 25, 29, 43, 44, 66, 74, 87, 102, 108, 116, 122, 127, 133, 134, 136 y/o 137 el residuo de aminoácido es Z6; en donde Zl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; Z2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de G, W y Y; Z3 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de N, Q, S y T; Z4 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, H y K; Z5 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención además comprenden una secuencia de aminoácidos en donde el residuo de aminoácidos en la posición 36 es seleccionada del grupo que consiste de Zl y Z3. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención además comprenden una secuencia de aminoácidos en donde el residuo de aminoácido en la posición 64 es seleccionado del grupo que consiste de Zl y Z2. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención comprenden una secuencia de aminoácidos en donde los residuos de aminoácido que corresponden a las siguientes posiciones, es por lo menos 80% conforman a las siguientes restricciones adicionales: (a) en la posición 2 el residuo de aminoácido es I o L; (b) en la posición 3 el residuo de aminoácido es E; (c) en la posición 4 el residuo de aminoácido es V o I; (d) en la posición 5 el residuo de aminoácido es K; (e) en la posición 6 el residuo de aminoácido es P, (f) en la posición 8 el residuo de aminoácido es N; (g) en la posición 10 el residuo de aminoácido es E; (h) en la posición 11 el residuo de aminoácido es D o E; (i) en la posición 12 el residuo de aminoácido es T; ( ) en la posición 14 el residuo de aminoácido es E o D; (k) en la posición 15 el residuo de aminoácido es L; (1) en la posición 17 el residuo de aminoácido es H; (m) en la posición 18 el residuo de aminoácido es R, E o K; (n) en la posición 19 el residuo de aminoácido es I o V; (o) en la posición 24 el residuo de aminoácido es Q (p) en la posición 26 el residuo de aminoácido es M, L, V o I; (q) en la posición 27 el residuo de aminoácido es E, (r) en la posición 28 el residuo de aminoácido es a 0 v; (s) en la posición 30 el residuo de aminoácido es M; (t) en la posición 31 el residuo de aminoácido es Y o F; (u) en la posición 32 el residuo de aminoácido es E o D; (v) en la posición 33 el residuo de aminoácido es T o S; (w) en la posición 35 el residuo de aminoácido es L; (x) en la posición 37 el residuo de aminoácido es R, G, E o Q; (y) en la posición 39 el residuo de aminoácido es A o S; (Z; en la posición 40 el residuo de amino cido es F o L; (aa) en la posición 45 el residuo de aminoácido es Y o F; (ab) en la posición 47 el residuo de aminoácido es R o G; (ac) en la posición 48 el residuo de aminoácido es G; (ad) en la posición 49 el residuo de aminoácido es , R o Q; (ae) en la posición 51 el residuo de aminoácido es I o V; (af) en la posición 52 el residuo de aminoácido es S; (ag) en la posición 53 el residuo de aminoácido es I o V; (ah) en la posición 54 el residuo de aminoácido es A; (ai) en la posición 57 el residuo de ami noácido es H o N; (aj) en la posición 58 el residuo de aminoácido es Q, K, R o P; (ak) en la posición 59 el residuo de aminoácido es A; (al) en la posición 60 el residuo de aminoácido es E; (am) en la posición 61 el residuo de aminoácido es H o R; (an) en la posición 63 el residuo de aminoácido es E o D; (ao) en la posición 65 el residuo de aminoácido es E, P o Q; (ap) en la posición 67 el residuo de aminoácido es Q o R; (aq) en la posición 68 el residuo de aminoácido es K o E; (ar) en la posición 69 el residuo de aminoácido es Q; (as) en la posición 79 el residuo de aminoácido es E; (at) en la posición 80 el residuo de aminoácido es G; (au) en la posición 81 el residuo de aminoácido es Y, H o F; (av ) en la posición 82 el residuo de aminoácido es R; (aw) en la posición 83 el residuo de aminoácido es E o D; (ax) en la posición 84 el residuo de ami noácido es Q; (ay) en la posición 86 el residuo de aminoácido es A; (az) en la posición 89 el residuo de aminoácido es G, T o S; (ba ) en la posición 90 el residuo de aminoácido es L, (bb) en la posición 91 el residuo de aminoácido es L, I o V; (be ) en la posición 92 el residuo de aminoácido es R o K; (bd) en la posición 93 el residuo de aminoácido es H; (be) en la posición 96 el residuo de ami noácido es E o Q; (bf) en la posición 97 el residuo de aminoácido es i; (bg) en la posición 100 el residuo de aminoácido es K o N; (bh) en la posición 101 el residuo de a i noácido es K o R; (bi) en la posición 103 el residuo de aminoácido es A o V; (bj ) en la posición 104 el residuo de aminoácido es D; (bk) en la posición 105 el residuo de aminoácido es M, L o I; (bl) en la posición 106 el residuo de aminoácido es L; (bm) en la posición 112 el residuo de aminoácido es T o A; (bn) en la posición 113 el residuo de aminoácido es S o T; (bo) en la posición 114 el residuo de aminoácido es A; (bp) en la posición 115 el residuo de aminoácido es S; (bq) en la posición 119 el residuo de aminoácido es K 0 R; (br) en la posición 120 el residuo de aminoácido es K o R; (bs) en la posición 123 el residuo de aminoácido es F o L; (bt) en la posición 125 el residuo de aminoácido es E; (bu) en la posición 126 el residuo de aminoácido es Q o H; (bv) en la posición 128 el residuo de aminoácido es ¦ E o D; (bw) en la posición 129 el residuo de aminoácido es V o i; (bx) en la posición 130 el residuo de aminoácido es F; (by) en la posición 131 el residuo de aminoácido es D o E (bx) en la posición 132 el residuo de aminoácido es T; (ca) en la posición 135 el residuo de aminoácido es V, (cb) en la posición 138 el residuo de aminoácido es H; (ce) en la posición 139 el residuo de aminoácido es i; (cd) en la posición 140 el residuo de aminoácido es L o M; (ce) en la posición 142 el residuo de aminoácido es Y; (cf) en la posición 143 el residuo de aminoácido es K o R; (cg) en la posición 145 el residuo de aminoácido es L 0 I; (ch) en la posición 146 el residuo de aminoácido es T. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención comprenden una secuencia de aminoácidos en la cual los residuos que corresponden a las posiciones especificadas en (a)-(ch) anterior, por lo menos 90% conforman a las restricciones de residuo de aminoácidos especificadas en (a)- (ch) . Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ' ID NO: 577; (b) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 578; (c) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 621; (d) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 579; (e) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 602; (f) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95% idéntica a la SEQ ID NO: 697; (g) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 721; (h) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 613; (i) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 89% idéntica a la SEQ ID NO: 677; (j ) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 584; (k) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 707; (1) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 616; (m) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 612; (n) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 590, además en donde los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 9, 76, 94 y 110 el residuo de aminoácido es A; (b) en las posiciones 29 y 108 el residuo de aminoácido es C; (c) en la posición 34 el residuo de aminoácido es D; (d) en la posición 95 el residuo de aminoácido es E; (e) en la posición 56 el residuo de aminoácido es F; (f) en las posiciones 43, 44, 66, 74, 87, 102, 116, 122, 127 y 136 el residuo de aminoácido es G; (g) en la posición 41 el residuo de aminoácido es H; (h) en la posición 7 el residuo de aminoácido es I; (i) en la posición 85 el residuo de aminoácido es K; (j) en las posiciones 20, 42. 50. 78 y 121 el residuo de aminoácido es L; (k) en las posiciones 1 y 141 el residuo de aminoácido es M; (1) en las posiciones 23 y 109 el residuo de aminoácido es N; (m) en las posiciones 22, 25, 133, 134 y 137 el residuo de P; (n) en la posición 71 el residuo de aminoácido es Q; (o) en las posiciones 16, 21, 73, 99 y 111 el residuo de aminoácido es R; (p) en la posición 55 el residuo de aminoácido es 3 ; (q) en la posición 77 el residuo de aminoácido es T; (r) en la posición 107 el residuo de aminoácido es W; y (s) en la posición 13, 46, 70 y 118 el residuo de aminoácido es Y. Algunos polipeptidos GAT preferidos de la invención además comprenden una secuencia de aminoácidos en la cual por lo menos uno de los siguientes criterios es cumplido: (a) en la posición 14 el residuo de aminoácido es D; (b) en la posición 18 el residuo de aminoácido es E; (c) en la posición 26 el residuo de aminoácido es M o V; (e en la posición 30 el residuo de aminoácido es I; (f) en la posición 32 el residuo de aminoácido es D; (g en la posición 36 el residuo de aminoácido es D; (j) en la posición 53 el residuo de aminoácido es V; (k) en la posición 58 el residuo de aminoácido es R; (1) en la posición 61 el residuo de aminoácido es R; (m) en la posición 62 el residuo de aminoácido es L; (n) en la posición 64 el residuo de aminoácido es I o F; (o) en la posición 65 el residuo de aminoácido es P; (P) en la posición 72 el residuo de aminoácido es I; (q) en la posición 75 el residuo de aminoácido es V; (r) en la posición 88 el residuo de aminoácido es R; (s) en la posición 89 el residuo de aminoácido es G; (t) en la posición 91 el residuo de aminoácido es L; (u) en la posición 98 el residuo de aminoácido es I; (v) en la posición 105 el residuo de aminoácido es I; (w) en la posición 112 el residuo de aminoácido es A; (X) en la posición 124 el residuo de aminoácido es G 0 C; (y) en la posición 12E el residuo de aminoácido es D; (z) en la posición 140 el residuo de aminoácido es M; (aa) en la posición L43 del residuo de aminoácido es R; y (ab) en la posición 144 el residuo de aminoácido es w. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención además comprenden una secuencia de aminoácidos en donde los residuos de aminoácidos que corresponden a las posiciones especificadas en (a) hasta (ab) como es descrito en lo anterior, por lo menos 80% conforman a las restricciones del residuo de aminoácido especificas en (a) hasta (ab) . Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención además comprende una secuencia de aminoácidos en donde las siguientes condiciones también son cumplidas: (a) en la posición 41 el residuo de aminoácido es H; (b) en la posición 138 el residuo de aminoácido es H; (c) en la posición 34 el residuo de aminoácido es N; y (d) en la posición 55 el residuo de aminoácido es S . Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención cuando se alinean óptimamente con una secuencia de aminoácidos de referencia seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 300, 445 y 457 para generar un registro de similitud de por lo menos 460 usando la matriz BLOSUM62, una sanción de existencia de espacio de 11, y una sanción de extensión de espacio de 1, tienen secuencias de aminoácidos tal que una o más de las siguientes posiciones conforman a las siguientes restricciones: (i) en las posiciones 18 y 38, hay un residuo de aminoácido Z5; (ii) en la posición 62, hay un residuo de aminoácido Zl; (iii) en la posición 124, hay un residuo de aminoácido Z6; y (iv) en la posición 144, hay un residuo de aminoácido Z2, en donde: Zl es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; Z2 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z5 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P. Algunos de los polipéptidos mencionados en lo anterior, el residuo de aminoácidos del polipéptido correspondiente a la posición 28 es V, l o A. La valina o isoleucina en la posición 28 generalmente se correlaciona con la KM reducida, mientras que la alanina en esa posición generalmente se correlaciona con la kcat incrementada. La treonina en la posición 89 y la arginina en la posición 58 generalmente se correlaciona con la KM reducida. Otros polipéptidos GAT preferidos se caracterizan por tener 127 (es decir, en I en la posición 27), M30, D34, S35, R37, S39, H141, G48, K49, N57, Q58, P62, T62, Q65, Q67, K68, V75, E83, S89, A96, E96, R101, T112, A114, K119, K120, E128, V129, D131,T131, V132, V134, V135, H138, R144, 1145 O T146, o cualquier combinación de los mismos. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención comprenden una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604 , 605, 606, 607 , 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 621, 623, 625, 627, 629, 631, 633, 635, 637, 639, 641, 643, 645, 647, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 663, 665, 667, 669, 671, 673, 675, 677, 679, 681, 683, 685, 687, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 701, 703, 705, 707, 709, 711, 713, 715, 717, 719, 721, 723, 725, 727, 729, 731, 733, 735, 737, 739, 741, 743, 745, 747, 749, 751, 753, 755, 757, 759, 761, 763, 765, 767, 769, 771, 773, 775, 777, 779, 781, 783, 785, 787, 789, 791, 793, 795, 797, 799, 801, 803, 805, 807, 809, 811, 813, 815, 817, 819, 821, 823 y 825. En otro aspecto, la Invención proporciona un polipéptido aislado o recombinante que comprende por lo menos 20, o alternativanente, por lo menos 50, por lo menos 75, por lo menos 100, por lo menos 125, por lo menos 130, por lo menos 135, por lo menos 140, por lo menos 141, por lo menos 142, por lo menos 143, por lo menos 144 o por lo menos 145 aminoácidos contiguos de una secuencia de aminoácidos seleccionada de los grupos que consiste de: (a) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO:919 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO:917, 919, 921, 923, 925, 927, 833, 835, 839, 843, 845, 859, 863, 873, 877, 891, 895, 901, 905, 907, 913, 915 o 950); (b) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 929 (tal como, por ejemplo, SEO ID NO: 929, 931, 835, 843, 849 o 867) ; (c) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEO ID NO: 847 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO:845 o 847); (d) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 851; (e) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 853; (f) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 855 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO:835 o 855); (g) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 857; (h) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 861 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO: 839, 861 o 883); (i) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 871; ( ) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 875; (k) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 831; (1) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO:885 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO-.845 o 885); (m) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 887; (n) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 889 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO: 863, 889, 891 o 903); (o) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 893; (p) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 897; (q) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 899; (r) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 909 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO: 883 o 909); (s) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 911; (t) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a la SEQ ID NO: 837; (u) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a la SEQ ID NO: 841; (v) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a la SEQ ID NO: 865; (w) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a la SEQ ID NO: 869; y (x) una secuencia de aminoácidos' que es por lo menos 99% idéntica a la SEQ ID NO: 879. En otro aspecto, la invención proporciona un polipéptido aislado o recombinante que comprende por lo menos 20, o alternativamente, por lo menos 50, por lo menos 75, por lo menos 100, por lo menos 125, por lo menos 130, por lo menos 135, por lo menos 140, por lo menos 141, por lo menos 142, por lo menos 143, por lo menos 144 o por lo menos 145 aminoácidos contiguos de una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95% idéntica a la SEQ ID NO: 929 y que comprende un residuo Gly o un residuo Asn en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 33 de la SEQ ID NO: 929 (tal como, por ejemplo, SEQ ID NO: 837, 849, 893, 897, 905, 921, 927, 929 o 931) . En otro aspecto, la invención proporciona un polipéptido que comprende residuos 2-145 de una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 833, 835, 837, 839, 841, 843, 845, 847, 849, 851, 853, 855, 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871, 873, 875, 877, 879, 881, 883, 885, 887, 889, 891, 893, 895, 897, 899, 901, 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, .917, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971 y 972. En algunas modalidades de la invención, la secuencia de aminoácidos del polipéptido comprende Met, Met-Ala, o Met-Ala-Ala en el lado N-terminal del aminoácido correspondiente en la posición 2 de la secuencia de aminoácidos de referencia. Algunos polipéptidos GAT preferidos de la invención comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 833, 835, 837, 839, 841, 843, 845, 847, 849, 851, 853, 855, 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871, 873, 875, 877, 879, 881, 883, 885, 887, 889, 891, 893, 895, 897, 899, 901, 903, 905r 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 946, 948 y 950. La invención además proporciona polipéptidos GAT preferidos que se caracterizan por una combinación de las restricciones de posición de residuo de aminoácido anteriores . Además, la invención proporciona polinucleótidos GAT que codifican los polipéptidos GAT preferidos descritos en lo anterior, y secuencias de nucleótidos complementarias de los mismos. Algunos aspectos de la invención pertenecen particularmente al subcon unto de cualquiera de las categorías descritas en lo anterior de polipéptidos GAT que tienen actividad GAT, como es descrito en la presente. Estos polipéptidos GAT son preferidos, por ejemplo, para el uso como agentes para conferir resistencia a glifosato en una planta. Ejemplos de niveles deseados de actividad GAT se describen én la presente. En un aspecto, los polipéptidos GAT comprenden una secuencia de aminoácidos modificada por una forma recombinante o aislada de ácidos nucleicos que ocurren de manera natural aislados de una fuente natural, por ejemplo, una cepa bacteriana. Los polinucleótidos de tipo silvestre que codifican tales polipéptidos GAT pueden ser específicamente detectados por técnicas estándares conocidas en la técnica. Los polipéptidos definidos por la SEQ ID NO: 6-10, por ejemplo, se describieron al clonar la expresión de secuencias de cepas de Bacillus que exhiben actividad' GAT, como es descrito en más detalle enseguida. La invención también incluye polipéptidos aislados o recombinantes que son codificados por un polinucleótido aislado o recombinante que comprende una secuencia de los péptidos que híbrida bajo condiciones severas sobre sustancialmente la longitud completa de una secuencia de nucleótidos seleccionado del grupo que consiste de SEQ ID NO: 516, 517, 518, 519, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 620, 622, 624, 626, 628, 630, 632, 634, 636, 638, 640, 642, 644, 646, 648, 650, 652, 654, 656, 658, 660, 662, 664, 666, 668, 670, 672, 674, 676, 678, 680, 682, 684, 686, 688, 690, 692, 694, 696, 698, 700, 702, 704, 706, 708, 710, 712, 714, 716, 718, 720, 722, 724, 726, 728, 730, 732, 734, 736, 738, 740, 742, 744, 746, 748, 750, 752, 754, 756, 758, 760, 762, 764, 768, 770, 772, 774, 776, 778, 780, ¦ 782, 784, 786, 788, 790, 792, 794, 796, 798, 800, 802, 804, 806, 808, 810, 812, 814, 816, 818, 820, 822 y 824, sus complementos, y secuencias de nucleótidos que codifican una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 621, 623, 625, 627, 629, 631, 633, 635, 637, 639, 641, 643, 645, 647, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 663, 665, 667, 669, 671, 673, 675, 677, 679 , 681, 683 , 685 , 687 , 689 , 691, 693 , 695 , 697 , 699 , 701, 703, 705, 707, 709, 711, 713, 715, 717, 719, 721, 723, 725, 727, 729, 731, 733, 735, 737, 739, 741, 743, 745, 747, 749, 751, 753, 755, 757, 759, 761, 763, 765, 767, 769, 771, 773, 775, 777, 779, 781, 783, 785, 787, 789, 791, 793, 795, 797, 799, 801, 803, 805, 807, 809, 811, 813, 815, 817, 819, 821, 823 y 825, incluyendo sus complementos . La invención también incluye polipéptidos aislados o recombinantes que son codificados por un polinucleótido aislado recombinante que comprende una secuencia de nucleótidos que híbrida bajo condiciones severas sobre sustancialmente la longitud completa de una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 832, 834, 836, 838, 840, 842, 844, 846, 848, 850, 852, 854, 856, 858, 860, 862, 864, 866, 868, 870, 872, 874, 876, 878, 880, 882, 884, 886, 888, 890, 892, 894, 896, 898, 900, 902, 924, 926, 908, 910, 912, 914, 916, 918, 920, 922, 924, 926, 928 y 930, sus complementos, y secuencias de nucleótidos que codifican una secuencia de aminoácidos seleccionado del grupo que consiste de SEQ ID NO: 833, 835, 837, 839, 841, 843, 845, 847 , 849 , 851, 853 , 855, 857 , 859, 861, 863 , 865, 867 , 869, 871, 873, 875, 877, 879, 881, 883, 885, 887, 889, 891, 893, 895, 897, 899, 901, 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970 , 971 y 972.

La invención además incluye cualquier polipéptido que tiene actividad GAT que es codificada por un fragmento de cualquiera de los polinucleótidos que codifican GAT descritos en la presente. La invención también proporciona fragmentos de polipéptidos GAT que pueden ser empalmados conjuntamente para formar un polipéptido GAR funcional. El empalme se puede realizar dn vitro o in vivo y pueden implicar un empalme cis-o trans (es decir, empalme intramolecular o intermolecular) . Los fragmentos mismos pueden tener, pero no necesitan tener, actividad GAT. Por ejemplo, dos o más segmentos de un polipéptido GAT se puede separar mediante inteinas; la remoción de la secuencia de interna mediante el empalme cis-resultan en un polipéptido GAT funcional. En otro ejemplo, un polipéptido GAT encriptado se puede expresar como dos o más fragmentos separados; el empalme trans de estos segmentos resulta en la recuperación de un polipéptido GAT funcional. Varios aspectos del empalme cis y trans, encripción del gen y la introducción de secuencias de intervención se describen en más detalle en la solicitudes de patentes norteamericanas Nos. de serie 09/517,933 y 09/710,686, ambas de las cuales son incorporadas por referencia en la presente en su totalidad. En general, la invención incluye cualquier polipéptido codificado por un polinucleótido GAT modificado derivado por mutación, recombinación de secuencia recursiva, y/o di ersificación de la secuencia de polinucleótido descritos en la presente. En algunos aspectos de la invención, un polipéptido GAT es modificado mediante sustituciones de aminoácidos individuales o múltiples, una supresión, una inserción, una combinación de uno o más de estos tipos de modificaciones. Las sustituciones pueden ser conservativas o no conservativas, pueden alterar la función o no pueden alterarla, y pueden adicionar nueva función. Las inserciones y supresiones pueden ser sustanciales, tal como el caso de un truncamiento de un fragmento sustancial de la secuencia, o la fusión de la secuencia adicional, ya sea internamente o en N o C terminal. En algunas modalidades de la invención, un polipéptido GAT es parte de una proteina de fusión que comprende una adición funcional tal como, por ejemplo, una señal de secreción, un péptido de tránsito de cloroplasto, una marca de purificación, o cualquiera de los otros numerosos funcionales que serán evidentes para la persona experta y que se describen en más detalle en otra parte en esta especificación. Los polipéptidos de la invención pueden contener uno o más aminoácidos modificados. La presencia de aminoácidos modificados puede ser ventajosa en, por ejemplo, (a) incrementar la vida media del polipéptido in vivo, (b) reducir o incrementar la antigenicidad del polipéptido, y (c) incrementar la estabilidad de almacenamiento del polipéptido. El (los) aminoácido (s) son modificados, por ejemplo, co-traduccionalmente o post-traduccionalmente durante la producción recombinante (por ejemplo, glicosilación de N-enlazada en las posiciones N-X-S/T durante la expresión en células mamiferas ) o modificado por medios sintéticos. Ejemplos no limitativos de un aminoácido modificado incluye un aminoácido glicosilado, un aminoácido sulfatado, un aminoácido prenilado (por ejemplo, farnesilado, geranilgeranilado ) un aminoácido acetilado, un aminoácido acilado, un aminoácido PEG-ilado, un aminoácido biotinilado, un aminoácido carboxilado, un aminoácido fosforilado y los similares. Las referencias adecuadas para guiar a un experto en la modificación de aminoácidos están repletas por toda la literatura. Protocolos de ejemplos se encuentran en Walter (1998) Protein Protocole on CD-ROM (Humana Press, Tocata, NJ) . Los métodos recombinantes para producir y aislar polipéptidos GAT de la invención se describen en la presente. Además de la producción recombinante, los polipéptidos se pueden producir mediante la síntesis de péptido directo usando técnicas en fase sólida (por ejemplo, Stewart y colaboradores (1969) Sol id-Phase Peptide Síntesis (WH Freeman Co, San Francisco) ; y Merrifield (1963) J. am. Chem. Soc. 85:2149-2154) . La síntesis de péptido se puede realizar usando técnicas manuales o mediante automatización. La síntesis automatizada se puede lograr, por ejemplo, usando Applied Biosystems 431A Peptide Synthesizer (Perkin Elmer, Fostr City, CA) de acuerdo con la instrucciones proporcionadas por el fabricante. Por ejemplo, las subsecuencias pueden ser químicamente sintetizadas por separado y combinadas usando métodos químicos para proporcionar polipéptidos GAT de longitud completa. Los péptidos también pueden ser ordenados a partir de una variedad de fuentes . En otro aspecto de la invención, un polipéptido GAT de la invención se usa para producir anticuerpos que tienen, por ejemplo, usos diagnósticos, por ejemplo, relacionados por la actividad, distribución y expresión de los polipéptidos GAT, por ejemplo, en varios tejidos de una planta transgénica . Los polipéptidos homólogos GAT para la inducción de anticuerpo no requieren actividad biológica; sin embargo, sin embargo, el polipéptido u oligopéptido debe ser antigénico. Los péptidos usados para inducir anticuerpos específicos pueden tener una secuencia de aminoácidos que consiste de por lo menos 10 aminoácidos, de preferencia por lo menos 15 o 20 aminoácidos. Los estiramientos cortos de un polipéptido GAT se pueden fusionar con otra proteína, tal como la hemocianina de lapa de punta, y un anticuerpo producido contra la molécula quimérica. Los métodos para producir anticuerpos policlonales y monoclonales son conocidos para aquellos expertos en la técnica, y muchos anticuerpos están disponibles. Ver, por ejemplo, Coligan (1991) Current Protocols in Immunology (Wiley/Greene, NY) ; Harlow y Lañe (1989 Antibodies : A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Press, NY) : Suites y colaboradores (eds.) Basic and Clinical Immunology, 4a. ed. (Lange Medical Publications, Los Altos, CA) y referencias citadas en las mismas; Goding (1986) Monoclonal Antibodies; Principies and Practice, 2a. ed. (Academic Press, New Cork, NY) ; y Kohler y Milstein (1975) Nature 256:495-497. Otras técnicas adecuadas para la preparación de anticuerpo incluye la selección de librería de anticuerpos recombinantes en vectores fago o similares. Ver, Huse y colaboradores (1989) Science 246:1275-1281; y Ward y colaboradores (1989) Nature 341:544-546. Los anticuerpos monoclonales y policlonales específicos y antisueros usualmente enlazarán con una KD de por lo menos aproximadamente 0.1 uM, de preferencia por lo menos aproximadamente 0.01 uM o mejor, y más típicamente de preferencia, 0.001 uM o mejor. Detalles adicionales del anticuerpo de producción y técnicas de ingeniería se pueden encontrar en Borreback, ed. (1995) Antíbody Engineering, 2a. ed. (Freeman and Company, NY) ; McCafferty y colaboradores (1996) Antibody Enrineering.

A Practical Approach (IRL at Oxford Press, Oxford, England) ; y Paul (1995) Antibody Engineering Protocols (Humana Press, Towata, NJ) . Variaciones de Secuencias Los polipéptidos GAT de la presente invención incluyen variaciones conservativamente modificadas de las secuencias divulgadas en la presente como SEQ ID NO: 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 621, 623, 625, 627, 629, 631, 633, 635, 637, 639, 641, 643, 645, 647, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 663, 665, 667, 669, 671, 673, 675, 677, 679, 681, 683, 685, 687, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 701, 703, 705, 707, 709, 711, 713, 715, 717, 719, 721, 723, 725, 727, 729, 731, 733, 735, 737, 739, 741, 743, 745, 747, 749, 751, 753, 755, 757, 759, 761, 763, 765, 767, 769, 771, 773, 775, 777, 779, 781, 783, 785, 787, 789, 791, 793, 795, 797, 799, 801, 803, 805, 807, 809, 811, 813, 815, 817, 819, 821, 823, 825, 833, 835, 837, 839, 841, 843, 845, 847, 849, 851, 853, 855, 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871, 873, 875, 877, 879, 881, 883, 885, 887, 889, 891, 893, 895, 897, 899, 901, 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971 y 972. Tales variaciones conservativamente modificadas comprenden sustituciones, adiciones o supresiones que alteran, adicionan o suprimen un aminoácido individual o un pequeño porcentaje de aminoácidos (típicamente menos de aproximadamente 5%, más típicamente menos de aproximadamente 4%, 2% o 1%) en cualquiera de la SEQ ID NO : 56É 3, 569, 570 , 571, 572 , 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 621, 623, 625, 627, 629, 631, 633, 635, 637, 639, 641, 643, 645, 647, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 663, 665, 667, 669, 671, 673, 675, 677, 679, 681, 683, 685, 687, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 701, 703, 705, 707, 709, 711, 713, 715, 717, 719, 721, 723, 725, 727, 729, 731, 733, 735, 737, 739, 741, 743, 745, 747, 749, 751, 753, 755, 757, 759, 761, 763, 765, 767, 769, 771, 773, 775, 777, 779, 781, 783, 785, 787, 789, 791, 793, 795, 797, 799, 801, 803, 805, 807, 809, 811, 813, 815, 817, 819, 821, 823, 825, 833, 835, 837, 839, 841, 843, 845, 847, 849, 851, 853, 855, 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871, 873, 875, 877, 879, 881, 883, 885, 887, 889, 891, 893, 895, 897, 899, 901, 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971 y 972.

Por ejemplo, una variación conservativamente modificada (por ejemplo, supresión) del aminoácido 146 del polipéptido identificado en la presente como SEQ ID NO: 6 que tiene una longitud de por lo menos 140 aminoácidos, de preferencia por lo menos 141 aminoácidos, más de preferencia por lo menos 144 aminoácidos, y todavía más de preferencia 145 aminoácidos, correspondiente a una supresión de menos que aproximadamente 5%, 4%, 2% a aproximadamente 1% o menos de la secuencia de polipéptido. Otro ejemplo de una variación conservativamente modificada (por ejemplo, una "variación conservativamente sustituida") del polipéptido identificado en la presente como SEQ ID NO: 6 contendrá "sustituciones conservativas", de acuerdo con los seis grupos de sustituciones expuestos en la Tabla 2, en hasta aproximadamente 7 residuos (es decir, menos de aproximadamente 5%) del polipéptido de 146 aminoácidos. Los homólogos de secuencias del polipéptido GAT de la invención, incluyendo secuencias conservativamente sustituidas, se puede presentar como parte de secuencias de polipéptido más grandes tal como ocurre en un polipéptido GAT, en una fusión GAT con una secuencia de señal, por ejemplo, una secuencia de dirección al cloroplasto, o la adición de uno o más dominios para la purificación de la proteína (por ejemplo, segmentos poli his, segmentos de marca FLAG, etc.) . En este último caso, los dominios funcionales adicionales tienen poco o nada de efecto en la actividad de la porción GAT de la proteína, o donde los dominios adicionales pueden ser removidos mediante etapas de procesamiento de post síntesis tal como el tratamiento con una proteasa. Definición de Polipéptidos por Inmunor eacti idad Debido a que los polipéptidos de la invención proporciona una nueva clase de enzimas con una actividad definida, es decir, la acetilación y acilación del glifosato, los polipéptidos también proporcionan nuevas características estructurales que pueden ser reconocidas, por ejemplo, en ensayos inmuno1ógicos . La generación de antisueros que específicamente enlazan los polipéptidos de la invención, así como los polipéptidos que son enlazados por tales antisueros, son una característica de la invención. La invención incluye polipéptidos GAT que específicamente enlazan a o que son específicamente inmunorreactivos con un anticuerpo o antisuero generado contra un inmunógeno que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de una o más de SEQ ID NO: 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618 , 619, 621, 623, 625, 627 , 629, 631, 633, 635, 637 , 639, 641, 643, 645, 647, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 663, 665, 667, 669, 671, 673, 675, 677, 679, 681, 683, 685, 687, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 701, 703, 705, 707, 709, 711, 713, 715, 717, 719, 721, 723, 725, 727, 729, 731, 733, 735, 737, 739, 741, 743, 745, 747, 749, 751, 753, 755, 757, 759, 761, 763, 765, 767, 769, 771, 773, 775, 777, 779, 781, 783, 785, 787, 789, 791, 793, 795, 797, 799, 801, 803, 805, 807, 809, 811, 813, 815, 817, 819, 821, 823, 825, 833, 835, 837, 839, 841, 843, 845, 847, 849, 851, 853, 855, 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871, 873, 875, 877, 879, 881, 883, 885, 887, 889, 891, 893, 895, 897, 899, 901, 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971 y 972. Para eliminar la reactividad cruzada con otros homólogos GAT, el anticuerpo o antisuero es extraído con proteínas relacionadas disponibles, tales como aquellas representadas por las proteínas o péptidos correspondientes a los números de acceso de GenBank disponibles hasta la fecha de presentación de esta solicitud, y e emplificados por CAA70664, Z99109 y Y09476. Donde el número de acceso corresponde a un ácido nucleico, un polipéptido codificado por el ácido nucleico es generado y usado para propósito de sustracción de anticuerpo/antisuero. La Figura 3 tabula la identidad relativa entre las secuencias GAT ejemplares y la secuencia más estrechamente relacionada disponible en GenBank, Yitl . La función de Yitl nativa todavía tiene que ser puesta en claro, pero la enzima se ha mostrado que posee actividad GAT detectable. En un formato típico, el inmunoensayo usa un antisuero policlonal que fue resaltado contra uno o más polipéptidos que comprenden uno o más de las secuencias correspondientes a uno o más de SEO ID NO: 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 621, 623, 625, 627, 629, 631, 633, 635, 637, 639, 641, 643, 645, 647, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 663, 665, 667, 669, 671, 673, 675, 677, 679, 681, 683, 685, 687, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 701, 703, 705, 707, 709, 711, 713, 715, 717, 719, 721, 723, 725, 727, 729, 731, 733, 735, 737, 739, 741, 743, 745, 747, 749, 751, 753, 755, 757, 759, 761, 763, 765, 767, 769, 771, 773, 775, 777, 779, 781, 783, 785, 787, 789, 791, 793, 795, 797, 799, 801, 803, 805, 807, 809, 811, 813, 815, 817, 819, 821, 823, 825, 833, 835, 837, 839, 841, 843, 845, 847, 849, 851, 853, 855, 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871, 873, 875, 877, 879, 881, 883, 885, 887, 889, 891, 893, 895, 897, 899, 901, 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971 y 972, o una subsecuencia sustancial de las mismas (es decir, por lo menos aproximadamente 30% de la secuencia de longitud completa proporcionada) . El conjunto completo de inmunogenos de polipéptidos potenciales derivados de SEQ ID NO: 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 621, 623, 625, 627, 629, 631, 633, 635, 637, 639, 641, 643, 645, 647, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 663, 665, 667, 669, 671, 673, 675, 677, 679, 681, 683, 685, 687, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 701, 703, 705, 707, 709, 711, 713, 715, 717, 719, 721, 723, 725, 727, 729, 731, 733, 735, 737, 739, 741, 743, 745, 747, 749, 751, 753, 755, 757, 759, 761, 763, 765, 767, 769, 771, 773, 775, 777, 779, 781, 783, 785, 787, 789, 791, 793, 795, 797, 799, 801, 803, 805, 807, 809, 811, 813, 815, 817, 819, 821, 823, 825, 833, 835, 837, 839, 841, 843, 845, 847, 849, 851, 853, 855, 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871, 873, 875, 877, 879, 881, 883, 885, 887, 889, 891, 893, 895, 897, 899, 901, 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971 y 972 son colectivamente referidos enseguida como "el (los) polipéptido (s) inmunogénico (s) " . El antisuero resultante opcionalmente seleccionado para tener baja reactividad cruzada contra otras secuencias relacionadas y cualquiera de tal reactividad utilizada es removida mediante inmunoabsorción con una o más de las secuencias relacionadas, antes del uso del antisuero policlonal en el inmunoensayo . Con el fin de producir antisuero para el uso de un inmunoensayo, uno o más del (los) polipéptido ( s ) inmunogéni o (s) es producido y purificado como es descrito en la presente. Por ejemplo, la proteína recombinante puede ser producida en una linea de células bacterianas. Una raza endogámica de ratón (usado en este ensayo debido a que los resultados son más reproductibles debido a la identidad genética virtual de los ratones) es inmunizada con el (los) polipéptido (s) inmunogénico (s) en combinación con un adyuvante estándar, tal como un adyuvante de Freund, usando un protocolo de inmunización de ratón estándar (ver, Harlow y Lañe (1988) Antibodies, A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Publciations, New Cork) , para una descripción estándar de generación de anticuerpo, formatos de inmunoensayo y condiciones que pueden ser utilizadas para determinar la inmunorreactividad específica. Alternativamente, uno o más polipéptidos sintéticos o recombinantes derivados de las secuencias divulgadas en la presente es conjugado a una proteína portadora y usado como un inmunogeno . Los sueros policlonales son recolectados y titulados contra el (los) polipéptido (s) inmunogénico (s ) en un inmunoensayo, por ejemplo, un inmunoensayo en fase sólida con una o más de las proteínas inmunogé icas inmovilizadas sobre un soporte sólido. Los antisueros policlonales con un título de 105 o más grande son seleccionados, acumulados y sustraídos con polipéptidos relacionados, por ejemplo, aquellos identificados de GENBANK como es mencionado, para producir antisueros policlonales titulados, acumulados, substraídos . Los antisueros policlonales, titulados, acumulados, sustraídos son probados para la reactividad cruzada contra los polipéptidos relacionados. De preferencia, por lo menos dos de los GATs inmunogénicos se utilizan en esta determinación, de preferencia en conjunción con por lo menos dos polipéptidos relacionados, para identificar anticuerpos que son específicamente enlazados, por el (los) polipéptido (s) inmunogénico (s) . En este ensayo comparativo, las condiciones de enlace discriminatorias son determinadas para los antisueros policlonales titulados, substraídos que resulta en por lo menos aproximadamente una relación de señal a ruido de 5-10 veces más alta para el enlace de los antisueros policlonales titulados a los polipéptidos GAT inmunogénicos como es comparado con el enlace a los polipéptidos relacionados. Esto es, la severidad de la reacción de enlace es ajustada mediante la adición de competidores no específicos tal como albúmina o leche seca sin grasa, o al ajustar las condiciones de sal, temperatura o los similares. Estas condiciones de enlace se usan en ensayos subsecuentes para determinar si un polipéptido de prueba es específicamente enlazado por los antisueros pcliclonales substraídos, acumulados. En particular, un polipéptido de prueba que muestra por lo menos una relación de señal a ruido de 2-5 veces más alta que el polipéptido de control bajo condiciones de enlace discriminatorias, y por lo menos aproximadamente una relación de señal a ruido de ½ como es comparado con el (los) polipéptido (s) inmunogénico ( s ) , comparte similitud estructural sustancial con el (los) polipéptido ( s ) inmunogénico (s) como es comparado con el GAT conocido, y es, por lo tanto, un polipéptido de la invención. En otro ejemplo, los inmunoensayos en el formato de enlace competitivo se utilizan para la detección de un polipéptido de prueba. Por e emplo, como es mencionado, los anticuerpos de reacción cruzada se remueven de la mezcla de antisueros acumulados mediante inmunoabsorción con los polipéptidos GAT de control. El (los) polipéptido (s) inmunogénico (s) luego se inmoviliza (n) a un suporte sólido que se expone a los antisueros acumulados substraídos. Las proteínas de prueba se adicionan al ensayo para competir para el enlace con los antisueros substraídos, acumulados. La habilidad de la(s) proteina(s) de prueba para competir por el enlace con los antisueros substraídos, acumulados como es comparado con la (s) proteína (s) inmovilizada (s) es comparado con la habilidad del (los) polipéptido (s) inmunogénico ( s ) adicionado al ensayo para competir por el enlace (el (los) polipéptido (s) inmunogénico (s) compiten efectivamente con el (los) polipéptido (s) inmunogénico (s) inmovilizado (s) para el enlace con los antisueros acumulados) . El por ciento de reactividad cruzada para las proteínas de prueba es calculado, usando cálculos estándares. En un ensayo en paralelo, la habilidad de las proteínas de control para competir por el enlace con los antisueros substraídos, acumulados es opcionalmente determinada como es comparada con la habilidad del (los) polipéptido (s) inmunogénico ( s ) para competir por enlace con los antisueros. Nuevamente, el por ciento de reactividad cruzada para los polipéptidos de control es calculado, usando cálculos estándares. Donde el por ciento de reactividad cruzada es de por lo menos 5-lGx más alto para los polipéptido de prueba, los polipéptidos de prueba se dicen que enlazan específicamente los antisueros substraídos, acumulados. En general, los antisueros inmunoabsorbídos y acumulados se pueden utilizar en un inmunoensayo de enlace competitivo como es descrito en la presente para comparar cualquier polipéptido de prueba con el (los) polipéptido (s) inmunogénico (s) . Con el fin de hacer esta comparación los dos polipéptidos son cada uno analizados en una amplia gama de concentraciones y la cantidad de cada polipéptido requerida para inhibir 50% de enlace de los antisueros substraídos a la proteína inmovilizada es determinada usando técnicas estándares. Si la cantidad del polipéptido de prueba requerida es menor que dos veces la cantidad del (los) polipéptido (s) ininunogénico (s) que es requerido, entonces el polipéptido de prueba se dice que enlaza específicamente un anticuerpo generado con el (los) polipéptido (s) inmunogénico (s) , siempre y cuando la cantidad sea por lo menos aproximadamente 5-10x más alta para un polipéptido de control . Como una determinación final de especificidad, los antisueros acumulados son opcionalmente de manera completa inmunosorbidos con el (los) polipéptido (s) inmunogénico (s) (antes que los polipéptido de control) hasta que poco o nada de enlace de los antisueros acumulados, substraídos al (los) polipéptido (s) inmunogénico (s) es detectable. Este antisuero completamente inmunosorbido luego es probado para la reactividad con el polipéptido de prueba. Si poco o nada de reactividad es observada (es decir no más de 2x la relación de señal a ruido observada para el enlace de los antisueros completamente inmunosorbidos al (los) polipéptido (s ) inmunogénico (s) ) , entonces el polipéptido de prueba es específicamente enlazado por el antisuero inducido por el (los) polipéptido (s) inmunogénico ( s ) . POLINUCLEOTIDOS DE GLIFOSATQ-N-ACETILTRANSFERASA En un aspecto, la invención proporciona una familia novedosa de polinucleótidos aislados o recombinantes referidos en la presente como "polinucleótidos de glifosato-N-acetiltransferasa" o "polinucleótidos GAT". Las secuencias de polinucleótidos GAT son caracterizadas por la habilidad para codificar un polipéptido GAT. En general, la invención incluye cualquier secuencia de nucleótidos que codifica cualquiera de los polipéptidos GAT novedosos descritos en la presente. En algunos aspectos de la invención, un polinucleótido GAT que codifica un polipéptido GAT con actividad GAT es preferido. En un aspecto, los polinucleótidos GAT comprenden formas recombinantes o aisladas de ácidos nucleicos que ocurren de manera natural aislados de un organismo, por ejemplo, una cepa bacteriana. Los polinucleótidos GAT ejemplares, por ejemplo, SEQ ID NO: 1-5, se descubrieron al clonar la expresión de secuencias de cepas de Bacillus que exhiben actividad GAT. Brevemente, una colección de aproximadamente 500 cepas de Bacillus Y Pseudomonas se clasificaron para la habilidad nativa al N-acetilato glifosato. Las cepas se cultivaron en LB durante la noche, se recolectaron por centrifugación, se permeabilizaron en tolueno diluido, y luego se lavaron y se resuspendieron en una mezcla de reacción que contiene solución reguladora, glifosato 5 mM y acetil-CoA 200 µ?. Las células se incubaron en la mezcla de reacción por entre 1 y 48 horas, tiempo en el cual un volumen igual de metanol se adicionó a la reacción. Las células luego se formaron en pelotillas mediante centrifugación y el sobrenadante se filtró antes del análisis mediante la espectrometría de masas de modo iónico de origen. El producto de la reacción fue positivamente identificado como N-acetilglifosato al comparar el perfil de espectrometría de masas de la mezcla de reacción con un estándar de N-acetilglifosato como es mostrado en la Figura 2. La detección de producto fue dependiente de la inclusión de ambos substratos (acetil CoA y glifosato) y fue suprimida por la denaturalización con calor de las células bacterianas . Los polinucleótidos GAT individuales luego se clonaron de las cepas identificadas mediante clasificación f ncional . El DNA geonómico se preparó y se digirió parcialmente con la enzima Sau3Al . Los fragmentos de aproximadamente 4 kb se clonaron en un vector de expresión de E. coli y se transformaron en E. coli electrocompetente . Clones individuales que exhiben actividad GAT se identificaron mediante espectrometría de masas después de una reacción como es descrito previamente excepto que el lavado de tolueno se reemplazó mediante la permeabilización con PMBS . Fragmentos genómicos se secuenciaron y se identificó la estructura de lectura abierta que codifica el polipéptido GAT putativo. La identidad del gen GAT se confirmó mediante la expresión de la estructura de lectura abierta en E. coli y la detección de altos niveles de N-acetilglifosato producido de las mezclas de reacción. En otro aspecto de la invención, los polinucleótidos GAT se producen al diversificar, por ejemplo, recombinar y/o n.utar uno o más polinucleótidos GAT que ocurren de manera natural, aislados o recombinantes . Como es descrito en más detalle en otra parte en la presente, frecuentemente es posible generar polinucleótidos GAT diversificados que codifican polipéptidos GAT con atributos funcionales superiores, por ejemplo, función catalítica incrementada, estabilidad incrementada o más alto nivel de expresión, que un polinucleótidos GAT usado como un substrato u origen en el proceso de di ersificación. Los polinucleótidos de la invención tienen una variedad de usos en, por ejemplo: producción recombinante (es decir, expresión) de los polipéptidos GAT de la invención; como transgenes (por ejemplo, para conferir resistencia a herbicida en plantas transgénicas) ; como marcadores seleccionables para la transformación y el mantenimiento de plásmido, como inmunogenos como sondas de diagnóstico para la presencia de ácidos nucleicos complementarios o parcialmente complementarios (incluyendo para la detección de ácidos nucleicos que codifican GAT natural) ; como substratos para generación de diversidad, por ejemplo, reacciones de recombinación o reacciones de mutación para producir nuevos y/o mejorados homólogos GAT y los similares. Es importante observar que ciertas utilidades especificas, sustanciales y creíbles de los polinucleótidos GAT no requieren que el polinucleótidos codifique un polipéptido con actividad GAT sustancial. Por ejemplo, los polinucleótidos GAT que no codifican enzimas activas pueden-ser fuentes valiosas de polinucleótidos parentales para el uso en procedimientos de diversificación para llegar a variantes de polinucleótidos GAT, o polinucleótidos no de GAT, con propiedades funcionales deseables (por ejemplo, alta kcat o kCat/Km, baja Km, alta estabilidad hacia el calor y otros factores ambientales, altas proporciones de transcripción o traducción, resistencia a la segmentación proteolítica, reducción de antigenicidad, etc.) . Por ejemplo, las secuencias de nucleótidos que codifican variantes de proteasa con poco o nada de actividad detectable se han usado como polinucleótidos parentales en experimentos de éntremezclamiento de DNA para producir progenie que codifica proteasas altamente activas (Ness y colaboradores, (1999) Nature Biotech. 17:893-96). Las secuencias de polinucleótidos producidas por los métodos de generación de diversidad o los métodos de recombinación de secuencia recursiva ("RSR") (por ejemplo, éntremezclamiento de DNA) son una característica de la invención. Los métodos de mutación y recombinación usando los ácidos nucleicos descritos en la presente son una característica de la invención. Por ejemplo, un método de la invención incluye recombinar recursivamente una o más secuencias de nucleótidos de la invención como es descrito en lo anterior y enseguida uno o más nucleótidos adicionales. Las etapas de recombinación son opcionalmente realizadas in vivo, ex vivo, in silico o in vitro. La generación de diversidad o recombinación de secuencia recursiva produce por lo menos una librería del polinucleótido GAT modificados rccombinar.tes . Los polipéptidos codificados por los miembros de esta librería son incluidos en la invención. También se contemplan usos de polinucleótidos, también referidos en la presente como oligonucleótidos, típicamente que tienen por lo menos 12 bases, de preferencia por lo menos 15, más de preferencia por lo menos 20, 30 o 50 o más bases, que hibridan bajo condiciones severas o altamente severas a una secuencia de polinucleótido GAT. Los polinucleótidos se pueden utilizar como sondas, cebadores, agentes de sentido y antisentido, y los similares, de acuerdo con los métodos como son mencionados en la presente . De acuerdo con la presente invención, los polinucleótidos GAT, incluyendo secuencias de nucleótidos que codifican polipéptidos GAT, fragmentos de polipéptidos GAT, proteínas de fusión relacionadas, o equivalentes funcionales de los mismos, se utilizan en moléculas de DNA recombi nantes que dirigen la expresión de los polipéptidos GAT en células hospederas apropiadas, tales como células bacterianas o de plantas. Debido a la degeneración inherente del código genético, otras secuencias de ácido nucleico que codifican sustanci lmente la misma o una secuencia de aminoácidos funcionalmente equivalente también puede ser usado para clonar y expresar los polinucleótidos GAT. La invención proporciona polinucleótidos GAT que codifican productos de transcripción y/o traducción que son subsecuentemente empalmados para finalmente producir polipéptidos GAT funcionales. El empalme se puede realizar in vitro o in vivo, y puede implicar el empalme cis o trans . El sustrato para empalme puede ser polinucleótidos (por ejemplo, transcriptos de R A) o polipéptidos. ün ejemplo de empalme cis de un polinucleótido es donde un intrón insertado en una secuencia de codificación es removido y las dos regiones de exón flanqueantes son empalmadas para generar una secuencia de codificación de polipéptido GAT. Un ejemplo de empalme trans sería donde un polinucleótido GAT es encriptado al separar la secuencia de codificación en dos o más fragmentos que pueden ser transcritos por separado y luego empalmados para formar la secuencia de codificación GAT de longitud completa. El uso de una secuencia incrementadora de empalme (que puede ser introducida en una construcción de la invención) puede facilitar el empalme ya sea en cis o trans . El empalme cis y trans de polipéptidos se describen en más detalle en otra parte en la presente y en las solicitudes de patentes norteamericanas números de serie 09/517,933 y 09/710, 686. Asi, algunos polinucleótidos GAT no directamente codifican un polipéptido GAT de longitud completa, sino más bien codifican un fragmento o fragmentos de un polipéptido GAT. Estos polinucleótidos GAT se pueden utilizar para expresar un polipéptido GAT funcional a través de un mecanismo que implica el empalme, donde el empalme puede ocurrir al nivel del polinucleótido (por e emplo, intrón/exón) y/o polipéptido (por ejemplo, inteina/exteina) . Este puede ser útil, por ejemplo, en controlar la expresión de la actividad GAT, puesto que el polipéptido GAT funcional solamente será expresado si todos los fragmentos requeridos se expresan en un medio ambiente que permite a los procesos de empalme generar un producto funcional. En otro ejemplo, la introducción de una o más secuencias de inserción en un polinucleótido GAT puede facilitar la recombinación con un polinucleótido de baja homología; el uso de un intrón o inteina para secuencia de inserción facilitan la remoción de la secuencia de intervención, restaurando de esta manera la función de la variante codificada. Como será entendido por aquellos expertos en la técnica, puede ser ventajoso modificar una secuencia de codificación para incrementar su expresión en un hospedero particular. El código genético es redundante con 64 condones posibles, pero la mayoría de los organismos preferencialmente usan un subconj unto de estos codones. Los codones que son utilizados más frecuentemente en una especie son llamados codones óptimos, y aquellos no utilizados muy frecuentemente son clasificados como codones raros o de bajo uso (ver, por ejemplo, Zhang y colaboradores, (1991) Gene 105:61-72). Los codones pueden ser sustituidos o reflejar la utilización del codón preferido del hospedero, un proceso alguna veces llamado "optimización de codón" o "control para la desviación del codón de la especie". Las secuencias de codificación optimizadas que contienen codones preferidos por un hospedero procariótico o eucariótico particular (ver también, Murray y colaboradores, (1989) Nucí. Acids Res. 17:477-508) se pueden preparar, por ejemplo, para incrementar la proporción de traducción o para producir transcriptos de RNA recombinantes que tienen propiedades deseables, tal como una vida media más larga, como es comparado con transcriptos producidos a partir de una secuencia no optimizada. Los codones de detención de traducción también pueden ser modificados para reflejar la preferencia del hospedero. Por ejemplo, los codones de detención preferidos para S. cerevisiae y mamíferos son UAA y UGA, respectivamente. El codón de detención preferido para plantas monocotiledóneas es UGA, mientras que los insectos y E. coli prefieren utilizar UAA como el codón de detención (Dalphin y colaboradores, (1996) Nucí. Acids Res. 24:216-218) . La metodología para utilizar una secuencia de nucleótidos para la expresión de una planta es proporcionada, por ejemplo, en la patente norteamericana No. 6,015,891 y las referencias citadas en la misma. Una modalidad de la invención incluye un polinucleótido GAT que tiene codones óptimos para la expresión en un hospedero relevante, por ejemplo, un hospedero de planta transgénica. Esto es particularmente deseable cuando un polinucleótido GAT de origen bacteriano es introducido en una planta transgénica, por ejemplo, para conferir resistencia a glifosato a la planta. Las secuencias de polinucleótido de la presente invención pueden ser diseñadas con el fin de alterar un polinucleótido GAT para una variedad de razones, incluyendo pero no limitadas a alteraciones que modifican la clonación, procesamiento y/o expresión del producto génico. Por ejemplo, las alteraciones pueden ser introducidas usando técnicas que son bien conocidas en el arte, por ejemplo, la mutagénesis dirigida al sitio, para insertar nuevos sitios de restricción, alterar los patrones de glieosilación, cambiar la preferencia del codón, introducir sitios de empalme, etc. Como es descrito en más detalle en la presente, los polinucleótidos de la invención incluyen secuencias que codifican polipéptidos GAT novedosos y secuencias complementarias a las secuencias de codificación, y fragmentos novedosos de secuencias de codificación y complementos de las mismas. Los polinucleótidos pueden estar en la forma de RNA o en la forma de DNA e incluyen mRNA, cR A, RNA sintético y DNA, DNA genómico y cDNA. Los polinucleótidos pueden ser de doble hebra o de una sola hebra, y si son de una sola hebra, puede ser la hebra de codificación o la hebra de no codificación (anti-sentido, complementaria) . Los polinucleótidos opcionalmente incluyen la secuencia de codificación de un polipéptido GAT (i) en aislamiento, (ii) en combinación con una secuencia de codificación adicional, para codificar, por ejemplo, una proteina de fusión, una pre-proteina, una prepro-proteina o los similares, (iii) en combinación con secuencias de no codificación tales como intrones o inteinas, elementos de control tal como un promotor, un incrementador, un elemento terminador o regiones no traducidas 5' y/o 3' efectivas para la expresión de la secuencia de codificación en un hospedero adecuado y/o (iv) en un vector o medio ambiente del hospedero en el cual el polinucleótidos GAT es un gen heterólogo. Las secuencias también se pueden encontrar en combinación con formulaciones de composición típicas de ácidos nucleicos, incluyendo la presencia de portadores, soluciones reguladoras, adyuvantes, excipientes y los similares. Los polinucleótidos y oligonucleótidos de la invención se pueden preparar mediante métodos en fase sólida estándares de acuerdo con métodos sintéticos conocidos . Típicamente, los fragmentos de hasta aproximadamente 100 bases son individualmente sintetizados, luego unidos (por ejemplo, mediante métodos de ligación enzimática o química, o métodos mediados por polimerasa) para formar esencialmente cualquier secuencia continua, deseada. Por ejemplo, los polinucleótidos y oligonucleótidos de la invención se pueden preparar mediante síntesis química usando, por ejemplo, el método de fosforamidita clásico descrito por Beaucage y colaboradores, (1981) Tetrahedron Letters 22:1859-69, o el método descrito por Matthes y colaboradores, (1984) EMBO J. 3:801-05, por ejemplo, como es típicamente practicado en métodos sintéticos automatizados. De acuerdo con el método de fosforamidita, los oligonucleótidos son sintetizados, por ejemplo, en un sintetizador de DNA automático, purificados, recocidos, ligados y clonados en vectores apropiados.

Además, esencialmente cualquier ácido nucleico se puede ordenar a la medida a partir de cualquiera de una variedad de fuentes comerciales, tal como The Midland Certified Reagent Company (mcrc@oligos.com), The Great American Gene Company (www.genco.com), ExpressGen Inc. (www.expressgen.com), Operon Technologies Inc. (Alameda, CA) y muchos otros. De manera similar, los péptidos y anticuerpos pueden ser ordenados a la medida a partir de cualquiera de una variedad de fuentes, tales como PeptidoGenic (pkim@ccnet.com), HTI Bio-products, Inc. (www.htibio.com), BMA Biomedicals Ltd (U.K.), Bio. Synthesis, Inc. y muchos otros . Los polinucleótidos también se pueden sintetizar por técnicas bien conocidas como es descrito en la literatura técnica. Ver, por ejemplo, Carruthers y colaboradores, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol . 47:411-418 (1982) y Adams y colaboradores, (1983) J. Am. Chem. Soc. 105:661. Los fragmentos de DNA de doble hebra luego se pueden obtener ya sea al sintetizar la hebra complementaria y al recocer las hebras conjuntamente bajo condiciones apropiadas o al adicionar la hebra complementaria usando polimerasa de DNA con una secuencia de cebador apropiado. Textos generales que describen técnicas biológicas moleculares útiles en la presente, incluyendo la mutagénesis, incluyen Berger y Kimmel, Guide to Molecular Cloning Techniques, Methods in Enzymology, Volumen 152 (Academic Press, Inc., San Diego, CA) ; Sambrook y colaboradores, (1989) Molecular Cloning-A Laboxatory Manual, 2- edición, Volúmenes 1-3 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, Nueva 5 York); y Ausubel y colaboradores, eds . (2000) Current Protocols in Molecular Biology (Greene Publishing Associates, Inc. y John Wiley & Sons, Inc.) . Ejemplos de técnicas suficientes para dirigir a personas expertas a través de métodos de amplificación in vitro, incluyendo la reacción en cadena de polimerasa (PCR) , la reacción en cadena de ligasa (LCR) , amplificación de ?ß-replicasa y otras técnicas mediadas por RNA polimerasa (por ejemplo, NASBA) se encuentran en Berger, Sambrook y Ausubel, asi como en Mullís y colaboradores, (1987) patente norteamericana No. 4,683,202; Innis y colaboradores, eds. (1990) PCR Protocols : A Guide to Methods and Applications (Academic Press Inc. San Diego, CA) ; Arnheim & Levinson (1 de Octubre de 1990) Chemical and Engineering News 36-47; The Journal Of NIH Research (1991)3:81-94; Kwoh y colaboradores, (1989) Proc. Nat'l.

Acad. Sci. EÜA 86:1173; Guatelli y colaboradores, (1990) Proc. Nat'l. Acad. Sci. EUA 87:1874; Lomell y colaboradores, (1989) Jr Clin, Chem, 35:1826; Landegren y colaboradores, (1988) Science 241: 1077-1080; Van Brunt (1990) Biotechnology 8:291-294; Wu y Wallace (1989) Gene 4:560; Barringer y colaboradores, (1990) Gene 89:117 y Sooknanan y Malek (1995) Bíotechnology 13:563-564. Métodos mejorados de clonación de ácidos nucleicos amplificados in vltro se describen en Wallace y colaboradores, patente norteamericana No. 5,426,039. Métodos mejorados para amplificar ácidos nucleicos grandes mediante PCR se resumen en Cheng y colaboradores, (1994) Nature 369:684-685 y la referencias citadas en la misma, en las cuales los amplicones de PCR de hasta 40 kb son generados. Un experto apreciará que esencialmente cualquier RNA puede ser convertido en un DNA de doble hebra adecuado para digestión de restricción, expansión . por PCR y secuenciación usando la transcriptasa inversa y una polimerasa. Ver, Ausbel, Sambrook y Berger, all supra. Un aspecto de la invención proporciona un polinucleótidos aislado o recombinante seleccionado del grupo que consiste de SEQ ID NO: 516, 517, 518, 519, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 620, 622, 624, 626, 628, 630, 632, 634, 636, 638, 640, 642, 644, 646, 648, 650, 652, 654, 656, 658, 660, 662, 664, 666, 668, 670, 672, 674, 676, 6787 680, 682, 684, 686, 688, 690, 692, 694, 696, 698, 700, 702, 704, 706, 708, 710, 712, 714, 716, 718, 720, 722, 724, 726, 728, 730, 732, 734, 736, 738, 740, 742, 744, 746, 748, 750, 752, 754, 756, 758, 760, 762, 764, 768, 770, 772, 774, 776, 778, 780, 782, 784, 786, 788, 790, 792, 794, 796, 798, 800, 802, 804, 806, 808, 810 , 812, 814, 816, 818, 820, 822, 824, 832, 834, 836, 838, 840 , 842, 844, 846, 848, 850, 852, 854, 856, 858, 860, 862, 864 , 866, 868, 870, 872, 874, 876, 878, 880, 882, 884, 886, 888 , 890, 892, 894, 896, 898, 900, 902, 904, 906, 908, 910, 912 , 914, 916, 918, 920, 922, 924, 926, 928, 930, 932, 933, 934 , 935, 936, 937, 938, 939, 940, 941, 942, 943, 944, 945, 947, 949, 951 y 952. Los polinucleótidos preferidos de la presente invención incluyen una secuencia de polinucleótido aislado recombinante que codifica una secuencia de aminoácidos que puede ser óptimamente alineada con una secuencia de aminoácidos de referencia seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 300, 445 y 457 para generar un registro de similitud de por lo menos 460 usando la matriz BLOSUM62 , una sanción de existencia de espacio de 11 y una sanción de extensión de espacio de 1, en donde uno o más de las siguientes posiciones conforman a las siguientes restricciones: (i) en las posiciones 18 y 38, hay un residuo de aminoácido Z5; (ii) en la posición 62, hay un residuo de aminoácido Zl; (iii) en la posición 124, hay un residuo de aminoácido Z6; y (iv) en la posición 144, hay un residuo de aminoácido Z2, en donde: Zl es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; Z2 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z5 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P, y además en donde los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones, por lo menos 90% conforman a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 2, 4, 15, 19, 26, 28, 31, 45, 51, 54, 86, 90, 91, 97, 103, 105, 106, 114, 123, 129, 139 y/o 145 el residuo de aminoácido es Bl ; y (b) en las posiciones 3, 5, 8, 10, 11, 14, 17, 24, 27, 32, 37, 47, 48, 49, 52, 57, 58, 61, 63, 68, 69, 79, 80, 82, 33, 89, 92, 100, 101, 104, 119, 120, 125, 126, 128, 131 y/o 143 el residuo de aminoácido es B2; en donde Bl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M, F, W, Y y V; y B2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, N, D, C, Q, E, G, H, K, P, S y T. Cuando se utiliza para especificar un aminoácido o un residuo de aminoácido, las designaciones de una sola letra A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W y Y tienen su significado estándar como es utilizado en la técnica y como es proporcionado en la Tabla 1 en la presente. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos tal que cuando la secuencia es óptimamente alineada con una secuencia de aminoácidos de referencia seleccionada del grupo que consiste de SEO ID NO: 300, 445, y 457 para generar un registro de similitud de por lo menos 460 usando la matriz BLOSÜM62, una sanción de existencia de espacio de 11 y una sanción de extensión de espacio de 1, una o más de las siguientes posiciones conforman a las siguientes restricciones: (i) en las posiciones 18 y 38, hay un residuo de aminoácido Z5; (ii) en la posición 62, hay un residuo de aminoácido Zl; (iii) en la posición 124, hay un residuo de aminoácido Z6; y (iv) en la posición 144, hay un residuo de aminoácido Z2, en donde: Zl es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; Z2 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z5 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P y además en donde los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones, por lo menos 80% conforman a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 2, 4, 15, 19, 26, 28, 51, 54, 86, 90, 91, 97, 103, 105, 106, 114, 129, 139 y/o 145 el residuo de aminoácido es Zl; (b) en las posiciones 31 y/o 45 el residuo de aminoácido es Z2; (c) en la posición 8 el residuo de aminoácido es Z3; (d) en la posición 89 el residuo de aminoácido es Z3 o Z6; (e) en las posiciones 82, 92, 101 y/o 120 el residuo de aminoácido es Z ; (f) en las posiciones 3, 11, 27 y/o 79 el residuo de aminoácido es Z5; (g) en la posición 18 el residuo de aminoácido es Z4 o Z5; (h) en la posición 123 el residuo de aminoácido es Zl o Z2; (i) en las posiciones 12, 33, 35, 39, 53, 59, 112, 132, 135, 140 y/o 146 el residuo de aminoácido es Zl o Z3; (j) en la posición 30 el residuo de aminoácido es Zl; (k) en la posición 6 el residuo de aminoácido es Z6; (1) en la posición 81 el residuo de aminoácido es Z2 o Z4; (m) en la posición 113 el residuo de aminoácido es Z3; (n) en la posición 138 el residuo de aminoácido es Z4; (o) en la posición 142 el residuo de aminoácido es Z2; (p) en las posiciones 57 y/o 126 el residuo de aminoácido es Z3 o Z4; (q) en la posición 5, 17 y 61 el residuo de aminoácido es Z4; (r) en la posición 24 el residuo de aminoácido es Z3; (s) en la posición 104 el residuo de aminoácido es Z5; (t) en las posiciones 52 y/o 69 el residuo de aminoácido es Z3; (u) en las posiciones 14 y/o 119 el residuo de aminoácido es Z5; (v) en las posiciones 10, 32, 63 y/o 83 el residuo de aminoácido es Z5; (w) en las posiciones 48 y/o 80 el residuo de aminoácido es Z6; (x) en la posición 40 el residuo de aminoácido es Zl o Z2; (y) en la posición 96 el residuo de aminoácido es Z3 o Z5; (z) en la posición 65 el residuo de aminoácido es Z3, Z4 o Z6; (aa) en las posiciones 84 y/o 115 el residuo de aminoácido es Z3; (ab) en la posición 93 el residuo de aminoácido es Z4; (ac) en la posición 130 el residuo de aminoácido es Z2; (ad) en la posición 58 el residuo de aminoácido es Z3, Z4 o Z6; (ae) en la posición 47 el residuo de aminoácido es Z4 o Z6; (af) en las posiciones 49 y/o 100 el residuo de aminoácido es Z3 o Z4; (ag) en la posición 68 el residuo de aminoácido es Z4 o Z5; (ah) en la posición 143 el residuo de aminoácido es Z4 (ai) en la posición 131 el residuo de aminoácido es Z5; (aj) en las posiciones 125 y/o 128 el residuo de aminoácido es Z5; (ak) en la posición 67 el residuo de aminoácido es Z3 o Z4; (al) en la posición 60 el residuo de aminoácido es Z5; y (am) en la posición 37 el residuo de aminoácido es Z4 o Z6; en donde Zl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; Z2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z3 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de N, Q, S y T Z4 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, H y K; Z5 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos que además comprende los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponden a las posiciones especificadas en (a)-(am), por lo menos 90¾ conforman a las restricciones de residuo de aminoácido especificadas en (a)-(am).

Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes de la invención codifican una secuencia de aminoácidos tal que cuando la secuencia es óptimamente alineada con la SEQ ID NO: 300, 445 o 457, por lo menos 90% de los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos conforman a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 1, 7, 9, 13, 20, 36, 42, 46, 50, 56, 64, 70, 72, 75, 76, 78, 94, 98, 107, 110, 117, 118, 121 y/o 141 el residuo de aminoácido es Bl ; y (b) en las posiciones 16, 21, 22, 23, 25, 29, 34, 41, 43, 44, 55, 66, 71, 73, 74, 77, 85, 87, 88, 95, 99, 102, 108, 109, 111, 116, 122, 127, 133, 134, 136 y/o 137 el residuo de aminoácido es B2; en donde Bl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M, F, W, Y y V; y B2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, N, D, C, Q, E, G, H, K, P, S y T. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos tal que cuando la secuencia es óptimamente alineada con la SEQ ID NO: 300, 445 o 457, por lo menos 90 ;r los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos conforman a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 1, 7, 9, 13, 20, 42, 46, 50, 56, 64, 70, 72, 75, 76, 78, 94, 98, 107, 110, 117, 118, 121 y/o 141 el residuo de aminoácido es Bl; y (b) en las posiciones 16, 21, 22, 23, 25, 29, 34, 36, 41, 43, 44, 55, 66, 71, 73, 74, 77, 85, 87, 88, 95, 99, 102, 108, 109, 111, 116, 122, 127, 133, 134, 136 y/o 137 el residuo de aminoácido es B2; en donde Bl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M, F, W, Y y V; y B2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, N, D, C, Q, E, G, H, K, P, S y T. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos tal que cuando las secuencias óptimamente alineadas con la SEO ID NO: 300, 445 o 457, por lo menos 90 los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos conforman a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 1, 7, 9, 20, 42, 50, 72, 75, 76, 78, 94, 98, 110, 121 y/o 141 el residuo de aminoácido es Zl; (b) en las posiciones 13, 46, 56, 70, 107, 117 y/o 118 el residuo de aminoácido es Z2; (c) en las posiciones 23, 55, 71, 77, 88 y/o 109 el residuo de aminoácido es Z3; (d) en las posiciones 16, 21, 41, 73, 85, 99 y/o 111 el residuo de aminoácido es Z4 ; (e) en las posiciones 34 y/o 95 el residuo de aminoácido es Z5; (f) en la posición 22, 25, 29, 43, 44, 66, 74, 87, 102, 108, 116, 122, 127, 133, 134, 136 y/o 137 el residuo de aminoácido es Z6; en donde Zl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; Z2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z3 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de N, Q, S y T; Z4 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, H y ; Z5 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E y Z6 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos que además comprende en la posición 36 un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de Zl y Z3. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifica una secuencia de aminoácidos que además comprende en la posición 64 un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de Zl y Z2. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos tal que cuando las secuencias óptimamente alineada con la SEQ ID NO: 300, 445 o 457, por lo menos 80% de los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos conforman a las siguientes restricciones: (a) en la posición 2 el residuo de aminoácido es I o L; (b) en la posición 3 el residuo de aminoácido es E; (c) en la posición 4 el residuo de aminoácido es V o I; (d) en la posición 5 el residuo de aminoácido es K; (e) en la posición 6 el residuo de aminoácido es P; (f) en la posición 8 el residuo de aminoácido es N; (g) en la posición 10 el residuo de aminoácido es E; (h) en la posición 11 el residuo de aminoácido es D o E; (i) en la posición 12 el residuo de aminoácido es T; (j) en la posición 14 el residuo de aminoácido es E o D; (k) en la posición 15 el residuo de aminoácido es L; (1) en la posición 17 el residuo de aminoácido es H; (m) en la posición 18 el residuo de aminoácido es R, E o K ; (n; ) en la posición 19 el residuo de aminoácido es I o V; (o) en la posición 24 el residuo de aminoácido es Q; (P) en la posición 26 el residuo de aminoácido es M, L, V o I; (q) en la posición 27 el residuo de aminoácido es E ; 1r) en la posición 28 el residuo de amino cido es A o V; (s) en la posición 30 el residuo de aminoácido es M; (t) en la posición 31 el residuo de aminoácido es Y 0 F; (u) en la posición 32 el residuo de aminoácido es E 0 D; (v) en la posición 33 el residuo de aminoácido es T o S; (w) en la posición 35 el residuo de aminoácido es L; (x) en la posición 37 el residuo de aminoácido es R, G, E o Q; (y) en la posición 39 el residuo de aminoácido es A o S; (z; ) en la posición 40 el residuo de aminoácido es F o L; (aa) en la posición 45 el residuo de aminoácido es Y o F; (ab) en la posición 47 el residuo de aminoácido es R o G; (ac) en la posición 48 el residuo de aminoácido es G; (ad) ' en la posición 49 el residuo de aminoácido es K, R, o Q; (ae) en la posición 51 el residuo de aminoácido es I o V; (af) en la posición 52 el residuo de aminoácido es S; (ag) en la posición 53 el residuo de aminoácido es I o V; (ah) en la posición 54 el residuo de aminoácido es A; (ai) en la posición 57 el residuo de aminoácido es H o N; (aj) en la posición 58 el residuo de aminoácido es Q, K, R o P; (al) en la posición 59 el residuo de aminoácido es A; (al) en la posición 60 el residuo de aminoácido es E; (am) en la posición 61 el residuo de aminoácido es H o R; (an) en la posición 63 el residuo de aminoácido es E o D; (ao) en la posición 65 el residuo de aminoácido es E, P o Q; (ap! ) en la posición 67 el residuo de aminoácido es Q o R; (aq) en la posición 68 el residuo de aminoácido es K o E (ar) en la posición 69 el residuo de aminoácido es Q; (as) en la posición 79 el residuo de aminoácido es E; (at) en la posición 80 el residuo de aminoácido es G; (au) en la posición 81 el residuo de aminoácido es Y/ H o F; (av; ) en la posición 82 el residuo de aminoácido es R; (aw) en la posición 83 el residuo de aminoácido es E o D; (ax) en la posición 84 el residuo de aminoácido es Q; (ay) en la posición 86 el residuo de aminoácido es A; (az) en la posición 89 el residuo de aminoácido es G, T o S; (ba; ) en la posición 90 el residuo de aminoácido es L; (bb) en la posición 91 el residuo de aminoácido es L, I o V; (be) en la posición 92 el residuo de aminoácido es R o K; (bd) en la posición 93 el residuo de aminoácido es H; (be) en la posición 96 el residuo de aminoácido es E o Q; (bf) en la posición 97 el residuo de aminoácido es i; (bg) en la posición 100 el residuo de aminoácido es K o N; (bh) en la posición 101 el residuo de aminoácido es K o R; (bi) en la posición 103 el residuo de aminoácido es A o V; (bj ) en la posición 104 el residuo de aminoácido es D; (bk) en la posición 105 el residuo de aminoácido es : M, L o I; (bl) en la posición 106 el residuo de aminoácido es L; (bm) en la posición 112 el residuo de aminoácido es T o A; (bn) en la posición 113 el residuo de aminoácido es S o T; (bo) en la posición 114 el residuo de aminoácido es A; (bp) en la posición 115 el residuo de aminoácido es S; (bq) en la posición 119 el residuo de aminoácido es K o R; (br) en la posición 120 el residuo de aminoácido es K o R; (bs) en la posición 123 el residuo de aminoácido es F o L; (bt) en la posición 125 el residuo de aminoácido es E; (bu) en la posición 126 el residuo de aminoácido es Q o H; (bv) en la posición 128 el residuo de aminoácido es E o D; (bw) en la posición 129 el residuo de aminoácido es V o I; (bx) en la posición 130 el residuo de aminoácido es F; (by) en la posición 131 el residuo de aminoácido es D o E; (bx) en la posición 132 el residuo de aminoácido es T; (ca) en la posición 135 el residuo de aminoácido es V; (cb) en la posición 138 el residuo de aminoácido es H; (ce) en la posición 139 el residuo de aminoácido es I; (cd) en la posición 140 el residuo de aminoácido es L o M; (ce) en la posición 142 el residuo de aminoácido es Y; (cf) en la posición 143 el residuo de aminoácido es K o R (cg) en la posición 145 el residuo de aminoácido es L o 1; y (ch) en la posición 146 el residuo de aminoácido es T. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos tal que cuando la secuencia es óptimamente alineada con la SEQ ID NO: 300, 445 o 457, por lo menos 90% los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos conforman a las restricciones de residuo de aminoácido especificadas en (a) - (ch) anteriormente. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos que cuando se alinea óptimamente con una secuencia de aminoácidos de referencia seleccionado del grupo que consiste de SEQ ID NO: 300, 445 y 457 para generar un registro de similitud de por lo menos 460 usando la matriz BLOSUM62, una sanción de existencia de espacio de 11 y una sanción de extensión de espacio de 1, uno o más de las siguientes posiciones conforman a las siguientes restricciones: (i) en las posiciones 18 y 38, hay un residuo de aminoácido Z5; (ii) en la posición 62, hay un residuo de aminoácido Zl; (iii) en la posición 124, hay un residuo de aminoácido 6; y (iv) en la posición 144, hay un residuo de aminoácido 7,2, en donde: Zl es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; Z2 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z5 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P, además en donde los residuos de aminoácido en las secuencias de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones, por lo menos 80% conforman a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 9, 76 94 y 110 el residuo de aminoácido es A; (b) en las posiciones 29 y 108 el residuo de aminoácido es C; (c) en la posición 34 el residuo de aminoácido es D; (d) en la posición 95 el residuo de aminoácido es E; (e) en la posición 56 el residuo de aminoácido es F; (f) en las posiciones 43, 44, 66, 74, 87, 102, 116, 122, 127 y 136 el residuo de aminoácido es G; (g) en la posición 41 el residuo de aminoácido es H; (h) en la posición 7 el residuo de aminoácido es I; (i) en la posición 85 el residuo de aminoácido es K; ( ) en las posiciones 20, 42, 50, 78 y 121 el residuo de aminoácido es L (k) en las posiciones 1 y 141 el residuo de aminoácido es M; (1) en las posiciones 23 y 109 el residuo de aminoácido es N; (m) en las posiciones 22, 25, 133, 134 y 137 el residuo de aminoácido es P; (n) en la posición 71 el residuo de aminoácido es Q; (o) en las posiciones 16, 21, 73, 99 y 111 el residuo de aminoácido es R; (p) en la posición 55 el residuo de aminoácido es S; (q) en la posición 77 el residuo de aminoácido es T; (r) en la posición 107 el residuo de aminoácido es W; y (s) en la posición 13, 46, 70 y 118 el residuo de aminoácido es Y. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos que conforman por lo menos una de las siguientes restricciones adicionales: (a) en la posición 36 el residuo de aminoácido es M, L o T; (b) en la posición 72 el residuo de aminoácido es L o I; (c) en la posición 75 el residuo de aminoácido es M or V; (d) en la posición 64 el residuo de aminoácido es L, I o F; (e) en la posición 88 el residuo de aminoácido es T o S; (f) en la posición 117 el residuo de aminoácido es Y o F. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos en la cual por lo menos una de las siguientes condiciones adicionales es cumplida: (a) en la posición 14 el residuo de aminoácido es D; (b) en la posición 18i el residuo de aminoácido es E; (c) en la posición 26 el residuo de aminoácido es M o V; (e) en la posición 30 el residuo de aminoácido es I; (f:l en la posición 32 el residuo de aminoácido es D; (g:i en la posición 36 el residuo de aminoácido es M o T; (i) en la posición 37 el residuo de aminoácido es C; (j: ) en la posición 38 el residuo de aminoácido es D; (j: ) en la posición 53 el residuo de aminoácido es V; ( ) en la posición 58 el residuo de aminoácido es R; (1) en la posición 61 el residuo de aminoácido es R; (m) en la posición 62 el residuo de aminoácido es L; (n) en la posición 64 el residuo de aminoácido es I o F; (o) en la posición' 65 el residuo de aminoácido es P; (P) en la posición 72 el residuo de aminoácido es i; (q) en la posición 75 el residuo de aminoácido es V; (r) en la posición 88 el residuo de aminoácido es T; (s) en la posición 89 el residuo de aminoácido es G; (t) en la posición 91 el residuo de aminoácido es L; (u) en la posición 98 el residuo de aminoácido es i; (v) en la posición 105 el residuo de aminoácido es i; ( ) en la posición 112 el residuo de aminoácido es A; (x) en la posición 124 el residuo de aminoácido es G o C; (y) en la posición 128 el residuo de aminoácido es D; (z) en la posición 140 el residuo de aminoácido es M; (aa) en la posición 143 el residuo de aminoácido es R; y (ab) en la posición 144 el residuo de aminoácido es . Algunos polinucleotidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos en donde, de los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las posiciones especificadas en (a) hasta (ab) como es descrito en lo anterior, por lo menos 80% conforman restricciones de residuo de aminoácidos especificadas en (a) hasta (ab) .

Algunos polinucleótidos aislados o recorabinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos que conforma a por lo menos una de las siguientes restricciones adicionales: (a) en la posición 41 el residuo de aminoácido es H; (b) en la posición 138 el residuo de aminoácido es H; (c) en la posición 34 el residuo de aminoácido es N; y (d) en la posición 55 el residuo de aminoácido es S. Algunos polinucleótidos aislados o recorabinantes preferidos de la invención son seleccionados del grupo que consiste de: (a) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 577; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la 3EQ ID NO: 578; (c) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 621; (d) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 579; (e) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 602; (f) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95 =*' idéntica a la SEQ ID NO: 697; (g) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 721; (h) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 613; (i) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 89% idéntica a la SEQ ID NO: 677; ( ) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96' idéntica a la SEQ ID NO: 584; (k) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 707; (1) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 616; (m) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 612; y (n) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 590. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención son seleccionados del grupo que consiste de: (a) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 577; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 578; (c) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 621/ (d) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 579; (e) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 602; (f) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95% idéntica a la SEQ ID NO: 697; (g) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 721; (h) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 613; (i) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 89% idéntica a la SEQ ID NO: 677; (j) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96¾ idéntica a la SEQ ID NO: 584; (k) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 707; (1) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 616; (m) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 612; y (n) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98¾ idéntica a la SEQ ID NO: 590, en donde la s siguientes posiciones conforman a las siguientes restricciones: (i) en las posiciones 18 y 38, hay un residuo de aminoácido Z5; (ii) en la posición 62, hay un residuo de aminoácido Zl; (iii) en la posición 124, hay un residuo de aminoácido Z6; y (iv) en la posición 144, hay un residuo de aminoácido Z2, en donde: Zl es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, 1, L, M V; Z2 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z5 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E ; y Z6 es un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención son seleccionados del grupo que consiste de: (a) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 577; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97¿. idéntica a la SEQ ID NO: 578; (c) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 621; (d) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 579; (e) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 602; (f) uña secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 951 idéntica a la SEQ ID NO: 697; (g) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 721; (h) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 613; (i) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 89% idéntica a la SEQ ID NO: 677; (j) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96. idéntica a la SEO ID NO: 584; (k) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 707; (1) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 616; (m) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 612; y (n) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98: idéntica a la SEQ ID NO: 590, además en donde los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones, por lo menos 90% conforman a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 2, 4, 15, 19, 26, 28 , 31, 45, 51, 54 , 86, 90, 91, 97, 103, 105, 106, 114, 123, 129, 139 y/o 145 el residuo de aminoácido es Bl; y (b) en las posiciones 3, 5, 8, 10, 11, 14, 17, 24, 27, 32, 37, 47, 48, 49, 52, 57, 58, 61, 63, 68, 69, 79, 80, 82, 83, 89, 92, 100, 101, 104, 119, 120, 125, 126, 128, 131 y/o 143 el residuo de aminoácido es B2; en donde Bl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M, F, W, Y y V; y B2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, N, D, C, Q, E, G, H, K, P, S y T. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención son seleccionados del grupo que consiste de: (a) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 577; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97-, idéntica a la SEQ ID NO: 578; (c) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 621; (d) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 579; (e) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 602; (f) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95¾ idéntica a la SEQ ID NO: 697; (g) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 721/ (h) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 613; (i) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 89% idéntica a la SEQ ID NO: 677; (j) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 584; (k) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 707; (1) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 616; (m) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEO ID NO: 612; and (n) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEO ID NO: 590 y además en donde los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones, por lo menos 80% conforman a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 2, 4, 15, 19, 26, 28, 51, 54, 86, 90, 91, 97, 103, 105, 106, 114, 129, 139 y/o 145 el residuo de aminoácido es Zl; (b) en las posiciones 31 y/o 45 el residuo de aminoácido es Z2; (c) en la posición 8 el residuo de aminoácido es Z3; (d) en la posición 89 el residuo de aminoácido es Z3 o Z6; (e) en las posiciones 82, 92, 101 y/o 120 el residuo de aminoácido es Z4; (f) en las posiciones 3,11, 27 y/o 79 el residuo de aminoácido es Z5; (g) en la posición 18 el residuo de aminoácido es Z4 o Z5; (h) en la posición 123 el residuo de aminoácido es Zl o Z2; (i) en las posiciones 12, 33, 35, 39, 53, 59, 112, 132, 135, 140 y/o 146 el residuo de aminoácido es Zl o Z3; (j) en la posición 30 el residuo de aminoácido es Zl; (k) en la posición 6 el residuo de aminoácido es Z6; (1) en la posición 81 el residuo de aminoácido es Z2 o Z ; (m) en la posición 113 el residuo de aminoácido es Z3; (n) en la posición 138 el residuo de aminoácido es Z4 ; (o) en la posición 142 el residuo de aminoácido es Z2 ; (p) en las posiciones 57 y/o 126 el residuo de aminoácido es Z3 o Z4; (q) en la posición 5, 17 y 61 el residuo de aminoácido es Z4 ; (r) en la posición 24 el residuo de aminoácido es Z3; (s) en la posición 104 el residuo de aminoácido es Z5; (t) en las posiciones 52 y/o 69 el residuo de aminoácido es Z3; (u) en las posiciones 14 y/o 119 el residuo de aminoácido es Z5; (v) en las posiciones 10, 32, 63 y/o 83 el residuo de aminoácido es Z5; ( ) en las posiciones 48 y/o 80 el residuo de aminoácido es Z6; (x) en la posición 40 el residuo de aminoácido es Zl o Z2 ; (y) en la posición 96 el residuo de aminoácido es Z3 o Z5; (z) en la posición 65 el residuo de aminoácido es 7,3, Z4 o Z6; (aa) en las posiciones 84 y/o 115 el residuo de aminoácido es Z3; (ab) en la posición 93 el residuo de aminoácido es Z4; (ac) en la posición 130 el residuo de aminoácido es Z2; (ad) en la posición 58 el residuo de aminoácido es Z3, Z4 o Z6; (ae) en la posición 47 el residuo de aminoácido es Z4 o Z6; (af) en las posiciones 49 y/o 100 el residuo de aminoácido es Z3 o Z4; (ag) en la posición 68 el residuo de aminoácido es 7,4 o Z5; (ah) en la posición 143 el residuo de aminoácido es Z4; (ai) en la posición 131 el residuo de aminoácido es Z5; (aj) en las posiciones 125 y/o 128 el residuo de aminoácido es Z5; (ak) en la posición 67 el residuo de aminoácido es Z3 o Z4; (al) en la posición 60 el residuo de aminoácido es Z5; y (am) en la posición 37 el residuo de aminoácido es Z4 o Z6; en donde Zl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; Z2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z3 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de N, Q, S y T; Z4 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, H y K; Z5 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G, y P. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos además en donde los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las posiciones especificadas en (a)-(am), por lo menos 90% conforman a las restricciones de residuo de aminoácidos especificadas en (a)- (am) . Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifica una secuencia de aminoácidos en la cual los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones, por lo menos 90% conforman a las siguientes restricciones adicionales: (a) e las posiciones 1, 7, 9, 13, 20, 36, 42, 46, 50, 56, 64, 70, 72, 75, 76, 78, 94, 98, 107, 110, 117, 118, 121 y/o 141 el residuo de aminoácido es Bl; y (b) en las posiciones 16, 21, 22, 23, 25, 29, 34, 41, 43, 44, 55, 66, 71, 73, 74, 77, 85, 87, 88, 95, 99, 102, 108, 109, 111, 116, 122, 127, 133, 134, 136 y/o 137 el residuo de aminoácido es B2; en donde Bl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M, F, W, Y y V; y B2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, N, D, C, Q, E, G, H, K, P, S y T. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifica una secuencia de aminoácidos tal que cuando las secuencias óptimamente alineada con la SEQ ID NO: 300, 445 o 457, por lo menos 90 los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos conforman a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 1, 7, 9, 13, 20, 42, 46, 50, 56, 64, 70, 72, 75, 76, 78, 94, 98, 107, 110, 117, 118, 121 y/o 141 el residuo de aminoácido es Bl; y (b) en las posiciones 16, 21, 22, 23, 25, 29, 34, 36, 41, 43, 44, 55, 66, 71, 73, 74, 77, 85, 87, 88, 95, 99, 102, 108, 109, 111, 116, 122, 127, 133, 134, 136 y/o 137 el residuo de aminoácido es B2; en donde Bl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M, F, W, Y y V; y B2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, N, D, C, O, E, G, H, K, P, S y T. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos tal que cuando las secuencias óptimamente alineada con la SEQ ID NO: 300, 445 o 457, por lo menos 90% los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos conforman a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 1, 7, 9, 20, 42, 50, 72, 75, 76, 78, 94, 98, 110, 121 y/o 141 el residuo de aminoácido es Zl; (b) en las posiciones 13, 46, 56, 70, 107, 117 y/o 118 el residuo de aminoácido es 7,2 ; (c) en las posiciones 23, 55, 71, 77, 88 y/o 109 el residuo de aminoácido es Z3; (d) en las posiciones 16, 21, 41, 73, 85, 99 y/o 111 el residuo de aminoácido es Z4 ; (e) en las posiciones 34 y/o 95 el residuo de aminoácido es Z5; (f) en la posición 22, 25, 29, 43, 44, 66, 74, 87, 102, 108, 116, 122, 127, 133, 134, 136 y/o 137 el residuo de aminoácido es Z6; en donde Zl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; Z2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de F, W y Y; Z3 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de N, Q, S, y T; ?4 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R H y K; Z5 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de D y E; y Z6 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de C, G y P. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos que además comprende en la posición 36 un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de Zl y Z3. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifica una secuencia de aminoácidos que además comprende en la posición 64 un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de Zl y Z2. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos tal que cuando las secuencias óptimamente alineada con la SEQ ID NO: 300, 445 o 457, por lo menos 80 de los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos conforman a las siguientes restricciones: (a) en la posición 2 el residuo de aminoácido es I o L; (b) en la posición 3 el residuo de aminoácido es E; (c) en la posición 4 el residuo de aminoácido es V o I; (d) en la posición 5 el residuo de aminoácido es K; (e) en la posición 6 el residuo de aminoácido es P; (f) en la posición 8 el residuo de aminoácido es N; (g) en la posición 10 el residuo de aminoácido es E; en la posición 11 el residuo de aminoácido es D o E; (i) en la posición 12 el residuo de aminoácido es T; (j) en la posición 14 el residuo de aminoácido es E o D; (k) en la posición 15 el residuo de aminoácido es L; (1) en la posición 17 el residuo de aminoácido es H; (m) en la posición 18 el residuo de aminoácido es R, E o K; (ni i en la posición 19 el residuo de aminoácido es I 0 V; (o) en la posición 24 el residuo de aminoácido es Q; (P) en la posición 26 el residuo de aminoácido es M, L , v o I; (q) en la posición 27 el residuo de aminoácido es E; (r) en la posición 28 el residuo de aminoácido es A o V; (s) en la posición 30 el residuo de aminoácido es M; (t) en la posición 31 el residuo de aminoácido es Y o F; (u) en la posición 32 el residuo de aminoácido es E o D; (v) en la posición 33 el residuo de aminoácido es T o S; (w) en la posición 35 el residuo de aminoácido es L; (x) en la posición 37 el residuo de aminoácido es R, G , E o Q; (y) en la posición 39 el residuo de aminoácido es A or S; (z) en la posición 40 el residuo de aminoácido es F o L; (aa) en la posición 45 el residuo de aminoácido es Y o F; (ab) en la posición 47 el residuo de aminoácido es R o G; (ac) en la posición 48 el residuo de aminoácido es G; (ad) en la posición 49 el residuo de aminoácido es K, R, o Q; (ae) en la posición 51 el residuo de aminoácido es I o V; (at) en la posición 52 el residuo de aminoácido es S; (ag) en la posición 53 el residuo de aminoácido es I o V; (ali) en la posición 54 el residuo de aminoácido es A; (ai) en la posición 57 el residuo de aminoácido es H o N; (aj) en la posición 58 el residuo de aminoácido es Q, , . R o P; (ak) en la posición 59 el residuo de aminoácido es A; (al) en la posición 60 el residuo de aminoácido es E; (am) en la posición 61 el residuo de aminoácido es H o R; (an) en la posición 63 el residuo de ami noácido es E o D; (ao) en la posición 65 el residuo de aminoácido es E, P o Q; (api ) en la posición 67 el residuo de aminoácido es Q o R; (aq) en la posición 68 el residuo de aminoácido es K o E; (ar) en la posición 69 el residuo de aminoácido es Q; (as) en la posición 79 el residuo de aminoácido es E; (at) en la posición 80 el residuo de aminoácido es G; (au) en la posición 81 el residuo de aminoácido es Y, H o F; (av ) en la posición 82 el residuo de aminoácido es R; (aw) en la posición 83 el residuo de aminoácido es E o D; (ax) en la posición 84 el residuo de aminoácido es Q; (ay) en la posición 86 el residuo de aminoácido es A; (az) en la posición 89 el residuo de aminoácido es G, T o S; (ba ) en la posición 90 el residuo de aminoácido es L (bb) en la posición 91 el residuo de aminoácido es L, I o V; (be ) en la posición 92 el residuo de aminoácido es R o ; (bd) en la posición 93 el residuo de aminoácido es H; (be) en la posición 96 el residuo de aminoácido es E o Q; (bf) en la posición 97 el residuo de aminoácido es 1; (bg) en la posición 100 el residuo de aminoácido es K o N (bh) en la posición 101 el residuo de aminoácido es K o R; (bi) en la posición 103 el residuo de aminoácido es A o V; (bj ) en la posición 104 el residuo de aminoácido es D; (bk) en la posición 105 el residuo de aminoácido es M, L o 1; (bl ) en la posición lOí 5 el residuo de aminoácido es L; (bm) en la posición 112 el residuo de aminoácido es T o A; (bn) en la posición 113 el residuo de aminoácido es S o T; (bo) en la posición 114 el residuo de aminoácido es A; (bp) en la posición 115 el residuo de aminoácido es S; (bq) en la posición 119 el residuo de aminoácido es K o R; (br) en la posición 120 el residuo de aminoácido es o R; (bs) en la posición 123 el residuo de aminoácido es F o L; (bt) en la posición 125 el residuo de aminoácido es E; (bu) en la posición 126 el residuo de aminoácido es Q Q H; (bv) en la posición 128 el residuo de aminoácido es E o D; (bw) en la posición 129 el residuo de aminoácido es V c I; (bx) en la posición 130 el residuo de aminoácido es F; (by) en la posición 131 el residuo de aminoácido es D o E; (bx) en la posición 132 el residuo de aminoácido es T; (ca) en la posición 135 el residuo de aminoácido es V; ( cb) en la posición 138 el residuo de aminoácido es H; (ce) en la posición 139 el residuo de aminoácido es I; (cd) en la posición 140 el residuo de aminoácido es L o M; (ce) en la posición 142 el residuo de aminoácido es Y; (cf) en la posición 143 el residuo de aminoácido es K o ; (cg) en la posición 145 el residuo de aminoácido es L o 1; y (ch) en la posición 146 el residuo de aminoácido es T. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos tal que cuando las secuencias óptimamente alineada con la SEQ ID NO: 300, 445 o 457, por lo menos 90¾ de los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos conforman restricciones de residuo de aminoácidos especificadas en (a)-(ch) anteriormente. Algunos polinucleótidos aislados o recom inantes preferidos de la invención son seleccionados del grupo que consiste de: (a) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 577; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97S idéntica a la SEQ ID NO: 578; (c) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 621; (d) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 579; (e) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 602; (f) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95¾ idéntica a la SEQ ID NO: 697; (g) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 721/ (h) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 613; (i) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 89% idéntica a la SEQ ID NO: 677; ( ) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEO ID NO: 584; (k) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 707; (1) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 616; (m) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 612; y (n) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEO ID NO: 590 y además en donde los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos que corresponde a las siguientes posiciones, por lo menos 80% conforman a las siguientes restricciones: (a) en las posiciones 9,76, 94 y 110 el residuo de aminoácido es A; (b) en las posiciones 29 y 108 el residuo de aminoácido es C; (c) en la posición 34 el residuo de aminoácido es D; (d) en la posición 95 el residuo de aminoácido es E; (e) en la posición 56 el residuo de aminoácido es F; (f) en las posiciones 43, 44, 66, 74, 87, 102, 116, 122, 127 y 136 el residuo de aminoácido es G; (g) en la posición 41 el residuo de aminoácido es H; (h) en la posición 7 el residuo de aminoácido es I; (i) en la posición 85 el residuo de aminoácido es K; (j) en las posiciones 20, 42, 50, 78 y 121 el residuo de aminoácido es L; (k) en las posiciones 1 and 141 el residuo de aminoácido es M; (1) en las posiciones 23 y 109 el residuo de aminoácido es N; (m) en las posiciones 22,25, 133, 134 y 137 el residuo de aminoácido es P; (n) en la posición 71 el residuo de aminoácido es Q; (o) en las posiciones 16, 21, 73, 99 y 111 el residuo de aminoácido es R; (p) en la posición 55 el residuo de aminoácido es S; (q) en la posición 77 el residuo de aminoácido es T; (r) en la posición 107 el residuo de aminoácido es W; y (s) en la posición 13, 46, 70 y 118 el residuo de aminoácido es y. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos que además comprende por lo menos un residuo de aminoácido que cumple los siguientes criterios: (a) en la posición 14 el residuo de aminoácido es D; (b) en la posición 18 el residuo de aminoácido es E; (c) en la posición 26 el residuo de aminoácido es M o V; (e) en la posición 30 el residuo de aminoácido es I; (f en la posición 32 el residuo de aminoácido es D; ( g) en la posición 36 el residuo de aminoácido es M o T; (i) en la posición 37 el residuo de aminoácido es C; (j) en la posición 38 el residuo de aminoácido es D; (j) en la posición 53 el residuo de aminoácido es V; (k) en la posición 58 el residuo de aminoácido es R; (1) en la posición 61 el residuo de aminoácido es R; (m) en la posición 62 el residuo de aminoácido es L (n) en la posición 64 el residuo de aminoácido es I o F; (o) en la posición 65 el residuo de aminoácido es P; (P) en la posición 72 el residuo de aminoácido es I; (q) en la posición 75 el residuo de aminoácido es V; (r) en la posición 88 el residuo de aminoácido es T (s) en la posición 89 el residuo de aminoácido es G; (t) en la posición 91 el residuo de aminoácido es L; (u) en la posició 98 el residuo de aminoácido es i; (v) en la posición L05 el residuo de aminoácido I; (w) en la posición 112 el residuo de aminoácido es A; (x) en la posición 124 el residuo de aminoácido es G o C; (y) en la posición 128 el residuo de aminoácido es D; (z) en la posición 140 el residuo de aminoácido es M; (aa) en la posición 143 el residuo de aminoácido es R y (ab) en la posición 144 el residuo de aminoácido es W. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos tal que cuando las secuencias óptimamente alineada con la SEQ ID NO: 300, 445 o 457, por lo menos 80% de los residuos de aminoácido en la secuencia de aminoácidos conforman restricciones de residuo de aminoácidos especificadas en [a) hasta (ab) anteriormente. Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención comprenden una secuencia de nucleótidos la codifica una secuencia de aminoácidos seleccionado del grupo que consiste de: (a) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 919 (tal como, por ejemplo, una secuencia de nucleótidos que codifica SEQ ID NO: 917, 919, 921, 923, 925, 927, 833, 835, 839, 843, 845, 859, 863, 873, 877, 891, 895, 901, 905, 907, 913, 915 o 950) ; (b) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 929 (tal como, por ejemplo, una secuencia de nucleótidos que codifica a la SEQ ID NO: 929, 931, 835, 843, 849 o 867); (c) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 847 (tal como, por ejemplo, una secuencia de nucleótidos que codifica SEQ ID NO: 845 o 847); (d) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 851; (e) uan secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98;: idéntica a la SEQ ID NO: 853; (f) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 855 (tal como, por ejemplo, una secuencia de nucleótidos que codifica SEQ ID NO: 835 o 855) ; (g) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 857; (h) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 861 (tal como, por ejemplo, una secuencia de nucleótidos que codifica SEQ ID NO: 839, 861 o 883) ; (i) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEO ID NO: 871; (j) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 875; (k) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 881; (1) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 885 (tal como, por ejemplo, una secuencia de nucleótidos que codifica SEQ ID NO: 845 o 885) ; (m) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 887; (n) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 889 (tal como, por ejemplo, una secuencia de nucleótidos que codifica SEQ ID NO: 863, 889, 891, o 903); (o) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 893; (p) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 897; (q) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98¾ idéntica a la SEQ ID NO: 899; (r) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 909 (tal como, por ejemplo, una secuencia de nucleótidos que codifica SEQ ID NO: 883 o 909) ; (s) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 919; (t) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a la SEQ ID NO: 837; (u) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a la SEQ ID NO: 841; (v) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99¾ idéntica a la SEQ ID NO: 865; (w) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a la SEQ ID NO: 869; y (x) una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a la SEQ ID NO: 879. Algunos polinucleotidos aislados o recombinantes preferidos de la invención son seleccionados del grupo que consiste de: (a) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 96% idéntica a la SEQ ID NO: 919 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 916, 918, 920, 922, 924, 926, 832, 834, 838, 842, 844, 858, 862, 872, 876, 890, 894, 900, 904, 906, 912, 914, 939, 940, 941, 942, 943, 944, 949, 951 o 952) ; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 97% idéntica a la SEQ ID NO: 929 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 928, 930, 834, 842, 848, 866, 936 o 937); (c) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 847 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 844 o 846) ; (d) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98\! idéntica a la SEQ ID NO: 851 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 850) ; (e) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 853 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 852) ; (f) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98¾ idéntica a la SEQ ID NO: 855 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 834 o 854) ; (g) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98 ' idéntica a la SEQ ID NO: 857 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 856) ; (h) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 861 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 838, 860 o 882) ; (i) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 871 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 870); (j) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 875 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 874) ; (k) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 881 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 880) ; (1) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 885 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 844 o 884) ; (m) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98 ¾ idéntica a la SEQ ID NO: 887 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 886) ; (n) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 889 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 862, 888, 890 o 902); (o) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 893 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 892) ; (p) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 897 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 896) ; (q) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 899 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 898) ; (r) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98% idéntica a la SEQ ID NO: 909 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 882 o 908) ; (s) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 98¾ idéntica a la SEQ ID NO: 911 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 910) ; (t) uáa secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a la SEQ ID NO: 837 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 836) ; (u) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a la SEQ ID NO: 841 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 840) ; (v) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a la SEQ ID NO: 865 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 864) ; (w) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a la SEQ ID NO: 869 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 868) ; y (x) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 99% idéntica a la SEQ ID NO: 879 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 878) . Alqunos polinucleótidos aislados o recom inantes preferidos de la invención comprenden una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95% idéntica a la SEQ ID NO: 929 y que comprende un residuo Gly o un residuo Asn en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 33 de la SEQ ID NO: 929 (tal como, por ejemplo, una secuencia de nucleótidos que codifica SEQ ID NO: 837, 849, 893, 897, 905, 921, 927, 929 o 931) . Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención comprenden una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 95% idéntica a la SEO ID NO: 929 y que comprende un residuo Gly o un residuo Asn en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 33 de la SEQ ID NO: 929 (por ejemplo, una secuencia de nucleótidos tal como SEQ ID NO: 836, 848, 892, 896, 904, 920, 926, 928, 930, 938) . Algunos polinucleótidos aislados o recombinantes preferidos de la invención codifican una secuencia de aminoácidos que además comprende uno o más residuos de aminoácido que cumplen los siguientes criterios: (a) en la posición 41 el residuo de aminoácido es H; (b) en la posición 138 el residuo de aminoácido es H; (c) en la posición 34 el residuo de aminoácido es N; y (d) en la posición 55 el residuo de aminoácido es S. Mientras que la descripción de los polipéptidos de la invención es algunas veces expresada en la presente como una lista de posibles restricciones sobre que residuos de aminoácidos se encuentran en posiciones particulares , en algunas modalidades, un polipéptido de la invención cumple todo el conjunto particular de posibles restricciones. Esto es, en algunos casos en la presente, una lista de posibles restricciones es expresada como una lista de opciones unidas por la conjunción "y/o" y en algunas modalidades, cada conjunción de tal clase opera como un " " antes que un "o". En algunas modalidades, las posibles restricciones que son expresadas como posibilidades alternas todas se encuentran en el polipéptido de la invención; esto es solamente verdadero donde las posibilidades alternas no son mutuamente exclusivas . Variaciones de Secuencia Será apreciado por aquellos expertos en la técnica que debido a la degeneración del código genético, una multitud de secuencias de nucleótidos que codifican polipéptidos GAT de la invención pueden ser producidos, algunos de los cuales llevan identidad sustancial a las secuencias de ácido nucleico explícitamente divulgadas en la presente . Tabla 1 Tabla de Codones Aminoácidos Codón Ala iña Ala A GCA GCC GCG GCU Cisterna Cys C UGC UGU Acido Asp D GAC GAU aspártico Acido Glu E GAA GAG glutámico Fenilalanina Phe F uuc UUÜ Glicina Gly G GGA GGC GGG GGU Histidina His H CAC CAU Isoleucina lie I AUA AUC AUU Lisina Lys K AAA AAG Leucina Leu L UÜA UUG CUA CUC CUG CUU Metionina Met M AUG Asparagina Asn N AAC AAU Prolina Pro P CCA CCC CCG CCU Glutamina Gln 0 CAA CAG Arginina Arg R AGA AGG CGA CGC CGG CGU Serina Ser S AGC AGU UCA UCC UCG UCÜ Treonina Thr T ACA ACC ACG ACU Valina Val V GUA GUC GUG GUU Triptófano Trp W UGG Tirosina Tyr y UAC UAU Por ejemplo, la inspección de la tabla de codones (Tabla 1) muestra que los codones AGA, AGG, CGA, CGC, CGG y CGU todos codificarán el aminoácido arginina. Así, en cada posición en los ácidos nucleicos de la invención donde una arginina es especificada por un codón, el codón puede ser alterado a cualquiera de los codones correspondientes descritos en 1c anterior sin alterar el polipéptido codificado. Se entiende que U en una secuencia de PUA corresponde a T en una secuencia de DNA. Usando como un ejemplo la secuencia de ácido nucleico correspondiente a los nucleótidos 1-15 de la SEO ID NO: 1 (ATG ATT GAA GTC AAA (SEQ ID NO: 826)), una variación silenciosa de esta secuencia incluyen AGT ATC GAG GTG AAG (SEO ID NO: 827) ; ambas secuencias codifican la secuencia de aminoácidos MIEVK (SEQ ID NO: 828), que corresponde a los aminoácidos 1-5 de la SEQ ID NO: 6. Tales "variaciones silenciosas" son una especie de "variaciones conservativamente modificadas" como es discutido enseguida. Un experto reconocerá que cada codón en un ácido nucleico (excepto AUG, que es ordinariamente el único codón para metionina) puede ser modificado por técnicas estándares para codificar un polipéptido funcionalmente idéntico. Por consiguiente, Cada variación silenciosa de un ácido nucleico que codifica un polipéptido está implícita en cualquier secuencia descrita. La invención proporciona cada una y cada posible variación de la secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido de la invención que podría ser hecha al seleccionar combinaciones basadas en elecciones de codones posibles. Estas combinaciones se hacen de acuerdo con el código genético de triplete estándar (por ejemplo, como se expone en la Tabla 1) como es aplicado a la secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido homologo GAT de la invención. Todas de tales variaciones de cada ácido nucleico se proporcionan específicamente y se describen en consideración de la secuencia en combinación con el código genético. Cualquier variante puede ser producida como es mencionado en la presente. Un grupo de dos o más codones diferentes que, cuando se traduce el mismo contexto, todos codifican el mismo aminoácido, son referidos en la presente como "codones sinónimos". Como es descrito en la presente, en algunos aspectos de la invención un polinucleótido GAT es diseñado para la utilización de codón optimizada en un organismo hospedero deseado, por ejemplo un hospedero de planta. E término "optimizado" u "óptimo" no se proponen para ser restringidos a la combinación mucho más posible de codones, sino simplemente índica que la secuencia de codificación como un total posee una utilización mejorada de codones con relación a un polinucleótido precursor del cual se derivó. Así, en un aspecto la invención proporciona un método para producir una variante de polinucleótido GAT al reemplazar por lo menos un codón parental en una secuencia de nucleótidos con un codón sinónimo que es preferencialmente en un organismo hospedero deseado, por ejemplo, una planta con relación al codón parental. "Variaciones conservativamente modificadas" o simplemente "variaciones conservativas" de una secuencia de ácido nucleico particular se refieren a aquellos ácidos nucleicos que codifican secuencias de aminoácidos idénticas o esencialmente idénticas, o donde el ácido nucleico no codifica una secuencia de aminoácidos, a secuencias esencialmente idénticas. Un experto reconocerá que sustituciones individuales, supresiones o adiciones que alteran, adicionan o suprimen un solo aminoácido o un pequeño porcentaje de aminoácidos (típicamente menos de 5%, más típicamente menos de 4%, 2% o 1% o menos) en una secuencia codificada son "variaciones conservativamente modificadas" donde las alteraciones resultan en la supresión de un aminoácido, sustitución de un aminoácido con un aminoácido químicamente similar. Las tablas de sustitución conservativa que proporcionan aminoácidos funcionalmente similares son bien conocidas en la técnica. La Tabla 2 se expone seis grupos que contienen aminoácidos que son "sustituciones conservativas" entre sí . Tabla 2 Grupos de Sustitución Conservativa 1 Alanina (A) Serina (S) Treonina (T) 2 Acido aspártico (D) Acido glutámico (E) 3 Asparagina (N) Glutamina (Q) 4 Arginina (R) Lisina (K) 5 Isoleucina (I) Leucina (1) Metionina (M) Valina (V) 6 Fenilalanina (F) Tirosina (X) Triptofano (W) Asi, las "variaciones conservativamente sustituidas" de una secuencia de polipéptido listada de la presente invención incluye sustituciones de un pequeño porcentaje, típicamente menos de 5%, más típicamente menos de 2% y frecuentemente menos de 1%, de los aminoácidos de la secuencia de polipéptido, con un aminoácido conservativamente seleccionado del mismo grupos de sustitución conservativa. Así, una variación conservativamente sustituida de un polipéptido de la invención puede contener 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 sustituciones con una variación conservativamente sustituida del mismo grupo de sustitución conservativa . Por ejemplo, una variación conservativamente sustituida del polipéptido identificado en la presente como SEQ ID NO: 6 contenderá "sustituciones conservativas" de acuerdo con los seis grupos definidos en lo anterior, en hasta 7 residuos (es decir, 5% de los aminoácidos) en el polipéptido de 146 aminoácido. En un ejemplo adicional, si se localizaron cuatro sustituciones conservativas en la región correspondiente a los aminoácidos 21 a 30 de SEO ID NO: 6, ejemplos de variaciones conservativamente sustituidas de esta región, RPN QPL EAC M (SEQ ID NO: 829), incluyen: KPQ OPV ESC M (SEQ ID NO: 830) y KPN NPL DAC V (SEQ ID NO: 831) y los similares, de acuerdo con las sustituciones conservativas listadas en la Tabla 2 (en el ejemplo anterior, las sustituciones conservativas están subrayadas) . El listado de una secuencia de proteína en la presente, en conjunción con la tabla de sustitución anterior, proporciona una lista expresa de todas las proteínas conservativamente sustituidas. Finalmente, la adición de secuencias que no alteran la actividad codificada de una molécula de ácido nucleico, tal como la adición de una secuencia no funcional o de no codificación, es una variación conservativa del ácido nucleico básico. Un experto apreciará que muchas variaciones conservativas .de las construcciones de ácido nucleico que son divulgadas producen una construcción funcionalmente idéntica. Por ejemplo, como es discutido en lo anterior, debido a la degeneración del código genético, "sustituciones silenciosas" (es decir, sustituciones en una secuencia de ácido nucleico que da por resultado una alteración en un polipéptido codificado) son una característica implícita de cada secuencia de ácido nucleico que codifica un aminoácido. De manera similar, "sustituciones de aminoácidos conservativas" en uno o unos cuantos aminoácidos en la secuencia de aminoácidos son sustituidos con diferentes aminoácidos con propiedades altamente similares, también son fácilmente identificadas que son altamente similares a una construcción divulgada, tales variaciones conservativas de cada secuencia divulgada son una característica de la presente invención. Las modificaciones no conservativas de un ácido nucleico particular son aquellas que sustituyen cualquier aminoácido no caracterizado como una sustitución conservativa. Por ejemplo, cualquier sustitución que cruza los límites de los seis grupos expuestos en la Tabla 2. Estos incluyen sustituciones de aminoácidos básicos acídicos por aminoácidos neutros, (por ejemplo, Asp, Glu, Asn o Gln para Val, lie, Leu o Met) , aminoácidos aromáticos por aminoácidos básicos o acídicos (por ejemplo, Phe, Tyr o Trp para Asp, Asn, Glu o Gln) o cualquier otra sustitución que no reemplaza un aminoácido con un aminoácido similar. Hibridación del Acido Nucleico Los ácidos nucleicos se "hibridan" cuando ellos se asociación, típicamente en solución. Los ácidos nucleicos se hibridan debido a una variedad de fuerzas físico-químicas bien caracterizadas, tal como el enlace de hidrógeno, exclusión de solvente, apilamiento de la base y los similares. Una guía extensiva para la hibridización de ácidos nucleicos se encuentra en Tijssen (1993) Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology--Hybridization with Nucleic Acid Pxobes, Parte I, Capitulo 2, "Overview of principies of hybridization and the strategy of nucleic acid probé assays," (Elsevier, Nueva York ( Tijssen") ) , asi como en Ausubel, supra, Hames and Higgins (1995) Gene Pxobes 1, IRL Press at Oxford Uni e sity Press, Oxford, Inglaterra ("Haines y Higgins I") y Hames y Higgins (1995) Gene Probes 2, IRL Press at Oxford University Press, Oxford, Inglaterra ("Hames y Higgins 2") y proporcionan detalles de la síntesis, marcación, detección y cuantificación de DNA y RNA, incluyendo oligonucleótidos . Las "condiciones de lavado de hibridación severas" en el contexto de experimentos de hibridación de ácido nucleico, tal como las hibridaciones de Southern y northern, son dependientes de la secuencia y son diferentes bajo diferentes parámetros ambientales. Una guía extensiva para la hibridación de ácido nucleico se encuentra en Tijssen (1993), supra, y en Hames y Higgins 1 y Hames y Higgins 2, supra. Para propósitos de la presente invención, generalmente, las condición de hibridación y lavado "altamente severas" son seleccionadas para ser aproximadamente 5°C o menos, menor que el punto de fusión térmico (Tm) para la secuencia específica a una concentración iónica definida y pH (como es mencionado enseguida, las condiciones altamente severas también pueden ser referidas en términos comparativos) . La Tm es la temperatura (bajo concentración iónica y pH definidos) en la cual 50% de la secuencia de prueba se híbrida a una sonda perfectamente igualada. Las condiciones muy severas son seleccionadas para ser iguales a la Tm para una sonda particular. La Tm de un dúplex de ácido nucleico indica la temperatura en la cual el dúplex es 50% desnaturalizado bajo las condiciones dadas y esto presente una medición directa de la estabilidad del híbrido de ácido nucleico. Asi, la Tm corresponde a la temperatura correspondiente al punto medio en la transición de la hélice a la espiral aleatoria y este depende de la longitud, composición de nucleótidos y concentración iónica para estiramientos largos de nucleótidos. Después de la hibridación, el material de ácido nucleico no hibridado puede ser removido mediante una serie de lavados, la severidad de lo cual se puede ajustar dependiendo de los resultados deseados. Las condiciones de lavado de baja severidad (por ejemplo usando más alta y temperatura inferior) incrementa la sensibilidad, pero pueden producir señales de hibridación especificas y señales antecedentes altas. Las condiciones de más alta severidad (por ejemplo, usando sal inferior y temperatura superior es más cercana la temperatura de hibridación) disminuye la señal antecedente, típicamente con solo la señal especifica restante. Ver Rapley, R. y Walker, J. M. eds . , Molecular Biomethoods Handbook (Humana Press, Inc. 1998) (hereinafter "Rapley y Walker") , que es incorporada en la presente por referencia en su totalidad para todos los propósitos . 181 ser iguales a la Tm para una sonda particular. La Tm ce un dúplex de ácido nucleico indica la temperatura en la cual el dúplex es 50% desnaturalizado bajo las condiciones dadas y esto presente una medición directa de la estabilidad del híbrido de ácido nucleico. Así, la Tm corresponde a la temperatura correspondiente al punto medio en la transición de la hélice a la espiral aleatoria y este depende de la longitud, composición de nucleótidos y concentración iónica para estiramientos largos de nucleótidos. Después de la hibridación, el material de ácido nucleico no hibridado puede ser removido mediante una serie de lavados, la severidad de lo cual se puede ajustar dependiendo de los resultados deseados. Las condiciones de lavado de baja severidad (por ejemplo usando más alta y temperatura inferior) incrementa la sensibilidad, pero pueden producir señales de hibridación específicas y señales antecedentes altas. Las condiciones de más alta severidad (por ejemplo, usando sal inferior y temperatura superior es más cercana la temperatura de hibridación) disminuye la señal antecedente, típicamente con solo la señal específica restante. Ver Rapley, R. y alker, J. M. eds . , Molecular Biomethoods Handbook (Humana Press, Inc. 1998) (hereinafter Rapley y Walker") , que es incorporada en la presente por referencia en su totalidad para todos los propósitos. 182 La Tm de un dúplex de DNA-DNA se puede estimar usando la Ecuación 1 como sigue: Tm (°C) = 81.5°C + 16.6 (logio ) + 0.41 (% G + C)-0.72 (% í) -500/n, donde M es la molaridad de los cationes monovalentes (usual mente Na+) , (% G + C) es el porcentaje de los nucleótidos guanosina (G) y citosina (C) , (% f) es el porcentaje de formamida y n es el número de bases de nucleótidos (es decir, longitud) del híbrido. Ver Rapley y Walker, supra. La Tm de un dúplex de RNA-DNA se puede estimar al usar la Ecuación 2 como sigue: Tm (°C) = 79.8°C + 18.5 (logioM) + 0.58 ( % G + C)-11. 8 (% G + C) 2-0.56 ( f)-820/n, donde M es la molaridad de cationes monovalentes (usualmente Na+) , (% G + C) es el porcentaje de los nucleótidos de guanosina (G) y citosina (C) , (% f) es el porcentaje de formamida y n el número de bases de nucleótidos (es decir, longitud) del híbrido. Id. Las ecuaciones 1 y 2 típicamente son precisas solamente para dúplex de híbridos más largos que aproximadamente 100-200 nucleótidos. Id. La Tm de las secuencias de ácido nucleico más cortas que 50 nucleótidos puede ser calculada como sigue: Tm (°C) =4 (G+C) +2 (A+T), 183 donde ? (adenina) , C, T (timina) y G son los números de los nucleótidos correspondientes. Un ejemplo de condiciones de hibridación severas para la hibridación de ácidos nucleicos complementarios que tienen más de 100 residuos complementarios sobre un filtro en un manchado de Southern o northern es formali na al 50% con 1 mg de heparina a 42°C, con la hibridación que es llevada a cabo durante la noche. Un ejemplo de condiciones de lavado severas es un lavado 0.2x SSC a 65°C durante 15 minutos (ver Sambrook, supra para una descripción de la solución-reguladora SSC) . Frecuentemente el lavado de alta severidad es precedido por un lavado de baja severidad para remover la señal de la sonda antecedente. Un ejemplo de lavado de baja severidad es 2x SSC a 40 °C durante 15 minutos. En general, una relación de señal a ruido de 2.5x-5x (o más alta) que aquella observada para una sonda no relacionada en el ensayo de hibridación particular indica la detección de una hibridación especifica. La detección de la hibridación al menos severa entre dos secuencias en el contexto de la presente invención indica una similitud u homología estructural relativamente fuerte a, por ejemplo, los ácidos nucleicos de la presente invención proporcionados en los listados de secuencias en la presente. Como es mencionado, condiciones "altamente severas" se seleccionan para ser aproximadamente 5°C o menos, menor 184 que el punto de fusión térmico (Tm) para la secuencia especifica a una concentración iónica y pH definidos. Las secuencias objetivo que están estrechamente relacionados o idénticas a la secuencia de nucleótidos de interés (por ejemplo, "sondas") puede ser identificado bajo condiciones altamente severas. Las condiciones de menor severidad son apropiadas para secuencias que son menos complementarias. Ver, por ejemplo, Rapley y Walker, supra. La hibridación comparativa se puede usar para identificar ácidos nucleicos de la invención, y este método de hibridación comparativo es un método preferido para distinguir ácidos nucleicos de la invención. La detección de la hibridación altamente severa entre dos secuencias de nucleótidos en el contexto de la presente invención indica una similitud/homología estructural relativamente fuerte a, por ejemplo, los ácidos nucleicos proporcionados en el estado de secuencias en la presente. La hibridación altamente severa entre dos secuencias de nucleótidos demuestra un grado de similitud u homología de estructura o composición de base de nucleótido, arreglo y orden que es mayor que aquel detectado por las condiciones de hibridación severas. En particular, la detección de hibridación altamente severa en el contexto de la presente invención indica una similitud estructural fuerte u homología estructural (por ejemplo, estructura de nucleótido, composición de base, arreglo u orden) a, por 185 ejemplo, los ácidos nucleicos proporcionados en los listados de secuencias en la presente. Por ejemplo, es deseable identificar ácidos nucleicos de prueba que hibriden a los ácidos nucleicos ejemplares en la presente bajo condiciones severas. Asi, una medición de la hibridación severa es la habilidad para hibridar a uno de los ácidos nucleicos listados, (por ejemplo, las secuencias de ácido nucleico SEQ ID NO : 516 , 517 , 518 / 519, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 620, 622, 624, 626, 628, 630, 632, 634, 636, 638, 640, 642, 644, 646, 648, 650, 652, 654, 656, 658, 660, 662, 664, 666, 668, 670, 672, 674, 676, 678, 680, 682, 684, 686, 688, 690, 692, 694, 696, 698, 700, 702, 704, 706, 708, 710, 712, 714, 716, 718, 720, 722, 724, 726, 728, 730, 732, 734, 736, 738, 740, 742, 744, 746, 748, 750, 752, 754, 756, 758, 760, 762, 764, 768, 770, 772, 774, 776, 778, 780, 782, 784, 786, 788, 790, 792, 794, 796, 798, 800, 802, 804, 806, 808, 810, 812, 814, 816, 818, 820, 822, 824, 832, 834, 836, 838, 840, 842, 844, 846, 848, 850, 852, 854, 856, 858, 860, 862, 864, 866, 868, 870, 872, 874, 876, 878, 880, 882, 884, 886, 888, 890, 892, 894, 896, 898, 900, 902, 904, 906, 908, 910, 912, 914, 916, 918, 920, 922, 924, 926, 928, 186 930, 932, 933, 934, 935, 936, 937, 933, 939, 940, 941, 942, 943, 944, 945, 947, 949, 951 y 952 y secuencias de polinucleótidos complementarias de los mismos), bajo condiciones altamente severas (o condiciones muy severas, o condiciones de hibridación de ultra alta severidad, o condiciones de hibridación de ultra-ultra alta severidad) . La hibridación severa (asi como las condiciones de hibridación de altamente severas, de ultra-severidad o de ultra-ultra alta severidad) y las condiciones de lavado fácilmente pueden ser determinadas empíricamente para cualquier ácido nucleico de prueba. Por ejemplo, en la determinación de las condiciones de iori di zación y lavado altamente severas, las condiciones de hibridación y lavado son gradualmente incrementadas (por ejemplo, al incrementar la temperatura, disminuir la concentración de sal, incrementar la concentración de detergente y/o incrementar la concentración de solvente orgánicos, tal como formalina, la hibridación o lavado) , hasta que un conjunto de criterio seleccionado son cumplidos. Por ejemplo, las condiciones de hibridación y lavado son gradualmente incrementadas hasta que una sonda que comprende una o más secuencias de ácido nucleico seleccionadas de SEQ ID NO: 516, 517, 518, 519, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 187 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 620, 622, 624, 626, 628, 630, 632, 634, 636, 638, 640, 642, 644, 646, 648, 650, 652, 654, 656, 658, 660, 662, 664, 666, 668, 670, 672, 674, 676, 678, 680, 682, 684, 686, 688, 690, 692, 694, 696, 698, 700, 702, 704, 706, 708, 710, 712, 714, 716, 718, 720, 722, 724, 726, 728, 730, 732, 734, 736, 738, 740, 742, 744, 746, 748, 750, 752, 754, 756, 758, 760, 762, 764, 768, 770, 772, 774, 776, 778, 780, 782, 784, 786, 788, 790, 792, 794, 796, 798, 800, 802, 804, 806, 808, 810, 812, 814, 816, 818, 820, 822, 824, 832, 834, 836, 838, 840, 842, 844, 846, 848, 850, 852, 854, 856, 858, 860, 862, 864, 866, 868, 870, 872, 874, 876, 878, 880, 882, 8 84, 886, 888, 890,892, 894, 896, 898, 900, 902, 904, 906, 908, 910, 912, 914, 916, 918, 920, 922, 924, 926, 928, 930, 932, 933, 934, 935, 936, 937, 938, 939, 940, 941, 942, 943, 944, 945, 947, 949, 951 y 952 y las secuencias de polinucleotido complementarias de las mismas, enlaza a un objetivo complementario perfectamente igualado (nuevamente, un ácido nucleico que comprende una o más secuencias de ácido nucleico seleccionadas de SEQ ID NO: 516, 5 51177,, 5 51188,, 5 51199,, 5 52200,, 5 52211,, 5 52222,, 5 52233,, 5 52244, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 620, 622, 624, 626, 628 630, 632, 634, 636, 6 63388 ,, 6 64400, , 6 64422, , 6 64444 ,, 6 64466, , 6 64488, , 6 65500, , 6 65522 r 654, 656, 658, 660, 188 662, 664, 666, 668, 670, 672, 674, 676, 678, 680, 682, 684, 686, 688, 690, 692, 694, 696, 698, 700, 702, 704, 706, 708, 710, 712, 714, 716, 718, 720, 722, 724, 726, 728, 730, 732, 734, 736, 738, 740, 742, 744, 746, 748, 750, 752, 754, 756, 758, 760, 762, 764, 768, 770, 772, 774, 776, 778, 780, 782, 784, 786, 788, 790, 792, 794, 796, 798, 800, 802, 804, 806, 808, 810, 812, 814, 816, 818, 820, 822, 824, 832, 834, 836, 838, 840, 842, 844, 846, 848, 850, 852, 854, 856, 858, 860, 862, 864, 866, 868, 870, 872, 874, 876, 878, 880, 882, 884, 886, 888, 890, 892, 894, 896, 898, 900, 902, 904, 906, 908, 910, 912, 914, 916, 918, 920, 922, 924, 926, 928, 930, 932, 933, 934, 935, 936, 937, 938, 939, 940, 941, 942, 943, 944, 945, 947, 949, 951 Y 952 y secuencias de polinucleótido complementarios de los mismos) , con una relación de señal a ruido que es por lo menos aproximadamente 2.5x y opcionalmente de manera aproximadamente 5x o más, tan alta como aquella observada para la hibridación de la sonda de un objetivo no igualado. En este caso, el objetivo no igualado es un ácido nucleico correspondiente a un ácido nucleico (diferente de aquellos en el listado de secuencias acompañantes) que está presente en la base datos pública tal como GenBank™ en el momento de presentación de la presente solicitud- Tales secuencias pueden ser identificadas en GenBank por un experto. Ejemplos incluyen los Número de Acceso Z99109 y Y09476. Tales secuencias adicionales pueden 189 ser identificadas en, por ejemplo, GenBank, por un experto ordinario en la técnica. Un ácido nucleico de prueba se dice que específicamente híbrida una sonda de ácido nucleico cuando este híbrida por lo menos ½ así como a la sonda en cuanto al objetivo complementario perfectamente igualado, es decir, una relación de señal a ruido de por lo menos ½ tan alto como la hibridación de la sonda al objetivo bajo condiciones en la cual la sonda perfectamente igualada enlaza al objetivo complementario perfectamente igualado con una relación de señal a ruido que es por lo menos aproximadamente 2x-10x, y que opcionalmente 20x, SOx o más grande que aquel observado para la hibridación a cualquiera de los polinucleótidos no igualadas de los Números de Acceso Z99109 y Y09476. Las condiciones de hibridación y lavado de ultra alta-severidad son aquellos en la cual la severidad de las condiciones de hibridación y lavado son incrementadas hasta que la relación de señal a ruido para el enlace de sonda al ácido nucleico objetivo complementario perfectamente igualado es de por lo menos lOx tan alto como aquel observado para hibridación a cualquiera de los ácidos nucleicos objetivos no igualados de los Números de Acceso Genbank 7,99109 y Y09476. Un ácido nucleico objetivo que híbrida una sonda bajo tales condiciones, con una relación de señal a ruido de por lo menos ½ del aquel del ácido nucleico objetivo complementario 190 perfectamente igualado se dice que enlaza a la sonda bajo condiciones de ultra alta-severidad. De manera similar, aún niveles más altos de severidad pueden ser determinados al incrementar gradualmente de las condiciones de hibridación y/o lavado del ensayo de hibridación relevante. Por ejemplo, aquellos en los cuales la severidad de las condiciones de hibridación y lavado son incrementadas hasta que la relación de señal a ruido para el enlace de la sonda al ácido nucleico objetivo complementario perfectamente igualado es por lo menos ???, 20x, 50x, lOOx, o 500x o mayor tan alto como aquel observado para la hibridación a cualquiera de los ácidos nucleicos objetivo no igualado de los números de Acceso de Genbank Z99109 y Y09476. Un ácido nucleico objetivo que híbrida una sonda bajo tales condiciones, con una relación de señal a ruido de por lo menos ½ de aquel del ácido nucleico objetivo complementario perfectamente igualado se dice que enlaza la sonda bajo condiciones de ultra-ultra-alta severidad. Los ácidos nucleicos objetivos que hibridan a los ácidos nucleicos representados por la SEQ ID NO: 516, 517, 518, 519, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 620, 622, 624, 626, 628, 630, 632, 634, 636, 638, 191 640, 642, 644, 646, 648, 650, 652, 654, 656, 658, 660, 662, 664, 666, 668, 670, 672, 674, 676, 678, 680, 682, 684, 686, 688, 690, 692, 694, 696, 698, 700, 702, 704, 706, 708, 710, 712, 714, 716, 718, 720, 722, 724, 726, 728, 730, 732, 734, 736, 738, 740, 742, 744, 746, 748, 750, 752, 754, 756, 758, 760, 762, 764, 768, 770, 772, 774, 776, 778, 780, 782, 784, 786, 788, 790, 792, 794, 796, 798, 800, ¦802, 804, 806, 808, 810, 812, 814, 816, 818, 820, 822, 824, 832, 834, 836, 838, 840, 842, 844, 846, 848, 850, 852, 854, 856, 858, 860, 862, 864, 866, 868, 870, 872, 874, 876, 878, 880, 882, 884, 886, 888, 890, 892, 894, 896, 898, 900, 902, 904, 906, 908, 910, 912, 914, 916, 918, 920, 922, 924, 926, 928, 930, 932, 933, 934, 935, 936, 937, 938, 939, 940, 941, 942, 943, 944, 945, 947, 949, 951 y 952 baj o condiciones de severidad de alta, ultra -alta y ultra-ultra alta severidad son una característica de la invención. Ejemplos de tales ácidos nucleicos incluyen aquellos con una o unas cuantas sustituciones de ácido nucleico silenciosos conservativas como es comparado con la secuencia de ácido nucleico dada. Los ácidos nucleicos que no se h.i bridan entre sí bajo condiciones severas son todavía sustancialmente idénticos y los polipéptidos que ellos codifican son sustancialmente idénticos. Esto ocurre, por ejemplo, cuando una copia de ácido nucleico es creada usando la degeneración de codón máxima permitida por el código genético, o cuando 192 antisueros o antisuero generado contra uno o más de SEQ ID O: 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 621, 623, 625 627, 629, 631, 633, 635, 637, 639, 641, 643, 645, 647, 649 651, 653, 655, 657, 659, 661, 663, 665, 667, 669, 671, 673 675, 677, 679, 681, 683, 685, 687, 689, 691, 693, 695, 697 699, 701, 703, 705, 707, 709, 711, 713, 715, 717, 719, 721 723, 725, 727, 729, 731, 733, 735, 737, 739, 741, 743, 745 747, 749, 751, 753, 755, 757, 759, 761, 763, 765, 767, 769 771, 773, 775, 777, 779, 781, 783, 785, 787, 789, 791, 793 795, 797, 799, 801, 803, 805, 807, 809, 811, 813, 815, 817 819, 821, 823, 825, 833, 835, 837, 839, 841, 843, 845, 847 849, 851, 853, 855, 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871 873, 875, 877, 879, 881, 883, 885, 887, 889, 891, 893, 895 897, 899, 901, 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919 921, 923, 925, 927, 929, 931, 946, 948, 950, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971 y 972, que se ha substraído los polipéptidos codificados por secuencias de nucleótidos conocidas, incluyendo aquellas del número de Acceso de Genbank C7AA70664. Detalles adicionales sobre la identificación inmunológica de polipéptidos de la invención se encuentran 193 enseguida. Adicionalmente, para distinguir entre dúplexes con secuencias de menos de aproximadamente 100 nucleótidos, un procedimiento de hibridación TMAC1 conocido para aquellos expertos ordinarios en la técnica puede ser utilizado. Ver, por ejemplo, Sorg, U. y colaboradores, Nucleíc Acide Res. (11 de Septiembre de 1991) 19(17), incorporado en la presente por referencia en su totalidad para todos los propósitos. En un aspecto, la invención proporciona un ácido nucleico que comprende una subsecuencia única en un ácido nucleico seleccionado de SEQ ID NO: 516, 517, 518, 519, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 620, 622, 624, 626, 628, 630, 632, 634, 636, 638, 640, 642, 644, 646, 648, 650, 652, 654, 656, 658, 660, 662, 664, 666, 668, 670, 672, 674, 676, 678, 680, 682, 684, 686, 688, 690, 692, 694, 696, 698, 700, 702, 704, 706, 708, 710, 712, 714, 716, 718, 720, 722, 724, 726, 728, 730, 732, 734, 736, 738, 740, 742, 744, 746, 748, 750, 752, 754, 756, 758, 760, 762, 764, 768, 770, 772, 774, 776, 778, 780, 782, 784, 786, 788, 790, 792, 794, 796, 798, 800, 802, 804, 806, 808, 810, 812, 814, 816, 818, 820, 822, 824, 832, 834, 836, 838, 840, 842, 844, 846, 848, 850, 852, 854, 856, 858, 860, 862, 864, 866, 868, 870, 872, 874, 876, 878, 880, 882, 884, 886, 888, 890, 892, 194 894, 896, 898, 900, 902, 904, 906, 908, 910, 912, 914, 916, 918, 920, 922, 924, 926, 928, 930, 932, 933, 934, 935, 936, 937, 938, 939, 940, 941, 942, 943, 944, 945, 947, 949, 951, y 952. La subsecuencia única es única como es comparada a un ácido nucleico correspondiente a cualquiera de los números de Acceso de Genbank Z99109 y Y09476. Tales subsecuencias únicas pueden ser determinadas al alinear cualquiera de SEQ ID NO: 516, 517, 518, 519, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 620, 622, 624, 626, 628, 630, 632, 634, 636, 638, 640, 642, 644, 646, 648, 650, 652, 654, 656, 658, 660, 662, 664, 666, 668, 670, 672, 674, 676, 678, 680, 682, 684, 686, 688, 6S0, 692, 694, 696, 698, 700, 702, 704, 706, 708, 710, 712, 714, 716, 718, 720, 722, 724, 726, 728, 730, 732, 734, 736, 738, 740, 742, 744, 746, 748, 750, 752, 754, 756, 758, 760, 762, 764, 768, 770, 772, 774, 776, 778, 780, 782, 784, 786, 788, 790, 792, 794, 796, 798, 800, 802, 804, 806, 808, 810, 812, 814, 816, 818, 820, 822, 824, 832, 834, 836, 838, 840, 842, 844, 846, 848, 850, 852, 854, 856, 858, 860, 862, 864, 866, 868, 870, 872, 874, 876, 878, 880, 882, 884, 886, 888, 890, 892 894, 896, 898, 900, 902, 904, 906, 908, 910, 912, 914, 916 918, 920, 922, 924, 926, 928, 930, 932, 933, 934, 935, 936 937, 938, 939, 940, 941, 942, 943, 195 944, 945, 947, 949, 951 y 952 contra el conjunto completo de ácidos nucleicos representado por los números de Acceso de GenBank Z99109 y Y09476 u otras secuencias relacionadas disponibles en las bases de datos públicas como en la fecha de presentación de la presente solicitud. La alineación se puede realizar el algoritmo BLAST ajustado a parámetros de error. Cualquier subsecuencia única es útil, por ejemplo, como una sonda para identificar los ácidos nucleicos de la invención. De manera similar, la invención incluye un polipéptido que comprende una subsecuencia única en un polipéptido seleccionado de: SEQ ID NO: 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 621, 623, 625, 627, 629, 631, 633, 635, 637, 639, 641, 643, 645, 647, 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 663, 665, 667, 669, 671, 673, 675, 677, 679, 681, 683, 685, 687, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 701, 703, 705, 707, 709, 711, 713, 715, 717, 719, 721, 723, 725, 727, 729, 731, 733, 735, 737, 739, 741, 743, 745, 747, 749, 751, 753, 755, 757, 759, 761, 763, 765, 767, 769, 771, 773, 775, 777, 779, 781, 783, 785, 787, 789, 791, 793, 795, 797, 799, 801, 803, 805, 807, 809, 811, 813, 815, 817, 819, 821, 823, 825, 833, 835, 837, 839, 841, 196 843, 845, 847, 849, 851, 853, 855, 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871, 873, 875, 877, 879, 881, 883, 885, 887, 889, 891, 893, 895, 897, 899, 901, 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 946, 948, 950, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 96 8, 969, 970, 971 y 972. Aquí, la subsecuencia única es única como es comparada con un polipéptido correspondiente a aquel de número de Acceso de GenBank CAA70664. Aquí nuevamente, el polipéptido es alineado contra las secuencias representadas por el número de Acceso CAA70664. Observar que si la secuencia corresponde a una secuencia no traducida tal como un pseudo gen, el polipéptido correspondiente es generado simplemente mediante la traducción in silico de la secuencia de ácido nucleico a una secuencia de aminoácidos, donde la estructura de lectura es seleccionada para corresponder a la estructura de lectura de los polinucleótidos GAT homólogos. La invención también proporciona ácidos nucleicos objetivo que hibridan bajo condiciones severas a un oligonucleótido de codificación único que codifica una subsecuencia única en un polipéptido seleccionado de SEQ ID NO: 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 197 615, 616, 617, 618, 619, 621, 623, 625, 627, 629, 631 r 633 , 635, 637, 639, 641, 643, 645, 647 649, 651, 653, 655, 657, 659, 661, 663, 665, 667, 669, 671, 673, 675, 677, 679 , 681, 683, 685, 687, 689, 691, 693, 695, 697, 699, 701, 703 , 705, 707, 709, 711, 713, 715, 717, 719, 721, 723, 725, 727 , 729, 731, 733, 735, 737, 739, 741, 743, 745, 747, 749, 751 f 753, 755, 757, 759, 761, 763, 765, 767, 769, 771, 773, 775 777, 779, 781, 783, 785, 787, 789, 791, 793, 795, 797, 799 801, 803, 805, 807, 809, 811, 813, 815, 817, 819, 821, 823 , 825, 833, 835, 837, 839, 841, 843, 845, 847, 849, 851, 853 , 855, 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871, 873, 875, 877 879, 881, 883, 885, 887, 889, 891, 893, 895, 897, 899, 901 , 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919, 921, 923, 925 927, 929, 931, 946, 948, 950, 953, 954, 955, 956, 957, 958 , 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971, y 972 en donde la sobsecuencia única es única como es comparado a un polipéptido correspondiente para cualquiera de los polipéptidos de control. Las secuencias únicas son determinadas como es mencionado en lo anterior. En un ejemplo, las condiciones severas se seleccionan tal que un oligonucleótido perfectamente complementario al oligonucleótido de codificación híbrida al oligonucleótido de por lo menos aproximadamente a 2.5x-10x más alto, de preferencia por lo menos aproximadamente 5-1 Ox más alta la relación de señal a ruido que para la hibridación 198 del oligonucleótido perfectamente complementario a un ácido nucleico de control correspondiente a cualquiera de los polipéptido de control. Las condiciones pueden ser seleccionadas tal que relaciones más altas de señal a ruido son observadas en el ensayo particular que es utilizado, por ejemplo, aproximadamente 15x, 20x, 30x, 50x o más. En este ejemplo, el ácido nucleico objetivo híbrida al oligonucleótido de codificación único con por lo menos una relación de señal a ruido de 2x más alta como es comparado con la hibridación del ácido nucleico de control al oligonucleótido. Nuevamente, las relaciones de señal a ruido más altas pueden ser seleccionadas, por ejemplo, aproximadamente 2.5x, 5x, lOx, 20x, 30x, 50x o mayor. La señal particular dependerá de la marca usada en el ensayo relevante, por ejemplo, una marca fluorescente, una marca colorimétrica, una marca radioactiva o los similares. Vectores, Promotores y Sistemas de Expresión La presente invención también incluye construcciones recombinantes que comprenden una o más de las secuencias de ácido nucleico como es descrito ampliamente en lo anterior. Las construcciones comprenden un vector, tal como un plásmido, un cósmido, un fago, un virus, un cromosoma artificial bacteriano (BAC) , un cromosoma artificial de levadura (YAC) o los similares, en los cuales una secuencia de ácido nucleico de la invención se ha insertado, en una 199 orientación hacia delante o hacia atrás. En un aspecto preferido de esta modalidad, la construcción además comprende secuencias regulatorias, incluyendo, por ejemplo, un promotor operablemente enlazado a la secuencia. Números grandes de vectores y promotores adecuados son conocidos para aquellos expertos en la técnica, y son comercialmente disponibles. Como es discutido previamente, los textos generales que describen técnicas moleculares útiles en la presente, incluyendo el uso de vectores, promotores y muchos otros temas relevantes incluyen Berger y Kimmel, Guide to Molecular Cloning Techniques, Methods in Enzymology Volumen 152, (Academic Press, Inc., San Diego, CA) ('"Berger") ; Sambrook y colaboradores, Molecular Cloning-? aboratory Manual, 2-edición, Volúmenes 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, Nueva York, 1989 ("Sambrook") y Current Protocols in Molecular Biology, P. M. Ausubel y colaboradores, eds . , Current Protocols, una empresa colectiva entre Greene Publishxng Associates, Inc. y John iley & Sons, Inc., (suplementada hasta 1999) ("Ausubel"). Ejemplos de protocolos suficientes para dirigir a personas expertas a través de los métodos de amplificación in vitro, incluyendo la reacción en cadena de polimerasa (PCR) , la reacción en cadena de ligasa (LCR) , amplificación de QP-replicasa y otras técnicas mediadas por RNA polimerasa (por ejemplo, NASBA) , por ejemplo, para la producción de los ácidos nucleicos homólogos de la invención que se encuentran en Berger, Sambrook y Ausubel, así como en Mullís y colaboradores/ (1987) patente norteamericana No. 4,683,202; Innis y colaboradores, eds. (1990) PCR Protocole: A Guide to Methods and Applications (Academic Press Inc. San Diego, CA) ("Innis"); Arnheim & Levinson (1 de Octubre de 1990) C&EN 36-47; The Journal Of NIH Research (1991) 3:81-94; Kwoh y colaboradores, (1989) Proc. Nat'l. Acad. Sci. EUA 86:1173; Guatelli y colaboradores, (1990) Proc. Nat'l. Acad. Sci. EUA 87:1874; Lomell y colaboradores, (1989) J. Clin. Chem 35:1826; landegren y colaboradores, (1988) Science 241:1077-1080; Van Brunt (1990) Biotechnology 8:291-294; Wu y Wallace (1989) Gene 4:560; Barringer y colaboradores, (1990) Gene 89:117; y Sooknanall and Malek (1995) Biotechnology 13:563-564. Los métodos mejorados para clonar ácidos nucleicos amplificados in vitro se describen en Wallace y colaboradores, patente norteamericana No . 5,426,039. Métodos mejorados para amplificar ácidos nucleicos grandes mediante PCR se resumen en Cheng y colaboradores, (1994) Nature 369 : 684-685 y las referencias citadas en la misma, en las cuales los amplxcones de PCR de hasta 40 kb son generados. Un experto apreciará que esencialmente cualquier RNA puede ser convertido en un DNA de doble hebra adecuado para la digestión de ' estricción, expansión por PCR y la secuenciación usando la transcriptasa inversa y una 201 polimerasa. Ver, por ejemplo, Ausubel, Sambrook y Berger, todo supra. La presente invención también se relaciona a células hospederas diseñadas que son transducidas (transformadas o transíectadas ) con un vector de la invención (por ejemplo, un vector de clonación de la invención o un vector de expresión de la invención) asi como la producción de polipéptidos de la invención mediante técnicas recombinantes . El vector puede ser, por ejemplo, un plásmido, una particular viral, un fago, etc. Las células hospederas diseñadas pueden ser cultivadas en medios nutrientes convencionales modificados como sea apropiado para activar promotores, seleccionar transformante o amplificar el gen homólogo GAT. Las condiciones de cultivo, tal como la temperatura, pH y los similares, son aquellos previamente usados con la célula hospedera seleccionada para la expresión, y serán evidentes para aquellos expertos en la técnica y en las referencias citadas en la presente, incluyendo, por ejemplo, Sambrook, Ausubel y Berger, asi como por ejemplo, Freshney (1994) Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 3- edición (Wiley-Liss, Nueva York) y las referencias citadas en las mismas. Los polipéptidos GAT de la invención se pueden producir en células no animales tales como plantas, levadura, hongos, bacterias y los similares. Además de Sambrook, Berger 202 y Ausubel, los detalles que consideran el cultivo de células no animales se pueden encontrar en Payne y colaboradores, (1992) Plant Cell and Tlssue Culture in Liquid Systems (John Wiley & Sons, Inc. Nueva York, NY) ; Gamborg y Phillips, eds . (1995) Plant Cell, Tissue and ürgan Culture: Fundamental Methods/Sprlger Lab Manual (Springer-Verlag, Berlín) ; y Atlas y Parks, eds., The Handbook of Microbiological Media (1993) CRC Press, Boca Ratón, FL. Los polinucleótidos de la presente invención se pueden incorporar en cualquiera de una variedad de vectores de expresión adecuados para expresar un polipéptido. Los vectores adecuados incluyen secuencias cromosomales, no cromosórnales y de DNA sintético, por ejemplo, derivados de SV40; plásmidos bacterianos; DNA de fago; baculovirus; plásmidos de levadura; vectores derivados de combinaciones de plásmidos y DNA de fago, DNA viral tal como vaccinia, adenovirus, virus fowl pox, pseudorrabias, adenovirus, virus adeno-asociados, retrovirus y muchos otros. Cualquier vector que transduce el material genético en una célula, y si se desea la replicación, que es replicable y viable en el hospedero relevante puede ser utilizado. Cuando es incorporado en un vector de expresión, un polinucleótido de la invención es operablemente enlazado a una secuencia de control de transcripción apropiadas (promotor) para dirigir la síntesis de mRNA. Ejemplos de 203 tales secuencias de control de transcripción particularmente adecuadas para el uso en plantas transgénicas incluyen los promotores de virus de mosaico de coliflor (CaMV) , virus de mosaico de escrofularia (IMV) y virus en bandas de vena de fresa (SVBV) , descritos en la Solicitud Provisional norteamericana No. 60/245,354. Otros promotores conocidos para controlar la expresión de genes en células procarióticas o eucarióticas o sus virus y que pueden ser utilizados en algunas modalidades de la invención incluyen el promotor SV40, promotor lac o trp de E. coli y el promotor lambda PL de fago. Un vector de expresión opcionalmente contiene un sitio de enlace de ribosoma para iniciación de la traducción, y un terminador de transcripción, tal como Pinll . El vector también opcionalmente incluye secuencias apropiadas para la amplificar la expresión, por ejemplo, un incrementador . Además, los vectores de expresión de la presente invención opcionalmente contienen uno o más marcadores seleccionables para proporcionar un atributo fenotipico para la selección de células hospederas transformadas. Usualmente, el gen marcador seleccionable codificará la resistencia al antibiótico o el herbicida. Los genes adecuados incluyen aquellos que codifican para la resistencia al antibiótico espectinomicina o estreptomicina (por ejemplo, el gen aada) , el gen de estreptomicina fosfotransferasa (SPT) que codifica para la resistencia de estreptomicina, el gen de neomicin 204 fosfotransferasa (NPTII) que codifica para la resistencia a canamicina o gene licina, el gen de higromicin fosfotransferasa (HPT) que codifica para la resistencia a higromicina . Los genes marcadores seleccionables adicionales incluyen dihidrofolato reductasa o resistencia a neomicina para el cultivo de células eucarióticas y resistencia a tetraciclina o ampicilina en E. coli . Los genes adecuados que codifican para resistencia a herbicidas incluyen aquellos que actúan para inhibir la acción de acetolactato sintasa (ALS ) , en particular los herbicidas de tipo sulfonilurea (por ejemplo, el gen de acetolactato sintasa (ALS) que contiene mutaciones que conducen a tal resistencia en particular las mutaciones S4 y/o Hra) , aquellos actúan para inhibir la acción de la glutamina sintasa, tal como fosfinotricina o basta (por ejemplo, el gen bar) u otros genes conocidos en la técnica. El gen bar codifica la resistencia al herbicida basta y el gen ALS codifica la resistencia al herbicida clorsulfurón. En algunos casos, los genes GAT modificados son utilizados como marcadores seleccionables. Los vectores de la presente invención se peden emplear para transformar un hospedero apropiado para permitir que el hospedero exprese una proteína o polipéptido inventivo. Ejemplos de hospederos de expresión apropiados incluye: células bacterianas, tales como E. coli, B. 205 subtilis, Streptomyccs y Salmonella typhi uri um; céulas fúngales, tales como Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris y Neurospora c assa; células de insectos tal como Dzosophila y Spodoptera frugíperda; células de mamífero tal como CHO, COS, BHK, HEK 293 o melanoma de Bowes; o células de plantas o explantas, etc. Se entiende que no todas las células o lineas de células necesitan ser capaces de producir polipéptidos GAT completamente funcionales; por ejemplo, los fragmentos antigénicos de un polipéptido GAT pueden ser producidos. La presente invención no está limitada por las células hospederas empleadas . En sistemas bacterianos, un número de vectores de expresión pueden ser seleccionados dependiendo del uso propuesto para el polipéptido GAT. Por ejemplo, cuando cantidades grandes de polipéptido GAT o fragmentos del mismo son necesarias para producción comercial o para inducción de anticuerpos, vectores que dirigen expresión de alto nivel de proteínas de fusión que son fácilmente purificadas, pueden ser deseables. Tales vectores incluyen, pero no están limitados a, vectores de clonación y expresión de E. coli multifuncional.es tal como BLUESCRIPT (Stratagene) , en los cuales la secuencia de codificación de polipéptido GAT puede ser ligada en la estructura del vector con secuencias para el Met amino- terminal y los 7 residuos subsecuentes de beta-galactosidasa de modo que se produce una proteina híbrida; 206 vectores pIN (Van Heeke & Schuster (1989) J. Biol. Chem. 264: 5503-5509) vectores pET (Novagen, Madison WI ) ; y los similares . De manera similar, en la levadura Saecharomyees cerevisiae un número de vectores que contienen promotores constitutivos o inducibles tales como factor alfa, alcohol oxidasa y PGH se pueden usar para la producción de polipéptidos GAT de la invención. Para revisiones, ver Ausubel (supra) y Gran y colaboradores, (1987) Methods xn Enzymology 153: 516-544. En células hospederas mamiferas, una variedad de sistemas de expresión, incluyendo sistemas de base viral, pueden ser utilizados. En casos donde se utiliza un adenovirus como un vector de expresión, una secuencia de codificación, por ejemplo de un polipeptido GAT, es opcionalmente ligada en un complejo de transcripción/traducción de adenovirus que consiste del promotor tardío y la secuencia tripartita. La inserción de una región de codificación del polipéptido GAT en una región El o E3 no esencial del genoma viral dará por resultado un virus viable capaz de expresar un GAT en células hospederas infectadas (Logan y Shenk (1984) Proc. Nafl. Acacl. Sci. USA 81: 3655-3659). Además, los incrementadotes de transcripción, tal como el incrementador del virus de carcoma rous (RSV) , se pueden usar para incrementar la expresión en células 207 hospederas mamiferas . De manera similar, en células de plantas, la expresión puede ser inducida a partir de un transgen integrado en un cromosoma de planta, o citoplásmicamente a partir de un ácido nucleico episomal o viral. En el caso de transgenes establemente integrados, frecuentemente es deseable proporcionar secuencias capaces de inducir la expresión constitutiva o inducible de los polinucleótidos GAT e la invención, por ejemplo, usando CaMV viral, por ejemplo, o secuencias reguladoras derivadas de plantas. Numerosas secuencias regulatorias derivadas de plantas han sido descritas, incluyendo secuencias que dirigen la expresión de una manera especifica al tejido, por ejemplo, TobRB7 , patatin B33, promotores del gen GRP, el promotor rbcS-3A, y los similares. Alternativamente, la expresión de alto nivel se puede lograr al expresar transientemente secuencias exógenas de un vector viral de planta, por ejemplo, TMV, BMV, etc. Típicamente, las plantas transgénicas constitutivamente que expresan un polinucleótido GAT de la invención serán preferidas, y las secuencias regulatorias son seleccionadas para asegurar la expresión estable constitutiva del polipéptido GAT. Los vectores típicos útiles para la expresión de ácidos nucleicos en plantas superiores son bien conocidos en la técnica e incluyen vectores derivados del plásmido que 208 induce tumor (Ti) de Agrobacterium tumafaciens descrito por Rogers y colaboradores, (1987) Mcth. Enzy ol . 153: 253-277. Los vectores de A. tumefaciens ejemplares útiles en la presente son los plásmidos pKYLX6 y pKYLX7 por Schardl y colaboradores, (1987) Gene 61: 1-11 Berger y colaboradores, (1989) Proc. Nat'l. Acad. Sci . U.S. A. 86: 8402-8406. Otro vector útil en la presente es el plásmido pBI191.2 que es disponible de Clontech Laboratories, Inc. (Palo Alto, CA) . Una variedad de virus de plantas que pueden ser empleados como vectores son conocidos en la técnica e incluyen el virus de mosaico de coliflor (CaMV) , geminivirus, virus de mosaico de bromo y virus de mosaico de tabaco . En algunas modalidades de la presente invención, una construcción de polinucleótido GAT adecuada para la transformación de células de plantas es preparado. Por ejemplo, un polinucleótido GAT deseado puede ser incorporado en un cásete de expresión recombinante para facilitar la introducción del gen en una planta y la expresión subsecuente del polipéptido codificado. Un cásete de expresión típicamente comprenderá un polinucleótido GAT, o fragmento funcional del mismo, operablemente enlazado a una secuencia de promotor y otras secuencias regulatorias de iniciación de transcripción y de traducción que dirigirán la expresión de la secuencia en los tejidos propuestos (por ejemplo, la planta completa, hojas, semillas) de la planta transformada. 209 Por ejemplo, un promotor de planta fuertemente o débilmente constructivo puede ser empleado el cual dirigirá la expresión del polipéptido GAT en todos los tejidos de una planta. Tales promotores son activos bajo la mayoría de las condiciones ambientales y estados de desarrollo o diferenciación celular. Ejemplos de promotores constitutivos incluyen el virus de mosaico de coliflor (CaMV) la región de iniciación de transcripción 35S, el 1'- o 2' -promotor derivado de T-DNA de Agrobacteri um tumefaciens, el promotor ubicuitin 1, el promotor Smas, el promotor alcohol cinamílico deshidrogenasa (patente norteamericana No. 5,683,439), el promotor Nos, el promotor pEmu, el promotor rubisco, el promotor GRP1-8 y otras regiones de iniciación de transcripción a partir de varios genes de plantas conocidos para aquellos expertos. En situaciones en las cuales la sobre expresión de un polinucleotido GAT es perjudicial a la planta o de otra manera indeseable, un experto, en revisión de esta descripción, reconocerá que promotores constitutivos débil pueden ser usados para niveles bajos de expresión. En aquellos casos donde altos niveles de expresión no es perjudicial para la planta, un promotor fuerte, por ejemplo, un promotor t-RNA u otro promotor pol III, o un promotor pol II fuerte, tal como el promotor de virus de mosaico de coliflor,' puede ser utilizado. Alternativamente, un promotor de planta puede estar 210 bajo control ambiental. Tales promotores son referidos aquí como promotores "inducibles" . Ejemplos de condiciones ambientales que puede efectuar la transcripción por los promotores inducibles incluyen el ataque por patógenos, condiciones anaeróbicas, o la presencia de luz. En particular, templos de promotores inducibles son el promotor Adhl que es inducible por ipoxia o estrés por frío, el promotor Hsp70 que es inducible por estrés por calor, y el promotor PPDK que es inducible por luz. También útiles son los promotores que son químicamente inducibles. Los promotores utilizados en la presente invención pueden ser "específicos del tejido" y, como tales, bajo el control de desarrollo en que el polinucleótido es expresado solamente en ciertos tejidos, tales como hojas, raíces, frutos, flores y/o semillas. Un promotor ejemplar es el promotor específico de antera 5126 (patentes norteamericanas Nos. 5,689,049 y 5,689,051). Ejemplos de promotores preferidos se semilla incluyen, pero no están limitados a, el promotor de gamma zeina 27 kD y el promotor ceroso, Boronat y colaboradores, 1986) Plant Sci. 47, 95-102; Reina y colaboradores, (1990) Nucleic Acids Res. 18 (21) : 6426; y Kloesgen y colaboradores, (1986) Mol. Gen. Genet. 203: 237-244. Los promotores que expresan en el embrión, pericarpio y endosperma son divulgados en las solicitudes de patentes norteamericanas Nos. de serie 60/097,233 presentada 211 el 20 de agosto de 1998 y 60/098,230 presentada el 28 de agosto de 1998. Las descripciones de cada una de estas son incorporadas en la presente por referencia en su totalidad. En modalidades en la cual uno o más secuencias de ácido nucleico endógenas al sistema de plantas son incorporadas en la construcción, los promotores endógenos (o variantes de los mismos) a partir de estos genes pueden ser empleados para dirigir la expresión de los genes en la planta transfectada . Los promotores específicos de tejido también pueden ser usados para dirigir la expresión de polinucleótidos heterólogos . En general, el promotor particular usado en el cásete de expresión en plantas depende de la aplicación propuesta. Cualquiera de los promotores heterólogos o no heterólogos (es decir, endógenos) pueden ser empleados para dirigir la expresión de los ácidos nucleicos de la presente invención. Estos promotores también pueden ser utilizados, por ejemplo, en cásete de expresión para inducir la expresión de ácidos nucleicos antisentido para reducir, incrementar o alterar la concentración y/o composición de las proteínas de la presente invención en un tejido deseado. Cualquiera de un número de promotores que dirigen la transcripción en células de plantas son adecuados. El promotor puede ser ya sea constitutivo o inducible. Además de los promotores mencionados en lo anterior, los promotores de origen 212 bacteriano que operan en plantas incluyen el promotor de octopina sintasa, el promotor de nopalina sintasa y otros promotores derivados de plásmidos Ti nativos (ver, Herrara-Estrella y colaboradores, (1983) Nature 303: 209-213) . Los promotores virales incluyen los promotores de RNA 35S y 19S del virus de mosaico de coliflor (Odell y colaboradores, (1985) Nature 313: 810-812) . Otros promotores de plantas incluyen el promotor de subunidad pequeña de ribulosa-1, 3-bifosfato carboxilasa y el promotor de faseolina. La secuencia del promotor del gene E8 y otros genes también pueden ser utilizados. El aislamiento y la secuencia de promotor E8 es descrito en detalle en Deikman y Fischer (1988) EMBO J. 7: 3315-3327. Para identificar promotores candidatos, las porciones 5' de un clon genómico es analizado para secuencias características de secuencias de promotor. Por ejemplo, los elementos de la secuencia de promotor incluyen la secuencia del consenso del cuadro TATA (TATAAT) , que es usualmente de 20 a 30 pares de bases corriente arriba del sitio de inicio de transcripción, en plantas, además de la corriente arriba del cuadro TATA, las posiciones -80 a -100, hay típicamente un elemento promotor con una serie de adeninas que circundan el trinucleótido G (o T) como es descrito por Messing y colaboradores, (1983) Genetic Enginnering in Plants, eds . Kosage, y colaboradores, pp. 221-227. 213 En la preparación de construcciones de polinucleótido, por ejemplo, vectores, de la invención, las secuencias diferentes al promotor y el polinucleótido counido también pueden ser empleados. Si de desea la expresión del polipéptido normal, una región de poliadenilación en el extremo 3' de una región que codifica GAT puede ser incluido. La región de poliadenilación puede ser derivada, por ejemplo, a partir de una variedad de genes de plantas, o a partir de T-DNA. La secuencia de extremo 3' que es adicionada puede ser derivada de, por ejemplo, el gen nopalina sintasa o el gen octopina sintasa, o alternativamente otro gen de planta, o menos de preferencia a partir de cualquier otro gen eucariótico . Una secuencia de intrón se puede adicionar a la región no traducida 5' de la secuencia de codificación o la secuencia de codificación parcial para incrementar la cantidad de del mensaje maduro que se acumula. Ver, por ejemplo, Buchman y Berg (1988) Mol. Cell Biol. 8: 4395-4405 y Callis y colaboradores, (1987) Genes Dev. 1: 1183-1200. El uso de intrones de maíz Adhl, intrón 1, 2 y 6, y el intrón Bronze-1 son conocidos en la técnica. Ver, generalmente, Freeling y Walbot, eds . (1994) The Maize Handbook (Springer, New York) , capítulo 116. La construcción también puede incluir un gen-marcador que confiere un fenotipo seleccionable sobre células 214 de plantas. Por ejemplo, el marcador puede codificar la tolerancia biocida, particularmente tolerancia a antibiótico, tal como la tolerancia a canamicina, G418, bleomicina, higromicina o tolerancia al herbicida, Tal como la tolerancia a clorsulfuron, o fosfinotricina (el ingrediente activo en los herbicidas bialafos y Basta) . Las señales de iniciación especificas pueden ayudar en la traducción eficiente de una secuencia de codificación de polinucleótido GAT de la presente invención. Esas señales pueden incluir, por ejemplo, el codón de iniciación ATG y las secuencias adyacentes. En los casos donde una secuencia de codificación de polipéptido GAT, su codón de iniciación y las secuencias corriente arriba son insertadas en un vector de expresión apropiado, no se puede necesitar señales de control tradicionales adicionales. Sin embargo, en casos donde solamente la secuencia de codificación (por ejemplo, una secuencia de codificación de proteina) , o una porción de la misma, es insertada, las señales de control transcripcional exógenas incluyendo el codón de iniciación deben ser proporcionados. Además, el codón de iniciación debe estar en la estructura de lectura correcta para asegurar la transcripción del inserto completo. Los elementos transcripcionales exógenos y los codones de iniciación pueden ser de varios orígenes, tanto naturales como sintéticos. La eficiencia de la expresión puede ser incrementada mediante la 215 inclusión de incremen adotes apropiados al sistema celular en uso (Scharf y colaboradores, (1994) Results Probl. Cell Differ. 20: 125-62 y Bittner y colaboradores, (1987) Methods in Enzymol 153: 516-544). Secuencias de Secreción/Localización Los polinucleótidos de la invención también pueden ser fusionados, por ejemplo, en la estructura a ácidos nucleicos que codifican una ' secuencia de secreción/localización, para dirigir la expresión del polipéptido a un compartimiento celular deseado, membrana u organelo de una célula hospedera, o para dirigir la secreción de polipéptido al espacio periplásmico o en el medio de cultivo de células. Tales secuencias son conocidas para aquellos expertos, e incluyen los péptidos de guia de secreción, secuencias de dirección de organelo (por ejemplo, secuencias de localización nuclear, señales de retención ER, secuencias de transito mitocondriales y secuencias de transito de cloroplasto) , secuencias de localización/fi ación a la membrana (por ejemplo, secuencias de transferencia de detención, secuencias de fijación GPI) y los similares. En una modalidad preferida, un polinucleótido de la invención se fusiona en la estructura con una secuencia de transito de cloroplasto N-terminal (o secuencia de péptido de tránsito de cloroplasto) derivado de un gen que codifica un polipéptido que es normalmente dirigido al cloroplasto. Tales 216 secuencias son típicamente ricas en serina y treonina; son deficientes en aspartato, glutamato y tirosina; y generalmente tienen un dominio central rico en aminoácidos positivamente cargados. Hospederos de Expresión En una modalidad adicional, la presente invención se relaciona a células hospederas que contienen las construcciones descritas en lo anterior. La célula hospedera puede ser una célula eucariótica, tal como una célula mamífera, una célula de levadura, o una célula de planta, o la célula hospedera puede ser una célula procariótica, tal como una célula bacteriana. La introducción de la construcción en la célula hospedera se puede efectuar mediante la transfección con fosfato de calcio, la transfección mediada con DEAE-Dextrano, electroporación, u otras técnicas comunes (Davis y colaboradores, Basic Methods in Molecular Biology) . Una célula hospedera es opcionalmente seleccionada por su habilidad para modular la expresión de las secuencias insertadas o para procesar la proteína expresada en el aspecto deseado. Tales modificaciones de la proteína incluyen, pero no están limitadas a, acetilación, carboxilación, glicosilación, fosforilación, lipidación y acilación. El procesamiento post-traduccional que segmenta una "pre" o una "prepro" forma de la proteína también puede 217 ser importante para la inserción correcta, plegamiento y/o función. Diferentes células hospederas tales como E. coll , Bacillus sp. , levadura o células martilieras tales como CHO, HeLa, BHK, MDCK, 293, WI38, etc. tienen la maquinaria celular especifica y mecanismos característicos, por ejemplo, para actividades post-traduccionales y pueden ser seleccionadas para asegurar la modificación deseada y el procesamiento de la proteína extraña, introducida. Para la producción de alto rendimiento, a largo plazo de proteína recombinante, se pueden utilizar sistemas de expresión estables. Por ejemplo, células de plantas, explantas o tejidos, por ejemplo, retoños o discos de hojas, que establemente expresan un polipéptido de la invención son transducidos usando vectores de expresión que contienen orígenes virales de replicación o elementos de expresión endógenos y un gen marcador seleccionable . Después de la introducción del vector, las células se pueden dejar crecer durante un período determinado para ser apropiado para el tipo de célula, por ejemplo, 1 o más horas para células bacterianas, 1-4 días para células de plantas, 2-4 semanas para algunas explantas de plantas, en un medio enriquecido antes de que se cambie al medio selectivo. El propósito del marcador seleccionable es conferir resistencia a la selección, y su presencia permite y recuperación de células que exitosamente expresan las secuencias introducidas. Por 218 ejemplo, las plantas transgénicas que expresan los polipéptidos de la invención pueden ser seleccionadas directamente para resistencia al herbicida, glifosato. Los embriones resistentes derivados de explantas establemente transformadas pueden ser proliferados, por ejemplo, usando técnicas de cultivo de tejido apropiadas para el tipo de célula. Las células hospederas transformadas con una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido de la invención son opcionalmente cultivadas bajo condiciones adecuadas para la expresión y recuperación de la proteína codificada a partir del cultivo de células. La proteina o fragmento de la misma producida por una célula recombinante puede ser secretada, enlazada a la membrana o contenida intracelularmente, dependiendo de la secuencia y/o el vector utilizado. Será entendido por aquellos expertos en la técnica, los vectores de expresión que contienen polinucleótidos GAT de la invención pueden ser diseñados con secuencias de señal que dirigen la secreción de los polipéptidos maduros a través de una membrana celular procariótica o eucariótica. Secuencias de Polipéptido Adicionales Los polipéptidos de la presente invención también pueden comprender una secuencia de codificación fusionada en la estructura a una secuencia marcadora que, por ejemplo, 219 facilita la purificación del polipéptido codificado. Tales dominios que facilitan la purificación incluyen, pero no están limitados a, péptidos quelantes de metal tal como los módulos histidina-triptofano que permiten la purificación sobre metales inmovilizados, una secuencia que enlaza glutationa (por ejemplo, GST) , una marca de hemaglutinina (HA) (correspondiente a un epitope derivado de la proteína hemaglutinina de influenza; Wilson y colaboradores, (1984) CeiJ 37: 767), secuencias de proteína de enlace de maltosa, el epitope FLAG utilizado en el sistema de purificación de extensión/afinidad FLAGS (Immunex Corp. Seattle, WA) y los similares. La inclusión tiene secuencia enlazadora de polipéptido segmentable de proteasa entre el dominio ' de purificación y la secuencia homologa GAT es útil para facilitar la purificación. Un vector de expresión contemplado por el uso en las composiciones y métodos descritos en la presente proporciona la expresión de una proteína de fusión que comprende un polipéptido de la invención fusionado en una región de polihistidina separada por un sitio de segmentación enteroquinasa . Los residuos de histidina facilitan la purificación sobre IMIAC (cromatografía de afinidad iónica de metal inmovilizado, como es descrito en Porath y colaboradores, (1992) Pxotein Expression and Purificatíon 3: 263-281) mientras que el sitio de segmentación enteroquinasa proporciona un medio para separar el polipéptido homólogo GAT 220 de la proteina de fusión. Los vectores pGEX (Promega; Madison WI) también se pueden utilizar para expresar polipéptidos extraños como proteínas de fusión con glutationa S-transferasa (GST) . En general, tales proteínas de fusión son solubles y fácilmente pueden ser purificadas a partir de células lisadas mediante la adsorción a cuentas de ligando-agarosa (por ejemplo, glutationa-agarosa en el caso de fusiones GST) seguido por la elusión en la presencia de ligando libre. Producción y Recuperación del Polipéptido Después de la transducción de una hospedera adecuada y el crecimiento de las células hospederas a una densidad de células apropiada, el promotor seleccionado es inducido por medios apropiados (por ejemplo, desplazamiento de temperatura o inducción química) y las células son cultivadas durante un período adicional. Las células típicamente son cosechadas por centrifugación, rotas por medios físicos o químicos, y el extracto crudo resultante retenido para la purificación adicional. Las células microbianas empleadas en la expresión de proteínas pueden ser rotas por cualquier método conveniente, incluyendo el ciclaje de congelación-descongelación, sonicación, ruptura mecánica, o el uso de agente de lisado celular, u otros métodos, que son bien conocidos por para aquellos expertos en la técnica. Como se mencionó, muchas referencias están 221 disponibles para el cultivo y la producción de muchas células, incluyendo células de origen bacteriano, de planta, animal (especialmente mamífera) y arco bacteriano. Ver, por ejemplo, Sambrook, Ausubel y Berger (all supra) , asi como Freshney (1994) Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 3a ed. (Wiley-Liss, New York) y las referencias citadas en las mismas; Doyle y Griffiths (1997) Mammalian Cell Culture: Essential Techniques (John Wiley and Sons, NY) ; Humason (1979) Animal Tissue Techniques, 4a ed. (W.H. Freeman y Company) ; y Ricciardelli, y colaboradores, (1989) Jn vitro Cell Dev. Biol. 25: 1016-1024. Para el cultivo y regeneración de células de plantas ver, Payne y colaboradores, (1992) Plant Cell and Tissue Culture in Liquíd Systems (John Wiley & Sons, Inc., New York, NY) ; Gamborg y Phillips, eds . (1995) Plant Cell r Tissue and Organ Culture: Fundamental Methods/ Springer Lab Manual (Springer-Verlag, Berlín) ; Jones, ed. (1984) Plant Gene Transfer and Expression Protocols (Humana Press, Totowa, New Jersey) ; y Croy, ed. (1993) Plant Molecular Biology (Bios Scientific Publishers, Oxford, U.K.), ISBN 0 12 198370 6. Los medios de cultivo de células en general son expuestos en Atlas y Parks, eds. (1993) The Handbook of Mícrobiological Media (CRC Press, Boca Ratón, FL) . Información adicional para el cultivo de células se encuentra en la literatura comercial disponible tal como el Life Science Research Cell Culture Catalogue (1998) de 222 Sigma-Aldrich, Inc. (St Louis, MO) Sigma-LSRCCC") y por ejemplo, The Plant Culture Catalogue y el suplemento (1997) también de Sigma-Aldrich, Inc. (St Louis, MO) ("Sigma-PCCS" ) . Detalles adicionales que consideran la transformación de células de planta y la producción de plantas transgénicas se encuentran enseguida. Los polipéptidos de la invención se pueden recuperar y purificar a partir de cultivos celulares recombinantes mediante cualquiera de un número de métodos bien conocidos en la técnica, incluyendo la precipitación con sulfato de amonio o etanol, extracción con ácido, la cromatografía de intercambio aniónico o catiónico, cromatografía de fosfocelulosa, cromatografía de interacción hidrofóbica, cromatografía de afinidad (por ejemplo, usando cualquiera de los sistemas de marcación mencionados en la presente) , cromatografía de hidroxilapatita, y la cromatografía de lectina . Se pueden utilizar etapas de replegamiento de proteína, como se ha deseado, en la completación de la configuración de la proteína madura. Finalmente, la cromatografía líquida de alto desempeño (HPLC) se puede emplear en las etapas de purificación finales. Además de las referencias mencionadas en lo anterior, una variedad de métodos de purificación son bien conocidos en la técnica, incluyendo, por ejemplo, aquellos expuestos en Sandana (1997) Bioseparation of Proteins (Academic Press, 223 Inc.; Bollag y colaboradores, (1996) Protein Methods, 2a ed. (Wiley-Liss, NY) ; Walker (1996) The Protein Protocole Handbook (Humana Press, NJ) , Harris y Angal (1990) Protein Purification Applications: A Practical Approach (IRL Press at Oxford, Oxford, England) ; Harris y Angal Protein Purification Methods: A Practical Approach (IRL Press at Oxford, Oxford, England) ; Scopes (1993) Protein Purification : Principies and Practice, 3a ed. (Springer Verlag, NY) ; Janson y Ryden (1998) Protein Purification: Principies, Hígh Resolution Methods and Applications, 2a ed. (Wiley-VCII, NY) ; y Walker (1998) Protein Protocole on CD-ROM (Humana . Press, NJ) . En algunos casos, es deseable producir el polipéptido GAT de la invención en gran escala adecuado para aplicaciones industriales y/o comerciales. En tales casos, se emplean los procedimientos de fermentación en volumen. Brevemente, un polinucleótido GAT, por ejemplo, un polinucleótido que comprende cualquiera de la SEQ ID NO: 516, 517, 518, 519, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 620, 622, 624, 626, 628, 630, 632, 634, 636, 638, 640, 642, 644, 646, 648, 650, 652, 654, 656, 658, 660, 662, 664, 666, 668, 670, 672, 674, 676, 678, 680, 682, 684, 686, 688, 690, 692, 694, 696, 698, 700, 702, 704, 706, 708, 224 710, 712, 714, 716, 718, 720, 722, 724 726, 728, 730, 732, 734, 736, 738, 740, 742, 744, 746, 748 750, 752, 754, 756, 758, 760, 762, 764, 768, 770, 772, 774 r 776, 778, 780, 782, 784, 786, 788, 790, 792, 794, 796, 798 , 800, 802, 804, 806, 808, 810, 812, 814, 816, 818, 820, 822 824, 832, 834, 836, 838, 840, 842, 844, 846, 848, 850, 852 854, 856, 858, 860, 862, 864, 866, 868, 870, 872, 874, 876 r 878, 880, 882, 884, 886, 888, 890, 892, 894, 896, 898, 900 r 902, 904, 906, 908, 910, 912, 914, 916, 918, 920, 922, 924 r 926, 928, 930, 932, 933, 934, 935, 936, 937, 938, 939, 940 r 941, 942, 943, 944, 945, 947, 949, 951 y 952, u otros ácidos nucleicos que codifican polipéptidos GAT de la invención pueden ser clonados en un vector de expresión. Por ejemplo, la patente norteamericana No. 5,955,310 por Widner y colaboradores, "METHODS FOR PRODUCING A POLYPEPTIDE IN A BACILLUS CELL", describe un vector con promotores en tamdem, y secuencias de estabilización operablemente enlazadas a una secuencia de codificación de polipéptido. Después de la inserción del polinucleótido de interés en un vector, el vector es transformado un hospedero bacteriano, por ejemplo Bacillus subtilis cepa PL1801IIE (amyE, apr, npr, spoIIE : : Tn917 ) . La introducción de un vector de expresión en una célula de Bacillus puede ser, por ejemplo, efectuada mediante la transformación de protoplasto (ver, por ejemplo, Chang y Cohén (1979) Mol. Gen. Genet. 168: 111), al usar células 225 competentes (ver, por ejemplo, Young y Spizizin (1961) J. Bacterial. 81: 823, o Dubnau y Davidoff-Abelson (1971) J. Mol. Biol. 56: 209), mediante electroforación (ver, por ejemplo, Shigekawa y Do er (1988) Biotechnigues 6: 742), o mediante conjugación (ver, por ejemplo, Koehler y Thorne (1987) J. Bacteriol. 169: 5271), ver, también, Ausubel, Sambrook y Berger, todo supra. Las células transformadas se cultivan en un medio nutriente adecuado para la producción del polipéptido usando métodos que son conocidos en la técnica. Por ejemplo, la célula puede ser cultivada mediante el cultivo en matraz de agitación, la fermentación en pequeña escala o gran escala (incluyendo las fermentaciones continuas, por lotes, de alimentación por lotes, o en estado sólidos) en termentadores de laboratorio o industriales desempeñados en un medio adecuado y condiciones que permiten que el polipéptido sea expresado y/o aislado. El cultivo toma lugar en un medio nutriente adecuado que comprende fuentes de carbono y nitrógeno y sales inorgánicas, usando procedimientos conocidos en la técnica. Los medios adecuados están disponibles de proveedores comerciales o se pueden preparar de acuerdo con las composiciones publicadas (por ejemplo, en catálogos de the American y e Culture Collection) . El polipéptido secretado puede ser recuperado directamente del medio . 226 El polipéptido resultante puede ser aislado por métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, el polipéptido puede ser aislado del medio nutriente mediante procedimientos convencionales incluyendo, pero no limitado a, centrifugación, filtración, extracción, secado por roció, evaporación o precipitación. El polipéptido aislado luego se puede purificar adicionalmente mediante una variedad de procedimientos conocidos en la técnica, incluyendo, pero no limitados a, cromatografía (por ejemplo, intercambio iónico, afinidad, hidrofóbica, cromatoenfocamiento exclusión de tamaño) , procedimientos electroforéticos (por ejemplo, enfocamiento isoeléctrico preparativo) , solubilidad diferencial (por ejemplo, precipitación con sulfato de amonio), o extracción (ver, por ejemplo, Bol] ag y colaboradores, (1996) Protein Methods, 2a ed. (Wiley-Liss , NY) y Walker (1996) The Protein Protocols Handbook (Humana Press, NJ) . Los sistemas de transcripción/traducción libres de célula también pueden ser empleados para producir polipéptidos usando DNAs o R As de la presente invención. Varios de tales sistemas están comercialmente disponibles. Una guía general para la transcripción in vitro y los protocolos de traducción se encuentra en Tymms (1995) Jn vi tro Transcription and Translation Protocols : Methods in Molecular Biology (Garland Publishing, NY) , vol . 37. 227 SUSTRATOS Y FORMATOS PARA LA RECOMBINACION DE LA SECUENCIA Los polinucleótidos de la invención opcionalmente se utilizan como sustratos para una variedad de procedimientos de generación de diversidad, por ejemplo, mutación, recombinación, y reacciones de recombinación recursivas, además de su uso en métodos de clonación estándares como se exponen en, por ejemplo, Ausubel, Berger y Sambrook, para producir polinucleótidos y polipéptidos GAT adicionales con propiedades deseadas. Una variedad de protocolos de generación de diversidad están disponibles y descritos en la técnica. Los procedimientos se pueden usar por separado, y/o en combinación para producir una o más variantes de un polinucleótido o conjunto de polinucleótidos, así como variantes de proteínas codificadas. Individualmente y colectivamente, estos procedimientos proporcionan maneras ampliamente aplicables, robustas para generar polinucleótidos diversificados y conjuntos de polinucleótidos (incluyendo, por ejemplo, librerías de polinucleótidos) útiles, por ejemplo, para el diseño y la evolución rápida de polinucleótidos, proteínas, rutass, células y/u organismos con nuevas y/o mejoradas características. El proceso de alteración de la secuencia puede resultar en, por ejemplo, sustituciones de nucleótidos individuales, sustituciones de nucleótidos múltiples y la inserción o supresión de regiones de la secuencia de ácido nucleico. 228 Mientras que distinciones y clasificaciones se hacen en curso de la discusión consecuente por claridad, será apreciado que las técnicas frecuentemente no son mutuamente exclusivas. En realidad, los diversos métodos se pueden utilizar individualmente o en combinación, en paralelo o en serie, para ingresar a diversas variantes de secuencias. El resultado de cualquiera de los procedimientos de generación de diversidad descritos en la presente puede ser la generación de uno o más polinucleótidos, que pueden ser seleccionados o clasificados para polinucleótidos que codifican proteínas con o que confieren propiedades deseables. Después de la diversificación por uno o más de los métodos descritos en la presente, o de otra manera disponibles para un experto, cualquiera de los polinucleótidos que son producidos pueden ser seleccionados para una actividad o propiedad deseada, por ejemplo Kttl alterado para glifosato, Km altera para acetyl CoA, uso de cofactores alternativos (por ejemplo, propionil CoA) incrementada, etc. Esto puede incluir la identificación de cualquier actividad que puede ser detectada, por ejemplo, un formato automatizado o automatizable, mediante cualquiera de los ensayos en la técnica. Por ejemplo, los homólogos GAT con actividad específica incrementada pueden ser detectados al analizar la conversión de glifosato a N-acetilglifosato, por ejemplo, mediante la espectrometría de masas. 229 Alternativamente, la habilidad mejorada para conferir resistencia al glifosato se puede analizar al cultivar las bacterias transformadas con ácido nucleico de la invención sobre agar que contiene concentraciones incrementadas de glifosato o al rociar las plantas transgénicas que incorporan un ácido nucleico de la invención con glifosato. Una variedad de propiedades relacionadas (o aún no relacionadas) pueden ser evaluadas, en serie o en paralelo, a juicio del profesional. Detalles adicionales que consideran la recombinación y selección para la tolerancia al herbicida se pueden encontrar, por ejemplo, en "DNA SHUFFLING TO PRODUCE HERBICIDE RESISTANT CROPS" (publicación norteamericana No. 2002/0058249) presentada el 12 de agosto de 1999. Descripciones de una variedad de procedimientos de generación de diversidad, incluyendo el éntremezclamiento multigen y métodos para generar secuencias de ácido nucleico modificadas que codifican dominios enzimáticos múltiples se encuentran en las siguientes publicaciones y las referencias citadas en las mismas: Soong, N. y colaboradores, (2000) Wat. Genet. 25 (4) : 436-39; Stemmer y colaboradores, (1999) Tumor Targeting 4: 1-4; Ness y colaboradores, (1999) Nature Biotech. 17: 893-896; Chang y colaboradores, (1999) Nature Biotech. 17: 793-797; Minshull y Stemmer (1999) Current Opinión in Chemical Biology 3: 284-290; Christians y colaboradores, (1999) Nature Biotech. 17: 259-264; Crameri y 230 colaboradores, (1998) Nature 391: 288-291; Crameri y colaboradores, (1997) Nature Biotech. 15: 436-438; Zhang y colaboradores, (1997) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 94: 4504-4509; Patten y colaboradores, (1997) Current Opinión in Biotech. 8: 724-733; Crameri y colaboradores, (1996) Nature Meó.. 2: 100-103; Crameri y colaboradores, (1996) Nature Biotech. 14: 315-319; Gates y colaboradores, (1996) J. Mol. Biol. 255: - 373-386; Stemmer (1996) "Sexual PCR and Assembly PCR" in The Encyclopedia of Molecular Biology (VCH Publishers, New York) pp. 447-457; Crameri y Stemmer (1995) BioTechñiques 18: 194-195; Stemmer y colaboradores, (1995) Gene 164: 49-53; Stemmer (1995) Science 270: 1510; Stemmer (1995) Bio/Technology 13: 549-553; Stemmer (1994) Nature 370: 389-391; y Stemmer (1994) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 91: 10747-10751. Los métodos mutacionales de generación de diversidad incluyen, por ejemplo, la mutagénesis dirigida al sitio (Ling y colaboradores, (1997) "Approaches to DNA mutagénesis: an over iew" Anal Biochem. 254(2): 157-178; Dale y colaboradores, (1996) "Oligonucleotide-directed random mutagénesis using the phosphorot ioate method" Methods Mol. Biol. 57: 369-374; Smith (1985) "Jn vitro mutagénesis" Ann. Rev. Genet. 19: 423-462; Botstein & Shortle (1985) "Strategies and applications of in vitro mutagénesis" Science 229: 1193-1201; Cárter (1986) "Site-directed mutagénesis" 231 Biochem. J. 237:1-7; y Kunkel (1987) "The efficiency of oligonucleotide directed mutagenesis" in Nucleic Acids & Molecular Biology (Eckstein, F. y Lilley, D.M.J. eds . , Springer Verlag, Berlín) ; mutagenesis usando plantillas que contienen uracilo (Kunkel (1985) "Rapid and efficient site-specific mutagenesis without p enotypic selection" Proc. Nati. Acad. Sci . USA 82: 488-492; Kunkel y colaboradores, (1987) "Rapid and efficient site-specific mutagenesis without phenotypic selection" Methods in Enzymol. 154, 367-382; y Bass y colaboradores, (1988) "Mutant Trp repressors with new DNA-binding specificities" Science 242: 240-245); oligonucleotide-directed mutagenesis (Methods in Enzymol. 100: 468-500 (1983); Methods in Enzymol. 154: 329-350 (1987); Zoller & Smith (1982) "Oligonucleotide-directed mutagenesis using M13-derived veotors : an efficient and general procedure for the production of point mutations in any DNA fragment" Nucleic Acids Res. 10: 6487-6500; Zcller & Smith (1983) "Oligonucleotide-directed mutagenesis of DNA fragments cloned into M13 vectors" Methods in Enzymol. 100: 468-500; y Zoller & Smith (1987) "Oligonucleotide-directed mutagenesis: a simple method using two oligonucleotide primers and a single-stranded DNA témplate" Methods in Enzymol. 154: 329-350); phosphorothioate-modified DNA mutagenesis (Taylor y colaboradores, (1985) "The use of phosphorothioate-modified DNA in restriction enzyme reactions to prepare nicked DNA" 232 Nucí. Acids Res. 13: 8749-8764; Taylor y colaboradores, (1985) "The rapid generation of oligonucleotide-directed mutations at high frequency using phosphorothioate-modified DNA" Nucí. Acids Res. 13: 8765-8787; Nakamaye & Eckstein (1986) "Inhibition of restriction endonuclease Nci I cleavage by phosphorothioate groups and its application to oligonucleotide-directed mutagenesis" Nucí. Acids Res. 14: 9679-9698; Sayers y colaboradores, (1988) "Y-T Exonucleases in phosphorothioate-based oligonucleotide-directed mutagenesis" Nucí. Acids Res. 16: 791-802; y Sayers y colaboradores, (1988) "Strand specific cleavage of phosphorcthioate-containing DNA by reaction with restriction endonucleases in the presence of ethidium bromide" Nucí. Acids Res. 16: 803-814); mutagenesis usando DNA dúplex espaciado (Kramer y -colaboradores, (1984) "The gapped dúplex DNA approach to oligonucleotide-directed mutation construction" Nucí. Acids Res. 12: 9441-9456; Kramer & Fritz (1987) Methods in Enzymol . "Oligonucleotide-directed construction of mutations via gapped dúplex DNA" 154: 350-367; Kramer y colaboradores, (1988) Improved enzymatic in vitro reactions in the gapped d plex DNA approach to oligonucleotide-directed construction of mutations" Nucí. Acids Res. 16: 7207; y Fritz y colaboradores, (1988) "Oligonucleotide-directed construction of mutations: a gapped 233 dúplex DNA procedure ithout enzymatic reactions in vi tro" Nucí. Acids Res. 16: 6987-6999). Los métodos adecuados adicionales incluyen la reparación de desigualación de puntos ( ramer y colaboradores, (1984) "Point Mismatch Repair" Cell 38: 879-887) , mutagénesis usando cepas hospederas de reparación deficiente (Cárter y colaboradores, (1985) "Improved oligonucleotide site-directed mutagénesis using M13 vectors" Nucí. Acids Res. 13: 4431-4443; y Cárter (1987) "Improved oligonucleotide-directed mutagénesis using M13 vectors" Methods in Enzymol. 154: 382-403), mutagénesis de supresión (Eghtedarzadeh & Henikoff (1986) "Use of oligonucleotides to genérate large deletions" Nucí. Acids Res. 14: 5115), restricción-selección y restricción-purificación (Wells y colaboradores, (1986) "Importance of hydrogen-bond formation in stabilizing the transition state of subtilisin" Phil. Trans . R. Soc. Lond. A 317: 415-423), mutagénesis mediante la síntesis de gen total (Nambiar y colaboradores, (1984) "Total synthesis and cloning of a gene coding for the ribonuclease S protein" Science 223: 1299-1301; Sakamar y Khorana (1988) "Total synthesis and expression of a gene for the a-subunit of bovine rod outer segment guanine nucleotide-binding protein (transducin) " Nucí. Acids Res. 14: 6361-6372; Wells y colaboradores, (1985) "Cassette mutagénesis: an efficient method for generation of múltiple mutations at defined sites" 234 Gene 34: 315-323; y Grundstróm y colaboradores, (1985) "Olígonuclcotide-aireetcd mutagenesis by microscale shot-gun' gene synthesis" Nucí. Acids Res. 13: 3305-3316); double-strand break repair (Mandecki (1986) ; Arnold (1993) "Protein engineering for unusual environme ts" Current Opinión in Biotechnology 4: 450-455; y "Oligonucleotide-directed double-strand break repair in plasmids of Escherichia coli: a method for site-specific mutagenesis" Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 83: 7177-7181) . Detalles adicionales de muchos de los métodos anteriores se pueden encontrar en Methods in Enzymology Volumen 154, que también describe controles útiles para problemas de reparación con varios métodos de mutagénesis. Detalles adicionales que consideran varios métodos de generación de diversidad se pueden encontrar en las siguientes patentes norteamericanas, publicaciones de PCT y publicaciones EPO: patente norteamericana No. 5,605,793 por Stemmer (25 de febrero de 1997) , "Methods for In vitro Recombination"; patente norteamericana No. 5,811,238 por Stemmer y colaboradores, (22 de septiembre -de 1998) "Methods for Generating Polynucleotides having Desired Characteristics by Iterative Selection and Recombination"; patente norteamericana No. 5,830,721 por Stemmer y colaboradores, (3 de noviembre de 1998) , "DNA Mutagenesis by Random Fragmentation and Reassembly"; patente norteamericana No. 5,834,252 por Stemmer y colaboradores, (10 de noviembre de 235 1998) "End-Complementary Polymerase Reaction"; patente norteamericana No. 5,837,458 por Minshull y colaboradores, (17 de noviembre de 1998), "Methods and Compositions for Cellular and Metabolic Engineering"; WO 95/22625, Stemmer y Crameri , "Mutagenesis by Random Fragmentation and Reassembly"; WO 96/33207 por Stemmer y I,i pschutz "End Complementary Polymerase Chain Reaction"; WO 97/20078 por Stemmer y Crameri "Methods for Generating Polynucleotides having Desired Characteristics by Iterative Selection and Recombination"; WO 97/35966 por Minshull y Stemmer, "Methods and Compositions for Cellular and Metabolic Engineering"; WO 99/41402 by Punnonen y colaboradores, "Targeting of Genetic Vaccine Vectors"; WO 99/41383 por Punnonen y colaboradores, "Antigen Library Immunization"; WO 99/41369 por Punnonen y colaboradores, "Genetic Vaccine Vector Engineering"; WO 99/41368 por Punnonen y colaboradores, "Optimization of Immmunomodulatory Properties of Genetic Vaccines"; EP 752008 por Stemmer y Crameri, "DNA Mutagenesis by Random Fragmentation and Reassembly"; EP 0932670 por Stemmer "Evolving Cellular DNA Uptake by Recursive Sequence Recombination"; WO 99/23107 por Stemmer y colaboradores, "Modification of Virus Tropism and Host Range by Viral Genome Shuffling"; WO 99/21979 por Apt y colaboradores, "Human Papillomavirus Vectors"; WO 98/31837 por del Cardayre y colaboradores, "EvoluLion of Whole Cells and Organisms by 236 Recursive Sequence Recombination"; WO 98/27230 por Patten y Stemmer, "Methods and Compositions for Polypcptide Engineering"; O 98/13487 por Stemmer y colaboradores, "Methods for Optiraization of Gene Therapy by Recursive Sequence Shuffling and Selection"; WO 00/00632, "Methods for Generating Highly Diverse Librarles"; WO 00/09679, "Methods for Obtaining in vitro Recombined Polynucleotide Sequence Banks and Resulting Sequences"; WO 98/42832 por Arnold y colaboradores, "Recombination of Polynucleotide Sequences Using Random or Defined Primers"; WO 99/29902 por Arnold y colaboradores, "Method for Creating Polynucleotide and Polypeptide Sequences"; WO 98/41653 por Vind, "An in vitro Method for Construction of a DNA Library"; WO 98/41622 por Borchert y colaboradores, "Method for Constructing a Library Using DNA Shuffling"; WO 98/42727 por Pati y Zarling, "Sequence Alterations using Homologous Recombination"; WO 00/18906 por Patten y colaboradores, "Sluffling of Codon-Altered Genes"; WO 00/04190 por del Cardayre y colaboradores, "Evolution of Whole Cells and Organisms by Recursive Recombination"; WO 00/42561 por Crameri y colaboradores, "Oligonucleotide Mediated Nucleic Acid Recombination"; WO 00/42559 por Selifonov y Stemmer "Methods of Populating Data Structures for Use in Evolutionary Simulations"; WO 00/42560 por Selifonov y colaboradores, "Methods for Making Character Strings, Polynucleotides & Polypeptides Having Desired 237 Characteristics"; O 01/23401 por Welch y colaboradores, "Use of Codon-Varied Oligonucleotide Synthesis for Synthetic Shuffling"; y WO 01/64864 "Single-Stranded Nucleic Acid Template-Mediated Recombination and Nucleic Acid Fragment Isolation" por Affholter. Ciertas solicitudes norteamericanas proporcionan detalles adicionales que consideran varios métodos de generación de diversidad, incluyendo, "SHUFFLING OF CODON ALTERED GENES" por Patten y colaboradores, presentada el 28 de septiembre de 1999, (USSN 09/407,800); "EVOLUTION OF WHOLE CELLS AND ORGANISMS BY RECURSIVE SEQUENCE RECOMBINATION", por del Cardayre y colaboradores, presentada el 15 de julio de 1998 (USSN 09/166,188), y 15 de Julio de 1999 (patente norteamericana No. 6,379,964); "OLIGONUCLEOTIDE MEDIATED NUCLEIC ACID RECOMBINATION" por Crameri y colaboradores, presentada el 28 de septiembre de 1999 (patente norteamericana No. 6,376,246); "OLIGONUCLEOTIDE MEDIATED NUCLEIC ACID RECOMBINATION" por Crameri y colaboradores, presentada el 18 de enero del 2000 (WO 00/42561); "USE OF CODON-BASED OLIGONUCLEOTIDE SYNTHESIS FOR SYNTHETIC SHUFFLING" por Welch y colaboradores, presentada el 28 de septiembre de 1999 (patente norteamericana No. 6,436,675); "METHODS FOR MAKING CHARACTER STRINGS, POLYNUCLEOTIDES & POLYPEPTIDES HAVING DESIRED CHARACTERISTICS" por Selifonov y colaboradores, presentada el 18 de enero del 2000, (WO 238 00/42560) ; "METHODS FOR MAKING CHARACTER STRINGS, POLYNUCLEOTIDES & POLYPEPTIDES HAVING DESIRED CHARACTERISTICS" por Selifonov y colaboradores, presentada el 18 de julio del 2000 (USSN 09/618,579); "METHODS OF POPULATIKG DATA S RUCTURES FOR USE IN EVOLUTIONARY SIMULATIONS" por Selifonov y Stemmer (WO 00/42559), presentada el 18 de enero del 2000; y "SI G.I.F,-STRANDED UCLEIC AGID TEMPLATE-MEDIATED RECOMBI ATIOM AND UCLEIC AGID FRAGMENT ISOLATION" por Affholter (USSM 60/186,482, presentada el 2 de marzo del 2000) . En resumen, varias clases generales diferentes de métodos de modificación de secuencia, tales como mutación, recombinación, etc. son aplicables a la presente invención y expuestas en las referencias anteriores. Esto es, las alteraciones a las secuencias de ácido nucleico componentes a las construcciones de fusión de gen modificado producidas, se puede realizar mediante cualquier número de los protocolos descritos, ya sea antes de counir las secuencias, o después del paso de counión. Lo siguiente ejemplifica algunos de los diferentes tipos de formatos preferidos para la generación de diversidad en el contexto de la presente invención, incluyendo, por ejemplo, ciertos formatos de generación de diversidad basados en recombinación. Los ácidos nucleicos se pueden recombinar in vi tro mediante cualquiera de una variedad de técnicas discutidas en 239 las referencias anteriores, incluyendo, por ejemplo, la digestión de DNAsa de ácidos nucleicos a ser recombinados seguidos por la ligación y/o el remontaje de PCR de los ácidos nucleicos. Por ejemplo, la mutagénesis de PCR sexual puede ser utilizada en la cual la fermentación aleatoria (o pseudos aleatoria, o aún no aleatoria) de la molécula de DNA es seguida por la recombinación, basada en la similitud de secuencia, entre moléculas de DNA con diferentes pero secuencias de DNA relacionadas, in vi tro, seguido por la fijación del cruzamiento mediante la extensión en una reacción en cadena de polimerasa. Este proceso y muchas variantes del proceso se describen en varias de las referencias anteriores, por ejemplo en Stemmer (1994) Proc. Nat'l. Acad. Scí. USA 91: 10747-10751. De manera similar, los ácidos nucleicos pueden ser recombinados recursi amente in vivo, por ejemplo, al permitir que ocurra la recombinación entre los ácidos nucleicos y las células. Muchos de tales formatos de recombinación in vivo se exponen en las referencias mencionadas en lo anterior. Tales formatos opcionalmente proporcionan la recombinación directa entre los ácidos nucleicos de de interés, o proporcionan la recombinación entre vectores, virus, plásmidos, etc., que comprenden los ácidos nucleicos de interés, asi como otros formatos. Los detalles que consideran que los procedimientos se encuentran en las regencias mencionadas en lo anterior. 240 Los métodos de recombinación del genoma completo también se pueden utilizar en los cuales los genomas de células u otros organismos son recombinados, opcionalmente incluyendo la perforación de las mezclas de recombinación genómicas con componentes de librerías deseadas (por ejemplo, genes correspondientes a las rutas de la presente invención) . Estos métodos tienen muchas aplicaciones, incluyendo aquellas en las cuales la identidad de un gen objetivo no es conocida. Los detalles sobre tales métodos se encuentras, por ejemplo, en WO 98/31837 por del Cardayre y colaboradores, ^Evolution of Whole Cells and Organisms by Recursive Sequence Recombination"; y en, por ejemplo, WO 00/04190 por del Cardayre y colaboradores, también intitulada "Evolution of Whole Cells and Organisms by Recursive Sequence Recombination". Así, cualquiera de estos procesos y técnicas para recombinación, recombinación recursiva y recombinación del genoma completo, solo o en combinación, se pueden utilizar para generar las secuencias de ácido nucleico modificadas y/o construcciones de fusión de gen modificadas de la presente invención. Los métodos de recombinación sintéticos también pueden ser utilizados, en los cuales los oligonucleótidos correspondientes a objetivos de interés son sintetizados y reensamblados en reacciones de PCR o de ligación que incluyen oligonucleótidos que corresponden en más de una ácido 241 nucleico parental, generando de esta manera nuevos ácidos nucleicos recombinados. Los oligonucleótidos se pueden hacer mediante métodos de adición de nucleótidos estándares, o se pueden hacer, por ejemplo, mediante procedimientos sintéticos de tri-nucleótido . Los detalles que consideran tales procedimientos se encuentran en las referencias mencionadas en lo anterior, incluyendo, por ejemplo, WO 00/42561 por Crameri y colaboradores, "Oligonucleotide Mediated Nucleic Acid Recombin iori" ; WO 01/23401 por Welch y colaboradores, "Use of Codon-Varied Oligonucleotide Syn.th.esis for Synthetic Shuffling"; WO 00/42560 por Selifonov y colaboradores, "Methods for Making Character Strings, Polynucleotides and Polypeptides Having Desired Characteristics"; y WO 00/42559 por Selifonov y Stemmer "Methods of Populating Data Structures for Use in Evolutionary Simulations" . Se pueden efectuar métodos de recombinación in sílico, en los cuales los algoritmos genéticos son utilizados en una computadora para recombinar las cadenas de secuencias que corresponden a ácidos nucleicos homólogos (o aún no homólogos) . Las cadenas de secuencias recombinadas resultantes opcionalmente se convierte en ácidos nucleicos mediante la síntesis de ácidos nucleicos que corresponden a las secuencias recombinadas, por ejemplo, de acuerdo con las técnicas de reensamble de gen de síntesis de oligonucleótido. Este procedimiento puede generar variantes aleatorias, 242 parcialmente aleatorias o diseñadas. Muchos detalles que consideran la recombinación en slllco, incluyendo el uso e algoritmos genéticos, operadores genéticos y los similares en sistemas de computadoras, combinadas con la generación de ácidos nucleicos correspondientes (y/o proteínas), así como combinaciones de ácidos nucleicos diseñados y/o proteínas (por ejemplo, basado en la selección del sitio cruzado) así como métodos de recombinación diseñados, pseudos-aleatorios o aleatorios son descritos en WO 00/42560 por Selifonov y colaboradores, "Methods for Making Character Strings, Polynucleotides and Polypeptides Having Desired Characteristics" y WO 00/42559 por Selifonov y Stemmer "Methods of Populating Data Structures for Use in Evolutionary Simulations" . Detalles extensivos que conceden los métodos de recombinación in sílico se encuentran en estas solicitudes. Esta metodología es generalmente aplicable a la presente invención en proporcionar la recombinación o secuencias de ácido nucleico y/o construcciones de fusión de gen que codifican proteínas implicadas en varias rutas metabólicas (tales como, por ejemplo, rutas biosintéticas de carotenoide, rutas biosintéticas de ectoina, rutas biosintéticas de polihidroxialcanoato, rutas biosintéticas de policeturo aromático y similares) en sílico y/o la generación de ácidos nucleicos o proteínas correspondientes . 243 Muchos métodos para ingresar a la diversidad natural, por ejemplo, mediante la hibridación de diversos ácidos nucleicos o fragmentos de ácido nucleico a plantillas de una sola hebra, seguido por la polimerización y/o ligación para regenerar secuencias de longitud completa, opcionalmente seguido por degradación de las plantillas y la recuperación de los ácidos nucleicos modificados resultantes, pueden ser similarmente utilizados. En un método que emplea una plantilla de una sola hebra, la población de fragmento derivada de la ( s ) librería (s) genómica (s) es Conplada con ssDNA o RNA parcial o frecuentemente de longitud aproximadamente completa a la hebra opuesta. El ensamble de genes quiméricos complejos a partir de esta población luego es mediada por la remoción de la base de nucleasa de extremos de fragmento no hibridantes, la polimerización para llenar espacios entre tales fragmentos y la ligación de una sola hebra subsecuente. Esta hebra de polinucleótido parental puede ser removida mediante digestión (por ejemplo, si es RNA o que contiene uracilo) , separación magnética bajo condiciones desnaturalizantes (si es marcada de una manera conducente a tal separación) y otros métodos de separación/purificación disponibles. Alternativamente, la hebra parental es opcionalmente co-purificada con las hebras quiméricas y removidas durante las etapas de clasificación y procesamientos subsecuentes. Los detalles adicionales que 244 consideran este procedimiento se encuentras, por ejemplo, en "Single-Stranded Nucleic Acid Template-Mediated Recombination and Nucleic Acid Fragment Isolation" por Affholter, WO 01/6486 . En otro procedimiento, las moléculas de una sola hebra se convierten a DNA de doble hebra (dsDNA) y las moléculas de dsDNA se enlazan a un soporte sólido mediante el enlace mediado por ligando. Después de la separación del DNA no enlazado, las moléculas de DNA seleccionadas son liberadas del soporte e introducidas en una célula hospedera adecuada para generar una librería de secuencias enriquecidas que hibridan una sonda. Una librería producida de esta manera proporciona un sustrato deseable para di ersificación adicional usando cualquiera de los procedimientos descritos en la presente. Cualquiera de los formatos de recombinación generales procedentes pueden ser practicados en un aspecto reiterativo (por ejemplo, uno o más ciclos de mutación/recombinación u otros métodos de generación de diversidad, opcionalmente seguido por uno o más métodos se selección) para generar un conjunto más diversos de ácidos nucleicos recombinantes . Los métodos de terminación de cadena de polinucleótido empleando la mutagénesis también han sido propuestos (ver, por ejemplo, la patente norteamericana No. 245 , 965, 408, "Method of D A reasseiably by interrupting síntesis" pro Short, y las referencias anteriores) , y pueden ser aplicados a la presente invención. En este procedimiento, los DNAs de doble hebra correspondientes a uno o más genes que comparten regiones de similitud de secuencia son combinados y desnaturalizados, en la presencia o ausencia de cebadores específicos para el gen. Los polinucleótidos de una sola hebra luego son templados e incubados en la presencia de una polimerasa y un reactivo de terminación de cadena (por ejemplo, ultravioleta, y radiación gamma o rayos X; bromuro de etidio u otros intercaladotes; proteínas que enlazan DNA, tal como las proteínas que enlazan una sola hebra, factores de activación de transcripción, o histonas; hidrocarburos aromáticos policíclicos; cromo trivalente o una sal de cromo trivalente; o la polimerización abreviada por el termociclado rápido; y los similares), dando por resultado la producción de moléculas dúplex parciales. Las moléculas dúplex parciales, por ejemplo, que contienen cadenas parcialmente extendidas, luego son desnaturalizadas y vueltas a templar en rondas subsecuentes de replicación o replicación parcial que dan por resultado polinucleótidos que comparten grados variables de similitud de secuencia y que son diversificados con respecto a la población de partida de moléculas de DNA. Opcionalmente, los productos, o acumulaciones parciales de los productos, pueden ser amplificados en una o más etapas en 246 el proceso. Los polinucleótidos producidos mediante un método de terminación en cadena, tal como es descrito en lo anterior, son sustratos adecuados para cualquier otro formato de recombinación descrito. La diversidad también puede ser generada en ácidos nucleicos o poblaciones de ácidos nucleicos usando un procedimiento de recombinación llamado "truncamiento incrementado para la creación de enzimas híbridas" ("ITCHY") descrito en Ostermeier y colaboradores, (1999) "A combinatorial approach to hybrid enzymes independent of DNA homology" Nature Biotech 17: 1205. Este procedimiento se puede utilizar para generar una librería inicial de variantes que opcionalmente pueden servir como un sustrato para uno o más método de recombinación in vitro o in vivo. Ver también, Ostermeier y colaboradores, (1999) "Combinatorial Protein Engineering by Incrementa! Truncation", Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 96: 3562-67; y Ostermeier y colaboradores, (1999), "Incremental Truncation as a Strategy in the Engineering of Novel Biocatalysts", Biological and Medicinal Chemistry, 7: 2139-44. Los métodos mutacionales que dan por resultado la alteración de los nucleótidos individuales o grupos de nucleótidos contiguos o no contiguos pueden ser fa orablemente empleados para introducir diversidad de nucleótidos en la secuencias de ácidos nucleicos y/o 247 construcciones de fusión de gen de la presente invención. Muchos métodos de mutagénesis son encontrados en las referencias citadas en lo anterior; detalles adicionales que consideran los métodos de mutagénesis se pueden encontrar en lo siguiente, que también puede ser aplicada a la presente invención. Por ejemplo, la PCR propensa a error se puede usar para generar variantes de ácido nucleico. Usando esta técnica, la PCR se realiza bajo condiciones donde la fidelidad de copiado de la polimerasa de DNA es baja, tal que una alta proporción de mutaciones puntuales es obtenida a lo largo de la longitud completa del producto de PCR. Ejemplos de tales técnicas se encuentran en las referencias anteriores y, por ejemplo, en Leung y colaboradores, (1989) Technique 1: 11-15 y Caldwell y colaboradores (1992) PCR Methods Applic. 2: 28-33. De manera similar, la PCR de ensamble se puede utilizar, en un proceso que involucra el ensamble de un producto de PCR que incluyee una mezcla de fragmentos de DNA pequeños. Un número grande de diferentes reacciones de PCR, pueden ocurrir en paralelo en la misma mezcla de reacción, con los productos de una reacción, con los productos de una reacción que sevan los productos de otra reacción. La mutagénesis dirigida al oligonucleótido se puede utilizar para introducir mutaciones especificas del sitio en la secuencia de ácido nucleico de interés. Ejemplos de tales 248 técnicas se encuentran en las referencias anteriores y, por ejemplo, en Reid aar-Olson y colaboradores, (1988) Science 241: 53-57. De manera similar, la mutagénesis de cásete se puede utilizar en un proceso que reemplaza una región pequeña de una molécula de D A de doble hebra con un cásete de oligonucleótido sintético que difiere de la secuencia nativa. El oligonucleótido puede contener, por ejemplo, secuencia (s) nativa (s) completamente y/o parcialmente aleatorizada. La mutagénesis de ensamble recursivo es un proceso en el cual un algoritmo para la mutagénesis de proteina se utiliza para producir diversas poblaciones de imitantes fenotipieamenté relacionados, los miembros de los cuales difieren en la secuencia de aminoácidos. Este método es un mecanismo de retroalimentación para verificar las rondas sucesivas del la mutagénesis del cásete combinatorio. Ejemplos de este procedimiento se encuentran en Arkin & Youvan (1992) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 89: 7811-7815. La mutagénesis de ensamble exponencial se puede usar para generar librerías combinatorias con alto porcentaje de imitantes únicos y funcionales. Pequeños grupos de residuos en una secuencia dé interés son aleatorizados en paralelo para identificar, en cada posición alterada, aminoácidos que conducen a proteínas funcionales. Ejemplos de tales procedimientos se encuentran en Delegrave & Youvan (1993) Biotech . Res. 11: 1548-1552. 249 La mutagénesis in vivo se puede usar para generar mutaciones aleatorias en cualquier DNA clonado de interés al propagar el DNA, por ejemplo, en una cepa de E. coli que lleva mutaciones en una o más de las rutas de reparación de DNA. Estas cepas "imitadora" tienen una proporción de mutación aleatoria más alta que aquella de un origen de tipo silvestre. La propagación del DNA en una estas cepas eventualmente generará mutaciones aleatorias dentro del DNA. Tales procedimientos son descritos en las referencias mencionadas en lo anterior. Otros procedimientos para introducir diversidad en un genoma, por ejemplo, un genoma bacteriano, fangal, animal o de planta se puede utilizar en conjunción con los métodos descritos y/o mencionados en lo anterior. Por ejemplo, además de los métodos anteriores, se han propuestos técnicas que producen multímeros de ácido nucleico adecuados para la transformación en una variedad de especies (ver, por ejemplo, Schellenberger, patente norteamericana No. 5,756,316 y las referencias anteriores) . La transformación de una hospedada adecuada con tales multímeros, que consisten de genes que son divergentes con respecto entre sí, (por ejemplo, derivados de la diversidad natural a través de la aplicación de la mutagénesis dirigida del sitio, PCR propensa a error, pasaje a través de cepas bacterianas mutagónicas, y los similares) , proporcionan una fuente de diversidad de ácido nucleico para 250 la di ersificación de DNA, por ejemplo, mediante un proceso de recombinación in vivo como es indicado en lo anterior. Alternativamente, una multiplicidad de polinucleótidos monoméricos que comparten regiones de similitud de secuencia parcial se pueden transformar en una especie hospedera y recombinarse in vivo por la célula hospedera. Rondas subsecuentes de división celular pueden ser usadas parea generar librerías, miembros de los cuales, incluyen una población homogénea, individual o acumulación de polinucleótidos monoméricos . Alternativamente, los ácidos nucleicos monoméricos pueden ser recuperados mediante técnicas estándares, por ejemplo, PCR y/o clonación, y recombinarse en cualquiera de los formatos de recombinación, incluyendo los formatos de recombinación recursivos, descritos en lo anterior. Los métodos para generar librerías de expresión de multiespecies se han descrito (además de las referencias mencionadas en lo anterior, ver, por ejemplo, Peterson y colaboradores, (1998) patente norteamericana No. 5,783,431 "METHODS FOR GENERATING AND SCREENING NOVEL METABOLIC PATHWAYS"; y Thompson y colaboradores, (1998) patente norteamericana No. 5,824,485 METHODS FOR GENERATING AND SCREENING NOVEL METABOLIC PATHWAYS) y su uso para identificar actividades de proteína de interés se han propuesto (además de las referencias mencionadas en lo anterior, ver, Short 251 (1999) patente norteamericana No. 5,958,672 "PROTEIN ACTIVITY SCREENING OF CLONES HAVING DMA FROM UNCULTIVATED MICROORGANISMS" ) . Las librerías de expresión de multiespecies incluyen, en general, librerías que comprende cDNA o secuencias genómicas a partir de una pluralidad de especies o cepas, operablemente enlazadas a secuencias regulatorias apropiadas, en un cásete de expresión. El cDNA y/o secuencias genómicas son opcionalmente de manera aleatoria ligadas para incrementar adicionalmente la diversidad. El vector puede ser un vector de lanzadera adecuado par la transformación y la expresión en más de una especie de organismo hospedero, por ejemplo, especies bacterianas o células eucarióticas . En algunos casos, la librería es desviada al preseleocionar secuencias que codifican una proteína de interés, o que hibridan un ácido nucleico de interés. Cualquiera de tales librerías, pueden ser proporcionadas como sustratos por cualquiera de los métodos descritos en la presente. Los procedimientos descritos anteriormente se han dirigido grandemente a incrementar el ácido nucleico y/o la diversidad de la proteína codificada. Sin embargo, en muchos casos, no toda la diversidad es útil, por ejemplo, funcional, y contribuye meramente a incrementar el antecedente de variantes que deben ser clasificados o seleccionados para identificar las variantes menos favorables . En algunas aplicaciones, es deseable preseleccionar o preclasificar 252 librerías (por ejemplo, una librería amplificada, una librería genómica, una librería de cDNA, una librería normalizada, etc.) u otros ácidos nucleicos de sustrato antes de la di ersificación, por ejemplo, mediante procedimientos de mutagénesis basados en recombinacíón, o de otra manera desviar los sustratos hacia ácidos nucleicos que codifican productos funcionales. Por ejemplo, en el caso de la ingeniería de anticuerpos, es posible desviar un proceso de generación de diversidad hacia anticuerpos con sitios de enlace de antíqeno funcional al tomar ventaja de los eventos de recombinación in vivo antes de la manipulación mediante cualquiera de los métodos descritos. Por ejemplo, las CDRs recombinadas derivadas de las librerías de cDNA de célula B pueden ser amplificadas y ensambladas en regiones de estructura (por ejemplo, Jirholt y colaboradores, (1998) "Exploiting sequence space: shuffling in vivo formed complementarity determining regions into a master framework" Gene 215: 471), antes de la diversificación de acuerdo con cualquiera de los métodos descritos en la presente. Las librerías pueden ser desviadas hacia ácidos nucleicos que codifican proteínas con actividad de enzima deseables. Por ejemplo, después de la identificación de un clon a partir de una librería que exhibe una actividad específica, el clon puede ser mutagenizado usando cualquier método conocido para introducir alteraciones de DNA. Una 253 librería que comprende los homólogos mutagenizados, luego es clasificada para una actividad deseada, que puede ser la misma o diferente de la actividad inicialmente especificada. Un ejemplo de tal procedimiento es propuesto en Short (1999) patente norteamericana No. 5,939,250 para PRODUC ION OF ENZYMES EAVING DESIRED ACTIVITIES BY MUTAGENESIS". Las actividades deseadas pueden ser identificadas mediante cualquier método conocido en la técnica. Por ejemplo, WO 99/10539 propone las librerías de genes que pueden ser clasificadas al combinar extractos de la librería de genes con componentes obtenidos de células me abólicamente ricas y al identificar las combinaciones que exhiben la actividad deseada. También se ha propuesto (por ejemplo, WO 98/58085) que los clones con actividades deseadas pueden ser identificados al insertar sustratos bioactivos en muestras de la librería, y al detectar la fluorescencia bioactiva correspondiente al producto de una actividad deseada usando un analizador fluorescente, por ejemplo, un dispositivo de citometría de flujo, un CCD, un fluorómetro, o un espectrofotómetro . Las librerías también pueden ser desviadas hacia ácidos nucleicos que tienen características específicas, por ejemplo, hibridación en una sonda de ácido nucleico seleccionada. Por ejemplo, WO 99/10539 propone que los polinucleótidos que codifican una actividad deseada (por 254 ejemplo, una actividad enzimática, por ejemplo: una lipasa, una esterasa, una proteasa, una glucosidasa, una glicosil transferasa, una fosfatasa, una quinasa, una oxigenasa, una peroxidasa, una hidrolasa, una hidratasa, una nitrilasa, una transaminasa, una amidasa o una acilasa) se pueden identificar a partir de entre las secuencias de DNA genómicas. En particular, las moléculas de DNA genómicas de una sola hebra a partir de una población de DNA genómico son hi ridadas a una sonda conjugada con ligando. El DNA genómico puede ser derivado de ya sea un microorganismo cultivado o no cultivado, o a partir de una muestra ambiental. Alternativamente el DNA genómico puede ser derivado desde un organismo multicelular. La síntesis de la segunda hebra se puede conducir directamente a partir de la sonda de hibridación usada en la captura, con o sin liberación previa del medio de captura o mediante una amplia variedad de otras estrategias conocidas en la técnica. Alternativamente, la población de DNA genómico de una sola hebra aislado se puede fragmentar sin clonación adicional y usar directamente en, por ejemplo, un procedimiento basado en recombinación, que emplea una plantilla de una sola hebra, como es descrito en lo anterior. Los métodos "no estocásticos" de generación de ácidos nucleicos y polipéptidos se describen en Short "Non-Stochastic Generation of Genetic Vaccines and Erizymes" WO 255 00/46344. Estos métodos, incluyendo el reensamble de polinucleótido no estocástico propuesto y los métodos de mutagénesis de saturación del sitio se pueden aplicar a la presente invención también. La mutagénesis aleatoria o semi aleatoria usando oligonucleótidos impurificados o degenerados también es descrita en, por ejemplo, Arkin y Youvan (1992) "Optimizing nucleotide mixtures to encode specific subsets of amino acids for semi-random mutagénesis" Biotechnology 10: 297-300; Reidhaar-Olson y colaboradores, (1991) "Random mutagénesis of protein sequences using oligonucleotide cassettes" Methods Enzymol. 208: 564-86; Lira y Sauer (1991) "The role of internal packmg interactions in determining the structure and stability of a protein" J. Mol. Biol. 219: 359-76; Breyer y Sauer (1989) "Mutational analysis of the fine specificity of binding of monoclonal antibody 51F to lambda repressor" J. Biol. Chem. 264: 13355-60); "Walk-Through Mutagénesis" (Crea, R; patentes norteamericanas Nos. 5, 830,650 y 5, 798,208, y patente Europea 0527809 Bl) . Será fácilmente apreciado que cualquiera de las técnicas descritas en lo anterior adecuadas para enriquecer una librería antes de la diversificación también se pueden utilizar para clasificar los productos, o librerías de productos, producidos por lo métodos de generación de diversidad. Cualquiera de los métodos descritos en lo anterior, se pueden practicar recursivamente o en combinación 256 para alterar ácidos nucleicos, por ejemplo, polinucleótidos de codificación de GAT . Los kits para mutagénesis, construcción de librerías y otros métodos de generación de diversidad también son comercialmente disponibles. Por ejemplo, los kits están disponibles de, por ejemplo, Stratagene (por ejemplo, el kit de mutagénesis dirigido al sitio QuickChangeMR; y el kit de mutagénesis dirigido al sitio, de doble hebra ChameleonMR) ; Bio/Can Scientific, Bio-Rad (por ejemplo, usando el método de Kunkel descrito en lo anterior); Boehringer Mannhexm Corp.; Clonetech Laboratories; DNA Technologies; Epicentre Technologies (por ejemplo, el kit de 5 prima 3 prima) ; Genpak Inc.; Lemargo Inc.; Life Technologies (Gibco BRL) ; New England Biolabs; Pharmacia Biotech; Promega Corp.; Quantum Biotechnologies ; Amersham International pie (por ejemplo, usando el método de Eckstein anterior) ; y Anglian Biotec nology Ltd (por ejemplo, usando el método de Carter/Winter anterior) . Las referencias anteriores proporcionan muchos formatos mutacionales, incluyendo recombinación, recombinación recursiva, mutación recursiva y combinaciones de recombinación con otras formas de mutagénesis, asi como muchas modificaciones de estos formatos. Sin considerar el formato de generación de diversidad que es utilizado, los ácidos nucleicos de la presente invención pueden ser 257 recombinados (entre si, o con secuencias relacionadas (o aún no relacionadas) ) para producir un conjunto diverso de ácidos nucleicos recombinantes para el uso en las construcciones de fusión de gen y construcciones de fusión de gen modificado de la presente invención, incluyendo, por ejemplo, conjuntos de ácidos nucleicos homólogos asi como polipéptidos correspondientes . Muchas de las metodologías descritas en lo anterior para generar polinucleótidos modificados generan un gran número de variantes diversas de una secuencia parental o secuencias. En algunas modalidades preferidas de la invención, la técnica de modificación (por ejemplo, una forma de entre mezclamientos) se utiliza para generar una librería de variantes que luego es clasificada para un polinucleótido modificado o acumulación de polinucleótidos modificados que codifican algún atributo funcional deseado, por ejemplo, la actividad GAT mejorada. Las actividades enzimáticas ejemplares que pueden ser clasificadas incluyen las proporciones catalíticas (convencionalmente caracterizadas en términos de constantes cinéticas tales como ca- y KH) , especificidad del sustrato y susceptibilidad a la activación o inhibición del sustrato, producto u otras moléculas (por e emplo, inhibidores o activadores) . Un ejemplo de selección para una actividad enzimática deseada comprende cultivar célula hospederas bajo 258 condiciones que inhiben el crecimiento y/o supervivencia de células que no expresan suficientemente una actividad enzimática de interés, por ejemplo, la actividad GAT. Usando tal proceso de selección se puede eliminar de la consideración de todos los polinucleótidos modificados excepto aquellos que codifican una actividad enzimática deseada. Por ejemplo, en algunas modalidades de la invención, las células hospederas son mantenidas bajo condiciones que inhiben el crecimiento o supervivencia de las células en la ausencia de niveles suficientes de GAT, por ejemplo, una concentración de glifosato que es letal o inhibe el crecimiento de una planta de tipo silvestre de la misma variedad que ya sea que carece o que no expresa un polinucleótido GAT. Bajo estas condiciones, solamente una célula hospedera que alberga un ácido nucleico modificado que codifica la actividad o actividades enzimáticas capaz de catalizar la producción de niveles suficientes del producto sobrevivirá y crecerá. Algunas modalidades de la invención emplean múltiples rondas de clasificación en concentraciones incrementadas de glifosato o un análogo de glifosato. En algunas modalidades de la invención, la espectrometría de masas se utiliza para detectar la acetilación de glifosato, o un análogo de glifosato o metabolito . El uso de la espectrometría de masas se describe en más detalle en los Ejemplos enseguida. 259 Por conveniencia y alto rendimiento frecuentemente es deseable clasificar/seleccionar los ácidos nucleicos modificados deseados en un microorganismo, por ejemplo, una bacteria tal como E. coli. Por otra parte, la clasificación en células de planta o plantas pueden algunos casos ser preferibles donde el objetivo final es generar un ácido nucleico modificado para la expresión en un sistema de planta. En algunas modalidades preferidas de la invención el rendimiento se incrementa al clasificar acumulaciones de células hospederas que expresan diferentes ácidos nucleicos modificados, ya sea solos o como parte de una construcción de fusión de gen. Cualquiera de las acumulaciones que muestran actividad significante pueden ser desenrolladas para identificar clones individuales que expresan actividad deseable . La persona experta reconocerá que el ensayo relevante, método de clasificación o selección variará dependiendo del organismo hospedero deseado y otros parámetros conocidos en la técnica. Normalmente es ventajoso emplear un ensayo que puede ser aplicado en un formato de alto rendimiento . En ensayos de alto rendimiento, es posible clasificar hasta varios miles de diferentes variantes en un solo día. Por ejemplo, cada cavidad de una placa de 260 mícrotitulo puede ser usada para correr un ensayo separado, o, si la concentración o los efectos del tiempo de incubación van a ser observados, cada 5-10 cavidades pueden probar una sola variante. Además de los procedimientos fluidicos, es posible, como es mencionado en lo anterior, simplemente cultivar células sobre placas de medio que seleccionan la función enzimática o metabólica deseada. Este procedimiento ofrece un método de clasificación simple y de alto rendimiento. Un número de sistemas robotieos bien conocidos también son desarrollados para las químicas en fase de solución útiles en los sistemas de ensayo. Estos sistemas incluyen estaciones de trabajo automatizadas similares al aparato de síntesis automatizado desarrollado por Takeda Chemical Industries, LTD. (Osaka, Japón) y muchos sistemas robóticos que utilizan brazos robóticos (Zymate II, Zymark Corporation, Hopkinton, ?; y Orea, Hewlett-Packard, Palo Alto, CA) que imitan las operaciones sintéticas manuales realizadas por un científico. Cualquiera de los dispositivos anteriores, son adecuados para la aplicación a la presente invención. La naturaleza e implementación de modificaciones a estos dispositivos (si los hay) de modo que pueden operar como es discutido en la presente con referencia al sistema integrado será evidente para personas expertas en la técnica relevante . 261 Los sistemas de clasificación de alto rendimiento son comercialmente disponibles (ver, por ejemplo, Zymark Cor . , Hopkinton, MA; Air Technical Industries, Mentor, OH; Beciarían Instruments, Inc. Fullerton, CA; Precisión Systems, Inc., Natick, MA, etc.). Estos sistemas típicamente automatizan los procedimientos completos incluyendo todo el pipeteo de la muestra y el reactivo, suministro de líquido, incubaciones sincronizadas y lecturas finales de la microplaca en el (los) detector (es) apropiado (s) para el ensayo particular. Estos sistemas configurables proporcionan un arranque de alto rendimiento rápido así como un lato grado de flexibilidad y ajustamiento. Los fabricantes de tales sistemas proporcionan protocolos detallados para los diversos dispositivos de alto rendimiento. Así, por ejemplo, Zymark Corp. proporciona boletines técnicos que describen los sistemas de clasificación para detectar la modulación de la transcripción del gen, el enlace del ligando y los similares. Los procedimientos microfluídicos para la manipulación de reactivos también han sido desarrollados, por ejemplo, por Caliper Technologies (Mountain View, CA) . Las imágenes ópticas visualizadas (y, opcionalmente, grabadas) por una cámara u otro dispositivo de grabación (por ejemplo, un fotodiodo y dispositivo de almacenamiento de datos) opcionalmente son además procesadas 262 en cualquiera de las modalidades en la presente, por ejemplo, al digitalizar la imagen y/o almacenar y analizar la imagen en una computadora. Una variedad de equipo periférico comercialmente disponible y software está disponible para digitalizar, almacenar y analizar una imagen de video digitalizada u óptica digitalizada . Por ejemplo, usando PC (Intel x86 o chip Pentium compatible con máquinas basadas en DOS™, OS™ WINDOWS™, WINDOWS NT™ or WINDOWS 95™) , MACINTOSH™, computadoras basadas en UNIX (por ejemplo, la estación de SUN™) . Un sistema convencional lleva luz desde el dispositivo de ensayo a una cámara de dispositivo acoplada a la carga enfriada (CCD) , un uso común en la técnica. Una cámara CCD incluye un arreglo de elementos de cuadro (pixeles) . La luz de la muestra es formada en imagen sobre la CCD. Pixeles particulares correspondientes a las regiones de la muestra (por ejemplo, sitios de hibridación individuales en un arreglo de polímeros biológicos) se muestrean para obtener lecturas de intensidad de luz para cada posición. Múltiples pixeles son procesados en paralelo para incrementar la velocidad. Los aparatos y métodos de la invención son fácilmente utilizados para visualizar cualquier muestra, por ejemplo, mediante técnicas microscópicas en campo fluorescente o en campo oscuro. OTRAS COMPOSICIONES DE POLINUCLEOTIDOS 263 La invención también incluye composiciones que comprenden dos o más polinucleótidos de la invención (por ejemplo, como sustratos para recombinación). La composición puede comprender una librería de ácidos nucleicos recombinantes, donde la librería contiene por lo menos 2, 3, 5, 10, 20, o 50 o más polinucleótidos. Los polinucleótidos son opcionalmente clonados en vectores de expresión, proporcionando librerías de expresión. La invención también incluye composiciones producidas al digerir uno o más polinucleótidos e la invención con una endonucleasa de restricción, una RNAsa, o una DNAsa (por ejemplo, como es realizado en algunos de los formatos de recombinación mencionados en lo anterior) ; y composiciones producidas al fragmentar o partir uno o más polinucleótidos de la invención por medios mecánicos (por ejemplo, sonicación, formación de vórtice y los similares), que también pueden ser proporcionados para proporcionar sustratos para la recombinación en los métodos anteriores. De manera similar, las composiciones que comprenden conjuntos de oligonucleótidos correspondientes a más de un ácido nucleico de la invención son útiles como sustratos de recombinación y son una característica de la invención. Por conveniencia, estas mezclas sintetizadas, fragmentadas, partidas o de oligonucleótidos son referidas como conjuntos de ácidos nucleicos fragmentados. 264 También incluidas en la invención están composiciones producidas al incubar uno o más de los conjuntos de ácidos nucleicos fragmentados en la presencia de trifosfatos de ribonucleótido o desoxiribonucleótido y ácido nucleico polimerasa . Esta composición resultante forma una mezcla de recombinación para muchos de los formatos de recombinación mencionados en lo anterior. El ácido nucleico polimerasa puede ser un RNA polimerasa, una DNA polimerasa, o una DNA polimerasa dirigida al RNA (por ejemplo, una "transcriptasa inversa") ; la polimerasa puede ser, por ejemplo, una DNA polimerasa termoestable (tal como, VENT, TAQ o los similares) . SISTEMAS INTEGRADOS La presente invención proporciona computadoras, medios leíbles en computadora y sistemas integrados que comprenden cadenas de caracteres correspondientes a la información de secuencia en la presente para los polipéptidos y ácidos nucleicos en la presente, incluyendo, por ejemplo, aquellas secuencias listadas en la presente y las diversas sustituciones silenciosas y sustituciones conservativas de las mismas. Por ejemplo, varios métodos y algoritmos genéticos (Gas) conocidos en la técnica se pueden usar para detectar homología o similitud entre diferentes cadenas de caracteres, o se pueden usar para realizar otras funciones deseables tal 265 como el control de archivos de salida, proporcionar la base para hacer presentaciones de información incluyendo las secuencias y los similares. Ejemplos incluyen BLAST, discutido supra. Asi, diferentes tipos de homología y similitud de varia severidad y longitud se pueden detectar y reconocer en los sistemas integrados descritos en la presente. Por ejemplo, muchos métodos de determinación de homología se han diseñado para el análisis comparativo de secuencias de biopolimeros, para la verificación por letra en el procesamiento de palabras, y para la recuperación de datos a partir de varias bases de datos. Con un entendimiento de las interacciones del complemento por pared de doble hélice entre 4 nucleobases principales en polinucleótidos naturales, los módulos que simulan el templado de cadenas de polinucleótidos homólogos complementarios también se pueden utilizar como una base de la alineación se secuencia u otras operaciones típicamente realizadas en las cadenas de caracteres correspondientes a las secuencias en la presente (por ejemplo, manipulaciones del procesamiento de palabras, construcción de figuras que comprenden cadenas de caracteres de secuencia o subsecuencia, tablas de salida, etc) . Un ejemplo de un paquete software con GAS para calcular la similitud de secuencia es BLAST, que puede ser adaptada a la presente invención al introducir cadenas de 266 caracteres correspondientes a la secuencias en la presente . De manera similar, las aplicaciones de escritorio estándares tal como el software de procesamiento de palabras (por ejemplo, Microsoft WordMR o Corel WordPerfectHR) y el software de base de datos por ejemplo el software de hoja de cálculo tal como Microsoft ExcelMR, Corel Quattro ProMR, o programas de base de datos tales como Microsoft AccessR o ParadoxMR) se pueden adaptar a la presente invención al introducir una cadena de caracteres correspondientes a los homólogos GAT de la invención (ya sea ácidos nucleicos o proteínas, o ambos) . Por ejemplo, los sistemas integrados pueden incluir el software anterior teniendo la información de la cadena de caracteres apropiada, por ejemplo, utilizada en conjunción con una interfaz de usuario (por ejemplo, un GUI en un sistema de operación estándar tal como Windows, Macintosh o sistema LINUX) para manipular cadenas de caracteres. Como es mencionado, los programas de alineación especializados tal como BLAST también pueden ser incorporados en los sistemas de la invención para la alineación de ácidos nucleico o proteínas (o cadenas de caracteres correspondientes) . Los sistemas integrados para el análisis en la presente invención típicamente incluyen una computadora digital con software GA para alinear secuencias, así como 267 conjuntos de datos introducidos en el sistema de software que comprende cualquiera de las secuencias en la presente. La computadora puede ser, por ejemplo, una PC (Intel x86 o chip Pentium compatible con la máquina basada en DOSMR, 0S2HK WINDOWSMR WINDOWS NT™, WINDOWS9oilR, WINDOWS98MR LINUX, una MACINT0SHMR, Power PC, o una máquina basada en UNIX (por ejemplo, estación de trabajo SUNMR) u otras computadora comercialiciente común que es conocida por un experto. El software para alinear o de otra manera manipular secuencias está disponible, o fácilmente puede ser construido por un experto usando un lenguaje de programación estándar tal como Visualbasic, Fortran, Basic, Java, o similares. Cualquier controlador o computadora opcionalmente incluye un monitor que es frecuentemente una pantalla de tubo de rayos catódicos ("CP.T") , una pantalla de panel plano (por ejemplo, pantalla de cristal liquido de matriz activa, pantalla de cristal liquido) u otros. El sistema de circuitos de la computadora f ecuentemente es colocada en una caja que incluye numerosos chips de circuitos integrados, tal como un microprocesador, memoria, circuitos de interfaz y otros. La caja también opcionalmente incluye una unidad de disco duro, una unidad de disco flexible, una unidad ramovible de alta capacidad tal como el CD-ROM escribible u otros elementos periféricos comunes. Los dispositivos de introducción tal como un tablero o ratón opcionalmente proporcionan la entrada 268 a partir de un usuario y para la selección de secuencias por el usuario para ser comparadas o de otra manera manipuladas en el sistema de computadora relevante. La computadora típicamente incluye un software apropiado para recibir instrucciones del usuario, ya sea en la forma de la entrada del usuario en campo de parámetro ajustados, por ejemplo, en un GUI, o en la forma de instrucciones preprogramadas, por ejemplo, preprogramadas para una variedad de diferentes operaciones especificas . El software luego convierte esas instrucciones a un lenguaje apropiado para instruir la operación de la dirección fluida y el controlador de transporte para llevar a cabo la operación deseada . El software también puede incluir elementos de salida para controlar la síntesis del ácido nucleico (por ejemplo, basado en una secuencia o una alineación de una secuencias en la presente) u otras operaciones que ocurren corriente abajo a partir de una alineación u otra operación realizada usando una cadena de caracteres correspondiente a una secuencia en la presente. El equipo de síntesis de ácido nucleico, por consiguiente, puede ser un componente en uno o más sistemas integrados en la presente. En un aspecto adicional, la presente invención proporciona kits que engloban los métodos, composición, sistemas y aparatos en la presente. Los kits de la invención 269 opcionalmente comprenden uno o más de los siguientes: (1) un aparato, sistema, componente de sistema o componente de aparato como es descrito en la presente; (2) instrucciones para practicar los métodos descritos en la presente, y/o para operar el aparato o componentes del aparato en la presente y/o para usar las composiciones en la presente; (3) una o más composiciones o componentes GAT; (4) un contenedor para contener los componentes o composiciones, y (5) materiales de empaque . En un aspecto adicional, la presente invención proporciona el uso de cualquier aparato, componente de aparato, composición o kit en la presente, para la práctica de cualquier método o ensayo en la presente, y/o para el uso de cualquier aparato o kit para practicar cualquier ensayo o método en la presente. CELULAS HOSPEDERAS ? ORGANISMOS La célula hospedera puede ser eucariótica, por ejemplo, una célula eucariótica, una célula de planta, una célula de animal, un protoplasto, o una célula de cultivo de tejido. La célula hospedera, opcionalmente comprende una pluralidad de células, por ejemplo, un organismo. Alternativamente, la célula hospedera puede ser procariótica incluyendo, pero no limitada a, bacteria (es decir, bacterias gram positivas, bacterias púrpuras, bacterias de azufre verde, bacterias no de azufre verde, cianobacterias, 270 espiroquetas, termotogales, flavobacterias y bacteroides) y arcaebacterias (es decir, Korarchaeota, Thermoproteus, Pyrodictium, T ermococcales, Methanogens, Archaeoglobus , y Halophiles extremo) . Las plantas transgénicas, o células de plantas, que incorporan los ácidos nucleicos GAT, y/o que expresan los polipéptidos GAT de la invención son una característica de la invención. La transformación de células de planta y protoplastos se pueden llevar a cabo esencialmente en cualquiera de las diversas maneras conocidas para aquellos expertos en la técnica de biología molecular de plantas, incluyendo, pero no limitados a, los métodos descrito en la presente. Ver, en general, Methods in Enzymology. Vol . 153 {Recombínant DNA Part D) Wu y Grossman (eds.) 1987, Academic Press; y eising .y colaboradores, Ann . Rev. Genet. 22: 421-477 (1988), incorporada en la presente por referencia. Por ejemplo, la construcción de DNA puede ser construida directamente en el DNA genómico de la célula de la planta usando técnicas tales como electroporación, transfección mediada por PEG, bombardeo de partículas, suministro de fibra de silicio, o micro inyección de protoplastos de célula de planta o callo embriogénico . Ver, por ejemplo, Tomes y colaboradores, (1995) "Direct DNA Transfer into Intact Plant Cells Via Microproj ectile Bombardment", in Plant Cell , Tissue and Organ Culture, Fundamental Methods, eds. Gamborg y 271 Phillips (Springer-Verlag, Berlín), pp. 197-213. Métodos adicionales para transformar varias células hospederas se divulgan en Klein y colaboradores, (1992) '"Transíormation of microbes, plants and animáis by particle bombardment" Bio/Technol. 10 (3) : 286-291. La introducción de construcciones de DNA usando la precipitación de polietilenglicol es descrita en Paszkowski y colaboradores, (1984) EMBO J. 3: 2717-2722. Las técnicas de electroporación se describen en Fromm y colaboradores, (1985) Proc. Nati. Acad. Sci. 82: 5824. Las técnicas de transformación balística se describen en Klein y colaboradores, (1987) Nature 327: 70-73. Alternativamente, las construcciones de DNA se pueden combinar con regiones flanqueantes de T-DNA adecuadas e introducidas en un vector hospedero de Agrohacterium tu efaciens convencional. Las funciones de virulencia del hospedero de Agrohacterium tumefaciens dirigirá la inserción de la construcción y el marcador adyacente en el DNA de la célula de la planta cuando la célula es infectada por la bacteria. Ver, la patente norteamericana No. 5,591,616. Las técnicas de transformación mediadas por Agrohacterium tumefaciens son bien descritas en la literatura científica. Ver, por ejemplo, Horsch y colaboradores, (1984) Science 233: 496-498, y Fraley y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci. 80: 4803. Por ejemplo, la transformación del maíz 272 con Agrobacterium es descrita en las patentes norteamericanas Nos. 5,550,318 y 5,981,840. Otros métodos de trasformación incluyen (1) La transformación mediada por Agrobacterium rhizogenes (ver, por ejemplo, Lichtenstein y Fuller In: Genetic Engineering, Vol. 6, PWJ Rigby, ed., London, Academic Press, 1987; Lichtenstein, CP., y Draper, J, . In: DNA Cloning, Vol. II, D.M. Glover, Ed., Oxford, IRI Press, 1985; WO 88/02405 describe el uso de la cepa A4 de A. rhizogenes y su plásmido Ri junto con los vectores pARC8 o pARC16 de A. tumefaciens; (2) capatación de DNA mediada por liposimas (ver, por ejemplo, Freeman y colaboradores, (1984) Plant Cell Physiol. 25: 1353; (3) e 'método de formación de vórtice (ver, por ejemplo, indle (1990) Proc. Nati. Acad. Sci . USA 87: 1228. El DNA también puede ser introducido en plantas mediante la transferencia de DNA directa en polen como es descrito por Zhou y colaboradores, (1983) Methods in Enzymology 101: 433; D . Hess (1987) Intern Rev. Cytol. 107:367; y Luo y colaboradores, (1988) Plant Mol. Biol. Repórter 6:165. La expresión de los ácidos nucleicos que codifican el polipéptido se pueden obtener mediante la inyección del DNA en órganos reproductores de una planta como es descrito por Pena y colaboradores, (1987) Nature 325:274. El DNA también puede ser inyectado directamente en las células de embriones inmaduros y la rehidratación de 273 embriones desecados como es descrito por Neuhaus y colaboradores, (1987) Theor. Appl . Genet. 75: 30; y Benbrook y colaboradores, (1986) en Proceedings Bio Expo 1986, Butterworth, Stoneham, Mass., pp. 27-54. Las células hospederas de animales y eucarióticas menores (por ejemplo, levadura) son competentes o se vuelven competentes para la transfeccion para varios medios. Existen varios métodos bien conocidos para introducir DNA en células de animales. Estos métodos incluyen: la precipitación con fosfato de calcio; fusión de las células recipientes con protoplastos bacterianos que contienen el DNA; tratamiento de las células recipientes con liposomas que contienen el DNA; DEA dextrano, electroporación; biolistica y microinyección del DNA directamente en las células. Las células transfectadas son cultivadas por medios bien conocidos en la técnica. Ver, Kuchler, R.J. (1977) Biochemical Methods in Cell Culture and Virology (Dowden, Hutchinson and Ross, Inc.). Como se utiliza en la presente, el término "transformación" significa la alteración del genotipo de una planta hospedera mediante la introducción de una secuencia de ácido nucleico, pro ejemplo, una secuencia de ácido nucleico "heteróloga" o "extraña". La secuencia de ácido nucleico heteróloga no necesita necesariamente originarse de una fuente diferente, sino más bien, en algún punto, ha sido externa a la célula en la cual es introducida. 274 Además de Berger, Ausubel y Sambrook, referencias generales útiles para la clonación de células de planta, cultivo de generación incluyen Jones, ed. (1995) Plant Gene Transfer and Expression Protocole—Methods in Molecular Biology, volumen 49 (Humana Press, Towata, NJ) Payne y colaboradores, (1992) Plant Cell and Tissue Culture in Liquid Systems (John Wiley & Sons, Inc. New York, NY) ("Payne") ; y Gamborg y Phillips, eds. (1995) Plant Cell, Tissue and Organ Culture, Fundamental Methods/Springer Lab Manual, (Springer-Verlag, Berlin) ("Gamborg") . Una variedad de medios de cultivo de células son descritas en Atlas y Parks, eds. The Handbook of Microbiological Media, (CRC Press, Boca Ratón, FL) ("Atlas") . La información adicional para el cultivo de células de planta se encuentra disponible en la literatura comercial tal como el Life Science Research Cell Culture Catalogue (1998) de Sigma-Aldrich, Inc. (St Louis, MO) (Sigma-LSRCCC) y, por ejemplo, el Plant Culture Catalogue and supplement (1997) también de Sigma-Aldrich, Inc. (St Louis, MO) (Sigma-PCCS) . Detalles adicionales que consideran el cultivo de células de plantas se encuentran en Croy, ed. (1993) Plant Molecular Biology (Bios Scientific Publishers, Oxford, UK) . En una modalidad de esta invención, los vectores recombinantes incluyendo uno o más polinucleótidos GAT, adecuados para la transformación de células de planta son 275 preparados. Una secuencia de DNA que codifica para el polipéptido GAT deseado, por ejemplo, seleccionado de entre SEQ ID NO: 516, 517, 518, 519, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526 527 528, 529, 530 531, 532, 533 534, 535, 536 537, 538 539 540, 541, 542 543, 544, 545 546, 547, 548 549, 550 551 552, 553, 554 555, 556, 557 558, 559, 560 561, 562 563 564, 565, 566 567, 620, 622 624, 626, 628 630, 632 634 636, 638, 640 642, 644, 646 648, 650, 652 654, 656 658 660, 662, 664 666, 668, 670 672, 674, 676 678, 680 682 684, 686, 688 690, 692, 694 696, 698, 700 702, 704 706 708, 710, 712 714, 716, 718 720, 722, 724 726, 728 730 732, 734, 736 738, 740, 742 744, 746, 748 750, 752 754 756, 758, 760 762, 764, 768 770, 772, 774 776, 778 780 782, 784, 786 788, 790, 792 794, 796, 798 800, 802 804 806, 808, 810 812, 814, 816 818, 820, 822 824, 832 834 836, 838, 840 842, 844, 846 848, 850, 852 854, 856 858 860, 862, 864 866, 868, 870 872, 874, 876 878, 880 882 884, 886, 888 890, 892, 894 896, 898, 900 902, 904 906 908, 910, 912 914, 916, 918 920, 922, 924 926, 928 930 932, 933, 934 935, 936, 937 938, 939, 940 941, 942, 943 944, 945, 947, 949, 951, y 952, es convenientemente usado para construir un cásete de expresión recombinante que puede ser introducida en la planta deseada. En el contexto de la presente invención, un cásete de expresión típicamente comprenderá un polinucleótido GAT seleccionado operablemente 276 enlazado a una secuencia de promotor y otras secuencias regulatorias de iniciación de transcripción y de traducción que son suficientes para dirigir la transcripción de la secuencia GAT en los tejidos propuestos (por ejemplo, la planta completa, hojas, raices, etc.) de la planta transformada. Un número de promotores pueden ser utilizados en la práctica de la presente invención. Los promotores pueden ser seleccionados en base al efecto deseado. Esto es, los ácidos nucleicos pueden ser combinados con promotores constitutivos, preferidos del tejido u otros promotores para la expresión en plantas . Los promotores constitutivos incluyen, por ejemplo, el promotor de núcleo del promotor Rsyn7 y otros promotores constitutivos divulgados en WO 99/43838 y la patente norteamericana No. 6,072,050; el promotor CaMV 35S de núcleo (Odell y colaboradores, (1985) Nature 313: 810-812); actina de arroz (McElroy y colaboradores, (1990) Plant Cell 2: 163-171); ubicuitin (Christensen y colaboradores, (1989) Plant Mol. Biol. 12: 619-632 y Christensen y colaboradores, (1992) Plant Mol. Biol. 18: 675-689); pEMÜ (Last y colaboradores, (1991) 7: Theor. Appl . Genet. 81: 581-588); MAS (Velten y colaboradores, (1984) EMBO J. 3: 2723-2730); promotor AL5 (patente norteamericana No. 5, 659, 026), y los similares. Otros promotores constitutivos incluyen, por 277 ejemplo, aquellos divulgados en las patentes Nos. 5, 608,149; 5, 608, 144/ 5, 604,121; 5, 569, 597; 5,466, 785; 5,399, 680; 5,268, 463; 5, 608,142; y 6,177,611. Los promotores regulados químicamente se pueden usar para modular la expresión de un gen en una planta a través de la aplicación de un regulador químico exógeno. Dependiendo del objetivo, el promotor puede ser un promotor inducible químicamente, donde la aplicación de la sustancia química induce la expresión del gen, o un promotor reprimible químicamente, donde la aplicación de la sustancia química reprime la expresión del gen. Los promotores inducibles químicamente son conocidos en la técnica e incluyen, pero no están limitados a, el promotor In2-2 de maíz, que es activado por los conservadores de herbicida de bencen sulfonamida; el promotor GST de maíz, que es activado por compuestos electrofílicos hidrofóbicos que son usados como herbicidas pre-emergente; y el promotor PR-la del tabaco, que es activado por el ácido salicílico. Otros promotores regulados químicamente de interés incluyen los promotores responsivos esteroides. Ver, por ejemplo, el promotor inducible por glucocorticoide en Schena y colaboradores, (1991) Proc. Nati. Acad. Sel. USA 88: 10421-10425 y McNellis y colaboradores, (1998) Plant J. 14(2): 247-257 y los promotores inducibles por tetraciclina y reprimibles por tetraciclina, por ejemplo, Gatz y colaboradores, (1991) Mol. Gen. Genet. 227: 229-237, y 278 las patentes norteamericanas Nos. 5,814,618 y 5,789,156, incorporadas en la presente por referencia. Los promotores preferidos de tejidos también pueden ser utilizados para dirigir la expresión G7AT dentro de un tejido de planta particular. Los promotores preferidos de tejido incluyen aquellos divulgados en Yamamoto y colaboradores, (1997) Plant J. 12(2) : 255-265; awamata y colaboradores, (1997) Plant Cell Physiol. 3(7) : 792-803; Hansen y colaboradores, (1997) Mol. Gen Genet. 254(3) : 337-343; Russell y colaboradores, (1997) Transgenic Res. 6(2) : 157-168; Rinehart y colaboradores, (1996) Plant Physiol. 112(3) : 1331-1341; Van Camp y colaboradores, (1996) Plant Pllysiol. 112(2) : 525-535; Canevascini (1996) Plant Physiol, 112(2) : 513-524; Yamamoto y colaboradores, (1994) Plant Cell Physiol. 35(5) : 773-778; Lam (1994) Resulte Probl . Cell Differ. 20: 181-196; Orozco y colaboradores, (1993) Plant Mol Biol. 23(6) : 1129-1138; Matsuoka y colaboradores, (1993) Pxoc Nati. Acad. Sci. USA 90(20) : 9586-9590; y Guevara-Garcia y colaboradores, (1993) Plant J. 4(3) : 495-505. Tales promotores pueden ser modificados si es necesario, para la expresión débil. Los promotores específicos de hoja son conocidos en la técnica. Ver, por ejemplo, Yamamoto y colaboradores, (1997) Plant J. 12(2) : 255-265; Kwon y colaboradores, (1994) Plant Physiol. 105: 357-67; Yamamoto y colaboradores, (1994) Plant Cell Physiol. 35(5): 773-778; Gotor y colaboradores, (1993) Plant J. 3: 509-18; Orozco y colaboradores, (1993) Plant Mol. Biol. 23(6): 1129-1138; y Matsuoka y colaboradores, (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90(20): 9586-9590. Los promotores preferidos de raiz son conocidos y se pueden seleccionar de los muchos disponibles de la literatura o aislados de novo de varias especies compatibles. Ver, por ejemplo Hire y colaboradores, (1992) Plant Mol. Biol. 20(2): 207-218 (gen de glutamina sintetasa especifico de raiz de soya); Keller y colaboradores, (1991) Plant Cell 3(10): 1051-1061 (elemento de control especifico de raiz en el gen GRP 1.8 de judia verde); Sanger y colaboradores, (1990) Plant Mol. Biol. 14(3): 433-443 (promotor especifico de raiz del gen manopine sintasa (MAS) de Agrobacterium turnefaciens) ; y Miao y colaboradores, (1991) Plant Cell 3(1): 11-22 (glutamina sintetasa (GS) citosólica que codifica el clon cDNA de longitud completa, que es expresado en raices u nodulos de raiz de soya) . Ver también Bogusz y colaboradores, (1990) Plant Cell 2(7): 633-641, que divulga los promotores específicos de raíz aislado de genes de hemoglobina a partir de la fijación de nitrógeno de la no legumbre Parasponia andersonii y la fijación no de nitrógeno relacionada de la no legumbre Trema tomentosa. Los promotores de estos genes se enlazaron a un gen reportador de B-glucuronidasa y se 280 introdujeron en tanto la no legumbre Micot ana tabacum y la legumbre Lotus cornículatus, y en ambos casos se preservó la actividad del promotor especifico de raiz. Leach y colaboradores, (1991) describe en su análisis de de los promotores de los genes inductores de raiz rolC y ro 7.D altamente expresados de Agrobacterium rhizogenes (ver Plant Science (Limerick] 79(1): 69-76). Ellos concluyeron que los determinantes de DNA preferidos de tejido incrementadores son disociados en estos promotores. Teeri y colaboradores, (1989) EMBO J. 8 (2) : 343-350 usaron la fusión del gen iacZ para mostrar que la octopina sintasa que codifica el gen T-DNA de Agrobacterium especialmente activo en la epidermis de la punta de la raiz y que el gen TR2' es especifico de la raíz en la planta intacta y estimulada por el lesionamiento en el tejido de hoja, que es una combinación especialmente deseable de características para el uso con un gen insecticida o larvicida. El gen TR1' , fusionado en nptll (neomicin fosfotransferase II), mostró características asimilares. Promotores preferidos de raíz adicionales incluyen el promotor de gen VfENOD-GRP3 (Kuster y colaboradores, (1995) Plant Mol. Biol. 29(4): 759-772); el promotor ZRP2 (patente norteamericana No. 5,633,636); el promotor IFS1 (solicitud de patente norteamericana No. de Serie 10/104,706) y el promotor rolB (Capana y colaboradores, (1994) Plant Mol. Biol. 25(4): 681-691). Ver también las patente norteamericanas Nos. 281 ,837,876; 5,750,386; 5,459,252; 5,401,836; 5,110,732; y 5, 023, 179. Los promotores "preferidos de semillas" incluyen tanto promotores "específicos de semillas" (aquellos promotores activos durante el desarrollo de la semilla tales como promotores de proteínas de almacenamiento de semilla) así como promotores de "germinación de semilla" (aquellos promotores activos durante la germinación de la semilla) . Ver Thompson y colaboradores, (1989) BioEssays 10: 108, incorporada en la presente por referencia. Tales promotores preferidos de semilla incluyen, pero no están limitados a, Ciml (mensaje inducido por citoquinina) ; cZl 9B1 (zeína de 19 kDa de maíz) ; milps (myo-inositol-l-fosfato sintasa) ; y celA (celulosa sintasa) (ver la patente norteamericana No. 6,225,529, incorporada en la presente por referencia). La Gamma-zeína es un promotor específico de endosperma. Glob-1 es un promotor específico de embrión. Para dicotiledóneas, los promotores específicos de semilla incluyen, pero no están limitados a, ß-faseolina de fríjol, napina, ß-conglicinina, lectina de soya, cruciferina, y los similares. Para monocotiledóneas, los promotores específicos de semilla incluyen, pero no están limitados a, zeina de 15 kDa de maíz, zeina de 22 kDa, zeina de 27 kDa, g-zeina, ceroso, shrunken 1, shrunken 2, globulin 1, etc. Ver también, WO 00/12733, que divulga promotores preferidos de semilla a partir de los 282 genes endl y end2; incorporados en la presente por referencia. En particular, un promotor de planta fuertemente o débilmente constitutivo que dirige la expresión de un ácido nucleico GAT en todos los tejidos de una planta puede ser favorablemente empleado. Tales promotores son activos bajo la mayoría de las condiciones ambientales y estados de desarrollo o diferenciación celular. Además de los promotores mencionados anteriormente, ejemplos de promotores constitutivos incluyen el promotor 1'- o 2'- de Agrobacteri um tumefaciens, y otras regiones de iniciación de transcripción de varios genes de plantas conocidos para aquellos expertos. Donde la sobre expresión de un polipéptido AGT de la invención es perjudicial a la planta, un experto reconocerá que los promotores constitutivos débil pueden ser usados para bajos niveles de expresión. Generalmente, por "promotor débil" se propone un promotor que induce la expresión de una secuencia de codificación a bajo nivel. Por "niveles de "bajo nivel" de aproximadamente 1/1000 transcriptos a aproximadamente 1/100,000 transcriptos, a aproximadamente tan bajo como 1/500,000 transcriptos por célula se propone. Alternativamente, se reconoce que los promotores débiles también incluyen promotores que son expresados en solamente una cuantas células y no en otras para dar un nivel bajo total de expresión. Donde un promotor es expresado en niveles inaceptablemente altos, porciones de la secuencia de promotor pueden ser suprimidas o modificadas para disminuir los niveles de expresión. En aquellos casos donde altos niveles de expresión no son per udiciales a la planta, se puede utilizar un promotor fuerte, por ejemplo, un t-RNA, u otro promotor pol III, o un promotor pol II fuerte, (por e emplo, el promotor de virus de mosaico de coliflor, CaMV, promotor 35S) . Alternativamente, un promotor de planta puede estar bajo control ambiental. Tales promotores son referidos como promotores "inducibles" . Ejemplos de condiciones ambientales que pueden alterar la transcripción mediante promotores inducibles incluyen el ataque por patógenos, condiciones anaeróbicas, o la presencia de luz. En algunos casos, es deseable usar promotores que sean "específicos de tejido" y/o estén bajo control de desarrollo tal que el polinucleótido GAT es expresado solamente en ciertos tejidos o etapas de desarrollo, por ejemplo, hojas, raíces, retoños, etc. Los promotores endógenos de genes relacionados con la tolerancia al herbicida y fenotipos relacionados son particularmente útiles para inducir la expresión de los ácidos nucleicos GAT, por ejemplo, P450 monooxigenasas, glutatione-S-transferasas, homoglutationa-S-transierasas, glifosato oxidasas y 5-enolpiruvilsiquimate-2-fosfato sintasas . 284 Los promotores específicos de tejido también se pueden utilizar para dirigir la expresión de genes estructurales heterólogos, incluyendo los polinucleótidos GAT descritos en la presente. Así, los promotores se pueden utilizar en cásete de expresión reco binantes para inducir la expresión de cualquier gen cuya expresión es deseable en las plantas transgénicas de la invención. Por ejemplo, GAT y/u otros genes que confieren resistencia al herbicida o tolerancia, genes que influyen en otras características útiles, por ejemplo, heterosis. De manera similar, los elementos incrementadotes, por ejemplo, derivados de las secuencias regulatorias 5' o intrón de un gen heterólogo también se pueden utilizar para mejorar la expresión de un gen estructural heterólogo, tal como un polinucleótido GAT. En general, el promotor particular usado en el cásete de expresión en plantas depende de la aplicación propuesta. Cualquiera de un número de promotores que dirige la transcripción en células de plantas puede ser adecuado. El promotor puede ser ya sea constitutivo o inducible. Además de los promotores mencionados en lo anterior, los promotores de origen bacteriano que operan en plantas incluyen el promotor de octopina sintasa, el promotor de nopaline sintasa y otros promotores derivados de los plásmidos Ti. Ver, Herrera-Estrella y colaboradores, (1983) Nature 303: 209. Los promotores virales incluyen los promotores de RNA 35S y 19S 285 de CaMV. Ver, Odell y colaboradores, (1985) Nature 313: 810. Otros promotores de plantas incluyen el promotor de subunidad pequeña de ribulosa-1 , 3-bifosfato carboxilasa y el promotor de faseolina. La secuencia del promotor del gen E8 (ver, Deikman y Fischer (1988) EMBO J 7: 3315) y otros genes también son favorablemente utilizados. Los promotores específicos para especies monocotiledóneas también son considerados (McElroy y Brettell (1994) "Foreign gene expression in transgenic cereals" Trends Biotech. 12: 62-68). Alternativamente, promotores novedosos con características útiles pueden ser identificados desde cualquier fuente viral, bacteriana o de planta por métodos, incluyendo el análisis de secuencia, atrapamiento de incrementador o promotor, y similares, conocidos en la técnica. En la preparación de vectores de expresión de la invención, las secuencias diferentes al promotor y el gen que codifica GAT también son favorablemente utilizadas. Si se desea la expresión del polipéptido apropiada, una región de poliadenilación puede ser derivada del gen natural, a partir de una variedad de otros genes de plantas, o de T-DNA. Los péptidos de señal/localización, que, por ejemplo, facilitan la translocación del polipéptido expresado a los organelos internos (por ejemplo, cloroplastos) o secreción extracelular, también pueden ser empleados. 286 El vector que comprende un polinucleótido GAT también puede incluir un gen marcador que confiere un fenotipo seleccionable sobre células de plantas. Por ejemplo, el marcador puede codificar codificar la tolerancia a biocide, particularmente tolerancia a antibiótico, tal como tolerancia a canamicina, G418, bleomicina, higromicina, o tolerancia herbicida, tal como tolerancia a clorosulfurón, o fosfinotricina . Los genes reportadores que se usan para monitorear la expresión del gen y la localización de proteína por la vía de productos de reacción visualizables (por ejemplo, beta-glucuronidase, beta-galactosidase, y cloramfenicol acetiltransferasa) o mediante visualización directa del producto de gen mismo (por ejemplo, proteína fluorescente verde, GFP; Sheen y colaboradores, (1995) The Plant Journal 8: 777) se puede utilizar por ejemplo, para monitorear la expresión del gen transiente en células de plantas. Los sistemas de expresión transientes pueden ser empleados en células de plantas, por ejemplo, en la clasificación de cultivos de células de plantas para actividades de tolerancia al herbicida. TRANSFORMACION DE PLANTAS Protoplastos Numerosos protocolos para el establecimiento de protoplastos transformables a partir de una variedad de tipos de plantas y la transformación subsecuente de los 287 protoplastos cultivados son disponibles en la técnica y son incorporados en la presente por referencia. Para ejemplos, ver, Hashinoto y colaboradores, (1990) Plant Physiol. 93: 857; Fowke y Constabel, eds . (1994) Plant Protoplasts; Saunders y colaboradores, (1993) Applications of Plant In vitro Technology Symposium, UPM 16-18; y Lyznik y colaboradores, (1991) BioTechniques 10: 295, cada una de las cuales es incorporada en la presente por referencia. Cloroplastos Los cloroplastos son el sitio de acción de algunas de las actividades de tolerancia a herbicida, y, en algunos casos, el polinucleótido GAT es fusionado a un péptido de secuencia de transito de cloroplasto para facilitar la translocación de los productos génicos en los cloroplastos. En estos casos, puede ser ventajoso transformar el polinucleótido GAT en los cloroplastos de las células hospederas de plantas. Numerosos métodos están disponibles en la técnica para realizar la transformación y expresión de cloroplastos (por ejemplo, Daniell y colaboradores, (1998) Nature Biotech. 16:346; O'Neill y colaboradores, (1993) The Plant Journal 3:729; y Maliga (1993) TIBTECH 11:1). La construcción de expresión comprende una secuencia regulatoria transcripcional funcional en plantas operablemente enlazado a un polinucleótido que codifica el polipéptido GAT. Los casetes de expresión que son diseñados para funcionar en 288 cloroplastos (tal como un cásete de expresión que incluye un polinucleótido GAT) incluyen las secuencias necesarias para asegurar la expresión en cloroplastos. Típicamente, la secuencia de codificación es flanqueada por dos regiones de homología al genoma de cloroplasto para efectuar una recombinación homologa con el genoma del cloroplasto; frecuentemente un marcador seleccionable también está presente dentro de las secuencias de DNA de la plástida flanqueantes para facilitar la selección de cloroplastos transformados genéticamente estables en la célula de planta transplastónica resultante (ver, por ejemplo, Maliga (1993) y Daniell (1998) supra, y referencias citadas en la misma) . Métodos de transformación generales Las construcciones de DNA de la invención se pueden introducir en el genoma hospedero de la planta deseada mediante una variedad de técnicas convencionales. Las técnicas para transformar una amplia variedad de especies de plantas superiores son bien conocidas y descritas en la literatura técnica y científica. Ver, por ejemplo, Payne, Gamborg, Croy, Jones, etc. todo supra, así como, por ejemplo, Weising y colaboradores, (1988) Ann. Rev. Genet. 22:421 y las patentes norteamericanas Nos. 5,889,191, 5,889,190, 5,866,785, 5,589,367 y 5,316,931, incorporadas en la presente por referencia. 289 Una variedad de otros protocolos de transformación son contemplados en la presente invención. Los protocolos de transformación asi como protocolos para introducir secuencias de nucleótidos en plantas pueden variar dependiendo del tipo de planta o célula de planta, es decir, monocotiledónea o dicotiledónea, dirigida para la transformación. Los métodos adecuados de introducción de secuencias de nucleótidos en células de plantas y la inserción subsecuente en el genoma de la planta incluye la microinyección (Crossway y colaboradores, (1986) Biotechniques 4: 320-334), electroporación (Riggs y colaboradores, (1986) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 83: 5602-5606), transformación mediada por Agrobacte.rium (patentes norteamericanas Nos. 5,563, 055 y 5,981,840), transferencia de gen directa (Paszkowski y colaboradores, (1984) EMBO J. 3: 2717-2722), y aceleración de partículas balísticas (ver, por ejemplo, la patente norteamericana No. 4,945,050; las patentes norteamericanas Nos. 5,879,918; 5,886,244; 5,932,782; Tomes y colaboradores, (1995) "Direct DNA Transfer into Intact Plant Cells via Micropro ectile Bombardment", in Plant Cell r Tissue, and Organ Culture: Fundamental Methods, Eds . , Gamborg y Phillips (Springer-Verlag, Berlín) ; McCabe y colaboradores, (1988) Biotechnology 6: 923-926); y la transformación Leel (WO 00/28058). Ver también, Weissinger y colaboradores, (1988) Ann. Rev. Genet. 22: 421-477; Sanford y colaboradores, (1987) 290 Particulate Science and Technology 5: 27-37 (cebolla) ; Christou y colaboradores, (1988) Plant Physiol. 87: 671-674 (soya); McCabe y colaboradores, (1988) Bio/'Technology 6: 923-926 (soya); Finer y McMullen (1991) In vitro Cell Dev. Biol . 27P: 175-182 (soya); Singh y colaboradores, (1998) Theor. Appl. Genet. 96: 319-324 (soya); Datta y colaboradores, (1990) Biotechnology 8: 736-740 (arroz); Klein y colaboradores, (1988) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85: 4305-4309 (maíz) ; Klein y colaboradores, (1988) Biotechnology 6: 559-563 (maíz); patentes norteamericanas Nos. 5,240,855; 5,322,783 y 5,324,646; Klein y colaboradores, (1988) Plant Physiol. 91: 440-444 (maíz); Fromm y colaboradores, (1990) Biotechnology 8: 833-839 (maíz); Hooykaas-Van Slogteren y colaboradores, (1984) Nature (London) 311: 763-764; patente norteamericana No. 5,736,369 (cereales); Bytebier y colaboradores, (1987) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 84: 5345-5349 (Liliáceas) ; De Wet y colaboradores, (1985) en The Experimental Manipulation of Ovule Tissucs, Eds. r Chapman y colaboradores, (Longman, New York), pp. 197-209 (polen) ; Kaeppler y colaboradores, (1990) Plant Cell Reports 9: 415-418 y Kaeppler y colaboradores, (1992) Theor. Appl. Genet. 84: 560-566 (transformación mediada por whisker) ; D'Halluin y colaboradores, (1992) Plant Cell 4: 1495-1505 (electroporación) ; Li y colaboradores,. (1993) Plant Cell Reports 12: 250-255 y Christou y Ford (1995) Annals of Botany 291 75: 407-413 (arroz); Osijoda y colaboradores, (1996) Nature Biotechnology 14: 745-750 (maíz por la vía Agrobactexium turnetaciens) ; todas las cuales son incorporadas por referencia. Por ejemplo, los DNAs pueden ser introducidos directamente en el DNA genómico de una célula de planta usando técnicas tales como electroporación y microinyección de protoplastos de células de planta, o las construcciones de DNA pueden ser introducidas directamente al tejido de planta usando métodos balísticos, tal como el bombardeo de partículas de DNA. Alternativamente, las construcciones de DNA pueden ser combinadas en regiones flanqueantes de T-DNA adecuadas e introducidas en un vector hospedero de Agrobactexium tumefaciens convencional. Las funciones de virulencia del hospedero de Agrobactexium dirigirá la inserción de la construcción y marcador adyacente en el DNA de la célula de la planta cuando la célula de planta es infectada por las bacterias. Las técnicas de microinyección son conocidas en la técnica y bien descritas en la literatura científica y de patente. La introducción de construcciones de DNA usando la precipitación con polietilenglicol es descrita en Paszkowski y colaboradores, (1984) EMBO J 3:2717. Las técnicas de electroporación se describen en Fromm y colaboradores, (1985) Proc Nat'l Acad Sci USA 82:5824. Las técnicas de 292 transformación balística se describen en Klein y colaboradores, (1987) Nature 327:70; y Weeks y colaboradores, Plant Physiol 102:1077. En algunas modalidades, las técnicas de transformación mediadas por Agrobacterium son utilizadas para transferir las secuencias GAT de la invención a plantas transgénicas . La transformación mediada por Agrobacterium es ampliamente utilizada para la transformación de dicotiledones, sin embargo, ciertos dicotiledones también pueden ser transformadas mediante Agrobacterium. Por ejemplo, la transformación del arroz por Agrobacterium es descrito por Hiei y colaboradores, (1994) Plant J. 6:271; patente norteamericana No. 5,187,073; patente norteamericana No. 5,591,616; Li y colaboradores, (1991) Science in China 34:54; y Raineri y colaboradores, (1990) Bio/'Technology 8:33. El maíz transformado, cebada, tritical y espárrago mediante la transformación mediada por Agrobacterium también ha sido descrito (Xu y colaboradores, (1990) Chínese J Bot 2:81). Las técnicas de transformación mediada por Agrobacterium toma ventaja de la habilidad del plásmido de inducción de tumor (Ti) de A. tumefaciens para integrarse en un genoma de la célula de la planta, o para co-transferir un ácido nucleico de interés en una célula de planta . Típicamente, se produce un vector de expresión en donde el ácido nucleico de interés, tal como un polinucleótido GAT de 293 la invención, es ligado en un plásmido autónomamente replicante que también contiene secuencias de T-DNA. Las secuencias de T-DNA típicamente flanquean el ácido nucleico del cásete de expresión de interés y comprenden las secuencias de integración de plásmido. Además del cásete de expresión, T-DNA también típicamente incluye una secuencia marcadora, por ejemplo, genes de resistencia a antibiótico. El plásmido con el T-DNA y el cásete de expresión luego se transfieren en células de Agrobacterium. Típicamente, para la transformación efectiva de células de planta, la bacteria A. tumefaciens también posee las regiones vir necesarias sobre un plásmido, o integradas en su cromosoma. Para una discusión de la transformación mediada por Agrobacterium, ver, Firoozabady y Kuehnle, (1995) en Plant Cell Tissue and Organ Culture Fundamental Methods, eds . Gamborg y Phillips. En ciertas modalidades, ¦ los polinucleótidos de la presente invención se pueden apilar con cualquier combinación de secuencias de polinucleótidos de interés con el fin de crear plantas con un fenotipo deseado. Por ejemplo, los polinucleótidos de la presente invención se pueden apilar con cualquiera de otros polinucleótidos que codifican polipéptidos que tienen actividad pesticida y/o insecticida, tal como las proteínas tóxicas de Bacillus thuringiensis (descritas en las patente norteamericanas Nos. 5,366,892; 5,747,450; 5,737,514; 5,723,756; 5,593,881; y Geiser y 294 colaboradores, (1986) Gene 48: 109), lectinas (Van Damitie y colaboradores, (1994) Plant Mol. Biol. 24:825, pentina (descrita en la patente norteamericana No. 5,981,722), y los similares . Las combinaciones generadas también pueden incluir múltiples copias de cualquiera de los polinucleótidos de interés. Los polinucleótidos de la presente invención también pueden ser apilados con otro gen o combinación de genes para producir plantas con una variedad de combinaciones de atributos deseados, incluyendo, pero no limitados a, atributos deseable para alimentación de animales tales como genes de alto contenido de aceite (por ejemplo, patente norteamericana No. 6,232,529); aminoácidos balanceados (por ejemplo, hordotioninas (patentes norteamericanas Nos. 5,990, 389; 5, 885, 801; 5, 885, 802; y 5, 703, 409); cebada de alto contenido de lisina (Williamson y colaboradores, (1987) Eur. J. Biochem. 165: 99-106; y O 98/20122) y proteínas de alto contenido de metionina (Pedersen y colaboradores, (1986) J. Biol. Chem. 261:6279; Kirihara y colaboradores, (1988) Gene 71:359; y Musumura y colaboradores, (1989) Plant Mol. Biol. 12:123)); digeribilidad incrementada (por ejemplo, proteínas de almacenamiento modificadas (solicitud norteamericana No. de serie 10/053,410, presentada el 7 de noviembre del 2001); y tioredoxinas (solicitud norteamericana No. de serie 10/005,429, presentada el 3 de diciembre del 2001)); las descripciones de las cuales son incorporadas en la presente por referencia. Los polinucleótidos de la presente invención también pueden ser apilados con atributos deseables para resistencia a enfermedad o herbicida (por ejemplo, genes de desintoxicación de fumoni si na (patente norteamericana No. 5,792,931); genes de resistencia a virulencia y enfermedad (Jones y colaboradores, (1994) Science 266:789; Martin y colaboradores, (1993) Science 262:1432; Mindrinos y colaboradores, (1994) Cell 78:1089); imitantes de acetolactato sintasa (ALS) que conducen a resistencia a herbicida tal como las mutaciones S4 y/o Hra; inhibidores de glutamina sintasa tal como fosfinotricina o basta (por ejemplo, gen bar); y resistencia a glifosato (gen EPSPS) ) ; y atributos deseables para el procesamiento o productos de proceso tal como alto contenido de aceite (por ejemplo, patente norteamericana No. 6,232,529); aceites modificados (por ejemplo, genes de desaturasa de ácido graso (patente norteamericana No. 5,952,544; WO 94/11516)); almidones modificados (por ejemplo, ADPG pirofosforilasas (AGPase) , almidón sintasa (SS) , enzima de ramificación de almidón (SBE) , y enzimas de desramificación de almidones (SDBE) ) ; y polímeros o bioplásticos (por ejemplo, patente norteamericana No. 5,602,321; beta-cetotiolase, polihidroxibutxrato sintasa, y acetoacetyl-CoA reductasa (Schubert y colaboradores, (1988) 296 J. Bactexiol. 170: 5837-5847) facilita la expresión de polihidrcxialcanoatos (PHAs ) ) ; las descripciones de las cuales son incorporadas en la presente por referencia. También se podrían combinar los polinucleótidos de la presente invención con polinucleótidos que proporcionan atributos agronómicos tal como esterilidad masculina (por ejemplo, ver la patente norteamericana No. 5.583,210), resistencia del tallo, tiempo de florecimiento o atributos de tecnología de transformación así como regulación del ciclo celular o dirección del gen (por ejemplo, WO 99/61619, WO 00/17364 y WO 99/25821); las descripciones de las cuales son incorporadas por referencia. Estas combinaciones apiladas pueden ser creadas mediante cualquier método incluyendo, pero no limitado al, cruzamiento de plantas mediante cualquier metodología convencional o TopCross, o transformación genética. Si los atributos son apilados al transformar genéticamente las plantas, las secuencias de polinucleótidos de interés se pueden combinar en cualquier tiempo y en cualquier orden. Por ejemplo, una planta transgénica que comprende uno o más atributos deseados se puede usar como el objetivo para introducir atributos adicionales mediante la transformación subsecuente. Los atributos se pueden introducir simultáneamente en un protocolo de co-transformación con los polinucleótidos de interés proporcionados por cualquier 297 combinación de cásete de transformación. Por ejemplo, si dos secuencias serán introducidas, las dos secuencias pueden ser contenidas en cásete de transformación separados (trans) o contenidos en el mismo cásete de transformación (cis) . La expresión de las secuencias puede ser inducida por el mismo promotor o diferentes promotores. En ciertos casos, puede ser deseable introducir un cásete de transformación que suprimirá la expresión del polinucleótido de interés. Esto puede ser combinado con cualquier combinación de otros casetes de supresión o casetes de sobresupresiónn para generar la combinación deseada de atributos en la planta. Además se reconoce que las secuencias de polinucleótido pueden ser apiladas en una ubicación genómica deseada usando un sistema de recombinación especifico del sitio. Ver, por ejemplo, 099/25821, W099/25854, 099/25840, W099/25855, y 099/25853, todas las cuales son incorporadas en la presente por referencia. Regeneración de Plantas Transgénicas . Las células de plantas transformadas que son derivadas mediante técnicas de transformación en plantas, incluyendo aquellas discutidas en lo anterior, pueden ser cultivadas para regenerar una planta completa que posee el genotipo transformado, (es decir, un polinucleótido GAT) , y asi el fenotipo deseado, tal como resistencia adquirida (es decir, tolerancia) a glifosato o a un análogo de glifosato. 298 Tales técnicas de regeneración dependen de la manipulación de ciertas fitohormonas en un medio de crecimiento de cultivo de tejido, que típicamente depende de un marcador biocida y/o herbicida que se ha introducido con untamente con las secuencias de nucleótidos deseadas. Para la transformación y generación de maíz ver, Gordon-Kamm y colaboradores, The Plant Cellf 2: 603-618 (1990). Alternativamente, la selección para la resistencia de glifosato conferida por el polinucleótido GAT de la invención puede ser realizada. La regeneración de plantas a partir de protoplastos cultivados es descrito en Evans y colaboradores, (1983) Protoplasts Isolation and Culture, Handbook of Plant Cell Culture, pp 124-176, Macmillan Publishing Company, New York; y Binding (1985) Regeneration of Plants, Plant Protoplasts pp 21-73, CRC Press, Boca Ratón. La regeneración también se puede obtener a partir del callo de planta, explantas, órganos o partes de las mismas. Tales técnicas de regeneración son descritas generalmente en lee y colaboradores, (19-87) Ann Rev of Plant Phys 38:467. Ver también, por ejemplo, Payne y Gamborg. Las células de plantas transformadas, callos o explantas pueden ser cultivadas en el medio de regeneración en la oscuridad durante varias semanas, generalmente de manera aproximada 1 a 3 semanas para permitir que maduren los embriones somáticos. El medio de regeneración preferido 299 incluye medios que contienen sales MS . Las células de planta, callo o explantas luego se cultivan típicamente sobre un medio para echar raíces en un ciclo de luz/oscuridad hasta que se desarrollan los retoños y las raíces. Los métodos para la generación de plantas son conocidos en la técnica y métodos preferidos son proporcionados por Kamo y colaboradores, (Bot. Gaz. 146(3) : 324-334, 1985) ; West y colaboradores, (The Plant Cell 5: 1361-1369, 1993); y Duncan y colaboradores, (Planta 165: 322-332, 1985) . Plantitas pequeñas luego pueden ser transferidas a tubos que contienen el medio de raíz y dejadas crecer y desarrollar más raíces por aproximadamente otra semana. Las plantas luego pueden ser transportadas a la mezcla de tierra en macetas en el invernadero. La regeneración de plantas que contienen el gen extraño introducido por Agrobacterium puede ser lograda como es descrito por Horsch y colaboradores, Science, 227: 1229-1231 (1985) y Fraley y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci. ü. S. A., 80:4803 (1983) . Este procedimiento típicamente produce retoños dentro de dos a cuatro semanas y estos retoños transformantes luego son transferidos a un medio inductor de raíz apropiado que contiene el agente selectivo y un antibiótico para prevenir el crecimiento bacteriano. Las plantas transgénicas de la presente invención pueden ser fértiles o estériles. 300 La regeneración también se puede obtener del callo de planta, explantas, órganos o partes de las mismas. Tales técnicas de regeneración son descritas generalmente en Klee y colaboradores, Ann. Rev. Of Plant Plys. 38: 467-486 (1987). La regeneración de plantas de ya sea un protoplasto de una sola planta o varias explantas es bien conocido en la técnica. Ver, por ejemplo, Methods for Plant Molecular Biology, A. Weissbach y H. Weissbach, eds . , Academic Press, Inc., San Diego, Calif. (1988). Para el cultivo y regeneración de células de maiz ver generalmente, The Maize Handbook, Freeling y Walbot, eds., Springer, New York (1994); Corrí and Corn Improvemet, 3a Ed., Sprague and Dudley eds., American Society of Agronomy, Madison, Wisconsin (1988) . Después de la transformación con Agrobacterxum, las explantas típicamente son transferidas al medio de selección. Un experto comprenderá que el medio de selección depende del marcador seleccionable que fue co-transformado en las explantas. Después de una duración de tiempo adecuada, los transformantes comenzaran a formar retoños. Después de que los retoños son de aproximadamente 1-2 cm en longitud, los retoños deben ser transferidos a un medio de raíz y retoños adecuados. La presión de selección debe ser mantenida en el medio de raíz y retoño. Típicamente, los transformantes desarrollarán raíces en aproximadamente 1-2 semanas y formarán plantitas. 301 Después de que las plantitas está de aproximadamente 3-5 cm en longitud, ellas son colocadas en tierra estéril en macetas de fibra. Aquellos expertos en la técnica comprenderán que diferentes procedimientos de aclimatación son utilizados para obtener plantas transformadas de diferentes especies. Por ejemplo, después de desarrollar la raiz y el retoño, cortes, asi como embriones somáticos de plantas transformadas, son transferidos al medio para el establecimiento de plantitas. Para una descripción de selección y regeneración de plantas transformadas, ver, por ejemplo, Dodds y Roberts (1995) Experiments in Plant Tissue Culture, 3a Ed. , Cambridge University Press. También existen métodos para la transformación por Agrobacterium de Arabidopsis usando la infiltración al vacio (Bechtold N. , Ellis J. y Pelletier G, 1993, In planta Agrobacterium mediated gene transfer by infiltration of adult Arabidopsis thaliana plants. CR Acad Sci París Life Sci 316: 1194-1199) y la inmersión simple de plantas flourecientes (Desfeux, C. , Clough S.J., y Bent A.F., 2000, Female reproductive tissues are the primary target of Agrobacterium-mediated transformation by the Arabidopsis floral-dip method. Plant Physiol. 123: 895-904) . Usando estos métodos, se produce semilla transgénica sin la necesidad por el cultivo de tejido. 302 Existen variedades de plantas para las cuales los protocolos de transformación mediados por Agrobacterium efectivos todavía tienen que ser desarrollados. Por ejemplo, la transformación del tejido exitoso acoplado con la regeneración del tejido transformado para producir una planta transgénica no se ha reportado para algunos de las variedades de cultivo de algodón más comercialmente relevantes . No obstante, un procedimiento que puede ser utilizado con estas plantas implica introducir establemente el polinucleótido en una variedad de plantas relacionadas con la vía de la transformación mediada por Agrobacterium, confirmando la operabilidad y luego transfiriendo el transgen a la cepa comercial deseada usando las técnicas de cruza sexual o retrocruza estándares. Por ejemplo, en el caso del algodón, el Agrobacterium puede ser usado para transformar una línea Coker de Gossypium hirusLum (por ejemplo, las líneas Coker 310, 312, 5110 Deltapine 61 o Stoneville 213), y luego el transgen puede ser introducido en otra variedad de cultivo de G. h i rustum más comercialmente relevante mediante cruzamiento posterior. Las plantas transgénicas de esta invención pueden ser caracterizadas ya sea genotípicamente o fenotípicamente para determinar la presencia del polinucleótido GAT de la invención. El análisis genotípico se puede realizar mediante cualquiera de un número de técnicas bien conocidas, 303 incluyendo la amplificación por PCR del DNA genómico y la hibridación del DNA genómico con sondas marcadas especificas. El análisis fenotipico incluye, por ejemplo, la supervivencia de plantas o tejidos de plantas expuestos a un herbicida seleccionado tal como glifosato. Un experto reconocerá que después de que el cásete de expresión que contiene el gen GAT es establemente incorporado en las plantas transgénicas y confirmado que es operable, este puede ser introducido en otras plantas mediante cruzamiento sexual. Cualquiera de un número de técnicas de reproducción estándares que pueden ser utilizadas, dependiendo de las especies que son cruzadas. En cultivos vegetativamente propagados, las plantas transgénicas maduras pueden ser propagadas al tomar cortes o mediante técnicas de cultivo de tejido para producir múltiples plantas idénticas. La selección de transgénicos deseables se hace y nuevas variedades son obtenidas y propagadas vegetativamente para uso comercial. En cultivos propagados de semilla, las plantas transgénicas maduras pueden ser autocruzadas para producir una planta endogámica homocigoto. La planta endogámica produce semillas que contiene el ácido nucleico heterólogo recientemente introducido. Estas semillas pueden ser cultivadas para producir plantas que producirían el fenotipo seleccionado. 304 Las partes obtenidas de la planta regenerada, tales como flores, semillas, hojas, ramas, frutos y similares son incluidas en la invención, con la condición de que estas partes comprendan células que comprenden el ácido nucleico GAT aislado. La progenie y variantes, y mutantes de las plantas regeneradas también son incluidos dentro del alcance de la invención, con la condición de que estas partes comprendan las secuencias de ácido nucleico introducidas. Las plantas transgénicas que expresan un marcador seleccionado pueden ser clasificadas para la transmisión del ácido nucleico GAT, por ejemplo, mediante técnicas de inmunomanchado estándares y técnicas de detección de DNA. Las lineas transgénicas también son típicamente evaluadas sobre los niveles de expresión del ácido nucleico heterólogo. La expresión en el nivel de RNA puede ser determinada inicialmente para identificar y cuantificar las plantas positivas en expresión. Las técnicas estándares para el análisis de KNA pueden ser empleadas e incluyen los ensayos de amplificación de PCR usando cebadores de oligonucleótido diseñados para amplificar solamente las plantillas de RNA heterologas y ensayos de hibridación en solución usando sondas específicas de ácido nucleico heterologas. Las plantas positivas de RNA luego pueden ser analizadas para la expresión de proteína mediante el análisis de inmunomanchado de Western usando los anticuerpos específicamente reactivos 305 de la presente invención. Además, la hibridación in situ y la inmunocitoquimica de acuerdo con los protocolos estándares se puede hacer usando sondas de polinucleótidos específicos de ácido nucleico heterólogos y anticuerpos, respectivamente, para localizar sitios de expresión dentro del tejido trasngénico. Generalmente, un número de líneas transgénicas son usualmente clasificadas para el ácido nucleico incorporado para identificar y seleccionar plantas con los perfiles de expresión más apropiados. Una modalidad preferida es una planta transgénica que es homocigota para el ácido nucleico heterólogo adicionado; es decir, una planta transgénica que contiene dos secuencias de ácido nucleico adicionadas, un gen en el mismo sitio o sobre cada cromosoma de un par de cromosomas. Una planta transgénica homocigota puede ser obtenida mediante el acoplamiento en forma sexual (autocruzamiento) de una planta transgénica heterocigoto que contiene un solo ácido nucleico heterólogo adicionado, germinando algo de la semilla producida y analizando las plantas resultantes producidas para la división celular alterada con relación a una planta de control (es decir, nativa, no transgénica) . El cruzamiento posterior con una planta de origen y el cruzamiento exterior con una planta no transgénica también son contemplados . Esencialmente cualquier planta puede ser transformada con los polinucleótidos GAT de la invención. Las 306 plantas adecuadas para la transformación y expresión de los polinucleótidos GAT novedosos de esta invención incluyen especies agronómicamente y hortícolamente importantes. Tales especies incluyen pero no están restringidos a miembros de las familias: Graminae (incluyendo maíz, centeno, triticale, cebada, mijo, arroz, avenas, etc.); Leguminosae (incluyendo guisantes, frijoles, lenteja, cacahuate, camote, caupís, alcotanes, soya, trébol, alfalfa, lupino, arveja, loto, trébol cloroso, glicina y arvejilla) ; Compositae (la familia más grande de plantas vasculares, incluyendo por lo menos 1,000 géneros, incluyendo los cultivos comerciales importantes tal como girasol) ; y Rosaciae (incluyendo frambuesa, albaricoque, almendra, durazno, rosa, etc.); asi como plantas de nuez (incluyendo nogal, pacana, avellana, etc.); y árboles forestales (incluyendo, Pinus, Quercus, Pseutotsuga, Sequoia, Populus, etc.). Objetivos adicionales para la modificación mediante los polinucleótidos GAT de la invención, asi como aquellos especificados en lo anterior, incluyen plantas de los géneros: Agrostis, Allium, Antirrhínum, Apium, Arachis, Asparagus, Atropa, Avena (por ejemplo, avenas) , Bambúsa, Brassica, Bromus, Browaalia, Camelliar Cannabisr Capsicum, ¦ Cicer, Chenopodium, Chichorium, Citrus, Coffea, Coix, Cucumis, Curcubita, Cynodon, Dactylis, Datura, Daucus, Digitalis, Dioscorea, Elaeis, Eleusine, Festuca, Fragaria, 307 Geranium, Gossypium, Glycine, Helianthus, Heterocallis, Hevea, Hordeum (por ejemplo, cebada), Hyoscyamus, Ipomoea, Lactuca, Lens, Lilium, Linum, Loliu , Lotus, Lycopersicon Majorana, Malus, Mangifera, Manihot, Medicago, Nemesia, Nicotiana, Onobrychis, Oryza (por ejemplo, arroz), Panicum, Pelargonium, Pennisetum (por ejemplo, mijo), Petunia, Pisum, Phaseolus, Phleum, Poa, Pxunus, Ranunculus, Raphanus, Ribes, Ricinus, Rubus, Saccharum, Salpiglossis, Sécale (por ejemplo, centeno) , Senecio, Setaria, Sinapis, Solanum, Sorghum, Stenotaphzum, Theobroma, Trifolíum, Trigonella, Triticum (por ejemplo, trigo), Vicia, Vigna, Vitis, Zea (por ejemplo, maíz) , y el Olyreae, el Pharoideae y muchas otras. Como es mencionado, las plantas en la familia Gramínea son particularmente plantas objetivo deseables para los métodos de la invención. Las plantas de cultivo comunes que son objetivos de la presente invención incluyen maíz, arroz, triticale, centeno, algodón, soya, sorgo, trigo, avena, cebada, mijo, girasol, cánola, guisantes, frijoles, lentejas, cacahuates, camotes, caupís, alcotanes, trébol, alfalfa, lupino, arveja, loto, trébol cloroso, glicina, arvej illa y plantas de nuez (por ejemplo, nogal, pacana, etc.) . En un aspecto, la proporción proporciona un método para producir un cultivo al cultivar una planta de cultivo que es tolerante a glifosato como resultado de ser 308 transformada con un gen que codifica una glifosato N-acetiltransferasa, bajo condiciones tal que la planta de cultivo produce un cultivo, y la cosecha del cultivo. De preferencia, el glifosato es aplicado a la planta, a la vecindad de la planta, a una concentración efectiva para controlar las malas hiervas sin impedir a la planta de cultivo transgénica del crecimiento y la producción del cultivo. La aplicación del glifosato puede ser antes de la plantación, o en cualquier tiempo después de la plantación hasta e incluyendo el tiempo de la cosecha. El glifosato puede ser aplicado una vez o múltiples veces. La sincronización de la aplicación de glifosato, cantidad aplicada, modo de aplicación y otros parámetros variará basado en la naturaleza especifica de la planta de cultivo y el medio ambiente de crecimiento, y puede ser fácilmente determinado por un experto en la técnica. La invención además proporciona un cultivo producido por este método . La invención proporciona la propagación de una planta que contiene un transgén de polinucleótido GAT. La planta puede ser, por ejemplo, una monocotiledónea o una dicotiledónea. En un aspecto, la propagación comprende cruzar una planta que contiene un transgen de polinucleótido GAT con una segunda planta, tal que por lo menos salga de progenie de la cruza exhibe tolerancia a glifosato. 309 En un aspecto, la invención proporciona un método para controlar selectivamente malas hierbas en un campo donde un cultivo está siendo cultivado. El método implica plantar semillas de cultivo o plantas que son tolerantes a glifosato como un resultado de ser transformadas con un gen que codifica un GAT, por ejemplo, un polinucleótido GAT y aplicar al cultivo y cualquiera de las malas hierbas una cantidad suficiente de glifosato para controlar las malas hierbas sin un impacto adverso significante sobre el cultivo. Es importante observar que no es necesario para el cultivo que sea totalmente insensible al herbicida, mientras que el beneficio derivado de la inhibición de las malas hierbas sobre pase cualquier impacto negativo del glifosato análogo de glifosato sobre el cultivo de planta de cultivo. En otro aspecto, la invención proporciona el uso de un polinucleótido GAT como un gen marcador seleccionable . En esta modalidad de la invención, la presencia del polinucleótido GAT en una célula u organismo confiere a la célula u organismo el atributo fenotipico detectable de resistencia a glifosato, permitiendo de esta manera seleccionar células u organismos que se han transformado con un gen de interés enlazado al polinucleótido GAT. Asi, por ejemplo, el polinucleótido GAT puede ser introducido en una construcción de ácido nucleico, por ejemplo, un vector, permitiendo de esta manera la identificación de un hospedero 310 (por ejemplo, una célula o planta transgénica) que contiene la construcción de ácido nucleico al cultivar el hospedero en la presencia de glifosato y al seleccionar por la habilidad ara sobrevivir y/o crecer a una proporción que es discerniblemente más grande que un hospedero que carece de la construcción de ácido nucleico que sobreviviría o crecería. Un polinucleótido GAT puede ser usado como un marcador seleccionable en una amplia variedad de hospederos que son sensibles al glifosato, incluyendo plantas, la mayoría de bacterias (incluyendo E. coli) , actinomiceto, levaduras, algas y hongos. Un beneficio de usar la resistencia a herbicida como un marcador en plantas, opuesto a la resistencia a antibiótico convencional, es que se evita la preocupación de algunos miembros del público de que la resistencia al antibiótico podría escapar al medio ambiente. Algunos datos experimentales de experimentos que demuestran el uso de un polinucleótido GAT como un marcador seleccionable de diversos sistemas hospederos se describen en la sección de Ejemplos de esta especificación. Selección de polinucleótidos GAT que confieren resistencia a glifosato incrementada en plantas transgénicas . Librerías de ácidos nucleicos que codifican GAT diversificados de acuerdo con los métodos descritos en la presente pueden ser seleccionadas para la habilidad para 311 conferir resistencia a glifosato en plantas transgénicas . Después de uno o más ciclos de diversificación y selección, los genes GAT modificados pueden ser usados como un marcador de selección para facilitar la producción y evaluación de plantas transgénicas y como un medio para conferir resistencia a herbicida en plantas experimentales o de agricultura. Por ejemplo, después de la diversificación de cualquiera de uno o más de, por ejemplo, SEQ ID NO: 1-5 para producir una librería de polinucleótidos GAT diversificados, una evaluación funcional inicial puede ser realizada al expresar la librería de secuencias de codificación GAT en E. coli. Los polipéptidos GAT expresados pueden ser purificados, o parcialmente purificados como es descrito en lo anterior, y, clasificados por cinética mejorada mediante espectrometría de masas. Después de una o más rondas preliminares de diversificación y selección, los polinucleótidos que codifican polipéptidos GAT mejorados son clonados en un vector de expresión de planta, operablemente enlazado a, por ejemplo, un promotor constitutivo fuerte, tal como el promotor CaMV 35S. Los vectores de expresión que comprenden los ácidos nucleicos GAT modificados son transformados, típicamente mediante la transformación mediada por Agrobacterium, en plantas hospederas de Arabidopsis thaliana . Por ejemplo, los hospederos de Arabidopsis son realmente transformados al sumergir inflorescencias en soluciones de 312 Agrobacterium y al permitirlas crecer y dejar semilla. Miles de semillas son recuperadas en aproximadamente 6 semanas. Las semillas luego son recolectadas a granel a partir de las plantas sumergidas y germinadas en el suelo. De esta manera, es posible generar varios miles de plantas independientemente transformadas para la evaluación, constituyendo un formato de transformación de plantas de alto rendimiento (HTP) . Las plántulas cultivadas en volumen son rociadas con glifosato y las plántulas sobrevivientes que exhiben resistencia a glifosato sobreviven al proceso de selección, mientras que las plantas no transgénicas y plantas que incorporan ácidos nucleicos GAT menos favorablemente modificados son dañadas o exterminadas por el tratamiento con herbicida. Opcionalmente, los ácidos nucleicos que codifican GAT que confieren resistencia mejorada al glifosato son recuperados, por ejemplo, mediante amplificación por PCR usando cebadores de T-DNA que flanquean los insertos de la librería, y usado en procedimientos de diversificación adicional o para producir plantas transgénicas adicionales de la misma o diferente especie. Si es deseado, rondas adicionales de diversificación y selección pueden ser realizadas usando concentraciones incrementadas de glifosato en cada selección subsecuente. De esta manera, los polinucleótidos y polipéptidos GAT que confieren resistencia a concentraciones de glifosato útiles en condiciones de campo pueden ser obtenidos. 313 Resistencia a Herbicida La presente invención proporciona una composición que comprende dos o más polinucleótidos de la invención. De preferencia, los polinucleótidos GAT codifican polipéptidos GAT que tienen diferentes parámetros cinéticos, es decir, una variante GAT que tiene una menor Km puede ser combinada con una que contiene casi Kcat más alta. En una modalidad adicional los diferentes polinucleótidos GAT pueden ser acoplados a una secuencia de tránsito de clcroplasto u otra secuencia de señal para de esta manera proporcionar expresión de polipéptido GAT en diferentes compartimientos celulares, organelos o secreción de uno o más de los polipéptidos GAT. El mecanismo de resistencia a glifosato de la presente invención puede ser combinado con otros modos de resistencia a glifosato conocidos en la técnica para producir plantas y explantas de plantas con resistencia a glifosato superior. Por ejemplo, las plantas tolerantes a glifosato pueden ser producidas al insertar en el genoma de la planta la capacidad para producir un nivel más alto de 5-enolpiruvilshiquimato-3-fosfato sintasa (EPSPS) como es descrito más completamente en las patente norteamericanas Nos. 6,248,876 Bl; 5,627,061/ 5,804,425; 5, 633,435; 5,145,783; 4,971,908; 5,312,910; 5,188,642; 4,940,835; 5, 866, 775; 6,225,114 Bl; 6,130,366; 5, 310, 667; 4, 535, 060; 4, 769, 061; 5, 633,448; 5,510,471; Re. 36, 449; RE 37,287 E; y 314 ,491,288; y en las publicaciones internacionales WO 97/04103; WO 00/66746; WO 01/66704; y WO 00/66747, que son incorporadas en la presente por referencia en sus totalidades para todos los propósitos. La resistencia a glifosato también es impartida a plantas que expresan un gen que codifica una enzima de glifosato óxido-reductasa como es descrito más completamente en las patentes norteamericanas Nos. 5,776,760 y 5,463,175, que son incorporadas en la presente por referencia en sus totalidades para todos los propósitos. Además, el mecanismo de resistencia a glifosato de la presente invención puede ser combinado con otros modos de resistencia a herbicida para proporcionar plantas y explantas de plantas que son resistentes a glifosato y uno o más de otros herbicidas. Por ejemplo, las hidroxifenilpiruvato-dioxigenasas son enzimas que catalizan la reacción en la cual el para-hidroxifenilpiruvato (HPP) es transformado en homogenizato . Las moléculas que inhiben esta enzima, y que enlazan a la enzima con el fin de inhibir la transformación del HPP en homogenizado son útiles como herbicidas. Plantas más resistentes a ciertos herbicidas se describen en las patentes norteamericanas Nos. 6,245,968 Bl; 6,268,549; y 6,069,115; y en la publicación internacional WO 99/23886, que son incorporadas en la presente por referencia en sus totalidades para todos los propósitos. 315 Los herbicidas sulfonilurea e imidazolinona también inhiben el crecimiento de plantas superiores al bloquear la acetolactato sintasa (ALS) o acetohidroxi ácido sintasa (AHAS) . La producción de plantas tolerantes a sulfonilurea e imidazolinona es descrito más completamente en las patentes norteamericanas Nos. 5,605,011; 5,013,659; 5,141,870; 5,767,361; 5,731,180; 5,304,732; 4,761,373; 5,331,107; 5,928,937; y 5,378,824; y la publicación internacional WO 96/33270, que son incorporadas en la presente por referencia en sus totalidades para todos los propósitos. La glutamina sintetasa (GS) se presenta que es una enzima esencial necesaria para el desarrollo y vida de la mayoría de células de planta. Los inhibidores de GS son tóxicos a las células de plantas. Los herbicidas de glufosinato se han desarrollado en base al efecto tóxico debido a la inhibición de GS en plantas. Estos herbicidas no son selectivos. Ellos inhiben el crecimiento en todas las diferentes especies de plantas presentes, causando su destrucción total. El desarrollo de plantas que contienen una fosfinotricina acetiltransferasa exógena es descrito en las patente norteamericanas Nos. 5,969,213; 5,489,520; 5,550,318; 5, 874,265; 5, 919, 675; 5,561,236; 5,648,477; 5, 646,024; 6,177,616 Bl; y 5,879,903, las cuales son incorporadas en la presente por referencia en sus totalidades para todos los propósitos . 316 La protoporfirinogen oxidasa (protox) es necesaria para la producción de clorofila, que es necesaria para toda la supervivencia de la planta. La enzima protox sirve como el objetivo para una variedad de compuestos herbicidas. Estos herbicidas también inhiben el crecimiento de todas las diferentes especies de plantas presentes, causando su destrucción total. El desarrollo de plantas que contienen actividad protox alterada que son resistentes a estos herbicidas se describen en las patentes norteamericanas Nos. 6,288, 306 Bl; 6, 282, 837 Bl; y 5,767, 373; y la publicación internacional O 01/12825, las cuales son incorporadas en la presente por referencia en sus totalidades para todos los propósitos . Por consiguiente, la invención proporciona métodos para controlar selectivamente malas hierbas en un campo que contiene un cultivo que implica plantar el campo con semillas de cultivo o plantas que son tolerantes a glifosato como un resultado de ser transformadas con un gen que codifica una glifosato N-acetiltransferasa, y al aplicar al cultivo y las malas hierbas en el campo una cantidad suficiente de glifosato para controlar las malas hierbas sin afectar significativamente el cultivo. La invención además proporciona métodos para controlar malas hierbas en un campo y prevenir la emergencia de malas hierbas resistentes a glifosato en un campo que 317 contiene un cultivo, que implica plantar el campo con semillas de cultivo o plantas que son tolerantes a glifosato como un resultado de ser transformadas con un gen que codifica un glifosato N-acetiltransrerasa y un gen que codifica un polipéptido que imparte tolerancia a glifosato por otro mecanismo, tal como 5-enolpiruvilshiquimate-3-fosfato sintasa- tolerante a glifosato y/o una glifosato óxido-reductasa tolerante a glifosato y al aplicar al cultivo y a las malas hierbas en el campo, una cantidad suficiente de glifosato para controlar las malas hierbas sin afectar significativamente el cultivo . En una modalidad adicional, la invención proporciona métodos para controlar malas hierbas en un campo y prevenir la emergencia de lamas hierbas resistentes a herbicidas en un campo que contiene un cultivo que implicar plantar el campo con semillas de cultivo o plantas que son tolerantes a glifosato como resultado de ser transformadas con un gen que codifica una glifos to-N-acetil transíerasa, un gen que codifica un polipéptido que imparte tolerancia a glifosato por otro mecanismo, tal como 5-enolpiruvilshiquimato-3-fosfato sintasa tolerante a glifosato y/o una glifosato óxido-reductasa y un gen que codifica un polipéptido que comparte tolerancia a un herbicida adicional, tal como una hidroxifenilpiruvatodioxigenasa mutada, una acetolactato sintasa tolerante a sulfonamida, un acetohidroxi 318 ácido sintasa, tolerante a sulfonamida, un acetolactato sintasa tolerante a imidazolinona, un acetohidroxi ácido sintasa tolerante a imidazolinona, una fosfinotricin acetiltransferasa y una protoporfirinogen oxidasa mutada y al aplicar al cultivo y a las malas hierbas en el campo una cantidad suficiente de glifosato y un herbicida adicional, tal como un inhibidor de hidroxifenilpiruvatodioxigenase, sulfonamida, imidazolinona, bialafos, fosfinotricina, azafenidin, butafenacil, sulfosato, glufosinato, y un inhibidor protox para controlar las malas hierbas sin afectar significativamente el cultivo. La invención además proporciona métodos para controlar malas hierbas en un campo y prevenir la emergencia de malas hierbas resistentes a herbicida en un campo que contiene un cultivo que implica plantar el campo con semillas de cultivo o plantas que son tolerantes a glifosato, como un resultado de ser transformadas con un gen que codifica una glifosato-N-acetiltransferasa y un que codifica un polipéptido que imparte tolerancia a un herbicida adicional, tal como una hidroxifenilpiruvatodioxigenasa mutada, una acetolactato sintasa tolerante a sulfonamida; un acetohidroxi ácido sintasa tolerante a sulfonamida, una acetolactato sintasa tolerante a imidazolinona, una acetohidroxi ácido sintasa tolerante a imidazolinona, una fosfinotricin acetiltransferasa y una protoporfirinogen oxidasa mutada y 319 aplicar al cultivo y a las malas hierbas en el campo una cantidad suficiente de glifosato y un herbicida adicional, tal como un inhibidor de hidroxifenilpiruvatodioxigenasa, sulfonamida, imidazolinona, bialafos, fosfinotricina, azafenidin, butafenacil, sulfosato, glufosinato, a un inhibidor protox para controlar las malas hierbas sin afectar significativamente el cultivo . EJEMPLOS Los siguientes ejemplos son ilustrativos y no limitativos . Un experto reconocerá una variedad de parámetros no críticos que pueden ser alterados para lograr resultados esencialmente similares. EJEMPLO 1: AISLAMIENTO DE POLINUCLEOTIDQS GAT NATIVOS NOVEDOSOS Cinco polinucleótidos GAT nativos (es decir, polinucleótidos GAT que ocurren naturalmente en un organismo no genéticamente modificado) se descubrieron al clonar la expresión de secuencias de cepas de Bac.il1 us que exhiben actividad GAT. Sus secuencias de nucleótidos se determinaron y se proporcionan en la presente como SEQ ID NO: 1-5. Brevemente, una colección de aproximadamente 500 cepas de Bacillus y Pseudomonas se clasificaron para la habilidad nativa al N-acetilato glifosato. Las cepas se cultivaron en LB durante la noche, se cosecharon por centrifugación, se 320 permeabilizaron en tolueno diluido, y luego se lavaron y se resuspendieron en una mezcla de reacción que contiene solución reguladora, glifosato 5 mM, y acetil-CoA 200 uM. Las células se incubaron en la mezcla de reacción durante entre 1 y 48 horas, tiempo en el cual se adicionó un volumen igual de metanol a la reacción. Las células luego se formaron en pelotillas mediante centrifugación y el sobrenadante se filtró antes del análisis mediante la espectrometría de masas de modo iónico de origen. El producto de la reacción fue positivamente identificado como N-acetilglifosato al comparar el perfil de espectrometría de masas de la mezcla de reacción a un estándar de N-acetilglifosato como es mostrado en la Figure 2. La detección del producto fue dependiente sobre la inclusión de ambos sustratos (acetil CoA y glifosato) y se anuló mediante la desnaturalización con calor de las células bacterianas . Los polinucleótídos GAT individuales luego se clonaron de las cepas identificadas mediante clasificación funcional. El DNA genómico se preparó y parcialmente se digirió con la enzima SauSAl . Los fragmentos de aproximadamente 4 Kb se clonaron en un vector de expresión de E. coli y se transformaron en E. coli electrocompetente . Los clones individuales que exhiben actividad GAT se identificaron mediante la espectrometría de masas después de una reacción como es descrito previamente excepto que el 321 lavado de tolueno se reemplazó mediante la permeabilización con PMBS . Los fragmentos genómicos se secuenciaron y se identificó la estructura de lectura abierta de codificación del polipéptido GAT putativo. La identidad del gen GAT se confirmó mediante la expresión de la estructura de lectura abierta en E. coli y la detección de altos niveles de N-aceti1glifosato producidos a partir de las mezclas de reacción . EJEMPLO 2: CARACTERIZACION DE UN POLIPEPTIDO GAT AISLADO DE LA CEPA B6 DE B. ICHENIFORMIS. El DNA genómico de la cepa B6 de B. licheniformis se purificó, se digirió parcialmente con Sau3Al y los fragmentos de 1-10 Kb se clonaron en un vector de expresión de E. coli. Un clon con un inserto de 2.5 kb confirió la actividad de glifosato-N-acetiltransferasa (GAT) sobre el hospedero de E. coli como es determinado con el análisis de espectrometría de masas. La secuenciación del inserto niveló una estructura de lectura abierta completa individual de 441 pares de bases. La clonación subsecuente de esta estructura de lectura abierta confirmó que esta codificó la enzima GAT. Un pl smico, pMAXY2120 se muestra en la Figura 4. El gen que codifica la enzima GAT de B6 se transformó en la cepa XL1 Blue de E. coli. Un inóculum al 10% de un cultivo saturado se adicionó al caldo Luria, y el cultivo se incubó a 37 °C durante 1 hr. La expresión de GAT se indujo mediante la 322 adición de IPTG en una concentración de 1 mM. El cultivo se incubó 4 hrs . adicionales, después de lo cual, las células se recolectaron por centrifugación y la pelotilla de células se almacenó a -80 °C. La lisis de las células fue efectuada por la adición de 1 mi de la siguiente solución reguladora a 0.2 g de células: HEPEs 25 mM, pH 7.3, KC1 100 mM y metano1 al 10% (HKM) más EDTA 0.1 mM, DTT 1 mM, lisozima de huevo de pollo 1 mg/ml y un cóctel inhibidor de proteasa obtenido de sigma y se usó de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. Después de 20 minutos de incubación a temperatura ambiente (por ejemplo, 22-25°C) , la lisis se completó con sonificación breve. El lisado se centrifugó y el sobrenadante se desalificó mediante el pasaje a través de Sephadex G25 equilibrado con HKM. La purificación parcial se obtuvo mediante la cromatografía de afinidad sobre CoA agarosa (Sigma) . La columna se equilibró con HKM y el extracto clarificado se dejó pasar a través bajo presión hidrostática . Las proteínas no de enlace se removieron mediante el lavado de la columna con HKM y el GAT se eluyó con HKM que contiene Coenzima A 1 mM. Este procedimiento proporcionó la purificación de 4 veces. En esta etapa, aproximadamente 65% del manchado de proteína observado sobre un gel de poliacrilamida SDS cargado con lisado crudo fue debido al GAT, con otro 20% debido a la cloranfenicol acetiltransferasa 323 codificada por el vector. La purificación a la homogeneidad se obtuvo mediante la filtración en gel de la proteina parcialmente purificada a través de Superdex 75 (Pharmacia) . La fase móvil fue HKM, en la cual la actividad de GAT eluyó a un volumen correspondiente a un radio molecular de 17 kD. Este material fue homogéneo como se estimó mediante el manchado de Coomassie de una muestra de 3 ig de GAT sometida a la electroforesis en gel de pol iacrilamida SDS sobre un gel de acrilamida al 12%, 1 mm de espesor. La purificación se logró con un incremento de 6 veces en la actividad especifica. La KM aparente para el glifosato se determinó en mezclas de reacción que contienen Acetil CoA en saturación (200 uM) , concentraciones variables de glifosato, y 1 uM de GAT purificado en solución reguladora que contiene morfolina 5 mM ajustado a pH 7.7 con ácido acético y etilenglicol al 20%. Las proporciones de reacción inicial se determinaron mediante la inspección continua de la hidrólisis del enlace de tioéster del acetil CoA a 235 nm (E 0 3.4 OD/mM/cm) . Las cinéticas de saturación hiperbólicas se observaron (Figura 5), a partir de las cuales se obtuvo una KM aparente de 2.9 + 0.2 (SD) mM. La KM aparente para Acetil CoA se determinó en mezclas de reacción que contienen glifosato 5 mM, concentraciones variables de Acetil CoA, y GAT 0.19 µ? en 324 solución reguladora que contiene morfolina en 5 mM ajustada a pH 7.7 con ácido acético y metanol al 50%. Las proporciones de reacción inicial se determinaron usando la detección espectrométrica de masas del N-acetil glifosato. Cinco µ? se inyectaron repetidamente en el instrumento y las proporciones de reacción se obtuvieron al graficar el tiempo de reacción contra el área del máximo ingrado (Figura 6) . Las cinéticas de saturación hiperbólicas se observaron (Figura 7) a partir de lo cual se derivó una KM aparente de 2 uM. Los valores para Vmax obtenidos a una concentración conocida de enzima, se calculó una kcat de 6/min. EJEMPLO 3: PROCESO DE CLASIFICACION POR ESPECTROMETRIA DE MASAS (MS) La muestra (5 µ?) se retiró de una placa microtitulo de 96 cavidades a una velocidad de una muestra cada 26 segundos y se inyectó en el espectrómetro de masas (Micromass Ouattro LC, espectrómetro de masas de cuadrupolo triple) sin ninguna separación. La muestra se llevó en el espectrómetro de masas mediante una fase móvil de agua/metanol (50:50) a una proporción de flujo de 500 Ul/min. Cada muestra inyectada se ionizó mediante un proceso de ionización por electrorocio negativo (voltaje de la aguja, -3.5 KV; voltaje del cono, 20 V; temperatura de la fuente, 120°C temperatura de desolvación, 250°C; flujo de gas del cono, 90 L/Hr; y flujo de gas de desolvación, 600 L/Hr) . Los 325 iones moleculares (m/z 210) formados durante este proceso se seleccionaron por el primer cuadrupolo para realizar la disociación inducida por colisión (CID) en el segundo cuadrupolo donde la presión se ajustó a 5 x 1CT4 mBar y la energía de colisión se ajustó a 20 Ev. El tercer cuadrupolo se ajustó para solamente permitir uno de los iones descendientes (m/z 124) producido de los iones de origen (m/z 210) para obtener en el vector el registro de la señal. El primero y el tercero cuadrupolos se ajustaron a resolución unitaria, mientras que el fotomultiplicador se operó a 650 V. Los estándares de N-acetilglifosato puro se usaron para comparación y la integración del máximo se usó para estimar las concentraciones. Fue posible detectar menos de 200 Nm de N-acetilglifosato mediante este método. EJEMPLO 4: DETECCION DE LAS ENZIMAS GAT NATIVAS O DE BAJA ACTIVIDAD Las enzimas GAT nativas o de baja actividad típicamente tienen una kcat de aproximadamente 1 min-1 y una ¾ para glifosato de 1.5-10 mM. La M para acetil CoA fue típicamente menor que 25 uM. Los cultivos bacterianos se cultivaron en medio rico en placas de 96 cavidades profundas y 0.5 mi de células en fases estacionarias se recolectaron por centrifugación, se lavaron con acetato de morfolina 5 mM, pH 8, y se resuspendieron en 0.1 mi de la mezcla de reacción que contiene amonio acetil CoA amonio 200 uM, glifosato de amonio 5 mM y 5 pg/ml de PMBS (Sigma) en acetato de morfolina 5 mM pH 8. El PMBS permeabiliza la membrana celular permitiendo a los sustratos y productos moverse de las células a la solución reguladora sin liberar los contenidos celulares completos. Las reacciones se llevaron a cabo a 25-37 °C durante 1-48 horas. Las reacciones se detuvieron con un volumen igual de etanol al 100% y la mezcla completa se filtró en una placa de filtro MAHV Multiscren 0.45 uM (Millipore) . Las muestras se analizaron usando un espectrómetro de masa, como es descrito en lo anterior y se compararon con los estándares de N-acetilglifosato sintéticos . EJEMPLO 5: DETECCION DE ENZIMAS GAT DE ALTA ACTIVIDAD Las enzimas GAT de alta actividad típicamente tienen una kcat de hasta 400 min-1 y una KM por debajo de 0.01 mM de glifosato. Los genes que codifican para las enzimas GAT se clonaron en el vector de expresión de E. coli pQE80 (Qiagen) y se introdujeron en la cepa XL1 Blue de E. coli (Stratagene) . Los cultivos se cultivaron en 150 µ? de medio rico (LB con 50 g/ml de carbenicilina) en placas de poliestireno de 96 cavidades de fondo en forma de U poco profundas para la fase tardía-log y se diluyeron 1:9 con el medio fresco que contiene IPTG 1 mM (USB) . Después de 4.8 horas de inducción, las células se recolectaron, se lavaron con acetato de morfolina 5 mM, pH 6.8 y se resuspendieron en un volumen igual de la misma solución reguladora de morfolina. Las reacciones se llevaron a cabo con hasta 10 µ? de células lavadas. A niveles de actividad más altos, las células primero se diluyeron hasta 1:200 y 5 µ? se adicionó a 100 µ? de la mezcla de reacción. Para medir la actividad de GAT, la misma mezcla de reacción como es descrito para baja actividad fue utilizada. Sin embargo, para detectar enzimas GAT altamente activas la concentración de glxfosato se redujo a 0.15-0.5 mM, el pH se redujo a 6.8 y las reacciones se llevaron a cabo durante 1 hora a 37 °C. La elaboración de la reacción y la detección con MS fueron como es descrito en la presente . EJEMPLO 6: PURIFICACION DE ENZIMAS GAT La purificación de la enzima se logró mediante la cromatografía de afinidad de lisados de células en CoA-agarosa y la filtración en gel sobre Superdex-75. Cantidades de enzima GAT purificada de hasta 10 mg se obtuvieron como sigue: Un cultivo de 100 ral de E. col! que lleva un polinucleótido GAT sobre un vector pQE80 y cultivado durante la noche en LB que contiene 50 µg/ml de carbenicilina se usó para inocular 1L de LB más 50 µg/ de carbenicilina. Después de 1 hr, IPTG - se adicionó a 1 mM, y el cultivo se cultivó 6 hr adicionales. Las células se recolectaron por 328 centrifugación. Las lisis se efectuaron al suspender las células en HEPES 25 mM (ph 7.2), kCl 100 mM, metanol al 10% (HKM) , EDTA 0.1 mM, DTT 1 mM, un cóctel inhibidor de proteasa suministrado por Sigma-Aldrich y 1 mg/ml de lisosima de huevo de pollo. Después de 30 minutos a temperatura ambiente, las células de sonificaron brevemente. El material particulado se removió por centrifugación y el lisado se pasó a través de un lecho de coenzima A. Agarosa. La columna se lavó con varios volúmenes de HKM y GAT se eluyó en 1.5 volúmenes de lecho de HKM que contiene acetil CoA 1 mM. El GAT en el producto eluído se concentró mediante su retención arriba de una membrana de ultrafiltración Centricon YM 50. La purificación adicional se obtuvo al pasar la proteina a través de una columna Superdex 75 a través de una serie de inyecciones de 0.6 mi . El máximo de la actividad GAT eluyó un volumen correspondiente a un peso molecular de 17 kD. Este método dio por resultado la purificación de la enzima GAT a homogeneidad >85% de recuperación. Un procedimiento similar se usó para obtener cantidades de 0.4 mg de hasta 96 variantes entremezcladas a la vez. El volumen de cultivo inducido se redujo de 1 a 10 mi, la cromatografía de afinidad de coenzima A-Agarosa se realizó en columnas de 0.15 mi empacadas en una placa de filtro MAHV (Millipore) y se omitió la cromatografía Superdex 75. EJEMPLO 7: PROTOCOLO ESTANDAR PARA LA DETERMINACION DE kCAT Y 329 ¾ kcat Y M para glifosato de proteina purificada se determinaron usando un ensayo espectrofotométrico continuo, en el cual la hidrólisis del enlace de sulfoéster de Acetil CoA se inspeccionó a 235 nm. Las reacciones se realizaron a temperatura ambiente (aproximadamente 23 °c) en las cavidades de una placa de ensayo de 96 cavidades, con los siguientes componentes presentes en un volumen final de 0.3 mi: HEPES 20 mM, pH 6.8, etilenglicol al 10%, Acetil CoA 0.2 mM y varias concentraciones de glifosato de amonio. En la comparación de la cinética de dos enzimas GAT, ambas enzimas se analizaron bajo las mismas condiciones, por ejemplo, ambas a 23°C. k,?:iC se calculó a partir de Vmax y la concentración de enzima, determinado por en ensayo Bradford. KM se calculó a partir de las propiedades de reacción iniciales obtenidas de concentraciones de glifosato que varían de 0.125 a 10 mM, usando la transformación de Lineweaver-Burke de la ecuación de Michaeiis-Menten. kcat/KM se determinó al dividir el valor determinado por kcat entre el valor determinado por ¾. Usando esta metodología, los parámetros cinéticos para un número de polipéptidos GAT ejemplificados en la presente fueron determinados. Por ejemplo, la ~kCatr KM y kcat/K;,, para el polipéptido GAT correspondiente a la SEQ ID NO: 445 se ha determinado que es 322 min"1, 0.5 mM y 660 mM-1 min-1, respectivamente, usando las condiciones de ensayo descritas 330 en lo anterior. La kcat/ KM y kcat/KM para el polipéptido GAT correspondiente a la SEQ ID NO: 457 se ha determinado que es de 118 rain-1, 0.1 mM y 1184 mM^min-1, respectivamente, usando las condiciones de ensayo descritas anteriormente. La k,-at, :¡ y kcat/KM para el polipéptido GAT correspondiente a la SEQ ID NO: 300 se ha determinado que es 296 min"1, 0.65 mM y 456 mM" ¦"¦min-1, 0.1 mM y 1184 mM-1 min-1, respectivamente, usando las condiciones de ensayo descritas anteriormente. Un experto en la técnica puede usar estos números para confirmar que un ensayo de actividad GAT está generando parámetros cinéticos para un GAT adecuado para la comparación con los valores dados en la presente. Por ejemplo, las condiciones usadas para comparar la actividad de GATs puede producir las mismas constantes cinéticas para la SEQ ID NO: 300, 445 y 457 (dentro de la variación experimental normal) a aquellos reportados en la presente, cuando las condiciones se usan para comparar un GAT de prueba con los pclipéptidos GAT ejemplificados en la presente . KM para acetil CoA se midió usando el método de espectrometría de masas con el muestreo repetido durante la reacción. Acetil CoA y glifosato (sales de amonio) se colocaron en soluciones de extracto concentradas 50 veces en una cavidad de una placa de muestra de espectrometría de masas. Las reacciones se iniciaron con la adición de la enzima apropiadamente diluida en una solución reguladora volátil tal como acetato de morfolina o carbonato de amonio, pH 6.8 o 7.7. La muestra se inyectó repetidamente en el instrumento y las proporciones iniciales se calcularon a partir de gráficas de tiempo de retención y área máxima. ¾ se calculó para el glifosato. EJEMPLO 8: SELECCION DE E. COLI TRANSFOKM7ADO Un gen GAT evolucionado (una quimera con un sitio de enlace de ribosoma de B. licheniformls nativo (7AACTGAAGGAGGAATCTC; SEQ ID NO: 515) unido directamente al extremo 5' de la secuencia de codificación GAT) se clonó en el vector de expresión pQE80 (Qiagen) entre los sitios EcoRI y Hindi, dando por resultado el plásmido pMAXY2190 (Figura 11) . Esto eliminó el dominio de la marca His a partir del plásmido y retuvo el gen B-lactamasa que confiere resistencia a los antibióticos ampicilina y carbenicilina . pMAXY2190 se electroporo (BioRad Gene Pulser) en células de E. coli XL1 Blue (Stratagene) . Las células se suspendieron en el medio rico SOC y se dejaron recuperar durante una hora. Las células luego se formaron en pelotillas suavemente, se lavaron una vez con el medio mínimo M9 que carece de los aminoácidos aromáticos (12.8 g/L Na2HP04.7 H20, 3.0 g/L KH2P04, NaCl 0.5 g/1, 1.0 g/L NH4C1, glucosa al 0.4%, MgS04 2 mM, CaCll2 0.1 mM, 10 mg/L de tiamina, 10 mg/L de prolina, 30 mg/L de carbenicilina) y se resuspendió en 20 mL del mismo medio M9. Después del crecimiento durante la noche a 37 °C a 250 rpm, volúmenes iguales de células se colocaron sobre ya sea el medio 9 o el M9 más el medio de glifosato 1 mM. El vector pOE80 sin el gen GAT se introdujo de manera similar en las células E. coli y se colocaron para las colonias individuales por comparación. La Tabla 3 presenta un resumen de los resultados, demostrando que la actividad GAT permite la selección y crecimiento de células E. coli transformadas con menos de 1% de antecedente. Observar que nada de inducción IPTG fue necesaria para suficiente actividad GAT para permitir el crecimiento de células transformadas . La transformación se verificó mediante el reaislamiento de pMAXY2190 de las células E. coli cultivadas en la presencia de glifosato. Tabla 3. Selección de Glifosato del pMAXY2190 en E. coli EJEMPLO 9: SELECCION DE CELULAS DE PLANTAS TRANSFORMADAS La transformación mediada por Agrobacteri um de células de plantas ocurre en bajas eficiencias. Para permitir la propagación de células transformadas mientras que se inhibe la proliferación de células no transformadas, se necesita un marcador seleccionable . Los marcadores antibióticos para canamicina e higromicina y el gen de 333 modificación de herbicida bar, que desintoxica el compuesto herbicida fos inotricina, son ejemplos de marcadores seleccionables usados en plantas (Methods in Molecular Biology, 1995, 49:9-18). Aquí los inventores demuestran que la actividad GAT sirve como un marcador seleccionable eficiente para la transformación de plantas. Un gen GAT evolucionado (0_5B8) SEQ ID NO: 190, se clonó entre un promotor de planta (virus en banda de vena de fresa incrementado) y un terminador de ubiquinona y se introdujo en la región T-DNA del vector binario pMAXY3793 adecuado para la transformación de células de plantas por la vía de EHA 105 de Agrobacterium tumefaciens como es mostrado en la Figura 12. Un marcador GUS clasificable estuvo presente en el T-DNA para permitir la confirmación de la transformación. Retoños de tabaco transgénico se generaron usando glifosato como el único agente de selección. Brotes axilares de L. Xanthi de Nicotiana tabacum se subculti arón en el medio MS de mediana resistencia con sacarosa (1.5%) y Gelrite (0.3%) bajo 16 h de luz (35-42 µ???=????3 mT's-1, lámparas fluorescentes blancas frías) a 24 °C cada 2-3 semanas. Las hojas jóvenes se extirparon de plantas después de 2-3 semanas de subcultivo y se cortaron en segmentos de 3x3 mm. EHA105 de A. tumefaciens se inoculó en el medio LB y se cultivaron durante la noche a una densidad de A600=1.0. Las células se formaron en pelotillas a 4,000 rpiri durante 5 minutos y se resuspendieron en 3 volúmenes de medio de co-cultivo liquido compuesto del medio Murashige y Skoog (MS) (pH 5.2) con 2 mg/L de ?ß-benciladenina (BA) , glucosa al 1% y acetisiringona 400 uM. Las piezas de hoja luego se sumergieron completamente en 20 mi de A. tumefaciens en las cajas Petri de 100 x 25 mm durante 30 min, se secaron con papel filtro de autoclave, luego se colocaron en el medio de co-cultivo sólido (Gertite 0.3%) y se incubaron como es descrito en lo anterior. Después de 3 días de co-cultivo, 20-30 segmentos se transfirieron al medio de inducción de retoño basado (BSI) compuesto del medio sólido MS (pH 5.7) con 2 mg/L de BA, sacarosa al 3%, Gelrite 0.3%, glifosato 0-200 uM y 400 µg ml de Timentin. Después de 3 semanas, los retoños fueron claramente evidentes sobre las explantas colocadas sobre el medio sin glifosato sin considerar la presencia o ausencia del gen GAT . La transferencia de T-DNA de ambas construcciones se confirmó mediante el manchado histoquimico GUS de las hojas a partir de los retoños regenerados. Las concentraciones de glifosato mayores que 20 uM completamente inhibieron cualquier formación de retoño de las explantas que carecen de un gen GAT. Las explantas se infectaron con A. tumefaciens con los retoños regenerados de construcción GAT a concentraciones de glifosato de hasta 200 uM (el nivel más alto probado) . La transformación se confirmó mediante el manchado histoquimico 335 GUS y mediante la amplificación de fragmento por PCR del gen GAT usando cebadores que templan a las regiones de promotor y 3'. Los resultados se resumen en la Tabla 4. Tabla 4. Regeneración de retoño de tabaco con selección de glifosato EJEMPLO 10: SELECCION DE GLIFOSATO DE LAS CELULAS DE LEVADURA TRANSFORMADAS Marcadores de selección para transformación de levadura son usualmente genes auxotróficos que permiten el crecimiento de células transformadas sobre un medio que carece del aminoácido o nucleótido especifico. Debido a que el Saccharomyces cerevisiae es sensible al glifosato, GAT también se puede utilizar como un marcador seleccionable . Para demostrar es~o, un gen GAT evolucionado (0_6D10), SEQ ID NO: 196, se clona del vector pMAXY3793 de T-DNA (como se muestra en el Ejemplo 9) como un fragmento PstI-Clal que contiene la región de codificación completa y se liga en el p424TEF digerido PstI-Clal (Gene, 1995, 156:119-122) como se muestra en la Figura 13. Este plásmido contiene un origen de 336 replicación de E. coli y un gen que confiere resistencia a carbenicilina así como un TRP1, marcador seleccionable de auxótrofo de triptofano para la transformación de levadura. La construcción que contiene GAR se transforma en XL1 Blue de E. coli (Stratagene) y se coloca en el medio de agar de carbenicilina LB (50 pg/mL) . El DNA del plásmido se prepara y se utiliza para transformar la cepa de levadura ???499 (Stratagene) usando un kit de transformación (BiolOl) . Cantidades iguales de células transformadas se colocan sobre el medio del CSM-YNB-glucosa (BiolOl) que carece de todos los aminoácidos aromáticos (triptofano, tirosina y fenilalanina) con glifosato agregado. Por comparación, p424TEF que carece del gen GAT también se introduce en YPH499 y se coloca como es descrito. Los resultados demuestran que la actividad de GAT funcionará como un marcador seleccionable. La presencia del vector que contiene GAT en colonias seleccionadas de glifosato puede ser confirmada mediante el reaislamiento del plásmido y el análisis de digestión de restricción. EJEMPLO 11. PRUEBAS DE ROCIO DE HERBICIDA DE PLANTAS DE TABACO QUE EXPRESAN GAT Retoños de tabaco generados como es descrito en el EJEMPLO 9 se extirparon de las explantas y se transfirieron al medio de inducción de raíz basal (BRI) compuesto del medio de Murashige y Skoog (MS) de mediana resistencia, pH 5.7, con sacarosa al 1.5%, Gelrite al 0.3%, glifosato 0.200 uM y 400 337 pg/ml de Timentin. Las plantas con raíz y retoños axilares se propagaron clonalmente al cortar de tallo y al transferirlo al medio BRI fresco hasta que se obtuvo el número deseado de clones. Las plantas con raíz se removieron cuidadosamente al medio sólido. Antes de la colocación de las plantas en macetas pequeñas de tierra, las raíces se lavaron para remover cualquier Gelrite restante. Una cubierta de plástico protectora se conservó sobre las plantas por al menos una semana hasta que las plantas estuvieron bien establecidas. Para determinar si las plantas de tabaco que expresan GAT podrían tolerar los rocíos de proporción de campo simulados de glifosato, líneas penales de varios casos por variante de GAT se probaron. Una prueba típica se ajustó como sigue: Un clon de cada caso se rocío con 1 mi de solución que contiene la sal de isopropilamina de glifosato (Sigma P5671) y Tritón x-100 0.125%, pH 6.8, tal que la cantidad de ingrediente activo rociada fue equivalente a aquella presente en los productos de glifosato comerciales. Por ejemplo, para lograr 32 oz/acre (IX) de herbicida que contiene 40% de ingrediente activo ("ai"), 2.4 ul de formulación al 40% se diluyó en 1 mi de agua y se roció sobre una planta en una planta cuadrada de 4' (16 pulgadas") . Una aplicación simulada (0X) con surfactante solamente también se incluyó. También en los casos se aplicó un segundo rocío 1-4 semanas después. Las plantas se conservaron en cuartos de crecimiento controlado a 25°C y 70% de humedad con 16 hr de luz . En este ejemplo, 10 casos se confirmaron positivos para GAT0_6D10 (SEQ ID NO: 196), diez para GAT0_5D3 (SEQ ID NO: 193), 8 casos para GAT0_5B8 (SEQ ID NO: 190) y las plantas transformadas con el vector solamente (sin GAT) se propagaron clonalmente, se transfirieron al suelo y se rociaron cuando las plantas tuvieron un promedio de 5 hojas. Las plantas de tipo silvestre cultivadas de semilla también se rociaron. Después de dos semanas, las plantas con vector solamente y cultivadas de semillas se rociaron con 0.5, 2 o 4X de glifosato, se detuvo el crecimiento, se marchitaron y se volvieron cafés. Cada una de las plantas GAT transgénicas sobrevivieron al procedimiento rociado sin signos de daño por glifosato tal como clorosis, alargamiento de la hoja, marchitamiento o coloración café. Todas las plantas OX estuvieron sanas, incluyendo las plantas de control sin GAT. Tres semanas después todas las plantas sobrevivientes se rociaron con una dosis 8X. Las plantas de control OX murieron dentro de dos semanas. Nuevamente, todas las plantas GAT sobrevivieron. Las plantas de tabaco transformadas con GAT y seleccionadas sobre glifosato fueron fértiles. El florecimiento y la semilla no fueron detectablemente diferentes de las plantas de tipo silvestre. 339 EJEMPLO 12. HERENCIA MENDELIAA DEL GEN GAT Y EL FENOTIPO TOLERANTE A GLIFOSATO La herencia mendeliana del gen GAT y el fenotipo tolerante a glifosato se demostró con Arabidopsis transformada. Las plantas Arabidopsis de tipo Columbia se cultivaron y se transformaron mediante el método de inmersión (Clough, SN and Bent, AF, (1998) Plant J. (16 (6) : 735-43) con una construcción que contiene la variante GAT llamada quimera (SEQ ID NO: 16). Semillas a granel se recolectaron y las plantas GAT se confinaron mediante PCR con cebadores específicos para el inserto dentro del T-DNA. La semilla TI de casos individuales se sembraron sobre el suelo con 10-30 semillas por maceta cuadrada de 2 pulgadas. Cuando el primer conjunto de hojas reales estuvo emergiendo, las macetas se rociaron con glifosato equivalente a 0.5 y IX de producto comercial (como es calculado en el EJEMPLO 11) . Después de dos semanas, la segregación del transgen y el fenotipo tolerante fue evidente como es mostrado en la Tabla 5. Tabla 5. Resumen de los datos de segregación para Arabidopsis TI tolerante a glifosato 0.5 IX. Caso de # de # de Muertas Relación de quimera (SEQ Sobrevivientes Segregación ID NO:16) 1 8 11 1:1.4 3 6 22 1:3.7 340 Las relaciones cerca de 3:1 indican un caso dominante de segregación individual. Las relaciones mayores que 3:1 indican varios insertos de segregación. Las relaciones menores que 3:1 pueden ser debido a efectos del tamaño de muestra pequeña, dominación incompleta o efectos de la posición que vuelven la expresión demasiado baja para conferir tolerancia al herbicida. Comparado con los controles, fue claro que el gen GAT fue transmitido a la generación TI y confirió tolerancia a glifosato. EJEMPLO 13: PRODUCCION DE MAIZ RESISTENTE A GLIFOSATO QUE EXPRESA TRANSGENES GAT Plantas de maíz que expresan transgenes variantes de GAT se produjeron usando los métodos descritos en la patente norteamericana No. 5,981,849, la cual es incorporada en la presente por referencia. Específicamente, los vectores Agrobacterium tumefaciens se construyeron de acuerdo con los métodos conocidos en la técnica. Cada vector contuvo un inserto que tiene un promotor ubiquitin e intrón, una variante GAT y un terminador PinII . Embriones inmaduros de 341 maíz se extirparon y se infectaron con un vector de Agxobacte ium tumefaciens que contiene la variante GAT de interés. Después de la infección, los embriones de transfirieron y se cultivaron en el medio de co-cultivo . Después del co-cultivo, los embriones inmaduros infectados se transfirieron sobre el medio que contiene glifosato 1.0 mM (Roundup ULTRA MAX™) . Esta selección perduró hasta que se identificaron callos transgénicos putativos activamente 300. Los tejidos de callo transgénico putativo se muestrearon para PCR y el ensayo de Western (datos no mostrados) para confirmar la presencia del gen GAT. Los tejidos de callo transgénico putativo se mantuvieron en el medio de selección de glifosato 1.0 mM para el crecimiento y la selección adicional antes de la regeneración de la planta. La regeneración, el tejido de callo confirmado que es transgénico se transfirió sobre el medio de maduración que contiene glifosato 0.1 mM y se cultivó para la maduración del embrión somático. Los embriones maduros luego se transfirieron sobre el medio de regeneración que contiene glifosato 0.1 mM para la formación de retoño y raíz. Después de que emergieron los retoños y raíces, las plantitas individuales se transfirieron en tubos con medio para hechar raíces que contiene glifosato 0.1 mM. Las plantitas con retoños y raíces establecidas se transplantaron en macetas en el invernadero para el crecimiento adicional, la generación 342 de datos de rocío TO y la producción de semilla TI. Con el fin de evaluar el nivel de resistencia a glifosato de las plantas de maíz transgénicas que expresan los transgenes variantes GAT, plantas TO se rociaron con glifosato (Roundup ULTRA MAX™) en el invernadero. Los niveles de la resistencia de la planta se evaluaron mediante los registros de decoloración de la planta y las mediciones de altura de la planta. La descoloración de la planta y la altura de la planta se evaluaron de acuerdo con las siguientes escalas: Registro de descoloración en 1, 2, 3 y 4 semanas después del rocío con glifosato 9 = nada de descoloración de la hoja/tallo 7 = menor descoloración de la hoja/tallo 5 = descoloración peor de la hoja/tallo 3 = planta severamente descolorada o planta teñida 1 = planta muerta Mediciones de altura de planta antes de rociado con glifosato después del rociado con glifosato a l, 2, 3 y 4 semanas plantas maduras (en formación de espiguilla) Dos plantas se enviaron al invernadero de cada caso (callo transgénico independiente) listado en la Tabla 6. La planta 1 se conservó para la producción de semilla y no se 343 roció con glifosato. La planta 2 se roció en glifosato 4x (glifosato lx = 26 onzas/acre) en 14 días después del transplante. Los registros de decoloración de la planta TO con roció 4x en 7 y 14 días después del rocío se muestran en las Tablas 6 y 7. Los datos de altura en la formación de espiguilla se muestra en la Figura 14. Un experimento adicional se realizó en el cual las plantas TO se rociaron con glifosato 6x. Los registros de decoloración de la planta TO con rocío 6x en 10 días después del rocío se muestran en la Tabla 8. Tabla 6. Registros de Resistencia en 7 días después del tratamiento con glifosato 4x construcciones # de casos % de % de % de probados eventos @ eventos @ eventos @ con 4 9 7 <7 18534 169 30% (50) 59% (101) 11% (18) (SEQ ID NO:196) 18537 72 40% (29) 54% (39) 6% (4) (SEQ ID NO.193) 18540 111 32% (36) 61% (67) 7% (8) (SEQ ID NO: 190) Total 352 33% (115) 59% (207) 8% (30) 344 Tabla 7. Registros de Resistencia en 14 dias después del tratamiento con glifosato 4x construcciones # de casos probados % de casos @ 9 con 4x 18534 169 29% (49) (SEO ID NO: 196) 18537 72 50% (36) (SEO ID NO.193) 18540 111 29% (32) (SEQ ID NO: 190) Total 352 33% (117) Tabla 8. Registro de Resistencia 10 dias después del tratamiento con glifosato 6X construcciones # de casos probados % de casos sin daño con 6x después del tratamiento con glifosato (registro=9) 19286 312 51% (160) (SEQ ID NO: 814) 19288 310 52% (163) 345 (SEQ ID NO.549) 19900 231 56% (129) (SEQ ID NO:738) 19902 230 42% (96) (SEQ ID NO: 638) 21895 55 30% (17) (SEO ID NO: 848) 21896 61 61% (37) (SEQ ID NO: 912) 21905 32 70% (25) (SEQ ID NO.906) Total 1231 51% (627) EJEMPLO 14: GAT TAMBIEN ES UNA ACILTRANSFERASA La habilidad de las variantes GAT (B6 (SEQ ID NO: 7 ) , 0_6D10 (SEQ ID NO: 448), 17-15H3 (SEQ ID NO: 601) y 20-8H12c (SEQ ID NO: 817)) para transferir el grupo propionilo del propionil CoA a glifosato se probó en mezclas de reacción que contienen glifosato 5 mM o sin glifosato. Propionil CoA estuvo presente en 1 mM. Después de 30 minutos las reacciones 346 se terminaron y la presencia de propionil CoA libre se determinó mediante la adición de DTNB. Todas las variantes mostraron hidrólisis dependiente de glifosato del propionil CoA. Estos resultados indican que GAT también funciona como una aciltransferasa . EJEMPLO 15: ESTUDIOS TI DE MAIZ RESISTENTE A GLIFOSATO QUE EXPRESAN TRANSGENES GAT Plantas de maíz que expresan transgenes variantes de GAT 18-28D9b (SEQ ID NO: 814) y 17-15H3 (SEQ ID NO: 549) se produjeron usando los métodos descritos en el Ejemplo 13. Las plantas TI se usaron para la generación de los datos de tolerancia en campo de glifosato. Las plantas TI se trataron en el campo con cuatro diferentes tratamientos de rocío de glifosato (OX, 4X, 8X y 4X + 4X) para cada caso. Las plantas se rociaron en V3 y V8. Las plantas se registraron 10 días después del tratamiento para la decoloración de la hoja y las comparaciones de altura de la planta como es descrito en el Ejemplo 13. Los datos de rocío en campo TI se correlacionaron bien con los resultados previamente obtenidos en el invernadero como es reportado en el Ejemplo 13. Las semillas T2 se recolectaron para estudios adicionales . EJEMPLO 16: TERMOESTABILIDAD DE POLIPEPTIDOS GAT A. EFECTO DE VARIACION DE LA TEMPERATURA SOBRE LA TOLERANCIA A GLIFOSATO DEL MAIZ RESISTENTE A GLIFOSATO QUE EXPRESA TRANSGENES GAT 347 Plantas de maíz que expresan transgenes variantes GAT 10_4F2 (SEQ ID NO: 203), 17-15H3 (SEQ ID NO: 549) y 18-28D9b (SEQ ID NO: 814) se produjeron usando los métodos descritos en el Ejemplo 13. El efecto de la temperatura sobre la tolerancia a glifosato se evaluó en plantas TI. Las plantas TI se cultivaron en condiciones de enfriamiento/frío (día 14°C, noche 8°C), cálido (día 28°C, noche 20°C) y caliente (día 37 °C, noche 20°C) . Las plantas TI se rociaron en V2 con cuatro diferentes tratamientos de rocío de glifosato (0X, 4X, 6X y 8X) . Las plantas se registraron en 5 y 14 días después del tratamiento para la decoloración de la hoja y las comparaciones de altura de la planta como es descrito en el Ejemplo 13. Las observaciones visuales indicaron que la tolerancia a glifosato no es afectada adversamente por el intervalo de temperaturas probado. B. EFECTO DE LA VARIACION DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD GAT IN VITRO La termoestabilidad in vi tro de varios polipéptidos GAT (DS3 (un polipéptido GAT nativo correspondiente a SEQ ID NO: 8), 6_6D5 (SEQ ID NO:410), 17-15H3 (SEQ ID NO: 601) , 20-8H12 (SEQ ID NO:739, 22-23B12 (SEQ ID NO:781) y 401 (un polipéptido GAT correspondiente a la SEQ ID NO: 6)) se evaluó de acuerdo con el siguiente método. Las enzimas se distribuyeron a tubos de PCR desmontados de 200 µ? (VWR, San Francisco, CA) y se incubaron en un termocidador gradiente 348 (ML Research, Watertown, MA) durante 15 minutos a varias temperaturas entre 30°C y 60°C como es indicado en la Figura 17. La proteina precipitada se removió por centrifugación, y la actividad enzimática superviviente de la proteina soluble restante se midió a 22 °C mediante el ensayo espectrofotométrico continuo, como es descrito en el Ejemplo 7. Las concentraciones de saturación de glifosato (10 mM para DS3 (SEQ ID NO: 8), 401 (SEQ ID NO: 6) y 6_6D5 (SEQ ID NO: 410); 5 mM para 17-15H3 (SEQ ID NO: 601), 20-8H12 (SEO ID NO:739) y 22-13B12 (SEQ ID NO: 781) y AcCoA (167 uM) fueron utilizados. Los datos se representan en la Figura 17. Los polipéptidos GAT nativos (es decir, tipo silvestre) DS3 (SEQ ID NO: 8) y 401 (SEQ ID NO: 6) aparecieron estables con respecto a la actividad en temperaturas de hasta aproximadamente 42 a aproximadamente 44 °C. Los polipéptidos GAT que no son nativos a cualquier organismo (es decir, no de tipo silvestre) se presentaron estables a temperaturas en intervalo de aproximadamente 47 °C a aproximadamente 54 °C. Las vidas medias de varios polipéptidos GAT también se midieron a 37.5°C de acuerdo con el siguiente procedimiento. Los polipéptidos GAT (SEQ ID NO: 6), 17-15H3 (SEQ ID NO: 601), 20-8H12 (SEQ ID NO.739), 22-223B12 (SEQ ID NO: 781 ) , 22-15B4 (SEQ ID NO:946) Y 22-18C5 (SEO ID NO.795) se incubaron en una matriz de Hepes 25 mM, pH 7.2, KC1 10 mM y metanol al 10% ("HKM") . En varios puntos en el tiempo, 349 alícuotas se retiraron y se analizaron por triplicado a 22 °C usando el ensayo espectrofotométrico continuo descrito en el Ejemplo 7 usando concentraciones saturadas de glifosato (20 mM para 401, 5 inM para el resto) y AcCoA (167 uM) . El error estándar en cada punto en el tiempo promedió aproximadamente 2.9%. La actividad GAT se gráfico como una función del tiempo de incubación y los datos se ajustaron a una curva para el decaimiento exponencial (y = e"x) , donde y es la actividad de la enzima y x es el tiempo en horas, del cual se calculó la vida media. Los datos se muestran enseguida en la Tabla 9.

Tabla 9. Vidas Medias de los oli é tidos GAT a 37.5°C EJEMPLO 17: PRODUCCION DE SOYA RESISTENTE A GLIFOSATO QUE 350 EXPRESA TRANSGENES GAT Plantas de soya que expresan transgenes variantes GAT se produjeron usando el método de bombardeo con pistola de partícula (ver Kevin y colaboradores (1987) Nature 327.70-73) usando un instrumento Du Pont Biolistic PDS 1000/He. El agente de selección usado durante " el proceso de transformación fue higromicina. Cualquier gen marcador seleccionado de higromicina permaneció en los casos transgénicos o el gen higromicina fue extirpado por métodos conocidos en la técnica. Los fragmentos de DNA se prepararon con un promotor constitutivo sintético, una variante GAT y el terminador Pinll. El gen marcador seleccionable, que comprende el promotor 35S cAMV, gen HPT y terminador NOS, se cobombardeó con la variante de gen GAT como es descrito en lo anterior. El tejido en suspensión embriogénico de soya bombardeados se cultivó durante una semana en la ausencia de agente de selección. El tejido de suspensión embriogénico se colocó en el medio de selección líquido durante 6 semanas. El tejido de suspensión transgénico putativo se muestreó para el análisis de PCR para determinar la presencia del gen GAT. El tejido de cultivo de suspensión transgénico putativo se mantuvo en un medio de selección durante 3 semanas para obtener bastante tejido para la regeneración de la planta. El tejido de suspensión se maduró durante 4 semanas usando procedimientos estándares; embriones somáticos maduros se 351 disecaron durante 4-7 días y se colocaron en el medio de inducción de germinación durante 2-4 semanas. Las plantitas germinadas se transfirieron a la tierra en charolas de empaque celular durante 3 semanas para la aclimatización. Las plantitas se colocaron en macetas de 10 pulgadas en el invernadero para la evaluación de la resistencia a glifosato. Para determinar el nivel de resistencia a glifosato de las células transgénicas que expresan los transgenes variantes GAT, plantas TO se rociaron con glifosato (Roundup ULTRA MAX™) en el invernadero. Los niveles de resistencia de la planta se evaluaron mediante registros de decoloración de la planta y mediciones de la altura de la planta. Registro de descoloración en 2 semanas después del roció con glifosato 9 = nada de descoloración de la hoja/tallo 7 = menor descoloración de la hoja/tallo '5 = descoloración peor de la hoja/tallo 3 = planta severamente descolorada o planta seca 1 = planta muerta Una de cuatro plantas se enviaron al invernadero de cada evento transgénico independiente. 1-2 plantas adicionales por caso se cultivaron en cámaras de crecimiento de ambiente controlado para la producción de semilla y no se rociaron con glifosato. Las plantas de invernadero se rociaron en glifosato IX, 2X o 4X (glifosato IX = 26 352 onzas/acre de RoundUp ULTRA MAX™) 3-4 semanas después de la transferencia al suelo. Los registros de decoloración de la planta TO con proporciones de roció 2X y 4X se muestran en la Tabla 10 y Tabla' 11, respectivamente. Estos resultados muestran que las soyas son efectivamente transformadas con las variantes de gen GAT como es confirmado por el análisis de PCR. Las soyas transgénicas que expresan variantes de gen GAT son resistentes al glifosato en proporciones de rocío 2X y 4X. Los casos que sobreviven a la proporción de rocío de glifosato 4X muestran algo de decoloración en la hoja menor sin embargo dentro de 2 semanas de la prueba de rocío, las plantas se recuperan y demuestran morfología de la hoja normal. Tabla 10. Registros de Resistencia 10 días después del tratamiento con glifosato 2X # DE CASOS % DE CASOS @ % DE CASOS @ PROBADOS CON 7-8 3-6 2X SEQ ID NO:193 27 15% (4) 11% (3) SEQ ID NO .82 38 8% (3) 74% (23) TABLA 11. Registro de la Resistencia 10 días después del tratamiento con glifosato 4X # DE CASOS % DE CASOS % DE CASOS @ PROBADOS CON @7-8 3-6 4X 353 SEQ ID NO.824 23 8% (2) 43% (10) EJEMPLO 18: EFECTO DE LA SAL SOBRE LA CINETICA DEL GAT Para mejor aproximar las condiciones fisiológicas bajo las cuales las enzimas GAT de la invención se proponen para ser utilizads (por ejemplo, células de planta), las actividades de algunas enzimas GAT de la invención se reevaluaron en la presencia de sal agregada. Las Figuras 15A y 15B proporcionan una comparación de los parámetros cinéticos Km y kcat/ m, respectivamente, para las enzimas GAT nativas GAT401 (SEQ ID NO.6), ?ß (SEQ ID NO: 7) y DS3 (SEQ ID NO: 8), y las enzimas GAT evolucionadas 0_6D10 (SEQ ID NO. 48), 10_4F2 (SEO ID NO.454), 18-28D9 (SEO ID NO.618), 17-15h3 (SEQ ID NO.601), 17-10B3 (SEQ ID NO.592), 29-8hl2 (SEQ ID NO: 739) , 20-16A3 (SEQ ID NO.639) Y 20-30C6 (SEQ ID NO: 683), analizado ya sea en la ausencia de KCl agregado (barras no sombreadas) o en la presencia de KCl 20 mM (barras sombreadas) . Las concentraciones de proteína se determinaron usando el ensayo Bradford como es descrito en el Ejemplo 7. Debido a sus Kms extremadamente bajas para glifosato en la ausencia de KCl, los parámetros cinéticos para las enzimas GAT evolucionadas 0_6D10, 18-28D9 y 20-8H12 se determinaron en la ausencia de KCl usando el ensayo de espectrometría de masas como es descrito en el Ejemplo 3, mientras que todos los otros parámetros cinéticos (ya sea en la ausencia o la presencia de KCl) se determinaron usando el ensayo 354 espectrofotométrico continuo como es descrito en el Ejemplo 7. Las barras de error representan la desviación estándar de ensayos múltiples donde es disponible .. La Figura 15A muestra que la adición de sal ( C1 20 mM) a la solución reguladora de ensayo significativamente incrementa el valor de Km para glifosato. El valor de kcat permanece relativamente sin cambio o se incrementa ligeramente, el resultado neto que es un valor de kcat/ m observado inferior para enzimas GAT analizadas en la presencia de KC1 20 mM que en la ausencia de KC1 agregado (Figura 15B) . EJEMPLO 19: GENES GAT EVOLUCIONADOS ADICIONALES QUE CODIFICAN ENZIMAS GAT CON ACTIVIDAD EXTREMADAMENTE ALTA Las iteraciones adicionales de la evolución molecular dirigida produjo además genes GAT evolucionados que codifican enzimas GAT que exhiben actividad de GAT extremadamente alta, por ejemplo que exhiben una o más propiedades mejoradas tal como Km reducida para glifosato, kcat incrementada o kcat/ m incrementada comparada con las enzimas GAT previamente descritas. Los genes GAT evolucionados adicionalmente primero se seleccionaron para el crecimiento en E. col! en el medio M9 mínimo como es descrito en el Ejemplo 8, excepto que 5 mM antes que 1 mM de glifosato se usó en la selección. Las proteínas se purificaron como es descrito en el Ejemplo 6 anterior. 355 Las concentraciones de proteína se determinaron mediante la absorbencia UV a 205 nm. El coeficiente de extinción se determinó por el método descrito por Scopes (1994; Protein Purification, Principies and Practice, Spririger, New York) de acuerdo con la fórmula E (mg mi"1 cm"1 ) = 27 + 120 (?280/?205) = 30.5. Antes de la cuantificación mediante la absorbencia de UV la solución de proteínas se intercambió con solución reguladora en Ka2S0<i 50 mM usando una columna NAP-5 (Amersham-Pharmacia Biotech) . Las secuencias de codificación GAT evolucionadas adicionalmente, ejemplares comprenden secuencias de ácidos nucleicos identificados en la presente como SEQ ID Nos: 832, 834, 836, 838, 840, 842, 844, 846, 848, 850, 852, 854, 856, 858, 860, 862, 864, 866, 868, 870, 872, 874, 876, 878, 880, 882, 884, 886, 888, 890, 892, 894, 896, 898, 900, 902, 904, 906, 908, 910, 912, 914, 916, 918, 920, 922, 924, 926, 929 y 930, que codifican adicionalmente enzimas GAT evolucionadas que comprenden secuencias de aminoácidos identificadas en la presente como SEQ ID Nos: 833, 835, 837, 839, 841, 843, 845, 847, 849, 851, 853, 855, 857 , 859, 861, 863, 865, 867 , 869, 871, 873, 875, 877, 879, 881, 883, 885, 887, 889, 891, 893, 895, 897, 899, 901, 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919, 921, 923, 925, 927, 929 y 931, respectivamente. Algunas de tales enzimas GAT evolucionadas adicionalmente exhiben actividad GAT extremadamente alta, en que ellas exhiben una o 356 más propiedades mejoradas tal como Km reducida para glifosato, kcat incrementada o kcat/Kra incrementada comparada con las enzimas GAT previamente descritas analizadas bajo las mismas condiciones. Las Figuras 16A, 16B y 16C proporcionan una comparación de los parámetros cinéticos Km/ kcaz, y kcat/ m, respectivamente, de varias enzimas GAT previamente descritas (barras no sombreadas) a los parámetros cinéticos de algunas enzimas GAT evolucionadas adicionalmente en la invención (barras sombreadas) , analizadas usando el ensayo espectrofotométrico continuo en la presencia de KCl 20 mM con proteina cuantificada por la via de absorbencia UV como es descrito en lo anterior. Las barras de error representan la desviación estándar de múltiples ensayos, donde es disponible. Bajo estas condiciones de ensayo, la enzima GAT nativa GAT401 (SEQ ID NO: 6) exhibió una m para glifosato de aproximadamente 4 mM, una kcat de aproximadamente 5. rain"1 y una kcat/ m de aproximadamente 1.35 mM-1 min-1. Cuando se analizaron bajo estas condiciones, algunas enzimas GAT evolucionadas adicionalmente de la invención (barras sombreadas) exhiben un intervalo de valores Km para glifosato de menos de aproximadamente 0.4 mM (tal como, entre aproximadamente 0.4 mM y 0.1 mM) , valores kcat de por lo -menos aproximadamente 1000 min-1 (tal como, entre aproximadamente 1000 min-1 y aproximadamente 2500 min-1) y valores de kcat/Km de 357 por lo menos aproximadamente 4800 mM-1 (tal como, entre aproximadamente 4800 mM-1 min"1 y aproximadamente 8000 mM-1 min-1) . Por ejemplo, algunas enzimas GAT evolucionadas adicionalmente en la invención sirven por lo menos aproximadamente un incremento de 7000 veces en kcat/ m sobre la enzima GAT nativa GAT401 bajo estas condiciones de ensayo. Algunas enzimas GAT evolucionadas adicionalmente en la invención comprenden una o más posiciones de residuos de aminoácidos no observadas en los polipéptidos GAT previamente descritos en las enzimas GAT, tal como, en la posición 27, como un residuo de aminoácido Bl, Zl o A; la posición 33, un residuo de aminoácido N o G; en la posición 46, un residuo de aminoácido B2, Z4 o H; en la posición 93, un residuo de aminoácido R; donde Bl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M, F, W, Y y V; B2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, N, D, C, Q, E, G, H, K, P., S y T; Zl es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de A, I, L, M y V; y Z4 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de R, H y K. Por ejemplo, algunas enzimas GAT evolucionadas adicionalmente en la invención comprenden uno o más de: una Ala en la posición 27 (es decir, Ala27) ; una Asn o una Gly en la posición 33 (es decir, Asn33 o Gly33) ; un His en la posición 46 (es decir, His46) y una Arg en la posición 93 (es decir, Arg93), con numeración de la secuencia correspondiente a aquella de, por 358 ejemplo, SEO ID NO: 907. Los análisis de secuencia/actividad se realizaron para identificar residuos de aminoácidos que se correlacionan positivamente con alta kcat/Km (como se manifiesta por un alta kcat, una baja Km o ambos) . Los residuos de aminoácidos que aparecen para correlacionarse positivamente con una alta kcat/Km incluyen G1414, Asp32, Asn33, Gly38 y Thr62 (numeración de secuencia correspondiente a aquella de la SEQ ID NO:907). Enzimas GAT adicionales pueden ser construidas al sustituir codones para uno o más de eszos residuos en la(s) posición (es) apropiada de una secuencia de codificación de un polipéptido GAT de plantilla. Por ejemplo, las enzimas GAT adicionales se generaron al sustituir uno o más codones que codifican Glu en la posición de codón 14, Asp en la posición 32, Asn en la posición 33, Gly en la posición 38, y Thr en la posición 62, en una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido de plantilla, tal como GAT 24-5H5 (SEQ ID NO: 845) o GT 25-8H7 (SEQ ID NO: 907), dos de las enzimas GAT evolucionadas adicionalmente que exhiben extremadamente alta actividad como es descrito en lo anterior. Las enzimas GAT evolucionadas adicionalmente, ejemplares, generadas de esta manera, identificadas en la presente, R12G1 (SEQ ID NOs : 17 ) , R12G2 (SEO ID NOs : 919) , R12G3 (SEQ ID NOs: 921) , R12G4 (SEQ ID NOs: 923), R12G5 (SEQ ID NOs: 925), R12G6 (SEQ ID NOs: 927), R12G7 (SEQ ID NOs: 929) y R12G8 (SEQ ID NOs: 31), codificadas por ácidos nucleicos identificados como SEQ ID Nos: 916, 918, 920, 922, 924, 926, 928 y 930, respectivamente, exhibieron actividad GAT extremadamente altas comparables a aquellas de los polipéptidos de plantilla. EJEMPLO 20: AMINOACIDOS QUE SE CORRELACIONAN CON ALTA ACTIVIDAD GAT Los aminoácidos ácido aspártico (Asp, D) , histidina (His, H) y cisterna (Cys, C) se conoce que están asociados con los sitios activos de varias enzimas de acetiltransferasa . Para determinarse en cualquiera de tales residuos desempeñan una función en la actividad GAT, todos los residuos de D, C y H de GAT20-30C6 (SEQ ID NO: 683) se mutaron individualmente a alanina (Ala, A) y las enzimas mutadas se analizaron para la actividad de N-acetilglifosato . Las variantes que contienen las sustituciones D34A y H41Are recluido solo aproximadamente 2%-3% de la actividad de la enzima no modificada, mientras que la variante que contiene la sustitución H138A exhibió actividad GAT esencialmente no medible. Por otra parte, las variantes que contienen las sustituciones H138R y H138S retuvieron actividad GAT baja pero medible (particularmente a pHs mayor que 6.8), sugiriendo que His (y nominalmente Arg y Ser) en la posición 138 puede servir como una base de sitio activo . Tabla 12 360 EJEMPLO 21: MEJORA DE LA EXPRESION GAT EN PLANTAS Plantas, animales y microbios se conocen que tienen preferencia de codones específicas que afectan la eficiencia de la incorporación de aminoácido durante la traducción de transcriptos de gen. Codones raros podrían causar problemas con el reclutamiento de tRNA durante la traducción, que luego podría conducir a acumulación inferior de la proteína codificada. Los genes gat parentales originales fueron de las 361 bacterias tal como Bacillus lichenifor is y, como tales, no pueden tener una distribución de codón óptima para la expresión en plantas. Los genes gat evolucionados de la invención han sido expresados exitosamente en plantas (ver, por ejemplo, Ejemplos 9, 11, 13 y 17, anteriormente), pero existe una oportunidad para mejorar la producción de proteína al incrementar la eficiencia de traducción en las plantas. Una manera para realizar esto es al sustituir uno o más codones de la secuencia de codificación GAT que son usados en frecuentemente plantas para codones para el (los) mismo (s) aminoácido (s) que son más frecuentemente utilizados con plantas, generando de esta manera mutaciones silenciosas en la secuencia de codificación gat con una secuencia sin cambio de la proteína codificada. Las tablas que muestran la preferencia de utilización de codón en maíz, algodón y soya (disponible, por ejemplo, del sitio de la red mantenido por el Kazusa DNA Research Intitute, Chiba, Japón) se compararon para generar la siguiente tabla (Tabla 13) demuestra codones que son, en general, más frecuentemente o menos frecuentemente utilizados en plantas ya sea monocotiledones o dicotiledones. Tabla 13 Aminoácido Codones más Codones menos frecuentemente frecuentemente utilizados en utilizados en 362 plantas plantas Alaniña Ala A GCA GCC GCT GCG Cisteína Cys C TGC TGT Acido Asp D GAC GAT aspártico Acido Glu E GAA GAG glutámico Fenilalanina Phe F TC TT Glicina Gly G GGA GGT GGC GGG Histidina His H CAC CAT Isoleucina lie I ATC ATT ATA Lisina Lys K ???. AAG Leucina Leu L TTG CTC CTG CTT CTA TTA Metionina Met M ATG Asparagina Asn N AAC AAT Asparagina Asn N AAC AT Prolina Pro P CA CCT CCC CCG Glutamina Gln Q CAA CAG Arginina Arg R AGA AGG CGA CGC CGT Serina Ser S AGT TCA TCC TCT AGC TCG Treonina T r T ACA ACC ACT ACG Valina Val V GTG GTT GTA GTC Triptofano Trp w TGG Tirosina Tyr Y TAC TAT 363 Una segunda manera para incrementar la expresión de la planta de genes microbianos es incrementar el contenido de G+C cerca del residuo de metionina de iniciación. La secuencia de codificación que ocurre de manera natural en plantas tienden a contener dos o tres residuos G y/o C inmediatamente corriente debajo de la iniciación ATG (Joshi y colaboradores (1997) Plant Mol. Biol. 35:993-1001). La introducción a la secuencia de codificación gat de uno o dos codones ricos en CG inmediatamente corriente abajo del codón de iniciación ATG puede crear una secuencia de codificación más similar a la planta y asi poder incrementar su expresión en plantas. La sustitución del segundo codón (isoleucina, ATA) para un codón de alanina (GCG) dio por resultado una variante Ile2Ala con kcat reducida comparada a la enzima no modificada. Por otra parte, la inserción de un codón de alanina (ya sea GCG o GCT) entre los codones para Met en la posición de codón 1 e lie en la posición de codón 2 dio por resultado una secuencia de codificación GAT que codifica una enzima GAT que contiene un residuo Ala insertada entre el Met en la posición 1 y el lie en la posición 2. Una variante de enzima GAT ejemplar que contiene dos alaninas insertadas entre Metí e Ile2 denotados, identificados como 22-15B4 M1MAA (que significa la inserción de dos residuos de Ala inmediatamente después del Met de la posición 1) y que tiene la secuencia de proteina SEQ ID NO: 948, exhibieron una kcat 364 reducida comparada con la enzima no modificada 22-15B4 (SEQ ID NO: 789). Una enzima GAT ejemplar que contiene una alanina insertada entre Metí y Ile2, denotada 22-15B4 MIMA (que significa la inserción de un residuo Ala inmediatamente después del Met en la posición 1 que tiene la secuencia de proteina SEQ ID NO: 946, exhibió cinética esencialmente no alterada comparada con la enzima no modificada 22-15B4. Una estrategia general para mejorar la expresión GAT en plantas fue desarrollada. Las secuencias de codificación gat evolucionadas pueden ser alteradas al reemplazar los codones menos frecuentemente utilizados en plantas por codones más frecuentemente utilizados en plantas, por ejemplo, de acuerdo con la tabla anterior. Los codones menos frecuentemente utilizados en plantas (por ejemplo, de acuerdo con la tabla anterior) deben ser evitados generalmente. De esta manera por lo menos un codón (tal como, por lo menos tres codones, por lo menos cinco codones, o por lo menos diez codones) puede ser cambiado en la secuencia de codificación gat de (los) codón (es) menos frecuentemente utilizados en plantas a codón (es) y más frecuentemente utilizados en plantas. Los codones que son reemplazados pueden ser ubicados en el extremo 5' de la secuencia de codificación (por ejemplo, dentro de los primeros 10 codones, dentro de los primeros 20 codones, dentro de los primeros 50 codones, o dentro de los primeros 100 codones) de la 365 secuencia de codificación gat. Alternativamente, los codones que son reemplazados pueden ser ubicados por toda la secuencia de codificación gat. Los codones más frecuentemente utilizados además pueden ser elegidos para evitar más de aproximadamente 5-10 (tal como, por ejemplo, más de aproximadamente 5, más de aproximadamente 6, más de aproximadamente 7, más de aproximadamente 8, más de aproximadamente 9 o más de aproximadamente 10) ocurrencias consecutivas de G+C o de ?+? dentro de la secuencia de codificación. La secuencia de codificación también puede ser alterada para contener uno o dos codones ricos en CG inmediatamente corriente abajo del codón de iniciación ATG, tal como, por ejemplo, al insertar un codón Ala (por ejemplo, un codón Ala frecuentemente utilizado) inmediatamente corriente abajo de y adyacente al codón Met de iniciación de la secuencia de codificación gat. La Tabla 14 proporciona secuencias de codificación gat ejemplares alterada como es descrito en lo anterior. Tabla 14 Secuencia de Secuencia de cambios de codones proteina codificación gat codificación gat hechos codificada or ginal alterada GAT20-8H12/4604 GAT4604SR Ser62 TCG->TCT 20-8H12 SEQ ID NO: 738) SEQ ID NO: 932) Arglll CGG—>AGG SEQ ID NO: 739) GAT22-18C5/4609 GAT4609SR Ser62 TCG->TCT 22-18C5 366 SEQ ID NO: 794) 3EQ ID NO: 33) Arglll CGG->AGG SEQ ID NO: 795) GAT22-16D8/4610 GAT4610R Arglll CGG->AGG 22-16D8 SEQ ID NO: 792) SEQ ID NO:934) SEQ ID NO: 793) GAT22-15B4//4611 GAT4611R A.rglll CGG->AGG 22-15B4 SEQ ID NO: 788) SEQ ID NO: 35) SEQ ID NO: 789) GAT24-5H5/4614 GAT4614R Ser62 TCG->TCT 24-5H5 SEQ ID NO: 848) SEQ ID NO:936) Arglll CGG->AGG SEQ ID NO: 849) GAT24-5H5/4614 GAT4614VSR Val4 GTG->GTA 24-5H5 SEQ ID NO:848) SEQ ID NO: 937) Ser62 TCG->TCT SEQ ID NO: 849) Arglll CGG—>AGG GAT23-2H11/4615 GAT4615R Arglll CGG—>AGG 23-2H11 SEQ ID NO: 836) SEQ ID NO: 38 ) SEQ ID NO: 837) GAT24-15C3/4616 GAT 616R Arglll CGG->AGG 24-15C3 SEQ ID NO: 862) SEQ ID NO: 939) SEQ ID NO: 863) GAT23-6H10/4617 GAT4617R Arglll CGG->AGG 23-6H10 SEQ ID NO: 844) SEQ ID NO: 940) SEQ ID NO: 845) GAT25-8H7/4618 GAT4618SR Ser62 TCG->TCT 25-8H7 SEQ ID SEQ ID NO: 906) SEQ ID NO: 941) Arglll CGG->AGG NO: 907, 957) GAT25-8H7/4618 GAT4618VSR Val4 GTG->GTA 25-8H7 SEQ ID NO: 06) SEQ ID NO: 42) Ser62 TCG->TCT SEQ ID NO: 907) Arglll CGG—>AGG GAT25-19C8/4619 GAT4619SR Ser62 TCG->TCT 25-19C8 SEQ ID NO: 912) SEQ ID NO: 943) Arglll CGG->AGG SEQ ID NO: 913) GAT25-19C8/4619 GAT4619VSR Val GTG->GTA 25-19C8 SEQ ID NO: 912) SEQ ID NO: 944) Ser62 TCG->TCT SEQ ID NO -.913) 367 Un vector binario con un cásete de dMMV-gat-UBQ3 en el T-DNA se transformó en las células de las cepas C58 de Agrobact.eriu tumefaciens competentes mediante 368 electroporación (McCormac y colaboradores, Mol Biotechnol . 9:155-159, 1998) . Después del crecimiento sobre placas de LB + 40 ug/ml de canamicina durante 2 días a 28 °C, las colonias se inocularon en el medio liquido de LB + 40 ug/ml de canamicina y se agitaron durante la noche a 28 °C. Las células de Agrobacteríum se recolectaron por centrifugación a 4000 g durante 10 minutos y luego se resuspendieron en un volumen de MgS04 10 itiM equivalente al volumen de cultivo inicial. Esta suspensión bacteriana se hizo pasar o "se infiltró" en los espacios intercelulares de hojas de Ni cotíana benthamíana usando una jeringa de plástico de 1 mi (sin aguja) . Mediante la infiltración 200-300 µ? de suspensión bacteriana en cada mancha (típicamente 3-4 cm2 en el área infiltrada) , 4 o más manchas podrían ser arregladas en una' sola hoja todavía unida a la planta. En algunos casos, las cepas de Agrobacteríum que contienen gat se diluyó 5:1 o 10:1 con una segunda cepa de Agrobacteríum que carece de gat antes de la infiltración. Esta- etapa de disolución tiene el efecto de reducir la expresión total del gen gat en las células de plantas, para de esta manera prevenir la saturación y permitir la visualización más fácil de diferencias de expresión entre las variantes y construcciones. Después de 3 días el material de la hoja se molió, se extrajo en solución reguladora acuosa y se centrifugó. El sobrenadante, que contiene las proteínas solubles, se sometió a SDS-PAGE y el gel se manchó y se 369 sondeó con un anticuerpo policlonal antiGAT. El nivel de proteina GAT acumulado en las hojas de tabaco infiltradas con el gen GAT4620 fue comparable al nivel de proteina acumulado en las hojas transformadas con el gen GAT25-8H7/4618 no modificado. Las hojas de tabaco que albergan el gen GAT4621, por otra parte, exhibieron una acumulación de proteina GAT de aproximadamente más grande de dos veces, con un por ciento de proteina total, comparado con las hojas que expresan el gen GAT25-8H7/4618 no modificado. EJEMPLO 22: ESTUDIOS TI DE SOYA RESISTENTE A GLIFOSATO QUE EXPRESA TRANSGENES GAT Plantas de soya que expresan el transgen de GAT 18-28D9c (SEQ ID NO.824) se produjeron usando los métodos descritos en el Ejemplo 17. La semilla TI se recolectó de plantas TO rociadas con glifosato. La semilla TI se germinó bajo condiciones de invernadero en el medio RediEarthR360, disponible de Scotts, Marysville, OH, y se rociaron en la etapa V2-V3 con ya sea Glifosato 2X o 4X (RoundUp ULTRA MAX™, disponible de Monsanto, St. Louise, MO) según los métodos descritos en el Ejemplo 17. Las plantas se registraron después de 10 dias y los registros de decoloración de la hoja se tomaron como es descrito en el Ejemplo 17. Los datos de roclo del invernadero TI se correlacionaron bien con el resultado de invernadero previos en la etapa de planta TO. La semilla T2 se recolectó para estudios adicionales. 370 EJEMPLO 23: PRODUCCION DE SOYAS RESISTENTES A GLIFOSATO Y SULFONAMIDA QUE EXPESAN TRANSGENES GAT Y HRA Plantas de soya que expresan los genes GAT & HRA, alelo de alta resistencia de acetolactato sintasa (patentes norteamericanas Nos. 5,605,011, 5,378,824, 5,141,870 y 5,013,659), se produjeron usando los métodos descritos en el Ejemplo 17. El gen HRA se usó como gen marcador seleccionable para la transformación. El agente de selección fue clorsulfurón a una concentración de 100 ng/ml . El gen marcador seleccionable estuvo comprendido del promotor de S-adenosil-L-metionina sintetasa (SAMS) de -la Glycine max (U.S. 2003/226166) , secuencia de codificación HRA de Glycine max y el terminador de acetolactato sintasa de Glycine max. El gen marcador seleccionable estuvo ya sea enlazado o co-bombardeado con una construcción GAT que consiste de un promotor constitutivo sintético (patentes norteamericanas Nos. 6, 072, 050 y 6,555, 673) o el promotor 2B de Histona de maíz (patente norteamericana No. 6,177,611), una variante GAT (18-28D9c (SEQ ID NO:824)) y el terminador Pin II (Gyheung an y colaboradores, Plant Cell 1:115:122 (1989)) . Plantas transgénicas se generaron como es descrito en el Ejemplo 17. Los niveles de resistencia a glifosato se determinaron como es descrito en el Ejemplo 17 usando los registros de decoloración de planta después de las proporciones de aplicación de glifosato 2X o 4X. Los resultados mostrados en 371 la Tabla 15 demuestran que los promotores constitutivos diferentes inducen la variante GAT (18-18D9c (SEQ ID NO:824)) confiere resistencia a glifosato en plantas TO. Tabla 15. Registros de Resistencia en 10 dias después del tratamiento con glifosato 4X # DE CASOS 5 DE EVENTOS CASOS PROBADOS CON @ 7-8 4X REGISTROS @ 3-6 REGISTRO PHP20163a 58 15.5% (9) 77.6% (45) (SEO ID NO: 824) (PROMOTOR SCP1) PHP558A 26 34.6% (9) 42.3% (11) (SEQ ID NO: 824) (PROMOTOR H2B) EJEMPLO 24: ESTUDIOS DE PRE-EMERGENCIA TI DE SOYAS QUE EXPRESAN LOS TRANSGENES GAT Y HRA Semilla TI generada de los experimentos como es descrito en el Ejemplo 17, se plantaron en macetas de tierra negra de Tama Silt en el invernadero. Las macetas se rociaron 372 inmediatamente con aplicación de pre-emergencia de clorimurón, rimsulfurón o tribenurón a una proporción de 70 gms a . i . /hectárea . Las plantas en germinación se evaluaron 10 días después de la aplicación del rocío basado en los registros de decoloración de la planta descritos en el Ejemplo 17. Todos los casos de HRA y GAT sobrevivieron a todas las aplicaciones de rocío de pre-emergencia con una clasificación de 9 (no lesionada) . Estos resultados demostraron resistencia de pre-emergencia a la química de sulfonamida en soyas. EJEMPLO 25: ESTUDIOS DE POST-EMERGENCIA TI DE SOYAS QUE EXPRESAN LOS TRANSGENES GAT Y HRA Semilla TI generada de los experimentos como es descrito en el Ejemplo 17 se germinaron en medio RediEarthR360 en el invernadero. Las plantas se rociaron en la etapa V2-V3 (14 días después de la colocación en maceta) con tifensulfurón, clorimurón, rimsulfurón o tribenurón (70, 70, 35, 35 gm a . i . /hectárea, respectivamente) . Las plantas se evaluaron 10 días después de la aplicación basada en los registros de descoloración de la planta descritos en el Ejemplo 17. Los resultados se muestran en la Tabla 16. Tabla 16. Registro de Resistencia en 10 días después del tratamiento de Post-Emergencia con la Química Sulfonamida Registro de Resistencia promedio de GA (SEQ ID 373 NO .824 ) /casos de promotor SAMS/HRA Control no rociado Clorimurón (70 gm a. i. /ha) 7.75 Rimsulfurón (35 gra a. i. /ha) 2.21 Tribenurón (35 gm a. i. /ha) 3.83 Tifensulfurón (70 gm a. i. /ha) 7.81 Los casos que tienen clasificación descoloración de planta 7 u 8 después del roció de tifensulf rón se rociaron con ya sea una aplicación2X o 4X de glifosato después de 10 días según los métodos descritos en el Ejemplo 17. Los casos se evaluaron basados en los registros de decoloración descritos en el Ejemplo 17. Todos los casos tolerantes a tifensulfurón sobrevivieron al rocío de glifosato con registro de 7 u 8 (resultado no mostrado) . Estos resultados demuestran 100% de correlación de tolerancia a tifensulfurón con tolerancia a glifosato bajo condiciones de invernadero conferidas por los genes HRA y GAT, respectivamente, en 70 gm. a . i . /hectáreatifensulfurón y glifosato 2X, respectivamente. EJEMPLO 26: ESTUDIOS T3 DE PLANTAS DE MAIZ RESISTENTES A GLIFOSATO QUE EXPRESAN TRANSGENES GAT Plantas de maíz que expresan transgenes GAT 20-H812 (SEQ ID NO: 738) y 20-16A3 (SEQ ID NO: 638) se produjeron usando los métodos descritos en el Ejemplo 13. Las plantas se 374. registraron después de 10 días y los registros de decoloración de la hoja se tomaron como es descrito en el Ejemplo 13. Específicamente, las plantas se rociaron en la etapa de hoja V4. Las plantas se distribuyeron en un espaciamiento igual y se tomaron conteos después de la aplicación de los tratamientos con rocío. NK603 comercialmente disponible (Monsanto, St. Louis, MO) se usó como un control. Los registros de resistencia se muestran en la Tabla 18. Las mediciones de altura de la planta también se tomaron 10 días después del tratamiento y se muestran en la Tabla 18. Tabla 18. Registros de Resistencia en 10 días después del tratamiento con glifosato Registros de Resistencia (escala 1-9) CONSTRUCCIONES # Control de IX (26 4X (104 8X (208 casos Tratamiento oz/A) oz/A) oz/A) probados sin UltraMax UltraMax UltraMax Glifosato 19900 2 9 8.8 7.9 5.4 (SEQ ID NO: 738) 19902 4 9 8.4 8.0 5.9 (SEQ ID NO: 638) NK603 1 9 8.4 7.9 5.5 375 Tabla 19. Altura de la Planta (en pulgadas) 10 días después del tratamiento con glifosato EJEMPLO 27: ESTUDIOS DE RENDIMIENTO T3 DEL MAIZ RESISTENTE AL GLIFOSATO QUE EXPRESA TRANSGENES GAT Semilla T3 del Ejemplo 15 se usó para generar plantas T3 para la generación de los datos de tolerancia en campo a glifosatos o de híbridos. El experimento se condujo en Viluco, Chile con cuatro (4) replicaciones usando un diseño de lote dividido. Específicamente, se incluyeron 3 entradas. Dos de las entradas comprendieron plantas de maíz que expresan los transgenes variantes GAT 17-15H3 (SEQ ID NO: 549). Un control resistente a glifosato NK603, que es comercialmente disponible de Monsanto, fue la tercera entrada. Todas las entradas se trataron en el campo con 4 376 diferentes tratamientos de roció de glifosato (OX, 4X a V4, 8X a V4 y 4X a V8) para cada caso. Las plantas se registraron 10 días después del tratamiento para las comparaciones de altura de la planta como es descrito en el Ejemplo 13. Los datos de roció en campo T3 se correlacionan bien con los resultados previamente obtenidos en el campo como es reportado en el Ejemplo 15. Específicamente, todas las entradas rociadas con glifosato IX y 4X fueron similares en la altura a los controles no rociados. En las proporciones más altas 4X en V4 y 4X en V8, las entradas GAT temporalmente se ajustaron nuevamente entre 12 y 17% en altura y la entrada N 603 se ajustó nuevamente a 6%; sin embargo, después en la estación (durante la madurez reproductora) la altura de las entradas tratadas con glifosato fue la misma como las entradas no rociadas. Además, los rendimientos entre las entradas tratadas con glifosato fueron no numéricamente ni estadísticamente reducidas de las entradas no rociadas · 8 bu. /acre, rendimiento promedio por entrada=243 bu. /acre) . Resultados similares se observaron en experimentos agronómicos preliminares con plantas T2 de los mismos casos que se plantaron en Johnston, 1A y York, NE (datos no mostrados) . EJEMPLO 28: ESTUDIOS T2 DEL MAIZ RESISTENTE A GLIFOSATO QUE EXPRESAN LOS GENES GAT Los experimentos se condujeron en iso-líneas GAT 377 positiva y GAT negativa. Las plantas de maíz que expresan transgenes GAT 18-28D9b (SEQ ID NO: 814, 17-15H3 (SEQ ID N0:549), 20-8H12 (SEQ ID O:738), 20-16A3 (SEQ ID NO:638), se produjeron usando los métodos los métodos descritos en el Ejemplo 17. Las plantas T2 se examinaron. Las plantas T2 positivas de GAT positiva se rociaron en V4 con IX (26 oz/A ULTRA MAX™) . Las plantas GAT negativas se muestrearon con PCR en V4. las plantas GAT positivas se removieron de la hilera. No se aplicó glifosato a las plantas GAT negativas. Las plantas se distribuyeron para crear espaciamiento igual entre las plantas dentro de cada hilera. Se realizaron cuatro (4) replicaciones . El grano de cinco (5) mazorcas cosechadas de la parte media de cada hilera se secaron y se pesaron. Como se muestra en la Tabla 20 no se detectó reducción del rendimiento para cualquiera de las construcciones. Tabla 20. Datos de Rendimiento Construcción # de casos Rendimiento RENDIMIENTO GAT positivo GAT negativo rociado con IX sin glifosato (26 oz/A) aplicado ULTRA MAX™ en V4 PHP19286 40 1.65 lbs/5 1.57 lbs/5 SEQ ID mazorcas mazorcas NO: 814) 378 EJEMPLO 29: SUSTRATOS DE AMINOACIDOS DE POLIPEPTIDOS GAT La actividad GAT de varios polipéptidos GAT de la presente invención se evaluó con respecto a un número de sustratos de aminoácidos. El polipéptido GAT, AcCoA y sustratos amino se incubaron en Hepes 25 mM, pH 6.8, etilenglicol al 10% y las cavidades de una placa de poliestireno de 96 cavidades. Después de 30 minutos, las reacciones se detuvieron mediante la adición de 30 µ? de 5, 5' -ditiobis-2-nitrobenzoato 10 mM (DTNB) en Tris 500 mM, pH 7.5. Después de 2 minutos, la absorbencia se leyó en 412 nm en un lector de placa Spectramax Plux (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) . Además del glifosato, el polipéptido GAT nativo 401 (SEQ ID NO: 6) (o B6 (SEQ ID NO: 7), en el caso de fosfoserina) exhibió actividad detectable con 12 aminoácidos. El polipéptido GAT nativo fue aproximadamente tan activo con L- 379 aspartato, aproximadamente 4.7 veces más activo con L-serina, y apro imadamente 2 veces más activo con fósforo-L-serina que con glifosato. Cuando se compara con el polipéptido GAT nativo, los polipéptidos GAT no nativos 17-15H3 (SEQ ID NO: 601) y 25 8117 (SEQ ID NO: 907) exhibieron un incremento de 40 veces la actividad con aspartato, pero pérdida de actividad con respecto a serina y fosfoserina. Además del aspartato y serina, la actividad con el polipéptido GAT nativo en 3% o más de aquel hacia glifosato cuando se presenta en 1 mM se observó con los siguientes L-aminoácidos: histidina (10%), tirosina (18%), treonina (250%), valina (12%), glutamato (51%), asparagina (27%), glutamina (32%) , alanina (33%) , glicina (21%) y cisteina (50%) . La actividad con los otros aminoácidos de proteina fue ya sea no detectada o menos de 3% de esa actividad GAThacia glifosato como el sustrato. No se observó actividad detectable con respecto al polipéptido GAT nativo sobre los derivados de N-metilo de L-aspartato (2 mM) , L-alanina (10 mM) y glicina (es decir, sarcosina, 10 M) . Los porcentajes se refieren al por ciento de actividad relativa a la actividad del polipéptido GAT hacia el sustrato, glifosato. Algunos de los datos se muestran enseguida en la Tabla 21. Tabla 21: Actividad GAT con respecto a Glifosato, Aspartato y Serina. 380 EJEMPLO 30: EFECTO DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD GAT El pH óptimo de kcat y KM para la enzima de tipo silvestre B6 (SEQ ID NO: 7) y el polipéptido GAT 17-15H3 (SEQ ID NO: 601) se determinaron usando el ensayo espectrofotométrico descrito en el Ejemplo 7 excepto que la solución reguladora del ensayo fue Hepes 50 niM y etilenglicol al 10%, titulado a un intervalo de valores de pH. Las concentraciones de proteina se determinaron mediante el ensayo de absorbencia UV descrito en el Ejemplo 19. El efecto del pH sobre KH y Kcat se muestra en la Figura 18 para los 381 clones B6 (SEQ ID N0:7 y 17-15H3 (SEQ ID NO: 601). Mientras que la invención anterior se ha descrito en algo de detalle para propósitos de claridad y de entendimiento, será claro para un experto en la técnica a partir de una lectura de esta descripción, que varios cambios en la forma y detalle se pueden hacer sin apartarse del alcance real de la invención. Por ejemplo, todas las técnicas, métodos, composiciones, aparatos y sistemas descritos en lo anterior pueden ser utilizados en varias combinaciones. La invención se propone para incluir todos los métodos y reactivos descritos en la presente, asi como todos los polinucleótidos , polipéptidos, células, organismos, plantas, cultivos, etc., que son los productos de estos métodos y reactivos novedosos. Todas las publicaciones, patentes, solicitudes de patentes, u otros documentos citados en esta solicitud se incorporan por referencia en su totalidad para todos los propósitos al mismo grado como si cada publicación individual, patente, solicitud de patente, u otro documento fuera individualmente indicado que es incorporado por referencia para todos los propósitos.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un polinucleótido aislado o recombinante, caracterizado porque comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido, en donde el polipéptido tiene actividad de glifosato-N-acetiltransferasa y comprende una secuencia de aminoácidos que: (a) comparte por lo menos 94% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 841; y/o (b) comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 968.
2. El polinucleótido aislado o recombinante de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que comparte identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 841 de por lo menos 95%, 96%, 97%, 98% o 99%.
3. El polinucleótido aislado o recombinante de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el polipéptido comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 621, 623, 639, 641, 647, 649, 653, 659, 661, 673, 677, 681, 683, 685, 723, 731, 733, 739, 741, 745, 7.51, 753, 755, 757, 759, 761, 765, 767, 769, 771, 773, 775, 777, 779, 781, 783, 787, 789, 791, 793, 795, 799, 803, 805, 807, 809, 811, 817, 819, 821, 833, 835, 837, 839, 841, 843, 845, 847, 849, 851, 853, 855, 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871, 873, 875, 877, 879, 881, 883, 885, 887, 889, 891, 893, 895, 383 897, 899, 901, 903, 905, 907, 909, 911, 913, 915, 917, 919, 921, 923, 925, 927, 931, 946, 948 o 950.
4. El polinucleótido aislado o recombinante de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el polipéptido cataliza la acetilación del glifosato con una kcat/ m de por lo menos 10 mM-1 min-1 para glifosato, en donde la kcat/Km es medida en la presencia de HEPES 20 mM a pH 6.8, etilenglicol al 10%, acetil CoA 0.2 mM y nada de KC1 adicional a 23°C.
5. El polinucleótido aislado o recombinante de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el polipéptido cataliza la acetilación del glifosato con una kcat/Km de por lo menos 100 mM"1 min^1 para glifosato.
6. El polinucleótido aislado o recombinante de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el polipéptido cataliza la acetilación del ácido aminometilfosfónico .
7. El polinucleótido aislado o recombinante de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el polipéptido también tiene actividad de glifosato-N-aciltransferasa .
8. Una construcción de ácido nucleico, caracterizada porque comprende el polinucleótido aislado o recombinante de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-7. 384
9. La construcción de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque además comprende un promotor operablemente enlazado al polinucleótido, en donde el promotor es heterólogo con respecto al polinucleótido y en donde la tolerancia a glifosato de una célula de planta transformada con la construcción de ácido nucleico es incrementada en comparación a una célula de planta que no se ha transformado con la construcción de ácido nucleico.
10. Una célula, caracterizada porque comprende por lo menos un polinucleótido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde el polinucleótido es heterólogo a la célula.
11. La célula de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque la célula es una célula de planta.
12. Una planta transgénica, caracterizada porque se produce a partir de la célula de la reivindicación 11.
13. Una explanta de planta transgénica, caracterizada porque comprende la célula de la reivindicación 11.
14. La planta transgénica de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque la planta transgénica es una planta de cultivo de un género seleccionado del siguiente grupo: Brassica , xn a, Zea, Glycine y Gossypium.
15. La planta transgénica de conformidad con la 385 reivindicación 14, caracterizada porque la planta exhibe tolerancia incrementada a glifosato como es comparada con una planta de la misma especie, clase o variedad de cultivo que no comprende por lo menos un polinucleótido de cualquiera de las reivindicaciones 1-7.
16. La planta transgénica de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque la planta no exhibe una reducción en el rendimiento después del tratamiento con glifosato aplicado a un nivel efectivo para inhibir el crecimiento de una planta de la misma especie, clase o variedad de cultivo que no comprende por lo menos un polinucleótido de cualquiera de las reivindicaciones 1-5.
17. La planta transgénica de conformidad con la reivindicación 15, caracterizada porque la planta además comprende por lo menos un polipéptido que imparte tolerancia a un herbicida adicional.
18. La planta transgénica de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque el por lo menos un polipéptido que imparte tolerancia a un herbicida adicional es seleccionado del grupo que consiste de: (a) una acetolactato sintasa tolerante a sulfonamida; (b) una acetohidroxi ácido sintasa tolerante a sulfonamida; (c) una acetolactato sintasa tolerante a 386 imidazolinona; y (d) una acetohidroxi ácido sintasa tolerante a imidazolinona .
19. Una semilla, caracterizada porque se produce mediante la planta de la reivindicación 12.
20. Un polipéptido que tiene actividad GAT, caracterizado porque el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que: (a) comparte por lo menos 94% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 841; y/o (b) comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 968.
21. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque el polipéptido tiene: (a) una Km para glifosato de menos de 2.9 M; y (b) una kcat igual a por lo menos 6 por minuto, en donde la kcat y m se miden en la presencia de HEPES 20 mM a pH 6.8, etilenglicol al 10%, acetil CoA 0.2 mM y nada de C1 adicional a 23 °C.
22. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el polipéptido además comprende un péptido de tránsito de cloroplasto.
23. Un método para producir una planta transgénica resistente a glifosato, caracterizado porque comprende: (a) transformar una célula de planta con el polinucleótido de cualquiera de las reivindicaciones 1-7; (b) seleccionar una célula de planta que es resistente a glifosato al cultivar células de planta en la presencia de una concentración de glifosato que inhibe el crecimiento de una célula de planta que no comprende un polinucleótido de cualquiera de las reivindicaciones 1-7; y (c) regenerar una planta transgénica a partir de la célula de planta.
24. Un método para controlar malas hierbas en un campo que contiene un cultivo, caracterizado porque comprende : (a) plantar el campo con semillas de cultivo o plantas que son tolerantes a glifosato como resultado de ser transformadas con el polinucleótido de cualquiera de las reivindicaciones 1-7; y (b) aplicar a cualquier cultivo y malas hierbas en el campo una cantidad suficiente de herbicida para controlar las malas hierbas sin afectar significativamente al cultivo.
25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la etapa (b) se realiza antes de la etapa (a) .
26. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el herbicida comprende glifosato.
27. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado por que el herbicida comprende un herbicida 388 de sulfonilurea.
28. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado por que el herbicida comprende glifosato y un herbicida de sulfonilurea .