MXPA02011263A - 2-(4-piridil)amino-6-dialcoxifenil- pirido(2,3-d) pirimidin-7-onas. - Google Patents

Abstract

Esta invencion proporciona compuestos antiangiogenicos de la Formula, que son utiles para el tratamiento de enfermedades, resultantes de la proliferacion celular descontrolada tales como cancer, arteriosclerosis, artritis reumatoide y psoriasis.

Description

2-(4-PIRIDlL)AMINO-ß-DIALCOXIFENIL-PIRIDO[2.3-P1PIRIMIDIN 7-ONAS CAMPO DE LA [NVENCIÓN Esta ¡nvención proporciona 2-(4-piridil)amino-6-dialcoxifeniI-pirido[2,3-d]pirimidin-7-onas antiangiogénicas que son útiles para tratar cáncer, aterosclerosis, artritis reumatoide, restenosis, psoriasis, retinopatía diabética, degeneración macular, y otras enfermedades asociadas con proliferación de vaso sanguíneo anormal.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La angiogénesis es la formación de venas capilares a partir de vasos pre-existentes, generalmente que ocurren en el embrión y organismos mamíferos adultos como parte del crecimiento y reparación normal, tal como curación de heridas. Sin embargo, la angiogénesis no controlada se asocia también con trastornos proliferativos celulares tales como cáncer, retinopatía diabética, degeneración macular, psoriasis, artritis reumatoide, ateroma, sarcoma de Kaposi y hemangioma. El crecimiento e invasión de tumor sólido depende del suministro sanguíneo adecuado para proporcionar factores de crecimiento celular, nutrientes, y para remover subproductos metabólicos a partir de la división celular activa.

La angiogénesis de tumor i mplica un número de procesos secuenciales y complejos comenzando con la producción y liberación de factores angiogénicos por células de tu mor o su matriz circundante, culminando en el desarrollo de la vasculatura de tumor. Esta cascada de multietapa incluye activación, prol iferación, y migración de célula endotelial (EC), seguida por la formación y maduración del conducto. Los factores de crecimiento angiogénicos, tales como factor de crecimiento de fibroblasto básico (FGF1 y factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), que se expresan durante el creci miento del tumor, son moduladores claves de la función EC y el proceso neovascular completo. Por consiguiente, los compuestos de peso molecular pequeños que son inhibidores específicos y selectivos de las tirosinas cinasas del receptor FGF y VEGF en las EC son útiles como terapias antiangiogénicas para tratar cáncer y otras enfermedades provocadas por proliferación celular no controlada. La Patente Norteamericana No . 5, 733, 914, incorporada en la presente para referencia, describe una amplia ciase de pirido[2, 3-d]p¡rimid;r,as que se dicen son útiles para tratar cáncer y otras enfermedades proliferativas celulares debido a su capacidad para inhibir una amplia variedad de las tirosina cinasas del receptor del factor de crecimiento tales como factor de creci miento derivado de plaqueta (PDGF), factor de creci miento epidermal f EGF). así como VEG F y FGF. Los compuestos se sustituyen en la posición 6 por grupos arilo y heteroapio . cuyos grupos pueden sustituirse con varias porciones incluyendo halo, alquilo, alcoxi, tio, tioalquilo, hidroxi, amino y alcanoilo. La descripción apunta al dihalofenilo como un sustituyente preferido en el núcleo pirido[2,3-d]pirimidina, y específicamente el 2,6-diclorofenilo como siendo el más preferido. La patente adicionalmente describe una variedad de posibles grupos sustituyentes en la posición 2 del núcleo pirido[2,3-d]pirimidina, incluyendo arilamino, con fenilamino para ser el más preferido. Estos compuestos sufren de falta de biodisponibilidad, estabilidad metabólica y selectividad de enzima. Se ha descubierto una serie de pirido[2,3-d]pirimidinas que son sorprendentemente más potentes y selectivas como inhibidores de VEGF y FGF que los compuestos descritos en la Patente Norteamericana No. 5,733,914, y las cuales son biodisponibles y estables en mamíferos. Los presentes compuestos se caracterizan como 2-[(4-piridil)amino]-6-(3,5-dialcoxifenil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-onas. Un objeto de esta invención es para proporcionar inhibidores potentes, selectivos y metabólicamente estables de VEGF y FGF, y un método para tratar enfermedades que resultan de la proliferación celular incontrolada utilizando tales compuestos.

ARTE PREVIO Esta invención proporciona compuestos caracterizados como 2-[(4-p?ridil)amino]-6-(3,5-dialcoxifenil)-8H-pirido[2,3- d]pirimidin-7-onas que son inhibidores de la tirosina cinasas del receptor del factor de crecimiento potentes, selectivos y metabólicamente estables conocidos como VEGF y FGF. La invención más particularmente proporciona compuestos de la Fórmula I en donde: R1, R2, R5, y R6 son independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo de CI-CT, alcoxi de Ci-Cß, tio, tioaiquilo, hidroxi. alcanoilo de C?-C6, -CN, -N02, alcanoiioxi de C?-C6, COOR8, -CF3, NR8R9, o (X)m-(CH2)n-NR8R9 dónde R8 y R9 son independientemente hidrógeno, alquilo de Ci-Ce, alcanoiio de Ci-C5, o R8 y R9 tomados juntos con el nitrógeno los cuales están completamente unidos aun anillo de 5- a 7-miembros; X es NH o O; m es 0 ó 1 : n es O a 6; con tal de que m y n no son ambos 0, R3 y R44 son independientemente alquilo de C?-C6 y halo sustituido de alquilo de Ci-Cß, R7 es hidrógeno, alquilo de Ci-Ce, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, o cicloalquilo de C3-C6, y las sales farmacéuticamente aceptables y solventes del mismo. Alternativamente, R1, R2, R5, y R6 son independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo de CI-CT, alcoxi de Ci-Cß, tio, tioalquilo, hidroxi, alcanoilo de C?-C6, -CN, -NO2, alcanoiloxi de C?-C6, COOR8, -CF3, NR8R9, o (X)m-(CH2)n-NR8R9 dónde R8 y R9 son independientemente hidrógeno, alquilo de C1-Cß, alcanoilo de C1-C6, o R8 y R9 tomados juntos con el nitrógeno los cuales pueden esta completamente unidos a un anillo teniendo 3 a 7 átomos de carbono y conteniendo opcionalmente 1, 2, o 3 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste de nitrógeno, nitrógeno sustituido, oxígeno, y sulfuro. Los compuestos preferidos tienen la Fórmula I en donde R1, R2. R5 y R6 sen hidrógeno, y R7 es alquilo de Ci-Ce Otro grupo preferido de compuestos tiene la Fórmula I en donde R3 y R4 son metilo. El compuesto más preferido de la Fórmula I es 6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-(piridin-4-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona.

La invención también proporciona un método para tratar enfermedades provocadas por proliferación celular no controlada en un mamífero que comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I. Enfermedades típicas son cánceres tales como leucemia y cáncer de mama. Por consiguiente, la presente invención proporciona un método para tratar angiogénesis no controlada en un mamífero que comprende administrar al mamífero con necesidad del tratamiento una cantidad antiangiogénica efectiva de un compuesto de la Fórmula 1. La presente invención también proporciona un método para tratar cáncer en un mamífero que tiene cáncer y con necesidad del tratamiento que comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I. Además, la presente ¡nvención proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para tratar cualesquiera de las enfermedades o estados de enfermedad mencionados anteriormente. Adicionalmente, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para tratar cualquiera de las enfermedades o estados de enfermedad mencionados anteriormente. Una modalidad adicional de esta invención es una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la Fórmula I mezclado con un portador farmacéuticamente aceptable, diluyente o excipiente para el mismo.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los compuestos de la presente invención pueden existir en forma no solvatada así como formas solvatadas, incluyendo formas hidratadas. En general, las formas solvatadas, incluyendo formas hidratadas, son equivalentes a formas no solvatadas y se pretenden para estar abarcadas dentro del alcance de la presente invención. En los compuestos de la Fórmula I, el término "alquilo de d-Cß" significa un radical hidrocarburo lineal o ramificado que tiene de 1 a 6 átomos de carbono e incluye, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, ter-butilo, n-pentilo, n-hexilo y similares. El término "alquilo de d-Cß" incluye dentro de su definición el término "alquilo de C1-C3". Los términos "halógeno" y "halo" incluyen fluoro, cloro, bromo y yodo. Grupos "alquilo de C1-C3 sustituido con halo" son los grupos alquilo anteriores que tienen uno o más sustituyentes halo. Los ejemplos incluyen trifluorometilo, perfluoropentilo, 1,2,3-tricloropropilo, 2-cloro-4-fluorohexilo, y similares. Los términos "alquenilo" y "alquenilo de C2-Ce" significan radicales hidrocarburo lineales o ramificados que tienen de 2 a 6 átomos de carbono y 1 doble enlace e incluye etenilo, 3-buten-1-ilo, 2-etenilbutilo, 3-hexen-1 -ilo y similares. Los términos "alquinilo" y "alquinilo de C2-C6" significan un radical hidrocarburo lineal o ramificado que tiene de 2 a 6 átomos de carbono y al menos un triple enlace. Los grupos alquinilo de C2-Cß normales incluyen propinilo, 2-butin-1 -ilo, 3-pent?n-1-ilo y similares. "Cicloalquilo de C3-C6" significa un grupo hidrocarbilo cíclico tal como ciclopropilo. ciclobutilo, ciciohexilo y ciclopentilo. "Alcoxi de Ci-Cd" se refiere a los grupos alquilo mencionados anteriormente unidos a través de oxígeno, ejemplos de los cuales incluyen metoxi, etoxi, isopropoxi, ter-butoxi y similares. "Alcanoilo de Ci-Cß" se refiere a un grupo alquilo, como se definió anteriormente, unido a través de un carbonilo, es decir., O alquilo de C1-C5 C- Tales grupos incluyen formilo, acetilo, propionilo. butirilo e isobutirilo. "Alcanoiloxi de CI-CT" se refiere a los grupos alcanoilo mencionados anteriormente unidos a través del oxígeno. Los grupos alquilo. alquenilo. alcoxi y alquinilo descritos anteriormente pueden sustituirse. Los grupos sustituyentes que pueden ser parte del alquilo, alquenilo, alcoxi y grupos alquinilo son NR8R9, fenilo, fenilo sustituido, tioalquilo de (Ci-Cß), alcoxi de C-i-Cß, hidroxi, carboxi, alcoxicarbonilo de Ci-Cß, halo, cicloalquilo, y un anillo carbocíclico o anillo heterocíclico de 5 ó 6 miembros que tienen 1 ó 2 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, nitrógeno sustituido, oxígeno y azufre. "Nitrógeno sustituido" significa nitrógeno soportando alquilo de Ci-Cß o (CH2)nPh. Ejemplos "R8 y R9 tomados juntos con el nitrógeno al cual están unidos pueden completar un anillo que tiene 3 a 7 átomos de carbono y opcionalmente contienen 1, 2 o 3 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste de nitrógeno, nitrógeno sustituido, oxígeno y azufre" incluye, pero no se limita a, pirrolidina, piperidina, y piperazina. El anillo de 5 a 7 miembros puede sustituirse opcionalmente por alquilo de Ci-Cß. Ejemplos de alquilo sustituido se agrupan de tal manera que ¡ncluyen 2-aminoetilo, 2-dietilaminoetilo, 2-dimetilaminopropilo, etoxicarbonilmetilo, 2-piperidinetilo, 3-feniiobutiio, metilsulfanilmetilo, meíoximetilo, 3-hidroxipentilo 2-carboxibutilo, 4-clorobutilo, 3-ciclopropilpropilo, 3-morfolinopropilo, piperazinilmetilo, y 2-(4-metilpiperazinilo)etilo. Ejemplos de alquenilo sustituido se agrupan de tal manera que ¡ncluyen 2-dietilaminoetenilo, 3-amino-2-butenilo, 3-(1 -piperazinil)-1 -propenilo, 3-hidroxi-1 -propenilo. 2-(1-s-triazini l)eteni lo. 3-fenil-3-pentenilo, y el similar.

Ejemplos de grupos alquinilo sustituidos incluyen 2-metoxietinilo, 2-etiisulfaniletinilo, 4-(1 -piperazinil)-3-(butinil), 3-fenil-5-hexinilo, 3-dietilamino-3-butinilo, 4-cloro-3-butinilo, 4-ciclobutil-4-hexinilo, y similares. Los grupos alcoxi sustituidos típicos incluyen aminometoxi, trifluorometoxi, 2-dietilaminoetoxi, 2-etoxicarboniletoxi, 3-pirrolidinopropoxi, 3-hidroxipropoxi, 6-carboxihexiloxi, y similares. Adicionalmente, ejemplos de grupos alquilo, alquenilo, y alquinilo sustituidos incluyen dimetilaminometilo, carboximetilo, 4-dietilamino-3-buten-1 -ilo, 5-etilmetilamino-3-pentin-1 -ilo, 4-morfolinobutilo, 4-tetrahidropiridinilbutil-3-imidazolidin-1 -il propi I o , 4-tetrahidrotiazol-3-il-butilo, fenilmetilo, 3-clorofenilmetilo, y similares. Los compuestos de la Fórmula I son capaces de formar adicionalmente sales farmacéuticamente aceptables, incluyendo ambas sales de adición y/o base farmacéuticamente aceptables. Todas de estas formas están dentro del alcance de la presente invención. Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la Fórmula I incluyen sales derivadas de ácidos inorgánicos tales como clorhídrico, nítrico, fosfórico, sulfúrico, bromhídrico, hiodriódico, fosforoso y similares, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos, tales como ácidos alifáticos mono- y dicarboxíiicos. ácidos alcanoicos sustituidos con fenilo, ácidos hidroxialcanoicos, ácidos alcandioicos, ácidos aromáticos, ácidos alifáticos y aromáticos, etc. Tales sales incluyen de esta manera sulfato, pirosulfato, bisulfato, sulfito, bisulfito, nitrato, fosfato, monohidrogenfosfato, dihidrogenfosfato, metafosfato, pirofosfato, cloruro, bromuro, yoduro, acetato, propionato, caprilato, isobutirato, oxaiato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, mandelato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato ftalato, bencensulfonato, toluensulfonato, fenilacetato, citrato, lactato, maleato, tartrato, metansulfonato, y similares. También contempladas son las sales de aminoácidos tales como arginato y similares y gluconato, gaiacturonato (véase, por ejemplo, Berge S.M., et al., "Pharmaceutical Salts", J. of Pharmaceutical Science, 1977;66:1-19). Las sales de adición de ácido de los compuestos básicos se preparan poniendo en contacto la forma de base libre con una cantidad suficiente del ácido deseado para producir la sal en una manera convencional. La forma de base libre puede regenerarse poniendo en contacto la forma de sal con la base y aislando la base libre en la manera convencional. Las formas de base libre difieren un poco de sus formas de sal respectivas en ciertas propiedades tales como solubilidad en solventes polares, pero de otra manera las sales son equivalentes a su base libre respectiva para propósitos de la presente invención.

Las sales de adición de base farmacéuticamente aceptables se forman con metales o aminas, tales como metales álcali y alcalinotérreos u aminas orgánicas. Ejemplos de metales utilizados como cationes son sodio, potasio, magnesio, calcio y similares. Ejemplos de aminas adecuadas son N , N'-dibenci letilendiamina, cloroprocaina, colina, dietanoiamina, etilendiamina, N-metilglucamina y procaina (véase, por ejemplo, Berge S. M. , supra. , 1977). Las sales de adición de base de los compuestos acídicos (por ejemplo, cuando R3 es un grupo carboxialquiio tal como carboximetilo o 3-carboxibutilo) se preparan poniendo en contacto la forma de ácido libre con una cantidad suficiente de la base deseada para producir la sal en la manera convencional. La forma de ácido libre puede regenerarse poniendo en contacto ia forma de sal con un ácido y aislando el ácido libre en la manera convencional. Las formas de ácido libre difieren un poco de sus formas de sal respectivas en ciertas propiedades físicas tales como solubilidad en solventes polares, pero de otra manera las sales son equivalontos a su respectivo ácido libre para propósitos de la presente invención. Mientras las formas de la invención en ia presente constituyen modalidades actual mente preferidas, muchas otras son posibles . No se pretende en la presente para mencionar todas de las posibles formas o ramificaciones equivalentes de la invención. Se entenderá que los términos utilizados en la presente son simplemente descriptivos en lugar de limitantes, y que varios cambios pueden hacerse sin apartarse del espíritu o alcance de la invención. Los compuestos de la Fórmula I pueden prepararse de acuerdo a la síntesis subrayada en los Esquemas 1-7. Aunque estos esquemas con frecuencia indican estructuras exactas, los métodos se aplican ampliamente a compuestos análogos de la Fórmula I, dando consideración apropiada para la protección y desprotección de grupos funcionales reactivos por métodos estándares a la técnica de la química orgánica. Por ejemplo, grupos hidroxi, para evitar reacciones laterales no deseadas, generalmente necesitan convertirse a éteres o esteres durante las reacciones químicas a otros sitios en la molécula. El grupo protector hidroxi se remueve fácilmente para proporcionar el grupo hidroxi libre. Los grupos amino y grupos ácido carboxílico se derivan similarmente para protegerlos contra reacciones laterales no deseadas. Los grupos protectores normales y métodos para unir y desdoblarlos, se describen completamente por Greene and Wuts en Protective Groups en Protective Groups in Organic Síntesis, John Wiley and Sons, New York, (2nd Ed; 1991), y McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, New York, 1973. El Esquema 1 describe un método típico para preparar pirido[3.2- ]pirimidinas de la Fórmula I. La síntesis inicia haciendo reaccionar el 4-(am?no sustituido)-2-metilsulfanil-p?rim?dina-5- carboxaldehído apropiado (J. Med Chem., 1998:41 (22):4365-4377 o J. Med. Chem., 1998:41 (17).3276-3292) con un reactivo acetonitrilo en la presencia de una base y solvente adecuado para producir el producto 6-(aril)-8-(sustituido)-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ilidenamina condensado. La reacción se lleva a cabo normalmente en un solvente no reactivo tal como dioxano, 2-etoxietanol, dimetilformamida, tetrahidrofurano y similares. Las bases típicas que pueden utilizarse en la reacción incluyen métoxido de sodio, hexametildisilano de potasio, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno, hidruro de sodio, ter-butóxido de potasio, dietilamida de litio, y similares. Los arilacetonitrilos típicos que pueden emplearse incluyen 3,5-dimetoxifenilacetonitrilo, 2, 6-dimetil-3,5-dimetoxif en i I acetonitrilo, 2-metil-3,5-dimetoxifenilacetonitrilo, 2, 6 -di cloro -3,5-dimetoxifenilacetonitrilo, 2-cloro-3,5-dimetoxifenil-cianometano, 2-fluoro-3,5-d i metoxif en i i acetonitrilo, 2, 6-dif I uoro-3, 5-di metoxif en i i o, 3,5-trifluorometoxifeniiacetonitrilo, y similares. La reacción se lleva a cabo normalmente a temperaturas elevadas de aproximadamente 50°C a aproximadamente 200°C y se completan generalmente de manera sustancial dentro de aproximadamente 2 a 24 horas. El producto, una 6-(aril)-8-(sustituida)-2-metilsulfanil-8H-pirido[2.3-d]pirimidin-7-ilidenamina se aisla fácilmente agregando agua a la mezcla de reacción, la cual provoca generalmente precipitación del producto. El producto imina puede purificarse además si se necesita por recristalización a partir de los solventes tales como acetato de etilo, acetona, isopropanol y similares, o por cromatografía sobre soportes sólidos tales como gel de sílice. Las 6-(aril)-8-(sustituida)-2-metiIsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ilidenaminas son agentes terapéuticos útiles, así como intermediarios y se convierten fácilmente al derivado 7-ceto correspondiente por acilación con un reactivo de acilación adecuado tal como anhídrido acético seguido por ácido de hidrólisis catalizada del grupo acilimino resultante. La hidrólisis del grupo acilimino se completa generalmente de manera sustancial después de calentarse con un ácido mineral acuoso tal como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico o similares durante aproximadamente 5 a 24 horas de aproximadamente 60°C a aproximadamente 200°C. El producto, una 6-(aril)-8-(sustituida)-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]piridimin-7-ona, se aisla fácilmente por la remoción del solvente de reacción por evaporación bajo presión reducida, y cristalización a partir de solventes comunes tales como acetato de etilo, etanol, dimetilformamida, y similares. El grupo metiltio de la 6-(aril)-8-(sustituida)-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona se oxidiza fácilmente al sulfóxido respectivo o sulfona oxidizando reactivos tales como ácido m-cloroperbenzoico, peróxido ácido, ácido peracético, 3-fenil-2-(fenilsulfonil)oxaziridina o similares. En el Esquema 1, el grupo 2-metiltio del intermediario pirimidona se oxidiza al suifóxido correspondiente utilizando 3-fenil-2- (fenilsulfonil)oxaziridina en un solvente adecuado tal como diclorometano a temperatura ambiente. El desplazamiento del grupo sulfóxido del penúltimo intermediario con 4-aminopiridina o un derivado 4-aminopiridina proporciona compuestos de la Fórmula I. En el método A del Esquema 1, el desplazamiento se logra haciendo reaccionar el anión del reactivo 4-aminopiridina con el intermediario sulfóxido. El anión se genera de -78°C a -40°C en solvente adecuado tal como tetrahidrofurano, dioxano, o similares utilizando una base fuerte tal como butil-litio o similares. El sulfóxido se agrega como un sólido o en un solvente tal como dimetilformamida al anión y se hace reaccionar durante 1 a 24 horas a una temperatura de -78°C a 30°C. Alternativamente como se describió por el método B del Esquema 1, el intermediario sulfóxido y el reactivo 4-aminopiridina se combinan directamente juntos a temperaturas de 80°C a 200°C. Adicionalmente, la reacción puede llevarse a cabo como una mezcla concentrada del intermediario sulfóxido y reactivo 4-aminopiridina en exceso en un solvente tal como DMSO a temperaturas de 80°C a 180°C. El producto puede purificarse por cristalización de solventes tales como acetato de etilo, dimetilformamida, ¡sopropanol y similares, o por cromatografía sobre soportes sóiidos tales como gel de sílice. El Esquema 2 muestra una ruta alternativa al Esquema 1 para la condensación del 4-(amino sustituido)-2-metilsulfanil-pirimidin-5-carboxaldehído con un reactivo acetonitrilo. En el Esquema 2 el aldehido se condensa directamente con un éster del ácido fenilacético sustituido en la presencia de una base adecuada tal como 1 ,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno. La reacción puede lograrse impecable o en un solvente tal como dimetilformamida o sulfóxido de dimetilo para producir el producto de 6-(aril)-8-(amino sustituido)-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona condensado. La pirimidinona puede entonces elaborarse a los compuestos de la Fórmula I como se describió en el Esquema 1. El Esquema 3 describe otro método para preparar compuestos de la Fórmula I empezando a partir del 2-metiltio-4-cloro-piridin-5-carboxilato de etilo comercialmente disponible. El grupo 4-cloro de la pirimidina de partida se desplaza por una amina primaria (NHR7) en un solvente adecuado tal como dimetilformamida para producir el 2-metiltio-4-(amino sustituido)-piridin-5-carboxilato de etilo correspondiente. El exceso de la amina de reacción puede emplearse para depurar el subproducto HCl producido en la reacción. La temperatura para el desplazamiento depende de la naturaleza de ia amina siendo reactiva Generalmente, las aminas alifáticas reaccionan a temperatura ambiente, mientras menos aminas nucleofílicas tales como aminas aromáticas requieren temperaturas más altas. La oxidación subsecuente del grupo metiitio con un oxidante tal como 3-fenil-2-(fenilsulfonii)oxazoridina en un solvente tal como diclorometano a temperatura ambiente proporciona el intermediario auifóxido correspondiente. Como se describe en el Esquema 1, e! sulfóxido se desplaza por 4-aminopiridina o derivado de 4-aminopiridina sustituido relacionado por desplazamiento directo con la amina a temperaturas más altas. Alternativamente, el sulfóxido puede hacerse reaccionar con el anión dei reactivo 4-aminopiridina que se genera a partir de la reacción de la amina con una base fuerte tal como butil-litio para dar el 2-(4-piridilamino)-4-(sustituido)-piridin-5-carboxilato. La reducción subsecuente del grupo éster con un agente de reducción común tal como LAH, proporciona el alcohol correspondiente. La oxidación dei alcohol con MnO2 u otro oxidante adecuado proporciona el penúltimo aldehido. La ciclización para los compuestos de la Fórmula I se logra como se describe en el Esquema 2, por reacción con un éster del ácido fenilácetico sustituido apropiadamente bajo condiciones básicas. Iniciando a partir del intermediario 6-(aril)-8-sustituido- 2-metansulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona descrito en los Esquemas 1 y 2, los compuestos de la Fórmula I pueden prepararse de acuerdo al Esquema 4. La reacción del sulfóxido con gas amoniaco disuelto en ?:n solvente adecuado t l como metanol, dioxano y similares o con hidróxido de amoniaco acuoso a temperaturas de 0°C a 100°C produce el intermediario 6-(aril)-8-sustituido-2-amino-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. La desprotonación del grupo 2-amino con una base fuerte tal como butil-litio. hidruro de sodio, o similares da lugar al anión correspondiente in situ el cual se hace reaccionar además con un derivado 4-halo piridina para dar los compuestos de la Fórmula I. El grupo saliente de halógeno representado por X en el Esquema 4 del derivado 4-halo piridina puede ser cloro, bromo, yodo o flúor. El Esquema 5 describe otra variación de la síntesis química de los compuestos de la Fórmula I. El grupo 4-cloro de la pirimidina de partida del 2-metiltio-4-cloro-piridin-5-carboxilato de etilo se desplaza utilizando gas amoniaco en un solvente adecuado tal como metanol o con hidróxido de amonio acuoso para dar 2-metiltio-4-amino-piridin-5-carboxilato de etilo. Los excesos de la amina reactiva pueden emplearse para depurar el subproducto HCl producido en la reacción. La reducción del éster utilizando LAH u otro agente de reducción adecuado tal como diborano, NaBH4-NiCI2 o similares produce el alcohol correspondiente. La oxidación con MnO2 u otro oxidante adecuado produce el intermediario aldehido 4-amino-2-metilsulfanil-pirimidin-5-carboxaldehído. La condensación del aldehido con el derivado de acetato de fenilo apropiadamente sustituido produce el producto ciclizado. La aiquilación de la posición 8 con X-R7 se logra primero formando el anión del intermediario ciclizado con una base tal como NaH, CS2CO3, DBU, y similares. El tratamiento subsecuente del anión con el reactivo de alquilación X-R7 donde X representa un grupo saliente tal como Cl, Br, I, CH3SO3, o similares da el intermediario de la 6-(aril)-8-sustituido-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-o']pirimidin-7-ona deseado. La elaboración para los compuestos de la Fórmula I se logra oxidizando el grupo metiltio al sulfóxido y el desplazamiento nucleofílico del sulfóxido con un derivado 4-amino piridina como se describe previamente en el Esquema 1. El Esquema 6 muestra un proceso preferido para preparar los compuestos de la ¡nvención de la Fórmula I que comprenden hacer reaccionar una 5-aminopiridina con una 2-(4-imino-4H-pirid¡n-1 -il)-6-aril-8-sustituido-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. La reacción se lleva a cabo normalmente mezclando la 4-aminopiridina y el reactivo ¡mino-4H-piridin-1 -ilo en un solvente orgánico no reactivo tal como dimetiisulfóxido o acetonitrilo en la presencia de una base tal como carbonato de potasio y en una temperatura elevada de aproximadamente 80°C a 100°C. La reacción prosigue a través de un intermediario dímero, principalmente 2-{4-[(6-aril-7-oxo-8-sustituido-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-2-il)-imina]-4H-piridin-1 -il}-6-aril-8-sustituido-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. Este intermediario puede aislarse si se desea o usarse in situ, y la reacción adicional con 4-aminopiridina adicional produce ei compuesto de la invención dessadc do !a Fórmula I El material de partida 2-(4-imina-4H-piridin-1 -ilo) se prepara haciendo reaccionar una 2-alqui Isutf ini I piridopirim?dina con una sal de adición del ácido 4-aminopiridina en aproximadamente temperatura ambiente. El proceso más preferido para preparar los compuestos de la invención comprende hacer reaccionar una 4-aminopiridina con una 2-aiqui isulfonil piridopirimidina en ia presencia de un hidruro tal como hidruro de litio o hidruro de sodio, o una amida de metal álcal i tal como amida de l itio. Esta reacción se ilustra en el Esquema 7. La 4-aminopiridina y la base de metal álcali se mezclan generalmente juntas en un solvente orgánico no reactivo tal como tetrahidrofurano y se calienta a aproximadamente 50°C durante 1 a 2 horas. La alquilsulfani l piridopirimidina se agrega entonces, y la mezcla generalmente se calienta a reflujo durante aproximadamente 24 horas. El producto se aisla fáci l mente en rendimiento elevado y excelente pureza. Como se observa anteriormente, los compuestos de la invención son básicos por naturaleza, en virtud del grupo piridilo y otros átomos de nitrógeno en los anil los, así como grupos sustituyentes que es básico, tal como grupos amino por ejemplo. Tales compuestos básicos forman fácilmente sales farmacéuticamente aceptables con cualquier número de ácidos orgánicos e inorgánicos. Las sales normalmente son cristalinas, y generalmente son solubles en agua y son así bien adecuadas para administración oral y similares. Las sales típicas se forman con ácidos inorgánicos tales corno ácido clorh ídrico y sulfónico, así como con ácidos orgánicos tales como ácido acético y ácido metansulfónico.

Formula I Fórmula I Esquema 2 Formula I Esquema 3 Formula I Esquema 4 Formula I Esquema 5 IÍAIH4 comercialmente disponible CE^OH MnO- DBU CH3S JC CH3S •^C xrC NmH°2. + C CO0„2QEt Formula I Esquema 6 Esquema 7 Los compuestos preferidos de la Fórmula I son aquellos en donde R1 y R2 son independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo de Ci-Cß, o alcoxi de Ci-Cß; y de mayor preferencia R1 y R2 son independientemente hidrógeno; R; Rf son independientemente hidrógeno, halógeno, o alquilo de Ci-Cß; y R7 es alquilo de Ci-Cß o cicloalquilo de C3-C6. Para R1 y R2, se prefiere que el halógeno sea cloro, alquilo de Ci-Cß sea metilo o etilo y alcoxi de C -CT es metoxi. Para R5 y R6, se prefiere que el halógeno sea cloro, y alquilo de Ci-Cß sea metilo. Para R7, se prefiere que alquilo de CI-CT sea metilo o etilo, y de mayor preferencia etilo; y cicloalquilo de C3-C6 sea ciclopentilo. Los siguientes ejemplos detallados ilustran además síntesis de los compuestos de esta invención. Los ejemplos son ilustrativos únicamente, y no serán ilustrados como limitantes de la invención en ningún aspecto.

EJEMPLO 1 Etiléster dei ácido 4-Etilamino-2-metiisulfanil-pir?dimidin-5-carboxílico Se equipó un matraz de fondo redondo de 4 cuellos de 22-I, con un agitador mecánico, un embudo de goteo y un termómetro. El matraz se cargó con el 4-cloro-2-(metiltio)-5-pirimidincarboxilato de etilo (1.53 kg, 6.56 moles), trietilamina (2.74 L, 19.7 moles, 3 equivalentes) y 7.5 L de tetrahidrofurano para dar una solución. Se agregó la etilamina acuosa (0.53 L, 6.56 moles, 1 eq) a través del embudo de goteo durante 20 minutos. La temperatura de reacción se elevó a 35°C durante la adición. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción se revisó para terminación utilizando TLC (SiO2; 7:3/heptano:acetato de etilo). El precipitado (clorhidrato de trietilamina) se extrajo por filtración y se lavó 2 veces con tetrahidrofurano, combinando los lavados con el filtrado original. El tetrahidrofurano se despojó a casi sequedad en un evaporador giratorio. El residuo se dividió entre bicarbonato de sodio acuoso saturado (500 ml) y acetato de etilo (1 L). Se observa que existe evolución de gas dióxido de carbono a partir del bicarbonato ambos durante la división y los lavados subsecuentes. Las capas separaron y la capa orgánica se lavó 2 veces con bicarbonato de sodio acuoso saturado y 1 vez con salmuera. La solución se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y despojó para dar el compuesto del título como un sólido blanquecino. Rendimiento: 95%.

EJEMPLO 2 4-Etilamino-2-metilsulfanil-pirimidin-5-il)-metanol Se purgó con argón 3 veces en un reactor incorporado de 50 L, y luego se mantuvo a través de todo el proceso una presión de argón positiva. El reactor se cargó con 4 L de tetrahidrofurano, seguido por hidruro de litio-aluminio (1 M en tetrahidrofurano, 6.77 kg, 7.48 L, 7.48 moles, 1.2 equivalentes). El enfriador/calentador se estableció a 18°C y se activó. El producto del Ejemplo 1, etiléster del ácido 1 ,4-etilamino-2-metilsulfanil-pirimidin-5-carboxílico (1.5 kg, 6.23 moles, 1 equivalente), se disolvió en 11 L de tetrahidrofurano (0.58 M) y se agregó al recipiente de reacción utilizando una bomba durante ~2 horas. Se utilizó el TLC (SiO2; 7:3/heptano:acetato de etilo) para verificar la reacción para la terminación. Cuando la reacción se completó, el enfriador/calentador se estableció a 10°C. El hidruro en exceso se extinguió agregando sucesivamente: 1.25 L de agua, 1.25 L de 15% en peso de hidróxido de sodio, y luego 4.1 L de agua. La primera porción de agua se agregó muy despacio y con agitación vigorosa para controlar el espumado y para mantener ia temperatura bajo 30°C. Como la extinción continua, la velocidad de adición se incrementó gradualmente hasta que la porción final de agua pudo agregarse en una corriente firme. La mezcla de reacción se agitó entonces durante 1 hora antes de filtrarse a través de un tapón de 1 pulgada de celite en un embudo de frita tosco de 2 L. Las sales se lavaron una vez con tetrahidrofurano en el embudo. El tetrahidrofurano se despojó, luego el residuo se hizo azeotrópico 2 veces con porciones de 1 L de tolueno. El sólido resultante se lavó a partir del matraz utilizando heptano, luego se secó en un horno al vacío a 40°C para dar el compuesto del título el cual se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.

EJEMPLO 3 4- Etilamino -2 -meti Isulfanil-p i rimidina-5 -carboxaldehído Se cargó un matraz de fondo redondo de 50 L, equipado con un agitador mecánico con 565 g (2.84 moles) del producto del Ejemplo 2, 4-etilamino-2-metilsulfanil-pirimidin-5-il)-metanol, 1.23 kg (14.2 moles, 5 equivalentes) de óxido de manganeso (IV), y 19 L de cloroformo. La mezcla se agitó 24 horas a temperatura ambiente, luego se revisó por TLC (SiO2; 7:3/heptano:acetato de etilo) para completar la reacción. La reacción se filtró a través de un tapón de celite y el cloroformo se despojó para dar el compuesto del título en 90% de rendimiento.

EJEMPLO 4 6-(3,5-Dimetoxi-feni!)-8-etil-2-meti!sulfani!-8H-pirido[2,3-d] pirimidin -7 -ilideneamina A una solución del producto del Ejemplo 3, 4-etilamino-2-metilsulfanil-pirimidin-5-carboxaldehído (37.0 g, 0.19 moles) y 3,5-dimetoxifenilacetonitrilo (37.0 g, 0.21 moles) en DMF (300 ml) se agregó K2C?3 anhídrido (130 g) en porciones con agitación. La mezcla de reacción se calentó durante la noche a 105-110°C y se filtró en caliente. Las sales insolubles se lavaron con DMF (100 ml); y se agregó agua al filtrado caliente hasta que la solución se volvió simplemente turbia. Los cristales desarrollados hasta la siembra o aliciente (raspando con un rodillo de vidrio). El producto se recolectó por filtración, se lavó con 100 ml. Se lavó con agua DMF/H2O (25:75), y se secó in vacuo para producir 50.5 g (76%) del compuesto del título, pf 93-95°C.

EJEMPLO 5 N-[6-(3,5-Dimetoxi-fenil)-8-etil-2-met¡lsulfanil-8H-pirido[2,3-d]p?rimidin-7-ilidep]-acetamida Se calentaron una mezcla del producto del Ejemplo 4, 6-(3,5-dimetoxi-fenil)-8-etil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-iIidenamina (50.0 g, 0.145 moles), y anhídrido acético (150 ml) con agitación hasta reflujo en el punto en el cual todo el material de partida se disolvió. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 5 minutos, se enfrió a un baño de hielo, y se agregó metiléter de t-butilo. El producto se recolectó por filtración, se lavó con anhídrido acético (50 ml) y éter (100 ml) para producir 43.7 g (78% de rendimiento) del compuesto del título, pf 145-150°C.

EJEMPLO 6 N-[6-{ 3, 5-Di metoxi -feni I )-8-eti I -2-metilsulf ani I -8 H-piridol 2,3-d]pirimidin-7-ona Se calentó una mezcla del producto del Ejemplo 5, N-[6-(3, 5-di metoxi-f enil )-8-eti I -2-metilsulf ani i -8H-pirido[2,3-d]pi rim idi n-7-iliden]-acetamida, (43.5 g, 0.11 moles) y dioxano (200 mL) se calentó con agitación al punto de ebullición en el punto en el cual el sólido se disolvió. En el punto de ebullición se agrego 100 ml de 15% acuoso de H2SO4 y la mezcla se llevó a reflujo durante 2 minutos. La mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo y se agregó agua (~200 mL). Los cristales formados se recolectaron por filtración y lavaron con agua. El sólido se disolvió en CH2CI2 (400 mL), se secó sobre K2CO3, se agregó carbón, y ia mezcla se filtró a través de celite. El filtrado se evaporó bajo presión reducida para dar 33.0 g del compuesto del título, pf 120-122°C.

EJEMPLO 7 6-{3,5-Dimetoxi-feni!)-8-etil-2-metansuifinil-8H-pirido[2,3 d3pirimidin-7-ona Se agregó a una solución del producto del Ejemplo 6, 6-(3,5-dimetoxi-fenil)-8-etil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimid¡n-7-ona (17.0 g, 0.048 moles), en CHCI3 (150 mL) trans-2-fenilsulfonil-3-feniloxaziridina (15.2 g, 0.058 moles; Organic Síntesis 1987; 66:203-210). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. El producto se purificó por filtración a través de un embudo de vidrio sinterizado grande relleno con gel de sílice hidratado con CHCI3. El producto se eluyó fuera del gel de sílice con la siguiente orden de solventes: CHCI3. EtOAc, MeOH/CHCh (1:20) y MeOH/CHCI3 (1:10). El solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se extrajo en EtOAc caliente (40 mL), se filtró, y se concentró a 20 mL bajo presión reducida. El producto se separó y se recolectó por filtración para dar 13.77 g del compuesto del título, pf 114-116°C. Alternativamente, a una solución del producto del Ejemplo 1 ó 1A, 2-metilsulfanil-6-(3,5-dimetoxi-fenil)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (536.2 g, 1.50 moles) en CHCI3 (3.4 L), se agregó fra?s-2-fenilsulfonil-3-feniloxaziridina (431 g, 1.65 moles; Organic Síntesis, 1987; 66:203-210). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó t-butiléter de metilo (MTBE) a la solución hasta formarse un precipitado (~7 L). El sólido se recolectó por filtración, se lavó una vez con MTBE y se secó en un horno al vacío a temperatura ambiente. El NMR de protón (DMSO) es consistente con la estructura.

EJEMPLO 8 6-(3,5-Dimetoxi-fenU)-8-etii-2-(piridin-4-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona Una mezcla del producto del Ejemplo 7, 6-(3,5-dimetoxi-fenil)-8-etil-2-metansulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (0.280 g, 10.75 mmoles), y 4-aminopiridina (0.5 g, 15.3 mmoles) se colocó en un matraz de fondo redondo pequeño y se sumergió en un baño de aceite a 180°C durante 5 minutos con agitación. La mezcla de reacción se enfrió a 20°C y la mezcla se trituró con agua (10 mL). El producto insoluble se filtró y se secó en aire en el filtro. El producto sin purificar se purificó por cromatografía en columna eluyendo con un gradiente de solvente empezando con cloroformo puro y finalizando con metanol/cioroformo (1:20). El producto se cristalizó suspendiéndolo en metanoi (10 mL) y agregando cloruro de metileno (30 mL) hasta resultar una solución. La solución se concentró en un baño de vapor a aproximadamente 8 mL en volumen. El producto precipitado se filtró y se lavó con metanol (0.5 mL) para producir 112 mg del compuesto del título, pf 305-307°C.

Espectro de masa (APCI) (m + )/z 403.9 EJEMPLO 9 6-(3,5-Di metoxi -fenil)-8-eti I-2-(2-metil-piridin-4-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona A una solución -78°C de 2.6 g (24.1 mmoles) de 4-amino-2-metilpiridina en 80 ml de tetrahidrofurano recientemente destilado se agregó 14.0 mL (22.5 mmoles) de n-butil-litio durante 5 minutos. La mezcla de reacción se agitó durante otros 15 minutos, tiempo en el cual se agregó 3.0 g (8.0 mmoles) de 6-(3,5-dimetoxi-fenil)-8-etil-2-met¡lsulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. La mezcla se dejo calentar a -10°C durante varias horas y se almacenó a -10°C durante ia noche. Se realizó una extracción acuosa vertiendo la mezcla de reacción en un embudo separador que contiene acetato de etilo, agua, y 3.75 mL de HCl 6N. La fase orgánica se lavó dos veces con agua y una vez con una solución saturada de cloruro de sodio, se secó sobre sulfato de magnesio. se filtró y se concentró. El residuo se trituró bajo 5:50:50 de metapol/acetato de etilo/diclorometano, luego 1:9 de metanol/cloroformo y se filtró para dar 0.79 g (23%) de un polvo amarillo pálido del compuesto del título, pf >300°C. Espectro de masa (Cl) (m + 1)/z 418. Análisis calculado para C23H23N5?3'0.25 H2O: C, 65.47; H, 5.61; N, 16.60. Encontrado: el C, 65.14; H, 5.49; N, 16.28.

EJEMPLO 10 6-(3,5-Di metoxi -fenil )-2-(2,6-dimetil-piridin-4-ilamino)-8-etil -8 H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona A una solución -78°C de 3.9 g (32.1 mmoles) de 4-amino-2,6-dimetilpiridina en 120 ml de THF se agregó en gotas 17.5 mL (30.5 mmoles) de n-butil-litio 1.6 M en hexanos. La solución de reacción se agitó durante 15 minutos tiempo en el cual se agregó en pequeñas porciones como un sólido 3.0 g (8.0 mmoies) del producto del Ejemplo 7, 6-(3,5-dimetoxi-fenil)-8-etil-2-metansulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. La mezcla de reacción se dejo calentar lentamente a -10°C luego permaneció a -10°C durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en acetato de etiio/agua/5 mL de 6N HCl. La mezcla se agitó y se separó. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio, dos veces con agua, y salmuera, luego se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y concentró a un residuo sólido. El residuo se trituró bajo acetato de etilo/diclorometano. El material resultante se purificó además por cromatografía en columna eluyendo con 5:50:50 de metanol/acetato de etilo/diclorometano para dar un material cristalino naranja. Este material se disolvió en 150 mL de 1:9 de metanol caliente/cloroformo y se filtró. La adición de 60 mL de hexano resultó en la precipitación de 0.99 g (28%) del compuesto del título como un sólido amarillo páiido. Análisis calculado para C24H25N5O3'0.25 H2O: C, 66.12; H, 5.90; N, 16.06. Encontrado: C, 66.14; H 5.90; N, 15.92.

EJEMPLO 11 6 -(3, 5 -Di metoxi -feni I )-2-(2-cloro-p iridin -4-i la mi no) -8 -eti I -8 H -pirido[2,3-dJpirimidin-7-ona A una solución -78°C de 4.1 g (32.1 mmoles) de 4-amino-2-cloropiridina en 120 mL de THF se agregó en gotas 17.5 mL (30.5 mmoles) de 1.6 M de n-butil-litio en hexanos. La solución de reacción se agitó durante 15 minutos tiempo en el cual se agregó en pequeñas porciones como un sólido 3.0 g (8.0 mmoles) del producto del Ejemplo 7, 6-(3,5-dimetoxi-fenil)-8-etil-2-metansulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. La mezcla de reacción se permitió calentar lentamente a -10°C, luego permaneció a -10°C durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en acetato de etilo/agua/5 mL de 6N HCl. La mezcla se agitó y se separó. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio, dos veces con agua, y salmuera, luego se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró a un volumen de aproximadamente 200 mL. La suspensión se agitó durante la noche y se filtró para dar un sólido amarillo. El sólido se trituró bajo 20 mL de 1:9 de metanol/cloroformo, se filtró y se secó par? dar 1.89 g (54%) de! compuesto del título. Análisis calculado para C22H2oN5O3CI-0.03 C4H8O2 .03 CHCI3 0.03 CH3OH: C, 59.86; H, 4.62; N, 15.74. Encontrado: C, 59.83; H, 4.43; N, 15.69.

EJEMPLO 12 6-(3,5-Di metoxi -fenil )-2-{2, 6-di metoxi -piridin -4-i I ami no)-8-eti I -8H-pirido[2,3.d]pipmidin-7-ona A una solución -78°C de 3.0 g (19.6 mmoles) de 4-amino-2,6-dimetoxipiridina en 75 mL de THF se agregó en gotas 10.6 mL (17.0 mmoles) de 16 M n-butil-litio en hexanos. La solución de reacción se agitó durante 15 minutos tiempo en el cual se agregó en pequeñas porciones como un sólido 1.8 g (4.9 mmoles) de 6-(3,5-dimetoxi-fenil)-8-etil-2-metilsulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. La mezcla de reacción se permitió calentar lentamente a -10°C, luego permaneció a -10°C durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en acetato de etilo/agua/3.5 mL de 6N HCl. La mezcla se agitó y se separó. La fase orgánica se lavó con solución saturada de bicarbonato de sodio, dos veces con agua, y salmuera, luego se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró a un residuo amarillo sólido. El sólido se trituró bajo 25 mL de 1:15:10 de metanoi/cloroformo/acetato de etilo y se filtró para dar un sólido amarillo que se cristalizó a partir de 300 mL de acetonitrilo para dar 1.15 g (51%) del compuesto del título.

Análisis calculado para C24H25N5O5: C, 62.19; H, 5.44; N, 15.11. Encontrado: C, 62.10; H, 5.35; N, 15.10.

EJEMPLO 13 Clorhidrato de 2-(Piridin-4-ilamino)-6-(3,5-dimetoxifen¡l)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]-pirimidin-7-ona (por Esquema 7) A una solución de 88 g (0.93 moles) de 4-aminopiridina en 1 L de tetrahidrofurano se agregó 21.2 g (2.67 moles) de hidruro de litio. La mezcla de reacción se calentó a 50°C durante 1 hora. A la mezcla de reacción agitada se agregó una solución de 317 g (0.89 moles) de 2-(metilsulfanil)-6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona en 1.8 L de tetrahidrofurano. La solución de reacción se calentó a reflujo durante 24 horas, y luego se enfrió a 50°C. La mezcla de reacción se diluyó por la adición lenta de una mezcla de 500 mL de agua y 1 L de ácido clorhídrico 6N. La mezcla de reacción se enfrió a 24°C y se agitó durante 16 horas. La mezcla de reacción se diluyó además por la adición de 250 ml de acetonitrilo y 200 mL de agua, y la agitación continuó durante 2 horas adicionales. La mezcla se filtró entonces, y la torta de futro se secó a 45°C al vacío durante 12 horas para proporcionar 360 g (92%) de clorhidrato de 2-(piridin-4-ilamino)-6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, pf 295-300°C (descomposición). El HPLC estabilizó la pureza a 98%. Espectro de masa (APCI) 439.89 m/z.

Siguiendo los procedimientos generales descritos anteriormente, se prepara los siguientes compuestos adicionales de la invención: EJEMPLO 14 6-{2-Cloro-3,5-dimetoxi -fenil )-2-(piridi n-4-ilam¡ no)-8-etii-8H -pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona; pf 26-272°C.

EJEMPLO 15 6-{2,6-Dicloro-3,5-di etoxi-fenil)-2-(piridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pipdo[2,3-d]pirimidin-7-ona; pf 295.5-297.0°C EJEMPLO 16 6-(3, 5- Di metoxifenil ) -2 -(pir i di n-4-i I ami no )-8. ciclopentil -8 H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona; pf 283-285°C. EJEMPLO 17 6-{3,5-Di metoxi -feni l)-2-(piridin-4-ilamino)-8-metiI -8 H-pirido[2J3-d]pirimidin-7-ona; pf 245-247°C.

EJEMPLO 18 6-{3,5-Di metoxi -feni I )2-[2-(4-meti!piperizi ni I )piridin-4-i lamino] 8-etii-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona EJEMPLO 19 6-{3,5-Dimetoxi-fenil)-2-[2-(2-dimetilaminoetoxi)-piridin-4-ilamino]-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidm-7-ona EJEMPLO 20 6-{3,5-Dimetoxi-fenil)-2-[2-(2-dietiIaminoetiIamino)-piridin-4-iIamino]-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona Como se observó anteriormente, los compuestos de la Fórmula I son. útiles para tratar enfermedades o estados de enfermedad tales como cáncer y otras enfermedades proliferativas que ¡ncluyen, pero no se limitan a, psoriasis, restenosis y aterosclerosis. Los compuestos de la invención son especialmente útiles para tratar restenosis siguiendo angioplastía de globo de arterias ocluidas. La restenosis ocurre en aproximadamente 40% de la angioplastía subyacente individual de arteria calcificada y es un gran problema asociado con esta forma de tratamiento de pacientes que sufren de tal condición cardiaca. El término "tratar" para propósitos de la presente invención: se refiere a profilaxis o prevención, disminución o eliminación de una condición nombrada una vez que la condición ha sido establecida. El término "mamífero" para propósitos de la presente invención incluye ser humanos, vacas, perros, gatos, cabras, ovejas y puercos. Preferiblemente, el mamífero es un ser humano.

Los compuestos de la presente ¡nvención pueden formularse y administrarse en una amplia variedad de formas de dosis oral y parenteral , incluyendo administración transdérmica y rectal. Se reconocerá por aquellos expertos en la técnica que ias siguientes formas de dosis pueden comprenderse como el componente activo, ya sea un compuesto de la Fórmula I o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable correspondiente de un compuesto de la Fórmula I. Una modalidad adicional de esta invención es una formulación farmacéutica o composición que comprende un compuesto de la Fórmula I junto con un portador, diluyente, o excipiente del mismo, tal como un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. Para preparar las composiciones farmacéuticas con los compuestos de la presente invención, los portadores farmacéuticamente aceptables, pueden ser ya sea sólidos o líquidos. Las preparaciones de forma sólida incluyen polvos, tabletas, pildoras, cápsulas, obleas, supositorios, y granulos dispersables. Un portador sólido puede ser una o más sustar.cicis, que pueden ací ar también como diluyentes, agentes saborizantes, aglutinantes, conservadores, agentes desintegrantes de tableta, o un material encapsulante. En polvos, el portador es un sólido finamente dividido tal como talco o almidón, el cual está en una mezcla con el componente activo finamente dividido.

En tabletas, el componente activo se mezcla con el portador que tiene las propiedades aglutinantes necesarias en proporciones adecuadas y compactadas en la forma y tamaño deseado. Las formulaciones o composiciones de esta invención preferiblemente contienen de aproximadamente 5% a aproximadamente 70% o más del compuesto activo. Los portadores adecuados incluyen carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, azúcar, lactosa, pectina, dextrina, almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, una cera de fusión baja, manteca de cacao, y similares. Una forma preferida para uso oral son cápsulas, que incluyen formulación del compuesto activo con material encapsulante como un portador para proporcionar una cápsula en la cual el componente activo con o sin otros portadores, se rodea por un portador, que está a su vez en asociación con él. De manera similar, las obleas y grageas se incluyen. Las tabletas, polvos, cápsulas, pildoras, obleas y grageas pueden utilizarse como formas de dosis sólidas adecuadas para administración oral. Para preparar los supositorios, una cera de fusión baja, tal como una mezcla de glicéridos de ácido graso o manteca de cacao, se funde primero, y el componente se dispersa homogéneamente en la presente, como por agitación. La mezcla homogénea fundida se vierte entonces en moldes de tamaño conveniente, permitidos para enfriar, y por lo tanto solidificar.

Las preparaciones de forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones, por ejemplo, soluciones de agua o propilenglicol acuoso. Para inyección parenteral, pueden formularse preparaciones líquidas en solución de polietilenglicoi acuoso, solución salina isotónica, 5% de glucosa acuosa, y similares. Las soluciones acuosas adecuadas para uso oral pueden prepararse disolviendo el componente activo en agua y agregando colorantes adecuados, sabores, estabilizantes, y agentes espesantes como se desee. Las suspensiones acuosas adecuadas para uso oral pueden hacerse dispersando el componente activo finamente dividido en agua con un material viscoso, tal como gomas naturales o sintéticas, resinas, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y otros agentes de suspensión bien conocidos. También se incluyen preparaciones de forma sólida, que se pretenden para convertirse, cortamente antes del uso a preparaciones de forma líquida para administración oral. Tales formas líquidas incluyen so'uciones suspensiones y emulsiones. Estas preparaciones pueden contener, además del componente activo, colorantes, sabores, estabilizadores, reguladores, edulcorantes artificiales y naturales, dispersantes, espesantes, agentes solubilizantes, y similares. Las ceras, polímeros, micropartículas y similares pueden utilizarse para preparar formas de dosis de liberación sostenida. También, las bombas osmóticas pueden emplearse para su mi n istrar el compuesto activo uniformemente durante un periodo prolongado. Las preparaciones farmacéuticas de la invención están preferiblemente en forma de unidad de dosis. En tal forma, la preparación se subdivide en unidad de dosis conteniendo cantidades apropiadas del componente activo. La forma de unidad de dosis puede ser una preparación empacada, el paquete contiene cantidades discretas de preparación, tal como tabletas empacadas, cápsulas, y polvos en frascos o ámpulas. También, la forma de unidad de dosis puede ser una cápsula, tableta, oblea o gragea por sí misma, o puede emplear el número apropiado de cualquiera de estos en forma empacada. Una "cantidad efectiva" es una cantidad de un compuesto de la presente invención que cuando se adm inistra a un paciente trata un estado de enfermedad, tal como restenosis, cáncer, aterosclerosis o angiogénesis. Una "cantidad ang iogénicamente efectiva" es una cantidad de un com puesto de la presente invención que cuando se administra a un paciente trata angiogénesis. La dosis terapéuticamente efectiva o cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I generalmente será de 1 mg a aproximadamente 100 mg/kg del peso corporal por día. Dosis para adulto normales será aproxi madamente 50 a aproxi madamente 800 mg por d ía. La cantidad del componente activo en una preparación de unidad de dosis puede variarse o ajustarse de aproximadamente 0.1 mg a aproximadamente 500 mg, preferiblemente aproximadamente 0.5 mg a 100 mg de acuerdo a la aplicación particular y la potencia del componente activo. La composición puede, si se desea, también contener otros agentes terapéuticos compatibles. Un sujeto con necesidad del tratamiento con un compuesto de la Fórmula I se le administrará una dosis de aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg por día, ya sea única o en dosis múltiple durante un periodo de 24 horas.

EJEMPLO 21 Una formulación farmacéutica en la forma de cápsulas de gelatina dura para administración oral se prepara utilizando los siguientes ingredientes: Cantidad (mg/cápsula) Compuesto activo 250 Polvo de almidón 200 Estearato de magnesio 10 Total 460 mg Los ingredientes anteriores se mezclan y rellenan en cápsulas de gelatina dura en cantidades de 460 mg. Un ingrediente activo típico es 6-(3,5-dimetoxifenil)-2-(2,6-dimetiipiridin-4-ilamino)-8-ciclopropil-8H-pirido[2,3-d]p¡rimid¡n-7-ona. La composición se administra de 2 a 4 veces un día para tratamiento de restenosis post-quirúrgica.

EJEMPLO 22 Formulación de Suspensión Oral Ingrediente Cantidad 6-(3,5-Dimetoxi-fenil)-2-(2,6- 500 mg dimetil-p¡ridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona Solución de sorbitoi (70% N.F.) 40 mL Benzoato de sodio 150 mg Sacarina 10 mg Sabor de cereza 50 mg Agua destilada es. agreg. 100 mL La solución de sorbitol se agrega a 40 mL de agua destilada, y la piridopirimidina se suspende en la misma. La sacarina, benzoato de sodio, y saborizante se agregan y disuelven. El volumen se ajusta a 100 mL con agua destilada. Cada mililitro de jarabe contiene 5 mg del ingrediente activo.

EJEMPLO ?3 Tabletas cada una conteniendo 60 mg del ingrediente activo Ingrediente activo 60 mg Almidón 45 mg Celulosa microcristalina 35 mg Polivinilpirrolidona (como 10% 4 mg de solución en agua) Almidón de carboxi metilo sódico 4.5 mg Estearato de magnesio 0.5 mg Talco 1 .0 mg Total 150 mg Los ingredientes activos, almidón y celulosa, se pasan a través de un tamiz U. S. de malla No. 45 y se mezcla completamente. La solución de polivinllpirrolidona se mezcla con los polvos resultantes y luego se pasa a través de un tamiz U. S. de malla No. 14. Los granulos se secan de 50°C a 60°C y se pasan a través de un tamiz U. S. de malla No. 18. El almidón de carboximetilo sódico, estearato de magnesio, y talco se pasan previamente a través de un tamiz U. S. de malla No. 60, se agregan entonces a los granulos, los cuales después de mezclarse se comprimen en una máquina de tableta para producir tabletas cada una pesando 150 mg. Un ingrediente activo típico utilizado en la preparación anterior es el compuesto del Ejemplo 12.

EJ EM PLO 24 Una composición parenteral adecuada para la administración por inyección se prepara disolviendo 1 00 mg de 2- (piridin-4-i lamino)-6-(3, 5-di isopropoxifenil)-8-isobutil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona en 250 mL de 0.9% de solución de cloruro de sodio acuoso y se ajusta al pH de la solución a aproximadamente 7.0. Esta formulación se adapta bien para el tratamiento de cáncer de mama.

EJEMPLO 25 Preparación para Supositorios Una mezcla de 500 mg de 2-(piridin-4-ilamino)-6-(3,5-dimetoxifenil)-pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona y 1500 mg de aceite de teobroma se mezclan a uniformidad a 60°C. La mezcla se enfría a 24°C en moldes ahusados. Cada supositorio pesará aproximadamente 2 g y pueden administrarse de 1 a 2 veces cada día para el tratamiento de infecciones bacteriales.

EJEMPLO 26 Preparación de Liberación Lenta Quinientos miligramos de clorhidrato de 6-(3,5-dietoxifenil)-2-(2,6-dietilpiridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimid¡n-7-ona se colocó en una tableta de bomba osmótica y se administró oralmente para tratamiento y prevención de restenosis. Los compuestos de la ¡nvención han sido evaluados en los análisis biológicos in vitro descritos en las Patentes Norteamericanas No. 5,733,914. Han sido comparados con compuestos representativos a partir de la patente 5,733,914 y ha exhibido mayor selectividad para inhibir VEGF y FGF, sin inhibir la familia Src cinasas c-Src y Lck. Por ejemplo, los datos en la Tabla 1 siguiente muestran una comparación del Ejemplo 8 de la presente invención con dos compuestos adoptados por 5,733, 914. El Compuesto de Referencia A tiene un grupo 2,6-diclorofenilo en la posición 6. El Compuesto de Referencia B tiene un grupo 3, 5-dimetoxifenilo en la posición 6 y un fenilamino sustituido en la posición 2. El compuesto de la invención del Ejemplo 8 tiene el 3,5-dimetoxifenilo requerido en la posición 6 y el (4-piridil)amino requerido en la posición 2. Las estructuras se muestran en la Tabla 1 , junto con sus respectivas actividades inhibidoras contra varias tirosina cinasas, cuando se evalúan en los modelos descritos en 5,733, 914. Análisis de Inhibición de Cinasa TABLA 1 Estructuras de los Compuestos de Referencia A y B, y del Compuesto de la Invención del Ejemplo 8, y Actividades de Inhibición de Cinasa Comparativas Ejemplo 8 Datos de Inhibición de Cinasa G r (VEGF-2) PDGF Lck c-Src Compuesto (IC50 = µ ) so-µM) aCso«µM> (Ki»µM) Cso-µM) Referencia A 0.004 0.009 0085 QíH3 0,003 Referencia B 0.002 0.004 0.46 0.06 1.34 Ejemplo 8 0.009 0.020 2M 1.79 36.5 Los datos de inhibición de cinasa en la Tabla 1 establecen que el compuesto del Ejemplo 8 es más selectivo en su actividad para VEGFR-2 y FGFR-1 (valores nM IC50) comparado a PDGFR, Lck, y c-Src (valores µM IC50) que los Compuestos d referencia A y B. Los compuestos de referencia inhibe potencialmente todas las cinco tirosina cinasas a un grado simila el cual puede resultar en una incidencia incrementada de efecto laterales indeseados de terapia del compuesto más selectivo. E perfil de selectividad de cinasa preferida del compuesto en e Ejemplo 8 se comparte por otros compuestos representativos de l invención mostrados en la Tabla 2. La actividad de inhibición d los compuestos en los Ejemplos 8, 9, 10 1 1 y 12 y Compuestos d Referencia A y B se evaluaron utilizando el Ensayo d Fluoroinmuno de Lantánido Mejorado Disociado (DELFIA) (Fran Loganzo and Carolyn Hardi. Un ensayo fluorométrico de tiemp resuelto, sensible para la detección de inhibidores de fosfotirosin cinasas. American Biotechnology Laboratory, December 1998). La placas DELFIA (EG&G allac, Gaithersburg, MD) se recubriero durante la noche con Poly Glu Tyr (4: 1 ) (Sigma, St. Louis, MO) temperatura ambiente, se lavó (reactivo lavado DELFIA, EG& Wallac), y se detuvo con 1 µL de dilución de inhibidor o contro portador DMSO por pozo. En aigunos casos, la cinasa s autofosforiló antes del análisis incubando 45 minutos a 4°C en l presencia de 4 mM de ATP y 25 mM de MgCI2- Una reacción d ensayo de cinasa típico de 100 µL contiene 20 mM de Tris (p 7.5), 20 mM de MgCl2) 50 mM de NaCl, 5 mM de DTT, e inhibidore de proteasa (tabletas cóctel de inhibidor de proteasa libre de Min EDTA, Booehringer Mannheim , Indianápolis, IN), 40 µM de ATP , una concentración apropiada del inhibidor. La reacción se permitió continuar durante 30 minutos a temperatura ambiente. Las placas se lavaron, bloqueador 30 minutos a temperatura ambiente (0.5% de albúmina de suero bovino en Regulador de Ensayo DELFIA, EG&G Wallac), y se lavaron. Cien microlitros de anticuerpo de antifosfotirosina conjugada con europio en regulador de ensayo DELFIA se agregó a cada pozo. Las placas se incubaron durante 1 hora y se decantaron. Cien microlitros de solución mejorada DELFIA (EG&G Wallac) se agregó y la fluorescencia resuelta a la vez de las reacciones determinadas utilizando un contador múltiple VICTOR2 1420 (EG&G Wallac). Los compuestos se probaron a partir de 10 a 0.0001 µM. c-Src (Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY) se utilizó en 3 unidad por reacción. Los dominios de cinasa a partir de FGFR-1 , VEGFR2, Lck y PDGF se purificaron a partir de los sistemas de expresión de vectores baculovirales y se utilizaron en los ensayos a 20 nM.

TABLA 2 Patos de Inhibición de Cínasa Ejemplo FOPr (VEC&-2) EDGF Lck c-Src No. sC5o µM) QCso µM) 8 0.009 0.020 2 4 1.79 36.5 9 10 0.0008 0.001 0.74 >4 11 0.0002 0.003 5 2.77 >4 12 Ensayos de Proliferación Celular Se sembraron células endoteliales de vena umbilical humana (las HUVEC) (Clonetics, Palo Alto, CA) en 2000 células por pozo en un medio de crecimiento que contiene 2% de suero (EGM, Clonetics) y se permitieron unirse durante la noche (37°C, 5% de C02, 100% de humedad). Se sembraron células de glioma de rata C6 (ATCC) en 600 células por pozo e incubaron en un medio F10 (GIBCO, Gaithersburg, MD) suplementado con 15% de suero de caballo, 2.5% de suero de bovino fetal, y 1 mM de glutamina. Se sembraron células de ovario humano A90 (Dr. Kent Crickard, SUNY/AB Medical School) en 600 células por pozo en RPMI1640 (GIBCO) más 10% de suero de bovino fetal. Las placas se incubaron durante la noche (37°C, 5% de CO2, 100% de humedad) para permitir a las células unirse. Las diluciones del compuesto de prueba se agregaron a los pozos apropiados, y ia incubación se continuó durante 4 días adicionales. Las monocapas se fijaron en 10% de ácido tricloroacético (30 minutos a 4°C), se lavaron con agua destilada, y se tiñeron con Sulforodamina B (0075% en 1% de ácido acético) (Sigma). Las placas se lavaron en 1% de ácido acético, y el tinte de unión se solubilizó en 100 µL de base Tris desregulada. La absorbancia se midió a 540 nm utilizando una longitud de onda de filtro de referencia de 630 nm. La potencia inhibidora (IC50) contra la proliferación celular se determinó, y la selectividad de célula endotelial se evaluó comparando la inhibición de la proliferación HUVEC a la proliferación de célula de tumor A90 y C6 (Tabla 3). Los compuestos en los Ejemplos 8, 9, 10, 11 y 12 son inhibidores selectivos de proliferación celular endotelial estimulada con suero en el cultivo celular.

TABLA 3 Inhibición de Proliferación Celular HUVEC Estimulada con Suero Ejemplo HUVEC A90 C6 (Suero) ac50 = µ ) 8 0.009 2.92 >25 9 10 11 0.013 25.00 9.68 12 Estudios de Permeabilidad Se condujeron estudios de transporte celular con crecimiento de células Caco-2 en Snapwells™ entre 22 y 28 días pos-sembrado. Normalmente, el regulador 10 mM MES (pH 6.5) con 5 mM de KCl, 135 mM de NaCI, y 1.8 mM de CaCI2 se utilizó para ei lado apical y 10 mM de MOPS (pH 7.4) con 5 M de KCl, 132 mM de NaCI, y 1.8 mM de CaC!2 con 5 mM de D-glucosa se utilizó para el lado basolateral. En el día del experimento, los medios de crecimiento se aspiraron, y las monocapas de célula se pre-equilibraron con reguladores apropiados a 37°C, y mediciones TEER se realizaron para confirmar la integridad de las monocapas. Las mediciones de flujo transepitelial se hicieron montando las monocapas de célula en un sistema de cámara de difusión lado a lado (Precisión Instrument Design, Tahoe City, California). La temperatura se mantuvo a 37°C con una cubierta de agua circulante. Las soluciones se mezclaron con circulación elevada de gas con 95% de oxígeno/5% de dióxido de carbono. Las soluciones donadoras se mezclaron con compuestos de prueba, manitol 14C (marcador de derrame) y metropolol 3H (compuesto de referencia), y se agregó a la cámara apical. Las muestras donadoras y receptoras se recolectaron en intervalos de tiempo seleccionados por hasta 3 horas. El manitol radiomarcado y metoprolol se analizaron utilizando conteo por centelleo (Top Count, Packard Instruments, Downers Grove, Illinois). Los compuestos de prueba se analizaron utilizando métodos LC-MS/MS. Los coeficientes de permeabilidad aparentes se calcularon utilizando la siguiente ecuación: _^ Papp = (V dC/dt)/(A-C0) en donde V = volumen de la solución receptora en mL; A = área superficial de la monocapa en cm2; Co = concentración donadora inicial en mM; y dC/dt = cambio de la concentración de fármaco en la cámara receptora durante el tiempo.

Los compuestos con permeabilidad similar o mayor que metoprolol (-30-10-6 cm/segundos; 90% de absorción) se suponen tener el potencial para absorción esencialmente completa.

Estudios de Estabilidad Metabólica Se incubaron individualmente los compuestos (5 µM en DMSO) con fracciones S9 de hígado de ser humano y ratón en 50 mM de regulador KHPO4 a 37°C en la presencia de 1.0 mM de NADPH y cofactores adicionales. A 0, 10, 20 y 40 minutos, se removieron alícuotas de 100 µL y se agregaron a 300 µL de acetonitrilo. Las curvas estándares se prepararon en una manera similar con cada compuesto. Las muestras se analizaron para concentración paterna por LC-MS/MS. Se determinó la vida media metabólica in vitro a partir de las gráficas de tiempo de concentración utilizando WinNonlin. Estos datos in vitro representan la velocidad del metabolismo oxidativo, hidrolítico y conjugativo. Los compuestos que demuestran vida media por arriba de 50 minutos se consideran tener el potencial para ser metsbólicamente estables in vivo Los resultados de la permeabilidad anterior y estudios metabólicos para los Compuestos de Referencia A y B, y para el compuesto de la ¡nvención del Ejemplo 8, se presentan posteriormente en la Tabla 4.

TABLA 4 Estabilidad Metabólica y Transporte In Vitro No. Par e-Davis MS9 HS9 A to B min müi lO-^cm/s Referencia A 14 46 37.2 Referencia B 10 22 20.1 Ejemplo 8 >200 >200 398 Actividad Antitu mor I n Vivo La eficacia anti-cáncer del compuesto del Ejemplo 8 se evaluó utilizando un modelo de tumor adenosarcoma mamario murino, M 16/C. Este tumor altamente vascularizado es muy agresivo con un doble tiempo de 1 .5 días. Los fragmentos de tumor se implantaron por fragmento trocar en la axila derecha del ratón C3H en el Día 0. La eficacia del tratamiento se evaluó en un modelo de etapa avanzada (tratam iento de compuesto de prueba para los nueve días consecutivos después de que los tumores alcanzaron 100 mg). El compuesto en el Ejemplo 8 se dosificó una vez al día durante el periodo de tratamiento por alimentación oral en 0.05 M de regu¡3dcr de lactato de sodio, pH 4. Los animales se permitieron continuar fuera de la terapia hasta que los tumores alcanzaron el tamaño evaluado (750 mg). Los pesos de los animales se determ inaron a través de todo el estudio para proporcionar una estimación de la toxicidad del compuesto de prueba. Una pérdida de peso media > 1 0% (3-4 g) para cualquier grupo de tratamiento es una indicación de toxicidad huésped. La actividad anticáncer se evaluó uti lizando dos métodos. El primero es %T/C en donde T = masa mediana de tumores tratados 3 d ías después dei final de la terapia, y C = masa mediana del grupo control en ese m ismo punto de tiempo. El grado más elevado de actividad antitumor utilizando esta evaluación ocurre cuando T = 0, y %T/C = 0%. Un valor menor que 40% describe actividad anticáncer significativa. El segundo método utiliza retraso de crecimiento tumoral (T-C), en donde T = los días para el tumor tratado mediano para alcanzar el tamaño evaluado (750 mg) y C = días para tumores control para alcanzar ese mismo tamaño. Como se muestra en la Tabla 5, el compuesto del Ejemplo 8 fue bien tolerado y demostró actividad anticáncer significativa en todas las cuatro dosis probadas (%T/C) . El retraso de crecimiento tumoral (T-C) fue mayor que la duración de terapia para los niveles de dosis de 40 y 20 mg/kg, y tratamiento en aquellas dosis de regresiones completas producidas (regresión de tumores después del nivel de palpación) en este modelo. TABLA 5 Efectividad !n Vivo del Ejemplo 8 contra Adenocarcinoma Mamario M16/C Compuesto Dosis Horario de Cambio T/C T-C CRs** U D6 (mg/kg) tratamiento de peso (%)*> (Dias)C corporal (g)» Ejemplo 8 40 D7-15Í -1.5 0 12.4 6/6 0/6 20 -0.2 0 10.7 4/6 0/6 10 -0.5 15 7.9 0/6 5 + 39 4.3 0/6 Tiempo mediano/medio para tumores de control para alcanzar 750 mg: 1 0.6/1 0.7 d ías. a Pérdida de peso inducida por tratamiento máxi mo. Una "+" indica una ganancia de peso neto b Masa de tumor tratada mediana/masa de tumor de control mediana x 100% c La diferencia, en d ías para los tumores tratados y control medianos para alcanzar 750 mg, respectivamente d Regresión completa, regresión de un tumor establecido a un tamaño no palpable e NSD, muertes no específicas/totales en el grupo de tratamiento f Masa de tumor en el primer Rx: 1 00 mg

Claims (22)

1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de la Fórmula I caracterizado porque: R1, R2, R5, y R6 son independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo de C?-C6, alcoxi de C1-C6, tio, tioalquilo, hidroxi, alcanoilo de C?-C6, -CN, -NO2, alcanoiloxi de C?-C6, COOR8, -CF3, NR8R9, o (X)m-(CH2)n-NR8R9 dónde R8 y R9 son independientemente hidrógeno, alquilo de Ci-Cß, alcanoilo de Ci-Cß, o R8 y R9 tomado juntos con el nitrógeno los cuales pueden estar completamente unidos aun anillo teniendo 3 a 7 átomos de carbono y conteniendo opcionalmente 1, 2, o 3 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste de nitrógeno, nitrógeno sustituido, oxígeno, y sulfuro X es NH o O; m es 0 ó 1 ; n es 0 a 6; con tal de que m y n no sean ambos 0,
2. R3 y R44 son independientemente alquilo de d-Cß y halo sustituido alquilo de Ci-Ce; R7 es hidrógeno, alquilo de alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, o cicloalquilo de C3-C6; y las sales farmacéuticamente aceptables y solventes del mismo. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 y R2 son independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo de Ci-Ce, o alcoxi de Ci-Ce.
3. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el halógeno es cloro.
4. 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el alquilo de Ci-Cß es metilo o etilo.
5. 5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el alcoxi de d-Cß es metoxi.
6. 6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 y R2 son hidrógeno.
7. 7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R5 y R6 son independientemente hidrógeno, halógeno, o alquilo de d-Cß-
8. 8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el halógeno es cloro.
9. 9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el alquilo de Ci-Cß es metilo.
10. 10. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R7 es alquilo de Ci-Cß o cicloalquilo de
11. 11. El compuesto de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el alquilo de C?-C6 es etilo.
12. 12. El compuesto de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el cicloalquilo de C3-C6 es ciclopentilo.
13. 13. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1. caracterizado porque R1, R2, R5 y R6 todos son hidrógeno.
14. 14. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R3 y R4 son metilo.
15. 15. Ei compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R7 es alquilo de C?-Cß.
16. 16. El compuesto 6-(3,5-dimetoxi-fenil)-8-etil-2-(piridin-4-¡lamino)-8H-pirido[2,3-d]piridim¡n-7-ona.
17. 17. El compuesto está caracterizado porque es: 6-(3,5-Dimetoxi-fenil)-2-(2-metil-piridin-4-ilamino)-8-etil- 8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona; 6-(3.5-D?metoxi-fenii)-2-(2,6-dimetil-piridin-4-ilam?no)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]p¡rimid¡n-7-ona; 6-(3,5-Dimetoxi-fenil)-2-(2-cloro-piridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2.3-d]pirimidin-7-ona; 6-(3,5-Dimetoxi-fenilo)-2-(2,6-dimetoxi-piridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2.3-d]pirimidin-7-ona; 6-(3,5-Dimetox¡-fenil)-2-(piridin-4-¡lamino)-8-met¡l-8H-pirido[2,3-d]pirim¡din-7-ona; 6-(2-Cloro-3,5-dimetoxi-fenii)-2-(piridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona; 6-(2,6-Dicloro-3,5-dimetoxi-fenil)-2-(piridin-4-¡lamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona; 6-(3,5-D¡metoxi-fenil)-2-(piridin-4-ilamino)-8-ciclopentil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona; 6-(3,5-Dimetoxi-fenil)-2-[2-(4-metilpiperizinil)piridin-4-ilamino]-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona; 6-(3,5-Dimetoxi-fenil)-2-[2-(2-dimetilaminoetoxi)-piridin-4-ilamino]-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona; y 6-(3,5-Dimetoxi-fenil)-2-[2-(2-dietilaminoetilamino)-piridin-4-ilamino]-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona.
18. 18. La composición farmacéutica caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 junto con un excipiente, portador o diluyente de la misma.
19. 19. La composición farmacéutica, caracterizada porque comprendo 6-(3,5-dimetoxi-feni¡)- -0til-?-(piridin-4-ilflmino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona junto con un excipiente, portador o diluyente de la misma.
20. 20. El método para tratar angiogénesis no controlada en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero con necesidad del tratamiento una cantidad angiogénica efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1.
21. 21. El método para tratar cáncer en un mamífero que tiene cáncer y con necesidad del tratamiento, caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1.
22. 22. Un método que está caracterizado para tratar cáncer en un mamífero que tiene cáncer y con necesidad del tratamiento en una cantidad efectiva de 6-(3,5-dimetoxi-fenil)-8-etil-2-(p¡rid¡n-4-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona.