[go: up one dir, main page]

MX2012008017A - Métodos y composiciones para tratar biopelículas. - Google Patents

Métodos y composiciones para tratar biopelículas.

Info

Publication number
MX2012008017A
MX2012008017A MX2012008017A MX2012008017A MX2012008017A MX 2012008017 A MX2012008017 A MX 2012008017A MX 2012008017 A MX2012008017 A MX 2012008017A MX 2012008017 A MX2012008017 A MX 2012008017A MX 2012008017 A MX2012008017 A MX 2012008017A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
amino acids
biofilm
composition
tyrosine
further characterized
Prior art date
Application number
MX2012008017A
Other languages
English (en)
Inventor
Richard Losick
Jon Clardy
Roberto Kolter
Illana Kolodkin-Gal
Diego Romero
Shugeng Cao
Original Assignee
Harvard College
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Harvard College filed Critical Harvard College
Publication of MX2012008017A publication Critical patent/MX2012008017A/es

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/44—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a nitrogen atom attached to the same carbon skeleton by a single or double bond, this nitrogen atom not being a member of a derivative or of a thio analogue of a carboxylic group, e.g. amino-carboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/48—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/50—1,3-Diazoles; Hydrogenated 1,3-diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/401—Proline; Derivatives thereof, e.g. captopril
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A61K31/405—Indole-alkanecarboxylic acids; Derivatives thereof, e.g. tryptophan, indomethacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/02—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for disorders of the vagina
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
    • Y10T428/13—Hollow or container type article [e.g., tube, vase, etc.]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
    • Y10T428/31504—Composite [nonstructural laminate]
    • Y10T428/31678—Of metal
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
    • Y10T428/31504—Composite [nonstructural laminate]
    • Y10T428/31971—Of carbohydrate
    • Y10T428/31989—Of wood
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
    • Y10T428/31504—Composite [nonstructural laminate]
    • Y10T428/31971—Of carbohydrate
    • Y10T428/31993—Of paper
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T442/00—Fabric [woven, knitted, or nonwoven textile or cloth, etc.]
    • Y10T442/20—Coated or impregnated woven, knit, or nonwoven fabric which is not [a] associated with another preformed layer or fiber layer or, [b] with respect to woven and knit, characterized, respectively, by a particular or differential weave or knit, wherein the coating or impregnation is neither a foamed material nor a free metal or alloy layer
    • Y10T442/2525—Coating or impregnation functions biologically [e.g., insect repellent, antiseptic, insecticide, bactericide, etc.]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Apparatus For Disinfection Or Sterilisation (AREA)
  • Eyeglasses (AREA)

Abstract

Se describen métodos para el tratamiento o reducción de biopeliculas, para el tratamiento de un trastorno relacionado con biopelículas, y para prevenir la formación de biopelículas usando D-aminoácidos.

Description

MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA TRATAR BIOPELÍC U L AS PRIORIDAD La presente solicitud reivindica prioridad de la solicitud provisional estadounidense No. 61/293,414, presentada el 8 de enero de 2010 y la solicitud provisional estadounidense No. 61/329,930, presentada el 30 de abril de 2010, pendientes.
La solicitud se refiere a la solicitud internacional de patente pendiente presentada en la misma fecha que la presente y titulada "Método y composición de recubrimiento para tratar biopelículas".
Los contenidos de dichas solicitudes se incorporan mediante esta referencia.
Declaración de derechos gubernamentales La presente invención fue realizada con el apoyo del gobierno de los Estados Unidos conforme a los premios del Instituto Nacional de la Salud CA24487, GM058213, GM082137, GM086258 y GM18568. El gobierno de Estados Unidos tiene determinados derechos sobre la invención.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las biopelículas son comunidades de células que se asientan y proliferan sobre las superficies y están recubiertas por una matriz exopolimérica. Presentan un crecimiento lento y muchas se encuentran en la fase de crecimiento estacionaria. Pueden estar formadas por la mayoría de, si no todos, los patógenos. De acuerdo con los CDC, el 65% de todas las infecciones en los Estados Unidos son causadas por biopelículas que pueden estar formadas por patógenos comunes. Las biopelículas también se encuentran en contextos industriales, tales como en sistemas de distribución de agua potable.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Los aspectos de la invención presentan métodos para tratar, reducir o inhibir la formación de biopelículas por parte de las bacterias. En algunas modalidades, el método comprende poner en contacto una superficie con una composición que comprende una cantidad eficaz de un D-aminoácido, tratando, reduciendo o inhibiendo así la formación de la biopelícula. En algunas modalidades, las bacterias son bacterias Gram negativas o Gram positivas. En modalidades particulares, las bacterias son bacterias Bacillus, Staphylococcus, E. coli o Pseudomonas.
En otros aspectos, la invención presenta composiciones, tales como composiciones industriales, terapéuticas o farmacéuticas, que comprenden uno o más D-aminoácidos. En determinadas modalidades, la composición comprende D-tirosina, D-leucina, D-metionina, D-triptófano o una combinación de estos. En algunas modalidades, la composición comprende D-tirosina, D-fenilalanina, D-prolina o una combinación de estos. En modalidades adicionales, la composición comprende dos o más de los siguientes: D-tirosina, D-leucina, D-fenilalanina, D-metionina, D-prolina y D-triptófano, y en otras modalidades adicionales, esta última composición básicamente no contiene detergente ni/o L-aminoácidos. En otras modalidades, la composición se usa para tratar una biopelicula industrial descrita en la presente, tal como en sistemas de tratamiento de agua o cañerías.
En algunas modalidades, la composición básicamente no contiene L-aminoácidos. Por ejemplo, la composición comprende menos de 30%, menos de 20%, menos de 10%, menos de 5%, menos de 1 %, menos de 0.5%, menos de 0.25%, menos de 0.1 %, menos de 0.05%, menos de 0.025%, menos de 0.01 %, menos de 0.005%, menos de 0.0025%), menos de 0.001 % o menos, de L-aminoácidos.
En algunas modalidades, la composición básicamente no contiene detergente. Por ejemplo, la composición comprende menos de 30%, menos de 20%, menos de 10%, menos de 5%, menos de 1 %, menos de 0.5%, menos de 0.25%, menos de 0.1 %o , menos de 0.05%, menos de 0.025%, menos de 0.01 %, menos de 0.005%, menos de 0.0025%, menos de 0.001 % o menos, de un detergente.
Otro aspecto de la presente descripción se refiere a métodos para tratar un trastorno relacionado con una biopelículas en un sujeto que lo necesite, el método comprende administrar al sujeto una composición que comprende una cantidad eficaz de un D-aminoácido o una combinación de D-aminoácidos, tratando así el trastorno relacionado con una biopelículas, donde el D-aminoácido se selecciona del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina y una combinación de estos, o donde la combinación de D-aminoácidos es una combinación sinergística de dos o más D-aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-metionina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina [sic], D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano y D-tirosina.
En algunas modalidades, la composición se administra a una superficie del sujeto seleccionada del grupo de superficies dérmicas y mucosas y combinaciones de estas. En otras modalidades, la superficie es una superficie oral, una superficie dérmica, una superficie del tracto urinario, una superficie del tracto vaginal o una superficie pulmonar.
En algunas modalidades, básicamente la composición no contiene el/los L-aminoácido/s correspondiente/s con respecto a los D-aminoácidos o combinación de D-aminoácidos.
En algunas modalidades, la composición se administra al sujeto mediante administración subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, oral, nasal o tópica, y una combinación de estas.
En algunas modalidades, el sujeto es un humano.
En algunas modalidades, se inhibe la formación de una biopelícula. En otras modalidades, se altera una biopelícula formada con anterioridad.
En algunas modalidades, el D-aminoácido se administra en una concentración de alrededor de 0.1 nM a alrededor de 100 µ?, por ejemplo, en una concentración de 0.1 nM a 100 µ?.
En modalidades adicionales, el trastorno relacionado con la biopelícula se selecciona del grupo que consiste en neumonía, fíbrosís quística, otitis media, enfermedad pulmonar obstructiva crónica y una infección del tracto urinario y combinaciones de estos. En otras modalidades, el trastorno relacionado con la biopelícula es una infección relacionada con dispositivos médicos. En modalidades adicionales, el trastorno relacionado con la biopelícula es una enfermedad periodontal, tal como gingivitis, periodontitis o halitosis. En modalidades más adicionales, el trastorno relacionado con la biopelícula es causado por bacterias. En algunas modalidades, las bacterias son bacterias Gram negativas o Gram positivas.
En aun otras modalidades, las bacterias pertenecen al género Actinobacillus, Acinetobacter, Aeromonas, Bordetella, Brevibacillus, Brucella, Bacteroides, Burkholderia, Borelia, Bacillus, Campylobacter, Capnocytophaga, Cardiobacterium, Citrobacter, Clostridium, Chlamydia, Eikenella, Enterobacter, Escherichia, Entembacter, Francisella, Fusobacterium, Flavobacterium, Haemophilus, Helicobacter, Kingella, Klebsiella, Legionella, Listeria, Leptospirae, Moraxella, Morganella, Mycoplasma, Mycobacterium, Neisseria, Pasteurella, Proteus, Prevotella, Plesiomonas, Pseudomonas, Providencia, Rickettsia, Stenotrophomonas, Staphylococcus, Streptococcus, Streptomyces, Salmonella, Serratia, Shigella, Spirillum, Treponema, Veillonella, Vibrio, Yersinia o Xanthomonas. Otro aspecto de la presente descripción se refiere a métodos para tratar, reducir o inhibir la formación de biopelículas por parte de bacterias que forman biopelículas sobre una superficie relacionada biológicamente, el método comprende poner en contacto una superficie biológica con una composición que comprende una cantidad eficaz de un D-aminoácido o una combinación de D-aminoácidos, tratando, reduciendo o inhibiendo así la formación de la biopelícula, donde el D-aminoácido se selecciona del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina y una combinación de estos, o donde la combinación de D-aminoácidos es una combinación sinergística de dos o más D-aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leuc¡na, D-metionina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arg¡nina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano y D-tirosina.
En algunas modalidades, básicamente la composición no contiene el/los L-aminoácido/s correspondiente/s con respecto a los D-aminoácidos o combinación de D-aminoácidos.
En algunas modalidades, las bacterias son bacterias Gram negativas o Gram positivas. En algunas modalidades, las bacterias pertenecen al género Actinobacillus, Acinetobacter, Aeromonas, Bordetella, Brevibacillus, Brucella, Bacteroides, Burkholderia, Borelia, Bacillus, Campylobacter, Capnocytophaga, Cardiobacterium, Citrobacter, Clostridium, Chlamydia, Eikenella, Enterobacter, Escheríchia, Entembacter, Francisella, Fusobacterium, Flavobacterium, Haemophilus, Helicobacter, Kingella, Klebsiella, Legionella, Listeria, Leptospirae, Moraxella, Morganella, Mycoplasma, Mycobacterium, Neisseria, Pasteurella, Proteus, Prevotella, Plesiomonas, Pseudomonas, Providencia, Rickettsia, Stenotrophomonas, Staphylococcus, Streptococcus, Streptomyces, Salmonella, Serratia, Shigella, Spiríllum, Treponema, Veillonella, Vibrio, Yersinia o Xanthomonas.
En algunas modalidades, la superficie comprende un dispositivo médico, un vendaje para heridas, un lente de contacto o un dispositivo oral. En otras modalidades, el dispositivo médico se selecciona del grupo que consiste en una pinza, fórceps, tijeras, gancho dérmico, tubo, aguja, retractor, raspador, torno, escoplo, escofina, sierra, catéter, dispositivo ortopédico, válvula coronaria artificial, articulación protésica, prótesis de voz, stent, fístula, marcapasos, clavo quirúrgico, respirador, ventilador y un endoscopio y combinaciones de estos.
En algunas modalidades de los métodos que anteceden, la composición comprende D tirosina. Además de D-tirosina, en algunas modalidades, la composición comprende adicionalmente uno o más de D prolina y D fenilalanina. En otras modalidades, además de D-tirosina, la composición comprende adicionalmente uno o más de D-leucina, D-triptófano y D-metionina. En modalidades aun adicionales, además de D-tirosina, la composición comprende adicionalmente uno o más de D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-metionina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina [sic], D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina y D-triptófano.
En algunas modalidades de cualquiera de los métodos que anteceden, el método comprende adicionalmente administrar un biocida. En algunas modalidades, el biocida es un antibiótico.
En otras modalidades, la composición básicamente no contiene detergente.
Otro aspecto de la invención se refiere a composiciones que comprenden un D-aminoácido o una mezcla de D-aminoácidos en una cantidad eficaz para tratar, reducir o inhibir la formación de una biopelícula, donde el D-aminoácido se selecciona del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina y una combinación de estos, o donde la combinación de D-aminoácidos es una combinación sinergística de dos o más D-aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-metionina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina [sic], D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina.
En algunas modalidades, básicamente la composición no contiene el/los L-aminoácido/s correspondiente/s con respecto a los D-aminoácidos o combinación de D-aminoácidos.
En algunas modalidades, el D-aminoácido es D tirosina. En otras modalidades, la composición comprende adicionalmente uno o más de D prolina y D fenilalanina. En otras modalidades, la composición comprende adicionalmente uno o más de D-leucina, D-triptófano y D-metionina. En modalidades adicionales, la composición comprende adicionalmente uno o más de D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-metionina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina [sic], D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leuc¡na, D-asparag¡na, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-ser¡na, D-treonina, D-valina y D-triptófano.
En algunas modalidades, cualquiera de las composiciones que anteceden también pueden comprender polihexametileno biguanida, clorhexidina, xilitol, triclosán o dióxido de cloro. En otras modalidades, cualquiera de las composiciones que anteceden también pueden comprender un portador farmacéuticamente aceptable. En otras modalidades de cualquiera de las composiciones que anteceden, la cantidad eficaz es una cantidad eficaz para tratar o prevenir un trastorno relacionado con una biopelícula. En algunas modalidades, una cantidad eficaz comprende una cantidad eficaz para tratar o prevenir una biopelícula sobre una superficie.
En otras modalidades de cualquiera de las composiciones que anteceden, el trastorno relacionado con una biopelícula es neumonía, fibrosis quística, otitis media, enfermedad pulmonar obstructiva crónica o una infección del tracto urinario. En algunas modalidades, el trastorno relacionado con la biopelícula es una infección relacionada con dispositivos médicos.
En algunas modalidades de cualquiera de las composiciones que anteceden, la composición comprende adicionalmente un agente adecuado para la aplicación a la superficie. En otras modalidades de cualquiera de las composiciones que anteceden, la composición se formula como una solución de lavado, un vendaje, un gel para heridas o un tejido sintético. En modalidades adicionales, la composición se formula como comprimidos, pildoras, caramelos, cápsulas, atomizador en aerosol, soluciones, suspensiones, geles, pastas, cremas o espumas. En algunas modalidades, la composición se formula para la administración parenteral, por ej., intravenosa, intradérmica, subcutánea, oral (por ej., inhalación), transdérmica (tópica), transmucosa, vaginal y rectal.
Otro aspecto de la presente descripción se refiere a dispositivos médicos resistentes a las biopelículas que comprenden una superficie que puede entrar en contacto con un fluido biológico y un D-aminoácido o una combinación de D-aminoácidos recubiertos sobre o impregnados dentro de dicha superficie, donde el D-aminoácido se selecciona del grupo que consiste en D-alanina, D-ciste¡na, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina y una combinación de estos, o donde la combinación de D-aminoácidos se encuentra en una cantidad eficaz para tratar, reducir o inhibir la formación de biopelículas, donde la combinación de D-aminoácidos es una combinación sinergística de dos o más D-aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-metionina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina [sic], D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina.
En algunas modalidades, el D-aminoácido es D-tirosina o la combinación de D-aminoácidos comprende D tirosina. En otras modalidades, la composición comprende adicionalmente uno o más de D prolina y D fenilalanina. En otras modalidades, la composición comprende adicionalmente uno o más de D-leucina, D-triptófano y D-metionina. En algunas modalidades, la composición comprende adicionalmente uno o más de D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-metionina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina [sic], D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina y D-triptófano.
En algunas modalidades, el D-aminoácido se formula como una formulación de liberación lenta. En algunas modalidades, la superficie básicamente no contiene L-aminoácidos. En modalidades adicionales, la superficie básicamente no contiene detergente.
En algunas modalidades, el dispositivo se selecciona de uno o más de los siguientes: pinza, fórceps, tijeras, gancho dérmico, tubo, aguja, retractor, raspador, torno, escoplo, escofina, sierra, catéter, dispositivo ortopédico, válvula coronaria artificial, articulación protésica, prótesis de voz, stent, fístula, marcapasos, clavo quirúrgico, respirador, ventilador y endoscopio.
Un aspecto adicional de la presente descripción se refiere a líquidos potables que comprenden un D-aminoácido o una combinación de D-aminoácidos en una concentración en el intervalo de 0.000001 % a 0.1 %, donde el D-aminoácido se selecciona del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina y una combinación de estos, o donde la combinación de D-aminoácidos es una combinación sinergística de dos o más D-aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-metionina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina [sic], D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina.
Otro aspecto de la presente descripción se refiere a composiciones resistentes a la formación de biopelículas, que comprenden una base farmacéutica o cosméticamente adecuada, y una cantidad eficaz de un D-aminoácido o una combinación de D-aminoácidos distribuidos en la base, tratando, reduciendo o inhibiendo así la formación de la biopelícula, donde el D-aminoácido se selecciona del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteina, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina y una combinación de estos, o donde la combinación de D-aminoácidos es una combinación sinergistica de dos o más D-aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-metionina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano y D-tirosina.
En algunas modalidades, básicamente la base no contiene el/los L-aminoácido/s correspondiente/s con respecto a los D-aminoácidos o combinación de D-aminoácidos.
En algunas modalidades, la base se selecciona de un líquido, gel, pasta o polvo. En modalidades adicionales, la composición se selecciona del grupo que consiste en champús, aditivos de baño, preparaciones para el cuidado del cabello, jabones, lociones, cremas, desodorantes, preparaciones para el cuidado de la piel, preparaciones cosméticas para el cuidado personal, preparaciones de higiene íntima, preparaciones para el cuidado del pie, preparaciones protectoras livianas, preparaciones para el bronceado de la piel, repelentes de insectos, antitranspirantes, preparaciones de afeitar, preparaciones para eliminar el vello, preparaciones perfumadas, preparaciones para el cuidado dental, cuidado de la dentadura y cuidado de la boca y combinaciones de estos.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Las siguientes figuras se presentan solamente a efectos ilustrativos y no pretenden limitar la descripción.
Las figuras 1A y 1 B muestran células de la cepa B. subtilis NCIB3610 que se cultivaron a 22 °C en placas de 12 pocilios en medio líquido que produce biopelícula durante 3 días (1A) o durante 8 días (1 B).
Las figuras 1 C y 1 D muestran células cultivadas durante 3 días en un medio al que se le agregó un eluato de metanol seco y resuspendido (1 : 100 v/v) de una columna C18 Sep Pak a la que se le cargó un medio acondicionado de un cultivo de 6-8 días (1C) o un cultivo de 3 días (1 D). La concentración final del factor concentrado agregado a los pocilios representó un dilución 1 :4 en una base de volumen del medio acondicionado original.
La figura 1 E es la misma que la figura 1 C salvo que el factor se purificó adicionalmente en la columna C-18 mediante la elución por etapas con metanol. Se muestra el resultado de agregar 3 µ? del eluato de metanol al 40%.
La figura 1 F es la misma que la figura 1 C salvo que antes de la adición al medio fresco el eluato de metanol al 40% se incubó con cuentas de proteinasa K durante 2 horas seguido de centrifugación para retirar las cuentas.
La figura 2A muestra los efectos de agregar D-tirosina (3 µ?), D-leucina (8.5 mM), L-tirosina (7 mM) o L-leucina (8.5 m ) a cultivos recién inoculados en medio que produce biopelicula luego de la incubación durante 3 días sobre la formación de una capa.
La figura 2B muestra la mínima concentración inhibitoria de biopelicula (MBIC) de D-aminoácidos necesarios para la inhibición completa de la formación de una capa.
La figura 2C muestra cultivos de 3 días a los que se les agregó D-tirosina (3 µ?), una mezcla de D-tirosina, D-triptófano, D-metionina y D-leucina (2.5 nM cada uno), o no se les agregaron aminoácidos, a lo que le siguió una incubación adicional durante 8 horas.
La figura 2D muestra el efecto del eluato de columna Sep Pak C- 18 concentrado del medio acondicionado de un cultivo de 8 días del tipo salvaje o de una cepa (IKG55) doblemente mutante para ylmE y racX.
La figura 2E muestra S. aureus (cepa SC01) que fue cultivada en placas de poliestireno de 12 pocilios durante 24 horas a 37 °C en medio de TSB que contiene glucosa (0.5%) y NaCI (3%). De manera adicional, se agregó D-tirosina (50 µ?) o la mezcla de D-aminoácidos (15 nM cada uno) o no se agregaron aminoácidos (sin tratar) a los pocilios. Se visualizaron las células unidas al poliestireno retirando las células no unidas y luego tiñiéndolas con cristal violeta.
La figura 3A muestra la incorporación de D-tirosina radiactiva en la pared celular. Las células se cultivaron en medio que produce biopelicula y se incubaron con 14C-D-tirosina o con 14C-L-prolina (10 pCi/ml) durante 2 h a 37°C. Los resultados se presentan como un porcentaje de la incorporación total en las células (360,000 cpm/ml para L-prolina y 46,000 cpm/ml para D-tirosina).
La figura 3B muestra la fluorescencia total de las células (DR-30 (Romero et ál., Proc. Nati. Acad. Sci. USA (2010, en prensa)) que contiene una fusión de traslación de tasA-mCherry funcional. Las células se cultivaron en fase estacionaria agitando en medio que produce biopelícula en presencia o ausencia de D-tirosina (6 µ?).
La figura 3C muestra la asociación de las células de TasA-mCherry mediante microscopía fluorescente. Las células de tipo salvaje y las células mutantes yqxM6 (IKG51 ) que contienen la fusión de tasA-mCherry se cultivaron en fase estacionaria (OD=1 .5) agitando en medio que produce biopelícula en presencia o ausencia (sin tratar) de D-tirosina (6 µ?) tal como se indicó, lavada en PBS, y se visualizaron mediante microscopía fluorescente.
La figura 3D muestra la asociación celular de las fibras TasA mediante microscopía electrónica. Se incubaron cultivos de 24 horas sin (imágenes 1 y 2) o con (imágenes 3-6) D-tirosina (0.1 mM) durante 12 horas adicionales. Se tiñeron fibras TasA mediante etiquetado inmunooro usando anticuerpos anti-TasA, y se visualizaron mediante microscopía electrónica de transmisión, tal como se describe en los Ejemplos. Las células eran mutantes con respecto al operón eps (Aeps) ya que la ausencia de exopolisacárido mejora significativamente la imagenología de fibras TasA. Las flechas llenas indican grupos de fibras; las flechas abiertas indican fibras individuales. La barra de escala es de 500 nm. La barra de escala en las ampliaciones de las imágenes 2, 4 y 6 es 100 nm. Las imágenes 1 y 2 muestran grupos de fibras ligados a las células, las imágenes 3, 4 y 6 muestran fibras individuales y grupos separados de las células y las imágenes 3-5 muestran células con poco o nada de material de fibras.
La figura 4A muestra células cultivadas durante 3 días en medio que produce biopelícula sólido (imágenes superiores) o líquido (imágenes inferiores) que contenía o no contenía D-tirosina.
La figura 4B muestra una secuencia de aminoácidos abreviada para YqxM. Los residuos especificados por los codones en donde las mutaciones del marco de lectura de yqxM2 e yqxM6 dieron como resultado los cambios indicados en las secuencias se encuentran subrayados.
La figura 5 muestra pocilios que contienen medio de MSgg complementado con D-triptófano (0.5 mM), D-metionina (2 mM), L-triptófano (5 mM) o L-metionina (5 mM) que fueron inoculados con la cepa NCIB3610 e incubados durante 3 días.
La figura 6 muestra placas que contienen medio de MSgg sólido complementado con D-tirosina (3 µ?) o D-leucina (8.5 mM) que fueron inoculados con la cepa NCIB3610 e incubados durante 4 días.
La figura 7 muestra NCIB3610 (WT) y un muíante doblemente eliminado para ylmE y racX (IKG155) que fueron cultivados en placas de 12 pocilios e incubados durante 5 días.
La Figura 8 muestra el efecto de los D-aminoácidos en el crecimiento celular. Las células se cultivaron en medio de MSgg que contiene D-tirosina (3 µ?), D-leucina (8.5 mM) o la mezcla de cuatro D-aminoácidos (2.5 nM cada uno) agitando.
La figura 9A muestra la expresión de PyqxM-lacZ mediante la cepa FC122 (que transporta PyqxM-lacZ) y la figura 9B muestra la expresión de PepsA-lacZ mediante la cepa FC5 (que transporta PepsA-lacZ) que se cultivaron en medio de MSgg que contiene D-tirosina (3 µ?), D-leucina (8.5 mM) o la mezcla de cuatro D-aminoácidos (2.5 nM cada uno) agitando.
La figura 10 muestra la inhibición de la formación de biopelícula de Pseudomonas aeruginosa mediante los D-aminoácidos. La cepa P014 de P. aeruginosa se cultivó en placas de poliestireno de 12 pocilios durante 48 horas a 30 °C en medio de M63 que contiene glicerol (0.2%) y ácidos casamino (20pg/ml). De manera adicional, se agregó D-tirosina o la mezcla de D-aminoácidos o no se agregaron aminoácidos (sin tratar). Se visualizaron las células unidas al poliestireno retirando las células no unidas y luego tiñiéndolas con cristal violeta. Los pocilios se tiñeron con 500 µ? de tinte de cristal violeta al 1.0%, se lavaron dos veces con 2 mi de agua destilada dos veces y se secaron por completo.
La figura 1 1 muestra la tinción con cristal violeta de biopelículas de Staphylococcus aureus cultivadas con D-aminoácidos individuales o con la mezcla cuádruple en medio de TSB durante 24 horas.
La figura 12 muestra la tinción con cristal violeta de Pseudomonas aeruginosa cultivadas con D-aminoácidos individuales o la mezcla cuádruple en medio de M63 durante 48 horas.
La figura 13 muestra la tinción con cristal violeta de biopelículas de Staphylococcus aureus cultivadas con D-aminoácidos individuales o con la mezcla cuádruple en medio de TSB durante 24 horas.
La figura 14 muestra la tinción con cristal violeta de biopelículas de Staphylococcus aureus cultivadas en medio de TSB con L-aminoácidos durante 24 horas.
La figura 15 es una imagen representativa de las biopelículas de Staphylococcus aureus formadas en el medio de TSB aplicado con D-aminoácidos luego de retirar las bacterias planctónicas.
La figura 16 es una imagen representativa de las biopelículas de Staphylococcus aureus formadas en el medio de TSB aplicado con L-aminoácidos luego de retirar las bacterias planctónicas.
La figura 17 es una cuantificación de las células dentro de las biopelículas de Staphylococcus aureus formadas en el medio de TSB luego de retirar las bacterias planctónicas. Las células se volvieron a suspender en PBS.
La figura 18 muestra el efecto de una mezcla de D-aminoácidos (1 mM) en la formación de biopelícula de Staphylococcus aureus sobre las superficies. Las superficies epoxi se empaparon en una mezcla de D/L aminoácidos y luego se incubaron con bacterias durante 24 horas.
La figura 19 muestra el efecto de una mezcla de D-aminoácidos (1 mM) en la formación de biopelícula de Staphylococcus aureus sobre las superficies. Las superficies epoxi se empaparon en una mezcla de D/L aminoácidos y luego se incubaron con bacterias durante 24 horas.
La figura 20 muestra el efecto de D-aminoácidos en la formación de biopelículas sobre el medio sólido de M63 en Pseudomonas aeruginosa. Las colonias se cultivaron a temperatura ambiente durante 4 días.
La figura 21 muestra la tinción con Sytox de células unidas individuales en el fondo de una placa de 6 pocilios de Pseudomonas aeruginosa en condiciones que producen biopelícula.
La figura 22 muestra la tinción con cristal violeta de Proteus mirabilis cultivadas con una mezcla de D-aminoácidos (100µ?) o L-aminoácidos (100µ?) en medio de LB durante 48 horas.
La figura 23 muestra la tinción con cristal violeta de mutantes de Streptococcus cultivados con D- o L- aminoácidos (1mM) en medio de BHI aplicado con medio de sucrosa (0.5%) durante 72 horas.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente tienen el mismo significado que entiende normalmente un experto en la técnica a la que pertenece esta invención. Si bien en la práctica o en el análisis de la presente invención se pueden utilizar métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente, a continuación se describen métodos y materiales adecuados.
Todas las publicaciones, solicitudes de patente, patentes y otras referencias a las que se hace referencia en la presente se incorporan mediante esta referencia en su totalidad. En caso de conflicto, prevalecerá la presente descripción, incluyendo las definiciones. Además, los materiales, métodos y ejemplos son únicamente ilustrativos y no pretenden ser limitativos.
Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada y de las reivindicaciones. Como será evidente para el experto en la técnica, las características y modalidades específicas descritas en la presente se pueden combinar con cualquier otra característica o modalidad.
Definiciones Los términos "trastorno", "enfermedad" y "afección" se usan en la presente de manera intercambiable con respecto a una afección de un sujeto. Un trastorno es una alteración que afecta el funcionamiento normal del organismo de un sujeto. Una enfermedad es una afección patológica de un órgano, parte del cuerpo o sistema resultante de varias causas, tales como infección, defecto genético o estrés ambiental caracterizada por un grupo identificable de síntomas. Un trastorno o enfermedad puede hacer referencia a un trastorno relacionado con biopelículas que está caracterizado por un crecimiento de bacterias relacionado con la enfermedad en que se establece una biopelícula.
Los términos "prevenir" y "prevención" se refieren en la presente a la inhibición del desarrollo o inicio de una biopelícula o de un trastorno relacionado con una biopelícula o la prevención de la reaparición, inicio o desarrollo de uno o más indicios o síntomas de una biopelícula o de un trastorno relacionado con una biopelícula, sobre una superficie o en un sujeto, resultante de la administración de una composición descrita en la presente (por ej., una composición profiláctica o terapéutica), o la administración de una combinación de terapias (por ej., una combinación de composiciones profilácticas o terapéuticas).
Tal como se usa en la presente, "tratar" o "tratamiento" se refiere a administrar una composición descrita en la presente en una cantidad, manera (por ej., cronograma de administración) y/o modo (por ej., vía de administración), eficaz para mejorar un trastorno o un síntoma de este, o para prevenir o retrasar la evolución de un trastorno o un síntoma de este. Esto se puede probar, por ejemplo, mediante una mejora en un parámetro asociado con una biopelícula o con un trastorno relacionado con una biopelícula o un indicio o síntoma de este, por ej., en un grado estadísticamente significativo o en un grado detectable por parte de un experto en la técnica. Una cantidad eficaz, manera o modo puede variar dependiendo de la superficie, aplicación y/o sujeto y se puede adaptar a la superficie, aplicación y/o sujeto. Al prevenir o retrasar la evolución de una biopelícula o de un trastorno relacionado con una biopelícula o un indicio o síntoma de este, un tratamiento puede prevenir o retrasar el deterioro resultante de una biopelícula o de un trastorno relacionado con una biopelícula o un indicio o síntoma de este sobre una superficie afectada o en un sujeto afectado o diagnosticado.
La invención está basada, al menos en parte, en el descubrimiento de que los D-aminoácidos presentes en un medio acondicionado de biopeliculas maduras previenen la formación de biopeliculas y provocan la desintegración de las biopeliculas existentes. Los aminoácidos estándar pueden existir en cualquiera de los dos isómeros ópticos, denominados L- o D-aminoácidos, que son imágenes en espejo de sí mismos. Mientras que los L-aminoácidos representan la gran mayoría de los aminoácidos que se encuentran en las proteínas, los D-aminoácidos son componentes de la pared celular de peptidoglicano de las bacterias.
Los D-aminoácidos descritos en la presente pueden penetrar las biopeliculas en las superficies vivas y no vivas, penetrar la adhesión de bacterias a las superficies y cualquier concentración de la biopelícula, separar dicha biopelícula y/o inhibir el crecimiento adicional de los microorganismos que forman biopeliculas en la matriz biológica o eliminar dichos microorganismos. Los D-aminoácidos son conocidos en la técnica y se pueden preparar usando técnicas conocidas. Los ejemplos de métodos incluyen, por ej., los descritos en la publicación estadounidense No. 20,090,203,091. Los D-aminoácidos también están comercialmente disponibles (por ej., en Sigma Chemicals, St. Louis, Mo.).
Se puede usar cualquier D-aminoácido en los métodos descritos en la presente, incluyendo de modo no taxativo, D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-metionina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-val¡na, D-triptófano o D-tirosina. Se puede usar un D-aminoácido solo o combinado con otros D-aminoácidos. En ejemplos de métodos, se usan 2, 3, 4, 5, 6 o más D-am¡noácidos combinados. Preferentemente, en los métodos descritos en la presente se usan D-tirosina, D-leucina, D-metionina o D-triptófano, ya sea solos o combinados. En otras modalidades preferidas, en los métodos descritos en la presente se usan D-tirosina, D-prolina y D-fenilalanina, ya sea solos o combinados.
Se puede administrar un D-aminoácido en una concentración de 0.1 nM a 100 µ?, por ej., 1 nM a 10 µ?, 5 nM a 5 µ?, o 10 nM a 1 µ?. En otras modalidades, se puede administrar el D-aminoácido en una concentración de alrededor de 0.1 nM a alrededor de 100 µ?, por ej., alrededor de 1 nM a alrededor de 10 µ?, alrededor de 5 nM a alrededor de 5 µ?, o alrededor de 10 nM a alrededor de 1 µ?.
Un ejemplo de una composición de D-aminoácidos que se descubrió que era particularmente eficaz para inhibir o tratar la formación de biopelículas incluye D-tirosina. En algunas modalidades, se usa D-tirosina sola y se puede usar, por ejemplo, como concentraciones inferiores a 1 mM, o inferiores a 100 µ? o inferiores a 10 µ?, o en una concentración de 0.1 nM a 100 µ?, por ej., 1 nM a 10 µ?, 5 nM a 5 µ?, o 10 nM a 1 µ?.
En otras modalidades, se usa D-tirosina combinada con uno o más de D-prolina y D-fenilalanina. En algunas modalidades, se usa D-tirosina combinada con uno o más de D-leucina, D-triptófano y D-metionina. Las combinaciones de D-tirosina con uno o más de D-prolina, D-fenilalanina, D-leucina, D-triptófano y D-metionina pueden ser sinergísticas y pueden ser eficaces para inhibir o tratar la formación de biopeliculas en concentraciones totales de D-aminoácidos de 10 µ? o menos, por ej., alrededor de 1 nM a alrededor de 10 µ?, alrededor de 5 nM a alrededor de 5 µ?, o alrededor de 10 nM a alrededor de 1 µ?, o en una concentración de 0.1 nM a 100 µ?, por ej., 1 nM a 10 µ?, 5 nM a 5 µ?, o 10 nM a 1 µ?.
En algunas modalidades, las combinaciones de D-aminoácidos son equimolares. En otras modalidades, las combinaciones de D-aminoácidos no se encuentran en cantidades equimolares.
En algunas modalidades, la composición básicamente no contiene L-aminoácidos. Por ejemplo, la composición comprende menos de alrededor de 30%, menos de alrededor de 20%, menos de alrededor de 10%, menos de alrededor de 5%, menos de alrededor de 1 %, menos de alrededor de 0.5%, menos de alrededor de 0.25%, menos de alrededor de 0.1%, menos de alrededor de 0.05%, menos de alrededor de 0.025%, menos de alrededor de 0.01 %, menos de alrededor de 0.005%, menos de alrededor de 0.0025%, menos de alrededor de 0.001 % o menos, de L-aminoácidos. En otras modalidades, la composición comprende menos de 30%, menos de 20%, menos de 10%, menos de 5%, menos de 1 %, menos de 0.5%, menos de 0.25%, menos de 0.1 %, menos de 0.05%, menos de 0.025%, menos de 0.01 %, menos de 0.005%, menos de 0.0025%, menos de 0.001 % de L-aminoácidos. En modalidades preferidas, el porcentaje de L-aminoácido está en relación con el D-aminoácido correspondiente. A modo de ejemplo, una mezcla racémica de L-aminoácido y D-aminoácido contiene 50% de L-aminoácido.
En algunas modalidades, la composición básicamente no contiene detergente. Por ejemplo, la composición comprende menos de alrededor de 30% en peso, menos de alrededor de 20% en peso, menos de alrededor de 10% en peso, menos de alrededor de 5% en peso, menos de alrededor de 1 % en peso, menos de alrededor de 0.5% en peso, menos de alrededor de 0.25% en peso, menos de alrededor de 0.1 % en peso, menos de alrededor de 0.05% en peso, menos de alrededor de 0.025% en peso, menos de alrededor de 0.01 % en peso, menos de alrededor de 0.005% en peso, menos de alrededor de 0.0025% en peso, menos de alrededor de 0.001 % en peso o menos, de un detergente. En otras modalidades, la composición comprende, con relación a la composición total, menos de alrededor de 30% en peso, menos de alrededor de 20% en peso, menos de alrededor de 10% en peso, menos de alrededor de 5% en peso, menos de alrededor de 1 % en peso, menos de alrededor de 0.5% en peso, menos de alrededor de 0.25% en peso, menos de alrededor de 0.1 % en peso, menos de alrededor de 0.05% en peso, menos de alrededor de 0.025% en peso, menos de alrededor de 0.01 % en peso, menos de alrededor de 0.005% en peso, menos de alrededor de 0.0025% en peso, menos de alrededor de 0.001 % en peso de un detergente. Muchas veces en las formulaciones que contienen detergentes, por ej., tensioactivos, el tensioactivo interactuará con el agente activo, [sic] el D- aminoácido, que podrían afectar bastante la eficacia del agente. En algunas modalidades, podría ser necesario analizar la eficacia de los agentes con relación a los tensioactivos aniónicos, tensioactivos catiónicos, tensioactivos no iónicos y tensioactivos zwiteriónicos como análisis para determinar si la presencia del tipo de tensioactivo altera la eficacia. Reducir o eliminar los detergentes puede aumentar la eficacia de las composiciones y/o reducir las complicaciones de formulación.
En otras modalidades, la composición básicamente no contiene detergente ni L-aminoácidos.
Biopelículas •La mayoría de las bacterias pueden formar comunidades multicelulares complejas que contienen matriz, conocidas como biopelículas (O'Toole et ál., Annu. Rev. Microbiol. 54:49 (2000); López et ál., FEMS Microbiol. Rev. 33:152 (2009); Karátan et ál., Microbiol. Mol. Biol. Rev. 73:310 (2009)). Las bacterias relacionadas con las biopelículas se protegen de las agresiones ambientales, tales como antibióticos (Bryers, Biotechnol. Bioeng.100:1 (2008)). Sin embargo, a medida que envejecen las biopelículas, los nutrientes se vuelven restrictivos, los productos residuales se acumulan y es ventajoso que las bacterias relacionadas con las biopelículas vuelvan a una existencia planctónica (Karatan et ál., Microbiol. Mol. Biol. Rev. 73:310 (2009)). Por lo tanto, las biopelículas tienen una duración limitada, caracterizada por una posible desintegración.
Las bactenas gram negativas y las bacterias gram positivas, además de otros organismos unicelulares, pueden producir biopelículas. Las biopelículas bacterianas son comunidades unidas a la superficie de las células que están encerradas dentro de una matriz extracelular de polisacáridos producida por las células colonizadoras. El desarrollo de la biopelícula se produce mediante una serie de pasos programados, que incluyen la unión inicial a la superficie, la formación de microcolonias tridimensionales y el desarrollo posterior de una biopelícula madura. Cuanto más profunda esté ubicada una célula dentro de una biopelícula (tal como, cuanto más cerca esté la célula a la superficie sólida a la que está unida la biopelícula, estando asi más protegida por el volumen de la matriz de la biopelícula), más metabólicamente inactivas serán las células. Las consecuencias de esta variación y gradiente fisiológicos crean un conjunto de comunidades bacterianas donde hay un sistema eficiente establecido mediante el cual los microorganismos presentan distintos rasgos funcionales. Una biopelícula también está compuesta por varios y distintos componentes no celulares y pueden incluir, de modo no taxativo, carbohidratos (simples y complejos), lípidos, proteínas (incluyendo polipéptidos) y complejos lípidos de azúcares y proteínas (lipopolisacáridos y lipoproteínas). Una biopelícula puede incluir una comunidad integrada de dos o más especies de bacterias (biopelículas polimicrobianas) o predominantemente una bacteria específica.
La biopelícula puede permitir que las bacterias existan en estado inactivo durante determinada cantidad de tiempo hasta que surjan las condiciones de crecimiento adecuadas ofreciendo de este modo al microorganismo una ventaja selectiva para asegurar su supervivencia. Sin embargo, esta selección puede representar serias amenazas para la salud humana ya que se ha observado que las biopeliculas están implicadas en alrededor del 65% de las infecciones bacterianas humanas (Smith, Adv. Drug Deliv. Rev. 57: 1539-1550 (2005); Hall-Stoodley et ál., Nat. Rev. Microbiol. 2:95-108 (2004)).
Tal como se describe en la presente, las biopeliculas también pueden afectar una gran variedad de operaciones biológicas, médicas, comerciales, industriales y de procesamiento.
Bacterias que forman biopeliculas Los métodos descritos en la presente se pueden usar para prevenir o retrasar la formación de biopeliculas y/o para tratarlas. En los ejemplos de métodos, las biopeliculas se forman por bacterias que forman biopeliculas. Las bacterias pueden ser especies bacterianas gram negativas o especies bacterianas gram positivas. Los ejemplos no taxativos de dichas bacterias incluyen un miembro del género Actinobacillus (tal como Actinobacillus actinomycetemcomitans), un miembro del género Acinetobacter (tal como Acinetobacter baumannii), un miembro del género Aeromonas, un miembro del género Bordetella (tales como Bordetella pertussis, Bordetella bronchiseptica o Bordetella parapertussis), un miembro del género Brevibacillus, un miembro del género Brucella, un miembro del género Bacteroides (tal como Bacteroides fragilis), un miembro del género Burkholderia (tales como Burkholdería cepacia o Burkholderia pseudomallei), un miembro del género Borelia (tal como Borelia burgdorferi), un miembro del género Bacillus (tales como Bacillus anthracis o Bacillus subtilis), un miembro del género Campyiobacter (tal como Campyiobacter jejuni), un miembro del género Capnocytophaga, un miembro del género Cardiobacteríum (tal como Cardiobacterium hominis), un miembro del género Citrobacter, un miembro del género Clostridium (tales como Clostridium tetani o Clostridium difficile), un miembro del género Chlamydia (tales como Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae o Chlamydia psiffaci), un miembro del género Eikenella (tal como Eikenella corrodens), un miembro del género Enterobacter, un miembro del género Escherichia (tal como Escherichia coli), un miembro del género Francisella (tal como Francisella tularensis), un miembro del género Fusobacterium, un miembro del género Flavobacterium, un miembro del género Haemophilus (tales como Haemophilus ducreyi o Haemophilus influenzae), un miembro del género Helicobacter (tal como Helicobacter pylori), un miembro del género Kingella (tal como Kingella kingaé), un miembro del género Klebsiella (tal como Klebsiella pneumoniae), un miembro del género Legionella (tal como Legionella pneumophila), un miembro del género Listeria (tal como Listeria monocytogenes), un miembro del género Leptospirae, un miembro del género / oraxella (tal como Moraxella catarrhalis), un miembro del género Morganella, un miembro del género Mycoplasma (tales como Mycoplasma hominis o Mycoplasma pneumoniae), un miembro del género Mycobacterium (tales como Mycobacterium tuberculosis o Mycobacterium leprae), un miembro del género Neisseria (tales como Neisseria gonorrhoeae o Neisseria meningitidis), un miembro del género Pasteurella (tal como Pasteurella multocida), un miembro del género Proteus (tales como Proteus vulgaris o Proteus mirablis), un miembro del género Prevotella, un miembro del género Plesiomonas (tal como Plesiomonas shigelloides), un miembro del género Pseudomonas (tal como Pseudomonas aeruginosa), un miembro del género Providencia, un miembro del género Rickettsia (tales como Rickettsia rickettsii o Rickettsia typhi), un miembro del género Stenotrophomonas (tal como Stenotrophomonas maltophila), un miembro del género Staphylococcus (tales como Staphylococcus aureus o Staphylococcus epidermidis), un miembro del género Streptococcus (tales como Streptococcus viridans, Streptococcus pyogenes (grupo A), Streptococcus agalactiae (grupo B), Streptococcus bovis o Streptococcus pneumoniae), un miembro del género Streptomyces (tal como Streptomyces hygroscopicus), un miembro del género Salmonella (tales como Salmonella enteriditis, Salmonella typhi o Salmonella typhimurium), un miembro del género Serratia (tal como Serratia marcescens), un miembro del género Shigella, un miembro del género Spirillum (tal como Spirillum minus), un miembro del género Treponema (tal como Treponema pallidum), un miembro del género Veillonella, un miembro del género Vibrio (tales como Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus o Vibrio vulnificus), un miembro del género Yersinia (tales como Yersinia enterocolitica, Yersinia pestis o Yersinia pseudotuberculosis), y un miembro del género Xanthornonas (tal como Xanthomonas maltophilia).
Específicamente, Bacillus subtilis forma comunidades arquitecturalmente complejas sobre superficies semisólidas y partículas gruesas en la interfaz aire/líquido de los cultivos en reposo (López et ál., FEMS Microbiol. Rev. 33:152 (2009); Aguilar et ál., Curr. Opin. Microbiol. 10:638 (2007); Vlamakis et ál., Genes Dev. 22:945 (2008); Branda et ál., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 98: 11621 (2001 )). Las biopelículas de B. subtilis consisten en cadenas largas de células unidas por una matriz extracelular que consiste en fibras de exopolisacáridos y amiloides compuestas de la proteína TasA (Branda et ál., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 98: 11621 (2001 ); Branda et ál., Mol. Microbiol.59:1229 (2006); Romero et ál., Proc. Nati. Acad. Sci. USA (2010, en prensa)). El exopolisacárido se produce mediante enzimas codificadas por el operón epsA-0 ("operón eps") y la proteína TasA está codificada por el gen promotor distal del operón yqxM-sipW-tasA ("operón yqxM") (Chu et ál., Mol. Microbiol. 59: 1216 (2006)).
Las bacterias que producen biopelículas, por ej., una especie descrita en la presente, se pueden encontrar en un sujeto vivo, in vitro, o sobre una superficie, tal como se describe en la presente.
Aplicaciones/Formulaciones En los casos en que se debe administrar un D-aminoácido a un sujeto, los D-aminoácidos descritos en la presente se pueden incorporar en composiciones farmacéuticas. Los D-aminoácidos se pueden incorporar en composiciones farmacéuticas como sales, esteres o derivados farmacéuticamente aceptables de los D-aminoácidos. En general, dichas composiciones incluyen un D-aminoácido y un portador farmacéuticamente aceptable. Tal como se usa en la presente, un "portador farmacéuticamente aceptable" significa un portador que se puede administrar a un sujeto junto con un D-aminoácido descrito en la presente, que no destruye la actividad farmacológica de este. Los portadores farmacéuticamente aceptables incluyen, por ej., solventes, aglutinantes, medios de dispersión, recubrimientos, conservantes, colorantes, agentes isotónicos y que retrasan la absorción y similares, compatibles con la administración farmacéutica. También se pueden incorporar compuestos activos complementarios en las composiciones.
El término "sales farmacéuticamente aceptables" incluye, de modo no taxativo, sales solubles en agua y no solubles en agua, tales como las sales de acetato, amsonato (4,4-diaminostilbeno-2,2-disulfonato), bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, butirato, edetato, camsilato, carbonato, cloruro, citrato, clavulariato, diclorhidrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexafluorofosfato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromhidrato, clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilbromuro, metilnitrato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, sal de amonio de N metilglucamina, 3-hidrox¡-2-naftoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato (1 , 1 -meteno-bis-2-hidroxi-3-naftoato, einbonato), pantotenato, fosfato/difosfato, picrato, poligalacturonato, propionato, p-toluenosulfonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, sulfato, sulfosaliculato, suramato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietioduro y valerato.
Los D-aminoácidos también se pueden encontrar en forma de esteres o derivados. Los ejemplos de ásteres adecuados incluyen formiatos, acetatos, propionatos, butiratos, isobutiratos, pentanoatos, crotonatos y benzoatos. Algunos derivados farmacéuticamente aceptables incluyen un grupo químico que aumenta la solubilidad acuosa.
Los ejemplos no taxativos de portadores farmacéuticamente aceptables que se pueden usar incluyen poli(etileno-co-vinil acetato), PVA, poli(etileno-co-v¡nil acetato) parcialmente hidrolizado, poli(etileno-co-vinil acetato-co-vinil alcohol), un poli(etileno-co-vinil acetato) reticulado, un poli(etileno-co-vinil acetato) reticulado parcialmente hidrolizado, un poli(etileno-co-vinil acetato-co-vinil alcohol) reticulado, poli-D,L-ácido láctico, poli-L-ácido láctico, ácido poliglicólico, PGA, copolímeros de ácido láctico y ácido glicólico (PLGA), policaprolactona, polivalerolactona, poli (anhídridos), copolímeros de policaprolactona con polietilenglicol, copolímeros de ácido poliláctico con polietilenglicol, polietilenglicol; y combinaciones y mezclas de estos.
Otros portadores incluyen, por ej., una gelatina acuosa, una proteína acuosa, un portador polimérico, un agente de reticulación o una combinación de estos. En otros casos, el portador es una matriz. En otros casos, el portador incluye agua, una sal amortiguadora farmacéuticamente aceptable, una solución amortiguadora farmacéuticamente aceptable, un antioxidante farmacéuticamente aceptable, ácido ascórbico, uno o más polipéptidos farmacéuticamente aceptables de bajo peso molecular, un péptido que comprende alrededor de 2 a alrededor de 10 residuos de aminoácidos, una o más proteínas farmacéuticamente aceptables, uno o más aminoácidos farmacéuticamente aceptables, un aminoácido esencial para el ser humano, uno o más carbohidratos farmacéuticamente aceptables, uno o más materiales derivados de carbohidratos farmacéuticamente aceptables, una azúcar no reductora, glucosa, sucrosa, sorbitol, trehalosa, manitol, maltodextrina, dextrinas, ciclodextrinas, un agente quelante farmacéuticamente aceptable, EDTA, DTPA, un agente quelante para un ion metálico divalente, un agente quelante para un ion metálico trivalente, glutatión, albúmina de suero no específica farmacéuticamente aceptable y/o combinaciones de estos.
Una composición farmacéutica que contiene un D-aminoácido se puede formular para ser compatible con su vía de administración deseada, según los conocimientos de los expertos en la técnica. Los ejemplos no taxativos de vías de administración incluyen la administración parenteral, por ej., intravenosa, intradérmica, subcutánea, oral (por ej., inhalación), transdérmica (tópica), transmucosa, vaginal y rectal. Las soluciones o suspensiones usadas para la aplicación parenteral, intradérmica o subcutánea pueden incluir los siguientes componentes: un diluyente estéril, tal como agua para inyección, solución salina, aceites fijos, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros solventes sintéticos; agentes antibacterianos tales como alcohol bencílico o metilparabenos, antioxidantes tal como ácido ascórbico o bisulfito de sodio, agentes quelantes tal como ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA), amortiguadores tales como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para ajustar la tonicidad, tal como cloruro de sodio o dextrosa. El pH se puede ajustar con ácidos o bases, como ácido clorhídrico o hidróxido de sodio. La preparación parenteral se puede colocar en ampollas, jeringas descartables o frascos de dosis múltiples de vidrio o plástico.
Las composiciones farmacéuticas adecuadas para el uso inyectable incluyen dispersiones o soluciones acuosas esterilizadas (cuando son solubles en agua) y polvos estériles para la preparación extemporánea de dispersiones o soluciones inyectables esterilizadas. Para la administración intravenosa, los portadores adecuados incluyen solución salina fisiológica, agua bacteriostática, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.) o solución salina tamponada con fosfato (PBS). En todos los casos, la composición puede ser esterilizada y fluida en la medida en que exista la posibilidad de inyectarla en una jeringa fácilmente. Debe ser estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento y se debe conservar contra la acción contaminante de microorganismos, tales como bacterias y hongos. El portador puede ser un solvente o un medio de dispersión que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido y similares) y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez adecuada se puede mantener, por ejemplo, utilizando un recubrimiento como lecitina, manteniendo el tamaño de partícula necesario en caso de una dispersión y utilizando tensioactivos. La prevención de la acción de microorganismos se puede lograr mediante diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal y similares. Puede ser deseable incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tal como manitol, sorbitol o cloruro de sodio en la composición. La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede lograrse incluyendo en la composición un agente que retarde la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina (ver, por ej., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21 a edición, Lippincott Williams & Wilkins, Gennaro, ed. (2006)).
Las soluciones inyectables esterilizadas se pueden preparar incorporando un D-aminoácido en la cantidad necesaria en un solvente apropiado con un ingrediente o una combinación de ingredientes mencionados anteriormente, según sea necesario, seguido por una esterilización filtrada. Generalmente, las dispersiones se preparan mediante la incorporación del compuesto activo en un vehículo esterilizado que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes necesarios de los mencionados anteriormente. En el caso de los polvos esterilizados para la preparación de soluciones inyectables esterilizadas, los métodos de preparación incluyen, de modo no taxativo, secado al vacío y liofilización que proporcionan un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado a partir de una solución previamente filtrada y esterilizada de estos.
En general, las composiciones orales incluyen un diluyente inerte o un portador comestible. A los efectos de la administración terapéutica oral, un D-aminoácido se puede incorporar con excipientes y usar en forma de comprimidos, pildoras, caramelos o cápsulas, por ej., cápsulas de gelatina. Las composiciones orales también se pueden preparar usando un portador fluido para ser usado como enjuague bucal. Los agentes aglutinantes farmacéuticamente compatibles y/o los materiales adyuvantes se pueden incluir como parte de la composición. Los comprimidos, pildoras, cápsulas, caramelos y similares pueden contener cualquiera de los siguientes ingredientes o compuestos de naturaleza similar: un aglutinante, tal como celulosa microcristalina, goma tragacanto o gelatina; un excipiente, tal como almidón o lactosa, un agente desintegrante, tal como ácido algínico, Primogel o almidón de maíz, un lubricante, tal como estearato de magnesio o Sterotes; un deslizante, tal como un dióxido de silicio coloidal; un agente endulzante, tal como sucrosa o sacarina; o un agente saborizante, tal como menta, salicilato de metilo o saborizante de naranja.
Para la administración mediante inhalación, un D-aminoácido se puede administrar en forma de un atomizador en aerosol con un recipiente o dispensador presurizados que contienen un propelente adecuado, por ej., un gas, tal como dióxido de carbono, o un nebulizador.
La administración sistémica también puede ser mediante métodos transmucosos o transdérmicos. Para la administración transmucosa o transdérmica, en la formulación se usan penetrantes apropiados para penetrar la barrera. En general, dichos penetrantes son conocidos en la técnica e incluyen, de modo no taxativo, para la administración transmucosa, por ejemplo, detergentes, sales biliares y derivados de ácido fusídico. La administración transmucosa se puede lograr mediante el uso de atomizadores nasales o supositorios. Para la administración transdérmica, los compuestos activos se formulan en, por ej., ungüentos, pomadas, geles o cremas tal como se conoce generalmente en la técnica.
Para el tratamiento de heridas agudas o crónicas, se puede formular un D-aminoácido como vendaje, solución de lavado, gel o un tejido sintético.
Una biopelícula se puede formar sobre una superficie oral (tal como dientes, lengua, parte trasera de la garganta y similares). Estas biopeliculas pueden estar relacionadas con la actividad bacteriana diaria de la flora natural ubicada en dichos ambientes, pero también pueden estar relacionadas con enfermedad orales relacionadas, tal como enfermedad periodontal (por ejemplo, gingivitis o periodontitis), halitosis o caries. Por ejemplo, se cree que la periodontitis, una forma común de enfermedad periodontal, es causada por un pequeño grupo de bacterias gram negativas presentes en las superficies de la raíz de los dientes como biopeliculas, en particular, Porphyromonas gingivalis, Bacteroides forsythus y Actinobacillus actinomycetemcomitans, esta última se encuentra mayormente en casos de periodontitis juvenil. Otras bacterias que pueden estar involucradas en la enfermedad periodontal incluyen T. denticola, T. socranskii, F. nucleatum y P. intermedia, L. acidophilus, L. casei, A. viscosus, S. sobrinus, S sanguis, S. viridans y S. mutans. La aplicación de D-aminoácidos sobre dichas superficies orales puede inhibir o prevenir la formación de biopelículas bacterianas. En general, la aplicación sobre dichas superficies orales se realizará mediante un producto que, en el transcurso del uso corriente, no debe tragarse voluntariamente a los efectos de la administración sistémica sino que debe retenerse en la cavidad oral durante un tiempo suficiente para entrar en contacto básicamente con todas las superficies dentales y/o tejidos orales. El D-aminoácido para su uso sobre las superficies orales se puede formular como una goma, pasta (tal como pasta de dientes), que luego se puede aplicar directamente a la biopelícula de dicha superficie en un sujeto. La formulación de pasta puede comprender adicionalmente un abrasivo. Un D-aminoácido también puede existir como una formulación de gel o formulación líquida. Por ejemplo, el D-aminoácido se puede formular como un enjuague bucal que puede entrar en contacto directamente con la biopelícula sobre la superficie oral de un sujeto. De manera adicional, un D-aminoácido se puede formular como una película polimérica o plaqueta (por ej., como una formulación de liberación lenta) para tratar o prevenir las afecciones orales. En una modalidad, los D-aminoácidos de la presente invención se pueden usar para la terapia antimicrobiana complementaria de la periodontitis y se pueden aplicar directamente a un diente o entre los dientes en forma de microplaquetas. Las composiciones para el cuidado oral de la presente invención pueden estar en varias formas que incluyen enjuagues terapéuticos, especialmente enjuagues bucales; dentífricos, tales como pastas de dientes, geles dentales y polvos dentales, geles no abrasivos, atomizadores bucales; mousse; espumas; gomas masticables, grageas o pastillas para el aliento; aditivos de agua potable; soluciones dentales y líquidos de irrigación e instrumentos dentales, tales como hilo o cinta dental. El instrumento dental puede ser una fibra impregnada que incluye hilo o cinta dental, microplaquetas, tiras, películas y fibras poliméricas.
Por ejemplo, una composición oral puede contener de alrededor de 0.01 % a alrededor de 15 % en peso, por ej., 0.01 % a 15 % en peso, según el peso total de la composición, de uno o más D-aminoácidos, y adyuvantes oralmente pasables. Un ejemplo no taxativo de una composición oral incluye 10 % en peso de sorbitol, 10 % en peso de glicerol, 5 % en peso de etanol, 15 % en peso de propilenglicol, 0.5 % en peso de laurilsulfato de sodio, 0.25 % en peso de metilcocil taurato de sodio, 0.25 % en peso de copolímero de bloque de polioxipropileno/polioxietileno, 0.10 % en peso de saborizante de menta, 0.1 a 0.5 % en peso de uno o más D-aminoácidos y 48.6 % en peso de agua.
Una composición oral puede estar, por ejemplo, en forma de un gel, una pasta, una crema o una preparación acuosa (enjuague bucal). La composición oral también puede comprender compuestos que liberan iones de fluoruro que son eficaces contra la formación de caries, por ejemplo, sales inorgánicas de fluoruro, por ej., fluoruro de sodio, potasio, amonio o calcio, o sales orgánicas de fluoruro, por ej., fluoruros de amina, que se conocen con el nombre comercial OLAFLUOR. Las composiciones orales pueden comprender adicionalmente compuestos conocidos en la técnica como "portadores oralmente aceptables", que tal como se usa en la presente significan aditivos convencionales en composiciones para el cuidado oral que incluyen, de modo no taxativo, fuentes de ion de fluoruro, agentes anti sarro o anti tártaro, amortiguadores, abrasivos, tales como sílice, agentes blanqueadores, tales como fuentes de peróxido, sales de bicarbonato de metal alcalino, materiales espesantes, humectantes, agua, tensioactivos, dióxido de titanio, sistema de sabor, agentes endulzantes, xilitol, agentes colorantes y mezclas de estos. Dichos materiales son conocidos en la técnica y son elegidos por el experto en la técnica basándose en las propiedades físicas, estéticas y de rendimiento deseadas para las composiciones que se van a preparar. Estos portadores pueden estar incluidos en niveles de alrededor de 50% a alrededor de 99% en peso, más preferentemente de alrededor de 70% a alrededor de 98% en peso, y más preferentemente de alrededor de 90% a alrededor de 95% en peso de la composición oral. La elección de un portador para ser usado básicamente es determinada por el modo en que se introduce la composición en la cavidad oral. En una modalidad preferida, las composiciones orales se encuentran en forma de dentífricos, tales como pastas de dientes, geles dentales y polvos dentales. Los componentes de dichas pastas de dientes y geles dentales en general incluyen uno o más abrasivos dentales (de alrededor de 6% a alrededor de 50%), un tensioactivo (de alrededor de 0.5% a alrededor de 10%), un agente espesante (de alrededor de 0.1 % a alrededor de 5%), un humectante (de alrededor de 10% a alrededor de 55%), un agente saborizante (de alrededor de 0.04% a alrededor de 2%), un agente endulzante (de alrededor de 0.1 % a alrededor de 3%), un agente colorante (de alrededor de 0.01 % a alrededor de 0 5%) y agua (de alrededor de 2% a alrededor de 45%). Dichas pastas de dientes o geles dentales también pueden incluir uno o más agentes anticaries (de alrededor de 0.05% a alrededor de 0.3% como ion de fluoruro) y un agente antisarro (de alrededor de 0.1 % a alrededor de 13%). Los polvos dentales contienen básicamente todos los componentes no líquidos. Otras composiciones para el cuidado oral preferidas son productos líquidos, incluyendo enjuagues bucales, atomizadores bucales, soluciones dentales y líquidos de irrigación. Los componentes de dichos enjuagues bucales y atomizadores bucales en general incluyen uno o más de los siguientes: agua (de alrededor de 45% a alrededor de 95%), etanol (de alrededor de 0% a alrededor de 25%), un humectante (de alrededor de 0% a alrededor de 50%), un tensioactivo (de alrededor de 0.01 % a alrededor de 7%), un agente saborizante (de alrededor de 0.04% a alrededor de 2%), un agente endulzante (de alrededor de 0.1 % a alrededor de 3%) y un agente colorante (de alrededor de 0.001 % a alrededor de 0.5%). Dichas pastas de dientes o geles dentales también pueden incluir uno o más agentes anticaries (de alrededor de 0.05% a alrededor de 0.3% como ion de fluoruro) y un agente antisarro (de alrededor de 0.1 % a alrededor de 3%). Los componentes de las soluciones dentales en general incluyen uno o más de los siguientes: agua (de alrededor de 90% a alrededor de 99%), conservante (de alrededor de 0.01 % a alrededor de 0.5%), agente espesante (de alrededor de 0% a alrededor de 5%), agente saborizante (de alrededor de 0.04% a alrededor de 2%), agente endulzante (de alrededor de 0.1 % a alrededor de 3%) y tensioactivo (de alrededor de 0% a alrededor de 5%).
Las composiciones farmacéuticas que contienen un D-aminoácido también se pueden preparar en forma de supositorios (por ej., con bases de supositorio convencionales, tales como manteca de cacao y otros glicéridos) o enemas de retención para la administración rectal.
En algunas modalidades, la composición básicamente no contiene detergente. En algunos casos, un detergente puede contribuir a la toxicidad de una composición. Por ejemplo, la composición comprende menos de alrededor de 30%, menos de alrededor de 20%, menos de alrededor de 10%, menos de alrededor de 5%, menos de alrededor de 1 %, menos de alrededor de 0.5%, menos de alrededor de 0.25%, menos de alrededor de 0.1 %, menos de alrededor de 0.05%, menos de alrededor de 0.025%, menos de alrededor de 0.01 %, menos de alrededor de 0.005%, menos de alrededor de 0.0025%, menos de alrededor de 0.001 %, o menos, de un detergente, por ej., menos de 30%, menos de 20%, menos de 10%, menos de 5%, menos de 1 %, menos de 0.5%, menos de 0.25%, menos de alrededor de 0.1 %, menos de 0.05%, menos de 0.025%, menos de 0.01%, menos de 0.005%, menos de alrededor de 0.0025%, menos de 0.001 %, de un detergente.
Algunas composiciones farmacéuticas se pueden preparar con un portador que protege el D-aminoácido contra la rápida eliminación del organismo, tal como una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes y sistemas de administración microencapsulados (tal como se describe, por ej., en Tan et ál., Pharm. Res. 24:2297-2308, 2007). Se pueden usar polímeros biodegradables y biocompatibles, tal como acetato de etilenvinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres y ácido poliláctico. Los métodos para la preparación de dichas formulaciones son conocidos por los expertos en la técnica. Los materiales también se pueden obtener comercialmente (por ej., de Alza Corp., Mountain View, Calif.). Las suspensiones liposómicas (incluyendo liposomas dirigidas a células particulares con anticuerpos monoclonales a los antígenos de la superficie celular) también se pueden usar como portadores farmacéuticamente aceptables. Estos se pueden preparar de acuerdo con métodos conocidos por los expertos en la técnica, por ej., tal como se describe en la patente estadounidense No. 4,522,81 .
Puede ser ventajoso formular composiciones orales o parenterales en forma de dosificación unitaria para mayor facilidad de administración y uniformidad de dosificación. Las formas de dosificación unitaria como se utilizan en la presente se refieren a unidades físicamente separadas adecuadas como dosificaciones unitarias para el sujeto que se desea tratar, donde cada unidad contiene una cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico necesario.
La toxicidad y eficacia terapéutica de dichos compuestos puede determinarse mediante procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, para determinar la LD50 (la dosis letal para el 50% de la población) y la ED5o (la dosis terapéuticamente eficaz en el 50% de la población). La proporción de la dosis entre los efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico y puede expresarse como la proporción LD5o/ED50. Si bien se pueden usar compuestos que exhiben efectos secundarios tóxicos, se debe prestar atención al diseñar un sistema de administración que dirige dichos compuestos al sitio del tejido afectado para minimizar el daño potencial a las células normales y, de este modo, reducir los efectos secundarios.
Los datos obtenidos de los ensayos de cultivos celulares y los estudios en animales pueden ser usados para formular un intervalo de dosificación para su uso en seres humanos. La dosificación de dichos compuestos se encuentra generalmente dentro de un intervalo de concentraciones circulantes que incluyen la ED50 con poca o ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. Para cualquier compuesto usado en los métodos descritos en la presente, la dosis terapéuticamente eficaz se puede calcular inicialmente a partir de ensayos de cultivo celular. Una dosis se puede formular en prototipos de animales para lograr un intervalo de concentración de plasma circulante que incluya la IC50 (es decir, la concentración del compuesto de prueba que logra una inhibición media máxima de los síntomas) como se determina en el cultivo celular. Dicha información puede utilizarse para determinar de manera más precisa las dosis útiles para los seres humanos. Los niveles de plasma se pueden medir, por ejemplo, mediante cromatografía líquida de alto rendimiento. La información para preparar y probar dichas composiciones es conocida en la técnica (ver, por ej., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21a edición, Lippíncott Williams & Wilkins, Gennaro, ed. (2006)).
En algunos casos, se administra de alrededor de 0.0005 µ? de D-aminoácido a alrededor de 50 µ? de D-aminoácido, por ej., de alrededor de 0.001 µ? de D-aminoácido a alrededor de 25 µ? de D-aminoácido, de alrededor de 0.002 µ? de D-aminoácido a alrededor de 10 µ? de D-aminoácido, de alrededor de 0.003 µ? de D-aminoácido a alrededor de 5 µ? de D-aminoácido, de alrededor de 0.004 µ? de D-aminoácido a alrededor de 1 µ? de D-aminoácido, de alrededor de 0.005 µ? de D-aminoácido a alrededor de 0.5 µ? de D-aminoácido, de alrededor de 0.01 µ? de D-aminoácido a alrededor de 0.1 µ? de D-aminoácido o de alrededor de 0.02 µ? de D-aminoácido a alrededor de 0.1 µ? de D-aminoácido, por ej., se administra de .0005 µ? de D-aminoácido a 50 µ? de D-aminoácido, de 0.001 µ? de D-aminoácido a 25 µ? de D-aminoácido, de 0.002 µ? de D-aminoácido a 10 µ? de D-aminoácido, de 0.003 µ? de D-aminoácido a 5 µ? de D-aminoácido, de 0.004 µ? de D-aminoácido a 1 µ? de D-amínoácido, de 0.005 µ? de D-aminoácido a 0.5 µ? de D-aminoácido, de 0.01 µ? de D-aminoácido a 0.1 µ? de D-aminoácido o de 0.02 µ? de D-aminoácido a 0.1 µ? de D-aminoácido. Preferentemente, se administra un D-aminoácido en concentraciones nanomolares, por ej., a alrededor de 5 n , a alrededor de 10 nM, a alrededor de 15 nM, a alrededor de 20 nM, a alrededor de 25 nM, a alrededor de 30 nM, a alrededor de 50 nM, o más, o preferentemente a 5 nM, a 10 nM, a 15 nM, a 20 nM, a 25 nM, a 30 nM O a 50 Nm.
En otros casos, una cantidad o dosificación terapéuticamente eficaz de un D-aminoácido puede variar de alrededor de 0.001 mg/kg en peso corporal a alrededor de 100 mg/kg en peso corporal, por ej., de alrededor de 0.01 mg/kg en peso corporal a alrededor de 50 mg/kg en peso corporal, de alrededor de 0.025 mg/kg en peso corporal a alrededor de 25 mg/kg en peso corporal, de alrededor de 0.1 mg/kg en peso corporal a alrededor de 20 mg/kg en peso corporal, de alrededor de 0.25 mg/kg en peso corporal a alrededor de 20 mg/kg en peso corporal, de alrededor de 0.5 mg/kg en peso corporal a alrededor de 20 mg/kg en peso corporal, de alrededor de 0.5 mg/kg en peso corporal a alrededor de 10 mg/kg en peso corporal, de alrededor de 1 mg/kg en peso corporal a alrededor de 10 mg/kg en peso corporal o de alrededor de 5 mg/kg en peso corporal o preferentemente de 0.001 mg/kg en peso corporal a 100 mg/kg en peso corporal, por ej., de 0.01 mg/kg en peso corporal a 50 mg/kg en peso corporal, de 0.025 mg/kg en peso corporal a 25 mg/kg en peso corporal, de 0.1 mg/kg en peso corporal a 20 mg/kg en peso corporal, de 0.25 mg/kg en peso corporal a 20 mg/kg en peso corporal, de 0.5 mg/kg en peso corporal a 20 mg/kg en peso corporal, de 0.5 mg/kg en peso corporal a 10 mg/kg en peso corporal, de 1 mg/kg en peso corporal a 10 mg/kg en peso corporal o de 5 mg/kg en peso corporal.
Un médico reconocerá que determinados factores pueden influir en la dosificación requerida para tratar eficazmente a un sujeto, incluyendo de modo no taxativo, la gravedad de la enfermedad o trastorno, tratamientos previos, la salud general y/o edad del sujeto y otras enfermedades presentes. Además, el tratamiento de un sujeto con una cantidad terapéuticamente eficaz de un D-aminoácido puede incluir un solo tratamiento o una serie de tratamientos. En un ejemplo, un sujeto es tratado con un D-aminoácido en el intervalo de entre alrededor de 0.06 mg y alrededor de 120 mg, una vez por semana durante entre alrededor de 1 y 10 semanas, de manera alternativa entre 2 y 8 semanas, entre alrededor de 3 y 7 semanas o durante alrededor de 4, 5 o 6 semanas, o preferentemente entre 0.06 mg y 120 mg, una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas, de manera alternativa entre 2 y 8 semanas, entre 3 y 7 semanas o durante 4, 5 o 6 semanas. También se reconocerá que la dosis eficaz de un D-aminoácido usada para el tratamiento puede aumentar o disminuir con el transcurso de un tratamiento particular.
Las composiciones farmacéuticas se pueden incluir en un recipiente, envase o dispensador, junto con instrucciones para su administración. Un experto en la técnica reconocerá que las composiciones farmacéuticas descritas en la presente se pueden formular como frascos de dosis unitaria.
El tratamiento de un sujeto con una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica que contiene D-aminoácidos descritas en la presente puede ser un tratamiento unitario, tratamiento continuo o una serie de tratamientos divididos en múltiples dosis. El tratamiento puede incluir una administración unitaria, administración continua o administración periódica durante uno o más años. En algunos casos se puede indicar la administración crónica a largo plazo. En general, cada formulación se administra en una cantidad suficiente para suprimir o reducir o eliminar un efecto perjudicial o un síntoma de un trastorno o afección relacionados con biopelículas, descritos en la presente.
Los D-aminoácidos son adecuados como sustancias activas antibiopelícula en preparaciones para el cuidado personal, por ejemplo, champús, aditivos de baño, preparaciones para el cuidado del cabello, jabones líquidos y sólidos (basados en tensioactivos y sales sintéticos de ácidos grasos saturados y/o insaturados), lociones y cremas, desodorantes, otras soluciones acuosas o alcohólicas, por ej., soluciones de limpieza para la piel, paños húmedos de limpieza, aceites o polvos. Propionibacterium acnés, que es el microorganismo predominante en el acné, puede residir en las biopelículas. Por lo tanto, los D-aminoácidos son particularmente adecuados para las composiciones de cuidado personal que se usan para controlar el acné. Por consiguiente, la invención también se refiere a las preparaciones para el cuidado personal que comprenden uno o más D-aminoácidos descritos en la presente y portadores o adyuvantes cosméticamente tolerables.
Los D-aminoácidos descritos en la presente también son adecuados para otorgar propiedades antibiopelícula a un intervalo de formulaciones usadas en el cuidado personal. Las preparaciones para el cuidado personal pueden contener de alrededor de 0.01 % a alrededor de 15 % en peso, por ejemplo, de alrededor de 0.1 % a alrededor de 10 % en peso o de 0.01 % a 15 % en peso, por ejemplo, de 0.1% a 10 % en peso, según el peso total de la preparación, de uno o más D-aminoácidos, y adyuvantes cosméticamente tolerables. Dependiendo de la forma de la preparación para el cuidado personal, dicha preparación puede incluir, además de uno o más D-aminoácidos, constituyentes adicionales, por ejemplo, agentes complejantes, colorantes, aceites perfumantes, agentes espezantes o solidificantes (reguladores de la consistencia), emolientes, absorbentes de UV, agentes protectores de la piel, antioxidantes, aditivos que mejoran las propiedades mecánicas, tales como ácidos dicarboxilicos y/o aluminio, zinc, sales de calcio o magnesio de ácido grasos CH-C22 y, opcionalmente, conservantes.
En una modalidad, la composición antiacné que comprende D-aminoácidos puede comprender adicionalmente al menos un agente antimicrobiano. Preferentemente, el agente antimicrobiano es un antibiótico. El antibiótico se puede seleccionar del grupo que consiste en tobramicina, clindamicina, ciprofloxacina, tetraciclinas, rifampina, triclosán, oxfloxacina, macrólidos, penicilinas, cefalosporinas, amoxicilina/clavulanato, quinupristina/dalfopristina, amoxicilina/sulbactam, metronidazol, fluoroquinolonas, quinolonas, cetólidos o aminoglucósidos. La presente invención proporciona un método para controlar el acné, que comprende administrar a un sujeto afectado con acné una cantidad eficaz de una composición antiacné que comprende uno o más D-aminoácidos, donde la cantidad de los D-aminoácidos en la composición antiacné es suficiente para prevenir, reducir, inhibir o retirar una biopelícula.
Las preparaciones para el cuidado personal se pueden encontrar en forma de una emulsión de agua en aceite o aceite en agua, una formulación alcohólica o que contiene alcohol, una dispersión vesicular de un lípido ampifílico iónico o no iónico, un gel, una barra sólida o una formulación en aerosol. Como una emulsión de agua en aceite o aceite en agua, el adyuvante cosméticamente tolerable contiene preferentemente de alrededor de 5 % a alrededor de 50 % de una fase de aceite, de alrededor de 5 % a alrededor de 20 % de un emulsificante y de alrededor de 30 % a 90 % de agua, o de 5 % a 50 % de una fase de aceite, de 5 % a 20 % de un emulsificante y de 30 % a 90 % de agua. La fase de aceite puede comprender cualquier aceite adecuado para formulaciones cosméticas, por ejemplo, uno o más aceites de hidrocarburo, una cera, un aceite natural, un aceite de silicona, un éster de ácido graso o un alcohol graso. Los mono- o polioles preferidos son etanol, isopropanol, propilenglicol, hexilenglicol, glicerol y sorbitol.
Las formulaciones cosméticas descritas en la presente son usadas en varias áreas. Dichas preparaciones incluyen, de modo no taxativo, por ejemplo: preparaciones para el cuidado de la piel, por ej. preparaciones para el lavado y la limpieza de la piel en forma de comprimidos o jabones líquidos, detergentes sintéticos o pastas de lavado, preparaciones para el baño, por ej., preparaciones para el baño líquidas (baños de espuma, leches, preparaciones para la ducha) o sólidas, por ej., cubos de esencias para el baño y sales de baño; preparaciones para el cuidado de la piel, por ej., emulsiones para la piel, multiemulsiones o aceites para la piel; preparaciones cosméticas para el cuidado personal, por ej., maquillaje facial en forma de cremas para el día o cremas en polvo, polvo facial (suelto o compacto), colorete o maquillaje en crema, preparaciones para el cuidado de los ojos, por ej., preparaciones de sombras de ojos, rímel, delineadores, cremas para los ojos o cremas antiarrugas; preparaciones para el cuidado de los labios, por ej., lápices labiales, brillos labiales, lápices delineadores, preparaciones para el cuidado de las uñas, tales como esmaltes de uñas, quitaesmaltes, endurecedores de uñas o removedores de cutículas; preparaciones para la higiene íntima, por ej., lociones para el lavado íntimo o aerosoles íntimos; preparaciones para el cuidado de los pies, por ej., baños de pies, polvos para los pies, cremas para los pies o bálsamos para los pies, desodorantes y antitranspirantes especiales o preparaciones para remover callos; preparaciones para protegerse de la luz, tales como, leches, lociones, cremas o aceites solares, bloqueadores solares o tropicales, preparaciones prebronceado o preparaciones postsolares; preparaciones para el bronceado de la piel, por ej., cremas de autobronceado; - preparaciones de despigmentación, por ej., preparaciones para decolorar la piel o preparaciones para aclarar la piel; repelentes de insectos, por ej., aceites, lociones, aerosoles o barras repelentes de insectos; desodorantes, tales como, desodorantes en aerosol, aerosoles accionados por bombeo, desodorantes en gel, barra o de bola; antitranspirantes, por ej., antitranspirantes en barra, crema o de bola; preparaciones para la limpieza y el cuidado de la piel manchada, por ej., detergentes sintéticos (sólidos o líquidos), preparaciones de peeling o limpieza o máscaras de peeling; preparaciones para eliminar el vello en forma química (depilación), por ej., polvos para eliminar el vello, preparaciones líquidas para eliminar el vello, preparaciones para eliminar el vello en forma de crema o pasta, preparaciones para eliminar el vello en forma de gel o espumas en aerosol; preparaciones de afeitar, por ej., jabón de afeitar, cremas de afeitar en espuma, cremas de afeitar sin espuma, espumas y geles, preparaciones para antes de afeitarse para afeitarse en seco, cremas para después de afeitar o lociones para después de afeitar; preparaciones de perfumes, por ej., perfumes (agua de colonia, agua de baño, agua de perfume, perfume de baño, perfume), aceites de perfume o cremas de perfume; - preparaciones para el cuidado de los dientes, dentadura y boca, por ej., pastas de dientes, pastas de dientes en gel, polvos de dientes, enjuagues bucales concentrados, enjuagues bucales antisarro, limpiadores para dentaduras o fijadores para dentaduras; preparaciones cosméticas para el tratamiento del cabello, por ej., preparaciones para el lavado del cabello en forma de champús y acondicionadores, preparaciones para el cuidado del cabello, por ej., preparaciones de pretratamiento, tónicos para el cabello, cremas de estilización, geles de estilización, pomadas, enjuagues para el cabello, paquetes de tratamiento, tratamientos intensivos para el cabello, preparaciones para moldear el cabello, por ej., preparaciones para ondular el cabello para ondas de permanente (onda caliente, onda suave, onda fría), preparaciones para alisar el cabello, preparaciones liquidas para fijar el cabello, espumas para el cabello, aerosol para el cabello, preparaciones decolorantes, por ej., soluciones de peróxido de hidrógeno, champús aclarantes, cremas decolorantes, polvos decolorantes, pastas o aceites decolorantes, colorantes temporales, semipermanentes o permanentes para el cabello, preparaciones que contienen tintes autooxidantes o colorantes naturales para el cabello, tales como alheña o manzanilla.
Los siguientes representan los ejemplos no restrictivos de varias formulaciones que se pueden preparar que contienen uno o más D-aminoácidos. En la técnica se conoce una gran variedad de formulaciones similares en las que se puede incorporar fácilmente uno o más D-aminoácidos en varias concentraciones.
Un ejemplo de jabón tiene, por ejemplo, la siguiente composición: 0.01 a 5 % en peso de uno o más D-aminoácidos, 0.3 a 1 % en peso de dióxido de titanio, 1 a 10 % en peso de ácido esteárico, base de jabón al 100 %, por ej., una sal de sodio de ácido graso de sebo o ácido graso de coco, o glicerol.
Un ejemplo de champú tiene, por ejemplo, la siguiente composición: 0.01 a 5 % en peso de uno o más D-aminoácidos, 12.0 % en peso de sodio lauret-2-sulfato, 4.0 % en peso de cocamidopropil betaína, 3.0 % en peso de NaCI y agua al 100 %.
Un ejemplo de desodorante tiene, por ejemplo, la siguiente composición: 0.01 a 5 % en peso de uno o más D-aminoácidos, 60 % en peso de etanol, 0.3 % en peso de aceite perfumante y agua al 100 %. En algunos casos, se administra una composición farmacéutica de D-aminoácidos para prevenir o reducir la formación de biopeliculas sobre una superficie o sustrato biológicamente importante. Estas superficies incluyen, de modo no taxativo, una superficie epitelial o mucosa del tracto respiratorio, pulmones, la cavidad oral, los tractos digestivo y vaginal, en el oído o la superficie del ojo, y en el tracto urinario. Por ejemplo, una biopelícula puede afectar la superficie de un pulmón (tal como el pulmón de un sujeto que padece neumonía, fibrosis cística o COPD), como las células epiteliales del pulmón.
En determinadas modalidades, la superficie es una superficie biológicamente importante que es una superficie que tiende a entrar en contacto con un fluido biológico, por ej., un componente líquido de un sujeto, tal como sangre, suero, esputo, secreciones lagrimales, semen, orina, secreciones vaginales, muestras de tejido y similares. La superficie biológicamente importante puede ser un componente de un dispositivo, instrumento o implante médico. Los ejemplos no restrictivos incluyen pinzas, fórceps, tijeras, ganchos cutáneos, tubo (tales como, tubos endotraqueales o gastrointestinales), agujas, retractores, raspadores, tornos, escoplos, escofinas, sierras, catéteres, incluyendo catéter permanente (tales como, catéteres urinarios, catéteres vasculares, catéter de diálisis peritoneal, catéteres venosos centrales), componentes de catéteres (tales como, agujas, conectores Leur-Lok, conectores sin agujas), dispositivos ortopédicos, válvulas coronarias artificiales, articulaciones protésicas, prótesis de voz, stents, fístulas, marcapasos, clavos quirúrgicos, respiradores, ventiladores y endoscopios. En particular, la presente invención es adecuada para reducir considerablemente el riesgo de acumulación de biopelículas sobre las superficies de un dispositivo médico adaptado para un implante a largo plazo, donde el dispositivo médico tiene la finalidad de permanecer implantado durante un período relativamente largo de alrededor de 30 días a alrededor de 2 meses o más, y la probabilidad resultante de fallo prematuro del dispositivo debido a la incrustación y oclusión por parte de dicha biopelicula. Sin embargo, dicha incrustación también puede ocurrir en los dispositivos médicos luego de períodos de tiempo más cortos, tales como 30 días o menos, los que también serían considerados como dispositivos para implantes a largo plazo. Por ejemplo, en determinadas modalidades, un dispositivo médico utilizado durante un período de tiempo prolongado se puede implantar durante un período más largo que 24 horas, tal como una semana.
En determinados casos, se puede administrar un D-aminoácido a un sujeto antes de, durante o luego del implante/inserción de un dispositivo médico, catéter, stent, prótesis y similares, o la aplicación de un vendaje para heridas. En algunos casos, el vendaje para heridas incluye un elemento antimicrobiano, tal como plata. El tratamiento antes o después del implante puede ocurrir inmediatamente antes o después del implante o varias horas antes o después del implante o en el momento o momentos que el médico experto considere apropiados.
Se puede aplicar un D-aminoácido a una superficie mediante cualquier medio conocido, por ejemplo, cubriendo, recubriendo, poniendo en contacto, asociando, rellenando o cargando la superficie con una cantidad terapéutica de un D-aminoácido. En ejemplos específicos, se añade directamente un D-aminoácido a una superficie pulverizando la superficie con un película polimérica/de D-aminoácidos, sumergiendo la superficie en una solución polimérica/de D-aminoácidos o mediante otros medios covalentes o no covalentes. En otros casos, la superficie se recubre con una sustancia (tal como hidrogel) que absorbe el D-aminoácido.
La composición puede ser un recubrimiento o una película. Cuando se aplica como parte de una película o recubrimiento, uno o más D-aminoácidos descritos en la presente pueden ser parte de una composición que también comprende un aglutinante. El aglutinante puede ser cualquier polímero u oligómero compatible con los antibiopelículas de la presente. El aglutinante puede encontrarse en forma de un polímero u oligómero antes de la preparación de la composición antibiopelícula, o puede formarse mediante polimerización durante o después de la preparación, incluyendo después de la aplicación al sustrato. En determinadas aplicaciones, tal como en determinadas aplicaciones de recubrimiento, sería deseable reticular el oligómero o polímero de la composición antibiopelícula después de la aplicación. El término "aglutinante", tal como se usa en la presente, incluye materiales como glicoles, aceites, ceras y tensioactivos usados comercialmente en las industrias farmacéutica y de cuidado personal. Es preferible utilizar los materiales que en general son considerados seguros (GRAS).
Cuando la composición es una película termoplástica que se aplica a una superficie, por ejemplo, mediante el uso de un adhesivo o mediante aplicaciones de fusión que incluyen calandrado y coextrusión, el aglutinante es la matriz polimérica termoplástica utilizada para preparar la película. Cuando la composición es un recubrimiento, se puede aplicar como una solución o suspensión líquida, una pasta, gel, aceite o la composición de recubrimiento puede ser un sólido, por ejemplo, un recubrimiento en polvo que posteriormente se cura con calor, luz UV u otro método.
Como la composición de la invención puede ser un recubrimiento o una película, el aglutinante puede estar comprendido por cualquier polímero utilizado en las formulaciones de recubrimiento o en la preparación de la película. Por ejemplo, el aglutinante es un polímero termoestable, termoplástico, elastomérico, intrínsecamente reticulado o reticulado. Los polímeros termoestables, termoplásticos, elastoméricos, intrínsecamente reticulados o reticulados incluyen poliolefina, poliamida, poliuretano, poliacrilato, poliacrilamida, policarbonato, poliestireno, polivinil acetatos, polivinil alcoholes, poliéster, polímeros de vinilo halogenados, tal como, PVC, gomas naturales y sintéticas, resinas de alquido, resinas de epoxi, poliésteres insaturados, poliamidas insaturadas, poliimidas, polímeros que contienen silicio y de carbamato, polímeros fluorinados, resinas acrílicas reticulables derivadas de ésteres acrílicos sustituidos, por ej., de acrilatos de epoxi, acrilatos de uretano o acrilato de poliéster. Los polímeros también pueden ser mezclas y copolímeros de la química que antecede.
Los polímeros de recubrimiento biocompatibles, tales como, poliésteres de poli[-alcoxialcanoato-co-3-hidroxialquenoato] (PHAE), Geiger et. ál. Polymer Bulletin 52, 65-70 (2004), también pueden ser útiles como aglutinantes en la presente invención. Las resinas de alquido, poliésteres, poliuretanos, resinas de epoxi, polímeros que contienen silicona, poliacrilatos, poliacrilamidas, polímeros fluorinados y polímeros de vinil acetato, vinil alcohol y vinil amina son ejemplos no taxativos de aglutinantes de recubrimiento comunes útiles en la presente invención. Otros aglutinantes de recubrimiento conocidos son parte de la presente descripción.
Los recubrimientos se pueden reticular con, por ejemplo, resinas de melamina, resinas de urea, isocianatos, isocianuratos, poliisocianatos, resinas de epoxi, anhídridos, poliácidos y aminas, con o sin aceleradores. Las composiciones descritas en la presente pueden ser, por ejemplo, un recubrimiento aplicado a una superficie que está expuesta a condiciones favorables para la bioacumulación. La presencia de uno o más D-aminoácidos descritos en la presente en dicho recubrimiento puede prevenir la adherencia de organismos a la superficie.
El recubrimiento puede ser base solvente o acuoso. En general, se considera que los recubrimientos acuosos son más ecológicos. En algunos ejemplos, el recubrimiento puede ser una dispersión acuosa de uno o más D-aminoácidos descritos en la presente y un aglutinante o un recubrimiento o pintura a base de agua. Por ejemplo, el recubrimiento puede comprender una dispersión acuosa de uno o más D-aminoácidos y polímeros o copolímeros acrílicos, metacrílicos o de acrilamida o un poliéster de poli[-alcoxialcanoato-co-3-hidroxialquenoato].
En algunos casos, la composición de recubrimiento se puede aplicar a una superficie mediante cualquier medio convencional incluyendo recubrimiento giratorio, recubrimiento por inmersión, recubrimiento por pulverización, trefilado, o mediante un cepillo, rodillo u otro aplicador. Se puede realizar un período de secado o cura.
El espesor del recubrimiento o la película puede variar dependiendo de la aplicación y el experto en la técnica puede determinarlo fácilmente luego de un período de prueba limitado.
En algunos casos, una composición descrita en la presente puede encontrarse en forma de una película laminada protectora. Dicha película puede comprender polímeros termoestables, termoplásticos, elastoméricos o reticulados. Los ejemplos de dichos polímeros incluyen, de modo no taxativo, poliolefina, poliamida, poliuretano, poliacrilato, poliacrilamida, policarbonato, poliestireno, polivinil acetatos, polivinil alcoholes, poliéster, polímeros de vinilo halogenados, tal como, PVC, gomas naturales y sintéticas, resinas de alquido, resinas de epoxi, poliésteres insaturados, poliamidas insaturadas, poliimidas, polímeros fluorínados, polímeros que contienen silicio y de carbamato. Los polímeros también pueden ser mezclas y copolímeros de la química que antecede.
Cuando una composición descrita en la presente es una película preformada, se puede aplicar a una superficie mediante, por ejemplo, el uso de un adhesivo, o se puede coextrudir sobre la superficie. También se puede adherir de forma mecánica mediante sujetadores, lo que puede requerir el uso de un sellador o masilla, donde también se pueden emplear ventajosamente los esteres de la presente invención. Una película plástica también se puede aplicar con calor, incluyendo aplicaciones de calandrado, fusión y mediante embalaje termoplástico.
Dado el amplio conjunto de aplicaciones para los D-aminoácidos descritos en la presente, una composición que contiene D-aminoácidos puede incluir otros aditivos, tales como antioxidantes, absorbentes UV, aminas impedidas, fosfitos o fosfonitas, benzofuran-2-onas, tiosinergistas, estabilizadores de poliamida, estearatos metálicos, agentes cristalizadores, rellenos, agentes de refuerzo, lubricantes, emulsificantes, tintes, pigmentos, dispersantes, otros abrillantadores ópticos, retardantes de llama, agentes antiestáticos, agentes de soplado y similares, tales como los materiales enumerados a continuación o mezclas de estos.
Los dispositivos médicos preparados a partir de plástico pueden incorporar un D-aminoácido durante el proceso de formación, por ej., moldeo. Los dispositivos médicos a base de plástico que se ven beneficiados con el presente método incluyen, de modo no taxativo, artículos de plástico utilizados en el área de la medicina, por ej., materiales de vendaje, jeringas, catéteres, etc., denominados "dispositivos médicos", guantes y colchones. Los ejemplos de dichos plásticos son polipropileno, polietileno, PVC, POM, polisulfonas, polietersulfonas, poliestirénicos, poliamidas, poliuretanos, poliésteres, policarbonato, poliacrílicos y metacrílicos, polibutadienos, poliolefinas termoplásticas, ¡onómeros, poliésteres insaturados y mezclas de resinas poliméricas incluyendo ABS, SAN y PC/ABS.
Los D-aminoácidos, especialmente en bajas concentraciones, se pueden usar de forma segura incluso en aplicaciones donde es posible la ingestión, tales como botellas de agua reutilizables o bebederos donde se puede desarrollar una biopelícula. Las superficies de dichos dispositivos de transporte de agua se pueden enjuagar con una formulación que contiene uno o más D-aminoácidos descritos en la presente, o se pueden introducir niveles bajos de uno o más D-aminoácidos en el agua que pasa a través de los recipientes de los conductos. Por ejemplo, se puede introducir alrededor de 0.0001 % o menos o hasta alrededor de 1 %, en general menos de alrededor de 0.1 % en peso de uno o más D-aminoácidos en dicha agua. Dada la gran actividad de los D-aminoácidos de la presente, se pueden usar muy pequeñas cantidades son eficaces en muchas circunstancias y concentraciones de alrededor de 0.000001 % a alrededor de 0.1 %, por ejemplo, alrededor de 0.000001 % a alrededor de 0.01 %, o alrededor de 0.000001 % a alrededor de 0.001 %, o 0.000001 % a 0.1 %, 0.000001 % a 0.01 %, o 0.000001 % a 0.001 % en dichas aplicaciones.
Cuando se usan en un recubrimiento o película, las pequeñas cantidades de uno o más D-aminoácidos pueden estar presentes para su uso a corto plazo, por ejemplo, un uso, artículos temporales o desechables, especialmente las aplicaciones que involucran un posible contacto humano, férulas, catéteres, tubos, equipo dental, etc. En general, se puede usar alrededor de 0.001 % o menos, hasta alrededor de 5%, por ejemplo, hasta alrededor de 3% o alrededor de 2%, o preferentemente 0.001 % o menos, hasta 5%, hasta 3% o 2% en peso de uno o más aminoácidos en dichos recubrimientos o películas. Dada la gran actividad de los D-aminoácidos de la presente, muy pequeñas cantidades son eficaces en muchas circunstancias y concentraciones de alrededor de 0.0001 % a alrededor de 1 %, por ejemplo, se puede usar alrededor de 0.0001 % a alrededor de 0.5%, o alrededor de 0.0001 % a alrededor de 0.01 %, o preferentemente 0.0001 % a 1%, 0.0001 % a 0.5%, o 0.0001 % a 0.01 % en peso de uno o más D-aminoácidos.
Para la incorporación en un artículo de plástico moldeado, se puede usar alrededor de 0.00001 % a alrededor de 10% de uno o más D-aminoácidos, por ejemplo, alrededor de 0.0001 % a alrededor de 3%, por ejemplo, se puede usar alrededor de 0.001 % hasta alrededor de 1 % de uno o más D-aminoácidos, o preferentemente, se puede usar 0.00001% a 10%, 0.0001 % a 3 0.001 % hasta 1 % en peso de uno o más D-aminoácidos. En las situaciones en las que los D-aminoácidos se impregnan en la superficie de una fibra o artículo moldeado previamente preparado, la cantidad real de un D-aminoácido presente en la superficie puede depender del material de sustrato, la formulación de la composición impregnadaí y del tiempo y temperatura usados durante el paso de impregnación. Dada la gran actividad de los D-aminoácidos de la presente, muy pequeñas cantidades son eficaces en muchas circunstancias y concentraciones de alrededor de 0.0001 % a alrededor de 1 %, por ejemplo, se puede usar alrededor de 0.0001 % a alrededor de 0.1 %, o alrededor de 0.0001 % a alrededor de 0.01 % en plásticos, o preferentemente se puede usar 0.0001 % a 1 %, 0.0001% a 0.1 %, o 0.0001 % a 0.01 % en peso de uno o más aminoácidos.
La inhibición o reducción en una biopelícula mediante el tratamiento con un D-aminoácido se puede medir usando técnicas consolidadas en la técnica. Estas técnicas permiten evaluar la unión bacteriana midiendo la tinción de la biomasa adherente, visualizar los microbios in vivo usando métodos de microscopía o controlar la muerte celular en la biopelícula como respuesta a los agentes tóxicos. Luego del tratamiento, la biopelícula se puede reducir con respecto al área de superficie cubierta por la biopelícula, espesor y consistencia (por ejemplo, la integridad de la biopelícula). Los ejemplos no taxativos de los ensayos de biopelícula incluyen ensayos de biopelícula de placa de microtitulación, ensayos fluorescentes de biopelícula, ensayos estáticos de biopelícula de acuerdo con Walker et ál., Infect. Immun. 73:3693-3701 (2005), ensayos de interfaz aire-líquido, ensayos de biopelícula de colonias y ensayos de cuentagotas de biopelícula Kadouri (Merritt et ál., (2005) Current Protocols in Microbiology 1 . B.1.1-1. B.1.17). Dichos ensayos se pueden usar para medir la actividad de un D-aminoácído en la desintegración o inhibición de la formación de una biopelícula (Lew et ál., (2000) Curr. Med. Chem. 7(6):663-72¡ Werner et ál., (2006) Brief Funct. Genomic Proteomic 5(1):32-6).
En otros casos, el tratamiento se puede evaluar midiendo el crecimiento de bacterias y/o se puede cuantificar midiendo la densidad de bacterias que forman biopelículas en una muestra biológica. Los ejemplos no taxativos de las muestras biológicas incluyen sangre, suero, esputo, secreciones lagrimales, semen, orina, secreciones vaginales y muestras de tejido. La reducción del crecimiento de bacterias también se puede medir mediante radiografías de tórax o mediante una prueba de función pulmonar (PFT) (por ejemplo, espirometría o volumen espiratorio forzado (FEV-i)).
En otras situaciones, la presencia o crecimiento de bacterias que producen biopelículas se puede medir detectando la presencia de antígenos de bacterias que producen biopelículas en una muestra biológica, tales como las que se describen anteriormente. Por ejemplo, se puede usar un anticuerpo de los componentes de S. pneumoniae para evaluar la colonización/infección en un sujeto afectado con una condición o trastorno relacionado con biopelículas, tal como evaluando la presencia de antígenos de Streptococcus en una muestra biológica. Dichos anticuerpos se pueden generar de acuerdo con métodos consolidados en la técnica o se pueden obtener comercialmente (por ejemplo, de Abcam, Cambridge, MA, Cell Sciences Cantón, MA, Novus Biologicals, Littleton, CO o GeneTex, San Antonio, TX).
Las terapias apropiadas para el tratamiento de trastornos relacionados con biopelículas con un D-aminoácido se pueden determinar usando técnicas consolidadas en la técnica. Por ejemplo, se pueden usar modelos animales que usan mamíferos para evaluar la eficacia del tratamiento con D-aminoácidos. Los ejemplos no taxativos incluyen implantar perlas poliméricas, por ej., perlas de polimetilmetacrilato (PMMA) cargadas con el D-aminoácido en ratas y evaluar su capacidad de prevenir biopelículas. Las perlas de polimetilmetacrilato (PMMA) en ratas y catéteres en ratones se han usado como modelos animales para la formación de biopelículas de Staph aureus. Ver, por ej., Anguita-Alonzo et ál., ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, julio de 2007, p. 2594-2596, y Beenken et ál. JOURNAL OF BACTERIOLOGY, julio de 2004, p. 4665-4684, que se incorporan a la presente en su totalidad mediante esta referencia.
Terapia combinada En términos muy generales, las biopelículas son consideradas conjuntos de microorganismos vivos o muertos, especialmente las bacterias, que se adhieren a las superficies vivas o inertes, junto con sus metabolitos en forma de sustancias poliméricas extracelulares (matriz de EPS), por ej., polisacáridos. La actividad de sustancias antibiopelícula que normalmente exhiben una marcada actividad de inhibición del crecimiento o letal con respecto a las células planctónicas se puede reducir mucho con respecto a los microorganismos que están organizados en las biopelículas, por ejemplo, debido a la inadecuada penetración de las sustancia activa en la matriz biológica.
En algunos casos, se puede administrar un D-aminoácido solo o junto con un segundo agente, por ej., un biocida, un antibiótico o un agente antimicrobiano, para tratar una biopelícula o para prevenir la formación de una biopelícula. Se puede coadministrar un antibiótico con el D-aminoácido ya sea secuencial o simultáneamente. Por ejemplo, cualquiera de las composiciones descritas en la presente se pueden formular para incluir uno o más D-aminoácidos y uno o más segundos agentes.
El antibiótico puede ser cualquier compuesto conocido por un experto en la técnica que puede inhibir el crecimiento de las bacterias o eliminarlas. Los ejemplos útiles no taxativos de antibióticos incluyen lincosamidas (clindomicina); cloranfenicoles; tetraciclinas (tal como, tetraciclina, clortetraciclina, demeclociclina, metaciclina, doxiciclina, minociclina); aminoglicósidos (tal como, gentamicina, tobramicina, netilmicina, amikacina, kanamicina, streptomicina, neomicina); beta-lactamas (tal como, penicilinas, cefalosporinas, imipenem, aztreonam); antibióticos glucopéptidos (tal como, vancomicina); antibióticos polipéptidos (tal como, bacitracina); macrólidos (eritromicinas), anfotericinas; sulfonamidas (tal como, sulfanilamida, sulfametoxazol, sulfacetamida, sulfadiazina, sulfisoxazol, sulfacitina, sulfadoxina, mafenida, p-ácido aminobenzoico, trimetoprim-sulfametoxazol); metenamina; nitrofurantoína; fenazopiridina; trimetoprim; rifampicinas; metronidazoles; cefazolinas; lincomicina; espectinomicina; mupirocinas; quinolonas (tales como, ácido nalidíxico, cinoxacina, norfloxacina, ciprofloxacina, perfloxacina, ofloxacina, enoxacina, fleroxacina, levofloxacina); novobiocinas; polimixinas; gramicidinas y antipseudomonales (tales como, carbenicilina, carbenicilina indanilo, ticarcilina, azlocilina, mezlocilina, piperacilina) o cualquier sal o variante de estos. Dichos antibióticos están comercialmente disponibles, por ej., en Daiichi Sankyo, Inc. (Parsipanny, NJ), Merck (Whitehouse Station, NJ), Pfizer (Nueva York, NY), Glaxo Smith Kline (Research Triangle Park, NC), Johnson & Johnson (New Brunswick, NJ), AstraZeneca (Wilmington, DE), Novartis (East Hanover, NJ) y Sanofi-Aventis (Bridgewater, NJ). El antibiótico utilizado dependerá del tipo de infección bacteriana.
Los biocidas conocidos adicionales incluyen biguanida, clorhexidina, triclosán, dióxido de cloro y similares.
Los ejemplos útiles de agentes antimicrobianos incluyen, de modo no taxativo, piritiones, especialmente el complejo de zinc (ZPT); Octopirox®; dimetildimetilol hidantoína (Glydant®); metilcloroisotiazolinona/ metilisotiazolinona (Kathon CG®); sulfito de sodio; bisulfito de sodio; imidazolidinil urea (Germall 115®, diazolidinil urea (Germaill II®); alcohol bencílico; 2-bromo-2-nitropropano-1 ,3-diol (Bronopol®); Formalin (formaldehído); yodo-'pro-'penil butilcarbamato (Polyphase P100®); cloroacetamida; metanamina; metildibromo-'nitnlo glutaronitrilo (1 ,2-dibromo-2,4-dicianobutano o Tektamer®); glutaraldehído; 5-bro-,mo-5-nitro-1 ,3-dioxano (Bronidox®); alcohol fenetílico; o-fenilfenol/sodio o-feni fenol; hidroximetilglicinato de sodio (Suttocide A®); oxazolidina bicíclica de polimetoxi (Nuosept C®); dimetoxano; timersal; alcohol diclorobencílico; captan; clorfenenesina; diclorofeno; clorbutanol; laurato de glicerilo; éteres de difenilo halogenados; 2,4,4,-tricloro-2'-hidroxi-difenil éter (Triclosán®. o TCS); 2,2'-dihidroxi-5,5'-dibromo-difenil éter; compuestos fenólicos; fenol; 2-metil fenol; 3-metil fenol; 4-metil fenol; 4-etil fenol; 2,4-dimetil fenol; 2,5-dimetil fenol; 3,4-dimetil fenol; 2,6-dimetil fe-'nol; 4-n-propil fenol; 4-n-butil fenol; 4-n-amil fenol; 4-terc-amil fenol; 4-n-hexil fenol; 4-n-heptil fenol; mono- y poli-alquilo y halofenoles aromáticos, p-cloro^fe^nol; metil p-clorofenol; etil p-clorofenol; n-propil p-clorofenol; n-butil p-cloro^fenol; n-amil p-clorofenol; sec-amil p-clorofenol; ciclohexil p-cloro-'fe-'nol; n-heptil p-clorofenol; n-octil p-clorofenol; o-clorofenol; metil o-cloimfenol; etil o-clorofenol; n-propil o-clorofenol; n-butil o-clorofenol; n-amil o-cloro^fenol; terc-amil o-clorofenol; n-hexil o-clorofenol; n-heptil o-clorofenol; o-ben-Oil p-clorofenol; o-bencil-m-metil p-clorofenol; o-bencil-m; m-dimetil p-cloro^fenol; o-feniletil p-clorofenol; o-feniletil-m-metil p-clorofenol; 3-metil p-clorofenol; 3,5-dimetil p-clorofenol; 6-etil-3-metil p-clorofenol; 6-n-propil-3-metil p-clorofenol; 6-iso-propil-3-metil p-clorofenol; 2-etil-3,5-dimetil p-cloro->fenol; 6-sec-butil-3-metil p-clorofenol; 2-iso-propil-3,5-dimetil p-clorofenol; 6-dietilmetil-3-metil p-clorofenol; 6-iso-propil-2-etil-3-metil p-clorofenol; 2-sec-amil-3,5-dimetil p-clorofenol; 2-dietilmetil-3,5-dimetil p-clorofenol; 6-sec-octil-3-metil p-clorofenol; p-cloro-m-cresol; p-bromofenol; metil p-bromofenol; etil p-bromofenol; n-propil p-bromofenol; n-butil p-bromofenol; n-amil p-bromo-'fenol; sec-amil p-bromofenol; n-hexil p-bromofenol; ciclohexil p-bromofenol; o-bromofenol; terc-amil o-bromofenol; n-hexil o-bromofenol; n-propil-m, m-dimetil o-bromofenol; 2-fenil fenol; 4-cloro-2-metil fenol; 4-cloro-3-metil fenol; 4-cloro-3,5-dimetil fenol; 2,4-dicloro-3,5-dimetilfenol; 3,4,5,6-terabromo-2-metihfenol; 5-metil-2-pentilfenol; 4-isopropil-3-metilfenol; para-cloro-meta-xilenol (PCMX); clorotimol; fenoxietanol; fenoxiisopropanol; S-cloro^-hidroxidi^feni metano; resorcinol y sus derivados; resorcinol; resorcinol de metilo; resorcinol de etilo; resorcinol de n-propilo; resorcinol de n-butilo; resorcinol de n-amilo; resorcinol de n-hexilo; Re-'sorcinol de n-heptilo; resorcinol de n-octilo; resorcinol de n-nonilo; resorcinol de fenilo; resorcinol de bencilo; resorcinol de feniletilo; resorcinol de fenilpropilo; resorcinol de p-clorobencilo; 5-cloro 2,4-dih drox difenil metano; 4'-cloro 2,4-dihidroxidifenil metano; 5-bromo 2,4-dihidrox difenil metano; 4'-bromo 2,4-dihidroxidifenil metano; compuestos bisfenólicos; 2,2'-metileno bis-(4-clorofenol); 2,2'-metileno bis-(3,4,6-triclorofenol); 2,2'-metileno bis-,(4-cloro-6-bromofenol); bis(2-hidroxi-3,5-diclorofenil)sulfuro; bis(2-hidroxi-5-clo-ro-'benci sulfuro; ésteres benzoicos (parabenos); metilparabeno; propilparabeno; butilpara^beno; etilparabeno; isopropilparabeno; isobutilparabeno; bencilparabeno; metilpara-'beno de sodio; propilparabeno de sodio; carbanilidas halogenados; 3,4,4'-triclorocarbanilidas (Triclo-Oanban® o TCC); 3-trifluorometil-4,4'-diclorocarban¡lida; 3,3',4-triclorocarbanilida; clorohexidina y su digluconato; diacetato y diclorhidrato; ácido undecenoico; tiabendazol, hexetidina; poli(hexametilenobiguanida) clorhidrato (Cosmocil®); compuestos de plata, tales como, sales orgánicas de plata o sales inorgánicas de plata, cloruro de plata, incluyendo formulaciones de estos, tales como, JM Acticare® y partículas micronizadas de plata.
Trastornos relacionados con biopelículas Los métodos y tratamientos que utilizan D-aminoácidos incluyen inhibir o prevenir la formación de biopelículas, incluso o especialmente sin inhibir el crecimiento de organismos, así como la desintegración de una biopelícula una vez formada.
Se puede usar un D-aminoácido para tratar trastornos relacionados con biopelículas en un sujeto administrando al sujeto una cantidad eficaz de D-aminoácido que reduce la formación de biopelículas en el sujeto. Una reducción del crecimiento bacteriano indica la reducción o inhibición de la producción de biopelículas en el sujeto.
En algunos casos, un D-aminoácido puede inhibir o reducir la formación de biopelículas disminuyendo la adherencia de las bacterias que forman biopelícula a una superficie o aumentando la muerte de bacterias. Este enfoque terapéutico puede ser útil para el tratamiento de trastornos o afecciones relacionados con biopelículas, o de infecciones relacionadas con dispositivos médicos asociadas con la formación de biopelículas microbianas.
Los ejemplos no taxativos de trastornos relacionados con biopelículas incluyen otitis media, prostatitis, cistitis, bronquiectasia, endocarditis bacteriana, osteomielitis, caries dental, enfermedad periodontal, cálculos renales infecciosos, acné, legionelosis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) y fibrosis cística. En un ejemplo específico, los sujetos que padecen fibrosis cística presentan una acumulación de biopelículas en los pulmones y el tracto digestivo. Los sujetos afectados con COPD, tales como enfisema y bronquitis crónica, presentan una inflamación característica de las vías respiratorias donde el flujo de aire que pasa por dichas vías respiratorias y, posteriormente sale de los pulmones, está crónicamente obstruido.
Los trastornos relacionados con biopelículas también pueden abarcar infecciones derivadas de dispositivos implantados/insertados, infecciones relacionadas con dispositivos médicos, tales como infecciones de los stents biliares, infecciones de implantes ortopédicos e infecciones relacionadas con catéteres (renal, vascular, peritoneal). Una infección también puede tener su origen en los sitios donde la integridad de la piel y/o tejido blando se ha visto comprometida. Los ejemplos no taxativos incluyen dermatitis, úlceras de la enfermedad vascular periférica, una herida por quemadura y traumatismo. Por ejemplo, una bacteria gram-positiva, tal como S. pneumoniae, puede causar infecciones oportunistas en dichos tejidos. La capacidad de S. pneumoniae para infectar los sitios de heridas por quemadura, por ej., se ve potenciada debido a la desintegración de la piel, defectos inmunitarios relacionados con quemaduras y antibióticos.
En algunos casos, se trata un sujeto. Un sujeto puede ser un mamífero incluyendo, de modo no taxativo, un primate (por ej., un mono, tal como un mono cinomolgo, un chimpancé y un humano). Un sujeto puede ser un animal no humano, tal como un pájaro (por ej., codorniz, pollo o pavo), un animal de granja (por ej., vaca, cabra, caballo, cerdo u oveja), una mascota (por ej., gato, perro, cobayo o ratón) o un animal de laboratorio (por ej., un modelo animal de un trastorno). Los sujetos humanos representativos no taxativos pueden ser un niño, un preadolescente, un adolescente, un adulto o un adulto mayor.
En algunos casos, un sujeto que necesita tratamiento puede ser un sujeto afectado con una o más infecciones o trastornos descritos en la presente. En algunos casos, el sujeto se encuentra en riesgo de generar una biopelícula sobre una superficie biológicamente importante o ya ha generado dicha biopelícula. Dichos sujeto que se encuentra en riesgo puede ser aspirante al tratamiento con un D-aminoácido para inhibir el desarrollo o inicio de un trastorno/afección relacionados con la producción de biopeliculas o prevenir la recurrencia, inicio o desarrollo de uno o más síntomas de un trastorno o afección relacionados con biopeliculas. Dicho sujeto puede estar albergando una biopelícula inmadura que es clínicamente manifiesta o detectable por parte del experto, pero que aún no se ha formado por completo. Un sujeto que se encuentra en riesgo de desarrollar una biopelícula también puede ser un sujeto que tiene programado el implante de un dispositivo permanente, tal como un dispositivo médico. El riesgo de desarrollar una biopelícula también puede deberse a una propensión a desarrollar una enfermedad relacionada con biopeliculas (tal como la presencia de una mutación del canal transportador asociada con la fibrosis cística). En dichos sujetos, un trastorno relacionado con biopeliculas puede encontrarse en cualquier etapa, por ej., aún no se ha detectado infección bacteriana ni formación de biopelícula.
En un ejemplo específico, los métodos descritos en la presente se pueden usar para prevenir la formación de biopeliculas en las vías respiratorias de un paciente con fibrosis cística. Dicho paciente puede ser tratado mientras no presenta infección bacteriana de las vías respiratorias luego de la detección de una infección bacteriana.
La invención se describe adicionalmente en el siguiente ejemplo, que no limita el alcance de la invención descrita en las reivindicaciones. La temperatura ambiente indica una temperatura del intervalo de 20-25°C.
EJEMPLOS Materiales y métodos Cepas y medios. Bacillus subtilis NCIB3610 y sus derivados fueron cultivados en medio de Luria-Bertani (LB) a 37°C o medio de MSgg (Branda et ál., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 98:11621 (2001 )) a 23°C. Los medios sólidos contienen 1.5% de Bacto agar. Cuando se consideró apropiado, los antibióticos se agregaron en las siguientes concentraciones para el crecimiento de B. subtilis: 10 pg por mi de tetraciclina, y 5 pg por mi de eritromicina, 500 pg por mi de espectinomicina.
Cepas utilizadas en este caso: Todas las cepas de B. subtilis son derivados de NCIB 3610, una cepa silvestre que forma biopelículas resistentes (Branda et ál., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 98:11621 (2001)); Cepa FC5 (PepsA-lacZ cat) (Chu et ál., Mol. Microbiol. 59:1216 (2006)); Cepa FC122 (PyqxM-lacZ spec) (Chu et ál., Mol. Microbiol. 59:1216 (2006)); Cepa IKG55 (AracX::spec AylmE::tetR); Cepa DR-30 (tasA-mCherry cat); Cepa IKG40 (yqxM2); Cepa IKG44 (yqxM6); Cepa IKG50 (yqxM2 tasA-mCherry); Cepa IKG51 (yqxM6 tasA-mCherry); Staphylococcus aureus SC01 de la colección de laboratorio de Kolter.
Construcción de las cepas. Las cepas se construyeron usando métodos estándar (J. Sambrook, D. W. Russell, Molecular Cloning. A Laboratory Manual. (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA, 2001 ). La mutagénesis por PCR de flanqueo largo se usó para crear AracX::spec y AylmE::tetR (Wach, Yeast 12:259 (1996)). Se introdujo ADN en los derivados de la cepa PY79 mediante transformación mediada por ADN de células competentes (Gryczan et ál., J. Bacteriol. 134:318 (1978)). La transducción mediada por fagos SPP1 se usó para introducir mutaciones relacionadas con la resistencia de los antibióticos de derivados de PY79 en NCIB3610 (Yasbin et ál., J. Virol. 14:1343 (1974)).
Reactivos. Los aminoácidos se obtuvieron de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). 4C-D-tirosina y 14C-L-prolina se obtuvieron de American Radiolabeled Chemicals, Inc (St. Louis, MO).
Formación de colonias y capas. Para la formación de colonias sobre el medio sólido, primero las células se cultivaron en una fase de crecimiento exponencial en caldo de LB y se salpicaron 3 µ? de cultivo sobre un medio de MSgg sólido que contiene 1.5% de Bacto agar. Las placas se incubaron a 23°C. Para la formación de una capa delgada en medio líquido, las células se cultivaron en fase exponencial y se mezclaron 6 pl de cultivo con 6 mi de medio en una placa de 12 pocilios (VWR). Las placas se incubaron a 23°C. Las imágenes de las colonias y las capas delgadas fueron tomadas usando una cámara SPOT (Diagnostic Instruments, USA).
Preparación del medio acondicionado. Las células se cultivaron en medio de LB en fase exponencial. Se agregó 0.1 mi de cultivo a 100 mi de medio de MSgg y se cultivó sin agitar en un vaso de precipitación de 500 mi a 23°C. luego, se recogieron la capa delgada y el medio acondicionado mediante centrifugación a 8,000 rpm durante 15 min. El medio acondicionado (fluido sobrenadante) se retiró y filtró a través de un filtro de 0.22 pm. Los filtrados se almacenaron a 4°C. Para la purificación adicional, la actividad de inhibición de biopelículas se dividió en un cartucho Sep Pak C-18 usando la elución gradual de 0% a 100% de metanol con pasos de 5%.
Identificación y cuantificacion de D-aminoácidos en el medio acondicionado. (A) Cuantificacion de aminoácidos. Las soluciones estándar de Tyr, Leu, Met y Trp se prepararon en varias concentraciones (0.001 - 0.2 mM). Estas soluciones se analizaron mediante LC/MS con un sistema de solvente gradiente gradual de 0% a 60%, luego a 100% de CH3CN con 0.1 % de ácido fórmico (0-12-20 min) (Thermo Scientific Hypercarb 4.6 mm ? 100 mm, 5 pm) para obtener las curvas de calibración de cada concentración de aminoácidos mediante integración del conteo de iones. Las muestras de medio acondicionado se analizaron mediante LC/MS de la misma manera para medir las concentraciones totales de todos los cuatro aminoácidos quirales. (B) Identificación de aminoácidos. La muestra se secó en un SpeedVac y disolvió en 100 pL 1 N de NaHC03. Se preparó una solución de 10 mg/mL de L-FDAA (N-(2,4-dinitro-5-fluoro-fenil)-L-alaninoamida) en acetona y se agregaron 50 µ?_ de la solución de acetona a la muestra en 1 N NaHC03. La mezcla de reacción se incubó a 80°C durante 5 min y se agregaron 50 µ?_ de 2N HCI para inactivar la reacción. Los derivados se analizaron mediante LC/MS usando un sistema de solvente gradiente de 10% a 100% CH3CN con 0.1 % de ácido fórmico durante 30 min (Agilent 1200 Series HPLC/ 6130 Series MS, Phenomenex Luna C18, 4.6 mm ? 100 mm, 5 pm). Se compararon los tiempos de retención de los L-FDAA-aminoácidos con los L-FDAA-aminoácidos auténticos estándar.
Tinción con cristal violeta. La tinción con cristal violeta se realizó tal como se describe anteriormente (OToole et ál., Mol. Microbiol. 30:295 (1998)), salvo que las células se cultivaron en placas de 6 pocilios. Los pocilios se tiñeron con 500 µ? de tinte de cristal violeta al 1 .0%, se lavaron dos veces con 2 mi de agua destilada dos veces y se secaron por completo.
Microscopía fluorescente. Para el análisis de microscopía fluorescente, se cosechó 1 mi de cultivo. Las células se lavaron con amortiguador de PBS y se suspendieron en 50 pl de amortiguador de PBS. Las láminas de recubrimiento se trataron previamente con poli L-lisina (Sigma). Las muestras se examinaron usando un microscopio Olympus workstation BX61 . Las imágenes fueron tomadas usando el programa de software automático SimplePCl y se analizaron con el programa MetaMorph (Universal Imaging Corporation).
Microscopía electrónica de transmisión e inmunotransferencia. Las muestras se diluyeron con agua destilada y absorbieron sobre una rejilla cubierta con carbono o formvar/carbono. La superficie de la rejilla se hizo hidrofilica antes de su uso con una descarga luminiscente en un evaporador a vacío. Una vez que se absorbió la muestra sobre la superficie de la película, el exceso de muestra se secó sobre un papel de filtro (Whatman #1) y se hizo flotar la rejilla en 5 µ? de la solución de tinción (1-2% de acetato de uranilo acuoso) durante unos pocos minutos y luego se secó. Las muestras se secaron y examinaron en un microscopio Tecnai™ G2 Spirit BioTWIN a un voltaje acelerado de 80 KV. Las imágenes fueron tomadas con una cámara AMT 2k CCD.
Para la inmunolocalización de TasA, se hicieron flotar muestras diluidas sobre rejillas de níquel en amortiguador de bloqueo que consiste en 1 % de leche seca no grasa en PBS con 0.1 % de Tween 20 durante 30 min, se incubaron durante 2 h con anticuerpo primario anti-TasA diluido 1 :150 en amortiguador de bloqueo, se enjuagaron en PBST, luego se expusieron a anticuerpo secundario cabra anti conejo con oro de 20 nm (Ted Pella, Inc., Redding, CA) durante 1 h y se enjuagaron. Todas las rejillas se tiñieron con acetato de uranilo y citrato de plomo, luego se visualizaron tal como se describe anteriormente.
Ensayos de la actividad de ß-galactosidasa. Las células se cultivaron en medio de MSgg a 37°C en un baño de agua con agitación. En cada momento se recogió 1 mi de cultivo. La actividad de ß-galactosidasa se determinó tal como se describió anteriormente (Chai et ál., Mol. Microbiol. 67:254 (2008)).
Incorporación de aminoácidos en la pared celular. Las células en 50 mi de cultivo en la fase exponencial media del crecimiento se cosecharon mediante centrifugación y se lavaron con 0.05 M de amortiguador de fosfato (pH 7) y se volvieron a suspender en 5 mi del mismo amortiguador. Las células se trataron con 10 pCi/ml de 14C-D-tirosina o uC-L-prolina y se incubaron adicionalmente a 37°C durante 2 horas. La radioactividad de las células enteras y la fracción de la pared celular se controlaron y las muestras se retiraron en intervalos. Para la medición de la incorporación en células enteras, se recogieron muestras de 0.1 mi. Para la medición de la incorporación en la pared celular, se recogieron muestras de 0.5 mi. Las células se cosecharon mediante centrifugación y se volvieron a suspender en amortiguador de SM [0.5 M de sucrosa, 20 mM de MgCI2 y 10 mM de fosfato de potasio a pH (6.8)] que contiene 0.1 mg/ml de lisozima. Luego, las células se incubaron a 37 °C durante 10 min. Luego, los protoplastos resultantes se retiraron mediante centrifugación a 5000 rpm durante 10 min, dejando el material de la pared celular en el fluido sobrenadante. Se confirmó que la fracción de la pared celular no contenía proteína mediante análisis de inmunotransferencia usando anticuerpos antisigma A. Por último, se agregaron 10 mi de ácido trifluoroacético al 5% a las muestras de células enteras y el material de la pared celular se mantuvo en hielo al menos durante 30 min. El material insoluble de TCA se recogió en filtros Millipore (tamaño de poro de 0.22 µ??, Millipore) y se lavó con TCA al 5%. Los filtros se secaron al aire y colocaron en recipientes de centelleo y los conteos insolubles en TCA por minuto se determinaron usando un conteo de centelleo.
EJEMPLO 1 Análisis de los D-aminoácidos en la formación de biopelículas por parte de B. Subtilis B. subtilis forma una capa gruesa en la interíaz aire-liquido de cultivos en reposo luego de tres días de incubación en medio que produce biopelícula (Fig. 1A). Luego de la incubación durante tres a cinco días adicionales, sin embargo, la capa pierde su integridad estructural (Fig. 1 B). Para investigar si las biopelículas maduras producen un factor que provoca la desintegración de la biopelícula, se analizó el efecto de extractos concentrados y parcialmente purificados de medio acondicionado en la formación de una capa cuando se agregaron al medio fresco. Con este propósito, el medio acondicionado de un cultivo de ocho días se aplicó a una columna Sep Pak C18. Luego, el eluato concentrado de la columna se agregó a un cultivo recién inoculado. Una cantidad del eluato concentrado correspondiente al 25% del material de un volumen equivalente de medio acondicionado fue suficiente para prevenir la formación de una capa (Fig. 1C). Como control, se observó que la adición del eluato concentrado preparado usando medio acondicionado de un cultivo de tres días no surtió efecto o muy poco efecto sobre la formación de una capa (Fig. D). La purificación adicional del factor se alcanzó eluyendo el cartucho de forma gradual con concentraciones cada vez mayores de metanol. La elución con 40% de metanol dio como resultado una fracción que era altamente activa en la inhibición de la formación de una capa (Fig. 1 E). Sin embargo, este material no surtió efecto o muy poco en el crecimiento celular. La actividad inhibidora de biopelículas fue resistente al calentamiento a 100 °C durante 2 horas y al tratamiento con proteinasa K (Fig. F).
Se analizaron D-tirosina, D-leucina, D-triptófano y D-metionina para inhibir la formación de biopelículas por parte de B. subtilis, tanto en medio líquido como sólido (Fig. 2A, 5, 6). La figura 2A muestra los efectos de agregar D-tirosina (3 µ?), D-leucina (8.5 mM), L-tirosina (7 mM) o L-leucina (8.5 mM) a cultivos recién inoculados en medio que produce biopelícula luego de la incubación durante 3 días sobre la formación de una capa. Tanto la D-tirosina como la D-leucina mostraron una inhibición considerable del crecimiento de biopelículas, en comparación con los L-aminoácidos correspondientes. De manera similar, la figura 5 muestra pocilios que contienen medio de MSgg complementado con D-triptófano (0.5 mM), D-metionina (2 mM), L-triptófano (5 mM) o L-metionina (5 mM) que fueron inoculados con la cepa NCIB3610 e incubados durante 3 días. Solamente los D-aminoácidos fueron activos en la inhibición de la formación de biopelículas.
La figura 6 muestra placas que contienen medio de MSgg sólido complementado con D-tirosina (3 µ?) o D-leucina (8.5 mM) que fueron inoculados con la cepa NCIB3610 e incubados durante 4 días. Tanto la D-tirosina como la D-leucina inhibieron la formación de biopelículas.
D-metionina, D-triptófano, D-tirosina y D-leucina mostraron una inhibición considerable del crecimiento de biopelículas, en comparación con los L-aminoácidos correspondientes. Por el contrario, los L-isómeros y D-isómeros correspondientes de otros aminoácidos, tales como D-alanina y D-fenilalanina, no fueron eficaces en el ensayo de inhibición de biopelículas de B. subtilis.
Luego, se determinó la concentración mínima (MIC significa mínima concentración inhibitoria) necesaria para prevenir la formación de biopelículas. Tal como se muestra en la Fig. 2B, la actividad de los D-aminoácidos individuales variaba, siendo la D-tirosina la más eficaz. D-metionina, D-triptófano y D-leucina presentaron una MIC de alrededor de 1 mM, mientras que D-tirosina presentó una MIC de alrededor de 100 nM. Sorprendentemente, una mezcla de los cuatro D-aminoácidos (en cantidades equímolares) fue particularmente potente, con una MBIC de <10 nM. Por lo tanto, los D-aminoácidos actúan de forma sinergística. Los D-aminoácidos no solamente previnieron la formación de biopelículas sino que también desintegraron la biopelículas existentes. La figura 2C muestra cultivos de 3 días a los que se les agregó D-tirosina (3 µ?) o una mezcla de D-tirosina, D-triptófano, D-metionina y D-leucina (2.5 nM cada uno), o no se les agregaron aminoácidos (sin tratar), a lo que le siguió una incubación adicional durante 8 horas.
La adición de D-tirosina o una mezcla de los cuatro D-aminoácidos provocó la desintegración notoria de capas en un período de 8 horas. Los D-am¡noácidos son generados por aminoácidos racemasas, enzimas que convierten el estereocentro a-carbono de estos aminoácidos de formas L a D (Yoshimura et ál., J. Biosci. Bioeng. 96:103 (2003)). Se obtuvo prueba genética que concuerda con la idea de que el factor inhibitorio de biopelículas son los D-aminoácidos, usando mutantes de ylmE y racX, genes cuyos productos previstos exhiben una similitud de secuencias con las racemasas conocidas. Los mutantes de cepas de ylmE o racX por sí solos mostraron un leve retraso en la desintegración de la capa (no se muestran los datos). La figura 7 muestra NCIB3610 (WT) y una cepa mutante doblemente eliminada para ylmE y racX (IKG155) que fueron cultivados en placas de 12 pocilios e incubados durante 5 días. La desintegración de las capas formadas por células doblemente mutantes para las racemasas putativas se retrasó considerablemente, lo que sugiere que las cepas en las que se reduce especialmente la actividad de la racemasa también exhiben una menor inhibición de antibiopelículas. Además, el medio acondicionado del doble mutante no fue eficaz para inhibir la formación de biopelículas, a diferencia del medio acondicionado de tipo salvaje. La figura 2D muestra el efecto del eluato concentrado de la columna Sep Pak C-18 del medio acondicionado de un cultivo de 8 días de tipo salvaje o de una cepa (IKG55) doblemente mutante de ylmE y racX, en la que el doble mutante muestra una concentración considerable de biopelículas.
Luego, se determinó si los D-aminoácidos se produjeron durante la maduración de la biopelícula y si eran lo suficientemente abundantes como para desintegrar las biopelículas maduras. Por consiguiente, se llevó a cabo la LC/MS, seguida de la identificación de los D-aminoácidos, usando derivatización con Na-(2,4-dinitro-5-fluorofenil)-L-alaninamida (L-FDAA) en medio acondicionado recogido en períodos tempranos y tardíos luego de la formación de la capa. Los resultados mostraron que la D-tirosina (6 µ?), D-leucina (23 µ?) y D-metionina (5 µ?) estaban presentes en concentraciones necesarias para inhibir la formación de biopelícualas, o superiores a estas, al día 6, pero en concentraciones de <10 n al día 3, por ej., a un nivel que no es suficiente para inhibir la formación de biopelículas.
De manera similar al medio acondicionado, los D-aminoácidos no inhibieron el crecimiento celular ni inhibieron la expresión de los operones de la matriz eps y yqxM (Figuras 8-9B). La Figura 8 muestra el efecto de los D-aminoácidos en el crecimiento celular. Las células se cultivaron en medio de MSgg que contiene D-tirosina (3 µ?), D-leucina (8.5 mM) o la mezcla de cuatro D-aminoácidos (2.5 nM cada uno) agitando. El crecimiento celular en los cultivos tratados con D-aminoácidos fue básicamente el mismo que en la muestra no tratada. La figura 9A muestra la expresión de PyqxM-lacZ mediante la cepa FC122 (que transporta PyqxM-lacZ) y la figura 9B muestra la expresión de PepsA-lacZ mediante la cepa FC5 (que transporta PepsA-lacZ) que se cultivaron en medio de MSgg que contiene D-tirosina (3 µ?), D-leucina (8.5 mM) o la mezcla de los cuatro D-aminoácidos (2.5 nM cada uno) agitando. Nuevamente, la expresión de yqxM y eps para las muestras tratadas con D-aminoácidos fue básicamente la misma que la muestra no tratada.
Se registró anteriormente que los D-aminoácidos se incorporan en el péptido cruzado del componente peptidoglicano de la pared celular. Para confirmar, las células se cultivaron en medio que produce biopelículas y se incubaron con 14C-D-tirosina o con 4C-L-prolina (10 pCi/ml) durante 2 h a 37°C. La figura 3A muestra la incorporación de D-tirosina radiactiva en la pared celular. Usando 14C -D-tirosina, se mostró que la D-tirosina (pero no 14C -L-prolina) se incorporó en la pared celular. Los resultados se presentan como un porcentaje de la incorporación total en las células (360,000 cpm/ml para L-prolina y 46,000 cpm/ml para D-tirosina).
Para analizar si los D-aminoácidos incorporados en la pared celular pueden prevenir que las fibras TasA estén sujetadas a la célula, se examinó la localización de una fusión funcional de TasA con el indicador fluorescente mCherry. La figura 3B muestra la fluorescencia total de las células que contienen una fusión traslacional funcional de tasA-mCherry. Las células se cultivaron en fase estacionaria agitando en medio que produce biopelículas en presencia o ausencia de D-tirosina (6 µ?). Tal como se muestra en la figura 3B, el tratamiento con D-tirosina no surtió efecto o muy poco en la acumulación total de TasA-mCherry. Cuando las células se lavaron por centrifugación, se volvieron a suspender y luego se examinaron con microscopio fluorescente, se observó que las células no tratadas (que a menudo se encontraban en grupos) estaban bastante cubiertas de TasA-mCherry. Por el contrario, las células tratadas con D-tirosina (que en su mayor parte no en encontraban en grupos) mostraron solamente niveles bajos de fluorescencia. Se obtuvieron resultados similares con D-leucina y con la mezcla equimolar de los cuatro D-aminoácidos. También se analizó la localización de la proteína TasA no modificada mediante un microscopio electrónico de transmisión usando anticuerpos antiTasaA etiquetados con oro. La figura 3D muestra la asociación celular de las fibras TasA mediante microscopía electrónica. Se incubaron cultivos de 24 horas sin (imágenes 1 y 2) o con (imágenes 3-6) D-tirosina (0.1 mM) durante 12 horas adicionales. Se tiñíeron fibras TasA mediante etiquetado ¡nmunooro usando anticuerpos anti-TasA, y se visualizaron mediante microscopía electrónica de transmisión, tal como se describe en los Ejemplos. Las células eran mutantes con respecto al operón eps (Aeps) ya que la ausencia de exopolisacárido mejora significativamente la imagenología de fibras TasA. Las flechas llenas indican grupos de fibras; las flechas abiertas indican fibras individuales. La barra de escala es de 500 nm. La barra de escala en las ampliaciones de las imágenes 2, 4 y 6 es 100 nm. Las imágenes 1 y 2 muestran grupos de fibras ligados a las células, las imágenes 3, 4 y 6 muestran fibras individuales y grupos separados de las células y las imágenes 3-5 muestran células con poco o nada de material de fibras. Se observó que las fibras TasA estaban sujetados a las células de las capas no tratadas (fig. 3D, imágenes 1 y 2). Por el contrario, las células tratadas durante 12 horas con D-tirosina consistían en una mezcla de células que en su mayor parte no estaban cubiertas con fibras TasA y fibras sin TasA o conjuntos de fibras que no estaban sujetadas a las células (fig. 3D, imágenes 3-6). Sin intención de limitarse a la teoría, uno de los mecanismos mediante los cuales se tratan las biopelículas con D-tirosina puede ser provocar el desprendimiento de las fibras por parte de las células.
Se obtuvieron pruebas genéticas de que los D-aminoácidos actúan interrumpiendo la sujeción de las fibras TasA de las células mediante el aislamiento de los mutantes resistentes a la D-tirosina. La figura 4A muestra células cultivadas durante 3 días en medio que produce biopelícula sólido (imágenes superiores) o líquido (imágenes inferiores) que contenía o no contenía D-tirosina. Las papilas arrugadas aparecieron espontáneamente en las colonias planas formadas durante el crecimiento en medio sólido que contiene D-tirosina (fig. 4A) o D-leucina (no se muestran los datos). Cabe destacar que dichas papilas no aparecieron en las placas que contienen los cuatro D-aminoácidos activos. Cuando se purifican, estos mutantes espontáneos producen colonias y capas arrugadas en presencia de D-tirosina o D-leucina. Dichos mutantes se aislaron y la mayoría de ellos contenían una mutación en o cerca del operón yqxM. Se examinaron detalladamente dos mutaciones y se descubrió que eran mutaciones del marco de lectura próximas al extremo 3' del gen yqxM de longitud de 759 pares de bases. yqxM2 era una inserción de G:C en el par de bases 728 en el marco de lectura abierto de yqxM y yqxM6 era una supresión de A:T en el par de bases 568 (Fig. 4B). La figura 4B muestra una secuencia de aminoácidos abreviada para YqxM. Los residuos especificados por los codones en donde las mutaciones del marco de lectura de yqxM2 e yqxM6 dieron como resultado los cambios indicados en las secuencias se encuentran subrayados.
La figura 3C muestra la asociación celular de TasA-mCherry mediante microscopía fluorescente. Las células de tipo salvaje y las células mutantes yqxM6 (IKG51 ) que contienen la fusión de tasA-mCherry se cultivaron en fase estacionaria (OD=1 .5) agitando en medio que produce biopelícula en presencia o ausencia (sin tratar) de D-tirosina (6 µ?) tal como se indicó, lavada en PBS, y se visualizaron mediante microscopía fluorescente. La microscopía fluorescente mostró que la presencia de yqxM2 y yqxM6 restituyó el agrupamiento y la cobertura de las células con TasA-mCherry de las células tratadas con D-tirosina (fig. 3C). Obras anteriores muestran que YqxM es necesaria para la asociación de TasA con las células (Branda et él., Mol. Microbiol. 59:1229 (2006)). Sin intención de limitarse a la teoría, este descubrimiento de que el efecto inhibitorio de biopelículas de los D-aminoácidos puede ser superado por los mutantes de YqxM refuerza la opinión de que el efecto de la incorporación de D-aminoácidos en la pared celular es afectar la sujeción de las fibras TasA a la célula. Un dominio cerca del extremo C de YqxM puede provocar la liberación de TasA en respuesta a la presencia de D-tirosina o D-leucina en la pared celular.
EJEMPLO 2 Análisis de D-aminoácidos en la formación de biopelículas por parte de S. aureus y P. aeruqinosa.
Se examinó el efecto de los D-aminoácidos en la formación de biopelículas por parte de otras bacterias. La bacteria patogénica Staphylococcus aureus forma biopelículas sobre las superficies plásticas (Otto, Curr. Top. Microbiol. Immunol. 322:207 (2008)), que se pueden detectar retirando las células no unidas y tiñendo las células unidas con cristal violeta. La figura 2E muestra S. aureus (cepa SCO1 ) que fue cultivada en placas de poliestireno de 12 pocilios durante 24 horas a 37 °C en medio de TSB que contiene glucosa (0.5%) y NaCI (3%). De manera adicional, se agregó D-tirosina (50 µ?) o la mezcla de D-aminoácidos (15 nM cada uno) o no se agregaron aminoácidos (sin tratar) a los pocilios. Se visualizaron las células unidas al poliestireno retirando las células no unidas y luego tiñiéndolas con cristal violeta. La fig. 2E muestra que las concentraciones de 50 µ? de D-tirosina y las concentraciones de 50 nM de D-amínoácidos mezclados (D-tirosina, D-leucina, D-triptófano y D-metionina; 50 nM cada uno) eran altamente eficaces para prevenir la formación de biopelículas mediante la bacteria patogénica.
Además, la fig. 10 demuestra que 10 µ? de D-tirosina era eficaz para prevenir la formación de biopelículas mediante Pseudomonas aeruginosa, mientras que 1 µ? de una mezcla equimolar de D-tirosina, D- leucina, D-triptófano y D-metionina era eficaz. La figura 10 muestra la inhibición de la formación de biopelícula de Pseudomonas aeruginosa mediante los D-aminoácidos. La cepa P014 de P. aeruginosa se cultivó en placas de poliestireno de 12 pocilios durante 48 horas a 30 °C en medio de M63 que contiene glicerol (0.2%) y ácidos casamino (20pg/ml). De manera adicional, se agregó D-tirosina o la mezcla equimolar de D-aminoácidos o no se agregaron aminoácidos (sin tratar). Se visualizaron las células unidas al poliestireno retirando las células no unidas y luego tiñiéndolas con cristal violeta. Los pocilios se tiñeron con 500 µ? de tinte de cristal violeta al 1.0%, se lavaron dos veces con 2 mi de agua destilada dos veces y se secaron por completo.
EJEMPLO 3 Mezclas de D-aminoácidos activas inhibiendo las biopelículas deStaphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa Dos mezclas distintas son muy activas para prevenir la formación de biopelículas de Staphylococcus aureus. Una es una mezcla equimolar de D-tirosina, D-metionina, D-leucina y D-triptófano. La mezcla de D-aminoácidos de D-trp, D-met, D-tyr y D-leu era activa en una concentración considerablemente menor que los aminoácidos individuales en todas las cepas bacterianas analizadas B. subtilis, Staphylococcus aureus (figura 1 ) y Pseudomonas aeruginosa (figura 12). Para los experimentos registrados en la Tabla 1 , el organismo/cepa utilizado fue S.a. Harvard SC01 , el medio de cultivo fue TSB y la inoculación de las células se realizó a 2x109 cfu. Para los experimentos registrados en la Tabla 2, el organismo/cepa utilizado fue S.a. Harvard PA14, el medio de cultivo fue M63 y la inoculación de las células se realizó a 1.5x 09 cfu. La biopelícula se visualizó usando el método con cristal violeta. Los datos se muestran a continuación en las Tablas 1 y 2: TABLA 1 (Datos de la figura 11 ) TABLA 2 (Datos de la figura 12) La mezcla equimolar de D-tirosina, D-fenilalanina, D-prolina es aun más eficaz que la mezcla que antecede. Además, la mezcla es más activa como una mezcla que cada uno de los aminoácidos de forma individual (Figuras 13 y 14). Para los experimentos registrados en las Tablas 3 y 4, el organismo/cepa utilizado fue S.a. Harvard SC01 , el medio de cultivo fue TSB y la inoculación de las células se realizó a 2x109 cfu. La biopelícula se visualizó usando el método con cristal violeta. Los datos se muestran en las Tablas 3 y 4: TABLA 3 (Datos de la figura 13) TABLA 4 (Datos de la figura 14) EJEMPLO 4 Método de cuantificación alternativo para la formación de biopelículas en Staphylococcus aureus Se retiraron por completo las células plantónicas mediante una pipeta de Gilson y luego se golpearon suavemente sobre una toalla de papel. Luego, se tomó cuidadosamente una imagen fotográfica de las placas de biopelícula contra un fondo negro (Figuras 15 y 16). Para los experimentos registrados en las Tablas 5 y 6, el organismo/cepa utilizado fue S.a. Harvard SC01 , el medio de cultivo fue TSB y la inoculación de las células se realizó a 2x109 cfu. La biopelícula se visualizó usando el método visual contra un fondo negro. Los datos se muestran en las Tablas 5 y 6: TABLA 5 (Fatos de la figura 15) TABLA 6 (Datos de la figura 16) Se retiraron las células de biopelícula de las placas que anteceden en las Tablas 5 y 6 volviendo a suspenderlas en PBS, y se determinó su OD600 usando un espectrofotómetro (Figura 17). Para los experimentos registrados en la Tabla 7, el organismo/cepa utilizado fue S.a. Harvard SC01 , el medio de cultivo fue TSB y la inoculación de las células se realizó a 2x109 cfu. La biopelícula se visualizó midiendo el OD600 de las bacterias absorbidas. Los datos se muestran en la Tabla 7: TABLA 7 (Datos de la figura 17) EJEMPLO 5 Efecto de los D-aminoácidos en la formación de las biopelículas de Staphylococcus aureus sobre superficies epoxi Para probar la posibilidad de desarrollar métodos de liberación controlada de D-aminoácidos de distintas superficies, las superficies epoxi se incubaron durante 24 horas en mezclas de D-aminoácidos. Se secaron por completo e incubaron en un medio fresco de TBS inoculado con Staphylococcus aureus. Para los experimentos registrados en las Tablas 8 y 9, el organismo/cepa utilizado fue S.a. Harvard SC01 , el medio de cultivo fue TSB y la inoculación de las células se realizó a 2x109 cfu. La biopelícula se visualizó usando el método visual contra un fondo negro. Tal como se muestra en las Figuras 18 y 19, las mezclas de D-aminoácidos (como se describe anteriormente) disminuyen enormemente la formación de biopelículas de Staphylococcus aureus en los sustratos empapados. Los datos se muestran en las Tablas 8 y 9: TABLA 8 (Datos de la figura 18) TABLA 9 (Datos de la figura 19) De manera adicional, se incubaron superficies de Norland Optical Adhesive 61 con D-tirosina, D-prolina, D-fenilalanina durante 24 hrs. Se secaron por completo e incubaron en un medio fresco de TSB con Staphylococcus aureus. La mezcla de D-aminoácidos (pero no la mezcla de L-aminoácidos) disminuyó enormemente la formación de biopelículas de Staphylococcus aureus.
Para este ejemplo, los sustratos poliméricos se moldearon en polidimetilsiloxano (SYLGARD 184, Dow Corning) de UVO-1 14 (Tecnología Epoxi) y polímeros Norland Optical Adhesive 61 (Productos Norland) curables con UV.
EJEMPLO 6 Formas adicionales de observar el efecto de los D-aminoácidos en la formación de biopelícula en Pseudomonas aeruginosa De manera similar a la Bacillus subtilis, la Pseudomonas aeruginosa forma una arquitectura compleja en el medio definido. Estas estructuras complejas requieren la formación y armado apropiados de la matriz extracelular. La adición de D-tirosina (500µ?) o D-triptófano (500µ?) inhibió la formación de biopelículas en el medio definido en Pseudomonas aeruginosa (Figura 20) mientras que la adición de L-tirosina (500µ?) o L-triptófano no lo hizo. Se obtuvieron resultados similares con Bacillus subtilis. Para estos experimentos, el organismo/cepa fue P.a. Harvard PA14, el medio de cultivo fue M63 y la inoculación de las células se realizó a 1.5x109 cfu.
Un método alternativo para observar la formación de biopelículas en una placa de 6 pocilios con o sin D-aminoácidos y usando tinción con Syto-9 es el siguiente: las biopelículas de Pseudomonas aeruginosa se lavaron dos veces con PBS y luego se fijaron al menos durante una hora en 5% de glutaraldehído en PBS. Las biopelículas fijadas luego se enjuagaron una vez más con PBS y se empaparon en 0.1 % v/v de Tritón X-100 en PBS (PBST) durante 15 minutos. La solución se intercambió con 0.1 nM de SYTOX verde (Invitrogen) en PBST frío y se agitó suavemente en la oscuridad al menos durante 15 minutos. Las imágenes fluorescentes de las biopelículas se captaron con un microscopio Leica DMRX usando una lámpara Xe y un filtro cúbico Leica K3. Tal como se muestra en la Figura 21 , se produjo una gran disminución de la cantidad de células unidas al fondo de la placa de biopelícula en presencia de D-tirosina. La cantidad de células simples unidas se cuantificó usando imágenes J. La disminución de la cantidad de células unidas a las superficies epoxi empapadas con D-aminoácidos en comparación con el control de L-aminoácidos fue considerablemente mayor.
TABLA 10 (Datos de la figura 21 ) EJEMPLO 7 Evaluación del efecto de los D-aminoácidos sobre los patógenos gram negativos Para evaluar la posibilidad de una actividad anti biopelícula de amplio espectro se probó el cuarteto equimolar eficaz de D-tirosina, D- fenilalanina y D-prolina con respecto al patógeno gram negativo Proteus mirabilis. Tal como se muestra en la Figura 22, la mezcla de D-aminoácidos fue activa con respecto a Proteus mirabilis. La biopelícula de la Tabla 1 1 se visualizó usando el método con cristal violeta. Los datos se muestran en la Tabla 11 : TABLA 11 (Datos de la figura 22) EJEMPLO 8 Evaluación del efecto de los D-aminoácidos sobre un patógeno gram positivo Para evaluar la posibilidad de una actividad anti biopelícula de amplio espectro se probó el cuarteto equimolar eficaz de D-tirosina, D- fenilalanina y D-prolina con respecto al patógeno gram positivo Streptococcus mutans. Tal como se muestra en la Figura 23, la mezcla de D-aminoácidos fue activa con respecto a Streptococcus mutans. La biopelícula de la Tabla 12 se visualizó usando el método con cristal violeta. Los datos se muestran en la Tabla 12: TABLA 12 (Datos de la figura 23) Ejemplos relacionados con los recubrimientos que se pueden usar en los dispositivos médicos.
EJEMPLO 9 Recubrimiento que contiene D-tirosina Se incorpora D-tirosina, 0.5 % en peso basado en el peso de los sólidos de resina, en un recubrimiento de poliéster uretano de dos componentes basado en un poliol poliéster comercialmente disponible y en isocianurato comercialmente disponible. El sistema de recubrimiento es catalizado con 0.015% de dilaurato de dibutilestaño basado en los sólidos de resina totales.
La formulación de recubrimiento se aplica mediante trefilado sobre láminas de vidrio transparentes de aproximadamente 4" x 6" con un espesor de película de alrededor de 2 mils (0.002").
Estas películas son curadas en un horno a 120°F (49°C).
EJEMPLO 10 Polímero que contiene una mezcla de D-aminoácidos Se preparan capas de goma de silicona líquida como se describe en la patente estadounidense No. 5,973,030. También se incluyen en las formulaciones 0.01 a 1 porcentaje en peso de una mezcla de D- aminoácidos, en una proporción de 1 :1 :1 : 1 de D-tirosina:D-leucina:D-metionina:D-triptófano.
EJEMPLO 11 Recubrimiento a base de agua que contiene una mezcla de D- aminoácidos Una formulación de recubrimiento industrial acrílica transparente a base de agua que contiene 1 porcentaje en peso de una mezcla de D-aminoácidos, en una proporción de 1 :1 : 1 :1 de D-tirosina:D-leucina:D-metionina:D-triptófano se cubre sobre láminas de vidrio en un espesor de 2 mil.
EJEMPLO 12 Recubrimiento a base de solvente que contiene una mezcla de D- aminoácidos Se prepara un recubrimiento de poliuretano a base de solvente que contiene 1 porcentaje en peso de una mezcla de D-aminoácidos, en una proporción de 1 : 1 : 1 :1 de D-tirosina:D-leucina:D-metionina:D-triptófano. El recubrimiento se aplica a láminas de vidrio a un espesor de 2 mil.
EJEMPLO 13 Recubrimiento a base de agua curable con UV que contiene una mezcla de D-aminoácidos Un recubrimiento industrial a base de agua curable con UV se formula mezclando con un agitador a alta velocidad los ingredientes (ver tabla a continuación).
A la formulación preparada, se agrega una mezcla de D-aminoácidos, en una proporción de 1 :1 :1 :1 de D-tirosina:D-leucina:D-metionina.D-triptófano, y se agita a alta velocidad de cizallamiento (2000 rpm) durante 30 minutos a temperatura ambiente. A los efectos de comparación, las formulaciones de control que no contienen D-aminoácidos se preparan de la misma manera.
El recubrimiento se aplica con un recubridor de corte de 50 pm a paneles blancos recubiertos con aluminio, se seca durante 10 minutos a 60°C y se cura con dos lámparas de vapor de mercurio a media presión (2 x 80W/cm) a 5m/min.
EJEMPLO 14 Recubrimiento a base de solvente que contiene una mezcla de D- aminoácidos Los recubrimientos de poliuretano a base de solvente 2 Pack se preparan de acuerdo con el siguiente procedimiento: La mezcla de D aminoácidos, en una proporción de 1 :1 : 1 :1 de D-tirosina:D-leucina:D-metionina:D-triptófano se agrega al aglutinante y solvente como una formulación base y se agita a alta velocidad de cizallamiento durante 10 minutos hasta que se alcanza un tamaño de partícula inferior a 5 m.
Formulación base: La formulación de recubrimiento se preparó mezclando los ingredientes del componente A y agregando el componente B al final antes de la aplicación (ver la tabla a continuación). El contenido de la mezcla de D-aminoácidos en la formulación total es 0.1 % en peso.
Cada formulación de recubrimiento es atomizada sobre paneles blancos recubiertos con aluminio (espesor seco de la película: 40µ??) y se seca 30 minutos a 80°C.
Ejemplos relacionados con la formulación de belleza/cuidado personal EJEMPLO 15 formulación representativa de agua en aceite W/O Se prepara la siguiente emulsión de W/O que contiene 0.1 % en peso/peso de mezcla de D-aminoácidos en una proporción de 1 : 1 :1 : 1 de D-tirosina:D-leucina:D-metionina:D-triptófano.
Emulsión de W/0: Parte A Parafina líquida 7.5 partes Isohexadecano 6.0 PEG-7 Aceite de ricino hidrogenado 4.1 Palimitato de isopropilo 2.0 Cera microcristalina 0.5 Alcohol de lanolina 0.6 Parte B agua dil. a 100 partes de formulación total Sulfato de magnesio 1.0 Glicina 3.20 Parte C mezcla de D-aminoácidos 20 partes de 0.5% en peso/ en peso/peso de solución acuosa EjemplO 16 Formulación representativa de aceite en agua 0/W Se prepara la siguiente emulsión de O/W que contiene 0.1 % en ¦' peso/peso de mezcla de D-aminoácidos en una proporción de 1 :1 : 1 :1 de D- tirosina:D-leucina:D-metionina:D-triptófano.
Emulsión de 0/W: Parte A Stearet-2 2.2 partes Stearet-21 1.0 PEG-15 éter de estearilo 6.0 éter de dicaprililo 6.0 Parte B agua dil. a 100 partes de formulación total Poliacrilato de sodio 0.2 Parte C mezcla de D-aminoácidos 20 partes de 0.5% en peso/peso de solución acuosa EJEMPLO 17 Inhibición in vivo de la formación de biopelicuias de S. Aureus El análisis ¡n vivo de un D-aminoácido o una combinación de dos o más D-aminoácidos se lleva a cabo tal como se describe en Anguita-Alonso et ál., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 51 :2594 (2007).
EJEMPLO 18 Inhibición alternativa in vivo de la formación de biopelicuias de S.
Aureus El análisis in vivo de un D-aminoácido o una combinación de dos o más D-aminoácidos se lleva a cabo tal como se describe en Beenken et ál., J. Bacteriology, 186:4665 (2004).
EJEMPLO 19 Preparación de una mezcla acuosa estable de D-Tyr, D-Leu, D-Typ y D- Met Los aminoácidos D-Met y D-Leu se disuelven individualmente en agua desonizada a temperatura ambiente usando una concentración de 5 mg/ mL. En general, se prepara una solución de 10mL para cada aminoácido. Se disuelve el D-triptófano en agua desonizada a 5 mg / mL, pero se requiere un leve calentamiento, 40 - 50°C durante 5 - 10 minutos. Se disuelve D-tirosina a 5 mg / mL en 0.05M de HCI y se requiere calentamiento, 40 - 50°C durante 5 -10 minutos. Se puede usar un baño de sonicación caliente para ayudar a la solución de los aminoácidos. Todas las soluciones se combinan y se filtran en condiciones de esterilización a temperatura ambiente, lo que da como resultado alrededor de 40 mL de solución madre.
EJEMPLO 20 Preparación de una mezcla acuosa estable de D-Tyr, D-Pro y D-Phe Se prepara una solución acuosa tal como se describe en el Ejemplo 19.
EJEMPLO 21 Preparación de una mezcla acuosa estable de D-Tyr, D-Asp y D-Glu Se prepara una solución acuosa tal como se describe en el Ejemplo 19.
EJEMPLO 22 Preparación de una mezcla acuosa estable de D-Tyr, D-Arq, D-His y D- Lys Se prepara una solución acuosa tal como se describe en el Ejemplo 19.
EJEMPLO 23 Preparación de una mezcla acuosa estable de D-Tyr, D-lle, D-Val- y D-Asn Se prepara una solución acuosa tal como se describe en el Ejemplo 19.
EJEMPLO 24 Preparación de una mezcla acuosa estable de D-Tyr, D-Cvs, D-Ser. D-Thr y D-GIn Se prepara una solución acuosa tal como se describe en el Ejemplo 19.
Equivalentes Debe reconocerse que si bien la invención ha sido descrita junto con su descripción detallada, la descripción que antecede pretende ilustrar y no limitar el alcance de la invención, que es definida por el alcance de las reivindicaciones adjuntas. Otros aspectos, ventajas y modificaciones están comprendidos en el alcance de las siguientes reivindicaciones.

Claims (22)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES
1 . Un método para tratar un trastorno relacionado con biopelículas en un sujeto que lo necesita, el método que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una cantidad eficaz de un D-aminoácido, o una sal, éster o derivado farmacéuticamente aceptables de éste, dicha composición básicamente no contiene el L-aminoácido correspondiente, tratando de este modo el trastorno relacionado con biopelículas, donde el D-aminoácido se selecciona del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina, D-asparagina y una combinación de éstos.
2. Un método para tratar un trastorno relacionado con biopelículas en un sujeto que lo necesita, el método comprende administrar al sujeto una composición que comprende una cantidad eficaz de una combinación de dos o más D-aminoácidos, o sales, ésteres o derivados farmacéuticamente aceptables de éstos, tratando de este modo el trastorno relacionado con biopelículas.
3. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque la combinación de D-aminoácidos es una combinación de dos o más D-aminoácidos que se seleccionan del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-metionina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-asparagina y D-tirosina.
4. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 , 2 ó 3, caracterizado además porque la composición se administra a una superficie del sujeto, que se selecciona del grupo de superficies dérmicas y mucosas y combinaciones de éstos.
5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque la superficie es una superficie oral, una superficie dérmica, una superficie del tracto urinario, una superficie del tracto vaginal o una superficie pulmonar.
6. El método de conformidad con las reivindicaciones 1 , 2 ó 3, caracterizado además porque la composición se administra al sujeto mediante administración subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, oral, nasal o tópica, y una combinación de éstas.
7. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizado además porque el sujeto es un humano.
8. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, caracterizado además porque se inhibe la formación de una biopelícula.
9. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -7, caracterizado además porque se desintegra una biopelícula formada anteriormente.
10. El método de conformidad con la reivindicación 1 , 2 ó 3, caracterizado además porque el trastorno relacionado con biopeiículas es una infección relacionada con un dispositivo médico.
1 1. Un método para tratar, reducir o inhibir la formación de biopeiículas por parte de bacterias sobre una superficie biológicamente relacionada, el método comprende, poner en contacto una superficie biológica con una composición que comprende una cantidad eficaz de un D-aminoácido, o una sal, éster o derivado farmacéuticamente aceptables de éste, que básicamente no contiene el L-aminoácido correspondiente, tratando, reduciendo o inhibiendo de este modo la formación de la biopelícula, donde el D-aminoácido se selecciona del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina, D-asparagina y una combinación de éstos.
12. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, caracterizado además porque las bacterias son bacterias gram negativas o gram positivas.
13. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado además porque las bacterias son del género Actinobacillus, Acinetobacter, Aeromonas, Bordetella, Brevibacillus, Brucella, Bacteroides, Burkholdería, Borelia, Bacillus, Campylobacter, Capnocytophaga, Cardiobacterium, Citrobacter, Clostridium, Chlamydia, Eikenella, Enterobacter, Escherichia, Entembacter, Francisella, Fusobacterium, Flavobacterium, Haemophilus, Helicobacter, Kingella, Klebsiella, Legionella, Listeria, Leptospirae, Moraxella, Morganella, Mycoplasma, Mycobacterium, Neisseria, Pasteurella, Proteus, Prevotella, Plesiomonas, Pseudomonas, Providencia, Rickettsia, Stenotrophomonas, Staphylococcus, Streptococcus, Streptomyces, Salmonella, Serratia, Shigella, Spirillum, Treponema, Veillonella, Vibrio, Yersinia o Xanthomonas.
14. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, caracterizado además la composición comprende D-tirosina.
15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado además poque la composición comprende adicionalmente uno o más D-aminoácidos que se seleccionan del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-metionina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano y D-asparagina.
16. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado además porque la composición comprende D-tirosina, D-leucina, D-triptófano y D-metionina.
17. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, caracterizado además porque comprende adicionalmente administrar un biocida.
18. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado además porque la biocida es un antibiótico.
19. Una composición que comprende: un D-aminoácido en una cantidad eficaz para tratar, reducir o inhibir la formación de biopelículas, dicha composición básicamente no contiene el L-aminoácido correspondiente, donde el D-aminoácido se selecciona del grupo que consiste en D-alanina, D-cisteína, D-ácido aspártico, D-ácido glutámico, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-asparagina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina, D-asparagina y una combinación de éstos.
20. La composición de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada además porque la composición comprende biguanida de polihexametileno, clorhexidina, xilitol, triclosán o dióxido de cloro.
21. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19 ó 20, caracterizada además porque una cantidad eficaz comprende una cantidad eficaz para tratar o prevenir una biopelícula sobre una superficie.
22. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19-21 , caracterizada además porque la composición se formula como una solución de lavado, un vendaje, un gel para heridas o un tejido sintético.
MX2012008017A 2010-01-08 2011-01-10 Métodos y composiciones para tratar biopelículas. MX2012008017A (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US29341410P 2010-01-08 2010-01-08
US32993010P 2010-04-30 2010-04-30
PCT/US2011/020705 WO2011085326A1 (en) 2010-01-08 2011-01-10 D- amino acids for use in treating biofilms

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MX2012008017A true MX2012008017A (es) 2012-10-03

Family

ID=43838150

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MX2012008017A MX2012008017A (es) 2010-01-08 2011-01-10 Métodos y composiciones para tratar biopelículas.
MX2012008018A MX2012008018A (es) 2010-01-08 2011-01-10 Métodos y recubrimientos para tratar biopeliculas.

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MX2012008018A MX2012008018A (es) 2010-01-08 2011-01-10 Métodos y recubrimientos para tratar biopeliculas.

Country Status (9)

Country Link
US (2) US20130059096A1 (es)
EP (2) EP2521448A1 (es)
JP (2) JP2013516492A (es)
KR (2) KR20120115375A (es)
CN (2) CN102791262A (es)
AU (2) AU2011203862A1 (es)
BR (2) BR112012016869A2 (es)
MX (2) MX2012008017A (es)
WO (2) WO2011085326A1 (es)

Families Citing this family (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2463181B (en) 2007-05-14 2013-03-27 Univ New York State Res Found Induction of a physiological dispersion response in bacterial cells in a biofilm
US9034812B2 (en) 2011-08-26 2015-05-19 Ohio University Compositions and methods for treating biofilms
DE102011085366A1 (de) 2011-10-28 2013-05-02 Henkel Ag & Co. Kgaa Biofilmreduzierende Spezialzahncreme
US20130108560A1 (en) * 2011-11-01 2013-05-02 Robert Davidson Chemical Treatments for the Disruption of Dental Plaque Biofilms and Related Methods
US9480669B2 (en) * 2015-01-06 2016-11-01 The Regents Of The University Of California Method of destroying and preventing bacterial and fungal biofilm by amino acid infusion
US9549904B2 (en) * 2012-06-06 2017-01-24 Thomas Bryan Method of destroying bacterial biofilm using sterile intravenous or intracavernous glycerin
WO2013126814A1 (en) * 2012-02-24 2013-08-29 Burzell Cynthia K Compounds for inhibition of biofilms
US8900338B2 (en) 2012-08-07 2014-12-02 Honeywell International Inc. Accessory cap for a respiratory filter cartridge
US20150182667A1 (en) * 2012-08-08 2015-07-02 Vanderbilt University Composition with Biofilm Dispersal Agents
US20150165340A1 (en) * 2012-09-03 2015-06-18 Laminar Co., Ltd. Purification System Comprising Continuous Reactor and Purification Method Using Continuous Reactor
KR101977711B1 (ko) 2012-10-12 2019-05-13 삼성전자주식회사 깊이 센서, 이의 이미지 캡쳐 방법, 및 상기 깊이 센서를 포함하는 이미지 처리 시스템
RU2694758C2 (ru) * 2012-12-20 2019-07-16 Раджив Бхушан Антимикробные композиции
CN103083291B (zh) * 2012-12-31 2014-11-26 中山大学 一种提高细菌对血清敏感性的物质
EP2803372A1 (en) 2013-05-16 2014-11-19 Universiteit Twente Process for the preparation of an object supporting a lipid bilayer
WO2014205096A1 (en) * 2013-06-18 2014-12-24 Novozymes A/S Bacterial mutants with improved transformation efficiency
JP2015155534A (ja) * 2014-01-17 2015-08-27 住友重機械工業株式会社 バイオフィルム分解剤及びバイオフィルムの分解方法
LT3283136T (lt) * 2015-04-16 2021-06-25 Hollister Incorporated Hidrofilinės dangos ir jų sudarymo būdai
WO2017192200A1 (en) 2016-05-05 2017-11-09 The Research Foundation For The State Unversity Of New York Compositions for treating periodontitis and dental calculus accumulation
IL265127B2 (en) * 2016-08-28 2025-04-01 The State Of Israel Ministry Of Agriculture & Rural Development Agricultural Res Organization Aro Vo Method for controlling fungal infection in plants
US11576884B2 (en) 2016-10-04 2023-02-14 University Of Florida Research Foundation, Inc. Amino acid compositions and uses thereof
CN106492640A (zh) * 2016-11-18 2017-03-15 哈尔滨商业大学 基于生物信息学减缓膜生物污染的方法
JP2018127427A (ja) * 2017-02-10 2018-08-16 味の素株式会社 唾液分泌促進剤、ならびにこれを配合した食品組成物、および口腔用組成物
DE102017107124A1 (de) * 2017-04-03 2018-10-04 Ferton Holding S.A. Pulver zur Reinigung eines inneren Körperteils und/oder eines Implantats, Verfahren zur Herstellung eines solchen Pulvers und geeignete Verwendungen
US11382885B2 (en) 2017-06-07 2022-07-12 The Regents Of The University Of California Compositions for treating fungal and bacterial biofilms and methods of using the same
WO2019070759A1 (en) * 2017-10-02 2019-04-11 University Of Florida Research Foundation Incorporated AMINO ACID COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING CYSTIC FIBROSIS
US20190142864A1 (en) * 2017-10-11 2019-05-16 California Institute Of Technology Methods and systems, for interfering with viability of bacteria and related antimicrobials and compositions
CN107998453B (zh) * 2017-12-12 2020-09-25 中山大学附属第一医院 一种表面改性的脱细胞基质及其改性方法
US20210106708A1 (en) * 2018-03-21 2021-04-15 Case Western Reserve University Thermoresponsive compositions and methods for preventing and disrupting biofilms
US11541105B2 (en) 2018-06-01 2023-01-03 The Research Foundation For The State University Of New York Compositions and methods for disrupting biofilm formation and maintenance
WO2020016713A1 (en) * 2018-07-16 2020-01-23 3M Innovative Properties Company Amino acid containing oral care composition for treating caries by reducing lactic acid release in oral biofilms
CN109055481B (zh) * 2018-08-21 2022-01-11 浙江海洋大学 一种纺锤水蚤体表附着细菌的检测方法
CN109221240A (zh) * 2018-11-01 2019-01-18 西安石油大学 一种水系统用抑制并分解生物膜的高效复合杀菌缓蚀剂
US12226386B2 (en) 2018-12-03 2025-02-18 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for treating biofilms
CN110064075B (zh) * 2019-04-23 2020-10-13 北京科技大学 一种基于纳米银/d-半胱氨酸的自组装抗菌涂层及制备方法
WO2021002743A1 (en) * 2019-07-04 2021-01-07 Petroliam Nasional Berhad (Petronas) Composition for treating and preventing bacterial growth on a substrate
CN110590188B (zh) * 2019-08-29 2020-12-18 泰山玻璃纤维邹城有限公司 玻璃纤维废丝粉料的加工方法
WO2021092612A1 (en) 2019-11-08 2021-05-14 Colgate-Palmolive Company Apparatus, system, and method for testing biological samples
EP4054517A1 (en) * 2019-11-08 2022-09-14 Colgate-Palmolive Company Methods of modifying biofilm
EP4072686A1 (en) 2019-12-12 2022-10-19 3M Innovative Properties Company Oral care composition with n-acetyl amino acid components for treating caries
EP3848017A1 (en) 2020-01-08 2021-07-14 3M Innovative Properties Company Oral care composition containing indole components for treating caries
CN111840103B (zh) * 2020-08-10 2023-04-07 黑龙江天龙药业有限公司 一种用于腋下的长效膜剂及其制备方法
CA3193765A1 (en) * 2020-09-29 2022-04-07 Anindya Dasgupta A personal care composition comprising amino acids
CN112022843B (zh) * 2020-10-20 2021-11-23 中国医科大学附属口腔医院 D-亮氨酸和氯己定组合物的应用
WO2022187274A1 (en) * 2021-03-01 2022-09-09 Carlo Ratti Combination therapy for treatment of conditions associated with aging
KR102393943B1 (ko) * 2021-03-23 2022-05-02 주식회사 엘지생활건강 피부 및 두피 케어용 바이오필름 제거 조성물
CN113546895A (zh) * 2021-06-11 2021-10-26 浙江万陌科技有限公司 一种清洗装置
CN114100378B (zh) * 2021-10-20 2023-03-03 山东大学 一种具有磁靶向-磁热功能的d-氨基酸热敏控释纳米微粒及在mbr膜污染上的应用
CN114223727A (zh) * 2021-12-30 2022-03-25 浙江工商大学 一种d-色氨酸卤水凝胶及其应用
WO2023240339A1 (en) * 2022-06-13 2023-12-21 Daniela Fischer Russell Oral health agent and composition for use in domestic animals
KR102839320B1 (ko) * 2023-01-10 2025-07-28 주식회사 엘지생활건강 타우레이트계 계면활성제를 포함하는 구강용 조성물
US12109176B1 (en) 2023-04-20 2024-10-08 Thomas Bryan Effect of glycerol on biofilm forming bacteria and fungi that changes the microbes sensitivity to pro and anti-biofilm non-toxic, non-bonded plasma amino acids and amino acid derivatives
CN117084345B (zh) * 2023-07-07 2025-04-18 合肥工业大学 一种食源性致病菌生物膜的抑制剂及其制备方法、应用
CN117735637A (zh) * 2023-12-26 2024-03-22 陕西省水务集团环境技术运维有限公司 一种基于氨基酸碳源的碳钢管材防腐方法
CN118104654B (zh) * 2024-03-04 2025-04-08 中山大学 一种杀菌剂及其制备方法与应用

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
EP0500712A1 (de) * 1989-11-16 1992-09-02 Henkel Kommanditgesellschaft auf Aktien Bekämpfung von schleimbildenden mikroorganismen
JPH06256184A (ja) * 1993-03-05 1994-09-13 Morishita Roussel Kk 癌患者用アミノ酸製剤
JPH06256186A (ja) * 1993-03-05 1994-09-13 Morishita Roussel Kk 癌用アミノ酸製剤
JP3828612B2 (ja) 1996-05-24 2006-10-04 東レ・ダウコーニング株式会社 液状シリコーンゴム組成物およびその製造方法
US7723303B2 (en) * 2000-08-24 2010-05-25 The Regents Of The University Of California Peptides and peptide mimetics to treat pathologies characterized by an inflammatory response
US7144862B2 (en) * 2000-08-24 2006-12-05 The Regents Of The University Of California Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis
EP1381668A1 (en) * 2001-04-27 2004-01-21 The Procter & Gamble Company Compounds, compositions, and methods for controlling biofilms
DE10251184A1 (de) 2002-11-04 2004-05-13 Degussa Ag Mutanten zur Herstellung von D-Aminosäuren
WO2005120489A2 (en) * 2004-06-04 2005-12-22 Molecular Therapeutics, Inc. Treatment of central nervous system disorders or injuries with d-methionine
US7271239B2 (en) * 2004-09-01 2007-09-18 The Research Foundation Of State University Of New York D-isomers of antimicrobial peptide
US7618697B2 (en) 2005-09-26 2009-11-17 Ciba Specialty Chemicals Corporation Carboxylic acid esters of zosteric acid for prevention of biofouling
TWI432231B (zh) * 2005-10-06 2014-04-01 Novabay Pharmaceuticals Inc 使用ｎ-鹵化胺基酸於預防包括泌尿道感染（ｕｔｉ）之細菌性與真菌性感染的系統與方法
WO2008098245A2 (en) * 2007-02-09 2008-08-14 University Of Georgia Reseach Foundation, Inc. Nmda receptor modulation and treatments for addictive behavior
AU2008275542B2 (en) * 2007-07-06 2014-06-05 Laclede, Inc. Use of hydrolytic and oxidative enzymes to dissolve biofilm in airway passages
IL188681A0 (en) * 2008-01-09 2008-12-29 Amino Acid Solutions Inc Pharmaceutical compositions and methods utilizing a d-amino acid
TWI458468B (zh) * 2008-02-08 2014-11-01 Colgate Palmolive Co 牙齒擦拭件

Also Published As

Publication number Publication date
EP2521448A1 (en) 2012-11-14
WO2011109119A1 (en) 2011-09-09
US20130071439A1 (en) 2013-03-21
EP2521542A1 (en) 2012-11-14
US20130059096A1 (en) 2013-03-07
BR112012016869A2 (pt) 2015-09-01
JP2013516297A (ja) 2013-05-13
MX2012008018A (es) 2012-10-03
JP2013516492A (ja) 2013-05-13
KR20120115375A (ko) 2012-10-17
WO2011085326A1 (en) 2011-07-14
BR112012016749A2 (pt) 2018-06-12
CN103025158A (zh) 2013-04-03
AU2011221564A1 (en) 2012-07-26
CN102791262A (zh) 2012-11-21
WO2011085326A9 (en) 2013-10-24
KR20120113259A (ko) 2012-10-12
AU2011203862A1 (en) 2012-07-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
MX2012008017A (es) Métodos y composiciones para tratar biopelículas.
US20140056951A1 (en) Methods and compositions for treating biofilms
US9616008B2 (en) Antimicrobial compositions
US10647736B2 (en) Antimicrobial preparation and uses thereof
US9961886B2 (en) Antimicrobial compounds and compositions, and uses thereof
JP7041166B2 (ja) トリアリールポリアミンを含む組成物および方法
AU2020204162B2 (en) Treating inflammatory conditions and improving oral hygiene using metal modulators with methylsulfonylmethane as transport enhancer
WO2014078801A1 (en) Methods and compositions comprising guanidines for treating biofilms
EP1519951A2 (fr) Peptides lineaires cationiques ayant des proprietes antibacteriennes et/ou antifongiques
HK1178784A (en) D-amino acids for use in treating biofilms
CA2664124A1 (fr) Nouvelle classe de composes derives de terpene a activite antibiotique, compositions les contenant et utilisations

Legal Events

Date Code Title Description
FA Abandonment or withdrawal