MX2008013189A - Metodo para preparar derivados de lisobactina. - Google Patents

Abstract

Método para preparar depsipéptidos cíclicos que tiene la siguiente fórmula (I) (ver fórmula (I)) mediante ciclación intramolecular.

Description

MÉTODO PARA PREPARAR DERIVADOS DE LISOBACTINA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con un método para preparar depsipéptidos cíclicos de la siguiente fórmula (I) en la cual R1 es H o CH3, en la cual R2 es hidrógeno, C3-C6-c¡cloalquilo, C5-C6-cicloalquenilo, C3-C6 cicloalquilmetilo, heterociclilmetilo de 5 a 7 miembros, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, 1 -met¡lprop-1 -¡lo, 2-metilprop-1 -ilo, 2,2-dimetilprop-1 -ilo, 1 , 1 -dimetilprop-1 -¡lo, 1 -et¡lprop-1 -ilo, 1 -etil-1 -metilprop-1 -ilo, n-butilo, 2-metilbut-1 -ilo, 3-metilbut-1 -ilo, 1 -etilbut-1 -ilo, ferf-butilo, 4-metilpent-1 -ilo, n-hexilo, alquenilo o arilo, donde R2 se puede sustituir con 0, 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de halógeno, hidroxi, amino, ciano, trimetilsililo, alquilo, alcoxi, benciloxi, C3-C6-ciclo-alquilo, arilo, heteroarilo de 5 a 10 miembros, alquilamino, arilamino, alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, arilcarbonilo y benciloxicarbonilamino, donde arilo y heteroarilo en cambio se puede sustituir con 0, 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de halógeno, hidroxi, amino, ciano, nitro, alquilo, alcoxi y fenilo, en la cual R3 es hidrógeno o Ci-C -alquilo, o en la cual R2 y R3 junto con el átomo de carbono al cual se encuentran unidos forman un anillo C3-C6-cicloalquilo o un anillo heterocíclico de 5 a 7 miembros, donde el anillo cicloalquilo y el anillo heterociclilo se puede sustituir con 0, 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de trifluorometilo, alquilo, alcoxi y alquilcarbonilo, en la cual R4 es alquilo, C3-C6-cicloalquilo, heterociclilo de 5 a 7 miembros, arilo, heteroarilo de 5 o 6 miembros, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, C3-C6-cicloalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo de 5 a 7 miembros, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo de 5 o 6 miembros o alquilaminocarbonilo, donde alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, alcoxicarbonilo, cicloalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo y alquilaminocarbonilo se puede sustituir con 0, 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de halógeno, hidroxi, amino, alquilamino y fenilo, y donde alquilcarbonilo se sustituye con un sustituyente amino o alquilamino, y donde alquilcarbonilo se puede sustituir con otros 0, 1 o 2 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de halógeno, hidroxi, trimetilsililo, alcoxi, alquiltio, benciloxi, C3-C6-cicloalquilo, fenilo, naftilo, heteroarilo de 5 a 10 miembros, alquilcarbonilamino, alcoxicarbonilamino, arilcarbonilamino, arilcarboniloxi, benciloxicarbonilo y benciloxicarbonilamino, donde fenilo y heteroarilo en cambio se puede sustituir con 0, 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de halógeno, hidroxi, nitro, alquilo, alcoxi y fenilo, o dos sustituyentes en el mismo átomo de carbono en el alquilcarbonilo junto con el átomo de carbono al cual se encuentran unidos forman un anillo C3-C6-cicloalquilo o un anillo heterociclilo de 5 a 7 miembros, donde el anillo cicloalquilo y el anillo heterociclilo se puede sustituir con 0, 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de trifluorometilo, alquilo y alcoxi, o donde el anillo cicloalquilo puede ser benzo-fusionado, en la cual R5 es hidrógeno, CrC^-alquilo, ciclopropilo o ciclopropilmetilo, o en el cual R4 y R5 junto con el átomo de nitrógeno al cual se encuentran unidos forman un anillo heterociclilo de 5 a 7 miembros, donde el anillo heterociclilo se puede sustituir con 0, 1 , 2, o 3 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de halógeno, hidroxi, amino, ciano, alquilo, alcoxi y alquilamino, así como también compuestos útiles en este método.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los depsipéptidos cíclicos representados previamente incluyen entre otros los dos productos naturales representados a continuación, que se conocen como lisobactina y katanosina A. Estas sustancias son inhibidores de la biosíntesis de la pared celular y por consiguiente tienen actividad antibacteriana. lisobactina, R = CH3 katanosina A, R = H La pared celular bacteriana es sintetizada por un número de enzimas (biosíntesis de la pared celular) y es esencial para la sobrevida y reproducción de los microorganismos. La estructura de esta macromolécula, así como las proteínas y los intermediarios de la biosíntesis ("precursores") relacionados con la síntesis de la misma, están altamente conservados entre las bacterias. Debido a su naturaleza y uniformidad esenciales, la biosíntesis de la pared celular constituye un punto ideal de ataque para antibióticos nuevos. La vancomicina y la penicilina son inhibidores de la biosíntesis de la pared celular bacteriana y representan ejemplos exitosos de la potencia antibiótica de este principio de acción. Se han empleado clínicamente por diversas décadas para el tratamiento de infecciones bacterianas, en especial con patógenos Gram-positivos. Debido a la creciente aparición de microbios resistentes, por ejemplo estafilococos resistente a meticilina, neumococos resistentes a penicilina y enterococos resistentes a vancomicina, y recientemente también por primera vez time estafilococos resistentes a vancomicina, estas sustancias están perdiendo de manera creciente su eficacia terapéutica. Hasta la fecha la lisobactina se ha obtenido por fermentación usando por ejemplo Lysobacter sp. SC 14067. Además, se ha descrito en WO 2004/099239 A1 la eliminación de las dos unidades leucina que forman el segmento lineal y las reemplazan por otros grupos. Hasta la fecha, se desconoce una manera de preparar la lisobactina, katanosina A o derivados de las mismas con variaciones en el segmento lineal mediante síntesis completa.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Por consiguiente, un objeto de la invención comprende describir un método para preparar depsipéptidos cíclicos de la fórmula (I) mencionada previamente. Este objeto se logra mediante un método para preparar depsipéptidos cíclicos de la fórmula (I) por medio de ciclación intramolecular de un compuesto de la siguiente fórmula (II) en donde R1 a R5 son como se definieron previamente, en donde X es OH, un éster activo, un pseudohalógeno (por ejemplo una azida) o un halógeno, y en donde PG es H o un grupo protector adecuado, y la subsiguiente desprotección del intermediario cíclico para formar el depsipéptido cíclico de la fórmula (I). Este método se caracteriza porque el ß-hidroxi -aminoácido (aquí ß-fenilserina = ß-hidroxifenilalanina) esterificado sobre el O3 es activado químicamente en el paso de ciclación y luego se comporta como un donante de acilo. La ciclación tiene lugar mediante un enlace amida (formación de lactama) y no por una reacción de esterificación (formación de lactona). El método se caracteriza además porque el segmento cíclico de la estructura de lazo del depsipéptido se prepara mediante una ciclación en el aminoácido cabeza de puente (en este caso ß-hidroxifenilalanina). A los efectos de la presente invención, los sustituyentes tienen el siguiente significado a menos que se especifique de otra manera: Alquilo, per se y "alq" y "alquilo" en alcoxi, alquilamino, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilaminocarbonilo y alquilcarbonilamino representan un radical alquilo de cadena lineal o ramificado que en general tiene entre 1 y 6, preferentemente entre 1 y 4, con particular preferencia entre 1 y 3 átomos de carbono, a modo de ejemplo y preferentemente metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, ter-butilo, n-pentilo y n-hexilo. Alcoxi, a modo de ejemplo y preferentemente, representa metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, ter-butoxi, n-pentox¡ y n-hexoxi. Alquenilo. representa un radical alquenilo de cadena lineal o ramificada que tiene entre 2 y 6 átomos de carbono. Se prefiere un radical alquenilo de cadena lineal o ramificada que tiene entre 2 y 4, con particular preferencia entre 2 y 3 átomos de carbono. Los ejemplos que se pueden mencionar con preferencia son: vinilo, alilo, n-prop-1-en-l-ilo, n-but-2-en-1 -ilo, 2-metilprop-1-en-1-ilo y 2-metilprop-2-en-1 -ilo. Alquilamino representa un radical alquilamino que tiene uno o dos sustituyentes alquilo (seleccionados de forma independiente entre sí), a modo de ejemplo y preferentemente, metilamino, etilamino, n-propilamino, isopropilamino, ter-butilamino, n-pentilamino, n-hexilamino, N,N-d/metilamino, ?/,/V-dietilamino, A/-etil-/V-metilamino, A/-metil-/V-n-propilamino, /V-isopropil-N-n- propilamino, W-ter-butil-N-metilamino, W-etil-N-n-pentilamino y N-n-hexil-W-metilamino. Arilamino. representa un radical arilamino que tiene un sustituyente arilo y opcionalmente un sustituyente adicional tal como, por ejemplo, arilo o alquilo, a modo de ejemplo y preferentemente fenilamino, naftilamino, fenilmetilamino o difenilamino. Alouilcarbonilo. representa un radical alquilcarbonilo que tiene un sustituyente, a modo de ejemplo y preferentemente metilcarbonilo, etilcarbonilo, n-propilcarbonilo, isopropilcarbonilo, ter-butilcarbonilo, n-pentilcarbonilo y n-hexilcarbonilo. Alcoxicarbonilo. representa un radical alcoxicarbonilo que tiene un sustituyente alcoxi, a modo de ejemplo y preferentemente metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, n-propoxi-carbonilo, isopropoxicarbonilo, fer-butoxicarbonilo, n-pentoxi-carbonilo y n-hexoxicarbonilo. Cicloalquilcarbonilo, representa un radical cicloalquilcarbonilo que tiene un sustituyente cicloalquilo, a modo de ejemplo y preferentemente ciclopropilcarbonilo, ciclobutilcarbonilo, ciclopentilcarbonilo y ciclohexilcarbonilo. Heterociclilcarbonilo. representa un radical heterociclilcarbonilo que tiene un sustituyente heterociclilo, a modo de ejemplo y preferentemente tetrahidrofuran-2-ilcarbonilo, pirrolidin-2-ilcarbonilo, pirrolidin-3-ilcarbonilo, pirrolinilcarbonilo, piperidinilcarbonilo, morfolinilcarbonilo y perhidroazepinilcarbonilo. Arilcarbonilo, representa un radical arilcarbonilo que tiene un sustituyente arilo, a modo de ejemplo y preferentemente fenilcarbonilo, naftilcarbonilo y fenantrenilcarbonilo. Heteroarilcarbonilo. representa un radical heteroarilcarbonilo que tiene un sustituyente heteroarilo, a modo de ejemplo y preferentemente tienilcarbonilo, furilcarbonilo, pirrolilcarbonilo, tiazolilcarbonilo, oxazolilcarbonilo, imidazolilcarbonilo, piridilcarbonilo, pirimidilcarbonilo, piridazinilcarbonilo, indolilcarbonilo, indazolilcarbonilo, benzofuranilcarbonilo, benzotiofenilcarbonilo, quinolinilcarbonilo e isoquinolinilcarbonilo. Alouilcarbonilamino. representa un radical alquilcarbonilamino que tiene un sustituyente alquilo, a modo de ejemplo y preferentemente metilcarbonilamino, etilcarbonilamino, n-propilcarbonilamino, isopropilcarbonilamino, fer-butilcarbonilamino, n-pentilcarbonilamino y n-hexilcarbonílamino.

Arilcarbonilamino. representa un radical arilcarbonilamino que tiene un sustituyente arilo, a modo de ejemplo y preferentemente fenilcarbonilamino, naftilcarbonilamino y fenantrenilcarbonilamino. Alquilaminocarbonilo representa un radical alquilaminocarbonilo que tiene uno o dos sustituyentes alquilo (seleccionados de forma independiente entre si), a modo de ejemplo y preferentemente, metilaminocarbonilo, etilaminocarbonilo, n-propilaminocarbonilo, isopropilaminocarbonilo, ter-butilaminocarbonilo, n-pentilaminocarbonilo, n-hexilaminocarbonilo, N,N-dimetilaminocarbonilo, A/,/V-dietilaminocarbonilo, N-etil-W-metilaminocarbonilo, /V-metil-/V-n-propilaminocarbonilo, /V-isopropil-N-n-propilaminocarbonilo, N-ter-butil-W-metilaminocarbonilo, N-e\\\-N-n-pentilaminocarbonilo y N-n-hexil-N-metilaminocarbonilo. Cicloalquilo, representa un grupo cicloalquilo que en general tiene entre 3 y 6 átomos de carbono, a modo de ejemplo y preferentemente ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo. Cicloalouenilo. representa un grupo cicloalquenilo que en general tiene entre 5 y 6 átomos de carbono y uno o dos enlaces dobles, a modo de ejemplo y preferentemente ciclopent-1-en-1-ilo, ciclopent-2-en-1-ilo, ciclopent-3-en-1-ilo, ciclohex-1-en-1-ilo, ciclohex-2-en-1 -ilo y ciclohex-3-en-1-ilo. Arilo. representa un radical carbocíclico aromático mono a tricíclico, que en general tiene entre 6 y 14 átomos de carbono; a modo de ejemplo y preferentemente fenilo, naftilo y fenantrenilo.

Heterociclilo. representa un radical mono o policíclico, preferentemente mono o bicíclico, heterocíclico que en general tiene entre 5 y 7 átomos de anillo y hasta 3, preferentemente hasta 2 heteroátomos y/o grupos hetera de las series N, O, S, SO, S02. Los radicales heterociclilo pueden estar saturados o parcialmente insaturados. Se prefieren los radicales heterociclilo saturados monocíclicos de 5 a 7 miembros que tienen hasta dos heteroátomos de las series O, N y S tales como, a modo de ejemplo y preferentemente, tetrahidrofuran-2-ilo, pirrolidin-2-ilo, pirrolidin-3-ilo, pirrolinilo, piperidinilo, morfolinilo y perhidroazepinilo. Heteroarilo. representa un radical aromático, mono o bicíclico que en general tiene entre 5 y 10, preferentemente entre 5 y 6, átomos de anillo y hasta 5, preferentemente hasta 4, heteroátomos de las series S, O y N, a modo de ejemplo y preferentemente tienilo, furilo, pirrolilo, tíazolilo, oxazolilo, imidazolilo, piridilo, pirimidilo, piridazinilo, ¡ndolilo, indazolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, quinolinilo e isoquinolinilo. Aminoácido unido a carbonilo. representa un aminoácido que está unido por medio de un grupo carbonilo de la función ácido del aminoácido. Se prefieren en este sentido los a-aminoácidos en la configuración L o D, en particular a-aminoácidos naturales tales como, por ejemplo, glicina, L-alanina, L-valina, L-leucina, L-isoleucina, L-prolina, L-fenilalanina, L-triptofano o a-aminoácidos naturales en una configuración D no natural tal como, por ejemplo, D-alanina, D-valina, D-leucina, D-isoleucina, D-prolina, D-fenilalanina, D-triptofano o aminoácidos no naturales que tienen un grupo lateral unido al átomo de carbono a del aminoácido, tal como, por ejemplo, C3-C6-cicloalquilmetilo, C3-C6-cicloalquilo, etilo, n-propilo, 2,2-di-metilpropilo, íer-butilo, 3-metilbutilo, n-hexilo o alilo, o la cadena lateral forma un anillo con el átomo de carbono a del aminoácido tal como, por ejemplo, ciclopropilo (aminoácido: ácido 1-amino-1-c¡clo-propancarboxílico), ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo, o ß-aminoácidos (por la nomenclatura, véase: D. Seebach, . Overftand, F. N. M. Kühnle, B. Martinoni, L. Oberer, U. Hommel, H. Widmer, Helv. Chim. Acta 1996, 79, 913-941 ), tal como, por ejemplo, ß-alanina, ß-fenilalanina, ß-Aib (a-metilalanina) o derivados del ácido 2,3-diaminopropiónico (por ejemplo ácido 2,3-diamino-3-fenilpropiónico). Halógeno, representa flúor, cloro, bromo y iodo, preferentemente flúor y cloro. El término éster activo incluye todos los ésteres activos conocidos por el especialista de la técnica. Los ejemplos de ésteres activos preferidos en la invención incluyen cianometilésteres, p-nitrofenilésteres, o-nitrofenilésteres, 2,4-dinitrofenilésteres, 2,4,5-triclorofenilésteres, pentaclorofenilésteres, pentafluorofenilésteres (Pfp), ésteres de V-hidroxiftalimida, ésteres de N-hidroxisuccinimida (O-Su), ésteres de 1-hidroxipiperidina, ésteres de 5-cloro-8-hidroxiquinolina. La ciclación intramolecular comprende la formación de un enlace amida lo cual se puede lograr en principio mediante cualquier proceso conocido por el especialista en la técnica. La ciclación tiene lugar entonces por el ataque nucleofílico representado a continuación.

Si X representa un éster activo, un pseudohalógeno o un halógeno, la reacción en general tiene lugar en solventes inertes, cuando fuera apropiado en la presencia de una base, preferentemente en un rango de temperatura entre -30°C y 50° bajo presión atmosférica. Los ejemplos de solventes inertes son tetrahidrofurano, cloruro de metileno, piridina, dioxano, cloroformo, éter dietílico, ter-butilmetiléter, acetato de etilo o dimetilformamida, con preferencia cloruro de metileno o dimetilformamida. Los ejemplos de bases son trietilamina, triisopropiletilamina o V-metilmorfolina, con preferencia triisopropiletilamina. Si X representa OH, la reacción en general tiene lugar en solventes inertes en la presencia de un reactivo deshidratante, cuando fuera apropiado en la presencia de una base, preferentemente en un rango de temperatura entre -30°C y 50°C bajo presión atmosférica. Los ejemplos de solventes inertes son los halohidrocarburos, tales como el diclorometano o el triclorometano, los hidrocarburos, tales como el benceno, el nitrometano, el dioxano, la dimetilformamida o el acetonitrilo. También es posible emplear una mezcla de solventes. Los solventes particularmente preferidos son diclorometano y dimetilformamida. Los ejemplos de reactivos deshidratantes adecuados son carbodiimidas tales como, por ejemplo, clorhidrato de ?/,?/'-dietil-, /V,/V-dipropil-, /V,/V-diisoprop¡l-, /V,/V-diciclohexil-carbo-di-imida, A/-(3-dimetilamino-isopropil)-A/'-etilcarbodiimida (EDC), W-cicIohexil-carbodiimida-A/'-propiloximetil-poliestireno (PS-carbodiimida) o compuestos de carbonilo tal como carbonildiimidazol o compuestos de 1 ,2-oxazolio tal como 3-sulfato de 2-etil-5-fenil-1 ,2-oxazolio o perclorato de 2-fer-butil-5-metil-isooxazolio o compuestos acilamino tal como 2-etoxi-1 -etoxicarbonil-1 ,2-dihidroquinolina o anh ídrido propanfosfónico o cloroformato de isobuti lo o cloruro de bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosforilo o hexafluorofosfato de benzotriaziloxitri(dimetilam ino)fosfonio o hexafluorofosfato de 0-(benzotriazol-1 -il)-N,A/, W',A/'-tetra-metil-uron¡o (H BTU), tetrafluoroborato de 2-(2-oxo-1 -(2-H )-piridil)-1 , 1 ,3,3-tetrametiluronio (TPTU) o hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1 -il)-W,N,N',N -tetrametiluronio (HATU) o 1-hidroxibenzotriazol (HOBt) o hexafluorofosfato de benzotriazol-1 -iloxitris(dimetilamino)fosfonio (BOP) o hexafluorofosfato de benzotriazol-1 -il-oxitris-(pirrolidin)-fosfonio (PyBOP) o N-hidroxi-succinimida o mezclas de los mismos con bases. Los ejemplos de bases son los carbonatos de metales alcalinos, tales como, por ejemplo, el carbonato de sodio o potasio, o el bicarbonato, o las bases orgánicas, tales como las trialquilaminas, por ejemplo, trietilamina, A/-metilmorfolina, 4-metil-morfolina, N-metilpiperidina, 4-dimetil-aminopiridina o diisopropiletilamina. La reacción se conduce preferentemente con HATU en la presencia de 4-metilmorfolina. Los compuestos de la fórmula (II) llevan grupos protectores cuando fuera apropiado, de modo que en estos casos la ciclación intramolecular del compuesto de la fórmula (II) es seguido por la eliminación de los grupos protectores mediante métodos conocidos por el especialista en la técnica. El término "grupo protector adecuado" según se usa en la presente, incluye todos los grupos protectores conocidos por el especialista de la técnica y se pueden usar para enmascarar una función específica y luego pueden ser eliminados nuevamente si alteraciones adicionales en la molécula a desproteger. Por ejemplo, se pueden proteger grupos hidroxi primarios o secundarios como éteres clivables, en particular como éteres de metoximetilo, benciloximetilo, p-metoxibenciloximetilo, bencilo, fer-butilo, tetrahidropiranilo, alilo, p-clorofenilo, p-nitrofenilo o trifenilmetilo. Los éteres de sililo representan una posibilidad adicional para proteger grupos hidroxi, por ejemplo éteres de trimetilsililo (TMS), fer-butildimetilsililo (TBDMS), triisopropilsililo (TIPS), fer-butildifenilsililo (TBDPS) o trifenilsililo. Los grupos hidroxi también se pueden proteger mediante grupos éster, por ejemplo ésteres de acetilo, benzoílo, propionilo, cloroacetilo, tricloroacetilo, trifluoroacetilo o crotilo. Además de ellos, los carbonatos, tal como, p.ej., carbonato de metilo, carbonato de alilo, carbonato de bencilo, también son adecuados para proteger a los alcoholes. Además es posible usar ésteres de ácido sulfúrico o de ácidos sulfónicos tales como, por ejemplo, sulfato, alilsulfonato, p-toluensulfonato (tosilato) o metilsulfonato como grupos protectores para alcoholes. Los grupos protectores preferidos para grupos hidroxi son éteres de fer-butilo o éteres de sililo, en especial éteres de fer-butildimetilsililo. Los grupos protectores adecuados para el grupo guanidino son en principio los mismos que para los grupos hidroxi, siendo preferidos en este caso el grupo (2,2,5,7,8-pentametil-3,4-dihidro-2H-cromen-6-il)sulfonilo (grupo PMC). Los grupos carboxi se pueden proteger en la forma de sus ésteres de alquilo, sililo, arilalquilo o arilo, por ejemplo como ésteres de metilo, etilo, fer-butilo, trimetilsililo, fer-butildimetilsililo, bencilo, picolilo, tricloroetilo o trimetilsililo. Los grupos carboxi también se pueden proteger en la forma de diversas amidas, anilidas o hidrazidas, por ejemplo como N,N-dimetilamida, pirrolidinilamida, piperidinilamida, o-nitroanilida, /V-7-nitroindolilamida o N-fenilhidrazida. Además de estos, también se pueden proteger como ortoésteres, por ejemplo como ortoésteres de trimetilo. Los ácidos carboxílicos se protegen preferentemente en la forma de sus ésteres, en especial como ésteres de metilo o trimetilsililetilo. Los grupos particularmente adecuados para proteger grupos amino son los que permite obtener carbamatos clivables, por ejemplo grupos metoxicarbonilo, fer-butoxicarbonilo (Boc), benciloxicarbonilo (CBz o Z), aliloxicarbonilo (alloc), 9-fluoroenilmetoxicarbonilo (Fmoc), 2-trime- tilsililetilcarbonilo, 1-adamantilcarbonilo, m-nitrofenilo. Los grupos amino también se pueden proteger en la forma de amidas o imidas fácilmente clivables, por ejemplo como formamida, cloroacetamida, tricloroacetamida, trifluoroacetamida, benzoílamida, o-nitrofenilacetamida, ftalimida, tetracloroftalimida o nitroftalimida. Una posibilidad adicional para proteger grupos amino comprende formar aminas clivables en particular grupos alquilo tal como, por ejemplo, el grupo ter-butilo, el grupo metilo, el grupo trifenilmetilo, el grupo ferrocenilmetilo o el grupo alilo o con grupos arilo tal como, por ejemplo, el grupo 2,4-di-nitrofenilo. Los carbamatos se usan preferentemente para proteger al grupo amino y entre estos en particular fer-butoxi-carbonilo (Boc), benciloxicarbonilo (CBz o Z) o grupos 9-fluoro-enilmetoxicarbonilo (Fmoc). Los grupos protectores enumerados aquí sirven meramente como ejemplo y no representan un listado exhaustivo de todas las posibilidades. Se puede consultar un tratamiento más extenso de esta área, entre otros, en T. W. Greene, P. G. M. Wuts Protective Groups in Organic Synthesis, 3a edición, John Wiley & Sons Inc. 1999. Los grupos representados por PG según se usan en la presente en una sola molécula pueden ser los mismos grupos protectores adecuados o pueden ser diferentes o pueden ser combinaciones de grupos protectores idénticos o diferentes con H o con H exclusivamente. El compuesto de fórmula (II) es preferentemente un compuesto de la siguiente fórmula (lia) en la cual X y R1 son como se definen precedentemente, en la cual R6 es isopropilmetilo, ferí-butilmetilo, 2,2-di-metilbut-1-ilo, 2-etil-2-metilbut-1-ilo, 2,2-di-etilbut-1-ilo, 2,2-dimetilpent-1-ilo, 3-piridilmetilo, 4-trifluorometil-3-piridilmetilo, bencilo o trimetilsililmetilo, en la cual R7 es isopropilmetilo, fert-butilmetilo, 2,2-dimetilbut-1-ilo, 2-etil-2-metilbut-1-ilo, 2,2-di-etilbut-1-ilo, 2,2-dimetilpent-1-ilo, trimetilsililmetilo o bencilo, y en la cual PG es H o un grupo protector adecuado. R6 es preferentemente isopropilmetilo, ferf-butilmetilo o 3-piridilmetilo y en particular R6 es isopropilmetilo. R7 es preferentemente isopropilmetilo, ferf-butilmetilo o trimetilsililmetilo y en particular R7 es isopropilmetilo. X es preferentemente OH. R1 es preferentemente CH3.

En otra realización de la invención, el compuesto (II) se prepara acoplando un compuesto de la siguiente fórmula (III) con un compuesto de la siguiente fórmula (IV) en la cual R1 a R5 son como se definen precedentemente, en la cual Y es OH, un éster activo, un pseudohalógeno o un halógeno, y en la cual PG es H o un grupo protector adecuado, y, donde resulta apropiado, desprotección parcial o completa del intermediario, y donde resulta apropiado conversión del grupo carboxi de la 3-hidroxifenilalanina en un grupo de fórmula -C(=0)X en la cual X es como se define precedentemente. El compuesto de fórmula (III) es en particular un compuesto de la siguiente fórmula (Illa) en la cual R6 y R7 son como se definen precedentemente, y en la cual PG es H o un grupo protector adecuado. El acoplamiento puede tener lugar bajo las mismas condiciones, o condiciones diferentes, como se describió previamente para la ciclación intramolecular. El acoplamiento tiene lugar entonces por el ataque nucleofílico representado a continuación. La conversión del grupo carboxi de la 3-hidroxi-fenilalanina en un grupo de la fórmula -C(=0)X puede tener lugar mediante métodos conocidos por el especialista de la técnica.

Los grupos protectores que están presentes en el intermediario pueden corresponder por completo, en parte o en nada a los del producto deseado. Se pueden eliminar, reemplazar o unir cuando fuera apropiado mediante métodos conocidos por un especialista en la técnica. En una realización adicional de la invención, se prepara un compuesto de la fórmula (III) mediante acoplamiento de un compuesto de la siguiente fórmula (V) con un compuesto de la siguiente fórmula (VI) en donde R2 a R5 son como se definieron previamente, en donde Z es OH, un éster activo, un pseudohalógeno o un halógeno, y en donde PG es H o un grupo protector adecuado, y, cuando fuera apropiado, desprotección parcial o completa del intermediario. El compuesto (V) es entonces en particular un compuesto de la siguiente fórmula (Va) en donde R6 y R7 son como se definieron previamente, y en donde PG es H o un grupo protector adecuado. El acoplamiento puede tener lugar bajo las mismas condiciones, o condiciones diferentes, como se describió previamente para el acoplamiento mencionado o para la ciclación intramolecular. El acoplamiento tiene lugar entonces por el ataque nucleofílico representado a continuación.

Los grupos protectores que están presentes en el intermediario pueden corresponder en parte, por completo o en nada a los del producto deseado. Se pueden unir, eliminar o reemplazar cuando fuera apropiado mediante métodos conocidos por un especialista en la técnica. La invención se relaciona además con un compuesto de la siguiente fórmula (III) en donde R2 a R5 son como se definieron previamente, y en donde PG es H o un grupo protector adecuado, en particular un compuesto de la siguiente fórmula (Illa) en donde R6 y R7 son como se definieron previamente, y en donde PG es H o un grupo protector adecuado, y en especial un compuesto de la siguiente fórmula (II Ib).

La invención se relaciona además con un método para preparar un compuesto de la fórmula (III) por acoplamiento de un compuesto de la fórmula (V) con un compuesto de la fórmula (VI) y, cuando fuera apropiado, desprotección parcial o completa del intermediario.

La invención se relaciona además con un compuesto de la siguiente fórmula (VI) P en donde Z es OH, un éster activo, un pseudohalógeno o un halógeno, y en donde PG es H o un grupo protector adecuado, en particular un compuesto de la siguiente fórmula (Vía).

También un método para preparar un compuesto de la fórmula (VI) por acoplamiento de puesto de la siguiente fórmula (VII) con un compuesto de la siguiente fórmula (VIII) en donde PG es H o un grupo protector adecuado, y, cuando fuera apropiado, desprotección completa o parcial del intermediario. Los compuestos de las fórmulas (VII) y (VIII) son entonces particularmente compuestos de las siguientes fórmulas (Vlla) y (Villa), respectivamente.

Los métodos de preparación de la invención y la preparación de los compuestos de la invención se explican con mayor detalle mediante los siguientes esquemas de síntesis con relación a la síntesis de lisobactina. El método se basa en una construcción modular de diversos fragmentos que luego se combinan para obtener un compuesto de la fórmula (II). El compuesto de la fórmula (II) es sometido luego a una delación intramolecular y, cuando fuera apropiado, es desprotegido con el fin de obtener el producto final deseado. En este sentido ha surgido sorpresivamente que, según la elección de los bloques de construcción y la secuencia de acoplamiento de los mismos, se pueden preparar moléculas de cadena abierta de la fórmula (II) que ya contienen un enlace éster en su cadena. Se ha encontrado además que estos compuestos de cadena abierta se pueden ciclar en la presencia del enlace éster para obtener los depsipéptidos cíclicos deseados. De acuerdo con el esquema de síntesis 1, se sintetiza un fragmento 1 a partir de ácido (2S,3S)-2-amino-3-hidrox¡-4-metoxi-4-oxobutírico y éster de Soc-glicina W-hidroxisuccinimida.

Fraemento 1 Esquema de síntesis 1 Se prepara un fragmento 2 de acuerdo con el esquema de síntesis 2 a partir de 3-hidroxifenilalanina.

TFA Fraemento 2„ : 2 Esquema de síntesis 2 Se prepara un fragmento 3 de acuerdo con el esquema de síntesis 3 a partir de ?/2-(benciloxicarbonil)-D-leucina y L-leucinato de metilo de acuerdo con el esquema de síntesis 3. Los compuestos de la fórmula (I) con cualquier radical. R2 a R5 se pueden preparar reemplazando los dos derivados leucina en este paso. Los fragmentos 2 y 3 se acoplan luego de acuerdo con el esquema de síntesis 4, se desprotegen parcialmente y el intermediario resultante se hace reaccionar con -(ter- butox¡carbonil)-03-fer-butil-L-serina con el fin de obtener, luego de una desprotección adicional, un fragmento4 parcialmente desprotegido.

FraemeoJoJ..

Esquema de síntesis 3 Fraementq„¾„„,..„ Fragmento 2 Fragmento 4 Esquema de síntesis 4 El fragmento 4 obtenido de esta manera se acopló con el fragmento 1 de acuerdo con el esquema de síntesis 5 con el fin de obtener el fragmento 5 después de una desprotección parcial.

Esquema de síntesis 5 El fragmento 5 se acopla luego con un fragmento 6 de acuerdo con el esquema de síntesis 6. Este fragmento 6 es un pentapéptido que se puede preparar mediante métodos conocidos. En lugar de lisobactina, es posible preparar katanosina A reemplazando la leucina en posición 2 en el fragmento 6 con una valina. La desprotección del intermediario resultante permite obtener el fragmento 7 que representa un compuesto de la fórmula (II). La ciclación intramolecular y subsiguiente desprotección de acuerdo con el esquema de síntesis 7 da como resultado el depsipéptido cíclico deseado, en este caso lisobactina.

Esquema de síntesis 6 Esquema de síntesis 7 Ejemplo Síntesis de novo de lisobactina Abreviaturas abs. absoluto aq. acuoso Boc W-íer-butoxicarbonilo conc. concentrado DCC diciclohexilcarbodiimida. DIEA /V,/V-diisopropiletilamina DMAP 4-dimetilaminopiridina DMF N,N-dimetilformamida EDC clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida EDTA ácido etilendiamintetraacético eq. equivalente(s) fmoc 9-fluorenilmetoxicarbonilo h hora(s) HATU hexafluorofosfato de 0-(7-Azabenzotriazol-1-il)-N,N,N ',/\/'-tetrametiluronio HOBT Hidrato de 1-hidroxi-1 H-benzotriazol LHMDS hexametildisilazida de litio min minuto(s) MTBE ter-butiléter de metilo NMM /V-metilmorfolina org. orgánico RT temperatura ambiente sat. saturado TBAF fluoruro de tetrabutilamonio TBTU tetrafluoroborato de / /-[(1 H-1 ,2,3-benzotriazol-1 -iloxi)-(dimetilamino)metilen]-N- metilmetanaminio TFA ácido trifluoroacético THF tetrahidrofurano TMG ?/,?,?,?-tetrametilguanidina XPHOS diciclohexil(2',4',6'-triisopropilbifenil-2-il)fosfina Materiales y métodos Métodos analíticos: HPLC/UV Método 1 Tipo de instrumento de HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; columna: Phenomenex Synergy 2µ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 I de agua + 0,5 ml de ácido fórmico 50%, eluyente B: 1 I de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico 50%; gradiente: 0,0 minutos de 90% de A -> 2,5 minutos de 30% de A -> 3,0 minutos de 5% de A - 4,5 minutos de 5% de A; velocidad de flujo: 0,0 minutos a 1 ml/minuto, 2,5 minuto/3,0 minuto/4,5 min. a 2 ml/minuto; horno: 50°C; detección UV: 210 nm. Método 2 Instrumento: HP 1100 con detección DAD; columna: Kromasyl 100 RP-18, 60 mm * 2,1 mm, 3,5 pm; eluyente: A = 5 ml de HCI04 (70%)/l de H20, B = ACN; gradiente: 0 minutos de 2% de B, 0,5 minutos de 2% de B, 4,5 minutos de 90% de B, 9 minutos de 90% de B, 9,2 minutos de 2% de B, 10 minutos de 2% de B; velocidad de flujo: 0,75 ml/minuto; temperatura de la columna: 30°C; detección: UV a 210 nm. Método 3 Instrumento: Agilent 1100 con DAD (G1315B), bomba binaria (G1312A), dosificador automático (G1313A), desgaseador de solvente (G1379A) y termostato de columna (G1316A); columna: Agilent Zorbax Eclipse XDB-C8 4,6 x 150 x 5 mm; temperatura de columna: 30°C; eluyente A: ácido perclórico 0,05%-70% en agua; eluyente B: acetonitrilo, velocidad de flujo: 2,00 ml/min; gradiente: 0-1 min de 10% de B, rampa, 4-5 min de 90% de B, rampa, 5,5 min de 10% de B.

Método 4 Tipo de instrumento de HPLC: HP 1050 Series; UV DAD; columna: Zorbax 300 mSB-C18 3,5 µ, 4,6 mm x 150 mm; eluyente A: 1 I de agua + TFA 0,1 %; eluyente B: Acetonitrilo 60% en agua con TFA 0,1 %; gradiente: 0,0 min a 10% de B, rampa, 18,0 de min a 80% de B, 20,0 min a 100% de B, 25,0 min a 100% de B. Velocidad de flujo: 1 ml/minuto; horno: 40°C; detección UV: 210 nm. Método 5 Tipo de instrumento de HPLC: HP 1050 Series; UV DAD; columna: Zorbax 300 mSB-C18 3,5 µ, 4,6 mm x 150 mm; eluyente A: 1 I de agua + TFA 0,1 %; eluyente B: Acetonitrilo 60% en agua con TFA 0,1 %; gradiente: 0,0 min a 10% de B, 2,00 min a 10% de B, rampa, 50,0 min a 80% de B, 52,0 min a 100% de B, 55 min a 100% de B. Velocidad de flujo: 0,7 ml/minuto; horno: 40°C; detección UV: 210 nm. Método 6 Agilent 1100 con DAD (G1315B), bomba binaria (G1312A), dosificador automático (G1313A), desgaseador (G1379A) y termostato de columna (G1316A); columna: Phenomenex Gemini 5 µ C-18, 50 x 2 mm; temperatura de horno: 40°C; eluyente A: agua + ácido fórmico 0,1 %; eluyente B: acetonitrilo, velocidad de flujo: 2,00 ml/min; gradiente: 0-1 min de 0% de B, rampa, 0-5 min de 100% de B, 5,50 min de 100% de B. Método 7 Daicel Chiralpak AD-H 5 µ?? 250 mm ? 2,0 mm, n-heptano/-etanol 95+5, velocidad de flujo: 0,2 ml/min, detección UV a 220 nm. Métodos analíticos: HPLC/MS. MALDI. HR-MS Método 8 Tipo de instrumento de MS: Micromass ZQ; Tipo de instrumento de HPLC: Waters Alliance 2795/HP 1100; columna: Phenomenex Synergy 2µ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 I de agua + 0,5 mi de ácido fórmico 50%, eluyente B: 1 I de acetonitrilo + 0,5 mi de ácido fórmico 50%; gradiente: 0,0 minutos de 90% de A -> 2,5 minutos de 30% de A -» 3,0 minutos de 5% de A - 4,5 minutos de 5% de A; velocidad de flujo: 0,0 minutos 1 ml/minuto, 2,5 minuto/3,0 minuto/4,5 minutos 2 ml/minuto; horno: 50°C; detección UV: 210 nm.

Método 9 Tipo de instrumento de MS: Micromass ZQ; Tipo de instrumento de HPLC: Waters Alliance 2795/HP 1100; columna: Phenomenex Gemini 3 µ C-18 100 A, 30 mm ? 3 mm; eluyente A: 1 I de agua + 0,5 ml de ácido fórmico 50%, eluyente B: 1 I de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico 50%; gradiente: 0,0 minutos de 90% de A -> 2,5 minutos de 30% de A -» 3,0 minutos de 5% de A -> 4,5 minutos de 5% de A; velocidad de flujo: 0,0 minutos 1 ml/minuto, 2,5 minuto/3,0 minuto/4,5 minutos 2 ml/minuto; horno: 50°C; detección UV: 210 nm. Método 10 Detección UV: 210 nm. Tipo de instrumento de MS: Micromass ZQ; Tipo de instrumento de HPLC: Waters Alliance 2795; columna: Phenomenex Synergy 2µ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 I de agua + 0,5 ml de ácido fórmico 50%, eluyente B: 1 I de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico 50%; gradiente: 0,0 minutos de 90% de A -» 2,5 minutos de 30% de A -> 3,0 minutos de 5% de A -> 4,5 minutos de 5% de A; velocidad de flujo: 0,0 minutos 1 ml/minuto, 2,5 minuto/3,0 minuto/4,5 minutos 2 ml/minuto; horno: 50°C; detección UV: 210 nm. Método 11 Instrumento: Micromass Platform LCZ con HPLC Agilent serie 1100; columna: Thermo Hypersilo GOLD 3µ 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 I de agua + 0,5 ml de ácido fórmico 50%, eluyente B: 1 I de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico 50%; gradiente: 0,0 minutos de 100% de A -> 0,2 minutos de 100% de A -> 2,9 minutos de 30% de A -» 3,1 minutos de 10% de A - 5,5 minutos de 10% de A; horno: 50°C; velocidad de flujo: 0,8 ml/minuto; detección UV: 210 nm. Método 12 Instrumento: Micromass Platform LCZ con HPLC Agilent serie 1100; columna: Thermo HyPURlTY Aquastar 3µ 50 mm x 2,1 mm; eluyente A: 1 I de agua + 0,5 ml de ácido fórmico 50%, eluyente B: 1 I de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico 50%; gradiente: 0,0 minutos de 100% de A -» 0,2 minutos de 100% de A -> 2,9 minutos de 30% de A -> 3,1 minutos de 10% de A -> 5,5 minutos de 10% de A; horno: 50°C; velocidad de flujo: 0,8 ml/minuto; detección UV: 210 nm. Método 13 Instrumento: Micromass LCT; ionización: ESI positivo/negativo; HP1100 con DAD y dosificador automático; horno a 40°C; columna: Waters Symmetry C-18, 50 ? 2,1 mm, 3,5 µ?t?; eluyente A: Ácido fómnico 0,1 %/acetonitrilo, eluyente B: ácido fórmico 0,1 %/agua; velocidad de flujo: 0,5 ml/min; gradiente: 0-1 min de 0% de A, 1 -6 min de 90% de A, 6-8 min de 100% de A, 8-10 min de 100% de A, 10-15 de 0% de A. Método 14 Los espectros de TOF-HR-MS-ESI+ se registraron con un instrumento Micromass LCT (voltaje capilar: 3,2 KV, voltaje de cono: 42 V, temperatura de la fuente: 120°C, temperatura de desolvatación: 280°C). Se usa una bomba de jeringa (Harvard Apparatus) para la distribución de muestras para este fin. Se usa leucina-encefalina (Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu) como estándar. Métodos de separación preparativa: HPLC. cromatografía sobre gel Método 15 Instrumento: Gilson Abimed HPLC; sistema de bombas binario; columna: Nucleodur C18 Gravity, Macherey-Nagel, 5 pm; 250 * 21 mm; eluyente A: agua + TFA 0,05%-0, 1 %; eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-8 min a 5% de B, 8-40 min a 5-60% de B, 40-60 min a 60% de B, 60-75 min a 60-100% de B, 75-80 min a 100% de B, y luego regeneración de la columna de cromatografía; velocidad de flujo: 7-15 ml/min; detector UV a 210 nm. Método 16 Instrumento: Gilson Abimed HPLC; sistema de bombas binario; columna: Kroma-sil- 00A C18, 5 pm; 250 ? 30 mm; eluyente A: agua/TFA 0,05-0,5%; eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-5 min a 5% de B, 5,01 -10 min a 10% B, 10,01 -20 min a 40% B, 20,01 -27 min a 50% de B, 27,01 -40 min a 60% de B, 40,01 -45 min a 90% de B, 45,01 -60 min a 100% de B; velocidad de flujo: 15-60 ml/min; detector UV a 210 nm. Método 17 Gilson Abimed HPLC; detector de UV 210 nm; columna: Kromasyl RP-18 5 pm, 100 A, 250 * 20 mm; eluyente A: agua + TFA 0,05%; eluyente B: acetonitrilo + TFA 0,05% Velocidad de flujo: 10 ml/min; 0-3 min de 5% de B, rampa, 35 min de 90% de B. Método 18 Gilson Abimed HPLC; detector de UV 210 nm; columna: Gromsil ODS-4HE 10 pm, 250 ? 40 mm; eluyente A: agua + TFA 0,05%; eluyente B: acetonitrilo + TFA 0,05% Velocidad de flujo: 20 ml/min; 0-3 min de 10% de B, rampa, 30-35 min de 90% de B, 35-40 min de 90% de B. Método 19 Gilson Abimed HPLC; detector de UV 210 nm; columna: Waters Symmetry-Prep™ C-18, 7 pm, 300 x 19 mm; eluyente A: agua + TFA 0,05%; eluyente B: acetonitrilo + TFA 0,05% Velocidad de flujo: 10 ml/min; 0-3 min de 10% de B, rampa, 30-38 min de 90% de B, 38-45 min de 10% de B. Método 20 La cromatografía sobre gel se realiza con Sephadex LH-20 (Pharmacia) sin presión. Las fracciones se toman (recolector de fracciones ISCO Foxi 200) de acuerdo con la actividad UV (detector de UV para 254 nm, Knauer). Dimensiones de la columna: 32 * 7 cm (escala 1000-100 pmol); 30 x 4 cm (escala 100-10 µ?t???); 25 * 2 cm (escala de 10-1 pmol). Se usa metanol como eluyente. Método 21 Gilson Abimed HPLC; detector de UV 210 nm; columna: Biotage Flash40 RP-18 o módulo compatible Vanan Metaflash C18 40M, 35 µ?t?, 150 * 40 mm; eluyente A: agua + TFA 0,05%; eluyente B: acetonitrilo + TFA 0,05% Velocidad de flujo: 40 ml/min; 0-3 min de 10% de B, rampa, 30-38 min de 90% de B, 38-45 min de 10% de B. Métodos generales de trabajo Procedimiento 1 El material de partida se toma en TFA 30% (solución en diclorometano) y se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. El solvente se separa luego por destilación bajo vacío, durante lo cual la temperatura del baño no debería exceder los 30°C. El producto se seca luego hasta peso constante bajo vacío con bomba de aceite. A. Preparación de los compuestos Compuesto ejemplif ¡cativo 1A: /^-(fert-butoxicarboni -L-alotreorina Se disolvió L-a/o-treorina (3,15 g, 26,44 mmol) en agua-dioxano (1 +2, 75 mi), se agregó dicarbonato de di-tert-butilo (6,35 g, 29,09 mmol, 1 ,1 equivalentes) y trietilamina (4,79 mi, 34,38 mmol, 1 ,3 equivalentes), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El solvente luego se eliminó al vacío. El residuo se colocó en acetato de etilo y se extrajo con ácido cítrico 1 M. La capa acuosa se extrajo varias veces más con acetato de etilo hasta que el producto dejó de ser detectable (HPLC, método 3). Los extractos orgánicos combinados luego se secaron sobre sulfato de sodio, se concentraron y se secó a un peso constante bajo una bomba de vacío de aceite. El producto se hizo reaccionar luego sin más purificación. Rendimiento: 6,5 g de producto crudo. HPLC (método 3): Rt = 3,23 min. LC-MS (método 11 ): R, = 2,51 min, MS (ESlneg): m/z (%) = 217,8 (100) [M-H]". 1H NMR (400 MHz, oVDMSO) d (ppm) = 1 ,08 (d, J = 5,4 Hz, 3H), 1 ,38 (s, 9H), 3,72-3,84 (m, 2H), 6,77 (d, .7 = 7,4 Hz, 1 H). Compuesto ejemplificativo 2A: / -(fert-butoxicarboniIJ-L-alotreoninato de bencilo El método se llevó a cabo de manera análoga a la siguiente literatura: S. B. Cohén, R. Halcomb, J. Am. Chem. Soc 2004, 124, 2534-2543. W. Jiang, J. Wanner, R. J. Lee, P.-Y. Bounaud, D. L. Boger, J. Am. Chem. Soc 2003, 125, 1877-1887.

El Compuesto ejemplificativo 1A (6,8 g de producto crudo, 26,44 mmol) se colocó en metanol (177 mi), y se agregó carbonato de cesio (5,56 g, 17,06 mmol, 0,63 equivalentes) y la mezcla se agitó hasta completarse la disolución. El solvente luego se eliminó mediante destilación, se agregó DMF (42 mi) y luego bromuro de bencilo (4,06 mi, 34,12 mmol, 1 ,26 equivalentes). La mezcla se dejó agitar por 16 h y luego la mayor parte del DMF se eliminó al vacío. El residuo se colocó en agua y se extrajo con 3 porciones de diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío. El producto crudo se purificó en Biotage RP18- Flash (gradiente de agua-acetonitrilo: 0-5 min 10% ACN, 3-30 min 10-90% ACN, 30-35 min 90% ACN; velocidad de flujo: 20 ml/min). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Rendimiento: 5,00 g (16,16 mmol, 52% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 3): R, = 4,36 min. LC-MS (método 8): R, = 2,39 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 332,6 (25) [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, cfe-DMSO) d (ppm) = 1 ,09 (d, J = 6,4, 3H), 1 ,37 (s, 9H), 3,82 (m, 1 H), 3,95 (dd, J = 6,4, J = 8,1 Hz), 4,98 (d, J = 5,4 Hz, 1 H), 5,09 (d, J = 12,7 Hz, 1 H), 5,16 (d, J = 12,7 Hz, 1 H), 7,10 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,31-7,37 (m, 5H). Compuesto ejemplificativo 3A: trifluoroacetato de L-alotreoninato de bencilo NH2 Se hicieron reaccionar 530 mg del compuesto ejemplificativo 2A de acuerdo con el procedimiento 1 con 8,0 mi de la solución de TFA. El producto crudo (589 mg, cuantitativo) se hizo reaccionar luego sin más purificación. HPLC (método 3): R, = 3,18 min. LC-MS (método 1 ): R, = 2,24 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 210,0 (100) [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, ck-DMSO) d (ppm) = 1 ,15 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 4,09-4,10 (m, 2H), 5,26 (s, 2H), 7,36-7,44 (m, 5H), 8,34 (br. S, 2H). Compuesto ejemplificativo 4A: [/^-(fert-butoxicarbonilJ-L-isoleucilj-L-alotreoninato de bencilo El Compuesto ejemplificativo 3A (2,30 g, 7,12 mmol) y /V-(ferf-butoxicarbon¡l)-L-isoleuc¡na (2,14 g, 9,25 mmol, 1 ,3 equivalentes) se disolvieron en DMF (21 ,0 mi). Se agregó 4- etilmorfolina (1 ,3 mi, 12,02 mmol, 1 ,7 equivalentes) y HATU (3,52 g, 9,25 mmol, 1 ,3 equivalentes), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 16 h. La mezcla completa luego se purificó por cromatografía, primero de acuerdo con el método 20 y luego de acuerdo con el método 21. Las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Rendimiento: 1 ,75 g (4,14 mmol, 58% del teórico) como un sólido amorfo color beige pálido. HPLC (método 3): R, = 4,59 min. LC-MS (método 8): R, = 2,56 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 423,8 (70) [M+H]+. 1H N R (400 MHz, oVDMSO) d (ppm) = 0,74-0,78 (m, 6H), 1 ,01 -1 ,07 (m, 2H), 1 ,10 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 1 ,37 (s, 9H), 1 ,64-1 ,66 (m, 1 H), 3,86-3,94 (m, 1 H), 4,28 (dd, J = 7,3, J = 7,3 Hz, 1 H), 5,05 (d, J = 5,6 Hz), 5,09 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 12,7 Hz, 1 H), 6,70 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,31-7,36 (m, 5H), 8,11 (d, J = 8,1 Hz). HR-TOF- S (método 14): C22H35N206 calculado 423,2490, encontrado 423,2489 [M+H]\ Compuesto ejemplificativo 5A: trifluoroacetato de L-isoleucil-L-alotreoninato de bencilo El Compuesto ejemplificativo 4A (224 mg, 0,53 mmol) se trató con 8,0 mi de la solución de TFA de acuerdo con el procedimiento 1. Se obtuvo 253 mg de producto crudo del ejemplo 5A (aproximadamente 91 % puro, 0,53 mmol, cuantitativo) y se hicieron reaccionar sin subsiguiente purificación. HPLC (método 3): R, = 3,51 min. LC- S (método 8): R, = 1 ,58 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 323,6 (100) [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, oVDMSO) d (ppm) = 0,77-0,86 (m, 6H), 1 ,02 (m, 1 H), 1 ,15 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1 ,45 (m, 1 H), 1 ,77 (m, 1 H), 3,97 (m, 1 H), 4,34 (m, 1 H), 5,11 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 5,16 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 7,37-7,39 (m, 5H), 7,47 (m, 1 H), 8,07-8,08 (m, 3H), 8,69 (d, J = 7,3 Hz, 1 H). Compuesto ejemplificativo 6A: [/^-(fert-butoxicarboni -D-arginilJ-L-isoleucil-L-alotreoninato de bencilo arginina (145 mg, 0,53 mmol, 1 equivalente) se disolvieron en DMF (3,0 mi). Se agregó 4-metilmorfolina (76 µ?, 0,70 mmol, 1 ,3 equivalentes) y HATU (221 mg, 0,58 mmol, 1 ,1 equivalentes), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 16 h. La mezcla completa luego se colocó en una columna HPLC y se purificó por cromatografía (método 18). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Rendimiento: 364 mg (0,53 mmol, 99% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 3): R, = 3,91 min. LC-MS (método 8): R, = 2,04 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 579,9 (100) [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) d (ppm) = 0,72-1 ,16 (m, 8H), 1 ,37 (s, 9H), 1 ,46 (m, 2H), 1 ,60 (m, 1 H), 1 ,69 (m, 1 H), 3,06 (m, 2H), 3,93-4,01 (m, 2H), 4,25 (m, 1 H), 4,33 (m, 1 H), 5,07-5,14 (m, 2H), 6,96 (d, J = 7,8, 1 H), 7,35 (m, 5H), 7,45 (m, 1 H), 7,66 (d, J = 8,8), 8,33 (m, 1 H). Compuesto ejemplificativo 7A: bistrifluoroacetato de D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoninato de bencilo El Compuesto ejemplificativo 6A (237 mg, 0,34 mmol) se trató con 2,0 mi de la solución de TFA de acuerdo con el procedimiento 1. Se obtuvieron 255 mg de producto crudo del compuesto ejemplificativo 7A (94% puro, 0,34 mmol, cuantitativo) y se hicieron reaccionar sin subsiguiente purificación. HPLC (método 3): R, = 3,42 min. LC-MS (método 11 ): R, = 2,42 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 479,3 (50) [M+H]+. 1H NMR (400 Hz, aVDMSO) d (ppm) = 0,73-0,81 (m, 5H), 1 ,11-1 ,19 (m, 5H), 1 ,33-1 ,49 (m, 3H), 1 ,74 (m, 3H), 3,10 (m, 2H), 3,88-3,95 (m, 2H), 4,25 (dd, J = 6,8, J = 7,1 Hz, 1 H), 4,46 (dd, J = 7,3, J = 8,8 Hz, 1 H), 5,09 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 5,15 (dd, J = 12,5 Hz), 7,36 (m, 5H), 7,61 (m, 1 H), 8,10 (m, 2H), 8,51 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 8,57 (d, J = 9,0 Hz, 1 H). Compuesto ejemplificativo 8A: trifluoroacetato de [/^-(fert-butoxicarbonilJ-L-leucilJ-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoninato de bencilo TFA El Compuesto ejemplificativo 7A (240 mg, 0,34 mmol) y A/-(ferf-butoxicarbonil)-L-leucina (79 mg, 0,34 mmol, 1 equivalente) se disolvieron en diclorometano-DMF (5+1 , 6 mi). Se agregó diisopropiletilamina (296 µ?, 1 ,70 mmol, 5 equivalentes) y HATU (194 mg, 0,51 mmol, 1 ,5 equivalentes), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 24 h. La mezcla completa luego se colocó en una columna de cromatografía en gel y se purificó por cromatografía (método 20, el eluyente fue metanol). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se concentró. Rendimiento: 146 mg (0,18 mmol, 53% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 3): R, = 4,15 min. LC-MS (método 8): R, = 1 ,92 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 692,8 (100), [M+H]+. 1H NMR (400 Hz, dg-DMSO) d (ppm) = 0,72-1 ,23 (m, 22H), 1 ,37 (s, 9H), 1 ,38-1 ,71 (m, 3H), 3,08 (m, 2H), 3,91-4,00 (m, 2H), 4,26 (m, 1 H), 4,33-4,42 (m, 2H), 5,07-5,15 (m, 2H), 6,92 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,35 (m, 5H), 7,47 (m, 1H), 7,88 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,93 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,35 (d, J = 7,3 Hz, 1H). Compuesto ejemplificativo 9A: bistrifluoroacetato de L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoninato de bencilo * 2 TFA El Compuesto ejemplificativo 8A (220 mg, 0,27 mmol) se trató con 2,0 mi de la solución de TFA de acuerdo con el procedimiento 1. Se obtuvieron 223 mg de producto crudo del ejemplo 9A (0,27 mmol, cuantitativo) y se hicieron reaccionar sin subsiguiente purificación. HPLC (método 2): R, = 3,80. LC-MS (método 11 ): Rt = 2,54 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 592,4 (2) [M+H]+. H NMR (400 MHz, de-DMSO) d (ppm) = 0,73-1 ,11 (m, 13H), 1 ,22-1 ,74 (m, 12H), 3,11 (m, 4H), 3,60 (m, 2H), 3,87 (m, 1H), 3,95 (m, 1 H), 4,25 (m, 1H), 4,38 (dd, J = 7,8, J = 8,6 Hz, 1 H), 4,64 (dd, J = 7,8, J = 13,7 Hz, 1 H), 5,09 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 12,7 Hz, 1 H), 7,35 (m, 5H), 7,58 (m, 1 H), 8,07 (m, 2H), 8,25 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 8,39 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 8,77 (d, J = 8,3 Hz, 1 H). Compuesto ejemplificativo 10A: trifluoroacetato de [(3R)-A -(fert-butoxicarbonil)-3-hidroxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoninato de bencilo El compuesto ejemplificativo 9A (223 mg, 0,27 mmol) y /V-(ferf-butoxicarbonil)-(3R)-3-hidroxi-L-leucina (89 mg, 0,33 mmol, 1 ,22 equivalentes) se disolvieron en DMF (6 mi), y la solución se enfrió a -20°C. Se agregó 4-metilmorfolina (150 µ?, 1 ,36 mmol, 5 equivalentes) y HATU (165 mg, 0,44 mmol, 1 ,6 equivalentes), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 16 h. La mezcla completa luego se colocó en una columna de cromatografía en gel y se purificó por cromatografía (método 20, el eluyente fue metanol). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se concentró. Rendimiento: 188 mg (0,20 mmol, 74% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 3): R, = 4,24 min. LC-MS (método 9): R, = 1 ,99 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 821 ,9 (100) [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, oVDMSO) d (ppm) = 0,71-0,90 (m, 15H), 1 ,00 (m, 1 H), 1 ,10 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1 ,24-1 ,26 (m, 3H), 1,38 (s, 9H), 1 ,42-1 ,71 (m, 6H), 3,06-3,17 (m, 3H), 3,45 (m, 1 H), 3,61 (m, 1H), 3,93 (m, 1 H), 4,05 (m, 1 H), 4,26 (m, 1 H), 4,35 (m, 2H), 4,54 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 5,07-5,15 (m, 2H), 5,45 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,35 (m, 5H), 7,46 (m, 1H), 7,85 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,89 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,97 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 8,35 (d, J = 7,6 Hz, 1H). Compuesto ejemplificativo 11 A: trifluoroaceteto de [(3R)-A 2-(íert-Butoxicarbonil)-3-hidroxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreorina * TFA El compuesto ejemplificativo 10A (100 mg, 0,1 1 mmol) se disolvió en ácido acético glacial (4,3 mi), se agregó paladio al 10% sobre carbono activado (22 mg), y la mezcla se hidrogenó bajo presión atmosférica a temperatura ambiente por 2 h. El catalizador se retiró por filtración y el material filtrado se liofilizó. El producto crudo se purificó por cromatografía (método 17). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Se obtuvieron 58 mg (60 µ?t???, 55% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 3): R, = 3,75 min. LC-MS (método 9): R, = 1 ,80 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 731 ,8 (100) [M+H]*. Compuesto ejemplificativo 12A: ácido [/^-(fert-Butoxicarboni -glicill-iSSJ-S-hidroxi-O^-metil-L-aspártico Se preparó ácido (3S)-3-hidroxiaspártico de acuerdo con el método de G. Cardillo, L. Gentilucci, A. Tolomelli, C. Tomasini, Synlett 1999, 1727-1730, y se convirtió de manera análoga a P. G. attingly, M. J. Miller, J. Org. Chem. 1983, 48, 3556-3559, usando radiación de microondas en un reactor cerrado en clorhidrato de ácido (2S,3S)-2-amino-3-hidroxi-4-metoxi-4-oxobutírico. Se disolvió clorhidrato de ácido (2S,3S)-2-amino-3-hidroxi-4-metoxi-4-oxobutírico (447 mg, 2,24 mmol) en DMF (9 mi). La solución se enfrió a 0°C, se agregó éster /V-hidroxisuccinimídico de Boc- -glicina (763 mg, 2,91 mmol, 1 ,3 equivalentes), DMAP (14 mg, 0,11 mmol, 0,05 equivalentes) y por último DIEA (1170 µ?, 6,72 mmol, 3 equivalentes). La mezcla se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente y luego se agitó por otras 2 h. La mezcla se acidificó con ácido acético glacial, se mezcló con acetonitrilo y se cromatografió sobre Sephadex LH 20 (método 20). Las fracciones que contenían producto se combinaron, se concentró y se cromatografió nuevamente (método 21 ). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. El producto resultante (761 mg, cuantitativo) se hizo reaccionar luego sin más purificación. Para propósitos analíticos, se obtuvo una muestra pura mediante HPLC (método 19). HPLC (método 3): R, = 3, 15 min. LC-MS (método 8): R, = 1 ,17 min, MS (ESlpoS) = 321 ,2 [ +H]+. W20Na = + 39° (c = 0,55, MeOH). 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) d (ppm) = 1 ,40 (s, 9H), 3,49-3,60 (m, 2H), 3,61 (s, 3H), 4,29 (m, 1 H), 4,73 (d, J = 6,6 Hz, 1 H), 7,01 (m, 1 H), 7,49 (d, J = 6,99 Hz, 1 H). 13C-NMR (d6-acetona, 126 MHz, DEPT) d (ppm) = 28,5 (CH3), 42,2 (CH2), 51 ,8 (CH3), 53,7 (CH), 56,0 (CH), 79,2 (cuat), 169,6 (cuat), 169,7 (cuat), 172,8 (cuat), 173,8 (cuat). HR-TOF-MS (método 14): C12H22N208 [M+H]+ calculado: 321 ,1298, encontrado: 321 ,1299. Compuesto ejemplif ¡cativo 13A: [/ -(fe/ -ButoxicarbonilJ-glicilJ-ÍSSJ-S-hidroxi-L-asparagina El compuesto ejemplificativo 12A (353 mg, 1 ,10 mmol) se disolvió en amoníaco acuoso al 25% (1 ,70 mi), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por aproximadamente 2 h. Al completarse la reacción (detección mediante HPLC, método 3), la mezcla se concentró a sequedad bajo una bomba de vacío de aceite, y el residuo se purificó por HPLC (método 17). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Rendimiento: 172 mg (51 % del teórico) del compuesto del título como un sólido incoloro. HPLC (método 3): R, = 2,70 min. LC-MS (método 11 ): R, = 2,21 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 306 (70) [M+H]+. Compuesto ejemplificativo 1 A: (3R)-3-Hidroxifenilalan¡na Este compuesto ejemplificativo se sintetizó de acuerdo con el método de Belokon (Y. N. Belokon, K. A. Kochetkov, N. S. Ikonnikov, T. V. Strelkova, S. R. Harutyunyan, A. S. Saghiyan, Tetrahedron: Asymmetry 2001 , 12, 481-485). LC-MS (método 12): R, = 0,41 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 182,1 (100) [M+H]+. [a]20Na = -21 ° (c = 0,1 , MeOH). Lit (D. Alker, G. Hamblett, L. M. Harwood, S. M. Robertson, D. J. Watkin, C. E. Williams, Tetrahedron 1998, 54, 6089-6098): [a]22Na = -20° (c = 0,8, MeOH). 1H NMR (400 MHz, D20) d (ppm) = 3,84 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 4,64 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 7,30-7,36 (m, 5H). Compuesto ejemplificativo 15A: A/-Butoxicarbonil-(3R)-3-hidroxifenilalanina El compuesto ejemplificativo 14A (0,5 g, 2,76 mmol) se colocó en 1 ,4-dioxano -agua (2+1 , 9 mi), y se agregó trietilamina (500 µ?, 3,59 mmol, 1 ,3 equivalentes) y dicarbonato de di-tert-butilo (660 mg, 3,04 mmol, 1 ,3 equivalentes). La mezcla se agitó a temperatura ambiente por 16 h y luego se detuvo usando ácido cítrico 1 M. La mezcla se extrajo con varias porciones de acetato de etilo hasta que el producto dejó de ser detectable en la capa acuosa por HPLC (método 3). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se concentró. Se obtuvieron 759 mg (2,70 mmol, 98% del teórico) del compuesto del titulo como un aceite incoloro en el residuo. HPLC (método 3): R, = 3,89 min. LC-MS (método 8): R, = 1 ,87 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 282,3 (40) [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) d (ppm) = 1 ,27 (s, 9H, COC(CH3)3), 4,21 (m, 1 H), 5,09 (s, 1 H), 6,30 (d, J = 9,8 Hz), 7,22-7,34 (m, 5H). HPLC quiral (método 7): e.e. 94,1%. Compuesto ejemplificativo 16A: A/-butoxicarbonil-(3R)-3-hidroxifenilalaninato de metilo Se disolvió compuesto ejemplificativo 16A (331 mg, 1 ,11 mmol) en diclorometano-metanol (5+1 , 12 mi), se enfrió a 0°C, y se agregó trimetilsilildiazometano (2M en THF, 1 ,66 mi, 3,32 mmol, 3 equivalentes) por goteo. La mezcla se agitó a 0°C por otros 30 min y luego se agregó unas pocas gotas de TFA hasta que ocurrió las decoloración. El solvente se destiló, y como residuo quedó el compuesto del título (345 mg, 95% puro de acuerdo a HPLC) en rendimiento cuantitativo como un aceite amarillento. HPLC (método 3): R, = 4,26 min. LC-MS (método 8): R, = 2,11 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 296,3 (50) [M+H]+. 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) d (ppm) = 1 ,27 (s, 9H, COC(CH3)3), 3,60 (s, 3H, OCH3), 4,31 (dd, J = 3,8, J = 9,3 Hz, 1H), 5,03 (d, J = 3,4 Hz, 1 H), 5,68 (br s, 1 H), 6,62 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,23-7,34 (m, 5H). Compuesto ejemplificativo 17A: trifluoroacetato de (3R)-3-hidroxi-fenilalaninato de metilo Se disolvió compuesto ejemplificativo 16A (345 mg, 1 ,17 mmol) en 30% TFA en diclorometano (10 mi) y se agitó a temperatura ambiente por 15 min. El solvente luego se destiló. El residuo se secó a un peso constante bajo una bomba de vacío de aceite. Rendimiento: 401 mg (cuantitativo) como un aceite amarillo que se utilizó en el siguiente paso sin subsiguiente purificación. HPLC (método 3): R, = 2,51 min. LC-MS (método 8): R, = 0,30 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 196,1 (20) [M+H]*.

Compuesto ejemplificativo 18 A: [/^-(benciloxicarboni -D-leucilj-L-leucinato de metilo Se disolvió /^-(BenciloxicarbonilJ-D-leucina (BACHEM Cat No zl3351.) (6,37 g, 24 mmol) y L-leucinato de metilo (3,49 g, 24 mmol, 1 eq.) en D F (75 mi) a 0°C, y luego se agregó NMM (5,28 mi, 48 mmol, 2 eq.) y HATU (13,69 g, 36 mmol, 1 ,5 eq.). La mezcla se agitó a temperatura ambiente por tres horas. Se agregó MTBE y una solución saturada de bicarbonato de sodio, y se llevó a cabo la extracción. La capa acuosa se extrajo nuevamente con una segunda porción de MTBE, y las fases orgánicas combinadas luego se lavaron con ácido cítrico 1 M y nuevamente con una solución saturada de bicarbonato de sodio, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en dos porciones (Biotage 40M, ciclohexano/acetato de etilo 3+1 ). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Rendimiento: 7,85 g (80% del teórico) del compuesto del título.

HPLC (método 3): R, = 4,82 min. LCMS (método 8): R, = 2,65 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 393 (100) [M+H]+. [<x]20Na = -5,2° (c = 0,52, MeOH). 1H NMR (400 MHz, ds-DMSO) d (ppm) = 0,77-0,92 (m, 12H), 1 ,31-1 ,66 (m, 6H), 3,60 (s, 3H), 4,10 (m, 1 H), 4,28 (m, 1 H), 5,02 (s, 2H), 7,25-7,38 (m, 6H), 8,23 (d, 1 H). 13C-NMR (126 Hz, cfe-DMSO) d (ppm) = 21 ,1 (CH3), 21 ,5 (CH3), 22,8 (CH3), 22,9 (CH3), 24,2 (CH), 41 ,0 (CH2), 50,0 (CH), 51 ,8 (CH3, OCH3), 52,9 (CH), 65,3 (CH2, OCH2Ph), 127,6 (CH, ar-C), 127,7 (CH, ar-C), 128,3 (CH, ar-C), 137,1 (C cuat, ar-C), 155,8 (C cuat, NCOC(CH3)3), 172,4 (C cuat, C=0), 172,9 (C cuat, C=0). Compuesto ejemplif ¡cativo 19A: [/ -(BenciloxicarbonilJ-D-leucilJ-L-leucina Se colocó compuesto ejemplificativo 18A (7,70 g, 19,62 mmol) en 200 ml de THF/agua (3+1 ), se enfrió a 0°C, y se agregó hidróxido de litio monohidratado (1 ,65 g, 39,24 mmol, 2 eq.). La mezcla se dejó agitar a 0°C hasta que de acuerdo al monitoreo mediante HPLC (método 3) la reacción se completó (aproximadamente 45 min). La mayor parte del THF se destiló al vacío, la mezcla se ajustó a aproximadamente pH 4 agregando ácido cítrico, y la mezcla se extrajo con 2 porciones de acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. El producto se obtuvo como una sustancia amorfa incolora en un rendimiento de 6,87 g (89% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 3): R, = 4,45 min. LC-MS (método 8): R, = 2,39 min, MS (ESlpos) m/z (%) = 379 (100) [M+H]\ 757 (40) [2M+H]+. [a]20Na = +4,7° (c = 0,50, MeOH). 1H NMR (300 MHz.dg-DMSO) d (ppm) = 0,77-0,92 (m, 12H), 1 ,34-1 ,68 (m, 6H), 4,04^,26 (m, 2H), ,02 (s, 2H), 7,25-7,38 (m, 6H), 8,12 (d, 1 H), 12,50 (br. s, 1 H). HR-TOF-MS (método 14): C2oH3iN205 [ +H]+ calculado 379,2228, encontrado 379,2216. Compuesto ejemplificativo 20A: [^-(benciloxicarboni -D-leucilj-L-leuci SRJ-S-hidroxifenilalaninato de metilo Se disolvió compuesto ejemplificativo 19A (550 mg, 1 ,45 mmol) y compuesto ejemplificativo 17A (449 mg, 1 ,45 mmol, 1 equivalente) en DMF (12 mi) a 0°C. Luego se agregó 4-metilmorfolina (320 µ?, 2,9 mmol, 2 equivalentes) y HATU (663 mg, 1 ,74 mmol, 1 ,2 equivalentes), y la mezcla se agitó a 0°C por 15 min. Luego se agregó más 4-metilmorfolina (160 µ?, 1 ,45 mmol, 1 equivalente), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 16 h. La mezcla luego se extrajo entre acetato de etilo y bicarbonato de sodio concentrado, y la fase orgánica se lavó con ácido cítrico 0,5M y nuevamente con bicarbonato de sodio concentrado, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía (método 17). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Rendimiento: 626 mg (1 ,13 mmol, 78% del teórico) del compuesto del titulo. HPLC (método 3): R, = 4,69 min. LC-MS (método 8): R, = 2,58 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 556,5 (100) [M+H]+. 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) d (ppm) = 0,76-0,88 (m, 12H), 1 ,23-1 ,60 (m, 6H), 3,54 (s, 3H, OCH3), 4,06-4,11 (m, 1 H), 4,43 (dd, J = 8,3, J = 14,9 Hz, 1H), 4,52 (dd, J = 4,1 , J = 7,7 Hz, 1 H), 5,02-5,06 (m, 3H), 5,87 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 7,20-7,40 (m, 11H), 8,01 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,08 (d, J = 8,5 Hz, 1H). Compuesto ejemplificativo 21A: [/V -(Benciloxi)carbonil-D-leucil]-L-leucil-(3f?)-3- hidroxifenilalanina Se disolvió compuesto ejemplificativo 20A (650 mg, 1 ,17 mmol) bajo argón en THF-agua (2+1 , 30 mi). A 0°C, se agregó una solución acuosa de hidróxido de litio (57 mg, 2,40 mmol, 4 equivalentes en 8,65 mi de agua) por goteo. La reacción se completó luego de 45 min (HPLC, método 1 ). Se agregó ácido acético glacial, y la mezcla se concentró. El producto crudo se purificó por cromatografía (método 16). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron.

Rendimiento: 618 mg (98% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 1 ): R, = 2,44 mín. LC- S (método 13) R, = 6,04; MS (ESlpos) m/z (%) = 542,5 (100) [M+H]+, 183,8 (80) [2 +H]+; MS (ESlneg) m/z (%) = 540,4 (40) [M-H]"; 1081 ,70 (100) [2M-H]". Compuesto ejemplificativo 22A: 2-(Trimetilsilil)etil-/V -[benc¡loxicarbonil-D-leucil]-L-leucil-(3R)-3-hidroxi-L-fenilalaninato Se disolvió compuesto ejemplificativo 21 A (150 mg, 277 pmol) y 2-(trimetilsilil)etanol (790 µ?, 5,54 mmol, 20 equivalentes) y algunos filtros moleculares de 4 A en diclorometano seco (3,0 mi) y se agitó a -30°C por aproximadamente 1 h. Luego se agregó DCC (1 14 mg, 553 mol, 2 equivalentes) y DMAP (34 mg, 277 µp???, 1 equivalente), y la mezcla se agitó durante la noche y se dejó alcanzar temperatura ambiente lentamente durante esto. La mezcla luego se concentró al vacío y se cromatografió (método 16). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Rendimiento: 108 mg (60% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 1 ): R, = 3,14 min. LC-MS (método 10): R, = 2,97 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 642,3 (100) [M+H]+. Compuesto ejemplificativo 23A: /^-[(benciloxiJcarbonill-D-leucil-L-leucil-ÍSRJ-S-ít/v^-ífert-butoxicarbonil)-03-(íerí-butil)-L-seril]oxi}-L-fenilalaninato de 2-(Trimetilsilil)etilo Se disolvió compuesto ejemplificativo 22A (104 mg, 162 pmol) y se agregó / -(fert-butoxicarbonil)-03-fert-butil-L-serina (47 mg, 178 µ?t???, 1 ,1 equivalentes) en diclorometano seco (2,0 mi) y algunos filtros moleculares de 4 A. Luego se agregó DCC (70 mg, 340 mol, 2,1 equivalentes) y DMAP (23 mg, 194 µp???, 1 ,2 equivalentes), y la mezcla se agitó durante la noche y se dejó alcanzar lentamente temperatura ambiente durante esto. La mezcla luego se concentró al vacío y se cromatografió (método 16). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Rendimiento: 120 mg (84% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 1 ): R, = 3,49 min. LC-MS (método 10): R, = 3,38 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 885,6 (100) [M+H]+. HR-TOF-MS (método 14): C^eH^OnSi calculado 885,5040, encontrado 885,5031 [M+H]+.

Compuesto ejemplificativo 24A: trifluoroacetato de ^-[(bencilox carbonifl-D-leucil-L-leuciKSR)-3-{[03-(ferí-butil)-L-seril]oxi}-L-fenilalaninato de 2-(Trimetilsilil)etilo Se disolvió compuesto ejemplificativo 23A (117 mg, 132 µ????) en diclorometano (3 mi). Se agregó 15% TFA en diclorometano (20 mi) y, luego de 10 min, la mezcla se concentró a sequedad. El residuo se purificó por cromatografía (método 16). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Rendimiento: 100 mg (83% del teórico). HPLC (método 1 ): R, = 2,40 min. LC-MS (método 10): R, = 2,28 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 785,4 (100) [M+H]+. Compuesto ejemplificativo 25A: / -[(benciloxiJcarbonilj-D-leucíl-L-leucil^SRJ-S-dA^-ítert-butoxicarbonil)glicil-(3S)-3-hidroxi-L-asparag¡nil-03-(fert-butil)seril]oxi}-L-fenilalaninato de 2-(Trimetilsilil)etilo Se disolvió Compuesto ejemplificativo 24A (96 mg, 107 pmol) y compuesto ejemplificativo 13A (33 mg, 107 pmol, 1 equivalente) en DMF (2,0 mi) y se enfrió a -30°C. Se agregó HATU (122 mg, 320 pmol, 3 equivalentes) y 4-metilmorfolina (86 mg, 854 µ?t???, 8 equivalentes), y la mezcla luego se dejó calentar lentamente a aproximadamente 4°C y se dejó reposar a esta temperatura por 12 h. La solución de la reacción cruda se cromatografió (método 15), y las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Rendimiento: 92 mg (89% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 1 ): R, = 3,22 min. LC-MS (método 9): R, = 3,21 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1072,6 (100) [M+H]+; MS (ESlneg): m/z (%) = 1070,5 (100) [M-H]\ HR-TOF-MS (método 14): C52H82N7015Si calculado 1072,5633, encontrado 1072,5667 [M+H]+. Compuesto ejemplificativo 26A: trifluoroacetato de /v -[(benciloxi)carbonil]-D-leucil-L-leucil-(3R)-3-{[glicil-(3S)-3-hidroxi-L-asparaginil-03-(ferf-butil)seril]oxi}-L-fenilalaninato de 2-(Trimetilsilil)etilo Se disolvió compuesto ejemplificativo 25A (90 mg, 84 pmol) en diclorometano (3,0 mi). Se agregó TFA al 15% en diclorometano (20 mi) y, luego de 10 min, la mezcla se concentró a sequedad. El residuo se purificó por cromatografía (método 16). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Rendimiento: 73 mg (80% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 1 ): Rt = 2,65 min. LC-MS (método 10): R, = 2,13 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 972,6 (100) [M+H]+; MS (ESlneg): m/z (%) = 970,7 (100) [M-H]\ HR-TOF-MS (método 14): C47H7 N7013Si calculado 972,5109, encontrado 972,5103 [M+H]+. Compuesto ejemplificativo 27A: trifluoroacetato de /v -[(benciloxi)carbonil]-D-leucil-L-leucil-(3R)-3-{[^-(tert-butoxicarbonil)-(3R)-3-hidroxi-L-leuci ^ 3-hidroxi-L-asparaginil-03-(íeAf-butil)seril]oxi}-L-fenilalaninato de 2-(Trimetilsilil)etilo Se disolvió compuesto ejemplificativo 26A (10,0 mg, 9,2 µ????) y compuesto ejemplificativo 1 1A (8,2 mg, 107 µ????, 1 equivalente) en DMF (0,5 mi) y se enfrió a -30°C. Se agregó HATU (10,5 mg, 27,6 pinol, 3 equivalentes) y 4-metilmorfolina (7,5 mg, 74 pmol, 8 equivalentes), y la mezcla luego se dejó calentar lentamente a aproximadamente 4°C y se dejó reposar a esta temperatura por 12 h. La solución de la reacción cruda se cromatografió (método 15), y las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Rendimiento: 10,7 mg (65% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 1 ): R, = 2,99 min. LC-MS (método 9): R, = 2,40 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1685,8 (50) [M+H]+; MS (ESlneg): m/z (%) = 1683,8 (50) [M-H]-, 1728,8 (100) [M+HCOOH]\ HR-TOF-MS (método 14): C80H134 15O22Si calculado 1684,9592, encontrado 1684,9573 [M+H]+. Compuesto ejemplificativo 28A: trifluoroacetato de /v -[(benc¡loxi)carbonil]-D-leucil-L-leucil-(3R)-3-{[/V2-(ferí-butox¡carbon¡l)-(3R)-3-hidroxi-L-leuc¡l^ 3-h¡droxi-L-asparag¡nil-03-(fert-butil)seril]oxi}-L-fenilalan¡na Método A: Se disolvió compuesto ejemplificativo 27A (10 mg, 5,6 pinol) en THF absoluto (0,5 mi). Se agregó TBAF (17,4 mg, 67 mol, 12 equivalentes), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 1 h. De acuerdo con el análisis HPLC (método 1 ), la reacción se había completado, y la reacción se detuvo con ácido acético glacial (6 µ?), y la mezcla se concentró y se cromatografió (método 5). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Rendimiento: 2,5 mg (aproximadamente 69% puro, 18% del teórico) del compuesto del título. Método B: Se disolvió Compuesto 27A (25 mg, 13,9 pmol) en THF absoluto (2,5 mi). Se agregó sulfato de sodio (anhidro, 200 mg, 1 ,4 mmol) y la suspensión se agitó por 30 min. Se agregó solución de TBAF (1M anhidro en THF, 84 µ?, 6 equivalentes), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 45 minutes. De acuerdo con el análisis HPLC (método 1), la reacción se había completado. La reacción se detuvo con ácido acético glacial (16 µ?), y la mezcla se filtró, se concentró y se cromatografió (método 15). Rendimiento: 21 mg (>95% puro, 89% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 6): R, = 2,99 min. LC-MS (método 9): Rt = 2,34 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1585,6 (20) [M+H]+; MS (ESlneg): m/z (%) = 1583,4 (100) [M-H]". HR-TOF-MS (método 14): C75H121N15023 calculado 1584,8884, encontrado 1584,8843 [M+H]+. Compuesto ejemplificativo 29A: trifluoroacetato de /^-[(bencilox carbonilJ-D-leucil-L-leuci ^ 3-{[(3R)-3-h¡droxi-L-leucil-L-leucil-D-arginil-L-i^ seril]oxi}-L-fenilalanina Se hizo reaccionar compuesto ejemplificativo 28A (2,5 mg, 1 ,5 µ?t???) con triisopropilsilano (12,5 µ?) y agua (2,8 µ?), y se agregó 0,5 mi de TFA. La mezcla luego se agitó a temperatura ambiente por 1 h y por último el solvente se eliminó al vacío. El residuo se cromatografió (método 15). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Rendimiento: 2 mg (82% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 6): R, = 2,00 min. LC-MS (método 9): Rt = 1 ,60 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 714,9 (100) [M+2H]2+; MS (ESlneg) m/z (%) = 1427,7 (100) [M-H]'. HR-TOF-MS (método 14): calculado 1428,7734, encontrado 1428,7700 [M+H]+. Compuesto ejemplificativo 30A: trifluoroacetato de W-benciloxicarbonil-lisobactma Se disolvió compuesto ejemplificativo 29A (1 ,0 mg, 1 ,1 µ????) en DMF (0,9 mi) y se enfrió a -15°C. Se agregó HATU (1 ,2 mg, 3,3 µ????, 3 equivalentes) y 4-metilmorfolina (1 1 µ? de una solución de 100 µ? de 4-metilmorfolina en 0,9 mi de DMF, 8,7 µ????, 8 equivalentes), y la mezcla luego se dejó calentar lentamente a aproximadamente 4°C y se agitó a temperatura ambiente por 3 h. La solución de la reacción cruda se cromatografió (método 15), y las fracciones que contenían producto se combinaron y se liofilizaron. Rendimiento: 1 ,2 mg (73% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 1 ): R, = 2,17 min. LC- S (método 9): R, = 2,00 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1410,8 (100) [M+H]+; MS (ESlneg) m/z (%) = 1408,7 (100) [M-H]\ HR-TOF-MS (método 14): C66H104N15O19 calculado 1410,7628, encontrado 1410,7639 [M+H]+. Compuesto ejemplificativo 31 A: bistrifluoroacetato de lisobactina Se disolvió compuesto ejemplificativo 30A (1 ,0 mg, 0,66 µ????) en dioxano (0,5 mi), se agregó 0,75 mi de TFA acuoso al 0,1 % y una punta de espátula de Pd/C al 10%, y la mezcla se hidrogenó bajo presión atmosférica a temperatura ambiente por 15 min. El producto se filtró para eliminar el catalizador, se concentró y se purificó por cromatografía (método 15). Rendimiento: 0,6 mg (61% del teórico) del compuesto del título. HPLC (método 4): Rt = 16,31 min. La identidad del producto sintetizado 31 A se confirmó mediante la coinyección con lisobactina auténtica (obtenida mediante el método descrito en WO 2004/099239 (A1 )). HPLC (método 5) Rt = 38,10 min. La identidad del producto sintetizado 31A se confirmó mediante la coinyección con lisobactina auténtica (obtenida mediante el método descrito en WO 2004/099239 (A1 )). LC-MS (método 9): R, = 1 ,40 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 638,9 (100) [M+2H]2+, 1276,8 (5) [M+H]+; MS (ESlneg): m/z (%) = 637,0 (100) [M-2H]2\ 1274,7 (40) [M-H]\ HR-TOF-MS (método 14): C58Hg8N15017 calculado 1276,7260, encontrado 1276,7264 [M+H]+. B. Evaluación de la actividad fisiológica El efecto in vitro de los compuestos de la invención se puede demostrar en el siguiente ensayo: Determinación de la concentración inhibitoria mínima (MIC) La MIC se determina en la prueba de dilución líquida de acuerdo con los lineamientos de NCCLS. Los cultivos de toda la noche de Staphilococcus aureus 133, Entercococcus faecalis ICB27159 y Streptococcus pneumoniae G9a se incuban con las sustancias de prueba descritas en una dilución en serie 1 :2. La determinación de MIC se conduce con un recuento celular de 105 microbios por mi en medio Isosensitest (Difco, Irvine/EE.UU.), con la excepción de S. pneumoniae, que se evalúa en caldo BHI (Difco, Irvine/EE.UU.) con suero bovino 10% con un recuento celular de 106 microbios por mi. Los cultivos se incuban a 37°C durante 18-24 horas, S. pneumoniae en la presencia de C02 10%. La MIC se define como la concentración más baja de cada sustancia a la cual no se observa ningún crecimiento bacteriano visible. Los valores MIC se informan en pg/ml. No surgieron diferencias significativas en la actividad fisiológica entre la lisobactina preparada mediante síntesis completa y la lisobactina fermentada.

Claims (19)

1. REIVINDICACIONES 1. Un método para preparar depsipéptidos cíclicos de la siguiente fórmula (I) en la cual R1 es H o CH3, en la cual R2 es hidrógeno, C3-C6-cicloalquilo, C5-C6-cicloalquenilo, C3-C6 cicloalquilmetilo, heterociclilmetilo de 5 a 7 miembros, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, 1-metilprop-1-ilo, 2-metilprop-1-ilo, 2,2-dimetilprop-1-ilo, 1 , 1 -dimetilprop-1 -ilo, 1 -etilprop-1 -ilo, 1-etil-1-metilprop-1-ilo, n-butilo, 2-metilbut-1 -ilo, 3-metilbut-1-ilo, 1-etilbut-1-ilo, fert-butilo, 4-metilpent-1-ilo, n-hexilo, alquenilo o arilo, donde R2 se puede sustituir con 0, 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de halógeno, hidroxi, amino, ciano, trimetilsililo, alquilo, alcoxi, benciloxi, C3-C6-ciclo-alquilo, arilo, heteroarilo de 5 a 10 miembros, alquilamino, arilamino, alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, arilcarbonilo y benciloxicarbonilamino, donde arilo y heteroarilo en cambio se puede sustituir con 0, 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de halógeno, hidroxi, amino, ciano, nitro, alquilo, alcoxi y fenilo, en la cual R3 es hidrógeno o CrC^alquilo, o en la cual R2 y R3 junto con el átomo de carbono al cual se encuentran unidos forman un anillo C3-C6-cicloalquilo o un anillo heterociclilo de 5 a 7 miembros, donde el anillo cicloalquilo y el anillo heterociclilo se pueden sustituir con 0, 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de trifluorometilo, alquilo, alcoxi y alquilcarbonilo, en la cual R4 es alquilo, C3-C6-cicloalquilo, heterociclilo de 5 a 7 miembros, arilo, heteroarilo de 5 o 6 miembros, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, C3-C6-cicloalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo de 5 a 7 miembros, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo de 5 o 6 miembros o alquilaminocarbonilo, donde alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, alcoxicarbonilo, cicloalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo y alquilaminocarbonilo se pueden sustituir con 0, 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de halógeno, hidroxi, amino, alquilamino y fenilo, y donde alquilcarbonilo se sustituye con un sustituyente amino o alquilamino, y donde alquilcarbonilo se puede sustituir con otros 0, 1 o 2 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de halógeno, hidroxi, trimetilsililo, alcoxi, alquiltio, benciloxi, C3-C6-cicloalquilo, fenilo, naftilo, heteroarilo de 5 a 7 miembros, alquilcarbonilamino, alcoxicarbonilamino, arilcarbonilamino, arilcarboniloxi, benciloxicarbonilo y benciloxicarbonilamino, donde fenilo y heteroarilo en cambio se pueden sustituir con 0, 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de halógeno, hidroxi, nitro, alquilo, alcoxi y fenilo, o dos sustituyentes en el mismo átomo de carbono en el alquilcarbonilo junto con el átomo de carbono al cual se encuentran unidos forman un anillo C3-C6-cicloalquilo o un anillo heterociclilo de 5 a 7 miembros, donde el anillo cicloalquilo y el anillo heterociclilo se pueden sustituir con 0, 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de trifluorometilo, alquilo y alcoxi, o donde el anillo cicloalquilo puede ser benzo-fusionado, en la cual R5 es hidrógeno, d-C4-alquilo, ciclopropilo o ciclopropilmetilo, o en la cual R4 y R5 junto con el átomo de nitrógeno al cual se encuentran unidos forman un anillo heterociclilo de 5 a 7 miembros, donde el anillo heterociclilo se puede sustituir con 0, 1 , 2, o 3 sustituyentes seleccionados en forma independiente entre sí del grupo que consiste de halógeno, hidroxi, amino, ciano, alquilo, alcoxi y alquilamino, mediante ciclación intramolecular de un compuesto de la siguiente fórmula (II) en la cual R1 a R5 son como se definen precedentemente, en la cual X es OH, un éster activo, un pseudohalógeno o un halógeno, y en la cual PG es H o un grupo protector adecuado, y subsiguiente desprotección del intermediario cíclico para formar el depsipéptido cíclico de fórmula (I).
2. 2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1 , caracterizado porque el compuesto de fórmula (II) es un compuesto de la siguiente fórmula (lia) en la cual X y R1 son como se definen en la reivindicación 1 , en la cual R6 es isopropilmetilo, ferf-butilmetilo, 2,2-di-metilbut-1-ilo, 2-etil-2-metilbut-1-ilo, 2,2-di-etilbut-1-ilo, 2,2-dimetilpent-1-ilo, 3-piridilmetilo, 4-trifluorometil-3-piridilmetilo, bencilo o trimetilsililmetilo, en la cual R7 es isopropilmetilo, ferf-butilmetilo, 2,2-dimetilbut-1-ilo, 2-etil-2-metilbut-1-ilo, 2,2-di-etilbut-1-ilo, 2,2-d¡metilpent-1-ilo, trimetilsililmetilo o bencilo, y en la cual PG es H o un grupo protector adecuado.
3. 3. Método de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizado porque R6 es isopropilmetilo, ferf-butilmetilo o 3-piridilmetilo, y R7 es isopropilmetilo, ferf-butilmetilo o trimetilsililmetilo.
4. 4. Un método de acuerdo con la reivindicación 3, caracterizado porque R6 = R7 y es isopropilmetilo.
5. 5. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque X es OH.
6. 6. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque R1 es CH3.
7. 7. El método de acuerdo con la reivindicación 1 , en donde la preparación del compuesto de la fórmula (II) es mediante acoplamiento de un compuesto de la siguiente fórmula (III) con un compuesto de la siguiente fórmula (IV) en donde R1 a R5 son como se definieron en la reivindicación 1 , en donde Y es OH, un éster activo, un pseudohalógeno o un halógeno, y en donde PG es H o un grupo protector adecuado, y, cuando fuera apropiado, la desprotección parcial o completa del intermediario, así como, cuando fuera apropiado, conversión del grupo carboxi de la 3-hidroxifenilalanina en un grupo de la fórmula -C(=0)X, en donde X es como se definió en la reivindicación 1.
8. 8. El método de acuerdo con la reivindicación 7, en donde el compuesto de la fórmula (III) es un compuesto de la siguiente fórmula (Illa) en donde R6 y R7 son como se definieron en las reivindicaciones 2 a 4, y en donde PG es H o un grupo protector adecuado.
9. 9. El método de acuerdo con la reivindicación 7, caracterizado por la preparación del compuesto de la fórmula (III) mediante acoplamiento de un compuesto de la siguiente fórmula (V) con un compuesto de la siguiente fórmula (VI) en donde R2 a R5 son como se definieron en la reivindicación 1 , en donde Z es OH, un éster activo, un pseudohalógeno o un halógeno, y en donde PG es H o un grupo protector adecuado, y, cuando fuera apropiado, desprotección parcial o completa del intermediario.
10. 10. El método de acuerdo con la reivindicación 9, caracterizado porque el compuesto de la fórmula (V) es un compuesto de la siguiente fórmula (Va) en donde R6 y R7 son como se definieron en las reivindicaciones 2 a 4, y en donde PG es H o un grupo protector adecuado.
11. 11. Un compuesto de la siguiente fórmula (III) en donde R2 a R5 son como se definieron en la reivindicación 1 , y en donde PG es H o un grupo protector adecuado.
12. 12. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 , que tiene la siguiente fórmula (Illa) en donde R6 y R7 son como se definieron en las reivindicaciones 2 a 4, y en donde PG es H o un grupo protector adecuado.
13. 13. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 12, que tiene la siguiente fórmula (lllb)
14. 14. Un método para preparar un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 , que comprende acoplar un compuesto de la fórmula (V) con un compuesto de la fórmula (VI) en donde R2 a R5 son como se definieron en la reivindicación 1, en donde Z es OH, un éster activo, un pseudohalógeno o un halógeno, y en donde PG es H o un grupo protector adecuado, y, cuando fuera apropiado, desprotección parcial o completa del intermediario. 15. Un compuesto de la siguiente fórmula (VI)
15. (VI) en donde Z es OH, un éster activo, un pseudohalógeno o un halógeno, y en donde PG es H o un grupo protector adecuado. 16. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 15, que tiene la siguiente fórmula
16. (Vía)
17. 17. Un método para preparar un compuesto de acuerdo con la reivindicación 15, que comprende el acoplamiento de un compuesto de la siguiente fórmula (VII) con un compuesto de la siguiente fórmula (VIII) en donde PG es H o un grupo protector adecuado, y, cuando fuera apropiado, desprotección completa o parcial del intermediario. 18. El método de acuerdo con la reivindicación 17, caracterizado porque el compuesto de la fórmula (VII) es un compuesto de la siguiente fórmula (Vlla)
18. * HCI (Vlla)
19. 19. El método de acuerdo con la reivindicación 17 ó 18, caracterizado porque el compuesto de la fórmula (VIII) es un compuesto de la siguiente fórmula (Villa)