MX2008012385A - Composicion farmaceutica oral estable que contiene agonistas del receptor de la hormona tiroides. - Google Patents

Abstract

Se describen composiciones en las cuales ciertos compuestos de enlace del receptor de la hormona tiroides son formulados junto con o un recubrimiento entérico, un antioxidante, o un recubrimiento entérico y un antioxidante. Tal formulación actúa para prevenir la formación de productos de reacción indeseados in vivo.

Description

COMPOSICION FARMACEUTICA ORAL ESTABLE QUE CONTIENE AGONISTAS DEL RECEPTOR DE LA HORMONA TIROIDES Descripción de la Invención Esta invención se relaciona con las composiciones farmacéuticas. En particular, aunque no exclusivamente, se relaciona con las estrategias de formulación para estabilizar los ingredientes activos farmacológicamente de composiciones farmacéuticas. Para muchos agentes activos farmacológicamente, se prefiere la ruta de administración oral. Sin embargo, para que estos agentes alcancen la corriente sanguínea del paciente, deben ser expuestos generalmente al contenido por lo menos de la parte superior del aparato gastrointestinal (es decir estómago e intestino pequeño). Ciertos agentes son sensibles al ambiente ácido del estómago. Tal sensibilidad da lugar generalmente a la hidrólisis mediante ácido del agente. Es conocido que se provean composiciones que contengan tales agentes hidrolítico-sensibles con un recubrimiento entérico. Tal recubrimiento comprende generalmente un polímero ácido que sea sustancialmente sin carga e insoluble en un pH bajo (es decir en el estómago), pero ionizado y más soluble en valores de pH más altos (es decir durante el paso por el intestino delgado). El compuesto 1A que tiene la estructura siguiente: Compuesto 1 A es descrito en el documento WO 01/60784 (nombre IUPAC ácido 3-[[3,5-Dibromo-4-[4-hidroxi-3-(1 - metiletil)-fenoxi]-fenil]-amino]-3-oxopropanoico). El compuesto 1A y una serie de compuestos relacionados son descritos como agonistas de los receptores de la hormona tiroides, en particular el receptor TRp. Tales compuestos deben ser útiles en el tratamiento o la prevención de una enfermedad asociada a la disfunción metabólica o que es dependiente de la expresión de un gen regulado por triyodotironina (T3). Tales enfermedades incluyen, por ejemplo, obesidad, hipercolesterolemia , aterosclerosis, arritmias cardiacas, depresión, osteoporosis, hipotiroidismo, bocio, cáncer de la tiroides así como glaucoma y paro cardíaco congestivo. Al conducir el trabajo de desarrollo de la formulación con el compuesto 1A, los actuales inventores inesperadamente encontraron que una transformación indeseable ocurría en el compuesto. Un producto de reacción que contiene un grupo nitro (-N02) en la posición orto al grupo hidroxilo en el anillo fenólico (es decir, el anillo a la izquierda de acuerdo con lo establecido arriba) se estaba produciendo. En la investigación, fue encontrado que este producto de reacción había alterado las características comparadas con el compuesto 1A no transformado, incluyendo, sorpresivamente, el potencial para la genotoxicidad . Con el examen adicional, fue encontrado que el producto de reacción era capaz de ser producido in vivo después de la administración oral. Los actuales inventores por lo tanto buscaron investigar el proceso que conducía a la producción del producto de reacción nitratado con objeto de inhibir su formación después de la administración oral. Se conoce (por ejemplo de Oldrieve y colaboradores, Chem. Res. Toxicol. 1998, 11, 1574), que ciertos compuestos flavonoidos son capaces de inhibir la nitración de la tirosina, o la formación de productos de desaminacion de ADNs básicos, que ocurren bajo condiciones ácidas en la presencia del nitrito. La nitración del ácido hidroxifenilacético y de las proteínas en presencia de nitrito y peróxido de hidrógeno en la saliva humana in vitro ha mostrado ser capaz de la inhibición por una especie reductora (Takahama y colaboradores Arch. Oral Biol. 2003, 48, 679). Estas descripciones no permiten que la persona experta prediga, sin embargo, si tales reacciones de la nitración pueden ocurrir en otros compuestos, tales como los estructuralmente distintos agonistas del receptor de la hormona tiroides ejemplificados por el compuesto 1A. Además, no dan ninguna indicación de que tales reacciones pueden ser de significación in vivo, y ninguna sugerencia en cuanto a predecir las características potenciales (por ejemplo genotoxicidad) de tales productos de reacción nitratados. La técnica anterior no describe o sugiere que los compuestos de enlace del receptor de la hormona tiroides tales como el compuesto 1A mencionado anteriormente puede ser convertido en productos de reacción potencialmente tóxicos para la administración oral, ni cómo tal conversión puede ocurrir, ni cómo tal problema puede ser tratado. Es por lo tanto un objeto de la presente invención proporcionar las composiciones farmacéuticas en las cuales el problema antes mencionado de la nitración de ciertos compuestos de enlace del receptor de la hormona tiroides después de la administración oral es atenuado. Por consiguiente, un primer aspecto de la presente invención proporciona una composición farmacéutica conveniente para la administración oral, que comprende: (i) un compuesto de la fórmula I: Fórmula I en donde: Z es H o un grupo alternativo capaz de ser substituido por N02 vía una reacción de nitración basada en nitrito; R-i es seleccionada de hidrógeno, halógeno, trifluorometilo, o alquilo de 1 a 6 carbones o cicloalquilo de 3 a 7 carbones; X es oxígeno (-0-), sulfuro (-S-), carbonilo (-CO-), metileno (-CH2-), o -NH-; R2 y 3 son iguales o diferentes y son hidrógeno, halógeno, alquilo de 1 a 4 carbones o cicloalquilo de 3 a 6 carbones, por lo menos uno de R2 y R3 que son diferentes de hidrógeno; R es hidrógeno o un alquilo más bajo; A es oxígeno (-0-), metileno (-CH2-), -CONR5-, -NR5-, ó -NR5CO-; R5 es H o un alquilo más bajo; R6 es ácido carboxílico (-C02H), o un éster del mismo, o un pro-fármaco del mismo; Y es -(CH2)n, donde n es, 0, 1, 2, 3, 4 ó 5 y en donde uno o más de los grupos CH2 puede sustituirse opcionalmente con halógeno, o Y es -C = C-, que puede ser cis o trans; y R7 es hidrógeno, o un grupo alcanoílo o aroílo, u otro grupo capaz de bioconversión para generar la estructura de fenol libre (en donde R7 = H); incluyendo todos los estereoisómeros del mismo, o una sal o un éster aceptable farmacéuticamente del mismo; (ii) por lo menos un excipiente aceptable farmacéuticamente; y (iii) un recubrimiento entérico. Los compuestos de la fórmula I son particularmente útiles como agonistas del receptor de la hormona tiroides. En particular, muchos de estos compuestos muestran actividad mejorada en el receptor TR (más que TRa). La composición de este primer aspecto de la invención está basada en el sorprendente hallazgo de los inventores, como resultado de las investigaciones mencionadas arriba, que el producto de reacción nitro del el compuesto 1A se forma con la administración oral vía una reacción de nitración basada en nitrito. La reacción de nitración basada en nitrito requiere un pH moderadamente bajo (aproximadamente 2) para proceder. Proveyendo a la composición de un recubrimiento entérico (es decir un que permanezca intacto en los ácidos del estómago, y se disuelva solamente durante el paso de la composición por el intestino delgado, donde el pH es más cercano a neutro), la reacción de nitración es inhibida perceptiblemente. La presencia del recubrimiento entérico previene la exposición del compuesto activo farmacológicamente de la fórmula I a los medios ácidos del estómago, evitando de tal modo que el reactivo de nitrito sea formado en la vecindad del compuesto activo. La consecuencia del recubrimiento entérico es por lo tanto que la reacción de nitración en la administración oral de un compuesto de la fórmula I se atenúa. Se deberá enfatizar que la motivación de los actuales inventores a entender y de la intentar atenuar la reacción de nitración era la producción inesperada de un producto de reacción nitratado del compuesto 1A durante el trabajo de desarrollo de la formulación. Tal reacción de nitración también ocurre en otros compuestos de IA fórmula (I) incluyendo por ejemplo el compuesto GC-1 mostrado abajo. A menos que este producto de reacción nitratado hubiera sido detectado, no habría habido razón de determinar su potencial genotoxicidad . Sin conocimiento de la toxicidad potencial (o de otras características indeseables) en tal producto de reacción, por supuesto, no habría habido incentivo para intentar prevenir su formación. La aplicabilidad de la presente invención no se limita a la estabilización del compuesto 1a. En cambio, las composiciones de acuerdo con este primer aspecto de la invención, todas debieron de experimentar un grado de estabilización en virtud de la atenuación de la reacción de nitración que es susceptible de ocurrir con la administración oral. La nitración de cualquier compuesto de la fórmula I puede conducir a alteraciones en los perfiles farmacológicos y/o toxicológicos del compuesto, o puede afectar igualmente sus farmacoquinéticas. Los productos de reacción nitro de tales compuestos pueden ser potencialmente genotóxicos. En ciertos casos, reacciones adicionales en los medios ácidos (por ejemplo liberación de anilina, que es por sí misma potencialmente genotóxica), pueden también ser prevenidas. Además, las reacciones de nitración en el anillo (es decir del lado derecho, de acuerdo con lo representado arriba) pueden también ocurrir en pH bajo por medio de la substitución aromática electrofílica. El recubrimiento entérico también inhibirá o prevendrá la formación de estos productos de reacción nitro. En cualquier caso, la habilidad de controlar y/o de prevenir tales modificaciones químicas de compuestos de la fórmula será generalmente una herramienta útil para el formulador. Las composiciones de acuerdo con el primer aspecto de la invención permiten que los compuestos de la fórmula I solamente sean liberados de la composición una vez que haya pasado del estómago hacia el intestino, punto en el que el recubrimiento entérico comienza a disolverse y/o se vuelve permeable. Dado que el pH en el intestino no es lo suficientemente bajo, sin embargo, para que la nitración basada en nitrito ocurra a un grado significativo, la nitración de los compuestos de la fórmula I después de ia administración oral se atenúa perceptiblemente. El término "alcanoilo" de acuerdo con es utilizado en la presente solo o como parte de otro grupo es alquilo ligado a un grupo carbonilo. El término "aroilo" de acuerdo con es utilizado en la presente solo o como parte de otro grupo es arilo ligado a un grupo carbonilo. A menos que se indicará lo contrario, el término "alquilo" o el "alqui" de acuerdo con es utilizado en la presente solo o como parte de otro grupo incluye tanto cadenas de hidrocarburos rectas o ramificadas, que contienen 1 a 12 carbones en la cadena normal, preferiblemente 1 a 4 carbones (en cuyo caso puede ser utilizado el término "alquilo más bajo"), tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, t-butilo, o isobutilo, pentilo, hexilo, isohexilo, heptilo, 4,4-dimetilpentilo, octilo, 2,2,4-trimetilpentilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo. El término "arilo" de acuerdo con es utilizado en la presente solo o como parte de otro grupo se refiere a grupos aromáticos monocíclicos y bicíclicos que contienen de 6 a 10 carbones en la porción del anillo (tal como fenilo o naftilo incluyendo 1-naftilo y 2-naftilo) y puede ser opcionalmente sustituido a través de los átomos de carbono disponibles con 1, 2, ó 3 grupos seleccionados de hidrógeno, halo, alquilo, haloalquilo, alcoxi, haloalcoxi, alquenilo, trifluorometilo, trifluorometoxi, alquinilo, hidroxi, amino, nitro, ciano y/o carboxilo o éster de alquilo de los mismos. A menos que se indique lo contrario, el término "cicloalquilo" de acuerdo con es utilizado en la presente solo o como parte de otro grupo incluye grupos de hidrocarburos cíclicos saturados o grupos de hidrocarburo (conteniendo 1 ó 2 enlaces dobles) cíclicos parcialmente no saturados, que contienen un anillo y un total de 3 a 7 carbones, preferiblemente 3 a 6 carbones, que forman el anillo, que incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclopentenilo y ciclohexenilo. El término "halógeno" o "halo" de acuerdo con es utilizado en la presente solo o como parte de otro grupo se refiere a cloro, bromo, flúor, y a yodo así como CF3, con cloro o bromo como los preferidos. El grupo alternativo capaz de ser substituido por N02 vía una reacción de nitración basada en nitrito puede por ejemplo ser seleccionado de halo (por ejemplo yodo, cloro, bromo o fluoro, con el anterior preferido) y pseudohalogenos (por ejemplo SCN, OCN, NCS, NCO y N3). El recubrimiento entérico se forma preferiblemente usando cualquier polímero disponible comercialmente producido para tal propósito. Como ejemplos de tales polímeros, los basados en los acrilatos, metacrilatos o copolímeros de los mismos (tal como la gama de polímeros de recubrimiento entérico comercializados bajo el nombre de Eudragit® por Degussa/Roehm), el ftalato de acetato de polivinilo, ftalato de acetato de celulosa, succinato de acetato de hidroxipropilmetilcelulosa, ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, succinato de acetato de hidroximetilcelulosa y carboximetiletilcelulosa pueden ser mencionados. En una modalidad particular, el recubrimiento entérico comprende un copolímero de acrilato de etilo-ácido metacrílico. Los monómeros constitutivos de este copolímero pueden estar presentes en la relación 1:1. El recubrimiento entérico también contiene preferiblemente un componente deslizante, tal como talco. Un plastificante puede también ser ventajosamente incluido. Un plastificante conveniente es citrato de trietilo. La composición recubierta entérica es formulada preferiblemente de modo que 5% o menos, más preferiblemente sustancialmente nada, del compuesto de la fórmula I sea liberado en por lo menos una hora, más preferiblemente dos horas, mayormente preferible tres horas, cuando la liberación es medida en un aparato II de disolución USP en 900 mi o 500 mi de líquido gástrico simulado ó 0.1 N de HCI a 37°C con un intervalo de agitación de 50 revoluciones por minuto. En modalidades preferidas, por lo menos 80%, preferiblemente por lo menos 90%, más preferiblemente por lo menos 95% y mayormente preferible sustancialmente todo el compuesto de la fórmula I es liberado, preferiblemente dentro de 1 hora, más preferiblemente dentro de 45 minutos, cuando la medida se realiza en un medio tamponado de pH 6.8 (por ejemplo líquido intestinal simulado de pH 6.8). En algunas circunstancias, puede ser preferible que un recubrimiento inerte sea proporcionado entre la porción de la composición que contiene el compuesto de la fórmula I, y el recubrimiento entérico (iii). Los recubrimientos entéricos son compuestos normalmente de polímeros ácidos y por lo tanto, por su misma naturaleza, tienen el potencial de conducir a cambios deletéreos en ciertos ingredientes activos. Un recubrimiento inerte interpuesto (hecho de, por ejemplo, un derivado de celulosa, tal como celulosa de hidroxipropilo o celulosa de hidroxipropilmetilo) tiende a inhibir tales interacciones. El recubrimiento inerte debe, por supuesto, ser soluble (o de otra manera se pueda dispersar) en los medios intestinales para permitir que el compuesto de la fórmula I sea liberado. El término "recubrimiento entérico" de acuerdo con es utilizado en la presente está pensado para incluir recubrimientos aplicados a una forma de composición/dosificación (por ejemplo una tableta) una vez que la forma de dosificación esté de otra manera esencialmente completa y los aplicados en las etapas intermedias de fabricación de la forma de dosificación. Así, se incluyen las composiciones en las cuales el compuesto de la fórmula I está formulado con excipientes en los gránulos que son posteriormente revestidos de manera entérica antes del procesamiento posterior, tal como compresión en tabletas o llenado en cápsulas, por ejemplo las cápsulas de gelatina. Igualmente, un método tal como el descrito en el documento WO 00/22909, mientras que es menos preferido, puede ser conveniente para preparar las composiciones de acuerdo con el primer aspecto de la invención para ciertos compuestos de la fórmula I. En este método, complejos entre ingredientes farmacológicamente activos y ácidos carboxilicos relativamente hidrofóbicos (por ejemplo ácidos carboxilicos alifáticos C9 a C30) son preparados por co-precipitación de la solución por ajuste de pH. En ciertos compuestos de la fórmula I, X es oxígeno o -CH2-. Alternativamente o además, A puede ser -NH-, -O-, -CH2-ó -CONR5-. En algunos compuestos preferidos de la fórmula I, R es isopropilo, yodo o H. Además o alternativamente, puede ser preferido que R2 y R3 sean cada uno independientemente halógeno o alquilo. En tal caso, R2 y R3 son preferiblemente cada uno independientemente Cl, Br, I o metilo. En ciertas modalidades preferidas, R2 = R3. R2 = R3 = Br o Cl se prefieren especialmente. En compuestos de la fórmula I, R4 es preferiblemente H o metilo, con H particularmente preferido. En ciertos compuestos de la fórmula I, Y es -(CH2)n- y n es 1 ó 2. Alternativamente o además, A puede ser -NR5CO-, con R5 siendo H. En compuestos particularmente preferidos de la fórmula I, Y es -(CH2)n- con n = 1, A es NHCO o CONH y R6 es COOH, o una forma correspondiente de sal, éster o pro-fármaco de COOH. El compuesto (i) puede, en modalidades seleccionadas de la presente invención, tener una fórmula seleccionada de las siguientes: TRIAC DITPA o una sal o un éster aceptable farmacéuticamente del mismo. Como sería entendido por la persona experta, la reacción de nitración descrita arriba conduciría a la introducción de un grupo nitro en la posición más baja del anillo de benceno del lado izquierdo de acuerdo con lo representado en las estructuras antes mencionadas, u orto al OH. Por consiguiente, mientras que en la mayoría de los casos el grupo sustituido sería H, grupos alternativos capaces de ser sustituidos por medio de una reacción de nitración basada en nitrito también son contemplados, por ejemplo un grupo yodo orto al grupo hidroxilo de fenol. Los inventores han mostrado esto para ser de una reacción fácil, aunque más lenta que el reemplazo de hidrógeno. Cuando un compuesto de la fórmula I está presente en la forma de un éster, se prefiere un éster alquilo del mismo. Cuando un compuesto de la fórmula I está presente en la forma de una sal aceptable farmacéuticamente, tales sales pueden incluir, cuando el compuesto tiene por lo menos un centro básico, sales de adición de ácido, por ejemplo con ácidos inorgánicos fuertes, tales como ácidos minerales, por ejemplo ácido sulfúrico, ácido fosfórico o un ácido hidrohálico, con los ácidos carboxílicos orgánicos fuertes, tales como ácidos alcanocarboxílico de 1 a 4 átomos de carbono que sean no sustituidos o sustituidos, por ejemplo, por halógeno, por ejemplo ácido acético, tal como ácidos dicarboxílicos saturados o no saturados, por ejemplo ácido oxálico, malónico, succínico, maléico, fumárico, itálico o tereftálico, tal como ácidos hidroxicarboxílicos por ejemplo ácido ascórbico, glicólico, láctico, málico, tartárico o cítrico, tal como aminoácidos, (por ejemplo ácido aspártico o glutámico o lisina o arginina), o ácido benzoico, o con ácidos sulfónicos orgánicos, tales como ácidos (C1-C4) alquilo o ariisulfónicos que están sin sustituir o sustituidos, por ejemplo por halógeno, por ejemplo ácido metansulfónico o ácido p-toluensulfónico. Las sales de adición de ácido correspondientes pueden también formarse teniendo, si se desea, un centro básico presente adicionalmente. Cuando el compuesto de la fórmula I tiene por lo menos un grupo ácido (por ejemplo COOH), puede también formar sales con bases. Las sales convenientes con bases son, por ejemplo, sales de metal, tales como sales de metales alcalinos o de malta de tierra alcalina, por ejemplo sales de sodio, potasio o magnesio, o sales con amoníaco o una amina orgánica, tal como morfolina, tiomorfolina, piperidina, pirrolidina, un mono, di o tri alquilamina más baja, por ejemplo etilo, tercbutilo, dietilo, diisopropilo, trietilo, tributilo o dimetilpropilamina , o un mono, di o trihidroxi alquilamina más baja, por ejemplo mono, di o trietanolamina . Sales internas correspondientes pueden además ser formadas. Las sales preferidas de los compuestos de la fórmula I las cuales incluyen un grupo básico incluyen monoclorhidrato, hidrogensulfato, metansulfonato, fosfato o nitrato. Las sales preferidas de los compuestos de la fórmula I que incluyen un grupo ácido que incluye, las sales de sodio, potasio y magnesio y aminas orgánicas aceptables farmacéuticamente. Los compuestos (i) pueden por supuesto ser solvatados si de desea, por ejemplo hidratos pueden utilizarse en la presente invención. En ciertas modalidades del primer aspecto de la invención, la composición también incluye un antioxidante. Tales modalidades están basadas en el hallazgo inesperado de los inventores, como un resultado de las investigaciones mencionadas arriba, que el producto de reacción nitro del compuesto 1A se forma con la administración oral vía una reacción basada en nitrito que es mediada por radicales libres. También ha sido determinado por los inventores que el compuesto de éter no biarilo GC-1, también descrito arriba, se nitrata fácilmente bajo condiciones fisiológicamente relevantes. La incorporación del antioxidante en la composición del primer aspecto de la invención inhibe la formación de los radicales libres y/o limpia los radicales libres que se forman, con la consecuencia que cualquier reacción de nitración que ocurra a pesar del recubrimiento entérico sea atenuada. El antioxidante es preferiblemente soluble en agua. Tales antioxidantes incluyen el ácido ascórbico, ácido fumárico, ácido mélico, ácido propiónico, o una sal de cualquiera de los ácidos, monotioglicerol, metabisulfito de potasio, bisulfito de sodio, sulfito de sodio y metabisulfito de sodio. Un antioxidante preferido es ácido ascórbico o su sal de sodio, que se ha encontrado que tiene particularmente efectos inhibitorios significativos en la reacción de nitración. Alternativamente, el antioxidante puede ser insoluble en agua. Tal antioxidante puede seleccionarse de a-tocoferol, palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, oleato de etilo y galato de propilo. Aunque no es esencial, puede ser preferible que el compuesto (i) y el antioxidante (ii) sean sustancialmente mezclados de manera homogénea. Esto ayuda a asegurar que, en cualquier contacto del compuesto (i) con nitrito (y/o ácido nitroso, y/o cualquier nitrógeno y oxígeno que contengan especies de radical libre), el antioxidante es más probable que esté en la vecindad de este contacto y así sea capaz de atenuar mejor cualquier reacción de nitración que pueda ocurrir. De acuerdo con un segundo aspecto de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica conveniente para administración oral, que comprende: (i) un compuesto de la fórmula I o una sal o un éster aceptable farmacéuticamente del mismo, de acuerdo con lo descrito arriba; (ii) por lo menos un antioxidante; y (¡ii) por lo menos un excipiente aceptable farmacéuticamente. En modalidades preferidas del segundo aspecto de la invención, la composición es una composición sólida. Las características preferidas de la fórmula I de acuerdo con lo descrito en relación con el primer aspecto de la invención también aplican en conexión con el segundo aspecto (y los otros aspectos descritos abajo, como sea apropiado). La composición del segundo aspecto de la invención preferiblemente también incluye un recubrimiento entérico. El recubrimiento entérico puede ser como lo descrito arriba en relación con el primer aspecto de la invención. La presente invención además proporciona, en un tercer aspecto, un método para estabilizar una composición farmacéutica conveniente para la administración oral, la composición farmacéutica que comprende: (i) un compuesto de la fórmula I o una sal o un éster aceptable farmacéuticamente del mismo de acuerdo con lo descrito arriba; y (ii) por lo menos un excipiente aceptable farmacéuticamente; el método comprende proveer a la composición de un recubrimiento entérico. En un aspecto adicional, la invención proporciona, en una composición farmacéutica conveniente para la administración oral que contiene un compuesto de la fórmula I o una sal o un éster aceptable farmacéuticamente del mismo de acuerdo con lo definido arriba, el uso de un recubrimiento entérico o de un antioxidante o ambos un recubrimiento entérico y un antioxidante para la reducción o la prevención de la nitración del compuesto. La presente invención también proporciona una composición de acuerdo con la invención, para el uso en terapia.

La presente invención también proporciona el uso de una composición de acuerdo con la invención en la preparación de un medicamento para la prevención, inhibición o tratamiento de una enfermedad asociada a la disfunción de metabolismo, o que es dependiente de la expresión de un gen regulado por triyodotironina (T3). La enfermedad puede ser seleccionada de obesidad, hipercolesterolemia, dislipidemia, aterosclerosis, arritmias cardiacas, depresión, osteoporosis, hipotiroidismo, bocio, cáncer de la tiroides así como glaucoma y paro cardíaco congestivo. Similarmente, la presente invención también proporciona un método de prevención, inhibición o tratamiento de una enfermedad asociada a la disfunción del metabolismo, o que es dependiente de la expresión de un gen regulado por triyodotironina (T3), el método implica la administración de una composición de acuerdo con la invención a un sujeto en necesidad de tal prevención, inhibición o tratamiento. En el uso y el método descritos inmediatamente arriba, el medicamento o la composición pueden administrarse en un intervalo de dosificación desde 30 minutos a un mes. Más preferiblemente, el intervalo de dosificación es desde uno a siete días, aun más preferiblemente uno a tres días. El intervalo típico de dosis del adulto humano para los compuestos (i) sería de aproximadamente 1 pg a aproximadamente 2000 pg por día. Para muchos compuestos (i), la dosis diaria sería menos de 300 pg.

Preferiblemente, la dosis de compuesto (i) es de aproximadamente 1 pg a aproximadamente 200 pg por el día, más preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 100 pg por día. Por ejemplo, los compuestos (i) pueden administrarse en una dosis, dos dosis, tres dosis o cuatro dosis por día. Preferiblemente, la cantidad del compuesto (i) por unidad de dosis de la composición es desde de la 1 200 pg, más preferiblemente de 1 a 100 pg, más preferiblemente 1, 5, 10, 20, 25 ó 50 pg. Por ejemplo, la cantidad del compuesto (i) por unidad de dosis puede ser desde 10 a 100, por ejemplo desde 20 a 80, normalmente desde 25 a 50 pg. La composición de acuerdo con el primero o segundo aspecto de la invención puede también comprender un ingrediente activo farmacológicamente seleccionado de agentes hipolipidaemicos, agentes anti-diabéticos, antidepresivos, inhibidores de resorción de hueso, supresores del apetito y/o de agentes contra la obesidad. Los ingredientes farmacológico activos adicionales tienden a tener efectos aditivos o sinérgicos con los compuestos (i) para realzar los efectos metabólicos del mismo. En composiciones de acuerdo con lo descrito anteriormente sobre contener un antioxidante, la cantidad de antioxidante puede variar sobre un muy amplio intervalo. Preferiblemente por lo menos 0.0001 mmol de antioxidante están presentes, por ejemplo 0.0005 mmol, más preferiblemente por lo menos 0.01 mmol. La cantidad de antioxidante puede por ejemplo ser desde 0.0001 a 15 mmol, por ejemplo de 0.0005 a 10 mmol, normalmente 0.01 a 4 mmol por dosis de la composición. Como será descrito más detalladamente abajo, el ser humano promedio traga aproximadamente 0.1 mmol de nitrito salival por hora. La presencia de las cantidades antes mencionadas de antioxidante en la composición debe proporcionar un efecto estabilizador útil para el compuesto (i), incluso si la composición de la invención es residente en el estómago por un período relativamente prolongado. En aun otro aspecto, la presente invención proporciona un medicamento de combinación conveniente para la administración oral, que comprende: (1) una primera composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula I o una sal o un éster aceptable farmacéuticamente del mismo, como se describe arriba; y (2) una segunda composición farmacéutica que comprende por lo menos un antioxidante, en donde cada una de las primeras y segundas composiciones farmacéuticas contiene por lo menos un excipiente aceptable farmacéuticamente, y en donde las primeras y segundas composiciones farmacéuticas pueden administrarse simultáneamente, secuencialmente o por separado. El medicamento de combinación de la presente invención toma ventaja del hecho de que, para la estabilización del compuesto (i) que se efectuará, el antioxidante debe simplemente estar presente cuando el anterior se pone en contacto con el ácido y una fuente de nitrito. Con tal que las dos composiciones del medicamento de combinación se den en tal proximidad temporal que hay un traslape entre sus períodos de residencia en el estómago, el compuesto (i) debe gozar por lo menos de un grado de estabilización contra la reacción de nitración. Las composiciones, o por lo menos la primera composición, son preferiblemente composiciones sólidas. La invención ahora será descrita más detalladamente a modo de ejemplo solamente y con relación a los dibujos adjuntos, de los cuales: La figura 1 muestra una serie de rastros CLAR estándares del compuesto 1A en la presencia de varias concentraciones de su producto de reacción 5'-nitro; y La figura 2 ilustra un proceso para la fabricación de tabletas recubiertas entéricas que contienen el compuesto 1A. Como se ha mencionado arriba, durante el desarrollo del compuesto 1A, fue determinado que la formación del producto de reacción 5'-nitro ocurría a través de una ruta abiótica (es decir no enzimática). Las características toxicológicas del producto de reacción nitro fueron determinadas que estaban alteradas a un grado relevante con respecto al compuesto original. Era por lo tanto importante determinar cómo ocurría la reacción de nitración e idear métodos para controlar o prevenir esto in vivo.

Ejemplo 1 - Genotoxicidad de un producto de reacción del Compuesto 1 A 1.1 Introducción Durante el desarrollo de una formulación del compuesto 1A, para una cápsula de 25 pg, una impureza previamente desapercibida fue observada en varios lotes; la impureza representó desde 0.8 a 1.2% del compuesto original. Esta impureza fue identificada como un análogo nitro, de aquí en adelante designada como producto de reacción 1B. Un potencial teórico para la formación in vivo de este producto de reacción/impureza por lo tanto fue identificado. Consecuentemente, este producto de reacción putativo fue probado para la actividad genotoxica en una batería estándar de estudios de la International Conference on Harmonisation (ICH). Este ejemplo resume los estudios de genotoxicidad conducidos con el producto de reacción 1B y relaciona los resultados de las exposiciones clínicas a este producto de reacción/impureza. 1.2 Genotoxicidad 1.2.1 Producto de reacción 1B 1.2.1.1 Ensayo exploratorio de Ames El producto de reacción 1B fue probado en cultivos duplicados en presencia y ausencia de activación metabolica S-9. Los artículos de control positivo fueron probados en cultivos duplicados y preparados en DMSO, a excepción de la azida de sodio, que fue disuelta en agua. Los controles negativos (vehículo) fueron probados en réplicas de cinco cultivos. El producto de reacción 1B exhibió citotoxicidad a cada una de las cepas de S. typhimurium y E. coli que se probaron. La citotoxicidad con un intervalo de mínimo a marcado era evidente basada en el número revertido medio y/o las reducciones en la densidad de la superficie del fondo bacteriano. Cuando se comparan con los controles negativos, los valores revertidos de histidina+ fueron elevados en los cultivos tratados del producto de reacción 1B de la cepa TA100 en presencia y ausencia de activación S-9, respectivamente. Como se esperaba, aumentos significativos en los números revertidos de histidina+ y triptofano+ fueron observados en los cultivos tratados con los compuestos de control positivo. En la conclusión, el producto de reacción 1B mostró una respuesta positiva en este estudio. 1.2.1.2 Estudio de mutación reversible de Ames en Salmonela y Escherichia coli El producto de reacción 1B fue evaluado en un estudio microbiano de mutagenicidad para determinar su potencial de inducir mutaciones por sustitución del par base o del cuadro de lectura en cepas de Salmonella typhimurium (histidina ) y de Escherichia coli (triptofano ) . El producto de reacción 1B fue probado con cada cepa en un ensayo de determinación de intervalo y posteriormente en un ensayo de mutación completa. El producto de reacción 1B fue evaluado, tanto con y sin activación metabólica S-9, hasta las concentraciones máximas de 3000 y 1000 pg/placa, en los ensayos de determinación de intervalo y de mutación completa, respectivamente. La citotoxicidad fue observada en cada una de las cepas bacterianas probadas. En presencia y ausencia de activación S-9, tanto en el análisis de determinación de intervalo como de mutación completa, los números revertidos promedio de de h i s t i d i n a + fueron elevados perceptiblemente (aproximadamente 2- a 3- veces) en los cultivos del producto de reacción tratados con 1B de la cepa de evaluación TA100. El aumento de revertidos del producto de reacción 1B inducido en la cepa TA100 pro arriba del valor de control indica una respuesta positiva. 1.2.1.3 Resumen de las pruebas de Ames realizadas En resumen, el producto de reacción/impureza nitro aromático del compuesto 1A, producto de reacción 1B, fue probado en un ensayo exploratorio de Ames y se encontró que induce un aumento dependiente de la concentración en revertidos por arriba del valor de control. El aumento era 2.5-3 veces por arriba de los controles, es decir, calificó como respuesta positiva. Este resultado fue confirmado en un ensayo completo de Ames. 1.2.1.4 Estudio citogenético en linfocitos humanos primarios Un estudio citogenético in vitro fue realizado para investigar el potencial del producto de reacción 1B para inducir aberraciones de cromosoma en linfocitos humanos cultivados. Basados con los resultados de la determinación de intervalo de citotoxicidad , las concentraciones dé 5 a 30 pg/ml fueron seleccionadas para evaluación en la exposición de 24 hrs sin activación de metabólica de la enzima y concentraciones de 2.5 a 20 g/ml para la exposición de 5 hrs con activación metabólica del hígado de la rata inducida por Aroclor 1254 (fracción S9). En la exposición de 5 hrs del producto de reacción 1B en presencia de activación metabólica S-9, un aumento estadístico significativo en la frecuencia de las aberraciones de cromosoma ocurrió. A la concentración más alta, 20 g/ml, la frecuencia de aberraciones de cromosoma era 10.5% comparada a 2.5% para el control de vehículo y la reducción en el índice mitótico era aproximadamente 51%. En la exposición de 24 hrs del producto de reacción 1B en ausencia de activación metabólica S-9, un aumento estadístico significativo en la frecuencia de aberraciones de cromosoma ocurrió. A las concentraciones más altas evaluadas, 40 pg/ml, la frecuencia de aberraciones de cromosoma fue 7.5% comparada al 2.5% para el control de vehículo con una reducción en el índice mitótico de aproximadamente 48%. De acuerdo con lo esperado, los controles positivos en cada prueba indujeron aumentos estadísticos significativos en las frecuencias de metafases dañadas. Por lo tanto, la validez de este ensayo fue demostrada. En conclusión, el producto de reacción 1B era clastogénico a dividir linfocitos humanos cuando fue probado a las concentraciones máximas recomendadas por los lineamientos internacionales para estudios citogenéticos in vitro. 1.-2.1.5 Estudio de micronúcleo oral en ratones El producto de reacción 1B fue evaluado en el ensayo de micronúcleo de la médula ósea de ratón para determinar su potencial genotóxico in vivo. A los grupos de ratones les fueron dadas tres dosis orales diarias consecutivas de 1000, 1500, ó 2000 mg/kg del producto de reacción 1B (es decir hasta el nivel de dosis máximo requerido por los lineamientos reguladores internacionales en la ICH y la OCDE). Muestras de la médula ósea del fémur fueron recogidas de todos los animales aproximadamente 24 horas después de la última dosis para evaluación de los eritrocitos policromáticos micronucledos (MN-PCE). Ningún animal murió durante el estudio y ningún signo clínico relacionado al fármaco fue observado. No se observó ninguna toxicidad de la médula ósea de acuerdo con lo medido por disminuciones significativas de los eritrocitos policromáticos (PCE). Las frecuencias de MN-PCE fueron aumentadas estadísticamente en 1000 y 1500 mg/kg. En conclusión, ninguna respuesta positiva dependiente de la dosis fue encontrada en los ratones. 1.3 Exposición Clínica al Producto de Reacción 1B Posterior a la administración de las dosis orales únicas del compuesto 1A a los seres humano voluntarios, el producto de reacción 1B podía ser detectado en plasma. Similarmente, en un ensayo en el cual los sujetos recibieron dosis diarias del compuesto 1A por dos semanas, el producto de reacción 1B se podía detectar en varios sujetos. En la conclusión, después de la dosificación del compuesto 1A en seres humanos, el producto de reacción de nitro 1B potencialmente mutágeno se podía detectar en plasma. Éste es el caso incluso si la dosificación se realiza durante un período relativamente corto (por ejemplo, 14 días, como arriba). Las genotoxinas potenciales son normalmente no dependientes de la dosis en sus efectos mutágenos y por lo tanto la presencia incluso de niveles bajos del producto de reacción 1B es de relevancia clínica. Además, los compuestos de la fórmula I normalmente se proporcionarían por un período de tiempo largo y por lo tanto la prevención de los productos de reacción nitro que se forman es de importancia suprema si se tienen que evitar los efectos genotóxicos potenciales que resultan de la acumulación de los productos de reacción. 1.4 Resumen y Conclusión El producto de reacción/impureza del compuesto 1A, producto de reacción 1B, fue encontrado que induce aberraciones cromosómicas en los linfocitos periféricos humanos in vitro y micronúcleo no dependiente de la dosis en un estudio de micronúcleos en ratón in vivo. Además, el producto de reacción 1B podría ser detectado en el plasma humano posterior a la dosificación a corto plazo del compuesto 1a. Por consiguiente, está claro que la prevención de la formación del producto de reacción nitro deberá ser beneficioso de manera significativa, porque las genotoxinas potenciales pueden ejercer efectos genotóxicos en concentraciones muy bajas y porque los compuestos de la fórmula I, tal como el compuesto 1A, generalmente se dará crónicamente. Ejemplo 2 - Nitrato y Nitrito - Fuentes y Mecanismos de Nitración 2.1 Introducción Una fuente posible de nitración es la vía no clásica del nitrito. Esta vía primero fue descrita por Uemura y colaboradores (1978, J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 9, 1076). La vía del nitrito puede proceder en pH moderadamente bajo (aproximadamente de 2) y es tolerante al agua, en contraste a la vía del nitrato. La vía del nitrito conduce a la producción de especies de radicales libres ' capaces de reaccionar con compuestos que contengan benceno hidroxilado, (Beake y colaboradores (1992) J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2, 10, 1653): Los actuales inventores consideraron que esta vía era probable la vía principal para la nitración de compuestos de la fórmula I administrados oralmente en el estómago y el intestino.

El promedio diario de ingestión de nitrato y nitrito de fuentes diferentes de los aditivos alimenticios ha sido estimado (T. Hambridge, WHO Food Additives Series: 50, Nitrate and Nitrite). Por lo que se refiere a las fuentes endógenas de nitrito, se sabe que el nitrato es producido del nitrato en la saliva por la acción de la reductasa del nitrato oral (Benjamín (2000) Ann. Zootech. 49, 207). Esto resulta en una concentración de aproximadamente 200 µ? de nitrito en la saliva. El ser humano promedio traga aproximadamente 500 mi de saliva por hora. Esto da lugar a la ingestión de aproximadamente 2.4 mmol (110 mg) de nitrito por día. Esto asciende aproximadamente a 1.6 mg/kg/día de nitrito (para un adulto promedio que pesa 70 kg). 2.2. Estudio de nitración in vivo En los experimentos conducidos in vivo en ratas, fue encontrado que, en a la administración del compuesto 1A junto con una solución de nitrato y nitrito (54 mg y 4 mg, respectivamente, por rata), aproximadamente 6% de la dosis administrada del compuesto 1A fue nitratada. 2.3. Antioxidantes De acuerdo con lo precisado arriba, fue hipotetizado que el mecanismo de nitración del compuesto 1A (y por lo tanto de otros compuestos que contengan benceno hidroxilados, tales como los de la fórmula I) era vía el nitrito y por lo tanto mediado por los radicales libres. Por consiguiente, se consideró que la reacción de nitración podría inhibirse por los radicales libres neutralizado res/antioxidantes. En general, cualquier antioxidante puede utilizarse de acuerdo con la presente invención. Los antioxidantes 'verdaderos' son los que bloquean reacciones en cadena mediadas por radicales reaccionando con los radicales libres (donando un solo electrón a la especie radical). Un ejemplo de un antioxidante verdadero es hidroxitolueno butilado (BHT). Otros ejemplos de tales especies incluyen los antioxidantes fenólicos, tales como ácido ferulico, rutina, catecina, epicatecina, epigalocatecina , epicatequingalato y epigalocatequingalato. Muchas de estas especies son naturales, por ejemplo, los antioxidantes tipo flavonoide- o trans-estilbeno-. Los agentes de reducción son especies que tienen un potencial redox más bajo que el compuesto que se está empleando para proteger, y/o pueden actuar como señuelo de nitración. Un ejemplo de un agente que actúa de esta manera es el ácido ascórbico. Además, ciertos agentes son sinergistas antioxidantes. Estos agentes realzan los efectos de los antioxidantes y pueden también incluirse en composiciones de la presente invención; un ejemplo es edetato de sodio. Los antioxidantes se pueden también agrupar de acuerdo con sus características de solubilidad. Los antioxidantes solubles en agua incluyen el ácido ascórbico (o su sal de sodio), ácido fumárico, ácido málico, monotioglicerol, metabisulfito de potasio (KO3S-SO2K), ácido propiónico (CH3CH2C02H), bisulfito de sodio (NaHS03) y sulfito de sodio (Na2S03). Los antioxidantes insolubles en agua incluyen alfa tocoferol, palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), oleato de etilo y galato de propilo. 2.4. La reacción de nitracion y su inhibición Se sabe que la L-tirosina puede convertirse en un producto de reacción nitro en el cual el grupo N02 es sustituido orto al grupo del anillo de hidroxilo. El procedimiento experimental para determinar el grado de nitracion del L-tirosina fue utilizado para determinar la nitracion del compuesto 1A y la inhibición del mismo por los antioxidantes seleccionados. El procedimiento experimental para la L-tirosina es conocido (1998, Chem. Res. Toxicol, 11, 1578). En breve, soluciones del compuesto 1A (50 µ?) fue expuesto a las soluciones de NaN03 (2500 µ?) y/o NaN02 (varias concentraciones) en varios valores de pH, a 37°C y en presencia o ausencia del tampón de fosfato. La reacción de nitracion conduce a la formación del producto de reacción 5'-nitro del compuesto 1A. Este producto de reacción se puede detectar y cuantificar usando el CLAR, el producto de reacción que tiene un tiempo de retención reducido (bajo las condiciones usadas) comparado al compuesto original. Los inhibidores antioxidantes posteriormente fueron agregados a las soluciones de prueba de NaN02- y 1A y las pruebas de nitracion repetidas. La figura 1 muestra una serie de cromatogramas estándares del CLAR de 1A (50 µ?) en presencia de 50 nM a 50 µ? del producto de reacción 1B. El análisis fue por CLAR-MS/MS, con las condiciones siguientes: Condiciones Del CLAR Instrumento: Waters Alliance 2795 LC Columna de Guarda: Waters Sentry Guard Column Symmetry C 8 3.5 µ?, 2.1 x 10mm. Columna: Waters Symmetry C 8 3.5 µ?, 2.1 x 50 mm. Temperatura de la Columna: 45°C Volumen de la Inyección: 5 µ? Temperatura del Procesador de Muestras Automático: 10°C índice de flujo: 0.2 ml/min Fase Móvil: A = 10 mM de acetato de amonio (pH=4.5 con ácido acético), B = acetonitrilo Gradiente: Condiciones de la Espectrometría de Masa: Instrumento: Micromass Quattro micro API Modo: ESI - Experimento: MRM (monitoreo de reacción múltiple) Transiciones MRM para el compuesto 1A: m/z 486.0 > 399.9 (tR = 3.47 min.) Transiciones MRM para el producto de reacción 1B: m/z 531.0 > 444.8 (tR = 3.91 min.) Límite de Cuantif icación (LOQ): LOQ para el compuesto 1A en MRM es 10 nM en 50% de acetonitrilo: 50% de agua. LOQ para el producto de reacción 1B en MRM es 1 nM en 50% de acetonitrilo: 50% de agua. Puede ser visto claramente que el producto de reacción tiene un tiempo de retención reducido bajo las condiciones usadas, con el compuesto original 1A enjuagándose a aproximadamente 3.5 minutos y el producto de reacción enjuagándose a aproximadamente 4 minutos. En la incubación de 1A con varias concentraciones de NaN02 y/o NaN03, los resultados de la tabla 1 fueron obtenidos.

Tabla 1: Nitración del compuesto 1A en presencia de nitrito y/o nitrato y bajo varias condiciones de pH. 1A NaNoj NaNo2 Agentes de pH Tiempo Nitración (µ?) (µ?) (µ?) Inhibición (hr) (%) 50 2 (HCI) 24 0 50 2 (fosfato) 24 0 50 6.4 24 0 1 A NaNo3 NaNo2 Agentes de PH Tiempo Nitración (µ?) (µ?) (µ?) Inhibición (hr) (%) 50 7.2 24 0 50 2500 100 2 (HCI) 4 8.4 50 2500 100 2 (fosfato) 4 9.63 50 2500 100 6.4 4 0.017 50 2500 100 7.2 4 0 50 2500 2 (HCI) 4 0 50 2500 2 (fosfato) 4 0 50 2500 6.4 4 0 50 2500 7.2 4 0 50 100 2 (HCI) 4 98.6 50 100 2 (fosfato) 4 4.27 50 100 6.4 4 0.013 50 100 7.2 4 0 Varias conclusiones pueden hacerse en base a estos datos. Primero, se demuestra claramente que el nitrito solo, bajo condiciones apropiadas de acidez, es suficiente para causar nitración significativa del compuesto 1A. De acuerdo con lo mostrado por el control negativo (filas 1 a 4), ningún resultado de nitración es observado cuando el nitrito y el nitrato están ausentes. Segundo, la presencia del tampón de fosfato puede conducir realmente a una inhibición significativa de la reacción basada en nitrito, la reacción que ocurre a un grado mucho mayor en la solución de pH 2 de HCI que en el tampón de pH 2. Tercero, el nitrato en pH 2 (HCI o tampón) no es capaz de conducir a una nitración mensurable del compuesto 1A. Cuarto, el nitrato parece inhibir la reacción basada en nitrito a un grado significativo, (más de una orden de magnitud; ver las figuras resaltadas en negrillas). Estos datos confirman así que la reacción de nitración observada con los compuestos que contienen benceno hidroxilado, tales como los de la fórmula I (por ejemplo, el compuesto 1A), cuando son administrados oralmente, son mediados por el nitrito más que por el nitrato. Los datos también demuestran claramente la importancia de un ambiente ácido para la reacción de nitración. Las composiciones recubiertas entéricas de la presente invención reducen o previenen el acceso de los medios ácidos a los ingredientes activos farmacológicamente contenidos en las mismas. Por consiguiente, tal método de formulación es capaz de reducir perceptiblemente la reacción de nitración que de otra manera ocurriría. Además de los agentes de inhibición antioxidantes seleccionados para el compuesto 1A en presencia de nitrito, los resultados de la tabla 2 fueron alcanzados. La cantidad de antioxidante usada fue generalmente de aproximadamente 10-20 veces la cantidad del compuesto 1A.

Tabla 2: Inhibición de la nitración del compuesto 1A en presencia de nitrito por medio de agentes de inhibición antioxidantes. 1 A NaNo2 Agentes PH Tiempo Nitración (µ?) (µ?) Inhibidores (hr) (%) 50 100 2 (HCI) 4 98.6 50 100 6.4 24 0.02 50 400 6.4 24 0.12 50 800 6.4 24 0.21 50 100 BHT 2 (HCI) 24 0.02 50 100 Ascorbato de sodio 2 (HCI) 4 0.00 50 100 Ascorbato de sodio 2 (fosfato) 4 0.00 50 100 Ascorbato de sodio 6.4 4 0.00 50 100 Ascorbato de sodio 7.2 4 0.00 50 100 Bisulfito de sodio 2 (HCI) 0 0.77 50 100 Bisulfito de sodio 2 (fosfato) 04 0.11 50 100 Bisulfito de sodio 2 (HCI) 2 0.11 50 100 Bisulfito de sodio 2 (fosfato) 2 0.16 50 100 Bisulfito de sodio 6.4 (NaAc) 2 0 50 100 Bisulfito de sodio 6.4 (fosfato) 2 0 50 100 Bisulfito de sodio 2 (HCI) 2 0.11 50 100 Bisulfito de sodio 2 (fosfato) 4 0.17 50 100 Bisulfito de sodio 6.4 (NaAc) 4 0 50 100 Bisulfito de sodio 6.4 (fosfato) 4 0 50 100 Catecina 2 (HCI) 4 0.01 50 100 Cateci na 2 (fosfato) 4 0.01 50 100 Catecina 6.4 (NaAc) 4 0 1 A NaNo2 Agentes PH Tiempo Nitración (µ?) (µ?) Inhibidores (hr) ( % ) 50 100 Catecina 6.4 (fosfato) 4 0 50 100 Catecina 2 (HCI) 24 0.02 50 100 Catecina 2 (fosfato) 24 0 50 100 Catecina 6.4 (NaAc) 24 0 50 100 Catecina 6.4 (fosfato) 24 0 Los datos de la tabla 2 permiten se saquen un número de conclusiones significativas. Está claro que, a menos que se acidifique el nitrito, ninguna o muy insignificante nitración del compuesto 1A ocurre, incluso cuando la concentración de nitrito es aumentada hasta ocho veces. Más importantemente, se ve que, bajo condiciones de pH y de concentración de nitrito que se hallan para conducir a una conversión casi total del compuesto de prueba a su producto de reacción nitro, de la presencia de BHT (insoluble en agua) o ascorbato (soluble en agua) conduce a una inhibición esencialmente completa de la nitración mediada por nitrito (ver las figuras resaltadas en negrillas). En conjunto, por lo tanto, los datos reportados en la presente ilustran claramente que el nitrito (N02) y no nitrato (N03) es la fuente probable de la nitración in vivo observada en el benceno hidroxilado que contiene compuestos, tales como los de la fórmula I (por ejemplo, el compuesto 1A). Esta nitración mediada por nitrito procede vía un mecanismo de radical libre y ocurre solamente a un grado relevante en medios acidificados.

La incorporación de un antioxidante en una composición que contiene el compuesto que contiene benceno hidroxilado inhibe esta reacción de nitración a un grado significativo. Además o alternativamente, la protección de la composición por medio de un recubrimiento entérico evitará que el nitrito acidificado entre en contacto con el compuesto que contiene benceno hidroxilado y proporciona así una potente estrategia para estabilizar el compuesto contra la nitración. Ejemplo 3 - Una formulación recubierta entérica del Compuesto 1 A 3.1 Mediciones del tamaño de partícula del Compuesto 1A antes y después de ser molido. Como el compuesto 1A sin moler contuvo una proporción grande de partículas más grandes que aproximadamente 100 pm, lo que afectará la uniformidad de contenido de una tableta, el compuesto 1A fue molido. Un Retsch MM 2000 fue utilizado para moler 2 x 2 g del compuesto 1A. Una partícula esférica de 100 µ? de diámetro con una densidad de 1.5 g/cm3 tiene una masa de aproximadamente 1 pg- La distribución de tamaño de partícula fue medida con un Malvern MasterSizer 2000, es decir, técnica de difracción del láser. La muestra del polvo es dispersada en Tween 20 y agua. Compuesto 1A Sin Moler: Las mediciones revelaron diámetros medianos, d(0.5), de 101 y 103 pm. El 90% de las cuartillas, d(0.9), eran 158 y 159 pm.

Compuesto 1A Molido: Después de molido d(0.5) era 20 µ?t? y d(0.9) era 85 µ?t?. Esto era una distribución de tamaño de partícula aceptable. 3.2 Fórmula para Tableta El producto medicinal hecho fue una tableta recubierta con una película entérica, blanca, circular (diámetro 7mm), convexa, de dos concentraciones, 50 y 300 g del compuesto 1A (de aquí en adelante ??') por tableta. La composición completa del producto medicinal se proporciona en la tabla 3.1, abajo. Tabla 3.1: Composición de las tabletas recubiertas entéricas de 1A * Se evapora durante el proceso de producción ** Cantidad de copolímero seco dentro de paréntesis El peso objetivo del centro de las tabletas era 140 mg y el peso objetivo de la película era 12 mg. Fórmula para Lote La fórmula para lote (ver tabla 3.2) para 50 µg/tableta y 300 g/tableta se refiere a 6000 pzas. (840 g) centros de tabletas durante la producción de las tabletas y 5700 pzas. (798 g) de centros de tabletas durante el recubrimiento. Tabla 3.2: Fórmula para lote de las tabletas recubiertas entéricas de 1 A * Incluye excedente de 6% debido a las pérdidas durante la producción de los centros de tabletas ** Se evapora durante el proceso de fabricación *** Cantidad de copolímero seco dentro de paréntesis La cantidad de la suspensión de recubrimiento (las últimas cuatro filas de la tabla) incluye un excedente de 11% debido a las pérdidas durante el proceso de recubrimiento. 3.3 Fabricación Un diagrama de flujo del proceso de fabricación de las Tabletas Recubiertas Entéricas de 1A se da en la figura 2. Centros de tabletas con 50 µg y 300 pg de 1A fueron hechas. Los centros de tabletas son una mezcla de una "base granulada" (conteniendo 1A), manitol, hipromelosa y estearato de magnesio. La "base granulada" está hecha suspendiendo 1A molido en una solución acuosa de hipromelosa y pulverizando la dispersión en MCC. Seis por ciento de excedente de 1A es usado debido a las pérdidas. Después de evaporar el agua, se tamiza el producto seco. La mezcla de polvo es comprimida en tabletas circulares, convexas de la fuerza de machacamiento y tiempo de desintegración convenientes. El peso de la tableta es 140 mg y el diámetro de 7 mm. Los centros de tabletas están recubiertos para obtener resistencia gástrica. El polímero es una dispersión de acuosa del copolímero de acrilato de etilo-ácido metacrílico (Eudragit L30 D-55). Se agrega talco como deslizante para la dispersión del polímero, y el citrato de trietilo funciona como plastificante.

La función de cada uno de los excipientes se proporciona en la tabla, abajo. Tabla 3.3: Función de los excipientes * Se evapora durante el proceso de fabricación 3.4 Análisis de la composición recubierta entérica Un método conveniente para determinar el contenido y las impurezas, etc. de las tabletas recubiertas entéricas es como sigue. El compuesto 1A es extraído de las tabletas revolviéndolas en solvente de muestra. Después de la centrifugación, remover partículas insolubles, la cantidad de 1A, Sustancias Relacionadas Individuales y Total de Sustancias Relacionadas en el sobrenadante puede determinarse usando las condiciones del instrumento descritas en la tabla 3.4. La cantidad de 1A y de sus sustancias relacionadas se determina por medio de la cromatografía de fase inversa y detección UV.

Tabla 3.4: Parámetros y soluciones del método CLAR para las tabletas de 1A Una prueba de disolución se puede realizar como sigue. La prueba de disolución se divide en dos etapas: la primera etapa prueba la resistencia del recubrimiento entérico y la segunda etapa prueba el índice de disolución. La resistencia del recubrimiento es probada en 0.1 M de ácido hidroclórico por 3 h.

La disolución es probada en 50 mM de tampón de fosfato de sodio pH 6.8 durante 1 h. Las muestras retiradas son centrifugadas para remover partículas insolubles antes del análisis. La cantidad de 1A liberado de la composición puede determinarse por medio de la cromatografía de fase inversa y de la detección UV de acuerdo con la tabla 3.5. Tabla 3.5: Parámetros y soluciones del método de CLAR para la prueba de disolución de las tabletas de 1A Parámetros y soluciones del método Baño de disolución Prolabo Dissolutest Aparato de disolución Modified Apparatus 1 (cesta) de acuerdo con USP. Recipientes de 100 mi.

Condiciones del baño de disolución Índice de agitación 100 ±2 rpm Temperatura del baño 37.0±0.5°C Distancia de la cesta al fondo del contenedor 10 ± 1 mm Instrumento Waters Alliance Separation Module con detector UV Waters 2487 o Equipo HPLC equivalente con bomba binaria y detector UV Columna Waters Atlantis dC18, 150 x 2.1 mm, 3µ Fase móvil A 0.05 % ácido trifluoroacético en Agua Fase móvil B 0.05 % ácido trifluoroacético en Acetonitrilo Medio de disolución Estado ácido 0.1 M HCI Estado del tampón 50 nM tampón fosfato de sodio de pH 6.8 Volumen de inyección Estado ácido 100 µ? Estado del tampón 100 µ? (50 µ& tabletas de IA. 15 µ?. (300 g tabletas de IA) Temperatura de columna 25°C Indice de flujo 0.3mL/min Longitud de onda de detección 250 nm Tiempo de corrida 60 min Parámetros y soluciones del método Programa del gradiente Tiempo (mili) % A % B 0 65 35 19 30 70 20 65 35 26 65 35 Tiempo de retención típico Compuesto Tiempo de retenrión 1A 13.2 Fue encontrado que la liberación del compuesto 1A era imperceptible después de la prueba de disolución en 0.1 M HCI. Sin embargo, cuando la prueba de disolución fue repetida en medios de pH 6.8, la disolución de las tabletas y la liberación del compuesto 1A fue virtualmente completa para cada tableta probada. Por consiguiente, cuando son utilizadas in vivo, estas composiciones recubiertas entéricas prevendrán a los ingredientes activos a ser expuestos, después de la administración oral, a un medio ácido que contenga nitrito en el estómago y prevendrán así o reducirán perceptiblemente la producción de los productos de reacción potencialmente genotóxicos de los ingredientes activos.

Ejemplo 4: Nitración de compuestos adicionales de la fórmula I.

Las pruebas fueron realizadas en los compuestos adicionales de la fórmula I siguientes para determinar su predisposición a la nitración: Fue encontrado que en todos los casos la exposición a las soluciones de varias concentraciones de nitrato y nitrito como en el ejemplo 2.4 arriba resultó en nitración. Ejemplo 5: Prueba clínica Dosificaciones relevantes clínicamente del compuesto 1A le fueron suministradas a sujetos humanos en la forma de una solución en una sola dosis. El producto de reacción nitratado fue detectado en un número significativo de los sujetos. Cuando el compuesto fue administrado en la forma de tabletas recubiertas entéricas, una reducción dramática en producto nitratado fue observada .

Claims (34)

Reivindicaciones

1. Composición farmacéutica conveniente para la administración oral, que comprende: (i) un compuesto de la fórmula I:

Fórmula I en donde: Z es H o un grupo alternativo capaz de ser sustituido por N02 vía una reacción de nitración basada en nitrito; R es seleccionada de hidrógeno, halógeno, trifluorometil, o alquilo de 1 a 6 carbones o cicloalquilo de 3 a 7 carbones; X es oxígeno (-O-), sulfuro (-S-), carbonilo (-CO-), metileno (-CH2-), o -NH-; R2 y 3 son iguales o diferentes y son hidrógeno, halógeno, alquilo de 1 a 4 carbones o cicloalquilo de 3 a 6 carbones, por lo menos uno de R2 y R3 son diferentes de hidrógeno; R es hidrógeno o un alquilo más bajo; A es oxígeno (-0-), metileno (-CH2-), -CONR5-, -NR5-, ó -NR5CO-; R5 es H o un alquilo más bajo;

R6 es ácido carboxílico (-C02H), o un éster del mismo, o un profármaco del mismo; Y es -(CH2)n, donde n es 0, 1 , 2, 3, 4 ó 5 y en donde uno o más de los grupos CH2 pueden sustituirse opcionalmente con halógeno, o Y es -C = C-, que puede ser cis o trans; y R7 es hidrógeno, o un grupo alcanoilo o aroilo, u otro grupo capaz de la bioconversión para generar la estructura de fenol libre (en donde R7 = H); o una sal o un éster aceptable farmacéuticamente del mismo; (ii) por lo menos un excipiente aceptable farmacéuticamente; y (iii) un recubrimiento entérico. 2. Composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde X es oxígeno o -CH2-. 3. Composición de conformidad con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde es A -NH-, -O-, -CH2- o -CONR5-.

4. Composición de conformidad con cualquier reivindicación precedente, en donde es H, yodo o isopropilo.

5. Composición de conformidad con cualquier reivindicación precedente, en donde R2 y R3 son cada uno independientemente halógeno o alquilo.

6. Composición de conformidad con la reivindicación 5, en donde R2 y R3 son cada uno independientemente Cl, Br, I o metilo.

7. Composición de conformidad con cualquier reivindicación precedente, en donde R es H o metilo.

8. Composición de conformidad con cualquier reivindicación precedente, en donde Y es -(CH2)n- y n es 1 ó 2.

9. Composición de conformidad con cualquier reivindicación precedente, en donde es A -NR5CO- y R5 es H.

10. Composición de conformidad con cualquier reivindicación precedente, en donde Z es H.

11. Composición de conformidad con la reivindicación 1, en la cual el compuesto (i) es seleccionado de T IAC DITPA o una sal o un éster aceptable farmacéuticamente del mismo.

12. Composición de conformidad con la reivindicación 11, en la cual el compuesto (i) es o una sal o un éster aceptable farmacéuticamente del mismo.

13. Composición de conformidad con la reivindicación 11, en la cual el compuesto (i) es o una sal o un éster aceptable farmacéuticamente del mismo.

14. Composición de conformidad con cualquier reivindicación precedente, en donde un recubrimiento inerte es proporcionado entre la porción de la composición que contiene el compuesto (i), y el recubrimiento entérico (iii).

15. Composición de conformidad con cualquier reivindicación precedente en donde el recubrimiento entérico comprende un polímero de acrilato, un polímero de metacrilato o un copolímero de acrilato-metacrilato.

16. Composición de conformidad con cualquier reivindicación precedente, que está en la forma de una tableta recubierta entérica y que contiene siguientes los ingredientes: Manitol, Celulosa microcristalina, Hipromelosa, Estearato de magnesio, Agua, copolímero de acrilato de etilo-ácido metacrílico (1:1), talco y citrato de trietilo.

17. Composición de conformidad con cualquier reivindicación precedente, en donde 5% o menos del compuesto de la fórmula I es liberado en por lo menos una hora, cuando la liberación se mide en un aparato II de USP en 500 mi de líquido gástrico simulado o 0.1 N HCI a 37°C con un índice de agitación de 50 revoluciones por minuto.

18. Composición de conformidad con cualquier reivindicación precedente, que también contiene un antioxidante.

19. Composición de conformidad con la reivindicación 18, en donde el antioxidante es seleccionado de ácido ascórbico, ácido fumárico, ácido málico, ácido propiónico, o de una sal de cualquiera de estos ácidos, monotioglicerol, metabisulfito de potasio, bisulfito de sodio, sulfito de sodio, metabisulfito de sodio, a-tocoferol, palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, oleato de etilo y galato de propilo.

20. Composición de conformidad con la reivindicación 18 o la reivindicación 19, en donde el compuesto (i) y el antioxidante son mezclados sustancialmente de manera homogénea.

21. Composición farmacéutica conveniente para la administración oral, que comprende: (i) un compuesto de la fórmula I: Fórmula I en donde: Z es H o un grupo alternativo capaz de ser sustituido por N02 vía una reacción de nitración basada en nitrito; R1 es seleccionada de hidrógeno, halógeno, trifluorometilo, o de alquilo de 1 a 6 carbones o cicloalquilo de 3 a 7 carbones; X es oxígeno (-0-), sulfuro (-S-), carbonilo (-CO-), metileno (-CH2-), o -NH-; R2 y 3 son iguales o diferentes y son hidrógeno, halógeno, alquilo de 1 a 4 carbones o cicloalquilo de 3 a 6 carbones, por lo menos uno de R2 y R3 son diferentes de hidrógeno; R4 es hidrógeno o un alquilo más bajo; A es oxígeno (-0-), metileno (-CH2-), -CONR5-, -NR5-, o -NR5CO-; R5 es H o un alquilo más bajo; R6 es ácido carboxílico, o un éster del mismo, o un profármaco del mismo; Y es -(CH2)n, donde n es 0, 1 , 2, 3, 4 ó 5 y en donde uno o más de los grupos CH2 puede sustituirse opcionalmente con halógeno, o Y es -C = C-, que puede ser cis o trans; y R7 es hidrógeno, o un grupo alcanoilo o aroilo, u otro grupo capaz de la bioconversión para generar la estructura de fenol libre (en donde R7 = H); o una sal o un éster aceptable farmacéuticamente del mismo; (ii) por lo menos un antioxidante; y (iii) por lo menos un excipiente aceptable farmacéuticamente.

22. Composición de conformidad con la reivindicación 21, en la cual el compuesto (i) es según lo especificado en cualquiera de las reivindicaciones 2 a 13.

23. Composición de conformidad con la reivindicación 21 o la reivindicación 22, que es una composición sólida.

24. Composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 23, en donde el antioxidante es mezclado sustancialmente de manera homogénea con el compuesto (i).

25. Composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 24, en donde el antioxidante es seleccionado del ácido ascórbico, ácido fumárico, ácido málico, ácido propiónico, o de una sal de cualquiera de estos ácidos, monotioglicerol, metabisulfito de potasio, bisulfito de sodio, sulfito de sodio, metabisulfito de sodio, a-tocoferol, palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, oleato de etilo y galato de propilo.

26. Composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 18 a 25, en donde el antioxidante está presente en una cantidad desde 0.0001 a 15 mmol por dosis.

27. Composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 26, que también comprenden un ingrediente activo farmacológicamente seleccionado de agentes hipolipidémicos, agentes anti-diabéticos, antidepresivos, inhibidores de la resorción del hueso, supresores del apetito y/o agentes contra la obesidad.

28. Método de estabilizar una composición farmacéutica conveniente para la administración oral, que comprende: (i) un compuesto de la fórmula I según lo definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, o una sal o un éster aceptable farmacéuticamente del mismo; y (ii) por lo menos un excipiente aceptable farmacéuticamente; el método que comprende proveer la composición con un recubrimiento entérico.

29. En una composición farmacéutica conveniente para la administración oral que contiene un compuesto de la fórmula I de conformidad con lo definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 o una sal o un éster aceptable farmacéuticamente del mismo, el uso de un recubrimiento entérico para la reducción o prevención de la nitración del compuesto.

30. En una composición farmacéutica conveniente para la administración oral que contiene un compuesto de la fórmula I según lo definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 o una sal o un éster aceptable farmacéuticamente del mismo, el uso de un antioxidante para la reducción o prevención de la nitración del compuesto.

31. Composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, para el uso en terapia.

32. Uso de una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, en la preparación de un medicamento para prevenir, inhibir o tratar una enfermedad asociada a la disfunción del metabolismo, o que es dependiente de la expresión de un gen regulado por triyodotironina (T3).

33. Método para la prevención, inhibición o tratamiento de una enfermedad asociada a la disfunción del metabolismo, o que es dependiente de la expresión de un gen regulado por triyodotironina (T3), el método que implica la administración de una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 26 a un sujeto en necesidad de tal prevención, inhibición o tratamiento.

34. medicamento de combinación conveniente para la administración oral, que comprende: (1) una primera composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula I según lo definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 o una sal o un éster aceptable farmacéuticamente del mismo; y (2) una segunda composición farmacéutica que comprende por lo menos un antioxidante, en donde cada una de la primera y segunda composiciones farmacéuticas contiene por lo menos un excipiente aceptable farmacéuticamente, y en donde las primera y segunda composiciones farmacéuticas pueden administrarse simultáneamente, secuencialmente o por separado.