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WO2024005142A1 - ステビア植物のスクリーニング方法 - Google Patents

ステビア植物のスクリーニング方法 Download PDF

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WO2024005142A1
WO2024005142A1 PCT/JP2023/024180 JP2023024180W WO2024005142A1 WO 2024005142 A1 WO2024005142 A1 WO 2024005142A1 JP 2023024180 W JP2023024180 W JP 2023024180W WO 2024005142 A1 WO2024005142 A1 WO 2024005142A1
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WO
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less
approximately
plant
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PCT/JP2023/024180
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English (en)
French (fr)
Inventor
正良 平井
一考 岩城
兼太郎 落合
克郎 宮川
絵美 岡田
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Suntory Holdings Ltd
Original Assignee
Suntory Holdings Ltd
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Publication date
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Priority to AU2023298977A priority patent/AU2023298977A1/en
Priority to EP23831581.6A priority patent/EP4549589A1/en
Priority to JP2024530964A priority patent/JPWO2024005142A1/ja
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/56—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical directly bound to a condensed ring system having three or more carbocyclic rings, e.g. daunomycin, adriamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
    • A01H1/04—Processes of selection involving genotypic or phenotypic markers; Methods of using phenotypic markers for selection
    • A01H1/045—Processes of selection involving genotypic or phenotypic markers; Methods of using phenotypic markers for selection using molecular markers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
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    • A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
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    • A01H1/101—Processes for modifying non-agronomic quality output traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine or caffeine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
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    • A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
    • A01H5/12—Leaves
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/14—Asteraceae or Compositae, e.g. safflower, sunflower, artichoke or lettuce
    • A01H6/1488—Stevia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L27/30—Artificial sweetening agents
    • A23L27/33—Artificial sweetening agents containing sugars or derivatives
    • A23L27/36—Terpene glycosides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
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    • C12Q2600/13—Plant traits
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Definitions

  • the present invention relates to a screening method for Stevia plants, etc.
  • Patent Document 1 discloses a functional sweetener composition containing a vitamin, a high-intensity sweetener, and a sweet taste improving composition.
  • Steviol glycosides are known as sweet components contained in Stevia extract.
  • Stevia extract is mainly extracted and purified from stevia leaves.
  • Stevia is a perennial plant of the Chrysanthemum family that is native to Paraguay in South America, and its scientific name is Stevia Rebaudiana Bertoni.
  • Stevia contains a component that is approximately 300 times sweeter than sugar, so it is cultivated to extract this sweet component and use it as a natural sweetener.
  • Rebaudioside A hereinafter “Rebaudioside” may be abbreviated as "Reb”
  • RebB RebC
  • RebD RebE
  • RebM RebM
  • Patent Document 2 Among various steviol glycosides, RebA, for example, has been evaluated as a sweetener with high sweetness and good quality sweetness, and is widely used. Other steviol glycosides are also being found to have their own sweetness and associated taste.
  • Patent Documents 3 to 6 Methods for screening Stevia plants characterized by steviol glycoside content etc. based on genetic information.
  • the invention provides: [1] The following chemical characteristics (a) to (r ) A method for screening Stevia plants having at least one of the following. (1) Heterozygous or homozygous for the allele in which the base corresponding to position 184 of SEQ ID NO: 1 is G. (2) Heterozygous or homozygous for the allele in which the base corresponding to position 170 of SEQ ID NO: 2 is C. (3) Heterozygous or homozygous for the allele in which the base corresponding to position 92 of SEQ ID NO: 3 is C. (a) Compared to Stevia plants that do not have any of the genetic characteristics (1) to (3), the content ratio of RebM to rebaudioside (Reb)D is high.
  • (g) Contains more RebF than Stevia plants that do not have any of the genetic characteristics (1) to (3).
  • (h) It has a higher RebG content than a Stevia plant that does not have any of the genetic characteristics (1) to (3).
  • the content of RebM is higher than that of a stevia plant that does not have any of the genetic characteristics (1) to (3).
  • (j) The content of steviol glycosides having ⁇ -1,3-glucoside bonds is higher than that of Stevia plants that do not have any of the genetic characteristics (1) to (3).
  • the content of RebD is lower than that of a Stevia plant that does not have any of the genetic characteristics (1) to (3).
  • (l) The content of RebE is lower than that of Stevia plants that do not have any of the genetic characteristics (1) to (3).
  • the content of RebN is lower than that of a Stevia plant that does not have any of the genetic characteristics (1) to (3).
  • the content of stevioside is lower than that of a stevia plant that does not have any of the genetic characteristics (1) to (3).
  • the content of steviol glycosides that do not have ⁇ -1,3-glucoside bonds is lower.
  • the chemical characteristic (p) includes, for example, an embodiment in which the content ratio of RebA to RebD is high and the content ratio of RebB to RebE is high.
  • (q) Compared to Stevia plants that do not have any of the genetic characteristics (1) to (3), they have ⁇ -1,3-glucoside bonds to steviol glycosides that do not have ⁇ -1,3-glucoside bonds. High steviol glycoside content.
  • (r) Compared to Stevia plants that do not have any of the genetic characteristics (1) to (3), the steviol glycoside produced by UGT76G1 from the substrate steviol glycoside of UGT76G1 is High content ratio.
  • [2] Further comprising the step of measuring the content of RebA, RebB, RebD, RebE, RebF, RebG, RebM, RebN and/or stevioside in the test Stevia plant tissue in which the presence and/or absence of the genetic characteristic has been detected. , the method described in [1]. [3] The method according to [1] or [2], wherein the step of detecting the presence and/or absence of the genetic characteristic is performed using a CAPS method, a dCAPS method, or a TaqMan PCR method. [4] A chemical characteristic as defined in [1] (a A screening kit for a Stevia plant having at least one of ) to (r).
  • the plant according to [6] which has at least one of the chemical characteristics (a) to (r) defined in [1].
  • RebN The content of RebN is lower than that of extracts from Stevia plants that do not have any of the genetic characteristics (1) to (3) defined in [1].
  • n' The content of stevioside is lower than that of an extract of a stevia plant that does not have any of the genetic characteristics (1) to (3) defined in [1].
  • o' A steviol glycoside that does not have ⁇ -1,3-glucosidic bonds compared to an extract of a Stevia plant that does not have any of the genetic characteristics (1) to (3) defined in [1]. content is low.
  • [16-2] The extract of dead tissue or dead cells according to [10-2] or [11-2], which has at least one of the following chemical characteristics (a') to (r').
  • (a') Contains RebM for rebaudioside (Reb)D compared to extracts of dead tissues or cells of Stevia plants that do not have any of the genetic characteristics (1) to (3) defined in [1]. The ratio is high.
  • (b') The content ratio of RebB to RebE is higher than the extract of dead tissue or dead cells of a Stevia plant that does not have any of the genetic characteristics (1) to (3) defined in [1].
  • (c') The content ratio of RebG to RebE is higher than the extract of dead tissue or dead cells of a Stevia plant that does not have any of the genetic characteristics (1) to (3) defined in [1].
  • (d') The content ratio of RebG to stevioside is higher than the extract of dead tissue or dead cells of a Stevia plant that does not have any of the genetic characteristics (1) to (3) defined in [1].
  • (e') Contains more RebA than extracts of dead tissues or cells of Stevia plants that do not have any of the genetic characteristics (1) to (3) defined in [1].
  • (f') Contains more RebB than extracts of dead tissues or cells of Stevia plants that do not have any of the genetic characteristics (1) to (3) defined in [1].
  • (g') Contains more RebF than extracts of dead tissues or cells of Stevia plants that do not have any of the genetic characteristics (1) to (3) defined in [1].
  • ADVANTAGE OF THE INVENTION it is possible to obtain a Stevia plant having various characteristics described herein, such as a higher content ratio of RebM to RebD, a means for producing such a plant, and a method for producing a Stevia plant from such a plant. It becomes possible to provide the leaves obtained and beverages containing steviol glycosides obtained from the leaves.
  • FIG. 1 is a diagram showing the positions of bases related to genetic characteristic (1) in the base sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the bases surrounded by frames are the bases related to genetic characteristic (1).
  • FIG. 2 is a diagram showing the positions of bases related to genetic characteristic (2) in the base sequence of SEQ ID NO: 2.
  • the bases surrounded by frames are the bases related to genetic characteristic (2).
  • FIG. 3 is a diagram showing the positions of bases related to genetic characteristic (3) in the base sequence of SEQ ID NO: 3.
  • the bases surrounded by frames are the bases related to genetic characteristic (3).
  • Stevia plant having at least one of the following genetic characteristics (1) to (3) (hereinafter collectively referred to as "the plant of the present invention” or “the Stevia plant of the present invention”). ).
  • the plant of the present invention or “the Stevia plant of the present invention”).
  • the plant of the present invention is derived from a wild Stevia plant and has at least one of the above genetic characteristics (1) to (3) (hereinafter referred to as genetic characteristics (1)). At least one of (3) to (3) may be collectively referred to as "genetic characteristics of the present invention").
  • the plant of the present invention may have at least one of the following chemical characteristics.
  • (b) The content ratio of RebB to RebE is higher than that of a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • (c) The content ratio of RebG to RebE is higher than that of a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content ratio of RebG to stevioside is higher than that of a stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content of RebE is lower than that of Stevia plants that do not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content of RebN is lower than that of a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content of stevioside is lower than that of a stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content of steviol glycosides that do not have ⁇ -1,3-glucoside bonds is lower than that of Stevia plants that do not have the genetic characteristics of the present invention.
  • “Position (or part) corresponding to” means, if a sequence identical to a reference sequence (e.g. SEQ ID NOs: 1 to 3) exists in the genome, the position in that sequence in the genome or If there is no sequence identical to the reference sequence in the genome, the position in the reference sequence in the sequence corresponding to the reference sequence in the genome. or a position or part corresponding to a part.
  • a sequence identical to or equivalent to the reference sequence for example, amplify the genomic DNA of the target Stevia plant using primers that can amplify the reference sequence by PCR, and then sequence the amplified product. This can be determined by performing alignment analysis between the obtained sequence and the reference sequence.
  • Non-limiting examples of sequences equivalent to the standard sequence include, for example, 60% or more, 70% or more, 75% or more, 80% or more, 81% or more, 82% or more, 83% or more, 84% or more of the standard sequence. , 85% or more, 86% or more, 87% or more, 88% or more, 89% or more, 90% or more, 91% or more, 92% or more, 93% or more, 94% or more, 95% or more, 96% or more, 97 Sequence identity of % or more, 98% or more, 98.1% or more, 98.4% or more, 98.7% or more, 99% or more, 99.2% or more, 99.5% or more, or 99.8% or more Examples include base sequences having the following.
  • the position or portion in the sequence corresponding to the reference sequence in the genome that corresponds to the position or portion in the reference sequence can be determined by considering the base sequences before and after the position or portion in the reference sequence. For example, by alignment analysis between a reference sequence and a sequence corresponding to the reference sequence in the genome, it is possible to determine the position or part of the sequence corresponding to the reference sequence in the genome that corresponds to the position or part in the reference sequence. can.
  • the genome of a Stevia plant has a portion consisting of the same base sequence as SEQ ID NO: 1.
  • the "position corresponding to position 184 of SEQ ID NO: 1" is the 184th position from the 5' side of the part of the genome that has the same base sequence as SEQ ID NO: 1.
  • the genome of the Stevia plant has a part consisting of a base sequence that is not identical to SEQ ID NO: 1 but corresponds to it, the genome does not have a part consisting of a base sequence identical to SEQ ID NO: 1, so "Position corresponding to position 184 of SEQ ID NO: 1" does not necessarily correspond to the 184th position from the 5' side of the part corresponding to SEQ ID NO: 1, but refers to the base sequence before and after position 184 of SEQ ID NO: 1. Taking this into account, it is possible to specify "the position corresponding to position 184 of SEQ ID NO: 1" in the genome of such a Stevia plant.
  • the ⁇ position corresponding to position 184 of SEQ ID NO: 1'' in the genome of the Stevia plant was identified. can do.
  • a portion consisting of a base sequence corresponding to SEQ ID NO: 1 is, for example, 60% or more, 70% or more, 75% or more, 80% or more, 81% or more, 82% or more, 83% or more, 84% or more, 85% or more, 86% or more, 87% or more, 88% or more, 89% or more, 90% or more, 91% or more, 92% or more, 93% or more, 94% or more, 95% 96% or more, 97% or more, 98% or more, 98.1% or more, 98.4% or more, 98.7% or more, 99% or more, 99.2% or more, 99.5% or more, or 99. It means a portion consisting of a base sequence having 8% or more sequence identity.
  • the "portion consisting of a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 1" includes positions 1 to 183 from the 5' end of SEQ ID NO: 1 (i.e., positions 1 to 183 from the 5' end of SEQ ID NO: 1), genetic characteristics ( A forward primer (for example, one having the sequence of SEQ ID NO: 4) that hybridizes to the complementary sequence of the 1 base at position 184, which is the position related to 1) (up to the base on the 5' end side), and 3 of SEQ ID NO: 1.
  • a portion of the Stevia plant genome that can be amplified by PCR using a reverse primer (eg, one having the sequence SEQ ID NO: 5).
  • the "portion consisting of a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 2" includes positions 1 to 169 from the 5' end of SEQ ID NO: 2 (i.e., positions 1 to 169 from the 5' end of SEQ ID NO: 2), genetic characteristics ( A forward primer (for example, one having the sequence of SEQ ID NO: 6) that hybridizes to the complementary sequence of the 1 base at position 170, which is the position related to 2) (up to the base on the 5' end side), and 3 of SEQ ID NO: 2.
  • Included is a portion of the genome of a Stevia plant that can be amplified by PCR using a reverse primer (eg, one having the sequence SEQ ID NO: 7).
  • the "portion consisting of a base sequence corresponding to SEQ ID NO: 3" includes positions 1 to 91 from the 5' end of SEQ ID NO: 3 (i.e., from the 5' end of SEQ ID NO: 3 to the genetic characteristic ( A forward primer (for example, one having the sequence of SEQ ID NO: 8) that hybridizes to the complementary sequence of the part of the 92nd base (up to the 5' end base), which is the position related to 3), and 3 of SEQ ID NO: 3.
  • a forward primer for example, one having the sequence of SEQ ID NO: 8 that hybridizes to the complementary sequence of the part of the 92nd base (up to the 5' end base), which is the position related to 3
  • a portion of the Stevia plant genome that can be amplified by PCR using a reverse primer (eg, one having the sequence SEQ ID NO: 9).
  • the "portion consisting of the base sequence corresponding to SEQ ID NO: 1" includes, for example, PCR using a forward primer containing the base sequence of SEQ ID NO: 4 and a reverse primer containing the base sequence of SEQ ID NO: 5. This includes the portion of the Stevia plant genome that can be amplified by.
  • the "portion consisting of the base sequence corresponding to SEQ ID NO: 2" includes, for example, PCR using a forward primer containing the base sequence of SEQ ID NO: 6 and a reverse primer containing the base sequence of SEQ ID NO: 7. This includes the portion of the Stevia plant genome that can be amplified by.
  • the "portion consisting of the base sequence corresponding to SEQ ID NO: 3" includes, for example, PCR using a forward primer containing the base sequence of SEQ ID NO: 8 and a reverse primer containing the base sequence of SEQ ID NO: 9. This includes the portion of the Stevia plant genome that can be amplified by.
  • the allele in which the base corresponding to position 184 of SEQ ID NO: 1 is G is SEQ ID NO: 10 to Contains at least one base sequence of 13.
  • the allele in which the base corresponding to position 170 of SEQ ID NO: 2 is C is SEQ ID NO: 14 to Contains at least one base sequence of 17.
  • the allele in which the base corresponding to position 92 of SEQ ID NO: 3 is C is SEQ ID NO: 18 to Contains at least one base sequence of 21.
  • (1) the position corresponding to position 184 of SEQ ID NO: 1, (2) the position corresponding to position 170 of SEQ ID NO: 2, and (3) the position corresponding to position 92 of SEQ ID NO: 3 are may be collectively referred to as "polymorphic site” or "site related to the genetic characteristics of the present invention.”
  • PCR method TaqMan PCR method
  • sequencing method microarray method
  • invader method TILLING method
  • RAD random amplified polymorphic DNA
  • RFLP restriction enzyme fragment length polymorphism
  • AFLP amplified fragment length polymorphism
  • SSLP simple sequence length polymorphism
  • CAPS cleaved amplified polymorphic sequence
  • dCAPS derived cleaved amplified polymorphic sequence
  • ASO allele-specific oligonucleotide
  • ARMS denaturing gradient gel electrophoresis
  • CCM chemical cleavage of mismatch
  • DOL DOL method
  • MALDI-TOF/MS method MALDI-TOF/MS method
  • TDI method padlock probe method
  • molecular beacon method DASH (dynamic allele specific hybridization) method
  • UCAN method ECA method
  • PINPOINT method PROBE (primer oligo base extension) method
  • VSET very short extension
  • the genetic characteristics of the present invention can be detected by the dCAPS method using the following combination of primer sets and restriction enzymes. If the candidate plant has the genetic characteristic (1) (heterozygosity) of the preferred embodiment, for example, a forward primer having the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 22 and a forward primer having the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 23 is applied to the genomic DNA of the candidate plant.
  • a forward primer having the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 22 and a forward primer having the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 23 is applied to the genomic DNA of the candidate plant.
  • PCR amplification is performed using a reverse primer having the nucleotide sequence shown, and the obtained PCR product (approximately 248 bp long, e.g.
  • SEQ ID NO: 24 or 25 is treated with the restriction enzyme EcoRV, an approximately 248 bp long band ( For example, SEQ ID NO: 25), a band about 213 bp long (eg SEQ ID NO: 26) and a band about 35 bp long (eg SEQ ID NO: 27) occur.
  • SEQ ID NO: 25 a band about 213 bp long
  • SEQ ID NO: 27 a band about 35 bp long
  • restriction enzyme treatment is performed, A band of approximately 213 bp long (eg, SEQ ID NO: 26) and a band of approximately 35 bp long (eg, SEQ ID NO: 27) result.
  • a forward primer having the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 28 and a forward primer having the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 29 is applied to the genomic DNA of the candidate plant.
  • PCR amplification is performed using a reverse primer having the nucleotide sequence shown, and the resulting PCR product (approximately 242 bp long, e.g.
  • SEQ ID NO: 30 or 31 is treated with the restriction enzyme PvuII, an approximately 242 bp long band ( For example, SEQ ID NO: 30), a band about 207 bp long (eg SEQ ID NO: 32) and a band about 35 bp long (eg SEQ ID NO: 33) occur.
  • PvuII restriction enzyme
  • a forward primer having the base sequence shown in SEQ ID NO: 34 and a forward primer having the base sequence shown in SEQ ID NO: 35 is applied to the genomic DNA of the candidate plant.
  • PCR amplification is performed using a reverse primer having the nucleotide sequence shown in FIG. No. 37) and a band approximately 35 bp long (eg SEQ ID No. 38).
  • PCR amplification in the same manner as above will generate a PCR product with a length of about 284 bp (for example, SEQ ID NO: 39), which is then treated with the restriction enzyme PvuII.
  • the plant of the present invention has any one of genetic characteristics (1) to (3). In some embodiments, the plants of the present invention have a combination of genetic characteristics (1) and (2). In some embodiments, the plants of the invention have a combination of genetic characteristics (1) and (3). In some embodiments, the plants of the invention have a combination of genetic characteristics (2) and (3). In some embodiments, the plants of the present invention have all of the genetic characteristics (1) to (3).
  • the stevia plant of the present invention is derived from a wild type stevia plant and has the above-mentioned genetic characteristics resulting in at least one of the chemical characteristics (a) to (r).
  • the genetic characteristics may be generated by genetic recombination techniques or non-genetic recombination techniques. Therefore, even if the plants of the present invention are obtained by genetically recombinant techniques or their descendants (hereinafter sometimes referred to as "genetically modified plants”), they can be obtained by non-genetically recombinant techniques. or its descendants (hereinafter sometimes referred to as "non-genetically modified plants").
  • non-genetically recombinant methods include methods of inducing mutations in genes of host cells (or host plants) without introducing foreign genes. Such a method includes a method of causing a mutagenic agent to act on plant cells.
  • mutagens include ethyl methanesulfonic acid (EMS), sodium azide, and the like.
  • EMS ethyl methanesulfonic acid
  • sodium azide ethyl methanesulfonic acid
  • Plant cells can be treated at a concentration such as 1.0%.
  • Processing time is approximately 1 hour to approximately 48 hours, approximately 2 hours to approximately 36 hours, approximately 3 hours to approximately 30 hours, approximately 4 hours to approximately 28 hours, approximately 5 hours to approximately 26 hours, approximately 6 hours to approximately 24 hours. It is.
  • the treatment procedure itself is known, it can be carried out by immersing water-absorbing seeds that have undergone a water-absorption process in a treatment solution containing a mutagenic agent at the above-mentioned concentration for the above-mentioned treatment time.
  • Non-genetically recombinant method is a method of irradiating plant cells with radiation or light such as X-rays, gamma rays, and ultraviolet rays.
  • ultraviolet rays use an appropriate amount of ultraviolet rays (ultraviolet lamp intensity, distance, time) to culture the irradiated cells on a selective medium, etc., and then culture the cells, callus, and plants that have the desired traits. You can choose.
  • the irradiation intensity at that time is 0.01-100Gr, 0.03-75Gr, 0.05-50Gr, 0.07-25Gr, 0.09-20Gr, 0.1-15Gr, 0.1-10Gr, 0.
  • the irradiation distance may be 1cm-200m, 5cm-100m, 7cm-75m, 9cm-50m, 10cm-30m, 10cm-20m, 10cm-10m, and the irradiation time is It may be 1 minute to 2 years, 2 minutes to 1 year, 3 minutes to 0.5 years, 4 minutes to 1 month, 5 minutes to 2 weeks, or 10 minutes to 1 week.
  • the intensity, distance, and time of irradiation vary depending on the type of radiation or light beam and the state to be irradiated (cell, callus, plant body), but can be adjusted as appropriate by those skilled in the art.
  • plant cells may undergo mutations during cultivation, so it is preferable to return them to individual plants in order to maintain more stable traits.
  • a plant obtained by performing genetic recombination (for example, by genome editing, etc.) using a non-genetically modified Stevia plant as a host for example, by performing genetic recombination using the plant of the present invention as a host, and further Plants with additional traits) are not excluded from the scope of the present invention.
  • the plant of the present invention may have at least one of the above chemical characteristics (a) to (r).
  • a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention refers to, for example, a Stevia plant that has at least one of the genetic characteristics (1) to (3) of the present invention.
  • Stevia plants that is, mean stevia plants that do not have genetic characteristics (1), and for stevia plants that have genetic characteristics (1) and (2), genetic characteristics (1) and ( Stevia plants other than stevia plants having 2), that is, (i) stevia plants having neither genetic characteristic (1) nor (2), (ii) having genetic characteristic (1) but , Stevia plants that do not have genetic characteristic (2), and (iii) Stevia plants that have genetic characteristic (2) but do not have genetic characteristic (1).
  • the content ratio of one steviol glycoside to another steviol glycoside is the ratio of the content of the latter steviol glycoside (e.g., RebM) to the content of the former steviol glycoside (e.g., RebD) (e.g., , RebM content/RebD content).
  • the content may be, for example, the mass of the target glycoside contained in a unit mass of dried Stevia leaves or the concentration of the target glycoside in the dried Stevia leaves.
  • Dried leaves are fresh leaves that are dried to reduce the water content to 10% by weight or less, 7% by weight or less, 5% by weight or less, 4% by weight or less, 3% by weight or less, 2% by weight or less, or 1% by weight or less. It refers to something that has been reduced to.
  • the moisture content of the dry leaves of the plants of the invention is 3 to 4% by weight.
  • the content ratio of RebM to RebD in the plant of the present invention is about 1.2 times or more of the ratio in the Stevia plant that does not have the genetic characteristic of the present invention, Approximately 1.6 times or more, approximately 2 times or more, approximately 2.4 times or more, approximately 2.8 times or more, approximately 3.2 times or more, approximately 3.6 times or more, approximately 4 times or more, approximately 4.4 times or more, approximately 4.8 times or more, approximately 5.2 times or more, Approximately 5.6 times or more, approximately 6 times or more, approximately 6.4 times or more, approximately 6.8 times or more, approximately 7.2 times or more, approximately 7.6 times or more, approximately 8 times or more, approximately 8.4 times or more, approximately 8.8 times or more, approximately 9.2 times or more, About 9.6 times or more, about 10 times or more, about 10.5 times or more, about 11 times or more, about 11.5 times or more, or about 12 times or more.
  • the content ratio of RebB to RebE in the plant of the present invention is about 1.5 times or more of the ratio in the Stevia plant that does not have the genetic characteristic of the present invention, Approximately 2 times or more, approximately 2.5 times or more, approximately 3 times or more, approximately 3.5 times or more, approximately 4 times or more, approximately 4.5 times or more, approximately 5 times or more, approximately 10 times or more, approximately 15 times or more, approximately 20 times or more, About 30 times or more, about 40 times or more, about 50 times or more, about 60 times or more, about 70 times or more, about 80 times or more, about 90 times or more, about 100 times or more, about 150 times or more, about 200 times or more, About 250 times or more, about 300 times or more, about 400 times or more, about 500 times or more, about 600 times or more, or about 700 times or more.
  • the content ratio of RebG to RebE in the plant of the present invention is about twice or more of the ratio in the Stevia plant that does not have the genetic characteristic of the present invention, Approximately 2.5 times or more, approximately 3 times or more, approximately 3.5 times or more, approximately 4 times or more, approximately 4.5 times or more, approximately 5 times or more, approximately 10 times or more, approximately 15 times or more, approximately 20 times or more, approximately 25 times or more, About 30 times or more, about 40 times or more, about 50 times or more, about 60 times or more, about 70 times or more, about 80 times or more, about 90 times or more, about 100 times or more, about 150 times or more, about 200 times or more, About 250 times or more, about 300 times or more, about 400 times or more, about 500 times or more, about 600 times or more, or about 700 times or more.
  • the content ratio of RebG to stevioside in the plant of the present invention is about 1.5 times or more of the ratio in the stevia plant that does not have the genetic characteristic of the present invention, Approximately 2 times or more, approximately 2.5 times or more, approximately 3 times or more, approximately 3.5 times or more, approximately 4 times or more, approximately 4.5 times or more, approximately 5 times or more, approximately 10 times or more, approximately 15 times or more, approximately 20 times or more, About 30 times or more, about 40 times or more, about 50 times or more, about 60 times or more, about 70 times or more, about 80 times or more, about 90 times or more, about 100 times or more, about 150 times or more, about 200 times or more, About 250 times or more, about 300 times or more, about 400 times or more, about 500 times or more, about 600 times or more, or about 700 times or more.
  • the content of RebA in the plant of the present invention is about 1.05 times or more the content of RebA in the Stevia plant that does not have the genetic characteristic of the present invention, Approximately 1.1 times or more, approximately 1.15 times or more, approximately 1.2 times or more, approximately 1.25 times or more, approximately 1.3 times or more, approximately 1.35 times or more, approximately 1.5 times or more, approximately 1.65 times or more, approximately 1.8 times or more, approximately 1.95 times or more, Approximately 2.1 times or more, approximately 2.25 times or more, approximately 2.4 times or more, approximately 2.55 times or more, approximately 2.7 times or more, approximately 2.85 times or more, approximately 3 times or more, approximately 3.15 times or more, approximately 3.3 times or more, approximately 3.5 times or more, About 3.7 times or more, about 3.9 times or more, about 4.1 times or more, about 4.3 times or more, about 4.5 times or more, or about 4.7 times or more.
  • the content of RebB in the plant of the present invention is about 1.05 times or more the content of RebB in the Stevia plant that does not have the genetic characteristic of the present invention, Approximately 1.15 times or more, approximately 1.25 times or more, approximately 1.35 times or more, approximately 1.5 times or more, approximately 1.65 times or more, approximately 1.8 times or more, approximately 2 times or more, approximately 2.25 times or more, approximately 2.5 times or more, approximately 3 times or more, Approximately 3.5 times or more, approximately 4 times or more, approximately 4.5 times or more, approximately 5 times or more, approximately 5.5 times or more, approximately 6 times or more, approximately 7 times or more, approximately 8 times or more, approximately 9 times or more, approximately 10 times or more, About 11 times or more, about 12 times or more, about 13 times or more, about 14 times or more, about 15 times or more, or about 16 times or more.
  • the content of RebF in the plant of the present invention is about 1.02 times or more the content of RebF in the Stevia plant that does not have the genetic characteristic of the present invention, Approximately 1.03 times or more, approximately 1.04 times or more, approximately 1.05 times or more, approximately 1.1 times or more, approximately 1.15 times or more, approximately 1.2 times or more, approximately 1.25 times or more, approximately 1.3 times or more, approximately 1.35 times or more, approximately 1.4 times or more, Approximately 1.45 times or more, approximately 1.5 times or more, approximately 1.6 times or more, approximately 1.8 times or more, approximately 2 times or more, approximately 2.2 times or more, approximately 2.4 times or more, approximately 2.6 times or more, approximately 2.8 times or more, approximately 3 times or more, About 3.2 times or more, about 3.4 times or more, about 3.6 times or more, about 3.8 times or more, about 4 times or more, or about 4.2 times or more.
  • the content of RebG in the plant of the present invention is about 1.2 times or more the content of RebG in the Stevia plant that does not have the genetic characteristic of the present invention, Approximately 1.3 times or more, approximately 1.4 times or more, approximately 1.5 times or more, approximately 2 times or more, approximately 2.5 times or more, approximately 3 times or more, approximately 3.5 times or more, approximately 4 times or more, approximately 4.5 times or more, approximately 5 times or more, About 6 times or more, about 7 times or more, about 8 times or more, about 9 times or more, about 10 times or more, about 12.5 times or more, about 15 times or more, about 17.5 times or more, about 20 times or more, about 22.5 times or more, About 25 times or more, about 30 times or more, about 35 times or more, about 40 times or more, about 45 times or more, or about 50 times or more.
  • the content of RebM in the plant of the present invention is about 1.05 times or more the content of RebM in the Stevia plant that does not have the genetic characteristic of the present invention, Approximately 1.1 times or more, approximately 1.15 times or more, approximately 1.2 times or more, approximately 1.3 times or more, approximately 1.4 times or more, approximately 1.5 times or more, approximately 1.7 times or more, approximately 2 times or more, approximately 2.5 times or more, approximately 3 times or more, Approximately 3.5 times or more, approximately 4 times or more, approximately 4.5 times or more, approximately 5 times or more, approximately 6 times or more, approximately 7 times or more, approximately 8 times or more, approximately 9 times or more, approximately 10 times or more, approximately 12 times or more, About 14 times or more, about 16 times or more, about 18 times or more, about 20 times or more, about 22 times or more, or about 24 times or more.
  • the content of steviol glycosides having a ⁇ -1,3-glucoside bond in the plant of the present invention is lower than that of the stevia plant not having the genetic characteristic of the present invention.
  • About 1.02 times or more, about 1.03 times or more, about 1.04 times or more, about 1.05 times or more, about 1.1 times or more, about 1.15 times or more the content of steviol glycosides having ⁇ -1,3-glucoside bonds in the body approximately 1.2 times or more, approximately 1.3 times or more, approximately 1.4 times or more, approximately 1.5 times or more, approximately 2 times or more, approximately 2.5 times or more, approximately 3 times or more, approximately 3.5 times or more, approximately 4 times or more, approximately 4.5 times or more , approximately 5 times or more, approximately 6 times or more, approximately 7 times or more, approximately 8 times or more, approximately 9 times or more, approximately 10 times or more, approximately 12.5 times or more, approximately 15 times or more, approximately 17.5 times or more, approximately 20 times or more
  • the content of RebD in the plant of the present invention is about 0.8 times or less than the content of RebD in the Stevia plant that does not have the genetic characteristic of the present invention, About 0.76 times or less, about 0.72 times or less, about 0.68 times or less, about 0.64 times or less, about 0.6 times or less, about 0.56 times or less, about 0.52 times or less, about 0.5 times or less, about 0.48 times or less, about 0.46 times or less, About 0.44 times or less, about 0.42 times or less, about 0.4 times or less, about 0.38 times or less, about 0.36 times or less, about 0.34 times or less, about 0.32 times or less, about 0.3 times or less, about 0.28 times or less, about 0.26 times or less, It is about 0.24 times or less, about 0.22 times or less, about 0.2 times or less, about 0.18 times or less, about 0.16 times or less, or about 0.14 times or less.
  • the content of RebE in the plant of the present invention is about 0.6 times or less than the content of RebE in a Stevia plant that does not have the genetic characteristic of the present invention, About 0.56 times or less, about 0.52 times or less, about 0.48 times or less, about 0.44 times or less, about 0.4 times or less, about 0.38 times or less, about 0.36 times or less, about 0.34 times or less, about 0.32 times or less, about 0.3 times or less, About 0.28 times or less, about 0.26 times or less, about 0.24 times or less, about 0.22 times or less, about 0.2 times or less, about 0.18 times or less, about 0.16 times or less, about 0.14 times or less, about 0.12 times or less, about 0.1 times or less, It is about 0.08 times or less, about 0.06 times or less, about 0.04 times or less, about 0.03 times or less, about 0.02 times or less, or about 0.01 times or less.
  • the content of RebN in the plant of the present invention is about 0.9 times or less than the content of RebN in a Stevia plant that does not have the genetic characteristic of the present invention, About 0.86 times or less, about 0.82 times or less, about 0.78 times or less, about 0.74 times or less, about 0.7 times or less, about 0.66 times or less, about 0.62 times or less, about 0.58 times or less, about 0.54 times or less, about 0.5 times or less, About 0.48 times or less, about 0.46 times or less, about 0.44 times or less, about 0.42 times or less, about 0.4 times or less, about 0.38 times or less, about 0.36 times or less, about 0.34 times or less, about 0.32 times or less, about 0.3 times or less, It is about 0.28 times or less, about 0.26 times or less, about 0.24 times or less, about 0.22 times or less, about 0.2 times or less, or about 0.18 times or less.
  • the content of stevioside in the plant of the present invention is about 0.8 times or less than the content of stevioside in a stevia plant that does not have the genetic characteristic of the present invention, About 0.75 times or less, about 0.7 times or less, about 0.65 times or less, about 0.6 times or less, about 0.55 times or less, about 0.5 times or less, about 0.45 times or less, about 0.4 times or less, about 0.35 times or less, about 0.3 times or less, About 0.28 times or less, about 0.26 times or less, about 0.24 times or less, about 0.22 times or less, about 0.2 times or less, about 0.18 times or less, about 0.16 times or less, about 0.14 times or less, about 0.12 times or less, about 0.1 times or less, It is about 0.08 times or less, about 0.06 times or less, about 0.05 times or less, about 0.04 times or less, about 0.03 times or less, or about 0.02 times or less.
  • the content of steviol glycosides that do not have ⁇ -1,3-glucosidic bonds in the plant of the present invention is higher than that of steviol glycosides that do not have the genetic characteristic of the present invention.
  • 0.66 times or less 0.62 times or less, 0.6 times or less, 0.56 times or less, 0.52 times or less, 0.48 times or less, 0.44 times or less, 0.4 times or less, 0.38 times or less, approximately 0.36 0.34 times or less, 0.32 times or less, 0.3 times or less, 0.28 times or less, 0.26 times or less, 0.24 times or less, 0.22 times or less, 0.2 times or less, 0.18 times or less, approximately 0.16 less than about 0.14 times, less than about 0.12 times, less than about 0.1 times, less than about 0.08 times, less than about 0.06 times, less than about 0.04 times, less than about 0.03 times, less than about 0.02 times, less than about 0.01 times.
  • the content ratio of any one of RebA, RebB, RebF, RebG, and RebM to any one of RebD, RebE, RebN, and stevioside in the plant of the present invention. is about 1.2 times or more, about 1.5 times or more, about 2 times or more, about 2.5 times or more, about 3 times or more, about 3.5 times or more, about 4 times or more, approximately 4.5 times or more, approximately 5 times or more, approximately 10 times or more, approximately 15 times or more, approximately 20 times or more, approximately 30 times or more, approximately 40 times or more, approximately 50 times or more, approximately 60 times or more, approximately 70 times or more, approximately 80 times or more, approximately 90 times or more, approximately 100 times or more, approximately 150 times or more, approximately 200 times or more, approximately 250 times or more, approximately 300 times or more, approximately 400 times or more, approximately 500 times or more, approximately 600 times or more or approximately 700 times or more.
  • the steviol glycoside having a ⁇ -1,3-glucoside bond versus the steviol glycoside having no ⁇ -1,3-glucoside bond in the plant of the present invention is about 1.2 times or more, about 1.5 times or more, about 2 times or more, about 2.5 times or more, about 3 times or more, about 3.5 times the above ratio in a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content ratio of steviol glycoside produced by UGT76G1 from the substrate steviol glycoside to the substrate steviol glycoside of UGT76G1 in the plant of the present invention is: About 1.2 times or more, about 1.5 times or more, about 2 times or more, about 3 times or more, about 4 times or more, about 5 times or more, about 6 times the above ratio in a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention or more, approximately 8 times or more, approximately 10 times or more, approximately 15 times or more, approximately 20 times or more, approximately 25 times or more, approximately 30 times or more, approximately 35 times or more, approximately 40 times or more, approximately 45 times or more, approximately 50 times or more, approximately 55 times or more, approximately 60 times or more, approximately 65 times or more, approximately 70 times or more, approximately 75 times or more, approximately 80 times or more, approximately 85 times or more, approximately 90 times or more, approximately 95 times or more, or approximately 100 times That's all.
  • the content ratio of RebM to RebD in the plant of the present invention is about 0.12 or more, about 0.16 or more, about 0.2 or more, about 0.24 or more, about 0.28 or more, about 0.32. or more, about 0.36 or more, about 0.4 or more, about 0.44 or more, about 0.48 or more, about 0.5 or more, about 0.525 or more, about 0.55 or more, about 0.575 or more, about 0.6 or more, about 0.625 or more, about 0.65 or more, about 0.675 or more, about 0.7 or more, about 0.725 or more, about 0.75 or more, about 0.775 or more, about 0.8 or more, about 0.825 or more, about 0.85 or more, about 0.875 or more, about 0.9 or more, about 0.925 or more, about 0.95 or more, about 0.975 or more, or about 1 That's all.
  • the content ratio of RebB to RebE in the plant of the present invention is about 0.17 or more, about 0.5 or more, about 1 or more, about 1.5 or more, about 2 or more, about 2.5. or more, about 3 or more, about 3.5 or more, about 4 or more, about 4.5 or more, about 5 or more, about 5.5 or more, about 6 or more, about 6.5 or more, about 7 or more, about 7.5 or more, about 8 or more, about 8.5 or more, About 9 or more, about 9.5 or more, about 10.1 or more, about 10.5 or more, about 11 or more, about 11.5 or more, about 12 or more, about 12.5 or more, about 13 or more, about 13.5 or more, about 14 or more, about 14.5 or more, or about 15 That's all.
  • the content ratio of RebG to RebE in the plant of the present invention is about 0.004 or more, about 0.05 or more, about 0.1 or more, about 0.2 or more, about 0.3 or more, about 0.4.
  • the content ratio of RebG to stevioside in the plant of the present invention is about 0.0007 or more, about 0.004 or more, about 0.006 or more, about 0.008 or more, about 0.01 or more, about 0.012.
  • the content of RebA in the plant of the present invention is about 2% by weight or more, about 2.15% by weight or more, about 2.3% by weight or more as a concentration in dry leaves. , about 2.45% by weight or more, about 2.6% by weight or more, about 2.75% by weight or more, about 2.9% by weight or more, about 3.05% by weight or more, about 3.2% by weight or more, about 3.35% by weight or more, about 3.5% by weight or more, about 3.65 weight% or more, about 3.8 weight% or more, about 4 weight% or more, about 4.2 weight% or more, about 4.4 weight% or more, about 4.6 weight% or more, about 4.8 weight% or more, about 5 weight% or more, about 5.25 weight% % or more, about 5.5% by weight or more, about 5.75% by weight or more, about 6% by weight or more, about 6.25% by weight or more, about 6.5% by weight or more, about 6.75% by weight or more, about 7% by weight or
  • the content of RebB in the plant of the present invention is about 0.04% by weight or more, about 0.044% by weight or more, about 0.048% by weight or more as a concentration in dry leaves. , about 0.052 weight% or more, about 0.056 weight% or more, about 0.06 weight% or more, about 0.064 weight% or more, about 0.068 weight% or more, about 0.072 weight% or more, about 0.076 weight% or more, about 0.08 weight% or more, about 0.084 weight% or more, about 0.088 weight% or more, about 0.092 weight% or more, about 0.096 weight% or more, about 0.1 weight% or more, about 0.105 weight% or more, about 0.11 weight% or more, about 0.115 weight% or more, about 0.12 weight% % or greater, about 0.125% or greater, about 0.13% or greater, about 0.135% or greater, about 0.14% or greater, about 0.145% or greater, about 0.15% or greater, or about 0.15% or greater, or about 0.1
  • the content of RebF in the plant of the present invention is about 0.06% by weight or more, about 0.064% by weight or more, about 0.068% by weight or more as a concentration in dry leaves. , about 0.072 weight% or more, about 0.076 weight% or more, about 0.08 weight% or more, about 0.084 weight% or more, about 0.088 weight% or more, about 0.092 weight% or more, about 0.096 weight% or more, about 0.1 weight% or more, about 0.105 weight% or more, about 0.11 weight% or more, about 0.115 weight% or more, about 0.12 weight% or more, about 0.125 weight% or more, about 0.13 weight% or more, about 0.135 weight% or more, about 0.14 weight% or more, about 0.145 weight% % or more, about 0.15% by weight or more, about 0.155% by weight or more, about 0.16% by weight or more, about 0.17% by weight or more, about 0.18% by weight or more, about 0.19%
  • the content of RebG in the plant of the present invention is about 0.001% by weight or more, about 0.002% by weight or more, about 0.003% by weight or more as a concentration in dry leaves. , about 0.004% by weight or more, about 0.005% by weight or more, about 0.006% by weight or more, about 0.007% by weight or more, about 0.008% by weight or more, about 0.009% by weight or more, about 0.01% by weight or more, about 0.011% by weight or more, about 0.012 weight% or more, about 0.013 weight% or more, about 0.014 weight% or more, about 0.016 weight% or more, about 0.018 weight% or more, about 0.02 weight% or more, about 0.022 weight% or more, about 0.024 weight% or more, about 0.026 weight% % or more, about 0.028 weight % or more, about 0.03 weight % or more, about 0.032 weight % or more, about 0.034 weight % or more,
  • the content of RebM in the plant of the present invention is about 0.15% by weight or more, about 0.17% by weight or more, about 0.19% by weight or more as a concentration in dry leaves. , about 0.21 weight% or more, about 0.23 weight% or more, about 0.25 weight% or more, about 0.27 weight% or more, about 0.29 weight% or more, about 0.31 weight% or more, about 0.33 weight% or more, about 0.35 weight% or more, about 0.37 weight% or more, about 0.39 weight% or more, about 0.41 weight% or more, about 0.43 weight% or more, about 0.45 weight% or more, about 0.47 weight% or more, about 0.49 weight% or more, about 0.51 weight% or more, about 0.54 weight% % or more, about 0.57% by weight or more, about 0.6% by weight or more, about 0.63% by weight or more, about 0.66% by weight or more, about 0.69% by weight or more, about 0.72% by weight or more, or about 0.57% by weight or more, about 0.6% by
  • the content of steviol glycosides having a ⁇ -1,3-glucoside bond in the plant of the present invention is about 0.001% by weight as a concentration in dry leaves. or more, about 0.002 weight% or more, about 0.005 weight% or more, about 0.01 weight% or more, about 0.02 weight% or more, about 0.04 weight% or more, about 0.06 weight% or more, about 0.08 weight% or more, about 0.1 weight% or more, About 0.15% by weight or more, about 0.2% by weight or more, about 0.3% by weight or more, about 0.4% by weight or more, about 0.5% by weight or more, about 0.6% by weight or more, about 0.7% by weight or more, about 0.8% by weight or more, about 1 weight% or more, about 1.5 weight% or more, about 2 weight% or more, about 2.5 weight% or more, about 3 weight% or more, about 3.5 weight% or more, about 4 weight% or more, about 5 weight% or more, about 6 weight% or about 7%
  • the content of RebD in the plant of the present invention is about 1.65% by weight or less, about 1.6% by weight or less, about 1.55% by weight or less as a concentration in dry leaves. , about 1.5% by weight or less, about 1.45% by weight or less, about 1.4% by weight or less, about 1.35% by weight or less, about 1.3% by weight or less, about 1.25% by weight or less, about 1.2% by weight or less, about 1.15% by weight or less, about 1.1% by weight or less, about 1.05% by weight or less, about 1% by weight or less, about 0.95% by weight or less, about 0.9% by weight or less, about 0.85% by weight or less, about 0.8% by weight or less, about 0.75% by weight or less, about 0.7% by weight % or less, about 0.65% by weight or less, about 0.6% by weight or less, about 0.55% by weight or less, about 0.5% by weight or less, about 0.45% by weight or less, about 0.4% by weight or less, or about
  • the content of RebE in the plant of the present invention is about 0.34% by weight or less, about 0.32% by weight or less, about 0.3% by weight or less as a concentration in dry leaves. , about 0.28% by weight or less, about 0.26% by weight or less, about 0.24% by weight or less, about 0.22% by weight or less, about 0.2% by weight or less, about 0.18% by weight or less, about 0.16% by weight or less, about 0.14% by weight or less, about 0.12 weight% or less, about 0.1 weight% or less, about 0.08 weight% or less, about 0.06 weight% or less, about 0.05 weight% or less, about 0.04 weight% or less, about 0.03 weight% or less, about 0.02 weight% or less, about 0.015 weight% % or less, about 0.01% by weight or less, about 0.009% by weight or less, about 0.008% by weight or less, about 0.007% by weight or less, about 0.006% by weight or less, about 0.005%
  • the content of RebN in the plant of the present invention is about 0.35% by weight or less, about 0.33% by weight or less, about 0.31% by weight or less as a concentration in dry leaves. , about 0.29% by weight or less, about 0.27% by weight or less, about 0.25% by weight or less, about 0.24% by weight or less, about 0.23% by weight or less, about 0.22% by weight or less, about 0.21% by weight or less, about 0.2% by weight or less, about 0.19 weight% or less, about 0.18 weight% or less, about 0.17 weight% or less, about 0.16 weight% or less, about 0.15 weight% or less, about 0.14 weight% or less, about 0.13 weight% or less, about 0.12 weight% or less, about 0.11 weight% % or less, about 0.1% by weight or less, about 0.09% by weight or less, about 0.08% by weight or less, about 0.07% by weight or less, about 0.06% by weight or less, about 0.055%
  • the content of stevioside in the plant of the present invention is about 2.5% by weight or less, about 2.4% by weight or less, about 2.3% by weight or less as a concentration in dry leaves. , about 2.2% by weight or less, about 2.1% by weight or less, about 2% by weight or less, about 1.9% by weight or less, about 1.8% by weight or less, about 1.7% by weight or less, about 1.6% by weight or less, about 1.5% by weight or less, about 1.4 weight% or less, about 1.3 weight% or less, about 1.2 weight% or less, about 1.1 weight% or less, about 1 weight% or less, about 0.9 weight% or less, about 0.8 weight% or less, about 0.7 weight% or less, about 0.6 weight% % or less, about 0.5% by weight or less, about 0.45% by weight or less, about 0.4% by weight or less, about 0.35% by weight or less, about 0.3% by weight or less, about 0.25% by weight or less, or about 0.2% by weight or
  • the content of steviol glycosides without ⁇ -1,3-glucosidic bonds in the plants of the present invention is about 2.5% by weight as a concentration in dry leaves. % or less, about 2.2% by weight or less, about 2% by weight or less, about 1.8% by weight or less, about 1.6% by weight or less, about 1.4% by weight or less, about 1.2% by weight or less, about 1% by weight or less, about 0.9% by weight or less , about 0.8% by weight or less, about 0.7% by weight or less, about 0.6% by weight or less, about 0.5% by weight or less, about 0.4% by weight or less, about 0.3% by weight or less, about 0.2% by weight or less, about 0.1% by weight or less, about 0.08 weight% or less, about 0.06 weight% or less, about 0.04 weight% or less, about 0.02 weight% or less, about 0.015 weight% or less, about 0.01 weight% or less, about 0.008 weight% or less, about 0.006 weight% or less
  • the content ratio of any one of RebA, RebB, RebF, RebG, and RebM to any one of RebD, RebE, RebN, and stevioside in the plant of the present invention. is about 0.0007 or more, about 0.004 or more, about 0.01 or more, about 0.02 or more, about 0.03 or more, about 0.05 or more, about 0.08 or more, about 0.091 or more, about 0.095 or more, about 0.1 or more, about 0.2 or more, about 0.3 or more, About 0.5 or more, about 0.8 or more, about 1 or more, about 1.05 or more, about 1.07 or more, about 1.1 or more, about 1.2 or more, about 1.5 or more, about 2 or more, about 3 or more, about 4 or more, about 5 or more, about 8 or more, about 10 or more, about 10.5 or more, about 11 or more, about 11.5 or more, about 12 or more, about 12.5 or more, about 13 or more, about 13.5 or more, about 14
  • the steviol glycoside having a ⁇ -1,3-glucoside bond versus the steviol glycoside having no ⁇ -1,3-glucoside bond in the plant of the present invention is about 0.0007 or more, about 0.004 or more, about 0.01 or more, about 0.02 or more, about 0.03 or more, about 0.05 or more, about 0.08 or more, about 0.091 or more, about 0.095 or more, about 0.1 or more, about 0.2 or more, about 0.3 or more, about 0.5 or more, about 0.8 or more, about 1 or more, about 1.05 or more, about 1.07 or more, about 1.1 or more, about 1.2 or more, about 1.5 or more, about 2 or more, about 3 or more, about 4 or more, about 5 or more , about 8 or more, about 10 or more, about 10.5 or more, about 11 or more, about 11.5 or more, about 12 or more, about 12.5 or more, about 13 or more, about 13.5 or more
  • the content ratio of steviol glycoside produced by UGT76G1 from the substrate steviol glycoside to the substrate steviol glycoside of UGT76G1 in the plant of the present invention is: About 0.15 or more, about 0.3 or more, about 0.5 or more, about 0.7 or more, about 0.9 or more, about 1 or more, about 1.5 or more, about 2 or more, about 3 or more, about 5 or more, about 7 or more, about 10 or more, about 15 or more, about 16 or more, about 17 or more, about 20 or more, about 25 or more, about 30 or more, about 35 or more, about 40 or more, about 45 or more, about 50 or more, about 51 or more, about 55 or more, about 60 or more, about 65 or more, about 66 or more, about 70 or more, about 75 or more, or about 80 or more.
  • the steviol glycoside having a ⁇ -1,3-glucosidic bond does not include RebD and RebN. In some embodiments, the steviol glycoside with ⁇ -1,3-glucosidic bonds has two ⁇ -1,3-glucosidic bonds. In another embodiment, the steviol glycoside having a ⁇ -1,3-glucosidic bond has one ⁇ -1,3-glucosidic bond. In a preferred embodiment, the steviol glycoside having a ⁇ -1,3-glucosidic linkage is selected from the group consisting of RebA, RebB, RebF, RebH, RebG, RebI, RebJ, RebM, RebO, RebQ and dulcoside B. In certain embodiments, the steviol glycoside having a ⁇ -1,3-glucosidic bond is selected from the group consisting of RebA, RebB, RebF, RebG and RebM.
  • the steviol glycoside without ⁇ -1,3-glucosidic linkages is selected from the group consisting of steviol monoside, steviolbioside, rubusoside, stevioside, RebE, and dulcoside A. In certain embodiments, the steviol glycoside without ⁇ -1,3-glucosidic linkages is selected from the group consisting of stevioside and RebE.
  • the substrate steviol glycoside of UGT76G1 is selected from steviol monoside, rubusoside, steviolbioside, stevioside, RebA, RebD, RebE, and RebG.
  • "steviol glycoside produced by UGT76G1 from the substrate steviol glycoside” is steviol-1,3-bioside for steviol monoside, RebG for rubusoside, and steviol-1,3-bioside for steviol bioside.
  • Steviol glycosides are extracted in the form of an extract by reacting fresh or dried leaves of the plant of the present invention with an appropriate solvent (an aqueous solvent such as water or an organic solvent such as alcohol, ether, and acetone).
  • an appropriate solvent an aqueous solvent such as water or an organic solvent such as alcohol, ether, and acetone.
  • For extraction conditions, etc. refer to the method described in Ohta et al., J. Appl. Glycosci., Vol. 57, No. 3, 199-209 (2010) or WO2010/038911, or the method described in Examples below. can do.
  • the extract obtained in this way was subjected to ethyl acetate and other organic solvent:water gradients, high performance liquid chromatography (HPLC), gas chromatography, time-of-flight mass spectrometry (TOF-MS), ultrahigh-speed
  • HPLC high performance liquid chromatography
  • TOF-MS time-of-flight mass spectrometry
  • UPLC liquid chromatography
  • individual steviol glycosides such as steviol glycosides having ⁇ -1,3-glucoside bonds, RebA, RebB, RebF, RebG, RebM, etc. Can be purified.
  • the content of steviol glycosides can be measured by the method described in Ohta et al. or WO2010/038911, or the method described in Examples below. Specifically, it can be measured, for example, by sampling fresh leaves from the Stevia plant of the present invention and performing LC-MS/MS.
  • the plant of the present invention includes not only the whole plant, but also plant organs (e.g., leaves, petals, stems, roots, seeds, etc.), plant tissues (e.g., epidermis, phloem, parenchyma, xylem, vascular bundles, palisade, etc.). tissue, spongy tissue, etc.) or various forms of plant cells (eg, suspension cultured cells), protoplasts, leaf sections, callus, and the like. Further, the leaves may be the dried leaves mentioned above.
  • plant organs e.g., leaves, petals, stems, roots, seeds, etc.
  • plant tissues e.g., epidermis, phloem, parenchyma, xylem, vascular bundles, palisade, etc.
  • tissue e.g., spongy tissue, etc.
  • various forms of plant cells eg, suspension cultured cells
  • protoplasts e.g, suspension cultured cells
  • the plant of the present invention may also include tissue culture or plant cultured cells. This is because a plant body can be regenerated by culturing such tissue culture or plant cultured cells.
  • tissue culture or plant cultured cells examples include, but are not limited to, embryos, meristematic cells, pollen, leaves, roots, root tips, petals, protoplasts, leaf sections, and callus. It's not a thing.
  • the present invention provides a method for producing a plant having chemical characteristics (a) to (r), which comprises a step of crossing the Stevia plant of the present invention with a second Stevia plant.
  • a method for producing a Stevia plant having at least one of the following hereinafter sometimes referred to as "the production method of the present invention”
  • Stevia plants produced by this method can have the same phenotypic and genetic characteristics as the plants of the present invention. Details of the individual chemical characteristics of the plant obtained by the production method of the present invention are as described above for the plant of the present invention.
  • crossing refers to crossbreeding a plant of the present invention (first generation (S1)) and a second plant (S1) of the offspring (of the present invention). It means obtaining a plant body (second generation (S2)) produced by the production method of. As a hybridization method, backcrossing is preferable.
  • Backcrossing means to obtain a plant body of the present invention and a second generation The seedlings (S2) born between the plant and the plant are further crossed with the plant of the present invention (that is, the plant having the genetic characteristics of the present invention) (S1) to obtain the genetic characteristics of the present invention.
  • the plants of the present invention can also be produced by self-fertilization. Self-fertilization can be carried out by self-pollinating the pistils of the plant of the present invention with pollen from the stamens of the plant of the present invention.
  • the plant produced by the production method of the present invention is further treated as a third Stevia plant.
  • crossing it is also possible to produce a Stevia plant having the same phenotype as the plant of the present invention.
  • the plant of the present invention can also be produced by regenerating the plant by culturing the tissue culture or plant cultured cells described above.
  • the culture conditions are the same as those for culturing tissue culture of wild-type stevia plants or cultured plant cells, and are known (Protocols for In Vitro cultures and secondary metabolite analysis of aromatic and medicinal plants, Methods in molecular biology, vol. 1391, pp113-123).
  • the plant of the present invention can be produced by modifying the genome of a Stevia plant to acquire the genetic characteristics of the present invention.
  • the genetic characteristics of the present invention may be acquired by genetic recombinant techniques (eg, genome editing, etc.) or by non-genetic recombinant techniques such as those described above.
  • Non-genetically recombinant methods include mutagenic treatments such as treatment with a mutagenic agent and treatment with radiation or light irradiation, as described in the plant section of the present invention.
  • Screening method for plants of the present invention Plants of the present invention and plants having the same phenotypic and/or genetic characteristics as the plants of the present invention are used to detect genetic characteristics of the present invention from tissues of the plants. Screening can be done by Here, “screening” means distinguishing between plants of the present invention and other plants, and selecting plants of the present invention. Therefore, in another aspect, the present invention provides chemical characteristics (a) to ( Provided is a method for screening Stevia plants having at least one of r) (hereinafter sometimes referred to as the "screening method of the present invention").
  • the genetic characteristic to be detected is any one of genetic characteristics (1) to (3). In some embodiments, the genetic characteristics to be detected are genetic characteristics (1) and (2). In some embodiments, the genetic characteristics to be detected are genetic characteristics (1) and (3). In some embodiments, the genetic characteristics to be detected are genetic characteristics (2) and (3). In some embodiments, the genetic characteristics to be detected are all of genetic characteristics (1) to (3).
  • the screening method of the present invention may further include the step of selecting plants in which the presence of at least one genetic characteristic described above has been detected from among the test plants.
  • the presence of the genetic characteristics of the invention can be determined by, for example: (I) An allele in which the base at the position corresponding to position 184 of SEQ ID NO: 1 is G (for example, an allele containing the base sequence of SEQ ID NO: 10, 11, 12, or 13), (II) an allele in which the base at the position corresponding to position 170 of SEQ ID NO: 2 is C (for example, an allele containing the base sequence of SEQ ID NO: 14, 15, 16, or 17), and (III) An allele in which the base corresponding to position 92 of SEQ ID NO: 3 is C (for example, an allele containing the base sequence of SEQ ID NO: 18, 19, 20, or 21) Detecting the presence of an allele selected from the group consisting of; and/or (i) It can be determined by detecting the absence of an allele in which the base corresponding to position 92 of SEQ ID NO: 3 is T (for example, an allele containing the base sequence of SEQ ID NO: 3, 46, 47, or 48).
  • the absence of a genetic feature of the invention may be due to, for example: (I) An allele in which the base at the position corresponding to position 184 of SEQ ID NO: 1 is G (for example, an allele containing the base sequence of SEQ ID NO: 10, 11, 12, or 13), (II) an allele in which the base at the position corresponding to position 170 of SEQ ID NO: 2 is C (for example, an allele containing the base sequence of SEQ ID NO: 14, 15, 16, or 17), and (III) Absence of an allele selected from the group consisting of alleles in which the base at the position corresponding to position 92 of SEQ ID NO: 3 is C (for example, an allele containing the base sequence of SEQ ID NO: 18, 19, 20, or 21) detection and/or (i) It can be determined by detecting the presence of an allele in which the base corresponding to position 92 of SEQ ID NO: 3 is T (for example, an allele containing the base sequence of SEQ ID NO: 3, 46, 47, or 48).
  • Specific examples of the method for detecting genetic characteristics of the present invention include PCR method, TaqMan PCR method, sequencing method, microarray method, invader method, TILLING method, RAD method, RFLP method, PCR-SSCP method, AFLP method, SSLP method.
  • CAPS method CAPS method, dCAPS method, ASO method, ARMS method, DGGE method, CCM method, DOL method, MALDI-TOF/MS method, TDI method, padlock probe method, molecular beacon method, DASH method, UCAN method, ECA method, PINPOINT method, PROBE method, VSET method, Survivor assay, Sniper assay, Luminex assay, GOOD method, LCx method, SNaPshot method, Mass ARRAY method, pyrosequence method, SNP-IT method, melting curve analysis method, etc. It is not limited to.
  • the genetic feature (1) of the present invention can be detected, for example, by the dCAPS method using the following primer set and restriction enzymes.
  • Primer set A forward primer containing any continuous sequence of 15 or more bases located at positions 1 to 211 of SEQ ID NO: 49 or 50 (for example, SEQ ID NO: 22) and a continuous sequence of 15 to 36 bases from the 3' end of SEQ ID NO: 23.
  • ⁇ Restriction enzyme EcoRV.
  • the genetic feature (2) of the present invention can be detected, for example, by the dCAPS method using the following primer set and restriction enzymes.
  • Primer set A forward primer containing any continuous sequence of 15 or more bases located at positions 1 to 204 of SEQ ID NO: 51 or 52 (for example, SEQ ID NO: 28) and a continuous sequence of 15 to 36 bases from the 3' end of SEQ ID NO: 29.
  • the genetic feature (3) of the present invention can be detected, for example, by the dCAPS method using the following primer set and restriction enzymes.
  • Primer set A forward primer containing any continuous sequence of 15 or more bases located at positions 1 to 246 of SEQ ID NO: 53 or 54 (e.g., SEQ ID NO: 34) and a continuous sequence of 15 to 36 bases from the 3' end of SEQ ID NO: 35.
  • the primer sequence can be optimized within the range that satisfies the above conditions.
  • optimization of primer design see, for example, Sambrook and Russell, “Molecular Cloning: A Laboratory Manual” 3rd Edition (2001), Cold Spring Harbor Laboratory Press, etc.
  • Each of the above primers may have a length of 15 to 50 bases, 18 to 48 bases, 20 to 45 bases, 30 to 40 bases, etc.
  • Restriction enzymes corresponding to each primer set also include other enzymes that recognize the same sequence and cleave the same site as the above-mentioned enzymes, or isoschizomers of the above-mentioned enzymes.
  • the genetic characteristics (1) to (3) of the present invention can be detected, for example, by the dCAPS method using a primer set having the following sequence and a restriction enzyme.
  • the screening method of the present invention determines the steviol glycoside content (e.g., RebA, RebB, RebD, RebE, RebF, RebG, RebM , RebN and/or stevioside content). Measurement of steviol glycoside content is as follows: 1. It is as described in the section of the Stevia plant. Furthermore, in this embodiment, among the test Stevia plants in which the genetic characteristics of the present invention have been detected, an individual having a high degree of at least one of the chemical characteristics (a) to (r) is selected, and this is combined with other plants.
  • the screening method of the present invention may be applied to the seedlings obtained by crossing with Stevia plants. Therefore, the screening method of the present invention may include one or more of the following steps.
  • individuals with a high degree of chemical characteristics include individuals with a high content ratio of target steviol glycosides, and chemical characteristics (e). ) to (j) mean individuals with a high content of the target steviol glycoside, and chemical characteristics (k) to (o) mean individuals with a low content of the target steviol glycoside. .
  • the individuals with a high degree of chemical characteristics to be selected are, for example, the top 50%, the top 40% of the test Stevia plants in which the genetic characteristics of the present invention have been detected in terms of the degree of the chemical characteristics, It may be the top 30%, top 20%, top 10%, top 5%, top 4%, top 3%, top 2%, top 1%, etc. Also, other stevia plants to be crossed may or may not contain the genetic characteristics of the present invention. In the above embodiments, steps (iv) to (vii) can be repeated multiple times. In this way, Stevia plants with a higher degree of chemical characteristics can be screened.
  • the test Stevia plant may be a natural plant or a non-genetically modified plant.
  • For non-genetically modified plants 1. It is as described in the section of the Stevia plant.
  • the test stevia plants may include mutagenic stevia plants and their progeny plants.
  • mutagenesis treatment 1. This is as described in the section on Stevia plants, and includes treatment with mutagenic agents, treatment with radiation or light irradiation, etc.
  • the present invention also provides the primer sets and combinations thereof described above, for example, the primer sets and combinations thereof described in Table 1 above.
  • the present invention further provides a primer set capable of amplifying a region having a base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to 3, 10, 14, and 18 by PCR, for example, a forward primer containing the base sequence of SEQ ID NO: 4. and a reverse primer containing the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 5, a primer set of a forward primer containing the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 6, and a reverse primer containing the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 7, a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 8. and a reverse primer containing the base sequence of SEQ ID NO: 9, as well as combinations of these primer sets.
  • the present invention provides probes (hereinafter sometimes referred to as "probes of the present invention") that can detect the presence and/or absence of the genetic characteristics of the present invention.
  • the probes of the invention may have structures suitable for various methods of detecting the presence and/or absence of the genetic characteristics of the invention (eg, real-time PCR methods such as TaqMan PCR).
  • the probe of the present invention may contain a base sequence that is complementary to a portion of the genome that includes a site related to the genetic characteristic of the present invention.
  • Non-limiting examples of such probes include those containing sequences complementary to base sequences selected from SEQ ID NOs: 11-13, 15-17, 19-21 and 40-48.
  • SEQ ID NOs: 11 to 13, 15 to 17, and 19 to 21 are specific to the alleles related to the genetic features of the present invention
  • SEQ ID NOs: 40 to 48 are specific to the alleles related to the genetic features of the present invention. Specific to an allele that is not an allele.
  • SEQ ID NOS: 11 to 13 are specific to the allele according to the genetic feature (1) of the present invention
  • SEQ ID NOs: 15 to 17 are specific to the allele related to the genetic feature (2) of the present invention
  • SEQ ID NOS: 19 to 21 are specific to the allele related to genetic feature (3) of the present invention.
  • SEQ ID NOs: 40 to 42 are specific to alleles that are not alleles according to the genetic feature (1) of the present invention
  • SEQ ID NOs: 43 to 45 are specific to alleles that are not alleles according to the genetic feature (2) of the present invention
  • SEQ ID NOs: 46 to 48 are specific to alleles that are not alleles according to genetic feature (3) of the present invention.
  • the presence of the genetic feature of the present invention can be detected by detection of an allele related to the genetic feature of the present invention, and the absence of the genetic feature of the present invention can be detected by the non-detection of an allele related to the genetic feature of the present invention. It can be detected by Furthermore, the presence of the genetic feature (3) of the present invention can also be detected by non-detection of an allele that is not an allele related to the genetic feature (3) of the present invention. The absence of can also be detected by detecting an allele that is not the allele according to genetic feature (3) of the present invention.
  • the probe of the present invention preferably has a label.
  • labels include fluorescent labels, luminescent labels, radioactive labels, dyes, enzymes, quenchers, moieties for binding detectable labels, and the like.
  • the probe of the present invention has a polynucleotide comprising a base sequence complementary to a sequence selected from SEQ ID NOs: 11-13, 15-17, 19-21, and 40-48, and a label.
  • the present invention also provides a kit containing the above primer set and the corresponding restriction enzyme.
  • the kit of the present invention includes a primer set including the combination of forward primer and reverse primer listed in Table 1 above, and a corresponding restriction enzyme.
  • the present invention also includes a primer set capable of amplifying a region having a base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 3, 10, 14, and 18 by PCR, and the corresponding probe of the present invention.
  • a kit capable of amplifying a region having a base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 3, 10, 14, and 18 by PCR, and the corresponding probe of the present invention.
  • primer sets, probes, and kits can be used to detect the genetic characteristics of the present invention, and can be used in the screening method of the present invention.
  • These primer sets and kits also include instructions including instructions regarding the detection of the genetic characteristics of the present invention and the screening methods of the present invention, such as instructions for use, and site information containing information regarding how to use them (e.g. , URL, two-dimensional code), a medium (for example, a flexible disk, CD, DVD, Blu-ray disc, memory card, USB memory), etc., on which information related to usage is recorded.
  • the invention provides at least one of the chemical characteristics (a) to (r), including a reagent for detecting the presence and/or absence of at least one of the genetic characteristics (1) to (3).
  • a Stevia plant screening kit having one of the following.
  • Reagents may include primers and/or probes for use in the CAPS method, dCAPS method, or TaqMan PCR method.
  • the reagent for detecting the presence and/or absence of at least one of genetic characteristics (1) to (3) is a reagent for detecting the presence and/or absence of at least one of genetic characteristics (1) to (3) described above.
  • a primer set that amplifies a site related to at least one of ⁇ (3) for example, a site containing a sequence selected from SEQ ID NOs: 10 to 21
  • genetic characteristics (1) to (3) This includes a combination with a probe having a complementary base sequence to such a site (for example, a site containing a sequence selected from SEQ ID NOs: 11-13, 15-17, and 19-21).
  • a method for producing an extract derived from a plant and a product using the extract in a further embodiment of the present invention, a plant of the present invention, a Stevia plant selected by the screening method of the present invention, or a product produced by the production method of the present invention the following chemical characteristics (a') to ( r') (hereinafter sometimes referred to as "the method for producing an extract of the present invention") is provided.
  • a' The content ratio of RebM to RebD is higher than that of an extract of a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content ratio of RebB to RebE is higher than that of an extract of a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content ratio of RebG to RebE is higher than that of an extract of a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content ratio of RebG to stevioside is higher than that of an extract of a stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content of RebA is higher than that of an extract of a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content of RebB is higher than that of an extract of a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content of RebF is higher than that of an extract of a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content of RebG is higher than that of an extract of a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content of RebM is higher than that of an extract of a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content of steviol glycosides having ⁇ -1,3-glucoside bonds is higher than that of extracts of Stevia plants that do not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content of RebD is lower than that of an extract of a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the content of RebE is lower than that of an extract of a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • the plant of the present invention the Stevia plant selected by the screening method of the present invention, or the Stevia plant produced by the production method of the present invention, or the seeds and leaves of the plant (for example, dried leaves or fresh leaves) ), a tissue, a tissue culture or a cell, an extract having at least one of the chemical characteristics (a') to (r') (hereinafter sometimes referred to as "extract of the present invention") is provided.
  • extract of the present invention is preferably produced by the method for producing an extract of the present invention.
  • the extract of the present invention may be unpurified (unpurified extract or crude extract) or purified (purified extract).
  • the steviol glycosides produced by the method for producing steviol glycosides of the present invention are not particularly limited, and include, for example, RebA, RebB, RebC, RebD, RebE, RebF, RebG, RebI, RebJ, RebM, RebN, RebO, Examples include RebQ, stevioside, steviolbioside, steviol monoside, dulcoside A, dulcoside B, rubusoside, and the like.
  • the steviol glycoside is a steviol glycoside having a ⁇ -1,3-glucoside bond.
  • the steviol glycoside is present in a higher content or content ratio in the plant of the present invention than in a Stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention.
  • said steviol glycosides are selected from RebA, RebB, RebF, RebG, RebM and combinations thereof.
  • the content ratio of RebG to RebE in the extract of the present invention is about 2 times or more, about 2.5 times or more, about 3 times the ratio in the control extract. or more, approximately 3.5 times or more, approximately 4 times or more, approximately 4.5 times or more, approximately 5 times or more, approximately 10 times or more, approximately 15 times or more, approximately 20 times or more, approximately 25 times or more, approximately 30 times or more, approximately 40 times or more, approximately 50 times or more, approximately 60 times or more, approximately 70 times or more, approximately 80 times or more, approximately 90 times or more, approximately 100 times or more, approximately 150 times or more, approximately 200 times or more, approximately 250 times or more, approximately 300 times or more, about 400 times or more, about 500 times or more, about 600 times or more, or about 700 times or more.
  • the content ratio of RebG to stevioside in the extract of the present invention is about 1.5 times or more, about 2 times or more, about 2.5 times the ratio in the control extract. or more, approximately 3 times or more, approximately 3.5 times or more, approximately 4 times or more, approximately 4.5 times or more, approximately 5 times or more, approximately 10 times or more, approximately 15 times or more, approximately 20 times or more, approximately 30 times or more, approximately 40 times or more, approximately 50 times or more, approximately 60 times or more, approximately 70 times or more, approximately 80 times or more, approximately 90 times or more, approximately 100 times or more, approximately 150 times or more, approximately 200 times or more, approximately 250 times or more, approximately 300 times or more, about 400 times or more, about 500 times or more, about 600 times or more, or about 700 times or more.
  • the content of RebA in the extract of the present invention is about 1.05 times or more, about 1.1 times or more, about 1.15 times the content of RebA in the control extract. or more, approximately 1.2 times or more, approximately 1.25 times or more, approximately 1.3 times or more, approximately 1.35 times or more, approximately 1.5 times or more, approximately 1.65 times or more, approximately 1.8 times or more, approximately 1.95 times or more, approximately 2.1 times or more, approximately 2.25 times or more, approximately 2.4 times or more, approximately 2.55 times or more, approximately 2.7 times or more, approximately 2.85 times or more, approximately 3 times or more, approximately 3.15 times or more, approximately 3.3 times or more, approximately 3.5 times or more, approximately 3.7 times or more, approximately 3.9 times or more, approximately 4.1 times or more, approximately 4.3 times or more, approximately 4.5 times or more, or approximately 4.7 times or more.
  • the content of RebB in the extract of the present invention is about 1.05 times or more, about 1.15 times or more, about 1.25 times the content of RebB in the control extract. or more, approximately 1.35 times or more, approximately 1.5 times or more, approximately 1.65 times or more, approximately 1.8 times or more, approximately 2 times or more, approximately 2.25 times or more, approximately 2.5 times or more, approximately 3 times or more, approximately 3.5 times or more, approximately 4 times or more, approximately 4.5 times or more, approximately 5 times or more, approximately 5.5 times or more, approximately 6 times or more, approximately 7 times or more, approximately 8 times or more, approximately 9 times or more, approximately 10 times or more, approximately 11 times or more, approximately 12 times or more, about 13 times or more, about 14 times or more, about 15 times or more, or about 16 times or more.
  • the content of steviol glycosides with ⁇ -1,3-glucosidic linkages in the extract of the invention is lower than the ⁇ -1,3- About 1.02 times or more, about 1.03 times or more, about 1.04 times or more, about 1.05 times or more, about 1.1 times or more, about 1.15 times or more, about 1.2 times or more, about 1.3 times the content of steviol glycosides having glucoside bonds.
  • the content of RebD in the extract of the invention is about 0.8 times or less, about 0.76 times or less, about 0.72 times the content of RebD in the control extract. Less than or equal to approximately 0.68 times, approximately 0.64 times or less, approximately 0.6 times or less, approximately 0.56 times or less, approximately 0.52 times or less, approximately 0.5 times or less, approximately 0.48 times or less, approximately 0.46 times or less, approximately 0.44 times or less, approximately 0.42 times Less than about 0.4 times, less than about 0.38 times, less than about 0.36 times, less than about 0.34 times, less than about 0.32 times, less than about 0.3 times, less than about 0.28 times, less than about 0.26 times, less than about 0.24 times, less than about 0.22 times or less, about 0.2 times or less, about 0.18 times or less, about 0.16 times or less, or about 0.14 times or less.
  • the content of RebN in the extract of the invention is about 0.9 times or less, about 0.86 times or less, about 0.82 times the content of RebN in the control extract. Less than or equal to approximately 0.78 times, less than or equal to approximately 0.74 times, less than or equal to approximately 0.7 times, less than or equal to approximately 0.66 times, less than or equal to approximately 0.62 times, less than or equal to approximately 0.58 times, less than or equal to approximately 0.54 times, less than or equal to approximately 0.5 times, less than or equal to approximately 0.48 times, approximately 0.46 times Below, about 0.44 times or less, about 0.42 times or less, about 0.4 times or less, about 0.38 times or less, about 0.36 times or less, about 0.34 times or less, about 0.32 times or less, about 0.3 times or less, about 0.28 times or less, about 0.26 times or less, about 0.24 times or less, about 0.22 times or less, about 0.2 times or less, or about 0.18 times or less.
  • the content of stevioside in the extract of the invention is about 0.8 times or less, about 0.75 times or less, about 0.7 times the content of stevioside in the control extract.
  • the content of any one of RebA, RebB, RebF, RebG, RebM for any one of RebD, RebE, RebN, stevioside in the extract of the present invention is about 1.2 times or more, about 1.5 times or more, about 2 times or more, about 2.5 times or more, about 3 times or more, about 3.5 times or more, about 4 times or more, about 4.5 times or more of the ratio in the control extract.
  • the content ratio of RebB to RebE in the extract of the present invention is about 0.17 or more, about 0.5 or more, about 1 or more, about 1.5 or more, about 2 or more, about 2.5 or more, about 3 or more, about 3.5 or more, about 4 or more, about 4.5 or more, about 5 or more, about 5.5 or more, about 6 or more, about 6.5 or more, about 7 or more, about 7.5 or more, about 8 or more, about 8.5 or more , about 9 or more, about 9.5 or more, about 10 or more, about 10.5 or more, about 11 or more, about 11.5 or more, about 12 or more, about 12.5 or more, about 13 or more, about 13.5 or more, about 14 or more, about 14.5 or more, or about 15 or more.
  • the content ratio of RebG to RebE in the extract of the present invention is about 0.004 or more, about 0.05 or more, about 0.1 or more, about 0.2 or more, about 0.3 or more, about 0.4 or more, about 0.5 or more, about 0.6 or more, about 0.7 or more, about 0.8 or more, about 0.9 or more, about 1 or more, about 1.05 or more, about 1.07 or more, about 1.1 or more, about 1.12 or more, about 1.13 or more, about 1.17 or more , about 1.2 or more, about 1.25 or more, about 1.3 or more, about 1.35 or more, about 1.37 or more, about 1.38 or more, about 1.4 or more, about 1.5 or more, about 1.6 or more, about 1.7 or more, about 1.72 or more, about 1.75 or more, about 1.8 or more, about 1.85 or more, about 1.9 or more, about 1.95 or more, or about 2 or more.
  • the content ratio of RebG to stevioside in the extract of the present invention is about 0.0007 or more, about 0.004 or more, about 0.006 or more, about 0.008 or more, about 0.01 or more, about 0.012 or more, about 0.014 or more, about 0.016 or more, about 0.018 or more, about 0.02 or more, about 0.025 or more, about 0.03 or more, about 0.035 or more, about 0.04 or more, about 0.045 or more, about 0.05 or more, about 0.055 or more, about 0.06 or more , about 0.065 or more, about 0.07 or more, about 0.075 or more, about 0.08 or more, about 0.085 or more, about 0.09 or more, about 0.091 or more, about 0.092 or more, about 0.093 or more, about 0.094 or more, about 0.095 or more, about 0.096 or more, about 0.097 or more, about 0.098 or more, about 0.099 or
  • the content of RebB in the extract of the present invention is about 0.04% by weight or more, about 0.044% by weight or more, about 0.048% by weight or more, about 0.052% by weight or more , about 0.056 weight% or more, about 0.06 weight% or more, about 0.064 weight% or more, about 0.068 weight% or more, about 0.072 weight% or more, about 0.076 weight% or more, about 0.08 weight% or more, about 0.084 weight% or more, about 0.088 weight% or more, about 0.092 weight% or more, about 0.096 weight% or more, about 0.1 weight% or more, about 0.105 weight% or more, about 0.11 weight% or more, about 0.115 weight% or more, about 0.12 weight% or more, about 0.125 weight% % or more, about 0.13% by weight or more, about 0.135% by weight or more, about 0.14% by weight or more, about 0.145% by weight or more, about 0.15% by weight or more,
  • the content of RebF in the extract of the present invention is about 0.06% by weight or more, about 0.064% by weight or more, about 0.068% by weight or more, about 0.072% by weight or more , about 0.076 weight% or more, about 0.08 weight% or more, about 0.084 weight% or more, about 0.088 weight% or more, about 0.092 weight% or more, about 0.096 weight% or more, about 0.1 weight% or more, about 0.105 weight% or more, about 0.11 weight% or more, about 0.115 weight% or more, about 0.12 weight% or more, about 0.125 weight% or more, about 0.13 weight% or more, about 0.135 weight% or more, about 0.14 weight% or more, about 0.145 weight% or more, about 0.15 weight% % or greater, about 0.155% or greater, about 0.16% or greater, about 0.17% or greater, about 0.18% or greater, about 0.19% or greater, or about 0.2% or greater.
  • the content of RebG in the extract of the present invention is about 0.001% by weight or more, about 0.002% by weight or more, about 0.003% by weight or more, about 0.004% by weight or more , about 0.005% by weight or more, about 0.006% by weight or more, about 0.007% by weight or more, about 0.008% by weight or more, about 0.009% by weight or more, about 0.01% by weight or more, about 0.011% by weight or more, about 0.012% by weight or more, about 0.013 weight% or more, about 0.014 weight% or more, about 0.016 weight% or more, about 0.018 weight% or more, about 0.02 weight% or more, about 0.022 weight% or more, about 0.024 weight% or more, about 0.026 weight% or more, about 0.028 weight% % or more, about 0.03% by weight or more, about 0.032% by weight or more, about 0.034% by weight or more, about 0.036% by weight or more, about 0.036% by weight or more, about 0.
  • the content of RebM in the extract of the present invention is about 0.15% by weight or more, about 0.17% by weight or more, about 0.19% by weight or more, about 0.21% by weight or more , about 0.23% by weight or more, about 0.25% by weight or more, about 0.27% by weight or more, about 0.29% by weight or more, about 0.31% by weight or more, about 0.33% by weight or more, about 0.35% by weight or more, about 0.37% by weight or more, about 0.39 weight% or more, about 0.41 weight% or more, about 0.43 weight% or more, about 0.45 weight% or more, about 0.47 weight% or more, about 0.49 weight% or more, about 0.51 weight% or more, about 0.54 weight% or more, about 0.57 weight% % or more, about 0.6% by weight or more, about 0.63% by weight or more, about 0.66% by weight or more, about 0.69% by weight or more, about 0.72% by weight or more, or about
  • the content of steviol glycosides having ⁇ -1,3-glucosidic bonds in the extract of the present invention is about 0.001% by weight or more, about 0.002% by weight or more, about 0.005% by weight or more, about 0.01% by weight or more, about 0.02% by weight or more, about 0.04% by weight or more, about 0.06% by weight or more, about 0.08% by weight or more, about 0.1% by weight or more, about 0.15% by weight or more, About 0.2% by weight or more, about 0.3% by weight or more, about 0.4% by weight or more, about 0.5% by weight or more, about 0.6% by weight or more, about 0.7% by weight or more, about 0.8% by weight or more, about 1% by weight or more, about 1.5 % by weight or more, 2% by weight or more, 2.5% by weight or more, 3% by weight or more, 3.5% by weight or more, 4% by weight or more, 5% by weight or more, 6% by weight or more, or
  • the content of RebD in the extracts of the present invention is about 1.65% by weight or less, about 1.6% by weight or less, about 1.55% by weight or less, about 1.5% by weight or less , about 1.45% by weight or less, about 1.4% by weight or less, about 1.35% by weight or less, about 1.3% by weight or less, about 1.25% by weight or less, about 1.2% by weight or less, about 1.15% by weight or less, about 1.1% by weight or less, about 1.05 weight% or less, about 1 weight% or less, about 0.95 weight% or less, about 0.9 weight% or less, about 0.85 weight% or less, about 0.8 weight% or less, about 0.75 weight% or less, about 0.7 weight% or less, about 0.65 weight% % or less, about 0.6% by weight or less, about 0.55% by weight or less, about 0.5% by weight or less, about 0.45% by weight or less, about 0.4% by weight or less, or about 0.35% by weight or less.
  • the content of RebE in the extracts of the present invention is about 0.34% by weight or less, about 0.32% by weight or less, about 0.3% by weight or less, about 0.28% by weight or less , about 0.26% by weight or less, about 0.24% by weight or less, about 0.22% by weight or less, about 0.2% by weight or less, about 0.18% by weight or less, about 0.16% by weight or less, about 0.14% by weight or less, about 0.12% by weight or less, about 0.1% by weight or less, 0.08% by weight or less, 0.06% by weight or less, 0.05% by weight or less, 0.04% by weight or less, 0.03% by weight or less, 0.02% by weight or less, 0.015% by weight or less, 0.01% by weight % or less, about 0.009% by weight or less, about 0.008% by weight or less, about 0.007% by weight or less, about 0.006% by weight or less, about 0.005% by weight or less, or about
  • the content of RebN in the extract of the present invention is about 0.35% by weight or less, about 0.33% by weight or less, about 0.31% by weight or less, about 0.29% by weight or less , about 0.27% by weight or less, about 0.25% by weight or less, about 0.24% by weight or less, about 0.23% by weight or less, about 0.22% by weight or less, about 0.21% by weight or less, about 0.2% by weight or less, about 0.19% by weight or less, about 0.18 weight% or less, about 0.17 weight% or less, about 0.16 weight% or less, about 0.15 weight% or less, about 0.14 weight% or less, about 0.13 weight% or less, about 0.12 weight% or less, about 0.11 weight% or less, about 0.1 weight% % or less, about 0.09% by weight or less, about 0.08% by weight or less, about 0.07% by weight or less, about 0.06% by weight or less, about 0.055% by weight or less, or about
  • the content of stevioside in the extracts of the present invention is less than or equal to about 2.5%, less than or equal to about 2.4%, less than or equal to about 2.3%, or less than or equal to about 2.2% by weight.
  • the content of steviol glycosides without ⁇ -1,3-glucosidic bonds in the extract of the present invention is about 2.5% by weight or less, about 2.2% by weight % or less, about 2% by weight or less, about 1.8% by weight or less, about 1.6% by weight or less, about 1.4% by weight or less, about 1.2% by weight or less, about 1% by weight or less, about 0.9% by weight or less, about 0.8% by weight or less , about 0.7% by weight or less, about 0.6% by weight or less, about 0.5% by weight or less, about 0.4% by weight or less, about 0.3% by weight or less, about 0.2% by weight or less, about 0.1% by weight or less, about 0.08% by weight or less, about 0.06 weight% or less, about 0.04 weight% or less, about 0.02 weight% or less, about 0.015 weight% or less, about 0.01 weight% or less, about 0.008 weight% or less, about 0.006 weight% or less, about 0.005 weight
  • the content of any one of RebA, RebB, RebF, RebG, RebM for any one of RebD, RebE, RebN, stevioside in the extract of the present invention The ratio is about 0.0007 or more, about 0.004 or more, about 0.01 or more, about 0.02 or more, about 0.03 or more, about 0.05 or more, about 0.08 or more, about 0.091 or more, about 0.095 or more, about 0.1 or more, about 0.2 or more, about 0.3 or more , about 0.5 or more, about 0.8 or more, about 1 or more, about 1.05 or more, about 1.07 or more, about 1.1 or more, about 1.2 or more, about 1.5 or more, about 2 or more, about 3 or more, about 4 or more, about 5 or more, about 8 or more, about 10 or more, about 10.5 or more, about 11 or more, about 11.5 or more, about 12 or more, about 12.5 or more, about 13 or more, about 13.5 or more, about
  • steviol glycosides with ⁇ -1,3-glucosidic bonds versus steviol glycosides without ⁇ -1,3-glucosidic bonds in the extract of the invention
  • the content ratio of the body is about 0.0007 or more, about 0.004 or more, about 0.01 or more, about 0.02 or more, about 0.03 or more, about 0.05 or more, about 0.08 or more, about 0.091 or more, about 0.095 or more, about 0.1 or more, about 0.2 or more, About 0.3 or more, about 0.5 or more, about 0.8 or more, about 1 or more, about 1.05 or more, about 1.07 or more, about 1.1 or more, about 1.2 or more, about 1.5 or more, about 2 or more, about 3 or more, about 4 or more, about 5 or more, about 8 or more, about 10 or more, about 10.5 or more, about 11 or more, about 11.5 or more, about 12 or more, about 12.5 or more, about 13 or more, about 13.5 or
  • the content ratio of steviol glycosides produced by UGT76G1 from the substrate steviol glycosides to the substrate steviol glycosides of UGT76G1 in the extract of the present invention is , about 0.15 or more, about 0.3 or more, about 0.5 or more, about 0.7 or more, about 0.9 or more, about 1 or more, about 1.5 or more, about 2 or more, about 3 or more, about 5 or more, about 7 or more, about 10 or more, about 15 or more, about 16 or more, about 17 or more, about 20 or more, about 25 or more, about 30 or more, about 35 or more, about 40 or more, about 45 or more, about 50 or more, about 51 or more, about 55 or more, about 60 or more , about 65 or more, about 66 or more, about 70 or more, about 75 or more, or about 80 or more.
  • sweetener compositions, fragrances, or pharmaceuticals hereinafter sometimes referred to collectively as foods, etc.
  • the present invention further provides a method for producing foods, etc., which includes a step of mixing the extract of the present invention and/or steviol glycosides obtained by the method for producing steviol glycosides of the present invention with other components.
  • the present invention provides foods and the like obtained by the above manufacturing method.
  • food includes beverages.
  • the food etc. contains steviol glycosides other than steviol glycosides contained in the extract of the present invention and/or steviol glycosides obtained by the method for producing steviol glycosides of the present invention. Not included.
  • the food, etc. When the food, etc. contains the extract of the present invention, it may have similar chemical characteristics to the extract of the present invention.
  • the food, etc. has the same steviol glycoside content ratio as at least one of the chemical characteristics (a') to (d'), (p'), and (r').
  • foods having the same content ratio of steviol glycosides as chemical characteristic (a') may contain an extract of a stevia plant that does not have the genetic characteristics of the present invention instead of the extract of the present invention.
  • the present invention provides a base sequence related to the Stevia plant of the present invention.
  • a specific embodiment of the nucleotide sequence related to the Stevia plant having the genetic characteristic (1) of the present invention includes or consists of a nucleotide sequence selected from SEQ ID NOs: 10 to 13 and 50.
  • a specific embodiment of the base sequence related to the Stevia plant having the genetic characteristic (2) of the present invention includes or consists of a base sequence selected from SEQ ID NOs: 14 to 17 and 52.
  • a specific embodiment of the nucleotide sequence related to a Stevia plant having genetic characteristic (3) of the present invention includes or consists of a nucleotide sequence selected from SEQ ID NOs: 18 to 21 and 54.
  • Dead tissue or dead cell of the present invention In a further aspect of the present invention, the stevia plant of the present invention, the tissue of a stevia plant selected by the screening method of the present invention, or the tissue of a stevia plant produced by the production method of the present invention, or Dead cells (hereinafter sometimes referred to as “dead tissue or dead cells of the present invention") are provided.
  • “Death” means a state in which the person does not have the ability to reproduce, proliferate, regenerate, or grow.It also means a state in which the person dies naturally without any artificial manipulation, such as by cutting, crushing, heating (via gas such as air).
  • Dead tissue means a tissue in which all the cells contained therein have died, and includes a dead plant body.
  • Specific examples of dead tissue or dead cells of the present invention include dead tissues or cells other than seeds. More specifically, examples include dead embryos, meristem cells, pollen, leaves, roots, root tips, petals, protoplasts, leaf sections, or callus. Dried leaves are preferred.
  • the dead tissue or dead cells of the present invention can be used as raw materials for the above-mentioned extracts, steviol glycoside purified products, pharmaceuticals, fragrances, food and drink products, and the like.
  • a method for producing an extract of a dead tissue or a dead cell in which the extract is obtained from the dead tissue or dead cell of the present invention by a method similar to the method for producing an extract of the present invention. Furthermore, there is provided a method for producing steviol glycosides having ⁇ -1,3-glucosidic bonds, which includes a step of purifying steviol glycosides having ⁇ -1,3-glucosidic bonds from the obtained extract. Ru. Further, a step of providing an extract of dead tissue or dead cells, or an extract obtained by the method for producing a dead tissue or dead cell extract of the present invention, and a step of using the extract in foods, sweetener compositions, etc. A method for producing a food, a sweetener composition, a flavor, or a drug is provided, which includes the step of adding the sweetener composition to a raw material for the flavor or drug.

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Abstract

ステビアの遺伝情報を解明する。本発明は、被験ステビア植物体のゲノムから、遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つの存在及び/又は不在を検出する工程を含む、化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つを有するステビア植物体をスクリーニングする方法等を提供する。

Description

ステビア植物のスクリーニング方法
　本発明は、ステビア植物のスクリーニング方法等に関する。
　多様化する消費者ニーズに対応すべく、様々な飲料が開発され、市販されている。ショ糖等の糖類は、甘味を与える等の目的で飲料にごく普通に配合される成分であるが、過剰摂取による健康への影響が指摘されてきており、より低カロリーであり、かつ天然由来の甘味料に対するニーズが高まりつつある。例えば特許文献1は、ビタミン、高甘味度甘味料、及び甘味改善組成物を含有する機能性甘味料組成物を開示している。
　ステビオール配糖体は、ステビア抽出物に含まれる甘味成分として知られている。ステビア抽出物は、主にステビアの葉から抽出、精製される。ステビアは南米パラグアイを原産地とする菊科多年生植物で、学名をステビア・レバウディアナ・ベルトニー(Stevia Rebaudiana Bertoni)という。ステビアは砂糖の約300倍以上の甘味を持つ成分を含むので、この甘味成分を抽出して天然甘味料として用いる為に栽培されている。ステビオール配糖体としては、レバウジオシドA(Rebaudioside A、以下「レバウジオシド」(Rebaudioside)を「Reb」と略すことがある)、RebB、RebC、RebD、RebE、RebM等、様々な配糖体の存在が報告されている(特許文献2)。様々なステビオール配糖体の中で、例えばRebAは、高甘味度と良質甘味を有する甘味料として評価されており、広く用いられている。その他のステビオール配糖体についても、その独自の甘さ及び付随する味を有することが判明しつつある。
　そのような状況において、ステビオール配糖体の含量等に特徴のあるステビア植物体を遺伝情報に基づいてスクリーニングする方法が知られている(特許文献3～6)。
WO2007/070224 WO2010/038911 WO2016/049531 WO2019/074089 WO2021/230256 WO2021/230257
　ステビアの遺伝情報のさらなる解明が求められている。
　一態様において、本発明は以下を提供する。
[1]　被験ステビア植物体のゲノムから、以下の遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つの存在及び/又は不在を検出する工程を含む、以下の化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つを有するステビア植物体をスクリーニングする方法。
(1)配列番号1の184位に相当する位置の塩基がGであるアレルについてヘテロ接合性又はホモ接合性である。
(2)配列番号2の170位に相当する位置の塩基がCであるアレルについてヘテロ接合性又はホモ接合性である。
(3)配列番号3の92位に相当する位置の塩基がCであるアレルについてヘテロ接合性又はホモ接合性である。
(a)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、レバウジオシド(Reb)Dに対するRebMの含有比が高い。
(b)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebEに対するRebBの含有比が高い。
(c)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebEに対するRebGの含有比が高い。
(d)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、ステビオシドに対するRebGの含有比が高い。
(e)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebAの含有量が多い。
(f)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebBの含有量が多い。
(g)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebFの含有量が多い。
(h)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebGの含有量が多い。
(i)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebMの含有量が多い。
(j)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有量が多い。
(k)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebDの含有量が少ない。
(l)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebEの含有量が少ない。
(m)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebNの含有量が少ない。
(n)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、ステビオシドの含有量が少ない。
(o)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体の含有量が少ない。
(p)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebD、RebE、RebN、ステビオシドのいずれか1つに対する、RebA、RebB、RebF、RebG、RebMのいずれか1つの含有比が高い。なお、化学的特徴(p)は、例えば、RebDに対するRebAの含有比が高く、且つ、RebEに対するRebBの含有比が高い、といった態様も包含するものである。
(q)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体に対するβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有比が高い。
(r)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、UGT76G1の基質ステビオール配糖体に対する、前記基質ステビオール配糖体からUGT76G1により生成されるステビオール配糖体の含有比が高い。
[2]　遺伝的特徴の存在及び/又は不在が検出された被験ステビア植物組織のRebA、RebB、RebD、RebE、RebF、RebG、RebM、RebN及び/又はステビオシドの含有量を測定する工程をさらに含む、[1]に記載の方法。
[3]　遺伝的特徴の存在及び/又は不在を検出する工程が、CAPS法、dCAPS法又はTaqMan　PCR法を用いて行われる、[1]又は[2]に記載の方法。
[4]　[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つの存在及び/又は不在を検出するための試薬を含む、[1]に定義された化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つを有するステビア植物体のスクリーニングキット。
[5]　試薬が、CAPS法、dCAPS法又はTaqMan　PCR法に使用するプライマー及び/又はプローブを含む、[4]に記載のキット。
[6]　[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つを有するステビア植物体。
[7]　[1]に定義された化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つを有する、[6]に記載の植物体。
[8]　非遺伝子組換植物体である、[6]又は[7]に記載の植物体。
[9]　変異誘発処理を行ったステビア植物体及びその子孫植物体を含む、[6]～[8]のいずれか一項に記載の植物体。
[10]　[6]～[9]のいずれか一項に記載の植物体の種子、組織、乾燥葉、組織培養物又は細胞。
[11]　胚、分裂組織細胞、花粉、葉、根、根端、花弁、プロトプラスト、葉の切片及びカルスから選択される、[10]に記載の組織、組織培養物又は細胞。
[12]　[6]～[9]のいずれか一項に記載のステビア植物体と第2のステビア植物体とを交雑させる工程を含む、[1]に定義された化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つを有するステビア植物体を作出する方法。
[13]　第2の植物体が[6]～[9]のいずれか一項に記載のステビア植物体である、[12]に記載の方法。
[14]　ステビア植物体のゲノムに、前記ゲノムが[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つを有するように改変を加える工程を含む、[1]に定義された化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つを有するステビア植物体を作出する方法。
[15]　ゲノムの改変が、変異誘発処理によって行われる、[14]に記載の方法。
[16]　以下の化学的特徴(a')～(r')の少なくとも1つを有する、[6]～[9]のいずれか一項に記載の植物体、[10]又は[11]に記載の種子、組織、乾燥葉、組織培養物又は細胞の抽出物。
(a')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、レバウジオシド(Reb)Dに対するRebMの含有比が高い。
(b')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebEに対するRebBの含有比が高い。
(c')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebEに対するRebGの含有比が高い。
(d')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、ステビオシドに対するRebGの含有比が高い。 
(e')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebAの含有量が多い。
(f')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebBの含有量が多い。
(g')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebFの含有量が多い。
(h')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebGの含有量が多い。
(i')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebMの含有量が多い。
(j')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有量が多い。
(k')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebDの含有量が少ない。
(l')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebEの含有量が少ない。
(m')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebNの含有量が少ない。
(n')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、ステビオシドの含有量が少ない。
(o')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体の含有量が少ない。
(p')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebD、RebE、RebN、ステビオシドのいずれか1つに対する、RebA、RebB、RebF、RebG、RebMのいずれか1つの含有比が高い。なお、化学的特徴(p')は、例えば、RebDに対するRebAの含有比が高く、且つ、RebEに対するRebBの含有比が高い、といった態様も包含するものである。
(q')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体に対するβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有比が高い。
(r')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、UGT76G1の基質ステビオール配糖体に対する、前記基質ステビオール配糖体からUGT76G1により生成されるステビオール配糖体の含有比が高い。
[17]　[6]～[9]のいずれか一項に記載の植物体、[10]又は[11]に記載の種子、組織、乾燥葉、組織培養物又は細胞から抽出物を得る工程を含む、[16]に定義された化学的特徴(a')～(r')の少なくとも1つを有する抽出物の製造方法。
[18]　[16]に記載の抽出物からβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体を精製する工程を含む、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の製造方法。
[19]　[6]～[9]のいずれか一項に記載の植物体の抽出物、[10]又は[11]に記載の種子、組織、乾燥葉、組織培養物又は細胞の抽出物、或いは、[16]に記載の抽出物を提供する工程、及び
前記抽出物を、食品、甘味料組成物、香料又は医薬品の原料に添加する工程
を含む、食品、甘味料組成物、香料又は医薬品の製造方法。
[20]　遺伝的特徴(1)が、配列番号1の184位に相当する位置の塩基がGであるアレルについてヘテロ接合性である、[1]に記載の方法。
[21]　遺伝的特徴(2)が、配列番号2の170位に相当する位置の塩基がCであるアレルについてヘテロ接合性である、[1]に記載の方法。
[22]　遺伝的特徴(3)が、配列番号3の92位に相当する位置の塩基がCであるアレルについてホモ接合性である、[1]に記載の方法。
[10-2]　[6]～[9]のいずれか一項に記載の植物体の死亡組織又は死亡細胞。
[11-2]　胚、分裂組織細胞、花粉、葉、根、根端、花弁、プロトプラスト、葉の切片及びカルスから選択される、[10-2]に記載の死亡組織又は死亡細胞。
[16-2]　以下の化学的特徴(a')～(r')の少なくとも1つを有する、[10-2]又は[11-2]に記載の死亡組織又は死亡細胞の抽出物。
(a')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、レバウジオシド(Reb)Dに対するRebMの含有比が高い。
(b')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、RebEに対するRebBの含有比が高い。
(c')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、RebEに対するRebGの含有比が高い。
(d')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、ステビオシドに対するRebGの含有比が高い。
(e')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、RebAの含有量が多い。
(f')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、RebBの含有量が多い。
(g')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、RebFの含有量が多い。
(h')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、RebGの含有量が多い。
(i')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、RebMの含有量が多い。
(j')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有量が多い。
(k')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、RebDの含有量が少ない。
(l')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、RebEの含有量が少ない。
(m')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、RebNの含有量が少ない。
(n')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、ステビオシドの含有量が少ない。
(o')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体の含有量が少ない。
(p')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、RebD、RebE、RebN、ステビオシドのいずれか1つに対する、RebA、RebB、RebF、RebG、RebMのいずれか1つの含有比が高い。
(q')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体に対するβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有比が高い。
(r')[1]に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の死亡組織又は死亡細胞の抽出物に比べ、UGT76G1の基質ステビオール配糖体に対する、前記基質ステビオール配糖体からUGT76G1により生成されるステビオール配糖体の含有比が高い。
[17-2]　[10-2]又は[11-2]に記載の死亡組織又は死亡細胞から抽出物を得る工程を含む、[16-2]に定義された化学的特徴(a')～(r')の少なくとも1つを有する抽出物の製造方法。
[18-2]　[16-2]に記載の抽出物からβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体を精製する工程を含む、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の製造方法。
[19-2]　[10-2]又は[11-2]に記載の死亡組織又は死亡細胞の抽出物、或いは、[16-2]に記載の抽出物を提供する工程、及び
前記抽出物を、食品、甘味料組成物、香料又は医薬品の原料に添加する工程
を含む、食品、甘味料組成物、香料又は医薬品の製造方法。
　本発明によって、RebDに対するRebMの含有比がより高いといった、本明細書に記載の種々の特性を有するステビア植物体の取得、そのような植物体を作出するための手段、そのような植物体より得られる葉、この葉より得られたステビオール配糖体を含む飲料等の提供が可能になる。
図1は、配列番号1の塩基配列における、遺伝的特徴(1)に係る塩基の位置を示した図である。枠で囲った塩基が遺伝的特徴(1)に係る塩基である。 図2は、配列番号2の塩基配列における、遺伝的特徴(2)に係る塩基の位置を示した図である。枠で囲った塩基が遺伝的特徴(2)に係る塩基である。 図3は、配列番号3の塩基配列における、遺伝的特徴(3)に係る塩基の位置を示した図である。枠で囲った塩基が遺伝的特徴(3)に係る塩基である。
　以下、本発明を詳細に説明する。以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をそのような実施の形態のみに限定する趣旨ではない。本発明は、その要旨を逸脱しない限り、様々な形態で実施をすることができる。
　なお、本明細書において引用した全ての文献、及び公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。
1．ステビア植物体
　本発明は、以下の遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つを有するステビア植物体(以下、「本発明の植物体」又は「本発明のステビア植物体」と総称する場合がある)を提供する。
(1)配列番号1の184位に相当する位置の塩基がGであるアレルについてヘテロ接合性又はホモ接合性であり、好適には、ヘテロ接合性である。
(2)配列番号2の170位に相当する位置の塩基がCであるアレルについてヘテロ接合性又はホモ接合性であり、好適には、ヘテロ接合性である。
(3)配列番号3の92位に相当する位置の塩基がCであるアレルについてヘテロ接合性又はホモ接合性であり、好適には、ホモ接合性である。
　本発明の植物体は、野生種のステビア植物体から派生したものであるが、上記遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つを有するものである(以下、遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つを「本発明の遺伝的特徴」と総称する場合がある)。
　本発明の植物体は、以下の化学的特徴の少なくとも1つを有し得る。
(a)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、RebDに対するRebMの含有比が高い。
(b)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、RebEに対するRebBの含有比が高い。
(c)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、RebEに対するRebGの含有比が高い。
(d)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、ステビオシドに対するRebGの含有比が高い。
(e)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、RebAの含有量が多い。
(f)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、RebBの含有量が多い。
(g)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、RebFの含有量が多い。
(h)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、RebGの含有量が多い。
(i)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、RebMの含有量が多い。
(j)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有量が多い。
(k)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、RebDの含有量が少ない。
(l)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、RebEの含有量が少ない。
(m)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、RebNの含有量が少ない。
(n)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、ステビオシドの含有量が少ない。
(o)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体の含有量が少ない。
(p)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、RebD、RebE、RebN、ステビオシドのいずれか1つに対する、RebA、RebB、RebF、RebG、RebMのいずれか1つの含有比が高い。
(q)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体に対するβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有比が高い。
(r)本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体に比べ、UGT76G1の基質ステビオール配糖体に対する、前記基質ステビオール配糖体からUGT76G1により生成されるステビオール配糖体の含有比が高い。
　「～に相当する位置(又は部分)」とは、ゲノム中に基準配列(例えば、配列番号1～3等)と同一の配列が存在する場合は、ゲノム中に存在するその配列中の位置又は部分(例えば、184位、170位、92位等)を意味し、ゲノム中に基準配列と同一の配列が存在しない場合は、ゲノム中の基準配列に相当する配列中の、基準配列中の位置又は部分に相当する位置又は部分を意味する。ゲノム中に基準配列と同一又はそれに相当する配列が存在するかどうかは、例えば、基準配列をPCRで増幅し得るプライマーで、対象となるステビア植物のゲノムDNAを増幅し、増幅産物のシーケンシングを行い、得られた配列と基準配列とのアラインメント解析を行うことで決定することができる。基準配列に相当する配列の非限定例としては、例えば、基準配列に対し60％以上、70％以上、75％以上、80％以上、81％以上、82％以上、83％以上、84％以上、85％以上、86％以上、87％以上、88％以上、89％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、98．1％以上、98．4％以上、98．7％以上、99％以上、99．2％以上、99．5％以上又は99．8％以上の配列同一性を有する塩基配列が挙げられる。ゲノム中の基準配列に相当する配列中の、基準配列中の位置又は部分に相当する位置又は部分は、基準配列中の位置又は部分の前後の塩基配列等を考慮して決定することができる。例えば、基準配列とゲノム中の基準配列に相当する配列とのアライメント解析により、ゲノム中の基準配列に相当する配列中の、基準配列中の位置又は部分に相当する位置又は部分を決定することができる。
　例えば、本発明の遺伝的特徴(1)の「配列番号1の184位に相当する位置」を例にとると、ステビア植物体のゲノムが配列番号1と同一の塩基配列からなる部分を有している場合、「配列番号1の184位に相当する位置」はゲノム中の配列番号1と同一の塩基配列からなる部分の5’側から184位である。一方、ステビア植物体のゲノムが配列番号1と同一ではないがこれに相当する塩基配列からなる部分を有している場合、ゲノムは配列番号1と同一の塩基配列からなる部分を有しないため、「配列番号1の184位に相当する位置」は、必ずしも配列番号1に相当する部分の5’側から184位に該当するわけではないが、配列番号1の184位の前後の塩基配列等を考慮し、かかるステビア植物のゲノムにおける「配列番号1の184位に相当する位置」を特定することができる。例えば、ステビア植物のゲノムにおける配列番号1に相当する部分の塩基配列と、配列番号1の塩基配列とのアライメント解析により、ステビア植物のゲノムにおける「配列番号1の184位に相当する位置」を特定することができる。
　「配列番号1に相当する塩基配列からなる部分」は、例えば、配列番号1の塩基配列に対し、60％以上、70％以上、75％以上、80％以上、81％以上、82％以上、83％以上、84％以上、85％以上、86％以上、87％以上、88％以上、89％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、98．1％以上、98．4％以上、98．7％以上、99％以上、99．2％以上、99．5％以上又は99．8％以上の配列同一性を有する塩基配列からなる部分を意味する。
　一部の態様において、「配列番号1に相当する塩基配列からなる部分」には、配列番号1の5’末端から1～183位(すなわち、配列番号1の5’末端から、遺伝的特徴(1)に係る位置である184位の1塩基5’末端側の塩基まで)の部分の相補配列にハイブリダイズするフォワードプライマー(例えば、配列番号4の配列を有するもの)と、配列番号1の3’末端側から1～31位(すなわち、配列番号1の3’末端から、遺伝的特徴(1)に係る位置である184位の1塩基3’末端側の塩基まで)の部分にハイブリダイズするリバースプライマー(例えば、配列番号5の配列を有するもの)とを用いたPCRにより増幅され得るステビア植物体のゲノムの部分が含まれる。
　一部の態様において、「配列番号2に相当する塩基配列からなる部分」には、配列番号2の5’末端から1～169位(すなわち、配列番号2の5’末端から、遺伝的特徴(2)に係る位置である170位の1塩基5’末端側の塩基まで)の部分の相補配列にハイブリダイズするフォワードプライマー(例えば、配列番号6の配列を有するもの)と、配列番号2の3’末端側から1～34位(すなわち、配列番号2の3’末端から、遺伝的特徴(2)に係る位置である170位の1塩基3’末端側の塩基まで)の部分にハイブリダイズするリバースプライマー(例えば、配列番号7の配列を有するもの)とを用いたPCRにより増幅され得るステビア植物体のゲノムの部分が含まれる。
　一部の態様において、「配列番号3に相当する塩基配列からなる部分」には、配列番号3の5’末端から1～91位(すなわち、配列番号3の5’末端から、遺伝的特徴(3)に係る位置である92位の1塩基5’末端側の塩基まで)の部分の相補配列にハイブリダイズするフォワードプライマー(例えば、配列番号8の配列を有するもの)と、配列番号3の3’末端側から1～29位(すなわち、配列番号3の3’末端から、遺伝的特徴(3)に係る位置である92位の1塩基3’末端側の塩基まで)の部分にハイブリダイズするリバースプライマー(例えば、配列番号9の配列を有するもの)とを用いたPCRにより増幅され得るステビア植物体のゲノムの部分が含まれる。
　特定の態様において、「配列番号1に相当する塩基配列からなる部分」には、例えば、配列番号4の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号5の塩基配列を含むリバースプライマーとを用いたPCRにより増幅され得るステビア植物のゲノムの部分が含まれる。
　特定の態様において、「配列番号2に相当する塩基配列からなる部分」には、例えば、配列番号6の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号7の塩基配列を含むリバースプライマーとを用いたPCRにより増幅され得るステビア植物のゲノムの部分が含まれる。
　特定の態様において、「配列番号3に相当する塩基配列からなる部分」には、例えば、配列番号8の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号9の塩基配列を含むリバースプライマーとを用いたPCRにより増幅され得るステビア植物のゲノムの部分が含まれる。
　特定の態様において、「配列番号1の184位に相当する位置の塩基がGであるアレル」(以下、「遺伝的特徴(1)に係るアレル」と称することがある)は、配列番号10～13の少なくとも1つの塩基配列を含む。
　特定の態様において、「配列番号2の170位に相当する位置の塩基がCであるアレル」(以下、「遺伝的特徴(2)に係るアレル」と称することがある)は、配列番号14～17の少なくとも1つの塩基配列を含む。
　特定の態様において、「配列番号3の92位に相当する位置の塩基がCであるアレル」(以下、「遺伝的特徴(3)に係るアレル」と称することがある)は、配列番号18～21の少なくとも1つの塩基配列を含む。
　ここで、(1)配列番号1の184位に相当する位置、(2)配列番号2の170位に相当する位置、及び(3)配列番号3の92位に相当する位置を、「本発明の多型部位」又は「本発明の遺伝的特徴に係る部位」と総称することがある。
　上記の遺伝的特徴は、PCR法、TaqMan PCR法、シーケンス法、マイクロアレイ法、インベーダー法、TILLING法、RAD(random amplified polymorphic DNA)法、制限酵素断片長多型(RFLP)法、PCR－SSCP法、AFLP(amplified fragment length polymorphism)法、SSLP(simple sequence length polymorphism)法、CAPS(cleaved amplified polymorphic sequence)法、dCAPS(derived cleaved amplified polymorphic sequence)法、アレル特異的オリゴヌクレオチド(ASO)法、ARMS法、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動(DGGE)法、CCM(chemical cleavage of mismatch)法、DOL法、MALDI－TOF/MS法、TDI法、パドロックプローブ法、分子ビーコン法、DASH(dynamic allele specific hybridization)法、UCAN法、ECA法、PINPOINT法、PROBE(primer oligo base extension)法、VSET(very short extension)法、Survivor assay、Sniper assay、Luminex assay、GOOD法、LCx法、SNaPshot法、Mass ARRAY法、パイロシーケンス法、SNP－IT法、融解曲線分析法等により検出することが可能であるが、検出方法はこれらに限定されるものではない。
　特定の態様において、本発明の遺伝的特徴は、以下のプライマーセット及び制限酵素の組合せによるdCAPS法等で検出することが可能である。
　候補植物体が好適な態様の遺伝的特徴(1)(ヘテロ接合性)を有する場合、例えば、候補植物体のゲノムDNAに対し、配列番号22に示す塩基配列を有するフォワードプライマー及び配列番号23に示す塩基配列を有するリバースプライマーを用いてPCR増幅を行い、得られたPCR産物(約248bp長、例えば、配列番号24又は25)に対し制限酵素EcoRVによる処理を行うと、約248bp長のバンド(例えば、配列番号25)、約213bp長のバンド(例えば、配列番号26)及び約35bp長のバンド(例えば、配列番号27)が生じる。一方、候補植物体が遺伝的特徴(1)を有しない場合、上記と同様にPCR増幅を行うと約248bp長のPCR産物(例えば、配列番号24)が生じるが、制限酵素処理を行うと、約213bp長のバンド(例えば、配列番号26)及び約35bp長のバンド(例えば、配列番号27)が生じる。
　候補植物体が好適な態様の遺伝的特徴(2)(ヘテロ接合性)を有する場合、例えば、候補植物体のゲノムDNAに対し、配列番号28に示す塩基配列を有するフォワードプライマー及び配列番号29に示す塩基配列を有するリバースプライマーを用いてPCR増幅を行い、得られたPCR産物(約242bp長、例えば、配列番号30又は31)に対し制限酵素PvuIIによる処理を行うと、約242bp長のバンド(例えば、配列番号30)、約207bp長のバンド(例えば、配列番号32)及び約35bp長のバンド(例えば、配列番号33)が生じる。一方、候補植物体が遺伝的特徴(2)を有しない場合、上記と同様にPCR増幅を行うと約242bp長のPCR産物(例えば、配列番号30)が生じるが、制限酵素処理を行っても、切断されていない約242bp長のPCR産物(例えば、配列番号30)のバンドしか得られない。
　候補植物体が好適な態様の遺伝的特徴(3)(ホモ接合性)を有する場合、例えば、候補植物体のゲノムDNAに対し、配列番号34に示す塩基配列を有するフォワードプライマー及び配列番号35に示す塩基配列を有するリバースプライマーを用いてPCR増幅を行い、得られたPCR産物(約284bp長、例えば、配列番号36)に制限酵素PvuIIによる処理を行うと、約249bp長のバンド(例えば、配列番号37)及び約35bp長のバンド(例えば、配列番号38)が生じる。一方、候補植物体が遺伝的特徴(3)を有しない場合、上記と同様にPCR増幅を行うと約284bp長のPCR産物(例えば、配列番号39)が生じるが、これに制限酵素PvuIIによる処理を行っても、切断されていない約284bp長のPCR産物(例えば、配列番号39)のバンドしか得られない。
　上記bp長に関し、「約」とは、±5bpを意味する。制限酵素処理は、使用する各制限酵素の販売元が推奨する条件に従って行うことができる。
　一部の態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴(1)～(3)のいずれか1つを有する。一部の態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴(1)と(2)の組合せを有する。一部の態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴(1)と(3)の組合せを有する。一部の態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴(2)と(3)の組合せを有する。一部の態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴(1)～(3)のすべてを有する。
　本発明のステビア植物体は、野生種のステビア植物体から派生したものであり、化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つをもたらす前述の遺伝的特徴を有するものである。当該遺伝的特徴は、遺伝子組換的手法により生じたものであっても、非遺伝子組換的手法により生じたものであってもよい。したがって、本発明の植物体は、遺伝子組換的手法により得られたもの又はその子孫(以下、「遺伝子組換植物体」と称することがある)であっても、非遺伝子組換的手法により得られたもの又はその子孫(以下、「非遺伝子組換植物体」と称することがある)であってもよい。
　本明細書中、「非遺伝子組換的手法」の例としては、外来遺伝子の導入を行わずに宿主細胞(又は宿主植物体)の遺伝子に変異を誘発する方法が挙げられる。そのような方法としては植物細胞に変異誘発剤を作用させる方法が挙げられる。そのような変異誘発剤としては、エチルメタンスルホン酸(EMS)及びアジ化ナトリウム等が挙げられる。例えば、EMSは、0．1％、0．2％、0．3％、0．4％、0．5％、0．6％、0．7％、0．8％、0．9％、1．0％等の濃度で植物細胞を処理することができる。処理時間は約1時間～約48時間、約2時間～約36時間、約3時間～約30時間、約4時間～約28時間、約5時間～約26時間、約6時間～約24時間である。処理の手順自体は公知であるが、吸水過程を経た吸水種子を上記濃度で変異誘発剤を含む処理液に、上記処理時間浸漬することで行うことができる。
　非遺伝子組換的手法の別の例として、X線、γ線、紫外線等の放射線や光線を植物細胞に照射する方法が挙げられる。紫外線を照射する場合、適当な紫外線の照射量(紫外線ランプ強さ、距離、時間)を用いて照射した細胞を、選択培地等で培養した後、目的の形質を有する細胞、カルス、植物体を選択できる。その際の照射強度は0．01～100Gr、0．03～75Gr、0．05～50Gr、0．07～25Gr、0．09～20Gr、0．1～15Gr、0．1～10Gr、0．5～10Gr、1～10Grであってよく、照射距離は1cm～200m、5cm～100m、7cm～75m、9cm～50m、10cm～30m、10cm～20m、10cm～10mであってよく、照射時間は1分～2年、2分～1年、3分～0．5年、4分～1か月、5分～2週間、10分～1週間であってよい。照射の強度、距離及び時間は、放射線や光線の種類や照射対象となる状態(細胞、カルス、植物体)により異なるが、当業者であれば適宜調整することができる。
　又、細胞融合、葯培養(半数体育成)、遠縁交雑(半数体育成)等の手法も公知である。
　一般に、植物細胞は、培養の間に変異を伴うことがあるため、より安定した形質維持のために植物個体に戻すことが好ましい。
　非遺伝子組換ステビア植物体を宿主として事後的に遺伝子組換(例えばゲノム編集等により)を行って得られた植物体(例えば、本発明の植物体を宿主として遺伝子組換を行って、さらに別の形質を付加した植物体)も、本発明の範囲から除外されるものではない。
　本発明の植物体は、上記の化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つを有し得る。ここで、「本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体」は、例えば、本発明の遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つを有するステビア植物体に対しては、本発明の遺伝的特徴(1)～(3)のいずれをも有しないステビア植物体、遺伝的特徴(1)を有するステビア植物体に対しては、遺伝的特徴(1)を有するステビア植物体以外のステビア植物体、すなわち、遺伝的特徴(1)を有しないステビア植物体を意味し、遺伝的特徴(1)及び(2)を有するステビア植物体に対しては、遺伝的特徴(1)及び(2)を有するステビア植物体以外のステビア植物体、すなわち、(i)遺伝的特徴(1)及び(2)のいずれをも有しないステビア植物体、(ii)遺伝的特徴(1)を有するが、遺伝的特徴(2)は有しないステビア植物体、及び(iii)遺伝的特徴(2)を有するが、遺伝的特徴(1)は有しないステビア植物体を意味する。
　あるステビオール配糖体に対する別のステビオール配糖体の含有比は、前者のステビオール配糖体(例えば、RebD)の含有量に対する後者のステビオール配糖体(例えば、RebM)の含有量の比(例えば、RebMの含有量/RebDの含有量)を意味する。含有量は、例えば、単位質量のステビア乾燥葉に含まれる対象配糖体の質量又はステビア乾燥葉中の対象配糖体の濃度であってもよい。乾燥葉とは、新鮮葉を乾燥させることにより含水量を10重量％以下、7重量％以下、5重量％以下、4重量％以下、3重量％以下、2重量％以下、1重量％以下にまで減らしたものをいう。好ましくは、本発明の植物体の乾燥葉の含水量は3～4重量％である。
　化学的特徴(a)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebDに対するRebMの含有比は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体における前記比の、約1.2倍以上、約1.6倍以上、約2倍以上、約2.4倍以上、約2.8倍以上、約3.2倍以上、約3.6倍以上、約4倍以上、約4.4倍以上、約4.8倍以上、約5.2倍以上、約5.6倍以上、約6倍以上、約6.4倍以上、約6.8倍以上、約7.2倍以上、約7.6倍以上、約8倍以上、約8.4倍以上、約8.8倍以上、約9.2倍以上、約9.6倍以上、約10倍以上、約10.5倍以上、約11倍以上、約11.5倍以上又は約12倍以上である。
　化学的特徴(b)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebEに対するRebBの含有比は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体における前記比の、約1.5倍以上、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約10倍以上、約15倍以上、約20倍以上、約30倍以上、約40倍以上、約50倍以上、約60倍以上、約70倍以上、約80倍以上、約90倍以上、約100倍以上、約150倍以上、約200倍以上、約250倍以上、約300倍以上、約400倍以上、約500倍以上、約600倍以上又は約700倍以上である。
　化学的特徴(c)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebEに対するRebGの含有比は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体における前記比の、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約10倍以上、約15倍以上、約20倍以上、約25倍以上、約30倍以上、約40倍以上、約50倍以上、約60倍以上、約70倍以上、約80倍以上、約90倍以上、約100倍以上、約150倍以上、約200倍以上、約250倍以上、約300倍以上、約400倍以上、約500倍以上、約600倍以上又は約700倍以上である。
　化学的特徴(d)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるステビオシドに対するRebGの含有比は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体における前記比の、約1.5倍以上、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約10倍以上、約15倍以上、約20倍以上、約30倍以上、約40倍以上、約50倍以上、約60倍以上、約70倍以上、約80倍以上、約90倍以上、約100倍以上、約150倍以上、約200倍以上、約250倍以上、約300倍以上、約400倍以上、約500倍以上、約600倍以上又は約700倍以上である。
　化学的特徴(e)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebAの含有量は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体におけるRebAの含有量の、約1.05倍以上、約1.1倍以上、約1.15倍以上、約1.2倍以上、約1.25倍以上、約1.3倍以上、約1.35倍以上、約1.5倍以上、約1.65倍以上、約1.8倍以上、約1.95倍以上、約2.1倍以上、約2.25倍以上、約2.4倍以上、約2.55倍以上、約2.7倍以上、約2.85倍以上、約3倍以上、約3.15倍以上、約3.3倍以上、約3.5倍以上、約3.7倍以上、約3.9倍以上、約4.1倍以上、約4.3倍以上、約4.5倍以上又は約4.7倍以上である。
　化学的特徴(f)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebBの含有量は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体におけるRebBの含有量の、約1.05倍以上、約1.15倍以上、約1.25倍以上、約1.35倍以上、約1.5倍以上、約1.65倍以上、約1.8倍以上、約2倍以上、約2.25倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約5.5倍以上、約6倍以上、約7倍以上、約8倍以上、約9倍以上、約10倍以上、約11倍以上、約12倍以上、約13倍以上、約14倍以上、約15倍以上又は約16倍以上である。
　化学的特徴(g)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebFの含有量は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体におけるRebFの含有量の、約1.02倍以上、約1.03倍以上、約1.04倍以上、約1.05倍以上、約1.1倍以上、約1.15倍以上、約1.2倍以上、約1.25倍以上、約1.3倍以上、約1.35倍以上、約1.4倍以上、約1.45倍以上、約1.5倍以上、約1.6倍以上、約1.8倍以上、約2倍以上、約2.2倍以上、約2.4倍以上、約2.6倍以上、約2.8倍以上、約3倍以上、約3.2倍以上、約3.4倍以上、約3.6倍以上、約3.8倍以上、約4倍以上又は約4.2倍以上である。
　化学的特徴(h)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebGの含有量は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体におけるRebGの含有量の、約1.2倍以上、約1.3倍以上、約1.4倍以上、約1.5倍以上、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約6倍以上、約7倍以上、約8倍以上、約9倍以上、約10倍以上、約12.5倍以上、約15倍以上、約17.5倍以上、約20倍以上、約22.5倍以上、約25倍以上、約30倍以上、約35倍以上、約40倍以上、約45倍以上又は約50倍以上である。
　化学的特徴(i)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebMの含有量は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体におけるRebMの含有量の、約1.05倍以上、約1.1倍以上、約1.15倍以上、約1.2倍以上、約1.3倍以上、約1.4倍以上、約1.5倍以上、約1.7倍以上、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約6倍以上、約7倍以上、約8倍以上、約9倍以上、約10倍以上、約12倍以上、約14倍以上、約16倍以上、約18倍以上、約20倍以上、約22倍以上又は約24倍以上である。
　化学的特徴(j)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有量は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体におけるβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有量の、約1.02倍以上、約1.03倍以上、約1.04倍以上、約1.05倍以上、約1.1倍以上、約1.15倍以上、約1.2倍以上、約1.3倍以上、約1.4倍以上、約1.5倍以上、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約6倍以上、約7倍以上、約8倍以上、約9倍以上、約10倍以上、約12.5倍以上、約15倍以上、約17.5倍以上、約20倍以上、約22.5倍以上、約25倍以上、約30倍以上、約35倍以上、約40倍以上、約45倍以上、約50倍以上である。
　化学的特徴(k)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebDの含有量は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体におけるRebDの含有量の、約0.8倍以下、約0.76倍以下、約0.72倍以下、約0.68倍以下、約0.64倍以下、約0.6倍以下、約0.56倍以下、約0.52倍以下、約0.5倍以下、約0.48倍以下、約0.46倍以下、約0.44倍以下、約0.42倍以下、約0.4倍以下、約0.38倍以下、約0.36倍以下、約0.34倍以下、約0.32倍以下、約0.3倍以下、約0.28倍以下、約0.26倍以下、約0.24倍以下、約0.22倍以下、約0.2倍以下、約0.18倍以下、約0.16倍以下又は約0.14倍以下である。
　化学的特徴(l)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebEの含有量は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体におけるRebEの含有量の、約0.6倍以下、約0.56倍以下、約0.52倍以下、約0.48倍以下、約0.44倍以下、約0.4倍以下、約0.38倍以下、約0.36倍以下、約0.34倍以下、約0.32倍以下、約0.3倍以下、約0.28倍以下、約0.26倍以下、約0.24倍以下、約0.22倍以下、約0.2倍以下、約0.18倍以下、約0.16倍以下、約0.14倍以下、約0.12倍以下、約0.1倍以下、約0.08倍以下、約0.06倍以下、約0.04倍以下、約0.03倍以下、約0.02倍以下又は約0.01倍以下である。
　化学的特徴(m)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebNの含有量は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体におけるRebNの含有量の、約0.9倍以下、約0.86倍以下、約0.82倍以下、約0.78倍以下、約0.74倍以下、約0.7倍以下、約0.66倍以下、約0.62倍以下、約0.58倍以下、約0.54倍以下、約0.5倍以下、約0.48倍以下、約0.46倍以下、約0.44倍以下、約0.42倍以下、約0.4倍以下、約0.38倍以下、約0.36倍以下、約0.34倍以下、約0.32倍以下、約0.3倍以下、約0.28倍以下、約0.26倍以下、約0.24倍以下、約0.22倍以下、約0.2倍以下又は約0.18倍以下である。
　化学的特徴(n)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるステビオシドの含有量は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体におけるステビオシドの含有量の、約0.8倍以下、約0.75倍以下、約0.7倍以下、約0.65倍以下、約0.6倍以下、約0.55倍以下、約0.5倍以下、約0.45倍以下、約0.4倍以下、約0.35倍以下、約0.3倍以下、約0.28倍以下、約0.26倍以下、約0.24倍以下、約0.22倍以下、約0.2倍以下、約0.18倍以下、約0.16倍以下、約0.14倍以下、約0.12倍以下、約0.1倍以下、約0.08倍以下、約0.06倍以下、約0.05倍以下、約0.04倍以下、約0.03倍以下又は約0.02倍以下である。
　化学的特徴(o)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるβ-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体の含有量は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体におけるβ-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体の含有量の、約0.9倍以下、約0.86倍以下、約0.82倍以下、約0.78倍以下、約0.74倍以下、約0.7倍以下、約0.66倍以下、約0.62倍以下、約0.6倍以下、約0.56倍以下、約0.52倍以下、約0.48倍以下、約0.44倍以下、約0.4倍以下、約0.38倍以下、約0.36倍以下、約0.34倍以下、約0.32倍以下、約0.3倍以下、約0.28倍以下、約0.26倍以下、約0.24倍以下、約0.22倍以下、約0.2倍以下、約0.18倍以下、約0.16倍以下、約0.14倍以下、約0.12倍以下、約0.1倍以下、約0.08倍以下、約0.06倍以下、約0.04倍以下、約0.03倍以下、約0.02倍以下、約0.01倍以下である。
　化学的特徴(p)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebD、RebE、RebN、ステビオシドのいずれか1つに対する、RebA、RebB、RebF、RebG、RebMのいずれか1つの含有比は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体における前記比の、約1.2倍以上、約1.5倍以上、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約10倍以上、約15倍以上、約20倍以上、約30倍以上、約40倍以上、約50倍以上、約60倍以上、約70倍以上、約80倍以上、約90倍以上、約100倍以上、約150倍以上、約200倍以上、約250倍以上、約300倍以上、約400倍以上、約500倍以上、約600倍以上又は約700倍以上である。
　化学的特徴(q)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるβ-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体に対するβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有比は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体における前記比の、約1.2倍以上、約1.5倍以上、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約10倍以上、約15倍以上、約20倍以上、約30倍以上、約40倍以上、約50倍以上、約60倍以上、約70倍以上、約80倍以上、約90倍以上、約100倍以上、約150倍以上、約200倍以上、約250倍以上、約300倍以上、約400倍以上、約500倍以上、約600倍以上又は約700倍以上である。
　化学的特徴(r)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるUGT76G1の基質ステビオール配糖体に対する、前記基質ステビオール配糖体からUGT76G1により生成されるステビオール配糖体の含有比は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体における前記比の、約1.2倍以上、約1.5倍以上、約2倍以上、約3倍以上、約4倍以上、約5倍以上、約6倍以上、約8倍以上、約10倍以上、約15倍以上、約20倍以上、約25倍以上、約30倍以上、約35倍以上、約40倍以上、約45倍以上、約50倍以上、約55倍以上、約60倍以上、約65倍以上、約70倍以上、約75倍以上、約80倍以上、約85倍以上、約90倍以上、約95倍以上又は約100倍以上である。
　化学的特徴(a)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebDに対するRebMの含有比は、約0.12以上、約0.16以上、約0.2以上、約0.24以上、約0.28以上、約0.32以上、約0.36以上、約0.4以上、約0.44以上、約0.48以上、約0.5以上、約0.525以上、約0.55以上、約0.575以上、約0.6以上、約0.625以上、約0.65以上、約0.675以上、約0.7以上、約0.725以上、約0.75以上、約0.775以上、約0.8以上、約0.825以上、約0.85以上、約0.875以上、約0.9以上、約0.925以上、約0.95以上、約0.975以上又は約1以上である。
　化学的特徴(b)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebEに対するRebBの含有比は、約0.17以上、約0.5以上、約1以上、約1.5以上、約2以上、約2.5以上、約3以上、約3.5以上、約4以上、約4.5以上、約5以上、約5.5以上、約6以上、約6.5以上、約7以上、約7.5以上、約8以上、約8.5以上、約9以上、約9.5以上、約10.1以上、約10.5以上、約11以上、約11.5以上、約12以上、約12.5以上、約13以上、約13.5以上、約14以上、約14.5以上又は約15以上である。
　化学的特徴(c)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebEに対するRebGの含有比は、約0.004以上、約0.05以上、約0.1以上、約0.2以上、約0.3以上、約0.4以上、約0.5以上、約0.6以上、約0.7以上、約0.8以上、約0.9以上、約1.01以上、約1.02以上、約1.03以上、約1.04以上、約1.05以上、約1.07以上、約1.1以上、約1.12以上、約1.13以上、約1.17以上、約1.2以上、約1.25以上、約1.3以上、約1.35以上、約1.37以上、約1.38以上、約1.4以上、約1.5以上、約1.6以上、約1.7以上、約1.72以上、約1.75以上、約1.8以上、約1.85以上、約1.9以上、約1.95以上又は約2以上である。
　化学的特徴(d)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるステビオシドに対するRebGの含有比は、約0.0007以上、約0.004以上、約0.006以上、約0.008以上、約0.01以上、約0.012以上、約0.014以上、約0.016以上、約0.018以上、約0.02以上、約0.025以上、約0.03以上、約0.035以上、約0.04以上、約0.045以上、約0.05以上、約0.055以上、約0.06以上、約0.065以上、約0.07以上、約0.075以上、約0.08以上、約0.085以上、約0.09以上、約0.091以上、約0.092以上、約0.093以上、約0.094以上、約0.095以上、約0.096以上、約0.097以上、約0.098以上、約0.099以上又は約0.1以上である。
　化学的特徴(e)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebAの含有量は、乾燥葉中の濃度として、約2重量％以上、約2.15重量％以上、約2.3重量％以上、約2.45重量％以上、約2.6重量％以上、約2.75重量％以上、約2.9重量％以上、約3.05重量％以上、約3.2重量％以上、約3.35重量％以上、約3.5重量％以上、約3.65重量％以上、約3.8重量％以上、約4重量％以上、約4.2重量％以上、約4.4重量％以上、約4.6重量％以上、約4.8重量％以上、約5重量％以上、約5.25重量％以上、約5.5重量％以上、約5.75重量％以上、約6重量％以上、約6.25重量％以上、約6.5重量％以上、約6.75重量％以上、約7重量％以上である。
　化学的特徴(f)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebBの含有量は、乾燥葉中の濃度として、約0.04重量％以上、約0.044重量％以上、約0.048重量％以上、約0.052重量％以上、約0.056重量％以上、約0.06重量％以上、約0.064重量％以上、約0.068重量％以上、約0.072重量％以上、約0.076重量％以上、約0.08重量％以上、約0.084重量％以上、約0.088重量％以上、約0.092重量％以上、約0.096重量％以上、約0.1重量％以上、約0.105重量％以上、約0.11重量％以上、約0.115重量％以上、約0.12重量％以上、約0.125重量％以上、約0.13重量％以上、約0.135重量％以上、約0.14重量％以上、約0.145重量％以上、約0.15重量％以上又は約0.16重量％以上である。
　化学的特徴(g)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebFの含有量は、乾燥葉中の濃度として、約0.06重量％以上、約0.064重量％以上、約0.068重量％以上、約0.072重量％以上、約0.076重量％以上、約0.08重量％以上、約0.084重量％以上、約0.088重量％以上、約0.092重量％以上、約0.096重量％以上、約0.1重量％以上、約0.105重量％以上、約0.11重量％以上、約0.115重量％以上、約0.12重量％以上、約0.125重量％以上、約0.13重量％以上、約0.135重量％以上、約0.14重量％以上、約0.145重量％以上、約0.15重量％以上、約0.155重量％以上、約0.16重量％以上、約0.17重量％以上、約0.18重量％以上、約0.19重量％以上又は約0.2重量％以上である。
　化学的特徴(h)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebGの含有量は、乾燥葉中の濃度として、約0.001重量％以上、約0.002重量％以上、約0.003重量％以上、約0.004重量％以上、約0.005重量％以上、約0.006重量％以上、約0.007重量％以上、約0.008重量％以上、約0.009重量％以上、約0.01重量％以上、約0.011重量％以上、約0.012重量％以上、約0.013重量％以上、約0.014重量％以上、約0.016重量％以上、約0.018重量％以上、約0.02重量％以上、約0.022重量％以上、約0.024重量％以上、約0.026重量％以上、約0.028重量％以上、約0.03重量％以上、約0.032重量％以上、約0.034重量％以上、約0.036重量％以上、約0.038重量％以上又は約0.04重量％以上である。
　化学的特徴(i)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebMの含有量は、乾燥葉中の濃度として、約0.15重量％以上、約0.17重量％以上、約0.19重量％以上、約0.21重量％以上、約0.23重量％以上、約0.25重量％以上、約0.27重量％以上、約0.29重量％以上、約0.31重量％以上、約0.33重量％以上、約0.35重量％以上、約0.37重量％以上、約0.39重量％以上、約0.41重量％以上、約0.43重量％以上、約0.45重量％以上、約0.47重量％以上、約0.49重量％以上、約0.51重量％以上、約0.54重量％以上、約0.57重量％以上、約0.6重量％以上、約0.63重量％以上、約0.66重量％以上、約0.69重量％以上、約0.72重量％以上又は約0.75重量％以上である。
　化学的特徴(j)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有量は、乾燥葉中の濃度として、約0.001重量％以上、約0.002重量％以上、約0.005重量％以上、約0.01重量％以上、約0.02重量％以上、約0.04重量％以上、約0.06重量％以上、約0.08重量％以上、約0.1重量％以上、約0.15重量％以上、約0.2重量％以上、約0.3重量％以上、約0.4重量％以上、約0.5重量％以上、約0.6重量％以上、約0.7重量％以上、約0.8重量％以上、約1重量％以上、約1.5重量％以上、約2重量％以上、約2.5重量％以上、約3重量％以上、約3.5重量％以上、約4重量％以上、約5重量％以上、約6重量％以上又は約7重量％以上である。
　化学的特徴(k)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebDの含有量は、乾燥葉中の濃度として、約1.65重量％以下、約1.6重量％以下、約1.55重量％以下、約1.5重量％以下、約1.45重量％以下、約1.4重量％以下、約1.35重量％以下、約1.3重量％以下、約1.25重量％以下、約1.2重量％以下、約1.15重量％以下、約1.1重量％以下、約1.05重量％以下、約1重量％以下、約0.95重量％以下、約0.9重量％以下、約0.85重量％以下、約0.8重量％以下、約0.75重量％以下、約0.7重量％以下、約0.65重量％以下、約0.6重量％以下、約0.55重量％以下、約0.5重量％以下、約0.45重量％以下、約0.4重量％以下又は約0.35重量％以下である。
　化学的特徴(l)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebEの含有量は、乾燥葉中の濃度として、約0.34重量％以下、約0.32重量％以下、約0.3重量％以下、約0.28重量％以下、約0.26重量％以下、約0.24重量％以下、約0.22重量％以下、約0.2重量％以下、約0.18重量％以下、約0.16重量％以下、約0.14重量％以下、約0.12重量％以下、約0.1重量％以下、約0.08重量％以下、約0.06重量％以下、約0.05重量％以下、約0.04重量％以下、約0.03重量％以下、約0.02重量％以下、約0.015重量％以下、約0.01重量％以下、約0.009重量％以下、約0.008重量％以下、約0.007重量％以下、約0.006重量％以下、約0.005重量％以下又は約0.004重量％以下である。
　化学的特徴(m)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebNの含有量は、乾燥葉中の濃度として、約0.35重量％以下、約0.33重量％以下、約0.31重量％以下、約0.29重量％以下、約0.27重量％以下、約0.25重量％以下、約0.24重量％以下、約0.23重量％以下、約0.22重量％以下、約0.21重量％以下、約0.2重量％以下、約0.19重量％以下、約0.18重量％以下、約0.17重量％以下、約0.16重量％以下、約0.15重量％以下、約0.14重量％以下、約0.13重量％以下、約0.12重量％以下、約0.11重量％以下、約0.1重量％以下、約0.09重量％以下、約0.08重量％以下、約0.07重量％以下、約0.06重量％以下、約0.055重量％以下又は約0.05重量％以下である。
　化学的特徴(n)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるステビオシドの含有量は、乾燥葉中の濃度として、約2.5重量％以下、約2.4重量％以下、約2.3重量％以下、約2.2重量％以下、約2.1重量％以下、約2重量％以下、約1.9重量％以下、約1.8重量％以下、約1.7重量％以下、約1.6重量％以下、約1.5重量％以下、約1.4重量％以下、約1.3重量％以下、約1.2重量％以下、約1.1重量％以下、約1重量％以下、約0.9重量％以下、約0.8重量％以下、約0.7重量％以下、約0.6重量％以下、約0.5重量％以下、約0.45重量％以下、約0.4重量％以下、約0.35重量％以下、約0.3重量％以下、約0.25重量％以下又は約0.2重量％以下である。
　化学的特徴(o)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるβ-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体の含有量は、乾燥葉中の濃度として、約2.5重量％以下、約2.2重量％以下、約2重量％以下、約1.8重量％以下、約1.6重量％以下、約1.4重量％以下、約1.2重量％以下、約1重量％以下、約0.9重量％以下、約0.8重量％以下、約0.7重量％以下、約0.6重量％以下、約0.5重量％以下、約0.4重量％以下、約0.3重量％以下、約0.2重量％以下、約0.1重量％以下、約0.08重量％以下、約0.06重量％以下、約0.04重量％以下、約0.02重量％以下、約0.015重量％以下、約0.01重量％以下、約0.008重量％以下、約0.006重量％以下、約0.005重量％以下、約0.004重量％以下である。
　化学的特徴(p)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるRebD、RebE、RebN、ステビオシドのいずれか1つに対する、RebA、RebB、RebF、RebG、RebMのいずれか1つの含有比は、約0.0007以上、約0.004以上、約0.01以上、約0.02以上、約0.03以上、約0.05以上、約0.08以上、約0.091以上、約0.095以上、約0.1以上、約0.2以上、約0.3以上、約0.5以上、約0.8以上、約1以上、約1.05以上、約1.07以上、約1.1以上、約1.2以上、約1.5以上、約2以上、約3以上、約4以上、約5以上、約8以上、約10以上、約10.5以上、約11以上、約11.5以上、約12以上、約12.5以上、約13以上、約13.5以上、約14以上、約14.5以上又は約15以上である。
　化学的特徴(q)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるβ-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体に対するβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有比は、約0.0007以上、約0.004以上、約0.01以上、約0.02以上、約0.03以上、約0.05以上、約0.08以上、約0.091以上、約0.095以上、約0.1以上、約0.2以上、約0.3以上、約0.5以上、約0.8以上、約1以上、約1.05以上、約1.07以上、約1.1以上、約1.2以上、約1.5以上、約2以上、約3以上、約4以上、約5以上、約8以上、約10以上、約10.5以上、約11以上、約11.5以上、約12以上、約12.5以上、約13以上、約13.5以上、約14以上、約14.5以上又は約15以上である。
　化学的特徴(r)に関し、一部の態様において、本発明の植物体におけるUGT76G1の基質ステビオール配糖体に対する、前記基質ステビオール配糖体からUGT76G1により生成されるステビオール配糖体の含有比は、約0.15以上、約0.3以上、約0.5以上、約0.7以上、約0.9以上、約1以上、約1.5以上、約2以上、約3以上、約5以上、約7以上、約10以上、約15以上、約16以上、約17以上、約20以上、約25以上、約30以上、約35以上、約40以上、約45以上、約50以上、約51以上、約55以上、約60以上、約65以上、約66以上、約70以上、約75以上又は約80以上である。
　一部の態様において、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体は、RebD及びRebNを含まない。一部の態様において、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体は、β-1,3-グルコシド結合を2個有する。別の態様において、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体は、β-1,3-グルコシド結合を1個有する。好ましい態様において、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体は、RebA、RebB、RebF、RebH、RebG、RebI、RebJ、RebM、RebO、RebQ及びズルコシドBからなる群から選択される。特定の態様において、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体は、RebA、RebB、RebF、RebG及びRebMからなる群から選択される。
　一部の態様において、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体は、ステビオールモノシド、ステビオールビオシド、ルブソシド、ステビオシド、RebE及びズルコシドAからなる群から選択される。特定の態様において、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体は、ステビオシド及びRebEからなる群から選択される。
　一部の態様において、UGT76G1の基質ステビオール配糖体は、ステビオールモノシド、ルブソシド、ステビオールビオシド、ステビオシド、RebA、RebD、RebE及びRebGから選択される。この態様において、「基質ステビオール配糖体からUGT76G1により生成されるステビオール配糖体」は、ステビオールモノシドに対してはステビオール-1,3-ビオシド、ルブソシドに対してはRebG、ステビオールビオシドに対してはRebB、ステビオシドに対してはRebA、RebAに対してはRebI、RebDに対してはRebM、RebEに対してはRebD、RebGに対してはRebQである。
　ステビオール配糖体は、本発明の植物体の新鮮葉又は乾燥葉に適切な溶媒(水等の水性溶媒又はアルコール、エーテル及びアセトン等の有機溶媒)を反応させることにより抽出液の状態で抽出することができる。抽出条件等はOhta et al., J. Appl. Glycosci., Vol. 57, No. 3, 199-209 (2010)又はWO2010/038911に記載の方法や、後述の実施例に記載の方法を参照することができる。
　さらに、このようにして得られた抽出液に対し、酢酸エチルその他の有機溶媒：水の勾配、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)、ガスクロマトグラフィー、飛行時間型質量分析(TOF-MS)、超高速液体クロマトグラフィー(UPLC)等の公知の方法を用いることにより個々のステビオール配糖体、例えば、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体、RebA、RebB、RebF、RebG、RebM等を精製することができる。
　ステビオール配糖体の含量は、上記Ohta et al.又はWO2010/038911に記載の方法や、後述の実施例に記載の方法で測定することができる。具体的には、例えば、本発明のステビア植物体から新鮮葉をサンプリングし、LC－MS/MSを行うことなどにより測定することができる。
　本発明の植物体には植物体全体のみならず、植物器官(例えば葉、花弁、茎、根、種子等)、植物組織(例えば表皮、師部、柔組織、木部、維管束、柵状組織、海綿状組織等)或いは種々の形態の植物細胞(例えば、懸濁培養細胞)、プロトプラスト、葉の切片、カルス等が含まれ得る。また、葉は先に述べた乾燥葉であってもよい。
　また、本発明の植物体には、組織培養物又は植物培養細胞も含まれ得る。このような組織培養物又は植物培養細胞を培養することにより、植物体を再生することができるからである。本発明の植物体の再生可能な形態の例としては、胚、分裂組織細胞、花粉、葉、根、根端、花弁、プロトプラスト、葉の切片及びカルス等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
2．本発明の植物体の作出方法
　本発明は、別の実施態様において、本発明のステビア植物体と第2のステビア植物体とを交雑させる工程を含む、化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つを有するステビア植物体を作出する方法(以下、「本発明の作出方法」と称する場合がある)を提供する。
　当該方法により作出されるステビア植物体は、本発明の植物体と同じ表現型と遺伝的特徴を有し得る。本発明の作出方法によって得られる植物体における個々の化学的特徴の詳細は、本発明の植物体について上記したとおりである。
　本発明の作出方法において、「交雑させる」とは、本発明の植物体(第一代(S1))と、第2の植物体(S1)とを交配させることにより、その子植物体(本発明の作出方法により作出される植物体(第二代(S2))を得ることを意味する。交雑方法としては、戻し交雑が好ましい。「戻し交雑」とは、本発明の植物体と第2の植物体との間に生まれた子植物体(S2)を、さらに本発明の植物体(つまり、本発明の遺伝的特徴を有する植物体)(S1)と交雑させて、本発明の遺伝的特徴を有する植物体を作出する手法である。本発明の作出方法に用いられる第2の植物体(S1)が、本発明の植物体と同じ表現型と遺伝的特徴を有する場合には、実質的に戻し交雑となる。
　或いは、本発明の植物体は自殖により作出することもできる。自殖は、本発明の植物体のおしべの花粉を本発明の植物体のめしべに自家受粉させることにより行うことができる。
　本発明の作出方法により作出される植物体の表現型及び遺伝的特徴が本発明の植物体と同じである場合、本発明の作出方法により作出される植物体をさらに第3のステビア植物体と交雑させることにより、本発明の植物体と同等の表現型を有するステビア植物体を作出することも可能である。
　別の態様として、本発明の植物体は、先に述べた組織培養物又は植物培養細胞を培養することにより植物体を再生することで作出することも可能である。培養条件については、野生型ステビア植物の組織培養物又は植物培養細胞を培養する条件と同じであり、公知である(Protocols for In Vitro cultures and secondary metabolite analysis of aromatic and medicinal plants, Method in molecular biology, vol. 1391, pp113-123)。
　さらに別の態様として、本発明の植物体は、ステビア植物体のゲノムを改変し、本発明の遺伝的特徴を獲得させることで作出することも可能である。本発明の遺伝的特徴の獲得は、遺伝子組換的手法(例えばゲノム編集等)により行っても、上述のような非遺伝子組換的手法により行ってもよい。非遺伝子組換的手法は、本発明の植物体の項に記載した、変異誘発剤による処理や、放射線又は光線の照射による処理等の変異誘発処理を含む。具体的には、例えば、配列番号1の184位に相当する位置の塩基がGではないアレル(例えば、前記位置の塩基がAであるアレル)を有する個体に対しては、前記位置の塩基のGへの置換、配列番号2の170位に相当する位置の塩基がCではないアレル(例えば、前記位置の塩基がTであるアレル)を有する個体に対しては、前記位置の塩基のCへの置換、配列番号3の92位に相当する位置の塩基がCではないアレル(例えば、前記位置の塩基がTであるアレル)を有する個体に対しては、前記位置の塩基のCへの置換により本発明の遺伝的特徴を獲得させることができる。
3．本発明の植物体のスクリーニング方法
　本発明の植物体及び本発明の植物体と同じ表現型及び/又は遺伝的特徴を有する植物体は、当該植物体の組織から本発明の遺伝的特徴を検出することによりスクリーニングすることができる。ここで、「スクリーニング」とは、本発明の植物体とそれ以外の植物体とを識別し、本発明の植物体を選択することを意味する。
　したがって、本発明は、別の側面において、被験植物のゲノムから遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つの存在及び/又は不在を検出する工程を含む、化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つを有するステビア植物体をスクリーニングする方法(以下、「本発明のスクリーニング方法」と称する場合がある)を提供する。
　一部の態様において、検出対象となる遺伝的特徴は遺伝的特徴(1)～(3)のいずれか1つである。一部の態様において、検出対象となる遺伝的特徴は遺伝的特徴(1)及び(2)である。一部の態様において、検出対象となる遺伝的特徴は遺伝的特徴(1)及び(3)である。一部の態様において、検出対象となる遺伝的特徴は遺伝的特徴(2)及び(3)である。一部の態様において、検出対象となる遺伝的特徴は遺伝的特徴(1)～(3)のすべてである。
　本発明のスクリーニング方法は、上記の少なくとも1つの遺伝的特徴の存在が検出された植物体を被験植物の中から選択する工程をさらに含んでもよい。
　本発明の遺伝的特徴の存在は、例えば、
(I)配列番号1の184位に相当する位置の塩基がGであるアレル(例えば、配列番号10、11、12又は13の塩基配列を含むアレル)、
(II)配列番号2の170位に相当する位置の塩基がCであるアレル(例えば、配列番号14、15、16又は17の塩基配列を含むアレル)、及び
(III)配列番号3の92位に相当する位置の塩基がCであるアレル(例えば、配列番号18、19、20又は21の塩基配列を含むアレル)
からなる群から選択されるアレルの存在の検出、及び/又は、
(i)配列番号3の92位に相当する位置の塩基がTであるアレル(例えば、配列番号3、46、47又は48の塩基配列を含むアレル)の不在の検出
により決定することができる。
　本発明の遺伝的特徴の不在は、例えば、
(I)配列番号1の184位に相当する位置の塩基がGであるアレル(例えば、配列番号10、11、12又は13の塩基配列を含むアレル)、
(II)配列番号2の170位に相当する位置の塩基がCであるアレル(例えば、配列番号14、15、16又は17の塩基配列を含むアレル)、及び
(III)配列番号3の92位に相当する位置の塩基がCであるアレル(例えば、配列番号18、19、20又は21の塩基配列を含むアレル)からなる群から選択されるアレルの不在の検出、及び/又は、
(i)配列番号3の92位に相当する位置の塩基がTであるアレル(例えば、配列番号3、46、47又は48の塩基配列を含むアレル)の存在の検出
により決定することができる。
　本発明の遺伝的特徴の検出方法の具体例としては、PCR法、TaqMan PCR法、シーケンス法、マイクロアレイ法、インベーダー法、TILLING法、RAD法、RFLP法、PCR－SSCP法、AFLP法、SSLP法、CAPS法、dCAPS法、ASO法、ARMS法、DGGE法、CCM法、DOL法、MALDI－TOF/MS法、TDI法、パドロックプローブ法、分子ビーコン法、DASH法、UCAN法、ECA法、PINPOINT法、PROBE法、VSET法、Survivor assay、Sniper assay、Luminex assay、GOOD法、LCx法、SNaPshot法、Mass ARRAY法、パイロシーケンス法、SNP－IT法、融解曲線分析法等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
　一態様において、本発明の遺伝的特徴(1)は、例えば、以下のプライマーセットと制限酵素とを用いたdCAPS法により検出することができる。
・プライマーセット：
　配列番号49又は50の1～211位に位置する任意の連続する15塩基以上の配列(例えば、配列番号22)を含むフォワードプライマーと、配列番号23の3’末端から15～36塩基長の連続する配列を含むリバースプライマーとを含む、プライマーセット。
・制限酵素：EcoRV。
　一態様において、本発明の遺伝的特徴(2)は、例えば、以下のプライマーセットと制限酵素とを用いたdCAPS法により検出することができる。
・プライマーセット：
　配列番号51又は52の1～204位に位置する任意の連続する15塩基以上の配列(例えば、配列番号28)を含むフォワードプライマーと、配列番号29の3’末端から15～36塩基長の連続する配列を含むリバースプライマーとを含む、プライマーセット。
・制限酵素：PvuII。
　一態様において、本発明の遺伝的特徴(3)は、例えば、以下のプライマーセットと制限酵素とを用いたdCAPS法により検出することができる。
・プライマーセット：
　配列番号53又は54の1～246位に位置する任意の連続する15塩基以上の配列(例えば、配列番号34)を含むフォワードプライマーと、配列番号35の3’末端から15～36塩基長の連続する配列を含むリバースプライマーとを含む、プライマーセット。
・制限酵素：PvuII。
　プライマーの配列は、上記の条件を満たす範囲で最適化することができる。プライマー設計の最適化については、例えば、Sambrook and Russell, ”Molecular Cloning: A Laboratory Manual” 3rd Edition (2001), Cold Spring Harbor Laboratory Press等を参照のこと。上記各プライマーは、15～50塩基長、18～48塩基長、20～45塩基長、30～40塩基長等であってよい。各プライマーセットに対応する制限酵素には、上記酵素と同じ配列を認識し、同じ個所を切断する他の酵素、又は上記酵素のアイソシゾマーも含まれる。また、本発明の遺伝的特徴に基づき、上記以外のプライマーセットを設計し、それに対応する制限酵素を選択することも可能である。
　特定の態様において、本発明の遺伝的特徴(1)～(3)は、例えば、以下の配列を有するプライマーセットと制限酵素とを用いたdCAPS法により検出することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　本発明のスクリーニング方法は、本発明の遺伝的特徴が検出された被験ステビア植物の組織(例えば葉)のステビオール配糖体の含有量(例えば、RebA、RebB、RebD、RebE、RebF、RebG、RebM、RebN及び/又はステビオシドの含有量)を測定する工程をさらに含んでもよい。ステビオール配糖体含有量の測定は、１．ステビア植物体の項に記載したとおりである。又、この態様において、本発明の遺伝的特徴が検出された被験ステビア植物体のうち、化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つの程度が高い個体を選択して、これを他のステビア植物体と交配し、得られた子植物体について、本発明のスクリーニング方法を適用してもよい。したがって、本発明のスクリーニング方法は、以下の1以上の工程を含み得る。
(i)被験ステビア植物のゲノムから、本発明の遺伝的特徴を検出する工程、
(ii)本発明の遺伝的特徴が検出された被験ステビア植物組織のステビオール配糖体の含有量を測定する工程、
(iii)本発明の遺伝的特徴が検出された被験ステビア植物体のうち、化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つの程度が高い個体を選択する工程、
(iv)選択した化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つの程度が高い個体を他のステビア植物体と交配する工程、
(v)交配により得られた子植物体のゲノムから、本発明の遺伝的特徴を検出する工程、
(vi)本発明の遺伝的特徴が検出された子植物組織のステビオール配糖体の含有量を測定する工程、
(vii)本発明の遺伝的特徴が検出された子植物体のうち、化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つの程度が高い個体を選択する工程。
　化学的特徴の程度が高い個体とは、化学的特徴(a)～(d)、(p)及び(r)については対象となるステビオール配糖体の含有比が高い個体、化学的特徴(e)～(j)については対象となるステビオール配糖体の含有量が多い個体、化学的特徴(k)～(o)については対象となるステビオール配糖体の含有量が少ない個体をそれぞれ意味する。
　選択する化学的特徴の程度が高い個体は、例えば、本発明の遺伝的特徴が検出された被験ステビア植物体のうち、化学的特徴の程度の高さに関し上位50％まで、上位40％まで、上位30％まで、上位20％まで、上位10％まで、上位5％まで、上位4％まで、上位3％まで、上位2％まで又は上位1％までの個体等であってよい。又、交配する他のステビア植物体は、本発明の遺伝的特徴を含んでいても含んでいなくてもよい。上記態様において、工程(iv)～(vii)は、複数回繰り返すことができる。このようにして、化学的特徴の程度がより高いステビア植物体をスクリーニングすることができる。
　本発明のスクリーニング方法において、被験ステビア植物体は、天然植物体であっても、非遺伝子組換植物体であってもよい。非遺伝子組換植物体については、１．ステビア植物体の項に記載したとおりである。
　本発明のスクリーニング方法において、被験ステビア植物体は、変異誘発処理を行ったステビア植物及びその子孫植物を含んでもよい。変異誘発処理については、１．ステビア植物体の項に記載したとおりであり、変異誘発剤による処理や、放射線又は光線の照射による処理等を含む。
　又本発明は、上記に記載されたプライマーセット及びその組合せ、例えば、前記表1に記載のプライマーセット及びその組合せを提供する。本発明は、さらに、配列番号1～3、10、14及び18からなる群から選択される塩基配列を有する領域をPCRにより増幅し得るプライマーセット、例えば、配列番号4の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号5の塩基配列を含むリバースプライマーとのプライマーセット、配列番号6の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号7の塩基配列を含むリバースプライマーとのプライマーセット、配列番号8の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号9の塩基配列を含むリバースプライマーとのプライマーセット、及びこれらのプライマーセットの組合せを提供する。
　さらに、本発明は、本発明の遺伝的特徴の存在及び/又は不在を検出し得るプローブ(以下、「本発明のプローブ」と称する場合がある)を提供する。本発明のプローブは、本発明の遺伝的特徴の存在及び/又は不在の各種検出方法(例えば、TaqMan　PCR法等のリアルタイムPCR法)に適した構造を有し得る。例えば、本発明のプローブは、本発明の遺伝的特徴に係る部位を含むゲノムの部分に相補性を有する塩基配列を含み得る。かかるプローブの非限定例としては、配列番号11～13、15～17、19～21及び40～48から選択される塩基配列に相補的な配列を含むものが挙げられる。これらの配列のうち、配列番号11～13、15～17及び19～21は本発明の遺伝的特徴に係るアレルに特異的であり、配列番号40～48は、本発明の遺伝的特徴に係るアレルではないアレルに特異的である。
　又、配列番号11～13は本発明の遺伝的特徴(1)に係るアレルに特異的であり、配列番号15～17は本発明の遺伝的特徴(2)に係るアレルに特異的であり、配列番号19～21は本発明の遺伝的特徴(3)に係るアレルに特異的である。さらに、配列番号40～42は本発明の遺伝的特徴(1)に係るアレルではないアレルに特異的であり、配列番号43～45は本発明の遺伝的特徴(2)に係るアレルではないアレルに特異的であり、配列番号46～48は本発明の遺伝的特徴(3)に係るアレルではないアレルに特異的である。
　本発明の遺伝的特徴の存在は、本発明の遺伝的特徴に係るアレルの検出により検出することができ、本発明の遺伝的特徴の不在は、本発明の遺伝的特徴に係るアレルの非検出により検出することができる。又、本発明の遺伝的特徴(3)の存在は、本発明の遺伝的特徴(3)に係るアレルではないアレルの非検出によっても検出することができ、本発明の遺伝的特徴(3)の不在は、本発明の遺伝的特徴(3)に係るアレルではないアレルの検出によっても検出することができる。
　本発明のプローブは、好ましくは標識を有する。かかる標識の非限定例としては、蛍光標識、発光標識、放射性標識、色素、酵素、クエンチャー、検出可能な標識との結合部分等が挙げられる。特定の態様において、本発明のプローブは、配列番号11～13、15～17、19～21及び40～48から選択される配列に相補的な塩基配列を含むポリヌクレオチドと、標識とを有する。
　本発明は又、上記のプライマーセットとこれに対応する制限酵素とを含むキットを提供する。特定の態様において、本発明のキットは前記表1に記載のフォワードプライマーとリバースプライマーとの組合せを含むプライマーセットと、これに対応する制限酵素とを含む。
　本発明は又、配列番号1～3、10、14及び18からなる群から選択される塩基配列を有する領域をPCRにより増幅し得るプライマーセットと、それに対応する上記の本発明のプローブとを含むキットを提供する。
　これらのプライマーセット、プローブ及びキットは、本発明の遺伝的特徴を検出するために用いること、本発明のスクリーニング方法に用いることなどが可能である。又、これらのプライマーセット及びキットには、本発明の遺伝的特徴の検出や、本発明のスクリーニング方法に関する説明を含む指示、例えば、使用説明書や、使用方法に関する情報を含むサイトの情報(例えば、URL、二次元コード)、使用方法に関する情報を記録した媒体(例えば、フレキシブルディスク、CD、DVD、ブルーレイディスク、メモリーカード、USBメモリー)等が含まれていてもよい。
　一部の態様において、本発明は、遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つの存在及び/又は不在を検出するための試薬を含む、化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つを有するステビア植物体のスクリーニングキットを提供する。試薬は、CAPS法、dCAPS法又はTaqMan　PCR法に使用するプライマー及び/又はプローブを含み得る。特定の態様において、遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つの存在及び/又は不在を検出するための試薬は、上記の遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つをdCAPS法で検出するためのプライマーセットと制限酵素との組合せ、例えば前記表1に記載のプライマーセットと制限酵素との組合せ、又は、TaqMan　PCR法等で使用することができる、遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つに係る部位(例えば、配列番号10～21から選択される配列を含む部位)を増幅するプライマーセットと、遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つに係る部位(例えば、配列番号11～13、15～17及び19～21から選択される配列を含む部位)に相補的な塩基配列を有するプローブとの組合せを含む。
4．植物体由来抽出物の製造方法及び当該抽出物を用いた製品
　本発明のさらなる態様において、本発明の植物体、本発明のスクリーニング方法により選別されたステビア植物体若しくは本発明の作出方法により製造されたステビア植物体、又は当該植物体の種子、葉(例えば、乾燥葉又は新鮮葉)、組織、組織培養物若しくは細胞から抽出物を得る工程を含む、以下の化学的特徴(a')～(r')の少なくとも1つを有する抽出物の製造方法(以下、「本発明の抽出物の製造方法」と称する場合がある)が提供される。
(a')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebDに対するRebMの含有比が高い。
(b')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebEに対するRebBの含有比が高い。
(c')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebEに対するRebGの含有比が高い。
(d')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、ステビオシドに対するRebGの含有比が高い。 
(e')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebAの含有量が多い。
(f')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebBの含有量が多い。
(g')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebFの含有量が多い。
(h')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebGの含有量が多い。
(i')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebMの含有量が多い。
(j')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有量が多い。 
(k')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebDの含有量が少ない。
(l')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebEの含有量が少ない。
(m')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebNの含有量が少ない。
(n')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、ステビオシドの含有量が少ない。
(o')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体の含有量が少ない。
(p') 本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebD、RebE、RebN、ステビオシドのいずれか1つに対する、RebA、RebB、RebF、RebG、RebMのいずれか1つの含有比が高い。
(q')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体に対するβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有比が高い。
(r')本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物に比べ、UGT76G1の基質ステビオール配糖体に対する、前記基質ステビオール配糖体からUGT76G1により生成されるステビオール配糖体の含有比が高い。
　さらに、本発明の植物体、本発明のスクリーニング方法により選別されたステビア植物体若しくは本発明の作出方法により製造されたステビア植物体、又は当該植物体の種子、葉(例えば、乾燥葉又は新鮮葉)、組織、組織培養物若しくは細胞からの化学的特徴(a')～(r')の少なくとも1つを有する抽出物(以下、「本発明の抽出物」と称する場合がある)が提供される。本発明の抽出物は、好適には、本発明の抽出物の製造方法により製造されたものである。本発明の抽出物は、未精製であっても(未精製抽出物又は粗抽出物)、精製されていてもよい(精製抽出物)。さらに又、本発明の抽出物からステビオール配糖体を精製する工程を含む、前記ステビオール配糖体の製造方法(以下、「本発明のステビオール配糖体の製造方法」と称する場合がある)が提供される。本発明のステビオール配糖体の製造方法は、本発明の植物体、本発明のスクリーニング方法により選別されたステビア植物体又は本発明の作出方法により製造されたステビア植物体から化学的特徴(a')～(r')の少なくとも1つを有する抽出物を得る工程をさらに含んでもよい。本発明のステビオール配糖体の製造方法により製造されるステビオール配糖体は特に限定されず、例えば、RebA、RebB、RebC、RebD、RebE、RebF、RebG、RebI、RebJ、RebM、RebN、RebO、RebQ、ステビオシド、ステビオールビオシド、ステビオールモノシド、ズルコシドA、ズルコシドB、ルブソシド等が挙げられる。好ましい態様において、前記ステビオール配糖体は、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体である。より好ましい態様において、前記ステビオール配糖体は、本発明の植物体において、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体におけるより含量又は含有比の高いものである。特に好ましい態様において、前記ステビオール配糖体は、RebA、RebB、RebF、RebG、RebM及びその組合せから選択される。
　化学的特徴(a')～(r')の少なくとも1つを有する抽出物は、本発明の植物体の新鮮葉又は乾燥葉に適切な溶媒(水等の水性溶媒又はアルコール、エーテル及びアセトン等の有機溶媒)を反応させることにより得ることができる。抽出条件等は上記Ohta et al.又はWO2010/038911に記載の方法や、後述の実施例に記載の方法を参照することができる。
　又、化学的特徴(a')～(r')の少なくとも1つを有する抽出物を酢酸エチルその他の有機溶媒：水の勾配、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)、ガスクロマトグラフィー、飛行時間型質量分析(TOF-MS)、超高速液体クロマトグラフィー(UPLC)等の公知の方法を用いることによりステビオール配糖体を精製することができる。
　化学的特徴(a')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebDに対するRebMの含有比は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体から本発明の抽出物と同様の製造方法で得られた抽出物(以下、対照抽出物という)における前記比の、約1.2倍以上、約1.6倍以上、約2倍以上、約2.4倍以上、約2.8倍以上、約3.2倍以上、約3.6倍以上、約4倍以上、約4.4倍以上、約4.8倍以上、約5.2倍以上、約5.6倍以上、約6倍以上、約6.4倍以上、約6.8倍以上、約7.2倍以上、約7.6倍以上、約8倍以上、約8.4倍以上、約8.8倍以上、約9.2倍以上、約9.6倍以上、約10倍以上、約10.5倍以上、約11倍以上、約11.5倍以上又は約12倍以上である。
　化学的特徴(b')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebEに対するRebBの含有比は、対照抽出物における前記比の、約1.5倍以上、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約10倍以上、約15倍以上、約20倍以上、約30倍以上、約40倍以上、約50倍以上、約60倍以上、約70倍以上、約80倍以上、約90倍以上、約100倍以上、約150倍以上、約200倍以上、約250倍以上、約300倍以上、約400倍以上、約500倍以上、約600倍以上又は約700倍以上である。
　化学的特徴(c')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebEに対するRebGの含有比は、対照抽出物における前記比の、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約10倍以上、約15倍以上、約20倍以上、約25倍以上、約30倍以上、約40倍以上、約50倍以上、約60倍以上、約70倍以上、約80倍以上、約90倍以上、約100倍以上、約150倍以上、約200倍以上、約250倍以上、約300倍以上、約400倍以上、約500倍以上、約600倍以上又は約700倍以上である。
　化学的特徴(d')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるステビオシドに対するRebGの含有比は、対照抽出物における前記比の、約1.5倍以上、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約10倍以上、約15倍以上、約20倍以上、約30倍以上、約40倍以上、約50倍以上、約60倍以上、約70倍以上、約80倍以上、約90倍以上、約100倍以上、約150倍以上、約200倍以上、約250倍以上、約300倍以上、約400倍以上、約500倍以上、約600倍以上又は約700倍以上である。
　化学的特徴(e')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebAの含有量は、対照抽出物におけるRebAの含有量の、約1.05倍以上、約1.1倍以上、約1.15倍以上、約1.2倍以上、約1.25倍以上、約1.3倍以上、約1.35倍以上、約1.5倍以上、約1.65倍以上、約1.8倍以上、約1.95倍以上、約2.1倍以上、約2.25倍以上、約2.4倍以上、約2.55倍以上、約2.7倍以上、約2.85倍以上、約3倍以上、約3.15倍以上、約3.3倍以上、約3.5倍以上、約3.7倍以上、約3.9倍以上、約4.1倍以上、約4.3倍以上、約4.5倍以上又は約4.7倍以上である。
　化学的特徴(f')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebBの含有量は、対照抽出物におけるRebBの含有量の、約1.05倍以上、約1.15倍以上、約1.25倍以上、約1.35倍以上、約1.5倍以上、約1.65倍以上、約1.8倍以上、約2倍以上、約2.25倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約5.5倍以上、約6倍以上、約7倍以上、約8倍以上、約9倍以上、約10倍以上、約11倍以上、約12倍以上、約13倍以上、約14倍以上、約15倍以上又は約16倍以上である。
　化学的特徴(g')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebFの含有量は、対照抽出物におけるRebFの含有量の、約1.02倍以上、約1.03倍以上、約1.04倍以上、約1.05倍以上、約1.1倍以上、約1.15倍以上、約1.2倍以上、約1.25倍以上、約1.3倍以上、約1.35倍以上、約1.4倍以上、約1.45倍以上、約1.5倍以上、約1.6倍以上、約1.8倍以上、約2倍以上、約2.2倍以上、約2.4倍以上、約2.6倍以上、約2.8倍以上、約3倍以上、約3.2倍以上、約3.4倍以上、約3.6倍以上、約3.8倍以上、約4倍以上又は約4.2倍以上である。
　化学的特徴(h')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebGの含有量は、対照抽出物におけるRebGの含有量の、約1.2倍以上、約1.3倍以上、約1.4倍以上、約1.5倍以上、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約6倍以上、約7倍以上、約8倍以上、約9倍以上、約10倍以上、約12.5倍以上、約15倍以上、約17.5倍以上、約20倍以上、約22.5倍以上、約25倍以上、約30倍以上、約35倍以上、約40倍以上、約45倍以上又は約50倍以上である。
　化学的特徴(i')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebMの含有量は、対照抽出物におけるRebMの含有量の、約1.05倍以上、約1.1倍以上、約1.15倍以上、約1.2倍以上、約1.3倍以上、約1.4倍以上、約1.5倍以上、約1.7倍以上、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約6倍以上、約7倍以上、約8倍以上、約9倍以上、約10倍以上、約12倍以上、約14倍以上、約16倍以上、約18倍以上、約20倍以上、約22倍以上又は約24倍以上である。
　化学的特徴(j')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有量は、対照抽出物におけるβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有量の、約1.02倍以上、約1.03倍以上、約1.04倍以上、約1.05倍以上、約1.1倍以上、約1.15倍以上、約1.2倍以上、約1.3倍以上、約1.4倍以上、約1.5倍以上、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約6倍以上、約7倍以上、約8倍以上、約9倍以上、約10倍以上、約12.5倍以上、約15倍以上、約17.5倍以上、約20倍以上、約22.5倍以上、約25倍以上、約30倍以上、約35倍以上、約40倍以上、約45倍以上、約50倍以上である。
　化学的特徴(k')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebDの含有量は、対照抽出物におけるRebDの含有量の、約0.8倍以下、約0.76倍以下、約0.72倍以下、約0.68倍以下、約0.64倍以下、約0.6倍以下、約0.56倍以下、約0.52倍以下、約0.5倍以下、約0.48倍以下、約0.46倍以下、約0.44倍以下、約0.42倍以下、約0.4倍以下、約0.38倍以下、約0.36倍以下、約0.34倍以下、約0.32倍以下、約0.3倍以下、約0.28倍以下、約0.26倍以下、約0.24倍以下、約0.22倍以下、約0.2倍以下、約0.18倍以下、約0.16倍以下又は約0.14倍以下である。
　化学的特徴(l')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebEの含有量は、対照抽出物におけるRebEの含有量の、約0.6倍以下、約0.56倍以下、約0.52倍以下、約0.48倍以下、約0.44倍以下、約0.4倍以下、約0.38倍以下、約0.36倍以下、約0.34倍以下、約0.32倍以下、約0.3倍以下、約0.28倍以下、約0.26倍以下、約0.24倍以下、約0.22倍以下、約0.2倍以下、約0.18倍以下、約0.16倍以下、約0.14倍以下、約0.12倍以下、約0.1倍以下、約0.08倍以下、約0.06倍以下、約0.04倍以下、約0.03倍以下、約0.02倍以下又は約0.01倍以下である。
　化学的特徴(m')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebNの含有量は、対照抽出物におけるRebNの含有量の、約0.9倍以下、約0.86倍以下、約0.82倍以下、約0.78倍以下、約0.74倍以下、約0.7倍以下、約0.66倍以下、約0.62倍以下、約0.58倍以下、約0.54倍以下、約0.5倍以下、約0.48倍以下、約0.46倍以下、約0.44倍以下、約0.42倍以下、約0.4倍以下、約0.38倍以下、約0.36倍以下、約0.34倍以下、約0.32倍以下、約0.3倍以下、約0.28倍以下、約0.26倍以下、約0.24倍以下、約0.22倍以下、約0.2倍以下又は約0.18倍以下である。
　化学的特徴(n')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるステビオシドの含有量は、対照抽出物におけるステビオシドの含有量の、約0.8倍以下、約0.75倍以下、約0.7倍以下、約0.65倍以下、約0.6倍以下、約0.55倍以下、約0.5倍以下、約0.45倍以下、約0.4倍以下、約0.35倍以下、約0.3倍以下、約0.28倍以下、約0.26倍以下、約0.24倍以下、約0.22倍以下、約0.2倍以下、約0.18倍以下、約0.16倍以下、約0.14倍以下、約0.12倍以下、約0.1倍以下、約0.08倍以下、約0.06倍以下、約0.05倍以下、約0.04倍以下、約0.03倍以下又は約0.02倍以下である。
　化学的特徴(o')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるβ-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体の含有量は、対照抽出物におけるβ-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体の含有量の、約0.9倍以下、約0.86倍以下、約0.82倍以下、約0.78倍以下、約0.74倍以下、約0.7倍以下、約0.66倍以下、約0.62倍以下、約0.6倍以下、約0.56倍以下、約0.52倍以下、約0.48倍以下、約0.44倍以下、約0.4倍以下、約0.38倍以下、約0.36倍以下、約0.34倍以下、約0.32倍以下、約0.3倍以下、約0.28倍以下、約0.26倍以下、約0.24倍以下、約0.22倍以下、約0.2倍以下、約0.18倍以下、約0.16倍以下、約0.14倍以下、約0.12倍以下、約0.1倍以下、約0.08倍以下、約0.06倍以下、約0.04倍以下、約0.03倍以下、約0.02倍以下、約0.01倍以下である。
　化学的特徴(p')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebD、RebE、RebN、ステビオシドのいずれか1つに対する、RebA、RebB、RebF、RebG、RebMのいずれか1つの含有比は、対照抽出物における前記比の、約1.2倍以上、約1.5倍以上、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約10倍以上、約15倍以上、約20倍以上、約30倍以上、約40倍以上、約50倍以上、約60倍以上、約70倍以上、約80倍以上、約90倍以上、約100倍以上、約150倍以上、約200倍以上、約250倍以上、約300倍以上、約400倍以上、約500倍以上、約600倍以上又は約700倍以上である。
　化学的特徴(q')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるβ-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体に対するβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有比は、対照抽出物における前記比の、約1.2倍以上、約1.5倍以上、約2倍以上、約2.5倍以上、約3倍以上、約3.5倍以上、約4倍以上、約4.5倍以上、約5倍以上、約10倍以上、約15倍以上、約20倍以上、約30倍以上、約40倍以上、約50倍以上、約60倍以上、約70倍以上、約80倍以上、約90倍以上、約100倍以上、約150倍以上、約200倍以上、約250倍以上、約300倍以上、約400倍以上、約500倍以上、約600倍以上又は約700倍以上である。
　化学的特徴(r')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるUGT76G1の基質ステビオール配糖体に対する、前記基質ステビオール配糖体からUGT76G1により生成されるステビオール配糖体の含有比は、対照抽出物における前記比の、約1.2倍以上、約1.5倍以上、約2倍以上、約3倍以上、約4倍以上、約5倍以上、約6倍以上、約8倍以上、約10倍以上、約15倍以上、約20倍以上、約25倍以上、約30倍以上、約35倍以上、約40倍以上、約45倍以上、約50倍以上、約55倍以上、約60倍以上、約65倍以上、約70倍以上、約75倍以上、約80倍以上、約85倍以上、約90倍以上、約95倍以上又は約100倍以上である。
　化学的特徴(a')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebDに対するRebMの含有比は、約0.12以上、約0.16以上、約0.2以上、約0.24以上、約0.28以上、約0.32以上、約0.36以上、約0.4以上、約0.44以上、約0.48以上、約0.5以上、約0.525以上、約0.55以上、約0.575以上、約0.6以上、約0.625以上、約0.65以上、約0.675以上、約0.7以上、約0.725以上、約0.75以上、約0.775以上、約0.8以上、約0.825以上、約0.85以上、約0.875以上、約0.9以上、約0.925以上、約0.95以上、約0.975以上又は約1以上である。
　化学的特徴(b')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebEに対するRebBの含有比は、約0.17以上、約0.5以上、約1以上、約1.5以上、約2以上、約2.5以上、約3以上、約3.5以上、約4以上、約4.5以上、約5以上、約5.5以上、約6以上、約6.5以上、約7以上、約7.5以上、約8以上、約8.5以上、約9以上、約9.5以上、約10以上、約10.5以上、約11以上、約11.5以上、約12以上、約12.5以上、約13以上、約13.5以上、約14以上、約14.5以上又は約15以上である。
　化学的特徴(c')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebEに対するRebGの含有比は、約0.004以上、約0.05以上、約0.1以上、約0.2以上、約0.3以上、約0.4以上、約0.5以上、約0.6以上、約0.7以上、約0.8以上、約0.9以上、約1以上、約1.05以上、約1.07以上、約1.1以上、約1.12以上、約1.13以上、約1.17以上、約1.2以上、約1.25以上、約1.3以上、約1.35以上、約1.37以上、約1.38以上、約1.4以上、約1.5以上、約1.6以上、約1.7以上、約1.72以上、約1.75以上、約1.8以上、約1.85以上、約1.9以上、約1.95以上又は約2以上である。
　化学的特徴(d')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるステビオシドに対するRebGの含有比は、約0.0007以上、約0.004以上、約0.006以上、約0.008以上、約0.01以上、約0.012以上、約0.014以上、約0.016以上、約0.018以上、約0.02以上、約0.025以上、約0.03以上、約0.035以上、約0.04以上、約0.045以上、約0.05以上、約0.055以上、約0.06以上、約0.065以上、約0.07以上、約0.075以上、約0.08以上、約0.085以上、約0.09以上、約0.091以上、約0.092以上、約0.093以上、約0.094以上、約0.095以上、約0.096以上、約0.097以上、約0.098以上、約0.099以上又は約0.1以上である。
　化学的特徴(e')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebAの含有量は、約2重量％以上、約2.15重量％以上、約2.3重量％以上、約2.45重量％以上、約2.6重量％以上、約2.75重量％以上、約2.9重量％以上、約3.05重量％以上、約3.2重量％以上、約3.35重量％以上、約3.5重量％以上、約3.65重量％以上、約3.8重量％以上、約4重量％以上、約4.2重量％以上、約4.4重量％以上、約4.6重量％以上、約4.8重量％以上、約5重量％以上、約5.25重量％以上、約5.5重量％以上、約5.75重量％以上、約6重量％以上、約6.25重量％以上、約6.5重量％以上、約6.75重量％以上、約7重量％以上である。
　化学的特徴(f')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebBの含有量は、約0.04重量％以上、約0.044重量％以上、約0.048重量％以上、約0.052重量％以上、約0.056重量％以上、約0.06重量％以上、約0.064重量％以上、約0.068重量％以上、約0.072重量％以上、約0.076重量％以上、約0.08重量％以上、約0.084重量％以上、約0.088重量％以上、約0.092重量％以上、約0.096重量％以上、約0.1重量％以上、約0.105重量％以上、約0.11重量％以上、約0.115重量％以上、約0.12重量％以上、約0.125重量％以上、約0.13重量％以上、約0.135重量％以上、約0.14重量％以上、約0.145重量％以上、約0.15重量％以上又は約0.16重量％以上である。
　化学的特徴(g')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebFの含有量は、約0.06重量％以上、約0.064重量％以上、約0.068重量％以上、約0.072重量％以上、約0.076重量％以上、約0.08重量％以上、約0.084重量％以上、約0.088重量％以上、約0.092重量％以上、約0.096重量％以上、約0.1重量％以上、約0.105重量％以上、約0.11重量％以上、約0.115重量％以上、約0.12重量％以上、約0.125重量％以上、約0.13重量％以上、約0.135重量％以上、約0.14重量％以上、約0.145重量％以上、約0.15重量％以上、約0.155重量％以上、約0.16重量％以上、約0.17重量％以上、約0.18重量％以上、約0.19重量％以上又は約0.2重量％以上である。
　化学的特徴(h')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebGの含有量は、約0.001重量％以上、約0.002重量％以上、約0.003重量％以上、約0.004重量％以上、約0.005重量％以上、約0.006重量％以上、約0.007重量％以上、約0.008重量％以上、約0.009重量％以上、約0.01重量％以上、約0.011重量％以上、約0.012重量％以上、約0.013重量％以上、約0.014重量％以上、約0.016重量％以上、約0.018重量％以上、約0.02重量％以上、約0.022重量％以上、約0.024重量％以上、約0.026重量％以上、約0.028重量％以上、約0.03重量％以上、約0.032重量％以上、約0.034重量％以上、約0.036重量％以上、約0.038重量％以上又は約0.04重量％以上である。
　化学的特徴(i')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebMの含有量は、約0.15重量％以上、約0.17重量％以上、約0.19重量％以上、約0.21重量％以上、約0.23重量％以上、約0.25重量％以上、約0.27重量％以上、約0.29重量％以上、約0.31重量％以上、約0.33重量％以上、約0.35重量％以上、約0.37重量％以上、約0.39重量％以上、約0.41重量％以上、約0.43重量％以上、約0.45重量％以上、約0.47重量％以上、約0.49重量％以上、約0.51重量％以上、約0.54重量％以上、約0.57重量％以上、約0.6重量％以上、約0.63重量％以上、約0.66重量％以上、約0.69重量％以上、約0.72重量％以上又は約0.75重量％以上である。
　化学的特徴(j')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有量は、約0.001重量％以上、約0.002重量％以上、約0.005重量％以上、約0.01重量％以上、約0.02重量％以上、約0.04重量％以上、約0.06重量％以上、約0.08重量％以上、約0.1重量％以上、約0.15重量％以上、約0.2重量％以上、約0.3重量％以上、約0.4重量％以上、約0.5重量％以上、約0.6重量％以上、約0.7重量％以上、約0.8重量％以上、約1重量％以上、約1.5重量％以上、約2重量％以上、約2.5重量％以上、約3重量％以上、約3.5重量％以上、約4重量％以上、約5重量％以上、約6重量％以上又は約7重量％以上である。
　化学的特徴(k')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebDの含有量は、約1.65重量％以下、約1.6重量％以下、約1.55重量％以下、約1.5重量％以下、約1.45重量％以下、約1.4重量％以下、約1.35重量％以下、約1.3重量％以下、約1.25重量％以下、約1.2重量％以下、約1.15重量％以下、約1.1重量％以下、約1.05重量％以下、約1重量％以下、約0.95重量％以下、約0.9重量％以下、約0.85重量％以下、約0.8重量％以下、約0.75重量％以下、約0.7重量％以下、約0.65重量％以下、約0.6重量％以下、約0.55重量％以下、約0.5重量％以下、約0.45重量％以下、約0.4重量％以下又は約0.35重量％以下である。
　化学的特徴(l')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebEの含有量は、約0.34重量％以下、約0.32重量％以下、約0.3重量％以下、約0.28重量％以下、約0.26重量％以下、約0.24重量％以下、約0.22重量％以下、約0.2重量％以下、約0.18重量％以下、約0.16重量％以下、約0.14重量％以下、約0.12重量％以下、約0.1重量％以下、約0.08重量％以下、約0.06重量％以下、約0.05重量％以下、約0.04重量％以下、約0.03重量％以下、約0.02重量％以下、約0.015重量％以下、約0.01重量％以下、約0.009重量％以下、約0.008重量％以下、約0.007重量％以下、約0.006重量％以下、約0.005重量％以下又は約0.004重量％以下である。
　化学的特徴(m')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebNの含有量は、約0.35重量％以下、約0.33重量％以下、約0.31重量％以下、約0.29重量％以下、約0.27重量％以下、約0.25重量％以下、約0.24重量％以下、約0.23重量％以下、約0.22重量％以下、約0.21重量％以下、約0.2重量％以下、約0.19重量％以下、約0.18重量％以下、約0.17重量％以下、約0.16重量％以下、約0.15重量％以下、約0.14重量％以下、約0.13重量％以下、約0.12重量％以下、約0.11重量％以下、約0.1重量％以下、約0.09重量％以下、約0.08重量％以下、約0.07重量％以下、約0.06重量％以下、約0.055重量％以下又は約0.05重量％以下である。
　化学的特徴(n')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるステビオシドの含有量は、約2.5重量％以下、約2.4重量％以下、約2.3重量％以下、約2.2重量％以下、約2.1重量％以下、約2重量％以下、約1.9重量％以下、約1.8重量％以下、約1.7重量％以下、約1.6重量％以下、約1.5重量％以下、約1.4重量％以下、約1.3重量％以下、約1.2重量％以下、約1.1重量％以下、約1重量％以下、約0.9重量％以下、約0.8重量％以下、約0.7重量％以下、約0.6重量％以下、約0.5重量％以下、約0.45重量％以下、約0.4重量％以下、約0.35重量％以下、約0.3重量％以下、約0.25重量％以下又は約0.2重量％以下である。
　化学的特徴(o')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるβ-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体の含有量は、約2.5重量％以下、約2.2重量％以下、約2重量％以下、約1.8重量％以下、約1.6重量％以下、約1.4重量％以下、約1.2重量％以下、約1重量％以下、約0.9重量％以下、約0.8重量％以下、約0.7重量％以下、約0.6重量％以下、約0.5重量％以下、約0.4重量％以下、約0.3重量％以下、約0.2重量％以下、約0.1重量％以下、約0.08重量％以下、約0.06重量％以下、約0.04重量％以下、約0.02重量％以下、約0.015重量％以下、約0.01重量％以下、約0.008重量％以下、約0.006重量％以下、約0.005重量％以下、約0.004重量％以下である。
　化学的特徴(p')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるRebD、RebE、RebN、ステビオシドのいずれか1つに対する、RebA、RebB、RebF、RebG、RebMのいずれか1つの含有比は、約0.0007以上、約0.004以上、約0.01以上、約0.02以上、約0.03以上、約0.05以上、約0.08以上、約0.091以上、約0.095以上、約0.1以上、約0.2以上、約0.3以上、約0.5以上、約0.8以上、約1以上、約1.05以上、約1.07以上、約1.1以上、約1.2以上、約1.5以上、約2以上、約3以上、約4以上、約5以上、約8以上、約10以上、約10.5以上、約11以上、約11.5以上、約12以上、約12.5以上、約13以上、約13.5以上、約14以上、約14.5以上又は約15以上である。
　化学的特徴(q')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるβ-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体に対するβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有比は、約0.0007以上、約0.004以上、約0.01以上、約0.02以上、約0.03以上、約0.05以上、約0.08以上、約0.091以上、約0.095以上、約0.1以上、約0.2以上、約0.3以上、約0.5以上、約0.8以上、約1以上、約1.05以上、約1.07以上、約1.1以上、約1.2以上、約1.5以上、約2以上、約3以上、約4以上、約5以上、約8以上、約10以上、約10.5以上、約11以上、約11.5以上、約12以上、約12.5以上、約13以上、約13.5以上、約14以上、約14.5以上又は約15以上である。
　化学的特徴(r')に関し、一部の態様において、本発明の抽出物におけるUGT76G1の基質ステビオール配糖体に対する、前記基質ステビオール配糖体からUGT76G1により生成されるステビオール配糖体の含有比は、約0.15以上、約0.3以上、約0.5以上、約0.7以上、約0.9以上、約1以上、約1.5以上、約2以上、約3以上、約5以上、約7以上、約10以上、約15以上、約16以上、約17以上、約20以上、約25以上、約30以上、約35以上、約40以上、約45以上、約50以上、約51以上、約55以上、約60以上、約65以上、約66以上、約70以上、約75以上又は約80以上である。
　好ましい態様において、上記の化学的特徴(a')～(r')に係るステビオール配糖体の含量又は含有比は、未精製の本発明の抽出物(粗抽出物)におけるものである。
　このようにして得られた本発明の抽出物及び/又は本発明のステビオール配糖体の製造方法により得られるステビオール配糖体と他の成分とを混合することにより、ステビオール配糖体を含む食品、甘味料組成物、香料又は医薬品(以下、食品等と総称することがある)を製造することができる。そこで、本発明はさらに、本発明の抽出物及び/又は本発明のステビオール配糖体の製造方法により得られるステビオール配糖体と他の成分とを混合する工程を含む、食品等の製造方法を提供する。さらに、本発明は、前記製造方法により得られた、食品等を提供する。ここで食品は、飲料を含む。一部の態様において、前記食品等は、本発明の抽出物に含まれるステビオール配糖体及び/又は本発明のステビオール配糖体の製造方法により得られるステビオール配糖体以外のステビオール配糖体を含まない。
　前記食品等は、本発明の抽出物を含む場合、本発明の抽出物と同様の化学的特徴を有し得る。一部の態様において、前記食品等は、化学的特徴(a')～(d')、(p')及び(r')の少なくとも1つと同じステビオール配糖体の含有比を有する。例えば、化学的特徴(a')と同じステビオール配糖体の含有比を有する食品等は、本発明の抽出物に代えて本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体の抽出物を含む以外は同じ成分で同様に製造された食品等に比べ、RebDに対するRebMの含有比が高く(例えば、約1.2倍以上、約1.6倍以上、約2倍以上、約2.4倍以上、約2.8倍以上、約3.2倍以上、約3.6倍以上、約4倍以上、約4.4倍以上、約4.8倍以上、約5.2倍以上、約5.6倍以上、約6倍以上、約6.4倍以上、約6.8倍以上、約7.2倍以上、約7.6倍以上、約8倍以上、約8.4倍以上、約8.8倍以上、約9.2倍以上、約9.6倍以上、約10倍以上、約10.5倍以上、約11倍以上、約11.5倍以上又は約12倍以上高く)、約0.12以上、約0.16以上、約0.2以上、約0.24以上、約0.28以上、約0.32以上、約0.36以上、約0.4以上、約0.44以上、約0.48以上、約0.5以上、約0.525以上、約0.55以上、約0.575以上、約0.6以上、約0.625以上、約0.65以上、約0.675以上、約0.7以上、約0.725以上、約0.75以上、約0.775以上、約0.8以上、約0.825以上、約0.85以上、約0.875以上、約0.9以上、約0.925以上、約0.95以上、約0.975以上又は約1以上のRebDに対するRebMの含有比を有し得る。
5．本発明の植物体に係る塩基配列
　本発明は、別の側面において、本発明のステビア植物体に係る塩基配列を提供する。本発明の遺伝的特徴(1)を有するステビア植物体に係る塩基配列の特定の態様は、配列番号10～13及び50から選択される塩基配列を含む、又はそれから、なる。本発明の遺伝的特徴(2)を有するステビア植物体に係る塩基配列の特定の態様は、配列番号14～17及び52から選択される塩基配列を含む、又はそれからなる。本発明の遺伝的特徴(3)を有するステビア植物体に係る塩基配列の特定の態様は、配列番号18～21及び54から選択される塩基配列を含む、又はそれからなる。
6．本発明の死亡組織又は死亡細胞
　本発明のさらなる態様において、本発明のステビア植物体、本発明のスクリーニング方法により選別されたステビア植物体若しくは本発明の作出方法により製造されたステビア植物体の組織又は細胞であって死亡しているもの(以下、「本発明の死亡組織又は死亡細胞」と称することがある。)が提供される。「死亡」とは、繁殖、増殖、再生および成長する能力を有さない状態を意味し、人為的な操作によらず自然と死亡する場合も、切断、破砕、加熱(空気などの気体を介した加熱、水などの液体を介した加熱、水蒸気などの蒸気を介した加熱を含む)、凍結、乾燥、凍結乾燥等の人為的な操作によって死亡する場合も含む。死亡組織とは、含まれる細胞が全て死亡している組織を意味し、死亡植物体も含むものとする。本発明の死亡組織又は死亡細胞の具体例としては、種子以外の組織または細胞であって死亡しているものが挙げられる。より具体的には、胚、分裂組織細胞、花粉、葉、根、根端、花弁、プロトプラスト、葉の切片またはカルスであって死亡しているものが挙げられる。好適には、乾燥葉が挙げられる。
　本発明の死亡組織又は死亡細胞は、前述の抽出物、ステビオール配糖体精製品、医薬品、香料、飲食品等の原料とすることができる。
　本態様においては、本発明の死亡組織又は死亡細胞から、本発明の抽出物の製造方法と同様の方法により抽出物を得る、死亡組織又は死亡細胞の抽出物の製造方法が提供される。さらに、得られた抽出物から、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体を精製する工程を含む、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の製造方法が提供される。
　また、本発明の死亡組織又は死亡細胞の抽出物、或いは、死亡組織又は死亡細胞抽出物の製造方法により得られた抽出物を提供する工程、及び、前記抽出物を、食品、甘味料組成物、香料又は医薬品の原料に添加する工程を含む、食品、甘味料組成物、香料又は医薬品の製造方法が提供される。
　以下に本発明に関する実施例を記載するが、本発明はこれらの具体的な態様に限定されるものではない。
(1)分離集団の創出
　市販のステビア植物体を、RebD又はRebMの含量に着目して3世代にわたり選別交配を行い、高RebD含有集団A及び高RebM含有集団Bを得た。さらに集団A及びBを交配し、分離集団Cを得た。
(2)RebM含量の多い個体の遺伝子解析
　集団Cの成長した各個体より適量の新鮮葉をサンプリングし、LC－MS/MS(島津LCMS8050)にてステビオール配糖体の濃度を定量した。具体的には、0．25gの新鮮葉をフリーズドライにより乾燥し、破砕乾物0．05gを100倍量(5mL)の純水中に投入した。超音波処理20分にて抽出し、遠心・濾過した後、32％アセトニトリルで60倍希釈したものをサンプル液とした。このサンプル液1mLをLCMS8050のMRMモードにてLC－MS/MS分析を行い、RebA、RebB、RebC、RebD、RebE、RebF、RebG、RebM、RebN及びステビオシドの濃度を定量した。さらに、集団Cの一部の個体の新鮮葉からゲノムDNAを抽出し、シーケンサー(HiSeq 2500、Illumina)により遺伝子解析を行った。結果を表2～3に示す。表中、ステビオール配糖体の数値は、乾燥葉における重量％を示し、遺伝的特徴は、「＋」が陽性、「-」が陰性を示す。又、「STV」はステビオシド、「TSG」は総ステビオール配糖体をそれぞれ示す。なお、TSGの数値は測定した全てのステビオール配糖体（すなわち、RebA、RebB、RebC、RebD、RebE、RebF、RebG、RebM、RebN及びステビオシド）の合計値である。
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Figure JPOXMLDOC01-appb-I000003
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Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000006
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000007
　上記結果より、本発明の遺伝的特徴を有する個体群のRebDに対するRebMの含有比が、本発明の遺伝的特徴を有しない個体のものより高い傾向が認められた。この結果が集団Cに特有のものでないかどうかを確認するため、他の集団(集団D及びE)についても同様の検討を行った。結果を表4～7に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
　上記結果より、集団D及びEにおいても同様の傾向が認められることが明らかとなった。
　次に、測定した各ステビオール配糖体の含量と本発明の遺伝的特徴との関連性について検討した。具体的には、集団C～Eを合わせた集団において、本発明の遺伝的特徴を有する個体群とそれ以外の個体群とで、各ステビオール配糖体の含量について統計学的な有意差があるかをウェルチのt検定で評価した。結果を表8に示す。表中、例えば「遺伝的特徴1」の結果は、遺伝的特徴(1)を有する個体群とそれ以外の個体群(すなわち、遺伝的特徴(1)を有する個体以外の個体群)における各ステビオール配糖体の含量を分析した結果であり、「遺伝的特徴1+2」の結果は、遺伝的特徴(1)と(2)を両方有する個体群とそれ以外の個体群(すなわち、遺伝的特徴(1)と(2)を両方有する個体以外の個体群)における各ステビオール配糖体の含量を分析した結果であり、「遺伝的特徴1/2/3」の結果は、遺伝的特徴(1)、(2)及び(3)の少なくとも1つを有する個体群とそれ以外の個体群(すなわち、遺伝的特徴(1)、(2)及び(3)のいずれも有しない個体群)における各ステビオール配糖体の含量を分析した結果である。又、「+」はP<0.05、「++」はP<0.01で遺伝的特徴を有する個体群の方が、それ以外の個体の個体群より含量が多いこと、「-」はP<0.05、「--」はP<0.01で遺伝的特徴を有する個体群の方が、それ以外の個体の個体群より含量が少ないこと、「±」は、両個体群の含量が有意水準0.05で有意差が認められなかったことをそれぞれ示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
　上記結果より、本発明の遺伝的特徴を有する個体は、本発明の遺伝的特徴を有しない個体に比べ、RebA、RebB、RebF、RebG及び/又はRebMの含量が多い傾向、及び/又は、RebD、RebE、RebN及び/又はステビオシドの含量が少ない傾向を有することが明らかとなった。又、遺伝的特徴(1)と(3)の組合せに着目することにより、前記傾向をより低い有意水準で最も多く検出することができることも明らかとなった。検出できる傾向の数は、多い順に、遺伝的特徴(3)及び遺伝的特徴(1)と(3)の組合せ(傾向数：9)、遺伝的特徴(1)(傾向数：8)、遺伝的特徴(1)と(2)の組合せ、遺伝的特徴(2)と(3)の組合せ及び遺伝的特徴(1)～(3)の組合せ(傾向数：7)、遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つ(傾向数：6)、遺伝的特徴(2)(傾向数：4)であった。
　多数の様々な改変が、本発明の精神から逸脱せずになされ得ることを当業者は理解する。したがって、本明細書に記載された本発明の形態は例示にすぎず、本発明の範囲を制限する意図がないことを理解すべきである。
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Figure JPOXMLDOC01-appb-I000016
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000017
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000018
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000019
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Claims (19)

  1. 　被験ステビア植物体のゲノムから、以下の遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つの存在及び/又は不在を検出する工程を含む、以下の化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つを有するステビア植物体をスクリーニングする方法。
    (1)配列番号1の184位に相当する位置の塩基がGであるアレルについてヘテロ接合性又はホモ接合性である。
    (2)配列番号2の170位に相当する位置の塩基がCであるアレルについてヘテロ接合性又はホモ接合性である。
    (3)配列番号3の92位に相当する位置の塩基がCであるアレルについてヘテロ接合性又はホモ接合性である。
    (a)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、レバウジオシド(Reb)Dに対するRebMの含有比が高い。
    (b)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebEに対するRebBの含有比が高い。
    (c)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebEに対するRebGの含有比が高い。
    (d)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、ステビオシドに対するRebGの含有比が高い。
    (e)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebAの含有量が多い。
    (f)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebBの含有量が多い。
    (g)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebFの含有量が多い。
    (h)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebGの含有量が多い。
    (i)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebMの含有量が多い。
    (j)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有量が多い。
    (k)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebDの含有量が少ない。
    (l)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebEの含有量が少ない。
    (m)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebNの含有量が少ない。
    (n)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、ステビオシドの含有量が少ない。
    (o)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体の含有量が少ない。
    (p)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、RebD、RebE、RebN、ステビオシドのいずれか1つに対する、RebA、RebB、RebF、RebG、RebMのいずれか1つの含有比が高い。
    (q)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体に対するβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有比が高い。
    (r)遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体に比べ、UGT76G1の基質ステビオール配糖体に対する、前記基質ステビオール配糖体からUGT76G1により生成されるステビオール配糖体の含有比が高い。
  2. 　遺伝的特徴の存在及び/又は不在が検出された被験ステビア植物組織のRebA、RebB、RebD、RebE、RebF、RebG、RebM、RebN及び/又はステビオシドの含有量を測定する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
  3. 　遺伝的特徴の存在及び/又は不在を検出する工程が、CAPS法、dCAPS法又はTaqMan　PCR法を用いて行われる、請求項1又は2に記載の方法。
  4. 　請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つの存在及び/又は不在を検出するための試薬を含む、請求項1に定義された化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つを有するステビア植物体のスクリーニングキット。
  5. 　試薬が、CAPS法、dCAPS法又はTaqMan　PCR法に使用するプライマー及び/又はプローブを含む、請求項4に記載のキット。
  6. 　請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つを有するステビア植物体。
  7. 　請求項1に定義された化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つを有する、請求項6に記載の植物体。
  8. 　非遺伝子組換植物体である、請求項6又は7に記載の植物体。
  9. 　変異誘発処理を行ったステビア植物体及びその子孫植物体を含む、請求項6～8のいずれか一項に記載の植物体。
  10. 　請求項6～9のいずれか一項に記載の植物体の種子、組織、乾燥葉、組織培養物又は細胞。
  11. 　胚、分裂組織細胞、花粉、葉、根、根端、花弁、プロトプラスト、葉の切片及びカルスから選択される、請求項10に記載の組織、組織培養物又は細胞。
  12. 　請求項6～9のいずれか一項に記載のステビア植物体と第2のステビア植物体とを交雑させる工程を含む、請求項1に定義された化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つを有するステビア植物体を作出する方法。
  13. 　第2の植物体が請求項6～9のいずれか一項に記載のステビア植物体である、請求項12に記載の方法。
  14. 　ステビア植物体のゲノムに、前記ゲノムが請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)の少なくとも1つを有するように改変を加える工程を含む、請求項1に定義された化学的特徴(a)～(r)の少なくとも1つを有するステビア植物体を作出する方法。
  15. 　ゲノムの改変が、変異誘発処理によって行われる、請求項14に記載の方法。
  16. 　以下の化学的特徴(a')～(r')の少なくとも1つを有する、請求項6～9のいずれか一項に記載の植物体、請求項10又は11に記載の種子、組織、乾燥葉、組織培養物又は細胞の抽出物。
    (a')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、レバウジオシド(Reb)Dに対するRebMの含有比が高い。
    (b')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebEに対するRebBの含有比が高い。
    (c')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebEに対するRebGの含有比が高い。
    (d')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、ステビオシドに対するRebGの含有比が高い。 
    (e')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebAの含有量が多い。
    (f')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebBの含有量が多い。
    (g')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebFの含有量が多い。
    (h')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebGの含有量が多い。
    (i')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebMの含有量が多い。
    (j')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有量が多い。
    (k')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebDの含有量が少ない。
    (l')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebEの含有量が少ない。
    (m')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebNの含有量が少ない。
    (n')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、ステビオシドの含有量が少ない。
    (o')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体の含有量が少ない。
    (p')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、RebD、RebE、RebN、ステビオシドのいずれか1つに対する、RebA、RebB、RebF、RebG、RebMのいずれか1つの含有比が高い。
    (q')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、β-1,3-グルコシド結合を有しないステビオール配糖体に対するβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の含有比が高い。
    (r')請求項1に定義された遺伝的特徴(1)～(3)をいずれも有しないステビア植物体の抽出物に比べ、UGT76G1の基質ステビオール配糖体に対する、前記基質ステビオール配糖体からUGT76G1により生成されるステビオール配糖体の含有比が高い。
  17. 　請求項6～9のいずれか一項に記載の植物体、請求項10又は11に記載の種子、組織、乾燥葉、組織培養物又は細胞から抽出物を得る工程を含む、請求項16に定義された化学的特徴(a')～(r')の少なくとも1つを有する抽出物の製造方法。
  18. 　請求項16に記載の抽出物からβ-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体を精製する工程を含む、β-1,3-グルコシド結合を有するステビオール配糖体の製造方法。
  19. 　請求項6～9のいずれか一項に記載の植物体の抽出物、請求項10又は11に記載の種子、組織、乾燥葉、組織培養物又は細胞の抽出物、或いは、請求項16に記載の抽出物を提供する工程、及び
    前記抽出物を、食品、甘味料組成物、香料又は医薬品の原料に添加する工程
    を含む、食品、甘味料組成物、香料又は医薬品の製造方法。
     
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