WO2019011217A1 - 吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物或其可药用盐及它们的用途 - Google Patents
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- WO2019011217A1 WO2019011217A1 PCT/CN2018/095033 CN2018095033W WO2019011217A1 WO 2019011217 A1 WO2019011217 A1 WO 2019011217A1 CN 2018095033 W CN2018095033 W CN 2018095033W WO 2019011217 A1 WO2019011217 A1 WO 2019011217A1
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- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
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- C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
Definitions
- the present invention relates to the field of medicinal chemistry, and in particular to pyrrole [1,2-b]pyridazine compounds or pharmaceutically acceptable salts thereof and uses thereof.
- PARP Poly(adenosine diphosphate [ADP]-ribose) polymerase
- ADP-ribose Novel functions for an old molecule. Nat. Rev. Mol. Cell Bio, 2006, 7, 517-528).
- the ADP-ribosyltransferases (ARTs) currently have a total of 18 subtypes found and identified, of which only 6 subtypes have the ability to form poly ADP-ribosylation, which are PARP-1, PARP, respectively.
- PARP-1, PARP respectively.
- PARP-3, PARP-4 vPARP
- PARP-5a TNKS1
- PARP-5b TNKS2
- PARP-1 is the most abundant and widely studied member, playing more than 90% of the functions in the PARP family.
- Human PARP-1 is a polypeptide chain with a molecular weight of 113 kDa and consists of three major functional domains: a DNA binding domain (DBD) containing two zinc finger fingers at the amino (N)-terminus. ), an Automodification domain, and a Catalytic domain at the carboxyl (C)-terminus.
- DBD DNA binding domain
- Human PARP-2 is a polypeptide chain with a molecular weight of 62 kDa, which is structurally most similar to PARP-1. Its catalytic domain shares 69% homology with the catalytic domain of PARP-1 and the DNA binding domain does not contain zinc finger structure.
- PARP-1 and PARP-2 play an important role in DNA damage repair, genomic stability, and apoptosis regulation through base excision repair, making it one of the most important anti-tumor drug research targets in recent years (Yelamos, J.; Farres, Jordi.; Llacuna, Laura.; Ampurdanes, Coral; Martin-Caballero, Juan.; PARP-1 and PARP-2: New players in tumour development. Am. J. Cancer Res. 2011 1(3), 328-346; Weaver, AN; Yang, ESBeyond DNA repair: additional functions of PARP-1 in cancer. Front. Oncol. 2013, 3, 290).
- Human DNA is caused by exogenous factors (such as ultraviolet radiation, particle radiation, alkylating agents, topoisomerase and platinum drugs) or endogenous factors (such as the spontaneous metabolism of human body and the chemical nature of DNA itself) Under the action of sexual reaction, DNA gaps are easily generated, and most of these gaps will be converted into DNA single-strand breaks, causing DNA damage. DNA damage can affect a wide range of cellular processes and is an important cause of tumorigenesis and other diseases. Studies have shown that the catalytic activity of PARP-1/2 is rapidly activated by DNA strand breaks.
- BRCA-1/2 is a key repair factor for the Homologous recombination (HR) repair pathway.
- HR Homologous recombination
- inhibition of PARP will result in increased accumulation of DNA single-strand breaks, and due to the collapse of the replication fork in progress, DNA single-strand breaks will be converted into double-strand breaks, and these tumor cells will The double-strand break can be repaired because of the inability to initiate the HR pathway, which ultimately leads to cell death due to genomic instability.
- the inhibition of PARP and the phenomenon of BRCA-1/2 deficiency in killing cells are also known as synthetic lethality.
- PARP is involved in multiple biological processes, including gene transcription, cell cycle progression, cell death, and chromatin function.
- PARP inhibitors have been proven to be useful in a number of therapeutic medicinal chemistries (in addition to malignant tumors), including stroke, myocardial ischemia, inflammation, antiviral and diabetes (Reference: Virág, L Szabó, C., The Therapeutic Potential of Poly (ADP-Ribose) Polymerase Inhibitors. Pharmacol Rev 2002, 54(3), 375-429).
- the pyrrole [1,2-b]pyridazine structure is an advantageous structure in medicinal chemistry.
- Compounds containing such structures exhibit a wide variety of biological activities in the pharmaceutical field, such as hypolipidemic/cholesterol (patent CN 1056690 discloses a class of compounds containing this predominant structure and their use in the treatment of hypercholesterolemia and high Application in lipemia), anti-tumor (patent WO 2011/014817 discloses JANUS kinase inhibitors containing such structures), anti-inflammatory, antibacterial (Butnariu, RM; Mangalagiu, II, New pyridazine derivatives: Synthesis, chemistry and Biological activity.
- J Heterocyclic Chem 2007, 44(5), 1149-1152), antiviral (patent CN103288832 discloses a class to Pyrrole [1,2-b]pyridazine derivatives for the treatment or prevention of HIV infection or other viral infections; WO 2004/087708 A1 and WO 2007/069671 respectively disclose corticotropin releasing factor (CRF) inhibition with this predominant structure
- CRF corticotropin releasing factor
- the use of the agent in pharmacy and the patent WO2010022240A1 disclose a class of derivatives containing such structures, which are capable of modulating the activity and/or activity of hypoxia-inducible factor (HIF) by effectively inhibiting the activity of HIF hydroxylase.
- R 1 is hydrogen, C 1-4 alkyl or halogen
- R 4 is hydrogen, halogen, C 1-4 alkyl or C 1-4 alkoxy
- X 1 is S, O or NH
- X 2 is CH or N
- Y 1 , Y 2 , Y 5 and Y 6 are independently a substituted or unsubstituted methylene group, a substituted or unsubstituted ethylene group, a substituted or unsubstituted propylene group or a substituted or unsubstituted butylene group.
- the substitution is substituted with at least one substituent selected from the group consisting of halogen, C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl and C 1-4 alkoxy;
- Y 3 and Y 4 are independently hydrogen, substituted or unsubstituted C 1-4 alkyl or substituted or unsubstituted C 3-6 cycloalkyl, the substituent being selected from halogen, C 1-6 alkyl Substituting at least one substituent of C 3-6 cycloalkyl and C 1-4 alkoxy;
- Y 7 is NR 8 or CHR 9 ,
- the R 9 is hydrogen, -OR 12 , an amino group substituted with at least one C 1-4 alkyl group, or a substituted or unsubstituted five- to six-membered saturated heterocyclic group, wherein the R 12 is hydrogen, substituted or An unsubstituted C 1-4 alkyl group or a substituted or unsubstituted C 3-6 cycloalkyl group, which is selected from the group consisting of halogen, C 1-4 alkyl, C 1-4 haloalkyl, amino, at least At least one substituent of a C 1-4 alkyl-substituted amino group, a nitrile group, a hydroxyl group, and a nitro group is substituted.
- R 1 is hydrogen, methyl, ethyl, propyl, fluorine, chlorine or bromine;
- R 3 is hydrogen, methyl, ethyl or propyl
- R 4 is hydrogen, fluorine, chlorine, bromine, methyl, ethyl, propyl, methoxy, ethoxy or propoxy;
- X 1 is S, O or NH
- X 2 is CH or N
- Y 1 , Y 2 , Y 5 and Y 6 are independently a substituted or unsubstituted methylene group, a substituted or unsubstituted ethylene group, a substituted or unsubstituted propylene group or a substituted or unsubstituted butylene group.
- the substitution is selected from the group consisting of fluorine, chlorine, bromine, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, sec-butyl, isobutyl, tert-butyl, cyclopropyl, cyclobutyl, and ring. Substituting at least one substituent of pentyl, cyclohexyl, methoxy, ethoxy or propoxy;
- Y 3 and Y 4 are independently hydrogen, methyl, ethyl, propyl, isopropyl or butyl;
- Y 7 is NR 8 or CHR 9 ,
- the R 9 is hydrogen, -OR 12 , N-methylamino, N-ethylamino, N,N-dimethylamino, N,N-diethylamino, pyrrolidinyl, tetrahydrofuranyl, piperidine Or a piperazinyl group, a morpholinyl group or a dioxane group, wherein the R 12 is hydrogen, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl or a ring Hexyl, the substitution is selected from the group consisting of fluorine, chlorine, bromine, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, trifluoromethyl, amino, N-methylamino, N-ethylamino, N, N Substituting at least one substituent of dimethylamino, N,N-diethylamino, nitrile,
- Formula I has the structure represented by Formula II:
- said R 1 is a halogen, more preferably chlorine.
- said X 1 is S or O, more preferably S.
- the general formula II has a structure represented by the general formula II-a:
- the Formula I has a structure represented by Formula III:
- said R 1 is a halogen, more preferably chlorine.
- said R 4 is a halogen, more preferably fluorine.
- said R 5 is -CH 2 -.
- said Y 3 and Y 4 are independently hydrogen, methyl, ethyl, propyl, isopropyl or butyl, more preferably methyl.
- the general formula III has the structure represented by the general formula III-a:
- the Formula I has a structure represented by Formula IV:
- said R 1 is a halogen, more preferably chlorine.
- said R 4 is a halogen, more preferably fluorine.
- the general formula IV has the structure represented by the general formula IV-a:
- the Formula I has a structure represented by Formula V:
- said R 1 is a halogen, more preferably chlorine.
- said R 4 is hydrogen or halogen, and said halogen is preferably fluorine.
- the general formula V has a structure represented by the general formula V-a:
- the pyrrole [1,2-b]pyridazine compound represented by the general formula I is one of the following compounds:
- the invention further provides the use of a pyrrole [1,2-b]pyridazine compound of the formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the preparation of a PARP inhibitor.
- the PARP inhibitor has a selective inhibitory effect on PARP-1 and/or PARP-2.
- the invention also provides a pharmaceutical composition
- a pharmaceutical composition comprising one or more therapeutically effective amounts of a pyrrole [1,2-b]pyridazine compound of the formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a Or a plurality of therapeutically effective amounts of an ester, prodrug, hydrate or crystal of the pyrrole [1,2-b]pyridazine compound.
- the pharmaceutical composition has an inhibitory effect on PARP, particularly a selective inhibitory effect on PARP-1 and/or PARP-2.
- the pharmaceutical composition is for use in preventing and/or treating a PARP-related disease, including a tumor (breast cancer, ovarian cancer, liver cancer, melanoma, prostate cancer, colon cancer) , solid tumors such as gastric cancer), ischemic diseases (brain, heart, etc.) and neurodegenerative diseases (Parkinson's disease, Alzheimer's disease, etc.).
- a tumor breast cancer, ovarian cancer, liver cancer, melanoma, prostate cancer, colon cancer
- solid tumors such as gastric cancer
- ischemic diseases brain, heart, etc.
- neurodegenerative diseases Parkinsoninson's disease, Alzheimer's disease, etc.
- the invention further provides a preparation method of the pyrrole [1,2-b]pyridazine compound represented by the general formula I, comprising the following steps:
- Aromatic aldehyde is reacted with a solution of ethynylmagnesium bromide in tetrahydrofuran (THF) to obtain an aromatic alkynyl alcohol I-b in the following reaction formula;
- N-amino-5-iodopyrrole-2-carboxylic acid methyl ester derivative Ia and the aromatic acetylenic alcohol Ib are subjected to a coupling cyclization reaction in a solvent under microwave conditions in the presence of palladium acetate, cuprous iodide and DBU.
- Compound I-0 is used as a solvent in a saturated methanol solution of ammonia gas, and sealed at 90 ° C for 20 hours to 24 hours, or directly with concentrated ammonia water, the solvent is methanol, and the reaction tube is reacted at 90 ° C for 20 hours to 24 hours to obtain the above.
- the present invention further provides a method for preparing a pyrrole [1,2-b]pyridazine compound represented by the general formula II or the general formula II-a, and the synthesis route thereof is as follows:
- the amide F is fused to a ring to obtain a compound under the action of phosphorus oxychloride, and then the compound is reduced under the condition of sodium borohydride to further reduce the imine and further protect the free amino group with Boc anhydride to obtain the compound I;
- the present invention designs and synthesizes a series of PARP inhibitors by using pyrrole [1,2-b]pyridazine-7-carboxamide as a core structure, and the compounds of the present invention have a selection of PARP-1 and PARP-2 of the PARP family. It has a sexual inhibitory effect and exhibits good biological activity both in vitro and in vivo, and is expected to develop into a novel antitumor drug and a drug for preventing and/or treating a PARP-related disease.
- alkyl refers to a straight or branched alkyl group.
- alkoxy refers to a straight or branched alkoxy group.
- substituted refers to the replacement of one or more hydrogen atoms.
- Tumors as referred to herein include benign tumors and malignant tumors.
- the "pyrrole [1,2-b]pyridazine compound” described herein includes optical isomers.
- a method for preparing a pyrrole [1,2-b]pyridazine compound represented by the formula I comprising the steps of:
- the scheme 1 comprises: the pyrrole-2-carboxylic acid methyl ester derivative A is obtained by heating under reflux of a base (such as 4-dimethylaminopyridine (DMAP)) in a solvent (such as methanol) to obtain a compound B, a compound B is stirred under the action of silver trifluoroacetate and iodine in a solvent such as chloroform to obtain Compound C in a base such as potassium t-butoxide and O-(4-nitrobenzoyl). Under the action of hydroxylamine, in a solvent (such as N-methylpyrrolidone (NMP)) stirred at room temperature overnight to obtain compound Ia;
- a base such as 4-dimethylaminopyridine (DMAP)
- a solvent such as methanol
- Scheme 2 includes: Compound B can be prepared by stirring a base (such as potassium t-butoxide) and O-(4-nitrobenzoyl)hydroxylamine in a solvent (such as NMP) at room temperature overnight to obtain compound D. D can be prepared under conditions of potassium iodide and hydrogen peroxide in a solvent (such as acetic acid) for 3 hours at room temperature;
- a base such as potassium t-butoxide
- NMP NMP
- D can be prepared under conditions of potassium iodide and hydrogen peroxide in a solvent (such as acetic acid) for 3 hours at room temperature;
- the starting reagents, solvents and materials except the special instructions are supplied by Sinopharm Reagent Group; the microwave reaction uses CEMNULL type microwave reactor; 1 H NMR is performed by Brucher AM-400 or GeMINI-300 NMR spectrometer Recording, chemical shifts are expressed in ⁇ (ppm); mass spectra were recorded by an Agilent Model 1200-6110 Single Quadrupole Liquid Chromatography Mass Spectrometer. Separation silica gel is used to produce 200-300 mesh column chromatography silica gel from Qingdao Ocean Chemical Plant.
- the chemical reagents represented by the English abbreviation are as follows:
- NBS N-bromosuccinimide
- reaction solution was poured into 300 mL of dichloromethane, and then quenched with ice water, the organic phase was separated, and the aqueous phase was extracted twice with dichloromethane (400 mL). The mixture was washed with a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate and brine, dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated.
- the compound 15 (120 mg, 0.24 mmol) was placed in a 100 mL round bottom flask, 5 mL of anhydrous dichloromethane was added, and 5 mL of HCl methyl acetate solution was added thereto, and the mixture was stirred at 40 ° C for 2 hours to precipitate a white solid to be cooled. After room temperature, it was filtered to give the hydrochloride salt of methyl 5-chloro-2-[4-(N-piperazinyl)phenyl]-pyrrole[1,2-b]pyridazin-7-carboxylate. Mg.
- 3-fluoro-4-formylbenzoic acid (1 g, 6 mmol, its preparation method refers to document EP2526945A1, the raw material used is 3-fluoro-4-methylbenzoic acid purchased from Shanghai Shuya Medicine), N-tert-butoxy Formylpiperazine (1.1 g, 5.66 mmol), HOBt (764 mg, 5.66 mmol), EDCI (1.3 g, 6.8 mmol) and DMAP (20 mg) were used as the starting material. The yield was 89%.
- the compound 6 (218 mg, 0.7 mmol) and the compound 18 (420 mg, 1.2 mmol) were used as a starting material.
- the retention time of the first enantiomer was 8.68 min and the solvent was removed in vacuo to give a yellow solid: 2-(4-[(3R)-tert-butoxyformylpiperidin-3-yl]-phenyl)-5 -Chloro-pyrrole [1,2-b]pyridazine-7-carboxamide (Compound 53-R, 99.9% ee).
- the retention time of the second enantiomer was 9.07 min.
- the compound 53-S (50 mg, 0.11 mmol) was used as a material.
- the compound 53-R (50 mg, 0.11 mmol) was used as a material.
- 4,5,6,7-tetrahydrothiophene [3,2-c]pyridine hydrochloride (10 g, 56.9 mmol) in 150 mL of dichloromethane, EtOAc (EtOAc)
- EtOAc EtOAc
- the methylene chloride solution was stirred at room temperature for 1 hour, 20 ml of a saturated ammonium chloride solution was added, and after stirring for 10 minutes, the organic phase was separated, the aqueous layer was extracted with dichloromethane, and the organic phase was combined and washed with saturated sodium chloride Dry over anhydrous sodium sulfate and concentrate to give 12.5 g of white solid.
- the compound I-34 (75 mg, 0.21 mmol) was used as a starting material. m.p.
- the compound 72 (866 mg, 2.3 mmol) was used as a starting material, and 357 mg of a colorless oil was obtained with reference to the preparation of compound 61, yield 50%.
- 2-Thiophenethylamine (1.3 g, 10 mmol, purchased from Tosoh Chemical) and cyclopropylcarbonyl chloride (1.3 g, 12.4 mmol) were used as a starting material.
- ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
- PAR polyadenosine diphosphate ribose
- anti-PAR anti-PAR antibodies
- inhibition rate (%) (OD control well-OD administration well) / OD control well ⁇ 100% (OD is absorbance value); and according to the inhibition rate, calculated by the Logit method to achieve 50% inhibition Drug concentration, which is the IC 50 value. (At the molecular level IC 50 ⁇ 1000 nM, +; ⁇ 500 nM, ++; ⁇ 100 nM, +++; - > 1000 nM or not determined), the results are shown in Table 1:
- the compound I-34 was prepared as a monohydrochloride salt as a yellow powder, which was dissolved in a yellow turbid liquid by using water for injection, and precipitated after standing. The mixture was thoroughly mixed before administration, and the above compound was formulated once a week.
- the positive control drug AZD2281 anticancer drug olaparib olaparib
- I-34 hydrochloride was set up in two dose groups, 100 mg/kg and 20 mg/kg, respectively.
- the positive control drug AZD2281 dose was 30 mg/kg.
- BALB/cA nude mice female, 4-5 weeks old, weighing 19 ⁇ 2 g, provided by Shanghai Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Sciences, production license number: SCXK (Shanghai) 2013-001. Use certificate number: SYXK (Shanghai) 2013-0049.
- the number of animals in each group 12 in the negative control group and 6 in the drug-administered group.
- Human breast cancer MDA-MB-436 cell line was preserved by our laboratory. The cell strain was inoculated subcutaneously into the right axilla of the nude mice, and the inoculation amount was 5 ⁇ 106/piece, and the transplanted tumor was formed and then used in nude mice for 2 generations.
- the tumor tissue in the vigorous growth period was cut into 1.5 mm 3 and inoculated subcutaneously in the right axilla of nude mice under aseptic conditions.
- the diameter of the transplanted tumor was measured with a vernier caliper in nude mice. After the average tumor volume grew to about 200 mm 3 , the animals were randomly divided into groups.
- Compound I-34 hydrochloride 100 mg/kg and 20 mg/kg groups were orally administered once a day for 21 consecutive days.
- the positive control drug AZD2281 30 mg/kg was orally administered once a day for 21 days.
- the solvent control was given an equal amount of water for injection.
- the diameter of the transplanted tumor was measured twice a week during the entire experiment, and the body weight of the mice was weighed.
- V 0 is the measured tumor volume at the time of sub-cage administration (i.e., d 0 )
- V t is the tumor volume at each measurement.
- I-34 hydrochloride 100mg/kg and 20mg/kg groups were administered orally once a day for 21 days, which had a significant inhibitory effect on the growth of human breast cancer MDA-MB-436 nude mice.
- the T/C percentages obtained on day 21 were 1.47% and 5.70%, respectively, and one mouse tumor in the high dose group completely resolved.
- AZD2281 30mg/kg, once orally administered once a day for 21 days, inhibited the growth of human breast cancer MDA-MB-436 nude mice subcutaneously transplanted.
- the percentage of T/C obtained on the 21st day was 51.41. %.
- I-34 hydrochloride activity was significantly better than AZD2281.
- T-test (vs solvent control group), *p ⁇ 0.05**p ⁇ 0.001"()" is the number of tumor regression mice
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Abstract
提供了吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物或其可药用盐及它们的用途。所述吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物或其可药用盐对聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）具有抑制效果，特别是对PARP家族的PARP-1和PARP-2具有选择性抑制效果，并且在体内外都表现出良好的生物活性，因此可以用作PARP抑制剂，用于药物组合物中，用以预防和/或治疗与PARP相关的疾病，如肿瘤、缺血性疾病和神经退行性疾病。
Description
本发明涉及药物化学领域，特别是涉及吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物或其可药用盐及它们的用途。
聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Poly(adenosine diphosphate[ADP]-ribose)polymerase,PARP)是一类存在于多数真核细胞中的细胞核酶。它的主要功能是将尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide，NAD
+)裂解为尼克酰胺和ADP-核糖，并在靶向蛋白上形成长链或支链的ADP-核糖聚合物，以此调控蛋白的功能，这些蛋白包括组蛋白、拓扑异构酶和PARP本身(Schreiber,V.；Dantzer,F；Ame,J.-C.and De Murcia G..Poly(ADP-ribose):novel functions for an old molecule.Nat.Rev.Mol.Cell Bio,2006,7,517-528)。ADP-核糖转移酶家族(ADP-ribosyltransferases，ARTs)目前所发现并确定的亚型蛋白总共含有18个，其中只有6个亚型具有形成聚ADP-核糖化能力，它们分别是PARP-1、PARP-2、PARP-3、PARP-4(vPARP)、PARP-5a(TNKS1)和PARP-5b(TNKS2)；而其它的ARTs 7-17亚型(通常也称为PARPs 6-16)只具备形成单一ADP-核糖修饰物的功能。PARP-1作为数量最丰富且研究最广泛的成员，在PARP家族中发挥90％以上的功能。人类PARP-1是一条分子量为113kDa的多肽链，由三个主要功能性结构域组成：位于氨基(N)-端的含有两个锌指结构(Zinc finger)的DNA结合域(DNA binding domain，DBD)、自身修饰域(Automodification domain)和位于羧基(C)-端的催化域(Catalytic domain)。人类PARP-2是一条分子量为62kDa的多肽链，它在结构上与PARP-1最相似，其催化域与PARP-1的催化域达到69％的同源性而DNA结合域不含有锌指结构(Amé,Jean-Christophe；Spenlehauer,Catherine；de Murcia,Gilbert.The PARP superfamily.BioEssays 2004,26,882-893)。PARP-1和PARP-2通过碱基切除修复在DNA损伤修复、基因组稳定性、细胞凋亡调节方面发挥重要作用，使其成为近年来最受关注的抗肿瘤药物研究靶点之一(Yelamos,J.；Farres,Jordi.；Llacuna,Laura.；Ampurdanes,Coral；Martin-Caballero,Juan.；PARP-1and PARP-2:New players in tumour development.Am.J.Cancer Res.2011 1(3),328-346；Weaver,A.N.；Yang,E.S.Beyond DNA repair:additional functions of PARP-1 in cancer.Front.Oncol.2013,3,290)。
人体DNA在外源性因素(如紫外辐射、粒子辐射、烷基化试剂、拓扑异构酶及铂类药物等)或内源性因素(如人体正常代谢活性物质和DNA自身化学本质所固有的自发性反应)的作用下容易产生DNA缺口，这些缺口绝大部分会转变为DNA单链断裂，造成DNA损伤。DNA损伤会广泛影响多种细胞过程，是引起肿瘤发生和其它疾病的一个重要原因。研究表明PARP-1/2的催化活性会被DNA链断裂迅速激活。当DNA受损时，活化的PARP-1与受损DNA的单链缺口结合，同时在靶蛋白(如组蛋白或PARP-1自身)上催化形成直链或支链的聚ADP-核糖聚合物。这将导致形成聚ADP-核糖的组蛋白和DNA之间的作用变得松弛，有利于DNA修复酶靠近受损DNA，最后完成DNA的修复。对于癌症治疗，由于放射治疗和许多化学治疗方法都是以靶向DNA损伤而起作用，所以PARP抑制剂可用作癌症治疗的化学和放射增敏剂(Miwa,Masanao；Masutani,Mitsuko.PolyADP-ribosylation and cancer.Cancer science 2007,98,1528-1535)。
PARP抑制剂已被证实可用于乳腺癌相关基因BRCA-1和BRCA-2缺陷肿瘤的特异性杀伤。BRCA-1/2是同源重组(Homologous recombination，HR)修复途径的关键修复因子。在BRCA-1和BRCA-2缺陷的肿瘤细胞中，抑制PARP的作用将导致DNA单链断裂蓄积增加，由于行进中的复制叉倒塌，DNA单链断裂将转化为双链断裂，这些肿瘤细胞将会因为无法启动HR途径对双链断裂进行修复，最终由于基因组的不稳定性而导致细胞死亡。PARP的抑制作用和BRCA-1/2缺陷共同杀伤细胞的现象也被称为协同致死(synthetic lethality)。利用协同致死的理论为恶性肿瘤的治疗提供了新策略和新思路，并开启了PARP抑制剂作为新型抗肿瘤药物研发的新纪元。(参考文献：Farmer,H.；McCabe,N.；Lord,C.J.；Tutt,A.N.J.；Johnson,D.A.；Richardson,T.B.；Santarosa,M.；Dillon,K.J.；Hickson,I.；Knights,C.；Martin,N.M.B.；Jackson,S.P.；Smith,G.C.M.；Ashworth,A..Targeting the DNA repair defect in BRCA mutant cell as a therapeutic strategy.Nature 2005,434,917-921；Kaelin,W.G.The Concept of Synthetic Lethality in the Context of Anticancer Therapy.Nat Rev cancer 2005,5(9),689-698；He JX,Yang CH,Miao ZH.PARP inhibitors as promising cancer therapeutics.Acta Pharmacol.Sin.2010，31,1172-1180.)
除DNA修复和维持基因组的稳定性外，PARP还参与了多个生物过程，包括基因转录，细胞周期进程，细胞死亡，染色质功能。同时PARP抑制剂已被证实可用于多项具有治疗意义的药物化学领域(除恶性肿瘤之外的疾病)，包括中风、心肌缺血、炎症、抗病毒和糖尿病等(参考文献：Virág,L.；Szabó,C.,The Therapeutic Potential of Poly(ADP-Ribose)Polymerase Inhibitors.Pharmacol Rev 2002,54(3),375-429)。
至今为止的绝大多数PARP抑制剂都属于竞争性抑制剂，它们与NAD
+竞争性的结合于酶的催化位点。目前已有抑制剂依然无法满足临床的需求，这些化合物普遍存在溶解度差、对PARP亚型缺乏选择性等缺点，因此迫切需要提供结构新颖的PARP的有效抑制剂。
吡咯[1,2-b]哒嗪结构在药物化学中是一个优势结构。含有此类结构的化合物在药物领域表现出各种各样的生物活性，比如降血脂/降胆甾醇(专利CN1056690公开了一类含此优势结构的化合物及其在治疗高胆甾醇血症和高脂血症方面的应用)、抗肿瘤(专利WO 2011/014817公开了含此类结构的JANUS激酶抑制剂)、抗炎、抗菌(Butnariu,R.M.；Mangalagiu,I.I.,New pyridazine derivatives:Synthesis,chemistry and biological activity.Bioorg Med Chem 2009,17(7),2823-2829；Tucaliuc,R.-A.；Cotea,V.V.；Niculaua,M.；Tuchilus,C.；Mantu,D.；Mangalagiu,I.I.,New pyridazine-fluorine derivatives:Synthesis,chemistry and biological activity.Part II.Eur J Med Chem 2013,67(0),367-372；Butnariu,R.M.；Caprosu,M.D.；Bejan,V.；Mangalagiu,I.I.；Ungureanu,M.；Poiata,A.；Tuchilus,C.；Florescu,M.,Pyridazine and phthalazine derivatives with potential antimicrobial activity.J Heterocyclic Chem 2007,44(5),1149-1152)、抗病毒(专利CN103288832公开了一类用于治疗或预防HIV感染或其它病毒感染的吡咯[1,2-b]哒嗪衍生物)；WO 2004/087708A1和WO 2007/069671分别公开了含此优势结构的肾上腺皮质激素释放因子(CRF)抑制剂在药学中的应用以及专利WO2010022240A1公开了一类含此类结构的衍生物，通过有效地抑制HIF羟化酶的活性，能够调节缺氧诱导因子(HIF)稳定性和/或活性等活性。
以上所述的已报道的吡咯[1,2-b]哒嗪衍生物均未覆盖和涉及本发明所述的化合物及其作为PARP抑制剂的内容。
发明内容
基于此，本发明的目的是提供一种由通式I表示的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物或其可药用盐：
其中，
R
1为氢、C
1-4烷基或卤素；
R
2为
R
3为氢、-C(＝O)R
6、-SO
2R
7、取代或未取代的C
1-4烷基或取代或未取代的C
3-6环烷基，其中，所述R
6和R
7独立地为取代或未取代的C
1-4烷基、取代或未取代的C
3-6环烷基或取代或未取代的C
6-10芳基，所述取代是被选自卤素、C
1-4烷基、氨基、腈基、羟基和硝基中的至少一个取代基取代；
R
4为氢、卤素、C
1-4烷基或C
1-4烷氧基；
R
5为-CH
2-或-C＝O；
X
1为S、O或NH；
X
2为CH或N；
Y
1、Y
2、Y
5和Y
6独立地为取代或未取代的亚甲基、取代或未取代的亚乙基、取代或未取代的亚丙基或取代或未取代的亚丁基，所述取代是被选自卤素、C
1-6烷基、C
3-6环烷基和C
1-4烷氧基中的至少一个取代 基取代；
Y
3和Y
4独立地为氢、取代或未取代的C
1-4烷基或取代或未取代的C
3-6环烷基，所述取代是被选自卤素、C
1-6烷基、C
3-6环烷基和C
1-4烷氧基中的至少一个取代基取代；
Y
7为NR
8或CHR
9，
其中，所述R
8为氢、-C(＝O)R
10、-SO
2R
11、取代或未取代的C
1-4烷基、取代或未取代的C
3-6环烷基或取代或未取代的C
6-10芳基，其中所述R
10和R
11独立地为取代或未取代的C
1-4烷基、取代或未取代的C
3-6环烷基、取代或未取代的五元至六元饱和杂环基或取代或未取代的C
6-10芳基，所述取代是被选自卤素、C
1-4烷基、C
1-4卤代烷基、氨基、被至少一个C
1-4烷基取代的氨基、腈基、羟基和硝基中的至少一个取代基取代，
所述R
9为氢、-OR
12、被至少一个C
1-4烷基取代的氨基、或取代或未取代的五元至六元饱和杂环基，其中所述R
12为氢、取代或未取代的C
1-4烷基或取代或未取代的C
3-6环烷基，所述取代是被选自卤素、C
1-4烷基、C
1-4卤代烷基、氨基、被至少一个C
1-4烷基取代的氨基、腈基、羟基和硝基中的至少一个取代基取代。
较优地，在所述通式I中，
R
1为氢、甲基、乙基、丙基、氟、氯或溴；
R
2为
R
3为氢、甲基、乙基或丙基；
R
4为氢、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基；
R
5为-CH
2-或-C＝O；
X
1为S、O或NH；
X
2为CH或N；
Y
1、Y
2、Y
5和Y
6独立地为取代或未取代的亚甲基、取代或未取代的亚乙基、取代或未取代的亚丙基或取代或未取代的亚丁基，所述取代是被选自氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、甲氧基、乙氧基或丙氧基中的至少一个取代基取代；
Y
3和Y
4独立地为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基或丁基；
Y
7为NR
8或CHR
9，
其中，所述R
8为氢、-C(＝O)R
10、-SO
2R
11、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、或取代或未取代的苯基，其中所述R
10和R
11独立地为取代或未取代的如下基团：甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、二氧六环基或苯基，所述取代是被选自氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、三氟甲基、氨基、N-甲基氨基、N-乙基氨基、N,N-二甲基氨基、N,N-二乙基氨基、腈基、羟基和硝基中的至少一个取代基取代，
所述R
9为氢、-OR
12、N-甲基氨基、N-乙基氨基、N,N-二甲基氨基、N,N-二乙基氨基、吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或二氧六环基，其中所述R
12为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基，所述取代是被选自氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、三氟甲基、氨基、N-甲基氨基、N-乙基氨基、N,N-二甲基氨基、N,N-二乙基氨基、腈基、羟基和硝基中的至少一个取代基取代。
在其中一个实施例中，所述通式I具有由通式II表示的结构：
优选地，所述R
1为卤素，更优选为氯。
优选地，所述X
1为S或O，更优选为S。
优选地，所述通式II具有由通式II-a表示的结构：
在其中一个实施例中，所述通式I具有由通式III表示的结构：
优选地，所述R
1为卤素，更优选为氯。
优选地，所述R
4为卤素，更优选为氟。
优选地，所述R
5为-CH
2-。
优选地，所述Y
3和Y
4独立地为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基或丁基，更优选为甲基。优选地，所述通式III具有由通式III-a表示的结构：
在其中一个实施例中，所述通式I具有由通式IV表示的结构：
优选地，所述R
1为卤素，更优选为氯。
优选地，所述R
4为卤素，更优选为氟。
优选地，所述R
5为-CH
2-或-C＝O。
优选地，所述通式IV具有由通式IV-a表示的结构：
在其中一个实施例中，所述通式I具有由通式V表示的结构：
优选地，所述R
1为卤素，更优选为氯。
优选地，所述R
4为氢或卤素，所述卤素优选为氟。
优选地，所述通式V具有由通式V-a表示的结构：
优选地，所述通式I表示的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物为下列化合物之一：
本发明进一步提供了通式I表示的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物或其可药用盐在制备PARP抑制剂中的用途。
在其中一个实施例中，所述PARP抑制剂对PARP-1和/或PARP-2具有选择性抑制效果。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含一种或多种治疗有效量的通式I表示的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物或其可药用盐，或者包含一种或多种治疗有效量的所述吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物的酯、前药、水合物或结晶。
在其中一个实施例中，所述药物组合物对PARP具有抑制效果，尤其是对PARP-1和/或PARP-2具有选择性抑制效果。
在其中一个实施例中，所述药物组合物用于预防和/或治疗与PARP相关疾病，所述与PARP相关疾病 包括肿瘤(乳腺癌、卵巢癌、肝癌、黑素瘤、前列腺癌、结肠癌、胃癌等实体瘤)、缺血性疾病(大脑、心脏等)和神经退行性疾病(帕金森氏症、阿尔兹海默病等)。
本发明进一步提供所述通式I表示的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物的制备方法，包括以下步骤：
吡咯-2-甲酸甲酯衍生物进行酯化反应后，先后进行碘代和氨基化反应或先后进行氨基化和碘代反应，得到下述反应式中的N-氨基-5-碘吡咯-2-甲酸甲酯衍生物I-a；
芳香醛与乙炔基溴化镁的四氢呋喃(THF)溶液反应得到下述反应式中的芳香炔醇I-b；
N-氨基-5-碘吡咯-2-甲酸甲酯衍生物I-a和芳香炔醇I-b在醋酸钯，碘化亚铜和DBU的存在下，在溶剂中，微波条件下进行偶联环化反应得到化合物I-0；
化合物I-0以氨气的饱和甲醇溶液做溶剂，封管90℃下反应20小时-24小时，或者直接与浓氨水，溶剂是甲醇，封管90℃下反应20小时-24小时得到所述通式I表示的吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺类化合物；
本发明进一步提供通式II或通式II-a表示的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物的制备方法，其合成路线如下：
具体包括以下步骤：
化合物E与酰氯或羧酸缩合得到相应的酰胺F；
酰胺F在三氯氧磷的作用下，稠合成环获得化合物，随后该化合物在硼氢化钠的条件下还原亚胺并进一步用Boc酸酐保护游离氨基得到化合物I；
化合物I在溶剂THF中，与正丁基锂反应后，进一步加入DMF反应得到2-甲酰基取代的噻吩衍生物J；
化合物J与乙炔基溴化镁的THF溶液反应得到化合物I-c；及
化合物I-c与上述化合物I-a进行偶联环化，用三氟乙酸脱除保护基并进一步氨解得到通式II所示化合物。
本发明以吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺作为母核结构，设计合成了一系列PARP抑制剂，本发明涉及的化合物对PARP家族的PARP-1和PARP-2具有选择性抑制效果，并且在体内外都表现出良好的生物活性，有望发展成为新型的抗肿瘤药物以及预防和/或治疗与PARP相关疾病的药物。
下面结合实施例对本发明所涉及化合物的结构和制备方法及体内外抑制PARP活性的效果作进一步阐述，但不限制本发明。
本文中所述的“烷基”指的是直链或支链烷基。
本文中所述的“烷氧基”指的是直链或支链烷氧基。
本文中所述的“取代”指的是取代一个或多个氢原子。
本文中所述的“肿瘤”包括良性肿瘤和恶性肿瘤。
本文中所述的“吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物”包括光学异构体。
通式I表示的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备N-氨基-5-碘吡咯-2-甲酸甲酯衍生物I-a，可以通过以下方案：
方案1：
方案2：
其中，方案1包括：吡咯-2-甲酸甲酯衍生物A在碱(如4-二甲氨基吡啶(DMAP))的作用下，在溶剂(如甲醇)中加热回流可制得化合物B，化合物B在三氟乙酸银和碘单质的作用下，在溶剂(如氯仿)中室温搅拌过夜可得到化合物C，化合物C在碱(如叔丁醇钾)和O-(4-硝基苯甲酰基)羟胺的作用下，在溶剂(如N-甲基吡咯烷酮(NMP))中室温下搅拌过夜可制得化合物I-a；
方案2包括：化合物B在碱(如叔丁醇钾)和O-(4-硝基苯甲酰基)羟胺的作用下，在溶剂(如NMP)中室温下搅拌过夜可制得化合物D，化合物D在碘化钾和过氧化氢的条件下，在溶剂(如乙酸)中室温搅拌3小时可制得化合物I-a；
(2)制备芳香炔醇I-b，由相应的芳香醛与乙炔基溴化镁的四氢呋喃(THF)溶液反应得到；
(3)N-氨基-5-碘吡咯-2-甲酸甲酯衍生物I-a和芳香炔醇I-b在醋酸钯，碘化亚铜和DBU的作用下，在溶剂如甲苯，四氢呋喃，二恶烷中，微波条件下进行偶联环化反应得到化合物I-0；和
(4)化合物I-0以氨气的饱和甲醇溶液做溶剂，封管90℃下反应20小时-24小时，或者也可直接与浓氨水，溶剂是甲醇封管90℃下反应20小时-24小时得到所述通式I表示的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物；
上述制备方法的反应式如下，
以下所有实施例中，除特殊说明外的起始试剂、溶剂、材料均为国药试剂集团供应；微波反应使用CEMNULL型微波反应仪；
1H NMR由BrucherAM-400型或GeMINI-300型核磁共振仪记录，化学位移以δ(ppm)表示；质谱由Agilent1200-6110型单四极杆液相色谱质谱联用仪记录。分离用硅胶为青岛海洋化工厂生产200-300目柱层析硅胶。其中英文缩写所代表的化学试剂如下：
NBS：N-溴代丁二酰亚胺
DMAP：N,N-二甲基吡啶
NaBH
4：硼氢化钠
BH
3的THF溶液：硼烷的四氢呋喃溶液
EDCI：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
HOBt：1-羟基苯并三唑
DBU：1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯
THF：四氢呋喃
NMP：N-甲基吡咯烷酮
实施例1
化合物的制备与合成
4-氯-2-三氯乙酰基吡咯(化合物2)的制备方法
往装有搅拌子的500mL圆底烧瓶中，加入2-三氯乙酰基吡咯1(40克，190mmol，上海书亚医药科技有限公司)和二氯甲烷200mL，在-10℃下缓慢滴加入磺酰氯(31克，227mmol)，约45分钟滴加完，继续保持在该温度下搅拌1小时，然后转移到室温下搅拌过夜。反应进行完全(薄层层析跟踪)以后，将反应液倒入300mL二氯甲烷中，再加入冰水淬灭，分离出有机相，水相用二氯甲烷400mL分两次萃取，合并有机相，再分别用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到32克粗品，收率69％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ9.42(brs,1H),7.27(dd,J＝3.2,1.5Hz,1H),7.11(dd,J＝3.2,1.5Hz,1H)；LC-MS(ESI):m/z 246.2[M+H]
+。
4-氯-吡咯-2-甲酸甲酯(化合物3)的制备方法
往装有搅拌子的250mL圆底烧瓶中，加入化合物2(8.1克，32.8mmol)和DMAP(800毫克)，倒入100mL的无水甲醇，70℃下搅拌1小时，冷却至室温，减压除去溶剂。再加入乙酸乙酯100mL和3MHCl溶液30mL，萃取分离出有机相，水层再用乙酸乙酯50mL萃取一次。合并有机相，然后用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。真空浓缩得到白色固体5.1克，收率为98％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ9.31(brs,1H)，6.90(dd,J＝3.2,1.5Hz,1H)，6.81(dd,J＝3.2,1.5Hz,1H)，3.86(s,3H)；LC-MS(ESI):m/z 160.1[M+H]
+。
4-氯-5-碘-吡咯-2-甲酸甲酯(化合物4)的制备
往装有搅拌子的100mL圆底烧瓶中，加入化合物3(5.3克，33mmol)，三氟乙酸银(7克，33mmol)和氯仿60mL，在冰浴下加入碘单质(4.7克，36mmol)，用N
2置换空气3次，避光，在室温下搅拌7小时。待反应完全后，加入饱和硫代硫酸钠溶液25mL，搅拌15分钟后，真空抽滤，滤饼用氯仿和水洗涤，分离出滤液的有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝30:1)得到白色固体8.3克，收率76％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ9.55(s,1H),6.80(d,J＝2.8Hz,1H),3.91(s,3H)；LC-MS(ESI):m/z 286.1[M+H]
+。
O-(4-硝基苯甲酰)羟基胺(化合物5)的制备方法
0℃下，将对硝基苯甲酰氯(13.2克，70mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液缓慢滴加入含有N-Boc羟胺(9.4克，70.0mmol)、5.4mL三乙胺的二氯甲烷(45mL)中，约45分钟加完。继续在该温度下搅拌10分钟，然后转移到室温下搅拌1.5小时。薄层层析检测反应完全后，加入60mL水淬灭反应，继续搅拌30分钟。分离出有机相，有机相用1％碳酸氢钠溶液48mL洗涤，再分出有机相。室温下往有机相中加入9mL甲磺酸，开始析出白色固体。静置6小时后，加入正己烷30mL，过滤出白色固体得到5的甲磺酸盐。再将白色固体放入500mL的烧杯中，加入二氯甲烷200mL，然后再滴加入饱和碳酸氢钠溶液，直至白色固体全部溶解。分离出有机相，并用饱和食盐水洗涤。无水硫酸镁干燥，浓缩得到白色固体8.9克，收率71％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ8.35-8.28(m,2H),8.23-8.18(m,2H),6.74(s,2H)；LC-MS(ESI)：m/z 183.1[M+H]
+。
N-氨基-4-氯-吡咯-2甲酸甲酯(化合物7)的制备方法
方法1：
将6克氯化铵，10mL氨水，120mL乙醚依次加入500mL圆底烧瓶中，在-10℃下，将5％(质量百分比)的次氯酸钠溶液140mL滴加入上述混合液中，约30分钟加完，并保持在该温度下搅拌1小时，然后分离出有机相，并用冰饱和食盐水60mL洗涤。无水氯化钙干燥，并置于-40℃下干燥1小时待用。
冰浴下，将化合物3(2.5克，15.7mmol)溶于30mL的无水DMF(购于百灵威化学)中，分两次加入NaH(800毫克，20mmol，60％，分散在矿物油中，购于百灵威化学)。搅拌30分钟后，加入上述制好的氯代胺溶液100mL，室温下搅拌4小时，薄层层析检测反应完全。加入饱和硫代硫酸钠溶液30mL，搅拌15分钟后，加入水100mL，分离出有机相，水层再用乙酸乙酯萃取。合并有机相，再用饱和食盐水洗涤。浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝20:1)洗脱得到白色固体2.3克，收率85％。
方法2：
在装有搅拌子的500mL的圆底烧瓶中，依次加入化合物3(2克，12.6mmol)，氯化铵(4克，75.5mmol)，3-辛基甲基氯化铵(Aliquat-336,0.5mL)，氨水15mL，水5mL，K
2CO
3(4.6克，33.3mmol)和甲基叔丁基醚45mL，然后通过恒压滴液漏斗滴加次氯酸钠溶液160mL，约30分钟滴加完毕。室温下搅拌6-7小时，待反应完全后，加入饱和硫代硫酸钠溶液50mL，搅拌10分钟后，分离出有机相，水层再用乙酸乙酯萃取。合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝20:1)洗脱得到黄色固体1.8克，收率82％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ6.91(d,J＝1.9Hz,1H),6.73(d,J＝2.2Hz,1H),5.54(s,2H),3.82(s,3H)；LC-MS(ESI):m/z 143.2(100％)[M-CH
3O]
+。
1-氨基-4-氯-5碘-吡咯-2-甲酸甲酯(化合物6)的制备方法
方法1：
冰浴下，将叔丁醇钾(526毫克，4.7mmol)加入到化合物4(857毫克，3mmol)的N-甲基吡咯烷 酮(10mL)溶液中，搅拌15分钟后，往混合液中加入O-(4-硝基苯甲酰基)-羟胺(692毫克，3.6mmol)的四氢呋喃5溶液mL，室温搅拌过夜。往反应液中加入饱和食盐水50mL和乙酸乙酯30mL，分离出有机相，水层再用乙酸乙酯50mL萃取一遍。合并后的有机相再用水和食盐水洗涤。浓缩有机相，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100:1)洗脱得到白色固体180毫克，收率13％，同时回收原料260毫克，转化率50.1％。
方法2：
将化合物7(625毫克，3.6mmol)溶于10毫升冰醋酸中，加入碘化钾(900毫克，5.4mmol)，然后再滴加入30％H
2O
2溶液2mL，反应液逐渐变成紫色溶液，室温下搅拌反应3小时，加入饱和硫代硫酸钠溶液5mL，继续搅拌10分钟后，加入乙酸乙酯，分离出有机相，水层再用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝30：1)洗脱得到白色固体700毫克，收率78％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ6.91(s,1H),5.74(s,2H),3.84(s,3H)；LC-MS(ESI):m/z 269.2(100％)[M-CH
3O]
+。
1-(4-二乙氧基甲基苯基)丙炔醇(化合物9)的制备方法
装有搅拌子的250mL的圆底烧瓶中，加入4-二乙氧基甲基苯甲醛8(780毫克，3.8mmol，购于TCI化学)及无水四氢呋喃50mL，然后通过恒压滴液漏斗加入乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，10mL，购于百灵威化学，)，约15分钟加完，室温下继续搅拌0.5～1小时，TLC检测反应完全后，加入饱和氯化铵溶液20毫升，搅拌10分钟后，分离出有机相，水层再用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤后，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)洗脱得到油状物390毫克，收率44％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.52(q,J＝8.2Hz,4H),5.50(s,1H),5.47(dd,J＝6.2,2.1Hz,1H),3.67-3.47(m,4H),2.68-2.65(m,1H),2.35-2.29(m,1H),1.28-1.19(m,6H)。LC-MS(ESI):m/z 257.2[M+H]
+。
2-(4-二乙氧基甲基苯基)-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物10)的制备方法
在一支装有搅拌子的25mL微波管中，加入化合物6(150毫克，0.5mmol)，化合物9(234毫克，1mmol)，醋酸钯(2.24毫克，0.01mmol)，碘化亚铜(1毫克，0.005mmol)，及甲苯5毫升，置换N
2 3次后，迅速加入DBU(380毫克，2.5mmol)，微波帽盖紧后，置于微波反应仪中，90℃(λ＝180W)下反应40分钟，冷却后，加入三氯甲烷25mL稀释，转移至100mL圆底烧瓶中，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝30:1)洗脱得到黄色油状物62毫克，收率32％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ8.06(d,J＝8.3Hz,2H),7.94(d,J＝9.4Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,2H),7.47(s,1H),7.35(d,J＝9.5Hz,1H),5.58(s,1H),3.96(s,3H),3.60(dd,J＝13.7,7.0Hz,4H),1.26(t,J＝7.1Hz,6H)；LC-MS(ESI):m/z 389.2[M+H]
+。
2-(4-甲酰基苯基)-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物11)的制备方法
在装有搅拌子的50mL圆底烧瓶中，加入化合物10(62毫克，0.16mmol)和无水甲醇10mL，再加入3N HCl溶液5mL，室温搅拌30分钟，待反应完全后，用NaOH溶液(2.5M)调节PH值到7～8。然后分离出有机相，水层用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到黄色 固体40毫克，收率80％。
LC-MS(ESI):m/z 315[M+H]
+。
2-(4-二甲氨基甲基苯基)-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-1)的制备方法
在装有搅拌子的50mL圆底烧瓶中，加入化合物11(50毫克，0.16mmol)，二甲胺盐酸盐(20毫克，0.24mmol)，几滴醋酸和甲醇5mL，室温搅拌5分钟后，再加入氰基硼氢化钠(50毫克，0.8mmol)，继续搅拌1小时，待反应完全后，减压蒸除溶剂，再加入三氯甲烷10mL，水4mL，萃取分离出有机相，水层再用三氯甲烷萃取2遍，合并有机相，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)洗脱得到粗产品40毫克，LC-MS(ESI):m/z 344.2[M+H]
+；将上述得到粗产品加入25mL封管中，加入氨的甲醇溶液，然后置于80～90℃下封管反应18～24小时，将反应液冷却至室温，减压蒸除溶剂，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)洗脱得到黄色固体25毫克，两步总收率47％。
1H NMR(300MHz,CD
3OD)δ8.08(d,J＝9.5Hz,1H),8.01(d,J＝8.3Hz,2H),7.61(d,J＝8.3Hz,2H),7.50-7.43(m,2H),4.03(s,2H),2.63(s,6H)；LC-MS(ESI):m/z 329.2[M+H]
+。
5-氯-2-(4-甲基氨基甲基苯基)吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-2)的制备方法
化合物11(50毫克，0.16mmol)和甲胺醇溶液(2mL)为原料，参照化合物I-1的制备过程，得到黄色固体20毫克，两步总收率40％：。
1H NMR(300MHz,CD
3OD)δ8.00(ddd,J＝8.4,7.2,1.6Hz,3H),7.69-7.59(m,2H),7.42(dt,J＝10.7,1.5Hz,2H),4.28(d,J＝1.6Hz,2H),2.77(s,3H),1.96-1.89(m,1H)；LC-MS(ESI):m/z 315.2[M+H]
+。
2-(4-二乙基氨基甲基苯基)-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-3)的制备方法
化合物11(50毫克，0.16mmol)和二乙胺醇溶液(1mL)为原料，参照化合物I-1的制备过程，得到黄色固体24毫克，两步总收率42％。
1H NMR(300MHz,CD
3OD)δ8.20(dd,J＝9.5,1.3Hz,1H),8.17-8.11(m,2H),7.75-7.70(m,2H),7.58-7.52(m,2H),4.42(s,2H),3.22(q,J＝7.3Hz,4H),1.37(t,J＝7.3Hz,6H)；LC-MS(ESI):m/z 357.2[M+H]
+。
2-[4-(吡咯啉-1-基)甲基苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-4)的制备方法
化合物11(50毫克，0.16mmol)和四氢吡咯烷(1mL)为原料，参照化合物I-1的制备方法，得到黄色固体15毫克，两步总收率26％。
1H NMR(300MHz,CD
3OD)δ8.18(dd,J＝9.4,1.4Hz,1H),8.12(dd,J＝8.3,1.5Hz,2H),7.73(d,J＝8.1 Hz,2H),7.58-7.49(m,2H),4.46(s,2H),3.35(d,J＝6.0Hz,4H),2.15-2.06(m,4H)；LC-MS(ESI):m/z 355.2[M+Na]
+。
2-[4-(哌嗪-1-基)-甲基苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-5)的制备方法
化合物11(50毫克，0.16mmol)和N-boc哌嗪(45毫克，0.24mmol)的甲醇5mL中，加入冰醋酸2滴，室温搅拌5分钟后，加入氰基硼氢化钠(50毫克)，室温下搅拌3小时后，直接浓缩得到油状物，往其中加入水3mL和三氯甲烷5mL，分离出有机相，水层用三氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到油状物直接投入下一步，往上述油状物中加入三氯甲烷10毫升，缓慢滴加三氟乙酸1.5mL，室温下搅拌1小时，冰浴下用3N HCl溶液调节pH值为8～9，分离出有机相，水层用三氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，未经纯化直接浓缩后，用甲醇5mL转移到25mL封管中，加入饱和氨的甲醇溶液8mL，80～90℃下封管反应18～24小时，将反应液冷却至室温，真空减压除去溶剂，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)洗脱得到黄色固体10毫克，三步总收率17％。
1H NMR(300MHz,CD
3OD)δ8.12-8.06(m,1H),7.92(dd,J＝8.1,2.0Hz,2H),7.52(dd,J＝8.3,2.0Hz,2H),7.46(ddd,J＝5.9,3.8,2.3Hz,2H),3.67(d,J＝2.0Hz,2H),3.34(d,J＝1.6Hz,1H),3.19(t,J＝5.5Hz,4H),2.69(t,J＝4.8Hz,4H)；LC-MS(ESI):m/z 370.2[M+H]
+。
2-[4-(3-甲基-哌嗪-1-基)甲基苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-6)的制备方法
化合物11(50毫克，0.16mmol)和2-甲基哌嗪(24毫克，0.24mmol)为原料，参照化合物I-1的制备方法，得到黄色固体15毫克，收率25％。
1H NMR(300MHz,CD
3OD)δ8.11(dd,J＝9.5,3.4Hz,1H),7.94(dq,J＝8.6,2.3,1.8Hz,2H),7.54(dd,J＝8.2,3.3Hz,2H),7.51-7.45(m,2H),3.68(s,2H),3.20-3.09(m,1H),3.05-2.93(m,2H),2.44-2.32(m,1H),2.26-2.10(m,2H),2.02(s,1H),1.93(dd,J＝3.8,2.8Hz,1H),1.29(d,J＝3.1Hz,3H)；LC-MS(ESI):m/z384.2[M+H]
+。
2-[4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-甲基苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-7)的制备方法
化合物11(50毫克，0.16mmol)和N-环丙基哌嗪(30毫克，0.24mmol)为原料，参照化合物I-1的制备方法，得到黄色固体24毫克，两步总收率37％。
1H NMR(300MHz,CD
3OD)δ8.10(dd,J＝9.4,1.7Hz,1H),7.95-7.88(m,2H),7.52(dd,J＝6.8,1.6Hz,3H),7.44(dd,J＝9.5,1.6Hz,1H),3.64(s,2H),2.80-2.65(m,4H),2.64-2.45(m,4H),0.91-0.80(m,1H),0.52-0.47(m,2H),0.45-0.37(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 410.2[M+H]
+。
2-[4-(4-异丙基-哌嗪-1-基)-甲基苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-8)的制备方法
化合物11(50毫克，0.16mmol)和N-异丙基哌嗪(31毫克，0.24mmol)为原料，参照化合物I-1的制备方法，得到黄色固体25毫克，两步总收率38％。
1H NMR(300MHz,CD
3OD)δ8.13(d,J＝9.5Hz,1H),7.97(d,J＝8.3Hz,2H),7.55(d,J＝8.3Hz,2H),7.50(dd,J＝5.2,4.3Hz,2H),3.71(s,2H),3.36-3.32(m,1H),3.22-3.10(m,4H),2.85-2.65(m,4H),1.31(d,J＝6.6Hz,6H)；LC-MS(ESI):m/z 412.2[M+H]
+。
2-[4-(4-二甲氨基哌啶-1-基)-甲基苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-9)的制备方法
化合物11(50毫克，0.16mmol)和4-二甲氨基哌啶(31毫克，0.24mmol)为原料，参照化合物I-1的制备方法，得到黄色固体26毫克，两步总收率39％。
1H NMR(300MHz,CD
3OD)δ8.12(dd,J＝9.4,0.6Hz,1H),7.95(dd,J＝8.4,2.2Hz,2H),7.56-7.46(m,4H),3.64(s,2H),3.11-3.02(m,2H),3.01-2.92(m,1H),2.74(s,6H),2.23-2.12(m,2H),2.08-1.98(m,2H),1.80-1.64(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 412.2[M+H]
+。
2-{4-[4-(吡咯烷-1-基)-哌啶-1-基]-甲基苯基}-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-10)的制备方法
化合物11(50毫克，0.16mmol)和4-吡咯烷-1-基-哌啶(37毫克，0.24mmol)为原料，参照化合物I-1的制备方法，得到黄色固体15毫克，收率21％。
1H NMR(300MHz,CD
3OD)δ8.13(d,J＝9.5Hz,1H),7.99-7.93(m,2H),7.58-7.52(m,2H),7.51(dd,J＝5.5,4.0Hz,2H),3.67(s,2H),3.42-3.35(m,3H),3.22-3.13(m,1H),3.11-3.02(m,2H),2.25-2.11(m,4H),2.10-2.02(m,4H),1.85-1.70(m,3H)；LC-MS(ESI):m/z 438.2[M+H]
+。
2-[4-(4-吗啉基哌啶-1-基)-甲基苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-11)的制备方法
化合物11(50毫克，0.16mmol)和4-(4-哌啶基)吗啉(41毫克，0.24mmol)为原料，参照化合物I-1的制备方法，得到黄色固体10毫克，两步总收率14％。
1H NMR(300MHz,CD
3OD)δ8.16(dd,J＝9.5,2.0Hz,1H),8.05-7.97(m,2H),7.64-7.56(m,2H),7.55-7.48(m,2H),3.83(s,2H),3.76-3.68(m,4H),3.21-3.10(m,2H),2.74-2.64(m,4H),2.52-2.30(m,3H),2.06-1.97(m,2H),1.73-1.62(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 454.2[M+H]
+。
2-[4-(4-对三氟甲基苯基-哌嗪-1-基)-甲基苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-12)的制备方法
化合物11(50毫克，0.16mmol)和对三氟甲基苯基哌嗪(55毫克，0.24mmol)为原料，参照化合物I-1的制备方法，得到黄色固体20毫克，两步总收率24％。
1H NMR(300MHz,CD
3OD)δ8.17(d,J＝9.4Hz,1H),8.00(d,J＝7.8Hz,2H),7.60(d,J＝7.9Hz,2H),7.54(dd,J＝6.5,2.8Hz,2H),7.47(d,J＝8.3Hz,2H),7.04(d,J＝8.7Hz,2H),3.73(s,2H),3.37-3.32(m,4H),2.79-2.62(m,4H)；LC-MS(ESI):m/z 514.2[M+H]
+。
4-(4-甲酰基苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物13)的制备方法
取一支装有搅拌子的50mL圆底烧瓶，依次加入4-甲酰基苯甲酸12(3.1克，20.7mmol)，N-叔丁氧甲酰基哌嗪(3.6克，19.4mmol)，EDCI(3.86克，20.2mmol)，HOBt(2.68克，19.8mmol)的二氯甲烷25mL，最后再加入DMAP(20毫克)，室温搅拌20～24小时，待反应完全后，加入NaOH溶液(2.5M)5毫升，搅拌5分钟后，分离出有机相，水层再用三氯甲烷萃取，合并有机相，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)洗脱得到白色固体4.5克，收率73％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ10.0(s,1H),7.93(d,J＝8.2Hz,2H),7.54(d,J＝8.1Hz,2H),3.82-3.67(m,2H),3.58-3.30(m,6H),1.46(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 319.2[M+H]
+。
4-{4-[1-(1-羟基-2-丙炔基)]苯甲酰基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物14)的制备方法
取一支装有搅拌子的50mL圆底烧瓶，加入化合物13(650毫克，2.05mmol)，无水THF 20毫升，完全溶解后，加入乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，7mL)，薄层层析法检测反应完全，加入饱和氯化铵溶液10mL淬灭，继续搅拌10分钟，加入乙酸乙酯10mL，分离出有机相，水层继续用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)洗脱得到黄色油状物305毫克，收率50％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.58(dd,J＝10.5,8.0Hz,2H),7.39(ddd,J＝10.2,8.2,1.8Hz,2H),5.52-5.44(m,1H),3.55(d,J＝96.8Hz,8H),2.67(ddd,J＝8.4,2.2,0.9Hz,1H),2.16(q,J＝1.6Hz,1H),1.46(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 367.2[M+Na]
+。
2-[4-(N-叔丁氧基甲酰基)哌嗪基甲酰基]苯基-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物15)的制备方法
取一支装有搅拌子的25mL微波反应管，依次加入化合物6(160毫克，0.52mmol)，化合物14(305 毫克，0.9mmol)，Pd(OAc)
2(7毫克，0.01mmol)，CuI(1毫克，0.005mmol)和甲苯8mL，置换N
2 3次后，在N
2保护下加入DBU(380毫克，2.5mmol)，盖好微波管帽子后，置于微波反应仪中，90℃(λ＝180W)下反应40分钟，冷却后，加入三氯甲烷25mL稀释，转移至100毫升圆底烧瓶中，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)洗脱得到黄色油状物121毫克，收率47％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ8.17-8.10(m,2H),7.99(dd,J＝9.5,2.5Hz,1H),7.59-7.52(m,2H),7.50(d,J＝3.0Hz,1H),7.35(dd,J＝9.4,3.0Hz,1H),3.96(s,3H),3.82-3.70(m,2H),3.58-3.36(m,6H),1.49(s,9H)；LC-MS(ESI)：m/z 521.2[M+Na]
+。
5-氯-2-[4-(哌嗪基-1-甲酰基)苯基]-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯的盐酸盐(化合物16)的制备方法
取化合物15(120毫克，0.24mmol)放于100mL的圆底烧瓶中，加入无水二氯甲烷5mL，再加入HCl的乙酸甲酯溶液5mL，40℃下搅拌2小时，析出白色固体，待冷却至室温后，过滤，得到5-氯-2-[4-(N-哌嗪基甲酰基)苯基]-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯的盐酸盐100毫克。
1H NMR(300MHz,DMSO-d
6)δ9.19-9.07(m,2H),8.29-8.20(m,3H),7.68-7.62(m,2H),3.86(s,3H),3.55-3.48(m,4H),3.22-3.10(m,4H)；LC-MS(ESI):m/z 399.2[M+H]
+。
5-氯-2-[4-(哌嗪基-1-甲酰基)苯基]-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-13)的制备方法
取化合物16(50毫克)的甲醇10mL溶解转移至25mL的封管中，加入NH
3的甲醇溶液8mL，80～90℃下反应20～24小时，冷却至室温，转移到100毫升圆底烧瓶中，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)洗脱得到黄色固体35毫克。
1H NMR(300MHz,DMSO-d
6)δ8.26(dt,J＝9.4,1.1Hz,1H),8.21(s,1H),8.14-8.05(m,2H),7.98(s,1H),7.65-7.59(m,1H),7.59-7.53(m,2H),7.51(p,J＝1.2Hz,1H),3.62-3.50(m,2H),3.29-3.22(m,2H),2.80-2.60(m,4H)；LC-MS(ESI):m/z 384.2[M+H]
+。
2-{4-[4-(环丙基甲酰基)-哌嗪-1-基]甲酰基苯基}-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-14)的制备方法
取化合物16(50毫克，0.13mmol)，加入无水二氯甲烷15mL，分别滴加入0.5mL NEt
3，环丙基甲酰氯(30μl)，室温下搅拌15分钟，薄层层析检测反应完全后，加入2mL甲醇，室温搅拌10分钟，浓缩，得到黄色固体，为粗品5-氯-2-{4-[(4-环丙基甲酰基)-哌嗪基-1-甲酰基]苯基}-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯，用甲醇10mL转移到25mL封管中，加入8mL的氨甲醇溶液，80～90℃下反应20～24小时，冷却至室温，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)洗脱得到黄色固体45毫克，两步总收率79％。
1H NMR(300MHz,DMSO-d
6)δ8.27(dt,J＝9.4,1.4Hz,1H),8.21(s,1H),8.11(dt,J＝8.3,1.7Hz,2H), 7.99(d,J＝3.2Hz,1H),7.71-7.57(m,3H),7.52(d,J＝1.0Hz,1H),3.85-3.45(m,8H),1.41-1.28(m,1H),0.82-0.65(m,4H)；LC-MS(ESI):m/z 452.2[M+H]
+。
2-[4-(3-甲基-1-氧代丁基)-哌嗪-1-基-甲酰基]-苯基-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-15)的制备方法
取化合物16(50毫克，0.16mmol)，加入无水二氯甲烷5mL，分别滴加入0.5mL NEt
3，异戊酰氯(30毫克，0.24mmol)，室温下搅拌30分钟，薄层层析检测反应完全后，加入3mL甲醇，室温下搅拌5分钟，浓缩，得到粗品65毫克，为2-[(N-异戊酰基)哌嗪-1-基甲酰基]-苯基-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯；用甲醇10mL将其转移到25mL封管中，加入8mL NH
3的甲醇溶液，80～90℃下反应20～24小时，冷却至室温，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)洗脱得到黄色固体40毫克，两步总收率53％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ8.69(s,1H),8.05(dd,J＝9.4,2.1Hz,1H),7.99-7.89(m,2H),7.65(d,J＝2.1Hz,1H),7.64-7.54(m,2H),3.85-3.40(m,8H),2.30-2.22(m,2H),2.20-2.08(m,1H),1.04-0.94(m,6H)；LC-MS(ESI):m/z 468.2[M+H]
+。
4-(3-氟-4-甲酰基苯基)-甲酰基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物17)的制备方法
3-氟-4-甲酰基苯甲酸(1克，6mmol，它的制备方法参照文献EP2526945A1，所用原料3-氟-4-甲基苯甲酸购于上海书亚医药)，N-叔丁氧基甲酰基哌嗪(1.1克，5.66mmol)，HOBt(764毫克，5.66mmol)，EDCI(1.3克，6.8mmol)和DMAP(20毫克)为原料，按照化合物13的制备方法，得到白色固体1.7克，收率89％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ10.38(d,J＝0.7Hz,1H),7.93(d,J＝8.3Hz,1H),7.33-7.17(m,2H),3.85-3.23(m,8H),1.43(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 359.2[M+Na]
+。
4-[3-氟-4-(1-羟基丙炔-2-基)苯甲酰基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物18)的制备方法
化合物17(600毫克，1.8mmol)和乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，6.5mL)为原料，参照化合物14的制备方法，得到白色固体420毫克，收率65％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.72(t,J＝7.6Hz,1H),7.23-7.10(m,2H),5.75(dd,J＝5.8,2.2Hz,1H),3.82-3.28(m,8H),2.68-2.66(m,1H)；LC-MS(ESI):m/z 385.2[M+Na]
+。
2-[2-氟-(4-叔丁氧甲酰基哌嗪-1-基甲酰基)苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物19)的制备方法
化合物6(218毫克，0.7mmol)和化合物18(420毫克，1.2mmol)为原料，参照化合物15的制备方法，得到黄色固体160毫克，收率44％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ8.14(t,J＝7.8Hz,1H),7.96(d,J＝9.5Hz,1H),7.51(s,1H),7.41-7.19(m,4H),3.94(s,3H),3.80-3.65(m,2H),3.55-3.35(m,6H),1.47(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 539.2[M+Na]
+。
2-[2-氟-4-(哌嗪-1-基-甲酰基)苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物20)的制备方法
取化合物19(150毫克，0.3mmol)溶于二氯甲烷中，滴加入三氟乙酸(1.5mL)，TLC检测反应完全后，冰浴下加入NaOH溶液(2.5M)调节pH值为7～8，分离出有机相，水层用三氯甲烷萃取，合并有机相，浓缩，柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1+几滴NH
3的甲醇溶液)洗脱得到黄色固体100毫克，收率80％。
LC-MS(ESI):m/z 417.2[M+H]
+。
2-[2-氟-4-(4-环丙基甲酰基哌嗪-1-基-甲酰基)苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-16)的制备方法
化合物20(60毫克，0.15mmol)的无水二氯甲烷10mL溶液，加入0.5mL NEt
3和环丙基甲酰氯(26毫克，0.25mmol)，室温下搅拌30分钟，TLC检测反应完全后，加入4mL甲醇，浓缩，得到粗品65毫克，5-氯-2-[3-氟-4-(4-环丙基甲酰基哌嗪-1-甲酰基)苯基]吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯；用甲醇10mL将其转移到25mL封管中，加入氨的甲醇溶液8mL，80～90℃下反应20～24小时，冷却至室温，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)洗得得到黄色固体30毫克，两步总收率43％。
1H NMR(300MHz,DMSO-d
6)δ8.83-8.48(s,1H),8.33-8.24(m,1H),8.18(s,1H),8.04-7.92(m,2H),7.58-7.52(m,1H),7.51-7.39(m,2H),3.87-3.36(m,8H),0.85-0.66(m,5H)；LC-MS(ESI):m/z 470.2[M+H]
+。
2-[2-氟-4-[4-[(2S)-2-甲基氨基-1-氧-丙基]-哌嗪-1-基甲酰基]苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-17)的制备方法
化合物20(100毫克，0.24mmol)、Boc-N-甲基-L-丙氨酸(54毫克，0.27mmol)，EDCI(55毫克， 0.29mmol)，HOBt(32毫克，0.24mmol)和DMAP(5毫克)的二氯甲烷(15mL)溶液，室温下搅拌14小时，加入NaOH(2.5M)溶液3毫升，室温下搅拌5分钟，分离出有机相，水层用氯仿萃取，合并有机相，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1)得到黄色固体58毫克，LC-MS(ESI):m/z 624.2[M+Na]
+；往上述固体的二氯甲烷20mL中，加入CF
3COOH 1.5mL，室温下搅拌2小时，并用NaOH(2.5M)溶液调节pH值到8～9，分离出有机相，水层用氯仿萃取，合并有机相，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)洗脱得到黄色固体40毫克，LC-MS(ESI):m/z 502.2[M+Na]
+；用甲醇10mL转移到25mL封管中，加入氨的甲醇溶液8mL，80～90℃下反应20～24小时，冷却至室温，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)洗得得到黄色固体30毫克，三步总收率26％。
1H NMR(300MHz,DMSO-d
6)δ8.29(d,J＝9.5Hz,1H),8.17(s,1H),8.04-7.95(m,2H),7.59-7.49(m,2H),7.45(ddd,J＝11.4,8.8,1.7Hz,2H),4.22-4.02(m,1H),3.78-3.39(m,8H),2.36(s,3H),1.24-1.16(m,3H)；LC-MS(ESI):m/z 487.2[M+Na]
+。
2-[4-(4-异丙基磺酰基哌嗪-1-基-甲酰基)苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-18)的制备方法
化合物I-13(10毫克，0.024mmol)的三氯甲烷5mL中加入吡啶1mL及异丙基磺酰氯250ul，室温下搅拌4小时，加入3N HCl溶液3mL，分离出有机相，水层用三氯甲烷萃取，合并有机相，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)洗脱得到黄色固体8毫克，收率为67％。
1H NMR(400MHz,CD
3OD)δ8.14(d,J＝9.4Hz,1H),8.07(d,J＝8.2Hz,2H),7.63(d,J＝8.2Hz,2H),7.54(s,1H),7.48(d,J＝9.5Hz,1H),3.63-3.54(m,2H),3.52-3.46(m,1H),3.43-3.37(m,6H),1.34(d,J＝6.9Hz,6H)；LC-MS(ESI):m/z 490.2[M+H]
+。
N-(2-氟-5-甲酰基-苯甲酰基)-哌嗪-1-基-甲酸叔丁酯(化合物21)的制备方法
2-氟-5-甲酰基苯甲酸(850毫克，5mmol它的制备方法参照文献)，N-Boc哌嗪(1.1克，6.1mmol)，EDCI(1.2克，6.1mmol)，HOBt(688毫克，5.1mmol)和DMAP(80毫克)为原料，参照化合物13的制备方法，得到白色固体1.4克，收率83％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ9.97(s,1H),8.00-7.93(m,2H),7.28(d,J＝8.6Hz,1H),3.81-3.74(t,J＝5.3Hz,2H),3.53(t,J＝5.3Hz,2H),3.42(t,J＝5.1Hz,2H),3.32-3.24(t,J＝5.3Hz,2H),1.45(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 359.2[M+Na]
+。
N-[2-氟-5-(1-羟基-丙炔-2-基)苯甲酰基]-哌嗪-1-基-甲酸叔丁酯(化合物22)的制备方法
化合物21(500毫克，1.5mmol)和乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，5mL)为原料，参照化合物14的制备方法，得到黄色油状物520毫克，收率94％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.64-7.56(m,2H),7.11(ddd,J＝9.0,8.1,1.0Hz,1H),5.45(dd,J＝5.9,2.2Hz,1H),3.82-3.74(m,2H),3.52(t,J＝5.3Hz,2H),3.41(t,J＝5.0Hz,2H),3.34-3.27(m,2H),2.73(d,J＝6.2Hz,1H),2.68(d,J＝2.2Hz,1H),1.46(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 385.2[M+Na]
+。
2-[3-(N-叔丁氧基-甲酰基-哌嗪-1-基-甲酰基)-4-氟-苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物23)的制备方法
化合物6(270毫克，0.9mmol)，化合物22(520毫克，1.5mmol)为原料，参照化合物15的制备方法，得到黄色固体160毫克，收率34％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ8.25-8.20(m,1H),8.05-8.02(m,1H),7.98(d,J＝8.3Hz,1H),7.48(s,1H),7.29-7.17(m,2H),3.95(s,3H)3.85-3.75(m,2H),3.58-3.52(m,2H),3.48-3.42(m,2H),3.38-3.32(m,2H),1.47(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 539.2[M+Na]
+。
2-[3-(哌嗪-1-基)-甲酰基-4-氟-苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物24)的制备方法
化合物23(108毫克，0.23mmol)的二氯甲烷10mL溶液中，室温下加入三氟乙酸(1.5mL)，继续搅拌1小时，薄层层析检测反应完全后，冰浴下用NaOH(2.5M)溶液调节pH值成碱性(8～9)，分离出有机相，水层用三氯甲烷萃取，合并有机相，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)洗脱得到黄色固体80毫克，收率83％。
LC-MS(ESI):m/z 417.2[M+H]
+。
2-[3-(N-环丙甲酰基-哌嗪-1-基)-甲酰基-4-氟-苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-19)的制备方法
化合物24(50毫克，0.12mmol)的二氯甲烷溶液10mL，加入几滴三乙胺，环丙甲酰氯(20毫克，0.18mmol)，室温下搅拌1小时，加入甲醇5mL，继续搅拌10分钟，浓缩，得到油状物为2-[3-(N-环丙甲酰基-哌嗪-1-基)-甲酰基-4-氟-苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯，LC-MS(ESI):m/z 485.2[M+H]
+；用甲醇10mL转移到25mL封管中，加入氨的甲醇溶液8mL，80～90℃下反应20～24小时，冷却至室温，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)洗脱得到黄色固体21毫克，两步总收率38％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.99(d,J＝9.4Hz,1H),7.98-7.83(m,2H),7.56(s,1H),7.27(t,J＝8.8Hz,1H),7.19(d,J＝9.4Hz,1H),3.90-3.65(m,6H),3.44-3.33(m,2H),1.75-1.65(m,1H),0.96-0.92(m,2H),0.82-0.75(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 470.2[M+H]
+。
2-[3-[N-[(2S)-吡咯啉-2-基]-甲酰基-哌嗪-1-基]-甲酰基]-4-氟-苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-20)的制备方法
化合物24(50毫克，0.12mmol)，Boc-L-脯氨酸(28毫克，0.13mmol)，EDCI(28毫克，0.15mmol)和HOBt(17毫克，0.12mmol)，及DMAP(5毫克)为原料，参照化合物I-17的制备方法，得到黄色固体15毫克，三步总收率25％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ8.29(d,J＝9.5Hz,1H),8.25-8.11(m,3H),8.00(s,1H),7.67-7.61(m,1H),7.59(d,J＝9.3Hz,1H),7.53(s,1H),4.47-4.30(m,1H),3.62(dd,J＝53.7,20.3Hz,8H),3.16(d,J＝5.0Hz,2H),3.01(s,1H),2.28(s,1H),1.76(s,4H)；LC-MS(ESI):m/z 499.2[M+H]
+。
3-(4-甲氧基哌啶-1-基-甲酰基)-4-氟-苯甲醛(化合物25)的制备方法
2-氟-5-甲酰基苯甲酸(370毫克，2.2mmol)，4-甲氧基哌啶的盐酸盐(300毫克，2mmol，它的制备方法参照文献US2011092475A1)，EDCI(460毫克，2.4mmol)，HOBt(300毫克，2.2mmol)的二氯甲烷40mL中，加入DMAP(20毫克)，室温下搅拌20～24小时，薄层层析检测反应完全后，加入NaOH(2.5M)溶液5mL，搅拌10分钟后，分离出有机相，水层用三氯甲烷萃取，合并有机相，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)洗脱得到白色固体370毫克，收率70％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ9.97(t,J＝0.5Hz,1H),7.98-7.89(m,2H),7.30-7.22(m,1H),4.05-3.97(m,1H),3.88-3.80(tt,J＝8.7,4.1Hz,1H),3.68-3.63(m,1H),3.53-3.42(m,2H),3.36(s,3H),3.20-3.10(m,1H),3.07-2.93(m,1H),1.98-1.92(m,1H),1.87-1.73(m,1H)；LC-MS(ESI):m/z 266.2[M+H]
+。
2-氟-5-(1-羟基-丙炔-2-基)-苯基-(4-甲氧基哌啶-1-基)-甲基酮(化合物26)的制备方法
化合物25(370毫克，1.4mmol)的无水THF40mL中，加入乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，4mL)，室温下搅拌1～1.5小时，加入饱和氯化铵溶液20mL，分离出有机相，水层用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)洗脱得到黄色油状物370毫克，收率90％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.61-7.50(m,2H),7.13-7.05(m,1H),5.43(s,1H),4.05-3.98(s,1H),3.86-3.79(m,1H),3.65-3.45(m,3H),3.36(s,3H),3.20-3.12(m,1H),3.05-2.92(m,1H),2.66(d,J＝2.2Hz,1H),1.99-1.76(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 314.2[M+Na]
+。
2-[3-(4-甲氧基哌啶-1-基-甲酰基)-4-氟-苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-21)的制备方法
取一支装有搅拌子的25-mL微波管中，加入化合物6(210毫克，0.7mmol)，化合物26(370毫克，1.3mmol)，醋酸钯(8毫克)，碘化亚铜(1毫克)及甲苯10mL，置换N
2 3次后，N
2保护下迅速加入DBU(532毫克)，微波帽盖紧后，置于微波反应仪中，90℃(λ＝180W)下反应40分钟，冷却后，加入三氯甲烷25毫升稀释，转移至100毫升圆底烧瓶中，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)洗脱得到黄色固体40毫克，为2-[3-(4-甲氧基哌啶-1-基-甲酰基)-4-氟-苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯粗品，收率13％，LC-MS(ESI):m/z 446.2[M+H]
+；用甲醇10mL将其转移到25mL封管中，加入氨的甲醇溶液8mL，80～90℃下反应20～24小时，冷却至室温，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)洗脱得到黄色固体20毫克，收率51％。
1H NMR(300MHz,DMSO-d
6)δ8.24(d,J＝9.5Hz,1H),8.15(ddd,J＝8.7,5.1,2.5Hz,2H),8.07(dd,J＝6.4,2.4Hz,1H),7.95(s,1H),7.62(d,J＝9.5Hz,1H),7.55-7.46(m,2H),3.99-3.88(m,1H),3.49-3.34(m,3H),3.25(s,3H),3.18-3.00(m,2H),1.95-1.85(m,1H),1.82-1.74(s,1H),1.51-1.41(m,1H)；LC-MS(ESI):m/z 431.2[M+H]
+。
4-(4-甲氧基哌啶-1-基)-甲酰基苯甲醛(化合物27)的制备方法
4-甲酰基苯甲酸(330毫克，2.2mmol)和4-甲氧基哌啶盐酸盐(302毫克，2mmol)为原料，按照化合物25的制备方法，得到白色固体320毫克，收率65％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ10.02(d,J＝0.6Hz,1H),7.94-7.87(d,J＝8.3Hz,2H),7.55-7.49(d,J＝8.3Hz,2H),4.04-3.94(m,1H),3.64-3.45(m,3H),3.35(s,3H),3.25-3.09(m,1H),2.64-2.44(m,1H),2.02-1.90(m,1H),1.83-1.65(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 248.2[M+H]
+。
4-(1-羟基-丙炔-2-基)-苯基-(4-甲氧基-哌啶-1-基)-甲基酮(化合物28)的制备方法
化合物27(320毫克，1.3mmol)和乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，4mL)为原料，按照化合物26的制备方法方法，得到油状物210毫克，收率59％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.61-7.55(m,2H),7.43-7.38(m,2H),5.49(dd,J＝6.1,2.3Hz,1H),4.06-4.02(m,1H),3.65-3.45(m,4H),3.36(s,3H),3.25-3.18(m,1H),2.68(d,J＝2.2Hz,1H),2.47(d,J＝6.1Hz,1H),1.81-1.61(m,3H)；LC-MS(ESI):m/z 274.2[M+H]
+。
2-[4-(4-甲氧基哌啶-1-基-甲酰基)-苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-22)的制备方法
化合物28(210毫克，0.8mmol)，化合物6(150毫克，0.5mmol)，醋酸钯(8毫克)，CuI(1毫克)和DBU(380毫克)为原料，按照化合物I-21的制备方法，得到黄色固体40毫克，两步总收率10％。
1H NMR(300MHz,DMSO-d
6)δ8.25(d,J＝9.5Hz,1H),8.21(drs,1H),8.08(d,J＝8.0Hz,2H),7.96(drs,1H),7.65-7.57(m,2H),7.53(d,J＝15.8Hz,2H),3.99-3.84(m,1H),3.50-3.38(m,2H),3.35-3.29(m,2H),3.25(s,3H),1.87(m,2H),1.47(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 428.2[M+H]
+。
2-氟-4-(4-甲氧基哌啶-1-基)-甲酰基苯甲醛(化合物29)的制备方法
2-氟-4-甲酰基-苯甲酸(370毫克，2.2mmol)，4-甲氧基哌啶盐酸盐(300毫克，2mmol)为原料，按照化合物25的制备方法，得到白色固体360毫克，收率50％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ10.37(d,J＝0.7Hz,1H),7.92(dd,J＝7.9,6.9Hz,1H),7.29(m,2H),4.00-3.89(m,1H),3.65-3.45(m,3H),3.37(s,3H),3.25-3.18(m,2H),1.98-1.88(m,1H),1.82-1.68(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 266.2[M+H]
+。
3-氟-4-(1-羟基-丙炔-2-基)-苯基-(4-甲氧基哌啶-1-基)-甲基酮(化合物30)的制备方法
化合物29(360毫克，1.4mmol)和乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，2.5mL)为原料，按照化合物26的制备方法，得到黄色油状物330毫克，收率80％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.69(t,J＝7.6Hz,1H),7.19(dd,J＝7.7,1.5Hz,1H),7.11(dd,J＝10.1,1.5Hz,1H),5.74(d,J＝3.8Hz,1H),4.04-3.84(m,1H),3.60-3.42(m,3H),3.36(s,3H),3.28-3.18(m,2H),2.74(d,J＝5.8Hz,1H),2.66(d,J＝2.2Hz,1H),1.91(d,J＝11.1Hz,3H)；LC-MS(ESI):m/z 314.2[M+H]
+。
2-[4-(4-甲氧基哌啶-1-基)-甲酰基-2-氟-苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-23)的制备方法
化合物30(330毫克，1.2mmol)，化合物6(180毫克，0.6mmol)为原料，按照化合物I-21的制备方法，得到黄色固体44毫克，两步总收率17％。
1H NMR(300MHz,DMSO-d
6)δ8.27(d,J＝9.4Hz,1H),8.17(s,1H),8.01-7.92(m,2H),7.54(d,J＝1.1Hz,1H),7.49(dd,J＝11.5,1.5Hz,1H),7.45-7.37(m,2H),3.96-3.86(m,1H),3.50-3.40(m,2H),3.25(s,3H),3.23-3.12(m,2H),1.95-1.74(m,2H),1.45(d,J＝16.3Hz,2H)；LC-MS(ESI):m/z 431.2[M+H]
+。
2-氟-4-(3-氟-4-甲氧基哌啶-1-基)甲酰基苯甲醛(化合物31)的制备方法
2-氟-4-甲酰基-苯甲酸(370毫克，2.2mmol)和3-氟-4-甲氧基哌啶(340毫克，2mmol)为起始原料，按照化合物25的制备方法，得到白色固体320毫克，收率56％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ10.38(d,J＝0.8Hz,1H),7.93(dd,J＝7.9,6.8Hz,1H),7.34-7.20(m,2H),4.78-4.60(m,1H),4.50-4.32(m,1H),3.62-3.50(m,1H),3.46(s,3H),3.20-3.05(m,2H),1.98-1.90(m,2H),1.78-1.68(m,1H)；LC-MS(ESI):m/z 284.2[M+H]
+。
3-氟-4-(1-羟基-丙炔-2-基)-苯基-(3-氟-4-甲氧基哌啶-1-基)甲基酮(化合物32)的制备方法
化合物31(320毫克，1.1mmol)和乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，4.2mmol)为原料，按照化合物26的制备方法，得到黄色油状物190毫克，收率56％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.72(t,J＝7.5Hz,1H),7.16(d,J＝10.1Hz,2H),5.76-5.73(m,1H),4.78-4.62(m,1H),4.45-4.32(m,1H)，4.02-3.93(m,1H),3.62-3.54(m,1H),3.45(s,3H),3.19-3.08(m,2H),2.67(d,J＝2.2Hz,1H),2.57-2.53(m,1H),1.96-1.90(m,1H)；LC-MS(ESI):m/z 332.2[M+H]
+。
2-[2-氟-4-(3-氟-4-甲氧基-哌啶-1-基)-甲酰基苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-24)的制备方法
化合物32(190毫克，0.6mmol)，化合物6(115毫克，0.38mmol)，Pd(OAc)
2(5毫克)，CuI(1毫克)和DBU(300毫克)为原料，按照化合物I-21的制备方法，得到黄色固体20毫克，两步总收率12％。
1H NMR(300MHz,DMSO-d
6)δ8.28(d,J＝9.4Hz,1H),8.17(d,J＝3.0Hz,1H),8.03-7.92(m,2H),7.55(s,1H),7.50-7.35(m,3H),5.09-4.74(m,2H),4.41(d,J＝20.0Hz,1H),3.83(d,J＝14.4Hz,1H),3.55(s,3H),2.98(dd,J＝10.0,5.0Hz,1H),1.90-1.82(m,1H),1.69(d,J＝17.1Hz,2H)；LC-MS(ESI):m/z 449.2[M+H]
+。
2-氟-4-(3-甲氧基吡咯啉-1-基)甲酰基苯甲醛(化合物33)的制备方法
3-氟-4-甲酰基苯甲酸(370毫克，2.2mmol)和3-甲氧基吡咯啉(274毫克，2mmol，它的制备方法参照文献US2011092475A1)为原料，按照化合物25的制备方法，得到白色固体240毫克，收率48％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ10.37(d,J＝0.9Hz,1H),7.91(t,J＝7.4Hz,1H),7.44-7.29(m,2H),4.00(d,J＝28.9Hz,1H),3.88-3.68(m,2H),3.68-3.39(m,2H),3.32(d,J＝27.5Hz,3H),2.20-1.82(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 252.2[M+H]
+。
3-氟-4-(1-羟基-丙炔-2-基)-苯基-(3-甲氧基-吡咯烷-1-基)甲基酮(化合物34)的制备方法
化合物33(240毫克，1mmol)和乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，3mL)为原料，按照化合物26的制备方法，得到油状物180毫克，收率65％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.39-7.10(m,2H),5.78-5.58(m,1H),4.06-3.88(m,1H),3.72(dd,J＝8.0,5.2Hz,2H),3.68-3.39(m,2H),3.31(d,J＝29.2Hz,3H),3.18(t,J＝5.4Hz,1H),2.64(d,J＝2.3Hz,1H),2.18-1.82(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 300.2[M+Na]
+。
2-[2-氟-4-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)甲酰基苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-25)的制备方法
化合物34(180毫克，0.65mmol)，化合物6(120毫克，0.4mmol)，Pd(OAc)
2(5毫克)，CuI(1毫克)和DBU(300毫克)为原料，按照化合物I-21的制备方法，得到黄色固体23毫克，两步总收率14％。
1H NMR(500MHz,DMSO-d
6)δ8.31(dd,J＝9.5,1.4Hz,1H),8.20(d,J＝3.7Hz,1H),8.00(tt,J＝7.9,4.6Hz,2H),7.62(dd,J＝11.1,1.6Hz,1H),7.57(d,J＝9.0Hz,2H),7.46(dt,J＝9.6,2.3Hz,1H),4.01(dtt,J＝39.6,4.6,2.2Hz,1H),3.72-3.46(m,4H),3.24(d,J＝47.8Hz,3H),2.06-1.94(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z417.2[M+H]
+。
4-(3-甲氧基吡咯啉-1-基)-甲酰基苯甲醛(化合物35)的制备方法
4-甲酰基苯甲酸(330毫克，2.2mmol)和3-甲氧基吡咯烷(274毫克，2mmol)为原料，参照化合物25的制备方法，得到白色固体320毫克，收率69％。
LC-MS(ESI):m/z 234.2[M+H]
+。
4-(1-羟基-丙炔-2-基)-苯基-(3-甲氧基吡咯啉-1-基)甲基酮(化合物36)的制备方法
化合物35(320毫克，1.4mmol)和乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，5mL)为原料，参照化合物26的制备方法，得到黄色油状物，收率。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.72-7.32(m,4H),5.48(d,J＝4.7Hz,1H),3.97(d,J＝35.4Hz,1H),3.76-3.70(m,2H),3.64-3.40(m,2H),3.31(d,J＝32.4Hz,3H),2.74(d,J＝6.1Hz,1H),2.67(d,J＝2.1Hz,1H),2.13-1.97(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 282.2[M+Na]
+。
2-[4-(3-甲氧基吡咯啉-1-基)-甲酰基苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-26)的制备方法
化合物36(200毫克，0.77mmol)，化合物6(128毫克，0.43mmol)，Pd(OAc)
2(6毫克)，CuI(1毫克)和DBU(327毫克)为原料，参照化合物I-21的制备方法，得到黄色固体28毫克，两步总收率17％。
1H NMR(500MHz,DMSO-d
6)δ8.28(dd,J＝9.4,1.7Hz,1H),8.24(s,1H),8.11(dd,J＝8.1,5.9Hz,2H),8.02(s,1H),7.72(dd,J＝8.3,2.1Hz,2H),7.65(dd,J＝9.5,3.5Hz,1H),7.54(s,1H),4.00(dtt,J＝43.0,4.6,2.2Hz,1H),3.68-3.45(m,4H),3.23(d,J＝54.9Hz,3H),2.06-1.91(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 399.2[M+H]
+。
3-甲基-4-(3-氟-4-甲酰基苯)-甲酰基-哌嗪-1-基-甲酸叔丁酯(化合物37)的制备方法
3-氟-4-甲酰基苯甲酸(370毫克，2.2mmol)和3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(400毫克，2mmol)为原料，参照化合物25的制备方法，得到白色固体470毫克，收率67％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ10.38(s,1H),7.94(t,J＝7.6Hz,1H),7.39-7.03(m,2H),4.15-4.10(m,1H),3.95-3.85(m,2H),3.24-2.85(m,4H),1.47(s,9H),1.27(d,J＝6.7Hz,3H)；LC-MS(ESI):m/z 373.2[M+Na]
+。
3-氟-4-(1-羟基-丙炔-2-基)苯基-(2-甲基-4-叔丁氧甲酰基-哌嗪-1-基)甲基酮(化合物38)的制备方法
化合物37(470毫克，1.4mmol)和乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，5mL)为原料，参照化合物26的制备方法，得到黄色油状物350毫克，收率66％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.72(t,J＝7.7Hz,1H),7.21-7.01(m,2H),5.74(d,J＝5.5Hz,1H),4.05-3.84(m,3H),3.25-2.80(m,4H),2.73-2.69(m,1H),2.67(d,J＝2.3Hz,1H),1.47(s,9H),1.26-1.21(m,3H)；LC-MS(ESI):m/z 399.2[M+Na]
+。
2-[2-氟-4-(2-甲基-4-叔丁氧基甲酰基-哌嗪-1-基)-甲酰基苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物39)的制备方法
化合物38(350毫克，0.93mmol)，化合物6(155毫克，0.52mmol)，Pd(OAc)2(7毫克)，CuI(1毫克)和DBU(450毫克)为原料，参照化合物15的制备方法，得到黄色固体63毫克，收率23％。
LC-MS(ESI):m/z 553.2[M+Na]
+。
5-氯-2-[2-氟-4-(2-甲基-4-环丙基甲酰基-哌嗪-1-基)-甲酰基苯基]吡咯[1,2-b]哒嗪7-甲酰胺(化合物I-27)的制备方法
化合物39(65毫克，0.13mmol)的二氯甲烷10mL中，加入三氟乙酸1.5mL，薄层层析检测反应完全后，冰浴下用NaOH(2.5M)溶液调节pH值成弱碱性(8～9)，分离出有机相，水层用三氯甲烷萃取，合并有机相，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)洗脱得到黄色固体52毫克，为(5-氯-2-[2-氟-4-(2-甲基-哌嗪-1-基)-甲酰基苯基]吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯)；将其溶于无水二氯甲烷10mL中，加入几滴三乙胺和环丙基甲酰氯(300毫克)，室温下搅拌1小时，加入甲醇5mL，室温下搅拌10分钟，浓缩得到粗品5-氯-2-[2-氟-4-(2-甲基-4-环丙基甲酰基-哌嗪-1-基)-甲酰基苯基]吡咯[1,2-b]哒嗪7-甲酸甲酯；用甲醇10mL转移到25mL封管中，加入8mL氨的甲醇溶液，80～90℃下反应20～24小时，冷却至室温，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)洗脱得到黄色固体40毫克，三步总收率63％。
1H NMR(300MHz,DMSO-d
6)δ8.35-8.23(m,1H),8.18(d,J＝2.9Hz,1H),8.03-7.93(m,1H),7.55(d,J＝1.3Hz,1H),7.53-7.37(m,3H),6.78-6.68(m,1H)4.78-4.05(m,3H),3.52-2.70(m,4H),1.95(dd,J＝20.7,9.5Hz,1H),1.35-1.03(m,3H),0.81-0.67(m,2H),0.64-0.56(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 484.2[M+H]
+。
2-甲基-4-(3-氟-4-甲酰基苯)-甲酰基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物40)的制备方法
3-氟-4-甲酰基苯甲酸(370毫克，2.2mmol)和2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(400毫克，2mmol)为原料，参照化合物25的制备方法，得到白色固体420毫克，收率60％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ10.38(s,1H),7.98-7.84(m,1H),7.33-7.05(m,2H),4.62-4.21(m,1H),3.98-3.82(m,2H),3.35-2.85(m,4H),1.47(d,J＝1.2Hz,9H),1.30-1.01(m,3H)；；LC-MS(ESI):m/z 373.2[M+Na]
+。
3-氟-4-(1-羟基-丙炔-2-基)-苯基-(3-甲基-4-叔丁氧甲酰基-哌嗪-1-基)甲基酮(化合物41)的制备方法
化合物40(420毫克，1.2mmol)和乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，4.3mL)为原料，参照化合物26的制备方法，得到黄色油状物365毫克，收率81％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.72(t,J＝7.5Hz,1H),7.17(dd,J＝22.3,8.9Hz,2H),5.75(d,J＝5.0Hz,1H),4.61-4.18(m,2H),3.94-3.80(m,1H),3.50-2.89(m,4H),2.70-2.66(m,1H),2.69-2.63(m,1H),1.46(s,9H),1.11(d,J＝6.3Hz,3H)；LC-MS(ESI):m/z 399.2[M+Na]
+。
2-[2-氟-4-(3-甲基-4-叔丁氧基甲酰基-哌嗪-1-基)-甲酰基苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物42)的制备方法
化合物41(364毫克，0.97mmol)，化合物6(160毫克，0.54mmol)，Pd(OAc)
2(11毫克)，CuI(1毫克)和DBU(410毫克)为原料，参照化合物15的制备方法，得到黄色固体146毫克粗品，收率52％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ8.14(t,J＝7.7Hz,1H),7.97(d,J＝9.5Hz,1H),7.52(s,1H),7.40-7.27(m,3H),4.59-4.22(m,2H),3.94(s,3H),3.42-3.33(m,1H),3.18-2.90(m,4H),1.47(s,9H),1.21-1.08(d,3H)；LC-MS(ESI):m/z 538.2[M+Na]
+。
5-氯-2-[2-氟-4-(3-甲基-4-环丙基甲酰基-哌嗪-1-基)-甲酰基苯基]吡咯[1,2-b]哒嗪7-甲酰胺(化合物I-28)的制备方法
化合物42(80毫克，0.16mmol)为原料，参照化合物I-27的制备方法，得到黄色固体45毫克，收率61％。
1H NMR(300MHz,DMSO-d
6)δ8.30(dd,J＝9.5,0.8Hz,1H),8.19(s,1H),8.01(dd,J＝10.4,5.3Hz,2H),7.62-7.39(m,4H),4.85-3.95(m,4H),3.79-2.79(m,3H),1.52-1.43(tt,J＝7.4,5.1Hz,1H),1.34-1.07(m,3H),0.84-0.67(m,4H)；LC-MS(ESI):m/z 484.2[M+H]
+。
2-(4-溴苯基)丙二酸二甲酯(化合物43)的制备方法
冰浴下，将钠丝(4.6克，0.2mol)，投入到无水甲醇100mL，控制温度的变化，防止过度放热，待Na全部溶解后，真空减压除去溶剂得到甲醇钠固体。再加入4-溴苯乙酸甲酯(22克；0.1mol)的无水THF100毫升，室温下搅拌25分钟后，再加入碳酸二甲酯(42mL，0.5mol)，室温下搅拌48小时，减压除去2/3体积的溶剂，然后加入水和乙酸乙酯，超声使混合液中的固体全部溶解，分离出有机相，水层再用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝50:1)洗脱得到白色固体20克，收率70％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.50(d,J＝8.5Hz,2H),7.28(d,J＝8.5Hz,2H),4.60(s,1H),3.76(s,6H)；LC-MS(ESI):m/z 287.2[M+H]
+,289.2[M+3H]
+。
1-(4-溴苯基)-丙烷-1,1,3-三甲酸三甲酯(化合物44)的制备方法
冰浴下，往无水甲醇100mL中加入Na丝(370毫克，16mmol)，全部溶解后，加入2-(4-溴苯基)丙二酸二甲酯(10克，35mmol)，室温下搅拌30分钟，再加入丙烯酸甲酯(8mL)，室温下搅拌24小时，直接加入硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100:1)洗脱得到白色固体9克，收率70％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.51-7.42(d,J＝8.7Hz,2H),7.24(d,J＝8.7Hz,2H),3.75(s,6H),3.64(s,3H),2.67-2.54(m,2H),2.32-2.25(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 373.2[M+H]
+,375.2[M+3H]
+。
2-(4-溴苯基)戊-1,5-二酸(化合物45)的制备方法
取化合物44(5.2克，14mmol)加入到250mL的圆底烧瓶中，加入氢氧化钾固体(3.8克，67.2mmol)和水100mL，110℃下搅拌3小时，冷却到室温后，加入浓硫酸10毫升，继续在110℃搅拌9小时，冷却至室温，乙酸乙酯萃取2遍，合并有机相，浓缩，柱层析(三氯甲烷：甲醇＝50:1)洗脱得到油状物3.6克，收率90％。
H-NMR(300 MHz,CDCl
3)δ7.47(d,J＝8.5Hz,2H),7.18(d,J＝8.5Hz,2H),3.63(t,J＝7.5Hz,1H),2.42-2.29(m,3H),2.13-2.03(m,1H)；LC-MS(ESI):m/z 286.2[M+H]
+,288.2[M+3H]
+。
2-(4-溴苯基)戊-1,5-二羟基-双(4-甲苯磺酸酯)(化合物46)的制备方法
化合物45(3.6克，12.6mmol)的无水THF80mL中，通过恒压滴液漏斗缓慢加入BH
3的THF溶液(1M，购于上海达瑞化学品公司)50mL，约25分钟加完，室温下搅拌1小时，缓慢滴加入甲醇溶液，直至不再产生气泡，继续搅拌30分钟，真空减压除去溶剂，加入水和乙酸乙酯各100毫升，分离出有机 相，水层再用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到油状物3.05克，直接投入下一步，收率95％；往上述粗品中加入二氯甲烷100mL，吡啶5mL，全部溶解后，分两次加入4-甲苯磺酰氯(7.5克，40mmol)，室温下搅拌过夜，加入3N HCl溶液10mL，搅拌10分钟后，加入水50mL，然后分离出有机相，水层用二氯甲烷萃取，合并有机相，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝8:1)洗脱得到无色油状物2.8克，两步总收率64％。
H-NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.74(d,J＝8.1Hz,2H),7.59(d,J＝8.3Hz,2H),7.33(dd,J＝8.4,1.8Hz,4H),7.28(d,J＝8.1Hz,2H),6.86(d,J＝8.4Hz,2H),4.04-3.96(m,1H),3.91(t,J＝5.9Hz,2H),2.85-2.73(m,1H),2.45(s,6H),1.83-1.68(m,1H),1.54-1.38(m,3H)；LC-MS(ESI):m/z 567.2[M+H]
+,569.2[M+3H]
+。
3-(4-溴苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-哌啶(化合物47)的制备方法
化合物46(1.85克，3.2mmol)的1,4-二氧六环100mL中，加入4-甲氧基苄胺(700毫克，5.1mmol)，110℃下搅拌48小时，冷却至室温，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝25:1)洗脱得到黄色固体1.6克，收率89％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.42-7.36(m,2H),7.25-7.18(m,2H),7.08(d,J＝8.4Hz,2H),6.87-6.80(m,2H),3.79(s,3H),3.47(s,2H),2.96-2.85(m,2H),2.78(tt,J＝11.4,3.7Hz,1H),1.92-1.84(m,2H),1.79-1.63(m,3H),1.39(qd,J＝12.0,4.9Hz,1H)；LC-MS(ESI):m/z 360.2[M+H]
+,362.2[M+3H]
+。
3-(4-溴苯基)哌啶(化合物48)的制备方法
化合物47(1.8克，5mmol)的乙腈50mL中，加入硝酸铈铵(11克，20mmol)的水溶液(20mL)，室温下搅拌过夜，真空减压除去一半体积的溶剂，加入乙酸乙酯萃取，分离出有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)洗脱得到无色液体1克，收率89％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.42(d,J＝8.3Hz,2H),7.11(d,J＝8.3Hz,2H),3.68(t,J＝11.0Hz,2H),3.31(dd,J＝1.9,1.3Hz,1H),3.16-2.98(m,3H),2.06(d,J＝4.2Hz,3H)；LC-MS(ESI):m/z 240.2[M+H]
+,242.2[M+3H]
+。
3-(4-溴苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(化合物49)的制备方法
化合物48(600毫克，2.5mmol)的二氯甲烷50mL中，加入吡啶1mL，及boc酸酐(820毫克，3.8mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液，室温下搅拌3小时，加入3N HCl溶液10毫升，继续搅拌10分钟，分离出有机相，水层用二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝80：1)洗脱得到白色固体460毫克，收率54％。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ7.46-7.39(d,J＝8.3Hz,2H),7.13-7.06(d,J＝8.3Hz,2H),4.13(s,2H),2.68(dd,J＝28.8,11.4Hz,3H),2.04-1.90(m,1H),1.81-1.68(m,1H),1.60-1.52(m,2H),1.46(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 340.2[M+H]
+。
3-(4-甲酰基苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(化合物50)的制备方法
取一支预干燥过的250mL三颈瓶中，加入化合物49(500毫克，1.5mmol)的无水THF溶液50毫升，Ar
2保护下，冷却至-78℃,缓慢滴加入n-BuLi(2.5M，1mL)，继续保持在该温度下搅拌30分钟，然后加入无水DMF5mL，继续搅拌2小时，然后加入饱和氯化铵溶液10mL，搅拌10分钟后转移到室温下搅拌30分钟，分离出有机相，水层用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)洗脱得到黄色油状物250毫克，收率58％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ9.98(s,1H),7.86-7.80(m,2H),7.43-7.37(m,2H),4.24-4.08(m,2H),2.75(d,J＝13.3Hz,3H),2.09-1.97(m,1H),1.82-1.72(m,1H),1.66-1.58(s,2H),1.47(s,9H)；LC-MS(ESI):(m/z)290.2[M+H]
+。
3-[4-(1-羟基-丙炔-2-基)苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯(化合物51)的制备方法
化合物50(280毫克，1mmol)的无水THF溶液50mL中，加入乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，4mL)，室温下搅拌1小时，加入饱和氯化铵溶液20mL，继续搅拌20分钟后，分离出有机相，水层用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)洗脱得到白色固体200毫克，收率63％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.50(d,J＝8.1Hz,2H),7.30-7.21(d,J＝8.1Hz,2H),5.45(dd,J＝6.2,2.2Hz,1H),4.12(dd,J＝15.3,9.0Hz,2H),2.84-2.54(m,4H),2.30(d,J＝6.2Hz,1H),2.04-1.94(m,1H),1.75(dt,J＝8.7,2.8Hz,1H),1.58(d,J＝3.3Hz,1H),1.46(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 338.2[M+Na]
+。
5-氯-2-[4-(1-叔丁氧基甲酰基哌啶-3-基)苯基]吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物52)的制备方法
取一支带微波帽的25mL微波管中，加入化合物51(200毫克，0.63mmol)，化合物6(120毫克，0.4mmol)，醋酸钯(5毫克)，碘化亚铜(1毫克)和甲苯10毫升，N
2置换3次后，N
2保护下加入DBU(300毫克)，盖紧微波帽，微波(λ＝180W)下90℃反应40分钟，待冷却至室温后，三氯甲烷稀释，并转移到100毫升圆底烧瓶中，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝7:1)洗脱得到黄色固体146毫克，收率78％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ8.01(d,J＝8.0Hz,2H),7.93(dd,J＝9.4,0.8Hz,1H),7.46(d,J＝0.9Hz,1H),7.35(ddd,J＝10.4,8.9,1.1Hz,3H),4.15(d,J＝14.0Hz,3H),3.95(s,3H),2.84-2.70(m,4H),2.08-1.98(m,1H),1.82-1.74(m,1H),1.47(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 492.2[M+Na]
+。
5-氯-2-[4-(1-叔丁氧基甲酰基哌啶-3-基)苯基]吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物53)的制备方法
化合物52(145毫克，0.31mmol)的甲醇20毫升加入到50毫升封管中，加入氨的甲醇溶液15毫升，90℃封管反应20小时，待冷却至室温后，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1)洗脱得到黄色固体110毫克，收率78％。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.80(d,J＝3.7Hz,1H),8.00(d,J＝9.4Hz,1H),7.85-7.74(m,2H),7.63(d,J＝0.5Hz,1H),7.41(d,J＝8.3Hz,2H),7.23(d,J＝9.4Hz,1H),5.97(s,1H),4.17(s,2H),2.91-2.63(m,3H),2.07(d,J＝12.1Hz,1H),1.84-1.76(m,1H),1.76-1.53(m,2H),1.48(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 477.2[M+H]
+。
2-(4-[(3S)-叔丁氧基甲酰基哌啶-3-基]-苯基)-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物53-S)的制备方法
消旋体53用手性SFC纯化法手性分离，CO
2作为超临界流体，手性柱：Chiralcel OJ-H，0.46cm I.D.×25cm L，流速：2.5mL/min，检测波长：UV 254nm，柱温：35℃，流动相：CO
2：MeOH：DEA＝60：40：0.1。第一个对映体的保留时间为8.68min，减压除去溶剂得到黄色固体：2-(4-[(3R)-叔丁氧基甲酰基哌啶-3-基]-苯基)-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物53-R，99.9％ee)。第二个对映体的保留时间为9.07min，减压除去溶剂得到黄色固体：2-[4-[(3S)-叔丁氧基甲酰基哌啶-3-基]-苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物53-S，98％ee)。
2-[4-[(3R)-叔丁氧基甲酰基哌啶-3-基]-苯基]-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物53-R)的制备方法
5-氯-2-[4-(哌啶-3-基)苯基]吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-29)的制备方法
化合物53(50毫克，0.11mmol)的三氯甲烷10mL中，加入三氟乙酸(1.8mL)，室温下搅拌1小时，冰浴下用NaOH溶液(2.5M)调节pH值成弱碱性(8～9)，分离出有机相，水层用三氯甲烷萃取，合并有 机相，饱和食盐水洗涤，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1，1L洗脱剂中加5毫升氨的甲醇溶液)洗脱得到黄色固体35毫克，收率90％。
H-NMR；LC-MS(ESI):m/z 355.2[M+H]
+。
5-氯-2-[4-((3S)-哌啶-3-基)苯基]吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-30)的制备方法
化合物53-S(50毫克，0.11mmol)为原料，参照化合物I-29的制备方法，得到黄色固体35毫克，收率89％。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.79(d,J＝3.8Hz,1H),7.98(d,J＝9.4Hz,1H),7.80(d,J＝8.2Hz,2H),7.61(s,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,2H),7.21(d,J＝9.5Hz,1H),6.16(d,J＝3.8Hz,1H),3.32-3.17(m,2H),2.93-2.85(m,1H),2.81-2.68(m,2H),2.12-1.84(m,2H),1.81-1.63(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 355.2[M+H]
+。
5-氯-2-[4-((3R)-哌啶-3-基)苯基]吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-31)的制备方法
化合物53-R(50毫克，0.11mmol)为原料，参照化合物I-31的制备方法，得到黄色固体34毫克，收率88％。
1H NMR(400MHz,CDCl
3)δ8.79(d,J＝3.8Hz,1H),7.98(d,J＝9.4Hz,1H),7.80(d,J＝8.2Hz,2H),7.61(s,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,2H),7.21(d,J＝9.5Hz,1H),6.16(d,J＝3.8Hz,1H),3.32-3.17(m,2H),2.93-2.85(m,1H),2.81-2.68(m,2H),2.12-1.84(m,2H),1.81-1.63(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 355.2[M+H]
+。
6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(化合物54)的制备方法
4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶盐酸盐(10克，56.9mmol)的二氯甲烷150mL中，加入三乙胺9mL，Boc酸酐(13.7克，62.8mmol)的二氯甲烷溶液，室温下搅拌1小时，加入饱和氯化铵溶液20毫升，搅拌10分钟后，分离出有机相，水层用二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到白色固体12.5克，收率：92％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.12(d,J＝5.1Hz,1H),6.78(d,J＝5.1Hz,1H),4.50(s,2H),3.71(t,J＝5.3Hz,2H),2.84(t,J＝5.3Hz,2H),1.48(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 240.2[M+H]
+。
2-甲酰基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(化合物55)的制备方法
取一支预干燥过的250mL三颈瓶中，加入化合物54(5.3克，22.2mmol)的无水THF溶液50mL，Ar
2保护下，冷却至-78℃，缓慢滴加入n-BuLi(1.6M，22mL)，继续保持在该温度下搅拌30分钟，然后 加入无水DMF 5毫升，继续搅拌2小时，然后加入饱和氯化铵溶液10毫升，搅拌10分钟后转移到室温下搅拌30分钟，分离出有机相，水层用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)洗脱得到黄色油状物3.8克，收率64％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ9.83(s,1H),7.47(s,1H),4.53(s,2H),3.74(t,J＝5.8Hz,2H),2.92(t,J＝5.6Hz,2H),1.49(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 268.2[M+H]
+。
2-(1-羟基-丙炔-2-基)-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(化合物56的制备方法
化合物55(2.3克，8.4mmol)的无水THF 80毫升中，加入乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，25mL)，室温下搅拌1小时，TLC检测反应完全后，加入饱和氯化铵溶液30毫升，继续搅拌10分钟后，分离出有机相，水层用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝8:1)洗脱得到黄色固体1.8克，收率72％。
H-NMR(300MHz,CDCl
3)δ6.89(d,J＝0.9Hz,1H),5.57(d,J＝2.5Hz,1H),4.43(t,J＝1.7Hz,2H),3.75-3.65(m,2H),2.80(d,J＝6.0Hz,2H),2.68(d,J＝2.2Hz,1H),1.48(s,9H).
2-[5-氯-7-甲氧基甲酰基吡咯[1,2-b]哒嗪-2-基]-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(化合物57)的制备方法
取一支带微波帽的25mL微波管中，加入化合物56(470毫克，1.6mmol)，化合物6(330毫克，1.1mmol)，醋酸钯(15毫克)，碘化亚铜(2毫克)和甲苯10mL，N
2置换3次后，N
2保护下加入DBU(840毫克)，盖紧微波帽，微波(λ＝180W)下90℃反应40分钟，待冷却至室温后，三氯甲烷稀释，并转移到100毫升圆底烧瓶中，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝7:1)洗脱得到黄色固体135毫克，收率28％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.84(d,J＝9.4Hz,1H),7.41(d,J＝0.6Hz,1H),7.35(s,1H),7.17(d,J＝9.4Hz,1H),4.55(s,2H),3.95(s,3H),3.75-3.64(m,2H),2.93(t,J＝5.6Hz,2H),1.49(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 448.2[M+H]
+。
5-氯-2-(4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-基)吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物58)的制备方法
化合物57(440毫克，0.98mmol)的三氯甲烷25毫升中，加入三氟乙酸2.5mL，室温下搅拌1小时后，TLC检测反应完全后，冰浴下用NaOH(2.5M)调节pH值为8～9，分离出有机相，水层用三氯甲烷萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1)洗脱得到黄色固体250毫克，收率74％。
LC-MS(ESI):m/z 348.2[M+H]
+。
2-(4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-基)-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物I-32)的制备方法
将化合物58(250毫克)的甲醇溶液10毫升加入到25毫升封管中，加入8毫升氨的甲醇溶液，90℃下反应20小时，待冷却至室温，将反应液的体积减压旋掉2/3，将析出的固体过滤，真空干燥得到黄色固体180毫克，收率75％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d
6)δ8.10(dd,J＝24.6,13.5Hz,3H),7.69(s,1H),7.51(d,J＝9.5Hz,1H),7.41(s,1H),3.85(s,2H),3.06(d,J＝6.0Hz,2H),2.80(d,J＝6.0Hz,2H)；LC-MS(ESI):m/z 333.2[M+H]
+。
5-氯-2-(5-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-基)吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物I-33)的制备方法
化合物58(75毫克，0.21mmol)的甲醇5mL中，加入几滴醋酸和37％甲醛溶液1.5mL，室温下搅拌10分钟后，在加入NaCNBH
3(50毫克)，室温下搅拌过夜，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝25:1)洗脱得到55毫克粗品，LC-MS(ESI):m/z 361.2[M+H]
+。用10mL甲醇转移到25mL封管中，加入8mL氨的甲醇溶液，90℃下反应20小时，待冷却至室温，将反应液的体积减压旋掉2/3，过滤析出的固体，真空干燥，得到52毫克，收率71％。
1H NMR(300MHz,CD
3OD)δ7.86(d,J＝9.5,1H),7.42(d,J＝1.2Hz,1H),7.31(s,1H),7.19(d,J＝9.5,1H),3.55(s,2H),2.94(d,J＝5.8Hz,2H),2.83(t,J＝5.7Hz,2H),2.50(s,3H)；LC-MS(ESI):m/z 347.2[M+H]
+。
4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-6(7H)-甲酸叔丁酯(化合物59)的制备方法
往4,5,6,7-四氢噻吩[2,3-c]吡啶盐酸盐(3克，17.1mmol)的二氯甲烷50毫升中，加入三乙胺2mL，Boc酸酐(4.1克，18.9mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液，室温下搅拌1小时，加入饱和氯化铵溶液20mL，搅拌10分钟后，分离出有机相，水层用二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到油状物4.0克，收率98％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.13(d,J＝5.0Hz,1H),6.79(d,J＝5.1Hz,1H),4.62(s,2H),3.67(t,J＝5.4Hz,2H),2.70(t,J＝5.4Hz,2H),1.8(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 240.2[M+H]
+。
2-溴-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-6(7H)-甲酸叔丁酯(化合物60)的制备方法
往59(4.0克，16.7mmol)的乙腈80mL中加入NBS(3.3克，18.8mmol)，然后在室温下搅拌1小时，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100:1)洗脱得到黄色油状物4.8克，收率89％。
LC-MS(ESI):m/z 318.2[M+H]
+。
2-甲酰基-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-6(7H)-甲酸叔丁酯(化合物61)的制备方法
取一支预干燥过的250mL三颈瓶中，加入化合物60(4.8克，15.1mmol)的无水THF溶液50mL，Ar
2保护下，冷却至-78℃,缓慢滴加入n-BuLi(1.6M，17mL)，继续保持在该温度下搅拌30分钟，然后加 入无水DMF 5mL，继续搅拌2小时，然后加入饱和氯化铵溶液10mL，搅拌10分钟后转移到室温下搅拌30分钟，分离出有机相，水层用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)洗脱得到黄色油状物3.1克，收率77％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ9.84(d,J＝1.1Hz,1H),7.48(s,1H),4.68(s,2H),3.69(t,J＝5.6Hz,2H),2.75(t,J＝5.8Hz,2H),1.48(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 268.2[M+H]
+。
2-(1-羟基-丙炔-2-基)-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-6(7H)-甲酸叔丁酯(化合物62)的制备方法
化合物61(3.1克，11.6mmol)和乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，42mL)为原料，参照化合物56的制备方法，得到黄色固体2.8克，收率82％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ6.89(s,1H),5.58(dd,J＝6.4,2.3Hz,1H),4.58(s,2H),3.65(t,J＝5.7Hz,2H),2.70-2.60(m,2H),2.47(d,J＝6.9Hz,1H),1.48(d,J＝2.5Hz,9H)；LC-MS(ESI):m/z 316.2[M+Na]
+。
5-氯-2-(5-叔丁氧甲酰基-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-2-基)吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物63)的制备方法
化合物62(228毫克，0,78mmol)，化合物6(50毫克，0.16mmol)，Pd(OAc)
2(8毫克)，CuI(1毫克)和DBU(460毫克)为原料，参照化合物57的制备方法，得到黄色固体20毫克，收率28％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.84(d,J＝9.4Hz,1H),7.41(d,J＝0.6Hz,1H),7.35(s,1H),7.17(d,J＝9.4Hz,1H),4.65(s,2H),3.95(s,3H),3.75-3.64(m,2H),2.73(t,J＝5.6Hz,2H),1.49(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 448.2[M+H]
+。
5-氯-2-(4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-2-基)吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物64)的制备方法
化合物63(450毫克，1mmol)为原料，参照化合物59的制备方法，得到黄色固体310毫克，收率89％。
LC-MS(ESI):m/z 348.2[M+H]
+。
5-氯-2-(4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-2-基)吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-34)的制备方法
化合物64(310毫克，0.9mmol)为原料，参照化合物I-32的制备方法，得到黄色固体210毫克，收率70％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.73(d,J＝9.5Hz,1H),7.25(s,1H),7.20(s,1H),7.04(d,J＝9.5Hz,1H),3.96(s,2H),3.05(t,J＝5.8Hz 2H),2.64(t,J＝5.8Hz,2H)；LC-MS(ESI):m/z 333.2[M+H]
+。
5-氯-2-(6-甲基-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-2-基)吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-35)的制备方法
化合物I-34(75毫克，0.21mmol)为原料，参照化合物I-33的制备方法，得到黄色固体54毫克，收率74％。
1H NMR(300MHz,DMSO-d
6)δ8.21(d,J＝9.5Hz,1H),7.87(d,J＝2.0Hz,1H),7.59(d,J＝9.5Hz,1H),7.45(s,1H),4.49(s,2H),3.49(d,J＝5.1Hz,2H),3.00(d,J＝6.0Hz,2H),2.92(s,3H)；LC-MS(ESI):m/z347.2[M+H]
+。
7-叔丁基-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶(化合物65)的制备方法
3-噻吩乙胺的盐酸盐(500毫克，3.7mmol，购买于skychemical)的二氯甲烷25毫升中，加入三乙胺1.5毫升和特戊酰氯(665毫克，5.5mmol)，室温下搅拌1小时，加入甲醇5毫升，继续搅拌10分钟后，浓缩得到油状物，为粗品N-(2-(噻吩-3-基)乙基)特戊酰胺，LC-MS(ESI):m/z 212(M+H)。往上述油状物中加入POCl
3 3毫升，并与65℃下搅拌3小时，待冷却到室温后，减压除去溶剂，然后加入冰水混合物10毫升，用NaOH(2.5M)调节pH值到7，最后用乙酸乙酯(20毫升×2)萃取，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得到无色油状物580毫克，两步收率97％。
LC-MS(ESI):m/z 194[M+H]
+。
2-溴-7-叔丁基-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-6(7H)-甲酸叔丁酯(化合物66)的制备方法
往化合物65(580毫克，3mmol)的无水甲醇5毫升中，分2次加入NaBH
4(240毫克，6.3mmol)，室温搅拌2小时，然后减压旋干溶剂，加入乙酸乙酯10毫升和饱和氯化钠溶液10毫升，分离出有机相，水层用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得到油状物510毫克，为粗品7-叔丁基-4,5,6,7-四氢噻吩[2,3-c]吡啶，LC-MS(ESI):m/z 196(M+H)；往上述油状物中加入二氯甲烷10毫升，三乙胺0.5毫升，及Boc酸酐(654毫克，3mmol)的二氯甲烷(5毫升)溶液，室温下搅拌1小时，然后加入氯化铵溶液，继续搅拌10分钟，分离出有机相，水层用二氯甲烷萃取，合并有机相，浓缩得到油状物950毫克；往油状物中加入乙腈30毫升，再加入NBS(590毫克)，室温下搅拌1小时，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝50:1)洗脱得到无色油状物1.0克，三步总收率84％。
LC-MS(ESI):m/z 396.2[M+Na]
+。
2-甲酰基-7-叔丁基-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-6(7H)-甲酸叔丁酯(化合物67)的制备方法
以化合物66(1.0克，2.7mmol)为原料，参照化合物61的制备方法，得到黄色油状物450毫克，收率52％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ9.85(d,J＝4.7Hz,1H),7.52-7.44(m,1H),5.10(d,J＝62.0Hz,1H),4.57-4.19(m,1H),3.33-3.07(m,1H),2.86-2.55(m,2H),1.47(s,9H),1.09(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 324[M+H]
+。
2-(1-羟基-丙炔-2-基)-7-叔丁基-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-6(7H)-甲酸叔丁酯(化合物68)的制备方法
化合物67(420毫克，1.3mmol)和乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，5毫升)为原料，参照化合物56的制备方法，得到黄色油状物330毫克，收率73％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ6.90(dd,J＝6.8,2.9Hz,1H),5.62-5.56(m,1H),5.14-4.87(m,1H),4.53-4.12(m,1H),3.30-3.10(m,1H),2.78-2.39(m,3H),1.45(s,9H),1.08(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 372.2[M+Na]
+。
5-氯-2-(6-叔丁氧基甲酰基-7-叔丁基-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-2-基)吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物69)的制备方法
化合物68(320毫克，0.9mmol)，化合物6(170毫克，0.6mmol)，Pd(OAc)
2(7毫克)，CuI(1毫克)和DBU(900毫克)为原料，参照化合物62的制备方法，得到黄色固体90毫克，收率30％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.89-7.80(m,1H),7.42(s,1H),7.39(d,J＝6.0Hz,1H),7.19(dd,J＝9.4,3.9Hz,1H),5.10(d,J＝53.8Hz,1H),4.60-4.14(m,1H),3.95(s,3H),3.35-3.15(m,1H),2.80-2.60(m,2H),1.47(s,9H),1.13(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 504.2[M+H]
+。
2-(7-叔丁基-4,5,6,7-四氢噻吩[2,3-c]吡啶-2-基)-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物70)的制备方法
化合物69(90毫克，0.18mmol)为原料，参照化合物64的制备方法，得到黄色固体65毫克，收率89％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.84(d,J＝9.4Hz,1H),7.44-7.37(m,2H),7.20(d,J＝9.5Hz,1H),3.96(s,3H),3.40-3.26(m,1H),2.97-2.81(m,1H),2.70-2.61(m,2H),2.52(s,1H),2.06-1.93(m,1H),1.14(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 404.2[M+H]
+。
2-(7-叔丁基-4,5,6,7-四氢噻吩[2,3-c]吡啶-2-基)-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-36)的制备方法
化合物70(65毫克，0.17mmol)为原料，参照化合物I-32的制备方法，得到黄色固体40毫克，收 率64％。
1H NMR(300MHz,CD
3OD)δ7.98(d,J＝9.5Hz,1H),7.77(s,1H),7.77(s,1H),7.49(s,1H),7.43(s,1H),7.38(d,J＝9.5Hz,1H),3.86-3.84(m,1H),3.37-3.34(m,1H),2.92-2.82(m,1H),2.75-2.63(m,2H),1.13(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 389.2[M+H]
+。
7-异丁基-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶(化合物71)的制备方法
3-噻吩乙胺盐酸盐(500毫克，3.1mmol)和异戊酰氯(445毫克，3.7mmol)为原料，参照化合物65的制备方法，得到无色油状物560毫克，两步总收率93％。
LC-MS(ESI):m/z 194[M+H]
+。
2-溴-7-异丁基-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-6(7H)-甲酸叔丁酯(化合物72)的制备方法
化合物71(560毫克，2.9mmol)为原料，参照化合物66的制备方法，得到无色油状物895毫克，收率83％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ6.71(s,1H),5.18(d,J＝57.9Hz,1H),4.36-3.98(m,1H),3.11-2.93(m,1H),2.74-2.55(m,1H),2.52-2.43(m,1H),1.78-1.67(m,3H),1.47(s,9H),1.02(d,J＝6.2Hz,3H),0.95(d,J＝6.3Hz,3H)；LC-MS(ESI):m/z 374.2[M+H]
+。
2-甲酰基-7-异丁基-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-6(7H)-甲酸叔丁酯(化合物73)的制备方法
化合物72(866毫克，2.3mmol)为原料，参照化合物61的制备方法，得到无色油状物375毫克，收率50％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)9.83(s,1H),7.44(s,1H),5.36(d,J＝61.8Hz,1H),4.28(d,J＝59.6Hz,1H),3.10-2.95(m,1H),2.85-2.70(m,1H),2.66-2.57(m,1H),1.85-1.69(m,3H),1.52-1.43(m,9H),1.05(d,J＝6.3Hz,3H),0.97(d,J＝6.4Hz,3H)；LC-MS(ESI):m/z 324.2[M+H]
+。
2-(1-羟基-丙炔-2-基)-7-异丁基-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-6(7H)-甲酸叔丁酯(化合物74)的制备方法
化合物73(370毫克，1.2mmol)和乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，3.5mL)为原料，参照化合物56的制备方法，得到黄色油状物330毫克，收率79％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ6.86(s,1H),5.57(d,J＝6.6Hz,1H),5.47-5.09(m,1H),4.44-4.02(m,1H),3.11-2.95(m,1H),2.76-2.65(m,2H),2.55-2.45(m,1H),2.40-2.35(m,1H),1.84-1.63(m,2H),1.47(s,9H),1.03(d,J＝6.3Hz,3H),0.96(d,J＝6.3Hz,3H)；LC-MS(ESI):m/z 350.2[M+H]
+。
2-(6-叔丁氧基甲酰基-7-异丁基-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-2-基)吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物75)的制备方法
化合物74(330毫克，0.95mmol)，化合物6(180毫克，0.6mmol)，Pd(OAc)
2(7毫克)，CuI(1毫克)和DBU(654毫克)为原料，参照化合物62的制备方法，得到黄色固体165毫克，收率55％。LC-MS(ESI):m/z 504.2[M+H]
+。
2-(7-异丁基-4,5,6,7-四氢噻吩[2,3-c]吡啶-2-基)-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物76)的制备方法
化合物75(100毫克，0.2mmol)为原料，参照化合物59的制备方法，得到黄色固体65毫克，收率80％。LC-MS(ESI):m/z 404.2[M+H]
+。
2-(7-异丁基-4,5,6,7-四氢噻吩[2,3-c]吡啶-2-基)-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-37)的制备方法
化合物76(65毫克，0.17mmol)为原料，参照化合物I-32的制备方法，得到黄色固体40毫克，收率61％。
1H NMR(300MHz,CD
3OD)δ7.97(dd,J＝9.5,1.7Hz,1H),7.67(d,J＝1.8Hz,1H),7.45(t,J＝2.2Hz,1H),7.35(dd,J＝9.5,1.7Hz,1H),4.10-4.03(m,1H),3.00-2.90(m,1H),2.77-2.62(m,2H),2.06-1.86(m,2H),1.70-1.60(m,2H),1.03-0.98(m,6H)；LC-MS(ESI):m/z 389.2[M+H]
+。
4-环丙基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶(化合物77)的制备方法
2-噻吩乙胺(1.3克，10mmol，购买欲韶远化学)和环丙基甲酰氯(1.3克，12.4mmol)为原料，参照化合物65的制备方法，得到无色油状物1.2克粗品。
LC-MS(ESI):m/z 178.2[M+H]
+。
4-环丙基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(化合物78)的制备方法
化合物77(1.2克，7.0mmol)的无水甲醇15mL中，分3次加入NaBH
4(520毫克，13.7mmol)，室温下搅拌2小时，减压除去溶剂，加入乙酸乙酯20毫升和水10毫升，分离出有机相，水层用乙酸乙酯40毫升萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到无色油状物。往上述油状物中加入二氯甲烷50mL，三乙胺2mL和Boc酸酐(2.6克，11.8mmol)的二氯甲烷溶液，室温下搅拌2小时， 加入饱和氯化铵溶液10毫升，继续搅拌15分钟，分离出有机相，水层用二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，浓缩，柱层析得到无色油状物1.3克，两步总收率59％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.09(d,J＝5.2Hz,1H),6.90(d,J＝5.2Hz,1H),4.55-4.32(m,2H),3.30-3.15(m,1H),2.95-2.81(m,1H),2.77-2.68(m,1H),1.46(d,J＝1.1Hz,9H),1.18-1.05(m,1H),0.69-0.62(m,2H),0.58-0.39(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 302.2[M+Na]
+。
2-甲酰基-4-环丙基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(化合物79)的制备方法
化合物78(665毫克，2.3mmol)为原料，参照化合物55的制备方法，得到黄色油状物260毫克，收率36％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ9.83(s,1H),7.59(s,1H),4.46(s,2H),3.22(s,1H),3.04-2.66(m,2H),1.47(s,9H),1.20-1.05(m,1H),0.82-0.21(m,4H)；LC-MS(ESI):m/z 308[M+H]
+。
2-(1-羟基-丙炔-2-基)-4-环丙基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(化合物80)的制备方法
化合物79(260毫克，0.85mmol)和乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，3毫升)为原料，参照化合物57的制备方法，得到黄色油状物200毫克，收率71％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ6.98(d,J＝5.3Hz,1H),5.60(dd,J＝9.1,6.6Hz,1H),4.50-4.25(m,2H),3.29-3.10(m,1H),2.94-2.56(m,2H),2.39(dd,J＝6.8,5.3Hz,1H),1.46(s,9H),1.20-1.02(m,1H),0.93-0.75(m,2H),0.71-0.41(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 356.2[M+Na]
+。
2-(4-环丙基-5-叔丁氧基甲酰基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-基)-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物81)的制备方法
化合物80(200毫克，0.6mmol)，化合物6(120毫克，0.4mmol)，Pd(OAc)
2(6毫克)，CuI(1毫克)和DBU(304毫克)为原料，参照化合物58的制备方法，得到黄色油状物80毫克，收率41％。
LC-MS(ESI):m/z 488.2[M+H]
+。
2-(4-环丙基-4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-基)-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-38)的制备方法
化合物81(80毫克，0.17mmol)的二氯甲烷中，加入三氟乙酸2毫升，室温下搅拌1小时后，冰浴下用NaOH(2.5M)调节pH值为8～9，分离出有机相，水层用三氯甲烷萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)洗脱得到黄色固体。用10mL甲醇溶解后转移到25mL 封管中，90℃下反应24小时，待冷却至室温，减压旋掉2/3体积溶剂，过滤得到黄色固体35毫克，收率56％。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.18(d,J＝9.5Hz,1H),8.07(s,2H),7.89(s,1H),7.68(d,J＝9.5Hz,1H),7.44(s,1H),3.58-3.46(m,2H),3.25-3.15(m,1H),3.09-3.01(m,2H),1.21-1.06(m,1H),0.90-0.70(m,2H),0.68-0.58(m,2H)；LC-MS(ESI):m/z 373.2[M+H]
+。
4-异丁基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶(化合物82)的制备方法
2-噻吩乙胺(500毫克，4mmol)和异戊酰氯(576毫克，4.8mmol)为原料，参照化合物65的制备方法，得到无色油状物700毫克，收率91％。
LC-MS(ESI):m/z 194(M+H)。
2-溴-4-异丁基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(化合物83)的制备方法
化合物82(500毫克，2.6mmol)为原料，参照化合物66的制备方法，得到无色油状物750毫克，收率78％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ6.71(s,1H),5.23-4.94(m,1H),4.48-4.07(m,1H),3.17-2.95(m,1H),2.88-2.72(m,1H),2.64-2.47(m,1H),1.76-1.62(m,3H),1.46(s,9H),1.03(d,J＝6.4Hz,3H),0.93(d,J＝6.5Hz,3H)；LC-MS(ESI):m/z 374.2[M+H]
+。
2-甲酰基-4-异丁基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(化合物84)的制备方法
化合物83(750毫克，2mmol)为原料，参照化合物61的制备方法，得到无色油状物300毫克，收率46％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ9.82(s,1H),7.45(s,1H),5.24(d,J＝57.1Hz,1H),4.35(d,J＝62.4Hz,1H),3.23-2.72(m,3H),1.80-1.60(m,3H),1.48(s,9H),1.07(d,J＝6.3Hz,3H),0.97(d,J＝6.5Hz,3H)；LC-MS(ESI):m/z 324.2[M+H]
+。
2-(1-羟基-丙炔-2-基)-4-异丁基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(化合物85)的制备方法
化合物84(300毫克，0.93mmol)和乙炔基溴化镁的THF溶液(0.5M，3.5毫升)为原料，参照化合物57的制备方法，得到黄色油状物280毫克，收率86％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ6.88-6.81(d,J＝2.4Hz,1H),5.57(d,J＝6.6Hz,1H),5.12(d,J＝52.5Hz,1H),4.47-4.16(m,1H),3.17-2.59(m,3H),2.38-2.31(m,1H),1.74-1.59(m,3H),1.46(s,9H),1.05(d,J＝ 6.3Hz,3H),0.94(d,J＝6.5Hz,3H)；LC-MS(ESI):m/z 372.2[M+Na]
+。
2-(4-异丁基-5-叔丁氧基甲酰基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-基)吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物86)的制备方法
化合物85(280毫克，0.8mmol)，化合物6(141毫克，0.46mmol)，Pd(OAc)
2(16毫克)，CuI(1毫克)和DBU(350毫克)为原料，参照化合物58的制备方法，得到黄色油状物81毫克，收率35％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.86-7.80(m,1H),7.41(s,1H),7.36-7.27(m,1H),7.18(d,J＝9.2Hz,1H),4.48-4.30(m,1H),3.95(s,3H),3.16-2.88(m,3H),2.78-2.68(m,1H),2.06-1.94(m,1H),1.78-1.66(m,2H),1.48(s,9H),1.09(d,J＝5.8Hz,3H),0.97(d,J＝5.8Hz,3H)；LC-MS(ESI):m/z 504.2[M+H]
+。
2-(4-异丁基-4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-基)-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-39)的制备方法
化合物86(80毫克，0.16mmol)为原料，参照化合物I-38的制备方法，得到黄色固体35毫克，收率56％。
1H NMR(300MHz,DMSO-d
6)δ8.20(d,J＝9.5Hz,1H),8.07(d,J＝3.9Hz,2H),7.92(s,1H),7.66(d,J＝9.6Hz,1H),7.43(s,1H),4.31(d,J＝8.2Hz,1H),3.45-3.15(m,2H),3.08-2.99(m,2H),2.02-1.94(m,1H),1.90-1.67(m,2H),1.01(d,J＝6.2Hz,3H),0.96(d,J＝6.4Hz,3H)；LC-MS(ESI):m/z 389.2[M+H]
+。
4-叔丁基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶(化合物87)的制备方法
2-噻吩乙胺(1.5克，11.8mmol)和异戊酰氯(2.1克，4.8mmol)为原料，参照化合物65的制备方法，得到无色油状物1300毫克，收率57％。LC-MS(ESI):m/z 194.2[M+H]
+。
4-叔丁基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(化合物88)的制备方法
往化合物87(1.3克，6.7mmol)的乙醇(40mL)中，分两次加入NaBH
4(500毫克)，室温下搅拌1小时，浓缩，加入水10mL和乙酸乙酯20mL，分离出有机相，水层用乙酸乙酯10mL萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到油状物，直接用于下一步；往上述油状物中加入二氯甲烷20mL，并分别滴加入NEt
3 0.5mL和Boc
2酸酐(1.5克，6.9mmol)的二氯甲烷8mL，室温下搅拌1小时，浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100:1)洗脱得到油状物1.5克，两步总收率75％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.08(dd,J＝10.3,5.3Hz,1H),6.91(d,J＝5.2Hz,1H),4.96(d,J＝50.4Hz,1H),4.41(ddd,J＝70.1,13.8,6.3Hz,1H),3.45-3.17(m,1H),2.97-2.66(m,2H),1.47-1.43(s,9H),1.03(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 318.2[M+Na]
+。
2-甲酰基-4-叔丁基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(化合物89)的制备方法
以化合物88(700毫克，2.4mmol)为原料，参照化合物55的制备方法得到黄色油状物250毫克，收率32％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ9.84(s,1H),7.60(s,1H),5.00(d,J＝57.3Hz,1H),4.45(ddd,J＝69.2,14.2,6.3Hz,1H),3.48-3.22(m,1H),2.99-2.68(m,2H),1.47(s,9H),1.05(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 324.2[M+H]
+。
2-(1-羟基-丙炔-2-基)-4-叔丁基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(化合物90)的制备方法
以化合物89(250毫克，0.85mmol)为原料，参照化合物57的制备方法，得到油状物140毫克，收率35％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.00(s,1H),5.59(d,J＝6.0Hz,1H),4.90(d,J＝50.2Hz,1H),4.39(ddd,J＝69.4,13.7,6.3Hz,1H),3.44-3.17(m,1H),2.93-2.75(m,1H),2.74-2.63(m,2H),2.53-2.39(m,1H),1.45(s,9H),1.03(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 372.2[M+Na]
+。
2-(4-叔丁基-5-叔丁氧基甲酰基-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-基)吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(化合物91)的制备方法
以化合物90(140毫克，0.4mmol)，化合物6(75毫克，0.25mmol)，Pd(OAc)
2(3毫克)，CuI(1毫克)和DBU(190毫克)为原料，得到黄色固体73毫克，收率56％。
1H NMR(300MHz,CDCl
3)δ7.87-7.81(m,1H),7.48-7.37(m,2H),7.19(dd,J＝9.5,4.9Hz,1H),4.99(d,J＝50.9Hz,1H),4.42(d,J＝66.6Hz,1H),3.95(s,3H),3.45-3.28(m,1H),2.96-2.74(m,2H),1.48(s,9H),1.08(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z 504.2[M+H]
+。
2-(4-叔丁基-4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-基)-5-氯-吡咯[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(化合物I-40)的制备方法
以化合物91(70毫克，0.14mmol)为原料，参照化合物I-38的制备方法，得到黄色固体35毫克，收率64％。
1H NMR(300MHz,DMSO-d
6)δ8.19-8.10(m,2H),8.05(s,1H),7.78(s,1H),7.68(d,J＝9.5Hz,1H),7.42(s,1H),3.65(s,1H),3.20(d,J＝7.8Hz,1H),2.72(d,J＝4.9Hz,3H),0.99(s,9H)；LC-MS(ESI):m/z388.2[M+H]
+。
活性测试部分
通过下面的药理实验测试本发明的化合物在分子水平对PARP-1和PARP-2活性的抑制作用
1、ELISA法测试本发明的化合物在分子水平对PARP-1和PARP-2活性的抑制作用
实验方法：酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)(参照Decker P.发表文献记载的酶联免疫吸附法；参考文献：Decker P，Miranda EA，de Murcia G，Muller S.An Improved nonisotopic test to screen a large series of new inhibitor molecules of Poly(ADP-ribose)Polymerase activity for therapeutic applications。Clinical Cancer Research，5：1169-1172,1999)。其原理是将底物组蛋白包被在吸附性96孔板上，加入PARP-1或2重组酶、底物NAD
+、激活的DNA使PARP-1或2发生酶反应，使组蛋白生成产物PAR(聚腺苷二磷酸核糖)，然后加入抗PAR(anti-PAR)的抗体，检测96孔板上所包被的组蛋白上的产物PAR的强度，就可以反映出PARP的酶活性。
药物抑制率的计算：抑制率(％)＝(OD对照孔-OD给药孔)/OD对照孔×100％(OD为吸光度值)；并依据抑制率按Logit法计算达到50％抑制时的药物浓度，即IC
50值。(在分子水平IC
50<1000nM,+；<500nM,++；<100nM,+++；-为>1000nM或者未测定)，结果如表1所示:
2、试验结果
从表1中，可以发现本发明中的化合物对PARP-1和PARP-2具有显著的抑制活性。
表1.部分化合物在分子水平对PARP-1和PARP-2活性的抑制作用
3.I-34对人乳腺癌MDA-MB-436裸小鼠皮下移植瘤的生长抑制作用
受试物及阳性对照药
化合物I-34制成单盐酸盐，为黄色粉末，用注射用水溶解成黄色浑浊液体，静置后有沉淀，给药前充 分混匀，以上化合物每周配制一次。阳性对照药物AZD2281(抗癌药物奥拉帕尼olaparib)为淡黄色粉末(Lot:PAR-105)，每周用0.5％羧甲基纤维素钠配置成混悬液后使用。
剂量设置
I-34盐酸盐均设置两个剂量组，分别为100mg/kg和20mg/kg组。阳性对照药物AZD2281剂量为30mg/kg。
实验动物和接种细胞
BALB/cA裸小鼠，雌性，4-5周龄，体重19±2g，由中国科学院上海药物研究所提供，生产许可证编号：SCXK(沪)2013-001。使用合格证编号：SYXK(沪)2013-0049。每组动物数：阴性对照组12只，给药组6只。人乳腺癌MDA-MB-436细胞株由我室保存。用该细胞株接种裸小鼠右侧腋窝皮下，细胞接种量为5×106/只，形成移植瘤后再在裸小鼠体内传2代后使用。
实验方法
取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm
3左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠皮下移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤平均体积生长至200mm
3左右后，将动物随机分组。化合物I-34盐酸盐100mg/kg和20mg/kg组，每天口服给药一次，连续给药21天。阳性对照药物AZD2281 30mg/kg，每天口服给药一次，连续给药21天。溶剂对照给等量注射用水。整个实验过程中，每周2次测量移植瘤直径，同时称量小鼠体重。肿瘤体积(tumor volume，TV)的计算公式为：TV＝1/2×a×b
2，其中a、b分别表示长、宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为：RTV＝V
t/V
0。其中V
0为分笼给药时(即d
0)测量所得肿瘤体积，V
t为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为(1)相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：T/C(％)＝(T
RTV/C
RTV)×100％，T
RTV：治疗组RTV；C
RTV：阴性对照组RTV；(2)肿瘤体积增长抑制率GI％，计算公式如下：GI％＝[1-(TVt-TV
0)/(CVt-CV
0)]×100％，TVt为治疗组每次测量的瘤体积；TV
0为治疗组分笼给药时所得瘤体积；CVt为对照组每次测量的瘤体积；CV
0为对照组分笼给药时所得瘤体积；(3)瘤重抑制率，计算公式如下：瘤重抑制率％＝(Wc-W
T)/Wc×100％，Wc：对照组瘤重，W
T：治疗组瘤重。
对人乳腺癌MDA-MB-436裸小鼠皮下移植瘤的生长抑制作用的结果
实验结果如表2所示。
I-34盐酸盐100mg/kg和20mg/kg组，每天口服给药一次，连续给药21天，对人乳腺癌MDA-MB-436裸小鼠皮下移植瘤的生长有极其显著的抑制作用，在第21天所得T/C百分数分别为1.47％和5.70％，并且高剂量组有一只小鼠肿瘤完全消退。
AZD2281 30mg/kg，每天口服给药一次，连续给药21天，对人乳腺癌MDA-MB-436裸小鼠皮下移植瘤的生长有一定的抑制作用，第21天所得T/C百分数为51.41％。I-34盐酸盐活性明显优于AZD2281。
表2.化合物对人乳腺癌MDA-MB-436裸小鼠皮下移植瘤的实验治疗作用
t-检验(vs溶剂对照组)，*p<0.05**p<0.001“()”内为肿瘤消退小鼠数
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (9)
- 一种由通式I表示的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物或其可药用盐：其中，R 1为氢、C 1-4烷基或卤素；R 2为R 3为氢、-C(＝O)R 6、-SO 2R 7、取代或未取代的C 1-4烷基或取代或未取代的C 3-6环烷基，其中，所述R 6和R 7独立地为取代或未取代的C 1-4烷基、取代或未取代的C 3-6环烷基或取代或未取代的C 6-10芳基，所述取代是被选自卤素、C 1-4烷基、氨基、腈基、羟基和硝基中的至少一个取代基取代；R 4为氢、卤素、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基；R 5为-CH 2-或-C＝O；X 1为S、O或NH；X 2为CH或N；Y 1、Y 2、Y 5和Y 6独立地为取代或未取代的亚甲基、取代或未取代的亚乙基、取代或未取代的亚丙基或取代或未取代的亚丁基，所述取代是被选自卤素、C 1-6烷基、C 3-6环烷基和C 1-4烷氧基中的至少一个取代基取代；Y 3和Y 4独立地为氢、取代或未取代的C 1-4烷基或取代或未取代的C 3-6环烷基，所述取代是被选自卤素、C 1-6烷基、C 3-6环烷基和C 1-4烷氧基中的至少一个取代基取代；Y 7为NR 8或CHR 9，其中，所述R 8为氢、-C(＝O)R 10、-SO 2R 11、取代或未取代的C 1-4烷基、取代或未取代的C 3-6环烷基或取代或未取代的C 6-10芳基，其中所述R 10和R 11独立地为取代或未取代的C 1-4烷基、取代或未取代的C 3-6环烷基、取代或未取代的五元至六元饱和杂环基或取代或未取代的C 6-10芳基，所述取代是被选自卤素、C 1-4烷基、C 1-4卤代烷基、氨基、被至少一个C 1-4烷基取代的氨基、腈基、羟基和硝基中的至少一个取代基取代，所述R 9为氢、-OR 12、被至少一个C 1-4烷基取代的氨基、或取代或未取代的五元至六元饱和杂环基，其中所述R 12为氢、取代或未取代的C 1-4烷基或取代或未取代的C 3-6环烷基，所述取代是被选自卤素、C 1-4烷基、C 1-4卤代烷基、氨基、被至少一个C 1-4烷基取代的氨基、腈基、羟基和硝基中的至少一个取代基取代。
- 根据权利要求1所述的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物或其可药用盐，其特征在于，在所述通式I中，R 1为氢、甲基、乙基、丙基、氟、氯或溴；R 2为R 3为氢、甲基、乙基或丙基；R 4为氢、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基；R 5为-CH 2-或-C＝O；X 1为S、O或NH；X 2为CH或N；Y 1、Y 2、Y 5和Y 6独立地为取代或未取代的亚甲基、取代或未取代的亚乙基、取代或未取代的亚丙基或取代或未取代的亚丁基，所述取代是被选自氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、甲氧基、乙氧基或丙氧基中的至少一个取代基取代；Y 3和Y 4独立地为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基或丁基；Y 7为NR 8或CHR 9，其中，所述R 8为氢、-C(＝O)R 10、-SO 2R 11、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、或取代或未取代的苯基，其中所述R 10和R 11独立地为取代或未取代的如下基团：甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、二氧六环基或苯基，所述取代是被选自氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、三氟甲基、氨基、N-甲基氨基、N-乙基氨基、N,N-二甲基氨基、N,N-二乙基氨基、腈基、羟基和硝基中的至少一个取代基取代，所述R 9为氢、-OR 12、N-甲基氨基、N-乙基氨基、N,N-二甲基氨基、N,N-二乙基氨基、吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或二氧六环基，其中所述R 12为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基，所述取代是被选自氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、三氟甲基、氨基、N-甲基氨基、N-乙基氨基、N,N-二甲基氨基、N,N-二乙基氨基、腈基、羟基和硝基中的至少一个取代基取代。
- 根据权利要求1所述的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物或其可药用盐，其特征在于，所述的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物为下列化合物之一：
- 根据权利要求1-3中任意一项所述的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物或其可药用盐在制备PARP抑制剂中的用途。
- 根据权利要求4所述的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物或其可药用盐在制备PARP抑制剂中的用途，其特征在于，所述PARP抑制剂对PARP-1和/或PARP-2具有选择性抑制效果。
- 一种药物组合物，其包含一种或多种治疗有效量的根据权利要求1-3中任意一项所述的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物或其可药用盐，或者包含一种或多种治疗有效量的根据权利要求1-3中任意一项所述的吡咯[1,2-b]哒嗪类化合物的酯、前药、水合物或结晶。
- 根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物对PARP具有抑制效果。
- 根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物对PARP-1和/或PARP-2具有选 择性抑制效果。
- 根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物用于预防和/或治疗与PARP相关疾病，所述与PARP相关疾病包括肿瘤、缺血性疾病和神经退行性疾病。
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|---|---|---|---|---|
| US20230142739A1 (en) * | 2020-04-03 | 2023-05-11 | The Regents Of The University Of California | Protein-protein interaction stabilizers |
| CN113461597B (zh) * | 2021-08-02 | 2023-07-21 | 天津太平洋化学制药有限公司 | 一种尼拉帕尼中间体的制备方法 |
| CN114456099A (zh) * | 2022-02-21 | 2022-05-10 | 八叶草健康产业研究院(厦门)有限公司 | 一种4-氯吡咯-2-羧酸的制备方法 |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004082606A2 (en) * | 2003-03-13 | 2004-09-30 | Synta Pharmaceuticals Corp. | Fused pyrrole compounds |
| WO2005013907A2 (en) * | 2003-08-07 | 2005-02-17 | Japan Tobacco Inc. | Pyrrolo[1,2-b]pyridazine derivatives |
| WO2005030144A2 (en) * | 2003-09-26 | 2005-04-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Pyrrolopyridazine compounds and methods of use thereof for the treatment of proliferative disorders |
| WO2006004191A1 (en) * | 2004-07-05 | 2006-01-12 | Astellas Pharma Inc. | Pyrrolopyridazine derivatives which inhibit pde iv and tnf alfa |
| CN1759117A (zh) * | 2003-01-09 | 2006-04-12 | 安斯泰来制药有限公司 | 吡咯并哒嗪衍生物 |
| WO2011058109A1 (en) * | 2009-11-12 | 2011-05-19 | Ucb Pharma S.A. | Fused bicyclic pyrrole and imidazole derivatives as kinase inhibitors |
| CN102596959A (zh) * | 2009-07-31 | 2012-07-18 | 拜奥克里斯特制药公司 | 吡咯并[1,2-b]哒嗪衍生物作为janus激酶抑制剂 |
| CN102971323A (zh) * | 2010-05-28 | 2013-03-13 | 拜奥克里斯特制药公司 | 作为janus激酶抑制剂的杂环化合物 |
| WO2014151142A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Constellation Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof |
| WO2016144847A1 (en) * | 2015-03-12 | 2016-09-15 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Pyrrolopyridazine inhibitors of irak4 activity |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU7891891A (en) * | 1990-05-25 | 1991-12-31 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Pyrrolopyridazine compounds |
| US20100184771A1 (en) * | 2005-12-15 | 2010-07-22 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Bicyclic Heterocyclic Compound |
| GB0610680D0 (en) * | 2006-05-31 | 2006-07-12 | Istituto Di Ricerche D Biolog | Therapeutic compounds |
| CN103288832A (zh) * | 2012-03-01 | 2013-09-11 | 世方药业（杭州）有限公司 | 具有抗病毒特性的吡咯并哒嗪类化合物 |
-
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Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1759117A (zh) * | 2003-01-09 | 2006-04-12 | 安斯泰来制药有限公司 | 吡咯并哒嗪衍生物 |
| WO2004082606A2 (en) * | 2003-03-13 | 2004-09-30 | Synta Pharmaceuticals Corp. | Fused pyrrole compounds |
| WO2005013907A2 (en) * | 2003-08-07 | 2005-02-17 | Japan Tobacco Inc. | Pyrrolo[1,2-b]pyridazine derivatives |
| WO2005030144A2 (en) * | 2003-09-26 | 2005-04-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Pyrrolopyridazine compounds and methods of use thereof for the treatment of proliferative disorders |
| WO2006004191A1 (en) * | 2004-07-05 | 2006-01-12 | Astellas Pharma Inc. | Pyrrolopyridazine derivatives which inhibit pde iv and tnf alfa |
| CN102596959A (zh) * | 2009-07-31 | 2012-07-18 | 拜奥克里斯特制药公司 | 吡咯并[1,2-b]哒嗪衍生物作为janus激酶抑制剂 |
| WO2011058109A1 (en) * | 2009-11-12 | 2011-05-19 | Ucb Pharma S.A. | Fused bicyclic pyrrole and imidazole derivatives as kinase inhibitors |
| CN102971323A (zh) * | 2010-05-28 | 2013-03-13 | 拜奥克里斯特制药公司 | 作为janus激酶抑制剂的杂环化合物 |
| WO2014151142A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Constellation Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof |
| WO2016144847A1 (en) * | 2015-03-12 | 2016-09-15 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Pyrrolopyridazine inhibitors of irak4 activity |
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| 121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 18831030 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |
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| NENP | Non-entry into the national phase |
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| 122 | Ep: pct application non-entry in european phase |
Ref document number: 18831030 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |