[go: up one dir, main page]

WO2019004877A1 - Средство для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных - Google Patents

Средство для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных Download PDF

Info

Publication number
WO2019004877A1
WO2019004877A1 PCT/RU2018/050068 RU2018050068W WO2019004877A1 WO 2019004877 A1 WO2019004877 A1 WO 2019004877A1 RU 2018050068 W RU2018050068 W RU 2018050068W WO 2019004877 A1 WO2019004877 A1 WO 2019004877A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
phenyl
symm
xanthene
follicles
female
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/RU2018/050068
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Рахимджан Ахметджанович РОЗИЕВ
Кенес Тагаевич ЕРИМБЕТОВ
Екатерина Валерьевна БОНДАРЕНКО
Елена Евгеньевна КАЛАШНИКОВА
Анна Яковлевна ГОНЧАРОВА
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to EA202090163A priority Critical patent/EA202090163A1/ru
Publication of WO2019004877A1 publication Critical patent/WO2019004877A1/ru
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/095—Sulfur, selenium, or tellurium compounds, e.g. thiols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/40—Cyclodextrins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis

Definitions

  • the group of inventions relates to medicine and veterinary medicine, namely to medical and veterinary gynecology, and can be used to treat female infertility and infertility of female animals (hereinafter referred to the treatment of female infertility).
  • follicles in the female body is carried out in several stages.
  • four types of follicles are distinguished: primodial, primary (pre-antral), secondary (antral), tertiary (pre-ovulatory).
  • the main type of follicles are primordial, representing the oocyte, surrounded by one incomplete layer of flat cells, the precursors of the esa granules.
  • Primordial follicles are formed before birth. They are formed in the process of proliferation of primary germ cells in the germinal ovary at an early stage of pregnancy.
  • primordial follicles can reach the stage of ovulation, the rest of 200-450 thousand follicles undergo atresia.
  • the reduction of follicles by apoptosis can begin at any stage of their development (Boyarsky K.Yu., Gaydukov SN. Molecular basis of folliculogenesis: from the stage of large antral follicles to ovulation // Problems of reproduction - 2010 - 5 - pp. 13-22).
  • a primary follicle is formed from primordial, which is an oocyte surrounded by one complete layer of granulosis.
  • the factors that ensure the release of follicles from the primordial state are unknown, but their growth at this stage in the absence of a developed network of blood vessels in the growth zone does not depend on blood circulating in the blood. hormones and therefore is hormonally insensitive. During this period, follicle growth is governed by local factors. In this case, the oocyte plays a leading role in the regulation of the transition from the stage of the primordial follicle to the primary stage. For such a transition, the oocyte needs expression of RFD-9 factors (growth factor of differentiation of the 9th type (CDF-9) and bone morphogenetic growth factor of the 15th type of KMF-15 (BMP-15)).
  • RFD-9 factors growth factor of differentiation of the 9th type (CDF-9) and bone morphogenetic growth factor of the 15th type of KMF-15 (BMP-15)
  • Teke This stage of growth takes place in the avascular zone of the ovary in the absence of pituitary gonads otropins.
  • the transition of the follicle to the next phase of the secondary follicle is characterized by a significant increase in the size of the oocyte and the number of granulosa cells.
  • This stage of follicular growth can occur only in the presence of basal levels of pituitary gonadotropins, primarily the follicle-stimulating hormone (FSH).
  • FSH pituitary gonadotropin
  • receptors for FSH are detected on granulosa cells, and receptors for luteinizing hormone (LH) are found on the cells of an emerging theca (Boyarsky K.Yu., Gaidukov S.N.,
  • the tech splits into inner and outer parts.
  • a follicle cavity is formed in the follicle with a follicular fluid that contains steroid hormones (estrogens), pituitary gonadotropic growth factors, enzymes, proteoglycans and other biologically active substances that are synthesized locally in the cells granulosis, tech and oocyte, and coming from the bloodstream.
  • steroid hormones estradiens
  • pituitary gonadotropic growth factors enzymes
  • proteoglycans and other biologically active substances that are synthesized locally in the cells granulosis, tech and oocyte, and coming from the bloodstream.
  • processes occur that provide neurotrophies.
  • an area bearing the germ cell of the egg-bearing tubercle is isolated.
  • the third period of folliculogenesis growth is hormone-dependent.
  • Tertiary follicles grapha vesicles
  • the follicle acquires large forms, a large cavity filled with fluid.
  • the walls of the follicle become thinner.
  • Cells of the follicular epithelium and the thecs intensively synthesize sex hormones, mainly estradiol.
  • Estradiol is necessary for the implementation of ovulation processes, as well as to ensure the proliferation of endometrial cells.
  • the increased estradiol content stimulates the release of LH, which initiates ovulation.
  • a bulge forms in the wall of the follicle, which breaks and the egg leaves the follicle.
  • a yellow body is formed from the granule of the follicle, producing progesterone.
  • the technical problem addressed by the invention is the expansion of the means for treating female infertility to increase fertility through non-hormonal stimulation of folliculogenesis.
  • the technical result consists in the implementation of the proposed means of providing treatment for female infertility due to non-hormonal stimulation of folliculogenesis, in improving the quality of gametes and the emergence of viable offspring.
  • the present invention proposes the use of 9-phenyl-sym-octahydroseleno-xanthene as an agent for treating female infertility, stimulating folliculogenesis and facilitating the implantation of embryos into the endometrium of the uterus.
  • a drug is proposed for the treatment of female infertility, which contains as an active ingredient 9-phenyl-stim-octahydroseleno-xanthene in an effective amount or may additionally contain ⁇ -cyclodextrin in ratios from 1: 1 to 1: 10.
  • the active component of the drug for the treatment of female infertility 9-phenyl-symm-octahydroselan-xanthen can be presented in the form of a clathrate complex with the ⁇ -cycle of dextrin.
  • a pharmaceutical composition for treating female infertility as an active ingredient contains 9-phenyl-symm-octahydroseleno-xanthene, or may additionally contain ⁇ -cyclodextrin, or 9-phenyl-symm-octahydroseleno-xanthene can be represented as a clathrate complex with ⁇ -cyclic o dextrin.
  • the specified pharmaceutical composition can be used in the form of tablets, with a content of 9-phenyl-symm-octahydroselano-xanthene from 5 to 30%, and the rest is one or more filler (s). When this tablet is formed by pressing or molding.
  • composition is applied in the form of gelatin capsules, in the following ratio of components:
  • the pharmaceutical composition can be made in the form of solutions, emulsions, suspensions, etc., with a content of 9-phenyl-sym-octahydroseleno-xanten from 0.25 to 2%; the rest is filler (s) or carrier (s).
  • the present invention is proposed to use as a means for treating female infertility, increasing fertility, stimulating folliculogenesis, as well as contributing to the implantation of embryos in the endometrium of the uterus.
  • the proposed tool provides improved quality of gametes and the emergence of resilient offspring.
  • Drug 1 is a pharmaceutical substance (FS) with a content of compound 9-phenyl-sym-octahydroseleno-xanthene above wt.99%
  • Preparation 2 is a mixture of compound 9-phenyl-sym-octahydroseleno-xanthene with ⁇ -cyclodextrin in ratios: from 2 mg to 10 mg of 9-phenyl-sim-octahydine-xanthene and from 188 mg to 180 mg of ⁇ -cyclodextrin, respectively .
  • Example 1 The purpose of studying the effect of the studied drugs on the reproductive functions of female mammals (using the BALB / c LacY mice as an example) is to assess their ability to influence the content of early (primordial and primary) and apoptotic follicles in the ovaries of inbred BALB / c LacY mice after 4 weeks of their intragastric administration.
  • mice of inbred BALB / c LacY mice which are characterized by low fecundity. Defect of female reproductive function is associated with high embryonic mortality. Loss of embryos before implantation is up to 39.5%; total embryonic losses from the number of yellow bodies - up to 49.4%. In this regard, the mice of this line are a convenient object for assessing the ability of the studied drugs to affect the reproductive function of females.
  • mice 20 mature female mice with an initial mass of 20-22 g were used.
  • the animals were divided into 4 groups - control and 3 experimental 5 animals each. Since the clinical application assumes the oral route of administration of the studied drugs, the animals of the experimental groups were injected intragastrally daily as a suspension with water prepared ex tempore.
  • the proposed drugs were administered for 4 weeks at a dose of 0.4 mg per kg of the body weight of the mice according to the active substance (9-phenyl-sym-octahydroseleno-xanten). Animals of the control group at the same time daily intragastric in the form of a suspension with water was administered the appropriate amount of ⁇ -cyclodextrin.
  • mice were euthanized in a C0 2 chamber, autopsied, and ovaries were isolated.
  • the female is sacrificed, laid on the stomach and a short incision is made in the dorso-ventral direction to the left or right 5 mm caudal to the lower ribs (cut through the skin and the wall of the abdominal cavity).
  • the tweezers capture the stuffing box and pull it out with the ovary, oviduct and upper uterus.
  • Under the control of a stereomicroscope (binocular), using a tweezer and small scissors the ovary is separated from the oviduct, uterus and adipose tissue.
  • the mouse ovary has a size of the order of 1 -2 mm with noticeable pre-ovulary follicles of the order of 300-500 microns.
  • the extracted ovary was placed in a special form and poured into blocks using the freezing agent Neg-50 Frozen Section Medium (Richard-Allan).
  • microtome-cryostat MICROM NM 525 (Thermo Scientific, Germany), allowing to obtain sections with a thickness in the range from 2 to 500 microns.
  • the device has a modular design with a working surface opening upwards and a cooling chamber made of stainless steel.
  • the temperature of the chamber is regulated from +5 ° ⁇ to -30 ° ⁇ .
  • the optimum temperature for slice production depends on the respective properties of the fabric, especially on the fat content. Considering the preliminary cleaning of the ovaries from fat and the fact that the ovaries are organs with a small amount of it, we chose the optimal temperature for producing sections of -20 ° C.
  • the frozen block was fixed on the sample holder, using the appropriate buttons on the control panel, we chose the required thickness of sections (5 ⁇ m) and made sections by turning the handwheel clockwise.
  • the cut is shifted into the gap between the upper side of the knife and the anti-roll plate, from which, by folding the anti-roll, the cut can be transferred to a prepared clean glass slide (Superfrost Plus Gold Adhesion Slides, Fisher Scientific, Germany) using a brush or making an imprint.
  • Electrostatic coating of these glasses provides high adhesion of frozen tissue sections, allowing preservation of sections on the glass during the dyeing process of the preparations, as well as avoiding the formation of artifacts due to the ability of these glass slides to immobilize nuclear and cytoplasmic tissue components.
  • Fibrillarin 34-36 K Da
  • snRNP small nucleolar ribonucleoprotein granules
  • Fibrillarin has a high degree of evolutionary conservatism and its main functions are associated with the processing of pre-ribosomal RNA (pre-rRNA) and its chemical modifications.
  • fibrillarin is a nucleolus RNA-binding protein involved in the early stages of processing ribosomal RNA (rRNA).
  • Immunohistochemical staining of ovarian tissue is a marker reaction that allows to detect oocytes of varying degree of maturity on cryosections.
  • the size of the nucleoli of oocytes detected by antibodies to fibrillarin greatly exceeds that of granular, stromal, and other surrounding cells.
  • two nucleoli are usually detected. Their size approaches 5 ⁇ m, which, in combination with the specific morphology of these types of follicles, allows them to be identified unmistakably (Fig. 1 and 2).
  • Caspase-3 an enzyme induced by progesterone, is a component of signaling of the Fas / FasL receptor system, which plays a role in the realization of apoptosis, particularly in ovarian tissue cells.
  • apoptosis is mediated by caspases, which ensures the removal of excess or non-viable germ cells and granulosa cells, while the excessive apoptosis and atresia of the follicles can adversely affect fertility.
  • Disorders of apoptosis are also involved in the pathogenesis of chronic anovulation and ovarian dysfunction.
  • a promising task of scientific research today is the study of the possibility of a medical effect on apoptosis in order to correct pathological changes in the female sex gland, as well as the possibility of increasing the positive outcomes of IVF programs.
  • immunohistochemical staining of ovarian cryosections with antibodies to caspase-3 is a suitable marker reaction to determine the possible effect of the studied drugs on the survival of progenitor ovarian cells.
  • mice treated with the studied drugs for 1 month were treated with mice treated with the studied drugs for 1 month compared with the control.
  • An increase in the number of apoptotic follicles may reflect the atresia of the “excess” follicles that have begun to mature in response to the use of the proposed drugs, since in the body of mammals, including humans and mice, there are natural mechanisms that limit the number of mature eggs that form to the physiological norm.
  • an increase in the number of apoptotic follicles in conjunction with a general decrease in the number of remaining early follicles, observed during the use of the proposed drugs, may reflect an increase in folliculogenesis associated with an increase in the number of follicles that have come out of dormancy and have begun to mature.
  • the implementation of natural processes in the body, controlling the number of mature eggs that are formed, functions as a factor in their natural selection, and the formation, subsequently, of the most healthy offspring.
  • Example 2 The purpose of this study was to assess the effect of the studied drugs on the reproductive function of mice when administered to the same sex (females).
  • BALB / c LacY with an initial body weight of 20-25 g.
  • the proposed drugs in as a suspension with water prepared ex tempore, was administered intragastrally to female mice of the experimental groups daily for 2 weeks at a dose of 0.4 mg per kg of body weight.
  • the proposed drugs were daily administered to the females of the experimental groups for 2 weeks (3–4 estral cycles) intragastrically, and the control group females — 0.4 mg ⁇ -cyclodextrin per kg of body weight.
  • a group of males consisting of 60 animals for 6 weeks (2-3 cycles of spermatozoa maturation) received the corresponding amount of ⁇ -cyclo dextrin.
  • the studied drugs were administered at 10 o'clock 1 time per day. After the introduction of the studied drugs formed the following groups of animals:
  • Group B 30 experienced females were assigned to the 15 control males.
  • Group G 30 experienced females were assigned to the 15 control males.
  • vaginal swabs were examined during two estrous cycles, the stages of proextrus, extrusion and dixtrus were noted. Detection of vaginal smear sperm was considered the first day of pregnancy. After 10 days, two subgroups were formed from females in each of the four groups (A1 and A2, B1 and B2,
  • the number of yellow bodies in the fertilized females is the number of implantation sites
  • the second subgroups of pregnant females were left to give birth, the date of delivery was recorded, the number of pups in the litter, the body weight of the newborns pups. On the 21st day from the day of birth, the percent survival rate was calculated, the total and average weight of the mice were noted, the postnatal mortality rate was evaluated. the number of mice in the litter after 3 weeks
  • Table 5 shows the data obtained in the analysis of females uncovered on the 20th day of pregnancy, according to the following indicators of reproductive function: the number of yellow bodies, implantation sites and live fruits. These data make it possible to calculate the preimplantation and postimplantation types of death of embryos of mice of the control and experimental groups using the above formulas.
  • Table 6 suggests that the introduction to the female mice of the proposed drugs increases, compared with the control, the number and percentage of giving birth females (Table 6, groups B2, B2 and G2).
  • the increase in the number of giving birth females corresponds to an increase in the number of litters, which increases the total number of mice in the analyzed groups.
  • a study of postnatal development of the offspring of BALB / c LacY mice showed that administration of females (Table 7, B2, B2 and G2 groups) to the proposed drugs increases, compared to control, the total number of newborn mice, of which from 85.2% to 90, 0% live to 3 weeks of age.
  • drugs are proposed that are 9-phenyl-symm-octahydroseleno-xanthene, its mixture and clathrate complex with ⁇ -cyclo dextrin, which provide stimulation of the fertility of females and viability of the offspring.
  • Example 1 The use of the proposed drugs at a dose of 0.4 mg / kg daily for 4 weeks in female BALB / c LacY mice leads to an increase in the number of apoptotic follicles (atresia) in combination with a decrease in the residual number of early follicles.
  • atresia apoptotic follicles
  • Example 2 the general positive impact of the proposed drugs on the reproductive performance of females and the quality of the offspring, and indicate a higher intensity of folliculogenesis in animals receiving the studied substances.
  • the proposed drugs do not violate the natural processes in the body, controlling the number of mature eggs.
  • a greater number of them undergo atresia with a relatively unchanged number of mature eggs.
  • This complex of natural physiological processes suggests that during oogenesis a pool of viable eggs is formed, during fertilization of which healthy offspring is formed.
  • the proposed drugs expand the arsenal of tools intended in gynecology for the treatment of female infertility due to non-hormonal stimulation of folliculogenesis.
  • solid dosage forms include, for example, tablets, pills, gelatin capsules, etc.
  • liquid dosage forms for injection and parenteral administration examples include solutions, emulsions, suspensions, etc.
  • Compositions are usually prepared using standard procedures involving mixing the active compound with a liquid or finely divided solid carrier.
  • compositions according to the invention in the form of tablets contain from 5 to
  • diluents beet sugar, lactose, glucose, sodium chloride, sorbitol, mannitol, glycol, disubstituted calcium phosphate
  • binders magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellulose, carboxymethylcellulose, and polyvinyl pyrrole and don
  • disintegrating agents dextrose, agar, alginic acid or its salts, starch, twin.
  • a tablet may be formed by compressing or molding the active ingredient with one or more additional ingredients. Getting pressed tablets is carried out on a special installation.
  • the active ingredient in free form, such as powder or granules, in an amount of 20 g (the amount of substance required to obtain 10,000 tablets) is mixed with a binder - tragacanth (200 g), mixed with a diluent - lactose (530 g), into a mixture a disintegrant is added — alginic acid (200 g) and perfume — citric acid (50 g).
  • tetrazine tetrazine
  • indigo tetrazine
  • stabilizers sodium metabisulfite, sodium benzoate.
  • Offered gelatin capsules contain from 1 to 20% of the active ingredient.
  • 1 capsule of 5 mg contains:
  • the active ingredient in free form such as powder or granules, in an amount of 50 g (the amount of the substance required to obtain 10,000 tablets) is mixed with the substance Betadex (1850 g).
  • the injection form of the composition is preferably isotonic and oil solutions, suspensions.
  • the above forms can be sterilized and contain additives such as preservatives: sodium metabisulphite, benzoic acid, sodium benzoate, a mixture of methyl paraben and propyl paraben; stabilizers: apricot and arabic gum, dextrin, starch paste, methylcellulose, twin; salts that regulate osmotic pressure (sodium chloride), or buffers. In addition, they may contain other therapeutically beneficial substances.
  • preservatives sodium metabisulphite, benzoic acid, sodium benzoate, a mixture of methyl paraben and propyl paraben
  • stabilizers apricot and arabic gum, dextrin, starch paste, methylcellulose, twin
  • salts that regulate osmotic pressure (sodium chloride), or buffers may contain other therapeutically beneficial substances.
  • EXAMPLE EXAMPLE.
  • the active compound (1 g; the amount needed to make 1000 ampoules) is finely ground and mixed in a mixer with hydrogenated soybean oil (2000 ml). The resulting solution is Packed in 2 ml ampoules and steam sterilized for 30 minutes.
  • the dosage of the active ingredient (9-phenyl-sym-octahydroselan-xanthene of formula 1 or its mixture with ⁇ -cyclodextrin or clathrate complex with ⁇ -cyclodextrin) prescribed for reception varies depending on many factors, such as age, sex, body weight of the patient, symptoms and severity of the disease, specifically prescribed compound, method of administration, form of the drug, in the form of which the active compound is administered.
  • the total prescribed dose ranges from 0.5 to 20 mg per day.
  • the total dose can be divided into several doses, for example, for receiving from 1 to 4 once a day.
  • the range of total doses of the active substance is from 0.5 to 20 mg per day, preferably from 1 to 10 mg.
  • range of prescribed doses is from 0.1 to 5 mg per day, preferably from 0.5 to 2 mg. Effective therapeutic dose of the drug can be selected by the attending physician.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к медицине и ветеринарии, а именно к медицинской и ветеринарной гинекологии. Предлагается применение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена в качестве средства для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных, стимулирующего фолликулогенез и способствующего имплантации эмбрионов в эндометрий матки. Предлагается также лекарственный препарат и фармацевтическая композиция, включающие в качестве активного компонента 9-фенил-симм- октагидроселено-ксантен. Изобретение расширяет арсенал средств, способствует увеличению фертильности за счет негормонального стимулирования фолликулогенеза.

Description

Средство для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных
Группа изобретений относится к медицине и ветеринарии, а именно к медицинской и ветеринарной гинекологии, и может быть использовано для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных (далее для лечения женского бесплодия).
Примерно в 40% случаев неспособность супружеских пар зачать ребенка обусловлена бесплодием женщины. Основная причина женского бесплодия связана с нарушением фолликулогенеза.
Рост фолликулов в женском организме осуществляется в несколько этапов. В составе яичников по морфологическим признакам выделяют четыре типа фолликулов: примодиальные, первичные (преантральные), вторичные (антральные) третичные (предовуляторные). К периоду достижения половой зрелости основным типом фолликулов являются примордиальные, представляющие собой ооцит, окруженный одним неполным слоем плоских клеток, предшественников гранул езы. Примордиальные фолликулы образуются еще до рождения ребенка. Они формируются в процессе пролиферации первичных зародышевых клеток в зародышевом яичнике на ранней стадии беременности. В течение жизни женщины 400-500 примордиальных фолликулов могут дойти до стадии овуляции, остальные из 200-450 тысяч фолликулов подвергаются атрезии. Редуцирование фолликулов посредством апоптоза может начаться на любой стадии их развития (Боярский К.Ю., Гайдуков С.Н. Молекулярные основы фолликулогенеза: от стадии больших антральных фолликулов до овуляции // Проблемы репродукции - 2010 - 5 - стр. 13-22). В процессе фолликулогенеза из примордиального образуется первичный фолликул, который представляет собой ооцит, окруженный одним полным слоем гранулезы. Факторы, обеспечивающие выход фолликулов из примордиального состояния неизвестны, но их рост на этой стадии при отсутствии развитой сети кровеносных сосудов в зоне роста не зависит от циркулирующих в крови гормонов и потому является гормонально -нечувствительным. В этот период рост фолликулов регулируется местными факторами. При этом ооцит играет ведущую роль в регуляции перехода от стадии примордиального фолликула к стадии первичного. Для такого перехода необходима экспрессия ооцитом факторов РФД-9 (ростового фактора дифференцировки 9-го типа (CDF-9) и костного морфогенетического фактора роста 15-го типа КМФ-15 (ВМР-15)).
При переходе примордиальных фолликулов в первичные увеличиваются размеры ооцита, фолликулярные клетки, окружающие ооцит, пролиферируют, увеличивается их число и размеры, однослойный эпителий становится многослойным. Скорость выхода фолликула из примордиального пула в течение жизни изменяется, увеличиваясь в постнатальном онтогенезе.
По мере увеличения растущего фолликула, окружающая его соединительная ткань уплотняется, давая начало образования внешней оболочке, так называемой теке. Эта стадия роста проходит в аваскулярной зоне яичника в условиях отсутствия гипофизарных гонад отропинов.
Переход фолликула в следующую фазу вторичного фолликула характеризуется значительным увеличением размеров ооцита и числа клеток гранулезы. Эта стадия роста фолликулов может проходить только в присутствии базальных уровней гипофизарных гонадотропинов, в первую очередь фолликулостимулирующий гормон (ФСГ). На этой стадии развития фолликула на клетках гранулезы выявляются рецепторы для ФСГ, а на клетках формирующейся теки обнаруживаются рецепторы для лютеинизирующего гормона (ЛГ) (Боярский К.Ю., Гайдуков С.Н.,
Чинчаладзе А.С. Факторы, определяющие овариальный резерв женщины //
Журнал акушерства и женских болезней. - 2009 - т.58 - 2 - стр. 65-71). В стадии вторичного фолликула тека разделяется на внутреннюю и наружную части. В фолликуле образуется полость с фолликулярной жидкостью, которая содержит стероидные гормоны (эстрогены), гипофизарные гонадотропные факторы роста, ферменты, протеогликаны и другие биологически активные вещества, синтезируемые как местно в клетках гранулезы, теке и ооците, так и поступающих из кровотока. Во внутренней теке происходят процессы, обеспечивающие нейротрофику. В многослойном фолликулярном эпителии обособлена область, несущая половую клетку яйценосный бугорок.
Третий период роста фолликулогенеза является гормонально- зависимым. Третичные фолликулы (граафовы пузырьки) достигают своего максимального развития и характеризуются подготовкой фолликула к овуляции. Фолликул приобретает крупные формы, большую полость, заполненную жидкостью. Стенки фолликула истончаются. Клетки фолликулярного эпителия и теки интенсивно синтезируют половые гормоны, главным образом эстрадиол.
Эстрадиол необходим для осуществления процессов овуляции, а также для того, чтобы обеспечить пролиферацию клеток эндометрия. Повышенное содержание эстрадиола стимулирует выброс ЛГ, который и инициирует овуляцию. В стенке фолликула образуется выпячивание, которое разрывается и яйцеклетка выходит из фолликула. После овуляции на месте фолликула из гранулезы образуется желтое тело, вырабатывающее прогестерон.
Нарушение нормального фолликулогенеза может привести к снижению репродуктивного потенциала женщины. Применение гормональных средств влияет только на гормонозависимые стадии фолликулогенеза в то время как на начальные гормононезависимые этапы гормональные препараты не действуют.
Известно, что для стимуляции роста и созревания ооцитов на ранних стадиях предлагается использовать ростовой фактор дифференцировки 9-го типа (РФД-9, CDP-9, патент US6660717 / А61Р15/08, опубл. 09.12.2003). Применение указанного фактора, как полагают авторы, обеспечивает эффективное развитие и созревание фолликулов и ооцитов и получение гамет «высокого качества», необходимых для рождения здорового потомства. Помимо фактора РФД-9 предлагаемое средство рекомендуется дополнять гонадотропинами, в частности ФСГ. Недостатком указанного средства является его полипептидная природа. Для получения РДФ-9 требуется использование трудозатратной рекомбинантной технологии. Кроме того применение гормональных средств может нарушить синтез эндогенных гормонов.
Технической проблемой, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является расширение арсенала средств, предназначенных для лечения женского бесплодия, для увеличения фертильности за счет негормонального стимулирования фолликулогенеза. Технический результат заключается в реализации предлагаемых средств, обеспечивающих лечение женского бесплодия за счет негормонального стимулирования фолликулогенеза, в улучшении качества гамет и появлении жизнестойкого потомства.
Для решения поставленной технической проблемы и достижения максимально возможного результата в настоящем изобретении предлагается применение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена в качестве средства для лечения женского бесплодия, стимулирующего фолликулогенез и способствующего имплантации эмбрионов в эндометрий матки.
Предлагается лекарственный препарат для лечения женского бесплодия, который содержит в качестве активного компонента 9-фенил- симм-октагидроселено-ксантен в эффективном количестве или может содержать дополнительно β-цикло декстрин в соотношениях от 1 : 1 - до 1 : 10.
Активный компонент лекарственного препарата для лечения женского бесплодия 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен может быть представлен в виде клатратного комплекса с β -цикл о декстрином.
Фармацевтическая композиция для лечения женского бесплодия в качестве активного компонента содержит 9-фенил-симм-октагидроселено- ксантен или может дополнительно содержать β-циклодекстрин, либо 9- фенил-симм-октагидроселено-ксантен может быть представлен в виде клатратного комплекса с β -цикл о декстрином. Указанная фармацевтическая композиция может применяться в форме таблеток, с содержанием 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена от 5 до 30%, а остальное - один или более наполнитель(и). При этом таблетки сформированы посредством прессовки или формовки.
Либо фармацевтическая композиция применяется в форме желатиновых капсул, при следующем соотношении компонентов:
- 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен от 1 до 20%;
- наполнитель(и) или носитель(и) остальное.
Фармацевтическая композиция может быть выполнена в виде растворов, эмульсий, суспензий и др., с содержанием 9-фенил-симм-октагидроселено- ксантенаа от 0,25 до 2%; остальное - наполнитель(и) или носитель(и).
Предлагаемое изобретение предлагается использовать в качестве средств для лечения женского бесплодия, увеличивающих фертильность, стимулирующих фолликулогенез, а также способствующих имплантации эмбрионов в эндометрий матки. Предлагаемое средство обеспечивает улучшение качества гамет и появление жизнестойкого потомства.
Сущность изобретения поясняется примерами конкретного
выполнения, в которых:
Препарат 1 - это фармацевтическая субстанция (ФС) с содержанием соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен выше мас.99%
Препарат 2 - смесь соединения 9-фенил-симм-октагидроселено- ксантен с β-цикло декстрином в соотношениях: от 2 мг до 10 мг 9-фенил- симм-октагидроселено-ксантена и от 188 мг до 180 мг β-цикло декстрина, соответственно.
Препарат 3 - клатратный комплекс β-циклодекстрина с 9-фенил-симм- октагидроселено-ксантеном в соотношении 10: 1, полученный стандартным способом /патент RU2451680, C07D 345/00, опубл. 27.05.2012г./.
Стимулирование фолликулогенеза у самок мышей линии BALB/c LacY и улучшение их репродуктивных функций под влиянием заявляемых средств для лечения женского бесплодия и увеличения фертильности продемонстрировано в двух независимых экспериментах. В настоящем изобретении, если не указано иное, концентрации представлены в мас.%.
Пример 1. Целью изучения влияния исследуемых препаратов на репродуктивные функции самок млекопитающих (на примере мышей линии BALB/c LacY)» является оценка их способности влиять на содержание ранних (примордиальных и первичных) и апоптотических фолликулов в яичниках инбредных мышей линии BALB/c LacY после 4 недель их внутрижелудочного введения.
В работе использовали самок инбредных мышей линии BALB/c LacY, которые отличаются низкой плодовитостью. Дефект репродуктивной функции самок связан с высокой эмбриональной смертностью. Потери эмбрионов до имплантации составляют до 39,5 %; общие эмбриональные потери от числа желтых тел - до 49,4 %. В связи с этим мыши этой линии являются удобным объектом для оценки способности исследуемых препаратов влиять на репродуктивную функцию самок.
В эксперименте были использованы 20 половозрелых самок мышей с исходной массой 20-22 г. В начале эксперимента животные были разделены на 4 группы - контроль и 3 опытных по 5 особей в каждой. Поскольку при клиническом применении предполагается пероральный путь введения исследуемых препаратов, животным опытных групп средства вводили ежедневно интрагастрально в виде суспензии с водой, приготовленной ех tempore. Предлагаемые препараты вводили в течение 4 недель в дозе 0,4 мг на кг массы тела мышей по действующему веществу (9-фенил-симм- октагидроселено-ксантену). Животным контрольной группы в те же сроки ежедневно интрагастрально в виде суспензии с водой вводили соответствующие количества β-циклодекстрина.
В течение опыта ежедневно контролировали состояние животных и в начале и конце экспериментального периода проводили измерение их массы тела. В конце эксперимента мышей подвергали эвтаназии в С02- камере, проводили аутопсию и выделяли яичники.
Использование замороженных гистологических срезов яичников млекопитающих, в отличие от других методов научного исследования, предоставляет уникальную возможность для изучения функционального состояния и развития женских половых клеток (ооцитов), а также других клеток, участвующих в этом процессе (таких как клетки гранулезы). В отличие от широко используемого пункционного метода выделения ооцитов из яичника, предлагаемый в настоящей работе подход позволяет исследовать женские половые клетки на ранних стадиях развития. Использование же парафиновых гистологических срезов яичников, предварительно обработанных различными видами фиксаторов, не позволяет в полной мере оценить состояние исследуемых клеток из-за эффекта маскирования некоторых антигенов, а также невозможности применения высокоинформативного метода иммунофлуоресценции.
Для извлечения яичников самку умерщвляют, кладут на живот и делают короткий разрез в дорзо-вентральном направлении слева или справа на 5 мм каудальнее нижних ребер (разрезают кожу и стенку брюшной полости). Пинцетом захватывают подушку сальника и вытаскивают наружу вместе с яичником, яйцеводом и верхним отделом матки. Под контролем стереомикроскопа (бинокуляра), используя микропинцет и маленькие ножницы, отделяют яичник от яйцевода, матки и жировой ткани. Яичник мыши имеет размер порядка 1 -2 мм с заметными предовуляторными фолликулами величиной порядка 300-500 мкм. Затем извлеченный яичник помещали в специальную форму и заливали в блоки при помощи замораживающего средства Neg-50 Frozen Section Medium (Richard-Allan
Scientific, USA), имеющего в своем составе поливиниловый спирт и полиэтиленгликоль, и замораживали при -20 °С. Данное средство препятствует образованию "кубического" льда и помогает замороженной ткани сохранять нативную структуру. Замораживающее средство является водорастворимым и никак не сказывается на фоновом окрашивании препарата. Затем готовые блоки монтировали на предметные столики криотома с использованием того же средства и изготавливали криосрезы.
Для изготовления замороженных срезов использовали специальный прибор микротом-криостат MICROM НМ 525 (Thermo Scientific, Germany), позволяющий получать срезы толщиной в диапазоне от 2 до 500 мкм. Прибор имеет модульную конструкцию с открывающейся наверх рабочей поверхностью и охлаждающую камеру из нержавеющей стали. Температура камеры регулируется от +5 °С до -30 °С. Оптимальная температура для производства срезов зависит от соответствующих свойств ткани, особенно от содержания жира. Учитывая предварительную очистку яичников от жира и тот факт, что яичники являются органами с небольшим его содержанием, нами была выбрана оптимальная температура для производства срезов -20°С.
Замороженный блок закрепляли на держателе образца, с помощью соответствующих кнопок на панели управления выбирали необходимую толщину срезов (5 мкм) и изготавливали срезы путем поворота маховика по часовой стрелке. При этом полученный срез сдвигается в щель между верхней стороной ножа и антироллерной пластиной, откуда, откинув антироллер, срез можно перенести на подготовленное чистое предметное стекло (Superfrost Plus Gold Adhesion Slides, Fisher Scientific, Germany), используя кисточку или производя отпечаток. Электростатическое покрытие этих стекол обеспечивает высокую адгезию замороженных срезов ткани, позволяя сохранить срезы на стеклах в процессе окрашивания препаратов, а также избежать образования артефактов из-за способности данных предметных стекол иммобилизовывать ядерные и цитоплазматические компоненты тканей.
Предметные стекла с прикрепленными срезами хранили при -80 °С до момента использования.
Для изучения препаратов криосрезов яичников использовали флуоресцентный микроскоп Axiovert 200 (Carl Zeiss, Germany), используя объектив Plan-NEOFLUAR 40χ/0,75 и соответствующие наборы фильтров. Изображения записывали с помощью 13 -битной монохромной камеры CoolSnapcf (RoperScientific, USA).
Подсчет фолликулов производили на криосрезах яичников животных контрольной и опытных групп после иммуногистохимического окрашивания. Количество проанализированных криосрезов зависело от индивидуального размера органа и состояния ткани после замораживания. Учитывались только тщательно расправленные срезы, с ровными краями и равномерно прокрашенные по всей площади среза.
Для статистической обработки посчитано среднее количество фолликулов (М) на срез для каждой мыши и затем для каждой группы. Для полученных значений контрольной и опытных групп (из 5 мышей каждая) найдена стандартная ошибка (т). Достоверность различий между группами оценивалась с помощью t-критерия Стьюдента.
Идентификацию ранних фолликулов в яичниках проводили после окрашивания криосрезов хроматиновым красителем DAPI и кроличьими моноклональными антителами к белку фибрилларину. Фибрилларин (34-36 к Да) является основным белковым компонентном U3, U8 и ШЗ малых ядрышковых рибонуклеопротеиновых гранул (мякРНП) и локализуется в фибриллярном центре и плотном фибриллярном компоненте ядрышка. Фибрилларин обладает высокой степенью эволюционной консервативности и его основные функции связаны с процессингом пре-рибосомальной РНК (пре- рРНК) и ее химическими модификациями. Белок содержит три основных структурных домена, включая GAR домен, обогащенный остатками глицина и аргинина, РНК-связывающий домен и область с доминирующей а-спиральной вторичной структурой, обладающей метилтрансферазной активностью. Таким образом, фибрилларин является РНК-связывающим белком ядрышка, участвующим в ранних стадиях процессинга рибосомальной РНК (рРНК).
9
ВКЛЮЧЕНИЕ ПУТЁМ ССЫЛКИ (ПРАВИЛО 20.6) Показано, что количественное содержание фибрилларина коррелирует с транскрипционной активностью РНК-полимеразы, скоростью клеточного деления и размером ядрышек, что говорит о том, что иммуноцитохимическое выявление этого белка может быть использовано для оценки общего уровня клеточного метаболизма.
Иммуногистохимическое окрашивание ткани яичников является маркерной реакцией, позволяющей выявлять на криосрезах ооциты различной степени зрелости. Размер ядрышек ооцитов, выявляемых антителами к фибрилларину, сильно превышает таковой у гранулезных, стромальных и других окружающих клеток. В ооцитах в составе примордиальных и первичных фолликулов выявляется, как правило, два ядрышка. Их размер приближается к 5 мкм, что в сочетании со специфической морфологией данных типов фолликулов позволяет безошибочно их идентифицировать (фиг. 1 и 2).
Нами было проанализировано от 23 до 58 криосрезов яичников от каждого животного контрольной и опытных групп. Результаты подсчета количества примордиальных и первичных фолликулов представлены в табл. 2 и на фиг. 1, 2. Динамика изменения массы тела подопытных мышей приведена в табл. 1.
Таблица 1 - Динамика изменения массы тела мышей при месячном внутрижелудочном введении предлагаемых препаратов
Figure imgf000011_0001
Таблица 2 - Количество примордиальных и первичных фолликулов
Figure imgf000012_0001
Примечание:
*Отличия от группы контроля достоверны по t-критерию, р<0,05
Статистическая обработка полученных результатов показала, что количество примордиальных и первичных фолликулов достоверно меньше у мышей, получавших исследуемые препараты по сравнению с контролем. Полученный результат может свидетельствовать о том, что предлагаемые препараты стимулируют фолликулогенез, и к моменту приготовления срезов яичников большая часть созревающих фолликулов уже прошла стадию первичных фолликулов и достигла более поздних стадий развития, не учитываемых в данном эксперименте. Выявление апоптотических фолликулов на криосрезах яичников
Идентификацию фолликулов с большим количеством апоптотических клеток в яичниках проводили после окрашивания криосрезов хроматиновым красителем DAPI и кроличьими моноклональными антителами к активной форме каспазы-3.
Каспаза-3 — фермент, индуцируемый прогестероном, является компонентом проведения сигнала рецепторной системы Fas/FasL, которой отводится роль в реализации апоптоза, в частности в клетках ткани яичника. Согласно литературным данным в яичниках позвоночных апоптоз опосредуется именно каспазами, благодаря чему обеспечивается удаление избыточных или нежизнеспособных зародышевых и гранулезных клеток, при этом чрезмерность апоптоза и атрезия фолликулов могут отрицательно влиять на фертильность. Нарушения апоптоза вовлечены также в патогенез хронической ановуляции и овариальной дисфункции. Перспективной задачей научных исследований на сегодняшний день является изучение возможности медикаментозного влияния на апоптоз с целью коррекции патологических изменений в женской половой железе, а также возможности повышения положительных исходов программ ЭКО.
Таким образом, иммуногистохимическое окрашивание криосрезов яичников антителами к каспазе-3 является подходящей маркерной реакцией для выяснения возможного влияния исследуемых препаратов на выживаемость прогениторных клеток яичников.
В ходе эксперимента было проанализировано от 23 до 58 криосрезов яичников от каждого животного контрольного и опытных групп. Результаты подсчета количества апоптотических фолликулов представлены в табл. 3.
Результаты проведенных исследований показали, что количество апоптотических фолликулов достоверно больше у мышей, получавших исследуемые препараты в течение 1 месяца по сравнению с контролем.
Увеличение количества апоптотических фолликулов может отражать атрезию «излишка» фолликулов, приступивших к созреванию в ответ на применение предлагаемых препаратов, поскольку в организме млекопитающих, в том числе, человека и мыши, функционируют естественные механизмы, ограничивающие количество формирующихся зрелых яйцеклеток до физиологической нормы.
Таблица 3 - Количество апоптотических фолликулов
Figure imgf000014_0001
При применении предлагаемых препаратов в дозе 0,4 мг/кг ежедневно в течение 4 недель, у самок мышей линии BALB/c LacY, характеризующихся низкой плодовитостью, связанной с высокой эмбриональной гибелью потомства, предположительно, из-за плохого качества родительских гамет, в яичниках отмечается снижение количества ранних фолликулов
(примордиальных и первичных) и увеличение числа фолликулов, претерпевающих атрезию (апоптических фолликулов).
Известно, что с каждым менструальным циклом общее количество фолликулов в яичнике уменьшается, и при их исчезновении наступает менопауза [Richardson S. et al. Follicular depletion during the menopausal transition: evidence for accelerated loss and ultimate exhaustion//
Jour.Clin.Endocr.Metab. - 1987.- Vol. 65. - p. 1231 - 1237; Боярский К.Ю.,
Гайдуков C.H., Чинчаладзе A.C. Факторы, определяющие овариальный резерв женщины // Журнал акушерства и женских болезней. - 2009 - т.58 - jN°2 - стр. 65-71]. При этом, чем интенсивнее происходит фолликулогенез, тем быстрее истощается овариальный резерв (ОР), отражающий остаточное количество находящихся в яичниках фолликулов (примордиальный пул и растущие фолликулы) (Боярский и др., 2009). Поскольку скорость снижения количества примордиальных и первичных (ранних) фолликулов коррелирует с интенсивностью фолликулогенеза, наблюдаемое в данном эксперименте уменьшение их числа относительно контроля может свидетельствовать об усилении процессов образования фолликулов у животных, получавших предлагаемые препараты. В пользу данного утверждения свидетельствует и выявленное увеличение количества апоптических фолликулов, которое связано с известными, функционирующими в организме естественными механизмами, контролирующими число образующихся яйцеклеток
[Боярский К.Ю., Гайдуков С.Н. Молекулярные основы фолликулогенеза: от стадии больших антральных фолликулов до овуляции // Проблемы репродукции - 2010 - 5 - стр. 13-22; Зенкина В. Г. Значение апоптоза в яичниках при развитии некоторых заболеваний репродуктивной системы//
Фундаментальные исследования N26, 2011. с.227-230]. Из большого числа активизирующихся примордиальных фолликулов, приступивших к дифференцировке, до овуляции доходит только небольшое количество доминантных фолликулов, количество которых, как и, соответственно, число рождающихся впоследствии детёнышей, отличается у разных видов. Например, у человека обычно созревает по 1 яйцеклетке в каждом цикле, у других млекопитающих количество созревающих яйцеклеток больше (в среднем, около 4-8 яйцеклеток у мыши, около 6 - у кошек и т. д.). Остальные созревающие фолликулы, отстающие в развитии от доминантных, претерпевают атрезию— останавливаются в развитии на разных стадиях и гибнут путем апоптоза [Боярский К.Ю., Гайдуков С.Н. Молекулярные основы фолликулогенеза: от стадии больших антральных фолликулов до овуляции // Проблемы репродукции - 2010 - 5 - стр. 13-22; Зенкина В.Г. Значение апоптоза в яичниках при развитии некоторых заболеваний репродуктивной системы// Фундаментальные исследования N26, 2011. с.227- 230; Березовкая Е.П. Гормонотерапия в акушерстве и гинекологии: иллюзии и реальность// 2014]. Следовательно, чем больше фолликулов вступают на путь дифференцировки, тем больше их погибнет путем атрезии, при относительно неизменном количестве образующихся зрелых яйцеклеток. Таким образом, увеличение числа апоптических фолликулов в совокупности с общим снижением количества оставшихся ранних фолликулов, наблюдаемое на фоне применения предлагаемых препаратов, может отражать повышение интенсивности фолликулогенеза, связанное с увеличением количества фолликулов, вышедших из состояния покоя и приступивших к созреванию. В этой ситуации, реализация естественных процессов в организме, контролирующих количество образующихся зрелых яйцеклеток, функционирует как фактор их естественного отбора, и образования, впоследствии, наиболее здорового потомства.
Пример 2. Целью данного исследования была оценка влияния исследуемых препаратов на репродуктивную функцию мышей при их введении одному полу (самкам).
Исследования проводили на 60 самцах и 120 самках мышей линии
BALB/c LacY с исходной массой тела 20-25 г. Предлагаемые препараты в виде суспензии с водой, приготовленной ex tempore, вводили самкам мышей опытных групп ежедневно интрагастрально в течение 2-х недель в дозе 0,4 мг на кг массы тела. Самок разделили на 4 подгруппы: контрольную (п=30) и 3 опытные группы по 30 особей (п=90). Самкам опытных групп ежедневно в течение 2-х недель (3-4 эстральных циклов) внутрижелудочно вводили предлагаемые препараты, а самкам контрольной группы - β-циклодекстрин 0,4 мг на кг массы тела. Группа самцов, состоящая из 60 животных в течение 6 недель (2-3 цикла созревания сперматозоидов) получали соответствующее количество β-цикло декстрина. Исследуемые препараты вводили в 10 часов 1 раз в сутки. После введения изучаемых препаратов формировали следующие группы животных:
• Группа А: К 15 контрольным самцам были подсажены 30 контрольных самок (Контроль);
• Группа Б: К 15 контрольным самцам были подсажены 30 опытных самок
(Препарат 1);
• Группа В: К 15 контрольным самцам были подсажены 30 опытных самок
(Препарат 2);
• Группа Г: К 15 контрольным самцам были подсажены 30 опытных самок
(Препарат 3).
Во всех исследуемых группах самок в течение двух эстральных циклов просматривали вагинальные мазки, отмечали стадии проэкструс, экструс и диэкструс. Обнаружение в вагинальных мазках сперматозоидов считали первым днем наступления беременности. По истечению 10 суток из самок в каждой из четырех групп формировали по две подгруппы (А1 и А2, Б1 и Б2,
В1 и В2, Г1 и Г2). В каждой группе первые подгруппы самок (А1, Б1, В1 и
Г1) вскрывали на 20 день беременности, подсчитывали число плодов, резорбций, мест имплантаций в полости матки, желтых тел в яичниках. На основании полученных данных по нижеуказанным формулам рассчитывали показатели предимплантационной и постимплантационной гибели и индексов плодовитости и беременности. кол - во оплодотвор енных самок
Индекс плодовитое ти •100%
кол - во ссаженных самок кол - во беременныхеамок
Индекс беременности •100%
кол - во оплодотворенных самок число желтых тел - число мест имплангаци и
Предимплан тационная гибель •100%
число желтых тел число мест имплантацш - число живыхплодов
Постимплангационная гибель •100% число мест имплантацш
При осмотре плодов регистрировали патологические изменения (подкожные кровоизлияния и отек подкожной клетчатки, нарушения развития скелета, глазных яблок).
Вторые подгруппы беременных самок оставляли на роды, фиксировали дату родов, количество мышат в помете, массу тела новорожденных мышат. На 21 день со дня родов вычисляли процент выживаемости, отмечали общий и средний вес мышат, оценивали показатель постнатальной смертности. число мышей в помете через 3 недели
Постнатальная смертность •100%
число новорожденных в помете
Для статистической обработки данных использовали стандартные методы, приведённые в руководстве В.Ю. Урбаха «Биометрические методы» и пакетах программ Excel 2003 и SigmaStat 3.0.
Результаты исследований влияния предлагаемых препаратов на плодовитость мышей линии BALB/c LacY свидетельствуют о том, что эти животные в контроле имеют низкую плодовитость и только у 50 % оплодотворённых самок наступает беременность (табл.4, гр. А). Повышение индекса беременности до 67,9 % наблюдалось в группах, в которых самки принимали исследуемые препараты (группы Б, В и Г).
Таблица 4 - Влияние изучаемых препаратов на показатели плодовитости мышей-самок линии BALB/c LacY
Исследуемые показатели Группы мышей-самок А Б В Г
Число ссаженных самок в группе 30 30 30 30
Число оплодотворенных самок в 24 25 26 28 группе
Индекс плодовитости, % 80 83 87 93
Число беременных самок в группе 12 15 16 19
Индекс беременности, % 50,0 60,0 61,5 67,9
В таблице 5 приведены данные, полученные при анализе вскрытых на 20-й день беременности самок, по следующим показателям репродуктивной функции: количество желтых тел, мест имплантации и живых плодов. Эти данные позволяют рассчитать по приведенным выше формулам предимплантационную и постимплантационную типы гибели зародышей мышей контрольной и опытных групп.
Полученные результаты (табл. 5) показали, что введение предлагаемых препаратов самкам (группы Б1, В1 и Г1) снижает предимплантационную и постимплантационную гибель зародышей.
Таблица 5 - Влияние предлагаемых препаратов на репродуктивную функцию мышей-самок линии BALB/c LacY, вскрытых на 20-й день беременности
Figure imgf000019_0001
Приведенные в таблице 6 данные свидетельствуют о том, что введение мышам-самкам предлагаемых препаратов увеличивает по сравнению с контролем число и процент рожающих самок (табл. 6, группы Б2, В2 и Г2). Увеличение числа рожающих самок соответствует увеличению числа пометов, что повышает общую численность мышат в анализируемых группах. Исследование постнатального развития родившегося потомства мышей линии BALB/c LacY показало, что введение самкам (табл. 7, группы Б2, В2 и Г2) предлагаемых препаратов увеличивает по сравнению с контролем общее число новорожденных мышат, из которых от 85,2 % до 90,0 % доживают до 3-х недельного возраста.
Таблица 6 - Влияние предлагаемых препаратов на показатели родовой активности мышей-самок линии BALB/c LacY
Figure imgf000020_0001
Таблица 7 - Влияние предлагаемых препаратов на показатели постнатального развития мышат линии BALB/c LacY
Figure imgf000020_0002
Отличия от группы контроля достоверны по t-критерию, р<0,05 Также была проведена оценка изменения массы тела новорожденных мышат, родившихся от самок, которым вводили предлагаемые препараты. Полученные результаты показали, что по росту и развитию новорожденные мышата, рожденные от самок опытных групп (табл. 7, группы Б2, В2 и Г2) достоверно опережали своих сверстников из контроля (табл. 7, группа А2).
Проведённые нами исследования показали, что у мышей линии BALB/c LacY имеются некоторые нарушения репродуктивной функции, связанные с деторождением беременных самок и рождением жизнеспособного потомства.
Для повышения репродуктивной способности женских особей предлагаются препараты, представляющие собой 9-фенил-симм- октагидроселено-ксантен, его смесь и клатратный комплекс с β- цикло декстрином, которые обеспечивают стимулирование детородной функции, плодовитости самок и жизнеспособности рождённого потомства.
Следует отметить, что в Примерах 1 и 2 Препарат 2, представляющий смесь соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен с β- циклодекстрином исследовался в соотношении 2 мг к 188 мг β- цикло декстрина, соответственно. При этом соотношении 9-фенил-симм- октагидроселено-ксантена с β-циклодекстрином отмечено стимулирование детородной функции, плодовитости самок и жизнеспособности рождённого потомства. Аналогичные результаты были получены при введении мышам- самкам Препарата 2 в других предложенных соотношениях.
Применение предлагаемых препаратов в дозе 0,4 мг/кг ежедневно в течение 4 недель, у самок мышей линии BALB/c LacY, приводит к увеличению количества апоптических фолликулов (атрезию) в совокупности с уменьшением остаточного количества ранних фолликулов. Полученные результаты Примера 1 согласуются с результатами, приведенными в
Примере 2, об общем положительном влиянии предлагаемых препаратов на репродуктивные показатели самок и качество полученного потомства, и свидетельствуют о более высокой интенсивности фолликулогенеза у животных, получающих изучаемые вещества. При этом предлагаемые препараты не нарушают естественные процессы в организме, контролирующие количество образующихся зрелых яйцеклеток. В данной ситуации, при большем числе фолликулов, вступивших на путь дифференцировки, большее их количество претерпевают атрезию при относительно неизменном числе образующихся зрелых яйцеклеток. Этот комплекс естественных физиологических процессов предполагает, что в оогенезе образуется пул жизнеспособных яйцеклеток, при оплодотворении которых формируется здоровое потомство.
Таким образом, проведенные исследования позволяют сделать вывод о том, что предлагаемые препараты оказывают положительное влияние на репродуктивную функцию женских особей, в значительной мере связанное со стимулированием у них фолликулогенеза.
Предлагаемые препараты расширяют арсенал средств, предназначенных в гинекологии для лечения женского бесплодия за счет негормонального стимулирования фолликулогенеза.
Примеры твердых лекарственных форм включают, например, таблетки, пилюли, желатиновые капсулы и др.
Примеры жидких лекарственных форм для инъекций и парентерального введения включают растворы, эмульсии, суспензии и др. Композиции, как правило, получают с помощью стандартных процедур, предусматривающих смешение активного соединения с жидким или тонко измельченным твердым носителем.
Композиции согласно изобретению в форме таблеток содержат от 5 до
30 % активного соединения и наполнитель(и) или носитель(и). В качестве таковых для таблеток применяются: а) разбавители: свекловичный сахар, лактоза, глюкоза, натрия хлорид, сорбит, маннит, гликоль, фосфат кальция двузамещенный; б) связующие вещества: магниевый силикат алюминия, крахмальная паста, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза и поливинил пиррол и дон; в) разрыхлители: декстроза, агар, альгиновая кислота или ее соли, крахмал, твин. ПРИМЕР 1.
100 мг таблетки, содержащие по 2 мг 9-фенил-симм-октагидроселено- ксантена
9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен 2 мг
Лактоза 53,0 мг
Альгиновая кислота 20,0 мг
Лимонная кислота 5,0 мг
Трагакант 20,0 мг
Таблетка может быть сформирована посредством прессовки или формовки активного ингредиента с одним или более дополнительными ингредиентами. Получение прессованных таблеток осуществляется на специальной установке. Активный ингредиент в свободной форме, такой, как порошок или гранулы, в количестве 20 г (количество вещества, необходимое для получения 10000 таблеток) перемешивается со связующим веществом - трагакантом (200 г), смешивается с разбавителем - лактозой (530 г), в смесь добавляется разрыхляющее вещество - альгиновая кислота (200 г) и отдушка - лимонная кислота (50 г).
Для желатиновых капсул обычно используются дополнительно красители и стабилизаторы. В качестве красителей применяются: тетразин, индиго; в качестве стабилизаторов могут быть представлены: натрия метабисульфит, натрия бензоат. Предлагаемые желатиновые капсулы содержат от 1 до 20 % активного ингредиента.
ПРИМЕР.
1 капсула 5 мг содержит:
Активное вещество:
9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен - 5 мг в пересчете на безводное вещество
Вспомогательные вещества:
Бетадекс (β-цикло декстрин) до массы содержимого 190 мг
Капсулы твердые желатиновые:
Желатин Титана диоксид (Е171)
Активный ингредиент в свободной форме, такой, как порошок или гранулы, в количестве 50 г (количество вещества, необходимое для получения 10000 таблеток) перемешивается с веществом бетадекс (1850 г).
Инъекционные формы композиции предпочтительно представляют собой изотонические и масляные растворы, суспензии. Вышеуказанные формы могут стерилизоваться и содержать добавки, такие как консерванты: натрия метабисульфит, бензойная кислота, натрия бензоат, смесь метилпарабена и пропилпарабена; стабилизаторы: абрикосовая и аравийская камедь, декстрин, крахмальный клейстер, метилцеллюлоза, твин; соли, регулирующие осмотическое давление (хлорид натрия), или буферы. Кроме того, они могут содержать другие терапевтически полезные вещества. ПРИМЕР.
2 мл ампулы, содержащие по 1 мг 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен 1 ,0 мг
Соевое масло гидрированное 2 мл
Для приготовления инъекционных форм активное соединения (1 г; количество, необходимое для изготовления 1000 ампул) тонко измельчают и смешивают в смесителе с соевым маслом гидрированным (2000 мл). Полученный раствор фасуют в ампулы по 2 мл и стерилизуют паром в течение 30 мин.
Назначаемая для приема доза активного компонента (9-фенил-симм- октагидроселено-ксантена формулы 1 или его смеси с β-циклодекстрином или клатратного комплекса с β-циклодекстрином) варьирует в зависимости от многих факторов, таких как возраст, пол, масса тела пациента, симптомы и тяжесть заболевания, конкретно назначаемое соединение, способ приема, форма препарата, в виде которой назначается активное соединение. Обычно, общая назначаемая доза составляет от 0,5 до 20 мг в день. Общая доза может быть разделена на несколько доз, например, для приема от 1 до 4 раз в день. При оральном назначении интервал общих доз активного вещества составляет от 0,5 до 20 мг в день, предпочтительно, от 1 до 10 мг. При парентеральном приеме интервал назначаемых доз составляет от 0,1 до 5 мг в день, предпочтительно, от 0,5 до 2 мг. Эффективная терапевтическая доза препарата может быть выбрана лечащим врачом.

Claims

Формула изобретения
1. Применение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена в качестве средства для лечения женского бесплодия, стимулирующего фолликулогенез и способствующего имплантации эмбрионов в эндометрий матки.
2. Лекарственный препарат для лечения женского бесплодия, отличающийся тем, что в качестве активного компонента содержит 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в эффективном количестве.
3. Лекарственный препарат по п.2, отличающийся тем, что дополнительно содержит β-цикло декстрин в соотношениях от 1 : 1 - до 1 : 10.
4. Лекарственный препарат по п.2, отличающийся тем, что активный компонент 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен представлен в виде клатратного комплекса с β-цикло декстрином.
5. Фармацевтическая композиция для лечения женского бесплодия, отличающаяся тем, что в качестве активного компонента содержит 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен.
6. Фармацевтическая композиция по п.5, отличающаяся тем, что содержит 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в виде клатратного комплекса с β-цикло декстрином.
7. Фармацевтическая композиция по п.5 или 6, отличающаяся тем, что применяется в форме таблеток.
8. Фармацевтическая композиция по п.7, отличающаяся тем, что содержит:
- 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен от 5 до 30% ;
- один или более наполнитель(и) или носитель(и) остальное.
9. Фармацевтическая композиция по п.8, отличающаяся тем, что таблетка сформирована посредством прессовки или формовки 9- фенил-симм-октагидроселено-ксантена с одним или более дополнительными ингредиентами.
10. Фармацевтическая композиция по п.5 или 6, отличающаяся тем, что она применяется в форме желатиновых капсул.
11. Фармацевтическая композиция по п.10, отличающаяся тем, что содержит:
- 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен от 1 до 20%;
- наполнитель(и) или носитель(и) остальное.
12. Фармацевтическая композиция по п.5 или 6, отличающаяся тем, что выполнена в виде растворов, эмульсий, суспензий и др.
13. Фармацевтическая композиция по п.12, отличающаяся тем, что содержит:
- 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен от 0,25 до 2% ;
- наполнитель(и) или носитель(и) остальное.
PCT/RU2018/050068 2017-06-28 2018-06-27 Средство для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных Ceased WO2019004877A1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EA202090163A EA202090163A1 (ru) 2017-06-28 2018-06-27 Средство для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017122775A RU2740922C2 (ru) 2017-06-28 2017-06-28 Средство для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных
RU2017122775 2017-06-28

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2019004877A1 true WO2019004877A1 (ru) 2019-01-03

Family

ID=64741812

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2018/050068 Ceased WO2019004877A1 (ru) 2017-06-28 2018-06-27 Средство для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных

Country Status (3)

Country Link
EA (1) EA202090163A1 (ru)
RU (1) RU2740922C2 (ru)
WO (1) WO2019004877A1 (ru)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2281007C2 (ru) * 2004-12-06 2006-08-10 Геннадий Иванович Боряев Способ получения биологически активного вещества - селенопирана, селенопиран и продукты, его содержащие
RU2317074C1 (ru) * 2006-03-16 2008-02-20 Общество с ограниченной ответственностью "МБФ" Ингибитор дифференцировки кроветворных клеток-предшественников
RU2414215C1 (ru) * 2009-09-24 2011-03-20 Общество С Ограниченной Ответственностью "Научно-Производственная Компания "Медбиофарм" Средство для улучшения и/или восстановления репродуктивной функции
RU2451680C1 (ru) * 2011-02-21 2012-05-27 Общество С Ограниченной Ответственностью "Научно-Исследовательская Компания "Медбиофарм" Клатратный комплекс циклодекстрина или арабиногалактана с 9-фенил-симм-октагидроселеноксантеном, способ его получения (варианты), фармацевтическая композиция и лекарственное средство

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2212888C2 (ru) * 2001-10-26 2003-09-27 Галочкин Владимир Анатольевич Способ нормализации воспроизводительной функции коров
RU2487705C1 (ru) * 2012-03-21 2013-07-20 ОКТАПАМ Лимитед Средство для улучшения репродуктивной функции

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2281007C2 (ru) * 2004-12-06 2006-08-10 Геннадий Иванович Боряев Способ получения биологически активного вещества - селенопирана, селенопиран и продукты, его содержащие
RU2317074C1 (ru) * 2006-03-16 2008-02-20 Общество с ограниченной ответственностью "МБФ" Ингибитор дифференцировки кроветворных клеток-предшественников
RU2414215C1 (ru) * 2009-09-24 2011-03-20 Общество С Ограниченной Ответственностью "Научно-Производственная Компания "Медбиофарм" Средство для улучшения и/или восстановления репродуктивной функции
RU2451680C1 (ru) * 2011-02-21 2012-05-27 Общество С Ограниченной Ответственностью "Научно-Исследовательская Компания "Медбиофарм" Клатратный комплекс циклодекстрина или арабиногалактана с 9-фенил-симм-октагидроселеноксантеном, способ его получения (варианты), фармацевтическая композиция и лекарственное средство

Also Published As

Publication number Publication date
RU2017122775A3 (ru) 2020-09-15
RU2017122775A (ru) 2018-12-29
EA202090163A1 (ru) 2020-08-17
RU2740922C2 (ru) 2021-01-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Mattawanon et al. Fertility preservation options in transgender people: a review
US20230158044A1 (en) Monolithic intravaginal rings comprising progesterone and methods of making and uses thereof
Jones et al. Human reproductive biology
JP2021054863A (ja) 生殖補助医療を受けている女性における着床及び妊娠のための黄体期のオキシトシン受容体アンタゴニスト療法
Sohn et al. Administration of progesterone before oocyte retrieval negatively affects the implantation rate
NO340956B1 (no) Anvendelse av antagonister for oksytocin og/eller vasopressin
CN111655245B (zh) 提高患有多囊卵巢综合征的雌性受试者的胚胎着床率的方法
RU2740922C2 (ru) Средство для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных
Fukuda et al. Administering human chorionic gonadotropin injections for triggering follicle maturation could impact fertility during the subsequent menstrual cycle
Mustafa et al. Physiological and hormonal study of women infertility
EA044244B1 (ru) Средство для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных
KR102821987B1 (ko) 베타 코어 단편 hCG를 유효성분으로 포함하는 난임 치료용 조성물
Hapangama Hormonal control of the menstrual cycle and hormonal disorders
Aslam et al. Spontaneous pregnancies in patients with resistant ovary syndrome while on HRT
Bondare et al. Managing Primary Infertility in a Woman With Uterine Fibroids Utilizing Myomectomy and In Vitro Maturation (IVM) of Oocytes
Tursunova THE INFLUENCE OF HORMONE REPLACEMENT THERAPY IN PREPARATION FOR EMBRYO TRANSFER IN ASSISTED REPRODUCTIVE TECHNOLOGIES
Duey Sex hormone relationship between the pituitary and ovary with clinical classification and therapy
Kelley Problems of Genital Infantilism: Investigation and Treatment
Klapholz MALE SYSTEM ANATOMY
Vural et al. The experimental premature ovarian insufficiency model of Fisher F344 rats: What is the dose and time of cyclophosphamide to decrease AMH levels and folliculogenesis?
BELLER hypothalamic Gn-RH release by decreasing the frequency of Gn-RH pulses. Consequently, gonadotropin pulses are released less frequently
Turek THE HYPOTHALAMIC–PITUITARY–GONADAL AXIS
Musa et al. Primary infertility due to retrograde ejaculation: Case series
Rachna FEMALE INFERTILITY AND ITS CAUSES
REAME THE EFFECTS OF D-NORGESTREL ON REPRODUCTIVE FUNCTION IN THE RHESUS MONKEY.

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 18822977

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

32PN Ep: public notification in the ep bulletin as address of the adressee cannot be established

Free format text: NOTING OF LOSS OF RIGHTS PURSUANT TO RULE 112(1) EPC (EPO FORM 1205A DATED 06/05/2020)

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 18822977

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1