[go: up one dir, main page]

WO2018186770A1 - Специфические пептидные ингибиторы клатрина - Google Patents

Специфические пептидные ингибиторы клатрина Download PDF

Info

Publication number
WO2018186770A1
WO2018186770A1 PCT/RU2018/000121 RU2018000121W WO2018186770A1 WO 2018186770 A1 WO2018186770 A1 WO 2018186770A1 RU 2018000121 W RU2018000121 W RU 2018000121W WO 2018186770 A1 WO2018186770 A1 WO 2018186770A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
aridor
hannan
clathrin
ala
syndrome
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/RU2018/000121
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2018186770A8 (ru
Inventor
Олег Аркадьевич КОТИН
Аркадий Михайлович КОТИН
Максим Олегович ЕМЕЛЬЯНОВ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CA3058388A priority Critical patent/CA3058388A1/en
Priority to EP18781670.7A priority patent/EP3741382A4/en
Priority to US16/500,592 priority patent/US20220088113A1/en
Priority to CN201880023947.0A priority patent/CN110869043A/zh
Priority to JP2019554629A priority patent/JP2020512996A/ja
Publication of WO2018186770A1 publication Critical patent/WO2018186770A1/ru
Anticipated expiration legal-status Critical
Publication of WO2018186770A8 publication Critical patent/WO2018186770A8/ru
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention relates to biochemistry, and more particularly, to biologically active peptides that are specific clathrin inhibitors and can be used in medicine and pharmacology as drugs for the prevention or treatment of various diseases and physiological conditions that are sensitive to clathrin inhibition or for which clathrin inhibition is necessary.
  • clathrin means an intracellular protein, which is the main component of the membrane of fringed vesicles formed during receptor-mediated endocytosis [McMahon, Boucrot, 2011].
  • clathrin consists of three heavy chains (-190 kDa), each of which is closely related to the light chain ( ⁇ 25 kDa). Heavy chains are encoded by two genes: on chromosome 17 (C 17 heavy chain) and on chromosome 22 (C22 heavy chain). The latter is mainly present in the muscles, while C17 is present in the clathrin of all cells.
  • clathrin forms a closed three-dimensional network resembling a sphere, with the size of clathrin vesicles about 100 nm. After the formation of the vesicle and the separation of the vesicle from the membrane (under the action of GTPase dynamin), the clathrin membrane rapidly dissociates and clathrin can be reused for endocytosis and exocytosis.
  • the process is stimulated as a result of the interaction of the ligand with a specific receptor [McMahon, Boucrot, 2011]. It is fundamentally important that turning off the activity of the clathrin heavy chain entails a loss of activity of the whole clathrin complex [Haarter, Harrison, Kirchhausen, 2000].
  • clathrin endocytosis not only receptors, but also other metabolites enter the cell: hormones, neurotransmitters, and all kinds of proteins [Most et al., 2003].
  • various pathogenic agents such as viruses, toxins and symbiotic microorganisms, enter the cell.
  • botulism neurotoxins and tetanus neurotoxin are bacterial proteins that cause two serious diseases: tetanus and botulism. Their effect depends on the internalization of neurotoxins through endocytosis into the nerve endings [Pellett et al., 2015].
  • the clathrin inhibitor is also known as the Thr-Pro-Val-Leu-Glu-Thr-Pro-Lys-Leu-Leu-Leu-Trp peptide (JP2009250552A).
  • the proposed 12-membered sequence is not an inhibitor of direct action, but initially inhibits the binding to clathrin of the GRP78 protein, which has inherent functions not related to clathrin. Therefore, the lack of specificity is also a disadvantage of this compound.
  • the proposed sequence consists exclusively of natural L-amino acids and, therefore, is sensitive to endopeptidases, which limits the possibility of its use in vivo.
  • the problem to which the invention is directed is to expand the range of effective agents that are specific clathrin inhibitors that do not have side effects and are obtained by simple synthesis.
  • XDL1 is one of the amino acids: L-Leu, L-Ala or D-Ala,
  • XDL2 is one of the amino acids: L-His, D-His, L-Ala or D-Ala,
  • R2 - OMe or KH 2 or a peptide, a retroinversion of formula (I) having the reverse sequence of amino acids, replacing the L-form of amino acids with the D-form and the D-form of amino acids with the L-form, general formula (II) [SEQ ID NO: 2]
  • XDL4 is one of the amino acids: D-Gln, D-Ala or L-Ala;
  • XDL5 - one of the amino acids: D-His, L-His, D-Ala or L-Ala,
  • Aceruloplasminemia Aceruloplasminemia [Aridor, Hannan, 20021
  • HIV virus
  • Acute lymphoblastic leukemia or acute leukemia or acute leukemia Acute lymphoblastic leukemia or acute leukemia or acute leukemia
  • Acute myeloid leukemia Acute myeloid leukemia [Aridor, Hannan, 2000]
  • kidney disease Polycystic kidney disease [Aridor, Hannan, 2000]
  • Alzheimer disease Alzheimer's disease [Aridor, Hannan, 20001
  • Amyotrophic lateral sclerosis sclerosis Anderson disease Anderson's disease [Aridor, Hannan, 2002]
  • Anthrax (Anthrax toxin from Bacillus [WO Patent Application
  • Botulism Botulism [Pellett et al., 2015]
  • Bovine respiratory disease eukotoxin Respiratory disease [Patent WO (LKT) from Mannheimia haemolytica) of cattle 2011088431 Al]
  • Carcinomas / haemangio-endotheliomas Carcinomas /
  • Cardiomyopathy Cardiomyopathy [Aridor, Hannan, 2002]
  • CDG-la Concordital Disorder of birth Defect
  • CDG-lb (Congenital Disorder of birth Defect
  • CDG-lc (Congenital Disorder of birth Defect
  • CDG-ld Concordital Disorder of birth Defect
  • CDG-le (Congenital Disorder of birth Defect
  • CDG-2a (Congenital Disorder of birth Defect
  • CDG-2b (Congenital Disorder of birth Defect
  • CDG-2c (Congenital Disorder of Type 2c Glycosylation
  • leukocyte Aridor, Hannan, 2002] failure II
  • CDG-2d (Congenital Disorder of birth Defect
  • Chlamydia Chlamydia psittaci and [WO Patent
  • Echovirus disease Echo virus (EV1) [WO Patent Application
  • Ehlers-Danlos syndrome Ehlers-Danlos syndrome [Aridor, Hannan, 2002]
  • Equine infectious anemia Equine Infectious Anemia [Patent WO infectious anemia virus (EIAV)) horses 2011088431 All
  • Familial chylomicronemia Familial chylomicronemia [Aridor, Hannan, 2000] Family
  • Feline infectious peritonitis Feline infectious peritonitis (Feline Infectious peritonitis [Patent WO infectious peritonitis virus (FIPV)) of cats 2011088431 All
  • Parkinsonism dementia with parkinsonism [Aridor, Hannan, 2000]
  • Hepatitis B Hepatitis B virus (HBV)
  • HBV Hepatitis B virus
  • Hepatitis C Hepatitis C virus (HCV)
  • HCV Hepatitis C virus
  • Hereditary pancreatitis Hereditary pancreatitis [Aridor, Hannan, 2000]
  • Hereditary spherocytosis Hereditary spherocytosis [Aridor, Hannan, 2002]
  • Hermansky-Pudlak syndrome type 2 type II [Aridor, Hannan, 2000]
  • Herpes simplex Herpes Simplex virus
  • Herpes simplex 2011088431 Al Herpes simplex 2011088431 Al
  • Microvillus inclusion disease of microvilli [Aridor, Hannan, 2000]
  • deafness dystonia syndrome (deafness-dystonia syndrome) [Aridor, Hannan, 2000]
  • hypoglycemia of infancy hypoglycemia of infants hypoglycemia of infants
  • Poliomyelitis Poliomyelitis (Poliovirus) Poliomyelitis 2011088431 Al]
  • Polyneuropathy pigmented retinitis, polyarthritis,
  • Wegner's granulomatosis Wegener granulomatosis
  • Rhizomelic chondrodysplasia punctata chondro dysplasia [Aridor, Hannan, 2000]
  • Semliki forest virus disease Semliki Forest viral disease [WO Patent Application
  • Sphingolipidoses Sphingolipidoses, gangliosidosis, gangliosidosis, disease
  • Tay-Sachs Tay-Sachs Disease [Aridor, Hannan, 2000]
  • Thyroxine binding globulin deficiency globulin deficiency [Aridor, Hannan, 2000]
  • Tuberous sclerosis Tuberous sclerosis Tuberous sclerosis [Aridor, Hannan, 2000]
  • VSV stomatitis virus
  • clathrin inhibitor means a compound that interacts with clathrin and at least partially inhibits the functional activity of clathrin in clathrin-mediated endocytosis (CME), which can be expressed by a decrease in CME and / or CME levels in the cells.
  • CME clathrin-mediated endocytosis
  • Clathrin-mediated endocytosis (CME) is important not only for the transfer of metabolites into the cell, but also in cell signaling, and inhibition of the function of clathrin is useful in the prevention or treatment of various diseases and conditions.
  • a list of diseases in which inhibition of clathrin function has a key role has been published previously in [Aridor, Hannan, 2002; Aridor, Hannan, 2000], the contents of which are incorporated into this description by reference in their entirety.
  • clathrin function inhibitors can be used in many diseases of the central nervous system, including: Alzheimer's disease [Harold et al., 2009], Parkinson's disease [Edvardson et al., 2012], epilepsy [Casillas-Espinosa, Powell, O 'Brien, 2012].
  • An example of a new antiepileptic agent acting by the mechanism of inhibition of the processes associated with clathrin is levetiracetam (Keppra TM) [Nowack et al., 2011].
  • Inhibition of clathrin-mediated endocytosis by blocking clathrin reduces synaptic transmission, reducing the availability of synaptic vesicles, which can be used to prevent or treat pain.
  • anticonvulsants such as phenytoin and gabapentin
  • These drugs act by altering the transmission process of synaptic vesicles, that is, inhibition of CMEs by blocking clathrin can stop or limit the transmission of pain signals and thereby reduce or improve pain sensation.
  • clathrin inhibitors are not only useful molecular tools to unravel the role of clathrin in the mitotic cycle, but, at least in some cases, can be used as antimitotic compounds for the treatment of cancer and cell proliferative pathologies.
  • CME clathrin-mediated endocytosis
  • inhibition of CME in accordance with one or more embodiments of the invention is important for the development of agents that prevent the penetration of cells, including the brain, a number of pathogenic viruses, as well as all kinds of toxins, including peptide ones that penetrate the cell by endocytosis.
  • viruses and toxins include (but are not limited to): diphtheria, leukotoxin (LKT), chlamydia, anthrax toxin, Staphylococcus aureus, candidiasis, periodontitis, adenovirus, African swine fever virus, dengue fever, Zairian ebolavirus (hemorrhagic fever Ebola), hepatitis B virus, hepatitis C virus, associated with Kaposi’s sarcoma herpes virus, human immunodeficiency virus (HIV), influenza virus and others.
  • LKT leukotoxin
  • chlamydia anthrax toxin
  • Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus
  • candidiasis periodontitis
  • adenovirus African swine fever virus
  • dengue fever dengue fever
  • Zairian ebolavirus hepatitis B virus
  • hepatitis C virus associated with
  • the mechanism of action of the most active compounds aimed at preventing infection with the Ebola virus is associated with blocking the adhesion of viruses on the cell surface, or with the suppression of their endocytosis in the cell [Anantpadma et al., 2016; Aleksandrowicz et al., 2011; Piccini, Castilla, Damonte, 2015].
  • examples of specific diseases and conditions for which the present invention finds use for prophylaxis or treatment include, but are not limited to, cell proliferative diseases and conditions, multifocal leukoencephalopathy, polycystic kidney disease, diseases associated with ⁇ -amyloid (such like Alzheimer's disease), neurodegenerative disorders, neuropsychiatric disorders, psychotic disorders, psychoses, bipolar disorders, schizophrenia, aberrant unregulated excitation of neurons, convulsions, neuropathic pain, migraine, as well as all diseases and conditions mediated or otherwise associated with the transmission of a synaptic signal involving CME processes (such as epilepsy) or with impaired recycling of cellular vesicles.
  • inhibition of CMEs in accordance with one or more embodiments of the invention may also be useful in preventing penetration. a number of pathogenic agents in the cells and, thus, be useful in the prevention or treatment of diseases or conditions associated with it.
  • Fig. 1 - peptide chromatogram (six-membered sequence);
  • Fig. 4 multicolor protein profile for determining approximate masses during gel electrophoresis (Thermo Fisher Scientific) (taken from the official website of Thermo Fisher Scientific) / [Electronic resource]. - Access mode: URL: https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/26634, accessed date: 03/17/2017).
  • Peptides were synthesized by peptide chemistry, solid phase method using L and D amino acids.
  • Example 1 The synthesis of the peptide L-Leu-D-His-L-Lys-L-Leu-L-Gln-L-Thr-NH 2 (Peptide N ° 7 SEQ ID ⁇ : 1).
  • the peptide L-Leu-D-His-L-Lys-L-Leu-L-Gln-L-Thr-NH 2 was obtained by the method of automatic solid-phase synthesis according to the Fmoc scheme on Rink polymer (Rink Amide Resin, 0.6 mmol amino groups per gram of polymer) using the DCC / HOBt (M, K'-dicyclohexylcarbodiimide / 1-hydroxybenzotriazole) amino acid activation method. Release was carried out by treatment with a solution of piperidine / DMF (piperidine / M-dimethylformamide) (1: 4) for 7 minutes.
  • piperidine / DMF piperidine / M-dimethylformamide
  • Peptides were characterized using a mass spectrometer. The purity of the peptide was also checked by HPLC, column Waters DeltaPak CI 8 3.9 * 150mm 5u 100A; solution A: 0.1% TFA in 100% water / MeCN; flow rate - 1ml / min; the detection wavelength is 230 nm (Fig. 1).
  • Example 2 Verification of the activity of synthesized peptides as specific clathrin inhibitors.
  • the experiment is based on the method of affinity chromatography, where a peptide molecule attached to a special matrix acts as a stationary phase. An extract of the brain of the rat acts as a mobile phase. Protein fraction specifically bound to the peptide molecule, it is subsequently subjected to fractionation by electrophoresis and direct detection of individual protein molecules.
  • the affinity sorbent was prepared as follows: the bromine activated sepharose 4B (Sigma-Aldrich) dissolved in 1 mM hydrochloric acid (HC1) was the matrix for the sorbent.
  • HC1 hydrochloric acid
  • the task of the “spacer” is to spatially separate the carrier (sepharose) and the peptide molecule itself in order to create conditions for the interaction of the studied peptide and the proteins of the brain extract. Such use of the “spacer” is quite common in affinity sorption.
  • spacers The nature of the "spacers” is very diverse [Day, Hashim, 1984; Lowe, 1977; Martinez-Ceron et al., 2012]. A spacer consisting of two amino acid residues (Asp-Asp) was used. The dipeptide was introduced in phosphate buffer (pH 7.8–8.0).
  • the studied peptide was dissolved in bidistilled water and added to the affinity sorbent under strict pH control; 5 mg of the peptide per 1 ml of sorbent was taken. "Crosslinking" was carried out at a temperature of 4 ° C for 12 hours. At the end of the crosslinking process, the unbound product was thoroughly washed with repeated washing with acetate buffer with a pH of 5.0 and bicarbonate buffer with a pH of 9.0.
  • mice were taken — Wistar rats, males, weighing about 300 g. The animals were decapitated, and the cerebral cortex was isolated in the cold. The resulting samples were placed in liquid nitrogen, where they were ground to a state of fine powder. The sample was then transferred to 10 mM TRIS buffer pH 7.6 with 0.3 M sucrose (Helicon), 1 mM CaCl 2 (Sigma-Aldrich) and Humm MgCl 2 (Sigma-Aldrich). Next, the resulting homogenate was centrifuged in the cold at 15,000 rpm for 20 minutes.
  • Affinity sorption was carried out for 24 hours at 4 ° C on a shaker with a supernatant obtained after centrifugation of preparations of the cerebral cortex.
  • Detection was carried out at a wavelength of 280 nm, a flow rate of 0.1 ml / min.
  • Figure 2 shows the presence of two peaks from 32 to 34 minutes, which indicate the presence of a protein fraction that specifically binds to the peptide molecule.
  • the protein fraction that specifically binds to the peptide molecule is subsequently subjected to fractionation by electrophoresis and directly detected individual protein molecules.
  • Electrophoresis was performed on a PAAG gel. Used concentrated fraction in quantities: 1, 5 and 10 ⁇ l. A Spectra marker (Spectra TM Multicolor Broad Range Protein Ladder) was applied. In Fig. 3, two major protein compounds are clearly visible, a marker is applied to the right, and the studied fraction in three concentrations to the left. Three strips corresponding to marker masses of 260, 50, and 10 kDa were cut for identification. To determine the masses, a control drawing from the manufacturer's manual was used (Fig. 4).
  • a Spectra marker Spectra TM Multicolor Broad Range Protein Ladder
  • the identification of phoresis spots was carried out using mass spectrometry. Chromatography-mass spectral analysis was performed on tryptic peptides isolated from cut pieces of gel with protein after tryptinization (treatment with trypsin enzyme). Then, chromatography-mass spectrometry of this solution of peptides was carried out, after which peptide sequences were identified by databases. After identification, the results were validated using the auto-vadilization procedure. Trypsin peptide sequences serve as a quality control. To verify the identification of spots of interest, a search is performed on the mammalian databases.
  • the present invention can also be used as a method for isolating the clathrin heavy chain.
  • the isolation method is substantially simpler than the generally accepted ones [Riddelle-Spencer, O'Halloran, 1997]. Therefore, the proposed method can find applications for preparative isolation of the clathrin heavy chain for molecular biological research and nanotechnology [Santos dos et al., 2011].
  • the technical result of the invention is the simplicity and cheapness of the synthesis of the proposed peptides, which are specific clathrin inhibitors, as well as their lack of unnecessary immunological activity and other side effects, which allows us to consider them as the basis for creating safe drugs that are specific clathrin inhibitors and obtained by simple synthesis.
  • JP20191093852A Clathrin-bonding peptide derivative / Kitahara H. et al. Publ. 05/12/2011.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности. Предложено применение синтетических пептидов в качестве специфических ингибиторов клатрина. Предложен также способ профилактики или лечения заболевания или состояния у животного, включающий введение эффективного количества пептидов или пролекарства или физиологически приемлемой соли или сольвата вышеназванных пептидов, или фармацевтической композиции, содержащей вышеназванные пептиды, как специфических ингибиторов клатрина. Пептиды могут найти применение в медицине, ветеринарии и фармакологии для создания новых лекарственных средств, являющихся специфическими ингибиторами клатрина.

Description

СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ПЕПТИДНЫЕ ИНГИБИТОРЫ КЛАТРИНА
Настоящее изобретение относится к биохимии, конкретнее, к биологически активным пептидам, которые являются специфическими ингибиторами клатрина и могут найти применение в медицине и фармакологии в качестве препаратов для профилактики или лечения различных заболеваний и физиологических состояний, чувствительных к ингибированию клатрина или для которых ингибирование клатрина необходимо.
Термин «клатрин», который используется в настоящем описании, означает внутриклеточный белок, который является основным компонентом оболочки окаймленных пузырьков, образующихся при рецептор-опосредованном эндоцитозе [McMahon, Boucrot, 2011]. В классическом варианте клатрин состоит из трех тяжелых цепей (—190 kDa), каждая из которых тесно связана с легкой цепью (~25 kDa). Тяжелые цепи кодируются двумя генами: на хромосоме 17 (тяжелая цепь С 17) и на хромосоме 22 (тяжелая цепь С22). Последняя представлена в основном в мышцах, тогда как С17 представлена в клатрине всех клеток. Однако, обе тяжелые цепи имеют высокую степень гомологии (95% совпадения аминокислотной последовательности) и функционально равнозначны [Hood, Royle, 2009]. В результате полимеризации клатрин формирует замкнутую трёхмерную сеть, напоминающую сферу, при размере клатриновых везикул около 100 нм. После образования везикулы и отрыва везикулы от мембраны (под действием ГТФазы динамина) клатриновая оболочка быстро диссоциирует и клатрин может повторно использоваться для эндоцитоза и экзоцитоза. Процесс стимулируется в результате взаимодействия лиганда со специфическим рецептором [McMahon, Boucrot, 2011]. Принципиально важно, что выключение активности тяжелой цепи клатрина влечет за собой потерю активности целого клатринового комплекса [Haar ter, Harrison, Kirchhausen, 2000]. В результате клатринового эндоцитоза в клетку попадают не только рецепторы, но и другие метаболиты: гормоны, нейромедиаторы, всевозможные белки [Most и др., 2003]. Также в результате клатринового эндоцитоза в клетку попадают различные патогенные агенты, такие, как вирусы, токсины и симбиотические микроорганизмы. Например, нейротоксины ботулизма и нейротоксин столбняка являются бактериальными белками, которые вызывают два тяжелых заболевания: столбняк и ботулизм. Их действие зависит от интернализации нейротоксинов через эндоцитоз в нервные окончания [Pellett и др., 2015].
Известны различные препараты, которые являются ингибиторами клатрина. Все они обладают теми или иными недостатками, которые сужают возможности их применения в медицине.
В частности, известны синтетические препараты, имеющие в своей основе соединения, которые могут связываться с терминальным доменом клатрина по меньшей мере с одной или несколькими аминокислотами: lie 52, Ие 62, lie 80, Phe 91 и/или He 93, (WO2013010218A9; Robertson и др., 2014). Существенным недостатком этих соединений является отсутствие специфичности [Willox, Sahraoui, Royle, 2014].
Также известен ингибитор клатрина в виде пептида Thr-Pro-Val-Leu-Glu-Thr-Pro-Lys- Leu-Leu-Leu-Trp (JP2009250552A). Однако в этом случае предложенная 12-членная последовательность является ингибитором не прямого действия, а первоначально ингибирует связывание с клатрином белка GRP78, которому присущи функции, не связанные с клатрином. Поэтому недостатком этого соединения также является отсутствие специфичности. Кроме того, предложенная последовательность состоит исключительно из природных L-аминокислот и, следовательно, чувствительна к эндопептидазам, что ограничивает возможность ее использования in vivo.
С целью устранения отмеченных недостатков экспериментальным путем было установлено, что синтетические пептиды с ненаркотическим типом анальгетического действия, защищенные нами ранее патентами РФ 2508295, US 9260482 ( СТ WO/2013/141750, 2013), эффективные при различных способах введения (субокципитальном, внутримышечном, интраназальном и внутривенном) на различных моделях тонической и острой боли, являются специфическими ингибиторами клатрина.
Ранее нами было показано, что разработанные пептидные последовательности не влияют на кальциевый обмен по тесту связывания с тетрациклином, не обладают иммунным действием, не образуют фибриллы в растворе, устойчивы при хранении, и являются дешевыми в изготовлении и использовании (патент РФ 2508295).
Задача, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, состоит в расширении ассортимента эффективных средств, являющихся специфическими ингибиторами клатрина, не имеющих побочных эффектов и получаемых простым синтезом.
Поставленная задача решается тем, что
Для достижения поставленного результата предлагается применение синтетического пептида общей формулы (I) [SEQ ID ΝΟ:1]
XDL - XDL1 - XDL2 - L-Lys - L-Leu - XDL3 - L-Thr - R2 (I) ,
где: XDL - отсутствие аминокислоты или L-Туг,
XDL1 - одна из аминокислот: L-Leu, L-Ala или D-Ala,
XDL2 - одна из аминокислот: L-His, D-His , L-Ala или D-Ala,
XDL3 - одна из аминокислот: L-Gln , L-Ala или D-Ala;
R2 - ОМе или КН2, или пептида - ретроинверсии формулы (I), имеющего обратную последовательность аминокислот с заменой L-формы аминокислот на D-форму и D-формы аминокислот на L- форму, общей формулы (II) [SEQ ID NO:2]
D-Thr - XDL4- D-Leu - D-Lys - XDL5 - XDL6 - XDL7 - R2 (II),
где: XDL4 - одна из аминокислот: D-Gln, D-Ala или L-Ala;
XDL5 - одна из аминокислот: D-His, L-His, D-Ala или L-Ala,
XDL6 - одна из аминокислот: D-Leu, D-Ala или L-Ala,
XDL7 - отсутствие аминокислоты или D-Tyr,
R2 - ОМе или ИН2,
в качестве специфического ингибитора клатрина.
Предлагается также способ профилактики или лечения заболевания или состояния у животного, включающий введение эффективного количества синтетических пептидов общей формулы (I) [SEQ ID ΝΟ:1] или общей формулы (И) [SEQ ID NO:2] или пролекарства или физиологически приемлемой соли или сольвата вышеназванных пептидов, или фармацевтической композиции, содержащей вышеназванные пептиды, как специфических ингибиторов клатрина.
Перечень заболеваний, при которых ингибирование функции клатрина имеет ключевую роль, представлен в нижеследующей таблице 1.
Таблица 1
Английское наименование Русское наименование
заболевания заболевания Ссылка
Abeta-lipoproteinema Абеталипопротеинемия [Aridor, Hannan, 2000]
Aceruloplasminemia Ацерулоплазминемия [Aridor, Hannan, 20021
Acquired-immunodeficiency syndrome
(AIDS) (Human immunodeficiency Синдром приобретенного [Патент WO
virus (HIV)) иммунодефицита 2011088431 Al]
Острый лимфобластный
Acute lymphoblastic leukemia or acute лейкоз или острый
myeloid leukemia миелоидный лейкоз [Aridor, Hannan, 2000]
Acute myeloid leukemia Острый миелоидный лейкоз [Aridor, Hannan, 2000]
[Патент WO
Adeno-associated virus Аденоассоциированный вирус 2011088431 Al]
Аутосомно-доминантная
ADPKD-autosomal dominant polycystic поликистозная болезнь почек
kidney disease (Поликистоз почек) [Aridor, Hannan, 2000]
African swine fever (African swine [Патент WO
fever virus) Африканская чума свиней 2011088431 All
Alpha- 1-antichymotrypsin (ACTH) Дефицит альфа- 1- deficiency антихимотрипсина [Aridor, Hannan, 20001
Alzheimer disease Болезнь Альцгеймера [Aridor, Hannan, 20001
Боковой амиотрофический [Aridor, Hannan, 2000]
Amyotrophic lateral sclerosis склероз Anderson disease Болезнь Андерсона [Aridor, Hannan, 2002]
Anthrax (Anthrax toxin from Bacillus [Патент WO
anthracis) Сибирская язва 2011088431 Al]
Anti-phospholipid syndrome Антифосфолипидный синдром [Aridor, Hannan, 2000]
Argentine hemorrhagic fever (Junin Аргентинская [Патент WO
arenavirus (JUNV)) геморрагическая лихорадка 2011088431 Al]
Aspartylglucosaminuria Аспартилглюкозаминурия [Aridor, Hannan, 2002]
Атаксия телеангиэктазии
Ataxia telangiectasia (синдром Луи-Бара) [Aridor, Hannan, 20001
Autosomal dominant retinitis Аутосомно-доминантный
pigmentosa пигментный ретинит [Aridor, Hannan, 2002]
Autosomal recessive juvenile Аутосомно-рецессивный
parkinsonism ювенильный паркинсонизм [Aridor, Hannan, 2002]
Autosomal recessive primary Аутосомно-рецессивная
hyperoxaluria первичная гипероксалурия [Aridor, Hannan, 2000]
Bare lymphocyte syndrome Синдром голых лимфоцитов [Aridor, Hannan, 2000]
Болезнь Баттена
Batten disease (neuronal ceroid- (нейрональный цероид- lipofuscinosis) липофусциноз) [Aridor, Hannan, 2000]
Bluetongue disease/ catarrhal fever [Патент WO
(Bluetongue virus- 1) Катаральная лихорадка 2011088431 Al]
Botulism Ботулизм [Pellett и др., 2015]
Bovine respiratory disease (eukotoxin Респираторное заболевание [Патент WO (LKT) from Mannheimia haemolytica) крупного рогатого скота 2011088431 Al]
Brugada syndrome Синдром Бругада [Aridor, Hannan, 2002]
[Патент WO
Candidiasis (Candida albicans) Кандидоз 2011088431 Al]
Carcinomas/ haemangio-endotheliomas Карциномы /
of the bladder (Bovine papillomavirus гемангиоэндотелиомы [Патент WO
BP VI) мочевого пузыря 2011088431 Al]
Cardiomyopathy Кардиомиопатия [Aridor, Hannan, 2002]
CDG-la (Congenital Disorder of Врожденный порок
Glycosylation) гликозилирования типа 1а [Aridor, Hannan, 2002]
CDG-lb (Congenital Disorder of Врожденный порок
Glycosylation) гликозилирования типа lb [Aridor, Hannan, 2002]
CDG-lc (Congenital Disorder of Врожденный порок
Glycosylation) гликозилирования типа 1с [Aridor, Hannan, 2002]
CDG-ld (Congenital Disorder of Врожденный порок
Glycosylation) гликозилирования типа Id [Aridor, Hannan, 2002]
CDG-le (Congenital Disorder of Врожденный порок
Glycosylation) гликозилирования типа 1е [Aridor, Hannan, 2002]
CDG- If (Congenital Disorder of Врожденный порок
Glycosylation) гликозилирования типа If [Aridor, Hannan, 2002]
CDG-2a (Congenital Disorder of Врожденный порок
Glycosylation) гликозилирования типа 2а [Aridor, Hannan, 2002]
CDG-2b (Congenital Disorder of Врожденный порок
Glycosylation) гликозилирования типа 2Ь [Aridor, Hannan, 2002]
Врожденный порок
CDG-2c (Congenital Disorder of гликозилирования типа 2с
Glycosylation) (leukocyte adhesion (синдром дефицита
deficiency II syndrome) лейкоцитарной [Aridor, Hannan, 2002] недостаточности II)
CDG-2d (Congenital Disorder of Врожденный порок
Glycosylation) гликозилирования типа 2d [Aridor, Hannan, 2002]
Charcot-Marie-Tooth syndrome Синдром Шарко-Мари-Туза [Aridor, Hannan, 2000]
Chediak-Higashi syndrome Синдром Чедиака-Хигаси [Aridor, Hannan, 2000]
Chikungunya disease (Chikungunya [Патент WO
virus (CHIKV)) Болезнь Чикунгунья 2011088431 Al]
Chlamydia (Chlamydia psittaci and [Патент WO
Chlamydia trachomatis) Хламидиоз 2011088431 Al]
Choroideremia Хориодеграмия [Aridor, Hannan, 2000]
Хронический
Chronic myelomonocytic leukemia миеломоноцитарный лейкоз [Aridor, Hannan, 2002]
Комбинированный
врожденный дефицит
факторов (V и VIII)
Combined factors V and VIII deficienc свертывания [Aridor, Hannan, 2000]
Common cold (Human rhinovirus 2 [Патент WO
(HRV)) Простуда 2011088431 Al]
Congenital hypothyroidism Врожденный гипотиреоз [Aridor, Hannan, 2000]
Врожденный синдром
Congenital Long QT syndrome удлиненного интервала QT [Aridor, Hannan, 2000]
Congenital nephritic syndrome of the Врожденный почечный
finnish type синдром финского типа [Aridor, Hannan, 2002]
Congenital sucrase-isomaltase Врожденная недостаточность
deficiency сукразы-изомальтазы [Aridor, Hannan, 2000]
Crigler-Najjar Синдром Криглера— Найяра [Aridor, Hannan, 2000]
Cushing's disease Болезнь Кушинга [Aridor, Hannan, 2000]
Cystic fibrosis Муковисцидоз [Aridor, Hannan, 2000]
Danon disease Болезнь Данона [Aridor, Hannan, 2000]
Dengue fever (Dengue virus 1 & 2 [Патент WO
(DENV)) Лихорадка денге 2011088431 Al]
Diabetes mellitus Сахарный диабет [Aridor, Hannan, 2000]
Диабет / Синдром Уолкотта-
Diabetes/Wolcott- Rallison syndrome Раллисона [Aridor, Hannan, 2002]
Diptheria (Corynebacterium [Патент WO
diphtheriae) Дифтерия 2011088431 Al]
Dubin- Johnson syndrome Синдром Дабина- Джонсона [Aridor, Hannan, 2002]
Ebola hemorrhagic fever (Zaire Геморрагическая лихорадка [Патент WO
Ebolavirus) Эбола 2011088431 Al]
Echovirus disease (Echo virus (EV1) [Патент WO
from Picornaviridae) Эховирусная инфекция 2011088431 Al]
Ehlers-Danlos syndrome Синдром Элерса-Данлоса [Aridor, Hannan, 2002]
Epilepsia Эпилепсия [Casillas-Espinosa,
Powell, O'Brien, 2012]
Equine infectious anemia (Equine Инфекционная анемия [Патент WO infectious anemia virus (EIAV)) лошадей 2011088431 All
Fabri disease Болезнь Фабри [Aridor, Hannan, 2000]
Faciogenital dysplasia (Aarskog-Scott Фациогенитальная дисплазия
syndrome) (синдром Аарскога-Скотта) [Aridor, Hannan, 20021
Familial chylomicronemia Семейная хиломикронемия [Aridor, Hannan, 2000] Семейная
Familial hypercholesterolemia гиперхолестеринемия [Aridor, Hannan, 2000]
Семейный внутрипеченочный
Familial intrahepatic cholestasis холестаз [Aridor, Hannan, 2000]
Feline infectious peritonitis (Feline Инфекционный перитонит [Патент WO infectious peritonitis virus (FIPV)) кошек 2011088431 All
Frontotemporal dementia with Фронтотемпоральное
Parkinsonism слабоумие с паркинсонизмом [Aridor, Hannan, 2000]
[Патент WO
Gastroenteritis (Rotavirus) Гастроэнтерит 2011088431 Al]
Genital warts/ cervical cancer (Human
papillomavirus 31 (HPV31) and 16 Генитальные наросты / рак [Патент WO
(HPV16)) шейки матки 2011088431 Al]
Golden staph infections [Патент WO (Staphylococcus aureus) Золотистый стафилоккок 2011088431 Al]
Griscelli disease Синдром Гришкелли [Aridor, Hannan, 2000]
Griscelli disease with hemophagic Болезнь Грискелли с
syndrome гемофилическим синдромом [Aridor, Hannan, 2000]
[Патент WO
Hepatitis В (Hepatitis В virus (HBV)) Гепатит В 2011088431 Al]
[Патент WO
Hepatitis С (Hepatitis С virus (HCV)) Гепатит С 2011088431 Al]
Hereditary emphysema Врожденная эмфизема [Aridor, Hannan, 2000]
Наследственная эмфизема с
Hereditary emphysema with liver injury повреждением печени [Aridor, Hannan, 2000]
Периодическая болезнь
Hereditary familial amyloidosis of (наследственный семейный
Finish амилоидоз) [Aridor, Hannan, 2002]
Наследственный
Hereditary hemochromatosis гемохроматоз [Aridor, Hannan, 2000]
Наследственная
Hereditary hyperhomocysteinemia гипергомоцистеинемия [Aridor, Hannan, 2002]
Наследственная
Hereditary hypofibrinogenemia гипофибриногенемия [Aridor, Hannan, 2000]
Hereditary pancreatitis Наследственный панкреатит [Aridor, Hannan, 2000]
Hereditary spherocytosis Наследственный сфероцитоз [Aridor, Hannan, 2002]
Синдром Германски-Пудлак I- го типа
Hermansky-Pudlak syndrome type 1 [Aridor, Hannan, 2000]
Синдром Германски-Пудлак
Hermansky-Pudlak syndrome type 2 П-го типа [Aridor, Hannan, 2000]
[Патент WO
Herpes simplex (Herpes Simplex virus) Простой герпес 2011088431 Al]
Спиноцеребеллярная атаксия
Huntington and spinocerebellar ataxias и болезнь Хантингтона [Aridor, Hannan, 2002]
Huntington's disease Болезнь Хантингтона [Aridor, Hannan, 2000]
I cell disease Ι-клеточная болезнь [Aridor, Hannan, 2000]
Восковидные липофусцинозы
Infantile neuronal ceroid lipofuscinosis нейронов (детская форма) [Aridor, Hannan, 2002]
[Патент WO
Influenza (Influenza virus) Грипп 2011088431 Al] Jaagsiekte/ ovine pulmonary
adenocarcinoma (Jaagsiekte sheep Овечья аденокарцинома [Патент WO
retrovirus (JSRV)) легких 2011088431 А1]
Kaposi's sarcoma (Kaposi's sarcoma- [Патент WO
associated herpes-virus) Саркома Калоши 2011088431 А1]
Korean hemorrhagic fever (Hantaan Корейская геморрагическая [Патент WO
virus) лихорадка 2011088431 А1]
Laron syndrome Синдром Ларона [Aridor, Hannan, 2000]
Мышечная дистрофия
Limb-girdle muscular dystrophy конечностей [Aridor, Hannan, 2002]
Lissencephaly Лизенцефалия [Aridor, Hannan, 2000]
[Патент WO
Listeriosis (Listeria monocytogenes) Листериоз 2011088431 Al]
Низкий уровень
Low plasma lipoprotein a levels липопротеидов плазмы [Aridor, Hannan, 2000]
Болезнь включения
Microvillus inclusion disease микроворсинок [Aridor, Hannan, 2000]
Miller Dieker syndrome Синдром Миллера- Дикера [Aridor, Hannan, 2000]
Mohr Tranebjaerg syndrome (human Синдром Мора Транберга
deafness dystonia syndrome) (синдром глухоты- дистонии) [Aridor, Hannan, 2000]
Боковой амиотрофический
Motor neuron disease склероз [Aridor, Hannan, 2000]
Mucolipidosis IV Муколипидоз ГУ-го типа [Aridor, Hannan, 2000]
Мукополисахаридоз типа IV /
Mucopolysaccharidosis type Синдром Марото— Лами
IV/Maroteaux- Lamy syndrome [Aridor, Hannan, 2002]
Синдром множественных
Multiple exostoses syndrome экзостозов [Aridor, Hannan, 2002]
Murine norovirus disease (Murine [Патент WO
norovirus-1 (MNV-1)) Мышиный нановирус 2011088431 Al]
МиелодиспластическийЬпрз ://t
ranslate.google.eom/#en/ru/Pvhiz
Myelodysplastic syndrome omelic синдром [Aridor, Hannan, 2000]
Myeloid leukemia Миелолейкоз [Aridor, Hannan, 2000]
[Richards, Whittle,
Neuropathic pain Нейропатическая боль Buchbinder, 2012]
Нефрогенный несахарный
Nephrogenic diabetes insipidus диабет [Aridor, Hannan, 2000]
Нейрогипофизарный
Neurohypophyseal diabetes insipidus несахарный диабет [Aridor, Hannan, 2000]
Niemann-Pick disease Болезнь Ниманна— Пика [Aridor, Hannan, 2000]
Синдром Лоу
(окулоцереброренальный
Oculocerebro-renal syndrome of Lowe синдром) [Aridor, Hannan, 2000]
Oculocutaneous albinism Глазокожный альбинизм [Aridor, Hannan, 2000]
Optiz syndrome Синдром Опица [Aridor, Hannan, 2000]
Остеогенез несовершенный
Osteogenesis imperfecta (01) (01) [Aridor, Hannan, 2000]
Системные заболевания
Overlap connective tissue disease соединительной ткани [Aridor, Hannan, 2000]
Parvo (Canine parvovirus) Парвовирус [Патент WO 2011088431 А1]
Болезнь Пелизеуса-
Pelizaeus-Merzbacher disease Мерцбахера [Aridor, Hannan, 2000]
Pendred syndrome Синдром Пендреда [Aridor, Hannan, 2002]
Periodontitis (Porphyromonas [Патент WO
gingivalis) Периодонтит 2011088431 Al]
Стойкая
Persistent hyperinsulinemic гиперинсулинемическая
hypoglycemia of infancy гипогликемия младенцев [Aridor, Hannan, 2002]
[Патент WO
Poliomyelitis (Poliovirus) Полиомиелит 2011088431 Al]
Полиневропатия, пигментный
ретинит, серонегативный
Polyneuropathy, pigmented retinitis, полиартрит,
seronegative polyarthritis, interstitial интерстициальный легочный
pulmonary fibrosis, Raynaud's фиброз, Феномен Рейно,
phenomenon, Wegner's granulomatosis, Гранулематоз Вегенера,
proteinuria протеинурия [Aridor, Hannan, 2002]
Первичная цилиарная
Primary ciliary dyskinesia (Kartagener's дискинезия (Синдром
syndrome) Картагенера) [Aridor, Hannan, 2000]
Primary hypothyroidism Первичный гипотиреоз [Aridor, Hannan, 2000]
Protein С deficiency Дефицит протеина С [Aridor, Hannan, 2000]
Псевдоахондроплазия и
Pseudoachondroplasia and Multiple множественная эпифизарная
epiphyseal дисплазия [Aridor, Hannan, 2002]
Pseudotuberculosis (Yersinia [Патент WO
pseudotuberculosis) Псевдотуберкулез 2011088431 Al]
[Патент WO
Respiratory infection (Adenovirus) Респираторные инфекции 2011088431 Al]
Ризомелическая точечная
Rhizomelic chondrodysplasia punctata хондро дисплазия [Aridor, Hannan, 2000]
Sarcoma Саркома [Aridor, Hannan, 2002]
Scott syndrome Синдром Скотт [Aridor, Hannan, 2000]
Semliki forest virus disease (Semliki Вирусное заболевание леса [Патент WO
forest virus (SFV)) Семлики 2011088431 Al]
Симианский вирус (вирус SV- [Патент WO
Simian virus 40 (SV-40) 40) 2011088431 Al]
Sjogren's syndrome Синдром Шегрена [Aridor, Hannan, 2000]
Sphingolipid activator protein Дефицит белка-активатора
deficiency сфинголипидов [Aridor, Hannan, 2000]
Сфинголипидозы,
Sphingolipidoses, gangliosidosis, ганглиозидоз, болезнь
Sandhoff disease, Fabry disease Сандхоффа, болезнь Фабри [Aridor, Hannan, 2000]
Спинная и бульбарная
Spinal and bulbar muscular atrophy мышечная атрофия [Aridor, Hannan, 2000]
Спондилоэпифизарная
дисплазия врожденного
Spondyloepiphyseal dysplasia congenita происхождения [Aridor, Hannan, 2000]
Штаргардтоподобная
Stargardt-like macular dystrophy макулодистрофия [Aridor, Hannan, 2002] Синдром мышечной
Stif-man syndrome скованности [Aridor, Hannan, 2000]
Shaking Palsy Болезнь Паркинсона [Edvardson и др., 2012]
Swine atrophic rhinitis ( Dermonecrotic [Патент WO
toxin (DNT) from Bordetella) Атрофический ринит свиней 2011088431 А1]
Tangier disease Болезнь Танжера [Aridor, Hannan, 2000]
Tay-Sachs Болезнь Тея— Сакса [Aridor, Hannan, 2000]
Tetanus Столбняк [Pellett и др., 2015]
Тироксинсвязывающая
Thyroxine binding globulin deficiency глобулиновая недостаточность [Aridor, Hannan, 2000]
Torsion dystonia Торсионная дистония [Aridor, Hannan, 2002]
Tuberous sclerosis Туберный склероз [Aridor, Hannan, 2000]
Наследственная
Type I hereditary angioedema ангиодистрофия 1-го типа [Aridor, Hannan, 2000]
Urinary tract infection (Uropathogenic Инфекция мочевых путей [Патент WO
Escherichia coli) 2011088431 Al]
Usher's syndrome Синдром Ушера [Aridor, Hannan, 2000]
Vesicular stomatitis (Vesicular [Патент WO
stomatitis virus (VSV)) Везикулярный стоматит 2011088431 Al]
Viral myocarditis/ CNS infection/ Вирусный миокардит /
respiratory disease (Coxsackievirus B3 инфекция ЦНС / [Патент WO
(CVB3) and A9 (CVA9)) респираторные заболевания 2011088431 Al] von Willebrand disease type IIA Болезнь Виллебранда типа НА [Aridor, Hannan, 2000]
Синдром Вискотта—
Wiskott-Aldrich syndrome Олдрича [Aridor, Hannan, 2000]
Х-сцепленная
X-linked adrenoleukodystrophy адренолейкодистрофия [Aridor, Hannan, 2000]
Х-сцепленная болезнь Шарко-
X-linked Charot-Marie-tooth disease Мари-Тута [Aridor, Hannan, 2002]
Х-сцепленная
X-linked hypophosphatemia гипофосфатемия [Aridor, Hannan, 2002]
Синдром Зельвегера
Zellweger syndrome (cerebro-hepato- (цереброгепаторенальный
renal syndrome) синдром) [Aridor, Hannan, 2000]
Сущность изобретения заключается в том, что экспериментальным путем было установлено, что заявляемые пептиды, имеющие простую структуру (что облегчает их получение химическим путем), являются специфическими ингибиторами клатрина.
Термин «ингибитор клатрина», который используется в настоящем описании, и его вариации, означает соединение, которое взаимодействует с клатрином, и, по меньшей мере, частично ингибирует функциональную активность клатрина в клатрино-опосредованном эндоцитозе (СМЕ), который может быть выражен снижением СМЕ и/или уровнем СМЕ в клетках. Таким образом, ингибирование клатрина в соответствии с изобретением может быть полным или частичным ингибированием функциональной активности клатрина. Клатрин-опосредованный эндоцитоз (СМЕ) важен не только для переноса метаболитов в клетку, но и при передаче сигналов клетками, а ингибирование функции клатрина имеет применение в профилактике или лечении различных заболеваний и состояний. Список болезней, при которых ингибирование функции клатрина имеет ключевую роль, опубликован ранее в работах [Aridor, Hannan, 2002; Aridor, Hannan, 2000], содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте.
В частности, ингибиторы функции клатрина могут найти применение при многих заболеваниях в центральной нервной системе, включая: болезнь Альцгеймера [Harold и др., 2009], болезнь Паркинсона [Edvardson и др., 2012], эпилепсии [Casillas-Espinosa, Powell, O'Brien, 2012]. Примером нового противоэпилептического средства, действующего по механизму ингибирования процессов, связанных с клатрином, является леветирацетам (Keppra™) [Nowack и др., 2011].
Ингибирование клатрин - опосредуемого эндоцитоза путем блокирования клатрина приводит к сокращению синаптической передачи, уменьшая доступность синаптических везикул, что может применяться для профилактики или лечения боли. Например, противосудорожные препараты, такие как фенитоин и габапентин, очень эффективны при лечении нейропатической боли [Richards, Whittle, Buchbinder, 2012]. Эти лекарственные средства действуют посредством изменения процесса передачи синаптических везикул, то есть ингибирование СМЕ путем блокирования клатрина может остановить или ограничить передачу сигналов боли и тем самым уменьшить или улучшить ощущение боли.
Также вызывают особый интерес данные о том, что одна из мутаций в тяжелой цепи клатрина приводит к редкому заболеванию у людей - потерю болевой и тактильной чувствительности [Nahorski и др., 2015], и то, что интенсивность воспалительных и, как следствие, болевых реакций находится в зависимости от тяжелой цепи клатрина [Escobar и др., 2006; Kim, Sorg, Arrieumerlou, 2011].
В самом деле, профилактика или лечение любого физиологического расстройства, которое может быть осуществлено путем ингибирования СМЕ, как описано здесь, прямо охватывается настоящим изобретением.
Также весьма значимым является возможность подавления ингибиторами клатрина избыточной клеточной пролиферации при раковых заболеваниях. Несколько известных в настоящее время ингибиторов, взаимодействующих с митотическими белками, на данный момент находятся на стадии доклинических или клинических исследованиях в качестве средств для лечения рака. Антимитотические эффекты этих ингибиторов могут быть частично обусловлены косвенным блокированием клатрином митотических функции [Booth и др., 2011]. Следовательно, ингибиторы клатрина являются не только полезными молекулярными инструментами для разгадывания роли клатрина в митотическом цикле, но, по крайней мере, в некоторых вариантах, могут применяться в качестве антимитотических соединений для лечения рака и клеточно-пролиферативных патологий. В этой связи нужно отметить, что многие рецепторы фактора роста (например, EGF-R) также требуют клатрин-опосредованного эндоцитоза (СМЕ) для интернализации и поддержания клеточной активности. Блокирование СМЕ предотвращает пролиферацию клеток в этих случаях и является дополнительным доказательством противораковой и противо-пролиферативной активности ингибиторов клатрина [Smith и др., 2013].
Также ингибирование СМЕ в соответствии с одним или несколькими вариантами осуществления изобретения является важным для разработки средств, предотвращающих проникновение в клетки, в том числе головного мозга, ряда патогенных вирусов, а также всевозможных токсинов, включая пептидные, которые проникают в клетку путем эндоцитоза. К числу таких вирусов и токсинов относятся (но не исчерпывается ими): дифтерия, лейкотоксин (LKT), хламидии, токсин сибирской язвы, золотистый стафилококк, кандидоз, пародонтит, аденовирус, вирус африканской чумы свиней, вирус лихорадки денге, заирский эболавирус (геморрагическая лихорадка Эбола), вирус гепатита В, вирус гепатита С, связанный с саркомой Капоши вирус герпеса, вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вирус гриппа и другие. Например, механизм действия наиболее активных соединений, направленных на предотвращение инфекцирования вирусом Эбола, связан с блокировкой адгезии вирусов на поверхности клетки, или с подавлением их эндоцитоза в клетку [Anantpadma и др., 2016; Aleksandrowicz и др., 2011; Piccini, Castilla, Damonte, 2015].
Таким образом, примеры конкретных заболеваний и состояний, для которых настоящее изобретение находит применение для профилактики или лечения, включают, но не ограничиваются ими, клеточно-пролиферативные заболевания и состояния, мультифокальную лейкоэнцефалопатию, поликистозные заболевания почек, заболевания, связанные с β- амилоидом (такие, как болезнь Альцгеймера), нейродегенеративные расстройства, нейропсихиатрические расстройства, психотические расстройства, психозы, биполярные расстройства, шизофрению, аберрантное нерегулируемое возбуждение нейронов, судороги, нейропатическую боль, мигрень, а также все заболевания и состояния, опосредованные или иным образом связанные с передачей синаптического сигнала с вовлечением процессов СМЕ (например, таких как эпилепсия) или с нарушением рециркуляции клеточных везикул. Также, как указано выше, ингибирование СМЕ в соответствии с одним или несколькими вариантами осуществления изобретения может также быть полезным для предотвращения проникновения ряда патогенных агентов в клетки и, таким образом, быть полезным в профилактике или лечении заболеваний или состояний, связанных с этим.
Все пептиды заявленного семейства обладают ранее показанным анальгетическим действием (см. РСТ WO/2013/141750) и являются специфическими ингибиторами клатрина.
Описание поясняется следующими рисунками:
рис.1 - хроматограмма пептида (шестичленная последовательность);
рис.2 - элюирование белковой фракции;
рис.3 - мажорные белковые соединения;
рис.4 - многоцветный белковый профиль для определения примерных масс при проведении гель-электрофореза (Thermo Fisher Scientific) (взято с официального сайта компании «Thermo Fisher Scientific)) / [Электронный ресурс]. - Режим доступа: URL: https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/26634, дата обращения: 17.03.2017).
Синтез пептидов осуществляли методами пептидной химии, твердофазным методом с использованием L и D аминокислот.
Пример 1. Синтез пептида L-Leu-D-His-L-Lys-L-Leu-L-Gln-L-Thr-NH2 (Пептид N° 7 SEQ ID ΝΟ:1).
Пептид L-Leu-D-His-L-Lys-L-Leu-L-Gln-L-Thr-NH2 получали методом автоматического твердофазного синтеза по Fmoc-схеме на полимере Ринка (Rink Amide Resin, 0,6 ммоль амино- групп на 1г полимера) с использованием DCC/HOBt (М,К'-дициклогексилкарбодиимид/1- гидроксибензотриазол) метода активации аминокислот. Деблокирование производили путем обработки раствором piperidine/DMF (пиперидин/М -диметилформамид) (1 :4) в течении 7 минут. Защиту групп боковых цепей производили следующими группами: tBu (трет-бутиловый эфир) для тирозина, треонина, Trt (тритил или трифенилметил) для глутамина и для гистидина, Вое (т-бутилоксикарбонил) для лизина. Пептиды отщепляли от полимера и деблокировали смесью TFA/H20/EDT (трифторуксусная кислота/вода/1,2-этандитиол) (90:5:5). Очистку пептидов проводили путем обратнофазовой ВЭЖХ (колонка С 18), элюент - ацетонитрил - вода (0,1М дигидрофосфата калия) в соотношении 6:4. Пептиды были охарактеризованы с помощью масс-спектрометра. Чистоту пептида проверяли также ВЭЖХ, колонка Waters DeltaPak CI 8 3,9*150мм 5u 100А; раствор A: 0,1% TFA в 100% воде/MeCN; скорость потока— 1мл/мин; длина волны детектирования— 230 нм (рис.1).
Пример 2. Проверка активности синтезированных пептидов как специфических ингибиторов клатрина.
В основу эксперимента положена методика аффинной хроматографии, где в качестве неподвижной фазы выступает пептидная молекула, закрепленная на специальной матрице. В качестве подвижной фазы выступает экстракт головного мозга крысы. Белковая фракция, специфически связавшаяся с молекулой пептида, в дальнейшем подвергается фракционированию путем электрофореза и непосредственно детектированию отдельных белковых молекул.
Аффинный сорбент готовили следующим образом: матрицей для сорбента являлась бромциан активированная сефароза 4В (Sigma- Aldrich), растворенная в 1мМ соляной кислоте (НС1). Для проведения исследований о возможности связывания клатрина с пептидом, а именно для посадки пептида на носитель (сефарозу) было необходимо ввести спейсер. Задача «спейсера» - пространственно разделить носитель (сефарозу) и собственно пептидную молекулу для создания условий взаимодействия исследуемого пептида и белков экстракта мозга. Такое использование «спейсера» достаточно часто встречается при проведении аффиной сорбции. Природа «спейсеров» весьма разнообразна [Day, Hashim, 1984; Lowe, 1977; Martinez- Ceron и др., 2012]. Использовали «спейсер», состоящий из двух аминокислотных остатков (Asp-Asp). Введение дипептида проходило в фосфатном буфере (рН 7,8— 8,0).
Исследуемый пептид растворяли в бидистиллированной воде и добавляли к аффинному сорбенту при строгом контроле рН, брали 5 мг пептида на 1 мл сорбента. «Сшивку» вели при температуре 4°С в течении 12 часов. По окончании процесса «сшивки» тщательно отмывали не связавшийся продукт многократным промыванием ацетатным буфером с рН 5,0 и бикарбонатным буфером рН 9,0.
Для получения препаратов коры головного мозга крыс брали животных - крыс породы Вистар, самцов, массой около 300 г. Животных декапитировали, на холоду выделяли кору головного мозга. Полученные образцы помещали в жидкий азот, где измельчали до состояния мелкодисперсного порошка. Далее образец переносили в 10 мМ ТРИС-буфер рН 7,6 с 0,3 М сахарозой (Helicon), 1мМ СаС12 (Sigma- Aldrich) и ЮмМ MgCl2 (Sigma- Aldrich). Далее полученный гомогенат на холоду центрифугировали при 15000 об/мин в течении 20 минут.
Аффинную сорбцию проводили в течение 24 часов при 4°С на шейкере с супернатантом, полученным после центрифугирования препаратов коры головного мозга. Далее сорбент переносили на колонку (Bio-Rad) и отмывали от неспецефически связанного белка. Отмывку проводили ТРИС-буфером при рН 7,6 без сахарозы. Вымывание белка контролировали при помощи хроматографа BioRad NGC Discovery. Элюцию смотрели при λ=280 нм. Затем белок отмывали ТРИС-буфером, рН 7,6, содержащим NaCl. Количество соли давалось согласно градиенту от 0,05 М до 0,5 М. Детекция проводилась при длине волны 280 нм, скорость потока 0,1 мл/мин. На рис.2 видно наличие двух пиков с 32 по 34 минуты, которые свидетельствуют о наличии белковой фракции, специфически связавшейся с молекулой пептида.
Белковая фракция, специфически связавшаяся с молекулой пептида, в дальнейшем подвергается фракционированию путем электрофореза и непосредственно детектированию отдельных белковых молекул.
Электрофорез проводили в PAAG-геле. Использовали концентрированную фракцию в количествах: 1, 5 и 10 мкл. Наносили маркер Spectra (Spectra™ Multicolor Broad Range Protein Ladder). На рис.3 отчетливо видны два мажорных белковых соединения, справа нанесен маркер, слева— исследуемая фракция в трех концентрациях. Для идентификации были вырезаны три полоски, соответствующие маркерным массам 260, 50 и 10 кДа. Для определения масс использовали контрольный рисунок из руководства производителя (рис.4).
Идентификацию форезных пятен производили при помощи масс-спектрометрии. Хромато-масс-спектрический анализ проводился на триптических пептидах, выделенных из вырезанных кусучков геля с белком после триптинизации (обработки ферментом трипсином). Затем была проведена хромато-масс-спектрометрия этого раствора пептидов, после чего происходит идентификация пептидных последовательностей по базам данных. После идентификации результаты были валидизированны при помощи процедуры автовадилизации. Пептидные последовательности трипсина служат качественным контролем. Для проверки идентификации интересующих пятен производится поиск по базам данных млекопитающих. Верхнее пятно, соответствующее массе в приделах от 140 кДа до 260 кДа было идентифицировано как тяжелая цепь клатрина по 13 пептидным последовательностям. Поскольку ранее было установлено и доказано обезболивающее действие исследуемых пептидов, а ингибирование СМЕ путем блокирования клатрина может остановить или ограничить передачу сигналов боли, был сделан вывод, что исследуемые пептиды являются специфическими ингибиторами тяжелой цепи клатрина.
Следует отметить, что элюция (отделение) тяжелой цепи клатрина от пептида происходило при высоких значениях градиента, что свидетельствует о существенной аффинности пептида к тяжелой цепи клатрина.
Следовательно, настоящее изобретение может быть использовано также как метод выделения тяжелой цепи клатрина. При этом метод выделения является суущественно более простым, чем общепринятые [Riddelle-Spencer, O'Halloran, 1997]. Поэтому предложенный метод может найти применения для препаративного выделения тяжелой цепи клатрина для молекулярно-биологических исследований и нанотехнологии [Santos dos и др., 2011].
Таким образом, техническим результатом предлагаемого изобретения является простота и дешевизна синтеза предложенных пептидов, являющихся специфическими ингибиторами клатрина, а также отсутствие у них ненужной иммунологической активности и других побочных эффектов, что позволяет рассматривать их в качестве основы для создания безопасных лекарственных средств, являющихся специфическими ингибиторами клатрина и получаемых простым синтезом. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. McMahon Н.Т., Boucrot E. Molecular mechanism and physiological functions of clathrin-mediated endocytosis // Nat Rev Mol Cell Biol. 2011. T. 12. jNb 8. C. 517-533.
2. Hood F.E., Royle S.J. Functional equivalence of the clathrin heavy chains CHC17 and CHC22 in endocytosis and mitosis // J. Cell Sci. 2009. T. 122. jNb 13. C. 2185- 2190.
3. McMahon H.T., Boucrot E. Molecular mechanism and physiological functions of clathrin-mediated endocytosis // Nat Rev Mol Cell Biol. 2011. T. 12. jN° 8. C. 517-533.
4. Haar E. ter, Harrison S.C., Kirchhausen T. Peptide-in-groove interactions link target proteins to the beta-propeller of clathrin. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2000. T. 97. J4° 3. C. 1096-100.).
5. Most P. и др. Extracellular S100A1 Protein Inhibits Apoptosis in Ventricular Cardiomyocytes via Activation of the Extracellular Signal-regulated Protein Kinase 1/2 (ERK1/2) // J. Biol. Chem. 2003. T. 278. JN 48. C. 48404-48412.
6. Pellett S. и др. Botulinum neurotoxins can enter cultured neurons independent of synaptic vesicle recycling // PLoS One. 2015. T. 10. N° 7. C. 1-17.
7. Патент WO2013010218A9. Inhibition of clathrin / Volker H., Robinson P., Mccluskey А. Опубл. 24.01.2013.
8. Robertson M.J. и др. Synthesis of the Pitstop family of clathrin inhibitors. // Nat. Protoc. 2014. T. 9. C. 1592-606.).
9. Willox A.K., Sahraoui Y.M.E., Royle S.J. Non-specificity of Pitstop 2 in clathrin-mediated endocytosis. // Biol. Open. 2014. T. 3. N° 5. С. 326-31.
10. Патент JP201 1093852A. Clathrin-bonding peptide derivative / Kitahara H. и др. Опубл. 12.05.2011.
11. PCT WO/2013/141750 "Synthetic peptides with a non-narcotic type of analgesic effect", 2013
12. Патент РФ 2508295 Синтетические пептиды с ненаркотическим типом анальгетического действия / Власов Г.П., Котин A.M. / Бюл. - 2013 - Ν° 27.
13. Aridor М., Hannan L. a. Traffic jams II: an update of diseases of intracellular transport. // Traffic. 2002. T. 3. JV° 11. C. 781-790.
14. Aridor M., Hannan L.A. Traffic Jam: A Compendium of Human Diseases that Affect Intracellular Transport Processes // Traffic. 2000. T. 1. Jis 11. C. 836-851. 15. Harold D. и др. Genome- Wide Association Study Identifies Variants at CLU and PICALM Associated with Alzheimer's Disease, and Shows Evidence for Additional Susceptibility Genes // Nat. Genet. 2009. T. 41. J 10. C. 1088-1093.
16. Edvardson S. и др. A deleterious mutation in DNAJC6 encoding the neuronal- specific clathrin-uncoating Co-chaperone auxilin, is associated with juvenile parkinsonism // PLoS One. 2012. T. 7. Jfs 5. C. 4-8.
17. Casillas-Espinosa P.M., Powell K.L., O'Brien T.J. Regulators of synaptic transmission: roles in the pathogenesis and treatment of epilepsy. // Epilepsia. 2012. T. 53 Suppl 9. C. 41-58.
18. Nowack А. и др. Levetiracetam reverses synaptic deficits produced by overexpression of sV2A // PLoS One. 201 1. T. 6. JV° 12. C. 1-8.
19. Richards B.L., Whittle S.L., Buchbinder R. Neuromodulators for pain management in rheumatoid arthritis. // Cochrane database Syst. Rev. 2012. T. 1. Na 1. C. CD008921.
20. Nahorski M.S. и др. A novel disorder reveals clathrin heavy chain-22 is essential for human pain and touch development // Brain. 2015. T. 138. N° 8. C. 2147-2160.
21. Escobar G.A. и др. Clathrin heavy chain is required for TNF-induced inflammatory signaling // Surgery. 2006. T. 140. Ks 2. C. 268-272.) (Kim M.L., Sorg I., Arrieumerlou C. Endocytosis-independent function of clathrin heavy chain in the control of basal NF-κΒ activation // PLoS One. 2011. T. 6. jV° 2.
22. Booth D.G. и др. A TACC3/ch-TOG/clathrin complex stabilises kinetochore fibres by inter-microtubule bridging. // EMBO J. 201 1. T. 30. JN° 5. C. 906-19.
23. Smith СМ. и др. Inhibition of clathrin by pitstop 2 activates the spindle assembly checkpoint and induces cell death in dividing HeLa cancer cells. // Mol. Cancer. 2013. T. 12. C. 4.
24. Anantpadma M. и др. Large-Scale Screening and Identification of Novel Ebola Virus and Marburg Virus Entry Inhibitors // 2016. T. 60. J ° 8. C. 4471^1481.
25. Aleksandrowicz P. и др. Ebola virus enters host cells by macropinocytosis and clathrin-mediated endocytosis // J. Infect. Dis. 201 1. T. 204. jV° SUPPL. 3. C. 957-967.
26. Piccini L.E., Castilla V., Damonte E.B. Dengue-3 virus entry into vero cells: Role of clathrin-mediated endocytosis in the outcome of infection // PLoS One. 2015. T. 10. JN° 10. C. 1-17.
27. Day E.D., Hashim G.A. Affinity purification of two populations of antibodies against format determinants of synthetic myelin basic protein peptide S82 from S82-AH- and S82-CH-Sepharose 4B columns. // Neurochem. Res. 1984. T. 9. J4° 10. C. 1453-65. 28. Lowe C.R. Immobilised lipoamide dehydrogenase. 2. Properties of the enzyme immobilised to agarose through spacer molecules of various lengths. // Eur. J. Biochem. 1977. T. 76. J ° 2. C. 401-9.
29. Martinez-Ceron M.C. и др. Recombinant protein purification using complementary peptides as affinity tags // N. Biotechnol. 2012. T. 29. Ν° 2. C. 206-210.
30. Официальный сайт компании «Thermo Fisher Scientific)) / [Электронный ресурс]. - Режим доступа: URL: https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/26634 (дата обращения: 17.03.2017).
31. Riddelle-Spencer K.S., O'Halloran T.J. Purification of clathrin heavy and light chain from Dictyostelium discoideum. // Protein Expr. Purif. 1997. T. 11. N° 3. С. 250-6.
32. Santos Т. dos и др. Effects of transport inhibitors on the cellular uptake of carboxylated polystyrene nanoparticles in different cell lines. // PLoS One. 2011. T. 6. N° 9. C. e24438.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Применение синтетического пептида общей формулы (I) [SEQ ID ΝΟ:1]
XDL - XDL1 - XDL2 - L-Lys - L-Leu - XDL3 - L-Thr - R2 (I) , где:
XDL - отсутствие аминокислоты или L-Tyr,
XDL1 - одна из аминокислот: L-Leu, L-Ala или D-Ala,
XDL2 - одна из аминокислот: L-His, D-His , L-Ala или D-Ala,
XDL3 - одна из аминокислот: L-Gln , L-Ala или D-Ala;
R2 - ОМе или М12,
или пептида - ретроинверсии формулы (I), имеющего обратную последовательность аминокислот с заменой L-формы аминокислот на D-форму и D-формы аминокислот на L- форму, общей формулы (II) [SEQ ID NO:2]
D-Thr - XDL4- D-Leu - D-Lys - XDL5 - XDL6 - XDL7 - R2 (И), где:
XDL4 - одна из аминокислот: D-Gln, D-Ala или L-Ala;
XDL5 - одна из аминокислот: D-His, L-His, D-Ala или L-Ala,
XDL6 - одна из аминокислот: D-Leu, D-Ala или L-Ala,
XDL7 - отсутствие аминокислоты или D-Tyr,
R2 - OMe mra NH2,
в качестве специфического ингибитора клатрина.
2. Способ профилактики или лечения заболевания или состояния у животного, включающий введение эффективного количества синтетических пептидов общей формулы (I) [SEQ ID ΝΟ:1] или общей формулы (II) [SEQ ID NO:2] или пролекарства или физиологически приемлемой соли или сольвата вышеназванных пептидов, или фармацевтической композиции, содержащей вышеназванные пептиды, как специфических ингибиторов клатрина.
PCT/RU2018/000121 2017-04-07 2018-03-01 Специфические пептидные ингибиторы клатрина Ceased WO2018186770A1 (ru)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CA3058388A CA3058388A1 (en) 2017-04-07 2018-03-01 Specific peptide clathrin inhibitors
EP18781670.7A EP3741382A4 (en) 2017-04-07 2018-03-01 SPECIFIC PEPTIDE CLATHRIN INHIBITORS
US16/500,592 US20220088113A1 (en) 2017-04-07 2018-03-01 Specific peptide clathrin inhibitors
CN201880023947.0A CN110869043A (zh) 2017-04-07 2018-03-01 特异性肽网格蛋白抑制剂
JP2019554629A JP2020512996A (ja) 2017-04-07 2018-03-01 クラスリンの特異的ペプチド阻害剤

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017111896 2017-04-07
RU2017111896A RU2651491C1 (ru) 2017-04-07 2017-04-07 Специфические пептидные ингибиторы клатрина

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2018186770A1 true WO2018186770A1 (ru) 2018-10-11
WO2018186770A8 WO2018186770A8 (ru) 2019-10-24

Family

ID=61976775

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2018/000121 Ceased WO2018186770A1 (ru) 2017-04-07 2018-03-01 Специфические пептидные ингибиторы клатрина

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20220088113A1 (ru)
EP (1) EP3741382A4 (ru)
JP (1) JP2020512996A (ru)
CN (1) CN110869043A (ru)
CA (1) CA3058388A1 (ru)
RU (1) RU2651491C1 (ru)
WO (1) WO2018186770A1 (ru)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009250552A (ja) 2008-04-08 2009-10-29 Kyoritsu Air Tech Inc 換気グリル
JP2011093852A (ja) 2009-10-30 2011-05-12 Shinshu Univ クラスリン結合性ペプチド誘導体
WO2013010218A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Freie Universität Berlin Inhibition of clathrin
WO2013141750A1 (ru) 2012-03-22 2013-09-26 КОТИН, Олег Аркадьевич Синтетические пептиды с ненаркотическим типом анальгетического действия

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1306976A (zh) * 2000-01-26 2001-08-08 上海博道基因技术有限公司 一种新的多肽——网格蛋白76和编码这种多肽的多核苷酸
WO2011088431A1 (en) * 2010-01-18 2011-07-21 Vela Eric M Prophylactic and treatment for virus-induced disease

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009250552A (ja) 2008-04-08 2009-10-29 Kyoritsu Air Tech Inc 換気グリル
JP2011093852A (ja) 2009-10-30 2011-05-12 Shinshu Univ クラスリン結合性ペプチド誘導体
WO2013010218A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Freie Universität Berlin Inhibition of clathrin
WO2013010218A9 (en) 2011-07-15 2013-03-28 Freie Universität Berlin Inhibition of clathrin
WO2013141750A1 (ru) 2012-03-22 2013-09-26 КОТИН, Олег Аркадьевич Синтетические пептиды с ненаркотическим типом анальгетического действия
RU2508295C2 (ru) 2012-03-22 2014-02-27 Общество с ограниченной ответственностью "Биофармокс" Синтетические пептиды с ненаркотическим типом анальгетического действия
US9260482B2 (en) 2012-03-22 2016-02-16 Oleg Arkadyevich KOTIN Synthetic peptides with a non-narcotic type of analgesic effect

Non-Patent Citations (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"The official website of the company", THERMO FISHER SCIENTIFIC, 17 March 2017 (2017-03-17), Retrieved from the Internet <URL:https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/26634>
"Thermo Fisher Scientific", THERMO FISHER SCIENTIFIC, 17 March 2017 (2017-03-17), Retrieved from the Internet <URL:https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/26634>
ALEKSANDROWICZ P. ET AL.: "Ebola virus enters host cells by macropinocytosis and clathrin-mediated endocytosis", J. INFECT. DIS., vol. 204, no. 3, 2011, pages 957 - 967
ANANTPADMA M. ET AL., LARGE-SCALE SCREENING AND IDENTIFICATION OF NOVEL EBOLA VIRUS AND MARBURG VIRUS ENTRY INHIBITORS, vol. 60, no. 8, 2016, pages 4471 - 4481
ARIDOR M.HANNAN L. A: "Traffic jams II: an update of diseases of intracellular transport", TRAFFIC., vol. 3, no. 11, 2002, pages 781 - 790
ARIDOR M.HANNAN LA: "Traffic Jam: A Compendium of Human Diseases that Affect Intracellular Transport Processes", TRAFFIC., vol. 1, no. 11, 2000, pages 836 - 851
BOOTH DG ET AL.: "A TACC3 / ch-TOG / clathrin complex stabilises kinetochore fibres by inter-microtubule bridging", EMBO J., vol. 30, no. 5, 2011, pages 906 - 19
CASILLAS-ESPINOSA PMPOWELL KLO'BRIEN TJ: "Regulators of synaptic transmission: roles in the pathogenesis and treatment of epilepsy", EPILEPSIA, vol. 53, no. 9, 2012, pages 41 - 58
DAY EDHASHIM GA: "Affinity purification of two populations of antibodies against format determinants of synthetic myelin basic protein peptide S82 from S82-AH- and S82-CH-Sepharose 4B columns", NEUROCHEM. RES., vol. 9, no. 10, 1984, pages 1453 - 65
EDVARDSON S. ET AL.: "A deleterious mutation in DNAJC6 encoding the neuronal- specific clathrin-uncoating Co-chaperone auxilin, is associated with juvenile parkinsonism", PLOS ONE, vol. 7, no. 5, 2012, pages 4 - 8
ESCOBAR GA ET AL.: "Clathrin heavy chain is required for TNF-induced inflammatory signaling", SURGERY, vol. 140, no. 2, 2006, pages 268 - 272, XP005592931, DOI: 10.1016/j.surg.2006.03.008
HAAR E. TERHARRISON SCKIRCHHAUSEN T: "Peptide-in-groove interactions link target proteins to the beta-propeller of clathrin", PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 97, no. 3, 2000, pages 1096 - 1100
HAROLD D. ET AL.: "Genome- Wide Association Study Identifies Variants at CLU and PI CALM Associated with Alzheimer's Disease, and Shows Evidence for Additional Susceptibility Genes", NAT. GENET., vol. 41, no. 10, 2009, pages 1088 - 1093
HOOD FEROYLE SJ: "Functional equivalence of the clathrin heavy chains CHC17 and CHC22 in endocytosis and mitosis", J. CELL SCI., vol. 122, no. 13, 2009, pages 2185 - 2190
KIM MLSORG I.ARRIEUMERLOU C: "Endocytosis-independent function of clathrin heavy chain in the control of basal NF- B activation", PLOS ONE, vol. 6, no. 2, 2011
LOWE CR: "Immobilised lipoamide dehydrogenase. 2. Properties of the enzyme immobilised to agarose through spacer molecules of various lengths", EUR. J. BIOCHEM., vol. 76, no. 2, 1977, pages 401 - 9, XP000998459, DOI: 10.1111/j.1432-1033.1977.tb11608.x
MARTINEZ-CERON MC ET AL.: "Recombinant protein purification using complementary peptides as affinity tags", N. BIOTECHNOL., vol. 29, no. 2, 2012, pages 206 - 210
MCMAHON HTBOUCROT E: "Molecular mechanism and physiological functions of clathrin-mediated endocytosis", NAT REV MOL CELL BIOL., vol. 12, no. 8, 2011, pages 517 - 533
MOST P. ET AL.: "Extracellular S100A1 Protein Inhibits Apoptosis in Ventricular Cardiomyocytes via Activation of the Extracellular Signal-regulated Protein Kinase 1/2 (ERfCl / 2", J. BIOL. CHEM., vol. 278, no. 48, 2003, pages 48404 - 48412, XP002419311, DOI: 10.1074/jbc.M308587200
NAHORSKI MS ET AL.: "A novel disorder reveals clathrin heavy chain-22 is essential for human pain and touch development", BRAIN, vol. 138, no. 8, 2015, pages 2147 - 2160
NOWACK A. ET AL.: "Levetiracetam reverses synaptic deficits produced by overexpression of sV2A", PLOS ONE, vol. 6, no. 12, 2011, pages 1 - 8
PELLETT S. ET AL.: "Botulinum neurotoxins can enter cultured neurons independent of synaptic vesicle recycling", PLOS ONE, vol. 10, no. 7, 2015, pages 1 - 17
PICCINI LECASTILLA V: "Damonte EB Dengue-3 virus entry into vero cells: Role of clathrin- mediated endocytosis in the outcome of infection", PLOS ONE, vol. 10, no. 10, 2015, pages 1 - 17
RICHARDS BLWHITTLE SLBUCHBINDER R: "Neuromodulators for pain management in rheumatoid arthritis", COCHRANE DATABASE SYST. REV., vol. 1, no. 1, pages CD008921
RIDDELLE-SPENCER KSO'HALLORAN TJ: "Purification of clathrin heavy and light chain from Dictyostelium discoideum", PROTEIN EXPR. PURIF., vol. 11, no. 3, 1997, pages 250 - 6, XP004459929, DOI: 10.1006/prep.1997.0793
ROBERTSON MJ ET AL.: "Synthesis of the Pitstop family of clathrin inhibitors", NAT. PROTOC., vol. 9, 2014, pages 1592
ROGACHEVSKII S. V. ET AL.: "Synthesis and Steric Structure of H-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-NH2 and H-Ala-D-Ala-Lys-Leu-Ala-Thr-NH2", RUSSIAN JOURNAL OF GENERAL CHEMISTRY, vol. 75, no. 5, May 2005 (2005-05-01), pages 815 - 824, XP055558482 *
SANTOS T. DOS ET AL.: "Effects of transport inhibitors on the cellular uptake of carboxylated polystyrene nanoparticles in different cell lines", PLOS ONE, vol. 6, no. 9, 2011, pages e24438
SMITH SM ET AL.: "Inhibition of clathrin by pitstop 2 activates the spindle assembly checkpoint and induces cell death in dividing HeLa cancer cells", MOL. CANCER, vol. 12, no. 4, 2013
WILLOX AKSAHRAOUI YME: "Royle SJ Non-specificity of Pitstop 2 in clathrin-mediated endocytosis", BIOL. OPEN., vol. 3, no. 5, 2014, pages 326 - 31

Also Published As

Publication number Publication date
RU2651491C1 (ru) 2018-04-19
US20220088113A1 (en) 2022-03-24
CN110869043A (zh) 2020-03-06
WO2018186770A8 (ru) 2019-10-24
EP3741382A1 (en) 2020-11-25
JP2020512996A (ja) 2020-04-30
EP3741382A4 (en) 2021-04-28
CA3058388A1 (en) 2018-10-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Burai et al. Elucidating the role of site-specific nitration of α-synuclein in the pathogenesis of Parkinson’s disease via protein semisynthesis and mutagenesis
JP2023145597A (ja) Ｒｎａを編集するための組成物および方法
Allan Butterfield Amyloid β-peptide (1-42)-induced oxidative stress and neurotoxicity: implications for neurodegeneration in Alzheimer's disease brain. A review
Hirokawa et al. Intracellular transport and kinesin superfamily proteins, KIFs: structure, function, and dynamics
Michels et al. Acid-mediated prevention of aspartimide formation in solid phase peptide synthesis
La Cognata et al. Splicing: is there an alternative contribution to Parkinson’s disease?
Arndt et al. The emerging role of the first 17 amino acids of huntingtin in Huntington’s disease
Vecchio et al. Are apolipoprotein E fragments a promising new therapeutic target for Alzheimer’s disease?
Chen et al. Exploring the roles of post-translational modifications in the pathogenesis of Parkinson’s disease using synthetic and semisynthetic modified α-synuclein
Zhang et al. Selection of a d-enantiomeric peptide specifically binding to PHF6 for inhibiting tau aggregation in transgenic mice
Christensen et al. A high‐affinity, bivalent PDZ domain inhibitor complexes PICK 1 to alleviate neuropathic pain
JP2022522414A (ja) 生存標的キメラ分子
JP2013515474A (ja) 組換え体ｈ因子ならびにそのバリアントおよびコンジュゲート
Ziehm et al. Increase of positive net charge and conformational rigidity enhances the efficacy of d-enantiomeric peptides designed to eliminate cytotoxic Aβ species
Chemuru et al. Improved chemical synthesis of hydrophobic Aβ peptides using addition of C‐terminal lysines later removed by carboxypeptidase B
Baumann et al. Photoactivatable Chemokines-Controlling Protein Activity by Light.
US6887844B1 (en) NCAM binding compounds
WO2007137163A2 (en) Abc transporter ligand
Chikugo et al. Optimization of the Linker Length in the Dimer Model of E22P-Aβ40 Tethered at Position 38
Gallego-Villarejo et al. Big dynorphin is a neuroprotector scaffold against amyloid β-peptide aggregation and cell toxicity
US20060233807A1 (en) Novel therapies and methods of screening for therapeutic compounds
WO2018186770A1 (ru) Специфические пептидные ингибиторы клатрина
US20150329609A1 (en) Chimeric dystrophin proteins to treat dystrophinopathies
WO2002057796A3 (en) Compounds for treating pathologies associated with molecular crystallization
Sato et al. Automated fast-flow synthesis of chromosome 9 open reading frame 72 dipeptide repeat proteins

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 18781670

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 3058388

Country of ref document: CA

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2019554629

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2018781670

Country of ref document: EP

Effective date: 20191107

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2018781670

Country of ref document: EP

Effective date: 20191107