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WO2018146390A1 - Utilisation d'un compose appartenant a la famille des diuretiques pour traiter le cancer - Google Patents

Utilisation d'un compose appartenant a la famille des diuretiques pour traiter le cancer Download PDF

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Publication number
WO2018146390A1
WO2018146390A1 PCT/FR2018/000020 FR2018000020W WO2018146390A1 WO 2018146390 A1 WO2018146390 A1 WO 2018146390A1 FR 2018000020 W FR2018000020 W FR 2018000020W WO 2018146390 A1 WO2018146390 A1 WO 2018146390A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cancer
compound
represent
optionally substituted
heteroatoms
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/FR2018/000020
Other languages
English (en)
Other versions
WO2018146390A8 (fr
Inventor
Laura FONTENILLE
Amel KISSA
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Azelead
Original Assignee
Azelead
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Azelead filed Critical Azelead
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Priority to EP18711384.0A priority patent/EP3579839A1/fr
Publication of WO2018146390A1 publication Critical patent/WO2018146390A1/fr
Publication of WO2018146390A8 publication Critical patent/WO2018146390A8/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • A61K31/549—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame having two or more nitrogen atoms in the same ring, e.g. hydrochlorothiazide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
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    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis

Definitions

  • the invention relates to the use of a compound belonging to the family of diuretics for treating cancer.
  • the treatment of cancer can be done at different stages of the disease, in particular by treating primary cancer tumors or preventing the occurrence and / or treatment of secondary cancerous tumors.
  • the occurrence of cancer metastases is the leading cause of death in cancer patients.
  • the identification of new drugs capable of preventing the metastatic progression of a cancerous tumor is therefore essential.
  • Dasatinib is a potent inhibitor of many tyrosine kinases (mainly BCR-Abl and Src), which act by lodging in the active site of the kinase in competition with ⁇ .
  • the deregulated action of these tyrosine kinases leads to an abnormal proliferation of myeloid cells causing the appearance of leukemias.
  • Dasatinib is primarily used for the treatment of chronic myeloid leukemia resistant to Imatinib.
  • Althiazide (CAS number: 5588-16-9) is a thiazide diuretic used primarily in combination with spironolactone, which acts at the nephron level by inhibiting sodium reabsorption, resulting in increased diuresis and sodium excretion. and chlorides.
  • the state of the art puts forward a correlation between hypertension, antihypertensive treatments and cancer-related mortality. If the literature seems to show an increase in cancer-related mortality among patients with hypertension, it would also appear that there is an incidence of cancer following treatment for hypertension. Indeed, diuretics, which are mainly thiazides, could be a risk factor for renal cancer.
  • one of the aims of the invention is to provide a compound for its use in the treatment of cancer.
  • Another object of the invention is to provide a compound for use in treating primary and secondary cancer tumors and / or preventing the occurrence and development of secondary cancerous tumors.
  • the present invention relates to a family of compounds for use in the treatment of cancer, said family of compounds being of formula (II)
  • a can represent:
  • Ri and R 5 may represent independently of one another:
  • R 3 and R 7 may represent independently of one another:
  • R4 can represent:
  • o R 2 can represent:
  • o R 3 can represent:
  • R 2 , R 3 and R 4 are as defined above.
  • cancer treatment refers both to the treatment of the primary cancer tumor by preventing the local progression thereof and to the prevention of formation of secondary cancerous tumors also called cancerous metastases, in which distant tissues.
  • a "cancerous tumor” is defined by the development of a newly formed tissue within a normal tissue.
  • the cancerous tumor is caused by the dysfunction of cellular development.
  • the present invention also relates to a family of compounds for use in the treatment of cancer, said family of compounds being of formula (III)
  • a can represent:
  • R 3 and R 7 may represent independently of one another:
  • o R 4 can represent:
  • R 5 is H 2 ;
  • a represents a single bond, then b represents a single bond and i is 1:
  • R 2 can represent:
  • R 3 can represent:
  • R 2 , R 3 and R 4 are as defined above
  • the present invention also relates to a family of compounds for use in the treatment of cancer, said family of compounds being of formula (III)
  • a can represent:
  • R 3 and R 7 ⁇ represent independently of one another:
  • R 5 is H 2 ;
  • o R4 can represent: • H
  • R 2 can represent:
  • o R 3 can represent:
  • o R4 is as defined above
  • the present invention also relates to a family of compounds for use in the treatment of cancer, said family of compounds being of formula (IV)
  • R 3 can represent:
  • R4 can represent:
  • the present invention also relates to a family of compounds for use in the treatment of cancer, said family of compounds being of formula (V):
  • R 2 can represent:
  • R 3 can represent:
  • R can represent:
  • the present invention also relates to a family of compounds for use in the treatment of cancer, said family of compounds being of formula (VI):
  • R 2 can represent: • H
  • a linear or branched alkyl or alkenyl chain of 1 to 10 carbon atoms optionally comprising one or more heteroatoms chosen from S and S0 2 , and being optionally substituted by one or more halogen atoms, said heteroatoms possibly forming functional groups; including functions selected from SR a , and S0 2 NR a Rb, wherein R a and / or R b are, independently, hydrogen or a linear alkyl or alkenyl chain of 1 to 10 carbons;
  • R 3 can represent:
  • R4 can represent:
  • the present invention also relates to a compound for its use in the treatment of cancer; said compound being althiazide of formula (I)
  • the althiazide of formula (I) comprises the set of formththiazide corresponding to this formula, namely:
  • the present invention thus relates to a compound for use in the treatment of cancer; said compound being the althiazide of formula (IA),
  • the chiral purity greater than 99% is measured for example according to the method of analysis of the chiral purity described in the Materials and Methods section.
  • the present invention thus relates to a compound for use in the treatment of cancer; said compound being the althiazide of formula (IB),
  • the chiral purity greater than 99% is measured for example according to the method of analysis of the chiral purity described in the Materials and Methods section.
  • the present invention also relates to a compound for its use in the treatment of cancer; said compound being the racemic form of althiazide.
  • racemic form of althiazide is understood to mean an enantiomer mixture of althiazide in which the respective chiral purities of the enantiomers of formula (IA) and (IB) are comprised of 49.5. % to 50.5%, measured in particular according to the method of analysis of the chiral purity described in the Materials and Methods section.
  • the present invention also relates to a compound for its use in the treatment of cancer; said compound being of formula:
  • the present invention also relates to a compound for its use in the treatment of cancer, said family of compounds being of formula (VIIa) or (VIIIb):
  • the present invention relates to the compound according to the invention of formula (II) for its use in combination with an anticancer compound in the treatment of primary cancer tumors.
  • primary cancer tumor means a tumor arising at the level of an organ.
  • the present invention also relates to the thiazide of formula (I) or an enantiomer of formula (IA) or (IB) for its use in combination with an anticancer compound as soon as the primary tumor appears in order to prevent the progression of this latter locally. .
  • the present invention also relates to a compound of formula (IVa), (Va), (Vb), (Vc), (Vd), (V e), (Vf), (Via), (Vlla) or (Vllb) for its use in combination with an anticancer compound from the onset of the primary tumor to prevent the progression of it locally.
  • the present invention relates to the compound of formula (II) according to the invention for use in combination with an anticancer compound in the treatment of cancer in the pre-metastatic state.
  • the present invention also relates to the althiazide of formula (I) or an enantiomer of formula (IA) or (IB) for its use in combination with an anticancer compound in the treatment of cancer in the pre-metastatic state.
  • the present invention also relates to a compound of formula (IVa), (Va), (Vb), (Vc), (Vd), (Ve), (Vf), (Via), (Vlla) or (Vllb) for its use in combination with an anticancer compound in the treatment of cancer in the pre-metastatic state.
  • Althiazide used alone, has an anti-metastatic effect under normal physiological conditions.
  • the "treatment of cancer in the pre-metastatic state” refers to the prevention of secondary cancerous tumors. It is a treatment of cancer before the appearance of metastases, in the case of tumors considered “high risk” of metastases or from the appearance of the first metastases and the prevention of the appearance of the following.
  • the terms "secondary cancerous tumor” or “metastasis” define the abnormal development of tissues from migration through the bloodstream or lymphatic circulation of cancer cells.
  • the term "high-risk" tumors of metastases refers to the last stage of stratification of patients, determined according to the stage of development of the tumor, the Gleason score and the value of PSA. .
  • an anti-migratory effect is therefore considered to be a good indicator in vivo of the anti-metastatic activity.
  • a method for determining whether a molecule is capable of treating cancer in the pre-metastatic state has been described in international application WO 2011/007259.
  • This method consists in isolating molecules capable of inhibiting the emergence of hematopoietic stem cells from the floor of the aorta without cell division, but by endothelio-hematopoietic transition.
  • This emergence involves the loss of cell polarity of emerging cells, the loss of cellular junctions with these neighboring cells and the acquisition of migratory properties.
  • This model is used because it mimics each stage of the epithelial-mesenchymal transition, the first stage of cancer metastasis.
  • the endothelio-hematopoietic transition takes place in a region of the embryo called Aorta-Gonad-Mesonephros (AGM).
  • AGM Aorta-Gonad-Mesonephros
  • the colonization of hematopoietic tissues by hematopoietic stem cells mimics the appearance and / or progression of a metastatic cancerous tumor since it involves intravasation, extravasation, or the migration of HSCs following a gradient of SDF-1.
  • the first colonized tissue is caudal hematopoietic tissue (THC).
  • transgenic CD4LGFP green fluorescent protein
  • HSCs express GFP under the control of the CD41 promoter, which allows them to be monitored in vivo under a fluorescence microscope.
  • the read-out is the number of hematopoietic stem cells CD41: GFP accumulated in the AGM (mimicking the initiation of the metastatic process) and / or in the THC of the zebrafish embryo (mimicking the progression of the metastatic process).
  • the accumulation of CD4LGFP cells in THC implies that each cell has made an endothelio-hematopoietic transition, intravasation, extravasation at the THC level, has settled in a stromal niche and has proliferated.
  • the phenotypic characterization of embryos makes it possible to isolate compounds capable of preventing the endothelio-hematopoietic transition and their migration to THC without causing toxic effects on the developing embryo.
  • the present invention relates to the compound of formula (II) according to the invention for its use in the treatment of primary and secondary cancer tumors.
  • the present invention also relates to the compound of formula (I), (IA) or (IB) according to the invention for its use in the treatment of primary and secondary cancer tumors.
  • the present invention also relates to the compound of formula (IVa), (Va), (Vb), (Vc), (Vd), (Ve), (Vf), (Via), (Vlla) or (Vllb) according to invention for its use in the treatment of primary and secondary cancer tumors.
  • the compound of the invention thus relates to use in patients who may be suffering from cancer at different stages of the disease: for the treatment of primary cancer tumors only or after migration and presence of metastases.
  • the althiazide of formula (I) is cytotoxic.
  • the "hypoxia conditions" correspond to a decrease in the oxygen content of from 1% to 0.1%. This condition is found in rapidly growing tumors for which the microcirculation within the cells is diminished.
  • the present invention relates to the compound according to the invention of formula (II) for its use as an anti-cancer agent or potentiator of an anti-cancer agent, especially as an anti-metastatic agent, in the treatment of Cancer.
  • the present invention also relates to the compound according to the invention of formula (I), (IA) or (IB) for its use as an anti-cancer agent or potentiator of an anti-cancer agent, especially as an anti-metastatic agent, in the treatment cancer.
  • the present invention also relates to the compound according to the invention of formula (IVa), (Va), (Vb), (Vc), (Vd), (Ve), (Vf), (Via), (Vlla) or ( Vllb) for its use as an anti-cancer agent or potentiator of an anti-cancer agent, especially as an anti-metastatic agent, in the treatment of cancer.
  • anti-cancer agents denotes a compound that makes it possible to fight against cancer.
  • potentialator of an anti-cancer agent designates a compound capable of improving the anti-cancer properties of an anti-cancer agent.
  • the present invention relates to the compound according to the invention for its use as an anti-cancer agent in the treatment of cancer; said compound being althiazide of formula (I)
  • the present invention relates to the compound of formula (I) according to the invention for its use as anti-metastatic agent in the treatment of cancer, alone or in combination with:
  • An anti-mitotic agent in particular vinca-alkaloid, dolastatin, taxane or epothilone,
  • An anti-metabolite agent especially a pyrimidine analogue, a purine analogue or a folic acid analogue
  • alkylating agent in particular nitrogen mustard, oxazaphosphorine, triazene and hydrazine, ethylene imine, nitrosourea, alkyl or alkane sulfonate or organoplatin,
  • a DNA modifying agent in particular a topoisomerase I and II inhibitor
  • An anti-angiogenic agent in particular a molecule interacting with the tumor angiogenesis activation pathways, a directly anti-angiogenic molecule, or an inhibitor of the matrix metalloproteinases,
  • the present invention relates to the compound according to the invention for its use as potentiator of an anti-cancer agent in the treatment of cancer; said compound being althiazide of formula (I)
  • althiazide When administered with other anti-cancer molecules active under normal physiological conditions, althiazide is cytotoxic. When administered with other active anti-cancer molecules under hypoxia conditions, althiazide is cytotoxic.
  • normal physiological conditions are defined by conditions in which the oxygen content is 21%. This condition is also called normoxia, as opposed to hypoxia conditions in which the oxygen level is greatly decreased (from 1% to 0.1%).
  • the althiazide of formula (I) potentiates the anticancer effects of other drugs.
  • the inventors have thus observed an improvement in the drugs already used as anticancer drugs after the addition of althiazide. For example, rapamycin is no longer active under hypoxic tumor conditions and althiazide restores this activity.
  • a cytotoxicity test can show a restoration or improvement of the cytotoxic activity of anti-cancer molecules in combination with althiazide.
  • the principle of this test is based on the reduction of the tetrazolium to formazan cycle by the mitochondrial succinate dehydrogenase of active living cells, leading to the formation of a violet color precipitate in the mitochondria.
  • the amount of precipitate formed is proportional to the amount of living cells (but also to the metabolic activity of each cell).
  • a spectroscopic assay of the optical density at a wavelength of 570 to 590 nm makes it possible to know the relative quantity of living and metabolically active cells.
  • the test is the same in normal condition and in hypoxia condition.
  • Althiazide potentiates the cytotoxic effect of treatments administered to patients at different stages of cancer, both on primary cancer tumors and secondary cancer tumors.
  • Althiazide has the effect of potentiating and / or reducing the doses of other anticancer agents and thus reducing the problems of tolerability.
  • the present invention relates to the compound of formula (I) according to the invention for use in combination with another anti-cancer agent in the treatment of cancer.
  • the present invention relates to the compound of formula (I) according to the invention for its use as an anti-cancer agent or an agent potentiator.
  • anti-cancer said other anti-cancer agent being a radiation or a chemical agent, in particular a chemotherapy, radiotherapy, radio-pharmaceutical or an anti-angiogenic agent.
  • the present invention relates to the compound of formula (I) for its use according to the invention, said other anti-cancer agent being chosen from
  • alkylating agents such as alkylsulphonates including busulfan, dacarbazine, procarbazine, cloretazine, nitrogen mustards such as chlormethine, melphalan, chlorambucil, cyclophosphamide, ifosfamide, nitrosoureas such as carmustine, lomustine, semustine, streptozocin l altretamine, fotemustine;
  • antineoplastic alkaloids such as vincristine, vinblastine, vinorelbine, vindesine;
  • taxanes such as paclitaxel or taxotere
  • antineoplastic antibiotics such as actinomycin, bleomycin
  • intercalating agents such as mitoxantrone, etoposide, bleomycin, actinomycin D, amsacrine, alliptinium
  • antineoplastic antimetabolites folate antagonists, methotrexate; inhibitors of purine synthesis; purine analogues such as mercaptopurine, 6-thioguanine; inhibitors of pyrimidine synthesis, aromatase inhibitors, capecitabine, pyrimidine analogs such as fluorouracil, gemcitabine, cytarabine and cytosine arabinoside; bréquinar, nelarabine;
  • topoisomerase inhibitors such as irinotecan, exatecan, topotecan, teniposide, camptothecin or etoposide;
  • anticancer hormone agonists and antagonists including tamoxifen
  • kinase inhibitors such as imatinib, nilotinib and dasatinib, midaustorin, sorafenib, lestaurtinib, tandutinib, sirolimus, everolimus or tensirolimus;
  • anti-inflammatories such as pentosan polysulphate, corticosteroids, prednisone, dexamethasone;
  • ceplene histamine dihydrochloride
  • antracyclines such as daunorubicin, epirubicin, pirarubicin, idarubicin, zorubicin, aclarubicin, annamycin, doxorubicin, mitomycin and methramycin;
  • anticancer metal complexes platinum derivatives such as cisplatin, carboplatin, oxaliplatin, satraplatin;
  • immunotherapy adjuvants such as gemtuzumab ozogamicin, HuM 195; biotherapeutic agents such as CT388-I L3;
  • antisense such as GTI-2040
  • the present invention relates to the compound of formula (II) for its use according to the invention, said compound being formulated to be administered to humans or animals at a dosage of 0.016 mg / kg to 16 mg / kg in admixture with pharmaceutically acceptable excipients.
  • the present invention also relates to the compound of formula (I), (IA) or (IB) for its use according to the invention, said compound being formulated to be administered to humans or animals at a dosage of 0.016 mg / kg to 16 mg / kg, in admixture with pharmaceutically acceptable excipients.
  • the present invention also relates to the compound of formula (IVa), (Va), (Vb), (Vc), (Vd), (Ve), (Vf), (Via), (Vlla) or (Vllb) for its use according to the invention, said compound being formulated to be administered to humans or animals at a dosage of 0.016 mg / kg to 16 mg / kg, in admixture with pharmaceutically acceptable excipients.
  • “Pharmaceutically acceptable excipients” are substances which are non-toxic, biologically tolerable and biologically capable of being administered to a subject, such as a inert substance, added to a pharmacological composition or used as a carrier, carrier or diluent to facilitate the administration of an agent and which is compatible therewith.
  • Examples of pharmaceutically acceptable excipients include, for example, within the meaning of the invention, oils, surfactants (such as Tween), alcohols, polyols, glycerol and vegetable oils, water, solutions salines, glycerol solutions, ethanol, N- (1- (2,3-dioleyloxy) propyl) -N, N, N-trimethylammonium (DOTMA), diolesylphosphatidylethanolamine (DOPE), and liposomes.
  • oils surfactants (such as Tween)
  • alcohols such as Tween
  • polyols such as glycerol and vegetable oils
  • water solutions salines
  • glycerol solutions ethanol
  • N- (1- (2,3-dioleyloxy) propyl) -N N, N-trimethylammonium (DOTMA), diolesylphosphatidylethanolamine (DOPE), and liposomes.
  • DOPE diolesylphosphatidy
  • the present invention relates to the compound of formula (I) for its use according to the invention, said compound being formulated to be administered to humans at a dosage of 0.016 mg / kg to 1.6 mg / kg in admixture with pharmaceutically acceptable excipients. Below 0.016 mg / kg of active substance, the althiazide of formula (I) is not effective when administered to humans. Abith an active ingredient above 1.6 mg / kg, the althiazide of formula (I) causes toxicity in humans.
  • the present invention relates to the compound of formula (I) for its use according to the invention, said compound being formulated to be administered to animals at a dosage of 0.1 mg / kg to 16 mg / kg in admixture with pharmaceutically acceptable excipients.
  • an administration to animals includes an administration, in particular to domestic animals such as dogs or cats.
  • the althiazide of formula (I) is not effective during administration to the animal. Above 16 mg / kg of active substance, the althiazide of formula (I) causes toxicity in the animal.
  • the present invention relates to the compound of formula (I) for its use according to the invention, said compound being formulated to be administered, to humans or animals, in unitary form of 1 mg to 160 mg, in admixture with pharmaceutically acceptable ones.
  • the present invention relates to the compound of formula (I) for its use according to the invention, said compound being formulated to be administered to humans in unit form from 1 mg to 100 mg, in admixture with pharmaceutically acceptable excipients. Below 1 mg of active substance, the althiazide of formula (I) is not effective when administered to humans. Above 100 mg of active substance, the althiazide of formula (I) causes toxicity in humans.
  • the present invention relates to the compound of formula (I) for its use according to the invention, said compound being formulated to be administered to animals in unit form from 1 mg to 160 mg, mixed with excipients pharmaceutically acceptable. Below 1 mg of active substance, the althiazide of formula (I) is not effective when administered to the animal. Above 160 mg of active substance, the althiazide of formula (I) causes toxicity in animals.
  • the present invention relates to a method for the treatment of cancer comprising the administration, to humans, of the compound of formula (I) according to the invention, used as an anti-cancer agent or potentiator of a anticancer agent, at a dosage of 1 mg / kg / day to 100 mg / kg / day, in admixture with pharmaceutically acceptable excipients.
  • the present invention relates to a method for the treatment of cancer comprising administering to animals the compound of formula (I) according to the invention, used as anti-cancer agent or potentiator of an anti-cancer agent. at a dosage of 1 mg / kg / day to 160 mg / kg / day, in admixture with pharmaceutically acceptable excipients.
  • the althiazide of formula (I), according to the invention is used as potentiator of an anti-cancer agent, the doses of active substances as defined above are lower, because of a synergy between the althiazide of formula (I) and the anti-cancer agent in combination
  • the present invention relates to a method for the treatment of cancer comprising administering to animals the compound of formula (I) according to the invention, at a dosage of 1 mg / kg / day to 160 mg / kg / day. mg / kg / day, in admixture with pharmaceutically acceptable excipients.
  • the althiazide of formula (I), according to the invention is used as potentiator of an anti-cancer agent, the doses of active substances as defined above are lower, because of a synergy between the althiazide of formula (I) and the anti-cancer agent in combination.
  • the present invention relates to the compound of formula (I) for its use as an anti-cancer agent or potentiator of an anti-cancer agent according to the invention, said compound being used by administration orally, parenterally, inhalation spray, nasal, vaginal, rectal, sub-lingual or local, including topical.
  • parenteral routes is meant, for example, the intramuscular, intraperitoneal, intravenous, intracerebroventricular, intracisternal or subcutaneous routes.
  • the compound of the invention is used by administration "orally". Oral administration is preferred for an anti-metastatic compound that is given as daily and long-term (several years) treatment.
  • Suitable oral dosage unit forms include tablets, soft or hard capsules, capsules, powders, granules, oral solutions or suspensions, and intravenous forms of administration.
  • the main active ingredient is mixed with a pharmaceutical carrier such as gelatin, starch, lactose, magnesium stearate, talc, gum arabic or the like.
  • a pharmaceutical carrier such as gelatin, starch, lactose, magnesium stearate, talc, gum arabic or the like.
  • the tablets can be coated with sucrose or other suitable materials or they can be treated in such a way that they have prolonged or delayed activity and continuously release a predetermined amount of active ingredient.
  • a preparation in capsules is obtained by mixing the active ingredient with a diluent and pouring the resulting mixture into soft or hard gelatin capsules.
  • a syrup or elixir preparation may contain the active ingredient together with a sweetener, an antiseptic, as well as a flavoring agent and a suitable colorant.
  • the water-dispersible powders or granules may contain the active ingredient by mixing with dispersing agents or wetting agents, or suspending agents, as well as with taste correctors or sweeteners.
  • dispersing agents or wetting agents or suspending agents, as well as with taste correctors or sweeteners.
  • aqueous suspensions, isotonic saline solutions or sterile and injectable solutions which contain pharmacologically compatible dispersing agents and / or wetting agents are used.
  • the active ingredient may also be formulated as microcapsules, optionally with one or more additive carriers.
  • Formulations suitable for the chosen form of administration are known in the art and described for example in Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 22 th Edition, 2013, The Pharmaceufical Press.
  • the present invention relates to the compound for its use according to the invention, said cancer being
  • digestive cancer such as rectal cancer, stomach cancer
  • gynecological cancer such as uterine cancer, cervical cancer, vaginal cancer, ovarian cancer
  • a urogenital cancer such as bladder cancer, prostate cancer, seminal vesicles, testes, germ cell tumors
  • ENT cancer such as cancer of the mouth, cheeks, palate, tongue, tonsils, pharynx, oropharynx and hypopharynx or cancer of the nasal cavity, sinuses, nasopharynx and larynx;
  • liver cancer liver cancer
  • pancreatic cancer pancreatic cancer
  • - cancers of the endocrine glands including thyroid cancer, pituitary gland, adrenal gland;
  • skin cancers including hemangiomas, melanomas, sarcomas, including Kaposi's sarcoma;
  • tumors of the brain, nerves, eyes, meninges including astrocytomas, gliomas, glioblastomas, retinoblastomas, neuromas, neuroblastomas, schwannomas, meningiomas;
  • leukemia (Acute Lymphocytic Leukemia (ALL), Acute Myeloid Leukemia (AML), Clironic Myeloid Leukemia (CML), Chronic lymphocytic leukemia (CLL)) chloromas, plasmocytomas, leukemias T or cellules cells, non-Hodgkin's or Hodgkin's lymphoma, myeloma, various hematological malignancies;
  • ALL Acute Lymphocytic Leukemia
  • AML Acute Myeloid Leukemia
  • CML Clironic Myeloid Leukemia
  • CLL Chronic lymphocytic leukemia
  • the present invention relates to the compound of formula (I) for its use according to the invention, in combination with another anti-cancer agent, said other anti-cancer agent being a radiation, in particular a radiotherapy agent , said cancer being
  • a digestive cancer such as a cancer of the rectum, a cancer of the stomach;
  • gynecological cancer such as uterine cancer, cervical cancer, vaginal cancer, ovarian cancer;
  • urogenital cancer such as bladder cancer, prostate cancer, seminal vesicles, testes, germ cell tumors;
  • ENT cancer such as cancer of the mouth, cheeks, palate, tongue, tonsils, pharynx, oropharynx and hypopharynx or cancer of the nasal cavity, sinuses, nasopharynx and larynx;
  • liver cancer liver cancer
  • cancers of the endocrine glands including thyroid, pituitary, adrenal gland cancer;
  • skin cancers including hemangiomas, melanomas, sarcomas, including Kaposi's sarcoma;
  • - tumors of the brain, nerves, eyes, meninges including astrocytomas, gliomas, glioblastomas, retinoblastomas, neuromas, neuroblastomas, schwannomas, meningiomas; hematopoietic malignancies; leukemia, (Acute Lymphocytic Leukemia (ALL), Acute Myeloid Leukemia (AML), Clironic Myeloid Leukemia (CML), Chromic Lymphocytic Leukemia (CLL)) Chloromas, Plasmacytomas, T or B cell leukemias, Non-Hodgkin's or Hodgkin's lymphomas, Myeloma, various hematological malignancies;
  • ALL acute Lymphocytic Leukemia
  • AML Acute Myeloid Leukemia
  • CML Clironic Myeloid Leukemia
  • CLL Chromic Lymphocytic Leukemia
  • the present invention also relates to a process for separating the racemic form of the althiazide of formula (I), to obtain the enantiomers of formula (IA) and of formula (IB) in pure form, or with a chiral purity greater than 99 %, by a supercritical fluid separation (SFC) technique, in particular at a temperature ranging from room temperature to 80 ° C and in particular by SFC with an acid mobile phase or by SFC with a mobile phase comprising acetonitrile.
  • SFC supercritical fluid separation
  • This separation mode makes it possible to obtain a high purity of the enantiomers (> 99%), while limiting the enantiomer loss during the separation.
  • the purities obtained are 100% for the first enantiomer (IA) and 99.4% for the second enantiomer (IB), with a mass recovery rate of the two enantiomers (IA ) and (IB) 83.7%
  • the present invention also relates to a method of preserving enantiomers, to preserve their chiral purity, by storage at a maximum temperature of 5 ° C, and protected from light.
  • This mode of preservation makes it possible to preserve the chiral purity of the product, but does not make it possible to totally preserve the enantiomers of the althiazide from a degradation to another product than a form of althiazide.
  • the present invention also relates to a pharmaceutical composition containing a compound of formula (IA) or (IB) in combination with a pharmacologically acceptable carrier.
  • PS A prostate specific antigen
  • AGM aorta-gonad-mesonephros region
  • CSH Hematopoietic stem cells
  • THC Caudal Hematopoietic Tissues
  • GFP Green Fluorescent Protein
  • EHT endothelio-hematopoietic transition
  • EMT epithelial-mesenchymal transition
  • Figure 1 Similarities of endothelial and epithelial cell migration processes at ⁇ and ⁇ . The main steps are conserved (loss of polarity and cell junctions, degradation and migration through the extracellular matrix, intravasation and extravasation into the bloodstream and colonization and proliferation in distant tissues).
  • Figure 2 Observation of the exit and local migration of HSCs in the Aorte-Gonade-Mesonephros (AGM) region of the 48hpf stage zebrafish embryo. After treatment with the thiazide at ⁇ , there is a reduction of the junction loss and the local migration of CSH.
  • AGM Aorte-Gonade-Mesonephros
  • Figure 3 Percentage of cells accumulated in THC after incubation of zebrafish embryos in the presence of molecules belonging to the diuretic or antihypertensive therapeutic classes.
  • Althiazide is the most effective chemical compound on inhibiting the migration of HSCs into distant tissues.
  • Dasatinib is used as a reference molecule. The compounds are tested at the concentration of 10 ⁇ .
  • Figure 5 Comparison of the anti-emigrative effects of dasatinib and althiazide on the zebrafish embryo in vivo. Both molecules are diluted at a concentration of 10 ⁇ and tested by balancing on zebrafish embryos.
  • the control solution contains an equivalent amount of DMSO (1%).
  • Statistical test student test. p-value: 5.6595E-6
  • Figure 6 Curve of the dose effect of althiazide on the zebrafish embryo. Observation of the number of cells migrated in distant tissues (THC) after treatment with balneation (percentage of effectiveness) with a solution containing althiazide at concentrations of 1 ⁇ , 10 ⁇ , 100 ⁇ , 1000 ⁇ . NOEC: No Observed Effect Concentration. EC50: Effective concentration 50%.
  • Figure 7 Evaluation of the toxicity of althiazide and dasatinib on the zebrafish embryo by measuring the percentage of embryo survival as a function of the concentration of althiazide and dasatinib (A) or the duration of treatment ( B).
  • the molecules are diluted at concentrations of 1 ⁇ , 10 ⁇ , 100 ⁇ and 1000 ⁇ and incubated for 24, 48 and 72 hours.
  • Statistical test student test.
  • p-value 1.49852E-7.
  • Figure 8 Migration and cytotoxicity test on 4T1 cells in culture in the presence of althiazide (A) or dasatinib (B) at concentrations of 10 nM, 100 nM, 1 ⁇ , 10 ⁇ and 100 ⁇ . Error bar calculated with the standard error.
  • Figure 9 Percentage of cells accumulated in THC after incubation of zebrafish embryos in the presence of molecules belonging to the class of thiazide compounds at different concentrations.
  • Althiazide is the most effective chemical compound on inhibiting the migration of CD41 cells into distant tissues. The compounds are tested at a concentration of 10 ⁇ or 25 ⁇ .
  • Figure 10 Rate of cells migrated during a migration test on MDA-MB-231 cells, as a function of the amount of althiazide added (10, 50 or 100 ⁇ ) compared to the control test.
  • Figure 11 Impact of althiazide on the expression of transcription factors of genes involved in the epithelio-mesenchymal transition (TEM) under hypoxic conditions.
  • the genes ZEB1, SNAIL, Vimentin and N-cad have a deleterious impact and must be inhibited.
  • the E-cad gene has a beneficial effect and needs to be overexpressed.
  • the white columns mention the control while the black columns are the expression results of these genes with an althiazide concentration of ⁇ .
  • FIG. 12 Cell viability and cytotoxicity test on MDA-MB-231 cells in the presence of doxorubicin alone (white columns) or of an althiazide and doxorubicin mixture (black columns), at different concentration (doxorubicin: 0.1, 0.5, 1, 2.5, 5, 10, 25, 50, 100 ⁇ , 100 ⁇ althiazide).
  • FIG. 13 Cytotoxicity test on MDA-MB-231 cells in the presence of doxorubicin alone (Control) or of a mixture of doxorubicin supplemented with a compound of the invention at a concentration of 50 ⁇ .
  • the althiazide batch used is noted AZ-M015 and is in racemic form.
  • the first enantiomer of formula (IA) and derived from ⁇ - ⁇ 015 is noted AZ (A).
  • the second enantiomer of formula (IB) and derived from ⁇ - ⁇ 015 is noted AZ (B).
  • the analysis of the chiral purity of the products to be tested was carried out by a supercritical fluid separation (SFC) technique on a Berger prep chromatograph, marketed by Thar Instruments.
  • the mobile phase of the separation consists of a mixture of methanol added. 0.01% acetic acid and C0 2 in a 20/80 ratio.
  • the stationary phase chosen is a Chiralpak IC 59m column, 250 mm by 20 mm, marketed by sigma aldrich.
  • the injection rate is 50 ml per minute, at 40 ° C. under a pressure of 100 bar.
  • the product to be analyzed is dissolved in methanol supplemented with 0.01% acetic acid, with a concentration of 1 mg / ml. 10 ⁇ of this product is injected.
  • the detector is a UV detector with a wavelength greater than 275 ran.
  • Table 1 Composition of the mobile phase used for UHPLC analysis. Between each point, the flow varies by gradient (TFA: Trifluoroacetate)
  • the column used is a Waters Acquity UPLC CSH Cl 8 1.7 ⁇ column, 2.1 * 100 mm, marketed by Water.
  • the mobile phase flux is 0.6 ml / minute.
  • the detector is a UV detector with a wavelength of 210 nm.
  • the product to be analyzed is dissolved in acetonitrile, with a concentration of 1 mg / ml, and the injected volume is 1 ⁇ l.
  • the separation of the two enantiomers of the AZ-M015 AZ (A) and AZ (B) althiazide was carried out by a supercritical fluid separation (SFC) technique on a Berger prep chromatograph.
  • SFC supercritical fluid separation
  • the shift in the retention time of each enantiomer makes it possible to recover, at the separation outlet, first the compound AZ (A) and, secondly, the compound AZ (B).
  • the recovery is indexed to the detector signal for opening and closing the recovery of each compound.
  • the mobile phase of the separation consists of a methanol mixture supplemented with 0.01% acetic acid and CO 2 in a 20/80 ratio or a mixture of acetonitrile and CO 2 in a 30/70 ratio.
  • the stationary phase chosen is a Chiralpak IC 5 ⁇ column, 250 mm by 20 mm.
  • the injection rate is 50 ml per minute, at 40 ° C. under a pressure of 100 bar.
  • the product to be separated is dissolved in a methanol mixture supplemented with 0.01% acetic acid or in acetonitrile. A series of injections is performed.
  • the detector is a UV detector with a wavelength greater than 275 nm.
  • the collection of the respective products is started when the signal exceeds a high threshold detection value and is stopped when the signal falls below a low threshold detection value.
  • the high and low threshold values are chosen during a preparatory test according to a compromise between the quantity of enantiomers recovered, the desired purity and the analysis conditions.
  • the collected products are evaporated before being analyzed for their respective purity.
  • Solubilization of althiazide and enantiomers was achieved by solubilization in a solvent of 95% 1M Tris pH 10.8 and supplemented with 5% pure ethanol. Althiazide and enantiomers are resuspended at a concentration of 2 mg / ml. Each of the solutions is vortexed for 30 seconds and then placed in an ultrasound bath for a sonication of 5min; this operation is repeated once. The dissolution is complete despite the absence of DMSO.
  • Solubilization of althiazide and enantiomers was also achieved by solubilization in a solution consisting of a mixture of 3.7% NaHCO 3 0.2M and 21% Na 2 CO 3 0.2M at pH 10.6 and completed with pure water.
  • Althiazide and enantiomers are resuspended at a concentration of 2.5 mg / ml.
  • Each of the solutions is vortexed for 30 seconds and then placed in an ultrasound bath for a sonication of 1min. The dissolution is complete despite the absence of DMSO.
  • the stability tests of the enantiomers were performed by comparing the racemization and the degradation of the stored samples either at room temperature without protection against light, or under controlled temperature at 5 ° C and protected from light.
  • the Tg transgenic zebrafish line (cd41: GFP) is maintained in accordance with the protocols described by the Ethical Committee for Animal Experimentation.
  • the fish are kept at a temperature of 28 ° C and their development stage is determined as before.
  • the molecules are tested on zebrafish embryos at the 25 hpf stage.
  • the embryos are decorticated and transferred to a 96-well plate (1 embryo / well) containing the test compounds in a final volume of 100 ⁇ l of the embryonic growth medium (60 ⁇ g salt for 1 ml H 2 0).
  • the final concentration of DMSO does not exceed 1%.
  • the treated embryos are incubated for 24 hours in an incubator at 28 ° C.
  • the embryos are imaged with a plate reader after being anesthetized with 0.16% tricaine (ethyl-3-aminobenzoate).
  • tricaine ethyl-3-aminobenzoate
  • a quantification of the number of fluorescent cells (CD41: GFP) accumulated in the CHT is carried out.
  • the toxicity study is carried out over 72 hours.
  • the embryos are treated at 25 hpf with the doses used for the test of chemical compounds of each of the compounds, in a 96-well plate, in a final volume of 100 ⁇ l of the embryonic growth medium.
  • the embryos are incubated 72 h at 28 ° C.
  • the medium is changed every 24 hours.
  • the survival rate of embryos and the appearance of developmental defects are analyzed daily.
  • the cell migration assays on the 4T1 cell line are carried out in vitro in 12-well plates on the 4T1 cell line.
  • the cells are maintained in a DMEM culture medium supplemented with 10% calf serum (S VF) and incubated at 37 ° C and 5% C0 2 .
  • S VF calf serum
  • the cell monolayer is injured with a 10 ⁇ pipette tip.
  • the medium is aspirated and replaced by a medium containing the compounds to be tested at the concentrations described.
  • the wells are imaged using a microscope and the injured surface is repaired at the indicated times to highlight the cell anti-migratory power of the tested chemical compounds.
  • MDA-MB-231 cell line Cell migration assays on the MDA-MB-231 cell line are performed in vitro in 96-well plates.
  • the MDA-MB-231 cells were seeded at the density of 50000 cells per well, to form a monolayer.
  • the cells are maintained in a DMEM culture medium supplemented with 0.2% fetal calf serum and incubated at 37 ° C, 5% CO 2 and 1% O 2 for 24 hours.
  • the cell monolayer is injured with a pipette tip.
  • the cells are then rinsed with PB S to remove the cells in suspension and the different treatments are added, as well as DMEM supplemented with 10% FCS.
  • the cells are incubated for 18 hours at 37 ° C, 5% CO 2 and 20% O 2.
  • the images were analyzed using ImageJ software (National Institutes of Health, USA).
  • the cytotoxicity tests are carried out in cell culture in 96-well plates, on the 4T1 cell line.
  • the cells are maintained in a DMEM culture medium supplemented with 10% fetal calf serum (control condition) or placed in the presence of an MTT solution (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) bromide). 2,5-diphenyl tetrazolium) at 1 mg / ml in DMEM medium supplemented with 10% fetal calf serum (100 ⁇ l per well).
  • the cells are incubated at 37 ° C and 5% CO 2 for 4 hours.
  • the reaction is stopped by the addition of 100 ⁇ l of a solution containing 10% of SDS and 0.01 M of HCl.
  • the cells are placed in an incubator at 37 ° C and 5% CO 2 for 2 hours.
  • the absorbance is measured between 570 and 590 ⁇ m.
  • the negative control is performed on a well without cells, containing 200 ⁇ l of a 1 mg / ml solution of MTT diluted in DMEM culture medium supplemented with 10% fetal calf serum.
  • the cell cultures are carried out on human breast cancer epithelial cell lines MDA-MB-231 (HTB-26 TM), resulting from metastases present in a pleural effusion of a patient with a mammary adenocarcinoma.
  • This line is used as a triple negative cancer cell model (no expression of ER-type nuclear estrogen receptors, nuclear progesterone receptors or overexpression of the oncogene encoding HER2 protein (Human Epidermal Growth factor Receptor).
  • the cells were cultured in DMEM medium (Eurobio, Fance) supplemented with 10% FCS (Eurobio, Fance) at 37 ° C, 5% CO2. the 3 days.
  • the cells were placed in a controlled atmosphere at 1% oxygen 24 hours before the application of the different treatments. Proliferation is measured by crystal violet staining.
  • Cells were seeded in 96-well plates at a density of 10,000 cells per well. After 24 h of culture at 37 ° C., 5% CO 2 and 1% O 2, the medium was renewed and added with althiazide (at the concentrations described). The cells were incubated for an additional 24, 48 or 72 hours at 37 ° C., 5% CO 2 and 1% O 2. After rinsing the cells with PBS, 50 ⁇ l of a 0.5% crystal violet solution in 20% ethanol. has been added to each well. The plate was incubated at room temperature with stirring for 15 minutes.
  • the cells were washed and then lysed with a 1% SDS solution in order to solubilize the crystal violet. Absorbance was measured at 570 nm using the Tecan Sunrise spectrophotometer. The results are expressed as a percentage of the control.
  • the cell viability is determined via the IC 50 index, measured by the MTT technique (2- (4,5-dimethyl-2-thiazolyl) -3,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide) (Mosmann, 1983). This colorimetric test is based on the reduction of yellow tetrazolium salts into insoluble purple formazan crystals in aqueous solution. The spectrophotometric measurement of the absorbance at 570 nm is directly proportional to the number of viable cells
  • the cells were seeded in 96-well plates at a density of 25,000 cells per well. After 24h culture at 37 ° C, 5% C02 and 1% 02, the medium was renewed and supplemented with increasing doses of doxorubicin +/- althiazide. The cells were incubated for 24 h at 37 ° C., 5% CO 2 and 1% O 2. The MDA-MB-231 cells were washed and then incubated for 1 hour at 37 ° C. with 100 ⁇ l of a 0% MTT solution. 5 mg / mL prepared in culture medium. The formazan crystals were dissolved in 100 of DMSO and the absorbance measured at 570 nm using the Tecan Sunrise spectrophotometer. The IC50 was determined using the Graphpad Prism 5.0 software. The treatments were carried out in triplicate and the manipulation was carried out 5 times.
  • Table 2 List of primers used by qPCR
  • mice The results are calculated using the Delta Delta Ct ( ⁇ ACt) method.
  • the anti-metastatic effects of althiazide in mice are evaluated in immunocompromised mice injected with cells from a tumor line in the mammary gland.
  • mice are treated for 4 weeks with an althiazide injection each day.
  • the mammary tumors of the mice are measured 3 times a week for 4 weeks.
  • mice for which the mammary tumor has reached 2g are sacrificed and the number of cancerous metastases invading the lung is counted.
  • This number is compared to the batch of control mice injected with the same tumor cell line and treated with PBS.
  • a decrease in the number of metastases in the lungs of mice treated with althiazide compared to the control lot in which the mice are treated with PBS makes it possible to validate the anti-metastatic effect of althiazide in vivo in mice.
  • mice The potentiating effects of althiazide on an anti-cancer agent in mice are evaluated in immunocompromised mice injected with cells from a tumor line in the mammary gland.
  • althiazide is given alone or in combination with the anti-cancer agent. Several doses of anti-cancer agent are tested.
  • mice undergo a treatment for 4 weeks with an injection of anticancer agent per week over 4 weeks and an injection of althiazide every day for 4 weeks.
  • the first dose of althiazide is given on the first day after injection of cells from a tumor line into the mammary gland.
  • the mammary tumors of the mice are measured 3 times a week and compared to the batches of mice treated with PBS alone or with althiazide alone.
  • Example 1 Anti-metastatic action of althiazide: test of initiation and progression of the metastatic process on the zebrafish embryo.
  • Althiazide was tested on the zebrafish embryo according to the method previously described in the international application WO 2011/007259.
  • This method consists in isolating molecules capable of inhibiting the emergence of hematopoietic stem cells from the floor of the aorta without cell division, but by endothelio-hematopoietic transition. This emergence involves the loss of cell polarity of emerging cells, the loss of cellular junctions with these neighboring cells and the acquisition of migratory properties.
  • This model is used, in the context of the invention, because it mimics each of the stages of the epithelio-mesenchymal transition, the first stage of the cancerous metastasis.
  • the endothelio-hematopoietic transition takes place in a region of the embryo called Aorto-Gonado- Mesonephros (AGM).
  • AGM Aorto-Gonado- Mesonephros
  • the colonization of hematopoietic tissues by hematopoietic stem cells mimics the appearance and / or progression of a metastatic tumor since it involves intravasation, extravasation, or the migration of HSCs following a gradient of SDF1.
  • the first colonized tissue is caudal hematopoietic tissue (THC). This physiological process is considered, in the context of the invention, as representative of the appearance and / or progression of a metastatic tumor.
  • CD41 green fluorescent protein (GFP) transgenic embryos, in which hematopoietic stem cells (HSCs) express GFP, were used, allowing them to be monitored in vitro. vivo under a fluorescence microscope.
  • GFP green fluorescent protein
  • Each CD41 GFP embryo at the 25-hour post fertilization (hpf) stage was added to a well of a 96-well plate containing one of the compounds to be tested. The treated embryos were incubated 24 hours at 28 ° C.
  • Each well containing the 50hpf embryos was then imaged using a fluorescence microscope to analyze the number of cells dispersed in the embryo and to quantify their distribution in the different regions of the embryo.
  • the read-out is the number of hematopoietic stem cells CD41: GFP accumulated in the AGM (mimicking the initiation of the metastatic process) and / or in the THC of the zebrafish embryo (mimicking the progression of the metastatic process). accumulation CD41: GFP cells in THC imply that each cell has made an endothelio-hematopoietic transition, intravasation, extravasation at the THC level, settled in a stromal niche and proliferated ( Figure 1). In parallel, the phenotypic characterization of embryos has made it possible to isolate compounds capable of preventing the endothelio-hematopoietic transition and their migration towards the THC without causing a toxic effect on the developing embryo.
  • althiazide has proved effective against the migration of CSH locally and to distant organs (THC).
  • Dasatinib is a potent inhibitor of many kinase enzymes such as BCR-ABL, KIT and PDGFR ⁇ / ⁇ , and is therefore primarily used for the treatment of chronic myeloid leukemia resistant to imatinib, but also a potent inhibitor of c-SRC. , LYN, FY and EPHA2, which may explain its low tolerability.
  • Example 2 Absence of anti-metastatic effect of other diuretics or antihypertensives: evaluation of the progression of the metastatic process on the zebrafish embryo.
  • althiazide In order to verify the specificity of action of althiazide, other chemical molecules belonging to the therapeutic classes of diuretic or anti-hypertensive (Chlortalidone, Metolazone, Pentolinium-bitartrate and Hydralazine-hydrochloride) were tested at the same concentration as the althiazide (10 ⁇ l). These chemical molecules do not cause a decrease in the number of HSCs accumulated in THC. A decrease of 20% is however observed after treatment with the concentration of 10 ⁇ of Hydrochlorothiazide which has a structure close to althiazide.
  • Chlortalidone Chlortalidone, Metolazone, Pentolinium-bitartrate and Hydralazine-hydrochloride
  • Example 3 In Vivo Anti-Migration Activity: Test of the Progression of the In Vivo Metastatic Process on the Zebrafish Embryo
  • the concentration at which the althiazide is not effective (NOEC)
  • the concentration at which the althiazide is 50% effective (EC50)
  • the concentration at which the althiazide is 100% effective the number of cells migrated to distant tissues (THC) after balancing with a solution containing althiazide at concentrations of 1 ⁇ , 10 ⁇ , 100 ⁇ , 1000 ⁇ for 24 hours was quantified.
  • the 4T1 cells are derived from tumors of the mammary gland in mice. It is a particularly suitable model and widely used for studies on cancerous tumors and more particularly on metastasis. Indeed, mammalian in vivo efficacy studies are performed on the mouse and the 4T1 model is an orthotopic syngeneic model of murine cells injected into BalbC mice, which promotes dialogue between the tumor and its environment; essential condition for cell migration. Moreover, this model is known to develop a large number of metastases in a relatively short period of time. Metastases appear in the lungs, which facilitates their observation in the visible.
  • the anti-metastatic efficacy of the thiazide compounds was determined as for the measurement of the anti-metastatic efficacy of athiazide, quantified by the cell migration assay on the 4T1 cell line described in the Materials and Methods section. These compounds were tested at 10 and 25 ⁇ . Each of these compounds makes it possible to reduce the number of cells having colonized THC (caudal haematopoietic tissue) and thus confirms the anti-metastatic activity of the thiazide compounds.
  • AZ-M015 reduces migration by 30%. However, the most effective compound is MCZ since it reduces migration by 37% when used at 10 ⁇ and 55% when used at 25 ⁇ .
  • the enantiomers of PAZ-M015, AZ (A) and AZ (B) further reduce the invasion of THC by CD41: GFP cells.
  • CD41 GFP cells.
  • a "scratch test” is carried out on MDA-MB-231 cells in culture according to the protocol of the cell migration test on the MDA-MB-231 cell line described. in the Materials and Methods section. This test is used to evaluate the migratory power of a chemical compound on cells in culture. The experiment consists in studying the ability of cells to reconstitute a cellular mat ('cicatrisation'), which implies the migration property of the cells. component cell monolayer on the injured area. The test is carried out in a 96-well microtiter plate. Injury is performed using a pipette tip, and then the cells are treated with althiazide.
  • the images were analyzed using Image J software (National Institue of Health, USA)
  • the epithelial-mesenchymal transition is the first step in the process of formation of cancer metastases. Indeed, epithelial cells begin by performing a TEM (loss of cellular adhesion, loss of cellular polarity and acquisition of migratory properties) and then become invasive (Thiery & Sleeman, 2006).
  • ⁇ - ⁇ 015 induces a decrease in the expression of transcription factors ZEB1 (-14%) and SNAIL (-19%), VIMENTIN (-22%) and N-CADHERIN (-33%) as well as an increase in ⁇ -CADHERIN expression of 73% (FIG. 11).
  • AZ-M015 is therefore an inhibitor of the TEM.
  • ⁇ - ⁇ 015 acts directly on the metastatic spread by blocking the first stage of this cancerous process.
  • Doxorubicin is a substance widely used in the treatment of many cancers (bronchopulmonary cancers, stomach cancers, ovarian cancers, bladder cancers, breast cancers, leukemias, multiple myeloma, non-Hodgkin's malignant lymphoma, Hodgkin's disease, AIDS-associated Kaposi's sarcomas, bone sarcomas, soft tissue sarcomas and solid tumors in children).
  • the use of anthracyclines and especially doxorubicin is associated with a risk of cardiotoxicity in a dose-dependent manner that can progress to severe and irreversible heart failure. So it is on the one hand, important to improve the effectiveness of this treatment and to reduce its toxicity. In this test, palthiazide was added to doxorubicin and cell viability was then determined.
  • the tests are carried out in cell culture in 96-well plates, on the cell line MDA-MB-231.
  • the MDA-MB-231 cells are seeded into 96-well plates at a density of 10,000 cells and incubated 24h at 37 ° C., 5% CO 2 and 1% O 2.
  • the medium is then renewed and added with increasing concentrations of doxorubicin. / - ⁇ of althiazide.
  • the cells are incubated for an additional 24 hours at 37 ° C., 5% CO 2 and 1% O.
  • the treatments were carried out in triplicas and the experiment was repeated 5 times.
  • a cell viability test is then performed according to the method described in part
  • Althiazide increases the effects of doxorubicin when it is used between 25 and 2.5 ⁇ of about 15%.
  • treatment with athiazide reduces the IC50 of doxorubicin by 45% from 6.02 to 3.318 ⁇ .
  • Althiazide is therefore a potentiator of the anticancer agent doxorubicin.
  • ⁇ - ⁇ 015 makes it possible to increase the effectiveness of anti-cancer treatments and / or to reduce the dose used and thus reduce the undesirable toxic effects of this anti-cancer drug.
  • the tests are carried out in cell culture in 96-well plates, on the cell line MDA-MB-231.
  • the MDA-MB-231 cells are seeded in 96-well plates at the density of 10,000 cells and incubated 24h at 37 ° C., 5% CO 2 and 1% O 2.
  • the medium is then renewed and added with doxorubicin and other compound of the invention (Formula (IA, IB, IVa, Va, Vb, Vc, Vd, Ve, Vf, Vla, Vlla and Vllb) at a concentration of 50 ⁇ l
  • the cells are incubated for 24 hours at 37 ° C. , 5% CO 2 and 1% O 2.
  • the treatments were performed in triplicas and the experiment was repeated 5 times.
  • Example 12 Evaluation of the Anti-Metastatic Effects of Althiazide on the Mouse The anti-metastatic effects of althiazide in mice are evaluated in immunocompromised mice injected with MDA-MB-231 cells into the mammary gland.
  • mice are treated for 4 weeks with an althiazide injection each day.
  • the mammary tumors of the mice are measured 3 times a week for 4 weeks.
  • mice for which the mammary tumor has reached 2g are sacrificed and the number of cancerous metastases invading the lung is counted. This number is compared to the lot of control mice injected with the MDA-MB-231 cancer cells and treated with PBS.
  • althiazide The maximum dose of althiazide is given alone or in combination with doxorubicin. 4 doses of doxorubicin are tested.
  • MDA-MB-231 cells are injected into the mammary gland of immunocompromised mice.
  • mice are treated for 4 weeks at a dose of doxorubicin per week over 4 weeks and an injection of althiazide every day for 4 weeks.
  • the first dose of althiazide is given on the first day after injection of MDA-MB-231 cells into the mammary gland.
  • the mammary tumors of the mice are measured 3 times a week and compared to the batches of mice treated with PBS alone or with althiazide alone.
  • Example 14 Separation of Enantiomers from Althiazide AZ-M015 a. Separation by SFC acid
  • the two compounds obtained following this separation were called EV-VZW001-070-001 (19.8 mg) and EV-VZW001-070-002 (20.1 mg).
  • Example 15 Separation Analysis a. Analysis of the starting product.
  • Table 3 shows the results obtained for the compounds from the three separations according to the chiral purity analysis and reverse phase purity analysis protocols both described in the Materials and Methods section.
  • Table 3 Result of analysis of the compounds resulting from the separations.
  • Figure 16 shows the chromatogram obtained for the analysis of the sample EV-VZWOO 1 -070-002.
  • Example 16 Stability test of enantiomers
  • Sample EV-VZWOO 1-070-005 is stored at a temperature of 5 ° C under light protection conditions.
  • Sample EV-VZWOO 1-070-006 is stored at room temperature on the bench without protection against light.
  • Figure 17 shows the chromatogram obtained during the analysis of sample EV-VZWOO 1-070-005 after 24h storage.
  • Figure 18 shows the chromatogram obtained during the analysis of sample EV-VZWOO 1-070-006 after 24 hours of storage.
  • Table 4 shows the evolution over time of the quantities of enantiomer present in the samples.

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Abstract

La présente invention concerne l'utilisation d'un composé appartenant à la famille des diurétiques pour traiter le cancer. En particulier, la présente invention concerne un composé pour son utilisation dans le traitement du cancer; ledit composé étant l'althiazide.

Description

UTILISATION D'UN COMPOSE APPARTENANT A LA FAMILLE DES
DIURETIQUES POUR TRAITER LE CANCER
L'invention concerne l'utilisation d'un composé appartenant à la famille des diurétiques pour traiter le cancer.
Le traitement du cancer peut se faire à différents stades de la maladie, en particulier par le traitement des tumeurs cancéreuses primaires ou la prévention de l'apparition et/ou le traitement des tumeurs cancéreuses secondaires. L'apparition de métastases cancéreuses est la cause majeure des décès des patients atteints d'un cancer. L'identification de nouveaux médicaments capables de prévenir l'évolution métastatique d'une tumeur cancéreuse est donc primordiale.
Le dasatinib est un puissant inhibiteur de nombreuses tyrosines kinases (BCR-Abl et Src principalement), qui agit en se logeant dans le site actif de la kinase en compétition avec ΓΑΤΡ. L'action dérégulée de ces tyrosines kinases entraîne une prolifération anormale des cellules myéloïdes à l'origine de l'apparition de leucémies. Le dasatinib est principalement utilisé pour le traitement des leucémies myéloïdes chroniques résistantes à l'Imatinib.
Des effets anti-métastatiques du dasatinib ont également été observés sur divers modèles expérimentaux, mais ce médicament n'a pas été retenu comme traitement anti- métastatique chez l'homme, principalement en raison de sa faible tolérabilité par les patients (fatigue, hyponatrémie, diarrhée, saignements gastro-intestinaux, effusions pleurales et péricardiaques et anémie) qui peut être expliquée par son activité inhibitrice des tyrosines kinases.
L'althiazide (numéro CAS : 5588-16-9) est un diurétique thiazidique utilisé principalement en combinaison avec le spironolactone qui agit au niveau du néphron en inhibant la réabsorption du sodium, provoquant ainsi une augmentation de la diurèse et l'excrétion du sodium et des chlorures. L'état de l'art met en avant une corrélation entre l'hypertension, les traitements contre l'hypertension et la mortalité liée au cancer. Si la bibliographie semble montrer une augmentation de la mortalité liée au cancer chez les patients souffrants d'hypertension, il semblerait également qu'on observe une incidence de l'apparition de cancer suite à des traitements contre l'hypertension. En effet, les diurétiques, qui sont principalement des thiazides, pourraient être un facteur de risque de cancer rénal. Sur ce point, les résultats publiés sont très contradictoires, et ne permettent pas de conclure si la corrélation est directe ou indirecte et si elle peut être étendue à tous les cancers ou si elle se restreint aux cancers rénaux. Une autre étude analyse l'impact de l'hypertension et des traitements anti- hypertenseurs sur la mortalité associée au cancer chez la femme. Les résultats observés sont variables et diffèrent selon les types de cancers. Pour les patients prenant un traitement anti- hypertenseur, la mortalité liée à certains cancers semble diminuer, alors qu'elle est augmentée pour d'autres.
Il existe donc un manque en molécules thérapeutiques tolérables pour les patients et efficaces pour le traitement ou la prévention des maladies causées ou exacerbées par la prolifération et la dispersion des cellules tumorales cancéreuses.
C'est pourquoi l'un des buts de l'invention est de fournir un composé pour son utilisation dans le traitement du cancer.
Un autre but de l'invention est de fournir un composé pour son utilisation dans le traitement des tumeurs cancéreuses primaires et secondaires et/ou la prévention de l'apparition et du développement des tumeurs cancéreuses secondaires.
La présente invention concerne une famille de composé pour son utilisation dans le traitement du cancer, ladite famille de composés étant de formule (II)
Figure imgf000003_0001
dans laquelle :
a peut représenter:
• rien,
• une liaison simple,
• une double liaison ;
b représente :
• rien si a représente rien,
• une liaison simple si a est soit une liaison simple soit une liaison double ;
la valeur de i étant :
• nulle si a représente rien, égale à 1 si a est une simple ou une double liaison ;
a représente rien, alors b représente rien et i vaut 0 :
Ri et R5 peuvent représenter indépendamment l'un de l'autre :
• H ;
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi N, O, S, SO, S02, et/ou 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
R3 et R7 peuvent représenter indépendamment l'un de l'autre :
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi N, O, S, SO, S02, et/ou 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
R4 peut représenter :
• H ;
• un atome d'halogène
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ; si a représente une simple liaison, alors b représente une simple liaison et i vaut 1 : o R\ peut représenter :
• H ;
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi N, O, S, SO, S02, et/ou 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
o R2 peut représenter :
• H ;
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi NRaRb, ORa, SRa, SORa, S02Ra, S02NRaRb, CONRaRb, dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène, une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée ou cyclique de 1 à 20 carbones, avec éventuellement des hétéroatomes et/ou des halogènes, ou un cycle aromatique de 1 à 20 carbones, contenant éventuellement des hétéroatomes et étant éventuellement substitués ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi N, O, S, SO, S02, et/ou 1 ou plusieurs atome d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi NRaRb, ORa, SRa, SORa, S02Ra, S02NRaRb, CONRaRb, dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène, une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée ou cyclique de 1 à 20 carbones, avec éventuellement des hétéroatomes et/ou des halogènes, ou un cycle aromatique de 1 à 20 carbones, contenant éventuellement des hétéroatomes et étant éventuellement substitués ;
o R3 peut représenter :
• H ;
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi N, O, S, SO, S02, et/ou 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
o R5 et R7 représentent rien
o R6 représente H
o R4 est tel que défini ci-dessus
si a représente une double liaison, alors b représente une simple liaison et i vaut 1 : o Ri, R5, RÔ et R7 représentent rien ;
o R2, R3 et R4 sont tels que définis ci-dessus.
Au sens de la présente Invention, le « traitement du cancer » se réfère à la fois au traitement de la tumeur cancéreuse primaire en prévenant la progression locale de celle-ci et à la prévention de formation des tumeurs cancéreuses secondaires appelées aussi métastases cancéreuses, dans des tissus distants.
Une « tumeur cancéreuse » est définie par le développement d'un tissu nouvellement formé au sein d'un tissu normal. La tumeur cancéreuse est provoquée par le dysfonctionnement du développement cellulaire.
La présente invention concerne aussi une famille de composé pour son utilisation dans le traitement du cancer, ladite famille de composés étant de formule (III)
Figure imgf000007_0001
dans laquelle, :
a peut représenter:
• rien ;
• une liaison simple ;
• une double liaison.
b représente :
• rien si a = rien
• une liaison simple si a est soit une liaison simple soit une liaison
la valeur de i étant :
• nulle si a représente rien,
• égale à 1 si a est une simple ou une double liaison ;
si a représente rien, alors b représente rien et i vaut 0 :
o R3 et R7 peuvent représenter indépendamment l'un de l'autre :
H ;
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
o R4 peut représenter :
H ;
• un atome d'halogène
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ; R5 représente H2 ;
a représente une simple liaison, alors b représente une simple liaison et i vaut 1 :
R2 peut représenter :
• H,
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi SRa, SORa, S02Ra, et S02NRaRb„ dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène, une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée ou cyclique de 1 à 20 carbones, avec éventuellement des hétéroatomes et/ou des halogènes, ou un cycle aromatique de 1 à 20 carbones, contenant éventuellement des hétéroatomes et étant éventuellement substitués ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi N, O, S, SO, S02, et/ou 1 ou plusieurs atome d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi SRa, SORa, S02Ra, et S02NRaRb„ dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène, une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée ou cyclique de 1 à 20 carbones, avec éventuellement des hétéroatomes et/ou des halogènes, ou un cycle aromatique de 1 à 20 carbones, contenant éventuellement des hétéroatomes et étant éventuellement substitués ;
R3 peut représenter :
• H ;
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ; o R.5 et ¾ représentent H ;
o R7 représentent rien ;
o R4 est tel que définis ci-dessus
si a représente une double liaison, alors b représente une simple liaison et i vaut 1 : o R5, ¾ et R7 représentent rien
o R2, R3 et R4 sont tels que définis ci-dessus
La présente invention concerne aussi une famille de composé pour son utilisation dans le traitement du cancer, ladite famille de composés étant de formule (III)
Figure imgf000009_0001
dans laquelle :
a peut représenter :
• rien ;
• une liaison simple ;
• une double liaison,
b représente :
• rien si a représente rien ;
• une liaison simple si a est soit une liaison simple soit une liaison double la valeur de i étant :
• nulle si a représente rien ;
• égale à 1 si a est une simple ou une double liaison ;
si a représente rien, alors b représente rien et i vaut 0 :
o R3 et R7 ρβμνεηί représenter indépendamment l'un de l'autre :
• H ;
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
o R5 représente H2 ;
o R4 peut représenter : • H ;
• un atome d'halogène
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
si a représente une simple liaison, alors b représente une simple liaison et i vaut 1 : o R2 peut représenter :
• H ;
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 10 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant . éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi S et S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi SRa, et S02NRaRb, dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène ou une chaîne alkyle ou alcényle linéaire de 1 à 10 carbones ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi, S et S02, et/ou 1 ou plusieurs atome d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi SRa, et S02NRaRb„ dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène ou une chaîne alkyle ou alcényle linéaire de 1 à 10 carbones ;
o R3 peut représenter :
• H ;
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
o R5 et RÔ représentent H ;
o R7 représentent rien ;
o R4 est tel que définis ci-dessus
si a représente une double liaison, alors b représente une simple liaison et i vaut 1 : o R5, e et R7 représentent rien
o R2, R3 et R4 sont tels que définis ci-dessus La présente invention concerne aussi une famille de composé pour son utilisation dans le traitement du cancer, ladite famille de composés étant de formule (IV)
Figure imgf000011_0001
dans laquelle :
R3 peut représenter :
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
R4 peut représenter :
• H ;
• un atome d'halogène
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
La présente invention concerne aussi une famille de composé pour son utilisation dans le traitement du cancer, ladite famille de composés étant de formule (V) :
Figure imgf000011_0002
dans laquelle :
R2 peut représenter :
• H ;
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 10 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi S et S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi SRa, et S02NRaRb, dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène ou une chaîne alkyle ou alcényle linéaire de 1 à 10 carbones ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi, S et S02, et/ou 1 ou plusieurs atome d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi SRa, et S02NRaRb„ dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène ou une chaîne alkyle ou alcényle linéaire de 1 à 10 carbones ;
R3 peut représenter :
H ;
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
R peut représenter :
H ;
• un atome d'halogène
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
La présente invention concerne aussi une famille de composé pour son utilisation dans le traitement du cancer, ladite famille de composés étant de formule (VI) :
Figure imgf000012_0001
dans laquelle :
R2 peut représenter : • H ;
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 10 atomes de carbones, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi S et S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi SRa, et S02NRaRb, dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène ou une chaîne alkyle ou alcényle linéaire de 1 à 10 carbones ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi, S et S02, et/ou 1 ou plusieurs atome d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi SRa, et S02NRaRb„ dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène ou une chaîne alkyle ou alcényle linéaire de 1 à 10 carbones ;
R3 peut représenter :
• H ;
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
R4 peut représenter :
• H ;
• un atome d'halogène
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes.
La présente invention concerne aussi un composé pour son utilisation dans le traitement du cancer ; ledit composé étant l'althiazide de formule (I)
Figure imgf000013_0001
L'althiazide de formule (I) comprend l'ensemble de forme de Palthiazide répondant à cette formule, à savoir :
• L' énantiomère de formule (IA)
Figure imgf000014_0001
• L' énantiomère de formule (IB)
Figure imgf000014_0002
• La forme racémique,
• L'ensemble des mélanges des formes (IA) et (IB), avec de teneurs en énantiomère (IA) compris de 1% à 99%, en particulier compris de 0% à 10%, de - 10% à 20%, de 20% à 30%, de 30% à 40%, de 40% à 50%, de 50% à 60%, de 60% à 70%, de 70% à 80% ; de 80% à 90% et de 90% à 100%, lesdites teneurs étant mesurées notamment selon la méthode d' analyse de la pureté chirale décrite dans la partie Matériels et Méthodes.
La présente invention concerne ainsi un composé pour son utilisation dans le traitement du cancer ; ledit composé étant l'althiazide de formule (IA),
Figure imgf000014_0003
et étant sous sa forme pure ou avec une pureté chirale supérieure à 99%
La pureté chirale supérieure à 99% est mesurée par exemple selon la méthode d' analyse de la pureté chirale décrite dans la partie Matériels et Méthodes. La présente invention concerne ainsi un composé pour son utilisation dans le traitement du cancer ; ledit composé étant l'althiazide de formule (IB),
Figure imgf000015_0001
et étant sous sa forme pure ou avec une pureté chirale supérieure à 99%.
La pureté chirale supérieure à 99% est mesurée par exemple selon la méthode d' analyse de la pureté chirale décrite dans la partie Matériels et Méthodes.
La présente invention concerne aussi un composé pour son utilisation dans le traitement du cancer ; ledit composé étant la forme racémique de l'althiazide.
Au sens de la présente invention, il est entendu par « forme racémique de l'althiazide », un mélange d'énantiomère de l'althiazide dans lequel les puretés chirales respectives des énantiomères de formule (IA) et (IB) sont comprises de 49.5 % à 50.5 %, mesurées notamment selon la méthode d'analyse de la pureté chirale décrite dans la partie Matériels et Méthodes.
La présente invention concerne aussi un composé pour son utilisation dans le traitement du cancer ; ledit composé étant de formule :
Figure imgf000015_0002
le 4-amino-6-chloro-l,3-benzenedisulfonamide (ACB) 1 ' Hydrochlorothiazide
Figure imgf000016_0001
le trichlormethiazide le cyclothiazide,
Figure imgf000016_0002
1 ' hydroflumethiazide le methyclothiazide
Figure imgf000016_0003
le bendrofluthiazide le chlorothiazide
La présente invention concerne aussi un composé pour son utilisation dans le traitement du cancer ladite famille de composés étant de formule (Vlla) ou (Vllb) :
Figure imgf000016_0004
(Vlla) (Vllb) l'Indapamide PAcetazolamide
Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne le composé selon l'invention de formule (II) pour son utilisation en association avec un composé anticancéreux dans le traitement des tumeurs cancéreuses primaires. Au sens de la présente invention, il est entendu par « tumeur cancéreuse primaire », une tumeur naissant au niveau même d'un organe.
La présente Invention concerne aussi Palthiazide de formule (I) ou un énantiomère de formule (IA) ou (IB) pour son utilisation en association avec un composé anticancéreux dès l'apparition de la tumeur primaire afin de prévenir la progression de celle-ci localement.
La présente Invention concerne aussi un composé de formule (IVa), (Va), (Vb), (Vc), (Vd), (V e), (Vf), (Via), (Vlla) ou (Vllb) pour son utilisation en association avec un composé anticancéreux dès l'apparition de la tumeur primaire afin de prévenir la progression de celle-ci localement.
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne le composé de formule (II) selon l'invention pour son utilisation en association avec un composé anticancéreux dans le traitement du cancer à l'état pré-métastatique.
La présente Invention concerne aussi l'althiazide de formule (I) ou un énantiomère de formule (IA) ou (IB) pour son utilisation en association avec un composé anticancéreux dans le traitement du cancer à l'état pré-métastatique.
La présente Invention concerne aussi un composé de formule (IVa), (Va), (Vb), (Vc), (Vd), (Ve), (Vf), (Via), (Vlla) ou (Vllb) pour son utilisation en association avec un composé anticancéreux dans le traitement du cancer à l'état pré-métastatique.
L'althiazide, utilisé seul, présente un effet anti-métastatique en conditions physiologiques normales. Au sens de l'invention, le « traitement du cancer à l'état pré- métastatique » se réfère à la prévention des tumeurs cancéreuses secondaires. Il s'agit d'un traitement du cancer avant l'apparition des métastases, dans le cas de tumeurs considérées à « haut risque » de métastases ou dès l'apparition des premières métastases et à la prévention de l'apparition des suivantes. Les termes « tumeur cancéreuse secondaire » ou « métastase » définissent le développement anormal de tissus provenant de la migration par la circulation par voie sanguine ou lymphatique de cellules cancéreuses. Au sens de la présente invention, l'expression « tumeurs à « haut risque » de métastases » désigne le dernier stade de stratification des patients, déterminé en fonction du stade de développement de la tumeur, du score de Gleason et de la valeur de PSA. Par exemple, les cancers de la prostate à haut risque sont les cancers localement avancés (T2c et T3 clinique), de haut grade (Gleason 4+3=7 et supérieur à 7) ou associée à une valeur de PSA total > 20 ng/ml ou dont la cinétique est > 2 ng/ml/an ou le temps de doublement < 3 mois.
Au sens de la présente Invention, un effet anti-migratoire est donc considéré comme un bon indicateur in vivo de l'activité anti-métastatique.
Une méthode permettant de déterminer si une molécule est susceptible de traiter le cancer à l'état pré-métastatique a été décrite dans la demande internationale WO 2011/007259. Ce procédé consiste à isoler des molécules capables d'inhiber l'émergence de cellules souches hématopoïetiques du plancher de l'aorte sans division cellulaire, mais par transition endothélio-hématopoïétiques. Cette émergence implique la perte de polarité cellulaire des cellules en émergence, la perte de jonctions cellulaires avec ces cellules voisines et l'acquisition de propriétés migratoires. Ce modèle est utilisé parce qu'il mime chacune des étapes de la transition épithélio-mésenchymateuse, la première étape de la métastase cancéreuse. La transition endothélio-hématopoïétiques a lieu dans une région de l'embryon appelée Aorte-Gonade-Mesonephros (AGM).
La colonisation des tissus hématopoïetiques par les cellules souches hématopoïetiques mime quant à elle l'apparition et/ou la progression d'une tumeur cancéreuse métastatique puisqu'elle implique l'intravasation, l'extravasation, ou encore la migration des CSH suivant un gradient de SDF1. Le premier tissu colonisé est le tissu hématopoïétique caudal (THC).
Afin d'évaluer l'inhibition de la transition endothélio-hématopoïétiques, des embryons transgéniques CD4LGFP (green fluorescent protein) sont utilisés. Les CSH y expriment la GFP sous le contrôle du promoteur CD41, ce qui permet de les suivre in vivo sous un microscope à fluorescence. Le read-out est le nombre de cellules souches hématopoïetiques CD41:GFP accumulées dans l'AGM (mimant l'initiation du processus métastatique) et/ou dans le THC de l'embryon de zebrafish (mimant la progression du processus métastatique). L'accumulation des cellules CD4LGFP dans le THC implique que chaque cellule a effectué une transition endothélio-hématopoïétiques, une intravasation, une extravasation au niveau du THC, s'est installé dans une niche stromale et a proliféré. Parallèlement, la caractérisation phénotypique des embryons permet d'isoler des composés capables de prévenir la transition endothélio-hématopoïétiques et leur migration vers le THC sans entraîner d'effets toxiques sur l'embryon en développement. Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne le composé de formule (II) selon l'invention pour son utilisation dans le traitement des tumeurs cancéreuses primaires et secondaires.
La présente invention concerne aussi le composé de formule (I), (IA) ou (IB) selon l'invention pour son utilisation dans le traitement des tumeurs cancéreuses primaires et secondaires.
La présente invention concerne aussi le composé de formule (IVa), (Va), (Vb), (Vc), (Vd), (Ve), (Vf), (Via), (Vlla) ou (Vllb) selon l'invention pour son utilisation dans le traitement des tumeurs cancéreuses primaires et secondaires.
Le composé de l'invention concerne ainsi une utilisation chez des patients pouvant être atteints de cancer à différents stades de la maladie : pour le traitement de tumeurs cancéreuses primaires uniquement ou après migration et présence de métastases.
En conditions d'hypoxie, c'est-à-dire dans les conditions retrouvées au sein d'une tumeur cancéreuse, l'althiazide de formule (I) est cytotoxique.
Au sens de l'Invention, les « conditions d'hypoxie » correspondent à une diminution du taux d'oxygène comprise de 1% à 0,1%. Cette condition est retrouvée au sein des tumeurs à croissance rapide pour lesquelles la microcirculation au sein des cellules est diminuée.
Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne le composé selon l'invention de formule (II) pour son utilisation comme agent anti-cancéreux ou potentialisateur d'un agent anti-cancéreux, notamment comme agent anti-métastatique, dans le traitement du cancer.
La présente invention concerne aussi le composé selon l'invention de formule (I), (IA) ou (IB) pour son utilisation comme agent anti-cancéreux ou potentialisateur d'un agent anticancéreux, notamment comme agent anti-métastatique, dans le traitement du cancer.
La présente invention concerne aussi le composé selon l'invention de formule (IVa), (Va), (Vb), (Vc), (Vd), (Ve), (Vf), (Via), (Vlla) ou (Vllb) pour son utilisation comme agent anticancéreux ou potentialisateur d'un agent anti-cancéreux, notamment comme agent anti- métastatique, dans le traitement du cancer.
Au sens de la présente invention, les termes « agents anti-cancéreux » désignent un composé permettant de lutter contre le cancer. Au sens de l'invention, l'expression « potentialisateur d'un agent anti-cancéreux » désigne un composé capable d'améliorer les propriétés anti-cancéreuses d'un agent anti-cancéreux.
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne le composé selon l'invention pour son utilisation comme agent anti-cancéreux dans le traitement du cancer ; ledit composé étant l'althiazide de formule (I)
Figure imgf000020_0001
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne le composé de formule (I) selon l'invention pour son utilisation comme agent anti-métastatique dans le traitement du cancer, seul ou en association avec :
• un agent anti-mitotique, notamment vinca-alcaloïde, dolastatine, taxane ou épothilone,
• un agent anti-métabolite, notamment analogue pyrimidique, analogue des purines ou analogue de l'acide folique),
• un agent alkylant, notamment moutarde azotée, oxazaphosphorine, triazène et hydrazine, éthylène imine, nitrosourée, alkyle ou alcane sulfonate ou organoplatine,
• un agent modificateur de TADN, notamment inhibiteur des topo-isomérases I et II,
• un anti-angiogénique, notamment molécule interagissant avec les voies d'activation de l'angiogenèse tumorale, molécule directement anti-angiogénique, ou inhibiteur des métalloprotéinases de la matrice,
• un anticorps monoclonal.
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne le composé selon l'invention pour son utilisation comme potentialisateur d'un agent anti-cancéreux dans le traitement du cancer ; ledit composé étant l'althiazide de formule (I)
Figure imgf000020_0002
(I) Lorsqu'il est administré avec d'autres molécules anti-cancéreuses actives en conditions physiologiques normales, l'althiazide est cytotoxique. Lorsqu'il est administré avec d'autres molécules anti-cancéreuses actives en conditions d'hypoxie, l'althiazide est cytotoxique.
Au sens de l'Invention, les « conditions physiologiques normales » sont définies par des conditions où le taux d'oxygène est de 21%. Cet état est également appelé normoxie, en opposition aux conditions d'hypoxie dans lesquelles le taux d'oxygène est fortement diminué (de 1% à 0,1%).
L'althiazide de formule (I) potentialise les effets anti-cancéreux d'autres médicaments. Les Inventeurs ont ainsi observé une amélioration des médicaments déjà utilisés comme anti- cancéreux après ajout de l'althiazide. Par exemple, la rapamycine n'est plus active en conditions de tumeur hypoxiques et l'althiazide restaure cette activité.
Un test de cytotoxicité (MTT) permet de montrer une restauration ou une amélioration de l'activité cytotoxique des molécules anti-cancéreuses en association avec l'althiazide. Le principe de ce test repose sur la réduction du cycle tétrazolium en formazan par la succinate déshydrogénase mitochondriale des cellules vivantes actives, conduisant à la formation d'un précipité de couleur violette dans la mitochondrie. La quantité de précipité formée est proportionnelle à la quantité de cellules vivantes (mais également à l'activité métabolique de chaque cellule). Après incubation des cellules avec du MTT pendant 3 h à 37 °C les cellules, leur mitochondries et donc les précipités violets de formazan sont dissout dans un mélange DMSO/EtOH (1 : 1). Un dosage par spectroscopie de la densité optique à une longueur d'onde comprise de 570 à 590 nm permet de connaître la quantité relative de cellules vivantes et métaboliquement actives. Le test est le même en condition normale et en condition d'hypoxie. L'althiazide potentialise l'effet cytotoxique des traitements administrés aux patients à différents stades du cancer, à la fois sur les tumeurs cancéreuses primaires et sur les tumeurs cancéreuses secondaires.
L'althiazide a pour effet de potentialiser et/ou de réduire les doses des autres agents anticancéreux et ainsi réduire les problèmes de tolérabilité.
Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne le composé de formule (I) selon l'invention pour son utilisation en association avec un autre agent anti-cancéreux dans le traitement du cancer.
Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne le composé de formule (I) selon l'invention pour son utilisation comme agent anti-cancéreux ou potentialisateur d'un agent anti-cancéreux, ledit autre agent anti-cancéreux étant un rayonnement ou un agent chimique, notamment un agent de chimiothérapie, de radiothérapie, un radio-pharmaceutique ou un anti- angiogénique.
Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne le composé de formule (I) pour son utilisation selon l'invention, ledit autre agent anti-cancéreux étant choisi parmi
les agents alkylants tels que les alkylsulfonates notamment busulfan, la dacarbazine, la procarbazine, la cloretazine, les moutardes azotées telles que chlorméthine, melphalan, chlorambucil, cyclophosphamide, ifosfamide, les nitrosourées tels que la carmustine, la lomustine, la sémustine, la streptozocine l'altretamine, la fotémustine ;
les alcaloïdes antinéoplasiques tels que la vincristine, la vinblastine, la vinorelbine, la vindesine ;
les taxanes tel que le paclitaxel ou le taxotère ;
les antibiotiques antinéoplasiques tels que l'actinomycine, la bleomycine ; - les agents intercalants tels la mitoxantrone, l'étoposide, la bléomycine, l'actinomycine D, l'amsacrine, l'alliptinium ;
- les antimétabolites antinéoplasiques: les antagonistes des folates, le méthotrexate; les inhibiteurs de la synthèse des purines; les analogues de la purine tels que mercaptopurine, 6-thioguanine; les inhibiteurs de la synthèse des pyrimidines, les inhibiteurs d'aromatase, la capécitabine, les analogues de la pyrimidine tels que fluorouracil, gemcitabine, cytarabine et cytosine arabinoside; le bréquinar, la nelarabine ;
- les inhibiteurs de topoisomérases de groupe I et II tels que l'irinotecan, l'exatecan, le topotecan, le teniposide, la camptothécine ou l'étoposide ;
- les agonistes et antagonistes hormonaux anticancéreux incluant le tamoxifène ;
- les inhibiteurs de kinase, tels que l'imatinib, le nilotinib et le dasatinib, la midaustorin, le sorafenib, le lestaurtinib, le tandutinib, le sirolimus, l'everolimus ou le tensirolimus ;
les inhibiteurs de facteurs de croissance ;
- les anti-inflammatoires tels que le pentosane polysulfate, les corticostéroïdes, la prednisone, la dexamethasone ;
le ceplene (dichlorhydrate d'histamine) ; les antracyclines tels que la daunorubicine, l'epirubicine, la pirarubicine, l'idarubicine, la zorubicine, l'aclarubicine, l'annamycine, la doxorubicine, la mitomycine et la méthramycine ;
les complexes métalliques anticancéreux, les dérivés du platine tel que le cisplatine, le carboplatine, l'oxaliplatine, le satraplatine ;
l'interféron alpha ;
le triphénylthiophosphoramide ;
les agents antiangiogéniques ;
la thalidomide ;
les inhibiteurs de la farnesyl-tranferase tel le tipifarnib ;
les inhibiteurs de l'ADN methyltransferase tel le MG98 ;
les adjuvants d'immunothérapie tel le gemtuzumab ozogamicin, le HuM 195 ; les agents biothérapeutiques tel le CT388-I L3;
- les antisens tel le GTI-2040 ;
les vaccins.
Selon un mode de réalisation la présente invention concerne le composé de formule (II) pour son utilisation selon l'invention, ledit composé étant formulé pour être administré aux êtres humains ou aux animaux à un dosage de 0,016 mg/kg à 16 mg/kg, en mélange avec des excipients pharmaceutiquement acceptables. La présente invention concerne aussi le composé de formule (I), (IA) ou (IB) pour son utilisation selon l'invention, ledit composé étant formulé pour être administré aux êtres humains ou aux animaux à un dosage de 0,016 mg/kg à 16 mg/kg, en mélange avec des excipients pharmaceutiquement acceptables.
La présente invention concerne aussi le composé de formule (IVa), (Va), (Vb), (Vc), (Vd), (Ve), (Vf), (Via), (Vlla) ou (Vllb) pour son utilisation selon l'invention, ledit composé étant formulé pour être administré aux êtres humains ou aux animaux à un dosage de 0,016 mg/kg à 16 mg/kg, en mélange avec des excipients pharmaceutiquement acceptables.
Au sens de la présente invention, il est entendu par « pharmaceutiquement acceptable » ce qui est utile dans la préparation d'une composition pharmaceutique qui est de pureté et de qualité suffisante pour une utilisation vétérinaire de même que pharmaceutique humaine.
Les « excipients pharmaceutiquement acceptables » s'entendent de substances non toxiques, biologiquement tolérables et biologiquement aptes à être administrées à un sujet, tel qu'une substance inerte, ajoutée à une composition pharmacologique ou utilisée comme véhicule, support ou diluant pour faciliter l'administration d'un agent et qui est compatible avec celui- ci. Des exemples d'excipients pharmaceutiquement acceptables incluent, par exemple, au sens de l'invention, les huiles, les tensioactifs (tels que le Tween), des alcools, des polyols, le glycérol et les huiles végétales, l'eau, des solutions salines, des solutions de glycérol, l'éthanol, le N-(l-(2,3-dioleyloxy)propyl)-N,N,N-triméthylammonium (DOTMA), diolesyl- phosphatidyl éthanolamine (DOPE), et des liposomes.
Selon un autre mode de réalisation la présente invention concerne le composé de formule (I) pour son utilisation selon l'invention, ledit composé étant formulé pour être administré aux êtres humains à un dosage de 0,016 mg/kg à 1,6 mg/kg, en mélange avec des excipients pharmaceutiquement acceptables. En-dessous de 0,016 mg/kg en substance active, l'althiazide de formule (I) n'est pas efficace lors d'une administration à l'être humain. Au-dessus de 1,6 mg/kg en substance active, l'althiazide de formule (I) provoque une toxicité chez l'être humain.
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne le composé de formule (I) pour son utilisation selon l'invention, ledit composé étant formulé pour être administré aux animaux à un dosage de 0,1 mg/kg à 16 mg/kg, en mélange avec des excipients pharmaceutiquement acceptables.
Au sens de l'invention, une administration aux animaux inclut une administration, en particulier, aux animaux domestiques tels que le chien ou le chat.
En-dessous de 0,1 mg/kg en substance active, l'althiazide de formule (I) n'est pas efficace lors d'une administration à l'animal. Au-dessus de 16 mg/kg en substance active, l'althiazide de formule (I) provoque une toxicité chez l'animal.
Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne le composé de formule (I) pour son utilisation selon l'invention, ledit composé étant formulé pour être administré, aux êtres humains ou aux animaux, sous forme unitaire de 1 mg à 160 mg, en mélange avec des pharmaceutiquement acceptables.
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne le composé de formule (I) pour son utilisation selon l'invention, ledit composé étant formulé pour être administré aux êtres humains sous forme unitaire de 1 mg à 100 mg, en mélange avec des excipients pharmaceutiquement acceptables. En-dessous de 1 mg de substance active, l'althiazide de formule (I) n'est pas efficace lors d'une administration à l'être humain. Au-dessus de 100 mg de substance active, l'althiazide de formule (I) provoque une toxicité chez l'être humain.
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne le composé de formule (I) pour son utilisation selon l'invention, ledit composé étant formulé pour être administré aux animaux sous forme unitaire de 1 mg à 160 mg, en mélange avec des excipients pharmaceutiquement acceptables. En-dessous de 1 mg de substance active, l'althiazide de formule (I) n'est pas efficace lors d'une administration à l'animal. Au-dessus de 160 mg de substance active, l'althiazide de formule (I) provoque une toxicité chez l'animal.
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne une méthode pour le traitement du cancer comprenant l'administration, aux êtres humains, du composé de formule (I) selon l'invention, utilisé comme agent anti-cancéreux ou potentialisateur d'un agent anticancéreux, à un dosage de 1 mg/kg/j à 100 mg/kg/j, en mélange avec des excipients pharmaceutiquement acceptables.
Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne une méthode pour le traitement du cancer comprenant l'administration, aux animaux du composé de formule (I) selon l'invention, utilisé comme agent anti-cancéreux ou potentialisateur d'un agent anti-cancéreux, à un dosage de 1 mg/kg/j à 160 mg/kg/j, en mélange avec des excipients pharmaceutiquement acceptables.
Lorsque l'althiazide de formule (I), selon l'invention, est utilisé comme potentialisateur d'un agent anti-cancéreux, les doses en substances actives telles que définies ci-dessus sont inférieures, en raison d'une synergie entre l'althiazide de formule (I) et l'agent anti-cancéreux en association
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne une méthode pour le traitement du cancer comprenant l'administration, aux animaux, du composé de formule (I) selon l'invention, à un dosage de 1 mg/kg/j à 160 mg/kg/j, en mélange avec des excipients pharmaceutiquement acceptables.
Lorsque l'althiazide de formule (I), selon l'invention, est utilisé comme potentialisateur d'un agent anti-cancéreux, les doses en substances actives telles que définies ci-dessus sont inférieures, en raison d'une synergie entre l'althiazide de formule (I) et l'agent anti-cancéreux en association.
Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne le composé de formule (I) pour son utilisation comme agent anti-cancéreux ou potentialisateur d'un agent anti-cancéreux selon l'invention, ledit composé étant utilisé par administration par voies orale, parentérale, spray d'inhalation, voies nasale, vaginale, rectale, sous-linguale ou locale, notamment topique.
Par « voies parentérales » on entend par exemple les voies intramusculaire, intrapéritonéale, intraveineuse, intracérébroventriculaire, intracisternale ou sous-cutanée. De préférence le composé de l'Invention est utilisé par administration par « voie orale ». Une administration par voie orale est privilégiée pour un composé anti-métastatique qui est donné comme traitement journalier et sur le long terme (plusieurs années).
Les formes unitaires d'administration par voie orale appropriées comprennent les comprimés, les gélules molles ou dures, les capsules, les poudres, les granules, les solutions ou suspensions orales et les formes d'administration intraveineuses.
Lorsque l'on prépare une composition solide sous forme de comprimés, on mélange l'ingrédient actif principal avec un véhicule pharmaceutique tel que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le talc, la gomme arabique ou analogues. On peut enrober les comprimés de saccharose ou d'autres matières appropriées ou encore on peut les traiter de telle sorte qu'ils aient une activité prolongée ou retardée et qu'ils libèrent d'une façon continue une quantité prédéterminée de principe actif.
On obtient une préparation en gélules en mélangeant l'ingrédient actif avec un diluant et en versant le mélange obtenu dans des gélules molles ou dures.
Une préparation sous forme de sirop ou d'élixir peut contenir l'ingrédient actif conjointement avec un édulcorant, un antiseptique, ainsi qu'un agent donnant du goût et un colorant approprié.
Les poudres ou les granules dispersibles dans l'eau peuvent contenir l'ingrédient actif en mélangeant avec des agents de dispersion ou des agents mouillants, ou des agents de mise en suspension, de même qu'avec des correcteurs de goût ou des édulcorants. Pour une administration par voie intraveineuse, on utilise des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutions stériles et injectables qui contiennent des agents de dispersion et/ou des agents mouillants pharmacologiquement compatibles.
Le principe actif peut être formulé également sous forme de microcapsules, éventuellement avec un ou plusieurs supports additifs. Les formulations appropriées pour la forme d'administration choisie sont connues par l'homme du métier et décrites, par exemple dans : Remington, The science and Practice of Pharmacy, 22ème édition, 2013, The Pharmaceufical Press.
Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne le composé pour son utilisation selon l'invention, ledit cancer étant
- un cancer tête et cou
un cancer du poumon ;
un cancer digestif, tel qu'un cancer du rectum, un cancer de l'estomac ; un cancer gynécologique tel qu'un cancer de l'utérus, un cancer du col de l'utérus, un cancer du vagin, cancer des ovaires ;
- un cancer urogénital tel qu'un cancer de la vessie, un cancer de la prostate, des vésicules séminales, des testicules, tumeurs des cellules germinales
un cancer ORL tel qu'un cancer de la bouche, des joues, du palais, de la langue, des amygdales, du pharynx, de l'oropharynx et de l'hypopharynx ou un cancer des fosses nasales, des sinus, du nasopharynx et du larynx ;
un cancer du sein ;
cancer de l'intestin grêle ;
cancer du colon ;
cancer du foie ;
- cancer des canaux biliaires ;
cancer de la vésicule biliaire ;
cancer du pancréas ;
cancers du rein ;
- cancers des glandes endocrines y compris cancer de la thyroïde, de l'hypophyse, des glandes surrénales ;
cancers de la peau y compris hémangiomes, mélanomes, sarcomes, incluant le sarcome de Kaposi ;
- tumeurs du cerveau, des nerfs, des yeux, des méninges, incluant astrocytomes, gliomes, glioblastomes, rétinoblastomes, neurinomes, neuroblastomes, schwannomes, méningiomes ;
- tumeurs malignes hématopoïétiques ; leucémies, (Acute Lymphocytic Leukemia (ALL), Acute Myeloid Leukemia (AML), Clironic Myeloid Leukemia (CML), Chronic lymphocytic leukemia (CLL)) chloromes, plasmocytomes, leucémies des cellules T ou Β, lymphomes non hodgkiniens ou hodgkiniens, myélomes, hémopathies malignes diverses ;
toute forme de cancer à haut risque métastatique.
Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne le composé de formule (I) pour son utilisation selon l'invention, en association avec un autre agent anti-cancéreux, ledit autre agent anti-cancéreux étant un rayonnement, notamment un agent de radiothérapie, ledit cancer étant
un cancer de la tête ;
- un cancer du cou ;
- un cancer du poumon ;
- un cancer digestif, tel qu'un cancer du rectum, un cancer de l'estomac ;
un cancer gynécologique tel qu'un cancer de l'utérus, un cancer du col de l'utérus, un cancer du vagin, cancer des ovaires ;
- un cancer urogénital tel qu'un cancer de la vessie, un cancer de la prostate, des vésicules séminales, des testicules, tumeurs des cellules germinales ;
un cancer ORL tel qu'un cancer de la bouche, des joues, du palais, de la langue, des amygdales, du pharynx, de l'oropharynx et de l'hypopharynx ou un cancer des fosses nasales, des sinus, du nasopharynx et du larynx ;
un cancer du sein ;
- cancer de l'intestin grêle ;
cancer du colon ;
cancer du foie ;
cancer des canaux biliaires ;
cancer de la vésicule biliaire ;
- cancer du pancréas ;
cancers du rein ;
cancers des glandes endocrines y compris cancer de la thyroïde, de l'hypophyse, des glandes surrénales ;
cancers de la peau y compris hémangiomes, mélanomes, sarcomes, incluant le sarcome de Kaposi ;
- tumeurs du cerveau, des nerfs, des yeux, des méninges, incluant astrocytomes, gliomes, glioblastomes, rétinoblastomes, neurinomes, neuroblastomes, schwannomes, méningiomes ; tumeurs malignes hématopoïétiques ; leucémies, (Acute Lymphocytic Leukemia (ALL), Acute Myeloid Leukemia (AML), Clironic Myeloid Leukemia (CML), Chrome lymphocytic leukemia (CLL)) chloromes, plasmocytomes, leucémies des cellules T ou B, lymphomes non hodgkiniens ou hodgkiniens, myélomes, hémopathies malignes diverses ;
- toute forme de cancer à haut risque métastatique
La présente invention concerne aussi un procédé de séparation de la forme racémique de l'althiazide de formule (I), pour obtenir les énantiomères de formule (IA) et de formule (IB) sous forme pure, ou avec une pureté chirale supérieure à 99%, par une technique de séparation par fluide supercritique (SFC), notamment à une température comprise de la température ambiante à 80°C et notamment par SFC avec une phase mobile acide ou par SFC avec une phase mobile comprenant de l'acétonitrile.
Ce mode de séparation permet d'obtenir une grande pureté des énantiomères (>99%), tout en limitant la perte d'énantiomère lors de la séparation. Par exemple, lors de la séparation avec de l'acétonitrile, les puretés obtenues sont de 100% pour le premier énantiomère (IA) et de 99.4 % pour le second énantiomère (IB), avec un taux de récupération massique des deux énantiomères (IA) et (IB) de 83.7 %
La présente invention concerne aussi un procédé de conservation des énantiomères, pour préserver leur pureté chirale, par un stockage à une température maximale de 5°C, et à l'abri de la lumière.
Ce mode de conservation permet de conserver la pureté chirale du produit, mais ne permet pas de totalement préserver les énantiomères de l'althiazide d'une dégradation en un autre produit qu'une forme d'althiazide.
La présente invention concerne aussi une composition pharmaceutique contenant un composé de formule (IA) ou (IB) en association avec un véhicule pharmacologiquement acceptable.
GLOSSAIRE :
PS A (prostate spécifie antigeri) : antigène prostatique spécifique AGM : région aorte-gonade-mesonephros CSH : Cellules souches hématopoïétiques THC : Tissus hématopoïétique caudal
GFP (Green fluorescent protein) : Protéine fluorescente verte
NOEC (No Observed Effect Concentration) : concentration à laquelle le composé testé n'est pas efficace
EC50 (Effective concentration 50%) : concentration à laquelle le composé testé a une efficacité de 50 %
EHT : transition endothélio-hématopoïetique
EMT {epithelial-mesenchymal transition) : transition épithélio-mesenchymateuse
ACB : le 4-amino-6-chloro-l,3-benzenedisulfonamide
FIGURES
Figure 1 : Similitudes des processus de migration des cellules endothéliales et épithéliales lors de ΓΕΗΤ et ΓΕΜΤ. Les principales étapes sont conservées (perte de polarité et de jonctions cellulaires, dégradation et migration à travers la matrice extra cellulaire, intravasation et extravasation dans la circulation sanguine puis colonisation et prolifération dans les tissus distants).
Figure 2 : Observation de la sortie et de la migration locale des CSH dans la région Aorte-Gonade-Mesonephros (AGM) de l'embryon de zebrafish au stade 48hpf. Après traitement avec I'althiazide à ΙΟμΜ on observe une réduction de la perte de jonction et de la migration locale des CSH.
Figure 3 : Pourcentage de cellules accumulées dans le THC après incubation des embryons de zebrafish en présence de molécules appartenant aux classes thérapeutiques diurétique ou anti-hypertenseur. L'althiazide est le composé chimique le plus efficace sur Pirihibition de la migration des CSH dans les tissus distants. Le dasatinib est utilisé comme molécule de référence. Les composés sont testés à la concentration de 10 μΜ.
- Figure 4 : Validation de l'effet de l'althiazide sur la migration des CSH dans l'embryon de zebrafish in vivo. Diminution du nombre de cellules ayant migrés dans le THC de 36,2 % après traitement par l'althiazide par balnéation à la concentration de 10 μΜ. Le nombre d'embryons est respectivement n = 64 et n = 74. Barre d'erreur calculée avec l'erreur-type. Test statistique: test de student. p-value: 2.9864E-7 Figure 5 : Comparaison des effets anti -migratoires du dasatinib et de l'althiazide sur l'embryon de zebrafish in vivo. Les deux molécules sont diluées à la concentration de 10 μΜ et testées par balnéation sur des embryons de zebrafish. La solution contrôle contient une quantité équivalente de DMSO (1 %). Dans ce test, les nombres d'embryons sont respectivement de n = 80, n = 79 et n = 81. Barre d'erreur calculée avec l'erreur-type. Test statistique: test de student. p-value: 5.6595E-6
Figure 6 : Courbe de l'effet dose de l'althiazide sur l'embryon de zebrafish. Observation du nombre de cellules ayant migrés dans les tissus distants (THC) après traitement par balnéation (pourcentage d'efficacité) avec une solution contenant l'althiazide aux concentrations de 1 μΜ, 10 μΜ, 100 μΜ, 1000 μΜ. NOEC : No Observed Effect Concentration. EC50: Effective concentration 50 %.
Figure 7 : Evaluation de la toxicité de l'althiazide et du dasatinib sur l'embryon de zebrafish par la mesure du pourcentage de survie des embryons en fonction de la concentration d'althiazide et de dasatinib (A) ou de la durée du traitement (B). Les molécules sont diluées aux concentrations de 1 μΜ, 10 μΜ, 100 μΜ et 1000 μΜ et incubées durant 24, 48 et 72 heures. La solution contrôle contient une quantité équivalente de DMSO (1 %). Le nombre d'embryons étant respectivement n = 50, n = 50 et n = 50). Barre d'erreur calculée avec l'erreur-type. Test statistique: test de student. p-value: 1.49852E-7.
Figure 8 : Test de migration et de cytotoxicité sur des cellules 4T1 en culture en présence d'althiazide (A) ou de dasatinib (B) aux concentrations de 10 nM, 100 nM, 1 μΜ, 10 μΜ et 100 μΜ. Barre d'erreur calculée avec l'erreur-type.
Figure 9 : Pourcentage de cellules accumulées dans le THC après incubation des embryons de zebrafish en présence de molécules appartenant à la classe des composés thiazidiques à différentes concentrations. L'althiazide est le composé chimique le plus efficace sur l'inhibition de la migration des cellules CD41 dans les tissus distants. Les composés sont testés à la concentration de 10 μΜ ou de 25 μΜ.
Figure 10 : Taux de cellules ayant migrées au cours d'un test de migration sur des cellules MDA-MB-231, en fonction de la quantité d'althiazide ajoutée (10, 50 ou 100 μΜ) par rapport au test de contrôle. Figure 11 : Impact de l'althiazide sur l'expression des facteurs de transcription des gènes impliqués dans la transition épithelio-mésenchymateuse (TEM) en condition hypoxique. Les gènes ZEB1, SNAIL, , Vimentin et N-cadh ont un impact délétère et doivent être inhibés. Le gène E-cadh à un effet bénéfique et doit être surexprimé. Les colonnes en blanc mentionnent le contrôle tandis que les colonnes en noir sont les résultats d'expression de ces gènes avec une concentration en althiazide de ΙΟΟμΜ.
Figure 12 : Test de viabilité cellulaire et de cytotoxicité sur des cellules MDA- MB-231 en présence de doxorubicine seule (colonnes blanches) ou d'un mélange althiazide et doxorubicine (colonnes noires), à différente concentration (doxorubicine :0.1, 0.5, 1, 2.5, 5, 10, 25, 50, 100 μΜ ; althiazide 100 μΜ).
- Figure 13 : Test de cytotoxicité sur des cellules MDA-MB-231 en présence de doxorubicine seule (Contrôle) ou de d'un mélange de doxorubicine additionné d'un composé de l'invention à une concentration de 50μΜ.
Figure 14 : Test préparatoire de séparation entre les deux énantiomères de l'althiazide avec 5 injections de 2mL chacune. Le trait en bas des pics indique les moments d'ouverture de la collecte de chaque produit. Le premier pic correspond à l'énantiomère AZ(A) et le second à l'énantiomère AZ(B).
- Figure 15 : Chromatogramme de l'althiazide AZ-M015 ( forme racémique). Le premier pic avec un temps de rétention de 10.15 minutes correspond au produit AZ(A), et le second pic avec un temps de rétention de 13.4 minutes correspond au produit AZ(B).
- Figure 16 : Chromatogramme de l'échantillon EV-VZWOO 1-070-002. Le premier pic avec un temps de rétention de 10.2 minutes correspond au produit AZ(A), et le second pic avec un temps de rétention de 13.5 minutes correspond au produit AZ(B).
- Figure 17 : Chromatogramme de l'échantillon EV-VZWOO 1-070-005 après 24h de stockage sous température contrôlée à 5°C et protégé de la lumière. Le premier pic avec un temps de rétention de 10.09 minutes correspond au produit AZ(A), et aucun pic proche de 13.5 minutes n'est visible.
- Figure 18 : Chromatogramme de l'échantillon EV-VZWOO 1-070-006 après 24h de stockage à température ambiante sans protection contre la lumière. Le premier pic avec un temps de rétention de 10.25 minutes correspond au produit AZ(A), et le second pic avec un temps de rétention de 13.79 minutes correspond au produit AZ(B).
MATERIELS ET METHODES
Le batch d'althiazide utilisé est noté AZ-M015 et est sous forme racémique. Le premier énantiomère de formule (IA) et issu de ΓΑΖ-Μ015 est noté AZ(A). Le second énantiomère de formule (IB) et issu de ΓΑΖ-Μ015 est noté AZ(B).
L'analyse de la pureté chirale des produits à tester a été réalisée par une technique de séparation par fluide supercritique (SFC) sur un chromatographe Berger prep, commercialisé par Thar Instruments La phase mobile de la séparation est constituée d'un mélange de méthanol additionné de 0.01 % d'acide acétique et de C02 dans un rapport 20/80. La phase stationnaire choisie est une colonne Chiralpak IC 59m, de 250 mm par 20mm, commercialisé par sigma aldrich. Le débit d'injection est de 50 ml par minutes, à 40°C sous une pression de 100 bars. Le produit à analyser est dissous dans du méthanol additionné de 0.01 % d'acide acétique, avec une concentration de 1 mg/ml. 10 μΐ de ce produit est injecté. Le détecteur est un détecteur UV avec une longueur d'onde supérieure à 275 ran.
L'analyse de la pureté en phase inverse des produits à tester a été réalisée par une technique de chromatographie à phase inverse par chromatographie liquide à ultra haute pression (UHPLC) sur un chromatographe en phase liquide Waters UPLC2, commercialisé par Waters. La phase mobile de la séparation varie au cours de la méthode selon le protocole du tableau 1.
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Tableau 1 : Composition de la phase mobile utilisée pour l'analyse par UHPLC. Entre chaque point, le flux varie par gradient (TFA : Trifluoroacétate) La colonne utilisée est une colonne Waters Acquity UPLC CSH Cl 8 1.7 μηι, 2.1*100 mm, commercialisé par Water^Le flux de phase mobile est de 0,6 ml/minute. Le détecteur est un détecteur UV avec une longueur d'onde de 210 nm. Le produit à analyser est dissous dans de l'acétonitrile, avec une concentration de 1 mg/ml, et le volume injecté est de 1 μL.
La séparation des deux énantiomères de l'althiazide AZ-M015 AZ(A) et AZ(B) a été réalisée par une technique de séparation par fluide supercritique (SFC) sur un chromatographe Berger prep. Le décalage du temps de rétention de chaque énantiomère permet de récupérer en sortie de séparation, en premier le composé AZ(A) et en second le composé AZ(B). La récupération est indexée sur le signal du détecteur pour l'ouverture et la fermeture de la récupération de chaque composé.
La phase mobile de la séparation est constituée d'un mélange de méthanol additionné de 0.01 % d'acide acétique et de C02 dans un rapport 20/80 ou d'un mélange d'acétonitrile et de C02 dans un rapport 30/70. La phase stationnaire choisie est une colonne Chiralpak IC 5μπι, de 250 mm par 20mm. Le débit d'injection est de 50 ml par minutes, à 40°C sous une pression de 100 bars. Le produit à séparer est dissous dans un mélange de méthanol additionné de 0.01 % d'acide acétique ou dans de l'acétonitrile. Une série d'injections est réalisée. Le détecteur est un détecteur UV avec une longueur d'onde supérieure à 275 nm. La collecte des produits respectifs est commencée quand le signal dépasse une valeur de détection de seuil haut et est stoppée quand le signal passe en dessous d'une valeur de détection de seuil bas. Les valeurs de seuil haut et seuil bas sont choisies lors d'un essai préparatoire en fonction d'un compromis entre la quantité d' énantiomères récupérée, la pureté souhaitée et les conditions d'analyse. Les produits collectés sont évaporés avant d'être analysés pour connaître leur pureté respective.
La solubilisation de l'althiazide et des énantiomères a été obtenue par une solubilisation dans un solvant constitué de 95% de Tris 1M au pH10,8 et complété avec 5% d'éthanol pur. L'althiazide et les énantiomères sont resuspendus à la concentration de 2mg/ml. Chacune des solutions est vortexée 30 secondes puis placée dans un bain à ultrason pour une sonication de 5min ; cette opération est répétée une fois. La dissolution est totale malgré l'absence de DMSO.
La solubilisation de l'althiazide et des énantiomères a également été obtenue par une solubilisation dans une solution constitué d'un mélange de 3,7% de NaHC03 0.2M et de 21% de Na2C03 0.2M au pH10,6 et complété avec de l'eau pur. L'althiazide et les énantiomères sont resuspendus à la concentration de 2,5mg/ml. Chacune des solutions est vortexée 30 secondes puis placée dans un bain à ultrason pour une sonication de 1min. La dissolution est totale malgré l'absence de DMSO.
Les tests de stabilité des énantiomères ont été réalisés par une comparaison de la racémisation et de la dégradation des échantillons stockés soit à température ambiante sans protection contre la lumière, soit sous température contrôlée à 5°C et à l'abri de la lumière.
Les produits stockés sont analysés régulièrement (T=0, lh, 2h, 3h, 6h, 24h) pour suivre l'évolution de la racémisation des énantiomères.
La lignée de zebrafish transgénique Tg(cd41 :GFP) est maintenue en conformité avec les protocoles décrits par le comité éthique en expérimentation animale. Les poissons sont maintenus à la température de 28 °C et leur stade de développement est déterminé comme précédemment. Les molécules sont testées sur des embryons de zebrafish au stade 25 hpf. Les embryons sont déchorionnés et transférés dans une plaque 96 puits (1 embryon / puits) contenant les composés à tester dans un volume final de 100 μΐ du milieu de croissance des embryons (60 μg sel pour 1ml H20). Pour les composés chimiques dilués en DMSO, la concentration finale de DMSO ne dépasse pas 1%. Les embryons traités sont incubés 24 heures dans un incubateur à 28 °C.
Les embryons sont imagés à l'aide d'un lecteur de plaque après avoir été anesthésiés avec 0,16 % de tricaïne (éthyl-3-aminobenzoate). Une quantification du nombre de cellules fluorescentes (CD41 :GFP) accumulées dans le CHT est réalisée.
L'étude de toxicité est réalisée sur 72 heures. Les embryons sont traités à 25 hpf avec les doses utilisées pour le test de composés chimiques de chacun des composés, dans une plaque 96 puits, dans un volume final de 100 μΐ du milieu de croissance des embryons. Les embryons sont incubés 72 h à 28 °C. Le milieu est changé toutes les 24 h. Le taux de survie des embryons et l'apparition de défauts de développement sont analysés tous les jours.
Les tests de migration cellulaires sur la lignée cellulaire 4T1 sont réalisés in vitro dans des plaques 12 puits, sur la lignée cellulaire 4T1. Les cellules sont maintenues dans un milieu de culture DMEM supplémenté de 10 % de sérum de veau (S VF) et incubées à 37 °C et 5 % de C02. La monocouche cellulaire est blessée à l'aide d'une pointe de pipette de 10 μ. Le milieu est aspiré et remplacé par un milieu contenant les composés à tester aux concentrations décrites. Les puits sont imagés à l'aide d'un microscope et la réparation de la surface blessée mesurée aux temps indiqués afin de mettre en évidence le pouvoir anti migratoire cellulaire des composés chimiques testés. La moyenne des mesures obtenues est comparée aux puits contrôles : (valeur moyenne des composés traités/ valeur moyenne des contrôles) *100 = % de la valeur moyenne.
Les tests de migration cellulaires sur la lignée cellulaire MDA-MB-231 sont réalisés in vitro dans des plaques 96 puits. Les cellules MDA-MB-231 ont été ensemencées à la densité de 50000 cellules par puit, afin de former une monocouche. Les cellules sont maintenues dans un milieu de culture DMEM supplémenté de 0.2 % de sérum de veau fœtal et incubées à 37 °C, 5 % de C02 et 1% d'02 pendant 24h. La monocouche cellulaire est blessée à l'aide d'une pointe de pipette. Les cellules sont alors rincées à l'aide de PB S afin d'éliminer les cellules en suspension puis les différents traitements sont ajoutées, ainsi que du DMEM supplémenté de 10 % de SVF. Les cellules sont incubées pendant 18 heures à 37°C, 5% C02 et 20% 02.
Une première série d'images de chaque puits (centre du puits) a été réalisée en début d'expérience (t=0) et après 18 heures de migration (t=18) à l'aide d'un microscope Nikon objectif 4x. Les images ont été analysées à l'aide du logiciel ImageJ (National Institue of Health, USA).
Les traitements ont été réalisés en triplicata et la manipulation a été effectuée 3 fois.
Les tests de cytotoxicité sont réalisés en culture cellulaire en plaques 96 puits, sur la lignée de cellule 4T1. Les cellules sont maintenues dans un milieu de culture DMEM supplémenté de 10 % de sérum de veau fœtal (condition contrôle) ou bien placées en présence d'une solution MTT (bromure de 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium) à 1 mg/ml dans du milieu DMEM supplémenté de 10 % de sérum de veau fœtal (100 μΐ par puits). Les cellules sont incubées à 37 °C et 5 % de C02 pendant 4 heures. La réaction est stoppée par addition de 100 μΐ d'une solution contenant 10 % de SDS et 0,01 M de HC1. Les cellules sont placées dans un incubateur à 37 °C et 5 % de C02 pendant 2 heures. L'absorbance est mesurée entre 570 et 590 irai. Le contrôle négatif est réalisé sur un puits sans cellules, contenant 200 μΐ d'une solution à 1 mg/ml de MTT dilué dans du milieu de culture DMEM supplémenté de 10 % de sérum de veau fœtal. La moyenne des mesures obtenues est comparée aux puits contrôles : (valeur moyenne des composés traités/ valeur moyenne des contrôles) * 100 = % de la valeur moyenne.
Les cultures cellulaires sont réalisées sur des lignées de cellules épithéliales cancéreuses mammaires humaines MDA-MB-231 (HTB-26™), issues de métastases présentes dans un épanchement pleural de patiente atteinte d'un adénocarcinome mammaire. Cette lignée est utilisée comme modèle de cellule cancéreuse triple négative (pas d'expression des récepteurs nucléaires aux œstrogènes de type ER, des récepteurs nucléaires à la progestérone ni de ne surexpression de l'oncogène codant pour la protéine HER2 (Human Epidermal Growth factor Receptor-2). Les cellules ont été cultivées dans du milieu DMEM (Eurobio, Fance) supplémenté de 10% de sérum de veau fœtal (SVF) (Eurobio, Fance) à 37°C, 5% C02. Le milieu a été changé tous les 3 jours.
Les cellules ont été placées dans une atmosphère contrôlée à 1% d'oxygène 24h avant l'application des différents traitements. La prolifération est mesurée grâce à une coloration au cristal violet. Les cellules ont été ensemencées dans des plaques 96 puits à une densité de 10 000 cellules par puits. Après 24h de culture à 37°C, 5% C02 et 1% 02, le milieu a été renouvelé et additionné d'althiazide (aux concentrations décrites). Les cellules ont été incubées durant 24, 48 ou 72 heures supplémentaires à 37°C, 5% C02 et 1% 02. Après rinçage des cellules avec du PBS, 50μ1 d'une solution de cristal violet 0,5% dans 20% éthanol a été ajoutée dans chaque puits. La plaque a été incubée à température ambiante sous agitation pendant 15 minutes. Les cellules ont été lavées puis lysées par une solution de SDS à 1 % afin de solubiliser le cristal violet. L'absorbance a été mesurée à 570 nm à l'aide du spectrophotomètre Tecan Sunrise. Les résultats sont exprimés en pourcentage du contrôle.
La viabilité cellulaire est déterminée via l'indice IC50, mesuré par la technique MTT (bromure de 2-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-3,5-diphenyl-2H-tetrazolium) (Mosmann, 1983). Ce test colorimétrique est basé sur la réduction des sels de tétrazolium jaunes en cristaux de formazan violets insolubles en solution aqueuse. La mesure par spectrophotométrie de l'absorbance à 570 nm est directement proportionnelle au nombre de cellules viables
Les cellules ont été ensemencées dans des plaques 96 puits à une densité de 25 000 cellules par puits. Après 24h de culture à 37°C, 5% C02 et 1% 02, le milieu a été renouvelé et complémenté de doses croissantes de doxorubicine +/- althiazide. Les cellules ont été incubées pendant 24h à 37°C, 5% C02 et 1% 02. Les cellules MDA-MB-231 ont été lavées puis incubées pendant 1 heure à 37°C avec 100 μL d'une solution de MTT à 0,5 mg / mL préparée dans du milieu de culture. Les cristaux de formazan ont été dissous dans 100 de DMSO et l'absorbance a été mesurée à 570 nm à l'aide du spectrophotomètre Tecan Sunrise. L'IC50 a été déterminée à l'aide du logicel Graphpad Prism 5.0. Les traitements ont été réalisés en triplicata et la manipulation a été effectuée 5 fois.
L'expression des ARNm est mesurée par la méthode q-RT-PCR. Les cellules ont été ensemencées à la densité de 500 000 cellules / puits dans des plaques 6 puits. Après 24 heures à 37°C, 5% C02 et 1% 02, le milieu a été renouvelé et additionné des différents traitements. L'ARN a été isolé à l'aide du TRI Reagent® (sigma), dosé et rétro-transcrit en ADN complémentaire à l'aide du PrimeScript RT Reagent Kit (Takara). Les niveaux d'expression de l'ARNm des gènes d'intérêts ont été déterminés par PCR quantitative (LightCycler® 480 Instrument II) avec les amorces listées dans le tableau 2:
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Tableau 2 : Liste des amorces utilisées par qPCR
Les résultats sont calculés en suivant la méthode des Delta Delta Ct (Δ ACt). Les effets anti-métasta tique de l'althiazide sur la souris sont évalués sur des souris immunodéprimées dans lesquelles sont injectées des cellules issues d'une lignée tumorale dans la glande mammaire.
Les souris suivent un traitement sur 4 semaines avec une injection d'althiazide chaque jour. Les tumeurs mammaires des souris sont mesurées 3 fois par semaine durant 4 semaines.
Les souris pour lesquelles la tumeur mammaire a atteint 2g, sont sacrifiées et le nombre de métastases cancéreuses ayant envahi le poumon est comptabilisé.
Ce nombre est comparé au lot de souris contrôle injectées avec la même lignée de cellules tumorales et traitées au PBS. Une diminution du nombre de métastases dans les poumons des souris traitées avec l'althiazide par rapport au lot contrôle dans lequel les souris sont traitées avec du PBS, permet de valider l'effet anti-métastatique de l'althiazide in vivo chez la souris.
Les effets potentialisateurs de l'althiazide sur un agent anti-cancéreux chez la souris sont évalués sur des souris immunodéprimées dans lesquelles sont injectées des cellules issues d'une lignée tumorale dans la glande mammaire.
La dose maximale d'althiazide est donnée seule ou en association avec l'agent anti-cancéreux. Plusieurs doses d'agent anti-cancéreux sont testées.
Les souris suivent un traitement sur 4 semaines à raison d'une injection d'agent anticancéreux par semaine sur 4 semaines et une injection d'althiazide chaque jour durant les 4 semaines. La première dose d'althiazide est donnée le premier jour après l'injection des cellules issues d'une lignée tumorale dans la glande mammaire.
Les tumeurs mammaires des souris sont mesurées 3 fois par semaine et comparées aux lots de souris traitées au PBS seul ou à l'althiazide seul.
Une réduction de la taille des tumeurs cancéreuses dans le lot de souris traité avec l'althiazide et la doxorubicine par rapport au lot contrôle ou les souris sont traitées avec la doxorubicine seule, permet de valider l'effet potentialisateur de l'althiazide sur l'activité de la doxorubicine in vivo chez la souris. EXEMPLES
Exemple 1 : Action anti-métastatique de l'althiazide : test d'initiation et de progression du processus métastatique sur l'embryon de zebrafish.
L'althiazide a été testée sur l'embryon de zebrafish selon le procédé précédemment décrit dans la demande internationale WO 2011/007259. Ce procédé consiste à isoler des molécules capables d'inhiber l'émergence de cellules souches hématopoïétiques du plancher de l'aorte sans division cellulaire, mais par transition endothélio-hématopoïétiques. Cette émergence implique la perte de polarité cellulaire des cellules en émergence, la perte de jonctions cellulaires avec ces cellules voisines et l'acquisition de propriétés migratoires. Ce modèle est utilisé, dans le contexte de l'Invention, parce qu'il mime chacune des étapes de la transition épithélio-mésenchymateuse, la première étape de la métastase cancéreuse. La transition endothélio-hématopoïétiques a lieu dans une région de l'embryon appelée Aorte- Gonade-Mesonephros (AGM).
La colonisation des tissus hématopoïétiques par les cellules souches hématopoïétiques mime quant à elle l'apparition et/ou la progression d'une tumeur métastatique puisqu'elle implique l'intravasation, l'extravasation, ou encore la migration des CSH suivant un gradient de SDF1. Le premier tissu colonisé est le tissu hématopoïétique caudal (THC). Ce processus physiologique est considéré, dans le contexte de l'Invention, comme représentatif de l'apparition et/ou la progression d'une tumeur métastatique.
Afin d'évaluer l'inhibition de la transition endothélio-hématopoïétiques, des embryons transgéniques CD41:green fluorescent protein (GFP), dans lesquels les cellules souches hématopoïétiques (CSH) exprime la GFP, ont été utilisés, ce qui permet de les suivre in vivo sous un microscope à fluorescence.
Chaque embryon CD41 :GFP au stade de développement 25 heures post fécondation (hpf) a été ajouté dans un puits d'une plaque 96 puits contenant un des composés à tester. Les embryons traités ont été incubés 24 heures à 28 °C.
Chaque puits contenant les embryons à 50hpf a ensuite été imagé à l'aide d'un microscope à fluorescence pour analyser le nombre de cellules dispersées dans l'embryon et quantifier leur répartition dans les différentes régions de l'embryon.
Le read-out est le nombre de cellules souches hématopoïétiques CD41 :GFP accumulées dans l'AGM (mimant l'initiation du processus métastatique) et/ou dans le THC de l'embryon de zebrafish (mimant la progression du processus métastatique). L'accumulation des cellules CD41 :GFP dans le THC implique que chaque cellule a effectué une transition endothélio-hématopoïétiques, une intravasation, une extravasation au niveau du THC, s'est installé dans une niche stromale et a proliféré (Figure 1). Parallèlement, la caractérisation phénotypique des embryons a permis d'isoler des composés capables de prévenir la transition endothélio-hématopoïétiques et leur migration vers le THC sans entraîner d'effet toxique sur l'embryon en développement.
Selon la méthodologie décrite précédemment, l'althiazide s'est révélé efficace contre la migration des CSH localement et vers les organes distants (THC).
Après traitement à la concentration de 10 μΜ d'althiazide (concentration dans le milieu de croissance des embryons : 60 g de sel dans 1 ml d'H20 distillée), le nombre de CSH accumulées dans l'AGM est supérieur aux nombrse de CSH accumulées dans les embryons de référence traités par la solution de dissolution de l'althiazide, le DMSO (Figure 2). L'althiazide réduit l'émergence des CSH et leur migration locale.
Après traitement à la concentration de 10 μΜ d'althiazide (concentration dans le milieu de croissance des embryons : 60 μg de sel dans 1 ml d'H20 distillée), le nombre de CSH accumulées dans le THC est réduit de 41 % par rapport aux nombres de CSH accumulées dans les embryons de référence traités par la solution de dissolution de l'althiazide, le DMSO (Figure 3), et ceci sans provoquer d'effets toxiques. Cet effet est identique à celui observé avec le dasatinib, molécule de référence dans ce test, qui a été utilisé dans divers essais cliniques pour ses effets anti-métastatique potentiel. Bien que les effets anti-métastatiqùes du dasatinib aient été observés sur divers modèles expérimentaux il n'a pas été retenu comme traitement anti-métastatique chez l'homme, principalement en raison de sa faible tolérabilité (fatigue, Hyponatrémie, diarrhée, saignements gastro-intestinaux, effusions pleurales et péricardiaques et anémie) par les patients. Le dasatinib est un puissant inhibiteur de nombreuses enzymes kinases telles BCR-ABL, KIT et PDGFRa/β, à ce titre il est principalement utilisé pour le traitement des leucémies myéloïdes chroniques résistantes à l'imatinib, mais aussi un puissant inhibiteur de c-SRC, LYN, FY et EPHA2, ce qui peut expliquer sa faible tolérabilité.
Exemple 2 : Absence d'effet anti-métastatique d'autres diurétiques ou anti-hypertenseurs : évaluation de la progression du processus métastatique sur l'embryon de zebrafish.
Afin de vérifier la spécificité d'action de l'althiazide, d'autres molécules chimiques appartenant aux classes thérapeutiques de diurétique ou d'anti-hypertenseur (Chlortalidone, Metolazone, Pentolinium-bitartrate et Hydralazine-hydrochloride) ont été testées à la même concentration que l'althiazide (10 μΜ). Ces molécules chimiques ne provoquent pas de diminution du nombre de CSH accumulées dans le THC. Une diminution de 20 % est toutefois observée après traitement à la concentration de 10 μΜ de l'Hydrochlorothiazide qui a une structure proche de l'althiazide.
Un second test, sur un plus grand nombre d'embryons, a permis de confirmer l'efficacité de l'althiazide comme anti-métastatique avec une diminution du nombre de cellules ayant colonisés le THC de 36,2 % (Figure 4).
Exemple 3 : Activité anti-migratoire in vivo : test de la progression du processus métastatique in vivo sur l'embryon de zebrafish
Considérant qu'un effet anti-migratoire est un bon indicateur de l'activité anti-métastatique, nous avons évalué l'effet anti-migratoire de l'althiazide in vivo sur l'embryon de zebrafish.
Le nombre de CSH accumulées dans les tissus distants (THC) de l'embryon de zebrafish après traitement à la concentration de 10μΜ d'althiazide et de dasatinib, molécule de référence dans ce test, a été comparé. Nous en avons conclu que l'althiazide a un effet anti-migratoire aussi efficace que le dasatinib, utilisé à la même concentration (Figure 5).
Exemple 4 : Mesure du seuil d'efficacité de l'althiazide : test de doses efficacité/toxicité in vivo sur l'embryon de zebrafish
Afin de déterminer la concentration à laquelle l'althiazide n'est pas efficace (NOEC), la concentration à laquelle l'althiazide est efficace à 50 % (EC50) et la concentration à laquelle l'althiazide est efficace à 100 %, le nombre de cellules ayant migrés dans les tissus distants (THC) après traitement en balnéation avec une solution contenant l'althiazide aux concentrations de 1 μΜ, 10 μΜ, 100 μΜ, 1000 μΜ pendant 24 heures a été quantifié.
A 1 μΜ, aucun effet n'est observé, à 10 μΜ, on observe une efficacité de 50 %, à 100 μΜ, on observe une efficacité de 100 % mais également l'apparition d'effets toxiques (Figure 6).
Parallèlement, nous avons analysé la toxicité de l'althiazide après traitement en balnéation avec une solution contenant l'althiazide aux concentrations de 1 μΜ, 10 μΜ, 100 μΜ, 1000 μΜ pendant 24, 48 et 72 heures. L'étude de la toxicité a été basée sur l'analyse du pourcentage de viabilité des embryons après traitement. Aux concentrations de 1 μΜ, 10 μΜ et 100 μΜ, l'althiazide ne provoque aucune toxicité même après 72 h de traitement. Une toxicité de 50 % est observée après un traitement durant 24 heures, l'althiazide à la concentration de 1 mM. En comparaison aux doses évaluées avec l'althiazide, le dasatinib présente une très importante toxicité (Figure 7).
Exemple 5 : Cytotoxicité : test de cytotoxicité sur cellules 4T1 Les cellules 4T1 sont issues de tumeurs de la glande mammaire chez la souris. C'est un modèle particulièrement adapté et largement utilisé pour les études sur les tumeurs cancéreuses et plus particulièrement sur la métastase. En effet, les études d'efficacité in vivo chez le mammifère se font sur la souris et le modèle 4T1 est un modèle syngènique orthotopique de cellules murines injectées dans des souris BalbC, ce qui favorise le dialogue entre la tumeur et son environnement; condition essentielle pour la migration des cellules. De plus ce modèle est connu pour développer un nombre important de métastases dans un laps de temps relativement court. Les métastases apparaissent dans les poumons, ce qui facilite leur observation en visible.
Afin d'étudier les effets cytotoxiques de l'althiazide in vitro, nous analysons la mortalité cellulaire induite par le traitement avec l'althiazide par un marquage au sel de tétrazolium MTT (bromure de 3-(4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényl tétrazolium) sur les cellules 4T1. La quantité de cellules vivantes dans le puits est dosée par spectrométrie. Les résultats sont comparés à ceux obtenus après traitement avec la solution contrôle (Figure 8). Dans ce test, nous observons une très faible mortalité des cellules après traitement avec l'althiazide (80 % de cellules vivantes à la dose la plus importante 100 μΜ). Les cellules traitées avec le dasatinib présentent un taux de mortalité beaucoup plus élevé, à des doses beaucoup plus faibles (80 % de cellules vivantes à la dose la plus faible 10 nM et 20 % de cellules vivantes à 100 μΜ).
Exemple 6 : Activité anti-métastatique de l'althiazide in vitro : test de migration sur cellules 4T1.
Afin de valider le potentiel anti-migratoire de l'althiazide, nous effectuons un "scratch test" sur les cellules 4T1 en culture selon le protocole du test de migration cellulaire sur la lignée cellulaire 4T1 décrit dans la partie Matériels et Méthodes. Ce test est utilisé pour évaluer le pouvoir migratoire d'un composé chimique sur des cellules en culture. L'expérience consiste à étudier la capacité des cellules à reconstituer un tapis cellulaire ('cicatrisation'), ce qui implique la propriété de migration des cellules composant la monocouche cellulaire sur la zone blessée. Le test est réalisé en plaque de microtitration 12 puits. Une blessure est réalisée à l'aide d'une pointe de pipette de 10 μΐ, puis les cellules sont traitées avec le dasatinib ou l'althiazide aux concentrations de 10 nM, 100 nM, 1 μΜ, 10 μΜ et 100 μΜ. Les cellules sont ensuite placées en conditions normoxique ou hypoxique. Une photo de la surface du puits est réalisée à t = 0 (après la blessure) puis à t = 24 h. La surface de la zone blessée est mesurée pour chaque puits et le pourcentage de migration est calculé dans chacune des conditions.
Nous observons une diminution de la migration des cellules de 40 % après traitement avec l'althiazide dès la concentration la plus faible 10 nM (Figure 8). Aux mêmes doses, le dasatinib est plus efficace mais provoque une toxicité beaucoup plus importante. Exemple 7 : Action anti-migratoire des autres composés thiazidiques : test d'initiation et de progression du processus migratoire sur l'embryon de zebrafish.
Afin de déterminer si l'action anti-métastatique de l'althiazide est également valable pour l'ensemble de la famille des thiazidiques, d'autres composés thiazidiques ont été testés.
L'efficacité anti-métastatique des composés thiazidiques a été déterminé comme pour la mesure de l'efficacité anti-métastatique de l'athiazide, quantifiée par le test de migration cellulaire sur la lignée cellulaire 4T1 décrit dans la partie Matériels et Méthodes. Ces composés ont été testés à 10 et 25 μΜ. Chacun de ces composés permet de diminuer le nombre de cellules ayant colonisé le THC (tissu hématopoïétique caudal) et confirme ainsi l'activité anti-métastatique des composés thiazidiques. L'AZ-M015 diminue la migration de 30%. Toutefois, le composé le plus efficace est le MCZ puisqu'il permet de réduire la migration de 37 % lorsqu'il est utilisé à 10 μΜ et de 55% lorsqu'il est utilisé à 25μηι. De plus, les énantiomères de PAZ-M015, AZ(A) et AZ(B) permettent de réduire de manière plus importante l'invasion du THC par les cellules CD41 : GFP. Ces composés, en diminuant l'accumulation des cellules CD41 : GFP ont altéré un ou plusieurs des processus suivants : transition endothélio-hématopoïétiques, intravasation et/ou extravasation au niveau du THC.
Exemple 8. Test de migration cellules MDA-MB-231.
Afin de valider le potentiel anti-migratoire de l'althiazide, nous effectuons un "scratch test" est effectué sur les cellules MDA-MB-231 en culture selon le protocole du test de migration cellulaires sur la lignée cellulaire MDA-MB-231 décrit dans la partie Matériels et Méthodes. Ce test est utilisé pour évaluer le pouvoir migratoire d'un composé chimique sur des cellules en culture. L'expérience consiste à étudier la capacité des cellules à reconstituer un tapis cellulaire ('cicatrisation'), ce qui implique la propriété de migration des cellules composant la monocouche cellulaire sur la zone blessée. Le test est réalisé en plaque de microtitration 96 puits. Une blessure est réalisée à l'aide d'une pointe de pipette, puis les cellules sont traitées avec l'althiazide.
Une première série d'images de chaque puits (centre du puits) est réalisée en début d'expérience (t=0) et après 18h de migration (t=18) à l'aide d'un microscope Nikon - objectif 4x. Les images ont été analysées à l'aide du logiciel Image J (National Institue of Health, USA)
Une activité anti-migratoire de ΓΑΖ-Μ015 est observée aux concentrations de 10, 50 et ΙΟΟμΜ. Une diminution de l'ordre de 50% de la migration est observée (figure 10).
Exemple 9 : expression des marqueurs de la transition épithélio-mésenchymateuse
La transition épithélio-mésenchymateuse (TEM) est la première étape du processus de formation de métastases cancéreuses. En effet les cellules épithéliales commence par effectuer une TEM (perte d'adhésion cellulaire, perte de polarité cellulaire et acquisition de propriétés migratoire) puis deviennent invasives ( Thiery & Sleeman, 2006).
La TEM est caractérisée par une surexpression des facteurs de transcription
SNAIL/SLUG/TWIST/ZEB 1 qui induisent une reprogrammation génique conduisant à l'acquisition des propriétés migratoires avec notamment l'augmentation de l'expression de la VIMENTINE et de la N-CADHERINE et la diminution de l'expression de Γ E-CADHERINE.
Ici, ΑΖ-Μ015 induit une diminution de l'expression des facteurs de transcription ZEB1 (-14%) et SNAIL (-19%), de la VIMENTINE (-22%) et la N-CADHERINE (-33%) ainsi qu'une augmentation de l'expression de ΓΕ-CADHERINE de 73 % (figure 11).
Ces modifications sont opposées à celles observées lors de la TEM. L'AZ-M015 est donc un inhibiteur de la TEM. Par cette inhibition, ΓΑΖ-Μ015 agit directement sur la dissémination métastatique en bloquant la première étape de ce processus cancéreux.
Exemple 10: Tests de potentialisation de cytotoxicité de l'althiazide
La doxorubicine est une substance largement utilisée dans les traitements de nombreux cancers (cancers bronchopulmonaires, cancers de l'estomac, cancers de l'ovaire, cancers de la vessie, cancers du sein, leucémies, myélomes multiples, lymphomes malins non hodgkiniens, maladie de Hodgkin, sarcomes de Kaposi associé au sida, sarcomes des os, sarcomes des tissus mous et tumeurs solides de l'enfant). L'utilisation des anthracyclines et notamment de la doxorubicine s'accompagne d'un risque de cardiotoxicité de manière dose dépendante pouvant évoluer vers une insuffisance cardiaque sévère et irréversible. Ainsi il est d'une part, important d'améliorer l'efficacité de ce traitement et d'autre part d'en réduire la toxicité. Dans ce test, Palthiazide a été ajouté à la doxorubicine et la viabilité cellulaire a été ensuite déterminée.
Les tests sont réalisés en culture cellulaire en plaques 96 puits, sur la lignée de cellule MDA-MB-231. Les cellules MDA-MB-231 sont ensemencées dans des plaques 96 puits à la densité de 10 000 cellules et incubées 24h à 37°C, 5% C02 et 1% 02. Le milieu est ensuite renouvelé et additionné de concentrations croissantes de doxorubicine +/- ΙΟΟμΜ d'althiazide. Les cellules sont incubées 24h supplémentaires à 37°C, 5% C02 et 1% 02. Les traitements ont été réalisés en triplicas et l'expérience a été répétée 5 fois. Un test de viabilité cellulaire est ensuite réalisé selon la méthode décrit dans la partie
Matériels et Méthodes. Les résultats sont normalisés par rapport à la condition contrôle (figure 12)
L'althiazide permet d'augmenter les effets de la doxorubicine lorsque celle-ci est utilisée entre 25 et 2,5 μΜ d'environ 15%. De plus, le traitement avec l'athiazide permet de diminuer l'IC50 de la doxorubicine de 45% en passant de 6,02μΜ à 3.318μΜ. L'althiazide est donc un potentialisateur de l'agent anticancéreux doxorubicine. Ainsi, ΓΑΖ-Μ015 permet d'augmenter l'efficacité des traitements anti-cancéreux et/ou de réduire la dose utilisée et ainsi diminuer les effets toxiques indésirables de cet anti-cancéreux.
Exemple 11: Tests de potentialisation de cytotoxicité de l'althiazide
Les tests sont réalisés en culture cellulaire en plaques 96 puits, sur la lignée de cellule MDA-MB-231. Les cellules MDA-MB-231 sont ensemencées dans des plaques 96 puits à la densité de 10 000 cellules et incubées 24h à 37°C, 5% C02 et 1% 02. Le milieu est ensuite renouvelé et additionné de doxorubicine et d'un autre composé de l'invention (Formule (IA, IB, IVa, Va, Vb, Vc, Vd, Ve, Vf, Via, Vlla et Vllb) à une concentration de 50 μΜ. Les cellules sont incubées 24h supplémentaires à 37°C, 5% C02 et 1% 02. Les traitements ont été réalisés en triplicas et l'expérience a été répétée 5 fois.
Exemple 12 : Evaluation des effets anti-métastatique de l'althiazide sur la souris Les effets anti-métastatique de l'althiazide sur la souris sont évalués sur des souris immunodéprimées dans lesquelles sont injectées des cellules MDA-MB-231 dans la glande mammaire.
Les souris suivent un traitement sur 4 semaines avec une injection d'althiazide chaque jour.
Les tumeurs mammaires des souris sont mesurées 3 fois par semaine durant 4 semaines.
Les souris pour lesquelles la tumeur mammaire a atteint 2g, sont sacrifiées et le nombre de métastases cancéreuses ayant envahies le poumon est comptabilisé. Ce nombre est comparé au lot de souris contrôle injectées avec les cellules cancéreuses MDA-MB-231 et traitées au PBS.
Exemple 13 : Evaluation des effets potentialisateurs de l'althiazide sur la doxorubicine chez la souris
La dose maximale d'althiazide est donnée seule ou en association à la doxorubicine. 4 doses de doxorubicine sont testées.
Les cellules MDA-MB-231 sont injectées dans la glande mammaire des souris immunodéprimées .
Les souris suivent un traitement sur 4 semaines à raison d'une injection de doxorubicine par semaine sur 4 semaines et une injection d'althiazide chaque jour durant les 4 semaines. La première dose d'althiazide est donnée le premier jour après l'injection des cellules MDA-MB-231 dans la glande mammaire.
Les tumeurs mammaires des souris sont mesurées 3 fois par semaine et comparées aux lots de souris traitées au PBS seul ou à l'althiazide seul.
Exemple 14. Séparation des énantiomères de l'althiazide AZ-M015 a. Séparation par SFC acide
La séparation des deux énantiomères a été réalisée selon le protocole décrit dans la partie Matériels et Méthodes, avec les paramètres suivants : • Phase mobile : méthanol additionné de 0.01 % d'acide acétique/C02 dans un rapport 20/80
• Produit à séparer : 49.2 mg de AZ-M015 dissous dans 2 ml de méthanol additionné de 0.01 % d'acide acétique.
• Injection : 10 injections de 5 mg chacune.
• Collecte : Seuil d'ouverture 50mUA, seuil de fermeture 30 mUA.
Les deux composées obtenues suite à cette séparation ont été appelés EV-VZW001- 070-001 (19.8 mg) et EV-VZW001-070-002 (20.1 mg).
b. Séparation par SFC acétonitrile version 1
La séparation des deux énantiomères a été réalisée selon le protocole décrit dans la partie Matériels et Méthodes, avec les paramètres suivants :
• Phase mobile : acétonitrile/C02 dans un rapport 30/70
• Produit à séparer : 50.9 mg de AZ-M015 dissous dans 2 ml d'acétonitrile.
• Injection : 13 injections de 4 mg chacune.
• Collecte : Seuil d'ouverture 60mUA, seuil de fermeture 50 mUA.
Les deux composées obtenus suite à cette séparation ont été appelés EV-VZW001- 070-003 (21.7 mg) et EV-VZW001-070-004 (22.1 mg). La figure 14 montre les essais préparatifs pour le réglage de l'ouverture et la fermeture de la collecte de chaque énantiomère. Ce mode de collecte conduit nécessairement à une plus faible pureté du second énantiomère. c. Séparation par SFC acétonitrile version 2
La séparation des deux énantiomères a été réalisée selon le protocole décrit dans la partie Matériels et Méthodes, avec les paramètres suivants :
• Phase mobile : acétonitrile/C02 dans un rapport 30/70
• Produit à séparer : 74.9 mg de AZ-M015 dissous dans 4 ml d'acétonitrile.
• Injection : 20 injections de 3.8 mg chacune.
• Collecte : Seuil d'ouverture 50mUA, seuil de fermeture 40 mUA.
Les deux composées obtenus suite à cette séparation ont été appelés EV-VZW001- 070-005 (33.6 mg) et EV-VZW001-070-006 (29.1mg). Exemple 15 : Analyse des séparations a. Analyse du produit de départ.
Le composé de départ, le AZ-M015 a été analysé pour identifier la répartition des deux énantiomères par le protocole d'analyse de la pureté chirale décrit dans la partie Matériels et Méthodes. La figure 15 montre le chromatographe qui a été obtenu avec une répartition de 49.8 % d'énantiomère AZ(A) et 50.2% d'énantiomère AZ(B). b. Analyse des autres composés EV-VZW001-070-X.
Le tableau 3 indique les résultats obtenus pour les composés issus des trois séparations selon les protocoles d'analyse de la pureté chirale et d'analyse de la pureté en phase inverse tout deux décrits dans la partie Matériels et Méthodes.
Figure imgf000049_0001
Tableau 3 : Résultat d'analyse des composés issus des séparations.
La figure 16 montre le chromatogramme obtenu pour l'analyse de l'échantillon EV- VZWOO 1 -070-002. Exemple 16 : Test de stabilité des énantiomères
A l'issue de la séparation par SFC acétonitrile version 2, 1.5 mg de EV-VZWOO 1- 070-005 et 2.4 mg de EV-VZWOO 1-070-006 sont retirées pour les tests de stabilité.
L'échantillon EV-VZWOO 1-070-005 est stocké à une température de 5 °C dans des conditions de protection contre la lumière. L'échantillon EV-VZWOO 1-070-006 est stocké à température ambiante sur la paillasse sans protection contre la lumière. La figure 17 montre le chromatogramme obtenu lors de l'analyse de l'échantillon EV- VZWOO 1-070-005 après 24h de stockage.
La figure 18 montre le chromatogramme obtenu lors de l'analyse de l'échantillon EV- VZWOO 1-070-006 après 24h de stockage. Le tableau 4 montre l'évolution dans le temps des quantités d'énantiomère présent dans les échantillons.
Figure imgf000050_0001
Tableau 4 : Stabilité temporelle des énantiomères stockés ou non dans des conditions optimales

Claims

REVENDICATIONS
1. Composé pour son utilisation dans le traitement du cancer, ledit composé étant de formule (II)
Figure imgf000051_0001
dans laquelle :
a peut représenter:
• rien,
• une liaison simple,
• une double liaison ;
b représente :
• rien si a représente rien,
• une liaison simple si a est soit une liaison simple soit une liaison double la valeur de i étant :
• nulle si a représente rien,
• égale à 1 si a est une simple ou une double liaison ;
si a représente rien, alors b représente rien et i vaut 0 :
o R\ et R5 peuvent représenter indépendamment l'un de l'autre :
H ;
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi N, O, S, SO, S02, et/ou 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ; o R3 et R7 peuvent représenter indépendamment l'un de l'autre :
H ;
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi N, O, S, SO, S02, et/ou 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
o R4 peut représenter :
H ;
• un atome d'halogène
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ; si a représente une simple liaison, alors b représente une simple liaison et i vaut 1 :
o R peut représenter :
H ;
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi N, O, S, SO, S02, et/ou 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
o R2 peut représenter : • H ;
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi NRaRb, ORa, SRa, SORa, S02Ra, S02NRaRb, CONRaRb, dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène, une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée ou cyclique de 1 à 20 carbones, avec éventuellement des hétéroatomes et/ou des halogènes, ou un cycle aromatique de 1 à 20 carbones, contenant éventuellement des hétéroatomes et étant éventuellement substitués ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi N, O, S, SO, S02, et/ou 1 ou plusieurs atome d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi NRaRb, ORa, SRa, SORa, S02Ra, S02NRaRb, CONRaRb, dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène, une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée ou cyclique de 1 à 20 carbones, avec éventuellement des hétéroatomes et/ou des halogènes, ou un cycle aromatique de 1 à 20 carbones, contenant éventuellement des hétéroatomes et étant éventuellement substitués ;
R3 peut représenter :
• H ;
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O, S, SO, S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi N, O, S, SO, S02, et/ou 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
o R5 et R7 représentent rien
o Re représente H
o R4 est tel que défini ci-dessus
si a représente une double liaison, alors b représente une simple liaison et i vaut 1 o Rj, R5, RÔ et R7 représentent rien ;
o R2, R3 et R4 sont tels que définis ci-dessus.
Composé, selon la revendication 1, pour son utilisation dans le traitement du ledit composé étant de formule (III)
Figure imgf000054_0001
dans laquelle :
a peut représenter :
• une liaison simple ;
• une double liaison,
b représente :
• rien si a représente rien ;
• une liaison simple si a est soit une liaison simple soit une liaison double ;
la valeur de i étant :
• nulle si a représente rien ;
• égale à 1 si a est une simple ou une double liaison ;
si a représente rien, alors b représente rien et i vaut 0 :
o R3 et R7 peuvent représenter indépendamment l'un de l'autre :
H ;
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
o R5 représente H2 ; o R4 peut représenter :
• H ;
• un atome d'halogène
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
si a représente une simple liaison, alors b représente une simple liaison et i vaut 1 : o R2 peut représenter :
• H ;
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 10 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi S et S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi SRa, et S02NRaRb, dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène ou une chaîne alkyle ou alcényle linéaire de 1 à 10 carbones ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi, S et S02, et/ou 1 ou plusieurs atome d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi SRa, et S(¾NRaRb„ dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène ou une chaîne alkyle ou alcényle linéaire de 1 à 10 carbones ;
o R3 peut représenter :
• H ;
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
o R5 et RÔ représentent H ;
o R7 représentent rien ;
o R4 est tel que définis ci-dessus
si a représente une double liaison, alors b représente une simple liaison et i vaut 1 : o R5, RÔ et R7 représentent rien
o R2, R3 et R4 sont tels que définis ci-dessus
3. Composé, selon Tune des revendications 1 ou 2, pour son utilisation dans le traitement du cancer, ledit composé étant de formule (IV)
Figure imgf000056_0001
dans laquelle :
- R3 peut représenter :
• H ;
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
R peut représenter :
· H ;
• un atome d'halogène
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ; en particulier le composé de formules (IVa)
Composé, selon l'une des revendications 1 ou 2, pour son utilisation dans le traitement du cancer, ledit composé étant de formule (V) :
Figure imgf000056_0002
dans laquelle :
R2 peut représenter
• H ; • une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 10 atomes de carbones, monocyclique ou polycyclique de 3 à 20 atomes de carbone, notamment bicyclique, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi S et S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi SRa, et S02NRaRb, dans lesquelles Ra et/ou R représentent, indépendamment, un hydrogène ou une chaîne alkyle ou alcényle linéaire de 1 à 10 carbones ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi, S et S02, et/ou 1 ou plusieurs atome d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi SRa, et S02NRaRb„ dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène ou une chaîne alkyle ou alcényle linéaire de 1 à 10 carbones ;
R3 peut représenter :
• H ;
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
R4 peut représenter :
• H '
• un atome d'halogène
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes.
Composé, selon l'une des revendications 1 ou 2, pour son utilisation dans le traitement du cancer, ledit composé étant de formule (VI) :
Figure imgf000057_0001
dans laquelli R2 peut représenter :
• une chaîne alkyle ou alcényle linéaire, ramifiée, de 1 à 10 atomes de carbones, comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi S et S02, et étant éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi SRa, et S02NRaRb, dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène ou une chaîne alkyle ou alcényle linéaire de 1 à 10 carbones ;
• un groupe aryle de 1 à 20 carbones, éventuellement substitué par une ou plusieurs chaînes alkyles et comportant éventuellement 1 ou plusieurs hétéroatomes ou fonctions choisis parmi, S et S02, et/ou 1 ou plusieurs atome d'halogènes, lesdits hétéroatomes formant éventuellement des fonctions, notamment des fonctions choisies parmi SRa, et S02NRaRb„ dans lesquelles Ra et/ou Rb représentent, indépendamment, un hydrogène ou une chaîne alkyle ou alcényle linéaire de 1 à 10 carbones ;
R3 peut représenter :
• H ;
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
R4 peut représenter :
. H ;
• un atome d'halogène
• une chaîne alkyle linéaire de 1 atome de carbone, éventuellement substituée par 1 ou plusieurs atomes d'halogènes ;
Composé, selon les revendications 1, 2 et 4, pour son utilisation dans le traitement du cancer, ledit composé étant l'althiazide de formule (I) sous forme racémique :
Figure imgf000058_0001
Composé selon l'une des revendications 1, 2, ou 4 pour son utilisation dans le traitement du cancer ; ledit composé étant l'althiazide de formule (IA) étant utilisé sous sa forme pure ou avec une pureté chirale supérieur à 99% :
Figure imgf000059_0001
Composé selon l'une des revendications 1, 2,ou 4 pour son utilisation dans le traitement du cancer ; ledit composé étant l'althiazide de formule (IB) étant utilisé sous sa forme pure ou avec une pureté chirale supérieur à 99% :
Figure imgf000059_0002
Composé, selon la revendication 1 , pour son utilisation dans le traitement du cancer ; ledit composé étant de formule :
Figure imgf000059_0003
),
Figure imgf000060_0001
10. Composé selon l'une des revendications 1 à 9 pour son utilisation dans le traitement des tumeurs cancéreuses primaires.
1 1. Composé selon l'une des revendications 1 à 9 pour son utilisation dans le traitement du cancer à l'état pré-métastatique.
12. Composé selon l'une des revendications 1 à 9 pour son utilisation comme agent anticancéreux ou potentialisateur d'un agent anti-cancéreux, notamment comme agent anti- métastatique, dans le traitement du cancer.
13. Composé selon l'une des revendications 1 à 9 pour son utilisation en association avec un autre agent anti-cancéreux dans le traitement du cancer.
14. Composé pour son utilisation comme agent anti-cancéreux ou potentialisateur d'un agent anti-cancéreux selon la revendication 12, ledit autre agent anti-cancéreux étant un rayonnement ou un agent chimique, notamment un agent de chimiothérapie, de radiothérapie, un radio-pharmaceutique ou un anti-angiogénique.
15. Composé pour son utilisation selon l'une des revendications 13 ou 14, ledit autre agent anti-cancéreux étant choisi parmi les agents alkylants tels que les alkylsulfonates notamment busulfan, la dacarbazine, la procarbazine, la cloretazine, les moutardes azotées telles que chlorméthine, melphalan, chlorambucil, cyclophosphamide, ifosfamide, les nitrosourées tels que la carmustine, la lomustine, la sémustine, la streptozocine l'altretamine, la fotémustine ; les alcaloïdes antinéoplasiques tels que la vincristine, la vinblastine, la vinorelbine, la vindesine;
les taxanes tel que le paclitaxel ou le taxotère ;
les antibiotiques antinéoplasiques tels que l'actinomycine, la bleomycine; les agents intercalants tels la mitoxantrone; l'étoposide, la bléomycine, l'actinomycine D, l'amsacrine, l'alliptinium ; les antimétabolites antinéoplasiques: les antagonistes des folates, le méthotrexate; les inhibiteurs de la synthèse des purines; les analogues de la purine tels que mercaptopurine, 6-thioguanine; les inhibiteurs de la synthèse des pyrimidines, les inhibiteurs d'aromatase, la capécitabine, les analogues de la pyrimidine tels que fluorouracil, gemcitabine, cytarabine et cytosine arabinoside; le bréquinar, la nelarabine ;
les inhibiteurs de topoisomérases de groupe I et II tels que l'irinotecan, l'exatecan, le topotecan, le teniposide, la camptothécine ou l'étoposide ;
les agonistes et antagonistes hormonaux anticancéreux incluant le tamoxifène ; les inhibiteurs de kinase, tels que l'imatinib, le nilotinib et le dasatinib, la midaustorin, le sorafenib, le lestaurtinib, le tandutinib ;
les inhibiteurs de facteurs de croissance ;
les anti-inflammatoires tels que le pentosane polysulfate, les corticostéroïdes, la prednisone, la dexamethasone ;
- le ceplene (dichlorhydrate d'histamine) ;
les antracyclines tels que la daunorubicine, l'epirubicine, la pirarubicine, l'idarubicme, la zorubicine, l'aclarubicme, l'annamycine, la doxorubicine, la mitomycine et la méthramycine ;
les complexes métalliques anticancéreux, les dérivés du platine tel que le cisplatine, le carboplatine, l'oxaliplatine, le satraplatine ;
- l'interféron alpha ; le triphénylthiophosphoramide ;
les agents antiangiogéniques ; la thalidomide ;
les inhibiteurs de la farnesyl-tranferase tel le tipifarnib ;
les inhibiteurs de l'ADN methyltransferase tel le MG98 ;
les adjuvants d'immunothérapie tel le gemtuzumab ozogamicin, le HuM 195 ; - les agents biothérapeutiques tel le CT388-I L3;
- les antisens tel le GTI-2040 ;
les vaccins.
16. Composé pour son utilisation selon l'une des revendications 1 à 15, ledit composé étant formulé pour être administré aux êtres humains ou aux animaux à un dosage de 0,016 mg/kg à 16 mg/kg, en mélange avec des excipients pharmaceutiques classiques.
17. Composé pour son utilisation selon l'une des revendications 1 à 15, ledit composé étant formulé pour être administré aux êtres humains ou aux animaux, sous forme unitaire de 1 mg à 160 mg, en mélange avec des excipients pharmaceutiques classiques.
18. Composé pour son utilisation comme agent anti-cancéreux ou potentialisateur d'un agent anti-cancéreux selon l'une des revendications 1 à 17, ledit composé étant utilisé par administration par voies orale, parentérale, spray d'inhalation, voies nasale, vaginale, rectale, sous-linguale ou locale.
19. Composé pour son utilisation selon l'une des revendications 1 à 18, ledit cancer étant - un cancer tête et cou
un cancer du poumon ;
un cancer digestif, tel qu'un cancer du rectum, un cancer de l'estomac ;
- un cancer gynécologique tel qu'un cancer de l'utérus, un cancer du col de l'utérus, un cancer du vagin, cancer des ovaires ;
- un cancer urogénital tel qu'un cancer de la vessie, un cancer de la prostate, des vésicules séminales, des testicules, tumeurs des cellules germinales ;
- un cancer ORL tel qu'un cancer de la bouche, des joues, du palais, de la langue, des amygdales, du pharynx, de Poropharynx et de Phypopharynx ou un cancer des fosses nasales, des sinus, du nasopharynx et du larynx ; un cancer du sein ;
cancer de l'intestin grêle ;
cancer du colon ;
cancer du foie ;
cancer des canaux biliaires ;
cancer de la vésicule biliaire ; cancer du pancréas ;
cancers du rein ;
cancers des glandes endocrines y compris cancer de la thyroïde, de l'hypophyse, des glandes surrénales ;
cancers de la peau y compris hémangiomes, mélanomes, sarcomes, incluant le sarcome de Kaposi ;
tumeurs du cerveau, des nerfs, des yeux, des méninges, incluant astrocytomes, gliomes, glioblastomes, rétinoblastomes, neurinomes, neuroblastomes, schwannomes, méningiomes ;
- tumeurs malignes hématopoïétiques ; leucémies, (Acute Lymphocytic Leukemia (ALL), Acute Myeloid Leukemia (AML), Clironic Myeloid Leukemia (CML), Chronic lymphocytic leukemia (CLL)) chloromes, plasmocytomes, leucémies des cellules T ou B, lymphomes non hodgkiniens ou hodgkiniens, myélomes, hémopathies malignes diverses ;
- toute forme de cancer à haut risque métastatique.
Composé pour son utilisation selon l'une des revendications 1 à 19, en association avec un autre agent anti-cancéreux, ledit autre agent anti-cancéreux étant un rayonnement, notamment un agent de radiothérapie, ledit cancer étant
un cancer de la tête ;
un cancer du cou ; un cancer du poumon ;
un cancer digestif, tel qu'un cancer du rectum, un cancer de l'estomac ;
un cancer gynécologique tel qu'un cancer de l'utérus, un cancer du col de l'utérus, un cancer du vagin, cancer des ovaires ;
un cancer urogénital tel qu'un cancer de la vessie, un cancer de la prostate, des vésicules séminales, des testicules, tumeurs des cellules germinales ;
un cancer ORL tel qu'un cancer de la bouche, des joues, du palais, de la langue, des amygdales, du pharynx, de oropharynx et de l'hypopharynx ou un cancer des fosses nasales, des sinus, du nasopharynx et du larynx ;
un cancer du sein ;
cancer de l'intestin grêle ;
cancer du colon ;
cancer du foie ;
cancer des canaux biliaires ;
cancer de la vésicule biliaire ;
cancer du pancréas ;
cancers du rein ;
cancers des glandes endocrines y compris cancer de la thyroïde, de l'hypophyse, des glandes surrénales ;
cancers de la peau y compris hémangiomes, mélanomes, sarcomes, incluant le sarcome de aposi ;
tumeurs du cerveau, des nerfs, des yeux, des méninges, incluant astrocytomes, gliomes, glioblastomes, rétinoblastomes, neurinomes, neuroblastomes, schwannomes, méningiomes ;
tumeurs malignes hématopoïétiques ; leucémies, (Acute Lymphocytic Leukemia (ALL), Acute Myeloid Leukemia (AML), Clironic Myeloid Leukemia (CML), Chronic lymphocytic leukemia (CLL)) chloromes, plasmocytomes, leucémies des cellules T ou B, lymphomes non hodgkiniens ou hodgkiniens, myélomes, hémopathies malignes diverses ; toute forme de cancer à haut risque métastatique.
21. Composition pharmaceutique contenant un composé de formule (IA) ou ,(IB), , selon les revendication 7 ou 8, en association avec un véhicule pharmacologiquement acceptable
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