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WO2018079740A1 - 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物 - Google Patents

癌の治療及び／又は予防用医薬組成物 Download PDF

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WO2018079740A1
WO2018079740A1 PCT/JP2017/038986 JP2017038986W WO2018079740A1 WO 2018079740 A1 WO2018079740 A1 WO 2018079740A1 JP 2017038986 W JP2017038986 W JP 2017038986W WO 2018079740 A1 WO2018079740 A1 WO 2018079740A1
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WO
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seq
amino acid
acid sequence
chain variable
variable region
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PCT/JP2017/038986
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French (fr)
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文義 岡野
孝則 齋藤
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Toray Industries Inc
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Toray Industries Inc
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    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies

Definitions

  • the present invention relates to a conjugate of an antibody against CAPRIN-1 protein and an immune activator, and a pharmaceutical use as a therapeutic and / or preventive agent for cancer using the same.
  • Non-Patent Documents 1 and 2 examples of ADCs include Cadosaila (Trastuzumab emtansine) in which the drug emtansine (DM1), which is killed by cells, is linked to trastuzumab, an existing antibody drug, and monomethylauristatin E (MMAE) as an anti-CD30 monoclonal antibody. ) Is used in the treatment of some cancers, and the survival rate has been shown to be longer than that of conventional therapies, making it useful for existing cancer therapies. (Non-Patent Documents 3 and 4).
  • An object of the present invention is to provide a means for enhancing the antitumor effect of an antibody against a CAPRIN-1 protein expressed on the cell membrane surface of cancer cells or a fragment thereof.
  • the present inventor has shown that a conjugate of an antibody against CAPRIN-1 protein or a fragment thereof and an immune activator exhibits an extremely strong antitumor effect compared to an antibody against CAPRIN-1 protein or a fragment thereof alone. Furthermore, the anti-tumor effect enhancement effect when an immunoactivator is conjugated to an antibody against CAPRIN-1 protein or a fragment thereof is an anti-tumor effect when an immunoactivator is conjugated to an existing cancer antibody drug As a result, the present invention was completed.
  • the present invention has the following features (1) to (14).
  • An immunological analysis with a CAPRIN-1 protein having an amino acid sequence represented by any one of SEQ ID NOs: 2 to 30 or an amino acid sequence having 80% or more sequence identity with the amino acid sequence A conjugate comprising a reactive antibody or fragment thereof and an immune activator bound thereto.
  • the antibody or fragment thereof has the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 31 to 35, 296 to 299, 308, 309 or an amino acid sequence having 80% or more sequence identity with the amino acid sequence.
  • the conjugate according to (1) which is immunologically reactive with a partial polypeptide of a CAPRIN-1 protein.
  • the antibody or fragment thereof is any of the following (A) to (M): A heavy chain variable region comprising complementarity determining regions (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) and a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 40, 41 and 42 (CDR1, CDR2 and CD3, respectively); A heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) of SEQ ID NOs: 44, 45 and 46, or an antibody or fragment (B) immunologically reactive with the CAPRIN-1 protein and SEQ ID NO: 48, A light chain variable region comprising 49 and 50 complementarity determining regions (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively), and a CAPRIN-1 tamper Antibody or fragment having immunological reactivity with the antibody (C) heavy chain variable region comprising complementarity determining regions (CDR1,
  • a heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of 302 and 303 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) and a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOS: 305, 306 and 307 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) And a heavy chain variable region comprising complementarity determining regions (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) of an antibody or fragment thereof (M) SEQ ID NOs: 134, 135 and 136 having immunological reactivity with the CAPRIN-1 protein And the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 137, 138 and 139 (CD respectively R1, CDR2 and CDR3), and an antibody or fragment thereof having immunoreactivity with the CAPRIN-1 protein (5)
  • the antibody or fragment thereof comprises the following (a) to (a): The conjugate according to any one of (1) to (4), which is any one of ak).
  • the fragment (e) is an antibody or heavy chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 68 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 69.
  • the immune activator is a ligand or agonist that binds to Toll-like receptor (TLR), NOD-like receptor (NLR), RIG-like receptor, C-type lectin receptor (CLR) (1
  • TLR Toll-like receptor
  • NLR NOD-like receptor
  • RIG-like receptor C-type lectin receptor
  • CLR C-type lectin receptor
  • TLR Toll-like receptor
  • a ligand or agonist that binds to TLR2 selected from the group consisting of peptidoglycan, lipoprotein, lipopolysaccharide and zymosan
  • ii selected from the group consisting of Poly
  • A: U A ligand or agonist that binds to TLR3
  • iii a ligand or agonist that binds to TLR4 selected from the group consisting of lipopolysaccharide (LPS), HSP60, RS09 and MPLA
  • iv selected from the group consisting of flagellin and FLA
  • a ligand or agonist that binds to TRL7 or 8 selected from the group consisting of an imid
  • a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer comprising the conjugate according to any one of (1) to (10) as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition according to (11), wherein the cancer is a cancer that expresses the CAPRIN-1 protein on the cell membrane surface.
  • the cancer is breast cancer, renal cancer, pancreatic cancer, colon cancer, lung cancer, brain tumor, stomach cancer, uterine cancer, ovarian cancer, prostate cancer, bladder cancer, esophageal cancer, leukemia, lymphoma, liver cancer, gallbladder cancer, sarcoma (11) or a cancer selected from the group consisting of mastocytoma, melanoma, adrenocortical cancer, Ewing tumor, Hodgkin lymphoma, mesothelioma, multiple myeloma, testicular cancer, thyroid cancer, and head and neck cancer
  • (14) Treatment of cancer and / or administration of a conjugate according to any one of (1) to (10) and a pharmaceutical composition according to any one of (11) to (13) to a subject Prevention method.
  • the conjugate according to the present invention not only exhibits an extremely strong anti-tumor effect as compared with an antibody against CAPRIN-1 protein alone, but also is superior to conventional conjugates of cancer antibody drugs and immune activators. Has antitumor effect. Moreover, the enhancement effect of the antitumor effect by the conjugate according to the present invention is superior to the enhancement effect of the antitumor effect when an immunoactivator is conjugated to an existing cancer antibody drug. Therefore, the conjugate according to the present invention is effective for the treatment and prevention of cancer.
  • anti-CAPRIN-1 antibody a conjugate of an antibody against a CAPRIN-1 protein used in the present invention or a fragment thereof (hereinafter referred to as “anti-CAPRIN-1 antibody”) and an immune activator is in vivo, as described later. It can be evaluated by examining the suppression of tumor growth in cancer animals.
  • conjugate refers to an antibody and an immune activator linked by a covalent bond.
  • a linker may be interposed between the antibody and the immune activator.
  • the anti-CAPRIN-1 antibody forming the conjugate according to the present invention may be a monoclonal antibody or a polyclonal antibody, preferably a monoclonal antibody, as long as the conjugate of the present invention can exhibit antitumor activity. Any kind of antibody may be used, and the antibody is a recombinant antibody, a human antibody, a humanized antibody, a chimeric antibody, or a non-human animal antibody.
  • the immune activator forming the conjugate according to the present invention may be any factor that activates immune cells, and is preferably Toll-like receptor (TLR), NOD-like receptor (NLR), RIG-like. It is a ligand, an agonist or a derivative thereof that binds to a receptor, a C-type lectin receptor (CLR). More preferred are ligands or agonists and derivatives thereof that bind to Toll-like receptors (TLR).
  • the subject to be treated and / or prevented from cancer in the present invention is a mammal such as a human, a pet animal, livestock, a sporting animal, etc., and a preferred subject is a human.
  • the following describes the anti-CAPRIN-1 antibody, immune activator, anti-CAPRIN-1 antibody and immunoactivator conjugate, pharmaceutical composition using the conjugate, and cancer treatment and / or prevention method according to the present invention. To do.
  • SEQ ID NO: 6 is the amino acid sequence of canine CAPRIN-1 protein
  • the amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 2 and 4 are the amino acid sequences of human CAPRIN-1 protein
  • the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16 is the amino acid sequence of bovine CAPRIN-1 protein
  • the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18 is the amino acid sequence of equine CAPRIN-1 protein, shown in SEQ ID NOs: 20 to 28.
  • the amino acid sequence is the amino acid sequence of the mouse CAPRIN-1 protein.
  • Amino acid sequence shown in 30 is the amino acid sequence of caprin-1 protein of chicken.
  • the anti-CAPRIN-1 antibody used in the present invention is 80% or more, preferably 90% or more, more preferably 95% of the amino acid sequence represented by any of the even SEQ ID NOs among SEQ ID NOs: 2 to 30. It may be immunologically reactive with a variant of CAPRIN-1 protein having a sequence identity of at least%, more preferably at least 99%.
  • “% sequence identity” refers to the amino acid (or base) of two sequences when they are aligned (aligned) for maximum similarity with or without gaps. The percentage (%) of the same amino acid (or base) relative to the total number.
  • the anti-CAPRIN-1 antibody used for preparing the conjugate in the present invention means an antibody or fragment thereof having immunological reactivity with the full length of CAPRIN-1 protein or a fragment thereof.
  • immunological reactivity means the property that an antibody binds to a CAPRIN-1 protein or a partial polypeptide thereof in a living body.
  • the anti-CAPRIN-1 antibody used in the present invention may be a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.
  • a polyclonal antibody (anti-CAPRIN-1 polyclonal antibody) having immunological reactivity with the full length of a CAPRIN-1 protein or a fragment thereof is, for example, a natural CAPRIN-1 protein, a fusion protein with GST, or a partial peptide thereof.
  • Sera are obtained by immunizing mice, human antibody-producing mice, rats, rabbits, chickens and the like.
  • the obtained serum can be obtained by ammonium sulfate precipitation, protein A, protein G, DEAE ion exchange column, affinity column to which CAPRIN-1 protein or partial peptide is bound, or the like.
  • CAPRIN-1 protein For the full length of CAPRIN-1 protein or a fragment thereof used for the above immunization, the base sequence and amino acid sequence of CAPRIN-1 and its homologue are accessed by GenBank (NCBI, USA), for example, algorithms such as BLAST and FASTA (Karlin and Altschul) , Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 5873-5877, 1993; Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, 1997).
  • GenBank NCBI, USA
  • FASTA Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, 1997.
  • the method for producing the CAPRIN-1 protein can be obtained by referring to WO2014 / 012479, and cells that express the CAPRIN-1 protein can also be used.
  • a monoclonal antibody having immunological reactivity with the full length of a CAPRIN-1 protein or a fragment thereof is, for example, a breast cancer cell SK-BR-3 or CAPRIN-1 protein expressing CAPRIN-1.
  • Immunize the mouse by administering the full length or a fragment thereof, fuse spleen cells isolated from the mouse and myeloma cells, and select clones that produce anti-CAPRIN-1 monoclonal antibodies from the resulting fused cells (hybridomas) Can be obtained.
  • the antibody produced from the selected hybridoma can be obtained by the same method as the polyclonal antibody purification method described above.
  • the antibodies used in the present invention include human antibodies, humanized antibodies, chimeric antibodies, and non-human animal antibodies.
  • the human antibody is obtained by sensitizing human lymphocytes infected with EB virus with a protein, protein-expressing cells or a lysate thereof, and fusing the sensitized lymphocytes with myeloma cells such as human-derived U266 cells.
  • Antibodies having immunological reactivity with the full-length CAPRIN-1 protein or a fragment thereof can be obtained from the cells.
  • a humanized antibody is a modified antibody also referred to as a reshaped human antibody.
  • Humanized antibodies are constructed by transplanting the complementarity determining regions of antibodies derived from immunized animals into the complementarity determining regions of human antibodies.
  • a gene recombination technique as a general technique is a well-known technique. Specifically, for example, several DNA sequences designed to link the complementarity determining regions of mouse antibodies and rabbit antibodies with the framework regions of human antibodies so as to have a portion overlapping the terminal portion. The oligonucleotide is synthesized by the PCR method.
  • the obtained DNA is obtained by ligating with the DNA encoding the constant region of a human antibody, incorporating it into an expression vector, introducing it into a host and producing it (European Patent Application Publication No. EP239400, International Publication Number). WO 96/02576).
  • As the framework region of a human antibody to be ligated via the complementarity determining region a region in which the complementarity determining region forms a favorable antigen binding site is selected. If necessary, the amino acid of the framework region in the variable region of the antibody may be substituted so that the complementarity determining region of the reshaped human antibody forms an appropriate antigen binding site (Sato K. et al., Cancer Research). 1993, 53: 851-856). Moreover, you may substitute by the framework area
  • Antibody is usually a hetero-rich glycoprotein containing at least two heavy chains and two light chains.
  • An antibody is composed of two identical light chains and two identical heavy chains.
  • the heavy chain has a heavy chain variable region at one end followed by a number of constant regions.
  • the light chain has a light chain variable region at one end followed by a number of constant regions.
  • a variable region refers to a specific variable region called a complementarity determining region (CDR) that confers binding specificity to the antibody.
  • CDR complementarity determining region
  • the portion stored relatively in the variable area is called a framework area (FR).
  • the complete heavy and light chain variable regions each contain four FRs linked by three CDRs (CDR1-CDR3).
  • the human heavy chain and light chain constant region and variable region sequences are available, for example, from NCBI (USA: GenBank, UniGene, etc.).
  • the heavy chain constant region of human IgG1 has the registration number J00228,
  • the heavy chain constant region of human IgG2 refer to the registration number J00230, the registration number V00557, X64135, X64133, etc. for the human light chain ⁇ constant region, and the registration number X64132, X64134, etc. for the human light chain ⁇ constant region. be able to.
  • a chimeric antibody is an antibody produced by combining sequences derived from different animals, for example, from a heavy chain variable region and a light chain variable region of a mouse antibody, and from a constant region of a heavy chain variable region and a light chain variable region of a human antibody. Antibody or the like.
  • a chimeric antibody can be prepared using a known method. For example, a DNA encoding an antibody V region and a DNA encoding a C region of a human antibody are linked, incorporated into an expression vector, and introduced into a host. It is obtained by producing.
  • Non-human animal antibodies are obtained by immunizing animals with a sensitizing antigen according to a known method.
  • a sensitizing antigen is obtained by intraperitoneal, intradermal or subcutaneous injection of an animal such as a mouse.
  • the sensitizing antigen is injected, it is mixed with an appropriate amount of various adjuvants such as CFA (Freund's complete adjuvant) and administered to the animal a plurality of times.
  • serum After immunizing the animal and confirming that the anti-CAPRIN-1 antibody is contained in the serum, serum is obtained, and as described above, ammonium sulfate precipitation, protein A, protein G, DEAE ion exchange column, CAPRIN-1 protein Or an affinity column to which a partial peptide is bound.
  • a monoclonal antibody from a non-human animal it can be obtained by collecting immune cells from the immunized animal and subjecting them to cell fusion with myeloma cells. Cell fusion between the immune cells and myeloma cells can be performed according to a known method (see Kohler, G. and Milstein, C. Methods Enzymol. (1981) 73, 3-46).
  • the antibody used in the present invention can also be obtained as a gene recombinant antibody produced by cloning a gene from a hybridoma, incorporating it into an appropriate vector, introducing it into a host, and using gene recombination technology.
  • Yes Refer to Carl, AK Borrebaeck, James, W. Larrick, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Published in the United Kingdom, MIMILLANPUBLISHER19).
  • the anti-CAPRIN-1 antibody used for obtaining the conjugate of the present invention may have a variable region (for example, FR) or an amino acid in the constant region substituted with another amino acid.
  • An amino acid substitution is a substitution of one or more, for example, less than 15, less than 10, less than 8, less than 6, less than 5, less than 4, less than 4, less than 3, or less than 2, preferably 1 to 9 amino acids.
  • the antibody should have an ability to bind specifically to the antigen and binding affinity to the antigen equivalent to or higher than those of an unsubstituted antibody, and should not cause rejection when applied to humans. .
  • the anti-CAPRIN-1 antibody used in the present invention can be expected to have a stronger antitumor effect when the binding affinity with the CAPRIN-1 protein on the surface of cancer cells is higher.
  • the binding constant (affinity constant) Ka (kon / koff) is preferably at least 10 7 M ⁇ 1 , at least 10 8 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 8 M ⁇ 1 , at least 10 9 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ . 10 9 M ⁇ 1 , at least 10 10 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 10 M ⁇ 1 , at least 10 11 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 11 M ⁇ 1 , at least 10 12 M ⁇ 1 , or at least 10 13 M ⁇ 1 is desirable.
  • the anti-CAPRIN-1 antibody used in the present invention substitutes one, two, or several amino acids in the heavy chain constant region of the antibody, or binds to the heavy chain constant region. By removing fucose bound to acetylglucosamine, the binding force of the anti-CAPRIN-1 antibody to effector cells can be improved.
  • the above may be an amino acid substitution alone or a composition with an antibody to which fucose is bound.
  • Antibodies in which one, two, or several amino acids in the heavy chain constant region are substituted are prepared by referring to, for example, WO2004 / 063511, WO2011 / 120135, US Pat. No. 8,388,955, WO2011 / 005481, US Pat. can do.
  • An anti-CAPRIN-1 polyclonal antibody, an anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody, an antibody production method, a purification method, and a CAPRIN-1 protein or partial polypeptide production method used for immunization are described in WO2010 / 016526, WO2011 / 096517, WO2011 / 096528, WO2011 / 096519, WO2011 / 096553, WO2011 / 096534, WO2011 / 096535, WO2013 / 018886, WO2013 / 018884, WO2013 / 018882, WO2013 / 018881, WO2013 / 018889, WO2013 / 018883, WO2013 / 018883 WO2013 / 125654, WO2013 / 125630, WO201 / 125640, it is possible to WO2013 / 147169, obtained by reference to WO2013 / 147176 and WO2015 / 020212.
  • anti-CAPRIN-1 antibody in the present invention examples include the aforementioned WO2010 / 016526, WO2011 / 096517, WO2011 / 096528, WO2011 / 096519, WO2011 / 096533, WO2011 / 096534, WO2011 / 096535, WO2013 / 018886, WO2013 / 018894, WO2013 / 018882, WO2013 / 018891, WO2013 / 018889, WO2013 / 018883, WO2013 / 125636, WO2013 / 125654, WO2013 / 125630, WO2013 / 125640, WO2013 / 147169, WO2013 / 147176, and anti-CAPR -1 antibody But, as the preferred anti-caprin-1 antibody include the following.
  • CAPRIN- having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 or an amino acid sequence having 80% or more (preferably 85% or more, more preferably 90% or more, more preferably 95% or more) of the amino acid sequence with the amino acid sequence
  • An antibody or fragment thereof, or a complementarity determining region of SEQ ID NOs: 140, 141, and 142 (CDR1, CDR2, and CDR3, respectively).
  • a heavy chain variable region comprising: and a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOS: 143, 144 and 145 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively), and immunoreactive with the CAPRIN-1 protein Antibody or fragment thereof, or SEQ ID NOs: 164, 165 and 1
  • a heavy chain variable region comprising 6 complementarity determining regions (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) and a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOS: 167, 168 and 169 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively)
  • an antibody or fragment thereof having immunological reactivity with the CAPRIN-1 protein.
  • the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 39, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43, or a fragment thereof, or the heavy chain variable region comprises SEQ ID NO: 70.
  • An antibody or fragment thereof, wherein the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, or the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78, and the light chain variable region An antibody or fragment thereof comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79.
  • CAPRIN- having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 or an amino acid sequence having 80% or more (preferably 85% or more, more preferably 90% or more, and still more preferably 95% or more) of the amino acid sequence.
  • the heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 60, 61 and 62 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) and the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 64, 65 and 66 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively)
  • An antibody or fragment thereof that is immunologically reactive with the CAPRIN-1 protein, or the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 63, and the light chain variable An antibody or fragment thereof, wherein the region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 67.
  • CAPRIN- having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 32 or an amino acid sequence having 80% or more (preferably 85% or more, more preferably 90% or more, and further preferably 95% or more) of the amino acid sequence.
  • the heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 52, 53 and 54 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) and the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 56, 57 and 58 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively)
  • an antibody or fragment thereof having immunological reactivity with the CAPRIN-1 protein More preferably, the antibody or fragment thereof, wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 55, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 59.
  • CAPRIN- having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 34 or an amino acid sequence having 80% or more (preferably 85% or more, more preferably 90% or more, and still more preferably 95% or more) of the amino acid sequence.
  • the heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 170, 171 and 172 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) and the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 173, 174 and 175 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) Or a fragment thereof, or the complementarity determining regions of SEQ ID NOS: 176, 177 and 178 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively).
  • a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 179, 180 and 181 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively), and immunologically reactive with the CAPRIN-1 protein Or a fragment thereof.
  • the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80
  • the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, or a fragment thereof, or the heavy chain variable region has SEQ ID NO: 82.
  • An antibody or fragment thereof, wherein the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83.
  • CAPRIN- having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 or an amino acid sequence having 80% or more (preferably 85% or more, more preferably 90% or more, more preferably 95% or more) of the amino acid sequence with the amino acid sequence
  • the heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOS: 182, 183 and 184 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) and the complementarity determining regions of SEQ ID NOS: 185, 186 and 187 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) Or a fragment thereof, or the complementarity-determining regions of SEQ ID NOs: 188, 189 and 190 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively).
  • a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 191, 192 and 193 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively), and immunoreactive with the CAPRIN-1 protein Or a fragment thereof.
  • the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 84 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 85, or a fragment thereof, or the heavy chain variable region has SEQ ID NO: 86.
  • a heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 44, 45 and 46 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) and a light chain comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 48, 49 and 50 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively).
  • An antibody or fragment thereof comprising a chain variable region and having immunological reactivity with a CAPRIN-1 protein.
  • an antibody or fragment thereof, wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 47
  • the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 51.
  • CAPRIN- having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 296 or an amino acid sequence having 80% or more (preferably 85% or more, more preferably 90% or more, and still more preferably 95% or more) of the amino acid sequence.
  • the heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOS: 146, 147 and 148 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) and the complementarity determining regions of SEQ ID NOS: 149, 150 and 151 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively)
  • An antibody or fragment thereof comprising a light chain variable region and having immunological reactivity with a CAPRIN-1 protein. More preferably, the antibody or fragment thereof, wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 72 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73.
  • CAPRIN- having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 297 or an amino acid sequence having 80% or more (preferably 85% or more, more preferably 90% or more, more preferably 95% or more) of the amino acid sequence with the amino acid sequence
  • an antibody or fragment thereof having immunological reactivity with a partial polypeptide of one protein
  • the heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 272, 273 and 274 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) and the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 275, 276 and 277 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively)
  • An antibody or fragment thereof comprising a light chain variable region and having immunological reactivity with a CAPRIN-1 protein.
  • the antibody or fragment thereof, wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 114 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 115.
  • CAPRIN- having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 298 or an amino acid sequence having 80% or more (preferably 85% or more, more preferably 90% or more, and still more preferably 95% or more) of the amino acid sequence.
  • the heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 290, 291 and 292 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) and the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 293, 294 and 295 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively)
  • An antibody or fragment thereof comprising a light chain variable region and having immunological reactivity with a CAPRIN-1 protein. More preferably, the antibody or fragment thereof, wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 120 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 121.
  • CAPRIN- having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 299 or an amino acid sequence having 80% or more (preferably 85% or more, more preferably 90% or more, more preferably 95% or more) of the amino acid sequence with the amino acid sequence
  • an antibody or fragment thereof having immunological reactivity with a partial polypeptide of one protein Preferably, the heavy chain variable region including the complementarity determining regions of SEQ ID NOS: 301, 302 and 303 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) and the complementarity determining regions of SEQ ID NOS: 305, 306 and 307 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively)
  • An antibody or fragment thereof comprising a light chain variable region and having immunological reactivity with a CAPRIN-1 protein. More preferably, the antibody or fragment thereof, wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 300 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 304.
  • CAPRIN- having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 308 or an amino acid sequence having 80% or more (preferably 85% or more, more preferably 90% or more, more preferably 95% or more) of the amino acid sequence with the amino acid sequence
  • the heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 134, 135 and 136 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) and the complementarity determining regions of SEQ ID NOS: 137, 138 and 139 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively)
  • An antibody or fragment thereof comprising a light chain variable region and having immunological reactivity with a CAPRIN-1 protein. More preferably, the antibody or fragment thereof, wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 68 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 69.
  • CAPRIN- having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 309 or an amino acid sequence having 80% or more (preferably 85% or more, more preferably 90% or more, more preferably 95% or more) of the amino acid sequence with the amino acid sequence
  • the heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 134, 135 and 136 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively) and the complementarity determining regions of SEQ ID NOS: 137, 138 and 139 (CDR1, CDR2 and CDR3, respectively)
  • An antibody or fragment thereof comprising a light chain variable region and having immunological reactivity with a CAPRIN-1 protein. More preferably, the antibody or fragment thereof, wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 68 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 69.
  • anti-CAPRIN-1 antibodies are also preferably used.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 68 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 69.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 70 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 71.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 74 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 75.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 81.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 84 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 85.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 86 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 87.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 88 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 89.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 91.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 92 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 94 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 95.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 97.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 99.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 100 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 101.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 102 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 103.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 104, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 106, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 107.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 108, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 109.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 110 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 111.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 112, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 113.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 114, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 115.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 116 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 117.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 118, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 120 and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 121.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 122, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 123.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 125.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 126, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 127.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 128, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 129.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 130, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 131.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 132, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 133.
  • an antibody or fragment thereof wherein the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 300, and the light chain variable region comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 304.
  • a conjugate with an immune activator is prepared using the above polyclonal antibody and monoclonal antibody against the full length of CAPRIN-1 protein, a partial polypeptide expressed in the cell membrane surface of cancer cells, Its strong anti-tumor effect was confirmed.
  • the immune activator according to the present invention is a factor that activates various immune cells, and means a natural compound, nucleic acid, or natural compound that can maintain and enhance the immune function of the cell.
  • Immunogen cells include T lymphocytes, B lymphocytes, NK cells, monocytes, dendritic cells, granulocytes, macrophages, bone marrow-derived suppressor cells, Langerance cells and their progenitor cells, and tumors.
  • the immune cell group present.
  • the immune activator used in the present invention is not particularly limited, but specific examples include Toll-like receptor (TLR), NOD-like receptor (NLR), RIG-like receptor or C-type lectin receptor (CLR). Ligands or agonists that bind to.
  • TLR Toll-like receptor
  • NLR NOD-like receptor
  • CLR C-type lectin receptor
  • TLR Toll-like receptor
  • ligands or agonists that bind to TLR2 include substances selected from the group consisting of peptidoglycan, lipoprotein, lipopolysaccharide, and zymosan.
  • ligands or agonists that bind to TLR3 include substances selected from the group consisting of Poly (I: C) and poly (A: U), polyICLC (Hiltonol), and Ampligen.
  • ligands or agonists that bind to TLR4 include substances selected from the group consisting of lipopolysaccharide (LPS), HSP60, RS09, MPLA (Monophosphoryl lipid A from Salmonella minnesota R595), GLA-SE, G100 and MPLA. Is mentioned.
  • ligands or agonists that bind to TLR5 include substances selected from the group consisting of flagellin and FLA.
  • ligands or agonists that bind to TLR7 or TLR8 include low molecular weight compounds such as imidazoquinoline compounds, single-stranded RNA, and the like, and specific examples thereof include Imimod, Resiquimod, Loxorbine, 852A, 854A, S-34240, Motorolimod (VTX-2337), DSR-6434, GS-9620, ANA773, AZD8848 / DSP-3025, GSK22445035, Gardiquimod, CL264, UC-1V150, CL075, CL097, CL307, CL347, 3M-003 -0043, 3M-052, CL264, IV209, ORN R-2176-dT, Poly (dT), ORN R-0006, ORN R-0002, RN R-2336, PolyU, ORN R-1886, polyG3, DSR6434, RWJ21757, SM324405, p-IMDQ, m-IMDQ and GSK22
  • ligands or agonists that bind to TLR9 include bacterial DNA, unmethylated CpG DNA, hemozorin, ODN1585, ODN1668, ODN1668, Leftitomod (MGN1703), SD-101, CYT003, CPG7909, DUK-CPG-001 and ODOD1826 A substance selected from the group consisting of:
  • ligands or agonists that bind to TLR10 include substances selected from the group consisting of profilin and uropathogenic bacteria.
  • ligands or agonists that bind to the Toll-like receptor (TLR) are preferably used, and ligands or agonists that bind to TLR7 or TLR8 include imidazoquinoline compounds and A ligand or agonist that binds to TRL7 or 8 selected from the group consisting of selected from single-stranded RNA is more preferably used, and a ligand or agonist that binds to TRL7 or 8 selected from imidazoquinoline compounds is more preferably used. It is done.
  • imidazoquinoline compounds include, for example, compounds described in US Pat. No. 8,951,528 and compounds described in WO2015 / 103989.
  • 1- (4-amino-2-ethylaminomethylidazo- [4,5-c] quinolin-1-yl) -2-methylpropan-2-ol (Gardiquimod)
  • N- [4- (4-amino-2-ethyl-1H-imidazo [4,5-c] quinolin-1-yl) butyl-] methanesulfonamide PF-4878691
  • 4-amino-aa-dimethyl-2-methyl-1H-imidazo [4] 5-c
  • ligands or agonists that bind to the NOD-like receptor include, for example, M-TriDAP and PGN, and other ligands or agonists for NOD1, such as Tri-DAP, iE-DAP, C12-iE. Further, it is a ligand or agonist for NOD2, and examples thereof include MDP, N-glycosyl-MDP, Murabtide, M-TriLyS-D-ASN, M-TriLYS, and L18-MDP.
  • ligands or agonists that bind to RIG-like receptors include 5′ppp-dsRNA, poly (dA: dT), poly (dG: dC), and poly (I: C). .
  • CLR C-type lectin receptor
  • the binding form of the anti-CAPRIN-1 antibody and the immune activator in the conjugate of the anti-CAPRIN-1 antibody and the immune activator is not particularly limited as long as it can maintain the antitumor activity against cancer. However, it is preferably in the form of a bond in which a linker structure is formed between the anti-CAPRIN-1 antibody and the immune activator.
  • the linker means a compound capable of binding an anti-CAPRIN-1 antibody and an immune activator.
  • Various kinds of known linkers may be used, or appropriate chemical modification may be applied to the structure on the activator side to directly bond them.
  • linker and the binding method can be carried out according to known methods (for example, see Greg T. Hermanson Bioconjugate Technologies, Third Edition and WO2004010957, WO2014 / 012479).
  • examples of the reactive group attached to the anti-CAPRIN-1 antibody, the immune activator and the linker include the following.
  • primary amine As a reactive group attached to the amino acid sequence of an antibody or a glycoprotein modified with an amino acid, unless specifically modified chemically, primary amine ( ⁇ -amino group), carboxyl, thiol (sulfhydryl), Examples include carbonyl (ketone or aldehyde) as well as hydroxyl.
  • Primary amines are present at the N-terminus of polypeptides and at the side chains of lysine residues, are positively charged under physiological conditions, and are usually present outside the protein, so they alter protein structure. Can be used for bonding.
  • Carboxyl is present at the C-terminus of the polypeptide and at the side chains of aspartic acid and glutamic acid.
  • Sulfhydryl is present in the side chain of cysteine and forms a disulfide bond that maintains the higher order structure of the protein.
  • Ketone or aldehyde groups are created in glycoproteins by oxidizing glycosyl with sodium metaperiodate.
  • the conjugate of the present invention is produced by binding a linker to the reactive group in the antibody, binding an immune activator to which the linker is bound, or directly binding an immunoactivator to the antibody.
  • reactive groups attached to linkers and immune activators include the following.
  • N-hydroxysuccinimide (NHS) ester N-hydroxysuccinimide (NHS) ester, imide ester, pentafluorophenyl ester, hydroxymethylphosphine, isothiocyanate, isocyanate, acyl azide, N-hydroxyl ester, sulfonyl chloride, aldehyde, glyoxal, epoxide, which are reactive groups capable of reacting with amines Oxiranes, carbonates, aryls, imide esters, carbodiimides and carboxylic anhydrides.
  • NHS N-hydroxysuccinimide
  • Hydrazide and alkoxyamine which are reactive groups capable of reacting with aldehydes.
  • Isocyanate a reactive group capable of reacting with hydroxyl.
  • linker having the reactive group include the following.
  • a linker having an N-hydroxysuccinimide ester as a reactive group for example, a disuccinimidyl glutarate (DSG), a disuccinimidyl suberate (DSS), a bis (sulfosuccinimidyl) suberate (BS3), a triccidyl (subsidyl-subc)), and a linker having the same reactive group end.
  • a linker having an N-hydroxysuccinimide ester as a reactive group for example, a disuccinimidyl glutarate (DSG), a disuccinimidyl suberate (DSS), a bis (sulfosuccinimidyl) suberate (BS3), a triccidyl (subsidyl-subc)
  • TSAT Aminotriacetate
  • PEGylated bis (sulfocuccinimidyl) suberate BS (PEG) 5 , BS (PEG) 9
  • dithiobis succinimidylpropionate
  • Linkers having different reactive group ends include linkers having NHS ester and maleimide as reactive groups (for example, AMAS, BMPS, GMBS, Sulfo-MBS, MBS, Sulfo-MBS, SMCC, Sulfo-SMCC, EMCS, Sulfo- EMCS, SMPB, Sulfo-SMPB, SMPH, LC-SMCC, Sulfo-KMUS, SM (PEG) 2 , SM (PEG) 4 , SM (PEG) 6 , SM (PEG) 8 , SM (PEG) 12 , SM ( PEG) 24 ), a linker having NHS ester and pyridyldithiol as a reactive group (for example, SPDP, LC-SPDP, Sulfo-LC-SPDP, SMPT, PEG4 horizontal SPDP, PEG12-SPDP), NHS ester and haloacetyl as a reactive group Phosphorus -(E
  • linkers include polypeptides, such as Fmoc-Ala-Ala-Asn-PAB, Fmoc-Ala-Ala-Asn (Trt) -PAB, Fmoc-PEG 3 -Ala-Ala-Asn (Trt) -PAB , Fmoc-PEG 4 -Ala-Ala -Asn (Trt) -PAB, Fmoc-Ala-Ala-Asn-PAB-PNP, Fmoc-Ala-Ala-Asn (Trt) -PAB-PNP, Fmoc-PEG 3 -Ala -Ala-Asn (Trt) -PAB-PNP, Azide-PEG 4 -Ala-Ala-Asn (Trt) -PAB-PNP, Mal-PEG 4 -Ala-Ala-Asn (Trt) -PAB-PNP, Fm
  • PEG Acid eg, Acid-PEG-TEMPO, Amino-PEG-acid, Amino-PEG-CH 2 CO 2 H, Aminoxy-PEG-acid, Azido-PEG-acid, Carboxy-PEG- sulfonic acid, Fmoc-N-amido-PEG-acid, Fmoc-N-amido-PEG-CH 2 CO 2 H, Fmoc-aminoxy-PEG-acid, Hydroxy-PEG-acid, Hydroxy-PEG-CH 2 CO 2 H , m-PEG-acid, m -PEG- (CH 2) 3 -acid, Methoxytrityl-N-PEG-acid, N-methyl-N- (t-Boc) -PEG-acid, Propar yl-PEG-acid, Propargyl- PEG-CH 2 CO 2 H, Propargyl-PEG- (CH 2) 3
  • the linker interposed between the anti-CAPRIN-1 antibody and the immune activator may be composed of a single species or a plurality of species.
  • Examples of a method for producing a conjugate of an anti-CAPRIN-1 antibody and an immune activator according to the present invention include a method of binding an immunoactivator using an ⁇ -amino group of a lysine side chain of the antibody, a disulfide of an antibody There is a method in which a cysteine residue forming a bond is bound using a thiol formed by a reduction treatment.
  • a method of reacting an active ester eg, N-hydroxysuccinimide ester
  • an active ester eg, N-hydroxysuccinimide ester
  • a dithiol bond on the antibody is generated using a reducing agent such as mercaptoethanol to generate a thiol and maleimide or ⁇ -haloamide.
  • a reaction method is used.
  • thiol for example, there are methods using sulfonephenyloxadiazole, 4-cyanoethynyloxy derivatives and the like. These bonds are more stable for a longer time than those resulting from the synergistic addition reaction of cysteine to maleimide.
  • a linker having an amino group in the vicinity of the imide group can also be used.
  • the cysteine thiol in the antibody forms a disulfide bond, and there is a method in which an immune activator or the like is bound between two thiols.
  • a cross-linked bond can be formed using a linker or dibromomaleimide having two disulfide bond sites that can be generated from an amide group having two sulfones at the ⁇ -position.
  • the conjugate of the present invention includes, for example, a method using THIOMAB TM technology, which is a method capable of introducing a fixed number of thiol groups into a specific part of an antibody (see Nature Biotechnology 26, 925-932 (2008)). .
  • the conjugate of the present invention can be obtained by, for example, obtaining an antibody having a thiol reactive group by reducing the antibody in a phosphate buffer using a reducing agent dithioleitol (DTT) and conjugating with an immune activator. Can be formed.
  • a reducing agent by introducing a trout reagent (2-Iminothiolane or N-Succinimidyl S-Acetylthioacetate (SATA)
  • a thiol group is added to the primary amine in the lysine residue of the antibody.
  • the amount of thiol added to the antibody can be determined, for example, by mixing a sample solution containing 5,5′-Dithiobis (2-nitrobenzonic acid) (DTNB) with an SH group with a phosphate buffer (pH 8.0) and distilled water.
  • DTNB 5,5′-Dithiobis (2-nitrobenzonic acid)
  • SH group a phosphate buffer (pH 8.0)
  • a DTNB solution dissolved in an acid buffer solution, a Good buffer solution or a Tris buffer solution is added, and after incubation for a certain period of time, it can be quantified by measuring the absorbance at 412 nm (GL Ellman, Arch. Biochem. Biophys., 82, 70 (1959)).
  • the thiol group added by cleaving the disulfide bond of the antibody by reduction treatment is preferably subjected to a treatment (capping) for preventing the disulfide bond from being formed again.
  • a treatment for example, N-ethylmaleimide (NEM) or iodoacetamide (IAA) can be used.
  • a known method can be used as a linker reagent that specifically binds to a thiol group of a reduced antibody.
  • binding can be performed by using a linker reagent having a maleimide group or a linker reagent having a bromoacetamide group.
  • a linker reagent having a maleimide group or a linker reagent having a bromoacetamide group.
  • N-succinimidyl-4- (N-maleimidomethyl) -cyclohexane-1-carboxylate (SMCC) is used as a linker having a maleimide group.
  • SMCC N-succinimidyl-4- (N-maleimidomethyl) -cyclohexane-1-carboxylate
  • SMCC N-succinimidyl-4- (N-maleimidomethyl) -cyclohexane-1-carboxylate
  • SMCC N-succinimi
  • an amide bond is formed on the amino group previously present in the activator using SMCC, and then the thiol group added to the antibody side and the maleimide group of SMCC to which the immunoactivator is bound are combined.
  • the conjugate can be obtained by reaction.
  • a conjugate of an antibody and an immune activator can be formed by using two linkers. For example, by preparing an amide bond between a primary amino group present in a lysine residue on the antibody side and an N-succinimide group of SATA (N-succinimidyl-S-acetylthioacetate), a thiol group is attached to the antibody.
  • SATA N-succinimidyl-S-acetylthioacetate
  • an amino group on the immune activator side or an amino group added is reacted with SMCC to synthesize N-succinimide group and amide bond in SMCC
  • a conjugate can be obtained by a reaction between a maleimide group in SMCC to which an immune activator is bound and a thiol group in SATA to which an antibody is bound.
  • MC-Val-Cit-PAB maleimidocaproyl-valine-citrulline-p-aminobenzyloxycarbonyl
  • MC-val-Cit-PAB is a linker that can be cleaved by an intracellular protease (for example, cathepsin B).
  • a thiol group is added to the antibody dissolved in the phosphate buffer using DTT or the like.
  • an immune activator having an amino group is reacted with benzyloxycarbonyl (PAB) in MC-Val-Cit-PAB to produce an immune activator in which MC-val-Cit-PAB is bound.
  • PAB benzyloxycarbonyl
  • the antibody can be reacted with an thiol-added antibody to obtain a conjugate.
  • SATA is attached to the primary amino group on the lysine residue of the antibody to add a thiol group, while succinimidyl 3- (2-pyridyldithio) propionate (SPDP) is attached to the amino group.
  • SPDP succinimidyl 3- (2-pyridyldithio) propionate
  • the number of immunoactivators bound per antibody of the anti-CAPRIN-1 antibody-immunoactivator conjugate of the present invention is determined based on known methods such as mass spectrometry, ELISA, electrophoresis, and HPLC. Can be used to characterize.
  • the conjugate of the anti-CAPRIN-1 antibody of the present invention and an immune activator has cytotoxic activity in vitro or in vivo. Therefore, the antitumor effect of the conjugate of the present invention can be known by examining the cytotoxic activity against cancer. Cytotoxic activity can be evaluated by administering a conjugate to a living body having cancer, measuring the size of the tumor after administration, and examining the size of the cancer over time. The antitumor effect of the present invention can also be evaluated by examining the survival rate. It can also be evaluated by examining the production ability of cytokines or chemokines. The antitumor effect of the conjugate of the present invention can be determined by examining cancer prevention, metastasis prevention or recurrence prevention.
  • the conjugate of the present invention can be expected to have a stronger antitumor effect when the binding affinity with the CAPRIN-1 protein on the surface of cancer cells is higher.
  • the binding constant (affinity constant) Ka (kon / koff) is preferably at least 10 7 M ⁇ 1 , at least 10 8 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 8 M ⁇ 1 , at least 10 9 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ . 10 9 M -1, at least 10 10 M -1, at least 5 ⁇ 10 10 M -1, at least 10 11 M -1, at least 5 ⁇ 10 11 M -1, at least 10 12 M -1 or at least 10 13 M ⁇ 1 is desirable.
  • the ability of the conjugate of the present invention to bind to CAPRIN-1 can be identified by using a binding assay using, for example, ELISA, Western blot, immunofluorescence, flow cytometry, and the like.
  • the conjugate of the present invention enhances the antitumor effect as compared with the anti-CAPRIN-1 antibody alone, but the enhancement rate is preferably 30% or more, more preferably 40% or more, and even more preferably 50% or more. Even more preferably, it is 55% or more, even more preferably 60% or more, even more preferably 65% or more, and most preferably 70% or more.
  • the enhancement rate of the anti-tumor effect of the conjugate of the present invention against the anti-CAPRIN-1 antibody alone is that each effective dose is administered to a tumor-bearing mouse under the same conditions, and the tumor volume after 10 days after the administration is compared. Can be calculated.
  • the target of the pharmaceutical composition for the treatment and / or prevention of cancer of the present invention is not particularly limited as long as it is a cancer (cell) expressing the CAPRIN-1 protein.
  • tumor and cancer refer to malignant neoplasms and are used interchangeably.
  • the cancer targeted in the present invention may be any cancer as long as it expresses the CAPRIN-1 protein on the cell membrane surface.
  • the cancer is, for example, breast cancer, complex breast cancer, breast malignant mixed tumor, intraductal papillary adenocarcinoma, lung adenocarcinoma, squamous cell carcinoma, small cell carcinoma, large cell carcinoma, nerve Glioma, glioblastoma, neuroblastoma, ventricular ependymoma, neuronal tumor, fetal neuroectodermal tumor, schwannoma, neurofibroma, meningioma, chronic Lymphocytic leukemia, lymphoma, gastrointestinal lymphoma, gastrointestinal lymphoma, small to medium cell lymphoma, cecal cancer, ascending colon cancer, descending colon cancer, transverse colon cancer, sigmoid colon cancer, rectal cancer, ovarian epithelium Cancer, germ cell tumor, stromal cell tumor, pancreatic duct cancer, invasive pancreatic duct cancer, adenocarcinoma of pancreatic cancer, acinar cell carcinoma
  • preferred subjects (patients) to be targeted are mammals, for example, mammals including primates, pet animals, domestic animals, sport animals and the like, and humans, dogs and cats are particularly preferable.
  • the conjugate used in the present invention when used as a pharmaceutical composition, it can be formulated by methods known to those skilled in the art. For example, it can be used parenterally in the form of a sterile solution with water or other pharmaceutically acceptable liquid, or an injection of suspension.
  • a pharmacologically acceptable carrier or medium specifically, sterilized water, physiological saline, vegetable oil, emulsifier, suspension, surfactant, stabilizer, fragrance, excipient, binder, etc. And may be formulated by mixing in a unit dosage form as required by accepted pharmaceutical practice. The amount of active ingredient in these preparations is such that an appropriate dose within the indicated range can be obtained.
  • a sterile composition for injection can be formulated in accordance with normal pharmaceutical practice using a vehicle such as distilled water for injection.
  • Aqueous solutions for injection include, for example, isotonic solutions containing physiological saline, glucose and other adjuvants such as D-sorbitol, D-mannose, D-mannitol and sodium chloride.
  • Suitable solubilizers such as Alcohols, specifically ethanol, polyalcohols such as propylene glycol, polyethylene glycol, nonionic surfactants such as polysorbate 80 (TM), HCO-60 may be used in combination.
  • the oily liquid include sesame oil and soybean oil, which may be used in combination with benzyl benzoate or benzyl alcohol as a solubilizing agent.
  • buffer for example, phosphate buffer, sodium acetate buffer, a soothing agent, for example, procaine hydrochloride, stabilizer, for example, benzyl alcohol, phenol, antioxidant.
  • the prepared injection solution is usually filled into a suitable ampoule.
  • the oily liquid include sesame oil and soybean oil, which may be used in combination with benzyl benzoate or benzyl alcohol as a solubilizing agent.
  • blend with buffer for example, phosphate buffer, sodium acetate buffer, a soothing agent, for example, procaine hydrochloride, stabilizer, for example, benzyl alcohol, phenol, antioxidant.
  • the prepared injection solution is usually filled into a suitable ampoule.
  • Administration is oral or parenteral, preferably parenteral administration. Specific examples include injection, nasal administration, pulmonary administration, and transdermal administration. Examples of the injection form can be administered systemically or locally by, for example, intravenous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, subcutaneous injection, intratumoral injection, and the like.
  • the administration method can be appropriately selected depending on the age, weight, sex, symptoms, etc. of the patient.
  • the dosage of the pharmaceutical composition containing the antibody or the polynucleotide encoding the antibody can be selected, for example, in the range of 0.0001 mg to 1000 mg per kg body weight. Alternatively, for example, the dose can be selected in the range of 0.001 to 100,000 mg / body per patient, but is not necessarily limited to these values.
  • the dose and administration method vary depending on the weight, age, sex, symptoms, etc. of the patient, but can be appropriately selected by those skilled in the art.
  • cancers that express the above-mentioned CAPRIN-1 on the cell membrane surface, preferably breast cancer, renal cancer , Pancreatic cancer, colon cancer, lung cancer, brain cancer, stomach cancer, uterine cancer, ovarian cancer, prostate cancer, bladder cancer, esophageal cancer, leukemia, lymphoma, liver cancer, gallbladder cancer, sarcoma, mastocytoma, melanoma, adrenocortical cancer, Ewing tumor, Hodgkin lymphoma, mesothelioma, multiple myeloma. Testicular cancer, thyroid cancer, or head and neck cancer can be treated and / or prevented.
  • Example 1 Anti-CAPRIN-1 Polyclonal Antibody
  • Anti-CAPRIN-1 polyclonal antibody having immunological reactivity with the CAPRIN-1 protein used in the conjugate was prepared in accordance with Example 3 of WO2010 / 016526.
  • 1 mg of the human CAPRIN-1 recombinant protein represented by the above formula was mixed with an equal volume of incomplete Freund's adjuvant (IFA) solution and administered subcutaneously to rabbits 4 times every 2 weeks. Thereafter, blood was collected to obtain an antiserum containing a polyclonal antibody.
  • the obtained antiserum was purified using a protein G carrier (GE Healthcare Bioscience) to obtain a polyclonal antibody against the CAPRIN-1 protein (anti-CAPRIN-1 polyclonal antibody # 1). Further, a rabbit control antibody was obtained by purifying the serum of a rabbit not administered with an antigen using a protein G carrier in the same manner as described above.
  • Polyclonal antibodies # 2 to # 6 against the following CAPRIN-1 partial polypeptides were obtained in the same manner as the above polyclonal antibody production method against the CAPRIN-1 protein.
  • Example 2 Anti-CAPRIN-1 Monoclonal Antibody The following anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody was used for the conjugate of the present invention.
  • An antibody in which CDR1 to CDR3 are SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, and SEQ ID NO: 42, respectively for example, the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 39, including CDRs 1 to 3 of the heavy chain variable region;
  • CDRs 1 to 3 of the heavy chain variable region are each composed of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, and SEQ ID NO: 46, and the light chain variable region
  • An antibody in which CDR1 to CDR3 are SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, and SEQ ID NO: 50 (for example, the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 47, including the CDR1 to 3 of the heavy chain variable region;
  • An antibody in which CDR1 to CDR3 are SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, and SEQ ID NO: 58 for example, the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 55, including the CDRs 1 to 3 of the heavy chain variable region;
  • CDRs 1 to 3 of the heavy chain variable region are each composed of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, and SEQ ID NO: 62, and the light chain variable region
  • An antibody in which CDR1 to CDR3 are SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, and SEQ ID NO: 66 (for example, the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 63, including the CDR1 to 3 of the heavy chain variable region;
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region.
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region an antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73
  • a monoclonal antibody against CAPRIN-1 described in WO2011 / 096533 wherein the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80 and the light chain variable represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 81
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region an antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83.
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region an antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 86 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 87.
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region an antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90, and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 91
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region an antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 104 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105.
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region.
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region.
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region.
  • a monoclonal antibody against CAPRIN-1 described in WO2013 / 125654 wherein the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 116 and the light chain variable represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 117
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region an antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 118, and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119.
  • a monoclonal antibody against CAPRIN-1 described in WO2015 / 020212 wherein the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 122 and the light chain variable represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 123
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region an antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 125
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 126 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 127, represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 128
  • the heavy chain variable regions CDR1 to CDR3 consist of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, and SEQ ID NO: 38, respectively, and the framework region contains the heavy antibody sequence.
  • the base sequence was designed so that the variable region can be expressed, and this was inserted into a mammalian expression vector into which the heavy chain constant region of human IgG1 was inserted.
  • the CDRs 1 to 3 of the light chain variable region are respectively SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, and SEQ ID NO: 42, so that the framework region can express the light chain variable region containing the sequence of the human antibody.
  • CDRs 1 to 3 of the heavy chain variable region are respectively composed of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, and SEQ ID NO: 38, and the light chain variable region
  • CDRs 1 to 3 of the heavy chain variable region are each composed of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, and SEQ ID NO: 46, and the heavy chain represented by SEQ ID NO: 47 whose framework region includes the sequence of a human antibody.
  • the base sequence was designed so that the variable region can be expressed, and this was inserted into a mammalian expression vector into which the heavy chain constant region of human IgG1 was inserted.
  • CDRs 1 to 3 of the light chain variable region each comprise the amino acid sequences of SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, and SEQ ID NO: 50, and the heavy chain represented by SEQ ID NO: 51, wherein the framework region includes the sequence of a human antibody.
  • the nucleotide sequence is designed so that the variable region can be expressed, and this is inserted into a mammalian expression vector into which the heavy chain constant region of human IgG1 is inserted, and the above two recombinant expression vectors are introduced into mammalian cells according to a conventional method.
  • CDRs 1 to 3 of the heavy chain variable region are composed of amino acid sequences of SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45 and SEQ ID NO: 46
  • CDRs 1 to 3 of the light chain variable region are SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49 and SEQ ID NO: 50, respectively.
  • a culture supernatant containing a humanized anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody # 2 (humanized antibody # 2) having the amino acid sequence was obtained.
  • CDRs 1 to 3 of the heavy chain variable region consist of amino acid sequences of SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, and SEQ ID NO: 54, respectively, and CDRs 1 to 3 of the light chain variable region respectively represent SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, and SEQ ID NO:
  • a culture supernatant containing the humanized anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody # 3 (humanized antibody # 3) consisting of No. 58 was obtained.
  • CDRs 1 to 3 of the heavy chain variable region consist of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61 and SEQ ID NO: 62, respectively, and CDRs 1 to 3 of the light chain variable region respectively represent SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65 and SEQ ID NO:
  • a culture supernatant containing the humanized anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody # 4 (humanized antibody # 4) consisting of No. 66 was obtained.
  • culture supernatants containing the following humanized anti-CAPRIN-1 monoclonal antibodies # 9 to # 41 were obtained.
  • Humanized monoclonal antibody # 9 (humanized antibody # 9) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 68 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 69 9).
  • Humanized monoclonal antibody # 10 (humanized antibody #) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 70 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 71 10).
  • Humanized monoclonal antibody # 11 (humanized antibody # 11) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 72 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73 11).
  • Humanized monoclonal antibody # 12 (humanized antibody # 12) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 74 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 75 12).
  • Humanized monoclonal antibody # 13 (humanized antibody # 13) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77 13).
  • a humanized monoclonal antibody # 14 (humanized antibody # 14) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79 14).
  • Humanized monoclonal antibody # 15 (humanized antibody # 15) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 81 15).
  • Humanized monoclonal antibody # 16 (humanized antibody # 16) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83 16).
  • Humanized monoclonal antibody # 17 (humanized antibody # 17) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 84 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 85 17).
  • Humanized monoclonal antibody # 18 (humanized antibody #) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 86 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 87 18).
  • Antibody humanized monoclonal antibody # 19 (humanized antibody) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 88 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 89 # 19).
  • Humanized monoclonal antibody # 20 (humanized antibody # 20) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 91 20).
  • Humanized monoclonal antibody # 21 (humanized antibody # 21) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 92 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93 21).
  • Humanized monoclonal antibody # 22 (humanized antibody # 22) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 94 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 95 22).
  • Humanized monoclonal antibody # 23 (humanized antibody # 23) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 96 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 97 23).
  • Humanized monoclonal antibody # 24 (humanized antibody # 24) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 99 24).
  • Humanized monoclonal antibody # 25 (humanized antibody # 25) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 100 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 101 25).
  • Humanized monoclonal antibody # 26 (humanized antibody # 26) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 102 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 103 26).
  • Humanized monoclonal antibody # 27 (humanized antibody # 27) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 104 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105 27).
  • Humanized monoclonal antibody # 28 (humanized antibody # 28) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 106 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 107 28).
  • Humanized monoclonal antibody # 29 (humanized antibody # 29) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 108 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 109 29).
  • Humanized monoclonal antibody # 30 (humanized antibody # 30) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 110 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 111 30).
  • Humanized monoclonal antibody # 31 (humanized antibody # 31) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 112 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 113 31).
  • Humanized monoclonal antibody # 32 (humanized antibody # 32) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 114 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 115 32).
  • Humanized monoclonal antibody # 33 (humanized antibody # 33) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 116 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 117 33).
  • Humanized monoclonal antibody # 34 (humanized antibody #) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 118 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119 34).
  • Humanized monoclonal antibody # 35 (humanized antibody # 35) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 120 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 121 35).
  • Humanized monoclonal antibody # 36 (humanized antibody # 36) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 122 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 123 36).
  • Humanized monoclonal antibody # 37 (humanized antibody # 37) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 124 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 125 37).
  • Humanized monoclonal antibody # 38 (humanized antibody # 38) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 126 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 127 38).
  • Humanized monoclonal antibody # 39 (humanized antibody # 39) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 128 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 129 39).
  • Humanized monoclonal antibody # 40 (humanized antibody #) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 130 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 131 40).
  • Humanized monoclonal antibody # 41 (humanized antibody # 41) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 132 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 133 41).
  • CDR1 to 3 of the heavy chain variable region heavy chain variable region of the humanized antibody # 1 consist of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, and SEQ ID NO: 38, respectively.
  • the nucleotide sequence was designed so that the framework region can express a heavy chain variable region containing the sequence of a human antibody, and serine (Ser), which is the 239th amino acid of EU numbering, was substituted with aspartic acid (Asp).
  • the CDRs 1 to 3 of the light chain variable region are respectively composed of SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, and SEQ ID NO: 42, and the nucleotide sequence so that the framework region can express the amino acid sequence of the light chain variable region including the sequence of a human antibody.
  • the above two recombinant expression vectors are introduced into mammalian cells according to a conventional method, and serine (Ser), the amino acid number 239 of EU numbering and EU numbering, is replaced with aspartic acid (Asp).
  • Ser serine
  • Asp aspartic acid
  • the heavy chain full-length amino acid sequence comprising the heavy chain constant region of human IgG1 in which isoleucine (Ile), the amino acid at position 332 of EU numbering, is substituted with glutamic acid (Glu), and the light chain variable region and human light chain prepared above.
  • a culture supernatant containing monoclonal antibody # 5 (humanized antibody # 5) against humanized CAPRIN-1 consisting of the light chain full-length amino acid sequence consisting of the chain constant region was obtained.
  • humanized anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody # 6 (humanized antibody # 6) consisting of the amino acid sequence of the heavy chain variable region of humanized antibody # 2 prepared above and the amino acid sequence of the light chain variable region A culture supernatant containing was obtained.
  • humanized anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody # 7 (humanized antibody # 7) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region and the amino acid sequence of the light chain variable region of humanized antibody # 3 prepared above. A culture supernatant containing was obtained.
  • humanized anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody # 8 (humanized antibody # 8) comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region and the amino acid sequence of the light chain variable region of humanized antibody # 4 prepared above. A culture supernatant containing was obtained.
  • humanized anti-CAPRIN-1 antibodies # 42 to # 74 consisting of the amino acid sequence of each heavy chain variable region and the light chain variable region of humanized antibodies # 9 to # 41 prepared above. Culture supernatants containing (humanized antibodies # 42 to # 74) were obtained.
  • the obtained culture supernatant containing the humanized anti-CAPRIN-1 monoclonal antibodies # 1 to # 74 is purified using Hitrap Protein A Sepharose FF (manufactured by GE Healthcare) according to a conventional method, and replaced with PBS ( ⁇ ). What filtered with a 0.22 micrometer filter (made by Millipore) was prepared.
  • Example 3 Preparation of conjugate of anti-CAPRIN-1 antibody and immune activator
  • This conjugate referred to the method described in WO2014 / 012479.
  • PBS ( ⁇ ) solution containing 1 mM diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA) 1 mM diethylenetriaminepentaacetic acid
  • the amount of thiol per antibody was calculated by reacting with DTNB and measuring the absorbance at 412 nm and the absorbance at 280 nm.
  • Requimod EZO
  • MC-Val-Cit-PABC-PNP Medchem Express
  • conjugate was concentrated by ultrafiltration, desalted with Sephadex G25 and replaced with PBS ( ⁇ ) solution, sterilized by filtration with a 0.22 ⁇ m filter, and anti-CAPRIN-1 polyclonal antibody # 1 And a requimod conjugate (conjugate 1).
  • Example 1 the rabbit control antibody described in Example 1 that does not react with the CAPRIN-1 protein was also obtained in the same manner to obtain a solution containing the rabbit control antibody-Resiquimod conjugate (control conjugate 1). .
  • conjugate (conjugate 9) with the immune activator Resiquimod was used, and an immunoactivator using the humanized antibody # 4.
  • immune activator Conjugation with Resiquimod (conjugate 14) was performed using humanized antibody # 9 to # 7. Was used to obtain a solution containing conjugate (Conjugate 45-conjugate 110) the immune activator Resiquimod, respectively.
  • a solution containing the obtained conjugates 1 to 14, conjugates 45 to 110 and control conjugate 1 was filtered through a 0.22 ⁇ m filter (Millipore).
  • Example 4 Preparation of conjugate of anti-CAPRIN-1 antibody and immune activator A conjugate of anti-CAPRIN-1 polyclonal antibody and immunoactivator described in Example 1 was prepared by the following method.
  • As an immunostimulatory factor 1- (2 (2-Aminoethoxy) -2-methylpropyl) -2- (ethylmethyl)-is a Requimod derivative in which a carbon atom is added to a tertiary hydroxyl group in Resiquimod to add an amino group.
  • 1H-imidazo [4,5-c] quinolin-4-amine was synthesized and prepared according to a conventional method.
  • Requimod, dry acetonitrile, triethylamine, and trityl chloride were added and reacted in an argon atmosphere. After the reaction, the residue was purified by silica gel column chromatography. The purified product was dissolved in dehydrated DMF and reacted by adding 3-Boc-1,2,3-oxathiazolidine 2,2-dioxide. According to a conventional method, the aqueous layer was extracted with ethyl acetate to obtain an organic layer, which was purified by column chromatography to obtain the Resiquimodo derivative.
  • succinimidyl 4- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-1-carbochelate (SMCC), Med. Chem. The following operation was performed with reference to the method described in 2008, 51, 6916-6926.
  • the above-mentioned Requimodo derivative was dissolved in dehydrated dichloromethane, and diisopropylethylamine and SMCC were added and reacted at room temperature for 2 hours.
  • the reaction solution was purified to obtain a condensate in which SMCC was bound to Resiquimod.
  • N-Succinimidyl S-Acetylthioacetate (SATA) (Thermo) dissolved in DMSO at 10-fold molar mass with respect to the antibody was added to anti-CAPRIN-1 polyclonal antibody # 1 dissolved in phosphate buffer. After adding and reacting at pH 8 for 30 minutes at room temperature, it was replaced with a phosphate buffer containing 10 mM EDTA using a desalting column (Thermo), and anti-CAPRIN-1 polyclonal to which SATA was bound A solution containing antibody # 1 was obtained.
  • SATA N-Succinimidyl S-Acetylthioacetate
  • a 10% volume of phosphate buffer containing 0.5 M Hydroxylamine and 25 mM EDTA was added to the solution, and the mixture was reacted at room temperature for 2 hours for deacetylation.
  • a solution containing the anti-CAPRIN-1 polyclonal antibody # 1 bound with deacetylated SATA was replaced with a phosphate buffer solution using a desalting column in the same manner as described above to obtain an anti-CAPRIN-1 antibody to which a thiol group was added.
  • a solution containing was obtained.
  • conjugate of the above using the anti-CAPRIN-1 polyclonal antibody # 2 and the derivative of the Requiquimod was combined with the above using the anti-CAPRIN-1 polyclonal antibody # 3.
  • the conjugate of immune activator (conjugate 17) was conjugated with the above immunostimulatory conjugate (conjugate 18) using anti-CAPRIN-1 polyclonal antibody # 4 and anti-CAPRIN-1 polyclonal antibody #.
  • the rabbit control antibody described in Example 1 that does not react with the CAPRIN-1 protein also contains a conjugate (control conjugate 2) using the rabbit control antibody in the same manner.
  • humanized antibody # 1 which is one of the anti-CAPRIN-1 monoclonal antibodies described in Example 2, includes a conjugate (conjugate 21) with the above-mentioned derivative of Requimod. A solution was obtained.
  • conjugate (conjugate 23) with the immune activator is used for the humanized antibody # 4.
  • Conjugate with immune activator for humanized antibody # 5
  • conjugate for humanized antibody # 8 with the above immunoactivator A solution containing (conjugate 28) was obtained.
  • humanized antibodies # 9 to # 74 were obtained as solutions containing conjugates (conjugate 111 to conjugate 176) with the above immunostimulatory factors.
  • a solution containing the obtained conjugates 15 to 28, conjugates 111 to 176 and control conjugate 2 was filtered through a 0.22 ⁇ m filter (Millipore).
  • Example 5 Specific Reactivity of Conjugates to CAPRIN-1 Protein and CAPRIN-1-expressing Cancer Cells Conjugate 1 to Conjugate 14, Conjugate 45 to Conjugate 110 and Example 4 prepared in Example 3 Specific reactivity of conjugate 15 to conjugate 28 and conjugate 111 to conjugate 176 prepared in 1 to CAPRIN-1 protein, and the cell membranes of human cancer cells and mouse cancer cells expressing CAPRIN-1 protein The reactivity on the surface was evaluated.
  • CAPRIN-1 protein solution 1 ⁇ g / mL was added per well of a 96-well plate, and the plate was allowed to stand at 4 ° C. for 18 hours. After washing each well 3 times with PBS-T, 400 ⁇ L of 0.5% Bovine Serum Albumin (BSA) solution was added per well and allowed to stand at room temperature for 3 hours. After the wells were washed three times with 400 ⁇ L of PBS-T per well except for the solution, a solution containing conjugate 1 to conjugate 6, conjugate 15 to conjugate 20, control conjugate 1 and control conjugate 2 was added at 100 ⁇ L per well and allowed to stand at room temperature for 2 hours.
  • BSA Bovine Serum Albumin
  • conjugates 1 to 6 and conjugates 15 to 20 which are conjugates of an anti-CAPRIN-1 polyclonal antibody and an immune activator are control conjugate 1 and control conjugate 2 which are negative controls. It was confirmed that the fluorescence intensity was higher than that of the human cancer cells BT474 and mouse cancer cells 4T1 expressing CAPRIN-1 strongly.
  • Uterine cancer cells HEC-1-A
  • prostate cancer cells 22Rv1
  • pancreatic cancer cells Pancreatic cancer cells
  • Pancreatic cancer cells Pancreatic cancer cells
  • Hep3B liver cancer cells
  • ovarian cancer cells SKOV3
  • renal cancer cells Caki-2 Brain tumor cells (U-87MG), bladder cancer cells (T24), esophageal cancer cells (OE33), leukemia cells (OCI-AML5), lymphoma cells (Ramos), gallbladder cancer cells (TGBC14TKB), fibrosarcoma cells (HT-) 1080), melanoma cells (G-361), mouse kidney cancer cells (Renca) in which the expression of CAPRIN-1 gene has been confirmed, mouse breast cancer cells 4T1).
  • Conjugate 1 to Conjugate 6 and Conjugate 15 to Conjugate 20 which are conjugates of anti-CAPRIN-1 antibody and immune activator for any cancer cells are negative controls. It was confirmed that the fluorescence intensity was stronger than that of conjugate 1 and control conjugate 2, and strongly reacted with the cell membrane surface of the cancer cells expressing CAPRIN-1.
  • anti-CAPRIN-1 polyclonal antibodies # 1 to # 6 prepared in Example 1 to which no immunostimulatory factor was bound were evaluated in the same manner.
  • the cancer cells expressing CAPRIN-1 were analyzed.
  • the fluorescence intensities equivalent to those of conjugates 1 to 6 and conjugates 15 to 20 were shown.
  • conjugate 7 to conjugate 14, conjugate 45 to conjugate 110 which are conjugates with immune activators using anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody prepared in Example 3, and Examples 4.
  • Specific reactivity of conjugate 21 to conjugate 28, conjugate 111 to conjugate 176 prepared in 4 to CAPRIN-1 protein, and cell membranes of human cancer cells and mouse cancer cells expressing CAPRIN-1 The surface was evaluated for reactivity by the same method as described above.
  • conjugate 7 to conjugate 14 and conjugate 21 to conjugate 28 showed significantly higher absorbance values than those to which PBS ( ⁇ ) was added as a negative control. It was shown to react specifically.
  • conjugate 7 to conjugate 14, conjugate 45 to conjugate 110, and conjugate 21 to conjugate 28, conjugate 111 to conjugate 176 are expressed on the cell membrane surface of cancer cells expressing CAPRIN-1 protein.
  • the antibody showed significantly stronger reactivity than that obtained by binding an immunoactivator to human IgG that did not react to the CAPRIN-1 protein, and the immunoactivator was not bound. None of the anti-CAPRIN-1 monoclonal antibodies # 1 to # 74 described in Example 2 showed the same level of reactivity.
  • conjugates of the anti-CAPRIN-1 antibody prepared above and an immune activator was shown to specifically bind to the cell membrane surface of cancer cells expressing CAPRIN-1 protein as well as CAPRIN-1.
  • the antitumor effect of the conjugate of the present invention was examined using NOD-SCID mice transplanted with human-derived cancer cells expressing the CAPRIN-1 protein.
  • 10 7 human breast cancer cells BT474 per mouse were mixed with Matrigel (SIGMA) and transplanted subcutaneously to prepare tumor-bearing mice grown until the tumor reached 180 mm 3 or more.
  • BT474 expresses the CAPRIN-1 protein on the cell membrane surface.
  • conjugates 1 to 6 and conjugate 15 prepared using anti-CAPRIN-1 polyclonal antibodies # 1 to # 6 were used.
  • conjugates 7 to 14 and conjugates 21 to 28 prepared using an anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody specifically bind to the cell membrane surface.
  • Conjugates 1 to 28 were each administered 10 mg / kg to the tail vein of tumor-bearing mice.
  • a solution containing a conjugate of trastuzumab and Resiquimod was prepared using the method described in Example 3, and the same amount was administered to the above tumor-bearing mice as a comparative control.
  • BT474 expresses the HER2 protein, which is a target antigen of trastuzumab, on the cell membrane surface, and the above-mentioned conjugate of trastuzumab and Resiquimod specifically binds.
  • Administration to tumor-bearing mice was performed once a week.
  • PBS (-) was administered to negative control tumor-bearing mice.
  • the tumor size of the tumor-bearing mouse was measured over time using a caliper, and the tumor volume was calculated according to a standard method: (length of the major axis of the cancer) ⁇ (length of the minor axis of the cancer) Calculated at 2 ⁇ 0.5.
  • conjugates 1 to 6 prepared in Example 3 and conjugates prepared in Example 4 were used. All mice administered 15-15 conjugate had a tumor volume of less than 37%. Both mice receiving conjugates 7-14 and conjugates 21-28 had tumor volumes of less than 15%.
  • cancer of mice administered with conjugates 11-14 and conjugates 25-28 was able to suppress the growth of cancer earlier compared to cancers of mice administered with conjugates 7-10 and conjugates 21-24. .
  • the tumor volume was less than 20%.
  • the tumor volume of a mouse administered with a solution containing a conjugate of trastuzumab and Resiquimod as a comparative control was 54% with respect to the negative control.
  • conjugates 1 to 28 and conjugate 45 to conjugate 176 prepared in Example 3 and Example 4 using an antibody against CAPRIN-1 showed significantly stronger antitumor effects than the negative control. It was shown to exert.
  • conjugates 1-28 and conjugate 45-conjugate 176 were shown to have a significantly strong antitumor effect on the conjugate of trastuzumab and Resiquimod prepared as a comparative control.
  • Example 7 Antitumor effect of conjugate 2 The antitumor effect of the conjugate of the anti-CAPRIN-1 antibody prepared in Examples 3 and 4 and an immune activator (conjugates 1 to 28) in vivo in cancer-bearing mice was evaluated.
  • the antitumor effect of the conjugate of the present invention was examined using Balb / c nude mice transplanted with human-derived cancer cells expressing CAPRIN-1.
  • Human lung cancer cells H1650 were transplanted subcutaneously in the ventral region, and tumor-bearing mice were produced that had grown until the tumor reached 180 mm 3 or more.
  • CAPRIN-1 protein is expressed on the cell membrane surface, and as shown in Example 5, conjugates 1 to 28 specifically bind to CAPRIN-1 on the cell membrane surface of lung cancer cell H1650.
  • 10 mg / kg of conjugates 1 to 14 prepared in Example 3 and conjugates 15 to 28 prepared in Example 4 were each administered to the tail vein of cancer-bearing mice by 10 mice.
  • a solution containing a conjugate of cetuximab and Resiquimod was prepared using the method described in Example 3, and the same amount was administered to the above tumor-bearing mice as a comparative control. Administration was performed once a week for a total of 3 times.
  • PBS (-) was administered to negative control tumor-bearing mice.
  • the tumor size of the tumor-bearing mouse was measured over time using a caliper, and the tumor volume was calculated according to a standard method: (length of the major axis of the cancer) ⁇ (length of the minor axis of the cancer) Calculated at 2 ⁇ 0.5.
  • the tumor volume of the mice administered with conjugates 1-6 and conjugates 15-20 was less than 22%.
  • Both mice receiving conjugates 7-14 and conjugates 21-28 had tumor volumes of less than 12%.
  • cancer of mice administered with conjugates 11-14 and conjugates 25-28 was able to suppress the growth of cancer earlier compared to cancers of mice administered with conjugates 7-10 and conjugates 21-24. .
  • the tumor volume was less than 16%.
  • mice administered with a solution containing a conjugate of cetuximab and Resiquimod as a comparative control was 32% with respect to the negative control.
  • conjugates 1 to 28 and conjugate 45 to conjugate 176 exhibited significantly stronger antitumor effects than the negative control.
  • Conjugates 1-28 and Conjugate 45-Conjugate 176 were also shown to have a significantly stronger anti-tumor effect on the cetuximab and Resiquimod conjugates as comparative controls.
  • Example 8 FIG. Preparation of conjugate of mouse chimeric anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody and immune activator Heavy chain having heavy chain variable region of anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody and heavy chain constant region of mouse IgG, and anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody
  • a mouse chimeric antibody consisting of a light chain variable region and a light chain constant region of mouse IgG was prepared, and a conjugate with Resimod, which is an immune activator, was prepared in the same manner as in Example 3. Further, the mouse chimeric antibody was prepared, and a conjugate of the Resiquimod derivative and the mouse chimeric antibody was prepared in the same manner as in Example 4.
  • mouse chimeric antibody consisting of the light chain variable region of the anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody of this example and the light chain constant region of mouse IgG, specifically, the following antibodies were used.
  • CDRs 1 to 3 of the heavy chain variable region are each composed of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, and SEQ ID NO: 38, and the light chain variable region
  • an amino acid sequence of the light chain variable region represented by SEQ ID NO: 43 comprising the CDR1 to CDR3 of the light chain variable region.
  • an amino acid sequence of the light chain variable region represented by SEQ ID NO: 51 comprising the CDR1 to CDR3 of the light chain variable region.
  • an amino acid sequence of the light chain variable region represented by SEQ ID NO: 59 comprising the light chain variable region CDRs 1 to 3.
  • CDRs 1 to 3 of the heavy chain variable region are each composed of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, and SEQ ID NO: 62, and the light chain variable region
  • An amino acid sequence of the light chain variable region represented by SEQ ID NO: 67 comprising the light chain variable region CDR1 to CDR3.
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region.
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region an antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73
  • a monoclonal antibody against CAPRIN-1 described in WO2011 / 096533 wherein the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80 and the light chain variable represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 81
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region an antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83.
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region an antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 86 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 87.
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region an antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90, and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 91
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region an antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 104 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105.
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region.
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region.
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region.
  • a monoclonal antibody against CAPRIN-1 described in WO2013 / 125654 wherein the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 116 and the light chain variable represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 117
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region an antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 118, and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119.
  • a monoclonal antibody against CAPRIN-1 described in WO2015 / 020212 wherein the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 122 and the light chain variable represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 123
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the region an antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 125
  • An antibody comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 126 and the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 127, represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 128
  • the mouse chimeric antibody was prepared using the following method.
  • both ends of a gene amplified fragment encoding the heavy chain variable region of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 39 in the present invention are purified after restriction enzyme treatment, and a human antibody-derived leader sequence and mouse IgG A vector in which the heavy chain constant region was already inserted was inserted according to a standard method. Furthermore, both ends of the gene amplified fragment encoding the light chain variable region of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 43 were purified after restriction enzyme treatment, and a leader sequence derived from a human antibody and a light chain constant region of mouse IgG were obtained. The already inserted vector was inserted according to a standard method.
  • the recombinant vector in which the heavy chain variable region of the antibody against CAPRIN-1 is inserted and the recombinant vector in which the light chain variable region is inserted are introduced into mammalian cells according to a conventional method, and SEQ ID NO: 39
  • a solution containing mouse chimeric antibody # 1 consisting of a light chain having a chain constant region was obtained.
  • the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 112 the heavy chain having the heavy chain constant region of mouse IgG, the amino acid sequence of the light chain variable region represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 113, and the mouse Mouse chimeric antibody # 27 consisting of a light chain with an IgG light chain constant region.
  • mice chimeric antibodies # 1 to # 37 were purified using Hitrap Protein A Sepharose FF (manufactured by GE Healthcare) according to a conventional method, and replaced with PBS ( ⁇ ) to 0.22 ⁇ m. The one filtered with a filter (manufactured by Millipore) was prepared.
  • conjugates with Resimod were prepared in the same manner as described in Example 3.
  • Conjugate of mouse chimeric antibody # 1 and Requiquimod conjugate of mouse chimeric antibody # 2 and Requiquimod (conjugate 30), conjugate of mouse chimeric antibody # 3 and Requiquimod (conjugate 31)
  • Conjugate of mouse chimeric antibody # 4 and Requiquimod conjugate 32
  • mouse chimeric antibody # 5 (conjugate 177), mouse chimeric antibody # 6 (conjugate 178), mouse chimeric antibody # 7 (conjugate 179)
  • Mouse chimeric antibody # 8 (conjugate 180), mouse chimeric antibody # 9 (conjugate 181), mouse chimeric antibody # 10 (conjugate 182), mouse chimeric antibody # 11 (conjugate 183), mouse Chimeric antibody # 12 (conjugate 184), mouse chimeric antibody # 13 (conjugate 185), mouse chimeric antibody # 14 (conjugate 186
  • conjugates with the above Requimod derivative were prepared in the same manner as described in Example 4.
  • a solution containing a conjugate using antibody # 4 (conjugate 36) was obtained.
  • solutions containing conjugates (conjugate 210 to conjugate 242) using mouse chimeric antibodies # 5 to # 37 were obtained.
  • a solution containing the obtained conjugates 29 to 36, conjugates 177 to 242 and control conjugate 2 was filtered through a 0.22 ⁇ m filter (Millipore).
  • conjugates 29 to 36 and conjugates 177 to 242 have the same specific reactivity as CAPRIN-1 protein as in Example 5. The method was evaluated. As a result, each of the solutions containing conjugates 29 to 36 and conjugates 177 to 242 showed specific reactivity to the CAPRN-1 protein.
  • conjugates 29 to 36 and conjugates 177 to 242 to the cancer cells using cancer cells in which CAPRIN-1 is expressed on the cell membrane surface.
  • the conjugate also showed a strong fluorescence intensity compared to the negative control.
  • anti-CAPRIN-1 monoclonal antibodies described in the mouse chimeric antibodies # 1 to # 37 prepared above, to which no immune activator is bound have the same level of reactivity. did it.
  • Example 9 Anti-tumor effect of conjugate of mouse chimeric anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody and immune activator Conjugate of mouse chimeric anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody and immune activator produced in Example 8 ( The antitumor effects of the antibodies of conjugates 29 to 36 and conjugates 177 to 242) in vivo in tumor-bearing mice were evaluated.
  • the antitumor effect of the conjugate of the present invention was examined using Balb / c mice transplanted with cancer cells derived from mice expressing CAPRIN-1.
  • 10 4 mouse breast cancer cells 4T1 were transplanted subcutaneously in the ventral region, and tumor-bearing mice were produced that had grown until the tumor reached 30 mm 3 or more.
  • the breast cancer cell 4T1 is a cell in which the CAPRIN-1 protein is expressed on the cell membrane surface as shown in Example 5, and each solution containing the conjugates 29 to 36 prepared in Example 8 is a breast cancer cell. It specifically binds to CAPRIN-1 on the cell membrane surface of 4T1.
  • Ten conjugates 29-36 prepared in Example 8 were administered at 8 mg / kg to the tail vein of tumor-bearing mice.
  • mice As a comparative control, the same amount of mouse chimeric antibody # 1 to mouse chimeric antibody # 4 was administered to cancer-bearing mice. Administration was performed twice a week for a total of 4 times. PBS ( ⁇ ) was administered to negative control tumor-bearing mice. After the administration, the tumor size of the tumor-bearing mouse was measured over time using a caliper, and the tumor volume was calculated according to a standard method: (length of the major axis of the cancer) ⁇ (length of the minor axis of the cancer) Calculated at 2 ⁇ 0.5. As a result, when the tumor volume of the negative control on the 20th day after the start of administration was taken as 100%, each mouse to which conjugates 29 to 36 were administered was 0%.
  • mice administered with only mouse chimeric antibody # 1 to # 4 was 69% on average when the tumor volume of negative control mice was taken as 100%.
  • the conjugate of Resquimod and the mouse chimeric anti-CAPRIN-1 antibody (mouse chimeric antibody) prepared in Example 8 conjugates 29 to 32
  • the conjugate of the above-described derivative of Resquimod (conjugate) Gates 33 to 36 were shown to exhibit a stronger antitumor effect than the negative control and anti-CAPRIN-1 antibody alone administered to tumor-bearing mice.
  • the antitumor effect of conjugates 177 to 242 was evaluated.
  • the tumor volume of each mouse administered with conjugates 29 to 36 was 0% when the tumor volume of the negative control mouse was taken as 100%.
  • the tumor volume of the mice administered with only the mouse chimeric antibody # 5 to # 37 was 69% on average when the tumor volume of the negative control mice was taken as 100%.
  • Example 10 Antitumor effect of conjugate 3 Examples using conjugates 7 to 14, conjugates 21 to 28, and conjugates 45 to 179 prepared using anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody prepared in Example 4 and an antibody drug trastuzumab against an existing cancer 4 was compared with the antitumor effect in vivo of tumor-bearing mice with trastuzumab conjugates and trastuzumab prepared using the same method as in FIG.
  • trastuzumab conjugate is a complex prepared by using trastuzumab and an immune activator in the same manner as described in Example 4.
  • a conjugate of trastuzumab and an immune activator was prepared by the following method.
  • the immunostimulatory factor is 1- (2 (2-Aminoethoxy) -2-methylpropyl) -2- (ethylmethyl) -1H, which is a Requimod derivative obtained by adding 2-amino carbon to a tertiary hydroxyl group in Resiquimod and adding an amino group.
  • trastuzumab is prepared by removing the pharmaceutical composition contained in the solution by using an ultrafilter, or by purifying only the trastuzumab with a protein A carrier by affinity purification and containing it in a phosphate buffer. Used for preparation. See the method described in US Pat. No. 8,951,528 for the conjugate of the above-mentioned Resquimod with linker SMCC bound to the linker SMCC and the anti-CAPRIN-1 antibody as well as the method of JIMD Reports-Case and Research Reports, 2012/5 And prepared according to a conventional method. In the same manner as in Example 4, a solution containing trastuzumab with SATA added to trastuzumab dissolved in phosphate buffer was obtained.
  • the condensate prepared above was reacted to obtain a solution containing a conjugate of trastuzumab and the derivative of Resiquimod (trastuzumab conjugate). It was confirmed by flow cytometry that the obtained trastuzumab conjugate showed a reaction to human breast cancer cells used for evaluation of the antitumor effect. Furthermore, conjugates 7 to 14 prepared using the immunoactivator binding to the prepared trastuzumab conjugate for comparison and the anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody prepared in Example 4, Those confirmed by mass spectrometry that the same number of immune activators bound to conjugates 21 to 28 and conjugates 45 to 179 were bound.
  • Tumor-bearing mice for comparison of anti-tumor effects were mixed with 10 7 human breast cancer cells BT474 per mouse mixed with Matrigel (SIGMA) and implanted subcutaneously into mice, and were grown until the tumor reached 150 mm 3 or more. Tumor-bearing mice were prepared. It has been confirmed that BT474 expresses the CAPRIN-1 protein and HER2, which is a target antigen of trastuzumab, on the cell membrane surface.
  • 10 anti-CAPRIN-1 antibody conjugates conjugates 7 to 14, conjugates 21 to 28, conjugates 45 to 179 and 10 trastuzumab conjugates prepared above were respectively introduced into the tail vein of the tumor-bearing mouse. 10 mg / kg each was administered. Administration was performed twice a week for a total of 13 doses. For comparison, the anti-CAPRIN-1 antibody and trastuzumab used for preparation of conjugates of anti-CAPRIN-1 antibody (conjugates 7 to 14, conjugates 21 to 28, and conjugates 45 to 179) were similarly administered. PBS ( ⁇ ) was administered to a negative control tumor-bearing mouse.
  • the tumor size of the tumor-bearing mouse was measured over time using a caliper, and the tumor volume was calculated according to a standard method: (length of the major axis of the cancer) ⁇ (length of the minor axis of the cancer) Calculated at 2 ⁇ 0.5.
  • both of the mice to which conjugates 11 and 25 were administered were less than 15%, and the conjugate to be compared Less than 50% of mice that received the previous anti-CAPRIN-1 antibody. From these results, it was confirmed that the antitumor effect was enhanced by 77% by conjugating an immune activator to an anti-CAPRIN-1 antibody.
  • the enhancement rate was calculated by the calculation formula: 1- (tumor volume of conjugate / tumor volume of antibody alone) ⁇ 100 (%).
  • mice administered with trastuzumab conjugate the tumor volume of the negative control was taken as 100%, 53%, and in mice administered trastuzumab prior to conjugation as a comparison subject, 74%.
  • the antitumor effect enhancement rate by conjugating to trastuzumab remained below 29%.
  • Example 11 Preparation of conjugate of anti-CAPRIN-1 antibody and immune activator and antitumor effect of conjugate Regarding humanized antibodies # 1 to # 8, which are anti-CAPRIN-1 monoclonal antibodies described in Example 2, Immune activating factor DSR-6434 (6-Amino-2 (butylamino) -9-[[6- [2- (dimethylamino) ethoxy] -3pyridinyl] methyl] -7,9-dihydro-8H-purin-8- one) conjugates (conjugates 37-44).
  • Example 4 a condensate with succinimidyl 4- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-1-carboxylate (SMCC) was synthesized via the amino group of DSR-6434. Then, a solution containing each of the conjugates 37 to 44, which is a conjugate of each of the humanized antibodies # 1 to # 8 and the immunostimulatory factor RSR-6434, was obtained.
  • SMCC succinimidyl 4- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-1-carboxylate
  • a solution containing the obtained conjugates 37 to 44 was filtered through a 0.22 ⁇ m filter (Millipore).
  • the conjugates were evaluated for specific reactivity to the CAPRIN-1 protein using the same method as in Example 5.
  • each solution containing conjugates 37 to 44 showed reactivity specific to CAPRN-1 protein.
  • the antitumor effect of the conjugates 37 to 44 on tumor-bearing mice was evaluated. 10 mg / kg of 10 anti-CAPRIN-1 antibody conjugates (conjugates 37 to 44) were administered to each of the tumor-bearing mouse tail veins in the same manner as described in Example 10. Administration was twice a week for a total of 16 doses. The anti-CAPRIN-1 antibody and trastuzumab used for the preparation of the conjugate were similarly administered. PBS ( ⁇ ) was administered to a negative control tumor-bearing mouse.
  • the tumor size of the tumor-bearing mouse was measured over time using a caliper, and the tumor volume was calculated according to a standard method: (length of the major axis of the cancer) ⁇ (length of the minor axis of the cancer) Calculated at 2 ⁇ 0.5.
  • the tumor volume of the negative control was taken as 100% on the 50th day after the start of administration, all of the mice administered with the conjugates 37 to 44 had less than 32%, and the conjugate to be compared Less than 50% of mice that received the previous anti-CAPRIN-1 antibody. From these results, it was confirmed that the antitumor effect was enhanced by 35% or more by conjugating an immune activator to an anti-CAPRIN-1 antibody.
  • the enhancement rate was calculated by the calculation formula: 1- (tumor volume of conjugate / tumor volume of antibody alone) ⁇ 100 (%).

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Abstract

本発明はＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質、と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメントと、免疫活性化因子が結合されてなるコンジュゲートならびに該コンジュゲートを有効成分として含むことを特徴とする、従来の抗体又は抗体と免疫活性化因子のコンジュゲートよりも抗腫瘍活性の優れた癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物である。

Description

癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
　本発明は、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に対する抗体と免疫活性化因子とのコンジュゲートと、それを用いた癌の治療及び／又は予防剤等としての医薬用途に関する。
　癌細胞上の特異的抗原タンパク質を標的にした、各種抗体医薬は、その癌特異性から、副作用が少ない癌治療薬として癌治療に適用されている。例えば、多くの固形癌の細胞膜表面には、Ｃｙｔｏｐａｓｍｉｃ－ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１（ＣＡＰＲＩＮ－１）が発現しており、このＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に対する抗体が癌の治療及び／又は予防用医薬用途として有望であることが知られている（特許文献１）。
　近年、これら抗体医薬の薬効を増強する検討が進められ、特に、細胞に対して直接的に強い殺傷能力を有する薬物と抗体をコンジュゲートした、抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）の開発が盛んに進められている（非特許文献１及び２）。ＡＤＣの例としては、既存抗体医薬であるトラスツマブに細胞に殺傷性を示す薬物エムタンシン（ＤＭ１）が連結されたカドサイラ（登録商標）（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ　ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）や、抗ＣＤ３０モノクローナル抗体にモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）が連結されたアドセトリス（登録商標）（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ　ｖｅｄｏｔｉｎ）が一部の癌の治療に用いられており、従来の治療法に比べて生存率の延長が示され、既存癌治療法に対する有用性が示されている（非特許文献３及び４）。
　また、別の例では、癌に対する抗体医薬に、免疫活性化因子をコンジュゲートして薬効の増強を試みる検討も実施されている。例えば、免疫活性化因子の一つＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄを既存の抗体医薬であるトラスツマブやセツキシマブへ結合させたコンジュゲート、あるいは、ＣＤ２０を標的抗原とした抗体医薬であるリツキシマブと各種免疫活性化因子とのコンジュゲートにより、動物モデルにおいて抗体の薬効増強効果が認められている（特許文献２及び３）。
　上記の通り、様々な因子を各種抗体とコンジュゲートすることで、癌に対する抗体医薬の薬効増強の試みが進められているが、様々な癌を完全に退縮させるほどの強力な抗腫瘍効果が得られてはいない。また、癌の再発や転移を予防する効果などは示されていない。
ＷＯ２０１０／０１６５２６ ＷＯ２０１４／０１２４７９ 米国特許８，９５１，５２８号
Ｌａｎｃｅｔ　Ｏｎｃｏｌ　２０１６；１７：ｅ２５６－６２ Ｐｈａｒｍ　Ｒｅｓ．２０１５　Ｎｏｖ；３２（１１）:３５２６－４０ Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　４６７；１９（８），２０１２ ＭＡｂｓ　２０１２；４（４）：４５８－６５
　本発明の目的は、癌細胞の細胞膜表面に発現するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に対する抗体又はそのフラグメントによる抗腫瘍効果を増強する手段を提供することである。
　本発明者は鋭意研究の結果、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に対する抗体又はそのフラグメントと免疫活性化因子のコンジュゲートが、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に対する抗体又はそのフラグメント単独に比べて極めて強い抗腫瘍効果を発揮すること、さらにはＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に対する抗体又はそのフラグメントに免疫活性化因子をコンジュゲートした場合の抗腫瘍効果の増強効果が、既存の癌抗体医薬に免疫活性化因子をコンジュゲートした場合の抗腫瘍効果の増強効果と比較して顕著に優れることを見出し、本発明を完成するに至った。
　具体的には、本発明は以下の（１）～（１４）の特徴を有する。
（１）配列番号２～３０のうち偶数の配列番号のいずれかで表されるアミノ酸配列又は、該アミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメントと、免疫活性化因子が結合されてなるコンジュゲート。
（２）前記抗体又はそのフラグメントが、配列番号３１～３５、２９６～２９９、３０８、３０９のいずれかで表されるアミノ酸配列あるいは該アミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する、（１）に記載のコンジュゲート。
（３）前記抗体がモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体である、（１）又は（２）に記載のコンジュゲート。
（４）前記抗体又はそのフラグメントが以下の（Ａ）～（Ｍ）のいずれかである、（１）～（３）のいずれかに記載のコンジュゲート
（Ａ）配列番号３６、３７及び３８の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号４０、４１及び４２の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はフラグメント
（Ｂ）配列番号４４、４５及び４６の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号４８、４９及び５０の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はフラグメント
（Ｃ）配列番号５２、５３及び５４の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号５６、５７及び５８の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はフラグメント
（Ｄ）配列番号６０、６１及び６２の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号６４、６５及び６６の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はフラグメント
（Ｅ）配列番号１７０、１７１及び１７２の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１７３、１７４及び１７５の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
（Ｆ）配列番号１７６、１７７及び１７８の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１７９、１８０及び１８１の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
（Ｇ）配列番号１８２、１８３及び１８４の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１８５、１８６及び１８７の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
（Ｈ）配列番号１８８、１８９及び１９０の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１９１、１９２及び１９３の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
（Ｉ）配列番号１４６、１４７及び１４８の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１４９、１５０及び１５１の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
（Ｊ）配列番号２７２、２７３及び２７４の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号２７５、２７６及び２７７の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
（Ｋ）配列番号２９０、２９１及び２９２の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号２９３、２９４及び２９５の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
（Ｌ）配列番号３０１、３０２及び３０３の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号３０５、３０６及び３０７の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
（Ｍ）配列番号１３４、１３５及び１３６の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１３７、１３８及び１３９の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
（５）前記抗体又はそのフラグメントが以下の（ａ）～（ａｋ）のいずれかである、（１）～（４）のいずれかに記載のコンジュゲート。
（ａ）重鎖可変領域が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号４３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｂ）重鎖可変領域が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号５１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｃ）重鎖可変領域が配列番号５５のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号５９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｄ）重鎖可変領域が配列番号６３のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号６７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｅ）重鎖可変領域が配列番号６８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号６９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｆ）重鎖可変領域が配列番号７０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｇ）重鎖可変領域が配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｈ）重鎖可変領域が配列番号７４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｉ）重鎖可変領域が配列番号７６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｊ）重鎖可変領域が配列番号７８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｋ）重鎖可変領域が配列番号８０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｌ）重鎖可変領域が配列番号８２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｍ）重鎖可変領域が配列番号８４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｎ）重鎖可変領域が配列番号８６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｏ）重鎖可変領域が配列番号８８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｐ）重鎖可変領域が配列番号９０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号９１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｑ）重鎖可変領域が配列番号９２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号９３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｒ）重鎖可変領域が配列番号９４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号９５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｓ）重鎖可変領域が配列番号９６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号９７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｔ）重鎖可変領域が配列番号９８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号９９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｕ）重鎖可変領域が配列番号１００のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１０１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｖ）重鎖可変領域が配列番号１０２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｗ）重鎖可変領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１０５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｘ）重鎖可変領域が配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１０７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｙ）重鎖可変領域が配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１０９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ｚ）重鎖可変領域が配列番号１１０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ａａ）重鎖可変領域が配列番号１１２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ａｂ）重鎖可変領域が配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ａｃ）重鎖可変領域が配列番号１１６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ａｄ）重鎖可変領域が配列番号１１８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ａｅ）重鎖可変領域が配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ａｆ）重鎖可変領域が配列番号１２２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ａｇ）重鎖可変領域が配列番号１２４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ａｈ）重鎖可変領域が配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ａｉ）重鎖可変領域が配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ａｉ）重鎖可変領域が配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１３１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ａｊ）重鎖可変領域が配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１３３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（ａｋ）重鎖可変領域が配列番号３００のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号３０４のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
（６）前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体である、（１）～（５）のいずれかに記載のコンジュゲート。
（７）前記免疫活性化因子が、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、ＮＯＤ様受容体（ＮＬＲ）、ＲＩＧ様受容体、Ｃ型レクチン受容体（ＣＬＲ）に結合するリガンド又はアゴニストである、（１）～（６）のいずれかに記載のコンジュゲート。
（８）前記Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）が、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９又はＴＬＲ１０である、（７）に記載のコンジュゲート。
（９）前記Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）に結合するリガンド又はアゴニスト又はその誘導体が以下の（ｉ）～（ｖｉｉ）のいずれかである、（７）又は（８）項に記載のコンジュゲート。
（ｉ）ペプチドグリカン、リポタンパク質、リポポリサッカライド及びザイモザンからななる群から選択されるＴＬＲ２に結合するリガンド又はアゴニスト
（ｉｉ）Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）及びｐｏｌｙ（Ａ：Ｕ）からなる群から選択されるＴＬＲ３に結合するリガンド又はアゴニスト
（ｉｉｉ）リポポリサッカライド（ＬＰＳ）、ＨＳＰ６０、ＲＳ０９及びＭＰＬＡからなる群から選択されるＴＬＲ４に結合するリガンド又はアゴニスト
（ｉｖ）フラジェリン及びＦＬＡからなる群から選択されるＴＬＲ５に結合するリガンド又はアゴニスト
（ｖ）イミダゾキノリン類化合物及び一重鎖ＲＮＡからなる群から選択されるＴＲＬ７又は８に結合するリガンド又はアゴニスト
（ｖｉ）バクテリアＤＮＡ、非メチル化ＣｐＧ　ＤＮＡ、ｈｅｍｏｚｏｒｉｎ、ＯＤＮ１５８５、ＯＤＮ１６６８、ＯＤＮ１６６８及びＯＤＮ１８２６からなる群から選択されるＴＲＬ９に結合するリガンド又はアゴニスト
（ｖｉｉ）ｐｒｏｆｉｌｉｎ及びｕｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃバクテリアからなる群から選択されるＴＲＬ１０に結合するリガンド又はアゴニスト
（１０）前記抗体又はそのフラグメントと前記免疫活性化因子がリンカーを介して結合する、（１）～（９）のいずれかに記載のコンジュゲート。
（１１）（１）～（１０）のいずれかに記載のコンジュゲートを有効成分として含む、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物。
（１２）前記癌がＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質を細胞膜表面に発現する癌である、（１１）に記載の医薬組成物。
（１３）前記癌が、乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、肝臓癌、胆嚢癌、肉腫、肥満細胞腫、メラノーマ、副腎皮質癌、ユーイング腫瘍、ホジキンリンパ腫、中皮腫、多発性骨髄腫、睾丸癌、甲状腺癌及び頭頸部癌からなる群から選択される癌である、（１１）又は（１２）に記載の医薬組成物。
（１４）（１）～（１０）のいずれかに記載のコンジュゲート、（１１）～（１３）のいずれかに記載の医薬組成物を被験者に投与することを含む、癌の治療及び／又は予防方法。
　本発明に係るコンジュゲートは、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に対する抗体単独に比べて極めて強い抗腫瘍効果を発揮するだけでなく、これまで知られている癌抗体医薬と免疫活性化因子のコンジュゲートよりも優れた抗腫瘍効果を有する。また、本発明に係るコンジュゲートによる抗腫瘍効果の増強効果は、既存の癌抗体医薬に免疫活性化因子をコンジュゲートした場合の抗腫瘍効果の増強効果と比較しても優れる。したがって、本発明に係るコンジュゲートは癌の治療や予防に有効である。
　本発明で用いられるＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に対する抗体又はそのフラグメント（以下、「抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体」という。）と免疫活性化因子とのコンジュゲートの抗腫瘍活性は、後述するように生体内で担癌動物に対する腫瘍増殖の抑制を調べることによって評価することができる。
　本発明において「コンジュゲート」とは、抗体と免疫活性化因子とが共有結合によって連結されたものをいう。抗体と免疫活性化因子との結合にリンカーが介されたものであってもよい。
　本発明に係る上記コンジュゲートを形成する抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体は、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であってもよく、好ましくはモノクローナル抗体であり、本発明のコンジュゲートが、抗腫瘍活性を発揮しうる限り、いかなる種類の抗体であってもよく、抗体は組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、非ヒト動物抗体である。
　本発明に係る上記コンジュゲートを形成する免疫活性化因子は、免疫細胞が活性化される因子であればよく、好ましくは、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、ＮＯＤ様受容体（ＮＬＲ）、ＲＩＧ様受容体、Ｃ型レクチン受容体（ＣＬＲ）に結合するリガンド、アゴニスト又はその誘導体である。より好ましくはＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）に結合するリガンド又はアゴニストおよびその誘導体である。
　また、本発明における癌の治療及び／又は予防の対象である被験者は、ヒト、ペット動物、家畜類、競技用動物等の哺乳動物であり、好ましい被験者はヒトである。
　以下に本発明に関する、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体、免疫活性化因子、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子のコンジュゲート、コンジュゲートを用いた医薬組成物並びに癌の治療及び／又は予防方法について説明する。
　＜抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＞
　本発明で用いられる抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫学的反応性を有する、配列番号２～３０のうち偶数の配列番号のいずれかで表されるアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質のうち、配列番号６、８、１０、１２及び１４で示されるアミノ酸配列はイヌのＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質のアミノ酸配列であり、配列番号２及び４で示されるアミノ酸配列はヒトのＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質のアミノ酸配列であり、配列番号１６で示されるアミノ酸配列はウシのＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質のアミノ酸配列であり、配列番号１８で示されるアミノ酸配列はウマのＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質のアミノ酸配列であり、配列番号２０～２８で示されるアミノ酸配列はマウスのＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質のアミノ酸配列であり、配列番号３０で示されるアミノ酸配列はニワトリのＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質のアミノ酸配列である。
　また、本発明で用いられる抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体は、前記配列番号２～３０のうち偶数の配列番号のいずれかで表されるアミノ酸配列と８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、さらに好ましくは９９％以上の配列同一性を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質のバリアントと免疫学的反応性を有するものであってもよい。ここでいう「％配列同一性」は、２つの配列を、ギャップを導入してか又はギャップを導入しないで、最大の類似度となるようにアラインメント（整列）したとき、アミノ酸（又は塩基）の総数に対する同一アミノ酸（又は塩基）のパーセンテージ（％）を意味する。
　本発明においてコンジュゲートを作製するために用いる抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体とは、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の全長又はその断片と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメントを意味する。ここで、「免疫学的反応性」とは、生体内で抗体とＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質又はその部分ポリペプチドとが結合する特性を意味する。
　本発明に用いる抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体は、モノクローナル抗体あるいはポリクローナル抗体であっても良い。
　ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の全長又はその断片と免疫学的反応性を有するポリクローナル抗体（抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体）は、例えば天然のＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質、あるいはＧＳＴなどとの融合タンパク質、又はその部分ペプチドをマウス、ヒト抗体産生マウス、ラット、ウサギ、ニワトリなどに免疫し、血清を得る。得られた血清を硫安沈殿、プロテインＡ、プロテインＧ、ＤＥＡＥイオン交換カラム、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質や部分ペプチドを結合させたアフィニティーカラムなどにより得ることができる。
　上記免疫に用いるＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の全長又はその断片は、ＣＡＰＲＩＮ－１及びそのホモログの塩基配列及びアミノ酸配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（米国ＮＣＢＩ）にアクセスし、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ等のアルゴリズム（Ｋａｒｌｉｎ　ａｎｄ　Ａｌｔｓｃｈｕｌ，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ，　９０：５８７３－５８７７，１９９３；　Ａｌｔｓｃｈｕｌ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．　２５：３３８９－３４０２，　１９９７）を利用することによって入手することができる。また、そのＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の作製方法はＷＯ２０１４／０１２４７９を参照することによって得ることができるし、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質を発現する細胞等を用いることもできる。
　ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の全長又はその断片と免疫学的反応性を有するモノクローナル抗体（抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体）は、例えば、ＣＡＰＲＩＮ－１を発現する乳癌細胞ＳＫ－ＢＲ－３やＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の全長あるいはその断片などをマウスに投与して免疫し、同マウスより分離した脾臓細胞とミエローマ細胞を融合し、得られた融合細胞（ハイブリドーマ）から抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体を産生するクローンを選択することで得ることができる。選択されたハイブリドーマから産生される抗体は、前述したポリクローナル抗体の精製方法と同様の方法で得ることができる。
　本発明に用いる抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、非ヒト動物抗体が含まれる。
　ヒト抗体は、ＥＢウィルスに感染したヒトリンパ球を、タンパク質、タンパク質発現細胞又はその溶解物で感作し、感作リンパ球をヒト由来のＵ２６６細胞などのミエローマ細胞と細胞融合させ、得られた融合細胞からＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の全長又はその断片と免疫学的反応性を有する抗体を得ることができる。
　ヒト化抗体とは、再構成（ｒｅｓｈａｐｅｄ）ヒト抗体とも称される改変抗体である。ヒト化抗体は、免疫動物由来の抗体の相補性決定領域を、ヒト抗体の相補性決定領域へ移植することによって構築される。その一般的な手法としての遺伝子組換え手法もよく知られた技術である。具体的には、例えば、マウス抗体、ウサギ抗体の相補性決定領域とヒト抗体のフレームワーク領域を連結するように設計したＤＮＡ配列を、末端部にオーバーラップする部分を有するように作製した数個のオリゴヌクレオチドからＰＣＲ法により合成する。得られたＤＮＡを、ヒト抗体の定常領域をコードするＤＮＡと連結して、発現ベクターに組み込んで、これを宿主に導入して産生させることによって得られる（欧州特許出願公開第ＥＰ２３９４００、国際公開番号ＷＯ９６／０２５７６を参照）。相補性決定領域を介して連結されるヒト抗体のフレームワーク領域は、相補性決定領域が良好な抗原結合部位を形成するものが選択される。必要に応じ、再構成ヒト抗体の相補性決定領域が適切な抗原結合部位を形成するように抗体の可変領域におけるフレームワーク領域のアミノ酸を置換してもよい（Ｓａｔｏ　Ｋ．ｅｔ　ａｌ．，　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　１９９３，　５３：　８５１－８５６）。また、様々なヒト抗体由来のフレームワーク領域に置換してもよい（ＷＯ９９／５１７４３を参照）。
　抗体は、通常少なくとも２本の重鎖及び２本の軽鎖を含むヘテロ多量糖タンパク質である。抗体は、２本の同一の軽鎖及び、２本の同一の重鎖で構成される。重鎖は一方の端に重鎖可変領域を有し、それにいくつかの定常領域が続く。軽鎖は一方の端に軽鎖可変領域を有し、それにいくつかの定常領域が続く。可変領域は相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる特定の可変領域を示して抗体に結合特異性を付与する。可変領域に相対的に保存されている部分はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれている。完全な重鎖及び軽鎖の可変領域は、それぞれ３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１～ＣＤＲ３）により連結された４つのＦＲを含む。
　なお、ヒト由来重鎖及び軽鎖の定常領域及び可変領域の配列は、例えばＮＣＢＩ（米国：ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＧｅｎｅ等）から入手可能であり、例えば、ヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域は、登録番号Ｊ００２２８、ヒトＩｇＧ２の重鎖定常領域は、登録番号Ｊ００２３０、ヒト軽鎖κ定常領域については登録番号Ｖ００５５７、Ｘ６４１３５、Ｘ６４１３３等、ヒト軽鎖λ定常域については、登録番号Ｘ６４１３２、Ｘ６４１３４等の配列を参照することができる。
　キメラ抗体は、異なる動物由来の配列を組み合わせて作製される抗体であり、例えば、マウス抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域とヒト抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域の定常領域からなる抗体等である。キメラ抗体の作製は公知の方法を用いて行うことができ、例えば、抗体Ｖ領域をコードするＤＮＡとヒト抗体のＣ領域をコードするＤＮＡを連結し、これを発現ベクターに組み込んで宿主に導入し産生させることにより得られる。
　非ヒト動物抗体は、公知の方法に従って、感作抗原を動物に免疫する、一般的な方法として、感作抗原をマウスなどの動物の腹腔内又、皮内あるいは皮下に注射することにより得られる。感作抗原を注射する際には、ＣＦＡ（フロイント完全アジュバント）をはじめとする各種アジュバントと適量混合して動物に複数回投与する。動物を免疫し、血清中に抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体が含まれていることを確認した後に血清を得て、前述の通り、硫安沈殿、プロテインＡ、プロテインＧ、ＤＥＡＥイオン交換カラム、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質や部分ペプチドを結合させたアフィニティーカラムなどにより得ることができる。また、非ヒト動物からモノクローナル抗体を得る場合には、免疫した動物から免疫細胞を採取し、ミエローマ細胞と細胞融合に付することで得ることができる。前記免疫細胞とミエローマ細胞との細胞融合は公知の方法に準じて行うことができる（Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．ａｎｄ　Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ．（１９８１）７３，３－４６を参照）。
　本発明で用いる抗体は、抗体遺伝子をハイブリドーマからクローニングし、適当なベクターに組み込んで、これを宿主に導入して、遺伝子組換え技術を用いて産生させた遺伝子組換え型抗体としても得ることができる（Ｃａｒｌ，　Ａ．Ｋ．　Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ，　Ｊａｍｅｓ，　Ｗ．　Ｌａｒｒｉｃｋ，　ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣ　ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ　ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｋｉｎｇｄｏｍ　ｂｙ　ＭＡＣＭＩＬＬＡＮ　ＰＵＢＬＩＳＨＥＲＳ　ＬＴＤ，１９９０を参照）。
　本発明のコンジュゲートを得るために用いる抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体は、可変領域（例えばＦＲ）や定常領域中のアミノ酸を他のアミノ酸に置換されたものであってもよい。アミノ酸置換は、１もしくは複数個、例えば１５未満、１０未満、８以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下のアミノ酸、好ましくは１～９アミノ酸の置換であり、置換された抗体は、未置換抗体に比べて、抗原へ特異的に結合する性質、抗原への結合親和性が同等あるいはそれ以上であり、ヒトへの適用時に拒絶反応を起こさない抗体であるべきである。
　本発明で用いる抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体は、癌細胞表面上のＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質との結合親和性が高いほうが、より強い抗腫瘍効果が期待できる。結合定数（親和定数）Ｋａ（ｋｏｎ／ｋｏｆｆ）が、好ましくは、少なくとも１０７Ｍ－１、少なくとも１０８Ｍ－１、少なくとも５×１０８Ｍ－１、少なくとも１０９Ｍ－１、少なくとも５×１０９Ｍ－１、少なくとも１０１０Ｍ－１、少なくとも５×１０１０Ｍ－１、少なくとも１０１１Ｍ－１、少なくとも５×１０１１Ｍ－１、少なくとも１０１２Ｍ－１、あるいは、少なくとも１０１３Ｍ－１であることが望ましい。
　本発明に用いる抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体は、抗体の重鎖定常領域のアミノ酸を１個、２個もしくは数個置換する、あるいは、重鎖定常領域に結合するＮ－グリコシド結合糖鎖中のＮ－アセチルグルコサミンに結合しているフコースを除去することで、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体のエフェクター細胞に対する結合力を向上させることができる。上記はアミノ酸置換単独であってもよいし、また、フコースが結合している抗体との組成物であってもよい。
　重鎖定常領域のアミノ酸を１個、２個もしくは数個置換された抗体は、例えばＷＯ２００４／０６３３５１、ＷＯ２０１１／１２０１３５、米国特許８３８８９５５、ＷＯ２０１１／００５４８１、米国特許６７３７０５６、ＷＯ２００５／０６３３５１を参照して作製することができる。
　重鎖定常領域中のＮ－グリコシド結合糖鎖中のＮ－アセチルグルコサミンに付加しているフコースが除去された抗体又はその産生細胞は、米国特許６６０２６８４号、欧州特許１９１４２４４、米国特許７５７９１７０を参照して作製することができる。重鎖定常領域に結合するＮ－グリコシド結合糖鎖中のＮ－アセチルグルコサミンに結合しているフコースを除去した抗体とフコースが結合している抗体の組成物又はその産生細胞は、例えば米国特許８６４２２９２号を参照して作製することができる。
　本発明で用いられる抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体、抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体、抗体の作製方法、精製方法ならびに免疫に用いるＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質あるいはその部分ポリペプチドの作製方法は、ＷＯ２０１０／０１６５２６、ＷＯ２０１１／０９６５１７、ＷＯ２０１１／０９６５２８、ＷＯ２０１１／０９６５１９、ＷＯ２０１１／０９６５３３、ＷＯ２０１１／０９６５３４、ＷＯ２０１１／０９６５３５、ＷＯ２０１３／０１８８８６、ＷＯ２０１３／０１８８９４、ＷＯ２０１３／０１８８９２、ＷＯ２０１３／０１８８９１、ＷＯ２０１３／０１８８８９、ＷＯ２０１３／０１８８８３、ＷＯ２０１３／１２５６３６、ＷＯ２０１３／１２５６５４、ＷＯ２０１３／１２５６３０、ＷＯ２０１３／１２５６４０、ＷＯ２０１３／１４７１６９、ＷＯ２０１３／１４７１７６ならびにＷＯ２０１５／０２０２１２を参照して得ることができる。
　本発明における抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体の具体例としては、前述のＷＯ２０１０／０１６５２６、ＷＯ２０１１／０９６５１７、ＷＯ２０１１／０９６５２８、ＷＯ２０１１／０９６５１９、ＷＯ２０１１／０９６５３３、ＷＯ２０１１／０９６５３４、ＷＯ２０１１／０９６５３５、ＷＯ２０１３／０１８８８６、ＷＯ２０１３／０１８８９４、ＷＯ２０１３／０１８８９２、ＷＯ２０１３／０１８８９１、ＷＯ２０１３／０１８８８９、ＷＯ２０１３／０１８８８３、ＷＯ２０１３／１２５６３６、ＷＯ２０１３／１２５６５４、ＷＯ２０１３／１２５６３０、ＷＯ２０１３／１２５６４０、ＷＯ２０１３／１４７１６９、ＷＯ２０１３／１４７１７６ならびにＷＯ２０１５／０２０２１２に記載の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体が挙げられるが、好ましい抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体としては以下のものが挙げられる。
　配列番号２又は配列番号４で表されるアミノ酸配列あるいは該アミノ酸配列と８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、よりさらに好ましくは９９％以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。
　配列番号３１で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。好ましくは配列番号３６、３７及び３８の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号４０、４１及び４２の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント、あるいは、配列番号１４０、１４１及び１４２の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１４３、１４４及び１４５の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント、あるいは、配列番号１６４、１６５及び１６６の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１６７、１６８及び１６９の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。より好ましくは、重鎖可変領域が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号４３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント、あるいは、重鎖可変領域が配列番号７０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント、あるいは、重鎖可変領域が配列番号７８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　配列番号３３で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。好ましくは、配列番号６０、６１及び６２の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号６４、６５及び６６の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント、あるいは、重鎖可変領域が配列番号６３のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号６７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　配列番号３２で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。好ましくは、配列番号５２、５３及び５４の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号５６、５７及び５８の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。より好ましくは、重鎖可変領域が配列番号５５のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号５９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　配列番号３４で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。好ましくは、配列番号１７０、１７１及び１７２の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１７３、１７４及び１７５の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント、あるいは、配列番号１７６、１７７及び１７８の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１７９、１８０及び１８１の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。より好ましくは、重鎖可変領域が配列番号８０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント、あるいは、重鎖可変領域が配列番号８２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　配列番号３５で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。好ましくは、配列番号１８２、１８３及び１８４の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１８５、１８６及び１８７の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント、あるいは、配列番号１８８、１８９及び１９０の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１９１、１９２及び１９３の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。より好ましくは、重鎖可変領域が配列番号８４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント、あるいは、重鎖可変領域が配列番号８６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　配列番号４４、４５及び４６の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号４８、４９及び５０の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。好ましくは、重鎖可変領域が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号５１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　配列番号２９６で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。好ましくは配列番号１４６、１４７及び１４８の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１４９、１５０及び１５１の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。より好ましくは、重鎖可変領域が配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　配列番号２９７で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。好ましくは配列番号２７２、２７３及び２７４の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号２７５、２７６及び２７７の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。より好ましくは、重鎖可変領域が配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　配列番号２９８で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。好ましくは配列番号２９０、２９１及び２９２の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号２９３、２９４及び２９５の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。より好ましくは、重鎖可変領域が配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　配列番号２９９で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。好ましくは配列番号３０１、３０２及び３０３の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号３０５、３０６及び３０７の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。より好ましくは、重鎖可変領域が配列番号３００のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号３０４のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　配列番号３０８で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。好ましくは配列番号１３４、１３５及び１３６の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１３７、１３８及び１３９の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。より好ましくは、重鎖可変領域が配列番号６８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号６９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　配列番号３０９で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。好ましくは配列番号１３４、１３５及び１３６の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１３７、１３８及び１３９の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。より好ましくは、重鎖可変領域が配列番号６８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号６９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　また、以下の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体も好ましく用いられる。
　重鎖可変領域が配列番号６８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号６９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号７０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号７４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号７６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号７８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号８０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号８２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号８４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号８６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号８８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号９０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号９１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号９２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号９３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号９４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号９５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号９６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号９７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号９８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号９９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１００のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１０１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１０２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１０５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１０７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１０９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１１０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１１２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１１６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１１８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１２２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１２４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１３１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１３３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　重鎖可変領域が配列番号３００のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号３０４のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
　後述の実施例では、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の全長、癌細胞の細胞膜表面に発現する領域の一部のポリペプチドに対する上記ポリクローナル抗体ならびにモノクローナル抗体を用いて免疫活性化因子とのコンジュゲートが作製され、その強い抗腫瘍効果が確認された。
　＜免疫活性化因子＞
　本発明に係る免疫活性化因子は、ここでは各種免疫細胞を活性化する因子であり、該細胞の免疫機能を維持、増強しうる天然化合物、核酸あるいは天然化合物を意味する。ここでいう「免疫細胞」とは、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、顆粒球、マクロファージ、骨髄由来抑制性細胞、Ｌａｎｇｅｒｈａｎｃｅ細胞およびその前駆細胞群、腫瘍内に存在する前記免疫細胞群である。
　本発明で用いられる免疫活性化因子としては特に制限はないが、具体例として、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、ＮＯＤ様受容体（ＮＬＲ）、ＲＩＧ様受容体又はＣ型レクチン受容体（ＣＬＲ）に結合するリガンド又はアゴニストが挙げられる。
　Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）に結合するリガンド又はアゴニストの具体例としては、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０に結合するリガンド又はアゴニストが挙げられる。
　ＴＬＲ２に結合するリガンド又はアゴニストの具体例としては、ペプチドグリカン、リポタンパク質、リポポリサッカライド及びザイモザンからなる群から選択される物質が挙げられる。
　ＴＬＲ３に結合するリガンド又はアゴニストの具体例としては、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）及びｐｏｌｙ（Ａ：Ｕ）、ｐｏｌｙＩＣＬＣ（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ）及びＡｍｐｌｉｇｅｎからなる群から選択される物質が挙げられる。
　ＴＬＲ４に結合するリガンド又はアゴニストの具体例としては、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）、ＨＳＰ６０、ＲＳ０９、ＭＰＬＡ（Ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ　ｌｉｐｉｄ　Ａ　ｆｒｏｍ　Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｍｉｎｎｅｓｏｔａ　Ｒ５９５）、ＧＬＡ－ＳＥ、Ｇ１００及びＭＰＬＡからなる群から選択される物質が挙げられる。
　ＴＬＲ５に結合するリガンド又はアゴニストの具体例としては、フラジェリン及びＦＬＡからなる群から選択される物質が挙げられる。
　ＴＬＲ７又はＴＬＲ８に結合するリガンド又はアゴニストの具体例としては、イミダゾキノリン類化合物等の低分子化合物や一重鎖ＲＮＡ等が挙げられ、それらの具体例としては、Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ、Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ、Ｌｏｘｏｒｂｉｎｅ、８５２Ａ、８５４Ａ、Ｓ－３４２４０、Ｍｏｔｏｌｉｍｏｄ（ＶＴＸ－２３３７）、ＤＳＲ－６４３４、ＧＳ－９６２０、ＡＮＡ７７３、ＡＺＤ８８４８／ＤＳＰ－３０２５、ＧＳＫ２２４５０３５、Ｇａｒｄｉｑｕｉｍｏｄ、ＣＬ２６４、ＵＣ－１Ｖ１５０、ＣＬ０７５、ＣＬ０９７、ＣＬ３０７、ＣＬ３４７、３Ｍ－００３、３Ｍ－００４３、３Ｍ－０５２、ＣＬ２６４、ＩＶ２０９、ＯＲＮ　Ｒ－２１７６－ｄＴ、Ｐｏｌｙ（ｄＴ）、ＯＲＮ　Ｒ－０００６、ＯＲＮ　Ｒ－０００２、ＯＲＮ　Ｒ－２３３６、ＰｏｌｙＵ、ＯＲＮ　Ｒ－１８８６、ｐｏｌｙＧ３、ＤＳＲ６４３４、ＲＷＪ２１７５７、ＳＭ３２４４０５、ｐ－ＩＭＤＱ、ｍ－ＩＭＤＱ及びＧＳＫ２２４５０３５が挙げられる。
　ＴＬＲ９に結合するリガンド又はアゴニストの具体例としては、バクテリアＤＮＡ、非メチル化ＣｐＧ　ＤＮＡ、ｈｅｍｏｚｏｒｉｎ、ＯＤＮ１５８５、ＯＤＮ１６６８、ＯＤＮ１６６８、Ｌｅｆｉｔｏｌｉｍｏｄ（ＭＧＮ１７０３）、ＳＤ－１０１、ＣＹＴ００３、ＣＰＧ７９０９、ＤＵＫ－ＣＰＧ－００１及びＯＤＮ１８２６からなる群から選択される物質が挙げられる。
　ＴＬＲ１０に結合するリガンド又はアゴニストの具体例としては、ｐｒｏｆｉｌｉｎ及びｕｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃバクテリアからなる群から選択される物質が挙げられる。
　前記Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）に結合するリガンド又はアゴニストのうち、本発明ではＴＬＲ７又はＴＬＲ８に結合するリガンド又はアゴニストが好ましく用いられ、ＴＬＲ７又はＴＬＲ８に結合するリガンド又はアゴニストとしてはイミダゾキノリン類化合物及び一重鎖ＲＮＡから選択されるからなる群から選択されるＴＲＬ７又は８に結合するリガンド又はアゴニストがより好ましく用いられ、イミダゾキノリン類化合物から選択されるＴＲＬ７又は８に結合するリガンド又はアゴニストがさらに好ましく用いられる。
　前記イミダゾキノリン類化合物の好ましい具体例としては、例えば米国特許８，９５１，５２８号に記載の化合物や、ＷＯ２０１５／１０３９８９に記載されている化合物があり、例えば、１－（２－ｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐｙｌ）－１Ｈ－ｉｍｉｄａｚｏ［４，５－ｃ］ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ－４－ａｍｉｎｅ（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）、１－（４－ａｍｉｎｏ－２－ｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌｉｍｉｄａｚｏ－[４，５－ｃ]ｑｕｉｎｏｌｉｎ－１－ｙｌ）－２－ｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐａｎ－２－ｏｌ（Ｇａｒｄｉｑｕｉｍｏｄ）、Ｎ－［４－（４－ａｍｉｎｏ－２－ｅｔｈｙｌ－１Ｈ－ｉｍｉｄａｚｏ[４，５－ｃ]ｑｕｉｎｏｌｉｎ－１－ｙｌ）ｂｕｔｙｌ－］ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅ（ＰＦ－４８７８６９１）、４－ａｍｉｎｏ－２－（ｅｔｈｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）－ａ，ａ－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－１Ｈ－ｉｍｉｄａｚｏ[４，５－ｃ]ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ－１－ｅｔｈａｎｏｌ（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）、４－ａｍｉｎｏ－ａａ－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－２－ｍｅｔｈｏｘｙｅｔｈｙｌ－１Ｈ－ｉｍｉｄａｚｏ[４，５－ｃ]ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ－１－ｅｔｈａｎｏｌ、１－（２－（３－（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｐｒｏｐｏｘｙ）ｅｔｈｙｌ）－２－（ｅｔｈｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）－１Ｈ－ｉｍｉｄａｚｏ[４，５－ｃ]ｑｕｉｎｏｌｉｎ－４－ａｍｉｎｅ、４－ａｍｉｎｏ－２－ｅｔｈｏｘｙｍｅｔｈｙｌ－ａａ－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－６，７，８，９－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ－１Ｈ－ｉｍｉｄａｚｏ[４，５－ｃ]ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ－１－ｅｔｈａｎｏｌ、Ｎ－（２－｛２－[４－ａｍｉｎｏ－２－（２－ｍｅｔｈｏｘｙｅｔｈｙｌ）－１Ｈ－ｉｍｉｄａｚｏ[４，５－ｃ]ｑｕｉｎｏｌｉｎ―ｌ－ｙｌ]ｅｙｈｏｘｙ｝ｅｔｈｙｌ）－ｎ’－ｐｈｅｎｙｌｕｒｅａ、１－２－ａｍｉｎｏ－２－ｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐｙｌ）－２－（ｅｔｈｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）－１Ｈ－ｉｍｉｄａｚｏ[４，５－ｃ]ｑｕｉｎｏｌｉｎ－４－ａｍｉｎｅ、１－｛４－［（３，５－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｓｕｌｆｏｎｙｌ］ｂｕｔｙｌ｝－２－ｅｔｈｙｌ－１Ｈ－ｉｍｉｄａｚｏ［４，５－ｃ］ｑｕｉｎｏｌｉｎ－４－ａｍｉｎｅ、Ｎ－（２－{２－［４－ａｍｉｎｏ－２－（ｅｔｈｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）－１Ｈ－ｉｍｉｄａｚｏ［４，５－ｃ］ｑｕｉｎｏｌｉｎ－１－ｙｌ］ｅｔｈｏｘｙ}ｅｔｈｙｌ）－ｎ’－ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｕｒｅａ、Ｎ－{３－［４－ａｍｉｎｏ－２－（ｅｔｈｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）－１Ｈ－ｉｍｉｄａｚｏ［４，５－ｃ］ｑｕｉｎｏｌｉｎ－１－ｙｌ］ｐｒｏｐｙｌ}－ｎ’－（３－ｃｙａｎｏｐｈｅｎｙｌ）ｔｈｉｏｕｒｅａ、Ｎ－［３－（４－ａｍｉｎｏ－２－ｂｕｔｙｌ－１Ｈ－ｉｍｉｄａｚｏ［４，５－ｃ］ｑｕｉｎｏｌｉｎ－ｌ－ｙｌ）－２，２－ｄｉｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐｙｌ］ｂｅｎｚａｍｉｄｅ、２－ｂｕｔｙｌ－１－[３－（ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｐｒｏｐｙｌ]－１Ｈ－ｉｍｉｄａｚｏ[４，５－ｃ]ｑｕｉｎｏｌｉｎ－４－ａｍｉｎｅが挙げられるが、ＴＬＲ７又はＴＬＲ８に結合するものであれば特に限定されない。
　ＮＯＤ様受容体（ＮＬＲ）に結合するリガンド又はアゴニストの具体例としては、例えば、Ｍ－ＴｒｉＤＡＰ、ＰＧＮが挙げられ、その他、ＮＯＤ１に対するリガンド又はアゴニストであって、例えばＴｒｉ－ＤＡＰ、ｉＥ－ＤＡＰ、Ｃ１２－ｉＥが挙げられる。また、ＮＯＤ２に対するリガンド又はアゴニストであって、ＭＤＰ、Ｎ－グリコシル－ＭＤＰ、Ｍｕｒａｂｕｔｉｄｅ、Ｍ－ＴｒｉＬｙＳ－Ｄ－ＡＳＮ、Ｍ－ＴｒｉＬＹＳ、Ｌ１８－ＭＤＰが挙げられる。
　ＲＩＧ様受容体に結合するリガンド又はアゴニストの具体例としては、例えば、５’ｐｐｐ－ｄｓＲＮＡ、ｐｏｌｙ（ｄＡ：ｄＴ）、ｐｏｌｙ（ｄＧ：ｄＣ）、ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）が挙げられるが挙げられる。
　Ｃ型レクチン受容体（ＣＬＲ）に結合するリガンド又はアゴニストの具体例としては、トレハロース６，６－ジベヘン酸塩、ザイモザン、ＷＧＰ、ＨＫＳＣ、ＨＫＣＡならびにカードランＡＬが挙げられる。
　＜抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子のコンジュゲート＞
　本発明において、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子のコンジュゲートにおける抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子の結合の形態は、癌に対する抗腫瘍活性を維持しうる形態であれば特に制限はないが、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子との間にリンカー構造が形成される結合の形態であることが好ましい。
　ここで、リンカーとは、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子を結合しうる化合物を意味する。各種公知のリンカーを用いてもよいし、活性化因子側の構造に適当な化学修飾が施し、直接結合してもよい。
　リンカーの種類ならびに結合方法の詳細は公知の方法に準じて行うことができる（例えば、Ｇｒｅｇ　Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ　Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，　Ｔｈｉｒｄ　ＥｄｉｔｉｏｎならびにＷＯ２００４０１０９５７、ＷＯ２０１４／０１２４７９を参照。）。
　本発明の実施形態において、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体、免疫活性化因子ならびにリンカーに付属する反応基には、以下のものが挙げられる。
　抗体のアミノ酸配列あるいはアミノ酸に修飾されている糖タンパク質に付属する反応基としては、特別な化学的修飾がなされていない限り、第一級アミン（ε－アミノ基）、カルボキシル、チオール（スルフヒドリル）、カルボニル（ケトンまたはアルデヒド）ならびにヒドロキシルが挙げられる。第一級アミンは、ポリペプチドのＮ末端や、リジン残基の側鎖に存在し、生理的条件下で正電荷であり、通常はタンパク質の外側に存在しているためタンパク質の構造を変成させずに結合に用いることができる。カルボキシルは、ポリペプチドのＣ末端や、アスパラギン酸ならびにグルタミン酸の側鎖に存在する。スルフヒドリルは、システインの側鎖に存在し、タンパク質の高次構造を維持するジスルフィド結合を形成している。ケトンまたはアルデヒド基は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムでグリコシルを酸化させることによって糖タンパク質中で作製される。
　本発明のコンジュゲートは、抗体にある前記反応基へ、リンカーを結合させる、リンカーが結合した免疫活性化因子を結合させる、あるいは直接抗体へ免疫活性化因子を結合させることによって作製される。
　リンカーならびに免疫活性化因子に付属する反応基としては下記のものが挙げられる。
　アミンへ反応しうる反応基であるＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル、イミドエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ヒドロキシメチルホスフィン、イソチオシアネート、イソシアネート、アシルアジド、Ｎ－ヒドロキシルエステル、スルホニルクロリド、アルデヒド、グリオキサール、エポキシド、オキシラン、カーボネート、アリール、イミドエステル、カルボジイミドならびに無水カルボン酸。
　カルボキシルならびにアミンへ反応しうる反応基であるカルボジイミド、ジアゾアルカン、ジアゾアセチル化合物、カルボニルジイミダゾール。
　チオールへ反応しうる反応基であるマレイミド、ハロアセトアミド、ピリジルジスルフィド、チオスルフォン、ビニルスルホン、ヘイローアセチル、アジリジン、アクリロイル、アリール。
　アルデヒドへ反応しうる反応基であるヒドラジド、アルコキシアミン。ヒドロキシルへ反応しうる反応基であるエポキシ、オキシラン、カルボニルジイミダゾール、Ｎ, Ｎ’－ジスクシイミジルカーボネート、Ｎ－ヒドロキシスクシニイミジルクロロホルメート、イソシアネート。
　ヒドロキルへ反応しうる反応基であるイソシアネート。
　光反応性の反応基としてジアジリン、アリールアジド、アリール、ベンゾフェノール、ジアゾ化合物。
　上記反応基を有するリンカーとしては、具体的に以下のものが挙げられる。
　同一の反応基末端を有するリンカーとして、Ｎ－ヒドロキシスクシイミドエステルを反応基とするリンカー（例えばＤｉｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　Ｇｌｕｔａｒａｔｅ　（ＤＳＧ）、ｄｉｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　ｓｕｂｅｒａｔｅ（ＤＳＳ）、ｂｉｓ（ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ）ｓｕｂｅｒａｔｅ（ＢＳ３）、ｔｒｉｓ－（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ）ａｍｉｎｏｔｒｉａｃｅｔａｔｅ（ＴＳＡＴ）、ＰＥＧｙｌａｔｅｄ　ｂｉｓ（ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ）ｓｕｂｅｒａｔｅ　（ＢＳ（ＰＥＧ）５、ＢＳ（ＰＥＧ）９）、ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ)（ＤＳＰ）、（ＤＴＳＳＰ）、（ＥＧＳ）、（Ｓｕｌｆｏ－ＥＧＳ）、（ＤＭＡ）、（ＤＭＰ）、（ＤＭＳ）、（ＤＴＢＰ）、（ＤＦＤＮＢ）、（ＤＳＴ）、（ＢＳＯＣＯＥＳ）、（ＥＧＳ）、（Ｓｕｌｆｏ－ＥＧＳ））ならびにマレイミドを反応基とするリンカー（例えば（ＢＭＯＥ）、（ＢＭＢ）、（ＢＭＨ）、（ＴＭＥＡ）、（ＢＭ（ＰＥＧ）２）、（ＢＭ（ＰＥＧ）３）、（ＤＴＭＥ）、（ＤＭＤＢ））が用いられる。
　異なる反応基末端を有する主なリンカーとしては、ＮＨＳエステルとマレイミドを反応基とするリンカー（例えばＡＭＡＳ、ＢＭＰＳ、ＧＭＢＳ、Ｓｕｌｆｏ－ＭＢＳ、ＭＢＳ、Ｓｕｌｆｏ－ＭＢＳ、ＳＭＣＣ、Ｓｕｌｆｏ－ＳＭＣＣ、ＥＭＣＳ、Ｓｕｌｆｏ－ＥＭＣＳ、ＳＭＰＢ、Ｓｕｌｆｏ－ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、Ｓｕｌｆｏ－ＫＭＵＳ、ＳＭ（ＰＥＧ）２、ＳＭ（ＰＥＧ）４、ＳＭ（ＰＥＧ）６、ＳＭ（ＰＥＧ）８、ＳＭ（ＰＥＧ）１２、ＳＭ（ＰＥＧ）２４）、ＮＨＳエステルとピリジルジチオールを反応基とするリンカー（例えば、ＳＰＤＰ、ＬＣ－ＳＰＤＰ、Ｓｕｌｆｏ－ＬＣ－ＳＰＤＰ、ＳＭＰＴ、ＰＥＧ４横ＳＰＤＰ、ＰＥＧ１２－ＳＰＤＰ）、ＮＨＳエステルとハロアセチルを反応基とするリンカー（例えばＳＩＡ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡＢ、Ｓｕｌｆｏ－ＳＩＡＢ）、ＮＨＳエステルとアリールアジドを反応基とするリンカー（例えばＡＮＢ－ＮＯＳ、Ｓｕｌｆｏ－ＳＡＮＰＡＨ、ＡＴＦＢ）、ＮＨＳエステルとジアジリンを反応基とするリンカー（例えばＳＤＡ、Ｓｕｌｆｏ－ＳＤＡ、ＬＣ－ＳＤＡ、ＳＤＡＤ、Ｓｕｌｆｏ－ＳＤＡＤ）、カルボジイミドを反応基とするリンカー（例えばＤＣＣ、ＥＤＣ、ＥＤＡＣ、ＮＨＳ、Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ）、マレイミドとヒドラジドを反応基とするリンカー（例えばＢＭＰＨ、ＥＭＣＨ、ＭＰＢＨ、ＫＭＵＨ）、ピリジルジチオールとヒドラジドを反応基とするリンカー（例えばＰＤＰＨ）、イソシアネートとマレイミドを反応基とするリンカー（例えばＰＭＰＩ）ならびにＮＨＳエステルとソラレンを反応基とするリンカー（例えばＳＰＢ）が用いられる。
　その他のリンカーとして、ポリペプチドを含むリンカー、例えばＦｍｏｃ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ＰＡＢ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＰＡＢ、Ｆｍｏｃ－ＰＥＧ３－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＰＡＢ、Ｆｍｏｃ－ＰＥＧ４－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＰＡＢ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ＰＡＢ－ＰＮＰ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＰＡＢ－ＰＮＰ、Ｆｍｏｃ－ＰＥＧ３－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＰＡＢ－ＰＮＰ、Ａｚｉｄｅ－ＰＥＧ４－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＰＡＢ－ＰＮＰ、Ｍａｌ－ＰＥＧ４－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＰＡＢ－ＰＮＰ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＯＨ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＰＮＰ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＰＮＰなどが用いられる。
　また、Ｂｉｓ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、ＰＥＧ　Ａｃｉｄ（例えばＡｃｉｄ－ＰＥＧ－ＴＥＭＰＯ、Ａｍｉｎｏ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ａｍｉｎｏ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、Ａｍｉｎｏｘｙ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ｃａｒｂｏｘｙ－ＰＥＧ－ｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ、Ｆｍｏｃ－Ｎ－ａｍｉｄｏ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ｆｍｏｃ－Ｎ－ａｍｉｄｏ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、Ｆｍｏｃ－ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ｈｙｄｒｏｘｙ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ｈｙｄｒｏｘｙ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、ｍ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、ｍ－ＰＥＧ－（ＣＨ２）３－ａｃｉｄ、Ｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ－Ｎ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｎ－（ｔ－Ｂｏｃ）－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－（ＣＨ２）３－ａｃｉｄ、ｔ－Ｂｏｃ－Ｎ－ａｍｉｄｏ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、ｔ－Ｂｏｃ－Ｎ－ａｍｉｄｏ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、ｔ－Ｂｏｃ－Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ａｃｉｄ－ＰＥＧ－ＰＦＰ　ｅｓｔｅｒ、Ｍｉｓｃｅｌｌａｎｅｏｕｓ　ＰＥＧ　ａｃｉｄ、）、ＰＥＧ　ＰＦＰ　ｅｓｔｅｒ（例えば、Ａｃｉｄ－ＰＥＧ－ＰＦＰ　ｅｓｔｅｒ、Ｂｉｓ－ＰＥＧ－ＰＦＰ　ｅｓｔｅｒ）、Ｂｉｓ－ＰＥＧ－ＮＨＳ、ＰＥＧ　Ａｌｄｅｈｙｄｅ（例えば、ｍ－ＰＥＧ－ａｌｄｅｈｙｄｅ、ｍ－ＰＥＧ－ｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅ、Ａｌｄ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ａｌｄ－ＰＥＧ－ａｍｉｎｅ、Ａｌｄ－ＰＥＧ－ａｚｉｄｅ、Ａｌｄ－ＰＥＧ－ＮＨ－Ｂｏｃ、Ａｌｄ－ＰＥＧ－ＮＨＳ　ｅｓｔｅｒ、Ａｌｄ－ＰＥＧ－ＴＦＰ　ｅｓｔｅｒ、Ａｌｄ－ＰＥＧ－ｔ－ｂｕｔｙｌ　ｅｓｔｅｒ）、ＰＥＧ　Ｔｏｓｙｌａｔｅ（例えば、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－Ｔｏｓ、Ｈｙｄｒｏｘｙ－ＰＥＧ－Ｔｏｓ、ｍ－ＰＥＧ－Ｔｏｓ、ｔ－Ｂｏｃ－Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－Ｔｏｓ、Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌ－ＰＥＧ－Ｔｏｓ、Ｔｏｓ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ｔｏｓ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、Ｔｏｓ－ＰＥＧ－ａｌｋｙｎｅ、Ｔｏｓ－ＰＥＧ－ｔ－ｂｕｔｙｌ　ｅｓｔｅｒ、Ｔｏｓ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＯ２ｔＢｕ、Ｔｏｓ－ＰＥＧ－Ｔｏｓ、Ｓ－ａｃｅｔｙｌ－ＰＥＧ６－Ｔｏｓ、Ｎ－Ｔｏｓ－Ｎ－（ｔ－ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）－ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ４－Ｔｏｓ、Ｍｓ－ＰＥＧ－Ｍｓ、Ｍｓ－ＰＥＧ－ｔ－ｂｕｔｙｌ　ｅｓｔｅｒ、ＰＥＧ－Ｍｓ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－Ｍｓ）、Ｂｏｃ－ＰＥＧ（例えば、Ａｍｉｎｏ－ＰＥＧ－ｔ－Ｂｏｃ－Ｈｙｄｒａｚｉｄｅ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ｔ－Ｂｏｃ－Ｈｙｄｒａｚｉｄｅ、Ｂｏｃ－ＮＨ－ＰＥＧ－ＮＨ－Ｂｏｃ、Ｂｒｏｍｏａｃｅｔａｍｉｄｏ－ＰＥＧ－Ｂｏｃ－ａｍｉｎｅ、ｍ－ＰＥＧ－ＯＮＨＢｏｃ、Ｍａｌ－Ａｌｋｙｌ－ｔ－Ｂｏｃ－ａｍｉｎｅ、Ｎ－Ｂｏｃ－ＰＥＧ－ａｌｃｏｈｏｌ、Ｎ－Ｂｏｃ－ＰＥＧ－ｂｒｏｍｉｄｅ、Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｎ－（ｔ－Ｂｏｃ）－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、ｔ－Ｂｏｃ－Ｎ－ａｍｉｄｏ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、ｔ－Ｂｏｃ－Ｎ－ａｍｉｄｏ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、ｔ－Ｂｏｃ－Ｎ－Ａｍｉｄｏ－ＰＥＧ－ａｍｉｎｅ、ｔ－Ｂｏｃ－Ｎ－ａｍｉｄｏ－ＰＥＧ－ａｚｉｄｅ、ｔ－Ｂｏｃ－Ｎ－ａｍｉｄｏ－ＰＥＧ－ＮＨＳ　ｅｓｔｅｒ、ｔ－Ｂｏｃ－Ｎ－ａｍｉｄｏ－ＰＥＧ－ｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）、ＰＥＧ　ＮＨＳ　ｅｓｔｅｒ（例えば、Ａｃｉｄ－ＰＥＧ－ＮＨＳ　ｅｓｔｅｒ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ＮＨＳ　ｅｓｔｅｒ、Ｂｉｓ－ＰＥＧ－ＮＨＳ、Ｆｍｏｃ－ＰＥＧ－ＮＨＳ　ｅｓｔｅｒ、ｍ－ＰＥＧ－ＮＨＳ　ｅｓｔｅｒ、ｍ－ＰＥＧ－ＮＨＳ　Ｃａｒｂｏｎａｔｅ、Ｍａｌ－ＰＥＧ－ＮＨＳ　ｅｓｔｅｒ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ＮＨＳ　ｅｓｔｅｒ、ｔ－Ｂｏｃ－Ｎ－ａｍｉｄｏ－ＰＥＧ－ＮＨＳ　ｅｓｔｅｒ、ｔ－Ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ－ＰＥＧ－ＮＨＳ　ｅｓｔｅｒ）、Ｆｍｏｃ－ＰＥＧ（例えばＦｍｏｃ－Ｎ－ａｍｉｄｏ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ｆｍｏｃ－ＮＨ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、Ｆｍｏｃ－ＰＥＧ－ＮＨＳ　ｅｓｔｅｒ）、Ｂｉｏｔｉｎ　ＰＥＧ（例えばＢｉｏｔｉｎ　ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ｂｉｏｔｉｎ　ＰＥＧ－ａｌｃｏｈｏｌ、Ｂｉｏｔｉｎ　ＰＥＧ－ａｌｋｙｎｅ、Ｂｉｏｔｉｎ　ＰＥＧ－ａｍｉｎｅ、Ｂｉｏｔｉｎ　ＰＥＧ－ａｚｉｄｅ、Ｂｉｏｔｉｎ　ＰＥＧ－ＤＢＣＯ、Ｂｉｏｔｉｎ　ＰＥＧ－ｈｙｄｒａｚｉｄｅ、Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ－Ｍａｌ、Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ－ＮＨＳ、Ｂｉｏｔｉｎ－ＥＤＡ－ＰＥＧ－ＮＨＳ、Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ－ｏｘｙａｍｉｎｅ、Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ－ＰＦＰ、Ｂｉｏｔｉｎ－ＥＤＡ－ＰＥＧ－ＰＦＰ、Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ－Ｔｅｔｒａｚｉｎｅ、Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ－ＴＦＰ、Ａｚｉｄｅ－ＳＳ－ｂｉｏｔｉｎ、Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ３－ＳＳ－ａｚｉｄｅ、ＤＢＣＯ－Ｓ－Ｓ－ＰＥＧ３－Ｂｉｏｔｉｎ、Ｄｄｅ　Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ４－Ａｌｋｙｎｅ、Ｄｄｅ　Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ４－Ａｚｉｄｅ、Ｄｄｅ　Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ４－ＤＢＣＯ、Ｄｉａｚｏ　Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ３－Ａｌｋｙｎｅ、Ｄｉａｚｏ　Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ３－Ａｚｉｄｅ、Ｄｉａｚｏ　Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ３－ＤＢＣＯ、Ｄｉｏｌ　Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ３－Ａｌｋｙｎｅ、Ｄｉｏｌ　Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ３－Ａｚｉｄｅ、ＰＣ　Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ３－Ａｌｋｙｎｅ、ＰＣ－Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ４－ＰＥＧ４－Ａｌｋｙｎｅ、ＰＣ－Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ４－ＰＥＧ４－Ａｌｋｙｎｅ、ＰＣ　Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ３－Ａｚｉｄｅ、ＰＣ－Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ４－ＰＥＧ３－Ａｚｉｄｅ、ＰＣ－Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ４－ＮＨＳ　ｃａｒｂｏｎａｔｅ、ＰＣ　ＤＢＣＯ－ＰＥＧ３－Ｂｉｏｔｉｎ、ＷＳＰＣ　Ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ３－ＤＢＣＯ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ　（ｂｉｏｔｉｎ－ＰＥＧ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｎ－ａｍｉｄｏ－（ＰＥＧ－ｂｉｏｔｉｎ）－ａｃｉｄ、ＴＡＭＲＡ－Ａｚｉｄｅ－ＰＥＧ－Ｂｉｏｔｉｎ）、ＰＥＧ　Ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ、Ａｍｉｎｏｏｘｙ　ＰＥＧ（例えばＡｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－ａｌｃｏｈｏｌ、Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－ａｚｉｄｅ、Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－ｂｒｏｍｉｄｅ、Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－ｍｅｔｈａｎｅ、Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ、Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－ｔ－ｂｕｔｙｌ ｅｓｔｅｒ、Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－Ｔｈｉｏｌ、Ｂｉｓ－（Ａｍｉｎｏｏｘｙ）－ＰＥＧ、ｔ－Ｂｏｃ－Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、ｔ－Ｂｏｃ－Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－ａｌｃｏｈｏｌ、ｔ－Ｂｏｃ－Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－ａｍｉｎｅ、ｔ－Ｂｏｃ－Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－Ａｚｉｄｅ、ｔ－Ｂｏｃ－Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－Ｂｒｏｍｉｄｅ、ｔ－Ｂｏｃ－ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－Ｍｅｔｈａｎｅ、ｔ－Ｂｏｃ－ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ、ｔ－Ｂｏｃ－ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－Ｓ－Ａｃ、ｔ－Ｂｏｃ－Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－Ｔｈｉｏｌ、ｔ－Ｂｏｃ－Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－Ｔｏｓ、Ｆｍｏｃ－ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌ－ＰＥＧ－Ａｍｉｎｏｏｘｙ）、Ａｌｋｙｎｅ　ＰＥＧ（例えば、ｅｎｄｏ－ＢＣＮ－ＰＥＧ、ｅｘｏ－ＢＣＮ－ＰＥＧ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－（ＣＨ２）３－ａｃｉｄ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－（ＣＨ２）３－ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－Ａｃｒｙｌａｔｅ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ａｌｃｏｈｏｌ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ａｍｉｎｅ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ、Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ａｚｉｄｅ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ｂｒｏｍｉｄｅ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－Ｍａｌｅｉｍｉｄｅ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－Ｍｓ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ＮＨＳ　ｅｓｔｅｒ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ｔ－ｂｕｔｙｌ　ｅｓｔｅｒ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＯ２ｔＢｕ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ｔｈｉｏｌ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－５－ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ　ｃａｒｂｏｎａｔｅ、ｔ－Ｂｏｃ－ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ、Ｂｉｓ－Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ、ｍ－ＰＥＧ－Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ）、Ａｚｉｄｏ　ＰＥＧ（例えば、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－（ＣＨ２）３－ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－Ａｃｒｙｌａｔｅ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ａｌｃｏｈｏｌ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－（ＣＨ２）３ＯＨ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ａｍｉｎｅ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ａｚｉｄｅ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－Ｍａｌｅｉｍｉｄｅ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ＮＨＳ　ｅｓｔｅｒ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＯ２－ＮＨＳ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ｏｘａｚｏｌｉｄｉｎ－２－ｏｎｅ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ＰＦＰ　ｅｓｔｅｒ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ　ａｃｉｄ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ｔ－Ｂｏｃ-Ｈｙｄｒａｚｉｄｅ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ｔ－ｂｕｔｙｌ　ｅｓｔｅｒ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＯ２－ｔ－ｂｕｔｙｌ　ｅｓｔｅｒ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ＴＦＰ　ｅｓｔｅｒ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－Ｔｏｓ、Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－ａｚｉｄｅ、Ｂｒｏｍｏ－ＰＥＧ－ａｚｉｄｅ、Ｂｒｏｍｏａｃｅｔａｍｉｄｏ－ＰＥＧ－ａｚｉｄｅ、Ｃａｒｂｏｘｙｒｈｏｄａｍｉｎｅ　１１０－ＰＥＧ－Ａｚｉｄｅ、Ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｏ－ＰＥＧ－Ａｚｉｄｅ、Ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｏ－ＰＥＧ－Ａｚｉｄｅ、ｍ－ＰＥＧ－ａｚｉｄｅ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ－ａｚｉｄｅ、ＴＡＭＲＡ－ＰＥＧ－Ａｚｉｄｅ、ｔ－Ｂｏｃ－Ｎ－Ａｍｉｄｏ－ＰＥＧ－Ａｚｉｄｅ、ｔ－Ｂｏｃ－Ａｍｉｎｏｏｘｙ－ＰＥＧ－Ａｚｉｄｅ、Ｔｈｉｏｌ－ＰＥＧ－Ａｚｉｄｅ、Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌ－ＰＥＧ－Ａｚｉｄｅ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ４－４－ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ　ｃａｒｂｏｎａｔｅ、Ｓ－Ａｃｅｔｙｌ－ＰＥＧ３－Ａｚｉｄｏ、Ａｚｉｄｅ、Ｔｒｉｔｙｌ－ＰＥＧ１０－Ａｚｉｄｅ）、Ａｌｋｙｎｅ　ＰＥＧ、ＤＢＣＯ－ＰＥＧ、ＢＣＮ－ＰＥＧ、Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ、Ｂｉｓ－ＰＥＧ－ａｃｉｄ、Ｂｉｓ－ＰＥＧ－ＮＨＳ、Ｂｉｓ－ＰＥＧ－ＰＦＰ、Ｂｉｓ－Ｐｒｏｐａｒｇｙｌ－ＰＥＧ、Ａｍｉｎｅ－ＰＥＧ－Ａｍｉｎｅ、Ａｚｉｄｏ－ＰＥＧ－ａｚｉｄｅ、Ｂｒｏｍｏ－ＰＥＧ、Ｍａｌ　ＰＥＧが用いられる。
　抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子の間に介するリンカーは、単一種で構成されていても複数種で構成されていてもよい。
　本発明である抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子のコンジュゲートを作製する方法としては、抗体のリジン側鎖のε－アミノ基を用いて免疫活性化因子を結合する方法や、抗体のジスルフィド結合を形成しているシステイン残基を還元処理により形成されるチオールを用いて結合する方法がある。
　抗体のリジン残基のε－アミノ基を用いる場合には、例えば活性エステル（例えばＮ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）を反応させてアミド結合を形成させる方法が用いられる。この場合、抗体には多くのリジン残基が存在することから、その結合は非特異的に反応が進む。
　抗体のシステインの側鎖に存在するジスルフィド結合を形成しているチオールを用いる場合には、抗体上にあるジスルフィド結合をメルカプトエタノールなどの還元剤を用いてチオールを生成させてマレイミドあるいはα－ハロアミドと反応させる方法が用いられる。また、チオールを介した結合を安定化させるためには、例えばスルホンフェニルオキサジアゾール、４－シアノエチニルオキシ誘導体などを用いる方法がある。これらの結合はシステインのマレイミドへの共益付加反応による結合よりも長時間安定である。また、チオール基がマレイミドに付加したイミド環が加水分解によって開環し、アミド結合となると安定性が向上するので、イミド基の近傍にアミノ基を有するリンカーを用いることもできる。また、抗体にあるシステインのチオールはジスルフィド結合を形成しており、２つのチオールを介して、その間に免疫活性化因子などを結合させる方法もある。例としては、β位に２つのスルホンをもつアミド基から生じさせることができる２つのジスルフィド結合部位をもつリンカーあるいはジブロモマレイミドを用いて架橋型の結合を形成させることが可能である。
　本発明のコンジュゲートは、例えば、抗体の特定の部分に、決まった数のチオール基を導入できる方法であるＴＨＩＯＭＡＢＴＭ技術を用いる方法がある（Ｎａｔｕｒｅ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　２６，９２５－９３２（２００８）を参照）。
　本発明のコンジュゲートは、例えば、抗体を還元剤ジチオレイトール（ＤＴＴ）用いてリン酸緩衝液中にて還元させることによってチオール反応基を有する抗体を得て、免疫活性化因子とのコンジュゲートを形成させることができる。還元剤を用いる方法の他に、トラウト試薬（２－ＩｍｉｎｏｔｈｉｏｌａｎｅやＮ－Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　Ｓ－Ａｃｅｔｙｌｔｈｉｏａｃｅｔａｔｅ（ＳＡＴＡ））を導入することによって抗体のリジン残基にある第一級アミンへチオール基を付加することで得ることができる。
　抗体に付加されたチオール量は、例えば５，５’－Ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｎｉｃａｃｉｄ）（ＤＴＮＢ）とＳＨ基を含む試料溶液をリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）と蒸留水を混合して、リン酸緩衝液、グッド緩衝液あるいはトリス緩衝液に溶解したＤＴＮＢ溶液を添加し、一定時間インキュベートした後に、４１２ｎｍの吸光度を測定することによって定量できる（Ｇ．Ｌ．Ｅｌｌｍａｎ，　Ａｒｃｈ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．，　８２，　７０　（１９５９）を参照）。
　還元処理によって抗体のジスルフィド結合が切断されて付加されたチオール基は、再度ジスルフィド結合が形成されるのを防ぐための処理（キャッピング）を行うことが好ましい。キャッピングは例えばＮ－エチルマレイミド（ＮＥＭ）やヨードアセトアミド（２－ｉｏｄｏａｃｅｔａｍｉｄｅ（ＩＡＡ））を用いることができる。
　抗体に付加されたチオール基を用いて免疫活性化因子を結合させてコンジュゲートを形成させるためには公知の方法により行うことができる。具体的には、例えば、還元処理した抗体のチオール基と特異的に結合するリンカー試薬として、マレイミド基を有するもの、ブロモアセトアミド基を有するリンカー試薬を用いることで結合することができる。例えばマレイミド基を有するリンカーとしてＮ－スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）が用いられる。この場合、免疫活性化因子にアミノ基が存在することでＳＭＣＣのＮ－スクシンイミド基とアミド結合を形成することでコンジュゲートを得ることができる。
　他の実施形態として、先に活性化因子に存在するアミノ基にＳＭＣＣを用いてアミド結合を形成させ、その後に抗体側に付加したチオール基と免疫活性化因子が結合したＳＭＣＣのマレイミド基とを反応させてコンジュゲートを得ることができる。
　また他の実施形態としては、２つのリンカーを用いることで抗体と免疫活性化因子とのコンジュゲートを形成することも可能である。例えば、抗体側のリジン残基に存在する第一級アミノ基とＳＡＴＡ（Ｎ－スクシンイミジル－Ｓ－アセチルチオアセテート）のＮ－スクシンイミド基とをアミド結合させたものを作製して抗体にチオール基を付加し、免疫活性化因子側にアミノ基が存在するものあるいは定法に従い、アミノ基を付加したものへＳＭＣＣを反応させてＳＭＣＣにあるＮ－スクシンイミド基とアミド結合を形成させたものを合成し、免疫活性化因子が結合したＳＭＣＣにあるマレイミド基と抗体が結合したＳＡＴＡにあるチオール基との反応によりコンジュゲートを得ることができる。
　他の実施形態として、抗体と免疫活性化因子とのコンジュゲートの作製には、例えばマレイミドカプロイル?バリン?シトルリン?ｐ?アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ）をリンカーとして用いる方法が挙げられる。ＭＣ－ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢは、細胞内のプロテアーゼ（例えばカテプシンＢ）により切断可能なリンカーである。リン酸緩衝液中に溶解した抗体へＤＴＴなどを用いてチオール基を付加しておく。一方でアミノ基を有する免疫活性化因子にＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢにあるベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）を反応させ、ＭＣ－ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢを結合させた免疫活性化因子を作製し、前述のチオールを付加した抗体へと反応させてコンジュゲートを得ることができる。
　さらに別な実施形態としては、抗体のリジン残基にある一級アミノ基にＳＡＴＡを結合させてチオール基を付加し、一方でスクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）を、アミノ基を有する免疫活性化因子と反応させ、ＳＰＤＰにあるＮ－スクシンイミド基とアミド結合させたもの
リンカーが結合した抗体を含んだ組成物を得るためには、例えばゲル濾過クロマトグラフィーなどに供することで、リンカーを結合する前の抗体と比較して、より高分子化したピークを分取することで得ることできる。
　本発明の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子のコンジュゲートの１抗体当たりに結合した免疫活性化因子の数は、公知の方法に基づき質量分析、ＥＬＩＳＡ法、電気泳動法ならびにＨＰＬＣなどの方法を用いて特徴づけることができる。
　＜コンジュゲートの抗腫瘍効果＞
　本発明の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子とのコンジュゲートは、インビトロあるいはインビボで、細胞障害活性を有する。よって本発明のコンジュゲートの抗腫瘍効果は、癌に対する細胞障害活性を調べることによって知ることが可能である。細胞障害活性は、癌を有する生体へコンジュゲートを投与し、投与後の腫瘍の大きさを計測して、癌の大きさを経時的に調べる事によって評価できる。本発明の抗腫瘍効果は、生存率を調べることによっても評価できる。また、サイトカインあるいはケモカインの産生能を調べる事によっても評価できる。本発明のコンジュゲートの抗腫瘍効果は、さらに癌の予防、転移の予防あるいは再発の予防を調べることによって知ることができる。
　本発明のコンジュゲートは、癌細胞表面上のＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質との結合親和性が高いほうが、より強い抗腫瘍効果が期待できる。結合定数（親和定数）Ｋａ（ｋｏｎ／ｋｏｆｆ）が、好ましくは、少なくとも１０７Ｍ－１、少なくとも１０８Ｍ－１、少なくとも５×１０８Ｍ－１、少なくとも１０９Ｍ－１、少なくとも５×１０９Ｍ－１、少なくとも１０１０Ｍ－１、少なくとも５×１０１０Ｍ－１、少なくとも１０１１Ｍ－１、少なくとも５×１０１１Ｍ－１、少なくとも１０１２Ｍ－１、あるいは、少なくとも１０１３Ｍ－１であることが望ましい。
　本発明のコンジュゲートがＣＡＰＲＩＮ－１に結合する能力は、例えば、ＥＬＩＳＡ法、ウエスタンブロット法、免疫蛍光及びフローサイトメトリー法等を用いた結合アッセイを利用して特定することができる。
　本発明のコンジュゲートは、前述の通り抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体単独よりも抗腫瘍効果が増強するが、その増強率は、好ましくは３０％以上、より好ましくは４０％以上、さらに好ましくは５０％以上、さらにより好ましくは５５％以上、さらにより好ましくは６０％以上、さらにより好ましくは６５％以上、最も好ましくは７０％以上である。本発明のコンジュゲートの抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体単独に対する抗腫瘍効果の増強率は、それぞれ有効量を担癌マウスに同条件で投与し、投与開始後、１０日目以降における腫瘍体積を比較することで算出することができる。
　＜医薬組成物、及び癌の治療及び／又は予防方法＞
　本発明の癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物の標的は、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質を発現する癌（細胞）であれば特に限定されない。
　本明細書で使用される「腫瘍」及び「癌」という用語は、悪性新生物を意味し、互換的に用いられる。
　本発明において対象となる癌としては、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質を細胞膜表面上に発現している癌であればいかなる癌であってもよい。好ましくは前述の乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、肝臓癌、胆嚢癌、肉腫、肥満細胞腫、メラノーマ、副腎皮質癌、ユーイング腫瘍、ホジキンリンパ腫、中皮腫、多発性骨髄腫。睾丸癌、甲状腺癌、頭頸部癌である。
　前記癌は、より具体的には、例えば、乳線癌、複合型乳腺癌、乳腺悪性混合腫瘍、乳管内乳頭状腺癌、肺腺癌、扁平上皮癌、小細胞癌、大細胞癌、神経上皮組織性腫瘍である神経膠腫、膠芽腫、神経芽腫、脳室上衣腫、神経細胞性腫瘍、胎児型の神経外胚葉性腫瘍、神経鞘腫、神経線維腫、髄膜腫、慢性型リンパ球性白血病、リンパ腫、消化管型リンパ腫、消化器型リンパ腫、小～中細胞型リンパ腫、盲腸癌、上行結腸癌、下行結腸癌、横行結腸癌、Ｓ状結腸癌、直腸癌、卵巣上皮癌、胚細胞腫瘍、間質細胞腫瘍、膵管癌、浸潤性膵管癌、膵臓癌の腺癌、腺房細胞癌、腺扁平上皮癌、巨細胞腫、膵管内乳頭粘液性腫瘍、粘液性嚢胞腺癌、膵芽腫、膵頭細胞腫、Ｆｒａｎｔｓ腫瘍、漿液性嚢胞腺癌、固体乳頭状癌、ガストリノーマ、グルカゴノーマ、インスリノーマ、多発性内分泌腺腫症１（Ｗｅｒｍｅｒ症候群）、非機能性島細胞腫、ソマトスタチノーマ、ＶＩＰ産生腫瘍、子宮頸癌、子宮体癌、線維肉腫、骨・関節肉種、ユーイング肉腫、ウィルムス腫瘍、肝芽腫、軟部肉腫、急性白血病、慢性白血病、脊髄腫瘍、軟部悪性腫瘍、奇形腫群腫瘍、頭頸部癌には、下咽頭癌、中咽頭癌、舌癌、上咽頭癌、口腔癌、口唇癌、副鼻腔癌、喉頭癌等が包含されるが、これらに限定されない。
　また、対象となる好ましい被験者（患者）は、哺乳動物であり、例えば霊長類、ペット動物、家畜類、競技用動物等を含む哺乳動物であり、特にヒト、イヌ及びネコが好ましい。
　本発明で用いられるコンジュゲートを医薬組成物として用いる場合には、当業者に公知の方法で製剤化することが可能である。例えば水もしくはそれ以外の薬学的に許容しうる液との無菌性溶液、又は懸濁液剤の注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、薬理学上許容される担体又は媒体、具体的には、減菌水や生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、芳香剤、賦形剤、結合剤等と適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することが考えられる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な用量が得られるようにするものである。
　注射のための無菌組成物は注射用蒸留水のようなベヒクルを用いて通常の製剤実施に従って処方することができる。注射用の水溶液としては、例えば生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液、例えばＤ－ソルビトール、Ｄ－マンノース、Ｄ－マンニトール、塩化ナトリウムが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール、具体的にはエタノール、ポリアルコール、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート８０（ＴＭ）、ＨＣＯ－６０と併用してもよい。油性液としてはゴマ油、大豆油があげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールと併用してもよい。また、緩衝剤、例えばリン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液、無痛化剤、例えば、塩酸プロカイン、安定剤、例えばベンジルアルコール、フェノール、酸化防止剤と配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填させる。油性液としてはゴマ油、大豆油があげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールと併用してもよい。また、緩衝剤、例えばリン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液、無痛化剤、例えば、塩酸プロカイン、安定剤、例えばベンジルアルコール、フェノール、酸化防止剤と配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填させる。
　投与は、経口又は非経口であり、好ましくは非経口投与であり、具体的には、注射剤型、経鼻投与剤型、経肺投与剤型、経皮投与型などが挙げられる。注射剤型の例としては、例えば、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、腫瘍内注射などにより全身又は局部的に投与することができる。
　また、患者の年齢、体重、性別、症状などにより適宜投与方法を選択することができる。抗体又は抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する医薬組成物の投与量としては、例えば、一回につき体重１ｋｇあたり０．０００１ｍｇから１０００ｍｇの範囲で選ぶことが可能である。あるいは、例えば、患者あたり０．００１～１０００００ｍｇ／ｂｏｄｙの範囲で投与量を選ぶことができるが、これらの数値に必ずしも制限されるものではない。投与量、投与方法は、患者の体重、年齢、性別、症状などにより変動するが、当業者であれば適宜選択することが可能である。
　本発明のコンジュゲートを有効成分として含む癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物を被験者に投与することによって、前述のＣＡＰＲＩＮ－１を細胞膜表面に発現する癌、好ましくは乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、肝臓癌、胆嚢癌、肉腫、肥満細胞腫、メラノーマ、副腎皮質癌、ユーイング腫瘍、ホジキンリンパ腫、中皮腫、多発性骨髄腫。睾丸癌、甲状腺癌、又は頭頸部癌を治療及び／又は予防することができる。
　以下、本発明を実施例に基づき具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの具体例によって制限されないものとする。
　実施例１　抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体
　コンジュゲートに用いるＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体は、ＷＯ２０１０／０１６５２６の実施例３に従って作製した配列番号２および配列番号４で示されるヒトＣＡＰＲＩＮ－１組換えタンパク質１ｍｇを等容量の不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）溶液と混合し、これを２週間毎に４回、ウサギの皮下に投与を行った。その後血液を採取し、ポリクローナル抗体を含む抗血清を得た。得られた抗血清を、プロテインＧ担体（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス）を用いて精製し、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に対するポリクローナル抗体（抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃１）を得た。また、抗原を投与していないウサギの血清を上記と同様にしてプロテインＧ担体を用いて精製したものをウサギコントロール抗体とした。
　ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に対する上記ポリクローナル抗体の作製方法と同様の方法にて、以下のＣＡＰＲＩＮ－１の部分ポリペプチドに対するポリクローナル抗体＃２～＃６を得た。
　配列番号ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質ＷＯ２０１１／０９６５２８に記載されている配列番号３７（本明細書の配列番号３１）で表される部分ポリペプチドに対する抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃２、ＷＯ２０１３／０１８８９４に記載されている配列番号５（本明細書の配列番号３２）で表される部分ポリペプチドに対する抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃３、ＷＯ２０１３／１２５６５４に記載されている配列番号５（本明細書の配列番号３３）で表される部分ポリペプチドに対する抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃４、ＷＯ２０１１／０９６５３３に記載されている配列番号３７（本明細書の配列番号３４）で表される部分ポリペプチドに対する抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃５、ＷＯ２０１１／０９６５３４に記載されている配列番号３７（本明細書の配列番号３５）で表される部分ポリペプチドに対する抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃６。
　実施例２　抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体
　本発明のコンジュゲートに用いる抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体は以下のものを用いた。
　ＷＯ２０１１／０９６５２８に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４０、配列番号４１及び配列番号４２ならなる抗体（例えば、前記重鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号３９で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、前記軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号４３で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体）。
　ＷＯ２０１５／０２０２１２に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４４、配列番号４５及び配列番号４６のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４８、配列番号４９及び配列番号５０ならなる抗体（例えば、前記重鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号４７で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、前記軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号５１で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体）。
　ＷＯ２０１１／０９６５１９に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号５２、配列番号５３及び配列番号５４のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号５６、配列番号５７及び配列番号５８ならなる抗体（例えば、前記重鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号５５で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、前記軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号５９で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体）。
　ＷＯ２０１３／１２５６５４に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号６０、配列番号６１及び配列番号６２のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号６４、配列番号６５及び配列番号６６ならなる抗体（例えば、前記重鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号６３で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、前記軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号６７で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体）。
　ＷＯ２０１１／０９６５１７に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号６８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号６９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１１／０９６５２８に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号７０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号７１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号７２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号７３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号７４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号７５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号７６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号７７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号７８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号７９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１１／０９６５３３に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号８０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号８１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号８２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号８３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１１／０９６５３４に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号８４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号８５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号８６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号８７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１０／０１６５２６に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号８８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号８９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号９０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号９１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号９２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号９３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号９４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号９５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号９６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号９７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号９８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号９９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１００のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１０１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／０１８８９４に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１０２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１０３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１０４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１０５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／０１８８９２に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１０６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１０７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／０１８８９１に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１０８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１０９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／０１８８８９に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１１０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／０１８８８３に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１１２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／１２５６３６に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１１４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／１２５６５４に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１１６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１１８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／１２５６３０に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１２０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１５／０２０２１２に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１２２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１２４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１２６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１２８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１３０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１３１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１３２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１３３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　上記、抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体のうち、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８のアミノ酸配列からなり、フレームワーク領域がヒト抗体の配列を含む重鎖可変領域を発現できるように、塩基配列を設計し、これをヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域が挿入された哺乳類発現用ベクターに挿入した。同様にして、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４０、配列番号４１及び配列番号４２ならなり、フレームワーク領域がヒト抗体の配列を含む軽鎖可変領域を発現できるように、塩基配列を設計し、これをヒトＩｇＧ１の軽鎖定常領域が挿入された哺乳類発現用ベクターに挿入した。上記２つの組換え発現ベクターを常法に従って哺乳類細胞に導入して、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４０、配列番号４１及び配列番号４２からなるＣＡＰＲＩＮ－１に対するヒト化モノクローナル抗体＃１（ヒト化抗体＃１）を含む培養上清を得た。
　同様にして、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４４、配列番号４５及び配列番号４６のアミノ酸配列からなり、フレームワーク領域がヒト抗体の配列を含む配列番号４７で表される重鎖可変領域を発現できるように、塩基配列を設計し、これをヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域が挿入された哺乳類発現用ベクターに挿入した。同様にして、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４８、配列番号４９及び配列番号５０のアミノ酸配列からなり、フレームワーク領域がヒト抗体の配列を含む配列番号５１で表される重鎖可変領域を発現できるように、塩基配列を設計し、これをヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域が挿入された哺乳類発現用ベクターに挿入し、上記２つの組換え発現ベクターを常法に従って哺乳類細胞に導入して、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３が配列番号４４、配列番号４５及び配列番号４６のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４８、配列番号４９及び配列番号５０のアミノ酸配列とからなるヒト化抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体＃２（ヒト化抗体＃２）を含む培養上清を得た。
　同様にして、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号５２、配列番号５３及び配列番号５４のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号５６、配列番号５７及び配列番号５８とからなるヒト化抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体＃３（ヒト化抗体＃３）を含む培養上清を得た。
　同様にして、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号６０、配列番号６１及び配列番号６２のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号６４、配列番号６５及び配列番号６６とからなるヒト化抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体＃４（ヒト化抗体＃４）を含む培養上清を得た。
　同様にして、以下のヒト化抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体＃９～＃４１（ヒト化抗体＃９～＃４１）を含む培養上清を得た。
　配列番号６８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号６９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃９（ヒト化抗体＃９）。
　配列番号７０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号７１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃１０（ヒト化抗体＃１０）。
　配列番号７２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号７３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃１１（ヒト化抗体＃１１）。
　配列番号７４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号７５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃１２（ヒト化抗体＃１２）。
　配列番号７６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号７７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃１３（ヒト化抗体＃１３）。
　配列番号７８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号７９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃１４（ヒト化抗体＃１４）。
　配列番号８０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号８１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃１５（ヒト化抗体＃１５）。
　配列番号８２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号８３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃１６（ヒト化抗体＃１６）。
　配列番号８４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号８５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃１７（ヒト化抗体＃１７）。
　配列番号８６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号８７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃１８（ヒト化抗体＃１８）。
　配列番号８８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号８９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体ヒト化モノクローナル抗体＃１９（ヒト化抗体＃１９）。
　配列番号９０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号９１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃２０（ヒト化抗体＃２０）。
　配列番号９２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号９３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃２１（ヒト化抗体＃２１）。
　配列番号９４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号９５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃２２（ヒト化抗体＃２２）。
　配列番号９６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号９７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃２３（ヒト化抗体＃２３）。
　配列番号９８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号９９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃２４（ヒト化抗体＃２４）。
　配列番号１００のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１０１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃２５（ヒト化抗体＃２５）。
　配列番号１０２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１０３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃２６（ヒト化抗体＃２６）。
　配列番号１０４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１０５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃２７（ヒト化抗体＃２７）。
　配列番号１０６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１０７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃２８（ヒト化抗体＃２８）。
　配列番号１０８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１０９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃２９（ヒト化抗体＃２９）。
　配列番号１１０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃３０（ヒト化抗体＃３０）。
　配列番号１１２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃３１（ヒト化抗体＃３１）。
　配列番号１１４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃３２（ヒト化抗体＃３２）。
　配列番号１１６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃３３（ヒト化抗体＃３３）。
　配列番号１１８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃３４（ヒト化抗体＃３４）。
　配列番号１２０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃３５（ヒト化抗体＃３５）。
　配列番号１２２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃３６（ヒト化抗体＃３６）。
　配列番号１２４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃３７（ヒト化抗体＃３７）。
　配列番号１２６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃３８（ヒト化抗体＃３８）。
　配列番号１２８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃３９（ヒト化抗体＃３９）。
　配列番号１３０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１３１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃４０（ヒト化抗体＃４０）。
　配列番号１３２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１３３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含むヒト化モノクローナル抗体＃４１（ヒト化抗体＃４１）。
　また、上記、抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体のうち、ヒト化抗体＃１について重鎖可変領域重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８のアミノ酸配列からなり、フレームワーク領域がヒト抗体の配列を含む重鎖可変領域を発現できるように、塩基配列を設計し、これを、ＥＵナンバリング２３９番目のアミノ酸であるセリン（Ｓｅｒ）がアスパラギン酸（Ａｓｐ）に置換されており、且つＥＵナンバリング３３２番目のアミノ酸であるイソロイシン（Ｉｌｅ）がグルタミン酸（Ｇｌｕ）に置換されたヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域が挿入された哺乳類発現用ベクターに挿入した。また、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４０、配列番号４１及び配列番号４２からなり、フレームワーク領域がヒト抗体の配列を含む軽鎖可変領域のアミノ酸配列を発現できるように塩基配列を設計し、これをヒトＩｇＧ１の軽鎖定常領域が挿入された哺乳類発現用ベクターに挿入した。上記２つの組換え発現ベクターを常法に従って哺乳類細胞に導入して、上記で作製した重鎖可変領域とＥＵナンバリング２３９番目のアミノ酸であるセリン（Ｓｅｒ）がアスパラギン酸（Ａｓｐ）に置換されており、且つＥＵナンバリング３３２番目のアミノ酸であるイソロイシン（Ｉｌｅ）がグルタミン酸（Ｇｌｕ）に置換されたヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域からなる重鎖全長アミノ酸配列と、上記で作製した軽鎖可変領域とヒト軽鎖定常領域からなる軽鎖全長アミノ酸配列とからなるヒト化ＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体＃５（ヒト化抗体＃５）を含む培養上清を得た。
　同様にして、上記で作製したヒト化抗体＃２の重鎖可変領域のアミノ酸配列と、軽鎖可変領域のアミノ酸配列とからなるヒト化抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体＃６（ヒト化抗体＃６）を含む培養上清を得た。
　同様にして、上記で作製したヒト化抗体＃３の重鎖可変領域のアミノ酸配列と、軽鎖可変領域のアミノ酸配列とからなるヒト化抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体＃７（ヒト化抗体＃７）を含む培養上清を得た。
　同様にして、上記で作製したヒト化抗体＃４の重鎖可変領域のアミノ酸配列と、軽鎖可変領域のアミノ酸配列とからなるヒト化抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体＃８（ヒト化抗体＃８）を含む培養上清を得た。
　同様にして、上記で作製したヒト化抗体＃９～＃４１のそれぞれの重鎖可変領域のアミノ酸配列と、軽鎖可変領域のアミノ酸配列とからなるヒト化抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃４２～＃７４（ヒト化抗体＃４２～＃７４）をそれぞれ含む培養上清を得た。
　得られたヒト化抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体＃１～＃７４を含む培養上清を常法に従ってＨｉｔｒａｐ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ（ＧＥヘルスケア社製）を用いて精製し、ＰＢＳ（－）に置換して０．２２μｍのフィルター（ミリポア社製）で濾過したものを調製した。
　実施例３　抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子とのコンジュゲートの作製
　実施例１に記載の抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃１～＃６と免疫活性化因子であるＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲートを、マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＰＮＰ）をリンカーとして用いて作製した。本コンジュゲートは、ＷＯ２０１４／０１２４７９に記載されている方法を参照した。
　ＰＢＳ（－）に溶解している実施例１に記載の抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃０、２０ｍｇ／ｍＬをｐＨ８．０の５００ｍＭのホウ酸ナトリウムおよび５００ｍＭの塩化ナトリウム溶液に置換し、１００ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）で、３７℃で３０分間インキュベートした後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ２５を用いて１ｍＭのジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）を含んだＰＢＳ（－）溶液に置換して氷冷し、還元された抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃０を得た。
　１抗体あたりのチオール量（チオール／抗体比）は、ＤＴＮＢと反応させて、４１２ｎｍの吸光度ならびに、２８０ｎｍの吸光度を計測することによって算出した。
　Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ（ＥＮＺＯ）とＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－ＰＮＰ（Ｍｅｄｃｈｅｍ　Ｅｘｐｒｅｓｓ）をＤＭＳＯ中で混合し、Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ側のアミノ基とＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－ＰＮＰにあるベンジルオキシカルボニルを反応させてＭＣ－ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢが結合したＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄ溶液を得て、上記にて作製した還元された抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃１に添加して反応させた。反応後、過剰量のマレイミドを加えて反応を停止し、実施例１に記載の抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃１とＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄのコンジュゲートを含む溶液を得た。得られたコンジュゲートを、限外濾過法により濃縮し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ２５により脱塩してＰＢＳ（－）溶液に置換し、０．２２μｍのフィルターで濾過滅菌して、抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃１とＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄのコンジュゲート（コンジュゲート１）を含む溶液を得た。
　上記と同様の操作で、抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃２とＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄのコンジュゲート（コンジュゲート２）、抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃３とＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄのコンジュゲート（コンジュゲート３）、抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃４とＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄのコンジュゲート（コンジュゲート４）、抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃５とＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄのコンジュゲート（コンジュゲート５）、抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃６とＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄのコンジュゲート（コンジュゲート６）を含む溶液を得た。
　上記と同様の操作で、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質には反応しない実施例１に記載のウサギコントロール抗体についても同様の方法でウサギコントロール抗体とＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄのコンジュゲート（コントロールコンジュゲート１）を含む溶液を得た。
　また、上記と同様の方法を用いて、実施例２に記載の抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体であるヒト化抗体＃１を用いて、免疫活性化因子Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲート（コンジュゲート７）を含む溶液を得た。
　同様にして、実施例２に記載の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体の一つであるヒト化抗体＃２を用いて、免疫活性化因子Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲート（コンジュゲート８）を含む溶液を得た。
　上記と同様にして、実施例２に記載のヒト化抗体＃３を用いて、免疫活性化因子Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲート（コンジュゲート９）を、ヒト化抗体＃４を用いて、免疫活性化因子Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲート（コンジュゲート１０）を、ヒト化抗体＃５を用いて、免疫活性化因子Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲート（コンジュゲート１１）を、ヒト化抗体＃６を用いて、免疫活性化因子Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲート（コンジュゲート１２）を、ヒト化抗体＃７を用いて、免疫活性化因子Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲート（コンジュゲート１３）を、ヒト化抗体＃８を用いて、免疫活性化因子Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲート（コンジュゲート１４）を、ヒト化抗体＃９～＃７４を用いて、免疫活性化因子Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲート（コンジュゲート４５～コンジュゲート１１０）含む溶液をそれぞれ得た。
　得られた上記コンジュゲート１～１４、コンジュゲート４５～１１０ならびにコントロールコンジュゲート１を含む溶液を０．２２μｍのフィルター（ミリポア社製）で濾過したものを調製した。
　実施例４　抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子とのコンジュゲートの作製
　実施例１に記載の抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体と免疫活性化因子とのコンジュゲートを以下の方法にて作製した。免疫活性化因子としては、Ｒｅｓｉｑｉｏｍｏｄにある三級水酸基へ２炭素増炭してアミノ基を付けたＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄ誘導体である１－（２（２－Ａｍｉｎｏｅｔｈｏｘｙ）－２－ｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐｙｌ）－２－（ｅｔｈｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）－１Ｈ－ｉｍｉｄａｚｏ［４，５－ｃ］ｑｕｉｎｏｌｉｎ－４－ａｍｉｎｅを定法に従い合成し、作製した。
　具体的には、Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄと乾燥アセトニトリル、トリエチルアミン、トリチルクロリドを添加して、アルゴン雰囲気下にて反応を行い、反応後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。精製したものを脱水ＤＭＦに溶解して、３-Ｂｏｃ－１，２，３－オキサチアゾリジン　２，２－ジオキシドを添加して反応させた。定法に従い、水層を酢酸エチルで抽出して有機層を得て、カラムクロマトグラフィーで精製し、前記Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄｏの誘導体を得た。
　次に、得られたＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄｏの誘導体と、リンカーの一つである、スクシイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキレート（ＳＭＣＣ）結合させるため、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００８，５１，６９１６－６９２６に記載の方法を参照して、以下の操作を行った。
　アルゴン雰囲気下にて、上記Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄｏの誘導体を、脱水ジクロロメタンに溶解し、ジイソプロピルエチルアミンとＳＭＣＣを添加した、室温にて２時間反応させた。反応液を精製して、ＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄにＳＭＣＣが結合した縮合体を得た。
　上記のＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄにリンカーＳＭＣＣが結合した縮合体と、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体のコンジュゲートを米国特許８，９５１，５２８に記載されている方法ならびにＪＩＭＤ　Ｒｅｐｏｒｔｓ－Ｃａｓｅ　ａｎｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１２／５を参照して、定法に従い作製した。
　具体的には、リン酸緩衝液中に溶解された抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃１へ、抗体に対して１０倍モル質量のＤＭＳＯに溶解したＮ－Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　Ｓ－Ａｃｅｔｙｌｔｈｉｏａｃｅｔａｔｅ（ＳＡＴＡ）（Ｔｈｅｒｍｏ）を添加して、ｐＨ８にて３０分間、室温にて反応させたのち、脱塩カラム（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いて、１０ｍＭのＥＤＴＡを含むリン酸緩衝液に置換し、ＳＡＴＡが結合した抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃１を含む溶液を得た。前記溶液へ０．５Ｍ　Ｈｙｄｒｏｘｙｌａｍｉｎｅと２５ｍＭのＥＤＴＡを含むリン酸緩衝液を前記溶液に対して１０％容量添加し、室温にて２時間反応させて脱アセチル化した。脱アセチル化したＳＡＴＡが結合した抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃１を含む溶液を前記と同様に脱塩カラムを用いてリン酸緩衝液に置換してチオール基が付加された抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体を含む溶液を得た。
　前記抗体に対して１０～５０倍モル質量のＤＭＳＯに溶解された、前記にて作製した縮合体を添加し、室温にて１時間反応させた。反応後、脱塩カラムを用いてＰＢＳ（－）溶液に置換し、限外濾過カラムを用いて濃縮して、０．２μｍのフィルターで濾過滅菌することで、実施例１に記載の抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃１と前記Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄの誘導体とのコンジュゲート（コンジュゲート１５）を含む溶液を得た。
　上記と同様の方法を用いて、抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃２を用いた上記と前記Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄの誘導体とのコンジュゲート（コンジュゲート１６）を、抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃３を用いた上記と免疫活性化因子とのコンジュゲート（コンジュゲート１７）を、抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃４を用いた上記と免疫活性化因子とのコンジュゲート（コンジュゲート１８）を、抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃５を用いた上記と免疫活性化因子とのコンジュゲート（コンジュゲート１９）を、抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃６を用いた上記と免疫活性化因子とのコンジュゲート（コンジュゲート２０）を含む溶液を得た。
　さらに上記と同様の方法を用いて、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質には反応しない実施例１に記載のウサギコントロール抗体についても同様の方法でウサギコントロール抗体を用いたコンジュゲート（コントロールコンジュゲート２）を含む溶液を得た。
　また、上記と同様の方法を用いて、実施例２に記載の抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体の一つであるヒト化抗体＃１について、前記Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄの誘導体とのコンジュゲート（コンジュゲート２１）を含む溶液を得た。
　同様にして、実施例２に記載の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体の一つであるヒト化抗体＃２について、前記Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄの誘導体とのコンジュゲート（コンジュゲート２２）を含む溶液を得た。
　上記と同様にして、実施例２に記載の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体であるヒト化抗体＃３について、上記免疫活性化因子とのコンジュゲート（コンジュゲート２３）を、ヒト化抗体＃４について、上記免疫活性化因子とのコンジュゲート（コンジュゲート２４）を、ヒト化抗体＃５について、上記免疫活性化因子とのコンジュゲート（コンジュゲート２５）を、ヒト化抗体＃６について、上記免疫活性化因子とのコンジュゲート（コンジュゲート２６）を、ヒト化抗体＃７について、上記免疫活性化因子とのコンジュゲート（コンジュゲート２７）を、ヒト化抗体＃８について、上記免疫活性化因子とのコンジュゲート（コンジュゲート２８）を含む溶液を得た。
　上記と同様にして、ヒト化抗体＃９～＃７４について、上記免疫活性化因子とのコンジュゲート（コンジュゲート１１１～コンジュゲート１７６）を含む溶液をそれぞれ得た。
　得られた上記コンジュゲート１５～２８、コンジュゲート１１１～１７６ならびにコントロールコンジュゲート２を含む溶液を０．２２μｍのフィルター（ミリポア社製）で濾過したものを調製した。
　実施例５　コンジュゲートのＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質ならびにＣＡＰＲＩＮ－１発現癌細胞への特異的反応性
　実施例３にて作製した、コンジュゲート１～コンジュゲート１４、コンジュゲート４５～コンジュゲート１１０ならびに実施例４にて作製したコンジュゲート１５～コンジュゲート２８、コンジュゲート１１１～コンジュゲート１７６のＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質への特異的反応性と、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質が発現しているヒト癌細胞ならびにマウス癌細胞の細胞膜表面に反応性を示すことを評価した。
　ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質への特異的反応性はＥＬＩＳＡ法を用いて確認した。ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質溶液１μｇ／ｍＬを９６穴プレート１ウェル当たりに１００μＬ添加し、４℃にて１８時間静置した。各ウェルをＰＢＳ－Ｔで３回洗浄後、０．５％　Ｂｏｖｉｎｅ　Ｓｅｒｕｍ　Ａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ）溶液を１ウェル当たり４００μＬ添加して室温にて３時間静置した。溶液を除いて、１ウェル当たり４００μＬのＰＢＳ－Ｔでウェルを３回洗浄後、コンジュゲート１～コンジュゲート６、コンジュゲート１５～コンジュゲート２０、コントロールコンジュゲート１ならびにコントロールコンジュゲート２を含んだ溶液をそれぞれ１ウェル当たり１００μＬ添加し、室温にて２時間静置した。ＰＢＳ－Ｔで各ウェルを３回洗浄した後、ＰＢＳで５０００倍に希釈したＨＲＰ標識抗ウサギ抗体を１ウェル当たり１００μＬ添加して室温にて１時間静置した。ＰＢＳ－Ｔでウェルを３回洗浄した後、ＴＭＢ基質溶液を１ウェル当たり１００μＬ添加して１５～３０分間静置して発色反応を行った。発色後、１規定硫酸を１ウェル当たり１００μＬ添加して反応を停止させ、吸光度計を用いて４５０ｎｍと５９５ｎｍの吸光度値を測定した。その結果、コンジュゲート１～コンジュゲート６、コンジュゲート１５～コンジュゲート２０は、陰性コントロールであるコントロールコンジュゲート１ならびにコントロールコンジュゲート２に比べて吸光度値が高く、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に特異的に反応を示すことが確認できた。
　次に、ＣＡＰＲＩＮ－１が発現している癌細胞の、細胞膜表面への反応性は、フローサイトメトリー法にて確認した。２×１０５個のヒト乳癌細胞ＢＴ－４７４（ＡＴＣＣから入手）ならびにマウス乳癌細胞４Ｔ１（ＡＴＣＣから入手）を１．５ｍｌ容のミクロ遠心チューブにて遠心分離し、これにコンジュゲート１～コンジュゲート６、コンジュゲート１５～コンジュゲート２０、コントロールコンジュゲート１ならびにコントロールコンジュゲート２を含んだ溶液１００μＬをそれぞれ別のチューブに添加し、氷上で１時間静置した。ＰＢＳで洗浄した後、０．５％のＦＢＳを含むＰＢＳ（－）（０．５％　ＦＢＳ－ＰＢＳ（－））で１００倍希釈したＡｌｅｘａ４８８標識抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）を添加し、氷上で１時間静置した。０．５％　ＦＢＳ－ＰＢＳ（－）で洗浄後、細胞を０．２μｇ／ｍＬのＰｒｏｐｉｄｉｕｍ　ｉｏｄｉｄｅと０．５％　ＦＢＳ－ＰＢＳ（－）に細胞を懸濁して、ＦＡＣＳＶｅｒｓｅＴＭ（ベクトン・ディッキンソンアンドカンパニー）で蛍光強度を測定した。その結果、抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体と免疫活性化因子のコンジュゲートである、コンジュゲート１～コンジュゲート６ならびにコンジュゲート１５～コンジュゲート２０は、陰性コントロールであるコントロールコンジュゲート１ならびにコントロールコンジュゲート２に比べて蛍光強度が高い、すなわちＣＡＰＲＩＮ－１が発現しているヒト癌細胞ＢＴ４７４ならびにマウス癌細胞４Ｔ１の細胞表面に強く反応することが確認できた。
　同様にして、上記コンジュゲートの各種ヒト癌細胞ならびにマウス癌細胞への反応性を確認した。ＣＡＰＲＩＮ－１の遺伝子の発現が確認されているヒト癌細胞である、乳癌細胞（ＢＴ－４７４）、大腸癌細胞（ＨＴ－２９）、肺癌細胞（ＱＧ５６、Ｈ１６５０）、胃癌細胞（ＮＣＩ－Ｎ８７）、子宮癌細胞（ＨＥＣ－１－Ａ）、前立腺癌細胞（２２Ｒｖ１）、膵臓癌細胞（Ｐａｎｃ１０．５）、肝臓癌細胞（Ｈｅｐ３Ｂ）、卵巣癌細胞（ＳＫＯＶ３）、腎癌細胞（Ｃａｋｉ－２）、脳腫瘍細胞（Ｕ－８７ＭＧ）、膀胱癌細胞（Ｔ２４）、食道癌細胞（ＯＥ３３）、白血病細胞（ＯＣＩ－ＡＭＬ５）、リンパ腫細胞（Ｒａｍｏｓ）、胆嚢癌細胞（ＴＧＢＣ１４ＴＫＢ）、線維肉腫細胞（ＨＴ－１０８０）、メラノーマ細胞（Ｇ－３６１）、ＣＡＰＲＩＮ－１の遺伝子の発現が確認されているマウス腎癌細胞（Ｒｅｎｃａ）、マウス乳癌細胞（４Ｔ１）。確認の結果、いずれの癌細胞に対しても抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子とのコンジュゲートであるコンジュゲート１～コンジュゲート６ならびにコンジュゲート１５～コンジュゲート２０は、陰性コントロールであるコントロールコンジュゲート１ならびにコントロールコンジュゲート２に比べて蛍光強度が強く、ＣＡＰＲＩＮ－１が発現している上記癌細胞の細胞膜表面に強く反応することが確認された。
　また、免疫活性化因子が結合していない実施例１にて作製した抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃１～＃６についても同様の評価をした結果、ＣＡＰＲＩＮ－１が発現している前記癌細胞への反応性をフローサイトメトリー法で評価した結果、コンジュゲート１～コンジュゲート６ならびにコンジュゲート１５～コンジュゲート２０と同等の蛍光強度の強さを示した。
　次に、実施例３にて作製した、抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体を用いた免疫活性化因子とのコンジュゲートである、コンジュゲート７～コンジュゲート１４、コンジュゲート４５～コンジュゲート１１０ならびに、実施例４にて作製したコンジュゲート２１～コンジュゲート２８、コンジュゲート１１１～コンジュゲート１７６のＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質への特異的反応性と、ＣＡＰＲＩＮ－１が発現しているヒト癌細胞ならびにマウス癌細胞の細胞膜表面に反応性を示すことを上記と同等の方法にて評価した。その結果、コンジュゲート７～コンジュゲート１４ならびにコンジュゲート２１～コンジュゲート２８は、陰性コントロールとしてＰＢＳ（－）を添加したものに比べて有意に高い吸光度値を示したことから、ＣＡＰＲＮ－１タンパク質に特異的に反応することが示された。
　さらに、コンジュゲート７～コンジュゲート１４、コンジュゲート４５～コンジュゲート１１０ならびにコンジュゲート２１～コンジュゲート２８、コンジュゲート１１１～コンジュゲート１７６についてＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質が発現している癌細胞の細胞膜表面への反応性を評価した結果、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質へ反応性を示さないヒトＩｇＧへ免疫活性化因子を結合させたものよりも、有意に強い反応性を示し、また、免疫活性化因子が結合していない実施例２に記載の抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体＃１～＃７４とそれぞれの同等の反応性の強さを示した。
　以上のことから，上記で作製した抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子とのコンジュゲート（コンジュゲート７～コンジュゲート１４、コンジュゲート４５～コンジュゲート１１０コンジュゲート２１～コンジュゲート２８、ならびにコンジュゲート１１１～コンジュゲート１１１～コンジュゲート１７６）は、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質ならびにＣＡＰＲＩＮ－１が発現している癌細胞の細胞膜表面へ特異的に結合することが示された。
　実施例６　コンジュゲートの抗腫瘍効果１
　次に、実施例３ならびに実施例４にて作製した、抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃１～＃６を用いて作製したコンジュゲート１～６ならびにコンジュゲート１５～２０と、抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体を用いて作製したコンジュゲート７～１４、コンジュゲート２１～２８の担癌マウス生体内における抗腫瘍効果を評価した。
　具体的には、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質を発現するヒト由来の癌細胞を移植したＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスを用いて、本発明のコンジュゲートの抗腫瘍効果を検討した。１匹あたり１０７個のヒト乳癌細胞ＢＴ４７４をマトリゲル（ＳＩＧＭＡ）と混合して皮下に移植し、腫瘍が１８０ｍｍ３以上になるまで成長させた担癌マウスを作製した。ＢＴ４７４は、細胞膜表面にＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質が発現しており、実施例５にて示した通り、抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体＃１～＃６を用いて作製したコンジュゲート１～６、コンジュゲート１５～２０と、抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体を用いて作製したコンジュゲート７～１４、コンジュゲート２１～２８が細胞膜表面の特異的に結合する。コンジュゲート１～２８を、それぞれ、担癌マウス尾静脈へ１０匹ずつ１０ｍｇ／ｋｇを投与した。
　また、実施例３に記載の方法を用いてトラスツマブとＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲートを含む溶液を作製し、比較対照として上記の担癌マウスへ同量投与した。ＢＴ４７４は、細胞膜表面にトラスツマブの標的抗原であるＨＥＲ２タンパク質が発現しており、上記のトラスツマブとＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲートが特異的に結合する。担癌マウスへの投与は１週間に１回投与した。
　陰性コントロールの担癌マウスへはＰＢＳ（－）を投与した。
　投与後の担癌マウスの癌の大きさを経時的にノギスを用いて計測し、腫瘍体積は、定法に従い、計算式：（癌の長径の長さ）×（癌の短径の長さ）２×０．５にて算出した。評価の結果、投与を開始して５０日目において、陰性コントロールの腫瘍体積を１００％としたとき、実施例３にて作製したコンジュゲート１～コンジュゲート６ならびに実施例４にて作製したコンジュゲート１５～コンジュゲート２０を投与したマウスではいずれも３７％未満の腫瘍体積であった。コンジュゲート７～１４ならびにコンジュゲート２１～２８を投与したマウスではいずれも１５％未満の腫瘍体積であった。なお、コンジュゲート１１～１４ならびコンジュゲート２５～２８を投与したマウスの癌は、コンジュゲート７～１０ならびにコンジュゲート２１～２４を投与したマウスの癌に比べて早期に癌の成長が抑えられた。また、同様にコンジュゲート４５～コンジュゲート１７６の担癌マウス生体内における抗腫瘍効果を評価した結果、いずれも腫瘍体積は２０％未満であった。
　一方、比較対照としたトラスツマブとＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲートを含む溶液を投与したマウスの腫瘍体積は、陰性コントロールに対して５４％であった。
　本評価の結果、ＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体を用いて実施例３ならびに実施例４にて作製したコンジュゲート１～２８ならびにコンジュゲート４５～コンジュゲート１７６は、陰性コントロールに比べて有意に強い抗腫瘍効果を発揮することが示された。また、コンジュゲート１～２８ならびにコンジュゲート４５～コンジュゲート１７６は、比較対照として作製したトラスツマブとＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲートに対して有意に強い抗腫瘍効果を有することが示された。
　実施例７　コンジュゲートの抗腫瘍効果２
　実施例３ならびに４にて作製した抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子とのコンジュゲート（コンジュゲート１～２８）の担癌マウス生体内における抗腫瘍効果を評価した。
　具体的には、ＣＡＰＲＩＮ－１を発現するヒト由来の癌細胞を移植したＢａｌｂ／ｃヌードマウスを用いて、本発明のコンジュゲートの抗腫瘍効果を検討した。ヒト肺癌細胞Ｈ１６５０を腹側部の皮下へ移植し、腫瘍が１８０ｍｍ３以上になるまで成長させた担癌マウスを作製した。肺癌細胞Ｈ１６５０は、細胞膜表面にＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質が発現しており、実施例５にて示した通り、コンジュゲート１～２８が肺癌細胞Ｈ１６５０の細胞膜表面にあるＣＡＰＲＩＮ－１へと特異的に結合する。１０ｍｇ／ｋｇの実施例３にて作製したコンジュゲート１～１４ならびに実施例４にて作製したコンジュゲート１５～２８を、それぞれ、担癌マウス尾静脈へ１０匹ずつ投与した。
　また、実施例３に記載の方法を用いてセツキシマブとＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲートを含む溶液を作製し、比較対照として上記の担癌マウスへ同量投与した。投与は１週間に１回、合計３回投与した。
　陰性コントロールの担癌マウスへはＰＢＳ（－）を投与した。
　投与後の担癌マウスの癌の大きさを経時的にノギスを用いて計測し、腫瘍体積は、定法に従い、計算式：（癌の長径の長さ）×（癌の短径の長さ）２×０．５にて算出した。その結果、投与を開始して２５日目において、陰性コントロールの腫瘍体積を１００％としたとき、コンジュゲート１～６ならびにコンジュゲート１５～２０を投与したマウスの腫瘍体積は２２％未満であった。コンジュゲート７～１４ならびにコンジュゲート２１～２８を投与したマウスではいずれも１２％未満の腫瘍体積であった。なお、コンジュゲート１１～１４ならびコンジュゲート２５～２８を投与したマウスの癌は、コンジュゲート７～１０ならびにコンジュゲート２１～２４を投与したマウスの癌に比べて早期に癌の成長が抑えられた。また、同様にコンジュゲート４５～コンジュゲート１７６の担癌マウス生体内における抗腫瘍効果を評価した結果、腫瘍体積は１６％未満であった。
　一方、比較対照としたセツキシマブとＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲートを含む溶液を投与したマウスの腫瘍体積は、陰性コントロールに対して３２％であった。
　本評価の結果、コンジュゲート１～２８ならびにコンジュゲート４５～コンジュゲート１７６は、陰性コントロールに比べて有意に強い抗腫瘍効果を発揮することが示された。また、コンジュゲート１～２８ならびにコンジュゲート４５～コンジュゲート１７６は、比較対照であるセツキシマブとＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲートに対して有意に強い抗腫瘍効果を有することが示された。
　実施例８．マウスキメラ抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体と免疫活性化因子とのコンジュゲートの作製
　抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体の重鎖可変領域とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体の軽鎖可変領域とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域からなるマウスキメラ抗体を作製し、実施例３と同様の方法にて免疫活性化因子であるＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲートを作製した。また、前記マウスキメラ抗体を作製し、実施例４と同様の方法にて前記Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄの誘導体とマウスキメラ抗体とのコンジュゲートを作製した。
　本実施例の抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体の軽鎖可変領域とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域からなるマウスキメラ抗体は、具体的には以下の抗体を用いた。
　ＷＯ２０１１／０９６５２８に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４０、配列番号４１及び配列番号４２ならなる抗体であって、前記重鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号３９で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、前記軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号４３で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１５／０２０２１２に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４４、配列番号４５及び配列番号４６のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４８、配列番号４９及び配列番号５０ならなる抗体であって、前記重鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号４７で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、前記軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号５１で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１１／０９６５１９に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号５２、配列番号５３及び配列番号５４のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号５６、配列番号５７及び配列番号５８ならなる抗体であって、前記重鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号５５で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、前記軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号５９で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／１２５６５４に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号６０、配列番号６１及び配列番号６２のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号６４、配列番号６５及び配列番号６６ならなる抗体であって、前記重鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号６３で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、前記軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３を含む、配列番号６７で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１１／０９６５１７に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号６８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号６９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１１／０９６５２８に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号７０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号７１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号７２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号７３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号７４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号７５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号７６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号７７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号７８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号７９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１１／０９６５３３に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号８０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号８１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号８２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号８３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１１／０９６５３４に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号８４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号８５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号８６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号８７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１０／０１６５２６に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号８８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号８９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号９０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号９１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号９２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号９３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号９４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号９５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号９６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号９７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号９８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号９９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１００のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１０１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／０１８８９４に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１０２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１０３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１０４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１０５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／０１８８９２に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１０６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１０７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／０１８８９１に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１０８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１０９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／０１８８８９に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１１０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／０１８８８３に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１１２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／１２５６３６に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１１４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／１２５６５４に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１１６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１１８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１３／１２５６３０に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１２０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　ＷＯ２０１５／０２０２１２に記載されているＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体であって、配列番号１２２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１２４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１２６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１２８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１３０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１３１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体、配列番号１３２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１３３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とを含む抗体。
　マウスキメラ抗体は、以下の方法を用いて作製した。
　具体的には、本発明における配列番号３９で表されるアミノ酸配列の重鎖可変領域をコードする遺伝子増幅断片の両端を、制限酵素処理した後に精製し、ヒト抗体由来のリーダー配列と、マウスＩｇＧの重鎖定常領域を既に挿入済みのベクターを定法に従って挿入した。さらに、配列番号４３で表されるアミノ酸配列の軽鎖可変領域をコードする遺伝子増幅断片の両端を、制限酵素処理した後に精製し、ヒト抗体由来のリーダー配列と、マウスＩｇＧの軽鎖定常領域を既に挿入済みのベクターを定法に従って挿入した。
　次に、上記にあるＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体の重鎖可変領域が挿入された上記組換えベクターと、軽鎖可変領域が挿入された上記組換えベクターを定法に従って哺乳類細胞に導入し、配列番号３９で表されるＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体の重鎖可変領域とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号４３で表されるＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体の軽鎖可変領域とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃１を含む溶液を得た。
　同様にして、配列番号４７で表されるアミノ酸配列の重鎖可変領域とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号５１で表されるアミノ酸配列の軽鎖可変領域とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ体＃２を含む溶液を得た。
　同様にして、配列番号５５で表されるアミノ酸配列の重鎖可変領域とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号５９で表されるアミノ酸配列の軽鎖可変領域とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ体＃３を含む溶液を得た。
　同様にして、配列番号６３で表されるアミノ酸配列の重鎖可変領域とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号６７で表されるアミノ酸配列の軽鎖可変領域とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ体＃４を含む溶液を得た。
　同様にして、以下のマウスキメラ抗体＃５～＃３７を含む溶液を得た。
　配列番号６８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号６９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃５。
　配列番号７０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号７１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃６。
　配列番号７２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号７３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃７を含む溶液。
　配列番号７４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号７５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃８。
　配列番号７６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号７７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃９。
　配列番号７８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号７９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃１０。
　配列番号８０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号８１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃１１。
　配列番号８２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号８３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃１２。
　配列番号８４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号８５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃１３。
　配列番号８６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号８７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃１４。
　配列番号８８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号８９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃１５。
　配列番号９０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号９１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃１６。
　配列番号９２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号９３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃１７。
　配列番号９４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号９５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃１８。
　配列番号９６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号９７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃１９。
　配列番号９８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号９９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃２０。
　配列番号１００のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１０１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃２１。
　配列番号１０２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１０３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃２２。
　配列番号１０４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１０５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃２３。
　配列番号１０６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１０７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃２４。
　配列番号１０８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１０９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃２５。
　配列番号１１０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１１１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃２６。
　配列番号１１２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１１３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃２７。
　配列番号１１４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１１５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃２８。
　配列番号１１６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１１７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃２９。
　配列番号１１８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１１９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃３０。
　配列番号１２０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１２１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃３１。
　配列番号１２２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１２３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃３２。
　配列番号１２４のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１２５のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃３３。
　配列番号１２６のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１２７のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃３４。
　配列番号１２８のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１２９のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃３５。
　配列番号１３０のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１３１のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃３６。
　配列番号１３２のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの重鎖定常領域を有する重鎖と、配列番号１３３のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とマウスＩｇＧの軽鎖定常領域を有する軽鎖からなる、マウスキメラ抗体＃３７。
　得られたマウスキメラ抗体＃１～＃３７を含むそれぞれの培養上清を常法に従ってＨｉｔｒａｐ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ（ＧＥヘルスケア社製）を用いて精製し、ＰＢＳ（－）に置換して０．２２μｍのフィルター（ミリポア社製）で濾過したものを調製した。
　上記にて作製したマウスキメラ抗体＃１～＃３７を用いて、実施例３に記載の方法と同様の方法で、Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲートを作製した。マウスキメラ抗体＃１とＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲート（コンジュゲート２９）、マウスキメラ抗体＃２とＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲート（コンジュゲート３０）、マウスキメラ抗体＃３とＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲート（コンジュゲート３１）、マウスキメラ抗体＃４とＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄとのコンジュゲート（コンジュゲート３２）、マウスキメラ抗体＃５（コンジュゲート１７７）、マウスキメラ抗体＃６（コンジュゲート１７８）、マウスキメラ抗体＃７（コンジュゲート１７９）、マウスキメラ抗体＃８（コンジュゲート１８０）、マウスキメラ抗体＃９（コンジュゲート１８１）、マウスキメラ抗体＃１０（コンジュゲート１８２）、マウスキメラ抗体＃１１（コンジュゲート１８３）、マウスキメラ抗体＃１２（コンジュゲート１８４）、マウスキメラ抗体＃１３（コンジュゲート１８５）、マウスキメラ抗体＃１４（コンジュゲート１８６）、マウスキメラ抗体＃１５（コンジュゲート１８７）、マウスキメラ抗体＃１６（コンジュゲート１８８）、マウスキメラ抗体＃１７（コンジュゲート１８９）、マウスキメラ抗体＃１８（コンジュゲート１９０）、マウスキメラ抗体＃１９（コンジュゲート１９１）、マウスキメラ抗体＃２０（コンジュゲート１９２）、マウスキメラ抗体＃２１（コンジュゲート１９３）、マウスキメラ抗体＃２２（コンジュゲート１９４）、マウスキメラ抗体＃２３（コンジュゲート１９５）、マウスキメラ抗体＃２４（コンジュゲート１９６）、マウスキメラ抗体＃２５（コンジュゲート１９７）、マウスキメラ抗体＃２６（コンジュゲート１９８）、マウスキメラ抗体＃２７（コンジュゲート１９９）、マウスキメラ抗体＃２８（コンジュゲート２００）、マウスキメラ抗体＃２９（コンジュゲート２０１）、マウスキメラ抗体＃３０（コンジュゲート２０２）、マウスキメラ抗体＃３１（コンジュゲート２０３）、マウスキメラ抗体＃３２（コンジュゲート２０４）、マウスキメラ抗体＃３３（コンジュゲート２０５）、マウスキメラ抗体＃３４（コンジュゲート２０６）、マウスキメラ抗体＃３５（コンジュゲート２０７）、マウスキメラ抗体＃３６（コンジュゲート２０８）、マウスキメラ抗体＃３７（コンジュゲート２０９）を含む溶液を得た。
　さらに、上記にて作製したマウスキメラ抗体＃１～＃３７を用いて、実施例４に記載の方法と同様の方法で、前記Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄの誘導体とのコンジュゲートを作製した。マウスキメラ抗体＃１を用いたコンジュゲート（コンジュゲート３３）、マウスキメラ抗体＃２を用いたコンジュゲート（コンジュゲート３４）、マウスキメラ抗体＃３を用いたコンジュゲート（コンジュゲート３５）、マウスキメラ抗体＃４を用いたコンジュゲート（コンジュゲート３６）を含む溶液を得た。同様にして、マウスキメラ抗体＃５～＃３７を用いたコンジュゲート（コンジュゲート２１０～コンジュゲート２４２）を含む溶液を得た。
　得られた上記コンジュゲート２９～３６、コンジュゲート１７７～２４２ならびにコントロールコンジュゲート２を含む溶液を０．２２μｍのフィルター（ミリポア社製）で濾過したものを調製した。
　得られた上記コンジュゲート２９～３６、コンジュゲート１７７～２４２を含む溶液を用いて、コンジュゲート２９～３６、コンジュゲート１７７～２４２がＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質への特異的反応性を実施例５と同等の方法を用いて評価した。その結果、コンジュゲート２９～３６、コンジュゲート１７７～２４２を含む各溶液は、ＣＡＰＲＮ－１タンパク質に特異的な反応性を示した。
　さらに、細胞膜表面にＣＡＰＲＩＮ－１が発現している癌細胞を用いて、コンジュゲート２９～３６、コンジュゲート１７７～２４２の上記癌細胞への反応性をフローサイトメトリー法により評価した結果、いずれのコンジュゲートも、陰性コントロールに比べて強い蛍光強度を示した。また、また、免疫活性化因子が結合していない前記にて作製したマウスキメラ抗体＃１～＃３７に記載の抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体とそれぞれの同等の反応性の強さを示すことが確認できた。
　実施例９　マウスキメラ抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体と免疫活性化因子とのコンジュゲートの抗腫瘍効果
　実施例８にて作製した、マウスキメラ抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体と免疫活性化因子とのコンジュゲート（コンジュゲート２９～３６、コンジュゲート１７７～２４２）の抗体の担癌マウス生体内における抗腫瘍効果を評価した。
　具体的には、ＣＡＰＲＩＮ－１を発現するマウス由来の癌細胞を移植したＢａｌｂ／ｃマウスを用いて、本発明のコンジュゲートの抗腫瘍効果を検討した。マウス乳癌細胞４Ｔ１を腹側部の皮下へ１０４個移植し、腫瘍が３０ｍｍ３以上になるまで成長させた担癌マウスを作製した。乳癌細胞４Ｔ１は、実施例５にて示した通り、細胞膜表面にＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質が発現している細胞であり、実施例８にて作製した、コンジュゲート２９～３６を含む各溶液が乳癌細胞４Ｔ１の細胞膜表面にあるＣＡＰＲＩＮ－１へと特異的に結合する。実施例８で作製したコンジュゲート２９～３６を、８ｍｇ／ｋｇにて、それぞれ担癌マウス尾静脈へ１０匹ずつ投与した。比較対照として、マウスキメラ抗体＃１～マウスキメラ抗体＃４を担癌マウスへ同量投与した。投与は１週間に２回、合計４回投与した。陰性コントロールの担癌マウスへはＰＢＳ（－）を投与した。投与後の担癌マウスの癌の大きさを経時的にノギスを用いて計測し、腫瘍体積は、定法に従い、計算式：（癌の長径の長さ）×（癌の短径の長さ）２×０．５にて算出した。その結果、投与を開始して２０日目における陰性コントロールの腫瘍体積を１００％とした場合、コンジュゲート２９～３６を投与した各マウスは０％であった。また、マウスキメラ抗体＃１～＃４のみを投与したマウスの腫瘍体積は、陰性コントロールのマウスの腫瘍体積を１００％としたとき、平均６９％であった。本評価の結果、実施例８で作製した、Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄとマウスキメラ型の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体（マウスキメラ抗体）とのコンジュゲート（コンジュゲート２９～３２）ならびに前記Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄの誘導体とのコンジュゲート（コンジュゲート３３～３６）は、陰性コントロールならびに抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体単独を担癌マウスに投与した場合に比べて強い抗腫瘍効果を発揮することが示された。また、同様にコンジュゲート１７７～２４２について抗腫瘍効果を評価した結果、コンジュゲート２９～３６を投与した各マウスの腫瘍体積は、陰性コントロールのマウスの腫瘍体積を１００％としたとき、０％であり、マウスキメラ抗体＃５～＃３７のみを投与したマウスの腫瘍体積は、陰性コントロールのマウスの腫瘍体積を１００％としたとき、平均６９％であった。
　実施例１０　コンジュゲートの抗腫瘍効果３
　実施例４にて作製した、抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体を用いて作製したコンジュゲート７～１４、コンジュゲート２１～２８、コンジュゲート４５～１７９と、既存の癌に対する抗体医薬トラスツマブを用いて実施例４と同様の方法を用いて作製したトラスツマブコンジュゲートならびにトラスツマブとの担癌マウス生体内における抗腫瘍効果を比較した。
　トラスツマブコンジュゲートは、トラスツマブと免疫活性化因子とを実施例４に記載と同様の方法を用いて作製された複合体である。トラスツマブと免疫活性化因子とのコンジュゲートを以下の方法にて作製した。
　免疫活性化因子は、Ｒｅｓｉｑｉｏｍｏｄにある三級水酸基へ２炭素増炭してアミノ基を付加したＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄ誘導体である１－（２（２－Ａｍｉｎｏｅｔｈｏｘｙ）－２－ｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐｙｌ）－２－（ｅｔｈｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）－１Ｈ－ｉｍｉｄａｚｏ［４，５－ｃ］ｑｕｉｎｏｌｉｎ－４－ａｍｉｎｅに、スクシイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキレート（ＳＭＣＣ）をＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００８，５１，６９１６－６９２６を参照して、ＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄにＳＭＣＣが結合した縮合体を得た。
　一方、トラスツマブは溶液中に含まれる製剤組成物を、限外濾過器を用いて除くあるいは、プロテインＡ担体を用いてトラスツマブのみをアフィニティー精製してリン酸緩衝液に含んだものを前記コンジュゲートの調製に用いた。上記のＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄにリンカーＳＭＣＣが結合した縮合体と、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体のコンジュゲートを米国特許８，９５１，５２８に記載されている方法ならびにＪＩＭＤ　Ｒｅｐｏｒｔｓ－Ｃａｓｅ　ａｎｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１２／５を参照して、定法に従い作製した。リン酸緩衝液中に溶解されたトラスツマブへ、実施例４と同様に、トラスツマブにＳＡＴＡが付加されたものを含む溶液を得た。さらに前記にて作製した縮合体を反応させてトラスツマブと前記Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄの誘導体とのコンジュゲート（トラスツマブコンジュゲート）を含む溶液を得た。得られたトラスツマブコンジュゲートが本抗腫瘍効果の評価に用いるヒト乳癌細胞へ反応成を示すことをフローサイトメトリー法により確認した。さらに、比較対象の調製したトラスツマブコンジュゲートに結合に結合している免疫活性化因子と、実施例４にて作製した、抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体を用いて作製したコンジュゲート７～１４、コンジュゲート２１～２８、コンジュゲート４５～１７９に結合している免疫活性化因子が同等の数が結合していることを質量分析法にて確認したものを用いた。
　抗腫瘍効果の比較のための担癌マウスは、１匹あたり１０７個のヒト乳癌細胞ＢＴ４７４をマトリゲル（ＳＩＧＭＡ）と混合してマウス皮下に移植し、腫瘍が１５０ｍｍ３以上になるまで成長させた担癌マウスを作製した。なお、ＢＴ４７４は、細胞膜表面にＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質ならびにトラスツマブの標的抗原であるＨＥＲ２が発現していることが確認している。
　抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体のコンジュゲート（コンジュゲート７～１４、コンジュゲート２１～２８、コンジュゲート４５～１７９）、上記にて調製したトラスツマブコンジュゲートをそれぞれ、前記担癌マウス尾静脈へ１０匹ずつ１０ｍｇ／ｋｇを投与した。投与は１週間に２回、合計１３投与した。なお、比較としてさらに抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体のコンジュゲート（コンジュゲート７～１４、コンジュゲート２１～２８、コンジュゲート４５～１７９）の作製に用いた抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体、トラスツマブを同様に投与した。陰性コントロールの担癌マウスへＰＢＳ（－）を投与した。
　投与後の担癌マウスの癌の大きさを経時的にノギスを用いて計測し、腫瘍体積は、定法に従い、計算式：（癌の長径の長さ）×（癌の短径の長さ）２×０．５にて算出した。評価の結果、投与を開始して４５日目において、陰性コントロールの腫瘍体積を１００％としたとき、コンジュゲート１１ならびに２５を投与したマウスではいずれも１５％未満であり、比較対象のコンジュゲートする前の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体を投与したマウスでは５０％未満であった。これらの結果から、免疫活性化因子を抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体へコンジュゲートすることにより、抗腫瘍効果は７７％増強することを確認した。なお、増強率は、計算式：１－（コンジュゲートの腫瘍体積／抗体単独での腫瘍体積）×１００（％）にて算出した。
　一方、トラスツマブコンジュゲートを投与したマウスでは陰性コントロールの腫瘍体積を１００％としたとき、５３％、比較対象のコンジュゲートする前のトラスツマブを投与したマウスでは７４％であり、免疫活性化因子をトラスツマブへコンジュゲートすることによる抗腫瘍効果の増強率は２９％未満に留まった。
　実施例１１　抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と免疫活性化因子とのコンジュゲートの作製とコンジュゲートの抗腫瘍効果
　実施例２に記載の抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体であるヒト化抗体＃１～＃８について、それぞれ免疫活性化因子ＤＳＲ－６４３４（６－Ａｍｉｎｏ－２（ｂｕｔｙｌａｍｉｎｏ）－９－［［６－［２－（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）ｅｔｈｏｘｙ］－３ｐｙｒｉｄｉｎｙｌ］ｍｅｔｈｙｌ］－７，９－ｄｉｈｙｄｒｏ－８Ｈ－ｐｕｒｉｎ－８－ｏｎｅ）とのコンジュゲート（コンジュゲート３７～４４）を作製した。具体的には、実施例４に記載の方法に準じて、まずはＤＳＲ－６４３４のアミノ基を介してスクシイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキレート（ＳＭＣＣ）との縮合体を合成したうえで、ヒト化抗体＃１～＃８のそれぞれと免疫活性化因子ＲＳＲ－６４３４とのコンジュゲートである各コンジュゲート３７～４４を含む溶液を得た。
　得られた上記コンジュゲート３７～４４を含む溶液を０．２２μｍのフィルター（ミリポア社製）で濾過したものを調製した。上記コンジュゲートについて、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質への特異的反応性を実施例５と同等の方法を用いて評価した。その結果、コンジュゲート３７～４４を含む各溶液は、ＣＡＰＲＮ－１タンパク質に特異的な反応性を示した。
　さらに、細胞膜表面にＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質が発現している癌細胞を用いて、コンジュゲート３７～４４の癌細胞への反応性をフローサイトメトリー法により評価した結果、いずれのコンジュゲートも、陰性コントロールに比べて強い蛍光強度を示した。また、コンジュゲートに用いた前記抗体と同様の蛍光強度をしめすことが確認できた。
　上記コンジュゲート３７～４４の担癌マウスに対する抗腫瘍効果を評価した。実施例１０に記載の方法と同様の方法で抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体のコンジュゲート（コンジュゲート３７～４４）をそれぞれ、前記担癌マウス尾静脈へ１０匹ずつ１０ｍｇ／ｋｇを投与した。投与は１週間に２回、合計１６回投与した。なお、前記コンジュゲートの作製に用いた抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体、トラスツマブを同様に投与した。陰性コントロールの担癌マウスへＰＢＳ（－）を投与した。
　投与後の担癌マウスの癌の大きさを経時的にノギスを用いて計測し、腫瘍体積は、定法に従い、計算式：（癌の長径の長さ）×（癌の短径の長さ）２×０．５にて算出した。評価の結果、投与を開始して５０日目において、陰性コントロールの腫瘍体積を１００％としたとき、コンジュゲート３７～４４を投与したマウスではいずれも３２％未満であり、比較対象のコンジュゲートする前の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体を投与したマウスでは５０％未満であった。これらの結果から、免疫活性化因子を抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体へコンジュゲートすることにより、抗腫瘍効果は３５％以上増強することを確認した。なお、増強率は、計算式：１－（コンジュゲートの腫瘍体積／抗体単独での腫瘍体積）×１００（％）にて算出した。

Claims (14)

  1. 　配列番号２～３０のうち偶数の配列番号のいずれかで表されるアミノ酸配列又は、該アミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質、と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメントと、免疫活性化因子が結合されてなるコンジュゲート。
  2. 　前記抗体又はそのフラグメントが、配列番号３１～３５、２９６～２９９、３０８、３０９のいずれかで表されるアミノ酸配列、あるいは該アミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する、請求項１に記載のコンジュゲート。
  3. 　前記抗体がモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体である、請求項１又は２に記載のコンジュゲート。
  4. 　前記抗体又はそのフラグメントが以下の（Ａ）～（Ｍ）のいずれかである、請求項１～３のいずれか１項に記載のコンジュゲート
    （Ａ）配列番号３６、３７及び３８の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号４０、４１及び４２の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はフラグメント
    （Ｂ）配列番号４４、４５及び４６の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号４８、４９及び５０の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はフラグメント
    （Ｃ）配列番号５２、５３及び５４の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号５６、５７及び５８の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はフラグメント
    （Ｄ）配列番号６０、６１及び６２の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号６４、６５及び６６の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はフラグメント
    （Ｅ）配列番号１７０、１７１及び１７２の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１７３、１７４及び１７５の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
    （Ｆ）配列番号１７６、１７７及び１７８の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１７９、１８０及び１８１の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
    （Ｇ）配列番号１８２、１８３及び１８４の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１８５、１８６及び１８７の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
    （Ｈ）配列番号１８８、１８９及び１９０の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１９１、１９２及び１９３の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
    （Ｉ）配列番号１４６、１４７及び１４８の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１４９、１５０及び１５１の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
    （Ｊ）配列番号２７２、２７３及び２７４の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号２７５、２７６及び２７７の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
    （Ｋ）配列番号２９０、２９１及び２９２の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号２９３、２９４及び２９５の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
    （Ｌ）配列番号３０１、３０２及び３０３の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号３０５、３０６及び３０７の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
    （Ｍ）配列番号１３４、１３５及び１３６の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域と配列番号１３７、１３８及び１３９の相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント
  5. 　前記抗体又はそのフラグメントが以下の（ａ）～（ａｋ）のいずれかである、請求項１～４のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
    （ａ）重鎖可変領域が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号４３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｂ）重鎖可変領域が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号５１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｃ）重鎖可変領域が配列番号５５のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号５９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｄ）重鎖可変領域が配列番号６３のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号６７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｅ）重鎖可変領域が配列番号６８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号６９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｆ）重鎖可変領域が配列番号７０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｇ）重鎖可変領域が配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｈ）重鎖可変領域が配列番号７４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｉ）重鎖可変領域が配列番号７６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｊ）重鎖可変領域が配列番号７８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号７９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｋ）重鎖可変領域が配列番号８０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｌ）重鎖可変領域が配列番号８２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｍ）重鎖可変領域が配列番号８４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｎ）重鎖可変領域が配列番号８６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｏ）重鎖可変領域が配列番号８８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号８９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｐ）重鎖可変領域が配列番号９０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号９１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｑ）重鎖可変領域が配列番号９２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号９３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｒ）重鎖可変領域が配列番号９４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号９５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｓ）重鎖可変領域が配列番号９６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号９７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｔ）重鎖可変領域が配列番号９８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号９９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｕ）重鎖可変領域が配列番号１００のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１０１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｖ）重鎖可変領域が配列番号１０２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｗ）重鎖可変領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１０５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｘ）重鎖可変領域が配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１０７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｙ）重鎖可変領域が配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１０９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ｚ）重鎖可変領域が配列番号１１０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ａａ）重鎖可変領域が配列番号１１２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ａｂ）重鎖可変領域が配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ａｃ）重鎖可変領域が配列番号１１６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ａｄ）重鎖可変領域が配列番号１１８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ａｅ）重鎖可変領域が配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ａｆ）重鎖可変領域が配列番号１２２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ａｇ）重鎖可変領域が配列番号１２４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２５のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ａｈ）重鎖可変領域が配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２７のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ａｉ）重鎖可変領域が配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２９のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ａｉ）重鎖可変領域が配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１３１のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ａｊ）重鎖可変領域が配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１３３のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント
    （ａｋ）重鎖可変領域が配列番号３００のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号３０４のアミノ酸配列を含んでなる抗体又はそのフラグメント。
  6. 　前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体又は単鎖抗体である、請求項１～５のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  7. 　前記免疫活性化因子が、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、ＮＯＤ様受容体（ＮＬＲ）、ＲＩＧ様受容体又はＣ型レクチン受容体（ＣＬＲ）に結合するリガンド又はアゴニストである、請求項１～６のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  8. 　前記Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）が、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９又はＴＬＲ１０に結合するリガンド又はアゴニストである、請求項７に記載のコンジュゲート。
  9. 　前記Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）に結合するリガンド又はアゴニストが、以下の（ｉ）～（ｖｉｉ）のいずれかである、請求項７又は８に記載のコンジュゲート。
    （ｉ）ペプチドグリカン、リポタンパク質、リポポリサッカライド及びザイモザンからななる群から選択されるＴＬＲ２に結合するリガンド又はアゴニスト
    （ｉｉ）Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）及びｐｏｌｙ（Ａ：Ｕ）からなる群から選択されるＴＬＲ３に結合するリガンド又はアゴニスト
    （ｉｉｉ）リポポリサッカライド（ＬＰＳ）、ＨＳＰ６０、ＲＳ０９及びＭＰＬＡからなる群から選択されるＴＬＲ４に結合するリガンド又はアゴニスト
    （ｉｖ）フラジェリン及びＦＬＡからなる群から選択されるＴＬＲ５に結合するリガンド又はアゴニスト
    （ｖ）イミダゾキノリン類化合物及び一重鎖ＲＮＡからなる群から選択されるＴＲＬ７又は８に結合するリガンド又はアゴニスト
    （ｖｉ）バクテリアＤＮＡ、非メチル化ＣｐＧ　ＤＮＡ、ｈｅｍｏｚｏｒｉｎ、ＯＤＮ１５８５、ＯＤＮ１６６８、ＯＤＮ１６６８及びＯＤＮ１８２６からなる群から選択されるＴＲＬ９に結合するリガンド又はアゴニスト
    （ｖｉｉ）ｐｒｏｆｉｌｉｎ及びｕｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃバクテリアからなる群から選択されるＴＲＬ１０に結合するリガンド又はアゴニスト
  10. 　前記抗体又はそのフラグメントと前記免疫活性化因子がリンカーを介して結合する、請求項１～９のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  11. 　請求項１～１０のいずれか１項に記載のコンジュゲートを有効成分として含む、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物。
  12. 　前記癌がＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質を細胞膜表面に発現する癌である、請求項１１に記載の医薬組成物。
  13. 　前記癌が、乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、肝臓癌、胆嚢癌、肉腫、肥満細胞腫、メラノーマ、副腎皮質癌、ユーイング腫瘍、ホジキンリンパ腫、中皮腫、多発性骨髄腫、睾丸癌、甲状腺癌、頭頸部癌である、請求項１１又は１２に記載の医薬組成物。
  14. 　請求項１～１０のいずれか１項に記載のコンジュゲート、請求項１１～１３のいずれか１項に記載の医薬組成物を、被験者に投与することを含む、癌の治療及び／又は予防方法。
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