[go: up one dir, main page]

WO2010095969A1 - Способ получения дигидрокверцетина - Google Patents

Способ получения дигидрокверцетина Download PDF

Info

Publication number
WO2010095969A1
WO2010095969A1 PCT/RU2009/000081 RU2009000081W WO2010095969A1 WO 2010095969 A1 WO2010095969 A1 WO 2010095969A1 RU 2009000081 W RU2009000081 W RU 2009000081W WO 2010095969 A1 WO2010095969 A1 WO 2010095969A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
alcohol
solution
concentration
column
dihydroquercetin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/RU2009/000081
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Виктор Семенович KAPACEB
Сергей Михайлович СТАРОВЕРОВ
Юрий Арсеньевич КОЛЕСНИК
Алексей Юрьевич КОЛЕСНИК
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
" Ox Mmak Ct"
JOINT STOCK Co "BIOCHEMMACK S&T"
Original Assignee
" Ox Mmak Ct"
JOINT STOCK Co "BIOCHEMMACK S&T"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by " Ox Mmak Ct", JOINT STOCK Co "BIOCHEMMACK S&T" filed Critical " Ox Mmak Ct"
Priority to PCT/RU2009/000081 priority Critical patent/WO2010095969A1/ru
Publication of WO2010095969A1 publication Critical patent/WO2010095969A1/ru
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/32—Bonded phase chromatography
    • B01D15/325—Reversed phase
    • B01D15/327—Reversed phase with hydrophobic interaction
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
    • B01D15/16—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the fluid carrier
    • B01D15/166—Fluid composition conditioning, e.g. gradient
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/42—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the development mode, e.g. by displacement or by elution
    • B01D15/424—Elution mode
    • B01D15/426—Specific type of solvent
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3
    • C07D311/28—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3 with aromatic rings attached in position 2 only
    • C07D311/32—2,3-Dihydro derivatives, e.g. flavanones
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 and B01D15/30 - B01D15/36, e.g. affinity, ligand exchange or chiral chromatography
    • B01D15/3861—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 and B01D15/30 - B01D15/36, e.g. affinity, ligand exchange or chiral chromatography using an external stimulus
    • B01D15/3876—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 and B01D15/30 - B01D15/36, e.g. affinity, ligand exchange or chiral chromatography using an external stimulus modifying the temperature

Definitions

  • the invention relates to the field of isolation and purification of bioflavonoids from larch and can be used to obtain highly purified dihydroquercetin, intended for medical and pharmaceutical purposes.
  • a known method for producing highly purified dihydroquercetin including extraction of larch sawdust with an aqueous-acetone mixture, purification of the aqueous-acetone extract by high-performance liquid chromatography on reversed-phase sorbents with a particle size of 5-10 ⁇ m using acetone solution with the addition of trifluoroacetic acid as a mobile phase.
  • the method allows to isolate a product with a purity of more than 99% to obtain standard samples.
  • the present invention is to develop a method for producing highly purified monocomponent dihydroquercetin from larch with high yield and purity of the target product.
  • the problem is solved by the described method for the preparation of highly purified dihydroquercetin, including the extraction of crushed larch wood with aliphatic alcohol to obtain an alcohol solution of dihydroquercetin-containing raw materials, distillation of alcohol, at least one chromatographic separation of the target product on a column filled with a hydrophobic sorbent during the elution of the adsorbent eluate, drying the resulting product, moreover, as an extractant and mobile fa PS use an aqueous solution of the same alcohol selected from the group: methyl, ethyl, isopropyl, the chromatographic isolation cycle is carried out in two stages, and in the first stage, the alcohol concentration in the dihydroquercetin-containing solution applied to the column and in the mobile phase are kept the same, equal to 20-40% vol., And in the second stage, the application of the dihydroquercetin-containing solution on the column is carried out at an alcohol concentration of not higher than 20% vol., And the sorbent is
  • the distillation of the alcohol is carried out after adding to the extract propylene glycol in an amount of about 1% vol., From its volume, which prevents clumping and sticking of the raw materials with insufficient control over the process of evaporation of the alcohol and allows you to get the raw material in the form of a concentrated solution.
  • the propylene glycol concentrate is treated with a 5% solution of sodium chloride, which allows you to remove part of the resinous substances.
  • the application and elution of the sample on the column is carried out at a concentration of alcohol in a solution of 20-40% vol.
  • the column is washed with a concentrated alcohol solution and balanced with an aqueous alcohol solution with a concentration of the corresponding alcohol concentration in the sample solution and the next chromatography cycle is carried out.
  • the chromatography is carried out in a thermostatic column, at a temperature of 30-50 0 C.
  • the selected alcohol concentrations are due to the following.
  • the application of the sample to the column is carried out at a concentration of alcohol in a solution of 1-20% vol.
  • the elution is carried out at a concentration of alcohol in a solution of 12-30% vol.
  • the column is washed with alcohol and balanced with an aqueous solution of alcohol with a concentration corresponding to the concentration of alcohol in the sample solution and the next chromatography cycle is carried out.
  • the chromatography is carried out in a thermostatic column, at a temperature of 30-50 0 C.
  • the selected alcohol concentrations are due to the following.
  • the selected temperature range is due to the following.
  • the solution is placed in a vacuum evaporator and evaporated until the alcohol is completely removed, and then dissolved in 250 ml of 20% ethyl alcohol (20% by volume based on 96% ethyl alcohol).
  • the first 250 ml is collected in the form of the target fraction, diluted to 10% vol. and applied to a 24x70 mm column filled with a hydrophobic sorbent Diacopb-130-Phenyl based on silica gel with a specific surface area of 280-350 m / g with grafted phenyl groups with a particle size of 40-60 microns, thermostated at 3O 0 C and balanced 10% - aqueous ethanol (10% volume based on 96% ethyl alcohol) apply the sample at a rate of 20 ml / min. Elution is carried out with a 13% solution of ethyl alcohol. The volume of the eluted sample is 500 ml.
  • the eluate is evaporated to 125 ml, then cooled to 4-7 ° C, the precipitate is discarded on a glass filter and dried in a vacuum oven.
  • the columns are washed with a concentrated solution of ethyl alcohol and equilibrated with a solution of ethyl alcohol with a concentration of 20% (first column) and 10% (second column).
  • a column with a 24x45 mm jacket and a jacket, filled with a Diafep-CT-500 hydrophobic sorbent based on styrene-divinylbenzene with a specific surface of 600-1000 m 2 / g with a particle size of 150-300 microns, is balanced with 30% methyl alcohol at a temperature of 30 ° C and apply the sample prepared above at a speed of 20 ml / min. Then 150 ml of 30% alcohol are passed through the column at a rate of 20 ml / min.
  • the first 200 ml is collected as a target fraction, diluted with water to an alcohol content of 1% vol. In water. and applied to a 24x70 mm column filled with a hydrophobic sorbent Diafer-CT-500 based on styrene-divinylbenzene with a specific surface of 600-1000 m 2 / g with a particle size of 150-300 ⁇ m, thermostated at 3O 0 C and balanced with 1% methyl alcohol at a rate of 50 ml / min. Elution is carried out with l l-% methanol.
  • the target fraction is collected in a volume of 600 ml.
  • the solution is evaporated to a volume of 150 ml and cooled to 1-4 0 C and incubated for 4 hours until a precipitate of dihydroquercetin.
  • the precipitate was filtered off and dried in a vacuum oven at 4O 0 C over anhydrous granular potassium hydroxide.
  • the columns are washed with a concentrated solution of methyl alcohol and equilibrated with a solution of methyl alcohol with a concentration of 30% (first column) and 1% (second column).
  • a column with a 24x45 mm jacket and a jacket, filled with a Diafep-CT-500 hydrophobic sorbent based on styrene-divinylbenzene with a specific surface of 600-1000 m 2 / g with a particle size of 150-300 microns, is balanced with 40% isopropyl alcohol at a temperature of 5O 0 C and apply the sample prepared above at a speed of 20 ml / min.
  • the column is washed with 250 ml of 40% alcohol at a rate of 20 ml / min.
  • the first 250 ml is collected as the target fraction, diluted twice to the content of isopropyl alcohol in water of 20% vol. and applied to a 24x70 mm column filled with a hydrophobic reversed-phase sorbent Diafer-130-C8 based on silica gel with a specific surface area of 280-350 m 2 / g, a particle size of 60-100 ⁇ m, thermostated at 5O 0 C and balanced 20% - solution isopropyl alcohol at a rate of 20 ml / min. Elution is carried out with a 30% solution of isopropyl alcohol. The volume of the eluted sample is 400 ml.
  • the eluate is evaporated to 100 ml, then cooled to 4-7 ° C, the precipitate is discarded on a glass filter and dried in a vacuum oven.
  • the proposed method allows to obtain high purity dihydroquercetin (more than 98%) using low pressure chromatography, which provides a cheaper process and allows it to scale.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Abstract

Изобретение относится к хроматографическому выделению биофлавоноидов. Предложен способ получения дигидрокверцетина, включающий экстракцию измельченной древесины лиственницы алифатическим спиртом, отгонку спирта, по меньшей мере, один цикл хроматографического выделения целевого продукта на колонке, заполненной гидрофобным сорбентом при элюировании сорбента спиртосодержащей подвижной фазой, причем в качестве экстрагента и подвижной фазы используют водный раствор одного и того же спирта, выбранного из группы: метиловый, этиловый, изопропиловый, цикл хроматографического выделения осуществляют в две стадии, причем на первой стадии концентрацию спирта в растворе, наносимом на колонку, и в подвижной фазе поддерживают одинаковой, равной 20-40% об., а на второй стадии нанесение раствора на колонку осуществляют при концентрации спирта в растворе не выше 20% об., а элюирование сорбента осуществляют при концентрации спирта в подвижной фазе, по меньшей мере, на 3% превышающей концентрацию спирта в растворе, из которого осуществлено нанесение раствора, но не выше концентрации, равной 30% об., полученный при хроматографии элюат подвергают упариванию и осадок высушивают. Способ позволяет обеспечить получение продукта высокой степени чистоты с высоким выходом.

Description

Способ получения дигидрокверцетина
Изобретение относится к области выделения и очистки биофлавоноидов из лиственницы и может быть использовано для получения высокоочищенного дигидрокверцетина, предназначенного для медицинских и фармацевтических целей.
На промежуточных стадиях процесса могут быть выделены также другие компоненты: биофлаваноидный комплекс, арабиногалактан и эфирные масла.
Известен способ выделения антоцианидов из растительного сырья, путем экстракции с последующей хроматографической очисткой на бромированных полистирольных сорбентах с использованием 70% этилового спирта.
(US 6 780 442 , 2004)
Известен способ выделения флавоноидов из растительного сырья путем экстракции с последующей хроматографической очисткой на стиролдивинилбензольном сорбенте с использованием в качестве элюента водноспиртовых растворов.
(US 5912363, 15.06.1999)
Однако указанные способы предназначены для выделения комплекса биофлаваноидов, а не их отдельных компонентов.
Известен способ получения высокоочищенного дигидрокверцетина, включающий экстракцию опилок лиственницы водно-ацетоновой смесью, очистку водно-ацетонового экстракта высокоэффективной жидкостной хроматографией на обращено-фазовых сорбентах с размером частиц 5-10 мкм с использованием в качестве подвижной фазы раствора ацетона с добавкой трифторуксусной кислоты. Способ позволяет выделять продукт с чистотой более 99% для получения стандартных образцов.
(RU 2114631, 10.07.1998)
Недостатком способа является его сложность и использование дорогостоящих ВЭЖХ сорбентов, что не позволяет эффективно его масштабировать для промышленной наработки высокоочищенного дигидрокверцетина.
Наиболее близким к заявленному является способ получения дигидрокверцетина в составе биофлавоноидного комплекса, путем экстракции измельченной древесины лиственницы 96,5% спиртом этиловым с последующей реэкстракцией пропиленгликолем (пpoпaндиoл-1,2), смешиванием пропиленгликолевого экстракта с раствором хлорида натрия в воде, отделением смолы и эфирных масел, нанесением дигидрокверцетинсодержащего сырья на полиамидный сорбент, промывкой сорбента и элюированием смеси биофлаваноидов 96,5% спиртом этиловым, упариванием спирта, кристаллизацией и сушкой продукта.
(RU 2186097, 27.07.2002)
Однако данный способ не позволяет выделить дигидрокверцетин в качестве самостоятельного компонента.
Задачей настоящего изобретения является разработка способа получения высокоочищенного монокомпонентного дигидрокверцетина из лиственницы с высоким выходом и чистотой целевого продукта.
Поставленная задача решается описываемым способом получения высокоочищенного дигидрокверцетина, включающим экстракцию измельченной древесины лиственницы алифатическим спиртом с получением спиртового раствора дигидрокверцентинсодержащего сырья, отгонку спирта, по меньшей мере, один цикл хроматографического выделения целевого продукта на колонке, заполненной гидрофобным сорбентом при элюировании сорбента спиртосодержащей подвижной фазой, упаривание элюата, сушку полученного продукта, причем в качестве экстрагента и подвижной фазы используют водный раствор одного и того же спирта, выбранного из группы: метиловый, этиловый, изопропиловый, цикл хроматографического выделения осуществляют в две стадии, причем на первой стадии концентрацию спирта в дигидрокверцетинсодержащем растворе, наносимом на колонку, и в подвижной фазе поддерживают одинаковой, равной 20-40% об., а на второй стадии нанесение дигидрокверцетинсодержащего раствора на колонку осуществляют при концентрации спирта в растворе не выше 20% об., а элюирование сорбента осуществляют при концентрации спирта в подвижной фазе, по меньшей мере, на 3% превышающей концентрацию спирта в растворе, из которого осуществлено нанесение раствора, но не выше концентрации, равной 30% об.
На стадии экстракции и отгонки спирта
Предпочтительно, отгонку спирта осуществляют после добавления к экстракту пропиленгликоля в количестве около 1% об., от его объема, что предотвращает комкования и слипания сырья при недостаточном контроле за процессом упаривания спирта и позволяет получить сырье в виде концентрированного раствора. Предпочтительно, пропиленгликолевый концентрат обрабатывают 5%-ным раствором хлорида натрия, что позволяет удалить часть смолистых веществ.
На первой стадии:
Предпочтительно, нанесение и элюирование пробы на колонку осуществляют при концентрации спирта в растворе 20-40% об. При осуществлении цикла хроматографии после элюирования, колонку промывают концентрированным раствором спирта и уравновешивают водным раствором спирта с концентрацией соответствующей концентрации спирта в растворе для нанесения пробы и осуществляют следующий цикл хроматографии.
Предпочтительно, хроматографию осуществляют в термостатируемой колонке, при температуре 30-500C.
Выбранные концентрации спирта обусловлены следующим.
При концентрации спирта в растворе менее 20% увеличивается время процесса и уменьшается концентрация целевого компонента в растворе.
При концентрации спирта в растворе более 40% происходит недостаточная очистка от примесей.
На второй стадии:
Предпочтительно, нанесение пробы на колонку осуществляют при концентрации спирта в растворе 1-20% об., а элюирование осуществляют при концентрации спирта в растворе 12- 30% об.
При осуществлении цикла хроматографии после элюирования колонку промывают спиртом и уравновешивают водным раствором спирта с концентрацией, соответствующей концентрации спирта в растворе для нанесения пробы и осуществляют следующий цикл хроматографии.
Предпочтительно, хроматографию осуществляют в термостатируемой колонке, при температуре 30-500C.
Выбранные концентрации спирта обусловлены следующим.
При концентрации спирта менее 1% растворимость дигидрокверцетина недостаточна, что обусловливает снижение нагрузочной емкости колонки. При увеличении концентрации спирта выше 20% дигидрокверцетин плохо удерживается на сорбенте, что снижает нагрузочную емкость колонки или приводит к проскоку уже на стадии нанесения. Концентрация спирта при элюировании не превышает 30%, так как в этом случае происходит одновременное элюирование, сопутствующих дигидрокверцетину примесей.
Уменьшение разницы в концентрации спирта между раствором для нанесения и раствором для элюирования менее 3% значительно увеличивает время элюирования и снижает производительность процесса.
Выбранный температурный интервал обусловлен следующим.
При температуре ниже 3O0C растворимость дигидрокверцетина недостаточна для высоких нагрузок. При температуре выше 5O0C также снижаются нагрузочные характеристики и селективность из-за снижения сорбционного связывания.
Способ получения высокоочищенного дигидрокверцетина иллюстрируется следующими примерами:
Пример 1
В колонку с рубашкой размером 50x1000 мм загружают 400 г щепы лиственницы. 2 литра этилового 96%-нoгo спирта пропускают циклически через колонку снизу вверх со скоростью 500 мл/мин в течение 1 часа при температуре 6O0C. Насос прокачки отключают и подключают насос к верхней части колонны. Сверху вниз пропускают 500 мл этилового спирта и объединяют с экстрактом. Получают экстракт в объеме 2,2 л.
Раствор помещают в вакуум-испаритель и упаривают до полного удаления спирта, а затем растворяют в 250 мл 20%-нoгo этилового спирта (20% объемных в расчете на 96% этиловый спирт).
Колонну с рубашкой размером 24x45 мм, заполненную гидрофобным сорбентом Диacфep-CT-500 на основе стиролдивинилбензола с удельной поверхностью 600-1000 м /г с размером частиц 150-300 мкм, уравновешивают 20%-ным этиловым спиртом при температуре 4O0C и наносят подготовленную выше пробу со скоростью 20 мл/мин. Далее через колонну пропускают 250 мл 20%-нoгo спирта со скоростью 20 мл/мин.
Первые 250 мл собирают в виде целевой фракции, разбавляют до содержания спирта в воде 10% об. и наносят на колонну размером 24x70 мм, заполненную гидрофобным сорбентом Диacopб-130-Фeнил на основе силикагеля с удельной поверхностью 280-350 м /г с привитыми фенильными группами с размером частиц 40- 60 мкм, термостатированную при 3O0C и уравновешенную 10%-ным водным этанолом (10% объемных в расчете на 96% этиловый спирт) наносят пробу со скоростью 20 мл/мин. Элюирование осуществляют 13%-ным раствором этилового спирта. Объем элюированной пробы составляет 500 мл.
Элюат упаривают до 125 мл, затем охлаждают до 4-7 0C, выпавший осадок отбрасывают на стеклянный фильтр и сушат в сушильном вакуумном шкафу.
Получают 6,2 грамма дигидрокверцетина чистотой 98,2% по данным ВЭЖХ.
Перед очередным хроматографическим циклом колонны промывают концентрированным раствором спирта этилового и уравновешивают раствором этилового спирта с концентрацией 20% (первую колонну) и 10% (вторую колонну).
Пример 2.
В колонку с рубашкой размером 50x1000 мм загружают 400 г щепы лиственницы. 2 литра метилового спирта пропускают циклически через колонку снизу вверх со скоростью 500 мл/мин в течение 1 часа при температуре 6O0C. Насос прокачки отключают и подключают насос к верхней части колонны. Сверху вниз пропускают 500 мл метилового спирта и объединяют с экстрактом. Получают экстракт в объеме 2,2 л.
К полученному экстракту добавляют 20 мл пропиленгликоля и осуществляют вакуум-выпаривание до полного удаления спирта и воды. Получают 35 мл сиропообразного концентрата. К концентрату добавляют 60 мл 5%-нoгo хлорида натрия и перемешивают в течение 30 минут до образования осадка смолистых веществ. Образовавшуюся эмульсию декантируют растворяют в 150 мл 30%-нoгo метилового спирта и подвергают хроматографической очистке.
Колонну с рубашкой размером 24x45 мм с рубашкой, заполненную гидрофобным сорбентом Диacфep-CT-500 на основе стиролдивинилбензола с удельной поверхностью 600-1000 м2/г с размером частиц 150-300 мкм, уравновешивают 30%- ным метиловым спиртом при температуре 30°C и наносят подготовленную выше пробу со скоростью 20 мл/мин. Далее через колонну пропускают 150 мл 30%-нoгo спирта со скоростью 20 мл/мин.
Первые 200 мл собирают в виде целевой фракции, разбавляют водой до содержания спирта в воде 1% об. и наносят на колонну размером 24x70 мм, заполненную гидрофобным сорбентом Диacфep-CT-500 на основе стиролдивинилбензола с удельной поверхностью 600-1000 м2/г с размером частиц 150- 300 мкм, термостатированную при 3O0C и уравновешенную 1%-ным метиловым спиртом со скоростью 50 мл/мин. Элюирование осуществляют l l-%ным метанолом. Целевую фракцию собирают в объеме 600 мл. Раствор упаривают до объема 150 мл и охлаждают до 1-40C и выдерживают 4 часа до выпадения осадка дигидрокверцетина. Осадок отфильтровывают и высушивают в вакуум-сушильном шкафу при 4O0C над безводным гранулированным гидроксидом калия.
Получают 7,8 грамма дигидрокверцетина чистотой 99,5% по данным ВЭЖХ.
Перед очередным хроматографическим циклом колонны промывают концентрированным раствором спирта метилового и уравновешивают раствором метилового спирта с концентрацией 30% (первую колонну) и 1% (вторую колонну).
Пример 3.
В колонку с рубашкой размером 50x1000 мм загружают 400 г щепы лиственницы. 2 литра изопропилового спирта пропускают циклически через колонку снизу вверх со скоростью 500 мл/мин в течение 1 часа при температуре 6O0C. Насос прокачки отключают и подключают насос к верхней части колонны. Сверху вниз пропускают 500 мл изопропилового спирта и объединяют с экстрактом. Получают экстракт в объеме 2,2 л.
К полученному раствору добавляют 20 мл пропиленгликоля и осуществляют вакуум-выпаривание до полного удаления спирта и воды. Получают 35 мл сиропообразного концентрата. К концентрату добавляют 60 мл 5%-нoгo хлорида натрия и перемешивают в течение 30 минут до образования осадка смолистых веществ. Образовавшуюся эмульсию декантируют, растворяют в 250 мл 40%-нoгo изопропилового спирта и подвергают хроматографической очистке.
Колонну с рубашкой размером 24x45 мм с рубашкой, заполненную гидрофобным сорбентом Диacфep-CT-500 на основе стиролдивинилбензола с удельной поверхностью 600-1000 м2/г с размером частиц 150-300 мкм, уравновешивают 40%- ным изопропиловым спиртом при температуре 5O0C и наносят подготовленную выше пробу со скоростью 20 мл/мин. Далее колонну промывают 250 мл 40%-нoгo спирта со скоростью 20 мл/мин.
Первые 250 мл собирают в виде целевой фракции, разбавляют вдвое до содержания изопропилового спирта в воде 20% об. и наносят на колонну размером 24x70 мм, заполненную гидрофобным обращено-фазовым сорбентом Диacфep-130-C8 на основе силикагеля с удельной поверхностью 280-350 м2/г, размером частиц 60-100 мкм, термостатированную при 5O0C и уравновешенную 20%-ным раствором изопропилового спирта со скоростью 20 мл/мин. Элюирование осуществляют 30%-ным раствором изопропилового спирта. Объем элюированной пробы составляет 400 мл.
Элюат упаривают до 100 мл, затем охлаждают до 4-7 0C, выпавший осадок отбрасывают на стеклянный фильтр и сушат в сушильном вакуумном шкафу.
Получают 6,0 грамма дигидрокверцетина чистотой 98,5% по данным ВЭЖХ.
Перед очередным хроматографическим циклом колонны промывают концентрированным раствором изопропилового спирта и уравновешивают раствором изопропилового спирта с концентрацией 40% (первую колонну) и 20% (вторую колонну).
Таким образом, предложенный способ позволяет получить дигидрокверцетин высокой степени чистоты (более 98%) с использованием хроматографии низкого давления, что обеспечивает удешевление процесса и позволяет его масштабировать.

Claims

Формула изобретения
1. Способ получения дигидрокверцетина, включающий экстракцию измельченной древесины лиственницы алифатическим спиртом с получением спиртового раствора дигидрокверцентинсодержащего сырья, отгонку спирта, по меньшей мере, один цикл хроматографического выделения целевого продукта на колонке, заполненной гидрофобным сорбентом при элюировании сорбента спиртосодержащей подвижной фазой, упаривание элюата, сушку полученного продукта, отличающийся тем, что в качестве экстрагента и подвижной фазы используют водный раствор одного и того же спирта, выбранного из группы: метиловый, этиловый, изопропиловый, цикл хроматографического выделения осуществляют в термостатированной колонке, при 30-50° С. в две стадии, причем на первой стадии концентрацию спирта в дигидрокверцетинсодержащем растворе, наносимом на колонку, и в подвижной фазе поддерживают одинаковой, равной 20-40% об., а на второй стадии нанесение дигидрокверцетинсодержащего раствора на колонку осуществляют при концентрации спирта в растворе 1-20% об., а элюирование сорбента осуществляют при концентрации спирта в подвижной фазе, по меньшей мере, на 3% превышающей концентрацию спирта в растворе, из которого осуществлено нанесение раствора, но не выше концентрации, равной 30% об.
2. Способ по п.l, отличающийся тем, что перед отгонкой алифатического спирта из раствора дигидрокверцетинсодержащего сырья в него вводят пропиленгликоль, а полученный концентрат обрабатывают раствором хлорида натрия.
3. Способ по п.l, отличающийся тем, что на второй стадии хроматографии элюирование осуществляют при концентрации спирта в подвижной фазе, равной 12-30% об.
4. Способ по п.l. отличающийся тем, что осуществляют несколько циклов хроматографического выделения, при этом после элюирования колонку промывают спиртом и уравновешивают водным раствором спирта с концентрацией, равной его концентрации в растворе для нанесения пробы и осуществляют следующий цикл хроматографии.
PCT/RU2009/000081 2009-02-17 2009-02-17 Способ получения дигидрокверцетина Ceased WO2010095969A1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/RU2009/000081 WO2010095969A1 (ru) 2009-02-17 2009-02-17 Способ получения дигидрокверцетина

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/RU2009/000081 WO2010095969A1 (ru) 2009-02-17 2009-02-17 Способ получения дигидрокверцетина

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2010095969A1 true WO2010095969A1 (ru) 2010-08-26

Family

ID=42634078

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2009/000081 Ceased WO2010095969A1 (ru) 2009-02-17 2009-02-17 Способ получения дигидрокверцетина

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2010095969A1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2435766C1 (ru) * 2010-11-11 2011-12-10 Сергей Алексеевич Лашин Способ получения дигидрокверцетина
RU2588969C2 (ru) * 2012-02-02 2016-07-10 Лда Аг Способ получения таксифолина из древесины

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5912363A (en) * 1997-08-29 1999-06-15 Interhealth Nutraceuticals Method for extraction of proanthocyanidins from plant material
RU2186097C1 (ru) * 2001-07-06 2002-07-27 Общество с ограниченной ответственностью "Сибларекс" Состав биофлавоноидного комплекса сибел для пищевых и парфюмерных изделий и способ получения биофлавоноидного комплекса сибел для пищевых и парфюмерных изделий
CN101054369A (zh) * 2007-06-05 2007-10-17 宋云飞 一种从黄杞叶中提取分离二氢槲皮素的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5912363A (en) * 1997-08-29 1999-06-15 Interhealth Nutraceuticals Method for extraction of proanthocyanidins from plant material
RU2186097C1 (ru) * 2001-07-06 2002-07-27 Общество с ограниченной ответственностью "Сибларекс" Состав биофлавоноидного комплекса сибел для пищевых и парфюмерных изделий и способ получения биофлавоноидного комплекса сибел для пищевых и парфюмерных изделий
CN101054369A (zh) * 2007-06-05 2007-10-17 宋云飞 一种从黄杞叶中提取分离二氢槲皮素的方法

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2435766C1 (ru) * 2010-11-11 2011-12-10 Сергей Алексеевич Лашин Способ получения дигидрокверцетина
WO2012064229A1 (ru) * 2010-11-11 2012-05-18 Ostronkov Vladimir Sergeevich Способ получения дигидрокверцетина
US20130281717A1 (en) * 2010-11-11 2013-10-24 Vladimir Sergeevich Ostronkov Method for producing dihydroquercetin
JP2014503489A (ja) * 2010-11-11 2014-02-13 セルゲーヴィチ オストロンコフ ウラジミール ジヒドロクエルセチンを製造する方法
RU2588969C2 (ru) * 2012-02-02 2016-07-10 Лда Аг Способ получения таксифолина из древесины

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2445969C2 (ru) Способ выделения бетаина
JP6488379B2 (ja) 薬用クロロゲン酸の調製方法
US11583829B2 (en) Polymer for separation of analytes and methods for preparation and use of same
CN106008647B (zh) 一种苦瓜皂苷的提取方法
RU2349331C1 (ru) Способ получения дигидрокверцетина
CN108911985B (zh) 从茶花粉中分离纯化对羟基肉桂酸乙酯的方法及其应用
RU2435766C1 (ru) Способ получения дигидрокверцетина
JP7305870B2 (ja) テトラガロイルグルコースの製造方法
WO2016110864A1 (en) Process for purification of artemisinin and other constituents from artemisia annua in high yield and high purity
WO2010095969A1 (ru) Способ получения дигидрокверцетина
CN113683490B (zh) 一种次大麻二酚晶体的制备方法
Bhatlu et al. Recovery of naringin from kinnow (Citrus reticulata Blanco) peels by adsorption–desorption technique using an indigenous resin
CN103787863A (zh) 制备型高效液相色谱法制备epa的方法
CN103288870B (zh) 一种注射级高纯度磷脂酰胆碱的制备方法
CN104788509B (zh) 一种从脱脂麦胚中提取制备高纯度棉子糖的工艺
JP2023542661A (ja) ｐ－クマロイル化アントシアニンの分離精製方法
CN103936846B (zh) 一种硫酸鱼精蛋白的纯化方法
RU2349330C1 (ru) Способ получения высокоочищенного дигидрокверцетина
CN101353294A (zh) 高含量白藜芦醇分离纯化的方法
RU2114631C1 (ru) Способ выделения дигидрокверцетина
RU2308267C1 (ru) Способ выделения биологически активных изомеров дигидрокверцетина
RU2180566C1 (ru) Способ выделения дигидрокверцетина
CN1724530A (zh) 一种连续中压柱层析制备高纯度egcg的方法
CN109400606B (zh) 一种从阿哌沙班粗品中精制阿哌沙班的方法
CN102911221A (zh) 一种从栀子中工业化制备栀子苷的方法

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 09840491

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 09840491

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1