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WO2009007026A1 - Aminoacyl-prodrugs als arzneimittelwirkstoff für thromboembolische erkrankungen - Google Patents

Aminoacyl-prodrugs als arzneimittelwirkstoff für thromboembolische erkrankungen Download PDF

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Publication number
WO2009007026A1
WO2009007026A1 PCT/EP2008/005301 EP2008005301W WO2009007026A1 WO 2009007026 A1 WO2009007026 A1 WO 2009007026A1 EP 2008005301 W EP2008005301 W EP 2008005301W WO 2009007026 A1 WO2009007026 A1 WO 2009007026A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
compound
formula
meaning given
salts
acid
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/EP2008/005301
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Hans-Georg Lerchen
Ursula Krenz
Michael Härter
Mark Jean Gnoth
Georges Degenfeld
Elke Dittrich-Wengenroth
Anja BUCHMÜLLER
Susanne Röhrig
Swen Allerheiligen
Elisabeth Perzborn
Christoph Gerdes
Karl-Heinz Schlemmer
Metin Akbaba
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bayer AG
Bayer Pharma AG
Original Assignee
Bayer Healthcare AG
Bayer Schering Pharma AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer Healthcare AG, Bayer Schering Pharma AG filed Critical Bayer Healthcare AG
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Priority to BRPI0813689-0A2A priority patent/BRPI0813689A2/pt
Priority to CA2693603A priority patent/CA2693603A1/en
Priority to EP08773744A priority patent/EP2209776A1/de
Priority to US12/668,619 priority patent/US20100273789A1/en
Priority to AU2008274577A priority patent/AU2008274577A1/en
Priority to CN200880024015A priority patent/CN101790528A/zh
Publication of WO2009007026A1 publication Critical patent/WO2009007026A1/de
Priority to IL202361A priority patent/IL202361A0/en
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Ceased legal-status Critical Current

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    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
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    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
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    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Definitions

  • the present application relates to prodrug derivatives of 5-chloro-N - ( ⁇ (5 ⁇ S) -2-oxo-3- [2-fluoro-4- (3-oxomorpholin-4-yl) -phenyl] -l, 3 -oxazolidin-5-yl ⁇ methyl) thiophene-2-carboxamide, process for their preparation, their use for the treatment and / or prophylaxis of diseases and their use for the preparation of medicaments for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular thromboembolic diseases ,
  • Prodrugs are derivatives of an active substance which undergo a single or multistage biotransformation of enzymatic and / or chemical nature in vivo before the actual active substance is released.
  • a prodrug residue is usually used to improve the property profile of the underlying active ingredient [P. Ettmayer et al., J. Med. Chem. 47, 2393 (2004)].
  • the design of the prodrug residue as well as the desired release mechanism must be tailored very precisely to the individual drug, the indication, the site of action and the route of administration.
  • a large number of drugs are administered as prodrugs which have improved bioavailability over the underlying drug, for example, by improving physicochemical profile, especially solubility, active or passive absorption properties or tissue-specific distribution. Examples of the extensive literature on prodrugs are: H. Bundgaard (Ed.), Design of Prodrugs: Bioreversible Derivatives for Various Functional Groups and Chemical Entities, Elsevier Science Publishers B.V., 1985.
  • Compound (A) is an orally active, direct inhibitor of serine protease factor Xa, which exerts an essential function in the regulation of blood coagulation.
  • An oxazolidinone is! is currently undergoing in-depth clinical trials as a potential new drug for the prevention and treatment of thromboembolic disease [p. Roehrig et al., J. Med. Chem. 48, 5900 (2005)].
  • compound (A) has only a limited solubility in water and physiological media, which makes it difficult, for example, an intravenous administration of the drug.
  • the object of the present invention was therefore the identification of derivatives or prodrugs of compound (A), which have an improved solubility in said media and at the same time after application allow a controlled release of the active ingredient (A) in the body of the patient.
  • WO 2005/028473 describes acyloxymethylcarbamate prodrugs of oxazolidinones which serve to increase oral bioavailability.
  • WO 01/00622 discloses acyl prodrugs of carbamate inhibitors of inosine 5'-monophosphate dehydrogenase.
  • Another type of amide prodrugs for oxazolidinones, which release the underlying active ingredient via a multi-stage activation mechanism, is described in WO 03/006440.
  • the present invention relates to compounds of the general formula (I)
  • n is the number 1 or 2
  • X is an oxygen atom, sulfur atom or NH
  • R 1 is the side group of a natural ⁇ -amino acid or its homologs or isomers
  • R is hydrogen or methyl
  • R is hydrogen
  • R 1 and R 3 are linked via a (CH 2 ) 3 or (CH 2 ) 4 group and together with the nitrogen or carbon atom to which they are attached form a 5- or 6-membered ring,
  • Compounds according to the invention are the compounds of the formula (I) and their salts, solvates and solvates of the salts comprising the compounds of the formulas below and their salts, solvates and solvates of the salts and of the formula (I) encompassed by formula (I), hereinafter referred to as exemplary compounds and their salts, solvates and solvates of the salts, as far as the compounds of formula (I), the compounds mentioned below are not already salts, solvates and solvates of the salts.
  • the compounds of the invention may exist in stereoisomeric forms (enantiomers, diastereomers).
  • the invention therefore includes the enantiomers or diastereomers and their respective mixtures. From such mixtures of enantiomers and / or diastereomers, the stereoisomerically uniform components can be isolated in a known manner.
  • the present invention encompasses all tautomeric forms.
  • Salts used in the context of the present invention are physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention. Also included are salts which are themselves unsuitable for pharmaceutical applications but can be used, for example, for the isolation or purification of the compounds of the invention.
  • Physiologically acceptable salts of the compounds of the invention include acid addition salts of mineral acids, carboxylic acids and sulfonic acids, e.g. Salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalene disulfonic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid, lactic acid, tartaric acid, malic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid and benzoic acid.
  • salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalene disulfonic acid acetic acid, trifluoroacetic acid, propi
  • Solvates in the context of the invention are those forms of the compounds according to the invention which form a complex in the solid or liquid state by coordination with solvent molecules. Hydrates are a special form of solvates that coordinate with water. As solvates, hydrates are preferred in the context of the present invention. Unless otherwise specified, in the context of the present invention, the substituents have the following meaning:
  • the side group of an ⁇ -amino acid in the meaning of R 1 comprises both the side groups of the naturally occurring ⁇ -amino acids and the side groups of homologues and isomers of these ⁇ -amino acids.
  • the ⁇ -amino acid can be present in both the L and the D configuration or else as a mixture of the L and D form.
  • side groups are exemplified: hydrogen (glycine), methyl (alanine), propan-2-yl (valine), propan-1-yl (norvaline), 2-methylpropan-1-yl (leucine), 1-methylpropane -l-yl (isoleucine), butan-1-yl (norleucine), phenyl (2-phenylglycine), benzyl (phenylalanine), p-hydroxybenzyl (tyrosine), indol-3-ylmethyl (tryptophan), imidazol-4-ylmethyl (Histidine), hydroxymethyl (serine), 2-hydroxyethyl (homoserine), 1-hydroxyethyl (threonine), mercaptomethyl (cysteine), methylthiomethyl (S-methylcysteine), 2-mercaptoethyl (homocysteine), 2-methylthioethyl ( Methionine), carbamoylmethyl (asparagine),
  • Preferred ⁇ -amino acid side groups in the meaning of R 2 are hydrogen (glycine), methyl (alanine), propan-2-yl (valine), propan-1-yl (norvaline), imidazol-4-ylmethyl (histidine), Hydroxymethyl (serine), 1-hydroxyethyl (threonine), carbamoylmethyl (asparagine), 2-carbamoyl-ethyl (glutamine), 4-aminobutan-1-yl (lysine), 3-aminopropan-1-yl (ornithine), 3 Guanidino-propan-1-yl (arginine).
  • the L configuration is preferred.
  • radicals are substituted in the compounds according to the invention, the radicals can, unless otherwise specified, be monosubstituted or polysubstituted. In the context of the present invention, the meaning is independent of each other for all radicals which occur repeatedly. Substitution with one or two identical or different substituents is preferred. Very particular preference is given to the substitution with a substituent.
  • n is the number 1 or 2
  • X is an oxygen atom, sulfur atom or NH
  • R 1 is hydrogen, methyl, propan-2-yl, propan-1-yl, 2-methylpropan-1-yl, imidazol-4-yl-methyl, hydroxymethyl, 1-hydroxyethyl, carboxymethyl, 2-carboxyethyl, carbamoylmethyl, 2 Carbamoylethyl, 4-aminobutan-1-yl, 3-aminopropan-1-yl, 3-guanidinopropan-1-yl, benzyl or 4-hydroxybenzyl, R 2 is hydrogen or methyl,
  • R 3 is hydrogen
  • R 1 and R 3 are linked via a (CH 2 ) 3 or (CH 2 ) 4 group and together with the nitrogen or carbon atom to which they are attached form a 5- or 6-membered ring,
  • n is the number 1 or 2
  • X is NH
  • R 1 is hydrogen, methyl, propan-2-yl, 2-methylpropan-1-yl, imidazol-4-ylmethyl, hydroxymethyl, 1-hydroxyethyl, carboxymethyl, 2-carboxyethyl, carbamoylmethyl, 2-carbamoylethyl, 4-aminobutane-1 -yl, benzyl or 4-hydroxybenzyl,
  • R 2 is hydrogen
  • R 3 is hydrogen
  • R 1 is hydrogen, methyl, propan-2-yl, 2-methylpropan-1-yl, imidazol-4-ylmethyl, hydroxymethyl, 1-hydroxyethyl, carboxymethyl, 2-carboxyethyl , Carbamoylmethyl, 2-carbamoylethyl, 4-aminobutan-1-yl, 3-guanidinopropan-1-yl, benzyl or 4-hydroxybenzyl.
  • R 1 is hydrogen, methyl, propan-2-yl, 2-methylpropan-1-yl, imidazol-4-ylmethyl, hydroxymethyl, 1-hydroxyethyl, carboxymethyl, 2-carboxyethyl , Carbamoylmethyl, 2-carbamoylethyl, 4-aminobutan-1-yl, benzyl or 4-hydroxybenzyl.
  • Another object of the invention is a process for the preparation of the compounds of formula (I), characterized in that either
  • PG is an amino-protecting group such as ter ⁇ -butoxycarbonyl (Boc) or benzyloxycarbonyl (Z)
  • n, R 1 , R 2 , R 3 and PG have the abovementioned meaning
  • n, R, R and R have the abovementioned meaning
  • PG is an amino-protecting group such as tert-butoxycarbonyl (Boc) or benzyloxycarbonyl (Z),
  • n, R 1 , R 2 , R 3 and PG have the abovementioned meaning, and subsequently the protective group PG by customary methods to obtain a compound of the formula
  • PG is an amino-protecting group such as, for example, tert-butoxy-carbonyl (Boc) or benzyloxycarbonyl (Z),
  • n, R, R, R and PG have the abovementioned meaning
  • the compounds of formula (I-A), (I-B) and (DC) may also be present in the form of their salts. These salts may optionally be converted to the free base with the appropriate (i) solvents and / or (ii) bases.
  • Protecting group PG is carried out by conventional methods known from peptide chemistry [see, e.g. T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York,
  • R 1 protecting groups can be removed simultaneously with the removal of PG or in a separate reaction step before or after the elimination of PG.
  • amino-protecting group PG tert-butoxycarbonyl (Boc) or benzyloxycarbonyl (Z) is preferably used in the above processes.
  • Boc tert-butoxycarbonyl
  • Z benzyloxycarbonyl
  • Methods preferably by reaction with a strong acid such as hydrogen chloride, bromine hydrogen or trifluoroacetic acid in an inert solvent such as dioxane, dichloromethane or acetic acid.
  • a strong acid such as hydrogen chloride, bromine hydrogen or trifluoroacetic acid in an inert solvent such as dioxane, dichloromethane or acetic acid.
  • the inert solvents used in process steps (A) + (H) -> (HI) and (A) + (VII) ⁇ (VTU) are preferably tetrahydrofuran, N, N-dimethylformamide or dimethyl sulfoxide; particularly preferred is N, N-dimethylformamide.
  • Particularly suitable bases in these reactions are sodium hydride.
  • the reactions mentioned are generally carried out in a temperature range of 0 0 C to +40 0 C at atmospheric pressure.
  • the process step (HI) + (IV) -> (V) is preferably carried out in N, N-dimethylformamide as a solvent.
  • the reaction in a temperature range of 0 0 C to +50 0 C, is forthcoming Trains t at +20 0 C to +50 0 C, at atmospheric pressure carried out.
  • the reaction can also be carried out advantageously under ultrasound treatment.
  • the compounds according to the invention and their salts are useful prodrugs of the active compound (A). On the one hand they have good stability, for example at pH 4, and on the other hand show efficient conversion to the active compound (A) in vivo. Moreover, the compounds according to the invention have good solubility in water and other physiologically compatible media, making them suitable for therapeutic use, especially in intravenous administration
  • Another object of the present invention is the use of the compounds according to the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, preferably of thromboembolic diseases and / or thromboembolic complications
  • STEMI myocardial infarction with ST segment elevation
  • non-STEMI ST segment elevation
  • stable angina pectoris unstable angina pectories
  • reocclusions and pains in particular, pay particular attention to the "thromboembo disorders" in the sense of the present invention
  • coronary interventions such as angioplasty or aortocoronary bypass, peripheral arterial occlusive diseases, pulmonary embolism, deep venous thrombosis and renal vein thrombosis, transito-ischemic attacks as well as thrombotic and thromboembolic hemorrhages
  • the substances are therefore also useful in the prevention and treatment of cardiogenic thromboembolic events, such as brain ischemia, stroke and systemic thromboembolic and ischemia, in patients with acute, intermittent or persistent cardiac arrhythmias. such as atrial fibrillation, and those undergoing cardioversion, as well as patients with valvular heart disease or with artificial heart valves.
  • cardiogenic thromboembolic events such as brain ischemia, stroke and systemic thromboembolic and ischemia
  • patients with acute, intermittent or persistent cardiac arrhythmias. such as atrial fibrillation, and those undergoing cardioversion, as well as patients with valvular heart disease or with artificial heart valves.
  • the compounds of the invention are suitable for the treatment of disseminated intravascular coagulation (DIC).
  • DIC disseminated intravascular coagulation
  • Thromboembolic complications also occur in microangiopathic hemolytic anemias, extracorporeal blood circuits such as hemodialysis, and heart valve prostheses.
  • the compounds according to the invention are also suitable for the prophylaxis and / or treatment of atherosclerotic vascular diseases and inflammatory diseases such as rheumatic diseases of the musculoskeletal system, moreover also for the prophylaxis and / or treatment of Alzheimer's disease.
  • the compounds of the present invention can inhibit tumor growth and metastasis, microangiopathies, age-related macular degeneration, diabetic retinopathy, diabetic nephropathy and other microvascular diseases and for the prevention and treatment of thromboembolic complications such as venous thromboembolism in tumor patients, particularly those that undergo major surgery or chemo- or radiotherapy.
  • Another object of the present invention is the use of the inventive compounds for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is a method for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases, using PHg of the compounds of the invention.
  • compositions containing a compound of the invention and one or more other active ingredients are pharmaceutical compositions containing a compound of the invention and one or more other active ingredients, in particular for the treatment and / or prophylaxis of the aforementioned diseases.
  • suitable combination active ingredients may be mentioned by way of example and preferably:
  • Lipid-lowering agents in particular HMG-CoA (3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A) reductase inhibitors; • Coronary / vasodilators, especially ACE (angiotensin converting enzyme) inhibitors; AII (angiotensin II) receptor antagonists; beta-adrenoceptor antagonists; alpha 1 -adrenoceptor antagonists; diuretics; Calcium channel blockers; Substances that cause an increase in cyclic guanosine monophosphate (cGMP), such as soluble guanylate cyclase stimulators;
  • cGMP cyclic guanosine monophosphate
  • Plasminogen activators thrombolytics / fibrinolytics
  • thrombolysis / fibrinolysis enhancing compounds such as inhibitors of plasminogen activator inhibitor (P AI inhibitors) or inhibitors of thrombin-activated fibrinolysis inhibitor (TAFI inhibitors);
  • anticoagulant substances anticoagulants
  • platelet aggregation inhibiting substances platelet aggregation inhibitors, antiplatelet agents
  • Fibrinogen receptor antagonists (glycoprotein IIb / IIIa antagonists);
  • compositions containing at least one inventive compound are pharmaceutical compositions containing at least one inventive compound, usually together with one or more inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipients, and their use for the purposes mentioned above.
  • the compounds according to the invention can act systemically and / or locally. For this purpose, they may be applied in a suitable manner, e.g. oral, parenteral, pulmonary or nasal. For these administration routes, the compounds according to the invention can be administered in suitable administration forms.
  • the compounds of the invention rapidly and / or modified donating application forms containing the compounds of the invention in crystalline and / or amorphized and / or dissolved form, such as tablets (uncoated or coated Tablets, for example with enteric or delayed-dissolving or insoluble coatings, which control the release of the compound of the invention), tablets or films / wafers, films / lyophilisates, capsules (for example hard or soft gelatine capsules), dragees, granules, rapidly disintegrating in the oral cavity Pellets, powders, emulsions, suspensions, aerosols or solutions.
  • parenteral administration can be done bypassing a resorption step (eg, intravenous, intraarterial, intracardiac, intraspinal, or intralumbar) or with involvement of resorption (eg, intramuscular, subcutaneous, intracutaneous, percutaneous, or intraperitoneal).
  • a resorption step eg, intravenous, intraarterial, intracardiac, intraspinal, or intralumbar
  • suitable application forms include injection and infusion preparations in the form of solutions, suspensions, emulsions, lyophilisates or sterile powders.
  • inhalative dosage forms such as powder inhalers or nebulizers
  • nasally administrable dosage forms such as drops, solutions or sprays.
  • the compounds according to the invention can be converted into the stated administration forms. This can be done in a conventional manner by mixing with inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipients.
  • excipients for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol
  • solvents for example liquid polyethylene glycols
  • emulsifiers and dispersants or wetting agents for example sodium dodecyl sulfate, polyoxysorbitanoleate
  • binders for example polyvinylpyrrolidone
  • synthetic and natural polymers for example albumin
  • Stabilizers eg, antioxidants such as ascorbic acid
  • dyes eg, inorganic pigments such as iron oxides
  • flavor and / or odoriferous include, among others.
  • Excipients for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol
  • solvents for example liquid polyethylene glycols
  • emulsifiers and dispersants or wetting agents for example sodium dodecy
  • the dosage is about 0.01 to 100 mg / kg, preferably about 0.01 to 20 mg / kg and most preferably 0.1 to 10 mg / kg of body weight.
  • Method 1 Instrument: HP 1 100 with DAD Detection; Column: Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 ⁇ m; Eluent A: 5 ml perchloric acid (70%) / 1 water, eluent B: acetonitrile; Gradient: 0 min 2% B ⁇ 0.5 min 2% B ⁇ 4.5 min 90% B ⁇ 6.5 min 90% B ⁇ 6.7 min 2% B ⁇ 7.5 min 2% B; Flow: 0.75 ml / min; Column temperature: 30 ° C .; UV detection: 210 nm.
  • Method 2 Instrument: HP 1 100 with DAD Detection; Column: Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 ⁇ m; Eluent A: 5 ml perchloric acid (70%) / 1 water, eluent B: acetonitrile; Gradient: 0 min 2% B ⁇ 0.5 min 2% B ⁇ 4.5 min 90% B ⁇ 9 min 0% B ⁇ 9.2 min 2% B ⁇ 10 min 2% B; Flow: 0.75 ml / min; Column temperature: 30 ° C; UV detection: 210 nm.
  • Method 3 Device Type MS: Micromass ZQ; Device type HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Column: Phenomenex Gemini 3 ⁇ 30 mm x 3.00 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A - »2.5 min 30% A ⁇ 3.0 min 5% A ⁇ 4.5 min 5% A; Flow: 0.0 min 1 ml / min, 2.5 min / 3.0 min / 4.5 min 2 ml / min; Oven: 50 ° C .; UV detection: 210 nm.
  • Method 4 Instrument: Micromass GCT, GC6890; Column: Restek RTX-35MS, 30 m ⁇ 250 ⁇ m ⁇ 0.25 ⁇ m; constant flow with helium: 0.88 ml / min; Oven: 60 ° C; Inlet: 250 ° C; Gradient: 60 0 C (0.30 min hold), (1.7 min hold) 50 ° C / min ⁇ 120 0 C, 16 ° C / min ⁇ 250 0 C, 30 ° C / min ⁇ 300 0C.
  • Method 5 Column: GROM-SIL 120 ODS-4 HE, 10 ⁇ M, 250 mm x 30 mm; Flow: 50 ml / min; Mobile phase and gradient program: acetonitrile / 0.1% aqueous formic acid 10:90 (0-3 min), acetonitrile / 0.1% aqueous formic acid 10:90 -> 95: 5 (3-27 min), acetonitrile / 0.1% aqueous formic acid 95: 5 (27-34 min), acetonitrile / 0.1% aqueous formic acid 10:90 (34-38 min); Temperature: 22 ° C; UV detection: 254 nm.
  • Method 6 Instrument: Micromass ZQ; Device type HPLC: HP 1 100 Series; UV DAD; Column: Phenomenex Gemini 3 ⁇ 30 mm x 3.00 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A -> 2.5 min 30% A ⁇ 3.0 min 5% A ⁇ 4.5 min 5% A; Flow: 0.0 min 1 ml / min, 2.5 min / 3.0 min / 4.5 min. 2 ml / min; Temperature: 50 ° C .; UV detection: 210 nm.
  • Method 7 Device Type MS: Waters (Micromass) Quattro Micro; Device type HPLC: Agilent 1 100 series; Column: Thermo Hypersil GOLD 3 ⁇ 20mm x 4mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 100% A ⁇ 3.0 min 10% A ⁇ 4.0 min 10% A ⁇ 4.01 min 100% A (flow: 2.5 ml) ⁇ 5.00 min 100% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 2 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • Method 9 Analytical HPLC: Device: HP1090 Series II; Column: Waters XTerra C18-5, 3.9 mm x 150 mm WAT 186000478; Eluent A: 10 ml of 70% perchloric acid in 2.5 liters of water, eluent B: acetonitrile; Gradient: 0.0 min 20% B ⁇ 1 min 20% B ⁇ 4 min 90% B ⁇ 6 min 90% B ⁇ 8 min 20% B. Temperature: 40 ° C .; Flow: 1 ml / min.
  • Method 10 (analytical HPLC): Instrument: HP 1090 series ü; Column: Merck Chromolith Speed ROD RP-18e, 50 mm x 4.6 mm; Precolumn Chromolith Guard Cartridge Kit, RP-18e, 5-4.6mm; Eluent A: 5 ml perchloric acid (70%) / 1 water, eluent B: acetonitrile; Gradient: 0 min 20% B ⁇ 0.5 min 20% B ⁇ 3 min 90% B ⁇ 3.5 min 90% B ⁇ 3.51 min 20% B ⁇ 4 min 20% B; Flow: 5 ml / min; Column temperature: 40 ° C; UV detection: 210 nm.
  • Method 1 1 (preparative HPLC): Device: Gilson with UV detector, column: Kromasil Cl 8, 5 ⁇ m / 250 mm ⁇ 20 mm (flow: 25 ml / min); Eluent A: water (0.01% trifluoroacetic acid); Eluent B: acetonitrile (0.01% trifluoroacetic acid); Gradient: 0 min 5-20% B, 10 min-15 min 5-20% B, 45 min 90% B, 50 min 90% B; UV detection: 210 nm; Flow: 25 ml / min.
  • Method 12 (preparative HPLC): Device: Gilson with UV detector, column: YMC ODS AQ Cl 8, 10 ⁇ m / 250 mm x 30 mm (flow: 50 ml / min); Eluent A: water (0.01% trifluoroacetic acid), eluent B: acetonitrile (0.01% trifluoroacetic acid); Gradient: 0 min 5-20% B, 10 min-15 min 5-20% B, 45 min 90% B, 50 min 90% B; UV detection: 210 nm; Flow: 50 ml / min.
  • Method 13 Instrument: Micromass Quattro Premier with Waters UPLC Acquity; Column: Thermo Hypersil GOLD 1.9 ⁇ , 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A ⁇ 0.1 min 90% A ⁇ 1.5 min 10% A ⁇ 2.2 min 10% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 0.33 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • NMR measurements were carried out at a proton frequency of 400.13 MHz or 500.13 MHz.
  • the samples were usually dissolved in DMSO-dö; Temperature: 302 K.
  • the starting material was 5-chloro-N - ( ⁇ (55) -2-oxo-3- [2-fluoro-4- (3-oxomethyl-4-yl) -phenyl] -1,3-oxazolidin-5-yl ⁇ methyl) thiophene-2-carboxamide [compound (A)].
  • the title compound can be prepared analogously to Example 12A from compound (A) and the compound from Example 19A.
  • the title compound was prepared from Boc-glycine analogously to the literature-known specification [R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201).
  • the title compound was prepared from bis-Boc-lysine analogously to the literature [R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201).
  • the title compound was prepared from Boc-alanine analogously to the literature [R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201).
  • the aqueous phase was adjusted to pH 2 with 4M hydrochloric acid and concentrated in vacuo.
  • the residue was purified by flash chromatography on silica gel with acetonitrile / water / acetic acid 5: 1: 0.1 as eluent. The appropriate fractions were concentrated and stirred with ethyl acetate and diethyl ether. The residue was then filtered off with suction and dried under high vacuum. 9.1 g (45% of theory) of the p-methoxybenzyl-protected amino acid were obtained.
  • Urethane-protected N-carboxyanhydrides of amino acid derivatives are either commercially available or can be prepared according to literature procedures: M. Johnston et al. J. Org. 1985, 50, 2200; W. D. Meder et al. J. Am. 1990, 112, 7414; S. Mobasheri et al. J. Org. 1992, 57, 2755.
  • N-hydroxysuccinimide Esters of amino acid derivatives are either commercially available or can be prepared by standard methods of peptide chemistry. example 1
  • the title compound can be prepared analogously to Examples 2 and 25 from the compound of Example 10A and Boc-glycine.
  • the title compound can be prepared in analogy to Examples 2 and 25 from the compound of Example 1 IA and Boc-valine.
  • the title compound was prepared by dissolving 7.4 mg of the compound of Example 26 in pH 3 adjusted aqueous hydrochloric acid and subsequent lyophilization. Yield: 6.4 mg (quant.)
  • Example 6 The title compound can be prepared in analogy to Examples 4 and 26 from the compounds of Examples 1 IA and 16A.
  • Example 6
  • the title compound can be prepared analogously to Examples 4 and 26 from the compounds of Examples IA and 17A.
  • Example 8 The title compound can be prepared analogously to Examples 4 and 26 from the compounds of Examples 1 IA and 18A.
  • Example 8
  • the Braverbind ⁇ ng can be prepared in analogy to Examples 4 and 26 from the compounds of Examples 10A and 15A.
  • the title compound can be prepared analogously to Example 23 from the compound of Example 12A with Boc-glycine.
  • the deprotection can alternatively also be carried out as in Example 25, step b) described be carried out with trifluoroacetic acid and from the initially formed trifluoroacetate by salination with aqueous hydrochloric acid, the title compound can be generated.
  • the title compound can be prepared analogously to Example 23 from the compound of Example 13A with Boc-glycine.
  • the deprotection can alternatively also be carried out as described in Example 25, step b) with trifluoroacetic acid and the title compound can be generated from the initially formed trifluoroacetate by salification with aqueous hydrochloric acid.
  • the title compound can be prepared analogously to Example 23 from the compound of Example 13A with Boc-proline.
  • the deprotection can alternatively also be carried out as described in Example 25, step b) with trifluoroacetic acid and the title compound can be generated from the initially formed trifluoroacetate by salification with aqueous hydrochloric acid.
  • the title compound can be prepared analogously to Example 23 from the compound of Example 13A with bis-Boc histidine.
  • the deprotection may alternatively be carried out as described in Example 25, step b) with trifluoroacetic acid and from the first formed trifluoroacetate by salting with aqueous hydrochloric acid, the title compound can be generated.
  • the title compound can be prepared analogously to Example 23 from the compound of Example 13A with Boc-valine.
  • the deprotection can alternatively also be carried out as described in Example 25, step b) with trifluoroacetic acid and the title compound can be generated from the initially formed trifluoroacetate by salification with aqueous hydrochloric acid.
  • the title compound can be prepared analogously to Example 23 from the compound of Example 13A with bis-Boc-lysine.
  • the deprotection can alternatively also be carried out as described in Example 25, step b) with trifluoroacetic acid and the title compound can be generated from the initially formed trifluoroacetate by salification with aqueous hydrochloric acid.
  • Example 16 The title compound can be prepared analogously to Example 23 from the compound of Example 13A with Boc-threonine.
  • the deprotection can alternatively also be carried out as described in Example 25, step b) with trifluoroacetic acid and the title compound can be generated from the initially formed trifluoroacetate by salification with aqueous hydrochloric acid.
  • Example 16
  • the title compound can be prepared analogously to Example 23 from the compound of Example 13A with Boc-tyrosine.
  • the deprotection can alternatively also be carried out as described in Example 25, step b) with trifluoroacetic acid and the title compound can be generated from the initially formed trifluoroacetate by salification with aqueous hydrochloric acid.
  • the title compound can be prepared analogously to Example 23 from the compound of Example 13A with Boc-asparagine.
  • the deprotection can alternatively also be carried out as described in Example 25, step b) with trifluoroacetic acid and the title compound can be generated from the initially formed trifluoroacetate by salification with aqueous hydrochloric acid.
  • the title compound can be prepared analogously to Example 23 from the compound of Example 13A with Boc-phenylalanine.
  • the deprotection can alternatively also be carried out as described in Example 25, step b) with trifluoroacetic acid and the title compound can be generated from the initially formed trifluoroacetate by salification with aqueous hydrochloric acid.
  • the title compound can be prepared analogously to Example 23 from the compound of Example 13A with Boc-glutamine.
  • the deprotection can alternatively also be carried out as described in Example 25, step b) with trifluoroacetic acid and the title compound can be generated from the initially formed trifluoroacetate by salification with aqueous hydrochloric acid.
  • the title compound can be prepared in analogy to Example 23 from the compound of Example 13A with Boc-glutamic acid tert-butyl ester.
  • the deprotection may alternatively be carried out as described in Example 25, step b) with trifluoroacetic acid and from initially formed trifluoroacetate by salting with aqueous hydrochloric acid, the title compound can be generated.
  • the title compound can be prepared analogously to Example 23 from the compound of Example 13A with Boc-serine.
  • the deprotection can alternatively also be carried out as described in Example 25, step b) with trifluoroacetic acid and the title compound can be generated from the initially formed trifluoroacetate by salification with aqueous hydrochloric acid.
  • the title compound can be prepared analogously to Example 23 from the compound of Example 13A with Boc-leucine.
  • the deprotection can alternatively also be carried out as described in Example 25, step b) with trifluoroacetic acid and the title compound can be generated from the initially formed trifluoroacetate by salification with aqueous hydrochloric acid.
  • the title compound can be prepared in analogy to Example 23 from the corresponding starting compounds.
  • test substance is suspended in water or dilute hydrochloric acid (pH 4). This suspension is shaken for 24 h at room temperature. After ultra-centrifugation at 224000g for 30 min, the supernatant is diluted with DMSO and analyzed by HPLC. Quantification is via a two-point calibration curve of the test compound in DMSO.
  • test substance weigh 0.25 mg of the test substance in a 2 ml HPLC vial and add 0.5 ml of acetonitrile. To dissolve the substance, the sample vessel is placed in the ultrasonic bath for approx. 10 seconds. Subsequently, 0.5 ml of the respective buffer solution is added and the sample is again treated in an ultrasonic bath.
  • pH 4.0 1 liter of Millipore water is adjusted to pH 4.0 with 1 N hydrochloric acid;
  • pH 7.4 90 g of sodium chloride, 13.61 g of potassium dihydrogen phosphate and 83.35 g of 1 M sodium hydroxide solution are made up to 1 liter with Millipore water and then diluted 1:10.
  • Agilent 1100 with DAD (G1314A), binary pump (G1312A), autosampler (G1329A), column oven (G1316A), thermostat (G1330A); Column: Kromasil 100 C18, 250 mm x 4.6 mm, 5 ⁇ m; Column temperature: 30 ° C .; Eluent A: water + 5 ml perchloric acid / liter, eluent B: acetonitrile.
  • a defined volume of plasma (e.g., 2.0 ml) is heated to 37 ° C in a closed test tube in a water bath. After reaching the target temperature, a defined amount of the test substance is added as a solution (volume of the solvent max 2% of the plasma volume). The plasma is shaken and a first sample (50-100 ⁇ l) taken immediately. In the period up to 2 h after the start of incubation, 4-6 further aliquots are subsequently taken.
  • test substance and optionally known cleavage products of the test substance are quantitatively determined in the supernatant with a suitable LC / MS-MS method.
  • test substance On the day of the test, a defined dose of the test substance is administered as a solution with a Hamilton ® glass syringe into the tail vein (bolus administration, application time ⁇ 10 s). Within 24 hours of substance administration, blood samples (8-12 times) are taken sequentially across the catheter. For plasma collection, the samples are centrifuged in heparinized tubes. At each point in time, a defined plasma volume for protein precipitation is mixed with acetonitrile. After centrifugation, test substance and optionally known cleavage products of the test substance are quantitatively determined in the supernatant with a suitable LC / MS-MS method.
  • the pharmacokinetic parameters of the test substance or of the active substance compound (A) released therefrom are calculated from the measured plasma concentrations.
  • the metabolic stability of the test compounds to hepatocytes is determined by incubating the compounds at low concentrations (preferably below 1 ⁇ M) and at low cell counts (preferably at 1 ⁇ 10 6 cells / ml) in order to ensure the best possible linear kinetic conditions in the experiment. Seven samples from the incubation solution are taken at a fixed time interval for LC-MS analysis to determine the half life (ie degradation) of the compound. From this half-life different "clearance" parameters (CL) and "F max " values are calculated (see below).
  • the CL and F max values are a measure of the phase I and phase 2 metabolism of the compound in the hepatocytes.
  • its concentration generally becomes limited to 1% (acetonitrile) and 0.1% (DMSO).
  • Fasting male rats (strain: HSD CPB: WU) are anesthetized by intraperitoneal administration of a Rompun / Ketavet solution (12 mg / kg / 50 mg / kg). Thrombus formation is performed in an arteriovenous shunt following the procedure described by PC Wong et al. described method [Thrombosis Research 82 (2), 117-126 (1996)]. For this purpose, the left jugular vein and the right carotid artery are dissected free.
  • An 8 cm long polyethylene catheter (PE60, Becton-Dickinson) is inserted into the artery, followed by a 6 cm long Tygon tube (R-3606, ID 3.2 mm, from Kronlab), which is roughened to produce a thrombogenic surface and to a double loop nylon thread (60 x 0.26 mm, Berkley Trilene) included.
  • a 2 cm long polyethylene catheter (PE60, Becton-Dickinson) is integrated and connected to the Tygon tube via a 6 cm long polyethylene catheter (PEI 60, Becton-Dickinson).
  • the tubes are filled with saline before opening the shunt.
  • the extracorporeal circuit is kept for 15 min. get right.
  • test substance as a solution in physiological saline adjusted to pH 4 with 0.1N hydrochloric acid
  • the test substance is administered as a bolus injection prior to application of the extracorporeal circuit.
  • the compounds according to the invention can be converted, for example, into pharmaceutical preparations as follows:
  • the compound according to the invention is dissolved in a concentration below the saturation solubility in a physiologically acceptable solvent (eg isotonic saline solution, glucose solution 5% and / or PEG 400 solution 30%, which are each adjusted to a pH of 3-5) ,
  • a physiologically acceptable solvent eg isotonic saline solution, glucose solution 5% and / or PEG 400 solution 30%, which are each adjusted to a pH of 3-5
  • the solution is optionally filtered sterile and / or filled into sterile and pyrogen-free injection containers.

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Abstract

Die vorliegende Anmeldung betrifft Prodrug-Derivate von 5-Chlor-N-({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3- oxomorpholin-4-yl)phenyl]-1,3-oxazolidin-5-yl}methyl)thiophen-2-carboxamid, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von thromboembolischen Erkrankungen.

Description

AMINOACYL-PRODRUGS ALS ARZNEIMITTELWIRKSTOFF FÜR
THROMBOEMBOLISCHE
ERKRANKUNGEN
Die vorliegende Anmeldung betrifft Prodrug-Derivate von 5-Chlor-N-({(5<S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3- oxomorpholin-4-yl)phenyl]-l ,3-oxazolidin-5-yl}methyl)thiophen-2-carboxamid, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von thromboembolischen Erkrankungen.
Prodrugs sind Derivate eines Wirkstoffs, die in vivo eine ein- oder mehrstufige Biotransformation enzymatischer und/oder chemischer Art durchlaufen, bevor der eigentliche Wirkstoff freigesetzt wird. Ein Prodrug-Rest wird in der Regel genutzt, um das Eigenschaftsprofil des zu Grunde liegen- den Wirkstoffs zu verbessern [P. Ettmayer et al., J. Med. Chem. 47, 2393 (2004)]. Um ein optimales Wirkprofil zu erreichen, muss dabei das Design des Prodrug-Restes ebenso wie der angestrebte Freisetzungsmechanismus sehr genau auf den individuellen Wirkstoff, die Indikation, den Wirkort und die Applikationsroute abgestimmt werden. Eine große Zahl von Arzneimitteln wird als Prodrugs verabreicht, die gegenüber dem zu Grunde liegenden Wirkstoff eine verbesserte Bioverfügbarkeit aufweisen, beispielsweise erzielt durch eine Verbesserung des physikochemischen Profils, speziell der Löslichkeit, der aktiven oder passiven Absorptionseigenschaften oder der gewebsspezifischen Verteilung. Aus der umfangreichen Literatur über Prodrugs sei beispielhaft genannt: H. Bundgaard (Ed.), Design of Prodrugs: Bioreversible derivatives for various functional groups and chemical entities, Elsevier Science Publishers B.V., 1985.
5-Chlor-N-({(5S)-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-2-oxo-l,3-oxazolidin-5-yl}methyl)- thiophen-2-carbonsäureamid [Verbindung (A)] ist ein oral wirksamer, direkter Inhibitor der Serin- Protease Faktor Xa, welche eine essentielle Funktion bei der Regulation der Blutgerinnung ausübt. Ein Oxazolidinon befinde! sich gegenwärtig in vertiefter klinischer Prüfung als möglicher neuer Arzneimittelwirkstoff für die Prävention und Therapie thromboembolischer Erkrankungen [S. Roehrig et al., J. Med. Chem. 48, 5900 (2005)].
(A)
Figure imgf000002_0001
Verbindung (A) weist jedoch nur eine begrenzte Löslichkeit in Wasser und physiologischen Medien auf, was beispielsweise eine intravenöse Applikation des Wirkstoffs erschwert. Aufgabe der vorliegenden Erfindung war daher die Identifizierung von Derivaten oder Prodrugs von Verbindung (A), die eine verbesserte Löslichkeit in den genannten Medien besitzen und gleichzeitig nach Applikation eine kontrollierte Freisetzung des Wirkstoffs (A) im Körper des Patienten erlauben.
In WO 2005/028473 werden Acyloxymethylcarbamat-Prodrugs von Oxazolidinonen beschrieben, die einer Erhöhung der oralen Bioverfügbarkeit dienen. In WO 01/00622 werden Acyl-Prodrugs von Carbamat-Inhibitoren der Inosin-5'-monophosphat-Dehydrogenase offenbart. Eine weitere Art von Amid-Prodrugs für Oxazolidinone, die über einen mehrstufigen Aktivierungsmechanismus den zu Grunde liegenden Wirkstoff freisetzen, ist in WO 03/006440 beschrieben.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Verbindungen der allgemeinen Formel (I)
Figure imgf000003_0001
in welcher
n für die Zahl 1 oder 2 steht,
X für ein Sauerstoffatom, Schwefelatom oder NH steht,
R1 für die Seitengruppe einer natürlichen α-Aminosäure oder ihrer Homologe oder Isomere steht,
R für Wasserstoff oder Methyl steht,
R für Wasserstoff steht,
oder R1 und R3 sind über eine (CH2)3- oder (CH2)4-Gruppe verknüpft und bilden zusammen mit dem Stickstoff- bzw. Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind einen 5- bzw. 6-Ring,
sowie ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
Erfindungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, die von Formel (I) umfassten Verbindungen der nachfolgend genannten Formeln und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze sowie die von Formel (I) umfassten, nachfolgend als Ausführungsbeispiele genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in stereoisomeren Formen (Enantiomere, Diastereomere) existieren. Die Erfindung umfasst deshalb die Enantiomeren oder Diastereomeren und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren.
Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegende Erfindung sämtliche tautomere Formen.
Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind, jedoch beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Säureadditionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethan- sulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Trifluor- essigsaure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.
Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt. Als Solvate sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung Hydrate bevorzugt. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:
Die Seitengruppe einer α-Aminosäure in der Bedeutung von R1 umfasst sowohl die Seitengruppen der natürlich vorkommenden α-Aminosäuren als auch die Seitengruppen von Homologen und Iso- meren dieser α-Aminosäuren. Die α-Aminosäure kann hierbei sowohl in der L- als auch in der D- Konfiguration oder auch als Gemisch der L- und D-Form vorliegen. Als Seitengruppen seien beispielhaft genannt: Wasserstoff (Glycin), Methyl (Alanin), Propan-2-yl (Valin), Propan-1-yl (Nor- valin), 2-Methylpropan-l-yl (Leucin), 1-Methylpropan-l-yl (Isoleucin), Butan-1-yl (Norleucin), Phenyl (2-Phenylglycin), Benzyl (Phenylalanin), p-Hydroxybenzyl (Tyrosin), Indol-3-ylmethyl (Tryptophan), Imidazol-4-ylmethyl (Histidin), Hydroxymethyl (Serin), 2-Hydroxyethyl (Homo- serin), 1 -Hydroxyethyl (Threonin), Mercaptomethyl (Cystein), Methylthiomethyl (S-Methyl- cystein), 2-Mercaptoethyl (Homocystein), 2-Methylthioethyl (Methionin), Carbamoylmethyl (Asparagin), 2-Carbamoylethyl (Glutamin), Carboxymethyl (Asparaginsäure), 2-Carboxyethyl (Glutaminsäure), 4-Aminobutan-l-yl (Lysin), 4-Amino-3-hydroxybutan-l-yl (Hydroxylysin), 3- Aminopropan-1-yl (Ornithin), 3-Guanidinopropan-l-yl (Arginin), 3-Ureidopropan-l-yl (Citrullin). Bevorzugte α-Aminosäure-Seitengruppen in der Bedeutung von R2 sind Wasserstoff (Glycin), Methyl (Alanin), Propan-2-yl (Valin), Propan-1-yl (Norvalin), Imidazol-4-ylmethyl (Histidin), Hydroxymethyl (Serin), 1 -Hydroxyethyl (Threonin), Carbamoylmethyl (Asparagin), 2-Carbamoyl- ethyl (Glutamin), 4-Aminobutan-l-yl (Lysin), 3-Aminopropan-l-yl (Ornithin), 3-Guanidino- propan-1-yl (Arginin). Bevorzugt ist die L-Konfiguration.
Wenn Reste in den erfindungsgemäßen Verbindungen substituiert sind, können die Reste, soweit nicht anders spezifiziert, ein- oder mehrfach substituiert sein. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung gilt, dass für alle Reste, die mehrfach auftreten, deren Bedeutung unabhängig voneinander ist. Eine Substitution mit einem oder zwei gleichen oder verschiedenen Substituenten ist bevor- zugt. Ganz besonders bevorzugt ist die Substitution mit einem Substituenten.
Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher
n für die Zahl 1 oder 2 steht,
X für ein Sauerstoffatom, Schwefelatom oder NH steht,
R1 für Wasserstoff, Methyl, Propan-2-yl, Propan-1-yl, 2-Methylpropan-l-yl, Imidazol-4-yl- methyl, Hydroxymethyl, 1 -Hydroxyethyl, Carboxymethyl, 2-Carboxyethyl, Carbamoylmethyl, 2-Carbamoylethyl, 4-Aminobutan-l-yl, 3-Aminopropan-l-yl, 3-Guanidinopropan- 1 -yl, Benzyl oder 4-Hydroxybenzyl steht, R2 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R3 für Wasserstoff steht,
oder
R1 und R3 sind über eine (CH2)3- oder (CH2)4-Gruppe verknüpft und bilden zusammen mit dem Stickstoff- bzw. Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind einen 5- bzw. 6-Ring,
sowie ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher
n für die Zahl 1 oder 2 steht,
X für NH steht,
R1 für Wasserstoff, Methyl, Propan-2-yl, 2-Methylpropan-l-yl, Imidazol-4-ylmethyl, Hydroxymethyl, 1 -Hydroxyethyl, Carboxymethyl, 2-Carboxyethyl, Carbamoylmethyl, 2- Carbamoylethyl, 4-Aminobutan-l-yl, Benzyl oder 4-Hydroxybenzyl steht,
R2 für Wasserstoff steht,
R3 für Wasserstoff steht,
sowie ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher n für die Zahl 2 steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher X für NH steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für Wasserstoff, Methyl, Propan- 2-yl, 2-Methylpropan-l-yl, Imidazol-4-ylmethyl, Hydroxymethyl, 1 -Hydroxyethyl, Carboxymethyl, 2-Carboxyethyl, Carbamoylmethyl, 2-Carbamoylethyl, 4-Aminobutan-l-yl, 3-Guanidinopropan-l- yl, Benzyl oder 4-Hydroxybenzyl steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für Wasserstoff, Methyl, Propan- 2-yl, 2-Methylpropan-l-yl, Imidazol-4-ylmethyl, Hydroxymethyl, 1 -Hydroxyethyl, Carboxymethyl, 2-Carboxyethyl, Carbamoylmethyl, 2-Carbamoylethyl, 4-Aminobutan-l-yl, Benzyl oder 4- Hydroxybenzyl steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R2 für Wasserstoff steht. Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R für Wasserstoff steht.
Weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I), dadurch gekennzeichnet, dass man entweder
[A] die Verbindung der Formel
Figure imgf000007_0001
zunächst in einem inerten Lösungsmittel in Gegenwart einer Base mit einer Verbindung der Formel
Figure imgf000007_0002
in welcher n die oben angegebene Bedeutung hat,
und
für eine Abgangsgruppe wie beispielsweise Chlor, Brom oder Iod steht,
in eine Verbindung der Formel
Figure imgf000007_0003
in welcher n und Q die oben angegebene Bedeutung haben,
überführt, diese dann nach Verfahren
[Al] in einem inerten Lösungsmittel mit dem Caesiumsalz einer α-Aminocarbonsäure oder einer α-Aminothiocarbonsäure der Formel
Figure imgf000008_0001
in welcher R1, R2 und R3 die oben angegebene Bedeutung haben,
PG für eine Amino-Schutzgruppe wie beispielsweise terΛ-Butoxycarbonyl (Boc) oder Benzyloxycarbonyl (Z) steht
und
für O oder S steht,
zu einer Verbindung der Formel
Figure imgf000008_0002
in welcher n, R1, R2, R3 und PG die oben angegebene Bedeutung haben, und
X für O oder S steht,
umsetzt und nachfolgend die Schutzgruppe PG nach üblichen Methoden unter Erhalt einer Verbindung der Formel
Figure imgf000009_0001
in welcher n, R , R und R die oben angegebene Bedeutung haben, und
X für O oder S steht,
entfernt
oder
[A2] in einem inerten Lösungsmittel in Gegenwart einer Base mit einer α- Aminothiocarbonsäure der Formel
Figure imgf000009_0002
in welcher R1, R2 und R3 die oben angegebene Bedeutung haben,
PG für eine Amino-Schutzgruppe wie beispielsweise tert.-Butoxycarbonyl (Boc) oder Benzyloxycarbonyl (Z) steht,
zu einer Verbindung der Formel
Figure imgf000010_0001
in welcher n, R1, R2, R3 und PG die oben angegebene Bedeutung haben, umsetzt und nachfolgend die Schutzgruppe PG nach üblichen Methoden unter Erhalt einer Verbindung der Formel
Figure imgf000010_0002
in welcher n, R | 1 , D R2 . u.∞ndΛ T Rj 3 die oben angegebene Bedeutung haben, entfernt
oder
[B] Verbindung (A) in einem inerten Lösungsmittel in Gegenwart einer Base mit einer Verbindung der Formel
Figure imgf000011_0001
in welcher n die oben angegebene Bedeutung hat,
zu einer Verbindung der Formel
Figure imgf000011_0002
in welcher n die oben angegebene Bedeutung hat,
umsetzt, anschließend die Schutzgruppen nach üblichen Methoden unter Erhalt einer Verbindung der Formel
(IX),
Figure imgf000011_0003
in welcher n die oben angegebene Bedeutung hat, entfernt und dann in Gegenwart einer Base mit einer Verbindung der Formel
Figure imgf000012_0001
in welcher R1, R2 und R3 die oben angegebene Bedeutung haben,
AG für Hydroxy oder Halogen, bevorzugt Chlor oder Brom, steht oder zusammen mit der Carbonylgruppe einen Aktivester, bevorzugt einen N-Hydoxysuccinimidester, oder ein gemischtes Anhydrid, bevorzugt einen Kohlensäurealkylester, besonders bevorzugt einen Kohlensäureethylester, bildet, und
PG für eine Amino-Schutzgruppe wie beispielsweise ter/.-Butoxycarbonyl (Boc) oder Benzyloxycarbonyl (Z) steht,
unter Erhalt einer Verbindung der Formel
Figure imgf000012_0002
in welcher n, R , R , R und PG die oben angegebene Bedeutung haben, umsetzt,
und anschließend die Schutzgruppe PG nach üblichen Methoden unter Erhalt einer Verbindung der Formel
Figure imgf000013_0001
in welcher n, R1, R2 und R3 die oben angegebene Bedeutung haben, entfernt
und die jeweils resultierenden Verbindungen der Formel (I-A) bzw. (I-B) gegebenenfalls mit den entsprechenden (i) Lösungsmitteln und/oder (ii) Säuren in ihre Solvate, Salze und/oder Solvate der Salze überführt.
Die Verbindungen der Formel (I-A), (I-B) und (DC) können auch in Form ihrer Salze vorliegen. Diese Salze können gegebenenfalls mit den entsprechenden (i) Lösungsmitteln und/oder (ii) Basen in die freie Base überführt werden.
In dem Rest R1 gegebenenfalls vorhandene funktionelle Gruppen können bei den zuvor beschriebenen Reaktionssequenzen, falls zweckmäßig oder erforderlich, auch in temporär geschützter Form vorliegen. Die Einführung und Entfernung solcher Schutzgruppen wie auch der
Schutzgruppe PG erfolgt hierbei nach üblichen, aus der Peptidchemie bekannten Methoden [siehe z.B. T.W. Greene und P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York,
1999; M. Bodanszky und A. Bodanszky, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin, 1984].
Solche in R1 gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen können hierbei gleichzeitig mit der Abspaltung von PG oder in einem separaten Reaktionsschritt vor oder nach der Abspaltung von PG entfernt werden.
Als Amino-Schutzgruppe PG wird bei den obigen Verfahren bevorzugt tert.-Butoxycarbonyl (Boc) oder Benzyloxycarbonyl (Z) verwendet. Die Abspaltung dieser Schutzgruppen sowie die
Abspaltung der Schutzgruppen in dem Verfahrensschritt (VIII) — > (X) wird nach üblichen
Methoden, vorzugsweise durch Reaktion mit einer starken Säure wie Chlorwasserstoff, Brom- wasserstoff oder Trifluoressigsäure in einem inerten Lösungsmittel wie Dioxan, Dichlormethan oder Essigsäure durchgeführt.
Als inerte Lösungsmittel werden in den Verfahrensschritten (A) + (H) -» (HI) und (A) + (VII) → (VTU) vorzugsweise Tetrahydrofuran, NN-Dimethylformamid oder Dimethylsulfoxid verwendet; besonders bevorzugt ist NN-Dimethylformamid. Als Base ist bei diesen Reaktionen insbesondere Νatriumhydrid geeignet. Die genannten Umsetzungen werden im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von 00C bis +400C bei Normaldruck durchgeführt.
Als inerte Lösungsmittel werden in den Verfahrensschritten (HI) + (VI) -> (V-A) und (DC) + (X) — > (XI) vorzugsweise Tetrahydrofuran, NN-Dimethylformamid oder Dimethylsulfoxid verwendet; besonders bevorzugt ist NN-Dimethylformamid. Als Base ist bei diesen Reaktionen insbesondere Ethyldiisopropylamin geeignet. Die genannten Umsetzungen werden im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von 00C bis +400C bei Normaldruck durchgeführt.
Der Verfahrensschritt (HI) + (IV) — > (V) erfolgt bevorzugt in NN-Dimethylformamid als Lösungsmittel. Im Allgemeinen wird die Reaktion in einem Temperaturbereich von 00C bis +500C, bevor- zugt bei +200C bis +500C, bei Normaldruck durchgeführt. Die Umsetzung kann auch vorteilhaft unter Ultraschall-Behandlung ausgeführt werden.
Die Verbindungen der Formeln (II), (IV), (VI), (VII) und (X) sind kommerziell erhältlich, literaturbekannt oder können nach literaturüblichen Verfahren hergestellt werden. Die Herstellung der Verbindung (A) ist in den Beispielen beschrieben.
Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen kann durch das folgende Syntheseschema veranschaulicht werden:
Schema
Figure imgf000015_0001
Figure imgf000015_0002
2 Tπfluoressigsaure
Figure imgf000015_0003
Die erfindungsgemaßen Verbindungen und ihre Salze stellen nützliche Prodrugs der Wirkstoff- Verbindung (A) dar Sie weisen einerseits eine gute Stabilität zum Beispiel bei pH 4 auf und zeigen andererseits eine effiziente Konversion zur Wirkstoff-Verbindung (A) in vivo Darüber hinaus besitzen die erfindungsgemaßen Verbindungen eine gute Loshchkeit in Wasser und anderen physiologisch vertraglichen Medien, was sie für die therapeutische Anwendung insbesondere bei intravenöser Applikation geeignet macht
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist der Einsatz der erfindungsgemaßen Verbin- düngen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, vorzugsweise von thromboembo- hschen Erkrankungen und/oder thromboembohschen Komplikationen
Zu den „thromboembohschen Erkrankungen" im Sinne der vorliegenden Erfindung zahlen insbesondere Erkrankungen wie Herzinfarkt mit ST-Segment-Erhohung (STEMI) und ohne ST- Segment-Erhohung (non-STEMI), stabile Angina Pectoris, instabile Angina Pectoπs, Reokklusio- nen und Restenosen nach Koronaπnterventionen wie Angioplastie oder aortokoronarem Bypass, peπphere arterielle Verschlusskrankheiten, Lungenembolien, tiefe venöse Thrombosen und Nierenvenenthrombosen, transitoπsche ischämische Attacken sowie thrombotischer und thrombo- embohscher Hirnschlag
Die Substanzen eignen sich daher auch zur Prävention und Behandlung von kardiogenen Thrombo- embohen, wie beispielsweise Hirn-Ischamien, Schlaganfall und systemischen Thromboembohen und Ischämien, bei Patienten mit akuten, intermittierenden oder persistierenden Herzarrhythmien, wie beispielsweise Vorhofflimmern, und solchen, die sich einer Kardioversion unterziehen, ferner bei Patienten mit Herzklappen-Erkrankungen oder mit künstlichen Herzklappen. Darüber hinaus sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung der disseminierten intravasalen Gerinnung (DIC) geeignet.
Thromboembolische Komplikationen treten ferner auf bei mikroangiopathischen hämolytischen Anämien, extrakorporalen Blutkreisläufen, wie Hämodialyse, sowie Herzklappenprothesen.
Außerdem kommen die erfindungsgemäßen Verbindungen auch für die Prophylaxe und/oder Behandlung von atherosklerotischen Gefäßerkrankungen und entzündlichen Erkrankungen wie rheumatische Erkrankungen des Bewegungsapparats in Betracht, darüber hinaus ebenso für die Prophylaxe und/oder Behandlung der Alzheimer'schen Erkrankung. Außerdem können die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Inhibition des Tumorwachstums und der Metastasenbildung, bei Mikroangiopathien, altersbedingter Makula-Degeneration, diabetischer Retinopathie, diabetischer Nephropathie und anderen mikrovaskulären Erkrankungen sowie zur Prävention und Behandlung thromboembolischer Komplikationen, wie beispielsweise venöser Thromboembolien, bei Tumorpatienten, insbesondere solchen, die sich größeren chirurgischen Eingriffen oder einer Chemo- oder Radiotherapie unterziehen, eingesetzt werden.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfmdungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwen- düng der erfindungsgemäßen Verbindungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend eine erfindungsgemäße Verbindung und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe, insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe der zuvor genannten Erkrankungen. Als geeignete Kombinationswirkstoffe seien beispielhaft und vorzugsweise genannt:
• Lipidsenker, insbesondere HMG-CoA-(3-Hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzym A)-Reduktase- Inhibitoren; • Koronartherapeutika/Vasodilatatoren, insbesondere ACE-(Angiotensin-Converting-Enzyme)- Inhibitoren; AII-(Angiotensin II)-Rezeptor-Antagonisten; ß-Adrenozeptor-Antagonisten; alpha- 1 -Adrenozeptor- Antagonisten; Diuretika; Calciumkanal-Blocker; Substanzen, die eine Erhöhung von cyclischem Guanosinmonophosphat (cGMP) bewirken, wie beispielsweise Stimulatoren der löslichen Guanylatcyclase;
• Plasminogen-Aktivatoren (Thrombolytika/Fibrinolytika) und die Thrombolyse/Fibrinolyse steigernde Verbindungen wie Inhibitoren des Plasminogen-Aktivator-Inhibitors (P AI-Inhibitoren) oder Inhibitoren des Thrombin-aktivierten Fibrinolyse-Inhibitors (TAFI-Inhibitoren);
• antikoagulatorisch wirksame Substanzen (Antikoagulantien);
• plättchenaggregationshemmende Substanzen (Plättchenaggregationshemmer, Thrombozytenaggregationshemmer);
• Fibrinogen-Rezeptor-Antagonisten (Glycoprotein-IIb/IIIa-Antagonisten);
• sowie Antiarrhythmika.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfln- dungsgemäße Verbindung, üblicherweise zusammen mit einem oder mehreren inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck können sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal oder nasal. Für diese Applikationswege können die erfindungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden.
Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende, die erfindungsgemäßen Verbindungen schnell und/oder modifiziert abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nicht-überzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden oder unlöslichen Überzügen, die die Freisetzung der erfindungsgemäßen Verbindung kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Filme/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder Weichgelatinekapseln), Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen. Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (z.B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszubereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten oder sterilen Pulvern.
Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. inhalative Arzneiformen wie Pulverinhalatoren oder Nebulizer, oder nasal applizierbare Arzneiformen wie Tropfen, Lösungen oder Sprays.
Bevorzugt ist die parenterale Applikation, insbesondere die intravenöse Applikation.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Lactose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige PoIy- ethylenglycole), Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natriumdodecyl- sulfat, Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide) und Geschmacks- und/oder Geruchskorrigentien.
Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation Mengen von etwa 0.001 bis 1 mg/kg, vorzugsweise etwa 0.01 bis 0.5 mg/kg Körpergewicht zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Dosierung etwa 0.01 bis 100 mg/kg, vorzugsweise etwa 0.01 bis 20 mg/kg und ganz besonders bevorzugt 0.1 bis 10 mg/kg Körpergewicht.
Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt bzw. Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt. So kann es in einigen Fällen ausreichend sein, mit weniger als der vorgenannten Mindestmenge auszukommen, während in anderen Fällen die genannte obere Grenze überschritten werden muss. Im Falle der Applikation größerer Mengen kann es empfehlenswert sein, diese in mehreren Einzelgaben über den Tag zu verteilen.
Die nachfolgenden Ausführungsbeispiele erläutern die Erfindung. Die Erfindung ist nicht auf die Beispiele beschränkt. Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen.
A. Beispiele
Abkürzungen und Akronyme:
abs. absolut
Boc rer/.-Butoxycarbonyl
DMF NN-Dimethylformamid
DMSO Dimethylsulfoxid d. Th. der Theorie (bei Ausbeute) h Stunde(n)
HPLC Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie
LC-MS Flüssigchromatographie-gekoppelte Massenspektrometrie min Minute(n)
MS Massenspektrometrie
NMR Kernresonanzspektrometrie
PaVC Palladium auf Aktivkohle quant. quantitativ (bei Ausbeute)
RT Raumtemperatur
R, Retentionszeit (bei HPLC)
UV Ultraviolett-Spektrometrie v/v Volumen-zu- Volumen-Verhältnis (einer Lösung)
Z Benzyloxycarbonyl
LC-MS- und HPLC-Methoden:
Methode 1 : Instrument: HP 1 100 mit DAD-Detektion; Säule: Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm; Eluent A: 5 ml Perchlorsäure (70%-ig) / 1 Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0 min 2% B → 0.5 min 2% B → 4.5 min 90% B → 6.5 min 90% B → 6.7 min 2% B → 7.5 min 2% B; Fluss: 0.75 ml/min; Säulentemperatur: 300C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 2: Instrument: HP 1 100 mit DAD-Detektion; Säule: Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm; Eluent A: 5 ml Perchlorsäure (70%-ig) / 1 Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0 min 2% B → 0.5 min 2% B → 4.5 min 90% B → 9 min 0% B → 9.2 min 2% B → 10 min 2% B; Fluss: 0.75 ml/min; Säulentemperarur: 300C; UV-Detektion: 210 nm. Methode 3: Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Säule: Phenomenex Gemini 3μ 30 mm x 3.00 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A — » 2.5 min 30%A → 3.0 min 5%A → 4.5 min 5%A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 4: Instrument: Micromass GCT, GC6890; Säule: Restek RTX-35MS, 30 m x 250 μm x 0.25 μm; konstanter Fluss mit Helium: 0.88 ml/min; Ofen: 600C; Inlet: 2500C; Gradient: 600C (0.30 min halten), 50°C/min → 1200C, 16°C/min → 2500C, 30°C/min → 3000C (1.7 min halten).
Methode 5: Säule: GROM-SIL 120 ODS-4 HE, 10 μM, 250 mm x 30 mm; Fluss: 50 ml/min; Laufmittel und Gradientenprogramm: Acetonitril/0.1% wässrige Ameisensäure 10:90 (0-3 min), Acetonitril/0.1% wässrige Ameisensäure 10:90 -» 95:5 (3-27 min), Acetonitril/0.1% wässrige Ameisensäure 95:5 (27-34 min), Acetonitril/0.1% wässrige Ameisensäure 10:90 (34-38 min); Temperatur: 22°C; UV-Detektion: 254 nm.
Methode 6: Instrument: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: HP 1 100 Series; UV DAD; Säule: Phenomenex Gemini 3μ 30 mm x 3.00 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A — > 2.5 min 30%A → 3.0 min 5%A → 4.5 min 5%A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min. 2 ml/min; Temperatur: 500C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 7 (LC-MS): Gerätetyp MS: Waters (Micromass) Quattro Micro; Gerätetyp HPLC: Agilent 1 100 Serie; Säule: Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100%A → 3.0 min 10% A → 4.0 min 10%A → 4.01 min 100%A (Fluss: 2.5 ml) → 5.00 min 100%A; Ofen: 500C; Fluss: 2 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 8 ("LC-MSV Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Phenomenex Synergi 2.5 μ MAX-RP 100A Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A → 0.1 min 90%A → 3.0 min 5%A → 4.0 min 5%A → 4.01 min 90%A; Fluss: 2 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 9 (analytische HPLC): Gerät: HP1090 Serie II; Säule: Waters XTerra C18-5, 3.9 mm x 150 mm WAT 186000478; Eluent A: 10 ml 70%-ige Perchlorsäure in 2.5 Liter Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0.0 min 20% B → 1 min 20% B → 4 min 90% B → 6 min 90% B → 8 min 20% B. Temperatur: 400C; Fluss: 1 ml/min. Methode 10: (analytische HPLC): Instrument: HP 1090 Serie ü; Säule: Merck Chromolith Speed ROD RP-18e, 50 mm x 4.6 mm; Vorsäule Chromolith Guard Cartridge Kit, RP-18e, 5-4.6mm; Eluent A: 5 ml Perchlorsäure (70%-ig) / 1 Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0 min 20% B → 0.5 min 20% B → 3 min 90% B → 3.5 min 90% B → 3.51 min 20% B → 4 min 20% B; Fluss: 5 ml/min; Säulentemperatur: 400C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 1 1 (präparative HPLC): Gerät: Gilson mit UV-Detektor, Säule: Kromasil Cl 8, 5 μm/ 250 mm x 20 mm (Fluss: 25 ml/min); Eluent A: Wasser (0.01% Trifluoressigsäure); Eluent B: Acetonitril (0.01% Trifluoressigsäure); Gradient: 0 min 5-20% B, 10 min-15 min 5-20% B, 45 min 90% B, 50 min 90% B; UV-Detektion: 210 nm; Fluss: 25 ml/min.
Methode 12 (präparative HPLC): Gerät: Gilson mit UV-Detektor, Säule: YMC ODS AQ Cl 8, 10 μm/ 250 mm x 30 mm (Fluss: 50 ml/min); Eluent A: Wasser (0.01% Trifluoressigsäure), Eluent B: Acetonitril (0.01 % Trifluoressigsäure); Gradient: 0 min 5-20% B, 10 min-15 min 5-20% B, 45 min 90% B, 50 min 90% B; UV-Detektion: 210 nm; Fluss: 50 ml/min.
Methode 13 (LC-MS): Instrument: Micromass Quattro Premier mit Waters UPLC Acquity; Säule: Thermo Hypersil GOLD 1.9μ, 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A → 0.1 min 90%A → 1.5 min 10%A → 2.2 min 10%A; Ofen: 500C; Fluss: 0.33 ml/min; UV- Detektion: 210 nm.
NMR-Spektrometrie:
NMR-Messungen wurden bei einer Protonenfrequenz von 400.13 MHz oder 500.13 MHz durchgeführt. Die Proben wurden üblicherweise in DMSO-dö gelöst; Temperatur: 302 K.
Ausgangsverbindungen :
Als Ausgangsmaterial wurde 5-Chlor-N-({(55)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]- l,3-oxazolidin-5-yl}methyl)thiophen-2-carboxamid [Verbindung (A)] verwendet.
Figure imgf000023_0001
Beispiel IA
5-Chlorthiophen-2-carbonsäurechlorid
Figure imgf000023_0002
Eine Suspension von 51.2 g (0.315 mmol) 5-Chlorthiophen-2 -carbonsäure in 307 ml Dichlormethan wurde mit 137 ml (1.57 mol) Oxalsäuredichlorid versetzt. Nach Zugabe von 2 Tropfen DMF wurde 15 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden das Lösemittel und überschüßiges Oxalylchlorid am Rotationsverdampfer entfernt. Der Rückstand wurde im Vakuum destilliert. Das Produkt siedete bei 74-78°C und einem Druck von 4-5 mbar. Es wurden 50.5 g (87% d. Th.) eines Öls erhalten, das beim Lagern im Kühlschrank fest wurde.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3, δ/ppm): 7.79 (d, IH), 7.03 (d, IH).
QCIMS (Methode 4): Rt = 5.18 min.
MS (EI+, m/z): 180/182/184 (2 35C1/37C1) M+.
Beispiel 2A
5-Chlorthiophen-2-carbonsäure-((S)-2,3-dihydroxy-propyl)-amid
(entnommen aus: CR. Thomas, Bayer HealthCare AG, DE-I 03001 U-Al (2004).)
Figure imgf000024_0001
461 g (4.35 mol) Natriumhydrogencarbonat und 350 g (3.85 mol) (2S)-3-Amino-propan-l ,2-diol- Hydrochlorid wurden bei 13-15°C in 2.1 1 Wasser vorgelegt und mit 950 ml 2- Methyltetrahydrofuran versetzt. Zu dieser Mischung wurden unter Kühlung bei 15-18°C 535 g (2.95 mol) S-Chlorthiophen^-carbonylchlorid (Verbindung aus Beispiel IA) in 180 ml Toluol über einen Zeitraum von zwei Stunden zugetropft. Zur Aufarbeitung wurden die Phasen getrennt und die organische Phase wurde in mehreren Schritten mit insgesamt 1.5 1 Toluol versetzt. Das ausgefallene Produkt wurde abgesaugt, mit Essigsäureethylester gewaschen und getrocknet. Man erhielt 593.8 g (92% d. Th.) Produkt.
Beispiel 3A
5-Chlorthiophen-2-carbonsäure-((S)-3-brom-2-hydroxy-propyl)-amid
(entnommen aus: CR. Thomas, Bayer HealthCare AG, DE-10300111-Al (2004).)
Figure imgf000024_0002
Zu einer Suspension von 100 g (0.423 mol) der Verbindung aus Beispiel 2A in 250 ml Eisessig wurden bei 21-26°C über einen Zeitraum von 30 Minuten 301.7 ml einer 33%igen Lösung von Bromwasserstoffsäure in Essigsäure zugegeben. Anschließend wurden 40 ml Essigsäureanhydrid zugegeben und der Reaktionsansatz wurde drei Stunden bei 60-650C gerührt. Bei 20-250C wurden dann über einen Zeitraum von 30 Minuten 960 ml Methanol zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 2.5 Stunden unter Rückfluss und dann über Nacht bei 20-250C gerührt. Zur Aufarbeitung wurden die Lösungsmittel im Vakuum bei ca. 95 mbar abdestilliert. Die zurückbleibende Suspension wurde mit 50 ml n-Butanol und 350 ml Wasser versetzt. Das ausgefallene Produkt wurde abgesaugt, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Man erhielt 89.8 g (71 % d. Th.) Produkt.
Beispiel 4A
5-Chlor-N-[(2S)-oxiran-2-ylmethyl]thiophen-2-carbonsäureamid
Figure imgf000025_0001
Eine Lösung von 50 g (0.167 mol) der Verbindung aus Beispiel 3 A in 500 ml wasserfreiem THF wurde mit 155 g (1.12 mol) gepulvertem Kaliumcarbonat versetzt und bei Raumtemperatur 3 Tage gerührt. Anschließend wurden die anorganischen Salze über eine Schicht von Kieselgur abgesaugt, zweimal mit je 100 ml THF gewaschen und das Filtrat am Rotationsverdampfer bei Raumtemperatur eingeengt. Es wurden 36 g (81% d. Th.) Produkt erhalten.
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6, δ/ppm): 8.81 (t, IH), 7.68 (d, IH), 7.19 (d, IH), 3.55-3.48 (m, IH), 3.29-3.22 (m, IH), 3.10-3.06 (m, IH), 2.75-2.72 (m, IH), 2.57-2.54 (m, IH).
HPLC (Methode 1): R, = 3.52 min.
MS (DCI, NH3, m/z): (35C1/37C1) 218/220 (M+H)+, 235/237 (M+NIL,)+.
Beispiel 5A
N,N-Dibenzyl-2-fluor-4-jodanilin
Figure imgf000025_0002
24.37 g (0.103 mol) 2-Fluor-4-jodanilin, 31.8 ml (0.267 mol) Benzylbromid, 23.98 g (0.226 mol) Νatriumcarbonat und 1.9 g (5.14 mmol) Tetra-n-butylarnrnoniumjodid wurden in einem Gemisch aus 100 ml Wasser und 200 ml Dichlormethan sechs Tage zum Rückfluss erhitzt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wurden die Phasen voneinander getrennt Die organische Phase wurde mit
Wasser und gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Nach Filtration wurde das Lösemittel am Rotationsverdampfer entfernt. Der erhaltene Rückstand wurde mittels Saugfϊltration über Kieselgel mit Cyclohexan als Laufmittel gereinigt. Es wurden 35 g (82% d. Th.) der Titel Verbindung erhalten.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ/ppm): 7.48 (IH, dd), 7.32-7.21 (m, 1 IH), 6.69 (dd, IH), 4.33 (s, 4H). HPLC (Methode 1): R, = 5.87 min.
MS (DCI, NH3, m/z): 418 (M+H)+.
Beispiel 6A
4-[4-(Dibenzylamino)-3-fluoφhenyl]moφholin-3-on
Figure imgf000026_0001
1.5 g (3.59 mmol) der Verbindung aus Beispiel 5A wurden in 20 ml wasserfreiem Dioxan gelöst und nacheinander mit 0.45 g (4.49 mmol) Morpholinon, 137 mg (0.719 mmol) Kupfer(I)-jodid, 1.53 g (7.19 mmol) Kaliumphosphat und 153 μl (1.44 mmol) N,N'-Dimethylethylendiamin versetzt. Die Rückflussapparatur wurde durch wiederholtes Anlegen eines leichten Vakuums und Begasen mit Argon inertisiert. Das Reaktionsgemisch wurde 15 Stunden zum Rückfluss erhitzt. Nach dieser Zeit ließ man auf Raumtemperatur abkühlen. Es wurde mit Wasser versetzt und mit Ethylacetat extrahiert. Der organische Extrakt wurde nacheinander mit Wasser und gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Es wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, anschließend filtriert und das Filtrat im Vakuum vom Lösemittel befreit. Der Rückstand wurde mittels Saugfiltration über Kieselgel mit Cyclohexan/Ethylacetat 1 : 1 als Laufmittel gereinigt. Es wurden 1.38 g (98% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ/ppm): 7.32-7.28 (m, 9H), 7.26-7.20 (m, 2H), 7.00-6.92 (m, 2H), 4.33 (s, 4H), 4.15 (s, 2H), 3.91 (dd, 2H), 3.55 (dd, 2H).
HPLC (Methode 1): R, = 4.78 min.
MS (DCI, NH3, m/z): 391 (M+H)+.
Beispiel 7A
4-(4-Amino-3-fiuorphenyl)morpholin-3-on
Figure imgf000027_0001
Methode 1 :
700 mg (1.79 mmol) der Verbindung aus Beispiel 6A wurden in 70 ml Ethanol gelöst und mit 95 mg Palladium auf Aktivkohle (10%) versetzt. Es wurde bei Raumtemperatur und einem Wasserstoffdruck von 1 bar eine Stunde lang hydriert. Dann wurde vom Katalysator über wenig Kieselgur abfiltriert und das Filtrat am Rotationsverdampfer eingeengt. Es wurden 378 mg (95% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ/ppm): 7.04 (dd, IH), 6.87 (dd, IH), 6.73 (dd, IH), 5.17 (s, breit, 2H), 4.12 (s, 2H), 3.91 (dd, 2H), 3.62 (dd, 2H).
HPLC (Methode 1): R, = 0.93 min.
MS (DCI, NH3, m/z): 21 1 (M+H)+, 228 (M+NH,)*.
Methode 2:
Eine Suspension von 29.6 g (125 mmol) 2-Fluor-4-iodanilin, 15.8 g (156 mmol, 1.25 eq.) Morpholin-3-on [J.-M. Lehn, F. Montavon, HeIv. Chim. Acta 1976, 59, 1566-1583], 9.5 g (50 mmol, 0.4 eq.) Kupfer(I)iodid, 53.1 g (250 mmol, 2 eq.) Kaliumphosphat und 8.0 ml (75 mmol, 0.6 eq.) NN'-Dimethylethylendiamin in 300 ml Dioxan wurde unter Argon über Nacht unter Rückfluss gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde nach Abkühlen auf RT über eine Kieselgur- Schicht filtriert und der Rückstand mit Dioxan gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wurde mittels Flash-Chromatographie gereinigt (Kieselgel 60, Dichlormethan/M ethanol 100:1 → 100:3). Es wurden 24 g (74% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
LC-MS (Methode 3): Rt = 0.87 min;
MS (ESIpos): m/z = 21 1 [M+H]+;
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = 7.05 (dd, IH), 6.87 (dd, IH), 6.74 (dd, IH), 5.14 (s, 2H), 4.1 1 (s, 2H), 3.92 (dd, 2H), 3.63 (dd, 2H). Beispiel 8A
5-Chlor-N-[(2R)-3-{[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]amino}-2-hydroxypropyl]thiophen-2- carbonsäureamid
Figure imgf000028_0001
Eine Lösung von 376 mg (1.79 mmol) des Produktes aus Beispiel 7A und 429 mg (1.97 mmol) der Verbindung aus Beispiel 4A in 10 ml Acetonitril wurde mit 600 mg (2.69 mmol) Magnesiumperchlorat versetzt und 15 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Es wurde mit Wasser versetzt und mit Ethylacetat extrahiert. Der organische Extrakt wurde nacheinander mit Wasser und gesättigter Νatriumchloridlösung gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Nach Filtration wurde das Lösemittel am Rotationsverdampfer entfernt. Der Rückstand wurde mittels präparativer HPLC (Methode 5) gereinigt. Es wurden 503 mg (64% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6, δ/ppm): 8.61 (t, IH), 7.68 (d, IH), 7.18 (d, IH), 7.11 (dd, IH), 6.97 (dd, IH), 6.73 (dd, IH), 5.33 (t, IH), 5.14 (d, IH), 4.13 (s, 2H), 3.92 (dd, 2H), 3.87-3.79 (m, IH), 3.63 (dd, 2H), 3.39-3.22 (m, 2H, teilweise überlagert vom Wassersignal), 3.21-3.15 (m, IH), 3.08-3.02 (m, IH).
HPLC (Methode 1): R, = 3.75 min.
MS (DCI, NH3, m/z): 428/430 (35C1/37C1) (M+H)+, 445/447 (M+N1L,)+.
Beispiel 9A
5-Chlor-N-({(5S)-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-2-oxo-l ,3-oxazolidin-5-yl}methyl)- thiophen-2 -carbonsäureamid
Figure imgf000028_0002
Methode 1 :
Eine Lösung von 478 mg (1.12 mmol) des Produktes aus Beispiel 8A und 363 mg (2.24 mmol) Carbonyldiimidazol in 10 ml Butyronitril wurde mit 2.7 mg (0.022 mmol) 4- Dimethylaminopyridin versetzt und auf 700C erwärmt. Nach drei Tagen wurde das Lösemittel am Rotationsverdampfer entfernt. Das Produkt wurde mittels präparativer HPLC (Methode 5) aus dem Rückstand isoliert. Es wurden 344 mg (68% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ/ppm): 8.98 (t, IH), 7.70 (d, IH), 7.52 (dd, IH), 7.48 (dd, IH), 7.31 (dd, IH), 7.21 (d, IH), 4.91-4.84 (m, IH), 4.21 (s, 2H), 4.12 (t, IH), 3.98 (dd, 2H), 3.80 (dd, IH), 3.76 (dd, 2H), 3.68-3.57 (m, 2H).
HPLC (Methode 1): R, = 3.82 min.
MS (DCI, NH3, m/z): 41MW (35Cy37Cl) (M+NH4)+.
Methode 2:
Eine Lösung von 11.2 g (36 mmol) der Verbindung aus Beispiel 62A in 224 ml Pyridin wurde bei 00C mit 7.9 g (43 mmol, 1.2 eq.) der Verbindung aus Beispiel IA versetzt. Nach 30 min wurde das Reaktionsgemisch im Vakuum eingeengt und der Rückstand in Wasser und Dichlormethan aufgenommen. Nach Phasentrennung wurde die wässrige Phase zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden mit Wasser und mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in Dichlormethan verrührt, filtriert und im Vakuum getrocknet, wobei 7.4 g (45% d. Th.) der Titelverbindung erhalten wurden. Das Filtrat wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand mittels Flash-Chromatographie gereinigt (Kieselgel 60, Dichlormethan/Methanol 100: 1 → 100:2), wobei weitere 1.9 g (12% d. Th.) der Titelverbindung erhalten wurden.
HPLC (Methode 2): R, = 3.74 min;
MS (ESIpos): m/z = 454 [M+H]+;
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = 8.94 (t, IH), 7.69 (d, IH), 7.52 (dd, IH), 7.48 (dd, IH), 7.31 (dd, IH), 7.20 (d, IH), 4.92-4.84 (m, IH), 4.21 (s, 2H), 4.12 (t, IH), 3.97 (t, 2H), 3.81 (dd, IH), 3.76 (t, 2H), 3.67-3.56 (m, 2H);
Schmelzpunkte: 177°C , ΔH 84 Jg"1 und 1830C, ΔH 7 Jg"1. Beispiel IQA
5-Chlor-N-(4-chlorbutanoyl)-N-({(55)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5 -yl } methyl)thiophen-2-carboxamid
Figure imgf000030_0001
400 mg (0.88 mmol) 5-Chlor-N-({(5S)-3-[2-fluor-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]-2-oxo-l,3- oxazolidin-5-yl}methyl)-thiophen-2-carbonsäureamid [Verbindung (A)] wurden unter Argon in 40 ml absolutem DMF gelöst. Man setzte 1.677 g (1.76mmol) Νatriumhydrid (98%ig) zu und ließ 20 min bei RT rühren. Dann wurden 461 mg (11.9 mmol) Chlorbutanoylchlorid zugesetzt, wobei die Reaktionstemperatur auf RT gehalten wurde. Man rührte 16 h bei RT, setzte dann etwas Wasser zu und goss den Ansatz anschließend auf gesättigte wässrige Ammoniumchloridlösung/ Essigsäureethylester 1 : 1. Die Phasen wurden getrennt und die Essigsäureethylesterphase zunächst mit Νatriumhydrogencarbonatlösung, dann mit gesättigter Νatriumchloridlösung ausgeschüttelt und anschließend über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wurde durch präparative HPLC (Methode 1 1) gereinigt. Die dabei erhaltene nach Enolisierung entstandene bis- acylierte Verbindung wurde in 5 ml einer gesättigten Lösung aus Chlorwasserstoff in Dichlormethan über Nacht gerührt. Dann wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand im Hochvakuum getrocknet. Es wurden 20 mg (4% d. Th.) der Zielverbindung erhalten.
HPLC (Methode 10): R1 = 1.8 min;
LC-MS (Methode 7): R, = 1.2 min; m/z = 558 (M+H)+.
Beispiel IIA
5-Chlor-N-(4-chlorpentanoyl)-N-({(55)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl}methyl)thiophen-2-carboxamid
Figure imgf000031_0001
100 mg (0.22 mmol) 5-Chlor-N-({(5S)-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-2-oxo-l,3- oxazolidin-5-yl}methyl)-thiophen-2-carbonsäureamid [Verbindung (A)] wurden unter Argon in 10 ml absolutem DMF gelöst. Man setzte 11 mg (0.44 mmol) Νatriumhydrid (98%ig) zu und ließ 20 min bei RT rühren. Dann wurden 461 mg (2.98 mmol) Chlorpentanoylchlorid zugesetzt, wobei die Reaktionstemperatur auf RT gehalten wurde. Man rührte 16 h bei RT und goss den Ansatz dann auf gesättigte wässrige Ammoniumchloridlösung/Essigsäureethylester 1 :1. Die Phasen wurden getrennt und die Essigsäureethylesterphase zunächst mit Νatriumhydrogencarbonatlösung, dann mit gesättigter Νatriumchloridlösung ausgeschüttelt und anschließend über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wurde durch präparative HPLC (Methode 11) gereinigt. Die dabei erhaltene nach Enolisierung entstandene bis-acylierte Verbindung wurde in 2 ml einer gesättigten Lösung aus Chlorwasserstoff in Dichlormethan über Nacht gerührt. Dann wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand im Hochvakuum getrocknet. Es wurden 20 mg (17% d. Th.) der Zielverbindung erhalten.
HPLC (Methode 10): R1 = 1.9 min;
LC-MS (Methode 6): R, = 2.4 min; m/z = 572 (M+H)+.
Beispiel 12A
N-(4-Aminobutanoyl)-5-chlor-N-({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl } methyl)thiophen-2-carboxamid-Hydrochlorid
Figure imgf000032_0001
x HCl
Stufe a):
0.5 g (1.1 mmol) der Verbindung (A) wurden unter Argonatmosphäre in 27 ml DMF gelöst, mit 79 mg (3.31 mmol) Natriumhydrid versetzt und die Mischung 30 min bei RT gerührt. Dann gab man 4.14 g (1 1 mmol) der frisch hergestellten Verbindung aus Beispiel 14A, gelöst in 3 ml DMF, hinzu. Man rührte weitere 15 min bei RT und versetzte den Ansatz dann mit 1 ml Methanol. Der Ansatz wurde auf ein 1 : 1 Gemisch aus 10%iger Natriumhydrogencarbonatlösung und Essigsäureethylester gegossen. Die organische Phase wurde abgetrennt und noch zweimal mit 10%iger Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen. Danach wurde eingeengt und der Rückstand 20 h lang bei RT mit 5 ml einer gesättigten Lösung von Chlorwasserstoff in Dichlormethan verrührt, wobei der initial entstandene Enolester gespalten wurde. Anschließend wurde eingeengt und der verbleibende Rückstand durch Flash-Chromatographie an Kieselgel mit Toluol/ Essigsäureethylester als Eluent gereinigt, wobei das Mischungsverhältnis von 1 : 1 über 1 :2 bis zu 1 :3 gesteigert wurde. Die entsprechenden Fraktionen wurden eingeengt, und man erhielt 124 mg (8% d. Th.) des zweifach geschützten Intermediats als Schaum.
HPLC (Methode 10): R, = 2.3 min;
LC-MS (Methode 8): R, = 2.33 min; m/z = 793 (M+H)+.
Stufe b):
118 mg (0.149 mmol) der oben erhaltenen Zwischenstufe wurden in 6 ml wasserfreier Trifluor- essigsaure über Nacht bei RT gerührt. Der Ansatz wurde danach im Hochvakuum eingeengt, wobei die Temperatur bei etwa 200C gehalten wurde. Der Rückstand wurde in 50 ml wässriger Salzsäure, die auf pH 3 eingestellt wurde, aufgenommen und die Lösung mit 75 ml Dichlormethan versetzt. Man schüttelte durch, trennte anschließend die wässrige Phase ab und engte diese im Hochvakuum ein. Der Rückstand wurde durch präparative HPLC (Methode 1 1) gereinigt. Die entsprechenden Fraktionen wurden vereinigt, eingeengt und anschließend aus IN Salzsäure lyophilisiert. Ausbeute: 59 mg (69% d. Th.)
HPLC (Methode 10): R, = 0.98 min;
LC-MS (Methode 8): Rt = 0.98 min; m/z = 539 (M+H)+.
Beispiel 13A
N-(5-Aminopentanoyl)-5-chlor-N-({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl } methyOthiophen^-carboxamid-Hydrochlorid
Figure imgf000033_0001
x HCl
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 12A aus Verbindung (A) und der Verbindung aus Beispiel 19A hergestellt werden.
Beispiel 14A
Benzyl-(4-chlor-4-oxobutyl)(4-methoxybenzyl)carbamat
Figure imgf000033_0002
Die Herstellung erfolgte in Analogie zu Beispiel 19A ausgehend von 4-Amino-buttersäure.
Beispiel 15A
(25)-2-[(?er/.-Butoxycarbonyl)amino]-3-methylbutanthio-S-säure
Figure imgf000034_0001
Die Titelverbindung wurde aus Boc-Valin analog literaturbekannter Vorschrift [R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201) hergestellt.
Beispiel 16A
[(tert-Butoxycarbonyl)amino]ethanthio S-säure
Figure imgf000034_0002
Die Titelverbindung wurde aus Boc-Glycin analog literaturbekannter Vorschrift [R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201) hergestellt.
Beispiel 17A
(2S)-2,6-Bis[(tert-butoxycarbonyl)amino]hexanthio S-säure
Figure imgf000034_0003
Die Titelverbindung wurde aus Bis-Boc-Lysin analog literaturbekannter Vorschrift [R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201) hergestellt.
Beispiel 18A
(2S)-2-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]propanthio S-säure
Figure imgf000035_0001
Die Titelverbindung wurde aus Boc-Alanin analog literaturbekannter Vorschrift [R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201) hergestellt.
Beispie» 19A
Benzyl-(5-chlor-5-oxopentyl)(4-methoxybenzyl)carbamat
Figure imgf000035_0002
10 g (85.4 mmol) 5-Amino-valeriansäure, 17.4 g (128 mmol) p-Anisaldehyd und 10.3 g (85.4 mmol) Magnesiumsulfat wurden in 330 ml Ethanol aufgenommen und 1 h unter Rückfluss erhitzt. Man filtrierte ab, wusch mit Ethanol nach und versetzte anschließend die Lösung portionsweise innerhalb von 15 min mit 1.94 g (51.2 mmol) Natriumborhydrid. Man setzte zunächst 10 ml Wasser zu und dann 128 ml einer 2M Natronlauge. Nach 5 min wurde mit 300 ml Wasser verdünnt und anschließend dreimal mit je 200 ml Essigsäureethylester ausgeschüttelt. Die wässrige Phase wurde mit 4M Salzsäure auf pH 2 eingestellt und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde durch Flash-Chromatographie an Kieselgel mit Acetonitril/Wasser/Essigsäure 5:1 :0.1 als Eluent gereinigt. Die entsprechenden Fraktionen wurden eingeengt und mit Essigsäureethylester und Diethylether verrührt. Der Rückstand wurde dann abgesaugt und im Hochvakuum getrocknet. Man erhielt 9.1 g (45% d. Th.) der p-Methoxybenzyl-geschützten Aminosäure.
Diese wurde in 1.6 1 Dioxan/Wasser 1 :1 aufgenommen, mit Natronlauge auf pH 10 eingestellt und anschließend tropfenweise mit 12.97 g (76 mmol) Benzyl-chlorcarbonat versetzt. Nach 15 min Rühren bei RT wurde Dioxan im Vakuum entfernt und die verbleibende Lösung mit 2M Salzsäure auf pH 2 eingestellt. Man extrahierte mit Essigsäureethylester und wusch die organische Phase anschließend zweimal mit Wasser. Die organische Phase wurde dann eingeengt und der Rückstand im Hochvakuum getrocknet. Anschließend erfolgte eine Reinigung durch Flash-Chromatographie an Kieselgel mit Acetonitril als Eluent. Die entsprechenden Fraktionen wurden eingeengt und der Rückstand im Hochvakuum getrocknet. Man erhielt 5.6 g (38% d. Th.) der geschützten Aminosäure.
LC-MS (Methode 6): R, = 2.47 min; m/z = 372 (M+H)+.
5.6 g (15 mmol) 5-{[(Benzyloxy)carbonyl](4-methoxybenzyl)amino}valeriansäure wurden in 60 ml Dichlormethan gelöst und mit 2.2 ml Thionylchlorid versetzt. Man erhitzte die Mischung 30 min lang unter Rückfluss. Danach wurde im Vakuum eingeengt, der Rückstand erneut mit Dichlormethan versetzt und abermals eingeengt. Zurück blieb ein viskoses Öl, das im Hochvakuum getrocknet wurde. Man erhielt 5.7 g (98% d. Th.) der Zielverbindung, welche ohne weitere Aufreinigung und Charakterisierung weiter umgesetzt wurde.
Ausführungsbeispiele:
Allgemeine Vorschrift 1 zur Herstellung von Caesium-Salzen von Carbonsäuren oder geeignet geschützten Aminosäure-Derivaten:
1 mmol der entsprechenden Carbonsäure wird in einer Mischung aus 10 ml Dioxan und 10 ml Wasser gelöst und mit 0.5 mmol Caesiumcarbonat versetzt. Anschließend wird lyophilisiert.
Allgemeine Vorschrift 2 zur Herstellung von urethan-geschϋtzten N-Carboxy-anhydriden von geeignet geschützten Aminosäure-Derivaten:
Figure imgf000037_0001
Urethangeschützte N-Carboxyanhydride von Aminsosäure-Derivaten sind entweder kommerziell erhältlich oder können nach Literaturvorschriften hergestellt werden: M. Johnston et al. J.Org.Chem. 1985, 50, 2200; W.D. Füller et al. J.Am.Chem.Soc. 1990, 112, 7414; S. Mobasheri et al. J.Org.Chem. 1992, 57, 2755.
Allgemeine Vorschrift 3 zur Herstellung von N-Hvdroxysuccinimid Estern von geeignet geschützten Aminosäure-Derivaten:
Figure imgf000037_0002
N-Hydroxysuccinimid Ester von Aminsosäure-Derivaten sind entweder kommerziell erhältlich oder können nach Standardmethoden der Peptidchemie hergestellt werden. Beispiel 1
2-[[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(55)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl } methyl)amino] -4-oxobutyl-glycinat-Hydrochlorid
Figure imgf000038_0001
Die Titelverbindung kann in Analogie zu den Beispielen 2 und 25 aus der Verbindung aus Beispiel 10A und Boc-Glycin hergestellt werden.
Beispiel 2
2-[[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(55)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l ,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino]-5-oxopentyl-glycinat-Hydrochlorid
Figure imgf000038_0002
Die Titelverbindung wurde durch Auflösen von 5 mg der Verbindung aus Beispiel 25 in auf pH 3 eingestellter, wässriger Salzsäure und anschließende Lyophilisation hergestellt. Ausbeute: 4.4 mg (99% d. Th.) HPLC (Methode 10): R, = 1.3 min;
LC-MS (Methode 8): R, = 1.08 min; m/z = 61 1 (M+H)+.
Beispiel 3
2-[[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(55)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l ,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino]-5-oxopentyl-L-valinat-Hydrochlorid
Figure imgf000039_0001
Die Titelverbindung kann in Analogie zu den Beispielen 2 und 25 aus der Verbindung aus Beispiel 1 IA und Boc-Valin hergestellt werden.
Beispiel 4
S-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino}-5-oxopentyl)(2S)-2-amino-3-methylbutanthioat-Hydrochlorid
Figure imgf000040_0001
Die Titelverbindung wurde durch Auflösen von 7.4 mg der Verbindung aus Beispiel 26 in auf pH 3 eingestellter, wässriger Salzsäure und anschließende Lyophilisation hergestellt. Ausbeute: 6.4 mg (quant.)
HPLC (Methode 10): R, = 1.6 min;
LC-MS (Methode 6): Rt = 1.52 min; m/z = 669 (M+H)+.
Beispiel 5
S-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino}-5-oxopentyl) aminoethanthioat-Hydrochlorid
Figure imgf000040_0002
Die Titelverbindung kann in Analogie zu den Beispielen 4 und 26 aus den Verbindungen der Beispiele 1 IA und 16A hergestellt werden. Beispiel 6
S-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino}-5-oxopentyl) (2S)-2,6-diaminohexanthioat-Dihydrochlorid
Figure imgf000041_0001
Die Titelverbindung kann in Analogie zu den Beispielen 4 und 26 aus den Verbindungen der Beispiele I IA und 17A hergestellt werden.
Beispiel 7
S-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino}-5-oxopentyl)(2S)-2-aminopropanthioat-Hydrochlorid
Figure imgf000041_0002
Die Titelverbindung kann in Analogie zu den Beispielen 4 und 26 aus den Verbindungen der Beispiele 1 IA und 18A hergestellt werden. Beispiel 8
S-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl } methyl)amino} -4-oxobutyl) (2S)-2-amino-3-methylbutanthioat-Hydrochlorid
Figure imgf000042_0001
Die Titelverbindυng kann in Analogie zu den Beispielen 4 und 26 aus den Verbindungen der Beispiele 1OA und 15A hergestellt werden.
Beispiel 9
5-Chlor-N-[4-(glycylamino)butanoyl]-N-({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]- l ^-oxazolidin-S-ylJmethyOthiophen^-carboxamid-Hydrochlorid
Figure imgf000042_0002
x HCl
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 23 aus der Verbindung aus Beispiel 12A mit Boc-Glycin hergestellt werden. Die Entschützung kann alternativ auch wie in Beispiel 25, Stufe b) beschrieben mit Trifluoressigsäure durchgeführt werden und aus dem zunächst entstandenen Trifluoracetat durch Umsalzung mit wässriger Salzsäure die Titelverbindung generiert werden.
Beispiel 10
5 -Chlor-N- [4-(glycylamino)pentanoyl] -N-( { (5 S)-2-oxo-3 - [2-fluor-4-(3 -oxomorpholin-4- yl)phenyl] -1 ,3 -oxazolidin-5 -yl } methyl)thiophen-2-carboxamide-Hydrochlorid
Figure imgf000043_0001
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 23 aus der Verbindung aus Beispiel 13A mit Boc-Glycin hergestellt werden. Die Entschützung kann alternativ auch wie in Beispiel 25, Stufe b) beschrieben mit Trifluoressigsäure durchgeführt werden und aus dem zunächst entstandenen Trifluoracetat durch Umsalzung mit wässriger Salzsäure die Titelverbindung generiert werden.
Beispiel 11
N-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino}-5-oxopentyl)-L-prolinamid-Hydrochlorid
Figure imgf000044_0001
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 23 aus der Verbindung aus Beispiel 13A mit Boc-Prolin hergestellt werden. Die Entschützung kann alternativ auch wie in Beispiel 25, Stufe b) beschrieben mit Trifluoressigsäure durchgeführt werden und aus dem zunächst entstandenen Trifluoracetat durch Umsalzung mit wässriger Salzsäure die Titelverbindung generiert werden.
Beispiel 12
N-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l ,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino}-5-oxopentyl)-L-histidinamid-Hydrochlorid
Figure imgf000044_0002
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 23 aus der Verbindung aus Beispiel 13A mit Bis-Boc-Histidin hergestellt werden. Die Entschützung kann alternativ auch wie in Beispiel 25, Stufe b) beschrieben mit Trifluoressigsäure durchgeführt werden und aus dem zunächst entstandenen Trifluoracetat durch Umsalzung mit wässriger Salzsäure die Titelverbindung generiert werden.
Beispiel 13
N-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino}-5-oxopentyl)-L-valinamid-Hydrochlorid
Figure imgf000045_0001
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 23 aus der Verbindung aus Beispiel 13A mit Boc-Valin hergestellt werden. Die Entschützung kann alternativ auch wie in Beispiel 25, Stufe b) beschrieben mit Trifluoressigsäure durchgeführt werden und aus dem zunächst entstandenen Trifluoracetat durch Umsalzung mit wässriger Salzsäure die Titelverbindung generiert werden.
Beispiel 14
N-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino}-5-oxopentyl)-L-lysinamid-Hydrochlorid
Figure imgf000046_0001
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 23 aus der Verbindung aus Beispiel 13A mit Bis-Boc-Lysin hergestellt werden. Die Entschützung kann alternativ auch wie in Beispiel 25, Stufe b) beschrieben mit Trifluoressigsäure durchgeführt werden und aus dem zunächst entstandenen Trifluoracetat durch Umsalzung mit wässriger Salzsäure die Titelverbindung generiert werden.
Beispiel 15
5-Chlor-N-({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l ,3-oxazolidin-5-yl}methyl)- N-[5-(L-threonylamino)pentanoyl]thiophen-2-carboxamid-Hydrochlorid
Figure imgf000046_0002
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 23 aus der Verbindung aus Beispiel 13A mit Boc-Threonin hergestellt werden. Die Entschützung kann alternativ auch wie in Beispiel 25, Stufe b) beschrieben mit Trifluoressigsäure durchgeführt werden und aus dem zunächst entstandenen Trifluoracetat durch Umsalzung mit wässriger Salzsäure die Titelverbindung generiert werden. Beispiel 16
N-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l ,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino}-5-oxopentyl)-L-tyrosinamid-Hydrochlorid
Figure imgf000047_0001
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 23 aus der Verbindung aus Beispiel 13A mit Boc-Tyrosin hergestellt werden. Die Entschützung kann alternativ auch wie in Beispiel 25, Stufe b) beschrieben mit Trifluoressigsäure durchgeführt werden und aus dem zunächst entstandenen Trifluoracetat durch Umsalzung mit wässriger Salzsäure die Titelverbindung generiert werden.
Beispiel 17
N'-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino}-5-oxopentyl)-L-aspartamid-Hydrochlorid
Figure imgf000047_0002
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 23 aus der Verbindung aus Beispiel 13A mit Boc-Asparagin hergestellt werden. Die Entschützung kann alternativ auch wie in Beispiel 25, Stufe b) beschrieben mit Trifluoressigsäure durchgeführt werden und aus dem zunächst entstandenen Trifluoracetat durch Umsalzung mit wässriger Salzsäure die Titelverbindung generiert werden.
Beispiel 18
N-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl } methyl)amino} -5-oxopentyl)-L-phenylalaninamid-Hydrochlorid
Figure imgf000048_0001
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 23 aus der Verbindung aus Beispiel 13A mit Boc-Phenylalanin hergestellt werden. Die Entschützung kann alternativ auch wie in Beispiel 25, Stufe b) beschrieben mit Trifluoressigsäure durchgeführt werden und aus dem zunächst entstandenen Trifluoracetat durch Umsalzung mit wässriger Salzsäure die Titelverbindung generiert werden.
Beispiel 19
Nl-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino}-5-oxopentyl)-L-glutamamid-Hydrochlorid
Figure imgf000049_0001
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 23 aus der Verbindung aus Beispiel 13A mit Boc-Glutamin hergestellt werden. Die Entschützung kann alternativ auch wie in Beispiel 25, Stufe b) beschrieben mit Trifluoressigsäure durchgeführt werden und aus dem zunächst entstandenen Trifluoracetat durch Umsalzung mit wässriger Salzsäure die Titelverbindung generiert werden.
Beispiel 20
N-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]-l ,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino}-5-oxopentyl)-L-alpha-glutamin-Hydrochlorid
Figure imgf000049_0002
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 23 aus der Verbindung aus Beispiel 13A mit Boc-Glutaminsäure-tert.-butylester hergestellt werden. Die Entschützung kann alternativ auch wie in Beispiel 25, Stufe b) beschrieben mit Trifluoressigsäure durchgeführt werden und aus dem zunächst entstandenen Trifluoracetat durch Umsalzung mit wässriger Salzsäure die Titelverbindung generiert werden.
Beispiel 21
5-Chlor-N-({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l,3-oxazolidin-5-yl}methyl)- N-[5-(L-serylamino)pentanoyl]thiophen-2-carboxamid-Hydrochlorid
Figure imgf000050_0001
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 23 aus der Verbindung aus Beispiel 13A mit Boc-Serin hergestellt werden. Die Entschützung kann alternativ auch wie in Beispiel 25, Stufe b) beschrieben mit Trifluoressigsäure durchgeführt werden und aus dem zunächst entstandenen Trifluoracetat durch Umsalzung mit wässriger Salzsäure die Titelverbindung generiert werden.
Beispiel 22
N-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl } methyl)amino} -5-oxopentyl)-L-leucinarnid-Hydrochlorid
Figure imgf000051_0001
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 23 aus der Verbindung aus Beispiel 13A mit Boc-Leucin hergestellt werden. Die Entschützung kann alternativ auch wie in Beispiel 25, Stufe b) beschrieben mit Trifluoressigsäure durchgeführt werden und aus dem zunächst entstandenen Trifluoracetat durch Umsalzung mit wässriger Salzsäure die Titelverbindung generiert werden.
Beispiel 23
N-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5 -yl } methyl)amino } -5 -oxobutyl)-L-histidinamid-Hydrochlorid
Figure imgf000051_0002
Stufe a):
59 mg (0.103 mmol) der Verbindung aus Beispiel 12A wurden in 15 ml DMF vorgelegt. Dann setzte man 51 mg (0.144 mmol) N,l-Bis(tert-butoxycarbonyl)-L-histidin, 19 mg (0.123 mmol) 1- Hydroxy-lH-benzotriazol und 24 mg (0.123 mmol) N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethyl- carbodiimid Hydrochlorid sowie 12 mg Ethyldiisopropylamin zu und rührte über Nacht bei RT. Der Ansatz wurde dann auf ein 1 : 1 Gemisch aus gesättigter Ammoniumchloridlösung und Essigsäureethylester gegossen. Die organische Phase wurde abgetrennt und mit 10%iger Natriumhydrogencarbonatlösung und gesättigter wässriger Natriumchloridlösung gewaschen und dann über Magnesiumsulfat getrocknet. Danach wurde eingeengt und der Rückstand im Hochvakuum getrocknet. Man erhielt 66 mg (55% d. Th.) eines Schaums der mono-Boc- geschützten Zwischenverbindung.
HPLC (Methode 10): R, = 1.2 min
LC-MS (Methode 13): R, = 0.93 min; m/z = 776 (M+H)+
Stufe b):
66 mg (0.085 mmol) der mono-Boc-geschützten Zwischenstufe wurden in 3 ml einer gesättigen Lösung aus Chlorwasserstoff in Dichlormethan gelöst und 30 min bei RT gerührt. Der ausgefallene Niederschlag wurde abgesaugt und mit der Mutterlauge ausgeschüttelt. Die wässrige Phase wurde eingeengt und durch präparative HPLC (Methode 11) gereinigt. Die entsprechenden Fraktionen wurden vereinigt, eingeengt und der Rückstand aus IN Salzsäure lyophilisiert. Man erhielt 3 mg (4% d. Th.) der Titelverbindung.
HPLC (Methode 10): R, = 1.07 min;
LC-MS (Methode 8): R, = 1 min; m/z = 676 (M+H)+.
Beispiel 24
N-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino}-5-oxopentyl)-L-alpha-asparagin-Hydrochlorid
Figure imgf000053_0001
Die Titelverbindung kann in Analogie zu Beispiel 23 aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen hergestellt werden.
Beispiel 25
2-[[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(55)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl}methyl)anύno]-5-oxopentyl-glycinat-Trifluoractetat
Figure imgf000053_0002
Stufe a):
48 mg (0.084 mmol) der Verbindung aus Beispiel I IA wurden mit 77 mg (0.252 mmol) des Caesiumsalzes von Boc-Glycin (hergestellt aus Boc-Glycin nach der Allgemeinen Vorschrift 1) in 10 ml DMF gelöst. Nach 3 h Rühren bei 600C setzte man nochmals die gleiche Menge an Caesiumsalz zu und rührte über Nacht bei 600C. Der Ansatz wurde dann auf ein 1 : 1 Gemisch aus gesättigter wässriger Ammoniumchloridlösung und Essigsäureethylester gegossen. Die organische Phase wurde abgetrennt und mit 10%iger Natriumhydrogencarbonatlösung und gesättigter wässriger Natriumchloridlösung gewaschen und dann über Magnesiumsulfat getrocknet. Danach wurde eingeengt und der Rückstand durch Flashchromatographie an Kieselgel gereinigt, wobei als Eluent zunächst Dichlormethan/ Essigsäureethylester 3: 1 und später Dichlormethan/ Essigsäureethylester/Methanol 15:5:1 verwendet wurde. Die entsprechenden Fraktionen wurden vereinigt, das Lösungsmittel abgedampft und der Rückstand dann im Hochvakuum getrocknet. Man erhielt 10 mg (16% d. Th.) der Boc-geschützten Zwischenverbindung.
HPLC (Methode 10): R, = 1.9 min;
LC-MS (Methode 8): R, = 1.98 min; m/z = 71 1 (M+H)+.
Stufe b):
9 mg (0.013 mmol) der geschützten Verbindung wurden in 1.5 ml Dichlormethan gelöst, mit 1.5 ml wasserfreier Trifluoressigsäure versetzt und dann 15 min bei RT gerührt. Dann wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand aus Dioxan/Wasser lyophilisiert. Man erhielt 8 mg (85% d. Th.) der Titelverbindung.
HPLC (Methode 10): R1 = 1.3 min;
LC-MS (Methode 13): R1 = 0.83 min; m/z = 61 1 (M+H)+.
Beispiel 26
S-(5-{[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]({(5S)-2-oxo-3-[2-fluor-4-(3-oxomoφholin-4-yl)phenyl]-l,3- oxazolidin-5-yl}methyl)amino}-5-oxopentyl)(2S)-2-amino-3-methylbutanthioat-Trifluoractetat
Figure imgf000054_0001
Stufe a):
47 mg (0.082 mmol) der Verbindung aus Beispiel I IA wurden mit 90 mg (0.25 mmol) des Caesiumsalzes von (2S)-2-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]-3-methylbutanthio-S-säure (hergestellt aus Beispiel 15A nach der Allgemeinen Vorschrift 1) in 2 ml DMF gelöst. Nach 3 h Rühren bei 600C setzte man nochmals die gleiche Menge an Caesiumsalz zu und rührte über Nacht bei 600C. Der Ansatz wurde dann auf ein 1 :1 Gemisch aus gesättigter wässriger Ammoniumchloridlösung und Essigsäureethylester gegossen. Die organische Phase wurde abgetrennt und mit 10%iger Natriumhydrogencarbonatlösung und gesättigter wässriger Natriumchloridlösung gewaschen und dann über Magnesiumsulfat getrocknet. Danach wurde eingeengt und der Rückstand durch Flashchromatographie an Kieselgel gereinigt, wobei als Eluent zunächst Dichlormethan/ Essigsäureethylester 3: 1 und später Dichlormethan/Essigsäureethylester/Methanol 15:5:1 verwendet wurde. Die entsprechenden Fraktionen wurden vereinigt und das Lösungsmittel abgedampft. Dieser Reinigungsprozess wurde ein zweites Mal wiederholt. Anschließend wurde der verbleibende Rückstand nochmals durch präparative HPLC gereinigt (Methode 11). Die entsprechenden Fraktionen wurden vereinigt und das Lösungsmittel abgedampft. Man erhielt 7 mg (1 1% d. Th.) der Boc-geschützten Zwischenverbindung.
HPLC (Methode 10): R, = 2.3 min;
LC-MS (Methode 13): Rt = 1.43 min; m/z = 769 (M+H)+.
Stufe b):
7 mg (0.009 mmol) der geschützten Verbindung wurden in 1 ml Dichlormethan gelöst, mit 1 ml wasserfreier Trifluoressigsäure versetzt und dann 15 min bei RT gerührt. Dann wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand aus Acetonitril/Wasser lyophilisiert. Man erhielt 6.8 mg (95% d. Th.) der Titelverbindung.
HPLC (Methode 10): R1 = 1.6 min;
LC-MS (Methode 8): R, = 1.24 min; m/z = 669 (M+H)+. B. Bestimmung von Löslichkeit, Stabilität und Freisetzungsverhalten
a) Bestimmung der Löslichkeit:
Die Prüfsubstanz wird in Wasser oder verdünnter Salzsäure (pH 4) suspendiert. Diese Suspension wird 24 h bei Raumtemperatur geschüttelt. Nach Ultra-Zentrifugation bei 224000g für 30 min wird der Überstand mit DMSO verdünnt und per HPLC analysiert. Quantifiziert wird über eine Zwei- Punkt-Kalibrationskurve der Testverbindung in DMSO.
HPLC Methode:
Agilent 1 100 mit DAD (Gl 315A), quat. Pumpe (Gl 31 IA), Autosampier CTC HTS PAL, Degaser (Gl 322A) und Säulenthermostat (Gl 316A); Säule: Zorbax Extend-C18 3.5 μ; Temperatur: 400C; Eluent A: Wasser + 5 ml Perchlorsäure/Liter, Eluent B: Acetonitril; Flussrate: 0.7 ml/min; Gradient: 0-0.5 min 98% A, 2% B; Rampe 0.5-4.5 min 10% A, 90% B; 4.5-6 min 10% A, 90% B; Rampe 6.5-6.7 min 98% A, 2% B; 6.7-7.5 min 98% A, 2% B.
b) Stabilität in Puffer bei verschiedenen pH-Werten:
0.25 mg der Testsubstanz werden in einem 2 ml-HPLC-Vial eingewogen und mit 0.5 ml Acetonitril versetzt. Zum Lösen der Substanz wird das Probengefäß für ca. 10 Sekunden ins Ultraschallbad gegeben. Anschließend werden 0.5 ml der jeweiligen Pufferlösung zugefügt und die Probe erneut im Ultraschallbad behandelt.
Eingesetzte Pufferlösungen:
pH 4.0: 1 Liter Millipore- Wasser wird mit 1 N Salzsäure auf pH 4.0 eingestellt;
pH 7.4: 90 g Natriumchlorid, 13.61 g Kaliumdihydrogenphosphat und 83.35 g 1 M Natronlauge werden auf 1 Liter mit Millipore- Wasser aufgefüllt und dann 1 : 10 verdünnt.
Über einen Zeitraum von 24 Stunden bei 37°C werden stündlich jeweils 10 μl der Probenlösung per HPLC auf ihren Gehalt an unveränderter Testsubstanz analysiert. Quantifiziert wird über die Flächenprozente der entsprechenden Peaks.
HPLC-Methode:
Agilent 1 100 mit DAD (G1314A), binärer Pumpe (G1312A), Autosampier (G1329A), Säulenofen (Gl 316A), Thermostat (G 1330A); Säule: Kromasil 100 Cl 8, 125 mm x 4 mm, 5 μm; Säulentemperatur: 300C; Eluent A: Wasser + 5 ml Perchlorsäure/Liter, Eluent B: Acetonitril. Gradient:
0-1.0 min 98% A, 2% B → 1.0-13.0 min 50% A, 50% B → 13.0-17.0 min 10% A, 90% B → 17.0- 18.0 min 10% A, 90% B → 18.0-19.5 98% A, 2% B → 19.5-23.0 min 98% A, 2% B; Flussrate: 2.0 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
c) In Wlro-Stabilität in Ratten- und Humanplasma (HPLC-Detektion):
0,5 mg Substanz werden in ImI Dimethylsulfoxid/Wasser 1 : 1 gelöst. 500 μl dieser Probenlösung werden mit 500 μl 37°C warmem Rattenplasma versetzt und geschüttelt. Es wird sofort eine erste Probe (10 μl) für die HPLC-Analyse gezogen. Im Zeitraum bis zu 2 h nach Inkubationsbeginn werden nach 2, 5, 10, 30, 60 und 90 min weitere Aliquote entnommen und der Gehalt der jeweiligen Prüfsubstanz und der daraus freigesetzten Wirkstoff-Verbindung (A) bestimmt.
HPLC-Methode:
Agilent 1100 mit DAD (G1314A), binärer Pumpe (G1312A), Autosampier (G1329A), Säulenofen (G1316A), Thermostat (G1330A); Säule: Kromasil 100 C18, 250 mm x 4.6 mm, 5 μm; Säulentemperatur: 300C; Eluent A: Wasser + 5 ml Perchlorsäure/Liter, Eluent B: Acetonitril.
Gradient:
0-3.0 min 69% A, 31% B → 3.0-18.0 min 69% A, 31% B -» 18.0-20.0 min 10% A, 90% B → 20.0-21.0 90% A, 10% B → 21.0-22.5.0 min 98% A, 2% B → 22.5-25.0 min 98% A, 2% B; Flussrate: 2.0 ml/min; UV-Detektion: 248 nm.
d) In v/fro-Stabilität in Ratten- und Humanplasma (LC/MS-MS-Detektion):
Ein definiertes Plasmavolumen (z.B. 2.0 ml) wird in einem geschlossenen Reagenzglas im Wasserbad auf 37°C erwärmt. Nach Erreichen der Soll-Temperatur wird eine definierte Menge der Prüfsubstanz als Lösung zugegeben (Volumen des Lösungsmittels max. 2% des Plasmavolumens). Das Plasma wird geschüttelt und eine erste Probe (50-100 μl) sofort entnommen. Im Zeitraum bis 2 h nach Inkubationsbeginn werden anschließend 4-6 weitere Aliquote entnommen.
Die Plasmaproben werden zur Proteinfällung mit Acetonitril versetzt. Nach Zentrifugation werden Prüfsubstanz und gegebenenfalls bekannte Spaltprodukte der Prüfsubstanz im Überstand mit einer geeigneten LC/MS-MS-Methode quantitativ bestimmt.
Stabilitätsbestimmungen in heparinisiertem Ratten- oder Humanblut werden wie für Plasma beschrieben durchgeführt. e) i.v.-Pharmakokinetik in Wistar-Ratten:
Am Tag vor der Substanzgabe wird den Versuchstieren (männliche Wistar-Ratten, Körpergewicht 200-250 g) unter Isofluran®-Narkose ein Katheter für die Blutgewinnung in die Vena Jugularis implantiert.
Am Versuchstag wird eine definierte Dosis der Prüfsubstanz als Lösung mit einer Hamilton®- Glasspritze in die Schwanzvene appliziert (Bolusgabe, Applikationsdauer <10 s). Innerhalb von 24 h nach Substanzgabe werden sequentiell Blutproben (8-12 Zeitpunkte) über den Katheter entnommen. Zur Plasmagewinnung werden die Proben in heparinisierten Röhrchen zentrifugiert. Pro Zeitpunkt wird ein definiertes Plasmavolumen zur Proteinfällung mit Acetonitril versetzt. Nach Zentrifugation werden Prüfsubstanz und gegebenenfalls bekannte Spaltprodukte der Prüfsubstanz im Überstand mit einer geeigneten LC/MS-MS-Methode quantitativ bestimmt.
Die Berechnung pharmakokinetischer Kenngrößen der Prüfsubstanz bzw. der daraus freigesetzten Wirkstoff-Verbindung (A) wie AUC, Cm3x, T1/2 (Halbwertszeit) und CL (Clearance) erfolgt aus den gemessenen Plasmakonzentrationen.
f) Hepatozytenassay zur Bestimmung der metabolischen Stabilität:
Die metabolische Stabilität der Testverbindungen gegenüber Hepatozyten wird bestimmt, indem die Verbindungen bei niedrigen Konzentrationen (bevorzugt unter 1 μM) und bei niedrigen Zellzahlen (bevorzugt bei 1 * 106 Zellen/ml) inkubiert werden, um möglichst lineare kinetische Bedingungen im Versuch sicherzustellen. Sieben Proben aus der Inkubationslösung werden in einem festgelegten Zeitraster für die LC-MS-Analytik entnommen, um die Halbwertszeit (d.h. den Abbau) der Verbindung zu bestimmen. Aus dieser Halbwertszeit werden unterschiedliche "Clearance"-Parameter (CL) und "Fmax"- Werte berechnet (s.u.).
Die CL- und Fmax-Werte stellen ein Maß für den Phase 1- und Phase 2-Metabolismus der Verbindung in den Hepatozyten dar. Um den Einfluss des organischen Lösungsmittels auf die Enzyme in den Inkubationsansätzen möglichst klein zu halten, wird dessen Konzentration im Allgemeinen auf 1% (Acetonitril) bzw. 0.1% (DMSO) begrenzt.
Für alle Spezies und Rassen wird mit einer Hepatozyten-Zellzahl in der Leber von 1.1 * 108 Zellen/g Leber gerechnet. CL-Parameter, deren Berechnung auf Halbwertszeiten beruhen, die über die Inkubationszeit hinausgehen (üblicherweise 90 Minuten), können nur als grobe Richtwerte an- gesehen werden. Die berechneten Parameter und deren Bedeutung sind:
Fmaχ well-stirred [%] maximal mögliche Bioverfügbarkeit nach oraler Applikation
Berechnung: (l-CLblood well-stirred/QH) * 100
CLbI0Od well-stirred [L/(h*kg)J berechnete Blut-Clearance (well stirred-Modell)
Berechnung: (QH * CL',nmnsic) / (QH + CL'intπnsκ:)
CL'in,rinsic [ml/(min*kg)] maximale Fähigkeit der Leber (der Hepatozyten), eine Verbindung zu metabolisieren (unter der Annahme, dass der Leberblutfluss nicht geschwindigkeitslimitierend ist)
Berechnung: CL'mtπnsic, apparent * speziesspezifische Hepatozytenzahl [1.1 * 108/g Leber] * speziesspezifisches Lebergewicht [g/kg]
CL'intrinsic, apparent [ml/(min*mg)] normiert die Eliminationskonstante, indem diese durch die eingesetzte Hepatozyten-Zellzahl x (x * 106/ml) dividiert wird
Berechnung: kei [l/min] / (Zellzahl [x * 106] / Inkubationsvolumen [ml])
(QH = speziesspezifischer Leberblutfluss).
g) Bestimmung der antithrombotischen Wirkung in einem arteriovenösen Shunt-Modell in Ratten:
Nüchterne männliche Ratten (Stamm: HSD CPB:WU) werden durch intraperitoneale Gabe einer Rompun/Ketavet-Lösung narkotisiert (12 mg/kg / 50 mg/kg). Die Thrombusbildung wird in einem arteriovenösen Shunt in Anlehnung an die von P.C. Wong et al. beschriebene Methode [Thrombosis Research 82 (2), 117-126 (1996)] ausgelöst. Dazu werden die linke Vena jugularis und die rechte Arteria carotis freipräpariert. In die Arterie wird ein 8 cm langer Polyethylen- katheter (PE60, Fa. Becton-Dickinson), gefolgt von einem 6 cm langen Tygonschlauch (R-3606, ID 3.2 mm, Fa. Kronlab), der zur Erzeugung einer thrombogenen Oberfläche einen aufgerauhten und zu einer Doppelschlinge gelegten Nylonfaden (60 x 0.26 mm, Fa. Berkley Trilene) enthält, eingebunden. In die Vena jugularis wird ein 2 cm langer Polyethylenkatheter (PE60, Fa. Becton- Dickinson) eingebunden und über einen 6 cm langen Polyethylenkatheter (PEl 60, Fa. Becton- Dickinson) mit dem Tygonschlauch verbunden. Die Schläuche werden mit physiologischer Kochsalzlösung vor Öffnung des Shuntes gefüllt. Der extrakorporale Kreislauf wird 15 min lang auf- rechterhalten. Dann wird der Shunt entfernt und der Nylonfaden mit dem Thrombus sofort gewogen. Das Leergewicht des Nylonfadens ist vor Versuchsbeginn ermittelt worden. Die Prüfsubstanz (als Lösung in physiologischer Kochsalzlösung, die mit 0.1 N Salzsäure auf pH 4 eingestellt ist) wird vor Anlegung des extrakorporalen Kreislaufs als Bolus-Injektion verabreicht.
C. Ausführungsbeispiele für pharmazeutische Zusammensetzungen
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können beispielsweise folgendermaßen in pharmazeutische Zubereitungen überführt werden:
i.v.-Lösung;
Die erfindungsgemäße Verbindung wird in einer Konzentration unterhalb der Sättigungslöslichkeit in einem physiologisch verträglichen Lösungsmittel (z.B. isotonische Kochsalzlösung, Glucose- lösung 5% und/oder PEG 400-Lösung 30%, die jeweils auf einen pH-Wert von 3-5 eingestellt sind) gelöst. Die Lösung wird gegebenenfalls steril filtriert und/oder in sterile und pyrogenfreie Injektionsbehältnisse abgefüllt.

Claims

Patentansprüche
1. Verbindung der Formel
Figure imgf000061_0001
in welcher
für die Zahl 1 oder 2 steht,
X für ein Sauerstoffatom, Schwefelatom oder NH steht,
R1 für die Seitengruppe einer natürlichen α-Aminosäure oder ihrer Homologe oder Isomere steht,
R2 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R3 für Wasserstoff steht,
oder
R1 und R3 sind über eine (CH2)3- oder (CH2)4-Gruppe verknüpft und bilden zusammen mit dem Stickstoff- bzw. Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind einen 5- bzw. 6-Ring,
sowie ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1 , in welcher
für die Zahl 1 oder 2 steht,
X für ein Sauerstoffatom, Schwefelatom oder NH steht, R1 für Wasserstoff, Methyl, Propan-2-yl, Propan-1-yl, 2-Methylpropan-l-yl, Imidazol- 4-ylmethyl, Hydroxymethyl, 1-Hydroxyethyl, Carboxymethyl, 2-Carboxyethyl, Carbamoylmethyl,
2-Carbamoylethyl, 4-Aminobutan-l-yl, 3-Aminopropan-l-yl, 3-Guanidinopropan-l-yl, Benzyl oder 4-Hydroxybenzyl steht,
R2 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R3 für Wasserstoff steht,
oder
R1 und R3 sind über eine (CH2)3- oder (CH2)4-Gruppe verknüpft und bilden zusammen mit dem Stickstoff- bzw. Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind einen 5- bzw. 6-Ring,
sowie ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
3. Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1 oder 2, in welcher
n für die Zahl 1 oder 2 steht,
X für NH steht,
R1 für Wasserstoff, Methyl, Propan-2-yl, 2-Methylpropan-l-yl, Imidazol-4-ylmethyl,
Hydroxymethyl, 1 -Hydroxyethyl, Carboxymethyl, 2-Carboxyethyl, Carbamoylmethyl, 2-Carbamoylethyl, 4-Aminobutan-l-yl, Benzyl oder 4-Hydroxybenzyl steht,
R2 für Wasserstoff steht,
R3 für Wasserstoff steht,
sowie ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
4. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass
[A] eine Verbindung der Formel
Figure imgf000063_0001
zunächst in einem inerten Lösungsmittel in Gegenwart einer Base mit einer Verbindung der Formel
Figure imgf000063_0002
in welcher n die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat,
und
Q für eine Abgangsgruppe wie beispielsweise Chlor, Brom oder Iod steht,
in eine Verbindung der Formel
Figure imgf000063_0003
in welcher n die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat, und
Q die in diesem Anspruch angegebene Bedeutung hat,
überfuhrt, diese dann nach Verfahren [Al] in einem inerten Lösungsmittel mit dem Caesiumsalz einer α-Aminocarbonsäure oder einer α-Aminothiocarbonsäure der Formel
Figure imgf000064_0001
in welcher R . 1 , r R> 2 und R die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben,
PG für eine Amino-Schutzgruppe wie beispielsweise tert.-Butoxycarbonyl (Boc) oder Benzyloxycarbonyl (Z) steht
und
für O oder S steht,
zu einer Verbindung der Formel
Figure imgf000064_0002
in welcher n, R , R und R die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben,
PG die in diesem Anspruch angegebene Bedeutung hat, und
X für O oder S steht,
umsetzt und nachfolgend die Schutzgruppe PG nach üblichen Methoden unter Erhalt einer Verbindung der Formel
Figure imgf000065_0001
in welcher n, R , R und R die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, und
X für O oder S steht, entfernt, oder
[A2] in einem inerten Lösungsmittel in Gegenwart einer Base mit einer α- Aminothiocarbonsäure der Formel
Figure imgf000065_0002
in welcher R , R und R die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben,
PG für eine Amino-Schutzgruppe wie beispielsweise tert.-Butoxycarbonyl (Boc) oder Benzyloxycarbonyl (Z) steht, zu einer Verbindung der Formel
Figure imgf000065_0003
in welcher n, R , R und R die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, und
PG die in diesem Anspruch angegebene Bedeutung hat, umsetzt und nachfolgend die Schutzgruppe PG nach üblichen Methoden unter Erhalt einer Verbindung der Formel
Figure imgf000066_0001
in welcher n, R1, R2 und R3 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, entfernt
oder
[B] Verbindung (A) in einem inerten Lösungsmittel in Gegenwart einer Base mit einer Verbindung der Formel
in welcher n die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat,
zu einer Verbindung der Formel
Figure imgf000067_0001
in welcher n die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat,
umsetzt, anschließend die Schutzgruppen nach üblichen Methoden unter Erhalt einer Verbindung der Formel
Figure imgf000067_0002
in welcher n die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat, entfernt und dann in Gegenwart einer Base mit einer Verbindung der Formel
in welcher R . 1 , D R2 und R die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, AG für Hydroxy oder Halogen, bevorzugt Chlor oder Brom, steht oder zusammen mit der Carbonylgruppe einen Aktivester, bevorzugt einen N-Hydoxysuccinimidester, oder ein gemischtes Anhydrid, bevorzugt einen Kohlensäurealkylester, besonders bevorzugt einen Kohlensäureethylester, bildet, und
PG für eine Amino-Schutzgruppe wie beispielsweise terf.-Butoxycarbonyl (Boc) oder Benzyloxycarbonyl (Z) steht,
unter Erhalt einer Verbindung der Formel
Figure imgf000068_0001
in welcher n, R , R und R die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, und
PG die in diesem Anspruch angegebene Bedeutung hat, umsetzt,
und anschließend die Schutzgruppe PG nach üblichen Methoden unter Erhalt einer Verbindung der Formel
in welcher n, R1, R2 und R3 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, entfernt
und die jeweils resultierenden Verbindungen der Formel (I-A) bzw. (I-B) gegebenenfalls mit den entsprechenden (i) Lösungsmitteln und/oder (ii) Säuren in ihre Solvate, Salze und/oder Solvate der Salze überführt.
5. Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert, zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.
6. Verwendung einer Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von thromboembolischen Erkrankungen.
7. Arzneimittel enthaltend eine Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert, gegebenenfalls in Kombination mit einem inerten, nicht-toxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff.
8. Arzneimittel enthaltend eine Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert, in Kombination mit einem weiteren Wirkstoff.
9. Arzneimittel nach Anspruch 7 oder 8 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von thromboembolischen Erkrankungen.
10. Arzneimittel nach einem der Ansprüche 7 bis 9 zur intravenösen Anwendung.
1 1. Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von thromboembolischen Erkrankungen bei Menschen und Tieren unter Verwendung mindestens einer Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert, oder eines Arzneimittels, wie in einem der
Ansprüche 7 bis 10 definiert.
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