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WO2007066760A1 - レムナント様リポ蛋白中のコレステロール測定方法、試薬及びキット - Google Patents

レムナント様リポ蛋白中のコレステロール測定方法、試薬及びキット Download PDF

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Publication number
WO2007066760A1
WO2007066760A1 PCT/JP2006/324558 JP2006324558W WO2007066760A1 WO 2007066760 A1 WO2007066760 A1 WO 2007066760A1 JP 2006324558 W JP2006324558 W JP 2006324558W WO 2007066760 A1 WO2007066760 A1 WO 2007066760A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
reagent
cholesterol
surfactant
oxidase
rlp
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2006/324558
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Shingo Mishima
Kazuhito Miyauchi
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Minaris Medical Co Ltd
Original Assignee
Kyowa Medex Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kyowa Medex Co Ltd filed Critical Kyowa Medex Co Ltd
Priority to US12/095,331 priority Critical patent/US20090170139A1/en
Priority to EP06834313A priority patent/EP1959021A4/en
Priority to JP2007549192A priority patent/JP5534644B2/ja
Publication of WO2007066760A1 publication Critical patent/WO2007066760A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
    • G01N2333/904—Oxidoreductases (1.) acting on CHOH groups as donors, e.g. glucose oxidase, lactate dehydrogenase (1.1)

Definitions

  • the present invention relates to a method, a measuring drug, and a kit for determining Nantopost which is a child of arteriosclerosis in clinical examination.
  • the 002 solution contains a white powder.
  • the Kyken (below, C) the ultra-low Po (below, below), Po (below, below), and the high density Po (below,
  • the central stadium is regarded as a negative risk of arteriosclerosis, and the central stadium is regarded as a positive risk of arteriosclerosis, which is often determined in the field of clinical investigation.
  • 000 4 R P occurs in the process of metabolism and dissolution of white by po, and is classified into a quasi-nanant (below, described by C France) and a ponant (below, described by France). Is a white, which is included in France and has a specific gravity of 6 to 9 and is called a meaningful proposition.
  • okipipi is a pookitinpookikin compound, pookichinpookiakinakite, pookichinpookiakinakite, conductor, pookichin It is selected from the group consisting of: notepad, pokitin test
  • Aqueous solution, containing (below), is a process of reacting with hydrogen and hydrogen to remove the post-P-poster, and after removing the post-P post-posture with (1), Okitin Pookitin compound, pookitin with a value of 6 or above, pookitin, pookitin, pookitin, pookitin with a value above 75 Selected from the following:
  • a step of reacting a hydrolyzed starch and a steric acid a step of reacting a hydrolyzed steric acid, a reaction of hydrogen and a hydrogen atom, to generate a hydrogen peroxide
  • 000 9 2 1 is a process of reacting water containing body and containing water, hydrogen, hydrogen and oxygen to remove the post-P impurities.
  • 001 Contains hydrolyzed starch, sterase, hydrogen peroxide drug, peracid drug c.
  • Oxidase hydrogen peroxide, peracid ,,, c.
  • 001 9 containing a first drug containing a steric acid, a peracid drug and and a second reagent containing a peracid drug and a steric hydrolyzate to both the first drug and the second reagent.
  • C kit characterized in that it is contained.
  • kit according to any one of 25 to 25, further comprising an ion divalent gold ion, and a body selected from the group consisting of the body and the body.
  • 002 26 is the (2) 25 kit.
  • 002 provides a simple, accurate method, reagent, and kit for determining c, which does not require the operation of Using the 002 kit and the P
  • P means a white color that matches France and C France
  • PC means a combination of the play stations in P, that is, the play station C in Liste. It means the sum of the play stations in Liste.
  • the 002 Ming PC setting method does not require the operation of It is characterized in that it has a step of removing the post-P outside of the temperature.
  • the po outside of P in removing the post outside the RP means the white of the outside of the white outside the P, and not only the white of the outside of the P but also the plural outside of the P. Also enjoy the po white.
  • the step in removing the post-P is not only the case of all the steps, but also the steps of all or a part of the stations, only the steps of all or a part of the stations, and the steps of the steps of a part of all the stations. It also means the combination of a part of the whole test, a part of the test, and a part of the test.
  • Examples of the specific method include plasma, serum ,,, water ,, and plasma and plasma are preferred.
  • the stealine hydrolyzate in the case of an enzyme, as long as it is an enzyme capable of hydrolyzing a stete, for example, a substance, a plant microorganism-derived stesterase, a poptain, or a genetic engineering method. It is also possible to use the manufactured steerase, poptain, etc.
  • starch hydrolyzate it is possible to use a decorative hydrolyzate or a chemically modified one.
  • a commercially available hydrolyzable element can also be used.
  • Stet hydrolyzable elements are Steterase Amano 2 (C 2 enzyme), Steterase Amano 3 (C 3 enzyme), Poptain Amano 6 (P 6 enzyme), Poptain (P 3 Western spinning), Poptei (P 3 2 Western spinning, Testerase (C 3 Western spinning), Poptain (PP), Examples thereof include Stellaze (manufactured by CP) and Steracese (manufactured by C). Also, obviously, it is possible to combine the above-mentioned Stet hydrolysers.
  • a modification (modification) of hydrogen in the chemical modification of a hydrolyzed element for example, a group containing a potting as a main component, a group containing a popping as a main component, or a popping potion is used.
  • a group having a polymer of water for example, a group containing a water-soluble saccharide, a group having spupi, a starch, a button, and a compound having a chito function, but a group having a potting as a main component is preferable.
  • soluble saccharides include kisstran, plan, and soluble starch.
  • Sunlight 4 Sunlight 5 S
  • Sunlight 3 S developed in Japan
  • Poking which have a group consisting mainly of potting and a kun.
  • Sunlight A's for example, Sunlight A 5 etc.
  • Sunlight C's developed in Japan
  • PX 34 PX 34
  • the modification of 003 hydrolyzed hydrolyzate can be performed, for example, by the following method, but is not limited to this method.
  • a solution above 8 ⁇ eg, P S
  • the degree of steric hydrolyzable element used in the 003 method is not particularly limited as long as it allows the determination of Ming PC, but it is preferable that the degree of decomposition is .about.2 during the reaction. , ⁇ It is more preferable that it is 5 ⁇ .
  • the sterium in the present invention is an enzyme capable of producing persulfate by steric acid, for example, a substance, a plant microorganism-derived steroid, or a bacterium produced by a genetic engineering method.
  • the 003 enzyme may be a decorative element or a modified element.
  • the degree of silicon used in the reaction method there is no particular limitation as to the degree of silicon used in the reaction method, as long as it allows the determination of a clear PC, but it is preferable that it is in the reaction range of ..- 2. Is more preferred.
  • the hydrogen peroxide in the present invention is an enzyme that has the ability to generate oxygen by sterilizing oxygen, for example, stedehydrgenase derived from substances or plant microorganisms, or genetically engineered. Stedehydrgenase produced by the method can also be used. It is also possible to use a city such as Stedehide Genase Amano 5 (C 5 enzyme). Also, obviously, it is possible to combine the hydrogen atoms above 2. It may be hydrogen, a decorative element, or a chemically modified element. Can be prepared by the above-mentioned modification method using a chemically modified styrene, for example, the above-mentioned modification.
  • the degree of hydrogen used in the 003 method is
  • reaction is carried out at a degree of .about.2, more preferably .about.5.
  • Examples of the element used in the determination of the hydrogen peroxide include (P) ", o (P)” and the like.
  • Examples of the element formed by the reaction of a sodium hydrogen atom include (P) o (P).
  • the degree of the element used in the Ming's law there are no particular restrictions on the degree of the element used in the Ming's law, as long as it allows the determination of the Ming's PC, but it is preferable that the degree of the element used in the reaction is .about.
  • the oxygenate in which the degree of OO o is more preferable as long as it is an enzyme capable of producing a hydrogen peroxide from an enzyme formed by the reaction of a hydrogen peroxide, for example (( P).
  • the oxygen commercially available products can also be used.
  • Odase is an example of an oxygen atom for sale.
  • the degree of oxynitride used in 003 Although there is no particular limitation as long as it is a degree that allows the determination of PC, it is preferable that the degree of reaction is within the range of .about.4, and more preferably within the range of 2 and 2.
  • water-decomposing element in the case of an enzyme as long as it is an enzyme capable of decomposing an enzyme.
  • Phos C, phos 2, azo, etc., among them, or phos 2 is preferred.
  • water-decomposing element commercially available products can be used.
  • water-decomposing elements for sale include Phos (manufactured by P Kasei), Phos (manufactured by P P), Phos C (manufactured by P C Kasei), and Phos 2 (manufactured by P 2).
  • Ming there are no particular restrictions on the aon in Ming, as long as it allows the determination of Ming's PC.
  • kisstran or its, or tungsten, its oxide or its oxide. Is the Pocabon molecule.
  • the gas include, for example, gas, su and ndoitine. Examples thereof include sodium, potassium, titanium, ammonium, and magnesium.
  • the degree of turn-on in the setting of Ming PC is not particularly limited as long as it is possible to set the setting of Ming PC, but it is preferable that the degree of reaction is .. I like it.
  • divalent gold ion in 004 Ming there is no particular limitation as long as it is a divalent gold ion that enables the determination of PC in Ming, and examples thereof include io, io, and ionic ion. Also, it is clear that divalent gold You can have more than two ions.
  • the degree of divalent gold ion in the determination of Ming PC is not particularly limited as long as it enables the determination of Ming PC, but it is preferable that the degree of reaction is .... Is more preferred.
  • the body in 004 is not particularly limited as long as it is a body that enables determination of P C of Ming.
  • Examples of such a compound include a hydrogen atom (), a hydrogen atom-containing liposome (eg, C France) (48) and the like.
  • a commercially available product can be used. Examples of the body include A apo pop o en An Apo pop o en (above, su-io) and the like.
  • the body in Ming there is no particular limitation as long as it can determine the P C of Ming, and examples thereof include a bond (including a quinant, France) containing.
  • a bond including a quinant, France
  • a commercially available product can be used. Examples of the body include An apo pop o e.
  • Tianjin ambo oxin po oxin pin compound (below, described as Tinzia PO POP compound), Po kintin akite (below, PO AK Polyoxine test (below, PO Test), Pookitin Akit (below, PO Akito), and Pookipupipu 2 75, which is Pookichinpookipupin compound (POP 2750 A PO POP compound), a PO POP
  • the achi in the 004 PO aki tenste has a carbon number of up to 3, such as methyl, chi, pupi, pliers ,,, oct ,,, unde, (lau), to, tetrade (st), Pentades, mixers (), octas (steers), nades, ai, i, dos (), tos, tetras, pentas, mixers, octas, toans, and the like.
  • Examples of the body of PO acetylene () include PRICER 28, PRICER 2 G, PRICER 25, PRICER 27 and PRISAFU 2 g (above, Dai-ichi Kogyo Seiyaku Co., Ltd.).
  • the achi in the octyl PO akitest salt is, for example, methyl, chi, puppy ,, pliers, oct, oct ,,, unde, (lau), tho, tetrade (st), pentade, having 3 to 3 carbon atoms.
  • PO akitest salt 5 S, 35 S, 3 S ( Above, Japanese agents), soto, soto P, soto, soto, soto, soto (above, Japan).
  • Examples of the market for aster salt include Nogen, No7, Nogen, Noge "423, Nogen, Nogen5 (above, Dai-ichi Kogyo Seiyaku Co., Ltd.) and the like.
  • the polycyclic ring in P te having a value of 6 ⁇ is that () having () has 2 substituents, and () having 2 groups has (2) or has multiple substitutions.
  • Examples of the group having is di, (), and the like. Examples of the group having the above two groups include chi and the like.
  • Gen 6 Gen g, Gen 66 (top, flower), O SP g O SP 2 5 O SP O SP 7/5, O SP 6 (top, Aoki), 6, 7 7, 7, 26 9, 26 4 (Above, Japanese agents) and the like.
  • Examples of the group having: include di, (), and the like. Examples of the groups having the above-mentioned 2 are chi and the like. As a city of PO test salt,
  • Examples of the group having a include di, (), and the like.
  • Examples of the groups having the above-mentioned 2 groups include, for example, PO, and the like in PO PO te, in addition to PO PO, includes PO PO, PO PO, etc.
  • PO te Kagen CP 2 Kagen GP 2 (above, Takemoto), 7 7,
  • Tongsia PO POP compounds include Puk 7, Puk 72, Puk 74, Puk 3 (above, manufactured by Asahi Kabushiki Kaisha), Tianjin P44, Tianjin P52 6 , 65 (above, Japan) and the like.
  • Examples of the space of 005 1 PO aki include octyl, octyl and the like.
  • the achi in the achitest salt is, for example, methyl, chi, puppy, pliers, oct, oct, unde, (lau), tho, tetrade (st), pentade having a carbon number of 3 or less.
  • Markets for PO akitest salts include Iteno 7, Iteno 8, Iteno 7 and Daiichi Kogyo Seiyaku.
  • Examples of the achi in the 005 PO PO aki include iso, iso, iso, iso, isode, ison, iso and the like, for example, having 6 to 2 carbon atoms.
  • Examples of PO akites include Neugen S, Neugen S 5, Neugen S 3, Neugen S 4 (above, Daiichi Kogyo Seiyaku Co., Ltd.).
  • PO PO Pokiaki in Pokit includes pookipupin, pookitin, etc. other than pookitin.
  • achi in PO PO akites include iso, iso, iso, iso, isode, isonde, isoisoto, isotetrade, isopentade, isoxa, de, iso, isoocta, isonade, etc. having 6 to 9 carbon atoms. , And the like.
  • the PO PO Alignment includes the indicators P 64,
  • Examples of pooki in PO PO Akito include pookipupin, pookitin, etc., except pookitin. ⁇
  • the aki in PO akite has 3 to 3 carbon atoms, such as methyl, chi, pupi ,, pliers ,,, oct ,,, unde, (lau), to, tetrade (st), pentade, Examples include a mixer (), an octa (steer), a cathode, an a, an a, a do (), a to, a tetra, a penta, a mixer, an, an octa, a toan, and the like.
  • XP P 2 7 X P X P 2 X P 25 X P 22 X P 23 (
  • a conductor for example, acid or its, tau acid or its, formic acid or its, tonic acid or its, deoxy acid or its, deoxy acid or its udeoxy acid, or Is the 7-toxic acid or the 2-tomic acid or the 2-deoxy acid or the 7-deoxy acid or the acid or the deoxy acid or the dehydric acid or the C PS 3 (3 Choamdop op dmeh ammon op opanes Onc ac R & D) C PS 3 (3 Choamdop op) dmeh ammono 2 hd ox p opanes onc ac R & D) GC P NN Bs 3 D g conamdop op choamd EO GC P NN Bs (3D g conamdop op) deox choamd manufactured by Kenkyusho Co., Ltd. Examples thereof include ammonium, titanium, sodium, potassium, magnesium, and potassium.
  • PO test PO test
  • PO test high-grade test
  • PO test with value 6 PO test
  • PO test PO PO test compound
  • PO Axis PO Axis
  • PO Axis PO Axis
  • OP 275 PO / PP compound
  • PO PO Axis PO PO Axis
  • Conductor PO Note
  • PO Te Selected from the group consisting of OP, Takinsia, Alone, Immediately, Pour-on, and Pour-on
  • () is a group of agents selected from, which can be used in combination with pour-on, pour-on, divalent gold ion, or in the body and in the presence of the body. .
  • () Is, for example, PO PO POP compound, PO POP compound, PO AK compound, PO AK compound, PO AK compound, PO AK compound, PO AK compound, PO Can be mentioned.
  • 006 () is a group of agents selected as described above.
  • a reagent prepared according to the composition described in 2 above that is, a portion of the reagent during the composition described in Embodiment 2 , Quistran sodium) and then other reagents in place of Gen 66, and by following the method of 77 or 78 of the description.
  • 006 (2) is a group of agents selected as described above.
  • a reagent prepared according to the composition described in 2 above that is, a part of Valence of gold ions (for example, kisstran sodium and magnesium), or It can be selected by adding a body and a body selected from the group consisting of the body and a reagent prepared by adding another body in place of Gen 66, and according to the method of 77 or 78 of the description. . 006, (), (), (2) may be a combination of 2 selected from each.
  • the degree of determination of Ming PC there is no particular limitation on the degree of determination of Ming PC as long as it enables determination of Ming PC, but it is preferable that the degree of reaction is .about.5, ⁇ 5 to 2 Is more preferred to be.
  • the pooxin pooxin compound (below, referred to as PO PO compound), the value is 6 ⁇ up, the pooxinte (below, the value is 6 ⁇ up P
  • the pooxin content in the 006 PO PO compound 7 is preferable, and upper is more preferable.
  • Examples of PO PO compounds include Phonon 24 and Phonon 28 (above, Japan).
  • the polycyclic ring in PO te with a value of 6-above means that () having a is substituted on the upper side, or that having an aromaticity on the group 2 is or is a multiple substitution.
  • Examples of the group having a include di, (), and the like.
  • Examples of groups having the above-mentioned 2 are, for example, Etc.
  • Examples of PO having a value of 6 or above include O SP 5 (), Gen 5 (), 74 (agent).
  • the achi is, for example, an aki having a prime number of 2 to 3, such as i, octidode, isoi, isodo, isoto, isotetra, tetrade, isopenta, pentade, isoxa, tetrade, Examples include iso, isoocta, iso, isotoane and the like. ⁇
  • the aki having 3 to 3 carbon atoms is preferable.
  • the PO aki in Ming the PO aki with a prime number of 2 to 3 or with a value of 5 ⁇ is more preferable.
  • Examples of aki having a prime number of 3 to 3 include isoto, isotetrade, isopentade, isoxa, de, iso, isoocta, isonade, isoi, octidode, isoi, isodo, isoto, isotetra, tetrade, isopenta, pentade. , Isoxa, tetrade, iso, isoocta, iso, isotoane and the like.
  • the degree of determination of Ming PC there is no particular limitation on the degree of determination of Ming PC as long as it can determine the determination of Ming PC, but it is preferable that the degree of reaction is ..2 in the reaction. Be more preferred.
  • 007 means a hydrophilic parent.
  • the value of P-te can be obtained by the method described in India, (formula company) or Shin (form public company).
  • the 007 drug is not particularly limited as long as it converts the peroxide generated from the PC outside the host into a substance that does not affect the reaction of the peroxide generated from the PC, but it contains catalase. It contains a drug, and two chemical compounds used for oxidative reactions. Physically,
  • the degree of catalase is preferably: ⁇ 5, more preferably: ⁇ is used as a peracid drug, for example, for an oxidative reaction 2
  • okida ⁇ ⁇ 5 is preferred and ⁇ OO is more preferred.
  • ⁇ ⁇ is preferred.
  • the quality includes, but pigments are preferable.
  • the quality is basic, it contains peracids such as peracid, body and oxidant.
  • Examples of the body include the following chromophores.
  • the effective quality is light, it contains peracid and quality.
  • the quality includes, for example, sodium, isono, aluminium, and the like.
  • a peracid or a peracid substance reacts with an acid to generate an oxygen, and the dye formed is quantified. With this, the amount of hydrogen peroxide can be quantified. Further, when a peracid drug containing a substance is used, the peroxyacid can be quantified by reacting with the peracid and the substance to generate light and quantifying the generated light.
  • chromophores examples include isomers and oxidative pigments.
  • Persistent substances such as oxygen peroxide and oxidizer are substances that can be replaced independently. Physically, O Cabo Methii 3 7 Bis (Methiano) Gin (CC P) Methii 3 7 Bis (Methano) Gin (CP), (Methano Novobo) 4 4 Bis (Methia) B) (4) bis (meth) azine, bis (3 bis (4) meth (4) methianol (C)) and the like.
  • peroxidative active substances such as 007, pungs, hydrogen peroxide and oxidase
  • 2 are pungent substances that produce oxygen. is there.
  • Examples of the combination of 007 72 include a combination with a coupler and a combination with a coupler type.
  • Examples of the coupler include 4 anoantipine (4, methyl 2 benzohydrazine, and the like.
  • Examples of the coupler include (3 pp), (2 pp 3) 3 meth (S) (2 pp 3 5 Methian (S (2 key 3 pp) 3 5 Tokia (OS)
  • the body includes, for example, an ion ,, Shi. Examples thereof include tos (meth) aminomethane, phosphorus, boron, and the like.
  • a step of reacting an element with oxygen to produce an oxygen peroxide In the method of Ming, the process (1) can be performed on a pour-on, a pour-on divalent gold ion, or a body and a body selected from the body. In the presence of pour-on,
  • the pour-on divalent gold ion or for the body selected from the body and the body, it is preferable to use (2).
  • a process for removing the post-RPS outside the R P for example, there is a process for removing the peroxygen generated in (1).
  • a process for removing the peroxygen generated in 1) the method of coexisting with the enzyme in process 1) and the method of using the 2 types of pungs used in the oxidative oxidation reaction are used. Is mentioned.
  • the step of removing the post-P impurities in the process is not limited to the step of converting the hydrogen peroxide generated from the stainless steel into another substance and erasing it. If it is possible to determine the element and the element, the peracid generated from the stearoyl
  • step ( ⁇ ) is used to generate the impurities other than P, and step () is to be used to generate the hydrogen peroxide from the steric elements in P, it is necessary to convert the oxygen generated in the step ⁇ to another substance.
  • the peracid generated in step () It also includes determining the PC by calculating the prime.
  • Ste, or Sterate and Stelate Hydrolyzable element are reacted with water in water containing the enzyme, and after the generated peroxygen is eliminated, the In addition, by performing a hydrolytic decomposition of water, and optionally an enzyme consisting of hydrolyzed hydrogen, in an aqueous solution containing a case to form hydrogen peroxide, and measuring the amount of hydrogen peroxide formed, the PC content is measured. To calculate.
  • the enzyme consisting of oxygen, or the enzyme hydrolyzing stearate, and the enzyme consisting of hydrogen, oxygen and oxygen, are reacted with water containing the enzyme to eliminate the peroxygen formed, and After the reaction, the hydrolyzed steric acid, hydrogen peroxide, oxygen oxide, and, if necessary, further an enzyme consisting of hydrolyzed hydrogen peroxide are reacted with the aqueous solution containing the enzyme to produce hydrogen peroxide.
  • the PC degree is calculated by measuring the generated element.
  • an enzyme consisting of ste, hydrogen, oxygen oxide and oxygen, or a hydrolyzate of starch, an enzyme consisting of steric enzyme, hydrogen hydrogen, oxygen and oxygen, and It is reacted with an aqueous solution containing
  • a starch hydrolyzate, a starch, a hydrogen peroxide, an oxygen and an acid, and, if necessary, an enzyme consisting of a hydrolyzate The PC content is calculated by reacting with aqueous solution containing hydrogen peroxide to produce hydrogen peroxide and measuring the produced hydrogen peroxide.
  • the reaction is carried out in an aqueous solution containing a mixture of the two pungers used in the reaction, and after the persulfate formed is eliminated, the steric and steric water contents after peroxidation are required.
  • the PC degree can be calculated by further producing an enzyme with an enzyme that decomposes water and measuring the produced element.
  • an enzyme consisting of steric hydrolyzation, steric hydrogen, an element and an element
  • an enzyme consisting of stea, hydrogen, oxygen oxide and oxygen or an enzyme consisting of stea hydrolyzing, stearinase, hydrogen peroxide, oxygen and oxygen. After reacting with an aqueous solution containing two pongs used for , After the removal of peracid, hydrolyzed by steric acid, steric acid, steric hydrogen, hydrogen and oxygen, and, if necessary, an enzyme consisting of hydrolyzed hydrogen,
  • the P C degree is calculated by reacting in an aqueous solution containing both chemical compounds to generate hydrogen peroxide and measuring the generated hydrogen peroxide.
  • the enzyme consisting of sodium and sodium water, and if necessary, an enzyme consisting of phosphorus hydrolyzing element,
  • the P C degree is calculated by reacting with an aqueous solution containing a case to produce hydrogen peroxide and measuring the produced hydrogen.
  • 0093 (8), Stehydrogen, Elemental and elementary acids
  • an enzyme consisting of steric hydrolyzation, steric hydrogen, an element and an element
  • the PC content is calculated by reacting in an aqueous solution containing a case to produce hydrogen peroxide, and measuring the produced oxygen.
  • aqueous solution containing a case to produce hydrogen peroxide and measuring the produced oxygen.
  • An enzyme consisting of hydrogen, oxygen and oxygen, or an enzyme consisting of water hydrolyzate, hydrogen, oxygen and oxygen (), is used for Pour-on-Oxidation. After removing the peroxygen formed by reacting with aqueous solution containing a mixture of the two compounds, the hydrolyzation of steric acid, hydrogen peroxide, oxyhydrogen, oxygen and oxygen, If necessary, an enzyme consisting of water-decomposing element is further reacted with an enzyme containing the other coupling agent in an aqueous solution containing the other coupling agent to generate hydrogen peroxide, and by measuring the generated hydrogen peroxide, the PC content is measured. To calculate.
  • the hydrolyzed product is composed of steric hydrolyzate, hydrogen peroxide, oxygen and oxygen oxidase, if necessary, further hydrolyzed.
  • the PC content is calculated by reacting the enzyme with an enzyme containing water containing the enzyme to produce hydrogen peroxide, and measuring the produced hydrogen peroxide.
  • an enzyme consisting of stea, hydrogen sulphur, oxygen oxide and oxygen, or a hydrolyzed stearate, a stearinase, an enzyme consisting of hydrogen sulphur, an oxygen and an oxygen (2), Pour-on, after reacting in an aqueous solution containing divalent gold ionase to eliminate the generated hydrogen peroxide, and after the removal of hydrogen peroxide, hydrolytic decomposition of starch, stearinase, hydrogen peroxide, oxygen and oxygen
  • the PC degree is calculated by reacting an acid, if necessary, with an enzyme that further decomposes water in an aqueous solution containing a case to produce hydrogen peroxide, and measuring the produced hydrogen oxide.
  • an enzyme consisting of stea, hydrogen, oxygen and oxygen, or a hydrolyzed starch, a stearinase, an enzyme consisting of hydrogen peroxide, an oxygen and an oxygen, (2), Body and / or antibody, reacting in aqueous solution containing case, eliminating generated peroxygen, and then removing peroxidation, hydrolyzed steric acid, steric enzyme, hydrogen peroxide, oxygen oxide, and oxygen acid, If necessary, an enzyme such as hydrogen-decomposing element is further reacted with an aqueous solution containing a case to produce hydrogen peroxide, and the produced element is measured to calculate the PC content.
  • a steric enzyme or a steric enzyme and a hydrolyzed protein of a test substance, are used in (2), the body and / or the antibody, and the oxidase.
  • 0106 (2) an enzyme consisting of hydrogen, oxygen and oxygen, or an enzyme consisting of water hydrolyzate, hydrogen, oxygen and oxygen oxidase (2), pour-on, divalent It reacts in an aqueous solution containing gold dioxides used for gold ion oxidation and its admixture, eliminates the hydrogen peroxide produced, and then removes the hydrolyzed water after removing the hydrogen peroxide.
  • the PC degree is calculated by measuring.
  • an enzyme consisting of stea, hydrogen, oxygen and oxygen or an enzyme consisting of water steric hydrolyzate, stearinase, hydrogen, oxygen and oxidase (2, polyamine).
  • Oh divalent gold 2 used for ion response After reacting in an aqueous solution containing a mixture of hydrates and hydrates to eliminate the generated hydrogen peroxide, after removing the hydrogen peroxide, hydrolyzing the steric acid, steric acid, hydrogen steric acid, oxygen and oxygen, If this is done, the RPC degree is calculated by further reacting with an enzyme consisting of water-decomposing element in an aqueous solution containing one of the components to generate an oxygen peroxide, and measuring the element formed. To do.
  • an enzyme consisting of ste, hydrogen, oxygen oxide and oxygen, or a hydrolyzate of starch a enzyme such as starch, an enzyme consisting of hydrogen, oxygen and oxygen (2), And / or the antibody, and the aqueous reaction containing the combination of the dihydrated pungent used for oxidization and the reaction with water, after eliminating the peroxygen formed, and after the peroxidation, Stet hydrolyses, ste, hydrogen, oxygen and oxygen oxidases, and, if necessary, further enzymes consisting of non-hydrolyzed oxygen, and reacts with hydrogen peroxide in aqueous solution containing one of the hydrogen peroxides. Generated, generated
  • the P C degree is calculated by measuring the element.
  • the reaction in the standard method is, for example, up to 5 C, preferably 2 to 4 C, for up to 6 hours, and preferably 2 to 3.
  • the amount of hydrogen peroxide formed is
  • Ming PC drugs include the following.
  • Stet Water decomposition Steh, Peracid PC containing drugs, peracid drugs ,,.
  • Examples of the drug include drugs containing two caps used for oxidization or those containing catalase.
  • Examples of the drug include a drug containing two caps used for oxidative response, or a drug containing catalase.
  • These reagents may further contain pour-on. As for having this, () is preferred.
  • these reagents may contain a pour-on divalent gold ion, or a body and a body selected from the body. Of these, (2) is preferred.
  • it may contain a hydrolyzable element.
  • Ming's more specific PC drugs include, for example, the following, but these do not limit the range of Ming. Obviously, it is possible to use a plurality of, each selected as, (), (2).
  • Stet Hydrolyzate Stet, Catalase, Catalase.
  • Stain Water-decomposition Stea, Catalase, Catalase, ... Contains drugs.
  • Stet Water decomposition Steh, water-removal, catalase, catalase,
  • Sterilized water decomposition hydrogen peroxide, oxygen ,, water decomposition, catalase, catalase.
  • Sterilized water decomposition hydrogen peroxide, oxygen acid, hydrolyzed water, catalase, catalase, and drugs.
  • Sterilized water decomposition Stes, hydrogen, oxygen oxidase, oxidation, hydrolyzed water, catalase, catalase.
  • Sterilized water decomposition hydrogen peroxide, oxygen, oxidation, nitrogen water decomposition, oxidase, pungent.
  • Sterilized water decomposition Ste, hydrogen peroxide, oxygen oxidase, oxidation, hydrolyzed water, oxidase, oxidative coupling compound.
  • Sterilized water decomposition hydrogen peroxide, oxygen, oxidation, pour-on, oxida, pung-form, ().
  • Sterilized water decomposition hydrogen peroxide, oxygen, water decomposition, pour-on, catalase, catalase, (contains ,.
  • Sterilized water decomposition hydrogen peroxide, oxygen, oxidation, hydrogen decomposition, pour-on, catalase, catalase, (), and drug.
  • Sterilized water decomposition Stes, hydrogen, oxygen oxidase, oxidation, hydrolyzed water, pour-on, catalase, catalase, ().
  • Sterilized water decomposition stain, moisture decomposition, pour-on, oxida, pung-form, ().
  • Sterilized water decomposition Ste, hydrogen peroxide, oxygen oxidase, oxidation, hydrolyzed water, pore, oxidase, oxidative coupling compound, ().
  • Sterilized water decomposition hydrogen peroxide, oxygen, pour-on, divalent gold ion, catalase, catalase, (2), drug.
  • Sterilized water decomposition hydrogen peroxide, oxygen, oxidation, hydrogen decomposition, pour-on, divalent gold ion, catalase, catalase, (),
  • Stet Water splitting Stet hydrogen, ,, water decomposition, pour-on, divalent gold ion, catalase, catalase, (2),
  • Sterilized water decomposition hydrogen peroxide, carboxylic acid, hydrolyzed water, body and / or antibody, catalase, catalase, (2,).
  • Sterilized water decomposition stain, moisture content, body and / or body, oxidizer, body, (2).
  • Sterilized water decomposition Stes, hydrogen peroxide, elementary oxidase, oxidation, hydrolyzed water, pour-on, divalent gold ion, oxidase, oxidized capping compound, and (). 01 82 72
  • kit It may be stored, distributed and used in the form of a clear P C, kit.
  • the form of the kit is not particularly limited as long as it is a form that allows the Ming PC method, but 2 or 3 may be used, but 2 is preferable. I can give you one.
  • PC kit characterized by containing.
  • It contains a first drug containing sodium hydrogen peroxide, an acid, a hydrogen peroxide drug and a second reagent containing a hydrogen peroxide drug, and a hydrolyzed starch compound between the first drug and the second reagent.
  • a PC kit characterized by being contained in both.
  • kits may further contain pour-on. As for having this, () is preferred. In addition, these kits may contain a pour-on divalent gold ion, or a body and a body selected from the body. Of these, (2) is preferred.
  • it may contain a hydrolyzable element.
  • the first drug is contained, but it may be contained in the first drug and the second reagent.
  • first hydrolytic agent the first drug
  • second reagent it is preferably contained in the first drug and the second reagent.
  • First hydrogen is contained, but it may be contained in the first drug and the second reagent.
  • the oxidase is contained first, but may be contained in the first drug and the second reagent.
  • 0190 contained first, but may be contained in both first drug and second reagent.
  • the enzyme used to remove the peroxygen generated during the reaction is contained in the first reagent and the second reagent contained in the catalase.
  • the first content is only in the case of the two oxidants used for the oxidative oxidation of oxygen, which is used to remove the hydrogen peroxide generated in the reaction.
  • Aon is preferably contained first.
  • the divalent gold ion is preferably contained first.
  • the first drug is contained in the first drug and the second reagent, it is preferable that the first drug is contained.
  • the first drug and the second reagent may be contained in the first drug and the second reagent, It is preferable to have it.
  • Water decomposition It is preferable that it is contained in the second reagent although it may be contained in either or both of the first drug and the second reagent.
  • Ming PC kits include, for example, the following kits, but these do not limit the enclosure of Ming.
  • Stet Water decomposition Steric hydrogen, Acid, Catalase, Peracid.
  • Stet Water splitting Sterol hydrogen, Acid, Catalase,
  • Stet Water decomposition Steh, Steh Hydrogen, oxygen oxidase, oxidation, catalase, hydrogen peroxide
  • Stabilizing enzyme Stet Hydrolysis, Hydrolysis, Catalase, Hydrogen peroxide
  • Stabilizing enzyme Stet Hydrolysis, Hydrolysis, Catalase, Hydrogen peroxide
  • Ste Ste, hydrogen, oxygen oxidase, oxidization, water decomposition, catalase,
  • Ste Ste, hydrogen, oxygen oxidase, oxidization, water decomposition, catalase,
  • Stet Water decomposition Steh
  • Steh Hydrogen oxygen oxidase, oxidation, water decomposition, catalase
  • Ste Ste, hydrogen, oxygen oxidase, oxidization, water decomposition, catalase,
  • Ste Ste, hydrogen, oxygen oxidase, oxidization, water decomposition, catalase,
  • Ste Ste, hydrogen, oxygen oxidase, oxidization, water decomposition, catalase,
  • 0322 Ming PC drug and kit may contain an aqueous solution, a stabilizing agent, a preservative, an influence agent, and a reaction accelerator, if necessary.
  • a stabilizing agent examples include those mentioned above. Examples thereof include Tianzian (), kus, and calcium.
  • the preservatives include azitonium, iodine, and antibiotics.
  • Examples include asbin oxida and the like for eliminating the effect of asbic acid.
  • Examples of the progressing agent include yeasts such as, and sodium, salts such as sodium.
  • the content in the state of being dissolved in an aqueous medium is preferably ... ⁇ 2, 5 ⁇
  • a content of which the degree of dissolution in an aqueous solution is ⁇ 2 is preferable, and a content of ⁇ 5 is more preferable.
  • the content in which it is dissolved in an aqueous medium is preferably ... to 5 o, and more preferably ... to O o.
  • the content in the state of being dissolved in an aqueous medium is preferably ..., and the content of ⁇ 5 is more preferable.
  • the content in which the degree when dissolved in an aqueous medium is ... is preferable, and the content in which it is ⁇ 5 is more preferable. Is preferably such that the degree when dissolved in an aqueous medium is ⁇ 3, and more preferably ⁇ 3.
  • the content in the state of being dissolved in an aqueous medium is preferably ... to 3, and the content of ... to 3 is more preferable.
  • the content in the state of being dissolved in an aqueous medium is preferably ... to 4, and the content to be ⁇ 2 is more preferred.
  • Gakken Co., Ltd. sodium (Gakusha Co., Ltd.), kisstran sodium (manufacturing company), magnesium (manufacturing company), 4 ananoantipine (manufacturing company), okida (yob spinning), CC (Staining enzyme kit), P 3 2 (Stea water splitting yoyo spinning), Chemical modification P (Product prepared by Stes water splitting company) P (Manufactured by Stes water splitting chemicals company), C (Stain water splitting compound Company), C 3 (steel water splitting yoyo spinning), PP (many water splitting chemical company), P 2 (many water splitting chemical company), Asbin Okida (manufactured by chemical company).
  • Test agent 723 SP Test agent, 34 POP, 2 75 of PO POP compound chemical, 68 POP, 2 75 of PO POP compound compound, 42 POP of 2 75 A certain PO POP compound Ichigohyo Pharmaceutical 8
  • POP of 2 75 is PO POP compound Ichigo Kogyo
  • OP 4 POP of 2 75 is PO / PP compound
  • Neu 4 PP Aquite Ichigohyo Pharmaceutical Neugen XPP Akite Ichigogyo Seiyaku
  • SE P 5 5 PP Axis Center P 5 6 PO PO Axis, Center 2 PO PO Axis, XP 23
  • P P 2 75 which is made by PO POP compound chemicals, sodium () Conductor Gakusha, Iteno 7 () P Akitesutei Kogyo Seiyaku, Gen 8 () P Aki
  • a PC kit consisting of the following () two reagents (a) was prepared.
  • a PC kit consisting of the following () two reagents (a) was prepared.
  • a PC kit consisting of the following () two reagents (a) was prepared.

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Abstract

　検体に含まれるレムナント様リポ蛋白（ＲＬＰ）中のコレステロール（ＲＬＰ－Ｃ）を簡便かつ、正確に測定するための方法を提供する。 　(i)界面活性剤Ａを含有する水性媒体中で、検体とコレステロール酸化酵素、或いは、コレステロール脱水素酵素及び酸化型補酵素とを反応させ、ＲＬＰ以外のリポ蛋白中のコレステロールを除去する工程、(ii)前記工程(i)でＲＬＰ以外のリポ蛋白中のコレステロールを除去した後の反応液に、界面活性剤Ｂを存在させ、コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素、或いは、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素及び酸化型補酵素を反応させ、過酸化水素又は還元型補酵素を生成させる工程、及び、(iii)前記工程(ii)で生成した過酸化水素又は還元型補酵素を測定する工程を有する検体中のＲＬＰ－Ｃの測定方法。

Description

明 細 書
レムナント様リポ蛋白中のコレステロール測定方法、試薬及びキット 技術分野
[0001] 本発明は臨床検査において動脈硬化症等の危険因子とされるレムナント様リポ蛋 白中のコレステロールの測定方法、測定用試薬及び測定用キットに関する。
背景技術
[0002] 血液中には、種々のリポ蛋白が含有されている。これらのリポ蛋白は比重の違いに より、カイロミクロン (以下、 CMと略記する）、超低密度リポ蛋白（以下、 VLDLと略記 する）、低密度リポ蛋白（以下、 LDLと略記する）、高密度リポ蛋白（以下、 HDLと略 記する）に分類されている。また、 VLDL力も LDLへ代謝される過程において生成す るリポ蛋白として、 VLDLと LDLの密度の中間に相当する中間密度リポ蛋白（以下、 I DLと略記する）が存在する。各リポ蛋白は、コレステロール、トリダリセライド、リン脂質 、蛋白質等の構成成分の割合が異なっており、生体内で異なる作用を有する。
[0003] 臨床検査にお!、て、 HDL中のコレステロールは動脈硬化症の負の危険因子と、 L DL中のコレステロールは動脈硬化症の正の危険因子とされており、臨床検査の分 野で頻繁に測定されている。
近年、脂質の代謝等に起因して生成するリポ蛋白中のコレステロール力 動脈硬化 症の危険因子としての LDL中のコレステロールより密接な指標となることが示されて いる。脂質の代謝等に起因して生成するリポ蛋白質としては、例えばレムナント様リポ 蛋白（以下、 RLPと略記する）が挙げられている。
[0004] RLPは、リポ蛋白がリポ蛋白リパーゼによって代謝 ·分解される過程で生じるもので あり、カイロミクロンレムナント（以下、 CMレムナントと略記する)及び超低密度リポ蛋 白レムナント（以下、 VLDLレムナントと略記する）に分類される。 IDLは、 VLDLレム ナントに包含される、比重 1. 006〜1. 019のリポ蛋白であり狭義の VLDLレムナント と呼ばれる。
[0005] RLPは、トリダリセライドが豊富なリポ蛋白であり、 CMレムナントはアポ B— 48とアポ Eとを主要アポ蛋白として含有し、 VLDLレムナントはアポ B— 100とアポ Eとを主要 アポ蛋白として含有する。
RLP中のコレステロール（以下、 RLP— Cと略記する）の測定方法としては、抗アポ A-Iモノクローナル抗体及び抗アポ B— 100モノクローナル抗体を含有するァフィ- ティーゲルを用いたィムノクロマトグラフィにより、血清から RLPを分離し、この分離し た RLPに含まれるコレステロールを定量する方法が知られて 、る。本定量方法に適 用される RLP— C定量試薬が、（株）日本抗体研究所力も発売されている [製品名： R LP—コレステロール「JIMRO」II] (非特許文献 1、非特許文献 2参照)。この免疫吸着 法による RLP— Cの定量法については、厚生労働省により保険点数が付与されてい る。し力しながら本方法は抗体を使用したァフィユティークロマトグラフィー方法であり 、試料の分離操作を必要とするため、操作が煩雑で、測定に時間がカゝかる。
[0006] 一方、試料の分離操作が不要な RLP— C定量法として、検体に界面活性剤、コレ ステロール酸化酵素もしくはコレステロール脱水素酵素、コレステロールエステルカロ 水分解酵素及びリン脂質加水分解酵素を作用させ、検体中の RLP— Cを測定する 方法が知られて!/ヽる (特許文献 1参照)。
特許文献 1 :特開 2001— 231597号公報
非特許文献 1 :動脈硬化、 25(9, 10)、 371-376 (1998)
非特許文献 2 :タリ-カル ケミストリー (Clinical Chemistry)、 48(2)、 217-219 (2002) 発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0007] 本発明の目的は、検体中の RLP— Cを簡便かつ、正確に測定するための方法、試 薬及びキットを提供することにある。
課題を解決するための手段
[0008] 本発明は、以下の [1]〜[27]に関する。
[1] 下記工程 G)〜(iiOを順次行うことを特徴とする、検体中のレムナント様リポ蛋白 (以下、 RLPと略記する）中のコレステロール (以下、 RLP— Cと略記する）の測定方 法。
(0検体、及び、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸エステル、ポリオキシェ チレンアルキルエーテル硫酸エステル塩、高級アルコール硫酸エステル塩、 HLB値 力 0未満であるポリオキシエチレン多環フエ-ルエーテル、ポリオキシエチレン多 環フエ-ルエーテル硫酸エステル塩、ポリオキシエチレンポリオキシアルキレン多環 フエ-ルエーテル、エチレンジァミン ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン縮合 物、ポリオキシエチレンアルキルフエ-ルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフエ -ルエーテル硫酸エステル塩、ポリオキシエチレン短鎖分岐アルキルエーテル、ポリ ォキシプロピレンの分子量が 2, 750未満であるポリオキシエチレンポリオキシプロピ レン縮合物、ポリオキシエチレンポリオキシアルキレン短鎖分岐アルキルエーテル、 ポリオキシエチレンポリオキシアルキレンアルキルエーテル、胆汁酸誘導体、ポリオキ シエチレンビスフエノールー A—エーテル、ポリオキシエチレンァリールエーテル硫酸 エステル塩、及び、ポリオキシプロピレンメタキシレンジアミンカもなる群より選ばれる 界面活性剤 (以下、該界面活性剤を界面活性剤 Aと略記する)を含有する水性媒体 中で、検体とコレステロール酸ィ匕酵素、或いは、コレステロール脱水素酵素及び酸ィ匕 型補酵素を反応させ、 RLP以外のリポ蛋白中のコレステロールを除去する工程、
GO前記工程 (0で RLP以外のリポ蛋白中のコレステロールを除去した後の反応液に 、ポリオキシエチレンポリオキシブチレン縮合物、 HLB値が 16. 0以上であるポリオキ シエチレン多環フエ-ルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシアルキレン長鎖分 岐アルキルエーテル、ポリオキシプロピレンの分子量が 2, 750以上であるポリオキシ エチレンポリオキシプロピレン縮合物、及び、ポリオキシエチレン長鎖分岐アルキル エーテルカゝらなる群より選ばれる界面活性剤（以下、該界面活性剤を界面活性剤 Bと 略記する）を存在させ、コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸 化酵素、或いは、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素 及び酸化型補酵素を反応させ、過酸化水素又は還元型補酵素を生成させる工程、 及び、
(m)前記工程 GOで生成した過酸ィ匕水素又は還元型補酵素を測定する工程。
[0009] [2] 工程 (0が、検体及び界面活性剤 Aを含有する水性媒体中で、検体にコレステ ロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素を反応させて、 RLP 以外のリポ蛋白中のコレステロールを除去する工程である、 [ 1 ]記載の方法。
[0010] [3] 工程 (0の反応が、ポリア二オン存在下で行われる [1]又は [2]記載の方法。 [4] 界面活性剤 A力 エチレンジァミン ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン 縮合物、ポリオキシエチレンアルキルフエ-ルエーテル、ポリオキシエチレンアルキル フエ-ルエーテル硫酸エステル塩、ポリオキシエチレン短鎖分岐アルキルエーテル、 ポリオキシプロピレンの分子量が 2, 750未満であるポリオキシエチレンポリオキシプ ロピレン縮合物、ポリオキシエチレンポリオキシアルキレン短鎖分岐アルキルエーテ ル、及び、胆汁酸誘導体からなる群より選ばれる界面活性剤 [以下、該界面活性剤を 界面活性剤 (A1)と略記する。 ]である [3]記載の方法。
[0011] [5] 工程 (0の反応力、ポリア-オン及び 2価の金属イオンの存在下、又は、抗アポ B抗体及び抗アポ E抗体力 なる群より選ばれる抗体の存在下で行われる [1]又は [ 2]記載の方法。
[6] 界面活性剤 A力 ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸エステル塩、ポリ ォキシエチレン多環フエ-ルエーテル硫酸エステル塩、ポリオキシエチレンポリオキ シアルキレン多環フエニルエーテル、エチレンジァミン ポリオキシエチレンポリオキ シプロピレン縮合物、ポリオキシエチレンアルキルフエ-ルエーテル、ポリオキシプロ ピレンの分子量が 2, 750未満であるポリオキシエチレンポリオキシプロピレン縮合物 、ポリオキシエチレンポリオキシアルキレン短鎖分岐アルキルエーテル、ポリオキシェ チレンポリオキシアルキレンアルキルエーテル、及び、胆汁酸誘導体からなる群より 選ばれる界面活性剤 [以下、該界面活性剤を界面活性剤 (A2)と略記する。 ]である [5]記載の方法。
[0012] [7] 工程 (0力、コレステロールエステル加水分解酵素の共存下で行われる [1]〜[ 6]の 、ずれかに記載の方法。
[8] 工程 (ii)が、リン脂質加水分解酵素の共存下で行われる [1]〜[7]のいずれか に記載の方法。
[9] 過酸化水素の消去が、パーォキシダーゼと酸ィヒカップリング発色反応に使用 される 2つの酸ィ匕カップリング型色原体の一方との組合せの存在下、又は、カタラー ゼの存在下に行われる [ 1]〜 [8]の 、ずれかに記載の方法。
[0013] [10] コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、過酸化水 素除去試薬、過酸化水素測定試薬、界面活性剤 A及び界面活性剤 Bを含有する検 体中の RLP— C測定用試薬。
[11] コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、酸ィ匕型 補酵素、界面活性剤 A、及び、界面活性剤 Bを含有する検体中の RLP— C測定用試 薬。
[0014] [12] コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、酸ィ匕型 補酵素、還元型補酵素酸化酵素、過酸化水素除去試薬、過酸化水素測定試薬、界 面活性剤 A、及び、界面活性剤 Bを含有する検体中の RLP— C測定用試薬。
[13] 過酸化水素除去試薬が、パーォキシダーゼと酸ィ匕カップリング型発色反応 に使用される 2つの酸化カップリング型色原体の一方とを含有する試薬、又は、カタ ラーゼを含有する試薬である [ 10]又は [ 12]記載の試薬。
[0015] [14] さらに、ポリア-オンを含有する [10]〜 [13]のいずれかに記載の試薬。
[15] 界面活性剤 Aが、界面活性剤 (A1)である [14]記載の試薬。
[0016] [16] さらに、ポリア-オン及び 2価の金属イオンを含有する試薬、又は、抗アポ B 抗体及び抗アポ E抗体からなる群より選ばれる抗体を含有する試薬を含有する [10] 〜 [13]のいずれかに記載の試薬。
[17] 界面活性剤 Aが、界面活性剤 (A2)である [16]記載の試薬。
[18] さらに、リン脂質加水分解酵素を含有する [10]〜[17]のいずれかに記載 の試薬。
[0017] [19] コレステロール酸化酵素、過酸化水素除去試薬及び界面活性剤 Aを含有 する第一試薬と、過酸化水素測定試薬及び界面活性剤 Bを含有する第二試薬とを 含有し、コレステロールエステル加水分解酵素を第一試薬、第二試薬のいずれか又 は両方に含有させることを特徴とする、検体中の RLP— C測定用キット。
[20] コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び界面活性剤 Aを含有する第 一試薬と、界面活性剤 Bを含有する第二試薬とを含有し、コレステロールエステルカロ 水分解酵素を第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有させることを特徴とす る、検体中の RLP— C測定用キット。
[0018] [21] コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素、還元型補酵素酸化酵素、過酸 化水素除去試薬及び界面活性剤 Aを含有する第一試薬と、過酸化水素測定試薬及 び界面活性剤 Bを含有する第二試薬とを含有し、コレステロールエステル加水分解 酵素を第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有させることを特徴とする、検 体中の RLP— C測定用キット。
[0019] [22] 過酸化水素除去試薬が、パーォキシダーゼと酸ィ匕カップリング発色反応に 使用される 2つの酸化カップリング型色原体の一方とを含有する試薬、又は、力タラ ーゼを含有する試薬である [19]又は [21]記載のキット。
[0020] [23] 第一試薬力 さらにポリア-オンを含有する [19]〜 [22]のいずれかに記載 のキット。
[24] 界面活性剤 Aが、界面活性剤 (A1)である [23]記載のキット。
[25] 第一試薬が、さらにポリア-オン及び 2価の金属イオン、或いは、抗アポ B抗 体及び抗アポ E抗体からなる群より選ばれる抗体を含有する [19]〜 [22]の ヽずれ かに記載のキット。
[0021] [26] 界面活性剤 Aが、界面活性剤 (A2)である [25]記載のキット。
[27] 第二試薬が、さらにリン脂質加水分解酵素を含有する [19]〜[26]のいず れかに記載のキット。
発明の効果
[0022] 本発明により、検体の分離操作が不要な、 RLP— Cを簡便、かつ、正確に測定する 方法、試薬及びキットが提供される。
図面の簡単な説明
[0023] [図 1]参考例 1のキットを用いた測定と RLP—コレステロール「JIMRO」II (日本抗体 研究所社製)を用いた測定との相関図を示す。
発明を実施するための最良の形態
[0024] 本発明にお 、て、 RLPとは、 VLDLレムナント、 CMレムナントをあわせたリポ蛋白 を意味し、 RLP— Cとは、 RLP中の遊離型コレステロールとエステル型コレステロ一 ルを合わせたもの、すなわち、 VLDLレムナント中の遊離型コレステロール及びエス テル型コレステロールと CMレムナント中の遊離型コレステロール及びエステル型コレ ステロールを合わせたものを意味する。
[0025] 本発明の RLP— C測定方法は、検体の分離操作を必要とせず、また、 RLP— Cの 測定に先んじて、 RLP以外のリポ蛋白中のコレステロールを除去する工程を有するこ とを特徴とする。ここで、 「RLP以外のリポ蛋白中のコレステロールを除去する」におけ る「RLP以外のリポ蛋白」とは、 RLP以外のリポ蛋白の 、ずれかのリポ蛋白を意味し、 RLP以外の全てのリポ蛋白のみならず、 RLP以外の一種又は複数のリポ蛋白をも意 味する。また、「RLP以外のリポ蛋白中のコレステロールを除去する」における「コレス テロール」は、全ての遊離型コレステロールと全てのエステル型コレステロールの組 合せのみならず、全て又は一部分の遊離型コレステロールのみ、全て又は一部分の エステル型コレステロールのみ、全ての遊離型コレステロールと一部分のエステル型 コレステロールとの組合せ、一部の遊離型コレステロールと全部のエステル型コレス テロールの組合せ、及び、一部分の遊離型コレステロールと一部分のエステル型コレ ステロールとの組み合わせをも意味する。
[0026] 本発明の測定方法において用いられる検体としては、例えば全血、血漿、血清、髄 液、唾液、羊水、尿、汗、脾液等が挙げられるが、血漿及び血清が好ましい。
本発明におけるコレステロールエステル加水分解酵素としては、コレステロールエス テルを加水分解する能力を有する酵素であれば特に限定はなぐ例えば動物、植物 又は微生物由来のコレステロールエステラーゼ、リポプロテインリパーゼの他、遺伝 子工学的な手法により製造されるコレステロールエステラーゼ、リポプロテインリパー ゼ等も用いることができる。
[0027] コレステロールエステルカ卩水分解酵素としては、無修飾のコレステロールエステル 加水分解酵素も、化学的に修飾されたコレステロールエステル加水分解酵素も使用 することができる。また、コレステロールエステル加水分解酵素としては市販品を使用 することちでさる。
市販されて 、るコレステロールエステルカ卩水分解酵素としては、コレステロールエス テラーゼ" Amano"2 (CHE2 ;天野ェンザィム社製）、コレステロールエステラーゼ" Am ano"3 (CHE3；天野ェンザィム社製）、リポプロテインリパーゼ" Amano"6 (LPL6；天 野ェンザィム社製）、リポプロテインリパーゼ (LPL— 311 ;東洋紡績社製）、リポプロ ティンリパーゼ (LPL - 312 ;東洋紡績社製）、コレテロールエステラーゼ（COE— 30 1 ;東洋紡績社製）、リポプロテインリパーゼ (LPBP ;旭化成社製）、コレステロールェ ステラーゼ（CEBP— M；旭化成社製）、コレステロールエステラーゼ（CEN；旭化成 社製）、等が挙げられる。また、本発明においては、 2種類以上のコレステロールエス テル加水分解酵素を組み合わせて用いることもできる。
[0028] コレステロールエステル加水分解酵素の化学修飾にぉ ヽて当該酵素を修飾する基
(化学修飾基）としては、例えばポリエチレングリコールを主成分とする基、ポリプロピ レングリコールを主成分とする基、ポリプロピレングリコールとポリエチレングリコール の共重合体を有する基、水溶性多糖類を含有する基、スルホプロピル基、スルホブ チル基、ポリウレタン基、キレート機能を有する基等が挙げられる力 ポリエチレンダリ コールを主成分とする基が好ましい。水溶性多糖類としては、例えばデキストラン、プ ルラン、可溶性デンプン等が挙げられる。
[0029] コレステロールエステル加水分解酵素をィ匕学的に修飾するための試薬 (化学修飾 剤）としては、上記の化学修飾基と、酵素のアミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル 基等と反応し得る官能基又は構造とを併せ持つ化合物等が挙げられる。酵素中のァ ミノ基と反応し得る官能基又は構造としては、例えばカルボキシル基、活性エステル 基 (N ヒドロキシサクシンイミド基等）、酸無水物、酸塩化物、アルデヒド、エポキシド 基、 1, 3 プロパンスルトン、 1, 4 ブタンスルトン等が挙げられる。酵素中のカルボ キシル基と反応し得る官能基又は構造としては、例えばアミノ基等が挙げられる。酵 素中のスルフヒドリル基と反応性がある基又は構造としては、例えばマレイミド基、ジ スルフイド、 aーハロエステル（ α ョードエステル等）等が挙げられる。
[0030] 化学修飾剤として、市販品を使用することもできる。市販されている化学修飾剤とし ては、ポリエチレングリコールを主成分とする基と N ヒドロキシサクシンイミド基とを有 するサンブライト VFM— 4101、サンブライト ME— 050AS、サンブライト DE— 030 AS (いずれも日本油脂社製）、ポリアルキレングリコールを主成分とする基と酸無水 物構造とを有するサンブライト AKMシリーズ (例えば、サンブライト AKM— 1510等） 、サンブライト ADMシリーズ、サンブライト ACMシリーズ (いずれも日本油脂社製）、 ポリエチレングリコールを主成分とする基とエポキシド基とを有する EPOX— 3400、 M— EPOX— 5000 (いずれも Sheawater Polymers社製）、キレート機能を有する 基と酸無水物構造とを有するジエチレントリアミンー N, N, Ν' , Ν" , Ν"—ペンタ 無水二酢酸 (DTPA anhydride；同仁ィ匕学研究所社製)等が挙げられる。
[0031] コレステロールエステル加水分解酵素の化学修飾は、例えば以下の方法で行うこと ができる力 本方法に限定されるものではない。まず、コレステロールエステル加水分 解酵素を PH8. 0以上の緩衝液（例えば HEPES緩衝液）に溶解し、 0〜55°Cで 0. 0 1〜500倍モル量の化学修飾剤を添加し、 5分間〜 5時間攪拌する。実際の酵素反 応においては、化学的に修飾されたコレステロールエステル加水分解酵素として、こ の反応液そのもののみならず、必要に応じて限外濾過膜等により未反応の化学修飾 剤等を除去したものも、使用することもできる。
[0032] 本反応の方法に用いられるコレステロールエステル加水分解酵素の濃度としては、 本発明の RLP— Cの測定を可能とする濃度であれば特に制限はないが、反応液中 で 0. 001〜2000U/mLの濃度であること力 S好ましく、 0. 005〜1000U/mLであ ることがより好まし!/、。
本発明におけるコレステロール酸ィ匕酵素としては、コレステロールを酸ィ匕して過酸 化水素を生成する能力を有する酵素であれば特に制限はなぐ例えば動物、植物又 は微生物由来のコレステロールォキシダーゼの他、遺伝子工学的な手法により製造 されるコレステロールォキシダーゼ等も用いることができ、コレステロールォキシダー ゼ" Amano"l (CHOD1；天野ェンザィム社製）、コレステロールォキシダーゼ（CHO PE ;キッコ一マン社製）、コレステロールォキシダーゼ（CHO— CE ;キッコ一マン社 製)コレステロールォキシダーゼ (C00321；東洋紡績社製)等の市販品を用いるこ ともできる。また、本発明においては、 2種類以上のコレステロール酸ィ匕酵素を組み 合わせて用いることもできる。
[0033] コレステロール酸ィ匕酵素は、無修飾の酵素であっても、化学的に修飾された酵素で あってもよい。化学的に修飾されたコレステロール酸ィ匕酵素は、例えば前述の化学 修飾剤を用いて、前述の化学修飾方法により作製することができる。
本反応の方法に用いられるコレステロール酸ィ匕酵素の濃度としては、本発明の RL P— Cの測定を可能とする濃度であれば特に制限はないが、反応液中で 0. 001〜2 OOOUZmLの濃度であることが好ましぐ 0. 005〜1000UZmLの濃度であること 力 り好ましい。 [0034] 本発明におけるコレステロール脱水素酵素としては、酸化型補酵素の存在下にコ レステロールを酸化して還元型補酵素を生成する能力を有する酵素であれば特に制 限はなぐ例えば動物、植物又は微生物由来のコレステロールデヒドロゲナーゼの他 、遺伝子工学的な手法により製造されるコレステロールデヒドロゲナーゼ等も用いるこ とができる。コレステロールデヒドロゲナーゼ" Amano" 5 (CHDH5 ;天野ェンザィム 社製)等の市販品を用いることもできる。また、本発明においては、 2種類以上のコレ ステロール脱水素酵素を組み合わせて用いることもできる。コレステロール脱水素酵 素は、無修飾の酵素であっても、化学的に修飾された酵素であってもよい。化学的に 修飾されたコレステロール脱水素酵素は、例えば前述の化学修飾剤を用いて、前述 の化学修飾方法により作製することができる。
[0035] 本反応の方法に用いられるコレステロール脱水素酵素の濃度としては、本発明の R LP— Cの測定を可能とする濃度であれば特に制限はないが、反応液中で 0. 001〜 2000UZmLの濃度であることが好ましぐ 0. 005〜1000UZmLの濃度であること 力 り好ましい。
コレステロール脱水素酵素を用いた測定において使用される酸ィ匕型補酵素として は、例えば NAD (P) +、 thio— NAD (P) +等が挙げられる。コレステロール脱水素酵 素の反応により生成する還元型補酵素としては、例えば NAD (P) H、 thio- NAD ( P) H等が挙げられる。
[0036] 本発明の方法に用いられる酸ィ匕型補酵素の濃度としては、本発明の RLP— Cの測 定を可能とする濃度であれば特に制限はないが、反応液中で 0. 01〜400mmolZ Lの濃度であることが好ましぐ 0. 1〜： LOOmmolZLの濃度であることがより好ましい 本発明における還元型補酵素酸ィ匕酵素としては、コレステロール脱水素酵素の反 応により生成する還元型補酵素力 過酸ィ匕水素を生成させる能力を有する酵素であ れば特に制限はなぐ例えば NAD (P) H酸ィ匕酵素等が挙げられる。還元型補酵素 酸化酵素としては、市販品を使用することもできる。市販の還元型補酵素酸化酵素と しては、 NADH Oxidase (コスモ'バイオ社製）等が挙げられる。
[0037] 本発明の方法に用いられる還元型補酵素酸ィ匕酵素の濃度としては、本発明の RL P— Cの測定を可能とする濃度であれば特に制限はないが、反応液中で 0. 01-40 OUZmLの濃度であることが好ましぐ 0. 02〜200UZmLの濃度であることがより 好ましい。
本発明におけるリン脂質加水分解酵素としては、リン脂質を分解する能力を有する 酵素であれば特に限定はなぐ例えば動物、植物又は微生物由来のホスホリパーゼ D、ホスホリパーゼじ、ホスホリパーゼ A2、リゾホスホリパーゼ等が挙げられ、その中 でもホスホリパーゼ0、又は、ホスホリパーゼ A2が好ましい。
[0038] リン脂質加水分解酵素としては、市販品を用いることができる。市販のリン脂質加水 分解酵素としては、ホスホリパーゼ D (PLD;旭化成社製）、ホスホリパーゼ D (PLDP ；旭化成社製）、ホスホリパーゼ C (PLC；旭化成社製）、ホスホリパーゼ A2 (PLA2； 旭化成社製)等が挙げられる。
本発明の方法に用いられるリン脂質加水分解酵素の濃度としては、本発明の RLP Cの測定を可能とする濃度であれば特に制限はないが、反応液中で 0. 01〜200 UZmLの濃度であることが好ましぐ 0. 1〜： LOOUZmLの濃度であることがより好ま しい。
[0039] 本発明におけるポリア-オンとしては、本発明の RLP— Cの測定を可能とするポリ ァニオンであれば特に制限はなぐ例えばデキストラン硫酸もしくはその塩、へパリン もしくはその塩、リンタングステン酸又はその塩、硫酸ィ匕シクロデキストリン又はその塩 、硫酸ィ匕オリゴ糖又はその塩、ポリカルボン酸型高分子等が挙げられる。硫酸化オリ ゴ糖としては、例えば硫酸ィ匕ァガロース、硫酸化トレハロース、コンドロイチン硫酸等 が挙げられる。塩としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモ-ゥム 塩、マグネシウム塩等が挙げられる。また、本発明においては、ポリア-オンを 2種以 上用いてもよい。本発明の RLP— Cの測定におけるポリア-オンの濃度としては、本 発明の RLP— Cの測定を可能とする濃度であれば特に制限はないが、反応液中の 濃度が 0. 0001〜10%であることが好ましぐ 0. 001〜1%がより好ましい。
[0040] 本発明における 2価の金属イオンとしては、本発明の RLP— Cの測定を可能とする 2価の金属イオンであれば特に制限はなぐ例えば、銅イオン、鉄イオン、マンガンィ オン及びマグネシウムイオン等が挙げられる。また、本発明においては、 2価の金属 イオンを 2種以上用いてもよい。本発明の RLP— Cの測定における 2価の金属イオン の濃度としては、本発明の RLP— Cの測定を可能とする濃度であれば特に制限はな いが、反応液中の濃度が 0. 0001〜10%であること力 子ましく、 0. 001〜1%がより 好ましい。
[0041] 本発明における抗アポ B抗体としては、本発明の RLP— Cの測定を可能とする抗ァ ポ B抗体であれば特に制限はなぐアポ B— 100を含有するリポ蛋白（例えば、 LDL 、 VLDLレムナント）と結合する抗体 (抗アポ B— 100抗体）、アポ B— 48を含有するリ ポ蛋白（例えば、 CMレムナント）と結合する抗体 (抗アポ B 48抗体)等が挙げられ る。抗アポ B抗体としては市販品を用いることができる。抗アポ B抗体の市販品として は、例えば Anti apolipoprotein B抗体、 Anti Apolipoprotein B100抗体（以上、コスモ 'バイオ社製)等が挙げられる。
[0042] 本発明における抗アポ E抗体としては、本発明の RLP— Cの測定を可能とする抗ァ ポ E抗体であれば特に制限はなぐアポ Eを含有するリポ蛋白（例えば、カイロミクロン レムナント、 VLDLレムナント）と結合する抗体等が挙げられる。抗アポ E抗体としては 巿販品を用いることができる。抗アポ E抗体の巿販品としては、例えば Anti apolipopro tein E抗体 (コスモ'バイオ社製)等が挙げられる。
[0043] 本発明における界面活性剤 Aとしては、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン 酸エステル（以下、 POEアルキルエーテルリン酸エステルと略記する）、ポリオキシェ チレンアルキルエーテル硫酸エステル塩（以下、 POEアルキルエーテル硫酸エステ ル塩と略記する）、高級アルコール硫酸エステル塩、 HLB値が 16. 0未満であるポリ ォキシエチレン多環フエ-ルエーテル（以下、 HLB値が 16. 0未満である POE多環 フエ-ルエーテルと略記する）、ポリオキシエチレン多環フエ-ルエーテル硫酸エステ ル塩（以下、 POE多環フエニルエーテル硫酸エステル塩と略記する）、ポリオキシェ チレンポリオキシアルキレン多環フエ-ルエーテル（以下、 POE · POA多環フエ-ル エーテルと略記する）、エチレンジァミン ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン縮 合物（以下、エチレンジァミン POE'POP縮合物と略記する）、ポリオキシエチレン アルキルフエ-ルエーテル（以下、 POEアルキルフエ-ルエーテルと略記する）、ポリ ォキシエチレンアルキルフエ-ルエーテル硫酸エステル塩（以下、 POEアルキルフエ -ルエーテル硫酸エステル塩と略記する）、ポリオキシエチレン短鎖分岐アルキルェ 一テル（以下、 POE短鎖分岐アルキルエーテルと略記する）、ポリオキシプロピレン の分子量が 2, 750未満であるポリオキシエチレンポリオキシプロピレン縮合物（以下 、 POPの分子量が 2, 750未満である ΡΟΕ· POP縮合物と略記する）、ポリオキシェ チレンポリオキシアルキレン短鎖分岐アルキルエーテル（以下、 POE · POA短鎖分 岐アルキルエーテルと略記する）、ポリオキシエチレンポリオキシアルキレンアルキル エーテル (以下、 POE'POAアルキルエーテルと略記する）、胆汁酸誘導体、ポリオ キシエチレンビスフエノール一 A—エーテル（以下、 POEビスフエノール一 A—エー テルと略記する）、ポリオキシエチレンァリールエーテル硫酸エステル塩（以下、 POE ァリールエーテル硫酸エステル塩と略記する）、及び、ポリオキシプロピレンメタキシレ ンジァミン（POPメタキシレンジァミン）等が挙げられる。
[0044] POEアルキルエーテルリン酸エステルにおけるアルキルとしては、炭素数 1〜30の 、例えばメチル、ェチル、プロピル、ブチル、ペンチル、へキシル、ヘプチル、ォクチ ル、ノエル、デシル、ゥンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリス チル）、ペンタデシル、へキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、ォクタデシル (ステァリ ル）、ノナデシル、ィコシル、へネィコシル、ドコシル（ベへ-ル）、トリコシル、テトラコシ ル、ペンタコシル、へキサコシル、ヘプタコシル、ォクタコシル、ノナコシル、トリアコン シル等が挙げられる。 POEアルキルエーテルリン酸エステルの具体例（市販品）とし ては、プライサーフ A208B、プライサーフ A210G、プライサーフ A215C、プライサ ーフ A217E、プライサーフ A219B (以上、第一工業製薬社製)等が挙げられる。
[0045] POEアルキルエーテル硫酸エステル塩におけるアルキルとしては、炭素数 1〜30 の、例えばメチル、ェチル、プロピル、ブチル、ペンチル、へキシル、ヘプチル、オタ チル、ノエル、デシル、ゥンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリ スチル）、ペンタデシル、へキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、ォクタデシル (ステ ァリル）、ノナデシル、ィコシル、へネィコシル、ドコシル（ベへ-ル）、トリコシル、テトラ コシル、ペンタコシル、へキサコシル、ヘプタコシル、ォクタコシル、ノナコシル、トリア コンシル等が挙げられる。 POEアルキルエーテル硫酸エステル塩の市販品としては 、ニューコール 1105— SN、ニューコール 1305— SN、ニューコール 1703— SFD ( 以上、 日本乳ィ匕剤社製）、パーソフト EF、パーソフト EP、パーソフト EL、パーソフト E K、パーソフト EFT、 ノ一ソフト EDO (以上、 日本油脂社製)等が挙げられる。 高級 アルコール硫酸エステル塩の市販品としては、モノゲン、モノゲン 170T、モノゲン L Η、モノゲン Τ— 423、モノゲン Υ— 100、モノゲン Υ— 500 (以上、第一工業製薬社 製)等が挙げられる。
[0046] HLB値が 16. 0未満である ΡΟΕ多環フエ-ルエーテルにおける多環フエ-ルとは 、基内に 1つの芳香環を有する基 (置換基）が 2つ以上置換したフエ-ル基、基内に 2 つ以上の芳香環を有する基 (置換基)が 1つまたは複数置換したフ ニル基等が挙 げられる。基内に 1つの芳香環を有する基としては、例えばベンジル、 1—(フエニル） ェチル等が挙げられる。基内に 2つ以上の芳香環を有する基としては、例えばナフチ ル等が挙げられる。
[0047] HLB値が 16. 0未満である ΡΟΕ多環フエ-ルエーテルの市販品としては、ェマル ゲン Α— 60、ェマルゲン Α— 90、ェマルゲン Β— 66 (以上、花王社製）、 BLAUNO N DSP— 9、 BLAUNON DSP— 12. 5、 BLAUNON TSP— 5、 BLAUNON TSP- 7. 5、 BLAUNON TSP— 16 (以上、青木油脂社製）、ニューコール 610 、ニューコール 707、ニューコール 710、ニューコール 2609、ニューコール 2614 (以 上、 日本乳化剤社製)等が挙げられる。
[0048] POE多環フエ-ルエーテル硫酸エステル塩における多環フエ-ルとは、基内に 1 つの芳香環を有する基 (置換基）が 2つ以上置換したフエ-ル基、基内に 2つ以上の 芳香環を有する基 (置換基)が 1つまたは複数置換したフ ニル基等が挙げられる。 基内に 1つの芳香環を有する基としては、例えばベンジル、 1 （フエニル)ェチル等 が挙げられる。基内に 2つ以上の芳香環を有する基としては、例えばナフチル等が挙 げられる。 POE多環フエ-ルエーテル硫酸エステル塩の市販品としては、二ユーコ一 ル 707— SF、ニューコール 707— SFC、ニューコール 707- SN、ニューコール 723 — SF、ニューコール 740— SF (以上、 日本乳化剤社製)等が挙げられる。
[0049] POE'POA多環フエ-ルエーテルにおける多環フエ-ルとは、基内に 1つの芳香 環を有する基 (置換基）が 2つ以上置換したフエニル基、基内に 2つ以上の芳香環を 有する基 (置換基)が 1つまたは複数置換したフ -ル基等が挙げられる。基内に 1 つの芳香環を有する基としては、例えばベンジル、 1 （フエ-ル)ェチル等が挙げら れる。基内に 2つ以上の芳香環を有する基としては、例えばナフチル等が挙げられる 。 POE'POA多環フエ-ルエーテルにおけるポリオキシアルキレンとしては、ポリオキ シエチレン以外の例えば、ポリオキシプロピレン、ポリオキシブチレン等が挙げられる 。 POE'POA多環フエ-ルエーテルの市販品としては、ニューカルゲン CP— 120、 ニューカルゲン GP— 120 (以上、竹本油脂社製）、ニューコール 707— F、ニューコ 一ノレ 710— F、ニューコール 714— F、ニューコール 2608— F、ニューコール 2616 — F、ニューコール 2618— F (以上、 日本乳化剤社製)等が挙げられる。
[0050] エチレンジァミン一 POE'POP縮合物の市販品としては、プル口ニック TR— 701、 プル口-ック TR— 702、プル口-ック TR— 704、プル口ニック TR— 913R (以上、旭 電化社製)、エチレンジァミン PO40EO40、エチレンジァミン PO52EO60、ュニルー ブ 32TY65BI (以上、 日本油脂社製)等が挙げられる。
[0051] POEアルキルフエ-ルエーテルのアルキルとしては、ノエル、ォクチル等が挙げら れる。 POEアルキルフエ-ルエーテルの市販品としては、トリトン N57、トリトン N60、 トリトン X100、トリトン X102、トリトン XI 14、トリトン X35(以上、 SIGMA社製)、 -ッコ ール NP—10、ニッコール NP— 15、ニッコール NP—18TX、ニッコール NP— 20、 -ッコール NP— 7. 5、 -ッコール OP— 10、 -ッコール OP— 30 (以上、 日光ケミカ ルズ社製）、ェマルゲン 810、ェマルゲン 903、ェマルゲン 905、ェマルゲン 906、ェ マルゲン 909、ェマルゲン 910、ェマルゲン 911、ェマルゲン 913、ェマルゲン 920、 ェマルゲン 930、ェマルゲン 931、エマルゲン 950 (以上、花王社製）、ノ-オン HS - 204. 5、ノ-オン HS- 206、ノ-オン HS— 208、ノ-オン HS— 210、ノ-オン HS - 215,ノニ才ン HS— 220、ノニ才ン HS— 240、ノニ才ン NS— 204. 5、ノニ才ン N S— 206、ノニ才ン NS— 208. 5、ノニ才ン NS— 210、ノニ才ン NS— 212、ノニ才ン NS— 215、ノニオン NS— 220、ノニオン NS— 230、ノ-オン NS— 240、ノ-オン N S— 270 (以上、 曰本油月旨社製）、モリノーノレ NP— 40、モリノーノレ NP— 60、モリノー ル NP— 85、モリノール NP— 100、モリノール NP— 120、モリノール NP— 160、モリ ノール NP— 300、モリノール NP— 400、モリノール NP— 600、モリノール NP— 800 (以上、モーリン化学社製）、ォクタポール 50、ォクタポール 60、ォクタポール 80 、ォクタポール 100 (以上、三洋化成社製)等が挙げられる。
[0052] POEアルキルフエ-ルエーテル硫酸エステル塩におけるアルキルとしては、炭素 数 1〜30の、例えばメチル、ェチル、プロピル、ブチル、ペンチル、へキシル、へプチ ル、ォクチル、ノエル、デシル、ゥンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデ シル（ミリスチル）、ペンタデシル、へキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、ォクタデシ ル (ステアリル）、ノナデシル、ィコシル、へネィコシル、ドコシル（ベへ-ル）、トリコシ ル、テトラコシル、ペンタコシル、へキサコシル、ヘプタコシル、ォクタコシル、ノナコシ ル、トリアコンシル等が挙げられる。 POEアルキルフエ-ルエーテル硫酸エステル塩 の市販品としては、ハイテノール N— 07、ハイテノール N— 08、ハイテノール N— 17 (以上、第一工業製薬社製)等が挙げられる。
[0053] POE短鎖分岐アルキルエーテルにおける、短鎖分岐アルキルとしては、炭素数 6 〜12の例えばイソへキシル、イソへプチル、イソオタチル、イソノエル、イソデシル、ィ ソゥンデシル、イソドデシル等が挙げられる。 POE短鎖分岐アルキルエーテルの巿販 品としては、ノィゲン SD110、ノィゲン SD150、ノィゲン SD300、ノィゲン SD400 ( 以上、第一工業製薬社製)等が挙げられる。
[0054] POPの分子量が 2, 750未満である ΡΟΕ· POP縮合物の市販品としては、プル口 ニック 25R— 1、プル口ニック 25R— 2、プル口ニック 17R— 1、プル口ニック 17R— 2、 プル口ニック 17R— 3、プル口ニック L— 33、プル口ニック L— 34、プル口ニック L— 62 、プル口ニック L— 64、プル口ニック P— 65、プル口ニック F— 68、プノレロニック P— 84 、プル口ニック P— 85、プル口ニック F— 88(以上、旭電化社製)、エノ ン 420、ェパン 720、ェパン U103、ェパン U105、ェパン U108 (以上、第一工業製薬社製）、モリノ ール PP— 100、モリノール PP— 300、モリノール PP— 400 (以上、モーリン化 学社製）、 BLAUNON P— 101、 BLAUNON P— 106、 BLAUNON P— 171 , BLAUNON P— 172、 BLAUNON P— 174、 BLAUNON P— 201、 BLA UNON EP— 0840、 BLAUNON EP— 0480、 BLAUNON EP— 0670、 BL AUNON EP—1461、（以上、青木油脂社製)等が挙げられる。
[0055] POE'POA短鎖分岐アルキルエーテルにおけるポリオキシアルキレンとしては、ポ リオキシエチレン以外の例えば、ポリオキシプロピレン、ポリオキシブチレン等が挙げ られる。 POE · POA短鎖分岐アルキルエーテルにおける短鎖分岐アルキルとしては 、炭素数 6〜19の例えばイソへキシル、イソへプチル、イソオタチル、イソノエル、イソ デシル、イソゥンデシル、イソドデシルイソトリデシル、イソテトラデシル、イソペンタデ シル、イソへキサデシル、へキシルデシル、イソへプタデシル、イソォクタデシル、イソ ノナデシル、等が挙げられる。 POE'POA短鎖分岐アルキルエーテルの市販品とし ては、ファインサーフ IDEP— 604、ファインサーフ IDEP— 608、ファインサーフ IDE P— 802、ワンダーサーフ ID— 50、ワンダーサーフ ID— 70、ワンダーサーフ ID— 90 (以上、青木油脂社製）、ノィゲン XL— 140、ノィゲン XL— 160、ノィゲン XL— 400、 ノィゲン XL— 1000F (以上、第一工業製薬社製)等が挙げられる。
[0056] POE'POAアルキルエーテルにおけるポリオキシアルキレンとしては、ポリオキシェ チレン以外の例えば、ポリオキシプロピレン、ポリオキシブチレン等が挙げられる。 PO E'POAアルキルエーテルにおけるアルキルとしては、炭素数 1〜30の、例えばメチ ル、ェチル、プロピノレ、ブチル、ペンチノレ、へキシル、ヘプチル、ォクチノレ、ノニノレ、 デシル、ゥンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペン タデシル、へキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、ォクタデシル (ステァリル）、ノナデ シル、ィコシル、へネィコシル、ドコシル（ベへ-ル）、トリコシル、テトラコシル、ペンタ コシル、へキサコシル、ヘプタコシル、ォクタコシル、ノナコシル、トリアコンシル等が 挙げられる。 POE'POAアルキルエーテルの市販品としては、 EMALEX DAPE - 207, EMALEX D APE- 210, EMALEX DAPE— 212、 EMALEX DAP E— 215、 EMALEX DAPE— 220、 EMALEX DAPE— 230(以上、 日本エマ ルジョン社製)、ェマルゲン LS— 110、ェマルゲン MS— 110(以上、花王社製)、 ワンダーサーフ RL— 80、ワンダーサーフ RL— 100、ワンダーサーフ RL— 140、ワン ダーサーフ S— 800、ワンダーサーフ S— 1000、ワンダーサーフ S— 1400 (以上、青 木油脂社製）、ュ-セーフ PKA— 5015、ュ-セーフ PKA— 5016、ュ-セーフ PK A- 5017,ュ-セーフ LM— 2 (以上、日本油脂社製)等が挙げられる。
[0057] 胆汁酸誘導体としては、例えばコール酸もしくはその塩、タウロコール酸もしくはそ の塩、グリココール酸もしくはその塩、リトコール酸もしくはその塩、デォキシコール酸 もしくはその塩、ケノデォキシコール酸もしくはその塩、ウルソデォキシコール酸もしく はその塩、 7—ォキソリトコール酸もしくはその塩、 12—ォキソリトコール酸もしくはそ の塩、 12—ォキソケノデォキシコール酸もしくはその塩、 7—ォキソデォキシコール酸 もしくはその塩、ヒォコール酸もしくはその塩、ヒォデォキシコール酸もしくはその塩、 デヒドロコール酸もしくはその塩、 CHAPS {3- [(3- Cholamidopropyl)] dimethylammon iolpropanesulfonic acid ;同仁化学研究所社製 }、 CHAPSO{3- [(3- Cholamidopropyl )]dimethylammonio]-2-hydroxypropanesulfonic acid ;同仁化学研究所社製 }、 BIGC HAP[N,N-Bis(3-D- gluconamidopropyDcholamide ;同仁化学研究所社製]、 deoxy- BIGCHAP [N,N-Bis(3-D-gluconamidopropyl)deoxycholamide；同仁化学研究所社 製]等が挙げられる。塩としては、例えばアンモ-ゥム塩、リチウム塩、ナトリウム塩、力 リウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等が挙げられる。
[0058] POEビスフエノール一 A—エーテルの市販品としては、 BLAUNON BEO— 6、 B LAUNON BEO— 10、 BLAUNON BEO— 17. 5 (以上、青木油脂社製）等が 挙げられる。
[0059] POEァリールエーテル硫酸エステル塩におけるァリールとしては、フエニル、ナフ チル等が挙げられる。 POEァリールエーテル硫酸エステル塩の市販品としては、ニュ 一コール B4— SN、ニューコール B13— SN (以上、日本乳化剤社製)等が挙げられ る。
[0060] POPメタキシレンジァミンの市販品としては、 BLAUNON MXDA— P01、 BLA UNON MXDA— P02、 BLAUNON MXDA— P04 (以上、青木油脂社製）等 が挙げられる。
[0061] 本発明にお 、て、界面活性剤 A、即ち、 POEアルキルエーテルリン酸エステル、 P OEアルキルエーテル硫酸エステル塩、高級アルコール硫酸エステル塩、 HLB値が 16. 0未満である POE多環フエ-ルエーテル、 POE多環フエ-ルエーテル硫酸エス テル塩、、 POE'POA多環フエ-ルエーテル、エチレンジァミン— ΡΟΕ· POP縮合 物、 POEアルキルフエ-ルエーテル、 POEアルキルフエ-ルエーテル硫酸エステル 塩、 POE分岐短鎖アルキルエーテル、 POPの分子量が 2, 750未満である POE'P OP縮合物、 POE'POA短鎖分岐アルキルエーテル、 POE'POAアルキルエーテ ル、胆汁酸誘導体、 POEビスフエノールー A—エーテル、 POEァリールエーテル硫 酸エステル塩、及び、 POPメタキシレンジアミンカゝらなる群より選ばれる界面活性剤は 、単独、即ち、ポリア-オン、ポリア-オンと 2価の金属イオンとの組合せ、抗アポ B抗 体及び抗アポ E抗体の非存在下で用いることができる。
[0062] 本発明にお 、て、界面活性剤 (A1)は、界面活性剤 Aより選択され、ポリア-オンの 存在下、且つ、ポリア-オンと 2価の金属イオンとの組合せ、又は、抗アポ B抗体及び 抗アポ E抗体の非存在下で用いることができる界面活性剤の群である。界面活性剤 ( A1)としては、例えば、エチレンジァミン— POE'POP縮合物、 POEアルキルフエ- ルエーテル、 POEアルキルフエ-ルエーテル硫酸エステル塩、 POE短鎖分岐アル キルエーテル、 POPの分子量が 2, 750未満である POE'POP縮合物、 POE'POA 短鎖分岐アルキルエーテル、及び、胆汁酸誘導体が挙げられる。
[0063] 本発明にお ヽて、界面活性剤 (A2)は、界面活性剤 Aより選択され、ポリア-オン及 び 2価の金属イオン、又は、抗アポ B抗体及び抗アポ E抗体力 なる群より選ばれる 抗体の存在下において使用される界面活性剤の群であって、一部の界面活性剤 (A 1)をも含有する。界面活性剤 (A2)としては、例えば、 POEアルキルエーテル硫酸ェ ステル塩、 POE多環フエ-ルエーテル硫酸エステル塩、、 POE'POA多環フエ-ル エーテル、エチレンジァミン— POE'POP縮合物、 POEアルキルフエ-ルエーテル、 POPの分子量が 2, 750未満である POE'POP縮合物、 POE · POA短鎖分岐アル キルエーテル、 POE'POAアルキルエーテル、及び、胆汁酸誘導体が挙げられる。
[0064] 界面活性剤 (A1)は、前述のように界面活性剤 Aより選択される界面活性剤の群で あり、例えば実施例 2記載の試薬組成に準じて調製した試薬、すなわち、実施例 2記 載の試薬組成中の主要の構成成分に、ポリア-オン (例えば、デキストラン硫酸ナトリ ゥム）を加え、さらに、ェマルゲン B— 66の代わりに他の様々な界面活性剤を加えて 調製した試薬を用いて、本発明の実施例 77又は 78の方法に従い検討することにより 適宜、選択することができる。
[0065] 界面活性剤 (A2)は、前述のように界面活性剤 Aより選択される界面活性剤の群で あり、例えば実施例 2記載の試薬組成に準じて調製した試薬、すなわち、実施例 2記 載の試薬組成中の主要の構成成分に、ポリア-オンと 2価の金属イオンの組み合わ せ (例えば、デキストラン硫酸ナトリウムと硝酸マグネシウムとの組み合わせ）、または、 抗アポ B抗体及び抗アポ E抗体力 なる群より選ばれる抗体をカ卩え、さらに、ェマル ゲン B— 66の代わりに他の様々な界面活性剤を加えて調製した試薬を用いて、本発 明の実施例 77又は 78の方法に従い検討することにより適宜、選択することができる。
[0066] 本発明にお ヽては、界面活性剤 A、界面活性剤 (A1)、及び、界面活性剤 (A2)は 、それぞれの界面活性剤の郡より選択される 1種又は 2種類以上を組合せて用いても 良い。
本発明の RLP— Cの測定における界面活性剤 Aの濃度としては、本発明の RLP— Cの測定を可能とする濃度であれば特に制限はないが、反応液中での濃度が 0. 00 01〜5%であることが好ましぐ 0. 0005〜2%であることがより好ましい。
[0067] 本発明における界面活性剤 Bとしては、ポリオキシエチレンポリオキシブチレン縮合 物（以下、 POE'POB縮合物と略記する）、 HLB値が 16. 0以上であるポリオキシェ チレン多環フエ-ルエーテル（以下、 HLB値が 16. 0以上である POE多環フエ-ル エーテルと略記する）、ポリオキシエチレンポリオキシアルキレン長鎖分岐アルキルェ 一テル（以下、 POE'POA長鎖分岐アルキルエーテルと略記する）、ポリオキシプロ ピレンの分子量が 2, 750未満であるポリオキシエチレンポリオキシプロピレン縮合物 (以下、 POPの分子量が 2, 750以上である ΡΟΕ· POP縮合物と略記する）、及び、 ポリオキシエチレン長鎖分岐アルキルエーテル（以下、 POE長鎖分岐アルキルエー テルと略記する）等が挙げられる。界面活性剤 Bは、 RLP以外のリポ蛋白中のコレス テロールを除去した後の反応液に添加され、 RLP中のコレステロールと酵素との反 応を可能とする界面活性剤である。
[0068] POE'POB縮合物におけるポリオキシブチレン部分の分子量としては、 700以上が 好ましぐ 1000以上がより好ましい。 POE'POB縮合物の市販品としては、プロノン B 204、プロノン B— 208 (以上、 日本油脂社製)等が挙げられる。
HLB値が 16. 0以上である POE多環フエ-ルエーテルにおける多環フエ-ルとは 、基内に 1つの芳香環を有する基 (置換基）が 2つ以上置換したフエ-ル基、基内に 2 つ以上の芳香環を有する基 (置換基)が 1つまたは複数置換したフ ニル基等が挙 げられる。基内に 1つの芳香環を有する基としては、例えばベンジル、 1—(フエニル） ェチル等が挙げられる。基内に 2つ以上の芳香環を有する基としては、例えばナフチ ル等が挙げられる。 HLB値が 16. 0以上である POE多環フエ-ルエーテルの巿販 品としては、 BLAUNON TSP— 50(青木油脂社製)、ェマルゲン A— 500 (花王社 製)、ニューコール 740 (日本乳化剤社製)等が挙げられる。
POE'POA長鎖分岐アルキルエーテルにおける、長鎖分岐アルキルとしては、例 えば炭素数 20〜30の分岐アルキル、例えばイソィコシル、オタチルドデシル、イソへ ネィコシル、イソドコシル、イソトリコシル、イソテトラコシル、デシルテトラデシル、イソ ペンタコシル、デシルペンタデシル、イソへキサコシル、ドデシルテトラデシル、イソへ プタコシル、イソォクタコシル、イソノナコシル、イソトリアコンシル等が挙げられる。 PO E'POA長鎖分岐アルキルエーテルの市販品としては、ュ-ループ MT— 0620B、 ュ-ループ 20MT—2000B、ュ-ループ 50MT— 2200B (以上、 日本油脂社製） 等が挙げられる。
POPの分子量が 2, 750以上である ΡΟΕ· POP縮合物の市販品としては、プル口 ニック L— 101、プル口ニック P— 103、プル口ニック F— 108、プル口ニック L— 121、 プル口-ック L— 122 (以上、旭電化社製）、 BLAUNON P— 303、 BLAUNON P— 304 (以上、青木油脂社製)等が挙げられる。
POE長鎖分岐アルキルエーテルにおける、長鎖分岐アルキルとしては、炭素数が 13〜30の分岐アルキルが好ましい。特に、本発明における POE長鎖分岐アルキル エーテルとしては、長鎖分岐アルキルの炭素数が 21〜30、又は、 HLB値が 15. 0 以上の POE長鎖分岐アルキルアルキルエーテルがより好ましい。炭素数が 13〜30 の分岐アルキルとしては、例えばイソトリデシル、イソテトラデシル、イソペンタデシル、 イソへキサデシル、へキシルデシル、イソへプタデシル、イソォクタデシル、イソノナデ シル、イソィコシル、オタチルドデシル、イソへネィコシル、イソドコシル、イソトリコシル 、イソテトラコシル、デシルテトラデシル、イソペンタコシル、デシルペンタデシル、イソ へキサコシル、ドデシルテトラデシル、イソへプタコシル、イソォクタコシル、イソノナコ シル、イソトリアコンシル等が挙げられる。 POE長鎖分岐アルキルエーテルの市販品 としては、 EMALEX 1615, EMALEX 1620、 EM ALEX 1625、 EMALEX 1815, EM ALEX 1820、 EMALEX 1825、 EMALEX OD— 16、 EMALEX
OD— 25、 EMALEX 2415、 EMALEX 2420、 EMALEX 2425、 EMALE X 2515, EMALEX 2520、 EM ALEX 2525 (以上、 日本エマルジョン社製）、 ノィゲン TDS - 500F (以上、第一工業製薬社製)等が挙げられる。
本発明の RLP— Cの測定における界面活性剤 Bの濃度としては、本発明の RLP— Cの測定を可能とする濃度であれば特に制限はないが、反応液中での濃度が 0. 00 1〜20%であることが好ましぐ 0. 01〜10%であることがより好ましい。
[0070] なお、 HLB値とは、親水性一親油性均衡値を意味する。本発明に用いられる界面 活性剤、例えば POE多環フエ-ルエーテルの HLB値は、界面活性剤ハンドブック（ 吉田 時行ら著 工業図書株式会社)や新界面活性剤 (堀口 博著 三共出版株式 会社）に記載の方法で算出することが可能である。また、該 HLB値としては、各種界 面活性剤の製造メーカーのカタログやパンフレットに記載されている HLB値を利用 することも可會である。
[0071] 過酸ィ匕水素除去試薬とは、 RLP— C以外のリポ蛋白コレステロールから生成する過 酸化水素を、 RLP— Cから生成する過酸ィ匕水素の測定反応に影響しない物質に変 換する試薬であれば特に制限はないが、カタラーゼを含有する試薬、バーオキシダ ーゼと酸化カップリング型発色反応に使用される 2つの酸化カップリング型色原体の 一方とを含有する試薬等が挙げられる。具体的には、後述の「酸ィ匕カップリング発色 型色原体」におけるカプラー、ァ-リン類又はフエノール類が例示される。本明細書 において、用語「もう片方の酸化カップリング型色原体」は、用語「酸化カップリング型 発色反応に使用される 2つの酸化カップリング型色原体の一方」と対で使用され、例 えば、前者がカップラーを意味する場合は、後者はフエノール類又はァ-リン類を示 し、前者力 Sフエノール類又はァ-リン類を意味する場合は、後者は、カップラーを示 す。
[0072] 過酸ィ匕水素除試薬として、力タラ一ゼを含有する試薬を用いる場合、カタラーゼの 濃度としては、 0. 001〜5000kU/I^ 子ましく、 0. 01〜： L000kU/L力より好まし!/ヽ 過酸ィ匕水素除試薬として、例えばパーォキシダーゼと酸ィ匕カップリング型発色反応 に使用される 2つの酸ィ匕カップリング型色原体の一方とを用いる場合、バーオキシダ —ゼの濃度は 0. 01〜500kUZLが好ましぐ 1〜： LOOkUZLがより好ましい。酸化 カップリング型発色反応に使用される 2つの酸ィ匕カップリング型色原体の一方の濃度 としては、 0. 01〜： LOgZLが好ましい。
[0073] 過酸ィ匕水素測定用試薬は、生成した過酸ィ匕水素を検出可能な物質へ変換するた めの試薬である。検出可能な物質としては、例えば色素、光等が挙げられるが、色素 が好ましい。検出可能な物質が色素の場合には、過酸化水素測定用試薬は、酸ィ匕 発色型色原体及びパーォキシダーゼ等の過酸化活性物質を含有する。酸化発色型 色原体としては、例えば後述の酸ィ匕発色型色原体が挙げられる。検出可能な物質が 光の場合には、過酸化水素測定用試薬は、化学発光物質を含有する。化学発光物 質としては、例えばルミノール、イソルミノール、ルシゲニン、アタリジ-ゥムエステル等 があげられる。
[0074] 過酸化水素測定用試薬として、酸化発色型色原体及びパーォキシダーゼ等の過 酸化活性物質を含有する試薬を用いる場合には、過酸化水素は、過酸化活性物質 の存在下に酸化発色型色原体と反応して色素を生成し、生成した色素を定量するこ とにより、過酸ィ匕水素を定量することができる。また、化学発光物質を含有する過酸 化水素測定用試薬を用いる場合には、過酸ィ匕水素は、化学発光物質と反応して光 を生じ、生じた光を定量することにより、過酸ィ匕水素を定量することができる。
[0075] 酸化発色型色原体としては、例えばロイコ型色原体、酸化カップリング発色型色原 体等が挙げられる。
ロイコ型色原体は、過酸化水素及びパーォキシダーゼ等の過酸化活性物質の存 在下、単独で色素へ変換される物質である。具体的には、 10— N カルボキシメチ ルカルバモイル— 3, 7 ビス（ジメチルァミノ）— 10H フエノチアジン（CCAP)、 10 —N—メチルカルバモイルー 3, 7 ビス（ジメチルァミノ）— 10H フエノチアジン（M CDP)、 N- (カルボキシメチルァミノカルボ-ル）—4, 4，一ビス（ジメチルァミノ）ジフ ェ-ルァミンナトリウム塩（DA— 64)、 4, 4，—ビス（ジメチルァミノ）ジフエ-ルァミン 、ビス〔3—ビス（4 クロ口フエ-ル)メチルー 4ージメチルァミノフエ-ル〕ァミン（BCM A)等が挙げられる。
[0076] 酸化カップリング発色型色原体は、過酸化水素及びパーォキシダーゼ等の過酸化 活性物質の存在下、 2つの化合物が酸ィ匕的カップリングして色素を生成する物質で ある。
[0077] 2つの化合物の組み合わせとしては、カプラーとァ-リン類との組み合わせ、カプラ 一とフエノール類との組み合わせ等が挙げられる。カプラーとしては、例えば 4 アミ ノアンチピリン (4— AA)、 3—メチルー 2 べンゾチアゾリノンヒドラジン等が挙げられ る。ァ-リン類としては、 N— (3—スルホプロピル）ァ-リン、 N ェチル N— (2 ヒ ドロキシ— 3—スルホプロピル）— 3—メチルァ-リン（TOOS)、 N—ェチルー N— (2 —ヒドロキシ— 3—スルホプロピル） - 3, 5—ジメチルァ-リン（MAOS)、 N ェチル -N- (2—ヒドロキシ一 3—スルホプロピル） - 3, 5—ジメトキシァ-リン（DAOS)、 N ェチル N— (3—スルホプロピル） 3—メチルァ-リン（TOPS)、 N— (2 ヒド 口キシ— 3—スルホプロピル）— 3, 5—ジメトキシァ-リン（HDAOS)、 N, N ジメチ ルー 3—メチルァ-リン、 N, N ジ（3—スルホプロピル）一 3, 5—ジメトキシァ-リン 、 N ェチル N— (3—スルホプロピル） 3—メトキシァ-リン、 N ェチル N— ( 3—スルホプロピル）ァ-リン、 N ェチル N— (3—スルホプロピル） - 3, 5—ジメト キシァ-リン、 N- (3—スルホプロピル）—3, 5—ジメトキシァ-リン、 N—ェチル N - (3—スルホプロピル） - 3, 5 ジメチルァ-リン、 N ェチル N— (2 ヒドロキシ —3—スルホプロピル） 3—メトキシァ-リン、 N ェチル N— (2—ヒドロキシ一 3 —スルホプロピル）ァ-リン、 N ェチル N— (3—メチルフエ-ル） N，—サクシ- ルエチレンジァミン（EMSE)、 N—ェチルー N— (3—メチルフエ-ル） N，—ァセ チルエチレンジァミン、 N ェチル N— (2—ヒドロキシ— 3—スルホプロピル）—4 フルオロー 3, 5—ジメトキシァ-リン（F—DAOS)等が挙げられる。フエノール類と しては、フエノール、 4 クロ口フエノール、 3—メチルフエノール、 3 ヒドロキシ一 2, 4 , 6 トリョード安息香酸 (HTIB)等が挙げられる。
[0078] 過酸ィ匕水素の測定にぉ 、て、過酸ィ匕活性物質の濃度は、測定に適した濃度であ れば特に制限はな 、が、過酸ィ匕活性物質としてパーォキシダーゼを用いる場合は、 1〜： LOOkUZLが好ましい。また、酸化発色型色原体の濃度は、測定に適した濃度 であれば特に制限はないが、 0. 01〜10gZLが好ましい。
本発明において、 RLP— Cの測定は水性媒体中で行われることが好ましい。水性 媒体としては、例えば脱イオン水、蒸留水、緩衝液等が挙げられる力 緩衝液が好ま しい。緩衝液に用いる緩衝剤としては、例えばトリス (ヒドロキシメチル)ァミノメタン緩 衝剤、リン酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、グッドの緩衝剤等が挙げられる。
[0079] グッドの緩衝剤としては、例えば 2 モルホリノエタンスルホン酸（MES)、ビス（2— ヒドロキシェチル)イミノトリス（ヒドロキシメチル)メタン（Bis— Tris)、 N— (2—ァセトァ ミド)イミノニ酢酸 (ADA)、ピペラジン一 N, N，一ビス（2—エタンスルホン酸） (PIPE S)、 N— (2 ァセトアミド） - 2-アミノエタンスルホン酸 (ACES)、 3 -モルホリノ一 2 —ヒドロキシプロパンスルホン酸（MOPSO)、 N, N ビス（2—ヒドロキシェチル） 2 アミノエタンスルホン酸（BES)、 3—モルホリノプロパンスルホン酸（MOPS)、 N— 〔トリス（ヒドロキシメチル)メチル〕 2 アミノエタンスルホン酸 (TES)、 2— [4- (2- ヒドロキシェチル） 1—ピペラジ -ル〕エタンスルホン酸（HEPES)、 3—〔N, N ビ ス（2—ヒドロキシェチル）ァミノ〕— 2—ヒドロキシプロパンスルホン酸（DIPSO)、 N— 〔トリス（ヒドロキシメチル)メチル〕 - 2-ヒドロキシ 3—ァミノプロパンスルホン酸 (TA PSO)、ピペラジン一 N, N，一ビス（2 ヒドロキシプロパンスルホン酸）（POPSO)、 3 —〔4— (2—ヒドロキシェチル） 1—ピペラジ -ル〕 2—ヒドロキシプロパンスルホン 酸（HEPPSO)、 3—〔4一（2 ヒドロキシェチル） 1ーピぺラジュル〕プロパンスル ホン酸〔（H) EPPS〕、 N 〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕グリシン（Tricine)、 N, N
—3 ァミノプロパンスルホン酸（TAPS)、 N シクロへキシル 2 アミノエタンスル ホン酸（CHES)、 N -シクロへキシル 3 ァミノ 2 ヒドロキシプロパンスルホン酸 (CAPSO)、 N シクロへキシル—3—ァミノプロパンスルホン酸（CAPS)等が挙げ られる。緩衝液の濃度は測定に適した濃度であれば特に制限はされないが、 0. 001 〜2. Omol/!L力好ましく、 0. 005〜1. Omol/:L力 ^より好まし!/ヽ。
[0080] 以下に、本発明の RLP— Cの測定方法、測定試薬及び測定キットを具体的に説明 する。
[0081] (RLP— Cの測定方法）
本発明の RLP— C測定方法は、（0界面活性剤 Aを含有する水性媒体中で、検体と コレステロール酸ィ匕酵素、或いは、コレステロール脱水素酵素及び酸ィ匕型補酵素と を反応させ、 RLP以外のリポ蛋白中のコレステロールを除去する工程、 GO前記工程 (i )で RLP以外のリポ蛋白中のコレステロールを除去した後の反応液に、界面活性剤 B を存在させ、コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素、或 いは、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素及び酸化 型補酵素を反応させ、過酸化水素又は還元型補酵素を生成させる工程、及び、 (iii) 前記工程 GOで生成した過酸ィ匕水素又は還元型補酵素を測定する工程を有する。
[0082] 本発明の方法においては、工程 (0は、ポリア二オンの存在下、ポリア二オン及び 2 価の金属イオンの存在下、又は、抗アポ B抗体及び抗アポ E抗体からなる群より選ば れる抗体の存在下に行うことができる。ポリア-オンが存在する条件下では、界面活 性剤 Aとして界面活性剤 (A1)が好ましい。また、ポリア-オン及び 2価の金属イオン の存在下、又は、抗アポ B抗体及び抗アポ E抗体カゝらなる群より選ばれる抗体の存在 下では、界面活性剤 Aとしては、界面活性剤 (A2)を用いることが好ましい。
[0083] RLP以外のリポ蛋白中のコレステロールを除去する工程としては、例えば本発明の 工程 (0で生成する過酸ィ匕水素又は還元型補酵素を除去する工程が挙げられる。 本発明の工程 (0で生成する過酸ィ匕水素を除去する工程としては、工程 (0に力タラ ーゼを共存させる方法、パーォキシダーゼと酸ィヒカップリング型発色反応に使用され る 2つの酸ィ匕カップリング型色原体の一方とを用いる方法などが挙げられる。
[0084] 本発明の工程 (0で生成する還元型補酵素を除去する工程は、工程 (0で還元型補 酵素に還元型補酵素酸化酵素を作用させることにより過酸化水素を生成させ、上記 と同様に除去する方法が挙げられる。
尚、本発明において、工程 (i)における RLP以外のリポ蛋白中のコレステロールを 除去する工程とは、該コレステロール力 生成した過酸ィ匕水素又は還元型補酵素を 、他の物質に変換して消去する工程にとどまらない。過酸化水素と還元型補酵素の 分別測定が可能な場合、該コレステロール力 生成した過酸ィ匕水素又は還元型補 酵素を他の物質に変換する必要はない。例えば工程 (i)で RLP以外のリポ蛋白中の コレステロールから還元型補酵素を生成させ、工程 (ii)で RLP中のコレステロールか ら過酸化水素を生成させる場合、工程 (i)で生成した還元型補酵素を他の物質に変 換する必要はない。更に、本発明は、工程 (i)で生成した過酸化水素又は還元型補 酵素を測定し、得られた測定値を基に、工程 (ii)で生成した過酸化水素又は還元型 補酵素を算出することにより、検体中の RLP— Cを決定することも包含する。
[0085] 本発明のより具体的な RLP— C測定方法としては、例えば以下の態様の方法が挙 げられる。
[0086] (1)検体と、コレステロール酸化酵素、あるいは、コレステロール酸化酵素及びコレ ステロールエステル加水分解酵素とを、界面活性剤 A及びカタラーゼとを含有する水 性媒体中で反応させ、生成した過酸ィ匕水素を消去した後に、過酸化水素消去後の 反応液と、コレステロール酸化酵素及びコレステロールエステル加水分解酵素、要す れば、更にリン脂質加水分解酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 B及びカタラーゼ 阻害剤を含有する水性媒体中で反応させて過酸化水素を生成させ、生成した該過 酸ィ匕水素を測定することにより、検体中の RLP— C濃度を算出する。
[0087] (2)検体と、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵 素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール 脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界面 活性剤 A及びカタラーゼとを含有する水性媒体中で反応させ、生成した過酸化水素 を消去した後に、過酸化水素消去後の反応液と、コレステロールエステル加水分解 酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素、要 すれば、更にリン脂質加水分解酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 B及びカタラー ゼ阻害剤を含有する水性媒体中で反応させて過酸化水素を生成させ、生成した該 過酸ィ匕水素を測定することにより、検体中の RLP— C濃度を算出する。
[0088] (3)検体と、コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステルカロ 水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 A及びカタラーゼとを 含有する水性媒体中で反応させ、生成した過酸化水素を消去した後に、過酸化水 素消去後の反応液と、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵 素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素、要す れば、更にリン脂質加水分解酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 B及びカタラーゼ 阻害剤を含有する水性媒体中で反応させて過酸化水素を生成させ、生成した該過 酸ィ匕水素を測定することにより、検体中の RLP— C濃度を算出する。
[0089] (4)検体と、コレステロール酸化酵素、ある 、は、コレステロール酸化酵素及びコレ ステロールエステル加水分解酵素とを、界面活性剤 A及びパーォキシダーゼと酸ィ匕 型発色反応に使用される 2つの酸化カップリング型色原体の一方との組み合わせと を含有する水性媒体中で反応させ、生成した過酸化水素を消去した後に、過酸化水 素消去後の反応液と、コレステロール酸化酵素及びコレステロールエステル加水分 解酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 B 及びもう片方の酸化カップリング型色原体を含有する水性媒体中で反応させて過酸 化水素を生成させ、生成した該過酸ィヒ水素を測定することにより、検体中の RLP— C 濃度を算出する。
[0090] (5)検体と、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵 素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール 脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界面 活性剤 A及びパーォキシダーゼと酸ィ匕型発色反応に使用される 2つの酸ィ匕カツプリ ング型色原体の一方との組み合わせとを含有する水性媒体中で反応させ、生成した 過酸ィ匕水素を消去した後に、過酸化水素消去後の反応液と、コレステロールエステ ル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸 化酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 B 及びもう片方の酸化カップリング型色原体を含有する水性媒体中で反応させて過酸 化水素を生成させ、生成した該過酸ィヒ水素を測定することにより、検体中の RLP— C 濃度を算出する。
[0091] (6)検体と、コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステルカロ 水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 A及びバーオキシダ ーゼと酸化型発色反応に使用される 2つの酸化カップリング型色原体の一方との組 み合わせとを含有する水性媒体中で反応させ、生成した過酸化水素を消去した後に 、過酸化水素消去後の反応液と、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロ ール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸ィ匕 酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 B及 びもう片方の酸化カップリング型色原体を含有する水性媒体中で反応させて過酸ィ匕 水素を生成させ、生成した該過酸ィ匕水素を測定することにより、検体中の RLP— C濃 度を算出する。
[0092] (7)検体と、コレステロール酸化酵素、又は、コレステロール酸化酵素及びコレステ ロールエステル加水分解酵素とを、界面活性剤 (A1)、ポリア-オン及びカタラーゼ を含有する水性媒体中で反応させ、生成した過酸化水素を消去した後に、過酸化水 素消去後の反応液と、コレステロール酸化酵素及びコレステロールエステル加水分 解酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 B 及びカタラーゼ阻害剤を含有する水性媒体中で反応させて過酸化水素を生成させ、 生成した該過酸ィ匕水素を測定することにより、検体中の RLP— C濃度を算出する。
[0093] (8)検体と、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵 素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール 脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界面 活性剤 (A1)、ポリア-オン及びカタラーゼを含有する水性媒体中で反応させ、生成 した過酸化水素を消去した後に、過酸化水素消去後の反応液と、コレステロールェ ステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵 素酸化酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素からなる酵素群とを、界面活性 剤 B及びカタラーゼ阻害剤を含有する水性媒体中で反応させて過酸化水素を生成さ せ、生成した該過酸ィ匕水素を測定することにより、検体中の RLP— C濃度を算出する
[0094] (9)検体と、コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステルカロ 水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 (A1)、ポリア-オン及 びカタラーゼを含有する水性媒体中で反応させ、生成した過酸化水素を消去した後 に、過酸化水素消去後の反応液と、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステ ロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸 化酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 B 及びカタラーゼ阻害剤を含有する水性媒体中で反応させて過酸化水素を生成させ、 生成した該過酸ィ匕水素を測定することにより、検体中の RLP— C濃度を算出する。
[0095] (10)検体と、コレステロール酸化酵素、又は、コレステロール酸化酵素及びコレス テロールエステル加水分解酵素とを、界面活性剤 (A1)、ポリア-オン及びパーォキ シダーゼと酸ィ匕型発色反応に使用される 2つの酸ィ匕カップリング型色原体の一方と の組み合わせとを含有する水性媒体中で反応させ、生成した過酸化水素を消去した 後に、過酸化水素消去後の反応液と、コレステロール酸ィ匕酵素及びコレステロール エステル加水分解酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素からなる酵素群とを 、界面活性剤 B及びもう片方の酸化カップリング型色原体を含有する水性媒体中で 反応させて過酸化水素を生成させ、生成した該過酸化水素を測定することにより、検 体中の RLP— C濃度を算出する。
[0096] (11)検体と、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸ィ匕 酵素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロ一 ル脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界 面活性剤 (A1)、ポリア-オン及びパーォキシダーゼと酸ィ匕型発色反応に使用され る 2つの酸化カップリング型色原体の一方との組み合わせとを含有する水性媒体中 で反応させ、生成した過酸ィ匕水素を消去した後に、過酸化水素消去後の反応液と、 コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素からなる酵素 群とを、界面活性剤 B及びもう片方の酸化カップリング型色原体を含有する水性媒体 中で反応させて過酸化水素を生成させ、生成した該過酸化水素を測定することによ り、検体中の RLP— C濃度を算出する。
[0097] (12)検体と、コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステルカロ 水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 (A1)、ポリア-オン及 びパーォキシダーゼと酸ィ匕型発色反応に使用される 2つの酸ィ匕カップリング型色原 体の一方との組み合わせとを含有する水性媒体中で反応させ、生成した過酸化水素 を消去した後に、過酸化水素消去後の反応液と、コレステロールエステル加水分解 酵素、コレステロール酸ィヒ酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還 元型補酵素酸化酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素からなる酵素群とを、 界面活性剤 B及びもう片方の酸化カップリング型色原体を含有する水性媒体中で反 応させて過酸化水素を生成させ、生成した該過酸化水素を測定することにより、検体 中の RLP— C濃度を算出する。
[0098] (13)検体と、コレステロール酸化酵素、又は、コレステロール酸化酵素及びコレス テロールエステル加水分解酵素とを、界面活性剤 (A2)、ポリア-オン、 2価の金属ィ オン及びカタラーゼを含有する水性媒体中で反応させ、生成した過酸化水素を消去 した後に、過酸化水素消去後の反応液と、コレステロール酸ィヒ酵素及びコレステロ一 ルエステル加水分解酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素からなる酵素群と を、界面活性剤 B及びカタラーゼ阻害剤を含有する水性媒体中で反応させて過酸化 水素を生成させ、生成した該過酸ィ匕水素を測定することにより、検体中の RLP— C濃 度を算出する。
[0099] (14)検体と、コレステロール酸化酵素、又は、コレステロール酸化酵素及びコレス テロールエステル加水分解酵素とを、界面活性剤 (A2)、抗アポ B抗体及び Z又は 抗アポ E抗体、及びカタラーゼを含有する水性媒体中で反応させ、生成した過酸ィ匕 水素を消去した後に、過酸化水素消去後の反応液と、コレステロール酸化酵素及び コレステロールエステル加水分解酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素から なる酵素群とを、界面活性剤 B及びカタラーゼ阻害剤を含有する水性媒体中で反応 させて過酸化水素を生成させ、生成した該過酸化水素を測定することにより、検体中 の RLP— C濃度を算出する。
[0100] (15)検体と、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸ィ匕 酵素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロ一 ル脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界 面活性剤 (A2)、ポリア-オン、 2価の金属イオン及びカタラーゼを含有する水性媒 体中で反応させ、生成した過酸ィ匕水素を消去した後に、過酸化水素消去後の反応 液と、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補 酵素及び還元型補酵素酸化酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素からなる 酵素群とを、界面活性剤 B及びカタラーゼ阻害剤を含有する水性媒体中で反応させ て過酸ィヒ水素を生成させ、生成した該過酸ィヒ水素を測定することにより、検体中の R LP— C濃度を算出する。
[0101] (16)検体と、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸ィ匕 酵素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロ一 ル脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界 面活性剤 (A2)、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、及びカタラーゼを含有する 水性媒体中で反応させ、生成した過酸ィ匕水素を消去した後に、過酸化水素消去後 の反応液と、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、酸 化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素か らなる酵素群とを、界面活性剤 B及びカタラーゼ阻害剤を含有する水性媒体中で反 応させて過酸化水素を生成させ、生成した該過酸化水素を測定することにより、検体 中の RLP— C濃度を算出する。
[0102] (17)検体と、コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステルカロ 水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 (A2)、ポリア-オン、 2価の金属イオン及びカタラーゼを含有する水性媒体中で反応させ、生成した過酸 化水素を消去した後に、過酸化水素消去後の反応液と、コレステロールエステルカロ 水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素からなる酵素 群とを、界面活性剤 B及びカタラーゼ阻害剤を含有する水性媒体中で反応させて過 酸化水素を生成させ、生成した該過酸ィヒ水素を測定することにより、検体中の RLP C濃度を算出する。 [0103] (18)検体と、コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステルカロ 水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 (A2)、抗アポ B抗体 及び Z又は抗アポ E抗体、及びカタラーゼを含有する水性媒体中で反応させ、生成 した過酸化水素を消去した後に、過酸化水素消去後の反応液と、コレステロールェ ステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロール脱水素酵素、酸ィ匕型 補酵素及び還元型補酵素酸化酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素からな る酵素群とを、界面活性剤 B及びカタラーゼ阻害剤を含有する水性媒体中で反応さ せて過酸化水素を生成させ、生成した該過酸化水素を測定することにより、検体中の RLP— C濃度を算出する。
[0104] (19)検体と、コレステロール酸化酵素、又は、コレステロール酸化酵素及びコレス テロールエステル加水分解酵素とを、界面活性剤 (A2)、ポリア-オン、 2価の金属ィ オン及びパーォキシダーゼと酸ィ匕型発色反応に使用される 2つの酸ィ匕カップリング 型色原体の一方との組み合わせとを含有する水性媒体中で反応させ、生成した過酸 化水素を消去した後に、過酸化水素消去後の反応液と、コレステロール酸化酵素及 びコレステロールエステル加水分解酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素か らなる酵素群とを、界面活性剤 B及びもう片方の酸化カップリング型色原体を含有す る水性媒体中で反応させて過酸化水素を生成させ、生成した該過酸化水素を測定 することにより、検体中の RLP— C濃度を算出する。
[0105] (20)検体と、コレステロール酸化酵素、又は、コレステロール酸化酵素及びコレス テロールエステル加水分解酵素とを、界面活性剤 (A2)、抗アポ B抗体及び Z又は 抗アポ E抗体、及びパーォキシダーゼと酸化型発色反応に使用される 2つの酸化力 ップリング型色原体の一方との組み合わせとを含有する水性媒体中で反応させ、生 成した過酸化水素を消去した後に、過酸化水素消去後の反応液と、コレステロール 酸化酵素及びコレステロールエステル加水分解酵素、要すれば、更にリン脂質加水 分解酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 B及びもう片方の酸ィ匕カップリング型色原 体を含有する水性媒体中で反応させて過酸化水素を生成させ、生成した該過酸ィ匕 水素を測定することにより、検体中の RLP— C濃度を算出する。
[0106] (21)検体と、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸ィ匕 酵素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロ一 ル脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界 面活性剤 (A2)、ポリア-オン、 2価の金属イオン及びパーォキシダーゼと酸ィ匕型発 色反応に使用される 2つの酸化カップリング型色原体の一方との組み合わせとを含 有する水性媒体中で反応させ、生成した過酸化水素を消去した後に、過酸化水素 消去後の反応液と、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵 素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解 酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 B及びもう片方の酸ィヒカップリング型色原体を 含有する水性媒体中で反応させて過酸化水素を生成させ、生成した該過酸化水素 を測定することにより、検体中の RLP— C濃度を算出する。
[0107] (22)検体と、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸ィ匕 酵素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロ一 ル脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界 面活性剤 (A2)、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、及びパーォキシダーゼと 酸化型発色反応に使用される 2つの酸化カップリング型色原体の一方との組み合わ せとを含有する水性媒体中で反応させ、生成した過酸化水素を消去した後に、過酸 化水素消去後の反応液と、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱 水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素、要すれば、更にリン脂質カロ 水分解酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 B及びもう片方の酸ィヒカップリング型色 原体を含有する水性媒体中で反応させて過酸化水素を生成させ、生成した該過酸 化水素を測定することにより、検体中の RLP— C濃度を算出する。
[0108] (23)検体と、コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステルカロ 水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 (A2)、ポリア-オン、 2価の金属イオン及びパーォキシダーゼと酸化型発色反応に使用される 2つの酸ィ匕 カップリング型色原体の一方との組み合わせとを含有する水性媒体中で反応させ、 生成した過酸ィ匕水素を消去した後に、過酸化水素消去後の反応液と、コレステロ一 ルエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、酸 化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素、要すれば、更にリン脂質加水分解酵素か らなる酵素群とを、界面活性剤 B及びもう片方の酸化カップリング型色原体を含有す る水性媒体中で反応させて過酸化水素を生成させ、生成した該過酸化水素を測定 することにより、検体中の RLP— C濃度を算出する。
[0109] (24)検体と、コレステロール酸ィヒ酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群、あるいは、コレステロールエステルカロ 水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素 及び還元型補酵素酸化酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 (A2)、抗アポ B抗体 及び Z又は抗アポ E抗体、及びパーォキシダーゼと酸ィヒ型発色反応に使用される 2 つの酸化カップリング型色原体の一方との組み合わせとを含有する水性媒体中で反 応させ、生成した過酸ィ匕水素を消去した後に、過酸化水素消去後の反応液と、コレ ステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素 酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素、要すれば、更にリン脂質加水分 解酵素からなる酵素群とを、界面活性剤 B及びもう片方の酸ィヒカップリング型色原体 を含有する水性媒体中で反応させて過酸化水素を生成させ、生成した該過酸化水 素を測定することにより、検体中の RLP— C濃度を算出する。
[0110] 本測定法における反応は、例えば 10〜50°Cで、好ましくは 20〜40°Cで、 1〜60 分間、好ましくは 2〜30分間行う。 生成した過酸ィ匕水素の量は、例えば直接過酸ィ匕 水素電極で測定することもできるが、過酸ィ匕水素測定用試薬により測定することもで きる。
[0111] (RLP— C測定試薬）
本発明の RLP— C測定用試薬は、本発明の RLP—Cの測定に使用することができ る。
[0112] 本発明の RLP— C測定用試薬としては、以下のものがあげられる。
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、過酸化水素除去 試薬、過酸化水素測定試薬、界面活性剤 A、及び、界面活性剤 Bを含有する検体中 の RLP— C測定用試薬。
過酸ィ匕水素除去試薬としては、パーォキシダーゼと酸ィ匕カップリング型発色反応に 使用される 2つの酸化カップリング型色原体の一方とを含有する試薬、又は、力タラ ーゼを含有する試薬があげられる。
[0113] また、本発明の RLP— C測定用試薬としては、以下のものがあげられる。
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素
、界面活性剤 A及び界面活性剤 Bを含有する検体中の RLP— C測定用試薬。 また、本発明の RLP— C測定用試薬としては、以下のものがあげられる。 コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素
、還元型補酵素酸化酵素、過酸化水素除去試薬、過酸化水素測定試薬、界面活性 剤 A及び界面活性剤 Bを含有する検体中の RLP— C測定用試薬。
[0114] 過酸ィヒ水素除去試薬としては、パーォキシダーゼと酸ィヒカップリング型発色反応に 使用される 2つの酸化カップリング型色原体の一方とを含有する試薬、又は、力タラ ーゼを含有する試薬等が挙げられる。
[0115] これら試薬には、さらに、ポリア-オン、を含有することができる。この際、含有する 界面活性剤 Aとしては、界面活性剤 (A1)が好まし ヽ。
また、これら試薬には、ポリア-オン及び 2価の金属イオン、もしくは、抗アポ B抗体 及び抗アポ E抗体力 なる群より選ばれる抗体を含有することができる。この際、含有 する界面活性剤 Aとしては、界面活性剤 (A2)が好まし ヽ。
さらに、リン脂質加水分解酵素を含有することができる。
本発明のより具体的な RLP— C測定試薬としては、例えば以下の態様の試薬が挙 げられる力 これらは本発明の範囲を何ら限定するものではない。本発明においては 、界面活性剤 A、界面活性剤 (A1)、界面活性剤 (A2)及び界面活性剤 Bとして、そ れぞれの郡より選択される、 1種又は複数の界面活性剤を用いることができる。
[0116] 試薬 1
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、カタラーゼ、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 A及び界面活性剤 Bを含有する試薬。 [0117] 試薬 2
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、カタラーゼ、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 A、界面活性剤 B及び過酸化水素測定用試薬を含有す る S¾薬。
[0118] 試薬 3
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 A及び界面 活性剤 Bを含有する試薬。
[0119] 試薬 4
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 A、界面活性 剤 B及び過酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
[0120] 試蓉 5
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤 A及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0121] 試蓉 6
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤 A、界面活性剤 B及び過酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
[0122] 試薬 7
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、パーォキシダー ゼ、酸化カップリング型色原体、界面活性剤 A及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0123] 試薬 8
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、バーオキシダーゼ、酸化カップリング型色原体、界面活 性剤 A及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0124] 試薬 9 コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、バーオキシダーゼ、酸化カツ プリング型色原体、界面活性剤 A及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0125] 試薬 10
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 A及び界面活性剤 Bを含有する 試薬。
[0126] 試薬 11
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 A界面活性剤 B及び過酸ィ匕水 素測定用試薬を含有する試薬。
[0127] 試蓉 12
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、 界面活性剤 A及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0128] 試蓉 13
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、 界面活性剤 A界面活性剤 B及び過酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
[0129] 試薬 14
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタ ラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 A及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0130] 試薬 15
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタ ラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 A界面活性剤 B及び過酸化水素測定用試薬 を含有する試薬。 [0131] 試薬 16
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、バーオキシダーゼ、酸化カップリング型色原体、界面活性剤 A及び界面活 性剤 Bを含有する試薬。
[0132] 試薬 17
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、バーオキシダーゼ、酸化カツプリ ング型色原体、界面活性剤 A及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0133] 試薬 18
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、パ ーォキシダーゼ、酸化カップリング型色原体、界面活性剤 A及び界面活性剤 Bを含 有する試薬。
[0134] 試蓉 19
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、力 タラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A1)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬
[0135] 試蓉 20
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、力 タラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A1)、界面活性剤 B及び過酸化水素測 定用試薬を含有する試薬。
[0136] 試薬 21
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性 剤 (A1)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0137] 試薬 22
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性 剤 (Al)、界面活性剤 B及び過酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
[0138] 試薬 23
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン、カタラーゼ、力 タラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A1)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0139] 試薬 24
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン、カタラーゼ、力 タラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A1)、界面活性剤 B及び過酸化水素測定用試薬を含 有する試薬。
[0140] 試蓉 25
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、パ ーォキシダーゼ、酸化カップリング型色原体、界面活性剤 (A1)、及び界面活性剤 B を含有する試薬。
[0141] 試蓉 26
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア-オン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色 原体、界面活性剤 (A1)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0142] 試蓉 27
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン、バーオキシダ ーゼ、酸化カップリング型色原体、界面活性剤 (A1)、及び界面活性剤 Bを含有する 試薬。
[0143] 試薬 28
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A1)、及び界面 活性剤 Bを含有する試薬。
[0144] 試薬 29 コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (dl)、界面活性 剤 B及び過酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
[0145] 試薬 30
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、ポリア二オン、カタラーゼ、力タラ ーゼ阻害剤、界面活性剤 (A1)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0146] 試薬 31
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、ポリア二オン、カタラーゼ、力タラ ーゼ阻害剤、界面活性剤 (A1)、界面活性剤 B及び過酸化水素測定用試薬を含有 する試薬。
[0147] 試蓉 32
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、ポリ ァ-オン、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A1)、及び界面活性剤 Bを 含有する試薬。
[0148] 試蓉 33
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、ポリ ァ-オン、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A1)、界面活性剤 B及び過 酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
[0149] 試薬 34
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、ポリア-オン、バーオキシダーゼ、酸化カップリング型色原体、界面活性剤（ A1)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0150] 試薬 35
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、ポリア-オン、パーォキシダーゼ
、酸化カップリング型色原体、界面活性剤 (A1)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬 [0151] 試薬 36
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、ポリ ァ-オン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色原体、界面活性剤 (A1)、及び 界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0152] 試薬 37
コレステロールエステルカ卩水分解酵素、コレステロール酸化酵素、ポリア-オン、 2 価の金属イオン、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、及び界面活性 剤 Bを含有する試薬。
[0153] 試蓉 38
コレステロールエステルカ卩水分解酵素、コレステロール酸化酵素、ポリア-オン、 2 価の金属イオン、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、界面活性剤 B 及び過酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
[0154] 試蓉 39
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、抗アポ B—抗体 及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、及び 界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0155] 試薬 40
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、抗アポ B抗体及 び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、界面活 性剤 B及び過酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
[0156] 試薬 41
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、カタラーゼ、カタラーゼ 阻害剤、界面活性剤 (A2)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。 [0157] 試薬 42
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、カタラーゼ、カタラーゼ 阻害剤、界面活性剤 (A2)、界面活性剤 B及び過酸化水素測定用試薬を含有する 試薬。
[0158] 試薬 43
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0159] 試蓉 44
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、界面活性剤 B及び過酸化水素測定用試薬を含 有する試薬。
[0160] 試蓉 45
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン、 2価の金属ィ オン、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、及び界面活性剤 Bを含有 する試薬。
[0161] 試薬 46
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン、 2価の金属ィ オン、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、界面活性剤 B及び過酸ィ匕 水素測定用試薬を含有する試薬。
[0162] 試薬 47
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗 アポ E抗体、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、及び界面活性剤 Bを 含有する試薬。
[0163] 試薬 48
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗 アポ E抗体、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、界面活性剤 B及び 過酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
[0164] 試薬 49
コレステロールエステルカ卩水分解酵素、コレステロール酸化酵素、ポリア-オン、 2 価の金属イオン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色原体、界面活性剤 (A2) 、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0165] 試蓉 50
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、抗アポ B抗体及 び Z又は抗アポ E抗体、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色原体、界面活性 剤 (A2)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0166] 試蓉 51
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、パーォキシダーゼ、酸 化カップリング型色原体、界面活性剤 (A2)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0167] 試蓉 52
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、バーオキシダ一 ゼ、酸化カップリング型色原体、界面活性剤 (A2)、及び界面活性剤 Bを含有する試 薬。
[0168] 試薬 53
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン、 2価の金属ィ オン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色原体、界面活性剤 (A2)、及び界面 活性剤 Bを含有する試薬。 [0169] 試薬 54
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗 アポ E抗体、バーオキシダーゼ、酸化カップリング型色原体、界面活性剤 (A2)、及 び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0170] 試薬 55
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性 剤 (A2)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
纏 56
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性 剤 (A2)、界面活性剤 B及び過酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
[0171] 試蓉 57
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界 面活性剤 (A2)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
纏 58
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界 面活性剤 (A2)、界面活性剤 B及び過酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
[0172] 試薬 59
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン 、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、及び界面活性剤 Bを含有する 試薬。
試薬 60
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン 、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、界面活性剤 B及び過酸化水素 測定用試薬を含有する試薬。
[0173] 試薬 61
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ A抗体、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、及び界面活性剤 Bを含 有する試薬。
試薬 62
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、界面活性剤 B及び過酸 化水素測定用試薬を含有する試薬。
[0174] 試蓉 63
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、ポリ ァ-オン、 2価の金属イオン、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、及 び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0175] 試蓉 64
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、ポリ ァ-オン、 2価の金属イオン、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 (A2)、界 面活性剤 B及び過酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
[0176] 試薬 65
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、抗 アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤（ A2)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。 [0177] 試薬 66
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、抗 アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤（ A2)、界面活性剤 B及び過酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
[0178] 試薬 67
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色 原体、界面活性剤 (A2)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
纏 68
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、パーォキシダーゼ、酸化カップリン グ型色原体、界面活性剤 (A2)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0179] 試蓉 69
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン 、バーオキシダーゼ、酸化カップリング型色原体、界面活性剤 (A2)、及び界面活性 剤 Bを含有する試薬。
[0180] 試蓉 70
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、バーオキシダーゼ、酸化カップリング型色原体、界面活性剤 (A2)、及び界 面活性剤 Bを含有する試薬。
[0181] 試薬 71
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、ポリ ァ-オン、 2価の金属イオン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色原体、界面活 性剤 (A2)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。 [0182] 試薬 72
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、抗 アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色原体 、界面活性剤 (A2)、及び界面活性剤 Bを含有する試薬。
[0183] (RLP— C測定用キット）
本発明の RLP— C測定用試薬は、キットの形態で保存、流通及び使用されても良 い。キットの形態としては、本発明の RLP— C測定法を可能とする形態であれば特に 制限はなぐ 2試薬系、 3試薬系の何れの形態であっても良いが、 2試薬系が好まし い。
[0184] 本発明の RLP— C測定用キットとしては、以下のものがあげられる。
コレステロール酸ィ匕酵素、過酸ィ匕水素除去試薬及び界面活性剤 Aを含有する第一 試薬と、過酸化水素測定試薬及び界面活性剤 Bを含有する第二試薬とを含有し、コ レステロールエステル加水分解酵素を第一試薬、第二試薬の 、ずれか又は両方に 含有させることを特徴とする、 RLP— C測定用キット。
[0185] また、本発明の RLP— C測定用キットとしては、以下のものがあげられる。
コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素及び界面活性剤 Aを含有する第一試薬 と、界面活性剤 Bを含有する第二試薬とを含有し、コレステロールエステル加水分解 酵素を第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有させることを特徴とする、 RL P— C測定用キット。
[0186] さらに、本発明の RLP— C測定用キットとしては、以下のものがあげられる。
コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素、還元型補酵素酸化酵素、過酸化水素 除去試薬及び界面活性剤 Aを含有する第一試薬と、過酸化水素測定試薬及び界面 活性剤 Bを含有する第二試薬とを含有し、コレステロールエステル加水分解酵素を 第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有させることを特徴とする、 RLP-C 測定用キット。
[0187] これらキットには、さらに、ポリア-オン、を含有することができる。この際、含有する 界面活性剤 Aとしては、界面活性剤 (A1)が好まし ヽ。 また、これらキットには、ポリア-オン及び 2価の金属イオン、もしくは、抗アポ B抗体 及び抗アポ E抗体力 なる群より選ばれる抗体を含有することができる。この際、含有 する界面活性剤 Aとしては、界面活性剤 (A2)が好まし ヽ。
さらに、リン脂質加水分解酵素を含有することができる。
[0188] 第一試薬と第二試薬とからなる 2試薬系の RLP— C測定用キットにおいては、コレ ステロール酸ィ匕酵素は第一試薬に含有されるが、第一試薬及び第二試薬両方に含 有されても良い。
界面活性剤 A、界面活性剤 (A1)、及び、界面活性剤 (A2)は第一試薬に含有さ れることが好ましい。
[0189] コレステロールエステル加水分解酵素は、第一試薬、第二試薬の何れか一方、又 は両方に含有されても良いが、第一試薬及び第二試薬両方に含有されることが好ま しい。
コレステロール脱水素酵素は、第一試薬に含有されるが、第一試薬及び第二試薬 両方に含有されても良い。
還元型補酵素酸化酵素は、第一試薬に含有されるが、第一試薬及び第二試薬両 方に含有されても良い。
[0190] 酸化型補酵素は、第一試薬に含有されるが、第一試薬及び第二試薬両方に含有 されても良い。
第一反応で発生する過酸ィ匕水素の消去に使用されるカタラーゼは、第一試薬に含 有されることが好ましぐカタラーゼ阻害剤は第二試薬に含有されることが好ましい。 第一反応で発生する過酸ィヒ水素の消去に使用されるパーォキシダーゼと酸ィ匕カツ プリング型発色反応に使用される 2つの酸化カップリング型色原体の一方との組み合 わせは、第一試薬に含有されることが好ましい。
[0191] ポリア-オンは、第一試薬に含有されることが好ましい。
2価の金属イオンは、第一試薬に含有されることが好ま 、。
抗アポ B抗体は、第一試薬及び第二試薬両方に含有されても良いが、第一試薬に 含有されることが好ましい。
抗アポ E抗体は、第一試薬及び第二試薬両方に含有されても良いが、第一試薬に 含有されることが好ましい。
[0192] 界面活性剤 B及び過酸ィ匕水素測定試薬は第二試薬に含有されることが好ましい。
リン脂質加水分解酵素は第一試薬、第二試薬の何れか又は両方に含有されても良 いが、第二試薬に含有されることが好ましい。
本発明の RLP— C測定用キットとしては、例えば以下の態様のキットが挙げられる 力 これらは本発明の範囲を何ら制限するものではない。
[0193] キット 1
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロールエステル加水分解酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤 B
[0194] キット 2
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロールエステル加水分解酵素、カタラーゼ、界面 活性剤 A
第二試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロールエステル加水分解酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤 B
[0195] キット 3
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロールエステル加水分解酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0196] キット 4
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロールエステル加水分解酵素、カタラーゼ、界面 活性剤 A
第二試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロールエステル加水分解酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0197] キット 5
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、 界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0198] キット 6
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0199] キット 7
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、 界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試 薬
[0200] キット 8
第一試薬 コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試 薬
[0201] キット 9
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活 性剤 B
[0202] キット 10
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活 性剤 B
[0203] キット 11
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活 性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0204] キット 12
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活 性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0205] キット 13
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、パーォキシダーゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、 界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、界面活性剤お もう一方の酸ィ匕カップリング型色原体
[0206] キット 14
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、パーォキシダー ゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、界面活性剤お もう一方の酸ィ匕カップリング型色原体
[0207] キット 15
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、パーォキシ ダーゼ、酸化カップリング型色原体の一方、界面活性剤 A 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体
[0208] キット 16
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、バーオキシダーゼ、酸ィヒカップリング型色原体の一方、 界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体 [0209] キット 17
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、コレステロ一 ル酸化酵素、バーオキシダーゼ、酸ィヒカップリング型色原体の一方、界面活性剤 A 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、コレステロール酸化酵素、界面活性剤おもう一方の酸化 カップリング型色原体
[0210] キット 18
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、コレステロール酸ィヒ酵素、バーオキシダーゼ、酸化カップ リング型色原体の一方、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、コレステロール酸化酵素、界面活性剤おもう一方の酸化 カップリング型色原体 [0211] キット 19
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、界面活性剤 (A1) 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤 B
[0212] キット 20
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、力 タラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤 B
[0213] キット 21
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、界面活性剤 (A1) 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0214] キット 22
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、力 タラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0215] キット 23
第一試薬 コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン
、カタラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0216] キット 24
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0217] キット 25
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン 、カタラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試 薬
[0218] キット 26
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試 薬 [0219] キット 27
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活 性剤 B
[0220] キット 28
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン、カタラーゼ、界 面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活 性剤 B
[0221] キット 29
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活 性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0222] キット 30
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン、カタラーゼ、界 面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活 性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0223] キット 31
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色 原体の一方、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、界面活性剤お もう一方の酸ィ匕カップリング型色原体
[0224] キット 32
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、パ ーォキシダーゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、界面活性剤お もう一方の酸ィ匕カップリング型色原体
[0225] キット 33
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン 、バーオキシダーゼ、酸ィヒカップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A1) 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体 [0226] キ、 t34 第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア-オン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色 原体の一方、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体 [0227] キット 35
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、ポリア-オン、パーォキシダーゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、 界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、界面活性剤おもう一方の酸 化カップリング型色原体
[0228] キット 36
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン、バーオキシダ ーゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、界面活性剤おもう一方の酸 化カップリング型色原体
[0229] キット 37
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、カタラーゼ、界面活性 剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤 B
[0230] キット 38
第一試薬
コレステロールエステルカ卩水分解酵素、コレステロール酸化酵素、ポリア-オン、 2 価の金属イオン、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤 B
[0231] キット 39
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、カタラーゼ、界面活性 剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0232] キッ 40
第一試薬
コレステロールエステルカ卩水分解酵素、コレステロール酸化酵素、ポリア-オン、 2 価の金属イオン、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0233] キット 41
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界 面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤 B
[0234] キット 42
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、抗アポ B抗体及 び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤 B
[0235] キット 43
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界 面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0236] キッ卜 44
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、抗アポ B抗体及 び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ阻害 剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0237] キット 45
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗 体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0238] キット 46
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界 面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0239] キット 47
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗 体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試 薬
[0240] キット 48
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界 面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試 薬
[0241] キット 49
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2) 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活 性剤 B
[0242] キット 50
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗 アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活 性剤 B
[0243] キット 51
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2) 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活 性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0244] キット 52
第一試薬 コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗 アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活 性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0245] キット 53
第一試薬
コレステロール酸化酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、パーォキシダーゼ、酸 化カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、界面活性剤お もう一方の酸ィ匕カップリング型色原体
[0246] キット 54
第一試薬
コレステロールエステルカ卩水分解酵素、コレステロール酸化酵素、ポリア-オン、 2 価の金属イオン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、界面活性剤お もう一方の酸ィ匕カップリング型色原体
[0247] キット 55
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン 、 2価の金属イオン、パーォキシダーゼ、酸ィヒカップリング型色原体の一方、界面活 性剤 (A2)
第二試薬 コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体
[0248] キット 56
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、パーォキシダーゼ、酸 化カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体 [0249] キット 57
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング 型色原体の一方、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、界面活性剤おもう一方の酸 化カップリング型色原体
[0250] キット 58
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン、 2価の金属ィ オン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2) 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、界面活性剤おもう一方の酸 化カップリング型色原体 [0251] キット 59
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、パーォキシダー ゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、界面活性剤お もう一方の酸ィ匕カップリング型色原体
[0252] キット 60
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、抗アポ B抗体及 び Z又は抗アポ E抗体、パーォキシダーゼ、酸ィヒカップリング型色原体の一方、界面 活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、界面活性剤お もう一方の酸ィ匕カップリング型色原体
[0253] キット 61
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗 体及び Z又は抗アポ E抗体、パーォキシダーゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、 界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体 [0254] キット 62
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、バーオキシダ一 ゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2) 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体
[0255] キット 63
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、バーオキシダーゼ、酸化カツ プリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、界面活性剤おもう一方の酸 化カップリング型色原体
[0256] キット 64
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗 アポ E抗体、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2 )
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、界面活性剤おもう一方の酸 化カップリング型色原体
[0257] キット 65
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロールエステル加水分解酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B [0258] キット 66
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロールエステル加水分解酵素、カタラーゼ、界面 活性剤 A
第二試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロールエステル加水分解酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0259] キット 67
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロールエステル加水分解酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0260] キット 68
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロールエステル加水分解酵素、カタラーゼ、界面 活性剤 A
第二試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、コレステロールエステル加水分解酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0261] キット 69
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、 界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B [0262] キット 70
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0263] キット 71
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、 界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0264] キット 72
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0265] キット 73
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0266] キット 74
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0267] キット 75
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0268] キット 76
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、カタラーゼ、界面活性剤 A 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 B、過酸化水素測定用試薬 [0269] キット 77
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、パーォキシダーゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、 界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体
[0270] キット 78
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、パーォキシダー ゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体
[0271] キット 79
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、パーォキシ ダーゼ、酸化カップリング型色原体の一方、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界面活性剤おもう一方の酸ィ匕 カップリング型色原体
[0272] キット 80
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、バーオキシダーゼ、酸ィヒカップリング型色原体の一方、 界面活性剤 A
第二試薬 コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界面活性剤おもう一方の酸ィ匕 カップリング型色原体
[0273] キット 81
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、バーオキシダーゼ、酸ィヒカップリング型色原体の一方、界面活性剤 A 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界 面活性剤 B、もう一方の酸化カップリング型色原体
[0274] キット 82
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、コレステロール酸ィヒ酵素、バーオキシダーゼ、酸化カップ リング型色原体の一方、界面活性剤 A
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界 面活性剤 B、もう一方の酸化カップリング型色原体
[0275] キット 83
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、界面活性剤 (A1) 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0276] キット 84
第一試薬 コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、力 タラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0277] キット 85
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、界面活性剤 (A1) 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0278] キット 86
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、力 タラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0279] キット 87
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン 、カタラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0280] キット 88
第一試薬 コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0281] キット 89
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン 、カタラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0282] キット 90
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0283] キット 91
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0284] キット 92
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン、カタラーゼ、界 面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0285] キット 93
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、ポリア-オン、カタラーゼ、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0286] キット 94
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン、カタラーゼ、界 面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 B、過酸化水素測定用試薬 [0287] キット 95
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色 原体の一方、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体
[0288] キット 96
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、パ ーォキシダーゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体
[0289] キット 97
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン 、バーオキシダーゼ、酸ィヒカップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A1) 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界面活性剤おもう一方の酸ィ匕 カップリング型色原体
[0290] キット 98
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア-オン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色 原体の一方、界面活性剤 (A1)
第二試薬 コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界面活性剤おもう一方の酸ィ匕 カップリング型色原体
[0291] キット 99
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、ポリア-オン、パーォキシダーゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、 界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界 面活性剤 B、もう一方の酸化カップリング型色原体
[0292] キッ卜 100
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン、バーオキシダ ーゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A1)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界 面活性剤 B、もう一方の酸化カップリング型色原体
[0293] キット 101
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、カタラーゼ、界面活性 剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B [0294] キット 102
第一試薬
コレステロールエステルカ卩水分解酵素、コレステロール酸化酵素、ポリア-オン、 2 価の金属イオン、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0295] キット 103
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、カタラーゼ、界面活性 剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0296] キッ 104
第一試薬
コレステロールエステルカ卩水分解酵素、コレステロール酸化酵素、ポリア-オン、 2 価の金属イオン、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0297] キット 105
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界 面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B [0298] キット 106
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、抗アポ B抗体及 び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0299] キット 107
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界 面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0300] キット 108
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、抗アポ B抗体及 び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬
[0301] キット 109
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗 体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0302] キット 110
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界 面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0303] キット 111
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗 体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0304] キット 112
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界 面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタラーゼ阻害剤、界面活性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0305] キ、 tl l3 第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2) 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0306] キット 114
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗 アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 B
[0307] キッ卜 115
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2) 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0308] キット 116
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗 アポ E抗体、カタラーゼ、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、カタ ラーゼ阻害剤、界面活性剤 B、過酸化水素測定用試薬
[0309] キット 117
第一試薬
コレステロール酸化酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、パーォキシダーゼ、酸 化カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体
[0310] キット 118
第一試薬
コレステロールエステルカ卩水分解酵素、コレステロール酸化酵素、ポリア-オン、 2 価の金属イオン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体
[0311] キッ卜 119
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン 、 2価の金属イオン、パーォキシダーゼ、酸ィヒカップリング型色原体の一方、界面活 性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界面活性剤おもう一方の酸ィ匕 カップリング型色原体
[0312] キット 120
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、パーォキシダーゼ、酸 化カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界面活性剤おもう一方の酸ィ匕 カップリング型色原体
[0313] キット 121
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、ポリア-オン、 2価の金属イオン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング 型色原体の一方、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界 面活性剤 B、もう一方の酸化カップリング型色原体
[0314] キッ卜 122
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、ポリア二オン、 2価の金属ィ オン、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2) 第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界 面活性剤 B、もう一方の酸化カップリング型色原体 [0315] キッ卜 123
第一試薬
コレステロール酸ィ匕酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、パーォキシダー ゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体
[0316] キット 124
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、抗アポ B抗体及 び Z又は抗アポ E抗体、パーォキシダーゼ、酸ィヒカップリング型色原体の一方、界面 活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、リン脂質加水分 解酵素、界面活性剤おもう一方の酸化カップリング型色原体
[0317] キッ卜 125
第一試薬
コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗 体及び Z又は抗アポ E抗体、パーォキシダーゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、 界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界面活性剤おもう一方の酸ィ匕 カップリング型色原体
[0318] キット 126
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、バーオキシダ一 ゼ、酸ィ匕カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素 酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界面活性剤おもう一方の酸ィ匕 カップリング型色原体
[0319] キッ卜 127
第一試薬
コレステロール酸化酵素、コレステロール脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸 化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗アポ E抗体、バーオキシダーゼ、酸化カツ プリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2)
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界 面活性剤 B、もう一方の酸化カップリング型色原体
[0320] キット 128
第一試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、抗アポ B抗体及び Z又は抗 アポ E抗体、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色原体の一方、界面活性剤 (A2 )
第二試薬
コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、コレステロール 脱水素酵素、還元型補酵素酸化酵素、酸化型補酵素、リン脂質加水分解酵素、界 面活性剤 B、もう一方の酸化カップリング型色原体
[0321] 本発明の RLP— C測定用試薬及びキットにおいては、前述の本発明の RLP—じの 測定方法において挙げられた、コレステロール酸ィ匕酵素、界面活性剤 A、界面活性 剤 (A1)、界面活性剤 (A2)、ポリア-オン、 2価の金属イオン、抗アポ B抗体、抗アポ E抗体、カタラーゼ、パーォキシダーゼ、酸化カップリング型色原体、コレステロール エステル加水分解酵素、界面活性剤お過酸化水素測定用試薬及びリン脂質加水 分解酵素を用いることができる。
[0322] 本発明の RLP— C測定用試薬及び測定用キットには、必要に応じて、水性媒体、 安定化剤、防腐剤、影響物質消去剤、反応促進剤等が含有されてもよい。水性媒体 としては、例えば前述の水性媒体等が挙げられる。安定化剤としては、例えばェチレ ンジァミン四酢酸 (EDTA)、シユークロース、塩ィ匕カルシウム等が挙げられる。防腐 剤としては、例えばアジィ匕ナトリウム、バイオェ—ス、抗生物質等が挙げられる。影響 物質消去剤としては、例えばァスコルビン酸の影響を消去するためのァスコルビン酸 ォキシダーゼ等が挙げられる。反応促進剤としては、例えばコリパーゼ等の酵素、硫 酸ナトリウム、塩ィ匕ナトリウム等の塩類等が挙げられる。
[0323] 本発明の RLP— C測定用試薬及び測定用キットは、凍結乾燥された状態でも、水 性媒体に溶解された状態でもよ 、。凍結乾燥された状態の試薬を用いて検体中の R LP— Cを測定する場合には、当該試薬は水性媒体に溶解して使用される。
本発明の RLP— C測定用試薬及び測定用キットにおけるコレステロールエステル 加水分解酵素、コレステロール酸化酵素の含量としては、水性媒体で溶解された状 態での濃度力0. 001〜2000U/mLとなる含量力 S好ましく、 0. 005〜1000U/m Lとなる含量がより好まし 、。
[0324] 本発明の RLP— C測定用試薬及び測定用キットにおけるコレステロール脱水素酵 素、還元型補酵素酸化酵素の含量としては、水性媒体で溶解された状態での濃度 が 0. 001〜2000UZmLとなる含量力 子ましく、 0. 005〜1000U/mLとなる含量 力 り好ましい。
本発明の RLP— C測定用試薬及び測定用キットにおける酸ィ匕型補酵素の含量とし ては、水性媒体で溶解された状態での濃度が 0. 01〜500mmol/Lとなる含量が 好ましぐ 0. 1〜： LOOmmolZLとなる含量がより好ましい。
[0325] 本発明の RLP— C測定用試薬及び測定用キットにおけるリン脂質加水分解酵素の 含量としては、水性媒体で溶解された状態での濃度が 0. 01〜： L000U/mLとなる 含量が好ましぐ 0. l〜500U/mLとなる含量がより好ましい。
本発明の RLP— C測定用試薬及び測定用キットにおける界面活性剤 A、界面活性 剤 (Al)及び界面活性剤 (A2)の含量としては、水性媒体で溶解された状態での濃 度が 0. 0001〜10%となる含量力 S好ましく、 0. 001〜5%となる含量がより好ましい
[0326] 本発明の RLP— C測定用試薬及び測定用キットにおけるポリア-オンの含量として は、水性媒体で溶解された状態での濃度が 0. 0001〜30%となる含量が好ましぐ 0 . 001〜3%となる含量がより好ましい。
本発明の RLP— C測定用試薬及び測定用キットにおける 2価の金属イオンの含量 としては、水性媒体で溶解された状態での濃度が 0. 001〜30%となる含量が好まし ぐ 0. 01〜3%となる含量がより好ましい。
[0327] 本発明の RLP— C測定用試薬及び測定用キットにおける界面活性剤 Bの含量とし ては、水性媒体で溶解された状態での濃度が 0. 001〜40%となる含量が好ましぐ 0. 01〜20%となる含量がより好ましい。
[0328] 以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、これらは本発明の範囲を何ら 限定するものではない。尚、本実施例および参考例においては、下記メーカーの試 薬及び酵素を使用した。
[0329] MOPS (同仁化学研究所社製）、 EMSE (ダイトーケミックス社製）、 TOOS (同仁化 学研究所社製)、硫酸ナトリウム（関東ィ匕学社製)、デキストラン硫酸ナトリウム (名糖産 業社製)、硝酸マグネシウム六水和物 (和光純薬工業社製)、 4ーァミノアンチピリン（ 埼京化成社製）、パーォキシダーゼ (東洋紡績社製）、 CHO— CE (コレステロール酸 化酵素；キッコ一マン社製）、 LPL - 312 (コレステロールエステル加水分解酵素；東 洋紡績社製)、化学修飾 LPL (コレステロールエステル加水分解酵素；自社調製品） 、 LPBP (コレステロールエステルカ卩水分解酵素；旭化成社製）、 CEN (コレステロ一 ルエステルカ卩水分解酵素；旭化成社製）、 COE- 301 (コレステロールエステルカロ水 分解酵素;東洋紡績社製)、 PLDP (リン脂質加水分解酵素;旭化成社製)、 PLA2 ( リン脂質加水分解酵素;旭化成社製)、ァスコルビン酸ォキシダーゼ (旭化成社製)。
[0330] ェマルゲン B— 66 [界面活性剤 A:HLB値が 16. 0未満である POE多環フエ-ル エーテル；花王社製]、ニューカルゲン GP— 120 [界面活性剤 A： POE · POA多環 フエ-ルエーテル；竹本油脂社製]、ニューコール 2608— F [界面活性剤 Α: ΡΟΕ· PO A多環フエ-ルエーテル；日本乳ィ匕剤社製]、プル口ニック TR— 704 [界面活性 剤 A：エチレンジァミン一 POE · POP縮合物；旭電化社製]、エチレンジァミン PO40 EO40 [界面活性剤 A：エチレンジァミン— ΡΟΕ· POP縮合物；日本油脂社製]、プ ライサーフ A219B [界面活性剤 A : POEアルキルエーテルリン酸エステル；第一ェ 業製薬社製]、モノゲン 170T [界面活性剤 A:高級アルコール硫酸エステル塩;第 一工業製薬社製]、 -ッコール NP— 10 [界面活性剤 A : POEアルキルフエ-ルェ 一テル；日光ケミカルズ社製]、ハイテノール N -07 [界面活性剤 A： POEアルキル フエ-ルエーテル硫酸エステル塩;第一工業製薬社製]、ノィゲン SD300 [界面活 性剤 A： POE短鎖分岐アルキルエーテル；第一工業製薬社製]、パーソフト EF [界 面活性剤 A : POEアルキルエーテル硫酸エステル塩；日本油脂社製]、パーソフト EP [界面活性剤 A : POEアルキルエーテル硫酸エステル塩；日本油脂社製]、パーソフ ト EFT [界面活性剤 A: POEアルキルエーテル硫酸エステル塩；日本油脂社製]、パ 一ソフト EDO [界面活性剤 A: POEアルキルエーテル硫酸エステル塩；日本油脂社 製]、ニューコール 707— SF [界面活性剤 A : POE多環フエ-ルエーテル硫酸エス テル塩；日本乳化剤社製]、ニューコール 707— SFC [界面活性剤 A: POE多環フ ェニルエーテル硫酸エステル塩；日本乳化剤社製]、ニューコール 723— SF [界面 活性剤 A : POE多環フエ-ルエーテル硫酸エステル塩；日本乳化剤社製]、プル口- ック L 34 [界面活性剤 A： POPの分子量が 2, 750未満である POE · POP縮合物； 旭電化社製]、プル口ニック F— 68 [界面活性剤 A： POPの分子量が 2, 750未満であ る ΡΟΕ· POP縮合物；旭電ィ匕社製]、ェパン 420 [界面活性剤 A： POPの分子量が 2, 750未満である POE'POP縮合物;第一工業製薬社製]、エバン U108 [界面活性剤 A： POPの分子量が 2, 750未満である ΡΟΕ· POP縮合物；第一工業製薬社製]、 BL AUNON EP— 1461 [界面活性剤 A: POPの分子量が 2, 750未満である POE'P OP縮合物；青木油脂社製]、ノィゲン XL— 400[POE · PO A短鎖分岐アルキルエー テル；第一工業製薬社製]、ノィゲン XL— 1000F[POE · POA短鎖分岐アルキルェ 一テル;第一工業製薬社製]、ュ-セーフ PKA— 5015 [界面活性剤 Α: ΡΟΕ·ΡΟ Αアルキルエーテル；日本油脂社製]、ュ-セーフ PKA— 5016 [界面活性剤 A : P ΟΕ· POAアルキルエーテル；日本油脂社製]、ュ-セーフ LM— 2 [界面活性剤 A： POE'PO Aアルキルエーテル；日本油脂社製]、 EMALEX DAPE— 230 [界面 活性剤 A： POE · PO Aアルキルエーテル；日本ェマルジョン社製]、 BLAUNON B EO- 10 [界面活性剤 A: POEビスフエノール— A—エーテル;青木油脂社製]、二 ユーコール B4— SN [界面活性剤 A : POEァリールエーテル硫酸エステル塩；日本 乳化剤社製]、二ユーコール B 13-SN [界面活性剤 A： POEァリールエーテル硫酸 エステル塩；日本乳化剤社製]、 BIGCHAP [胆汁酸誘導体；同仁化学研究所社製]、 deoxy— BIGCHAP [胆汁酸誘導体；同仁ィ匕学研究所社製]、 CHAPSO [胆汁酸誘 導体；同仁化学研究所社製]、 BLAUNON MXDA-P04 [界面活性剤 A: POP メタキシレンジァミン；青木油脂社製]。
[0331] エチレンジァミン PO40EO40 [界面活性剤（A1)：エチレンジァミン一 POE'POP 縮合物；日本油脂社製]、ファインサーフ IDEP— 802 [界面活性剤 (A1)： POE-P OA短鎖分岐アルキルエーテル;青木油脂社製]、プル口ニック 25R—2 [界面活性 剤 (A1)： POPの分子量が 2, 750未満である POE'POP縮合物；旭電ィ匕社製]、コ ール酸ナトリウム [界面活性剤 (A1) :胆汁酸誘導体；関東化学社製]、ハイテノール N-07 [界面活性剤（A1)： POEアルキルフエ-ルエーテル硫酸エステル塩；第一 工業製薬社製]、ェマルゲン 810 [界面活性剤 (A1)： POEアルキルフエ-ルエー テル；花王社製]、ノィゲン SD110 [界面活性剤 (A1)： POE短鎖分岐アルキルェ 一テル:第一工業製薬社製]、ノィゲン SD150 [界面活性剤 (A1)： POE短鎖分岐 アルキルエーテル；第一工業製薬社製]、ノィゲン SD300 [界面活性剤 (A1)： PO E短鎖分岐アルキルエーテル；第一工業製薬社製]。
[0332] ニューコール 707— F [界面活性剤（A2) : ΡΟΕ·ΡΟΑ多環フエ-ルエーテル；日 本乳化剤社製]、ニューコール 707— SN [界面活性剤 (Α2)： ΡΟΕ多環フエ-ルェ 一テル硫酸エステル塩；日本乳ィ匕剤社製]、 EMALEX DAPE— 230 [界面活性 剤（A2)： POE'POAアルキルエーテル；日本ェマルジヨン社製]、ニューコール 110 5— SN [界面活性剤 (A2)： POEアルキルエーテル硫酸エステル塩；日本乳化剤 社製]、 BLAUNON EP—1461 [界面活性剤（A2)： POPの分子量が 2, 750未 満である POE'POP縮合物;青木油脂社製]、コール酸ナトリウム [界面活性剤 (A2 )：胆汁酸誘導体;関東化学社製]、エマルゲン 810 [界面活性剤 (A2)： POEアル キルフエ-ルエーテル；花王社製]、プル口ニック TR— 704 [界面活性剤 (A2)：ェ チレンジァミン— ΡΟΕ· POP縮合物；旭電化社製]、ファインサ―フ IDEP— 802 [ 界面活性剤 (A2)： POE · POA短鎖分岐アルキルエーテル；青木油脂社製]。
プロノン B - 208 [界面活性剤 B： POE · POB縮合物；日本油脂社製]、 BLAUN ON TSP- 50 [界面活性剤 B:HLB値が 16. 0以上である POE多環フエ-ルェ 一テル;青木油脂社製]、ェマルゲン A— 500 [界面活性剤 B :HLB値が 16. 0以 上である POE多環フエ-ルエーテル；花王社製]、二ユーコール 740 [界面活性剤 B： HLB値が 16. 0以上である POE多環フエ-ルエーテル；日本乳化剤社製]、ュ-ル ーブ MT—0620B [界面活性剤B : POE·POA長鎖分岐ァルキルェーテル；日本 油脂社製]、プル口ニック F— 108 [界面活性剤 B : POPの分子量が 2, 750以上で ある ΡΟΕ· POP縮合物；旭電化社製]、 EMALEX 2425[POE長鎖分岐アルキル エーテル；日本乳化剤社製]、ノィゲン TDS— 500F[POE長鎖分岐アルキルエーテ ル；第一工業製薬社製]、ワンダサーフ RL— 100 (POE'POAアルキルエーテル； 青木油脂社製)。
実施例 1
以下の第一試薬 (試薬 及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 A)
Figure imgf000091_0001
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 0. 75 g/L
化学修飾 LPL 0. 05 kU/L
コール酸ナトリウム 0. 75 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000091_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 ―. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 2
[0335] 以下の第一試薬 (試薬 B)及び第二試薬 (試薬 a)力もなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 B)
Figure imgf000092_0001
硫酸ナトリウム 1 g/L
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
ェマルゲン B— 66 1 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000092_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 3
[0336] 以下の第一試薬 (試薬 C)及び第二試薬 (試薬 a)力もなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 C)
Figure imgf000092_0003
硫酸ナトリウム 1 g, パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
プル口ニック TR— 704 5 g,
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000093_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 4
以下の第一試薬 (試薬 D)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 D)
Figure imgf000093_0002
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 1. 5 g/L
硝酸マグネシウム六水和物 1. 5g/L
ニューコール 1105— SN 2 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000093_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L 実施例 5
[0338] 以下の第一試薬 (試薬 E)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 E)
Figure imgf000094_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 2 kU/L
ェマルゲン B— 66 2. 5 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000094_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 6
[0339] 以下の第一試薬 (試薬 F)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 F)
Figure imgf000094_0003
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 1 kU,L ニューカルゲン GP— 120 4 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000095_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 7
[0340] 以下の第一試薬 (試薬 G)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 G)
Figure imgf000095_0002
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 1 kU/L
ニューコール 2608— F 4 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000095_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 8
[0341] 以下の第一試薬 (試薬 H)及び第 ：試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 H)
Figure imgf000096_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 1 kU/L
プル口ニック TR— 704 5 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000096_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 9
以下の第一試薬 (試薬 I)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを調 製した。
第一試薬 (試薬 I)
Figure imgf000096_0003
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 1 kU,L
プライサーフ A219B 0. 5g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000097_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 10
[0343] 以下の第一試薬 m)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを調 製した。
第一試薬 (試萌）
Figure imgf000097_0002
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 1 kU/L
モノゲン 170T 3 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000097_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 11
[0344] 以下の第一試薬 (試薬 K)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 K)
Figure imgf000098_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPBP 600 kUZし
ニッコール NP— 10 0. 1 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000098_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 12
以下の第一試薬 (試薬 L)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 L)
Figure imgf000098_0003
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 05 kUZし
ハイテノール N— 07 2 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000098_0004
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 13
[0346] 以下の第一試薬 (試薬 M)及び第二試薬 (試薬 a)力 なる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 M)
Figure imgf000099_0001
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 05 kUZし
ノィゲン SD300 3 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000099_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 14
[0347] 以下の第一試薬 (試薬 N)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 N)
Figure imgf000099_0003
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L デキストラン硫酸ナトリウム 0. 75 g/L
化学修飾 LPL 0. 05 kU/L
エチレンジァミン PO40EO40 0. 25 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000100_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 15
以下の第一試薬 (試薬 O)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬。）
Figure imgf000100_0002
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 0. 75 g/L
化学修飾 LPL 0. 05 kU/L
ファインサーフ IDEP -802 0. 1 g,
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000100_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L 実施例 16
[0349] 以下の第一試薬 (試薬 P)及び第二試薬 (試薬 a)力もなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 P)
Figure imgf000101_0001
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 0. 75 g/L
化学修飾 LPL 0. 05 kU/L
プル口ニック 25R— 2 1
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000101_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 17
[0350] 以下の第一試薬 (試薬 Q)及び第二試薬 (試薬 a)力もなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 Q)
Figure imgf000101_0003
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 0. 75 g/L
化学修飾 LPL 0. 05 kU/L ハイテノール N— 07 2 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000102_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 18
[0351] 以下の第一試薬 (試薬 R)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 R)
Figure imgf000102_0002
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 0. 75 g/L
化学修飾 LPL 0. 05 kU/L
ノィゲン SD110 1 /
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000102_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 19
[0352] 以下の第一試薬 (試薬 S)及び第 ：試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 s)
Figure imgf000103_0001
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 0. 75 g/L
化学修飾 LPL 0. 05 kU/L
ノィゲン SD150 1 /
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000103_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 20
以下の第一試薬 (試薬 T)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 T)
Figure imgf000103_0003
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 0. 75 g/L
化学修飾 LPL 0. 05 kU/L
ノィゲン SD300 3 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000104_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 21
[0354] 以下の第一試薬 (試薬 U)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 U)
Figure imgf000104_0002
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 0. 75 g/L
化学修飾 LPL 0. 05 kU/L
ェマルゲン 810 0. 05 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000104_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 22
[0355] 以下の第一試薬 (試薬 V)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 V)
Figure imgf000105_0001
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 1. 5 g/L
硝酸マグネシウム六水和物 1. 5g/L
COE- 301 1 kU/L
ニューコール 707— F 2 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000105_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 23
以下の第一試薬 (試薬 W)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 W)
Figure imgf000105_0003
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 1. 5 g/L
硝酸マグネシウム六水和物 1. 5g/L
COE- 301 1 kU/L
ニューコール 707— SN 4 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000106_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 24
[0357] 以下の第一試薬 (試薬 X)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 X)
Figure imgf000106_0002
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 1. 5 g/L
硝酸マグネシウム六水和物 1. 5g/L
COE- 301 1 kU/L
EMALEX DAPE- 230 2 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000106_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 25
[0358] 以下の第一試薬 (試薬 Y)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。 第一試薬 (試薬 Y)
Figure imgf000107_0001
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 1. 5 g/L
硝酸マグネシウム六水和物 1. 5g/L
COE- 301 1 kU/L
ニューコール 1105— SN 2 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000107_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 26
以下の第一試薬 (試薬 Z)及び第 試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 Z)
Figure imgf000107_0003
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 1. 5 g/L
硝酸マグネシウム六水和物 1. 5g/L
化学修飾 LPL 0. 2 kU/L
プル口ニック TR— 704 1 g/L 第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000108_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 27
[0360] 以下の第一試薬 (試薬 AA)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AA)
Figure imgf000108_0002
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 1. 5 g/L
硝酸マグネシウム六水和物 1. 5g/L
化学修飾 LPL 0. 2 kU/L
ファインサーフ IDEP -802 0. 1 g,
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000108_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 28
[0361] 以下の第一試薬 (試薬 AB)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AB)
Figure imgf000109_0001
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 1. 5 g/L
硝酸マグネシウム六水和物 1. 5g/L
化学修飾 LPL 0. 2 kU/L
BLAUNON EP— 1461 4 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000109_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 29
以下の第一試薬 (試薬 AC)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AC)
Figure imgf000109_0003
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 1. 5 g/L
硝酸マグネシウム六水和物 1. 5g/L
化学修飾 LPL 0. 2 kU/L コール酸ナトリウム g
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000110_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 30
以下の第一試薬 (試薬 AD)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AD)
Figure imgf000110_0002
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 1. 5 g/L
硝酸マグネシウム六水和物 1. 5g/L
LPBP 600 kU/L
ェマルゲン 810 0. 75 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000110_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 31 [0364] 以下の第一試薬 (試薬 E)及び第:：試薬 (試薬 b)からなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 E)
Figure imgf000111_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 2 kU/L
ェマルゲン B— 66 2. 5 g/L
第二試薬 (試薬 b)
Figure imgf000111_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
ュニルーブ MT— 0620B 22. 5 g/L
実施例 32
[0365] 以下の第一試薬 (試薬 E)及び第: ：試薬 (試薬 c)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 E)
Figure imgf000111_0003
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 2 kU/L
ェマルゲン B— 66 2. 5 g/L 第二試薬 (試薬 c)
Figure imgf000112_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 0. 3 kU/L
BLAUNON TSP- 50 100 g/L
実施例 33
[0366] 以下の第一試薬 (試薬 N)及び第二試薬 (試薬 b)からなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 N)
Figure imgf000112_0002
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 0. 75 g/L
化学修飾 LPL 0. 05 kU/L
エチレンジァミン PO40EO40 0. 25 g/L
第二試薬 (試薬 b)
Figure imgf000112_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
ュニルーブ MT— 0620B 22. 5 g/L
実施例 34
[0367] 以下の第一試薬 (試薬 Y)及び第: ：試薬 (試薬 b)からなる RLP— C測定用キットを 調製した。 第一試薬 (試薬 Y)
Figure imgf000113_0001
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 1. 5 g/L
硝酸マグネシウム六水和物 1. 5g/L
COE- 301 1 kU/L
ニューコール 1105— SN 2 g/L
第二試薬 (試薬 b)
Figure imgf000113_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
ュニルーブ MT— 0620B 22. 5 g/L
実施例 35
以下の第一試薬 (試薬 AE)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AE)
Figure imgf000113_0003
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
パーソフト EP 1. 5 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000114_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 36
[0369] 以下の第一試薬 (試薬 AF)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 AF)
Figure imgf000114_0002
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
パーソフト EF 5 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000114_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 37
[0370] 以下の第一試薬 (試薬 AG)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AG)
Figure imgf000115_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
パーソフト EFT 5 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000115_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 38
以下の第一試薬 (試薬 AH)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AH)
Figure imgf000115_0003
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
ノ ーソフト EDO 1. 5 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000115_0004
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 ―. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 39
[0372] 以下の第一試薬 (試薬 AI)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 AI)
Figure imgf000116_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
ニューコール 707— SF 5 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000116_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 40
[0373] 以下の第一試薬 (試薬 AJ)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 AJ)
Figure imgf000116_0003
EMSE 0. 3 g/L 硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
ニューコール 707— SFC 1 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000117_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 41
以下の第一試薬 (試薬 AK)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AK)
Figure imgf000117_0002
硫酸ナトリウム 1 g/L
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
ニューコール 723— SF 1 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000117_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 42
[0375] 以下の第一試薬 (試薬 AL)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 AL)
Figure imgf000118_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 1 kU/L
ェパン U108 1 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000118_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 43
[0376] 以下の第一試薬 (試薬 AM)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AM)
Figure imgf000118_0003
硫酸ナトリウム 1 g/L
パーォキシダーゼ 10 kU/L CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
ェパン 420 1 g,
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000119_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 44
以下の第一試薬 (試薬 AN)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AN)
Figure imgf000119_0002
硫酸ナトリウム 1 g/L
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
プル口ニック L— 34 1 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000119_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L 実施例 45
[0378] 以下の第一試薬 (試薬 AO)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AO)
Figure imgf000120_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
プル口ニック F— 68 1 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000120_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 46
[0379] 以下の第一試薬 (試薬 AP)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 AP)
Figure imgf000120_0003
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L BLAUNON EP— 1461 3 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000121_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 47
[0380] 以下の第一試薬 (試薬 AQ)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AQ)
Figure imgf000121_0002
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
エチレンジァミン PO40EO40 0. 5 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000121_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 48
[0381] 以下の第一試薬 (試薬 AR)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AR)
Figure imgf000122_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
ュニセーフ PKA— 5015 3 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000122_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 49
以下の第一試薬 (試薬 AS)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 AS)
Figure imgf000122_0003
硫酸ナトリウム 1 g/L
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 01 kU/L
ュニセーフ PKA— 5016 1 /
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000123_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 50
[0383] 以下の第一試薬 (試薬 AT)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AT)
Figure imgf000123_0002
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
EMALEX DAPE- 230 0. 5 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000123_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 51
[0384] 以下の第一試薬 (試薬 AU)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AU)
Figure imgf000124_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 01 kU/L
BLAUNON BEO- 10 0. 5 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000124_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 52
以下の第一試薬 (試薬 AV)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AV)
Figure imgf000124_0003
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
BLAUNON MXDA-P04 3 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000124_0004
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 ―. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 53
[0386] 以下の第一試薬 (試薬 AW)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AW)
Figure imgf000125_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
ニューコール B4— SN 0. 05 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000125_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 54
[0387] 以下の第一試薬 (試薬 AX)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AX)
Figure imgf000125_0003
EMSE 0. 3 g/L 硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
ニューコール B13— SN 0. 05 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000126_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 55
以下の第一試薬 (試薬 AY)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AY)
Figure imgf000126_0002
硫酸ナトリウム 1 g/L
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
ュニセーフ LM— 2 1 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000126_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 56
[0389] 以下の第一試薬 (試薬 AZ)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 AZ)
Figure imgf000127_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 1 kU/L
ノィゲン XL— 400 0. 5 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000127_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 57
[0390] 以下の第一試薬 (試薬 BA)及び第二試薬 (試薬 a)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 BA)
Figure imgf000127_0003
硫酸ナトリウム 1 gZL
パーォキシダーゼ 10 kUZL CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 1 kU/L
ノィゲン XL— 1000F 0. 5 g/L
第二試薬 (試薬 a)
Figure imgf000128_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
実施例 58
以下の第一試薬 (試薬 E)及び第二試薬 (試薬 d)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 E)
Figure imgf000128_0002
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 2 kU/L
ェマルゲン B— 66 2. 5 g/L
第二試薬 (試薬 d)
Figure imgf000128_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 0. 5 kU/L
ェマルゲン A— 500 100 g/L 実施例 59
[0392] 以下の第一試薬 (試薬 E)及び第二試薬 (試薬 e)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 E)
Figure imgf000129_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 2 kU/L
ェマルゲン B— 66 2. 5 g/L
第二試薬 (試薬 e)
Figure imgf000129_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 0. 5 kU/L
ニューコーノレ 740 100 g/L
実施例 60
[0393] 以下の第一試薬 (試薬 E)及び第二試薬 (試薬 f)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 E)
Figure imgf000129_0003
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 2 kU/L ェマルゲン B— 66 2. 5 g/L
第二試薬 (試薬 f)
Figure imgf000130_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
EMALEX 2425 50 g/L
実施例 61
[0394] 以下の第一試薬 (試薬 E)及び第二試薬 (試薬 g)からなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 E)
Figure imgf000130_0002
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 2 kU/L
ェマルゲン B— 66 2. 5 g/L
第二試薬 (試薬 g)
Figure imgf000130_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
ノィゲン TDS— 500F 75 g/L
実施例 62
[0395] 以下の第一試薬 (試薬 F)及び第二試薬 (試薬 h)からなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 F)
Figure imgf000131_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 1 kU/L
ニューカルゲン GP - 120 4 g/L
第二試薬 (試薬 h)
Figure imgf000131_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プル口ニック F— 108 75 g/L
実施例 63
以下の第一試薬 (試薬 BB)及び第二試薬 (試薬 i)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 BB)
Figure imgf000131_0003
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 1 kU,L
ノィゲン XL— 400 0. 75 g/L
第二試薬 (試薬 i)
Figure imgf000132_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
ェマルゲン A— 500 75 g/L
実施例 64
[0397] 以下の第一試薬 (試薬 BB)及び第二試薬 (試菊)からなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 BB)
Figure imgf000132_0002
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 1 kU/L
ノィゲン XL— 400 0. 75 g/L
第二試薬 (試菊）
Figure imgf000132_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
ニューコーノレ 740 75 g/L
実施例 65
[0398] 以下の第一試薬 (試薬 BB)及び第二試薬 (試薬 f)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 BB)
Figure imgf000133_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 1 kU/L
ノィゲン XL— 400 0. 75 g/L
第二試薬 (試薬 f)
Figure imgf000133_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
EMALEX 2425 50 g/L
実施例 66
以下の第一試薬 (試薬 AN)及び第二試薬 (試薬 k)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AN)
Figure imgf000133_0003
硫酸ナトリウム 1 g/L
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
プル口ニック L— 34 1 g/L
第二試薬 (試薬 k)
Figure imgf000133_0004
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 0. 5 kU/L
ェマルゲン A— 500 50 g/L
実施例 67
[0400] 以下の第一試薬 (試薬 AN)及び第二試薬 (試薬 1)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 AN)
Figure imgf000134_0001
硫酸ナトリウム 1 g/L
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
プル口ニック L— 34 1 g/L
第二試薬 (試薬 1)
Figure imgf000134_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 0. 5 kU/L
ニューコーノレ 740 50 g/L
実施例 68
[0401] 以下の第一試薬 (試薬 AN)及び第二試薬 (試薬 m)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 AN)
Figure imgf000134_0003
EMSE 0. 3 g/L 硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
プル口ニック L— 34 1 g/L
第二試薬 (試薬 m)
Figure imgf000135_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
ノィゲン TDS— 500F 50 g/L
実施例 69
以下の第一試薬 (試薬 BC)及び第二試薬 (試薬 n)からなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 BC)
Figure imgf000135_0002
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
BIGCHAP 0. 5 g/L
第二試薬 (試薬 n)
Figure imgf000135_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 2 g/L
実施例 70
[0403] 以下の第一試薬 (試薬 BD)及び第二試薬 (試薬 n)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 BD)
Figure imgf000136_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
deoxy-BIGCHAP 0. 5 g/L
第二試薬 (試薬 n)
Figure imgf000136_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 2 g/L
実施例 71
[0404] 以下の第一試薬 (試薬 BE)及び第二試薬 (試薬 n)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 BE)
Figure imgf000136_0003
硫酸ナトリウム 1 gZL
パーォキシダーゼ 10 kUZL CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
CHAPSO 0. 5 g/L
第二試薬 (試薬 n)
Figure imgf000137_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 2 g/L
実施例 72
以下の第一試薬 (試薬 BD)及び第二試薬 (試薬 o)カゝらなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 BD)
Figure imgf000137_0002
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
deoxy-BIGCHAP 0. 5 g/L
第二試薬 (試薬。）
Figure imgf000137_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
ュニルーブ MT— 0620B 2 g/L 実施例 73
[0406] 以下の第一試薬 (試薬 BD)及び第二試薬 (試薬 p)力もなる RLP— C測定用キット を調製した。
第一試薬 (試薬 BD)
Figure imgf000138_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
化学修飾 LPL 0. 025 kU/L
deoxy-BIGCHAP 0. 5 g/L
第二試薬 (試薬 p)
Figure imgf000138_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
CEN 20 kU/L
ェマルゲン A— 500 40 g/L
実施例 74
[0407] 以下の第一試薬 (試薬 BF)及び第二試薬 (試薬 q)力もなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 BF)
Figure imgf000138_0003
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 0. 75 g/L
化学修飾 LPL 0. 05 kU/L BIGCHAP 0. 5 g/L
第二試薬 (試薬 q)
Figure imgf000139_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
CEN 20 kU/L
プロノン B— 208 2 g/L
実施例 75
[0408] 以下の第一試薬 (試薬 BF)及び第二試薬 (試薬 p)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 BF)
Figure imgf000139_0002
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 0. 75 g/L
化学修飾 LPL 0. 05 kU/L
BIGCHAP 0. 5 g/L
第二試薬 (試薬 p)
Figure imgf000139_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
CEN 20 kU/L
ェマルゲン A— 500 40 g/L
実施例 76
[0409] 以下の第一試薬 (試薬 BF)及び第二試薬 (試薬!：)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 BF)
Figure imgf000140_0001
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 0. 75 g/L
化学修飾 LPL 0. 05 kU/L
BIGCHAP 0. 5 g/L
第二試薬 (試薬 r)
Figure imgf000140_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
CEN 20 kU/L
EMALEX 2425 2 g/L
実施例 77
[0410] 参考例 1に記載の RLP— C測定用キット（以下、対照キットと!/、う）及び実施例 2〜4 のキットを用いて、ヒト血清 45検体中の RLP— C濃度を測定した。なお、参考例 2は、 参考例 1記載の対照キットの性能を示すデータである。
(1)検量線の作成
標準液として、生理食塩水（RLP— C : 0. OmgZdL)と、 RLP—コレステロール「JI MRO」II (日本抗体研究所社製)を用いた測定より、 RLP— C濃度が 35. Omg/dL であることが判明している標準血清とを用いて、対照キット及び実施例 2〜4のキット を用いて、日立 7170S型自動分析機により、それぞれのキットについて、 RLP—じと 「吸光度」との関係を示す検量線を作成した。
[0411] ここで記す「吸光度」とは、以下の反応で測定された 2つの吸光度 (E1及び E2)を 基に、 E2から E1を差し引くことによって得られる値を表す。 反応セルへ標準液（3. 2 L)と第一試薬（150 L)とを添加し、 37°Cで 5分間加 温し、その反応液の吸光度 (E1)を主波長 600nm、副波長 700nmで測定し、次い で、この反応液に第二試薬（50 L)を添加し、さらに 37°Cで 5分間加温した後に、 反応液の吸光度 (E2)を主波長 600nm、副波長 700nmで測定した。
(2)ヒト血清検体と当該検体における「吸光度」の測定
(1)の検量線作成にぉ 、て、標準液の代わりにヒト血清検体 (45検体)を用いる以 外は、（1)の「吸光度」算出方法と同様の操作を行い、当該検体における「吸光度」を 測定した。
(3)ヒト血清検体中の RLP— C濃度の決定
(2)で測定した「吸光度」と、（1)で作成した検量線とから、各検体中の RLP— C濃 度を測定した。
[0412] 対照キットを用いて測定して得られた各検体中の RLP— C濃度と、実施例 2〜4の キットを用いて測定して得られた各検体中の RLP— C濃度とから、対照キットと実施 例 2〜4のキットとを用いた測定の相関係数を求めた。その結果を第 1表に示す。
[0413] [表 1] 第 1表
Figure imgf000141_0001
[0414] 第 1表に示す様に、対照キットを用いた測定と実施例 2〜4のキットを用いた測定と の間の相関は良好であった。
実施例 78
[0415] 日本抗体研究所社製の RLP— C測定用キット (製品名： RLP—コレステロール「JI MRO」II)を用い、添付文書記載の操作を行い、新鮮ヒト血清検体 40検体の RLP— C濃度を測定した。別個に、対照キット及び実施例 1、 5〜30のキットを用いて、当該 40検体中の RLP— C濃度を実施例 77と同様の方法により測定した。対照キット、及 び、実施例 1, 5〜11, 14〜30のキットを用いて測定した当該 40検体の各検体中の RLP C濃度と、 RLP コレステロール「JIMRO」 IIを用 、て測定した当該 40検体の 各検体中の RLP— C濃度とから、 RLP コレステロール「JIMRO」IIと実施例 1, 5〜 11、 14〜30のキットとの相関係数を求めた。その結果を第 2表に示す。
[表 2]
第 2表
Figure imgf000142_0001
第 2表に示す様に、対照キット及び実施例 1、 5〜11、 14〜30のキットを用いた測 定と、 RLP コレステロ—ル ^^1^0」11を用いた測定との間の相関は良好であった。 実施例 79
[0418] 対照キット及び実施例 1、 5〜76のキットを用いて、ヒト血清検体 40検体中の RLP —C濃度を実施例 77と同様の方法により測定した。実施例 5〜76のキットを用い て測定した当該 40検体の各検体中の RLP— C濃度と、対照キットを用いて測定した 当該 40検体の各検体中の RLP— C濃度とから、対照キットと実施例 1, 5〜76のキッ トとの相関係数を求めた。その結果を第 3表に示す。
[0419] [表 3]
Jif 3 ¾
鰂キットに iキットに 鰂キットに キッ卜 キッ卜 キッ卜
财る相靈 财る相隱文 财る相隠繳 難例 1 0. 9701 難例 29 0. 8957 難例 54 0. 8978 魅例 5 0. 9396 細列 30 0. 9785 細列 55 0. 9191 麵列 6 0. 9716 麵列 31 0. 9705 麵列 56 0. 9612 例 7 0. 9593 麵列 32 0. 8942 麵列 57 0. 9596 難例 8 0. 891 7 麵列 33 0. 9739 麵列 58 0. 9246 難例 9 0. 9215 麵列 34 0. 8905 難例 59 0. 9280 麵列 10 0. 9088 麵列 35 0. 8376 麵列 60 0. 8858 難例 11 0. 8427 麵列 36 0. 9304 麵列 61 0. 8204 鐘列 12 0. 8071 麵列 37 0. 9179 鐘列 62 0. 8103 麵列 13 0. 8416 麵列 38 0. 8483 麵列 63 0. 9310 難例 14 0. 9660 麵列 39 0. 8047 難例 64 0. 9464 雄例 15 0. 9619 麵列 40 0. 8233 麵列 65 0. 9014 難例 16 0. 9173 麵列 41 0. 8606 麵列 66 0. 8936 麵列丄 Ί 0. 8486 麵列 42 0. 9525 難例 67 0. 8928 難例 18 0. 9657 簾列 43 0. 8797 麵68 0. 8061 難例 19 0. 9563 細列 44 0. 9164 0. 8067 雄例 20 0. 8847 麵列 45 0. 9089 麵列 70 0. 8724 麵列 21 0. 9571 麵列 46 0. 9295 0. 8974 麵列 22 0. 9655 麵列 47 0. 9293 0. 9594 難例 23 0. 9255 麵列 48 0. 9170 0. 9388 難例 24 0. 8891 細列 49 0. 8402 0. 9369 雄例 25 0. 9383 麵列 50 0. 9203 麵列 75 0. 9021 難例 26 0. 9695 麵列 51 0. 8671 0. 8884 麵列 27 0. 9455 麵列 52 0. 9440
難例 28 0. 9688 麵列 53 0. 8845 [0420] 第 3表に示す様に、対照キットを用いた測定と、実施例 1、 5〜76のキットを用いた 測定との間の相関は良好であった。
実施例 80
[0421] 以下の第一試薬 (試薬 E)及び第二試薬 (試薬 s)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 E)
Figure imgf000144_0001
硫酸ナトリウム 丄 g
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 2 kU/L
ェマルゲン B— 66 2. 5 g/L
第二試薬 (試薬 s)
Figure imgf000144_0002
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
PLDP 5 kU/L
実施例 81
[0422] 以下の第一試薬 (試薬 E)と第二試薬 (試薬 t)からなる RLP— C測定用キットを調製 した。
第一試薬 (試薬 E)
Figure imgf000144_0003
硫酸ナトリウム 1 g, パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
COE- 301 2 kU/L
ェマルゲン B— 66 2. 5 g/L
第二試薬 (試薬 t)
Figure imgf000145_0001
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
PLA2 3 kU/L
実施例 82
以下の第一試薬 (試薬 W)及び第二試薬 (試薬 s)カゝらなる RLP— C測定用キットを 調製した。
第一試薬 (試薬 W)
Figure imgf000145_0002
パーォキシダーゼ 10 kU/L
CHO-CE 2 kU/L
デキストラン硫酸ナトリウム 1. 5 g/L
硝酸マグネシウム六水和物 1. 5g/L
COE- 301 1 kU/L
ニューコール 707— SN 4 g/L
第二試薬 (試薬 s)
Figure imgf000145_0003
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
パーォキシダーゼ 20 kU/L CHO-CE 2 kU/L
LPL- 312 1. 5 kU/L
プロノン B— 208 20 g/L
PLDP 5 kU/L
実施例 83
[0424] 対照キット及び実施例 5、 23、 80〜82のキットを用いて、実施例 77と同様の方法に より、日立 7170S型自動分析機によりヒト血清 50検体の各検体中の RLP— C濃度を 測定した。対照キットを用いて測定した当該 50検体の各検体中の RLP— C濃度と、 実施例 5、 23、 80〜82のキットを用いて測定した当該 50検体の各検体中の RLP— C濃度とから、対照キットと実施例 5、 23、 80〜82のキットとの相関係数を求めた。そ の結果を第 4表に示す。
[0425] [表 4]
第 4表
Figure imgf000146_0001
[0426] 第 4表より、実施例 5のキットを用いた測定と実施例 80, 81のキットを用いた測定と の比較から、また、実施例 23のキットを用いた測定と実施例 82のキットを用いた測定 との比較から、第二試薬にリン脂質加水分解酵素を追加することにより、対照キットを 用いた測定との相関における相関係数が向上することが判明した。
[0427] 参考例 1
以下の第一試薬及び第二試薬力もなる RLP— C定量用キットを作成した。 '第一試薬
MOPS (pH6. 8) 20 mmol/L
TOOS 0. 3 g/L 硫酸ナトリウム 2 g/L
プロノン B— 208 8 g/L
ワンダサーフ RL— 100 1 g/L
パーォキシダーゼ 10 kU/L
ァスコルビン酸ォキシダーゼ 2 kU/L
'第二試薬
MOPS (pH6. 8) 20 mmol/L
4ーァミノアンチピリン 0. 5 g/L
ワンダサーフ RL— 100 1 g/L
パーォキシダーゼ 10 kU/L
コレステロールエステラーゼ (東洋紡績社製） 1 kU/L
コレステロールォキシダーゼ (協和発酵工業社製） 3 kU/L
ホスホリパーゼ D (旭化成社製） 5 kU/L
[0428] 参考例 2 RLP— Cの定量
参考例 1のキットを用いて、ヒト新鮮血清 64検体について、各検体中の RLP— Cを 日立 7170型自動分析機により、以下の方法により定量した。
(1)検量線の作成
RLP—コレステロール「JIMRO」II (日本抗体研究所社製）を用いた測定より、 RLP —C濃度が 32. 4 mgZdLであることが判明している血清標準液を標準品として用 Vヽて、当該血清標準液を適宜希釈して調製した希釈血清を検量線作成用サンプル とした。
[0429] 測定用キットとして参考例 1のキットを用いて、以下の手順に従い、日立 7170型自 動分析機にて、各希釈血清中の RLP— C濃度を測定し、検量線を作成した。
反応セルへ希釈血清（3. 8 /z L)と第 1試薬 (0. 18 mL)とを添加し 37°Cで 5分 間加温し、反応液の吸光度 (E1)を主波長 600nm、副波長 700nmで測定し (測光 ポイント： 16)、次いで、この反応液に、 37°Cに予め加温された第 2試薬（0. 06 mL )を添加しさらに 37°Cで 5分間加温し、反応液の吸光度 (E2)を主波長 600nm、副 波長 700nmで測定した (測光ポイント： 32)。反応における吸光度変化 (E2— E1)と 希釈血清中の RLP— C濃度との関係から検量線を作成した。
(2)ヒト新鮮血清 64検体中の RLP— Cの定量
血清標準液の代わりにヒト新鮮血清 64検体を用いて、（1)と同様の方法により、該 6 4検体各々について反応を行い、反応後の反応液の吸光度と（1)で作成した検量線 とから、各検体中の RLP— C濃度を定量した。
[0430] (3) RLP—コレステロール「JIMRO」II (日本抗体研究所社製）を用いた測定との 相関
前述のヒト新鮮血清 64検体について、 RLP—コレステロール「JIMRO」II (日本抗 体研究所社製)を用いて、各検体中の RLP— C濃度を定量した。
各検体について、上記（2)と（3)の定量値の相関性を相関係数で評価した。その 結果、相関係数は、 0. 9513が得られた。また、相関図を図 1に示す。
産業上の利用可能性
[0431] 本発明により、動脈硬化等の診断に有効なレムナント様リポ蛋白中のコレステロ一 ルの測定方法、測定用試薬及び測定用キットが提供される。

Claims

請求の範囲
下記工程 (i)〜(iii)を順次行うことを特徴とする、検体中のレムナント様リポ蛋白（以下、 RLPと略記する）中のコレステロール（以下、 RLP— Cと略記する）の測定方法。
(0検体、及び、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸エステル、ポリオキシェ チレンアルキルエーテル硫酸エステル塩、高級アルコール硫酸エステル塩、 HLB値 が 16. 0未満であるポリオキシエチレン多環フエ-ルエーテル、ポリオキシエチレン多 環フエ-ルエーテル硫酸エステル塩、ポリオキシエチレンポリオキシアルキレン多環 フエ-ルエーテル、エチレンジァミン ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン縮合 物、ポリオキシエチレンアルキルフエ-ルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフエ -ルエーテル硫酸エステル塩、ポリオキシエチレン短鎖分岐アルキルエーテル、ポリ ォキシプロピレンの分子量が 2, 750未満であるポリオキシエチレンポリオキシプロピ レン縮合物、ポリオキシエチレンポリオキシアルキレン短鎖分岐アルキルエーテル、 ポリオキシエチレンポリオキシアルキレンアルキルエーテル、胆汁酸誘導体、ポリオキ シエチレンビスフエノールー A—エーテル、ポリオキシエチレンァリールエーテル硫酸 エステル塩、及び、ポリオキシプロピレンメタキシレンジアミンカもなる群より選ばれる 界面活性剤 (以下、該界面活性剤を界面活性剤 Aと略記する)を含有する水性媒体 中で、検体とコレステロール酸ィ匕酵素、或いは、コレステロール脱水素酵素及び酸ィ匕 型補酵素を反応させ、 RLP以外のリポ蛋白中のコレステロールを除去する工程、
GO前記工程 (0で RLP以外のリポ蛋白中のコレステロールを除去した後の反応液に 、ポリオキシエチレンポリオキシブチレン縮合物、 HLB値が 16. 0以上であるポリオキ シエチレン多環フエ-ルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシアルキレン長鎖分 岐アルキルエーテル、ポリオキシプロピレンの分子量が 2, 750以上であるポリオキシ エチレンポリオキシプロピレン縮合物、及び、ポリオキシエチレン長鎖分岐アルキル エーテルカゝらなる群より選ばれる界面活性剤（以下、該界面活性剤を界面活性剤 Bと 略記する）を存在させ、コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸 化酵素、或いは、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素 及び酸化型補酵素を反応させ、過酸化水素又は還元型補酵素を生成させる工程、 及び、 (m)前記工程 GOで生成した過酸ィ匕水素又は還元型補酵素を測定する工程。
[2] 工程 (0が、検体及び界面活性剤 Aを含有する水性媒体中で、検体にコレステロール 脱水素酵素、酸化型補酵素及び還元型補酵素酸化酵素を反応させて、 RLP以外の リポ蛋白中のコレステロールを除去する工程である、請求項 1記載の方法。
[3] 工程 (0の反応力 ポリア-オン存在下で行われる請求項 1又は 2記載の方法。
[4] 界面活'性剤 A力 エチレンジァミン ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン縮合物 、ポリオキシエチレンアルキルフエニルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフエ二 ルエーテル硫酸エステル塩、ポリオキシエチレン短鎖分岐アルキルエーテル、ポリオ キシプロピレンの分子量が 2, 750未満であるポリオキシエチレンポリオキシプロピレ ン縮合物、ポリオキシエチレンポリオキシアルキレン短鎖分岐アルキルエーテル、及 び、胆汁酸誘導体からなる群より選ばれる界面活性剤 [以下、該界面活性剤を界面 活性剤 (A1)と略記する。 ]である請求項 3記載の方法。
[5] 工程 (0の反応力 ポリア-オン及び 2価の金属イオンの存在下、又は、抗アポ B抗体 及び抗アポ E抗体力 なる群より選ばれる抗体の存在下で行われる請求項 1又は 2 記載の方法。
[6] 界面活性剤 A力 ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸エステル塩、ポリオキシ エチレン多環フエ-ルエーテル硫酸エステル塩、ポリオキシエチレンポリオキシアル キレン多環フエニルエーテル、エチレンジァミン ポリオキシエチレンポリオキシプロ ピレン縮合物、ポリオキシエチレンアルキルフエ-ルエーテル、ポリオキシプロピレン の分子量が 2, 750未満であるポリオキシエチレンポリオキシプロピレン縮合物、ポリ ォキシエチレンポリオキシアルキレン短鎖分岐アルキルエーテル、ポリオキシェチレ ンポリオキシアルキレンアルキルエーテル、及び、胆汁酸誘導体からなる群より選ば れる界面活性剤 [以下、該界面活性剤を界面活性剤 (A2)と略記する。 ]である請求 項 5記載の方法。
[7] 工程 (0が、コレステロールエステル加水分解酵素の共存下で行われる請求項 1〜6 のいずれかに記載の方法。
[8] 工程 GOが、リン脂質加水分解酵素の共存下で行われる請求項 1〜7のいずれかに記 載の方法。
[9] 過酸化水素の消去が、パーォキシダーゼと酸ィ匕カップリング発色反応に使用される 2 つの酸化カップリング型色原体の一方との組合せの存在下、又は、カタラーゼの存 在下に行われる請求項 1〜8のいずれかに記載の方法。
[10] コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸ィ匕酵素、過酸化水素除去 試薬、過酸化水素測定試薬、界面活性剤 A、及び、界面活性剤 Bを含有する検体中 の RLP— C測定用試薬。
[11] コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素、 界面活性剤 A、及び、界面活性剤 Bを含有する検体中の RLP— C測定用試薬。
[12] コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素、 還元型補酵素酸化酵素、過酸化水素除去試薬、過酸化水素測定試薬、界面活性 剤 A、及び、界面活性剤 Bを含有する検体中の RLP— C測定用試薬。
[13] 過酸ィ匕水素除去試薬が、パーォキシダーゼと酸ィ匕カップリング型発色反応に使用さ れる 2つの酸化カップリング型色原体の一方とを含有する試薬、又は、カタラーゼを 含有する試薬である請求項 10又は 12記載の試薬。
[14] さらに、ポリア-オンを含有する請求項 10〜 13のいずれかに記載の試薬。
[15] 界面活性剤 Aが、界面活性剤 (A1)である請求項 14記載の試薬。
[16] さら〖こ、ポリア-オン及び 2価の金属イオンを含有する試薬、又は、抗アポ B抗体及び 抗アポ E抗体力もなる群より選ばれる抗体を含有する試薬を含有する請求項 10〜13 の！、ずれかに記載の試薬。
[17] 界面活性剤 Aが、界面活性剤 (A2)である請求項 16記載の試薬。
[18] さらに、リン脂質加水分解酵素を含有する請求項 10〜17のいずれかに記載の試薬
[19] コレステロール酸ィ匕酵素、過酸化水素除去試薬及び界面活性剤 Aを含有する第一 試薬と、過酸化水素測定試薬及び界面活性剤 Bを含有する第二試薬とを含有し、コ レステロールエステル加水分解酵素を第一試薬、第二試薬の 、ずれか又は両方に 含有させることを特徴とする、検体中の RLP— C測定用キット。
[20] コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素、及び、界面活性剤 Aを含有する第一試 薬と、界面活性剤 Bを含有する第二試薬とを含有し、コレステロールエステル加水分 解酵素を第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有させることを特徴とする、 検体中の RLP— C測定用キット。
[21] コレステロール脱水素酵素、酸化型補酵素、還元型補酵素酸化酵素、過酸化水素 除去試薬、及び、界面活性剤 Aを含有する第一試薬と、過酸化水素測定試薬、及び
、界面活性剤 Bを含有する第二試薬とを含有し、コレステロールエステル加水分解酵 素を第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有させることを特徴とする、検体 中の RLP— C測定用キット。
[22] 過酸ィ匕水素除去試薬が、パーォキシダーゼと酸ィ匕カップリング発色反応に使用され る 2つの酸化カップリング型色原体の一方とを含有する試薬、又は、カタラーゼを含 有する試薬である請求項 19又は 21記載のキット。
[23] 第一試薬が、さらにポリア-オンを含有する請求項 19〜22のいずれかに記載のキッ
[24] 界面活性剤 Aが、界面活性剤 (A1)である請求項 23記載のキット。
[25] 第一試薬が、さらにポリア-オン及び 2価の金属イオン、或いは、抗アポ B抗体及び 抗アポ E抗体からなる群より選ばれる抗体を含有する請求項 19〜22のいずれかに 記載のキット。
[26] 界面活性剤 Aが、界面活性剤 (A2)である請求項 25記載のキット。
[27] 第二試薬が、さらにリン脂質加水分解酵素を含有する請求項 19〜26のいずれかに 記載のキット。
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