WO2006035969A1

WO2006035969A1 - キサンタンガムおよびアミノ酸を含有する眼科用組成物

Info

Publication number: WO2006035969A1
Application number: PCT/JP2005/018239
Authority: WO
Inventors: Koji Doi; Hiroshi Aki
Original assignee: Senju Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Senju Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2004-09-28
Filing date: 2005-09-27
Publication date: 2006-04-06
Anticipated expiration: 2007-03-28
Also published as: EP1797888A1; US20080039423A1; JP4948176B2; KR20070059188A; US7939511B2; KR101301839B1; US20120269845A2; JPWO2006035969A1; US8450295B2; CN101031310B; EP1797888A4; US20100203079A1; CN101031310A

Abstract

優れた角膜上皮障害の治療効果及び角膜上皮細胞保護効果を有するキサンタンガム、またはキサンタンガムおよびアミノ酸を含有する眼科用組成物を提供する。

Description

明細書

キサンタンガムおょぴァミノ酸を含有する眼科用組成物

技術分野

本発明は、角膜上皮障害を治療するためのキサンタンガム、またはキサンタンガムおよびアミノ酸を含有する眼科用組成物に関する。

背景技術

涙液は、角膜や結膜からなる眼球表面を覆って角結膜の湿潤性を保持し、乾燥を防いでいる。しかしながら、近年、涙液減少症に伴う.角結膜表面の乾燥、コンタクトレンズ装用時の眼の乾燥、あるいは O A機器の操作中に起きる眼の乾燥等により、疲労感、異物感を始めとした種々の症状、すなわち、ドライアィ症状を訴える人が増えている。ドライアイは、しばしば角膜上皮細胞の障害による角膜上皮障害や角膜上皮糜爛等を伴い、重篤な場合は角膜潰瘍や眼感染症を発症させることもある。これらの乾燥に伴うさまざまな症状を緩和するために、塩化ナトリゥムなどの塩類を主剤とした人工涙液、ヒドロキシェチルセルロース、コンドロイチン硫酸またはヒアルロン酸を含む点眼剤等が使用されているが、未だ満足すべきものがないのが現状である。

涙液は擬塑性を示すと言われている。すなわち、涙液は、瞬きによる力が加わった時は粘度低下、加わらない時は粘度上昇を示す。したがって、涙液は、瞬き時には粘度が低くさらさらして瞬きをし易い状態であるが、瞬きの前後には粘度が高く眼表面を覆って保護するという特有の性質を有している。このような擬塑性を示す高分子化合物としてキサンタンガムが知られている。

キサンタンガムを含有する眼科用組成物としては、次のような報告がある。例えば、ョゥ化工コチォパートとキサンタンガムとを含有する眼科用組成物が開示され、キサンタンガムがヨウ化工コチォパートの治療効果を高めることが報告されている（米国特許第 4 1 3 6 1 7 7号明細書）。またキサンタンガムと炭酸脱水酵素阻害剤とを含有する眼科用組成物が開示され、キサンタンガムは炭酸脱水酵素阻害剤の眼バイオアベィラビリティを改善させる目的で使用されている（特表 200 1— 508035号公報、特表 2002— 5010 1 7号公報、特表 2002— 50646 1号公報）。さらに、薬物の眼バイオアベイラビリティを改善させる目的でキサンタンガムが使用され、炭酸脱水酵素阻害剤、プロスタグランジン誘導体およびキサンタンガムを含有する眼科用組成物が開示されている（特表 2002— 50 1 5 3 3号公報、特表 2002— 52 1 3 32号公報、特表 2002 -521 333号公報）。ドライアイ処置のための第四級窒素含有ェトキシ化グリコシドとキサンタンガムとを含有する眼科用組成物が開示されている（特表 2001- 51 6 7 1 3号公報）。また、キサンタンガムを含有する、眼に接触するとゲル化する眼科用組成物が開示されている（特表 2002 _ 5 1 0654号公報）。

し力、しながら、キサンタンガムとアミノ酸とを含有する眼科用組成物については報告されていない。また、キサンタンガムが角膜上皮細胞保護作用を有すること、またはキサンタンガムとアミノ酸とを組み合わせることにより角膜上皮細胞保護作用が改善されることは知られていない。

発明の開示

本発明の課題は、使用感の良い、優れた角膜上皮障害の治療効果を有する眼科用組成物を提供することである。具体的には優れた角膜上皮細胞保護効果を有する眼科用組成物を提供することである。

本発明者らは、前記目的を達成すべく鋭意検討を行った結果、角膜上皮細胞の培養試験系において、キサンタンガムが角膜上皮細胞保護作用を有することを見出し、またキサンタンガムとアミノ酸とを組み合わせることにより細胞保護作用が改善されることを見出し、この知見に基づいてさらに研究を進めて本発明を完成した。

すなわち本発明は、

(1) キサンタンガムを含有する眼科用組成物。

(2) さらにァミノ酸を含有する 1に記載の眼科用組成物。

(3) アミノ酸がァスパラギン酸、アミノエチルスルホン酸、コンドロイチン硫酸およびそれらの薬理学的に許容される塩から選択される少なくとも 1つである 2に記載の眼科用組成物。

(4) 眼科用組成物中のキサンタンガムの濃度が 0. 05〜0. 4w/v%である 1〜 3のいずれかに記載の眼科用組成物。

(5) 眼科用組成物中のアミノ酸の濃度が 0. 05〜2 w/v%である 2〜4 のいずれかに記載の眼科用組成物。

( 6)角膜上皮障害を治療するための 1〜 5のいずれかに記載の眼科用組成物。

(7) 角膜上皮障害が角膜上皮細胞の障害である 6に記載の眼科用組成物。

( 8)角膜上皮細胞を保護するための 1〜 5のいずれかに記載の眼科用組成物。 (9) 点眼剤である 1〜 8のいずれかに記載の眼科用組成物。

(10) 角膜上皮障害を治療する医薬の製造のためのキサンタンガムの使用。

(1 1) 角膜上皮細胞を保護する医薬の製造のためのキサンタンガムの使用。

(1 2) 角膜上皮障害を治療する医薬の製造のためのキサンタンガムおよびァミノ酸の使用。

(1 3) 角膜上皮細胞を保護する医薬の製造のためのキサンタンガムおよびァミノ酸の使用。

(14) アミノ酸がァスパラギン酸、アミノエチルスルホン酸、コンドロイチン硫酸およびそれらの薬理学的に許容される塩から選択される少なくとも 1つである 12または 1 3に記載の使用。

( 1 5) キサンタンガムの濃度が 0. 05〜0. 4 wZv%である 1 0〜14 のいずれかに記載の使用。

(1 6) アミノ酸の濃度が 0. 0 5〜2 wZv%である 1 2〜1 5のいずれかに記載の使用。

(1 7) 角膜上皮障害を治療する方法であって、該治療を必要とする投与対象にキサンタンガムの有効量を投与する工程を含む、方法。

(18) 角膜上皮細胞を保護する方法であって、該保護を必要とする投与対象にキサンタンガムの有効量を投与する工程を含む、方法。 (1 9) 角膜上皮障害を治療する方法であって、該治療を必要とする投与対象にキサンタンガムおよびアミノ酸の有効量を投与する工程を含む、方法。

(20) 角膜上皮細胞を保護する方法であって、該保護を必要とする投与対象にキサンタンガムおよびアミノ酸の有効量を投与する工程を含む、方法。 (21) アミノ酸がァスパラギン酸、アミノエチルスルホン酸、コンドロイチン硫酸およびそれらの薬理学的に許容される塩から選択される少なくとも 1つである 1 9または 20に記載の方法。

(22) キサンタンガムの濃度が 0. 05〜0. 4 w/v%である 1 7~2 1 のいずれかに記載の方法。

(23) アミノ酸の濃度が 0. 05〜2 wZv%である 1 9〜22のいずれかに記載の方法。

本発明によれば、優れた角膜上皮障害の治療効果を有するキサンタンガム、またはキサンタンガムおよびアミノ酸を含有する眼科用組成物を提供することができる。さらに、点眼剤の態様をとつた本発明の眼科用組成物は、擬塑性を示すキサンタンガムを含有することから優れた使用感を有するものである。発明を実施するための最良の形態

以下、本発明についてさらに詳細に説明する。

本発明は、キサンタンガムを含有する眼科用組成物を提供する。別の実施形態では、本発明のキサンタンガムを含有する眼科用組成物はさらに、アミノ酸を含有する。以下、これらの眼科用組成物をまとめて、本発明の眼科用組成物ともいう。

本発明の眼科用組成物は、眼の局所組織に投与することができる製剤であればよく、例えば、点眼剤、貼付剤、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤等が挙げられるが、好ましくは、点眼剤である。さらに、本発明の眼科用組成物は、コンタクトレンズ装着液としても用いることができる。

本発明の眼科用組成物に用いられるキサンタンガムの平均分子量は、通常 1 00000〜 50000000、好ましくは 200000〜 20000000、特に好ましくは 1000000〜 10000000である。該キサンタンガムとしては、大日本製薬株式会社より市販されているエコーガム τ、エコーガム

F等のエコーガムシリーズ、三栄源エフ · エフ · アイ株式会社より市販されているサンエース NXG— S等のサンエースシリーズ、三晶株式会社より巿販されているケトロール CG、ケトロール CG— T等のケトロールシリーズ等が用いられるが、好ましくは、エコーガム T、ケトロール CG— Τである。

本発明の眼科用組成物におけるキサンタンガムの含有量は、通常 0. 005 〜1 w/v%、好ましくは 0. 0 1〜0. 6w/v%、さらに好ましくは 0. 02〜0. 5 w/ v%、特に好ましくは 0. 05〜0. 4 ^%である。また、本発明の眼科用組成物に用いられるアミノ酸類としては、グリシン、ァラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フエニノレアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、チロシン、ァスパラギン、グノレタミン、リシン、アルギニン、トリプトファン、ヒスチジン、システィン、メチォェン、ァスパラギン酸、グルタミン酸、アミノエチルスルホン酸、コンドロイチン硫酸またはそれらの薬理学的に許容される塩が挙げられる。塩としては、ナトリウム塩、カリゥム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩が挙げられる。これらは、 1種または 2種以上の組み合わせで用いられる。好ましく用いられるアミノ酸類は、ァスパラギン酸、アミノエチルスルホン酸、コンドロイチン硫酸、グルタミン酸、グリシン、リジンまたはそれらの薬理学的に許容される塩である。特に好ましくは、ァスパラギン酸、コンドロイチン硫酸、アミノエチルスルホン酸またはそれらの薬理学的に許容される塩である。

本発明の眼科用組成物におけるアミノ酸の含有量は、通常 0. 0 1~10w / V %s 好ましくは 0. 05〜 2 w,v %、さらに好ましくは 0. 1〜 1 w/ v%、特に好ましくは 0. 2〜： L w/v%である。

キサンタンガムとアミノ酸との組合せの割合は、重量比率として、通常 5 ：

1〜1 ： 50の範囲であり、 2 ： 1〜1 ： 20の範囲が好ましい。本発明の眼科用 ffi^成物は、緩衝剤、等張化剤、保存剤、溶解補助剤、安定化剤、キレート剤、増粘剤、 p H調整剤等の各種の添加剤を適宜配合することができる。

緩衝剤としては、例えば、ホウ酸またはその塩（ホウ砂等）、クェン酸またはその塩（タエン酸ナトリゥム等）、酒石酸またはその塩（酒石酸ナトリゥム等）、ダルコン酸またはその塩（ダルコン酸ナトリゥム等）、酢酸またはその塩（酢酸ナトリウム等）、リン酸またはその塩（リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリゥム等）、グルタミン酸ゃィプシロンアミノカプロン酸等の各種アミノ酸およびトリス緩衝剤等、またはそれらの組み合わせが挙げられる。

等張化剤としては、例えば、ソルビトール、マンニトール、グリセリン、プロピレンダリコール、塩化ナトリウム、塩化カリウム等が挙げられる。

保存剤としては、例えば、パラォキシ安息香酸エステル類、塩化ベンザルコェゥム、塩化べンゼトニゥム、ベンジルアルコール、ソルビン酸またはその塩、ダルコン酸クロルへキシジン、デヒドロ酢酸ナトリウム、塩化セチルピリジェゥム、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン、ク口ロブタノール等が挙げられる。

溶解補助剤としては、例えば、ポリビュルピロリドン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 6 0、ステアリン酸ポリォキシル 4 0、ポリソルベート 8 0 (商品名： T w e e n 8 0 ) 等が挙げられる。 .

安定化剤としては、例えば、ェデト酸ナトリウム、チォ硫酸ナトリウム、ァスコルビン酸、シクロデキストリン、縮合リン酸またはその塩、亜硫酸塩、クェン酸またはその塩、ジプチルヒドロキシトルエン等が挙げられる。

キレート剤としては、例えば、ェデト酸ナトリウム、クェン酸ナトリウム、縮合リン酸またはその塩（縮合リン酸ナトリゥム等）等が挙げられる。

增粘剤としては、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシェチルセルロース、ヒドロキシプロピノレセノレロース、ヒドロキシプロピノレメチノレセノレロース、力ノレポキシメチノレセノレロースナトリゥム、ポリビニルピロリドン、ポリビュルァノレコール、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸等が挙げられる。

pH調整剤としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリゥム、炭酸水素ナトリゥム、ホウ酸またはその塩（ホウ砂）、塩酸、クェン酸またはその塩（タエン酸ナトリゥム、クェン酸二水素ナトリゥム等）、リン酸またはその塩（リン酸水素ニナトリゥム、リン酸ニ水素力リゥム等）、酢酸またはその塩（酢酸ナトリゥム、酢酸アンモ-ゥム等）、酒石酸またはその塩（酒石酸ナトリウム等）等が挙げられる。

本発明の眼科用組成物の ρΗは、 3〜1 0、好ましくは ρΗ5〜8となるように調整される。

本発明の眼科用組成物は、角膜上皮細胞保護作用を有する。従って、本発明の眼科用組成物は、角膜上皮障害、特に角膜上皮障害に伴う角膜上皮細胞の障害の予防■治療剤として有用である。

とりわけ、本発明の眼科用組成物は、乾燥によって引き起こされる角膜上皮障害（例えば、涙液減少症、眼乾燥症、マイボーム腺機能不全、シーダレン症候群、乾性角結膜炎、眼瞼炎、ステイーブンス一ジョンソン症候群、 VDT (V i s u a l D i s l a y T e rm i n a l ) 作業に関連したドライアィ等のドライアイ症候群、または、ドライアイに伴う角結膜上皮障害、角膜上皮糜爛、角膜潰瘍、眼瞼縁炎、眼類天疱瘡、春季カタル、アレルギー性結膜炎等）の予防■治療剤、特に、乾燥によって引き起こされる角膜上皮障害に伴う角膜上皮細胞の障害の予防 ·治療剤に有用である。

また本発明の眼科用組成物は、紫外線によって引き起こされる角膜上皮障害 (例えば、角膜炎、雪目等）の予防 ·治療剤、特に紫外線によって引き起こされる角膜上皮障害に伴う角膜上皮細胞の障害の予防 ·治療剤に有用である。さらに、本発明の眼科用組成物は、保存剤が接触することによって引き起こされる角膜上皮障害（例えば、点状表層角膜炎、角膜潰瘍等）の予防 ·治療剤、特に、保存剤が接触することによって引き起こされる角膜上皮障害に伴う角膜上皮細胞の障害の予防■治療剤に有用である。

本発明の眼科用組成物はさらに、目の疲れ、目のかわき、目のかすみ、目のかゆみ、結膜充血、コンタクトレンズ着用時の不快感等の予防または改善するための点眼用組成物としても用いることができる。

本発明の眼科用組成物は、ヒト、ヒト以外の動物〔例えば、ヒト以外の哺乳類 (ブタ、ゥシ、ゥマ、ィヌ等の家畜および愛玩動物）等〕における上記疾患または状態を予防 ·治療するために用いることができる。

従って、本発明は、上記疾患または状態を予防■治療する方法を提供し、該方法は、該治療を必要とする投与対象（例えば、ヒトまたはヒト以外の動物）にキサンタンガムの有効量か、またはキサンタンガムおよびアミノ酸の有効量を投与する工程を含む。

本発明はまた、角膜上皮細胞を保護する方法を提供し、該方法は、該保護を必要とする投与対象（例えば、ヒトまたはヒト以外の動物）にキサンタンガムの有効量か、またはキサンタンガムおよびアミノ酸の有効量を投与する工程を含む。

キサンタンガムとアミノ酸とを投与する場合、投与時にキサンタンガムとァミノ酸とを組み合わすことができるものであれば、キサンタンガムとアミノ酸とを同時に製剤化して得られる単一の製剤として投与しても、キサンタンガムとアミノ酸とを別々に製剤化して得られる 2種の製剤を組み合わせて同時に投与してもよい。

キサンタンガムの投与量は、剤形、対象疾患、被検体の年齢、性別、体重、症状などに依存して変化し得るが、例えば、成人（例えば、体重 6 O k g ) の場合、 1日あたり通常 0 . 0 1 μ g〜： L 0 μ gの範囲であり、 0 . 0 2 g〜 5 gの範囲が好ましい。

また、キサンタンガムをアミノ酸と組み合わせて投与する場合、アミノ酸の投与量は、剤形、対象疾患、被検体の年齢、性別、体重、症状などに依存して変化し得るが、例えば、成人（例えば、体重 60 k g) の場合、 1日あたり通常 0. 01 μ g〜： L 0 μ gの範囲であり、 0. 02 μ g〜5 μ gの範囲が好ましい。

キサンタンガムとアミノ酸との組合せの割合は、両者が単一製剤として投与される場合、別個の製剤として投与される場合のいずれにおいても、重量比率として、通常 5 ： 1〜1 ： 50の範囲であり、 2 ： 1〜1 ： 20の範囲が好ましい。

各成分の 1日あたりの用量は、一度にもしくは数回に分けて投与することができる。例えば、点眼剤として使用する場合には、本発明の眼科用組成物を、 1日あたり数回、好ましくは 1〜6回、 1回数滴、好ましくは 1〜 3滴投与することができる。また投与期間は特に限定されない。

本発明はさらに、上記方法を実施するためのキット（商業パッケージ）を提供する。該キットは、本発明の眼科用組成物を含み、さらに、当該組成物を上記疾患または状態の予防■治療に使用することができる、または当該組成物を角膜上皮細胞の保護に使用することができることなどを記載した記載物（例えば、該キットを用いて上記方法を実施するための指示書）を含む。

以下に、実施例および試験例を挙げて、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。実施例

[試験例 1 ] キサンタンガムとァスパラギン酸との組み合わせの乾燥による障害に対する角膜上皮細胞保護作用

1. 試験方法

本試験は、文献（B r . J. Op h t h a l mo l . 200 1, 8 5, 6 1 0) に準じて行った。凍結正常ゥサギ角膜上皮細胞懸濁液（NRCE 2、クラボウ社製）を培養液（RCGM2、クラボウ社製）に懸濁した。この懸濁液を遠心分離し（5分間、 400 X g)、上清を除去した。この細胞に 2 m Lの培養液を加えて懸濁し、その内 20 μ Lをトリパンブルー 20 μ Lで希釈し、生細胞数を血球計算盤でカウントした。その後、 96ゥエルプレートの各ゥエルに 4 X 1 0³個/ゥエル/ μ Lになるように細胞を播種し、 37°C、 5%C0₂、加湿下でコンフルェントまで培養を行った（n= 5)。 96ゥエルプレートの培養上清を除去した後、種々の濃度（w/v%) の Lーァスパラギン酸カリウムおよび Zまたはキサンタンガム（エコーガム T ：登録商標）を含むリン酸緩衝液（ p H 7、試験溶液）またはリン酸緩衝液（ p H 7、対照溶液）を 100 μ L添加し、 3 7 °C、 5 % C O ₂、加湿下で 1 5分間培養した。培養後、添加した試験溶液または対照溶液を除去し、室温で 30分間乾燥させた。各ゥエルに C e l l C o u n t i n g K i t - 8溶液（同仁化学研究所製） 1 00 /ζ Lを添力 tlし、 2時間後に 96ウェルマィクロプレートリーダー（L a b s y s t ern s Mu 1 t i s k a n, 登録商標）を用い、吸光度（波長 450 nm) を測定した。角膜上皮細胞の生存率（％) は下記式を用い、試験溶液または対照溶液の吸光度の平均値および無処置群の吸光度の平均値から求めた。

生存率 (%) =

試験溶液または対照溶液添加群の吸光度の平均値 X 1 00

無処置群の吸光度の平均値

2. 試験結果

表 1に示すように、 0. 1 %キサンタンガムを添加した 0. 2%、 0. 5 % または 1 %L—ァスパラギン酸カリゥム溶液で処置した時の角膜上皮細胞の生存率は、キサンタンガム未添加の Lーァスパラギン酸カリゥム溶液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。また、 0. 1%キサンタンガムを添加したリン酸緩衝液（キサンタンガム単独溶液）で処置した時の生存率も、キサンタンガムを含まない単なるリン酸緩衝液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。しかしながら、キサンタンガムを添加することによる生存率改善効果（キサンタンガムを添加した時と添加しない時との生存率の差）は、 Lーァスパラギン酸カリゥム溶液の方がリン酸緩衝液より高かった。表 1 . Lーァスパラギン酸力リゥム溶液にキサンタンガムを添加することよる生存率改善効果

表 2に示すように、 1 % L—ァスパラギン酸カリウムを添加した 0 . 0 5 % または 0 . 1 %キサンタンガム溶液で処置した時の角膜上皮細胞の生存率は、 Lーァスパラギン酸カリゥム未添加のキサンタンガム溶液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。一方、 1 °/₀ L—ァスパラギン酸カリウムを添加したリン酸緩衝液（L—ァスパラギン酸カリウム単独溶液）で処置した時の生存率は、キサンタンガム未添加の単なるリン酸緩衝液で処置した時の生存率とほとんど変わらなかった。すなわち、 Lーァスパラギン酸カリウムを添加することによる生存率改善効果（Lーァスパラギン酸カリウムを添加した時と添加しない時との生存率の差）は、キサンタンガム溶液の方がリン酸緩衝液より高かった。

これらの結果は、キサンタンガムと L—ァスパラギン酸力リゥムとを組み合わせることにより、角膜上皮細胞保護作用が改善されることを示す。表 2 . キサンタンガム溶液に Lーァスパラギン酸カリゥムを添加することによる生存率改善効果生存率（％)

1 %L_ァスパ

Lーァスパラギ生存率改善効果ラギン酸力リゥ

ン酸カリウム (B-A, %) ム

未添加（A)

添加（B)

0. 05 %キサンタン

78. 0 94. 8 1 6. 8 ガム溶液

0. 1 %キサンタンガ

79. 7 8 9. 8 10. 1 ム溶液

リン酸緩衝液 71. 4 72. 9 1. 5

[試験例 2」キサンタンガムとアミノエチルスルホン酸との組み合わせの乾燥による障害に対する角膜上皮細胞保護作用

1. 試験方法

L—ァスパラギン酸力リゥムの代わりにァミノェチルスルホン酸を用いて試験例 1と同様に操作した。

2. 試験結果

表 3に示すように、 0. 5%アミノエチルスルホン酸を添加した 0. 1%キサンタンガム溶液で処置した時の角膜上皮細胞の生存率は、アミノエチルスルホン酸未添加のキサンタンガム溶液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。また、 0. 5 %ァミノェチルスルホン酸を添加したリン酸緩衝液（ァミノェチルスルホン酸単独溶液）で処置した時の生存率も、アミノエチルスルホン酸未添加の単なるリン酸緩衝液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。しかしながら、アミノエチルスルホン酸を添加することによる生存率改善効果（アミノエチルスルホン酸を添加した時と添加しない時との生存率の差）は、キサンタンガム溶液の方がリン酸緩衝液より高かった。この結果は、キサンタンガムとァミノェチルスルホン酸とを組み合わせることにより、角膜上皮細胞保護作用が改善されることを示す。表 3 . キサンタンガム溶液にアミノエチルスルホン酸を添加することによる生存率改善効果

[試験例 3 ] キサンタンガムとコンドロイチン硫酸ナトリゥムとの組み合わせの乾燥による障害に対する角膜上皮細胞保護作用

1 . 試験方法

L—ァスパラギン酸力リゥムの代わりにコンドロイチン硫酸ナトリウムを用いて試験例 1と同様に操作した。

2 . 試験結果

表 4に示すように、 0 . 5 %コンドロイチン硫酸ナトリウムを添加した 0 . 1 %キサンタンガム溶液で処置した時の角膜上皮細胞の生存率は、コンドロイチン硫酸ナトリゥム未添加のキサンタンガム溶液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。また、 0 . 5 %コンドロイチン硫酸ナトリウムを添加したリン酸緩衝液（コンドロイチン硫酸ナトリウム単独溶液）で処置した時の生存率も、コンドロイチン硫酸ナトリゥム未添加の単なるリン酸緩衝液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。しかしながら、コンドロイチン硫酸ナトリゥムを添加することによる生存率改善効果（コンドロイチン硫酸ナトリウムを添加した時と添加しない時との生存率の差）は、キサンタンガム溶液の方がリン酸緩衝液より高かった。この結果は、キサンタンガムとコンドロィチン硫酸ナトリゥムとを組み合わせることにより、角膜上皮細胞保護作用が改善されることを示す。表 4. キサンタンガム溶液にコンドロイチン硫酸ナト Vゥムを添加することによる生存率改善効果

[試験例 4 ] キサンタンガムとァスパラギン酸との組み合わせの乾燥による障害に対する角膜上皮細胞保護作用

1. 試験方法

3 7°C、 5 %C0₂における培養時間を 1 5分間から 5分間に変更および乾燥条件を室温 30分間から 37°C60分間に変更することを除き、試験例 1と同様に操作した。

2. 試験結果

表 5に示すように、 0. 4%キサンタンガムを添加した 0. 2%L_ァスパラギン酸カリゥム溶液で処置した時の角膜上皮細胞の生存率は、キサンタンガム未添加の Lーァスパラギン酸力リゥム溶液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。また、 0. 4%キサンタンガムを添加したリン酸緩衝液（キサンタンガム単独溶液）で処置した時の生存率も、キサンタンガムを含まない単なるリン酸緩衝液で処置した時の生存率と比較すると高い値を示した。しかしながら、キサンタンガムを添加することによる生存率改善効果 (キサンタンガムを添加した時と添加しない時との生存率の差）は、 Lーァスパラギン酸力リゥム溶液の方がリン酸緩衝液より高かった。表 5. L—ァスパラギン酸力リゥム溶液にキサンタンガムを添加することによる生存率改善効果

[試験例 5 ] 保存剤による障害に対するキサンタンガムの角膜上皮細胞保護作用

1. 試験方法

凍結正常ゥサギ角膜上皮細胞懸濁液（NRCE 2、クラボウ社製）を培養液 (RCGM2、クラボウ社製）に懸濁した。この懸濁液を遠心分離し（5分間、 400 X g)、上清を除去した。この細胞に 2 m Lの培養液を加えて懸濁し、その内をトリパンブルー 20 μ Lで希釈し、生細胞数を血球計算盤で力ゥントした。その後、 96ゥエルプレートの各ゥエルに 4 X 1 0³個 Ζゥェル / Lになるように細胞を播種し、 3 7°C、 5%CO₂、加湿下でコンフルェントまで培養を行った（n = 6)。 96ゥェルプレートの培養上清を除去した後、塩化ベンザルコニゥムを含むリン酸緩衝液（pH7)、キサンタンガム（エコーガム T :登録商標）を含むリン酸緩衝液（pH7) またはリン酸緩衝液（p H 7) を 100 /x L添加し、 3 7 °C、 5 % C O ₂、加湿下で 30分間培養した。培養後、添加したそれぞれの溶液を除去し、培養液 100 μ Lで 2回洗浄した。各ゥエルに C e l l C o u n t i n g K i t— 8溶液（同仁化学研究所製） 1 00 / Lを添加し、 2時間後に 96ウェルマイク口プレートリーダー（L a b s y s t ems Mu 1 t i s k a n, 登録商標）を用い、吸光度（波長 4 50 nm) を測定した。角膜上皮細胞の生存率（％) は下記式を用い、各溶液の吸光度の平均値および無処置群の吸光度の平均値から求めた。生存率（％) =

各試験溶液添加群の吸光度の平均値 X 100

無処置群の吸光度の平均値

2. 試験結果

表 6に示すように、保存剤である塩化ベンザルコニゥムを含む水溶液で培養した時の生存率は、リン酸緩衝液で培養した時よりも低かった。しかしながら、さらに 0. 1%または 0. 4%のキサンタンガムを加えた水溶液で培養することによって、生存率は改善した。この結果は、保存剤による障害に対して、キサンタンガムが角膜上皮細胞の保護効果を有することを示している。

表 6. 保存剤による障害に対するキサンタンガムの角膜上皮細胞保護作用

[試験例 6 ] 紫外線による障害に対するキサンタンガムの角膜上皮細胞保護作用

1. 試験方法

凍結正常ゥサギ角膜上皮細胞懸濁液（NRCE 2、クラボウ社製）を培養液 (RCGM 2、クラボウ社製）に懸濁した。この懸濁液を遠心分離し（5分間、 400 X g)、上清を除去した。この細胞に 2 m Lの培養液を加えて懸濁し、その内をトリパンブルー 20 / Lで希釈し、生細胞数を血球計算盤で力ゥントした。その後、 9 6ゥエルプレートの各ゥエルに 4 X 1 0³個/ゥエル / Lになるように細胞を播種し、 37°C、 5%C0₂、加湿下でコンフルェントまで培養を行った（n = 6)。 96ゥエルプレートの培養上清を除去した後、キサンタンガム（エコーガム T ：登録商標）を含むリン酸緩衝液（pH7) またはリン酸緩衝液（ p H 7 ) を 100 L添加した後、紫外線（約 20 μ W/ cm²) を 90分間照射した。照射後、添加したそれぞれの溶液を除去し、培養液 100 で 2回洗浄した。各ゥエルに C e 1 1 C o u n t i n g

1 t _8溶液（同仁化学研究所製） 100 / Lを添加し、 2時間後に 96ゥュノレマイクロプレートリーター ( L a b s y s t ern s M u 1 t i s k a n , 登録商標）を用い、吸光度（波長 450 nm) を測定した。角膜上皮細胞の生存率（％) は下記式を用い、各試験溶液の吸光度の平均値および無処置群の吸光度の平均値から求めた。

生存率（％) =

各試験溶液添加群の吸光度の平均値 X 1 00

無処置群の吸光度の平均値

2. g ¾;f|ig果

表 7に示すように、角膜上皮細胞の生存率は、紫外線を照射することによつて低下した。しかしながら、 0. 4%のキサンタンガムを加えた水溶液おいては、紫外線を照射しても生存率は高い値を示した。この結果は、紫外線による障害に対して、キサンタンガムが角膜上皮細胞の保護効果を有することを示している。

表 7. 紫外線による障害に対するキサンタンガムの角膜上皮細胞保護作用

角膜上皮細胞の生存率（％)

紫外線照射あり紫外線照射なし

0. 4%キサンタンガム水溶 85. 8 一

液

リン酸緩衝液 39. 4 78. 1 以下に、本発明によるキサンタンガムおょぴアミノ酸を含有する点眼剤の製剤実施例を示す。

[実施例 1] キサンタンガムおよびコンドロイチン硫酸ナトリゥム含有人工涙液

常法により、次の処方の人工涙液を調製した。

コンドロイチン硫酸ナトリウム 0. 5 g

塩化ナトリウム 0. 5 g

ホウ酸 0. 3 g

、商

ホウ砂

タエン酸ナトリウム 0. 2 g

キサンタンガム 0. 2 g

ソノレビン酸 0. 2 g

精製水

全量 1 00m l (p H 7. 0)

[実施例 2] キサンタンガムおよび Lーァスパラギン酸カリゥム含有人工涙液常法により、次の処方の人工涙液を調製した。

Lーァスパラギン酸力リウム 1 g

塩化ナトリゥム 0. 5 g

ホウ酸 0. 2 g

ホウ砂

キサンタンガム 0. 2 g

塩化ベンザルコニゥム液（1 0wZv%) 0. 05m l

(塩化ベンザルコェゥムとして 0. 005 g)

精製水適量

全量 100m l (p H 7. 2)

[実施例 3] キサンタンガムおよびアミノエチルスルホン酸含有人工涙液常法により、次の処方の人工涙液を調製した。アミノエチルスノレホン酸丄 g

塩化ナトリウム 0. 5 g

ホウ酸 0. 4 g

ホウ砂

キサンタンガム 0

塩化べンザルコニゥム液 ( 10 w/ V %) 0. 05m l

(塩化ベンザルコニゥムとして 0. 00 5 g

精製水

100m l (p H 7. 2)

[実施例 4] キサンタンガムおよびコンドロイチン硫酸ナトリゥム含有コンタクトレンズ用点眼剤

常法により、次の処方のコンタクトレンズ用点眼剤を調製した。

コンドロイチン硫酸ナトリム 0. 5 g

塩化ナトリウム 0. 55 g

塩化力リウム 0. 1 5 g

ホウ酸 0. 5 g

ホウ砂適量

ェデト酸ナトリウム 0. 01 g

キサンタンガム 0. 1 g

ポリソノレべ一ト 80 0 1 5 m L ダルコン酸クロルへキシジン液（ 20 w/v %) 0 025 mL

(ダルコン酸クロルへキシジンとして 0. 005 g)

精製水

全量 100m l (p H 7. 2)

[実施例 5 ] キサンタンガムおょぴアミノエチルスルホン酸含有コンタクトレンズ装着液

常法により、次の処方のコンタクトレンズ装着液を調製した。了ミノエチノレスルホン酸 1 g

ポリビエルアルコール（部分けん化物） 2 g

塩化ナトリウム 0. 6 g

ヒドロキシプロピルメチルセノレロース 2 906 0. 5 g

ェデト酸ナトリウム 0. 02 g

酢酸ナトリウム 0. 1 g

水酸化ナトリウム

0. 1 g

塩化ベンザルコユウム液（l O w/v⁰/)) 0. 05 mL

(塩化ベンザルコユウムとして 0. 00 5 g)

精製水

100m l (p H 7. 2)

[実施例 6] キサンタンガムおよびコンドロイチン硫酸ナトリゥム含有人工涙液

常法により、次の処方の人工涙液を調製した。

コンドロイチン硫酸ナトリウム 0 5 g

塩化ナトリウム 0. 5 g

ホウ酸 0. 3 g

ホウ砂

クェン酸ナトリウム 0. 2 g

0. 3 g

ン酸 0. 2 g

精製水

100m l (p H 7. 0)

[実施例 7] キサンタンガムおよび Lーァスパラギン酸力リゥム含有人工涙液常法により、次の処方の人工涙液を調製した。

L—ァスパラギン酸カリウム l g 塩化ナトリウム 0. 5 g ホウ酸 0. 2 g

ホウ砂

キサンタンガム 0. 4 g

塩化ベンザルコユウム液（I O Z 0. 05m l

(塩化ベンザルコニゥムとして 0. 005 g)

精製水

00m l (p H 7. 2)

[実施例 8] キサンタンガムおよびアミノエチルスルホン酸含有人工涙液常法により、次の処方の人工涙液を調製した。

アミノエチルスルホン酸 l g

塩化ナトリウム 0. 5 g

ホウ酸 0. 4 g

ホウ砂

0. 5 g

塩化ベンザルコユウム液（10wZv%) 0. 05m l

(塩化ベンザルコニゥムとして 0. 005 g)

精製水

100m l (p H 7. 2)

[実施例 9] キサンタンガムおよびコンドロイチン硫酸ナトリゥム含有コンタクトレンズ用点眼剤

コンドロイチン硫酸ナトリウム 0. 5 g

塩化ナトリウム 0. 55 g

塩化力リウム 0. 1 5 g

ホウ酸 0. 5 g

ホウ砂ェデト酸ナトリウム 0 01 g

キサンタンガム 0 3 g

ポリソ /レベート 80 0 1 5 m L ダルコン酸ク口ルへキシジン液（ 20 w/ V %) 0 025 mL

(グノレコン酸クロノレへキシジンとして 0. 005 g)

精製水

1 00m l (p H 7. 2)

[実施例 1 0] キサンタンガムおよび Lーァスパラギン酸力リゥム含有コンタクトレンズ装着液

常法により、次の処方のコンタクトレンズ装着液を調製した。

Lーァスパラギン酸カリウム l g

ポリビュルアルコール（部分けん化物） 2 g

塩化ナトリウム 0. 4 g

ヒドロキシプロピルメチルセルロース 2906 0. 5 g

ェデト酸ナトリゥム 0. 02 g

酢酸ナトリウム 0. 1 g

水酸化ナトリウム

キサンタンガム 0. 4 g

塩化ベンザルコ-ゥム液（10w/v%) 0. 05 mL

(塩化ベンザルコ -ゥムとして 0. 005 g)

精製水

1 00m l (p H 7. 2)

[実施例 1 1] キサンタンガムおよびアミノエチルスルホン酸含有コンタクトレンズ装着液

アミノエチルスルホン酸 l g

ポリビエルアルコール（部分けん化物） 2 g 塩化ナトリウム 0 . 6 g ヒドロキシプロピルメチノレセルロ -ス 2 9 0 6 0 . 5 g

ェデト酸ナトリウム 0 . 0 2 g

酢酸ナトリウム 0 . 1 g

水酸化ナトリウム適量

キサンタンガム 0 . 5 g

塩化ベンザルコユウム液（1 0 wz %) 0 . 0 5 m

(塩化ベンザルコユウムとして 0 . 0 0 5 g )

、商 .

精製水

全量 1 0 0 m 1 ( P 産業上の利用可能性

本発明によれば、優れた角膜上皮障害の治療効果および角膜上皮細胞の保護効果を有するキサンタンガム、またはキサンタンガムおよびアミノ酸を含有する眼科用組成物を提供することができる。本発明の眼科用組成物は、涙液減少症、眼乾燥症、マイボーム腺機能不全、シユーダレン症候群、乾性角結膜炎、眼瞼炎、ステイーブンス一ジョンソン症候群、 V D T作業に関連したドライアィ等のドライアイ症候群またはドライアイに伴う角結膜上皮障害等の予防 ·治療剤としても有用である。また本発明の眼科用組成物は、紫外線によって引き起こされる角膜上皮障害または保存剤が接触することによって引き起こされる角膜上皮障害の予防■治療剤に有用である。

さらに、点眼剤の態様をとつた本発明の眼科用組成物は、擬塑性を示すキサンタンガムを含有することから優れた使用感を有するものである。以上、本発明の具体的な態様のいくつかを詳細に説明したが、当業者であれば示された特定の態様には、本発明の教示と利点から実質的に逸脱しない範囲で様々な修正と変更をなすことは可能である。従って、そのような修正おょぴ変更も、すべて後記の請求の範囲で請求される本発明の精神と範囲内に含まれるものである。

本出願は、日本で出願された特願 2004-28 1 588を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims

請求の範囲

1. キサンタンガムを含有する眼科用組成物。

2. さらにアミノ酸を含有する請求項 1に記載の眼科用組成物。

3. アミノ酸がァスパラギン酸、アミノエチルスルホン酸、コンドロイチン硫酸およびそれらの薬理学的に許容される塩から選択される少なくとも 1つである請求項 2に記載の眼科用組成物。

4. 眼科用組成物中のキサンタンガムの濃度が 0. 05〜0. 4wZv°/oである請求項 1〜 3のいずれかに記載の眼科用組成物。

5. 眼科用組成物中のアミノ酸の濃度が 0. 0 5〜2 w_/v%である請求項 2〜4のいずれかに記載の眼科用組成物。

6. 角膜上皮障害を治療するための請求項 1〜 5のいずれかに記載の眼科用組成物。

7. 角膜上皮障害が角膜上皮細胞の障害である請求項 6に記載の眼科用組成物。

8. 角膜上皮細胞を保護するための請求項 1〜 5のいずれかに記載の眼科用組成物。

9. 点眼剤である請求項 1〜 8のいずれかに記載の眼科用組成物。

1 0. 角膜上皮障害を治療する医薬の製造のためのキサンタンガムの使用。

1 1. 角膜上皮細胞を保護する医薬の製造のためのキサンタンガムの使用。

1 2. 角膜上皮障害を治療する医薬の製造のためのキサンタンガムおよびァミノ酸の使用。

1 3. 角膜上皮細胞を保護する医薬の製造のためのキサンタンガムおょぴァミノ酸の使用。

1 4. アミノ酸がァスパラギン酸、アミノエチルスルホン酸、コンドロイチン硫酸およびそれらの薬理学的に許容される塩から選択される少なくとも 1つである請求項 1 2または 1 3に記載の使用。

1 5. キサンタンガムの濃度が 0. 0 5〜0. 4 w/v。/。である請求項 1 0 〜14のいずれかに記載の使用。

16. アミノ酸の濃度が 0. 05〜2 wZv%である請求項 1 2〜1 5のいずれかに記載の使用。

1 7. 角膜上皮障害を治療する方法であって、該治療を必要とする投与対象にキサンタンガムの有効量を投与する工程を含む、方法。

1 8. 角膜上皮細胞を保護する方法であって、該保護を必要とする投与対象

1 9. 角膜上皮障害を治療する方法であって、該治療を必要とする投与対象にキサンタンガムおよびアミノ酸の有効量を投与する工程を含む、方法。

20. 角膜上皮細胞を保護する方法であって、該保護を必要とする投与対象にキサンタンガムおょぴアミノ酸の有効量を投与する工程を含む、方法。

2 1. ァミノ酸がァスパラギン酸、ァミノエチルスルホン酸、コンドロイチン硫酸およびそれらの薬理学的に許容される塩から選択される少なくとも 1つである請求項 1 9または 20に記載の方法。

22. キサンタンガムの濃度が 0. 05〜0. 4wZv%である請求項 1 7 〜 21のいずれかに記載の方法。

23. アミノ酸の濃度が 0. 0 5〜2 wZv%である請求項 1 9〜22のいずれかに記載の方法。