WO2006030750A1

WO2006030750A1 - 乳癌を抑制するカワリハラタケ抽出物

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Publication number: WO2006030750A1
Application number: PCT/JP2005/016784
Authority: WO
Inventors: Insu Lee
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Filing date: 2005-09-12
Publication date: 2006-03-23
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Abstract

　乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する食品素材を提供する。乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分を含むカワリハラタケ抽出物。前記成分は、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理する工程によって得られる、分子量１００～２０００のクロマトグラフィー主溶出画分であり得る。あるいは、前記成分は、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、および該沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液であり得る。

Description

乳癌を抑制するカヮリハラタケ抽出物

技術分野

[0001] 本発明は、乳癌を抑制するカヮリハラタケの抽出物に関する。より詳細には、特に、乳癌の発生または末期に乳癌の増殖をも抑制する成分を含むカヮリハラタケの抽出物に関する。さらにより詳細には、本発明は、メチルー N 二トロソゥレアで誘発される乳癌の発生またはメチルー N -トロソゥレアで誘発されて発生した乳癌の増殖を抑制するカヮリハラタケ抽出物に関する。

背景技術

[0002] 一般に、カヮリハラタケと呼ばれるものは、学名を「力ヮリハラタケ ·ブラゼィ 'ムリル

Agaricus blazei MurillJ和名を「力ヮリハラタケ」という担子菌類ハラタケ科に属するきのこである。カヮリハラタケ (以後、本明細書では、一般に、カヮリハラタケ、または ABM、またはァガリタスと称する）は、ブラジルのサンパゥロ州に位置する Piedade地方で伝統的に医薬として用いられている。カヮリハラタケは、種々の免疫賦活活性、発癌予防効果、腫瘍増殖抑制効果をもっといわれ、現在、健康食品として幅広く内服されている。

[0003] カヮリハラタケに含まれる多糖類は、 β— 1 , 6—ダルコビラノシル残基を含み、ザルコーマ 180に対して抗腫瘍活性を有する（Ebina Tら（1986)、 Jpn. J. Cancer Re s 77 : 1034—1042)。

[0004] カヮリハラタケ抽出物は、（1→6)— β分岐をもつ（1→4) a D グルカンを含み、ナチュラルキラー細胞活性ィ匕およびアポトーシスを経由して媒介される選択的抗腫瘍活性を有する（Fujimiya Yら（1998)、 Cancer Immunol

Immunother 46 : 147—159)。

[0005] カヮリハラタケに含まれるペプチドダリカンは、二重移植腫瘍系において、 Meth A 腫瘍細胞に対して直接的な細胞傷害性作用を有し、そして腫瘍をもつマウスに対して間接的な免疫増強作用を有する（Ebina Tら（1998)、 Biotherapy 11 : 259— [0006] カヮリハラタケに含まれる多糖類は、マウスにおける T細胞サブセットにおける脾臓 Thyl, 2—、 L3T4陽性細胞の割合を変えた（Mizuno Mら（1998)、 Biosci. Biot echnol. Biochem. 62 :434—437)。

[0007] これらの報告は、カヮリハラタケに含まれる多糖類が、免疫調節活性を通じて腫瘍細胞に対する細胞傷害性作用を有することを示唆している。

[0008] このように、カヮリハラタケ抽出物の免疫増強活性および抗腫瘍活性に関する多くの報告があるが、これらはいずれも、インビトロで行われた試験またはすでに癌に罹患した動物を対象にカヮリハラタケ抽出物の影響を試験しているものであって、乳癌などの癌が誘発されて発生する過程でカヮリハラタケ抽出物の影響を検討したものではない。また、本発明者が知る限り、末期癌に対するカヮリハラタケ抽出物およびそれに含まれる成分の影響を検討した報告もな!/ヽ。

非特許文献 l :Ebina Tら（1986)、 Jpn. J. Cancer Res 77 : 1034—1042 非特許文献 2 :Fujimiya Yら（1998)、 Cancer Immunol Immunother 46 : 1 47- 159

非特許文献 3 :Ebina Tら（1998)、 Biotherapy 11 : 259- 265

非特許文献 4: Mizuno Mら（1998)、 Biosci. Biotechnol. Biochem. 62 :434—

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発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0009] 乳癌は、女性における主要な疾患の 1つである。本発明は、乳癌を抑制する成分を含む薬品素材および食品素材を提供することを目的とする。本発明は、乳癌の発生および末期乳癌の増殖をも抑制する薬品素材および食品素材を提供することを目的とする。

課題を解決するための手段

[0010] 本発明は、乳癌を抑制する成分を含む、カヮリハラタケ抽出物に関する。

[0011] 本発明はまた、乳癌の発生または末期乳癌の増殖を抑制する成分を含む、カヮリハラタケ抽出物に関する。

[0012] 好ましくは、上記カヮリハラタケ抽出物は溶媒抽出して調製される。 [0013] 好ましくは、上記カヮリハラタケ抽出物は熱水抽出して調製される。

[0014] 好ましくは、上記成分は、カヮリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理するェ程によって得られる、分子量 100〜2000のクロマトグラフィー主溶出画分である。

[0015] 好ましくは、上記成分は、カヮリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、および該沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液である。

[0016] 代表的には、上記乳癌は、メチルー N—二トロソゥレアで誘発される。

[0017] 本発明はまた、乳癌を抑制する組成物であって、カヮリハラタケ抽出物および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物に関する。

[0018] 代表的には、上記組成物は、粉末、液体、錠剤、カプセル、およびペレットからなる群から選択される形態である。

[0019] 本発明はまた、乳癌を抑制する方法に関し、この方法は、カヮリハラタケ抽出物および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を被験体に投与する工程を包含する。

[0020] 本発明はまた、乳癌の発生または末期乳癌の増殖を抑制する方法に関し、この方法は、カヮリハラタケ抽出物および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を被験体に投与する工程を包含する。

[0021] 好ましくは、上記抽出物は、カヮリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理する工程によって得られる、分子量 100〜2000のクロマトグラフィー主溶出画分である。

[0022] 好ましくは、前記抽出物は、カヮリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、およびこの沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液である。

[0023] 本発明はまた、乳癌を抑制する組成物の調製のためのカヮリハラタケ抽出物の使用に関する。

[0024] 本発明はまた、乳癌の発生または末期乳癌の増殖を抑制する組成物の調製のためのカヮリハラタケ抽出物の使用に関する。

[0025] 好ましくは、上記抽出物は、カヮリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理する工程によって得られる、分子量 100〜2000のクロマトグラフィー主溶出画分である。

[0026] 好ましくは、上記抽出物は、カヮリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、および該沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液である。

発明の効果

[0027] カヮリハラタケ抽出物は乳癌を抑制する成分を含む。カヮリハラタケ抽出物は乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分を含む。この成分は、癌 (特に乳癌）が誘発される段階、および誘発された癌の末期増殖をも抑制するので、乳癌を抑制するのに有効な、薬品素材および食品素材が提供される。

図面の簡単な説明

[0028] [図 1]本発明のカヮリハラタケ抽出物（1SY16)の乳癌発生を抑制する効果を示す図である。

[図 2]本発明のカヮリハラタケ抽出物（1SY16)の乳癌発生を抑制する効果を示す図である。

[図 3]本発明のカヮリハラタケ抽出物（1SY16)の乳癌増殖を抑制する効果を示す図である。

[図 4]本発明のカヮリハラタケ抽出物 (ABMK22)の乳癌発生を抑制する効果を示す図である。

[図 5]本発明のカヮリハラタケ抽出物 (ABMK22)の乳癌発生を抑制する効果を示す図である。

[図 6]本発明のカヮリハラタケ抽出物 (ABMK22)の乳癌増殖を抑制する効果を示す図である。

発明を実施するための最良の形態

[0029] 本明細書で用いる用語「力ヮリハラタケ」は、一般に、学名を「力ヮリハラタケ'ブラゼィ 'ムリル Agaricus blazei Murll」和名を「力ヮリハラタケ」という担子菌類ハラタケ科に属するきのこの子実体、菌糸体、培養液などを含むカヮリハラタケ原料を意味する。代表的には、用語「力ヮリハラタケ」は、カヮリハラタケの子実体を意味する。なお、以後、本明細書では、「力ヮリハラタケ」、「ABM」、および「ァガリタス」は、交換可能に用いられ、同じカヮリハラタケ原料を意味する用語として用いられる。

[0030] 本発明のカヮリハラタケ抽出物は、カヮリハラタケ原料を、溶媒抽出して調製される。カヮリハラタケ原料は、代表的には、天然または栽培されたカヮリハラタケの子実体である。培養タンクなどで培養されたカヮリハラタケの菌糸体を用いてもよい。通常、カヮリハラタケは、洗浄された後、乾燥して用いられる。市販されている子実体の乾燥物もまた便利に利用できる。通常、乾燥されたカヮリハラタケは常法に従って粉末とされ、抽出原料として用いられる。

[0031] 本発明のカヮリハラタケ抽出物は、上記子実体の乾燥物またはその粉末に種々の溶媒を添加して抽出操作を行うことによって得られ得る。一般に、上記溶媒は、上記乾燥子実体またはその粉末の重量に対して 2〜10倍の重量で添加されて抽出操作が行われる。上記溶媒としては、水、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトン、 1, 3—ブチレングリコール、酢酸ェチル、へキサン、塩化メチレン、メタノールまたはそれらの混合物が用いられる。代表的には、水を用いてカヮリハラタケ抽出物を調製する。

[0032] カヮリハラタケ粉末と上記溶媒のいずれかとの混合物を、 0°C〜100°Cの温度、好ましくは室温〜 80°Cの温度で、 10分〜数日、好ましくは 1〜24時間の間、マグネティックスターラー（100〜500rpmでの回転数)などを用いて攪拌または振盪して抽出操作が行われる。代表的には、本発明のカヮリハラタケ抽出物は、カヮリハラタケ粉末に脱イオン水を添加し、 70°Cで 24時間連続攪拌することによって得られ得る。得られる溶液から、遠心分離法、濾過などの常法に従って残渣を取り除いた後、凍結乾燥等により、乾燥物を得る。得られた粉末等の乾燥物をカヮリハラタケ抽出物とする。

[0033] このように調製されたカヮリハラタケ抽出物に含まれる、乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分は、当業者に公知の HPLC (高速液体クロマトグラフィー）などの手法を利用して得ることができる。得られた成分は、 NMR法 (核磁気共鳴分析法)などの手法を用いてその構造が識別され得る。

[0034] 以下は、本発明のカヮリハラタケ抽出物の製法の一例である。

[0035] 乾燥子実体に 5から 10倍の重量の水をカ卩え、 1〜3時間好ましくは 95°C以上の温度で加熱抽出または加熱還流する。このカヮリハラタケの熱水抽出は、必要に応じて、熱水抽出残渣についても繰り返して行われる。このようにして得られる熱水抽出液は、凍結乾燥、スプレードライなど、当業者に公知の方法によって乾燥物（以下乾燥物 Aという）とする。乾燥物 Aを、 5〜20倍の容量の水に懸濁または溶解した後、これを、透析チューブに入れ、数倍の容量の蒸留水に対して 10〜15時間透析する。得られる透析外液を凍結乾燥して、乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分を含む、乾燥物 (以下乾燥物 Cという）を得る。

[0036] 次に、透析内液についても、さらに流水中で 20〜40時間透析し、そして蒸留水で 2回各数時間透析した後に得られる透析内液を、上記と同様に乾燥物とすることによつても、乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分を含む、カヮリハラタケの熱水抽出物の乾燥物（以下乾燥物 Bという）が得られる。

[0037] 次に、得られた上記乾燥物 Cを、約 10倍重量の蒸留水に溶解し、蒸留水を流出溶媒としてゲル濾過クロマトグラフィーを行い、 20mLずつ分取し、多くの画分を得る。得られた画分の中程の主溶出画分で、ゲル濾過法によって分子量 100〜2000の画分が、本発明の乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分として好適に用いられる。

[0038] これらの画分は、さらに ODS (ォクタデシルシラン化シリカゲル）を用いる逆相クロマトグラフィー、 DEAE— TO YOPEARL650を用いるイオン交換クロマトグラフィーなどを用いて分析すると、アルギニン、リジン、マン-トールの他、数種の成分を含んで、ることが確認されて、る。

[0039] また、上記の方法で得られる熱水抽出液に等量のエタノールをカ卩えて混合し、遠心分離処理して沈殿と上澄液に分け、得られる上澄液にさらにその 1〜3倍容量のエタノールを加えて混合し、さらに遠心分離処理して得られる沈殿を蒸留水に溶解し、得られる溶液を透析処理して得られる透析外液もまた、本発明の、乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分である。

[0040] 上記のように調製されたカヮリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分は、そのまま、あるいは種々のキャリアとともに医薬製剤の製造に用いることができる。 [0041] 上記のように調製されたカヮリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分は、代表的には、生体適合性の薬学的キヤリァ（例えば、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、および水など）とともに経口的に摂取され得る組成物として処方され得る。

[0042] 上記薬学的に受容可能なキャリアは、当業者に公知であって、例えば、以下のものが挙げられる：リンゲル溶液、ハンクス溶液、または緩衝ィ匕生理食塩水などの緩衝液；ゴマ油などの脂肪酸、ォレイン酸ェチルまたはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル；ラタトース、スクロース、マン-トール、ソルビトールなどの糖類；トウモロコシ、コムギ、イネ、ジャガイモなどの植物由来デンプン;メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース；アラビアゴム、トラガカントゴムなどのゴム；ゼラチン、コラーゲンなどのタンパク質;架橋ポリビ -ルピロリドン、寒天、アルギン酸またはその塩など。

[0043] 上記のように調製されたカヮリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分は、単独または他の薬剤もしくは食品素材と組み合わせて摂取され得る。

[0044] 上記のように調製されたカヮリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分およびそれを含む組成物は、経口的または非経口的に投与され得る。非経口送達は、静脈内、筋肉内、腹腔内、または鼻孔内への投与により達成され得る。本発明の薬学的組成物の処方および投与の詳細は、例えば、当該分野における教科書「REMINGTON' S PHARMACEUTICAL SCIENCES] (Maack Publishing Co.、 Easton、 PA)の記載に従って行なわれ得る。

[0045] 経口投与のためのカヮリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分は、摂取に適した投与形態で当該分野で周知の薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物として処方され得る。このようなキャリアは、得られる組成物が、患者による摂取に適した、錠剤、丸剤、糖衣剤、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁物などに処方されることを可能とする。

[0046] 本発明の組成物は、カヮリハラタケ熱水抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分を、乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制するに有効な量で含む。当業者は、「乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制するに有効な量」を十分に理解および認識する。「乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制するに有効な量」は、まず、細胞培養によるインビトロアッセィまたは適切な動物モデルによって評価され得る。次に、このような情報を用いて、ヒトにおける摂取に有用な量を決定し得る。「乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制するに有効な量」は、例えば、本明細書に記載される発癌物質メチルー N—二トロソゥレアを投与することによって乳癌が誘発される Sprague— Dawleyラットを用いるアツセィ系を用いて決定され得る。

[0047] 実際に摂取されるカヮリハラタケ抽出物の量は、適用される個体の健康状態などに依存し、所望の効果が達成されるように最適化され得る。薬学的または栄養学的に有効な量を決定することは、当業者にとっては慣用的な手順である。

[0048] 上記のカヮリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分は、その機能を発揮するに十分な量で、選択された 1種またはそれ以上の食品素材と混合され得る。選択された 1種またはそれ以上の食品素材は、当業者に公知の形態、通常粉末形態で、上記のカヮリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分と混合される。そしてこれらは、用途または好みに応じて、液状の食品として供することができる。あるいはハードカプセル、ソフトカプセルなどのカプセル剤、錠剤もしくは丸剤としてか、または粉末状、顆粒状、茶状、ティーバック状もしくは、飴状などの形状に成形され得る。

[0049] 上記のカヮリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分は、メチルー N— -トロソゥレアによって誘発される乳癌の発生および発生した乳癌の増殖を抑制する。本発明は、発癌物質に対する種々の投与剤形におけるカヮリハラタケ抽出物治療の研究に基づくものである。本明細書に開示される手法またはプロトコールを指針を参照すれば、その他の発癌物質で誘発される癌に対する上記のカヮリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分の有効性は、容易に実証され得る。 [0050] すなわち、上記のカヮリハラタケ抽出物またはそれに含まれる乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも抑制する成分の濃度を変えて含有する食餌が、発癌物質を投与されたマウスにおける癌の発生または発生した癌の増殖の抑制を測定することにより容易に実証し得る。

[0051] 以下、発癌物質としてメチルー N— -トロソゥレアを用いた実施例により本発明をより詳細に説明するが、以下の実施例は本発明の例示であり、本発明を制限するものではない。

[0052] 以下、本願発明を、実施例を挙げて説明する。

実施例 1

[0053] カヮリハラタケ抽出物の調製

(1)カヮリハラタケの熱水抽出物として上記の乾燥物 Aを用いた。これは、カヮリハラタケの乾燥子実体 (協和ァガリタス茸)を沸騰水で抽出し、 1800 X gで 10分間遠心分離して残渣を取り除き、そして凍結乾燥したものである。これを、 3. 7mgZmlの濃度で精製水に溶解したものを試料 I、そして 8mgZmlの精製水に溶解したものを試料 IIとした。

[0054] (2) 300gの協和ァガリタス茸に蒸留水 2Lをカ卩え、 2時間 95°C以上で加熱還流を行った。得られた液を濾過して濾液 (熱水抽出液）と残查とに分けた。残查には再び蒸留水 2Lを加え、さらに 2時間 95°C以上で加熱還流して熱水抽出を行い濾液を得た。さらに残った残查についてもう一度同様の熱水抽出を行った。得られた濾液を合わせて凍結乾燥し、乾燥物 A ( 153g：抽出率 51 %)を得た。

[0055] 50gの乾燥物 Aに 500mLの蒸留水をカ卩え、透析チューブ（SpectraZPor Mem brane 50 X 31、 8mm内径 X 30cm長さ、 FE— 0526— 65)に入れた。これを 3Lの蒸留水に対して 12時間透析した。得られた透析外液を凍結乾燥して乾燥物 C (27g ：抽出率 53%)を得た。透析内液についてはさらに流水中で 30時間透析し、その後蒸留水で 2回 (各 4時間、合計 8時間)透析した後、透析内液を凍結乾燥し、乾燥物 B (l lg:抽出率 22%)を得た。続いて、 3gの乾燥物 Cを 30mLの蒸留水に溶かし、 TO YOPEARL HW40C (40mm内径 X 420mm長さ）を用いるクロマトグラフィーを行つた。流出溶媒はすべて蒸留水を用いた。各フラクションについてそれぞれ 20mLずつ分取し、画分 1〜30を得た。それらのフラクションは薄層クロマトグラフィーを参考にして以下の 5群に分けた。乾燥重量は次の通りであった。画分 l〜l l (75mg、 2. 5%)、画分 12〜15 (920mg、 30. 7%)、画分 16〜17(1570mg、 52. 3%)、画分 18〜19(270mg、 9%)、画分 20〜28 (97mg、 3. 2%)。

[0056] 画分 16 (以後、 1SY— 16と、う）の赤外線吸収スペクトル (IR)データは以下の通りであった。

W^16 :IR(KBr) 3390, 3325、 3285、 2940、 2920、 1641、 1634、 1622、 161 5、 1600、 1595、 1405、 1394、 1084、 1020 :分子量（ゲル濾過法〇0〜2000。

[0057] (3)上記 (2)と同様の熱水抽出を実施して、合わせた濾液 (熱水抽出液) 6Lを得た。この濾液を減圧濃縮して 1Lとし、これにエタノール 1Lをカ卩えて混合し、遠心分離して沈殿と上澄液を得た。この上澄液にさらにエタノール 3Lをカ卩えて混合し、遠心分離して得られる沈殿を蒸留水に溶解し、透析処理した。得られた透析外液を凍結乾燥して粉末を得た（以後、 ABMK22という）。

実施例 2

[0058] カヮリハラタケ抽出物による、 MNUで誘発される乳癌の予防

メチルー N— -トロソゥレア（MNU :乳癌誘導物質）によって誘導されるラット乳癌モデルを用い、カヮリハラタケ抽出物（1SY16および ABMK22)の乳癌予防効果を評価し 7こ。

[0059] ラットは、 Sprague— Dawleyラット（雌、 50日齢）を用いた。ラットは、 Hyland飼料栄養会社 (Madisoru Wisconsin州）から購入した研究用の 4%標準 Tekladラット飼料を与えて飼育した。乳癌は、蒸留水に溶解し pHを 5. 0に調節した MNUを、 50m gZkg体重の用量で 1回静脈注射することによって誘導した。

[0060] MNUを注射した 2時間後、以下のようにグルーピングした (グループ 1〜4)乳癌誘導ラットに、カヮリハラタケ抽出物（1SY16または ABMK22)を投与し、合計 5ヶ月間飼育する試験を行った。

[0061] グループ 1では、ラットを各群 5匹で 4群に分け、 1SY16を、それぞれの群のラットに、一日あたり OmgZkg体重（対照群）、 lOOmgZkg体重、 200mgZkg体重および 4 OOmgZkg体重となるように投与量を変えて、 2週間の間経口投与した (単回胃管栄養法 (gavage)；以後本明細書では、通常、この単回胃管栄養法を

経口投与という）。

[0062] グループ 2では、ラットを各群 5匹で 4群に分け、各ラットに一日あたり 200mgZkg 体重となるよう、第 1群のラットには、 MNU静脈注射後 1〜15日の間 1SY16 を経口投与し、第 2群のラットには MNU静脈注射後 31〜60日の間 1SY16を投与し、第 3群のラットには、 MNU静脈注射後 61〜90日の間 1SY16を経口投与し、そして、第 4群のラットには MNU静脈注射後 91〜120日の間 1SY16を投与した。第 5 群のラットには、対照として飲水を経口投与した。

[0063] グループ 3では、ラットを各群 5匹で 5群に分け、第 1群のラットには対照として飲水を、第 2群〜第 5群のラットには、カヮリハラタケ抽出物 (ABMK22)を、一日あたり、それぞれ、 50mgZkg体重、 lOOmgZkg体重、 200mgZkg体重、および 400mg Zkg体重となるように投与量を変えて 120日間投与した。

[0064] グループ 4では、ラットを各群 5匹で 5群に分け、第 1群のラットには対照として飲水を、第 2群〜第 5群のラットには、カヮリハラタケ抽出物 (ABMK22)を、一日あたり、それぞれ、 400mgZkg体重（1〜120曰間）、 800mgZkg体重（31〜60曰目）、 16 OOmgZkg体重（61〜90曰目）、および 3200mgZkg体重（91〜120曰目）となるように投与量および投与期間を変えて投与した。

[0065] 5ヶ月の実験期間後、ラットを屠殺し、各群のラットについて乳癌の発生数と、発生した個々の乳癌の重量を測定した。

[0066] 結果を、図 1〜図 6に示す。

[0067] 図 1は、グループ 1の試験結果を示す。図 1の横軸は、左から、それぞれ、対照群、 1SY16の lOOmgZkg体重投与群、同 200mgZkg体重投与群および同 400mgZ kg体重投与群を示す。図 1の縦軸は、各群の乳癌発生率を、対照群の乳癌発生率を 100%として示している。図 1の上の矢印は、 1SY16の投与を 2週間経口投与したことをイメージ的に示して!/ヽる。

[0068] 図 1に示されるように、 1SY16では、投与量に依存して乳癌の発生を減少させ、 10 OmgZkg体重投与群で約 22%、 200mgZkg体重投与群で約 43%、そして 400m gZkg体重投与群で約 55%乳癌発生率を減少させた。 [0069] 図 1において、 *は、対照群の癌発生率と比較して、統計処理で p< 0. 05で有意差があり、 * *は p< 0. 01で、そして * * *は p< 0. 001でそれぞれ有意差があることを示している。

[0070] 図 2は、グループ 2の試験結果を示す。図 2の横軸は、 1SY16を、それぞれ、 1〜1 5日の間、 31〜60日の間、 61〜90日の間、および 91〜120日の間経口投与した群を示している。 MNU静脈注射後 1SY16を 1〜15日の間投与した群は 1M (1ヶ月）で、 31〜60日の間投与した群は 2M (2ヶ月）で、 61〜90日の間投与した群は 3M ( 3ヶ月）で、そして 91〜120日の間投与した群は 4M (4ヶ月）で示す。図 2の上の矢印は、 1SY16を投与した期間をイメージ的に示している。図 2の縦軸は、図 1と同様に、各群の乳癌発生率を、対照群の乳癌発生率を 100%として示して、る。

[0071] 図 2に示されるように、 1SY16投与群では、投与時期にほぼ依存して乳癌の発生を減少させ、 1ヶ月投与群で約 40%、 2ヶ月投与群で約 35%、 3ヶ月投与群で約 46 %、そして 4ヶ月投与群で約 72%乳癌発生率を減少させた。図 2における *および * *は、図 1と同様に、対照群に対し統計処理で有意差があることを示している。

[0072] 図 3は、図 2に示される試験における各群の乳癌の平均重量を示したものである。

図 3から明らかなように、各群の乳癌の平均重量は、それぞれ、対照群の乳癌重量の約 26%、 46%、 54%および 17%であって、乳癌発生率と同様に、投与時期にほぼ依存して少な力つた。図 3における *は、図 1および 2と同様に、対照群に対し統計処理で有意差があることを示してヽる。

[0073] 図 2および図 3に示される結果から、カヮリハラタケ抽出物（1SY16)の投与によつて、乳癌の発生が抑制されるのみならず、発生した特に末期における乳癌の増殖も抑制されることが示された。また図 2および図 3に示される結果から、乳癌の増殖の抑制効果は、乳癌の誘発後 91〜120日の投与においても確認され、対照群と比較して顕著な乳癌の増殖抑制効果が確認された。

[0074] 図 4は、グループ 3の試験結果を示す。図 4の横軸は、左から、それぞれ、対照群、 ABMK22の 50mgZkg体重投与群、同 lOOmgZkg体重投与群、同 200mgZkg 体重投与群、および同 400mgZkg体重投与群を示す。図 4の縦軸は、図 1および 2 と同様に、各群の乳癌発生率を、対照群の乳癌発生率を 100%として示している。 [0075] 図 4に示されるように、 ABMK22投与群では、投与量に依存して乳癌の発生を減少させ、 50mgZkg体重投与群で対照群の乳癌発生率の約 82%、 lOOmgZkg体重投与群で対照群の乳癌発生率の約 85%、 200mgZkg体重投与群で対照群の乳癌発生率の約 73%、そして 400mgZkg体重投与群で対照群の乳癌発生率の約 70%と乳癌の発生が抑制される結果が得られた。乳癌の阻害率で表せば、上記各群で、それぞれ、約 18%、約 15%、約 27%および約 30%の阻害率である。図 4における *、 * *および * * *は、図 1〜3と同様に、対照群に対し統計処理で有意差があることを示している。

[0076] 図 5は、グループ 4の試験結果を示す。図 5の横軸は、それぞれ、対照群、 ABMK 22の 400mgZkg体重投与群、同 800mgZkg体重投与群、同 1600mgZkg体重投与群、および同 3200mgZkg体重投与群を示す。図 5の縦軸は、図 1、 2および 4 と同様に、各群の乳癌発生率を、対照群の乳癌発生率を 100%として示している。図 5の矢印は、各群の ABMK22の投与期間をイメージで表して!/、る。

[0077] 図 5に示されるように、 ABMK22投与群では、投与量に依存して乳癌の発生を減少させ、 400mgZkg体重投与群で対照群の乳癌発生率の約 68%、 800mg/kg 体重投与群で対照群の乳癌発生率の約 66%、 1600mgZkg体重投与群で対照群の乳癌発生率の約 62%、そして 3200mgZkg体重投与群で対照群の乳癌発生率の約 63%と乳癌の発生が抑制される結果が得られた。乳癌の阻害率で表せば、上記各群で、それぞれ、約 32%、約 34%、約 38%および約 37%の阻害率である。また、図 5における * * *は、図 1〜4と同様に、対照群に対し統計処理で有意差があることを示してヽる。

[0078] 図 6は、図 4に示される試験における各群の乳癌の平均重量を示したものである。

図 6から明らかなように、 ABMK22を 200mgZkg体重投与した群のラットでは、癌の平均重量は、対照群の乳癌重量の約 10%であって、統計的に有意な差異を示した。

産業上の利用可能性

[0079] 乳癌の発生または末期乳癌の増殖をも予防する、薬品素材および食品素材が提供される。

Claims

請求の範囲

[I] 乳癌を抑制する成分を含む、カヮリハラタケ抽出物。

[2] 乳癌の発生または末期乳癌の増殖を抑制する成分を含む、カヮリハラタケ抽出物。

[3] 溶媒抽出して調製される、請求項 1または 2に記載の抽出物。

[4] 熱水抽出して調製される、請求項 3に記載の抽出物。

[5] 前記成分が、カヮリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理する工程によって得られる、分子量 100〜2000のクロマトグラフィー主溶出画分である、請求項 1または 2に記載の抽出物。

[6] 前記成分が、カヮリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、および該沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液である、請求項 1または 2に記載の抽出物。

[7] 前記乳癌が、メチルー N— -トロソゥレアで誘発される、請求項 1または 2に記載の抽出物。

[8] 乳癌を抑制する組成物であって、カヮリハラタケ抽出物および薬学的に受容可能なキャリアを含む、組成物。

[9] 粉末、液体、錠剤、カプセル、およびペレットからなる群力選択される形態の、請求項 8に記載の組成物。

[10] 乳癌を抑制する方法であって、カヮリハラタケ抽出物および薬学的に受容可能なキヤリアを含む組成物を被験体に投与する工程を包含する方法。

[II] 乳癌の発生または末期乳癌の増殖を抑制する方法であって、カヮリハラタケ抽出物および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を被験体に投与する工程を包含する方法。

[12] 前記抽出物が、カヮリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理する工程によつて得られる、分子量 100〜2000のクロマトグラフィー主溶出画分である、請求項 10または 11に記載の方法。

[13] 前記抽出物が、カヮリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、および該沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液である、請求項 10または 11に記載の方法。

[14] 乳癌を抑制する組成物の調製のための、カヮリハラタケ抽出物の使用。

[15] 乳癌の発生または末期乳癌の増殖を抑制する組成物の調製のためのカヮリハラタケ抽出物の使用。

[16] 前記抽出物が、カヮリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液を透析処理する工程、および得られる透析外液をクロマトグラフィー処理する工程によつて得られる、分子量 100〜2000のクロマトグラフィー主溶出画分である、請求項 14または 15に記載の使用。

[17] 前記抽出物が、カヮリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、得られる抽出液にエタノールを添加して沈殿を得る工程、および該沈殿を水に溶解して透析処理する工程によって得られる透析外液である、請求項 14または 15に記載の使用。