CN117643600A - 一种桦褐孔菌活性组分提取物及其应用 - Google Patents
一种桦褐孔菌活性组分提取物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种桦褐孔菌活性组分提取物及其应用，涉及桦褐孔菌提取制备工艺技术领域，其技术方案要点是：本发明公开的方法制备得到的桦褐孔菌热敏性和/或中小分子量活性物质提取物中，SOD提取率≥70%、总多酚提取率≥76%、总黄酮提取率≥75%、总三萜类提取率≥70%、总多糖提取率≥78%、芳香类提取率≥80%。本发明的制备方法适于工业化批量制备，能够避免热敏性物质的氧化和逸散，并把高沸点、低挥发性、易热解的物质在远低于其沸点温度下萃取出来。本发明的提取物可用于制备胃癌、肿瘤放化疗后白细胞升高、调节机体免疫力、调节血糖和降血脂的药品、保健品及食品。
Description
技术领域
本发明涉及桦褐孔菌提取制备工艺技术领域，更具体地说，它涉及一种桦褐孔菌热敏性中小分子量活性组分提取物及其应用。
背景技术
桦褐孔菌（Inonotus obliqqus (Ach.ex Pers.)Pilát）为多孔菌科褐卧孔菌属真菌。我国民间常称为桦树茸、桦树胆、斜纤孔菌等。其生长分布区域极具特点，主要以北半球北纬40゜～50゜寒带地区为主要产区。因其处于高寒地带，生长周期长，次生代谢产物种类丰富，在调节免疫力、降血糖、降血脂、抗肿瘤等方面获得了广泛的关注和认可。由于桦褐孔菌生长地理环境的特殊性，世界上拥有该真菌资源的仅有中国、俄罗斯、芬兰、波兰和日本等国家。而我国主要分布在黑龙江、吉林和西藏等部分地区。桦褐孔菌物质组分主要含有多糖、多酚类、三萜类、甾体类以及芳香类等多种成分。其中，桦褐孔菌中超氧化物歧化酶（SOD）含量是灵芝的50倍，被称为“天然免疫力之王”。
目前桦褐孔菌工业化提取的方法主要采用水或乙醇为溶媒，以热回流为主的提取方法。该方法尤其对热敏性和/或中小分子量的SOD、芳香类和多酚类等成分提取的精准度和效率低下，提取物杂质多，并容易造成有机溶剂残留的弊端。
发明内容
本发明的目的是提供一种桦褐孔菌热敏性和/或中小分子量活性物质提取物及其制备方法和应用，有针对性、精准制备桦褐孔菌热敏性和/或中小分子量物质成分提取物，将该提取物用于制备治疗胃癌、升高肿瘤放化疗白细胞、调节免疫力、降血糖和血脂的药品、保健食品或食品。同时解决现有技术中存在的提取效率低、提取物杂质多、活性物质成分损失大，提取物中有异物残留等工艺问题的弊端。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种桦褐孔菌热敏性和/或中小分子量活性物质提取物，所述活性物质提取物由桦褐孔菌子实体、菌丝体和菌核中的一种或多种，经CO2超临界提取或亚临界提取获得；
所述提取物中SOD提取率≥70%、总多酚提取率≥76%、总黄酮提取率≥75%、总三萜类提取率≥70%、总多糖提取率≥78%、芳香类提取率≥80%；
所述桦褐孔菌中小分子量活性物质的分子量≤100KD。
本发明还提供该活性物质提取物的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
S1.将桦褐孔菌子实体、菌丝体和菌核中的一种或多种，在喷口风速≥27m/s条件下，风淋清洗2～3分钟后，粉碎成30～80目或200～1200目的桦褐孔菌子实体、菌丝体和菌核其中一种的粉末或多种的混合粉末；
S2.将加入夹带剂或溶剂中的粉末，分层装填至CO2超临界或亚临界提取釜中，CO2流速8～25kg/h，提取压力10～40MPa，提取温度30～60℃，提取时间45～120分钟；
S3.分离除去夹带剂、CO2或溶剂，获得提取物，冷冻干燥即得。
作为优选，CO2流速20kg/h。
作为优选，所述亚临界提取的压力为18～22MPa；
作为优选，所述亚临界提取的溶剂流量为2kg/h～4kg/h。
本发明进一步设置为：所述S3中冷冻干燥的操作如下：在－60～－80℃冷阱中预冻2～6小时后，再冷冻干燥6～32小时。
本发明进一步设置为：所述夹带剂为70%～95%乙醇、乙酸乙酯和正己烷中的一种或多种；所述溶剂为水、70%～95%乙醇、乙酸乙酯和正己烷中的一种或多种。
作为优选，夹带剂为80%乙醇水溶液。
作为优选，夹带剂的流速为2kg/h～3.5kg/h。
本发明进一步设置为：所述夹带剂与桦褐孔菌粉末质量比（0.6～6）：1；所述溶剂与桦褐孔菌子粉末质量比（1～12）：1。所述桦褐孔菌粉末为桦褐孔菌子实体、菌丝体和菌核中其中一种的粉末或多种的混合粉末。
本发明进一步设置为：所述S3中分离的压力及温度如下：Ⅰ级分离压力8～35MPa，分离温度40～45℃；Ⅱ级分离压力5～30MPa，分离温度30～40℃。
通过上述制备方法提取出来的活性物质提取物可应用于制备治疗胃癌及升高肿瘤放化疗白细胞、调节机体免疫力、调节血糖和血脂药品、保健品和食品。
综上所述，本发明具有以下有益效果：
（1）设定提取对象为桦褐孔菌的子实体、菌丝体、菌核其中的一种或多种的组合；设定指定分子量范围物质组分为桦褐孔菌中分子量≤100KD的中小分子量物质组分和/或热敏性成分的提取物；采用CO2超临界或亚临界提取能够更高效获得指定分子量范围的活性组分和热敏性组分。
（2）采用CO2超临界或亚临界提取可以精准提取桦褐孔菌中SOD、芳香类等热敏性成分和/或中小分子量多酚类等成分，其中SOD提取率≥70%、总多酚提取率≥76%、总黄酮提取率≥75%、总三萜类提取率≥70%、总多糖提取率≥78%和芳香类提取率≥80%，提取时间缩短了三分之二，且无溶剂残留。
（3）有关工业化采用CO2超临界或亚临界精准提取桦褐孔菌中热敏性成分和/或中小分子量物质提取物的应用研究较少，对于桦褐孔菌中热敏性成分和/或中小分子量物质成分治疗胃癌、升高肿瘤放化疗白细胞、调节免疫力、降血糖和血脂等方面的研究未有详细研究报道，本发明弥补了该方面的技术空缺。
（4）使用该方法获得的中小分子量和/或热敏性活性物质成分明确，多酚类、黄酮类、超氧化物歧化酶和芳香类提取率显著提高，多糖成分中单糖组成和化学结构明确，各组分在抗肿瘤、升高放化疗白细胞、调节免疫力、调节血糖和血脂等方面具有明显的生物活性。
附图说明
图1中A为本发明实施例1桦褐孔菌子实体中CO2超临界提取物（CZS01）和实施例4桦褐孔菌子实体亚临界提取物（YZS02）与对比例1之间SOD提取率比较图；
图1中B为本发明实施例1桦褐孔菌子实体中CO2超临界提取物（CZS01）和实施例4桦褐孔菌子实体亚临界提取物（YZS02）与对比例1之间总多酚提取率比较图；
图1中C为本发明实施例1桦褐孔菌子实体中CO2超临界提取物（CZS01）和实施例4桦褐孔菌子实体亚临界提取物（YZS02）与对比例1之间总黄酮提取率比较图；
图1中D为本发明实施例1桦褐孔菌子实体中CO2超临界提取物（CZS01）和实施例4桦褐孔菌子实体亚临界提取物（YZS02）与对比例1之间芳香类化合物提取率比较图。
图2中A为本发明实施例1桦褐孔菌子实体CO2超临界提取物（CZS01）和实施例4桦褐孔菌子实体亚临界提取物（YZS02）与对比例1提取物之间，对肿瘤放化疗后白细胞影响作用图；
图2中B为本发明实施例1桦褐孔菌子实体CO2超临界提取物（CZS01）和实施例4桦褐孔菌子实体亚临界提取物（YZS02）与对比例1提取物之间，对肿瘤放化疗后血小板影响作用图；
图2中C为本发明实施例1桦褐孔菌子实体CO2超临界提取物（CZS01）和实施例4桦褐孔菌子实体亚临界提取物（YZS02）与对比例1提取物之间，对肿瘤放化疗后红细胞影响作用图；
图2中D为本发明实施例1桦褐孔菌子实体CO2超临界提取物（CZS01）和实施例4桦褐孔菌子实体亚临界提取物（YZS02）与对比例1提取物之间，对肿瘤放化疗后血小板影响作用图。
具体实施方式
以下结合附图1-2对本发明作进一步详细说明。
实施例1：本实施例制备了一种桦褐孔菌热敏性和/或中小分子量活性物质提取物，具体过程为：
将桦树茸子实体粉末1.2kg装入CO2超临界提取釜中，CO2流量20kg/h，提取压力20MPa，提取温度45℃，提取时间90分钟，转移至分离釜中，Ⅰ级分离压力12MPa，分离温度40℃；Ⅱ级分离压力7MPa，分离温度35℃，收集分离物，通过分子量≤100KD滤膜，冷冻干燥即得（命名为CZS01）。
实施例2：本实施例制备了一种桦褐孔菌热敏性和/或中小分子量活性物质提取物，具体过程为：
将桦树茸子实体粉末1.2kg装入CO2超临界提取釜中，CO2流量20kg/h，采用75%乙醇作为夹带剂，夹带剂流量2.3kg/h，提取压力20MPa，提取温度45℃，提取时间90分钟，转移至分离釜中，Ⅰ级分离压力12MPa，分离温度40℃；Ⅱ级分离压力7MPa，分离温度35℃，收集分离物，通过分子量≤100KD滤膜，冷冻干燥即得（命名为CZS02）。
实施例3：本实施例制备了一种桦褐孔菌热敏性和/或中小分子量活性物质提取物，具体过程为：
将桦树茸子实体粉末1.2kg装入亚临界提取釜中，按液料比8:1（质量比）加入75%乙醇，提取压力20MPa，提取温度45℃，提取时间90分钟，通过分子量≤100KD滤膜，减压回收乙醇，冷冻干燥即得（命名为YZS01）。
实施例4：本实施例制备了一种桦褐孔菌热敏性和/或中小分子量活性物质提取物，具体过程为：
将桦树茸子实体粉末1.2kg装入亚临界提取釜中，按液料比8:1（质量比）加入水，提取压力20MPa，提取温度45℃，提取时间90分钟，通过分子量≤100KD滤膜，冷冻干燥即得（命名为YZS02）。
实施例5：本实施例制备了一种桦褐孔菌热敏性和/或中小分子量活性物质提取物，具体过程为：
将桦树茸菌丝体粉末1.2kg装入CO2超临界提取釜中，CO2流量20kg/h，提取压力20MPa，提取温度45℃，提取时间90分钟，转移至分离釜中，Ⅰ级分离压力12MPa，分离温度40℃；Ⅱ级分离压力7MPa，分离温度35℃，收集分离物，通过分子量≤100KD滤膜，冷冻干燥即得（命名为CJS01）。
实施例6：本实施例制备了一种桦褐孔菌热敏性和/或中小分子量活性物质提取物，具体过程为：
将桦树茸菌丝体粉末1.2kg装入CO2超临界提取釜中，CO2流量20kg/h，采用75%乙醇作为夹带剂，夹带剂流量2.3kg/h，提取压力20MPa，提取温度45℃，提取时间90分钟，转移至分离釜中，Ⅰ级分离压力12MPa，分离温度40℃；Ⅱ级分离压力7MPa，分离温度35℃，收集分离物，通过分子量≤100KD滤膜，减压回收乙醇，冷冻干燥即得（命名为CJS02）。
实施例7 ：本实施例制备了一种桦褐孔菌热敏性和/或中小分子量活性物质提取物，具体过程为：
将桦树茸菌丝体粉末1.2kg装入亚临界提取釜中，按液料比8:1（质量比）加入75%乙醇，提取压力20MPa，提取温度45℃，提取时间90分钟，通过分子量≤100KD滤膜，减压回收乙醇，冷冻干燥即得（命名为YJS01）。
实施例8：本实施例制备了一种桦褐孔菌热敏性和/或中小分子量活性物质提取物，具体过程为：
将桦树茸菌丝体粉末1.2kg装入亚临界提取釜中，按液料比8:1（质量比）加入水，提取压力20MPa，提取温度45℃，提取时间90分钟，通过分子量≤100KD滤膜，冷冻干燥即得（命名为YJS02）。
对比例1：本对比例制备了一种桦褐孔菌活性物质提取物，具体过程为：
将桦树茸子实体粉末1.2kg，按液料比8:1（质量比）加入水，加热至90℃，煎煮2次，每次1小时，合并煎煮液，通过分子量≤100KD滤膜，冷冻干燥即得。
对比例2：本对比例制备了一种桦褐孔菌活性物质提取物，具体过程为：
将桦树茸子实体粉末1.2kg，按液料比8:1（质量比）加入75%乙醇，加热至90℃，提取2次，每次1小时，合并提取液，通过分子量≤100KD滤膜，减压回收乙醇，冷冻干燥即得。
对比例3：本对比例制备了一种桦褐孔菌活性物质提取物，具体过程为：
将桦树茸菌丝体粉末1.2kg，按液料比8:1（质量比）加入水，加热至90℃，煎煮2次，每次1小时，合并煎煮液，通过分子量≤100KD滤膜，冷冻干燥即得。
对比例4：本对比例制备了一种桦褐孔菌活性物质提取物，具体过程为：
将桦树茸菌丝体粉末1.2kg，按液料比8:1（质量比）加入75%乙醇，加热至90℃，提取2次，每次1小时，合并提取液，减压回收乙醇，冷冻干燥即得。
应用实例：将本发明实施例1桦褐孔菌子实体CO2超临界提取物（CZS01）和实施例4桦褐孔菌子实体亚临界提取物（YZS02）与对比例1提取物对比，进行升高环磷酰胺模型小鼠外周血细胞药效学实验。
1.材料和方法
健康昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22g，购于辽宁长生生物技术有限公司，许可证号：SCXK（辽）2020-0001；环磷酰胺（Cyclophosphamide，1g/支，海南普利制药股份有限公司），利可君（20mg/片，吉林制药股份有限公司，）BC3000全自动血液细胞分析仪。
2. 外周血细胞试验
将小鼠分为模型组、空白组、利可君阳性对照组、实施例1桦褐孔菌子实体超临界提取物组（CZS01）和实施例4桦褐孔菌子实体亚临界提取物（YZS02）及对比例1桦褐孔菌子实体取物组，每组10只。除空白组外，其余各组每天给小鼠一次性腹腔注射80mg/kg环磷酰胺，连续注射5天，造模后第5天80mg/kg环磷酰胺加强注射1次。空白组腹腔注射生理盐水，方法同上。连续灌胃给药7天，阳性药利可君灌胃给药20mg/kg，桦褐孔菌CO2超临界提取物组（CZS01）和亚临界提取物组（YZS02）灌胃给药2.73g/kg，空白组和模型组给与生理盐水，各组给药体积均为0.2ml/10g。最后一次给药24小时后，各组小鼠摘眼球取血，与血细胞分析仪分别计数外周白细胞（WBS）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）和血小板（PLT）。
3.结果
与空白组比较，经过连续3天腹腔注射环磷酰胺后，模型组外周血的白细胞、血小板、血红蛋白和红细胞数量显著下降，具有显著性差异（P＜0.05）。与模型组比较，经过7天连续给药治疗后，桦褐孔菌CO2超临界提取物组（CZS01）和亚临界提取物组（YZS02）的白细胞、血小板、血红蛋白和红细胞数量明显升高，具有显著性差异（P＜0.05）；且与对比例1桦褐孔菌提取物比较，实施例1桦褐孔菌CO2超临界提取物组（CZS01）和实例4桦褐孔菌亚临界提取物组（YZS02），升高白细胞、血小板、血红蛋白和红细胞数量作用明显优于对比例1，说明采用CO2超临界提取或亚临界提取获得的桦褐孔菌子实体中热敏性和/或中小分子量≤100KD成分生物活性明显高于采用普通提取方法获得的提取物。
与对比例1相比， 实施例1桦褐孔菌CO2超临界提取物组（CZS01）和实例4桦褐孔菌亚临界提取物组（YZS02），桦褐孔菌子实体热敏性和/或中小分子量≤100KD成分中SOD、总多酚、总黄酮和芳香类成分提取率均明显高于对比例1所采用的普通提取方法的提取率，并具有显著性差异。
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (7)
1.一种桦褐孔菌热敏性和/或中小分子量活性物质提取物，其特征是：所述活性物质提取物由桦褐孔菌子实体、菌丝体和菌核中的一种或多种，经CO2超临界提取或亚临界提取获得；
所述提取物中SOD提取率≥70%、总多酚提取率≥76%、总黄酮提取率≥75%、总三萜类提取率≥70%、总多糖提取率≥78%、芳香类提取率≥80%；
所述桦褐孔菌中小分子量活性物质的分子量≤100KD。
2.根据权利要求1所述提取物的制备方法，其特征是：
所述制备方法包括如下步骤：
S1.将桦褐孔菌子实体、菌丝体和菌核中的一种或多种，在喷口风速≥27m/s条件下，风淋清洗2～3分钟后，粉碎成30～80目或200～1200目的桦褐孔菌子实体、菌丝体和菌核其中一种的粉末或多种的混合粉末；
S2.将加入夹带剂或溶剂中的粉末，分层装填至CO2超临界或亚临界提取釜中，CO2流速8～25kg/h，提取压力10～40MPa，提取温度30～60℃，提取时间45～120分钟；
S3.分离除去夹带剂、CO2或溶剂，获得提取物，冷冻干燥即得。
3.根据权利要求2所述提取物的制备方法，其特征是：
所述S3中冷冻干燥的操作如下：在－60～－80℃冷阱中预冻2～6小时后，再冷冻干燥6～32小时。
4.根据权利要求2所述提取物的制备方法，其特征是：
所述夹带剂为70%～95%乙醇、正己烷、乙酸乙酯中的一种或多种；
所述溶剂为水、70%～95%乙醇、乙酸乙酯和正己烷中的一种或多种。
5.根据权利要求2所述提取物的制备方法，其特征是：所述夹带剂与桦褐孔菌粉末质量比（0.6～6）：1；所述溶剂与桦褐孔菌子粉末质量比（1～12）：1，所述桦褐孔菌粉末为桦褐孔菌子实体、菌丝体和菌核中其中一种的粉末或多种的混合粉末。
6.根据权利要求2-5任意一项所述提取物的制备方法，其特征是：所述S3中分离的压力及温度如下：
Ⅰ级分离压力8～35MPa，分离温度40～45℃；
Ⅱ级分离压力5～30MPa，分离温度30～40℃。
7.根据权利要求1所述的一种桦褐孔菌热敏性和/或中小分子量活性物质提取物在制备治疗胃癌及升高肿瘤放化疗白细胞、调节机体免疫力、调节血糖和血脂药品、保健品和食品中的应用。
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