WO2003039567A1

WO2003039567A1 - Compositions anticancereuses

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Publication number: WO2003039567A1
Application number: PCT/JP2002/011512
Authority: WO
Inventors: Akikuni Yagita
Original assignee: ORIENT CANCER THERARY CO Ltd
Current assignee: ORIENT CANCER THERARY CO Ltd
Priority date: 2001-11-06
Filing date: 2002-11-05
Publication date: 2003-05-15
Anticipated expiration: 2004-05-06
Also published as: JPWO2003039567A1; US20040248772A1; CN1596116A; KR20050043751A; CA2469818A1

Description

明細書抗癌組成物本出願は、参照によりここに援用されるところの、日本特許出願番号 2001-341115、 2002.046694、 2002-191474力らの優先権を請求する。技術分野

本発明は、新規な抗癌組成物の提供に関する。より詳しくは、 Ι,ΒΖΐ,δ グルカン構造を有する酵母由来成分 NBG又はイミュトール（商品名）を含有する I L一 1 2誘導剤に関する。さらに、 ]3 1 ,3 Ζ 1,6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）の経口投与により、 ΝΚ細胞活性化能、 ΝΚΤ 細胞活性化能、腫瘍新生血管阻害能を期待しうる抗癌組成物に関する。背景技術

力、ん (m a 1 i g n a n t n e o p l a s m s ) c a n c e r) の予！ ¾又は治療のために有用な物質の選別には、従来、がん細胞へのその直接的作用が重要視されていた。免疫賦活剤ががん治療に有用であることは認められていたが、免疫賦活剤として得られた化合物はいずれもその抗がん効果が微弱であり、免疫療法単独又は化学療法との併用治療によってもがんの十分な治療効果は達成されていない。

本発明者の医学博士、八木田は、先にがん治療における画期的な手法として、インターロイキン 1 2 ( I L— 1 2)を生体内で誘発する物質の有用性に着目し、椎茸菌糸体加工物がその機能を有することを発見し、新免疫療法（N o V e 1 I mm u n o t h e r a p y f o r c a n c e r) (N I TC)ともレヽうべき力 S ん治療法を確立した。従来 I L_ l 2は、杭がん効果があるものの生体内に I L 一 1 2自体を直接投与した場合には副作用を生じるために患者が治療に耐えられないという事実があり、それ自体を抗がん剤として使用できなかった。しかし、八木田が報告した椎茸菌糸体加工物を含む製剤は、がんの治療において著しい治癒 ·延命効果を達成した。つまり八木田は、 I L— 1 2を生体内で誘発できる有効量の椎茸菌糸体加工物を投与することにより、がんの治療目的を達成した（特開平 1 0— 1 3 9 6 7 0号公報）。

I L— 1 2は、 T N F a→I F Νγ→ I L _ 1 2→C T L活性とレ、うルートでキラー T細胞の活性化効果と増強効果をもつ。つまり I L一 1 2の産生増強は、キラー T細胞の活性化と増強により抗がん効果が期待される。

八木田は、 IL-12の産生増強の系とは別に NKT細胞の活性化が抗ガン効果に有用であることを報告している。谷口等は、 NKT 細胞が有する Va 2 4 V6 1 1 という特異的な Τ細胞抗原受容体（T C R ) が認識する特異的な糖脂質抗原を発見し、この抗原が、 α ガラクトシルセラミドであることを報告している。更に、 α ガラクトシルセラミドを投与した担ガンマウスでは、 ΝΚΤ細胞が活性化され、ガンの消失はみられないものの転移が抑制されることを証明した。

ΝΚΤ細胞には、もう一つの受容体として ΝΚ細胞抗原受容体（NKR-P1；ナチュラルキラ一受容体 Ρ 1 ) があることは報告されている（特集 ΝΚΤ細胞の基礎と臨床：最新医学 5 5卷 4号 2 0 0 0年 8 1 8〜8 2 3ページ）。 NKR-P1も ΝΚΤ 細胞の活性化に関与し、この活性化が抗ガン効果をより優位であることを八木田は見出している。

ΝΚ細胞についても生体の抗ガン作用に係わるという報告がなされているが、これまで ΝΚ細胞の活性と臨床的な抗ガン効果とが相関せず、 IL-12の産生誘発量と ΝΚ細胞の活性とが完全な逆相関を示すことが八木田により証明されており、ヒトにおける抗ガン作用についての ΝΚ細胞の関与は疑問視されていた。

これまでに医学博士八木田は、種々の I L _ l 2生体内で誘発剤の検討を進め、癌周期との関係を考慮したしま万年茸菌糸体由来の新規な I L一 1 2誘発剤を見出している（ I L Y登録商標：株式会社オリエントキャンサーセラピー商品名）。医学博士八木田は、 β 1 , 3 Ζ 1 , 6グルカンを含有するキノコ菌糸体に抗腫瘍効果があり、その抗腫瘍性が Th 1系免疫を総合的に活性化するサイト力イン（ I L一 1 2) に起因するものであることを見出し、商品名 AHCC、 I LX、 I L Y、クレスチン、 S PG等の製品の新用途に関する特許出願をしてきた。発明の開示

本発明は、さらに有用な I L一 1 2誘発剤、特にガンの進行度の重篤（進行性癌、末期癌）な場合にも、より効果的な I L_ l 2誘発剤を提供すること、さらに、；3 1 ,3ノ 1 ,6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）の経口投与により、 NK細胞活性化能、 NKT細胞活性化能、腫瘍新生血管阻害能を期待しうる抗癌組成物を提供することを課題とする。

本発明は、新規な材料として酵母の検討を進め、 i3 Ι ,β/Ι,θグルカン構造を有する酵母由来成分 NBG又はィミュトールを含有する組成物が、従来にない効果的な I L— 1 2誘導剤であることを新規に見出し、さらに i3 1，3ノ 1，6グルカン構造を有する酵母由来成分ィミュトール（商品名）の経口投与により、 NK 細胞活性化能、 NKT細胞活性化能、腫瘍新生血管阻害能を期待しうる抗癌組成物であることを新規に見出し、本発明からなる抗癌組成物の提供に成功した。すなわち本発明は、

1. β 1,3ノ 1,6グルカン構造を有する酵母由来成分 NBG又はィミュトール（商品名）を含有する I L一 1 2誘導剤。

2. ]3 1,3/1,6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を含有する NK細胞及び/又は NKT細胞活性化剤。

3. 生体への摂取量として β 1,3/1 ,6グルカン構造を有する酵母由来成分 NBG又はィミュトールを 1 0mg〜2000111 § /^/体重 gZ日で経口摂取する前項 1の誘導剤又は前項 2の活性化剤。

4. 前項 1〜3記載の経口摂取用健康補助食品製剤。

5. ]3 1， 3 1，6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を含有する I L— 1 2誘導能、 NK細胞活性化能、 NKT細胞活性化能、及び Z又は腫瘍新生血管阻害能を期待しうる抗癌組成物。

6. 経口で投与する形態であることを特徴とする前項 5の組成物を含むガンの治療剤。

7. I L一 1 2誘導能を治療マーカーとして、 j3 1 ,3Z 1 ,6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。

8. NK細胞及び又は NKT細胞の活性化能を治療マーカーとして、 β 1 ,3/ 1，6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。

9. 腫瘍新生血管阻害能を治療マーカーとして、 β 1， 3 1 ,6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。

1 0. I L— 1 2誘導能、腫瘍新生血管阻害能、 ΝΚ 細胞活性化能、及び Ζ又は ΝΚΤ細胞活性化能を治療マーカーとして、 ]3 1 ,3 1 ,6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。

1 1. 前項 6〜1 0の情報を自然法則を利用した媒体に担持した商業用媒体。

1 2. 前項 1 1の商業用媒体を利用した商業方法。

からなる。図面の簡単な説明

(図 1 ) 腫瘍体積への影響を示す。 6 dは、 6日目の結果である。

(図 2) 腫瘍体積への影響を示す。 9 d、 1 3 dは、各 9日目、 1 3日目の結果である。

(図 3) I L— 1 2誘導量への影響を示す。 7 dは、 7日目の結果である。

(図 4) I L一 1 2誘導量への影響を示す。 1 0 d、 1 4 dは、各 1 0日目、 1 4日目の結果である。

(図 5) 臨床例 1

(図 6) 臨床例 2

(図 7) 臨床例 3

(図 8) 臨床例 4

(図 9) 臨床例 5

(図 10) 臨床例 6

(図 1 1) イミュトール投与前後における、 IL-12 生産能力の変化を図式化した

(投与前 26 1例、投与後 248例）。

(図 12) カテゴリ一別のイミュトール投与前後における、 IL-12 生産能力の変化を図式化した。効果ァリはカテゴリーが上昇した症例に該当（例 PR→CR、 PD →NCなど）。現状維持はカテゴリーが変化しない症例に該当（例 CR→CR、 NC →NCなど）。効果ナシはカテゴリーが落ちた症例に該当（例 CR→PR、 NC→PD)。

(図 1 3) イミュトール投与前後における、 NK細胞数（CD3— CD16 1+) の変化を図式化した（投与前 244例、投与後 234例）。

(図 14) イミュトール投与前後における、 NKT細胞数（CD3+CD1 6 1 +) の変化を図式化した（投与前 26 1例、投与後 247例）。

(図 1 5) イミュトール投与前後における、血管内皮細胞増生因子（VEGF) の変化を図式化した（投与前 259例、投与後 255例）。発明を実施するための最良の形態

本発明の主成分 NB G又はィミュトールは、 β 1 ,3 1 ,6グルカン構造を有している酵母である。詳しくは、パン酵母（Saccharomyces cerevisiae) 由来の商品名 N B G (NB G： Norwegian Beta GlucanTM)又はィミュトール（ β 1，3/1，6グルカン、マンノース不含、酵母細胞壁蛋白由来物不含：製造元 ImmunoCorp) である。検討の結果、 ]3 1 , 3 / 1 , 6グルカン構造を有している酵母は、強力な I L— 1 2誘導剤であり、特に進行性、末期性ガンにおける強力な I L一 1 2誘導剤であることを見出した。さらに、 3 Ι,ΒΖΙ,Θグルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）の経口投与により、 ΝΚ細胞活性化能、 ΝΚΤ細胞活性化能、腫瘍新生血管阻害能を期待しうる抗癌組成物であることを新規に見出した。

本発明者は、 I L一 1 2産生誘発剤には、 AHCCのように初期癌の患者に特に効果的に I L一 12産生誘発をおこす物質の他に、本発明からなる ]3 l,3Zl, 6グルカン構造を有している酵母由来物のように進行性の癌又は末期癌の患者にも特徴的に I L一 12産生誘発効果を発揮する物質の存在を見出した。

本発明の組成物又は経口摂取用健康補助食品製剤は、肺癌、肺腺腫、胸腺腫、甲状腺癌、膀胱癌、結腸癌、直腸癌、盲腸癌、尿管癌、乳癌、子宮頸癌、脳腫瘍、舌癌、咽頭癌、鼻腔癌、喉頭癌、胃癌、肝癌、胆管癌、精巣癌、卵巣癌、子宮体癌、悪性黒色腫、脂肪肉腫等の治療に有効である力これらの癌に限定されない。とくに、 AHCC (株式会社ァミノアップ）等の I L_ 1 2産生誘発剤を投与しても I L— 1 2量が低値（例えば 7. 8 p gZm l以下）の者に好適に投与される。

本発明に係る IL-12産生誘導剤、 NK活性化剤、 NKT活性化剤は、免疫測定法による結果を指標として、その活性化を誘導または増強し、さらに活性化を維持できる処方にて用いられる。すなわち、指標をもとに、その活性化を誘導または増強し、さらに活性化を維持できる投与量、ならびに投与期間を選択して用いられる。当該 IL- 12産生誘導剤、 NK活性化剤、 NKT活性化剤は、好適には経口摂取される。無論、投与量を減少させ、これらを非経口に耐え得る品質に調製することで、非経口摂取（静脈内または筋肉内投与などを含む）も可能である。

また、イミュトール投与による、該投与前後の免疫に与える影響を以下のマーカーを用いて測定、検討した。

①血管新生阻害作用

血管新生阻害作用は、血管内皮細胞増殖因子（VEGF) [-VEGF： VEGF (血管新生増生因子）の反数（VEGF測定数値にマイナス 1を掛けて算出したパラメ一ター数値）〕を測定することでその効果は判定が可能であり、 VEGF 値のマイナス（負）値（-VEGF) で評価できる。この VEGF値の替わりに FGF、 HGFなどのその他の血管増殖因子を用いることも血管新生阻害能を評価することが可能である。

また VEGF の替わりに血管新生阻害作用の正数値でもその評価が可能である (例えばェンドスタチン値）。

② IL-12産生能力

CTL 活性は CD8( + )パーフォリン産生能力で判定が可能であるが、この CD8( + )パーフォリン値には細胞障害性 T細胞 (CTL)と免疫抑制性 T細胞 (STC; Suppressor T cell)とがあり、前者はガン細胞を障害し、後者の活性化は結果的にガンの増殖につながる。したがってその絶対値では評価はできない。しかし前者は IFN_Yが 10 IU/ml以上かもしくは IL-12値が 7.8 pg/ml以上であれば CTLであり、 IFN_Yと IL-12が低値であれば STCと判定される。そこで CTL活性は、 IFNY産生能力（IFNY値）もしくは IL-12産生能力 (IL-12値)で評価が可能である。

③ NKと NKT細胞活性化能

NKと NKT細胞とは NKR-P1(NK細胞受容体 CD161( + ))を共有しており、前者は CD3(— )CD161( + )の表面マーカーで NK細胞数は測定可能であり、その活性化は CD3(— )CD161( + )パーフォリン産生能力で判定が可能である。一方後者の NKT細胞は CD3( + )CD161( + )でその細胞数は測定が可能となり、そのパーフオリン産生能力で NKT細胞の活性化は測定可能である。

したがってガン治療における新免疫療法（NITC) であっても一般的な免疫療法であっても以下の測定項目でそれぞれの effector細胞もしくは血管新生阻害作用を評価することが可能である。具体的には、 CTL活性は IFNyあるいは IL-12 の誘導産生能力で評価が可能である。 NK細胞の活性化は CD3(_)CD161( + )もしくは CD3(—） CD16 + )パーフオリン値でも評価可能である。 NKT細胞の活性ィ匕は CD3( + )CD161( + )もしくは CD3(+)CD161( + )パーフオリン値でも評価が可能である。

細胞および各マーカーの測定方法を以下に例示する。

(NKT細胞の測定）（NK細胞の測定）（CD8の測定）

NKR-P1を有する NKT細胞の測定は、 NKT細胞の細胞表面に特異的に存在する細胞表面抗原（CD3 および CD161) の測定により行うことができる。具体的には、末梢血中のリンパ球について、 CD3が陽性でかつ CD161が陽性（CD3 ( + ) CD161 ( + ) ) の細胞を検定する。つまり、 NKT細胞の細胞表面抗原である CD3 および CD161 を、モノクローナル抗体を用いてフローサイトメトリーを使用する Two Color検査により測定する。ここで NKT細胞が活性化されているとは、リンパ球の中で CD3 ( + ) CD161 ( + ) NKT細胞の割合が 1 0 %以上、より好ましくは 1 6 %以上であることをいう。 NKT細胞活性化能とは、 NKT細胞の割合を 1 0 %以上、より好ましくは 1 6 %以上に増加せしめる機能、またはある物質を投与する前の NKT細胞の割合より更に増強せしめる機能を意味する。

同様に（CD3 ( - ) CD161 ( + ) ) とは CD3が陰性でかつ CD161が陽性の細胞を検定することである。この方法が本発明では NK細胞の測定に有用であることを確認した。

さらに CD8 ( + ) とは CD8が陽性の細胞を検定することである。この方法が本発明では CTL活性の測定に有用であることを確認した。

実施例ではガン患者の血液を用いて、血中細胞について細胞表面抗原である CD3、 CD161、 CD8について陽性 ·陰性で区別し、各細胞の割合を、フローサイトメトリーを用いた Two Color検査により常法通り測定した。このとき CD3、 CD161、 CD8に対するモノクローナル抗体は、それぞれコールター社製又はべクトンディッキンソン社製ものを使用した。

(パーフオリン産生細胞の測定）

末梢血中のリンパ球について、細胞表面抗原である CD3、 CD8、 CD161 のうち 2者とパ一フォリンについてフローサイトメトリ一を用いた Three Color検査により常法通り測定する。具体的には、採取した血液に固定液を加えて細胞を固定し、膜透過液を添加後抗パーフォリン抗体（Pharmingen社製）を添加して反応させ、さらに P R E— C y 5標識二次抗体（DAKO社製）を添加して反応させ、ついで抗 CD3-PE (Coulter 6604627) 抗体および抗 CD161-FITC (B_D) 抗体を添加して反応させ、その後フローサイトメトリーで測定する。図中での略語は PERFと表示した。

(サイトカインを測定するための試料の調製）

まず、血液より単核球画分を分離調製する。へパリン加末梢血をリン酸緩衝生理食塩水（Phosphate Buffered Saline) (PBS) で 2倍に希釈して混和した後、 Ficoll-Conray 液（比重 1 . 0 7 7 ) 上に重層し、 4 0 0 Gで 2 0分間遠沈後、単核球画分を採取する。洗浄後、 1 0 %牛胎児血清（F B S ) を加えた R P M I - 1 6 4 0培地を加え、細胞数を 1 X I 0 ⁶個となるように調製する。得られた細胞浮遊液 2 0 Ο μ ΐにフィトへマグルチニン（Phytohemagglutinin) (DIFCO社製）を 2 O g /m 1の濃度となるように加え、 9 6穴マイクロプレートにて 5 % C〇2存在下、 3 7 °Cで 2 4時間培養し、該培養した細胞溶液中のサイト力インを測定する試料とする。

( I L一 1 2量の測定）

誘発される I L一 1 2量の測定は、後述するマウスを用いた実験例では血清中に十分な I L _ 1 2量の誘発があり、ヒ卜におけるような間接的な測定をすること無しに直接酵素免疫測定法（E L I S A)による測定キットで測定可能である。マウスを用いたこの系では、経口により I L— 1 2産生誘発物質を継続的に摂取させ、その後の血中 I L— 1 2量の増加により I L— 1 2産生誘発能を検定できる。

なおヒトにおいては、血中における阻害剤の存在により、直接血液中の I L一 1 2量は測定できず、例えば癌患者において誘発される I L一 1 2量の測定は、該癌患者の血液から分離調製した末梢血単核球に刺激物質を与えて培養した後の遠沈して細胞を除いた培養液に対して行う。培養に用いる細胞の数は 0 . 5 X 1 0 ⁶個/ m 1〜： 1 X 1 0 ⁷個/ m 1であり、好ましくは 1 X 1 0 ⁶個 1である。また、細胞を刺激する物質としては、従来使用されているマイト一ジェンであるフィトへマグルチニン（PHA) を、終濃度 0. ：!〜 1 0 0 g/m 1、好ましくは 1〜2 0 μ g/m 1 となるように加えて培養する。細胞を刺激する物質としては、 PH Aに限定されるものではなく、本発明の目的を達成するため、細胞を刺激して免疫生理活性物質を産生させることができる物質であれば良く、 PMA (P h o r b o l 1 2 -My r i s t a t e— 1 3— A c e t a t e)、 PMA + I o n o my c i n、 L P S (L i p o p o l y s a c c h a r i d e)、 P W M (P o k e We e d M i t o g e n) などが挙げられる。 I L— 1 2量の測定は自体公知の臨床、生化学的検査を利用できるが、 R&D SY S TEMS 社や MB L社より入手することのできる酵素免疫測定法（E L I SA) による測定キットが使用される.。ここで I L一 1 2産生誘発能とは、末梢血単核球が刺激により産生する I L_ 1 2量を、 7. 8 p gZm 1以上に増強せしめる機能、又はある物質を投与する前の I L— 1 2産生量より増強せしめる機能を意味する。 (血管新生阻害能の測定）

(血管内皮細胞増殖因子、 VEGFと塩基性繊維芽細胞増殖因子、 b FGF及び血管新生阻害因子ェンドスタチン、 endostatinの測定）

市販キッ卜の各酵素免疫固相法（ELISA： enzyme linked immuno sorbent assay) (ACCUCYTE Human VEGF, ACCUCYTE Human bFGF, ACCUCYTE Human Endostatin: CYTIMMUNE Sciences Inc.) で血清中濃度を測定した。本発明の経口摂取用組成物は、 I L一 1 2産生誘発能を有する活性成分として NBG又はィミュトールを含有し、それは 1 ,3/ 1 , 6グルカン構造を有している酵母由来成分である。

本発明の I L— 1 2産生を誘発せしめる活性成分として ]3 1 , 3/ 1 ,6グルカン構造を有している酵母由来成分 NBG又はィミュトールを含有する経口摂取用組成物は、癌の各進行段階における I L— 1 2産生誘発能において公知の AHC Cと大きな差異を有する。本発明の /3 1 , 3/ 1 ,6グルカン構造を有している酵母由来成分を有効成分とするものは、癌の初期段階においても十分な I L一 1 2 産生誘発能を示し、特徴的には進行した末期癌においても同等もしくはより強力な I L— 1 2産生誘発能を発揮する。一方、 AHCCは、癌の初期段階において特徴的な I L一 1 2産生誘発能を発揮するが、癌の進行とともにその誘発能は減衰していく。

本発明の経口摂取用組成物の投与量は、 1 日当たり l Z O O OmgZk g体重、より好ましくは 1 0〜2000mg/k g体重程度であり、 1 0日〜 1ケ年、 1〜数回ノ日で、好適には経口摂取される。無論、投与量を減少させ、化合物を非経口に耐えうる品質に調製することで、非経口摂取も可能である。

本発明の主成分である β 1, 3 Ζ 1,6グルカン構造を有している酵母由来成分 NBG又はイミュトールは、食品素材として公知である。例えば NBG又はイミュトール（ImmunoCorp)等が例示される。なお、本発明では、市販品をサンプルとした。

経口製剤は、錠剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤等に調製される。製剤は、無論既知の賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤等必要な添加物を配合し、常套手段を使用することでも製剤化できる。さらに必要に応じて、矯味剤、着色料、香料、安定剤、殺菌剤、防腐剤等の添加も可能である。

以上説示したように本発明は、 β 1,3/1,6グルカン構造を有している酵母由来成分 NBG又はィミュトールを有効成分とする経口摂取用組成と癌の進行段階による I L一 1 2産生誘発能との関係を明らかにし、また、 /3 1,3Zl ,6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）の投与と IL-12産生能増強、血管新生阻害作用、 ΝΚ細胞及び/又は ΝΚΤ細胞活性化との関係を明らかにしたものであるから、これらのことを商業的媒体に担持させれば、当該製品の価値について差別化手段となる。従って、これら情報を商業的媒体に担持させた物は、極めて有用性の高いものである。そのうえ、これら情報を商業的に利用すれば、当該製品の価値について差別化手段となるから、これら情報を利用した商業方法は、極めて有用性の高いものである。以上のような情報は、自然法則を利用した媒体に担持すれば有用な商業用媒体となり、またその商業用媒体は有用な商業方法を提供する。実施例

以下に、実施例を用いて本発明を具体的に説明するが、本発明は本実施例に限定されるものではない。 (実施例 1 )

]3 1 , 3/ 1，6グルカンを有するパン酵母（アルペンローゼ実用パン酵母（3 0 Omg/k g) およびノルウェー産パン酵母抽出物（NBG 1 OmgZk g)) で免疫学的抗腫瘍作用と I L一 1 2産生能力を検討した。尚、それぞれの投与量は各群におい ]3 1,3/1,6グルカンの含有量が同量になるように調整して投与した。

実験は、 B 1 0マウス（C 5 7 B L/ 1 0 ) に 3 L L腫瘍を 2 X 1 0⁶ cells/mouse移植し 1 3日目腫瘍体積および I L一 1 2産生量で比較した。

腫瘍移植後水の強制経口投与の control (A) が 239. 4 1 ± 1 5 Omm ³に対し、普通パン酵母'乾燥酵母（B) (30 Omg/k g)では controlに比較し、増大傾向が認められた。

NBG (1 0mg/k g) 投与例は（7 1. 88 7 ±44. 5 92 mm³) と有意に縮小していた（Pく 0. 0393)。図 1及び図 2。

血中 I L-1 2濃度に関しては NBG (1 Omg/k g) は control (A) に対して有意な I L - 1 2濃度の増加を認めた。 I L一 1 2濃度は Amersham Pharmacia の Biotrak RPN2702Interleukin-12total{(m) I L— 1 2 }、 ( p 40andp70),mouseELISA system キットで計った。

すなわち、水強制経口投与 control (Α') に比較し、試験群はいずれも I L— 1 2は高値を示し、 NBGは有意に I L— 1 2濃度の増加があった（図 3及び図 4)。臨床例

以下に、臨床例を用いて本発明を具体的に説明するが、本発明は本臨床例に限定されるものではない。また用いた療法の有効性を、日本国厚生省の GCP に基づく抗がん剤の効果判定基準（Standard for judgement of the efficacy of anti-cancer agent under GCP of the Japan Ministry of Health and Welfare)に則って、完全治癒（C R )、部分治癒（P R )、無反応（がんの進展無し）（N C ： No Change) , または無効（ P D ： Progressive Disease) として表した。 (臨床例 1 )

I.Y. 60y.o. 直腸癌、肝転移、肺転移

患者は、直腸癌で肝転移と肺転移が認められている。 200X年 9月 12 日よりベターシヤーク MCと ILX (登録商標） 6.0g/日、 ILY (登録商標） 3.0g/日、クレスチン 3.0g/隔日でキノコ菌子体の ]3 - 1,3 グルカン投与を開始した。この治療法は八木田が NITCとなずけている。 NITCを開始して 5ヶ月間は NCの状態が維持されたが 6ヶ月目に入り腫瘍マーカーのほとんどが上昇した。

そこで酵母由来の ]3 -1,3グルカンであるィミュトール 6T/日の投与を開始した。イミュトール開始後 2ヶ月で IFN yと IL-12は著増し、腫瘍マーカ一も減少に転じた。投与 3ヶ月目でも腫瘍マーカーはさらに改善し PRの状態を維持している。本症例もキノコ菌子体では NCそして PDとなった症例に酵母 ]3 -1,3グルカンを追加投与することで腫瘍の縮小に誘導することが可能となった。

詳細データは、図 5に示した。

(臨床例 2 )

N.H. 56y.o. 乳癌、腋窩リンパ節転移

患者は、 50歳の女性で 200 &年 7月 21 日に右乳癌で乳房切除と腋窩リンパ節転移巣切除を受けている（癌研にて）。 200 &年 11月、肝転移が出現し、 200X年 3月 26 日の肝部分切除を受けた。 200X年 4月 20 日より NITCを開始した。平成 200X年 6月 12 日には肝切除断端に多数の肝転移と両肺転移が認められた。そこで ILY3.0g/隔日投与を開始する。 7月 13 日より ILY3.0g/毎日に変更する。 1 ヶ月後の 8月 4 日の腫瘍マーカーは CEAが 773ng/ml、 NCC 13 U/ml、 I CTP 7.7ng/ml と一部のマーカーが低下している。 HER-2 が（+++) であったため癌研で 8月 7 日より（パクリタキセル +ハーセプチン）の毎週の投与を開始する。以後 CEAは順調に低下し 200X年 11月には 4.3ng/ml、 SLX-1も 30U/mlといずれも正常値となり CR と判定された。しかしそれ以後 CEA値は漸増したためタキソールを中止してハーセプチン単独とした。

免疫活性力を強化するためにィミュトール 4T/日を 200Y年 3月 23日より開始する。

その後 CEA値は 1力月後の 81.8ng/mlと上昇したが 2力月後に 55.7ng/ml、 3 力月後に 27.4ng/mlと低下し PRと判定された。

この事実はキノコ菌子体の ILX 6.0g/日、クレスチン 3.0g/隔日に ILYを追加投与し、さらにタキソールとハーセプチンの追加投与で腫瘍マ一カーは著減し、一時 CRとなったが 200Y年 1月から再上昇し PDと判定された。

そこで酵母 /3 -1，3グルカンのィミュトール 4T/日を追加投与したが腫瘍マーカ一は著明に低下し PRと判定された。

この事実は酵母 β -1,3グルカンの免疫活性によるものと考えられた。

詳細データは、図 6に示した。

(臨床例 3 )

Μ.Η. 43歳、肺腺癌、肝転移

患者は、右肺腺癌で肝に 3個の転移が認められて免疫療法を希望して来院する。 200Χ年 7月 27 日から血管新生阻害剤のベターシヤーク MC とキノコ菌子体 j3 •1,3グルカンの ILX (6.0g/日）、 ILY (3.0g/日）、クレスチン（3.0g/隔日）の服用を開始した。腫瘍マーカーの CEAが 9.2ng/mlと高値を示し、 Echo (エコー）検査と胸部 CTでも肝転移 3個、右肺に 3cm大の肺腺癌が認められた。 9月 21 日までは、 IL-12が上昇し CEA値も低下傾向を示したが、 200Y年の 1月 11 日に SCC力 S 8.0 と異常値を示したので、酵母のイミュトール（6T/日）投与を開始した。その後 CEA値と SCC値は低下し続け 200Y年 6月 8 日にはすべての腫瘍マ一力一は正常値を示し、肝転移も肺腺癌も消失し CRと判定された。この事実はキノコ菌子体の ILX、 ILYおよびクレスチンで腫瘍の進行は停止したものの充分な免疫活性化が得られなかったが酵母（]3 -1，3 グルカン）を投与することで NC から CRに誘導することが可能となったことを示す。

詳細データは、図 7に示した。

(臨床例 4 )

T.K. 66歳、男性肺腺癌

66歳の男性で肺腺癌の診断を受け 200X年 10月 3日から NITC (ILX 6.0g/日、 ILY 3.0g/日、ベターシヤーク LO 20g/日）を開始する。

1 ヶ月後に CEA (5.0ng/ml以下が正常値）力 S 13.2ng/ml と上昇したが以後 6 ヶ月目まで CEA値は一定であった。

しかし 9ヶ月目から CEA値は上昇し 10ヶ月間上昇しこの間は PDと判定された。

そこで酵母製剤であるイミュトール 6カプセル（1.2g) /日分 3で経口投与が開始された。

以後 CEA値は漸減しつづけ、 IL-12の高い産生能力は維持されづづけるとともに NK細胞（CD3-CD161+) と NKT細胞（CD3+CD161+) も細胞数の増加とともに活性の増強も得られた。

詳細データは、図 8に示した。

(臨床例 5 )

I.Y. 72歳、男性肺腺癌 72歳の男性で肺腺癌の症例である。

200X年 6月 3日より NITC (ILX 6.0g/日、 ILY 3.0_g/日、ベターシャーク LO 20g/ 日）を開始する。

以後 5ヶ月間は CEAをはじめ各種腫瘍マーカーは漸増し PDと判定された。その後 9ヶ月目まではマーカーは不変で NCと判定されたがその後 4ヶ月間は

PRであった。その後 14ヶ月目から 20ヶ月目まで PDとなった。

20ヶ月目からイミュトール 3CAP (0.6g) /日分 3の追加投与がなされたが腫瘍マーカーが上昇したためイミュトールを 6CAP (1.2g) /日分 3に増量した。その後腫瘍マーカーは漸減しつづけている。

イミュトールの至適量は 3CAPよりも 6CAPと推定された。

免疫カはィミュトールの増量により IL-12産生能力の増強が認められている。詳細データは、図 9に示した。

(臨床例 6 )

T.F. 52歳、女性上行結腸癌

52歳の女性で、上行結腸癌で肝臓と肺に転移があり、 200Y年 5月 21 日より NITC (ILX 6.0g/日、 ILY 3.0g/日、ベターシヤーク LO 20g/日）が開始された。

6ヶ月間の NC状態がつづいたが 8ヶ月と 9ヶ月目に腫瘍マーカーが上昇し PD と判定された。

そこでイミュトール 6CAP (1.2g) /日分 3の投与が開始された。

イミュトール 6CAP/日投与後 2ヶ月目で IL-12産生能力の上昇とともに NK細胞の数と活性も維持され、 CEA、 Cal9-9、 Span-1 のいずれも正常値内に入り CR と判定された。

詳細データは、図 1 0に示した。

(試験例）

イミュトール投与による免疫に与える影響臨床例と同様な方法で、イミュトール投与前後において各マーカーの値の変化を測定、検討した。また、 IL-12 産生能力をカテゴリ一別（イミュトール投与による効果別）において評価した。

図 1 1は、イミュトール投与前後における、 IL-12 生産能力の変化を表したものである（投与前 2 6 1例、投与後 2 4 8例）。全体では治療前の値 27.90±2.65 pg/mlに比較し、治療後の値 32.43± 2.53 pg/mlと上昇傾向を認められた（p = 0.204) 力有意差は認められなかった。

図 1 2は、カテゴリ一別のイミュトール投与前後における、 IL-12 生産能力の変化を表したものである。効果ァリグループ（1 0 1例イミュトール投与により改善）の治療前 27.0607±2.7835 pg/mlに比較し、治療後の値 39.2038±4.8113 pg/mlと有意な上昇を示した（p < 0.01)。

図 1 3は、イミュトール投与前後における、 NK細胞数の変化を表したものである（投与前 2 4 4例、投与後 2 3 4例）。治療前の値 12.39 ±0.42 %に比較し、治療後の値は 15.48±0.48 %と有意の改善が認められた（pく 0.001)。

図 1 4は、イミュトール投与前後における、 NKT細胞数の変化を表したものである（投与前 2 6 1例、投与後 2 4 7例）。治療前の値 12.09± 0.29 %に比較し、治療後の値は 13.03±0.32 %と有意の改善が認められた（pく 0.001)。

図 1 5は、イミュトール投与前後における、血管内皮細胞増生因子（VEGF) の変化を表したものである（投与前 2 5 9例、投与後 2 5 5例）。治療前の値 426.12±26.06 pg/mlに比較し、治療後の値は 380.79± 19.16 pg/mlと有意に低下していた（ p < 0.05)。

以上の結果から、 13 1 , 3 1 , 6グルカン構造を有する酵母由来成分ィミュトール（商品名）の投与が臨床において有効であることを確認した。また、 ΐ , 3 Ζ 1 , 6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）の投与と IL-12 産生能増強、腫瘍新生血管阻害能、 Ν Κ細胞活性化能、及び/又は Ν Κ Τ 細胞活性化能に相関がみられた。この結果、 I L一 1 2誘導能、腫瘍新生血管阻害能、 Ν Κ細胞活性化能、及び/又は Ν Κ Τ細胞活性化能を治療マーカーとして、 jS 1 ,3 1，6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることがガン治療に有効であることを確認した。産業上の利用可能性

β 1, 3 Ζ 1,6グルカン構造を有する酵母由来成分 NBG又はィミュトールを含有する組成物が、従来にない効果的な I L_ l 2誘導剤であることを新規に見出し、さらに /3 1,3ノ 1,6グルカン構造を有する酵母由来成分ィミュトール（商品名）の経口投与により、 NK細胞活性化能、 NKT細胞活性化能、腫瘍新生血管阻害能を期待しうる抗癌組成物であることを新規に見出し、本発明からなる抗癌組成物の提供に成功した。

Claims

請求の範囲

1. 1， 3 1,6グルカン構造を有する酵母由来成分 NBG又はィミュトーノレ（商品名）を含有する I L一 1 2誘導剤。

2. 1,3 1，6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を含有する NK細胞及び/又は NKT細胞活性化剤。

3. 生体への摂取量として ]3 1， 3 1 ,6グルカン構造を有する酵母由来成分 NBG又はイミュトールを 10mg〜200 OmgZ体重 k gZ日で経口摂取する請求項 1の誘導剤又は請求項 2の活性化剤。

4. 請求項 1〜3記載の経口摂取用健康補助食品製剤。

5. /3 1， 3/ 1,6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を含有する I L一 1 2誘導能、 NK細胞活性化能、 NKT細胞活性化能、及び Z又は腫瘍新生血管阻害能を期待しうる抗癌組成物。

6. 経口で投与する形態であることを特徴とする請求項 5の組成物を含むガンの治療剤。

7. I L一 12誘導能を治療マーカーとして、 β 1,3/1,6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。

8. ΝΚ細胞及び/又は ΝΚΤ細胞の活性化能を治療マーカーとして、 i3 1,3ノ 1，6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。

9.腫瘍新生血管阻害能を治療マーカーとして、 β 1, 3 1,6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。

1 0. I L- 1 2誘導能、腫瘍新生血管阻害能、 ΝΚ細胞活性化能、及ぴノ又は ΝΚΤ細胞活性化能を治療マーカーとして、 β 1，3 1,6グルカン構造を有する酵母由来成分イミュトール（商品名）を摂取させることを特徴とするガンの治療方法。

1 1. 請求項 6〜 1 0の情報を自然法則を利用した媒体に担持した商業用媒体。

1 2. 請求項 1 1の商業用媒体を利用した商業方法。