WO2003041740A1

WO2003041740A1 - Agent de necrose tumorale

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Publication number: WO2003041740A1
Application number: PCT/JP2002/011918
Authority: WO
Inventors: Katsuyoshi Hori
Original assignee: Ajinomoto Co Inc
Current assignee: Ajinomoto Co Inc
Priority date: 2001-11-16
Filing date: 2002-11-15
Publication date: 2003-05-22
Anticipated expiration: 2004-05-16
Also published as: US20070264198A1; US20050003467A1; JPWO2003041740A1

Description

技術分野

本発明は新規腫瘍壌死剤等の薬剤（医薬品）、腫瘍壊死作用を有する物質の腫瘍壌死剤製造への使用、腫瘍壌死作用物質のスクリーニング方法及び腫瘍の治療、改善方法、特に腫瘍を壌死せしめる方法に関する。本発明によれば、腫瘍の治明

療を求める動物、特にヒト（患者）に対して腫瘍を有効かつ選択的に破壌又は損田

なうに適した薬剤に使用する有効成分を提供し、その有効成分の薬剤への使用、このような有効成分のスクリ一二ング方法やこのような薬剤を使用して腫瘍を治療することができる。背景技術

癌化学療法の最終目標は、抗癌剤を使用して生体内で増殖する全ての癌細胞を攻撃し削除することにある。従って、抗癌剤の対象はこれまで癌細胞に向けられてきた。しかしながら、癌細胞に対して強い細胞毒性を示す化学物質は同様に、造血細胞や消化管粘膜細胞等、積極的に分裂する正常細胞に対して同様の効果を有しており、ひどい副作用を弓 ,ίき起こす。現在、腫瘍に対して選択的な毒性を示' す薬剤は極めて少ない。

このような情況下に、副作用が無いか少なく、腫瘍組織（細胞）を選択的に攻撃する薬剤の開発が求められている。

発明が解決しょうとする課題

本発明が解決しょうとする課題は、上記腫瘍組織を選択的に攻撃し、縮小又は削除することができる薬剤のための有効成分を開発し、このような薬剤を製造したり、提供したりして副作用を極力抑えた腫瘍の選択的治療に貢献することにある。発明の開示

本発明者等は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、腫瘍を生じた実験動物の生体内で、下記作用を有する物質が腫瘍組織に対して有効かつ選択的に攻撃し腫瘍を破壌し害うが、正常組織に対しては殆ど副作用を示さないこと、更に腫瘍の種類や腫瘍が発生する部位には限定されないこと等を見出し、これ等種々の知見に基づいて本発明を完成するに到った：

ィ. 腫瘍組織に栄養成分を供給する血管を収縮せしめる作用、及び

口 . 当該腫瘍組織周縁部血管内の赤血球を溶血せしめる作用。

特に、この作用を有する物質の例として、制癌作用を有するコンブレタスタチン（Combretastatin) 誘導体或いはスチルベン誘導体（J. Med. Chem. 41 : 3022- 3032 , 1998; Bioorg. Med. Chem. Lett. 8: 3153-3158， 1998; Bioorg. Med. Ch em. Lett. 8: 3371-3374, 1998; 米国第 56，122号、米国第 5，430，062号特許、特開平 7- 228558号公報、特開平 8-301831号公報、 TO93/23357号明細書等参照。）に見出されること、特に（Z)-N- [2-メトキシ- 5- [2-(3，4，5-トリメトキシフエニル) ビュル]フエニル] -L-セリンアミド塩酸塩 ((Z)-N- [2-methoxy-5- [2-(3,4, 5-trim ethoxyphenyl)viny丄」 phenylj一し serinamide hydrochloride

；以下、「MTPVS」と称する。）にそのような作用を有することも確認された。即ち、本発明は一つの形態として、腫瘍を有する生体内に投与したときに、下記作用を有する物質を含有することに特徴を有する月重瘍壌死剤等の薬剤 ( 「本発明の薬剤」とも称する。）：

口 . 当該腫瘍組織周縁部血管内の赤血球を溶血せしめる作用、

に存する。

当該血管を収縮せしめる作用については、好ましくは腫瘍血流支配血管を強力かつ持続的に収縮させ腫瘍の血流を低下又は停止せしめる作用であり、当該赤血球を溶血せしめる作用については、好ましくは赤血球を溶血させ腫瘍の血管を栓塞せしめる作用である。上記作用を示す物質により腫瘍組織の血流を不可逆的に遮断し、腫瘍を壌死せしめることができる。

上記作用の有無検出には腫瘍（特に制限は無い。）を有する実験動物、例えばラット等のげつ歯類を用いて容易に行うことができる。この場合の実験動物に対する投与形式については制限は無いが、静脈内投与が目的とする効果を高感度に確認することができるので有利である。

当該作用の有無の判定については、対照群、例えば生理食塩水投与群との比較において容易に確認することができるが、当該作用が、対照群との比較で有意差を有するものが好ましい。より好ましい方法として、 MTPVSと、例えばラット等のげつ歯類に投与したときに同等又はそれ以上である物質を使用することもできる。そのような作用の有無を判定する方法として、試料を実験動物、例えばラット等のげつ歯類に投与し、腫瘍の生体顕微鏡観察或いは病理組織を対照群投与のものと比較する方法が簡便である。

本発明は、別の形態として、腫瘍を有する生体内に投与したときに、前記ィ及び口に記載の作用を有する物質の腫瘍壊死剤製造への使用にも存する。

この発明は、前記本発明の薬剤に使用する有効成分を当該薬剤に使用する方法であり、それ自体を薬剤として使用することもできるが、必要により従来から使用される各種の製剤用 (例えば、抗腫瘍剤用）の担体や添加剤を併用使用して製剤を製造することもできる。その際、有効成分の物性や剤形により適当な収納容器中に保存することができる。

前述の如く、当該血管を収縮せしめる作用については腫瘍血流支配血管を強力かつ持続的に収縮させ B重瘍の血流を低下又は停止せしめる作用であり、当該赤血球を溶血せしめる作用については赤血球を溶血させ腫瘍の血管を栓塞せしめる作用であることが好ましい。

なお、当該腫瘍壊死剤については、前記記載された腫瘍壊死剤（本発明の薬剤 ) の何れかの形態を使用することができる。

従来知られている抗腫瘍剤の中には、有効性及び選択性において本発明におけるような優れた抗腫瘍剤についての報告は見当たらないが、目的とする前記作用の程度を問わなければ既知の抗腫瘍剤の中にもそのような物質が含まれるので、このような既知の抗腫瘍剤或いはその有効成分（MTPVS等）以外の物質を選択、使用する必要がある。

本発明は、更に別の形態として、腫瘍を有する実験動物の生体内に試料を投与後、前記ィ及び口の作用の有無を検定し、その両方の作用を有する試料を選別することに特徴を有する腫瘍壌死作用物質のスクリ一二ング方法にも存する。

この発明は、前記本発明の薬剤において「腫瘍を有する生体内に投与したときに、前記ィ及び口の作用を有する物質」を具体的に選択又は選別する方法に該当する。従って、この発明については前記本発明の薬剤の発明についての説明を全て参照することができる。

特に当該血管を収縮せしめる作用が血管を収縮させ腫瘍の血流を低下又は停止せしめる作用であり、当該赤血球を溶血せしめる作用が赤血球を溶血させ腫瘍の血管を栓塞せしめる作用であることが好ましい。

当該腫瘍を有する実験動物についてはラット等のげつ歯類を使用するのが入手、管理及び取り扱い等の点で好ましく、当該投与方法についても静脈内投与である方が好ましい。

当該試料の投与量については、ラット等のげつ歯類の場合、好ましくは 0. 01〜 1000mg/kg程度、より好ましくは 0. 05〜500mg/kg程度、更に好ましくは 0.：!〜 100 mg/kgを採用することができる。

このようなスクリーニング方法で得られ、又は得ることができる物質や組成物も本発明に含まれる。但し、好ましくは抗腫瘍剤として公知の物質及び組成物は除かれるべきである。

本発明は、他の形態として、腫瘍を有する生体内に投与したときに、前記ィ及び口の作用を有する物質を腫瘍の治療を求める動物、特にヒト（患者）に投与することに特徴を有する腫瘍の治療、改善方法、特に腫瘍を壊死せしめる方法にも存する。

前述の如く、当該血管を収縮せしめる作用が血管を収縮させ腫瘍の血流を低下又は停止せしめる作用であり、当該赤血球を溶血せしめる作用が赤血球を溶血させ腫瘍の血管を栓塞せしめる作用であることが好ましい。

当該投与する形態については、前記記載された腫瘍壊死剤（本発明の薬剤）の何れかの形態を使用することができる。図面の簡単な説明

[図 1 ]

図 1は、 MTPVS投与前の腫瘍及び腫瘍中へ栄養成分を供給する細動脈の顕微鏡写真を図示したものである。矢印部分が腫瘍中へ栄養成分を供給する細動脈である。

[図 2 ]

図 2は、 MTPVS投与 15分後の腫瘍及び腫瘍中へ栄養成分を供給する細動脈の顕微鏡写真を図示したものである。

[図 3 ]

図 3は、 MTPVS投与 2時間後の腫瘍及び腫瘍中へ栄養成分を供給する細動脈の顕微鏡写真を図示したものである。

[図 4 ]

図 4は、 MTPVS投与 2. 5時間後の腫瘍及び腫瘍中へ栄養成分を供給する細動脈の顕微鏡写真を図示したものである。左上部挿入部分は B重瘍周縁部の血管を拡大したものである。発明の実施の形態

以下、本発明の実施の形態について説明する。

本発明には、幾つかの形態、即ち腫瘍壌死剤（薬剤）、その有効成分として使用することができる腫瘍壌死作用物質のスクリーニング方法、当該腫瘍壌死作用物質の腫瘍壊死剤製造への使用、及び腫瘍の治療、改善方法等が含まれる。

(有効成分が有する作用の内容及びその確認）

即ち、本発明は下記の作用（ィ及び口の作用）を動物の生体内で発現する物質を薬剤の有効成分のために使用し又はそのように使用した薬剤、その薬剤の治療等での使用、或いはそのような作用を有する物質（前記有効成分）をスクリー二ングする方法等に存し、従って下記の作用の内容やその確認（判定）方法が重要となる：

従って、先ずこの作用の内容について、若干説明する。

腫瘍組織に栄養成分を供給する血管については、腫瘍組織に含まれる血管ではなく、その組織に血液を供給する血管、例えば細動脈であればよいが、好ましくは腫瘍組織に血液を流入する直前の血管である。血管を収縮せしめる作用とは、例えば血管の内径を縮小せしめる作用であり、生体顕微鏡観察により容易に確認し、判定することができる。

血管を収縮させることにより、腫瘍の血流を低下又は停止せしめることができ、この結果腫瘍組織への栄養成分の供給を制限又は遮断することができる。腫瘍組織周縁部血管とは、腫瘍組織に含まれている部分の血管であって腫瘍の外周部に存在する血管をいう。

腫瘍組織周縁部血管における赤血球の溶血については、例えばラット等のげつ歯類の腫瘍血管について生体顕微鏡観察、病理組織の比較観察により容易に判定することができる。赤血球を溶血させることにより腫瘍血管を栓塞せしめることができ、この作用は不可逆的な作用である。

このような作用により、好ましくは不可逆的に腫瘍組織の血流を遮断することで腫瘍組織を壌死せしめることができ、この結果、腫瘍組織を選択的に破壊し害うことができる。

一方、正常組織に対しては、このような作用を起こさないし、また、一部起こしても一過性で（可逆的であり）回復容易である。この結果、このような作用を有する物質は副作用を起こさないか、殆ど起こすことなく、目的とする腫瘍組織を有効かつ選択的に破壌し害うことができるので、癌分野の薬剤として極めて期待できる。

このような作用を有する物質を取得するには困難は無く、例えば、ラット等の実験動物に試料を投与し、対照群と比較すればその作用を有する物質を容易に取得することができる（本発明のスクリーニング方法。）。例えば、対照群に対して前記作用を、有意差を以つて示す成分を取得することができる。好ましくは MT PVSとの作用の比較で、この物質と同等又はそれ以上の作用を有する物質を取得することもできる。

(本発明の薬剤）

前記作用を有する物質を有効成分として含有する本発明の薬剤について説明する。

本発明は、前記の如く特定の薬剤、腫瘍壊死剤（本発明の薬剤）、これ等薬剤による治療、改善方法、或いはこれ等薬剤製造のための前記作用を有する物質（有効成分）の使用、前記作用を有する物質のスクリーニング方法等に関し、当該薬剤が本発明において共通する重要な内容を含むということができるので、この薬剤を中心に説明することで、本発明について以下詳細に説明する。

本発明の薬剤は、目的とする薬剤自体、医薬品自体であればよく、これを投与する場合の対象については、制限は無いが、腫瘍の治療、改善を求める者を代表的に挙げることができる。これ等の薬剤を必要とする生体、特に哺乳動物、通常はヒト（患者）に対してその有効量が適用される。

この薬剤の使用方法が、本発明において腫瘍の治療、改善方法に対応する。一方、次に詳細に述べる本発明の薬剤の必須有効成分として使用すること、即ち、実質的にこれと同等である前記作用を有する物質を必須の有効成分として使用し、又はこのように含んだ状態が本発明において、腫瘍壌死剤製造のための前記作用物質の使用に対応する。また、前記有効成分取得方法が本努明のスクリーニング方法に対応する。

本発明の薬剤に使用する必須の有効成分は前記の如く前記作用を有する物質を、例えば実験動物に投与して確認又はそのような物質を選択して（本宪明のスクリーニング方法）、その物質を有効成分に使用することができる。その際、既知の抗腫瘍剤の中にはそのような作用を有することがあるとしても目的とする作用が十分でないか、低いので、後述の実施例に示されるように MTPVSと同等かそれ以上の作用を有する物質を使用することが好ましい。

本発明の薬剤をヒト（患者）等に投与する場合の投与形態については特に制限は無い。従って、経口投与、非経口投与（静脈投与等）各種の投与形態が採用可能であるが、効果の点で静脈内投与が好ましい。

本発明の薬剤は腫瘍壊死効果を有するが、その腫瘍の種類や重症度、腫瘍発現部位等により制限は無く、抗腫瘍効果を求める対象であればこの薬剤を広く適用することができる。

前記有効成分のみを薬剤として使用することもできる力 s、薬理学的に許容し得る各種の製剤用物質（補助剤として）を含むこともできる（以下、「製剤学上許容される担体」とも称する。）。製剤用物質は製剤の剤型により適宜選択することができるが、例えば、賦形剤、希釈剤、添加剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、潤滑剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶化剤等を挙げることができる。更に、製剤用物質を具体的に例示すると、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラタトース、マンニトール及びその他の糖類、タルク、牛乳蛋白、ゼラチン、澱粉、セルロース及びその誘導体、動物及び植物油、ポリエチレングリコール、及び溶剤、例えば滅菌水及び一価又は多価アルコール、例えばグリセロールを挙げることができる。

本発明の薬剤は、前述の如く公知の又は将来開発される様々な医薬製剤の形態、例えば、経口投与、腹腔内投与、経皮的投与、吸入投与等各種の投与形態に調製することができる。本発明の薬剤をこれ等の様々な医薬製剤の形態に調製するためには公知の又は将来開発される方法を適宜採用することができる。

これ等の様々な医薬製剤の形態として、例えば適当な固体又は液状の製剤形態

、例えば顆粒、粉剤、被覆錠剤、錠剤、（マイクロ）カプセル、坐剤、シロップ、ジュース、懸濁液、乳濁液、滴下剤、注射用溶液、活性物質の放出を延長する製剤等を挙げることができる。

以上に例示した製剤形態にある本発明の薬剤には、薬効を奏するに有効な量の前記成分を含有すべきことは当然のことである。

(本発明の腫瘍壊死作用物質の腫瘍壌死剤製造への使用）このような使用とは、主として腫瘍壌死作用物質（有効成分）を製剤化するために使用することであり、前記製剤についての説明に基づいて容易に実施することができる。薬剤中にこのような有効成分を含んだ状態のものもこの使用に含まれる。

本発明の薬剤に使用する腫瘍壊死剤の投与量については、使用する有効成分の前記作用の程度、症状の程度、製剤の形態等に応じて適当に選択される。例えば

、 MTPVSと同程度の作用を有する有効成分を使用する製剤の場合には、経口投与で患者 1日当たり、その有効成分の正味重量で表して好ましくは l m g〜1 0 g 程度、より好ましくは 2 m g〜5 g程度、更に好ましくは 4 m g〜4 g程度投与することができる。また、重篤な場合には更に増量することもできる。投与の回数、時期については、数日に 1回でも、また 1日当たり数回でも可能である。また、静脈投与等非経口投与の場合には上記経口投与に比べて十〜二十分の一程度の投与量でもよい。

(本発明の腫瘍の治療、改善方法）

以上の説明から、本発明の腫瘍の治療、改善方法、特に腫瘍を壊死せしめる方迭に使用する場合の本発明の薬剤の使用方法等についても容易に理解することができ、この方法を容易に実施することができる。

(本発明のスクリーニング方法）

前記作用を有する物質をスクリーニングする方法に関し、適当な実験動物、例えばラット等のげつ歯類を用い、その作用（前記ィ及び口の作用）を確認することにより容易に実施することができる。

前記ィ及び口の作用やその確認をする方法については前記に説明した通りであり、その説明や公知技術を利用して本発明のスクリ一ニング方法を容易に実施することができる。好谪な実施の形 ϋ

以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、この実施例により本発明は何等制限されるものではない。 (実験動物）

Donryuラット（Crj - Donryu；日本チャールズリパー製）雄性。

(腫瘍細胞）

ラッ卜肺癌 ato 丄 ung carcinoma (SIX) 。

(被試験試料）

被試験試料には下記構造式（ 1 )で示される（Z) - N- [2-メトキシ- 5- [2-(3，4，5-トリメトキシフエニル）ビュル]フエ二ル]- L-セリンアミド塩酸塩（（Z)-N- [2- metho xy-5- [2-(3,4, 5-trimethoxyphenyl)vinyl]phenyl] -L-serinamide hydrocnloride ) (MTPVS) を使用した。

( 1 )

(試料調製）

MTPVSの粉末を、濃度が 10mg/mlとなるように生理食塩水に溶解した。溶液（10 mg/kg) は尾静脈より投与した。 Pentobarbital塩 (Nembutal； Abbott Laborator ies製）と enflurane (Ethrane； Abbott Laboratories製）は麻酔のために使用した。 Pentobarbitalは実験 10分前に 25mg/kgの投与量で筋肉内に投与され、実験時間の間中、麻酔を維持するため 90分間隔で適量が追加投与された。小動物用麻酔装置を使って、 enfluraneの濃度は 1 % ( 1 L/min) で維持された。

(実験方法）

腫瘍血流（tumor blood flow；以下、「TBF」と称する。）の変化を生体顕微鏡により観察した。無菌条件下で、ラットの背部皮膚を透明チャンパ一（transp arent chamber) で挟み込み、そこに腫瘍細切片を移植し、腫瘍生着後に実験に供した（Jpn. J. Cancer Res. 81 : 279-288， 1990参照。）。チャンパ一は厚さ 3 ΟΟ μ πιの円形の石英ガラス窓を含む同一の 2つのチタンフレームで構成される。麻酔後、チャンパーをつけたラットは顕微鏡の 34· 5°Cに熱せられたステージに置かれた。

被試験群として使用した MTPVSは注入ポンプを使って尾静脈経由で投与された。 TBFの変化と S重瘍の組織学的変化は接眼レンズ 10倍、対物レンズ 2〜 2 0倍を装着した光学顕微鏡（Eclipse E800；ニコン製）を通して直接観察された。チヤンバー内の腫瘍血管は 12V、 100Wのハロゲンランプにより可視化された。顕微鏡の画像は CCDビデオカメラ（CS-900；ォリンパス光学工業製）、テレビモニタ一及び S- VHSビデオレコーダーを用いて記録された。

(実施例 1 ) 透明チヤンパー内で増殖する腫瘍に対する抗腫瘍効果

透明チャンパ一内で増殖している SLC腫瘍は MTPVS10mg/kg投与後 25時間以内に壌死し、以後この状態は投与 48時間後まで保たれた。

(実施例 2 ) 腫瘍の微小循環の変化の生体顕微鏡観察

腫瘍では、 10mg/kgの MTPVSの静脈内注入により腫瘍へ栄養成分を供給する細動脈が著しく収縮した。それに伴い、腫瘍血流は徐々に低下し、 MTPVS投与 30分後にはほぼ完全に停止した。その際、腫瘍周縁部の血管では血漿量が減少すると共に大量の赤血球が滞留した。これ等の赤血球は MTPVS投与 2〜 3時間以内に溶血し、栓塞を形成した。これ等一連の変化は図 1〜図 4に示されている（図 1〜4 参照。）。図 1は MTPVS投与前、図 2は MTPVS投与 15分後、図 3は MTPVS投与 2時間後、図 4は MTPVS投与 2. 5時間後を観察している。図 4の左上部挿入部分は腫瘍周縁部血管を拡大したものである。図 1〜図 4は 10倍接眼レンズと 4倍対物レンズを使用して撮影した（パーの長さは 500 mである。）写真に基づいている。前記揷入部分は 10倍接眼レンズと 20倍対物レンズを使用して撮影した（パーの長さは 50 μ πιである。）写真に基づいている。栄養成分を腫瘍に供給する細動脈（図 1中矢印部分参照。）は MTPVS投与により著しく収縮したことが分かる（図 2 参照。 ) 。一度溶血性栓塞が起こると（図 4揷入部分参照。）、 TBFは決して回復しなかった。

正常な組織においては、血管構造は正常に保持されていた。

以上から明らかなように、 MTPVSは腫瘍の TBFを遮断し、腫瘍壊死に導くことができる。このように TBFを遮断する機構（メカニズム）は明らかではないが、腫瘍血管への薬剤有効成分、例えば MTPVSの直接的な効果のみならず細動脈を介した間接的な効果が同様に重要であることが示唆された。即ち、最初の段階で薬剤有効成分、例えば、 MTPVS投与による細動脈の著明で持続的な収縮が TBFの顕著な低下を引き起こすものと思われた。一度停止すると TBFが再び回復しなかった理由として、腫瘍周縁部に滞留した赤血球が 2〜3時間内に溶血し、栓塞が形成されたことが考えられる。

TBF遮断に基づく癌化学療法の有効性は、理論上癌細胞の性質とは無関係である。従って、本発明はこれまで手に負えない各種の癌に対する強力な治療、改善に役立つことが期待される。

そのような薬剤の例として、 MTPVSと同等程度かそれ以上の薬剤を挙げることができる。発明の効果

本発明により、副作用が無いか少なく、有効かつ選択的に腫瘍組織を破壌し害うことができる腫瘍壊死剤を提供する。また、腫瘍組織の血流を選択的に遮断することにより腫瘍を壌死せしめる作用を有する有効成分のスクリーニング方法や、その有効成分の薬剤への使用、その薬剤の使用方法、特に腫瘍の治療、改善方法等も提供する。

従って、本発明は、医薬品や、医療、特に癌治療の分野等で産業上極めて有用である。

Claims

請求の範囲

1 . 腫瘍を有する生体内に投与したときに、下記作用を有する物質を含有することを特徴とする腫瘍壌死剤：

2 . 当該血管を収縮せしめる作用が、血管を収縮させ腫瘍の血流を低下又は停止せしめる作用である請求の範囲 1記載の腫瘍壌死剤。

3 . 当該赤血球を溶血せしめる作用が、赤血球を溶血させ腫瘍の血管を栓塞せしめる作用である請求の範囲 1記載の腫瘍壌死剤。

4 . 腫瘍組織の血流を不可逆的に遮断し、腫瘍を壌死せしめる請求の範囲 1 記載の腫瘍壌死剤。

5 . 当該作用が、 (Z)-N - [2-メトキシ- 5- [2- (3，4，5 -トリメトキシフエ二ル）ビエル]フエ二ル] - L-セリンアミド塩酸塩と同等又はそれ以上である請求の範囲 1記載の腫瘍壊死剤。

6 . 当該物質が既知の抗腫瘍剤成分以外の物質である請求の範囲 1記載の腫

7 . 腫瘍を有する実験動物の生体内に試料を投与後、下記作用の有無を検定し、下記両方の作用を有する試料を選別することを特徴とする腫瘍壊死作用物質のスクリ一二ング方法：

8 . 当該血管を収縮せしめる作用が、血管を収縮させ腫瘍の血流を低下又は停止せしめる作用であり、当該赤血球を溶血せしめる作用が、赤血球を溶血させ腫瘍の血管を栓塞せしめる作用である請求の範囲 7記載の方法。

9 . 請求の範囲 7又は 8記載の方法で得られ、又は得ることができることを特徴とする物質又は組成物。

但し、抗腫瘍剤として公知の物質及び組成物は除かれる。

10. 腫瘍を有する生体内に投与したときに、下記作用を有する物質の腫瘍壌死剤製造への使用：

11. 当該血管を収縮せしめる作用が血管を収縮させ腫瘍の血流を低下又は停止せしめる作用であり、当該赤血球を溶血せしめる作用が赤血球を溶血させ腫瘍の血管を栓塞せしめる作用である請求の範囲 10記載の使用。

12. 当該腫瘍壊死剤が請求の範囲 1〜 6記載の腫瘍壌死剤の何れかの形態にある請求の範囲 10又は 11記載の使用。

13. 腫瘍を有する生体内に投与したときに、下記作用を有する物質を腫瘍の治療を求める動物に投与することを特徴とする腫瘍の治療、改善方法：

14. 当該血管を収縮せしめる作用が、血管を収縮させ腫瘍の血流を低下又は停止せしめる作用であり、当該赤血球を溶血せしめる作用が、赤血球を溶血させ腫瘍の血管を栓塞せしめる作用である請求の範囲 13記載の方法。

15. 当該投与する形態が請求の範囲 1〜 6記載の腫瘍壌死剤の何れかの形態にある請求の範囲 13又は 14記載の方法。