WO2002052005A1

WO2002052005A1 - Genes et proteines codees par ceux-ci

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Publication number: WO2002052005A1
Application number: PCT/JP2001/011217
Authority: WO
Inventors: Osamu Ohara; Takahiro Nagase; Daisuke Nakajima
Original assignee: CELESTAR LEXICO-SCIENCES Ltd; Kazusa DNA Research Institute Foundation
Current assignee: CELESTAR LEXICO-SCIENCES Ltd; Kazusa DNA Research Institute Foundation
Priority date: 2000-12-22
Filing date: 2001-12-20
Publication date: 2002-07-04
Anticipated expiration: 2003-06-22
Also published as: US7375199B2; US20050037347A1; EP1354948A4; US20080262202A1; US20060063152A1; WO2002052008A1; EP1354948A1; JPWO2002052008A1; US8008437B2; JP4125595B2

Description

明細書新規遺伝子及びそれにコードされる蛋白質技術分野本発明は、 DNA及び該 DNAを含む遺伝子、並びに該 DNAにコードされる組換えポリペプチド及ぴ該ポリペプチドを含む新規組換え蛋白質に関する。背景技術ヒトゲノム計画における大規模シークェンシングによって、 2001年 2月にヒトゲノムドラフト配列が公開された。

ヒトゲノム計画の最終目的は単にゲノム全塩基配列を決定することではなく、その構造情報、即ち、 DNAの塩基配列情報からヒトのさまざまな生命現象を読み解くことにあろう。

ヒトゲノム配列中で蛋白質をコードしている領域はそのごく一部であり、現在は、ニューラルネットワークや隠れマルコフモデルと呼ばれる情報科学の手法を用いて、そのコード領域の予測が行われている。しかしながら、それらの予測精度はまだ充分なものではない。今回、本発明者は新規な遺伝子を見出すベヒト成人全脳、ヒト扁桃、ヒト成人海馬及びヒト胎児全脳由来の cD NAライブラリ一から、蛋白質をコードしている領域を含む新規な DNAを直接クロ一ニングすることに成功し、それらの塩基配列を決定して本発明を完成させた。発明の開示即ち、本発明は第一の態様として、以下の（a )又は（b)のポリペプチドをコードする塩基配列を含む DNAに係る：

(a )配列番号：1乃至 31のいずれか一つで示されるアミノ酸配列と同一又は実質的に同一のアミノ酸配列から成るポリペプチド、

( b)配列番号： 1乃至 3 1のいずれか一つで示されるアミノ酸配列において、一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列から成り、（a)のポリペプチドの機能と実質的に同質の生物学的活性を有するポリペプチド。

本発明の第二の態様として、以下の（a)又は（b)の DNAに係る：

(a)配列番号： 1乃至 31のいずれか一つで示される塩基配列において、夫々の配列で示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む DNA、

(b) (a)の DNAとストリンジェン卜な条件下でハイブリダィズし、（a)のアミノ酸配列から成るポリペプチドの機能と実質的に同質の生物学的活性を有する蛋白質をコードする DNA。

以上の本発明の第一及び第二の態様である DNAをまとめて、以下、「本発明 DNAJともし、う。又、本発明はこれら DNAを含む遺伝子にも係る。

更に、本発明は上記 DNA又は遺伝子にコードされる組換えポリペプチド（以下、「本発明ポリペプチド」ともいう。）、及び該ポリペプチドを含む組換え蛋白質に係る。本発明 DNAを有するクローンの名称、本発明ポリペプチド又は蛋白質の長さ，その機能については、表 1に示されている。本発明 DNAは、市販されている（クロンテック社製）ヒト成人全脳、ヒト扁桃、ヒト成人海馬及びヒ卜胎児全脳の m RNAを出発材料として、本発明者が調製した cDNAライブラリ一から、 cDNA断片として単離した後に、塩基配列を決定し同定したものである。

即ち、具体的には、小原他の方法（DNA Research Vol.4，53— 59 (1997) )に従って調製したヒト成人全脳、ヒト扁桃、ヒト成人海馬及びヒ卜胎児全脳由来の cDNAライブラリーからクローンをランダムに単離する。

次に、ハイブリダィゼーシヨンにより、重複クローン（繰り返し出てくるクローン）を除き、その後インビトロでの転写翻訳を行い 50kDa以上の産物が認められるクローンについてその両末端の塩基配列を決定する。

更に、こうして得られた末端塩基配列をクエリーとして既知遺伝子のデータべ —スにて相同性検索を行い、その結果、新規であることが判明したクローンについて全塩基配列を決定する。

また、上記のスクリーニング法に加えて、 cDNAの 5'および 3'の末端配列をヒ卜のゲノム配列に対応させ、それらが挟む領域に未知の長鎖遺伝子が確認された場合には、その cDNAの全長解析をおこなう。

このようにして既知の遺伝子に依存した従来のクローニング方法では得られなかった未知の遺伝子も、システマチックにクローニングを行なうことができる。又、短い断片や得られた配列に人工的な間違いが起こらないように十分な注意を払いながら、 RACE等の PCR法を使用することによつても、本発明 DNA を含むヒ卜由来遺伝子の全領域を調製することも可能である。更に、本発明は、本発明 DNA又は本発明 DNAを含む遺伝子を含有する組換えベクター、該組換えベクターを保持する形質転換体、該形質転換体を培養し、本発明ポリペプチド若しくは該ポリペプチドを含む組換え蛋白質を生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする、本発明ポリペプチド若しくは該ポリペプチドを含む組換え蛋白質、又はその塩の製造方法、及び、こうして得られる本発明ポリペプチド若しくは該ポリペプチドを含む組換え蛋白質又はその塩を提供する。又、本発明は、本発明 D NA又は遺伝子を含有してなる医薬、本発明ポリべプチド若しくはその部分ポリペプチド又は該ポリペプチドを含む組換え蛋白質をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド（DNA)、それら塩基配列に実質的に相補的な塩基配列を有するアンチセンスヌクレオチド、該ポリヌクレオチド又はアンチセンスヌクレオチドを含有してなる医薬、本発明ポリペプチド若しくはその部分ポリペプチド、及び、該ポリペプチド又はそれらを含む組換え蛋白質を含有してなる医薬に係る。更に、本発明は、本発明ポリペプチド若しくはその部分ポリペプチド又は該ポリペプチドを含む組換え蛋白質又はそれらの塩に対する抗体、及び、本発明ポリペプチド、その部分ポリペプチド若しくは該ポリペプチドを含む組換え蛋白質又はそれらの塩、又はそれらに対する抗体を用いることを特徴とする、それら物質と特異的に相互作用する物質のスクリーニング方法、スクリーニング用キット、並びに、該スクリーニング方法によって同定される物質（化合物）自体等にも係る。発明を実施する為の最良の形態本発明 DNAとしては、前述した本発明ポリペプチドをコードする塩基配列から成るものであればいかなるものであってもよい。また、ヒ卜の脳、又は、それ以外の組織、例えば、心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、精巣、等の細胞 ·組織に由来する cD NAライブラリ一等から同定'単離された cDNA、又は、合成 D NAのいずれでもよい。

ライブラリ一作成に使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前記した細胞-組織より total R N A画分または m R N A画分を調製したものを用いて、直接 Reverse Transcription coupled Polymerase Chain Reaction (以下、 I RT - PCR； fi jと略称する）によって増幅することもできる。配列番号： 1乃至 31のいずれか一つで示されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列とは、配列番号： 1乃至 3 1のいずれか一つで示される全アミノ酸配列との相同性の程度が、全体の平均で約 70 %以上、好ましくは約 8 0%以上、更に好ましくは約 900/0以上、特に好ましくは約 95 <½以上であるアミノ酸配列を意味する。

従って、本発明の配列番号： 1乃至 31のいずれか一つで示されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列から成るポリペプチドとしては、例えば、前記の各配列番号で示されるアミノ酸配列に対して上記の相同性を有し、各配列番号で示されるアミノ酸配列から成るポリペプチドの機能と実質的に同質の生物学的活性（機能）を有するポリペプチドを挙げることが出来る。ここで、実質的に同質とは、それらの活性（機能）が性質的に同質であることを示す。

又、本発明ポリペプチドには、例えば、配列番号： 1乃至 31のいずれか一つで示されるアミノ酸配列中の一部（好ましくは、 1〜20個程度、より好ましくは 1 〜1 0個程度、さらに好ましくは数個）のアミノ酸が欠失、置換又は付加したアミノ酸配列、或いはそれらを組み合わせたアミノ酸配列から成り、配列番号： 1乃至 31のいずれか一つで示されるアミノ酸配列から成るポリペプチドの機能と実質的に同質の生物学的活性（機能）を有するポリペプチドも含まれる。上記の配列番号： 1乃至 3 1のいずれか一つで示されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列から成るポリペプチド、又はその一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加したアミノ酸配列から成るポリペプチドは、例えば、部位特異的変異導入法、遺伝子相同組換え法、プライマー伸長法、及び PCR法等の当業者に周知の方法を適宜組み合わせて、容易に作成することが可能である。

尚、その際に、実質的に同質の生物学的活性を有するためには、当該ポリぺプチドを構成するアミノ酸のうち、同族アミノ酸（極性 ·非極性アミノ酸、疎水性- 親水性アミノ酸、陽性-陰性荷電アミノ酸、芳香族アミノ酸など）同士の置換が可能性として考えられる。又、実質的に同質の生物学的活性の維持のためには、本発明の各ポリペプチドに含まれる機能ドメイン内のアミノ酸は保持されることが望ましい。更に、本発明 DNAは、配列番号： 1乃至 3 1のいずれか一つで示される塩基配列において、夫々の配列で示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む DNA、及び、該 DNAとストリンジェン卜な条件下でハイブリダィズし、各配列で示されるアミノ酸配列から成るポリペプチドの機能と同質の生物学的活性 (機能）を有するポリペプチド（蛋白質）をコードする DNAを包含する。

かかる条件下で、配列番号： 1乃至 31のいずれか一つで示される塩基配列において、夫々の配列で示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む DN Aとハイブリダィズできる D NAとしては、例えば、該 DNAの全塩基配列との相同性の程度が、全体の平均で約 80%以上、好ましくは約 90%以上、より好ましくは約 95 %以上である塩基配列を含有する DNA等を挙げることが出来る。ハイブリダィゼーシヨンは、カレント'プロ卜コールズ'イン-モレキユラ一'バイォロン一 ( Current protocols in molecular biology (edited by t- redenck M. Ausubel et al.， 1987) )に記載の方法等、当業界で公知の方法あるいはそれに準じる方法に従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。

ここで、「ストリンジェン卜な条件 Jとは、例えば、 65°Cの 1 mM EDTA ナトリウム、 0.5M リン酸水素ナトリウム（pH7.2)、 7 %SDS 水溶液中でハイブリダィズさせ、 65°Cの 1 mM EDTA ナトリウム、 40mM リン酸水素ナトリウム（pH7.2)、 1 % SDS 水溶液中でメンブレンを洗浄する条件でのサザンプロットハイブリダィゼーシヨンで本発明 D N Aプローブにハイプリダイズする程度の条件である。本発明 D NAのクローニングの手段としては、本発明ポリペプチドの部分等の適当な塩基配列を有する合成 DNAプライマーを用いて PGR法によって増幅するか、または適当なベクタ一に組み込んだ DNAを本発明ポリペプチドの一部あるいは全領域をコードする DNA断片もしま合成 DNAを用いて標識したものとのハイブリダィゼーシヨンによって選別することができる。

ハイブリダィゼーシヨンの方法は、例えば、上記の Current protocols in molecular biology (edited by Frederick M. Ausubel et al.， 1 987)に載の；去などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。

クローン化されたポリペプチドをコードする DNAは目的によりそのまま、または所望により制限酵素で消化したり、リンカ一を付加したりして使用することができる。該 DNAはその 5'末端側に翻訳開始コドンとしての ATGを有し、また 3 ' 末端側には翻訳終止コドンとしての TAA、丁 GAまたは TAGを有していてもよい。これらの翻訳開始コドンや翻訳終止コドンは、適当な合成 DNAアダプターを用いて付加することもできる。本発明の蛋白質の発現ベクターは、当該技術分野で公知の方法に従って作成することが出来る。例えば、（1 )本発明 DNA又は本発明 DNAを含む遺伝子を含有する DNA断片を切り出し、（2)該 DNA断片を適当な発現ベクター中のプロモーターの下流に連結することにより製造することができる。

ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミド（例、 pBR322， pBR325, pUC 1 8 , pUC 1 1 8)、枯草菌由来のプラスミド（例、 pUB 1 1 0， pTP5, pC 1 94)、酵母由来プラスミド（例、 pSH I 9 , pSH 1 5 )、えファージなどのバクテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウィルス，バキュロウィルスなどの動物ウィルス等を利用することが出来る。

本発明で用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に用いる宿主に対応した適切なプロモーターであればいかなるものでもよい。例えば、宿主が大腸菌である場合は、 trpプロモーター、 lacプロモーター、 recAプロモータ一、 λ PL プロモーター、 Ippプロモーターなどが、宿主が枯草菌である場合は、 SP01プ口モーター、 SP 02プロモーター、 pen Pプロモーターなど、宿主が酵母である場合は、 PH05プロモーター、 PGKプロモータ一、 GAPプロモータ一、 ADHプロモーターなどが好ましい。動物細胞を宿主として用いる場合は、 SR O?プロモーター、 SV40プロモーター、 LTRプロモーター、 CMVプロモーター、 HSV-TKプ口モーターなどが挙げられる。発現ベクターには、以上の他に、所望により当該技術分野で公知の、ェンハンサ一、スプライシングシグナル、ポリ A付加シグナル、選択マーカー、 SV40複製オリジン等を付加することができる。また、必要に応じて、本発明の DNAにコ —ドされた蛋白質を他の蛋白質（例えば、グルタチオン Sトランスフェラーゼ及びプロテイン A)との融合蛋白質として発現させることも可能である。このような融合蛋白質は、適当なプロテア一ゼを使用して切断し、それぞれの蛋白質に分離することが出来る。宿主細胞としては、例えば、ェシヱリヒア属菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞などが用いられる。

ェシエリヒア属菌の具体例としては、ェシエリヒア 'コリ（Escherichia coli)K1 2-DH1 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 60巻， 160(1968))， JM 103 (Nucleic Acids Research， 9巻， 309 ( 1 981 ) )， J A 221 ( Journal of Molecular Biology, 120巻， 517(1 978))，及び HB101 (Journal of Molecular Biology, 41卷， 459(1969))等力《用し、られる。

バチルス属菌としては、例えば、バチルス-サチルス（Bacillus subtilis)MI11 4(Gene, 24巻， 255(1983)), 207-21 [Journal of Biochemistry, 95卷， 87(1984)〕等が用いられる。

酵母としては、例えば、サッカロマイセスセレビシェ（ Saccaromyces cerevisiae)AH22, AH22R-， NA87-11 A, DKD-5D, 20B— 12、シゾサッカロマイセスポンべ（Schizosaccaromyces pombe)NCYC1913, NCYC 2036、サッカロマイセスピキアノストリス（Saccaromyces picjia pastoris)等が用いられる。

動物細胞としては、例えば、サル細胞 COS— 7， Vero, チャイニーズハムスター細胞 CHO (以下、 CHO細胞と略記）， dhfr遺伝子欠損 CHO細胞，マウス L細胞，マウス AtT— 20, マウスミエローマ細胞，ラット GH3, ヒト FL細胞などが用いられる。これら宿主細胞の形質転換は、当該技術分野で公知の方法に従って行うことが出来る。例えば、以下に記載の文献を参照することが出来る。

Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 69巻， 2110(1972); Gene, 17卷， 107(1 982);Molecular &. General Genetics, 168卷， 111 (1979) ; Methods in Enzymology, 194卷， 182-187(1991 ) ;Proc. Natl. Acad. Sci. USA), 7 5巻， 1929(1978);細胞工学別冊 8 新細胞工学実験プロ卜コール. 263 一 267(1995) (秀潤社発行）；及び Virology, 52卷， 456(1973)。このようにして得られた、本発明 DNA又は本発明 DNAを含む遺伝子を含有する発現ベクターで形質転換された形質転換体は、当該技術分野で公知の方法に従って培養することが出来る。

例えば、宿主がェシエリヒア属菌の場合、培養は通常約 1 5〜43°Cで約 3〜 24時間行ない、必要により、通気や撹拌を加えることもできる。宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常、約 30〜40°Cで約 6〜24時間行ない、必要によリ通気や撹拌を加えることもできる。

宿主が酵母である形質転換体を培養する際、培養は通常、 pH約 5 ~ 8に調整された培地を用いて約 20 °C ~ 35 °Cで約 24 ~ 72時間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加えることもできる。

宿主が動物細胞である形質転換体を培養する際、 pHは約 6〜8に調整された培地を用いて、通常約 30 °C ~ 40 °Cで約 1 5 ~ 60時間行なし、、必要に応じて通気や撹拌を加えることもできる。上記培養物から本発明ポリペプチド又は蛋白質を分離精製するには、例えば、培養後、公知の方法で菌体あるいは細胞を集め、これを適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび Zまたは凍結融解などによって菌体あるいは細胞を破壊したのち、遠心分離やろ過により蛋白質の粗抽出液を得る。緩衝液の中に尿素や塩酸グァニジンなどの蛋白質変性剤や、トリトン X— 1 00^TM などの界面活性剤が含まれていてもよい。培養液中に蛋白質が分泌される場合には、培養終了後、公知の方法で菌体あるいは細胞と上清とを分離し、上清を集める。このようにして得られた培養上清、あるいは抽出液中に含まれる蛋白質の精製は、公知の分離'精製法を適切に組み合わせて行なうことがでぎる。

こうして得られた本発明ポリペプチド（蛋白質）は、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって塩に変換することができ、逆に塩で得られた場合には公知の方法あるいはそれに準じる方法により、遊離体または他の塩に変換することができる。更に、組換え体が産生する蛋白質を、精製前または精製後に、トリプシン及びキモトリブシンのような適当な蛋白修飾酵素を作用させることにより、任意に修飾を加えたり、ポリペプチドを部分的に除去することもできる。本発明ポリペプチド（蛋白質）又はその塩の存在は、様々な結合アツセィ及び特異抗体を用いたェンザィムィ厶ノアッセィ等によ¹ 測定することができる。本発明ポリペプチド（蛋白質）は、 C末端が通常カルボキシル基（一 COOH ) またはカルボキシレート（一COO-)である力 C末端がアミド（一 CON H₂)またはエステル（一 COOR)であってもよい。ここでエステルにおける Rとしては、例えば、メチル、ェチル、 n—プロピル、イソプロピルもしくは n—ブチルなどの C1 -6 アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロへキシルなどの C3-8シクロアルキル基、例えば、フエニル、一ナフチルなどの C6-12 ァリール基、例えば、ベンジル、フエネチルなどのフエ二ルー C1- 2 アルキル基もしくはひ一ナフチルメチルなどの一ナフチルー C1 -2アルキル基などの C7- 14ァラルキル基のほか、経口用エステルとして汎用されるピパロィルォキシメチルエステルなどが用いられる。本発明ポリペプチド（蛋白質）が C末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものも本発明の蛋白質に含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記した C末端のエステルなどが用いられる。さらに、本発明の蛋白質には、 N末端のメチォニン残基のァミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、ァセチル基などの C1 -6ァシル基など）で保護されているもの、生体内で切断されて生成する N末端のグルタミン酸残基がピログルタミン化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上にある、例えば OH、 COOH、 N H₂、 SHなどが適当な保護基（例えば、ホルミル基、ァセチル基などの C1 - 6ァシル基など）で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖蛋白質などの複合蛋白質なども含まれる。本発明の蛋白質の部分ポリペプチドとしては、前記した本発明ポリペプチド (蛋白質）の部分ペプチドであって、実質的に同質の活性を有するものであれぱいずれのものでもよい。例えば、本発明ポリペプチド（蛋白質）の構成アミノ酸配列のうち少なくとも 1 0個以上、好ましくは 50個以上、さらに好ましくは 70 個以上、より好ましくは 1 00個以上、最も好ましくは 200個以上のアミノ酸配列を有し、例えば、本発明のポリペプチドの機能と実質的に同質の生物学的活性を有するするペプチドなどが用いられる。本発明の部分ポリペプチドとしては、例えば、各機能ドメインを含むものが好ましい。又、本発明の部分ペプチドは C末端が通常カルボキシル基（一 COOH )またはカルボキシレート（一 COO -）である力前記した本発明の蛋白質のごとく、 C末端がアミド（一CONH₂ )またはエステル（一 COOR)であってもよい。さらに、本発明の部分ペプチドには、前記した本発明の蛋白質と同様に、 N末端のメチォニン残基のァミノ基が保護基で保護されているもの、 N端側が生体内で切断され生成したグルタミル基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。本発明の部分ペプチドは、例えば、試薬、実験の際の標準物質、又は免疫原若しくはその一部として使用することが出来る。本発明ポリペプチド（蛋白質）又はその部分ペプチドの塩としては、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クェン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。本発明ポリペプチド（蛋白質）、その部分ペプチドもしくはそれらの塩またはそれらのアミド体は、当該技術分野で公知の化学合成方法を用いて調製することも出来る。

例えば、通常市販されている蛋白質合成用樹脂を用い、 α—ァミノ基と側鎖官能基を適当に保護したアミノ酸を、目的とする蛋白質の配列通りに、当業界において自体公知の各種縮合方法に従い、樹脂上で縮合させる。反応の最後に樹脂から蛋白質を切り出すと同時に各種保護基を除去し、さらに高希釈溶液中で分子内ジスルフイド結合形成反応を実施し、目的の蛋白質、その部分ペプチドまたはそれらのアミド体を取得する。上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、例えば、 DGG、 Ν,Ν'-ジイソプロピルカルポジイミド、及び Ν-ェチル- Ν'- (3-ジメチルァミノプロリル）カルポジイミドのようなカルポジイミド類に代表される蛋白質合成に使用できる各種活性化試薬を用いることができる。これらによる活性化にはラセミ化抑制添加剤（例えば、 HOBt, HOOBt)とともに保護アミノ酸を直接樹脂に添加するかまたは、対称とする酸無水物または HOBtエステルあるいは HOOBtエステルとしてあらかじめ保護アミノ酸の活性化を行なった後に樹脂に添加することができる。保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用いられる溶媒としては、酸アミド類、ハロゲン化炭化水素類、アルコール類、スルォキシド類、及びエーテル類等、当業界において蛋白質縮合反応に使用しうることが知られている溶媒から適宜選択されうる。反応温度は蛋白質結合形成反応に使用され得ることが知られている範囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は通常 1 .5〜 4倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基の脱離を行うことなぐ縮合反応を繰り返すことにより十分な縮合を行なうことができる。反応を繰り返しても十分な縮合が得られないときには、無水酢酸またはァセチルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をァセチル化して、後の反応に影響を及ぼさないようにすることができる。

原料の各ァミノ基、カルボキシル基、及びセリン水酸基等の保護基としても、当該技術分野において、通常使用される基を使用することができる。

原料の反応に関与すべきでない官能基の保護ならびに保護基、およびその保護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化などは公知の基または公知の手段から適宜選択しうる。本発明の部分ペプチドまたはそれらの塩は、当該技術分野において自体公知のペプチドの合成法に従って、あるいは本発明の蛋白質を適当なぺプチダーゼで切断することによって製造することができる。ペプチドの合成法としては、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれによっても良い。公知の縮合方法や保護基の脱離としては、例えば、以下の（υ ~ ( 3)に記載された方法が挙げられる。

( 1 )泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、丸善 (株）（1 975年）

( 2 )矢島治明および榊原俊平、生化学実験講座 1、蛋白質の化学【V、 205、 (1 977年）

(3)矢島治明監修、続医薬品の開発第 U巻ペプチド合成広川書店反応後の精製も自体公知の方法、例えば、溶媒抽出-蒸留 'カラムクロマトグラフィー■液体クロマトグラフィー■再結晶などを組み合わせて本発明の部分べプチドを精製単離することができる。上記方法で得られる部分ペプチドが遊離体である場合は、公知の方法によって適当な塩に変換することができるし、逆に塩で得られた場合は、公知の方法によって遊離体に変換することができる。本発明ポリペプチド（蛋白質）、その部分ペプチドまたはそれらの塩に対する抗体は、それらを認識し得るものであれば、ポリクロ一ナル抗体、モノクローナル抗体の何れであってもよい。本発明ポリペプチド（蛋白質）、その部分べプチドまたはそれらの塩に対する抗体は、本発明ポリペプチド（蛋白質）又はその部分ペプチドを抗原として用い、公知の抗体または抗血清の製造法に従って製造することができる。

本発明の抗体は、体液や組織などの被検体中に存在する本発明ポリぺプチド（蛋白質）等を検出するために使用することができる。また、これらを精製するために使用する抗体カラムの作製、精製時の各分画中の本発明ポリべプチド（蛋白質）の検出、被検細胞内における本発明ポリペプチド（蛋白質）の挙動の分析などのために使用することができる。更に、本発明の抗体は、公知の方法による被検液中の本発明ポリペプチド (蛋白質）等の定量、特に、モノクローナル抗体を使用したサンドイッチ免疫測定法による定量、及び組織染色等による検出などに使用することができる。それによって、例えば、本発明ポリペプチド（蛋白質）等が関与する疾病の診断を行なうことができる。

これらの目的には、抗体分子そのものを用いてもよく、また、抗体分子の F(a b')2 、 Fab'、あるいは Fab画分を用いてもよい。本発明の抗体を用いる本発明の蛋白質等の定量法は、特に制限されるべきものではな被測定液中の抗原量（例えば、蛋白質量）に対応した抗体、抗原もしくは抗体—抗原複合体の量を化学的または物理的手段により検出し、これを既知量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出する測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよい。例えば、ネフロメトリ一、競合法、ィムノメトリック法およびサンドイッチ法が好適に用いられるが、感度、特異性の点で、後述するサンドイツチ法を用いるのが好ましい。標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤としては、当該技術分野で公知の、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質などを用いることが出来る。これらの測定.検出方法に関する一般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを参照することができる。例えば、入江寛編「続ラジオィ厶ノアツセィ〕（講談社、昭和 54年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第 3版） (医学書院、昭和 6 2年発行）、 Γ Methods in ENZY OLOGY J Vol. 70([mmunochemical Techniques(Part A))、 |B] -rf Vol. "(Immunochemical Techniques(Part B))、 |。] rf Vol. 74(Immunochemical Techniques(Part G))、同書 Vol. 84(Immunochemical Techniques(Part D:Selected Immunoassays)) 同音 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E: onoclonal Antibodies and General Immunoassay Methods)) 、同書 Vol. 1 21 (Immunochemical Techniques(Part I:Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodies)) (以上、アカデミックプレス社発行)などを参照することができる。本発明ポリペプチド（蛋白質）又はその部分ポリペプチドをコードする D NAに実質的に相補的な塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド（DNA)としては、当該 D NAの塩基配列に実質的に相補的な塩基配列を有し、該 D NA の発現を抑制し得る作用を有するものであれば、いずれのアンチセンス DNAであってもよい。実質的に相補的な塩基配列とは、例えば、本発明 DNAに相補的な塩基配列の全塩基配列または部分塩基配列と好ましくは約 90<½以上、より好ましくは約 95 %以上、最も好ましくは 1 00 %の相同性を有する塩基配列などが挙げられる。又、これらアンチセンス DNAと同様の作用を有する核酸配列（RNAまたは DNAの修飾体）も本発明でいうアンチセンス DNAに含まれる。これらのアンチセンス D NAは、公知の DNA合成装置などを用いて製造することができる。更に、本発明ポリペプチド（蛋白質）等は、これら物質と特異的に相互作用する化合物をスクリーニングする為の試薬として有用である。すなわち、本発明は、本発明ポリペプチド（蛋白質）、その部分ペプチド若しくはそれらの塩、又はそれらに対する抗体を用いることを特徴とする、該物質又はそれらの塩と特異的に相互作用する化合物のスクリーニング方法、及びその為のスクリーニング用キットを提供する。

本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて同定される化合物またはその塩は、上記した試験化合物から選ばれた化合物であり、本発明ポリペプチド（蛋白質）等と相互作用し、その生物学的活性を調節、阻害、促進、又は拮抗等する化合物である。該化合物またはその塩は、本発明の蛋白質等の活性に直接作用するものであってもよいし、本発明ポリペプチド (蛋白質）等の発現に作用することによって間接的に本発明ポリペプチド（蛋白質）等の活性に作用するものであってもよし、。該化合物の塩としては、例えば、薬学的に許容可能な塩などが用いられる。例えば、無機塩基との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩、塩基性または酸性アミノ酸との塩などがあげられる。本発明ポリペプチド（蛋白質）等の生物学的活性を阻害する化合物も上記各種疾病に対する治療'予防剤などの医薬として使用できる可能性がある。本発明 DNA及ぴ該 DNAを含む遺伝子をプローブとして使用することにより、本発明ポリペプチド又はその部分ペプチドをコードする DNAまたは mRNAの異常（遺伝子異常）を検出することができるので、例えば、該 D NAまたは m RNA の損傷、突然変異あるいは発現低下や、該 D NAまたは m RNAの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断剤として有用である。本発明の D NAを用いる上記の遺伝子診断は、例えば、公知のノーザンハイブリダィゼーシヨンや PCR— SSCP法（Genomics, 第 5巻， 874〜 879頁（ 1 989年）、 Proceedings of the National Academy of Sciences of the United states of Ameri ca, 8 ^ , 2 766〜2770頁（1 989年））などにより実施することができる。

更に、本発明 D NA又は遺伝子に異常があつたり、欠損している場合あるいは発現量が減少している場合、生体内において正常な機能を発揮できない患者に対しては、公知手段に従って（1 )レトロウイルスベクター、アデノウイルスべクタ一、アデノウイルスァソシェ一テッドウィルスベクタ一などの適当なベクターをべヒクルとして使用する遺伝子治療によって、本発明 DNA又は遺伝子を該患者体内に導入し、発現させるか、又は（2 )本発明の蛋白質等を該患者に注入すること等によって、該患者において本発明の蛋白質等の機能を発揮させることができるものと考えられる。

本発明 DNA又は遺伝子を、該 D NAを単独、又は、摂取促進のための補助剤とともに、遺伝子銃やハイド口ゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与することも可能である。本明細書および表において、塩基やアミノ酸などを略号で表示する場合、 IU PAC— IUB Commision on Biochemical Nomenclature による略号あるし、は当該分野における慣用略号に基づくものであり、またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、特に明示しなければ L体を示すものとする。実施例

以下に、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれに限定されるものではない。なお、実施例における各種遺伝子操作は、上記の Current protocols in molecular biology (edited by Frederick M. Ausubel et al.， 1 987)に記載されている方法に従った。 ( 1 )ヒ卜成人全脳、ヒ卜扁桃、ヒ卜成人海馬及びヒト胎児全脳由来 cDNAライブラリーの構築

Notl部位を有するオリゴヌクレオチド（GACTAGTTCTAGATCGCGAGCG GCCGCCC (T) _{1 5}) (インビトロジェン）をプライマーとして、ヒト成人全脳、ヒト扁桃、ヒト成人海馬及びヒト胎児全脳由来 mRNA (クローンテック社製）を錶型に SuperScriptll 逆転写酵素キット（インビ卜ロジェン社製）で 2本鎖 cD NAを合成した。 Sa il部位を有するアダプター（インビトロジェン社製）を cDNAとライゲ一シヨンした。その後、 Notl消化し、 1 %濃度の低融解ァガロース電気泳動により、 3kb以上の DNA断片を精製した。

精製 cDNA断片を、 Sail— Notl制限酵素処理した pBluescript HSK+ プラスミドとライゲーシヨンした。大腸菌 ElectroMax DH10B 株（インビトロジェン）にエレクト口ポレーシヨン法によりこの組換えプラスミドを導入した。

( 2)スクリーニング（その 1 )

次いで、こうして構築した cD NAライブラリ一からランダムにクローンをピックアップし、メンブランにスポッティングした。次に、これまでに本発明者等によって既に全長の解析が行われている約 1 ,300個のクローンの塩基配列に基づき作成したオリゴ D NA (各 2 1塩基）の混合物の各 3 '末端をターミナル卜ランスフエラーゼで DIGラベルし、これらをプローブとして使用してドットハイブリダィゼ一シヨン ( Current protocols in molecular biology (eaited by Frederick M. Ausubel et aに 1 987) )により、重複クローン（繰り返し出てくるクローン）を除いた。

次に、インビト口での転写翻訳（プロメガ社 TNT T7 Quick Coupled Transcription/Translation System cat.no丄 1 1 07)を行 Ι 、 50kDa以上の産 fe) が認められるクローンを選択した。

次に、選択したクローンの末端塩基配列を決定し、得られた配列をクエリーとして相同検索プログラム BLASTN 2.2.1 (Altschul, Stephen F" Thomas L. Madden, Alejandro A. S chaffer, Jinghui Zhang, Zheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1 997), "Gapped BLAST and PSト BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25:3389 - 3402) を用し、て、 nr(AII GenBank+E BL+DDBJ+PDB sequences (but no EST, STS.GSS, or phase 0,1 or 2 HTGS sequences))データベースに対して相同検索を行った。その結果、相同遺伝子が存在しなかったもの、即ち、新規遺伝子であるものについて全塩基配列を決定した。スクリーニング（その 2)

cDNAの 5'および 3'の末端配列を、相同検索プログラム BLASTN2.2.1 を用いて、ヒ卜のゲノム配列（に対応させた。

次に、それらが挟むゲノム領域から、 Genscan プログラム（Burge, G. and Karlin, S. 1 997， Prediction of complete gene structures in human genomic DNA, J Mol. Biol" 268， 78-94 、ゲノムから遺伝子を予測するコンピューターソフト)を用いて、コードされる遺伝子を抜き出した。これをクエリ一として、相同検索プログラム BLASTN2.1 .3を用いて、 mergedb (かずさ DNA研究所で決定したヒトの cDNAの配列と GenBankの homo sapiensデータベース力、ら ESTとゲノ厶を除いたものを重複なく混ぜ合わせた、かずさ DNA 研究所で独自に作成した DMA配列データベース）に対応させ、新規の長鎖 (Genscan予想 cdsが 1 200 bp以上)遺伝子が確認された場合には、 5'および 3'の末端配列決定をおこなつた cDNAの全長解析をおこなった。

配列決定には、 PEアプライドバイオシステム社製の DNAシークェンサ一（ABI P ISM377)と同社製反応キットを使用した。大部分の配列はショットガンクローンをダイターミネータ一法を用いて決定した。一部の塩基配列については、決定した塩基配列を元にしてオリゴヌクレオチドを合成し、プライマーウォーキング法で決定した。このようにして新規 DNA又は遺伝子のスクリーニングを行なった。その結果、配列表の配列番号 1乃至 3 1のいずれか一つに示された新規 D N A又は遺伝子が検出された。

これらの新規 DNA又は遺伝子について、上記の配列決定方法によりその塩基配列を決定した。本発明 D NA又は遺伝子を有するクローンの名称は表 1に示されている。

( 3)本発明 DNAの相同性検索

次に、こうして得られた全塩基配列に基づき、クローンのアミノ酸配列を既知配列ライブラリー nrに対して解析プログラム BLASTP 2.2.1 (Altschul, Stephen F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schafrer, Jinghui Zhang, Zheng hang, Webb Miller, and David J. Lipman (1 997), "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25:3389- 3402)を用いて検索したところ、表 2に示した各相同遺伝子と相同性を示すことが明らかになった。尚、表 2には、これら相同遺伝子に関する情報、即ち、その名称、データベース、生物種、蛋白質長、及び記載文献が挙げられている。又、これら各表中の「生物種」の略号の意味は表 3で説明されている。更に、各クローンに含まれる本発明 D NA又は遺伝子と表 2に示した各相同遺伝子との相同性に関する各種データを表 4にまとめた。これら表中の各項目の意味は以下の通りである。

「相同領域クローン」クローンの相同領域の起点及び終点

「相同領域相同遺伝子」相同遺伝子の相同領域の起点及び終点 rScoreJこの値が高いほど信頼度が高い

「E- valuejこの値が 0に近いほど信頼度が高い

「相同性」相同領域のアミノ酸残基の一致の割合

「相同範囲率」相同遺伝子中の相同領域の割合

( 4)各種ドメインの検索

次に、クローンに含まれる DNAがコードするアミノ酸配列中から、 Pfam 6.6に含まれる検索ツール Pfam HMM ver 2.1 Search (HMMPFAM) (Sonnhammer ELL, Eddy SR, Birney E, Bateman A, Durbin R (1 998) Pfam: multiple sequence alignments and HMM - profiles of protein domains, Nucleic Acids Research 26:320- 322)を用いて機能ドメインを検索した。

更に、膜蛋白予測プログラムである SOSUI system (ver. 1 .0 / 1 0, Mar., 1 996) (Takatsugu Hirokawa, Seah Boon- Ghieng and Shigeki Mitaku, SO¾UI: Classification and Secondary Structure Prediction System for Membrane Proteins, Bioinformatics (formerly CABIOS) 1998 May;1 4(4):378-379.) を用いて膜貫通ドメインを検索した。

これらの検出された機能ドメイン及び膜貫通ドメインを表 5にそれぞれのクローンについて示した。

これら表中の各項目の意味は以下の通りである。

「機能ドメイン」 Pfam SOSUIにより検出されたドメイン

「クローン fromjクローン機能ドメインの起点

「クローン to」クローン機能ドメインの終点

「相同遺伝子 fromj相同遺伝子機能ドメインの起点

「相同遺伝子 to」相同遺伝子機能ドメインの終点

「Score(Pfamのみ)」この値が高いほど信頼度が高い

「Exp(Pfamのみ)」この値が 0に近いほど信頼度が高い

又、各機能ドメインの完全標記は以下の通りである。

ank: Ankynn repeats;

ArfGap: ADP - ribosylation - factor G I'Pase— activating protein;

DSPc: Dual specificity phosphatase, catalytic domain;

PH: PH domain;

Rhodanese: Rhodanese - like domain;

RhoGAP: GTPase activator proteins towards Rho/Rac/ Cdc42-like small

GTPases;

Sema: semaphorins

Zf-C2H2: Zinc finger, C2H2 type.

( 5)発現部位 RT-PCR Coupled E1JSAを用いて、組織と脳の部位での発現を、それぞれで —番強い発現を示したものを表 6に示した。尚、組織及び脳の部位の完全標記を表 7に示した。

( 6)染色体位置

クローンの DNA配列を、相同検索プログラム BLASTN 2.2.1を用いてヒトゲノムをコードするクローンのライブラリー（に対応させた。対応したクローンの説明 (Definition)の中からこのクローンが由来した染色体の番号を抽出し、これを表 6に示した。以上の、相同性、相同性遺伝子に関する情報、各種ドメイン、発現部位、及び染色体位置、等に基づき、当業者であれば、本発明の DNA又は遺伝子が表 1に示した各機能を有するものと予測することが出来る。尚、以下のクローンに含まれる遺伝子が完全長であることは、以下の理由により判定した。

fj1 5353 :相同遺伝子とのアラインメントから相同遺伝子の全体を含んでいると考えられる。ただし、タンパク質の N末端付近 (配列番 1 3のアミノ酸配列 1から 12)の相同性はない。

hj05518 :相同遺伝子とのアラインメントから相同遺伝子の全体を含んでいると考えられる。ただし、タンパク質の G 末端付近 (配列番号 20のアミノ酸配列 318から 362)の相同性はない。

PJ00464 :相同遺伝子とのアラインメントから相同遺伝子の全体を含んでいると考えられる。ただし、タンパク質の N末端付近 (配列番号 30のアミノ酸配列 1 から 85)の相同性はない。

略記英語名曰本名

Bt Bos taurus シ

Ce Caenorhabditis elegans センチユウ

Cr Chlamydomonas reinhardtii クラミドモナス

Dm Drosophila melanogaster ショウジヨウハエ

Dr Danio redo ゼブラフィッシュ

Gg Gallus gallus ニヮトリ

Hs Homo sapiens ヒ卜

Mf Macaca fascicularis 力二クイザル

Mm us musculus マウス

Oc Oryctoiagus cunicuius ゥサギ

Pa Pseudomonas aeruginosa シユードモナス

Rn Rattus norvegicus ラッ卜

Tg Ί npneustes gratilla ゥニ

Tr TaKifugu rubripes フグ

Vc Volvox carteri f. nagariensis ヴォルボックス

XI Xenopus laevis アフリカッメガエル

S3

LlZUIlQdilLDd 西？别芸クローン相同遺伝子

01 機能ドメイン From To Score Exp 機能ドメイン From To Score Exp

3 sosui 48 70 一 ―

1 1 PH 739 841 65.1 7.8eH 7

•t

I Rhodanese 1 1 131 53.4 4.9e-12 DSPc 160 299 248.9 7.2e - 71

DSPc 158 297 244.5 1.4e-69

15 SOSUI 18 40 ― ―

sosui 66 88 一 ―

16 sosui 1 23 一

M sosui 3 25 一

sosui 54 76 ― 一

21 PH 272 366 67.2 2.1 e-17 PH 267 361 66.4 3.4e-17

ArfGap 406 528 212 8.7e-60 ArfGap 399 520 232 8.4e-66

ank 672 704 33.1 6.3e-06

ank 705 737 16.5 0.63

23 RhoGAP 1260 1411 178.5 1.1 e-49 RhoGAP 1242 1393 157.7 1.9e- 43

24 sosui 58 80 ― - sosui 465 487 - - sosui 99 121 ― - sosui 138 160 ―― ―

sosui 163 185 一一

sosui 195 217 一一

sosui 236 257 一 ―

sosui 269 291 一 ―

sosui 305 327 一 ―

sosui 341 363 一 ―

25 zf-C2H2 81 103 13.8 4

z -C2H2 108 130 17.3 0.36

zf-C2H2 136 159 18.1 0.2

z -C2H2 982 1004 17.2 0.4

30 SOSUI 11 32 SOSUI 1 23

Sema 106 534 680.9 6.10E - 201 Sema 53 481 743.4 1 e-219

sosui 653 670 sosui 636 657

sosui 688 709 sosui 665 687

sosui 714 736

31 Sema 126 563 539.8 1.9e-158 Sema 16 453 499.3 3e-146

sosui 772 794 sosui 660 681

配列

発現部位

畨染色体位置組織 m 位置

1 Brain B.cerebellum 5

2 Testis B.subthalamicnucleus 22

3 一 - 22

4 Brain B.cerebellum 22

5 1 estis B.corpuscallosum 19

6 Kidney B.hippocampus 22

7 Brain B.cerebellum . 7

8 Brain B.cerebellum 4

9 Ovary B.substanianigra 5

10 Ovary B.cerebellum 7

11 Kidney B.cerebellum ―

12 Testis B.cerebellum 一

13 Brain B.cerebellum 12

14 Brain B.amygdala 6

15 lung Spinalcord 22

16 Ovary B.cerebellum 22

17 22

18 Ovary Spinalcord 22

19 Ovary B.cerebellum 22

20 Brain B.amygdala 19

21 Brain Spinalcord 1

22 Liver B.thalamus 4

23 Brain 19

24 Liver B.amygdala

25 Ovary B.cerebellum

26

27 Ovary B.substanianigra 11

28 Brain B.caudatenucleus 6

29 S.muscle B.cerebellum 14

30 Brain B.substanianigra 2

31 Liver B.subthalamicnucleus 15 W

28

日本語

組織 Brain 脳

Heart /Ι、牆

Kidney 肾臓

Liver 肝臓

Lung 肺臓

Ovary 卵巣

Pancreas 瞧

S.muscle 骨格筋

Spleen 脾臓

Testis 精巣

脳 B.amygdala 脳の扁桃体

B.caudatenucleus 脳の尾状核

B.cerebellum 脳の小脳

B.corpuscallosum 脳の脳梁

B.hippocampus 脳の海馬

B.substanianigra 脳の黒質

B.subthalamicnucleus 脳の視床下部の核

B.thalamus 脳の視床

Spinalcord 脊髄産業上の利用分野本発明で得られた新規な DNA又は遺伝子を所謂 DNAチップ等に集積させ、これに、例えば、精神病等の脳が関与する疾患の患者と対照としての正常人の血液又は組織等から作成したプローブをハイブリダィゼーシヨンさせることによって、これら疾患の診断、治療等に役立てることが出来る。又、本発明の DNA若しくは遺伝子又はそれらの一部の塩基配列に基づき作成した合成 DNAプライマーを使用し、ヒトの血液又は組織から抽出した染色体 DNAを用いて PCRを行い、その産物の塩基配列を決定することにより、本発明の DNA又は遺伝子中にある個体によって異なる一塩基の変異、即ち、 cSN Psを見出すことが出来る。これにより、個体の体質等が予測され、各自に適した医薬の開発等が可能となる。又、クロスハイブリダィゼーシヨンにより、マウス等のモデル生物における本発明の DNA又は遺伝子に対するオルソログ（ホモログ、カウンターパート）遺伝子を単離し、例えば、これら遺伝子をノックアウトすることによってヒトの疾患モデル動物を作成し、ヒトの病因となる遺伝子を探索，同定することも可能である。更に、本発明ポリペプチド、その部分ポリペプチド若しくは該ポリペプチドを含む組換え蛋白質、又は、本発明の DNA又は遺伝子に対する抗体を網羅的に作成し、それらを集積させて所謂 P ROTEINチップを作成し、患者と正常人との蛋白質発現量の差異を検出する等のプロテオーム解析から、病気の診断- 治療等に役立てることが出来る。

Claims

請求の範囲

1 . 以下の（a)又は（b)のポリペプチドをコードする塩基配列を含む DNA :

(a)配列番号： 1乃至 31のいずれか一つで示されるアミノ酸配列と同一又は実質的に同一のアミノ酸配列から成るポリペプチド、

(b)配列番号： 1乃至 31のいずれか一つで示されるアミノ酸配列において、一部のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列から成り、（a)のポリペプチドの機能と実質的に同質の生物学的活性を有するポリペプチド。

2. 以下の（a)又は（b)の DNA :

( a )配列番号： 1乃至 3 1のいずれか一つで示される塩基配列において、夫々の配列で示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む DNA、

(b) (a)の DNAとストリンジェン卜な条件下でハイブリダィズし、（a)のァミノ酸配列から成るポリペプチドの機能と実質的に同質の生物学的活性を有する蛋白質をコードする DNA。

3. 請求項 1又は 2記載のヒ卜 DNAを含む遺伝子,

4 以下の（a)又は（b)の組換えポリペプチド：

(a)配列番号： 1乃至 3 1のいずれか一つで示されるアミノ酸配列と同一又は実質的に同一のアミノ酸配列から成るポリペプチド、

5. 請求項 3に記載の遺伝子にコードされる組換え蛋白質。