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WO2001003713A1 - PROCEDE D'EXTRACTION DE RESVERATROL ET/OU D'ε-VINIFERINE - Google Patents

PROCEDE D'EXTRACTION DE RESVERATROL ET/OU D'ε-VINIFERINE Download PDF

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Publication number
WO2001003713A1
WO2001003713A1 PCT/FR2000/001969 FR0001969W WO0103713A1 WO 2001003713 A1 WO2001003713 A1 WO 2001003713A1 FR 0001969 W FR0001969 W FR 0001969W WO 0103713 A1 WO0103713 A1 WO 0103713A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
resveratrol
solvent
vine
content
extraction
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/FR2000/001969
Other languages
English (en)
Inventor
Jean-Claude Izard
Jean-Dominique Fourneron
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ACTICHEM
Original Assignee
ACTICHEM
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from FR9908832A external-priority patent/FR2795964A1/fr
Application filed by ACTICHEM filed Critical ACTICHEM
Priority to AU62959/00A priority Critical patent/AU6295900A/en
Publication of WO2001003713A1 publication Critical patent/WO2001003713A1/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/87—Vitaceae or Ampelidaceae (Vine or Grape family), e.g. wine grapes, muscadine or peppervine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/08—Magnoliopsida [dicotyledons]

Definitions

  • the present invention relates to a process for the preparation of an extract of the vine concentrated in resveratrol and / or in ⁇ -vinifé ⁇ ne as well as an extract obtained by this process
  • Resveratrol or 3, 5, 4'-t ⁇ hydroxyst ⁇ lbange, is found in very low contents, of the order of a few mg / l, in red wines
  • the resveratrol present in the skin and in the seeds of grapes is extracted during vinification and is found in the final product, the wine, especially the red wine for which the skin of the grapes macerates in the must of the wine
  • Resveratrol exists in the cis and trans form II is generally present in the monomer form but also exists as an oligomer comprising up to four monomers
  • the term "resveratrol” below relates to the cis or trans forms of 3, 5, 4'- tr ⁇ hydroxyst ⁇ lbène Resveratrol is often associated with ⁇ -v ⁇ n ⁇ fé ⁇ ne which is the dimer of resveratrol This product is therefore generally extracted at the same time as resveratrol
  • Resveratrol is particularly interesting because it has many properties with therapeutic applications. It is in particular to this molecule that we attribute the effects of the “French Paradox”. First studies have indeed shown its effects in reducing of the risk of cardiovascular diseases Resveratrol improves the fluidity of the blood, and therefore the circulation of blood, and reduces the risks of blockage of the vessels by clots II also decreases the level of lipids and cholesterol in the blood
  • revesratrol which is produced by the vine in response to bacterial attacks by the bacterium Botrytis cmerea, responsible for gray rot disease, has fungicidal and bactericidal properties
  • Resveratrol is also found in other plant sources such as peanuts, blackberries, and also a plant used by Chinese medicine, Polygonum Cuspitadum
  • Extracts from the vine from the skin and grape seeds are not very concentrated in resveratrol The maximum concentration of around
  • the extracts obtained by the processes described in these documents do not contain emodin, or other annoying active ingredients, but their yield of resveratrol and ⁇ -viniferin is low.
  • the subject of the present invention is a process for the manufacture of resveratrol and / or ⁇ -vinifenne, which does not contain an active principle such as emodin and has a good extraction yield.
  • this process will be easy to implement and will not require the use of advanced purification techniques
  • the process it offers is a process for extracting resveratrol and / or ⁇ -vinifenne from vine shoots
  • the vine shoots used to implement this process are dry shoots
  • the branches used to extract resveratrol and ⁇ -v ⁇ n ⁇ fé ⁇ ne have been dried in the open air for at least two months.
  • the branches dried in the open air for three months give very good results.
  • the branches used advantageously have a humidity level of less than 20%, preferably less than 5%
  • the invention also proposes to extract resveratrol and / or ⁇ -v ⁇ n ⁇ fér ⁇ ne using a process in which, after the stage of drying the branches, an extraction stage using a solvent chosen from the group comprising the products having a carbonyl radical, such as for example esters and ketones, and alcohols is provided
  • a solvent chosen from the group comprising the products having a carbonyl radical such as for example esters and ketones, and alcohols
  • the extraction is advantageously carried out in the absence of water
  • the solvent used to carry out this extraction can be, for example, ethanol or else acetone, which both give very good results, acetone being however the preferred solvent.
  • the extraction can also be done continuously with a counter-current circulation of the ground branches and the extraction solvent.
  • the method according to the invention comprises, after an extraction step, a primary purification step in which a hydroalcoholic mixture is used as the primary purification solvent.
  • the solvent used is for example a mixture of water and d ethanol
  • the process can include an additional secondary purification step in which a hydroalcoholic mixture having a lower alcohol content than that of the primary purification solvent is used as the secondary purification solvent.
  • the purification solvent secondary used can be simply water
  • the solvent used in this step is for example evaporated. realization provides that this solvent is distilled in the presence of water so as to precipitate the solid
  • the mass solvent rate which must be sufficient to impregnate the whole of the solid and allow the mixture to be stirred, is generally between 5 and 15
  • the contact is made at a temperature between room temperature and the boiling temperature of the solvent
  • the contact time between the plant material from the vine and the extraction solvent is between a few hours and 24 hours
  • the contact time can be reduced up to 'at% of hour
  • the solvent and the plant material from the vine are then separated by filtration and the solvent is eliminated by evaporation.
  • the crude extract obtained has a resveratrol content of between 1 and 5% and has a greenish gum texture.
  • the crude extract is then purified to obtain a less colored product in the form of a powder.
  • the primary purification is carried out by dissolution in a solvent which is a hydro-alcoholic mixture.
  • the alcohol is an alcohol miscible with water. It is for example ethanol
  • the alcohol content is between 10 and 80%
  • the dissolution is carried out at a temperature between 20 and 40 ° C.
  • the impurities insoluble in this solvent are separated from the supernatant by cent ⁇ fugation Filtration could be performed HERE instead of, or in addition to, centrifugation
  • the solid obtained after removal of the solvent from the supernatant by evaporation is a light brown powder, having a resveratrol content of between 7 and 20%
  • the ratio between the mass content of resveratrol and the mass content of ⁇ -vinifé ⁇ ne in the extract purified is around 1
  • This extract is then purified a second time by dissolving certain impurities in a secondary purification solvent.
  • This solvent is water or a hydro-alcoholic solvent having a lower alcohol content than primary purification solvent Dissolution is carried out at a temperature between 20 and 40 ° C.
  • the supernatant is separated from the insoluble part by centrifugation
  • filtration can be envisaged
  • the solid obtained after removal of the solvent from the supernatant by evaporation is a powder light brown in color, having a resveratrol content of between 1 and 3%
  • the ratio of the resveratrol content to the content of ⁇ -vinifenne is between 0.25 and 1
  • the purified extract obtained after drying of the insoluble part has a light brown color and is in the form of a powder Its resveratrol content is between 10 and 50%, and the ratio between the resveratrol content and the ⁇ -vinifenne content is between 0.25 and 4
  • the present invention also relates to a natural extract of the vine obtained by a process as described above.
  • This natural extract of the vine has for example a content of resveratrol greater than 1%, preferably greater than 10%
  • the invention relates more particularly to a natural extract of the vine whose ⁇ -viniferin content is greater than 1%, preferably greater than 10%
  • the mass content of ⁇ -vinifé ⁇ ne is for example between 0.25 and 4 times its mass content of resveratrol
  • vine represents in this document in particular the vine families Vitis Vinifera and Vitis Rupestris Without this list being exhaustive, we can cite HERE as examples the varietals Merlot, Sauvignon, Chardonnay, Cabernet, Syrah, Tanat, Gamay, etc.
  • the invention allows advantages compared to the prior art, in that it allows the obtaining of vine extracts from 20 to 1000 times more concentrated in resveratrol than the extracts currently marketed and obtained from the vine
  • This invention allows the preparation of liquid, powder or tablet formulations having high contents of resveratrol extracted from the vine, compatible with the usual industrial applications for these products. It applies in particular to uses in the pharmaceutical, dietetic fields. and cosmetics Various particular embodiments of the invention are described in more detail below. This description below is in no way limiting.
  • the method according to the invention can be implemented as follows.
  • the crude extract is taken up with 225 milliliters of a water / ethanol mixture at 50% by volume.
  • the mixture is maintained at 25 ° C., with stirring for one hour, then the undissolved solid and the supernatant are separated by centrifugation.
  • a purified extract After removing the solvent from the supernatant by evaporation, 8 grams of a purified extract are obtained having a resveratrol content of 10% and an ⁇ -viniferin content of 7%.
  • the purified extract has a light brown color and is in the form of a powder.
  • the purified extract is taken up in 225 milliliters of water. The mixture is kept at a temperature of 25 ° C with stirring for one hour. The undissolved solid and the supernatant are separated by centrifugation. After drying the undissolved solid, 2.5 grams of an extract are obtained having a resveratrol content of 28% and an ⁇ -viniferin content of 12%. The purified extract has a light brown color and is in the form of a powder. After removing the water from the supernatant, 5.5 grams of an extract having a resveratrol content of 2% and an ⁇ -viniferin content of 5% are obtained. The purified extract has a light brown color and is in the form of a powder.
  • the extraction is carried out for 20 hours at a temperature of 25 ° C, with moderate agitation
  • the crude extract is taken up with 250 milliliters of a water / ethanol mixture at 50% by volume.
  • the mixture is maintained at 25 ° C., with stirring for one hour, then the undissolved solid and the supernatant are separated by centrifugation.
  • a purified extract After removal of the solvent from the supernatant by evaporation, 7 grams of a purified extract are obtained having a resveratrol content of 11% and an ⁇ -vinifé ⁇ ne content of 10%.
  • the purified extract has a light brown color and is present in the powder form
  • the purified extract is taken up in 250 milliliters of water The mixture is kept at a temperature of 25 ° C. with stirring for one hour The undissolved solid and the supernatant are separated by centrifugation After drying the undissolved solid, 2 is obtained, 5 grams of an extract having a resveratrol content of 25% and an ⁇ -vinifenne content of 15% The purified extract has a light brown color and is in the form of a powder After removal of the water from the supernatant, 6.5 grams of an extract having a resveratrol content of 2% and an ⁇ -viniferin content of 4% are obtained. The purified extract has a light brown color and is in the form of a powder.
  • Tests were carried out on the following four grape varieties Syrah, Cabemet Franc, Merlot and Gamay For each of these grape varieties, an extraction of resveratrol and ⁇ -vinifé ⁇ ne was carried out according to the same operating protocol Tests were carried out on A) fresh branches pruned for less than a fortnight and having a humidity level of around 50%,
  • the branches are first crushed to a particle size of less than 4mm.
  • the ground branches and dried in the oven were not ground a second time.
  • the grinding of fresh branches which have been parboiled is the same as that of fresh branches and dried branches.
  • the ground branches are then macerated in 3 liters of acetone at 30 ° C for 12 hours. The agitation during this maceration is moderate. The mixture thus obtained is then filtered and the solid material obtained undergoes dry evaporation of the acetone.
  • the crude extract then obtained is taken up in 150 ml of a mixture of water and ethanol at 50% by volume of ethanol. This mixture is kept at 25 ° C for one hour and with stirring. The solid then not dissolved and the supernatant are then separated by centrifugation.
  • This variant consists in not evaporating to dryness after the extraction phase and the first purification, but in distilling the solvent in the presence of water so as to precipitate the solid.
  • the purification solvent is then removed from the supernatant by distillation, water is added to the mixture during the distillation, so that at the end of the operation, the content of solvent in the mixture is less than 5%, and the volume between 25 and 500 milliliters per kilogram of shoot
  • the precipitated solid is separated from the mixture by filtration
  • An aqueous phase and a wet solid are obtained
  • a brown powder is recovered, having a resveratrol content between 15 and 50%, with a ratio between the content of resveratrol and ⁇ -vinifé ⁇ ne between 0.25 and 1
  • a powder of brown in color having a resveratrol content of between 1 and 3% with a ratio between the content of revesratrol and ⁇ -viniferin between 0.25 and 1

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Abstract

Ce procédé d'extraction de resvératrol et/ou d' epsilon -viniférine est réalisé à partir de sarments de vigne et les sarments de vigne utilisés sont des sarments secs. Ce procédé comporte une étape d'extraction, une étape de purification primaire suivie de préférence d'une étape de purification secondaire. L'extrait purifié par ce procédé se caractérise par sa teneur en resvératrol et/ou en epsilon -viniférine particulièrement élevée.

Description

Procédé d'extraction de resveratrol et/ou d' ε-viπiférine
La présente invention a pour objet un procédé pour la préparation d'un extrait de la vigne concentré en resveratrol et/ou en ε-viniféπne ainsi qu'un extrait obtenu par ce procédé
Le resveratrol, ou 3, 5, 4'-tπhydroxystιlbène, se trouve à des teneurs très faibles, de l'ordre de quelques mg/l, dans les vins rouges Le resveratrol présent dans la peau et dans les pépins des raisins est extrait lors de la vinification et se retrouve dans le produit final, le vin, notamment le vin rouge pour lequel la peau des raisins macère dans le moût du vin
Le resveratrol existe sous la forme cis et trans II se présente généralement sous la forme monomère mais existe également comme oligomère comportant jusqu'à quatre monomères Le terme « resveratrol » par la suite concerne les formes cis ou trans du 3, 5, 4'-trιhydroxystιlbène Le resveratrol est souvent associé à de l'ε-vιnιféπne qui est le dimère du resveratrol Ce produit est donc généralement extrait en même temps que le resveratrol
Le resveratrol est particulièrement intéressant car il présente de nombreuses propriétés ayant des applications thérapeutiques C'est notamment à cette molécule que l'on attribue les effets du « French Paradox » (paradoxe français) Des premières études ont en effet montré ses effets dans la réduction du risque des maladies cardio-vasculaires Le resveratrol améliore la fluidité du sang, et donc la circulation du sang, et réduit les risques d'obturation des vaisseaux par des caillots II diminue aussi le taux de lipides et de cholestérol dans le sang
Les propriétés et les bienfaits du resveratrol vont au delà, puisque des premières études ont montré des effets dans la prévention des cancers et de certaines maladies neurologiques, ainsi que son activité anti-oxydante
Enfin, le révesratrol qui est produit par la vigne en réponse à des attaques bactériennes par la bactérie Botrytis cmerea, responsable de la maladie de la pourriture grise, a des propriétés fongicides et bactéricides
Le resveratrol se trouve aussi dans d'autres sources végétales comme par exemple les cacahuètes, les mûres, et aussi une plante utilisée par la médecine chinoise, le Polygonum Cuspitadum
Les extraits de la vigne provenant de la peau et des pépins de raisin sont peu concentrés en resveratrol La concentration maximale de l'ordre de
500ppm n'est pas compatible avec certaines applications industrielles La concentration en resveratrol dans la plupart des autres végétaux, ne permet pas d'envisager la production d'extraits plus concentrés
Seuls les extraits provenant de racines de Polygonum Cuspitadum peuvent avoir des teneurs en resveratrol supérieures à 20% Cependant, ces extraits présentent l'inconvénient de contenir aussi de l'émodine La présence de ce principe actif ne permet pas l'utilisation de ces extraits dans certaines applications industrielles
La publication faite suite à la conférence du 15 au 18 juillet 1996 à
Bordeaux concernant les polyphénols (pages 39-40 « isolement et caractérisât! on du trans-resvèratrol et de l'ε-vιnιférιne à partir du sarment de vigne » par Boukharta, Girardin et Metche) indique qu'il est possible d'extraire du trans-resvératrol et de I' ε-viniféπne de sarments de vigne lignifiés
Le document WO-99/03816 révèle quant à lui un procédé d'obtention de fractions de resveratrol monomère et/ou oligomère à partir de rafles de vigne
Les extraits obtenus par les procédés décrits dans ces documents ne contiennent pas d'emodine, ou d'autres principes actifs gênants, mais leur rendement en resveratrol et ε-viniférine est faible
La présente invention a pour objet un procédé de fabrication de resveratrol et/ou ε-vinifénne, qui ne contient pas de principe actif tel l'émodine et présente un bon rendement d'extraction De préférence, ce procédé sera facile à mettre en œuvre et ne nécessitera pas l'utilisation de techniques de purification poussées
A cet effet, le procédé qu'elle propose est un procédé d'extraction de resveratrol et/ou d' ε-vinifénne à partir de sarments de vigne
Selon l'invention, les sarments de vigne utilisés pour mettre en œuvre ce procédé sont des sarments secs
De façon surprenante, il a été remarqué que l'utilisation de sarments secs permettait d'avoir un rendement en resveratrol et ε-viniférine bien supérieur à celui obtenu avec des sarments « frais » Pour l'instant, aucune explication, même a posteriori, ne permet d'expliquer ce résultat
De préférence, les sarments utilisés pour extraire du resveratrol et de l'ε-vιnιféπne ont été séchés à l'air libre pendant au moins deux mois Des sarments séchés à l'air libre pendant trois mois donnent de très bons résultats
Les sarments utilisés présentent avantageusement un taux d'humidité inférieur à 20 %, de préférence inférieur à 5 %
L'invention propose aussi d'extraire le resveratrol et/ou l'ε-vιnιférιne en utilisant un procédé dans lequel, après l'étape de séchage des sarments, une étape d'extraction utilisant un solvant choisi dans l'ensemble comportant les produits possédant un radical carbonyle, tels par exemple les esters et les cétones, et les alcools est prévue Dans ce procédé, l'extraction est avantageusement réalisée en l'absence d'eau Ceci est contraire à tous les procédés connus de l'art antérieur où le solvant utilisé pour extraire du resveratrol est toujours un solvant aqueux. Le solvant utilisé pour réaliser cette extraction peut être par exemple de l'éthanol ou bien de l'acétone, qui donnent tous deux de très bons résultats, l'acétone étant toutefois le solvant préféré
Pour améliorer les rendements d'extraction, plusieurs contacts successifs peuvent être effectués L'extraction peut aussi être faite en continu avec une circulation à contre-courant des sarments broyés et du solvant d'extraction
De préférence, le procédé selon l'invention comporte, après une étape d'extraction, une étape de purification primaire dans laquelle un mélange hydro- alcoolique est utilisé comme solvant de purification primaire Le solvant utilisé est par exemple un mélange d'eau et d'éthanol
Pour obtenir un produit encore plus concentré, le procédé peut comporter une étape supplémentaire de purification secondaire dans laquelle un mélange hydro-alcoolique ayant une teneur en alcool plus faible que celle du solvant de purification primaire est utilisé comme solvant de purification secondaire Le solvant de purification secondaire utilisé peut être tout simplement de l'eau
Après l'étape d'extraction et/ou après l'étape de purification primaire, le solvant utilisé dans cette étape est par exemple évaporé Une variante de réalisation prévoit que ce solvant est distillé en présence d'eau de façon à faire précipiter le solide
Un procédé préférentiel d'extraction à partir de sarments séchés trois mois à l'air libre est décrit ci-apres avec indication de quelques valeurs numériques obtenues
Pour réaliser une extraction de resveratrol et/ou d'ε-viniféπne, le taux de solvant massique, qui doit être suffisant pour imprégner la totalité du solide et permettre une agitation du mélange, est généralement compris entre 5 et 15 Le contact est effectué à une température comprise entre la température ambiante et la température d'ébul tion du solvant Le temps de contact entre la matière végétale provenant de la vigne et le solvant d'extraction est compris entre quelques heures et 24 heures Le temps de contact peut être abaissé jusqu'à % d'heure
Le solvant et la matière végétale provenant de la vigne sont ensuite séparés par filtration et le solvant est éliminé par évaporation L'extrait brut obtenu a une teneur en resveratrol comprise entre 1 et 5 % et présente une texture de gomme verdâtre
L'extrait brut est ensuite purifié pour obtenir un produit moins coloré se présentant sous la forme d'une poudre La purification primaire est faite par dissolution dans un solvant qui est un mélange hydro-alcoolique L'alcool est un alcool miscible à l'eau II s'agit par exemple d'éthanol La teneur en alcool est comprise entre 10 et 80 % La dissolution est faite à une température comprise entre 20 et 40°C Les impuretés insolubles dans ce solvant sont séparées du surnageant par centπfugation Une filtration pourrait être effectuée ICI à la place, ou en complément, de la centrifugation
Le solide obtenu après élimination du solvant du surnageant par évaporation est une poudre de couleur marron clair, ayant une teneur en resveratrol comprise entre 7 et 20 % Le rapport entre la teneur massique en resveratrol et la teneur massique en ε-viniféπne dans l'extrait purifié est de l'ordre de 1
Cet extrait est ensuite purifié une deuxième fois par dissolution de certaines impuretés dans un solvant de purification secondaire Ce solvant est de l'eau ou un solvant hydro-alcoolique ayant une teneur en alcool plus faible que le solvant de purification primaire La dissolution est faite à une température comprise entre 20 et 40°C Le surnageant est séparé de la partie insoluble par centnfugation Ici aussi, une filtration peut être envisagée Le solide obtenu après élimination du solvant du surnageant par évaporation est une poudre de couleur marron clair, ayant une teneur en resveratrol comprise entre 1 et 3 % Le rapport entre la teneur en resveratrol et la teneur en ε-vinifénne est compris entre 0,25 et 1 L'extrait purifié obtenu après séchage de la partie insoluble a une couleur marron clair et se présente sous la forme d'une poudre Sa teneur en resveratrol est comprise entre 10 et 50 %, et le rapport entre la teneur en resveratrol et la teneur en ε-vinifénne est compris entre 0,25 et 4
La présente invention concerne également un extrait naturel de la vigne obtenu par un procédé tel que décrit ci-dessus Cet extrait naturel de la vigne a par exemple une teneur en resveratrol supérieure à 1 %, de préférence supérieure à 10 % De même, l'invention concerne plus particulièrement un extrait naturel de la vigne dont la teneur en ε-viniférine est supérieure à 1%, de préférence supérieure à 10 %
Dans un extrait naturel de la vigne selon l'invention, la teneur massique en ε-viniféπne est par exemple comprise entre 0,25 et 4 fois sa teneur massique en resveratrol
Le terme vigne représente dans le présent document en particulier les familles de vigne Vitis Viniféra et Vitis Rupestris Sans que cette liste soit limitative on peut citer ICI à titre d'exemples les cépages Merlot, Sauvignon, Chardonnay, Cabernet, Syrah, Tanat, Gamay, etc L'invention permet des avantages par rapport à l'art antérieur, en ce sens qu'elle permet l'obtention d'extraits de la vigne de 20 à 1000 fois plus concentrés en resveratrol que les extraits actuellement commercialisés et obtenus à partir de la vigne Cette invention permet la préparation de formulations liquides, en poudre ou en comprimés ayant des teneurs élevées en resveratrol extrait de la vigne, compatibles avec les applications industrielles habituelles pour ces produits Elle s'applique notamment à des utilisations dans les domaines pharmaceutiques, diététiques et cosmétiques Divers modes particuliers de réalisation de l'invention sont décrits plus dans le détail ci-après. Cette description ci-après n'est en aucun cas limitative.
Le procédé selon l'invention peut être mis en œuvre de la façon suivante.
Exemple 1 :
Un kilogramme de sarments de vigne, provenant d'un cépage Cabernet, séché à l'air libre pendant quatre mois et ayant un taux d'humidité de 4% est broyé à une granulométrie inférieure à 4 mm. Le solide broyé obtneu est mélangé avec 7 litres d'éthanol. L'extraction est opérée pendant 20 heures à une température de 30 °C, avec une agitation modérée.
Le solide et le surnageant sont séparés par filtration. Après évaporation de l'éthanol, on obtient 28 grammes d'extrait brut ayant une couleur verdâtre, un aspect gommeux, et une teneur en resveratrol de 3%.
L'extrait brut est repris avec 225 millilitres d'un mélange eau/éthanol à 50 % en volume. Le mélange est maintenu à 25°C, sous agitation pendant une heure, puis le solide non dissous et le surnageant sont séparés par centrifugation.
Après élimination du solvant du surnageant par évaporation, on obtient 8 grammes d'un extrait purifié ayant une teneur en resveratrol de 10 % et une teneur en ε-viniférine de 7 %. L'extrait purifié a une couleur marron clair et se présente sous la forme d'une poudre.
L'extrait purifié est repris dans 225 millilitres d'eau. Le mélange est maintenu à une température de 25°C sous agitation pendant une heure. Le solide non dissous et le surnageant sont séparés par centrifugation. Après séchage du solide non dissous, on obtient 2,5 grammes d'un extrait ayant une teneur en resveratrol de 28% et une teneur en ε-viniférine de 12%. L'extrait purifié a une couleur marron clair et se présente sous la forme d'une poudre. Après l'élimination de l'eau du surnageant, on obtient 5.5 grammes d'un extrait ayant une teneur en resveratrol de 2% et une teneur en ε-viniférine de 5%. L'extrait purifié a une couleur marron clair et se présente sous la forme d'une poudre. Exemple 2
Un kilogramme de sarments de vigne, provenant d'un cépage Cabemet, séché à l'air libre pendant trois mois et ayant un taux d'humidité de 12% est broyé à une granulometπe inférieure à 4 mm Le solide broyé obtenu est mélangé avec 7 litres d'acétone
L'extraction est opérée pendant 20 heures à une température de 25°C, avec une agitation modérée
Le solide et le surnageant sont séparés par filtration Après évaporation de l'acétone, on obtient 25 grammes d'extrait brut ayant une couleur verdâtre, un aspect gommeux, et une teneur en resveratrol de 3%
L'extrait brut est repris avec 250 millilitres d'un mélange eau/éthanol à 50% en volume Le mélange est maintenu à 25°C, sous agitation pendant une heure, puis le solide non dissous et le surnageant sont séparés par centrifugation
Après élimination du solvant du surnageant par évaporation, on obtient 7 grammes d'un extrait purifié ayant une teneur en resveratrol de 11 % et une teneur en ε-viniféπne de 10 % L'extrait purifié a une couleur marron clair et se présente sous la forme d'une poudre
L'extrait purifié est repris dans 250 millilitres d'eau Le mélange est maintenu à une température de 25°C sous agitation pendant une heure Le solide non dissous et le surnageant sont séparés par centrifugation Après séchage du solide non dissous, on obtient 2,5 grammes d'un extrait ayant une teneur en resveratrol de 25% et une teneur en ε-vinifénne de 15% L'extrait purifié a une couleur marron clair et se présente sous la forme d'une poudre Après élimination de l'eau du surnageant, on obtient 6,5 grammes d'un extrait ayant une teneur en resveratrol de 2% et une teneur en ε-viniférine de 4% L'extrait purifié a une couleur marron clair et se présente sous la forme d'une poudre
Exemple 3
Des essais ont été effectués sur les quatre cépages suivants Syrah, Cabemet Franc, Merlot et Gamay Pour chacun de ces cépages, on a réalisé une extraction de resveratrol et d' ε-viniféπne selon le même protocole opératoire Des essais ont été effectues sur A) des sarments frais taillés depuis moins de quinze jours et présentant un taux d'humidité d'environ 50%,
B) des sarments frais taillés depuis moins de quinze jours, broyés et séchés à l'étuve à 40°C jusqu'à un taux d'humidité inférieur à 3%, et C) des sarments séchés naturellement à l'air libre pendant trois mois et présentant un taux d'humidité compris entre 3 et 12%.
En tout, douze extractions distinctes ont été réalisées. Le procédé d'extraction est décrit ci-après pour 500 g de sarments.
Les sarments sont tout d'abord broyés à une granulométrie inférieure à 4mm. Bien entendu, les sarments broyés et séchés à l'étuve n'ont pas été broyés une seconde fois. Le broyage des sarments frais qui ont été étuvés est le même que celui des sarments frais et des sarments séchés.
Les sarments broyés sont alors macérés dans 3 litres d'acétone à 30°C pendant 12 heures. L'agitation au cours de cette macération est modérée. Le mélange ainsi obtenu est ensuite filtré et la matière solide obtenue subit une évaporation à sec de l'acétone.
L'extrait brut alors obtenu est repris avec 150ml d'un mélange d'eau et d'ethanol à 50% en volume d'ethanol. Ce mélange est maintenu à 25 °C pendant une heure et sous agitation. Le solide alors non dissout et le surnageant sont ensuite séparés par centrifugation.
Par évaporation du solvant, on obtient alors un solide contenant du resveratrol et de I' ε-viniférine.
Ce solide obtenu a ensuite été broyé pour réaliser son analyse. Les résultats de cette analyse sont résumés dans le tableau ci-dessous. On constate bien à partir du tableau ci-après que les rendements les plus élevés sont obtenus par les procédés mettant en œuvre des sarments secs. Ils sont sensiblement plus élevés encore lorsque les sarments ont été séchés à l'air libre pendant trois mois. Le séchage en étuve permet d'avoir une concentration intéressante en ε-viniférine. Ces résultats sont surprenants et sont uniquement empiriques.
Figure imgf000010_0001
Exemple 4
Cette variante consiste à pas évaporer à sec après la phase d'extraction et la première purification, mais à distiller le solvant en présence d'eau de façon à faire précipiter le solide
Après une préconcentration du solvant d'extraction, de l'eau est ajoutée au mélange, et l'élimination du solvant est poursuivie par distillation de telle façon qu'en fin d'opération, la teneur en solvant dans le mélange soit inférieure à 5% et que le volume du mélange soit compris entre 25 et 500 millilitres par kilogramme (ml/kg) de sarment Un volume équivalent de solvant de purification est alors ajouté au mélange Le mélange est maintenu sous agitation pendant une heure, puis le solide non dissous est séparé du mélange par filtration ou centrifugation
Le solvant de purification est alors éliminé du surnageant par distillation, de l'eau est ajoutée au mélange pendant la distillation, de sorte qu'à la fin de l'opération, la teneur en solvant dans le mélange soit inférieure à 5%, et le volume compris entre 25 et 500 millilitres par kilogramme de sarment Le solide précipité est séparé du mélange par filtration On obtient une phase aqueuse et un solide humide Après séchage et broyage du solide, on récupère une poudre de couleur marron, ayant une teneur en resveratrol comprise entre 15 et 50 %, avec un rapport entre la teneur en resveratrol et ε-viniféπne comprise entre 0,25 et 1 Après évaporation de l'eau du mélange liquide, on obtient une poudre de couleur marron, ayant une teneur en resveratrol comprise entre 1 et 3 % avec un rapport entre le teneur en revesratrol et ε-viniférine entre 0,25 et 1
De nombreuses variantes peuvent être considérées en fonction des circonstances d'utilisation, en ce qui concerne les paramètres opératoires des différentes étapes du procédé
La présente invention ne se limite pas aux détails des formes de réalisation ci-dessus considérées à titre d'exemple, mais s'étend au contraire aux modifications à la portée de l'homme de l'art dans le cadre des revendications ci- après

Claims

REVENDICATIONS
1. Procédé d'extraction de resveratrol et/ou d' ε-viniférine à partir de sarments de vigne, caractérisé en ce que les sarments de vigne utilisés sont des sarments secs.
2. Procédé selon la revendication 1 , caractérisé en ce que le taux d'humidité des sarments utilisés est inférieur à 20 %, de préférence inférieur à 5% .
3. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que les sarments ont été séchés à l'air libre pendant au moins deux mois.
4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'après l'étape de séchage des sarments, il comporte une étape d'extraction utilisant un solvant choisi dans l'ensemble comportant les produits possédant un radical carbonyle, tels par exemple les esters et les cétones, et les alcools.
5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'extraction est réalisée en l'absence d'eau.
6. Procédé selon l'une des revendications 4 ou 5, caractérisé en ce que le solvant utilisé est de l'éthanol.
7. Procédé selon l'une des revendications 4 ou 5, caractérisé en ce que le solvant utilisé est de l'acétone.
8. Procédé selon l'une des revendications 4 à 7, caractérisé en ce qu'il comporte après l'étape d'extraction, une étape de purification primaire dans laquelle un mélange hydro-alcoolique est utilisé comme solvant de purification primaire.
9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que le solvant utilisé est un mélange d'eau et d'ethanol.
10. Procédé selon l'une des revendications 8 ou 9, caractérisé en ce qu'il comporte une étape de purification secondaire dans laquelle un mélange hydro-alcoolique ayant une teneur en alcool plus faible que celle du solvant de purification primaire est utilisé comme solvant de purification secondaire.
11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que le solvant de purification secondaire utilisé est de l'eau.
12. Procédé selon l'une des revendications 1 à 11 , caractérisé en ce que le solvant utilisé dans l'étape d'extraction et/ou de purification primaire est évaporé.
13. Procédé selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que l'extrait obtenu après l'étape d'extraction et/ou l'étape de purification primaire est distillé en présence d'eau de façon à faire précipiter le solide.
14. Extrait naturel de la vigne, caractérisé en ce qu'il est obtenu par un procédé selon l'une des revendications 1 à 13.
15. Extrait naturel de la vigne selon la revendication 14, caractérisé en ce que sa teneur en resveratrol est supérieure à 1%, de préférence supérieure à
10 %.
16. Extrait naturel de la vigne selon l'une des revendications 14 ou 15, caractérisé en ce que sa teneur en ε-viniférine est supérieure à 1 %, de préférence supérieure à 10 %.
17. Extrait naturel de la vigne selon l'une des revendications 14 à 16, caractérisé en ce que sa teneur massique en ε-viniférine est comprise entre 0,25 et 4 fois sa teneur massique en resveratrol.
18. Application des extraits naturels selon l'une des revendications 14 à 17 dans les domaines thérapeutiques, cosmétiques et diététiques.
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