WO2000043360A1

WO2000043360A1 - Method for isolation of n-protected s-phenylcysteine

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Publication number: WO2000043360A1
Application number: PCT/JP2000/000274
Authority: WO
Inventors: Yasuyoshi Ueda; Hiroshi Murao; Koki Yamashita; Koichi Kinoshita
Original assignee: Kaneka Corp
Current assignee: Kaneka Corp
Priority date: 1999-01-21
Filing date: 2000-01-21
Publication date: 2000-07-27
Anticipated expiration: 2001-07-21
Also published as: EP1067119A1; EP1067119A4; US6320072B1; AU3075300A

Description

明細書

N—保護一 S—フユニルシスティンの単離方法技術分野

本発明は、下記式（1) で表される N—保護一 S—フエニルシスティン [以下， N—保護一 S—フエニルシスティン（1) ともいう。 ] を単離する方法に関する。 N—保護一 S—フエニルシスティン、例えば、 N—べンジルォキシカルボ二ノレ一 S—フエ二ルー L—システィンは、 W096/23 756号公報、 E P 604 1 85 A 1号公報等に記載されているように、 H I V—プロテアーゼ阻害剤の製造中間体の原料として重要な化合物である。

式中、 R¹は、ァミノ基の保護基を表す。 R²は、水素原子を表すか、又は、上記 R¹から独立して若しくは一緒になつてァミノ基の保護基を表す。背景技術

N—保護一 S—フエニルシスティン（1 ) は、例えば、特願平 1 0— 2643 97号に記載されているように、塩基性条件下、式（2) ；

(式中、 R¹及び R²は、上記と同じ基を表す。 Xは、脱離基を表す。）

で表される化合物をチォフユノールで処理する方法を用いて合成することができる。例えば、 N—ペンジノレオキシカ^^ボニ^^一 S—フエニノレシスティンは、ァノレカリ水溶液中で、 N—ベンジルォキシカルボ二ルー ]3—クロロアラニンをチオフェノールで処理することにより合成することができる。

このようにして得られた N—保護一 S—フエニルシスティン（1 ) は、例えば, N—保護一 S—フエニルシスティンの塩基性水溶液に酸を添加することにより、 N—保護一 S—フエニルシスティンを遊離の酸として晶析させ回収することができる。このような方法としては、特開平 1 0— 2 9 9 7 3号公報に、例えば、 N 一ベンジルォキシカルポニル一 S—フエニルシスティンの水酸化ナトリゥム水溶液に塩酸を添加して、 N—べンジルォキシカルボ二ルー S—フエニルシスティンを遊離の酸として晶析させる方法が記載されている。この方法は、水に易溶な N 一べンジルォキシカルボニル一 S—フヱニルシスティンと塩基との塩（この場合、 N—ペンジノレオキシカルボ二ルー S—フエ二ノレシスティンのナトリウム塩）を酸性化することにより、水に難溶な遊離の N—べンジルォキシカルボニル一 S—フェニルシスティンに変換するものである。しかしながら、同公報に記載されているように、晶析時に遊離の N—べンジルォキシカルボニル一 S一フエニルシステインがゲル化したり、良好に結晶が成長しない等の問題があり、また、不純物として共存する類縁化合物を精製除去しにくい等といった問題もあった。このように、 N—保護一 S—フユニルシスティン（1 ) を遊離の酸として晶析させる既存の方法は、必ずしも有効な単離方法ではなかつた。発明の要約

本発明は、上記現状に鑑み、 N—保護一 S—フエニルシスティン（1 ) を、簡便且つ効率的に収量良く高品質で単離する方法を提供することを目的とするものである。

すなわち、本発明は、 N—保護一 S—フエニルシスティン（1 ) を単離するに際して、水の存在下で、上記 N—保護一 S—フエニルシスティンを塩基との塩として塩析させることからなる、上記 N—保護一 S—フエニルシスティンの単離方法である。

水に易溶である N—保護一 S—フエニルシスティン（1 ) と塩基との塩が、水の存在下で、簡便且つ効率的に収量良く高品質で塩析できることは、本発明者らにより初めて見いだされたものである。以下、本発明を詳述する。発明の詳細な開示

本明細書において、 N—保護一 S—フエニルシスティンに関して使用する「塩基との塩」なる語は、 N—保護一 S—フエニルシスティンのカルボン酸部分の水素イオンが金属イオンやアンモニゥムイオンなどの陽イオンで置換されたものを意味する。また、 N—保護一 S—フヱニルシスティンに関して使用する「遊離」又は「遊離の酸」なる語は、 N—保護一 S—フエニルシスティンが他の塩基性化合物と結合しておらず、従って、 N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩において存在する金属ィオンやアンモニゥムィオン等の陽ィオンが水素ィオンで置換された状態又はものを意味する。

本明細書において、 N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩に関して使用する「塩析」なる語は、 N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩の水性溶液に、他の物質（主として無機塩）を共存させることにより、 N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩を当該溶液から分離させることを意味する。上記式（1) において、 R¹は、ァミノ基の保護基を表す。 R²は、水素原子を表すか、又は、上記 R¹から独立して若しくは一緒になつてアミノ基の保護基を表す。

本発明の方法においては、 S—フエニルシスティンにァミノ基の保護基の存在が必須条件である。

上記アミノ基の保護基としては特に限定されず、例えば、アルキル基、ァラルキル基、ァリール基等のほか、プロテクティブ 'グループス 'イン 'オーガニック ·シンセシス第 2版（P ROTECT I VE GROUPS I N ORG A N I C SYNTHES I S 2 n d E d. ) 、ジョン ' ウィリー .アンド ' サンズ（J OHN WI LEY&SONS) 出版（1 99 1年）に記載されている保護基のなかから選ぶことができる。

N—保護一 S—フエニルシスティン（1 ) の更なる誘導化を考慮した場合には、一般に、ァミノ基の塩基性を遮蔽できるウレタン型保護基及びァシル型保護基が好適に用いられる。このような保護基の具体例としては、ベンジルォキシカルボニスレ基、エトキシカルボニル基、メトキシカルボニル基、 t e r t—ブトキシカルポニル基、ァセチル基、トシル基、ベンゾィル基、フタロイル基等を挙げることができ、さらに、（3 S ) —テトラヒドロフラニルォキシカルボニル基、ヒド口キシル基が保護されていても良い 3—ヒドロキシー 2—メチルベンゾィル基等も選択の範囲である。なかでも、ウレタン型保護基がより好ましく、ァラルキルォキシカルボ二ル基、低級アルコキシカルボニル基が更に好ましい。特に、ベンジルォキシカルボニル基、 t e r t—ブトキシカルボニル基、メトキシカルボ二ル基、エトキシカルボニル基が好ましく、なかでも、ベンジルォキシカルボニル基がより好ましい。なお、ァミノ基の保護基がベンジルォキシカルボニル基である場合、 N—保護一 S—フエニルシスティン（1 ) は、 WO 9 6 2 3 7 5 6号公報、 E P 6 0 4 1 8 5 A 1号公報等に記載されているように、 H I V—プロテァーゼ阻害剤の製造中間体の原料として重要な化合物である。

N—保護一 S—フエニルシスティン（1 ) は、光学活性体のものであってもよレ、。本発明においては、光学活性体を用いても光学純度の低下を伴うことなく塩析を行うことができる。

N—保護一 S—フエニルシスティン（1 ) と塩基との塩としては特に限定されず、例えば、 N—保護一 S—フエニルシスティン（1 ) のリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩等の金属塩；アンモ二ゥム塩等を挙げることができる。なかでも、金属塩が好ましく、アルカリ金属塩がより好ましく、ナトリウム塩が更に好ましい。

N—保護一 S—フユニルシスティン（1 ) を塩基との塩とするために使用する塩基としては特に限定されず、例えば、アルカリ金属水酸化物、アルカリ金属炭酸塩、アルカリ金属炭酸水素塩、アルカリ土類金属水酸化物、アルカリ土類金属炭酸塩、アンモニア等を挙げることができる。好ましくは、アルカリ金属水酸化物、アルカリ金属炭酸塩、アルカリ金属炭酸水素塩である。具体的には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸リチウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等を挙げることができる。より好ましくは、水酸化ナトリウムである。

N—保護一 S—フエニルシスティン（ 1 ) を塩基との塩とするには、中性〜塩基性条件下で、 N—保護一 S—フエニルシスティン（ 1 ) と上記塩基とを反応させることが好ましい。 p Hで規定すると、アミノ基保護基の安定性を考慮して、 p H 7以上であり、好ましくは p H 8以上、より好ましくは p H 9以上である。一般には p H 9〜l 1付近で好適に反応を行わせることができる。 p Hが 7未満であると、 N—保護一 S—フエエルシスティンと塩基との塩から、遊離の N—保護一 S—フエニルシスティンへの変換が生じるので好ましくない。また、ァミノ基保護基がトリフルォロアセチル基等の、塩基性条件下で安定性に難がある保護基の場合には、強塩基性条件、例えば、 p H I 2以上の条件を避けることが好ましい。

本発明において、塩析は、水の存在下で行われる。一般には、 N—保護— S— フエニルシスティン（1 ) の水溶液において行われる。この際、 N—保護— S— フエニルシスティン（1 ) を塩基との塩として存在させるために、塩基性条件下で実施することが好ましい。

上記水溶液には、悪影響のない範囲で有機溶剤等を含ませてもよい。この有機溶剤としては特に限定されず、例えば、酢酸ヱチル、酢酸イソプロピル等の酢酸エステル類；トルエン等の芳香族炭化水素類；へキサン、ヘプタン等の脂肪族炭化水素類；メチル t e r t—ブチルエーテル、ジ n—ブチルエーテル、テトラヒドロフラン等のェ一テル類；メタノール等のアルコール類；ァセトン、 2—ブタノン等のケトン類等を挙げることができる。このような有機溶剤を存在させることにより、共存する脂溶性不純物を溶解除去しやすくすることができる。上記有機溶剤は、塩析時に存在させてもよいし、塩析が充分進行した後に添加してもよい。

N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩を塩析させるためには、別途、他の塩を存在させる必要がある。このような塩としては無機塩が好ましレ、。無機塩としては特に限定されず、例えば、塩化ナトリゥム、塩化力リゥム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム等のアルカリ金属塩；硫酸アンモニゥム、塩化アンモ-ゥム、塩化カルシウム等を挙げることができる。使用の容易さから、アルカリ金属塩が好ましく、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウムがより好ましい。なかでも、安価であること、取り扱い易さ、廃水処理の容易さ、 N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩の塩析効果、得られる塩の性状等の観点から、塩化ナトリウムが最も好適に用いられる。上記塩は、系中に添加しても良く、また、酸と塩基の中和反応を利用して、系中で形成させても良い。

また、上記塩析のために用いる塩の陽イオンは、塩析する N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩における陽イオンと同種のものであることが好ましレ、。例えば、 N—べンジノレォキシカノレボニノレー S—フエ二ノレシスティンを用いる場合、ナトリウム塩として塩祈させることが好ましいが、この場合、塩析のために用いる塩は、塩化ナトリゥム、硫酸ナトリゥム等のナトリゥム塩を用いるのが好ましく、塩化ナトリウムを用いるのが最も好ましい。

上記塩析のために用いる塩の使用量としては、塩析に用いる塩の種類、 N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩の種類やその存在量等に依存するため一律に規定できないが、収量良く塩析させるに充分な量を用いることが好ましい。具体的には、水に対する無機塩濃度として、約 5重量％以上存在させるのが好ましい。上限は、一般に、飽和濃度である。例えば、塩化ナトリウムの場合、通常、約 5重量％〜飽和濃度で好適に塩析を行うことができる。

塩析時の N—保護一 S—フユニルシスティン（1 ) と塩基との塩の濃度としては特に限定されず、通常、水に対して約 3 0重量％以下であり、好ましくは、約 5〜2 0重量％の範囲である。

N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩を簡便且つ効率的に塩析させるためには、 N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩及び塩析のために用いる塩が、共に、有効量（塩祈させるに充分な量）系中に存在するように操作するのが好ましい。この場合、塩析は、

i ) 上記無機塩の存在量を維持しつつ、上記 N—保護— S—フエニルシスティンと塩基との塩の存在量を高める、

i i ) 上記 N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩の存在量を維持しつつ、上記無機塩の存在量を高める、又は

i i i ) 上記無機塩の存在量を高めるとともに、上記 N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩の存在量も高める

ことにより行われることが好ましい。また、塩析時の温度として特に限定されず、例えば、系の固化温度〜約 1 0 0 。Cであり、好ましくは、約 0〜6 0 °Cの範囲である。特に、約 1 0〜約 5 0 °Cの範囲で好適に実施することができる。

また、 N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩がスムーズに塩析されにくい場合は、種晶を共存させてもよい。

上述したように、特開平 1 0— 2 9 9 7 3号公報には、 N—ベンジルォキシカルボニルー S—フエニルシスティンと塩基との塩（即ち、ナトリウム塩）を含有する塩基性（p H l 0〜1 1 ) の水溶液を塩酸で酸性化して、 N—ベンジルォキシカルボ二ルー S—フエニルシスティンを遊離の酸として晶析させることが開示されている。しかしながら、上記塩基性水溶液中の塩化ナトリウム濃度は 3重量 %に満たない程低く、塩析させるための条件として充分ではない。また、酸性化時においては、その中和反応によって無機塩（塩化ナトリウム）の存在量が高まる以前に、 N—べンジルォキシカルボニル一 S—フエニルシスティンと塩基との塩（即ち、ナトリウム塩）は遊離の酸に変換されるために、 N—ベンジルォキシカルボ二ルー S—フユニルシスティンと塩基との塩が塩析されることはない。本発明の方法は、遊離の N—保護一 S—フエニルシスティン又は N—保護一 S 一フエニルシスティンと塩基との塩を精製する目的や、 N—保護一 S—フエニルシスティンを塩基との塩として反応混合物から分離する目的等に使用することができる。

このようなことを目的として、例えば、塩基性条件下でかつ塩析させるに充分な量の無機塩が存在する水性媒体中で、 N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩を形成させると同時に、形成された N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩を塩祈させることができる。この場合も、種晶を共存させることにより、 N—保護— S—フエニルシスティンと塩基との塩の形成と同時進行の速やかな塩析が可能になる。

また、塩基性条件下の反応で N—保護一 S—フエニルシスティンを合成すると同時に、得られた N—保護一 S—フエニルシスティンを塩基との塩として反応混合物から塩析させることができる。この方法は、塩基性条件下で必ずしも安定ではない N—保護— S—フエニルシスティンの分解、ラセミ化等を防護できるので、 N—保護一 S—フエニルシスティンの収率及び又は品質の向上に資することができる。更には、塩基との塩を形成し得る構造類似化合物等の不純物を含有する反応混合物から、 N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩のみを塩析させることもできるので、上記の不純物を非常に効率良く水相に除去し、精製することができる。

具体的には、塩基性条件下でかつ塩祈させるに充分な量の無機塩が存在する水性媒体中で、式（2 ) ；

(式中、 1^及び1¾ ²は、上記と同じ基を表す。 Xは脱離基を表す。）

で表される化合物をチォフエノールで処理して N—保護一 S—フエニルシスティンを得ると同時に、得られた N—保護一 S—フエニルシスティンを塩基との塩として反応混合物から塩析させる（即ち、 N—保護一 S—フエニルシスティンを塩基との塩の状態で反応場から追い出す）ことができる。これにより、塩基性条件下で必ずしも安定ではない N—保護— S—フエニルシスティンは分解、ラセミ化等から防護され、高品質の N—保護— S—フエニルシスティンが高収率で得られる。なお、言うまでもなく、ここで使用する塩基、塩基性条件、無機塩等は、上述したものと同様である。

ここで、 Xを表す脱離基としては特に限定されず、例えば、塩素等のハロゲン原子、メシルォキシ基等の炭素数 1〜 1 0のアルキルスルホニルォキシ基、トシルォキシ基等の炭素数 6〜 1 0のァリールスルホニルォキシ基、炭素数 7〜1 0 のァラルキルスルホニルォキシ基、ァセチルォキシ基、トリハロアセチルォキシ基、ホスホリル基等を挙げることができる。

品質向上を目的とする塩析に際しては、上述したように、有機溶剤（例えば、酢酸ェチル、酢酸ィソプロピル等の酢酸エステル類；トルエン等の芳香族炭化水素類；へキサン、ヘプタン等の脂肪族炭化水素類；メチル t e r t—ブチルエーテル、ジ n—ブチルェ一テル、テトラヒドロフラン等のエーテル類；メタノール等のアルコール類；アセトン、 2—ブタノン等のケトン類等）を存在させることにより、共存する脂溶性不純物を溶解除去することができる。特に、反応晶析等の反応混合物からの塩折の場合に有効である。上記有機溶剤は、塩析時に存在させてもよいし、塩析が充分進行した後に添加してもよい。

本発明の方法により塩析した N—保護一 S—フ： rニルシスティンと塩基との塩は、例えば、濾過等の分離操作により回収することができる。回収した N—保護 —S—フエニルシスティンと塩基との塩は、水 [例えば、冷水や、塩析に利用した塩を含有する水（例えば、塩化ナトリウム水溶液）が好ましい] や上記有機溶剤を用いて洗浄することができ、更に必要に応じて、常圧下又は減圧下で水等の溶剤を除去することができる。塩析時の収量は、通常 8 0 %以上であり、好ましくは 9 0 %以上、より好ましくはほぼ 1 0 0 %が期待できる。

このようにして得られた N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩は、塩酸や硫酸等の酸を用いて中和することにより、遊離の N—保護一 S—フエニルシスティンを得ることができる。この遊離の N—保護一 S—フエニルシスティンを有機溶剤と混合することにより、有機溶剤と遊離の N—保護一 S—フエニルシスティンとの混合物を得ることができる。上記有機溶剤としては特に限定されず、例えば、酢酸ェチル、酢酸イソプロピル等の酢酸エステル類；トルエン等の芳香族炭化水素類；メチル t e r t一ブチルエーテル、ジ n—ブチルェ一テル、テトラヒドロフラン等のエーテル類等を挙げることができる。言うまでもなく、上記酸による中和は上記有機溶剤の共存下に実施することもできる。このようにして得られる有機溶剤と遊離の N—保護一 S—フエニルシスティンとの混合物（例えば、トルエンと遊離の N—保護一 S—フエニルシスティンとの混合物等）は、更なる誘導化（例えば、アルコールを用いるエステル化反応等）に使用することができる。図面の簡単な説明

図 1は、得られた N—ペンジノレオキシ力/レポ二 — S—フエ二/レー L一システインのナトリウム塩の赤外線吸収スペクトル（K B r錠剤）である。

図 2は、遊離の N—ベンジ/レオキシカノレポニノレー S一フエ二ノレ一 L—システィンの赤外線吸収スぺクトル（KB r錠剤）である。

図 3は、 40°Cにおける、 N—べンジルォキシカルボ二ルー S—フエニル _ L —システィンのナトリゥム塩残存率の経時変化を示したものである。

図 4は、塩化ナトリゥム濃度に対する N ^ンジルォキシカルボニル一 S—フェニル一L—システィンのナトリゥム塩の溶解度を示したものである。発明を実施するための最良の形態

以下に実施例、比較例、参考例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらのみに限定されるものではない。なお、以下の実施例等における S— フエニルシスティン誘導体の定量は、 UV検出器を備えた HP LCを用いて行つた。

実施例 1

N—ペンジノレオキシカノレボニノレ一 S—フエニノレー L—システィン 13 7. 8 g に、水 300mし 30重量⁰ /₀水酸化ナトリウム水溶液 56. 4 g (N—べンジノレォキシカルボニル一 S—フエ二ルー L—システィンに対して 1. 0倍モル）を加え、 ρΗ Ι Ο. 2に調整した。この溶液を約 40°Cに加温下、 1時間攪拌して澄明な溶液とした後、塩化ナトリウム 73. 5 g (水に対して 22重量 °/o) を投入し、 1時間攪拌を継続したところ、結晶が析出した。析出した結晶を吸引濾過により濾別して、 N—べンジルォキシカルボニル一 S—フエ二ルー L—システィンのナトリウム塩の湿結晶 3 1 2. 2 gを得た。 HP LC分析した結果、晶析収率は 1 00 %であった。

参考例 1

実施例 1で得られた、 N—ベンジルォキシカルポ二ルー S—フエニル一L—システィンのナトリウム塩の湿結晶 3 1 0. 0 gを、水 700m 1に溶解後、約 5 0°C、減圧下に水を留去し、液量 6 1 9. 5 gまで濃縮し、結晶を析出させた。析出晶を吸引濾過により分離し、水 1 0 Om 1で洗浄して、湿結晶 208 gを得た。

得られた湿結晶全量を、水 6 O Om lに溶解し、約 50°C、減圧下に水を留去し、液量 209. 5 gまで濃縮して得られた油状物に、アセトン 1 000m lを添加して晶析した。析出した結晶を吸引濾過により分離し、アセトン 2 O Om l で洗浄して、湿結晶 88. 8 gを得た。

更に、水 40 Om 1に溶解後、アセトン 2800m lを添加して晶析した。析出した結晶を吸引濾過により分離し、アセトン 1 30 Om 1で洗浄した後、減圧乾燥（l〜30mmHg、 20〜40°C、 20時間）して、結晶 44. 5 gを得た。この結晶は、 N—ベンジルォキシカルボニル一 S—フエ二ルー L—システィンのナトリウム塩 43. 8 gを含有し、純度は 98. 4重量％ (遊離の N—ベンジルォキシカルボ二ルー S—フエ二ルー L—システィンを基準として HP LCにて定量し、ナトリウム塩に換算）であった。

得られた N—ベンジルォキシカルボ二ルー S—フエ二ルー L—システィンのナトリウム塩の 40 OMH z核磁気共鳴スペクトル [重水、 3— （トリメチルシリル） —プロパンスルホン酸ナトリウム内部標準] は、 δ (p p m) ： 3. 1 9 ( 1 H、 d d、 J = 8. 1、 1 3. 9 H z ) 、 3. 5 1 (1 H、 d d、 J = 3. 4、 1 3. 9 H z ) 、 4. 1 5 (1 H、 d d、 J = 3. 4、 8. 1 H z ) 、 4. 89 -5. 0 1 (2H、 AB q、 J = 1 2. 4Hz) 、 7. 2- 7. 4 (10H、 m ) であった。

得られた N—ベンジルォキシカルボ二ルー S—フエ二ルー L—システィンのナトリウム塩の赤外線吸収スペクトル（KB r錠剤）を、図 1に示す。対照として、遊離の N—べンジルォキシカルボ二ルー S—フエ二ルー L—システィンの赤外線吸収スぺクトル（KB r錠剤）を、図 2に示す。実施例 2

参考例 1で調製した、 N—ベンジルォキシカルボニル一 S—フエニル一 L—システィンのナトリウム塩の結晶 3 gを用い、 A：水 3 Om 1に溶解させたもの、 B ： 20重量％塩化ナトリウム水溶液 30 m 1に懸濁させたもの、にそれぞれ 3 重量％水酸化ナトリウム水溶液を添加して pH 9. 7に調整し、 40°C下で攪拌した。溶液の一部をサンプリングし、 HP LCにより N—ベンジルォキシカルボ二ルー S—フエニル— L—システィンのナトリゥム塩濃度を測定し、 N—べンジルォキシカルボ二ルー S—フエ二ルー L—システィンのナトリゥム塩の残存率を追跡した。

図 3に、 40°Cにおける、 N—ベンジルォキシカルボ二ルー S—フエ二ルー L —システィンのナトリゥム塩残存率の経時変化を示す。

この結果から、塩基性条件下で不安定な N—ベンジルォキシカルボ二ルー S— フエ二ルー L—システィンのナトリゥム塩が、塩析により安定化されることが判る。実施例 3

—クロロアラニン 7. 47 gを含有する水溶液 86. 1 9₈に、約5°じ、攪拌下、 3◦%水酸化ナトリウム水溶液により p H 9. 7に保ちながら、ベンジルォキシカルボユルクロリド 1 1. 35 g (/3—クロロアラニンに対して 1. 1倍モル）を 1時間かけて滴下して反応させた。更に 3時間反応させて得られた反応液をトルエン 5 Om 1で洗浄した。洗浄後の反応液 89. 53 gは、 N—べンジルォキシカルボ二ルー 3—クロロアラニン 1 5. 52 g (収率 1 00%) を含有していた。

この反応液 88. 27 g (N—べンジルォキシカルボ二ルー j3—クロロアラニン 1 5. 30 g含有）に塩化ナトリウム 1 3. 95 g (25重量％対水）を添加し、約 40°C、攪拌、窒素雰囲気下、 30%水酸化ナトリウム水溶液により p H 1 0付近に保ちながら、チォフエノール 9 · 82 g (N—ベンジルォキシカルボニル一 ]3—クロロアラニンに対して 1. 5倍モル）を 1時間かけて滴下して反応させた。反応の進行と共に、生成した N—ベンジルォキシカルボ二ルー S—フエ二ルー L一システィンがナトリゥム塩として析出し、反応系はスラリーとなった。 20時間反応させて得られた反応液スラリー 148. 97 gは、 N—ベンジルォキシカルボ二ルー S—フエ二ルー L一システィンとして 1 9. 21 g (反応収率 98%) を含有していた。実施例 4

精製した N—ベンジルォキシカルボニル一 —クロロアラニン 5. 0 gに水 3 2 gを添加し、 A： 0 · 0 g (無添加）、 B ： 8. 0 g (濃度 25重量％対水），の塩化ナトリウムをそれぞれ添加し、約 40°C、攪拌、窒素雰囲気下、 30%水酸化ナトリウム水溶液により pH 1 0付近に保ちながら、チォフエノール 3. 2 g (N—ベンジルォキシカルボ二ルー ]3—クロロアラニンに対して 1. 5倍モル ) を 1時間かけて滴下して反応させた。更に、 20時間反応させて得られた反応液中の N—^ ンジ/レオキシカルボ二ルー S—フエニル一 L—システィン含量を定量し、収率を算出した。

表 1に、水に対する塩化ナトリウムの濃度、 N—べンジルォキシカルボ二ルー S—フエニル一 L一システィンの収率をまとめる。

なお、塩化ナトリウム無添加の場合（A) では、反応液はスラリー化せず、塩化ナトリウムを添加した場合（B) では、反応液はスラリー化した。

この結果から、塩化ナトリウムを添加することにより、生成した N—べンジルォキシカルボ二ルー S—フエ二ルー L一システィンのナトリゥム塩の塩析を促進して反応場から追い出し、分解反応から効果的に防護できることが判る。比較例 1

実施例 3と同様にして得られた反応液スラリー 1 4 1. 22 g (N—べンジルォキシカルボニル一 S—フエ二ルー L一システィンとして 1 8. 4 1 g含有）に、約 25°C、攪拌、窒素雰囲気下、濃塩酸 1 7. 44 g (N—ベンジルォキシカルボニルー S—フエニル— L—システィンに対して 3. 0倍モル）を 5時間かけて滴下し、 pH3に調整した。更に同温度で 3時間攪拌して充分に晶析を行った後に、吸引濾過により結晶を分離し、水で洗浄して、湿結晶 26. 1 l gを得た。この結晶は、 N—べンジル才キシカルボニノレー S一フエ二ノレ一 L—システィン 1 8. 1 9 g (晶析収率 99%) を含有し、 HP L Cの見かけ純度は 74. 8 a r e a %であった。実施例 5

実施例 3で得られた反応液スラリー 1 45. 34 g (N—ベンジルォキシカルボニル一 S—フエニル一 L—システィンとして 1 8. 73 g含有）にトノレェン 6 5m lを添力 tlし、約 40°C、窒素雰囲気下、 1時間攪拌した後に、吸引濾過により結晶を分離した。得られた湿結晶をトルエン、飽和塩化ナトリゥム水溶液で順次洗浄した後、減圧乾燥（1〜3 OmmHg、 20〜40°C、 20時間）して、結晶 2 1. 96 gを得た。この結晶は、 N—べンジルォキシカルボ二ルー S—フェニルー L一システィンのナトリウム塩 1 9. 67 g (晶析収率 99%) を含有し、 HP LCの見かけ純度は 99. O a r e a⁰ /。であった。 N—ベンジルォキシカルボ二ルー S—フエニル一 L一システィンを遊離の酸として晶析した場合（比較例 1) と比較して、 HP LCで検出される不純物は極少量であり、 N—べンジルォキシカルボニル一 S—フエニル一 L—システィンを塩基との塩として高品質で取得できることが判る。実施例 6

N—べンジルォキシカルボニル一 S—フエニル一 L—システィン 20. 04 g、水酸化ナトリウム 8. 04 g (N—ベンジルォキシカルボ二ルー S—フエ二ルー L—システィンに対して 1. 0倍モル）より調製した水溶液 1 90. 89 g (p HI 0. 8) に、塩化ナトリウムを添加しながら、溶液の一部をサンプリングし、析出した結晶を濾別して得られた濾液中の、 N—ベンジルォキシカルボ二ルー S —フエ二ルー L—システィンのナトリウム塩の重量％濃度（溶解度）を測定した。塩化ナトリゥム濃度に対する N—べンジルォキシカルボニル一 S—フエニル— L —システィンのナトリウム塩の溶解度を、図 4に示す。実施例 7

N—べンジノレ才キシカノレボニノレー S—フエ二/レー L—システィン 2. 05 g、水酸化リチウム一水和物 0. 26 g (N—ベンジ /レオキシカ^^ボニ^^— S—フエ二ルー L一システィンに対して 1. 0倍モル）を水 20m lに溶解した。この溶液に、塩化リチウム 7. 08 g (35重量％対水）を添加して 1 0分間振とうしたところ、結晶が析出した。実施例 8

水 20 m 1に N—ベンジルォキシカルボ二ルー S—フエニル一 L一システィン 2. 02 gを懸濁し、完全に溶解するまで 28重量％アンモニア水溶液を添加して、 p H9. 2の水溶液 21. 93 gを調整した。この溶液に、塩化アンモニゥム 1. O l g (5重量％対水）を添加して 10分間振とうしたところ、結晶が析出した。実施例 9

N—べンジ /レー S—フエニルシスティン 5. 04 g、水酸化ナトリウム 2. 3 8 g (N—ベンジル— S—フヱニルシスティンに対して 1. 0倍モル）より調製した水溶液 45. 52 g (pHl 0. 8) に、塩化ナトリゥム 9. 71 g (24 重量％対水）を添加して 1時間攪拌したところ、結晶が析出した。比較例 2

S—フエニル一 L一システィン 5. 1 2 g、水酸化ナトリウム 3 · 55 g (S —フエニル一 L—システィンに対して 1. 0倍モル）より調製した水溶液 46. 85 g (p H 10. 8) に、塩化ナトリウム 1 2. 29 g (30重量⁰ /₀対水）を添加したが、 S—フエニル一 L—システィンのナトリウム塩は塩析されず、液性状に変化は認められなかった。

以上の結果から、本発明においては、ァミノ基の保護基の存在が必須条件であることが判る。比較例 3

S—フエニル一 L一システィン 4. 55 gを含有する水溶液 62. 3 1 gに、約 25°C、攪拌下、 30%水酸化ナトリウム水溶液により p H 1 1に保ちながら、ベンジルォキシカルボユルクロリド 3. 94 g (S—フエニル一 L—システィンに対して 0倍モル）を 1時間かけて滴下し、更に 1 2時間反応させた。得られた反応液 67. 1 9 gは、 ρΗΙ Ο. 9であり、 N—ベンジルォキシカルポ二ルー S—フエニル一 L—システィン 7. 1 2 g (濃度 1 0. 6重量⁰ /₀、収率 93 %) を含有していた。反応液中の塩化ナトリウム濃度は 2. 7重量％ (対水）であった。この反応液においては、 N—べンジルォキシカルボニル— S—フエニル — L—システィンのナトリゥム塩は塩析されなかった。実施例 1 0

実施例 5で得られた、 N—ペンジノレオキシカルボ二ルー S—フエニル一 Lーシスティンのナトリウム塩結晶 14. 98 g (純分 1 3. 42 g) に水 50mしトルエン 260m lを添加し、約 40°C、攪拌下、濃塩酸にて p H 1. 8に調整した。分液により水層を除去し、トルエン溶液 236. 65 gを得た。このトルェン溶液は、 N—ベンジルォキシカルボニル一 S—フエ二ルー L—システィン 1 2. 54 g (回収率 100%) を含有していた。

このトルエン溶液 235. 14 g (N—ベンジ /レオキシカルボ二ルー S—フエ二ノレ一 L—システィン 1 2. 46 g含有）に p— トルエンスルホン酸 '一水和物 0. 66 gを添加し、総量としてメタノール 25. 99 gを用いて、還留下で水を共沸脱水により系外に除去しながら 20時間反応させた後、約 30°Cまで冷却して、反応液 9 1. 99 gを得た。この反応液は、 N—ベンジルォキシカルボ二ルー S 一フエニル一 L—システィンメチルエステル 1 2. 50 gを含有し、収率 96% であった。実施例 1 1

—クロ口一 L—ァラニン塩酸塩 1 5. 7 g (98. 1 mm o 1 ) を水 1 60 m lに加えて溶解させた。内温を 0〜5°Cに冷却し、強攪拌下、 30w t /o水酸化ナトリウム水溶液約 36 gを滴下して p Hを 1 0に調整した。内温を 0〜5°C に維持しながら、強攪拌下、クロロギ酸べンジル 20. 5 g (1 20. 0 mmo 1 ) を 1時間かけて滴下した後、引き続き 4時間攪拌を続けた。この間、 30w t %水酸化ナトリウム水溶液約 1 6 gを滴下して、反応液の p Hを 9. 5〜10. 5に維持した。得られた反応液中の N—カルボべンジロキシ一 |3—クロロー L— ァラニンの量を HP L Cで定量した結果、 25. 1 g (97. 5mmo l ) であつた。

得られた反応液に窒素雰囲気下、強攪拌下にチォフエノール 22. 0 g (20 0. 0 mm o 1 ) を滴下した。この間、 30 w t %水酸化ナトリウム水溶液約 2 6 gを滴下して、反応液の pHを 9. 7〜10. 3に維持した。窒素雰囲気下、内温を 50°Cに昇温し、 3. 5時間反応させた。この間、 30w t %水酸化ナトリウム水溶液約 1 gを滴下して、反応液の pHを 9. 7〜1 0. 3に維持した。反応中生成した N—カルボべンジロキシー S—フエニル一 L一システィン（N— ベンジルォキシカルボ二ルー S—フエ二ルー L一システィン）がナトリウム塩として析出し、反応系はスラリーとなった。得られたスラリーに窒素雰囲気下、強攪拌下に濃塩酸約 20 gを 3時間かけてゆつくり滴下し、スラリーの pHを 3に調整した。析出した N—カ^^ボベンジロキシ一 S—フエ二ルー L—システィンの結晶を減圧濾過し、水 1 00m 1で 2回洗浄して充分に脱液し、 N—カルボベンジロキシ一 S—フエ二ルー L—システィンの湿結晶 [N—カルボべンジロキシー S—フエ二ノレ一 L一システィンの純分量 29. 8 g (89. 9mmo l ) ] を得た。得られた N—カルボべンジロキシ— S—フエ二ルー L—システィンの光学純度は、 99. 9 % e . e . であつた。産業上の利用可能性

本発明は、上述の構成からなるので、簡便且つ効率的に収量良く高品質の N— 保護一 S—フエニルシスティンを単離することができる。

Claims

請求の範囲下記式（1 ) ；

(式中、 R ¹は、ァミノ基の保護基を表す。 R ²は、水素原子を表すか、又は、前記 R ¹から独立して若しくは一緒になつてアミノ基の保護基を表す。）で表される N—保護一 S—フエニルシスティンを単離するに際して、水の存在下で、前記 N—保護一 S—フエニルシスティンを塩基との塩として塩析させることを特徴とする、前記 N—保護一 S—フユニルシスティンの単離方法。

2 . 塩析は、塩基性条件下に行われるものである請求項 1記載の単離方法。

3 . 塩析のために用いる塩が、無機塩である請求項 1又は 2記載の単離方法。

4 . 無機塩は、アルカリ金属塩である請求項 3記載の単離方法。

5 . 無機塩は、塩化ナトリウム又は硫酸ナトリウムである請求項 4記載の単離方法。

6 . 塩析のために用いる塩の陽イオンは、塩析する N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩における陽イオンと同種のものである請求項 1 2 3

4又は 5記載の単離方法。

7 . 無機塩は、塩析させるに充分な量が用いられる請求項 3 4 5又は 6記載の単離方法。

8 . 無機塩は、水に対して 5重量。 /o以上の濃度で用いられる請求項 7記載の単離方法。

9 . 無機塩の存在下における N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩の塩析は、

i ) 前記無機塩の存在量を維持しつつ、前記 N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩の存在量を高める、

i i ) 前記 N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩の存在量を維持しつつ、前記無機塩の存在量を高める、又は

i i i ) 前記無機塩の存在量を高めるとともに、前記 N—保護一 S—フユニルシスティンと塩基との塩の存在量も高める

ことにより行われるものである請求項 3、 4、 5、 6、 7又は 8記載の単離方法。

1 0 . 塩基性条件下でかつ塩祈させるに充分な量の無機塩が存在する水性媒体中で、 N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩を形成させると同時に、形成された N—保護一 S—フユニルシスティンと塩基との塩を塩析させる請求項 7、 8又は 9記載の単離方法。

1 1 . 塩基性条件下でかつ塩祈させるに充分な量の無機塩が存在する水性媒体中で、式（2 ) ；

R² 0

、X

(式中、 R ¹は、ァミノ基の保護基を表す。 R ²は、水素原子を表すか、又は、前記 R ¹から独立して若しくは一緒になつてアミノ基の保護基を表す。 Xは、脱離基を表す。）

で表される化合物をチオフェノールで処理して N—保護— S—フエニルシスティンを得ると同時に、得られた N—保護一 S—フエニルシスティンを塩基との塩として反応混合物から塩析させる請求項 1 0記載の単離方法。

1 2. 塩析は、種晶を共存させて行われるものである請求項 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 1 0又は 1 1記載の単離方法。

13. 塩析時又は塩析後に有機溶剤を存在させて、共存する脂溶性不純物を溶解除去する請求項 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 1 1又は 1 2記載の単離方法。

14. 請求項 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 1 1、 1 2又は 1 3記載の単離方法により取得した N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩を酸で中和することにより、遊離の N—保護一 S—フエニルシスティンを得、次いで、当該遊離の N—保護— S—フエニルシスティンを有機溶剤と混合することを特徴とする、有機溶剤と遊離の N—保護一 S—フエニルシスティンとの混合物を取得する方法。

1 5. N—保護一 S—フエニルシスティンと塩基との塩は、 N—保護— S—フェニルシスティンの金属塩である請求項 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 1 1、 1 2、 1 3又は 14記載の方法。

16. N—保護一 S—フエニルシスティンの金属塩は、 N—保護一 S—フエ- ルシスティンのアルカリ金属塩である請求項 1 5記載の方法。

1 7. N—保護— S—フエニルシスティンのアルカリ金属塩は、 N—保護一 S —フエニルシスティンのナトリゥム塩である請求項 1 6記載の方法。

18. ァミノ基の保護基は、ウレタン型保護基である請求項 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 1 0、 1 1、 1 2、 1 3、 14、 1 5、 1 6又は 1 7記载の方法。

1 9. ァミノ基の保護基は、ァラルキルォキシカルボニル基又は低級アルコキシカルボニル基である請求項 1 8記載の方法。

20. ァミノ基の保護基は、ベンジルォキシカルボニル基、 t e r t—ブトキシカルボニル基、メトキシカルボニル基又はエトキシカルボニル基である請求項 1 9記載の方法。

2 1. ァミノ基の保護基は、ベンジルォキシカルボニル基である請求項 20記載の方法。