WO1997035621A1

WO1997035621A1 - Obturateur scleral contenant des medicaments proteiniques

Info

Publication number: WO1997035621A1
Application number: PCT/JP1997/000939
Authority: WO
Inventors: Yuichiro Ogura; Noriyuki Kunou; Atsutoshi Ota
Original assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1996-03-25
Filing date: 1997-03-19
Publication date: 1997-10-02
Anticipated expiration: 1998-09-25
Also published as: EP0904787A1; JPH09255555A; JP3309175B2

Description

タンパタ性薬物含有強膜プラグ技術分野

本発明は、加熱や有機溶媒との接触によって失活しゃすいタンパク性薬物の新規な徐放性組成物を提供するものであり、特にその組成物を強膜プラグに成形し、これを用いて硝子体内に医薬品を放出させることにより内眼部疾患の治療または予防に役立つ技術を提供するものである。背景技術

網膜、硝子体等の内眼部における疾患には難治性疾患が多く、その効果的な治療法の開発が望まれている。眼疾患に対しては、薬物の点眼投与により治療するのがもっとも一般的であるが、網膜、硝子体等の内眼部へは薬物がほとんど移行しないことが、内眼部における疾患の治療をより困難にしている。静脈投与等による治療も試みられているが、血液房水柵のため有効濃度になるほど薬物を移行させるのは困難である。硝子体に直接薬物を注入する方法もあるが、高濃度のものを一時に注入すると内眼部組織に障害をもたらし、また、頻回の注入は感染の危険性や手技の煩わしさにより実際的でない。

そこで、生体分解性共重合体からなる強膜プラグが考え出された（特開平 6 — 3 1 2 9 4 3 ) 。この強膜プラグは、乳酸単位とグリコール酸単位で構成される乳酸共重合体に薬物を含有させたもので成形され、共重合体の生体分解性を利用して硝子体内に薬物を徐放させ、硝子体や網膜の疾患を治療することを目的としたものである。また、この強膜プラグは硝子体手術時等に生じる強膜小切開口より簡便に挿入できるものである。本発明は、特開平 6 — 3 1 2 9 4 3に開示された強膜プラグの基本的技術を応用し、さらに加熟や有機溶媒との接触により活性を失いやすいタンパク性薬物に、より効果的に適用するための新たな技術を付加したものである。

—方、医薬品のコントロールリリースを目的として、マイクロスフユアを用いる技術が数多く報告され、最近さらに微細粒化したナノスフユア、すなわち粒子径がナノメートルォ一グーである微細粒子を用いる技術が報告されている

(Journal of Controlled Release, 25 89 - 98，特開平 5 — 5 8 8 8 2他）。これらの技術は、薬物を微細粒化したカブセルの中に取り込み、その薬物の放出を制御しょうとするものである。さらに、上記のナノスフヱァに関する報告は、乳酸とダリコール酸の共重合体からなるナノスフヱァを開示している。より詳しく説明すると、共重合体を水混和性有機溶媒を用いて薬物とともに溶解し、最終的に乳化させ、溶媒を蒸発させることにより薬物をカプセルの中に取り込む技術を開示している。この共重合体は脂溶性が高いので、溶解するには通常有機溶媒を用いられ、上記報告でも水混和性有機溶媒が用いられている。従って、有機溶媒との接触により活性を失いやすいタンパク性薬物に用いるのは困難である。

ところで、インタ一フエロン一）8等のタンパク性薬物には、硝子体や網膜等の内眼部疾患に有効と期待されるものも多く知られている。特に、インターフュロン一； Sは、血管新生抑制作用を有しており（日本眼科学会雑誌、 JL 、 5 7 1. 1 9 9 5 ) 、黄斑変性症、糖尿病性網膜症、網膜中心静脈閉塞症、血管新生由来の緑内障等にも効果が期待されている。さらに、これは抗ウィルス作用もあり、種々の内眼部ウィルス感染症にも効果が期待されている。ィンタ一フュロン一 /S等のタンパク性薬物を硝子体や網膜等の内眼部疾患に効果的に適用できる技術の開発が望まれているにも拘らず、硝子体や網膜等の内眼部組織には薬物が移行しにくいという基本的問題とともに、タンパク性薬物の安定性の問題、すなわちタンパク性薬物が加熱や有機溶媒との接触により失活しゃすいという問題があり、技術的に極めて困難であつた。発明の開示

まず硝子体や網膜等の内眼部組織に簡便且つ効果的に薬物を放出できる生体分解性の乳酸共重合体からなる強膜プラグに着目し、インタ一フュロン一） 9等のタンパク性薬物を強膜プラグに含有させることを試みた。ところが、乳酸共重合体は脂溶性が高く、薬物と均一に混和するには有機溶媒を用いる必要があり、実際にタンパク性薬物に適用してみると、その活性は大きく失われた。また、公知技術（特開平 6 — 3 1 2 9 4 3 ) は加熱成形によって強膜プラグを成形する方法を具体的実施例として開示しているが、加熱によって失活しゃすいタンパク性薬物にはこの製法は適用しがたい方法である。次に、乳酸共重合体からなる微細粒子の中にタンパク性薬物を取り込み、圧縮成形することにより強膜プラグに成形することを想定した。しかし、乳酸共重合体の高い脂溶性のためタンパク性薬物を取り込むには有機溶媒を使用しなければならず、タンパク性薬物には適用できないことがわかった。

そこで、タンパク性薬物を有機溶媒と実質上接触させず、乳酸共重合体に含有させる方法を鋭意研究した。従来、ナノスフア等の微細粒子を用いる技術は、薬物を微細粒子の中に取り込むことを目的としていたが、タンパクは末端にァミノ残基を有するので乳酸共重合体のカルボキシル残基と結合しゃすい性質を有することに着目し、従来の発想を転換し、微細粒子の表面に薬物を吸着させ、微細粒子の極めて広い表面積を活用することにより、薬物の均一な分散がなし得ることを見いだした。この方法によると、乳酸共重合体からなる微細粒子の製造過程でタンパク性薬物を共存させる必要はないので、タンパク性薬物の有機溶媒との接触は実質上起こらなくなり、活性の低下は見られないことがわかった。また、この乳酸共重合体からなる微細粒子の表面にタンパク性薬物を吸着させたものは、加熱を要しない圧縮成形技術を用いて強膜プラグに容易に成形できることも併せて見いだした。さらに、ナノメーターオーダーの微細粒子を用いると特に成形がしやすく且つ均一性に優れた強膜プラグが得られることもわカヽった ₀

本発明は、タンパク性薬物を乳酸共重合体からなる微細粒子の表面に吸着させてなることを特徴とする組成物、およびその組成物で成形された強膜プラグに関する。

本発明において、タンパク性薬物とは、タンパクを組成の中に含む医薬品を示し、特に内眼部疾患に効果が期待されるもの、例えば、インタ一フエロン一；9等のインターフェロン類、各種モノクローナル抗体、インターロイキン類等のサイトカイン類、抗サイトカイン抗体等が挙げられる。無論それらのタンパクは糖鎖を有していてもよい。

乳酸共重合体とは、乳酸単位とグリコール酸単位からなる共重合体を示す。

微細粒子とは、平均粒子径が極めて小さい粒子を示し、平均粒子径が 1 0 0 0ナノメートル未満の、いわゆるナノスフエアと称されている大きさの粒子が好ましく、より好ましくは 5 0〜 5 0 0ナノメーター程度の粒子である。

吸着とは、実質上粒子表面に薬物がほぼ均一状態に分布し、物理的には粒子表面から簡単に離脱しない状態であることを示す。

強膜プラグとは、特開平 6— 3 1 2 9 4 3に開示されている形状、性質を有する生体分解性のプラグを示す。

以下より詳しく説明する。

本発明の第 1の主構成は、タンパク性薬物を乳酸共重合体からなる微細粒子の表面に吸着させてなることを特徴とする組成物である。この組成物は強膜プラグへの成形を最終的目的とするが、そのままの形態でも医薬品として利用できるものである。この組成物の製造方法を簡単に説明する。まず、乳酸共重合体を有機溶媒に溶解し、次いでその溶液をポリビニルアルコール水溶液に加え、撹拌後ろ過し、ろ液を超遠心分離し、沈殿物を水に再分散し、分散液を再び超遠心分離し微細粒子を得、その微細粒子を凍結乾燥して微細粒子粉末を得る。この微細粒子粉末を水に再分散し、タンパク性薬物の水性溶液を加え撹拌後凍結乾燥して目的とする組成物を得る。この方法によるとタンパク性薬物の有機溶媒との接触は実質上起こらず、タンパク性薬物の活性の低下を来さない。

本発明の第 2の主構成は、第 1 の主構成の組成物で成形された強膜プラグである。この強膜プラグは、硝子体手術時にあける強膜の小切開口より挿入し、硝子体内へ薬物を徐放させ、網膜や硝子体等の内眼部疾患を治療するのを主たる目的としている。その強膜プラグの形状や強度等は公知の強膜プラグ（特開平 6— 3 1 2 9 4 3 ) に従って定められる。また、薬物の徐放を目的とするため、乳酸共重合体の分子量や構成単位の組成モル比も治療を要する期間（疾患の種類、症状、年齢等によって変わってくる）等に応じて定められ、特開平

6 - 3 1 2 9 4 3に開示された技術がそのまま応用できるが、以下に簡単に説明する。

まず、乳酸共重合体の重量平均分子量は、 1万〜 1 0 0万の範囲が好ましい。 1万未満では、強膜プラグに求められる強度が保てなく、 1 0 0万を超えると、プラグの分解速度が遅くなりすぎるとともに成形も困難になる。薬物の放出期間 (有効濃度維持期間）は、分子量および構成単位の組成モル比を適宜選択することによって定められる。分子量の観点から考えると、放出期間と重量平均分子量との関係を次に示す。 1〜 2週間程度の場合は 1万〜 1 0万程度、好ましくは 1万〜 5万程度、より好ましくは 2万〜 4万程度； 2週間〜 1ケ月程度の場合は、 1万〜 2 0万程度、好ましくは 2万〜 1 0 万程度、より好ましくは 2万〜 5万程度； 1ヶ月〜 6ヶ月程度の場合は、 1万〜 1 0 0万程度、好ましくは 2万〜 4 0万程度、より好ましくは 4万〜 2 0万程度である。タンパク性薬物がインタ一フヱロン一 /3の場合、 1ヶ月〜 6ヶ月程度の期間が好ましい。

乳酸共重合体における乳酸単位とグリコール酸単位の組成モル比も、強膜プラグの分解性に影響を与える。すなわち、グリコール酸単位の組成モル比が高くなると親水性が増し、吸水性が高くなるので分解が速くなる。グリコール酸単位の組成モル比が 5 0 %を超えると溶解度の問題で強膜プラグの作成が困難になる。従って、乳酸単位とグリコール酸単位の組成モル比は、 5 0 5 0〜 1 0 0 / 0の間で選択される。医薬品がインターフュロン— 5の場合、乳酸単位とグリコール酸単位の組成モル比は、 5 0/ 5 0〜 8 0/ 2 0が好ましく、より好ましくは 7 0 / 3 0— 8 0Z2 0である。尚、乳酸単位成分としては、 L一体、 D—体または D L —体を用いることができる。

乳酸共重合体の製造は、公知の方法、例えば、特開平 6 —

3 1 2 9 4 3に記載された製法等を用いて行うことができ、各種の分子量、また各種組成モル比のものを得ることができる

強膜ブラグへの成形は圧縮成形技術を用いて行うことがでさ o

強膜ブラグの形状は特開平 6 — 3 1 2 9 4 3 に記載された形状と同等のものが使用できる。簡単に説明すると、強膜プラグが眼内に落ち込むのを阻止するへッド部分と、強膜開口部に挿入されるシャフト部分とからなる釘状のものが好ましく、シャフトの先端部分が角錐または円錐のような鋭角状の錐形となつているのが好ましい。サイズは通常 6 m m程度の長さを有し、へッド部分の直径は 2 m m程度であり、シャフト部分の直径または幅は 1 m m程度である。また全体の重量は 9 m g程度である。

本発明の強膜プラグの用途は、硝子体や網膜等の内眼部疾患の治療または予防であるが、薬物の種類を選択することによって種々の疾患に適用することができる。例えば、インタ一フュロンーは、血管新生抑制作用を有しており、黄斑変性症、糖尿病性網膜症、網膜中心静脈閉塞症、血管新生由来の緑内障等にもに好適に適用できる。また、これは抗ウィルス作用もあり、種々の内眼部ウィルス感染症にも適用できる。発明を実施するための最良の形態

実施例 1 (乳酸共重合体の微細粒子の製造）

D L -乳酸 Zグリコール酸の組成モル比が 7 5 / 2 5で、重量平均分子量が約 3. 3万の乳酸共重合体（PLGA) 5 0 0 m gを塩化メチレン（2 m l ) およびアセトン（ 1 0 0 m l ) の混合液に溶解した。この溶液をポリビニルアルコール（PV A)の水溶液（ 2 wZ v %、 2 0 0 m l ) にマグネチックスタ —ラーで撹拌しながら滴下した。ァスピレーターで吸引減圧下 2時間撹拌後、生じた懇濁液をメンブランフィルター（孔怪 l x m) にてろ過した。ろ液を 1時間超遠心分離（ 156000 X g ) した。沈殿物を精製水（適量）で再分散後、分散液を再度超遠心分離し微細粒子を得た。この微細粒子を精製水 ( 1 5 m 1 ) にて再分散後凍結乾燥して微細粒子粉末 4 9 5 m gを得た。

この微細粒子の平均粒子径は約 1 0 0ナノメーターであり、ナノメートルオーダーの粒子径であることが確認された。

同様の手法にて、溶媒として用いた塩化メチレンとァセトンとの混合比を変えることにより異なる粒子径のものを製造することができる。実施例 2 (薬物を表面に吸着させた微細粒子の製造）

実施例 1 で得られた PLGA微細粒子粉末（ 1 2 5 m g ) を精製水（ 2. 5 m l ) にて再分散した。ここに、インターフエ。ンー β (IFN- 9 ) の溶液（ 7. 5 X 1 0⁴ units 、 0. 1 %の牛血清アルブミンを含むリン酸緩衝液に溶解したもの） 7 5 μ 1 および精製水（ 1 7 5 1 ) を滴下し、 3 0分間マグネチックスターラーで撹拌後凍結乾燥し、目的とする薬物を表面に吸着させた微細粒子（IFN-yS ZPLGA粉末）を得た。実施例 3 (強膜プラグの成形）

実施例 2で得た薬物を表面に吸着させた微細粒子を型に入れ、圧縮成形し強膜プラグに成形した。比較実施例 1 (酢酸溶解法）

PLGA ( 1 2 5 m g、実施例 1 の原料として用いたものと同じ）を酢酸（ 2. 5 m l ) に溶解した。この溶液に IFN-/S溶液（実施例 2 と同じもの） Ί 5 β 1 および精製水（ 1 7 5 ;/ 1 ) を滴下し、溶解後直ちに凍結乾燥し IFN_ S ZPLGA粉末を得た。比較実施例 2 (wZ o型ェマルジヨン法）

PLGA ( 1 2 5 m g、実施例 1 の原料として用いたものと同じ）をクロ口ホルム（ 2. 5 m l ) に溶解した。この溶液に IFN- 3溶液（実施例 2 と同じもの） 7 5 μ 1 および精製水 ( 1 7 5 // 1 ) を滴下した。滴下終了後、超音波照射（ 6 0 0 w、 6 0秒）により安定な wZ o型ェマルジヨンを調製し、それを凍結乾燥して IFN-^ ZPLGA粉末を得た。本発明によりつぎの効果が発揮される。

タンパク性薬物の活性を損なうことなく乳酸共重合体の表面上に吸着した微細粒子が得られたかどうか検証するため、医薬品の残存活性を測定した。タンパク性薬物の代表例としてインターフヱロン— / S (IFN-yS ) を用いた実施例 2の IFN- S ZPLGA粉末における IFN- の活性を測定すると共に、比較試験として、比較実施例 1 および 2で得られた IFN- S ZPLGA 粉末における IFN-/3の活性を測定した。

活性測定は、 IFN- ;S ZPLGA粉末（ 1 0 m g ) を精製水（ 2 m l ) およびクロ口ホルム（ 4 m l ) 中に加え、 3 0分間振とう後遠心分離（ 1 0分間）し、水層中の IFN- の活性の測定を ELISA により行った。尚、本抽出操作においては IFN- /S の活性低下が起こらないことを別途確認した。

結果を下記表に示す。

表中の数字は、最初の IFN- ;Sの活性を 1 0 0 とした場合の比活性（ 3例の平均値）を示す。

この表に示された結果から明らかなように、本発明の IFN - β ZPLGA粉末においては、 IFN- ;9の活性の低下はほとんど見られないのに対し、有機溶媒と IFN- jSとを接触させる比較実施例 1の溶液法および比較実施例 2のェマルジヨン法では IF N- /Sの極端な活性の低下が見られた。産業上の利用可能性

本発明は、加熱や有機溶媒との接触によって失活しゃすいタンパク性薬物の新規な徐放性組成物を提供するものであり、特にその組成物を強膜プラグに成形し、これを用いて硝子体内に医薬品を放出させることにより内眼部疾患の治療または予防に役立つ技術を提供するものである。

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Claims

請求の範囲

1. タンパク性薬物を乳酸共重合体からなる微細粒子表面に吸着させてなることを特徵とする組成物。

2. 微細粒子の平均径が 1 0 0 0ナノメーター未満である請求項 1による組成物。

3. 微細粒子の平均怪が 5 0〜 5 0 0ナノメーターである請求項 1による組成物。

4. タンパク性薬物がインタ一フエロンである請求項 1による組成物。

5. インターフヱロンの種類がインタ一フエロン一 ;9である請求項 4による組成物。

6. 乳酸共重合体の組成が乳酸単位とグリコール酸単位である請求項 1 による組成物。

7. インターフヱロン— /Sを、乳酸単位とグリコール酸単位で構成される乳酸共重合体からなる微細粒子であつて、その平均径が 1 0 0 0ナノメ一ター未満である微細粒子に吸着させてなることを特徴とする組成物。

8. タンパク性薬物を乳酸共重合体からなる微細粒子表面に吸着させてなることを特徴とする組成物で成形された強膜ブラグ。

9. 微細粒子の平均径が 1 0 0 0ナノメーター未満である請求項 8による強膜プラグ。

1 0. 微細粒子の平均径が 5 0〜 5 0 0ナノメーターである請求項 8による強膜プラグ。

1 1. タンパク性薬物がインターフヱロンである請求項 8による強膜プラグ。

1 2. インターフェロンの種類がインターフェロン一である請求項 1 1 による強膜ブラグ。

1 3. 乳酸共重合体の組成が乳酸単位とグリコ—ル酸単位である請求項 8による強膜プラグ。

1 4. インターフヱロン一 /5を、乳酸単位とグリコール酸単位で構成される乳酸共重合体からなる微細粒子であつて、その平均径が 1 0 0 0ナノメーター未満である微細粒子に吸着させた組成物で成形された強膜ブラグ。

1 5. 乳酸共重合体の重量平均分子量が 1万〜 1 0 0 万である請求項 8による強膜プラグ。

1 6. 乳酸共重合体の重量平均分子量が 2万〜 2 0万である請求項 8による強膜ブラグ。

1 7. 乳酸単位とグリコール酸単位の組成モル比が 5 0 5 0〜 1 0 0 Z 0である請求項 8〜 1 6による強膜ブラグ。

1 8. 乳酸単位とグリコール酸単位の組成モル比が 5

0 5 0〜 8 0 / 2 0である請求項 8〜 1 6による強膜ブラグ

1 9. 乳酸単位とグリコール酸単位の組成モル比が 7

0 3 0 ~ 8 0 / 2 0である請求項 8〜 1 6による強膜ブラグ

2 0. タンパク性薬物を乳酸共重合体からなる微細粒子表面に吸着させてなることを特徴とする組成物で成形された強膜プラグであって、該薬物が硝子体内に徐々に放出されることを特徴とする強膜プラグ。

2 1. タンパク性薬物を乳酸共重合体からなる微細粒子表面に吸着させてなることを特徴とする組成物で成形された強膜プラグであって、該薬物が硝子体内に徐々に放出されることを特徴とする内眼部疾患治療または予防用強膜ブラ

2 グ。

2 2. 内眼部疾患が網膜疾患である請求項 2 1による強膜ブラグ。

2 3. 網膜疾患が糖尿病性網膜症、黄斑変性症または網膜中心静脈閉塞症である請求項 2 1による強膜プラグ。

2 4. インターフヱロン— ^を、乳酸単位とグリコール酸単位の組成モル比が 5 0 / 5 0〜 1 0 0 Z 0で重量平均分子量が 1万〜 1 0 0万の乳酸共重合体からなる微細粒子表面に吸着させてなることを特徴とする組成物で成形された強膜プラグであって、インターフュロン — /3が硝子体内に徐々に放出されることを特徴とする強膜プラグ。

2 5. インタ一フヱロン一 ^を、乳酸単位とグリコール酸単位の組成モル比が 7 0 3 0〜 8 0 / 2 0で重量平均分子量が 2万〜 2 0万の乳酸共重合体からなる微細粒子表面に吸着させてなることを特徴とする組成物で成形された強膜プラグであって、ィンターフヱロン一 /9が硝子体内に徐々に放出されることを特徴とする強膜プラグ。

2 6. 乳酸単位成分が L体、 D体または D L体である請求項 8〜 2 5による強膜プラグ。

2 7. 圧縮成形により製造されることを特徴とする請求項 8〜 2 6による強膜プラグ。

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